タンパク質キナーゼ阻害剤としての化合物および組成物
本発明は新規クラスの化合物、かかる化合物を含む医薬組成物、ならびにかかる化合物を用いて異常なまたは調節解除されたキナーゼ活性に関連する疾患または障害、特にＡｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６およびＳＡＰＫ２βキナーゼの異常活性化を伴う疾患または障害を処置または予防する方法を提供する。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は２００３年１０月８日出願の米国仮特許出願第６０／５０９５７２号の優先権の利益を主張するものである。本出願の全開示はその全てをそして全ての目的のために出典明示により本明細書の一部とする。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は新規クラスの化合物、かかる化合物を含む医薬組成物、および異常なまたは調節解除されたキナーゼ活性に関連する疾患または障害、特にＡｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＰＤＧＦ−Ｒ、Ｂｍｘ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６およびＳＡＰＫ２α、ＳＡＰＫ２βキナーゼの異常活性化に関与する疾患または障害を処置または予防するためにかかる化合物を用いる方法を提供する。
【０００３】
（背景）
タンパク質キナーゼはタンパク質の大きなファミリーを表し、広範な細胞過程の調節および細胞機能制御の維持において中心的な役割を果たしている。限定するものではないが、これらのキナーゼのリストの一部には：血小板由来成長因子受容体キナーゼ（ＰＤＧＦ−Ｒ）、幹細胞因子の受容体キナーゼ、ｃ−ｋｉｔ、神経成長因子受容体、ｔｒｋＢ、および繊維芽細胞成長因子受容体、ＦＧＦＲ３のような受容体チロシンキナーゼ；Ａｂｌおよび融合キナーゼＢＣＲ−Ａｂｌ、Ｆｅｓ、ＬｃｋおよびＳｙｋのような非受容体チロシンキナーゼ；ならびにｂ−ＲＡＦ、ＭＡＰキナーゼ（例えばＭＫＫ６）およびＳＡＰＫ２βのようなセリン／スレオニンキナーゼが挙げられる。異常キナーゼ活性は良性および悪性増殖性障害ならびに免疫および神経系の不適切な活性化の結果である疾患を含む多くの疾患状態で観察されている。
【０００４】
本発明の新規化合物は１つまたはそれより多いタンパク質キナーゼの活性を阻止し、そしてしたがって、キナーゼ関連疾患の処置に有用であると予測される。
【０００５】
（発明の要旨）
１つの態様では、本発明は式Ｉ：
【化１】
（式中、
ｎは０、１または２であり；
Ｙは−Ｃ（Ｈ）＝および−Ｎ＝から選択され；
Ｚは−Ｃ（Ｈ）＝および−Ｎ＝から選択され；
Ｒ１は水素、ハロおよび−Ｒ４から選択され；
Ｒ２は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ３はハロ、ニトロ、Ｃ１−６アルキルおよびＣ１−６アルコキシから選択され；
Ｒ４はＣ３−８ヘテロシクロアルキル、−ＸＮＲ５Ｒ６、−ＸＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６および−ＸＮＲ５Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ６から選択され；ここでＸは単結合またはＣ１−４アルキレンであり；Ｒ５は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；Ｒ６はＣ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここでＲ４の任意のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルは場合によってはハロ、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、場合によってはヒドロキシで置換されていてよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキル、ハロ置換Ｃ１−６アルコキシ、−ＸＯＸＮＲ７Ｒ８、−ＸＳ（Ｏ）０−２Ｒ７、−ＸＳ（Ｏ）０−２ＮＲ７Ｒ８、−ＸＯＲ７、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−ＸＮＲ７Ｒ８、−ＸＮＲ７Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ７および−ＸＲ９から別個に選択される１から３個のラジカルにより置換されていてよく；ここでＸは単結合またはＣ１−４アルキレンであり；Ｒ７およびＲ８は別個に水素およびＣ１−６アルキルから選択され；Ｒ９はＣ６−１０アリール、Ｃ５−１０ヘテロアリールＣ３−１２シクロアルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキルから選択され；ここでＲ９の任意のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは場合によっては１から３個のＣ１−６アルキルラジカルにより置換されていてよく；
Ｒ１０は水素、ハロおよびＣ１−６アルキルから選択される）
の化合物ならびにＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、保護された誘導体、個々の異性体およびその異性体の混合物；ならびにかかる化合物の薬学的に許容される塩および溶媒和物（例えば水和物）を提供する。
【０００６】
第２の態様では、本発明は１つまたはそれより多い適当な賦形剤と混合して式Ｉの化合物またはそのＮ−オキシド誘導体、その個々の異性体および異性体の混合物；またはその薬学的に許容される塩を含有する医薬組成物を提供する。
【０００７】
第３の態様では本発明は、動物に治療上有効量の式Ｉの化合物またはＮ−オキシド誘導体、その個々の異性体および異性体の混合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、キナーゼ活性、特にＡｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６および／またはＳＡＰＫ２β活性の阻止が疾患の病理および／または症状を予防、阻止または改善することができる動物の疾患を処置する方法を提供する。
【０００８】
第４の態様では本発明は、キナーゼ活性、特にＡｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６および／またはＳＡＰＫ２β活性が疾患の病理および／または症状の原因となる、動物において疾患を処置するための医薬品の製造における式Ｉの化合物の使用を提供する。
【０００９】
第５の態様では本発明は、式Ｉの化合物およびＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、保護された誘導体、個々の異性体およびその異性体の混合物、ならびにその薬学的に許容される塩を調製するための方法を提供する
【００１０】
（発明の詳細な説明）
定義
基として、およびその他の基の構造エレメントとしての「アルキル」、例えばハロ置換アルキルおよびアルコキシは直鎖状かまたは分岐しているかのいずれかでよい。Ｃ１−４−アルコキシにはメトキシ、エトキシ等が挙げられる。ハロ置換アルキルにはトリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル等が挙げられる。
【００１１】
「アリール」は６から１０個の環炭素原子を含有する単環式または融合二環式芳香族環集合体を意味する。例えばアリールはフェニルまたはナフチル、好ましくはフェニルでよい。「アリーレン」はアリール基から誘導される２価ラジカルを意味する。「ヘテロアリール」はアリールに関して定義されるとおりであり、ここで１つまたはそれより多い環メンバーがヘテロ原子である。例えばヘテロアリールにはピリジル、インドリル、インダゾリル、キノキサリニル、キノリニル、ベンゾフラニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾ[１,３]ジオキソール、イミダゾリル、ベンゾ−イミダゾリル、ピリミジニル、フラニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピラゾリル、チエニル等が挙げられる。
【００１２】
「シクロアルキル」は指示された数の環原子を含有する飽和もしくは部分的不飽和、単環式、融合二環式または架橋多環式環集合体を意味する。例えばＣ３−１０シクロアルキルにはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等が挙げられる。「ヘテロシクロアルキル」は、指示された１つまたはそれより多い環炭素が−Ｏ−、−Ｎ＝、−ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−または−Ｓ（Ｏ）２−（ここでＲは水素、Ｃ１−４アルキルまたは窒素保護基である）から選択される部分により置換されていれば、本出願で定義されるようなシクロアルキルを意味する。例えば本発明の化合物を記載するために本出願で用いられるようなＣ３−８ヘテロシクロアルキルにはモルホリノ、ピロリジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピペリジニルオン、１,４−ジオキサ−８−アザ−スピロ[４.５]デカ−８−イル等が挙げられる。
【００１３】
「ハロゲン」（またはハロ）は好ましくはクロロまたはフルオロを表すが、ブロモまたはヨードでもよい。
【００１４】
「処置する」、「処置すること」および「処置」は疾患および／またはその付随される症状を改善または和らげる方法を意味する。
【００１５】
（好ましい実施態様の説明）
融合タンパク質ＢＣＲ−Ａｂｌは、ＡｂｌプロトオンコジーンをＢｃｒ遺伝子と融合させる相互転座の結果である。ＢＣＲ−Ａｂｌは次いでマイトジェン活性の上昇を介してＢ細胞を形質転換することができる。この上昇の結果、アポトーシスに対する感受性を低減させ、ならびにＣＭＬ前駆細胞の付着およびホーミングを変化させる。本発明はキナーゼ関連疾患、特にＡｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６および／またはＳＡＰＫ２βキナーゼ関連疾患の処置のための化合物、組成物および方法を提供する。例えば白血病およびＢＣＲ−Ａｂｌに関係するその他の増殖障害を、野生型および変異型のＢｃｒ−Ａｂｌの阻止を介して処置することができる。
【００１６】
１つの実施態様では、式Ｉの化合物に関して、ｎは０、１または２であり；
Ｙは−Ｃ（Ｈ）＝および−Ｎ＝から選択され；
Ｚは−Ｃ（Ｈ）＝および−Ｎ＝から選択され；
Ｒ１は水素、ハロおよび−Ｒ４から選択され；
Ｒ２は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ３はハロ、Ｃ１−６アルキルおよびＣ１−６アルコキシから選択され；
Ｒ４はＣ３−８ヘテロシクロアルキル、−ＸＮＲ５Ｒ６、−ＸＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ６および−ＸＮＲ５Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ６から選択され；ここでＸは単結合またはＣ１−４アルキレンであり；Ｒ５は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；Ｒ６はＣ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここでＲ４の任意のアリール、ヘテロアリールおよびシクロアルキルは場合によってはハロ、ヒドロキシ、ニトロ、場合によってはヒドロキシにより置換されたＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキル、ハロ置換Ｃ１−６アルコキシ、−ＸＳ（Ｏ）０−２Ｒ７、−ＸＯＸＮＲ７Ｒ８、−ＸＳ（Ｏ）０−２ＮＲ７Ｒ８、−ＸＯＲ７、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−ＸＮＲ７Ｒ８および−ＸＲ９から別個に選択される１から３個のラジカルにより置換されていてよく；ここでＸは単結合またはＣ１−４アルキレンであり；Ｒ７およびＲ８は水素およびＣ１−６アルキルから別個に選択され；Ｒ９はＣ５−１０ヘテロアリールおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキルから選択され；ここでＲ９の任意のヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルは場合によっては１から３個のＣ１−６アルキルラジカルにより置換されていてよく；
そしてＲ１０は水素である。
【００１７】
別の実施態様では、Ｒ１は水素、ハロ、ピロリジニルおよび−ＮＨＲ６から選択され；ここでＲ６は水素、メチル、エチル、ジエチル−アミノ−プロピル、モルホリノ−エチル、ヒドロキシ−エチル、ベンゾ[１,３]ジオキソリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリジニル−メチル、２−（２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−エチルおよびフェニルから選択され；ここで該ピロリジニル、ピリジニル、ピラゾリル、ピラジニル、ピリジニル−メチル、２−（２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−エチルまたはフェニルは場合によってはアミノ、メトキシ、ジメチルアミノ、ジメチルアミノ−メチル、ジメチルアミノ−エチル、ジメチルアミノ−プロピル、ジメチルアミノ−エトキシ、メチル−スルファニル、ヒドロキシ、メチルスルホニル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシ−エチル、メタン−スルホニル−アミノ、モルホリノ、モルホリノ−エチル、フラニル−メチル、４−メチル−ピペラジン−１−イル、４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル、ベンジル、メチル−アミノカルボニル、メチル−カルボニル−アミノ、メチル−ピラゾリル、アミノカルボニルおよびアミノ−スルホニルから別個に選択される１から２個のラジカルにより置換されていてよい。
【００１８】
さらなる実施態様では、Ｒ４は−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ６および−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ６から選択され；ここでＲ６はメチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロヘキシル、フラニル、ピロリル、フェニル、ピリジニル、ピリダジニル、ピラジニル、ピラゾリル、テトラゾリル−メチルおよびベンジルから選択され；ここでＲ６の該シクロヘキシル、フラニル、ピロリル、フェニル、ピリジニル、ピリダジニル、ピラジニル、ピラゾリル、テトラゾリル−メチルまたはベンジルは場合によっては４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル、４−メチル−ピペラジン−１−イル、４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル、４−エチル−ピペラジン−１−イル、フェニル、エチル、トリフルオロメチル、モルホリノ、ジメチルアミノ、ハロ、ニトロ、トリフルオロメトキシ、１−メチル−ピロール−２−イル、４−メチル−イミダゾール−１−イル、４−メチル−ピペラジン−１−イル、４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル、イソブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルから選択される１から３個のラジカルにより置換されていてよい。
【００１９】
好ましい式Ｉの化合物を後記の実施例および表１に詳記する。
【００２０】
薬理学および有用性
本発明の化合物はタンパク質チロシンキナーゼの活性を調整し、そしてそのためにタンパク質チロシンキナーゼ、特にＡｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６および／またはＳＡＰＫ２βキナーゼが疾患の病理および／または症状の原因となる疾患または障害を処置するために有用である。
【００２１】
エイブルソンチロシンキナーゼ（すなわちＡｂｌ、ｃ−Ａｂｌ）は細胞サイクルの調節、遺伝毒性ストレスに対する細胞応答、およびインテグリンシグナリングを介する細胞環境についての情報の伝達に関与する。全体的にはＡｂｌタンパク質は、種々の細胞外および細胞内供給源からのシグナルを統合し、そして細胞サイクルおよびアポトーシスに関する決定に影響する細胞モジュールとして複雑な役割を果たす。エイブルソンチロシンキナーゼにはチロシンキナーゼ活性が調節解除されているキメラ融合体（腫瘍性タンパク質）ＢＣＲ−Ａｂｌまたはｖ−Ａｂｌのようなサブタイプの誘導体が含まれる。ＢＣＲ−Ａｂｌは慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の９５％および急性リンパ球性白血病の１０％の病因において重要である。ＳＴＩ−５７１（Gleevec）は発癌性ＢＣＲ−Ａｂｌチロシンキナーゼの阻害剤であり、そして慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の処置に用いられる。しかしながら、ＣＭＬの急性転化段階の患者にはＢＣＲ−Ａｂｌキナーゼにおける変異のためにＳＴＩ−５７１に抵抗するものもある。今日では２２個を越える変異が報告されており、最も一般的であるのはＧ２５０Ｅ、Ｅ２５５Ｖ、Ｔ３１５Ｉ、Ｆ３１７ＬおよびＭ３５１Ｔである。
【００２２】
本発明の化合物はａｂｌキナーゼ、特にｖ−ａｂｌキナーゼを阻止する。本発明の化合物はまた野生型ＢＣＲ−ＡｂｌキナーゼおよびＢＣＲ−Ａｂｌキナーゼの変異体をも阻止し、そしてしたがって白血病（特に作用のアポトーシスメカニズムが見出される、特に慢性骨髄性白血病および急性リンパ芽球性白血病）のようなＢｃｒ−ａｂｌ陽性癌および腫瘍性疾患の処置に適当であり、そしてまた白血病性幹細胞のサブグループへの影響ならびに該細胞除去（例えば骨髄除去）後のインビトロでのこれらの細胞の精製およびこれらが一度癌細胞除去されると細胞の再移植（例えば精製された骨髄細胞の再移植）の可能性をも示す。
【００２３】
ＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）は非常に一般的に存在する成長因子であり、これは正常な成長ならびに、発癌およびまた血管平滑筋細胞の疾患、例えばアテローム性動脈硬化症および血栓症に認められるような病的な細胞増殖の双方で重要な役割を果たす。本発明の化合物はＰＤＧＦ受容体（ＰＤＧＦＲ）活性を阻止することができ、そしてしたがって、神経膠腫、肉腫、前立腺腫瘍ならびに結腸、乳房および卵巣の腫瘍のような腫瘍性疾患の処置に適当である。
【００２４】
本発明の化合物を、例えば小細胞性肺癌における腫瘍阻止物質としてのみならず、アテローム性動脈硬化症、血栓症、乾癬、強皮症および線維症のような良性増殖性障害を処置するための薬剤としても、ならびに幹細胞の保護のために、例えば５−フルオロウラシルのような化学療法剤の血液毒性効果に対抗するために、そして喘息において用いることができる。本発明の化合物を特にＰＤＧＦ受容体キナーゼの阻止に応答する疾患の処置のために用いることができる。
【００２５】
本発明の化合物は移植、例えば同種移植の結果として生じる障害、特に閉塞性細気管支炎（ＯＢ）のような特に組織拒絶、すなわち同種肺移植の慢性拒絶の処置に有用な効果を示す。ＯＢでない患者とは対照的に、ＯＢの患者はしばしば気管支肺胞洗浄液におけるＰＤＧＦ濃度の上昇を示す。
【００２６】
本発明の化合物はまた再狭窄およびアテローム性動脈硬化症のような血管平滑筋細胞移動および増殖に関連する疾患（この場合ＰＤＧＦおよびＰＤＧＦ−Ｒもまたしばしば役割を果たす）においても有効である。インビトロおよびインビボでの血管平滑筋細胞増殖または移動に関するこれらの効果およびその結果を本発明の化合物の投与により、そしてまたインビボでの機械的損傷の後の血管内膜の肥厚に及ぼすその効果を調査することによっても実証することができる。
【００２７】
本発明の化合物はまたＳＣＦ受容体（ｋｉｔ）自己リン酸化およびＳＣＦ刺激されたＭＡＰＫキナーゼ（マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ）の活性化の阻止のような、幹細胞因子（ｃ−ｋｉｔリガンドまたは造血幹細胞因子としても公知のＳＣＦ）を伴う細胞過程をも阻止する。ＭＯ７ｅ細胞はヒト前巨核球性白血病細胞系であり、これは増殖に関してＳＣＦに依存する。本発明の化合物はＳＣＦ受容体の自己リン酸化を阻止することができる。
【００２８】
ニューロトロフィン受容体のｔｒｋファミリー（ｔｒｋＡ、ｔｒｋＢ、ｔｒｋＣ）は神経および非神経組織の生存、成長および分化を促進する。ＴｒｋＢタンパク質は小腸および結腸の神経内分泌型細胞において、膵臓のアルファ細胞において、リンパ節および脾臓の単球およびマクロファージにおいて、ならびに表皮の顆粒層において発現される（Shibayama and Koizumi, 1996）。ＴｒｋＢタンパク質の発現はウィルムス腫瘍および神経芽細胞腫の望ましくない進行に随伴されている。さらにＴｋｒＢは癌性前立腺細胞において発現されるが、正常細胞では発現されない。ｔｒｋ受容体の下流のシグナリング経路はＳｈｃ、活性化Ｒａｓ、ＥＲＫ−１およびＥＲＫ−２遺伝子を介するＭＡＰＫ活性化のカスケードならびにＰＬＣ−ガンマ１変換経路を伴う（Sugimoto et al., 2001）。
【００２９】
マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）は転写因子、翻訳因子および種々の細胞外シグナルに応答するその他の標的分子を活性化する保存されたシグナル伝達経路のメンバーである。ＭＡＰＫはマイトジェン活性化タンパク質キナーゼキナーゼ（ＭＫＫ）による配列Ｔｈｒ−Ｘ−Ｔｙｒを有する二重リン酸化モチーフでのリン酸化により活性化される。高等真核生物では、ＭＡＰＫシグナリングの生理学的役割は増殖、腫瘍形成、発達および分化のような細胞性事象に相関している。したがって、これらの経路を介して（特にＭＫＫ４およびＭＫＫ６を介して）シグナル伝達を調節する能力は炎症性疾患、自己免疫疾患および癌のようなＭＡＰＫシグナル伝達に関連するヒト疾患の処置および予防的治療の開発に至り得る。
【００３０】
Ｓｙｋは肥満細胞脱顆粒および好酸球活性化において重要な役割を果たすチロシンキナーゼである。したがって、Ｓｙｋキナーゼは種々のアレルギー性障害、特に喘息に関係している。ＳｙｋはＮ−末端ＳＨ２ドメインを介してＦｃεＲ１受容体のリン酸化されたガンマ鎖に結合し、そして下流へのシグナル伝達に必須であることが示されている。
【００３１】
Ｒａｓ−Ｒａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫシグナリング経路は成長シグナルに対する細胞応答を媒介する。Ｒａｓはヒト癌の〜１５％で発癌性形態に変異する。Ｒａｆファミリーはセリン／スレオニンタンパク質キナーゼに属し、そして３つのメンバー、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆおよびｃ−Ｒａｆ（またはＲａｆ−１）を含む。薬物標的であるＲａｆの焦点はＲａｓの下流エフェクターとしてのＲａｆの関係に集中している。しかしながら、最近のデータにより、Ｂ−ＲａｆがＲａｓ対立遺伝子の活性化を必要とせずに特定の腫瘍の形成において顕著な役割を有し得る（Nature 417, 949 - 954(01 Jul 2002)）ことが示唆されている。特にＢ−Ｒａｆ変異体は高いパーセンテージの悪性メラノーマで検出されている。
【００３２】
メラノーマに関する既存の医学的処置は、特に後期段階のメラノーマに関して、その有効性が限定的である。本発明の化合物はまたｂ−Ｒａｆキナーゼを伴う細胞過程をも阻止し、ヒト癌の処置、特にメラノーマに関して新しい治療の機会を提供する。
【００３３】
各々別個の遺伝子によりコードされるｐ３８ ＭＡＰＫの複数の形態（α、β、γ、δ）は、浸透圧ストレス、ＵＶ光およびサイトカイン媒介事象を含む種々の刺激に対する細胞の応答に関与するキナーゼカスケードの一部を形成する。ｐ３８のこれらの４つのアイソフォームは細胞内シグナリングの異なる態様を調節すると考えられている。その活性化はＴＮＦαのような前炎症性サイトカインの合成および生成に至るシグナリング事象のカスケードの一部である。Ｐ３８はその他のキナーゼおよび転写因子を含む下流の基質をリン酸化することにより機能する。ｐ３８キナーゼを阻止する薬剤は限定するものではないが、ＴＮＦα、ＩＬ−６、ＩＬ−８およびＩＬ−１βを含むサイトカインの生成を遮断することが示されている。末梢血単球（ＰＢＭＣ）はインビトロでリポ多糖類（ＬＰＳ）で刺激された場合、前炎症性サイトカインを発現および分泌することが示されている。ＰＢＭＣがＬＰＳでの刺激の前にかかる化合物で前処理される場合、Ｐ３８阻害剤はこの効果を効率よく遮断する。Ｐ３８阻害剤は炎症疾患の動物モデルにおいて効果的である。多くの疾患状態の破壊的効果は前炎症性サイトカインの過剰生成により引き起こされる。ｐ３８阻害剤のこの過剰生成を調節する能力により、これらは予防維持薬として有用になる。
【００３４】
ｐ３８の機能を遮断する分子は骨再吸収、炎症ならびにその他の免疫および炎症基盤の病理を阻止するのに有効であることが示されている。したがって、安全でそして有効なｐ３８阻害剤は、例えばＲＡのようなｐ３８シグナリングを調整することにより調節され得る疾患を弱める処置をするための手段を提供する。したがってｐ３８活性を阻止する本発明の化合物は炎症、変形性関節炎、リウマチ性関節炎、癌、自己免疫疾患の処置、およびその他のサイトカイン媒介疾患の処置に有用である。
【００３５】
形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦβ）は、例えばＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３を含むタンパク質のスーパーファミリーを表し、これは細胞成長および分化、胚および骨発達、細胞外マトリックス形成、造血、免疫並びに炎症応答の多面的モジュレータである。ＴＧＦβファミリーのメンバーは、最終的には細胞サイクルを調節するか、増殖応答を制御するか、または細胞外から細胞内へのシグナリング、細胞付着、移動および細胞内情報伝達を媒介する細胞外マトリックスタンパク質に関係する遺伝子の発現に至る細胞内シグナリング経路を開始する。結果的にＴＧＦβ細胞内シグナリング経路の阻害剤である本発明の化合物は、糸球体間質増殖性ＧＮ、免疫性ＧＮおよび半月体形成性ＧＮのような糸球体腎炎（ＧＮ）を含む、未制御のＴＧＦβ活性および過剰な繊維症に関連する腎臓障害を含む繊維増殖性疾患の処置に有用である。その他の腎臓症状には糖尿病性腎症、腎間質線維症、シクロスポリン投与を受けている移植患者の腎線維症、およびＨＩＶ関連腎症が挙げられる。膠原血管障害には全身性進行性硬化症、多発性筋炎、強皮症、皮膚筋炎、好酸球性筋膜炎、限局性強皮症、レイノー症候群の発症に関連するものが挙げられる。過剰なＴＧＦβ活性の結果である肺線維症には成人呼吸窮迫症候群、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、およびしばしば全身性エリテマトーデスおよび強皮症、化学的接触、またはアレルギーのような自己免疫障害に関連する間質性肺線維症が挙げられる。繊維増殖特性に関連する別の自己免疫障害はリウマチ性関節炎である。繊維増殖症状は眼の外科的処置に関連し得る。かかる処置には増殖性硝子体網膜症を伴う網膜復位術、眼内レンズ挿入時の水晶体摘出、および緑内障後ドレナージ手術が挙げられる。
【００３６】
繊維芽細胞成長因子受容体３は骨成長に負の調節効果を及ぼし、そして軟骨細胞増殖を阻止することが示された。致死性異形成は繊維芽細胞成長因子受容体３における様々な変異により引き起こされ、そして１つの変異体、ＴＤＩＩ ＦＧＦＲ３は転写因子Ｓｔａｔ１を活性化する構成的チロシンキナーゼ活性を有し、細胞サイクル阻害剤の発現、成長停止および骨の異常発達を導く（Su et al., Nature, 1997, 386, 288-292）。ＦＧＦＲ３はまたしばしば多発性骨髄腫型の癌においても発現される。
【００３７】
キナーゼ、ｃ−Ｓｒｃは多くの受容体の発癌性シグナルを伝達する。例えば腫瘍におけるＥＧＦＲまたはＨＥＲ２／ｎｅｕの過剰発現はｃ−ｓｒｃの構成的活性化を導き、これは悪性細胞に特徴的であるが、正常細胞には存在しない。一方、ｃ−ｓｒｃの発現を欠くマウスは大理石骨病表現型を呈し、これは破骨機能におけるｃ−ｓｒｃの重要な関与および関連する障害に関係する可能性を示している。
【００３８】
ヒトリボソームＳ６タンパク質キナーゼファミリーは少なくとも８つのメンバー（ＲＳＫ１、ＲＳＫ２、ＲＳＫ３、ＲＳＫ４、ＭＳＫ１、ＭＳＫ２、ｐ７０Ｓ６Ｋおよびｐ７０Ｓ６ Ｋｂ）からなる。リボソームタンパク質Ｓ６タンパク質キナーゼは重要な多面的機能を果たし、中でもタンパク質生合成の間のｍＲＮＡ翻訳の調節における重要な役割である（Eur. J. Biochem 2000 November; 267(21): 6321-30, Exp Cell Res. Nov. 25, 1999; 253(1):100-9, Mol Cell Endocrinol. May 25, 1999;151(1-2):65-77）。ｐ７０Ｓ６によるＳ６リボソームタンパク質のリン酸化はまた細胞運動性（Immunol. Cell Biol. 2000 August;78(4):447-51）および細胞成長（Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol., 2000;65:101-27）にも関与しており、そしてしたがって、腫瘍転移、免疫応答および組織修復、ならびにその他の疾患状態に重要であり得る。
【００３９】
ＳＡＰＫ'ｓ（「ｊｕｎ Ｎ−末端キナーゼ」または「ＪＮＫ'ｓ」とも称される）はまたｃ−ｊｕｎ転写因子の活性化およびｃ−ｊｕｎにより調節される遺伝子の発現に至るシグナル伝達経路における最後から２番目の工程に相当するタンパク質キナーゼファミリーである。特にｃ−ｊｕｎは遺伝毒性傷害により損傷を受けたＤＮＡの修復に関与するタンパク質をコードする遺伝子の転写に関与する。細胞におけるＳＡＰＫ活性を阻止する薬剤はＤＮＡ修復を妨げ、そしてＤＮＡ損傷を引き起こすことにより作用するこれらの癌治療方法に対する細胞の感受性を高める。
【００４０】
ＬｃｋはＴ細胞シグナリングにおいて役割を果たす。Ｌｃｋ遺伝子を欠くマウスは胸腺細胞を発達させる能力に乏しい。Ｔ細胞シグナリングの正のアクチベーターとしてのＬｃｋの機能は、Ｌｃｋ阻害剤がリウマチ性関節炎のような自己免疫疾患を処置するのに有用であり得ることを示唆している。
【００４１】
Ｆｅｓは骨髄造血細胞において強く発現され、そして骨髄性白血病における分化および生存の双方のシグナリング経路に関与している。ＣＳＫは癌、特に結腸直腸癌および乳癌に関与している。
【００４２】
前記にしたがって、本発明はさらにかかる処置を必要とする対象において前記したいずれかの疾患または障害を予防または処置するための方法を提供し、その方法は該対象に治療上有効な量（後記の「投与および医薬組成物」参照）の式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む。前記のいずれかの使用に関して、必要とされる用量は投与様式、処置される特定の症状および望ましい効果に依存して異なる。
【００４３】
投与および医薬組成物
一般に、本発明の化合物を当分野で公知のいずれかの有用なおよび許容される様式により、単一でまたは１つまたはそれより多い治療薬との組合せのいずれかで治療上有効量で投与する。治療上有効な量は疾患の重篤度、対象の年齢および相対的健康状態、用いる化合物の効力、およびその他の因子に依存して大きく異なる。一般に、約０.０３から２.５ｍｇ／ｋｇ体重の１日用量で全身的に満足できる結果が得られることが示されている。大型の哺乳動物、例えばヒトでの指示される１日用量は約０.５ｍｇから約１００ｍｇの範囲で、便宜的に例えば１日４回までの分割量で、または遅延形態で投与される。経口投与用の適当な単位投与形態は約１から５０ｍｇの活性成分を含む。
【００４４】
本発明の化合物を任意の慣用される経路により、特に経腸的に、例えば経口的に、例えば錠剤もしくはカプセルの形態で、または非経口的、例えば注射用溶液もしくは懸濁液の形態で、局所的に、例えばローション、ゲル、軟膏もしくはクリームの形態で、または鼻用もしくは坐剤形態で医薬組成物として投与することができる。少なくとも１つの薬学的に許容される担体または希釈剤に随伴された、遊離の形態または薬学的に許容される塩の形態の本発明の化合物を含む医薬組成物を、混合、顆粒化またはコーティング法により慣用される様式で製造することができる。例えば経口用組成物は、ａ）希釈剤、例えばラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン；ｂ）滑沢剤、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウムもしくはカルシウム塩および／またはポリエチレングリコール；錠剤用にはまたｃ）結合剤、例えばケイ酸マグネシウムアルミニウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン；所望によりｄ）崩壊剤、例えばデンプン、寒天、アルギン酸もしくはそのナトリウム塩、または発泡混合物；ならびに／またはｅ）吸収剤、着色剤、着香剤、および甘味剤と一緒に活性成分を含む錠剤またはゼラチンカプセルでよい。注射用組成物は等張水溶液または懸濁液でよく、そして坐剤を脂肪エマルジョンまたは懸濁液から調製することができる。組成物は滅菌され、そして／または保存剤、安定剤、湿潤剤もしくは乳化剤、溶解促進剤、浸透圧を調節するための塩および／もしくはバッファーのような添加剤を含有することができる。加えてこれらはまたその他の治療的に価値のある物質を含有することもできる。経皮適用のための適当な処方は有効量の本発明の化合物を担体と共に含む。担体は宿主の皮膚を経る通過を補助するための吸収可能な薬理学的に許容される溶媒を含むことができる。例えば経皮装置はバッキング材、化合物を場合によっては担体を伴って含有する貯蔵器、場合によっては制御されそして予め決定された速度で長時間にわたって宿主の皮膚に化合物を分配するための速度制御バリヤ、および装置を皮膚に固定するための手段を含む包帯の形態である。マトリックス経皮処方を用いることもできる。例えば皮膚および眼への、局所適用のための適当な処方は好ましくは当分野で周知の水溶液、軟膏、クリームまたはゲルである。このようなものは可溶化剤、安定剤、張度増強剤（tonicity enhancing agents）、バッファーおよび保存剤を含有してよい。
【００４５】
