有機化合物
遊離形、塩形態またはプロドラッグ形態の、２−（所望により、ヘテロ）アリールメチル−３−（所望により、ヘテロ）アリールアミノ−［２Ｈ］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン化合物は、医薬として、特にホスホジエステラーゼ１阻害剤として有用である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本発明は、新規の２−（所望により、ヘテロ）アリールメチル−３−（所望により、ヘテロ）アリールアミノ−［２Ｈ］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン化合物、それらの製造方法、医薬としてのそれらの使用およびそれらを含む医薬組成物に関する。特に興味深いのは、例えば、パーキンソン病、鬱病、ナルコレプシーおよび例えば統合失調症における認知機能の損傷のようなドーパミンＤ１受容体の細胞内経路の障害、または増大したプロゲステロン−シグナル伝達経路を介して改善され得る障害、例えば女性性機能障害、を伴う疾患の処置において、ホスホジエステラーゼ１（ＰＤＥ１）の阻害剤として有用な新規の化合物である。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）の１１ファミリーが同定されているが、ファミリーＩのＰＤＥであるＣａ２＋−カルモジュリン−依存性ホスホジエステラーゼ（ＣａＭ−ＰＤＥ）のみが、カルシウムおよび環状ヌクレオチド（例えば、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ）シグナル伝達経路の両方を仲介することが示されている。３個の既知のＣａＭ−ＰＤＥ遺伝子であるＰＤＥ１Ａ、ＰＤＥ１Ｂ、およびＰＤＥ１Ｃは全て、中枢神経系組織で発現される。ＰＤＥ１Ａは脳全体で発現され、海馬のＣＡ１からＣＡ３層および小脳で高レベルであり、線条体で低レベルである。ＰＤＥ１Ａはまた、肺および心臓でも発現される。ＰＤＥ１Ｂは、主に線条体、歯状回、嗅索、および小脳で発現され、その発現は、高レベルのドーパミン作動性神経支配を有する脳領域と相関する。ＰＤＥ１Ｂは主に中枢神経系で発現されるが、心臓においても検出され得る。ＰＤＥ１Ｃは主に嗅上皮、小脳顆粒細胞および線条体で発現される。ＰＤＥ１Ｃはまた、心臓および血管平滑筋でも発現される。
【０００３】
環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼは、これらの環状ヌクレオチドをそれぞれの不活性な５’−モノホスフェート（５’ＡＭＰおよび５’ＧＭＰ）に加水分解することにより、細胞内ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰシグナル伝達を減少させる。ＣａＭ−ＰＤＥは、特に基底核または線条体として公知の脳領域内での脳細胞におけるシグナル伝達の仲介に重要な役割を果たす。例えば、ＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体活性化および／またはドーパミンＤ２受容体活性化は、増大した細胞内カルシウム濃度をもたらし、カルモジュリン依存性キナーゼＩＩ（ＣａＭＫＩＩ）およびカルシニューリンのようなエフェクターの活性化ならびにＣａＭ−ＰＤＥの活性化をもたらし、減少したｃＡＭＰおよびｃＧＭＰをもたらす。一方、ドーパミンＤ１受容体活性化は、ヌクレオチドシクラーゼの活性化をもたらし、増加したｃＡＭＰおよびｃＧＭＰをもたらす。これらの環状ヌクレオチドは、次に、ＤＡＲＰＰ−３２（ドーパミンおよびｃＡＭＰにより調節されたホスホタンパク質）およびｃＡＭＰ応答配列結合タンパク質（ＣＲＥＢ）のような下流のシグナル伝達経路の要素をリン酸化する、タンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡ；ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ）および／またはタンパク質キナーゼＧ（ＰＫＧ；ｃＧＭＰ依存性タンパク質キナーゼ）を活性化する。リン酸化ＤＡＲＰＰ−３２は、次に、リン酸化タンパク質−１（ＰＰ−１）の活性を阻害し、それによりプロゲステロン受容体（ＰＲ）のような基質タンパク質のリン酸化状態を増大させ、生理的応答の減少をもたらす。げっ歯動物での実験は、ドーパミンＤ１またはプロゲステロン受容体の活性化を介するｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ合成の低下が、いくつかのげっ歯動物における交尾受容性と関係する脊柱前弯応答（lordosis response）を含む、様々な生理的応答と関係するプロゲステロンシグナル伝達を増強することを示唆している。引用によりその内容が本明細書中に包含されるMani, et al., Science (2000) 287: 1053を参照。
【０００４】
ＣａＭ−ＰＤＥは、故に、一酸化窒素、ノルアドレナリン、ニューロテンシン、ＣＣＫ、ＶＩＰ、セロトニン、グルタミン酸（例えば、ＮＭＤＡ受容体、ＡＭＰＡ受容体）、ＧＡＢＡ、アセチルコリン、アデノシン（例えば、Ａ２Ａ受容体）、カンナビノイド受容体、ナトリウム利尿ペプチド（例えば、ＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰ）、ＤＡＲＰＰ−３２、およびエンドルフィン細胞内シグナル伝達経路を含むが、これらに限定されない、基底核（線条体）におけるドーパミンにより調節されたシグナル伝達経路および他の細胞内シグナル伝達経路に影響を与え得る。
【０００５】
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）活性、特にホスホジエステラーゼ１（ＰＤＥ１）活性は、脳組織内で自発運動および学習および記憶の調節因子として機能する。ＰＤＥ１は、ドーパミンＤ１受容体、ドーパミンＤ２受容体、一酸化窒素、ノルアドレナリン、ニューロテンシン、ＣＣＫ、ＶＩＰ、セロトニン、グルタミン酸（例えば、ＮＭＤＡ受容体、ＡＭＰＡ受容体）、ＧＡＢＡ、アセチルコリン、アデノシン（例えば、Ａ２Ａ受容体）、カンナビノイド受容体、ナトリウム利尿ペプチド（例えば、ＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰ）、エンドルフィン細胞内シグナル伝達経路およびプロゲステロンシグナル伝達経路を含むが、これらに限定されない、好ましくは神経系における細胞内シグナル伝達経路の調節のための治療標的である。例えば、ＰＤＥ１Ｂの阻害は、分解からｃＧＭＰおよびｃＡＭＰを保護することによりドーパミンＤ１アゴニスト作用を増強するように作用し、同様にＰＤＥ１活性を阻害することによりドーパミンＤ２受容体シグナル伝達経路を阻害するはずである。細胞内カルシウムレベルの慢性的上昇は、多くの障害、特にアルツハイマー、パーキンソン病およびハンチントン病のような神経変性疾患、ならびに卒中および心筋梗塞をもたらす循環系の障害における細胞死と関係がある。故に、ＰＤＥ１阻害剤は、パーキンソン病、下肢静止不能症候群、鬱病、ナルコレプシーおよび認知障害(cognitive impairment)のような、低下したドーパミンＤ１受容体シグナル伝達活性により特徴付けられる疾患において有用な可能性がある。ＰＤＥ１阻害剤はまた、女性性機能障害のようなプロゲステロンシグナル伝達の増強により軽減され得る疾患においても有用である。
【０００６】
故に、ＰＤＥ１活性、とりわけＰＤＥ１Ｂ活性を選択的に阻害する化合物が必要とされる。
【発明の概要】
【０００７】
発明の概要
本発明は、遊離形、塩形態またはプロドラッグ形態の、新規の２−（所望により、ヘテロ）アリールメチル−３−（所望により、ヘテロ）アリールアミノ−［２Ｈ］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン（以下、“本発明の化合物”）を提供する。２位の（所望により）ヘテロアリール基は、好ましくは、アリールまたはヘテロアリールとの結合点に対してパラ位で、例えばフェニル、ピリジルまたはチアジアゾリルで置換された、置換ベンジルまたはピリジルメチルである。これらの化合物は、驚くべき事に、ホスホジエステラーゼ１（ＰＤＥ１）活性、例えばＰＤＥ１Ａ、ＰＤＥ１ＢおよびＰＤＥ１Ｃ活性、とりわけＰＤＥ１Ｂ活性を選択的に阻害することが見出されている。
【０００８】
好ましくは、本発明の化合物は、遊離形、塩形態またはプロドラッグ形態の、式Ｉ
【化１】
［式中、
（ｉ）Ｒ１は、Ｈまたはアルキル（例えば、メチル）であり；
（ｉｉ）Ｒ２は、Ｈ、アルキル（例えば、イソブチル、２−メチルブチル、２，２−ジメチルプロピル）、シクロアルキル（例えば、シクロペンチル、シクロヘキシル）、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル）、アルキルアミノアルキル（例えば、２−（ジメチルアミノ）エチル）、ヒドロキシアルキル（例えば、３−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）、アリールアルキル（例えば、ベンジル）、ヘテロアリールアルキル（例えば、ピリジルメチル）、またはアルコキシアリールアルキル（例えば、４−メトキシベンジル）であり；
（ｉｉｉ）Ｒ３は、例えばハロアルキルで置換された、置換ヘテロアリールアルキルであるか、または
Ｒ３は、式１のピラゾロ部分上の窒素の１つに結合し、そして式Ａ
【化２】
〔式中、Ｘ、ＹおよびＺは、独立して、ＮまたはＣであり、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１およびＲ１２は、独立してＨまたはハロゲン（例えば、ＣｌまたはＦ）であり；そして、Ｒ１０は、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル）、アリール（例えば、フェニル）、ヘテロアリール（例えば、ピリジル（例えば、ピリド−２−イル）、または例えばチアジアゾリル（例えば、１，２，３−チアジアゾール−４−イル）、ジアゾリル、トリアゾリル（例えば、１，２，４−トリアゾール−１−イル）、テトラゾリル（例えば、テトラゾール−５−イル）、アルコキサジアゾリル（例えば、５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール）、ピラゾリル（例えば、ピラゾール−１−イル）、アルキルスルホニル（例えば、メチルスルホニル）、アリールカルボニル（例えば、ベンゾイル）、またはヘテロアリールカルボニル、アルコキシカルボニル（例えば、メトキシカルボニル）、アミノカルボニル；好ましくはフェニルまたはピリジル、例えば２−ピリジルであり；ただし、Ｘ、ＹまたはＸが窒素であるとき、Ｒ８、Ｒ９またはＲ１０はそれぞれ、存在しない。〕
で示される部分であり、
（ｉｖ）Ｒ４は、アリール（例えば、フェニル）またはヘテロアリールであり；そして、
（ｖ）Ｒ５は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル（例えば、シクロペンチル）、ヘテロアリール、アリール、ｐ−ベンジルアリール（例えば、ビフェニル−４−イルメチル）である（ここで、“ａｌｋ”または“アルキル”は、Ｃ１−６アルキルを意味し、“シクロアルキル”は、Ｃ３−６シクロアルキルを意味する。）。］
で示されるピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンである。
【０００９】
本発明はさらに、遊離形、塩形態またはプロドラッグ形態の、下記の式Ｉの化合物を提供する。
１．１ 式Ｉ（式中、Ｒ１はメチルである。）；
１．２ 式Ｉまたは１．１（式中、Ｒ２はＣ１−６アルキルである。）；
１．３ 式１．２（式中、Ｒ２は、イソブチル、２，２−ジメチルプロピルまたは２−メチルブチルである。）；
１．４ 式Ｉまたは１．１（式中、Ｒ２は、ヒドロキシＣ１−６アルキルである。）；
１．５ 式Ｉまたは１．１（式中、Ｒ２は、３−ヒドロキシ−２−メチルプロピルである。）；
１．６ 式Ｉまたは１．１（式中、Ｒ２は、Ｃ１−６アルコキシ−ベンジルである。）；
１．７ 式１．６（式中、Ｒ２は、ｐ−メトキシベンジルである。）；
１．８ 式Ｉまたは１．１（式中、Ｒ２は、Ｃ３−６シクロアルキルである。）；
１．９ 式１．８（式中、Ｒ２は、シクロペンチルまたはシクロヘキシルである。）；
１．１０ 式Ｉまたは１．１（式中、Ｒ２は、Ｃ１−６ハロアルキルである。）；
１．１１ 式１．１０（式中、Ｒ２は、２，２，２−トリフルオロエチルである。）；
１．１２ 上記の式の何れか（式中、Ｒ３は、式Ａ部分（式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれＨであり、Ｒ１０はフェニルである。）である。）；
１．１３ 上記の式Ｉ−１．１１の何れか（式中、Ｒ３は、式Ａ部分（式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれＨであり、Ｒ１０は、ピリジルまたはチアジアゾリル（thiadizolyl）である。）である。）；
１．１４ 式１．１３（式中、Ｒ３は、式Ａ部分（式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれＨであり、Ｒ１０は２−ピリジルである。）である。）；
１．１５ 上記の式の何れか（式中、Ｒ４はフェニルである。）；
１．１６ 上記の式の何れか（式中、Ｒ５はＨである。）；
１．１７ 上記の式の何れか（式中、Ｘ、ＹおよびＺは、全てＣである。）；
１．１８ 上記の式の何れか（式中、Ｒ２は、テトラヒドロフラン−２−イルメチルである。）；
１．１９ 上記の式の何れか（式中、Ｒ１０はピリミジニルである。）；
【００１０】
１．２０ 式１．１９の化合物（式中、ピリミジニルは、５−フルオロピリミジニルである。）；
１．２１ 上記の式の何れか（式中、Ｒ１０はピラゾール−１−イルである。）；
１．２２ 上記の式の何れか（式中、Ｒ１０は１，２，４−トリアゾール−１−イルである。）；
１．２３ 上記の式の何れか（式中、Ｒ１０は、アミノカルボニルである。）；
１．２４ 上記の式の何れか（式中、Ｒ１０は、メチルスルホニルである。）；
１．２５ 上記の式の何れか（式中、Ｒ１０は、５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イルである。）；
１．２６ 上記の式の何れか（式中、Ｒ１０は、５−フルオロピリミジン−２−イルである。）；
１．２６ 上記の式の何れか（式中、Ｒ４は、４−フルオロフェニルである。）；
１．２７ 上記の式の何れか（式中、Ｒ１０は、トリフルオロメチルである。）；
１．２８ 上記の式の何れか（式中、Ｒ３は式Ａ部分であり、ＸおよびＺはＣであり、ＹはＮである。）；
１．２９ 下記の実施例１−２４の化合物から選択される化合物；および／または、
１．３０ 上記の式の何れか（ここで、該化合物は、ホスホジエステラーゼにより仲介される（例えば、ＰＤＥ１により、とりわけＰＤＥ１Ｂにより仲介される）ｃＧＭＰの加水分解を、例えば、実施例２５に記載の通りの、固定化金属親和性粒子試薬ＰＤＥアッセイにおいて、例えば１μＭ未満、好ましくは２５ｎＭ未満のＩＣ５０で阻害する。）。
【００１１】
とりわけ好ましい態様において、本発明の化合物は、遊離形または塩形態の、
（ｉ）Ｒ１がメチルであり；
（ｉｉ）Ｒ２がＣ１−６アルキルであり；
（ｉｉｉ）Ｒ３が式Ａ部分（式中、Ｘ、ＹおよびＺが全てＣであり、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１およびＲ１２がそれぞれＨであり、Ｒ１０が、フェニル、ピリジル（例えば、ピリド−２−イル）、またはチアジアゾリル（例えば、１，２，３−チアジアゾール−４−イル）であり；
（ｉｖ）Ｒ４がフェニルであり；そして
（ｖ）Ｒ５がＨである、
式Ｉの化合物である。
【００１２】
例えば、本発明の好ましい化合物は、遊離形、塩形態またはプロドラッグ形態の、式ＩＩ
【化３】
［式中、
Ｒ２は、Ｈ、アルキル（例えば、イソブチル、２−メチルブチル、２，２−ジメチルプロピル）、シクロアルキル（例えば、シクロペンチル、シクロヘキシル）、ヘテロアリール（例えば、ピリジル）、アリール（例えば、フェニル）、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル）、アルキルアミノアルキル（例えば、２−（ジメチルアミノ）エチル）、ヒドロキシアルキル（例えば、３−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）、アリールアルキル（例えば、ベンジル）、またはアルコキシアリールアルキル（例えば、４−メトキシベンジル）であり（ここで、“ａｌｋ”または“アルキル”は、Ｃ１−６アルキルを意味する。）；そして
Ｒ１０は、フェニル、ピリジル（例えば、ピリド−２−イル）またはチアジアゾリル（例えば、１，２，３−チアジアゾール−４−イル）である。］
で示される化合物を含む。
【００１３】
ある態様において、本発明の化合物は、遊離形、塩形態またはプロドラッグ形態の、
Ｒ２が、Ｈ、アルキル（例えば、イソブチル、２−メチルブチル、２，２−ジメチルプロピル）、シクロアルキル（例えば、シクロペンチル、シクロヘキシル、テトラヒドロフラン−２−イルメチル）、ヘテロアリール（例えば、ピリジル）、アリール（例えば、フェニル）、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル）、アルキルアミノアルキル（例えば、２−（ジメチルアミノ）エチル）、ヒドロキシアルキル（例えば、３−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）、アリールアルキル（例えば、ベンジル）、またはアルコキシアリールアルキル（例えば、４−メトキシベンジル）であり；そして、
Ｒ１０が、フェニル、ピリジル（例えば、ピリド−２−イル）、ピリミジニル（例えば、５−フルオロピリミジン−２−イル）、ピラゾリル（例えば、ピラゾール−１−イル）、チアジアゾリル（例えば、１，２，３−チアジアゾール−４−イル）、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル）、アルキルスルホニル（例えば、メチルスルホニル）、オキサジアゾリル（例えば、５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）、アミノカルボニル（例えば、４−ベンズアミド構造を形成するような）、トリアゾリル（例えば、１，２，４−トリアゾール−１−イル）である（ここで、“ａｌｋ”または“アルキル”は、Ｃ１−６アルキルを意味する。）、
式ＩＩの化合物である。
【００１４】
他に具体的に記載がないか、または文脈から明らかでないとき、本明細書中、下記の用語は、以下の意味を有する：
（ａ）本明細書で用いる“アルキル”は、飽和または不飽和の、好ましくは飽和の、好ましくは１ないし６個の炭素原子を有する炭化水素部分であって、直鎖または分枝鎖であってよく、そして所望により、例えばハロゲン（例えば、クロロまたはフルオロ）、ヒドロキシまたはカルボキシで、一、二または三置換されていてよい。
【００１５】
（ｂ）本明細書で用いる“シクロアルキル”は、飽和または不飽和の、好ましくは飽和の、好ましくは３ないし９個の炭素原子を含み、それらの少なくとも数個が、非芳香族性一もしくは二環式、または架橋環状構造を形成する、非芳香族性炭化水素部分であって、そして所望により、例えばハロゲン（例えば、クロロまたはフルオロ）、ヒドロキシまたはカルボキシで置換されていてよい。ある態様において、シクロアルキルは、所望により、該基の環または結合部分中に、１個以上のヘテロ原子、例えば窒素、酸素または硫黄を含んでいてよく、例えばテトラヒドロフラニルメチルである。
【００１６】
（ｃ）本明細書で用いる“アリール”は、単もしくは二環式芳香族性炭化水素、好ましくはフェニルであり、所望により、例えばアルキル（例えば、メチル）、ハロゲン（例えば、クロロまたはフルオロ）、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル）、ヒドロキシ、カルボキシ、またはさらにアリールもしくはヘテロアリール（例えば、ビフェニルまたはピリジルフェニル）で置換されていてよい。
