Ｗｎｔ５ａ産生促進剤、養毛剤
【課題】育毛剤、若しくは糖尿病、高脂血症、耐糖能異常などの予防・治療等として有用なＷｎｔ５ａ産生促進剤、並びにかかるＷｎｔ５ａ産生促進剤を有効成分とする養毛剤の提供。
【解決手段】リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される１種又は２種以上を有効成分とするＷｎｔ５ａ産生促進剤。また、リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される１種又は２種以上のＷｎｔ５ａ産生促進剤を有効成分とする養毛剤。
【解決手段】リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される１種又は２種以上を有効成分とするＷｎｔ５ａ産生促進剤。また、リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される１種又は２種以上のＷｎｔ５ａ産生促進剤を有効成分とする養毛剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はＷｎｔ５ａの産生を促進する、Ｗｎｔ５ａ産生促進剤に関する。また、本発明は、Ｗｎｔ５ａ産生促進剤を有効成分とする養毛剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
胚発生に伴う形態形成では分泌性シグナル分子を介した相互作用が細胞間のコミュニケーションの１つの方法として使われている。この細胞間シグナル分子の１つであるＷｎｔファミリーには１９種以上のメンバーが知られている。線虫，昆虫からマウス，ヒトに至るまでの動物においてＷｎｔ遺伝子群は発生のさまざまな局面で時間的，位置的に特異的な発現を示し，形態形成の誘導因子，細胞の極性決定因子，増殖分化の調節因子として機能している。Ｗｎｔにより惹起される細胞内シグナル伝達のネットワークには、形態形成だけでなく細胞増殖，形質転換（癌化）に関連する多くの因子が関与している。このようなＷｎｔファミリーのうち、Ｗｎｔ５ａに関して、インスリン分泌関与すること（特許文献１参照）や、毛乳頭細胞の細胞死を抑制する効果等が知られている。
【０００３】
従来より、脱毛症の防止，改善を目的とした養毛用化粧料が開発されてきた。脱毛症のうち、男性型脱毛症の占める割合が高いことから、特に抗アンドロゲン作用を有する成分の応用が検討され、活性型テストステロンであるジヒドロテストステロンの受容体への結合を競合的に阻害するものや、テストステロンからジヒドロテストステロンへの変換を触媒する酵素であるテストステロン５α−リダクターゼを阻害するものが開示されてきた。前者としては酢酸シプロテロンが、後者としてはアンドロスタノン誘導体，ジシクロヘプテノン誘導体，フェノキシブタン誘導体，トコフェリルキノン，トロポロン誘導体，ユビキノン等の他、シソ科植物，キク科植物をはじめ多くの植物の抽出物が挙げられる（特許文献２）。また、2,4-ジアミノ-6-ピペリジノピリミジン-3-オキシド(ミノキシジル)，セファランチン，ビタミンＥ誘導体，塩化カルプロニウム等、頭皮の血行促進作用を有するものや、アデノシン三リン酸，ウロガストロン，バイカレイン，パンテテイン-S-スルホン酸， 奇数鎖脂肪酸誘導体といった毛母細胞をはじめ毛包を活性化する作用を有するものの応用も検討されている。しかしながら脱毛症の発症は、テストステロン依存性の男性型脱毛症の他に、老化や栄養不良，ストレス等種々の原因により見られる。このような男性型以外の脱毛症には、抗アンドロゲン作用を有する成分の効果は期待できず、また上記した抗アンドロゲン作用を有する成分の中には、副作用の発現が懸念されたり、化粧料基剤中での安定性が悪かったり、作用効果が不十分であったりするものも少なくなかった。さらに、植物抽出物等天然物を基原とするものについては、一定の品質のものを得るのが困難で、さらに化粧料への配合に際し好ましくない色や臭いを有するものも多かった。一方、頭皮血行促進作用や毛包活性化作用を有すると報告されたものについても、低濃度で十分な作用効果の得られるものは少なく、安定性及び安全性上問題のあるものも存在していた。その為、より効果的な養毛料が強く要望されている。
【０００４】
【特許文献１】特開２００５−２２００２２号公報
【特許文献２】特開平３−１６１４２６合公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