本発明の化合物を治療上有効な量で１つまたはそれより多い治療薬と組み合わせて（医薬用組み合わせ）投与することができる。例えばその他の免疫調節剤もしくは抗炎症性物質とで、例えばシクロスポリン、ラパマイシン、もしくはアスコマイシン、またはその免疫抑制類似体、例えばシクロスポリンＡ（ＣｓＡ）、シクロスポリンＧ、ＦＫ−５０６、ラパマイシン、もしくは同等な化合物、コルチコステロイド、シクロホスファミド、アザチオプリン、メソトレキセート、ブレキナール、レフルノミド、ミゾリビン、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチル、１５−デオキシスパガリン、免疫抑制抗体、特に白血球受容体のモノクローナル抗体、例えばＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２５、ＣＤ２８、Ｂ７、ＣＤ４５、ＣＤ５８もしくはそのリガンド、またはＣＴＬＡ４１ｇのようなその他の免疫調節化合物と組み合わせて用いたときに相乗効果を生じることができる。本発明の化合物をその他の治療と組み合わせて投与する場合、同時投与する化合物の用量はもちろん用いる併用薬（co-drug）の型、用いる特定の薬物、処置される症状等に依存して異なる。
【００４６】
本発明はまた医薬用組み合わせ、例えばａ）本明細書に開示するような、遊離形態または薬学的に許容される塩の形態の本発明の化合物である第１の薬剤およびｂ）少なくとも１つの併用薬を含むキットをも提供する。キットはその投与のための指示書を含むことができる。
【００４７】
「同時投与」もしくは「組み合わせ投与」なる用語または本明細書で利用されるような同様の用語は単一の患者に対して選択された治療薬の投与を包含することを意味し、そして薬剤が同一の投与経路により、または同時に投与される必要がない処置計画を含むことを意図する。
【００４８】
本明細書で用いる「医薬用組み合わせ」なる用語は１つ以上の活性成分の混合または組み合わせの結果である生成物を意味し、そして活性成分の一定のおよび不定の双方の組み合わせを含む。「固定の組み合わせ」なる用語は、活性成分、例えば式Ｉの化合物および併用薬を単一の物または投与形態で患者に同時に双方とも投与することを意味する。「不定の組み合わせ」なる用語は、活性成分、例えば式Ｉの化合物および併用薬を特定の時間的限定を伴わずに同時に、併用して、または逐次的のいずれかで別個の物として患者に双方とも投与することを意味し、ここでかかる投与により患者の体内では２つの化合物の治療的に有効なレベルが提供される。後者はまたカクテル療法、例えば３つまたはそれより多い活性成分の投与にも適用される。
【００４９】
本発明の化合物を作成するための方法
本発明はまた本発明の化合物の調製のための方法をも含む。記載する反応では、反応における好ましくない関与を避けるために最終生成物において望まれる場合、反応性の官能基、例えばヒドロキシ、アミノ、イミノ、チオまたはカルボキシ基を保護する必要があり得る。慣用される保護基を標準的な実践にしたがって用いることができ、例えばT.W. Greene and P. G. M. Wuts in 「Protective Groups in Organic Chemistry」, John Wiley and Sons, 1991を参照のこと。
【００５０】
以下の３つの反応スキームの各々で、Ｒ１０は水素として示される。Ｒ２が水素である式Ｉの化合物を以下の反応スキームＩのような手順により調製することができる：
反応スキームＩ
【化２】
【００５１】
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｙ、Ｚおよびｎは発明の要旨の式Ｉに関して定義されるとおりである。適当な酸（例えばＴＦＡ等）の存在下、式２の化合物を適当な酸化剤（例えばＮａＮＯ２等）と反応させることにより、式Ｉの化合物を調製することができる。反応を２０から４０℃で実施し、そして完了まで４時間かかり得る。
【００５２】
Ｒ２がＣ１−６アルキルである式Ｉの化合物を以下の反応スキームＩＩのような手順により調製することができる：
反応スキームＩＩ
【化３】
【００５３】
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｙ、Ｚおよびｎは発明の要旨の式Ｉに関して定義されるとおりである。
【００５４】
適当な溶媒（例えばＤＭＦ等）および適当な酸化剤（例えばＮａＨ等）の存在下、Ｒ２が水素である式Ｉの化合物をＲ２ＩまたはＲ２Ｂｒと反応させることにより、式Ｉの化合物を調製することができる。反応を０から２５℃で実施し、そして完了まで４時間かかり得る。
反応スキームＩＩＩ
【化４】
【００５５】
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｙ、Ｚおよびｎは発明の要旨の式Ｉに関して定義されるとおりである。
【００５６】
適当な溶媒（例えばジオキサン等）、適当な塩基（例えばリン酸カリウム、ｔｅｒｔ−ブタンオキシドカリウム等）、適当なリガンド（例えばXantphos、イミダゾリウムリガンド（実施例８参照）等）および適当な触媒（例えばＰｄ２（ｄｂａ）３、Ｐｄ（ＯＡｃ）２等）の存在下、式Ｉの化合物をＲ６ＮＨ２と反応させることにより式Ｉの化合物を調製することができる。反応を約８０から１２０℃で実施し、そして完了まで２４時間かかり得る。
【００５７】
式Ｉの化合物の合成の詳細な記載を後記の実施例において見出すことができる。
【００５８】
本発明の化合物を作成するための別の方法
化合物の遊離塩の形態を薬学的に許容される無機または有機酸と反応させることにより本発明の化合物を薬学的に許容される酸付加塩として調製することができる。これに代えて、化合物の遊離酸の形態を薬学的に許容される無機または有機塩基と反応させることにより、本発明の化合物の薬学的に許容される塩基付加塩を調製することができる。これに代えて、出発材料または中間物質の塩を用いて本発明の化合物の塩の形態を調製することができる。
【００５９】
本発明の化合物の遊離酸または遊離塩基を各々対応する塩基付加塩または酸付加塩の形態から調製することができる。例えば酸付加塩の形態の本発明の化合物を適当な塩基（例えば水酸化アンモニウム溶液、水酸化ナトリウム等）と処理することにより対応する遊離塩基に変換することができる。塩基付加塩の形態の本発明の化合物を適当な酸（例えば塩酸等）と処理することにより対応する遊離酸に変換することができる。
【００６０】
適当な不活性有機溶媒（例えばアセトニトリル、エタノール、水性ジオキサン等）中０から８０℃で還元剤（例えばイオウ、二酸化イオウ、トリフェニルホスフィン、ホウ化水素リチウム、ホウ化水素ナトリウム、三塩化、三臭化リン等）と処理することにより、本発明の化合物のＮ−オキシドから未酸化形態の本発明の化合物を調製することができる。
【００６１】
本発明の化合物のプロドラッグ誘導体を当業者に公知の方法により調製することができる（例えばさらに詳細な記載に関しては、Saulnier et al.,(1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985を参照）。例えば本発明の非誘導体化化合物を適当なカルバミル化剤（例えば１,１−アシルオキシアルキルカルバノクロリダート、炭酸パラニトロフェニル等）と反応させることにより適当なプロドラッグを調製することができる。
【００６２】
当業者に公知の手段により本発明の化合物の保護された誘導体を作成することができる。保護基の創成およびその除去に適用できる技術の詳細な記載をT. W. Greene,「Protecting Groups in Organic Chemistry」, 3rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999に見出すことができる。
【００６３】
本発明の化合物を溶媒和物（例えば水和物）として都合よく調製できるか、または本発明の方法の間に形成することができる。本発明の化合物の水和物をジオキシン、テトラヒドロフランまたはメタノールのような有機溶媒を用いて水性／有機溶媒混合物からの再結晶により都合よく調製できる。
【００６４】
化合物のラセミ混合物を光学的に活性な分割剤と反応させてジアステレオマー化合物の対を形成し、ジアステレオマーを分離し、そして光学的に純粋な鏡像異性体を回収することにより、本発明の化合物をその個々の立体異性体として調製することができる。本発明の化合物の共有結合性ジアステレオマー誘導体を用いて鏡像異性体の分割を実施することができるが、解離性複合体（例えば結晶性ジアステレオマー塩）が好ましい。ジアステレオマーは異なる物理学的特性（例えば融点、沸点、溶解性、反応性等）を有し、そしてこれらの相違点を利用することにより容易に分離することができる。クロマトグラフィーにより、または好ましくは溶解性の違いに基づく分離／分割技術によりジアステレオマーを分離することができる。次いでラセミ化に至らない任意の実用的な手段により分割剤と共に光学的に純粋な鏡像異性体を回収する。化合物の立体異性体をそのラセミ混合物から分割するのに適用できる技術のさらに詳細な記載をJean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, 「Enantiomers, Racemates and Resolutions」, John Wiley And Sons, Inc., 1981に見出すことができる。
【００６５】
要約すると、式Ｉの化合物を：
（ａ）反応スキームＩ、ＩＩまたはＩＩＩの方法；ならびに
（ｂ）場合によっては本発明の化合物を薬学的に許容される塩に変換すること；
（ｃ）場合によっては本発明の化合物の塩形態を塩でない形態に変換すること；
（ｄ）場合によっては本発明の化合物の未酸化形態を薬学的に許容されるＮ−オキシドに変換すること；
（ｅ）場合によっては本発明の化合物のＮ−オキシドをその未酸化形態に変換すること；
（ｆ）場合によっては本発明の化合物の個々の異性体を異性体の混合物から分割すること；
（ｇ）場合によっては本発明の非誘導体化化合物を薬学的に許容されるプロドラッグ誘導体に変換すること；および
（ｈ）場合によっては本発明の化合物のプロドラッグ誘導体をその非誘導体化形態に変換すること；
を伴う方法により作成することができる。
【００６６】
出発材料の生成の場合は特記しておらず、化合物は公知であるか、または当分野において公知の方法に類似して、もしくは本明細書後記の実施例に開示するように調製することができる。
【００６７】
前記の変換は本発明の化合物の調製のための方法の代表例にすぎず、そしてその他の周知の方法を同様に用いることができることは当業者には理解されよう。
【００６８】
実施例
限定するものではないが、本発明にしたがって式Ｉの化合物（実施例）および中間物質（参照）の調製を説明する以下の実施例により本発明をさらに例示する。
【００６９】
実施例１
Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−フェニル]−４−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ベンズアミド
【化５】
工程Ａ：２,６−ジクロロ−３−ニトロフェニル−アセトニトリルの調製
【化６】
【００７０】
ジクロロメタン（５０ｍｌ）およびＨ２ＳＯ４（４０ｍｌ）中２,６−ジクロロ−フェニル−アセトニトリル（１５.０ｇ、８０.６２ミリモル）の溶液に０℃でＨ２ＳＯ４（１４ｍｌ）およびＨＮＯ３（５.５ｍｌ）の混合物を（ゆっくりと）加える。反応混合物を０℃で２０分間攪拌し、半時間で室温まで加温し、そして次に濃縮して有機溶媒を除去する。溶液を氷水（４００ｍｌ）の入ったビーカーに注いで結晶性の沈殿が得られ、これを真空濾過により収集し、そして水で洗浄して生成物が得られる（２０.４４ｇ、８２.４％）。
【００７１】
工程Ｂ：３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−[１,６]ナフチリジン−２−イルアミンの調製
【化７】
【００７２】
ＥｔＯＨ（２.０ｍｌ）中２,６−ジクロロ−３−ニトロフェニル−アセトニトリル（１.０２ｇ、４.４２ミリモル）、４−アミノ−ピリジン−３−カルバルデヒド（０.４ｇ、３.２８ミリモル）およびＮａＯＨ（５２ｍｇ、１.３１ミリモル）の溶液を１０５℃まで２４時間加熱する。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３および塩類溶液で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られる。ＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（２Ｎ ＮＨ３）（１００／６）のグラジエントで溶出するフラッシュシリカゲルカラム精製により固体の標題中間物質が得られる（２５７ｍｇ、２３.４％）.
【００７３】
工程Ｃ：３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オンの調製
【化８】
【００７４】
ＴＦＡ（３.０ｍｌ）中３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−[１,６]ナフチリジン−２−イルアミン（５０ｍｇ、０.１４９ミリモル）の溶液に０℃でＮａＮＯ２をゆっくりと加える。反応混合物を０℃で１５分間攪拌し、室温まで加温し、そして３時間攪拌する。溶液を氷水（５０ｍｌ）およびＮａＣＯ３の入ったビーカーに注ぎ、次いでＥｔＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で抽出し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３および塩類溶液で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して固体の標題中間物質が得られる（５０ｍｇ、１００％）。
【００７５】
３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オンの調製の別法：
【００７６】
工程Ａ'：（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−酢酸の調製
【化９】
【００７７】
水（１００ｍｌ）およびＨ２ＳＯ４（濃１００ｍｌ）中２,６−ジクロロ−３−ニトロフェニル−アセトニトリル（１５.０ｇ、６４.９４ミリモル）の溶液を１２０℃まで３時間加熱する。反応混合物を室温まで冷却し、そして氷水（２５０ｍｌ）の入ったビーカーに注いで結晶性の沈殿が得られ、これを真空濾過により収集し、そして水で洗浄して生成物が得られる（１６.０ｇ、９８.６％）。
【００７８】
工程Ｂ'：２−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−Ｎ−（３−ホルミル−ピリジン−４−イル）−アセトアミドの調製
【化１０】
【００７９】
塩化チオニル（６０ｍｌ）中（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−酢酸（１５.０ｇ、６０.０ミリモル）の溶液を１時間還流する。濃縮により溶媒を除去し；乾燥トルエンを加え、そして濃縮して塩化チオニルを完全に除去する。乾燥ジクロロメタン（２００ｍｌ）中酸塩化物の溶液にジクロロメタン（５０ｍｌ）およびＤＩＥＤＡ（１０.７ｍｌ、６０ミリモル）中４−アミノ−ピリジン−３−カルバルデヒド（６.６ｇ、５４ミリモル）の溶液を加える（滴加する）。混合物を室温で２時間おく。反応混合物をＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）で希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３および塩類溶液で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られる。ジクロロメタン／ヘキサンでの再結晶により固体の標題化合物（１８.２ｇ、９５.２％）に至る。
【００８０】
工程Ｃ'：３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オンの調製
【００８１】
ＭｅＯＨ（３００ｍｌ）中２−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−Ｎ−（３−ホルミル−ピリジン−４−イル）−アセトアミド（５.０ｇ、１４.１２ミリモル）およびＮａ２ＣＯ３（２.５ｇ）の溶液を７０℃で１５分間加熱する。反応混合物を濾過した後、濃縮により溶媒を除去して、粗製生成物が得られ、これをＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（２Ｎ ＮＨ３）（９３／７％）のグラジエントでのフラッシュシリカゲルカラム溶出により精製して固体の標題中間物質（３.７５ｇ、７７.７％）が得られる。
【００８２】
工程Ｄ：３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オンの調製
【化１１】
【００８３】
ＤＭＦ（５０ｍｌ）中３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オン（２.０ｇ、５.９５ミリモル）の溶液にＨＮａ（２８６ｍｇ、６０％、７.１４ミリモル）およびＩＭｅ（０.５ｍｌ、８.０３ミリモル）を０℃で加える。混合物を０℃で２時間攪拌し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）で希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（２Ｎ ＮＨ３）（９８.５／１.５）のグラジエントでのフラッシュシリカゲルカラム溶出により精製して固体の標題中間物質（１.６７ｇ、８０.３％）が得られる。
【００８４】
工程Ｅ：３−（３−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オンの調製
【化１２】
【００８５】
ＥｔＯＨ（１２ｍｌ）中３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オン（１.５５ｇ、４.４２７ミリモル）の懸濁溶液にＨＣｌ（濃１６ｍｌ）中Ｓｎ（ＩＩ）Ｃｌ２（３.８０ｇ、１９.９２ミリモル）の溶液を７５℃で加える。７５℃で３０分間攪拌した後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そしてＫ２ＣＯ３でｐＨ８まで中和する。有機層を飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液で洗浄し、そして乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られる。粗製生成物をＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ／ヘキサンでの再結晶により精製して固体の標題中間物質（１.３２ｇ、９３.１５％）が得られる。
【００８６】
工程Ｆ：４−クロロメチル−Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−フェニル]−ベンズアミドの調製
【化１３】
【００８７】
ジクロロメタン（７ｍｌ）中３−（３−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−[１,６]−ナフチリジン−２−オン（３０ｍｇ、０.０９３７ミリモル）の溶液に塩化４−（クロロメチル）ベンゾイル（５３.２ｍｇ、０.２８ミリモル）を加える。混合物を室温で２４時間攪拌した後、ＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（ＮＨ３、２Ｎ）（９５／５％）のグラジエントでのフラッシュシリカゲルカラム溶出により精製して固体の標題中間物質（３２.４ｍｇ、７３.１％）が得られる。
【００８８】
工程Ｇ：Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−フェニル]−４−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ベンズアミドの調製
【化１４】
【００８９】
ＤＭＦ（２.５ｍｌ）中４−クロロメチル−Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−フェニル]−ベンズアミド（２５ｍｇ、０.０５２９ミリモル）の溶液にＣｓＣＯ３（５１.７ｍｇ、０.１５８７ミリモル）および（５３.２ｍｇ、０.２８ミリモル）を加える。混合物を室温で３０分間攪拌した後、ＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３および塩類溶液で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（ＮＨ３、２Ｎ）（９８／８）のグラジエントでのフラッシュシリカゲルカラム溶出により精製して、固体のＮ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−フェニル]−４−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ベンズアミド（２１ｍｇ、７３.９％）が得られる：1H NMR 400 MHz(CDCl3)δ 8.86(s, 1H), 8.69(s, 1H), 8.63(d, 1H), 8.44(s, 1H), 7.84-7.86(m, 2H), 7.77(s, 1H), 7.46-7.52(m, 3H), 7.29(d, 1H), 3.78(s, 3H), 3.58(s, 2H), 2.50(m, 8H), 2.30(s, 3H); MS m/z 537.2(M + 1).
【００９０】
実施例２
Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンゼンスルホンアミド
【化１５】
３−（３−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オン（３５ｍｇ、０.１０９３ミリモル）を乾燥ＴＨＦ（２ｍｌ）に溶解する。塩化４−トリフルオロメチルベンゼンスルホニル（２６.７４ｍｇ、０.１０９３ミリモル）およびピリジン（１２.９５ｍｇ、０.１６４０ミリモル）を加える。反応物を２時間還流し、酢酸エチル（１５０ｍｌ）で希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３および塩類溶液で洗浄する。ＭｇＳＯ４を用いて有機相を乾燥させ、そして粗製生成物をシリカゲルカラムのカラムクロマトグラフィーにより精製し、そして０−４％メタノール／塩化メチレングラジエントで溶出して白色固体のＮ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンゼンスルホンアミド（２０.６ｍｇ）が得られる：1H NMR (CD3OD): δ3.70(s, 3H), 7.44(d, 1H), 7.53(d, 1H), 7.63(t, 1h), 7.82(m, 3H), 7.91(s, 1H), 7.98(s, 1H), 8.62(d, 1H), 9.03(s, 1H); MS m/z 528.1(M + 1).
【００９１】
実施例３
Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−キノリン−３−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化１６】
工程Ａ：２−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−Ｎ−（２−ホルミル−フェニル）−アセトアミドの調製
【化１７】
【００９２】
塩化チオニル（１５ｍｌ）中（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−酢酸（０.９０ｇ、３.３５ミリモル）の溶液を１時間還流する。濃縮により溶媒を除去し、そして乾燥トルエンを加えて塩化チオニルを完全に除去する。乾燥ジクロロメタン（３０ｍｌ）中酸塩化物の溶液にジクロロメタン（５.０ｍｌ）中２−アミノベンズアルデヒド（０.３６５ｇ、３.０２ミリモル）の溶液を加える（滴加する）。混合物を室温で２時間攪拌する。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３および塩類溶液で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物（０.９４ｇ、８８.６％）が得られる。
【００９３】
工程Ｂ：３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−キノリン−２−オンの調製
【化１８】
【００９４】
ＭｅＯＨ（１５０ｍｌ）中２−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−Ｎ−（２−ホルミル−フェニル）−アセトアミド（０.７ｇ、１.９９ミリモル）およびＮａ２ＣＯ３（１.０ｇ）の溶液を７０℃で３０分間加熱する。反応混合物を濾過した後、濃縮により溶媒を除去して粗製生成物が得られる。フラッシュシリカゲルカラムによりＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（２Ｎ ＮＨ３）（９７／３％）のグラジエントで溶出して粗製生成物を精製して、固体の標題中間物質（０.２８８ｇ、４１.３％）が得られる。
【００９５】
工程Ｃ：３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−キノリン−２−オンの調製
【化１９】
【００９６】
ＤＭＦ（５.０ｍｌ）中３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−キノリン−２−オン（０.２１ｇ、０.６２６６ミリモル）の溶液にＨＮａ（３０.１ｍｇ、６０％、０.７５２ミリモル）およびＩＭｅ（１２０.１ｍｇ、０.８４６ミリモル）を０℃で加える。混合物を０℃で２時間攪拌した後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをフラッシュシリカゲルカラムにより、ＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（２Ｎ ＮＨ３）（９５／５）のグラジエントで溶出して精製して固体の標題中間物質（７８ｍｇ、３５.８％）が得られる。
【００９７】
工程Ｄ：３−（３−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−キノリン−２−オンの調製
【化２０】
【００９８】
ＥｔＯＨ（３.０ｍｌ）中３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−キノリン−２−オン（５０ｍｇ、０.１４３ミリモル）の懸濁溶液に濃縮ＨＣｌ（２.０ｍｌ）中Ｓｎ（ＩＩ）Ｃｌ２（１２２ｍｇ、０.６４４ミリモル）の溶液を７５℃で加える。混合物を７５℃で３０分間攪拌した後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そしてｐＨが８に達するまでＫ２ＣＯ３で中和する。有機層を飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液で洗浄し、そして乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物（４４.２ｍｇ、９６.７％）が得られる。
【００９９】
工程Ｅ：Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−キノリン−３−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化２１】
【０１００】
ジクロロメタン（５.０ｍｌ）中３−（３−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−キノリン−２−オン（３０ｍｇ、０.０９４ミリモル）の溶液に塩化４−（クロロメチル）ベンゾイル（５８.７ｍｇ、０.２８３ミリモル）を加える。混合物を室温で２４時間攪拌した後、ＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（ＮＨ３、２Ｎ）（９５／５）のグラジエントでのフラッシュシリカゲルカラム溶出により精製して、固体のＮ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−キノリン−３−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（３４.５ｍｇ、７５.０％）が得られる：1H NMR 400 MHz(CDCl3)δ 8.53(d, 1H), 8.47(s, 1H), 8.20(s, 1H), 8.05(d, 1H), 7.84(d, 1H), 7.72(s, 1H), 7.61-7.69(m, 3H), 7.51(d, 1H), 7.46(d, 1H), 7.30(m, 1H), 3.83(s, 3H); MS m/z 491.20(M + 1).
【０１０１】
実施例４
Ｎ−[３,５−ジクロロ−４−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化２２】
【０１０２】
ＤＭＳＯ（４００ｍｌ）中３,５−ジクロロニトロベンゼン（５０.００ｇ、２６０.６ミリモル）およびメチルチオアセトニトリル（２２.７１ｇ、２６０.６ミリモル）の溶液にＮａＯＨ（２０.８４ｇ、５２１.２ミリモル）を０℃で加える。室温でＮ２下、２４時間攪拌して、反応混合物を室温まで加温する。反応物を氷水で希釈し、そして３Ｎ ＨＣｌによりｐＨ１まで酸性にする。混合物を酢酸エチル（３×５００ｍｌ）により抽出し、Ｈ２Ｏにより洗浄し、ＭｇＳＯ４により乾燥させ、そして濃縮して黒色の油状物が得られる。油状物をシリカゲルカラムのカラムクロマトグラフィーにより０−１０％ 酢酸エチル／ヘキサングラジエントで溶出して精製して黄色固体の２,６−ジクロロ−４−ニトロベンジルニトリル（１１.００ｇ）が得られる。
【０１０３】
濃縮Ｈ２ＳＯ４（４５ｍｌ）およびＨ２Ｏ（５０ｍｌ）中２,６−ジクロロ−４−ニトロベンジルニトリル（１０.８６ｇ、４７.０ミリモル）の攪拌懸濁液を１５０℃で２.５時間加熱する。次いで反応混合物を水（３００ｍｌ）に注ぐ。沈殿物を濾過により収集して白色固体の２,６−ジクロロ−４−ニトロベンジル−カルボン酸（１０.４１ｇ）が得られる。
【０１０４】
２,６−ジクロロ−４−ニトロベンジル−カルボン酸（３.００ｇ、１１.９８ミリモル）を塩化チオニル（１２ｍｌ）に懸濁する。懸濁液を８０℃まで加熱し、そして３０分間還流する。乾燥トルエンを添加することにより過剰の塩化チオニルを完全に蒸発させる。残留物を乾燥塩化メチレン（５０ｍｌ）に溶解し、そして次に乾燥塩化メチレン（５ｍｌ）およびトリエチルアミン（２.９１ｇ、２８.７６ミリモル）中４−アミノ−３−ピリジルカルボキシアルデヒド（１.７６ｇ、１４.３８ミリモル）の溶液に加える。室温で２時間攪拌した後、反応混合物を酢酸エチル（５００ｍｌ）により希釈し、飽和Ｋ２ＣＯ３溶液および塩類溶液で洗浄する。有機相をＭｇＳＯ４により乾燥させ、そして粗製生成物をシリカゲルカラムのカラムクロマトグラフィーにより０−４％ メタノール／塩化メチレングラジエントで溶出して精製し、白色固体の２−（２,６−ジクロロ−４−ニトロ−フェニル）−Ｎ−（３−ホルミル−ピリジン−４−イル）−アセトアミド（３.００ｇ）が得られる。
【０１０５】
２−（２,６−ジクロロ−４−ニトロ−フェニル）−Ｎ−（３−ホルミル−ピリジン−４−イル）−アセトアミド（３.０ｇ、８.４７ミリモル）を乾燥メタノール（２４０ｍｌ）に溶解する。Ｎａ２ＣＯ３（１.８０ｇ、１６.９４ミリモル）を加える。反応物を３０分間還流し、酢酸エチル（２１０ｍｌ）により希釈し、そして濾過する。溶媒を蒸発させて粗製生成物が得られ、これを酢酸エチル／ヘキサンにより再結晶してわずかに黄色の固体の３−（２,６−ジクロロ−４−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オン（３.０７ｇ）が得られる。
【０１０６】
３−（２,６−ジクロロ−４−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−[１,６]−ナフチリジン−２−オン（１.５０ｇ、４.４６ミリモル）を乾燥ＤＭＦ（６０ｍｌ）に溶解し、そして０℃まで冷却する。０℃で１.５時間攪拌しながらＮａＨ（０.２０ｇ、鉱物油中６０％、４.９１ミリモル）およびヨードメタン（０.７６ｇ、５.３５ミリモル）を加える。溶媒を蒸発により除去し、残留物を酢酸エチル（３００ｍｌ）に溶解し、飽和Ｋ２ＣＯ３および塩類溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、そして濃縮して粗製生成物（１.３０ｇ）が得られ、これをさらに精製することなく直接次の工程で使用した。
【０１０７】
最後の工程の粗製物（４３７ｍｇ）を無水エタノール（４５ｍｌ）に懸濁する。濃縮ＨＣｌ（６ｍｌ）に溶解したＳｎＣｌ２（９４６ｍｇ、４.９９ミリモル）を懸濁液に加える。反応物を７５℃まで加熱し、そして３０分間還流する。反応物を酢酸エチル（２００ｍｌ）により希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３および塩類溶液で洗浄する。有機相をＭｇＳＯ４により乾燥させ、そして粗製生成物をシリカゲルカラムのカラムクロマトグラフィーにより０−４％ ２.０Ｎ アンモニアメタノール溶液／塩化メチレングラジエントで溶出して精製し、黄色固体の３−（４−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オン（２６５ｍｇ）が得られる。
【０１０８】
乾燥塩化メチレン（１２ｍｌ）中３−（４−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オン（３０ｍｇ、０.０９３７ミリモル）の溶液に塩化３−トリフルオロメチルベンゾイル（３９.０８ｍｇ、０.１８７４ミリモル）を加える。反応物を室温で２時間攪拌し続ける。反応物を酢酸エチル（１００ｍｌ）により希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３および塩類溶液で洗浄する。有機相をＭｇＳＯ４により乾燥させ、そして粗製生成物をシリカゲルカラムのカラムクロマトグラフィーにより０−４％ メタノール／塩化メチレングラジエントで溶出して精製し、白色固体のＮ−[３,５−ジクロロ−４−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（４２ｍｇ）が得られる。1H NMR 400 MHz(CD3OD): δ3.80(s, 3H), 7.62(d, 1H), 7.76(t, 1H), 7.92(d, 1H), 8.01(s, 2H), 8.06(s, 1H), 8.23(d, 1H), 8.30(s, 1H), 8.64(d, 1H), 8.92(s, 1H). MS m/z 492.2(M + 1).
