エラスターゼ阻害組成物
【課題】エラスターゼ阻害活性の高い化合物を有効成分とするエラスターゼ阻害組成物や皮膚外用剤を提供すること。
【解決手段】２，３−ジヒドロキシ安息香酸のみがエラスターゼ阻害活性効果を有し、２，５−ジヒドロキシ安息香酸などの他のジヒドロキシ安息香酸の異性体はエラスターゼ阻害活性効果を示さないことから、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有するエラスターゼ阻害組成物や皮膚外用剤を調製した。２，３−ジヒドロキシ安息香酸の塩としては、ナトリウム塩等のカチオン塩を好適に例示することができる。
【解決手段】２，３−ジヒドロキシ安息香酸のみがエラスターゼ阻害活性効果を有し、２，５−ジヒドロキシ安息香酸などの他のジヒドロキシ安息香酸の異性体はエラスターゼ阻害活性効果を示さないことから、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有するエラスターゼ阻害組成物や皮膚外用剤を調製した。２，３−ジヒドロキシ安息香酸の塩としては、ナトリウム塩等のカチオン塩を好適に例示することができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分とするエラスターゼ阻害組成物や、かかるエラスターゼ阻害組成物を含有する皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
エラスチン線維は、ヒト等のほ乳類や魚類などの体内の血管・靭帯・肺・皮膚をはじめとする、ほぼ全身の臓器・組織に分布する細胞外マトリックスの結合組織の線維の一種で、伸縮可能なαへリックス構造が架橋することによって形成され、組織の柔軟性維持に重要な役割を担っていることが知られている。一方、皮膚は表皮、真皮、皮下組織からなり、表皮は外部の乾燥や異物から体を守り、皮下組織は皮下脂肪等により外部からの衝撃を和らげ、真皮は線維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持する真皮細胞外マトリックスによって構成されており、皮膚の構造維持に重要な役割を果たしている。エラスチン線維は、皮膚では乳頭層の最下部で表皮面に平行に走る線維と乳頭層の中ほどの線維（elaunin fiber）、さらにそこから細い終末の線維が出て表皮の基底膜まで垂直に上がるもの（oxytalan fiber）があるとされている。
【０００３】
皮膚のしわ形成、くすみ、きめの消失、弾力性の低下といった肌の老化といわれる現象は、加齢による線維芽細胞の増殖能の低下によるエラスチン線維等の産生能の低下が一因とされているが、皮膚の紫外線への曝露、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等の外部刺激などが、エラスチン線維の分解を引き起こす結果、しわ形成、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等を原因とする肌荒れや皮膚の老化などの症状が現れるともいわれている。
【０００４】
エラスチン線維が分解する一因として、エラスターゼによる分解があると考えられている。エラスターゼはセリンプロテアーゼファミリーに属する酵素であり、例えば、膵エラスターゼは、膵の病変によって血中値が高くなることから各種膵疾患のマーカーとなっており、白血球由来のエラスターゼは、肉眼で確認できない初期の微小炎症においても血中濃度が上昇することが知られている。皮膚においては、例えば紫外線Ａ波が照射された場合に微小炎症の蓄積があることが推察され、エラスターゼ活性が増加することが確認されている（例えば、特許文献１参照）。
【０００５】
従って、真皮におけるエラスターゼの作用を抑制し、エラスチン線維の分解を防止することが、しわやたるみ等の肌の老化防止に有効であるとされ、例えば、ブルセラ ランシフォリア抽出物（例えば、特許文献２参照）、スイートピーの花の抽出物（例えば、特許文献３参照）、アイスランドモスの抽出物（例えば、特許文献４参照）、マンネンタケの抽出物（例えば、特許文献５参照）等、植物・真菌抽出物などを有効成分として含有するエラスターゼ活性阻害剤が提案されている。
【０００６】
