新規ＰＴＨ反応性遺伝子
本発明は新規ＰＴＨ遺伝子に関する。本発明はさらに、骨関連障害の治療法のスクリーニング、診断および開発法に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号２、４、６、８および１０をコード化する単離された核酸フラグメント；
（ｂ）配列番号２、４、６、８および１０と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列をコード化する単離された核酸フラグメント；
（ｃ）（ａ）の単離された核酸フラグメントと、３７℃で、６ＸＳＳＣ（１Ｍ ＮａＣｌ）、４５〜５０％ホルムアミド、１％ＳＤＳ、および０．５×〜１×ＳＳＣ中、５５〜６０℃での洗浄のハイブリダイゼーション条件下でハイブリッド形成する、単離された核酸分子；
（ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）に対して相補性である単離された核酸フラグメント
からなる群から選択されるＰＡＩＧＢポリペプチドをコード化する単離された核酸フラグメント。
【請求項２】
配列番号１、３、５、７および９からなる群から選択される請求項１記載の単離された核酸フラグメント。
【請求項３】
単離された核酸フラグメントがＤＮＡである請求項１記載の単離された核酸フラグメント。
【請求項４】
単離された核酸フラグメントがＲＮＡである請求項１記載の単離された核酸フラグメント。
【請求項５】
核酸フラグメントがＰＴＨシグナル化経路に関与するポリペプチドをコード化する請求項１記載の核酸フラグメント。
【請求項６】
過剰発現されると骨組織において骨形成活性を誘発する請求項１記載の核酸フラグメント。
【請求項７】
断続的なＰＴＨ投与に応答して過剰発現される請求項１記載の単離された核酸フラグメント。
【請求項８】
請求項１の単離された核酸フラグメントによりコード化されるポリペプチド。
【請求項９】
配列番号２、４、６、８および１０からなる群から選択される請求項８記載のポリペプチド。
【請求項１０】
ＰＴＨシグナル化経路に関与する請求項８記載のポリペプチド。
【請求項１１】
過度に発現されると骨組織において骨形成活性を誘発する請求項８記載のポリペプチド。
【請求項１２】
断続的なＰＴＨ投与に応答して過剰発現される請求項８記載のポリペプチド。
【請求項１３】
適当な調節配列と操作可能に結合した請求項１記載の単離された核酸フラグメントを含むキメラ構造物。
【請求項１４】
請求項１３記載のキメラ構築物で形質転換された宿主細胞。
【請求項１５】
宿主細胞が真核細胞、原核細胞および多細胞生物からなる群から選択される請求項１４記載の宿主細胞。
【請求項１６】
宿主細胞が哺乳動物細胞である請求項１５記載の宿主細胞。
【請求項１７】
宿主細胞が哺乳動物骨芽細胞である請求項１６記載の宿主細胞。
【請求項１８】
宿主細胞が、ＣＯＳ−７（サル腎臓）、２９３（ヒト腎臓）、ＣＨＯ（ハムスター卵巣）、ＨｅｐＧ２（ヒト肝臓）、ＨｅＬａ（ヒト頚部）、ＮＩＨ３Ｔ３（マウス線維芽細胞）、一次骨芽細胞、ＴＥ−８５（ヒト骨芽細胞）、ＭＧ−６３（ヒト骨芽細胞）、ＳＡＯＳ−２（ヒト骨芽細胞）、ＵＭＲ１０６（ラット骨芽細胞）、ＲＯＳ１７／２．８（ラット骨芽細胞）、ＭＣ３Ｔ３（マウス骨芽細胞）およびＵ２ＯＳ（ヒト骨芽細胞）からなる群から選択される請求項１６記載の宿主細胞。
【請求項１９】
宿主細胞がヒト骨芽細胞である請求項１５記載の宿主細胞。
【請求項２０】
宿主細胞がイー・コリである請求項１５記載の宿主細胞。
【請求項２１】
宿主細胞がＤＨ５アルファ、ＢＬ２１およびＤＨ１０Ｂからなる群から選択される請求項２０記載の宿主細胞。
【請求項２２】
宿主細胞が酵母細胞である請求項１５記載の宿主細胞。
【請求項２３】
宿主細胞が、シザサッカロミセス（Ｓｃｈｉｚａｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ Ｃｅｒｅｖｉｓｉｃｅ）、ピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ Ｐａｓｔｏｒｉｓ）およびピチア・メタノリック（Ｐｉｃｈｉａ Ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃ）からなる群から選択される請求項２２記載の宿主細胞。
【請求項２４】
宿主細胞が昆虫細胞である請求項１５記載の宿主細胞。
【請求項２５】
宿主細胞が、ＳＦ、ＳＦ２１−Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ Ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ、Ｓ２シュナイダー細胞、およびＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ卵から得られるハイファイブ細胞から選択される請求項２４記載の宿主細胞。
【請求項２６】
請求項１記載の核酸フラグメントを含むベクター。
【請求項２７】
ベクターがプラスミドである請求項２６記載のベクター。