【０１０９】
実施例５
Ｎ−[４−クロロ−３−（２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化２３】
ジクロロメタン（１５０ｍｌ）中２−クロロ−５−ニトロ−フェニル酢酸（３.０８ｇ、１４.２８ミリモル）の溶液に塩化オキサリル（６.２ｍｌ、７１.００ミリモル）を加え、そして混合物を１時間還流する。室温まで冷却した後、これを濃縮し、そして残留物を無水トルエン（２×３０ｍｌ）と同時蒸発させる。次いでこの残留物をジクロロメタン（６０ｍｌ）に溶解し、そしてジクロロメタン（３０ｍｌ）中４−アミノ−ピリジン−３−カルバルデヒド（１.７４４ｇ、１４.２８ミリモル）の溶液を加える。この混合物を２０分間攪拌した後、Ｎ,Ｎ'−ジイソプロピルエチルアミン（２.５６ｍｌ、１４.２８ミリモル）を加える。攪拌をさらに２時間続けた後、ジクロロメタン（５００ｍｌ）で希釈する。混合物を水（１００ｍｌ）、塩類溶液（１００ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮する。この粗製生成物をさらに精製することなく使用する。
【０１１０】
メタノール（５０ｍｌ）中前記の粗製生成物および炭酸ナトリウム（３.０ｇ、２８.３ミリモル）を３０分間還流する。濾過により固体を除去し、そして濾液を濃縮する。残留物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）に溶解し、水（２×５０ｍｌ）で洗浄し、有機相を分離し、そして濃縮する。結晶化の後、最終生成物（２.７８ｇ）が得られる。
【０１１１】
３−（２−クロロ−５−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−[１,６]−ナフチリジン−２−オン（０.９６ｇ、３.１８ミリモル）をエタノール（１５ｍｌ）に懸濁する。ＳｎＣｌ２（２.７１ｇ、１４.３ミリモル）およびＨＣｌ（２０ｍｌ）を加え、そして混合物を２時間還流した後、室温まで冷却する。ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を加え、そして炭酸ナトリウムの添加により混合物を中和する。ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍｌ）で抽出し、合わせた有機物を塩類溶液（５０ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、淡黄色固体の最終生成物（０.６２ｇ、７１.７％）が得られる。
【０１１２】
無水ＴＨＦ（２.５ｍｌ）中３−（５−アミノ−２−クロロ−フェニル）−１Ｈ−[１,６]−ナフチリジン−２−オン（６０ｍｇ、０.２３ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（８２μｌ、０.４６ミリモル）の溶液に塩化３−トリフルオロメチル−ベンゾイル（４４μｌ）の溶液を加える。この混合物を室温で３０分間攪拌し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で希釈し、水（１０ｍｌ）および塩類溶液（１０ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、そして調製用ＨＰＬＣにより精製してＮ−[４−クロロ−３−（２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−フェニル]−３−トリフルオロ−メチル−ベンズアミド（１８.３ｍｇ）が得られる。
【０１１３】
実施例６
Ｎ−（２,４−ジクロロ−３−{２−[３−（１−ヒドロキシ−エチル）−フェニルアミノ]−８−メチル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル}−フェニル）−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化２４】
工程Ａ：４−アミノ−２−メチルスルファニル−ピリミジン−５−カルバルデヒドの調製
【化２５】
【０１１４】
ＴＨＦ（１００ｍｌ）中４−アミノ−２−（メチルチオ）ピリミジン−５−カルボニトリル（３.０ｇ、１８.０５ミリモル）の溶液に水素化ジイソブチルアルミニウム（４１.５２ｍｌ、ＣＨ２Ｃｌ２中１.０Ｍ、４１.５２ミリモル）を０℃で加える。混合物を０℃で２.５時間攪拌した後、塩酸（２Ｎ、３０ｍｌ）を加え、そして２０分間攪拌を続ける。ｐＨ８に達するまで反応混合物に飽和Ｎａ２ＣＯ３を加える。懸濁した材料をセライトパッドを通して濾過し、そしてＫ２ＣＯ３溶液で洗浄する。溶液をＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液で洗浄し、そして乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをフラッシュシリカゲルカラムによりヘキサン（１００％）からヘキサン／エーテル（６０／４０％）のグラジエントで溶出して精製し、固体の標題中間物質（１.６２ｇ、５３.１％）が得られる。
【０１１５】
工程Ｂ：６−（３−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−２−メチルスルファニル−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−７−イルアミンの調製
【化２６】
【０１１６】
ＤＭＦ（２０ｍｌ）中４−アミノ−２−メチルスルファニル−ピリミジン−５−カルバルデヒド（２.０ｇ、１１.８２ミリモル）、（３−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−アセトニトリル（２.８５ｇ、１４.１８ミリモル）およびＫ２ＣＯ３（４.９ｇ、３５.４９ミリモル）の混合物を１１０℃まで３０時間加熱する。溶液を室温まで冷却し、そして濾紙により固体を除去し、そして濃縮して粗製生成物が得られる。ＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（２Ｎ ＮＨ３）（１００／７％）のグラジエントで溶出するフラッシュシリカゲルカラム精製により固体の標題中間物質（３.３１ｇ、８０.０％）が得られる。
【０１１７】
工程Ｃ：Ｎ−[３−（７−アミノ−２−メチルスルファニル−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−２,４−ジクロロ−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化２７】
【０１１８】
ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍｌ）中６−（３−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−２−メチルスルファニル−ピリド[２,３−ｄ]−ピリミジン−７−イルアミン（０.５ｇ、１.４２ミリモル）の溶液に塩化３−（トリフルオロメチル）ベンゾイル（１.０７ｍｌ、７.１ミリモル）を加える。混合物を室温で２４時間攪拌した後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをフラッシュシリカゲルカラムにより、ＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（ＮＨ３、２Ｎ）（９５／５％）のグラジエントで溶出して精製して固体の標題中間物質（０.５９１ｇ、７９.４％）が得られる。
【０１１９】
工程Ｄ：Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（２−メチルスルファニル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化２８】
【０１２０】
ＴＦＡ（１５ｍｌ）中Ｎ−[３−（７−アミノ−２−メチルスルファニル−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−２,４−ジクロロ−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（１.７ｇ、３.２４ミリモル）の溶液にＮａＮＯ２（７８３ｍｇ、１１.３５ミリモル）を０℃で２０分間攪拌しながらゆっくりと加える。溶媒を蒸発させ、そしてＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られる。粗製生成物をフラッシュシリカゲルカラムにより、ＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（ＮＨ３、２Ｎ）（９３／７％）のグラジエントで溶出して精製し、固体の標題中間物質（１.６４ｇ、９６.５％）が得られる。
【０１２１】
工程Ｅ：Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（８−メチル−２−メチルスルファニル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化２９】
【０１２２】
ＤＭＦ（３５ｍｌ）中Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（２−メチルスルファニル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（１.１４ｇ、２.１７ミリモル）の溶液にＮａＨ（１１７.２ｍｇ、６０％、２.９３ミリモル）を０℃で３０分間攪拌しながらゆっくりと加える。前記の溶液にヨードメタン（３６９ｍｇ、２.６０ミリモル）を０℃で４０分間攪拌しながら加える。溶媒を蒸発させ、そしてＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをフラッシュシリカゲルカラムにより、ＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（ＮＨ３、２Ｎ）（９３／７）のグラジエントで溶出して精製し、固体の標題中間物質（１.１４ｇ、９８.０％）が得られる。
【０１２３】
工程Ｆ：Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（２−メタンスルホニル−８−メチル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化３０】
【０１２４】
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）中Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（８−メチル−２−メチルスルファニル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（１.１ｇ、２.０４ミリモル）およびＭＣＰＢＡ（９８３ｍｇ、６０％、４.３８ミリモル）の溶液を室温で１時間攪拌する。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをフラッシュシリカゲルカラムにより、ヘキサン（１００％）からヘキサン／ＥｔＯＡｃ（６５／３５）のグラジエントで溶出して精製し、固体の標題中間物質（４７２ｍｇ、４０.７％）が得られる。
【０１２５】
工程Ｇ：Ｎ−（２,４−ジクロロ−３−{２−[３−（１−ヒドロキシ−エチル）−フェニルアミノ]−８−メチル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル}−フェニル）−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化３１】
【０１２６】
Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（２−メタンスルホニル−８−メチル−７−オキソ−７,８−ジヒドロピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（２０ｍｇ、０.０３５ミリモル）および３−（１−ヒドロキシエチル）−アニリン（５０ｍｇ、０.３６４ミリモル）の混合物を１２０℃で１０分間加熱する。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これを調製用ＨＰＬＣにより精製して白色固体のＮ−（２,４−ジクロロ−３−{２−[３−（１−ヒドロキシ−エチル）−フェニルアミノ]−８−メチル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル}−フェニル）−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（１７.９ｍｇ、８１.４％）が得られる。1H NMR (CD3OD): δ 10.50(s, 1H), 8.57(d, 1H), 8.52(s, 1H), 8.41(s, 1H), 8.19(s, 1H), 8.06(d, 1H), 7.92(s, 1H), 7.86(d, 1H), 7.68(t, 1H), 7.59(d, 1H), 7.56(s, 1H), 7.52(d, 1H), 7.41(t, 1H), 7.21(s, 1H), 7.20(d, 1H), 4.98(q, 1H), 3.83(s, 3H), 1.54(d, 2H); MS m/z 629.10(M + 1).
【０１２７】
実施例７
Ｎ−{３−[２−（３−アミノ−フェニルアミノ）−８−メチル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル]−４−クロロ−フェニル}−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化３２】
工程Ａ：（２−クロロ−５−ニトロ−フェニル）−アセトニトリルの調製
【化３３】
【０１２８】
ジクロロメタン（５０ｍｌ）およびＨ２ＳＯ４（４０ｍｌ）中２−クロロ−フェニル−アセトニトリル（１５.０ｇ、９９.０ミリモル）の溶液にＨ２ＳＯ４（１４ｍｌ）およびＨＮＯ３（５.５ｍｌ）の混合物を０℃でゆっくりと加える。反応混合物を０℃で２０分間攪拌し、室温まで３０分間加温し、そして次に濃縮して有機溶媒を除去する。溶液を氷水（４００ｍｌ）の入ったビーカーに注いで結晶性の沈殿が得られ、これを真空濾過により収集し、そして水で洗浄して標題中間物質（１３.４ｇ、６９.０％）が得られる。
【０１２９】
工程Ｂ：（５−アミノ−２−クロロ−フェニル）−アセトニトリルの調製
【化３４】
【０１３０】
ＥｔＯＨ（１０ｍｌ）中（２−クロロ−５−ニトロ−フェニル）−アセトニトリル（４.０ｇ、２０.０ミリモル）の懸濁溶液に濃縮ＨＣｌ（１４ｍｌ）中Ｓｎ（ＩＩ）Ｃｌ２（１５.３６ｇ、８１.０ミリモル）の溶液を７５℃で加える。混合物を７５℃で３０分間攪拌した後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そしてｐＨ８に達するまでＫ２ＣＯ３で中和する。有機層を飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液で洗浄し、そして乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ／ヘキサンでの再結晶により精製して固体の標題中間物質（３.０４ｇ、８９.７％）が得られる。
【０１３１】
工程Ｃ：６−（５−アミノ−２−クロロ−フェニル）−２−メチルスルファニルピリド[２,３ｄ]ピリミジン−７−イルアミンの調製
【化３５】
【０１３２】
ＤＭＦ（２０ｍｌ）中４−アミノ−２−メチルスルファニル−ピリミジン−５−カルバルデヒド（１.８ｇ、１０.６４ミリモル）、（５−アミノ−２−クロロ−フェニル）−アセトニトリル（２.３ｇ、１３.８３ミリモル）およびＫ２ＣＯ３（４.４１ｇ、３１.９２ミリモル）の溶液を１１０℃で３６時間加熱する。溶液を室温まで冷却し、そして固体を濾紙により除去する。次いで混合物を濃縮して粗製生成物が得られる。ＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（２Ｎ ＮＨ３）（９７／３％）のグラジエントでのフラッシュシリカゲルカラム精製溶出により固体の標題中間物質（１.２４ｇ、３６.７％）が得られる。
【０１３３】
工程Ｄ：Ｎ−[３−（７−アミノ−２−メチルスルファニル−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−４−クロロ−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化３６】
【０１３４】
ＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍｌ）中６−（５−アミノ−２−クロロ−フェニル）−２−メチルスルファニルピリド[２,３ｄ]−ピリミジン−７−イルアミン（０.６５ｇ、２.０４６ミリモル）の溶液に塩化３−（トリフルオロメチル）ベンゾイル（２.１３ｇ、１０.２３ミリモル）を加える。混合物を室温で２４時間攪拌した後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して固体の粗製生成物（１.０ｇ、〜１００％）が得られる。
【０１３５】
工程Ｅ：Ｎ−[４−クロロ−３−（２−メチルスルファニル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化３７】
【０１３６】
ＴＦＡ（１０ｍｌ）中Ｎ−[３−（７−アミノ−２−メチルスルファニル−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−４−クロロ−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（１.０ｇ、２.０４ミリモル）の溶液にＮａＮＯ２（４２３ｍｇ、６.１２ミリモル）を０℃で２０分間攪拌しながらゆっくりと加える。溶媒を蒸発させ、ＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをフラッシュシリカゲルカラムにより、ＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（ＮＨ３、２Ｎ）（９３／７％）のグラジエントで溶出して精製し、固体の標題中間物質（０.６４４ｇ、６４.４％）が得られる。
【０１３７】
工程Ｆ：Ｎ−[４−ジクロロ−３−（８−メチル−２−メチルスルファニル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化３８】
【０１３８】
ＤＭＦ（３５ｍｌ）中Ｎ−[４−ジクロロ−３−（２−メチルスルファニル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（３７０ｍｇ、０.７５ミリモル）の溶液にＮａＨ（４０.７ｍｇ、６０％、１.０２ミリモル）を０℃で３０分間攪拌しながらゆっくりと加える。ヨードメタン（１３３.７ｍｇ、０.９４ミリモル）を前記の溶液に加え、０℃で４０分間攪拌する。溶媒を蒸発させ、そしてＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをさらに精製することなく次の反応で使用する。
【０１３９】
工程Ｇ：Ｎ−[４−ジクロロ−３−（２−メタンスルホニル−８−メチル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化３９】
【０１４０】
ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍｌ）中Ｎ−[４−ジクロロ−３−（８−メチル−２−メチルスルファニル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（３８０ｍｇ、０.７５ミリモル）およびＭＣＰＢＡ（３８６ｍｇ、６０％、１.７２ミリモル）の溶液を室温で１時間攪拌する。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをフラッシュシリカゲルカラムにより、ヘキサン（１００％）からヘキサン／ＥｔＯＡｃ（６５／３５％）のグラジエントで溶出して精製し、固体の標題中間物質（１２６ｍｇ、３１.１％）が得られる。
【０１４１】
工程Ｈ：Ｎ−{３−[２−（３−アミノ−フェニルアミノ）−８−メチル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル]−４−クロロ−フェニル}−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【０１４２】
３−アミノアニリン（１２１.１ｍｇ、１.１２ミリモル）を１１０℃まで加熱する。融解したとき、Ｎ−[４−クロロ−３−（２−メタンスルホニル−８−メチル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド３４（１５ｍｇ、０.０２８ミリモル）を加える。反応物を１１０℃で２５分間攪拌する。反応物をＭｅＯＨ（１ｍｌ）で希釈し、そして調製用ＨＰＬＣにより精製して黄色固体の最終生成物が得られる：1H NMR (CDCl3): δ3.64(s, 3H), 6.66(d, 1H), 7.17(t, 1H), 7.28(d, 1H), 7.42(m, 2H), 7.48(t, 1H), 7.50(dd, 1H), 7.57(s, 1H), 7.63(m, 2H), 7.97(d, 1H), 8.07(s, 1H), 8.49(s, 1H); MS m/z 565.0(M + 1).
【０１４３】
実施例８
Ｎ−{３−[７−（６−メトキシ−ピリジン−３−イルアミノ）−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル]−４−メチル−フェニル}−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化４０】
【化４１】
【０１４４】
前記の反応スキームに関して、Ｒ６ＮＨ２は６−メトキシ−ピリジン−３−イルアミンである。１００ｍｌフラスコ中１,３−アセトンジカルボン酸ジエチル（１０.１１ｇ、５０ミリモル）をオルトギ酸トリエチル（８.１４ｇ、５５ミリモル）および無水酢酸（１０.２０ｇ、１００ミリモル）と混合し、そして１２０℃まで１.５時間加熱する。粗製生成物をほぼ９０−１００℃で真空下（１５０−２００ｍｍＨｇ）蒸留し、淡黄色油状の溶液がコンデンサーに集まる。残った残留物を氷中で冷却し、そして３０％ アンモニア（４ｍｌ）と混合する。氷浴中で１時間反応を持続させ、そして次に２Ｎ ＨＣｌでｐＨ＜５まで酸性にする。真空下で溶媒を除去する。粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによりＥＡ／ヘキサン（１：１）を用いて精製する。最終生成化合物（２）４,６−ジヒドロキシ−ニコチン酸エチルエステルは透明な油状物（２.８５ｇ）である。
【０１４５】
４,６−ジヒドロキシ−ニコチン酸エチルエステル（２.８５ｇ）を１００ｍｌフラスコ中で純粋なＰＯＣｌ３ ２５ｍｌと混合し、１１０℃まで２時間加熱する。冷却した後、ほとんどのＰＯＣｌ３を真空下で除去する。粗製の暗色の生成物を少量の氷水混合物中に貯め、そして飽和炭酸ナトリウム溶液で中和する。酢酸エチル２００ｍｌを用いて生成物を数回抽出する。合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム溶液により洗浄し、そしてＮａ２ＳＯ４により乾燥させる。溶媒を除去した後、粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによりＥＡ／ヘキサン（１５％：８５％）を用いて精製する。最終化合物（３）４,６−ジクロロ−ニコチン酸エチルエステルは白色の固体（３.０５ｇ）である。
【０１４６】
４,６−ジクロロ−ニコチン酸エチルエステル（２.１９ｇ、１０ミリモル）をアセトニトリル ３０ｍｌに溶解し、そして０℃まで冷却し、メチルアミン溶液（４０％ メチルアミン水溶液、５０ミリモル）４ｍｌをゆっくりと加える。反応物を０℃で３０分間攪拌し、そしてさらに２時間室温まで加温する。真空下で溶媒を除去し、そして粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによりＥＡ／ヘキサン（３０％：７０％）を用いて精製する。最終化合物（４）６−クロロ−４−メチルアミノ−ニコチン酸エチルエステルは白色固体（２.０３ｇ）である。
【０１４７】
６−クロロ−４−メチルアミノ−ニコチン酸エチルエステル（２.０３ｇ、９.５ミリモル）を無水ＴＨＦ ３０ｍｌに溶解し、そして−７８℃まで冷却する。ＬＡＨ ＴＨＦ溶液（１Ｍ ＴＨＦ溶液、２０ミリモル）２０ｍｌをゆっくりと加え、そして−７８℃で３時間反応を持続させる。反応物を室温までゆっくりと加温し、そしてＴＬＣを確認して出発材料が残留しないことを確かめる。少量のＭｅＯＨ／ＥＡ（１：１）混合物をゆっくりと加えて過剰のＬＡＨを分解する。粗製生成物をセライトプラグに通し、そしてＥＡにより数回洗浄する。真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによりＭｅＯＨ／ＤＣＭ（５％：９５％）を用いて精製する。最終化合物（５）（６−クロロ−４−メチルアミノ−ピリジン−３−イル）−メタノールは白色固体（１.４０ｇ）である。
【０１４８】
（６−クロロ−４−メチルアミノ−ピリジン−３−イル）−メタノール（１.４０ｇ、８.１ミリモル）をＤＣＭ ４０ｍｌに溶解し、そしてＭｎＯ２（８１ミリモル）７.０ｇを加える。反応物を室温で２時間攪拌する。次いで反応溶液をセライトプラグに通し、そしてＥＡにより洗浄する。真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによりＥＡ／ヘキサン（３：７）を用いて精製する。最終化合物（６）６−クロロ−４−メチルアミノ−ピリジン−３−カルバルデヒドは白色固体（１.３０ｇ）である。
【化４２】
【０１４９】
２−メチル−５−ニトロ安息香酸（５.０ｇ、２７.５ミリモル）を無水ＴＨＦ ５０ｍｌに溶解する。ＴＨＦ中１Ｍ ボラン溶液４１.３ｍｌ（４１.３ミリモル）を加えた後、反応物を室温で１８時間攪拌する。水１００ｍｌ中炭酸カリウム（４.５ｇ）の溶液により反応をクエンチする。真空下でＴＨＦを除去した後、水溶液をＤＣＭで抽出し、そして合わせた有機層を塩類溶液により洗浄し、そして硫酸ナトリウム上で乾燥させる。濾過し、そして真空下で溶媒を除去した後、最終生成化合物（１２）（２−メチル−５−ニトロフェニル）−メタノールは浅黄色固体（４.３ｇ）である。
【０１５０】
（２−メチル−５−ニトロフェニル）−メタノール（４.３ｇ、２５.７ミリモル）を無水ＤＣＭ １００ｍｌに溶解し、そして０℃まで冷却し、そして塩化メタンスルホニル（３.２２ｇ、２８.３ミリモル）およびＤＩＥＡ（５.３６ｍｌ、３０.８ミリモル）と３０分間処理する。反応物を室温まで加温し、そしてさらに３０分間攪拌する。水３０ｍｌを加えることにより反応をクエンチする。有機層を塩類溶液で洗浄し、そして硫酸ナトリウム上で乾燥させ、そして濾過する。真空下で溶媒を除去した後、最終生成化合物（１３）メチルスルホン酸（２−メチル−５−ニトロフェニル）−メチルは黄色油状物（６.２ｇ）である。
【０１５１】
メチルスルホン酸（２−メチル−５−ニトロフェニル）−メチル（６.２ｇ、２５.３ミリモル）およびシアン化カリウム（５.０ｇ、７６ミリモル）をアセトニトリル ２００ｍｌ中、８時間還流し、そして室温まで冷却する。真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物ＤＣＭに溶解し、そして濾過する。濾液を塩類溶液により洗浄し、そして硫酸ナトリウム上で乾燥させる。真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによりＥＡ／ヘキサン（１：１）を用いて精製する。最終生成化合物（１４）２−（２−メチル−５−ニトロフェニル）−エタンニトリルは黄色固体（３.１ｇ）である。
【０１５２】
２−（２−メチル−５−ニトロフェニル）−エタンニトリル（２.５ｇ、１４.２ミリモル）をメタノール ５０ｍｌに溶解する。水５０ｍｌ中水酸化カリウム（８.０ｇ、１４２ミリモル）を加え、そして反応物を１４時間加熱環流する。冷却した後、メタノールを除去し、水層をＤＣＭおよびエーテルで洗浄する。合わせた有機層を塩類溶液で洗浄し、そして硫酸ナトリウム上で乾燥させ、そして濾過する。真空下で溶媒を除去した後、最終生成化合物（１５）２−（２−メチル−５−ニトロフェニル）−酢酸は橙色固体（１.９ｇ）である。
【０１５３】
２−（２−メチル−５−ニトロフェニル）−酢酸（１.９ｇ、９.７ミリモル）をメタノール ５０ｍｌに溶解し、そして１,４−ジオキサン中４Ｍ ＨＣｌ ５ｍｌを加える。反応物を１４時間加熱環流する。冷却し、そして溶媒を除去した後、粗製生成物を水５０ｍｌに溶解し、そして２Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液によりｐＨ＞１２まで塩基性にする。溶液を酢酸エチルにより抽出し、そして合わせた有機層を塩類溶液により洗浄し、そして硫酸ナトリウム上で乾燥させ、そして濾過する。溶媒を除去した後、最終生成化合物（１６）２−（２−メチル−５−ニトロフェニル）−酢酸メチルエステルは暗黄色固体（１.８５ｇ）である。
【０１５４】
２−（２−メチル−５−ニトロフェニル）−酢酸メチルエステル（１.８５ｇ、８.８５ミリモル）をエタノール ４０ｍｌに溶解する。１０％ パラジウム炭素 １８０ｍｇを加え、そして水素バルーンを用いる。反応物を室温で１６時間攪拌する。セライトプラグを通すことによりパラジウム炭素を除去し、そして溶媒を除去した後、粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによりＭｅＯＨ／ＤＣＭ（７％：９３％）を用いて精製する。最終生成化合物（７）２−（５−アミノ−２−メチル−フェニル）−酢酸メチルエステルは黄色油状物（１.５ｇ）である。
【０１５５】
６−クロロ−４−メチルアミノ−ピリジン−３−カルバルデヒド（８５０ｍｇ、５ミリモル）をＤＭＦ １５ｍｌ中２−（５−アミノ−２−メチル−フェニル）−酢酸メチルエステル（化合物７、１.３５ｇ、７.５ミリモル）および炭酸カリウム（２.０７ｇ、１５ミリモル）と混合し、１００℃まで１６時間加熱する、冷却し、そして真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによりＥＡ／ヘキサン（６：４）を用いて精製する。最終化合物（８）３−（４−アミノ−２−メチル−フェニル）−７−クロロ−１−メチル−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オンは淡色固体（１.３０ｇ）である。
【化４３】
【０１５６】
３−（４−アミノ−２−メチル−フェニル）−７−クロロ−１−メチル−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オン（６００ｍｇ、２.０ミリモル）を無水ＤＣＭ ２０ｍｌ中塩化３−トリフルオロメチル−ベンゾイル（４４０ｍｇ、２.１ミリモル）およびＤＩＥＡ ５２０μｌ（３.０ミリモル）と混合する。反応物を室温で４時間攪拌する。真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによりＥＡ／ヘキサン（１：１）を用いて精製する。最終化合物（９）Ｎ−[３−（７−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドは白色固体（９００ｍｇ）である：1H NMR 400 MHz(CDCl3)δ 8.58(s, 1H), 8.25(s, 1H), 8.13(s, 1H), 8.08(d, 1H, J=7.8Hz), 7.78(d, 1H, J=7.8Hz), 7.71(s, 1H), 7.62(m, 2H), 7.44(d, 1H, J=5.8Hz), 7.31(s, 1H), 7.20(d, 1H, J=8.2Hz), 3.76 (s, 3H), 2.03 (s, 3H); MS m/z 477.2 (M+1).
【０１５７】
Ｎ−[３−（７−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（５０ｍｇ、０.１０６ミリモル）をアルゴン環境下、６−メトキシ−ピリジン−３−イルアミン（２０ｍｇ、０.１６ミリモル）、Ｐｄ２（ｄｂａ）２（２.４ｍｇ、２.５％）、塩化１,３−ビス（２,６−ジ−ｉ−プロピルフェニル）イミダゾリウム（２.３ｍｇ、５％）およびｔｅｒｔ−ブタンオキシドカリウム（１７.８ｍｇ、０.１５９ミリモル）と混合する。無水１,４−ジオキサン ６ｍｌを加え、そして１００℃で１４時間反応を持続させる。冷却し、そして真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をＤＭＳＯに溶解し、そして逆相調製用ＨＰＬＣにより精製して淡色固体の最終生成物が得られる： 1H NMR 400 MHz(CDCl3)δ 11.61(s, 1H), 8.26(d, 1H, J=2.6Hz), 8.16(s, 1H), 8.10(s, 1H), 8.05(d, 1H, J=7.9Hz), 7.95(s, 1H), 7.80(d, 1H, J=7.7Hz), 7.69(d, 1H, J=2.1Hz), 7.61(m, 2H), 7.51(s, 1H), 7.42(dd, 1H, J=6.0Hz), 6.89(d, 1H, J=8.7Hz), 6.38(s, 1H), 4.00(s, 3H), 3.52(s, 3H), 2.15(s, 3H); MS m/z 560.3(M+1).
【０１５８】
実施例９
Ｎ−[３−（７−エチルアミノ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化４４】
Ｎ−[３−（７−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（５０ｍｇ、０.１０６ミリモル）を密封チューブ内でエチルアミン（０.１４ｍｌ、水中７０％、２.２ミリモル）と混合する。ｎ−ブタノール １ｍｌを加え、そして反応物を１００℃で１６時間攪拌する。冷却し、そして真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をＤＭＳＯに溶解し、そして逆相調製用ＨＰＬＣにより精製して白色固体の最終生成物が得られる：1H NMR 400 MHz(DMSO-d6)δ 10.47(s, 1H), 8.48(s, 1H), 8.29(s, 1H), 8.25(d, 1H, J=8.0Hz), 7.96(d, 1H, J=7.8Hz), 7.78(m, 2H), 7.66(m, 2H), 7.26(d, 1H, J=9.0Hz), 6.46(s, 1H), 3.57(s, 3H), 3.39(q, 2H, J=7.1Hz), 2.13(s, 3H), 1.22(t, 3H, J=7.1Hz); MS m/z 481.2(M+1).
【０１５９】
実施例１０
Ｎ−（４−メチル−３−{１−メチル−２−オキソ−７−[（ピリジン−３−イルメチル）−アミノ]−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル}−フェニル）−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化４５】
Ｎ−[３−（７−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（５０ｍｇ、０.１０６ミリモル）をアルゴン環境下、３−（アミノメチル）−ピリジン（１８ｍｇ、０.１６ミリモル）、Ｐｄ２（ｄｂａ）２（２.４ｍｇ、２.５％）、塩化１,３−ビス（２,６−ジ−ｉ−プロピルフェニル）−イミダゾリウム（２.３ｍｇ、５％）およびｔｅｒｔ−ブタンオキシドカリウム（１７.８ｍｇ、０.１５９ミリモル）と混合する。無水１,４−ジオキサン ６ｍｌを加え、そして１００℃で１４時間反応を持続させる。冷却し、そして真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をＤＭＳＯに溶解し、そして逆相調製用ＨＰＬＣにより精製して淡色固体の最終生成物が得られる：1H NMR 400 MHz(DMSO-d6)δ 10.46(s, 1H), 8.79(s, 1H), 8.68(d, 1H, J=4.6Hz), 8.44(s, 1H), 8.29(s, 1H), 8.24(t, 2H, J=7.5Hz), 7.96(d, 2H, J=7.8Hz), 7.76(m, 3H), 7.65(m, 2H), 7.24(d, 1H, J=8.3Hz), 6.46(s, 1H), 4.74(s, 2H), 3.52(s, 3H), 2.11(s, 3H); MS m/z 544.3(M+1).
