血液脳関門におけるアミロイドβペプチド／ＲＡＧＥ相互作用の阻害
小分子はアルツハイマー病のアミロイドβペプチド（Ａβ）と終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ）との間の特異的な受容体−リガンド相互作用を阻害するために用いられる。目的は、アルツハイマー病および脳のアミロイド血管症含む他の病変の治療；脳へのもしくは脳内の血流の改善；脳内のＡβレベルの減少；アルツハイマー病に関連した神経病変の低減；脳内の炎症および／もしくは酸化ストレスの低減；記憶および／もしくは学習の改善；血液脳関門でのＡβ／ＲＡＧＥの相互作用、ＲＡＧＥの介在したＡβの脳への輸送、または脳血管系および／もしくは脳実質でのＲＡＧＥの活性化（たとえば糖尿病性合併症）を含む他の疾患の治療；またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は２００６年１月２６日付申請の米国仮出願番号６０／７６２，１１７の便益を主張するものである。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、アルツハイマー病のアミロイドβペプチド（Ａβ）と終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ）との間の特異的な受容体−リガンド相互作用を阻害することに関する。
【０００３】
多くの遺伝学的研究、細胞研究、生化学的研究、および動物実験が、アルツハイマー病（ＡＤ）においてアミロイドβペプチド（Ａβ）の脳における蓄積が重要な事象であり、その一方で、神経原線維変化の形成を含む疾患過程の残りの部分は、Ａβの生成とＡβのクリアランスとの間の不均衡に起因することを示唆する（Ｈａｒｄｙ ＆ Ｓｅｌｋｏｅ，２００２； Ｔａｎｚｉ ｅｔ ａｌ．，２００４； Ｚｌｏｋｏｖｉｃ，２００５）。Ａβは神経毒であり（Ｗａｌｓｈ ｅｔ ａｌ．，２００２； Ｋａｙｅｄ ｅｔ ａｌ．，２００３； Ｇｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００３）、散発性ＡＤおよび家族性ＡＤ（ＦＡＤ）の患者の、脳実質および脳血管においてアミロイドとして沈着する。Ａβの生成の原因となる機構、すなわち、そのより大きな前駆タンパク質（ＡＰＰ）からＡβを切断するタンパク分解酵素であるβセクレターゼおよびγセクレターゼが、明らかにされ（Ｓｅｌｋｏｅ，１９９８； Ｖａｓｓａｒ ｅｔ ａｌ．，１９９９）、それぞれの阻害剤が開発された。しかしながら、増加したＡβの発生は、ＡＰＰ遺伝子（すなわちスウェーデン変異）またはプレセニリン１もしくはプレセニリン２遺伝子内に受け継いだ変異を持つ早発型のＦＡＤの症例のうち、少ない数のものしか説明できなく、しかし後発型のＡＤもしくは９８％以上の全てのＡＤの症例にも寄与しなかった（Ｓｅｌｋｏｅ，２００１； Ｈｏｌｔｚｍａｎ ＆ Ｚｌｏｋｏｖｉｃ，２００６）。新しく現れている概念によると、Ａβのクリアランスの減少、および／もしくは、血液脳関門（ＢＢＢ）を通り抜ける輸送を介した、それの循環系から脳への流入および再移行の増加が、散発性ＡＤにおけるＡβの脳蓄積の原因である可能性がある（Ｔａｎｚｉ ｅｔ ａｌ．，２００４； Ｚｌｏｋｏｖｉｃ，２００５； Ｈｏｌｔｚｍａｎ ＆ Ｚｌｏｋｏｖｉｃ，２００６）。
【０００４】
近年の証拠は、血管内腔のＡβが脳内の沈着したＡβと関連付けられる事を示し、これの示唆することは、血液脳関門（ＢＢＢ）を通り抜ける血管から脳へのおよび脳から血管のＡβの輸送が脳内のＡβを調節するということである（Ｓｈｉｂａｔａ ｅｔ ａｌ．，２０００； ＤｅＭａｔｔｏｓ ｅｔ ａｌ．，２００２ａ； ＤｅＭａｔｔｏｓ ｅｔ ａｌ．，２００２ｂ； Ｂａｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００２； Ｍａｃｋｉｃ ｅｔ ａｌ．，２００２； Ｃａｒｒｏ ｅｔ ａｌ．，２００２； Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００３； Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００４； Ｔａｎｚｉ ｅｔ ａｌ．，２００４； Ｚｌｏｋｏｖｉｃ，２００５； Ｈｏｌｔｚｍａｎ ＆ Ｚｌｏｋｏｖｉｃ，２００６）。動物モデルによる多くの研究（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００４とＨｏｌｔｚｍａｎ ＆ Ｚｌｏｋｏｖｉｃ，２００６に概説される）およびＡＤ患者におけるいくつかの研究は、血しょう中のリポプロテインおよびタンパク質上でのＡβのレベルの上昇を示し（Ｍａｔｓｕｂａｒａ ｅｔ ａｌ．，１９９９； Ｋｕｏ ｅｔ ａｌ．，１９９９）、ＢＢＢを通り抜ける輸送を介した循環するＡβの脳への再移行は、脳のＡβの重要な供給源であるということを示唆してきた。たとえばＡＰＰｓｗ＋／−マウスのようなＡＤのマウスモデルで基本条件おいて（Ｋａｗａｒａｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，２００１）、もしくはたとえば抗Ａβ抗体（ＤｅＭａｔｔｏｓ ｅｔ ａｌ．，２００２ａ）、ｓＲＡＧＥ（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００３）のようなＡβ末梢結合物質による治療ののちに、Ａβ４０／４２の血しょう中の高いレベルが測定されてきたが、それらは血管内腔のＡβと脳のＡβの関連性を確かめることとなる。
【０００５】
ＲＡＧＥは、イムノグロブリン・スーパーファミリーに属する複数のリガンドを持つ受容体で、Ａβを含む広い範囲のリガンドに結合する（Ｓｔｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，２００２）。成体の多くの組織において比較的低いＲＡＧＥの発現が見られるが、リガンドの沈着がＲＡＧＥの発現を引き起こす。ＡβがＡＤにおいてもしくはＡＤの動物モデルにおいて蓄積すると、ＲＡＧＥの発現は、特にｉｎ ｖｉｖｏでのＢＢＢの部位である脳微小血管において上昇する（Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９６； Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００３； ＬａＲｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４； Ｄｏｎａｈｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４）。ＲＡＧＥは、可溶性のＡβとナノモーラーの濃度域で結合し、Ａβによる結合の後に起こる病態生理学的な細胞の反応を媒介する（Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９６； Ｍａｃｋｉｃ ｅｔ ａｌ．，１９９８； Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，２０００）。それらは、ＢＢＢを通り抜ける血しょうＡβの病態生理学的に関連する濃度の輸送、神経血管のストレス、および脳血流（ＣＢＦ）の減少を含む（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００３； ＬａＲｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４）。ＲＡＧＥ遺伝子の欠損は、循環するＡβの脳への再移入を除去することによって、ＡβのＣＮＳプールをそれの末梢プールの影響から保護し、一方、ＡＤのマウスモデルにおいて、可溶性ＲＡＧＥによる全身治療は、循環するＡβを抑制し、脳でのＡβの蓄積と沈着を減少させる（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００３）。このように、Ａβ／ＲＡＧＥのＢＢＢにおける相互作用を妨げる化合物はＡβの脳への再移行を妨げ、Ａβに関連した病態を低減し、そしてＣＢＦの異常調節と認識衰退を改善することができ、このことは重大で有益なＡＤにおける治療効果を有する。
【０００６】
Ａβ／ＲＡＧＥの相互作用を阻害するための化合物、一つもしくはそれ以上のそれら化合物を含有している組成物、ならびに治療方法は、アルツハイマー病と、血液脳関門におけるＡβ−ＲＡＧＥの相互作用、ＲＡＧＥの媒介するＡβの脳への輸送ならびに／または脳血管系もしくは脳実質におけるＲＡＧＥ活性化ＲＡＧＥ活性化を含む他の疾患とに適用可能なように、本明細書に示される。本発明の他の利点は、以下に説明されるか、その説明から当業者にとって明らかであろう。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明はＡβとＲＡＧＥの間の特異的な受容体−リガンドの相互作用を阻害するために用いられる。これは、アルツハイマー病、または血液脳関門におけるＡβ−ＲＡＧＥの相互作用、ＲＡＧＥの媒介するＡβの脳への輸送ならびに／または脳血管系もしくは脳実質におけるＲＡＧＥ活性化ＲＡＧＥ活性化を含む他の疾患を、治療するための薬剤（たとえば治療用および／もしくは予防用組成物）を製造するために用いることが出来る。脳におけるＡβの量および濃度が減少させられ、アルツハイマー病に関連した神経病変が緩和され、脳血流が増加させられ、記憶および／もしくは学習が改善され、またはそれらが組合わされる。特に、第３級アミンＲ１（ＣＯ）ＮＲ２Ｒ３のような化合物、ならびに一つもしくはそれ以上の化合物を含有する組成物は本発明の実施形態とみなされる。Ｒ１は電子欠損のアリール部分（たとえば、モノ−もしくはジ−ハライドならびにモノ−もしくはヂ−ニトロのような一つもしくはそれ以上の電子吸引基によって置換されているアリール部分）であることができる。Ｒ２は疎水性の炭化水素部分（たとえば、直鎖もしくは分岐状の脂肪族の、シクロヘキシルのような脂環式の、直鎖のもしくは分岐状の非環式または環式のオレフィンの、直鎖のもしくは分岐状の非環式または環式のアセチレンの、アリール含有の、ならびに／またはアミン含有のＣ４−Ｃ１８の炭化水素部分であり、任意選択で置換される）であることができる。Ｒ３は電子豊富なアリール部分（たとえば、フラニル、ピロリル、ベンジル、フェニル、アルキルフェニル、アルコキシフェニル、ナフチル、ベンゾフリル、インジル、もしくはキノリル部分であり、任意選択で置換される）であることができ、Ｃ１−Ｃ４アルキルの（たとえば、直鎖もしくは分岐の）または複素環式芳香族化合物のリンカーを有しているかあるいは有していない。たとえば、一つもしくはそれ以上の化合物は、薬剤としてもしくは医薬組成物中に、製造される。
本発明の更なる様態は、以下の詳細な記述および請求項から当業者には明らかであり、これを一般化できるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
ＲＡＧＥは、イムノグロブリン・スーパーファミリーに属する複数のリガンドを持つ受容体で、神経毒のＡβを含む広い範囲のリガンドに結合する。ＲＡＧＥの生物学はそのリガンドの発現もしくは蓄積によって大部分決定される。成体において、多くの組織でのＲＡＧＥは比較的少ない発現であるが、リガンドの蓄積が受容体の発現を引き起こす。既にわれわれおよび他の人が報告してきたように、アルツハイマー病（ＡＤ）および／もしくはＡＤのトランスジェニックマウスモデルにおいて、病原性のＡβが蓄積する時、ＲＡＧＥの発現が脳、特にｉｎ ｖｉｖｏでのＢＢＢの部位である脳微小血管において上昇する。われわれは、ＢＢＢにおけるＲＡＧＥの過剰発現が循環するＡβの脳への流入を増加させ、これは炎症性サイトカインの発現と、神経血管系ストレスと、脳血流（ＣＢＦ）の減少とに関連していることを示した。ＲＡＧＥ遺伝子の欠損が脳へのＢＢＢを通り抜けるＡβの流入（すなわち輸送）を抑制し、脳血管系のストレスを低減し、そしてＣＢＦの異常調節を改善する。ＡＤのマウスモデルにおいて、可溶性ＲＡＧＥ（ｓＲＡＧＥ）の全身投与は循環するＡβを隔離し、それの脳への輸送および再移入を防ぎ、それの脳への蓄積および沈着を減少させる。このように、われわれは、ＢＢＢにおけるＡβ／ＲＡＧＥの相互作用を阻害する化合物は再移入を阻止し、アルツハイマー病において有益な治療効果を持っているはずであるとの仮説を立てた。
【０００９】
ＲＡＧＥがトランスフェクトされたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における一次スクリーンによって、５０００の低分子有機化合物の多様性のあるライブラリからの７つのヒットから、Ａβ／ＲＡＧＥの相互作用への３つの高親和性阻害剤が同定された。それら３つの化合物（ＦＰＳ１、ＦＰＳ２およびＦＰＳ３）はいくつかの構造的特徴を共有する（図１）。３つ全ては第３級アミドであり、大きな疎水性の炭水化物部分と一置換の芳香族部分とによって置換される。一置換芳香族への結合は直接（ＦＰＳ２）であるか、またはアルキル（ＦＰＳ１）もしくは複素環式芳香族（ＦＰＳ３）のスペーサーを介している。化合物のうちの２つはまた、非常に電子欠損に置換されたベンゼン環（ＦＰＳ１は３−ニトロ，４−クロロ；ＦＰＳ２は３，５−ジニトロ）を特色とする。
【００１０】
図２Ａは、ＲＡＧＥがトランスフェクトされたＣＨＯ細胞における、４℃での１２５Ｉ−Ａβ４０のＲＡＧＥに対する飽和結合を示す； Ｋｄ（結合定数）はわれわれが報告した（Ｍａｃｋｉｃ ｅｔ ａｌ．，１９９８）とおり、７５±８ｎＭであった。偽トランスフェクションされた細胞へは結合が無かった。すべての化合物は、親和性の低くなって行くＦＰＳ２＞ＦＰＳ３＞ＦＰＳ１（図２Ｂ）の順で、ＲＡＧＥがトランスフェクトされたＣＨＯ細胞におけるＡβ４０のＲＡＧＥへの結合のＫｄ（結合定数）に近いＫｉ（阻害定数）で、Ａβ−ＲＡＧＥの結合を競合的に阻害する。それぞれのＫｉ／Ｋｄ比はそれぞれ０．４５、１．６および２．６であり（図２Ｃ）、ここでＫｉは化合物の阻害定数で、ＫｄはＡβ−ＲＡＧＥの結合定数である。われわれはもっとも高い親和性の阻害剤としてＦＰＳ２に焦点を当てた。ＲＡＧＥがトランスフェクトされたＣＨＯ細胞において、ＦＰＳ２はＡβ／ＲＡＧＥによって引き起こされる酸化ストレス(図２Ｄ)および核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）の移行（図２Ｅ）を阻害する。それはまたｉｎ ｖｉｔｒｏのセルフリーシステムにおけるＡβ４０／ＲＡＧＥ相互作用をも阻害する。
【００１１】
動脈脳潅流法（ＬａＲｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４）は、４〜６月齢のＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおける、循環する１２５Ｉで標識されたＡβ４０のＲＡＧＥが介在するＢＢＢを通り抜ける輸送を、ＦＰＳ２が阻止するかどうかを究明するために用いられた。それらのマウスでの脳微小血管におけるＲＡＧＥの発現が同腹子のコントロールに比べて約５倍増加していることは、われわれおよび他の人が報告してきた（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００３；Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００４）。図３は、血しょうの動脈流入の２０μｇ／ｍｌという高い濃度のＲＡＧＥ特異的ＩｇＧがＢＢＢを通り抜けるＡβの輸送の８０％以上を阻害し、一方、４．８μｇ／ｍｌのＦＰＳ２が、ＢＢＢを通り抜けるＡβの輸送を破壊し、結果として１００％阻害になることを示す。(図３)。このデータは、ＦＰＳ２および恐らくそれと関連する化合物がｉｎ ｖｉｖｏにおける循環するＡβのＢＢＢを通り抜ける流入と再移行とを阻止する可能性を持ち、これはＡＤの動物モデルにおいて、Ａβの脳蓄積とアミロイド病変とを低減し、ＣＢＦの異常調節と行動とを改善することを示唆する。
【００１２】
本発明の化合物は、本明細書に開示されている一つもしくはそれ以上の有用性を伴って、薬剤としてもしくは組成物を調合するために使用することが出来る。「医薬」組成物はさらに、生理学的に利用可能なビヒクルを含有し、無菌条件下で製造される。組成物はさらに、その作用点に化合物を送達するために有用な構成要素をさらに含有することができる。そのようなビヒクルおよび担体の選択と化合物への添加は、当業者における技術の程度内のことである。化合物および組成物はｉｎ ｖｉｔｒｏで培養細胞へ、ｉｎ ｖｉｖｏで生体内へ、あるいはｅｘ ｖｉｖｏで将来同じ被治療者もしくは他の被治療者の生体へと戻されるであろう被治療者の外部の細胞へと投与出来る。被治療者は、治療が必要なヒト（たとえば、アルツハイマー病およびその進行に侵されたかまたはその進行の危険のある患者）もしくはアルツハイマー病あるいはその病変の動物モデルである。
【００１３】
「医薬」組成物は全身循環、血液脳関門、脳血管系もしくは脳実質への送達に適応した調合で投与されても良い。代替的に、組成物は培地中に投与されても良い。活性化合物に加えて、そのような組成物は生理学的に利用可能なビヒクル、担体、および他の投与を円滑にするためおよび／もしくは吸収を促進するための構成要素（たとえば、生理食塩水、ジメチルスルホキシド、脂質、ポリマー、親和性に基いた細胞特異的標的システム）を含有出来る。組成物は、ゲル、スポンジ、もしくは透過性のマトリックスなどに組み込まれていて（たとえば、ペレットもしくはディスクとして成型される）も良く、持続した局所での放出のために、内皮近傍に置かれても良い。それは単回投与で、あるいは異なった時間に投与される反復投与で、投与されても良い。
【００１４】
医薬組成物はどのような既知の経路によっても投与できる。一例として、組成物は、粘膜、肺、局所的もしくは他の局部的なまたは全身性の経路（たとえば、腸内のおよび非経口の）によって投与されうる。用語「非経口」は皮下、動脈内、皮内、筋肉内、くも膜下、静脈内、および他の投与もしくは注入技術を限定無しに含有する。特に、一つもしくはそれ以上の有効量の化合物がＡβとＲＡＧＥの相互作用する場所に存在する。
【００１５】
投与の量とタイミング、調合、および投与経路の適切な選択は、アルツハイマー病の、もしくはその危険にある被治療者での望ましい反応の達成の目標（すなわち、有効性）に沿って行われ、不適切な毒性やそれに加えて他の害毒が避けられる（すなわち、安全性）。それゆえ、「効果的」は、望ましい効果を達成するためにする状況の所定の操作を含有するような選択を指している。
【００１６】
一日に一度の短い時間のボーラス投与は便利な投与スケジュールである。代替的に、効果的な毎日の投与は、投与の目的のために、たとえば、一日に二回から十二回の投与のように複数回の投与に分割できる。医薬組成物中の有効成分の投与量レベルはまた、被治療者内、特に脳の血管内皮のもしくは全身循環系の内部ならびに周辺において化合物の一時的なもしくは持続した濃度を達成し、そして、望ましい治療のもしくは予防の反応が得られるように変更させることが出来る。しかしながら、望ましい治療のもしくは予防の効果を達成するために望まれるものより低いレベルの投与から開始し、効果が達成されるまで投与量を徐々に上昇することは当業者の範囲内のことである。
【００１７】
投与される化合物の量は、たとえば、化合物の生物活性および生物利用効率（たとえば、体内での半減期、安定性、代謝）、化合物の化学的性質（たとえば、分子量、疎水性、および溶解度）、投与の経路およびスケジュール等のような、当業者に既知の因子に依存する。全身投与において、化合物もしくはその代謝体の血液脳関門を介する通り抜けは危機的でない。ある特定の被治療者に対して達成される特定の投与量レベルは、年齢、性別、健康状態、病歴、体重、一つもしくはそれ以上の他の薬剤、および病気の重篤度を含む様々な因子によることが出来ることは理解されるべきである。
【００１８】
アルツハイマー病の「治療」という用語は、とりわけ、被治療者における一つもしくはそれ以上の症状を軽減するかもしくは緩和し、一つもしくはそれ以上の症状が悪化するかもしくは進行するのを防ぎ、回復を促進するかもしくは、予後を改善し、ならびに／または、それらから免れている被治療者において病気を防ぎ、また同様に存在する病気の進行を遅らせるかまたは低減させることを指している。特定の被治療者に対して、症状の改善、その悪化、回帰、もしくは進行は、客観的尺度もしくは主観的尺度によって決定されても良い。治療の有効性は、発病率もしくは死亡率の改善によって測ることが可能である。予防的方法（たとえば、病気の進行もしくは再発を防ぐこと）はまた、治療と考えられる。
【００１９】
被治療者へ投与される量は、好ましくは、投与の結果得られる利点を超える毒性を誘発しない量である。さらに、目標は、数の低減、重篤度の減少、および／もしくは、別の点では、標準的に認識されている治療と比較して病気の症状からの苦痛を軽減することである。
【００２０】
現行規則に従った化合物の製造は、政府機関（たとえば、米国食品医薬品局および欧州医薬品庁）による医薬品安全性試験実施基準（ＧＬＰ）および医薬品製造管理および品質管理基準（ＧＭＰ）の下、管理される。これは、ＱＡ／ＱＣの監督と同様、正確で完全な記録保持を要求する。機関および機関の委員会による患者プロトコルの監督はまた、インフォームドコンセントが得られていること、安全性、生物活性、適切な服用、生産品の有効性がフェーズにおいて研究されていること、結果が統計的に有意であること、ならびに倫理ガイドラインに従っていることを確認すると想定される。動物モデルの使用のプロトコールと有毒化学薬品の使用は、同様の監督および規則の順守が要求される。
【００２１】
ＢＢＢにおけるＲＡＧＥはＡβに対する主要な流入受容体で、その輸送、脳内の蓄積および保持、サイトカイン反応、およびＣＢＦの抑制を媒介する（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００３； ＬａＲｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４）。本明細書でのわれわれの研究は、ＢＢＢにおけるＲＡＧＥは、Ａβ−血管の相互作用の、脳アミロイド症の進行を含む病原性の帰結を阻害するための主要な治療の標的であることを示す。これらのデータは、ＡＰＰｓｗ＋／−マウスをＦＰＳ２または関連した化合物ＦＰＳ３およびＦＰＳ１で治療することは（１）βアミロイド症の進行を妨げ、（２）ＣＢＦの異常調節を改善し、（３）行動を改善するというわれわれの提言を強く支持する。ＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおいて、ＲＡＧＥの介在するＡβのＢＢＢを通り抜ける輸送に対するｉｎ ｖｉｖｏでのＦＰＳ２の阻害効果が明らかにされた。ＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおいて、Ａβの病変、ＣＢＦの異常調節、および行動に対するＦＰＳ２の治療効果が評価された。本発明の他の化合物は、アルツハイマー病への薬効（複数可）が同様に明らかにされるであろう。
【００２２】
アミロイド仮説によると、Ａβの脳内での蓄積はＡＤの病原に寄与する最重要な事象である（Ｈａｒｄｙ ＆ Ｓｅｌｋｏｅ， ２００２）。最近の証拠は、血管内腔のＡβは脳内のＡβ沈着に関連していることを示す。このことは、ＢＢＢを通り抜けての血管から脳へのおよび脳から血管へのＡβの輸送経路が脳でのＡβのレベルを調節することを示唆する（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００３； Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００４； Ｔａｎｚｉ ｅｔ ａｌ．，２００４； Ｚｌｏｋｏｖｉｃ， ２００５、 Ｈｏｌｔｚｍａｎ ＆ Ｚｌｏｋｏｖｉｃ， ２００６）。
【００２３】
ＢＢＢにおいて、ＲＡＧＥは、脳血管系ストレス、脳でのＡβの蓄積、およびＡβの関与する病変の進行と関連しているＡβのＣＮＳへの輸送を媒介する（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００３； ＬａＲｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４； Ｄｏｎａｈｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４）。ＡＤおよびＡＤの動物モデルのＢＢＢにおける脳微小血管でのＲＡＧＥの発現増加は血しょうのＡβの脳への輸送の増大、ＣＢＦの減少、および炎症性サイトカインの発現という結果になるであろう。ＲＡＧＥ遺伝子の欠損は、循環するＡβの脳への流入とＣＢＦや炎症へのＡβが誘発する変化を解消する。ＡＤのマウスモデルにおいて、可溶性のＲＡＧＥ（ｓＲＡＧＥ）は脳でのＡβの蓄積をさまたげる。われわれはここで、ＢＢＢにおいてＲＡＧＥ／Ａβの相互作用を阻害する化合物は、Ａβの輸送、脳内炎症、潅流低下および脳での蓄積への影響を防ぐことで、Ａβを減少させる薬剤として作用するであろうとする仮説を立てた。
