ピリミジンジアミン化合物を使用することによる細胞増殖性障害を処置する方法
本開示は、ＳｙｋキナーゼまたはＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害剤の投与による、細胞増殖性障害の治療方法を提供する。これらの方法によって治療可能な細胞増殖性障害は、造血新生物およびウイルス関連腫瘍を包含する。これらの化合物はまた、腫瘍転移の治療的または予防的阻害も対象とする。一局面において、本発明の化合物で治療可能な造血新生物としては、様々な骨髄およびリンパ系の新生物、例えば慢性骨髄性白血病、バーキットリンパ腫、および急性骨髄性白血病が挙げられる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本願は、２００６年４月１８日に出願された米国特許出願第１１／４０７，２３３に優先権を主張し、この全ての内容は本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（技術分野）
本開示は、細胞増殖性障害の治療のための方法および組成物に関しており、該組成物は、細胞の増殖可能性に影響を与えるキナーゼ活性を標的とする阻害剤を含んでいる。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
非調節細胞成長は、腫瘍および癌ならびに他の細胞増殖性障害の顕著な特徴である。細胞分裂および細胞増殖を制御する細胞プロセスは複雑であり、細胞分裂および成長を促進する遺伝子産物と、このようなプロセスを阻止する遺伝子産物との間の複雑な相互作用をともなう。成長および増殖の正の調節剤は一般に、前癌遺伝子として記載され、これらは、改変遺伝子、ならびに腫瘍および癌形成を促進することが知られているこれらの遺伝子産物の正常な対応物である。前癌遺伝子は、細胞分裂を促進し、細胞アポトーシスを負に調節をする。これらの正常な調節状態からのこれらの遺伝子産物の活性の脱共役は、前癌遺伝子を癌遺伝子へ転化する。前癌遺伝子の正常な機能は、成長因子、成長因子受容体、細胞情報伝達分子、および核因子を包含する。前癌遺伝子の癌遺伝子形態への活性化は、多様な方法で起こりうる。これは、遺伝子突然変異、増幅、遺伝子転座、およびウイルス活性化を包含する。
【０００４】
前癌遺伝子とは対照的に、腫瘍抑制剤は一般に、細胞成長に対して負の影響を及ぼし、細胞のアポトーシスを促進し、細胞サイクルの進行を阻害し、浸潤および転移の可能性に影響を与える。いくつかの例において、腫瘍抑制剤は、これらの改変形態においてでさえ癌遺伝子の活性に対抗しうる。腫瘍抑制機能の損失または阻害の際に、前癌遺伝子またはこれらの対応癌遺伝子形態の非調節活性は、細胞形質転換および発癌をもたらす。遺伝子突然変異もしくは欠失、抑制転写、分解の増加、または腫瘍抑制剤と協力して作用する関連タンパク質の異常性は、腫瘍抑制活性を危うくすることがある。腫瘍抑制遺伝子は、突然変異体対立遺伝子とともに正常対立遺伝子を有する細胞が、依然として正常に挙動するように、劣性対立遺伝子として作用する。このようにして、異型接合の損失（ＬＯＨ）とも呼ばれている正常対立遺伝子の損失は、異常な細胞成長および増殖のいくつかの型を特徴付ける。癌遺伝子活性および正常な細胞分裂制御の破壊の結果として生じるゲノムの不安定性は、ＬＯＨの確率、したがって癌遺伝子による形質転換表現型の発生を増加させうる。
【０００５】
細胞増殖性障害の治療は、形質転換細胞において影響を受けた癌遺伝子および／または腫瘍抑制剤を標的としうる。しかしながら、機能の損失、例えば腫瘍抑制剤に起因する障害は典型的には、根底にある分子欠陥を治療しようとする際、機能の獲得の変化、例えば癌遺伝子の活性化に起因する障害における、根底にある分子欠陥の治療よりも問題が多い。失われた細胞機能を与えるための細胞プロセスの改変は、多くの事例では実際的でない。このようにして、腫瘍抑制活性の損失に起因する細胞増殖性障害についてでさえ、治療は典型的には、失われた腫瘍抑制機能の結果として作用する、調節不全分子（例えば前癌遺伝子）へ向けられる。多くの分子標的、例えば非受容体および受容体ベースのタンパク質キナーゼが同定されているが、細胞増殖および成長において効果を現わす細胞調節メカニズムの複雑な性質は、治療標的になりうる他の分子が依然として同定されていないことを示すであろう。これらのうちのいくつかは未知であろうが、一方、公知であっても、細胞増殖性障害と関連付けられないことがある場合もある。
【０００６】
このように、細胞増殖性障害において癌遺伝子的に、それ自体の活性の改変の帰結として、またはその活性を調節する作用をする細胞機能の損失の結果としてのどちらかとして作用する、他の細胞分子を同定することが望ましい。このような分子を同定する際、特異的にその細胞分子に向けられた化合物を同定することができ、独立して、または他の公知療法と組み合わせて、細胞増殖性障害を治療するために用いることができる。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（要旨）
本開示は、細胞増殖性障害の治療方法であって、細胞増殖性障害を治療するのに有効な量のＳｙｋキナーゼ阻害化合物を被験体に投与することによる方法を提供する。いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤は、Ｓｙｋキナーゼに対して選択的であり、これによって、増殖性障害に存在する異常なＳｙｋキナーゼ活性を特異的に標的する。Ｓｙｋが、正常でない細胞分裂または細胞成長のいくつかの態様においてある役割を果たすいずれの細胞増殖性障害も、これらの阻害化合物で治療することができる。いくつかの実施形態において、これらの阻害化合物で治療可能な細胞増殖性障害は、造血新生物であり、これらは、造血系統の細胞に関わる正常でない成長である。これらのＳｙｋ阻害化合物で治療可能な造血新生物は、とりわけ、様々な骨髄およびリンパ系の新生物、例えば慢性骨髄性白血病、バーキットリンパ腫、および急性骨髄性白血病を包含する。
【０００８】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼ阻害化合物は、ＳｙｋキナーゼおよびＦｌｔ−３キナーゼの両方の活性を阻害しうる、Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害化合物を含む。これらの化合物は、異常なＦｌｔ−３キナーゼ活性と関連する細胞増殖性障害を治療するために用いることができる。Ｆｌｔ−３活性が正常でない様々な造血新生物は、とりわけ、急性骨髄性白血病、Ｂ−前駆体細胞急性リンパ芽球性白血病、Ｔ−細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄異形成症候群、および慢性骨髄性白血病を包含する。Ｆｌｔ−３に関わるこれらおよび他のこのような障害は、Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３阻害化合物、例えば本明細書に記載されている２，４−ピリミジンジアミン化合物のメンバーで治療することができる。
【０００９】
他の態様において、これらの阻害化合物は、正常細胞を腫瘍細胞に形質転換するウイルス遺伝子によって媒介された腫瘍を治療するために用いることができる。これらの実施形態において、ウイルス癌遺伝子の活性がその形質転換メカニズムの一部としてＳｙｋキナーゼ機能を破壊する腫瘍は、治療のための標的とすることができる。このようにして、いくつかの実施形態において、ウイルス媒介腫瘍は、免疫受容体チロシン−ベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を有するタンパク質をコードする遺伝子を保有するウイルスによる感染と関連している。通常、これらの保存された配列は、免疫系細胞（例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、好中球など）の発達および機能の間にＳｙｋキナーゼ活性を調節する。しかしながら、ＩＴＡＭ配列を有するウイルスタンパク質の永続的な発現は、異常なＳｙｋキナーゼ活性および結果として生じる腫瘍形成および／または維持を生じうる。様々な実施形態において、ウイルス媒介腫瘍は、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、エプスタイン−バーウイルス、ヒトＴ−細胞リンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ−１）、または乳腺癌ウイルス（ＭＴＶ）と関連する場合がある。これらのウイルスの存在は、いくつかの細胞増殖性障害と相関関係がある。これは、カポジ肉腫、バーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、成人Ｔ細胞白血病、および乳癌のあるいくつかの形態を包含する。
【００１０】
いくつかの態様において、本開示は、腫瘍転移の阻害方法であって、腫瘍転移を阻害するのに有効な量のＳｙｋキナーゼ阻害化合物を被験体に投与することによる方法を提供する。転移の可能性があるいずれの腫瘍も、これらの阻害化合物で治療することができる。いくつかの実施形態において、腫瘍転移は、インテグリンの活性と関連している。これらは、細胞接着特性の調節においてＳｙｋキナーゼを通して作用しうる。例えば腫瘍細胞の転移において観察されるものである。Ｓｙｋキナーゼ阻害剤は、インテグリン、例えばβ１、β２、および／またはβ３インテグリンによって媒介された細胞シグナル伝達事象に影響を与えることによって、腫瘍転移を阻害するために用いることができる。
【００１１】
いくつかの態様において、これらの阻害化合物は、他の癌治療と組み合わせて用いることができる。いくつかの実施形態において、Ｓｙｋ阻害化合物は、他の化学療法薬と組み合わせて用いられる。これはとりわけ、代謝拮抗物質、アルキル化剤、配位化合物、転写阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ＤＮＡ副溝結合化合物、ビンカアルキロイド、抗腫瘍抗生物質、ホルモン、および抗腫瘍酵素を包含する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
（発明の詳細な説明）
６．１ 処理方法
本開示は、細胞増殖性障害の治療方法であって、ＳｙｋキナーゼまたはＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害化合物を投与することによる方法を提供する。Ｓｙｋキナーゼは、Ｓｙｋ族（ＳｙｋおよびＺＡＰ−７０）非受容体チロシンキナーゼの２つの公知メンバーの１つである。Ｓｙｋは、そのｓｒｃ相同体２（ＳＨ２）ドメインの免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）への結合の時に活性化される。Ｓｙｋキナーゼは、リンパ球の発達および免疫細胞の活性化において必須の役割を果たし、Ｂ細胞受容体シグナル伝達およびマスト細胞顆粒のＦｃ受容体媒介放出におけるその役割について最もよく特徴付けられている。Ｓｙｋは、造血細胞中に遍在的に発現されるが、他の組織、例えば乳房上皮細胞および肝細胞においても発現される。Ｓｙｋは腫瘍抑制剤であり、転移可能性の負の調節剤として作用することを、この分野において信じている人もいる。Ｓｙｋ活性の損失は、浸潤性乳癌の形成と関連していることが示唆され、Ｓｙｋ遺伝子の染色体消失が、原発性乳癌のリンパ節転移のあるいくつかの型において示されている。このようにして、細胞増殖性障害の治療のため、または腫瘍細胞の転移可能性を低下させるための治療としてのＳｙｋ阻害剤の使用は、Ｓｙｋが腫瘍抑制剤として機能する場合、禁忌であろう。
【００１３】
Ｆｌｔ−３はまた、チロシンキナーゼでもあるが、Ｓｙｋとは異なって、これはチロシンキナーゼ受容体タンパク質族に属する。Ｆｌｔ−３は、クラスＩＩＩ受容体チロシンキナーゼのメンバーであり、これらは、アミノ酸配列および構造特性によって関連付けられる。Ｆｌｔ−３は、その同族リガンドＦｌｔ−３Ｌへの結合によって活性化される。Ｆｌｔ−３キナーゼは、正常な骨髄の初期造血幹細胞中に発現され、様々な下流細胞標的の活性を制御することによって、多能幹細胞およびＢ細胞の発達において機能するように見える。これらは、とりわけ、ホスホリパーゼＣ−（ＰＬＣ）、ホスファチジルイノシトール３’−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）のｐ８５サブユニット、Ｓｈｃ、Ｓｈｐ−２、Ｓｈｉｐ、Ｇｒｂ２、Ｖａｖ、Ｆｙｎキナーゼ、Ｓｒｃキナーゼ、Ｓｔａｔ５情報伝達タンパク質、およびＥｒｋを包含する。Ｆｌｔ−３キナーゼは、骨髄中の神経前駆細胞中に正常に発現されるが、発現の高レベルはまた、血液細胞増殖性障害、例えば急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｂ−前駆体細胞急性リンパ芽球性白血病、Ｔ−細胞急性リンパ芽球性白血病、およびリンパ急性転化における慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の範囲内でも観察される（例えばＲｏｓｎｅｔら、１９９６，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １０：２３８−２４８；Ｃａｒｏｗら、１９９６，Ｂｌｏｏｄ ８７：１０８９−１０９６を参照されたい）。血液細胞増殖性障害におけるＦｌｔ−３突然変異の存在は、寛解率の減少、再発率の増加、および一般により低い全体の生存率と相関関係がある（Ｒｏｍｂｏｕｔｓら、２０００，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １４：６７５−６８３；Ｔｈｉｅｄｅら、２００２、Ｂｌｏｏｄ ９９：４３２６−４３３５；Ｆｒｏｈｌｉｎｇら、２００２，Ｂｌｏｏｄ １００：４３７２−４３８０）。
【００１４】
当業界は、Ｓｙｋが腫瘍抑制剤として作用しうることを示唆しているが、本開示は、Ｓｙｋがその仮定された役割とは反対の機能を果たすという指摘に基づいている。例えば、腫瘍細胞中のＳｙｋキナーゼの強制的発現は、腫瘍細胞の形質転換された表現型を逆転するようには見えない。対して、Ｓｙｋが細胞増殖を促進および／または維持する発癌能力において作用することが、本発明において示唆されている。Ｓｙｋの役割に関するこの観点で、本開示は、細胞増殖性障害の治療方法であって、細胞増殖性障害を治療するのに有効な量のＳｙｋキナーゼ阻害化合物を被験体に投与することによる方法を提供する。
【００１５】
さらには、いくつかのＳｙｋ阻害化合物、例えば下にさらに詳細に記載されている２，４−ピリミジンジアミン化合物のメンバーもまた、Ｆｌｔ−３キナーゼの阻害剤として作用しうることも、本明細書において示されている。その結果、いくつかの実施形態において、Ｆｌｔ−３キナーゼならびにＳｙｋキナーゼを阻害する、この二重または多作用阻害プロフィール（すなわちＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害活性）を有するＳｙｋ阻害化合物は、異常なＦｌｔ−３受容体キナーゼ活性と関連した細胞増殖性障害の治療のための用途を見出す。ＳｙｋキナーゼおよびＦｌｔ−３キナーゼの両方と、造血細胞の発達との組合せは、造血新生物の治療のための、このようなＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害化合物の使用を支持する。
【００１６】
本発明の方法の記載において、用いられている用語は、本明細書において特別に他の規定がなされていなければ、これらの通常かつ共通の意味を有する。
【００１７】
「Ｓｙｋ」または「Ｓｙｋキナーゼ」とは、Ｂ−細胞および他の造血細胞中に発現される７２ｋＤａ非受容体（細胞質）脾臓タンパク質チロシンキナーゼのことを言う。Ｓｙｋキナーゼは、リン酸化免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（「ＩＴＡＭ」）、「リンカー」ドメイン、および触媒ドメインへ結合する、縦列の２つのコンセンサスＳｒｃ−同族体２（ＳＨ２）ドメインを特徴とする（概論については、Ｓａｄａら、２００１，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（Ｔｏｋｙｏ）１３０：１７７−１８６、および同様にＴｕｒｎｅｒら、２０００，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ２１：１４８−１５４、およびＷｏｎｇら、２００４，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ １３（７）：７４３−６２を参照のこと）。Ｓｙｋキナーゼはまた、免疫受容体から通じている重要な経路、例えばＣａ２＋動員、およびマイトゲン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）カスケード、および脱顆粒を調節する、多重タンパク質のチロシンリン酸化にとっても重要である。Ｓｙｋキナーゼはまた、好中球中のインテグリンシグナル伝達においても重要な役割を果たす（例えばＭｏｃｓａｉら、２００２，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １６：５４７−５５８参照のこと）。Ｓｙｋキナーゼは、Ｓｙｋ族に属すると認識されているあらゆる動物種からのキナーゼを包含する。この動物種は、非限定的にホモサピエンス、サル、ウシ、ブタ、げっ歯類などを包含する。具体的には、自然発生および人工の両方のイソ型、スプライス変異体、対立変異体、突然変異体が含まれる。このようなＳｙｋキナーゼのアミノ酸配列は、ＧＥＮＢＡＮＫから入手しうる。ヒトＳｙｋキナーゼの異なるイソ型をコードするｍＲＮＡの具体例は、ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ｇｉｌ２１３６１５５２｜ｒｅｆ｜ＮＭ ００３１７７．２、ｇｉｌ４９６８９９｜ｅｍｂ｜Ｚ２９６３０．１｜ＨＳＳＹＫＰＴＫ［４９６８９９］、およびｇｉｌ５０３０２５８｜ｇｂ｜ＢＣ０１１３９９．１｜ＢＣ０１１３９９［１５０３０２５８］として入手可能であり、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。
【００１８】
「Ｆｌｔ−３」または「Ｆｌｔ−３受容体チロシンキナーゼ」とは、ｆｌｔ−３リガンド（Ｆｌｔ−３ＬまたはＦＬ）を結合する受容体チロシンキナーゼのことを言う。Ｆｌｔ−３はまた、Ｆｍｓ−様チロシンキナーゼ３、ＦＬＫ−２（胎児肝臓キナーゼ−２）およびＳＴＫ−１（ヒト幹細胞キナーゼ−１１）としても公知である（例えばＭａｔｈｅｗｓら、１９９１，Ｃｅｌｌ．６５：１１４３−１１５２；Ｒｏｓｎｅｔら、１９９１，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．６：１６４１−１６５０を参照されたい）。Ｆｌｔ−３は、クラスＩＩＩ受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫＩＩＩ）族のメンバーとの配列類似性を有し、これのサブセットは、とりわけ、ＦＭＳ、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、およびＫｉｔを包含する（Ｒｏｓｎｅｔら、１９９３，Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｏｎｃｏｇ．４：５９５−６１３）。マウスおよびヒトにおけるＦｌｔ−３ポリペプチドは、それぞれ１０００−および９９３−アミノ酸タンパク質であり、未成熟造血細胞、胎盤、生殖腺、および脳で発現されることが公知である。上記のように、Ｆｌｔ−３は、多能性幹細胞およびＢ細胞の発達において想定された役割を有する。クラスＩＩＩ受容体チロシンキナーゼの他のメンバーと同様に、Ｆｌｔ−３は、細胞外ドメイン、膜貫通（ＴＭ）ドメイン、近接膜（ＪＭ）ドメイン、キナーゼ挿入（ＫＩ）ドメインによって分離された２つの細胞内チロシンキナーゼ（ＴＫ１およびＴＫ２）ドメイン、およびＣ−末端ドメインにおける５免疫グロブリン様反復を特徴とする（Ａｇｎｅｓら、１９９４，Ｇｅｎｅ １４５：２８３−２８８；２００４，Ｇｒｉｆｆｉｔｈら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ １３：１６９−１７８）。Ｆｌｔ−３キナーゼは、Ｆｌｔ−３受容体族に属すると認識されている、非限定的にホモサピエンス、サル、ウシ、ブタ、げっ歯類などを包含するあらゆる動物種からのキナーゼを包含する。具体的には、自然発生および人工の両方のイソ型、スプライス変異体、対立変異体、突然変異体が含まれる。このようなＳｙｋキナーゼのアミノ酸配列は、ＧＥＮＢＡＮＫから入手しうる。異なるＦｌｔ−３キナーゼの核酸配列および対応アミノ酸配列の具体例は、とりわけ、ヒト（受入番号ＮＭ ００４１１９．１）、チンパンジー（受入番号４５２５０８；ＸＭ ５０９６０１．１；ＸＰ ５０９６０１．１）、イヌ（ＮＭ ００１０２０８１１．１；ＮＰ ００１０１８６４７．１）、およびマウス（受入番号１４２５５１；ＮＭ ０１０２２９．１１；ＮＰ ０３４３５９．１１；ＡＫ０４５８６５４；ＡＫ１４９２９２４；ＡＫ１６３６４０４；ＢＣ１０９００３４；ＢＣ１０９００４４；Ｌ３６１６３４；Ｍ６４６８９４；Ｘ５９３９８４）を包含し、これらは参照により本明細書に組み込まれる。
【００１９】
Ｆｌｔ−３変異体のいくつかの実施形態は、ある造血細胞増殖性障害と関連している。「Ｆｌｔ−３ ＩＴＤ」とは、近接膜（ＪＭ）ドメインに内部縦列重複（ＩＴＤ）を有するＦｌｔ−３の変異体のことを言う（Ｎａｋａｏら、１９９６，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １０：１９１１−１９１８；Ｇｒｉｆｆｉｔｈら、上記）。Ｆｌｔ−３ ＩＴＤにおいて重複されたＪＭドメインの数は被験体毎に異なるが、インフレームであり、一般に、異常な（すなわち増加した）チロシンキナーゼ活性を有するタンパク質を結果として生じる。Ｆｌｔ−３ ＩＴＤ型の変異体は、多くの場合、急性骨髄性白血病、および骨髄異形成症候群と関連している。変異体の別の型は、「Ｆｌｔ−３活性化ループ突然変異」であり、これは、第２チロシンキナーゼ（ＴＫ２）ドメインの活性化ループにアミノ酸配列変化（野生型と比較した場合）を有する変異体のことを言う。理論によって縛られるわけではないが、この活性化ループは、アデノシントリホスフェート（ＡＴＰ）および基質のキナーゼドメインへのアクセスを妨げることにおいて機能を果たすように見え、これによってキナーゼに対して阻害効果を与える。結果として、活性化ループ突然変異は、構成的活性を有するＦｌｔ−３キナーゼ形態を生じうる。例示的活性化ループ変異体は、Ｄ８３５Ａであり、これは、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、および急性リンパ芽球性白血病において観察される（Ｙａｍａｍｏｔｏら、２００１，Ｂｌｏｏｄ ９７：２４３４−２４３９；Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｊ．Ｄ．，２００１，Ｂｌｏｏｄ ９７：２１９３ａ）。ヒトにおける細胞増殖性障害と関連した他の例示的活性化ループ変形例は、とりわけ、Ｄ８３５Ｙ、Ｄ８３５Ａ、Ｄ８３５Ｅ、Ｄ８３５Ｈ、Ｄ８３５Ｎ、Ｄ８３５Ｖ、Ｄ８３５ｄｅｌ、およびＩ８３６ｄｅｌを包含していた。
【００２０】
「細胞増殖性障害」とは、細胞の正常でない増殖を特徴とする障害のことを言う。増殖性障害は、細胞成長率に関する制限を含まず、単に成長および細胞分裂に影響を与える正常な制御の損失を示すだけである。このようにして、いくつかの実施形態において、増殖性障害の細胞は、正常な細胞と同じ細胞分裂速度を有しうるが、このような成長を制限するシグナルに応答しない。「細胞増殖性障害」の領域内には、新生物または腫瘍があり、これは、組織の正常でない成長である。癌とは、周囲組織に侵入し、および／または新しいコロニー化部位へ転移する能力を有する細胞の増殖を特徴とする、様々な悪性新生物のいずれかのことを言う。
【００２１】
「造血新生物」とは、造血系統の細胞に起因する細胞増殖性障害のことを言う。一般に造血は、未分化細胞または幹細胞が、末梢血中に見られる様々な細胞として発達する生理学的プロセスである。発達の初期段階において、典型的には骨髄中に見られる造血幹細胞は、一連の細胞分裂を受け、２つの主な発達経路、すなわちリンパ系統および骨髄系統に責任を有する多能性前駆細胞を形成する。骨髄系統の委任前駆細胞は、赤血球、巨核球、および顆粒球／単球発達経路からなる、３つの主要なサブブランチに分化する。追加経路は、抗原提示に関与する樹状細胞の形成を生じる。赤血球系統は、赤血球細胞を生じ、一方、巨核球系統は、血小板を生じる。顆粒球／単球系統の委任細胞は、顆粒球または単球発達経路に分裂し、前者の経路は、好中球、好酸球、および好塩基球の形成を生じ、後者の経路は、血中単球およびマクロファージを生じる。
【００２２】
リンパ系統の委任前駆細胞は、発達してＢ細胞経路、Ｔ細胞経路、または非−Ｔ／Ｂ細胞経路になる。骨髄系統と同様に、追加のリンパ経路は、抗原提示に関与する樹状細胞を生じるように見える。Ｂ細胞前駆細胞は、発達して前駆体Ｂ細胞（プレ−Ｂ）になり、これは、免疫グロブリンの生産の原因となるＢ細胞に分化する。Ｔ細胞系統の前駆体細胞は、前駆体Ｔ細胞（プレ−Ｔ）に分化し、これらは、あるサイトカインの影響に基づき、発達して、細胞媒介免疫に関与する細胞毒性またはヘルパー／抑制剤Ｔ細胞になる。非−Ｔ／Ｂ細胞経路は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の発生を生じる。造血細胞の新生物は、造血のいずれの段階の細胞を含んでいてもよく、これは、造血幹細胞、多能性前駆細胞、オリゴ能性委任前駆細胞、前駆体細胞、および成熟分化細胞を包含する。造血新生物のカテゴリーは一般に、当業者によって使用されている説明および診断基準に従いうる（例えばＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｐｒｏｂｌｅｍｓ（ＩＣＤ １０）、Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（２００３）を参照されたい）。造血新生物はまた、分子特徴、例えば細胞表面マーカーおよび遺伝子発現プロフィール、異常細胞によって示される細胞表現型、および／またはある造血新生物に特徴的な染色体異常（例えば欠失、転座、挿入など）、例えば慢性骨髄性白血病に見られるフィラデルフィア染色体に基づいて特徴付けることもできる。他の分類は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｗｏｒｋｉｎｇ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ（Ｃａｎｃｅｒ，１９８２，４９：２１１２−２１３５）およびＲｅｖｉｓｅｄ Ｅｕｒｏｐｅａｎ−Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｌｙｍｐｈｏｍａ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＲＥＡＬ）を包含する。
【００２３】
「リンパ系の新生物」とは、造血のリンパ系統の細胞に関与する増殖性障害のことを言う。リンパ系の新生物は、造血幹細胞、ならびにリンパ委任前駆細胞、前駆体細胞、および最終分化細胞に起因しうる。これらの新生物は、異常細胞の表現型属性、または正常でない細胞が起因する分化状態に基づいて再分割されうる。再分割は、とりわけ、Ｂ細胞新生物、Ｔ細胞新生物、ＮＫ細胞新生物、およびホジキンリンパ腫を包含する。
【００２４】
「骨髄新生物」とは、造血の骨髄系統の細胞の増殖性障害のことを言う。新生物は、造血幹細胞、骨髄委任前駆細胞、前駆体細胞、および最終分化細胞に起因しうる。骨髄新生物は、異常細胞の表現型属性、または正常でない細胞が起因する分化状態に基づいて再分割されうる。再分割は、とりわけ、骨髄増殖性疾患、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、および急性二表現型白血病を包含する。
【００２５】
「ウイルス媒介腫瘍」とは、ウイルス感染、またはウイルスでコードされた産物の活性に関連した新生物または腫瘍のことを言う。新生物は、細胞ゲノム中に統合された潜伏ウイルスの存在に起因するか、またはウイルス関連遺伝子産物の活性に起因しうる。ウイルス感染は、インキュベーション期間が、腫瘍表現型の発達前に数ヶ月または数年に及びうるという点で、時間的に腫瘍形成と密接な相関関係があるとする必要はない。本発明における治療は、Ｓｙｋ阻害剤の使用を対象としているので、適用可能なウイルス関連腫瘍は、Ｓｙｋ活性のウイルス調節が、異常な細胞増殖と相関関係がある腫瘍である。Ｓｙｋの活性化がウイルス感染の結果である、ＲＮＡおよびＤＮＡウイルス、およびエピソーム的に存在するか、または細胞ゲノム中に統合されるウイルスを包含するあらゆるウイルスは、本発明の方法を用いて標的することができる。
【００２６】
「腫瘍転移」とは、腫瘍細胞が、元の腫瘍部位から移動して、他の組織中でコロニー化する能力のことを言う。広がった細胞から形成される腫瘍は、「二次性腫瘍」と呼ばれ、元の「原発性」腫瘍にあるものと同様な細胞を含有する。転移性腫瘍は典型的には、元の腫瘍部位から血液およびリンパ系を通って他の組織への腫瘍細胞の移動によって形成される。
【００２７】
「Ｓｙｋ媒介インテグリンシグナル伝達」とは、Ｓｙｋキナーゼとの相互作用を介して発生する、細胞表面インテグリンの情報伝達のことを言う。インテグリンは、細胞外マトリックスおよび細胞表面リガンドを結合する、細胞表面接着受容体の拡大された族を含む。構造的には、インテグリンは、αおよびβ鎖からなるヘテロダイマータンパク質であり、各々のサブユニットは、細胞外ドメイン、単一膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインを有する。αサブユニットは一般に、約７の縦列反復から構成され、反復のサブセットは、一般的構造ＤｘＤｘＤＧｘｘＤ（式中、ｘは、いずれかのアミノ酸である）の推定金属結合配列を含有する。インテグリンの２つのグループは、αサブユニットによって特徴付けることができる。すなわち、「Ａ」ドメインを含有するもの、およびタンパク質分解の切断部位を有するものである。βサブユニットは、細胞外ドメインに約２００アミノ酸の保存領域を含み、これは、αサブユニットの「Ａ」ドメインと構造的類似性を有する領域、およびラミニン中に見られるものと同様な、上皮成長因子（ＥＧＦ）様反復を有する別の領域を特徴とする（例えばＸｉｏｎｇら、２００３，Ｂｌｏｏｄ，１０２（４）：１１５５−１１５９）。インテグリン活性は、細胞内Ｓｙｋを調節しうるか、または逆に、インテグリン機能は、Ｓｙｋの活性を介して調節することができる。いくつかの例において、インテグリンは、その同族リガンドを結合するために、細胞内の活性化を必要とすることが、一般に理解されている（インサイドアウト活性化）。Ｓｙｋを調節するか、またはこれによって調節されるインテグリンは、とりわけ、β１−インテグリン（Ｌｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９５，２７０（２７）：１６１８９−９７）、例えばα２ｂ１（Ｋｅｅｌｙら、１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（４３）：２６６６８−７６）、β２−インテグリン、およびβ３−インテグリン（Ｗｏｏｄｓｉｄｅら、２００１，Ｃｕｒｒ Ｂｉｏｌ．１１（２２）：１７９９−８０４）、例えばαＩＩｂβ３（Ｃｌａｒｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９４、２６９（４６）：２８８５９−６４）を包含する。例えば、Ｓｙｋは、インテグリンβ３細胞質尾へ、ＳＨ２ドメインを通って直接結合すると考えられている。しかしながら、ＩＴＡＭへ結合するＳｙｋとは異なり、β３インテグリンとの相互作用は、縦列ＳＨ２ドメインのホスホチロシン結合機能とは独立して現われる。
【００２８】
一般に、本明細書において開示されている化合物で治療可能な細胞増殖性障害は、異常な細胞増殖を特徴とするあらゆる障害に関する。これらは、良性または悪性、転移性または非転移性の様々な腫瘍および癌を包含する。癌の具体的な特性、例えば組織浸潤性または転移は、本明細書に記載された方法を用いて標的することができる。細胞増殖性障害は、多様な癌を包含し、これは、とりわけ、乳癌、卵巣癌、腎性癌（ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、胃腸癌、腎臓癌、膀胱癌、膵臓癌、肺扁平癌（ｌｕｎｇ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、および腺癌を包含する。
【００２９】
いくつかの実施形態において、治療された細胞増殖性障害は造血新生物であり、これは、造血系の細胞の異常成長である。造血悪性腫瘍は、造血に関与する多能性幹細胞、多能性前駆細胞、オリゴ能性委任前駆細胞、前駆体細胞、および最終分化細胞にその起源を有しうる。いくつかの血液悪性腫瘍は、自己更新能力を有する造血幹細胞に起因すると考えられている。例えば、移植の際に急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の特定の亜類型を発達させうる細胞は、造血幹細胞の細胞表面マーカーを示し、このことは、造血幹細胞を白血病細胞源としての関与を示唆する。造血幹細胞に特徴的な細胞マーカーを有しない芽細胞は、移植の際に腫瘍を定着させることができないように見える（Ｂｌａｉｒｅら、１９９７，Ｂｌｏｏｄ ８９：３１０４−３１１２）。ある血液悪性腫瘍の幹細胞起源はまた、特定の型の白血病に関連した特定の染色体異常が、造血系統の正常な細胞ならびに白血病芽細胞中に見られるという観察事項においても裏付けが得られる。例えば慢性骨髄性白血病の約９５％に関連する相互転座ｔ（９ｑ３４：２２ｑ１１）は、骨髄、赤血球、およびリンパ系統の細胞中に存在するようであり、このことは、この染色体異常が、造血幹細胞に由来することを示唆している。ＣＭＬのあるいくつかの型における細胞のサブグループは、造血幹細胞の細胞マーカー表現型を示す。
【００３０】
造血新生物は、多くの場合幹細胞に由来するが、委任前駆細胞、または発達系統のより多くの最終分化細胞もまた、いくつかの白血病源でありうる。例えば、共通の骨髄前駆体または顆粒球／マクロファージ前駆体細胞における（慢性骨髄性白血病に関連する）融合タンパク質Ｂｃｒ／Ａｂｌの強制発現は、白血病様状態を生成する。さらには、白血病の亜類型と関連したいくつかの染色体異常は、造血幹細胞のマーカー表現型を有する細胞集団では見られないが、造血経路のより分化した状態のマーカーを示す細胞集団では見られる（Ｔｕｒｈａｎら、１９９５，Ｂｌｏｏｄ ８５：２１５４−２１６１）。このようにして、委任前駆体細胞および他の分化細胞は、細胞分裂に対して限定した可能性しか有しないが、白血病細胞は、未調節で成長する能力を獲得している場合があり、いくつかの場合には、造血幹細胞の自己更新特徴を模倣する（Ｐａｓｓｅｇｕｅら、Ｐｒｏｃ，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００３，１００：１１８４２−９）。
【００３１】
いくつかの実施形態において、治療された造血新生物は、リンパ系の新生物であり、正常でない細胞は、リンパ系統の細胞の特徴的表現型に由来し、および／またはこれを示す。リンパ系の新生物は、Ｂ−細胞新生物、ＴおよびＮＫ−細胞新生物、およびホジキンリンパ腫に再分割されうる。Ｂ−細胞新生物はさらに、前駆体Ｂ−細胞新生物および成熟／末梢Ｂ−細胞新生物に再分割されうる。例示的Ｂ−細胞新生物は、前駆体Ｂ−リンパ芽球性白血病／リンパ腫（前駆体Ｂ−細胞急性リンパ芽球性白血病）であるが、例示的成熟／末梢Ｂ−細胞新生物は、Ｂ−細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、Ｂ−細胞前リンパ球性白血病、リンパ芽球性リンパ腫、脾臓辺縁帯域Ｂ−細胞リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、形質細胞性骨髄腫／形質細胞腫、ＭＡＬＴ型の節外性辺縁帯域Ｂ−細胞リンパ腫、節性辺縁帯域Ｂ−細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、外套細胞リンパ腫、びまん性大Ｂ−細胞リンパ腫、縦隔大Ｂ−細胞リンパ腫、原発性浸出リンパ腫、およびバーキットリンパ腫／バーキット細胞白血病である。Ｔ−細胞およびＮＫ−細胞新生物はさらに、前駆体Ｔ−細胞新生物および成熟（末梢）Ｔ−細胞新生物に再分割される。例示的前駆体Ｔ−細胞新生物は、前駆体Ｔ−リンパ芽球性リンパ腫／白血病（前駆体Ｔ−細胞急性リンパ芽球性白血病）であり、一方、例示的成熟（末梢）Ｔ−細胞新生物は、Ｔ−細胞前リンパ球性白血病、Ｔ−細胞顆粒リンパ球性白血病、攻撃性ＮＫ−細胞白血病、成人Ｔ−細胞リンパ腫／白血病（ＨＴＬＶ−１）、節外性ＮＫ／Ｔ−細胞リンパ腫、鼻腔型、腸疾患型Ｔ−細胞リンパ腫、肝脾γ−δＴ−細胞リンパ腫、皮下脂肪組織炎様Ｔ−細胞リンパ腫、真菌症菌状腫／セザリー症候群、未分化大細胞リンパ腫、Ｔ／ヌル細胞、原発性皮膚型、末梢Ｔ−細胞リンパ腫、他に特徴決定されていない、血管免疫芽球性Ｔ−細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、Ｔ／ヌル細胞、原発性全身型である。リンパ系の新生物の第３のメンバーは、ホジキン病とも呼ばれるホジキンリンパ腫である。これらの化合物で治療することができる、この種類の例示的診断は、とりわけ、結節性リンパ球優勢ホジキンリンパ腫、およびホジキン病の様々な従来の型を包含し、これらの例示的メンバーは、結節性硬化症ホジキンリンパ腫（グレード１および２）、リンパ球リッチな従来のホジキンリンパ腫、混合細胞質ホジキンリンパ腫、およびリンパ球枯渇ホジキンリンパ腫である。様々な実施形態において、異常なＳｙｋ活性と関連するリンパ系の新生物のどれも、Ｓｙｋ阻害化合物で治療することができる。
【００３２】
いくつかの実施形態において、治療される造血新生物は骨髄新生物である。このグループは、骨髄系統の細胞の特徴的表現型に関与するか、またはこれを示す細胞増殖性障害の大きなクラスを含む。骨髄新生物は、骨髄増殖性疾患、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄異形成症候群、および急性骨髄性白血病に再分割されうる。例示的骨髄増殖性疾患は、慢性骨髄性白血病（例えばフィラデルフィア染色体陽性（ｔ（９；２２）（ｑｑ３４；ｑ１１））、慢性好中球性白血病、慢性好酸球性白血病／高好酸球性症候群、慢性突発性骨髄線維症、真性赤血球増加症、および本態性血小板血症である。例示的骨髄異形成／骨髄増殖性疾患は、慢性骨髄単球性白血病、非定型慢性骨髄性白血病、および若年性骨髄単球性白血病である。例示的骨髄異形成症候群は、環状鉄芽球をともなう、および環状鉄芽球をともなわない不応性貧血、多系統異形成をともなう不応性血球減少（骨髄異形成症候群）、過剰な芽をともなう不応性貧血（骨髄異形成症候群）、５ｑ−症候群、およびｔ（９；１２）（ｑ２２；ｐ１２）をともなう骨髄異形成症候群である（ＴＥＬ−Ｓｙｋ融合；例えばＫｕｎｏら、２００１，Ｂｌｏｏｄ ９７：１０５０を参照されたい）。様々な実施形態において、異常なＳｙｋ活性と関連した骨髄新生物のどれも、Ｓｙｋ阻害化合物で治療することができる。
【００３３】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋ阻害化合物は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を治療するために用いることができる。これは、障害のそれ自体の下位区分を有する骨髄新生物の大きなクラスを代表する。これらの下位区分は、とりわけ、再発性細胞遺伝転座を有するＡＭＬ、多系統異形成を有するＡＭＬ、および他のカテゴリーに入れられない他のＡＭＬを包含する。再発性細胞遺伝転座を有する例示的ＡＭＬは、とりわけ、ｔ（８；２１）（ｑ２２；ｑ２２）をともなうＡＭＬ、ＡＭＬ１（ＣＢＦ−α）／ＥＴＯ、急性前骨髄性白血病（ｔ（１５；１７）（ｑ２２；ｑ１１−１２）をともなうＡＭＬ、および変異体ＰＭＬ／ＲＡＲ−α）、正常でない骨髄好酸球（ｉｎｖ（１６）（ｐ１３ｑ２２）またはｔ（１６；１６）（ｐ１３：ｑ１１）、ＣＢＦｂ／ＭＹＨ１１Ｘ）をともなうＡＭＬ、および１１ｑ２３（ＭＬＬ）異常をともなうＡＭＬを包含する。多系統異形成をともなう例示的ＡＭＬは、以前の骨髄異形成症候群に関連するか、または関連しないものである。いずれかの規定可能なグループ中に分類されない他の急性骨髄性白血病は、最小限に分化されたＡＭＬ、成熟をともなわないＡＭＬ、成熟をともなうＡＭＬ、急性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、急性赤血球白血病、急性巨核球性白血病、急性好塩基性白血病、および骨髄線維症をともなう急性汎骨髄症を包含する。
【００３４】
他の態様において、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤で標的することができる細胞増殖性障害は、ウイルス媒介腫瘍を含む。これらは、正常細胞を腫瘍細胞に形質転換させる能力を有する発癌ウイルスによる細胞の感染に起因しうる。ウイルス感染率は、細胞形質転換の実際の発生数をはるかに超えるので、ウイルス媒介形質転換は一般に、他の細胞因子とともに作用して、形質転換腫瘍細胞を発生させる。このようにして、ウイルス媒介腫瘍は、このウイルスが細胞増殖性障害の唯一の原因物質であることを必要としないが、むしろウイルス感染またはウイルスの永続的な存在が、腫瘍の発生と関連していることを必要とする。一般に、原因物質がウイルスである腫瘍は典型的には、限定数のウイルス遺伝子の継続的な発現を有し、ウイルス性のこれらの癌遺伝子は、ウイルス感染の一部として、またはこのウイルスの永続を通して発現され、正常な細胞遺伝子発現および情報伝達経路を破壊する。理論によって縛られるわけではないが、細胞形質転換に関与するウイルス癌遺伝子は、４つの主な細胞プロセスを破壊するように見える：すなわち、成長因子および細胞外マトリックスと相互作用する細胞表面受容体、膜貫通型シグナル伝達ネットワーク、細胞質ゾル要素、例えば可溶性タンパク質および第２のメッセンジャー、および遺伝子調節および複製において直接的および間接的に機能するＤＮＡ結合タンパク質および因子を包含する核タンパク質である。あるウイルスでコードされたタンパク質は、形質転換プロセスの一部として特定の細胞成分を標的するので、Ｓｙｋ阻害剤の適用は、ウイルス成分がＳｙｋキナーゼの活性を標的する場合に適切でありうる。
【００３５】
いくつかの実施形態において、本明細書において開示されている化合物で治療可能なウイルス媒介腫瘍は、Ｓｙｋ活性を調節しうる免疫受容体チロシン−ベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）をコードするいずれかのウイルスと関連している。このモチーフは、上記のように、非受容体チロシンキナーゼと相互作用し、これを活性化することによって機能する保存アミノ酸配列モチーフのことを言う。ＩＴＡＭモチーフは、とりわけ、ＦｃεＲＩのβおよびγ鎖、Ｔ細胞受容体のεサブユニット、および免疫グロブリンβ（Ｉｇβ）、およびＢ細胞受容体のＩｇα中に見られる。規範的配列モチーフは典型的には、Ｙｘｘ（Ｌ／Ｉ）ｘ６−８Ｙｘｘ（Ｌ／Ｉ）（式中、ｘはいずれかのアミノ酸を表わす）である。一般に、このモチーフ中のチロシン残渣は、ＩＴＡＭシグナル伝達に関与し、キナーゼのＳｒｃ族によるリン酸化のための基質である。ＩＴＡＭのリン酸化形態は、シグナル伝達タンパク質、例えばＳｙｋ／ＺＡＰ−７０キナーゼを含有するＳＨ２（ｓｒｃ同族体ドメイン）のための相互作用部位として機能する。多様な細胞の細胞表面分子中のその存在に加えて、ＩＴＡＭ配列は、ウイルスでコードされたタンパク質中に同定されている。癌遺伝子としてのＳｙｋキナーゼの機能を指摘している本明細書の記載に鑑みて、ＩＴＡＭ配列を有するタンパク質をコードする遺伝子を保有するウイルスと関連した腫瘍は、Ｓｙｋ阻害化合物で治療することができる。
【００３６】
したがって、いくつかの実施形態において、これらの阻害化合物で治療可能なウイルス媒介腫瘍は、カポジ肉腫（ＫＳ）関連ヘルペスウイルス、カポジ肉腫に関わるリンパ栄養ウイルス、ＨＩＶ感染集団の中でより高い発生率で発見される稀な悪性腫瘍と関連している。ＫＳ関連ヘルペスウイルスは、免疫受容体チロシン−ベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）様配列を有する、ＫＩと呼ばれている膜貫通型タンパク質をコードする。ＫＩ遺伝子産物は、Ｓｙｋおよびその関連キナーゼＺａｐ−７０を活性化するために、そのシステインリッチなエクトドメインを通して構成的に作用すると考えられる（Ｌａｇｕｎｏｆｆ，Ｍ．ら、１９９９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９６（１０）：５７０４−５７０９）。本発明の方法のさらなる裏付けとして、ＫＩ遺伝子を有するトランスジェニックマウスは、感染動物においてある肉腫およびリンパ種の発生率を増加させるように見え、このことは、腫瘍形成におけるＫＩ活性についての役割を示している（Ｐｒａｋａｓｈら、２００２，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．９４：９２６−３５）。
【００３７】
いくつかの実施形態において、ウイルス媒介腫瘍は、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）と関連している。エプスタイン−バーウイルスは、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ族のメンバーであり、これは、一次感染後、中咽頭の上皮細胞において複製され、再循環Ｂリンパ球を感染させる。感染は、腺熱としても公知の急性感染性単球増加症を生じうる。感染性単球増加症は、一時的免疫抑制、および大部分がＣＤ８＋Ｔ細胞である異常なリンパ球の拡張を特徴とする良性のリンパ増殖性疾病である。これらのＴ細胞において、ＥＢＶは、潜在的であるが永続性の感染を樹立し、感染の間、精選された組のウイルス遺伝子が発現される。ゲノム全体が、エピソームＤＮＡとして増殖するリンパ球中に存続しうる。ＥＢＶ感染は、バーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、および成人Ｔ細胞白血病と関連している。
【００３８】
ＥＢＶゲノムによってコードされたＬＭＰ２Ａタンパク質は、感染後のＥＢＶウイルスの潜伏の維持においてある役割を果たすと考えられている膜貫通型タンパク質である。これは、延長アミノ末端尾、１２膜スパンのドメイン、および細胞質ドメインからなる。アミノ末端領域は、ＩＴＡＭモチーフを含有し、これは、ＬＭＰ２ＡとＳｙｋキナーゼとの相互作用を可能にする（Ｆｒｕｅｈｌｉｎｇら、１９９７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２３５：２４１−２５１）。ＬＭＰ２Ａは、Ｂ−細胞生存を促進し、潜伏を維持するために、リンパ細胞中のＳｙｋキナーゼを調節するように見える。Ｓｙｋは、他のシグナル伝達経路、例えばＰＩ−３Ｋ、ＢＬＮＫ、およびホスホリパーゼγ２を調節する情報伝達経路において重要な役割を果たし、リンパ細胞生存の強化に関与しているので、ＬＭＰ２Ａタンパク質、または他のウイルス媒介エフェクターを通した不適切なＳｙｋ活性化は、異常なリンパ増殖の誘発においてある役割を果たすことがある（Ｃａｌｄｗｅｌｌら、２０００，Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７４（１９）：９１１５；Ｃａｌｄｗｅｌｌら、１９９８，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ９：４０５）。このようにして、Ｓｙｋ活性の阻害は、ＥＢＶウイルス感染と関連した細胞増殖性障害に対して治療効果を与えうる。