【０１６０】
実施例１１
Ｎ−{３−[７−（３−ジメチルアミノメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル]−４−メチル−フェニル}−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化４６】
Ｎ−[３−（７−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（５０ｍｇ、０.１０６ミリモル）をアルゴン環境下、３−ジメチル−アミノメチル−フェニルアミン（２４ｍｇ、０.１６ミリモル）、Ｐｄ２（ｄｂａ）２（２.４ｍｇ、２.５％）、塩化１,３−ビス（２,６−ジ−ｉ−プロピルフェニル）イミダゾリウム（２.３ｍｇ、５％）およびｔｅｒｔ−ブタンオキシドカリウム（１７.８ｍｇ、０.１５９ミリモル）と混合する。無水１,４−ジオキサン ６ｍｌを加え、１００℃で１４時間反応を持続させる。冷却し、そして真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をＤＭＳＯに溶解し、そして逆相調製用ＨＰＬＣにより精製して淡色固体の最終生成物が得られる：1H NMR 400 MHz(DMSO-d6)δ 10.48(s, 1H), 9.64(s, 1H), 8.60(s, 1H), 8.30(s, 1H), 8.26(d, 1H, J=8.9Hz), 7.96(d, 1H, J=7.8Hz), 7.87(s, 2H), 7.79(t, 1H, J=7.8Hz), 7.67(m, 3H), 7.41(t, 1H, J=7.8Hz), 7.27(d, 1H, J=9.1Hz), 7.08(d, 1H, J=7.7Hz), 6.78(s, 1H), 4.28(d, 2H, J=5.0Hz), 3.58(s, 3H), 2.77(d, 6H, J=4.6Hz), 2.14(s, 3H); MS m/z 586.3(M+1).
【０１６１】
実施例１２
Ｎ−（４−メチル−３−{１−メチル−７−[３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ]−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル}−フェニル）−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化４７】
Ｎ−[３−（７−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（５０ｍｇ、０.１０６ミリモル）をアルゴン環境下、３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミン（３１ｍｇ、０.１６ミリモル）、Ｐｄ２（ｄｂａ）２（２.４ｍｇ、２.５％）、塩化１,３−ビス（２,６−ジ−ｉ−プロピルフェニル）イミダゾリウム（２.３ｍｇ、５％）およびｔｅｒｔ−ブタンオキシドカリウム（１７.８ｍｇ、０.１５９ミリモル）と混合する。無水１,４−ジオキサン ６ｍｌを加え、そして１００℃で１４時間反応を持続させる。冷却し、そして真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をＤＭＳＯに溶解し、そして逆相調製用ＨＰＬＣにより精製して淡色固体の最終生成物が得られる：1H NMR 400 MHz(DMSO-d6)δ 10.47(s, 1H), 9.43(s, 1H), 8.58(s, 1H), 8.30(s, 1H), 8.26(d, 1H, J=8.1Hz), 7.97(d, 1H, J=7.9Hz), 7.83(s, 1H), 7.79(t, 1H, J=7.8Hz), 7.69(m, 2H), 7.37(s, 1H), 7.21(m, 3H), 6.74(s, 1H), 6.65(d, 1H, J=6.5Hz), 3.80(d, 2H, J=13.9Hz), 3.56(s, 3H), 3.54(d, 2H, J= 13.9Hz), 3.18(m, 2H), 2.98(m, 2H), 2.88(d, 3H, J=3.8Hz), 2.14(s, 3H); MS m/z 627.3(M+1).
【０１６２】
実施例１３
Ｎ−[３−（７−アミノ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化４８】
Ｎ−[３−（７−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（１００ｍｇ、０.２１ミリモル）をアルゴン環境下、ベンジルアミン（３５ｍｇ、０.３２ミリモル）、Ｐｄ２（ｄｂａ）２（４.８ｍｇ、２.５％）、塩化１,３−ビス（２,６−ジ−ｉ−プロピルフェニル）イミダゾリウム（４.６ｍｇ、５％）およびｔｅｒｔ−ブタンオキシドカリウム（３５.６ｍｇ、０.３２ミリモル）と混合する。無水１,４−ジオキサン ６ｍｌを加え、そして１００℃で１４時間反応を持続させる。冷却し、そして真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をＤＭＳＯに溶解し、そして逆相調製用ＨＰＬＣにより精製して淡色固体の生成物Ｎ−[３−（７−ベンジルアミノ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドが得られる。この生成物をエタノール １０ｍｌに溶解し、そして１０％ パラジウム炭素粉末 ８ｍｇを加える。反応物を室温で５０ｐｓｉ水素環境下で１６時間攪拌する。セライトプラグを通してパラジウム炭素を除去し、そして溶媒を除去した後、粗製生成物をＤＭＳＯに溶解し、そして逆相調製用ＨＰＬＣにより精製して白色固体の最終生成物が得られる：1H NMR 400 MHz(DMSO-d6)δ 10.42(s, 1H), 8.35(s, 1H), 8.31(s, 1H), 8.26(d, 1H, J=7.8Hz), 7.96(d, 1H, J=7.7Hz), 7.78(t, 1H, J=7.8Hz), 7.69(m, 2H), 7.61(s, 1H), 7.24(d, 1H, J=8.1Hz), 6.53(s, 2H), 6.29(s, 1H), 3.49(s, 3H), 2.12(s, 3H); MS m/z 453.2(M+1).
【０１６３】
適切な出発材料を用いて前記の実施例に記載したような手順を繰り返すことにより、表１で同定されるような以下の式Ｉの化合物が得られる。
【表１】
【表２】
【表３】
【表４】
【表５】
【表６】
【表７】
【表８】
【表９】
【表１０】
【表１１】
【表１２】
【表１３】
【表１４】
【表１５】
【表１６】
【表１７】
【表１８】
【表１９】
【表２０】
【表２１】
【０１６４】
アッセイ
親３２Ｄ細胞と比較して、ＢＣＲ−Ａｂｌ（３２Ｄ−ｐ２１０）を発現する３２Ｄ細胞の細胞増殖を選択的に阻止する能力を測定するために本発明の化合物を検定する。これらのＢＣＲ−Ａｂｌ形質転換細胞の増殖を選択的に阻止する化合物を、野生型または変異形態のいずれかのＢｃｒ−ａｂｌを発現するＢａ／Ｆ３細胞における抗増殖活性に関して試験する。加えてｂ−Ｒａｆを阻止するその能力を測定するために化合物を検定する。
【０１６５】
ＢＣＲ−Ａｂｌ依存性細胞増殖の阻止（ハイスループット法）
用いたネズミ細胞系はＢＣＲ−Ａｂｌ ｃＤＮＡ（３２Ｄ−ｐ２１０）で形質転換した３２Ｄ造血前駆細胞系である。これらの細胞を５０μｇ／ｍｌ ペニシリン、５０μｇ／ｍｌ ストレプトマイシンおよび２００ｍＭ Ｌ−グルタミンを補充したＲＰＭＩ／１０％ ウシ胎仔血清（ＲＰＭＩ／ＦＣＳ）中で維持する。ＩＬ３の供給源として１５％ ＷＥＨＩ条件培地を添加して、形質転換されていない３２Ｄ細胞を同様に維持する。
【０１６６】
３２Ｄまたは３２Ｄ−ｐ２１０細胞懸濁液５０μｌをウェルあたり５０００セルの密度でGreiner ３８４ウェルマイクロプレート（黒）に蒔く。被験化合物５０ｎｌ（ＤＭＳＯストック溶液中１ｍＭ）を各ウェルに加える（陽性対照としてＳＴＩ５７１を含む）。細胞を３７℃、５％ ＣＯ２で７２時間インキュベートする。６０％ Alamar Blue溶液（Tek diagnostics）１０μｌを各ウェルに加え、そして細胞をさらに２４時間インキュベートする。Acquest（商標）システム（Molecular Devices）を用いて蛍光強度（５３０ｎｍで励起、５８０ｎｍで発光）を定量する。
【０１６７】
ＢＣＲ−Ａｂｌ依存性細胞増殖の阻止
９６ウェルＴＣプレートに３２Ｄ−ｐ２１０細胞をウェルあたり１５０００セルの密度で蒔く。被験化合物の２倍連続希釈５０μｌ（Ｃｍａｘは４０μＭ）を各ウェルに加える（陽性対照としてＳＴＩ５７１を含む）。細胞を３７℃、５％ ＣＯ２で４８時間インキュベートした後、ＭＴＴ（Promega）１５μｌを各ウェルに加え、そして細胞をさらに５時間インキュベートする。５７０ｎｍでの光学密度を分光光度法により定量し、そして５０％阻止に必要な化合物の濃度であるＩＣ５０値を用量応答曲線から決定する。
【０１６８】
細胞サイクル分布に及ぼす影響
３２Ｄおよび３２Ｄ−ｐ２１０細胞を６ウェルＴＣプレートにウェルあたり２.５×１０６セルで培地５ｍｌ中に蒔き、そして被験化合物１または１０μＭを加える（対照としてＳＴＩ５７１を含む）。次いで細胞を３７℃、５％ ＣＯ２で２４または４８時間インキュベートする。細胞懸濁液２ｍｌをＰＢＳで洗浄し、７０％ ＥｔＯＨ中で１時間固定し、そしてＰＢＳ／ＥＤＴＡ／ＲＮアーゼＡと３０分間処理する。ヨウ化プロピジウム（Ｃｆ＝１０μｇ／ｍｌ）を加え、そしてFACScalibur（商標）システム（BD Biosciences）のフローサイトメトリーにより蛍光強度を定量する。本発明の被験化合物は３２Ｄ−ｐ２１０細胞に及ぼすアポトーシス効果を実証するが、３２Ｄ親細胞にはアポトーシスを誘導しない。
【０１６９】
細胞性ＢＣＲ−Ａｂｌ自己リン酸化に及ぼす影響
ｃ−ａｂｌ特異的捕捉抗体および抗ホスホチロシン抗体を用いて捕捉ElisaでＢＣＲ−Ａｂｌ自己リン酸化を定量する。３２Ｄ−ｐ２１０細胞を９６ウェルＴＣプレートにウェルあたり２×１０５セルで培地５０μｌ中に蒔く。被験化合物の２倍連続希釈５０μｌ（Ｃｍａｘは１０μＭである）を各ウェルに加える（陽性対照としてＳＴＩ５７１を含む）。細胞を３７℃、５％ ＣＯ２で９０分間インキュベートする。次いで細胞を氷上で１時間、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含有する溶解バッファー（５０ｍＭ トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７.４）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＥＧＴＡおよび１％ ＮＰ−４０）１５０μｌと処理する。予め抗ａｂｌ特異抗体でコートし、そして遮断した９６ウェルオプチプレート（optiplate）に細胞ライゼート５０μｌを加える。プレートを４℃で４時間インキュベートする。ＴＢＳ−Tween ２０バッファーで洗浄した後、アルカリ性ホスファターゼ結合抗ホスホチロシン抗体５０μｌを加え、そしてプレートをさらに４℃で一晩インキュベートする。ＴＢＳ−Tween ２０バッファーで洗浄した後、発光基質９０μｌを加え、そしてAcquest（商標）システム（Molecular Devices）を用いて発光を定量する。ＢＣＲ−Ａｂｌ発現細胞の増殖を阻止する本発明の被験化合物は用量依存的な様式で細胞性ＢＣＲ−Ａｂｌ自己リン酸化を阻止する。
【０１７０】
Ｂｃｒ−ａｂｌの変異形態を発現する細胞の増殖に及ぼす影響
本発明の化合物を、ＳＴＩ５７１に対する抵抗性を付与するかまたは感受性を低減させる野生型または変異形態のいずれかのＢＣＲ−Ａｂｌ（Ｇ２５０Ｅ、Ｅ２５５Ｖ、Ｔ３１５Ｉ、Ｆ３１７Ｌ、Ｍ３５１Ｔ）を発現するＢａ／Ｆ３細胞に及ぼすその抗増殖効果に関して試験する。変異体ＢＣＲ−Ａｂｌ発現細胞および非形質転換細胞に及ぼすこれらの化合物の抗増殖効果を前記したように（ＩＬ３を欠く培地中で）１０、３.３、１.１および０.３７μＭで試験した。非形質転換細胞において毒性を欠く化合物のＩＣ５０値を前記したように得られた用量応答曲線から決定した。
【０１７１】
ＦＧＦＲ３（酵素アッセイ）
精製したＦＧＦＲ３（Upstate）を用いるキナーゼ活性アッセイを、キナーゼバッファー（３０ｍＭ トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７.５）、１５ｍＭ ＭｇＣｌ２、４.５ｍＭ ＭｎＣｌ２、１５μＭ Ｎａ３ＶＯ４および５０μｇ／ｍｌＢＳＡ）中０.２５μｇ／ｍｌ 酵素、および基質（５μｇ／ｍｌ ビオチン−ポリ−ＥＹ（Ｇｌｕ、Ｔｙｒ）（CIS-US, Inc.）および３μＭ ＡＴＰ）を含有する最終容量１０μｌで実施する。２つの溶液を作成する：キナーゼバッファー中にＦＧＦＲ３酵素を含有する第１溶液５μｌを最初に３８４−フォーマットProxiPlate（登録商標）（Perkin-Elmer）に分配し、続いてＤＭＳＯに溶解した化合物５０ｎｌを添加し、次いでキナーゼバッファー中に基質（ポリ−ＥＹ）およびＡＴＰを含有する第２溶液５μｌを各ウェルに加えた。反応物を室温で１時間インキュベートし、３０ｍＭ トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７.５）、０.５Ｍ ＫＦ、５０ｍＭ ＥＴＤＡ、０.２ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、１５μｇ／ｍｌ ストレプトアビジン−ＸＬ６６５（CIS-US, Inc.）および１５０ｎｇ／ｍｌ クリプタート結合抗ホスホチロシン抗体（CIS-US, Inc.）を含有するＨＴＲＦ検出混合物 １０μｌの添加により停止させる。ストレプトアビジン−ビオチン相互作用を可能にするために室温で１時間インキュベートした後、時間分解蛍光シグナルをAnalyst GT（Molecular Devices Corp.）で読む。各化合物の１２濃度（５０μＭから０.２８ｎＭまで１：３希釈）での阻止パーセンテージの線形回帰分析によりＩＣ５０値を計算する。このアッセイで、本発明の化合物は１０ｎＭから２μＭの範囲のＩＣ５０を有する。
【０１７２】
ＦＧＦＲ３（細胞アッセイ）
本発明の化合物を形質転換Ｂａ／Ｆ３−ＴＥＬ−ＦＧＦＲ３細胞増殖を阻止するその能力に関して試験し、これはＦＧＦＲ３細胞キナーゼ活性に依存する。培養培地として１０％ ウシ胎仔血清を補充したＲＰＭＩ １６４０を用いて、Ｂａ／Ｆ３−ＴＥＬ−ＦＧＦＲ３を懸濁液中８０００００セル／ｍｌまで培養する。細胞を培養培地５０μｌ中５０００セル／ウェルで３８４−ウェルフォーマットプレートに分配する。本発明の化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で溶解し、そして希釈する。１２段階１：３連続希釈をＤＭＳＯに作成して、典型的には１０ｍＭから０.０５μＭの範囲で濃度グラジエントを創成する。細胞に希釈した化合物５０ｎｌを加え、そして細胞培養インキュベーター中で４８時間インキュベートする。増殖細胞により創成された還元環境をモニタリングするために用いることができるAlamarBlue（登録商標）（TREK Diagnostic Systems）を最終濃度１０％で細胞に加える。３７℃の細胞培養インキュベーター中でさらに４時間インキュベートした後、還元型AlamarBlue（登録商標）（５３０ｎｍで励起、５８０ｎｍで発光）からの蛍光シグナルをAnalyst GT（Molecular Devices Corp.）で定量する。各化合物の１２濃度での阻止パーセンテージの線形回帰分析によりＩＣ５０値を計算する。
【０１７３】
ｂ−Ｒａｆ
本発明の化合物をｂ−Ｒａｆの活性を阻止するその能力に関して試験する。黒色の壁面および透明な底部を有する３８４−ウェルMaxiSorpプレート（ＮＵＮＣ）でアッセイを実施する。基質ＩκＢαをＤＰＢＳ（１：７５０）で希釈し、そして１５μｌを各ウェルに加える。プレートを４℃で一晩インキュベートし、そしてＥＭＢＬＡプレートワッシャーを用いてＴＢＳＴ（２５ｍＭ トリス（ｐＨ８.０）、１５０ｍＭ ＮａＣｌおよび０.０５％ Tween−２０）で３回洗浄する。プレートをSuperblock（１５μｌ／ウェル）で室温で３時間遮断し、ＴＢＳＴで３回洗浄し、そして軽く水気を取る。２０μＭ ＡＴＰ（１０μｌ）を含有するアッセイバッファー、続いて化合物１００ｎｌまたは５００ｎｌをを各ウェルに加える。Ｂ−Ｒａｆをアッセイバッファーで（１μｌを２５μｌに）希釈し、そして希釈したｂ−Ｒａｆ １０μｌを各ウェルに加える（０.４μｇ／ウェル）。プレートを室温で２.５時間インキュベートする。プレートをＴＢＳＴで６回洗浄することによりキナーゼ反応を停止させる。Phosph−ＩκＢα（Ｓｅｒ３２／３６）抗体をSuperblock（１：１００００）で希釈し、そして１５μｌを各ウェルに加える。プレートを４℃で一晩インキュベートし、そしてＴＢＳＴで６回洗浄する。ＡＰ結合ヤギ抗マウスＩｇＧをSuperblock（１：１５００）で希釈し、そして１５μｌを各ウェルに加える。プレートを室温で１時間インキュベートし、そしてＴＢＳＴで６回洗浄するAttophos ＡＰ基質 １５μｌを各ウェルに加え、そしてプレートを室温で１５分間インキュベートする。Fluorescence Intensity Nanxin ＢＢＴアニオン（５０５ダイクロイックミラー）を用いてプレートをAcquestまたはAnalyst ＧＴで読む。
【０１７４】
Upstate Kinase Profiler（商標） 放射酵素フィルター結合アッセイ
本発明の化合物をキナーゼパネル（部分的な、限定するものではないキナーゼのリストには：Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６およびＳＡＰＫ２βが挙げられる）の個々のメンバーを阻止するその能力に関して検定する。この一般的なプロトコールにしたがって最終濃度１０μＭで２検体ずつで化合物を試験する。キナーゼバッファーの組成および基質は、「Upstate Kinase Profiler（商標）」パネルに含まれる種々のキナーゼで異なることに留意されたい。キナーゼバッファー（２.５μｌ、１０× 必要な場合ＭｎＣｌ２を含有する）、活性キナーゼ（０.００１−０.０１単位；２.５μｌ）、キナーゼバッファー中特異的またはポリ（Ｇｌｕ４−Ｔｙｒ）ペプチド（５−５００μＭまたは.０１ｍｇ／ｍｌ）およびキナーゼバッファー（５０μＭ；５μｌ）を氷上でエッペンドルフ中で混合する。Ｍｇ／ＡＴＰミックス（１０μｌ；６７.５（または３３.７５）ｍＭ ＭｇＣｌ２、４５０（または２２５）μＭ ＡＴＰおよび１μＣｉ／μｌ[γ−３２Ｐ]−ＡＴＰ（３０００Ｃｉ／ミリモル））を加え、そして反応物を約３０℃で約１０分間インキュベートする。反応混合物を２ｃｍ×２ｃｍ Ｐ８１（リン酸セルロース、正荷電ペプチド基質用）またはWhatman Ｎｏ.１（ポリ（Ｇｌｕ４−Ｔｙｒ）ペプチド基質用）四角紙にスポットする。アッセイ用四角紙を０.７５％ リン酸で各５分間で４回洗浄し、そしてアセトンで５分間１回洗浄する。アッセイ用四角紙をシンチレーションバイアルに移し、シンチレーションカクテル５ｍｌを加え、そしてペプチド基質への３２Ｐの取り込み（ｃｐｍ）をBeckmanシンチレーションカウンターで定量する。各反応に関して阻止パーゼンテージを計算する。
【０１７５】
遊離形態または薬学的に許容される塩形態の式Ｉの化合物は、例えば本出願で記載するインビトロ試験により示されるような価値ある薬理学的特性を呈する。例えば式Ｉの化合物は野生型ＢＣＲ−ＡｂｌおよびＧ２５０Ｅ、Ｅ２５５Ｖ、Ｔ３１５Ｉ、Ｆ３１７ＬおよびＭ３５１Ｔ ＢＣＲ−Ａｂｌ変異体に関して、好ましくは１×１０−１０から１×１０−５Ｍの範囲の、好ましくは５０ｎＭ未満のＩＣ５０を示す。例えば：
【０１７６】
ａ）Ｎ−{３−[７−（６−メトキシ−ピリジン−３−イルアミノ）−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル]−４−メチル−フェニル}−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（実施例８）は野生型、Ｇ２５０Ｅ、Ｅ２５５Ｖ、Ｔ３１５Ｉ、Ｆ３１７ＬおよびＭ３５１Ｔ Ｂｃｒ−ａｂｌに関して各々＜０.５ｎＭ、４３ｎＭ、４８ｎＭ、１２２ｎＭ、＜０.５ｎＭおよび９ｎＭのＩＣ５０を有する；
【０１７７】
ｂ）Ｎ−{３−[７−（６−メトキシ−ピリジン−３−イルアミノ）−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル]−４−メチル−フェニル}−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（実施例８）はＦＧＦＲ３酵素および細胞アッセイに関して各々１０７ｎＭおよび３ｎＭ、ならびにｂ−Ｒａｆおよびｃ−Ｒａｆ酵素アッセイに関して各々５００ｎＭおよび１７ｎＭのＩＣ５０を有する；
【０１７８】
式Ｉの化合物は１０μＭの濃度で、Ａｂｌ、Ｂｃｒ−ａｂｌ、Ｂｍｘ、ｃ−ＲＡＦ、ＣＳＫ、Ｆｅｓ、ＦＧＦＲ３、Ｆｌｔ３、ＧＳＫ３β、ＩＲ、ＪＮＫ１α１、ＪＮＫ２α２、Ｌｃｋ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＰＤＧＦＲα、Ｒｓｋ１、ＳＡＰＫ２α、ＳＡＰＫ２β、ＳｙｋおよびＴｒｋＢキナーゼに対して好ましくは５０％以上、好ましくは約７０％以上の阻止パーセンテージを示す。例えば：
【０１７９】
ｃ）Ｎ−{３−[７−（６−メトキシ−ピリジン−３−イルアミノ）−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル]−４−メチル−フェニル}−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（実施例８）は１０μＭの濃度で以下のキナーゼを括弧内に示すパーセンテージまで阻止する（例えば、１００％は完全な阻止を意味し、０％は阻止しないことを意味する）：野生型Ａｂｌ（１００％）、Ｂｍｘ（１００％）、ｃ−ＲＡＦ（９０％）、ＣＳＫ（１００％）、ＦＧＦＲ３（９６％）、ＪＮＫ１α１（８９％）、ＪＮＫ２α２（９９％）、Ｌｃｋ（９９％）、ＭＫＫ４（９１％）、ＭＫＫ６（９７％）、ｐ７０Ｓ６Ｋ（８６％）、ＳＡＰＫ２α（９５％）、ＳＡＰＫ２β（９８％）およびＴｒｋＢ（９７％）。
【０１８０】
本明細書で記載する実施例および実施態様は説明目的のためのみであり、ならびに様々の修飾またはそれに照らした変更は当業者に示唆され、そして本出願および添付の請求の範囲の精神および範囲内に含まれるべきであることは理解される。本明細書に引用した全ての出版物、特許および特許出願は全ての目的に関して出典明示により本明細書の一部とする。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は２００３年１０月８日出願の米国仮特許出願第６０／５０９５７２号の優先権の利益を主張するものである。本出願の全開示はその全てをそして全ての目的のために出典明示により本明細書の一部とする。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は新規クラスの化合物、かかる化合物を含む医薬組成物、および異常なまたは調節解除されたキナーゼ活性に関連する疾患または障害、特にＡｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＰＤＧＦ−Ｒ、Ｂｍｘ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６およびＳＡＰＫ２α、ＳＡＰＫ２βキナーゼの異常活性化に関与する疾患または障害を処置または予防するためにかかる化合物を用いる方法を提供する。
【０００３】
（背景）
タンパク質キナーゼはタンパク質の大きなファミリーを表し、広範な細胞過程の調節および細胞機能制御の維持において中心的な役割を果たしている。限定するものではないが、これらのキナーゼのリストの一部には：血小板由来成長因子受容体キナーゼ（ＰＤＧＦ−Ｒ）、幹細胞因子の受容体キナーゼ、ｃ−ｋｉｔ、神経成長因子受容体、ｔｒｋＢ、および繊維芽細胞成長因子受容体、ＦＧＦＲ３のような受容体チロシンキナーゼ；Ａｂｌおよび融合キナーゼＢＣＲ−Ａｂｌ、Ｆｅｓ、ＬｃｋおよびＳｙｋのような非受容体チロシンキナーゼ；ならびにｂ−ＲＡＦ、ＭＡＰキナーゼ（例えばＭＫＫ６）およびＳＡＰＫ２βのようなセリン／スレオニンキナーゼが挙げられる。異常キナーゼ活性は良性および悪性増殖性障害ならびに免疫および神経系の不適切な活性化の結果である疾患を含む多くの疾患状態で観察されている。
【０００４】
本発明の新規化合物は１つまたはそれより多いタンパク質キナーゼの活性を阻止し、そしてしたがって、キナーゼ関連疾患の処置に有用であると予測される。
【０００５】
（発明の要旨）
１つの態様では、本発明は式Ｉ：
【化１】
（式中、
ｎは０、１または２であり；
Ｙは−Ｃ（Ｈ）＝および−Ｎ＝から選択され；
Ｚは−Ｃ（Ｈ）＝および−Ｎ＝から選択され；
Ｒ１は水素、ハロおよび−Ｒ４から選択され；
Ｒ２は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ３はハロ、ニトロ、Ｃ１−６アルキルおよびＣ１−６アルコキシから選択され；
Ｒ４はＣ３−８ヘテロシクロアルキル、−ＸＮＲ５Ｒ６、−ＸＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６および−ＸＮＲ５Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ６から選択され；ここでＸは単結合またはＣ１−４アルキレンであり；Ｒ５は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；Ｒ６はＣ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここでＲ４の任意のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルは場合によってはハロ、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、場合によってはヒドロキシで置換されていてよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキル、ハロ置換Ｃ１−６アルコキシ、−ＸＯＸＮＲ７Ｒ８、−ＸＳ（Ｏ）０−２Ｒ７、−ＸＳ（Ｏ）０−２ＮＲ７Ｒ８、−ＸＯＲ７、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−ＸＮＲ７Ｒ８、−ＸＮＲ７Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ７および−ＸＲ９から別個に選択される１から３個のラジカルにより置換されていてよく；ここでＸは単結合またはＣ１−４アルキレンであり；Ｒ７およびＲ８は別個に水素およびＣ１−６アルキルから選択され；Ｒ９はＣ６−１０アリール、Ｃ５−１０ヘテロアリールＣ３−１２シクロアルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキルから選択され；ここでＲ９の任意のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは場合によっては１から３個のＣ１−６アルキルラジカルにより置換されていてよく；
Ｒ１０は水素、ハロおよびＣ１−６アルキルから選択される）
の化合物ならびにＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、保護された誘導体、個々の異性体およびその異性体の混合物；ならびにかかる化合物の薬学的に許容される塩および溶媒和物（例えば水和物）を提供する。
【０００６】
第２の態様では、本発明は１つまたはそれより多い適当な賦形剤と混合して式Ｉの化合物またはそのＮ−オキシド誘導体、その個々の異性体および異性体の混合物；またはその薬学的に許容される塩を含有する医薬組成物を提供する。
【０００７】
第３の態様では本発明は、動物に治療上有効量の式Ｉの化合物またはＮ−オキシド誘導体、その個々の異性体および異性体の混合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、キナーゼ活性、特にＡｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６および／またはＳＡＰＫ２β活性の阻止が疾患の病理および／または症状を予防、阻止または改善することができる動物の疾患を処置する方法を提供する。
【０００８】
第４の態様では本発明は、キナーゼ活性、特にＡｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６および／またはＳＡＰＫ２β活性が疾患の病理および／または症状の原因となる、動物において疾患を処置するための医薬品の製造における式Ｉの化合物の使用を提供する。
【０００９】
第５の態様では本発明は、式Ｉの化合物およびＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、保護された誘導体、個々の異性体およびその異性体の混合物、ならびにその薬学的に許容される塩を調製するための方法を提供する
【００１０】
（発明の詳細な説明）
定義
基として、およびその他の基の構造エレメントとしての「アルキル」、例えばハロ置換アルキルおよびアルコキシは直鎖状かまたは分岐しているかのいずれかでよい。Ｃ１−４−アルコキシにはメトキシ、エトキシ等が挙げられる。ハロ置換アルキルにはトリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル等が挙げられる。
【００１１】
「アリール」は６から１０個の環炭素原子を含有する単環式または融合二環式芳香族環集合体を意味する。例えばアリールはフェニルまたはナフチル、好ましくはフェニルでよい。「アリーレン」はアリール基から誘導される２価ラジカルを意味する。「ヘテロアリール」はアリールに関して定義されるとおりであり、ここで１つまたはそれより多い環メンバーがヘテロ原子である。例えばヘテロアリールにはピリジル、インドリル、インダゾリル、キノキサリニル、キノリニル、ベンゾフラニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾ[１,３]ジオキソール、イミダゾリル、ベンゾ−イミダゾリル、ピリミジニル、フラニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピラゾリル、チエニル等が挙げられる。
【００１２】
「シクロアルキル」は指示された数の環原子を含有する飽和もしくは部分的不飽和、単環式、融合二環式または架橋多環式環集合体を意味する。例えばＣ３−１０シクロアルキルにはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等が挙げられる。「ヘテロシクロアルキル」は、指示された１つまたはそれより多い環炭素が−Ｏ−、−Ｎ＝、−ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−または−Ｓ（Ｏ）２−（ここでＲは水素、Ｃ１−４アルキルまたは窒素保護基である）から選択される部分により置換されていれば、本出願で定義されるようなシクロアルキルを意味する。例えば本発明の化合物を記載するために本出願で用いられるようなＣ３−８ヘテロシクロアルキルにはモルホリノ、ピロリジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピペリジニルオン、１,４−ジオキサ−８−アザ−スピロ[４.５]デカ−８−イル等が挙げられる。
【００１３】
「ハロゲン」（またはハロ）は好ましくはクロロまたはフルオロを表すが、ブロモまたはヨードでもよい。
【００１４】
「処置する」、「処置すること」および「処置」は疾患および／またはその付随される症状を改善または和らげる方法を意味する。
【００１５】
（好ましい実施態様の説明）
融合タンパク質ＢＣＲ−Ａｂｌは、ＡｂｌプロトオンコジーンをＢｃｒ遺伝子と融合させる相互転座の結果である。ＢＣＲ−Ａｂｌは次いでマイトジェン活性の上昇を介してＢ細胞を形質転換することができる。この上昇の結果、アポトーシスに対する感受性を低減させ、ならびにＣＭＬ前駆細胞の付着およびホーミングを変化させる。本発明はキナーゼ関連疾患、特にＡｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６および／またはＳＡＰＫ２βキナーゼ関連疾患の処置のための化合物、組成物および方法を提供する。例えば白血病およびＢＣＲ−Ａｂｌに関係するその他の増殖障害を、野生型および変異型のＢｃｒ−Ａｂｌの阻止を介して処置することができる。
【００１６】
１つの実施態様では、式Ｉの化合物に関して、ｎは０、１または２であり；
Ｙは−Ｃ（Ｈ）＝および−Ｎ＝から選択され；
Ｚは−Ｃ（Ｈ）＝および−Ｎ＝から選択され；
Ｒ１は水素、ハロおよび−Ｒ４から選択され；
Ｒ２は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ３はハロ、Ｃ１−６アルキルおよびＣ１−６アルコキシから選択され；
Ｒ４はＣ３−８ヘテロシクロアルキル、−ＸＮＲ５Ｒ６、−ＸＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ６および−ＸＮＲ５Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ６から選択され；ここでＸは単結合またはＣ１−４アルキレンであり；Ｒ５は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；Ｒ６はＣ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここでＲ４の任意のアリール、ヘテロアリールおよびシクロアルキルは場合によってはハロ、ヒドロキシ、ニトロ、場合によってはヒドロキシにより置換されたＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキル、ハロ置換Ｃ１−６アルコキシ、−ＸＳ（Ｏ）０−２Ｒ７、−ＸＯＸＮＲ７Ｒ８、−ＸＳ（Ｏ）０−２ＮＲ７Ｒ８、−ＸＯＲ７、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−ＸＮＲ７Ｒ８および−ＸＲ９から別個に選択される１から３個のラジカルにより置換されていてよく；ここでＸは単結合またはＣ１−４アルキレンであり；Ｒ７およびＲ８は水素およびＣ１−６アルキルから別個に選択され；Ｒ９はＣ５−１０ヘテロアリールおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキルから選択され；ここでＲ９の任意のヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルは場合によっては１から３個のＣ１−６アルキルラジカルにより置換されていてよく；
そしてＲ１０は水素である。
【００１７】