【００２４】
本発明の化合物の治療効果はＡＤの動物モデルにおいて判定できる。ＡＰＰｓｗ＋／−マウスはｓＲＡＧＥ（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．， ２００３を参照のこと）について記述されたように一つもしくはそれ以上の化合物によって治療できる。マウスは、Ａβ負荷、Ａβ４０とＡβ４２のレベル、および可溶性／不溶性画分を測定するために犠牲にされた。結果は、化合物はＡβの蓄積とアミロイド負荷を実質的に減少させるというわれわれの仮説を確かにした。脳活性化によるＣＢＦの増加に対する治療効果を判定するために、ＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおけるひげ刺激に対するＣＢＦ反応を測定できる。空間記憶と空間学習のためのバーンズ迷路（Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．， １９９５）、一般活動性、空間パターニング、運動、運動失調、ふるえ、発作などのためのフォースプレート・アクトメーター（Ｚａｒｃｏｎｅ， ２０００）、そして、記憶と学習における空間変更と注意のためオペラントチャンバー（Ｍａｒｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．， ２０００）などの一連の行動テストも行うことが出来る。
【００２５】
アッセイ（すなわち、ＴＵＮＥＬ、ヘキスト染色、ＬＤＨ遊離、陰性ＷＳＴ−８）において、化合物の毒性は観察されなかったが、一つもしくは全ての化合物がｉｎ ｖｉｖｏで毒性であるという可能性はある。化合物がｉｎ ｉｖｏ毒性であるか判定するために、血球計算、ヘモグロビンレベル、電解質、グルコース、血圧、心拍数、呼吸、血液ガス、およびｐＨが測定されるであろう。腎機能（尿素、クレアチン）、肝酵素、一般活動性、空間パターニング、運動、運動失調、ふるえ、注意、および記憶と学習における空間変更などもまた、調べられても良い。化合物がＡβ／ＲＡＧＥ結合の特異的な阻害剤でない可能性がある。この問題に当たり、化合物が特異的にＡβ−ＲＡＧＥの結合をさまたげるか、または破壊することを確認するために、固定したＬＲＰ、アポリポプロテインＥ、およびＪ，α２マクログロブリン、そして、Ａβに対する推定される受容体、Ａβに対する結合タンパク質を伴うセルフリーシステムを用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ分析を行うことが可能である。
【００２６】
ＡＰＰｓｗ＋／−マウスは、８月齢から開始して２ヶ月の間、毎日、腹腔内注射によって、ＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ）で、もしくはビヒクルで治療された。治療期間が終了するとき、脳の活性化のための脳血流（ＣＢＦ）における機能的変化および記憶テストが判定された。ＦＰＳ２およびビヒクル治療マウスにおける脳および血しょうのＡβレベルが決定された。ビヒクルと比較して、ＦＰＳ２による長期治療は脳の活性化時のＣＢＦ約５０％増加させ、そして、新規物体配置および新規物体認識によって判定される記憶を有意に増加させた（図４）。ＦＰＳ２が安静時ＣＢＦを変化させるかどうか立証するため、急性試験もまた実施された。それらの研究において、ＡＰＰｓｗ＋／−（７〜９月齢）へのＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ）の静脈内ボーラス投与が、安静時ＣＢＦを約３５％一時的に増加させ、２５〜３０分後に頂点に達した（図５）。
【００２７】
長期治療されたマウスにおいて、ビヒクルに比べて、ＦＰＳ２治療されたマウスでは、海馬でのＡβ４０とＡβ４２のレベルはそれぞれ、約８５％と約９０％減少した（図６Ａ）。同様に、脳皮質でのＡβ４０とＡβ４２のレベルはそれぞれ、約８５％と約９０％減少した(図６Ｂ)。海馬および大脳皮質におけるチオフラビンＳ陽性領域(アミロイド負荷)はビヒクルと比較してＦＰＳ２治療マウスにおいて、有意に約８５％減少した(図７)。
【００２８】
はじめの三つの化合物はＡβ／ＲＡＧＥ相互作用を阻害するのに十分に効果的でなく、群内の他の化合物がより効果的である可能性がある。それゆえ、ＦＰＳ１およびＦＰＳ２の構造の共通性、構造・活性研究は１２５の構造的に関連した化合物のライブラリを合成し分析することによって実行された（図８を参照のこと）。たとえば、第３級アミド、Ｒ１（ＣＯ）ＮＲ２Ｒ３はＲ１（たとえば、２−フルオロベンゼン、４−フルオロベンゼン、２，４−ジフルオロベンゼン、３−クロロ−４−フルオロベンゼン、４−クロロ−３−フルオロベンゼン、３，５−ジフルオロベンゼン）、Ｒ２（たとえば、エチル、プロピル、ブチル、ジメチルプロパン、ヘキシル、ヘプチル、オクチル）、Ｒ３（たとえば、ｏ−メトキシベンゼン、ｐ−メトキシベンゼン、２，４−ジメトキシベンゼン、３，４−ジメトキシベンゼン、３，４，５−トリメトキシベンゼン、４−トリフルオロメトキシベンゼン）もしくはそれらの組合せの産物であって良い。それらの研究は、ＢＢＢにおけるＲＡＧＥ−Ａβ相互作用と、Ａβの血管から脳への正味の輸送、脳内炎症、および脳でのＡβ蓄積を含む病態生理学的な帰結とを阻害することのできる、新しいＡβ低下薬剤を発見するという結果になるに違いない。
【００２９】
化合物は、半自動の化学反応を用いて並行的に合成された。５個の市販の芳香族アルデヒドは、５個の疎水性アミンとの還元的アミノ化反応によって縮合され２５個の第２級アミンが製造された。これら２５の第２級アミンの５つの芳香族塩化アシルでの並行的なアシル化によって最終的な１２５個の３級アミドの化合物ライブラリを提供する。化合物の同一性はマススペクトロメトリーによって検証された（図９）。純度は逆相勾配ＨＰＬＣによって調べられた。９５％以下の純度で単離されたライブラリの構成分子は、アッセイの前に分取ＨＰＬＣ精製にかけられた。
【００３０】
動物
ＡＰＰｓｗ＋／−（Ｔｇ２５７６）マウスはタコニックファームス（ジャーマンタウン， ＮＹ）からのものであった。マウスは標準的な条件（午前７時に開始される１２時間明／暗サイクル、２１±２℃、５５±１０％湿度）で、固い底のケージでウッドチップ床敷上で飼育された。マウスはウレタン（７５０ｍｇ／ｋｇ）およびα-クロラロース（５０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射されることで、麻酔された。マウスにおける全ての実験はＮＩＨのガイドラインに従って行われ、それらはロチェスター大学の動物資源委員会の許可を得られた。
【００３１】
ＡＰＰｓｗ＋／−マウスのＦＰＳ２長期投与
ＡＰＰｓｗ＋／−マウス（ｎ＝５〜６／群）はＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ／日）もしくは生理食塩水を８月齢で始めて２ヶ月間腹腔内投与された。２ヶ月間の治療のあと（ｉ）脳の活性化（ひげ刺激）に対する脳血管反応が測定され、（ｉｉ）オペラント学習、新規物体配置（ＮＯＬ）および新規物体認識（ＮＯＲ）を含む行動テストが実行された。これらの機能テストの後、マウスは犠牲にされ、それらの脳はＡβ４０、Ａβ４２およびアミロイドのレベルが分析された。
【００３２】
脳の活性化に対するＣＢＦ反応
麻酔されたＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおける感覚毛の刺激に対するＣＢＦ反応はレーザードップラーフローメトリー（トランソニックシステムズ，ＢＬＦ２１Ｄ）を用いて測定された。レーザードップラープローブの先端は頭蓋窓の硬膜の上部０．５ｍｍに定位固定に配置された。右の感覚毛は約５ｍｍまで切断され、３−４Ｈｚで１分間、綿棒によってやさしくなでることで、刺激された。直腸の温度は加温された毛布（恒温毛布、ハーバードアパラタス）によって、３７℃に保たれた。感覚毛の刺激によるＣＢＦの増加パーセントは基準値のＣＢＦから取得され、３つの試験より平均化された。
【００３３】
記憶テスト
記憶テストは、習慣、物体および選択試験の３つのフェーズからなる。マウスは始めに空のテスト箱に習慣付けられる。物体試験（物体露出）は、５つの異なった物体を含有するテスト箱へとマウスを置くことからなる。マウスはテスト箱から出され、遅延（記憶期間）のあと、選択試験のためにテスト箱の中に戻される。選択試験は、物体のうちの２つの位置を交換すること（新規物体配置（ＮＯＬ）試験）もしくは一つの物体を新しい物体に置き換えること（新規物体認識（ＮＯＲ）試験）からなる。新規の物体および見覚えのある物体を探索する時間は、識別を提供するために手動で記録された。
【００３４】
ヒトのＡβ４０およびＡβ４２
ＡＰＰｓｗ＋／−マウスは氷冷したヘパリン化生理食塩水で経心臓的に還流され、脳が取り出された。海馬と大脳皮質は氷冷のグアニジン緩衝液（５Ｍ塩酸グアニジン／５０ｍＭ ＴｒｓＣｌ，ｐＨ８．０）内でホモジナイズされ、ヒトＡβ４０およびＡβ４２の判定のために用いられた。手短に言うと、脳（海馬および大脳皮質）と血しょうのヒトＡβ４０およびＡβ４２のレベルは、それぞれ、ヒト特異的ＥＬＩＳＡキット、ＫＨＢ３４８１およびＫＨＢ３４４１を用いて製造者の取扱説明書に従って測定された（インビトロジェン、カールスバッド、ＣＡ）。ヒトＡβ４０およびＡβ４２ＥＬＩＳＡアッセイのために、ヒトＡβのアミノ端に対して特異的なモノクローナル抗体が捕捉抗体として用いられ、Ａβ４０もしくはＡβ４２のどちらかのカルボキシ端に特異的なウサギ抗体が、検出抗体として用いられた。
【００３５】
アミロイド負荷
アセトンで固定されたクリオスタットの脳スライス（１０μｍ）は、１％チオフラビンＳ（シグマアルドリッチ）を含有するＰＢＳによってインキュベートされ、続いて８０％エタノール、９０％エタノール、およびｄｄＨ２Ｏによって洗浄された。チオフラビンＳ陽性のアミロイド負荷は、ＩＭＡＧＥ−ＰＲＯ（登録商標）−Ｐｌｕｓソフトウェア（メディアサイバネティクス）によて測定された。
【００３６】
ＡＰＰｓｗ＋／−マウスのＦＰＳ２による急性処理
感覚運動大脳皮質における安静時ＣＢＦはレーザードップラーフローメトリー（トランソニックシステムズ，ＢＬＦ２１Ｄ）を用いて決定された。レーザードップラープローブの先端は頭蓋窓の硬膜の上部０．５ｍｍに定位固定に配置された。１５分後、安定した状態が得られてから、ＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ）もしくはビヒクルが静脈注射（大腿静脈経由）され、ＣＢＦはさらに７５分間記録された。直腸の温度は加温された毛布（恒温毛布、ハーバードアパラタス）によって、３７℃に保たれた。基準値からのＣＢＦの変化パーセントが取得された。値は平均値±平均値の標準誤差である（ｎ＝３）。
【００３７】
参考文献
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【００３８】
本明細書に引用した特許、特許出願、本、および他の出版物はそれら全体で参照として組み込まれる。
【００３９】
「約」という用語は、測定に関連した統計的不確実性もしくは数量の可変性を示し、当業者ならそれが本発明の実施や本発明の特許性に影響を与えないと理解できであろう。
【００４０】
請求項の意味に入るすべての変更および置換とそれらの法的に等価なものの範囲は、それらの範囲内に包含される。「含有する」と記述する請求項は他の要素を請求項の範囲内に含めることが許される。本発明はまた「含有する」という用語の代わりに、「本質的に〜からなる」（すなわち、本発明の実施に大きく影響しない限り、他の要素を本願請求項の範囲内へ含めることが許される。）もしくは「〜からなる」（すなわち、本発明に通常関連する不純物もしくは重要度の低い機能以外には、請求項内に列挙された要素のみが許される。）という移行フレーズを記述するような請求項によって記述される。これら３つの移行語のいずれも本発明を請求するために用いることが出来る。
【００４１】
