発毛の低減
育毛の軽減方法は、ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ作用物質を、単独で或いは熱と共に、局所適用することを含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳動物の、特に美容上の目的において発毛を低減することに関する。
【背景技術】
【０００２】
哺乳類の毛の主要機能は、環境からの保護を提供することである。しかし、その機能は、ヒトではほとんど失われており、毛は、本質的に美容上の理由から、身体の様々な部分で維持又は除去されている。例えば、一般に、頭皮に毛髪を有することは好まれるが、顔面に毛を有することは好まれない。
【０００３】
剃毛、電解、脱毛クリーム又はローション、ワクシング、抜き毛、及び治療用抗アンドロゲン剤を含む種々の手順が、不必要な毛を除去するために使用されてきた。一般に、これらの従来の手順は、これらに伴う欠点を有する。例えば、剃毛は、切り傷をもたらすことがあり、毛の再生の速度が速まるという感じを残すことがありうる。また、剃毛は、望ましくない不精ひげを残すことがありうる。一方電解は、処置領域を無毛状態に長期間保つことができるが、高価で痛みを伴い、時には瘢痕を残すことがありうる。脱毛クリームは、非常に有効であるが、典型的には、それらの刺激の可能性が高いために頻繁な使用は推奨されない。ワクシング除毛及び抜き毛は、痛み、不快感、及び短毛の不十分な除去をもたらすこともありうる。最後に、抗アンドロゲン剤―これは、女性の多毛症を処置するために使用されてきた―は、望ましくない副作用をもたらすことがありうる。
【０００４】
発毛の速度及び性質は、特定の酵素の皮膚阻害物質の適用によって変わりうることが、以前に開示されている。これら阻害物質には、５−αレダクターゼ、オルニチンデカルボキシラーゼ、Ｓ−アデノシルメチオニン・デアルボキシラーゼ、γ−グルタミル・トランスペプチターゼ、及びトランスグルタミナーゼ阻害剤が挙げられる。例えば、ブリューワー（Breuer）らによる米国特許第４，８８５，２８９号、シャンダー（Shander）による米国特許第４，７２０，４８９号、アルワリア（Ahluwalia）による米国特許第５，０９５，００７号、アルワリア（Ahluwalia）らによる米国特許第５，０９６，９１１号、及びシャンダー（Shander）らによる米国特許第５，１３２，２９３号を参照されたい。
【０００５】
イオンチャネルのトランジェントレセプターポテンシャル（ＴＲＰ）属は３０超過のカチオンチャネルを含んでおり、次の７つの主要なサブファミリーに分類される：ＴＲＰＣ、ＴＲＰＶ、ＴＲＰＭ、ＴＲＰＰ、ＴＲＰＭＬ、ＴＲＰＡ、及びＴＲＰＮ。ＴＲＰチャネル２つの別のサブファミリーのメンバーは冷覚の原因であると特定されている：ＴＲＰＭ８及びＴＲＰＡ１。
【０００６】
トランジェントレセプターポテンシャルメラスタチン（ＴＲＰＭ８）はＴＲＰイオンチャネルのメラスタチンのサブファミリーに属する（トミナガ．Ｍ（Tominaga M.）ら、（２００４）ニューロバイオロジー誌（J. Neurobiol.）、６１（１）：３〜１２）。ＴＲＰＭ８は、特定の刺激に反応してＣａ（２＋）イオンの直接流入を仲介するＣａ（２＋）透過性非選択的カチオンチャネルである。反応は、低温度（２４℃以下）並びにメタノール及びイシリンなどの冷却化合物によって活性化される（ツァバラー（Tsavaler）ら、（２００１）、キャンサーリサーチ（Cancer Res.）、６１（９）：３７６０−９；マッケミー（McKemy）ら、（２００２）、ネイチャー（Nature）４１６：５２〜８；パイエル（Peier）ら、（２００２）セル（Cell）、１０８（５）：７０５〜１５）。ＴＲＰＭ８チャネルは温度感知小型後根及び三叉神経ガングリオンのニューロンのサブセットで発現される（マッケミー（McKemy）ら、（２００２）、上掲；パイエル（Peier）ら、（２００２）上掲；ベイブズ（Babes）ら、（２００４）、Ｅｕｒニューロサイエンス（Eur J Neurosci.）２０（９）：２２７６〜８２；ニーレン（Nealen）ら、（２００４）、ニューロフィジオロジー（Neurophysiol.）誌（J Neurophysiol.）、９０（１）：５１５〜２０）。三叉神経ガングリオンのニューロンは、口の上部の顔面皮膚、下顎領域、並びに額の上側及び目の周りに知覚神経繊維を提供する。したがって、ＴＲＰＭ８は哺乳類の温受容体の神経末端で低温度を感じることに関与している。知覚ニューロンに存在しているのに加え、機能的ＴＲＰＭ８受容体はまた各種神経細胞上でも確認されている。ＴＲＰＭ８ｍＲＮＡ発現は正常な前立腺組織に中程度報告されており、前立腺がんでは上昇するように思われ、増殖及びアポトーシスを含む多くのＣａ（２＋）依存性プロセスに関与している（チュボー（Thebault）ら、バイオロジカルケミカル（J Biol Chem）誌、２８０（４７）：３９４２３〜３５）。また、乳房、結腸、肺及び皮膚起源の腫瘍でも発現する（（チュボー（Thebault）ら、上掲）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
別のイオンチャネルであるアンキリン様タンパク質１（ＡＮＫＴＭ１）受容体とも言われるはトランジェントレセプターポテンシャルチャネルアンキリンリピート１（ＴＲＰＡ１）は、低温度（１８℃以下）、シンナムアルデヒド、アリシン、オイゲノール、ジンジェロール、及びサリチル酸メチル、並びにＴＲＰＭ８と同様にイシリンにより活性化される。ＴＲＰＡ１は、ＴＲＰＶ１、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）及びサブスタンスＰなどの侵害受容マーカーを発現するニューロンのサブセットで発現される（ストーリー（Story）ら、（２００３）、セル（Cell）１１２：８１９〜８２９）。また、培養された線維芽細胞でも発現することが報告されており、線維芽細胞の発癌性形質転換後に下方制御される（ジャクマール（Jaquemar）ら、生化学（J. Biol. Chem.）誌、２７４：７３２５〜７３３３）。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
ある態様では、本発明は、哺乳類（好ましくはヒト）の不要な発毛を低減させる方法（典型的には美容のための方法）を提供する。本発明は、１以上の冷受容体作用物質、例えば、トランジェントレセプターポテンシャルメラスタチン−８（ＴＲＰＭ８）作用物質、及び／又はトランジェントレセプターポテンシャルチャネルアンキリンリピート１（ＴＲＰＡ１）作用物質、を皮膚の領域に適用することを含む。不必要な育毛は、例えば、美容上の観点から、望ましくない場合がある。
【０００９】
ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質は、ＴＲＰＭ８（複数）及び／又はＴＲＰＡ１（複数）と強く相互作用することにより、１以上の、毛嚢の中の、ＴＲＰＭ８（複数）、及び／又はＴＲＰＡ１（複数）（例えば、１以上のＴＲＰＭ８（複数））、及び／又はＴＲＰＡ１（複数）、の少なくとも１つの活性を活性化させる化合物を含み、化合物は毛嚢の中の、１以上の、ＴＲＰＭ８（複数）及び／又はＴＲＰＡ１（複数）の、レベル及び／又は発現、を増加させ；及び／又は化合物は毛嚢の中の、１以上の、ｍＲＮＡのＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１の、発現、を増加させる。「強く相互作用する」とは、化合物がＴＲＰＭ８（複数）及び／又はＴＲＰＡ１（複数）に結合する又は優先的に結合することを意味する。前記化合物は、例えば、以下で論じる種類の化合物の１つから選択されることができる。代表的なＴＲＰＭ８作用物質にはテルペン、例えば、環状テルペン類（例えば、メントール又はメンチルラクテート）、ＷＳ−３、冷却剤１０、フレスコラト（Frescolat）ＭＧＡ、及びフレスコラトＭＬが含まれる。ＴＲＰＭ８作用物質はまたＴＲＰＡ１作用物質、例えば、イシリン及びオイゲノールでもあり得る。その他の代表的なＴＲＰＡ１作用物質には、ジンジェロール、サリチル酸メチル、アリシン、及びシンナムアルデヒドが挙げられる。さらなるＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質の例は本明細書中に記載されている。
【００１０】
一実施形態において、前記組成物は、ＴＲＰＭ８又はＴＲＰＡ１作用物質、例えば、ＴＲＰＭ８又はＴＲＰＡ１作用物質を単に能動的育毛阻害物質として有する組成物から基本的に成る。別の実施形態において、前記組成物は次の１以上を含まない：α−ジフルオロメチルオルニチン（ＤＦＭＯ）、熱ショックタンパク質阻害剤、アポトーシスを促進する化合物、又はそれらの組み合わせ。さらに別の実施形態において、前記組成物はテルペン、例えば、メントールを含まない。その他の実施形態において、前記組成物は２５重量％以上のＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を含む。
【００１１】
別の実施形態において、前記方法はＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１の１以上の作用物質を有する組成物を含む。一実施形態において、前記作用物質はＴＲＰＭ８及びＴＲＰＡ１を活性化させ、例えば、前記作用物質は両方のチャネルに結合し、またそれらを活性化するイシリンである。その他の実施形態において、ＴＲＰＭ８又はＴＲＰＡ１に対して選択性のある１以上の作用物質の組み合わせを使用する。
【００１２】
典型的には、本明細書に記載の方法を施行する際には、前記化合物に、皮膚科学的又は美容的に許容可能な賦形剤も含めることになろう。
【００１３】
別の実施形態において、前記方法は、熱による皮膚領域の処理、化学的脱毛剤（例えば、本明細書に記載の１以上の育毛還元剤を含む）、又はその他の脱毛方法（例えば、剃毛、ワクシング、機械的な脱毛電解を含む）を含む。一実施形態において、熱脱毛処置は、例えば、レーザー又はフラッシュランプで皮膚領域を加熱することを含む。典型的には、加熱は１０日、７日、５日以内で行い、より典型的には３日、２日又は１日以内であり、同時に組成物を適用する。適切な期間は、特定の作用物質により、１日まで短くすることが可能であろう。処置は同時であってもよい。典型的には、組成物は複数回適用し、加熱は７日以内、より好ましくは３日又は１日以内に行うか、何回目かの適用と同時に行うのが好ましい。その他の実施形態において、ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質は熱媒介毛髪阻害を促進し及び／又は光熱装置の使用頻度を削減する。例えば、光及び／又は高熱装置のエネルギー出力を約１０〜３０Ｊ／ｃｍ2、より典型的には約１〜３Ｊ／ｃｍ2に削減することができる。
【００１４】
その他の実施形態において、ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を含む組成物は、化学的脱毛剤又はその他の脱毛方法、例えば、ワクシングなどの皮膚への適用前に、適用中、又は適用後に、適用される。例えば、組成物は、１回又は複数回適用することができ、ワクシングは７日以内、より好ましくは３日以内、２日以内、又は１日以内に行うか、何回目かの適用と同時に行う。組成物はまた脱毛後、例えば、ワクシングの後などに適用することもでき、これにより、脱毛に伴う痛みを改善するという追加的利点を得ることができる。いくつかの実施形態において、ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質は、熱的、化学的、又はその他の脱毛方法がもたらす、例えば、刺激症及び／又は炎症などの１以上の望ましくない影響を軽減する。
【００１５】
