骨関連の活性を調節する新規な方法
本発明は、Ｒｏｒ分子を調節することにより対象の体内の骨関連活性を調節することに関する。本発明はさらに、骨関連障害についてのスクリーニング、診断および療法開発のための組成物および方法にも関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｒｏｒポリペプチドあるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体をコードするポリヌクレオチドを含む発現カセットであって、そのポリヌクレオチドが骨細胞の中で操作可能なプロモータの制御下にあるところの発現カセット。
【請求項２】
ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ１ポリペプチドである、請求項１記載の発現カセット。
【請求項３】
ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ２ポリペプチドである、請求項１記載の発現カセット。
【請求項４】
該プロモータがコーディング配列に対し異種である、請求項１記載の発現カセット。
【請求項５】
プロモータが骨特異的プロモータである、請求項１記載の発現カセット。
【請求項６】
骨特異的プロモータがラット３．６ＫｂＩ型コラーゲンまたはラット１．７Ｋｂオステオカルシンプロモータである、請求項５記載の発現カセット。
【請求項７】
該プロモータが誘発可能なプロモータである、請求項１〜６のいずれか１項記載の発現カセット。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項記載の発現カセットを含むベクター。
【請求項９】
ベクターがウイルスベクターである、請求項８記載のベクター。
【請求項１０】
該ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ関連性ウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクターおよびヘルペスウイルスベクターからなる群から選択される、請求項９記載のベクター。
【請求項１１】
該発現カセットがさらにポリアデニル化シグナルを含む、請求項１記載の発現カセット。
【請求項１２】
Ｒｏｒポリペプチドあるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体をコードするポリヌクレオチドを含む発現カセットを含む宿主細胞であって、該ポリヌクレオチドが真核細胞内で操作可能なプロモータの制御下にあり、該プロモータが該ポリヌクレオチドに対し異種であるところの、宿主細胞。
【請求項１３】
ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ１ポリペプチドである、請求項１２記載の宿主細胞。
【請求項１４】
ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ２ポリペプチドである、請求項１２記載の宿主細胞。
【請求項１５】
有効量のＲｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体を含む骨関連活性を調節する組成物。
【請求項１６】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ１分子である、請求項１５記載の組成物。
【請求項１７】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ２分子である、請求項１５記載の組成物。
【請求項１８】
医薬上許容される担体をさらに含む、請求項１５記載の組成物。
【請求項１９】
骨関連活性が骨芽細胞分化、破骨細胞分化、骨芽細胞生存、破骨細胞生存、骨芽細胞活性、または破骨細胞活性である、請求項１５記載の組成物。
【請求項２０】
（ａ）作用物質をＲｏｒ分子と組み合せ、（ｂ）該作用物質のＲｏｒ活性に対する効果を検出することを含む、作用物質についてのスクリーニング方法であって、Ｒｏｒ活性の減少および増加の検出が、作用物質が骨関連作用物質であることの指標であるところの、方法。
【請求項２１】
Ｒｏｒ活性の減少または増加が、Ｒｏｒ誘発のＷｎｔ−３シグナル化の阻害の減少または増加によって検出される。請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ１分子であり、Ｒｏｒ活性がＲｏｒ１活性である、請求項２０記載の方法。
【請求項２３】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ２分子であり、Ｒｏｒ活性がＲｏｒ２活性である、請求項２０記載の方法。
【請求項２４】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ２分子であり、Ｒｏｒ活性の減少および増加がＲｏｒ２誘発のＷｎｔ−１シグナル化の活性化の減少または増加によって検出される、請求項２０記載の方法。
【請求項２５】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒポリペプチドであり、Ｒｏｒ活性の減少および増加がＲｏｒ自己リン酸化反応の減少または増加によって検出される、請求項２０記載の方法。
【請求項２６】
ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ１ポリペプチドであり、Ｒｏｒ活性がＲｏｒ１活性である、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ２ポリペプチドであり、Ｒｏｒ活性がＲｏｒ２活性である、請求項２５記載の方法。
【請求項２８】
（ａ）作用物質をレポータ遺伝子に操作可能な形で連結されたＲｏｒプロモータ配列を含む単離された細胞と組み合わせ；（ｂ）該作用物質のレポータ活性に対する効果を検出することを含む、作用物質についてのスクリーニング方法であって、レポータ活性により測定されるＲｏｒプロモータ活性の減少または増加の検出が、作用物質が骨関連作用物質であることの指標であるところの、方法。
【請求項２９】
ＲｏｒプロモータがＲｏｒ１プロモータである、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
Ｒｏｒ１プロモータがヒトＲｏｒ１プロモータである、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
ＲｏｒプロモータがＲｏｒ２プロモータである、請求項２８記載の方法。
【請求項３２】
Ｒｏｒ２プロモータがマウス２プロモータである、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
Ｒｏｒポリペプチドの結合パートナーとの結合を調節する作用物質についてのスクリーニング方法であって、（ａ）作用物質の存在下でＲｏｒポリペプチドをＲｏｒ結合パートナーと接触させ；（ｂ）対照の存在下または作用物質の不在下でＲｏｒポリペプチドをＲｏｒ結合パートナーと接触させ；（ｃ）工程（ａ）における該Ｒｏｒポリペプチドの結合パートナーに対する結合を、工程（ｂ）における該Ｒｏｒポリペプチドの結合パートナーに対する結合と比較することによって、ＲｏｒポリペプチドのＲｏｒ結合パートナーに対する結合を調節する作用物質を選択すること、を含む方法。
【請求項３４】
ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ２ポリペプチドであり、Ｒｏｒ結合パートナーがＲｏｒ２結合パートナーである、請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
Ｒｏｒ２結合パートナーが、ＡＤＰ／ＡＴＰ担体タンパク質、ＵＤＰ−グルコースセラミドグルコシルトランスフェラーゼ様１、１４−３−３タンパク質ベータ／アルファ、１４−３−３タンパク質ガンマ、リボフォリン１、アルギニンＮ−メチルトランスフェラーゼ１、細胞アポトーンス感受性タンパク質、ＮＯＴＣＨ２タンパク質、およびヒト骨格筋ＬＩＭ−タンパク質３からなる群から選択される、請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
標的Ｒｏｒ分子の発現または活性を調節する作用物質を対象に投与することを含む、対象の骨関連活性を調節する方法。
【請求項３７】
該作用物質がＲｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体のうちの１つまたはそれ以上のものを含む、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
該作用物質がＲｏｒ分子結合パートナーあるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体のうちの１つまたはそれ以上のものを含む、請求項３６記載の方法。
【請求項３９】
標的Ｒｏｒ分子がＲｏｒ１分子である、請求項３６記載の方法。
【請求項４０】
標的Ｒｏｒ分子がＲｏｒ２分子である、請求項３６記載の方法。
【請求項４１】
標的Ｒｏｒ分子活性がチロシンキナーゼ活性である、請求項３６記載の方法。
【請求項４２】
骨関連活性が骨芽細胞分化、破骨細胞分化、骨芽細胞生存、破骨細胞生存、骨芽細胞活性または破骨細胞活性である、請求項３６記載の方法。
【請求項４３】
該作用物質が、抗体、小分子、ペプチド、オリゴペプチドおよびポリペプチドからなる群から選択される、請求項３６記載の方法。
【請求項４４】
該作用物質がＲｏｒ遺伝子に特異的なアンチセンス核酸またはｓｉＲＮＡ分子を含み、そのアンチセンス核酸またはｓｉＲＮＡ分子が１つまたはそれ以上のＲｏｒポリペプチドあるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体をコードする核酸を認識して結合する、請求項３６記載の方法。
【請求項４５】
Ｒｏｒ遺伝子がＲｏｒ１遺伝子であり、ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ１ポリペプチドである、請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
Ｒｏｒ遺伝子がＲｏｒ２遺伝子であり、ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ２ポリペプチドである、請求項４４記載の方法。
【請求項４７】
該作用物質が、Ｒｏｒ結合パートナーと結合することによって、標的Ｒｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体の発現および／または活性を調節する、請求項３６記載の方法。
【請求項４８】