本明細書に記載の要素は、請求項に明確に記述されない限り、特許請求の限定と解釈されるべきではないと理解されるべきである。従って、供与されるクレームは、クレームの中に読み込まれる明細書からの限定ではなく、法的保護の範囲を決めるための根拠である。対照的に、従来技術は、特許請求されている発明を予期させるか又は新規性を消失させる具体的な実施形態の範囲まで、本発明から明確に除外される。
【００４２】
さらに、クレームの限定の間には、その関係がそのクレーム中で明瞭に記載されていない限り、特別の関係は意図されていない(例えば、物のクレームにおける成分の並び、又は、方法のクレームにおけるステップの順序は、そのように明瞭に記載されていない限り、そのクレームを限定するものではない)。本明細書に開示されている個々の要素の全ての可能な組合せ及び順列は、本発明の態様であると見なされる。同様に、本発明の記載の一般化は、本発明の一部であると見なされる。
【００４３】
上述の事項から、本発明を、本発明の精神もしくは本質的な特徴を離れることなく、別の特定の形態で具体化することができるということは、当業者には明らかであろう。本発明に対して与えられる法的な保護の範囲は、本明細書によってではなく、添付の特許請求の範囲によって示されるので、本明細書に記載されている実施形態は、単なる例示であって、非限定的なものであると見なされるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】図１はＦＰＳ１（３−クロロ−Ｎ−[２−[シクロヘキシル[[１−[（４−フルオロフェニル）メチル]−１Ｈ−ピロール−２−イル]メチル]アミノ]−２−オキソエチル]−Ｎ−（３−エトキシプロピル）−２，２−ジメチル−（９Ｃｌ）−プロパンアミド）； ＦＰＳ２（３，５−ジニトロ−Ｎ−フェニル−Ｎ−[３−[（３，５，５−トリメチル−１−オキソヘキシル）アミノ]プロピル]−（９Ｃｌ）−ベンズアミド）； およびＦＰＳ３（４−クロロ−Ｎ−[２−（１Ｈ−インド−３−イル）−エチル]−３−ニトロ−Ｎ−（２−ペンチル−３−フェニル−アリル）−ベンズアミド）の化学構造を示す。
【図２】図２はＦＰＳ１、ＦＰＳ２、およびＦＰＳ３の化合物がＡβ４０／ＲＡＧＥの相互作用を妨げていることを示す（Ａ）。ＲＡＧＥがトランスフェクトされたＣＨＯ細胞（四角）もしくは偽トランスフェクトされたＣＨＯ細胞（三角）への１２５Ｉ−Ａβ４０の４℃での特異的な結合。化合物ＦＰＳ１、ＦＰＳ２、およびＦＰＳ３は、ＲＡＧＥをトランスフェクトされたＣＨＯ細胞上でのＡβ−ＲＡＧＥ結合の高親和性の競合阻害剤であり、これはそれらの阻害定数（Ｋｉ）（Ｂ）の低いｎＭ値およびそれぞれのＫｉ／Ｋｄ比（Ｃ）（Ｋｄは図２Ａから得たＡβのＲＡＧＥに対する結合定数である）によって示されるとおりである。１μＭのＡβ４０によるチオバルビツール酸反応物質（ＴＢＡＲＳ）生成）（Ｄ）およびＮＦ−κＢ活性化（Ｅ）は５０ｎＭもしくは５００ｎＭのＦＰＳ２の存在によって阻害された。（Ｆ）ＦＰＳ２はｉｎ ｖｉｔｒｏのセルフリーシステムにおけるＡβ４０／可溶性ＲＡＧＥの相互作用を妨げたが、これはＥＬＩＳＡによって測定された。差の統計的有意性は図２Ｂ−Ｄおよび２Ｆに示される。データは平均値±平均値の標準誤差で、ｎ＝３／群である。
【図３】図３は１．５ｎＭの濃度（ＡＰＰｓｗ＋／−マウスの血しょう濃度に相当する）における、１２５Ｉ−Ａβ４０のＢＢＢを通り抜ける輸送を示し、５−６月齢のＡＰＰｓｗ＋／−マウス（塗りつぶされたバー）および齢の釣り合ったコントロール(中空のバー)においてｉｎ ｖｉｖｏで動脈脳潅流法によってＲＡＧＥ特異的ＩｇＧ（α−ＲＡＧＥ、２０μｇ／ｍｌ）もしくはＦＰＳ２（４．８μｇ／ｍｌ）の存在下または比存在下において測定された。差の統計的有意性が示される。データは平均値±平均値の標準誤差で、ｎ＝３〜４／群である。
【図４】図４はＦＰＳ２による治療によってＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおいて機能転帰が好転した事を示す。（Ａ）ビヒクル（中空のバー）もしくはＦＰＳ２(塗りつぶされたバー)によって治療されたマウスの脳活性化に対する反応での脳血流（ＣＢＦ）の増加パーセント。（Ｂ−Ｃ）ビヒクル(中空のバー)もしくはＦＰＳ２（塗りつぶされたバー）によって治療されたＡＰＰｓｗ＋／−マウスによる探索嗜好パーセントによって表された新規物体配置（Ｂ）および新規物体認識（Ｃ）。ＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ／日）は８月齢のマウスから開始して２ヶ月間にわたり腹腔内に投与された。データは平均値±平均値の標準誤差で、ｎ＝５〜６／群である。
【図５】図５はＦＰＳ２投与後のＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおける安静時脳血流の変化を示す。脳血流の変化はＦＰＳ２（塗りつぶされた三角）もしくはビヒクル（塗りつぶされた四角）を投与されたマウスで９０分以上記録された基準値のパーセントによって表される。ＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ）は７〜９月齢のマウスで静脈内ボーラス投与（矢印）された。データは平均値±平均値の標準誤差で、ｎ＝３／群である。
【図６】図６はＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおいて、ＦＰＳ２が脳からＡβを除去する事を示す。Ａ−Ｂ、ビヒクル(塗りつぶされた四角)もしくはＦＰＳ２（塗りつぶされた三角）によって治療されたＡＰＰｓｗ＋／−マウスの海馬（Ａ）大脳皮質（Ｂ）でのＡβ４０およびＡβ４２のレベル。ＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ／日）は８月齢のマウスから開始して２ヶ月間にわたり腹腔内に投与された。データは平均値±平均値の標準誤差で、ｎ＝５〜６／群である。
【図７】図７はＦＰＳ２がＡＰＰｓｗ＋／−マウスの脳におけるアミロイド負荷を低減させきれいにする事を示す。ビヒクル（中空のバー）もしくはＦＰＳ２（塗りつぶされたバー）によって治療されたＡＰＰｓｗ＋／−マウスのアミロイド負荷された海馬および大脳皮質。ＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ／日）は８月齢のマウスから開始して２ヶ月間にわたり腹腔内に投与された。データは平均値±平均値の標準誤差で、ｎ＝５〜６／群である。
【図８】図８は、ＦＰＳ１、ＦＰＳ２、およびＦＰＳ３に基いた構造−活性の関連性を検定するために策定されたコンビナトリアルなライブラリの構築を図示する。
【図９】図９はＮ１Ａ２Ｂ１（Ｎ−ベンジル−４−クロロ−Ｎ−シクロヘキシル−ベンズアミド）； Ｎ１Ａ２Ｂ２（Ｎ−ベンジル−２，４−ジクロロ−Ｎ−シクロヘキシル−ベンズアミド）； Ｎ２Ａ１Ｂ１（４−クロロ−Ｎ−（３−メチル−ブチル）−Ｎ−フェネチル−ベンズアミド）； Ｎ２Ａ２Ｂ２（Ｎ−ベンジル−２，４−ジクロロ−Ｎ−（３−メチル−ブチル）−ベンズアミド）； Ｎ２Ａ２Ｂ３（Ｎ−ベンジル−Ｎ−（３−メチル−ブチル）−３，５−ジニトロ−ベンズアミド）； Ｎ２Ａ２Ｂ４（Ｎ−ベンジル−Ｎ−（３−メチル−ブチル）−３−ニトロ−ベンズアミド）； Ｎ２Ａ２Ｂ５（Ｎ−ベンジル−４−クロロ−Ｎ−（３−メチル−ブチル）−３−ニトロ−ベンズアミド）； Ｎ３Ａ２Ｂ２（Ｎ−ベンジル−２，４−ジクロロ−Ｎ−（１−エチル−プロピル）−ベンズアミド）； Ｎ３Ａ２Ｂ３ （Ｎ−ベンジル−Ｎ−（１−エチル−プロピル）−３，５−ジニトロ−ベンズアミド）；Ｎ３Ａ２Ｂ５ （Ｎ−ベンジル−４−クロロ−Ｎ−（１−エチル−プロピル）−３−ニトロ−ベンズアミド）；Ｎ４Ａ２Ｂ２ （Ｎ−ベンジル−２，４−ジクロロ−Ｎ−（３−フェニル−プロピル）−ベンズアミド）；およびＮ４Ａ２Ｂ５（Ｎ−ベンジル−４−クロロ−３−ニトロ−Ｎ−（３−フェニル−プロピル）−ベンズアミド）の化学構造を示す。それぞれの化合物の質量は構造に続けて示される。
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は２００６年１月２６日付申請の米国仮出願番号６０／７６２，１１７の便益を主張するものである。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、アルツハイマー病のアミロイドβペプチド（Ａβ）と終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ）との間の特異的な受容体−リガンド相互作用を阻害することに関する。
【０００３】
多くの遺伝学的研究、細胞研究、生化学的研究、および動物実験が、アルツハイマー病（ＡＤ）においてアミロイドβペプチド（Ａβ）の脳における蓄積が重要な事象であり、その一方で、神経原線維変化の形成を含む疾患過程の残りの部分は、Ａβの生成とＡβのクリアランスとの間の不均衡に起因することを示唆する（Ｈａｒｄｙ ＆ Ｓｅｌｋｏｅ，２００２； Ｔａｎｚｉ ｅｔ ａｌ．，２００４； Ｚｌｏｋｏｖｉｃ，２００５）。Ａβは神経毒であり（Ｗａｌｓｈ ｅｔ ａｌ．，２００２； Ｋａｙｅｄ ｅｔ ａｌ．，２００３； Ｇｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００３）、散発性ＡＤおよび家族性ＡＤ（ＦＡＤ）の患者の、脳実質および脳血管においてアミロイドとして沈着する。Ａβの生成の原因となる機構、すなわち、そのより大きな前駆タンパク質（ＡＰＰ）からＡβを切断するタンパク分解酵素であるβセクレターゼおよびγセクレターゼが、明らかにされ（Ｓｅｌｋｏｅ，１９９８； Ｖａｓｓａｒ ｅｔ ａｌ．，１９９９）、それぞれの阻害剤が開発された。しかしながら、増加したＡβの発生は、ＡＰＰ遺伝子（すなわちスウェーデン変異）またはプレセニリン１もしくはプレセニリン２遺伝子内に受け継いだ変異を持つ早発型のＦＡＤの症例のうち、少ない数のものしか説明できなく、しかし後発型のＡＤもしくは９８％以上の全てのＡＤの症例にも寄与しなかった（Ｓｅｌｋｏｅ，２００１； Ｈｏｌｔｚｍａｎ ＆ Ｚｌｏｋｏｖｉｃ，２００６）。新しく現れている概念によると、Ａβのクリアランスの減少、および／もしくは、血液脳関門（ＢＢＢ）を通り抜ける輸送を介した、それの循環系から脳への流入および再移行の増加が、散発性ＡＤにおけるＡβの脳蓄積の原因である可能性がある（Ｔａｎｚｉ ｅｔ ａｌ．，２００４； Ｚｌｏｋｏｖｉｃ，２００５； Ｈｏｌｔｚｍａｎ ＆ Ｚｌｏｋｏｖｉｃ，２００６）。
【０００４】
近年の証拠は、血管内腔のＡβが脳内の沈着したＡβと関連付けられる事を示し、これの示唆することは、血液脳関門（ＢＢＢ）を通り抜ける血管から脳へのおよび脳から血管のＡβの輸送が脳内のＡβを調節するということである（Ｓｈｉｂａｔａ ｅｔ ａｌ．，２０００； ＤｅＭａｔｔｏｓ ｅｔ ａｌ．，２００２ａ； ＤｅＭａｔｔｏｓ ｅｔ ａｌ．，２００２ｂ； Ｂａｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００２； Ｍａｃｋｉｃ ｅｔ ａｌ．，２００２； Ｃａｒｒｏ ｅｔ ａｌ．，２００２； Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００３； Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００４； Ｔａｎｚｉ ｅｔ ａｌ．，２００４； Ｚｌｏｋｏｖｉｃ，２００５； Ｈｏｌｔｚｍａｎ ＆ Ｚｌｏｋｏｖｉｃ，２００６）。動物モデルによる多くの研究（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００４とＨｏｌｔｚｍａｎ ＆ Ｚｌｏｋｏｖｉｃ，２００６に概説される）およびＡＤ患者におけるいくつかの研究は、血しょう中のリポプロテインおよびタンパク質上でのＡβのレベルの上昇を示し（Ｍａｔｓｕｂａｒａ ｅｔ ａｌ．，１９９９； Ｋｕｏ ｅｔ ａｌ．，１９９９）、ＢＢＢを通り抜ける輸送を介した循環するＡβの脳への再移行は、脳のＡβの重要な供給源であるということを示唆してきた。たとえばＡＰＰｓｗ＋／−マウスのようなＡＤのマウスモデルで基本条件おいて（Ｋａｗａｒａｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，２００１）、もしくはたとえば抗Ａβ抗体（ＤｅＭａｔｔｏｓ ｅｔ ａｌ．，２００２ａ）、ｓＲＡＧＥ（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００３）のようなＡβ末梢結合物質による治療ののちに、Ａβ４０／４２の血しょう中の高いレベルが測定されてきたが、それらは血管内腔のＡβと脳のＡβの関連性を確かめることとなる。
