Ｇ型肝炎ウイルスおよびその分子クローニング
【課題】実質的に単離された形態の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）を提供する。
【解決手段】実質的に単離された形態の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）であって、ここでＨＧＶが、（ｉ）霊長類において伝染可能であり、（ｉｉ）Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｄ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）、およびＥ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）と血清学的に異なり、（ｉｉｉ）フラビウイルス科のメンバーであり、そして（ｉｖ）複数の特定の配列、またはそれらの相補体として示される配列を有するポリヌクレオチドに対してストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドを含有することを特徴とする肝炎ウイルス。
【解決手段】実質的に単離された形態の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）であって、ここでＨＧＶが、（ｉ）霊長類において伝染可能であり、（ｉｉ）Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｄ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）、およびＥ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）と血清学的に異なり、（ｉｉｉ）フラビウイルス科のメンバーであり、そして（ｉｖ）複数の特定の配列、またはそれらの相補体として示される配列を有するポリヌクレオチドに対してストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドを含有することを特徴とする肝炎ウイルス。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
実質的に単離された形態の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）で あって、ここで該ＨＧＶが、
（ｉ）霊長類において伝染可能であり、
（ｉｉ）Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｄ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）、およびＥ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）と血清学的に異なり、
（ｉｉｉ）フラビウイルス科のメンバーであり、そして
（ｉｖ）配列番号３７、もしくは配列番号１９、またはそれらの相補体として示される配列を有するポリヌクレオチドに対してストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドを含有する：
ことを特徴とする肝炎ウイルス。
【請求項２】
実質的に単離された形態の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）ポリペプチドであって、ここで該ＨＧＶが、
（ｉ）請求項１に記載のＨＧＶウイルスの特徴を有し、そして
（ｉｉ）配列番号３８の１９０アミノ酸配列、および配列番号２０の６７アミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに対してストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを含むことをさらに特徴とする、
ポリペプチド。
【請求項３】
請求項２に記載のポリペプチドであって、ここで、該ポリペプチドは少なくとも１つの抗ＨＧＶ抗体と特異的に免疫反応し、そして、該ポリペプチドはＨＧＶ陽性被験体由来の体液または組織サンプルと特異的に免疫反応する能力を有する、ポリペプチド。
【請求項４】
請求項２に記載のＨＧＶポリペプチドおよび第二のポリペプチドからなる組換え融合ポリペプチドであって、ここで該第二のポリペプチドが、β−ガラクトシダーゼタンパク質、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼタンパク質、および粒子形成タンパク質からなる群より選択される、融合ポリペプチド。
【請求項５】
ＨＧＶゲノム、そのｃＤＮＡまたはその相補体によりコードされる少なくとも１５個の連続するアミノ酸配列を含有し、ここで該アミノ酸配列が、
（ｉ）配列番号３８の１９０アミノ酸配列、またはそのフラグメント、および
（ｉｉ）配列番号２０の６７アミノ酸配列、またはそのフラグメント、
からなる群より選択される、請求項２に記載のポリペプチド。
【請求項６】
請求項１に記載の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）に対する特異的な抗体を含有する体液または組織サンプルのスクリーニングに使用するための診断キットであって、
請求項３に記載のポリペプチド、および
該ポリペプチドと該サンプル中の該抗体との特異的な免疫反応により形成される免疫学的複合体を検出するための手段、
を含む、診断キット。
【請求項７】
血清のスクリーニングにおいて使用するための、請求項６に記載の診断キット。
【請求項８】
非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）抗原を含有する体液または組織サンプルのスクリーニングに使用するための診断キットであって、