【００３９】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋ阻害剤で治療されることになるウイルス媒介腫瘍は、ヒトＴ−細胞リンパ球性ウイルス（ＨＴＬＶ−１ウイルス）、エイズウイルスＨＩＶ−１と同じ種類のウイルス中のレトロウイルスと関連している。ＣＤ８＋Ｔ−細胞は、ウイルスリザーバとしても機能しうるが、このウイルスは、ＣＤ４＋Ｔ−細胞に対しても親和性である。ＨＴＬＶ−１感染は、とりわけ、成人Ｔ−細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬＬ）、およびいくつかの他のリンパ球障害と関連している。ＨＴＬＶ−１感染の間、Ｓｙｋは感染細胞中に発現され、一方、Ｓｙｋ関連キナーゼＺＡＰ−７０の発現は存在しない（Ｗｅｉｌら、１９９９，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７３（５）：３７０９−１７）。Ｓｙｋを包含するいくつかのキナーゼの制御不良は、成人Ｔ−細胞白血病のＨＴＬＶ−１媒介誘発に関わっている。
【００４０】
いくつかの実施形態において、ウイルス媒介腫瘍は、乳癌ウイルス（ＭＴＶ）と関連している。ＩＴＡＭ配列は、ネズミ乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）、すなわちマウスの乳癌の病因的作用物質として同定されたＢ型レトロウイルスのＥｎｖ遺伝子の中に見出される。ＭＭＴＶ Ｅｎｖ遺伝子でトランスフェクションされたマウス乳房上皮細胞は、形質転換表現型の特性、例えば軟寒天中のコロニー形成、および基底膜調製物中への侵入力を示す（Ｋａｔｚら、２００５，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２０１（３）：４３１−９）。ネズミ乳癌ウイルス様配列はまた、ヒト癌、例えば乳癌およびＴ細胞リンパ腫中にも存在し（Ｗａｎｇら、２０００，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６：１２７３−１２７８）、腫瘍形成と相関関係があるが、その理由は、これらの配列が、正常な乳房組織の大部分において観察されないからである。このようにして、ＭＴＶと関連した腫瘍は、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤で治療することができる。
【００４１】
ウイルス媒介腫瘍の治療のためのＳｙｋ阻害化合物の使用は、先に特定されたウイルスと関連した腫瘍に限定されないと理解すべきである。記載されているように、Ｓｙｋが、その発癌性メカニズムの一部として活性化される発癌性ウイルスと関連したあらゆる腫瘍は、これがＩＴＡＭ配列をともなっていてもいなくても、Ｓｙｋ阻害化合物を用いて標的することができる。
【００４２】
いくつかの実施形態において、これらの阻害剤で標的することができる細胞増殖性障害は、異常なＦｌｔ−３キナーゼ活性と関連した細胞増殖性障害を含む。「異常なＦｌｔ−３キナーゼ活性」という用語は、次のものから見て正常でない活性のことを言う。すなわち、Ｆｌｔ−３キナーゼ活性の正常レベルが、野生型Ｆｌｔ−３キナーゼについてはどんなものであろうか、または正常なＦｌｔ−３発現細胞、組織、器官、または有機体中においてはどんなものであろうかという観点からである。異常なＦｌｔ−３キナーゼ活性は、タンパク質の誤った局在化（空間発現）、（直接的または間接的）酵素の活性の増加または減少、または一時的発現の変化（すなわち発達発現）に起因しうる。
【００４３】
いくつかの実施形態において、異常なキナーゼ活性は、Ｆｌｔ−３の変異体と関連している。いくつかの実施形態において、これらの変異体は、増加したＦｌｔ−３受容体キナーゼ活性を特徴とする。本明細書において用いられているように、「増加したキナーゼ活性」とは、野生型Ｆｌｔ−３キナーゼについて、または正常なＦｌｔ−３発現細胞、組織、器官、または有機体において観察されるものよりも高いキナーゼ活性のことを言う。例示的な増加したキナーゼ活性は、あるＦｌｔ−３変異体、例えばＦｌｔ−３ ＩＴＤ、およびＦｌｔ−３活性化ループ突然変異を有する細胞中に見出される。
【００４４】
異常なＦｌｔ−３キナーゼ活性は、造血新生物の多くの異なる型の中に観察されるので、いくつかの実施形態において、Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３阻害化合物は、異常なＦｌｔ−３キナーゼの存在を特徴とする造血新生物を治療するために用いることができる。このようにして、いくつかの実施形態において、Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３阻害化合物で治療可能な造血新生物は、とりわけ、急性骨髄性白血病、Ｂ−前駆体細胞急性リンパ芽球性白血病、Ｔ−細胞急性リンパ芽球性白血病、および被験体において異常なＦｌｔ−３の存在が診断されているか、または疑われている慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を包含しうる。しかしながら、当業者は、このような情報がなくてもこれらの治療を適用しうること、およびこれらの阻害化合物が、生存率の確率を高めるために予防的に与えることができることを理解すべきである。さらに当業者は、異常なＦｌｔ−３キナーゼ活性が検出されているか、または疑われている他の細胞増殖性障害へ、本明細書におけるＳｙｋ／Ｆｌｔ−３阻害化合物を適用することができる。
【００４５】
他の態様において、本開示は、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤の使用による、腫瘍転移の治療を対象とする。転移は、腫瘍細胞が、その起源部位から脱離し、ついで広がって他の部位でコロニー化する、悪性腫瘍細胞の特徴である。これらの二次性腫瘍は、腫瘍細胞が由来する細胞と関連しない組織中に形成されうる。癌の悪性形態からの死亡率の主要原因であるように見えるのは、転移によるこれらの二次性腫瘍の形成である。転移は、悪性細胞が原発腫瘍から離脱し、血液またはリンパ系に入り、ついで他のコロニー化部位へ移動する時に始まる。一般に正常細胞は、異種細胞が互いに接着するのを阻害する様々なシグナル、ならびに細胞成長を阻害する細胞間のシグナルによって脱離せず、かつ他の組織に侵入しない。しかしながら細胞形質転換は、腫瘍細胞が局部的組織細胞と相互作用して、局部的細胞外マトリックスを修飾し、移動を刺激し、増殖および生存を促進するように、これらの正常な調節プログラムを改変する。細胞接着分子（ＣＡＭ）、例えば免疫グロブリンおよびカルシウム依存性カドへリン族およびインテグリンのメンバーの改変は、侵入および転移において重要な役割を果たすように見える。例えば、接着性の高いイソ型から接着性の低い型へのＮ−ＣＡＭの改変は、そのダウンレギュレーションとともに、浸潤性膵臓癌を生じることがある。
【００４６】
組織侵入および転移に関わる別のクラスの接着性タンパク質は、インテグリンである。上に記載されているように、インテグリンは、多様なクラスの細胞表面分子を形成する。２２超のインテグリン亜類型の範囲内の順列もまた、異なる細胞シグナル伝達状態または変わりつつある外部環境に応答して細胞の相互作用を変更するための柔軟系を作成することができる。インテグリンは、インテグリンの活性化状態に応じて、細胞外リガンドと動的に相互作用する。これは、インテグリン親和性および結合活性を修飾する細胞内シグナルによって制御される（すなわちインサイドアウトシグナル伝達）。逆に、インテグリンと細胞外リガンドとの相互作用は、細胞接着特性、および変わりつつある細胞外環境への細胞応答に影響を与える情報伝達カスケードを始動させうる（すなわちアウトサイドインシグナル伝達）。インテグリンサブユニットの発現における変更は、浸潤性および転移性成長を誘発または阻害し、このことは、これらのタンパク質をこれらのプロセスの重要な決定因としての関与を示唆する（Ｇｕｏら、２００４，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．５（１０）：８１６−２６；Ｊｉｎら、２００４，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，９０：５６１−５６５）。例えば、インテグリンαｖβ３が、脈管形成に必要とされ、そのアップレギュレーションは、腫瘍浸潤性および転移可能性と相関関係がある（Ｌｉａｐｉｓら、１９９６，Ｄｉａｇ．Ｍｏｌ．Ｐａｔｈｏｌ．２３：１２７−１３５）。培養された転移乳癌細胞は、αｖβ３の構成的発現を示し（Ｐｅｃｈｅｕｒら、２００２，ＦＡＳＥＢ Ｊ．１６：１２６６−１２６８）、一方、例えば、インテグリンとその天然基質との結合のために競合するＲＧＤペプチド類似剤の使用による、インテグリン活性を含有するαｖサブユニットの阻害は、細胞増殖特性に影響を与えることなく、腫瘍の転移可能性を減少させうる（Ｋｒｉｎｓｔｅｎら、２００４，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ２１（２）：１２９−３８；Ｈａｒｍｓら、２００４，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ２１（２）：１１９−２８）。同様に、β１インテグリンの過剰発現は、細胞を基底膜へ付着させたままにする機能を果たす接着性接合部を破壊する場合がある。
【００４７】
Ｓｙｋキナーゼ活性は、造血系統の細胞上で発現するが、同様に非造血細胞中でも発現する様々なインテグリンと関連している。Ｓｙｋキナーゼは、肺上皮細胞（Ｕｌａｎｏｖａら、２００４，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８８：Ｌ４９７−Ｌ５０７）および単球（Ｌｉｎら、１９９５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０（２７）：１６１８９−９７）のβ１インテグリンシグナル伝達、顆粒球／好中球中のβ２インテグリンシグナル伝達（Ｍｉｕｒａら、２０００，Ｂｌｏｏｄ ９６（５）：１７３３−９；Ｋｕｓｕｍｏｔｏら、２００１，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５（３）：２４１−８）、および血小板活性化および細胞接着におけるβ３インテグリンシグナル伝達（Ｇａｏら、１９９７，ＥＭＢＯ Ｊ．１６（２１）：６４１４−２５）に関わっている。Ｓｙｋキナーゼ活性と腫瘍形成との間に、本発明において示されている関係があるとすれば、腫瘍の浸潤性および転移特性の軽減におけるＳｙｋキナーゼ阻害剤の使用は、Ｓｙｋキナーゼ活性とあるいくつかのインテグリンとの間の連結を通して示される（Ｍｏｃｓａｉら、２００２，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １６（４）：５４７−５８）。このようにして、いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼの阻害剤は、インテグリン活性によって媒介された腫瘍の転移特性を調節するために用いることができる。いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤は、腫瘍細胞組織の浸潤性、およびβ１インテグリンによって影響される転移可能性を軽減するために用いることができる（Ｌｉｎら、１９９５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１６１８９−１６１９７；Ｋｕｓｕｍｏｔｏら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１，４５（３）：２４１−８；Ｏｒｔｉｚ−Ｓｔｅｒｎら、２００５，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ．（Ｅｐｕｂ））。この型の例示的インテグリンは、インテグリンα２ｂ１である。
【００４８】
いくつかの実施形態において、これらのＳｙｋキナーゼ阻害剤は、腫瘍細胞組織浸潤性、およびβ２インテグリン（ＣＤ１８）の活性によって影響された転移可能性を軽減するために用いることができる（Ｗｉｌｌｅｋｅら、２００３，Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．７４（２）：２６０−９）。これらは、とりわけ、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８、ＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８、およびＣＤ１１ｄ／ＣＤ１８を包含する。さらなる実施形態において、これらのＳｙｋキナーゼ阻害剤は、腫瘍細胞組織浸潤性、およびβ３インテグリンの活性によって影響された転移可能性を軽減するために用いることができる。この型の例示的インテグリンは、αＩＩｂβ３およびαｖβ３である。
【００４９】
転移が可能な様々な腫瘍型は、これらのＳｙｋ阻害化合物で治療することができる。このような腫瘍は、例として非限定的に、乳癌、卵巣癌、腎性癌、胃腸癌、腎臓癌、膀胱癌、膵臓癌、肺扁平癌、および腺癌を包含する（例えば、Ｆｅｌｄｉｎｇ−Ｈａｂｅｒｍａｎｎら、２００１，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９８（４）：１８５３−８を参照されたい）。定着腫瘍の転移を軽減するための治療的処理は、転移の診断に従うことができる。転移の診断がなされなかったならば、この阻害化合物は、転移の確率を減少させるために予防的に投与することができる。
【００５０】
これらのＳｙｋ阻害化合物は、他のどの治療からも独立して用いることができるか、または外科手術、放射線使用、または他の化学療法を包含する他の癌治療法と組み合わせて用いることができると理解すべきである。したがって、いくつかの実施形態において、これらのＳｙｋキナーゼ阻害剤は、他の化学療法薬と組み合わせて用いることができる。Ｓｙｋ阻害剤との組み合わせ治療は、第２の化学療法薬の適切な選択によって、異なる細胞成分を標的しうる。例えば、Ｓｙｋ阻害剤は、いくつかの実施形態において、腫瘍細胞の転移可能性を制限するために用いることができ、一方で、別の化学療法薬は、異常な細胞を除去または死滅させるために用いることができる。
【００５１】
様々な化学療法薬が、細胞増殖性障害を治療するために、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤と組み合わせて用いることができる。これらの化学療法薬は、一般的な細胞毒性薬であってもよく、または特定の細胞分子を標的してもよい。様々なクラスの癌化学療法薬は、とりわけ、代謝拮抗薬、ＤＮＡと反応する作用物質（例えばアルキル化剤、配位化合物など）、転写酵素の阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ＤＮＡ副溝結合化合物、抗有糸分裂薬（例えばビンカアルキロイド）、抗腫瘍抗生物質、ホルモン、および酵素を包含する。例示的アルキル化剤は、例として非限定的に、メクロロタミン、シクロホスファミド、イフォスファミド、メルファラン、クロラムブシル、エチレンイミン、メチルメラミン、アルキルスルホネート（例えばブスルファン）、およびカルムスチンを包含する。例示的代謝拮抗薬は、例として非限定的に、葉酸類似体メトトレキセート；ピリミジン類似体フルオロウラシル、シトシンアラビノシド；およびプリン類似体メカプトプリン、チオグアニン、およびアザチオプリンを包含する。例示的ビンカアルキロイドは、例として非限定的に、ビンブラスシン、ビンクリスチン、パクリタキセル、およびコルシシンを包含する。例示的抗腫瘍抗生物質は、例として非限定的に、アクチノマイシンＤ、ダウノルビシン、およびブレオマイシンを包含する。抗新生物薬として効果的な例示的酵素は、Ｌ−アスパラギナーゼである。例示的配位化合物は、例として非限定的に、シスプラチンおよびカルボプラチンを包含する。例示的ホルモンおよびホルモン関連化合物は、例として非限定的に、アドレノコルチコステロイドプレドニゾン、およびデキサメタゾン；アロマターゼ阻害剤アミノグルテチミド、ホルメスタン、およびアナストロゾール；プロゲスチン化合物ヒドロキシプロゲステロンカプロエート、メドロキシプロゲステロン；および抗エストロゲン化合物タモキシフェンを包含する。例示的トポイソメラーゼ阻害剤は、例として非限定的に、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）；ミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン、およびカンプトセシンを包含する。
【００５２】
これらの抗癌化合物および他の有用な抗癌化合物は、Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ，１３ｔｈ Ｅｄ．（Ｏ’Ｎｅｉｌ，Ｍ．Ｊ．ら、ｅｄ）Ｍｅｒｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ（２００１）、およびＧｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｈａｒｄｍａｎ，Ｊ．Ｇ．、およびＬｉｍｂｉｒｄ，Ｌ．Ｅ．ｅｄｓ．ｐｇ．１３８１−１２８７，ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ，（１９９６）に記載されている。これらの文献のどちらも、参照により本明細書に組み込まれる。
【００５３】
Ｓｙｋ阻害剤と組み合わせて有用な他の抗増殖性化合物は、例として非限定的に、成長因子受容体に対して向けられた抗体（例えば抗−Ｈｅｒ２）；サイトカイン、例えばインターフェロン−αおよびインターフェロン−γ、インターロイキン−２、およびＧＭ−ＣＳＦ；および細胞表面マーカー用抗体（例えば抗−ＣＴＬＡ−４、抗−ＣＤ２０（リチュキシマブ）；抗−ＣＤ３３）を包含する。細胞表面マーカーに対する抗体が用いられるとき、化学療法薬は、腫瘍細胞への特異的標的のためにこれへ共役することができる。適切な共役体は、放射性化合物（例えば抗体共役キレート剤へ結合された放射性金属）、細胞毒性化合物、および薬品活性化酵素（例えばアリナーゼ、ペプチダーゼ、エステラーゼ、触媒抗体など）を包含する（例えば、Ａｒｄｉｔｔｉら、２００５，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐ．４（２）：３２５−３３１；米国特許第６，２５８，３６０号を参照されたい；これらは、参照により本明細書に組み込まれる）。
【００５４】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋ阻害剤は、Ｓｙｋ、またはＳｙｋおよびＦｌｔ−３とは異なる発癌キナーゼを標的する第２のキナーゼ阻害剤とともに用いることができる。Ｓｙｋ阻害剤が、造血新生物の治療のために本明細書に開示されているとすれば、造血新生物の治療のために用いられている他の適合性キナーゼ阻害剤もまた、用いることができる。いくつかの実施形態において、この第２のキナーゼ阻害剤は、Ａｂｌキナーゼの阻害剤である。慢性骨髄性白血病は、骨髄中の白血病幹細胞の悪性増殖を特徴とする骨髄新生物である。慢性骨髄性白血病の大部分は、相互転座ｔ（９；２２）（ｑ３４；ｑ１１）によって規定された細胞遺伝異常と関連している。この染色体異常は結果として、活性化キナーゼ活性を有するＢＣＲ／ＡＢＬ融合タンパク質の発生をもたらす。この融合タンパク質キナーゼ活性の阻害剤は、抵抗形態が連続治療の際に発達しうるが、慢性骨髄性白血病の治療において有効でありうる。Ａｂｌキナーゼ阻害剤と組み合わせたＳｙｋキナーゼ阻害剤の使用は、第２のキナーゼ阻害剤により標的されたのとは異なる細胞プロセスを標的することによって、抵抗性細胞の機会を減少させうる。例示的Ａｂｌキナーゼ阻害剤は、イマチニブメシレートおよびＧｌｅｅｖｅ（登録商標）としても公知の２−フェニルアミノピリミジンである。このようにして、いくつかの実施形態において、これらのＳｙｋキナーゼ阻害剤は、Ａｂｌキナーゼ阻害剤２−フェニルアミノピリミジンおよびその誘導体と組み合わせて用いることができる。他の実施形態において、この第２のキナーゼ阻害剤は、ピリドール［２−３−ｄ］ピリミジンおよびその誘導体であってもよく、これは元来、Ｓｒｃキナーゼの阻害剤として同定された。さらに他の実施形態において、第２のキナーゼ阻害剤は、チルホスチンおよびその誘導体（例えばアダホスチン）であってもよく、これらは、このキナーゼとその基質との会合に影響を与えることがある。他のキナーゼ阻害化合物は、当業者には明白であろう。
【００５５】
本明細書にさらに記載されているように、他の化学療法薬の投与は、組成物の形態で行なうか、またはＳｙｋ阻害剤と組み合わせて付加的に投与されてもよい。化学療法薬は、付加的に与えられるとき、Ｓｙｋ阻害剤の投与とともに同時に、または連続的に投与されてもよい。
【００５６】
６．２ ＳｙｋキナーゼおよびＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害剤
様々な阻害剤に関連して、これらの化合物を記載するために用いられる用語は、異なる定義が本明細書において示されているか、または特定の阻害化合物について記載している参考文献において示されているのでなければ、当業者によって用いられているこれらの通常かつ共通の意味を有する。
【００５７】
単独で、または別の置換基の一部としての「アルキル」とは、親アルカン、アルケン、またはアルキンの単一炭素原子からの１つの水素原子の除去によって誘導された、記載された数の炭素原子を有する（すなわちＣ１−Ｃ６とは、１〜６炭素原子を意味する）飽和または不飽和、分枝、直鎖、または環状一価炭化水素基を言う。典型的なアルキル基は、メチル；エチル、例えばエタニル、エテニル、エチニル；プロピル、例えばプロパン−１−イル、プロパン−２−イル、シクロプロパン−１−イル、プロプ−１−エン−１−イル、プロプ−１−エン−２−イル、プロプ−２−エン−１−イル（アリル）、シクロプロプ−１−エン−１−イル、シクロプロプ−２−エン−１−イル、プロプ−１−イン−１−イル、プロプ−２−イン−１−イルなど；ブチル、例えばブタン−１−イル、ブタン−２−イル、２−メチル−プロパン−１−イル、２−メチル−プロパン−２−イル、シクロブタン−１−イル、ブト−１−エン−１−イル、ブト−１−エン−２−イル、２−メチル−プロプ−１−エン−１−イル、ブト−２−エン−１−イル、ブト−２−エン−２−イル、ブタ−１，３−ジエン−１−イル、ブタ−１，３−ジエン−２−イル、シクロブト−１−エン−１−イル、シクロブト−１−エン−３−イル、シクロブタ−１，３−ジエン−１−イル、ブト−１−イン−１−イル、ブト−１−イン−３−イル、ブト−３−イン−１−イル等々を包含するが、これらに限定されない。「アルキル」という用語は具体的には、いずれかの程度またはレベルの飽和を有する基、すなわちまったく炭素−炭素単結合のみを有する基、１またはそれ以上の炭素−炭素二重結合を有する基、１またはそれ以上の炭素−炭素三重結合を有する基、および炭素−炭素単結合、二重結合、および三重結合の混合物を有する基を包含するものとする。特定レベルの飽和が意図されている場合、「アルカニル」、「アルケニル」、および「アルキニル」という表現が用いられる。「低級アルキル」という表現は、１〜６炭素原子からなるアルキル基を言う。
【００５８】
単独で、または別の置換基の一部としての「アルカニル」とは、飽和分枝、直鎖、または環状アルキル基を言う。典型的なアルカニル基は、メタニル；エタニル；プロパニル、例えばプロパン−１−イル、プロパン−２−イル（イソプロピル）、シクロプロパン−１−イルなど；ブチアニル、例えばブタン−１−イル、ブタン−２−イル（ｓｅｃ−ブチル）、２−メチル−プロパン−１−イル（イソブチル）、２−メチル−プロパン−２−イル（ｔ−ブチル）、シクロブタン−１−イルなどを包含するが、これらに限定されない。
【００５９】
単独で、または別の置換基の一部としての「アルケニル」とは、親アルケンの単一炭素原子からの１つの水素原子の除去によって誘導された、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する不飽和分枝、直鎖、または環状アルキル基を言う。この基は、１または複数の二重結合の周りでシスまたはトランスのどちらかのコンホメーションにあってもよい。典型的なアルケニル基は、エテニル；プロペニル、例えばプロプ−１−エン−１−イル、プロプ−１−エン−２−イル、プロプ−２−エン−１−イル（アリル）、プロプ−２−エン−２−イル、シクロプロプ−１−エン−１−イル；シクロプロプ−２−エン−１−イル；ブテニル、例えばブト−１−エン−１−イル、ブト−１−エン−２−イル、２−メチル−プロプ−１−エン−１−イル、ブト−２−エン−１−イル、ブト−２−エン−１−イル、ブト−２−エン−２−イル、ブタ−１，３−ジエン−１−イル、ブタ−１，３−ジエン−２−イル、シクロブト−１−エン−１−イル、シクロブト−１−エン−３−イル、シクロブタ−１，３−ジエン−１−イルなどを包含するが、これらに限定されない。
【００６０】
単独で、または別の置換基の一部としての「アルキニル」とは、親アルキンの単一炭素原子からの１つの水素原子の除去によって誘導された、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する不飽和分枝、直鎖、または環状アルキル基を言う。典型的なアルキニル基は、エチニル；プロピニル、例えばプロプ−１−イン−１−イル、プロプ−２−イン−１−イルなど；ブチニル、例えばブト−１−イン−１−イル、ブト−１−イン−３−イル、ブト−３−イン−イルなどを包含するが、これらに限定されない。
【００６１】
「親芳香族環系」とは、共役ｐｉ電子系を有する不飽和環状または多環式環系を言う。具体的には、「親芳香族環系」の定義の中に、これらの環の１またはそれ以上が芳香族であり、これらの環の１またはそれ以上が飽和または不飽和である縮合環系、例えばフルオレン、インダン、インデン、フェナレンなどが含まれる。典型的な親芳香族環系は、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、クリセン、コロネン、フルオランテン、フルオレン、ヘキサセン、ヘキサフェン、ヘキサレン、ａｓ−インダセン、ｓ−インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、オクタセン、オクタフェン、オクタレン、オバレン、ペンタ−２，４−ジエン、ペンタセン、ペンタレン、ペンタフェン、ペリレン、フェナレン、フェナントレン、ピセン、プレイアデン、ピレン、ピラントレン、ルビセン、トリフェニレン、トリナフタレンなどを包含するが、これらに限定されない。
【００６２】
単独で、または別の置換基の一部としての「アリール」とは、親芳香族環系の単一炭素原子からの１つの水素原子の除去によって誘導された、記載された数の炭素環原子を有する（すなわちＣ５−Ｃ１４とは、５〜１４炭素環原子を意味する）一価の芳香族炭化水素基を言う。典型的なアリール基は、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、クリセン、コロネン、フルオランテン、フルオレン、ヘキサセン、ヘキサフェン、ヘキサレン、ａｓ−インダセン、ｓ−インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、オクタセン、オクタフェン、オクタレン、オバレン、ペンタ−２，４−ジエン、ペンタセン、ペンタレン、ペンタフェン、ペリレン、フェナレン、フェナントレン、ピセン、プレイアデン、ピレン、ピラントレン、ルビセン、トリフェニレン、トリナフタレンなどに由来する基を包含するが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、アリール基は、（Ｃ５−Ｃ１４）アリールであり、（Ｃ５−Ｃ１０）がさらに好ましい。特に好ましいアリールは、シクロペンタジエニル、フェニル、およびナフチルである。
【００６３】
単独で、または別の置換基の一部としての「アリールアルキル」とは、炭素原子に結合した水素原子の１つ、典型的には末端またはｓｐ３炭素原子がアリール基で置換されている非環式アルキル基を言う。典型的なアリールアルキル基は、ベンジル、２−フェニレンタン−１−イル、２−フェニレンテン−１−イル、ナフチルメチル、２−ナフチルエタン−１−イル、２−ナフチルエテン−１−イル、ナフトベンジル、２−ナフトフェニルエタン−１−イルなどを包含するが、これらに限定されない。特定のアルキル部分が意図されている場合、用語アリールアルカニル、アリールアルケニル、および／またはアリールアルキニルが用いられる。好ましい実施形態において、アリールアルキル基は、（Ｃ６−Ｃ１６）アリールアルキルであり、例えばアリールアルキル基のアルカニル、アルケニル、またはアルキニル部分は、（Ｃ１−Ｃ６）であり、アリール部分は（Ｃ５−Ｃ１０）である。特に好ましい実施形態において、アリールアルキル基は、（Ｃ６−Ｃ１３）であり、例えばアリールアルキル基のアルカニル、アルケニル、またはアルキニル部分は、（Ｃ１−Ｃ３）であり、アリール部分は（Ｃ５−Ｃ１０）である。
【００６４】
「親ヘテロ芳香族環系」とは、１またはそれ以上の炭素原子が各々独立して、同一または異なるヘテロ原子またはヘテロ原子基で置換されている親芳香族環系を言う。炭素原子を置換するのに典型的なヘテロ原子またはヘテロ原子基は、Ｎ、ＮＨ、Ｐ、Ｏ、Ｓ、Ｓｉなど包含するが、これらに限定されない。具体的には、「親ヘテロ芳香族環系」の定義中に、これらの環の１またはそれ以上が芳香族であり、これらの環の１またはそれ以上が飽和または不飽和である縮合環系が含まれる。例えばアルシンドール、ベンゾジオキサン、ベンゾフラン、クロマン、クロメン、インドール、インドリン、キサンテンなどである。同様に「親ヘテロ芳香族環系」の定義中に、置換基を含む、認識された環、例えばベンゾピロンが含まれる。典型的な親ヘテロ芳香族環系は、アルシンドール、ベンゾジオキサン、ベンゾフイラン、ベンゾピロン、カルバゾール、β−カルボリン、クロマン、クロメン、シンノリン、フラン、イミダゾール、インダゾール、インドール、インドリン、インドリジン、イソベンゾフラン、イソクロメン、イソインドール、イソインドリン、イソキノリン、イソチアゾール、イソキサゾール、ナフチリジン、オキサジアゾール、オキサゾール、ペリミジン、フェナントリジン、フェナントロリン、フェナジン、フタラジン、プテリジン、プリン、ピラン、ピラジン、ピラゾール、ピリダジン、ピリジン、ピリミジン、ピロール、ピロリジン、キナゾリン、キノリン、キノリジン、キノキサリン、テトラゾール、チアジアゾール、チアゾール、チオフェン、トリアゾール、キサンテンなどを包含するが、これらに限定されない。
【００６５】
単独で、または別の置換基の一部としての「ヘテロアリール」とは、親ヘテロ芳香族環系の単一原子からの１つの水素原子の除去によって誘導された、記載された数の環原子を有する（すなわち「５〜１４員」とは、５〜１４環原子を意味する）一価のヘテロ芳香族基を言う。典型的なヘテロアリール基は、アクリジン、アルシンドール、カルバゾール、β−カルボリン、クロマン、クロメン、シンノリン、フラン、イミダゾール、インダゾール、インドール、インドリン、インドリジン、イソベンゾフラン、イソクロメン、イソインドール、イソインドリン、イソキノリン、イソチアゾール、イソキサゾール、ナフチリジン、オキサジアゾール、オキサゾール、ペリミジン、フェナントリジン、フェナントロリン、フェナジン、フタラジン、プテリジン、プリン、ピラン、ピラジン、ピラゾール、ピリダジン、ピリジン、ピリミジン、ピロール、ピロリジン、キナゾリン、キノリン、キノリジン、キノキサリン、テトラゾール、チアジアゾール、チアゾール、チオフェン、トリアゾール、キサンテンなどに由来する基を包含するが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ヘテロアリール基は、５〜１４員ヘテロアリール、または５〜１０員ヘテロアリールである。
【００６６】
単独で、または別の置換基の一部としての「ヘテロアリールアルキル」とは、炭素原子に結合した水素原子の１つ、典型的には末端またはｓｐ３炭素原子が、ヘテロアリール基で置換されている非環式アルキル基を言う。特定のアルキル部分が意図されている場合、用語ヘテロアリールアルカニル、ヘテロアリールアルケニル、および／またはヘテロリルアルキニルが用いられる。いくつかの実施形態において、ヘテロアリールアルキル基は、６〜２０員ヘテロアリールアルキルであり、例えばヘテロアリールアルキルのアルカニル、アルケニル、またはアルキニル部分は１〜６員であり、ヘテロアリール部分は、５〜１４員ヘテロアリールである。特に好ましい実施形態において、ヘテロアリールアルキルは、６〜１３員ヘテロアリールアルキルであり、例えばアルカニル、アルケニル、またはアルキニル部分は１〜３員であり、ヘテロアリール部分は５〜１０員ヘテロアリールである。
【００６７】
「置換アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、またはヘテロアリールアルキル」とは、１またはそれ以上の水素原子が別の置換基で置換されているアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、またはヘテロアリールアルキル基を言う。例示的置換基は、−ＯＲ’、−ＳＲ’、−ＮＲ’Ｒ’、−ＮＯ２、−ＮＯ、−ＣＮ，−ＣＦ３、ハロゲン（例えば−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、および−Ｉ）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’（式中、各Ｒ’は独立して、水素および（Ｃ１−Ｃ６）アルキルからなる群から選択される）を包含するが、これらに限定されない。
【００６８】
「プロドラッグ」とは、使用条件、例えば体内で、活性薬を放出するために形質転換を必要とする活性化合物（薬品）の誘導体のことを言う。プロドラッグは、活性薬へ転化されるまで、薬理学的に不活性であることが多いが、必ずしもそうではない。プロドラッグは典型的には、活性のために一部必要とされると考えられている薬品中の官能基を、プロ基（下に規定されている）でマスキングすることによって得られ、プロ部分を形成し、これは、特定の使用条件下に形質転換、例えば切断を受け、官能基を放出し、したがって活性薬が得られる。プロ部分の切断は、自然に、例えば加水分解反応によって進行しうる。またはこれは別の作用物質、例えば酵素、光、酸、または物理的または環境的パラメータの変化またはこれへの暴露、例えば温度の変化によって触媒されるか、または誘発されうる。この作用物質は、使用条件、例えばプロドラッグが投与される細胞中に存在する酵素、または胃の酸性条件に対して内因性であってもよく、またはこれは外部的に供給されてもよい。
【００６９】
プロドラッグを生じるために活性薬中の官能基をマスキングするのに適した非常に多様なプロドラッグ、ならびにその結果生じたプロ部分は、当業界において周知である。例えば、ヒドロキシル官能基は、スルホネート、エステル、またはカーボネートプロ部分としてマスキングされてもよく、これは、インビボで加水分解されて、ヒドロキシル基を生じうる。アミノ官能基は、アミド、カルバメート、イミン、ウレア、ホスフェニル、ホスホリル、またはスルフェニルプロ部分としてマスキングされてもよく、これは、インビボで加水分解されて、アミノ基を生じうる。カルボキシル基は、エステル（シリルエステルおよびチオエステルを包含する）、アミド、またはヒドラジドプロ部分としてマスキングされてもよく、これは、インビボで加水分解されて、カルボキシル基を生じうる。適切なプロ基およびこれらのそれぞれのプロ部分の他の具体例は、当業者には明らかであろう。
【００７０】
ＳｙｋキナーゼまたはＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ活性を阻害する様々な化合物は、本明細書に記載された方法において用いることができる。これらは、とりわけ、小さい有機分子、ペプチドもしくはタンパク質、または核酸を包含する。本明細書において用いられているように、「Ｓｙｋ阻害剤」または「Ｓｙｋキナーゼ阻害化合物」とは、Ｓｙｋキナーゼそれ自体の活性を直接阻害するか、または本明細書に記載されているＩＣ５０範囲における適切なＳｙｋ機能に必要とされる他の細胞標的とのＳｙｋの相互作用を阻害するいずれかの化合物を言う。本明細書において用いられている阻害剤は、酵素阻害剤、例えば競合的、非競合的、および不競合的阻害剤の従来の記載を包含する。Ｓｙｋ阻害剤である化合物は一般に、インビトロまたは細胞アッセイにおいて、Ｓｙｋキナーゼ活性、例えばＳｙｋキナーゼが合成または内因性基質をリン酸化する能力に対して、約５ｕＭまたはそれ以下、約１ｕＭまたはそれ以下、約５００ｎｍまたはそれ以下、約１００ｎｍまたはそれ以下、約５０ｎｍまたはそれ以下、約１０ｎｍまたはそれ以下、または約１ｎｍまたはそれ以下の範囲内のＩＣ５０を示す化合物である。例えば例示的Ｓｙｋ阻害化合物は、米国特許出願第１０／６３１，０２９号およびＰＣＴ公報第ＷＯ２００４／０１４３８２号に開示されている。当業者なら、より低いＩＣ５０、例えば約１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、またはそれ以下でさえある範囲内のＩＣ５０を示す化合物が、本発明の方法に有用であることを理解するであろう。
【００７１】
いくつかの実施形態において、この阻害化合物は、Ｓｙｋキナーゼに対して選択的であってもよい。「Ｓｙｋキナーゼ選択的阻害化合物」とは、Ｓｙｋに対して選択性を示す化合物を言い、これは、規定された組のアッセイにおいて、ＳｙｋキナーゼについてのＩＣ５０に対する、参照キナーゼについてのＩＣ５０の比として規定される。一般に、Ｓｙｋキナーゼ選択的阻害化合物は、約１０超、約５０超、約１００超、約１，０００超、またはそれ以上である、Ｓｙｋキナーゼに対する選択率を有しうる。参照キナーゼは、細胞増殖性障害と関連したいずれのキナーゼ活性であってもよく、これは、キナーゼ、例えば、例として非限定的に、Ａｕｒｏｒａ−Ａ、ＡＫＴ、ＣＤＫ１／サイクリンＢ、ＣＤＫ２／サイクリンＡ、ＣＤＫ３／サイクリンＥ、ＣＤＫ５／ｐ３５、ＣＤＫ６／サイクリンＤ３、ＣＤＫ７／サイクリンＨ／ＭＡＴ１、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、ＥＧＦＲ、ｃ−ＲＡＦ、ＲＡＳ、ｃＳＲＣ、Ｙｅｓ、Ｆｙｎ、Ｌｃｋ、Ｆｅｓ、Ｌｙｎ、Ｂｍｘ、ＦＧＦＲ３、ＧＳＫ３α、ＧＳＫ３β、Ｐ１３、ＩＧＦ−１Ｒ、ＭＡＰＫ２、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＪＮＫ，ＭＥＫ１、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＰＡＫ２、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＰＤＫ１、ＰＫＡ、ＰＫＣε、ＰＫＣ、ＰＫＤ２、ＶＥＧＦ、ＰＲＡＫ、ＰＲＡＫ２、ＲＯＣＫ−ＩＩ、Ｒｓｋ１、Ｒｓｋ２、Ｒｓｋ３、ＳＧＫを包含する。これらのキナーゼの各々についての様々なアッセイは、当業者には明らかであろう。例えば、Ａｕｒｏｒａキナーゼ活性は、インビトロアッセイ、または細胞中のリン酸化産物の測定において、天然または合成基質（例えば蛍光ペプチド、ヒストンＨ３）を用いうる（Ｗａｌｔｅｒら、２０００、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９（４２）：４９０６−１６）。キナーゼ活性は、様々な研究方法を用いて検出することができる。これは、例として非限定的に、免疫沈降（例えばＣｙｃｌｅｘ Ａｕｒｏｒａ Ａ Ｋｉｎａｓｅ Ａｓｓａｙ；ＭＢＬ Ｃｏｒｐ，Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）、移動度シフト（例えばＣａｌｉｐｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ，ＵＳＡ）、自己蛍光融合タンパク質基質（例えば米国特許第６，２４８，５５０号）、およびＦＲＥＴベースのアッセイ（Ｚ−ＬＹＴＥ（登録商標）；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＣＡ，ＵＳＡ）を包含する。当業者によって理解されるように、異常な細胞増殖に関与する他の活性キナーゼが、Ｓｙｋに対するキナーゼ阻害剤の選択性を決定するために用いることができる。
【００７２】
いくつかの実施形態において、細胞増殖性障害の治療のために用いられる阻害化合物は、Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害化合物を含む。「Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害化合物」または「Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害剤」とは、例えばＦｌｔ−３キナーゼそれ自体の活性を直接阻害することによって、または本明細書に記載されているＩＣ５０範囲における適切なＦｌｔ−３機能に必要とされる他の細胞標的との相互作用を阻害することによって、Ｆｌｔ−３キナーゼを阻害することもできるＳｙｋ阻害化合物を言う。Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３阻害剤である化合物は一般に、インビトロまたは細胞アッセイにおいて、Ｆｌｔ−３キナーゼ活性、例えばＦｌｔ−３キナーゼが合成または内因性基質をリン酸化する能力に対して、約５ｕＭまたはそれ以下、約１ｕＭまたはそれ以下、約５００ｎｍまたはそれ以下、約１００ｎｍまたはそれ以下、約５０ｎｍまたはそれ以下、約１０ｎｍまたはそれ以下、または約１ｎｍまたはそれ以下の範囲内のＩＣ５０を示す化合物である。例えば例示的Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３阻害化合物は、米国特許出願第１０／６３１，０２９号およびＰＣＴ公報第ＷＯ２００４／０１４３８２号に開示されている化合物の属に見出すことができる。当業者なら、より低いＩＣ５０、例えば約１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、またはそれ以下でさえある範囲内のＩＣ５０を示す化合物が、本発明の方法に有用であることを理解するであろう。
【００７３】
様々なキナーゼ阻害剤を、本発明の方法において用いることができ、適用可能な場合、対応阻害化合物の塩、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物を包含するものとする。いくつかの実施形態において、ＳｙｋキナーゼまたはＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害剤は、米国特許出願第１０／６３１，０２９号および公開されたＰＣＴ出願第ＷＯ２００４／０１４３８２号に記載されているように、２，４−ピリミジンジアミン化合物およびその様々な誘導体を含む。これらの特許は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。これらの化合物は一般に、次の構造および番号付け方式を有する、２，４−ピリミジンジアミン「核」を含む：
【００７４】
【化９】
該化合物は、Ｃ２窒素（Ｎ２）で置換されて第二級アミンを形成し、場合により次の位置、すなわちＣ４窒素（Ｎ４）、およびＣ５位および／またはＣ６位の１またはそれ以上でさらに置換されている。Ｎ４で置換されている時、置換基は、第二級アミンを形成する。Ｎ２における置換基、ならびに他の位置における任意置換基は、特徴および物理化学的性質において広い範囲にわたることができる。例えば、１または複数のこの置換基は、分枝、直鎖、または環状アルキル、分枝、直鎖、または環状ヘテロアルキル、単環式もしくは多環式アリール、単環式もしくは多環式ヘテロアリール、またはこれらの基の組み合わせであってもよい。これらの置換基は、米国特許出願第１０／６３１，０２９号およびＰＣＴ公報第ＷＯ２００４／０１４３８２号に記載されているように、さらに置換されてもよい。
【００７５】
Ｎ２および／またはＮ４置換基は、これらのそれぞれの窒素原子へ直接付着されてもよく、またはこれらは、これらのそれぞれの窒素原子から、同一または異なっていてもよいリンカーを介して間隔があけられていてもよい。これらのリンカーの性質は、広く様々であってもよく、互いから１分子部分の間隔をあけるのに有用な原子または基の事実上いずれの組み合わせを含んでいてもよい。例えばリンカーは、非環式炭化水素橋（例えば、飽和または不飽和アルキレノ、例えばメタノ、エタノ、エテノ、プロパノ、プロプ［１］エノ、ブタノ、ブト［１］エノ、ブト［２］エノ、ブタ［１，３］ジエノなど）、単環式もしくは多環式炭化水素橋（例えば、［１，２］ベンゼノ、［２，３］ナフタレノなど）、単純非環式へテロ原子またはヘテロアルキルジイル橋（例えば、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＰＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−、−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−、−Ｏ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−など）、単環式もしくは多環式ヘテロアリール橋（例えば、［３，４］フラノ、ピリジノ、チオフェノ、ピペリジノ、ピペラジノ、ピラジニノ、ピロリジノなど）、またはこのような橋の組み合わせであってもよい。
【００７６】
Ｎ２、Ｎ４、Ｃ５位および／またはＣ６位における置換基、ならびに任意選択的なリンカーは、同一または異なる置換基の１またはそれ以上でさらに置換されていてもよい。これらの置換基の性質は、広く様々であってもよい。適切な置換基の非限定例は、分枝、直鎖、または環状アルキル、単環式もしくは多環式アリール、分枝、直鎖、または環状ヘテロアルキル、単環式もしくは多環式ヘテロアリール、ハロ、分枝、直鎖、または環状ハロアルキル、ヒドロキシル、オキソ、チオキソ、分枝、直鎖、または環状アルコキシ、分枝、直鎖、または環状ハロアルコキシ、トリフルオロメトキシ、単環式もしくは多環式アリールオキシ、単環式もしくは多環式へテロアリールオキシ、エーテル、アルコール、スルフィド、チオエーテル、スルファニル（チオール）、イミン、アゾ、アジド、アミン（第一級、第二級、および第三級）、ニトリル（いずれかの異性体）、シアネート（いずれかの異性体）、チオシアネート（いずれかの異性体）、ニトロソ、ニトロ、ジアゾ、スルホキシド、スルホニル、スルホン酸、スルファミド、スルホンアミド、スルファミンエステル、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、エステル、アミド、アミジン、ホルマジン、アミノ酸、アセチレン、カルバメート、ラクトン、ラクタム、グルコシド、グルコヌリド、スルホン、ケタール、アセタール、チオケタール、オキシム、オキサミン酸、オキサミンエステルなど、およびこれらの基の組み合わせを包含する。反応性官能基を保有する置換基は、当業界において周知のように、保護されていてもよく、保護されていなくてもよい。
【００７７】