【０００５】
ＲＡＧＥは、イムノグロブリン・スーパーファミリーに属する複数のリガンドを持つ受容体で、Ａβを含む広い範囲のリガンドに結合する（Ｓｔｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，２００２）。成体の多くの組織において比較的低いＲＡＧＥの発現が見られるが、リガンドの沈着がＲＡＧＥの発現を引き起こす。ＡβがＡＤにおいてもしくはＡＤの動物モデルにおいて蓄積すると、ＲＡＧＥの発現は、特にｉｎ ｖｉｖｏでのＢＢＢの部位である脳微小血管において上昇する（Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９６； Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００３； ＬａＲｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４； Ｄｏｎａｈｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４）。ＲＡＧＥは、可溶性のＡβとナノモーラーの濃度域で結合し、Ａβによる結合の後に起こる病態生理学的な細胞の反応を媒介する（Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９６； Ｍａｃｋｉｃ ｅｔ ａｌ．，１９９８； Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，２０００）。それらは、ＢＢＢを通り抜ける血しょうＡβの病態生理学的に関連する濃度の輸送、神経血管のストレス、および脳血流（ＣＢＦ）の減少を含む（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００３； ＬａＲｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４）。ＲＡＧＥ遺伝子の欠損は、循環するＡβの脳への再移入を除去することによって、ＡβのＣＮＳプールをそれの末梢プールの影響から保護し、一方、ＡＤのマウスモデルにおいて、可溶性ＲＡＧＥによる全身治療は、循環するＡβを抑制し、脳でのＡβの蓄積と沈着を減少させる（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００３）。このように、Ａβ／ＲＡＧＥのＢＢＢにおける相互作用を妨げる化合物はＡβの脳への再移行を妨げ、Ａβに関連した病態を低減し、そしてＣＢＦの異常調節と認識衰退を改善することができ、このことは重大で有益なＡＤにおける治療効果を有する。
【０００６】
Ａβ／ＲＡＧＥの相互作用を阻害するための化合物、一つもしくはそれ以上のそれら化合物を含有している組成物、ならびに治療方法は、アルツハイマー病と、血液脳関門におけるＡβ−ＲＡＧＥの相互作用、ＲＡＧＥの媒介するＡβの脳への輸送ならびに／または脳血管系もしくは脳実質におけるＲＡＧＥ活性化ＲＡＧＥ活性化を含む他の疾患とに適用可能なように、本明細書に示される。本発明の他の利点は、以下に説明されるか、その説明から当業者にとって明らかであろう。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明はＡβとＲＡＧＥの間の特異的な受容体−リガンドの相互作用を阻害するために用いられる。これは、アルツハイマー病、または血液脳関門におけるＡβ−ＲＡＧＥの相互作用、ＲＡＧＥの媒介するＡβの脳への輸送ならびに／または脳血管系もしくは脳実質におけるＲＡＧＥ活性化ＲＡＧＥ活性化を含む他の疾患を、治療するための薬剤（たとえば治療用および／もしくは予防用組成物）を製造するために用いることが出来る。脳におけるＡβの量および濃度が減少させられ、アルツハイマー病に関連した神経病変が緩和され、脳血流が増加させられ、記憶および／もしくは学習が改善され、またはそれらが組合わされる。特に、第３級アミンＲ１（ＣＯ）ＮＲ２Ｒ３のような化合物、ならびに一つもしくはそれ以上の化合物を含有する組成物は本発明の実施形態とみなされる。Ｒ１は電子欠損のアリール部分（たとえば、モノ−もしくはジ−ハライドならびにモノ−もしくはヂ−ニトロのような一つもしくはそれ以上の電子吸引基によって置換されているアリール部分）であることができる。Ｒ２は疎水性の炭化水素部分（たとえば、直鎖もしくは分岐状の脂肪族の、シクロヘキシルのような脂環式の、直鎖のもしくは分岐状の非環式または環式のオレフィンの、直鎖のもしくは分岐状の非環式または環式のアセチレンの、アリール含有の、ならびに／またはアミン含有のＣ４−Ｃ１８の炭化水素部分であり、任意選択で置換される）であることができる。Ｒ３は電子豊富なアリール部分（たとえば、フラニル、ピロリル、ベンジル、フェニル、アルキルフェニル、アルコキシフェニル、ナフチル、ベンゾフリル、インジル、もしくはキノリル部分であり、任意選択で置換される）であることができ、Ｃ１−Ｃ４アルキルの（たとえば、直鎖もしくは分岐の）または複素環式芳香族化合物のリンカーを有しているかあるいは有していない。たとえば、一つもしくはそれ以上の化合物は、薬剤としてもしくは医薬組成物中に、製造される。
本発明の更なる様態は、以下の詳細な記述および請求項から当業者には明らかであり、これを一般化できるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
ＲＡＧＥは、イムノグロブリン・スーパーファミリーに属する複数のリガンドを持つ受容体で、神経毒のＡβを含む広い範囲のリガンドに結合する。ＲＡＧＥの生物学はそのリガンドの発現もしくは蓄積によって大部分決定される。成体において、多くの組織でのＲＡＧＥは比較的少ない発現であるが、リガンドの蓄積が受容体の発現を引き起こす。既にわれわれおよび他の人が報告してきたように、アルツハイマー病（ＡＤ）および／もしくはＡＤのトランスジェニックマウスモデルにおいて、病原性のＡβが蓄積する時、ＲＡＧＥの発現が脳、特にｉｎ ｖｉｖｏでのＢＢＢの部位である脳微小血管において上昇する。われわれは、ＢＢＢにおけるＲＡＧＥの過剰発現が循環するＡβの脳への流入を増加させ、これは炎症性サイトカインの発現と、神経血管系ストレスと、脳血流（ＣＢＦ）の減少とに関連していることを示した。ＲＡＧＥ遺伝子の欠損が脳へのＢＢＢを通り抜けるＡβの流入（すなわち輸送）を抑制し、脳血管系のストレスを低減し、そしてＣＢＦの異常調節を改善する。ＡＤのマウスモデルにおいて、可溶性ＲＡＧＥ（ｓＲＡＧＥ）の全身投与は循環するＡβを隔離し、それの脳への輸送および再移入を防ぎ、それの脳への蓄積および沈着を減少させる。このように、われわれは、ＢＢＢにおけるＡβ／ＲＡＧＥの相互作用を阻害する化合物は再移入を阻止し、アルツハイマー病において有益な治療効果を持っているはずであるとの仮説を立てた。
【０００９】
ＲＡＧＥがトランスフェクトされたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における一次スクリーンによって、５０００の低分子有機化合物の多様性のあるライブラリからの７つのヒットから、Ａβ／ＲＡＧＥの相互作用への３つの高親和性阻害剤が同定された。それら３つの化合物（ＦＰＳ１、ＦＰＳ２およびＦＰＳ３）はいくつかの構造的特徴を共有する（図１）。３つ全ては第３級アミドであり、大きな疎水性の炭水化物部分と一置換の芳香族部分とによって置換される。一置換芳香族への結合は直接（ＦＰＳ２）であるか、またはアルキル（ＦＰＳ１）もしくは複素環式芳香族（ＦＰＳ３）のスペーサーを介している。化合物のうちの２つはまた、非常に電子欠損に置換されたベンゼン環（ＦＰＳ１は３−ニトロ，４−クロロ；ＦＰＳ２は３，５−ジニトロ）を特色とする。
【００１０】
図２Ａは、ＲＡＧＥがトランスフェクトされたＣＨＯ細胞における、４℃での１２５Ｉ−Ａβ４０のＲＡＧＥに対する飽和結合を示す； Ｋｄ（結合定数）はわれわれが報告した（Ｍａｃｋｉｃ ｅｔ ａｌ．，１９９８）とおり、７５±８ｎＭであった。偽トランスフェクションされた細胞へは結合が無かった。すべての化合物は、親和性の低くなって行くＦＰＳ２＞ＦＰＳ３＞ＦＰＳ１（図２Ｂ）の順で、ＲＡＧＥがトランスフェクトされたＣＨＯ細胞におけるＡβ４０のＲＡＧＥへの結合のＫｄ（結合定数）に近いＫｉ（阻害定数）で、Ａβ−ＲＡＧＥの結合を競合的に阻害する。それぞれのＫｉ／Ｋｄ比はそれぞれ０．４５、１．６および２．６であり（図２Ｃ）、ここでＫｉは化合物の阻害定数で、ＫｄはＡβ−ＲＡＧＥの結合定数である。われわれはもっとも高い親和性の阻害剤としてＦＰＳ２に焦点を当てた。ＲＡＧＥがトランスフェクトされたＣＨＯ細胞において、ＦＰＳ２はＡβ／ＲＡＧＥによって引き起こされる酸化ストレス(図２Ｄ)および核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）の移行（図２Ｅ）を阻害する。それはまたｉｎ ｖｉｔｒｏのセルフリーシステムにおけるＡβ４０／ＲＡＧＥ相互作用をも阻害する。
【００１１】
動脈脳潅流法（ＬａＲｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４）は、４〜６月齢のＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおける、循環する１２５Ｉで標識されたＡβ４０のＲＡＧＥが介在するＢＢＢを通り抜ける輸送を、ＦＰＳ２が阻止するかどうかを究明するために用いられた。それらのマウスでの脳微小血管におけるＲＡＧＥの発現が同腹子のコントロールに比べて約５倍増加していることは、われわれおよび他の人が報告してきた（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００３；Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００４）。図３は、血しょうの動脈流入の２０μｇ／ｍｌという高い濃度のＲＡＧＥ特異的ＩｇＧがＢＢＢを通り抜けるＡβの輸送の８０％以上を阻害し、一方、４．８μｇ／ｍｌのＦＰＳ２が、ＢＢＢを通り抜けるＡβの輸送を破壊し、結果として１００％阻害になることを示す。(図３)。このデータは、ＦＰＳ２および恐らくそれと関連する化合物がｉｎ ｖｉｖｏにおける循環するＡβのＢＢＢを通り抜ける流入と再移行とを阻止する可能性を持ち、これはＡＤの動物モデルにおいて、Ａβの脳蓄積とアミロイド病変とを低減し、ＣＢＦの異常調節と行動とを改善することを示唆する。
【００１２】
本発明の化合物は、本明細書に開示されている一つもしくはそれ以上の有用性を伴って、薬剤としてもしくは組成物を調合するために使用することが出来る。「医薬」組成物はさらに、生理学的に利用可能なビヒクルを含有し、無菌条件下で製造される。組成物はさらに、その作用点に化合物を送達するために有用な構成要素をさらに含有することができる。そのようなビヒクルおよび担体の選択と化合物への添加は、当業者における技術の程度内のことである。化合物および組成物はｉｎ ｖｉｔｒｏで培養細胞へ、ｉｎ ｖｉｖｏで生体内へ、あるいはｅｘ ｖｉｖｏで将来同じ被治療者もしくは他の被治療者の生体へと戻されるであろう被治療者の外部の細胞へと投与出来る。被治療者は、治療が必要なヒト（たとえば、アルツハイマー病およびその進行に侵されたかまたはその進行の危険のある患者）もしくはアルツハイマー病あるいはその病変の動物モデルである。
【００１３】
「医薬」組成物は全身循環、血液脳関門、脳血管系もしくは脳実質への送達に適応した調合で投与されても良い。代替的に、組成物は培地中に投与されても良い。活性化合物に加えて、そのような組成物は生理学的に利用可能なビヒクル、担体、および他の投与を円滑にするためおよび／もしくは吸収を促進するための構成要素（たとえば、生理食塩水、ジメチルスルホキシド、脂質、ポリマー、親和性に基いた細胞特異的標的システム）を含有出来る。組成物は、ゲル、スポンジ、もしくは透過性のマトリックスなどに組み込まれていて（たとえば、ペレットもしくはディスクとして成型される）も良く、持続した局所での放出のために、内皮近傍に置かれても良い。それは単回投与で、あるいは異なった時間に投与される反復投与で、投与されても良い。
【００１４】
