本発明は、匂い物質受容体細胞表面局在化および匂い物質受容体機能発現を促進する能力があるポリペプチドに関する。本発明はさらに、様々な匂い物質受容体に特異的なリガンドの検出のためのアッセイ法を提供する。さらに、本発明は、疾患状態に関連した匂い物質受容体アクセサリータンパク質多型および突然変異についてスクリーニングする方法、加えてそのようなタンパク質の治療剤、リガンドおよびモジュレーターについてスクリーニングする方法を提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
a)i)REEP1、RTP1、RTP1-A、RTP1-A1、RTP1-D1、RTP1-D3もしくはRTP2を発現する、匂い物質受容体を含む細胞または細胞膜、および
ii)試験化合物、
を供給する段階、
b)該試験化合物を該細胞系へ曝す段階、ならびに
c)該匂い物質受容体の活性を検出する段階を含む、
匂い物質受容体リガンドを同定するための方法。
【請求項２】
検出段階がレポーティング剤を検出する段階を含む、請求項1記載の方法。
【請求項３】
細胞が293T細胞系である、請求項1記載の方法。
【請求項４】
匂い物質受容体がヒト匂い物質受容体である、請求項1記載の方法。
【請求項５】
試験化合物が匂いのある分子である、請求項1記載の方法。
【請求項６】
レポーティング剤がcAMP応答配列により制御される、請求項2記載の方法。
【請求項７】
細胞がG_αolfを含む、請求項1記載の方法。
【請求項８】
匂い物質受容体がマウス匂い物質受容体である、請求項1記載の方法。
【請求項９】
匂い物質受容体が合成匂い物質受容体である、請求項1記載の方法。
【請求項１０】
匂い物質受容体が、S6/79、S18、S46、S50、MOR23-1、MOR31-4、MOR31-6、MOR32-5および/またはMOR32-11を含む、請求項1記載の方法。
【請求項１１】
レポーティング剤が照射剤である、請求項2記載の方法。
【請求項１２】
照射剤がルシフェラーゼである、請求項11記載の方法。
【請求項１３】
d)活性に基づいて匂い物質受容体リガンドの存在または非存在を検出する段階をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項１４】
細胞が異種細胞系および天然の細胞系からなる群より選択される、請求項1記載の方法。
【請求項１５】
発現が細胞表面に局在しており、細胞系がREEP1、RTP1、RTP2、RTP1-A、RTP1-A1、RTP1-D1、およびRTP1-D3の1つまたは複数を含む異種遺伝子を含む、匂い物質受容体を発現する細胞系。
【請求項１６】
293T細胞系である、請求項15記載の細胞系。
【請求項１７】
匂い物質受容体がヒト匂い物質受容体である、請求項15記載の細胞系。
【請求項１８】
匂い物質受容体がレポーティング剤でタグを付けられている、請求項15記載の細胞系。
【請求項１９】
レポーティング剤が照射レポーティング剤である、請求項18記載の細胞系。
【請求項２０】
照射レポーティング剤が、グルタチオン-S-トランスフェラーゼ(GST)、c-myc、6-ヒスチジン(6X-His)、緑色蛍光タンパク質(GFP)、マルトース結合タンパク質(MBP)、インフルエンザAウイルス赤血球凝集素(HA)、β-ガラクトシダーゼ、またはGAL4を含む、請求項19記載の細胞系。
【請求項２１】
G_αolf発現をさらに含む、請求項15記載の細胞系。
【請求項２２】
匂い物質受容体がマウス匂い物質受容体である、請求項15記載の細胞系。
【請求項２３】
匂い物質受容体が合成匂い物質受容体である、請求項15記載の細胞系。
【請求項２４】
匂い物質受容体が、S6/79、S18、S46、S50、MOR23-1、MOR31-4、MOR31-6、MOR32-5およびMOR32-11を含む、請求項15記載の細胞系。
【請求項２５】
配列番号:21、27、33、34、37、38、41、42、43、44、45、46、47、48、49、および50、ならびに配列番号:21、27、33、34、37、38、41、42、43、44、45、46、47、48、49、および50と少なくとも80%同一であるそれらの変種からなる群より選択されるタンパク質をコードする配列を含む単離かつ精製された核酸。
【請求項２６】
異種プロモーターへ実施可能に連結される、請求項25記載の核酸配列。
【請求項２７】
ベクター内に含まれる、請求項25記載の核酸配列。
【請求項２８】