育毛剤、若しくは糖尿病、高脂血症、耐糖能異常などの予防・治療等として有用なＷｎｔ５ａ産生促進剤、並びにかかるＷｎｔ５ａ産生促進剤を有効成分とする養毛剤を得ることを目的とした。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者等は、リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される１種又は２種以上が、Ｗｎｔ５ａの産生を促進することを見いだし、本願発明を完成した。
【０００７】
すなわち本発明のＷｎｔ５ａ産生促進剤は、リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される１種又は２種以上を有効成分とするものである。
【０００８】
また本発明の養毛剤は、リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される１種又は２種以上を有効成分とする、Ｗｎｔ５ａ産生促進剤を有効成分とするものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、Ｗｎｔ５ａの産生を促進し、糖尿病などの予防・治療剤、若しくは育毛剤として有用なＷｎｔ５ａ産生促進剤を提供することができる。特に本発明のＷｎｔ産生促進剤は、養毛剤として有効で、かかるＷｎｔ産生促進剤、養毛剤を頭皮に適用することにより、優れた養毛効果を発揮する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明の実施形態について詳細に説明する。
【００１１】
本発明のＷｎｔ５ａ産生促進剤は、リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される１種又は２種以上を有効成分とする。これらの化合物は、従来公知の方法により合成することが可能である。また市販品として入手することも可能である。
【００１２】
本発明のＷｎｔ５ａ産生促進剤は、リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される１種又は２種以上を有効成分とするものであればその形態は限定されず、例えば、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）や健康食品などの飲食品、医薬品、化粧品、医薬部外品などとして用いることができる。
【００１３】
飲食品として用いる場合は、そのまま直接摂取することができ、また、公知の担体や助剤などを使用してカプセル剤、錠剤、顆粒剤など服用しやすい形態に成型して摂取することができる。これら成型剤における各抽出物の含有量は０．００１〜１００質量％、好ましくは０．１〜９０質量％がよい。さらに、飲食物材料に混合して、チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ビスケット、クラッカーなどの菓子類、アイスクリーム、氷菓などの冷菓類、茶、清涼飲料、栄養ドリンク、美容ドリンクなどの飲料、うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類、蒲鉾、竹輪、半片などの練り製品、ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料、マーガリン、バター、サラダ油などの油脂類、パン、ハム、スープ、レトルト食品、冷凍食品など、すべての飲食物に使用することができる。これら飲食用組成物を摂取する場合、その摂取量は各抽出物換算で成人一人一日当たり０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重がよい。また、家畜やペット用の飼料やペットフードとしても使用することができ、その摂取量は各抽出物換算で一日当たり０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重が好ましい。
【００１４】
医薬品として用いる場合は、その剤形は特に限定されず、例えば、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、注射剤、坐剤、貼付剤などが挙げられる。製剤化においては、薬剤学的に許容される他の製剤素材、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などを適宜添加して調製することができる。これら製剤の投与量としては、各抽出物換算で成人一人一日当たり０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を１回ないし数回に分けて投与する。また、家畜やペット用の医薬品としても使用することができ、その投与量は各抽出物換算で一日当たり０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重が好ましい。
【００１５】