Ｓｙｋキナーゼ阻害化合物の特定の実施形態はまた、２００３年７月２９日に出願された米国特許出願第１０／６３１，０２９号；２００４年７月３０日に出願された米国特許出願第１０／９０３，２６３号（米国出願公報第２００５／０２３４０４９号）；２００４年７月３０日に出願された米国特許出願第１０／９０３，８７０号（米国出願公報第２００５／０２０９２２４号）；米国特許出願第６０／６３０，８０８号；およびＰＣＴ公報第ＷＯ２００４／０１４３８２号にも記載されている。２，４−ピリミジンジアミン化合物のプロドラッグ形態は、２００６年１月１９日に出願された米国特許出願第１１／３３７，０４９号に記載されている。すべての公報および特許出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。これらの化合物はまた、２００５年４月１８日に出願された米国仮出願第６０／６７２，６４８号の付属書Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤにも開示されている。これの内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００７８】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋ阻害化合物は、２００３年８月７日に出願された米国特許出願第６０／４９４，００８号、２００４年５月１８日に出願された米国特許出願第６０／５７２，５３４号；および米国出願公報第２００５／０１１３３９８号（出願番号第１０／９１３，２７０号）に記載されている特定の実施形態を包含しない。すべての特許出願および公報は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。これらの化合物はまた、２００５年４月１８日に出願された米国仮出願第６０／６７２，６４８号の付属書１、２、および３にも開示されている。これの内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００７９】
本明細書に記載されている状態および障害の治療のための、２，４−ピリミジンジアミンをベースとするＳｙｋまたはＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害剤の例示的実施形態は、とりわけ、次の構造：
【００８０】
【化１０】
を有する化合物、およびその様々な塩、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物を包含する。
【００８１】
２，４−ピリミジンジアミンをベースとするＳｙｋまたはＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害剤の他の例示的実施形態は、とりわけ、Ｎ４−（２，２−ジメチル−３−オキソ−４Ｈ−５−ピリド［１，４］オキサジン−６−イル）−５−フルオロ−Ｎ２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−２，４−ピリミジンジアミン（化合物ＶＩ）；Ｎ４−（２，２−ジメチル−４−［（二水素ホスホノキシ）メチル］−３−オキソ−５−ピリド［１，４］オキサジン−６−イル）−５−フルオロ−Ｎ２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−２，４−ピリミジンジアミン（化合物ＶＩＩ）；およびこれらの様々な塩（例えばカルシウム塩など）、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物を包含する。
【００８２】
いくつかの実施形態において、これらのＳｙｋキナーゼ阻害剤は、公開された米国特許出願第２００４／０１０６６１５号およびＰＣＴ公報第ＷＯ２００４／０１６５９７号に記載されているように、ピリジン、ピリミジン、またはトリアジン環をベースとする化合物を含んでいてもよい。これらは、参照により本明細書に組み込まれる。一般に、ピリジン、ピリミジン、またはトリアジン環は、０〜３窒素原子を有する６員アリールもしくはヘテロアリール環へ直接付着されている。
【００８３】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤は、ＰＣＴ公報第ＷＯ２００５／０１３９８２号および第ＷＯ２００４／０４６１２０号、および公開された米国特許出願第２００４／０２１４８１７号に記載されているように、アミノ−もしくはジアミノトリアゾールをベースとする化合物を含んでいる。これらは、参照により本明細書に組み込まれる。アミノトリアゾール化合物は典型的には、トリアゾール環の３位または４位において窒素原子上に置換基を有するか、またはこの環上にアミノ置換基を有する。例示的アミノトリアゾールは、とりわけ、アミノトリアゾールピリジンおよびアミノトリアゾールピリミジンを包含する（例えば第ＷＯ２００５／０１３９８２号を参照されたい）。同様に、キナーゼを阻害するジアミノトリアゾール化合物は、アミノ基の１つの上に複数の置換基を有し、およびトリアゾール環の３位または４位において窒素原子上に１つの置換基を有する。ジアミノトリアゾールをベースとする例示的キナーゼ阻害剤は、第ＷＯ２００４／０４６１２０号および米国出願第２００４／０２１４８１７号に記載されている。
【００８４】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤は、米国特許第６，８４９，６４１号、公開された米国特許出願第２００４／００５３９３１号、およびＰＣＴ公報第ＷＯ０３／０００６８８号に記載されているように、アザインドールをベースとする化合物を含んでいる。これらの特許のすべては、参照により本明細書に組み込まれる。米国特許第６，８４９，６４１号は、３−ヘテロアリーリデンアザインドリン−２−オン化合物について記載している。同様に、米国特許出願第２００４／００５３９３１号およびＰＣＴ公報第ＷＯ０３／０００６８８号は、とりわけ、ピロロピリジンが、２位または３位に芳香族またはヘテロ環式置換基（例えばベンジルまたはインドリル）を有するアザインドール化合物について記載している。
【００８５】
他の実施形態において、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤は、公開された米国特許出願第２００４／００４８８６８号およびＰＣＴ公報第ＷＯ０３／０２０６９８号に記載されているように、ベンズイミダゾールをベースとする化合物を含んでいる。これらの特許のどちらも、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。これらの化合物は典型的には、ベンジル環上の追加置換基とともに、イミダゾリルの１位および２位に置換基を有する。２位における例示的置換基は、アリールまたはヘテロアリール、例えばピラゾリル、トリアゾリル、イミダゾリル、インドリル、インダゾリル、チエノピラゾリル、テトラヒドロインダゾリル、テトラヒドロシクロペンタピラゾリル、ジヒドロフロピラゾリル、オキソジヒドロピリダジニル、テトラヒドロピロロピラゾリル、オキソテトラヒドロピロロピラゾリル、テトラヒドロピラノピラゾリル、テトラヒドロピリジノピラゾリル、またはオキソジヒドロピリジノピラゾリル基である。
【００８６】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤は、米国特許第６，７６２，１７９号、公開された米国特許出願第２００３／０１１９８５６号および第２００５／０００４１５２号、およびＰＣＴ公報第ＷＯ０２／０９６９０５号に記載されているように、チアゾールをベースとした化合物を含んでいる。これらの特許は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的なチアゾールベースの阻害剤は、ピリミジンが２位および４位に置換基を有する４−チアゾリルピリミジンである。典型的には２位における基は、非置換もしくは置換アミンである。アミン上の置換基は一般に、単環式およびヘテロ環式環、例えば置換フェニル、インダニル、ナフチル、ピリミジニル、またはピリジル環である。
【００８７】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤は、公開された米国特許出願第２００４／０１４２９４７号およびＰＣＴ公報第ＷＯ０３／０００６９５号および第ＷＯ２００４／０１６５９７号に記載されているように、ピロロピリミジンをベースとした化合物を含んでいる。これらの特許は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、ピロロピリミジンは、インドール環の３位に付着されている。一般に、このインドールは、１位および／または５位に置換基を有する。追加置換基は、このピロロピリミジンの４位に存在しうる。これは、とりわけ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、アルケニル、またはアルキニルを包含する。
【００８８】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤は、公開された米国特許出願第２００５／０００９８７６号、および米国特許第６，５３４，５２４号に記載されているように、インダゾールをベースとした化合物を含んでいる。これらの特許は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。米国特許第６，５３４，５２４号は、インダゾールが３位および／または５位に置換基を有する阻害化合物を開示している。３位における置換基は、とりわけ、非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリール、またはＣＨ＝ＣＨ−Ｒ、またはＣＨ＝Ｎ−Ｒ（式中、Ｒは、置換もしくは非置換アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールである）である。５位における置換基は、とりわけ、置換もしくは非置換アリール、ヘテロアリール、またはＹ−Ｘ（式中、Ｙは、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、Ｓ＝Ｏ、ＳＯ２、アルキリデン、ＮＨ、Ｎ−アルキルであり、Ｒ１は、置換もしくは非置換アリール、ヘテロアリール、またはＮ−Ｒ’（式中、Ｒ’は、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルコキシル、またはジアルキルアミドである）である。同様に、米国特許出願第２００５／０００９８７６号は、インダゾールがこのインダゾールの３位および／または５位に置換基を有する化合物を開示している。３位において、置換もしくは非置換アリール、またはヘテロアリール、またはフェニルへ縮合されたヘテロ環は、アルキル、例えばアルカニル、アルケニル、またはアルキニルを介して付着されている。５位における置換基は、とりわけ、ハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、アシルオキシ、チオアルキル、スルフィニルアルキル、スルホニルアルキル、ヒドロキシアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロ環、置換へテロ環、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、エステル、アミド、シアノ、または置換もしくは非置換アミンである。
【００８９】
いくつかの実施形態において、このＳｙｋキナーゼ阻害剤は、米国特許第６，５７３，２９５号、公開された米国特許出願第２００２／００６２０３１号、およびＰＣＴ公報第ＷＯ００／２７８０２号に記載されているように、二環式化合物を含んでいる。これらの特許のすべては、参照により本明細書に組み込まれる。これらの実施形態のいくつかにおいて、非置換もしくは置換ベンジルは、これも置換もしくは非置換であるシクロアルキルへ縮合されている。例示的シクロアルキルは、ヘプテニルである。例示的二環式阻害化合物は、｛４−［２−（７−カルバモイル−８−シクロヘキシルメトキシ−２，３，４，５−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］オキセピン−（Ｓ）−５−イルカルバモイル）−２−フェニルアセチルアミノ−エチル］−２−ホスホノ−フェニル｝−ホスホン酸；｛４−［（Ｓ）−２−アセチルアミノ−２−（３−カルバモイル−２−シシクロキシメトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−（Ｓ）−５−イルカルバモイル）−エチル］−フェノキシ｝−酢酸；および（４−［（ｓ）−２−アセチルアミノ−２−（３−カルバモイル−２−シシクロキシメトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−（Ｓ）−５−イルカルバモイル）−エチル］−２−カルボキシメチル−フェノキシ−酢酸である。
【００９０】
他の実施形態において、キナーゼ阻害剤は、公開された米国特許出願第２００４／０１９８７５０号およびＰＣＴ公報第ＷＯ２００４／０９２１５４号に記載されているように、クロメノンオキシム化合物を含んでいる。これらの特許は、参照により本明細書に組み込まれる。一般に、置換基はクロメノンオキシム核の２位および７位にある。
【００９１】
他のキナーゼ阻害化合物は、ＰＣＴ公報第ＷＯ９９／４７５２９号に記載されている置換へテロ環（例えばチアゾール、オキサゾール、イソキサゾール、ジアゾール、オキサジアゾール、ジオキサゾール、フラン、およびピリジン）、および置換アリール、またはＰＣＴ公報第ＷＯ２００４／０８５３８８号に記載されているような５−もしくは６−員ヘテロアリール環；およびＬａｉら、２００３，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ．１３（１８）：３１１１−４に記載されているようなスルホンアミドを包含する。他のキナーゼ阻害化合物は、当業者には明らかであろうし、本明細書に示されたガイダンスを用いて、Ｓｙｋキナーゼ阻害活性について試験することができる。
【００９２】
化合物は、様々な生化学的アッセイおよび細胞アッセイにおいて、Ｓｙｋおよび／またはＦｌｔ−３キナーゼに対するこれらの阻害効果について試験することができる。Ｓｙｋキナーゼは、ＬＡＴおよびＰＬＣ−γｌをリン酸化し、これは、とりわけ、マスト細胞および／または好塩基性細胞における脱顆粒を生じる。Ｓｙｋキナーゼ活性はまた、Ｔ−細胞受容体刺激への応答において観察される。これらの活性のどれも、Ｓｙｋ阻害化合物の活性を確認するために用いることができることを理解すべきである。いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼアッセイは、抗−ＩｇＥでの刺激後の顆粒内容物放出の測定に基づく脱顆粒アッセイである。これらのアッセイは、例えば、トリプターゼ、ヒスタミン、ロイコトリエンＬＴＣ４、またはヘキソサミニダーゼ放出の測定を包含する。他の実施形態において、活性は、単離Ｓｙｋキナーゼもしくはこれの活性断片と阻害化合物とを、Ｓｙｋキナーゼ基質（例えばシグナル伝達カスケードにおいてＳｙｋによってリン酸化されることが公知である合成ペプチドもしくはタンパク質）の存在下に接触させ、Ｓｙｋキナーゼがこの基質をリン酸化するかどうかを評価することによって決定される。あるいはまた、アッセイは、Ｓｙｋキナーゼを発現する細胞を用いて実施することができる。これらの細胞は、Ｓｙｋキナーゼを内因的に発現しうるか、またはこれらは組換えＳｙｋキナーゼを発現するように設計することができる。これらの細胞は場合により、Ｓｙｋキナーゼ基質を発現させることも可能である。このような確認アッセイを実施するのに適した細胞、ならびに適切な細胞を設計する方法は、当業者には明らかであろう。適切なＳｙｋキナーゼ基質は、例として非限定的に、ヒトバンド３タンパク質（Ｗａｎｇら、１９９９，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７４（４５），３２１５９−３２１６６）；タンパク質キナーゼＣ（Ｋａｗａｋａｍｉら、２００３，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１００（１６）：９４７０−５）、チューブリン（Ｐｅｔｅｒｓら、１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７１：４７５５）、コルタクチン（Ｍａｒｕｙａｍａら、１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７１：６６３１）、およびｐ５０／ＨＳ１（Ｒｕｚｚｅｎｅら、１９９６，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３５：１５２７）を包含する。Ｓｙｋ阻害化合物の活性を確認するのに適した生化学的アッセイおよび細胞アッセイの具体例は、Ｆｏｘら、１９９８，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，７：２２４９、米国特許出願第１０／６３１，０２９号、第ＷＯ２００４／０１４３８２号、およびその中に引用されている引例に記載されている。これらの特許のすべては、参照により本明細書に組み込まれる。
【００９３】
Ｆｌｔ−３キナーゼの活性化は、自己リン酸化、ならびにとりわけ、単球性ＴＨＰ−１細胞中にイノシトール−５−ホスファターゼ（ＳＨＩＰ）および１００−ｋＤタンパク質を含有するＳｒｃ相同体２（ＳＨ２）−のいくつかの細胞基質のリン酸化：骨髄細胞中のＳｈｃおよびＣｂ１のリン酸化；β−アレスチン；ＳＨ２含有チロシンホスファターゼ、およびプロ−Ｂ細胞中のＣｂ１−ｂを生じる（例えばＲｏｔｔａｐｅｌら、１９９４，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ９：１７５５−１７６５；Ｚｈａｎｇら、１９９９，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．６５：３７２−３８０を参照されたい）。いくつかの実施形態において、Ｆｌｔ−３キナーゼの活性は、Ｆｌｔ−３キナーゼのリン酸化形態への抗体の使用によって測定することができる（すなわち自己リン酸化アッセイ；Ｋｉｙｏｉら、１９９８，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １２：１３３３−１３３７）。いくつかの実施形態において、この活性は、単離されたＦｌｔ−３キナーゼもしくはこれの活性断片と阻害化合物とを、Ｆｌｔ−３キナーゼ基質（例えばシグナル伝達カスケードにおいてＦｌｔ−３によってリン酸化されることが公知である合成ペプチドもしくはタンパク質）の存在下に接触させることによって決定することができる。あるいは、アッセイは、内因的にＦｌｔ−３キナーゼを発現するか、またはこれらが組換えＦｌｔ−３キナーゼを発現するように設計されている細胞を用いて実施することができる（例えばＹａｍａｍｏｔｏら、２００１，Ｂｌｏｏｄ ９７（８）：２４３４−２４３９）。これらの細胞は任意選択的に、Ｆｌｔ−３キナーゼ基質を発現することも可能である。いくつかの実施形態において、Ｆｌｔ−３発現細胞は、上に記載されている様々な下流標的、例えばホスホリパーゼＣ−（ＰＬＣ）、ホスファチジルイノシトール３’−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）のｐ８５サブユニット、ＳＨＣ、ＳＨＰ−２、ＳＨＩＰ、ＧＲＢ２、ＶＡＶ、Ｆｙｎキナーゼ、Ｓｒｃキナーゼ、Ｓｔａｔ５情報伝達タンパク質、およびＥＲＫの活性化について調べられる。
【００９４】
細胞増殖に対するこれらの阻害化合物の効果の測定は、インビトロおよびインビボアッセイをいくつ用いてもよい。例えば増殖性細胞は、インビトロで適切に培養することができ、該化合物で処理することができる。細胞集団中の増殖能力は、染料染色（例えばトリパンブルー染料−排除；３−４，５−ジメチルチアゾール−２，５−ジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）；およびアネキシンＶ）、または細胞ソーティング技術（例えばプロピジウムヨーダイドでの蛍光活性化細胞ソーティング）を用いて決定することができる。細胞増殖についてのインビボアッセイは、実験動物への腫瘍細胞の移植、ついでこれらの阻害化合物の投与に基づいていてもよい。細胞増殖のこれらの評価方法および他の評価方法は、当業者には明らかであろう。
【００９５】
６．３ 投薬量
１つまたは複数の活性化合物、またはこれらの組成物は、治療される特定の疾病を治療または予防するのに有効な量で用いることができる。該化合物は、治療効果を得るために治療的に、または予防効果を得るために予防的に投与することができる。治療効果とは、治療される、根底にある細胞増殖性障害、例えばリンパ系の新生物、骨髄新生物、ウイルス関連腫瘍の根絶または改善、および／または根底にある障害に関連した症状の１またはそれ以上の根絶または改善を意味し、したがって患者が依然として、根底にある障害に悩むことがあるにもかかわらず、患者が状態の改良を報告するようになっている。治療効果はまた、改善が実感されるかどうかにかかわらず、疾病の進行を停止または遅延化することも含む。
【００９６】
予防的投与のために、活性化合物は、異常な細胞増殖を特徴とするか、またはこれによって引き起こされるか、またはこれに関連した障害、例えば既に上に記載されている様々な障害を発症するリスクのある患者へ投与することができる。例えば、患者が腫瘍を有すると診断されるが、転移の兆候がないならば、これらの阻害化合物は、腫瘍転移を阻害するために、予防的に投与することができる。
【００９７】
投与される１または複数の阻害化合物の量は、多様な要因によるであろう。これは例えば、治療される特定の適応症、投与様式、所望の効果が予防的であるかまたは治療的であるか、治療される適応症の重症度、および患者の年齢および体重、特定の活性化合物のバイオアベイラビリティなどを包含する。有効投薬量の決定は、十分に当業者の能力範囲内にある。
【００９８】
初期投薬量は、最初はインビトロアッセイから推定することができる。例えば、動物への使用のための初期投薬量は、細胞増殖または腫瘍細胞の浸潤性を減少させるのに十分なほど、ＳｙｋまたはＦｌｔ−３を阻害する化合物の循環血または血清濃度を得るように配合することができる。あるいは、動物への使用のための初期投薬量は、ＳｙｋキナーゼまたはＦｌｔ−３阻害アッセイにおいて測定されているようなＩＣ５０と等しいか、またはそれを超える活性化合物の循環血または血清濃度を得るように配合することができる。特定の阻害化合物のバイオアベイラビリティを考慮に入れて、このような循環血または血清濃度を得るための投薬量の計算は、十分に当業者の能力範囲内にある。例えば、読者は、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ １，ｐｐ．１−４６，１９７５中のＦｉｎｇｌおよびＷｏｏｄｂｕｒｙ，”Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ”、およびその中で引用されている文献を参照されたい。初期投薬量はまた、インビボデータ、例えば動物モデルから推定することもできる。ＳｙｋキナーゼまたはＦｌｔ−３キナーゼ活性を特徴とするか、またはこれによって引き起こされるか、またはこれに関連した病気を治療または予防するための化合物の有効性を試験するのに有用な動物モデルは、本明細書に記載されている。
【００９９】
投薬量は典型的には、約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日、２００ｍｇ／ｋｇ／日、３００ｍｇ／ｋｇ／日、４００ｍｇ／ｋｇ／日、または５００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内にあるであろうが、他の要因の中でも特に、阻害化合物の活性、そのバイオアベイラビリティ、投与様式、および上で考察された様々な要因に応じて、これよりも高くても低くてもよい。投薬量および間隔は、治療または予防効果を維持するのに十分な、１または複数のこの活性化合物の血漿レベルを与えるように個別に調節することができる。局部的投与または選択的摂取、例えば局部的局所投与の場合、活性化合物の有効な局部的濃度は、血漿濃度と関連しなくてもよい。当業者なら、必要以上の実験を行なわずに、有効投薬量を最適化することができるであろう。
【０１００】
該化合物は、とりわけ、治療される適応症、および処方する医師の判断に応じて、一日あたり１回、一日あたり２〜３回もしくは数回、または一日あたり多数回さえ投与することができる。
【０１０１】
好ましくは、該活性化合物は、実質的な毒性を引き起こすことなく、治療的または予防的効果を与えるであろう。該活性化合物の毒性は、標準的製薬手順を用いて決定することができる。毒性と治療（または予防）効果との間の用量比が、治療指数である。高い治療指数を示す活性化合物が好ましい。
【０１０２】
６．４ 投与
細胞増殖性障害を治療または予防するために用いられる時、ＳｙｋまたはＳｙｋ／Ｆｌｔ−３阻害化合物は、単独で、または１またはそれ以上の活性化合物の混合物として、またはこのような病気、および／またはこのような病気と関連した症状の治療に有用な他の薬剤と混合して、または組み合わせて、投与することができる。これらの活性化合物は、それ自体で、または製薬組成物として投与することができる。
【０１０３】
本発明の活性化合物を含んでいる製薬組成物は、従来の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠製造のすり潰し、乳化、カプセル化、エントラッピング、または凍結乾燥方法を用いて製造することができる。組成物は、活性化合物を、製薬的に用いることができる調製物に加工処理することを容易にする、１またはそれ以上の生理学的に許容しうる担体、希釈剤、賦形剤、または補助剤を用いて、従来の方法で配合することができる。投与された実際の製薬組成物は、投与方法によるであろう。ほぼあらゆる投与方法を用いることができ、これは、例えば局所、経口、全身、吸入、注入、経皮などを包含する。
【０１０４】
活性化合物は、それ自体で、または製薬的に許容しうる塩の形態で、製薬組成物中に配合することができる。本明細書において用いられているように、「製薬的に許容しうる塩」という表現は、実質的に生物学的有効性および活性化合物の特性を保持し、かつ生物学的または他の点でも望ましくないわけではない塩を意味する。このような塩は、当業界において周知であるように、無機および有機酸、および塩基から調製することができる。典型的には、このような塩は、対応遊離酸および塩基よりも、水溶液中に可溶である。
【０１０５】
局所投与のためには、活性化合物は、当業界において周知であるように、溶液、ジェル、軟膏、クリーム、縣濁液などとして配合することができる。
【０１０６】
全身配合物は、注入、例えば皮下、静脈内、筋肉内、クモ膜下、または腹腔内注入による投与のために設計されたもの、ならびに経皮、経粘膜経口、または肺投与のために設計されたものを包含する。
【０１０７】
有用な注入可能な調製物は、水性または油性ビヒクル中の１または複数のこの活性化合物の滅菌縣濁液、溶液、またはエマルジョンを包含する。これらの組成物はまた、配合剤、例えば縣濁剤、安定剤、および／または分散剤も含有しうる。注入のためのこれらの配合物は、単位投薬形態において、例えばアンプル、または多用量容器において提示されてもよく、添加防腐剤を含有してもよい。
【０１０８】
あるいは、注入可能な配合物は、使用前に、非限定的に、発熱物質のない滅菌水、緩衝剤、デキストロース溶液などを包含する適切なビヒクルで再構成するための粉末形態で提供されてもよい。この目的のために、活性化合物は、いずれかの当業界で公知の技術、例えば凍結乾燥によって乾燥され、使用前に再構成することができる。
【０１０９】
経粘膜投与のために、透過されるバリアに適した浸透剤が、配合物において用いられる。このような浸透剤は、当業界において公知である。
【０１１０】
経口投与のために、製薬組成物は例えば、従来の手段によって、製薬的に許容しうる賦形剤、例えば結合剤（例えば予めゼラチン化されたトウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、またはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えばラクトース、微晶質セルロース、またはリン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、またはシリカ）；崩壊剤（例えばジャガイモデンプン、またはナトリウムデンプングリコレート）；または湿潤剤（例えばナトリウムラウリルサルフェート）を用いて調製された錠剤またはカプセルの形態を取ってもよい。錠剤は、当業界において公知の方法、例えば糖または腸溶コーティングでコーティングされてもよい。
【０１１１】
経口投与のための液体調製物は、例えばエリキシル、溶液、シロップ、または縣濁液の形態を取ってもよく、またはこれらは、使用前に水または他の適切なビヒクルでの構成のための乾燥物質として提示されてもよい。このような液体調製物は、従来の手段によって、製薬的に許容しうる添加剤、例えば縣濁剤（例えばソルビトールシロップ、セルロース誘導体、または水素化食用脂）；乳化剤（例えばレシチンまたはアカシア）；非水性ビヒクル（例えばアーモンド油、油性エステル、エチルアルコール、または分別植物油）；および防腐剤（例えばメチルもしくはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエート、またはソルビン酸）を用いて調製することができる。これらの調製物はまた、必要に応じて、緩衝塩、風味料、着色料、および甘味料を含有してもよい。経口投与のための調製物は、活性化合物の制御放出を与えるように、適切に配合することができる。
【０１１２】
口腔内投与のために、組成物は、従来の方法で配合された錠剤またはトローチ剤の形態を取ってもよい。
【０１１３】
直腸および膣投与経路のために、活性化合物は、従来の座薬の基剤、例えばカカオバターまたは他のグリセリドを含有する溶液（保持浣腸）座薬または軟膏として配合されてもよい。
【０１１４】
吸入による投与のためには、活性化合物は、加圧パックからのエアゾールスプレー、またはネブライザの形態で、適切な推進薬、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適切なガスを使用して好都合に送達することができる。加圧エアゾールの場合、投薬単位は、計量された量を送達するためのバルブを備えることによって決定することができる。吸入器または注入器への使用のための例えばゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、化合物と適切な粉末基剤、例えばラクトースまたはデンプンとの粉末混合物を収容して配合することができる。
【０１１５】
長時間送達のために、活性化合物は、移植、例えば皮下、皮内、または筋肉内注入による投与のために、デポー調製物として配合されてもよい。このようにして例えば、活性成分は、適切なポリマーまたは疎水性材料を用いて（例えば許容しうる油中のエマルジョンとして）、またはイオン交換樹脂として、またはやや溶解性がない誘導体として；例えばやや溶解性がない塩として配合されてもよい。
【０１１６】
あるいは、経皮吸収のために活性化合物をゆっくりと放出する、接着性ディスクまたはパッチとして製造された経皮送達系を用いることもできる。この目的のために、活性化合物の経皮浸透を容易にするために、透過エンハンサーを用いることができる。適切な経皮パッチは、例えば米国特許第５，４０７，７１３号；米国特許第５，３５２，４５６号；米国特許第５，３３２，２１３号；米国特許第５，３３６，１６８号；米国特許第５，２９０，５６１号；米国特許第５，２５４，３４６号；米国特許第５，１６４，１８９号；米国特許第５，１６３，８９９号；米国特許第５，０８８，９７７号；米国特許第５，０８７，２４０号；米国特許第５，００８，１１０号；および米国特許第４，９２１，４７５号に記載されている。
【０１１７】
あるいはまた、他の製薬送達系を用いることもできる。リポソームおよびエマルジョンは、活性化合物を送達するために用いることができる送達ビヒクルの周知例である。ある有機溶媒、例えばジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）もまた、通常はより大きい毒性という代償を払うが、用いることもできる。
【０１１８】
製薬組成物は、所望であれば、活性化合物を含有する、１または複数の単位投薬形態を含有することができるパックまたはディスペンサーにおいて提示されてもよい。このパックは例えば、金属またはプラスチックホイル、例えばブリスターパックを含んでいてもよい。パックまたはディスペンサー装置は、投与のための説明書をともなってもよい。
【実施例】
【０１１９】
７．実施例
７．１ 実施例１：Ｓｙｋ誘発プレ−Ｂ細胞形質転換に対するＳｙｋ阻害化合物の効果
Ｓｙｋ阻害化合物によるＳｙｋ−形質転換細胞の増殖の阻害を証明する実験は、Ｗｏｓｓｎｉｎｇ，Ｔ．，Ｈｅｒｚｏｇ，Ｓ．，Ｋｏｈｌｅｒ，Ｆ．，Ｍｅｉｘｌｓｐｅｒｇｅｒ，Ｓ．，Ｋｕｌａｔｈｕ，Ｙ．，Ｍｉｔｔｌｅｒ，Ｇ．，Ａｂｅ，Ａ．，およびＪｕｍａａ，Ｈ．，“Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ Ｓｙｋ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ”、（準備中の原稿）に記載されている。この原稿に記載されている実験は、下に簡単に要約されている。
【０１２０】
染色体転座Ｔｅｌ−Ｓｙｋの結果として生じる異常なＳｙｋ変異体を、Ｔｅｌ−Ｓｙｋを発現するＩＲＥＳ−ＧＦＰベクターを有する、新たに単離された骨髄プレ−Ｂ細胞をレトロウイルス的に形質導入することによって、プレ−Ｂ細胞を形質転換するその能力について試験した。これらの細胞培養からのＩＬ−７の回収は、Ｔｅｌ−Ｓｙｋ発現細胞の濃縮、および安定ＩＬ−７非依存性細胞系の発生を生じ、このことは、Ｔｅｌ−Ｓｙｋ発現が、プレ−Ｂ細胞の増殖および形質転換を促進しうることを示している。Ｔｅｌ−Ｓｙｋ活性によるプレ−Ｂ細胞の形質転換を、Ｔｅｌ−ＳＹＫ形質導入細胞をＲＡＧ／γＣ−／−マウスに注入することによって確認した。これは、骨髄異形成疾患の症状を示す動物を生じた。データは、Ｔｅｌ−Ｓｙｋ発現細胞が、インビボで急速に増殖し、これによって攻撃的白血病を誘発しうることを示している。
【０１２１】
Ｔｅｌ−Ｓｙｋで形質転換された細胞中のＳｙｋ活性の阻害が細胞増殖を妨げるかどうかを試験するために、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤２，４−ピリミジンジアミン化合物ＩＶの効果を、処理済み細胞のＤＮＡ含有量を調べることによって、インビトロで試験した。化合物ＩＶは、これらの細胞中のκ軽鎖の発現によって示されているように、Ｓｙｋ誘発プレ−Ｂ細胞増殖を効果的に妨げ、プレ−Ｂ細胞が分化することを可能にした。データは、Ｓｙｋ発現が、白血病細胞の増殖のために必要とされる場合があること、およびＳｙｋキナーゼ活性の妨げが、白血病細胞増殖の阻害を生じうる場合を示している。
【０１２２】
７．２ 実施例２：定着白血病に対するＳｙｋ阻害剤の効果
白血病細胞の増殖に対するＳｙｋ阻害剤の効果を決定するために、マウス中への注入後に白血病を誘発するいくつかの腫瘍形成性プレ−Ｂ細胞系を用いた。腫瘍形成性細胞は、増殖のためにプレ−Ｂ細胞受容体（プレ−ＢＣＲ）を必要とし、Ｓｙｋが、プレ−ＢＣＲシグナル伝達カスケードのための重要なタンパク質であるので、Ｓｙｋ阻害剤は、これらの腫瘍形成性プレ−Ｂ細胞の増殖を阻害するであろうと予想される。１つの実験において、化合物ＶＩが増殖を妨げる能力を、Ｍｙｃ発現ベクターで形質導入されたプレ−Ｂ細胞を用いて調べ、ＩＬ−７の不在下で培養した。これらのインビボでの増殖能力を調べるために、細胞をＲＡＧ／γＣ−＋／−マウスに注入した。ＶＩが増殖を妨げる能力を、Ｍｙｃ形質導入細胞系を用いて、インビトロで試験した（図２Ａおよび図２Ｂ）。
【０１２３】
ＶＩが増殖を妨げる能力はまた、腫瘍形成性ＳＬＰ−６５−／−プレ−Ｂ細胞系を用いても調べた。これらのインビボでの増殖能力を調べるために、細胞をＲＡＧ／γＣ−＋／−マウスに注入した。ＶＩが腫瘍形成性ＳＬＰ−６５−／−プレ−Ｂ細胞系の増殖を妨げる能力を、インビトロで試験した（図３Ａおよび図３Ｂ）。
【０１２４】
Ｓｙｋ阻害化合物の効果を調べるのに有用な他の白血病細胞系は、例として非限定的に、Ｂ細胞リンパ種細胞系ＪＭ１（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−１０４２３）、ホジキンリンパ種細胞系ＲＰＭＩ−６６６６（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＣＬ−１１３）、前骨髄球性白血病細胞系ＨＬ−６０クローン１５（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−１９６４）、バーキットリンパ種細胞系ＧＬ−１０（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−２３９２）、急性骨髄性白血病細胞系ＢＤＣＭ（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−２７４０）、骨髄単球性白血病（ＥＢＶ）細胞系ＣＥＳＳ（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＴＩＢ−１９０）、ＥＢＶ形質転換形質細胞腫／骨髄腫細胞系ＭＣ−ＣＡＲ（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−８０８３）、およびＥＢＶ形質転換プラズマ細胞白血病細胞系ＡＲＨ−７７（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−１６２１）を包含する。
【０１２５】
７．３ 実施例３：化合物ＶＩＩのカルシウム塩形態のインビボ評価、およびシクロホスファミドで予め処理されたＮＯＤ−ＳＣＩＤ免疫不全マウスにおけるＭＶ４−１１急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）静脈内腫瘍植付けモデルにおける細胞滴定
Ｆｌｔ−３ ＩＴＤ突然変異を、罹患したＡＭＬ患者における予後の悪さおよび寛解率の低下と関連付け、治療的介入の魅力的な標的とした。調査は、変異体Ｆｌｔ−３ ＩＴＤ受容体が、Ｆｌｔ−３リガンド−非依存的に二量体化し、受容体の自己リン酸化が、結果として構成的活性化、増殖の増加、および変異体細胞の成長因子独立を生じることを示した。初期の調査は、カルシウム塩形態ＶＩＩが皮下腫瘍成長を減少させ、生存率を延ばし、Ｆｌｔ−３ ＩＴＤ突然変異を有する５百万のＭＶ４−１１ヒト急性骨髄性白血病細胞が静脈内（ｉ．ｖ．）接種されたマウスの全身腫瘍組織量を減少させたことを示した。この調査は、シクロホスファミドで予め処理されたＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスへの、５百万または１千万のどちらかのＭＶ４−１１白血病細胞のｉ．ｖ．注入の結果生じた病気の進行、重症度、および生存率に対する、４０ｍｇ／ｋｇのＶＩＩで一日２回の経口処理を通した、腫瘍成長の阻害におけるＶＩＩ投与の有効性を証明するために実施した。
【０１２６】
７．３．１ 実験方法
細胞系
白血病細胞系：ＭＶ４−１１ヒト急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）（供給業者：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ））を、ＲｉｇｅｌにおけるＯｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐによって維持し、採集した。細胞を、２００４年１１月３０日にＩＭＰＡＣＴ試験し、エクトロメリア、ＥＤＩＭ、Ｈａｎｔａａｎ、Ｋウイルス、ＬＣＭＶ、ＬＤＥＶ、ＭＡＤ、ｍＣＭＶ、ＭＨＶ、ＭＭＶ、ＭＰＶ、ＭＴＶ、マイコプラズマｓｐ．、ポリオーマ、ＰＶＭ，ＲＥＯ３、センダイ、ＴＭＥＶ、およびＧＤＶＩＩについてマイナスであった。
【０１２７】
細胞系維持：ＭＶ４−１１細胞を、イスコフ改変ダルベッコ培地（ＡＴＣＣ（登録商標）番号：３０−２００５）に、１．５ｇ／Ｌ重炭酸ナトリウム、８０％；胎仔ウシ血清、２０％（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（１０，０００ＩＵ／ｍｌおよび１０，０００ｕｇ／ｍｌ）（ＣｅｌｌＧｒｏ／Ｍｅｄｉａ Ｔｅｃｈ，カタログ番号３０−００２−Ｃｌ）を含有するように調節した４ｍＭ Ｌ−グルタミンとともに維持する。細胞を、対数増殖期に採集し、洗浄し、新鮮な培地に注入した。ＭＶ４−１１細胞を、動物あたり５×１０６または１０×１０６細胞で接種した。
【０１２８】
薬剤学
この調査において用いられた試験製品および試験配合物の明細を、以下の配合物シートに列挙する。試験製品およびビヒクル配合物は、投薬（ビヒクル（ロット：１０２４−１５−０１）；８ｍｇ／ｍＬ ＶＩＩカルシウム塩（ロット：１０２４−１５−０３）の開始前に薬剤部によって作製した。カルシウム塩形態ＶＩＩは、ＶＩの等濃度で調製した。配合物を４℃で保存し、光保護し、使用前にボルテックスた。
【０１２９】
【化１１】
動物および収容
生後約１０週のメスＮＯＤ．ＣＢ１７−Ｐｒｋｄｃ ｓｃｉｄ／Ｊ（ＮＯＤ／ＳＣＩＤ）マウス（ｎ＝６０；出生日２００５年５月３０日；Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥから２００５年７月１９日に入荷）を調査のために用いた。ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウス（系統番号００１３０３）は、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙからのみ入手可能であり、ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスに独特な生来の適応的免疫における多重欠陥は、ヒト造血細胞での再構成のための優れたインビボ環境を提供する。約５０匹のマウスにシクロホスファミドを与え、この調査の生存中部分のために用いたが、追加のマウスは、植付けレベルのフローサイトメトリー分析用のバックグラウンド染色の評価のための非腫瘍対照のために用いた。わずかに年長のマウス（＞１９グラム）を、シクロホスファミド注入後の過剰な体重減少による早期の死を避けようとするために用いた（Ｖ０５０１４４と比較して）。
【０１３０】
動物を、換気されたＨＥＰＡ−フィルターケージラック（Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ Ｄｅｓｉｇｎ，Ｓｉｌｏａｍ Ｓｐｒｉｎｇｓ，ＡＺ）のＭｉｃｒｏアイソレーターケージに、ケージあたり５匹ずつ収容した。到着の際、これらを、使用前に少なくとも４作業日の間順化させた。温度を７２±５°Ｆ、相対湿度を３５〜７０％に維持し、１２時間明／暗サイクルを用いた。マウスには、認定されたげっ歯類食（Ｄｅａｎｓ Ｆｅｅｄ，Ｓａｎ Ｃａｒｌｏｓ，ＣＡ）を無制限に与えた。オートクレーブされたＲ．Ｏ．飲料水が無制限に利用可能であった。ケージおよび食料を使用前にオートクレーブした。すべての生存中手順は、Ｒｉｇｅｌ ＩＡＣＵＣによって承認された。
【０１３１】
ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスは、生存の間中は、ＮＯＤ自己免疫糖尿病傾向のバックグラウンドにもかかわらず、インスリン炎および糖尿病のどちらでもないが、特定の病原を含まない条件下では、この共通遺伝子系統には胸腺リンパ腫の高い発生率があり、平均寿命をわずか８．５ヶ月に制限される。染色体１１上のＥｍｖ−３０プロウイルスは、ＮＯＤ−ＳＣＩＤにおいて生後５〜６ヶ月に始まる胸腺腫の高い頻度を結果として生じ（３，４）、（５）、これは、レシピエントとしてＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスを用いて実施される実験期間を制限する。この実験では、すべての生存マウスにおいて、この調査における結果変数に対する自然な胸腺腫の影響を制限するために、マウスが生後約５ヶ月（調査の８３日目）に達したとき終結させた。
【０１３２】
動物手順
植付けの強化のための骨髄枯渇：これらの動物についての順化期間の終わりに（この調査において＞３週間）、マウスを、２日間、ついで下記のように、側面尾静脈を介した白血病細胞の静脈内（ｉ．ｖ．）注入前７２時間の残存期間、１５０ｍｇ／ｋｇ／日の腹腔内注入により、０．９％滅菌生理食塩水（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）中で調製された、（０．２２μＭシリンジフィルターを用いて）滅菌濾過されたシクロホスファミドで予め処理した。
【０１３３】
腫瘍接種：調査の０日目、マウスを、表１に概要が示されているように１００マイクロリットルの新鮮培地中に再縣濁された５百万または１千万ヒトＭＶ４−１１白血病細胞の静脈内尾静脈注入によって一回接種した。
【０１３４】
投薬：マウスに、ヒトＭＶ４−１１細胞（０日目）を接種した後、調査の１７日目に投薬を開始した。マウスには、調査の間、投薬間に最小８時間の間隔を空けて、５ｍＬ／ｋｇ投薬容量で、ビヒクルまたは４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩのどちらかを一日２回（ｂｉｄ）経口（ＰＯ）投与した。
【０１３５】
実験手順
腫瘍モデル：この調査は、腫瘍の植付けを強化するためのシクロホスファミド予備処理とともに、宿主としてＮＯＤ−ＳＣＩＤ免疫不全マウスを用いて、ネズミ静脈内ＭＶ４−１１白血病モデルにおける腫瘍の植付け、病気の進行、重症度、および全生存に対する、様々な用量のＶＩＩの効果を評価するよう設計した。歴史的データは、＞２０％体重減少、瀕死状態、後肢麻痺による運動性の多大な損失、または終点としての予期せぬ死によって決定された腫瘍細胞注入の均一な致死率にもかかわらず、骨髄（ＢＭ）および末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）における可変腫瘍細胞植付けを示している（調査Ｖ０５０１２３およびＶ０５０１４４）。加えて、シクロホスファミドは、このモデルにおいて致死のために必要であることが証明された。ビヒクル対照マウスにおける５１日間の中央値生存時間を示す公開された調査もまた、ＢＭ区画において検出された２〜１９％ヒト細胞の範囲の犠牲において、可変ＢＭ植付けを実証している。
【０１３６】
この調査は、調査から以前の有効性データを確認しようとして実施すたが、同様に、５百万または１千万の細胞接種が、骨髄および末梢血における腫瘍細胞植付けにおいて同様な不一致を生じるかどうか、またはこれらのマウスにおいて結果として生じる致死率を改変するかどうかを決定するためにも実施した。いくつかの動物における植付けの検出可能レベルはパイロット調査において腫瘍細胞注入の４週間後に早くも観察され、歴史的有効性データがこのレジメンで決定しているので、腫瘍細胞注入の約２週間後に開始し、毎日一日あたり２回（ｂｉｄ）のスケジュールで、４０ｍｇ／ｋｇにおいてビヒクルまたはＲ９４５７８８カルシウム塩で、動物は経口的に（ＰＯ）処理した。動物には、安楽死するまで、またはこの調査の終わりまで、このレジメンを続行した。この実験では、すべての生存マウスにおいて、自然な胸腺腫の発症の影響を制限するために、マウスが生後約５ヶ月（調査の８３日目）に達したとき終結させた。自然な胸腺腫の発症は、ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスにおいて、生後約５〜６ヶ月で始まるのがわかる。
【０１３７】
調査の設計：０日目（２００５年８月１２日）、マウスに、側面尾静脈を介してマウスあたり５百万または１千万細胞で、新鮮培地中のヒトＭＶ４−１１細胞をｉ．ｖ．注入した。ＭＶ４−１１細胞注入後３日目（２００５年８月１５日）までに、無作為化または処理の前に、潜在的にはシクロホスファミド処理によって、１匹のマウスを過剰な体重減少からの早期の死によって除外した。残りの動物を体重によって処理グループに無作為に入れ、細胞注入後１７日目（２００５年８月２９日）に投薬を開始した。グループ１〜４の平均体重は、それぞれ２０．６６±０．４３、２０．２３±０．４１、２０．１８±０．５４、および２０．８８±０．５９であった。処理グループの概要を、表１に示す。
【０１３８】
【表１】