別の実施態様では、Ｒ１は水素、ハロ、ピロリジニルおよび−ＮＨＲ６から選択され；ここでＲ６は水素、メチル、エチル、ジエチル−アミノ−プロピル、モルホリノ−エチル、ヒドロキシ−エチル、ベンゾ[１,３]ジオキソリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリジニル−メチル、２−（２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−エチルおよびフェニルから選択され；ここで該ピロリジニル、ピリジニル、ピラゾリル、ピラジニル、ピリジニル−メチル、２−（２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−エチルまたはフェニルは場合によってはアミノ、メトキシ、ジメチルアミノ、ジメチルアミノ−メチル、ジメチルアミノ−エチル、ジメチルアミノ−プロピル、ジメチルアミノ−エトキシ、メチル−スルファニル、ヒドロキシ、メチルスルホニル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシ−エチル、メタン−スルホニル−アミノ、モルホリノ、モルホリノ−エチル、フラニル−メチル、４−メチル−ピペラジン−１−イル、４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル、ベンジル、メチル−アミノカルボニル、メチル−カルボニル−アミノ、メチル−ピラゾリル、アミノカルボニルおよびアミノ−スルホニルから別個に選択される１から２個のラジカルにより置換されていてよい。
【００１８】
さらなる実施態様では、Ｒ４は−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ６および−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ６から選択され；ここでＲ６はメチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロヘキシル、フラニル、ピロリル、フェニル、ピリジニル、ピリダジニル、ピラジニル、ピラゾリル、テトラゾリル−メチルおよびベンジルから選択され；ここでＲ６の該シクロヘキシル、フラニル、ピロリル、フェニル、ピリジニル、ピリダジニル、ピラジニル、ピラゾリル、テトラゾリル−メチルまたはベンジルは場合によっては４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル、４−メチル−ピペラジン−１−イル、４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル、４−エチル−ピペラジン−１−イル、フェニル、エチル、トリフルオロメチル、モルホリノ、ジメチルアミノ、ハロ、ニトロ、トリフルオロメトキシ、１−メチル−ピロール−２−イル、４−メチル−イミダゾール−１−イル、４−メチル−ピペラジン−１−イル、４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル、イソブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルから選択される１から３個のラジカルにより置換されていてよい。
【００１９】
好ましい式Ｉの化合物を後記の実施例および表１に詳記する。
【００２０】
薬理学および有用性
本発明の化合物はタンパク質チロシンキナーゼの活性を調整し、そしてそのためにタンパク質チロシンキナーゼ、特にＡｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６および／またはＳＡＰＫ２βキナーゼが疾患の病理および／または症状の原因となる疾患または障害を処置するために有用である。
【００２１】
エイブルソンチロシンキナーゼ（すなわちＡｂｌ、ｃ−Ａｂｌ）は細胞サイクルの調節、遺伝毒性ストレスに対する細胞応答、およびインテグリンシグナリングを介する細胞環境についての情報の伝達に関与する。全体的にはＡｂｌタンパク質は、種々の細胞外および細胞内供給源からのシグナルを統合し、そして細胞サイクルおよびアポトーシスに関する決定に影響する細胞モジュールとして複雑な役割を果たす。エイブルソンチロシンキナーゼにはチロシンキナーゼ活性が調節解除されているキメラ融合体（腫瘍性タンパク質）ＢＣＲ−Ａｂｌまたはｖ−Ａｂｌのようなサブタイプの誘導体が含まれる。ＢＣＲ−Ａｂｌは慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の９５％および急性リンパ球性白血病の１０％の病因において重要である。ＳＴＩ−５７１（Gleevec）は発癌性ＢＣＲ−Ａｂｌチロシンキナーゼの阻害剤であり、そして慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の処置に用いられる。しかしながら、ＣＭＬの急性転化段階の患者にはＢＣＲ−Ａｂｌキナーゼにおける変異のためにＳＴＩ−５７１に抵抗するものもある。今日では２２個を越える変異が報告されており、最も一般的であるのはＧ２５０Ｅ、Ｅ２５５Ｖ、Ｔ３１５Ｉ、Ｆ３１７ＬおよびＭ３５１Ｔである。
【００２２】
本発明の化合物はａｂｌキナーゼ、特にｖ−ａｂｌキナーゼを阻止する。本発明の化合物はまた野生型ＢＣＲ−ＡｂｌキナーゼおよびＢＣＲ−Ａｂｌキナーゼの変異体をも阻止し、そしてしたがって白血病（特に作用のアポトーシスメカニズムが見出される、特に慢性骨髄性白血病および急性リンパ芽球性白血病）のようなＢｃｒ−ａｂｌ陽性癌および腫瘍性疾患の処置に適当であり、そしてまた白血病性幹細胞のサブグループへの影響ならびに該細胞除去（例えば骨髄除去）後のインビトロでのこれらの細胞の精製およびこれらが一度癌細胞除去されると細胞の再移植（例えば精製された骨髄細胞の再移植）の可能性をも示す。
【００２３】
ＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）は非常に一般的に存在する成長因子であり、これは正常な成長ならびに、発癌およびまた血管平滑筋細胞の疾患、例えばアテローム性動脈硬化症および血栓症に認められるような病的な細胞増殖の双方で重要な役割を果たす。本発明の化合物はＰＤＧＦ受容体（ＰＤＧＦＲ）活性を阻止することができ、そしてしたがって、神経膠腫、肉腫、前立腺腫瘍ならびに結腸、乳房および卵巣の腫瘍のような腫瘍性疾患の処置に適当である。
【００２４】
本発明の化合物を、例えば小細胞性肺癌における腫瘍阻止物質としてのみならず、アテローム性動脈硬化症、血栓症、乾癬、強皮症および線維症のような良性増殖性障害を処置するための薬剤としても、ならびに幹細胞の保護のために、例えば５−フルオロウラシルのような化学療法剤の血液毒性効果に対抗するために、そして喘息において用いることができる。本発明の化合物を特にＰＤＧＦ受容体キナーゼの阻止に応答する疾患の処置のために用いることができる。
【００２５】
本発明の化合物は移植、例えば同種移植の結果として生じる障害、特に閉塞性細気管支炎（ＯＢ）のような特に組織拒絶、すなわち同種肺移植の慢性拒絶の処置に有用な効果を示す。ＯＢでない患者とは対照的に、ＯＢの患者はしばしば気管支肺胞洗浄液におけるＰＤＧＦ濃度の上昇を示す。
【００２６】
本発明の化合物はまた再狭窄およびアテローム性動脈硬化症のような血管平滑筋細胞移動および増殖に関連する疾患（この場合ＰＤＧＦおよびＰＤＧＦ−Ｒもまたしばしば役割を果たす）においても有効である。インビトロおよびインビボでの血管平滑筋細胞増殖または移動に関するこれらの効果およびその結果を本発明の化合物の投与により、そしてまたインビボでの機械的損傷の後の血管内膜の肥厚に及ぼすその効果を調査することによっても実証することができる。
【００２７】
本発明の化合物はまたＳＣＦ受容体（ｋｉｔ）自己リン酸化およびＳＣＦ刺激されたＭＡＰＫキナーゼ（マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ）の活性化の阻止のような、幹細胞因子（ｃ−ｋｉｔリガンドまたは造血幹細胞因子としても公知のＳＣＦ）を伴う細胞過程をも阻止する。ＭＯ７ｅ細胞はヒト前巨核球性白血病細胞系であり、これは増殖に関してＳＣＦに依存する。本発明の化合物はＳＣＦ受容体の自己リン酸化を阻止することができる。
【００２８】
ニューロトロフィン受容体のｔｒｋファミリー（ｔｒｋＡ、ｔｒｋＢ、ｔｒｋＣ）は神経および非神経組織の生存、成長および分化を促進する。ＴｒｋＢタンパク質は小腸および結腸の神経内分泌型細胞において、膵臓のアルファ細胞において、リンパ節および脾臓の単球およびマクロファージにおいて、ならびに表皮の顆粒層において発現される（Shibayama and Koizumi, 1996）。ＴｒｋＢタンパク質の発現はウィルムス腫瘍および神経芽細胞腫の望ましくない進行に随伴されている。さらにＴｋｒＢは癌性前立腺細胞において発現されるが、正常細胞では発現されない。ｔｒｋ受容体の下流のシグナリング経路はＳｈｃ、活性化Ｒａｓ、ＥＲＫ−１およびＥＲＫ−２遺伝子を介するＭＡＰＫ活性化のカスケードならびにＰＬＣ−ガンマ１変換経路を伴う（Sugimoto et al., 2001）。
【００２９】
マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）は転写因子、翻訳因子および種々の細胞外シグナルに応答するその他の標的分子を活性化する保存されたシグナル伝達経路のメンバーである。ＭＡＰＫはマイトジェン活性化タンパク質キナーゼキナーゼ（ＭＫＫ）による配列Ｔｈｒ−Ｘ−Ｔｙｒを有する二重リン酸化モチーフでのリン酸化により活性化される。高等真核生物では、ＭＡＰＫシグナリングの生理学的役割は増殖、腫瘍形成、発達および分化のような細胞性事象に相関している。したがって、これらの経路を介して（特にＭＫＫ４およびＭＫＫ６を介して）シグナル伝達を調節する能力は炎症性疾患、自己免疫疾患および癌のようなＭＡＰＫシグナル伝達に関連するヒト疾患の処置および予防的治療の開発に至り得る。
【００３０】
Ｓｙｋは肥満細胞脱顆粒および好酸球活性化において重要な役割を果たすチロシンキナーゼである。したがって、Ｓｙｋキナーゼは種々のアレルギー性障害、特に喘息に関係している。ＳｙｋはＮ−末端ＳＨ２ドメインを介してＦｃεＲ１受容体のリン酸化されたガンマ鎖に結合し、そして下流へのシグナル伝達に必須であることが示されている。
【００３１】
Ｒａｓ−Ｒａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫシグナリング経路は成長シグナルに対する細胞応答を媒介する。Ｒａｓはヒト癌の〜１５％で発癌性形態に変異する。Ｒａｆファミリーはセリン／スレオニンタンパク質キナーゼに属し、そして３つのメンバー、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆおよびｃ−Ｒａｆ（またはＲａｆ−１）を含む。薬物標的であるＲａｆの焦点はＲａｓの下流エフェクターとしてのＲａｆの関係に集中している。しかしながら、最近のデータにより、Ｂ−ＲａｆがＲａｓ対立遺伝子の活性化を必要とせずに特定の腫瘍の形成において顕著な役割を有し得る（Nature 417, 949 - 954(01 Jul 2002)）ことが示唆されている。特にＢ−Ｒａｆ変異体は高いパーセンテージの悪性メラノーマで検出されている。
【００３２】
メラノーマに関する既存の医学的処置は、特に後期段階のメラノーマに関して、その有効性が限定的である。本発明の化合物はまたｂ−Ｒａｆキナーゼを伴う細胞過程をも阻止し、ヒト癌の処置、特にメラノーマに関して新しい治療の機会を提供する。
【００３３】
各々別個の遺伝子によりコードされるｐ３８ ＭＡＰＫの複数の形態（α、β、γ、δ）は、浸透圧ストレス、ＵＶ光およびサイトカイン媒介事象を含む種々の刺激に対する細胞の応答に関与するキナーゼカスケードの一部を形成する。ｐ３８のこれらの４つのアイソフォームは細胞内シグナリングの異なる態様を調節すると考えられている。その活性化はＴＮＦαのような前炎症性サイトカインの合成および生成に至るシグナリング事象のカスケードの一部である。Ｐ３８はその他のキナーゼおよび転写因子を含む下流の基質をリン酸化することにより機能する。ｐ３８キナーゼを阻止する薬剤は限定するものではないが、ＴＮＦα、ＩＬ−６、ＩＬ−８およびＩＬ−１βを含むサイトカインの生成を遮断することが示されている。末梢血単球（ＰＢＭＣ）はインビトロでリポ多糖類（ＬＰＳ）で刺激された場合、前炎症性サイトカインを発現および分泌することが示されている。ＰＢＭＣがＬＰＳでの刺激の前にかかる化合物で前処理される場合、Ｐ３８阻害剤はこの効果を効率よく遮断する。Ｐ３８阻害剤は炎症疾患の動物モデルにおいて効果的である。多くの疾患状態の破壊的効果は前炎症性サイトカインの過剰生成により引き起こされる。ｐ３８阻害剤のこの過剰生成を調節する能力により、これらは予防維持薬として有用になる。
【００３４】
ｐ３８の機能を遮断する分子は骨再吸収、炎症ならびにその他の免疫および炎症基盤の病理を阻止するのに有効であることが示されている。したがって、安全でそして有効なｐ３８阻害剤は、例えばＲＡのようなｐ３８シグナリングを調整することにより調節され得る疾患を弱める処置をするための手段を提供する。したがってｐ３８活性を阻止する本発明の化合物は炎症、変形性関節炎、リウマチ性関節炎、癌、自己免疫疾患の処置、およびその他のサイトカイン媒介疾患の処置に有用である。
【００３５】
形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦβ）は、例えばＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３を含むタンパク質のスーパーファミリーを表し、これは細胞成長および分化、胚および骨発達、細胞外マトリックス形成、造血、免疫並びに炎症応答の多面的モジュレータである。ＴＧＦβファミリーのメンバーは、最終的には細胞サイクルを調節するか、増殖応答を制御するか、または細胞外から細胞内へのシグナリング、細胞付着、移動および細胞内情報伝達を媒介する細胞外マトリックスタンパク質に関係する遺伝子の発現に至る細胞内シグナリング経路を開始する。結果的にＴＧＦβ細胞内シグナリング経路の阻害剤である本発明の化合物は、糸球体間質増殖性ＧＮ、免疫性ＧＮおよび半月体形成性ＧＮのような糸球体腎炎（ＧＮ）を含む、未制御のＴＧＦβ活性および過剰な繊維症に関連する腎臓障害を含む繊維増殖性疾患の処置に有用である。その他の腎臓症状には糖尿病性腎症、腎間質線維症、シクロスポリン投与を受けている移植患者の腎線維症、およびＨＩＶ関連腎症が挙げられる。膠原血管障害には全身性進行性硬化症、多発性筋炎、強皮症、皮膚筋炎、好酸球性筋膜炎、限局性強皮症、レイノー症候群の発症に関連するものが挙げられる。過剰なＴＧＦβ活性の結果である肺線維症には成人呼吸窮迫症候群、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、およびしばしば全身性エリテマトーデスおよび強皮症、化学的接触、またはアレルギーのような自己免疫障害に関連する間質性肺線維症が挙げられる。繊維増殖特性に関連する別の自己免疫障害はリウマチ性関節炎である。繊維増殖症状は眼の外科的処置に関連し得る。かかる処置には増殖性硝子体網膜症を伴う網膜復位術、眼内レンズ挿入時の水晶体摘出、および緑内障後ドレナージ手術が挙げられる。
【００３６】
繊維芽細胞成長因子受容体３は骨成長に負の調節効果を及ぼし、そして軟骨細胞増殖を阻止することが示された。致死性異形成は繊維芽細胞成長因子受容体３における様々な変異により引き起こされ、そして１つの変異体、ＴＤＩＩ ＦＧＦＲ３は転写因子Ｓｔａｔ１を活性化する構成的チロシンキナーゼ活性を有し、細胞サイクル阻害剤の発現、成長停止および骨の異常発達を導く（Su et al., Nature, 1997, 386, 288-292）。ＦＧＦＲ３はまたしばしば多発性骨髄腫型の癌においても発現される。
【００３７】
キナーゼ、ｃ−Ｓｒｃは多くの受容体の発癌性シグナルを伝達する。例えば腫瘍におけるＥＧＦＲまたはＨＥＲ２／ｎｅｕの過剰発現はｃ−ｓｒｃの構成的活性化を導き、これは悪性細胞に特徴的であるが、正常細胞には存在しない。一方、ｃ−ｓｒｃの発現を欠くマウスは大理石骨病表現型を呈し、これは破骨機能におけるｃ−ｓｒｃの重要な関与および関連する障害に関係する可能性を示している。
【００３８】
ヒトリボソームＳ６タンパク質キナーゼファミリーは少なくとも８つのメンバー（ＲＳＫ１、ＲＳＫ２、ＲＳＫ３、ＲＳＫ４、ＭＳＫ１、ＭＳＫ２、ｐ７０Ｓ６Ｋおよびｐ７０Ｓ６ Ｋｂ）からなる。リボソームタンパク質Ｓ６タンパク質キナーゼは重要な多面的機能を果たし、中でもタンパク質生合成の間のｍＲＮＡ翻訳の調節における重要な役割である（Eur. J. Biochem 2000 November; 267(21): 6321-30, Exp Cell Res. Nov. 25, 1999; 253(1):100-9, Mol Cell Endocrinol. May 25, 1999;151(1-2):65-77）。ｐ７０Ｓ６によるＳ６リボソームタンパク質のリン酸化はまた細胞運動性（Immunol. Cell Biol. 2000 August;78(4):447-51）および細胞成長（Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol., 2000;65:101-27）にも関与しており、そしてしたがって、腫瘍転移、免疫応答および組織修復、ならびにその他の疾患状態に重要であり得る。
【００３９】
ＳＡＰＫ'ｓ（「ｊｕｎ Ｎ−末端キナーゼ」または「ＪＮＫ'ｓ」とも称される）はまたｃ−ｊｕｎ転写因子の活性化およびｃ−ｊｕｎにより調節される遺伝子の発現に至るシグナル伝達経路における最後から２番目の工程に相当するタンパク質キナーゼファミリーである。特にｃ−ｊｕｎは遺伝毒性傷害により損傷を受けたＤＮＡの修復に関与するタンパク質をコードする遺伝子の転写に関与する。細胞におけるＳＡＰＫ活性を阻止する薬剤はＤＮＡ修復を妨げ、そしてＤＮＡ損傷を引き起こすことにより作用するこれらの癌治療方法に対する細胞の感受性を高める。
【００４０】
ＬｃｋはＴ細胞シグナリングにおいて役割を果たす。Ｌｃｋ遺伝子を欠くマウスは胸腺細胞を発達させる能力に乏しい。Ｔ細胞シグナリングの正のアクチベーターとしてのＬｃｋの機能は、Ｌｃｋ阻害剤がリウマチ性関節炎のような自己免疫疾患を処置するのに有用であり得ることを示唆している。
【００４１】
Ｆｅｓは骨髄造血細胞において強く発現され、そして骨髄性白血病における分化および生存の双方のシグナリング経路に関与している。ＣＳＫは癌、特に結腸直腸癌および乳癌に関与している。
【００４２】
前記にしたがって、本発明はさらにかかる処置を必要とする対象において前記したいずれかの疾患または障害を予防または処置するための方法を提供し、その方法は該対象に治療上有効な量（後記の「投与および医薬組成物」参照）の式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む。前記のいずれかの使用に関して、必要とされる用量は投与様式、処置される特定の症状および望ましい効果に依存して異なる。
【００４３】
投与および医薬組成物
一般に、本発明の化合物を当分野で公知のいずれかの有用なおよび許容される様式により、単一でまたは１つまたはそれより多い治療薬との組合せのいずれかで治療上有効量で投与する。治療上有効な量は疾患の重篤度、対象の年齢および相対的健康状態、用いる化合物の効力、およびその他の因子に依存して大きく異なる。一般に、約０.０３から２.５ｍｇ／ｋｇ体重の１日用量で全身的に満足できる結果が得られることが示されている。大型の哺乳動物、例えばヒトでの指示される１日用量は約０.５ｍｇから約１００ｍｇの範囲で、便宜的に例えば１日４回までの分割量で、または遅延形態で投与される。経口投与用の適当な単位投与形態は約１から５０ｍｇの活性成分を含む。
【００４４】
本発明の化合物を任意の慣用される経路により、特に経腸的に、例えば経口的に、例えば錠剤もしくはカプセルの形態で、または非経口的、例えば注射用溶液もしくは懸濁液の形態で、局所的に、例えばローション、ゲル、軟膏もしくはクリームの形態で、または鼻用もしくは坐剤形態で医薬組成物として投与することができる。少なくとも１つの薬学的に許容される担体または希釈剤に随伴された、遊離の形態または薬学的に許容される塩の形態の本発明の化合物を含む医薬組成物を、混合、顆粒化またはコーティング法により慣用される様式で製造することができる。例えば経口用組成物は、ａ）希釈剤、例えばラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン；ｂ）滑沢剤、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウムもしくはカルシウム塩および／またはポリエチレングリコール；錠剤用にはまたｃ）結合剤、例えばケイ酸マグネシウムアルミニウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン；所望によりｄ）崩壊剤、例えばデンプン、寒天、アルギン酸もしくはそのナトリウム塩、または発泡混合物；ならびに／またはｅ）吸収剤、着色剤、着香剤、および甘味剤と一緒に活性成分を含む錠剤またはゼラチンカプセルでよい。注射用組成物は等張水溶液または懸濁液でよく、そして坐剤を脂肪エマルジョンまたは懸濁液から調製することができる。組成物は滅菌され、そして／または保存剤、安定剤、湿潤剤もしくは乳化剤、溶解促進剤、浸透圧を調節するための塩および／もしくはバッファーのような添加剤を含有することができる。加えてこれらはまたその他の治療的に価値のある物質を含有することもできる。経皮適用のための適当な処方は有効量の本発明の化合物を担体と共に含む。担体は宿主の皮膚を経る通過を補助するための吸収可能な薬理学的に許容される溶媒を含むことができる。例えば経皮装置はバッキング材、化合物を場合によっては担体を伴って含有する貯蔵器、場合によっては制御されそして予め決定された速度で長時間にわたって宿主の皮膚に化合物を分配するための速度制御バリヤ、および装置を皮膚に固定するための手段を含む包帯の形態である。マトリックス経皮処方を用いることもできる。例えば皮膚および眼への、局所適用のための適当な処方は好ましくは当分野で周知の水溶液、軟膏、クリームまたはゲルである。このようなものは可溶化剤、安定剤、張度増強剤（tonicity enhancing agents）、バッファーおよび保存剤を含有してよい。
【００４５】
本発明の化合物を治療上有効な量で１つまたはそれより多い治療薬と組み合わせて（医薬用組み合わせ）投与することができる。例えばその他の免疫調節剤もしくは抗炎症性物質とで、例えばシクロスポリン、ラパマイシン、もしくはアスコマイシン、またはその免疫抑制類似体、例えばシクロスポリンＡ（ＣｓＡ）、シクロスポリンＧ、ＦＫ−５０６、ラパマイシン、もしくは同等な化合物、コルチコステロイド、シクロホスファミド、アザチオプリン、メソトレキセート、ブレキナール、レフルノミド、ミゾリビン、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチル、１５−デオキシスパガリン、免疫抑制抗体、特に白血球受容体のモノクローナル抗体、例えばＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２５、ＣＤ２８、Ｂ７、ＣＤ４５、ＣＤ５８もしくはそのリガンド、またはＣＴＬＡ４１ｇのようなその他の免疫調節化合物と組み合わせて用いたときに相乗効果を生じることができる。本発明の化合物をその他の治療と組み合わせて投与する場合、同時投与する化合物の用量はもちろん用いる併用薬（co-drug）の型、用いる特定の薬物、処置される症状等に依存して異なる。
【００４６】
本発明はまた医薬用組み合わせ、例えばａ）本明細書に開示するような、遊離形態または薬学的に許容される塩の形態の本発明の化合物である第１の薬剤およびｂ）少なくとも１つの併用薬を含むキットをも提供する。キットはその投与のための指示書を含むことができる。
【００４７】
「同時投与」もしくは「組み合わせ投与」なる用語または本明細書で利用されるような同様の用語は単一の患者に対して選択された治療薬の投与を包含することを意味し、そして薬剤が同一の投与経路により、または同時に投与される必要がない処置計画を含むことを意図する。
【００４８】
本明細書で用いる「医薬用組み合わせ」なる用語は１つ以上の活性成分の混合または組み合わせの結果である生成物を意味し、そして活性成分の一定のおよび不定の双方の組み合わせを含む。「固定の組み合わせ」なる用語は、活性成分、例えば式Ｉの化合物および併用薬を単一の物または投与形態で患者に同時に双方とも投与することを意味する。「不定の組み合わせ」なる用語は、活性成分、例えば式Ｉの化合物および併用薬を特定の時間的限定を伴わずに同時に、併用して、または逐次的のいずれかで別個の物として患者に双方とも投与することを意味し、ここでかかる投与により患者の体内では２つの化合物の治療的に有効なレベルが提供される。後者はまたカクテル療法、例えば３つまたはそれより多い活性成分の投与にも適用される。
【００４９】
本発明の化合物を作成するための方法
本発明はまた本発明の化合物の調製のための方法をも含む。記載する反応では、反応における好ましくない関与を避けるために最終生成物において望まれる場合、反応性の官能基、例えばヒドロキシ、アミノ、イミノ、チオまたはカルボキシ基を保護する必要があり得る。慣用される保護基を標準的な実践にしたがって用いることができ、例えばT.W. Greene and P. G. M. Wuts in 「Protective Groups in Organic Chemistry」, John Wiley and Sons, 1991を参照のこと。
【００５０】
以下の３つの反応スキームの各々で、Ｒ１０は水素として示される。Ｒ２が水素である式Ｉの化合物を以下の反応スキームＩのような手順により調製することができる：
反応スキームＩ
【化２】
【００５１】
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｙ、Ｚおよびｎは発明の要旨の式Ｉに関して定義されるとおりである。適当な酸（例えばＴＦＡ等）の存在下、式２の化合物を適当な酸化剤（例えばＮａＮＯ２等）と反応させることにより、式Ｉの化合物を調製することができる。反応を２０から４０℃で実施し、そして完了まで４時間かかり得る。
【００５２】
Ｒ２がＣ１−６アルキルである式Ｉの化合物を以下の反応スキームＩＩのような手順により調製することができる：
反応スキームＩＩ
【化３】
【００５３】
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｙ、Ｚおよびｎは発明の要旨の式Ｉに関して定義されるとおりである。
【００５４】
適当な溶媒（例えばＤＭＦ等）および適当な酸化剤（例えばＮａＨ等）の存在下、Ｒ２が水素である式Ｉの化合物をＲ２ＩまたはＲ２Ｂｒと反応させることにより、式Ｉの化合物を調製することができる。反応を０から２５℃で実施し、そして完了まで４時間かかり得る。
反応スキームＩＩＩ
【化４】
【００５５】
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｙ、Ｚおよびｎは発明の要旨の式Ｉに関して定義されるとおりである。
【００５６】
適当な溶媒（例えばジオキサン等）、適当な塩基（例えばリン酸カリウム、ｔｅｒｔ−ブタンオキシドカリウム等）、適当なリガンド（例えばXantphos、イミダゾリウムリガンド（実施例８参照）等）および適当な触媒（例えばＰｄ２（ｄｂａ）３、Ｐｄ（ＯＡｃ）２等）の存在下、式Ｉの化合物をＲ６ＮＨ２と反応させることにより式Ｉの化合物を調製することができる。反応を約８０から１２０℃で実施し、そして完了まで２４時間かかり得る。
【００５７】
式Ｉの化合物の合成の詳細な記載を後記の実施例において見出すことができる。
【００５８】
本発明の化合物を作成するための別の方法
化合物の遊離塩の形態を薬学的に許容される無機または有機酸と反応させることにより本発明の化合物を薬学的に許容される酸付加塩として調製することができる。これに代えて、化合物の遊離酸の形態を薬学的に許容される無機または有機塩基と反応させることにより、本発明の化合物の薬学的に許容される塩基付加塩を調製することができる。これに代えて、出発材料または中間物質の塩を用いて本発明の化合物の塩の形態を調製することができる。
【００５９】
本発明の化合物の遊離酸または遊離塩基を各々対応する塩基付加塩または酸付加塩の形態から調製することができる。例えば酸付加塩の形態の本発明の化合物を適当な塩基（例えば水酸化アンモニウム溶液、水酸化ナトリウム等）と処理することにより対応する遊離塩基に変換することができる。塩基付加塩の形態の本発明の化合物を適当な酸（例えば塩酸等）と処理することにより対応する遊離酸に変換することができる。
【００６０】
適当な不活性有機溶媒（例えばアセトニトリル、エタノール、水性ジオキサン等）中０から８０℃で還元剤（例えばイオウ、二酸化イオウ、トリフェニルホスフィン、ホウ化水素リチウム、ホウ化水素ナトリウム、三塩化、三臭化リン等）と処理することにより、本発明の化合物のＮ−オキシドから未酸化形態の本発明の化合物を調製することができる。
【００６１】
本発明の化合物のプロドラッグ誘導体を当業者に公知の方法により調製することができる（例えばさらに詳細な記載に関しては、Saulnier et al.,(1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985を参照）。例えば本発明の非誘導体化化合物を適当なカルバミル化剤（例えば１,１−アシルオキシアルキルカルバノクロリダート、炭酸パラニトロフェニル等）と反応させることにより適当なプロドラッグを調製することができる。
【００６２】
当業者に公知の手段により本発明の化合物の保護された誘導体を作成することができる。保護基の創成およびその除去に適用できる技術の詳細な記載をT. W. Greene,「Protecting Groups in Organic Chemistry」, 3rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999に見出すことができる。
【００６３】
本発明の化合物を溶媒和物（例えば水和物）として都合よく調製できるか、または本発明の方法の間に形成することができる。本発明の化合物の水和物をジオキシン、テトラヒドロフランまたはメタノールのような有機溶媒を用いて水性／有機溶媒混合物からの再結晶により都合よく調製できる。
【００６４】
化合物のラセミ混合物を光学的に活性な分割剤と反応させてジアステレオマー化合物の対を形成し、ジアステレオマーを分離し、そして光学的に純粋な鏡像異性体を回収することにより、本発明の化合物をその個々の立体異性体として調製することができる。本発明の化合物の共有結合性ジアステレオマー誘導体を用いて鏡像異性体の分割を実施することができるが、解離性複合体（例えば結晶性ジアステレオマー塩）が好ましい。ジアステレオマーは異なる物理学的特性（例えば融点、沸点、溶解性、反応性等）を有し、そしてこれらの相違点を利用することにより容易に分離することができる。クロマトグラフィーにより、または好ましくは溶解性の違いに基づく分離／分割技術によりジアステレオマーを分離することができる。次いでラセミ化に至らない任意の実用的な手段により分割剤と共に光学的に純粋な鏡像異性体を回収する。化合物の立体異性体をそのラセミ混合物から分割するのに適用できる技術のさらに詳細な記載をJean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, 「Enantiomers, Racemates and Resolutions」, John Wiley And Sons, Inc., 1981に見出すことができる。
【００６５】
要約すると、式Ｉの化合物を：
（ａ）反応スキームＩ、ＩＩまたはＩＩＩの方法；ならびに
（ｂ）場合によっては本発明の化合物を薬学的に許容される塩に変換すること；
（ｃ）場合によっては本発明の化合物の塩形態を塩でない形態に変換すること；
（ｄ）場合によっては本発明の化合物の未酸化形態を薬学的に許容されるＮ−オキシドに変換すること；
（ｅ）場合によっては本発明の化合物のＮ−オキシドをその未酸化形態に変換すること；
（ｆ）場合によっては本発明の化合物の個々の異性体を異性体の混合物から分割すること；
（ｇ）場合によっては本発明の非誘導体化化合物を薬学的に許容されるプロドラッグ誘導体に変換すること；および
（ｈ）場合によっては本発明の化合物のプロドラッグ誘導体をその非誘導体化形態に変換すること；
を伴う方法により作成することができる。
【００６６】
出発材料の生成の場合は特記しておらず、化合物は公知であるか、または当分野において公知の方法に類似して、もしくは本明細書後記の実施例に開示するように調製することができる。
【００６７】
前記の変換は本発明の化合物の調製のための方法の代表例にすぎず、そしてその他の周知の方法を同様に用いることができることは当業者には理解されよう。
【００６８】
実施例
限定するものではないが、本発明にしたがって式Ｉの化合物（実施例）および中間物質（参照）の調製を説明する以下の実施例により本発明をさらに例示する。
【００６９】
実施例１
Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−フェニル]−４−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ベンズアミド
【化５】
工程Ａ：２,６−ジクロロ−３−ニトロフェニル−アセトニトリルの調製
【化６】
【００７０】
ジクロロメタン（５０ｍｌ）およびＨ２ＳＯ４（４０ｍｌ）中２,６−ジクロロ−フェニル−アセトニトリル（１５.０ｇ、８０.６２ミリモル）の溶液に０℃でＨ２ＳＯ４（１４ｍｌ）およびＨＮＯ３（５.５ｍｌ）の混合物を（ゆっくりと）加える。反応混合物を０℃で２０分間攪拌し、半時間で室温まで加温し、そして次に濃縮して有機溶媒を除去する。溶液を氷水（４００ｍｌ）の入ったビーカーに注いで結晶性の沈殿が得られ、これを真空濾過により収集し、そして水で洗浄して生成物が得られる（２０.４４ｇ、８２.４％）。
【００７１】
工程Ｂ：３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−[１,６]ナフチリジン−２−イルアミンの調製
【化７】
【００７２】
ＥｔＯＨ（２.０ｍｌ）中２,６−ジクロロ−３−ニトロフェニル−アセトニトリル（１.０２ｇ、４.４２ミリモル）、４−アミノ−ピリジン−３−カルバルデヒド（０.４ｇ、３.２８ミリモル）およびＮａＯＨ（５２ｍｇ、１.３１ミリモル）の溶液を１０５℃まで２４時間加熱する。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３および塩類溶液で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られる。ＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（２Ｎ ＮＨ３）（１００／６）のグラジエントで溶出するフラッシュシリカゲルカラム精製により固体の標題中間物質が得られる（２５７ｍｇ、２３.４％）.