化粧品、医薬部外品として用いる場合、その剤型は任意であり、例えば、ローションなどの可溶化系、クリームや乳液などの乳化系、カラミンローション等の分散系として提供することができる。さらに、噴射剤と共に充填したエアゾール、軟膏剤、粉末、顆粒などの種々の剤型で提供することもできる。
【００１６】
本発明のＷｎｔ５ａ産生促促進剤を含有する、化粧品、医薬部外品には、プロテアーゼ活性促進剤のほかに、必要に応じて、通常化粧品、医薬部外品、及び洗浄料に配合される、油性成分、細胞賦活剤、抗酸化剤、保湿剤、粉体、色素、乳化剤、可溶化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、増粘剤、薬剤、香料、樹脂、防菌防黴剤、アルコール類等を適宜配合することができる。
【００１７】
本発明のＷｎｔ５ａ産生促進剤を化粧品、医薬部外品に配合する際の配合量は、皮化粧品、医薬部外品の種類や使用目的等によって調整することができるが、効果や安定性などの点から、全量に対して０．０００１〜５０．０質量％が好ましく、より好ましくは、０．００１〜２５．０質量％である。
【実施例】
【００１８】
（１）Ｗｎｔ５ａの細胞からの分泌促進効果の評価
リアルタイムＰＣＲを用いてＷｎｔ５ａの細胞からの分泌促進効果の評価を行った。
ヒト毛乳頭細胞（ｈＤＰＣ，東洋紡社製）は、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを用いて維持培養した。
五代目ヒト毛乳頭細胞（ｈＤＰＣ）を６穴プレートに１％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを用いて播種し、一晩培養した。サンプル非添加／添加培地と交換し、さらに２４時間培養した。培養終了後、培地を除去し、ＰＢＳ（−）で洗浄後、ＩＳＯＧＥＮ試薬（ＷＡＫＯ社製）を用いて全てのＲＮＡ（総ＲＮＡ）を抽出した。各総ＲＮＡ １２５０ｎｇをＴａＫａＲａＲＴ−ＰＣＲｋｉｔ（ＴａＫａＲａ社製）を用い、添付のプロトコルに従って全量２５μｌの反応系でＦｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ合成を行った。この反応液を使用し、リアルタイムＰＣＲを行った。
Ｗｎｔ５ａ ｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡは配列番号１および２のプライマー（それぞれ、Ｗｎｔ５ａの６２１〜６４０および７６２〜７８０の塩基配列、表３）を使用して、サイバーグリーン（ＳＹＢＲ−Ｇｒｅｅｎ）法によるリアルタイムＰＣＲで測定した。このときの試料問の誤差補正のために、ＧＡＰＤＨ（グリセリルアルデヒド−３−リン酸 デヒドロゲナーゼ）ｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡを配列番号３および４のプライマー（それぞれ、ＧＡＰＤＨの５０２〜５２２および６２９〜６４８の塩基配列）を使用したサイバーグリーン法によるリアルタイムＰＣＲの測定も行った。
Ｗｎｔ５ａ：プライマー
配列番号１ CAA GGG CTC CTA CGA GAG TG
配列番号２ CAG CCA GCA TGT CTT CAG G
ＧＡＰＤＨ：プライマー
配列番号３ TTT GGT ATC GTG GAA GGA CTC
配列番号４ GAG GCA GGG ATG ATG TTC TG
同一の試料毎に３本の反応ウェルを使用して、リアルタイムＰＣＲ反応１反応ウェル当たり、総ＲＮＡ １００ｎｇに相当する分量を投入して鋳型とした。反応１ウェル当たり、６ｐｍｏｌずつのプライマー、最終濃度１倍のＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ ＭａｓｔｅｒＭｉｘ（Ａｐｐ１ｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を加えた。リアルタイムＰＣＲは、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７５００ Ｆａｓｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を使用してサイバーグリーン法の標準的方法（９５℃１５分、９５℃１５秒、６０℃１分×４５サイクル、その後解離曲線を描くために９５℃まで緩やかに上昇）にて行った。なお、プライマー非添加の反応で増幅が検出されないことを確認すると同時に、解離曲線のパターンから、対照配列以外の増幅反応が発生していないことを毎回確認した。測定後、倍数増幅の算出が可能なように演算開始サイクル数および演算終了サイクル数を設定し、倍数増幅範囲における増幅率であるＲ値を求めた。各試料については３ウェルの反応それぞれについて、増幅が一定量に到達するに要したサイクル数をＣＴ値として求め、１／（ＲＣＴ）値を求めることによりｃＤＮＡ量の割合を算出した。その平均およびＳＤ値を求めた後、サンプル非添加時及び添加時におけるＧＡＰＤＨ ｃＤＮＡとＷｎｔ５ａ ｃＤＮＡの比を求め、非添加時の値を１００とした相対値をＷｎｔ５ａ ｍＲＮＡ平均発現率として、表１、図１に示した。