また、例えば、グルコサミン、グルコサミン誘導体又はそれらの塩（例えば、特許文献６参照）や、ホスホン酸誘導体、メルカプトプロピオンアミド誘導体等（例えば、特許文献７参照）や、コロソリン酸（例えば、特許文献８参照）や、１，６−ヘプタジエン−３，５−ジオン誘導体（例えば、特許文献９参照）などの化合物を有効成分として含有するエラスターゼ阻害剤が提案されている。
【０００７】
一方、皮膚組織内のエラスターゼ活性が、毛周期と対応し、皮膚組織内エラスターゼ活性の上昇が毛包形成及びその成長に不可欠であることが報告されており（例えば、特許文献１０参照）、エラスターゼ活性阻害剤を有効成分とする発毛抑制剤が提案されている（例えば、特許文献１１参照）。
【０００８】
【特許文献１】特許第３７４９７６９号公報
【特許文献２】特開２００２−２５５７３４号公報
【特許文献３】特開２００６−２８２６１７号公報
【特許文献４】特開２００７−３０２６０７号公報
【特許文献５】特開２００５−２３０２１号公報
【特許文献６】特開２００４−８３４３２号公報
【特許文献７】特開２００６−１０４２０９号公報
【特許文献８】特開２００６−２６５２３２号公報
【特許文献９】特開２００６−３４７８９７号公報
【特許文献１０】特開平１１−１９９４５０号公報
【特許文献１１】特開２００５−３４３８８７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上記の種々のエラスターゼ活性阻害剤は、安全性、安定性等が確認されていないものもあり、エラスターゼ阻害活性効果が十分確認されていない場合もある。したがって、本発明の課題は、エラスターゼ阻害活性の高い化合物を有効成分とするエラスターゼ阻害組成物や皮膚外用剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは上記課題を解決するため、従来のエラスターゼ阻害剤とは全く異なった化学構造を有するエラスターゼ阻害作用を有する化合物を同定すべく鋭意研究を重ねていたところ、今回、ポリフェノールの一種である特定のジヒドロキシ安息香酸、すなわち２，３−ジヒドロキシ安息香酸のみがエラスターゼ阻害活性効果を有し、他のジヒドロキシ安息香酸の異性体はエラスターゼ阻害活性効果を有さないことを見い出した。また、ジヒドロキシ安息香酸の異性体について先行技術を調査したところ、２，５−ジヒドロキシ安息香酸が、スクアリン酸と併用される有機酸として、エラスターゼ阻害活性ではなくエラスターゼ産生抑制作用を有する化粧料組成物の一構成要素として提案されている（特開２００５−１４５８８３号公報参照）にすぎないことを確認し、本発明を完成した。
【００１１】
すなわち本発明は、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分とするエラスターゼ阻害組成物や、該エラスターゼ阻害組成物の有効成分である２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物を含有する皮膚外用剤や、老化防止用であることを特徴とする上記皮膚外用剤に関する。その他、本発明は、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物をエラスターゼ阻害剤や皮膚外用剤として使用する方法や、皮膚外用剤の製造における２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物の使用方法を包含する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の２，３−ジヒドロキシ安息香酸又はその塩を有効成分とする本発明のエラスターゼ阻害組成物（阻害剤）は、真皮細胞外マトリックスのエラスチン線維のエラスターゼによる分解を原因とするしわ、たるみ等の肌の老化防止剤として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明のエラスターゼ阻害組成物としては、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分とするものであれば特に制限されず、本発明の皮膚外用剤としては、前記エラスターゼ阻害剤としての２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物を含有する皮膚外用剤であれば特に制限されず、本発明の皮膚外用剤の種類としては、日焼け止め、化粧水、乳液、クリーム、美容液、パック等の顔、手足又はボディ用の基礎化粧料、ファンデーション、コンシーラー、白粉、頬紅、口紅、アイシャドウ等のメーキャップ化粧料、発毛抑制剤等の毛髪・頭皮用化粧料などからなる化粧料を挙げることができ、また、かかる皮膚外用剤の形態としては液状、粉末状、固形状、棒状、水中油型・油中水型乳液状、クリーム状、ジェル状等を挙げることができる。