【請求項２８】
請求項２６記載のベクターを含む形質転換された細胞。
【請求項２９】
宿主微生物が、真核細胞、原核細胞、および多細胞生物からなる群から選択される請求項２８記載の形質転換された細胞。
【請求項３０】
宿主微生物が哺乳動物細胞である請求項２９記載の形質転換された細胞。
【請求項３１】
宿主細胞が哺乳動物骨芽細胞である請求項３０記載の宿主細胞。
【請求項３２】
宿主微生物がイー・コリである請求項２８記載の形質転換された細胞。
【請求項３３】
宿主微生物が酵母細胞である請求項２８記載の形質転換された細胞。
【請求項３４】
（ａ）配列番号３、配列番号５、配列番号７または配列番号９に記載された核酸フラグメントの全部または一部でゲノムライブラリーをプローブし；
（ｂ）工程（ａ）の核酸フラグメントとハイブリッド形成するＤＮＡクローンを同定し；
（ｃ）工程（ｂ）において同定されたＤＮＡクローンを含む核酸フラグメントの配列を決定する
ことを含む、請求項８に記載のポリペプチドをコード化する核酸フラグメントを得る方法。
【請求項３５】
（ａ）請求項２６に記載のベクターを適当な宿主細胞中に導入し；
（ｂ）得られた細胞をポリペプチドを産生するために培養し；
（ｃ）工程（ｂ）において産生されたポリペプチドを回収し；
（ｄ）かくして回収されたポリペプチドを単離する
ことを含む、請求項８に記載のポリペプチドを得る方法。
【請求項３６】
（ａ）生物学的サンプルを請求項１に記載の核酸フラグメントと接触させ；（ｂ）核酸フラグメントが生物学的サンプル中の核酸分子と結合するかどうかを決定し、これによりサンプルにおける請求項１に記載の核酸フラグメントの存在を検出することを含む、生物学的サンプルにおける請求項１に記載の核酸フラグメントの存在を検出する方法。
【請求項３７】
請求項８〜１２に記載のＰＡＩＧＢポリペプチドの１以上のエピトープと特異的に結合する抗体。
【請求項３８】
（ｉ）請求項１〜７に記載の核酸フラグメント、（ｉｉ）請求項８〜１２に記載のポリペプチド、（ｉｉｉ）かかるポリペプチドまたはその一部から形成される抗体のうちの少なくとも１つを含む哺乳動物における骨形成活性を調節する組成物。
【請求項３９】
該ＰＡＩＧＢがヒト骨芽細胞から由来するところの請求項３８記載の組成物。
【請求項４０】
骨形成活性が骨成長の調節である請求項３８記載の組成物。
【請求項４１】
骨形成活性が骨密度の調節である請求項３８記載の組成物。
【請求項４２】
ＰＡＩＧＢが配列番号２、４、６、８および１０に記載するアミノ酸配列を有する請求項３８〜４１に記載の組成物。
【請求項４３】
ＰＡＩＧＢ遺伝子またはポリペプチドの発現を変更する薬剤。
【請求項４４】
ポリヌクレオチドである請求項４３記載の薬剤。
【請求項４５】
ポリペプチドである請求項４３記載の薬剤。
【請求項４６】
化学小分子である請求項４３記載の薬剤。
【請求項４７】
ペプチドである請求項４３記載の薬剤。
【請求項４８】
骨形成活性を誘発する請求項４３記載の薬剤。
【請求項４９】
（ａ）骨形成活性の誘発、（ｂ）骨先祖細胞からの骨芽細胞の分化における増大、（ｃ）骨芽活性の増大、（ｄ） 骨芽細胞増殖における増大、または（ｅ）骨芽細胞アポトーシスの減少のうちの少なくとも１を示す請求項４３記載の薬剤。
【請求項５０】
請求項４３記載の薬剤を含む組成物。
【請求項５１】
薬剤がＰＡＩＧＢ ｍＲＮＡの発現を変更するかどうかを決定するための方法であって：ａ）該薬剤と接触していない試験サンプル中に存在しているＰＡＩＧＢ ｍＲＮＡのレベルを測定すること；ｂ）該薬剤と接触している試験サンプル中に存在しているＰＡＩＧＢ ｍＲＮＡのレベルを測定すること；およびｃ）工程ａ）において測定されたＰＡＩＧＢ ｍＲＮＡのレベルが、工程ｂ）において測定されたＰＡＩＧＢ ｍＲＮＡのレベルと異なる場合に、該薬剤がＰＡＩＧＢ ｍＲＮＡの発現を改変することを測定すること、含む方法。
【請求項５２】
請求項１に記載の核酸フラグメントの発現の変更における有効性に関する薬剤のスクリーニング法であって、ａ）請求項１に記載の核酸フラグメントを含む試験サンプルを請求項１に記載の核酸フラグメントの発現に適した条件下で薬剤と接触させ、ｂ）請求項１に記載の核酸フラグメントの変更された発現を検出し、およびｃ）可変量の薬剤の存在下および該化合物の不在下での請求項１に記載の核酸フラグメントの発現を比較することを含む方法。
【請求項５３】
試験サンプルが骨組織バイオプシー、骨髄穿刺液、および滑液からなる群から選択される請求項５１または５２記載の方法。
【請求項５４】
ａ）ＰＡＩＧＢ遺伝子を発現するために遺伝子操作された、培養された宿主細胞と薬剤を接触させ（ここで、ＰＡＩＢＧ遺伝子は請求項８に記載のポリペプチドをコード化する）、ｂ）ＰＡＩＧＢ遺伝子、ＰＡＩＧＢ ｍＲＮＡまたはＰＡＩＧＢポリペプチドレベルの発現における変化を検出することを含む、骨関連疾患の治療に有用な薬剤のスクリーニング法。
【請求項５５】
該薬剤が骨細胞の機能的活性を誘発する請求項５４記載の方法。
【請求項５６】
骨の機能的活性が、骨特異性細胞の発現を誘発することにより誘発される請求項５５記載の方法。