【００７３】
工程Ｃ：３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オンの調製
【化８】
【００７４】
ＴＦＡ（３.０ｍｌ）中３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−[１,６]ナフチリジン−２−イルアミン（５０ｍｇ、０.１４９ミリモル）の溶液に０℃でＮａＮＯ２をゆっくりと加える。反応混合物を０℃で１５分間攪拌し、室温まで加温し、そして３時間攪拌する。溶液を氷水（５０ｍｌ）およびＮａＣＯ３の入ったビーカーに注ぎ、次いでＥｔＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で抽出し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３および塩類溶液で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して固体の標題中間物質が得られる（５０ｍｇ、１００％）。
【００７５】
３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オンの調製の別法：
【００７６】
工程Ａ'：（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−酢酸の調製
【化９】
【００７７】
水（１００ｍｌ）およびＨ２ＳＯ４（濃１００ｍｌ）中２,６−ジクロロ−３−ニトロフェニル−アセトニトリル（１５.０ｇ、６４.９４ミリモル）の溶液を１２０℃まで３時間加熱する。反応混合物を室温まで冷却し、そして氷水（２５０ｍｌ）の入ったビーカーに注いで結晶性の沈殿が得られ、これを真空濾過により収集し、そして水で洗浄して生成物が得られる（１６.０ｇ、９８.６％）。
【００７８】
工程Ｂ'：２−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−Ｎ−（３−ホルミル−ピリジン−４−イル）−アセトアミドの調製
【化１０】
【００７９】
塩化チオニル（６０ｍｌ）中（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−酢酸（１５.０ｇ、６０.０ミリモル）の溶液を１時間還流する。濃縮により溶媒を除去し；乾燥トルエンを加え、そして濃縮して塩化チオニルを完全に除去する。乾燥ジクロロメタン（２００ｍｌ）中酸塩化物の溶液にジクロロメタン（５０ｍｌ）およびＤＩＥＤＡ（１０.７ｍｌ、６０ミリモル）中４−アミノ−ピリジン−３−カルバルデヒド（６.６ｇ、５４ミリモル）の溶液を加える（滴加する）。混合物を室温で２時間おく。反応混合物をＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）で希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３および塩類溶液で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られる。ジクロロメタン／ヘキサンでの再結晶により固体の標題化合物（１８.２ｇ、９５.２％）に至る。
【００８０】
工程Ｃ'：３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オンの調製
【００８１】
ＭｅＯＨ（３００ｍｌ）中２−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−Ｎ−（３−ホルミル−ピリジン−４−イル）−アセトアミド（５.０ｇ、１４.１２ミリモル）およびＮａ２ＣＯ３（２.５ｇ）の溶液を７０℃で１５分間加熱する。反応混合物を濾過した後、濃縮により溶媒を除去して、粗製生成物が得られ、これをＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（２Ｎ ＮＨ３）（９３／７％）のグラジエントでのフラッシュシリカゲルカラム溶出により精製して固体の標題中間物質（３.７５ｇ、７７.７％）が得られる。
【００８２】
工程Ｄ：３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オンの調製
【化１１】
【００８３】
ＤＭＦ（５０ｍｌ）中３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オン（２.０ｇ、５.９５ミリモル）の溶液にＨＮａ（２８６ｍｇ、６０％、７.１４ミリモル）およびＩＭｅ（０.５ｍｌ、８.０３ミリモル）を０℃で加える。混合物を０℃で２時間攪拌し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）で希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（２Ｎ ＮＨ３）（９８.５／１.５）のグラジエントでのフラッシュシリカゲルカラム溶出により精製して固体の標題中間物質（１.６７ｇ、８０.３％）が得られる。
【００８４】
工程Ｅ：３−（３−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オンの調製
【化１２】
【００８５】
ＥｔＯＨ（１２ｍｌ）中３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オン（１.５５ｇ、４.４２７ミリモル）の懸濁溶液にＨＣｌ（濃１６ｍｌ）中Ｓｎ（ＩＩ）Ｃｌ２（３.８０ｇ、１９.９２ミリモル）の溶液を７５℃で加える。７５℃で３０分間攪拌した後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そしてＫ２ＣＯ３でｐＨ８まで中和する。有機層を飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液で洗浄し、そして乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られる。粗製生成物をＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ／ヘキサンでの再結晶により精製して固体の標題中間物質（１.３２ｇ、９３.１５％）が得られる。
【００８６】
工程Ｆ：４−クロロメチル−Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−フェニル]−ベンズアミドの調製
【化１３】
【００８７】
ジクロロメタン（７ｍｌ）中３−（３−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−[１,６]−ナフチリジン−２−オン（３０ｍｇ、０.０９３７ミリモル）の溶液に塩化４−（クロロメチル）ベンゾイル（５３.２ｍｇ、０.２８ミリモル）を加える。混合物を室温で２４時間攪拌した後、ＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（ＮＨ３、２Ｎ）（９５／５％）のグラジエントでのフラッシュシリカゲルカラム溶出により精製して固体の標題中間物質（３２.４ｍｇ、７３.１％）が得られる。
【００８８】
工程Ｇ：Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−フェニル]−４−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ベンズアミドの調製
【化１４】
【００８９】
ＤＭＦ（２.５ｍｌ）中４−クロロメチル−Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−フェニル]−ベンズアミド（２５ｍｇ、０.０５２９ミリモル）の溶液にＣｓＣＯ３（５１.７ｍｇ、０.１５８７ミリモル）および（５３.２ｍｇ、０.２８ミリモル）を加える。混合物を室温で３０分間攪拌した後、ＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３および塩類溶液で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（ＮＨ３、２Ｎ）（９８／８）のグラジエントでのフラッシュシリカゲルカラム溶出により精製して、固体のＮ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−フェニル]−４−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ベンズアミド（２１ｍｇ、７３.９％）が得られる：1H NMR 400 MHz(CDCl3)δ 8.86(s, 1H), 8.69(s, 1H), 8.63(d, 1H), 8.44(s, 1H), 7.84-7.86(m, 2H), 7.77(s, 1H), 7.46-7.52(m, 3H), 7.29(d, 1H), 3.78(s, 3H), 3.58(s, 2H), 2.50(m, 8H), 2.30(s, 3H); MS m/z 537.2(M + 1).
【００９０】
実施例２
Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンゼンスルホンアミド
【化１５】
３−（３−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オン（３５ｍｇ、０.１０９３ミリモル）を乾燥ＴＨＦ（２ｍｌ）に溶解する。塩化４−トリフルオロメチルベンゼンスルホニル（２６.７４ｍｇ、０.１０９３ミリモル）およびピリジン（１２.９５ｍｇ、０.１６４０ミリモル）を加える。反応物を２時間還流し、酢酸エチル（１５０ｍｌ）で希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３および塩類溶液で洗浄する。ＭｇＳＯ４を用いて有機相を乾燥させ、そして粗製生成物をシリカゲルカラムのカラムクロマトグラフィーにより精製し、そして０−４％メタノール／塩化メチレングラジエントで溶出して白色固体のＮ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンゼンスルホンアミド（２０.６ｍｇ）が得られる：1H NMR (CD3OD): δ3.70(s, 3H), 7.44(d, 1H), 7.53(d, 1H), 7.63(t, 1h), 7.82(m, 3H), 7.91(s, 1H), 7.98(s, 1H), 8.62(d, 1H), 9.03(s, 1H); MS m/z 528.1(M + 1).
【００９１】
実施例３
Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−キノリン−３−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化１６】
工程Ａ：２−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−Ｎ−（２−ホルミル−フェニル）−アセトアミドの調製
【化１７】
【００９２】
塩化チオニル（１５ｍｌ）中（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−酢酸（０.９０ｇ、３.３５ミリモル）の溶液を１時間還流する。濃縮により溶媒を除去し、そして乾燥トルエンを加えて塩化チオニルを完全に除去する。乾燥ジクロロメタン（３０ｍｌ）中酸塩化物の溶液にジクロロメタン（５.０ｍｌ）中２−アミノベンズアルデヒド（０.３６５ｇ、３.０２ミリモル）の溶液を加える（滴加する）。混合物を室温で２時間攪拌する。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３および塩類溶液で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物（０.９４ｇ、８８.６％）が得られる。
【００９３】
工程Ｂ：３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−キノリン−２−オンの調製
【化１８】
【００９４】
ＭｅＯＨ（１５０ｍｌ）中２−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−Ｎ−（２−ホルミル−フェニル）−アセトアミド（０.７ｇ、１.９９ミリモル）およびＮａ２ＣＯ３（１.０ｇ）の溶液を７０℃で３０分間加熱する。反応混合物を濾過した後、濃縮により溶媒を除去して粗製生成物が得られる。フラッシュシリカゲルカラムによりＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（２Ｎ ＮＨ３）（９７／３％）のグラジエントで溶出して粗製生成物を精製して、固体の標題中間物質（０.２８８ｇ、４１.３％）が得られる。
【００９５】
工程Ｃ：３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−キノリン−２−オンの調製
【化１９】
【００９６】
ＤＭＦ（５.０ｍｌ）中３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−キノリン−２−オン（０.２１ｇ、０.６２６６ミリモル）の溶液にＨＮａ（３０.１ｍｇ、６０％、０.７５２ミリモル）およびＩＭｅ（１２０.１ｍｇ、０.８４６ミリモル）を０℃で加える。混合物を０℃で２時間攪拌した後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをフラッシュシリカゲルカラムにより、ＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（２Ｎ ＮＨ３）（９５／５）のグラジエントで溶出して精製して固体の標題中間物質（７８ｍｇ、３５.８％）が得られる。
【００９７】
工程Ｄ：３−（３−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−キノリン−２−オンの調製
【化２０】
【００９８】
ＥｔＯＨ（３.０ｍｌ）中３−（２,６−ジクロロ−３−ニトロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−キノリン−２−オン（５０ｍｇ、０.１４３ミリモル）の懸濁溶液に濃縮ＨＣｌ（２.０ｍｌ）中Ｓｎ（ＩＩ）Ｃｌ２（１２２ｍｇ、０.６４４ミリモル）の溶液を７５℃で加える。混合物を７５℃で３０分間攪拌した後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そしてｐＨが８に達するまでＫ２ＣＯ３で中和する。有機層を飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液で洗浄し、そして乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物（４４.２ｍｇ、９６.７％）が得られる。
【００９９】
工程Ｅ：Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−キノリン−３−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化２１】
【０１００】
ジクロロメタン（５.０ｍｌ）中３−（３−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−キノリン−２−オン（３０ｍｇ、０.０９４ミリモル）の溶液に塩化４−（クロロメチル）ベンゾイル（５８.７ｍｇ、０.２８３ミリモル）を加える。混合物を室温で２４時間攪拌した後、ＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（ＮＨ３、２Ｎ）（９５／５）のグラジエントでのフラッシュシリカゲルカラム溶出により精製して、固体のＮ−[２,４−ジクロロ−３−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−キノリン−３−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（３４.５ｍｇ、７５.０％）が得られる：1H NMR 400 MHz(CDCl3)δ 8.53(d, 1H), 8.47(s, 1H), 8.20(s, 1H), 8.05(d, 1H), 7.84(d, 1H), 7.72(s, 1H), 7.61-7.69(m, 3H), 7.51(d, 1H), 7.46(d, 1H), 7.30(m, 1H), 3.83(s, 3H); MS m/z 491.20(M + 1).
【０１０１】
実施例４
Ｎ−[３,５−ジクロロ−４−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化２２】
【０１０２】
ＤＭＳＯ（４００ｍｌ）中３,５−ジクロロニトロベンゼン（５０.００ｇ、２６０.６ミリモル）およびメチルチオアセトニトリル（２２.７１ｇ、２６０.６ミリモル）の溶液にＮａＯＨ（２０.８４ｇ、５２１.２ミリモル）を０℃で加える。室温でＮ２下、２４時間攪拌して、反応混合物を室温まで加温する。反応物を氷水で希釈し、そして３Ｎ ＨＣｌによりｐＨ１まで酸性にする。混合物を酢酸エチル（３×５００ｍｌ）により抽出し、Ｈ２Ｏにより洗浄し、ＭｇＳＯ４により乾燥させ、そして濃縮して黒色の油状物が得られる。油状物をシリカゲルカラムのカラムクロマトグラフィーにより０−１０％ 酢酸エチル／ヘキサングラジエントで溶出して精製して黄色固体の２,６−ジクロロ−４−ニトロベンジルニトリル（１１.００ｇ）が得られる。
【０１０３】
濃縮Ｈ２ＳＯ４（４５ｍｌ）およびＨ２Ｏ（５０ｍｌ）中２,６−ジクロロ−４−ニトロベンジルニトリル（１０.８６ｇ、４７.０ミリモル）の攪拌懸濁液を１５０℃で２.５時間加熱する。次いで反応混合物を水（３００ｍｌ）に注ぐ。沈殿物を濾過により収集して白色固体の２,６−ジクロロ−４−ニトロベンジル−カルボン酸（１０.４１ｇ）が得られる。
【０１０４】
２,６−ジクロロ−４−ニトロベンジル−カルボン酸（３.００ｇ、１１.９８ミリモル）を塩化チオニル（１２ｍｌ）に懸濁する。懸濁液を８０℃まで加熱し、そして３０分間還流する。乾燥トルエンを添加することにより過剰の塩化チオニルを完全に蒸発させる。残留物を乾燥塩化メチレン（５０ｍｌ）に溶解し、そして次に乾燥塩化メチレン（５ｍｌ）およびトリエチルアミン（２.９１ｇ、２８.７６ミリモル）中４−アミノ−３−ピリジルカルボキシアルデヒド（１.７６ｇ、１４.３８ミリモル）の溶液に加える。室温で２時間攪拌した後、反応混合物を酢酸エチル（５００ｍｌ）により希釈し、飽和Ｋ２ＣＯ３溶液および塩類溶液で洗浄する。有機相をＭｇＳＯ４により乾燥させ、そして粗製生成物をシリカゲルカラムのカラムクロマトグラフィーにより０−４％ メタノール／塩化メチレングラジエントで溶出して精製し、白色固体の２−（２,６−ジクロロ−４−ニトロ−フェニル）−Ｎ−（３−ホルミル−ピリジン−４−イル）−アセトアミド（３.００ｇ）が得られる。
【０１０５】
２−（２,６−ジクロロ−４−ニトロ−フェニル）−Ｎ−（３−ホルミル−ピリジン−４−イル）−アセトアミド（３.０ｇ、８.４７ミリモル）を乾燥メタノール（２４０ｍｌ）に溶解する。Ｎａ２ＣＯ３（１.８０ｇ、１６.９４ミリモル）を加える。反応物を３０分間還流し、酢酸エチル（２１０ｍｌ）により希釈し、そして濾過する。溶媒を蒸発させて粗製生成物が得られ、これを酢酸エチル／ヘキサンにより再結晶してわずかに黄色の固体の３−（２,６−ジクロロ−４−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オン（３.０７ｇ）が得られる。
【０１０６】
３−（２,６−ジクロロ−４−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−[１,６]−ナフチリジン−２−オン（１.５０ｇ、４.４６ミリモル）を乾燥ＤＭＦ（６０ｍｌ）に溶解し、そして０℃まで冷却する。０℃で１.５時間攪拌しながらＮａＨ（０.２０ｇ、鉱物油中６０％、４.９１ミリモル）およびヨードメタン（０.７６ｇ、５.３５ミリモル）を加える。溶媒を蒸発により除去し、残留物を酢酸エチル（３００ｍｌ）に溶解し、飽和Ｋ２ＣＯ３および塩類溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、そして濃縮して粗製生成物（１.３０ｇ）が得られ、これをさらに精製することなく直接次の工程で使用した。
【０１０７】
最後の工程の粗製物（４３７ｍｇ）を無水エタノール（４５ｍｌ）に懸濁する。濃縮ＨＣｌ（６ｍｌ）に溶解したＳｎＣｌ２（９４６ｍｇ、４.９９ミリモル）を懸濁液に加える。反応物を７５℃まで加熱し、そして３０分間還流する。反応物を酢酸エチル（２００ｍｌ）により希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３および塩類溶液で洗浄する。有機相をＭｇＳＯ４により乾燥させ、そして粗製生成物をシリカゲルカラムのカラムクロマトグラフィーにより０−４％ ２.０Ｎ アンモニアメタノール溶液／塩化メチレングラジエントで溶出して精製し、黄色固体の３−（４−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オン（２６５ｍｇ）が得られる。
【０１０８】
乾燥塩化メチレン（１２ｍｌ）中３−（４−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オン（３０ｍｇ、０.０９３７ミリモル）の溶液に塩化３−トリフルオロメチルベンゾイル（３９.０８ｍｇ、０.１８７４ミリモル）を加える。反応物を室温で２時間攪拌し続ける。反応物を酢酸エチル（１００ｍｌ）により希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３および塩類溶液で洗浄する。有機相をＭｇＳＯ４により乾燥させ、そして粗製生成物をシリカゲルカラムのカラムクロマトグラフィーにより０−４％ メタノール／塩化メチレングラジエントで溶出して精製し、白色固体のＮ−[３,５−ジクロロ−４−（１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（４２ｍｇ）が得られる。1H NMR 400 MHz(CD3OD): δ3.80(s, 3H), 7.62(d, 1H), 7.76(t, 1H), 7.92(d, 1H), 8.01(s, 2H), 8.06(s, 1H), 8.23(d, 1H), 8.30(s, 1H), 8.64(d, 1H), 8.92(s, 1H). MS m/z 492.2(M + 1).
【０１０９】
実施例５
Ｎ−[４−クロロ−３−（２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化２３】
ジクロロメタン（１５０ｍｌ）中２−クロロ−５−ニトロ−フェニル酢酸（３.０８ｇ、１４.２８ミリモル）の溶液に塩化オキサリル（６.２ｍｌ、７１.００ミリモル）を加え、そして混合物を１時間還流する。室温まで冷却した後、これを濃縮し、そして残留物を無水トルエン（２×３０ｍｌ）と同時蒸発させる。次いでこの残留物をジクロロメタン（６０ｍｌ）に溶解し、そしてジクロロメタン（３０ｍｌ）中４−アミノ−ピリジン−３−カルバルデヒド（１.７４４ｇ、１４.２８ミリモル）の溶液を加える。この混合物を２０分間攪拌した後、Ｎ,Ｎ'−ジイソプロピルエチルアミン（２.５６ｍｌ、１４.２８ミリモル）を加える。攪拌をさらに２時間続けた後、ジクロロメタン（５００ｍｌ）で希釈する。混合物を水（１００ｍｌ）、塩類溶液（１００ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮する。この粗製生成物をさらに精製することなく使用する。
【０１１０】
メタノール（５０ｍｌ）中前記の粗製生成物および炭酸ナトリウム（３.０ｇ、２８.３ミリモル）を３０分間還流する。濾過により固体を除去し、そして濾液を濃縮する。残留物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）に溶解し、水（２×５０ｍｌ）で洗浄し、有機相を分離し、そして濃縮する。結晶化の後、最終生成物（２.７８ｇ）が得られる。
【０１１１】
３−（２−クロロ−５−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−[１,６]−ナフチリジン−２−オン（０.９６ｇ、３.１８ミリモル）をエタノール（１５ｍｌ）に懸濁する。ＳｎＣｌ２（２.７１ｇ、１４.３ミリモル）およびＨＣｌ（２０ｍｌ）を加え、そして混合物を２時間還流した後、室温まで冷却する。ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を加え、そして炭酸ナトリウムの添加により混合物を中和する。ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍｌ）で抽出し、合わせた有機物を塩類溶液（５０ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、淡黄色固体の最終生成物（０.６２ｇ、７１.７％）が得られる。
【０１１２】
無水ＴＨＦ（２.５ｍｌ）中３−（５−アミノ−２−クロロ−フェニル）−１Ｈ−[１,６]−ナフチリジン−２−オン（６０ｍｇ、０.２３ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（８２μｌ、０.４６ミリモル）の溶液に塩化３−トリフルオロメチル−ベンゾイル（４４μｌ）の溶液を加える。この混合物を室温で３０分間攪拌し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で希釈し、水（１０ｍｌ）および塩類溶液（１０ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、そして調製用ＨＰＬＣにより精製してＮ−[４−クロロ−３−（２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−フェニル]−３−トリフルオロ−メチル−ベンズアミド（１８.３ｍｇ）が得られる。
【０１１３】
実施例６
Ｎ−（２,４−ジクロロ−３−{２−[３−（１−ヒドロキシ−エチル）−フェニルアミノ]−８−メチル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル}−フェニル）−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化２４】
工程Ａ：４−アミノ−２−メチルスルファニル−ピリミジン−５−カルバルデヒドの調製
【化２５】
【０１１４】
ＴＨＦ（１００ｍｌ）中４−アミノ−２−（メチルチオ）ピリミジン−５−カルボニトリル（３.０ｇ、１８.０５ミリモル）の溶液に水素化ジイソブチルアルミニウム（４１.５２ｍｌ、ＣＨ２Ｃｌ２中１.０Ｍ、４１.５２ミリモル）を０℃で加える。混合物を０℃で２.５時間攪拌した後、塩酸（２Ｎ、３０ｍｌ）を加え、そして２０分間攪拌を続ける。ｐＨ８に達するまで反応混合物に飽和Ｎａ２ＣＯ３を加える。懸濁した材料をセライトパッドを通して濾過し、そしてＫ２ＣＯ３溶液で洗浄する。溶液をＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液で洗浄し、そして乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをフラッシュシリカゲルカラムによりヘキサン（１００％）からヘキサン／エーテル（６０／４０％）のグラジエントで溶出して精製し、固体の標題中間物質（１.６２ｇ、５３.１％）が得られる。
【０１１５】
工程Ｂ：６−（３−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−２−メチルスルファニル−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−７−イルアミンの調製
【化２６】
【０１１６】
ＤＭＦ（２０ｍｌ）中４−アミノ−２−メチルスルファニル−ピリミジン−５−カルバルデヒド（２.０ｇ、１１.８２ミリモル）、（３−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−アセトニトリル（２.８５ｇ、１４.１８ミリモル）およびＫ２ＣＯ３（４.９ｇ、３５.４９ミリモル）の混合物を１１０℃まで３０時間加熱する。溶液を室温まで冷却し、そして濾紙により固体を除去し、そして濃縮して粗製生成物が得られる。ＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（２Ｎ ＮＨ３）（１００／７％）のグラジエントで溶出するフラッシュシリカゲルカラム精製により固体の標題中間物質（３.３１ｇ、８０.０％）が得られる。
【０１１７】
工程Ｃ：Ｎ−[３−（７−アミノ−２−メチルスルファニル−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−２,４−ジクロロ−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化２７】
【０１１８】
ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍｌ）中６−（３−アミノ−２,６−ジクロロ−フェニル）−２−メチルスルファニル−ピリド[２,３−ｄ]−ピリミジン−７−イルアミン（０.５ｇ、１.４２ミリモル）の溶液に塩化３−（トリフルオロメチル）ベンゾイル（１.０７ｍｌ、７.１ミリモル）を加える。混合物を室温で２４時間攪拌した後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをフラッシュシリカゲルカラムにより、ＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（ＮＨ３、２Ｎ）（９５／５％）のグラジエントで溶出して精製して固体の標題中間物質（０.５９１ｇ、７９.４％）が得られる。
【０１１９】
工程Ｄ：Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（２−メチルスルファニル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化２８】
【０１２０】
ＴＦＡ（１５ｍｌ）中Ｎ−[３−（７−アミノ−２−メチルスルファニル−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−２,４−ジクロロ−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（１.７ｇ、３.２４ミリモル）の溶液にＮａＮＯ２（７８３ｍｇ、１１.３５ミリモル）を０℃で２０分間攪拌しながらゆっくりと加える。溶媒を蒸発させ、そしてＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られる。粗製生成物をフラッシュシリカゲルカラムにより、ＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（ＮＨ３、２Ｎ）（９３／７％）のグラジエントで溶出して精製し、固体の標題中間物質（１.６４ｇ、９６.５％）が得られる。
【０１２１】
工程Ｅ：Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（８−メチル−２−メチルスルファニル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化２９】
【０１２２】
ＤＭＦ（３５ｍｌ）中Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（２−メチルスルファニル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（１.１４ｇ、２.１７ミリモル）の溶液にＮａＨ（１１７.２ｍｇ、６０％、２.９３ミリモル）を０℃で３０分間攪拌しながらゆっくりと加える。前記の溶液にヨードメタン（３６９ｍｇ、２.６０ミリモル）を０℃で４０分間攪拌しながら加える。溶媒を蒸発させ、そしてＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをフラッシュシリカゲルカラムにより、ＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（ＮＨ３、２Ｎ）（９３／７）のグラジエントで溶出して精製し、固体の標題中間物質（１.１４ｇ、９８.０％）が得られる。
【０１２３】
工程Ｆ：Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（２−メタンスルホニル−８−メチル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化３０】
【０１２４】
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）中Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（８−メチル−２−メチルスルファニル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（１.１ｇ、２.０４ミリモル）およびＭＣＰＢＡ（９８３ｍｇ、６０％、４.３８ミリモル）の溶液を室温で１時間攪拌する。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをフラッシュシリカゲルカラムにより、ヘキサン（１００％）からヘキサン／ＥｔＯＡｃ（６５／３５）のグラジエントで溶出して精製し、固体の標題中間物質（４７２ｍｇ、４０.７％）が得られる。
【０１２５】
工程Ｇ：Ｎ−（２,４−ジクロロ−３−{２−[３−（１−ヒドロキシ−エチル）−フェニルアミノ]−８−メチル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル}−フェニル）−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化３１】
【０１２６】
Ｎ−[２,４−ジクロロ−３−（２−メタンスルホニル−８−メチル−７−オキソ−７,８−ジヒドロピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（２０ｍｇ、０.０３５ミリモル）および３−（１−ヒドロキシエチル）−アニリン（５０ｍｇ、０.３６４ミリモル）の混合物を１２０℃で１０分間加熱する。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これを調製用ＨＰＬＣにより精製して白色固体のＮ−（２,４−ジクロロ−３−{２−[３−（１−ヒドロキシ−エチル）−フェニルアミノ]−８−メチル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル}−フェニル）−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（１７.９ｍｇ、８１.４％）が得られる。1H NMR (CD3OD): δ 10.50(s, 1H), 8.57(d, 1H), 8.52(s, 1H), 8.41(s, 1H), 8.19(s, 1H), 8.06(d, 1H), 7.92(s, 1H), 7.86(d, 1H), 7.68(t, 1H), 7.59(d, 1H), 7.56(s, 1H), 7.52(d, 1H), 7.41(t, 1H), 7.21(s, 1H), 7.20(d, 1H), 4.98(q, 1H), 3.83(s, 3H), 1.54(d, 2H); MS m/z 629.10(M + 1).