本発明はまた、皮膚科学的又は美容的に許容可能な賦形剤及び冷受容体作用物質、例えば、本明細書に記載のＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質、又はこれらの組み合わせを含む、局所適用（例えば、化粧品）の組成物に関する。さらに、本発明は、局所適用の組成物（例えば、本明細書に記載の組成物）の製造のための、冷受容体作用物質、例えば、本明細書に記載のＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質の使用に関する。本発明のこれら態様の実施形態は上記の１以上の特徴を含んでもよい。
【００１６】
本明細に記した特有の化合物には、化合物それ自体、及びそれらの塩のうち製薬上許容可能な塩の双方を含む。
【００１７】
本発明のその他の特徴及び利点は、発明を実施するための最良の形態及び請求項から明らかになるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
組成物の例は、美容上及び／又は皮膚科学的に許容可能な賦形剤中の冷受容体作用物質、例えば、ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を含む。組成物は、固体、半固体、又は液体であってもよい。組成物は、例えば、軟膏、ローション、フォーム、クリーム、ゲル、又は溶液の形態の、例えば、美容及び皮膚用製品であってもよい。また、本組成物は、剃毛調製物又はアフターシェーブの形態であってもよい。賦形剤自体は、不活性であることができるか、あるいはそれ自体の美容的、生理学的及び／又は薬学的利益を有することができる。
【００１９】
ＴＲＰＭ８作用物質の例には、例えば、メントール及びメンチルラクテート（FrescolatML）などの環状テルペン類のようなテルペンを含む。テルペンは精油にみられる有機化合物類であり、芳香剤、香料及び薬などに用いられてきた。テルペンは、イソプレンユニット（Ｃ5Ｈ8）を有する化合物であり、含有するイソプレノイドユニットの数で分類され得る。例えば、モノテルペンは２つのイソプレンユニット（Ｃ１０）から成り、セスキテルペンは３つ（Ｃ１５）、及びジテルペンは４つ（Ｃ２９）のイソプレンユニットから成る。通常使用されるテルペンはメントールであり、吸入及び皮膚軟化剤製剤に組み込まれてきた。テルペン類のその他の例には、ユーカリプトール（１，８−シネオール）、ゲラニオール、ネロリドール、メントン、シネオール、テルピネオール、Ｄ−リモネン、プレゴール（例えば、イソプレゴール）及びカルバクロールが挙げられる。テルペン及び非テルペンＴＲＰＭ８作用物質のその他の例には、トランス−メンタン−３，８−ジオール、シス−ｐ−メンタン３，８−ジオール、Ｌ−カルボン（スペアミント油）、Ｎ，２，３−トリメチル−２−イソプロピルブタンアミド（ＷＳ−２３）、Ｎ−エチルパラメンタン−３−カルボキシアミド（ＷＳ−３）、メンタングリセリンアセタール（フレスコラトＭＧＡ）、メントキシプロパンジオール（冷却剤１０）、クールアクト（Coolact P）Ｐ、ＰＭＤ−３８、モノメチルコハク酸（フィスクール（Physcool））、モノメチルグルタル酸塩、及びヒドロキシシトロネラールが挙げられる。（例えば、国際公開特許ＷＯ２００５／０８９２０６；ベーレント（Behrendt, H-J.）ら、（２００４）、ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー（British Journal of Pharmacology）１４１：７３７〜７４５；カリスト（Calixto, J.B）ら、（２００５）、ファーマコロジー・アンド・セラピュティクス（Pharmacology & Therapeutics）１０６：１７９−２０８；エルマン（Erman, M. B.）ら、（２００５）コスメティクス・アンド・トイレタリーズ１２０（５）：１０５〜１１８を参照のこと。これら文献は参照することにより本明細書に組み込まれる。）
ＴＲＰＭ８及びＴＲＰＡ１に結合する及び活性化する作用物質の例は、オイゲノール、イシリン及びこれらの類縁体、例えば、イシリン様化合物を含む。イシリン、１−（２−ヒドロキシフェニル）−４−（３−ニトロフェニル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリミジン−２−オン（ＣＡＳＮｏ．３６９４５−９８−９）は次のような化学構造を有する：
【００２０】
【化１】
【００２１】
イリシン様化合物は、典型的には以下のような１−［Ｒ１−フェニル］４−［Ｒ２−フェニル］−１，２，３，６−テトラヒドロピリミジン−２−オン化学構造を有し、式中Ｒ１は典型的には１以上のヒドロキシ、クロロ、フルオロ、アルキル（約２〜４炭素原子）、アセトキシ、又は、トリフルオロメチルから選択され；及びＲ２は典型的には１以上の、ニトロ、クロロ、フルオロ、アルキル（約２〜４炭素原子）、又はトリフルオロメチルから選択される。
【００２２】
【化２】
【００２３】
イシリン及びイシリン様化合物の調製に好適な方法は、米国特許第３，８２１，２２１号、米国特許第６，９１９，３４８号に記載されており、両特許の内容は参照することにより本明細書に組み込まれる。
【００２４】
メチルＴＲＰＡ−１作用物質には次が含まれる：ジンジェロール；サリチル酸メチル（冬緑油）；イソチオシアネート化合物（例えば、アリシン又はアリルイソチオシアネート（マスタード油）、並びに、ベンジル、フェニルエチル、イソプロピル、及びイソチオシアネート）；シンナムアルデヒド（桂皮油）；及びΔ9−テトラヒドロカンナビノール。本明細書に開示のＴＲＰＡ１作用物質、並びにそれらの作用物質の合成及び試験方法は当該技術分野において既知であり、例えば、国際公開特許ＷＯ２００５／０８９２０及びカリスト（Calixto, J.B）ら、（２００５）（上掲）に開示されており、当該文献の内容は参照することにより本明細書に組み込まれる。
【００２５】
合成物質は１以上のＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を含んでもよい。前記組成物には、ＨＳＰ阻害物質、及び／又はアポトーシスを促進する化合物を１つ以上含有させてもよい。前記組成物には更に、米国特許第４，７２０，４８９号、米国特許第４，８８５，２８９号、米国特許第５，０９５，００７号、米国特許第５，０９６，９１１号、米国特許第５，１３２，２９３号、米国特許第５，１４３，９２５号、米国特許第５，３２８，６８６号、米国特許第５，３６４，８８５号、米国特許第５，４１１，９９１号、米国特許第５，４４０，０９０号、米国特許第５，４６８，４７６号、米国特許第５，４７５，７６３号、米国特許第５，５５４，６０８号、米国特許第５，６４８，３９４号、米国特許第５，６５２，２７３号、米国特許第５，６７４，４７７号、米国特許第５，７２８，７３６号、米国特許第５，７７６，４４２号、米国特許第５，８２４，６６５号、米国特許第５，８４０，７５２号、米国特許第５，９０８，８６７号、米国特許第５，９３９，４５８号、米国特許第５，９５８，９４６号、米国特許第５，９６２，４６６号、米国特許第６，０２０，００６号、米国特許第６，０３７，３２６号、米国特許第６，０６０，４７１号、米国特許第６，０９３，７４８号、米国特許第６，１２１，２６９号、米国特許第６，２１８，４３５号、米国特許第６，２３５，７３７号、米国特許第６，２３９，１７０号、米国特許第６，２４８，７５１号、米国特許第６，２９９，８６５号、米国特許第６，４１４，０１７号、米国特許第６，７４３，４１９号、及び米国特許第６，７４３，８２２号に記載されているような、その他の種類の発毛低下剤を１つ以上含有させてよい。前記の特許は全て、参照することにより本明細書に組み込まれる。
【００２６】
前記組成物中の前記ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質の濃度は、飽和溶液までの広範囲にわたって変えることができ、好ましくは０．１重量％〜３０重量％まで、又は更にそれ以上であり、発毛の低減は、皮膚の単位面積当たりに適用される作用物質の量が増加すると、増強する。有効適用量の最大値は、皮膚の浸透度によってのみ制限される。有効量は、例えば、皮膚の１平方センチメートル当たり１０〜３０００マイクログラム、又はそれよりも上の範囲であってもよい。
【００２７】
賦形剤は、不活性であることができるか、又は、それ自体の美容的、生理学的及び／又は薬学的利益を有することができる。賦形剤は、液体又は固体皮膚軟化剤、溶媒、増粘剤、保湿剤、及び／又は粉末と共に配合できる。皮膚軟化剤としては、ステアリルアルコール、ミンク油、セチルアルコール、オレイルアルコール、イソプロピルラウレート、ポリエチレングリコール、石油ゼリー、パルミチン酸、オレイン酸、及びミリスチルミリステートが挙げられる。溶媒としては、エチルアルコール、イソプロパノール、アセトン、ジエチレングリコール、エチレングリコール、ジメチルスルホキシド、及びジメチルホルムアミドが挙げられる。
【００２８】
組成物は任意に、皮膚への及び／又は作用部位へのＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質の浸透を増進させる構成成分を含むことができる。浸透増進剤の例としては、尿素、ポリオキシエチレンエーテル類（例えば、ブリジ（Brij）−３０及びラウレス（Laureth）−４）、３−ヒドロキシ−３，７，１１−トリメチル−１，６，１０−ドデカトリエン、テルペン類、シス−脂肪酸類（例えば、オレイン酸、パルミトレイン酸）、アセトン、ラウロカプラム（laurocapram）、ジメチルスルホキシド、２−ピロリドン、オレイルアルコール、グリセリル−３−ステアレート、プロパン−２−オール、ミリスチン酸イソプロピルエステル、コレステロール、及びプロピレングリコールが挙げられる。浸透増進剤は、例えば、０．１重量％〜２０重量％、又は０．５重量％〜５重量％の濃度で添加できる。
【００２９】
また、組成物は、ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を連続的に持続放出するために、皮膚の内部又は表面上に貯蔵所（reservoir）を提供するように調製できる。また、前記組成物は、皮膚からゆっくり蒸発するように調製し、作用物質が更に時間をかけて皮膚に浸透可能になるようにすることもできる。
【００３０】
ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を含有するクリーム系の局所的組成物は、水及び全ての水溶性構成成分を混合容器−Ａで混合することにより調製する。ｐＨは約３．５〜８．０の所望の範囲に調節する。成分を完全に溶解するために、容器の温度を４５℃まで上げてもよい。ｐＨ及び温度の選択はＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質の安定度による。防腐剤及び香料構成成分を除く油溶性構成成分を、別の容器（Ｂ）内で一緒に混合し、構成成分を溶融及び混合するために７０℃まで加熱する。容器Ｂの加熱された内容物を、水相（容器Ａ）に、勢いよく攪拌しながら注ぐ。混合は、約２０分間続ける。防腐剤構成成分を、約４０℃の温度で添加する。８Ｐａ．ｓ（８，０００ｃｐｓ）〜１２Ｐａ．ｓ（１２，０００ｃｐｓ）の粘度又は所望の粘度の軟質クリームを得るため、温度が約２５℃に達するまで攪拌を続ける。内容物がまだ混合されており、粘度は所望の範囲まで高まっていない状態で、香料構成成分を約２５℃〜３０℃で添加する。得られるエマルションの粘度を上げることが望まれる場合、従来のホモジナイザー、例えば、角穴高剪断スクリーンを有するシルバーソン（Silverson）Ｌ４Ｒホモジナイザーを使用して、剪断を行なうことができる。局所適用組成物は、上記の製剤調製の際に水相に活性物質を含めることにより作製することができるか、又は製剤（賦形剤）調製が完了した後で加えることができる。活性物質は、賦形剤調製のいずれかの工程で加えることもできる。クリーム製剤の構成成分は、下記の実施例に記載されている。