該作用物質が、Ｒｏｒ結合パートナーと結合することによって、標的Ｒｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体の発現および／または活性を阻害する、請求項４７記載の方法。
【請求項４９】
該作用物質が、Ｒｏｒ結合パートナーと結合することによって、標的Ｒｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体の発現および／または活性を増強させる、請求項４７記載の方法。
【請求項５０】
標的Ｒｏｒ分子がＲｏｒ２分子であり、Ｒｏｒ結合パートナーがＲｏｒ２結合パートナーである、請求項４７〜４９のいずれか１項記載の方法。
【請求項５１】
Ｒｏｒ２結合パートナーが、ＡＤＰ／ＡＴＰ担体タンパク質、ＵＤＰ−グルコースセラミドグルコシルトランスフェラーゼ様１、１４−３−３タンパク質ベータ／アルファ、１４−３−３タンパク質ガンマ、リボフォリン１、アルギニンＮ−メチルトランスフェラーゼ１、細胞アポトーンス感受性タンパク質、ＮＯＴＣＨ２タンパク質、およびヒト骨格筋ＬＩＭ−タンパク質３からなる群から選択される、請求項５０記載の方法。
【請求項５２】
該作用物質がＲｏｒ結合パートナーに対するＲｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体の結合を調節する、請求項３６記載の方法。
【請求項５３】
該作用物質がＲｏｒ結合パートナーに対するＲｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体の結合を増強させる、請求項５２記載の方法。
【請求項５４】
該作用物質がＲｏｒ結合パートナーに対するＲｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体の結合を阻害する、請求項５２記載の方法。
【請求項５５】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ２分子であり、Ｒｏｒ結合パートナーがＲｏｒ２結合パートナーである、請求項５２記載の方法。
【請求項５６】
Ｒｏｒ２結合パートナーが、ＡＤＰ／ＡＴＰ担体タンパク質、ＵＤＰ−グルコースセラミドグルコシルトランスフェラーゼ様１、１４−３−３タンパク質ベータ／アルファ、１４−３−３タンパク質ガンマ、リボフォリン１、アルギニンＮ−メチルトランスフェラーゼ１、細胞アポトーンス感受性タンパク質、ＮＯＴＣＨ２タンパク質、およびヒト骨格筋ＬＩＭ−タンパク質３からなる群から選択される、請求項５５記載の方法。
【請求項５７】
作用物質が培養中の単離された細胞に投与される、請求項３６記載の方法。
【請求項５８】
細胞が一次骨芽細胞、骨芽細胞起源の不死化細胞系列または非骨芽細胞起源の不死化細胞系列である、請求項５７記載の方法。
【請求項５９】
骨芽細胞起源の不死化細胞系列がＨＯＢ、Ｕ２ＯＳおよびＳａＯＳ−２細胞からなる群から選択される、請求項５８記載の方法。
【請求項６０】
作用物質がヒト以外のトランスジェニック動物に投与される、請求項３６記載の方法。
【請求項６１】
トランスジェニック動物がマウスである、請求項６０記載の方法。
【請求項６２】
作用物質がヒト以外のノックアウト動物に投与される、請求項６０記載の方法。
【請求項６３】
該対象が脊椎動物または無脊椎動物生体である、請求項３６記載の方法。
【請求項６４】
対象が哺乳動物である、請求項３６記載の方法。
【請求項６５】
哺乳動物がヒトである、請求項６４記載の方法。
【請求項６６】
対象におけるＷｎｔ−１およびＷｎｔ−３活性を調節する方法であって、標的Ｒｏｒ２分子の発現または活性を調節する作用物質をＷｎｔ−１およびＷｎｔ−３活性を調節するのに有効な量にて投与することを含む、方法。
【請求項６７】
骨関連活性を調節するための作用物質を同定する方法であって、（ａ）細胞内でＲｏｒ分子を発現するかまたは内因性Ｒｏｒ発現を使用し；（ｂ）細胞を作用物質と接触させ；および（ｃ）Ｒｏｒ分子の発現または活性をモニター観察することを含み、作用物質の存在下でのＲｏｒ分子の発現または活性の向上または低下が骨関連活性を調節するものとして作用物質を同定するところの、方法。
【請求項６８】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ１分子である、請求項６７記載の方法。
【請求項６９】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ２分子である、請求項６７記載の方法。
【請求項７０】
Ｒｏｒ分子活性がチロシンキナーゼ活性である、請求項６７記載の方法。
【請求項７１】
骨関連活性が骨芽細胞分化、破骨細胞分化、骨芽細胞生存、破骨細胞生存、骨芽細胞活性または破骨細胞活性である、請求項６７記載の方法。
【請求項７２】
該作用物質が、抗体、小分子、ペプチド、オリゴペプチドおよびポリペプチドからなる群から選択される、請求項６７記載の方法。
【請求項７３】
該作用物質がＲｏｒ遺伝子に特異的なアンチセンス核酸またはｓｉＲＮＡ分子を含み、アンチセンス核酸またはｓｉＲＮＡ分子が、１つまたはそれ以上のＲｏｒポリペプチドあるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体をコードする核酸を認識してそれと結合する、請求項６７記載の方法。
【請求項７４】