医薬組成物はどのような既知の経路によっても投与できる。一例として、組成物は、粘膜、肺、局所的もしくは他の局部的なまたは全身性の経路（たとえば、腸内のおよび非経口の）によって投与されうる。用語「非経口」は皮下、動脈内、皮内、筋肉内、くも膜下、静脈内、および他の投与もしくは注入技術を限定無しに含有する。特に、一つもしくはそれ以上の有効量の化合物がＡβとＲＡＧＥの相互作用する場所に存在する。
【００１５】
投与の量とタイミング、調合、および投与経路の適切な選択は、アルツハイマー病の、もしくはその危険にある被治療者での望ましい反応の達成の目標（すなわち、有効性）に沿って行われ、不適切な毒性やそれに加えて他の害毒が避けられる（すなわち、安全性）。それゆえ、「効果的」は、望ましい効果を達成するためにする状況の所定の操作を含有するような選択を指している。
【００１６】
一日に一度の短い時間のボーラス投与は便利な投与スケジュールである。代替的に、効果的な毎日の投与は、投与の目的のために、たとえば、一日に二回から十二回の投与のように複数回の投与に分割できる。医薬組成物中の有効成分の投与量レベルはまた、被治療者内、特に脳の血管内皮のもしくは全身循環系の内部ならびに周辺において化合物の一時的なもしくは持続した濃度を達成し、そして、望ましい治療のもしくは予防の反応が得られるように変更させることが出来る。しかしながら、望ましい治療のもしくは予防の効果を達成するために望まれるものより低いレベルの投与から開始し、効果が達成されるまで投与量を徐々に上昇することは当業者の範囲内のことである。
【００１７】
投与される化合物の量は、たとえば、化合物の生物活性および生物利用効率（たとえば、体内での半減期、安定性、代謝）、化合物の化学的性質（たとえば、分子量、疎水性、および溶解度）、投与の経路およびスケジュール等のような、当業者に既知の因子に依存する。全身投与において、化合物もしくはその代謝体の血液脳関門を介する通り抜けは危機的でない。ある特定の被治療者に対して達成される特定の投与量レベルは、年齢、性別、健康状態、病歴、体重、一つもしくはそれ以上の他の薬剤、および病気の重篤度を含む様々な因子によることが出来ることは理解されるべきである。
【００１８】
アルツハイマー病の「治療」という用語は、とりわけ、被治療者における一つもしくはそれ以上の症状を軽減するかもしくは緩和し、一つもしくはそれ以上の症状が悪化するかもしくは進行するのを防ぎ、回復を促進するかもしくは、予後を改善し、ならびに／または、それらから免れている被治療者において病気を防ぎ、また同様に存在する病気の進行を遅らせるかまたは低減させることを指している。特定の被治療者に対して、症状の改善、その悪化、回帰、もしくは進行は、客観的尺度もしくは主観的尺度によって決定されても良い。治療の有効性は、発病率もしくは死亡率の改善によって測ることが可能である。予防的方法（たとえば、病気の進行もしくは再発を防ぐこと）はまた、治療と考えられる。
【００１９】
被治療者へ投与される量は、好ましくは、投与の結果得られる利点を超える毒性を誘発しない量である。さらに、目標は、数の低減、重篤度の減少、および／もしくは、別の点では、標準的に認識されている治療と比較して病気の症状からの苦痛を軽減することである。
【００２０】
現行規則に従った化合物の製造は、政府機関（たとえば、米国食品医薬品局および欧州医薬品庁）による医薬品安全性試験実施基準（ＧＬＰ）および医薬品製造管理および品質管理基準（ＧＭＰ）の下、管理される。これは、ＱＡ／ＱＣの監督と同様、正確で完全な記録保持を要求する。機関および機関の委員会による患者プロトコルの監督はまた、インフォームドコンセントが得られていること、安全性、生物活性、適切な服用、生産品の有効性がフェーズにおいて研究されていること、結果が統計的に有意であること、ならびに倫理ガイドラインに従っていることを確認すると想定される。動物モデルの使用のプロトコールと有毒化学薬品の使用は、同様の監督および規則の順守が要求される。
【００２１】
ＢＢＢにおけるＲＡＧＥはＡβに対する主要な流入受容体で、その輸送、脳内の蓄積および保持、サイトカイン反応、およびＣＢＦの抑制を媒介する（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００３； ＬａＲｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４）。本明細書でのわれわれの研究は、ＢＢＢにおけるＲＡＧＥは、Ａβ−血管の相互作用の、脳アミロイド症の進行を含む病原性の帰結を阻害するための主要な治療の標的であることを示す。これらのデータは、ＡＰＰｓｗ＋／−マウスをＦＰＳ２または関連した化合物ＦＰＳ３およびＦＰＳ１で治療することは（１）βアミロイド症の進行を妨げ、（２）ＣＢＦの異常調節を改善し、（３）行動を改善するというわれわれの提言を強く支持する。ＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおいて、ＲＡＧＥの介在するＡβのＢＢＢを通り抜ける輸送に対するｉｎ ｖｉｖｏでのＦＰＳ２の阻害効果が明らかにされた。ＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおいて、Ａβの病変、ＣＢＦの異常調節、および行動に対するＦＰＳ２の治療効果が評価された。本発明の他の化合物は、アルツハイマー病への薬効（複数可）が同様に明らかにされるであろう。
【００２２】
アミロイド仮説によると、Ａβの脳内での蓄積はＡＤの病原に寄与する最重要な事象である（Ｈａｒｄｙ ＆ Ｓｅｌｋｏｅ， ２００２）。最近の証拠は、血管内腔のＡβは脳内のＡβ沈着に関連していることを示す。このことは、ＢＢＢを通り抜けての血管から脳へのおよび脳から血管へのＡβの輸送経路が脳でのＡβのレベルを調節することを示唆する（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００３； Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００４； Ｔａｎｚｉ ｅｔ ａｌ．，２００４； Ｚｌｏｋｏｖｉｃ， ２００５、 Ｈｏｌｔｚｍａｎ ＆ Ｚｌｏｋｏｖｉｃ， ２００６）。
【００２３】
ＢＢＢにおいて、ＲＡＧＥは、脳血管系ストレス、脳でのＡβの蓄積、およびＡβの関与する病変の進行と関連しているＡβのＣＮＳへの輸送を媒介する（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００３； ＬａＲｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４； Ｄｏｎａｈｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４）。ＡＤおよびＡＤの動物モデルのＢＢＢにおける脳微小血管でのＲＡＧＥの発現増加は血しょうのＡβの脳への輸送の増大、ＣＢＦの減少、および炎症性サイトカインの発現という結果になるであろう。ＲＡＧＥ遺伝子の欠損は、循環するＡβの脳への流入とＣＢＦや炎症へのＡβが誘発する変化を解消する。ＡＤのマウスモデルにおいて、可溶性のＲＡＧＥ（ｓＲＡＧＥ）は脳でのＡβの蓄積をさまたげる。われわれはここで、ＢＢＢにおいてＲＡＧＥ／Ａβの相互作用を阻害する化合物は、Ａβの輸送、脳内炎症、潅流低下および脳での蓄積への影響を防ぐことで、Ａβを減少させる薬剤として作用するであろうとする仮説を立てた。
【００２４】
本発明の化合物の治療効果はＡＤの動物モデルにおいて判定できる。ＡＰＰｓｗ＋／−マウスはｓＲＡＧＥ（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．， ２００３を参照のこと）について記述されたように一つもしくはそれ以上の化合物によって治療できる。マウスは、Ａβ負荷、Ａβ４０とＡβ４２のレベル、および可溶性／不溶性画分を測定するために犠牲にされた。結果は、化合物はＡβの蓄積とアミロイド負荷を実質的に減少させるというわれわれの仮説を確かにした。脳活性化によるＣＢＦの増加に対する治療効果を判定するために、ＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおけるひげ刺激に対するＣＢＦ反応を測定できる。空間記憶と空間学習のためのバーンズ迷路（Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．， １９９５）、一般活動性、空間パターニング、運動、運動失調、ふるえ、発作などのためのフォースプレート・アクトメーター（Ｚａｒｃｏｎｅ， ２０００）、そして、記憶と学習における空間変更と注意のためオペラントチャンバー（Ｍａｒｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．， ２０００）などの一連の行動テストも行うことが出来る。
【００２５】
アッセイ（すなわち、ＴＵＮＥＬ、ヘキスト染色、ＬＤＨ遊離、陰性ＷＳＴ−８）において、化合物の毒性は観察されなかったが、一つもしくは全ての化合物がｉｎ ｖｉｖｏで毒性であるという可能性はある。化合物がｉｎ ｉｖｏ毒性であるか判定するために、血球計算、ヘモグロビンレベル、電解質、グルコース、血圧、心拍数、呼吸、血液ガス、およびｐＨが測定されるであろう。腎機能（尿素、クレアチン）、肝酵素、一般活動性、空間パターニング、運動、運動失調、ふるえ、注意、および記憶と学習における空間変更などもまた、調べられても良い。化合物がＡβ／ＲＡＧＥ結合の特異的な阻害剤でない可能性がある。この問題に当たり、化合物が特異的にＡβ−ＲＡＧＥの結合をさまたげるか、または破壊することを確認するために、固定したＬＲＰ、アポリポプロテインＥ、およびＪ，α２マクログロブリン、そして、Ａβに対する推定される受容体、Ａβに対する結合タンパク質を伴うセルフリーシステムを用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ分析を行うことが可能である。
【００２６】
ＡＰＰｓｗ＋／−マウスは、８月齢から開始して２ヶ月の間、毎日、腹腔内注射によって、ＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ）で、もしくはビヒクルで治療された。治療期間が終了するとき、脳の活性化のための脳血流（ＣＢＦ）における機能的変化および記憶テストが判定された。ＦＰＳ２およびビヒクル治療マウスにおける脳および血しょうのＡβレベルが決定された。ビヒクルと比較して、ＦＰＳ２による長期治療は脳の活性化時のＣＢＦ約５０％増加させ、そして、新規物体配置および新規物体認識によって判定される記憶を有意に増加させた（図４）。ＦＰＳ２が安静時ＣＢＦを変化させるかどうか立証するため、急性試験もまた実施された。それらの研究において、ＡＰＰｓｗ＋／−（７〜９月齢）へのＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ）の静脈内ボーラス投与が、安静時ＣＢＦを約３５％一時的に増加させ、２５〜３０分後に頂点に達した（図５）。
【００２７】
長期治療されたマウスにおいて、ビヒクルに比べて、ＦＰＳ２治療されたマウスでは、海馬でのＡβ４０とＡβ４２のレベルはそれぞれ、約８５％と約９０％減少した（図６Ａ）。同様に、脳皮質でのＡβ４０とＡβ４２のレベルはそれぞれ、約８５％と約９０％減少した(図６Ｂ)。海馬および大脳皮質におけるチオフラビンＳ陽性領域(アミロイド負荷)はビヒクルと比較してＦＰＳ２治療マウスにおいて、有意に約８５％減少した(図７)。
【００２８】
はじめの三つの化合物はＡβ／ＲＡＧＥ相互作用を阻害するのに十分に効果的でなく、群内の他の化合物がより効果的である可能性がある。それゆえ、ＦＰＳ１およびＦＰＳ２の構造の共通性、構造・活性研究は１２５の構造的に関連した化合物のライブラリを合成し分析することによって実行された（図８を参照のこと）。たとえば、第３級アミド、Ｒ１（ＣＯ）ＮＲ２Ｒ３はＲ１（たとえば、２−フルオロベンゼン、４−フルオロベンゼン、２，４−ジフルオロベンゼン、３−クロロ−４−フルオロベンゼン、４−クロロ−３−フルオロベンゼン、３，５−ジフルオロベンゼン）、Ｒ２（たとえば、エチル、プロピル、ブチル、ジメチルプロパン、ヘキシル、ヘプチル、オクチル）、Ｒ３（たとえば、ｏ−メトキシベンゼン、ｐ−メトキシベンゼン、２，４−ジメトキシベンゼン、３，４−ジメトキシベンゼン、３，４，５−トリメトキシベンゼン、４−トリフルオロメトキシベンゼン）もしくはそれらの組合せの産物であって良い。それらの研究は、ＢＢＢにおけるＲＡＧＥ−Ａβ相互作用と、Ａβの血管から脳への正味の輸送、脳内炎症、および脳でのＡβ蓄積を含む病態生理学的な帰結とを阻害することのできる、新しいＡβ低下薬剤を発見するという結果になるに違いない。