【００３１】
（実施例番号１）
【００３２】
【表１】
a活性成分はＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質。
bポリクオチニウム（Polyquartinium）−５１（コラボレイティブ・ラボ（Collaborative Labs）、ニューヨーク）。
cグリセリン、水、ナトリウムＰＣＡ、尿素、トレハロース、ポリクアタニウム（polyqauternium）−５１、及びヒアルロン酸ナトリウム（コラボラティブ・ラボ（Collaborative Labs）、ニューヨーク）。
【００３３】
（実施例♯２）
【００３４】
【表２】
a活性成分はＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質。
【００３５】
（実施例♯３）
【００３６】
【表３】
a活性成分はＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質。
【００３７】
（実施例♯４）
【００３８】
【表４】
【００３９】
ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を実施例４の処方に加え、可溶化するまで混合する。
【００４０】
（実施例♯５）
【００４１】
【表５】
【００４２】
ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を実施例５の処方に加え、可溶化するまで混合する。
【００４３】
（実施例♯６）
【００４４】
【表６】
【００４５】
ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を実施例６の処方に加え、可溶化するまで混合する。
【００４６】
（実施例♯７）
【００４７】
【表７】
【００４８】
ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を実施例７の処方に加え、可溶化するまで混合する。
【００４９】
（実施例♯８）
【００５０】
【表８】
【００５１】
ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を実施例８の処方に加え、可溶化するまで混合する。
【００５２】
ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を包含するヒドロアルコール性製剤は、処方の構成成分を混合器の中で混合して調製する。製剤のｐＨは、３．５〜８．０の範囲の所望の値に調整される。このｐＨ調整は、製剤成分を完全に溶解するためにも実施することができる。加えて、製剤成分の溶解を達成するために、活性物質の安定性に応じて、加熱を４５℃まで、更には７０℃まで行なうことができる。幾つかのヒドロアルコール性製剤が下記に示されている。
【００５３】
（実施例♯９）
【００５４】
【表９】
a活性成分はＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質である。
bカプリル酸／カプリン酸トリグリセリド（アビテック社（Abitec Corp.）、オハイオ州）。
【００５５】
（実施例番号１０）
【００５６】
【表１０】
a活性成分はＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質である。
【００５７】
（実施例番号１１）
【００５８】
【表１１】
【００５９】
ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を実施例８の処方に加え、可溶化するまで混合する。
【００６０】
加熱は、例えばレーザー、フラッシュランプ、又は超短パルス光（ＩＰＬ）装置を用いて行うことができる。例えば前記装置は、波長帯が７００〜１，３００ｎｍ（例えば８１０ｎｍ）のダイオードレーザー、６５４ｎｍのルビーレーザー、７５５ｎｍのアレキサンドライトレーザー、１，０６４ｎｍのＮｄ：ＹＡＧレーザー、６００〜８５０ｎｍのＮｄ：ＹＡＧレーザー、４００〜１，２００ｎｍのパルス光、超短パルス光、若しくはフラッシュランプ、５５０ｎｍ、５８０ｎｍ若しくは６１５〜１，２００ｎｍの蛍光パルス光、波長帯が４００〜７００ｎｍの発光ダイオード（ＬＥＤ）、並びに、高周波電気エネルギーと組み合わせた光（５８０〜９８０ｎｍ）エネルギー若しくはダイオード（８００＋２５ｎｍ）エネルギーにすることができる。前記光及び光熱装置のエネルギー出力（Ｊ／ｃｍ2）は、例えば、０．５〜５０Ｊ／ｃｍ2、２〜２０Ｊ／ｃｍ2、又は１〜１０Ｊ／ｃｍ2であり得る。加熱をもたらすその他のレーザー源及び光源のパラメーターとしては、パルス幅、スポットサイズ、繰り返し数が挙げられる。これらのパラメーターの範囲は、使用する加熱装置によって異なる。パルス幅は、例えば０．１ｍ〜５００ｍまでの範囲であり得るか、又はそれは、米国特許第６，２７３，８８４号に記載されているように、連続波（ＣＷ）であり得る。
【００６１】
加熱中、皮膚の温度は一般に、少なくとも４０℃、例えば４０℃〜５５℃に加熱する。ただし皮膚は、ほんの数ミリ秒のパルスを用いて皮膚の火傷を回避しながら、例えば７０℃ほどの高さまで加熱できる。４０〜６０℃のより低い温度域の場合、露光時間を０．５分〜数分に抑えるべきである。６０℃超の温度の場合、露光時間を１〜５００ミリ秒の範囲に留めるべきである。特定の機構による加熱によって実現される皮膚の温度は、一般に、以下に従って算出することができる。平均的な体温を有する対象者を２５℃の温度の部屋に入れる。０．２３ｍｍ（０．００９−インチ）直径の熱電対を皮膚のある領域に入れる。熱電対計の出力をナショナルインスツルメンツ（National Instruments）の熱電対信号コンディショナーＳＣＸＩ−１１１２に接続する。ナショナルインスツルメンツ（National Instruments）のデータ収集ボードで、最大収集速度が毎秒３３３キロサンプルである６０５２Ｅによってデータ収集及び信号利得を制御した。ＳＣＸＩ−１１１２及びＮＩ６０５２ＥＤＡＱの組み合わせによって、毎秒４２キロサンプルの速度で最大８つの熱電対出力を同時に検出することができた。抽出率は、例えば１，０００サンプル／秒で実施することができる。
【００６２】
真皮領域の温度範囲を算出する際にも同様の方法を用いる。この場合には、熱電対計を生体外の人肌の約５ｍｍの深さまで挿入し、皮膚表面に処理を適用する。
【００６３】
当該組成物は、育毛を低減することが望まれる、皮膚の選択された領域に局所的に適用すべきである。加熱処理の前又は後から局所適用組成物を適用するまでの期間は、局所適用組成物内の活性化学物質の特性に応じて、１日という短期間から、若しくは加熱と同時にと、様々であってよい。組成物は、加熱の７日以内に（複数回、例えば２回、３回、又は４回）、より好ましくは加熱の１日又は２日以内に少なくとも１回適用するのが好ましい。組成物は、加熱の前に少なくとも２日又は３日間にわたって、１日に１回適用することができる。
【００６４】
組成物は、例えば、顔、とりわけ顔のひげ領域、すなわち、頬、首、唇の上、あごに適用することができる。組成物は脚、腕、胴体、腋窩、眉毛、及び／又はビキニ領域に適用することができる。本組成物は、多毛症又は他の状態を有する女性において、不必要な毛の発育を低減するのに特に適している。組成物と加熱の組み合わせは、剃毛、ワクシング、機械脱毛、化学的脱毛、電解処理などのその他の除毛手段に対する補助として使用されてもよい。例えば、ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を、例えば、ワクシングなどの前記の任意のその他の脱毛方法と組み合わせて使用するすることが可能である。かかる混合処置は熱的脱毛剤処置（例えば、レーザー）をさらに含んでもよい。ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を用いる上記処置の組み合わせ及び／又は順序は本発明の範囲内である。
【００６５】
発毛の低減は、処理領域における毛の長さ、毛の直径、毛の色素沈着、及び／又は毛の密度の低減により、定量的に実証することができる。発毛の低減は、処理領域において、目に見える毛が減少すること、毛の刈り株がより短くなること、毛がより細かく／より細くなること、毛が柔らかくなること、及び／又は剃毛が長期持続することによって、美容的に実証することができる。
【００６６】
添付の実施例で使用するプロトコルは以下のとおりである。
【００６７】
ヒト毛嚢発育分析結果
成長期（発育）のヒト毛嚢をフェイスリフト組織から単離した。
【００６８】
（美容整形により得た）皮膚を薄い細片にスライスし、分析しやすそうな毛嚢の２〜３列を露出させた。毛嚢を、フィルポット（Philpott et al.）ら、（（１９９０）セル・ソサイエティー誌（J. Cell Sci.）、９７（Ｐｔ３）：４６３〜７１）に記載のように、２ｍＬのＬ−グルタミン、１０μｇ／ｍＬのインスリン、１０ｎｇ／ｍＬのヒドロコルチゾン、及び抗生物質／抗菌物質の混合物を補充したウィリアムＥ培地（William's E medium）（ライフ・テクノロジーズ（Life Technologies）、メリーランド州ゲイサーズバーグ（Gaithersburg, MD.））に定置した。毛嚢を２４ウエルプレート（24-well plates）（１つの毛嚢／ウェル）の中で、３７℃、５％のＣＯ2雰囲気、及び湿度１００％で、異なる時間インキュベートした（フィルポット（Philpott et al.）ら、上掲）。画像分析ソフトウェアシステムを用いて毛嚢の長さを算定した。ＴＲＰＭ８／ＴＲＰＡ１活性を変化させる分子の育毛への影響を測定するため、毛嚢をイシリン（トクリス・バイオサイエンス（Tocris Bioscience））及びＬ−メントール、Ｌ−メンチルラクテート（シグマ（）Sigma）と共にインキュベートした。２０倍率の解剖用顕微鏡下で、２４ウエルプレート中の毛嚢の画像を取った。毛嚢の長さを、０日目（毛嚢を培地の中に置いた日）に測定し、６〜７日目に再び測定した。０日目の毛嚢の長さを６日目に測定した長さから減じることによって、毛の繊維の成長度合を算出した。
【００６９】
免疫組織化学
毛嚢中のＴＲＰＭ８の発現を測定するため、間接蛍光抗体プロトコルを採用した。新鮮な毛嚢のクリオスタット切片（μｍ）を用意しアセトン中に固定し、２０％の羊正常血清でプレインキュベートし、続いて一晩室温にてＴＲＰＭ８の一次抗体でインキュベートした。切片を次にＴＲＩＴＣ標識羊のウサギＩｇＧ抗体でインキュベートした（ジャクソン・イミュノリサーチャー（Jackson ImmunoResearch）；４５分、３７℃）。
【００７０】
増殖性細胞を検出するため、Ｋｉ−６７に対するウサギモノクロナール抗体を使用した間接蛍光抗体プロトコル。８μｍの毛嚢切片をホルマリン中に固定し、次にエタノール／酢酸中に固定した。次に、切片をＫｉ−６７に対する抗体（１：５０；ダコ（Dako）；Ｍ７１８７）で一晩室温でインキュベートし、次にＴＲＩＴＣ標識羊のウサギＩｇＧ抗体でインキュベートした（ジャクソン・イミュノリサーチャー（Jackson ImmunoResearch）；４５分、３７℃）。
【００７１】
ホエクスト（HOECHST）３３３４２染料を使用して、対比染色を行った（ＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬ；１０分間）。各相は、洗浄工程（３回）により、ＰＢＳに散在させた（interspersed）。最後に、切片は、ベクタシールド（VectaShield）（ベクター・ラボラトリース（Vector Laboratories））を使用して、組み込まれた。
【００７２】