【請求項５７】
該薬剤が骨同化剤である請求項５４記載の方法。
【請求項５８】
対象における骨関連疾患の治療の有効性を評価するための方法であって：所定のプロトコルで治療される対象について、請求項１において定義されたＰＡＩＧＢ核酸分子または請求項８のＰＡＩＢＧポリペプチドの発現レベルを評価（ここで、治療前のレベルに対する治療後のＰＡＩＧＢ核酸またはＰＡＩＢＧポリペプチドの発現レベルにおける変化は骨疾患の治療の有効性の指標となる）することを含む方法。
【請求項５９】
ＰＡＩＧＢと結合できるポリペプチドを同定する方法であって、該ＰＡＩＧＢをコード化する配列が１つのハイブリッドベクターによって運ばれ、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡライブラリから由来の配列が第二のハイブリッドベクターによって運ばれ、該ベクターを次いで宿主細胞を形質転換するために使用し、明確な形質転換された細胞を単離し、続いて該第二のハイブリッドベクターを抽出して、該ＰＡＩＧＢと結合するポリペプチドをコード化する配列を得る、哺乳動物の２ハイブリッド法を適用することを含む方法。
【請求項６０】
対象の骨関連薬剤を用いる治療の有効性をモニターする方法であって、（ａ）薬剤の投与前に対象から投与前サンプルを得る工程；（ｂ）投与前サンプル中のＰＡＩＧＢタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現のレベルを検出する工程；（ｃ）１またはそれ以上の投与後サンプルを対象から得る工程；（ｄ）投与後サンプル中のＰＡＩＧＢタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または活性レベルを検出する工程；（ｅ）投与前サンプルにおけるＰＡＩＧＢタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または活性レベルを、投与後サンプルまたは複数のサンプルにおけるＰＡＩＧＢタンパク質、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡの発現または活性レベルと比較する工程；および（ｆ）それに応じて対象に対する該薬剤の投与を変更する工程を含む方法。
【請求項６１】
請求項１に記載のＤＮＡを含むトランスジェニック動物。
【請求項６２】
該動物が齧歯類である請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項６３】
該動物がマウスである請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項６４】
該動物がラットである請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項６５】
少なくとも１５の配列番号１、３、５、７または９の連続したヌクレオチドまたはそのフラグメントを含む配列と操作可能に結合した動物および／またはヒト細胞においてタンパク質発現の指令能を有するプロモーター領域を含む核酸を含む体細胞および／または胚細胞を有する請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項６６】
核酸が動物および／またはヒト細胞におけるタンパク質発現の指令能を有する操作可能に結合したプロモーター領域をさらに含む、請求項６に記載のポリペプチドをコード化する配列を含む核酸からなる体細胞および／または胚細胞を有する請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項６７】
骨量が１以上の骨パラメーターにおいて同じ種の非トランスジェニック動物に関連して調節される、配列番号１、３、５、７または９の少なくとも１５の連続したポリヌクレオチドを含む配列と操作可能に結合した動物および／またはヒト細胞においてタンパク質の発現を指令するプロモーター領域を含む核酸からなる体細胞および／または胚細胞を有する請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項６８】
ヒトＰＡＩＧＢポリペプチドを発現する請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項６９】
ヒトＰＡＩＧＢポリペプチドが骨組織において最高に発現される請求項６８記載のトランスジェニック動物。
【請求項７０】
骨表現型を示す請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項７１】
骨量が、骨密度、骨強度、骨梁数、骨サイズ、および骨組織連結度から選択される１以上のパラメータにおいて同じ種の非トランスジェニック動物に関連して調節される請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項７２】
請求項６１記載のトランスジェニック動物で構成される第一動物群および対照動物の第二群を含む骨密度調節の研究用動物モデル。
【請求項７３】