【００１９】
【表１】
【００２０】
表１に示した通り、リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルは、Ｗｎｔ５ａの発現を促進する効果が認められた。
【００２１】
続いて、本発明のＷｎｔ５ａ産生促進剤を用いた養毛剤に関する実施例について説明する。
【００２２】
［処方例１］ 液状基剤
（１）エタノール ２０．０（質量％）
（２）ポリオキシエチレン(60E.O.)硬化ヒマシ油 １．０
（３）ジプロピレングリコール ５．０
（４）1,3-ブチレングリコール １０．０
（５）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（６）リナロールオキシド ０．１
（７）フェニルエチルアルコール ０．１
（８）精製水 ６３．７
製法：（１）〜（７）を（８）に順次添加して溶解する。
【００２３】
［処方例２］ 乳状基剤
（１）セタノール １．０（質量％）
（２）ミツロウ ０．５
（３）ワセリン ２．０
（４）スクワラン ６．０
（５）ジメチルポリシロキサン ２．０
（６）ポリオキシエチレン(20E.O.)ソルビタン
モノステアリン酸エステル １．０
（７）グリセリルモノステアリン酸エステル １．０
（８）グリセリン ４．０
（９）1,3-ブチレングリコール ４．０
（10）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（11）精製水 ６７．２
（12）カルボキシビニルポリマー（１．０質量％水溶液）１０．０
（13）水酸化カリウム（１０．０質量溶液） １．０
（14）アンスラニル酸メチル ０．１
（15）リモネン ０．１
製法：（１）〜（７）の油相成分を混合し、加熱溶解して７５℃とする。一方、（８）〜（11）の水相成分を混合，溶解して７５℃とする。これに前記油相を加えて予備乳化した後、（12）を添加してホモミキサーにて均一に乳化し、次いで（13）を加えて増粘させた後冷却し、４０℃で（14）〜（15）を添加，混合する。
【００２４】
［処方例３］ ゲル状基剤
（１）ジプロピレングリコール １０．０（質量％）
（２）カルボキシビニルポリマー ０．５
（３）水酸化カリウム（１０．０質量％水溶液） １．０
（４）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（５）リナロールオキシド ０．１
（６）フェニルエチルアルコール ０．１
（７）アンスラニル酸メチル ０．１
（８）精製水 ８８．１
製法：（８）に（２）を均一に溶解した後、（１）に（４）〜（７）を溶解して添加し、次いで（３）を加えて増粘させる。
【００２５】
［処方例４］ シャンプー
（１）アルキルエーテル硫酸ナトリウム １８．０（質量％）
（２）ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ２．０
（３）リナロールオキシド ０．１
（４）フェニルエチルアルコール ０．１
（５）アンスラニル酸メチル ０．１
（６）精製水 ７９．４
製法；（１）〜（５）を順次（６）に添加し、均一に混合，溶解させる。
【００２６】
［処方例５］ ヘアリンス
（１）セタノール ２．０（質量％）
（２）塩化ステアリルトリメチルアンモニウム ２．０
（３）シリコーン油 ３．０
（４）ポリオキシエチレンオレイルエーテル(10E.O.) １．０
（５）グリセリン ３．０
（６）リナロールオキシド ０．１
（７）フェニルエチルアルコール ０．１
（８）アンスラニル酸メチル ０．１
（９）精製水 ８８．４
製法；（９）に（５）を加え、７０℃に加熱する。一方（１）〜（４）を混合，溶解し、７０℃に加熱する。この油相を撹拌しながら先に調製した水相に徐々に加えて予備乳化し、ホモミキサーを加えて均一とした後冷却し、４０℃にて（６）〜（８）を添加する。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】本発明のＷｎｔ５ａ産生促進剤による、Ｗｎｔ５ａ ｍＲＮＡ発現率を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明はＷｎｔ５ａの産生を促進する、Ｗｎｔ５ａ産生促進剤に関する。また、本発明は、Ｗｎｔ５ａ産生促進剤を有効成分とする養毛剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