ベクターが宿主細胞において発現される、請求項27記載の核酸配列。
【請求項２９】
配列番号:1、7、13、14、17および/または18を含む核酸へ高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、単離かつ精製された核酸配列。
【請求項３０】
異種プロモーターへ実施可能に連結される、請求項29記載の核酸配列。
【請求項３１】
ベクター内に含まれる、請求項29記載の核酸配列。
【請求項３２】
ベクターが宿主細胞において発現される、請求項31記載の核酸配列。
【請求項３３】
宿主細胞が生物体に位置し、該生物体が非ヒト動物である、請求項32記載の核酸。
【請求項３４】
請求項29記載の単離されたヌクレオチド配列へ高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする能力がある少なくとも15ヌクレオチドを含む、単離されたポリヌクレオチド配列。
【請求項３５】
配列番号:1、7、13、14、17および18、ならびに配列番号:1、7、13、14、17および18と少なくとも80%同一であるそれらの変種からなる群より選択される核酸によりコードされる単離されたポリペプチド。
【請求項３６】
タンパク質が配列番号:1、7、13、14、17および18と少なくとも90%同一である、請求項35記載の単離されたポリペプチド。
【請求項３７】
タンパク質が配列番号:1、7、13、14、17および18と少なくとも95%同一である、請求項35記載の単離されたポリペプチド。
【請求項３８】
タンパク質が配列番号:1、7、13、14、17および18と100%同一である、請求項35記載の単離されたポリペプチド。
【請求項３９】
配列番号:1、7、13、14、17および18からなる群より選択される核酸の少なくとも一部のそれらの相補配列への結合を通してREEPまたはRTPポリペプチドの発現を阻害する単離された核酸を含む、組成物。
【請求項４０】
a)REEP1ポリペプチドを含む被験体由来の生体試料を供給する段階、および
b)該生体試料において変種REEP1ポリペプチドの存在または非存在を検出する段階を含む、
被験体における変種REEP1ポリペプチドの検出のための方法。
【請求項４１】
生体試料が、血液試料、組織試料、尿試料、および羊水試料からなる群より選択される、請求項40記載の方法。
【請求項４２】
被験体が胎芽、胎児、新生動物、および幼若動物からなる群より選択される、請求項40記載の方法。
【請求項４３】
動物がヒトである、請求項42記載の方法。
【請求項４４】
検出段階が抗体結合の差を含む、請求項40記載の方法。
【請求項４５】
検出段階がウェスタンブロットを含む、請求項40記載の方法。
【請求項４６】
検出段階がREEP1核酸配列を検出する段階を含む、請求項40記載の方法。
【請求項４７】
a)RTPポリペプチドを含む被験体由来の生体試料を供給する段階、および
b)該生体試料において、変種RTP1ポリペプチドおよび変種RTP2ポリペプチドからなる群より選択される変種RTPポリペプチドの存在または非存在を検出する段階を含む、
被験体における変種RTPポリペプチドの検出のための方法。
【請求項４８】
生体試料が、血液試料、組織試料、尿試料、および羊水試料からなる群より選択される、請求項47記載の方法。
【請求項４９】
被験体が胎芽、胎児、新生動物、および幼若動物からなる群より選択される、請求項47記載の方法。
【請求項５０】
動物がヒトである、請求項47記載の方法。
【請求項５１】
検出段階が抗体結合の差を含む、請求項47記載の方法。
【請求項５２】
検出段階がウェスタンブロットを含む、請求項47記載の方法。
【請求項５３】
変種RTP1ポリペプチドが、RTP1-A、RTP1-B、RTP1-C、RTP1-D、およびRTP1-E、RTP1-A1、RTP1-D1、RTP-D2、およびRTP1-D3からなる群より選択される、請求項47記載の方法。
【請求項５４】
生体試料において変種REEP1ポリペプチドの存在または非存在を検出するために十分な試薬を含むキット。
【請求項５５】
生体試料において変種REEPポリペプチドの存在または非存在を検出するためのキットを用いることについての使用説明書をさらに含む、請求項54記載のキット。
【請求項５６】
使用説明書が、インビトロ診断キットについて連邦食品医薬品局(U.S. Food and Drug Agency)により要求される指示を含む、請求項54記載のキット。
【請求項５７】