ＰＡＩＧＢをコード化する遺伝子の変更を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスであって、変更が、マウスＰＡＩＧＢ遺伝子とホモローガスな第一部分およびマウスＰＡＩＧＢ遺伝子の別の部分とホモローガスな第二部分を含み、第一および第二部分の間にＰＡＩＧＢ遺伝子の一部の操作された欠失、核酸配列変化、または核酸挿入を含む中間部分を含む胚肝細胞または多能性細胞中へのホモローガスな組換えにより遺伝子ターゲティングのための核酸の導入により引き起こされ、核酸が内因性遺伝子とのホモローガスな組換えを可能とするトランスジェニックマウス。
【請求項７４】
遺伝子ターゲティングのための核酸の中間部分が、ＡＴＧ開始コドンの操作された欠失、操作されたフレームシフト変異、操作された停止コドン、ネオマイシン耐性配列、ループ組換え部位、または合成転写停止配列を含む請求項７３記載のトランスジェニックマウス。
【請求項７５】
遺伝子ターゲティングのための核酸がさらに、マウスＰＡＩＧＢ遺伝子のイントロンおよびエクソン配列のどちらも含む請求項７３記載のトランスジェニックマウス。
【請求項７６】
内因性ＰＡＩＧＢの発現が、ホモローガスまたは非ホモローガスな組換えにより導入される、変更された遺伝子調節配列により調節されるトランスジェニック動物。
【請求項７７】
ＰＡＩＧＢ遺伝子が誘発可能である請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項７８】
前記動物が、動物のＰＡＩＧＢ遺伝子の一つの一方または両方のコピーがホモローガスな組換えまたは遺伝子ターゲティングにより部分的または完全に欠失しているか、または内因性配列のホモローガスな組み換えまたは遺伝子ターゲティングによる挿入または置換により不活化されている「ノックアウト」動物である請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項７９】
（ａ）請求項１に記載のトランスジェニック動物の第一群を提供する工程；および（ｂ）該トランスジェニック動物における骨発生の少なくとも１つのパラメータを測定する工程を含む骨量決定因子を研究する方法。
【請求項８０】
（ａ）請求項１に記載のトランスジェニック動物の第一群を提供する工程；（ｂ）試験化合物の投与または実験を行う工程；および（ｃ）試験化合物を投与されたトランスジェニック動物における骨発生の少なくとも１つのパラメータを測定する工程を含む、骨量の調節を研究する方法。
【請求項８１】
ＰＡＩＧＢの骨障害に対する影響を研究する方法であって：（ａ）骨関連障害表現型を有する動物の胚を提供する工程；（ｂ）請求項１に記載の核酸を胚の第一群に導入する工程；（ｃ）胚を偽妊娠マウスに移す工程；および（ｄ）得られたマウスにおける発生の少なくとも１つのパラメータを測定する工程を含む方法。
【請求項８２】
骨関連障害の治療に有効な薬剤を同定する方法であって、請求項６１に記載のトランスジェニック動物に前記薬剤を投与し、前記動物の細胞におけるＰＡＩＧＢ発現を測定し、ＰＡＩＧＢ発現を未処置の対照動物におけるものと比較することを含む方法。
【請求項８３】
他の骨関連薬剤との組み合わせにおいて前記薬剤が投与される請求項８２記載の方法。
【請求項８４】
該薬剤が骨形成活性を有するかどうかを確認する方法であって、ａ）該薬剤を請求項６１に記載のトランスジェニック動物に投与する工程；およびｂ）該動物のＢＭＤが変化したかどうかを決定するために該トランスジェニック動物を該薬剤の投与後に検査する工程を含む方法。
【請求項８５】
前記薬剤が他の骨関連薬剤との組み合わせにおいて投与される請求項８４記載の方法。
【請求項８６】
組み合わせ投与が骨ミネラル密度の増大をもたらす請求項８５記載の方法。
【請求項８７】
２つの構築物を含む安定にトランスフェクトされた細胞系であって、第一の構築物は、その発現の全てが構成プロモーターにより行われる活性化ドメインと結合したＤＮＡ結合ドメインと結合したリガンド結合ドメインを含み、第二の構築物はＰＡＩＧＢ ｃＤＮＡと結合した最小プロモーターと結合したＤＮＡ結合エレメントの複数のコピーを含み、化学インデューサーの添加によりＰＡＩＧＢ遺伝子の転写が誘発される、安定にトランスフェクトされた細胞系。
【請求項１】
（ａ）配列番号２、４、６、８および１０をコード化する単離された核酸フラグメント；
（ｂ）配列番号２、４、６、８および１０と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列をコード化する単離された核酸フラグメント；
（ｃ）（ａ）の単離された核酸フラグメントと、３７℃で、６ＸＳＳＣ（１Ｍ ＮａＣｌ）、４５〜５０％ホルムアミド、１％ＳＤＳ、および０．５×〜１×ＳＳＣ中、５５〜６０℃での洗浄のハイブリダイゼーション条件下でハイブリッド形成する、単離された核酸分子；
（ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）に対して相補性である単離された核酸フラグメント