Ｒｏｒ遺伝子がＲｏｒ１遺伝子であり、ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ１ポリペプチドである、請求項７３記載の方法。
【請求項７５】
Ｒｏｒ遺伝子がＲｏｒ２遺伝子であり、ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ２ポリペプチドである、請求項７３記載の方法。
【請求項７６】
該作用物質が、Ｒｏｒ結合パートナーと結合することによって、Ｒｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体の発現および／または活性を調節する、請求項６７記載の方法。
【請求項７７】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ２分子であり、Ｒｏｒ結合パートナーがＲｏｒ２結合パートナーである、請求項７６記載の方法。
【請求項７８】
Ｒｏｒ２結合パートナーが、ＡＤＰ／ＡＴＰ担体タンパク質、ＵＤＰ−グルコースセラミドグルコシルトランスフェラーゼ様１、１４−３−３タンパク質ベータ／アルファ、１４−３−３タンパク質ガンマ、リボフォリン１、アルギニンＮ−メチルトランスフェラーゼ１、細胞アポトーンス感受性タンパク質、ＮＯＴＣＨ２タンパク質、およびヒト骨格筋ＬＩＭ−タンパク質３からなる群から選択される、請求項７７記載の方法。
【請求項７９】
該作用物質がＲｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体のＲｏｒ結合パートナーとの結合を調節する、請求項６７記載の方法。
【請求項８０】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ２分子であり、Ｒｏｒ結合パートナーがＲｏｒ２結合パートナーである、請求項７９記載の方法。
【請求項８１】
細胞が一次骨芽細胞、骨芽細胞起源の不死化細胞系列または非骨芽細胞起源の不死化細胞系列である、請求項６７記載の方法。
【請求項８２】
骨芽細胞起源の不死化細胞系列がＨＯＢ、Ｕ２ＯＳおよびＳａＯＳ−２細胞からなる群から選択される、請求項８１記載の方法。
【請求項８３】
作用物質がさらにＲｏｒ分子の発現または活性をモニター観察するため脊椎動物生体に投与され、作用物質の存在下でのＲｏｒ分子の発現または活性の向上または低下が、作用物質を骨関連活性を調節するとして同定する、請求項６７記載の方法。
【請求項８４】
該脊椎動物生体が哺乳動物である、請求項８３記載の方法。
【請求項８５】
該脊椎動物生体がヒト以外のトランスジェニック動物である、請求項８３記載の方法。
【請求項８６】
Ｗｎｔシグナル化経路を調節するための作用物質を同定する方法であって、Ｒｏｒ分子の発現または活性の調節能について１つまたはそれ以上の作用物質をスクリーニングすることを含み、Ｒｏｒ分子の発現または活性を調節することのできる作用物質が、Ｗｎｔシグナル化経路を調節する作用物質であるところの、方法。
【請求項８７】
Ｗｎｔペプチドを発現する細胞に対し生物活性分子を連結する方法であって、細胞を生物活性分子に結合させるＲｏｒ２ポリペプチドと接触させ、Ｗｎｔポリペプチドと該Ｒｏｒ２ポリペプチドを互いに結合させ、それにより該生物活性分子を該細胞に連結させることを含む、方法。
【請求項８８】
ＷｎｔポリペプチドがＷｎｔ−１およびＷｎｔ−３からなる群から選択される、請求項８７記載の方法。
【請求項８９】
対象を骨関連障害についてスクリーニングする方法であって、対象におけるＲｏｒ分子の発現を測定し、その対象における該Ｒｏｒ分子の、正常な対象におけるその発現と比較した、または骨関連障害について治療を受けた後の同じ対象でのその発現に比較した相対発現を決定する、方法。
【請求項９０】
骨形成に関与する遺伝子を同定する方法であって、ａ）細胞内でＲｏｒ分子を過剰発現させ、ｂ）遺伝子発現プロフィールにおける変化をモニター観察し、およびｃ）Ｒｏｒ発現によりどの遺伝子が調節されるかを決定し、それにより骨形成に関与する遺伝子を同定することを含む、方法。
【請求項９１】
Ｗｎｔシグナル化経路を調節する遺伝子を同定する方法であって、ａ）細胞内でＲｏｒ分子を過剰発現させ、ｂ）遺伝子発現プロフィールにおける変化をモニター観察し、およびｃ）Ｒｏｒ発現によりどの遺伝子が調節されるかを決定し、それによりＷｎｔシグナル化経路を調節する遺伝子を同定することを含む、方法。
【請求項９２】
マーカーとしてＲｏｒ２を用いて増殖性ヒト前骨芽細胞を同定する方法であって、ヒト骨芽細胞内でのＲｏｒ２遺伝子の発現を決定することを含み、ここでＲｏｒ２発現の増加がその細胞を増殖性前骨芽細胞であると同定する、方法。
【請求項１】
Ｒｏｒポリペプチドあるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体をコードするポリヌクレオチドを含む発現カセットであって、そのポリヌクレオチドが骨細胞の中で操作可能なプロモータの制御下にあるところの発現カセット。
【請求項２】
ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ１ポリペプチドである、請求項１記載の発現カセット。
【請求項３】
ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ２ポリペプチドである、請求項１記載の発現カセット。
【請求項４】
