皮膚外用剤
【課題】本発明の皮膚外用剤は、優れた皮膚老化防止又は改善効果や発毛抑制効果等を有する。
【解決手段】次の一般式（１）
〔式中、Ｒ1は水素原子、アルキル基、アルカノイル基又は-CH(R6)COOR7（ここでＲ6は水素原子又は低級アルキル基を、Ｒ7は水素原子、低級アルキル基、低級アルケニル基又はアラルキル基を示す）を示し；
Ｒ2は水素原子又は置換基を有していてもよいアルキル基を示し；
Ｒ3は低級アルキル基又はフェニル基を示し；
Ｒ4は水素原子又は低級アルキル基を示すか、Ｒ5と一緒になって隣接する窒素原子とともに複素環を形成してもよい；
Ｒ5は水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基又は置換基を有していてもよいアラルキル基を示すか、Ｒ4と一緒になって前記の複素環を形成してもよい；
Ｘは-COOR8又は-SO3H（ここでＲ8は水素原子、低級アルキル基、低級アルケニル基又はアラルキル基を示す）を示し；
ｎは０〜４の整数を示す〕
で表されるジペプチド化合物又はその塩を含有する皮膚外用剤。
【解決手段】次の一般式（１）
〔式中、Ｒ1は水素原子、アルキル基、アルカノイル基又は-CH(R6)COOR7（ここでＲ6は水素原子又は低級アルキル基を、Ｒ7は水素原子、低級アルキル基、低級アルケニル基又はアラルキル基を示す）を示し；
Ｒ2は水素原子又は置換基を有していてもよいアルキル基を示し；
Ｒ3は低級アルキル基又はフェニル基を示し；
Ｒ4は水素原子又は低級アルキル基を示すか、Ｒ5と一緒になって隣接する窒素原子とともに複素環を形成してもよい；
Ｒ5は水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基又は置換基を有していてもよいアラルキル基を示すか、Ｒ4と一緒になって前記の複素環を形成してもよい；
Ｘは-COOR8又は-SO3H（ここでＲ8は水素原子、低級アルキル基、低級アルケニル基又はアラルキル基を示す）を示し；
ｎは０〜４の整数を示す〕
で表されるジペプチド化合物又はその塩を含有する皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は皮膚の老化防止又は改善効果や、発毛抑制効果等を有する皮膚外用剤
に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚老化に関する研究により、皮膚老化の原因として、加齢、乾燥、酸化、太陽光（紫外線）等による影響が主な因子に挙げられている。皮膚老化は、皮膚真皮におけるコラーゲンやエラスチンの減少、ヒアルロン酸をはじめとするムコ多糖類の減少、紫外線による細胞の損傷等により認知される。
【０００３】
しかし、しわ発生防止等については、例えば、コラーゲン配合化粧料では充分な効果は得られていない。又、紫外線との関連性から紫外線照射により生じた皮膚の老化について種々研究されているが、未だに紫外線吸収剤、紫外線防御剤にかわる化粧料が開発されていない。
【０００４】
美的外観から特に手足等における体毛は無い方が好ましいとする傾向が高まり、各種の体毛除去方法、例えば、シェーバー、抜毛器等を用いる機械的除去方法、脱毛剤を用いた体毛を毛根から抜去する方法、除毛剤を用いてその化学的作用により体毛を除去する方法等が利用されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、これらの体毛除去方法は、皮膚に対して物理的又は化学的刺激を伴い、かつ、体毛除去の持続性には限界がある。そこで、体毛除去処理の軽減化が望まれている。
【０００６】
本発明は、しわの発生等の皮膚の老化防止又は改善効果や、発毛抑制効果等を有する皮膚外用剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は特定の構造を有するジペプチド化合物又はその塩に優れたしわ形成抑制作用、皮膚弾力性低下防止作用、発毛抑制効果などを有し、皮膚老化防止や発毛抑制を目的とした皮膚外用剤として有用であることを見出した。
【０００８】
すなわち、本発明は、下記一般式（１）で表されるジペプチド化合物又はその塩を含有する皮膚外用剤を提供するものである。
【０００９】
【化１】
【００１０】
〔式中、Ｒ1は水素原子、アルキル基、アルカノイル基又は-CH(R6)COOR7（ここでＲ6は水素原子又は低級アルキル基を、Ｒ7は水素原子、低級アルキル基、低級アルケニル基又はアラルキル基を示す）を示し；
Ｒ2は水素原子又は置換基を有していてもよいアルキル基を示し；
Ｒ3は低級アルキル基又はフェニル基を示し；
Ｒ4は水素原子又は低級アルキル基を示すか、Ｒ5と一緒になって隣接する窒素原子とともに複素環を形成してもよい；
Ｒ5は水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基又は置換基を有していてもよいアラルキル基を示すか、Ｒ4と一緒になって前記の複素環を形成してもよい；
Ｘは-COOR8又は-SO3H（ここでＲ8は水素原子、低級アルキル基、低級アルケニル基又はアラルキル基を示す）を示し；
ｎは０〜４の整数を示す〕
【発明の効果】
【００１１】
本発明の皮膚外用剤は、優れた皮膚老化防止又は改善効果や発毛抑制効果等を有する。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
一般式（１）中、Ｒ1で示されるアルキル基としてはＣ1−Ｃ6アルキル基が好ましく、当該アルキル基としては直鎖でも分岐鎖でもよく、特にメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基が好ましい。
【００１３】
Ｒ1で示されるアルカノイル基としてはＣ1−Ｃ6アルカノイル基が好ましく、当該アルカノイル基としては直鎖でも分岐鎖でもよく、特にアセチル基、プロピオニル基、ブチリル基が好ましい。
【００１４】
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8で示される低級アルキル基としてはＣ1−Ｃ6アルキル基が好ましく、当該アルキル基としては直鎖でも分岐鎖でもよく、特にメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基が好ましい。
【００１５】
Ｒ7及びＲ8で示される低級アルケニル基としてはＣ2−Ｃ6アルケニル基が好ましく、特にビニル基、プロペニル基が好ましい。
Ｒ7及びＲ8で示されるアラルキル基としては総炭素数７〜１８のアラルキル基、例えばフェニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基、ビフェニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基、ナフチル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基が挙げられるが、フェニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基がより好ましく、ベンジル基が特に好ましい。
【００１６】
Ｒ2で示される置換基を有していてもよいアルキル基としてはＣ1−Ｃ6アルキル基、カルボキシ−Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ1−Ｃ6アルコキシカルボニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基が挙げられるが、このうちＣ1−Ｃ6アルキル基がより好ましい。さらにＲ2としてはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基が特に好ましい。
【００１７】
Ｒ5で示される置換基を有していてもよいアルキル基としてはＣ1−Ｃ6アルキル基、カルボキシ−Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ1−Ｃ6アルコキシカルボニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基が挙げられ、このうち、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、カルボキシ−Ｃ1−Ｃ6アルキル基が好ましい。さらにメチル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、カルボキシメチル基、カルボキシエチル基が特に好ましい。
Ｒ4とＲ5が一緒になって形成する複素環としてはピロリジン、ピペリジンが挙げられる。