【００１７】
（ｄ）本明細書で用いる“ヘテロアリール”は、芳香族性部分（ここで、芳香環を構成する原子の１個以上が、炭素ではなく硫黄または窒素である。）、例えばピリジルまたはチアジアゾリルであり、それは、所望により、例えばアルキル、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシまたはカルボキシで置換されていてよい。
【００１８】
（ｅ）参照を容易にするため、他に特記されない限り、本発明の化合物のピラゾロ−ピリミジンコア上の原子は式１に示す数字で番号付けされる。
【００１９】
本発明の化合物は、遊離形または塩形態で、例えば酸付加塩として存在していてよい。本明細書中、他に特記しない限り、“本発明の化合物”のような語句は、全ての形態、例えば遊離形または酸付加塩形態の化合物、または該化合物が酸性置換基を含むとき、塩基付加塩形態の化合物を包含すると理解されるべきである。本発明の化合物は、医薬として使用するためのものであり、故に薬学的に許容される塩が好ましい。薬学的使用に適さない塩類は、例えば、遊離形の本発明の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩の単離または精製のために有用である可能性があり、そのためそれらも包含される。
【００２０】
本発明の化合物は、いくつかの場合に、プロドラッグ形態でも存在していてよい。プロドラッグ形態は、体内で本発明の化合物に変換される化合物である。例えば、本発明の化合物がヒドロキシまたはカルボキシ置換基を含むとき、これらの置換基は、生理学的に加水分解性の、および許容されるエステルを形成し得る。本明細書で用いる通り、“生理学的に加水分解性の、および許容されるエステル”は、生理学的条件下で加水分解されて、投与されるべき用量でそれ自体生理学的に許容される酸（ヒドロキシ置換基を有する本発明の化合物の場合）またはアルコール（カルボキシ置換基を有する本発明の化合物の場合）を産生する本発明の化合物のエステルを意味する。故に、該用語は慣用の薬学的プロドラッグ形態を包含することが理解され得る。
【００２１】
本発明はまた、本発明の化合物の製造方法、本発明の化合物の製造に有用な新規の中間体、および下記に記載の疾患および障害の処置（とりわけ、パーキンソン病、トゥーレット症候群、自閉症、脆弱Ｘ症候群、ＡＤＨＤ、下肢静止不能症候群、鬱病および統合失調症における認知障害のような低下したドーパミンＤ１受容体シグナル伝達活性により特徴付けられる疾患の処置）のための本発明の化合物の使用方法を提供する。
【００２２】
本発明の詳しい説明
本発明の化合物の製造方法
式Ｉの化合物およびそれらの薬学的に許容される塩は、本明細書に記載および例示の方法を用いて、およびそれと同様の方法により、および化学分野で公知の方法により製造され得る。かかる方法には、下記の方法が包含されるが、これらに限定されない。これらの方法のための出発物質が市販されていないとき、それらは、化学分野から選択される方法により、公知の化合物の合成法と同様または類似の技術を用いて製造され得る。本明細書中に引用される全ての文献は、参照によりその内容を本明細書中に包含される。
【００２３】
本発明の化合物は、それらのエナンチオマー、ジアステレオ異性体およびラセミ体、ならびにそれらの多形体である水和物、溶媒和物および複合体を包含する。本発明の範囲内のいくつかの個々の化合物は、二重結合を包含し得る。本発明において二重結合の記載は、二重結合のＥおよびＺ異性体の両方を包含することを意味する。さらに、本発明の範囲内のいくつかの化合物は、１個以上の不斉中心を含み得る。本発明は、光学的に純粋な立体異性体の何れかならびに立体異性体の何れかの組合せの使用を包含する。
【００２４】
融点は補正されておらず、（ｄｅｃ）は分解を示す。温度は、摂氏（℃）で示し；他に特記しない限り、操作は室温または環境温度、すなわち１８−２５℃の範囲の温度で実行する。クロマトグラフィーは、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーを意味し；薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、シリカゲルプレート上で行う。ＮＭＲデータは、主要構造プロトンのデルタ値であり、内部標準としてテトラメチルシラン（ＴＭＳ）に対する百万分率（ｐｐｍ）で示す。シグナル形について常套の略語を用いる。結合定数（Ｊ）は、Ｈｚで示す。質量スペクトル（ＭＳ）について、同位体分裂により複数の質量スペクトルピークが得られるとき、最低質量の主要イオンを分子について報告する。溶媒混合組成は、容量パーセントまたは容量比として示される。ＮＭＲスペクトルが複雑なとき、特徴的シグナルのみを記載する。
【００２５】
用語および略語：
ＢｕｔＯＨ＝ｔｅｒｔ−ブチルアルコール
ＣＡＮ＝硝酸アンモニウムセリウム（ＩＶ）
ＤＩＰＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
Ｅｔ２Ｏ＝ジエチルエーテル
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ｅｑｕｉｖ．＝当量
ｈ＝時間
ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィー
Ｋ２ＣＯ３＝炭酸カリウム
ＭｅＯＨ＝メタノール
ＮａＨＣＯ３＝重炭酸ナトリウム
ＮＨ４ＯＨ＝水酸化アンモニウム
ＰＭＢ＝ｐ−メトキシベンジル
ＰＯＣｌ３＝オキシ塩化リン
ＳＯＣｌ２＝塩化チオニル
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン。
【００２６】
本発明の合成方法を以下に説明する。Ｒ基の意味は、他に特記しない限り、上記の式Ｉに記載の通りである。
【００２７】
本発明の一局面において、式ＩＩｂの中間化合物は、式ＩＩａの化合物をジカルボン酸、酢酸無水物および酢酸と、約３時間加熱しながら混合して反応させ、その後冷却して合成され得る：
【化４】
〔式中、Ｒ１はＨまたはＣ１−４アルキル［例えば、メチル］である。〕。
【００２８】
中間体ＩＩｃは、例えば、ＩＩｂの化合物を、例えばＰＯＣｌ３のような塩素化合物と、いくつかの場合に少量の水と、約４時間加熱しながら反応させ、その後冷却して製造され得る。
【化５】
【００２９】
中間体ＩＩｄは、ＩＩｃの化合物を、ＤＭＦのような溶媒およびＫ２ＣＯ３のような塩基中、例えばＰ１−Ｘと、室温で、または加熱しながら反応させて形成され得る：
【化６】
〔式中、Ｐ１は、保護基［例えば、ｐ−メトキシベンジル基（ＰＭＢ）］であり；Ｘは、ハロゲン、メシレートまたはトシレートのような脱離基である。〕。
【００３０】
中間体ＩＩｅは、ＩＩｄの化合物を、メタノールのような溶媒中、ヒドラジンまたはヒドラジン水和物と、約４時間還流しながら反応させ、その後冷却して製造され得る。
【化７】
【００３１】
中間体ＩＩｆは、ＩＩｅの化合物を、ＤＭＦのような溶媒中、例えばアリールイソチオシアネートまたはイソシアネートと、約２日間１１０℃で加熱しながら反応させ、その後冷却して合成され得る：
【化８】
〔式中、Ｒ４は、（ヘテロ）アリールまたは（ヘテロ）アリールメチル［例えば、フェニルまたはベンジル］である。〕。
【００３２】
中間体ＩＩｇは、ＩＩｆの化合物を、ＤＭＦのような溶媒およびＫ２ＣＯ３のような塩基中、例えばＲ３−Ｘと、室温で、または加熱しながら反応させて形成され得る：
【化９】
〔式中、Ｒ３は、上記の通り［例えば、所望により置換されていてよいベンジル基］であり；Ｘは、ハロゲン、メシレートまたはトシレートのような脱離基である。〕。
【００３３】
中間体ＩＩｈは、ＩＩｇの化合物から、適当な方法で保護基Ｐ１を除去することにより合成され得る。例えば、Ｐ１がｐ−メトキシベンジル基であるとき、室温で、アニソールの存在下でＡｌＣｌ３が除去され得る。
【化１０】
【００３４】
化合物Ｉは、ＩＩｈの化合物を、ＤＭＦのような溶媒およびＫ２ＣＯ３のような塩基中、例えばＲ２−Ｘおよび／またはＲ５−Ｘと、室温で、または加熱しながら反応させて形成され得る：
【化１１】
〔式中、Ｒ２およびＲ５は、上記に定義の通り［例えば、シクロペンチル基］であり；Ｘは、ハロゲン、メシレートまたはトシレートのような脱離基である。〕。
【００３５】
化合物Ｉの別の合成方法がある。
【００３６】
中間体ＩＩＩａは、ＩＩｃの化合物を、ＤＭＦのような溶媒およびＫ２ＣＯ３のような塩基中、例えばＲ２−Ｘと、室温で、または加熱しながら反応させて形成され得る：
【化１２】
【００３７】
中間体ＩＩＩｂは、ＩＩＩａの化合物を、メタノールのような溶媒中、ヒドラジンまたはヒドラジン水和物と、数時間加熱しながら反応させ、その後冷却して製造され得る。
【化１３】
【００３８】
中間体ＩＩＩｃは、ＩＩＩｂの化合物を、ＤＭＦのような溶媒中、例えばアリールイソチオシアネートまたはイソシアネートと、約２日間１１０℃で加熱しながら反応させ、その後冷却して合成され得る。
【化１４】
【００３９】
化合物Ｉは、ＩＩＩｃの化合物を、ＤＭＦのような溶媒およびＫ２ＣＯ３のような塩基中、例えばＲ３−Ｘと、室温で、または加熱しながら反応させて形成され得る。得られた生成物Ｉ（Ｒ５＝Ｈ）は、塩基性条件下で、例えばＲ５−Ｘとさらに反応させて化合物Ｉを得る。
【化１５】
【００４０】
故に、本発明は、上記の本発明の化合物の製造方法であって、例えば、以下を含む方法を提供する。
（ｉ）２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンを、式Ｘ−Ｒ３の化合物〔式中、Ｘは脱離基、例えばハロゲン、メシレートまたはトシレートであり、Ｒ３は、所望により置換されていてよいアリールアルキルまたはヘテロアリールアルキルであり、例えば式中Ｒ３は、上記の式Ａの置換ベンジルである。〕と、例えば塩基性条件下で反応させる工程、例えば、ここで、２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンは、式ＩＩＩｃ：
【化１６】
〔式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は、上記で、例えば式Ｉで定義の通りである。〕
で示される化合物であり；および／または
【００４１】
（ｉｉ）２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンを、式Ｘ−Ｒ２の化合物〔式中、Ｘは脱離基、例えばハロゲン、メシレートまたはトシレートであり、Ｒ２は、アルキル、シクロアルキル、アリールアルキルまたはヘテロシクロアルキルであり、例えば式中Ｒ２はイソブチルである。〕と、例えば塩基性条件下で反応させる工程、例えば、ここで、２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンは、式ＩＩｈ：
【化１７】
〔式中、Ｒ１、Ｒ３およびＲ４は、上記で、例えば式Ｉで定義の通りである。〕
で示される化合物である。
【００４２】
本発明の化合物の使用方法
本発明の化合物は、例えば、ドーパミンおよび一酸化窒素（ＮＯ）のような環状ヌクレオチド合成の誘導因子の阻害または低下したレベルにより、増大したＰＤＥ１発現または減少したｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ発現がもたらされる、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ仲介経路の崩壊または損傷により特徴付けられる疾患の処置に有用である。ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの分解をＰＤＥ１Ｂにより阻止することにより、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの細胞内レベルが増大するため、本発明の化合物は、環状ヌクレオチド合成誘導物質の活性を増強する。
【００４３】
本発明は、以下の状態：
（ｉ）パーキンソン病、下肢静止不能症、振戦、ジスキネジア、ハンチントン病、アルツハイマー病、および薬剤誘発性運動障害を含む神経変性疾患；
（ｉｉ）鬱病、注意欠陥障害、注意欠陥多動性障害、双極性障害、不安、睡眠障害、例えばナルコレプシー、認知障害、認知症(dementia)、トゥーレット症候群、自閉症、脆弱Ｘ症候群、精神刺激薬の使用中止、および薬物中毒を含む精神障害；
（ｉｉｉ）脳血管疾患、卒中、鬱血性心疾患、高血圧、肺高血圧および性機能障害を含む、循環器および心血管障害；
（ｉｖ）喘息、慢性閉塞性肺疾患、およびアレルギー性鼻炎、ならびに自己免疫性および炎症性疾患を含む、呼吸器および炎症性障害；
（ｖ）ＰＤＥ１発現細胞における、ｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰの低レベル（または、ｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰシグナル伝達経路の阻害）により特徴付けられる何らかの疾患または状態；および／または
（ｖｉ）低下したドーパミンＤ１受容体シグナル伝達活性により特徴付けられる何らかの疾患または状態、
の１種以上の処置方法であって、有効量の本発明の化合物、例えば式１−１．３０または式ＩＩのいずれかに記載の化合物を、それを必要とするヒト患者または動物に投与することを含む方法を提供する。
【００４４】
とりわけ好ましい態様において、本発明は、ナルコレプシーの処置または予防方法を提供する。この態様において、ＰＤＥ１阻害剤は、単一の治療剤として用いられてよく、他の活性剤と併用または共投与して用いられてもよい。故に、本発明は、治療的有効量の、
（ｉ）ＰＤＥ１阻害剤、例えば、式１−１．３０または式ＩＩの何れかに記載の化合物、および
（ｉｉ）例えば、（ａ）中枢神経系刺激剤−アンフェタミンおよびアンフェタミン様化合物、例えばメチルフェニデート、デキストロアンフェタミン、メタンフェタミン、およびペモリン；（ｂ）モダフィニル、（ｃ）抗鬱剤、例えば三環系薬（イミプラミン、デシプラミン、クロミプラミン、およびプロトリプチリンを含む）および選択的セロトニン再取り込み阻害剤（フルオキセチンおよびセルトラリンを含む）；および／または、（ｄ）ガンマヒドロキシ酪酸（ＧＨＢ）から選択される、覚醒を促進するか、または睡眠を調節する化合物
を、それを必要とするヒト患者または動物に同時、逐次または共投与することを含む、ナルコレプシーの処置法をさらに含む。
【００４５】
別の態様において、本発明は、有効量の本発明の化合物、例えば式１−１．３０または式ＩＩの何れかに記載の化合物を、それを必要とするヒト患者または動物に投与することを含む、プロゲステロンシグナル伝達の増強により軽減され得る状態の処置または予防方法をさらに提供する。プロゲステロンシグナル伝達の増強により改善され得る疾患または状態には、女性性機能障害、続発性無月経（例えば、運動性無月経（exercise amenorrhoea）、無排卵、閉経、更年期症状、甲状腺機能低下症）、月経前緊張症、早産、不妊症、例えば反復流産による不妊症、不規則な月経周期、異常子宮出血、骨粗鬆症、自己免疫疾患、多発性硬化症、前立腺肥大、前立腺癌、および甲状腺機能低下症が含まれるが、これらに限定されない。例えば、プロゲステロンシグナル伝達の増強により、ＰＤＥ１阻害剤は、子宮粘膜への影響を介して卵の着床を促進するため、および妊娠に対する免疫反応または低プロゲステロン機能により流産しやすい女性における妊娠の維持を促進するために用いられ得る。例えば本明細書に記載の新規のＰＤＥ１阻害剤はまた、例えば、閉経後の女性、ならびにエストロゲン誘導性子宮内膜増殖症および癌腫において、エストロゲン／エストラジオール／エストリオールおよび／またはプロゲステロン／プロゲスチンと併用して投与されて、ホルモン補充療法の効果を増大するのにも有用であり得る。本発明の方法はまた、家畜動物に、例えば、飼育された非ヒトメス哺乳動物に性的受容性（sexual receptivity）および／または発情を誘発するのに有用である。
【００４６】
この態様において、ＰＤＥ１阻害剤は、単一の治療剤として上記の処置または予防方法に用いられてよく、他の活性剤と組み合わせて、または共投与して、例えばホルモン補充療法と併用して用いられてもよい。故に、本発明は、治療的有効量の、
（ｉ）ＰＤＥ１阻害剤、例えば、式１−１．３０または式ＩＩの何れかに記載の化合物、および
（ｉｉ）例えば、エストロゲンおよびエストロゲン類似体（例えば、エストラジオール、エストリオール、エストラジオールエステル）、ならびにプロゲステロンおよびプロゲステロン類似体（例えば、プロゲスチン）から選択される、ホルモン
を、それを必要とするヒト患者または動物に同時、逐次または共投与することを含む、プロゲステロンシグナル伝達の増強により改善され得る障害の処置方法をさらに含む。
【００４７】
本発明はまた、細胞または組織をＰＤＥ１Ｂ活性の阻害に十分な量の本発明の化合物と接触させることを含む、該細胞または組織におけるドーパミンＤ１細胞内シグナル伝達活性を増強または促進する方法も提供する。
【００４８】
本発明はまた、細胞または組織をＰＤＥ１Ｂ活性の阻害に十分な量の本発明の化合物と接触させることを含む、該細胞または組織におけるプロゲステロンシグナル伝達活性を増強または促進する方法も提供する。
【００４９】
本発明はまた、ＰＤＥ１関連、とりわけＰＤＥ１Ｂ関連障害、ドーパミンＤ１受容体細胞内シグナル伝達経路障害、またはプロゲステロンシグナル伝達経路の増強により軽減され得る障害の処置方法であって、ＰＤＥ１Ｂを阻害する（ここで、ＰＤＥ１Ｂ活性は、ＤＡＲＰＰ−３２および／またはＧｌｕＲ１ ＡＭＰＡ 受容体のリン酸化を調節する。）本発明の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法も提供する。
【００５０】
本発明はまた、
（ｉ）例えば、何らかの方法または上記の疾患もしくは状態の何れかの処置方法に用いるための、医薬として使用するための本発明の化合物
（ｉｉ）上記の何れかの疾患または状態を処置するための薬剤の製造における、本発明の化合物の使用
（ｉｉｉ）本発明の化合物を、薬学的に許容される希釈剤または担体と組み合わせて、または合して含む、医薬組成物、ならびに
（ｉｖ）上記の何れかの疾患または状態の処置における使用のための、本発明の化合物を、薬学的に許容される希釈剤または担体と組み合わせて、または結合して含む、医薬組成物
を提供する。
【００５１】
用語“処置”および“処置する”は、疾患の症状の予防および処置または改善ならびに疾患の原因の処置を包含することが理解されるべきである。
【００５２】
本発明の化合物は、特に、パーキンソン病、ナルコレプシーおよび女性性機能障害の処置に有用である。
【００５３】
本発明の化合物は、単一の治療剤として用いられてよく、他の活性剤と組み合わせて、または共投与して用いられてもよい。例えば、本発明の化合物は、ドーパミンのようなＤ１アゴニストの活性を増強するため、それらは、例えばパーキンソン病を有する患者の処置において、レボドバおよびレボドバ補助剤（カルビドバ、ＣＯＭＴ阻害剤、ＭＡＯ−Ｂ阻害剤）のような常套のドーパミン作動薬、ドーパミンアゴニスト、および抗コリン作動薬と同時、逐次または共投与されてよい。さらに、例えば本明細書に記載の新規のＰＤＥ１阻害剤はまた、エストロゲン誘導性子宮内膜増殖症または癌腫のホルモン補充療法または処置の効果を増強するため、エストロゲン／エストラジオール／エストリオールおよび／またはプロゲステロン／プロゲスチンと併用投与されてもよい。
【００５４】