請求項３に記載の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）ポリペプチドと特異的に免疫反応する実質的に単離された抗体、および
該抗体に対する該ポリペプチドの結合を検出するための手段、
を含む、診断キット。
【請求項９】
インビトロにおいて非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）感染を検出する方法であって、
試験被験体から得られた体液または組織サンプルと、請求項８に記載のキットの実質的に単離されたＨＧＶ特異的抗体とを反応させる工程、および
結合抗原の存在について抗体を試験する工程、
を包含する、方法。
【請求項１０】
請求項３に記載の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）ポリペプチドと特異的に免疫反応するモノクローナル抗体。
【請求項１１】
請求項３に記載の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）ポリペプチドと特異的に免疫反応するポリクローナル抗体の実質的に単離された調製物。
【請求項１２】
請求項１に記載の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）に対して特異的な抗体を含有する体液または組織サンプルをスクリーニングする方法であって、
該サンプルと請求項３に記載のポリペプチドとを接触させる工程、および
該ポリペプチドと該サンプル中の抗体との特異的な免疫反応により形成される免疫学的複合体を検出する工程、
を包含する、方法。
【請求項１３】
請求項１に記載の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）に対する抗体を生成するための組成物であって、
請求項３に記載のポリペプチドを含む、組成物。
【請求項１４】
モザイク状ポリペプチドであって、請求項３に記載の少なくとも２つの異なるポリペプチドを含有し、ここで該モザイク状ポリペプチドは、天然のＨＧＶポリペプチドにおける該ポリペプチド間に通常、介在するアミノ酸を欠失する、ポリペプチド。
【請求項１５】
実質的に単離された形態の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）ポリヌクレオチドであって、ここで該ＨＧＶが請求項１に記載のＨＧＶの特徴を有する、ポリヌクレオチド。
【請求項１６】
配列番号３７、もしくは配列番号１９、またはそれらの相補体として示される配列を有するポリヌクレオチドに対してストリンジェントな条件でハイブリダイズする、請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１７】
非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）のＰＣＲ検出に有用である、請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１８】
インビトロにおいて非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）核酸を検出する方法であって、以下の工程を包含する方法：
被験体から得られた核酸含有サンプルを、適切なハイブリダイゼーション条件下で、請求項１５に記載のポリヌクレオチドからなるプローブと組み合わせる工程、および
ＨＧＶ核酸と該プローブとのハイブリダイゼーションにより形成される、ＨＧＶ核酸／プローブ複合体の存在を検出する工程。
【請求項１９】
請求項１８に記載の方法であって、前記検出工程がＨＧＶ核酸特異的プローブを使用する工程、ここで２つの該プローブはＨＧＶ核酸の内部領域を規定し、そして各プローブは該領域の３’末端内側を含有する１つのストランドを有し、前記核酸／プローブハイブリダイゼーション複合体をプライマー伸長反応により２本鎖のプローブ含有フラグメントに転換する工程、
以下の工程を連続的に繰り返すことによりプローブ含有フラグメントの数を増幅する工程：（ｉ）２本鎖フラグメントを変性して１本鎖フラグメントを生成する工程、（ｉｉ）該１本鎖フラグメントを該プローブとハイブリダイズさせてストランド／プローブ複合体を形成させる工程、（ｉｉｉ）酵素および４つのすべてのデオキシリボヌクレオチドの存在下で、該ストランド／プローブ複合体から２本鎖フラグメントを作製する工程、および（ｉｖ）所望の増幅度が達成されるまで工程（ｉ）から（ｉｉｉ）を繰り返す工程、
該増幅産物を同定する工程、
を包含する、方法。
【請求項２０】
請求項１に記載の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）由来のポリヌクレオチドの存在についてサンプルを分析するためのキットであって、
請求項１５に記載のＨＧＶポリヌクレオチドとストリンジェントな条件で特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含有する少なくとも１つのポリヌクレオチドプローブ、および
適切な容器、
を含有する、キット。
【請求項２１】
適切な条件下で、非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）ゲノム由来のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、またはその相補体を発現し得るクローニングベクターであって、ここで該ウイルスが請求項１に記載の特徴を有し、そして該ＯＲＦが所望の宿主に適合し得る制御配列に作動可能に連結される、クローニングベクター。