ｎは０〜２の整数が特に好ましい。
【００１８】
一般式（１）中、Ｒ1としては水素原子、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ1−Ｃ6アルカノイル基又は-CH(R6)COOR7（ここでＲ6は水素原子又はＣ1−Ｃ6アルキル基を、Ｒ7は水素原子、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ2−Ｃ6アルケニル基又はフェニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基を示す）がより好ましい。Ｒ2としては、水素原子又はＣ1−Ｃ6アルキル基がより好ましい。Ｒ3としては、Ｃ1−Ｃ6アルキル基又はフェニル基がより好ましい。Ｒ4としては、水素原子又はＣ1−Ｃ6アルキル基がより好ましい。Ｒ5としては、水素原子、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、フェニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基又はカルボキシＣ1−Ｃ6アルキル基がより好ましい。また、Ｘとしては、-COOR8又は-SO3H（ここでＲ8は水素原子、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ2−Ｃ6アルケニル基又フェニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基を示す）がより好ましい。さらにｎとしては、０、１又は２が特に好ましい。
【００１９】
ジペプチド化合物（１）の塩としては、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アミン塩、アミノ酸塩、酸付加塩等が挙げられる。好ましくはアルカリ金属塩又はアミノ酸塩である。なお、ジペプチド化合物（１）は光学活性を有していてもよく、立体配置はＲ、Ｓのいずれでも、ラセミ体でもよい。また、本化合物は水和物の形態であってもよい。
【００２０】
ジペプチド化合物（１）のうち、特に好ましい化合物としては、次のようなものを例示できる。
【００２１】
【化２】
【００２２】
【化３】
【００２３】
Ｐｈｅ−Ｇｌｙ（化合物１１）、Ｐｈｅ−β−Ａｌａ（化合物１２）、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ（化合物１３）、Ｐｈｅ−Ｌｅｕ（化合物１４）、Ｐｈｅ−Ａｌａ（化合物１５）、Ｐｈｅ−Ａｓｐ（化合物１６）、Ｐｈｅ−Ｔａｕ（化合物１７）
上記のうち、化合物１及び化合物１２が特に好ましい。
【００２４】
一般式（１）中、Ｒ1が水素原子である化合物は、K. Ienalga, K. Higashihara and H. Kimura, Chem. Pharm. Bull. ,35, 1249-1254(1987)に記載の方法により合成できる。また一般式（１）中、Ｒ1が水素原子以外の基である化合物、例えば次の方法により合成することができる。
【００２５】
【化４】
【００２６】
（式中、Ｙはハロゲン原子、ｐ−トルエンスルホニル基又はメタンスルホニルオキシ基を示し、Ｒ1は水素原子以外の前記の基を示し、Ｒ2〜Ｒ5、ｎ及びＸは前記と同じ）
【００２７】
すなわち、化合物（２）と化合物（３）を塩基の存在下又は非存在下に反応させ、必要に応じて水酸化ナトリウム等の塩基による加水分解反応や、パラジウムカーボン等による接触水素化反応を行うことにより本発明化合物（１）を得る。
この反応に用いられる塩基としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、トリエチルアミン等が挙げられるが、炭酸カリウム、トリエチルアミンが好ましく、トリエチルアミンが特に好ましい。
【００２８】
また反応溶媒としては水、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ベンゼン、トルエン、キシレン、ヘキサン等が用いられるが、トルエン、ベンゼンがより好ましく、トルエンがさらに好ましい。反応温度は−３０〜２００℃、さらに１０〜９０℃、特に４０〜７０℃が好ましい。
【００２９】
ジペプチド化合物（１）又はその塩の、本発明の皮膚外用剤への配合量は、０．０００１〜４０重量％（以下、単に「％」で示す）、特に０．０１〜２０％が好ましい。
【００３０】
本発明の皮膚外用剤は、皮膚の老化で生じる、しわ、たるみ、はりの減少等の改善・防止、又は発毛抑制の目的で使用することが特に好ましい。
【００３１】
また、本発明の皮膚外用剤に、角化改善剤を配合することにより、さらにしわの発生等の皮膚の老化防止又は発毛抑制効果等を向上させうる。この角化改善剤としては、スフィンゴシン誘導体等が挙げられる。
【００３２】
本発明の皮膚外用剤は、上記成分の他に、通常の化粧品、医薬部外品、医薬品等に用いられる各種任意成分、例えば保湿剤、粉体、ゲル化剤、増粘剤、界面活性剤、乳化剤、抗炎症剤、抗酸化剤、pH調整剤、キレート剤、防腐剤、増粘剤、色素、香料や、紫外線吸収剤、紫外線防御剤、コラーゲン等の既存の皮膚老化防止・改善剤、既存の発毛抑制剤等を適宜配合し、使用形態に応じて常法に従って製造することができる。
【００３３】
本発明の皮膚外用剤は、その使用形態において、薬用皮膚外用剤と化粧料とを包含する。薬用皮膚外用剤としては、例えば薬効成分を含有する各種軟膏剤を挙げることができる。軟膏剤としては、油性基剤をベースとするもの、水中油型又は油中水型の乳化系基剤をベースとするもののいずれでもよい。油性基剤に特に制限はなく、例えば植物油、動物油、合成油、脂肪酸、及び天然、合成のグリセライド等が挙げられる。薬効成分に特に制限はなく、例えば鎮痛消炎剤、鎮痒剤、収斂剤、ホルモン剤等を必要に応じて適宜使用することができる。
【００３４】
また、化粧料としては、ローション状、乳液状、クリーム状、軟膏状、テスィック状、有機溶媒や精製水等による溶液状、パック状、ゲル状、エアゾール状等の形態を挙げることができる。すなわち、化粧料としては、ローション、オイルエッセンス、Ｏ／Ｗ型又はＷ／Ｏ型のクリーム、パック、ファンデーション、皮膚洗浄剤、トニック、浴用剤、エアゾール等として使用することができる。
【実施例】
【００３５】
参考例１
フェニルアラニル−β−アラニンベンジルエステル塩酸塩１０．０ｇ（０．０２８mol）及びブロモ酢酸ベンジル１４．６ｇ（０．０６２mol）をテトラヒドロフラン２００mLに溶解した。これにテトラヒドロフランに懸濁させたトリエチルアミンを加え、４２時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチル１００mLで抽出し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。次いで、溶媒を留去し、残留物をカラムクロマトグラフィーに付し、酢酸エチル−ｎ−ヘキサン混合溶媒で抽出した。溶媒を留去して、ジベンジルエステルを８．８ｇ（６６％）得た。これをメタノールに懸濁させ、１０％のパラジウムカーボンで接触水素化した。次いで結晶をろ過し、水で再結晶を行ない、化合物１を１．３４ｇ（３５％）得た。
NMR(DMSO-d6)δ：2.30(t,2H,J=7Hz), 2.75(dd,1H,J=8,14Hz), 2.87(dd,1H,J=6,14Hz), 3.10(dd,2H,J=17,25Hz), 3.22(dt,2H,J=7,7Hz), 3.33(t,1H,J=7Hz), 7.10-7.36(m,5H), 7.99(t,1H,J=6Hz)
【００３６】
参考例２
フェニルアラニル−γ−アミノ酪酸メチルエステル塩酸塩１．４ｇ（０．００４７mol）及びブロモ酢酸エチル０．８ｇ（０．００５６mol）をテトラヒドロフラン８０mLに溶解した。これにテトラヒドロフランに懸濁させたトリエチルアミンを加え、２４時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチル２０mLで抽出し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。次いで、溶媒を留去し、残留物をカラムクロマトグラフィーに付し、酢酸エチル−ｎ−ヘキサン混合溶媒で溶出した。溶媒を留去して、エチルエステルを０．５ｇ（３１％）得た。これをメタノールに溶解し、水酸化ナトリウム水溶液（２．２当量）を加え、１５時間攪拌した。次いで溶媒を留去し、塩酸で中和した後、溶媒を留去して化合物２を０．１８ｇ（４１％）得た。