本発明の実施に用いられる投与量は、もちろん、例えば処置すべき特定の疾患または状態、用いられる特定の本発明の化合物、投与方法、および所望の治療によって変化し得る。本発明の化合物は、経口的、非経腸的、経皮的、または吸入を含む何らかの適当な経路で投与されてよく、好ましくは経口投与される。一般的に、例えば上記の疾患の処置について満足のいく結果は、約０．０１ないし２．０ｍｇ／ｋｇ量の投与量で経口投与して得られることが示される。従って、より大型哺乳動物、例えばヒトにおいて、経口投与のための表示される１日投与量は、約０．７５ないし１５０ｍｇの範囲で、都合よくは１日１回もしくは分割用量で２ないし４回、または持続放出形態で投与され得る。故に、経口投与のための単回投与量形態は、例えば、約０．２ないし７５または１５０ｍｇ、例えば約０．２または２．０ないし５０、７５または１００ｍｇの本発明の化合物を、その薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含み得る。
【００５５】
本発明の化合物を含む医薬組成物は、慣用の希釈剤または賦形剤および製剤分野で公知の技術を用いて製造され得る。故に、経口投与量形態には、錠剤、カプセル剤、溶液、懸濁液などが含まれ得る。
【実施例】
【００５６】
実施例
実施例１：
２−（ビフェニル−４−イルメチル）−７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化１８】
【００５７】
（ａ）１−メチルピリミジン−２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）−トリオン
酢酸１８０ｍｌ中、マロン酸（８０ｇ、０．７９ｍｏｌ）およびメチルウレア（５０ｇ、０．６８ｍｏｌ）の溶液に、７０℃で、酢酸無水物（１３０ｍｌ、１．３７ｍｏｌ）をゆっくり添加する。添加完了後、反応混合物を９０℃で３時間撹拌し、その後室温まで冷却する。溶媒を減圧下で除去し、残渣をエタノール３５０ｍＬで処理して、黄色がかった固体を沈殿させる。該固体をエタノールから再結晶させて６３．１ｇの生成物を結晶性固体として得る（収率：６５．８％）。ｍ．ｐ．＝１３１．２−１３３．１℃［Ｌｉｔ．１：融点＝１３０−１３１．５℃］．
【００５８】
（ｂ）６−クロロ−３−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン
水（２．７ｍＬ）を、ＰＯＣｌ３（９５ｍＬ）中、１−メチルピリミジン−２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）−トリオン（１４．２ｇ、１００ｍｏｌ）の懸濁液に、０℃で滴下する。その後、反応混合物を８０℃で５時間加熱する。得られた褐色がかった溶液を冷却し、ＰＯＣｌ３を減圧下で蒸発させる。残渣をＭｅＯＨで処理し、得られた固体をエタノールから再結晶させて、１１．５ｇの生成物を得る（収率：７１．６％）。融点＝２７９−２８２℃（摂氏）［Ｌｉｔ．２：２８０−２８２℃］。1H NMR(400 MHz, DMSO−d6) δ 3.10(S, 3H), 5.90(S, 1H), 12.4(br, 1H)。
【００５９】
（ｃ）６−クロロ−１−イソブチル−３−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン
無水ＤＭＦ（２００ｍＬ）中、６−クロロ−３−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン（３ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）、ヨウ化イソブチル（５ｍＬ、４３．５ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（５．３ｇ、３８．４ｍｍｏｌ）の混合物を、５０℃で８時間加熱する。さらなるヨウ化イソブチル（４．３ｍＬ、３７．５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を５０℃で２４時間加熱する。熱濾過後、濾液を減圧下で蒸発乾固させる。得られた油状物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによりさらに精製して、２．１ｇの純粋な生成物を得る（収率：５２％）。
【００６０】
（ｄ）６−ヒドラジニル−１−イソブチル−３−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン
ＥｔＯＨ（８ｍＬ）中、６−クロロ−１−イソブチル−３−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン（２．０ｇ、９．３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥｔＯＨ（３ｍＬ）中ヒドラジン一水和物（１．３ｍＬ）をゆっくり添加する。反応混合物を５時間還流し、その後冷却する。大量のＡｃＯＥｔを反応混合物に添加し、次いで冷却し濾過して、１．９５ｇの生成物を黄色がかった固体として得る（収率：１００％）。
【００６１】
（ｅ）７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
フェニルイソチオシアネート（０．１７ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中、６−ヒドラジニル−１−イソブチル−３−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン（３１ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を１２０℃で６時間加熱し、次いで溶媒を減圧下で蒸発させて除去する。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによりさらに精製して、２０ｍｇの生成物を得る（収率：４１％）。 1H NMR(400 MHz, DMSO−d6) δ 0.95(s, 3H), 0.97(s, 3H), 2.30(m, 1H), 3.37(s, 3H), 3.77(d, 2H), 7.16−7.43(m, 5H), 7.61(s, 1H). MS(FAB) m/z 314.3 [M＋H]＋。
【００６２】
（ｆ）２−（ビフェニル−４−イルメチル）−７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
アセトン（２．５ｍＬ）中、７−イソブチル−５−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン（１２．０ｇ、０．０３８３ｍｍｏｌ）、臭化ｐ−ビフェニルメチル（９．４６ｍｇ、０．０３８３ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（５．３ｍｇ、０．０３８３ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で一晩撹拌する。溶媒を減圧下で除去する。残渣をクロマトグラフィーにより直接精製して、７．０ｍｇの生成物を白色固体として得る（収率：３８．０％）。1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 0.97(s, 3H), 0.99(s, 3H), 2.33(m, 1H). 3.34(s, 3H), 3.85(d, 2H), 4.99(s, 2H), 6.76(s, 1H), 6.91−7.56(m, 13H). MS(FAB) m/z 480.3 [M＋H]＋。
【００６３】
実施例２
２−（ビフェニル−４−イルメチル）−７−（４−メトキシベンジル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化１９】
【００６４】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、塩化ｐ−メトキシベンジルが、工程（ｃ）においてヨウ化イソブチルの代わりに添加される。）。ＴＬＣ Ｒｆ＝０．６１（ＡｃＯＥｔ：ヘキサン＝１：１）。1H NMR(CDCl3) δ 3.31(s, 3H), 3.71(s, 3H), 4.99(s, 2H), 5.10(s, 2H), 6.75−7.57(m, 19H). MS(FAB) m/z 544.4 [M＋H]＋。
【００６５】
実施例３
２−（ビフェニル−４−イルメチル）−３−（（ビフェニル−４−イルメチル）（フェニル）アミノ）−７−（４−メトキシベンジル）−５−メチル−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２０】
【００６６】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、塩化ｐ−メトキシベンジルが、工程（ｃ）においてヨウ化イソブチルの代わりに添加される。）。ＴＬＣ Ｒｆ＝０．８１（ＡｃＯＥｔ：ヘキサン＝１：１）。1H NMR(CDCl3) δ 3.38(s, 3H), 3.68(s, 3H), 4.99(s, 2H), 5.10(s, 2H), 5.20(s, 2H), 6.70−7.57(m, 27H). MS(FAB) m/z 710.5 [M＋H]＋。
【００６７】
実施例４
７−（４−メトキシベンジル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２１】
【００６８】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、塩化ｐ−メトキシベンジルが、工程（ｃ）においてヨウ化イソブチルの代わりに添加され；そして、ｐ−トリフルオロメチル臭化ベンジルが、工程（ｆ）において臭化ｐ−ビフェニルメチルの代わりに添加される。）（収率：８０％）。MS(ESI) m/z 536.5 [M＋H]＋。
【００６９】
実施例５
７−（４−メトキシベンジル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２２】
【００７０】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、塩化ｐ−メトキシベンジルが、工程（ｃ）においてヨウ化イソブチルの代わりに添加され；そして、ｐ−（ピリジン−２−イル）臭化ベンジルが、工程（ｆ）において臭化ｐ−ビフェニルメチルの代わりに添加される。）（収率：６０％）。MS(ESI) m/z 545.2 [M＋H]＋。
【００７１】
実施例６
５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２３】
【００７２】
ＡｌＣｌ３（０．７３３ｇ、５．５０ｍｍｏｌ）を、１，２−ジクロロエタン（１５ｍＬ）中、７−（４−メトキシベンジル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン（１．０８ｇ、１．９８ｍｍｏｌ）およびアニソール（ｍＬ）の溶液に、アルゴン下で添加する。反応混合物を室温で一晩撹拌し、次いで冷却しながら水でクエンチする。得られる懸濁液を２０％ＮａＯＨ（７０ｍＬ）で処理し、次いで塩化メチレンで５回抽出する。有機層を合わせ、蒸発乾固させる。残渣をクロマトグラフィーによりさらに精製し、７５１ｍｇの純粋な生成物を得る（収率：８９％）。MS(FAB) m/z 425.3 [M＋H]＋。
【００７３】
実施例７
７−シクロペンチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２４】
【００７４】
メチルエチルケトン（１．２ｍＬ）を、５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン（２５ｍｇ、０．０５８９ｍｍｏｌ）、ヨードシクロペンタン（８．２μＬ、０．０７０７ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（９．８ｍｇ、０．０７０７ｍｍｏｌ）を含む０．５〜５ｍＬ反応容器中に添加した。密閉した容器をBiotageのマイクロ波装置に入れ、マイクロ波反応を１４０℃で１時間行った。その後、得られた粗生成物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、１４．９ｍｇの純粋な生成物を得る（収率：５１．４％）。ＴＬＣ Ｒｆ＝０．７２（ＡｃＯＥｔ：ヘキサン＝２：１）。MS(ESI) m/z 493.4 [M＋H]＋。
【００７５】
実施例８
３−（シクロペンチル（フェニル）アミノ）−５−メチル−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２５】
【００７６】
メチルエチルケトン（１．２ｍＬ）を、５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン（２５ｍｇ、０．０５８９ｍｍｏｌ）、ヨードシクロペンタン（８．２μＬ、０．０７０７ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（９．８ｍｇ、０．０７０７ｍｍｏｌ）を含む０．５〜５ｍＬ反応容器中に添加した。密閉した容器をBiotageのマイクロ波装置に入れ、マイクロ波反応を１４０℃で１時間行った。その後、得られた粗生成物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、５．２ｍｇの純粋な生成物を得た（収率：１７．９％）。ＴＬＣ Ｒｆ＝０．５０（ＡｃＯＥｔ：ヘキサン＝２：１）。MS(ESI) m/z 493.4 [M＋H]＋。
【００７７】
実施例９
７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２６】
【００７８】
合成方法は、実施例７と同様である（ここで、ヨウ化イソブチルがヨードシクロペンタンの代わりに添加される。）（収率：９５．８％）。MS(ESI) m/z 481.4 [M＋H]＋。
【００７９】
実施例１０
７−シクロヘキシル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２７】
【００８０】
合成方法は、実施例７と同様である（ここで、ヨードシクロヘキサンがヨードシクロペンタンの代わりに添加される。）（収率：１０％）。MS(ESI) m/z 507.4 [M＋H]＋。
【００８１】
実施例１１
５−メチル−７−ネオペンチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２８】
【００８２】
合成方法は、実施例７と同様である（ここで、１−ヨード−２，２−ジメチルプロパンがヨードシクロペンタンの代わりに添加される。）（収率：４．１％）。MS(ESI) m/z 495.4 [M＋H]＋。
【００８３】
実施例１２
（Ｓ）−５−メチル−７−（２−メチルブチル）−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２９】
【００８４】
合成方法は、実施例７と同様である（ここで、（Ｓ）−１−ヨード−２−メチルブタンがヨードシクロペンタンの代わりに添加される。）（収率：８１．８％）。MS(ESI) m/z 495.4 [M＋H]＋。
【００８５】
実施例１３
５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−７−（２，２，２−トリフルオロエチル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化３０】
【００８６】
合成方法は、実施例７と同様である（ここで、１，１，１−トリフルオロ−２−ヨードエタンがヨードシクロペンタンの代わりに添加される。）（収率：１４．８％）。MS(ESI) m/z 507.3 [M＋H]＋。
【００８７】
実施例１４
（Ｒ）−７−（３−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化３１】
【００８８】
合成方法は、実施例７と同様である（ここで、（Ｓ）−３−ブロモ−２−メチルプロパン−１−オールがヨードシクロペンタンの代わりに添加される。）（収率：８６．３％）。MS(ESI) m/z 497.4 [M＋H]＋。
【００８９】
実施例１５
７−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化３２】
【００９０】
合成方法は、実施例７と同様である（ここで、臭化２−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミニウムがヨードシクロペンタンの代わりに添加される。）（収率：６４．４％）。MS(ESI) m/z 496.3 [M＋H]＋。
【００９１】
実施例１６
２−（４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンジル）−７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化３３】
【００９２】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、１−（４−（ブロモメチル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾールが、工程（ｆ）において臭化ｐ−ビフェニルメチルの代わりに添加される。）。MS(ESI) m/z 470.1 [M＋H]＋。
【００９３】
実施例１７
２−（４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ベンジル）−７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化３４】
【００９４】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、１−（４−（ブロモメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾールが、工程（ｆ）において臭化ｐ−ビフェニルメチルの代わりに添加される。）（収率：８９．２％）。MS(ESI) m/z 471.1 [M＋H]＋。
【００９５】
実施例１８
４−（（７−イソブチル−５−メチル−４，６−ジオキソ−３−（フェニルアミノ）−４，５，６，７−テトラヒドロピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−２−イル）メチル）ベンズアミド
【化３５】
【００９６】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、４−（クロロメチル）ベンズアミドが、工程（ｆ）において臭化ｐ−ビフェニルメチルの代わりに添加される。）。MS(ESI) m/z 447.1 [M＋H]＋。
【００９７】
実施例１９
７−イソブチル−５−メチル−２−（４−（メチルスルホニル）ベンジル）−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化３６】
【００９８】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、１−（ブロモメチル）−４−（メチルスルホニル）ベンゼンが、工程（ｆ）において臭化ｐ−ビフェニルメチルの代わりに添加される。）。MS(ESI) m/z 482.1 [M＋H]＋。
【００９９】
実施例２０
７−イソブチル−５−メチル−２−（４−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）ベンジル）−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化３７】
【０１００】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、３−（４−（ブロモメチル）フェニル）−５−メチル−１，２，４−オキサジアゾールが、工程（ｆ）において臭化ｐ−ビフェニルメチルの代わりに添加される。）。MS(ESI) m/z 486.1 [M＋H]＋。
【０１０１】
実施例２１
２−（４−（５−フルオロピリミジン−２−イル）ベンジル）−７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化３８】