胚発生に伴う形態形成では分泌性シグナル分子を介した相互作用が細胞間のコミュニケーションの１つの方法として使われている。この細胞間シグナル分子の１つであるＷｎｔファミリーには１９種以上のメンバーが知られている。線虫，昆虫からマウス，ヒトに至るまでの動物においてＷｎｔ遺伝子群は発生のさまざまな局面で時間的，位置的に特異的な発現を示し，形態形成の誘導因子，細胞の極性決定因子，増殖分化の調節因子として機能している。Ｗｎｔにより惹起される細胞内シグナル伝達のネットワークには、形態形成だけでなく細胞増殖，形質転換（癌化）に関連する多くの因子が関与している。このようなＷｎｔファミリーのうち、Ｗｎｔ５ａに関して、インスリン分泌関与すること（特許文献１参照）や、毛乳頭細胞の細胞死を抑制する効果等が知られている。
【０００３】
従来より、脱毛症の防止，改善を目的とした養毛用化粧料が開発されてきた。脱毛症のうち、男性型脱毛症の占める割合が高いことから、特に抗アンドロゲン作用を有する成分の応用が検討され、活性型テストステロンであるジヒドロテストステロンの受容体への結合を競合的に阻害するものや、テストステロンからジヒドロテストステロンへの変換を触媒する酵素であるテストステロン５α−リダクターゼを阻害するものが開示されてきた。前者としては酢酸シプロテロンが、後者としてはアンドロスタノン誘導体，ジシクロヘプテノン誘導体，フェノキシブタン誘導体，トコフェリルキノン，トロポロン誘導体，ユビキノン等の他、シソ科植物，キク科植物をはじめ多くの植物の抽出物が挙げられる（特許文献２）。また、2,4-ジアミノ-6-ピペリジノピリミジン-3-オキシド(ミノキシジル)，セファランチン，ビタミンＥ誘導体，塩化カルプロニウム等、頭皮の血行促進作用を有するものや、アデノシン三リン酸，ウロガストロン，バイカレイン，パンテテイン-S-スルホン酸， 奇数鎖脂肪酸誘導体といった毛母細胞をはじめ毛包を活性化する作用を有するものの応用も検討されている。しかしながら脱毛症の発症は、テストステロン依存性の男性型脱毛症の他に、老化や栄養不良，ストレス等種々の原因により見られる。このような男性型以外の脱毛症には、抗アンドロゲン作用を有する成分の効果は期待できず、また上記した抗アンドロゲン作用を有する成分の中には、副作用の発現が懸念されたり、化粧料基剤中での安定性が悪かったり、作用効果が不十分であったりするものも少なくなかった。さらに、植物抽出物等天然物を基原とするものについては、一定の品質のものを得るのが困難で、さらに化粧料への配合に際し好ましくない色や臭いを有するものも多かった。一方、頭皮血行促進作用や毛包活性化作用を有すると報告されたものについても、低濃度で十分な作用効果の得られるものは少なく、安定性及び安全性上問題のあるものも存在していた。その為、より効果的な養毛料が強く要望されている。
【０００４】
【特許文献１】特開２００５−２２００２２号公報
【特許文献２】特開平３−１６１４２６合公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
育毛剤、若しくは糖尿病、高脂血症、耐糖能異常などの予防・治療等として有用なＷｎｔ５ａ産生促進剤、並びにかかるＷｎｔ５ａ産生促進剤を有効成分とする養毛剤を得ることを目的とした。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者等は、リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される１種又は２種以上が、Ｗｎｔ５ａの産生を促進することを見いだし、本願発明を完成した。
【０００７】
すなわち本発明のＷｎｔ５ａ産生促進剤は、リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される１種又は２種以上を有効成分とするものである。
【０００８】
また本発明の養毛剤は、リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される１種又は２種以上を有効成分とする、Ｗｎｔ５ａ産生促進剤を有効成分とするものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、Ｗｎｔ５ａの産生を促進し、糖尿病などの予防・治療剤、若しくは育毛剤として有用なＷｎｔ５ａ産生促進剤を提供することができる。特に本発明のＷｎｔ産生促進剤は、養毛剤として有効で、かかるＷｎｔ産生促進剤、養毛剤を頭皮に適用することにより、優れた養毛効果を発揮する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明の実施形態について詳細に説明する。