疾病の進行および疾病の重症度：全体的な疾病の重症度は、体重減少、臨床的観察事項、検死発見事項、および選択された組織中の腫瘍細胞植付けの定量の組み合わせから決定した。マウスを毎週２〜３回体重測定し、パーセント体重変化を計算した。ＩＡＣＵＣ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ Ｒｉｇｅｌ ６−２００２，“Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ｎｏｖｅｌ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ／Ｍｏｕｓｅ Ｔｕｍｏｒ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ Ｍｏｄｅｌｓ”に概要が示されているように、嗜眠、かき乱された毛などをともなう、病的状態、明らかな消耗を有する後肢麻痺、重症の悪液質、または２０％超の体重減少の最初の兆候があったとき、動物を調査から除去し、安楽死させた。犠牲時、動物をＣＯ２ガスで麻酔し、血液を心臓穿刺によって収集した。動物からの血液を、Ｋ２ＥＤＴＡコーティングしたＭｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ（ラベンダートップ）チューブに移した。全血を間接的に氷に載せ、以下のセクションに記載されているように、フローサイトメトリー染色のために加工処理した。病気の重症度をさらに評価するために、全体試験において、触知可能なまたは疑わしい腫瘍の位置および描写を検死の際に注意深く書き留めた。
【０１３９】
腫瘍細胞植付け：全身腫瘍組織量を評価するために、骨髄および末梢血中のＭＶ４−１１腫瘍細胞の分布は、ヒトおよびマウス表面マーカー染色を用いて、フローサイトメトリー分析を介して、数匹のマウスの犠牲の上に決定した。
【０１４０】
腫瘍植付けの範囲は、数匹のマウスにおいて、犠牲の際の大腿部および／または脛骨の単離によって評価した。骨髄（ＢＷ）を１ｍｌの冷ＰＢＳを有するクリーンなエッペンドルフ管内に吸引し、フロー染色前に氷に保持した。すべての残留組織または腫瘍を、組織病理学および免疫組織化学（ＩＨＣ）のために１０％緩衝ホルマリンに固定した。末梢血もまた、心臓穿刺を介して得、Ｋ２ＥＤＴＡコーティングしたＭｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ（紫色）管に入れた。赤血球を溶解し、試料を洗浄し、腫瘍細胞植付けレベルを決定するためのフローサイトメトリー染色および分析のために、単核細胞（ＰＢＭＣ）のみが残った。
【０１４１】
ヒトＭＶ４−１１腫瘍細胞を同定するために、ＢＭおよびＰＢＭＣ試料を、マウスＣＤ４５、ヒトＣＤ４５、ヒトＨＬＡ、およびヒトＣＤ３３細胞表面マーカーに特異的な抗体で染色した。次いでフローサイトメトリー染色および分析を、ＶＩＩ処理およびビヒクル処理された動物から無作為に選択された試料中に存在するヒトＭＶ４−１１白血病細胞のパーセントを同定および計量するために、この多重マーカーストラテジーを用いて実施した（付属書５および６）。ヒトＭＶ４−１１細胞のパーセントは、全事象（ヒトＣＤ３３＋ＨＬＡ＋およびネズミＣＤ４５＋事象の合計として規定される）からのＣＤ３３＋ＨＬＡ＋事象の数として規定した。調査におけるすべての動物を収集および分析するためにあらゆる努力がなされた。しかしながら、このモデル中のビヒクル処理されたマウスにおける死の突然性によって、分析にはより少ない試料しか利用可能でなく、動物の数は、これらのグループの間で可変であった。細胞調製およびフロー染色および分析手順の詳細については、付属書５および６を参照されたい。
【０１４２】
統計分析：マウスの生存を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ４．０（登録商標）ソフトウエアパッケージを用いて、相対的疾病重症度の決定として（ｎ＝１８〜２０匹／グループ）、カプラン−マイヤー積極限法によって評価した。可能な場合、曲線比較のためのＬｏｇ Ｒａｎｋ（Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌ）試験（両側ｐ値）、生存動力学のためのハザード比、および全体の中央値生存を含めた追加の生存率曲線分析もまた、Ｐｒｉｓｍ ４．０（登録商標）を用いて計算した。調査終了時（８３日目）に生存しているすべての動物を、Ｐｒｉｓｍ（登録商標）分析において統計目的のために審査した。生存曲線の傾斜として規定されたハザード統計は、被験体がどれほど急速に死にかけているかの尺度である。したがって報告されたハザード比は、２つのグループ間の死亡率の比較である。例えば、ハザード比が２．０であると、１つのグループ中の死亡率は、他方のグループの死亡率の２倍である。一般に、Ｐｒｉｓｍ ４．０（登録商標）は、Ｄ．Ｇ．Ａｌｔｍａｎ，Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９１，ＣｈａｐｍａｎおよびＨａｌｌに詳細に記載されているような標準的計算を用いる。すべての結果は、別途指示しない限り、平均±ＳＥＭとして表示する。
【０１４３】
加えて、寿命におけるパーセント増加（％ＩＬＳ）は、次の方程式を用いて、ビヒクル対照グループと比較した各グループについての計算された中央値死亡日を用いて決定した。式中、ＤＯＤを死亡日と規定する：
％ＩＬＳ＝（中央値ＤＯＤ処理−中央値ＤＯＤビヒクル）／中央値ＤＯＤビヒクル×１００
４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩで処理されたマウスは、規定されない中央値生存時間を有したが、それは、不適切な数のマウス（＜５０％）が、調査の終了までに死んだからである。したがって％ＩＬＳの計算は、このグループについて８０日の最大中央値生存率と仮定し、計算値よりも大きいことを意味した。
【０１４４】
植付けデータは、不等質分散がバートレット検定によって検出されない場合、一元ＡＮＯＶＡを用いて分析した。この場合、不等質の分散を説明するために、ウエルチ補正を用いて非対両側スチューデント検定を実施した。細胞の総数あたりのパーセントＣＤ３３＋ＨＬＡ＋細胞の標準化を実施した。平均パーセント腫瘍細胞は、各試料について次の方程式を用い、ついでこれらの値の平均を測定することによって決定した。マウス細胞の総数を、単一細胞表面マーカーネズミＣＤ４５を用いて決定し、ヒト事象の総数を二重ヒト表面マーカーＣＤ３３およびＨＬＡを用いて決定した。
【０１４５】
パーセント腫瘍細胞＝［（＃ＣＤ３３＋ＨＬＡ＋二重陽性事象）／（総＃ネズミＣＤ４５＋および＃ＣＤ３３＋ＨＬＡ＋事象）］×１００
このモデル中のビヒクル処理されたマウスにおける死の突然性によって、分析にはより少ない試料しか利用可能でなく、本発明者らが統計的有意性を得る能力を制限した。十分な試料サイズおよび無作為サンプリングは、ＶＩＩ処理されたマウスの場合に得た。したがって、２０、４０、および８０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩ処理されたマウス間で比較を行ない、統計を上記のように実施した。
【０１４６】
カテゴリー変数、例えばグループあたりの腫瘍動物の総数について、ｐ値は、同様にＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ４．０（登録商標）ソフトウエアパッケージを用いて実施された、９５％信頼区間を有する両側フィッシャー精密検定を用いて、処理グループ対ビヒクルグループの比較の結果を反映している。
【０１４７】
７．３．２ 結果
生存率に対する化合物ＶＩＩ処理の効果：全体として、ＶＩＩで処理された動物は、検死の際に調べた時、長い生存率および触知可能な腫瘍塊体の減少数を示した。５百万ＭＶ４−１１細胞が接種された、ビヒクル処理されたマウスは、４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩ処理されたマウスにおける７９日と比較して、５４日の中央値生存時間を有した。１千万腫瘍が接種された、ビヒクル処理されたマウスは、５４日の中央値生存時間を有し、４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩ処理されたマウスについて、中央値死亡日は不確定数であった（＞８３日）。１千万ＭＶ４−１１細胞グループにおいて４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩで処理されたマウスは、不確定中央値生存時間を有したが、それは、不適切な数のマウス（＜５０％）が調査の終了までに死んだからである。したがって、％ＩＬＳの計算は、このグループについて８３日の最大中央値生存率と仮定し、計算値よりも大きいことを意味した。ＶＩＩ処理された動物とビヒクル処理された動物との間の全体の生存率において、有意差が見られた（５百万細胞での４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩについてはＬｏｇＲａｎｋ ｐ＜０．００２２および％ＩＬＳ＝４５％、１千万細胞での４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩについてはＬｏｇＲａｎｋ ｐ＜０．０００１および％ＩＬＳ＝＞５４％（このグループについて中央値ＤＯＤ＝８３と仮定して））。
【０１４８】
【表２】
８３日目には、ビヒクル処理グループには生存動物はいなかった。これに対して、５百万および１千万ＭＶ４−１１細胞が注入されたＶＩＩ処理グループからのマウスは、それぞれ５匹および９匹の生存マウスを有した。５０％以上のマウスが、ビヒクル対照の０％生存率と比較して、４０ｍｇ／ｋｇでＶＩＩ処理された１千万細胞グループにおいて８３日目まで生存した。
【０１４９】
疾病の重症度および腫瘍頻度および分布に対する化合物ＶＩＩの効果
ビヒクルおよびＶＩＩ処理動物の疾病の進行を比較した時、有意な表現型の差が明白であった。検死の際、ビヒクル処理動物における触知可能な腫瘍が、様々なリンパ節（ＬＮ）、下大静脈近くの下領域の脊髄（ＬＮの可能性がある）、胸壁に、および肋骨および胸骨の周りに、気管の近くに、顎および喉区域（おそらくは唾液腺およびＬＮ関連）において観察された。腫瘍はまた、腎臓、卵巣、および心臓にも見られた。加えて、非常に大きい腫瘍が、多くの場合、肩、腕、および脚の骨の周りに見られた。いくつかのマウスは、柔らかで滑らかな脳または明白な腫瘍を有するのが注目され、１匹のマウスは、初期の調査におけるＭＯＬＭ１３白血病モデルからの数匹のマウスと同様、検死の際に腫瘍があるように見える、非常に拡張された目を有していた。
【０１５０】
ビヒクル処理された動物は、５百万細胞グループにおいてはＭＶ４−１１注入の４２日後、１千万細胞グループにおいては４８日後に早くも後肢麻痺を明らかに示した。検死の際、ビヒクル処理された動物における触知可能な腫瘍が、以前の調査と同様な位置において観察された。全体で、５百万腫瘍細胞が接種された８匹のマウスのうちの８匹が、検死の際に触知可能な腫瘍塊体を有し、多くのマウスは、腫瘍を有すると同定された多重の解剖学的部位を有した。ビヒクル処理グループからの５匹のマウスは、死んでいるのが発見され、これらのマウスのうちの４匹は、進行した崩壊によって検死報告を有しておらず、結果として、このグループにおいて全部でわずか８つの検死となった。調査の終了まで（ＭＶ４−１１移植後８３日目）に、１２匹のビヒクル処理動物のうちの１２匹は終結させ、これらの動物のうち５匹は死んでいるのが発見され、これらのうち３匹は検査の際に瀕死状態にあり、２匹は、＞２０％の体重減少で犠牲にし、２匹は、重い衰弱と関連したＨＬＰのために犠牲にした。
【０１５１】
同様に、１２匹のマウスのうち１１匹は、目に見える腫瘍塊体を有し、多くは、１千万細胞が接種されたビヒクル処理マウスにおいて同定された多重部位を有していた。全部で１匹のビヒクル処理動物が死んでいるのが発見され、１匹は進行した崩壊によって検視を実施せず、その結果、このグループでは全部で１１の検死を行なった。調査の終了の際（ＭＶ４−１１移植後８３日目）、１３匹のビヒクル処理マウスのうち１３匹は終結させ、これらの動物のうち１匹は死んでいるのが発見され、これらのうち３匹は調べた際に瀕死状態にあり、７匹は＞２０％の体重減少を有し、２匹は重い衰弱に関連したＨＬＰのために犠牲にした。
【０１５２】
好対照として、４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩで処理されたマウスはほとんど腫瘍を示さず、５百万細胞グループにおいて検死された全部で１１匹の動物のうち３匹のみ、および１千万細胞グループにおいて１３匹の動物のうち７匹が、いくらかの目に見えるか、または触知可能な腫瘍を示した。処理グループ中のこれらの動物の大部分は、ビヒクル処理グループよりもはるかに小さい腫瘍を示した。腫瘍は、同様な解剖学的部位に位置し、調査の終了までに、１２匹の動物のうちの７匹は５百万細胞４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩ処理グループにおいて終結させ、これらの動物のうちの２匹は死んでいるのが発見され、１匹は調べた際に瀕死状態にあり、４匹は＞２０％の体重減少を有し、ＨＬＰのために犠牲にした動物はいなかった。同様に、１千万ＭＶ４−１１細胞が接種された４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩ処理動物はほとんど腫瘍を示さず、いくつかのマウスが、拡張された唾液腺、またはわずかに拡張されたＬＮを有した。調査の終了の際、４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩ処理マウス１３匹のうちわずか４匹は、これまでに終結させ、３匹のマウスは＞２０％の体重減少を有し、１匹のマウスは調べた際に瀕死状態にあるのが発見された。全体として、ＶＩＩ処理マウスは、腫瘍の総数、検死の際に観察された腫瘍の相対サイズ、およびこの調査における疾病の全体的な重症度の有意な減少を示し、４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩ処理は、初期の調査において見られたのと同様な有効性を示した。
【０１５３】
骨髄（ＢＭ）および末梢血（ＰＢ）におけるＭＶ４−１１腫瘍細胞の植付けに対する化合物ＶＩＩの影響：以前の調査と相関させるために、骨髄または末梢血におけるＭＶ４−１１植付けのレベルもまた、いくつかの動物において終結時に調べた。本発明者らの最高の努力にもかかわらず、この実験におけるビヒクル処理マウスの死の突然性によって、いくつかの試料は、分析のために利用不可能であった。初期の調査とは異なって、犠牲の際のＶＩＩ処理動物の骨髄および末梢血における平均パーセントＭＶ４−１１腫瘍細胞の統計学的に有意な減少は、ビヒクル処理動物と比較したとき、接種された細胞の滴定とは無関係に観察された（表３）。
【０１５４】
５百万細胞が接種されたビヒクル処理マウスは、ＢＭ（ｎ＝６）およびＰＢ（ｎ＝４）中に、それぞれ２５％および６１％ＣＤ３３＋／ＨＬＡ＋ヒト腫瘍細胞を有していた。対して、５百万細胞が接種されたＶＩＩ処理マウスは、ＢＭ（ｎ＝８）およびＰＢ（ｎ＝８）中に、それぞれ１％および０．６％ＣＤ３３＋／ＨＬＡ＋ヒト腫瘍細胞を有していた（ビヒクル対照に対して、４０ｍｇ／ｋｇについて、ＢＭはｐ＝０．１３、ＰＢはｐ＝０．０２である）。１千万細胞ビヒクル処理グループは、ＢＭ（ｎ＝８）およびＰＢ（ｎ＝８）中に、それぞれ１３％および４５％ＣＤ３３＋／ＨＬＡ＋ヒト腫瘍細胞を有していた。対して、１千万細胞ＶＩＩ処理グループは、ＢＭ（ｎ＝１３）およびＰＢ（ｎ＝１１）中に、それぞれ５％および３％ＣＤ３３＋／ＨＬＡ＋ヒト腫瘍細胞を有していた（ビヒクル対照に対して、４０ｍｇ／ｋｇについて、ＢＭはｐ＝０．０５、ＰＢはｐ＝０．００７である）。
【０１５５】
【表３】
（）内の数字は、汚染が疑われる２つのＰＢ試料を除外するために調節された値を反映する（各グループにおいてｎ＝１）。これらの試料は、心臓穿刺による血液収集を試みている間に、乳白色の浸出液を有することが注目され、その後、検死の際に、心臓または胸腺の近くに腫瘍を有することが注目された。これら２つの疑われた値は、ビヒクルおよび４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩグループ（１千万細胞）において、それぞれ９８％および９３％腫瘍細胞を示した。
【０１５６】
＊平均％腫瘍細胞は、ＣＤ３３＋ＨＬＡ＋事象の数／総事象として規定し、ここで、総事象＝ネズミＣＤ４５＋細胞の数＋ＣＤ３３＋ＨＬＡ＋事象の数である。
【０１５７】
＊＊ナイーブ試料を、３つの別々の調査のうち別々の３日で染色した。値は、アッセイの検出限界を反映するが、それは、マウスにＭＶ４−１１腫瘍細胞を注入しなかったからである。
【０１５８】
＊＊＊統計的有意性は、試料サイズが等質分散についてのバートレット検定には小さすぎる事象でさえ、データ中の不等質分散を説明するために、ウエルチ補正を有する非対両側スチューデントｔ検定を用いて決定した。
【０１５９】
これらのデータは、ビヒクルグループと比較した時、ＶＩＩ処理でのＢＭ中の全身腫瘍組織量において９６％および５９％減少（それぞれ５百万および１千万細胞注入グループ）、およびビヒクルグループと比較した時、ＶＩＩ処理での腫瘍細胞植付けにおいてＰＢ中の９９％および９４％減少（それぞれ５百万および１千万細胞）を示している（表４）。
【０１６０】
【表４】
（）内の数字は、汚染が疑われる試料を除外するために調節された値を反映する（各１千万細胞ＰＢグループにおいてｎ＝１）。これらの試料は、心臓穿刺によって血液収集を試みている間、乳白色の浸出液を有することが注目され、その後、検死の際に、心臓または胸腺の近くに腫瘍を有することが注目された。これら２つの疑われた値は、ビヒクルおよび４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩグループ（１千万細胞）においてそれぞれ９８％および９３％腫瘍細胞を示した。
【０１６１】
ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスにおける化合物ＶＩＩの薬物動力学：ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスにおける初期のＰＫデータは、初期の調査において、この調査における投薬に先立って生成された。結果は、２０、４０、または８０ｍｇ／ｋｇ用量および暴露でのＶＩの血漿レベルの用量比例増加が投薬後２〜４時間に限定され、ＶＩの血漿レベルは、すべてのメスマウスにおいて投薬後６時間までには事実上検出不可能であったことを示している。オスは、メスと比較したとき、同等の用量および血漿中のＶＩレベルのより長い期間で、より高い暴露を示した。
【０１６２】
初期の調査および他の調査において調製された調査中の配合物中に観察された沈殿物によって、調査終了後、残りの投薬溶液を用いて追加のＰＫデータを得た。ＮＯＤ−ＳＣＩＤメスマウス（ｎ＝４）にＶＩＩの４０ｍｇ／ｋｇ用量溶液を投薬し、投薬後１時間で血漿を得た。表５に示されているように、残留配合物を用いたＰＫデータは、４匹の動物間で中程度に可変であり、パーセント変動係数（％ＣＶ）値は２５％であった。１時間の暴露について得られた血漿ＶＩ濃度は以前のＰＫ調査において得られた値と同様であり、これらの配合物が匹敵しうることを示した。
【０１６３】
表５Ａおよび５Ｂ：ＶＩＩカルシウム塩のＰＯ投与：血漿中の化合物ＶＩの平均濃度（ｎｇ／ｍＬ）
【０１６４】
【表５Ａ】
【０１６５】
【表５Ｂ】
【０１６６】
【表６】
７．３．３ 結論
マウス匹あたり１千万細胞でのＭＶ４−１１腫瘍細胞の静脈内投与は、５百万細胞と比較して、多重の解剖学的部位への腫瘍のより大きい播種を結果として生じた。さらに、１千万細胞が接種されたマウスはより一貫して、骨髄および末梢血における植付けの高いレベルを有していた。播種されたＭＶ４−１１腫瘍を保有するマウスへの４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩの投与は、細胞滴定とは関係なく、全体的生存率および病気関連後遺症に関して、ビヒクル処理マウスと比較したとき、顕著な有効性を証明した。加えて、ＶＩＩは、この調査において、６０日超の期間、ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスによって十分に許容され、用いられた配合物は、以前のＰＫ調査においてと同様な全身暴露を得るのに適しているように見えた。
【０１６７】
要約すれば、ＶＩＩ処理マウスは、同定された総腫瘍の数、腫瘍のある動物の総数において、および体重減少、検死の際の状態、および他の生存中の臨床観察事項によって測定された疾病の重症度において、薬品関連の減少を再現可能に証明した。この調査からのデータは、以前の有効性調査と同様であり、ＶＩＩ処理では、ＭＶ４−１１保有マウスの生存率の度重なる延長を示した。加えて、ＶＩＩで処理されたマウスは、ビヒクル対照と比較したとき、骨髄および末梢血において、検出可能なより少ないＭＶ４−１１腫瘍細胞を証明した。これらのデータは、Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害剤が、ＦＬＴ−３ＩＴＤを保有する白血病患者、またはＦｌｔ−３突然変異に関連する他の白血病の治療のための貴重な治療薬でありうることを示唆している。
【０１６８】
７．４ 実施例４：ＭＶ４−１１腫瘍移植片からの溶解物における構成的Ｆｌｔ−３活性の阻害
初期の調査は、ＭＶ４−１１ヒトＡＭＬ細胞の処理が結果としてＦｌｔ−３の構成的リン酸化の阻害を生じたことを示した。これらのデータがあるとして、総Ｆｌｔ−３に対するＦｌｔ−３のリン酸化を、ヒトＦｌｔ−３の免疫沈降（ＩＰ）を用いて、この調査からの無作為に選択されたマウスからの腫瘍細胞溶解物においてエキソビボで評価し、その後リン酸化Ｆｌｔ−３のウェスタンブロット分析を次のように実施した。
【０１６９】
７．４．１ 実験プロトコル
腫瘍溶解物の調製
１．腫瘍をできるだけ早く採集する。
２．凍結腫瘍を液体窒素中に微粉砕する。
３．プロテアーゼ阻害剤およびホスホターゼ阻害剤カクテル（Ｓｉｇｍａ、Ｐ５７２６、１ｍｌ／１００ｍｌ溶解緩衝剤）を含有する、２５０ｍｇ／１ｍｌ氷冷ＲＩＰＡ緩衝剤（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｓｃ−２４９４８）中に、重量を測り、標準化する。
４．氷にて均質化する。
腫瘍溶解物である透明な上澄み液をマイクロ遠心分離し、収集する。
【０１７０】
タンパク質濃度を測定するためのＢＣＡアッセイ
ＢＣＡアッセイキットをＰｉｅｒｃｅ Ｐｒｏｄ＃２３２２７から得た。
１．ＢＳＡ標準の調製：
２０００ｕｇ／ｍｌ→１５００ｕｇ／ｍｌ→１０００ｕｇ／ｍｌ→７５０ｕｇ／ｍｌ→５００ｕｇ／ｍｌ→２５０ｕｇ／ｍｌ→１２５ｕｇ／ｍｌ→２５ｕｇ／ｍｌ
２．冷ＰＢＳで試験試料を前希釈する（腫瘍溶解物１：２０希釈）
３．２００ｕｌ ＢＣＡ作業溶液＋２５ｕｌ標準／試料、３７℃で３０分間インキュベートする。
４．プレートを冷却し、ＯＤ５７０ｎｍを読取る。
【０１７１】
免疫沈降
１．１ｍｇの腫瘍溶解物を取り、一次抗体２ｕｇ（抗Ｆｌｔ−３ Ｓ−１８、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、＃ｓｃ−４８０）を添加し、溶液を溶解緩衝剤で５００ｕｌに調節する。４℃で１時間穏やかに振動させながらインキュベートする。
２．タンパク質Ａ／Ｇプラス−アガロースビーズ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、ＳＣ−２００３）４０ｕｌを添加する。室温で１時間穏やかに振動させながらインキュベートする。
３．４℃で３０秒間マイクロ遠心分離する。５００ｕｌの１×溶解緩衝剤で３回ペレットを洗浄する。洗浄の間、氷上に保持する。
４．３０ｕｌの２×トリス−グリシンＳＤＳ負荷緩衝剤＋５ｕｌの還元剤１０×（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でペレットを再縣濁する。
５．試料を５分間９５〜１００℃へ加熱する。
６．試料を−８０℃で保存する。
【０１７２】
ウェスタンブロット手順
１．８％トリス−グリシンゲルに２０ｕｌの試料を負荷する。
２．１×トリス−グリシンＳＤＳ作業緩衝剤中で作業する。
３．１×トリス−グリシン転移緩衝剤中でＰＶＤＦ膜へ移す。
４．室温で１時間、１％ＢＳＡ／ＴＢＳＴ（ＴＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０）中で遮断する。
５．一次抗体１：５，０００を一晩４℃で添加する。
【０１７３】
抗−ホスホチロシンクローン４Ｇ１０（マウスモノクローナル、Ｕｐｓｔａｔｅ、＃０５−３２１）。
抗−ホスホ−Ｆｌｔ−３（Ｔｙｒ５９１）（マウスｍＡｂ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃３４６６Ｓ）。
６．ＴＢＳＴ中で２時間洗浄する。
７．５％ミルク／ＴＢＳＴ（ブロッティンググレード遮断剤、ノンファットドライミルク、Ｂｉｏ−Ｒａｄ、＃１７０−６４０４）中で１時間の、２°Ａｂ抗−マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＮＡ９３１Ｖ）１：５，０００。
ＥＣＬ−プラス（Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＲＰＮ２１３２）の短時間暴露。
【０１７４】
膜のストリッピングおよびリプロービング
１．膜をストリッピング緩衝剤（Ｐｉｅｒｃｅ、＃２１０６２）に沈め、３７℃で１時間インキュベートする。
２．膜をＴＢＳＴ中で１５分間、２回洗浄する。
３．膜を１％ＢＳＡ／ＴＢＳＴで１時間遮断する。
４．５％ミルク／ＴＢＳＴ中の抗−Ｆｌｔ−３ １：５，０００（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、＃ｓｃ−４８０）を添加し、４℃で一晩インキュベートする。
５．ＴＢＳＴ中で２時間洗浄する。
６．室温で１時間、５％ミルク／ＴＢＳＴ中の２°Ａｂ抗−ウサギＩｇＧ−ＨＲＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＮＡ９３４Ｖ）１：５，０００。
７．ＥＣＬ−プラスの短時間暴露。
【０１７５】
加えて、ブロットを総Ｆｌｔ−３レベルについてリプローブした。Ｆｌｔ−３の構成的リン酸化は、ビヒクル処理対照と比較したとき、用量依存的に４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩ処理動物からの腫瘍において低下した。
【０１７６】
７．４．２ ＭＶ４−１１腫瘍異種移植片のリン酸化ヒストンＨ３分析
腫瘍細胞増殖についてのマーカーとして、ヒト特異的リン酸化ヒストンＨ３（ｐｈＨ３）の免疫組織化学染色を用いて、この調査からの３匹の無作為選択されたマウスからのホルマリン固定腫瘍切片において、増殖をエキソビボで評価した。ヒトｐｈＨ３発現は、ＶＩＩでの処理後、用量依存的に腫瘍切片において低下した。ビヒクル処理されたマウスからのＭＶ４−１１腫瘍異種移植片と比較したとき、２０および４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩでの処理は結果として、それぞれｐｈＨ３染色の５３％および７１％阻害を生じた。これらのデータは、ＶＩＩ阻害がインビボでのＭＶ４−１１腫瘍の増殖能力を減少させ、この調査の生存中部分の間に観察された減少した腫瘍容積と相関関係があることを示している。減少した増殖は、減少した構成的Ｆｌｔ−３リン酸化による可能性があるが、それは、この活性が、インビトロでのＭＶ４−１１細胞の生存に必要とされることが証明されているからである。
【０１７７】
７．４．３ 下流シグナル伝達事象の阻害
２６日間４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩで治療されたマウスからの腫瘍切片の追加の免疫組織化学染色は、減少したＳＴＡＴ５およびＥＲＫ１／２リン酸化を証明した。これらは、ＭＶ４−１１細胞中のＦｌｔ−３：ＩＴＤシグナル伝達経路における下流分子である（図１１）。
【０１７８】
７．５ 実施例５：急性骨髄性白血病細胞に対する化合物ＶＩの調査、およびキナーゼ阻害剤ＡＧ１２９６との比較
ＡＭＬ細胞または３２Ｄトランスフェクタントを１ｕＭのＶＩで４８時間（ＡＭＬ）または２４時間（３２Ｄ）処理し、アポトーシス細胞の％増加は、アネキシンＶおよびＰＩ染色を用いて決定した。データは、Ｆｌｔ−３ ＩＴＤを有するＡＭＬ細胞が、ＶＩ−誘発アポトーシスのみへ感受性があることを示している。同様に、ＩＴＤでトランスフェクションされた３２Ｄまたは点突然変異Ｆｌｔ−３ ＴＤＫは、ｗｔ Ｆｌｔ−３でトランスフェクションされた３２Ｄ細胞よりも、２４時間でより多くのアポトーシスを受ける。
【０１７９】
本発明の具体的な実施形態の前記の記載は、例証および説明を目的として提示されている。これらは、網羅的であることも、開示された正確な形態へ本発明を限定することも意図されておらず、明らかに多くの改変例および変形例が、上の教示に鑑みて可能である。これらの実施形態は、本発明の原理およびその実際の適用を最もよく説明し、これによって他の当業者が、本発明、および考察されている特別な使用に適した様々な改変を有する様々な実施形態を最もよく利用することを可能にするために選択され、記載されている。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲およびその同等物によって規定されるものとする。
【０１８０】
本明細書において引用されたすべての特許、特許出願、出版物、および参考文献は明らかに、各々の個別出版物または特許出願が、具体的かつ個別に参照により組み込まれることが指示されているかのように、同程度まで参照により組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１８１】
【図１Ａ】Ｓｙｋ阻害化合物ＶＩが増殖を妨げ、ＴＥＬ−Ｓｙｋ−形質転換細胞の分化を誘発する能力を示している。ＤＭＳＯ、Ｓｙｋ−阻害化合物ＶＩ（２μＭ）、またはＡｂ１キナーゼ阻害剤ＳＴＩ−５７１（２μＭ）のいずれかで３６時間処理されたＴＥＬ−Ｓｙｋ−またはＢＣＲＡｂ１−形質転換細胞のＤＮＡ含有量が示されている。
【図１Ｂ】Ｓｙｋ阻害化合物ＶＩが増殖を妨げ、ＴＥＬ−Ｓｙｋ−形質転換細胞の分化を誘発する能力を示している。ＴＥＬ−Ｓｙｋがプレ−Ｂ細胞の分化を妨げる能力が示されている。
【図１Ｃ】Ｓｙｋ阻害化合物ＶＩが増殖を妨げ、ＴＥＬ−Ｓｙｋ−形質転換細胞の分化を誘発する能力を示している。細胞は、ＩＬ−７の不在下に３日間培養され、ＦＡＣＳによってκＬＣの発現について分析された。化合物ＶＩでのＴＥＬ−Ｓｙｋ活性の阻害が示されている。
【図２Ａ】Ｓｙｋ−阻害剤ＶＩが、Ｍｙｃ−形質転換されたプレ−Ｂ細胞の増殖を妨げる能力を示している。図２Ａは、Ｍｙｃ発現ベクターで形質導入され、かつＩＬ−７の不在下に１週間培養されたプレ−Ｂ細胞のＦＡＣＳプロフィールである。
【図２Ｂ】Ｓｙｋ−阻害剤ＶＩが、Ｍｙｃ−形質転換されたプレ−Ｂ細胞の増殖を妨げる能力を示している。図２Ｂの下方の図は、指示された細胞の注入の５週間後のＲＡＧ／γＣ−＋／−マウスの脾臓を示し、Ｍｙｃ−形質転換細胞が脾腫および白血病を引き起こす能力を図解している。図２Ｂは、ＤＭＳＯ、ＶＩ（２μＭ）、またはＳＴＩ−５７１（２μＭ）のいずれかで３６時間処理されたＭｙｃ−形質転換細胞のＤＮＡ含有量を示している。
【図３Ａ】Ｓｙｋ−阻害剤ＶＩが、腫瘍形成性ＳＬＰ−６５−／−プレ−Ｂ細胞系の増殖を妨げる能力を示している。図３Ａは、ＳＬＰ−６５−／−プレ−Ｂ細胞系が、指示された細胞の注入の５週間後のＲＡＧ／γＣ−−／−マウスの脾臓の状態によって証明されているように、脾腫および白血病を引き起こしうることを示している。
【図３Ｂ】Ｓｙｋ−阻害剤ＶＩが、腫瘍形成性ＳＬＰ−６５−／−プレ−Ｂ細胞系の増殖を妨げる能力を示している。図３Ｂは、ＤＭＳＯ、ＶＩ（２μＭ）、またはＳＴＩ−５７１（２μＭ）のいずれかで３６時間処理された腫瘍形成性ＳＬＰ−６５−／−プレ−Ｂ細胞系のＤＮＡ含有量を示している。
【図４】ＭＶ４−１１ヒト急性骨髄性白血病細胞が静脈内（ｉ．ｖ．）接種され、かつ腫瘍細胞接種後１７日目から調査の間中ずっと、一日２回ＰＯで４０ｍｇ／ｋｇにおいて化合物ＶＩＩで処理されたＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスについての生存曲線を示している。４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩグループ（１０６細胞）のＩＬＳ％についての計算は、調査終了時（８３日目）におけるこのグループの５０％超の生存率により、８３日の中央値死亡日と想定される。
【図５】個々の動物についての死亡までの日数を示している。生存率データは、ＭＶ４−１１腫瘍細胞が静脈内に注入されたＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスについてである。マウスは、腫瘍細胞注入後１７日目から調査の終了（８３日目）まで、一日２回ＰＯで、ビヒクルまたは様々な用量のＶＩＩで処理された。犠牲にされた動物についての死亡までの日数が、グラフ中で、青い線で表示された中央値死亡日で示されている。調査終了時の各グループにおける生存動物は、グラフの頂部に、生存動物数／総マウス数として示されている。
【図６Ａ】検死時にＭＶ４−１１腫瘍を保有するＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスにおける腫瘍の頻度を示している。病気の重症度は、犠牲の理由とは無関係に、終了時の検死の時に触診可能な腫瘍を有するマウスの頻度を定量化することによって評価された。
【図６Ｂ】検死時にＭＶ４−１１腫瘍を保有するＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスにおける腫瘍の頻度を示している。１グループあたりの腫瘍の総数が、図６Ｂに示されている。マウスは、５百万または１千万ＭＶ４−１１ヒトＡＭＬ細胞（それぞれ５Ｅ６または１０Ｅ６として示されている）でｉ．ｖ．接種された。細胞注入後１７日目に、マウスは、犠牲にされるまで、または調査の間中ずっと、生存動物については８３日目まで、ビヒクルまたは４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩ（ＰＯ．ｂｉｄ）で処理された。マウスは犠牲にされ、包括的検死が実施された。グループあたり実施された検死の総数は、８〜１３匹であった。
【図７】実験動物の腫瘍分布プロフィールを示している。様々な解剖学的位置に見られた総腫瘍のパーセントが、犠牲時の検死の時に記録された。マウスは、５百万または１千万ＭＶ４−１１細胞がｉ．ｖ，注入され、調査の間中ずっと、一日２回ビヒクルまたは４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩのどちらかが経口投与された。触診可能な腫瘍は検出されなかったが、拡張された唾液腺を示す動物がグラフに含まれている。グループあたり実施された検死の総数は、８〜１３匹であった。
【図８】ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスの骨髄（ＢＭ）および末梢血（ＰＢ）におけるＭＶ４−１１腫瘍細胞の植付けプロフィールを示している。データは、腫瘍細胞ｉ．ｖ．注入後１７日目から調査の終了まで、一日２回ＰＯで、ビヒクルまたは４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩで処理されたＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスにおけるＭＶ４−１１ヒト腫瘍細胞の植付けからのものである。骨髄（ＢＭ）および末梢血（ＰＢ）腫瘍細胞植付けは、ＭＶ４−１１腫瘍細胞の検出のためにＣＤ３３およびＨＬＡ細胞表面染色を用いて、フローサイトメトリック分析によって検出された。データは標準化され、総細胞からのパーセントヒト腫瘍細胞が計算された。総細胞は、ヒトＣＤ３３＋ＨＬＡ＋陽性事象およびネズミＣＤ４５陽性染色事象の数として規定された。グラフはすべての試料を含む。
【図９】免疫沈降およびウェスタンブロット分析によるＭＶ４−１１異種移植片におけるＦｌｔ−３の検出を示している。図Ａは、ブロットの左側で抗ホスホチロシン抗体およびブロットの右側で抗−ホスホ−Ｆｌｔ−３特異的抗体を用いて、ＶＩＩまたはビヒクルの最終投与の約２時間後、マウスからのＭＶ４−１１腫瘍溶解物におけるリン酸化Ｆｌｔ−３の検出である。加えて、総Ｆｌｔ−３レベルについてのブロットのリプローブは、図Ｂに示されている。
【図１０】ＭＶ４−１１腫瘍異種移植片のリン酸化ヒストンＨ３分析を示している。増殖は、腫瘍細胞増殖についてのマーカーとして、ヒト特異的リン酸化ヒストンＨ３（ｐｈＨ３）の免疫組織化学染色を用いて、この調査から無作為に選択された３匹のマウスからのホルマリン固定腫瘍切片においてエキソビボで評価された。ヒトｐｈＨ３発現は、腫瘍切片において、ＶＩＩでの処理後に用量依存的に低下した。ビヒクル処理マウスからのＭＶ４−１１腫瘍異種移植片と比較したとき、２０および４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩでの処理は結果として、それぞれｐｈＨ３染色の５３％および７１％阻害を生じた。これらのデータは、ＶＩＩ媒介阻害が、インビボのＭＶ４−１１腫瘍の増殖能力を低下させ、このことは、この調査の生存中部分の間に観察された腫瘍容積の低下と相関関係があることを示している。低下した増殖は、低下した構成的Ｆｌｔ−３リン酸化によるものである可能性があるが、それは、この活性がインビトロでのＭＶ４−１１細胞の生存に必要とされることが証明されているからである。
【図１１】一日２回２６日間経口処理されたＭＶ４−１１腫瘍保有マウスからの腫瘍切片における、ｐＥｒｋ１／２およびｐＳｔａｔ５についての免疫組織化学染色を図解している代表的なデータを示している。腫瘍は、ビヒクルまたは４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩの最終投与の約２時間後にマウスから採集された。
【図１２】アネキシンＶおよびＰＩ染色によって決定された、アポトーシスの誘発における、１ｕＭ ＶＩでのＡＭＬ細胞または３２Ｄトランスフェクタントの処理の効果を示している。
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本願は、２００６年４月１８日に出願された米国特許出願第１１／４０７，２３３に優先権を主張し、この全ての内容は本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（技術分野）
本開示は、細胞増殖性障害の治療のための方法および組成物に関しており、該組成物は、細胞の増殖可能性に影響を与えるキナーゼ活性を標的とする阻害剤を含んでいる。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
非調節細胞成長は、腫瘍および癌ならびに他の細胞増殖性障害の顕著な特徴である。細胞分裂および細胞増殖を制御する細胞プロセスは複雑であり、細胞分裂および成長を促進する遺伝子産物と、このようなプロセスを阻止する遺伝子産物との間の複雑な相互作用をともなう。成長および増殖の正の調節剤は一般に、前癌遺伝子として記載され、これらは、改変遺伝子、ならびに腫瘍および癌形成を促進することが知られているこれらの遺伝子産物の正常な対応物である。前癌遺伝子は、細胞分裂を促進し、細胞アポトーシスを負に調節をする。これらの正常な調節状態からのこれらの遺伝子産物の活性の脱共役は、前癌遺伝子を癌遺伝子へ転化する。前癌遺伝子の正常な機能は、成長因子、成長因子受容体、細胞情報伝達分子、および核因子を包含する。前癌遺伝子の癌遺伝子形態への活性化は、多様な方法で起こりうる。これは、遺伝子突然変異、増幅、遺伝子転座、およびウイルス活性化を包含する。
【０００４】
前癌遺伝子とは対照的に、腫瘍抑制剤は一般に、細胞成長に対して負の影響を及ぼし、細胞のアポトーシスを促進し、細胞サイクルの進行を阻害し、浸潤および転移の可能性に影響を与える。いくつかの例において、腫瘍抑制剤は、これらの改変形態においてでさえ癌遺伝子の活性に対抗しうる。腫瘍抑制機能の損失または阻害の際に、前癌遺伝子またはこれらの対応癌遺伝子形態の非調節活性は、細胞形質転換および発癌をもたらす。遺伝子突然変異もしくは欠失、抑制転写、分解の増加、または腫瘍抑制剤と協力して作用する関連タンパク質の異常性は、腫瘍抑制活性を危うくすることがある。腫瘍抑制遺伝子は、突然変異体対立遺伝子とともに正常対立遺伝子を有する細胞が、依然として正常に挙動するように、劣性対立遺伝子として作用する。このようにして、異型接合の損失（ＬＯＨ）とも呼ばれている正常対立遺伝子の損失は、異常な細胞成長および増殖のいくつかの型を特徴付ける。癌遺伝子活性および正常な細胞分裂制御の破壊の結果として生じるゲノムの不安定性は、ＬＯＨの確率、したがって癌遺伝子による形質転換表現型の発生を増加させうる。
【０００５】
細胞増殖性障害の治療は、形質転換細胞において影響を受けた癌遺伝子および／または腫瘍抑制剤を標的としうる。しかしながら、機能の損失、例えば腫瘍抑制剤に起因する障害は典型的には、根底にある分子欠陥を治療しようとする際、機能の獲得の変化、例えば癌遺伝子の活性化に起因する障害における、根底にある分子欠陥の治療よりも問題が多い。失われた細胞機能を与えるための細胞プロセスの改変は、多くの事例では実際的でない。このようにして、腫瘍抑制活性の損失に起因する細胞増殖性障害についてでさえ、治療は典型的には、失われた腫瘍抑制機能の結果として作用する、調節不全分子（例えば前癌遺伝子）へ向けられる。多くの分子標的、例えば非受容体および受容体ベースのタンパク質キナーゼが同定されているが、細胞増殖および成長において効果を現わす細胞調節メカニズムの複雑な性質は、治療標的になりうる他の分子が依然として同定されていないことを示すであろう。これらのうちのいくつかは未知であろうが、一方、公知であっても、細胞増殖性障害と関連付けられないことがある場合もある。
【０００６】
このように、細胞増殖性障害において癌遺伝子的に、それ自体の活性の改変の帰結として、またはその活性を調節する作用をする細胞機能の損失の結果としてのどちらかとして作用する、他の細胞分子を同定することが望ましい。このような分子を同定する際、特異的にその細胞分子に向けられた化合物を同定することができ、独立して、または他の公知療法と組み合わせて、細胞増殖性障害を治療するために用いることができる。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（要旨）
本開示は、細胞増殖性障害の治療方法であって、細胞増殖性障害を治療するのに有効な量のＳｙｋキナーゼ阻害化合物を被験体に投与することによる方法を提供する。いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤は、Ｓｙｋキナーゼに対して選択的であり、これによって、増殖性障害に存在する異常なＳｙｋキナーゼ活性を特異的に標的する。Ｓｙｋが、正常でない細胞分裂または細胞成長のいくつかの態様においてある役割を果たすいずれの細胞増殖性障害も、これらの阻害化合物で治療することができる。いくつかの実施形態において、これらの阻害化合物で治療可能な細胞増殖性障害は、造血新生物であり、これらは、造血系統の細胞に関わる正常でない成長である。これらのＳｙｋ阻害化合物で治療可能な造血新生物は、とりわけ、様々な骨髄およびリンパ系の新生物、例えば慢性骨髄性白血病、バーキットリンパ腫、および急性骨髄性白血病を包含する。
【０００８】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼ阻害化合物は、ＳｙｋキナーゼおよびＦｌｔ−３キナーゼの両方の活性を阻害しうる、Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害化合物を含む。これらの化合物は、異常なＦｌｔ−３キナーゼ活性と関連する細胞増殖性障害を治療するために用いることができる。Ｆｌｔ−３活性が正常でない様々な造血新生物は、とりわけ、急性骨髄性白血病、Ｂ−前駆体細胞急性リンパ芽球性白血病、Ｔ−細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄異形成症候群、および慢性骨髄性白血病を包含する。Ｆｌｔ−３に関わるこれらおよび他のこのような障害は、Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３阻害化合物、例えば本明細書に記載されている２，４−ピリミジンジアミン化合物のメンバーで治療することができる。
【０００９】
他の態様において、これらの阻害化合物は、正常細胞を腫瘍細胞に形質転換するウイルス遺伝子によって媒介された腫瘍を治療するために用いることができる。これらの実施形態において、ウイルス癌遺伝子の活性がその形質転換メカニズムの一部としてＳｙｋキナーゼ機能を破壊する腫瘍は、治療のための標的とすることができる。このようにして、いくつかの実施形態において、ウイルス媒介腫瘍は、免疫受容体チロシン−ベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を有するタンパク質をコードする遺伝子を保有するウイルスによる感染と関連している。通常、これらの保存された配列は、免疫系細胞（例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、好中球など）の発達および機能の間にＳｙｋキナーゼ活性を調節する。しかしながら、ＩＴＡＭ配列を有するウイルスタンパク質の永続的な発現は、異常なＳｙｋキナーゼ活性および結果として生じる腫瘍形成および／または維持を生じうる。様々な実施形態において、ウイルス媒介腫瘍は、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、エプスタイン−バーウイルス、ヒトＴ−細胞リンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ−１）、または乳腺癌ウイルス（ＭＴＶ）と関連する場合がある。これらのウイルスの存在は、いくつかの細胞増殖性障害と相関関係がある。これは、カポジ肉腫、バーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、成人Ｔ細胞白血病、および乳癌のあるいくつかの形態を包含する。
【００１０】
いくつかの態様において、本開示は、腫瘍転移の阻害方法であって、腫瘍転移を阻害するのに有効な量のＳｙｋキナーゼ阻害化合物を被験体に投与することによる方法を提供する。転移の可能性があるいずれの腫瘍も、これらの阻害化合物で治療することができる。いくつかの実施形態において、腫瘍転移は、インテグリンの活性と関連している。これらは、細胞接着特性の調節においてＳｙｋキナーゼを通して作用しうる。例えば腫瘍細胞の転移において観察されるものである。Ｓｙｋキナーゼ阻害剤は、インテグリン、例えばβ１、β２、および／またはβ３インテグリンによって媒介された細胞シグナル伝達事象に影響を与えることによって、腫瘍転移を阻害するために用いることができる。
【００１１】
いくつかの態様において、これらの阻害化合物は、他の癌治療と組み合わせて用いることができる。いくつかの実施形態において、Ｓｙｋ阻害化合物は、他の化学療法薬と組み合わせて用いられる。これはとりわけ、代謝拮抗物質、アルキル化剤、配位化合物、転写阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ＤＮＡ副溝結合化合物、ビンカアルキロイド、抗腫瘍抗生物質、ホルモン、および抗腫瘍酵素を包含する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
（発明の詳細な説明）
６．１ 処理方法
本開示は、細胞増殖性障害の治療方法であって、ＳｙｋキナーゼまたはＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害化合物を投与することによる方法を提供する。Ｓｙｋキナーゼは、Ｓｙｋ族（ＳｙｋおよびＺＡＰ−７０）非受容体チロシンキナーゼの２つの公知メンバーの１つである。Ｓｙｋは、そのｓｒｃ相同体２（ＳＨ２）ドメインの免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）への結合の時に活性化される。Ｓｙｋキナーゼは、リンパ球の発達および免疫細胞の活性化において必須の役割を果たし、Ｂ細胞受容体シグナル伝達およびマスト細胞顆粒のＦｃ受容体媒介放出におけるその役割について最もよく特徴付けられている。Ｓｙｋは、造血細胞中に遍在的に発現されるが、他の組織、例えば乳房上皮細胞および肝細胞においても発現される。Ｓｙｋは腫瘍抑制剤であり、転移可能性の負の調節剤として作用することを、この分野において信じている人もいる。Ｓｙｋ活性の損失は、浸潤性乳癌の形成と関連していることが示唆され、Ｓｙｋ遺伝子の染色体消失が、原発性乳癌のリンパ節転移のあるいくつかの型において示されている。このようにして、細胞増殖性障害の治療のため、または腫瘍細胞の転移可能性を低下させるための治療としてのＳｙｋ阻害剤の使用は、Ｓｙｋが腫瘍抑制剤として機能する場合、禁忌であろう。