メラニン形成タンパク質の免疫検出のため、切片をヒトチロシナーゼに対するマウスモノクロナール抗体又はヒトｐ−ｍｅｌ１７に対するトリモノクロナール抗体のいずれかでインキュベートし（それぞれ、ネオマーカー（Neomarker）及びザイメッド（Zymed）、１：１００、一晩）、次にＴＲＩＴＣ標識羊のウサギＩｇＧ抗体（ジャクソン・イミュノリサーチャー（Jackson ImmunoResearch）；４５分、３７℃）及びＦＩＴＣ−標識羊トリＩｇＧ抗体でそれぞれインキュベートした。次に、細胞核を同定するために切片をヘキスト（Hoechst）３３３４２で対比染色し（１：３００、１５分）し、ベクタシールド（VectaShield）（ベクター・ラボラトリーズ（Vector Laboratories）を用いて標本にした。
【００７３】
全ての切片は、オリンパス（Olympus）ＢＸ６０蛍光顕微鏡下で検査され、デジタル画像分析システム（クールスナップ（CoolSnap）（商標）冷却ＣＣＤカメラ、アルファ・イノテック（Alpha Innotech））の助けを借りて写真記録された。
【００７４】
ウエスタンブロット分析
ヒトメラノサイトの合計細胞タンパク質をリシスバッファー中に採取した（全タンパク質抽出キット：ケミコン・インターナショナル社（CHEMICON International, Inc））。１レーンに２０μｇのタンパク質を添加し、１０％ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離し、１０Ｖで１時間ニトロセルロース膜に移動した。次の一晩、トリス−リン酸−緩衝材生理食塩水（ＰＢＳ）（ＰＢＳ中に０．５％のツイーン（Tween）２０）の中で５％無脂肪ドライミルク／ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を用いて、４℃でブロックし、膜をチロシナーゼ又はチロシナーゼ関連タンパク質−１或いはアクチンに対するモノクロナール抗体で１：１０００の希釈で一晩インキュベートした。インキュベーション後、膜を短くＰＢＳ中で洗い、続いてトリス−ＰＢＳで洗い、１：１０００の希釈で、１％ミルク／０．２％ＢＳＡの中で１時間、対応する二次抗体でインキュベートした（ピアース（Pierce）、イリノイ州ロックフォード（Rockford, IL））。よく洗浄した後、膜を酵素結合化学発光（enzyme-linked chemiluminescence）ウェスタンブロッティング（Western Blotting Detection Reagent）検出試薬（アマシャム（Amersham）、英国バッキンガムシャー州（Buckinghamshire, U.K.））で１分間インキュベートし、バンドをプリフラッシュしたコダックＸ−Ｏｍａｔフィルムで検出し、数秒間露光した後に現像した。
【００７５】
ＲＴ−ＰＣＲ
ヒトの皮膚全層及び毛嚢の単離された真皮乳頭細胞におけるＴＲＰＡ１遺伝子転写は、ＲＴ−ＰＣＲ分析で特徴付けた。全ＲＮＡは、全層頭皮皮膚サンプル及び単離された毛嚢真皮乳頭からＴＲＩｚｏｌ試薬を使用して単離した（インビトロジェン（Invitrogen）、カリフォルニア州サンディエゴ（San Diego, Calif.））。ＲＴ−ＰＣＲ用スーパースクリプト（SuperScript）（商標）ファースト・ストランド・シンセシス・システム（SuperScript（Trademark）First-Strand Synthesis System）（インビトロジェン（Invitrogen）、カリフォルニア州サンディエゴ（San Diego,Calif.））を使用し、２．５μｇの全ＲＮＡを逆転写して、ｃＤＮＡを合成した。次のオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、次の特定のｃ−ＤＮＡを増幅した：ＴＲＰＡ１：ヒトプライマー＃１：５’・ＴＣＡＴＧＧＴＣＣＡＡＣＡＧＡＡＣＡＣＡＴＧＧＣ−３’・及び５’・ＧＣＡＴＧＡＣＡＧＧＣＡＴＧＧＴＡＣＡＧＴＧＴＴ−３’・（プラマーのプロダクトサイズ：２２８ｂｐ）、プラマー＃２：５’・ＴＣＣＴＣＴＣＣＡＴＣＴＧＧＣＡＧＣＡＡＡＧＡＡ−３’・及び５・ＡＴＴＧＴＧＧＣＴＣＡＧＡＡＧＡＡＧＣＧＣＡＡＣ−３’・（プラマーのプロダクトサイズ：２６２ｂｐ）。増幅は、ＰＣＲスーパーミックス（SuperMix）（インビトロジェン（Invitrogen））を使用して、自動サーマルサイクラーによって３８サイクル以上行なった。各サイクルは次の工程により構成されている：９４℃で変性する（１分）、５８℃でアニールする（４５秒）、及び７２℃で延伸する（４５秒）。ＰＣＲ生成物は、通常の方法を用いてゲル電気泳動（２％アガロース）及び酵素消化で分析した。
【００７６】
（実施例１）：発育毛嚢におけるＴＲＰＭ８の免疫組織化学的局在
ヒト発育毛嚢におけるＴＲＰＭ８を局在化させるために、ヒトＴＲＰＭ８に対するウサギポリクローナル抗体を用いて免疫組織化学を適用した。ＴＲＰＭ８の発現が、毛嚢の真皮乳頭、並びに真皮乳頭を囲む毛髪マトリックスの細胞中に見られた。ＴＲＰＭ８及びメラノサイトマーカーｐＭｅｌ−１７（ｇｐ１００）同時検出のための多重免疫染色法は、これら２種類のタンパク質が毛嚢に共に局在化していることを明らかにした。これにより、毛髪マトリックスに見られるＴＲＰＭ８発現細胞がメラノサイトであることが示唆される。したがって、ＴＲＰＭ８発現が、毛嚢の真皮乳頭、及び濾胞性並びに表皮メラニン細胞に検出された。
【００７７】
（実施例２）：ヒトの皮膚及び毛嚢におけるＴＲＰＡ１ｍＲＮＡの発現
ヒトの皮膚全厚における、また単離された毛嚢の真皮乳頭における、ＴＲＰＡ１遺伝子転写が、ＲＴ−ＰＣＲ分析によって特徴付けられた。ヒトの頭皮皮膚及び毛髪真皮乳頭細胞からの全ＲＮＡが抽出され、また逆転写された。その結果、ＴＲＰＡ１−ｍＲＮＡの検出可能な安定状態のレベルが、皮膚および真皮乳頭細胞に見つかった。
【００７８】
（実施例３）：ＴＲＰＭ８及びＴＲＰＡ１作用物質の育毛への影響
ＴＲＰＭ８及びＴＲＰＡ１活性の調節が育毛に影響するかどうかを同定するため、それらの作用物質が毛嚢培養モデルで試験された。１０μＭのメタノール、イシリン及びメンチルラクテートによる毛嚢処置は、対照と比較して、それぞれ、４０％、４５％、及び６０％と十分有意な育毛阻害をもたらした。イシリン（ＴＲＰＭ８及びＴＲＰＡ１の作用物質）で処置した毛嚢は濃度依存方法での細胞増殖を阻害する結果となり、これは毛髪マトリックス及び外毛根鞘のＫｉ−６７免疫活性の顕著な減少により検出された。したがって、冷却剤によるＴＲＰＭ８又はＴＲＰＡ１の活性化はインビトロでの育毛速度の顕著な減速につながる。
【００７９】
（実施例４）：ＴＲＰＭ８及びＴＲＰＡ１作用物質のメラノサイトへの影響
ＴＲＰＭ８及びＴＲＰＡ１作用物質がメラノサイトへの色素精製活性に影響を与えるかどうかを決定するために、１０μＭイシリンで免疫組織化学によって処置された毛嚢のチロシナーゼの発現を分析した。チロシナーゼ発現は対照と比較して、処置された毛嚢において減少した。さらに、イシリンのメラニン形成タンパク質発現への影響が、ヒトの表皮のメラノサイトの培養物で試験された。ウエスターンブロット分析で測定されたように、対象と比較して、１０μＭのイシリンで処置した後４８時間でチロシナーゼ及びチロシナーゼ−関連タンパク質（ＴＲＰ）−１発現レベルの減少が観察された。したがって、イシリンは、メラノサイトの色素生成活性の減少を伴ったインビトロでの育毛阻害効果を発揮する。これらの結果は、ＴＲＰＭ８及びＴＲＰＡ１受容体の作用物質は過剰な色素沈着からメラノサイトを保護する可能性があることを示唆している。
【００８０】
他の実施形態は、特許請求の範囲内にある。例えば、上記の特許のリストに記載され又参照して組み込まれる、化合物並びに特定の化合物の部類は、概要の項で開示された方法の中で使用することができる。
【００８１】
「発明を実施するための最良の形態」で引用したすべての文献は、その関連部分において、本明細書に参照して組み込まれる；いかなる文献の引用も、それが本発明に対する先行技術であることを認めるものであると解釈すべきではない。本書における用語の任意の意味又は定義が、参照して組み込まれた文献における同一の用語の任意の意味又は定義と相反する限りにおいて、本書においてその用語に与えられた意味又は定義が適用されるものとする。
【００８２】
本発明の特定の諸実施形態を図示し、記載したが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく他の様々な変更及び修正を実施できることは当業者には自明であろう。したがって、本発明の範囲内にあるかようなすべての変更及び修正を、付加された許請求の範囲でカバーするものとする。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳動物の、特に美容上の目的において発毛を低減することに関する。
【背景技術】
【０００２】
哺乳類の毛の主要機能は、環境からの保護を提供することである。しかし、その機能は、ヒトではほとんど失われており、毛は、本質的に美容上の理由から、身体の様々な部分で維持又は除去されている。例えば、一般に、頭皮に毛髪を有することは好まれるが、顔面に毛を有することは好まれない。
【０００３】
剃毛、電解、脱毛クリーム又はローション、ワクシング、抜き毛、及び治療用抗アンドロゲン剤を含む種々の手順が、不必要な毛を除去するために使用されてきた。一般に、これらの従来の手順は、これらに伴う欠点を有する。例えば、剃毛は、切り傷をもたらすことがあり、毛の再生の速度が速まるという感じを残すことがありうる。また、剃毛は、望ましくない不精ひげを残すことがありうる。一方電解は、処置領域を無毛状態に長期間保つことができるが、高価で痛みを伴い、時には瘢痕を残すことがありうる。脱毛クリームは、非常に有効であるが、典型的には、それらの刺激の可能性が高いために頻繁な使用は推奨されない。ワクシング除毛及び抜き毛は、痛み、不快感、及び短毛の不十分な除去をもたらすこともありうる。最後に、抗アンドロゲン剤―これは、女性の多毛症を処置するために使用されてきた―は、望ましくない副作用をもたらすことがありうる。
【０００４】
発毛の速度及び性質は、特定の酵素の皮膚阻害物質の適用によって変わりうることが、以前に開示されている。これら阻害物質には、５−αレダクターゼ、オルニチンデカルボキシラーゼ、Ｓ−アデノシルメチオニン・デアルボキシラーゼ、γ−グルタミル・トランスペプチターゼ、及びトランスグルタミナーゼ阻害剤が挙げられる。例えば、ブリューワー（Breuer）らによる米国特許第４，８８５，２８９号、シャンダー（Shander）による米国特許第４，７２０，４８９号、アルワリア（Ahluwalia）による米国特許第５，０９５，００７号、アルワリア（Ahluwalia）らによる米国特許第５，０９６，９１１号、及びシャンダー（Shander）らによる米国特許第５，１３２，２９３号を参照されたい。
【０００５】
イオンチャネルのトランジェントレセプターポテンシャル（ＴＲＰ）属は３０超過のカチオンチャネルを含んでおり、次の７つの主要なサブファミリーに分類される：ＴＲＰＣ、ＴＲＰＶ、ＴＲＰＭ、ＴＲＰＰ、ＴＲＰＭＬ、ＴＲＰＡ、及びＴＲＰＮ。ＴＲＰチャネル２つの別のサブファミリーのメンバーは冷覚の原因であると特定されている：ＴＲＰＭ８及びＴＲＰＡ１。
【０００６】