【０１０２】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、２−（４−（ブロモメチル）フェニル）−５−フルオロピリミジンが、工程（ｆ）において臭化ｐ−ビフェニルメチルの代わりに添加される。）。MS(ESI) m/z 500.0 [M＋H]＋。
【０１０３】
実施例２２
５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−７−（（テトラヒドロフラン−２−イル）メチル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化３９】
【０１０４】
合成方法は、実施例７と同様である（ここで、２−（ブロモメチル）−テトラヒドロフランがヨードシクロペンタンの代わりに添加される。）。MS(ESI) m/z 509.2 [M＋H]＋。
【０１０５】
実施例２３
５−メチル−７−ネオペンチル−３−（フェニルアミノ）−２−（（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）メチル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化４０】
【０１０６】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、１−ヨード−２，２−ジメチルプロパンが、工程（ｃ）においてヨウ化イソブチルの代わりに添加され；そして、５−（ブロモメチル）−２−（トリフルオロメチル）ピリジンが、工程（ｆ）において臭化ｐ−ビフェニルメチルの代わりに添加される。）。MS(ESI) m/z 487.2 [M＋H]＋。
【０１０７】
実施例２４
３−（４−フルオロベンジルアミノ）−７−イソブチル−５−メチル−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化４１】
【０１０８】
合成方法は、実施例７と同様である（ここで、３−（４−フルオロベンジルアミノ）−５−メチル−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンが、５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンの代わりに添加され、そしてヨウ化イソブチルがヨードシクロペンタンの代わりに添加される。）。MS(ESI) m/z 490.2 [M＋H]＋。
【０１０９】
実施例２５
ＩＭＡＰホスホジエステラーゼアッセイキットを用いる、インビトロでのＰＤＥ１Ｂ阻害の測定
ホスホジエステラーゼ １Ｂ（ＰＤＥ１Ｂ）は、環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）を５’−グアノシン一リン酸（５’−ＧＭＰ）に変換するカルシウム／カルモジュリン依存性ホスホジエステラーゼ酵素である。ＰＤＥ１Ｂはまた、蛍光分子ｃＧＭＰ−フルオレセインのような修飾ｃＧＭＰ基質を、対応するＧＭＰ−フルオレセインに変換し得る。ｃＧＭＰ−フルオレセインからのＧＭＰ−フルオレセインの産生は、例えばＩＭＡＰ（Molecular Devices, Sunnyvale, CA）固定化金属親和性粒子試薬を用いて定量され得る。
【０１１０】
簡単には、ＩＭＡＰ試薬は、ＧＭＰ−フルオレセインに見出され、ｃＧＭＰ−フルオレセインに見出されない、遊離５’−ホスフェートに高親和性で結合する。得られるＧＭＰ−フルオレセイン−ＩＭＡＰ複合体は、ｃＧＭＰ−フルオレセインに大きく相関する。大きな、ゆっくり崩壊する複合体中に結合された小さいフルオロフォアは、それらが発光するとき放出される光子が、蛍光を励起するのに用いられるのと同じ極性を有するため、非結合フルオロフォアと区別され得る。
【０１１１】
ホスホジエステラーゼアッセイにおいて、ＩＭＡＰと結合不可能であり、故にほとんど蛍光偏光を有しないｃＧＭＰ−フルオレセインは、ＩＭＡＰと結合したとき、ＧＭＰ−フルオレセインに変換され、蛍光偏光（Δｍｐ）の大幅な増加が得られる。故に、ホスホジエステラーゼの阻害は、Δｍｐの減少として検出される。
【０１１２】
酵素アッセイ
材料：全ての化学物質は、Molecular Devices（Sunnyvale, CA）により市販されるＩＭＡＰ試薬（反応緩衝液、結合緩衝液、ＦＬ−ＧＭＰおよびＩＭＡＰビーズ）を除いて、Sigma−Aldrich（St. Louis, MO）により市販される。
アッセイ：３’，５’−環状ヌクレオチド特異的ウシ脳ホスホジエステラーゼ（Sigma, St. Louis, MO）は、５０％グリセロールで２．５Ｕ／ｍｌに再構成される。１ユニットの酵素は、ｐＨ７．５、３０℃で、１分当たりに１．０μｍｏｌｅの３’，５’−ｃＡＭＰから５’−ＡＭＰに加水分解し得る。１部の酵素を１９９９部の反応緩衝液（３０μＭ ＣａＣｌ２、１０Ｕ／ｍｌのカルモジュリン（Sigma P2277）、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．２、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．１％ＢＳＡ、０．０５％ＮａＮ３）に添加して、最終濃度１．２５ｍＵ／ｍｌを得る。９９μｌの希釈した酵素溶液を平底９６ウェルのポリスチレンプレートの各ウェルに添加し、そこに１００％ＤＭＳＯ中に溶解した１μｌの試験化合物を添加する。該化合物を酵素と混合し、１０分間、室温で予めインキュベートする。
【０１１３】
ＦＬ−ＧＭＰ変換反応は、３８４ウェルマイクロタイタープレート中、４部の酵素および１部の基質溶液（０．２２５μＭ）中、阻害剤混合物を合わせて開始される。反応液は、暗所にて室温で１５分間インキュベートする。反応を、３８４ウェルプレートの各ウェルに６０μｌの結合試薬（１：１８００希釈の消泡剤を添加した結合緩衝液中、１：４００希釈のＩＭＡＰビーズ）を添加して停止させる。プレートを室温で１時間インキュベートし、ＩＭＡＰ結合を完了まで促進させ、その後、Envisionのマルチモードマイクロプレートリーダー（PerkinElmer, Shelton, CT）に入れて、蛍光偏光（Δｍｐ）を測定する。
【０１１４】
低下したΔｍｐとして測定されるＧＭＰ濃度の減少は、ＰＤＥ活性の阻害の指標である。ＩＣ５０値は、０．００３７ｎＭないし８０，０００ｎＭの範囲の８ないし１６種の化合物濃度の存在下で酵素活性を測定し、その後、ＩＣ５０値を非線形回帰ソフトウェア（XLFit; IDBS, Cambridge, MA）を用いて概算するのを可能にするΔｍＰに対する薬剤濃度をプロットして決定される。
【０１１５】
実施例２６
ＰＤＥ１阻害剤は、メスラットの性反応に効果がある
メスラットにおける脊柱前弯応答に対するＰＤＥ１阻害剤の効果は、Mani, et al., Science(2000) 287: 1053に記載の通りに測定される。卵巣摘除し、挿管した野生型ラットを２μｇのエストロゲンで刺激し、次いで２４時間後に、プロゲステロン（２μｇ）、本発明のＰＤＥ１阻害剤（０．１ｍｇ、１．０ｍｇまたは２．５ｍｇ）またはゴマ油ビークル（対照）を脳室内（ｉｃｖ）注入して刺激する。該ラットをオスラットの存在下で脊柱前弯応答について試験する。脊柱前弯応答を、前弯指数(lordosis quotient)（ＬＱ＝前弯症数／１０マウント×１００）により定量する。０．１ｍｇの化合物１または２を受容するエストロゲン刺激したメスラットのＬＱは、プロゲステロンを受容するエストロゲン刺激したラットと同様に７５以上であり、ビークルを受容するエストロゲン刺激したラットよりも有意（ｐ＜０．００１）に高い。
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本発明は、新規の２−（所望により、ヘテロ）アリールメチル−３−（所望により、ヘテロ）アリールアミノ−［２Ｈ］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン化合物、それらの製造方法、医薬としてのそれらの使用およびそれらを含む医薬組成物に関する。特に興味深いのは、例えば、パーキンソン病、鬱病、ナルコレプシーおよび例えば統合失調症における認知機能の損傷のようなドーパミンＤ１受容体の細胞内経路の障害、または増大したプロゲステロン−シグナル伝達経路を介して改善され得る障害、例えば女性性機能障害、を伴う疾患の処置において、ホスホジエステラーゼ１（ＰＤＥ１）の阻害剤として有用な新規の化合物である。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）の１１ファミリーが同定されているが、ファミリーＩのＰＤＥであるＣａ２＋−カルモジュリン−依存性ホスホジエステラーゼ（ＣａＭ−ＰＤＥ）のみが、カルシウムおよび環状ヌクレオチド（例えば、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ）シグナル伝達経路の両方を仲介することが示されている。３個の既知のＣａＭ−ＰＤＥ遺伝子であるＰＤＥ１Ａ、ＰＤＥ１Ｂ、およびＰＤＥ１Ｃは全て、中枢神経系組織で発現される。ＰＤＥ１Ａは脳全体で発現され、海馬のＣＡ１からＣＡ３層および小脳で高レベルであり、線条体で低レベルである。ＰＤＥ１Ａはまた、肺および心臓でも発現される。ＰＤＥ１Ｂは、主に線条体、歯状回、嗅索、および小脳で発現され、その発現は、高レベルのドーパミン作動性神経支配を有する脳領域と相関する。ＰＤＥ１Ｂは主に中枢神経系で発現されるが、心臓においても検出され得る。ＰＤＥ１Ｃは主に嗅上皮、小脳顆粒細胞および線条体で発現される。ＰＤＥ１Ｃはまた、心臓および血管平滑筋でも発現される。
【０００３】
環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼは、これらの環状ヌクレオチドをそれぞれの不活性な５’−モノホスフェート（５’ＡＭＰおよび５’ＧＭＰ）に加水分解することにより、細胞内ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰシグナル伝達を減少させる。ＣａＭ−ＰＤＥは、特に基底核または線条体として公知の脳領域内での脳細胞におけるシグナル伝達の仲介に重要な役割を果たす。例えば、ＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体活性化および／またはドーパミンＤ２受容体活性化は、増大した細胞内カルシウム濃度をもたらし、カルモジュリン依存性キナーゼＩＩ（ＣａＭＫＩＩ）およびカルシニューリンのようなエフェクターの活性化ならびにＣａＭ−ＰＤＥの活性化をもたらし、減少したｃＡＭＰおよびｃＧＭＰをもたらす。一方、ドーパミンＤ１受容体活性化は、ヌクレオチドシクラーゼの活性化をもたらし、増加したｃＡＭＰおよびｃＧＭＰをもたらす。これらの環状ヌクレオチドは、次に、ＤＡＲＰＰ−３２（ドーパミンおよびｃＡＭＰにより調節されたホスホタンパク質）およびｃＡＭＰ応答配列結合タンパク質（ＣＲＥＢ）のような下流のシグナル伝達経路の要素をリン酸化する、タンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡ；ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ）および／またはタンパク質キナーゼＧ（ＰＫＧ；ｃＧＭＰ依存性タンパク質キナーゼ）を活性化する。リン酸化ＤＡＲＰＰ−３２は、次に、リン酸化タンパク質−１（ＰＰ−１）の活性を阻害し、それによりプロゲステロン受容体（ＰＲ）のような基質タンパク質のリン酸化状態を増大させ、生理的応答の減少をもたらす。げっ歯動物での実験は、ドーパミンＤ１またはプロゲステロン受容体の活性化を介するｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ合成の低下が、いくつかのげっ歯動物における交尾受容性と関係する脊柱前弯応答（lordosis response）を含む、様々な生理的応答と関係するプロゲステロンシグナル伝達を増強することを示唆している。引用によりその内容が本明細書中に包含されるMani, et al., Science (2000) 287: 1053を参照。
【０００４】
ＣａＭ−ＰＤＥは、故に、一酸化窒素、ノルアドレナリン、ニューロテンシン、ＣＣＫ、ＶＩＰ、セロトニン、グルタミン酸（例えば、ＮＭＤＡ受容体、ＡＭＰＡ受容体）、ＧＡＢＡ、アセチルコリン、アデノシン（例えば、Ａ２Ａ受容体）、カンナビノイド受容体、ナトリウム利尿ペプチド（例えば、ＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰ）、ＤＡＲＰＰ−３２、およびエンドルフィン細胞内シグナル伝達経路を含むが、これらに限定されない、基底核（線条体）におけるドーパミンにより調節されたシグナル伝達経路および他の細胞内シグナル伝達経路に影響を与え得る。
【０００５】
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）活性、特にホスホジエステラーゼ１（ＰＤＥ１）活性は、脳組織内で自発運動および学習および記憶の調節因子として機能する。ＰＤＥ１は、ドーパミンＤ１受容体、ドーパミンＤ２受容体、一酸化窒素、ノルアドレナリン、ニューロテンシン、ＣＣＫ、ＶＩＰ、セロトニン、グルタミン酸（例えば、ＮＭＤＡ受容体、ＡＭＰＡ受容体）、ＧＡＢＡ、アセチルコリン、アデノシン（例えば、Ａ２Ａ受容体）、カンナビノイド受容体、ナトリウム利尿ペプチド（例えば、ＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰ）、エンドルフィン細胞内シグナル伝達経路およびプロゲステロンシグナル伝達経路を含むが、これらに限定されない、好ましくは神経系における細胞内シグナル伝達経路の調節のための治療標的である。例えば、ＰＤＥ１Ｂの阻害は、分解からｃＧＭＰおよびｃＡＭＰを保護することによりドーパミンＤ１アゴニスト作用を増強するように作用し、同様にＰＤＥ１活性を阻害することによりドーパミンＤ２受容体シグナル伝達経路を阻害するはずである。細胞内カルシウムレベルの慢性的上昇は、多くの障害、特にアルツハイマー、パーキンソン病およびハンチントン病のような神経変性疾患、ならびに卒中および心筋梗塞をもたらす循環系の障害における細胞死と関係がある。故に、ＰＤＥ１阻害剤は、パーキンソン病、下肢静止不能症候群、鬱病、ナルコレプシーおよび認知障害(cognitive impairment)のような、低下したドーパミンＤ１受容体シグナル伝達活性により特徴付けられる疾患において有用な可能性がある。ＰＤＥ１阻害剤はまた、女性性機能障害のようなプロゲステロンシグナル伝達の増強により軽減され得る疾患においても有用である。
【０００６】
故に、ＰＤＥ１活性、とりわけＰＤＥ１Ｂ活性を選択的に阻害する化合物が必要とされる。
【発明の概要】
【０００７】
発明の概要
本発明は、遊離形、塩形態またはプロドラッグ形態の、新規の２−（所望により、ヘテロ）アリールメチル−３−（所望により、ヘテロ）アリールアミノ−［２Ｈ］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン（以下、“本発明の化合物”）を提供する。２位の（所望により）ヘテロアリール基は、好ましくは、アリールまたはヘテロアリールとの結合点に対してパラ位で、例えばフェニル、ピリジルまたはチアジアゾリルで置換された、置換ベンジルまたはピリジルメチルである。これらの化合物は、驚くべき事に、ホスホジエステラーゼ１（ＰＤＥ１）活性、例えばＰＤＥ１Ａ、ＰＤＥ１ＢおよびＰＤＥ１Ｃ活性、とりわけＰＤＥ１Ｂ活性を選択的に阻害することが見出されている。
【０００８】
好ましくは、本発明の化合物は、遊離形、塩形態またはプロドラッグ形態の、式Ｉ
【化１】
［式中、
（ｉ）Ｒ１は、Ｈまたはアルキル（例えば、メチル）であり；
（ｉｉ）Ｒ２は、Ｈ、アルキル（例えば、イソブチル、２−メチルブチル、２，２−ジメチルプロピル）、シクロアルキル（例えば、シクロペンチル、シクロヘキシル）、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル）、アルキルアミノアルキル（例えば、２−（ジメチルアミノ）エチル）、ヒドロキシアルキル（例えば、３−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）、アリールアルキル（例えば、ベンジル）、ヘテロアリールアルキル（例えば、ピリジルメチル）、またはアルコキシアリールアルキル（例えば、４−メトキシベンジル）であり；
（ｉｉｉ）Ｒ３は、例えばハロアルキルで置換された、置換ヘテロアリールアルキルであるか、または
Ｒ３は、式１のピラゾロ部分上の窒素の１つに結合し、そして式Ａ
【化２】
〔式中、Ｘ、ＹおよびＺは、独立して、ＮまたはＣであり、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１およびＲ１２は、独立してＨまたはハロゲン（例えば、ＣｌまたはＦ）であり；そして、Ｒ１０は、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル）、アリール（例えば、フェニル）、ヘテロアリール（例えば、ピリジル（例えば、ピリド−２−イル）、または例えばチアジアゾリル（例えば、１，２，３−チアジアゾール−４−イル）、ジアゾリル、トリアゾリル（例えば、１，２，４−トリアゾール−１−イル）、テトラゾリル（例えば、テトラゾール−５−イル）、アルコキサジアゾリル（例えば、５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール）、ピラゾリル（例えば、ピラゾール−１−イル）、アルキルスルホニル（例えば、メチルスルホニル）、アリールカルボニル（例えば、ベンゾイル）、またはヘテロアリールカルボニル、アルコキシカルボニル（例えば、メトキシカルボニル）、アミノカルボニル；好ましくはフェニルまたはピリジル、例えば２−ピリジルであり；ただし、Ｘ、ＹまたはＸが窒素であるとき、Ｒ８、Ｒ９またはＲ１０はそれぞれ、存在しない。〕
で示される部分であり、
（ｉｖ）Ｒ４は、アリール（例えば、フェニル）またはヘテロアリールであり；そして、
（ｖ）Ｒ５は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル（例えば、シクロペンチル）、ヘテロアリール、アリール、ｐ−ベンジルアリール（例えば、ビフェニル−４−イルメチル）である（ここで、“ａｌｋ”または“アルキル”は、Ｃ１−６アルキルを意味し、“シクロアルキル”は、Ｃ３−６シクロアルキルを意味する。）。］
で示されるピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンである。
【０００９】
本発明はさらに、遊離形、塩形態またはプロドラッグ形態の、下記の式Ｉの化合物を提供する。
１．１ 式Ｉ（式中、Ｒ１はメチルである。）；
１．２ 式Ｉまたは１．１（式中、Ｒ２はＣ１−６アルキルである。）；
１．３ 式１．２（式中、Ｒ２は、イソブチル、２，２−ジメチルプロピルまたは２−メチルブチルである。）；
１．４ 式Ｉまたは１．１（式中、Ｒ２は、ヒドロキシＣ１−６アルキルである。）；
１．５ 式Ｉまたは１．１（式中、Ｒ２は、３−ヒドロキシ−２−メチルプロピルである。）；
１．６ 式Ｉまたは１．１（式中、Ｒ２は、Ｃ１−６アルコキシ−ベンジルである。）；
１．７ 式１．６（式中、Ｒ２は、ｐ−メトキシベンジルである。）；
１．８ 式Ｉまたは１．１（式中、Ｒ２は、Ｃ３−６シクロアルキルである。）；
１．９ 式１．８（式中、Ｒ２は、シクロペンチルまたはシクロヘキシルである。）；
１．１０ 式Ｉまたは１．１（式中、Ｒ２は、Ｃ１−６ハロアルキルである。）；
１．１１ 式１．１０（式中、Ｒ２は、２，２，２−トリフルオロエチルである。）；
１．１２ 上記の式の何れか（式中、Ｒ３は、式Ａ部分（式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれＨであり、Ｒ１０はフェニルである。）である。）；
１．１３ 上記の式Ｉ−１．１１の何れか（式中、Ｒ３は、式Ａ部分（式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれＨであり、Ｒ１０は、ピリジルまたはチアジアゾリル（thiadizolyl）である。）である。）；