【００１３】
Ｆｌｔ−３はまた、チロシンキナーゼでもあるが、Ｓｙｋとは異なって、これはチロシンキナーゼ受容体タンパク質族に属する。Ｆｌｔ−３は、クラスＩＩＩ受容体チロシンキナーゼのメンバーであり、これらは、アミノ酸配列および構造特性によって関連付けられる。Ｆｌｔ−３は、その同族リガンドＦｌｔ−３Ｌへの結合によって活性化される。Ｆｌｔ−３キナーゼは、正常な骨髄の初期造血幹細胞中に発現され、様々な下流細胞標的の活性を制御することによって、多能幹細胞およびＢ細胞の発達において機能するように見える。これらは、とりわけ、ホスホリパーゼＣ−（ＰＬＣ）、ホスファチジルイノシトール３’−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）のｐ８５サブユニット、Ｓｈｃ、Ｓｈｐ−２、Ｓｈｉｐ、Ｇｒｂ２、Ｖａｖ、Ｆｙｎキナーゼ、Ｓｒｃキナーゼ、Ｓｔａｔ５情報伝達タンパク質、およびＥｒｋを包含する。Ｆｌｔ−３キナーゼは、骨髄中の神経前駆細胞中に正常に発現されるが、発現の高レベルはまた、血液細胞増殖性障害、例えば急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｂ−前駆体細胞急性リンパ芽球性白血病、Ｔ−細胞急性リンパ芽球性白血病、およびリンパ急性転化における慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の範囲内でも観察される（例えばＲｏｓｎｅｔら、１９９６，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １０：２３８−２４８；Ｃａｒｏｗら、１９９６，Ｂｌｏｏｄ ８７：１０８９−１０９６を参照されたい）。血液細胞増殖性障害におけるＦｌｔ−３突然変異の存在は、寛解率の減少、再発率の増加、および一般により低い全体の生存率と相関関係がある（Ｒｏｍｂｏｕｔｓら、２０００，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １４：６７５−６８３；Ｔｈｉｅｄｅら、２００２、Ｂｌｏｏｄ ９９：４３２６−４３３５；Ｆｒｏｈｌｉｎｇら、２００２，Ｂｌｏｏｄ １００：４３７２−４３８０）。
【００１４】
当業界は、Ｓｙｋが腫瘍抑制剤として作用しうることを示唆しているが、本開示は、Ｓｙｋがその仮定された役割とは反対の機能を果たすという指摘に基づいている。例えば、腫瘍細胞中のＳｙｋキナーゼの強制的発現は、腫瘍細胞の形質転換された表現型を逆転するようには見えない。対して、Ｓｙｋが細胞増殖を促進および／または維持する発癌能力において作用することが、本発明において示唆されている。Ｓｙｋの役割に関するこの観点で、本開示は、細胞増殖性障害の治療方法であって、細胞増殖性障害を治療するのに有効な量のＳｙｋキナーゼ阻害化合物を被験体に投与することによる方法を提供する。
【００１５】
さらには、いくつかのＳｙｋ阻害化合物、例えば下にさらに詳細に記載されている２，４−ピリミジンジアミン化合物のメンバーもまた、Ｆｌｔ−３キナーゼの阻害剤として作用しうることも、本明細書において示されている。その結果、いくつかの実施形態において、Ｆｌｔ−３キナーゼならびにＳｙｋキナーゼを阻害する、この二重または多作用阻害プロフィール（すなわちＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害活性）を有するＳｙｋ阻害化合物は、異常なＦｌｔ−３受容体キナーゼ活性と関連した細胞増殖性障害の治療のための用途を見出す。ＳｙｋキナーゼおよびＦｌｔ−３キナーゼの両方と、造血細胞の発達との組合せは、造血新生物の治療のための、このようなＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害化合物の使用を支持する。
【００１６】
本発明の方法の記載において、用いられている用語は、本明細書において特別に他の規定がなされていなければ、これらの通常かつ共通の意味を有する。
【００１７】
「Ｓｙｋ」または「Ｓｙｋキナーゼ」とは、Ｂ−細胞および他の造血細胞中に発現される７２ｋＤａ非受容体（細胞質）脾臓タンパク質チロシンキナーゼのことを言う。Ｓｙｋキナーゼは、リン酸化免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（「ＩＴＡＭ」）、「リンカー」ドメイン、および触媒ドメインへ結合する、縦列の２つのコンセンサスＳｒｃ−同族体２（ＳＨ２）ドメインを特徴とする（概論については、Ｓａｄａら、２００１，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（Ｔｏｋｙｏ）１３０：１７７−１８６、および同様にＴｕｒｎｅｒら、２０００，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ２１：１４８−１５４、およびＷｏｎｇら、２００４，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ １３（７）：７４３−６２を参照のこと）。Ｓｙｋキナーゼはまた、免疫受容体から通じている重要な経路、例えばＣａ２＋動員、およびマイトゲン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）カスケード、および脱顆粒を調節する、多重タンパク質のチロシンリン酸化にとっても重要である。Ｓｙｋキナーゼはまた、好中球中のインテグリンシグナル伝達においても重要な役割を果たす（例えばＭｏｃｓａｉら、２００２，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １６：５４７−５５８参照のこと）。Ｓｙｋキナーゼは、Ｓｙｋ族に属すると認識されているあらゆる動物種からのキナーゼを包含する。この動物種は、非限定的にホモサピエンス、サル、ウシ、ブタ、げっ歯類などを包含する。具体的には、自然発生および人工の両方のイソ型、スプライス変異体、対立変異体、突然変異体が含まれる。このようなＳｙｋキナーゼのアミノ酸配列は、ＧＥＮＢＡＮＫから入手しうる。ヒトＳｙｋキナーゼの異なるイソ型をコードするｍＲＮＡの具体例は、ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ｇｉｌ２１３６１５５２｜ｒｅｆ｜ＮＭ ００３１７７．２、ｇｉｌ４９６８９９｜ｅｍｂ｜Ｚ２９６３０．１｜ＨＳＳＹＫＰＴＫ［４９６８９９］、およびｇｉｌ５０３０２５８｜ｇｂ｜ＢＣ０１１３９９．１｜ＢＣ０１１３９９［１５０３０２５８］として入手可能であり、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。
【００１８】
「Ｆｌｔ−３」または「Ｆｌｔ−３受容体チロシンキナーゼ」とは、ｆｌｔ−３リガンド（Ｆｌｔ−３ＬまたはＦＬ）を結合する受容体チロシンキナーゼのことを言う。Ｆｌｔ−３はまた、Ｆｍｓ−様チロシンキナーゼ３、ＦＬＫ−２（胎児肝臓キナーゼ−２）およびＳＴＫ−１（ヒト幹細胞キナーゼ−１１）としても公知である（例えばＭａｔｈｅｗｓら、１９９１，Ｃｅｌｌ．６５：１１４３−１１５２；Ｒｏｓｎｅｔら、１９９１，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．６：１６４１−１６５０を参照されたい）。Ｆｌｔ−３は、クラスＩＩＩ受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫＩＩＩ）族のメンバーとの配列類似性を有し、これのサブセットは、とりわけ、ＦＭＳ、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、およびＫｉｔを包含する（Ｒｏｓｎｅｔら、１９９３，Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｏｎｃｏｇ．４：５９５−６１３）。マウスおよびヒトにおけるＦｌｔ−３ポリペプチドは、それぞれ１０００−および９９３−アミノ酸タンパク質であり、未成熟造血細胞、胎盤、生殖腺、および脳で発現されることが公知である。上記のように、Ｆｌｔ−３は、多能性幹細胞およびＢ細胞の発達において想定された役割を有する。クラスＩＩＩ受容体チロシンキナーゼの他のメンバーと同様に、Ｆｌｔ−３は、細胞外ドメイン、膜貫通（ＴＭ）ドメイン、近接膜（ＪＭ）ドメイン、キナーゼ挿入（ＫＩ）ドメインによって分離された２つの細胞内チロシンキナーゼ（ＴＫ１およびＴＫ２）ドメイン、およびＣ−末端ドメインにおける５免疫グロブリン様反復を特徴とする（Ａｇｎｅｓら、１９９４，Ｇｅｎｅ １４５：２８３−２８８；２００４，Ｇｒｉｆｆｉｔｈら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ １３：１６９−１７８）。Ｆｌｔ−３キナーゼは、Ｆｌｔ−３受容体族に属すると認識されている、非限定的にホモサピエンス、サル、ウシ、ブタ、げっ歯類などを包含するあらゆる動物種からのキナーゼを包含する。具体的には、自然発生および人工の両方のイソ型、スプライス変異体、対立変異体、突然変異体が含まれる。このようなＳｙｋキナーゼのアミノ酸配列は、ＧＥＮＢＡＮＫから入手しうる。異なるＦｌｔ−３キナーゼの核酸配列および対応アミノ酸配列の具体例は、とりわけ、ヒト（受入番号ＮＭ ００４１１９．１）、チンパンジー（受入番号４５２５０８；ＸＭ ５０９６０１．１；ＸＰ ５０９６０１．１）、イヌ（ＮＭ ００１０２０８１１．１；ＮＰ ００１０１８６４７．１）、およびマウス（受入番号１４２５５１；ＮＭ ０１０２２９．１１；ＮＰ ０３４３５９．１１；ＡＫ０４５８６５４；ＡＫ１４９２９２４；ＡＫ１６３６４０４；ＢＣ１０９００３４；ＢＣ１０９００４４；Ｌ３６１６３４；Ｍ６４６８９４；Ｘ５９３９８４）を包含し、これらは参照により本明細書に組み込まれる。
【００１９】
Ｆｌｔ−３変異体のいくつかの実施形態は、ある造血細胞増殖性障害と関連している。「Ｆｌｔ−３ ＩＴＤ」とは、近接膜（ＪＭ）ドメインに内部縦列重複（ＩＴＤ）を有するＦｌｔ−３の変異体のことを言う（Ｎａｋａｏら、１９９６，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １０：１９１１−１９１８；Ｇｒｉｆｆｉｔｈら、上記）。Ｆｌｔ−３ ＩＴＤにおいて重複されたＪＭドメインの数は被験体毎に異なるが、インフレームであり、一般に、異常な（すなわち増加した）チロシンキナーゼ活性を有するタンパク質を結果として生じる。Ｆｌｔ−３ ＩＴＤ型の変異体は、多くの場合、急性骨髄性白血病、および骨髄異形成症候群と関連している。変異体の別の型は、「Ｆｌｔ−３活性化ループ突然変異」であり、これは、第２チロシンキナーゼ（ＴＫ２）ドメインの活性化ループにアミノ酸配列変化（野生型と比較した場合）を有する変異体のことを言う。理論によって縛られるわけではないが、この活性化ループは、アデノシントリホスフェート（ＡＴＰ）および基質のキナーゼドメインへのアクセスを妨げることにおいて機能を果たすように見え、これによってキナーゼに対して阻害効果を与える。結果として、活性化ループ突然変異は、構成的活性を有するＦｌｔ−３キナーゼ形態を生じうる。例示的活性化ループ変異体は、Ｄ８３５Ａであり、これは、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、および急性リンパ芽球性白血病において観察される（Ｙａｍａｍｏｔｏら、２００１，Ｂｌｏｏｄ ９７：２４３４−２４３９；Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｊ．Ｄ．，２００１，Ｂｌｏｏｄ ９７：２１９３ａ）。ヒトにおける細胞増殖性障害と関連した他の例示的活性化ループ変形例は、とりわけ、Ｄ８３５Ｙ、Ｄ８３５Ａ、Ｄ８３５Ｅ、Ｄ８３５Ｈ、Ｄ８３５Ｎ、Ｄ８３５Ｖ、Ｄ８３５ｄｅｌ、およびＩ８３６ｄｅｌを包含していた。
【００２０】
「細胞増殖性障害」とは、細胞の正常でない増殖を特徴とする障害のことを言う。増殖性障害は、細胞成長率に関する制限を含まず、単に成長および細胞分裂に影響を与える正常な制御の損失を示すだけである。このようにして、いくつかの実施形態において、増殖性障害の細胞は、正常な細胞と同じ細胞分裂速度を有しうるが、このような成長を制限するシグナルに応答しない。「細胞増殖性障害」の領域内には、新生物または腫瘍があり、これは、組織の正常でない成長である。癌とは、周囲組織に侵入し、および／または新しいコロニー化部位へ転移する能力を有する細胞の増殖を特徴とする、様々な悪性新生物のいずれかのことを言う。
【００２１】
「造血新生物」とは、造血系統の細胞に起因する細胞増殖性障害のことを言う。一般に造血は、未分化細胞または幹細胞が、末梢血中に見られる様々な細胞として発達する生理学的プロセスである。発達の初期段階において、典型的には骨髄中に見られる造血幹細胞は、一連の細胞分裂を受け、２つの主な発達経路、すなわちリンパ系統および骨髄系統に責任を有する多能性前駆細胞を形成する。骨髄系統の委任前駆細胞は、赤血球、巨核球、および顆粒球／単球発達経路からなる、３つの主要なサブブランチに分化する。追加経路は、抗原提示に関与する樹状細胞の形成を生じる。赤血球系統は、赤血球細胞を生じ、一方、巨核球系統は、血小板を生じる。顆粒球／単球系統の委任細胞は、顆粒球または単球発達経路に分裂し、前者の経路は、好中球、好酸球、および好塩基球の形成を生じ、後者の経路は、血中単球およびマクロファージを生じる。
【００２２】
リンパ系統の委任前駆細胞は、発達してＢ細胞経路、Ｔ細胞経路、または非−Ｔ／Ｂ細胞経路になる。骨髄系統と同様に、追加のリンパ経路は、抗原提示に関与する樹状細胞を生じるように見える。Ｂ細胞前駆細胞は、発達して前駆体Ｂ細胞（プレ−Ｂ）になり、これは、免疫グロブリンの生産の原因となるＢ細胞に分化する。Ｔ細胞系統の前駆体細胞は、前駆体Ｔ細胞（プレ−Ｔ）に分化し、これらは、あるサイトカインの影響に基づき、発達して、細胞媒介免疫に関与する細胞毒性またはヘルパー／抑制剤Ｔ細胞になる。非−Ｔ／Ｂ細胞経路は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の発生を生じる。造血細胞の新生物は、造血のいずれの段階の細胞を含んでいてもよく、これは、造血幹細胞、多能性前駆細胞、オリゴ能性委任前駆細胞、前駆体細胞、および成熟分化細胞を包含する。造血新生物のカテゴリーは一般に、当業者によって使用されている説明および診断基準に従いうる（例えばＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｐｒｏｂｌｅｍｓ（ＩＣＤ １０）、Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（２００３）を参照されたい）。造血新生物はまた、分子特徴、例えば細胞表面マーカーおよび遺伝子発現プロフィール、異常細胞によって示される細胞表現型、および／またはある造血新生物に特徴的な染色体異常（例えば欠失、転座、挿入など）、例えば慢性骨髄性白血病に見られるフィラデルフィア染色体に基づいて特徴付けることもできる。他の分類は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｗｏｒｋｉｎｇ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ（Ｃａｎｃｅｒ，１９８２，４９：２１１２−２１３５）およびＲｅｖｉｓｅｄ Ｅｕｒｏｐｅａｎ−Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｌｙｍｐｈｏｍａ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＲＥＡＬ）を包含する。
【００２３】
「リンパ系の新生物」とは、造血のリンパ系統の細胞に関与する増殖性障害のことを言う。リンパ系の新生物は、造血幹細胞、ならびにリンパ委任前駆細胞、前駆体細胞、および最終分化細胞に起因しうる。これらの新生物は、異常細胞の表現型属性、または正常でない細胞が起因する分化状態に基づいて再分割されうる。再分割は、とりわけ、Ｂ細胞新生物、Ｔ細胞新生物、ＮＫ細胞新生物、およびホジキンリンパ腫を包含する。
【００２４】
「骨髄新生物」とは、造血の骨髄系統の細胞の増殖性障害のことを言う。新生物は、造血幹細胞、骨髄委任前駆細胞、前駆体細胞、および最終分化細胞に起因しうる。骨髄新生物は、異常細胞の表現型属性、または正常でない細胞が起因する分化状態に基づいて再分割されうる。再分割は、とりわけ、骨髄増殖性疾患、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、および急性二表現型白血病を包含する。
【００２５】
「ウイルス媒介腫瘍」とは、ウイルス感染、またはウイルスでコードされた産物の活性に関連した新生物または腫瘍のことを言う。新生物は、細胞ゲノム中に統合された潜伏ウイルスの存在に起因するか、またはウイルス関連遺伝子産物の活性に起因しうる。ウイルス感染は、インキュベーション期間が、腫瘍表現型の発達前に数ヶ月または数年に及びうるという点で、時間的に腫瘍形成と密接な相関関係があるとする必要はない。本発明における治療は、Ｓｙｋ阻害剤の使用を対象としているので、適用可能なウイルス関連腫瘍は、Ｓｙｋ活性のウイルス調節が、異常な細胞増殖と相関関係がある腫瘍である。Ｓｙｋの活性化がウイルス感染の結果である、ＲＮＡおよびＤＮＡウイルス、およびエピソーム的に存在するか、または細胞ゲノム中に統合されるウイルスを包含するあらゆるウイルスは、本発明の方法を用いて標的することができる。
【００２６】
「腫瘍転移」とは、腫瘍細胞が、元の腫瘍部位から移動して、他の組織中でコロニー化する能力のことを言う。広がった細胞から形成される腫瘍は、「二次性腫瘍」と呼ばれ、元の「原発性」腫瘍にあるものと同様な細胞を含有する。転移性腫瘍は典型的には、元の腫瘍部位から血液およびリンパ系を通って他の組織への腫瘍細胞の移動によって形成される。
【００２７】
「Ｓｙｋ媒介インテグリンシグナル伝達」とは、Ｓｙｋキナーゼとの相互作用を介して発生する、細胞表面インテグリンの情報伝達のことを言う。インテグリンは、細胞外マトリックスおよび細胞表面リガンドを結合する、細胞表面接着受容体の拡大された族を含む。構造的には、インテグリンは、αおよびβ鎖からなるヘテロダイマータンパク質であり、各々のサブユニットは、細胞外ドメイン、単一膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインを有する。αサブユニットは一般に、約７の縦列反復から構成され、反復のサブセットは、一般的構造ＤｘＤｘＤＧｘｘＤ（式中、ｘは、いずれかのアミノ酸である）の推定金属結合配列を含有する。インテグリンの２つのグループは、αサブユニットによって特徴付けることができる。すなわち、「Ａ」ドメインを含有するもの、およびタンパク質分解の切断部位を有するものである。βサブユニットは、細胞外ドメインに約２００アミノ酸の保存領域を含み、これは、αサブユニットの「Ａ」ドメインと構造的類似性を有する領域、およびラミニン中に見られるものと同様な、上皮成長因子（ＥＧＦ）様反復を有する別の領域を特徴とする（例えばＸｉｏｎｇら、２００３，Ｂｌｏｏｄ，１０２（４）：１１５５−１１５９）。インテグリン活性は、細胞内Ｓｙｋを調節しうるか、または逆に、インテグリン機能は、Ｓｙｋの活性を介して調節することができる。いくつかの例において、インテグリンは、その同族リガンドを結合するために、細胞内の活性化を必要とすることが、一般に理解されている（インサイドアウト活性化）。Ｓｙｋを調節するか、またはこれによって調節されるインテグリンは、とりわけ、β１−インテグリン（Ｌｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９５，２７０（２７）：１６１８９−９７）、例えばα２ｂ１（Ｋｅｅｌｙら、１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（４３）：２６６６８−７６）、β２−インテグリン、およびβ３−インテグリン（Ｗｏｏｄｓｉｄｅら、２００１，Ｃｕｒｒ Ｂｉｏｌ．１１（２２）：１７９９−８０４）、例えばαＩＩｂβ３（Ｃｌａｒｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９４、２６９（４６）：２８８５９−６４）を包含する。例えば、Ｓｙｋは、インテグリンβ３細胞質尾へ、ＳＨ２ドメインを通って直接結合すると考えられている。しかしながら、ＩＴＡＭへ結合するＳｙｋとは異なり、β３インテグリンとの相互作用は、縦列ＳＨ２ドメインのホスホチロシン結合機能とは独立して現われる。
【００２８】
一般に、本明細書において開示されている化合物で治療可能な細胞増殖性障害は、異常な細胞増殖を特徴とするあらゆる障害に関する。これらは、良性または悪性、転移性または非転移性の様々な腫瘍および癌を包含する。癌の具体的な特性、例えば組織浸潤性または転移は、本明細書に記載された方法を用いて標的することができる。細胞増殖性障害は、多様な癌を包含し、これは、とりわけ、乳癌、卵巣癌、腎性癌（ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、胃腸癌、腎臓癌、膀胱癌、膵臓癌、肺扁平癌（ｌｕｎｇ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、および腺癌を包含する。
【００２９】
いくつかの実施形態において、治療された細胞増殖性障害は造血新生物であり、これは、造血系の細胞の異常成長である。造血悪性腫瘍は、造血に関与する多能性幹細胞、多能性前駆細胞、オリゴ能性委任前駆細胞、前駆体細胞、および最終分化細胞にその起源を有しうる。いくつかの血液悪性腫瘍は、自己更新能力を有する造血幹細胞に起因すると考えられている。例えば、移植の際に急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の特定の亜類型を発達させうる細胞は、造血幹細胞の細胞表面マーカーを示し、このことは、造血幹細胞を白血病細胞源としての関与を示唆する。造血幹細胞に特徴的な細胞マーカーを有しない芽細胞は、移植の際に腫瘍を定着させることができないように見える（Ｂｌａｉｒｅら、１９９７，Ｂｌｏｏｄ ８９：３１０４−３１１２）。ある血液悪性腫瘍の幹細胞起源はまた、特定の型の白血病に関連した特定の染色体異常が、造血系統の正常な細胞ならびに白血病芽細胞中に見られるという観察事項においても裏付けが得られる。例えば慢性骨髄性白血病の約９５％に関連する相互転座ｔ（９ｑ３４：２２ｑ１１）は、骨髄、赤血球、およびリンパ系統の細胞中に存在するようであり、このことは、この染色体異常が、造血幹細胞に由来することを示唆している。ＣＭＬのあるいくつかの型における細胞のサブグループは、造血幹細胞の細胞マーカー表現型を示す。
【００３０】
造血新生物は、多くの場合幹細胞に由来するが、委任前駆細胞、または発達系統のより多くの最終分化細胞もまた、いくつかの白血病源でありうる。例えば、共通の骨髄前駆体または顆粒球／マクロファージ前駆体細胞における（慢性骨髄性白血病に関連する）融合タンパク質Ｂｃｒ／Ａｂｌの強制発現は、白血病様状態を生成する。さらには、白血病の亜類型と関連したいくつかの染色体異常は、造血幹細胞のマーカー表現型を有する細胞集団では見られないが、造血経路のより分化した状態のマーカーを示す細胞集団では見られる（Ｔｕｒｈａｎら、１９９５，Ｂｌｏｏｄ ８５：２１５４−２１６１）。このようにして、委任前駆体細胞および他の分化細胞は、細胞分裂に対して限定した可能性しか有しないが、白血病細胞は、未調節で成長する能力を獲得している場合があり、いくつかの場合には、造血幹細胞の自己更新特徴を模倣する（Ｐａｓｓｅｇｕｅら、Ｐｒｏｃ，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００３，１００：１１８４２−９）。
【００３１】
いくつかの実施形態において、治療された造血新生物は、リンパ系の新生物であり、正常でない細胞は、リンパ系統の細胞の特徴的表現型に由来し、および／またはこれを示す。リンパ系の新生物は、Ｂ−細胞新生物、ＴおよびＮＫ−細胞新生物、およびホジキンリンパ腫に再分割されうる。Ｂ−細胞新生物はさらに、前駆体Ｂ−細胞新生物および成熟／末梢Ｂ−細胞新生物に再分割されうる。例示的Ｂ−細胞新生物は、前駆体Ｂ−リンパ芽球性白血病／リンパ腫（前駆体Ｂ−細胞急性リンパ芽球性白血病）であるが、例示的成熟／末梢Ｂ−細胞新生物は、Ｂ−細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、Ｂ−細胞前リンパ球性白血病、リンパ芽球性リンパ腫、脾臓辺縁帯域Ｂ−細胞リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、形質細胞性骨髄腫／形質細胞腫、ＭＡＬＴ型の節外性辺縁帯域Ｂ−細胞リンパ腫、節性辺縁帯域Ｂ−細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、外套細胞リンパ腫、びまん性大Ｂ−細胞リンパ腫、縦隔大Ｂ−細胞リンパ腫、原発性浸出リンパ腫、およびバーキットリンパ腫／バーキット細胞白血病である。Ｔ−細胞およびＮＫ−細胞新生物はさらに、前駆体Ｔ−細胞新生物および成熟（末梢）Ｔ−細胞新生物に再分割される。例示的前駆体Ｔ−細胞新生物は、前駆体Ｔ−リンパ芽球性リンパ腫／白血病（前駆体Ｔ−細胞急性リンパ芽球性白血病）であり、一方、例示的成熟（末梢）Ｔ−細胞新生物は、Ｔ−細胞前リンパ球性白血病、Ｔ−細胞顆粒リンパ球性白血病、攻撃性ＮＫ−細胞白血病、成人Ｔ−細胞リンパ腫／白血病（ＨＴＬＶ−１）、節外性ＮＫ／Ｔ−細胞リンパ腫、鼻腔型、腸疾患型Ｔ−細胞リンパ腫、肝脾γ−δＴ−細胞リンパ腫、皮下脂肪組織炎様Ｔ−細胞リンパ腫、真菌症菌状腫／セザリー症候群、未分化大細胞リンパ腫、Ｔ／ヌル細胞、原発性皮膚型、末梢Ｔ−細胞リンパ腫、他に特徴決定されていない、血管免疫芽球性Ｔ−細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、Ｔ／ヌル細胞、原発性全身型である。リンパ系の新生物の第３のメンバーは、ホジキン病とも呼ばれるホジキンリンパ腫である。これらの化合物で治療することができる、この種類の例示的診断は、とりわけ、結節性リンパ球優勢ホジキンリンパ腫、およびホジキン病の様々な従来の型を包含し、これらの例示的メンバーは、結節性硬化症ホジキンリンパ腫（グレード１および２）、リンパ球リッチな従来のホジキンリンパ腫、混合細胞質ホジキンリンパ腫、およびリンパ球枯渇ホジキンリンパ腫である。様々な実施形態において、異常なＳｙｋ活性と関連するリンパ系の新生物のどれも、Ｓｙｋ阻害化合物で治療することができる。
【００３２】
いくつかの実施形態において、治療される造血新生物は骨髄新生物である。このグループは、骨髄系統の細胞の特徴的表現型に関与するか、またはこれを示す細胞増殖性障害の大きなクラスを含む。骨髄新生物は、骨髄増殖性疾患、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄異形成症候群、および急性骨髄性白血病に再分割されうる。例示的骨髄増殖性疾患は、慢性骨髄性白血病（例えばフィラデルフィア染色体陽性（ｔ（９；２２）（ｑｑ３４；ｑ１１））、慢性好中球性白血病、慢性好酸球性白血病／高好酸球性症候群、慢性突発性骨髄線維症、真性赤血球増加症、および本態性血小板血症である。例示的骨髄異形成／骨髄増殖性疾患は、慢性骨髄単球性白血病、非定型慢性骨髄性白血病、および若年性骨髄単球性白血病である。例示的骨髄異形成症候群は、環状鉄芽球をともなう、および環状鉄芽球をともなわない不応性貧血、多系統異形成をともなう不応性血球減少（骨髄異形成症候群）、過剰な芽をともなう不応性貧血（骨髄異形成症候群）、５ｑ−症候群、およびｔ（９；１２）（ｑ２２；ｐ１２）をともなう骨髄異形成症候群である（ＴＥＬ−Ｓｙｋ融合；例えばＫｕｎｏら、２００１，Ｂｌｏｏｄ ９７：１０５０を参照されたい）。様々な実施形態において、異常なＳｙｋ活性と関連した骨髄新生物のどれも、Ｓｙｋ阻害化合物で治療することができる。
【００３３】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋ阻害化合物は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を治療するために用いることができる。これは、障害のそれ自体の下位区分を有する骨髄新生物の大きなクラスを代表する。これらの下位区分は、とりわけ、再発性細胞遺伝転座を有するＡＭＬ、多系統異形成を有するＡＭＬ、および他のカテゴリーに入れられない他のＡＭＬを包含する。再発性細胞遺伝転座を有する例示的ＡＭＬは、とりわけ、ｔ（８；２１）（ｑ２２；ｑ２２）をともなうＡＭＬ、ＡＭＬ１（ＣＢＦ−α）／ＥＴＯ、急性前骨髄性白血病（ｔ（１５；１７）（ｑ２２；ｑ１１−１２）をともなうＡＭＬ、および変異体ＰＭＬ／ＲＡＲ−α）、正常でない骨髄好酸球（ｉｎｖ（１６）（ｐ１３ｑ２２）またはｔ（１６；１６）（ｐ１３：ｑ１１）、ＣＢＦｂ／ＭＹＨ１１Ｘ）をともなうＡＭＬ、および１１ｑ２３（ＭＬＬ）異常をともなうＡＭＬを包含する。多系統異形成をともなう例示的ＡＭＬは、以前の骨髄異形成症候群に関連するか、または関連しないものである。いずれかの規定可能なグループ中に分類されない他の急性骨髄性白血病は、最小限に分化されたＡＭＬ、成熟をともなわないＡＭＬ、成熟をともなうＡＭＬ、急性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、急性赤血球白血病、急性巨核球性白血病、急性好塩基性白血病、および骨髄線維症をともなう急性汎骨髄症を包含する。
【００３４】
他の態様において、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤で標的することができる細胞増殖性障害は、ウイルス媒介腫瘍を含む。これらは、正常細胞を腫瘍細胞に形質転換させる能力を有する発癌ウイルスによる細胞の感染に起因しうる。ウイルス感染率は、細胞形質転換の実際の発生数をはるかに超えるので、ウイルス媒介形質転換は一般に、他の細胞因子とともに作用して、形質転換腫瘍細胞を発生させる。このようにして、ウイルス媒介腫瘍は、このウイルスが細胞増殖性障害の唯一の原因物質であることを必要としないが、むしろウイルス感染またはウイルスの永続的な存在が、腫瘍の発生と関連していることを必要とする。一般に、原因物質がウイルスである腫瘍は典型的には、限定数のウイルス遺伝子の継続的な発現を有し、ウイルス性のこれらの癌遺伝子は、ウイルス感染の一部として、またはこのウイルスの永続を通して発現され、正常な細胞遺伝子発現および情報伝達経路を破壊する。理論によって縛られるわけではないが、細胞形質転換に関与するウイルス癌遺伝子は、４つの主な細胞プロセスを破壊するように見える：すなわち、成長因子および細胞外マトリックスと相互作用する細胞表面受容体、膜貫通型シグナル伝達ネットワーク、細胞質ゾル要素、例えば可溶性タンパク質および第２のメッセンジャー、および遺伝子調節および複製において直接的および間接的に機能するＤＮＡ結合タンパク質および因子を包含する核タンパク質である。あるウイルスでコードされたタンパク質は、形質転換プロセスの一部として特定の細胞成分を標的するので、Ｓｙｋ阻害剤の適用は、ウイルス成分がＳｙｋキナーゼの活性を標的する場合に適切でありうる。
【００３５】
いくつかの実施形態において、本明細書において開示されている化合物で治療可能なウイルス媒介腫瘍は、Ｓｙｋ活性を調節しうる免疫受容体チロシン−ベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）をコードするいずれかのウイルスと関連している。このモチーフは、上記のように、非受容体チロシンキナーゼと相互作用し、これを活性化することによって機能する保存アミノ酸配列モチーフのことを言う。ＩＴＡＭモチーフは、とりわけ、ＦｃεＲＩのβおよびγ鎖、Ｔ細胞受容体のεサブユニット、および免疫グロブリンβ（Ｉｇβ）、およびＢ細胞受容体のＩｇα中に見られる。規範的配列モチーフは典型的には、Ｙｘｘ（Ｌ／Ｉ）ｘ６−８Ｙｘｘ（Ｌ／Ｉ）（式中、ｘはいずれかのアミノ酸を表わす）である。一般に、このモチーフ中のチロシン残渣は、ＩＴＡＭシグナル伝達に関与し、キナーゼのＳｒｃ族によるリン酸化のための基質である。ＩＴＡＭのリン酸化形態は、シグナル伝達タンパク質、例えばＳｙｋ／ＺＡＰ−７０キナーゼを含有するＳＨ２（ｓｒｃ同族体ドメイン）のための相互作用部位として機能する。多様な細胞の細胞表面分子中のその存在に加えて、ＩＴＡＭ配列は、ウイルスでコードされたタンパク質中に同定されている。癌遺伝子としてのＳｙｋキナーゼの機能を指摘している本明細書の記載に鑑みて、ＩＴＡＭ配列を有するタンパク質をコードする遺伝子を保有するウイルスと関連した腫瘍は、Ｓｙｋ阻害化合物で治療することができる。
【００３６】
したがって、いくつかの実施形態において、これらの阻害化合物で治療可能なウイルス媒介腫瘍は、カポジ肉腫（ＫＳ）関連ヘルペスウイルス、カポジ肉腫に関わるリンパ栄養ウイルス、ＨＩＶ感染集団の中でより高い発生率で発見される稀な悪性腫瘍と関連している。ＫＳ関連ヘルペスウイルスは、免疫受容体チロシン−ベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）様配列を有する、ＫＩと呼ばれている膜貫通型タンパク質をコードする。ＫＩ遺伝子産物は、Ｓｙｋおよびその関連キナーゼＺａｐ−７０を活性化するために、そのシステインリッチなエクトドメインを通して構成的に作用すると考えられる（Ｌａｇｕｎｏｆｆ，Ｍ．ら、１９９９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９６（１０）：５７０４−５７０９）。本発明の方法のさらなる裏付けとして、ＫＩ遺伝子を有するトランスジェニックマウスは、感染動物においてある肉腫およびリンパ種の発生率を増加させるように見え、このことは、腫瘍形成におけるＫＩ活性についての役割を示している（Ｐｒａｋａｓｈら、２００２，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．９４：９２６−３５）。
【００３７】
いくつかの実施形態において、ウイルス媒介腫瘍は、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）と関連している。エプスタイン−バーウイルスは、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ族のメンバーであり、これは、一次感染後、中咽頭の上皮細胞において複製され、再循環Ｂリンパ球を感染させる。感染は、腺熱としても公知の急性感染性単球増加症を生じうる。感染性単球増加症は、一時的免疫抑制、および大部分がＣＤ８＋Ｔ細胞である異常なリンパ球の拡張を特徴とする良性のリンパ増殖性疾病である。これらのＴ細胞において、ＥＢＶは、潜在的であるが永続性の感染を樹立し、感染の間、精選された組のウイルス遺伝子が発現される。ゲノム全体が、エピソームＤＮＡとして増殖するリンパ球中に存続しうる。ＥＢＶ感染は、バーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、および成人Ｔ細胞白血病と関連している。
【００３８】
ＥＢＶゲノムによってコードされたＬＭＰ２Ａタンパク質は、感染後のＥＢＶウイルスの潜伏の維持においてある役割を果たすと考えられている膜貫通型タンパク質である。これは、延長アミノ末端尾、１２膜スパンのドメイン、および細胞質ドメインからなる。アミノ末端領域は、ＩＴＡＭモチーフを含有し、これは、ＬＭＰ２ＡとＳｙｋキナーゼとの相互作用を可能にする（Ｆｒｕｅｈｌｉｎｇら、１９９７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２３５：２４１−２５１）。ＬＭＰ２Ａは、Ｂ−細胞生存を促進し、潜伏を維持するために、リンパ細胞中のＳｙｋキナーゼを調節するように見える。Ｓｙｋは、他のシグナル伝達経路、例えばＰＩ−３Ｋ、ＢＬＮＫ、およびホスホリパーゼγ２を調節する情報伝達経路において重要な役割を果たし、リンパ細胞生存の強化に関与しているので、ＬＭＰ２Ａタンパク質、または他のウイルス媒介エフェクターを通した不適切なＳｙｋ活性化は、異常なリンパ増殖の誘発においてある役割を果たすことがある（Ｃａｌｄｗｅｌｌら、２０００，Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７４（１９）：９１１５；Ｃａｌｄｗｅｌｌら、１９９８，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ９：４０５）。このようにして、Ｓｙｋ活性の阻害は、ＥＢＶウイルス感染と関連した細胞増殖性障害に対して治療効果を与えうる。
【００３９】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋ阻害剤で治療されることになるウイルス媒介腫瘍は、ヒトＴ−細胞リンパ球性ウイルス（ＨＴＬＶ−１ウイルス）、エイズウイルスＨＩＶ−１と同じ種類のウイルス中のレトロウイルスと関連している。ＣＤ８＋Ｔ−細胞は、ウイルスリザーバとしても機能しうるが、このウイルスは、ＣＤ４＋Ｔ−細胞に対しても親和性である。ＨＴＬＶ−１感染は、とりわけ、成人Ｔ−細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬＬ）、およびいくつかの他のリンパ球障害と関連している。ＨＴＬＶ−１感染の間、Ｓｙｋは感染細胞中に発現され、一方、Ｓｙｋ関連キナーゼＺＡＰ−７０の発現は存在しない（Ｗｅｉｌら、１９９９，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７３（５）：３７０９−１７）。Ｓｙｋを包含するいくつかのキナーゼの制御不良は、成人Ｔ−細胞白血病のＨＴＬＶ−１媒介誘発に関わっている。
【００４０】
いくつかの実施形態において、ウイルス媒介腫瘍は、乳癌ウイルス（ＭＴＶ）と関連している。ＩＴＡＭ配列は、ネズミ乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）、すなわちマウスの乳癌の病因的作用物質として同定されたＢ型レトロウイルスのＥｎｖ遺伝子の中に見出される。ＭＭＴＶ Ｅｎｖ遺伝子でトランスフェクションされたマウス乳房上皮細胞は、形質転換表現型の特性、例えば軟寒天中のコロニー形成、および基底膜調製物中への侵入力を示す（Ｋａｔｚら、２００５，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２０１（３）：４３１−９）。ネズミ乳癌ウイルス様配列はまた、ヒト癌、例えば乳癌およびＴ細胞リンパ腫中にも存在し（Ｗａｎｇら、２０００，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６：１２７３−１２７８）、腫瘍形成と相関関係があるが、その理由は、これらの配列が、正常な乳房組織の大部分において観察されないからである。このようにして、ＭＴＶと関連した腫瘍は、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤で治療することができる。
【００４１】
ウイルス媒介腫瘍の治療のためのＳｙｋ阻害化合物の使用は、先に特定されたウイルスと関連した腫瘍に限定されないと理解すべきである。記載されているように、Ｓｙｋが、その発癌性メカニズムの一部として活性化される発癌性ウイルスと関連したあらゆる腫瘍は、これがＩＴＡＭ配列をともなっていてもいなくても、Ｓｙｋ阻害化合物を用いて標的することができる。
【００４２】
いくつかの実施形態において、これらの阻害剤で標的することができる細胞増殖性障害は、異常なＦｌｔ−３キナーゼ活性と関連した細胞増殖性障害を含む。「異常なＦｌｔ−３キナーゼ活性」という用語は、次のものから見て正常でない活性のことを言う。すなわち、Ｆｌｔ−３キナーゼ活性の正常レベルが、野生型Ｆｌｔ−３キナーゼについてはどんなものであろうか、または正常なＦｌｔ−３発現細胞、組織、器官、または有機体中においてはどんなものであろうかという観点からである。異常なＦｌｔ−３キナーゼ活性は、タンパク質の誤った局在化（空間発現）、（直接的または間接的）酵素の活性の増加または減少、または一時的発現の変化（すなわち発達発現）に起因しうる。
【００４３】
いくつかの実施形態において、異常なキナーゼ活性は、Ｆｌｔ−３の変異体と関連している。いくつかの実施形態において、これらの変異体は、増加したＦｌｔ−３受容体キナーゼ活性を特徴とする。本明細書において用いられているように、「増加したキナーゼ活性」とは、野生型Ｆｌｔ−３キナーゼについて、または正常なＦｌｔ−３発現細胞、組織、器官、または有機体において観察されるものよりも高いキナーゼ活性のことを言う。例示的な増加したキナーゼ活性は、あるＦｌｔ−３変異体、例えばＦｌｔ−３ ＩＴＤ、およびＦｌｔ−３活性化ループ突然変異を有する細胞中に見出される。
【００４４】
異常なＦｌｔ−３キナーゼ活性は、造血新生物の多くの異なる型の中に観察されるので、いくつかの実施形態において、Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３阻害化合物は、異常なＦｌｔ−３キナーゼの存在を特徴とする造血新生物を治療するために用いることができる。このようにして、いくつかの実施形態において、Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３阻害化合物で治療可能な造血新生物は、とりわけ、急性骨髄性白血病、Ｂ−前駆体細胞急性リンパ芽球性白血病、Ｔ−細胞急性リンパ芽球性白血病、および被験体において異常なＦｌｔ−３の存在が診断されているか、または疑われている慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を包含しうる。しかしながら、当業者は、このような情報がなくてもこれらの治療を適用しうること、およびこれらの阻害化合物が、生存率の確率を高めるために予防的に与えることができることを理解すべきである。さらに当業者は、異常なＦｌｔ−３キナーゼ活性が検出されているか、または疑われている他の細胞増殖性障害へ、本明細書におけるＳｙｋ／Ｆｌｔ−３阻害化合物を適用することができる。
【００４５】
他の態様において、本開示は、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤の使用による、腫瘍転移の治療を対象とする。転移は、腫瘍細胞が、その起源部位から脱離し、ついで広がって他の部位でコロニー化する、悪性腫瘍細胞の特徴である。これらの二次性腫瘍は、腫瘍細胞が由来する細胞と関連しない組織中に形成されうる。癌の悪性形態からの死亡率の主要原因であるように見えるのは、転移によるこれらの二次性腫瘍の形成である。転移は、悪性細胞が原発腫瘍から離脱し、血液またはリンパ系に入り、ついで他のコロニー化部位へ移動する時に始まる。一般に正常細胞は、異種細胞が互いに接着するのを阻害する様々なシグナル、ならびに細胞成長を阻害する細胞間のシグナルによって脱離せず、かつ他の組織に侵入しない。しかしながら細胞形質転換は、腫瘍細胞が局部的組織細胞と相互作用して、局部的細胞外マトリックスを修飾し、移動を刺激し、増殖および生存を促進するように、これらの正常な調節プログラムを改変する。細胞接着分子（ＣＡＭ）、例えば免疫グロブリンおよびカルシウム依存性カドへリン族およびインテグリンのメンバーの改変は、侵入および転移において重要な役割を果たすように見える。例えば、接着性の高いイソ型から接着性の低い型へのＮ−ＣＡＭの改変は、そのダウンレギュレーションとともに、浸潤性膵臓癌を生じることがある。
【００４６】
組織侵入および転移に関わる別のクラスの接着性タンパク質は、インテグリンである。上に記載されているように、インテグリンは、多様なクラスの細胞表面分子を形成する。２２超のインテグリン亜類型の範囲内の順列もまた、異なる細胞シグナル伝達状態または変わりつつある外部環境に応答して細胞の相互作用を変更するための柔軟系を作成することができる。インテグリンは、インテグリンの活性化状態に応じて、細胞外リガンドと動的に相互作用する。これは、インテグリン親和性および結合活性を修飾する細胞内シグナルによって制御される（すなわちインサイドアウトシグナル伝達）。逆に、インテグリンと細胞外リガンドとの相互作用は、細胞接着特性、および変わりつつある細胞外環境への細胞応答に影響を与える情報伝達カスケードを始動させうる（すなわちアウトサイドインシグナル伝達）。インテグリンサブユニットの発現における変更は、浸潤性および転移性成長を誘発または阻害し、このことは、これらのタンパク質をこれらのプロセスの重要な決定因としての関与を示唆する（Ｇｕｏら、２００４，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．５（１０）：８１６−２６；Ｊｉｎら、２００４，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，９０：５６１−５６５）。例えば、インテグリンαｖβ３が、脈管形成に必要とされ、そのアップレギュレーションは、腫瘍浸潤性および転移可能性と相関関係がある（Ｌｉａｐｉｓら、１９９６，Ｄｉａｇ．Ｍｏｌ．Ｐａｔｈｏｌ．２３：１２７−１３５）。培養された転移乳癌細胞は、αｖβ３の構成的発現を示し（Ｐｅｃｈｅｕｒら、２００２，ＦＡＳＥＢ Ｊ．１６：１２６６−１２６８）、一方、例えば、インテグリンとその天然基質との結合のために競合するＲＧＤペプチド類似剤の使用による、インテグリン活性を含有するαｖサブユニットの阻害は、細胞増殖特性に影響を与えることなく、腫瘍の転移可能性を減少させうる（Ｋｒｉｎｓｔｅｎら、２００４，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ２１（２）：１２９−３８；Ｈａｒｍｓら、２００４，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ２１（２）：１１９−２８）。同様に、β１インテグリンの過剰発現は、細胞を基底膜へ付着させたままにする機能を果たす接着性接合部を破壊する場合がある。
【００４７】
Ｓｙｋキナーゼ活性は、造血系統の細胞上で発現するが、同様に非造血細胞中でも発現する様々なインテグリンと関連している。Ｓｙｋキナーゼは、肺上皮細胞（Ｕｌａｎｏｖａら、２００４，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８８：Ｌ４９７−Ｌ５０７）および単球（Ｌｉｎら、１９９５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０（２７）：１６１８９−９７）のβ１インテグリンシグナル伝達、顆粒球／好中球中のβ２インテグリンシグナル伝達（Ｍｉｕｒａら、２０００，Ｂｌｏｏｄ ９６（５）：１７３３−９；Ｋｕｓｕｍｏｔｏら、２００１，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５（３）：２４１−８）、および血小板活性化および細胞接着におけるβ３インテグリンシグナル伝達（Ｇａｏら、１９９７，ＥＭＢＯ Ｊ．１６（２１）：６４１４−２５）に関わっている。Ｓｙｋキナーゼ活性と腫瘍形成との間に、本発明において示されている関係があるとすれば、腫瘍の浸潤性および転移特性の軽減におけるＳｙｋキナーゼ阻害剤の使用は、Ｓｙｋキナーゼ活性とあるいくつかのインテグリンとの間の連結を通して示される（Ｍｏｃｓａｉら、２００２，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １６（４）：５４７−５８）。このようにして、いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼの阻害剤は、インテグリン活性によって媒介された腫瘍の転移特性を調節するために用いることができる。いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤は、腫瘍細胞組織の浸潤性、およびβ１インテグリンによって影響される転移可能性を軽減するために用いることができる（Ｌｉｎら、１９９５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１６１８９−１６１９７；Ｋｕｓｕｍｏｔｏら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１，４５（３）：２４１−８；Ｏｒｔｉｚ−Ｓｔｅｒｎら、２００５，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ．（Ｅｐｕｂ））。この型の例示的インテグリンは、インテグリンα２ｂ１である。