トランジェントレセプターポテンシャルメラスタチン（ＴＲＰＭ８）はＴＲＰイオンチャネルのメラスタチンのサブファミリーに属する（トミナガ．Ｍ（Tominaga M.）ら、（２００４）ニューロバイオロジー誌（J. Neurobiol.）、６１（１）：３〜１２）。ＴＲＰＭ８は、特定の刺激に反応してＣａ（２＋）イオンの直接流入を仲介するＣａ（２＋）透過性非選択的カチオンチャネルである。反応は、低温度（２４℃以下）並びにメタノール及びイシリンなどの冷却化合物によって活性化される（ツァバラー（Tsavaler）ら、（２００１）、キャンサーリサーチ（Cancer Res.）、６１（９）：３７６０−９；マッケミー（McKemy）ら、（２００２）、ネイチャー（Nature）４１６：５２〜８；パイエル（Peier）ら、（２００２）セル（Cell）、１０８（５）：７０５〜１５）。ＴＲＰＭ８チャネルは温度感知小型後根及び三叉神経ガングリオンのニューロンのサブセットで発現される（マッケミー（McKemy）ら、（２００２）、上掲；パイエル（Peier）ら、（２００２）上掲；ベイブズ（Babes）ら、（２００４）、Ｅｕｒニューロサイエンス（Eur J Neurosci.）２０（９）：２２７６〜８２；ニーレン（Nealen）ら、（２００４）、ニューロフィジオロジー（Neurophysiol.）誌（J Neurophysiol.）、９０（１）：５１５〜２０）。三叉神経ガングリオンのニューロンは、口の上部の顔面皮膚、下顎領域、並びに額の上側及び目の周りに知覚神経繊維を提供する。したがって、ＴＲＰＭ８は哺乳類の温受容体の神経末端で低温度を感じることに関与している。知覚ニューロンに存在しているのに加え、機能的ＴＲＰＭ８受容体はまた各種神経細胞上でも確認されている。ＴＲＰＭ８ｍＲＮＡ発現は正常な前立腺組織に中程度報告されており、前立腺がんでは上昇するように思われ、増殖及びアポトーシスを含む多くのＣａ（２＋）依存性プロセスに関与している（チュボー（Thebault）ら、バイオロジカルケミカル（J Biol Chem）誌、２８０（４７）：３９４２３〜３５）。また、乳房、結腸、肺及び皮膚起源の腫瘍でも発現する（（チュボー（Thebault）ら、上掲）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
別のイオンチャネルであるアンキリン様タンパク質１（ＡＮＫＴＭ１）受容体とも言われるはトランジェントレセプターポテンシャルチャネルアンキリンリピート１（ＴＲＰＡ１）は、低温度（１８℃以下）、シンナムアルデヒド、アリシン、オイゲノール、ジンジェロール、及びサリチル酸メチル、並びにＴＲＰＭ８と同様にイシリンにより活性化される。ＴＲＰＡ１は、ＴＲＰＶ１、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）及びサブスタンスＰなどの侵害受容マーカーを発現するニューロンのサブセットで発現される（ストーリー（Story）ら、（２００３）、セル（Cell）１１２：８１９〜８２９）。また、培養された線維芽細胞でも発現することが報告されており、線維芽細胞の発癌性形質転換後に下方制御される（ジャクマール（Jaquemar）ら、生化学（J. Biol. Chem.）誌、２７４：７３２５〜７３３３）。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
ある態様では、本発明は、哺乳類（好ましくはヒト）の不要な発毛を低減させる方法（典型的には美容のための方法）を提供する。本発明は、１以上の冷受容体作用物質、例えば、トランジェントレセプターポテンシャルメラスタチン−８（ＴＲＰＭ８）作用物質、及び／又はトランジェントレセプターポテンシャルチャネルアンキリンリピート１（ＴＲＰＡ１）作用物質、を皮膚の領域に適用することを含む。不必要な育毛は、例えば、美容上の観点から、望ましくない場合がある。
【０００９】
ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質は、ＴＲＰＭ８（複数）及び／又はＴＲＰＡ１（複数）と強く相互作用することにより、１以上の、毛嚢の中の、ＴＲＰＭ８（複数）、及び／又はＴＲＰＡ１（複数）（例えば、１以上のＴＲＰＭ８（複数））、及び／又はＴＲＰＡ１（複数）、の少なくとも１つの活性を活性化させる化合物を含み、化合物は毛嚢の中の、１以上の、ＴＲＰＭ８（複数）及び／又はＴＲＰＡ１（複数）の、レベル及び／又は発現、を増加させ；及び／又は化合物は毛嚢の中の、１以上の、ｍＲＮＡのＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１の、発現、を増加させる。「強く相互作用する」とは、化合物がＴＲＰＭ８（複数）及び／又はＴＲＰＡ１（複数）に結合する又は優先的に結合することを意味する。前記化合物は、例えば、以下で論じる種類の化合物の１つから選択されることができる。代表的なＴＲＰＭ８作用物質にはテルペン、例えば、環状テルペン類（例えば、メントール又はメンチルラクテート）、ＷＳ−３、冷却剤１０、フレスコラト（Frescolat）ＭＧＡ、及びフレスコラトＭＬが含まれる。ＴＲＰＭ８作用物質はまたＴＲＰＡ１作用物質、例えば、イシリン及びオイゲノールでもあり得る。その他の代表的なＴＲＰＡ１作用物質には、ジンジェロール、サリチル酸メチル、アリシン、及びシンナムアルデヒドが挙げられる。さらなるＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質の例は本明細書中に記載されている。
【００１０】
一実施形態において、前記組成物は、ＴＲＰＭ８又はＴＲＰＡ１作用物質、例えば、ＴＲＰＭ８又はＴＲＰＡ１作用物質を単に能動的育毛阻害物質として有する組成物から基本的に成る。別の実施形態において、前記組成物は次の１以上を含まない：α−ジフルオロメチルオルニチン（ＤＦＭＯ）、熱ショックタンパク質阻害剤、アポトーシスを促進する化合物、又はそれらの組み合わせ。さらに別の実施形態において、前記組成物はテルペン、例えば、メントールを含まない。その他の実施形態において、前記組成物は２５重量％以上のＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を含む。
【００１１】
別の実施形態において、前記方法はＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１の１以上の作用物質を有する組成物を含む。一実施形態において、前記作用物質はＴＲＰＭ８及びＴＲＰＡ１を活性化させ、例えば、前記作用物質は両方のチャネルに結合し、またそれらを活性化するイシリンである。その他の実施形態において、ＴＲＰＭ８又はＴＲＰＡ１に対して選択性のある１以上の作用物質の組み合わせを使用する。
【００１２】
典型的には、本明細書に記載の方法を施行する際には、前記化合物に、皮膚科学的又は美容的に許容可能な賦形剤も含めることになろう。
【００１３】
別の実施形態において、前記方法は、熱による皮膚領域の処理、化学的脱毛剤（例えば、本明細書に記載の１以上の育毛還元剤を含む）、又はその他の脱毛方法（例えば、剃毛、ワクシング、機械的な脱毛電解を含む）を含む。一実施形態において、熱脱毛処置は、例えば、レーザー又はフラッシュランプで皮膚領域を加熱することを含む。典型的には、加熱は１０日、７日、５日以内で行い、より典型的には３日、２日又は１日以内であり、同時に組成物を適用する。適切な期間は、特定の作用物質により、１日まで短くすることが可能であろう。処置は同時であってもよい。典型的には、組成物は複数回適用し、加熱は７日以内、より好ましくは３日又は１日以内に行うか、何回目かの適用と同時に行うのが好ましい。その他の実施形態において、ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質は熱媒介毛髪阻害を促進し及び／又は光熱装置の使用頻度を削減する。例えば、光及び／又は高熱装置のエネルギー出力を約１０〜３０Ｊ／ｃｍ2、より典型的には約１〜３Ｊ／ｃｍ2に削減することができる。
【００１４】
その他の実施形態において、ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を含む組成物は、化学的脱毛剤又はその他の脱毛方法、例えば、ワクシングなどの皮膚への適用前に、適用中、又は適用後に、適用される。例えば、組成物は、１回又は複数回適用することができ、ワクシングは７日以内、より好ましくは３日以内、２日以内、又は１日以内に行うか、何回目かの適用と同時に行う。組成物はまた脱毛後、例えば、ワクシングの後などに適用することもでき、これにより、脱毛に伴う痛みを改善するという追加的利点を得ることができる。いくつかの実施形態において、ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質は、熱的、化学的、又はその他の脱毛方法がもたらす、例えば、刺激症及び／又は炎症などの１以上の望ましくない影響を軽減する。
【００１５】
本発明はまた、皮膚科学的又は美容的に許容可能な賦形剤及び冷受容体作用物質、例えば、本明細書に記載のＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質、又はこれらの組み合わせを含む、局所適用（例えば、化粧品）の組成物に関する。さらに、本発明は、局所適用の組成物（例えば、本明細書に記載の組成物）の製造のための、冷受容体作用物質、例えば、本明細書に記載のＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質の使用に関する。本発明のこれら態様の実施形態は上記の１以上の特徴を含んでもよい。
【００１６】
本明細に記した特有の化合物には、化合物それ自体、及びそれらの塩のうち製薬上許容可能な塩の双方を含む。
【００１７】
本発明のその他の特徴及び利点は、発明を実施するための最良の形態及び請求項から明らかになるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
組成物の例は、美容上及び／又は皮膚科学的に許容可能な賦形剤中の冷受容体作用物質、例えば、ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を含む。組成物は、固体、半固体、又は液体であってもよい。組成物は、例えば、軟膏、ローション、フォーム、クリーム、ゲル、又は溶液の形態の、例えば、美容及び皮膚用製品であってもよい。また、本組成物は、剃毛調製物又はアフターシェーブの形態であってもよい。賦形剤自体は、不活性であることができるか、あるいはそれ自体の美容的、生理学的及び／又は薬学的利益を有することができる。
【００１９】
ＴＲＰＭ８作用物質の例には、例えば、メントール及びメンチルラクテート（FrescolatML）などの環状テルペン類のようなテルペンを含む。テルペンは精油にみられる有機化合物類であり、芳香剤、香料及び薬などに用いられてきた。テルペンは、イソプレンユニット（Ｃ5Ｈ8）を有する化合物であり、含有するイソプレノイドユニットの数で分類され得る。例えば、モノテルペンは２つのイソプレンユニット（Ｃ１０）から成り、セスキテルペンは３つ（Ｃ１５）、及びジテルペンは４つ（Ｃ２９）のイソプレンユニットから成る。通常使用されるテルペンはメントールであり、吸入及び皮膚軟化剤製剤に組み込まれてきた。テルペン類のその他の例には、ユーカリプトール（１，８−シネオール）、ゲラニオール、ネロリドール、メントン、シネオール、テルピネオール、Ｄ−リモネン、プレゴール（例えば、イソプレゴール）及びカルバクロールが挙げられる。テルペン及び非テルペンＴＲＰＭ８作用物質のその他の例には、トランス−メンタン−３，８−ジオール、シス−ｐ−メンタン３，８−ジオール、Ｌ−カルボン（スペアミント油）、Ｎ，２，３−トリメチル−２−イソプロピルブタンアミド（ＷＳ−２３）、Ｎ−エチルパラメンタン−３−カルボキシアミド（ＷＳ−３）、メンタングリセリンアセタール（フレスコラトＭＧＡ）、メントキシプロパンジオール（冷却剤１０）、クールアクト（Coolact P）Ｐ、ＰＭＤ−３８、モノメチルコハク酸（フィスクール（Physcool））、モノメチルグルタル酸塩、及びヒドロキシシトロネラールが挙げられる。（例えば、国際公開特許ＷＯ２００５／０８９２０６；ベーレント（Behrendt, H-J.）ら、（２００４）、ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー（British Journal of Pharmacology）１４１：７３７〜７４５；カリスト（Calixto, J.B）ら、（２００５）、ファーマコロジー・アンド・セラピュティクス（Pharmacology & Therapeutics）１０６：１７９−２０８；エルマン（Erman, M. B.）ら、（２００５）コスメティクス・アンド・トイレタリーズ１２０（５）：１０５〜１１８を参照のこと。これら文献は参照することにより本明細書に組み込まれる。）