からなる群から選択されるＰＡＩＧＢポリペプチドをコード化する単離された核酸フラグメント。
【請求項２】
配列番号１、３、５、７および９からなる群から選択される請求項１記載の単離された核酸フラグメント。
【請求項３】
単離された核酸フラグメントがＤＮＡである請求項１記載の単離された核酸フラグメント。
【請求項４】
単離された核酸フラグメントがＲＮＡである請求項１記載の単離された核酸フラグメント。
【請求項５】
核酸フラグメントがＰＴＨシグナル化経路に関与するポリペプチドをコード化する請求項１記載の核酸フラグメント。
【請求項６】
過剰発現されると骨組織において骨形成活性を誘発する請求項１記載の核酸フラグメント。
【請求項７】
断続的なＰＴＨ投与に応答して過剰発現される請求項１記載の単離された核酸フラグメント。
【請求項８】
請求項１の単離された核酸フラグメントによりコード化されるポリペプチド。
【請求項９】
配列番号２、４、６、８および１０からなる群から選択される請求項８記載のポリペプチド。
【請求項１０】
ＰＴＨシグナル化経路に関与する請求項８記載のポリペプチド。
【請求項１１】
過度に発現されると骨組織において骨形成活性を誘発する請求項８記載のポリペプチド。
【請求項１２】
断続的なＰＴＨ投与に応答して過剰発現される請求項８記載のポリペプチド。
【請求項１３】
適当な調節配列と操作可能に結合した請求項１記載の単離された核酸フラグメントを含むキメラ構造物。
【請求項１４】
請求項１３記載のキメラ構築物で形質転換された宿主細胞。
【請求項１５】
宿主細胞が真核細胞、原核細胞および多細胞生物からなる群から選択される請求項１４記載の宿主細胞。
【請求項１６】
宿主細胞が哺乳動物細胞である請求項１５記載の宿主細胞。
【請求項１７】
宿主細胞が哺乳動物骨芽細胞である請求項１６記載の宿主細胞。
【請求項１８】
宿主細胞が、ＣＯＳ−７（サル腎臓）、２９３（ヒト腎臓）、ＣＨＯ（ハムスター卵巣）、ＨｅｐＧ２（ヒト肝臓）、ＨｅＬａ（ヒト頚部）、ＮＩＨ３Ｔ３（マウス線維芽細胞）、一次骨芽細胞、ＴＥ−８５（ヒト骨芽細胞）、ＭＧ−６３（ヒト骨芽細胞）、ＳＡＯＳ−２（ヒト骨芽細胞）、ＵＭＲ１０６（ラット骨芽細胞）、ＲＯＳ１７／２．８（ラット骨芽細胞）、ＭＣ３Ｔ３（マウス骨芽細胞）およびＵ２ＯＳ（ヒト骨芽細胞）からなる群から選択される請求項１６記載の宿主細胞。
【請求項１９】
宿主細胞がヒト骨芽細胞である請求項１５記載の宿主細胞。
【請求項２０】
宿主細胞がイー・コリである請求項１５記載の宿主細胞。
【請求項２１】
宿主細胞がＤＨ５アルファ、ＢＬ２１およびＤＨ１０Ｂからなる群から選択される請求項２０記載の宿主細胞。
【請求項２２】
宿主細胞が酵母細胞である請求項１５記載の宿主細胞。
【請求項２３】
宿主細胞が、シザサッカロミセス（Ｓｃｈｉｚａｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ Ｃｅｒｅｖｉｓｉｃｅ）、ピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ Ｐａｓｔｏｒｉｓ）およびピチア・メタノリック（Ｐｉｃｈｉａ Ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃ）からなる群から選択される請求項２２記載の宿主細胞。
【請求項２４】
宿主細胞が昆虫細胞である請求項１５記載の宿主細胞。
【請求項２５】
宿主細胞が、ＳＦ、ＳＦ２１−Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ Ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ、Ｓ２シュナイダー細胞、およびＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ卵から得られるハイファイブ細胞から選択される請求項２４記載の宿主細胞。
【請求項２６】
請求項１記載の核酸フラグメントを含むベクター。
【請求項２７】
ベクターがプラスミドである請求項２６記載のベクター。
【請求項２８】
請求項２６記載のベクターを含む形質転換された細胞。
【請求項２９】
宿主微生物が、真核細胞、原核細胞、および多細胞生物からなる群から選択される請求項２８記載の形質転換された細胞。
【請求項３０】
宿主微生物が哺乳動物細胞である請求項２９記載の形質転換された細胞。
【請求項３１】
宿主細胞が哺乳動物骨芽細胞である請求項３０記載の宿主細胞。
【請求項３２】
宿主微生物がイー・コリである請求項２８記載の形質転換された細胞。
【請求項３３】
宿主微生物が酵母細胞である請求項２８記載の形質転換された細胞。
【請求項３４】
（ａ）配列番号３、配列番号５、配列番号７または配列番号９に記載された核酸フラグメントの全部または一部でゲノムライブラリーをプローブし；
（ｂ）工程（ａ）の核酸フラグメントとハイブリッド形成するＤＮＡクローンを同定し；
（ｃ）工程（ｂ）において同定されたＤＮＡクローンを含む核酸フラグメントの配列を決定する
ことを含む、請求項８に記載のポリペプチドをコード化する核酸フラグメントを得る方法。