NMR(DMSO-d6)δ：1.52(tt,2H,J=7,7Hz), 2.09(t,2H,J=8Hz), 2.86(dd,2H,J=7,13Hz), 3.01(dd,2H,J=8,14Hz), 3.10(dt,2H,J=3,16Hz), 3.44(t,1H,J=7Hz), 7.04-7.49(m,5H), 8.15(t,1H,J=16Hz)
【００３７】
参考例３
参考例２において、フェニルアラニル−γ−アミノ酪酸メチルエステル塩酸塩の代りにフェニルアラニルロイシンメチルエステル塩酸塩１．０ｇ（０．００３０４mol）及びブロモ酢酸エチルを０．６ｇ（０．００３６５mol）とした以外は参考例２と同様にして、化合物３を０．３４ｇ（３３％）得た。
NMR(DMSO-d6)δ：0.81(d,3H,J=6Hz), 0.86(d,3H,J=6Hz), 1.40-1.68(m,3H), 2.76(dd,1H,J=8,14Hz), 2.93(dd,1H,J=6,14Hz), 3.08(d,1H,J=17Hz), 3.23(d,1H,J=17Hz), 3.42(dd,1H,J=6,8Hz), 4.16-4.28(m,1H), 7.17-7.29(m,5H), 8.12(d,1H,J=8Hz)
【００３８】
参考例４
フェニルアラニル−β−アラニンエチルエステル１０ｇ(０．０３８mol)及びトリエチルアミン１０．３ｇ（０．１mol）をトルエン４５ｇに懸濁させ、６０℃まで昇温した。これにトルエン５ｇに懸濁させたブロモ酢酸エチル９．３ｇ（０．０５７mol）を０．５時間かけて滴下し、３時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチル２０ｇで抽出した。有機層を２．５％クエン酸水溶液で洗浄した。次いで、溶媒を留去し、Ｎ−（カルボエトキシメチル）フェニルアラニル−β−アラニンエチルエステルを１０．７ｇ（８０．３％）得た。この化合物をメタノールに溶解し、４８％水酸化ナトリウム水溶液６．６ｇ（０．０８mol）を加え、３時間攪拌した。反応終了後、溶媒を留去して、残留物を水２０mLに溶解させ、酢酸エチル１０ｇで洗浄した。次いで、水層に塩酸を加え、pH３．５に調整した。溶液を冷却後、濾過し、粗結晶を得た。２０％イソプロピルアルコール水溶液で再結晶を行い、化合物１を６．０ｇ（６７％）得た。
【００３９】
参考例５
参考例４においてフェニルアラニル−β−アラニンエチルエステルの代わりにフェニルアラニルアラニンエチルエステル３．７ｇ（０．０１４mol）及びブロモ酢酸エチルを３．５ｇ（０．０２１mol）とした以外は参考例４と同様にして化合物４を１．４ｇ（３３％）得た。
NMR(DMSO-d6)δ：1.24(d,3H,J=7Hz), 2.78(dd,1H,J=8,14Hz), 2.96(dd,1H,J=5,14Hz), 3.08(d,1H,J=17Hz), 3.24(d,1H,J=17Hz), 2.46(dd,1H,J=7,7Hz), 4.29(dq,1H,J=7,7Hz), 7.13-7.35(m,5H), 8.22(d,1H,J=7Hz), 5.5-8.5(br.s,2H)
【００４０】
参考例６
参考例４においてフェニルアラニル−β−アラニンエチルエステルの代わりにフェニルアラニルアスパラギン酸ジメチルエステル７．４ｇ（０．０２４mol）及びブロモ酢酸エチルを６．０ｇ（０．０３６mol）とした以外は参考例４と同様にして化合物５を１．０ｇ（１２％）得た。
NMR(DMSO-d6)δ：2.54-2.70(m,2H), 2.77(dd,1H,J=7,14Hz), 2.93(dd,1H,J=6,14Hz), 3.10(d,1H,J=17Hz), 3.28(d,1H,J=17Hz), 3.44(dd,1H,J=6,7Hz), 4.45-4.55(m,1H), 7.19-7.29(m,5H), 8.28(d,1H,J=8Hz)
【００４１】
参考例７
フェニルアラニル−β−アラニン１７．４ｇ（０．０７４mol）をピリジン１２０ｇに懸濁し１５℃に冷却した。無水酢酸３０ｇを１時間かけて滴下し、滴下終了後、室温に戻し、１３時間攪拌し、反応を終了した。反応混合物を５℃に冷却し、エタノール５０mLを加えて３０分攪拌した後、溶媒を留去した。残留物を酢酸エチル５００mLで抽出し、５％塩酸、蒸留水、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。次いで溶媒を留去し、残留物をカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム−メタノール混合溶媒で溶出した。溶媒を留去したところ化合物６を１１．５ｇ（５６％）を得た。
NMR(DMSO-d6)δ：1.74(s,3H), 2.30(dd,2H,J=7,7Hz), 2.70(dd,1H,J=10,14Hz), 2.91(dd,1H,J=5,14Hz), 3.12-3.36(m,2H), 4.35-4.46(m,1H), 7.13-7.28(m,5H), 8.02(t,1H,J=6Hz), 8.67(d,1H,J=8Hz), 12.22(br.s,1H).
【００４２】
参考例８
フェニルアラニル−β−アラニン１ｇ（０．００４２mol）を水２ｇに懸濁させた。これにパラジウムカーボン（１０％）１ｇ及び３６％ホルムアルデヒド水溶液７．１ｇ（０．０４２mol）を加え、Ｈ2雰囲気下、１０気圧で２４時間攪拌した。反応終了後、溶媒を留去した。残留物をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物７を１２．８mg（８．１％）得た。
NMR(DMSO-d6)δ：1.92-2.32(m,2H), 2.81(s,6H), 2.89-3.32(m,2H), 3.11(dd,2H,J=6,13Hz), 3.94(dd,1H,J=4,10Hz), 7.00-7.41(m,5H), 8.44(t,1H,J=6Hz), 11.82-12.52(br.s,1H)
【００４３】
参考例９
フェニルアラニン−β−アラニン０．５ｇ（０．００２１mol）を水５ｇに懸濁させた。これにパラジウムカーボン（１０％）０．５ｇ及びメタノール５ｇに溶解させたプロピオンアルデヒド０．１５ｇ（０．０２７mol）を加え、Ｈ2雰囲気下で２４時間攪拌した。反応終了後、溶媒を留去した。残留物をメタノールで再結晶を行ない、化合物８を０．１３ｇ（２２．２％）得た。
NMR(DMSO-d6)δ：0.75(t,3H,J=7Hz), 1.30(ddt,2H,J=7.7,14Hz), 2.12-2.44(m,2H), 2.28(dd,2H,J=7.7Hz), 2.65(dd,1H,J=8,14Hz), 2.81(dd,1H,J=6,13Hz), 3.16(dd,1H,J=6,8Hz), 3.13-3.33(m,2H), 7.05-7.35(m,5H), 7.89(t,1H,J=6Hz)
【００４４】
参考例１０
参考例４においてフェニルアラニル−β−アラニンエチルエステルの代わりにロイシル−β−アラニンエチルエステル２．０ｇ（０．００９mol）及びブロモ酢酸エチルを２．２ｇ（０．０１３mol）とした以外は参考例４と同様にして化合物９を１．６ｇ（４５％）得た。
NMR(DMSO-d6)δ：0.83(d,3H,J=7Hz), 0.85(d,3H,J=7Hz), 1.37(dd,2H,J=7,6Hz), 1.48-1.68(m,1H), 2.37(t,2H,J=7Hz), 3.02(d,1H,J=17Hz), 3.15(d,1H,J=17Hz), 3.21-3.27(m,4H), 8.26(t,1H,J=6Hz)
【００４５】
参考例１１
フェニルアラニルタウリン２．５ｇ（９．１８mmol）及び水酸化ナトリウム０．５８ｇ（０．０１４４mol）を蒸留水２５ｇに溶解し、５０℃まで昇温した。これに、蒸留水３ｇを溶解させたブロモ酢酸１．５ｇ（０．０１１mol）を系内のpHが１０．５〜１１．５となるように水酸化ナトリウム水溶液を同時に滴下しながら０．５時間かけて滴下し、３時間攪拌した。反応終了後、塩酸を加えて系内のpHを３とし、溶媒を留去して、Ｎ−（カルボエトキシメチル）フェニルアラニルタウリン・無機塩混合物７．１５ｇを得た。このうち１ｇをＯＤＳ−ゲルカラムクロマトグラフィーに付し、Ｎ−（カルボエトキシメチル）フェニルアラニルタウリン０．１５ｇを得た。更に、これを分取ＨＰＬＣで処理して、化合物１０を４８mg得た。
NMR(DMSO-d6)δ：2.29-2.43(m,2H), 2.97-3.26(m,4H), 3.74(d,2H,J=3.3Hz), 4.01(t,1H,J=6.7Hz), 7.19-7.32(m,5H), 8.29(t,1H,J=5.5Hz), 9.41(bs,1H)
【００４６】
試験例１ ヘアレスマウスによるしわ形成抑制試験