１．１４ 式１．１３（式中、Ｒ３は、式Ａ部分（式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれＨであり、Ｒ１０は２−ピリジルである。）である。）；
１．１５ 上記の式の何れか（式中、Ｒ４はフェニルである。）；
１．１６ 上記の式の何れか（式中、Ｒ５はＨである。）；
１．１７ 上記の式の何れか（式中、Ｘ、ＹおよびＺは、全てＣである。）；
１．１８ 上記の式の何れか（式中、Ｒ２は、テトラヒドロフラン−２−イルメチルである。）；
１．１９ 上記の式の何れか（式中、Ｒ１０はピリミジニルである。）；
【００１０】
１．２０ 式１．１９の化合物（式中、ピリミジニルは、５−フルオロピリミジニルである。）；
１．２１ 上記の式の何れか（式中、Ｒ１０はピラゾール−１−イルである。）；
１．２２ 上記の式の何れか（式中、Ｒ１０は１，２，４−トリアゾール−１−イルである。）；
１．２３ 上記の式の何れか（式中、Ｒ１０は、アミノカルボニルである。）；
１．２４ 上記の式の何れか（式中、Ｒ１０は、メチルスルホニルである。）；
１．２５ 上記の式の何れか（式中、Ｒ１０は、５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イルである。）；
１．２６ 上記の式の何れか（式中、Ｒ１０は、５−フルオロピリミジン−２−イルである。）；
１．２６ 上記の式の何れか（式中、Ｒ４は、４−フルオロフェニルである。）；
１．２７ 上記の式の何れか（式中、Ｒ１０は、トリフルオロメチルである。）；
１．２８ 上記の式の何れか（式中、Ｒ３は式Ａ部分であり、ＸおよびＺはＣであり、ＹはＮである。）；
１．２９ 下記の実施例１−２４の化合物から選択される化合物；および／または、
１．３０ 上記の式の何れか（ここで、該化合物は、ホスホジエステラーゼにより仲介される（例えば、ＰＤＥ１により、とりわけＰＤＥ１Ｂにより仲介される）ｃＧＭＰの加水分解を、例えば、実施例２５に記載の通りの、固定化金属親和性粒子試薬ＰＤＥアッセイにおいて、例えば１μＭ未満、好ましくは２５ｎＭ未満のＩＣ５０で阻害する。）。
【００１１】
とりわけ好ましい態様において、本発明の化合物は、遊離形または塩形態の、
（ｉ）Ｒ１がメチルであり；
（ｉｉ）Ｒ２がＣ１−６アルキルであり；
（ｉｉｉ）Ｒ３が式Ａ部分（式中、Ｘ、ＹおよびＺが全てＣであり、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１およびＲ１２がそれぞれＨであり、Ｒ１０が、フェニル、ピリジル（例えば、ピリド−２−イル）、またはチアジアゾリル（例えば、１，２，３−チアジアゾール−４−イル）であり；
（ｉｖ）Ｒ４がフェニルであり；そして
（ｖ）Ｒ５がＨである、
式Ｉの化合物である。
【００１２】
例えば、本発明の好ましい化合物は、遊離形、塩形態またはプロドラッグ形態の、式ＩＩ
【化３】
［式中、
Ｒ２は、Ｈ、アルキル（例えば、イソブチル、２−メチルブチル、２，２−ジメチルプロピル）、シクロアルキル（例えば、シクロペンチル、シクロヘキシル）、ヘテロアリール（例えば、ピリジル）、アリール（例えば、フェニル）、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル）、アルキルアミノアルキル（例えば、２−（ジメチルアミノ）エチル）、ヒドロキシアルキル（例えば、３−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）、アリールアルキル（例えば、ベンジル）、またはアルコキシアリールアルキル（例えば、４−メトキシベンジル）であり（ここで、“ａｌｋ”または“アルキル”は、Ｃ１−６アルキルを意味する。）；そして
Ｒ１０は、フェニル、ピリジル（例えば、ピリド−２−イル）またはチアジアゾリル（例えば、１，２，３−チアジアゾール−４−イル）である。］
で示される化合物を含む。
【００１３】
ある態様において、本発明の化合物は、遊離形、塩形態またはプロドラッグ形態の、
Ｒ２が、Ｈ、アルキル（例えば、イソブチル、２−メチルブチル、２，２−ジメチルプロピル）、シクロアルキル（例えば、シクロペンチル、シクロヘキシル、テトラヒドロフラン−２−イルメチル）、ヘテロアリール（例えば、ピリジル）、アリール（例えば、フェニル）、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル）、アルキルアミノアルキル（例えば、２−（ジメチルアミノ）エチル）、ヒドロキシアルキル（例えば、３−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）、アリールアルキル（例えば、ベンジル）、またはアルコキシアリールアルキル（例えば、４−メトキシベンジル）であり；そして、
Ｒ１０が、フェニル、ピリジル（例えば、ピリド−２−イル）、ピリミジニル（例えば、５−フルオロピリミジン−２−イル）、ピラゾリル（例えば、ピラゾール−１−イル）、チアジアゾリル（例えば、１，２，３−チアジアゾール−４−イル）、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル）、アルキルスルホニル（例えば、メチルスルホニル）、オキサジアゾリル（例えば、５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）、アミノカルボニル（例えば、４−ベンズアミド構造を形成するような）、トリアゾリル（例えば、１，２，４−トリアゾール−１−イル）である（ここで、“ａｌｋ”または“アルキル”は、Ｃ１−６アルキルを意味する。）、
式ＩＩの化合物である。
【００１４】
他に具体的に記載がないか、または文脈から明らかでないとき、本明細書中、下記の用語は、以下の意味を有する：
（ａ）本明細書で用いる“アルキル”は、飽和または不飽和の、好ましくは飽和の、好ましくは１ないし６個の炭素原子を有する炭化水素部分であって、直鎖または分枝鎖であってよく、そして所望により、例えばハロゲン（例えば、クロロまたはフルオロ）、ヒドロキシまたはカルボキシで、一、二または三置換されていてよい。
【００１５】
（ｂ）本明細書で用いる“シクロアルキル”は、飽和または不飽和の、好ましくは飽和の、好ましくは３ないし９個の炭素原子を含み、それらの少なくとも数個が、非芳香族性一もしくは二環式、または架橋環状構造を形成する、非芳香族性炭化水素部分であって、そして所望により、例えばハロゲン（例えば、クロロまたはフルオロ）、ヒドロキシまたはカルボキシで置換されていてよい。ある態様において、シクロアルキルは、所望により、該基の環または結合部分中に、１個以上のヘテロ原子、例えば窒素、酸素または硫黄を含んでいてよく、例えばテトラヒドロフラニルメチルである。
【００１６】
（ｃ）本明細書で用いる“アリール”は、単もしくは二環式芳香族性炭化水素、好ましくはフェニルであり、所望により、例えばアルキル（例えば、メチル）、ハロゲン（例えば、クロロまたはフルオロ）、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル）、ヒドロキシ、カルボキシ、またはさらにアリールもしくはヘテロアリール（例えば、ビフェニルまたはピリジルフェニル）で置換されていてよい。
【００１７】
（ｄ）本明細書で用いる“ヘテロアリール”は、芳香族性部分（ここで、芳香環を構成する原子の１個以上が、炭素ではなく硫黄または窒素である。）、例えばピリジルまたはチアジアゾリルであり、それは、所望により、例えばアルキル、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシまたはカルボキシで置換されていてよい。
【００１８】
（ｅ）参照を容易にするため、他に特記されない限り、本発明の化合物のピラゾロ−ピリミジンコア上の原子は式１に示す数字で番号付けされる。
【００１９】
本発明の化合物は、遊離形または塩形態で、例えば酸付加塩として存在していてよい。本明細書中、他に特記しない限り、“本発明の化合物”のような語句は、全ての形態、例えば遊離形または酸付加塩形態の化合物、または該化合物が酸性置換基を含むとき、塩基付加塩形態の化合物を包含すると理解されるべきである。本発明の化合物は、医薬として使用するためのものであり、故に薬学的に許容される塩が好ましい。薬学的使用に適さない塩類は、例えば、遊離形の本発明の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩の単離または精製のために有用である可能性があり、そのためそれらも包含される。
【００２０】
本発明の化合物は、いくつかの場合に、プロドラッグ形態でも存在していてよい。プロドラッグ形態は、体内で本発明の化合物に変換される化合物である。例えば、本発明の化合物がヒドロキシまたはカルボキシ置換基を含むとき、これらの置換基は、生理学的に加水分解性の、および許容されるエステルを形成し得る。本明細書で用いる通り、“生理学的に加水分解性の、および許容されるエステル”は、生理学的条件下で加水分解されて、投与されるべき用量でそれ自体生理学的に許容される酸（ヒドロキシ置換基を有する本発明の化合物の場合）またはアルコール（カルボキシ置換基を有する本発明の化合物の場合）を産生する本発明の化合物のエステルを意味する。故に、該用語は慣用の薬学的プロドラッグ形態を包含することが理解され得る。
【００２１】
本発明はまた、本発明の化合物の製造方法、本発明の化合物の製造に有用な新規の中間体、および下記に記載の疾患および障害の処置（とりわけ、パーキンソン病、トゥーレット症候群、自閉症、脆弱Ｘ症候群、ＡＤＨＤ、下肢静止不能症候群、鬱病および統合失調症における認知障害のような低下したドーパミンＤ１受容体シグナル伝達活性により特徴付けられる疾患の処置）のための本発明の化合物の使用方法を提供する。
【００２２】
本発明の詳しい説明
本発明の化合物の製造方法
式Ｉの化合物およびそれらの薬学的に許容される塩は、本明細書に記載および例示の方法を用いて、およびそれと同様の方法により、および化学分野で公知の方法により製造され得る。かかる方法には、下記の方法が包含されるが、これらに限定されない。これらの方法のための出発物質が市販されていないとき、それらは、化学分野から選択される方法により、公知の化合物の合成法と同様または類似の技術を用いて製造され得る。本明細書中に引用される全ての文献は、参照によりその内容を本明細書中に包含される。
【００２３】
本発明の化合物は、それらのエナンチオマー、ジアステレオ異性体およびラセミ体、ならびにそれらの多形体である水和物、溶媒和物および複合体を包含する。本発明の範囲内のいくつかの個々の化合物は、二重結合を包含し得る。本発明において二重結合の記載は、二重結合のＥおよびＺ異性体の両方を包含することを意味する。さらに、本発明の範囲内のいくつかの化合物は、１個以上の不斉中心を含み得る。本発明は、光学的に純粋な立体異性体の何れかならびに立体異性体の何れかの組合せの使用を包含する。
【００２４】
融点は補正されておらず、（ｄｅｃ）は分解を示す。温度は、摂氏（℃）で示し；他に特記しない限り、操作は室温または環境温度、すなわち１８−２５℃の範囲の温度で実行する。クロマトグラフィーは、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーを意味し；薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、シリカゲルプレート上で行う。ＮＭＲデータは、主要構造プロトンのデルタ値であり、内部標準としてテトラメチルシラン（ＴＭＳ）に対する百万分率（ｐｐｍ）で示す。シグナル形について常套の略語を用いる。結合定数（Ｊ）は、Ｈｚで示す。質量スペクトル（ＭＳ）について、同位体分裂により複数の質量スペクトルピークが得られるとき、最低質量の主要イオンを分子について報告する。溶媒混合組成は、容量パーセントまたは容量比として示される。ＮＭＲスペクトルが複雑なとき、特徴的シグナルのみを記載する。
【００２５】
用語および略語：
ＢｕｔＯＨ＝ｔｅｒｔ−ブチルアルコール
ＣＡＮ＝硝酸アンモニウムセリウム（ＩＶ）
ＤＩＰＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
Ｅｔ２Ｏ＝ジエチルエーテル
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ｅｑｕｉｖ．＝当量
ｈ＝時間
ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィー
Ｋ２ＣＯ３＝炭酸カリウム
ＭｅＯＨ＝メタノール
ＮａＨＣＯ３＝重炭酸ナトリウム
ＮＨ４ＯＨ＝水酸化アンモニウム
ＰＭＢ＝ｐ−メトキシベンジル
ＰＯＣｌ３＝オキシ塩化リン
ＳＯＣｌ２＝塩化チオニル
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン。
【００２６】
本発明の合成方法を以下に説明する。Ｒ基の意味は、他に特記しない限り、上記の式Ｉに記載の通りである。
【００２７】
本発明の一局面において、式ＩＩｂの中間化合物は、式ＩＩａの化合物をジカルボン酸、酢酸無水物および酢酸と、約３時間加熱しながら混合して反応させ、その後冷却して合成され得る：
【化４】
〔式中、Ｒ１はＨまたはＣ１−４アルキル［例えば、メチル］である。〕。
【００２８】
中間体ＩＩｃは、例えば、ＩＩｂの化合物を、例えばＰＯＣｌ３のような塩素化合物と、いくつかの場合に少量の水と、約４時間加熱しながら反応させ、その後冷却して製造され得る。
【化５】
【００２９】
中間体ＩＩｄは、ＩＩｃの化合物を、ＤＭＦのような溶媒およびＫ２ＣＯ３のような塩基中、例えばＰ１−Ｘと、室温で、または加熱しながら反応させて形成され得る：
【化６】
〔式中、Ｐ１は、保護基［例えば、ｐ−メトキシベンジル基（ＰＭＢ）］であり；Ｘは、ハロゲン、メシレートまたはトシレートのような脱離基である。〕。
【００３０】
中間体ＩＩｅは、ＩＩｄの化合物を、メタノールのような溶媒中、ヒドラジンまたはヒドラジン水和物と、約４時間還流しながら反応させ、その後冷却して製造され得る。
【化７】
【００３１】
中間体ＩＩｆは、ＩＩｅの化合物を、ＤＭＦのような溶媒中、例えばアリールイソチオシアネートまたはイソシアネートと、約２日間１１０℃で加熱しながら反応させ、その後冷却して合成され得る：
【化８】
〔式中、Ｒ４は、（ヘテロ）アリールまたは（ヘテロ）アリールメチル［例えば、フェニルまたはベンジル］である。〕。
【００３２】
中間体ＩＩｇは、ＩＩｆの化合物を、ＤＭＦのような溶媒およびＫ２ＣＯ３のような塩基中、例えばＲ３−Ｘと、室温で、または加熱しながら反応させて形成され得る：
【化９】
〔式中、Ｒ３は、上記の通り［例えば、所望により置換されていてよいベンジル基］であり；Ｘは、ハロゲン、メシレートまたはトシレートのような脱離基である。〕。
【００３３】
中間体ＩＩｈは、ＩＩｇの化合物から、適当な方法で保護基Ｐ１を除去することにより合成され得る。例えば、Ｐ１がｐ−メトキシベンジル基であるとき、室温で、アニソールの存在下でＡｌＣｌ３が除去され得る。
【化１０】
【００３４】
化合物Ｉは、ＩＩｈの化合物を、ＤＭＦのような溶媒およびＫ２ＣＯ３のような塩基中、例えばＲ２−Ｘおよび／またはＲ５−Ｘと、室温で、または加熱しながら反応させて形成され得る：
【化１１】
〔式中、Ｒ２およびＲ５は、上記に定義の通り［例えば、シクロペンチル基］であり；Ｘは、ハロゲン、メシレートまたはトシレートのような脱離基である。〕。
【００３５】
化合物Ｉの別の合成方法がある。
【００３６】
中間体ＩＩＩａは、ＩＩｃの化合物を、ＤＭＦのような溶媒およびＫ２ＣＯ３のような塩基中、例えばＲ２−Ｘと、室温で、または加熱しながら反応させて形成され得る：
【化１２】
【００３７】
中間体ＩＩＩｂは、ＩＩＩａの化合物を、メタノールのような溶媒中、ヒドラジンまたはヒドラジン水和物と、数時間加熱しながら反応させ、その後冷却して製造され得る。
【化１３】
【００３８】
中間体ＩＩＩｃは、ＩＩＩｂの化合物を、ＤＭＦのような溶媒中、例えばアリールイソチオシアネートまたはイソシアネートと、約２日間１１０℃で加熱しながら反応させ、その後冷却して合成され得る。
【化１４】
【００３９】
化合物Ｉは、ＩＩＩｃの化合物を、ＤＭＦのような溶媒およびＫ２ＣＯ３のような塩基中、例えばＲ３−Ｘと、室温で、または加熱しながら反応させて形成され得る。得られた生成物Ｉ（Ｒ５＝Ｈ）は、塩基性条件下で、例えばＲ５−Ｘとさらに反応させて化合物Ｉを得る。
【化１５】
【００４０】
故に、本発明は、上記の本発明の化合物の製造方法であって、例えば、以下を含む方法を提供する。
（ｉ）２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンを、式Ｘ−Ｒ３の化合物〔式中、Ｘは脱離基、例えばハロゲン、メシレートまたはトシレートであり、Ｒ３は、所望により置換されていてよいアリールアルキルまたはヘテロアリールアルキルであり、例えば式中Ｒ３は、上記の式Ａの置換ベンジルである。〕と、例えば塩基性条件下で反応させる工程、例えば、ここで、２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンは、式ＩＩＩｃ：
【化１６】
〔式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は、上記で、例えば式Ｉで定義の通りである。〕
で示される化合物であり；および／または
【００４１】
（ｉｉ）２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンを、式Ｘ−Ｒ２の化合物〔式中、Ｘは脱離基、例えばハロゲン、メシレートまたはトシレートであり、Ｒ２は、アルキル、シクロアルキル、アリールアルキルまたはヘテロシクロアルキルであり、例えば式中Ｒ２はイソブチルである。〕と、例えば塩基性条件下で反応させる工程、例えば、ここで、２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンは、式ＩＩｈ：
【化１７】
〔式中、Ｒ１、Ｒ３およびＲ４は、上記で、例えば式Ｉで定義の通りである。〕
で示される化合物である。
【００４２】
本発明の化合物の使用方法
本発明の化合物は、例えば、ドーパミンおよび一酸化窒素（ＮＯ）のような環状ヌクレオチド合成の誘導因子の阻害または低下したレベルにより、増大したＰＤＥ１発現または減少したｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ発現がもたらされる、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ仲介経路の崩壊または損傷により特徴付けられる疾患の処置に有用である。ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの分解をＰＤＥ１Ｂにより阻止することにより、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの細胞内レベルが増大するため、本発明の化合物は、環状ヌクレオチド合成誘導物質の活性を増強する。
【００４３】
本発明は、以下の状態：
（ｉ）パーキンソン病、下肢静止不能症、振戦、ジスキネジア、ハンチントン病、アルツハイマー病、および薬剤誘発性運動障害を含む神経変性疾患；
（ｉｉ）鬱病、注意欠陥障害、注意欠陥多動性障害、双極性障害、不安、睡眠障害、例えばナルコレプシー、認知障害、認知症(dementia)、トゥーレット症候群、自閉症、脆弱Ｘ症候群、精神刺激薬の使用中止、および薬物中毒を含む精神障害；
（ｉｉｉ）脳血管疾患、卒中、鬱血性心疾患、高血圧、肺高血圧および性機能障害を含む、循環器および心血管障害；
（ｉｖ）喘息、慢性閉塞性肺疾患、およびアレルギー性鼻炎、ならびに自己免疫性および炎症性疾患を含む、呼吸器および炎症性障害；
（ｖ）ＰＤＥ１発現細胞における、ｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰの低レベル（または、ｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰシグナル伝達経路の阻害）により特徴付けられる何らかの疾患または状態；および／または