【００１４】
上記２，３−ジヒドロキシ安息香酸とは、式（Ｉ）で表されるポリフェノールの一種であり、ｏ−ピロカテク酸（o-pyrocatechuic acid）と称されることもある。
【００１５】
【化１】
【００１６】
本発明に用いられる上記式（Ｉ）で表される２，３−ジヒドロキシ安息香酸又はその塩等の本発明の化合物、あるいは該化合物含有組成物の製法や入手方法としては、該化合物又は該化合物含有組成物を、植物体から分離・抽出する方法や、微生物の代謝物より分離・抽出する方法や、酵素的に生産する方法や、カテコールのジナトリウム塩を二酸化炭素でカルボキシル化する方法等化学的に合成する方法や、市販品を購入する方法などの公知の方法を含め特に制限されない。
【００１７】
上記２，３−ジヒドロキシ安息香酸は、各種の生物に分布することが知られており、かかる２，３−ジヒドロキシ安息香酸を含有する植物体としては、例えば、ボレエバ・オリエンタリス（Boreava orientalis）（Sakushima et al., Phytochemistry Vol. 40 No. 1 pp.257-261, 1995参照）や、ツツジ科のゴールセリア・プロカンベンズ（gaultheria procumbens）（Nature 184, 1803, 1959参照）等を挙げることができ、これら植物体から２，３−ジヒドロキシ安息香酸を分離・抽出する方法としては常法を用いることができる。例えば、植物体原料を乾燥後粉砕し溶媒抽出した後、遠心分離、ろ過等を行うことにより抽出することができ、必要に応じてカラムクロマトグラフィー等の通常の精製手段を用いて精製することができる。また、２，３−ジヒドロキシ安息香酸を生産する微生物としては、例えば、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）(Terui et al., The Society for Bioscience and Bioengineering, Japan Vol.31, No.2 pp.65-71, 1953参照)、アゾトバクター・ヴィネランディ（Azotobacter vinelandii）（Corbin et al., Biochemistry Vol.8, No.3, 1969参照）、リゾビウム・ラジオバクター（Rhizobium radiobacter）（特開２００５−１１８００２号公報参照）等を挙げることができ、これら微生物から２，３−ジヒドロキシ安息香酸を分離・抽出する方法としては常法を用いることができる。例えば、上記微生物の培養物を溶媒抽出した後、遠心分離、ろ過等を行うことにより抽出することができ、必要に応じてカラムクロマトグラフィー等の通常の精製手段を用いて精製することができる。また、２，３−ジヒドロキシ安息香酸を産生する微生物から単離された２，３−ジヒドロキシ安息香酸の産生を触媒しうる酵素と適当な基質を含む酵素反応液から２，３−ジヒドロキシ安息香酸を抽出してもよい。
【００１８】
本発明の２，３−ジヒドロキシ安息香酸の塩としては、本発明のエラスターゼ阻害組成物における阻害活性が２，３−ジヒドロキシ安息香酸と同効であれば特に制限されず、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、アルミニウム塩、アンモニウム塩等のカチオン塩などを挙げることができ、ナトリウム塩を好適に例示することができる。なお、本発明の２，３−ジヒドロキシ安息香酸の塩としては、使用時において水溶液、懸濁液、粉体等として用いることができ、２，３−ジヒドロキシ安息香酸とその塩は単独でも２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００１９】