ヘアレスマウス（HR／ICR ，実験開始時６週齢、１群５匹）の背部に、健康線用ランプ（東芝製、SE20）で、１回の照射量を１ＭＥＤ以下に調節してＵＶ−Ｂ照射し、直後に、被験化合物を０．１％含有する８０％エタノール溶液（被験体）を１００μＬ塗布した。この作業を２０週間にわたって行なった。照射エネルギー量はＵＶ−Radiometer（TOKYOOPTICAL社製、UVR-305/365D）を用いて測定した。また、コントロールとして８０％エタノールのみを塗布したものを同様に試験した。試験終了後、形成されたしわの度数を肉眼により下記の基準（しわスコア）で評価した。結果を表１に示す。
【００４７】
＜しわスコア＞
０：しわが無形成
１：しわがかすかに形成
２：しわが微量形成
３：しわが若干形成
４：しわが強固に形成
【００４８】
【表１】
【００４９】
表１の結果から、ジペプチド化合物（１）は、顕著なしわ形成抑制作用を有し、優れた皮膚老化防止・改善効果を示した。
【００５０】
試験例２ ラットによる皮膚弾力性維持試験
３週齢のＳＤ系雄性ラットの両足底を４群に分け（１群５匹）、被験化合物含有８０％エタノール溶液塗布群、溶媒（８０％エタノール）塗布群、無処理群とした。ＵＶ−Ｂ（１ＭＥＤ以下）照射後、被験物質又は溶媒を１足当たり１０μＬを塗布した。この作業を、隔日、週３回、６週間にわたって行なった。
皮膚の弾力性測定はキュートメーターＳＥＳ５７５（クレージュ・カザカ社製）を用い、５００hPa で３秒間吸引後、解放し、その後３秒間の計６秒間の変位を測定した。測定は１足当たり５回行ない、Ｕｅ値及びＵｆ値を求めた。
弾性繊維の直線性の解析は、ＳＥＭ写真の画像解析を用いたImokawa らの方法（J. Invest. Dermatol., 105, 254-258(1995)）によった。すなわち、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）用試料は、試験終了後、ラット足底をメルコックス（大日本インキ（株））にて還流固定後、ギ酸消化を行ないＳＥＭに供した。各試料ごとに採取１０００倍のＳＥＭ写真からそれぞれ代表的な１０枚を抽出し、拡大コピーをした後、均等に１６分割した。各領域で任意の弾性繊維を一本抽出し、透明フィルム上に一定太さの線（８ピクセル幅）でトーレスした。この弾性繊維をトーレスした線の占める面積をＡ、トーレスが囲まれる最小面積の長方形の縦長をＢ、横長をＣとして弾性繊維の直線性はＡ／（Ｂ×Ｃ）で表わされる。例えば、弾性繊維のトーレスが直線であれば直線性は１となる。結果を表２に示す。
【００５１】
【表２】
【００５２】
表２の結果から、ジペプチド化合物（１）は、ＵＶ−Ｂによる皮膚の弾力性低下及びその原因となる弾性繊維の３次元構造の変性を強く予防する効果を示し、皮膚のはりを保持できることが明らかとなった。
【００５３】
試験例３ マウスによる発毛抑制試験
生後６週齢のＣ３Ｈマウス１群５匹の背部毛を、電気バリカン及び電気シェーバーを用い、皮膚を傷つけないように２×４cm2にわたり剃毛した。剃毛部位に試料を１日２回１００μＬずつ４週間にわたり塗布した。試料は、被験物質を溶媒（８０％エタノール）に溶解して表３に示す濃度に調整した。対照群には溶媒のみを塗布した。３週間後、再生毛を観察するために、剃毛部分を一定倍率で撮影し、画像解析装置を用いて再生毛面積比（再生毛面積／剃毛面積）を対照群と比較した。発毛抑制率は、対象群の再生毛面積比を１００としたときの相対値（％）で示した。結果を表３に示す。
【００５４】
【表３】
【００５５】
表３の結果から、ジペプチド化合物（１）は、優れた発毛抑制効果を有していた。
【００５６】
配合例１
下記に示す配合で皮膚老化改善用クリームを常法に従い製造した。該クリームは優れた皮膚老化改善効果を示した。
（％）
化合物１又は化合物１２ ０．２
ステアリン酸 ２．０
セタノール ４．０
スクワレン ８．０
ワセリン ５．０
硬化パーム油 ４．０
ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート
（20E.O.） １．４
親油性モノステアリン酸グリセリン ２．４
ブチルパラベン ０．１
グリセリン ３．０
１０．０％水酸化カリウム ０．２
香料 ０．１
精製水 バランス
合計 １００．０
【００５７】
配合例２
下記に示す配合で皮膚老化防止・改善用パックを常法に従い製造した。該パックは優れた皮膚老化防止・改善効果を示した。
（％）
化合物３ ３．０
ポリビニルアルコール ２０．０
グリセリン ５．０
エタノール １６．０
香料 ０．１
色素 ０．１
精製水 バランス
合計 １００．０
【００５８】
配合例３
下記に示す配合で発毛抑制ローションを製造した。すなわちＡに属する成分を溶解し、これとは別にＢに属する成分を溶解した。ＡにＢを添加して均一に攪拌混合し、発毛抑制ローションを得た。該ローションは、優れた発毛抑制効果を示した。
（％）
Ａ．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 ０．８
エタノール ３０．０
Ｂ．化合物１又は化合物１２ １．０
ドデシル硫酸ナトリウム ０．１２
ドデシルメチルアミンオキシド ０．１８
イソプロピルアルコール １５．０
ベンジルアルコール １２．０
グリセリン ２．０
精製水 バランス
合計 １００．０
【００５９】
配合例４
下記に示す配合で発毛抑制エアゾールを製造した。すなわちＡに属する成分を均一に混合して容器に入れ、常法によりＢを容器に充填して発毛抑制エアゾールを製造した。該エアゾールは、優れた発毛抑制効果を示した。
（％）
Ａ．化合物１ １．０
セタノール １．２
プロピレングリコール ４．０
エタノール ８．０
精製水 バランス
Ｂ．液化石油ガス（噴射剤） ４．０
合計 １００．０
【技術分野】
【０００１】
本発明は皮膚の老化防止又は改善効果や、発毛抑制効果等を有する皮膚外用剤
に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚老化に関する研究により、皮膚老化の原因として、加齢、乾燥、酸化、太陽光（紫外線）等による影響が主な因子に挙げられている。皮膚老化は、皮膚真皮におけるコラーゲンやエラスチンの減少、ヒアルロン酸をはじめとするムコ多糖類の減少、紫外線による細胞の損傷等により認知される。
【０００３】
しかし、しわ発生防止等については、例えば、コラーゲン配合化粧料では充分な効果は得られていない。又、紫外線との関連性から紫外線照射により生じた皮膚の老化について種々研究されているが、未だに紫外線吸収剤、紫外線防御剤にかわる化粧料が開発されていない。
【０００４】
美的外観から特に手足等における体毛は無い方が好ましいとする傾向が高まり、各種の体毛除去方法、例えば、シェーバー、抜毛器等を用いる機械的除去方法、脱毛剤を用いた体毛を毛根から抜去する方法、除毛剤を用いてその化学的作用により体毛を除去する方法等が利用されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、これらの体毛除去方法は、皮膚に対して物理的又は化学的刺激を伴い、かつ、体毛除去の持続性には限界がある。そこで、体毛除去処理の軽減化が望まれている。
【０００６】
本発明は、しわの発生等の皮膚の老化防止又は改善効果や、発毛抑制効果等を有する皮膚外用剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は特定の構造を有するジペプチド化合物又はその塩に優れたしわ形成抑制作用、皮膚弾力性低下防止作用、発毛抑制効果などを有し、皮膚老化防止や発毛抑制を目的とした皮膚外用剤として有用であることを見出した。
【０００８】
すなわち、本発明は、下記一般式（１）で表されるジペプチド化合物又はその塩を含有する皮膚外用剤を提供するものである。
【０００９】
【化１】
【００１０】
〔式中、Ｒ1は水素原子、アルキル基、アルカノイル基又は-CH(R6)COOR7（ここでＲ6は水素原子又は低級アルキル基を、Ｒ7は水素原子、低級アルキル基、低級アルケニル基又はアラルキル基を示す）を示し；
Ｒ2は水素原子又は置換基を有していてもよいアルキル基を示し；
Ｒ3は低級アルキル基又はフェニル基を示し；
Ｒ4は水素原子又は低級アルキル基を示すか、Ｒ5と一緒になって隣接する窒素原子とともに複素環を形成してもよい；
Ｒ5は水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基又は置換基を有していてもよいアラルキル基を示すか、Ｒ4と一緒になって前記の複素環を形成してもよい；
