抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、及び保湿剤
【課題】天然由来成分を有効成分とし、皮膚外用剤や飲食品などの分野に幅広く応用が可能な抗老化剤、抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、及び保湿剤を提供する。
【解決手段】ユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）の抽出物を有効成分として含有する抗老化剤、抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、及び保湿剤。カタクリの抽出物には真皮繊維芽細胞賦活作用、真皮繊維芽細胞賦1型コラーゲン産生促進作用、ヒト表皮角化細胞賦活作用、ＤＰＰＨラジカル消去作用，ＳＯＤ用活性作用、表皮角化細胞アルギナーゼ活性促進作用、メラニン合成阻害作用等の多くの作用が見いだされる。
【解決手段】ユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）の抽出物を有効成分として含有する抗老化剤、抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、及び保湿剤。カタクリの抽出物には真皮繊維芽細胞賦活作用、真皮繊維芽細胞賦1型コラーゲン産生促進作用、ヒト表皮角化細胞賦活作用、ＤＰＰＨラジカル消去作用，ＳＯＤ用活性作用、表皮角化細胞アルギナーゼ活性促進作用、メラニン合成阻害作用等の多くの作用が見いだされる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然由来成分を有効成分とする抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、保湿剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、皮膚の美観を保つことに対する女性の関心は非常に高く、シワ、シミ、タルミなどは女性の肌に対する悩みの上位に常に位置する。これらの悩みのうち、シワやタルミは、加齢等による真皮線維芽細胞の機能低下や、それに伴うコラーゲンやエラスチン等の真皮マトリックスの減少や変性、さらには紫外線等の外来ストレスによる酸化障害などが重要な要因となっている。また、もう一方の大きな悩みである、皮膚の色黒は一部不明な点もあるがホルモンの異常や日光の紫外線の刺激によるメラニン色素の産生が原因であり、その中でも、シミやソバカスはメラニン色素が異常沈着することが、その要因である。
【０００３】
特に皮膚外用剤の分野では、上述の皮膚の美観を損なうような諸症状を防止、或いは改善するために、さまざまな細胞賦活剤や抗酸化剤、メラニン産生抑制剤の検索及び配合検討が成されてきた。
【０００４】
例えば、細胞賦活剤としては、ポンカンのエッセンス（特許文献１参照）、ツリガネニンジン属、クサギ及びそれらの抽出物（特許文献２参照）、有機溶媒によるクロレラ抽出物（特許文献３参照）等、抗酸化剤としては、キク科ヘテロテカ属植物抽出物（特許文献４参照）やカユンアンギンの抽出物（特許文献５参照）等、さらにメラニン産生抑制剤としては、ホンダワラの抽出物（特許文献６参照）等が知られている。
【０００５】
これまで天然由来成分であるユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）に関して、その利用については、食品分野でよく知られている。カタクリについては、あまり研究が実施されておらず、カタクリの水蒸気蒸留水を、化粧品、医薬品、医薬部外品、食品に安全に配合できること（特許文献７参照）は知られているが、これ以外では文献も少ない。
【０００６】
【特許文献１】特開２００１−１３１０４５号公報
【特許文献２】特開２０００−１７８１９８号公報
【特許文献３】特開平１１−３３５２９３号公報
【特許文献４】特開平１１−１８０８８６号公報
【特許文献５】特開平１０−１８２４１３号公報
【特許文献６】特開平１０−３３０２２０号公報
【特許文献７】特開２００１−２２０３１３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
天然由来成分は、様々な薬理作用や美容効果を有することが知られ、これまでにも数多くの植物や菌類などが皮膚外用剤や飲食品などの分野に幅広く応用されている。しかし、天然由来成分の中には未だその効果が知られていないものも数多く存在し、優れた保湿作用、細胞賦活作用、抗酸化作用、美白作用などを有する有効成分の開発が期待されていた。本発明は、このような有効成分を見出すためになされたものであり、皮膚外用剤や飲食品などの分野に幅広く応用が可能な抗老化剤、抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、及び保湿剤を提供することを課題とする。具体的には、ユリ科カタクリ属植物カタクリより得られる成分を利用し、上記課題を解消したものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、天然由来の種々の成分について検討を行った結果、ユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）の抽出物に優れた抗老化作用、抗酸化作用、抗炎症作用、美白作用、及び保湿作用が存在することを見出し、さらに検討を重ねて本発明を完成させるに至った。すなわち、本発明は、ユリ科カタクリ属カタクリの抽出物を有効成分とする抗老化剤、抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、及び保湿剤に関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、ユリ科カタクリ属カタクリの抽出物を有効成分とすることで、優れた抗老化剤、抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、及び保湿剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
ユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）は、春先に北日本で多く見られる多年草で、鱗茎は地下深くもぐることが知られている。現在、市販されている片栗粉は、量産されたトウモロコシやジャガイモのデンプンであるが、本来はこのカタクリの鱗茎から良質のデンプンがとれたことから、この名がついたものである。花期は４〜５月で、淡く鮮やかな紫色の花をつけ、くるりと反転した花弁が特徴である。
【００１１】
本発明では、このカタクリの全草から得られる抽出物を利用するものである。
【００１２】
カタクリ抽出物の調製には、カタクリの全草を生のまま用いてもよいが、抽出効率を考えると、細切、乾燥、粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。抽出は、後述する任意の溶媒を用いて行うことができ、異なる溶媒を用いて抽出された抽出物を２種以上混合して用いてもよい。
【００１３】
抽出方法としては、室温、冷却または加温した状態で、任意の抽出溶媒に所定時間浸漬させて抽出する方法、生の全草を圧搾して抽出物を得る圧搾法等が例示できる。これらの任意の方法を単独で、または２種以上を組み合わせて、抽出を行うことができる。あるいは、超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法でも行うことができる。抽出効率を上げるため、撹拌したり抽出溶媒中でホモジナイズしたりしてもよい。
【００１４】
なかでも、カタクリ全草中の生理活性成分を効率よく抽出するためには、溶媒抽出法による抽出が好ましい。溶媒抽出法は、抽出時間や抽出温度の調節が容易であり、たとえば熱変性しやすい成分が含まれている場合でも、適宜対応のできる方法である。
【００１５】
抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は、抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。抽出の際の溶媒との比率は特に限定されるものではないが、全草（乾燥品）１に対し、溶媒０．５〜１０００質量倍が好ましく、特に抽出操作、効率の点で０．５〜１００質量倍が好ましい。
【００１６】