本発明のエラスターゼ阻害組成物としては、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有する組成物であれば特に制限されず、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物に、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、希釈剤、緩衝剤、等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤等を配合した組成物や、前述の植物体や微生物からの精製過程における２，３−ジヒドロキシ安息香酸の抽出・濃縮物を例示することができる。
【００２０】
本発明のエラスターゼ阻害組成物における阻害活性としては、エラスターゼとその基質タンパク質であるエラスチン線維との結合を阻害するなど、エラスターゼの作用を抑制する活性をいい、上記エラスターゼとしては、ヒト等のほ乳類や魚類の体内の血管・靭帯・肺・皮膚をはじめとする、ほぼ全身の臓器・組織に分布する細胞外マトリックスの結合組織のエラスチン線維の分解活性を有するものであれば特に制限されず、例えば、ほ乳動物の結合組織から抽出したエラスターゼや、ヒトの真皮細胞外マトリックスに存在するエラスターゼを挙げることができ、具体的には、白血球に由来するエラスターゼ（ＥＣ３．４．２１．３７）や、膵臓に由来するエラスターゼ（ＥＣ３．４．２１．３６）を例示することができる。また、本発明のエラスターゼ阻害組成物における阻害活性の程度としては、Ｎ−サクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−ｐ−ニトロアニリドを基質とした以下の方法において、エラスターゼ活性抑制率が、２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは３５％以上、最も好ましくは４０％以上の阻害活性を具体的に例示することができる。
【００２１】
上記エラスターゼ活性抑制率を算出する方法としては、基質としてＮ−サクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−ｐ−ニトロアニリドを用い、エラスターゼ酵素が該基質に作用するとニトロアニリンを遊離して発色して、波長４０５ｎｍにおける吸光度が上昇するが、エラスターゼの酵素活性が阻害されると遊離ニトロアニリン量が低下して該吸光度が低下する性質を利用して、試料溶液と１ｍｍｏｌ／Ｌ濃度のＮ−サクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−ｐ−ニトロアニリド１００μＬとを混合した後、０．０５ｕｎｉｔｓ／ｍＬ濃度のエラスターゼ５０μＬを添加し、３７℃にて３０分間反応させ、波長４０５ｎｍにおける吸光度を測定し、生成したニトロアニリンを定量して、試料未添加の場合の吸光度を１００％とした相対値により、エラスターゼ酵素活性抑制率を以下の式により計算する方法を挙げることができる；
エラスターゼ活性抑制率＝｛１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）｝×１００
（式中：
Ａ：基質溶液と試料溶液とを混合した混合液に酵素溶液を添加した後３０分経過時の該混合液の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｂ：基質溶液と試料溶液とを混合した混合液の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｃ：試料溶液の代わりに、該溶液の溶媒を基質溶液と上記割合で混合した後、酵素溶液を添加した時の混合液の波長４０５ｎｍの吸光度
Ｄ：試料溶液も酵素溶液も添加していない、基質溶液の波長４０５ｎｍの吸光度）。
【００２２】
本発明のエラスターゼ阻害組成物は、エラスチン線維のエラスターゼによる分解を原因とする状態を改善する手段として用いられる用途、例えば、皮膚外用剤や、肺気腫、アテローム性動脈硬化、リュウマチ性関節炎等の治療・予防剤、皮膚の弾力が減退または消失し、しわやたるみが生じるとともに肺気腫、大動脈瘤、腸管拡張症などを引き起こす一連の症候群である皮膚弛緩症、及び主に日光に連続曝露された部位において、外観所見でなめし皮様の皮膚肥厚、深いしわ、黄変色などが認められる日光弾性線維症等の一連の皮膚疾患等の治療・予防剤等の医薬品、医薬部外品などの用途に用いることができるが、化粧料等の皮膚外用剤をその用途として特に好適に例示することができる。