ＴＲＰＭ８及びＴＲＰＡ１に結合する及び活性化する作用物質の例は、オイゲノール、イシリン及びこれらの類縁体、例えば、イシリン様化合物を含む。イシリン、１−（２−ヒドロキシフェニル）−４−（３−ニトロフェニル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリミジン−２−オン（ＣＡＳＮｏ．３６９４５−９８−９）は次のような化学構造を有する：
【００２０】
【化１】
【００２１】
イリシン様化合物は、典型的には以下のような１−［Ｒ１−フェニル］４−［Ｒ２−フェニル］−１，２，３，６−テトラヒドロピリミジン−２−オン化学構造を有し、式中Ｒ１は典型的には１以上のヒドロキシ、クロロ、フルオロ、アルキル（約２〜４炭素原子）、アセトキシ、又は、トリフルオロメチルから選択され；及びＲ２は典型的には１以上の、ニトロ、クロロ、フルオロ、アルキル（約２〜４炭素原子）、又はトリフルオロメチルから選択される。
【００２２】
【化２】
【００２３】
イシリン及びイシリン様化合物の調製に好適な方法は、米国特許第３，８２１，２２１号、米国特許第６，９１９，３４８号に記載されており、両特許の内容は参照することにより本明細書に組み込まれる。
【００２４】
メチルＴＲＰＡ−１作用物質には次が含まれる：ジンジェロール；サリチル酸メチル（冬緑油）；イソチオシアネート化合物（例えば、アリシン又はアリルイソチオシアネート（マスタード油）、並びに、ベンジル、フェニルエチル、イソプロピル、及びイソチオシアネート）；シンナムアルデヒド（桂皮油）；及びΔ9−テトラヒドロカンナビノール。本明細書に開示のＴＲＰＡ１作用物質、並びにそれらの作用物質の合成及び試験方法は当該技術分野において既知であり、例えば、国際公開特許ＷＯ２００５／０８９２０及びカリスト（Calixto, J.B）ら、（２００５）（上掲）に開示されており、当該文献の内容は参照することにより本明細書に組み込まれる。
【００２５】
合成物質は１以上のＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を含んでもよい。前記組成物には、ＨＳＰ阻害物質、及び／又はアポトーシスを促進する化合物を１つ以上含有させてもよい。前記組成物には更に、米国特許第４，７２０，４８９号、米国特許第４，８８５，２８９号、米国特許第５，０９５，００７号、米国特許第５，０９６，９１１号、米国特許第５，１３２，２９３号、米国特許第５，１４３，９２５号、米国特許第５，３２８，６８６号、米国特許第５，３６４，８８５号、米国特許第５，４１１，９９１号、米国特許第５，４４０，０９０号、米国特許第５，４６８，４７６号、米国特許第５，４７５，７６３号、米国特許第５，５５４，６０８号、米国特許第５，６４８，３９４号、米国特許第５，６５２，２７３号、米国特許第５，６７４，４７７号、米国特許第５，７２８，７３６号、米国特許第５，７７６，４４２号、米国特許第５，８２４，６６５号、米国特許第５，８４０，７５２号、米国特許第５，９０８，８６７号、米国特許第５，９３９，４５８号、米国特許第５，９５８，９４６号、米国特許第５，９６２，４６６号、米国特許第６，０２０，００６号、米国特許第６，０３７，３２６号、米国特許第６，０６０，４７１号、米国特許第６，０９３，７４８号、米国特許第６，１２１，２６９号、米国特許第６，２１８，４３５号、米国特許第６，２３５，７３７号、米国特許第６，２３９，１７０号、米国特許第６，２４８，７５１号、米国特許第６，２９９，８６５号、米国特許第６，４１４，０１７号、米国特許第６，７４３，４１９号、及び米国特許第６，７４３，８２２号に記載されているような、その他の種類の発毛低下剤を１つ以上含有させてよい。前記の特許は全て、参照することにより本明細書に組み込まれる。
【００２６】
前記組成物中の前記ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質の濃度は、飽和溶液までの広範囲にわたって変えることができ、好ましくは０．１重量％〜３０重量％まで、又は更にそれ以上であり、発毛の低減は、皮膚の単位面積当たりに適用される作用物質の量が増加すると、増強する。有効適用量の最大値は、皮膚の浸透度によってのみ制限される。有効量は、例えば、皮膚の１平方センチメートル当たり１０〜３０００マイクログラム、又はそれよりも上の範囲であってもよい。
【００２７】
賦形剤は、不活性であることができるか、又は、それ自体の美容的、生理学的及び／又は薬学的利益を有することができる。賦形剤は、液体又は固体皮膚軟化剤、溶媒、増粘剤、保湿剤、及び／又は粉末と共に配合できる。皮膚軟化剤としては、ステアリルアルコール、ミンク油、セチルアルコール、オレイルアルコール、イソプロピルラウレート、ポリエチレングリコール、石油ゼリー、パルミチン酸、オレイン酸、及びミリスチルミリステートが挙げられる。溶媒としては、エチルアルコール、イソプロパノール、アセトン、ジエチレングリコール、エチレングリコール、ジメチルスルホキシド、及びジメチルホルムアミドが挙げられる。
【００２８】
組成物は任意に、皮膚への及び／又は作用部位へのＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質の浸透を増進させる構成成分を含むことができる。浸透増進剤の例としては、尿素、ポリオキシエチレンエーテル類（例えば、ブリジ（Brij）−３０及びラウレス（Laureth）−４）、３−ヒドロキシ−３，７，１１−トリメチル−１，６，１０−ドデカトリエン、テルペン類、シス−脂肪酸類（例えば、オレイン酸、パルミトレイン酸）、アセトン、ラウロカプラム（laurocapram）、ジメチルスルホキシド、２−ピロリドン、オレイルアルコール、グリセリル−３−ステアレート、プロパン−２−オール、ミリスチン酸イソプロピルエステル、コレステロール、及びプロピレングリコールが挙げられる。浸透増進剤は、例えば、０．１重量％〜２０重量％、又は０．５重量％〜５重量％の濃度で添加できる。
【００２９】
また、組成物は、ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を連続的に持続放出するために、皮膚の内部又は表面上に貯蔵所（reservoir）を提供するように調製できる。また、前記組成物は、皮膚からゆっくり蒸発するように調製し、作用物質が更に時間をかけて皮膚に浸透可能になるようにすることもできる。
【００３０】
ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を含有するクリーム系の局所的組成物は、水及び全ての水溶性構成成分を混合容器−Ａで混合することにより調製する。ｐＨは約３．５〜８．０の所望の範囲に調節する。成分を完全に溶解するために、容器の温度を４５℃まで上げてもよい。ｐＨ及び温度の選択はＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質の安定度による。防腐剤及び香料構成成分を除く油溶性構成成分を、別の容器（Ｂ）内で一緒に混合し、構成成分を溶融及び混合するために７０℃まで加熱する。容器Ｂの加熱された内容物を、水相（容器Ａ）に、勢いよく攪拌しながら注ぐ。混合は、約２０分間続ける。防腐剤構成成分を、約４０℃の温度で添加する。８Ｐａ．ｓ（８，０００ｃｐｓ）〜１２Ｐａ．ｓ（１２，０００ｃｐｓ）の粘度又は所望の粘度の軟質クリームを得るため、温度が約２５℃に達するまで攪拌を続ける。内容物がまだ混合されており、粘度は所望の範囲まで高まっていない状態で、香料構成成分を約２５℃〜３０℃で添加する。得られるエマルションの粘度を上げることが望まれる場合、従来のホモジナイザー、例えば、角穴高剪断スクリーンを有するシルバーソン（Silverson）Ｌ４Ｒホモジナイザーを使用して、剪断を行なうことができる。局所適用組成物は、上記の製剤調製の際に水相に活性物質を含めることにより作製することができるか、又は製剤（賦形剤）調製が完了した後で加えることができる。活性物質は、賦形剤調製のいずれかの工程で加えることもできる。クリーム製剤の構成成分は、下記の実施例に記載されている。
【００３１】
（実施例番号１）
【００３２】
【表１】
a活性成分はＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質。
bポリクオチニウム（Polyquartinium）−５１（コラボレイティブ・ラボ（Collaborative Labs）、ニューヨーク）。
cグリセリン、水、ナトリウムＰＣＡ、尿素、トレハロース、ポリクアタニウム（polyqauternium）−５１、及びヒアルロン酸ナトリウム（コラボラティブ・ラボ（Collaborative Labs）、ニューヨーク）。
【００３３】
（実施例♯２）
【００３４】
【表２】
a活性成分はＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質。
【００３５】
（実施例♯３）
【００３６】
【表３】
a活性成分はＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質。
【００３７】
（実施例♯４）
【００３８】
【表４】
【００３９】
ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を実施例４の処方に加え、可溶化するまで混合する。
【００４０】
（実施例♯５）
【００４１】
【表５】
【００４２】
ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を実施例５の処方に加え、可溶化するまで混合する。
【００４３】
（実施例♯６）
【００４４】
【表６】
【００４５】
ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を実施例６の処方に加え、可溶化するまで混合する。
【００４６】
（実施例♯７）
【００４７】
【表７】
【００４８】
ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を実施例７の処方に加え、可溶化するまで混合する。
【００４９】
（実施例♯８）
【００５０】
【表８】
【００５１】
ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を実施例８の処方に加え、可溶化するまで混合する。
【００５２】
ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を包含するヒドロアルコール性製剤は、処方の構成成分を混合器の中で混合して調製する。製剤のｐＨは、３．５〜８．０の範囲の所望の値に調整される。このｐＨ調整は、製剤成分を完全に溶解するためにも実施することができる。加えて、製剤成分の溶解を達成するために、活性物質の安定性に応じて、加熱を４５℃まで、更には７０℃まで行なうことができる。幾つかのヒドロアルコール性製剤が下記に示されている。
【００５３】
（実施例♯９）
【００５４】
【表９】
a活性成分はＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質である。
bカプリル酸／カプリン酸トリグリセリド（アビテック社（Abitec Corp.）、オハイオ州）。
【００５５】
（実施例番号１０）
【００５６】
【表１０】
a活性成分はＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質である。
【００５７】
（実施例番号１１）
【００５８】
【表１１】
【００５９】
ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を実施例８の処方に加え、可溶化するまで混合する。
【００６０】