Ｘは-COOR8又は-SO3H（ここでＲ8は水素原子、低級アルキル基、低級アルケニル基又はアラルキル基を示す）を示し；
ｎは０〜４の整数を示す〕
【発明の効果】
【００１１】
本発明の皮膚外用剤は、優れた皮膚老化防止又は改善効果や発毛抑制効果等を有する。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
一般式（１）中、Ｒ1で示されるアルキル基としてはＣ1−Ｃ6アルキル基が好ましく、当該アルキル基としては直鎖でも分岐鎖でもよく、特にメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基が好ましい。
【００１３】
Ｒ1で示されるアルカノイル基としてはＣ1−Ｃ6アルカノイル基が好ましく、当該アルカノイル基としては直鎖でも分岐鎖でもよく、特にアセチル基、プロピオニル基、ブチリル基が好ましい。
【００１４】
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8で示される低級アルキル基としてはＣ1−Ｃ6アルキル基が好ましく、当該アルキル基としては直鎖でも分岐鎖でもよく、特にメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基が好ましい。
【００１５】
Ｒ7及びＲ8で示される低級アルケニル基としてはＣ2−Ｃ6アルケニル基が好ましく、特にビニル基、プロペニル基が好ましい。
Ｒ7及びＲ8で示されるアラルキル基としては総炭素数７〜１８のアラルキル基、例えばフェニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基、ビフェニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基、ナフチル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基が挙げられるが、フェニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基がより好ましく、ベンジル基が特に好ましい。
【００１６】
Ｒ2で示される置換基を有していてもよいアルキル基としてはＣ1−Ｃ6アルキル基、カルボキシ−Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ1−Ｃ6アルコキシカルボニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基が挙げられるが、このうちＣ1−Ｃ6アルキル基がより好ましい。さらにＲ2としてはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基が特に好ましい。
【００１７】
Ｒ5で示される置換基を有していてもよいアルキル基としてはＣ1−Ｃ6アルキル基、カルボキシ−Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ1−Ｃ6アルコキシカルボニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基が挙げられ、このうち、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、カルボキシ−Ｃ1−Ｃ6アルキル基が好ましい。さらにメチル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、カルボキシメチル基、カルボキシエチル基が特に好ましい。
Ｒ4とＲ5が一緒になって形成する複素環としてはピロリジン、ピペリジンが挙げられる。
ｎは０〜２の整数が特に好ましい。
【００１８】
一般式（１）中、Ｒ1としては水素原子、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ1−Ｃ6アルカノイル基又は-CH(R6)COOR7（ここでＲ6は水素原子又はＣ1−Ｃ6アルキル基を、Ｒ7は水素原子、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ2−Ｃ6アルケニル基又はフェニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基を示す）がより好ましい。Ｒ2としては、水素原子又はＣ1−Ｃ6アルキル基がより好ましい。Ｒ3としては、Ｃ1−Ｃ6アルキル基又はフェニル基がより好ましい。Ｒ4としては、水素原子又はＣ1−Ｃ6アルキル基がより好ましい。Ｒ5としては、水素原子、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、フェニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基又はカルボキシＣ1−Ｃ6アルキル基がより好ましい。また、Ｘとしては、-COOR8又は-SO3H（ここでＲ8は水素原子、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ2−Ｃ6アルケニル基又フェニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基を示す）がより好ましい。さらにｎとしては、０、１又は２が特に好ましい。
【００１９】
ジペプチド化合物（１）の塩としては、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アミン塩、アミノ酸塩、酸付加塩等が挙げられる。好ましくはアルカリ金属塩又はアミノ酸塩である。なお、ジペプチド化合物（１）は光学活性を有していてもよく、立体配置はＲ、Ｓのいずれでも、ラセミ体でもよい。また、本化合物は水和物の形態であってもよい。
【００２０】
ジペプチド化合物（１）のうち、特に好ましい化合物としては、次のようなものを例示できる。
【００２１】
【化２】
【００２２】
【化３】
【００２３】
Ｐｈｅ−Ｇｌｙ（化合物１１）、Ｐｈｅ−β−Ａｌａ（化合物１２）、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ（化合物１３）、Ｐｈｅ−Ｌｅｕ（化合物１４）、Ｐｈｅ−Ａｌａ（化合物１５）、Ｐｈｅ−Ａｓｐ（化合物１６）、Ｐｈｅ−Ｔａｕ（化合物１７）
上記のうち、化合物１及び化合物１２が特に好ましい。
【００２４】
一般式（１）中、Ｒ1が水素原子である化合物は、K. Ienalga, K. Higashihara and H. Kimura, Chem. Pharm. Bull. ,35, 1249-1254(1987)に記載の方法により合成できる。また一般式（１）中、Ｒ1が水素原子以外の基である化合物、例えば次の方法により合成することができる。
【００２５】
【化４】
【００２６】
（式中、Ｙはハロゲン原子、ｐ−トルエンスルホニル基又はメタンスルホニルオキシ基を示し、Ｒ1は水素原子以外の前記の基を示し、Ｒ2〜Ｒ5、ｎ及びＸは前記と同じ）
【００２７】
すなわち、化合物（２）と化合物（３）を塩基の存在下又は非存在下に反応させ、必要に応じて水酸化ナトリウム等の塩基による加水分解反応や、パラジウムカーボン等による接触水素化反応を行うことにより本発明化合物（１）を得る。
この反応に用いられる塩基としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、トリエチルアミン等が挙げられるが、炭酸カリウム、トリエチルアミンが好ましく、トリエチルアミンが特に好ましい。
【００２８】
また反応溶媒としては水、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ベンゼン、トルエン、キシレン、ヘキサン等が用いられるが、トルエン、ベンゼンがより好ましく、トルエンがさらに好ましい。反応温度は−３０〜２００℃、さらに１０〜９０℃、特に４０〜７０℃が好ましい。
【００２９】
ジペプチド化合物（１）又はその塩の、本発明の皮膚外用剤への配合量は、０．０００１〜４０重量％（以下、単に「％」で示す）、特に０．０１〜２０％が好ましい。
【００３０】
本発明の皮膚外用剤は、皮膚の老化で生じる、しわ、たるみ、はりの減少等の改善・防止、又は発毛抑制の目的で使用することが特に好ましい。
【００３１】
また、本発明の皮膚外用剤に、角化改善剤を配合することにより、さらにしわの発生等の皮膚の老化防止又は発毛抑制効果等を向上させうる。この角化改善剤としては、スフィンゴシン誘導体等が挙げられる。
【００３２】