抽出溶媒としては、水の他、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級（炭素数１〜３）アルコール；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価（２〜３価）アルコール；エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル類；アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類などの溶媒を用いることができる。これらは、単独で用いられるほか、任意の２種以上を組み合わせて用いてもよい。生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニアなどの１種又は２種以上の超臨界液体や亜臨界液体を用いてもよい。なかでも、レモングラス中の生理活性成分を効率よく抽出するためには、水、低級アルコール、または多価アルコールを用いた抽出が好ましく、特に、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、およびグリセリンからなる群から選ばれる１種以上を用いることが好ましい。
【００１７】
カタクリ抽出物は、そのままでも使用することができるが、一定期間静置して熟成させて用いてもよいし、濃縮、乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解して使用することもできる。あるいは、これらの生理作用を損なわない範囲で、脱色、脱臭、脱塩等の精製処理や、カラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。得られた抽出物やその処理物および分画物は、各処理および分画後に凍結乾燥し、用時に溶媒に溶解して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００１８】
本発明の抗老化剤、抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、及び保湿剤は、そのまま適用するか、外用剤等に配合して適用することもできる。その配合量は、外用剤等の種類や使用目的によって調整することができる。一般的な配合量としては、効果や安定性などの点から、全量に対して、固形分換算で０．０００１〜１０質量％が好ましく、より好ましくは０．００１〜５質量％である。
【実施例】
【００１９】
以下に、本発明の抗老化剤、抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、及び保湿剤として用いるカタクリ抽出物の調製例、各作用を評価するための試験についてさらに詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらによりなんら限定されるものではない。
【００２０】
＜抽出方法１：カタクリ全草エタノール抽出物＞
ユリ科カタクリ属植物カタクリの全草を乾燥させて粉砕し、サンプル５グラムに対して１００グラム重量（２０倍量）のエタノールを加え、室温にて攪拌し、３時間浸漬を行った。これをろ過により不溶物を取り除き、減圧濃縮後、凍結乾燥を行って抽出物を得た。
【００２１】
＜抽出方法２：カタクリ全草熱水抽出物＞
ユリ科カタクリ属植物カタクリの全草を乾燥させて粉砕し、サンプル５グラムに対して１００グラム重量（２０倍量）の精製水を加えてオートクレーブ（１２０度、２０ｍｉｎ）を使って抽出し、温度の高い状態を保って吸引濾過後、凍結乾燥を行って抽出物を得た。
【００２２】
表中の＊および＊＊は、ｔ検定における有意確率Ｐ値に対し、有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊、有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊で表したものである。
【００２３】
＜真皮線維芽細胞賦活作用の確認＞
正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１重量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間後、１％重量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各濃度に調整したサンプル培養液に交換しさらに４８時間培養した。次にMTT試薬を４００μｇ／ｍｌとなるように培地にて調整し上清を除いた細胞に添加して約２時間培養した。最後に２−プロパノールにて生じたフォルマザンを抽出し、マイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍ，６５０ｎｍの吸光度を測定し、両測定値の差を用いて細胞賦活作用を評価した。評価ではサンプル培養液の他にネガティブコントロールとして１％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を、ポジティブコントロールとして５重量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いた。評価結果を、試料無添加のブランクにおける細胞賦活作用を１００とした相対値にて表１に示す。
【００２４】
【表１】
【００２５】
上記結果から、カタクリ抽出物は、有意な真皮線維芽細胞賦活作用を有することが明らかとなった。
【００２６】
＜真皮線維芽細胞Ｉ型コラーゲン産生効果＞
正常ヒト真皮繊維芽細胞を１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５重量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間後、０．５％重量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各濃度に調整したサンプル培養液に交換しさらに２４時間培養した。培養上清中に分泌されたタイプＩコラーゲン量はＥＬＩＳＡ法を用い、最後は標識されたペルオキシダーゼに対し２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）ジアンモニウム塩（ＡＢＴＳ）及び過酸化水素を添加し反応させた後、マイクロプレートリーダーにて４０５ｎｍの吸光度を測定した。評価ではサンプル培養液の他にネガティブコントロールとして０．５％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を、ポジティブコントロールとして５０μＭのＬ−アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩（ＶＣＰＭｇ）を含有する０．５重量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いた。ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔにてタンパク量を測定し単位タンパク量当りのコラーゲン産生量を求めた。評価はネガティブコントロールの単位当りコラーゲン産生量を１００とした時の相対値を求めて行った。結果を表２、表３に示す。
【００２７】
【表２】
【００２８】
【表３】
【００２９】
上記結果から、カタクリ抽出物は、有意な真皮線維芽細胞Ｉ型コラーゲン産生作用を有することが明らかとなった。
【００３０】
＜ＨａＣａＴ（ヒト表皮角化細胞）の細胞賦活効果＞
ヒト表皮細胞株ＨａＣａＴを１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には５重量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間後、５％重量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各濃度に調整したサンプル培養液に交換し、さらに２４時間培養した。次に１００μｇ／ｍｌとなるよう培地にて調整したＭＭＴ試薬を、上清を除いた細胞に添加し、約２時間培養した。最後に２−プロパノールにて生じたフォルマザンを抽出し、５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍの吸光度を測定し、両測定値の差を用いて細胞賦活作用を評価した。評価結果を試料無添加のコントロールにおける細胞賦活作用を１００とした時の相対値にて表４に示す
【００３１】
【表４】
【００３２】
上記結果から、カタクリ抽出物は、有意な表皮角化細胞の細胞賦活作用を有することが明らかとなった。
【００３３】
＜ＤＰＰＨラジカル消去作用＞
５０重量％エタノールによってサンプルを濃度調整し、９６ウェルマイクロプレートに１００ｍｌずつ添加した。そこへ、０．２ｍＭの１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）エタノール溶液を１００μｌずつ添加し、よく混合した後、室温、暗所にて１０分ｏｒ２４時間静置した。最後にＤＰＰＨラジカルに由来する５１６ｎｍの吸光度を測定した。サンプル液を添加しなかった場合の吸光度を（Ａ）、試料を添加した場合の吸光度を（Ｂ）としたとき、ＤＰＰＨラジカルの消去率は次式に定義される。
ラジカル消去率＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００