（ｖｉ）低下したドーパミンＤ１受容体シグナル伝達活性により特徴付けられる何らかの疾患または状態、
の１種以上の処置方法であって、有効量の本発明の化合物、例えば式１−１．３０または式ＩＩのいずれかに記載の化合物を、それを必要とするヒト患者または動物に投与することを含む方法を提供する。
【００４４】
とりわけ好ましい態様において、本発明は、ナルコレプシーの処置または予防方法を提供する。この態様において、ＰＤＥ１阻害剤は、単一の治療剤として用いられてよく、他の活性剤と併用または共投与して用いられてもよい。故に、本発明は、治療的有効量の、
（ｉ）ＰＤＥ１阻害剤、例えば、式１−１．３０または式ＩＩの何れかに記載の化合物、および
（ｉｉ）例えば、（ａ）中枢神経系刺激剤−アンフェタミンおよびアンフェタミン様化合物、例えばメチルフェニデート、デキストロアンフェタミン、メタンフェタミン、およびペモリン；（ｂ）モダフィニル、（ｃ）抗鬱剤、例えば三環系薬（イミプラミン、デシプラミン、クロミプラミン、およびプロトリプチリンを含む）および選択的セロトニン再取り込み阻害剤（フルオキセチンおよびセルトラリンを含む）；および／または、（ｄ）ガンマヒドロキシ酪酸（ＧＨＢ）から選択される、覚醒を促進するか、または睡眠を調節する化合物
を、それを必要とするヒト患者または動物に同時、逐次または共投与することを含む、ナルコレプシーの処置法をさらに含む。
【００４５】
別の態様において、本発明は、有効量の本発明の化合物、例えば式１−１．３０または式ＩＩの何れかに記載の化合物を、それを必要とするヒト患者または動物に投与することを含む、プロゲステロンシグナル伝達の増強により軽減され得る状態の処置または予防方法をさらに提供する。プロゲステロンシグナル伝達の増強により改善され得る疾患または状態には、女性性機能障害、続発性無月経（例えば、運動性無月経（exercise amenorrhoea）、無排卵、閉経、更年期症状、甲状腺機能低下症）、月経前緊張症、早産、不妊症、例えば反復流産による不妊症、不規則な月経周期、異常子宮出血、骨粗鬆症、自己免疫疾患、多発性硬化症、前立腺肥大、前立腺癌、および甲状腺機能低下症が含まれるが、これらに限定されない。例えば、プロゲステロンシグナル伝達の増強により、ＰＤＥ１阻害剤は、子宮粘膜への影響を介して卵の着床を促進するため、および妊娠に対する免疫反応または低プロゲステロン機能により流産しやすい女性における妊娠の維持を促進するために用いられ得る。例えば本明細書に記載の新規のＰＤＥ１阻害剤はまた、例えば、閉経後の女性、ならびにエストロゲン誘導性子宮内膜増殖症および癌腫において、エストロゲン／エストラジオール／エストリオールおよび／またはプロゲステロン／プロゲスチンと併用して投与されて、ホルモン補充療法の効果を増大するのにも有用であり得る。本発明の方法はまた、家畜動物に、例えば、飼育された非ヒトメス哺乳動物に性的受容性（sexual receptivity）および／または発情を誘発するのに有用である。
【００４６】
この態様において、ＰＤＥ１阻害剤は、単一の治療剤として上記の処置または予防方法に用いられてよく、他の活性剤と組み合わせて、または共投与して、例えばホルモン補充療法と併用して用いられてもよい。故に、本発明は、治療的有効量の、
（ｉ）ＰＤＥ１阻害剤、例えば、式１−１．３０または式ＩＩの何れかに記載の化合物、および
（ｉｉ）例えば、エストロゲンおよびエストロゲン類似体（例えば、エストラジオール、エストリオール、エストラジオールエステル）、ならびにプロゲステロンおよびプロゲステロン類似体（例えば、プロゲスチン）から選択される、ホルモン
を、それを必要とするヒト患者または動物に同時、逐次または共投与することを含む、プロゲステロンシグナル伝達の増強により改善され得る障害の処置方法をさらに含む。
【００４７】
本発明はまた、細胞または組織をＰＤＥ１Ｂ活性の阻害に十分な量の本発明の化合物と接触させることを含む、該細胞または組織におけるドーパミンＤ１細胞内シグナル伝達活性を増強または促進する方法も提供する。
【００４８】
本発明はまた、細胞または組織をＰＤＥ１Ｂ活性の阻害に十分な量の本発明の化合物と接触させることを含む、該細胞または組織におけるプロゲステロンシグナル伝達活性を増強または促進する方法も提供する。
【００４９】
本発明はまた、ＰＤＥ１関連、とりわけＰＤＥ１Ｂ関連障害、ドーパミンＤ１受容体細胞内シグナル伝達経路障害、またはプロゲステロンシグナル伝達経路の増強により軽減され得る障害の処置方法であって、ＰＤＥ１Ｂを阻害する（ここで、ＰＤＥ１Ｂ活性は、ＤＡＲＰＰ−３２および／またはＧｌｕＲ１ ＡＭＰＡ 受容体のリン酸化を調節する。）本発明の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法も提供する。
【００５０】
本発明はまた、
（ｉ）例えば、何らかの方法または上記の疾患もしくは状態の何れかの処置方法に用いるための、医薬として使用するための本発明の化合物
（ｉｉ）上記の何れかの疾患または状態を処置するための薬剤の製造における、本発明の化合物の使用
（ｉｉｉ）本発明の化合物を、薬学的に許容される希釈剤または担体と組み合わせて、または合して含む、医薬組成物、ならびに
（ｉｖ）上記の何れかの疾患または状態の処置における使用のための、本発明の化合物を、薬学的に許容される希釈剤または担体と組み合わせて、または結合して含む、医薬組成物
を提供する。
【００５１】
用語“処置”および“処置する”は、疾患の症状の予防および処置または改善ならびに疾患の原因の処置を包含することが理解されるべきである。
【００５２】
本発明の化合物は、特に、パーキンソン病、ナルコレプシーおよび女性性機能障害の処置に有用である。
【００５３】
本発明の化合物は、単一の治療剤として用いられてよく、他の活性剤と組み合わせて、または共投与して用いられてもよい。例えば、本発明の化合物は、ドーパミンのようなＤ１アゴニストの活性を増強するため、それらは、例えばパーキンソン病を有する患者の処置において、レボドバおよびレボドバ補助剤（カルビドバ、ＣＯＭＴ阻害剤、ＭＡＯ−Ｂ阻害剤）のような常套のドーパミン作動薬、ドーパミンアゴニスト、および抗コリン作動薬と同時、逐次または共投与されてよい。さらに、例えば本明細書に記載の新規のＰＤＥ１阻害剤はまた、エストロゲン誘導性子宮内膜増殖症または癌腫のホルモン補充療法または処置の効果を増強するため、エストロゲン／エストラジオール／エストリオールおよび／またはプロゲステロン／プロゲスチンと併用投与されてもよい。
【００５４】
本発明の実施に用いられる投与量は、もちろん、例えば処置すべき特定の疾患または状態、用いられる特定の本発明の化合物、投与方法、および所望の治療によって変化し得る。本発明の化合物は、経口的、非経腸的、経皮的、または吸入を含む何らかの適当な経路で投与されてよく、好ましくは経口投与される。一般的に、例えば上記の疾患の処置について満足のいく結果は、約０．０１ないし２．０ｍｇ／ｋｇ量の投与量で経口投与して得られることが示される。従って、より大型哺乳動物、例えばヒトにおいて、経口投与のための表示される１日投与量は、約０．７５ないし１５０ｍｇの範囲で、都合よくは１日１回もしくは分割用量で２ないし４回、または持続放出形態で投与され得る。故に、経口投与のための単回投与量形態は、例えば、約０．２ないし７５または１５０ｍｇ、例えば約０．２または２．０ないし５０、７５または１００ｍｇの本発明の化合物を、その薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含み得る。
【００５５】
本発明の化合物を含む医薬組成物は、慣用の希釈剤または賦形剤および製剤分野で公知の技術を用いて製造され得る。故に、経口投与量形態には、錠剤、カプセル剤、溶液、懸濁液などが含まれ得る。
【実施例】
【００５６】
実施例
実施例１：
２−（ビフェニル−４−イルメチル）−７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化１８】
【００５７】
（ａ）１−メチルピリミジン−２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）−トリオン
酢酸１８０ｍｌ中、マロン酸（８０ｇ、０．７９ｍｏｌ）およびメチルウレア（５０ｇ、０．６８ｍｏｌ）の溶液に、７０℃で、酢酸無水物（１３０ｍｌ、１．３７ｍｏｌ）をゆっくり添加する。添加完了後、反応混合物を９０℃で３時間撹拌し、その後室温まで冷却する。溶媒を減圧下で除去し、残渣をエタノール３５０ｍＬで処理して、黄色がかった固体を沈殿させる。該固体をエタノールから再結晶させて６３．１ｇの生成物を結晶性固体として得る（収率：６５．８％）。ｍ．ｐ．＝１３１．２−１３３．１℃［Ｌｉｔ．１：融点＝１３０−１３１．５℃］．
【００５８】
（ｂ）６−クロロ−３−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン
水（２．７ｍＬ）を、ＰＯＣｌ３（９５ｍＬ）中、１−メチルピリミジン−２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）−トリオン（１４．２ｇ、１００ｍｏｌ）の懸濁液に、０℃で滴下する。その後、反応混合物を８０℃で５時間加熱する。得られた褐色がかった溶液を冷却し、ＰＯＣｌ３を減圧下で蒸発させる。残渣をＭｅＯＨで処理し、得られた固体をエタノールから再結晶させて、１１．５ｇの生成物を得る（収率：７１．６％）。融点＝２７９−２８２℃（摂氏）［Ｌｉｔ．２：２８０−２８２℃］。1H NMR(400 MHz, DMSO−d6) δ 3.10(S, 3H), 5.90(S, 1H), 12.4(br, 1H)。
【００５９】
（ｃ）６−クロロ−１−イソブチル−３−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン
無水ＤＭＦ（２００ｍＬ）中、６−クロロ−３−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン（３ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）、ヨウ化イソブチル（５ｍＬ、４３．５ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（５．３ｇ、３８．４ｍｍｏｌ）の混合物を、５０℃で８時間加熱する。さらなるヨウ化イソブチル（４．３ｍＬ、３７．５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を５０℃で２４時間加熱する。熱濾過後、濾液を減圧下で蒸発乾固させる。得られた油状物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによりさらに精製して、２．１ｇの純粋な生成物を得る（収率：５２％）。
【００６０】
（ｄ）６−ヒドラジニル−１−イソブチル−３−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン
ＥｔＯＨ（８ｍＬ）中、６−クロロ−１−イソブチル−３−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン（２．０ｇ、９．３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥｔＯＨ（３ｍＬ）中ヒドラジン一水和物（１．３ｍＬ）をゆっくり添加する。反応混合物を５時間還流し、その後冷却する。大量のＡｃＯＥｔを反応混合物に添加し、次いで冷却し濾過して、１．９５ｇの生成物を黄色がかった固体として得る（収率：１００％）。
【００６１】
（ｅ）７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
フェニルイソチオシアネート（０．１７ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中、６−ヒドラジニル−１−イソブチル−３−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン（３１ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を１２０℃で６時間加熱し、次いで溶媒を減圧下で蒸発させて除去する。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによりさらに精製して、２０ｍｇの生成物を得る（収率：４１％）。 1H NMR(400 MHz, DMSO−d6) δ 0.95(s, 3H), 0.97(s, 3H), 2.30(m, 1H), 3.37(s, 3H), 3.77(d, 2H), 7.16−7.43(m, 5H), 7.61(s, 1H). MS(FAB) m/z 314.3 [M＋H]＋。
【００６２】
（ｆ）２−（ビフェニル−４−イルメチル）−７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
アセトン（２．５ｍＬ）中、７−イソブチル−５−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン（１２．０ｇ、０．０３８３ｍｍｏｌ）、臭化ｐ−ビフェニルメチル（９．４６ｍｇ、０．０３８３ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（５．３ｍｇ、０．０３８３ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で一晩撹拌する。溶媒を減圧下で除去する。残渣をクロマトグラフィーにより直接精製して、７．０ｍｇの生成物を白色固体として得る（収率：３８．０％）。1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 0.97(s, 3H), 0.99(s, 3H), 2.33(m, 1H). 3.34(s, 3H), 3.85(d, 2H), 4.99(s, 2H), 6.76(s, 1H), 6.91−7.56(m, 13H). MS(FAB) m/z 480.3 [M＋H]＋。
【００６３】
実施例２
２−（ビフェニル−４−イルメチル）−７−（４−メトキシベンジル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化１９】
【００６４】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、塩化ｐ−メトキシベンジルが、工程（ｃ）においてヨウ化イソブチルの代わりに添加される。）。ＴＬＣ Ｒｆ＝０．６１（ＡｃＯＥｔ：ヘキサン＝１：１）。1H NMR(CDCl3) δ 3.31(s, 3H), 3.71(s, 3H), 4.99(s, 2H), 5.10(s, 2H), 6.75−7.57(m, 19H). MS(FAB) m/z 544.4 [M＋H]＋。
【００６５】
実施例３
２−（ビフェニル−４−イルメチル）−３−（（ビフェニル−４−イルメチル）（フェニル）アミノ）−７−（４−メトキシベンジル）−５−メチル−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２０】
【００６６】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、塩化ｐ−メトキシベンジルが、工程（ｃ）においてヨウ化イソブチルの代わりに添加される。）。ＴＬＣ Ｒｆ＝０．８１（ＡｃＯＥｔ：ヘキサン＝１：１）。1H NMR(CDCl3) δ 3.38(s, 3H), 3.68(s, 3H), 4.99(s, 2H), 5.10(s, 2H), 5.20(s, 2H), 6.70−7.57(m, 27H). MS(FAB) m/z 710.5 [M＋H]＋。
【００６７】
実施例４
７−（４−メトキシベンジル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２１】
【００６８】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、塩化ｐ−メトキシベンジルが、工程（ｃ）においてヨウ化イソブチルの代わりに添加され；そして、ｐ−トリフルオロメチル臭化ベンジルが、工程（ｆ）において臭化ｐ−ビフェニルメチルの代わりに添加される。）（収率：８０％）。MS(ESI) m/z 536.5 [M＋H]＋。
【００６９】
実施例５
７−（４−メトキシベンジル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２２】
【００７０】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、塩化ｐ−メトキシベンジルが、工程（ｃ）においてヨウ化イソブチルの代わりに添加され；そして、ｐ−（ピリジン−２−イル）臭化ベンジルが、工程（ｆ）において臭化ｐ−ビフェニルメチルの代わりに添加される。）（収率：６０％）。MS(ESI) m/z 545.2 [M＋H]＋。
【００７１】
実施例６
５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２３】
【００７２】
ＡｌＣｌ３（０．７３３ｇ、５．５０ｍｍｏｌ）を、１，２−ジクロロエタン（１５ｍＬ）中、７−（４−メトキシベンジル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン（１．０８ｇ、１．９８ｍｍｏｌ）およびアニソール（ｍＬ）の溶液に、アルゴン下で添加する。反応混合物を室温で一晩撹拌し、次いで冷却しながら水でクエンチする。得られる懸濁液を２０％ＮａＯＨ（７０ｍＬ）で処理し、次いで塩化メチレンで５回抽出する。有機層を合わせ、蒸発乾固させる。残渣をクロマトグラフィーによりさらに精製し、７５１ｍｇの純粋な生成物を得る（収率：８９％）。MS(FAB) m/z 425.3 [M＋H]＋。
【００７３】
実施例７
７−シクロペンチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２４】
【００７４】
メチルエチルケトン（１．２ｍＬ）を、５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン（２５ｍｇ、０．０５８９ｍｍｏｌ）、ヨードシクロペンタン（８．２μＬ、０．０７０７ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（９．８ｍｇ、０．０７０７ｍｍｏｌ）を含む０．５〜５ｍＬ反応容器中に添加した。密閉した容器をBiotageのマイクロ波装置に入れ、マイクロ波反応を１４０℃で１時間行った。その後、得られた粗生成物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、１４．９ｍｇの純粋な生成物を得る（収率：５１．４％）。ＴＬＣ Ｒｆ＝０．７２（ＡｃＯＥｔ：ヘキサン＝２：１）。MS(ESI) m/z 493.4 [M＋H]＋。
【００７５】
実施例８
３−（シクロペンチル（フェニル）アミノ）−５−メチル−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２５】
【００７６】
メチルエチルケトン（１．２ｍＬ）を、５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン（２５ｍｇ、０．０５８９ｍｍｏｌ）、ヨードシクロペンタン（８．２μＬ、０．０７０７ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（９．８ｍｇ、０．０７０７ｍｍｏｌ）を含む０．５〜５ｍＬ反応容器中に添加した。密閉した容器をBiotageのマイクロ波装置に入れ、マイクロ波反応を１４０℃で１時間行った。その後、得られた粗生成物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、５．２ｍｇの純粋な生成物を得た（収率：１７．９％）。ＴＬＣ Ｒｆ＝０．５０（ＡｃＯＥｔ：ヘキサン＝２：１）。MS(ESI) m/z 493.4 [M＋H]＋。