【００１１】
本発明のＷｎｔ５ａ産生促進剤は、リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される１種又は２種以上を有効成分とする。これらの化合物は、従来公知の方法により合成することが可能である。また市販品として入手することも可能である。
【００１２】
本発明のＷｎｔ５ａ産生促進剤は、リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される１種又は２種以上を有効成分とするものであればその形態は限定されず、例えば、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）や健康食品などの飲食品、医薬品、化粧品、医薬部外品などとして用いることができる。
【００１３】
飲食品として用いる場合は、そのまま直接摂取することができ、また、公知の担体や助剤などを使用してカプセル剤、錠剤、顆粒剤など服用しやすい形態に成型して摂取することができる。これら成型剤における各抽出物の含有量は０．００１〜１００質量％、好ましくは０．１〜９０質量％がよい。さらに、飲食物材料に混合して、チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ビスケット、クラッカーなどの菓子類、アイスクリーム、氷菓などの冷菓類、茶、清涼飲料、栄養ドリンク、美容ドリンクなどの飲料、うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類、蒲鉾、竹輪、半片などの練り製品、ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料、マーガリン、バター、サラダ油などの油脂類、パン、ハム、スープ、レトルト食品、冷凍食品など、すべての飲食物に使用することができる。これら飲食用組成物を摂取する場合、その摂取量は各抽出物換算で成人一人一日当たり０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重がよい。また、家畜やペット用の飼料やペットフードとしても使用することができ、その摂取量は各抽出物換算で一日当たり０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重が好ましい。
【００１４】
医薬品として用いる場合は、その剤形は特に限定されず、例えば、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、注射剤、坐剤、貼付剤などが挙げられる。製剤化においては、薬剤学的に許容される他の製剤素材、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などを適宜添加して調製することができる。これら製剤の投与量としては、各抽出物換算で成人一人一日当たり０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を１回ないし数回に分けて投与する。また、家畜やペット用の医薬品としても使用することができ、その投与量は各抽出物換算で一日当たり０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重が好ましい。
【００１５】
化粧品、医薬部外品として用いる場合、その剤型は任意であり、例えば、ローションなどの可溶化系、クリームや乳液などの乳化系、カラミンローション等の分散系として提供することができる。さらに、噴射剤と共に充填したエアゾール、軟膏剤、粉末、顆粒などの種々の剤型で提供することもできる。
【００１６】
本発明のＷｎｔ５ａ産生促促進剤を含有する、化粧品、医薬部外品には、プロテアーゼ活性促進剤のほかに、必要に応じて、通常化粧品、医薬部外品、及び洗浄料に配合される、油性成分、細胞賦活剤、抗酸化剤、保湿剤、粉体、色素、乳化剤、可溶化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、増粘剤、薬剤、香料、樹脂、防菌防黴剤、アルコール類等を適宜配合することができる。
【００１７】
本発明のＷｎｔ５ａ産生促進剤を化粧品、医薬部外品に配合する際の配合量は、皮化粧品、医薬部外品の種類や使用目的等によって調整することができるが、効果や安定性などの点から、全量に対して０．０００１〜５０．０質量％が好ましく、より好ましくは、０．００１〜２５．０質量％である。
【実施例】
【００１８】
（１）Ｗｎｔ５ａの細胞からの分泌促進効果の評価
リアルタイムＰＣＲを用いてＷｎｔ５ａの細胞からの分泌促進効果の評価を行った。