１０分後の評価結果を表５、表６、２４時間後の評価結果を表７、表８に示す。また、ラジカル消去率による抗酸化作用の評価基準を表９に示す。
【００３４】
【表５】
【００３５】
【表６】
【００３６】
【表７】
【００３７】
【表８】
【００３８】
【表９】
【００３９】
上記結果から、カタクリ抽出物は、高いラジカルの消去率を示し、優れた抗酸化作用を有することが明らかとなった。
【００４０】
＜ＳＯＤ様活性作用＞
０．２５ｍＭ ＷＳＴ−１及び１ｍＭ Ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅを含むＨＡＮＫ’Ｓ（＋）溶液７５μｌに、ＨＡＮＫ’Ｓ（＋）溶液にて任意の濃度に調製したサンプル溶液２５μｌを添加する。更に、Ｘａｎｔｈｉｎｅ Ｏｘｉｄａｓｅ ２５μｌ（０．００７５Ｕｎｉｔｓ）を添加し、３７℃、１５分間反応後、４５０ｎｍの吸光度を測定する。サンプル溶液にかえてＨＡＮＫ’Ｓ（＋）のみを添加した場合の吸光度を（Ａ）、サンプル溶液を添加した場合の吸光度を（Ｂ）としたとき、スーパーオキサイドアニオン消去率は次式に定義される。
消去率（％）＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００
評価結果を表１０、表１１に示す。
【００４１】
【表１０】
【００４２】
【表１１】
【００４３】
上記結果から、カタクリ抽出物は、有意なスーパーオキシドアニオン消去率を示し、優れた抗酸化作用を有することが明らかとなった。
【００４４】
＜表皮角化細胞アルギナーゼ活性促進作用の評価＞
ヒト表皮角化細胞ＨａＣａＴを１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には５重量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間後１．２ｍＭ ＣａＣｌ２を含む５重量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ（分化誘導培地）によって各濃度に調整したサンプル培養液に交換し、さらに９日間培養した。培地交換は３日に１回のペースで行った。培養上清中に分泌された尿素の定量には、尿素窒素 Ｂ−テストワコー（和光純薬）を用いた。アルギナーゼはアルギニンを加水分解し、オルニチン、尿素を生成する。尿素はウレアーゼによってアンモニアに分解され、アンモニアはペンタシアノニトロシル鉄（III）酸ナトリウム二水和物(ニトロプルシッドナトリウム)存在下でサリチル酸、次亜塩素酸と反応し、インドフェノールが生成する。アルカリ性条件下でマイクロプレートリーダーにてインドフェノールに由来する５７０ｎｍの吸光度を測定し、尿素濃度を求め、アルギナーゼ活性の定量を行った。ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔにてタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのアルギナーゼ活性を求めた。評価結果を試料無添加のコントロールにおける単位タンパク量当りのアルギナーゼ活性を１００とした時の相対値にて表１２に示す。
【００４５】
【表１２】
【００４６】
上記結果から、カタクリ抽出物は、有意な表皮角化細胞アルギナーゼ活性促進作用を有することが明らかとなった。
【００４７】
＜Ｂ１６細胞を用いたメラニン合成阻害作用＞
Ｂ１６マウスメラノーマ細胞 （Ｂ１６Ｆ０細胞）を１ディッシュ当り１８０００個となるように９０ｍｍディッシュに播種した。播種培地にはダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５重量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間後、５％重量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各濃度に調整したサンプル培養液に交換しさらに５日間培養した。培養終了後、トリプシン処理にて細胞をはがし、１．５ｍｌマイクロチューブに移して遠心操作して細胞沈殿物を得た。得られた沈殿物は下記判定基準を基にその黒化状況を肉眼判定した。評価ではネガティブコントロールに５％重量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地、ポジティブコントロールに乳酸ナトリウムを５０ｍＭ濃度で含有する５％重量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いた。これらの肉眼判定結果は判定５及び判定１としサンプル判定の指標とした。肉眼判定は下記に示す通り、５段階評価した。また同時に、沈殿物に組織溶解剤（商品名Ｓｏｌｖａｂｌｅ）を添加して煮沸し、室温に戻して９６ｗｅｌｌマイクロプレートに１５０μｌ添加して５００ｎｍの波長を測定した。評価結果を表１３、表１４に示す。
＜判定基準＞
１ ポジティブコントロールと同程度（ほぼ白）
２ ポジティブコントロールより僅かに黒化する（うすい褐色）
３ ポジティブコントロールとネガティブコントロールの中間（褐色）
４ ネガティブコントロールと比べやや黒化が抑制されている（黒褐色）
５ ネガティブコントロールと同程度（ほぼ黒）
【００４８】
【表１３】
【００４９】
【表１４】
【００５０】
上記結果から、カタクリ抽出物は、優れたメラニン合成阻害作用を有することが明らかとなった。
【００５１】
本発明を実施した処方例を示す。
【００５２】
［処方例１］乳液
（１）スクワラン １０．０（質量％）
（２）メチルフェニルポリシロキサン ４．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）モノステアリン酸ポリオキシエチレン
ソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン １．０
（７）グリセリン ４．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）カルボキシビニルポリマー ０．１５
（１０）精製水 ５３．８５
（１１）アルギニン（１質量％水溶液） ２０．０
（１２）カタクリ全草エタノール抽出物 ５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（１０）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、冷却を開始し、（１１）と（１２）を順次加え、均一に混合する。
【００５３】
［処方例２］化粧水
（１）エタノール １５．０（質量％）
（２）ポリオキシエチレン（４０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油 ０．３
（３）香料 ０．１
（４）精製水 ７８．３８
（５）クエン酸 ０．０２
（６）クエン酸ナトリウム ０．１
（７）グリセリン １．０
（８）ヒドロキシエチルセルロース ０．１
（９）カタクリ全草熱水抽出物 ５．０
製法：（１）に（２）及び（３）を溶解する。溶解後、（４）〜（８）を順次添加した後、十分に攪拌し、（９）を加え、均一に混合する。
【００５４】
［処方例３］クリーム
（１）スクワラン １０．０（質量％）
（２）ステアリン酸 ２．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）セタノール ３．６
（６）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（７）グリセリン １０．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）アルギニン（２０質量％水溶液） １５．０
（１０）精製水 ４０．７
（１１）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液） １５．０
（１２）カタクリ全草エタノール抽出物 １．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（１０）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、（１１）を加え、冷却を開始し、４０℃にて（１２）を加え、均一に混合する。
【００５５】
［処方例４］美容液
（１）精製水 ２７．４５（質量％）
（２）グリセリン １０．０
（３）ショ糖脂肪酸エステル １．３
（４）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液） １７．５
（５）アルギン酸ナトリウム（１質量％水溶液） １５．０
（６）モノラウリン酸ポリグリセリル １．０
（７）マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル ３．０