【００７７】
実施例９
７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２６】
【００７８】
合成方法は、実施例７と同様である（ここで、ヨウ化イソブチルがヨードシクロペンタンの代わりに添加される。）（収率：９５．８％）。MS(ESI) m/z 481.4 [M＋H]＋。
【００７９】
実施例１０
７−シクロヘキシル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２７】
【００８０】
合成方法は、実施例７と同様である（ここで、ヨードシクロヘキサンがヨードシクロペンタンの代わりに添加される。）（収率：１０％）。MS(ESI) m/z 507.4 [M＋H]＋。
【００８１】
実施例１１
５−メチル−７−ネオペンチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２８】
【００８２】
合成方法は、実施例７と同様である（ここで、１−ヨード−２，２−ジメチルプロパンがヨードシクロペンタンの代わりに添加される。）（収率：４．１％）。MS(ESI) m/z 495.4 [M＋H]＋。
【００８３】
実施例１２
（Ｓ）−５−メチル−７−（２−メチルブチル）−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化２９】
【００８４】
合成方法は、実施例７と同様である（ここで、（Ｓ）−１−ヨード−２−メチルブタンがヨードシクロペンタンの代わりに添加される。）（収率：８１．８％）。MS(ESI) m/z 495.4 [M＋H]＋。
【００８５】
実施例１３
５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−７−（２，２，２−トリフルオロエチル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化３０】
【００８６】
合成方法は、実施例７と同様である（ここで、１，１，１−トリフルオロ−２−ヨードエタンがヨードシクロペンタンの代わりに添加される。）（収率：１４．８％）。MS(ESI) m/z 507.3 [M＋H]＋。
【００８７】
実施例１４
（Ｒ）−７−（３−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化３１】
【００８８】
合成方法は、実施例７と同様である（ここで、（Ｓ）−３−ブロモ−２−メチルプロパン−１−オールがヨードシクロペンタンの代わりに添加される。）（収率：８６．３％）。MS(ESI) m/z 497.4 [M＋H]＋。
【００８９】
実施例１５
７−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化３２】
【００９０】
合成方法は、実施例７と同様である（ここで、臭化２−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミニウムがヨードシクロペンタンの代わりに添加される。）（収率：６４．４％）。MS(ESI) m/z 496.3 [M＋H]＋。
【００９１】
実施例１６
２−（４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンジル）−７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化３３】
【００９２】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、１−（４−（ブロモメチル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾールが、工程（ｆ）において臭化ｐ−ビフェニルメチルの代わりに添加される。）。MS(ESI) m/z 470.1 [M＋H]＋。
【００９３】
実施例１７
２−（４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ベンジル）−７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化３４】
【００９４】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、１−（４−（ブロモメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾールが、工程（ｆ）において臭化ｐ−ビフェニルメチルの代わりに添加される。）（収率：８９．２％）。MS(ESI) m/z 471.1 [M＋H]＋。
【００９５】
実施例１８
４−（（７−イソブチル−５−メチル−４，６−ジオキソ−３−（フェニルアミノ）−４，５，６，７−テトラヒドロピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−２−イル）メチル）ベンズアミド
【化３５】
【００９６】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、４−（クロロメチル）ベンズアミドが、工程（ｆ）において臭化ｐ−ビフェニルメチルの代わりに添加される。）。MS(ESI) m/z 447.1 [M＋H]＋。
【００９７】
実施例１９
７−イソブチル−５−メチル−２−（４−（メチルスルホニル）ベンジル）−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化３６】
【００９８】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、１−（ブロモメチル）−４−（メチルスルホニル）ベンゼンが、工程（ｆ）において臭化ｐ−ビフェニルメチルの代わりに添加される。）。MS(ESI) m/z 482.1 [M＋H]＋。
【００９９】
実施例２０
７−イソブチル−５−メチル−２−（４−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）ベンジル）−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化３７】
【０１００】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、３−（４−（ブロモメチル）フェニル）−５−メチル−１，２，４−オキサジアゾールが、工程（ｆ）において臭化ｐ−ビフェニルメチルの代わりに添加される。）。MS(ESI) m/z 486.1 [M＋H]＋。
【０１０１】
実施例２１
２−（４−（５−フルオロピリミジン−２−イル）ベンジル）−７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化３８】
【０１０２】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、２−（４−（ブロモメチル）フェニル）−５−フルオロピリミジンが、工程（ｆ）において臭化ｐ−ビフェニルメチルの代わりに添加される。）。MS(ESI) m/z 500.0 [M＋H]＋。
【０１０３】
実施例２２
５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−７−（（テトラヒドロフラン−２−イル）メチル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化３９】
【０１０４】
合成方法は、実施例７と同様である（ここで、２−（ブロモメチル）−テトラヒドロフランがヨードシクロペンタンの代わりに添加される。）。MS(ESI) m/z 509.2 [M＋H]＋。
【０１０５】
実施例２３
５−メチル−７−ネオペンチル−３−（フェニルアミノ）−２−（（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）メチル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化４０】
【０１０６】
合成方法は、実施例１と同様である（ここで、１−ヨード−２，２−ジメチルプロパンが、工程（ｃ）においてヨウ化イソブチルの代わりに添加され；そして、５−（ブロモメチル）−２−（トリフルオロメチル）ピリジンが、工程（ｆ）において臭化ｐ−ビフェニルメチルの代わりに添加される。）。MS(ESI) m/z 487.2 [M＋H]＋。
【０１０７】
実施例２４
３−（４−フルオロベンジルアミノ）−７−イソブチル−５−メチル−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【化４１】
【０１０８】
合成方法は、実施例７と同様である（ここで、３−（４−フルオロベンジルアミノ）−５−メチル−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンが、５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンの代わりに添加され、そしてヨウ化イソブチルがヨードシクロペンタンの代わりに添加される。）。MS(ESI) m/z 490.2 [M＋H]＋。
【０１０９】
実施例２５
ＩＭＡＰホスホジエステラーゼアッセイキットを用いる、インビトロでのＰＤＥ１Ｂ阻害の測定
ホスホジエステラーゼ １Ｂ（ＰＤＥ１Ｂ）は、環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）を５’−グアノシン一リン酸（５’−ＧＭＰ）に変換するカルシウム／カルモジュリン依存性ホスホジエステラーゼ酵素である。ＰＤＥ１Ｂはまた、蛍光分子ｃＧＭＰ−フルオレセインのような修飾ｃＧＭＰ基質を、対応するＧＭＰ−フルオレセインに変換し得る。ｃＧＭＰ−フルオレセインからのＧＭＰ−フルオレセインの産生は、例えばＩＭＡＰ（Molecular Devices, Sunnyvale, CA）固定化金属親和性粒子試薬を用いて定量され得る。
【０１１０】
簡単には、ＩＭＡＰ試薬は、ＧＭＰ−フルオレセインに見出され、ｃＧＭＰ−フルオレセインに見出されない、遊離５’−ホスフェートに高親和性で結合する。得られるＧＭＰ−フルオレセイン−ＩＭＡＰ複合体は、ｃＧＭＰ−フルオレセインに大きく相関する。大きな、ゆっくり崩壊する複合体中に結合された小さいフルオロフォアは、それらが発光するとき放出される光子が、蛍光を励起するのに用いられるのと同じ極性を有するため、非結合フルオロフォアと区別され得る。
【０１１１】
ホスホジエステラーゼアッセイにおいて、ＩＭＡＰと結合不可能であり、故にほとんど蛍光偏光を有しないｃＧＭＰ−フルオレセインは、ＩＭＡＰと結合したとき、ＧＭＰ−フルオレセインに変換され、蛍光偏光（Δｍｐ）の大幅な増加が得られる。故に、ホスホジエステラーゼの阻害は、Δｍｐの減少として検出される。
【０１１２】
酵素アッセイ
材料：全ての化学物質は、Molecular Devices（Sunnyvale, CA）により市販されるＩＭＡＰ試薬（反応緩衝液、結合緩衝液、ＦＬ−ＧＭＰおよびＩＭＡＰビーズ）を除いて、Sigma−Aldrich（St. Louis, MO）により市販される。
アッセイ：３’，５’−環状ヌクレオチド特異的ウシ脳ホスホジエステラーゼ（Sigma, St. Louis, MO）は、５０％グリセロールで２．５Ｕ／ｍｌに再構成される。１ユニットの酵素は、ｐＨ７．５、３０℃で、１分当たりに１．０μｍｏｌｅの３’，５’−ｃＡＭＰから５’−ＡＭＰに加水分解し得る。１部の酵素を１９９９部の反応緩衝液（３０μＭ ＣａＣｌ２、１０Ｕ／ｍｌのカルモジュリン（Sigma P2277）、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．２、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．１％ＢＳＡ、０．０５％ＮａＮ３）に添加して、最終濃度１．２５ｍＵ／ｍｌを得る。９９μｌの希釈した酵素溶液を平底９６ウェルのポリスチレンプレートの各ウェルに添加し、そこに１００％ＤＭＳＯ中に溶解した１μｌの試験化合物を添加する。該化合物を酵素と混合し、１０分間、室温で予めインキュベートする。
【０１１３】
ＦＬ−ＧＭＰ変換反応は、３８４ウェルマイクロタイタープレート中、４部の酵素および１部の基質溶液（０．２２５μＭ）中、阻害剤混合物を合わせて開始される。反応液は、暗所にて室温で１５分間インキュベートする。反応を、３８４ウェルプレートの各ウェルに６０μｌの結合試薬（１：１８００希釈の消泡剤を添加した結合緩衝液中、１：４００希釈のＩＭＡＰビーズ）を添加して停止させる。プレートを室温で１時間インキュベートし、ＩＭＡＰ結合を完了まで促進させ、その後、Envisionのマルチモードマイクロプレートリーダー（PerkinElmer, Shelton, CT）に入れて、蛍光偏光（Δｍｐ）を測定する。
【０１１４】
低下したΔｍｐとして測定されるＧＭＰ濃度の減少は、ＰＤＥ活性の阻害の指標である。ＩＣ５０値は、０．００３７ｎＭないし８０，０００ｎＭの範囲の８ないし１６種の化合物濃度の存在下で酵素活性を測定し、その後、ＩＣ５０値を非線形回帰ソフトウェア（XLFit; IDBS, Cambridge, MA）を用いて概算するのを可能にするΔｍＰに対する薬剤濃度をプロットして決定される。
【０１１５】
実施例２６
ＰＤＥ１阻害剤は、メスラットの性反応に効果がある
メスラットにおける脊柱前弯応答に対するＰＤＥ１阻害剤の効果は、Mani, et al., Science(2000) 287: 1053に記載の通りに測定される。卵巣摘除し、挿管した野生型ラットを２μｇのエストロゲンで刺激し、次いで２４時間後に、プロゲステロン（２μｇ）、本発明のＰＤＥ１阻害剤（０．１ｍｇ、１．０ｍｇまたは２．５ｍｇ）またはゴマ油ビークル（対照）を脳室内（ｉｃｖ）注入して刺激する。該ラットをオスラットの存在下で脊柱前弯応答について試験する。脊柱前弯応答を、前弯指数(lordosis quotient)（ＬＱ＝前弯症数／１０マウント×１００）により定量する。０．１ｍｇの化合物１または２を受容するエストロゲン刺激したメスラットのＬＱは、プロゲステロンを受容するエストロゲン刺激したラットと同様に７５以上であり、ビークルを受容するエストロゲン刺激したラットよりも有意（ｐ＜０．００１）に高い。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
遊離形、塩形態またはプロドラッグ形態の、２−（所望により、ヘテロ）アリールメチル−３−（所望により、ヘテロ）アリールアミノ−［２Ｈ］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン。
【請求項２】
遊離形、塩形態またはプロドラッグ形態の、式Ｉ
【化１】
［式中、
（ｉ）Ｒ１は、Ｈまたはアルキルであり；
（ｉｉ）Ｒ２は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、アルキルアミノアルキル、ヒドロキシアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキルまたはアルコキシアリールアルキルであり；
（ｉｉｉ）Ｒ３は、ヘテロアリールメチルまたは式Ａ
【化２】
〔式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１およびＲ１２は、独立してＨまたはハロゲンであり；Ｒ１０は、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、アルコキシカルボニル、またはアミノカルボニルである。〕
で示される置換ベンジルであり；
（ｉｖ）Ｒ４は、アリールまたはヘテロアリールであり；そして
（ｖ）Ｒ５は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アリール、ｐ−ベンジルアリールである（ここで、“ａｌｋ”または“アルキル”は、Ｃ１−６アルキルを意味し、“シクロアルキル”は、Ｃ３−６シクロアルキルを意味する。）。］
で示される請求項１記載の化合物。
【請求項３】
遊離形、塩形態またはプロドラッグ形態の、式ＩＩ
【化３】
［式中、
Ｒ１はメチルであり；
Ｒ２はＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アリール、ハロアルキル、アルキルアミノアルキル、ヒドロキシアルキル、アリールアルキル、またはアルコキシアリールアルキルであり；
Ｒ４はフェニルであり；
Ｒ５はＨであり；そして、
Ｒ１０は、フェニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラゾリル、チアジアゾリル、ハロアルキル、アルキルスルホニル、オキサジアゾリル、アミノカルボニル、またはトリアゾリルである（ここで、“ａｌｋ”または“アルキル”は、Ｃ１−６アルキルを意味する。）。］
で示される、請求項２記載の化合物。
【請求項４】
遊離形または薬学的に許容される塩形態の、
ａ．２−（ビフェニル−４−イルメチル）−７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｂ．２−（ビフェニル−４−イルメチル）−７−（４−メトキシベンジル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｃ．２−（ビフェニル−４−イルメチル）−３−（（ビフェニル−４−イルメチル）（フェニル）アミノ）−７−（４−メトキシベンジル）−５−メチル−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｄ．７−（４−メトキシベンジル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｅ．７−（４−メトキシベンジル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｆ．５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｇ．７−シクロペンチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｈ．３−（シクロペンチル（フェニル）アミノ）−５−メチル−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｉ．７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｊ．７−シクロヘキシル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｋ．５−メチル−７−ネオペンチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｌ．（Ｓ）−５−メチル−７−（２−メチルブチル）−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｍ．５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−７−（２，２，２−トリフルオロエチル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｎ．（Ｒ）−７−（３−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｏ．７−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｐ．２−（４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンジル）−７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｑ．２−（４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ベンジル）−７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｒ．４−（（７−イソブチル−５−メチル−４，６−ジオキソ−３−（フェニルアミノ）−４，５，６，７−テトラヒドロピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−２−イル）メチル）ベンズアミド