該プロモータがコーディング配列に対し異種である、請求項１記載の発現カセット。
【請求項５】
プロモータが骨特異的プロモータである、請求項１記載の発現カセット。
【請求項６】
骨特異的プロモータがラット３．６ＫｂＩ型コラーゲンまたはラット１．７Ｋｂオステオカルシンプロモータである、請求項５記載の発現カセット。
【請求項７】
該プロモータが誘発可能なプロモータである、請求項１〜６のいずれか１項記載の発現カセット。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項記載の発現カセットを含むベクター。
【請求項９】
ベクターがウイルスベクターである、請求項８記載のベクター。
【請求項１０】
該ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ関連性ウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクターおよびヘルペスウイルスベクターからなる群から選択される、請求項９記載のベクター。
【請求項１１】
該発現カセットがさらにポリアデニル化シグナルを含む、請求項１記載の発現カセット。
【請求項１２】
Ｒｏｒポリペプチドあるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体をコードするポリヌクレオチドを含む発現カセットを含む宿主細胞であって、該ポリヌクレオチドが真核細胞内で操作可能なプロモータの制御下にあり、該プロモータが該ポリヌクレオチドに対し異種であるところの、宿主細胞。
【請求項１３】
ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ１ポリペプチドである、請求項１２記載の宿主細胞。
【請求項１４】
ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ２ポリペプチドである、請求項１２記載の宿主細胞。
【請求項１５】
有効量のＲｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体を含む骨関連活性を調節する組成物。
【請求項１６】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ１分子である、請求項１５記載の組成物。
【請求項１７】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ２分子である、請求項１５記載の組成物。
【請求項１８】
医薬上許容される担体をさらに含む、請求項１５記載の組成物。
【請求項１９】
骨関連活性が骨芽細胞分化、破骨細胞分化、骨芽細胞生存、破骨細胞生存、骨芽細胞活性、または破骨細胞活性である、請求項１５記載の組成物。
【請求項２０】
（ａ）作用物質をＲｏｒ分子と組み合せ、（ｂ）該作用物質のＲｏｒ活性に対する効果を検出することを含む、作用物質についてのスクリーニング方法であって、Ｒｏｒ活性の減少および増加の検出が、作用物質が骨関連作用物質であることの指標であるところの、方法。
【請求項２１】
Ｒｏｒ活性の減少または増加が、Ｒｏｒ誘発のＷｎｔ−３シグナル化の阻害の減少または増加によって検出される。請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ１分子であり、Ｒｏｒ活性がＲｏｒ１活性である、請求項２０記載の方法。
【請求項２３】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ２分子であり、Ｒｏｒ活性がＲｏｒ２活性である、請求項２０記載の方法。
【請求項２４】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ２分子であり、Ｒｏｒ活性の減少および増加がＲｏｒ２誘発のＷｎｔ−１シグナル化の活性化の減少または増加によって検出される、請求項２０記載の方法。
【請求項２５】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒポリペプチドであり、Ｒｏｒ活性の減少および増加がＲｏｒ自己リン酸化反応の減少または増加によって検出される、請求項２０記載の方法。
【請求項２６】
ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ１ポリペプチドであり、Ｒｏｒ活性がＲｏｒ１活性である、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ２ポリペプチドであり、Ｒｏｒ活性がＲｏｒ２活性である、請求項２５記載の方法。
【請求項２８】
（ａ）作用物質をレポータ遺伝子に操作可能な形で連結されたＲｏｒプロモータ配列を含む単離された細胞と組み合わせ；（ｂ）該作用物質のレポータ活性に対する効果を検出することを含む、作用物質についてのスクリーニング方法であって、レポータ活性により測定されるＲｏｒプロモータ活性の減少または増加の検出が、作用物質が骨関連作用物質であることの指標であるところの、方法。
【請求項２９】
ＲｏｒプロモータがＲｏｒ１プロモータである、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
Ｒｏｒ１プロモータがヒトＲｏｒ１プロモータである、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