（８）Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸
ジ（フィトステリル−２−オクチルドデシル） ２．０
（９）硬化パーム油 ２．０
（１０）スクワラン（オリーブ由来） １．０
（１１）ベヘニルアルコール ０．７５
（１２）ミツロウ １．０
（１３）ホホバ油 １．０
（１４）１、３−ブチレングリコール １０．０
（１５）Ｌ−アルギニン（１０質量％水溶液） ２．０
（１６）カタクリ全草エタノール抽出物 ５．０
製法：（１）〜（６）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（１４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化を行った後、ホモミキサーにて均一に乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、５０℃にて（１５）を加える。さらに４０℃まで冷却し、（１６）を加え、均一に混合する。
【００５６】
［処方例５］水性ジェル
（１）カルボキシビニルポリマー ０．５（質量％）
（２）精製水 ８６．７
（３）水酸化ナトリウム（１０質量％水溶液） ０．５
（４）エタノール １０．０
（５）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（６）香料 ０．１
（７）カタクリ全草熱水抽出物 ２．０
（８）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油 ０．１
製法：（１）を（２）に加え、均一に攪拌した後、（３）を加える。均一に攪拌した後、（４）に予め溶解した（５）を加える。均一に攪拌した後、予め混合しておいた（６）〜（８）を加え、均一に攪拌混合する。
【００５７】
［処方例６］クレンジング料
（１）スクワラン ８１．０（質量％）
（２）イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル １５．０
（３）精製水 ３．０
（４）カタクリ全草エタノール抽出物 １．０
製法：（１）と（２）を均一に溶解する。これに、（３）と（４）を順次加え、均一に混合する。
【００５８】
［処方例７］洗顔フォーム
（１）ステアリン酸 １６．０（質量％）
（２）ミリスチン酸 １６．０
（３）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（４）グリセリン ２０．０
（５）水酸化ナトリウム ７．５
（６）ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン １．０
（７）精製水 ３６．５
（８）カタクリ全草熱水抽出物 １．０
製法：（１）〜（４）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（５）〜（７）の水相成分を８０℃にて加熱溶解し、油相成分と均一に混合撹拌する。冷却を開始し、４０℃にて（８）を加え、均一に混合する。
【００５９】
［処方例８］メイクアップベースクリーム
（１）スクワラン １０．０（質量％）
（２）セタノール ２．０
（３）グリセリントリ−２−エチルヘキサン酸エステル ２．５
（４）親油型モノステアリン酸グリセリル １．０
（５）プロピレングリコール １１．０
（６）ショ糖脂肪酸エステル １．３
（７）精製水 ６９．４
（８）酸化チタン １．０
（９）ベンガラ ０．１
（１０）黄酸化鉄 ０．４
（１１）香料 ０．１
（１２）カタクリ全草エタノール抽出物 １．２
製法：（１）〜（４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（５）〜（７）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（８）〜（１０）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１１）と（１２）の成分を加え、均一に混合する。
【００６０】
［処方例９］乳液状ファンデーション
（１）メチルポリシロキサン ２．０（質量％）
（２）スクワラン ５．０
（３）ミリスチン酸オクチルドデシル ５．０
（４）セタノール １．０
（５）ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）
ソルビタンモノステアリン酸エステル １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン ０．７
（７）１、３−ブチレングリコール ８．０
（８）キサンタンガム ０．１
（９）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（１０）精製水 ５７．４
（１１）酸化チタン ９．０
（１２）タルク ７．４
（１３）ベンガラ ０．５
（１４）黄酸化鉄 １．１
（１５）黒酸化鉄 ０．１
（１６）香料 ０．１
（１７）カタクリ全草熱水抽出物 １．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（１０）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（１１）〜（１５）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散する。油相成分を加え、乳化を行う。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１６）と（１７）の成分を順次加え、均一に混合する。
【００６１】
［処方例１０］油中水型エモリエントクリーム
（１）流動パラフィン ３０．０（質量％）
（２）マイクロクリスタリンワックス ２．０
（３）ワセリン ５．０
（４）ジグリセリンオレイン酸エステル ５．０
（５）塩化ナトリウム １．３
（６）塩化カリウム ０．１
（７）プロピレングリコール ３．０
（８）１、３−ブチレングリコール ５．０
（９）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（１０）カタクリ全草エタノール抽出物 １．０
（１１）精製水 ４７．４
（１２）香料 ０．１
製法：（５）と（６）を（１１）の一部に溶解して５０℃とし、５０℃に加熱した（４）に撹拌しながら徐々に加える。これを混合した後、７０℃にて加熱溶解した（１）〜（３）に均一に分散する。これに（７）〜（１０）を（１１）の残部に７０℃にて加熱溶解したものを撹拌しながら加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１２）を加え、均一に混合する。
【００６２】
［処方例１１］パック
（１）精製水 ５８．９（質量％）
（２）ポリビニルアルコール １２．０
（３）エタノール １７．０
（４）グリセリン ５．０
（５）ポリエチレングリコール（平均分子量１０００） ２．０
（６）カタクリ全草熱水抽出物 ５．０
（７）香料 ０．１
製法：（２）と（３）を混合し、８０℃に加温した後、８０℃に加温した（１）に溶解する。均一に溶解した後、（４）と（５）を加え、攪拌しながら冷却を開始する。４０℃まで冷却し、（６）と（７）を加え、均一に混合する。
【００６３】
［処方例１２］入浴剤
（１）香料 ０．３（質量％）
（２）カタクリ全草熱水抽出物 １．０
（３）炭酸水素ナトリウム ５０．０
（４）硫酸ナトリウム ４８．７
製法：（１）〜（４）を均一に混合する。
【００６４】
［処方例１３］飲料
（１）カタクリ全草熱水抽出物 ８．０（質量％）
（２）エリスリトール １．０
（３）クエン酸 ０．１
（４）ステビア ０．０１
（５）精製水 ９０．８９
製法：（１）〜（５）を均一に混合する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然由来成分を有効成分とする抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、保湿剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、皮膚の美観を保つことに対する女性の関心は非常に高く、シワ、シミ、タルミなどは女性の肌に対する悩みの上位に常に位置する。これらの悩みのうち、シワやタルミは、加齢等による真皮線維芽細胞の機能低下や、それに伴うコラーゲンやエラスチン等の真皮マトリックスの減少や変性、さらには紫外線等の外来ストレスによる酸化障害などが重要な要因となっている。また、もう一方の大きな悩みである、皮膚の色黒は一部不明な点もあるがホルモンの異常や日光の紫外線の刺激によるメラニン色素の産生が原因であり、その中でも、シミやソバカスはメラニン色素が異常沈着することが、その要因である。
【０００３】
特に皮膚外用剤の分野では、上述の皮膚の美観を損なうような諸症状を防止、或いは改善するために、さまざまな細胞賦活剤や抗酸化剤、メラニン産生抑制剤の検索及び配合検討が成されてきた。