【請求項２２】
非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）ポリペプチドを生産する方法であって、前記オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）配列の発現をもたらす条件下で、請求項２１に記載のベクターで形質転換した細胞を培養する工程を包含する、方法。
【請求項１】
実質的に単離された形態の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）で あって、ここで該ＨＧＶが、
（ｉ）霊長類において伝染可能であり、
（ｉｉ）Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｄ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）、およびＥ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）と血清学的に異なり、
（ｉｉｉ）フラビウイルス科のメンバーであり、そして
（ｉｖ）配列番号３７、もしくは配列番号１９、またはそれらの相補体として示される配列を有するポリヌクレオチドに対してストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドを含有する：
ことを特徴とする肝炎ウイルス。
【請求項２】
実質的に単離された形態の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）ポリペプチドであって、ここで該ＨＧＶが、
（ｉ）請求項１に記載のＨＧＶウイルスの特徴を有し、そして
（ｉｉ）配列番号３８の１９０アミノ酸配列、および配列番号２０の６７アミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに対してストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを含むことをさらに特徴とする、
ポリペプチド。
【請求項３】
請求項２に記載のポリペプチドであって、ここで、該ポリペプチドは少なくとも１つの抗ＨＧＶ抗体と特異的に免疫反応し、そして、該ポリペプチドはＨＧＶ陽性被験体由来の体液または組織サンプルと特異的に免疫反応する能力を有する、ポリペプチド。
【請求項４】
請求項２に記載のＨＧＶポリペプチドおよび第二のポリペプチドからなる組換え融合ポリペプチドであって、ここで該第二のポリペプチドが、β−ガラクトシダーゼタンパク質、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼタンパク質、および粒子形成タンパク質からなる群より選択される、融合ポリペプチド。
【請求項５】
ＨＧＶゲノム、そのｃＤＮＡまたはその相補体によりコードされる少なくとも１５個の連続するアミノ酸配列を含有し、ここで該アミノ酸配列が、
（ｉ）配列番号３８の１９０アミノ酸配列、またはそのフラグメント、および
（ｉｉ）配列番号２０の６７アミノ酸配列、またはそのフラグメント、
からなる群より選択される、請求項２に記載のポリペプチド。
【請求項６】
請求項１に記載の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）に対する特異的な抗体を含有する体液または組織サンプルのスクリーニングに使用するための診断キットであって、
請求項３に記載のポリペプチド、および
該ポリペプチドと該サンプル中の該抗体との特異的な免疫反応により形成される免疫学的複合体を検出するための手段、
を含む、診断キット。
【請求項７】
血清のスクリーニングにおいて使用するための、請求項６に記載の診断キット。
【請求項８】
非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）抗原を含有する体液または組織サンプルのスクリーニングに使用するための診断キットであって、
請求項３に記載の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）ポリペプチドと特異的に免疫反応する実質的に単離された抗体、および
該抗体に対する該ポリペプチドの結合を検出するための手段、
を含む、診断キット。
【請求項９】
インビトロにおいて非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）感染を検出する方法であって、
試験被験体から得られた体液または組織サンプルと、請求項８に記載のキットの実質的に単離されたＨＧＶ特異的抗体とを反応させる工程、および
結合抗原の存在について抗体を試験する工程、
を包含する、方法。
【請求項１０】
請求項３に記載の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）ポリペプチドと特異的に免疫反応するモノクローナル抗体。
【請求項１１】
請求項３に記載の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）ポリペプチドと特異的に免疫反応するポリクローナル抗体の実質的に単離された調製物。
【請求項１２】
請求項１に記載の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）に対して特異的な抗体を含有する体液または組織サンプルをスクリーニングする方法であって、
該サンプルと請求項３に記載のポリペプチドとを接触させる工程、および
該ポリペプチドと該サンプル中の抗体との特異的な免疫反応により形成される免疫学的複合体を検出する工程、
を包含する、方法。
【請求項１３】