本発明の皮膚外用剤は、上記成分の他に、通常の化粧品、医薬部外品、医薬品等に用いられる各種任意成分、例えば保湿剤、粉体、ゲル化剤、増粘剤、界面活性剤、乳化剤、抗炎症剤、抗酸化剤、pH調整剤、キレート剤、防腐剤、増粘剤、色素、香料や、紫外線吸収剤、紫外線防御剤、コラーゲン等の既存の皮膚老化防止・改善剤、既存の発毛抑制剤等を適宜配合し、使用形態に応じて常法に従って製造することができる。
【００３３】
本発明の皮膚外用剤は、その使用形態において、薬用皮膚外用剤と化粧料とを包含する。薬用皮膚外用剤としては、例えば薬効成分を含有する各種軟膏剤を挙げることができる。軟膏剤としては、油性基剤をベースとするもの、水中油型又は油中水型の乳化系基剤をベースとするもののいずれでもよい。油性基剤に特に制限はなく、例えば植物油、動物油、合成油、脂肪酸、及び天然、合成のグリセライド等が挙げられる。薬効成分に特に制限はなく、例えば鎮痛消炎剤、鎮痒剤、収斂剤、ホルモン剤等を必要に応じて適宜使用することができる。
【００３４】
また、化粧料としては、ローション状、乳液状、クリーム状、軟膏状、テスィック状、有機溶媒や精製水等による溶液状、パック状、ゲル状、エアゾール状等の形態を挙げることができる。すなわち、化粧料としては、ローション、オイルエッセンス、Ｏ／Ｗ型又はＷ／Ｏ型のクリーム、パック、ファンデーション、皮膚洗浄剤、トニック、浴用剤、エアゾール等として使用することができる。
【実施例】
【００３５】
参考例１
フェニルアラニル−β−アラニンベンジルエステル塩酸塩１０．０ｇ（０．０２８mol）及びブロモ酢酸ベンジル１４．６ｇ（０．０６２mol）をテトラヒドロフラン２００mLに溶解した。これにテトラヒドロフランに懸濁させたトリエチルアミンを加え、４２時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチル１００mLで抽出し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。次いで、溶媒を留去し、残留物をカラムクロマトグラフィーに付し、酢酸エチル−ｎ−ヘキサン混合溶媒で抽出した。溶媒を留去して、ジベンジルエステルを８．８ｇ（６６％）得た。これをメタノールに懸濁させ、１０％のパラジウムカーボンで接触水素化した。次いで結晶をろ過し、水で再結晶を行ない、化合物１を１．３４ｇ（３５％）得た。
NMR(DMSO-d6)δ：2.30(t,2H,J=7Hz), 2.75(dd,1H,J=8,14Hz), 2.87(dd,1H,J=6,14Hz), 3.10(dd,2H,J=17,25Hz), 3.22(dt,2H,J=7,7Hz), 3.33(t,1H,J=7Hz), 7.10-7.36(m,5H), 7.99(t,1H,J=6Hz)
【００３６】
参考例２
フェニルアラニル−γ−アミノ酪酸メチルエステル塩酸塩１．４ｇ（０．００４７mol）及びブロモ酢酸エチル０．８ｇ（０．００５６mol）をテトラヒドロフラン８０mLに溶解した。これにテトラヒドロフランに懸濁させたトリエチルアミンを加え、２４時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチル２０mLで抽出し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。次いで、溶媒を留去し、残留物をカラムクロマトグラフィーに付し、酢酸エチル−ｎ−ヘキサン混合溶媒で溶出した。溶媒を留去して、エチルエステルを０．５ｇ（３１％）得た。これをメタノールに溶解し、水酸化ナトリウム水溶液（２．２当量）を加え、１５時間攪拌した。次いで溶媒を留去し、塩酸で中和した後、溶媒を留去して化合物２を０．１８ｇ（４１％）得た。
NMR(DMSO-d6)δ：1.52(tt,2H,J=7,7Hz), 2.09(t,2H,J=8Hz), 2.86(dd,2H,J=7,13Hz), 3.01(dd,2H,J=8,14Hz), 3.10(dt,2H,J=3,16Hz), 3.44(t,1H,J=7Hz), 7.04-7.49(m,5H), 8.15(t,1H,J=16Hz)
【００３７】
参考例３
参考例２において、フェニルアラニル−γ−アミノ酪酸メチルエステル塩酸塩の代りにフェニルアラニルロイシンメチルエステル塩酸塩１．０ｇ（０．００３０４mol）及びブロモ酢酸エチルを０．６ｇ（０．００３６５mol）とした以外は参考例２と同様にして、化合物３を０．３４ｇ（３３％）得た。
NMR(DMSO-d6)δ：0.81(d,3H,J=6Hz), 0.86(d,3H,J=6Hz), 1.40-1.68(m,3H), 2.76(dd,1H,J=8,14Hz), 2.93(dd,1H,J=6,14Hz), 3.08(d,1H,J=17Hz), 3.23(d,1H,J=17Hz), 3.42(dd,1H,J=6,8Hz), 4.16-4.28(m,1H), 7.17-7.29(m,5H), 8.12(d,1H,J=8Hz)
【００３８】
参考例４
フェニルアラニル−β−アラニンエチルエステル１０ｇ(０．０３８mol)及びトリエチルアミン１０．３ｇ（０．１mol）をトルエン４５ｇに懸濁させ、６０℃まで昇温した。これにトルエン５ｇに懸濁させたブロモ酢酸エチル９．３ｇ（０．０５７mol）を０．５時間かけて滴下し、３時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチル２０ｇで抽出した。有機層を２．５％クエン酸水溶液で洗浄した。次いで、溶媒を留去し、Ｎ−（カルボエトキシメチル）フェニルアラニル−β−アラニンエチルエステルを１０．７ｇ（８０．３％）得た。この化合物をメタノールに溶解し、４８％水酸化ナトリウム水溶液６．６ｇ（０．０８mol）を加え、３時間攪拌した。反応終了後、溶媒を留去して、残留物を水２０mLに溶解させ、酢酸エチル１０ｇで洗浄した。次いで、水層に塩酸を加え、pH３．５に調整した。溶液を冷却後、濾過し、粗結晶を得た。２０％イソプロピルアルコール水溶液で再結晶を行い、化合物１を６．０ｇ（６７％）得た。
【００３９】
参考例５
参考例４においてフェニルアラニル−β−アラニンエチルエステルの代わりにフェニルアラニルアラニンエチルエステル３．７ｇ（０．０１４mol）及びブロモ酢酸エチルを３．５ｇ（０．０２１mol）とした以外は参考例４と同様にして化合物４を１．４ｇ（３３％）得た。
NMR(DMSO-d6)δ：1.24(d,3H,J=7Hz), 2.78(dd,1H,J=8,14Hz), 2.96(dd,1H,J=5,14Hz), 3.08(d,1H,J=17Hz), 3.24(d,1H,J=17Hz), 2.46(dd,1H,J=7,7Hz), 4.29(dq,1H,J=7,7Hz), 7.13-7.35(m,5H), 8.22(d,1H,J=7Hz), 5.5-8.5(br.s,2H)
【００４０】
参考例６
参考例４においてフェニルアラニル−β−アラニンエチルエステルの代わりにフェニルアラニルアスパラギン酸ジメチルエステル７．４ｇ（０．０２４mol）及びブロモ酢酸エチルを６．０ｇ（０．０３６mol）とした以外は参考例４と同様にして化合物５を１．０ｇ（１２％）得た。
NMR(DMSO-d6)δ：2.54-2.70(m,2H), 2.77(dd,1H,J=7,14Hz), 2.93(dd,1H,J=6,14Hz), 3.10(d,1H,J=17Hz), 3.28(d,1H,J=17Hz), 3.44(dd,1H,J=6,7Hz), 4.45-4.55(m,1H), 7.19-7.29(m,5H), 8.28(d,1H,J=8Hz)
【００４１】
参考例７
フェニルアラニル−β−アラニン１７．４ｇ（０．０７４mol）をピリジン１２０ｇに懸濁し１５℃に冷却した。無水酢酸３０ｇを１時間かけて滴下し、滴下終了後、室温に戻し、１３時間攪拌し、反応を終了した。反応混合物を５℃に冷却し、エタノール５０mLを加えて３０分攪拌した後、溶媒を留去した。残留物を酢酸エチル５００mLで抽出し、５％塩酸、蒸留水、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。次いで溶媒を留去し、残留物をカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム−メタノール混合溶媒で溶出した。溶媒を留去したところ化合物６を１１．５ｇ（５６％）を得た。
NMR(DMSO-d6)δ：1.74(s,3H), 2.30(dd,2H,J=7,7Hz), 2.70(dd,1H,J=10,14Hz), 2.91(dd,1H,J=5,14Hz), 3.12-3.36(m,2H), 4.35-4.46(m,1H), 7.13-7.28(m,5H), 8.02(t,1H,J=6Hz), 8.67(d,1H,J=8Hz), 12.22(br.s,1H).