【０００４】
例えば、細胞賦活剤としては、ポンカンのエッセンス（特許文献１参照）、ツリガネニンジン属、クサギ及びそれらの抽出物（特許文献２参照）、有機溶媒によるクロレラ抽出物（特許文献３参照）等、抗酸化剤としては、キク科ヘテロテカ属植物抽出物（特許文献４参照）やカユンアンギンの抽出物（特許文献５参照）等、さらにメラニン産生抑制剤としては、ホンダワラの抽出物（特許文献６参照）等が知られている。
【０００５】
これまで天然由来成分であるユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）に関して、その利用については、食品分野でよく知られている。カタクリについては、あまり研究が実施されておらず、カタクリの水蒸気蒸留水を、化粧品、医薬品、医薬部外品、食品に安全に配合できること（特許文献７参照）は知られているが、これ以外では文献も少ない。
【０００６】
【特許文献１】特開２００１−１３１０４５号公報
【特許文献２】特開２０００−１７８１９８号公報
【特許文献３】特開平１１−３３５２９３号公報
【特許文献４】特開平１１−１８０８８６号公報
【特許文献５】特開平１０−１８２４１３号公報
【特許文献６】特開平１０−３３０２２０号公報
【特許文献７】特開２００１−２２０３１３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
天然由来成分は、様々な薬理作用や美容効果を有することが知られ、これまでにも数多くの植物や菌類などが皮膚外用剤や飲食品などの分野に幅広く応用されている。しかし、天然由来成分の中には未だその効果が知られていないものも数多く存在し、優れた保湿作用、細胞賦活作用、抗酸化作用、美白作用などを有する有効成分の開発が期待されていた。本発明は、このような有効成分を見出すためになされたものであり、皮膚外用剤や飲食品などの分野に幅広く応用が可能な抗老化剤、抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、及び保湿剤を提供することを課題とする。具体的には、ユリ科カタクリ属植物カタクリより得られる成分を利用し、上記課題を解消したものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、天然由来の種々の成分について検討を行った結果、ユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）の抽出物に優れた抗老化作用、抗酸化作用、抗炎症作用、美白作用、及び保湿作用が存在することを見出し、さらに検討を重ねて本発明を完成させるに至った。すなわち、本発明は、ユリ科カタクリ属カタクリの抽出物を有効成分とする抗老化剤、抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、及び保湿剤に関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、ユリ科カタクリ属カタクリの抽出物を有効成分とすることで、優れた抗老化剤、抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、及び保湿剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
ユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）は、春先に北日本で多く見られる多年草で、鱗茎は地下深くもぐることが知られている。現在、市販されている片栗粉は、量産されたトウモロコシやジャガイモのデンプンであるが、本来はこのカタクリの鱗茎から良質のデンプンがとれたことから、この名がついたものである。花期は４〜５月で、淡く鮮やかな紫色の花をつけ、くるりと反転した花弁が特徴である。
【００１１】
本発明では、このカタクリの全草から得られる抽出物を利用するものである。
【００１２】
カタクリ抽出物の調製には、カタクリの全草を生のまま用いてもよいが、抽出効率を考えると、細切、乾燥、粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。抽出は、後述する任意の溶媒を用いて行うことができ、異なる溶媒を用いて抽出された抽出物を２種以上混合して用いてもよい。
【００１３】
抽出方法としては、室温、冷却または加温した状態で、任意の抽出溶媒に所定時間浸漬させて抽出する方法、生の全草を圧搾して抽出物を得る圧搾法等が例示できる。これらの任意の方法を単独で、または２種以上を組み合わせて、抽出を行うことができる。あるいは、超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法でも行うことができる。抽出効率を上げるため、撹拌したり抽出溶媒中でホモジナイズしたりしてもよい。
【００１４】
なかでも、カタクリ全草中の生理活性成分を効率よく抽出するためには、溶媒抽出法による抽出が好ましい。溶媒抽出法は、抽出時間や抽出温度の調節が容易であり、たとえば熱変性しやすい成分が含まれている場合でも、適宜対応のできる方法である。
【００１５】
抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は、抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。抽出の際の溶媒との比率は特に限定されるものではないが、全草（乾燥品）１に対し、溶媒０．５〜１０００質量倍が好ましく、特に抽出操作、効率の点で０．５〜１００質量倍が好ましい。
【００１６】
抽出溶媒としては、水の他、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級（炭素数１〜３）アルコール；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価（２〜３価）アルコール；エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル類；アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類などの溶媒を用いることができる。これらは、単独で用いられるほか、任意の２種以上を組み合わせて用いてもよい。生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニアなどの１種又は２種以上の超臨界液体や亜臨界液体を用いてもよい。なかでも、レモングラス中の生理活性成分を効率よく抽出するためには、水、低級アルコール、または多価アルコールを用いた抽出が好ましく、特に、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、およびグリセリンからなる群から選ばれる１種以上を用いることが好ましい。
【００１７】
カタクリ抽出物は、そのままでも使用することができるが、一定期間静置して熟成させて用いてもよいし、濃縮、乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解して使用することもできる。あるいは、これらの生理作用を損なわない範囲で、脱色、脱臭、脱塩等の精製処理や、カラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。得られた抽出物やその処理物および分画物は、各処理および分画後に凍結乾燥し、用時に溶媒に溶解して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００１８】
本発明の抗老化剤、抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、及び保湿剤は、そのまま適用するか、外用剤等に配合して適用することもできる。その配合量は、外用剤等の種類や使用目的によって調整することができる。一般的な配合量としては、効果や安定性などの点から、全量に対して、固形分換算で０．０００１〜１０質量％が好ましく、より好ましくは０．００１〜５質量％である。
【実施例】
【００１９】
以下に、本発明の抗老化剤、抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、及び保湿剤として用いるカタクリ抽出物の調製例、各作用を評価するための試験についてさらに詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらによりなんら限定されるものではない。
【００２０】
＜抽出方法１：カタクリ全草エタノール抽出物＞
ユリ科カタクリ属植物カタクリの全草を乾燥させて粉砕し、サンプル５グラムに対して１００グラム重量（２０倍量）のエタノールを加え、室温にて攪拌し、３時間浸漬を行った。これをろ過により不溶物を取り除き、減圧濃縮後、凍結乾燥を行って抽出物を得た。