ＲｏｒプロモータがＲｏｒ２プロモータである、請求項２８記載の方法。
【請求項３２】
Ｒｏｒ２プロモータがマウス２プロモータである、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
Ｒｏｒポリペプチドの結合パートナーとの結合を調節する作用物質についてのスクリーニング方法であって、（ａ）作用物質の存在下でＲｏｒポリペプチドをＲｏｒ結合パートナーと接触させ；（ｂ）対照の存在下または作用物質の不在下でＲｏｒポリペプチドをＲｏｒ結合パートナーと接触させ；（ｃ）工程（ａ）における該Ｒｏｒポリペプチドの結合パートナーに対する結合を、工程（ｂ）における該Ｒｏｒポリペプチドの結合パートナーに対する結合と比較することによって、ＲｏｒポリペプチドのＲｏｒ結合パートナーに対する結合を調節する作用物質を選択すること、を含む方法。
【請求項３４】
ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ２ポリペプチドであり、Ｒｏｒ結合パートナーがＲｏｒ２結合パートナーである、請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
Ｒｏｒ２結合パートナーが、ＡＤＰ／ＡＴＰ担体タンパク質、ＵＤＰ−グルコースセラミドグルコシルトランスフェラーゼ様１、１４−３−３タンパク質ベータ／アルファ、１４−３−３タンパク質ガンマ、リボフォリン１、アルギニンＮ−メチルトランスフェラーゼ１、細胞アポトーンス感受性タンパク質、ＮＯＴＣＨ２タンパク質、およびヒト骨格筋ＬＩＭ−タンパク質３からなる群から選択される、請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
標的Ｒｏｒ分子の発現または活性を調節する作用物質を対象に投与することを含む、対象の骨関連活性を調節する方法。
【請求項３７】
該作用物質がＲｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体のうちの１つまたはそれ以上のものを含む、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
該作用物質がＲｏｒ分子結合パートナーあるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体のうちの１つまたはそれ以上のものを含む、請求項３６記載の方法。
【請求項３９】
標的Ｒｏｒ分子がＲｏｒ１分子である、請求項３６記載の方法。
【請求項４０】
標的Ｒｏｒ分子がＲｏｒ２分子である、請求項３６記載の方法。
【請求項４１】
標的Ｒｏｒ分子活性がチロシンキナーゼ活性である、請求項３６記載の方法。
【請求項４２】
骨関連活性が骨芽細胞分化、破骨細胞分化、骨芽細胞生存、破骨細胞生存、骨芽細胞活性または破骨細胞活性である、請求項３６記載の方法。
【請求項４３】
該作用物質が、抗体、小分子、ペプチド、オリゴペプチドおよびポリペプチドからなる群から選択される、請求項３６記載の方法。
【請求項４４】
該作用物質がＲｏｒ遺伝子に特異的なアンチセンス核酸またはｓｉＲＮＡ分子を含み、そのアンチセンス核酸またはｓｉＲＮＡ分子が１つまたはそれ以上のＲｏｒポリペプチドあるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体をコードする核酸を認識して結合する、請求項３６記載の方法。
【請求項４５】
Ｒｏｒ遺伝子がＲｏｒ１遺伝子であり、ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ１ポリペプチドである、請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
Ｒｏｒ遺伝子がＲｏｒ２遺伝子であり、ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ２ポリペプチドである、請求項４４記載の方法。
【請求項４７】
該作用物質が、Ｒｏｒ結合パートナーと結合することによって、標的Ｒｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体の発現および／または活性を調節する、請求項３６記載の方法。
【請求項４８】
該作用物質が、Ｒｏｒ結合パートナーと結合することによって、標的Ｒｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体の発現および／または活性を阻害する、請求項４７記載の方法。
【請求項４９】
該作用物質が、Ｒｏｒ結合パートナーと結合することによって、標的Ｒｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体の発現および／または活性を増強させる、請求項４７記載の方法。
【請求項５０】
標的Ｒｏｒ分子がＲｏｒ２分子であり、Ｒｏｒ結合パートナーがＲｏｒ２結合パートナーである、請求項４７〜４９のいずれか１項記載の方法。
【請求項５１】
Ｒｏｒ２結合パートナーが、ＡＤＰ／ＡＴＰ担体タンパク質、ＵＤＰ−グルコースセラミドグルコシルトランスフェラーゼ様１、１４−３−３タンパク質ベータ／アルファ、１４−３−３タンパク質ガンマ、リボフォリン１、アルギニンＮ−メチルトランスフェラーゼ１、細胞アポトーンス感受性タンパク質、ＮＯＴＣＨ２タンパク質、およびヒト骨格筋ＬＩＭ−タンパク質３からなる群から選択される、請求項５０記載の方法。