【請求項３５】
（ａ）請求項２６に記載のベクターを適当な宿主細胞中に導入し；
（ｂ）得られた細胞をポリペプチドを産生するために培養し；
（ｃ）工程（ｂ）において産生されたポリペプチドを回収し；
（ｄ）かくして回収されたポリペプチドを単離する
ことを含む、請求項８に記載のポリペプチドを得る方法。
【請求項３６】
（ａ）生物学的サンプルを請求項１に記載の核酸フラグメントと接触させ；（ｂ）核酸フラグメントが生物学的サンプル中の核酸分子と結合するかどうかを決定し、これによりサンプルにおける請求項１に記載の核酸フラグメントの存在を検出することを含む、生物学的サンプルにおける請求項１に記載の核酸フラグメントの存在を検出する方法。
【請求項３７】
請求項８〜１２に記載のＰＡＩＧＢポリペプチドの１以上のエピトープと特異的に結合する抗体。
【請求項３８】
（ｉ）請求項１〜７に記載の核酸フラグメント、（ｉｉ）請求項８〜１２に記載のポリペプチド、（ｉｉｉ）かかるポリペプチドまたはその一部から形成される抗体のうちの少なくとも１つを含む哺乳動物における骨形成活性を調節する組成物。
【請求項３９】
該ＰＡＩＧＢがヒト骨芽細胞から由来するところの請求項３８記載の組成物。
【請求項４０】
骨形成活性が骨成長の調節である請求項３８記載の組成物。
【請求項４１】
骨形成活性が骨密度の調節である請求項３８記載の組成物。
【請求項４２】
ＰＡＩＧＢが配列番号２、４、６、８および１０に記載するアミノ酸配列を有する請求項３８〜４１に記載の組成物。
【請求項４３】
ＰＡＩＧＢ遺伝子またはポリペプチドの発現を変更する薬剤。
【請求項４４】
ポリヌクレオチドである請求項４３記載の薬剤。
【請求項４５】
ポリペプチドである請求項４３記載の薬剤。
【請求項４６】
化学小分子である請求項４３記載の薬剤。
【請求項４７】
ペプチドである請求項４３記載の薬剤。
【請求項４８】
骨形成活性を誘発する請求項４３記載の薬剤。
【請求項４９】
（ａ）骨形成活性の誘発、（ｂ）骨先祖細胞からの骨芽細胞の分化における増大、（ｃ）骨芽活性の増大、（ｄ） 骨芽細胞増殖における増大、または（ｅ）骨芽細胞アポトーシスの減少のうちの少なくとも１を示す請求項４３記載の薬剤。
【請求項５０】
請求項４３記載の薬剤を含む組成物。
【請求項５１】
薬剤がＰＡＩＧＢ ｍＲＮＡの発現を変更するかどうかを決定するための方法であって：ａ）該薬剤と接触していない試験サンプル中に存在しているＰＡＩＧＢ ｍＲＮＡのレベルを測定すること；ｂ）該薬剤と接触している試験サンプル中に存在しているＰＡＩＧＢ ｍＲＮＡのレベルを測定すること；およびｃ）工程ａ）において測定されたＰＡＩＧＢ ｍＲＮＡのレベルが、工程ｂ）において測定されたＰＡＩＧＢ ｍＲＮＡのレベルと異なる場合に、該薬剤がＰＡＩＧＢ ｍＲＮＡの発現を改変することを測定すること、含む方法。
【請求項５２】
請求項１に記載の核酸フラグメントの発現の変更における有効性に関する薬剤のスクリーニング法であって、ａ）請求項１に記載の核酸フラグメントを含む試験サンプルを請求項１に記載の核酸フラグメントの発現に適した条件下で薬剤と接触させ、ｂ）請求項１に記載の核酸フラグメントの変更された発現を検出し、およびｃ）可変量の薬剤の存在下および該化合物の不在下での請求項１に記載の核酸フラグメントの発現を比較することを含む方法。
【請求項５３】
試験サンプルが骨組織バイオプシー、骨髄穿刺液、および滑液からなる群から選択される請求項５１または５２記載の方法。
【請求項５４】
ａ）ＰＡＩＧＢ遺伝子を発現するために遺伝子操作された、培養された宿主細胞と薬剤を接触させ（ここで、ＰＡＩＢＧ遺伝子は請求項８に記載のポリペプチドをコード化する）、ｂ）ＰＡＩＧＢ遺伝子、ＰＡＩＧＢ ｍＲＮＡまたはＰＡＩＧＢポリペプチドレベルの発現における変化を検出することを含む、骨関連疾患の治療に有用な薬剤のスクリーニング法。
【請求項５５】
該薬剤が骨細胞の機能的活性を誘発する請求項５４記載の方法。
【請求項５６】
骨の機能的活性が、骨特異性細胞の発現を誘発することにより誘発される請求項５５記載の方法。
【請求項５７】
該薬剤が骨同化剤である請求項５４記載の方法。
【請求項５８】
対象における骨関連疾患の治療の有効性を評価するための方法であって：所定のプロトコルで治療される対象について、請求項１において定義されたＰＡＩＧＢ核酸分子または請求項８のＰＡＩＢＧポリペプチドの発現レベルを評価（ここで、治療前のレベルに対する治療後のＰＡＩＧＢ核酸またはＰＡＩＢＧポリペプチドの発現レベルにおける変化は骨疾患の治療の有効性の指標となる）することを含む方法。
【請求項５９】
ＰＡＩＧＢと結合できるポリペプチドを同定する方法であって、該ＰＡＩＧＢをコード化する配列が１つのハイブリッドベクターによって運ばれ、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡライブラリから由来の配列が第二のハイブリッドベクターによって運ばれ、該ベクターを次いで宿主細胞を形質転換するために使用し、明確な形質転換された細胞を単離し、続いて該第二のハイブリッドベクターを抽出して、該ＰＡＩＧＢと結合するポリペプチドをコード化する配列を得る、哺乳動物の２ハイブリッド法を適用することを含む方法。