【００２３】
また、本発明のエラスターゼ阻害組成物を医薬品、医薬部外品等として調製するに際しては、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、希釈剤、緩衝剤、等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤等の医薬品添加物と適宜混合、希釈又は溶解して配合してもよく、かかる剤型としては、軟膏、外用液剤、貼付剤、乳液、ローション、溶液、ゲル等の剤型やパック、パウダー、スティック等を挙げることができ、また、治療目的に応じて非経口的又は経口的に用いることができる。
【００２４】
さらに、本発明のエラスターゼ阻害組成物は、上記必須成分としての２，３−ジヒドロキシ安息香酸又はその塩の他に、通常皮膚外用剤に配合される成分として、以下の油性成分、粉体成分、界面活性剤、水性成分、酸化防止剤、防腐剤、皮膚老化防止に効果があるといわれている化合物、紫外線吸収剤、紫外線防御剤、抗炎症剤成分から選択される１種又は２種以上を本発明の効果を妨げない範囲で適宜配合することで、本発明のエラスターゼ阻害剤を含有する化粧料を中心とした皮膚外用剤を製造することができる。
【００２５】
２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物に配合することができる油性成分としては、皮膚外用剤に一般に用いられる油性成分であれば特に制限されず、例えば、動物油、植物油、合成油等を起源とする炭化水素類、油脂類、ロウ類、硬化油類、エステル油類、脂肪酸類、高級アルコール類、シリコーン油類、フッ素系油類、ラノリン誘導体類、油性ゲル化剤類などを挙げることができ、具体的には、流動パラフィン、スクワラン、ワセリン、ポリエチレンワックス、エチレン・プロピレンコポリマー、パラフィンワックス、モンタンワックス、フィッシャートロプシュワックス、ポリイソブチレン、ポリブテン、セレシンワックス、オゾケライトワックス等の炭化水素類、モクロウ、オリーブ油、ヒマシ油、ミンク油、マカデミアンナッツ油等の油脂類、ミツロウ、ゲイロウ、カルナウバワックス、キャンデリラワックス等のロウ類、ホホバ油、２−エチルヘキサン酸セチル、乳酸イソステアリル、乳酸オクチルドデシル、乳酸オレイル、乳酸ステアリル、ジイソステアリン酸グリセリル、トリイソステアリン酸ジグリセリル、リンゴ酸ジイソステアリル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ロジン酸ペンタエリトリットエステル、ジオクタン酸ネオペンチルグリコール、ジオクタン酸ネオペンチルグリコール、コレステロール脂肪酸エステル、フィトステロール脂肪酸エステル、トリグリセライド等のエステル類、ステアリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、ベヘニン酸、イソステアリン酸、オレイン酸等の脂肪酸類、ステアリルアルコール、セチルアルコール、ラウリルアルコール、オレイルアルコール、イソステアリルアルコール、ベヘニルアルコール等の高級アルコール類、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、オクタメチルシクロテトラシロキサン、トリメチルシロキシケイ酸、高重合度メチルフェニルポリシロキサン、架橋型メチルポリシロキサン、ポリオキシアルキレン変性オルガノポリシロキサン、架橋型ポリエーテル変性メチルポリシロキサン、メタクリル変性ポリシロキサン、ステアリル変性メチルポリシロキサン、オレイル変性メチルポリシロキサン、ベヘニル変性メチルポリシロキサン、ポリビニルピロリドン変性メチルポリシロキサン、高重合度ジメチルポリシロキサン、ポリオキシアルキレン・アルキルメチルポリシロキサン・メチルポリシロキサン共重合体、アルコキシ変性ポリシロキサン、架橋型オルガノポリシロキサン、フッ素変性ポリシロキサン等のシリコーン類、パーフルオロデカン、パーフルオロオクタン、パーフルオロポリエーテル等のフッ素系油剤類、ラノリン、酢酸ラノリン、ラノリン脂肪酸イソプロピル、ラノリンアルコール等のラノリン誘導体、オクタン酸デキストリン、ラウリン酸デキストリン、パルミチン酸デキストリン、ミリスチン酸デキストリン、ステアリン酸デキストリン、ベヘニン酸デキストリン、ヤシ油脂肪酸デキストリン、（パルミチン酸／オクタン酸）デキストリン、蔗糖脂肪酸エステル、デンプン脂肪酸エステル、イソステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸カリウム、１２−ヒドロキシステアリン酸等の油性ゲル化剤類などを挙げることができる。