【０１２７】
実施例７
Ｎ−{３−[２−（３−アミノ−フェニルアミノ）−８−メチル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル]−４−クロロ−フェニル}−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化３２】
工程Ａ：（２−クロロ−５−ニトロ−フェニル）−アセトニトリルの調製
【化３３】
【０１２８】
ジクロロメタン（５０ｍｌ）およびＨ２ＳＯ４（４０ｍｌ）中２−クロロ−フェニル−アセトニトリル（１５.０ｇ、９９.０ミリモル）の溶液にＨ２ＳＯ４（１４ｍｌ）およびＨＮＯ３（５.５ｍｌ）の混合物を０℃でゆっくりと加える。反応混合物を０℃で２０分間攪拌し、室温まで３０分間加温し、そして次に濃縮して有機溶媒を除去する。溶液を氷水（４００ｍｌ）の入ったビーカーに注いで結晶性の沈殿が得られ、これを真空濾過により収集し、そして水で洗浄して標題中間物質（１３.４ｇ、６９.０％）が得られる。
【０１２９】
工程Ｂ：（５−アミノ−２−クロロ−フェニル）−アセトニトリルの調製
【化３４】
【０１３０】
ＥｔＯＨ（１０ｍｌ）中（２−クロロ−５−ニトロ−フェニル）−アセトニトリル（４.０ｇ、２０.０ミリモル）の懸濁溶液に濃縮ＨＣｌ（１４ｍｌ）中Ｓｎ（ＩＩ）Ｃｌ２（１５.３６ｇ、８１.０ミリモル）の溶液を７５℃で加える。混合物を７５℃で３０分間攪拌した後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そしてｐＨ８に達するまでＫ２ＣＯ３で中和する。有機層を飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液で洗浄し、そして乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ／ヘキサンでの再結晶により精製して固体の標題中間物質（３.０４ｇ、８９.７％）が得られる。
【０１３１】
工程Ｃ：６−（５−アミノ−２−クロロ−フェニル）−２−メチルスルファニルピリド[２,３ｄ]ピリミジン−７−イルアミンの調製
【化３５】
【０１３２】
ＤＭＦ（２０ｍｌ）中４−アミノ−２−メチルスルファニル−ピリミジン−５−カルバルデヒド（１.８ｇ、１０.６４ミリモル）、（５−アミノ−２−クロロ−フェニル）−アセトニトリル（２.３ｇ、１３.８３ミリモル）およびＫ２ＣＯ３（４.４１ｇ、３１.９２ミリモル）の溶液を１１０℃で３６時間加熱する。溶液を室温まで冷却し、そして固体を濾紙により除去する。次いで混合物を濃縮して粗製生成物が得られる。ＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（２Ｎ ＮＨ３）（９７／３％）のグラジエントでのフラッシュシリカゲルカラム精製溶出により固体の標題中間物質（１.２４ｇ、３６.７％）が得られる。
【０１３３】
工程Ｄ：Ｎ−[３−（７−アミノ−２−メチルスルファニル−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−４−クロロ−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化３６】
【０１３４】
ＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍｌ）中６−（５−アミノ−２−クロロ−フェニル）−２−メチルスルファニルピリド[２,３ｄ]−ピリミジン−７−イルアミン（０.６５ｇ、２.０４６ミリモル）の溶液に塩化３−（トリフルオロメチル）ベンゾイル（２.１３ｇ、１０.２３ミリモル）を加える。混合物を室温で２４時間攪拌した後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して固体の粗製生成物（１.０ｇ、〜１００％）が得られる。
【０１３５】
工程Ｅ：Ｎ−[４−クロロ−３−（２−メチルスルファニル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化３７】
【０１３６】
ＴＦＡ（１０ｍｌ）中Ｎ−[３−（７−アミノ−２−メチルスルファニル−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−４−クロロ−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（１.０ｇ、２.０４ミリモル）の溶液にＮａＮＯ２（４２３ｍｇ、６.１２ミリモル）を０℃で２０分間攪拌しながらゆっくりと加える。溶媒を蒸発させ、ＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをフラッシュシリカゲルカラムにより、ＣＨ２Ｃｌ２（１００％）からＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（ＮＨ３、２Ｎ）（９３／７％）のグラジエントで溶出して精製し、固体の標題中間物質（０.６４４ｇ、６４.４％）が得られる。
【０１３７】
工程Ｆ：Ｎ−[４−ジクロロ−３−（８−メチル−２−メチルスルファニル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化３８】
【０１３８】
ＤＭＦ（３５ｍｌ）中Ｎ−[４−ジクロロ−３−（２−メチルスルファニル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（３７０ｍｇ、０.７５ミリモル）の溶液にＮａＨ（４０.７ｍｇ、６０％、１.０２ミリモル）を０℃で３０分間攪拌しながらゆっくりと加える。ヨードメタン（１３３.７ｍｇ、０.９４ミリモル）を前記の溶液に加え、０℃で４０分間攪拌する。溶媒を蒸発させ、そしてＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをさらに精製することなく次の反応で使用する。
【０１３９】
工程Ｇ：Ｎ−[４−ジクロロ−３−（２−メタンスルホニル−８−メチル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【化３９】
【０１４０】
ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍｌ）中Ｎ−[４−ジクロロ−３−（８−メチル−２−メチルスルファニル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（３８０ｍｇ、０.７５ミリモル）およびＭＣＰＢＡ（３８６ｍｇ、６０％、１.７２ミリモル）の溶液を室温で１時間攪拌する。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｋ２ＣＯ３、塩類溶液および水で洗浄する。有機層を乾燥させ、濾過し、そして濃縮して粗製生成物が得られ、これをフラッシュシリカゲルカラムにより、ヘキサン（１００％）からヘキサン／ＥｔＯＡｃ（６５／３５％）のグラジエントで溶出して精製し、固体の標題中間物質（１２６ｍｇ、３１.１％）が得られる。
【０１４１】
工程Ｈ：Ｎ−{３−[２−（３−アミノ−フェニルアミノ）−８−メチル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル]−４−クロロ−フェニル}−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドの調製
【０１４２】
３−アミノアニリン（１２１.１ｍｇ、１.１２ミリモル）を１１０℃まで加熱する。融解したとき、Ｎ−[４−クロロ−３−（２−メタンスルホニル−８−メチル−７−オキソ−７,８−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−６−イル）−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド３４（１５ｍｇ、０.０２８ミリモル）を加える。反応物を１１０℃で２５分間攪拌する。反応物をＭｅＯＨ（１ｍｌ）で希釈し、そして調製用ＨＰＬＣにより精製して黄色固体の最終生成物が得られる：1H NMR (CDCl3): δ3.64(s, 3H), 6.66(d, 1H), 7.17(t, 1H), 7.28(d, 1H), 7.42(m, 2H), 7.48(t, 1H), 7.50(dd, 1H), 7.57(s, 1H), 7.63(m, 2H), 7.97(d, 1H), 8.07(s, 1H), 8.49(s, 1H); MS m/z 565.0(M + 1).
【０１４３】
実施例８
Ｎ−{３−[７−（６−メトキシ−ピリジン−３−イルアミノ）−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル]−４−メチル−フェニル}−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化４０】
【化４１】
【０１４４】
前記の反応スキームに関して、Ｒ６ＮＨ２は６−メトキシ−ピリジン−３−イルアミンである。１００ｍｌフラスコ中１,３−アセトンジカルボン酸ジエチル（１０.１１ｇ、５０ミリモル）をオルトギ酸トリエチル（８.１４ｇ、５５ミリモル）および無水酢酸（１０.２０ｇ、１００ミリモル）と混合し、そして１２０℃まで１.５時間加熱する。粗製生成物をほぼ９０−１００℃で真空下（１５０−２００ｍｍＨｇ）蒸留し、淡黄色油状の溶液がコンデンサーに集まる。残った残留物を氷中で冷却し、そして３０％ アンモニア（４ｍｌ）と混合する。氷浴中で１時間反応を持続させ、そして次に２Ｎ ＨＣｌでｐＨ＜５まで酸性にする。真空下で溶媒を除去する。粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによりＥＡ／ヘキサン（１：１）を用いて精製する。最終生成化合物（２）４,６−ジヒドロキシ−ニコチン酸エチルエステルは透明な油状物（２.８５ｇ）である。
【０１４５】
４,６−ジヒドロキシ−ニコチン酸エチルエステル（２.８５ｇ）を１００ｍｌフラスコ中で純粋なＰＯＣｌ３ ２５ｍｌと混合し、１１０℃まで２時間加熱する。冷却した後、ほとんどのＰＯＣｌ３を真空下で除去する。粗製の暗色の生成物を少量の氷水混合物中に貯め、そして飽和炭酸ナトリウム溶液で中和する。酢酸エチル２００ｍｌを用いて生成物を数回抽出する。合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム溶液により洗浄し、そしてＮａ２ＳＯ４により乾燥させる。溶媒を除去した後、粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによりＥＡ／ヘキサン（１５％：８５％）を用いて精製する。最終化合物（３）４,６−ジクロロ−ニコチン酸エチルエステルは白色の固体（３.０５ｇ）である。
【０１４６】
４,６−ジクロロ−ニコチン酸エチルエステル（２.１９ｇ、１０ミリモル）をアセトニトリル ３０ｍｌに溶解し、そして０℃まで冷却し、メチルアミン溶液（４０％ メチルアミン水溶液、５０ミリモル）４ｍｌをゆっくりと加える。反応物を０℃で３０分間攪拌し、そしてさらに２時間室温まで加温する。真空下で溶媒を除去し、そして粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによりＥＡ／ヘキサン（３０％：７０％）を用いて精製する。最終化合物（４）６−クロロ−４−メチルアミノ−ニコチン酸エチルエステルは白色固体（２.０３ｇ）である。
【０１４７】
６−クロロ−４−メチルアミノ−ニコチン酸エチルエステル（２.０３ｇ、９.５ミリモル）を無水ＴＨＦ ３０ｍｌに溶解し、そして−７８℃まで冷却する。ＬＡＨ ＴＨＦ溶液（１Ｍ ＴＨＦ溶液、２０ミリモル）２０ｍｌをゆっくりと加え、そして−７８℃で３時間反応を持続させる。反応物を室温までゆっくりと加温し、そしてＴＬＣを確認して出発材料が残留しないことを確かめる。少量のＭｅＯＨ／ＥＡ（１：１）混合物をゆっくりと加えて過剰のＬＡＨを分解する。粗製生成物をセライトプラグに通し、そしてＥＡにより数回洗浄する。真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによりＭｅＯＨ／ＤＣＭ（５％：９５％）を用いて精製する。最終化合物（５）（６−クロロ−４−メチルアミノ−ピリジン−３−イル）−メタノールは白色固体（１.４０ｇ）である。
【０１４８】
（６−クロロ−４−メチルアミノ−ピリジン−３−イル）−メタノール（１.４０ｇ、８.１ミリモル）をＤＣＭ ４０ｍｌに溶解し、そしてＭｎＯ２（８１ミリモル）７.０ｇを加える。反応物を室温で２時間攪拌する。次いで反応溶液をセライトプラグに通し、そしてＥＡにより洗浄する。真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによりＥＡ／ヘキサン（３：７）を用いて精製する。最終化合物（６）６−クロロ−４−メチルアミノ−ピリジン−３−カルバルデヒドは白色固体（１.３０ｇ）である。
【化４２】
【０１４９】
２−メチル−５−ニトロ安息香酸（５.０ｇ、２７.５ミリモル）を無水ＴＨＦ ５０ｍｌに溶解する。ＴＨＦ中１Ｍ ボラン溶液４１.３ｍｌ（４１.３ミリモル）を加えた後、反応物を室温で１８時間攪拌する。水１００ｍｌ中炭酸カリウム（４.５ｇ）の溶液により反応をクエンチする。真空下でＴＨＦを除去した後、水溶液をＤＣＭで抽出し、そして合わせた有機層を塩類溶液により洗浄し、そして硫酸ナトリウム上で乾燥させる。濾過し、そして真空下で溶媒を除去した後、最終生成化合物（１２）（２−メチル−５−ニトロフェニル）−メタノールは浅黄色固体（４.３ｇ）である。
【０１５０】
（２−メチル−５−ニトロフェニル）−メタノール（４.３ｇ、２５.７ミリモル）を無水ＤＣＭ １００ｍｌに溶解し、そして０℃まで冷却し、そして塩化メタンスルホニル（３.２２ｇ、２８.３ミリモル）およびＤＩＥＡ（５.３６ｍｌ、３０.８ミリモル）と３０分間処理する。反応物を室温まで加温し、そしてさらに３０分間攪拌する。水３０ｍｌを加えることにより反応をクエンチする。有機層を塩類溶液で洗浄し、そして硫酸ナトリウム上で乾燥させ、そして濾過する。真空下で溶媒を除去した後、最終生成化合物（１３）メチルスルホン酸（２−メチル−５−ニトロフェニル）−メチルは黄色油状物（６.２ｇ）である。
【０１５１】
メチルスルホン酸（２−メチル−５−ニトロフェニル）−メチル（６.２ｇ、２５.３ミリモル）およびシアン化カリウム（５.０ｇ、７６ミリモル）をアセトニトリル ２００ｍｌ中、８時間還流し、そして室温まで冷却する。真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物ＤＣＭに溶解し、そして濾過する。濾液を塩類溶液により洗浄し、そして硫酸ナトリウム上で乾燥させる。真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによりＥＡ／ヘキサン（１：１）を用いて精製する。最終生成化合物（１４）２−（２−メチル−５−ニトロフェニル）−エタンニトリルは黄色固体（３.１ｇ）である。
【０１５２】
２−（２−メチル−５−ニトロフェニル）−エタンニトリル（２.５ｇ、１４.２ミリモル）をメタノール ５０ｍｌに溶解する。水５０ｍｌ中水酸化カリウム（８.０ｇ、１４２ミリモル）を加え、そして反応物を１４時間加熱環流する。冷却した後、メタノールを除去し、水層をＤＣＭおよびエーテルで洗浄する。合わせた有機層を塩類溶液で洗浄し、そして硫酸ナトリウム上で乾燥させ、そして濾過する。真空下で溶媒を除去した後、最終生成化合物（１５）２−（２−メチル−５−ニトロフェニル）−酢酸は橙色固体（１.９ｇ）である。
【０１５３】
２−（２−メチル−５−ニトロフェニル）−酢酸（１.９ｇ、９.７ミリモル）をメタノール ５０ｍｌに溶解し、そして１,４−ジオキサン中４Ｍ ＨＣｌ ５ｍｌを加える。反応物を１４時間加熱環流する。冷却し、そして溶媒を除去した後、粗製生成物を水５０ｍｌに溶解し、そして２Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液によりｐＨ＞１２まで塩基性にする。溶液を酢酸エチルにより抽出し、そして合わせた有機層を塩類溶液により洗浄し、そして硫酸ナトリウム上で乾燥させ、そして濾過する。溶媒を除去した後、最終生成化合物（１６）２−（２−メチル−５−ニトロフェニル）−酢酸メチルエステルは暗黄色固体（１.８５ｇ）である。
【０１５４】
２−（２−メチル−５−ニトロフェニル）−酢酸メチルエステル（１.８５ｇ、８.８５ミリモル）をエタノール ４０ｍｌに溶解する。１０％ パラジウム炭素 １８０ｍｇを加え、そして水素バルーンを用いる。反応物を室温で１６時間攪拌する。セライトプラグを通すことによりパラジウム炭素を除去し、そして溶媒を除去した後、粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによりＭｅＯＨ／ＤＣＭ（７％：９３％）を用いて精製する。最終生成化合物（７）２−（５−アミノ−２−メチル−フェニル）−酢酸メチルエステルは黄色油状物（１.５ｇ）である。
【０１５５】
６−クロロ−４−メチルアミノ−ピリジン−３−カルバルデヒド（８５０ｍｇ、５ミリモル）をＤＭＦ １５ｍｌ中２−（５−アミノ−２−メチル−フェニル）−酢酸メチルエステル（化合物７、１.３５ｇ、７.５ミリモル）および炭酸カリウム（２.０７ｇ、１５ミリモル）と混合し、１００℃まで１６時間加熱する、冷却し、そして真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによりＥＡ／ヘキサン（６：４）を用いて精製する。最終化合物（８）３−（４−アミノ−２−メチル−フェニル）−７−クロロ−１−メチル−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オンは淡色固体（１.３０ｇ）である。
【化４３】
【０１５６】
３−（４−アミノ−２−メチル−フェニル）−７−クロロ−１−メチル−１Ｈ−[１,６]ナフチリジン−２−オン（６００ｍｇ、２.０ミリモル）を無水ＤＣＭ ２０ｍｌ中塩化３−トリフルオロメチル−ベンゾイル（４４０ｍｇ、２.１ミリモル）およびＤＩＥＡ ５２０μｌ（３.０ミリモル）と混合する。反応物を室温で４時間攪拌する。真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによりＥＡ／ヘキサン（１：１）を用いて精製する。最終化合物（９）Ｎ−[３−（７−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドは白色固体（９００ｍｇ）である：1H NMR 400 MHz(CDCl3)δ 8.58(s, 1H), 8.25(s, 1H), 8.13(s, 1H), 8.08(d, 1H, J=7.8Hz), 7.78(d, 1H, J=7.8Hz), 7.71(s, 1H), 7.62(m, 2H), 7.44(d, 1H, J=5.8Hz), 7.31(s, 1H), 7.20(d, 1H, J=8.2Hz), 3.76 (s, 3H), 2.03 (s, 3H); MS m/z 477.2 (M+1).
【０１５７】
Ｎ−[３−（７−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（５０ｍｇ、０.１０６ミリモル）をアルゴン環境下、６−メトキシ−ピリジン−３−イルアミン（２０ｍｇ、０.１６ミリモル）、Ｐｄ２（ｄｂａ）２（２.４ｍｇ、２.５％）、塩化１,３−ビス（２,６−ジ−ｉ−プロピルフェニル）イミダゾリウム（２.３ｍｇ、５％）およびｔｅｒｔ−ブタンオキシドカリウム（１７.８ｍｇ、０.１５９ミリモル）と混合する。無水１,４−ジオキサン ６ｍｌを加え、そして１００℃で１４時間反応を持続させる。冷却し、そして真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をＤＭＳＯに溶解し、そして逆相調製用ＨＰＬＣにより精製して淡色固体の最終生成物が得られる： 1H NMR 400 MHz(CDCl3)δ 11.61(s, 1H), 8.26(d, 1H, J=2.6Hz), 8.16(s, 1H), 8.10(s, 1H), 8.05(d, 1H, J=7.9Hz), 7.95(s, 1H), 7.80(d, 1H, J=7.7Hz), 7.69(d, 1H, J=2.1Hz), 7.61(m, 2H), 7.51(s, 1H), 7.42(dd, 1H, J=6.0Hz), 6.89(d, 1H, J=8.7Hz), 6.38(s, 1H), 4.00(s, 3H), 3.52(s, 3H), 2.15(s, 3H); MS m/z 560.3(M+1).
【０１５８】
実施例９
Ｎ−[３−（７−エチルアミノ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化４４】
Ｎ−[３−（７−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（５０ｍｇ、０.１０６ミリモル）を密封チューブ内でエチルアミン（０.１４ｍｌ、水中７０％、２.２ミリモル）と混合する。ｎ−ブタノール １ｍｌを加え、そして反応物を１００℃で１６時間攪拌する。冷却し、そして真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をＤＭＳＯに溶解し、そして逆相調製用ＨＰＬＣにより精製して白色固体の最終生成物が得られる：1H NMR 400 MHz(DMSO-d6)δ 10.47(s, 1H), 8.48(s, 1H), 8.29(s, 1H), 8.25(d, 1H, J=8.0Hz), 7.96(d, 1H, J=7.8Hz), 7.78(m, 2H), 7.66(m, 2H), 7.26(d, 1H, J=9.0Hz), 6.46(s, 1H), 3.57(s, 3H), 3.39(q, 2H, J=7.1Hz), 2.13(s, 3H), 1.22(t, 3H, J=7.1Hz); MS m/z 481.2(M+1).
【０１５９】
実施例１０
Ｎ−（４−メチル−３−{１−メチル−２−オキソ−７−[（ピリジン−３−イルメチル）−アミノ]−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル}−フェニル）−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化４５】
Ｎ−[３−（７−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（５０ｍｇ、０.１０６ミリモル）をアルゴン環境下、３−（アミノメチル）−ピリジン（１８ｍｇ、０.１６ミリモル）、Ｐｄ２（ｄｂａ）２（２.４ｍｇ、２.５％）、塩化１,３−ビス（２,６−ジ−ｉ−プロピルフェニル）−イミダゾリウム（２.３ｍｇ、５％）およびｔｅｒｔ−ブタンオキシドカリウム（１７.８ｍｇ、０.１５９ミリモル）と混合する。無水１,４−ジオキサン ６ｍｌを加え、そして１００℃で１４時間反応を持続させる。冷却し、そして真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をＤＭＳＯに溶解し、そして逆相調製用ＨＰＬＣにより精製して淡色固体の最終生成物が得られる：1H NMR 400 MHz(DMSO-d6)δ 10.46(s, 1H), 8.79(s, 1H), 8.68(d, 1H, J=4.6Hz), 8.44(s, 1H), 8.29(s, 1H), 8.24(t, 2H, J=7.5Hz), 7.96(d, 2H, J=7.8Hz), 7.76(m, 3H), 7.65(m, 2H), 7.24(d, 1H, J=8.3Hz), 6.46(s, 1H), 4.74(s, 2H), 3.52(s, 3H), 2.11(s, 3H); MS m/z 544.3(M+1).
【０１６０】
実施例１１
Ｎ−{３−[７−（３−ジメチルアミノメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル]−４−メチル−フェニル}−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化４６】
Ｎ−[３−（７−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（５０ｍｇ、０.１０６ミリモル）をアルゴン環境下、３−ジメチル−アミノメチル−フェニルアミン（２４ｍｇ、０.１６ミリモル）、Ｐｄ２（ｄｂａ）２（２.４ｍｇ、２.５％）、塩化１,３−ビス（２,６−ジ−ｉ−プロピルフェニル）イミダゾリウム（２.３ｍｇ、５％）およびｔｅｒｔ−ブタンオキシドカリウム（１７.８ｍｇ、０.１５９ミリモル）と混合する。無水１,４−ジオキサン ６ｍｌを加え、１００℃で１４時間反応を持続させる。冷却し、そして真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をＤＭＳＯに溶解し、そして逆相調製用ＨＰＬＣにより精製して淡色固体の最終生成物が得られる：1H NMR 400 MHz(DMSO-d6)δ 10.48(s, 1H), 9.64(s, 1H), 8.60(s, 1H), 8.30(s, 1H), 8.26(d, 1H, J=8.9Hz), 7.96(d, 1H, J=7.8Hz), 7.87(s, 2H), 7.79(t, 1H, J=7.8Hz), 7.67(m, 3H), 7.41(t, 1H, J=7.8Hz), 7.27(d, 1H, J=9.1Hz), 7.08(d, 1H, J=7.7Hz), 6.78(s, 1H), 4.28(d, 2H, J=5.0Hz), 3.58(s, 3H), 2.77(d, 6H, J=4.6Hz), 2.14(s, 3H); MS m/z 586.3(M+1).
【０１６１】
実施例１２
Ｎ−（４−メチル−３−{１−メチル−７−[３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ]−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル}−フェニル）−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化４７】
Ｎ−[３−（７−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（５０ｍｇ、０.１０６ミリモル）をアルゴン環境下、３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミン（３１ｍｇ、０.１６ミリモル）、Ｐｄ２（ｄｂａ）２（２.４ｍｇ、２.５％）、塩化１,３−ビス（２,６−ジ−ｉ−プロピルフェニル）イミダゾリウム（２.３ｍｇ、５％）およびｔｅｒｔ−ブタンオキシドカリウム（１７.８ｍｇ、０.１５９ミリモル）と混合する。無水１,４−ジオキサン ６ｍｌを加え、そして１００℃で１４時間反応を持続させる。冷却し、そして真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をＤＭＳＯに溶解し、そして逆相調製用ＨＰＬＣにより精製して淡色固体の最終生成物が得られる：1H NMR 400 MHz(DMSO-d6)δ 10.47(s, 1H), 9.43(s, 1H), 8.58(s, 1H), 8.30(s, 1H), 8.26(d, 1H, J=8.1Hz), 7.97(d, 1H, J=7.9Hz), 7.83(s, 1H), 7.79(t, 1H, J=7.8Hz), 7.69(m, 2H), 7.37(s, 1H), 7.21(m, 3H), 6.74(s, 1H), 6.65(d, 1H, J=6.5Hz), 3.80(d, 2H, J=13.9Hz), 3.56(s, 3H), 3.54(d, 2H, J= 13.9Hz), 3.18(m, 2H), 2.98(m, 2H), 2.88(d, 3H, J=3.8Hz), 2.14(s, 3H); MS m/z 627.3(M+1).
【０１６２】
実施例１３
Ｎ−[３−（７−アミノ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化４８】
Ｎ−[３−（７−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（１００ｍｇ、０.２１ミリモル）をアルゴン環境下、ベンジルアミン（３５ｍｇ、０.３２ミリモル）、Ｐｄ２（ｄｂａ）２（４.８ｍｇ、２.５％）、塩化１,３−ビス（２,６−ジ−ｉ−プロピルフェニル）イミダゾリウム（４.６ｍｇ、５％）およびｔｅｒｔ−ブタンオキシドカリウム（３５.６ｍｇ、０.３２ミリモル）と混合する。無水１,４−ジオキサン ６ｍｌを加え、そして１００℃で１４時間反応を持続させる。冷却し、そして真空下で溶媒を除去した後、粗製生成物をＤＭＳＯに溶解し、そして逆相調製用ＨＰＬＣにより精製して淡色固体の生成物Ｎ−[３−（７−ベンジルアミノ−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドが得られる。この生成物をエタノール １０ｍｌに溶解し、そして１０％ パラジウム炭素粉末 ８ｍｇを加える。反応物を室温で５０ｐｓｉ水素環境下で１６時間攪拌する。セライトプラグを通してパラジウム炭素を除去し、そして溶媒を除去した後、粗製生成物をＤＭＳＯに溶解し、そして逆相調製用ＨＰＬＣにより精製して白色固体の最終生成物が得られる：1H NMR 400 MHz(DMSO-d6)δ 10.42(s, 1H), 8.35(s, 1H), 8.31(s, 1H), 8.26(d, 1H, J=7.8Hz), 7.96(d, 1H, J=7.7Hz), 7.78(t, 1H, J=7.8Hz), 7.69(m, 2H), 7.61(s, 1H), 7.24(d, 1H, J=8.1Hz), 6.53(s, 2H), 6.29(s, 1H), 3.49(s, 3H), 2.12(s, 3H); MS m/z 453.2(M+1).