【請求項５２】
該作用物質がＲｏｒ結合パートナーに対するＲｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体の結合を調節する、請求項３６記載の方法。
【請求項５３】
該作用物質がＲｏｒ結合パートナーに対するＲｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体の結合を増強させる、請求項５２記載の方法。
【請求項５４】
該作用物質がＲｏｒ結合パートナーに対するＲｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体の結合を阻害する、請求項５２記載の方法。
【請求項５５】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ２分子であり、Ｒｏｒ結合パートナーがＲｏｒ２結合パートナーである、請求項５２記載の方法。
【請求項５６】
Ｒｏｒ２結合パートナーが、ＡＤＰ／ＡＴＰ担体タンパク質、ＵＤＰ−グルコースセラミドグルコシルトランスフェラーゼ様１、１４−３−３タンパク質ベータ／アルファ、１４−３−３タンパク質ガンマ、リボフォリン１、アルギニンＮ−メチルトランスフェラーゼ１、細胞アポトーンス感受性タンパク質、ＮＯＴＣＨ２タンパク質、およびヒト骨格筋ＬＩＭ−タンパク質３からなる群から選択される、請求項５５記載の方法。
【請求項５７】
作用物質が培養中の単離された細胞に投与される、請求項３６記載の方法。
【請求項５８】
細胞が一次骨芽細胞、骨芽細胞起源の不死化細胞系列または非骨芽細胞起源の不死化細胞系列である、請求項５７記載の方法。
【請求項５９】
骨芽細胞起源の不死化細胞系列がＨＯＢ、Ｕ２ＯＳおよびＳａＯＳ−２細胞からなる群から選択される、請求項５８記載の方法。
【請求項６０】
作用物質がヒト以外のトランスジェニック動物に投与される、請求項３６記載の方法。
【請求項６１】
トランスジェニック動物がマウスである、請求項６０記載の方法。
【請求項６２】
作用物質がヒト以外のノックアウト動物に投与される、請求項６０記載の方法。
【請求項６３】
該対象が脊椎動物または無脊椎動物生体である、請求項３６記載の方法。
【請求項６４】
対象が哺乳動物である、請求項３６記載の方法。
【請求項６５】
哺乳動物がヒトである、請求項６４記載の方法。
【請求項６６】
対象におけるＷｎｔ−１およびＷｎｔ−３活性を調節する方法であって、標的Ｒｏｒ２分子の発現または活性を調節する作用物質をＷｎｔ−１およびＷｎｔ−３活性を調節するのに有効な量にて投与することを含む、方法。
【請求項６７】
骨関連活性を調節するための作用物質を同定する方法であって、（ａ）細胞内でＲｏｒ分子を発現するかまたは内因性Ｒｏｒ発現を使用し；（ｂ）細胞を作用物質と接触させ；および（ｃ）Ｒｏｒ分子の発現または活性をモニター観察することを含み、作用物質の存在下でのＲｏｒ分子の発現または活性の向上または低下が骨関連活性を調節するものとして作用物質を同定するところの、方法。
【請求項６８】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ１分子である、請求項６７記載の方法。
【請求項６９】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ２分子である、請求項６７記載の方法。
【請求項７０】
Ｒｏｒ分子活性がチロシンキナーゼ活性である、請求項６７記載の方法。
【請求項７１】
骨関連活性が骨芽細胞分化、破骨細胞分化、骨芽細胞生存、破骨細胞生存、骨芽細胞活性または破骨細胞活性である、請求項６７記載の方法。
【請求項７２】
該作用物質が、抗体、小分子、ペプチド、オリゴペプチドおよびポリペプチドからなる群から選択される、請求項６７記載の方法。
【請求項７３】
該作用物質がＲｏｒ遺伝子に特異的なアンチセンス核酸またはｓｉＲＮＡ分子を含み、アンチセンス核酸またはｓｉＲＮＡ分子が、１つまたはそれ以上のＲｏｒポリペプチドあるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体をコードする核酸を認識してそれと結合する、請求項６７記載の方法。
【請求項７４】
Ｒｏｒ遺伝子がＲｏｒ１遺伝子であり、ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ１ポリペプチドである、請求項７３記載の方法。
【請求項７５】
Ｒｏｒ遺伝子がＲｏｒ２遺伝子であり、ＲｏｒポリペプチドがＲｏｒ２ポリペプチドである、請求項７３記載の方法。
【請求項７６】
該作用物質が、Ｒｏｒ結合パートナーと結合することによって、Ｒｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体の発現および／または活性を調節する、請求項６７記載の方法。
【請求項７７】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ２分子であり、Ｒｏｒ結合パートナーがＲｏｒ２結合パートナーである、請求項７６記載の方法。
【請求項７８】