ヒト毛乳頭細胞（ｈＤＰＣ，東洋紡社製）は、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを用いて維持培養した。
五代目ヒト毛乳頭細胞（ｈＤＰＣ）を６穴プレートに１％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを用いて播種し、一晩培養した。サンプル非添加／添加培地と交換し、さらに２４時間培養した。培養終了後、培地を除去し、ＰＢＳ（−）で洗浄後、ＩＳＯＧＥＮ試薬（ＷＡＫＯ社製）を用いて全てのＲＮＡ（総ＲＮＡ）を抽出した。各総ＲＮＡ １２５０ｎｇをＴａＫａＲａＲＴ−ＰＣＲｋｉｔ（ＴａＫａＲａ社製）を用い、添付のプロトコルに従って全量２５μｌの反応系でＦｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ合成を行った。この反応液を使用し、リアルタイムＰＣＲを行った。
Ｗｎｔ５ａ ｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡは配列番号１および２のプライマー（それぞれ、Ｗｎｔ５ａの６２１〜６４０および７６２〜７８０の塩基配列、表３）を使用して、サイバーグリーン（ＳＹＢＲ−Ｇｒｅｅｎ）法によるリアルタイムＰＣＲで測定した。このときの試料問の誤差補正のために、ＧＡＰＤＨ（グリセリルアルデヒド−３−リン酸 デヒドロゲナーゼ）ｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡを配列番号３および４のプライマー（それぞれ、ＧＡＰＤＨの５０２〜５２２および６２９〜６４８の塩基配列）を使用したサイバーグリーン法によるリアルタイムＰＣＲの測定も行った。
Ｗｎｔ５ａ：プライマー
配列番号１ CAA GGG CTC CTA CGA GAG TG
配列番号２ CAG CCA GCA TGT CTT CAG G
ＧＡＰＤＨ：プライマー
配列番号３ TTT GGT ATC GTG GAA GGA CTC
配列番号４ GAG GCA GGG ATG ATG TTC TG
同一の試料毎に３本の反応ウェルを使用して、リアルタイムＰＣＲ反応１反応ウェル当たり、総ＲＮＡ １００ｎｇに相当する分量を投入して鋳型とした。反応１ウェル当たり、６ｐｍｏｌずつのプライマー、最終濃度１倍のＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ ＭａｓｔｅｒＭｉｘ（Ａｐｐ１ｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を加えた。リアルタイムＰＣＲは、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７５００ Ｆａｓｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を使用してサイバーグリーン法の標準的方法（９５℃１５分、９５℃１５秒、６０℃１分×４５サイクル、その後解離曲線を描くために９５℃まで緩やかに上昇）にて行った。なお、プライマー非添加の反応で増幅が検出されないことを確認すると同時に、解離曲線のパターンから、対照配列以外の増幅反応が発生していないことを毎回確認した。測定後、倍数増幅の算出が可能なように演算開始サイクル数および演算終了サイクル数を設定し、倍数増幅範囲における増幅率であるＲ値を求めた。各試料については３ウェルの反応それぞれについて、増幅が一定量に到達するに要したサイクル数をＣＴ値として求め、１／（ＲＣＴ）値を求めることによりｃＤＮＡ量の割合を算出した。その平均およびＳＤ値を求めた後、サンプル非添加時及び添加時におけるＧＡＰＤＨ ｃＤＮＡとＷｎｔ５ａ ｃＤＮＡの比を求め、非添加時の値を１００とした相対値をＷｎｔ５ａ ｍＲＮＡ平均発現率として、表１、図１に示した。
【００１９】
【表１】
【００２０】
表１に示した通り、リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルは、Ｗｎｔ５ａの発現を促進する効果が認められた。
【００２１】
続いて、本発明のＷｎｔ５ａ産生促進剤を用いた養毛剤に関する実施例について説明する。
【００２２】
［処方例１］ 液状基剤
（１）エタノール ２０．０（質量％）
（２）ポリオキシエチレン(60E.O.)硬化ヒマシ油 １．０
（３）ジプロピレングリコール ５．０
（４）1,3-ブチレングリコール １０．０
（５）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（６）リナロールオキシド ０．１
（７）フェニルエチルアルコール ０．１
（８）精製水 ６３．７
製法：（１）〜（７）を（８）に順次添加して溶解する。