加熱は、例えばレーザー、フラッシュランプ、又は超短パルス光（ＩＰＬ）装置を用いて行うことができる。例えば前記装置は、波長帯が７００〜１，３００ｎｍ（例えば８１０ｎｍ）のダイオードレーザー、６５４ｎｍのルビーレーザー、７５５ｎｍのアレキサンドライトレーザー、１，０６４ｎｍのＮｄ：ＹＡＧレーザー、６００〜８５０ｎｍのＮｄ：ＹＡＧレーザー、４００〜１，２００ｎｍのパルス光、超短パルス光、若しくはフラッシュランプ、５５０ｎｍ、５８０ｎｍ若しくは６１５〜１，２００ｎｍの蛍光パルス光、波長帯が４００〜７００ｎｍの発光ダイオード（ＬＥＤ）、並びに、高周波電気エネルギーと組み合わせた光（５８０〜９８０ｎｍ）エネルギー若しくはダイオード（８００＋２５ｎｍ）エネルギーにすることができる。前記光及び光熱装置のエネルギー出力（Ｊ／ｃｍ2）は、例えば、０．５〜５０Ｊ／ｃｍ2、２〜２０Ｊ／ｃｍ2、又は１〜１０Ｊ／ｃｍ2であり得る。加熱をもたらすその他のレーザー源及び光源のパラメーターとしては、パルス幅、スポットサイズ、繰り返し数が挙げられる。これらのパラメーターの範囲は、使用する加熱装置によって異なる。パルス幅は、例えば０．１ｍ〜５００ｍまでの範囲であり得るか、又はそれは、米国特許第６，２７３，８８４号に記載されているように、連続波（ＣＷ）であり得る。
【００６１】
加熱中、皮膚の温度は一般に、少なくとも４０℃、例えば４０℃〜５５℃に加熱する。ただし皮膚は、ほんの数ミリ秒のパルスを用いて皮膚の火傷を回避しながら、例えば７０℃ほどの高さまで加熱できる。４０〜６０℃のより低い温度域の場合、露光時間を０．５分〜数分に抑えるべきである。６０℃超の温度の場合、露光時間を１〜５００ミリ秒の範囲に留めるべきである。特定の機構による加熱によって実現される皮膚の温度は、一般に、以下に従って算出することができる。平均的な体温を有する対象者を２５℃の温度の部屋に入れる。０．２３ｍｍ（０．００９−インチ）直径の熱電対を皮膚のある領域に入れる。熱電対計の出力をナショナルインスツルメンツ（National Instruments）の熱電対信号コンディショナーＳＣＸＩ−１１１２に接続する。ナショナルインスツルメンツ（National Instruments）のデータ収集ボードで、最大収集速度が毎秒３３３キロサンプルである６０５２Ｅによってデータ収集及び信号利得を制御した。ＳＣＸＩ−１１１２及びＮＩ６０５２ＥＤＡＱの組み合わせによって、毎秒４２キロサンプルの速度で最大８つの熱電対出力を同時に検出することができた。抽出率は、例えば１，０００サンプル／秒で実施することができる。
【００６２】
真皮領域の温度範囲を算出する際にも同様の方法を用いる。この場合には、熱電対計を生体外の人肌の約５ｍｍの深さまで挿入し、皮膚表面に処理を適用する。
【００６３】
当該組成物は、育毛を低減することが望まれる、皮膚の選択された領域に局所的に適用すべきである。加熱処理の前又は後から局所適用組成物を適用するまでの期間は、局所適用組成物内の活性化学物質の特性に応じて、１日という短期間から、若しくは加熱と同時にと、様々であってよい。組成物は、加熱の７日以内に（複数回、例えば２回、３回、又は４回）、より好ましくは加熱の１日又は２日以内に少なくとも１回適用するのが好ましい。組成物は、加熱の前に少なくとも２日又は３日間にわたって、１日に１回適用することができる。
【００６４】
組成物は、例えば、顔、とりわけ顔のひげ領域、すなわち、頬、首、唇の上、あごに適用することができる。組成物は脚、腕、胴体、腋窩、眉毛、及び／又はビキニ領域に適用することができる。本組成物は、多毛症又は他の状態を有する女性において、不必要な毛の発育を低減するのに特に適している。組成物と加熱の組み合わせは、剃毛、ワクシング、機械脱毛、化学的脱毛、電解処理などのその他の除毛手段に対する補助として使用されてもよい。例えば、ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を、例えば、ワクシングなどの前記の任意のその他の脱毛方法と組み合わせて使用するすることが可能である。かかる混合処置は熱的脱毛剤処置（例えば、レーザー）をさらに含んでもよい。ＴＲＰＭ８及び／又はＴＲＰＡ１作用物質を用いる上記処置の組み合わせ及び／又は順序は本発明の範囲内である。
【００６５】
発毛の低減は、処理領域における毛の長さ、毛の直径、毛の色素沈着、及び／又は毛の密度の低減により、定量的に実証することができる。発毛の低減は、処理領域において、目に見える毛が減少すること、毛の刈り株がより短くなること、毛がより細かく／より細くなること、毛が柔らかくなること、及び／又は剃毛が長期持続することによって、美容的に実証することができる。
【００６６】
添付の実施例で使用するプロトコルは以下のとおりである。
【００６７】
ヒト毛嚢発育分析結果
成長期（発育）のヒト毛嚢をフェイスリフト組織から単離した。
【００６８】
（美容整形により得た）皮膚を薄い細片にスライスし、分析しやすそうな毛嚢の２〜３列を露出させた。毛嚢を、フィルポット（Philpott et al.）ら、（（１９９０）セル・ソサイエティー誌（J. Cell Sci.）、９７（Ｐｔ３）：４６３〜７１）に記載のように、２ｍＬのＬ−グルタミン、１０μｇ／ｍＬのインスリン、１０ｎｇ／ｍＬのヒドロコルチゾン、及び抗生物質／抗菌物質の混合物を補充したウィリアムＥ培地（William's E medium）（ライフ・テクノロジーズ（Life Technologies）、メリーランド州ゲイサーズバーグ（Gaithersburg, MD.））に定置した。毛嚢を２４ウエルプレート（24-well plates）（１つの毛嚢／ウェル）の中で、３７℃、５％のＣＯ2雰囲気、及び湿度１００％で、異なる時間インキュベートした（フィルポット（Philpott et al.）ら、上掲）。画像分析ソフトウェアシステムを用いて毛嚢の長さを算定した。ＴＲＰＭ８／ＴＲＰＡ１活性を変化させる分子の育毛への影響を測定するため、毛嚢をイシリン（トクリス・バイオサイエンス（Tocris Bioscience））及びＬ−メントール、Ｌ−メンチルラクテート（シグマ（）Sigma）と共にインキュベートした。２０倍率の解剖用顕微鏡下で、２４ウエルプレート中の毛嚢の画像を取った。毛嚢の長さを、０日目（毛嚢を培地の中に置いた日）に測定し、６〜７日目に再び測定した。０日目の毛嚢の長さを６日目に測定した長さから減じることによって、毛の繊維の成長度合を算出した。
【００６９】
免疫組織化学
毛嚢中のＴＲＰＭ８の発現を測定するため、間接蛍光抗体プロトコルを採用した。新鮮な毛嚢のクリオスタット切片（μｍ）を用意しアセトン中に固定し、２０％の羊正常血清でプレインキュベートし、続いて一晩室温にてＴＲＰＭ８の一次抗体でインキュベートした。切片を次にＴＲＩＴＣ標識羊のウサギＩｇＧ抗体でインキュベートした（ジャクソン・イミュノリサーチャー（Jackson ImmunoResearch）；４５分、３７℃）。
【００７０】
増殖性細胞を検出するため、Ｋｉ−６７に対するウサギモノクロナール抗体を使用した間接蛍光抗体プロトコル。８μｍの毛嚢切片をホルマリン中に固定し、次にエタノール／酢酸中に固定した。次に、切片をＫｉ−６７に対する抗体（１：５０；ダコ（Dako）；Ｍ７１８７）で一晩室温でインキュベートし、次にＴＲＩＴＣ標識羊のウサギＩｇＧ抗体でインキュベートした（ジャクソン・イミュノリサーチャー（Jackson ImmunoResearch）；４５分、３７℃）。
【００７１】
ホエクスト（HOECHST）３３３４２染料を使用して、対比染色を行った（ＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬ；１０分間）。各相は、洗浄工程（３回）により、ＰＢＳに散在させた（interspersed）。最後に、切片は、ベクタシールド（VectaShield）（ベクター・ラボラトリース（Vector Laboratories））を使用して、組み込まれた。
【００７２】
メラニン形成タンパク質の免疫検出のため、切片をヒトチロシナーゼに対するマウスモノクロナール抗体又はヒトｐ−ｍｅｌ１７に対するトリモノクロナール抗体のいずれかでインキュベートし（それぞれ、ネオマーカー（Neomarker）及びザイメッド（Zymed）、１：１００、一晩）、次にＴＲＩＴＣ標識羊のウサギＩｇＧ抗体（ジャクソン・イミュノリサーチャー（Jackson ImmunoResearch）；４５分、３７℃）及びＦＩＴＣ−標識羊トリＩｇＧ抗体でそれぞれインキュベートした。次に、細胞核を同定するために切片をヘキスト（Hoechst）３３３４２で対比染色し（１：３００、１５分）し、ベクタシールド（VectaShield）（ベクター・ラボラトリーズ（Vector Laboratories）を用いて標本にした。
【００７３】
全ての切片は、オリンパス（Olympus）ＢＸ６０蛍光顕微鏡下で検査され、デジタル画像分析システム（クールスナップ（CoolSnap）（商標）冷却ＣＣＤカメラ、アルファ・イノテック（Alpha Innotech））の助けを借りて写真記録された。
【００７４】
ウエスタンブロット分析
ヒトメラノサイトの合計細胞タンパク質をリシスバッファー中に採取した（全タンパク質抽出キット：ケミコン・インターナショナル社（CHEMICON International, Inc））。１レーンに２０μｇのタンパク質を添加し、１０％ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離し、１０Ｖで１時間ニトロセルロース膜に移動した。次の一晩、トリス−リン酸−緩衝材生理食塩水（ＰＢＳ）（ＰＢＳ中に０．５％のツイーン（Tween）２０）の中で５％無脂肪ドライミルク／ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を用いて、４℃でブロックし、膜をチロシナーゼ又はチロシナーゼ関連タンパク質−１或いはアクチンに対するモノクロナール抗体で１：１０００の希釈で一晩インキュベートした。インキュベーション後、膜を短くＰＢＳ中で洗い、続いてトリス−ＰＢＳで洗い、１：１０００の希釈で、１％ミルク／０．２％ＢＳＡの中で１時間、対応する二次抗体でインキュベートした（ピアース（Pierce）、イリノイ州ロックフォード（Rockford, IL））。よく洗浄した後、膜を酵素結合化学発光（enzyme-linked chemiluminescence）ウェスタンブロッティング（Western Blotting Detection Reagent）検出試薬（アマシャム（Amersham）、英国バッキンガムシャー州（Buckinghamshire, U.K.））で１分間インキュベートし、バンドをプリフラッシュしたコダックＸ−Ｏｍａｔフィルムで検出し、数秒間露光した後に現像した。
【００７５】
ＲＴ−ＰＣＲ
ヒトの皮膚全層及び毛嚢の単離された真皮乳頭細胞におけるＴＲＰＡ１遺伝子転写は、ＲＴ−ＰＣＲ分析で特徴付けた。全ＲＮＡは、全層頭皮皮膚サンプル及び単離された毛嚢真皮乳頭からＴＲＩｚｏｌ試薬を使用して単離した（インビトロジェン（Invitrogen）、カリフォルニア州サンディエゴ（San Diego, Calif.））。ＲＴ−ＰＣＲ用スーパースクリプト（SuperScript）（商標）ファースト・ストランド・シンセシス・システム（SuperScript（Trademark）First-Strand Synthesis System）（インビトロジェン（Invitrogen）、カリフォルニア州サンディエゴ（San Diego,Calif.））を使用し、２．５μｇの全ＲＮＡを逆転写して、ｃＤＮＡを合成した。次のオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、次の特定のｃ−ＤＮＡを増幅した：ＴＲＰＡ１：ヒトプライマー＃１：５’・ＴＣＡＴＧＧＴＣＣＡＡＣＡＧＡＡＣＡＣＡＴＧＧＣ−３’・及び５’・ＧＣＡＴＧＡＣＡＧＧＣＡＴＧＧＴＡＣＡＧＴＧＴＴ−３’・（プラマーのプロダクトサイズ：２２８ｂｐ）、プラマー＃２：５’・ＴＣＣＴＣＴＣＣＡＴＣＴＧＧＣＡＧＣＡＡＡＧＡＡ−３’・及び５・ＡＴＴＧＴＧＧＣＴＣＡＧＡＡＧＡＡＧＣＧＣＡＡＣ−３’・（プラマーのプロダクトサイズ：２６２ｂｐ）。増幅は、ＰＣＲスーパーミックス（SuperMix）（インビトロジェン（Invitrogen））を使用して、自動サーマルサイクラーによって３８サイクル以上行なった。各サイクルは次の工程により構成されている：９４℃で変性する（１分）、５８℃でアニールする（４５秒）、及び７２℃で延伸する（４５秒）。ＰＣＲ生成物は、通常の方法を用いてゲル電気泳動（２％アガロース）及び酵素消化で分析した。