ｓ．７−イソブチル−５−メチル−２−（４−（メチルスルホニル）ベンジル）−３−
（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｔ．７−イソブチル−５−メチル−２−（４−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）ベンジル）−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｕ．２−（４−（５−フルオロピリミジン−２−イル）ベンジル）−７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｖ．５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−７−（（テトラヒドロフラン−２−イル）メチル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｗ．５−メチル−７−ネオペンチル−３−（フェニルアミノ）−２−（（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）メチル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｘ．３−（４−フルオロベンジルアミノ）−７−イソブチル−５−メチル−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
から選択される化合物。
【請求項５】
請求項１、２、３または４のいずれか一項記載の化合物を薬学的に許容される希釈剤または担体と混合して含む、医薬組成物。
【請求項６】
下記の状態：パーキンソン病、下肢静止不能症、振戦、ジスキネジア、ハンチントン病、アルツハイマー病、および薬剤誘発性運動障害；鬱病、注意欠陥障害、注意欠陥多動性障害、双極性障害、不安、睡眠障害、ナルコレプシー、認知障害(cognitive impairment)、認知症(dementia)、トゥーレット症候群、自閉症、脆弱Ｘ症候群、精神刺激薬の使用中止、および／または薬物中毒；脳血管疾患、卒中、鬱血性心疾患、高血圧、肺高血圧、および／または性機能障害；喘息、慢性閉塞性肺疾患、および／またはアレルギー性鼻炎、ならびに自己免疫性および炎症性疾患；および／または、女性性機能障害、運動性無月経（exercise amenorrhoea）、無排卵、閉経、更年期症状、甲状腺機能低下症、月経前緊張症、早産、不妊症、不規則な月経周期、異常子宮出血、骨粗鬆症、多発性硬化症、前立腺肥大、前立腺癌、甲状腺機能低下症、エストロゲン誘導性子宮内膜増殖症もしくは癌腫；および／または、ＰＤＥ１発現細胞における、ｃＡＭＰおよび／もしくはｃＧＭＰの低レベル（または、ｃＡＭＰおよび／もしくはｃＧＭＰシグナル伝達経路の阻害）および／または減少したドーパミンＤ１受容体シグナル伝達活性により特徴付けられる何らかの疾患または状態；および／または、プロゲステロンシグナル伝達の増大により改善され得る何らかの疾患もしくは状態、の何れかの処置方法であって、有効量の請求項１、２、３または４の何れか一項記載の化合物または請求項５記載の医薬組成物を、かかる処置を必要とする患者に投与することを含む、方法。
【請求項７】
該状態がパーキンソン病である、請求項６記載の方法。
【請求項８】
該状態が認知障害である、請求項６記載の方法。
【請求項９】
該状態がナルコレプシーである、請求項６記載の方法。
【請求項１０】
中枢神経系刺激剤、モダフィニル、抗鬱剤、およびガンマヒドロキシ酪酸から選択される１個または複数の化合物を、それを必要とする患者に投与することをさらに含む、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
該状態が女性性機能障害である、請求項６記載の方法。
【請求項１２】
エストラジオール、エストリオール、エストラジオールエステル、プロゲステロンおよびプロゲスチンからなる群から選択される１個または複数の化合物を、それを必要とする患者に投与することをさらに含む、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
請求項１、２、３または４記載の化合物の製造方法であって、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンを式Ｘ−Ｒ３の化合物（式中、Ｘは脱離基であり、Ｒ３は、所望により置換されていてよいベンジルである。）と反応させる工程、およびこのようにして得られた請求項１、２、３または４記載の化合物を単離する工程を含む、方法。
【請求項１４】
該ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンが、式ＩＩＩＣ：
【化４】
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は、式ＩまたはＩＩについて請求項２または３で定義した通りである。］
で示される化合物である、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
請求項１、２、３または４記載の化合物の製造方法であって、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンを式Ｘ−Ｒ２の化合物（式中、Ｘは脱離基であり、Ｒ２は、請求項２または３における式Ｉについての定義の通りである。）と反応させる工程、およびこのようにして得られた請求項１、２または３記載の化合物を単離する工程を含む、方法。
【請求項１６】
該ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンが、式ＩＩｈ：
【化５】
［式中、Ｒ１、Ｒ３およびＲ４は、式ＩまたはＩＩについて請求項２または３で定義した通りである。］
で示される化合物である、請求項１５記載の方法。
【請求項１】
遊離形、塩形態またはプロドラッグ形態の、２−（所望により、ヘテロ）アリールメチル−３−（所望により、ヘテロ）アリールアミノ−［２Ｈ］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン。
【請求項２】
遊離形、塩形態またはプロドラッグ形態の、式Ｉ
【化１】
［式中、
（ｉ）Ｒ１は、Ｈまたはアルキルであり；
（ｉｉ）Ｒ２は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、アルキルアミノアルキル、ヒドロキシアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキルまたはアルコキシアリールアルキルであり；
（ｉｉｉ）Ｒ３は、ヘテロアリールメチルまたは式Ａ
【化２】
〔式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１およびＲ１２は、独立してＨまたはハロゲンであり；Ｒ１０は、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、アルコキシカルボニル、またはアミノカルボニルである。〕
で示される置換ベンジルであり；
（ｉｖ）Ｒ４は、アリールまたはヘテロアリールであり；そして
（ｖ）Ｒ５は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アリール、ｐ−ベンジルアリールである（ここで、“ａｌｋ”または“アルキル”は、Ｃ１−６アルキルを意味し、“シクロアルキル”は、Ｃ３−６シクロアルキルを意味する。）。］
で示される請求項１記載の化合物。
【請求項３】
遊離形、塩形態またはプロドラッグ形態の、式ＩＩ
【化３】
［式中、
Ｒ１はメチルであり；
Ｒ２はＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アリール、ハロアルキル、アルキルアミノアルキル、ヒドロキシアルキル、アリールアルキル、またはアルコキシアリールアルキルであり；
Ｒ４はフェニルであり；
Ｒ５はＨであり；そして、
Ｒ１０は、フェニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラゾリル、チアジアゾリル、ハロアルキル、アルキルスルホニル、オキサジアゾリル、アミノカルボニル、またはトリアゾリルである（ここで、“ａｌｋ”または“アルキル”は、Ｃ１−６アルキルを意味する。）。］
で示される、請求項２記載の化合物。
【請求項４】
遊離形または薬学的に許容される塩形態の、
ａ．２−（ビフェニル−４−イルメチル）−７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｂ．２−（ビフェニル−４−イルメチル）−７−（４−メトキシベンジル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｃ．２−（ビフェニル−４−イルメチル）−３−（（ビフェニル−４−イルメチル）（フェニル）アミノ）−７−（４−メトキシベンジル）−５−メチル−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｄ．７−（４−メトキシベンジル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｅ．７−（４−メトキシベンジル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｆ．５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｇ．７−シクロペンチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｈ．３−（シクロペンチル（フェニル）アミノ）−５−メチル−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｉ．７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｊ．７−シクロヘキシル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｋ．５−メチル−７−ネオペンチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｌ．（Ｓ）−５−メチル−７−（２−メチルブチル）−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｍ．５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−７−（２，２，２−トリフルオロエチル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｎ．（Ｒ）−７−（３−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｏ．７−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｐ．２−（４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンジル）−７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｑ．２−（４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ベンジル）−７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｒ．４−（（７−イソブチル−５−メチル−４，６−ジオキソ−３−（フェニルアミノ）−４，５，６，７−テトラヒドロピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−２−イル）メチル）ベンズアミド
ｓ．７−イソブチル−５−メチル−２−（４−（メチルスルホニル）ベンジル）−３−
（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｔ．７−イソブチル−５−メチル−２−（４−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）ベンジル）−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｕ．２−（４−（５−フルオロピリミジン−２−イル）ベンジル）−７−イソブチル−５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｖ．５−メチル−３−（フェニルアミノ）−２−（４−（ピリジン−２−イル）ベンジル）−７−（（テトラヒドロフラン−２−イル）メチル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｗ．５−メチル−７−ネオペンチル−３−（フェニルアミノ）−２−（（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）メチル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
ｘ．３−（４−フルオロベンジルアミノ）−７−イソブチル−５−メチル−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオン
から選択される化合物。
【請求項５】
請求項１、２、３または４のいずれか一項記載の化合物を薬学的に許容される希釈剤または担体と混合して含む、医薬組成物。
【請求項６】
下記の状態：パーキンソン病、下肢静止不能症、振戦、ジスキネジア、ハンチントン病、アルツハイマー病、および薬剤誘発性運動障害；鬱病、注意欠陥障害、注意欠陥多動性障害、双極性障害、不安、睡眠障害、ナルコレプシー、認知障害(cognitive impairment)、認知症(dementia)、トゥーレット症候群、自閉症、脆弱Ｘ症候群、精神刺激薬の使用中止、および／または薬物中毒；脳血管疾患、卒中、鬱血性心疾患、高血圧、肺高血圧、および／または性機能障害；喘息、慢性閉塞性肺疾患、および／またはアレルギー性鼻炎、ならびに自己免疫性および炎症性疾患；および／または、女性性機能障害、運動性無月経（exercise amenorrhoea）、無排卵、閉経、更年期症状、甲状腺機能低下症、月経前緊張症、早産、不妊症、不規則な月経周期、異常子宮出血、骨粗鬆症、多発性硬化症、前立腺肥大、前立腺癌、甲状腺機能低下症、エストロゲン誘導性子宮内膜増殖症もしくは癌腫；および／または、ＰＤＥ１発現細胞における、ｃＡＭＰおよび／もしくはｃＧＭＰの低レベル（または、ｃＡＭＰおよび／もしくはｃＧＭＰシグナル伝達経路の阻害）および／または減少したドーパミンＤ１受容体シグナル伝達活性により特徴付けられる何らかの疾患または状態；および／または、プロゲステロンシグナル伝達の増大により改善され得る何らかの疾患もしくは状態、の何れかの処置方法であって、有効量の請求項１、２、３または４の何れか一項記載の化合物または請求項５記載の医薬組成物を、かかる処置を必要とする患者に投与することを含む、方法。
【請求項７】
該状態がパーキンソン病である、請求項６記載の方法。
【請求項８】
該状態が認知障害である、請求項６記載の方法。
【請求項９】
該状態がナルコレプシーである、請求項６記載の方法。
【請求項１０】
中枢神経系刺激剤、モダフィニル、抗鬱剤、およびガンマヒドロキシ酪酸から選択される１個または複数の化合物を、それを必要とする患者に投与することをさらに含む、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
該状態が女性性機能障害である、請求項６記載の方法。
【請求項１２】
エストラジオール、エストリオール、エストラジオールエステル、プロゲステロンおよびプロゲスチンからなる群から選択される１個または複数の化合物を、それを必要とする患者に投与することをさらに含む、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
請求項１、２、３または４記載の化合物の製造方法であって、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンを式Ｘ−Ｒ３の化合物（式中、Ｘは脱離基であり、Ｒ３は、所望により置換されていてよいベンジルである。）と反応させる工程、およびこのようにして得られた請求項１、２、３または４記載の化合物を単離する工程を含む、方法。
【請求項１４】
該ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンが、式ＩＩＩＣ：
【化４】
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は、式ＩまたはＩＩについて請求項２または３で定義した通りである。］
で示される化合物である、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
請求項１、２、３または４記載の化合物の製造方法であって、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンを式Ｘ−Ｒ２の化合物（式中、Ｘは脱離基であり、Ｒ２は、請求項２または３における式Ｉについての定義の通りである。）と反応させる工程、およびこのようにして得られた請求項１、２または３記載の化合物を単離する工程を含む、方法。
【請求項１６】
該ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−ジオンが、式ＩＩｈ：
【化５】
［式中、Ｒ１、Ｒ３およびＲ４は、式ＩまたはＩＩについて請求項２または３で定義した通りである。］
で示される化合物である、請求項１５記載の方法。
【公表番号】特表２００９−５３９８７２（Ｐ２００９−５３９８７２Ａ）
【公表日】平成２１年１１月１９日（２００９．１１．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５１４５１８（Ｐ２００９−５１４５１８）
【出願日】平成１９年６月６日（２００７．６．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０７０５５１
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１４３７０５
【国際公開日】平成１９年１２月１３日（２００７．１２．１３）
【出願人】（５０７４０１２２５）イントラ−セルラー・セラピーズ・インコーポレイテッド (21)
【氏名又は名称原語表記】ＩＮＴＲＡ−ＣＥＬＬＵＬＡＲ ＴＨＥＲＡＰＩＥＳ， ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１１月１９日（２００９．１１．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年６月６日（２００７．６．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０７０５５１
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１４３７０５
【国際公開日】平成１９年１２月１３日（２００７．１２．１３）
【出願人】（５０７４０１２２５）イントラ−セルラー・セラピーズ・インコーポレイテッド (21)
【氏名又は名称原語表記】ＩＮＴＲＡ−ＣＥＬＬＵＬＡＲ ＴＨＥＲＡＰＩＥＳ， ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
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