【００４２】
参考例８
フェニルアラニル−β−アラニン１ｇ（０．００４２mol）を水２ｇに懸濁させた。これにパラジウムカーボン（１０％）１ｇ及び３６％ホルムアルデヒド水溶液７．１ｇ（０．０４２mol）を加え、Ｈ2雰囲気下、１０気圧で２４時間攪拌した。反応終了後、溶媒を留去した。残留物をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物７を１２．８mg（８．１％）得た。
NMR(DMSO-d6)δ：1.92-2.32(m,2H), 2.81(s,6H), 2.89-3.32(m,2H), 3.11(dd,2H,J=6,13Hz), 3.94(dd,1H,J=4,10Hz), 7.00-7.41(m,5H), 8.44(t,1H,J=6Hz), 11.82-12.52(br.s,1H)
【００４３】
参考例９
フェニルアラニン−β−アラニン０．５ｇ（０．００２１mol）を水５ｇに懸濁させた。これにパラジウムカーボン（１０％）０．５ｇ及びメタノール５ｇに溶解させたプロピオンアルデヒド０．１５ｇ（０．０２７mol）を加え、Ｈ2雰囲気下で２４時間攪拌した。反応終了後、溶媒を留去した。残留物をメタノールで再結晶を行ない、化合物８を０．１３ｇ（２２．２％）得た。
NMR(DMSO-d6)δ：0.75(t,3H,J=7Hz), 1.30(ddt,2H,J=7.7,14Hz), 2.12-2.44(m,2H), 2.28(dd,2H,J=7.7Hz), 2.65(dd,1H,J=8,14Hz), 2.81(dd,1H,J=6,13Hz), 3.16(dd,1H,J=6,8Hz), 3.13-3.33(m,2H), 7.05-7.35(m,5H), 7.89(t,1H,J=6Hz)
【００４４】
参考例１０
参考例４においてフェニルアラニル−β−アラニンエチルエステルの代わりにロイシル−β−アラニンエチルエステル２．０ｇ（０．００９mol）及びブロモ酢酸エチルを２．２ｇ（０．０１３mol）とした以外は参考例４と同様にして化合物９を１．６ｇ（４５％）得た。
NMR(DMSO-d6)δ：0.83(d,3H,J=7Hz), 0.85(d,3H,J=7Hz), 1.37(dd,2H,J=7,6Hz), 1.48-1.68(m,1H), 2.37(t,2H,J=7Hz), 3.02(d,1H,J=17Hz), 3.15(d,1H,J=17Hz), 3.21-3.27(m,4H), 8.26(t,1H,J=6Hz)
【００４５】
参考例１１
フェニルアラニルタウリン２．５ｇ（９．１８mmol）及び水酸化ナトリウム０．５８ｇ（０．０１４４mol）を蒸留水２５ｇに溶解し、５０℃まで昇温した。これに、蒸留水３ｇを溶解させたブロモ酢酸１．５ｇ（０．０１１mol）を系内のpHが１０．５〜１１．５となるように水酸化ナトリウム水溶液を同時に滴下しながら０．５時間かけて滴下し、３時間攪拌した。反応終了後、塩酸を加えて系内のpHを３とし、溶媒を留去して、Ｎ−（カルボエトキシメチル）フェニルアラニルタウリン・無機塩混合物７．１５ｇを得た。このうち１ｇをＯＤＳ−ゲルカラムクロマトグラフィーに付し、Ｎ−（カルボエトキシメチル）フェニルアラニルタウリン０．１５ｇを得た。更に、これを分取ＨＰＬＣで処理して、化合物１０を４８mg得た。
NMR(DMSO-d6)δ：2.29-2.43(m,2H), 2.97-3.26(m,4H), 3.74(d,2H,J=3.3Hz), 4.01(t,1H,J=6.7Hz), 7.19-7.32(m,5H), 8.29(t,1H,J=5.5Hz), 9.41(bs,1H)
【００４６】
試験例１ ヘアレスマウスによるしわ形成抑制試験
ヘアレスマウス（HR／ICR ，実験開始時６週齢、１群５匹）の背部に、健康線用ランプ（東芝製、SE20）で、１回の照射量を１ＭＥＤ以下に調節してＵＶ−Ｂ照射し、直後に、被験化合物を０．１％含有する８０％エタノール溶液（被験体）を１００μＬ塗布した。この作業を２０週間にわたって行なった。照射エネルギー量はＵＶ−Radiometer（TOKYOOPTICAL社製、UVR-305/365D）を用いて測定した。また、コントロールとして８０％エタノールのみを塗布したものを同様に試験した。試験終了後、形成されたしわの度数を肉眼により下記の基準（しわスコア）で評価した。結果を表１に示す。
【００４７】
＜しわスコア＞
０：しわが無形成
１：しわがかすかに形成
２：しわが微量形成
３：しわが若干形成
４：しわが強固に形成
【００４８】
【表１】
【００４９】
表１の結果から、ジペプチド化合物（１）は、顕著なしわ形成抑制作用を有し、優れた皮膚老化防止・改善効果を示した。
【００５０】
試験例２ ラットによる皮膚弾力性維持試験
３週齢のＳＤ系雄性ラットの両足底を４群に分け（１群５匹）、被験化合物含有８０％エタノール溶液塗布群、溶媒（８０％エタノール）塗布群、無処理群とした。ＵＶ−Ｂ（１ＭＥＤ以下）照射後、被験物質又は溶媒を１足当たり１０μＬを塗布した。この作業を、隔日、週３回、６週間にわたって行なった。
皮膚の弾力性測定はキュートメーターＳＥＳ５７５（クレージュ・カザカ社製）を用い、５００hPa で３秒間吸引後、解放し、その後３秒間の計６秒間の変位を測定した。測定は１足当たり５回行ない、Ｕｅ値及びＵｆ値を求めた。
弾性繊維の直線性の解析は、ＳＥＭ写真の画像解析を用いたImokawa らの方法（J. Invest. Dermatol., 105, 254-258(1995)）によった。すなわち、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）用試料は、試験終了後、ラット足底をメルコックス（大日本インキ（株））にて還流固定後、ギ酸消化を行ないＳＥＭに供した。各試料ごとに採取１０００倍のＳＥＭ写真からそれぞれ代表的な１０枚を抽出し、拡大コピーをした後、均等に１６分割した。各領域で任意の弾性繊維を一本抽出し、透明フィルム上に一定太さの線（８ピクセル幅）でトーレスした。この弾性繊維をトーレスした線の占める面積をＡ、トーレスが囲まれる最小面積の長方形の縦長をＢ、横長をＣとして弾性繊維の直線性はＡ／（Ｂ×Ｃ）で表わされる。例えば、弾性繊維のトーレスが直線であれば直線性は１となる。結果を表２に示す。
【００５１】
【表２】
【００５２】
表２の結果から、ジペプチド化合物（１）は、ＵＶ−Ｂによる皮膚の弾力性低下及びその原因となる弾性繊維の３次元構造の変性を強く予防する効果を示し、皮膚のはりを保持できることが明らかとなった。
【００５３】
試験例３ マウスによる発毛抑制試験
生後６週齢のＣ３Ｈマウス１群５匹の背部毛を、電気バリカン及び電気シェーバーを用い、皮膚を傷つけないように２×４cm2にわたり剃毛した。剃毛部位に試料を１日２回１００μＬずつ４週間にわたり塗布した。試料は、被験物質を溶媒（８０％エタノール）に溶解して表３に示す濃度に調整した。対照群には溶媒のみを塗布した。３週間後、再生毛を観察するために、剃毛部分を一定倍率で撮影し、画像解析装置を用いて再生毛面積比（再生毛面積／剃毛面積）を対照群と比較した。発毛抑制率は、対象群の再生毛面積比を１００としたときの相対値（％）で示した。結果を表３に示す。