【００７６】
（実施例１）：発育毛嚢におけるＴＲＰＭ８の免疫組織化学的局在
ヒト発育毛嚢におけるＴＲＰＭ８を局在化させるために、ヒトＴＲＰＭ８に対するウサギポリクローナル抗体を用いて免疫組織化学を適用した。ＴＲＰＭ８の発現が、毛嚢の真皮乳頭、並びに真皮乳頭を囲む毛髪マトリックスの細胞中に見られた。ＴＲＰＭ８及びメラノサイトマーカーｐＭｅｌ−１７（ｇｐ１００）同時検出のための多重免疫染色法は、これら２種類のタンパク質が毛嚢に共に局在化していることを明らかにした。これにより、毛髪マトリックスに見られるＴＲＰＭ８発現細胞がメラノサイトであることが示唆される。したがって、ＴＲＰＭ８発現が、毛嚢の真皮乳頭、及び濾胞性並びに表皮メラニン細胞に検出された。
【００７７】
（実施例２）：ヒトの皮膚及び毛嚢におけるＴＲＰＡ１ｍＲＮＡの発現
ヒトの皮膚全厚における、また単離された毛嚢の真皮乳頭における、ＴＲＰＡ１遺伝子転写が、ＲＴ−ＰＣＲ分析によって特徴付けられた。ヒトの頭皮皮膚及び毛髪真皮乳頭細胞からの全ＲＮＡが抽出され、また逆転写された。その結果、ＴＲＰＡ１−ｍＲＮＡの検出可能な安定状態のレベルが、皮膚および真皮乳頭細胞に見つかった。
【００７８】
（実施例３）：ＴＲＰＭ８及びＴＲＰＡ１作用物質の育毛への影響
ＴＲＰＭ８及びＴＲＰＡ１活性の調節が育毛に影響するかどうかを同定するため、それらの作用物質が毛嚢培養モデルで試験された。１０μＭのメタノール、イシリン及びメンチルラクテートによる毛嚢処置は、対照と比較して、それぞれ、４０％、４５％、及び６０％と十分有意な育毛阻害をもたらした。イシリン（ＴＲＰＭ８及びＴＲＰＡ１の作用物質）で処置した毛嚢は濃度依存方法での細胞増殖を阻害する結果となり、これは毛髪マトリックス及び外毛根鞘のＫｉ−６７免疫活性の顕著な減少により検出された。したがって、冷却剤によるＴＲＰＭ８又はＴＲＰＡ１の活性化はインビトロでの育毛速度の顕著な減速につながる。
【００７９】
（実施例４）：ＴＲＰＭ８及びＴＲＰＡ１作用物質のメラノサイトへの影響
ＴＲＰＭ８及びＴＲＰＡ１作用物質がメラノサイトへの色素精製活性に影響を与えるかどうかを決定するために、１０μＭイシリンで免疫組織化学によって処置された毛嚢のチロシナーゼの発現を分析した。チロシナーゼ発現は対照と比較して、処置された毛嚢において減少した。さらに、イシリンのメラニン形成タンパク質発現への影響が、ヒトの表皮のメラノサイトの培養物で試験された。ウエスターンブロット分析で測定されたように、対象と比較して、１０μＭのイシリンで処置した後４８時間でチロシナーゼ及びチロシナーゼ−関連タンパク質（ＴＲＰ）−１発現レベルの減少が観察された。したがって、イシリンは、メラノサイトの色素生成活性の減少を伴ったインビトロでの育毛阻害効果を発揮する。これらの結果は、ＴＲＰＭ８及びＴＲＰＡ１受容体の作用物質は過剰な色素沈着からメラノサイトを保護する可能性があることを示唆している。
【００８０】
他の実施形態は、特許請求の範囲内にある。例えば、上記の特許のリストに記載され又参照して組み込まれる、化合物並びに特定の化合物の部類は、概要の項で開示された方法の中で使用することができる。
【００８１】
「発明を実施するための最良の形態」で引用したすべての文献は、その関連部分において、本明細書に参照して組み込まれる；いかなる文献の引用も、それが本発明に対する先行技術であることを認めるものであると解釈すべきではない。本書における用語の任意の意味又は定義が、参照して組み込まれた文献における同一の用語の任意の意味又は定義と相反する限りにおいて、本書においてその用語に与えられた意味又は定義が適用されるものとする。
【００８２】
本発明の特定の諸実施形態を図示し、記載したが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく他の様々な変更及び修正を実施できることは当業者には自明であろう。したがって、本発明の範囲内にあるかようなすべての変更及び修正を、付加された許請求の範囲でカバーするものとする。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類の育毛を軽減させる方法であって、
（ａ）育毛の軽減が望ましい哺乳類の皮膚領域を選択すること、及び
（ｂ）前記皮膚領域に、トランジェントレセプターポテンシャルメラスタチン−８（ＴＲＰＭ８）作用物質、トランジェントレセプターポテンシャルチャネルアンキリンリピート１（ＴＲＰＡ１）作用物質、又はこれらの組み合わせ、から選択される冷受容体作用物質を含む、皮膚科学的に許容可能な組成物を適用すること、を含む方法。
【請求項２】
前記組成物がα−ジフルオロメチルオルニチンを含んでいない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＴＲＰＭ８作用物質が非テルペンＴＲＰＭ８作用物質である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記組成物がテルペンをさらに含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＴＲＰＭ８作用物質がテルペンである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項６】
前記テルペンがメントール又はメンチルラクテートである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＴＲＰＭ８又はＴＲＰＡ１がイシリンである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項８】
前記組成物が熱ショックタンパク質阻害剤又はアポトーシスを促進する化合物を含んでいない、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
（ｃ）前記皮膚領域を熱的脱毛剤と接触させる工程をさらに含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
レーザーが工程（ｃ）に使用される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記皮膚領域が、前記組成物の適用後４８時間以内にレーザーで処置される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
フラッシュランプが工程（ｃ）に使用される、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記組成物が０．１重量％〜３０重量％の作用物質を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
ヒトの前記皮膚領域が、顔、腋窩、脚、まゆ、及びビキニ領域から成る群から選択される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１】
哺乳類の育毛を軽減させる方法であって、
（ａ）育毛の軽減が望ましい哺乳類の皮膚領域を選択すること、及び
（ｂ）前記皮膚領域に、トランジェントレセプターポテンシャルメラスタチン−８（ＴＲＰＭ８）作用物質、トランジェントレセプターポテンシャルチャネルアンキリンリピート１（ＴＲＰＡ１）作用物質、又はこれらの組み合わせ、から選択される冷受容体作用物質を含む、皮膚科学的に許容可能な組成物を適用すること、を含む方法。
【請求項２】
前記組成物がα−ジフルオロメチルオルニチンを含んでいない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＴＲＰＭ８作用物質が非テルペンＴＲＰＭ８作用物質である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記組成物がテルペンをさらに含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＴＲＰＭ８作用物質がテルペンである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項６】
前記テルペンがメントール又はメンチルラクテートである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＴＲＰＭ８又はＴＲＰＡ１がイシリンである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項８】
前記組成物が熱ショックタンパク質阻害剤又はアポトーシスを促進する化合物を含んでいない、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
（ｃ）前記皮膚領域を熱的脱毛剤と接触させる工程をさらに含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
レーザーが工程（ｃ）に使用される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記皮膚領域が、前記組成物の適用後４８時間以内にレーザーで処置される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
フラッシュランプが工程（ｃ）に使用される、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記組成物が０．１重量％〜３０重量％の作用物質を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
ヒトの前記皮膚領域が、顔、腋窩、脚、まゆ、及びビキニ領域から成る群から選択される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【公表番号】特表２００９−５２９４９４（Ｐ２００９−５２９４９４Ａ）
【公表日】平成２１年８月２０日（２００９．８．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５５５９３３（Ｐ２００８−５５５９３３）
【出願日】平成１９年２月２８日（２００７．２．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００７／０５０６５４
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０９９５０３
【国際公開日】平成１９年９月７日（２００７．９．７）
【出願人】（５００００６５２４）ザ ジレット コンパニー (14)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年８月２０日（２００９．８．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年２月２８日（２００７．２．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００７／０５０６５４
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０９９５０３
【国際公開日】平成１９年９月７日（２００７．９．７）
【出願人】（５００００６５２４）ザ ジレット コンパニー (14)
【Ｆターム（参考）】
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