【００４８】
いくつかの実施形態において、これらのＳｙｋキナーゼ阻害剤は、腫瘍細胞組織浸潤性、およびβ２インテグリン（ＣＤ１８）の活性によって影響された転移可能性を軽減するために用いることができる（Ｗｉｌｌｅｋｅら、２００３，Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．７４（２）：２６０−９）。これらは、とりわけ、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８、ＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８、およびＣＤ１１ｄ／ＣＤ１８を包含する。さらなる実施形態において、これらのＳｙｋキナーゼ阻害剤は、腫瘍細胞組織浸潤性、およびβ３インテグリンの活性によって影響された転移可能性を軽減するために用いることができる。この型の例示的インテグリンは、αＩＩｂβ３およびαｖβ３である。
【００４９】
転移が可能な様々な腫瘍型は、これらのＳｙｋ阻害化合物で治療することができる。このような腫瘍は、例として非限定的に、乳癌、卵巣癌、腎性癌、胃腸癌、腎臓癌、膀胱癌、膵臓癌、肺扁平癌、および腺癌を包含する（例えば、Ｆｅｌｄｉｎｇ−Ｈａｂｅｒｍａｎｎら、２００１，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９８（４）：１８５３−８を参照されたい）。定着腫瘍の転移を軽減するための治療的処理は、転移の診断に従うことができる。転移の診断がなされなかったならば、この阻害化合物は、転移の確率を減少させるために予防的に投与することができる。
【００５０】
これらのＳｙｋ阻害化合物は、他のどの治療からも独立して用いることができるか、または外科手術、放射線使用、または他の化学療法を包含する他の癌治療法と組み合わせて用いることができると理解すべきである。したがって、いくつかの実施形態において、これらのＳｙｋキナーゼ阻害剤は、他の化学療法薬と組み合わせて用いることができる。Ｓｙｋ阻害剤との組み合わせ治療は、第２の化学療法薬の適切な選択によって、異なる細胞成分を標的しうる。例えば、Ｓｙｋ阻害剤は、いくつかの実施形態において、腫瘍細胞の転移可能性を制限するために用いることができ、一方で、別の化学療法薬は、異常な細胞を除去または死滅させるために用いることができる。
【００５１】
様々な化学療法薬が、細胞増殖性障害を治療するために、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤と組み合わせて用いることができる。これらの化学療法薬は、一般的な細胞毒性薬であってもよく、または特定の細胞分子を標的してもよい。様々なクラスの癌化学療法薬は、とりわけ、代謝拮抗薬、ＤＮＡと反応する作用物質（例えばアルキル化剤、配位化合物など）、転写酵素の阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ＤＮＡ副溝結合化合物、抗有糸分裂薬（例えばビンカアルキロイド）、抗腫瘍抗生物質、ホルモン、および酵素を包含する。例示的アルキル化剤は、例として非限定的に、メクロロタミン、シクロホスファミド、イフォスファミド、メルファラン、クロラムブシル、エチレンイミン、メチルメラミン、アルキルスルホネート（例えばブスルファン）、およびカルムスチンを包含する。例示的代謝拮抗薬は、例として非限定的に、葉酸類似体メトトレキセート；ピリミジン類似体フルオロウラシル、シトシンアラビノシド；およびプリン類似体メカプトプリン、チオグアニン、およびアザチオプリンを包含する。例示的ビンカアルキロイドは、例として非限定的に、ビンブラスシン、ビンクリスチン、パクリタキセル、およびコルシシンを包含する。例示的抗腫瘍抗生物質は、例として非限定的に、アクチノマイシンＤ、ダウノルビシン、およびブレオマイシンを包含する。抗新生物薬として効果的な例示的酵素は、Ｌ−アスパラギナーゼである。例示的配位化合物は、例として非限定的に、シスプラチンおよびカルボプラチンを包含する。例示的ホルモンおよびホルモン関連化合物は、例として非限定的に、アドレノコルチコステロイドプレドニゾン、およびデキサメタゾン；アロマターゼ阻害剤アミノグルテチミド、ホルメスタン、およびアナストロゾール；プロゲスチン化合物ヒドロキシプロゲステロンカプロエート、メドロキシプロゲステロン；および抗エストロゲン化合物タモキシフェンを包含する。例示的トポイソメラーゼ阻害剤は、例として非限定的に、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）；ミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン、およびカンプトセシンを包含する。
【００５２】
これらの抗癌化合物および他の有用な抗癌化合物は、Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ，１３ｔｈ Ｅｄ．（Ｏ’Ｎｅｉｌ，Ｍ．Ｊ．ら、ｅｄ）Ｍｅｒｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ（２００１）、およびＧｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｈａｒｄｍａｎ，Ｊ．Ｇ．、およびＬｉｍｂｉｒｄ，Ｌ．Ｅ．ｅｄｓ．ｐｇ．１３８１−１２８７，ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ，（１９９６）に記載されている。これらの文献のどちらも、参照により本明細書に組み込まれる。
【００５３】
Ｓｙｋ阻害剤と組み合わせて有用な他の抗増殖性化合物は、例として非限定的に、成長因子受容体に対して向けられた抗体（例えば抗−Ｈｅｒ２）；サイトカイン、例えばインターフェロン−αおよびインターフェロン−γ、インターロイキン−２、およびＧＭ−ＣＳＦ；および細胞表面マーカー用抗体（例えば抗−ＣＴＬＡ−４、抗−ＣＤ２０（リチュキシマブ）；抗−ＣＤ３３）を包含する。細胞表面マーカーに対する抗体が用いられるとき、化学療法薬は、腫瘍細胞への特異的標的のためにこれへ共役することができる。適切な共役体は、放射性化合物（例えば抗体共役キレート剤へ結合された放射性金属）、細胞毒性化合物、および薬品活性化酵素（例えばアリナーゼ、ペプチダーゼ、エステラーゼ、触媒抗体など）を包含する（例えば、Ａｒｄｉｔｔｉら、２００５，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐ．４（２）：３２５−３３１；米国特許第６，２５８，３６０号を参照されたい；これらは、参照により本明細書に組み込まれる）。
【００５４】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋ阻害剤は、Ｓｙｋ、またはＳｙｋおよびＦｌｔ−３とは異なる発癌キナーゼを標的する第２のキナーゼ阻害剤とともに用いることができる。Ｓｙｋ阻害剤が、造血新生物の治療のために本明細書に開示されているとすれば、造血新生物の治療のために用いられている他の適合性キナーゼ阻害剤もまた、用いることができる。いくつかの実施形態において、この第２のキナーゼ阻害剤は、Ａｂｌキナーゼの阻害剤である。慢性骨髄性白血病は、骨髄中の白血病幹細胞の悪性増殖を特徴とする骨髄新生物である。慢性骨髄性白血病の大部分は、相互転座ｔ（９；２２）（ｑ３４；ｑ１１）によって規定された細胞遺伝異常と関連している。この染色体異常は結果として、活性化キナーゼ活性を有するＢＣＲ／ＡＢＬ融合タンパク質の発生をもたらす。この融合タンパク質キナーゼ活性の阻害剤は、抵抗形態が連続治療の際に発達しうるが、慢性骨髄性白血病の治療において有効でありうる。Ａｂｌキナーゼ阻害剤と組み合わせたＳｙｋキナーゼ阻害剤の使用は、第２のキナーゼ阻害剤により標的されたのとは異なる細胞プロセスを標的することによって、抵抗性細胞の機会を減少させうる。例示的Ａｂｌキナーゼ阻害剤は、イマチニブメシレートおよびＧｌｅｅｖｅ（登録商標）としても公知の２−フェニルアミノピリミジンである。このようにして、いくつかの実施形態において、これらのＳｙｋキナーゼ阻害剤は、Ａｂｌキナーゼ阻害剤２−フェニルアミノピリミジンおよびその誘導体と組み合わせて用いることができる。他の実施形態において、この第２のキナーゼ阻害剤は、ピリドール［２−３−ｄ］ピリミジンおよびその誘導体であってもよく、これは元来、Ｓｒｃキナーゼの阻害剤として同定された。さらに他の実施形態において、第２のキナーゼ阻害剤は、チルホスチンおよびその誘導体（例えばアダホスチン）であってもよく、これらは、このキナーゼとその基質との会合に影響を与えることがある。他のキナーゼ阻害化合物は、当業者には明白であろう。
【００５５】
本明細書にさらに記載されているように、他の化学療法薬の投与は、組成物の形態で行なうか、またはＳｙｋ阻害剤と組み合わせて付加的に投与されてもよい。化学療法薬は、付加的に与えられるとき、Ｓｙｋ阻害剤の投与とともに同時に、または連続的に投与されてもよい。
【００５６】
６．２ ＳｙｋキナーゼおよびＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害剤
様々な阻害剤に関連して、これらの化合物を記載するために用いられる用語は、異なる定義が本明細書において示されているか、または特定の阻害化合物について記載している参考文献において示されているのでなければ、当業者によって用いられているこれらの通常かつ共通の意味を有する。
【００５７】
単独で、または別の置換基の一部としての「アルキル」とは、親アルカン、アルケン、またはアルキンの単一炭素原子からの１つの水素原子の除去によって誘導された、記載された数の炭素原子を有する（すなわちＣ１−Ｃ６とは、１〜６炭素原子を意味する）飽和または不飽和、分枝、直鎖、または環状一価炭化水素基を言う。典型的なアルキル基は、メチル；エチル、例えばエタニル、エテニル、エチニル；プロピル、例えばプロパン−１−イル、プロパン−２−イル、シクロプロパン−１−イル、プロプ−１−エン−１−イル、プロプ−１−エン−２−イル、プロプ−２−エン−１−イル（アリル）、シクロプロプ−１−エン−１−イル、シクロプロプ−２−エン−１−イル、プロプ−１−イン−１−イル、プロプ−２−イン−１−イルなど；ブチル、例えばブタン−１−イル、ブタン−２−イル、２−メチル−プロパン−１−イル、２−メチル−プロパン−２−イル、シクロブタン−１−イル、ブト−１−エン−１−イル、ブト−１−エン−２−イル、２−メチル−プロプ−１−エン−１−イル、ブト−２−エン−１−イル、ブト−２−エン−２−イル、ブタ−１，３−ジエン−１−イル、ブタ−１，３−ジエン−２−イル、シクロブト−１−エン−１−イル、シクロブト−１−エン−３−イル、シクロブタ−１，３−ジエン−１−イル、ブト−１−イン−１−イル、ブト−１−イン−３−イル、ブト−３−イン−１−イル等々を包含するが、これらに限定されない。「アルキル」という用語は具体的には、いずれかの程度またはレベルの飽和を有する基、すなわちまったく炭素−炭素単結合のみを有する基、１またはそれ以上の炭素−炭素二重結合を有する基、１またはそれ以上の炭素−炭素三重結合を有する基、および炭素−炭素単結合、二重結合、および三重結合の混合物を有する基を包含するものとする。特定レベルの飽和が意図されている場合、「アルカニル」、「アルケニル」、および「アルキニル」という表現が用いられる。「低級アルキル」という表現は、１〜６炭素原子からなるアルキル基を言う。
【００５８】
単独で、または別の置換基の一部としての「アルカニル」とは、飽和分枝、直鎖、または環状アルキル基を言う。典型的なアルカニル基は、メタニル；エタニル；プロパニル、例えばプロパン−１−イル、プロパン−２−イル（イソプロピル）、シクロプロパン−１−イルなど；ブチアニル、例えばブタン−１−イル、ブタン−２−イル（ｓｅｃ−ブチル）、２−メチル−プロパン−１−イル（イソブチル）、２−メチル−プロパン−２−イル（ｔ−ブチル）、シクロブタン−１−イルなどを包含するが、これらに限定されない。
【００５９】
単独で、または別の置換基の一部としての「アルケニル」とは、親アルケンの単一炭素原子からの１つの水素原子の除去によって誘導された、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する不飽和分枝、直鎖、または環状アルキル基を言う。この基は、１または複数の二重結合の周りでシスまたはトランスのどちらかのコンホメーションにあってもよい。典型的なアルケニル基は、エテニル；プロペニル、例えばプロプ−１−エン−１−イル、プロプ−１−エン−２−イル、プロプ−２−エン−１−イル（アリル）、プロプ−２−エン−２−イル、シクロプロプ−１−エン−１−イル；シクロプロプ−２−エン−１−イル；ブテニル、例えばブト−１−エン−１−イル、ブト−１−エン−２−イル、２−メチル−プロプ−１−エン−１−イル、ブト−２−エン−１−イル、ブト−２−エン−１−イル、ブト−２−エン−２−イル、ブタ−１，３−ジエン−１−イル、ブタ−１，３−ジエン−２−イル、シクロブト−１−エン−１−イル、シクロブト−１−エン−３−イル、シクロブタ−１，３−ジエン−１−イルなどを包含するが、これらに限定されない。
【００６０】
単独で、または別の置換基の一部としての「アルキニル」とは、親アルキンの単一炭素原子からの１つの水素原子の除去によって誘導された、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する不飽和分枝、直鎖、または環状アルキル基を言う。典型的なアルキニル基は、エチニル；プロピニル、例えばプロプ−１−イン−１−イル、プロプ−２−イン−１−イルなど；ブチニル、例えばブト−１−イン−１−イル、ブト−１−イン−３−イル、ブト−３−イン−イルなどを包含するが、これらに限定されない。
【００６１】
「親芳香族環系」とは、共役ｐｉ電子系を有する不飽和環状または多環式環系を言う。具体的には、「親芳香族環系」の定義の中に、これらの環の１またはそれ以上が芳香族であり、これらの環の１またはそれ以上が飽和または不飽和である縮合環系、例えばフルオレン、インダン、インデン、フェナレンなどが含まれる。典型的な親芳香族環系は、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、クリセン、コロネン、フルオランテン、フルオレン、ヘキサセン、ヘキサフェン、ヘキサレン、ａｓ−インダセン、ｓ−インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、オクタセン、オクタフェン、オクタレン、オバレン、ペンタ−２，４−ジエン、ペンタセン、ペンタレン、ペンタフェン、ペリレン、フェナレン、フェナントレン、ピセン、プレイアデン、ピレン、ピラントレン、ルビセン、トリフェニレン、トリナフタレンなどを包含するが、これらに限定されない。
【００６２】
単独で、または別の置換基の一部としての「アリール」とは、親芳香族環系の単一炭素原子からの１つの水素原子の除去によって誘導された、記載された数の炭素環原子を有する（すなわちＣ５−Ｃ１４とは、５〜１４炭素環原子を意味する）一価の芳香族炭化水素基を言う。典型的なアリール基は、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、クリセン、コロネン、フルオランテン、フルオレン、ヘキサセン、ヘキサフェン、ヘキサレン、ａｓ−インダセン、ｓ−インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、オクタセン、オクタフェン、オクタレン、オバレン、ペンタ−２，４−ジエン、ペンタセン、ペンタレン、ペンタフェン、ペリレン、フェナレン、フェナントレン、ピセン、プレイアデン、ピレン、ピラントレン、ルビセン、トリフェニレン、トリナフタレンなどに由来する基を包含するが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、アリール基は、（Ｃ５−Ｃ１４）アリールであり、（Ｃ５−Ｃ１０）がさらに好ましい。特に好ましいアリールは、シクロペンタジエニル、フェニル、およびナフチルである。
【００６３】
単独で、または別の置換基の一部としての「アリールアルキル」とは、炭素原子に結合した水素原子の１つ、典型的には末端またはｓｐ３炭素原子がアリール基で置換されている非環式アルキル基を言う。典型的なアリールアルキル基は、ベンジル、２−フェニレンタン−１−イル、２−フェニレンテン−１−イル、ナフチルメチル、２−ナフチルエタン−１−イル、２−ナフチルエテン−１−イル、ナフトベンジル、２−ナフトフェニルエタン−１−イルなどを包含するが、これらに限定されない。特定のアルキル部分が意図されている場合、用語アリールアルカニル、アリールアルケニル、および／またはアリールアルキニルが用いられる。好ましい実施形態において、アリールアルキル基は、（Ｃ６−Ｃ１６）アリールアルキルであり、例えばアリールアルキル基のアルカニル、アルケニル、またはアルキニル部分は、（Ｃ１−Ｃ６）であり、アリール部分は（Ｃ５−Ｃ１０）である。特に好ましい実施形態において、アリールアルキル基は、（Ｃ６−Ｃ１３）であり、例えばアリールアルキル基のアルカニル、アルケニル、またはアルキニル部分は、（Ｃ１−Ｃ３）であり、アリール部分は（Ｃ５−Ｃ１０）である。
【００６４】
「親ヘテロ芳香族環系」とは、１またはそれ以上の炭素原子が各々独立して、同一または異なるヘテロ原子またはヘテロ原子基で置換されている親芳香族環系を言う。炭素原子を置換するのに典型的なヘテロ原子またはヘテロ原子基は、Ｎ、ＮＨ、Ｐ、Ｏ、Ｓ、Ｓｉなど包含するが、これらに限定されない。具体的には、「親ヘテロ芳香族環系」の定義中に、これらの環の１またはそれ以上が芳香族であり、これらの環の１またはそれ以上が飽和または不飽和である縮合環系が含まれる。例えばアルシンドール、ベンゾジオキサン、ベンゾフラン、クロマン、クロメン、インドール、インドリン、キサンテンなどである。同様に「親ヘテロ芳香族環系」の定義中に、置換基を含む、認識された環、例えばベンゾピロンが含まれる。典型的な親ヘテロ芳香族環系は、アルシンドール、ベンゾジオキサン、ベンゾフイラン、ベンゾピロン、カルバゾール、β−カルボリン、クロマン、クロメン、シンノリン、フラン、イミダゾール、インダゾール、インドール、インドリン、インドリジン、イソベンゾフラン、イソクロメン、イソインドール、イソインドリン、イソキノリン、イソチアゾール、イソキサゾール、ナフチリジン、オキサジアゾール、オキサゾール、ペリミジン、フェナントリジン、フェナントロリン、フェナジン、フタラジン、プテリジン、プリン、ピラン、ピラジン、ピラゾール、ピリダジン、ピリジン、ピリミジン、ピロール、ピロリジン、キナゾリン、キノリン、キノリジン、キノキサリン、テトラゾール、チアジアゾール、チアゾール、チオフェン、トリアゾール、キサンテンなどを包含するが、これらに限定されない。
【００６５】
単独で、または別の置換基の一部としての「ヘテロアリール」とは、親ヘテロ芳香族環系の単一原子からの１つの水素原子の除去によって誘導された、記載された数の環原子を有する（すなわち「５〜１４員」とは、５〜１４環原子を意味する）一価のヘテロ芳香族基を言う。典型的なヘテロアリール基は、アクリジン、アルシンドール、カルバゾール、β−カルボリン、クロマン、クロメン、シンノリン、フラン、イミダゾール、インダゾール、インドール、インドリン、インドリジン、イソベンゾフラン、イソクロメン、イソインドール、イソインドリン、イソキノリン、イソチアゾール、イソキサゾール、ナフチリジン、オキサジアゾール、オキサゾール、ペリミジン、フェナントリジン、フェナントロリン、フェナジン、フタラジン、プテリジン、プリン、ピラン、ピラジン、ピラゾール、ピリダジン、ピリジン、ピリミジン、ピロール、ピロリジン、キナゾリン、キノリン、キノリジン、キノキサリン、テトラゾール、チアジアゾール、チアゾール、チオフェン、トリアゾール、キサンテンなどに由来する基を包含するが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ヘテロアリール基は、５〜１４員ヘテロアリール、または５〜１０員ヘテロアリールである。
【００６６】
単独で、または別の置換基の一部としての「ヘテロアリールアルキル」とは、炭素原子に結合した水素原子の１つ、典型的には末端またはｓｐ３炭素原子が、ヘテロアリール基で置換されている非環式アルキル基を言う。特定のアルキル部分が意図されている場合、用語ヘテロアリールアルカニル、ヘテロアリールアルケニル、および／またはヘテロリルアルキニルが用いられる。いくつかの実施形態において、ヘテロアリールアルキル基は、６〜２０員ヘテロアリールアルキルであり、例えばヘテロアリールアルキルのアルカニル、アルケニル、またはアルキニル部分は１〜６員であり、ヘテロアリール部分は、５〜１４員ヘテロアリールである。特に好ましい実施形態において、ヘテロアリールアルキルは、６〜１３員ヘテロアリールアルキルであり、例えばアルカニル、アルケニル、またはアルキニル部分は１〜３員であり、ヘテロアリール部分は５〜１０員ヘテロアリールである。
【００６７】
「置換アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、またはヘテロアリールアルキル」とは、１またはそれ以上の水素原子が別の置換基で置換されているアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、またはヘテロアリールアルキル基を言う。例示的置換基は、−ＯＲ’、−ＳＲ’、−ＮＲ’Ｒ’、−ＮＯ２、−ＮＯ、−ＣＮ，−ＣＦ３、ハロゲン（例えば−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、および−Ｉ）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’（式中、各Ｒ’は独立して、水素および（Ｃ１−Ｃ６）アルキルからなる群から選択される）を包含するが、これらに限定されない。
【００６８】
「プロドラッグ」とは、使用条件、例えば体内で、活性薬を放出するために形質転換を必要とする活性化合物（薬品）の誘導体のことを言う。プロドラッグは、活性薬へ転化されるまで、薬理学的に不活性であることが多いが、必ずしもそうではない。プロドラッグは典型的には、活性のために一部必要とされると考えられている薬品中の官能基を、プロ基（下に規定されている）でマスキングすることによって得られ、プロ部分を形成し、これは、特定の使用条件下に形質転換、例えば切断を受け、官能基を放出し、したがって活性薬が得られる。プロ部分の切断は、自然に、例えば加水分解反応によって進行しうる。またはこれは別の作用物質、例えば酵素、光、酸、または物理的または環境的パラメータの変化またはこれへの暴露、例えば温度の変化によって触媒されるか、または誘発されうる。この作用物質は、使用条件、例えばプロドラッグが投与される細胞中に存在する酵素、または胃の酸性条件に対して内因性であってもよく、またはこれは外部的に供給されてもよい。
【００６９】
プロドラッグを生じるために活性薬中の官能基をマスキングするのに適した非常に多様なプロドラッグ、ならびにその結果生じたプロ部分は、当業界において周知である。例えば、ヒドロキシル官能基は、スルホネート、エステル、またはカーボネートプロ部分としてマスキングされてもよく、これは、インビボで加水分解されて、ヒドロキシル基を生じうる。アミノ官能基は、アミド、カルバメート、イミン、ウレア、ホスフェニル、ホスホリル、またはスルフェニルプロ部分としてマスキングされてもよく、これは、インビボで加水分解されて、アミノ基を生じうる。カルボキシル基は、エステル（シリルエステルおよびチオエステルを包含する）、アミド、またはヒドラジドプロ部分としてマスキングされてもよく、これは、インビボで加水分解されて、カルボキシル基を生じうる。適切なプロ基およびこれらのそれぞれのプロ部分の他の具体例は、当業者には明らかであろう。
【００７０】
ＳｙｋキナーゼまたはＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ活性を阻害する様々な化合物は、本明細書に記載された方法において用いることができる。これらは、とりわけ、小さい有機分子、ペプチドもしくはタンパク質、または核酸を包含する。本明細書において用いられているように、「Ｓｙｋ阻害剤」または「Ｓｙｋキナーゼ阻害化合物」とは、Ｓｙｋキナーゼそれ自体の活性を直接阻害するか、または本明細書に記載されているＩＣ５０範囲における適切なＳｙｋ機能に必要とされる他の細胞標的とのＳｙｋの相互作用を阻害するいずれかの化合物を言う。本明細書において用いられている阻害剤は、酵素阻害剤、例えば競合的、非競合的、および不競合的阻害剤の従来の記載を包含する。Ｓｙｋ阻害剤である化合物は一般に、インビトロまたは細胞アッセイにおいて、Ｓｙｋキナーゼ活性、例えばＳｙｋキナーゼが合成または内因性基質をリン酸化する能力に対して、約５ｕＭまたはそれ以下、約１ｕＭまたはそれ以下、約５００ｎｍまたはそれ以下、約１００ｎｍまたはそれ以下、約５０ｎｍまたはそれ以下、約１０ｎｍまたはそれ以下、または約１ｎｍまたはそれ以下の範囲内のＩＣ５０を示す化合物である。例えば例示的Ｓｙｋ阻害化合物は、米国特許出願第１０／６３１，０２９号およびＰＣＴ公報第ＷＯ２００４／０１４３８２号に開示されている。当業者なら、より低いＩＣ５０、例えば約１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、またはそれ以下でさえある範囲内のＩＣ５０を示す化合物が、本発明の方法に有用であることを理解するであろう。
【００７１】
いくつかの実施形態において、この阻害化合物は、Ｓｙｋキナーゼに対して選択的であってもよい。「Ｓｙｋキナーゼ選択的阻害化合物」とは、Ｓｙｋに対して選択性を示す化合物を言い、これは、規定された組のアッセイにおいて、ＳｙｋキナーゼについてのＩＣ５０に対する、参照キナーゼについてのＩＣ５０の比として規定される。一般に、Ｓｙｋキナーゼ選択的阻害化合物は、約１０超、約５０超、約１００超、約１，０００超、またはそれ以上である、Ｓｙｋキナーゼに対する選択率を有しうる。参照キナーゼは、細胞増殖性障害と関連したいずれのキナーゼ活性であってもよく、これは、キナーゼ、例えば、例として非限定的に、Ａｕｒｏｒａ−Ａ、ＡＫＴ、ＣＤＫ１／サイクリンＢ、ＣＤＫ２／サイクリンＡ、ＣＤＫ３／サイクリンＥ、ＣＤＫ５／ｐ３５、ＣＤＫ６／サイクリンＤ３、ＣＤＫ７／サイクリンＨ／ＭＡＴ１、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、ＥＧＦＲ、ｃ−ＲＡＦ、ＲＡＳ、ｃＳＲＣ、Ｙｅｓ、Ｆｙｎ、Ｌｃｋ、Ｆｅｓ、Ｌｙｎ、Ｂｍｘ、ＦＧＦＲ３、ＧＳＫ３α、ＧＳＫ３β、Ｐ１３、ＩＧＦ−１Ｒ、ＭＡＰＫ２、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＪＮＫ，ＭＥＫ１、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＰＡＫ２、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＰＤＫ１、ＰＫＡ、ＰＫＣε、ＰＫＣ、ＰＫＤ２、ＶＥＧＦ、ＰＲＡＫ、ＰＲＡＫ２、ＲＯＣＫ−ＩＩ、Ｒｓｋ１、Ｒｓｋ２、Ｒｓｋ３、ＳＧＫを包含する。これらのキナーゼの各々についての様々なアッセイは、当業者には明らかであろう。例えば、Ａｕｒｏｒａキナーゼ活性は、インビトロアッセイ、または細胞中のリン酸化産物の測定において、天然または合成基質（例えば蛍光ペプチド、ヒストンＨ３）を用いうる（Ｗａｌｔｅｒら、２０００、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９（４２）：４９０６−１６）。キナーゼ活性は、様々な研究方法を用いて検出することができる。これは、例として非限定的に、免疫沈降（例えばＣｙｃｌｅｘ Ａｕｒｏｒａ Ａ Ｋｉｎａｓｅ Ａｓｓａｙ；ＭＢＬ Ｃｏｒｐ，Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）、移動度シフト（例えばＣａｌｉｐｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ，ＵＳＡ）、自己蛍光融合タンパク質基質（例えば米国特許第６，２４８，５５０号）、およびＦＲＥＴベースのアッセイ（Ｚ−ＬＹＴＥ（登録商標）；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＣＡ，ＵＳＡ）を包含する。当業者によって理解されるように、異常な細胞増殖に関与する他の活性キナーゼが、Ｓｙｋに対するキナーゼ阻害剤の選択性を決定するために用いることができる。
【００７２】
いくつかの実施形態において、細胞増殖性障害の治療のために用いられる阻害化合物は、Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害化合物を含む。「Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害化合物」または「Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害剤」とは、例えばＦｌｔ−３キナーゼそれ自体の活性を直接阻害することによって、または本明細書に記載されているＩＣ５０範囲における適切なＦｌｔ−３機能に必要とされる他の細胞標的との相互作用を阻害することによって、Ｆｌｔ−３キナーゼを阻害することもできるＳｙｋ阻害化合物を言う。Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３阻害剤である化合物は一般に、インビトロまたは細胞アッセイにおいて、Ｆｌｔ−３キナーゼ活性、例えばＦｌｔ−３キナーゼが合成または内因性基質をリン酸化する能力に対して、約５ｕＭまたはそれ以下、約１ｕＭまたはそれ以下、約５００ｎｍまたはそれ以下、約１００ｎｍまたはそれ以下、約５０ｎｍまたはそれ以下、約１０ｎｍまたはそれ以下、または約１ｎｍまたはそれ以下の範囲内のＩＣ５０を示す化合物である。例えば例示的Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３阻害化合物は、米国特許出願第１０／６３１，０２９号およびＰＣＴ公報第ＷＯ２００４／０１４３８２号に開示されている化合物の属に見出すことができる。当業者なら、より低いＩＣ５０、例えば約１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、またはそれ以下でさえある範囲内のＩＣ５０を示す化合物が、本発明の方法に有用であることを理解するであろう。
【００７３】
様々なキナーゼ阻害剤を、本発明の方法において用いることができ、適用可能な場合、対応阻害化合物の塩、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物を包含するものとする。いくつかの実施形態において、ＳｙｋキナーゼまたはＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害剤は、米国特許出願第１０／６３１，０２９号および公開されたＰＣＴ出願第ＷＯ２００４／０１４３８２号に記載されているように、２，４−ピリミジンジアミン化合物およびその様々な誘導体を含む。これらの特許は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。これらの化合物は一般に、次の構造および番号付け方式を有する、２，４−ピリミジンジアミン「核」を含む：
【００７４】
【化９】
該化合物は、Ｃ２窒素（Ｎ２）で置換されて第二級アミンを形成し、場合により次の位置、すなわちＣ４窒素（Ｎ４）、およびＣ５位および／またはＣ６位の１またはそれ以上でさらに置換されている。Ｎ４で置換されている時、置換基は、第二級アミンを形成する。Ｎ２における置換基、ならびに他の位置における任意置換基は、特徴および物理化学的性質において広い範囲にわたることができる。例えば、１または複数のこの置換基は、分枝、直鎖、または環状アルキル、分枝、直鎖、または環状ヘテロアルキル、単環式もしくは多環式アリール、単環式もしくは多環式ヘテロアリール、またはこれらの基の組み合わせであってもよい。これらの置換基は、米国特許出願第１０／６３１，０２９号およびＰＣＴ公報第ＷＯ２００４／０１４３８２号に記載されているように、さらに置換されてもよい。
【００７５】
Ｎ２および／またはＮ４置換基は、これらのそれぞれの窒素原子へ直接付着されてもよく、またはこれらは、これらのそれぞれの窒素原子から、同一または異なっていてもよいリンカーを介して間隔があけられていてもよい。これらのリンカーの性質は、広く様々であってもよく、互いから１分子部分の間隔をあけるのに有用な原子または基の事実上いずれの組み合わせを含んでいてもよい。例えばリンカーは、非環式炭化水素橋（例えば、飽和または不飽和アルキレノ、例えばメタノ、エタノ、エテノ、プロパノ、プロプ［１］エノ、ブタノ、ブト［１］エノ、ブト［２］エノ、ブタ［１，３］ジエノなど）、単環式もしくは多環式炭化水素橋（例えば、［１，２］ベンゼノ、［２，３］ナフタレノなど）、単純非環式へテロ原子またはヘテロアルキルジイル橋（例えば、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＰＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−、−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−、−Ｏ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−など）、単環式もしくは多環式ヘテロアリール橋（例えば、［３，４］フラノ、ピリジノ、チオフェノ、ピペリジノ、ピペラジノ、ピラジニノ、ピロリジノなど）、またはこのような橋の組み合わせであってもよい。
【００７６】
Ｎ２、Ｎ４、Ｃ５位および／またはＣ６位における置換基、ならびに任意選択的なリンカーは、同一または異なる置換基の１またはそれ以上でさらに置換されていてもよい。これらの置換基の性質は、広く様々であってもよい。適切な置換基の非限定例は、分枝、直鎖、または環状アルキル、単環式もしくは多環式アリール、分枝、直鎖、または環状ヘテロアルキル、単環式もしくは多環式ヘテロアリール、ハロ、分枝、直鎖、または環状ハロアルキル、ヒドロキシル、オキソ、チオキソ、分枝、直鎖、または環状アルコキシ、分枝、直鎖、または環状ハロアルコキシ、トリフルオロメトキシ、単環式もしくは多環式アリールオキシ、単環式もしくは多環式へテロアリールオキシ、エーテル、アルコール、スルフィド、チオエーテル、スルファニル（チオール）、イミン、アゾ、アジド、アミン（第一級、第二級、および第三級）、ニトリル（いずれかの異性体）、シアネート（いずれかの異性体）、チオシアネート（いずれかの異性体）、ニトロソ、ニトロ、ジアゾ、スルホキシド、スルホニル、スルホン酸、スルファミド、スルホンアミド、スルファミンエステル、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、エステル、アミド、アミジン、ホルマジン、アミノ酸、アセチレン、カルバメート、ラクトン、ラクタム、グルコシド、グルコヌリド、スルホン、ケタール、アセタール、チオケタール、オキシム、オキサミン酸、オキサミンエステルなど、およびこれらの基の組み合わせを包含する。反応性官能基を保有する置換基は、当業界において周知のように、保護されていてもよく、保護されていなくてもよい。
【００７７】
Ｓｙｋキナーゼ阻害化合物の特定の実施形態はまた、２００３年７月２９日に出願された米国特許出願第１０／６３１，０２９号；２００４年７月３０日に出願された米国特許出願第１０／９０３，２６３号（米国出願公報第２００５／０２３４０４９号）；２００４年７月３０日に出願された米国特許出願第１０／９０３，８７０号（米国出願公報第２００５／０２０９２２４号）；米国特許出願第６０／６３０，８０８号；およびＰＣＴ公報第ＷＯ２００４／０１４３８２号にも記載されている。２，４−ピリミジンジアミン化合物のプロドラッグ形態は、２００６年１月１９日に出願された米国特許出願第１１／３３７，０４９号に記載されている。すべての公報および特許出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。これらの化合物はまた、２００５年４月１８日に出願された米国仮出願第６０／６７２，６４８号の付属書Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤにも開示されている。これの内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００７８】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋ阻害化合物は、２００３年８月７日に出願された米国特許出願第６０／４９４，００８号、２００４年５月１８日に出願された米国特許出願第６０／５７２，５３４号；および米国出願公報第２００５／０１１３３９８号（出願番号第１０／９１３，２７０号）に記載されている特定の実施形態を包含しない。すべての特許出願および公報は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。これらの化合物はまた、２００５年４月１８日に出願された米国仮出願第６０／６７２，６４８号の付属書１、２、および３にも開示されている。これの内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００７９】
本明細書に記載されている状態および障害の治療のための、２，４−ピリミジンジアミンをベースとするＳｙｋまたはＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害剤の例示的実施形態は、とりわけ、次の構造：
【００８０】
【化１０】
を有する化合物、およびその様々な塩、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物を包含する。
【００８１】
２，４−ピリミジンジアミンをベースとするＳｙｋまたはＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害剤の他の例示的実施形態は、とりわけ、Ｎ４−（２，２−ジメチル−３−オキソ−４Ｈ−５−ピリド［１，４］オキサジン−６−イル）−５−フルオロ−Ｎ２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−２，４−ピリミジンジアミン（化合物ＶＩ）；Ｎ４−（２，２−ジメチル−４−［（二水素ホスホノキシ）メチル］−３−オキソ−５−ピリド［１，４］オキサジン−６−イル）−５−フルオロ−Ｎ２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−２，４−ピリミジンジアミン（化合物ＶＩＩ）；およびこれらの様々な塩（例えばカルシウム塩など）、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物を包含する。
【００８２】
いくつかの実施形態において、これらのＳｙｋキナーゼ阻害剤は、公開された米国特許出願第２００４／０１０６６１５号およびＰＣＴ公報第ＷＯ２００４／０１６５９７号に記載されているように、ピリジン、ピリミジン、またはトリアジン環をベースとする化合物を含んでいてもよい。これらは、参照により本明細書に組み込まれる。一般に、ピリジン、ピリミジン、またはトリアジン環は、０〜３窒素原子を有する６員アリールもしくはヘテロアリール環へ直接付着されている。
【００８３】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤は、ＰＣＴ公報第ＷＯ２００５／０１３９８２号および第ＷＯ２００４／０４６１２０号、および公開された米国特許出願第２００４／０２１４８１７号に記載されているように、アミノ−もしくはジアミノトリアゾールをベースとする化合物を含んでいる。これらは、参照により本明細書に組み込まれる。アミノトリアゾール化合物は典型的には、トリアゾール環の３位または４位において窒素原子上に置換基を有するか、またはこの環上にアミノ置換基を有する。例示的アミノトリアゾールは、とりわけ、アミノトリアゾールピリジンおよびアミノトリアゾールピリミジンを包含する（例えば第ＷＯ２００５／０１３９８２号を参照されたい）。同様に、キナーゼを阻害するジアミノトリアゾール化合物は、アミノ基の１つの上に複数の置換基を有し、およびトリアゾール環の３位または４位において窒素原子上に１つの置換基を有する。ジアミノトリアゾールをベースとする例示的キナーゼ阻害剤は、第ＷＯ２００４／０４６１２０号および米国出願第２００４／０２１４８１７号に記載されている。
【００８４】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤は、米国特許第６，８４９，６４１号、公開された米国特許出願第２００４／００５３９３１号、およびＰＣＴ公報第ＷＯ０３／０００６８８号に記載されているように、アザインドールをベースとする化合物を含んでいる。これらの特許のすべては、参照により本明細書に組み込まれる。米国特許第６，８４９，６４１号は、３−ヘテロアリーリデンアザインドリン−２−オン化合物について記載している。同様に、米国特許出願第２００４／００５３９３１号およびＰＣＴ公報第ＷＯ０３／０００６８８号は、とりわけ、ピロロピリジンが、２位または３位に芳香族またはヘテロ環式置換基（例えばベンジルまたはインドリル）を有するアザインドール化合物について記載している。
【００８５】
他の実施形態において、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤は、公開された米国特許出願第２００４／００４８８６８号およびＰＣＴ公報第ＷＯ０３／０２０６９８号に記載されているように、ベンズイミダゾールをベースとする化合物を含んでいる。これらの特許のどちらも、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。これらの化合物は典型的には、ベンジル環上の追加置換基とともに、イミダゾリルの１位および２位に置換基を有する。２位における例示的置換基は、アリールまたはヘテロアリール、例えばピラゾリル、トリアゾリル、イミダゾリル、インドリル、インダゾリル、チエノピラゾリル、テトラヒドロインダゾリル、テトラヒドロシクロペンタピラゾリル、ジヒドロフロピラゾリル、オキソジヒドロピリダジニル、テトラヒドロピロロピラゾリル、オキソテトラヒドロピロロピラゾリル、テトラヒドロピラノピラゾリル、テトラヒドロピリジノピラゾリル、またはオキソジヒドロピリジノピラゾリル基である。
【００８６】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤は、米国特許第６，７６２，１７９号、公開された米国特許出願第２００３／０１１９８５６号および第２００５／０００４１５２号、およびＰＣＴ公報第ＷＯ０２／０９６９０５号に記載されているように、チアゾールをベースとした化合物を含んでいる。これらの特許は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的なチアゾールベースの阻害剤は、ピリミジンが２位および４位に置換基を有する４−チアゾリルピリミジンである。典型的には２位における基は、非置換もしくは置換アミンである。アミン上の置換基は一般に、単環式およびヘテロ環式環、例えば置換フェニル、インダニル、ナフチル、ピリミジニル、またはピリジル環である。
【００８７】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤は、公開された米国特許出願第２００４／０１４２９４７号およびＰＣＴ公報第ＷＯ０３／０００６９５号および第ＷＯ２００４／０１６５９７号に記載されているように、ピロロピリミジンをベースとした化合物を含んでいる。これらの特許は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、ピロロピリミジンは、インドール環の３位に付着されている。一般に、このインドールは、１位および／または５位に置換基を有する。追加置換基は、このピロロピリミジンの４位に存在しうる。これは、とりわけ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、アルケニル、またはアルキニルを包含する。
【００８８】
いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤は、公開された米国特許出願第２００５／０００９８７６号、および米国特許第６，５３４，５２４号に記載されているように、インダゾールをベースとした化合物を含んでいる。これらの特許は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。米国特許第６，５３４，５２４号は、インダゾールが３位および／または５位に置換基を有する阻害化合物を開示している。３位における置換基は、とりわけ、非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリール、またはＣＨ＝ＣＨ−Ｒ、またはＣＨ＝Ｎ−Ｒ（式中、Ｒは、置換もしくは非置換アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールである）である。５位における置換基は、とりわけ、置換もしくは非置換アリール、ヘテロアリール、またはＹ−Ｘ（式中、Ｙは、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、Ｓ＝Ｏ、ＳＯ２、アルキリデン、ＮＨ、Ｎ−アルキルであり、Ｒ１は、置換もしくは非置換アリール、ヘテロアリール、またはＮ−Ｒ’（式中、Ｒ’は、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルコキシル、またはジアルキルアミドである）である。同様に、米国特許出願第２００５／０００９８７６号は、インダゾールがこのインダゾールの３位および／または５位に置換基を有する化合物を開示している。３位において、置換もしくは非置換アリール、またはヘテロアリール、またはフェニルへ縮合されたヘテロ環は、アルキル、例えばアルカニル、アルケニル、またはアルキニルを介して付着されている。５位における置換基は、とりわけ、ハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、アシルオキシ、チオアルキル、スルフィニルアルキル、スルホニルアルキル、ヒドロキシアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロ環、置換へテロ環、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、エステル、アミド、シアノ、または置換もしくは非置換アミンである。
【００８９】