【０１６３】
適切な出発材料を用いて前記の実施例に記載したような手順を繰り返すことにより、表１で同定されるような以下の式Ｉの化合物が得られる。
【表１】
【表２】
【表３】
【表４】
【表５】
【表６】
【表７】
【表８】
【表９】
【表１０】
【表１１】
【表１２】
【表１３】
【表１４】
【表１５】
【表１６】
【表１７】
【表１８】
【表１９】
【表２０】
【表２１】
【０１６４】
アッセイ
親３２Ｄ細胞と比較して、ＢＣＲ−Ａｂｌ（３２Ｄ−ｐ２１０）を発現する３２Ｄ細胞の細胞増殖を選択的に阻止する能力を測定するために本発明の化合物を検定する。これらのＢＣＲ−Ａｂｌ形質転換細胞の増殖を選択的に阻止する化合物を、野生型または変異形態のいずれかのＢｃｒ−ａｂｌを発現するＢａ／Ｆ３細胞における抗増殖活性に関して試験する。加えてｂ−Ｒａｆを阻止するその能力を測定するために化合物を検定する。
【０１６５】
ＢＣＲ−Ａｂｌ依存性細胞増殖の阻止（ハイスループット法）
用いたネズミ細胞系はＢＣＲ−Ａｂｌ ｃＤＮＡ（３２Ｄ−ｐ２１０）で形質転換した３２Ｄ造血前駆細胞系である。これらの細胞を５０μｇ／ｍｌ ペニシリン、５０μｇ／ｍｌ ストレプトマイシンおよび２００ｍＭ Ｌ−グルタミンを補充したＲＰＭＩ／１０％ ウシ胎仔血清（ＲＰＭＩ／ＦＣＳ）中で維持する。ＩＬ３の供給源として１５％ ＷＥＨＩ条件培地を添加して、形質転換されていない３２Ｄ細胞を同様に維持する。
【０１６６】
３２Ｄまたは３２Ｄ−ｐ２１０細胞懸濁液５０μｌをウェルあたり５０００セルの密度でGreiner ３８４ウェルマイクロプレート（黒）に蒔く。被験化合物５０ｎｌ（ＤＭＳＯストック溶液中１ｍＭ）を各ウェルに加える（陽性対照としてＳＴＩ５７１を含む）。細胞を３７℃、５％ ＣＯ２で７２時間インキュベートする。６０％ Alamar Blue溶液（Tek diagnostics）１０μｌを各ウェルに加え、そして細胞をさらに２４時間インキュベートする。Acquest（商標）システム（Molecular Devices）を用いて蛍光強度（５３０ｎｍで励起、５８０ｎｍで発光）を定量する。
【０１６７】
ＢＣＲ−Ａｂｌ依存性細胞増殖の阻止
９６ウェルＴＣプレートに３２Ｄ−ｐ２１０細胞をウェルあたり１５０００セルの密度で蒔く。被験化合物の２倍連続希釈５０μｌ（Ｃｍａｘは４０μＭ）を各ウェルに加える（陽性対照としてＳＴＩ５７１を含む）。細胞を３７℃、５％ ＣＯ２で４８時間インキュベートした後、ＭＴＴ（Promega）１５μｌを各ウェルに加え、そして細胞をさらに５時間インキュベートする。５７０ｎｍでの光学密度を分光光度法により定量し、そして５０％阻止に必要な化合物の濃度であるＩＣ５０値を用量応答曲線から決定する。
【０１６８】
細胞サイクル分布に及ぼす影響
３２Ｄおよび３２Ｄ−ｐ２１０細胞を６ウェルＴＣプレートにウェルあたり２.５×１０６セルで培地５ｍｌ中に蒔き、そして被験化合物１または１０μＭを加える（対照としてＳＴＩ５７１を含む）。次いで細胞を３７℃、５％ ＣＯ２で２４または４８時間インキュベートする。細胞懸濁液２ｍｌをＰＢＳで洗浄し、７０％ ＥｔＯＨ中で１時間固定し、そしてＰＢＳ／ＥＤＴＡ／ＲＮアーゼＡと３０分間処理する。ヨウ化プロピジウム（Ｃｆ＝１０μｇ／ｍｌ）を加え、そしてFACScalibur（商標）システム（BD Biosciences）のフローサイトメトリーにより蛍光強度を定量する。本発明の被験化合物は３２Ｄ−ｐ２１０細胞に及ぼすアポトーシス効果を実証するが、３２Ｄ親細胞にはアポトーシスを誘導しない。
【０１６９】
細胞性ＢＣＲ−Ａｂｌ自己リン酸化に及ぼす影響
ｃ−ａｂｌ特異的捕捉抗体および抗ホスホチロシン抗体を用いて捕捉ElisaでＢＣＲ−Ａｂｌ自己リン酸化を定量する。３２Ｄ−ｐ２１０細胞を９６ウェルＴＣプレートにウェルあたり２×１０５セルで培地５０μｌ中に蒔く。被験化合物の２倍連続希釈５０μｌ（Ｃｍａｘは１０μＭである）を各ウェルに加える（陽性対照としてＳＴＩ５７１を含む）。細胞を３７℃、５％ ＣＯ２で９０分間インキュベートする。次いで細胞を氷上で１時間、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含有する溶解バッファー（５０ｍＭ トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７.４）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＥＧＴＡおよび１％ ＮＰ−４０）１５０μｌと処理する。予め抗ａｂｌ特異抗体でコートし、そして遮断した９６ウェルオプチプレート（optiplate）に細胞ライゼート５０μｌを加える。プレートを４℃で４時間インキュベートする。ＴＢＳ−Tween ２０バッファーで洗浄した後、アルカリ性ホスファターゼ結合抗ホスホチロシン抗体５０μｌを加え、そしてプレートをさらに４℃で一晩インキュベートする。ＴＢＳ−Tween ２０バッファーで洗浄した後、発光基質９０μｌを加え、そしてAcquest（商標）システム（Molecular Devices）を用いて発光を定量する。ＢＣＲ−Ａｂｌ発現細胞の増殖を阻止する本発明の被験化合物は用量依存的な様式で細胞性ＢＣＲ−Ａｂｌ自己リン酸化を阻止する。
【０１７０】
Ｂｃｒ−ａｂｌの変異形態を発現する細胞の増殖に及ぼす影響
本発明の化合物を、ＳＴＩ５７１に対する抵抗性を付与するかまたは感受性を低減させる野生型または変異形態のいずれかのＢＣＲ−Ａｂｌ（Ｇ２５０Ｅ、Ｅ２５５Ｖ、Ｔ３１５Ｉ、Ｆ３１７Ｌ、Ｍ３５１Ｔ）を発現するＢａ／Ｆ３細胞に及ぼすその抗増殖効果に関して試験する。変異体ＢＣＲ−Ａｂｌ発現細胞および非形質転換細胞に及ぼすこれらの化合物の抗増殖効果を前記したように（ＩＬ３を欠く培地中で）１０、３.３、１.１および０.３７μＭで試験した。非形質転換細胞において毒性を欠く化合物のＩＣ５０値を前記したように得られた用量応答曲線から決定した。
【０１７１】
ＦＧＦＲ３（酵素アッセイ）
精製したＦＧＦＲ３（Upstate）を用いるキナーゼ活性アッセイを、キナーゼバッファー（３０ｍＭ トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７.５）、１５ｍＭ ＭｇＣｌ２、４.５ｍＭ ＭｎＣｌ２、１５μＭ Ｎａ３ＶＯ４および５０μｇ／ｍｌＢＳＡ）中０.２５μｇ／ｍｌ 酵素、および基質（５μｇ／ｍｌ ビオチン−ポリ−ＥＹ（Ｇｌｕ、Ｔｙｒ）（CIS-US, Inc.）および３μＭ ＡＴＰ）を含有する最終容量１０μｌで実施する。２つの溶液を作成する：キナーゼバッファー中にＦＧＦＲ３酵素を含有する第１溶液５μｌを最初に３８４−フォーマットProxiPlate（登録商標）（Perkin-Elmer）に分配し、続いてＤＭＳＯに溶解した化合物５０ｎｌを添加し、次いでキナーゼバッファー中に基質（ポリ−ＥＹ）およびＡＴＰを含有する第２溶液５μｌを各ウェルに加えた。反応物を室温で１時間インキュベートし、３０ｍＭ トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７.５）、０.５Ｍ ＫＦ、５０ｍＭ ＥＴＤＡ、０.２ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、１５μｇ／ｍｌ ストレプトアビジン−ＸＬ６６５（CIS-US, Inc.）および１５０ｎｇ／ｍｌ クリプタート結合抗ホスホチロシン抗体（CIS-US, Inc.）を含有するＨＴＲＦ検出混合物 １０μｌの添加により停止させる。ストレプトアビジン−ビオチン相互作用を可能にするために室温で１時間インキュベートした後、時間分解蛍光シグナルをAnalyst GT（Molecular Devices Corp.）で読む。各化合物の１２濃度（５０μＭから０.２８ｎＭまで１：３希釈）での阻止パーセンテージの線形回帰分析によりＩＣ５０値を計算する。このアッセイで、本発明の化合物は１０ｎＭから２μＭの範囲のＩＣ５０を有する。
【０１７２】
ＦＧＦＲ３（細胞アッセイ）
本発明の化合物を形質転換Ｂａ／Ｆ３−ＴＥＬ−ＦＧＦＲ３細胞増殖を阻止するその能力に関して試験し、これはＦＧＦＲ３細胞キナーゼ活性に依存する。培養培地として１０％ ウシ胎仔血清を補充したＲＰＭＩ １６４０を用いて、Ｂａ／Ｆ３−ＴＥＬ−ＦＧＦＲ３を懸濁液中８０００００セル／ｍｌまで培養する。細胞を培養培地５０μｌ中５０００セル／ウェルで３８４−ウェルフォーマットプレートに分配する。本発明の化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で溶解し、そして希釈する。１２段階１：３連続希釈をＤＭＳＯに作成して、典型的には１０ｍＭから０.０５μＭの範囲で濃度グラジエントを創成する。細胞に希釈した化合物５０ｎｌを加え、そして細胞培養インキュベーター中で４８時間インキュベートする。増殖細胞により創成された還元環境をモニタリングするために用いることができるAlamarBlue（登録商標）（TREK Diagnostic Systems）を最終濃度１０％で細胞に加える。３７℃の細胞培養インキュベーター中でさらに４時間インキュベートした後、還元型AlamarBlue（登録商標）（５３０ｎｍで励起、５８０ｎｍで発光）からの蛍光シグナルをAnalyst GT（Molecular Devices Corp.）で定量する。各化合物の１２濃度での阻止パーセンテージの線形回帰分析によりＩＣ５０値を計算する。
【０１７３】
ｂ−Ｒａｆ
本発明の化合物をｂ−Ｒａｆの活性を阻止するその能力に関して試験する。黒色の壁面および透明な底部を有する３８４−ウェルMaxiSorpプレート（ＮＵＮＣ）でアッセイを実施する。基質ＩκＢαをＤＰＢＳ（１：７５０）で希釈し、そして１５μｌを各ウェルに加える。プレートを４℃で一晩インキュベートし、そしてＥＭＢＬＡプレートワッシャーを用いてＴＢＳＴ（２５ｍＭ トリス（ｐＨ８.０）、１５０ｍＭ ＮａＣｌおよび０.０５％ Tween−２０）で３回洗浄する。プレートをSuperblock（１５μｌ／ウェル）で室温で３時間遮断し、ＴＢＳＴで３回洗浄し、そして軽く水気を取る。２０μＭ ＡＴＰ（１０μｌ）を含有するアッセイバッファー、続いて化合物１００ｎｌまたは５００ｎｌをを各ウェルに加える。Ｂ−Ｒａｆをアッセイバッファーで（１μｌを２５μｌに）希釈し、そして希釈したｂ−Ｒａｆ １０μｌを各ウェルに加える（０.４μｇ／ウェル）。プレートを室温で２.５時間インキュベートする。プレートをＴＢＳＴで６回洗浄することによりキナーゼ反応を停止させる。Phosph−ＩκＢα（Ｓｅｒ３２／３６）抗体をSuperblock（１：１００００）で希釈し、そして１５μｌを各ウェルに加える。プレートを４℃で一晩インキュベートし、そしてＴＢＳＴで６回洗浄する。ＡＰ結合ヤギ抗マウスＩｇＧをSuperblock（１：１５００）で希釈し、そして１５μｌを各ウェルに加える。プレートを室温で１時間インキュベートし、そしてＴＢＳＴで６回洗浄するAttophos ＡＰ基質 １５μｌを各ウェルに加え、そしてプレートを室温で１５分間インキュベートする。Fluorescence Intensity Nanxin ＢＢＴアニオン（５０５ダイクロイックミラー）を用いてプレートをAcquestまたはAnalyst ＧＴで読む。
【０１７４】
Upstate Kinase Profiler（商標） 放射酵素フィルター結合アッセイ
本発明の化合物をキナーゼパネル（部分的な、限定するものではないキナーゼのリストには：Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６およびＳＡＰＫ２βが挙げられる）の個々のメンバーを阻止するその能力に関して検定する。この一般的なプロトコールにしたがって最終濃度１０μＭで２検体ずつで化合物を試験する。キナーゼバッファーの組成および基質は、「Upstate Kinase Profiler（商標）」パネルに含まれる種々のキナーゼで異なることに留意されたい。キナーゼバッファー（２.５μｌ、１０× 必要な場合ＭｎＣｌ２を含有する）、活性キナーゼ（０.００１−０.０１単位；２.５μｌ）、キナーゼバッファー中特異的またはポリ（Ｇｌｕ４−Ｔｙｒ）ペプチド（５−５００μＭまたは.０１ｍｇ／ｍｌ）およびキナーゼバッファー（５０μＭ；５μｌ）を氷上でエッペンドルフ中で混合する。Ｍｇ／ＡＴＰミックス（１０μｌ；６７.５（または３３.７５）ｍＭ ＭｇＣｌ２、４５０（または２２５）μＭ ＡＴＰおよび１μＣｉ／μｌ[γ−３２Ｐ]−ＡＴＰ（３０００Ｃｉ／ミリモル））を加え、そして反応物を約３０℃で約１０分間インキュベートする。反応混合物を２ｃｍ×２ｃｍ Ｐ８１（リン酸セルロース、正荷電ペプチド基質用）またはWhatman Ｎｏ.１（ポリ（Ｇｌｕ４−Ｔｙｒ）ペプチド基質用）四角紙にスポットする。アッセイ用四角紙を０.７５％ リン酸で各５分間で４回洗浄し、そしてアセトンで５分間１回洗浄する。アッセイ用四角紙をシンチレーションバイアルに移し、シンチレーションカクテル５ｍｌを加え、そしてペプチド基質への３２Ｐの取り込み（ｃｐｍ）をBeckmanシンチレーションカウンターで定量する。各反応に関して阻止パーゼンテージを計算する。
【０１７５】
遊離形態または薬学的に許容される塩形態の式Ｉの化合物は、例えば本出願で記載するインビトロ試験により示されるような価値ある薬理学的特性を呈する。例えば式Ｉの化合物は野生型ＢＣＲ−ＡｂｌおよびＧ２５０Ｅ、Ｅ２５５Ｖ、Ｔ３１５Ｉ、Ｆ３１７ＬおよびＭ３５１Ｔ ＢＣＲ−Ａｂｌ変異体に関して、好ましくは１×１０−１０から１×１０−５Ｍの範囲の、好ましくは５０ｎＭ未満のＩＣ５０を示す。例えば：
【０１７６】
ａ）Ｎ−{３−[７−（６−メトキシ−ピリジン−３−イルアミノ）−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル]−４−メチル−フェニル}−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（実施例８）は野生型、Ｇ２５０Ｅ、Ｅ２５５Ｖ、Ｔ３１５Ｉ、Ｆ３１７ＬおよびＭ３５１Ｔ Ｂｃｒ−ａｂｌに関して各々＜０.５ｎＭ、４３ｎＭ、４８ｎＭ、１２２ｎＭ、＜０.５ｎＭおよび９ｎＭのＩＣ５０を有する；
【０１７７】
ｂ）Ｎ−{３−[７−（６−メトキシ−ピリジン−３−イルアミノ）−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル]−４−メチル−フェニル}−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（実施例８）はＦＧＦＲ３酵素および細胞アッセイに関して各々１０７ｎＭおよび３ｎＭ、ならびにｂ−Ｒａｆおよびｃ−Ｒａｆ酵素アッセイに関して各々５００ｎＭおよび１７ｎＭのＩＣ５０を有する；
【０１７８】
式Ｉの化合物は１０μＭの濃度で、Ａｂｌ、Ｂｃｒ−ａｂｌ、Ｂｍｘ、ｃ−ＲＡＦ、ＣＳＫ、Ｆｅｓ、ＦＧＦＲ３、Ｆｌｔ３、ＧＳＫ３β、ＩＲ、ＪＮＫ１α１、ＪＮＫ２α２、Ｌｃｋ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＰＤＧＦＲα、Ｒｓｋ１、ＳＡＰＫ２α、ＳＡＰＫ２β、ＳｙｋおよびＴｒｋＢキナーゼに対して好ましくは５０％以上、好ましくは約７０％以上の阻止パーセンテージを示す。例えば：
【０１７９】
ｃ）Ｎ−{３−[７−（６−メトキシ−ピリジン−３−イルアミノ）−１−メチル−２−オキソ−１,２−ジヒドロ−[１,６]ナフチリジン−３−イル]−４−メチル−フェニル}−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（実施例８）は１０μＭの濃度で以下のキナーゼを括弧内に示すパーセンテージまで阻止する（例えば、１００％は完全な阻止を意味し、０％は阻止しないことを意味する）：野生型Ａｂｌ（１００％）、Ｂｍｘ（１００％）、ｃ−ＲＡＦ（９０％）、ＣＳＫ（１００％）、ＦＧＦＲ３（９６％）、ＪＮＫ１α１（８９％）、ＪＮＫ２α２（９９％）、Ｌｃｋ（９９％）、ＭＫＫ４（９１％）、ＭＫＫ６（９７％）、ｐ７０Ｓ６Ｋ（８６％）、ＳＡＰＫ２α（９５％）、ＳＡＰＫ２β（９８％）およびＴｒｋＢ（９７％）。
【０１８０】
本明細書で記載する実施例および実施態様は説明目的のためのみであり、ならびに様々の修飾またはそれに照らした変更は当業者に示唆され、そして本出願および添付の請求の範囲の精神および範囲内に含まれるべきであることは理解される。本明細書に引用した全ての出版物、特許および特許出願は全ての目的に関して出典明示により本明細書の一部とする。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
（式中、
ｎは０、１または２であり；
Ｙは−Ｃ（Ｈ）＝および−Ｎ＝から選択され；
Ｚは−Ｃ（Ｈ）＝および−Ｎ＝から選択され；
Ｒ１は水素、ハロおよび−Ｒ４から選択され；
Ｒ２は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ３はハロ、ニトロ、Ｃ１−６アルキルおよびＣ１−６アルコキシから選択され；
Ｒ４はＣ３−８ヘテロシクロアルキル、−ＸＮＲ５Ｒ６、−ＸＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６および−ＸＮＲ５Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ６から選択され；ここでＸは単結合またはＣ１−４アルキレンであり；Ｒ５は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；Ｒ６はＣ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここでＲ４の任意のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルは場合によってはハロ、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、場合によってはヒドロキシで置換されていてよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキル、ハロ置換Ｃ１−６アルコキシ、−ＸＯＸＮＲ７Ｒ８、−ＸＳ（Ｏ）０−２Ｒ７、−ＸＳ（Ｏ）０−２ＮＲ７Ｒ８、−ＸＯＲ７、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−ＸＮＲ７Ｒ８、−ＸＮＲ７Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ７および−ＸＲ９から別個に選択される１から３個のラジカルにより置換されていてよく；ここでＸは単結合またはＣ１−４アルキレンであり；Ｒ７およびＲ８は別個に水素およびＣ１−６アルキルから選択され；Ｒ９はＣ６−１０アリール、Ｃ５−１０ヘテロアリールＣ３−１２シクロアルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキルから選択され；ここでＲ９の任意のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは場合によっては１から３個のＣ１−６アルキルラジカルにより置換されていてよく；
Ｒ１０は水素、ハロおよびＣ１−６アルキルから選択される）
の化合物；ならびにその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物および異性体。
【請求項２】
ｎは０、１または２であり；
Ｙは−Ｃ（Ｈ）＝および−Ｎ＝から選択され；
Ｚは−Ｃ（Ｈ）＝および−Ｎ＝から選択され；
Ｒ１は水素、ハロおよび−Ｒ４から選択され；
Ｒ２は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ３はハロ、Ｃ１−６アルキルおよびＣ１−６アルコキシから選択され；
Ｒ４はＣ３−８ヘテロシクロアルキル、−ＸＮＲ５Ｒ６、−ＸＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ６および−ＸＮＲ５Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ６から選択され；ここでＸは単結合またはＣ１−４アルキレンであり；Ｒ５は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；Ｒ６はＣ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここでＲ４の任意のアリール、ヘテロアリールおよびシクロアルキルは場合によってはハロ、ヒドロキシ、ニトロ、場合によってはヒドロキシにより置換されたＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキル、ハロ置換Ｃ１−６アルコキシ、−ＸＳ（Ｏ）０−２（Ｏ）０−２Ｒ７、−ＸＯＸＮＲ７Ｒ８、−ＸＳ（Ｏ）０−２ＮＲ７Ｒ８、−ＸＯＲ７、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−ＸＮＲ７Ｒ８および−ＸＲ９から別個に選択される１から３個のラジカルにより置換されていてよく；ここでＸは単結合またはＣ１−４アルキレンであり；Ｒ７およびＲ８は水素およびＣ１−６アルキルから別個に選択され；Ｒ９はＣ５−１０ヘテロアリールおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキルから選択され；ここでＲ９の任意のヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルは場合によっては１から３個のＣ１−６アルキルラジカルにより置換されていてよく；
そしてＲ１０は水素である：
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が水素、ハロ、ピロリジニルおよび−ＮＨＲ６から選択され；ここでＲ６は水素、メチル、エチル、ジエチル−アミノ−プロピル、モルホリノ−エチル、ヒドロキシ−エチル、ベンゾ[１,３]ジオキソリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリジニル−メチル、２−（２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−エチルおよびフェニルから選択され；ここで該ピロリジニル、ピリジニル、ピラゾリル、ピラジニル、ピリジニル−メチル、２−（２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−エチルまたはフェニルは場合によってはアミノ、メトキシ、ジメチルアミノ、ジメチルアミノ−メチル、ジメチルアミノ−エチル、ジメチルアミノ−プロピル、ジメチルアミノ−エトキシ、メチル−スルファニル、ヒドロキシ、メチルスルホニル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシ−エチル、メタン−スルホニル−アミノ、モルホリノ、モルホリノ−エチル、フラニル−メチル、４−メチル−ピペラジン−１−イル、４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル、ベンジル、メチル−アミノカルボニル、メチル−カルボニル−アミノ、メチル−ピラゾリル、アミノカルボニルおよびアミノ−スルホニルから別個に選択される１から２個のラジカルにより置換されていてよい請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ４が−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ６および−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ６から選択され；ここでＲ６はメチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロヘキシル、フラニル、ピロリル、フェニル、ピリジニル、ピリダジニル、ピラジニル、ピラゾリル、テトラゾリル−メチルおよびベンジルから選択され；ここでＲ６の該シクロヘキシル、フラニル、ピロリル、フェニル、ピリジニル、ピリダジニル、ピラジニル、ピラゾリル、テトラゾリル−メチルまたはベンジルは場合によっては４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル、４−メチル−ピペラジン−１−イル、４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル、４−エチル−ピペラジン−１−イル、フェニル、エチル、トリフルオロメチル、モルホリノ、ジメチルアミノ、ハロ、ニトロ、トリフルオロメトキシ、１−メチル−ピロール−２−イル、４−メチル−イミダゾール−１−イル、４−メチル−ピペラジン−１−イル、４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル、イソブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルから選択される１から３個のラジカルにより置換されていてよい請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
薬学的に許容される賦形剤と組み合わせた治療上有効量の請求項１に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項６】
動物に治療上有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含むキナーゼ活性の阻止が疾患の病理および／または症状を予防、阻止または改善することができる動物の疾患を処置するための方法。
【請求項７】
キナーゼがＡｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６およびＳＡＰＫ２βから選択される請求項５に記載の方法。
【請求項８】
Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６および／またはＳＡＰＫ２βのキナーゼ活性が疾患の病理および／または症状の原因となる動物の疾患を処置するための医薬品の製造における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
（式中、
ｎは０、１または２であり；
Ｙは−Ｃ（Ｈ）＝および−Ｎ＝から選択され；
Ｚは−Ｃ（Ｈ）＝および−Ｎ＝から選択され；
Ｒ１は水素、ハロおよび−Ｒ４から選択され；
Ｒ２は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ３はハロ、ニトロ、Ｃ１−６アルキルおよびＣ１−６アルコキシから選択され；
Ｒ４はＣ３−８ヘテロシクロアルキル、−ＸＮＲ５Ｒ６、−ＸＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６および−ＸＮＲ５Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ６から選択され；ここでＸは単結合またはＣ１−４アルキレンであり；Ｒ５は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；Ｒ６はＣ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここでＲ４の任意のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルは場合によってはハロ、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、場合によってはヒドロキシで置換されていてよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキル、ハロ置換Ｃ１−６アルコキシ、−ＸＯＸＮＲ７Ｒ８、−ＸＳ（Ｏ）０−２Ｒ７、−ＸＳ（Ｏ）０−２ＮＲ７Ｒ８、−ＸＯＲ７、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−ＸＮＲ７Ｒ８、−ＸＮＲ７Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ７および−ＸＲ９から別個に選択される１から３個のラジカルにより置換されていてよく；ここでＸは単結合またはＣ１−４アルキレンであり；Ｒ７およびＲ８は別個に水素およびＣ１−６アルキルから選択され；Ｒ９はＣ６−１０アリール、Ｃ５−１０ヘテロアリールＣ３−１２シクロアルキルおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキルから選択され；ここでＲ９の任意のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは場合によっては１から３個のＣ１−６アルキルラジカルにより置換されていてよく；
Ｒ１０は水素、ハロおよびＣ１−６アルキルから選択される）
の化合物；ならびにその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物および異性体。
【請求項２】
ｎは０、１または２であり；
Ｙは−Ｃ（Ｈ）＝および−Ｎ＝から選択され；
Ｚは−Ｃ（Ｈ）＝および−Ｎ＝から選択され；
Ｒ１は水素、ハロおよび−Ｒ４から選択され；
Ｒ２は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ３はハロ、Ｃ１−６アルキルおよびＣ１−６アルコキシから選択され；
Ｒ４はＣ３−８ヘテロシクロアルキル、−ＸＮＲ５Ｒ６、−ＸＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ６および−ＸＮＲ５Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ６から選択され；ここでＸは単結合またはＣ１−４アルキレンであり；Ｒ５は水素およびＣ１−６アルキルから選択され；Ｒ６はＣ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル−Ｃ０−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリール−Ｃ０−４アルキルおよびＣ３−１２シクロアルキル−Ｃ０−４アルキルから選択され；ここでＲ４の任意のアリール、ヘテロアリールおよびシクロアルキルは場合によってはハロ、ヒドロキシ、ニトロ、場合によってはヒドロキシにより置換されたＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキル、ハロ置換Ｃ１−６アルコキシ、−ＸＳ（Ｏ）０−２（Ｏ）０−２Ｒ７、−ＸＯＸＮＲ７Ｒ８、−ＸＳ（Ｏ）０−２ＮＲ７Ｒ８、−ＸＯＲ７、−ＸＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−ＸＮＲ７Ｒ８および−ＸＲ９から別個に選択される１から３個のラジカルにより置換されていてよく；ここでＸは単結合またはＣ１−４アルキレンであり；Ｒ７およびＲ８は水素およびＣ１−６アルキルから別個に選択され；Ｒ９はＣ５−１０ヘテロアリールおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキルから選択され；ここでＲ９の任意のヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルは場合によっては１から３個のＣ１−６アルキルラジカルにより置換されていてよく；
そしてＲ１０は水素である：
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が水素、ハロ、ピロリジニルおよび−ＮＨＲ６から選択され；ここでＲ６は水素、メチル、エチル、ジエチル−アミノ−プロピル、モルホリノ−エチル、ヒドロキシ−エチル、ベンゾ[１,３]ジオキソリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリジニル−メチル、２−（２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−エチルおよびフェニルから選択され；ここで該ピロリジニル、ピリジニル、ピラゾリル、ピラジニル、ピリジニル−メチル、２−（２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−エチルまたはフェニルは場合によってはアミノ、メトキシ、ジメチルアミノ、ジメチルアミノ−メチル、ジメチルアミノ−エチル、ジメチルアミノ−プロピル、ジメチルアミノ−エトキシ、メチル−スルファニル、ヒドロキシ、メチルスルホニル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシ−エチル、メタン−スルホニル−アミノ、モルホリノ、モルホリノ−エチル、フラニル−メチル、４−メチル−ピペラジン−１−イル、４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル、ベンジル、メチル−アミノカルボニル、メチル−カルボニル−アミノ、メチル−ピラゾリル、アミノカルボニルおよびアミノ−スルホニルから別個に選択される１から２個のラジカルにより置換されていてよい請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ４が−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ６および−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ６から選択され；ここでＲ６はメチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロヘキシル、フラニル、ピロリル、フェニル、ピリジニル、ピリダジニル、ピラジニル、ピラゾリル、テトラゾリル−メチルおよびベンジルから選択され；ここでＲ６の該シクロヘキシル、フラニル、ピロリル、フェニル、ピリジニル、ピリダジニル、ピラジニル、ピラゾリル、テトラゾリル−メチルまたはベンジルは場合によっては４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル、４−メチル−ピペラジン−１−イル、４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル、４−エチル−ピペラジン−１−イル、フェニル、エチル、トリフルオロメチル、モルホリノ、ジメチルアミノ、ハロ、ニトロ、トリフルオロメトキシ、１−メチル−ピロール−２−イル、４−メチル−イミダゾール−１−イル、４−メチル−ピペラジン−１−イル、４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル、イソブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルから選択される１から３個のラジカルにより置換されていてよい請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
薬学的に許容される賦形剤と組み合わせた治療上有効量の請求項１に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項６】
動物に治療上有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含むキナーゼ活性の阻止が疾患の病理および／または症状を予防、阻止または改善することができる動物の疾患を処置するための方法。
【請求項７】
キナーゼがＡｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６およびＳＡＰＫ２βから選択される請求項５に記載の方法。
【請求項８】
Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６および／またはＳＡＰＫ２βのキナーゼ活性が疾患の病理および／または症状の原因となる動物の疾患を処置するための医薬品の製造における請求項１に記載の化合物の使用。
【公表番号】特表２００７−５０８３１０（Ｐ２００７−５０８３１０Ａ）
【公表日】平成１９年４月５日（２００７．４．５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５３４３１２（Ｐ２００６−５３４３１２）
【出願日】平成１６年１０月８日（２００４．１０．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３３００９
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０３４８６９
【国際公開日】平成１７年４月２１日（２００５．４．２１）
【出願人】（５０３２６１５２４）アイアールエム・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー (158)
【氏名又は名称原語表記】ＩＲＭ，ＬＬＣ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年４月５日（２００７．４．５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１０月８日（２００４．１０．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３３００９
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０３４８６９
【国際公開日】平成１７年４月２１日（２００５．４．２１）
【出願人】（５０３２６１５２４）アイアールエム・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー (158)
【氏名又は名称原語表記】ＩＲＭ，ＬＬＣ
【Ｆターム（参考）】
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