【００２１】
＜抽出方法２：カタクリ全草熱水抽出物＞
ユリ科カタクリ属植物カタクリの全草を乾燥させて粉砕し、サンプル５グラムに対して１００グラム重量（２０倍量）の精製水を加えてオートクレーブ（１２０度、２０ｍｉｎ）を使って抽出し、温度の高い状態を保って吸引濾過後、凍結乾燥を行って抽出物を得た。
【００２２】
表中の＊および＊＊は、ｔ検定における有意確率Ｐ値に対し、有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊、有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊で表したものである。
【００２３】
＜真皮線維芽細胞賦活作用の確認＞
正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１重量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間後、１％重量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各濃度に調整したサンプル培養液に交換しさらに４８時間培養した。次にMTT試薬を４００μｇ／ｍｌとなるように培地にて調整し上清を除いた細胞に添加して約２時間培養した。最後に２−プロパノールにて生じたフォルマザンを抽出し、マイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍ，６５０ｎｍの吸光度を測定し、両測定値の差を用いて細胞賦活作用を評価した。評価ではサンプル培養液の他にネガティブコントロールとして１％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を、ポジティブコントロールとして５重量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いた。評価結果を、試料無添加のブランクにおける細胞賦活作用を１００とした相対値にて表１に示す。
【００２４】
【表１】
【００２５】
上記結果から、カタクリ抽出物は、有意な真皮線維芽細胞賦活作用を有することが明らかとなった。
【００２６】
＜真皮線維芽細胞Ｉ型コラーゲン産生効果＞
正常ヒト真皮繊維芽細胞を１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５重量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間後、０．５％重量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各濃度に調整したサンプル培養液に交換しさらに２４時間培養した。培養上清中に分泌されたタイプＩコラーゲン量はＥＬＩＳＡ法を用い、最後は標識されたペルオキシダーゼに対し２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）ジアンモニウム塩（ＡＢＴＳ）及び過酸化水素を添加し反応させた後、マイクロプレートリーダーにて４０５ｎｍの吸光度を測定した。評価ではサンプル培養液の他にネガティブコントロールとして０．５％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を、ポジティブコントロールとして５０μＭのＬ−アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩（ＶＣＰＭｇ）を含有する０．５重量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いた。ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔにてタンパク量を測定し単位タンパク量当りのコラーゲン産生量を求めた。評価はネガティブコントロールの単位当りコラーゲン産生量を１００とした時の相対値を求めて行った。結果を表２、表３に示す。
【００２７】
【表２】
【００２８】
【表３】
【００２９】
上記結果から、カタクリ抽出物は、有意な真皮線維芽細胞Ｉ型コラーゲン産生作用を有することが明らかとなった。
【００３０】
＜ＨａＣａＴ（ヒト表皮角化細胞）の細胞賦活効果＞
ヒト表皮細胞株ＨａＣａＴを１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には５重量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間後、５％重量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各濃度に調整したサンプル培養液に交換し、さらに２４時間培養した。次に１００μｇ／ｍｌとなるよう培地にて調整したＭＭＴ試薬を、上清を除いた細胞に添加し、約２時間培養した。最後に２−プロパノールにて生じたフォルマザンを抽出し、５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍの吸光度を測定し、両測定値の差を用いて細胞賦活作用を評価した。評価結果を試料無添加のコントロールにおける細胞賦活作用を１００とした時の相対値にて表４に示す
【００３１】
【表４】
【００３２】
上記結果から、カタクリ抽出物は、有意な表皮角化細胞の細胞賦活作用を有することが明らかとなった。
【００３３】
＜ＤＰＰＨラジカル消去作用＞
５０重量％エタノールによってサンプルを濃度調整し、９６ウェルマイクロプレートに１００ｍｌずつ添加した。そこへ、０．２ｍＭの１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）エタノール溶液を１００μｌずつ添加し、よく混合した後、室温、暗所にて１０分ｏｒ２４時間静置した。最後にＤＰＰＨラジカルに由来する５１６ｎｍの吸光度を測定した。サンプル液を添加しなかった場合の吸光度を（Ａ）、試料を添加した場合の吸光度を（Ｂ）としたとき、ＤＰＰＨラジカルの消去率は次式に定義される。
ラジカル消去率＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００
１０分後の評価結果を表５、表６、２４時間後の評価結果を表７、表８に示す。また、ラジカル消去率による抗酸化作用の評価基準を表９に示す。
【００３４】
【表５】
【００３５】
【表６】
【００３６】
【表７】
【００３７】
【表８】
【００３８】
【表９】
【００３９】
上記結果から、カタクリ抽出物は、高いラジカルの消去率を示し、優れた抗酸化作用を有することが明らかとなった。
【００４０】
＜ＳＯＤ様活性作用＞
０．２５ｍＭ ＷＳＴ−１及び１ｍＭ Ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅを含むＨＡＮＫ’Ｓ（＋）溶液７５μｌに、ＨＡＮＫ’Ｓ（＋）溶液にて任意の濃度に調製したサンプル溶液２５μｌを添加する。更に、Ｘａｎｔｈｉｎｅ Ｏｘｉｄａｓｅ ２５μｌ（０．００７５Ｕｎｉｔｓ）を添加し、３７℃、１５分間反応後、４５０ｎｍの吸光度を測定する。サンプル溶液にかえてＨＡＮＫ’Ｓ（＋）のみを添加した場合の吸光度を（Ａ）、サンプル溶液を添加した場合の吸光度を（Ｂ）としたとき、スーパーオキサイドアニオン消去率は次式に定義される。
消去率（％）＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００
評価結果を表１０、表１１に示す。
【００４１】
【表１０】
【００４２】
【表１１】
【００４３】
上記結果から、カタクリ抽出物は、有意なスーパーオキシドアニオン消去率を示し、優れた抗酸化作用を有することが明らかとなった。
【００４４】
＜表皮角化細胞アルギナーゼ活性促進作用の評価＞
ヒト表皮角化細胞ＨａＣａＴを１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には５重量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間後１．２ｍＭ ＣａＣｌ２を含む５重量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ（分化誘導培地）によって各濃度に調整したサンプル培養液に交換し、さらに９日間培養した。培地交換は３日に１回のペースで行った。培養上清中に分泌された尿素の定量には、尿素窒素 Ｂ−テストワコー（和光純薬）を用いた。アルギナーゼはアルギニンを加水分解し、オルニチン、尿素を生成する。尿素はウレアーゼによってアンモニアに分解され、アンモニアはペンタシアノニトロシル鉄（III）酸ナトリウム二水和物(ニトロプルシッドナトリウム)存在下でサリチル酸、次亜塩素酸と反応し、インドフェノールが生成する。アルカリ性条件下でマイクロプレートリーダーにてインドフェノールに由来する５７０ｎｍの吸光度を測定し、尿素濃度を求め、アルギナーゼ活性の定量を行った。ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔにてタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのアルギナーゼ活性を求めた。評価結果を試料無添加のコントロールにおける単位タンパク量当りのアルギナーゼ活性を１００とした時の相対値にて表１２に示す。