【請求項６０】
対象の骨関連薬剤を用いる治療の有効性をモニターする方法であって、（ａ）薬剤の投与前に対象から投与前サンプルを得る工程；（ｂ）投与前サンプル中のＰＡＩＧＢタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現のレベルを検出する工程；（ｃ）１またはそれ以上の投与後サンプルを対象から得る工程；（ｄ）投与後サンプル中のＰＡＩＧＢタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または活性レベルを検出する工程；（ｅ）投与前サンプルにおけるＰＡＩＧＢタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または活性レベルを、投与後サンプルまたは複数のサンプルにおけるＰＡＩＧＢタンパク質、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡの発現または活性レベルと比較する工程；および（ｆ）それに応じて対象に対する該薬剤の投与を変更する工程を含む方法。
【請求項６１】
請求項１に記載のＤＮＡを含むトランスジェニック動物。
【請求項６２】
該動物が齧歯類である請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項６３】
該動物がマウスである請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項６４】
該動物がラットである請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項６５】
少なくとも１５の配列番号１、３、５、７または９の連続したヌクレオチドまたはそのフラグメントを含む配列と操作可能に結合した動物および／またはヒト細胞においてタンパク質発現の指令能を有するプロモーター領域を含む核酸を含む体細胞および／または胚細胞を有する請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項６６】
核酸が動物および／またはヒト細胞におけるタンパク質発現の指令能を有する操作可能に結合したプロモーター領域をさらに含む、請求項６に記載のポリペプチドをコード化する配列を含む核酸からなる体細胞および／または胚細胞を有する請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項６７】
骨量が１以上の骨パラメーターにおいて同じ種の非トランスジェニック動物に関連して調節される、配列番号１、３、５、７または９の少なくとも１５の連続したポリヌクレオチドを含む配列と操作可能に結合した動物および／またはヒト細胞においてタンパク質の発現を指令するプロモーター領域を含む核酸からなる体細胞および／または胚細胞を有する請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項６８】
ヒトＰＡＩＧＢポリペプチドを発現する請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項６９】
ヒトＰＡＩＧＢポリペプチドが骨組織において最高に発現される請求項６８記載のトランスジェニック動物。
【請求項７０】
骨表現型を示す請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項７１】
骨量が、骨密度、骨強度、骨梁数、骨サイズ、および骨組織連結度から選択される１以上のパラメータにおいて同じ種の非トランスジェニック動物に関連して調節される請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項７２】
請求項６１記載のトランスジェニック動物で構成される第一動物群および対照動物の第二群を含む骨密度調節の研究用動物モデル。
【請求項７３】
ＰＡＩＧＢをコード化する遺伝子の変更を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスであって、変更が、マウスＰＡＩＧＢ遺伝子とホモローガスな第一部分およびマウスＰＡＩＧＢ遺伝子の別の部分とホモローガスな第二部分を含み、第一および第二部分の間にＰＡＩＧＢ遺伝子の一部の操作された欠失、核酸配列変化、または核酸挿入を含む中間部分を含む胚肝細胞または多能性細胞中へのホモローガスな組換えにより遺伝子ターゲティングのための核酸の導入により引き起こされ、核酸が内因性遺伝子とのホモローガスな組換えを可能とするトランスジェニックマウス。
【請求項７４】
遺伝子ターゲティングのための核酸の中間部分が、ＡＴＧ開始コドンの操作された欠失、操作されたフレームシフト変異、操作された停止コドン、ネオマイシン耐性配列、ループ組換え部位、または合成転写停止配列を含む請求項７３記載のトランスジェニックマウス。
【請求項７５】