試薬が1つまたは複数の抗体を含む、請求項54記載のキット。
【請求項５８】
生体試料が、血液試料、組織試料、尿試料、および羊水試料からなる群より選択される、請求項54記載のキット。
【請求項５９】
試薬がREEP1核酸配列を検出するように構成されている、請求項54記載のキット。
【請求項６０】
生体試料において、変種RTP1ポリペプチドおよび変種RTP2ポリペプチドからなる群より選択される変種RTPポリペプチドの存在または非存在を検出するために十分な試薬を含むキット。
【請求項６１】
生体試料において変種RTPポリペプチドの存在または非存在を検出するためのキットを用いることについての使用説明書をさらに含む、請求項60記載のキット。
【請求項６２】
変種RTP1ポリペプチドが、RTP1-A、RTP1-B、RTP1-C、RTP1-D、およびRTP1-E、RTP1-A1、RTP1-D1、RTP-D2、およびRTP1-D3からなる群より選択される、請求項60記載のキット。
【請求項６３】
使用説明書が、インビトロ診断キットについて連邦食品医薬品局により要求される指示を含む、請求項61記載のキット。
【請求項６４】
試薬が1つまたは複数の抗体を含む、請求項60記載のキット。
【請求項６５】
生体試料が、血液試料、組織試料、尿試料、および羊水試料からなる群より選択される、請求項60記載のキット。
【請求項６６】
試薬が、RTP1核酸配列およびRTP2核酸配列からなる群より選択される核酸を検出するように構成されている、請求項60記載のキット。
【請求項６７】
a)i. REEP1ポリペプチドを発現する試料、
ii. 試験化合物
を供給する段階、
b)該試料を該試験化合物に曝し、生物学的効果を検出する段階を含む、
REEP1に対して特異的な化合物をスクリーニングするための方法。
【請求項６８】
試料が細胞を含む、請求項67記載の方法。
【請求項６９】
試料が組織を含む、請求項67記載の方法。
【請求項７０】
試料が被験体において見出される、請求項67記載の方法。
【請求項７１】
生物学的効果がREEP1の活性における変化を含む、請求項67記載の方法。
【請求項７２】
生物学的効果がREEP1の発現における変化を含む、請求項67記載の方法。
【請求項７３】
a)i. RTP1またはRTP2ポリペプチドを発現する試料
ii. 試験化合物
を供給する段階、
b)該試料を該試験化合物に曝し、生物学的効果を検出する段階を含む、
RTPに対して特異的な化合物をスクリーニングするための方法。
【請求項７４】
RTPポリペプチドが、RTP1、RTP2、RTP1-A、RTP1-B、RTP1-C、RTP1-D、およびRTP1-E、RTP1-A1、RTP1-D1、RTP-D2、およびRTP1-D3からなる群より選択される、請求項73記載の方法。
【請求項７５】
試料が細胞を含む、請求項73記載の方法。
【請求項７６】
試料が組織を含む、請求項73記載の方法。
【請求項７７】
試料が被験体において見出される、請求項73記載の方法。
【請求項７８】
生物学的効果がRTPの活性における変化を含む、請求項73記載の方法。
【請求項７９】
生物学的効果がRTPの発現における変化を含む、請求項73記載の方法。

【図１】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図２Ｃ】

【図２Ｄ】

【図３】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図３７】

【図３８】

【図３９】

【図４０】

【図４１】

【図４２】

【図４３】

【図４４】

【図４５】

【図４６】

【図４７】

【図４８】

【図４９】

【図５０】

【図５１】

【図５２】

【図５３】

【図５４】

【図５５】

【図５６】

【公表番号】特表２００８−５０３２２０（Ｐ２００８−５０３２２０Ａ）
【公表日】平成２０年２月７日（２００８．２．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５１６８３７（Ｐ２００７−５１６８３７）
【出願日】平成１７年６月２０日（２００５．６．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２１９２１
【国際公開番号】ＷＯ２００６／００２１６１
【国際公開日】平成１８年１月５日（２００６．１．５）
【出願人】（５０６４１９３３１）デューク　ユニバーシティー (2)
【Ｆターム（参考）】