【００４５】
【表１２】
【００４６】
上記結果から、カタクリ抽出物は、有意な表皮角化細胞アルギナーゼ活性促進作用を有することが明らかとなった。
【００４７】
＜Ｂ１６細胞を用いたメラニン合成阻害作用＞
Ｂ１６マウスメラノーマ細胞 （Ｂ１６Ｆ０細胞）を１ディッシュ当り１８０００個となるように９０ｍｍディッシュに播種した。播種培地にはダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５重量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間後、５％重量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各濃度に調整したサンプル培養液に交換しさらに５日間培養した。培養終了後、トリプシン処理にて細胞をはがし、１．５ｍｌマイクロチューブに移して遠心操作して細胞沈殿物を得た。得られた沈殿物は下記判定基準を基にその黒化状況を肉眼判定した。評価ではネガティブコントロールに５％重量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地、ポジティブコントロールに乳酸ナトリウムを５０ｍＭ濃度で含有する５％重量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いた。これらの肉眼判定結果は判定５及び判定１としサンプル判定の指標とした。肉眼判定は下記に示す通り、５段階評価した。また同時に、沈殿物に組織溶解剤（商品名Ｓｏｌｖａｂｌｅ）を添加して煮沸し、室温に戻して９６ｗｅｌｌマイクロプレートに１５０μｌ添加して５００ｎｍの波長を測定した。評価結果を表１３、表１４に示す。
＜判定基準＞
１ ポジティブコントロールと同程度（ほぼ白）
２ ポジティブコントロールより僅かに黒化する（うすい褐色）
３ ポジティブコントロールとネガティブコントロールの中間（褐色）
４ ネガティブコントロールと比べやや黒化が抑制されている（黒褐色）
５ ネガティブコントロールと同程度（ほぼ黒）
【００４８】
【表１３】
【００４９】
【表１４】
【００５０】
上記結果から、カタクリ抽出物は、優れたメラニン合成阻害作用を有することが明らかとなった。
【００５１】
本発明を実施した処方例を示す。
【００５２】
［処方例１］乳液
（１）スクワラン １０．０（質量％）
（２）メチルフェニルポリシロキサン ４．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）モノステアリン酸ポリオキシエチレン
ソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン １．０
（７）グリセリン ４．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）カルボキシビニルポリマー ０．１５
（１０）精製水 ５３．８５
（１１）アルギニン（１質量％水溶液） ２０．０
（１２）カタクリ全草エタノール抽出物 ５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（１０）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、冷却を開始し、（１１）と（１２）を順次加え、均一に混合する。
【００５３】
［処方例２］化粧水
（１）エタノール １５．０（質量％）
（２）ポリオキシエチレン（４０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油 ０．３
（３）香料 ０．１
（４）精製水 ７８．３８
（５）クエン酸 ０．０２
（６）クエン酸ナトリウム ０．１
（７）グリセリン １．０
（８）ヒドロキシエチルセルロース ０．１
（９）カタクリ全草熱水抽出物 ５．０
製法：（１）に（２）及び（３）を溶解する。溶解後、（４）〜（８）を順次添加した後、十分に攪拌し、（９）を加え、均一に混合する。
【００５４】
［処方例３］クリーム
（１）スクワラン １０．０（質量％）
（２）ステアリン酸 ２．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）セタノール ３．６
（６）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（７）グリセリン １０．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）アルギニン（２０質量％水溶液） １５．０
（１０）精製水 ４０．７
（１１）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液） １５．０
（１２）カタクリ全草エタノール抽出物 １．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（１０）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、（１１）を加え、冷却を開始し、４０℃にて（１２）を加え、均一に混合する。
【００５５】
［処方例４］美容液
（１）精製水 ２７．４５（質量％）
（２）グリセリン １０．０
（３）ショ糖脂肪酸エステル １．３
（４）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液） １７．５
（５）アルギン酸ナトリウム（１質量％水溶液） １５．０
（６）モノラウリン酸ポリグリセリル １．０
（７）マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル ３．０
（８）Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸
ジ（フィトステリル−２−オクチルドデシル） ２．０
（９）硬化パーム油 ２．０
（１０）スクワラン（オリーブ由来） １．０
（１１）ベヘニルアルコール ０．７５
（１２）ミツロウ １．０
（１３）ホホバ油 １．０
（１４）１、３−ブチレングリコール １０．０
（１５）Ｌ−アルギニン（１０質量％水溶液） ２．０
（１６）カタクリ全草エタノール抽出物 ５．０
製法：（１）〜（６）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（１４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化を行った後、ホモミキサーにて均一に乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、５０℃にて（１５）を加える。さらに４０℃まで冷却し、（１６）を加え、均一に混合する。
【００５６】
［処方例５］水性ジェル
（１）カルボキシビニルポリマー ０．５（質量％）
（２）精製水 ８６．７
（３）水酸化ナトリウム（１０質量％水溶液） ０．５
（４）エタノール １０．０
（５）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（６）香料 ０．１
（７）カタクリ全草熱水抽出物 ２．０
（８）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油 ０．１
製法：（１）を（２）に加え、均一に攪拌した後、（３）を加える。均一に攪拌した後、（４）に予め溶解した（５）を加える。均一に攪拌した後、予め混合しておいた（６）〜（８）を加え、均一に攪拌混合する。
【００５７】
［処方例６］クレンジング料
（１）スクワラン ８１．０（質量％）
（２）イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル １５．０
（３）精製水 ３．０
（４）カタクリ全草エタノール抽出物 １．０
製法：（１）と（２）を均一に溶解する。これに、（３）と（４）を順次加え、均一に混合する。
【００５８】
［処方例７］洗顔フォーム
（１）ステアリン酸 １６．０（質量％）
（２）ミリスチン酸 １６．０
（３）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（４）グリセリン ２０．０
（５）水酸化ナトリウム ７．５
（６）ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン １．０
（７）精製水 ３６．５
（８）カタクリ全草熱水抽出物 １．０