いくつかの実施形態において、このＳｙｋキナーゼ阻害剤は、米国特許第６，５７３，２９５号、公開された米国特許出願第２００２／００６２０３１号、およびＰＣＴ公報第ＷＯ００／２７８０２号に記載されているように、二環式化合物を含んでいる。これらの特許のすべては、参照により本明細書に組み込まれる。これらの実施形態のいくつかにおいて、非置換もしくは置換ベンジルは、これも置換もしくは非置換であるシクロアルキルへ縮合されている。例示的シクロアルキルは、ヘプテニルである。例示的二環式阻害化合物は、｛４−［２−（７−カルバモイル−８−シクロヘキシルメトキシ−２，３，４，５−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］オキセピン−（Ｓ）−５−イルカルバモイル）−２−フェニルアセチルアミノ−エチル］−２−ホスホノ−フェニル｝−ホスホン酸；｛４−［（Ｓ）−２−アセチルアミノ−２−（３−カルバモイル−２−シシクロキシメトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−（Ｓ）−５−イルカルバモイル）−エチル］−フェノキシ｝−酢酸；および（４−［（ｓ）−２−アセチルアミノ−２−（３−カルバモイル−２−シシクロキシメトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−（Ｓ）−５−イルカルバモイル）−エチル］−２−カルボキシメチル−フェノキシ−酢酸である。
【００９０】
他の実施形態において、キナーゼ阻害剤は、公開された米国特許出願第２００４／０１９８７５０号およびＰＣＴ公報第ＷＯ２００４／０９２１５４号に記載されているように、クロメノンオキシム化合物を含んでいる。これらの特許は、参照により本明細書に組み込まれる。一般に、置換基はクロメノンオキシム核の２位および７位にある。
【００９１】
他のキナーゼ阻害化合物は、ＰＣＴ公報第ＷＯ９９／４７５２９号に記載されている置換へテロ環（例えばチアゾール、オキサゾール、イソキサゾール、ジアゾール、オキサジアゾール、ジオキサゾール、フラン、およびピリジン）、および置換アリール、またはＰＣＴ公報第ＷＯ２００４／０８５３８８号に記載されているような５−もしくは６−員ヘテロアリール環；およびＬａｉら、２００３，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ．１３（１８）：３１１１−４に記載されているようなスルホンアミドを包含する。他のキナーゼ阻害化合物は、当業者には明らかであろうし、本明細書に示されたガイダンスを用いて、Ｓｙｋキナーゼ阻害活性について試験することができる。
【００９２】
化合物は、様々な生化学的アッセイおよび細胞アッセイにおいて、Ｓｙｋおよび／またはＦｌｔ−３キナーゼに対するこれらの阻害効果について試験することができる。Ｓｙｋキナーゼは、ＬＡＴおよびＰＬＣ−γｌをリン酸化し、これは、とりわけ、マスト細胞および／または好塩基性細胞における脱顆粒を生じる。Ｓｙｋキナーゼ活性はまた、Ｔ−細胞受容体刺激への応答において観察される。これらの活性のどれも、Ｓｙｋ阻害化合物の活性を確認するために用いることができることを理解すべきである。いくつかの実施形態において、Ｓｙｋキナーゼアッセイは、抗−ＩｇＥでの刺激後の顆粒内容物放出の測定に基づく脱顆粒アッセイである。これらのアッセイは、例えば、トリプターゼ、ヒスタミン、ロイコトリエンＬＴＣ４、またはヘキソサミニダーゼ放出の測定を包含する。他の実施形態において、活性は、単離Ｓｙｋキナーゼもしくはこれの活性断片と阻害化合物とを、Ｓｙｋキナーゼ基質（例えばシグナル伝達カスケードにおいてＳｙｋによってリン酸化されることが公知である合成ペプチドもしくはタンパク質）の存在下に接触させ、Ｓｙｋキナーゼがこの基質をリン酸化するかどうかを評価することによって決定される。あるいはまた、アッセイは、Ｓｙｋキナーゼを発現する細胞を用いて実施することができる。これらの細胞は、Ｓｙｋキナーゼを内因的に発現しうるか、またはこれらは組換えＳｙｋキナーゼを発現するように設計することができる。これらの細胞は場合により、Ｓｙｋキナーゼ基質を発現させることも可能である。このような確認アッセイを実施するのに適した細胞、ならびに適切な細胞を設計する方法は、当業者には明らかであろう。適切なＳｙｋキナーゼ基質は、例として非限定的に、ヒトバンド３タンパク質（Ｗａｎｇら、１９９９，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７４（４５），３２１５９−３２１６６）；タンパク質キナーゼＣ（Ｋａｗａｋａｍｉら、２００３，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１００（１６）：９４７０−５）、チューブリン（Ｐｅｔｅｒｓら、１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７１：４７５５）、コルタクチン（Ｍａｒｕｙａｍａら、１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７１：６６３１）、およびｐ５０／ＨＳ１（Ｒｕｚｚｅｎｅら、１９９６，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３５：１５２７）を包含する。Ｓｙｋ阻害化合物の活性を確認するのに適した生化学的アッセイおよび細胞アッセイの具体例は、Ｆｏｘら、１９９８，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，７：２２４９、米国特許出願第１０／６３１，０２９号、第ＷＯ２００４／０１４３８２号、およびその中に引用されている引例に記載されている。これらの特許のすべては、参照により本明細書に組み込まれる。
【００９３】
Ｆｌｔ−３キナーゼの活性化は、自己リン酸化、ならびにとりわけ、単球性ＴＨＰ−１細胞中にイノシトール−５−ホスファターゼ（ＳＨＩＰ）および１００−ｋＤタンパク質を含有するＳｒｃ相同体２（ＳＨ２）−のいくつかの細胞基質のリン酸化：骨髄細胞中のＳｈｃおよびＣｂ１のリン酸化；β−アレスチン；ＳＨ２含有チロシンホスファターゼ、およびプロ−Ｂ細胞中のＣｂ１−ｂを生じる（例えばＲｏｔｔａｐｅｌら、１９９４，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ９：１７５５−１７６５；Ｚｈａｎｇら、１９９９，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．６５：３７２−３８０を参照されたい）。いくつかの実施形態において、Ｆｌｔ−３キナーゼの活性は、Ｆｌｔ−３キナーゼのリン酸化形態への抗体の使用によって測定することができる（すなわち自己リン酸化アッセイ；Ｋｉｙｏｉら、１９９８，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １２：１３３３−１３３７）。いくつかの実施形態において、この活性は、単離されたＦｌｔ−３キナーゼもしくはこれの活性断片と阻害化合物とを、Ｆｌｔ−３キナーゼ基質（例えばシグナル伝達カスケードにおいてＦｌｔ−３によってリン酸化されることが公知である合成ペプチドもしくはタンパク質）の存在下に接触させることによって決定することができる。あるいは、アッセイは、内因的にＦｌｔ−３キナーゼを発現するか、またはこれらが組換えＦｌｔ−３キナーゼを発現するように設計されている細胞を用いて実施することができる（例えばＹａｍａｍｏｔｏら、２００１，Ｂｌｏｏｄ ９７（８）：２４３４−２４３９）。これらの細胞は任意選択的に、Ｆｌｔ−３キナーゼ基質を発現することも可能である。いくつかの実施形態において、Ｆｌｔ−３発現細胞は、上に記載されている様々な下流標的、例えばホスホリパーゼＣ−（ＰＬＣ）、ホスファチジルイノシトール３’−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）のｐ８５サブユニット、ＳＨＣ、ＳＨＰ−２、ＳＨＩＰ、ＧＲＢ２、ＶＡＶ、Ｆｙｎキナーゼ、Ｓｒｃキナーゼ、Ｓｔａｔ５情報伝達タンパク質、およびＥＲＫの活性化について調べられる。
【００９４】
細胞増殖に対するこれらの阻害化合物の効果の測定は、インビトロおよびインビボアッセイをいくつ用いてもよい。例えば増殖性細胞は、インビトロで適切に培養することができ、該化合物で処理することができる。細胞集団中の増殖能力は、染料染色（例えばトリパンブルー染料−排除；３−４，５−ジメチルチアゾール−２，５−ジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）；およびアネキシンＶ）、または細胞ソーティング技術（例えばプロピジウムヨーダイドでの蛍光活性化細胞ソーティング）を用いて決定することができる。細胞増殖についてのインビボアッセイは、実験動物への腫瘍細胞の移植、ついでこれらの阻害化合物の投与に基づいていてもよい。細胞増殖のこれらの評価方法および他の評価方法は、当業者には明らかであろう。
【００９５】
６．３ 投薬量
１つまたは複数の活性化合物、またはこれらの組成物は、治療される特定の疾病を治療または予防するのに有効な量で用いることができる。該化合物は、治療効果を得るために治療的に、または予防効果を得るために予防的に投与することができる。治療効果とは、治療される、根底にある細胞増殖性障害、例えばリンパ系の新生物、骨髄新生物、ウイルス関連腫瘍の根絶または改善、および／または根底にある障害に関連した症状の１またはそれ以上の根絶または改善を意味し、したがって患者が依然として、根底にある障害に悩むことがあるにもかかわらず、患者が状態の改良を報告するようになっている。治療効果はまた、改善が実感されるかどうかにかかわらず、疾病の進行を停止または遅延化することも含む。
【００９６】
予防的投与のために、活性化合物は、異常な細胞増殖を特徴とするか、またはこれによって引き起こされるか、またはこれに関連した障害、例えば既に上に記載されている様々な障害を発症するリスクのある患者へ投与することができる。例えば、患者が腫瘍を有すると診断されるが、転移の兆候がないならば、これらの阻害化合物は、腫瘍転移を阻害するために、予防的に投与することができる。
【００９７】
投与される１または複数の阻害化合物の量は、多様な要因によるであろう。これは例えば、治療される特定の適応症、投与様式、所望の効果が予防的であるかまたは治療的であるか、治療される適応症の重症度、および患者の年齢および体重、特定の活性化合物のバイオアベイラビリティなどを包含する。有効投薬量の決定は、十分に当業者の能力範囲内にある。
【００９８】
初期投薬量は、最初はインビトロアッセイから推定することができる。例えば、動物への使用のための初期投薬量は、細胞増殖または腫瘍細胞の浸潤性を減少させるのに十分なほど、ＳｙｋまたはＦｌｔ−３を阻害する化合物の循環血または血清濃度を得るように配合することができる。あるいは、動物への使用のための初期投薬量は、ＳｙｋキナーゼまたはＦｌｔ−３阻害アッセイにおいて測定されているようなＩＣ５０と等しいか、またはそれを超える活性化合物の循環血または血清濃度を得るように配合することができる。特定の阻害化合物のバイオアベイラビリティを考慮に入れて、このような循環血または血清濃度を得るための投薬量の計算は、十分に当業者の能力範囲内にある。例えば、読者は、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ １，ｐｐ．１−４６，１９７５中のＦｉｎｇｌおよびＷｏｏｄｂｕｒｙ，”Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ”、およびその中で引用されている文献を参照されたい。初期投薬量はまた、インビボデータ、例えば動物モデルから推定することもできる。ＳｙｋキナーゼまたはＦｌｔ−３キナーゼ活性を特徴とするか、またはこれによって引き起こされるか、またはこれに関連した病気を治療または予防するための化合物の有効性を試験するのに有用な動物モデルは、本明細書に記載されている。
【００９９】
投薬量は典型的には、約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日、２００ｍｇ／ｋｇ／日、３００ｍｇ／ｋｇ／日、４００ｍｇ／ｋｇ／日、または５００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内にあるであろうが、他の要因の中でも特に、阻害化合物の活性、そのバイオアベイラビリティ、投与様式、および上で考察された様々な要因に応じて、これよりも高くても低くてもよい。投薬量および間隔は、治療または予防効果を維持するのに十分な、１または複数のこの活性化合物の血漿レベルを与えるように個別に調節することができる。局部的投与または選択的摂取、例えば局部的局所投与の場合、活性化合物の有効な局部的濃度は、血漿濃度と関連しなくてもよい。当業者なら、必要以上の実験を行なわずに、有効投薬量を最適化することができるであろう。
【０１００】
該化合物は、とりわけ、治療される適応症、および処方する医師の判断に応じて、一日あたり１回、一日あたり２〜３回もしくは数回、または一日あたり多数回さえ投与することができる。
【０１０１】
好ましくは、該活性化合物は、実質的な毒性を引き起こすことなく、治療的または予防的効果を与えるであろう。該活性化合物の毒性は、標準的製薬手順を用いて決定することができる。毒性と治療（または予防）効果との間の用量比が、治療指数である。高い治療指数を示す活性化合物が好ましい。
【０１０２】
６．４ 投与
細胞増殖性障害を治療または予防するために用いられる時、ＳｙｋまたはＳｙｋ／Ｆｌｔ−３阻害化合物は、単独で、または１またはそれ以上の活性化合物の混合物として、またはこのような病気、および／またはこのような病気と関連した症状の治療に有用な他の薬剤と混合して、または組み合わせて、投与することができる。これらの活性化合物は、それ自体で、または製薬組成物として投与することができる。
【０１０３】
本発明の活性化合物を含んでいる製薬組成物は、従来の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠製造のすり潰し、乳化、カプセル化、エントラッピング、または凍結乾燥方法を用いて製造することができる。組成物は、活性化合物を、製薬的に用いることができる調製物に加工処理することを容易にする、１またはそれ以上の生理学的に許容しうる担体、希釈剤、賦形剤、または補助剤を用いて、従来の方法で配合することができる。投与された実際の製薬組成物は、投与方法によるであろう。ほぼあらゆる投与方法を用いることができ、これは、例えば局所、経口、全身、吸入、注入、経皮などを包含する。
【０１０４】
活性化合物は、それ自体で、または製薬的に許容しうる塩の形態で、製薬組成物中に配合することができる。本明細書において用いられているように、「製薬的に許容しうる塩」という表現は、実質的に生物学的有効性および活性化合物の特性を保持し、かつ生物学的または他の点でも望ましくないわけではない塩を意味する。このような塩は、当業界において周知であるように、無機および有機酸、および塩基から調製することができる。典型的には、このような塩は、対応遊離酸および塩基よりも、水溶液中に可溶である。
【０１０５】
局所投与のためには、活性化合物は、当業界において周知であるように、溶液、ジェル、軟膏、クリーム、縣濁液などとして配合することができる。
【０１０６】
全身配合物は、注入、例えば皮下、静脈内、筋肉内、クモ膜下、または腹腔内注入による投与のために設計されたもの、ならびに経皮、経粘膜経口、または肺投与のために設計されたものを包含する。
【０１０７】
有用な注入可能な調製物は、水性または油性ビヒクル中の１または複数のこの活性化合物の滅菌縣濁液、溶液、またはエマルジョンを包含する。これらの組成物はまた、配合剤、例えば縣濁剤、安定剤、および／または分散剤も含有しうる。注入のためのこれらの配合物は、単位投薬形態において、例えばアンプル、または多用量容器において提示されてもよく、添加防腐剤を含有してもよい。
【０１０８】
あるいは、注入可能な配合物は、使用前に、非限定的に、発熱物質のない滅菌水、緩衝剤、デキストロース溶液などを包含する適切なビヒクルで再構成するための粉末形態で提供されてもよい。この目的のために、活性化合物は、いずれかの当業界で公知の技術、例えば凍結乾燥によって乾燥され、使用前に再構成することができる。
【０１０９】
経粘膜投与のために、透過されるバリアに適した浸透剤が、配合物において用いられる。このような浸透剤は、当業界において公知である。
【０１１０】
経口投与のために、製薬組成物は例えば、従来の手段によって、製薬的に許容しうる賦形剤、例えば結合剤（例えば予めゼラチン化されたトウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、またはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えばラクトース、微晶質セルロース、またはリン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、またはシリカ）；崩壊剤（例えばジャガイモデンプン、またはナトリウムデンプングリコレート）；または湿潤剤（例えばナトリウムラウリルサルフェート）を用いて調製された錠剤またはカプセルの形態を取ってもよい。錠剤は、当業界において公知の方法、例えば糖または腸溶コーティングでコーティングされてもよい。
【０１１１】
経口投与のための液体調製物は、例えばエリキシル、溶液、シロップ、または縣濁液の形態を取ってもよく、またはこれらは、使用前に水または他の適切なビヒクルでの構成のための乾燥物質として提示されてもよい。このような液体調製物は、従来の手段によって、製薬的に許容しうる添加剤、例えば縣濁剤（例えばソルビトールシロップ、セルロース誘導体、または水素化食用脂）；乳化剤（例えばレシチンまたはアカシア）；非水性ビヒクル（例えばアーモンド油、油性エステル、エチルアルコール、または分別植物油）；および防腐剤（例えばメチルもしくはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエート、またはソルビン酸）を用いて調製することができる。これらの調製物はまた、必要に応じて、緩衝塩、風味料、着色料、および甘味料を含有してもよい。経口投与のための調製物は、活性化合物の制御放出を与えるように、適切に配合することができる。
【０１１２】
口腔内投与のために、組成物は、従来の方法で配合された錠剤またはトローチ剤の形態を取ってもよい。
【０１１３】
直腸および膣投与経路のために、活性化合物は、従来の座薬の基剤、例えばカカオバターまたは他のグリセリドを含有する溶液（保持浣腸）座薬または軟膏として配合されてもよい。
【０１１４】
吸入による投与のためには、活性化合物は、加圧パックからのエアゾールスプレー、またはネブライザの形態で、適切な推進薬、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適切なガスを使用して好都合に送達することができる。加圧エアゾールの場合、投薬単位は、計量された量を送達するためのバルブを備えることによって決定することができる。吸入器または注入器への使用のための例えばゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、化合物と適切な粉末基剤、例えばラクトースまたはデンプンとの粉末混合物を収容して配合することができる。
【０１１５】
長時間送達のために、活性化合物は、移植、例えば皮下、皮内、または筋肉内注入による投与のために、デポー調製物として配合されてもよい。このようにして例えば、活性成分は、適切なポリマーまたは疎水性材料を用いて（例えば許容しうる油中のエマルジョンとして）、またはイオン交換樹脂として、またはやや溶解性がない誘導体として；例えばやや溶解性がない塩として配合されてもよい。
【０１１６】
あるいは、経皮吸収のために活性化合物をゆっくりと放出する、接着性ディスクまたはパッチとして製造された経皮送達系を用いることもできる。この目的のために、活性化合物の経皮浸透を容易にするために、透過エンハンサーを用いることができる。適切な経皮パッチは、例えば米国特許第５，４０７，７１３号；米国特許第５，３５２，４５６号；米国特許第５，３３２，２１３号；米国特許第５，３３６，１６８号；米国特許第５，２９０，５６１号；米国特許第５，２５４，３４６号；米国特許第５，１６４，１８９号；米国特許第５，１６３，８９９号；米国特許第５，０８８，９７７号；米国特許第５，０８７，２４０号；米国特許第５，００８，１１０号；および米国特許第４，９２１，４７５号に記載されている。
【０１１７】
あるいはまた、他の製薬送達系を用いることもできる。リポソームおよびエマルジョンは、活性化合物を送達するために用いることができる送達ビヒクルの周知例である。ある有機溶媒、例えばジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）もまた、通常はより大きい毒性という代償を払うが、用いることもできる。
【０１１８】
製薬組成物は、所望であれば、活性化合物を含有する、１または複数の単位投薬形態を含有することができるパックまたはディスペンサーにおいて提示されてもよい。このパックは例えば、金属またはプラスチックホイル、例えばブリスターパックを含んでいてもよい。パックまたはディスペンサー装置は、投与のための説明書をともなってもよい。
【実施例】
【０１１９】
７．実施例
７．１ 実施例１：Ｓｙｋ誘発プレ−Ｂ細胞形質転換に対するＳｙｋ阻害化合物の効果
Ｓｙｋ阻害化合物によるＳｙｋ−形質転換細胞の増殖の阻害を証明する実験は、Ｗｏｓｓｎｉｎｇ，Ｔ．，Ｈｅｒｚｏｇ，Ｓ．，Ｋｏｈｌｅｒ，Ｆ．，Ｍｅｉｘｌｓｐｅｒｇｅｒ，Ｓ．，Ｋｕｌａｔｈｕ，Ｙ．，Ｍｉｔｔｌｅｒ，Ｇ．，Ａｂｅ，Ａ．，およびＪｕｍａａ，Ｈ．，“Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ Ｓｙｋ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ”、（準備中の原稿）に記載されている。この原稿に記載されている実験は、下に簡単に要約されている。
【０１２０】
染色体転座Ｔｅｌ−Ｓｙｋの結果として生じる異常なＳｙｋ変異体を、Ｔｅｌ−Ｓｙｋを発現するＩＲＥＳ−ＧＦＰベクターを有する、新たに単離された骨髄プレ−Ｂ細胞をレトロウイルス的に形質導入することによって、プレ−Ｂ細胞を形質転換するその能力について試験した。これらの細胞培養からのＩＬ−７の回収は、Ｔｅｌ−Ｓｙｋ発現細胞の濃縮、および安定ＩＬ−７非依存性細胞系の発生を生じ、このことは、Ｔｅｌ−Ｓｙｋ発現が、プレ−Ｂ細胞の増殖および形質転換を促進しうることを示している。Ｔｅｌ−Ｓｙｋ活性によるプレ−Ｂ細胞の形質転換を、Ｔｅｌ−ＳＹＫ形質導入細胞をＲＡＧ／γＣ−／−マウスに注入することによって確認した。これは、骨髄異形成疾患の症状を示す動物を生じた。データは、Ｔｅｌ−Ｓｙｋ発現細胞が、インビボで急速に増殖し、これによって攻撃的白血病を誘発しうることを示している。
【０１２１】
Ｔｅｌ−Ｓｙｋで形質転換された細胞中のＳｙｋ活性の阻害が細胞増殖を妨げるかどうかを試験するために、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤２，４−ピリミジンジアミン化合物ＩＶの効果を、処理済み細胞のＤＮＡ含有量を調べることによって、インビトロで試験した。化合物ＩＶは、これらの細胞中のκ軽鎖の発現によって示されているように、Ｓｙｋ誘発プレ−Ｂ細胞増殖を効果的に妨げ、プレ−Ｂ細胞が分化することを可能にした。データは、Ｓｙｋ発現が、白血病細胞の増殖のために必要とされる場合があること、およびＳｙｋキナーゼ活性の妨げが、白血病細胞増殖の阻害を生じうる場合を示している。
【０１２２】
７．２ 実施例２：定着白血病に対するＳｙｋ阻害剤の効果
白血病細胞の増殖に対するＳｙｋ阻害剤の効果を決定するために、マウス中への注入後に白血病を誘発するいくつかの腫瘍形成性プレ−Ｂ細胞系を用いた。腫瘍形成性細胞は、増殖のためにプレ−Ｂ細胞受容体（プレ−ＢＣＲ）を必要とし、Ｓｙｋが、プレ−ＢＣＲシグナル伝達カスケードのための重要なタンパク質であるので、Ｓｙｋ阻害剤は、これらの腫瘍形成性プレ−Ｂ細胞の増殖を阻害するであろうと予想される。１つの実験において、化合物ＶＩが増殖を妨げる能力を、Ｍｙｃ発現ベクターで形質導入されたプレ−Ｂ細胞を用いて調べ、ＩＬ−７の不在下で培養した。これらのインビボでの増殖能力を調べるために、細胞をＲＡＧ／γＣ−＋／−マウスに注入した。ＶＩが増殖を妨げる能力を、Ｍｙｃ形質導入細胞系を用いて、インビトロで試験した（図２Ａおよび図２Ｂ）。
【０１２３】
ＶＩが増殖を妨げる能力はまた、腫瘍形成性ＳＬＰ−６５−／−プレ−Ｂ細胞系を用いても調べた。これらのインビボでの増殖能力を調べるために、細胞をＲＡＧ／γＣ−＋／−マウスに注入した。ＶＩが腫瘍形成性ＳＬＰ−６５−／−プレ−Ｂ細胞系の増殖を妨げる能力を、インビトロで試験した（図３Ａおよび図３Ｂ）。
【０１２４】
Ｓｙｋ阻害化合物の効果を調べるのに有用な他の白血病細胞系は、例として非限定的に、Ｂ細胞リンパ種細胞系ＪＭ１（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−１０４２３）、ホジキンリンパ種細胞系ＲＰＭＩ−６６６６（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＣＬ−１１３）、前骨髄球性白血病細胞系ＨＬ−６０クローン１５（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−１９６４）、バーキットリンパ種細胞系ＧＬ−１０（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−２３９２）、急性骨髄性白血病細胞系ＢＤＣＭ（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−２７４０）、骨髄単球性白血病（ＥＢＶ）細胞系ＣＥＳＳ（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＴＩＢ−１９０）、ＥＢＶ形質転換形質細胞腫／骨髄腫細胞系ＭＣ−ＣＡＲ（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−８０８３）、およびＥＢＶ形質転換プラズマ細胞白血病細胞系ＡＲＨ−７７（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−１６２１）を包含する。
【０１２５】
７．３ 実施例３：化合物ＶＩＩのカルシウム塩形態のインビボ評価、およびシクロホスファミドで予め処理されたＮＯＤ−ＳＣＩＤ免疫不全マウスにおけるＭＶ４−１１急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）静脈内腫瘍植付けモデルにおける細胞滴定
Ｆｌｔ−３ ＩＴＤ突然変異を、罹患したＡＭＬ患者における予後の悪さおよび寛解率の低下と関連付け、治療的介入の魅力的な標的とした。調査は、変異体Ｆｌｔ−３ ＩＴＤ受容体が、Ｆｌｔ−３リガンド−非依存的に二量体化し、受容体の自己リン酸化が、結果として構成的活性化、増殖の増加、および変異体細胞の成長因子独立を生じることを示した。初期の調査は、カルシウム塩形態ＶＩＩが皮下腫瘍成長を減少させ、生存率を延ばし、Ｆｌｔ−３ ＩＴＤ突然変異を有する５百万のＭＶ４−１１ヒト急性骨髄性白血病細胞が静脈内（ｉ．ｖ．）接種されたマウスの全身腫瘍組織量を減少させたことを示した。この調査は、シクロホスファミドで予め処理されたＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスへの、５百万または１千万のどちらかのＭＶ４−１１白血病細胞のｉ．ｖ．注入の結果生じた病気の進行、重症度、および生存率に対する、４０ｍｇ／ｋｇのＶＩＩで一日２回の経口処理を通した、腫瘍成長の阻害におけるＶＩＩ投与の有効性を証明するために実施した。
【０１２６】
７．３．１ 実験方法
細胞系
白血病細胞系：ＭＶ４−１１ヒト急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）（供給業者：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ））を、ＲｉｇｅｌにおけるＯｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐによって維持し、採集した。細胞を、２００４年１１月３０日にＩＭＰＡＣＴ試験し、エクトロメリア、ＥＤＩＭ、Ｈａｎｔａａｎ、Ｋウイルス、ＬＣＭＶ、ＬＤＥＶ、ＭＡＤ、ｍＣＭＶ、ＭＨＶ、ＭＭＶ、ＭＰＶ、ＭＴＶ、マイコプラズマｓｐ．、ポリオーマ、ＰＶＭ，ＲＥＯ３、センダイ、ＴＭＥＶ、およびＧＤＶＩＩについてマイナスであった。
【０１２７】
細胞系維持：ＭＶ４−１１細胞を、イスコフ改変ダルベッコ培地（ＡＴＣＣ（登録商標）番号：３０−２００５）に、１．５ｇ／Ｌ重炭酸ナトリウム、８０％；胎仔ウシ血清、２０％（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（１０，０００ＩＵ／ｍｌおよび１０，０００ｕｇ／ｍｌ）（ＣｅｌｌＧｒｏ／Ｍｅｄｉａ Ｔｅｃｈ，カタログ番号３０−００２−Ｃｌ）を含有するように調節した４ｍＭ Ｌ−グルタミンとともに維持する。細胞を、対数増殖期に採集し、洗浄し、新鮮な培地に注入した。ＭＶ４−１１細胞を、動物あたり５×１０６または１０×１０６細胞で接種した。
【０１２８】
薬剤学
この調査において用いられた試験製品および試験配合物の明細を、以下の配合物シートに列挙する。試験製品およびビヒクル配合物は、投薬（ビヒクル（ロット：１０２４−１５−０１）；８ｍｇ／ｍＬ ＶＩＩカルシウム塩（ロット：１０２４−１５−０３）の開始前に薬剤部によって作製した。カルシウム塩形態ＶＩＩは、ＶＩの等濃度で調製した。配合物を４℃で保存し、光保護し、使用前にボルテックスた。
【０１２９】
【化１１】
動物および収容
生後約１０週のメスＮＯＤ．ＣＢ１７−Ｐｒｋｄｃ ｓｃｉｄ／Ｊ（ＮＯＤ／ＳＣＩＤ）マウス（ｎ＝６０；出生日２００５年５月３０日；Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥから２００５年７月１９日に入荷）を調査のために用いた。ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウス（系統番号００１３０３）は、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙからのみ入手可能であり、ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスに独特な生来の適応的免疫における多重欠陥は、ヒト造血細胞での再構成のための優れたインビボ環境を提供する。約５０匹のマウスにシクロホスファミドを与え、この調査の生存中部分のために用いたが、追加のマウスは、植付けレベルのフローサイトメトリー分析用のバックグラウンド染色の評価のための非腫瘍対照のために用いた。わずかに年長のマウス（＞１９グラム）を、シクロホスファミド注入後の過剰な体重減少による早期の死を避けようとするために用いた（Ｖ０５０１４４と比較して）。
【０１３０】
動物を、換気されたＨＥＰＡ−フィルターケージラック（Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ Ｄｅｓｉｇｎ，Ｓｉｌｏａｍ Ｓｐｒｉｎｇｓ，ＡＺ）のＭｉｃｒｏアイソレーターケージに、ケージあたり５匹ずつ収容した。到着の際、これらを、使用前に少なくとも４作業日の間順化させた。温度を７２±５°Ｆ、相対湿度を３５〜７０％に維持し、１２時間明／暗サイクルを用いた。マウスには、認定されたげっ歯類食（Ｄｅａｎｓ Ｆｅｅｄ，Ｓａｎ Ｃａｒｌｏｓ，ＣＡ）を無制限に与えた。オートクレーブされたＲ．Ｏ．飲料水が無制限に利用可能であった。ケージおよび食料を使用前にオートクレーブした。すべての生存中手順は、Ｒｉｇｅｌ ＩＡＣＵＣによって承認された。
【０１３１】
ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスは、生存の間中は、ＮＯＤ自己免疫糖尿病傾向のバックグラウンドにもかかわらず、インスリン炎および糖尿病のどちらでもないが、特定の病原を含まない条件下では、この共通遺伝子系統には胸腺リンパ腫の高い発生率があり、平均寿命をわずか８．５ヶ月に制限される。染色体１１上のＥｍｖ−３０プロウイルスは、ＮＯＤ−ＳＣＩＤにおいて生後５〜６ヶ月に始まる胸腺腫の高い頻度を結果として生じ（３，４）、（５）、これは、レシピエントとしてＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスを用いて実施される実験期間を制限する。この実験では、すべての生存マウスにおいて、この調査における結果変数に対する自然な胸腺腫の影響を制限するために、マウスが生後約５ヶ月（調査の８３日目）に達したとき終結させた。
【０１３２】
動物手順
植付けの強化のための骨髄枯渇：これらの動物についての順化期間の終わりに（この調査において＞３週間）、マウスを、２日間、ついで下記のように、側面尾静脈を介した白血病細胞の静脈内（ｉ．ｖ．）注入前７２時間の残存期間、１５０ｍｇ／ｋｇ／日の腹腔内注入により、０．９％滅菌生理食塩水（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）中で調製された、（０．２２μＭシリンジフィルターを用いて）滅菌濾過されたシクロホスファミドで予め処理した。
【０１３３】
腫瘍接種：調査の０日目、マウスを、表１に概要が示されているように１００マイクロリットルの新鮮培地中に再縣濁された５百万または１千万ヒトＭＶ４−１１白血病細胞の静脈内尾静脈注入によって一回接種した。
【０１３４】
投薬：マウスに、ヒトＭＶ４−１１細胞（０日目）を接種した後、調査の１７日目に投薬を開始した。マウスには、調査の間、投薬間に最小８時間の間隔を空けて、５ｍＬ／ｋｇ投薬容量で、ビヒクルまたは４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩのどちらかを一日２回（ｂｉｄ）経口（ＰＯ）投与した。
【０１３５】
実験手順
腫瘍モデル：この調査は、腫瘍の植付けを強化するためのシクロホスファミド予備処理とともに、宿主としてＮＯＤ−ＳＣＩＤ免疫不全マウスを用いて、ネズミ静脈内ＭＶ４−１１白血病モデルにおける腫瘍の植付け、病気の進行、重症度、および全生存に対する、様々な用量のＶＩＩの効果を評価するよう設計した。歴史的データは、＞２０％体重減少、瀕死状態、後肢麻痺による運動性の多大な損失、または終点としての予期せぬ死によって決定された腫瘍細胞注入の均一な致死率にもかかわらず、骨髄（ＢＭ）および末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）における可変腫瘍細胞植付けを示している（調査Ｖ０５０１２３およびＶ０５０１４４）。加えて、シクロホスファミドは、このモデルにおいて致死のために必要であることが証明された。ビヒクル対照マウスにおける５１日間の中央値生存時間を示す公開された調査もまた、ＢＭ区画において検出された２〜１９％ヒト細胞の範囲の犠牲において、可変ＢＭ植付けを実証している。
【０１３６】
この調査は、調査から以前の有効性データを確認しようとして実施すたが、同様に、５百万または１千万の細胞接種が、骨髄および末梢血における腫瘍細胞植付けにおいて同様な不一致を生じるかどうか、またはこれらのマウスにおいて結果として生じる致死率を改変するかどうかを決定するためにも実施した。いくつかの動物における植付けの検出可能レベルはパイロット調査において腫瘍細胞注入の４週間後に早くも観察され、歴史的有効性データがこのレジメンで決定しているので、腫瘍細胞注入の約２週間後に開始し、毎日一日あたり２回（ｂｉｄ）のスケジュールで、４０ｍｇ／ｋｇにおいてビヒクルまたはＲ９４５７８８カルシウム塩で、動物は経口的に（ＰＯ）処理した。動物には、安楽死するまで、またはこの調査の終わりまで、このレジメンを続行した。この実験では、すべての生存マウスにおいて、自然な胸腺腫の発症の影響を制限するために、マウスが生後約５ヶ月（調査の８３日目）に達したとき終結させた。自然な胸腺腫の発症は、ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスにおいて、生後約５〜６ヶ月で始まるのがわかる。
【０１３７】
調査の設計：０日目（２００５年８月１２日）、マウスに、側面尾静脈を介してマウスあたり５百万または１千万細胞で、新鮮培地中のヒトＭＶ４−１１細胞をｉ．ｖ．注入した。ＭＶ４−１１細胞注入後３日目（２００５年８月１５日）までに、無作為化または処理の前に、潜在的にはシクロホスファミド処理によって、１匹のマウスを過剰な体重減少からの早期の死によって除外した。残りの動物を体重によって処理グループに無作為に入れ、細胞注入後１７日目（２００５年８月２９日）に投薬を開始した。グループ１〜４の平均体重は、それぞれ２０．６６±０．４３、２０．２３±０．４１、２０．１８±０．５４、および２０．８８±０．５９であった。処理グループの概要を、表１に示す。
【０１３８】
【表１】
疾病の進行および疾病の重症度：全体的な疾病の重症度は、体重減少、臨床的観察事項、検死発見事項、および選択された組織中の腫瘍細胞植付けの定量の組み合わせから決定した。マウスを毎週２〜３回体重測定し、パーセント体重変化を計算した。ＩＡＣＵＣ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ Ｒｉｇｅｌ ６−２００２，“Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ｎｏｖｅｌ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ／Ｍｏｕｓｅ Ｔｕｍｏｒ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ Ｍｏｄｅｌｓ”に概要が示されているように、嗜眠、かき乱された毛などをともなう、病的状態、明らかな消耗を有する後肢麻痺、重症の悪液質、または２０％超の体重減少の最初の兆候があったとき、動物を調査から除去し、安楽死させた。犠牲時、動物をＣＯ２ガスで麻酔し、血液を心臓穿刺によって収集した。動物からの血液を、Ｋ２ＥＤＴＡコーティングしたＭｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ（ラベンダートップ）チューブに移した。全血を間接的に氷に載せ、以下のセクションに記載されているように、フローサイトメトリー染色のために加工処理した。病気の重症度をさらに評価するために、全体試験において、触知可能なまたは疑わしい腫瘍の位置および描写を検死の際に注意深く書き留めた。
【０１３９】
腫瘍細胞植付け：全身腫瘍組織量を評価するために、骨髄および末梢血中のＭＶ４−１１腫瘍細胞の分布は、ヒトおよびマウス表面マーカー染色を用いて、フローサイトメトリー分析を介して、数匹のマウスの犠牲の上に決定した。
【０１４０】
腫瘍植付けの範囲は、数匹のマウスにおいて、犠牲の際の大腿部および／または脛骨の単離によって評価した。骨髄（ＢＷ）を１ｍｌの冷ＰＢＳを有するクリーンなエッペンドルフ管内に吸引し、フロー染色前に氷に保持した。すべての残留組織または腫瘍を、組織病理学および免疫組織化学（ＩＨＣ）のために１０％緩衝ホルマリンに固定した。末梢血もまた、心臓穿刺を介して得、Ｋ２ＥＤＴＡコーティングしたＭｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ（紫色）管に入れた。赤血球を溶解し、試料を洗浄し、腫瘍細胞植付けレベルを決定するためのフローサイトメトリー染色および分析のために、単核細胞（ＰＢＭＣ）のみが残った。
【０１４１】
ヒトＭＶ４−１１腫瘍細胞を同定するために、ＢＭおよびＰＢＭＣ試料を、マウスＣＤ４５、ヒトＣＤ４５、ヒトＨＬＡ、およびヒトＣＤ３３細胞表面マーカーに特異的な抗体で染色した。次いでフローサイトメトリー染色および分析を、ＶＩＩ処理およびビヒクル処理された動物から無作為に選択された試料中に存在するヒトＭＶ４−１１白血病細胞のパーセントを同定および計量するために、この多重マーカーストラテジーを用いて実施した（付属書５および６）。ヒトＭＶ４−１１細胞のパーセントは、全事象（ヒトＣＤ３３＋ＨＬＡ＋およびネズミＣＤ４５＋事象の合計として規定される）からのＣＤ３３＋ＨＬＡ＋事象の数として規定した。調査におけるすべての動物を収集および分析するためにあらゆる努力がなされた。しかしながら、このモデル中のビヒクル処理されたマウスにおける死の突然性によって、分析にはより少ない試料しか利用可能でなく、動物の数は、これらのグループの間で可変であった。細胞調製およびフロー染色および分析手順の詳細については、付属書５および６を参照されたい。
【０１４２】
統計分析：マウスの生存を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ４．０（登録商標）ソフトウエアパッケージを用いて、相対的疾病重症度の決定として（ｎ＝１８〜２０匹／グループ）、カプラン−マイヤー積極限法によって評価した。可能な場合、曲線比較のためのＬｏｇ Ｒａｎｋ（Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌ）試験（両側ｐ値）、生存動力学のためのハザード比、および全体の中央値生存を含めた追加の生存率曲線分析もまた、Ｐｒｉｓｍ ４．０（登録商標）を用いて計算した。調査終了時（８３日目）に生存しているすべての動物を、Ｐｒｉｓｍ（登録商標）分析において統計目的のために審査した。生存曲線の傾斜として規定されたハザード統計は、被験体がどれほど急速に死にかけているかの尺度である。したがって報告されたハザード比は、２つのグループ間の死亡率の比較である。例えば、ハザード比が２．０であると、１つのグループ中の死亡率は、他方のグループの死亡率の２倍である。一般に、Ｐｒｉｓｍ ４．０（登録商標）は、Ｄ．Ｇ．Ａｌｔｍａｎ，Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９１，ＣｈａｐｍａｎおよびＨａｌｌに詳細に記載されているような標準的計算を用いる。すべての結果は、別途指示しない限り、平均±ＳＥＭとして表示する。
【０１４３】
加えて、寿命におけるパーセント増加（％ＩＬＳ）は、次の方程式を用いて、ビヒクル対照グループと比較した各グループについての計算された中央値死亡日を用いて決定した。式中、ＤＯＤを死亡日と規定する：
％ＩＬＳ＝（中央値ＤＯＤ処理−中央値ＤＯＤビヒクル）／中央値ＤＯＤビヒクル×１００
４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩで処理されたマウスは、規定されない中央値生存時間を有したが、それは、不適切な数のマウス（＜５０％）が、調査の終了までに死んだからである。したがって％ＩＬＳの計算は、このグループについて８０日の最大中央値生存率と仮定し、計算値よりも大きいことを意味した。
【０１４４】
植付けデータは、不等質分散がバートレット検定によって検出されない場合、一元ＡＮＯＶＡを用いて分析した。この場合、不等質の分散を説明するために、ウエルチ補正を用いて非対両側スチューデント検定を実施した。細胞の総数あたりのパーセントＣＤ３３＋ＨＬＡ＋細胞の標準化を実施した。平均パーセント腫瘍細胞は、各試料について次の方程式を用い、ついでこれらの値の平均を測定することによって決定した。マウス細胞の総数を、単一細胞表面マーカーネズミＣＤ４５を用いて決定し、ヒト事象の総数を二重ヒト表面マーカーＣＤ３３およびＨＬＡを用いて決定した。
【０１４５】
パーセント腫瘍細胞＝［（＃ＣＤ３３＋ＨＬＡ＋二重陽性事象）／（総＃ネズミＣＤ４５＋および＃ＣＤ３３＋ＨＬＡ＋事象）］×１００
このモデル中のビヒクル処理されたマウスにおける死の突然性によって、分析にはより少ない試料しか利用可能でなく、本発明者らが統計的有意性を得る能力を制限した。十分な試料サイズおよび無作為サンプリングは、ＶＩＩ処理されたマウスの場合に得た。したがって、２０、４０、および８０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩ処理されたマウス間で比較を行ない、統計を上記のように実施した。
【０１４６】
カテゴリー変数、例えばグループあたりの腫瘍動物の総数について、ｐ値は、同様にＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ４．０（登録商標）ソフトウエアパッケージを用いて実施された、９５％信頼区間を有する両側フィッシャー精密検定を用いて、処理グループ対ビヒクルグループの比較の結果を反映している。
【０１４７】
７．３．２ 結果
生存率に対する化合物ＶＩＩ処理の効果：全体として、ＶＩＩで処理された動物は、検死の際に調べた時、長い生存率および触知可能な腫瘍塊体の減少数を示した。５百万ＭＶ４−１１細胞が接種された、ビヒクル処理されたマウスは、４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩ処理されたマウスにおける７９日と比較して、５４日の中央値生存時間を有した。１千万腫瘍が接種された、ビヒクル処理されたマウスは、５４日の中央値生存時間を有し、４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩ処理されたマウスについて、中央値死亡日は不確定数であった（＞８３日）。１千万ＭＶ４−１１細胞グループにおいて４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩで処理されたマウスは、不確定中央値生存時間を有したが、それは、不適切な数のマウス（＜５０％）が調査の終了までに死んだからである。したがって、％ＩＬＳの計算は、このグループについて８３日の最大中央値生存率と仮定し、計算値よりも大きいことを意味した。ＶＩＩ処理された動物とビヒクル処理された動物との間の全体の生存率において、有意差が見られた（５百万細胞での４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩについてはＬｏｇＲａｎｋ ｐ＜０．００２２および％ＩＬＳ＝４５％、１千万細胞での４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩについてはＬｏｇＲａｎｋ ｐ＜０．０００１および％ＩＬＳ＝＞５４％（このグループについて中央値ＤＯＤ＝８３と仮定して））。
【０１４８】
【表２】
８３日目には、ビヒクル処理グループには生存動物はいなかった。これに対して、５百万および１千万ＭＶ４−１１細胞が注入されたＶＩＩ処理グループからのマウスは、それぞれ５匹および９匹の生存マウスを有した。５０％以上のマウスが、ビヒクル対照の０％生存率と比較して、４０ｍｇ／ｋｇでＶＩＩ処理された１千万細胞グループにおいて８３日目まで生存した。
【０１４９】
疾病の重症度および腫瘍頻度および分布に対する化合物ＶＩＩの効果
ビヒクルおよびＶＩＩ処理動物の疾病の進行を比較した時、有意な表現型の差が明白であった。検死の際、ビヒクル処理動物における触知可能な腫瘍が、様々なリンパ節（ＬＮ）、下大静脈近くの下領域の脊髄（ＬＮの可能性がある）、胸壁に、および肋骨および胸骨の周りに、気管の近くに、顎および喉区域（おそらくは唾液腺およびＬＮ関連）において観察された。腫瘍はまた、腎臓、卵巣、および心臓にも見られた。加えて、非常に大きい腫瘍が、多くの場合、肩、腕、および脚の骨の周りに見られた。いくつかのマウスは、柔らかで滑らかな脳または明白な腫瘍を有するのが注目され、１匹のマウスは、初期の調査におけるＭＯＬＭ１３白血病モデルからの数匹のマウスと同様、検死の際に腫瘍があるように見える、非常に拡張された目を有していた。
【０１５０】
ビヒクル処理された動物は、５百万細胞グループにおいてはＭＶ４−１１注入の４２日後、１千万細胞グループにおいては４８日後に早くも後肢麻痺を明らかに示した。検死の際、ビヒクル処理された動物における触知可能な腫瘍が、以前の調査と同様な位置において観察された。全体で、５百万腫瘍細胞が接種された８匹のマウスのうちの８匹が、検死の際に触知可能な腫瘍塊体を有し、多くのマウスは、腫瘍を有すると同定された多重の解剖学的部位を有した。ビヒクル処理グループからの５匹のマウスは、死んでいるのが発見され、これらのマウスのうちの４匹は、進行した崩壊によって検死報告を有しておらず、結果として、このグループにおいて全部でわずか８つの検死となった。調査の終了まで（ＭＶ４−１１移植後８３日目）に、１２匹のビヒクル処理動物のうちの１２匹は終結させ、これらの動物のうち５匹は死んでいるのが発見され、これらのうち３匹は検査の際に瀕死状態にあり、２匹は、＞２０％の体重減少で犠牲にし、２匹は、重い衰弱と関連したＨＬＰのために犠牲にした。