【００２９】
化合物は、半自動の化学反応を用いて並行的に合成された。５個の市販の芳香族アルデヒドは、５個の疎水性アミンとの還元的アミノ化反応によって縮合され２５個の第２級アミンが製造された。これら２５の第２級アミンの５つの芳香族塩化アシルでの並行的なアシル化によって最終的な１２５個の３級アミドの化合物ライブラリを提供する。化合物の同一性はマススペクトロメトリーによって検証された（図９）。純度は逆相勾配ＨＰＬＣによって調べられた。９５％以下の純度で単離されたライブラリの構成分子は、アッセイの前に分取ＨＰＬＣ精製にかけられた。
【００３０】
動物
ＡＰＰｓｗ＋／−（Ｔｇ２５７６）マウスはタコニックファームス（ジャーマンタウン， ＮＹ）からのものであった。マウスは標準的な条件（午前７時に開始される１２時間明／暗サイクル、２１±２℃、５５±１０％湿度）で、固い底のケージでウッドチップ床敷上で飼育された。マウスはウレタン（７５０ｍｇ／ｋｇ）およびα-クロラロース（５０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射されることで、麻酔された。マウスにおける全ての実験はＮＩＨのガイドラインに従って行われ、それらはロチェスター大学の動物資源委員会の許可を得られた。
【００３１】
ＡＰＰｓｗ＋／−マウスのＦＰＳ２長期投与
ＡＰＰｓｗ＋／−マウス（ｎ＝５〜６／群）はＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ／日）もしくは生理食塩水を８月齢で始めて２ヶ月間腹腔内投与された。２ヶ月間の治療のあと（ｉ）脳の活性化（ひげ刺激）に対する脳血管反応が測定され、（ｉｉ）オペラント学習、新規物体配置（ＮＯＬ）および新規物体認識（ＮＯＲ）を含む行動テストが実行された。これらの機能テストの後、マウスは犠牲にされ、それらの脳はＡβ４０、Ａβ４２およびアミロイドのレベルが分析された。
【００３２】
脳の活性化に対するＣＢＦ反応
麻酔されたＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおける感覚毛の刺激に対するＣＢＦ反応はレーザードップラーフローメトリー（トランソニックシステムズ，ＢＬＦ２１Ｄ）を用いて測定された。レーザードップラープローブの先端は頭蓋窓の硬膜の上部０．５ｍｍに定位固定に配置された。右の感覚毛は約５ｍｍまで切断され、３−４Ｈｚで１分間、綿棒によってやさしくなでることで、刺激された。直腸の温度は加温された毛布（恒温毛布、ハーバードアパラタス）によって、３７℃に保たれた。感覚毛の刺激によるＣＢＦの増加パーセントは基準値のＣＢＦから取得され、３つの試験より平均化された。
【００３３】
記憶テスト
記憶テストは、習慣、物体および選択試験の３つのフェーズからなる。マウスは始めに空のテスト箱に習慣付けられる。物体試験（物体露出）は、５つの異なった物体を含有するテスト箱へとマウスを置くことからなる。マウスはテスト箱から出され、遅延（記憶期間）のあと、選択試験のためにテスト箱の中に戻される。選択試験は、物体のうちの２つの位置を交換すること（新規物体配置（ＮＯＬ）試験）もしくは一つの物体を新しい物体に置き換えること（新規物体認識（ＮＯＲ）試験）からなる。新規の物体および見覚えのある物体を探索する時間は、識別を提供するために手動で記録された。
【００３４】
ヒトのＡβ４０およびＡβ４２
ＡＰＰｓｗ＋／−マウスは氷冷したヘパリン化生理食塩水で経心臓的に還流され、脳が取り出された。海馬と大脳皮質は氷冷のグアニジン緩衝液（５Ｍ塩酸グアニジン／５０ｍＭ ＴｒｓＣｌ，ｐＨ８．０）内でホモジナイズされ、ヒトＡβ４０およびＡβ４２の判定のために用いられた。手短に言うと、脳（海馬および大脳皮質）と血しょうのヒトＡβ４０およびＡβ４２のレベルは、それぞれ、ヒト特異的ＥＬＩＳＡキット、ＫＨＢ３４８１およびＫＨＢ３４４１を用いて製造者の取扱説明書に従って測定された（インビトロジェン、カールスバッド、ＣＡ）。ヒトＡβ４０およびＡβ４２ＥＬＩＳＡアッセイのために、ヒトＡβのアミノ端に対して特異的なモノクローナル抗体が捕捉抗体として用いられ、Ａβ４０もしくはＡβ４２のどちらかのカルボキシ端に特異的なウサギ抗体が、検出抗体として用いられた。
【００３５】
アミロイド負荷
アセトンで固定されたクリオスタットの脳スライス（１０μｍ）は、１％チオフラビンＳ（シグマアルドリッチ）を含有するＰＢＳによってインキュベートされ、続いて８０％エタノール、９０％エタノール、およびｄｄＨ２Ｏによって洗浄された。チオフラビンＳ陽性のアミロイド負荷は、ＩＭＡＧＥ−ＰＲＯ（登録商標）−Ｐｌｕｓソフトウェア（メディアサイバネティクス）によて測定された。
【００３６】
ＡＰＰｓｗ＋／−マウスのＦＰＳ２による急性処理
感覚運動大脳皮質における安静時ＣＢＦはレーザードップラーフローメトリー（トランソニックシステムズ，ＢＬＦ２１Ｄ）を用いて決定された。レーザードップラープローブの先端は頭蓋窓の硬膜の上部０．５ｍｍに定位固定に配置された。１５分後、安定した状態が得られてから、ＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ）もしくはビヒクルが静脈注射（大腿静脈経由）され、ＣＢＦはさらに７５分間記録された。直腸の温度は加温された毛布（恒温毛布、ハーバードアパラタス）によって、３７℃に保たれた。基準値からのＣＢＦの変化パーセントが取得された。値は平均値±平均値の標準誤差である（ｎ＝３）。
【００３７】
参考文献
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【００３８】
本明細書に引用した特許、特許出願、本、および他の出版物はそれら全体で参照として組み込まれる。
【００３９】
「約」という用語は、測定に関連した統計的不確実性もしくは数量の可変性を示し、当業者ならそれが本発明の実施や本発明の特許性に影響を与えないと理解できであろう。
【００４０】
請求項の意味に入るすべての変更および置換とそれらの法的に等価なものの範囲は、それらの範囲内に包含される。「含有する」と記述する請求項は他の要素を請求項の範囲内に含めることが許される。本発明はまた「含有する」という用語の代わりに、「本質的に〜からなる」（すなわち、本発明の実施に大きく影響しない限り、他の要素を本願請求項の範囲内へ含めることが許される。）もしくは「〜からなる」（すなわち、本発明に通常関連する不純物もしくは重要度の低い機能以外には、請求項内に列挙された要素のみが許される。）という移行フレーズを記述するような請求項によって記述される。これら３つの移行語のいずれも本発明を請求するために用いることが出来る。
【００４１】
本明細書に記載の要素は、請求項に明確に記述されない限り、特許請求の限定と解釈されるべきではないと理解されるべきである。従って、供与されるクレームは、クレームの中に読み込まれる明細書からの限定ではなく、法的保護の範囲を決めるための根拠である。対照的に、従来技術は、特許請求されている発明を予期させるか又は新規性を消失させる具体的な実施形態の範囲まで、本発明から明確に除外される。
【００４２】
さらに、クレームの限定の間には、その関係がそのクレーム中で明瞭に記載されていない限り、特別の関係は意図されていない(例えば、物のクレームにおける成分の並び、又は、方法のクレームにおけるステップの順序は、そのように明瞭に記載されていない限り、そのクレームを限定するものではない)。本明細書に開示されている個々の要素の全ての可能な組合せ及び順列は、本発明の態様であると見なされる。同様に、本発明の記載の一般化は、本発明の一部であると見なされる。
【００４３】
上述の事項から、本発明を、本発明の精神もしくは本質的な特徴を離れることなく、別の特定の形態で具体化することができるということは、当業者には明らかであろう。本発明に対して与えられる法的な保護の範囲は、本明細書によってではなく、添付の特許請求の範囲によって示されるので、本明細書に記載されている実施形態は、単なる例示であって、非限定的なものであると見なされるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】図１はＦＰＳ１（３−クロロ−Ｎ−[２−[シクロヘキシル[[１−[（４−フルオロフェニル）メチル]−１Ｈ−ピロール−２−イル]メチル]アミノ]−２−オキソエチル]−Ｎ−（３−エトキシプロピル）−２，２−ジメチル−（９Ｃｌ）−プロパンアミド）； ＦＰＳ２（３，５−ジニトロ−Ｎ−フェニル−Ｎ−[３−[（３，５，５−トリメチル−１−オキソヘキシル）アミノ]プロピル]−（９Ｃｌ）−ベンズアミド）； およびＦＰＳ３（４−クロロ−Ｎ−[２−（１Ｈ−インド−３−イル）−エチル]−３−ニトロ−Ｎ−（２−ペンチル−３−フェニル−アリル）−ベンズアミド）の化学構造を示す。
【図２】図２はＦＰＳ１、ＦＰＳ２、およびＦＰＳ３の化合物がＡβ４０／ＲＡＧＥの相互作用を妨げていることを示す（Ａ）。ＲＡＧＥがトランスフェクトされたＣＨＯ細胞（四角）もしくは偽トランスフェクトされたＣＨＯ細胞（三角）への１２５Ｉ−Ａβ４０の４℃での特異的な結合。化合物ＦＰＳ１、ＦＰＳ２、およびＦＰＳ３は、ＲＡＧＥをトランスフェクトされたＣＨＯ細胞上でのＡβ−ＲＡＧＥ結合の高親和性の競合阻害剤であり、これはそれらの阻害定数（Ｋｉ）（Ｂ）の低いｎＭ値およびそれぞれのＫｉ／Ｋｄ比（Ｃ）（Ｋｄは図２Ａから得たＡβのＲＡＧＥに対する結合定数である）によって示されるとおりである。１μＭのＡβ４０によるチオバルビツール酸反応物質（ＴＢＡＲＳ）生成）（Ｄ）およびＮＦ−κＢ活性化（Ｅ）は５０ｎＭもしくは５００ｎＭのＦＰＳ２の存在によって阻害された。（Ｆ）ＦＰＳ２はｉｎ ｖｉｔｒｏのセルフリーシステムにおけるＡβ４０／可溶性ＲＡＧＥの相互作用を妨げたが、これはＥＬＩＳＡによって測定された。差の統計的有意性は図２Ｂ−Ｄおよび２Ｆに示される。データは平均値±平均値の標準誤差で、ｎ＝３／群である。
【図３】図３は１．５ｎＭの濃度（ＡＰＰｓｗ＋／−マウスの血しょう濃度に相当する）における、１２５Ｉ−Ａβ４０のＢＢＢを通り抜ける輸送を示し、５−６月齢のＡＰＰｓｗ＋／−マウス（塗りつぶされたバー）および齢の釣り合ったコントロール(中空のバー)においてｉｎ ｖｉｖｏで動脈脳潅流法によってＲＡＧＥ特異的ＩｇＧ（α−ＲＡＧＥ、２０μｇ／ｍｌ）もしくはＦＰＳ２（４．８μｇ／ｍｌ）の存在下または比存在下において測定された。差の統計的有意性が示される。データは平均値±平均値の標準誤差で、ｎ＝３〜４／群である。
【図４】図４はＦＰＳ２による治療によってＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおいて機能転帰が好転した事を示す。（Ａ）ビヒクル（中空のバー）もしくはＦＰＳ２(塗りつぶされたバー)によって治療されたマウスの脳活性化に対する反応での脳血流（ＣＢＦ）の増加パーセント。（Ｂ−Ｃ）ビヒクル(中空のバー)もしくはＦＰＳ２（塗りつぶされたバー）によって治療されたＡＰＰｓｗ＋／−マウスによる探索嗜好パーセントによって表された新規物体配置（Ｂ）および新規物体認識（Ｃ）。ＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ／日）は８月齢のマウスから開始して２ヶ月間にわたり腹腔内に投与された。データは平均値±平均値の標準誤差で、ｎ＝５〜６／群である。
【図５】図５はＦＰＳ２投与後のＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおける安静時脳血流の変化を示す。脳血流の変化はＦＰＳ２（塗りつぶされた三角）もしくはビヒクル（塗りつぶされた四角）を投与されたマウスで９０分以上記録された基準値のパーセントによって表される。ＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ）は７〜９月齢のマウスで静脈内ボーラス投与（矢印）された。データは平均値±平均値の標準誤差で、ｎ＝３／群である。