製法：（１）〜（４）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（５）〜（７）の水相成分を８０℃にて加熱溶解し、油相成分と均一に混合撹拌する。冷却を開始し、４０℃にて（８）を加え、均一に混合する。
【００５９】
［処方例８］メイクアップベースクリーム
（１）スクワラン １０．０（質量％）
（２）セタノール ２．０
（３）グリセリントリ−２−エチルヘキサン酸エステル ２．５
（４）親油型モノステアリン酸グリセリル １．０
（５）プロピレングリコール １１．０
（６）ショ糖脂肪酸エステル １．３
（７）精製水 ６９．４
（８）酸化チタン １．０
（９）ベンガラ ０．１
（１０）黄酸化鉄 ０．４
（１１）香料 ０．１
（１２）カタクリ全草エタノール抽出物 １．２
製法：（１）〜（４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（５）〜（７）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（８）〜（１０）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１１）と（１２）の成分を加え、均一に混合する。
【００６０】
［処方例９］乳液状ファンデーション
（１）メチルポリシロキサン ２．０（質量％）
（２）スクワラン ５．０
（３）ミリスチン酸オクチルドデシル ５．０
（４）セタノール １．０
（５）ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）
ソルビタンモノステアリン酸エステル １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン ０．７
（７）１、３−ブチレングリコール ８．０
（８）キサンタンガム ０．１
（９）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（１０）精製水 ５７．４
（１１）酸化チタン ９．０
（１２）タルク ７．４
（１３）ベンガラ ０．５
（１４）黄酸化鉄 １．１
（１５）黒酸化鉄 ０．１
（１６）香料 ０．１
（１７）カタクリ全草熱水抽出物 １．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（１０）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（１１）〜（１５）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散する。油相成分を加え、乳化を行う。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１６）と（１７）の成分を順次加え、均一に混合する。
【００６１】
［処方例１０］油中水型エモリエントクリーム
（１）流動パラフィン ３０．０（質量％）
（２）マイクロクリスタリンワックス ２．０
（３）ワセリン ５．０
（４）ジグリセリンオレイン酸エステル ５．０
（５）塩化ナトリウム １．３
（６）塩化カリウム ０．１
（７）プロピレングリコール ３．０
（８）１、３−ブチレングリコール ５．０
（９）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（１０）カタクリ全草エタノール抽出物 １．０
（１１）精製水 ４７．４
（１２）香料 ０．１
製法：（５）と（６）を（１１）の一部に溶解して５０℃とし、５０℃に加熱した（４）に撹拌しながら徐々に加える。これを混合した後、７０℃にて加熱溶解した（１）〜（３）に均一に分散する。これに（７）〜（１０）を（１１）の残部に７０℃にて加熱溶解したものを撹拌しながら加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１２）を加え、均一に混合する。
【００６２】
［処方例１１］パック
（１）精製水 ５８．９（質量％）
（２）ポリビニルアルコール １２．０
（３）エタノール １７．０
（４）グリセリン ５．０
（５）ポリエチレングリコール（平均分子量１０００） ２．０
（６）カタクリ全草熱水抽出物 ５．０
（７）香料 ０．１
製法：（２）と（３）を混合し、８０℃に加温した後、８０℃に加温した（１）に溶解する。均一に溶解した後、（４）と（５）を加え、攪拌しながら冷却を開始する。４０℃まで冷却し、（６）と（７）を加え、均一に混合する。
【００６３】
［処方例１２］入浴剤
（１）香料 ０．３（質量％）
（２）カタクリ全草熱水抽出物 １．０
（３）炭酸水素ナトリウム ５０．０
（４）硫酸ナトリウム ４８．７
製法：（１）〜（４）を均一に混合する。
【００６４】
［処方例１３］飲料
（１）カタクリ全草熱水抽出物 ８．０（質量％）
（２）エリスリトール １．０
（３）クエン酸 ０．１
（４）ステビア ０．０１
（５）精製水 ９０．８９
製法：（１）〜（５）を均一に混合する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）の抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗老化剤。
【請求項２】
ユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）の抽出物を有効成分とすることを特徴とする美白剤。
【請求項３】
ユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）の抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗酸化剤。
【請求項４】
ユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）の抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗炎症剤。
【請求項５】
ユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）の抽出物を有効成分とすることを特徴とする保湿剤。
【請求項６】
ユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）の抽出物を有効成分とすることを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項１】
ユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）の抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗老化剤。
【請求項２】
ユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）の抽出物を有効成分とすることを特徴とする美白剤。
【請求項３】
ユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）の抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗酸化剤。
【請求項４】
ユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）の抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗炎症剤。
【請求項５】
ユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）の抽出物を有効成分とすることを特徴とする保湿剤。
【請求項６】
ユリ科カタクリ属カタクリ（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）の抽出物を有効成分とすることを特徴とする皮膚外用剤。
【公開番号】特開２００９−１４３８４９（Ｐ２００９−１４３８４９Ａ）
【公開日】平成２１年７月２日（２００９．７．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−３２３０７４（Ｐ２００７−３２３０７４）
【出願日】平成１９年１２月１４日（２００７．１２．１４）
【出願人】（０００１３５３２４）株式会社ノエビア (258)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年７月２日（２００９．７．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１２月１４日（２００７．１２．１４）
【出願人】（０００１３５３２４）株式会社ノエビア (258)
【Ｆターム（参考）】
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