【００２３】
［処方例２］ 乳状基剤
（１）セタノール １．０（質量％）
（２）ミツロウ ０．５
（３）ワセリン ２．０
（４）スクワラン ６．０
（５）ジメチルポリシロキサン ２．０
（６）ポリオキシエチレン(20E.O.)ソルビタン
モノステアリン酸エステル １．０
（７）グリセリルモノステアリン酸エステル １．０
（８）グリセリン ４．０
（９）1,3-ブチレングリコール ４．０
（10）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（11）精製水 ６７．２
（12）カルボキシビニルポリマー（１．０質量％水溶液）１０．０
（13）水酸化カリウム（１０．０質量溶液） １．０
（14）アンスラニル酸メチル ０．１
（15）リモネン ０．１
製法：（１）〜（７）の油相成分を混合し、加熱溶解して７５℃とする。一方、（８）〜（11）の水相成分を混合，溶解して７５℃とする。これに前記油相を加えて予備乳化した後、（12）を添加してホモミキサーにて均一に乳化し、次いで（13）を加えて増粘させた後冷却し、４０℃で（14）〜（15）を添加，混合する。
【００２４】
［処方例３］ ゲル状基剤
（１）ジプロピレングリコール １０．０（質量％）
（２）カルボキシビニルポリマー ０．５
（３）水酸化カリウム（１０．０質量％水溶液） １．０
（４）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（５）リナロールオキシド ０．１
（６）フェニルエチルアルコール ０．１
（７）アンスラニル酸メチル ０．１
（８）精製水 ８８．１
製法：（８）に（２）を均一に溶解した後、（１）に（４）〜（７）を溶解して添加し、次いで（３）を加えて増粘させる。
【００２５】
［処方例４］ シャンプー
（１）アルキルエーテル硫酸ナトリウム １８．０（質量％）
（２）ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ２．０
（３）リナロールオキシド ０．１
（４）フェニルエチルアルコール ０．１
（５）アンスラニル酸メチル ０．１
（６）精製水 ７９．４
製法；（１）〜（５）を順次（６）に添加し、均一に混合，溶解させる。
【００２６】
［処方例５］ ヘアリンス
（１）セタノール ２．０（質量％）
（２）塩化ステアリルトリメチルアンモニウム ２．０
（３）シリコーン油 ３．０
（４）ポリオキシエチレンオレイルエーテル(10E.O.) １．０
（５）グリセリン ３．０
（６）リナロールオキシド ０．１
（７）フェニルエチルアルコール ０．１
（８）アンスラニル酸メチル ０．１
（９）精製水 ８８．４
製法；（９）に（５）を加え、７０℃に加熱する。一方（１）〜（４）を混合，溶解し、７０℃に加熱する。この油相を撹拌しながら先に調製した水相に徐々に加えて予備乳化し、ホモミキサーを加えて均一とした後冷却し、４０℃にて（６）〜（８）を添加する。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】本発明のＷｎｔ５ａ産生促進剤による、Ｗｎｔ５ａ ｍＲＮＡ発現率を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される１種又は２種以上を有効成分とする、Ｗｎｔ５ａ産生促進剤。
【請求項２】
請求項１に記載のＷｎｔ５ａ産生促進剤を有効成分とする、養毛剤。
【請求項１】
リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される１種又は２種以上を有効成分とする、Ｗｎｔ５ａ産生促進剤。
【請求項２】
請求項１に記載のＷｎｔ５ａ産生促進剤を有効成分とする、養毛剤。
【図１】
【公開番号】特開２００８−１３３２３３（Ｐ２００８−１３３２３３Ａ）
【公開日】平成２０年６月１２日（２００８．６．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−３２１３４２（Ｐ２００６−３２１３４２）
【出願日】平成１８年１１月２９日（２００６．１１．２９）
【出願人】（０００１３５３２４）株式会社ノエビア (258)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年６月１２日（２００８．６．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１１月２９日（２００６．１１．２９）
【出願人】（０００１３５３２４）株式会社ノエビア (258)
【Ｆターム（参考）】
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