Ｒｏｒ２結合パートナーが、ＡＤＰ／ＡＴＰ担体タンパク質、ＵＤＰ−グルコースセラミドグルコシルトランスフェラーゼ様１、１４−３−３タンパク質ベータ／アルファ、１４−３−３タンパク質ガンマ、リボフォリン１、アルギニンＮ−メチルトランスフェラーゼ１、細胞アポトーンス感受性タンパク質、ＮＯＴＣＨ２タンパク質、およびヒト骨格筋ＬＩＭ−タンパク質３からなる群から選択される、請求項７７記載の方法。
【請求項７９】
該作用物質がＲｏｒ分子あるいはその相同体または誘導体またはフラグメントまたは変種または変異体のＲｏｒ結合パートナーとの結合を調節する、請求項６７記載の方法。
【請求項８０】
Ｒｏｒ分子がＲｏｒ２分子であり、Ｒｏｒ結合パートナーがＲｏｒ２結合パートナーである、請求項７９記載の方法。
【請求項８１】
細胞が一次骨芽細胞、骨芽細胞起源の不死化細胞系列または非骨芽細胞起源の不死化細胞系列である、請求項６７記載の方法。
【請求項８２】
骨芽細胞起源の不死化細胞系列がＨＯＢ、Ｕ２ＯＳおよびＳａＯＳ−２細胞からなる群から選択される、請求項８１記載の方法。
【請求項８３】
作用物質がさらにＲｏｒ分子の発現または活性をモニター観察するため脊椎動物生体に投与され、作用物質の存在下でのＲｏｒ分子の発現または活性の向上または低下が、作用物質を骨関連活性を調節するとして同定する、請求項６７記載の方法。
【請求項８４】
該脊椎動物生体が哺乳動物である、請求項８３記載の方法。
【請求項８５】
該脊椎動物生体がヒト以外のトランスジェニック動物である、請求項８３記載の方法。
【請求項８６】
Ｗｎｔシグナル化経路を調節するための作用物質を同定する方法であって、Ｒｏｒ分子の発現または活性の調節能について１つまたはそれ以上の作用物質をスクリーニングすることを含み、Ｒｏｒ分子の発現または活性を調節することのできる作用物質が、Ｗｎｔシグナル化経路を調節する作用物質であるところの、方法。
【請求項８７】
Ｗｎｔペプチドを発現する細胞に対し生物活性分子を連結する方法であって、細胞を生物活性分子に結合させるＲｏｒ２ポリペプチドと接触させ、Ｗｎｔポリペプチドと該Ｒｏｒ２ポリペプチドを互いに結合させ、それにより該生物活性分子を該細胞に連結させることを含む、方法。
【請求項８８】
ＷｎｔポリペプチドがＷｎｔ−１およびＷｎｔ−３からなる群から選択される、請求項８７記載の方法。
【請求項８９】
対象を骨関連障害についてスクリーニングする方法であって、対象におけるＲｏｒ分子の発現を測定し、その対象における該Ｒｏｒ分子の、正常な対象におけるその発現と比較した、または骨関連障害について治療を受けた後の同じ対象でのその発現に比較した相対発現を決定する、方法。
【請求項９０】
骨形成に関与する遺伝子を同定する方法であって、ａ）細胞内でＲｏｒ分子を過剰発現させ、ｂ）遺伝子発現プロフィールにおける変化をモニター観察し、およびｃ）Ｒｏｒ発現によりどの遺伝子が調節されるかを決定し、それにより骨形成に関与する遺伝子を同定することを含む、方法。
【請求項９１】
Ｗｎｔシグナル化経路を調節する遺伝子を同定する方法であって、ａ）細胞内でＲｏｒ分子を過剰発現させ、ｂ）遺伝子発現プロフィールにおける変化をモニター観察し、およびｃ）Ｒｏｒ発現によりどの遺伝子が調節されるかを決定し、それによりＷｎｔシグナル化経路を調節する遺伝子を同定することを含む、方法。
【請求項９２】
マーカーとしてＲｏｒ２を用いて増殖性ヒト前骨芽細胞を同定する方法であって、ヒト骨芽細胞内でのＲｏｒ２遺伝子の発現を決定することを含み、ここでＲｏｒ２発現の増加がその細胞を増殖性前骨芽細胞であると同定する、方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図５Ｃ】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図５Ｃ】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【公表番号】特表２００６−５２４５０８（Ｐ２００６−５２４５０８Ａ）
【公表日】平成１８年１１月２日（２００６．１１．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５１００１４（Ｐ２００６−５１００１４）
【出願日】平成１６年４月１４日（２００４．４．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１１４５２
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０９４６４１
【国際公開日】平成１６年１１月４日（２００４．１１．４）
【出願人】（５９１０１１５０２）ワイス (573)
【氏名又は名称原語表記】Ｗｙｅｔｈ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年１１月２日（２００６．１１．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年４月１４日（２００４．４．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１１４５２
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０９４６４１
【国際公開日】平成１６年１１月４日（２００４．１１．４）
【出願人】（５９１０１１５０２）ワイス (573)
【氏名又は名称原語表記】Ｗｙｅｔｈ
【Ｆターム（参考）】
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