遺伝子ターゲティングのための核酸がさらに、マウスＰＡＩＧＢ遺伝子のイントロンおよびエクソン配列のどちらも含む請求項７３記載のトランスジェニックマウス。
【請求項７６】
内因性ＰＡＩＧＢの発現が、ホモローガスまたは非ホモローガスな組換えにより導入される、変更された遺伝子調節配列により調節されるトランスジェニック動物。
【請求項７７】
ＰＡＩＧＢ遺伝子が誘発可能である請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項７８】
前記動物が、動物のＰＡＩＧＢ遺伝子の一つの一方または両方のコピーがホモローガスな組換えまたは遺伝子ターゲティングにより部分的または完全に欠失しているか、または内因性配列のホモローガスな組み換えまたは遺伝子ターゲティングによる挿入または置換により不活化されている「ノックアウト」動物である請求項６１記載のトランスジェニック動物。
【請求項７９】
（ａ）請求項１に記載のトランスジェニック動物の第一群を提供する工程；および（ｂ）該トランスジェニック動物における骨発生の少なくとも１つのパラメータを測定する工程を含む骨量決定因子を研究する方法。
【請求項８０】
（ａ）請求項１に記載のトランスジェニック動物の第一群を提供する工程；（ｂ）試験化合物の投与または実験を行う工程；および（ｃ）試験化合物を投与されたトランスジェニック動物における骨発生の少なくとも１つのパラメータを測定する工程を含む、骨量の調節を研究する方法。
【請求項８１】
ＰＡＩＧＢの骨障害に対する影響を研究する方法であって：（ａ）骨関連障害表現型を有する動物の胚を提供する工程；（ｂ）請求項１に記載の核酸を胚の第一群に導入する工程；（ｃ）胚を偽妊娠マウスに移す工程；および（ｄ）得られたマウスにおける発生の少なくとも１つのパラメータを測定する工程を含む方法。
【請求項８２】
骨関連障害の治療に有効な薬剤を同定する方法であって、請求項６１に記載のトランスジェニック動物に前記薬剤を投与し、前記動物の細胞におけるＰＡＩＧＢ発現を測定し、ＰＡＩＧＢ発現を未処置の対照動物におけるものと比較することを含む方法。
【請求項８３】
他の骨関連薬剤との組み合わせにおいて前記薬剤が投与される請求項８２記載の方法。
【請求項８４】
該薬剤が骨形成活性を有するかどうかを確認する方法であって、ａ）該薬剤を請求項６１に記載のトランスジェニック動物に投与する工程；およびｂ）該動物のＢＭＤが変化したかどうかを決定するために該トランスジェニック動物を該薬剤の投与後に検査する工程を含む方法。
【請求項８５】
前記薬剤が他の骨関連薬剤との組み合わせにおいて投与される請求項８４記載の方法。
【請求項８６】
組み合わせ投与が骨ミネラル密度の増大をもたらす請求項８５記載の方法。
【請求項８７】
２つの構築物を含む安定にトランスフェクトされた細胞系であって、第一の構築物は、その発現の全てが構成プロモーターにより行われる活性化ドメインと結合したＤＮＡ結合ドメインと結合したリガンド結合ドメインを含み、第二の構築物はＰＡＩＧＢ ｃＤＮＡと結合した最小プロモーターと結合したＤＮＡ結合エレメントの複数のコピーを含み、化学インデューサーの添加によりＰＡＩＧＢ遺伝子の転写が誘発される、安定にトランスフェクトされた細胞系。
【公表番号】特表２００６−５０６０６７（Ｐ２００６−５０６０６７Ａ）
【公表日】平成１８年２月２３日（２００６．２．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５５１９３７（Ｐ２００４−５５１９３７）
【出願日】平成１５年１１月１０日（２００３．１１．１０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０３５６５５
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０４４１５２
【国際公開日】平成１６年５月２７日（２００４．５．２７）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ
【出願人】（５９１０１１５０２）ワイス (573)
【氏名又は名称原語表記】Ｗｙｅｔｈ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年２月２３日（２００６．２．２３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１５年１１月１０日（２００３．１１．１０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０３５６５５
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０４４１５２
【国際公開日】平成１６年５月２７日（２００４．５．２７）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ
【出願人】（５９１０１１５０２）ワイス (573)
【氏名又は名称原語表記】Ｗｙｅｔｈ
【Ｆターム（参考）】
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