【０１５１】
同様に、１２匹のマウスのうち１１匹は、目に見える腫瘍塊体を有し、多くは、１千万細胞が接種されたビヒクル処理マウスにおいて同定された多重部位を有していた。全部で１匹のビヒクル処理動物が死んでいるのが発見され、１匹は進行した崩壊によって検視を実施せず、その結果、このグループでは全部で１１の検死を行なった。調査の終了の際（ＭＶ４−１１移植後８３日目）、１３匹のビヒクル処理マウスのうち１３匹は終結させ、これらの動物のうち１匹は死んでいるのが発見され、これらのうち３匹は調べた際に瀕死状態にあり、７匹は＞２０％の体重減少を有し、２匹は重い衰弱に関連したＨＬＰのために犠牲にした。
【０１５２】
好対照として、４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩで処理されたマウスはほとんど腫瘍を示さず、５百万細胞グループにおいて検死された全部で１１匹の動物のうち３匹のみ、および１千万細胞グループにおいて１３匹の動物のうち７匹が、いくらかの目に見えるか、または触知可能な腫瘍を示した。処理グループ中のこれらの動物の大部分は、ビヒクル処理グループよりもはるかに小さい腫瘍を示した。腫瘍は、同様な解剖学的部位に位置し、調査の終了までに、１２匹の動物のうちの７匹は５百万細胞４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩ処理グループにおいて終結させ、これらの動物のうちの２匹は死んでいるのが発見され、１匹は調べた際に瀕死状態にあり、４匹は＞２０％の体重減少を有し、ＨＬＰのために犠牲にした動物はいなかった。同様に、１千万ＭＶ４−１１細胞が接種された４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩ処理動物はほとんど腫瘍を示さず、いくつかのマウスが、拡張された唾液腺、またはわずかに拡張されたＬＮを有した。調査の終了の際、４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩ処理マウス１３匹のうちわずか４匹は、これまでに終結させ、３匹のマウスは＞２０％の体重減少を有し、１匹のマウスは調べた際に瀕死状態にあるのが発見された。全体として、ＶＩＩ処理マウスは、腫瘍の総数、検死の際に観察された腫瘍の相対サイズ、およびこの調査における疾病の全体的な重症度の有意な減少を示し、４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩ処理は、初期の調査において見られたのと同様な有効性を示した。
【０１５３】
骨髄（ＢＭ）および末梢血（ＰＢ）におけるＭＶ４−１１腫瘍細胞の植付けに対する化合物ＶＩＩの影響：以前の調査と相関させるために、骨髄または末梢血におけるＭＶ４−１１植付けのレベルもまた、いくつかの動物において終結時に調べた。本発明者らの最高の努力にもかかわらず、この実験におけるビヒクル処理マウスの死の突然性によって、いくつかの試料は、分析のために利用不可能であった。初期の調査とは異なって、犠牲の際のＶＩＩ処理動物の骨髄および末梢血における平均パーセントＭＶ４−１１腫瘍細胞の統計学的に有意な減少は、ビヒクル処理動物と比較したとき、接種された細胞の滴定とは無関係に観察された（表３）。
【０１５４】
５百万細胞が接種されたビヒクル処理マウスは、ＢＭ（ｎ＝６）およびＰＢ（ｎ＝４）中に、それぞれ２５％および６１％ＣＤ３３＋／ＨＬＡ＋ヒト腫瘍細胞を有していた。対して、５百万細胞が接種されたＶＩＩ処理マウスは、ＢＭ（ｎ＝８）およびＰＢ（ｎ＝８）中に、それぞれ１％および０．６％ＣＤ３３＋／ＨＬＡ＋ヒト腫瘍細胞を有していた（ビヒクル対照に対して、４０ｍｇ／ｋｇについて、ＢＭはｐ＝０．１３、ＰＢはｐ＝０．０２である）。１千万細胞ビヒクル処理グループは、ＢＭ（ｎ＝８）およびＰＢ（ｎ＝８）中に、それぞれ１３％および４５％ＣＤ３３＋／ＨＬＡ＋ヒト腫瘍細胞を有していた。対して、１千万細胞ＶＩＩ処理グループは、ＢＭ（ｎ＝１３）およびＰＢ（ｎ＝１１）中に、それぞれ５％および３％ＣＤ３３＋／ＨＬＡ＋ヒト腫瘍細胞を有していた（ビヒクル対照に対して、４０ｍｇ／ｋｇについて、ＢＭはｐ＝０．０５、ＰＢはｐ＝０．００７である）。
【０１５５】
【表３】
（）内の数字は、汚染が疑われる２つのＰＢ試料を除外するために調節された値を反映する（各グループにおいてｎ＝１）。これらの試料は、心臓穿刺による血液収集を試みている間に、乳白色の浸出液を有することが注目され、その後、検死の際に、心臓または胸腺の近くに腫瘍を有することが注目された。これら２つの疑われた値は、ビヒクルおよび４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩグループ（１千万細胞）において、それぞれ９８％および９３％腫瘍細胞を示した。
【０１５６】
＊平均％腫瘍細胞は、ＣＤ３３＋ＨＬＡ＋事象の数／総事象として規定し、ここで、総事象＝ネズミＣＤ４５＋細胞の数＋ＣＤ３３＋ＨＬＡ＋事象の数である。
【０１５７】
＊＊ナイーブ試料を、３つの別々の調査のうち別々の３日で染色した。値は、アッセイの検出限界を反映するが、それは、マウスにＭＶ４−１１腫瘍細胞を注入しなかったからである。
【０１５８】
＊＊＊統計的有意性は、試料サイズが等質分散についてのバートレット検定には小さすぎる事象でさえ、データ中の不等質分散を説明するために、ウエルチ補正を有する非対両側スチューデントｔ検定を用いて決定した。
【０１５９】
これらのデータは、ビヒクルグループと比較した時、ＶＩＩ処理でのＢＭ中の全身腫瘍組織量において９６％および５９％減少（それぞれ５百万および１千万細胞注入グループ）、およびビヒクルグループと比較した時、ＶＩＩ処理での腫瘍細胞植付けにおいてＰＢ中の９９％および９４％減少（それぞれ５百万および１千万細胞）を示している（表４）。
【０１６０】
【表４】
（）内の数字は、汚染が疑われる試料を除外するために調節された値を反映する（各１千万細胞ＰＢグループにおいてｎ＝１）。これらの試料は、心臓穿刺によって血液収集を試みている間、乳白色の浸出液を有することが注目され、その後、検死の際に、心臓または胸腺の近くに腫瘍を有することが注目された。これら２つの疑われた値は、ビヒクルおよび４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩグループ（１千万細胞）においてそれぞれ９８％および９３％腫瘍細胞を示した。
【０１６１】
ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスにおける化合物ＶＩＩの薬物動力学：ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスにおける初期のＰＫデータは、初期の調査において、この調査における投薬に先立って生成された。結果は、２０、４０、または８０ｍｇ／ｋｇ用量および暴露でのＶＩの血漿レベルの用量比例増加が投薬後２〜４時間に限定され、ＶＩの血漿レベルは、すべてのメスマウスにおいて投薬後６時間までには事実上検出不可能であったことを示している。オスは、メスと比較したとき、同等の用量および血漿中のＶＩレベルのより長い期間で、より高い暴露を示した。
【０１６２】
初期の調査および他の調査において調製された調査中の配合物中に観察された沈殿物によって、調査終了後、残りの投薬溶液を用いて追加のＰＫデータを得た。ＮＯＤ−ＳＣＩＤメスマウス（ｎ＝４）にＶＩＩの４０ｍｇ／ｋｇ用量溶液を投薬し、投薬後１時間で血漿を得た。表５に示されているように、残留配合物を用いたＰＫデータは、４匹の動物間で中程度に可変であり、パーセント変動係数（％ＣＶ）値は２５％であった。１時間の暴露について得られた血漿ＶＩ濃度は以前のＰＫ調査において得られた値と同様であり、これらの配合物が匹敵しうることを示した。
【０１６３】
表５Ａおよび５Ｂ：ＶＩＩカルシウム塩のＰＯ投与：血漿中の化合物ＶＩの平均濃度（ｎｇ／ｍＬ）
【０１６４】
【表５Ａ】
【０１６５】
【表５Ｂ】
【０１６６】
【表６】
７．３．３ 結論
マウス匹あたり１千万細胞でのＭＶ４−１１腫瘍細胞の静脈内投与は、５百万細胞と比較して、多重の解剖学的部位への腫瘍のより大きい播種を結果として生じた。さらに、１千万細胞が接種されたマウスはより一貫して、骨髄および末梢血における植付けの高いレベルを有していた。播種されたＭＶ４−１１腫瘍を保有するマウスへの４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩの投与は、細胞滴定とは関係なく、全体的生存率および病気関連後遺症に関して、ビヒクル処理マウスと比較したとき、顕著な有効性を証明した。加えて、ＶＩＩは、この調査において、６０日超の期間、ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスによって十分に許容され、用いられた配合物は、以前のＰＫ調査においてと同様な全身暴露を得るのに適しているように見えた。
【０１６７】
要約すれば、ＶＩＩ処理マウスは、同定された総腫瘍の数、腫瘍のある動物の総数において、および体重減少、検死の際の状態、および他の生存中の臨床観察事項によって測定された疾病の重症度において、薬品関連の減少を再現可能に証明した。この調査からのデータは、以前の有効性調査と同様であり、ＶＩＩ処理では、ＭＶ４−１１保有マウスの生存率の度重なる延長を示した。加えて、ＶＩＩで処理されたマウスは、ビヒクル対照と比較したとき、骨髄および末梢血において、検出可能なより少ないＭＶ４−１１腫瘍細胞を証明した。これらのデータは、Ｓｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害剤が、ＦＬＴ−３ＩＴＤを保有する白血病患者、またはＦｌｔ−３突然変異に関連する他の白血病の治療のための貴重な治療薬でありうることを示唆している。
【０１６８】
７．４ 実施例４：ＭＶ４−１１腫瘍移植片からの溶解物における構成的Ｆｌｔ−３活性の阻害
初期の調査は、ＭＶ４−１１ヒトＡＭＬ細胞の処理が結果としてＦｌｔ−３の構成的リン酸化の阻害を生じたことを示した。これらのデータがあるとして、総Ｆｌｔ−３に対するＦｌｔ−３のリン酸化を、ヒトＦｌｔ−３の免疫沈降（ＩＰ）を用いて、この調査からの無作為に選択されたマウスからの腫瘍細胞溶解物においてエキソビボで評価し、その後リン酸化Ｆｌｔ−３のウェスタンブロット分析を次のように実施した。
【０１６９】
７．４．１ 実験プロトコル
腫瘍溶解物の調製
１．腫瘍をできるだけ早く採集する。
２．凍結腫瘍を液体窒素中に微粉砕する。
３．プロテアーゼ阻害剤およびホスホターゼ阻害剤カクテル（Ｓｉｇｍａ、Ｐ５７２６、１ｍｌ／１００ｍｌ溶解緩衝剤）を含有する、２５０ｍｇ／１ｍｌ氷冷ＲＩＰＡ緩衝剤（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｓｃ−２４９４８）中に、重量を測り、標準化する。
４．氷にて均質化する。
腫瘍溶解物である透明な上澄み液をマイクロ遠心分離し、収集する。
【０１７０】
タンパク質濃度を測定するためのＢＣＡアッセイ
ＢＣＡアッセイキットをＰｉｅｒｃｅ Ｐｒｏｄ＃２３２２７から得た。
１．ＢＳＡ標準の調製：
２０００ｕｇ／ｍｌ→１５００ｕｇ／ｍｌ→１０００ｕｇ／ｍｌ→７５０ｕｇ／ｍｌ→５００ｕｇ／ｍｌ→２５０ｕｇ／ｍｌ→１２５ｕｇ／ｍｌ→２５ｕｇ／ｍｌ
２．冷ＰＢＳで試験試料を前希釈する（腫瘍溶解物１：２０希釈）
３．２００ｕｌ ＢＣＡ作業溶液＋２５ｕｌ標準／試料、３７℃で３０分間インキュベートする。
４．プレートを冷却し、ＯＤ５７０ｎｍを読取る。
【０１７１】
免疫沈降
１．１ｍｇの腫瘍溶解物を取り、一次抗体２ｕｇ（抗Ｆｌｔ−３ Ｓ−１８、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、＃ｓｃ−４８０）を添加し、溶液を溶解緩衝剤で５００ｕｌに調節する。４℃で１時間穏やかに振動させながらインキュベートする。
２．タンパク質Ａ／Ｇプラス−アガロースビーズ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、ＳＣ−２００３）４０ｕｌを添加する。室温で１時間穏やかに振動させながらインキュベートする。
３．４℃で３０秒間マイクロ遠心分離する。５００ｕｌの１×溶解緩衝剤で３回ペレットを洗浄する。洗浄の間、氷上に保持する。
４．３０ｕｌの２×トリス−グリシンＳＤＳ負荷緩衝剤＋５ｕｌの還元剤１０×（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でペレットを再縣濁する。
５．試料を５分間９５〜１００℃へ加熱する。
６．試料を−８０℃で保存する。
【０１７２】
ウェスタンブロット手順
１．８％トリス−グリシンゲルに２０ｕｌの試料を負荷する。
２．１×トリス−グリシンＳＤＳ作業緩衝剤中で作業する。
３．１×トリス−グリシン転移緩衝剤中でＰＶＤＦ膜へ移す。
４．室温で１時間、１％ＢＳＡ／ＴＢＳＴ（ＴＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０）中で遮断する。
５．一次抗体１：５，０００を一晩４℃で添加する。
【０１７３】
抗−ホスホチロシンクローン４Ｇ１０（マウスモノクローナル、Ｕｐｓｔａｔｅ、＃０５−３２１）。
抗−ホスホ−Ｆｌｔ−３（Ｔｙｒ５９１）（マウスｍＡｂ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃３４６６Ｓ）。
６．ＴＢＳＴ中で２時間洗浄する。
７．５％ミルク／ＴＢＳＴ（ブロッティンググレード遮断剤、ノンファットドライミルク、Ｂｉｏ−Ｒａｄ、＃１７０−６４０４）中で１時間の、２°Ａｂ抗−マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＮＡ９３１Ｖ）１：５，０００。
ＥＣＬ−プラス（Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＲＰＮ２１３２）の短時間暴露。
【０１７４】
膜のストリッピングおよびリプロービング
１．膜をストリッピング緩衝剤（Ｐｉｅｒｃｅ、＃２１０６２）に沈め、３７℃で１時間インキュベートする。
２．膜をＴＢＳＴ中で１５分間、２回洗浄する。
３．膜を１％ＢＳＡ／ＴＢＳＴで１時間遮断する。
４．５％ミルク／ＴＢＳＴ中の抗−Ｆｌｔ−３ １：５，０００（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、＃ｓｃ−４８０）を添加し、４℃で一晩インキュベートする。
５．ＴＢＳＴ中で２時間洗浄する。
６．室温で１時間、５％ミルク／ＴＢＳＴ中の２°Ａｂ抗−ウサギＩｇＧ−ＨＲＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＮＡ９３４Ｖ）１：５，０００。
７．ＥＣＬ−プラスの短時間暴露。
【０１７５】
加えて、ブロットを総Ｆｌｔ−３レベルについてリプローブした。Ｆｌｔ−３の構成的リン酸化は、ビヒクル処理対照と比較したとき、用量依存的に４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩ処理動物からの腫瘍において低下した。
【０１７６】
７．４．２ ＭＶ４−１１腫瘍異種移植片のリン酸化ヒストンＨ３分析
腫瘍細胞増殖についてのマーカーとして、ヒト特異的リン酸化ヒストンＨ３（ｐｈＨ３）の免疫組織化学染色を用いて、この調査からの３匹の無作為選択されたマウスからのホルマリン固定腫瘍切片において、増殖をエキソビボで評価した。ヒトｐｈＨ３発現は、ＶＩＩでの処理後、用量依存的に腫瘍切片において低下した。ビヒクル処理されたマウスからのＭＶ４−１１腫瘍異種移植片と比較したとき、２０および４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩでの処理は結果として、それぞれｐｈＨ３染色の５３％および７１％阻害を生じた。これらのデータは、ＶＩＩ阻害がインビボでのＭＶ４−１１腫瘍の増殖能力を減少させ、この調査の生存中部分の間に観察された減少した腫瘍容積と相関関係があることを示している。減少した増殖は、減少した構成的Ｆｌｔ−３リン酸化による可能性があるが、それは、この活性が、インビトロでのＭＶ４−１１細胞の生存に必要とされることが証明されているからである。
【０１７７】
７．４．３ 下流シグナル伝達事象の阻害
２６日間４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩで治療されたマウスからの腫瘍切片の追加の免疫組織化学染色は、減少したＳＴＡＴ５およびＥＲＫ１／２リン酸化を証明した。これらは、ＭＶ４−１１細胞中のＦｌｔ−３：ＩＴＤシグナル伝達経路における下流分子である（図１１）。
【０１７８】
７．５ 実施例５：急性骨髄性白血病細胞に対する化合物ＶＩの調査、およびキナーゼ阻害剤ＡＧ１２９６との比較
ＡＭＬ細胞または３２Ｄトランスフェクタントを１ｕＭのＶＩで４８時間（ＡＭＬ）または２４時間（３２Ｄ）処理し、アポトーシス細胞の％増加は、アネキシンＶおよびＰＩ染色を用いて決定した。データは、Ｆｌｔ−３ ＩＴＤを有するＡＭＬ細胞が、ＶＩ−誘発アポトーシスのみへ感受性があることを示している。同様に、ＩＴＤでトランスフェクションされた３２Ｄまたは点突然変異Ｆｌｔ−３ ＴＤＫは、ｗｔ Ｆｌｔ−３でトランスフェクションされた３２Ｄ細胞よりも、２４時間でより多くのアポトーシスを受ける。
【０１７９】
本発明の具体的な実施形態の前記の記載は、例証および説明を目的として提示されている。これらは、網羅的であることも、開示された正確な形態へ本発明を限定することも意図されておらず、明らかに多くの改変例および変形例が、上の教示に鑑みて可能である。これらの実施形態は、本発明の原理およびその実際の適用を最もよく説明し、これによって他の当業者が、本発明、および考察されている特別な使用に適した様々な改変を有する様々な実施形態を最もよく利用することを可能にするために選択され、記載されている。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲およびその同等物によって規定されるものとする。
【０１８０】
本明細書において引用されたすべての特許、特許出願、出版物、および参考文献は明らかに、各々の個別出版物または特許出願が、具体的かつ個別に参照により組み込まれることが指示されているかのように、同程度まで参照により組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１８１】
【図１Ａ】Ｓｙｋ阻害化合物ＶＩが増殖を妨げ、ＴＥＬ−Ｓｙｋ−形質転換細胞の分化を誘発する能力を示している。ＤＭＳＯ、Ｓｙｋ−阻害化合物ＶＩ（２μＭ）、またはＡｂ１キナーゼ阻害剤ＳＴＩ−５７１（２μＭ）のいずれかで３６時間処理されたＴＥＬ−Ｓｙｋ−またはＢＣＲＡｂ１−形質転換細胞のＤＮＡ含有量が示されている。
【図１Ｂ】Ｓｙｋ阻害化合物ＶＩが増殖を妨げ、ＴＥＬ−Ｓｙｋ−形質転換細胞の分化を誘発する能力を示している。ＴＥＬ−Ｓｙｋがプレ−Ｂ細胞の分化を妨げる能力が示されている。
【図１Ｃ】Ｓｙｋ阻害化合物ＶＩが増殖を妨げ、ＴＥＬ−Ｓｙｋ−形質転換細胞の分化を誘発する能力を示している。細胞は、ＩＬ−７の不在下に３日間培養され、ＦＡＣＳによってκＬＣの発現について分析された。化合物ＶＩでのＴＥＬ−Ｓｙｋ活性の阻害が示されている。
【図２Ａ】Ｓｙｋ−阻害剤ＶＩが、Ｍｙｃ−形質転換されたプレ−Ｂ細胞の増殖を妨げる能力を示している。図２Ａは、Ｍｙｃ発現ベクターで形質導入され、かつＩＬ−７の不在下に１週間培養されたプレ−Ｂ細胞のＦＡＣＳプロフィールである。
【図２Ｂ】Ｓｙｋ−阻害剤ＶＩが、Ｍｙｃ−形質転換されたプレ−Ｂ細胞の増殖を妨げる能力を示している。図２Ｂの下方の図は、指示された細胞の注入の５週間後のＲＡＧ／γＣ−＋／−マウスの脾臓を示し、Ｍｙｃ−形質転換細胞が脾腫および白血病を引き起こす能力を図解している。図２Ｂは、ＤＭＳＯ、ＶＩ（２μＭ）、またはＳＴＩ−５７１（２μＭ）のいずれかで３６時間処理されたＭｙｃ−形質転換細胞のＤＮＡ含有量を示している。
【図３Ａ】Ｓｙｋ−阻害剤ＶＩが、腫瘍形成性ＳＬＰ−６５−／−プレ−Ｂ細胞系の増殖を妨げる能力を示している。図３Ａは、ＳＬＰ−６５−／−プレ−Ｂ細胞系が、指示された細胞の注入の５週間後のＲＡＧ／γＣ−−／−マウスの脾臓の状態によって証明されているように、脾腫および白血病を引き起こしうることを示している。
【図３Ｂ】Ｓｙｋ−阻害剤ＶＩが、腫瘍形成性ＳＬＰ−６５−／−プレ−Ｂ細胞系の増殖を妨げる能力を示している。図３Ｂは、ＤＭＳＯ、ＶＩ（２μＭ）、またはＳＴＩ−５７１（２μＭ）のいずれかで３６時間処理された腫瘍形成性ＳＬＰ−６５−／−プレ−Ｂ細胞系のＤＮＡ含有量を示している。
【図４】ＭＶ４−１１ヒト急性骨髄性白血病細胞が静脈内（ｉ．ｖ．）接種され、かつ腫瘍細胞接種後１７日目から調査の間中ずっと、一日２回ＰＯで４０ｍｇ／ｋｇにおいて化合物ＶＩＩで処理されたＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスについての生存曲線を示している。４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩグループ（１０６細胞）のＩＬＳ％についての計算は、調査終了時（８３日目）におけるこのグループの５０％超の生存率により、８３日の中央値死亡日と想定される。
【図５】個々の動物についての死亡までの日数を示している。生存率データは、ＭＶ４−１１腫瘍細胞が静脈内に注入されたＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスについてである。マウスは、腫瘍細胞注入後１７日目から調査の終了（８３日目）まで、一日２回ＰＯで、ビヒクルまたは様々な用量のＶＩＩで処理された。犠牲にされた動物についての死亡までの日数が、グラフ中で、青い線で表示された中央値死亡日で示されている。調査終了時の各グループにおける生存動物は、グラフの頂部に、生存動物数／総マウス数として示されている。
【図６Ａ】検死時にＭＶ４−１１腫瘍を保有するＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスにおける腫瘍の頻度を示している。病気の重症度は、犠牲の理由とは無関係に、終了時の検死の時に触診可能な腫瘍を有するマウスの頻度を定量化することによって評価された。
【図６Ｂ】検死時にＭＶ４−１１腫瘍を保有するＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスにおける腫瘍の頻度を示している。１グループあたりの腫瘍の総数が、図６Ｂに示されている。マウスは、５百万または１千万ＭＶ４−１１ヒトＡＭＬ細胞（それぞれ５Ｅ６または１０Ｅ６として示されている）でｉ．ｖ．接種された。細胞注入後１７日目に、マウスは、犠牲にされるまで、または調査の間中ずっと、生存動物については８３日目まで、ビヒクルまたは４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩ（ＰＯ．ｂｉｄ）で処理された。マウスは犠牲にされ、包括的検死が実施された。グループあたり実施された検死の総数は、８〜１３匹であった。
【図７】実験動物の腫瘍分布プロフィールを示している。様々な解剖学的位置に見られた総腫瘍のパーセントが、犠牲時の検死の時に記録された。マウスは、５百万または１千万ＭＶ４−１１細胞がｉ．ｖ，注入され、調査の間中ずっと、一日２回ビヒクルまたは４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩのどちらかが経口投与された。触診可能な腫瘍は検出されなかったが、拡張された唾液腺を示す動物がグラフに含まれている。グループあたり実施された検死の総数は、８〜１３匹であった。
【図８】ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスの骨髄（ＢＭ）および末梢血（ＰＢ）におけるＭＶ４−１１腫瘍細胞の植付けプロフィールを示している。データは、腫瘍細胞ｉ．ｖ．注入後１７日目から調査の終了まで、一日２回ＰＯで、ビヒクルまたは４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩで処理されたＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスにおけるＭＶ４−１１ヒト腫瘍細胞の植付けからのものである。骨髄（ＢＭ）および末梢血（ＰＢ）腫瘍細胞植付けは、ＭＶ４−１１腫瘍細胞の検出のためにＣＤ３３およびＨＬＡ細胞表面染色を用いて、フローサイトメトリック分析によって検出された。データは標準化され、総細胞からのパーセントヒト腫瘍細胞が計算された。総細胞は、ヒトＣＤ３３＋ＨＬＡ＋陽性事象およびネズミＣＤ４５陽性染色事象の数として規定された。グラフはすべての試料を含む。
【図９】免疫沈降およびウェスタンブロット分析によるＭＶ４−１１異種移植片におけるＦｌｔ−３の検出を示している。図Ａは、ブロットの左側で抗ホスホチロシン抗体およびブロットの右側で抗−ホスホ−Ｆｌｔ−３特異的抗体を用いて、ＶＩＩまたはビヒクルの最終投与の約２時間後、マウスからのＭＶ４−１１腫瘍溶解物におけるリン酸化Ｆｌｔ−３の検出である。加えて、総Ｆｌｔ−３レベルについてのブロットのリプローブは、図Ｂに示されている。
【図１０】ＭＶ４−１１腫瘍異種移植片のリン酸化ヒストンＨ３分析を示している。増殖は、腫瘍細胞増殖についてのマーカーとして、ヒト特異的リン酸化ヒストンＨ３（ｐｈＨ３）の免疫組織化学染色を用いて、この調査から無作為に選択された３匹のマウスからのホルマリン固定腫瘍切片においてエキソビボで評価された。ヒトｐｈＨ３発現は、腫瘍切片において、ＶＩＩでの処理後に用量依存的に低下した。ビヒクル処理マウスからのＭＶ４−１１腫瘍異種移植片と比較したとき、２０および４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩでの処理は結果として、それぞれｐｈＨ３染色の５３％および７１％阻害を生じた。これらのデータは、ＶＩＩ媒介阻害が、インビボのＭＶ４−１１腫瘍の増殖能力を低下させ、このことは、この調査の生存中部分の間に観察された腫瘍容積の低下と相関関係があることを示している。低下した増殖は、低下した構成的Ｆｌｔ−３リン酸化によるものである可能性があるが、それは、この活性がインビトロでのＭＶ４−１１細胞の生存に必要とされることが証明されているからである。
【図１１】一日２回２６日間経口処理されたＭＶ４−１１腫瘍保有マウスからの腫瘍切片における、ｐＥｒｋ１／２およびｐＳｔａｔ５についての免疫組織化学染色を図解している代表的なデータを示している。腫瘍は、ビヒクルまたは４０ｍｇ／ｋｇ ＶＩＩの最終投与の約２時間後にマウスから採集された。
【図１２】アネキシンＶおよびＰＩ染色によって決定された、アポトーシスの誘発における、１ｕＭ ＶＩでのＡＭＬ細胞または３２Ｄトランスフェクタントの処理の効果を示している。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞増殖性障害の治療方法であって、該細胞増殖性障害を治療するのに有効な量のＳｙｋキナーゼまたはＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害化合物を、これを必要としている被験体に投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記細胞増殖性障害が、造血新生物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記造血新生物が、リンパ系の新生物である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記リンパ系の新生物が、Ｔ細胞新生物である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記Ｔ細胞新生物が、Ｔリンパ芽球性白血病である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記リンパ系の新生物が、Ｂ細胞新生物である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記Ｂ細胞新生物が、Ｂ−リンパ芽球性白血病である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記Ｂ細胞新生物が、バーキットリンパ腫である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記細胞増殖性障害が、骨髄新生物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記骨髄新生物が、骨髄増殖性疾患である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記骨髄増殖性疾患が、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記骨髄新生物が、骨髄異形成疾患である、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記骨髄異形成疾患が、慢性骨髄単球性白血病である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記骨髄新生物が、骨髄異形成症候群である、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
前記骨髄新生物が、急性骨髄性白血病である、請求項９に記載の方法。
【請求項１６】
前記急性骨髄性白血病が、ＴＥＬ／Ｓｙｋ融合タンパク質の活性と関連している、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記造血新生物が、ｆｌｔ−３キナーゼの異常活性と関連している、請求項２に記載の方法。
【請求項１８】
前記ｆｌｔ−３キナーゼの異常活性が、Ｆｌｔ−３ ＩＴＤによって引き起こされる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記造血新生物が、急性骨髄性白血病、Ｂ−前駆体細胞急性リンパ芽球性白血病、Ｔ−細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄異形成症候群、および慢性骨髄性白血病から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記増殖性障害が、Ｓｙｋキナーゼ活性の調節から生じるウイルス媒介腫瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記ウイルス媒介腫瘍が、ＩＴＡＭモチーフをコードするウイルスと関連している、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ウイルス媒介腫瘍が、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスと関連している、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記ウイルス媒介腫瘍が、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスのＫ１タンパク質の活性と関連している、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ウイルス媒介腫瘍が、エプスタイン−バーウイルスと関連している、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
前記ウイルス媒介腫瘍が、エプスタイン−バーウイルスのＬＭＰ２Ａタンパク質の活性と関連している、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ウイルス媒介腫瘍が、ＨＴＬＶ−１ウイルスと関連している、請求項２０に記載の方法。
【請求項２７】
前記Ｓｙｋ阻害化合物が、２，４−ピリミジンジアミン化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記２，４−ピリミジンジアミン化合物が、式：
【化１】
を有するか、またはその塩、プロドラッグ、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記２，４−ピリミジンジアミン化合物が、式：
【化２】
を有するか、またはその塩、プロドラッグ、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記２，４−ピリミジンジアミン化合物が、式：
【化３】
を有するか、またはその塩、プロドラッグ、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記２，４−ピリミジンジアミン化合物が、式：
【化４】
を有するか、またはその塩、プロドラッグ、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記Ｓｙｋ阻害化合物が、Ｓｙｋ阻害化合物の混合物を含んでいる、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
前記Ｓｙｋ阻害化合物を、Ａｂ１キナーゼ阻害剤とともに付加的に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
前記Ａｂ１キナーゼ阻害剤が、２−フェニルアミノピリミジンである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＳｙｋおよびＡｂ１キナーゼ阻害剤を、連続的に投与する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＳｙｋおよびＡｂ１キナーゼ阻害剤を、同時に投与する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
腫瘍転移を阻害する方法であって、
腫瘍転移を阻害するのに有効な量のＳｙｋキナーゼまたはＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害化合物を、これを必要としている被験体に投与することを含む、方法。
【請求項３８】
前記腫瘍が、乳癌、卵巣癌、腎性癌、胃腸癌、腎臓癌、膀胱癌、膵臓癌、肺扁平癌、および腺癌から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記阻害剤を、腫瘍転移の診断前に予防的に投与する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記転移が、Ｓｙｋを通るインテグリンシグナル伝達によって引き起こされる、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記転移が、β１インテグリンによるインテグリンシグナル伝達によって引き起こされる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記転移が、β２インテグリンによるインテグリンシグナル伝達によって引き起こされる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記転移が、β３インテグリンによるインテグリンシグナル伝達によって引き起こされる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記Ｓｙｋ阻害化合物が、２，４−ピリミジンジアミン化合物である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４５】
前記２，４−ピリミジンジアミン化合物が、式：
【化５】
を有するか、またはその塩、プロドラッグ、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記２，４−ピリミジンジアミン化合物が、式：
【化６】
を有するか、またはその塩、プロドラッグ、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
前記２，４−ピリミジンジアミン化合物が、式：
【化７】
を有するか、またはその塩、プロドラッグ、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４８】
前記２，４−ピリミジンジアミン化合物が、式：
【化８】
を有するか、またはその塩、プロドラッグ、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物である、請求項４４に記載の方法。
【請求項１】
細胞増殖性障害の治療方法であって、該細胞増殖性障害を治療するのに有効な量のＳｙｋキナーゼまたはＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害化合物を、これを必要としている被験体に投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記細胞増殖性障害が、造血新生物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記造血新生物が、リンパ系の新生物である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記リンパ系の新生物が、Ｔ細胞新生物である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記Ｔ細胞新生物が、Ｔリンパ芽球性白血病である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記リンパ系の新生物が、Ｂ細胞新生物である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記Ｂ細胞新生物が、Ｂ−リンパ芽球性白血病である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記Ｂ細胞新生物が、バーキットリンパ腫である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記細胞増殖性障害が、骨髄新生物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記骨髄新生物が、骨髄増殖性疾患である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記骨髄増殖性疾患が、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記骨髄新生物が、骨髄異形成疾患である、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記骨髄異形成疾患が、慢性骨髄単球性白血病である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記骨髄新生物が、骨髄異形成症候群である、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
前記骨髄新生物が、急性骨髄性白血病である、請求項９に記載の方法。
【請求項１６】
前記急性骨髄性白血病が、ＴＥＬ／Ｓｙｋ融合タンパク質の活性と関連している、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記造血新生物が、ｆｌｔ−３キナーゼの異常活性と関連している、請求項２に記載の方法。
【請求項１８】
前記ｆｌｔ−３キナーゼの異常活性が、Ｆｌｔ−３ ＩＴＤによって引き起こされる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記造血新生物が、急性骨髄性白血病、Ｂ−前駆体細胞急性リンパ芽球性白血病、Ｔ−細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄異形成症候群、および慢性骨髄性白血病から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記増殖性障害が、Ｓｙｋキナーゼ活性の調節から生じるウイルス媒介腫瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記ウイルス媒介腫瘍が、ＩＴＡＭモチーフをコードするウイルスと関連している、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ウイルス媒介腫瘍が、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスと関連している、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記ウイルス媒介腫瘍が、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスのＫ１タンパク質の活性と関連している、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ウイルス媒介腫瘍が、エプスタイン−バーウイルスと関連している、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
前記ウイルス媒介腫瘍が、エプスタイン−バーウイルスのＬＭＰ２Ａタンパク質の活性と関連している、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ウイルス媒介腫瘍が、ＨＴＬＶ−１ウイルスと関連している、請求項２０に記載の方法。
【請求項２７】
前記Ｓｙｋ阻害化合物が、２，４−ピリミジンジアミン化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記２，４−ピリミジンジアミン化合物が、式：
【化１】
を有するか、またはその塩、プロドラッグ、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記２，４−ピリミジンジアミン化合物が、式：
【化２】
を有するか、またはその塩、プロドラッグ、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記２，４−ピリミジンジアミン化合物が、式：
【化３】
を有するか、またはその塩、プロドラッグ、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記２，４−ピリミジンジアミン化合物が、式：
【化４】
を有するか、またはその塩、プロドラッグ、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記Ｓｙｋ阻害化合物が、Ｓｙｋ阻害化合物の混合物を含んでいる、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
前記Ｓｙｋ阻害化合物を、Ａｂ１キナーゼ阻害剤とともに付加的に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
前記Ａｂ１キナーゼ阻害剤が、２−フェニルアミノピリミジンである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＳｙｋおよびＡｂ１キナーゼ阻害剤を、連続的に投与する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＳｙｋおよびＡｂ１キナーゼ阻害剤を、同時に投与する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
腫瘍転移を阻害する方法であって、
腫瘍転移を阻害するのに有効な量のＳｙｋキナーゼまたはＳｙｋ／Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害化合物を、これを必要としている被験体に投与することを含む、方法。
【請求項３８】
前記腫瘍が、乳癌、卵巣癌、腎性癌、胃腸癌、腎臓癌、膀胱癌、膵臓癌、肺扁平癌、および腺癌から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記阻害剤を、腫瘍転移の診断前に予防的に投与する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記転移が、Ｓｙｋを通るインテグリンシグナル伝達によって引き起こされる、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記転移が、β１インテグリンによるインテグリンシグナル伝達によって引き起こされる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記転移が、β２インテグリンによるインテグリンシグナル伝達によって引き起こされる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記転移が、β３インテグリンによるインテグリンシグナル伝達によって引き起こされる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記Ｓｙｋ阻害化合物が、２，４−ピリミジンジアミン化合物である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４５】
前記２，４−ピリミジンジアミン化合物が、式：
【化５】
を有するか、またはその塩、プロドラッグ、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記２，４−ピリミジンジアミン化合物が、式：
【化６】
を有するか、またはその塩、プロドラッグ、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
前記２，４−ピリミジンジアミン化合物が、式：
【化７】
を有するか、またはその塩、プロドラッグ、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４８】
前記２，４−ピリミジンジアミン化合物が、式：
【化８】
を有するか、またはその塩、プロドラッグ、水和物、溶媒和物、およびＮ−酸化物である、請求項４４に記載の方法。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４】
【図５】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４】
【図５】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【公表番号】特表２００９−５３４３９７（Ｐ２００９−５３４３９７Ａ）
【公表日】平成２１年９月２４日（２００９．９．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５０６６６２（Ｐ２００９−５０６６６２）
【出願日】平成１９年３月２１日（２００７．３．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０６４５１１
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１２４２２１
【国際公開日】平成１９年１１月１日（２００７．１１．１）
【出願人】（５０４２９４１４５）ライジェル ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (63)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年９月２４日（２００９．９．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年３月２１日（２００７．３．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０６４５１１
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１２４２２１
【国際公開日】平成１９年１１月１日（２００７．１１．１）
【出願人】（５０４２９４１４５）ライジェル ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (63)
【Ｆターム（参考）】
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