【００５４】
【表３】
【００５５】
表３の結果から、ジペプチド化合物（１）は、優れた発毛抑制効果を有していた。
【００５６】
配合例１
下記に示す配合で皮膚老化改善用クリームを常法に従い製造した。該クリームは優れた皮膚老化改善効果を示した。
（％）
化合物１又は化合物１２ ０．２
ステアリン酸 ２．０
セタノール ４．０
スクワレン ８．０
ワセリン ５．０
硬化パーム油 ４．０
ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート
（20E.O.） １．４
親油性モノステアリン酸グリセリン ２．４
ブチルパラベン ０．１
グリセリン ３．０
１０．０％水酸化カリウム ０．２
香料 ０．１
精製水 バランス
合計 １００．０
【００５７】
配合例２
下記に示す配合で皮膚老化防止・改善用パックを常法に従い製造した。該パックは優れた皮膚老化防止・改善効果を示した。
（％）
化合物３ ３．０
ポリビニルアルコール ２０．０
グリセリン ５．０
エタノール １６．０
香料 ０．１
色素 ０．１
精製水 バランス
合計 １００．０
【００５８】
配合例３
下記に示す配合で発毛抑制ローションを製造した。すなわちＡに属する成分を溶解し、これとは別にＢに属する成分を溶解した。ＡにＢを添加して均一に攪拌混合し、発毛抑制ローションを得た。該ローションは、優れた発毛抑制効果を示した。
（％）
Ａ．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 ０．８
エタノール ３０．０
Ｂ．化合物１又は化合物１２ １．０
ドデシル硫酸ナトリウム ０．１２
ドデシルメチルアミンオキシド ０．１８
イソプロピルアルコール １５．０
ベンジルアルコール １２．０
グリセリン ２．０
精製水 バランス
合計 １００．０
【００５９】
配合例４
下記に示す配合で発毛抑制エアゾールを製造した。すなわちＡに属する成分を均一に混合して容器に入れ、常法によりＢを容器に充填して発毛抑制エアゾールを製造した。該エアゾールは、優れた発毛抑制効果を示した。
（％）
Ａ．化合物１ １．０
セタノール １．２
プロピレングリコール ４．０
エタノール ８．０
精製水 バランス
Ｂ．液化石油ガス（噴射剤） ４．０
合計 １００．０
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（１）
【化１】
〔式中、Ｒ1は水素原子、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ1−Ｃ6アルカノイル基又は-CH(R6)COOR7（ここでＲ6は水素原子又はＣ1−Ｃ6アルキル基を、Ｒ7は水素原子、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ2−Ｃ6アルケニル基又はフェニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基を示す）を示し；
Ｒ2は水素原子又はＣ1−Ｃ6アルキル基を示し；
Ｒ3はＣ1−Ｃ6アルキル基又はフェニル基を示し；
Ｒ4は水素原子又はＣ1−Ｃ6アルキル基を示し；
Ｒ5は水素原子、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、フェニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基又はカルボキシＣ1−Ｃ6アルキル基を示し；
Ｘは-COOR8又は-SO3H（ここでＲ8は水素原子、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ2−Ｃ6アルケニル基又フェニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基を示す）を示し；
ｎは０、１又は２の整数を示す〕
で表されるジペプチド化合物又はその塩を含有する皮膚外用剤。
【請求項２】
皮膚老化防止又は改善剤である請求項１記載の皮膚外用剤。
【請求項３】
発毛抑制剤である請求項１記載の皮膚外用剤。
【請求項１】
次の一般式（１）
【化１】
〔式中、Ｒ1は水素原子、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ1−Ｃ6アルカノイル基又は-CH(R6)COOR7（ここでＲ6は水素原子又はＣ1−Ｃ6アルキル基を、Ｒ7は水素原子、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ2−Ｃ6アルケニル基又はフェニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基を示す）を示し；
Ｒ2は水素原子又はＣ1−Ｃ6アルキル基を示し；
Ｒ3はＣ1−Ｃ6アルキル基又はフェニル基を示し；
Ｒ4は水素原子又はＣ1−Ｃ6アルキル基を示し；
Ｒ5は水素原子、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、フェニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基又はカルボキシＣ1−Ｃ6アルキル基を示し；
Ｘは-COOR8又は-SO3H（ここでＲ8は水素原子、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ2−Ｃ6アルケニル基又フェニル−Ｃ1−Ｃ6アルキル基を示す）を示し；
ｎは０、１又は２の整数を示す〕
で表されるジペプチド化合物又はその塩を含有する皮膚外用剤。
【請求項２】
皮膚老化防止又は改善剤である請求項１記載の皮膚外用剤。
【請求項３】
発毛抑制剤である請求項１記載の皮膚外用剤。
【公開番号】特開２０１０−３１０３９（Ｐ２０１０−３１０３９Ａ）
【公開日】平成２２年２月１２日（２０１０．２．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２５４９１３（Ｐ２００９−２５４９１３）
【出願日】平成２１年１１月６日（２００９．１１．６）
【分割の表示】特願２０００−２７２９８０（Ｐ２０００−２７２９８０）の分割
【原出願日】平成１２年９月８日（２０００．９．８）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年２月１２日（２０１０．２．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１１月６日（２００９．１１．６）
【分割の表示】特願２０００−２７２９８０（Ｐ２０００−２７２９８０）の分割
【原出願日】平成１２年９月８日（２０００．９．８）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
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