【図６】図６はＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおいて、ＦＰＳ２が脳からＡβを除去する事を示す。Ａ−Ｂ、ビヒクル(塗りつぶされた四角)もしくはＦＰＳ２（塗りつぶされた三角）によって治療されたＡＰＰｓｗ＋／−マウスの海馬（Ａ）大脳皮質（Ｂ）でのＡβ４０およびＡβ４２のレベル。ＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ／日）は８月齢のマウスから開始して２ヶ月間にわたり腹腔内に投与された。データは平均値±平均値の標準誤差で、ｎ＝５〜６／群である。
【図７】図７はＦＰＳ２がＡＰＰｓｗ＋／−マウスの脳におけるアミロイド負荷を低減させきれいにする事を示す。ビヒクル（中空のバー）もしくはＦＰＳ２（塗りつぶされたバー）によって治療されたＡＰＰｓｗ＋／−マウスのアミロイド負荷された海馬および大脳皮質。ＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ／日）は８月齢のマウスから開始して２ヶ月間にわたり腹腔内に投与された。データは平均値±平均値の標準誤差で、ｎ＝５〜６／群である。
【図８】図８は、ＦＰＳ１、ＦＰＳ２、およびＦＰＳ３に基いた構造−活性の関連性を検定するために策定されたコンビナトリアルなライブラリの構築を図示する。
【図９】図９はＮ１Ａ２Ｂ１（Ｎ−ベンジル−４−クロロ−Ｎ−シクロヘキシル−ベンズアミド）； Ｎ１Ａ２Ｂ２（Ｎ−ベンジル−２，４−ジクロロ−Ｎ−シクロヘキシル−ベンズアミド）； Ｎ２Ａ１Ｂ１（４−クロロ−Ｎ−（３−メチル−ブチル）−Ｎ−フェネチル−ベンズアミド）； Ｎ２Ａ２Ｂ２（Ｎ−ベンジル−２，４−ジクロロ−Ｎ−（３−メチル−ブチル）−ベンズアミド）； Ｎ２Ａ２Ｂ３（Ｎ−ベンジル−Ｎ−（３−メチル−ブチル）−３，５−ジニトロ−ベンズアミド）； Ｎ２Ａ２Ｂ４（Ｎ−ベンジル−Ｎ−（３−メチル−ブチル）−３−ニトロ−ベンズアミド）； Ｎ２Ａ２Ｂ５（Ｎ−ベンジル−４−クロロ−Ｎ−（３−メチル−ブチル）−３−ニトロ−ベンズアミド）； Ｎ３Ａ２Ｂ２（Ｎ−ベンジル−２，４−ジクロロ−Ｎ−（１−エチル−プロピル）−ベンズアミド）； Ｎ３Ａ２Ｂ３ （Ｎ−ベンジル−Ｎ−（１−エチル−プロピル）−３，５−ジニトロ−ベンズアミド）；Ｎ３Ａ２Ｂ５ （Ｎ−ベンジル−４−クロロ−Ｎ−（１−エチル−プロピル）−３−ニトロ−ベンズアミド）；Ｎ４Ａ２Ｂ２ （Ｎ−ベンジル−２，４−ジクロロ−Ｎ−（３−フェニル−プロピル）−ベンズアミド）；およびＮ４Ａ２Ｂ５（Ｎ−ベンジル−４−クロロ−３−ニトロ−Ｎ−（３−フェニル−プロピル）−ベンズアミド）の化学構造を示す。それぞれの化合物の質量は構造に続けて示される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルツハイマー病のアミロイドβペプチド（Ａβ）と終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ）との間の特異的な受容体−リガンド相互作用、もしくはＲＡＧＥの活性化を阻害する方法であって、少なくともいくらかのＡβ／ＲＡＧＥの相互作用が阻害されるように一つもしくはそれ以上のＲ１（ＣＯ）ＮＲ２Ｒ３の化学式の第３級アミドの有効量を投与することを含有し、ここでＲ１が電子欠損のアリール部分で、Ｒ２が疎水性の炭化水素部分で、そしてＲ３が電子豊富なアリール部分で直接にもしくは任意選択のリンカーによって結合されている、方法。
【請求項２】
Ｒ１がアリール部分であり、一つもしくはそれ以上の電子吸引基によって置換されている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒ２が、直鎖もしくは分岐状の脂肪族の、脂環式の、直鎖のもしくは分岐状の非環式または環式のオレフィンの、直鎖のもしくは分岐状の非環式または環式のアセチレンの、アリール含有の、ならびに／またはアミン含有のＣ４からＣ１８の炭化水素部分であり、任意選択で置換される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ３が、フラニル、ピロリル、ベンジル、フェニル、アルキルフェニル、アルコキシフェニル、ナフチル、ベンゾフリル、インジル、もしくはキノリル部分であり、任意選択で置換される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
Ｒ３が、Ｃ１からＣ４のアルキルの、もしくは複素環式芳香族のリンカーによって結合されている、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記一つもしくはそれ以上の第３級アミドが図１と図９とに図示される化合物を含む群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記一つもしくはそれ以上の第３級アミドが、治療の必要に応じて被治療者にｉｎ ｖｉｖｏで医薬組成物として投与される、請求項１から６のいずれか一つに記載の方法。
【請求項８】
ＲＡＧＥによって媒介されるＡβの被治療者の脳への輸送の少なくともいくらかが、治療によって阻害される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
被治療者の血液脳関門におけるＡβによるＲＡＧＥの活性化の少なくともいくらかが、治療によって阻害される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
少なくともＡβの被治療者の脳におけるその量や濃度が治療によって減少する、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも被治療者の脳におけるアルツハイマー病に関連した神経病変が治療によって軽減する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも被治療者における脳血流が治療によって増加する、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
少なくとも被治療者における記憶および／もしくは学習が治療によって改善する、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
アルツハイマー病、または血液脳関門におけるＡβ−ＲＡＧＥ相互作用、ＲＡＧＥによって媒介されるＡβの脳への輸送および脳血管系もしくは脳実質におけるＲＡＧＥの活性化からなる群の少なくとも一つを含む他の疾患を、治療するための薬剤を製造するための一つもしくはそれ以上の第３級アミドの使用。
【請求項１５】
図１と図９とに図示される化合物からなる群から選択される化合物。
【請求項１６】
（ｉ）一つもしくはそれ以上の請求項１５に記載される化合物および（ｉｉ）少なくとも一つのビヒクルもしくは担体を含有する組成物。
【請求項１】
アルツハイマー病のアミロイドβペプチド（Ａβ）と終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ）との間の特異的な受容体−リガンド相互作用、もしくはＲＡＧＥの活性化を阻害する方法であって、少なくともいくらかのＡβ／ＲＡＧＥの相互作用が阻害されるように一つもしくはそれ以上のＲ１（ＣＯ）ＮＲ２Ｒ３の化学式の第３級アミドの有効量を投与することを含有し、ここでＲ１が電子欠損のアリール部分で、Ｒ２が疎水性の炭化水素部分で、そしてＲ３が電子豊富なアリール部分で直接にもしくは任意選択のリンカーによって結合されている、方法。
【請求項２】
Ｒ１がアリール部分であり、一つもしくはそれ以上の電子吸引基によって置換されている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒ２が、直鎖もしくは分岐状の脂肪族の、脂環式の、直鎖のもしくは分岐状の非環式または環式のオレフィンの、直鎖のもしくは分岐状の非環式または環式のアセチレンの、アリール含有の、ならびに／またはアミン含有のＣ４からＣ１８の炭化水素部分であり、任意選択で置換される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ３が、フラニル、ピロリル、ベンジル、フェニル、アルキルフェニル、アルコキシフェニル、ナフチル、ベンゾフリル、インジル、もしくはキノリル部分であり、任意選択で置換される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
Ｒ３が、Ｃ１からＣ４のアルキルの、もしくは複素環式芳香族のリンカーによって結合されている、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記一つもしくはそれ以上の第３級アミドが図１と図９とに図示される化合物を含む群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記一つもしくはそれ以上の第３級アミドが、治療の必要に応じて被治療者にｉｎ ｖｉｖｏで医薬組成物として投与される、請求項１から６のいずれか一つに記載の方法。
【請求項８】
ＲＡＧＥによって媒介されるＡβの被治療者の脳への輸送の少なくともいくらかが、治療によって阻害される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
被治療者の血液脳関門におけるＡβによるＲＡＧＥの活性化の少なくともいくらかが、治療によって阻害される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
少なくともＡβの被治療者の脳におけるその量や濃度が治療によって減少する、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも被治療者の脳におけるアルツハイマー病に関連した神経病変が治療によって軽減する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも被治療者における脳血流が治療によって増加する、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
少なくとも被治療者における記憶および／もしくは学習が治療によって改善する、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
アルツハイマー病、または血液脳関門におけるＡβ−ＲＡＧＥ相互作用、ＲＡＧＥによって媒介されるＡβの脳への輸送および脳血管系もしくは脳実質におけるＲＡＧＥの活性化からなる群の少なくとも一つを含む他の疾患を、治療するための薬剤を製造するための一つもしくはそれ以上の第３級アミドの使用。
【請求項１５】
図１と図９とに図示される化合物からなる群から選択される化合物。
【請求項１６】
（ｉ）一つもしくはそれ以上の請求項１５に記載される化合物および（ｉｉ）少なくとも一つのビヒクルもしくは担体を含有する組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【公表番号】特表２００９−５２４６８０（Ｐ２００９−５２４６８０Ａ）
【公表日】平成２１年７月２日（２００９．７．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５５２４４８（Ｐ２００８−５５２４４８）
【出願日】平成１９年１月２６日（２００７．１．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／００２２２０
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０８９６１６
【国際公開日】平成１９年８月９日（２００７．８．９）
【出願人】（５０８１４６３０７）ザ ユニバーシティ オブ ロチェスター (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年７月２日（２００９．７．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１月２６日（２００７．１．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／００２２２０
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０８９６１６
【国際公開日】平成１９年８月９日（２００７．８．９）
【出願人】（５０８１４６３０７）ザ ユニバーシティ オブ ロチェスター (1)
【Ｆターム（参考）】
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