請求項１に記載の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）に対する抗体を生成するための組成物であって、
請求項３に記載のポリペプチドを含む、組成物。
【請求項１４】
モザイク状ポリペプチドであって、請求項３に記載の少なくとも２つの異なるポリペプチドを含有し、ここで該モザイク状ポリペプチドは、天然のＨＧＶポリペプチドにおける該ポリペプチド間に通常、介在するアミノ酸を欠失する、ポリペプチド。
【請求項１５】
実質的に単離された形態の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）ポリヌクレオチドであって、ここで該ＨＧＶが請求項１に記載のＨＧＶの特徴を有する、ポリヌクレオチド。
【請求項１６】
配列番号３７、もしくは配列番号１９、またはそれらの相補体として示される配列を有するポリヌクレオチドに対してストリンジェントな条件でハイブリダイズする、請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１７】
非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）のＰＣＲ検出に有用である、請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１８】
インビトロにおいて非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）核酸を検出する方法であって、以下の工程を包含する方法：
被験体から得られた核酸含有サンプルを、適切なハイブリダイゼーション条件下で、請求項１５に記載のポリヌクレオチドからなるプローブと組み合わせる工程、および
ＨＧＶ核酸と該プローブとのハイブリダイゼーションにより形成される、ＨＧＶ核酸／プローブ複合体の存在を検出する工程。
【請求項１９】
請求項１８に記載の方法であって、前記検出工程がＨＧＶ核酸特異的プローブを使用する工程、ここで２つの該プローブはＨＧＶ核酸の内部領域を規定し、そして各プローブは該領域の３’末端内側を含有する１つのストランドを有し、前記核酸／プローブハイブリダイゼーション複合体をプライマー伸長反応により２本鎖のプローブ含有フラグメントに転換する工程、
以下の工程を連続的に繰り返すことによりプローブ含有フラグメントの数を増幅する工程：（ｉ）２本鎖フラグメントを変性して１本鎖フラグメントを生成する工程、（ｉｉ）該１本鎖フラグメントを該プローブとハイブリダイズさせてストランド／プローブ複合体を形成させる工程、（ｉｉｉ）酵素および４つのすべてのデオキシリボヌクレオチドの存在下で、該ストランド／プローブ複合体から２本鎖フラグメントを作製する工程、および（ｉｖ）所望の増幅度が達成されるまで工程（ｉ）から（ｉｉｉ）を繰り返す工程、
該増幅産物を同定する工程、
を包含する、方法。
【請求項２０】
請求項１に記載の非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）由来のポリヌクレオチドの存在についてサンプルを分析するためのキットであって、
請求項１５に記載のＨＧＶポリヌクレオチドとストリンジェントな条件で特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含有する少なくとも１つのポリヌクレオチドプローブ、および
適切な容器、
を含有する、キット。
【請求項２１】
適切な条件下で、非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）ゲノム由来のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、またはその相補体を発現し得るクローニングベクターであって、ここで該ウイルスが請求項１に記載の特徴を有し、そして該ＯＲＦが所望の宿主に適合し得る制御配列に作動可能に連結される、クローニングベクター。
【請求項２２】
非Ａ非Ｂ非Ｃ非Ｄ非Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）ポリペプチドを生産する方法であって、前記オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）配列の発現をもたらす条件下で、請求項２１に記載のベクターで形質転換した細胞を培養する工程を包含する、方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【公開番号】特開２００６−１１５８４５（Ｐ２００６−１１５８４５Ａ）
【公開日】平成１８年５月１１日（２００６．５．１１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−３２０１７５（Ｐ２００５−３２０１７５）
【出願日】平成１７年１１月２日（２００５．１１．２）
【分割の表示】特願平７−５３０３８７の分割
【原出願日】平成７年５月１９日（１９９５．５．１９）
【出願人】（３９８０５５４６２）ジェネラブス テクノロジーズ，インコーポレイテッド (6)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年５月１１日（２００６．５．１１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１１月２日（２００５．１１．２）
【分割の表示】特願平７−５３０３８７の分割
【原出願日】平成７年５月１９日（１９９５．５．１９）
【出願人】（３９８０５５４６２）ジェネラブス テクノロジーズ，インコーポレイテッド (6)
【Ｆターム（参考）】
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