【００２６】
また、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物に配合することができる粉体としては、皮膚外用剤に一般に用いられる粉体であれば、球状、板状、針状等の形状、煙霧状、微粒子、顔料級等の粒子径、多孔質、無孔質等の粒子構造等により特に制限されず、例えば、無機粉体類、光輝性粉体類、有機粉体類、色素粉体類、金属粉体類、複合粉体類等を挙げることができ、具体的には、酸化チタン、酸化亜鉛、酸化セリウム、硫酸バリウム等の白色無機顔料、酸化鉄、カーボンブラック、チタン・酸化チタン焼結物、酸化クロム、水酸化クロム、紺青、群青等の有色無機顔料、タルク、白雲母、金雲母、紅雲母、黒雲母、合成雲母、絹雲母（セリサイト）、合成セリサイト、カオリン、炭化珪素、ベントナイト、スメクタイト、無水ケイ酸、酸化アルミニウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、珪ソウ土、ケイ酸アルミニウム、メタケイ酸アルミニウムマグネシウム、ケイ酸カルシウム、ケイ酸バリウム、ケイ酸マグネシウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、ヒドロキシアパタイト、窒化ホウ素等の白色体質粉体、二酸化チタン被覆雲母、二酸化チタン被覆オキシ塩化ビスマス、酸化鉄雲母チタン、紺青処理雲母チタン、カルミン処理雲母チタン、オキシ塩化ビスマス、魚鱗箔、ポリエチレンテレフタレート・アルミニウム・エポキシ積層末、ポリエチレンテレフタレート・ポリオレフィン積層フィルム末、ポリエチレンテレフタレート・ポリメチルメタクリレート積層フィルム末等の光輝性粉体、ポリアミド系樹脂、ポリエチレン系樹脂、ポリアクリル系樹脂、ポリエステル系樹脂、フッ素系樹脂、セルロース系樹脂、ポリスチレン系樹脂、スチレン−アクリル共重合樹脂等のコポリマー樹脂、ポリプロピレン系樹脂、シリコーン樹脂、ウレタン樹脂等の有機高分子樹脂粉体、ステアリン酸亜鉛、Ｎ−アシルリジン等の有機低分子性粉体、シルク粉末、セルロース粉末等の天然有機粉体、赤色２０１号、赤色２０２号、赤色２０５号、赤色２２６号、赤色２２８号、橙色２０３号、橙色２０４号、青色４０４号、黄色４０１号等の有機顔料粉体、赤色３号、赤色１０４号、赤色１０６号、橙色２０５号、黄色４号、黄色５号、緑色３号、青色１号等のジルコニウム、バリウム又はアルミニウムレーキ等の有機顔料粉体あるいはさらにアルミニウム粉、金粉、銀粉等の金属粉体、微粒子酸化チタン被覆雲母チタン、微粒子酸化亜鉛被覆雲母チタン、硫酸バリウム被覆雲母チタン、酸化チタン含有二酸化珪素、酸化亜鉛含有二酸化珪素等の複合粉体などを挙げることができる。
【００２７】
また、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物に配合することができる界面活性剤としては、皮膚外用剤に一般に用いられる界面活性剤であれば特に制限されず、例えば、非イオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤等を挙げることができ、具体的には、グリセリン脂肪酸エステル及びそのアルキレングリコール付加物、ポリグリセリン脂肪酸エステル及びそのアルキレングリコール付加物、ソルビタン脂肪酸エステル及びそのアルキレングリコール付加物、蔗糖脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシアルキレンアルキル共変性オルガノポリシロキサン、ポリエーテル変性オルガノポリシロキサン、レシチン等を挙げることができる。
【００２８】
また、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物に配合することができる水性成分としては、皮膚外用剤に一般に用いられる水及び水に可溶な成分であれば特に制限されず、例えば、低級アルコール、グリコール類、グリセロール類、植物抽出液、水溶性高分子等を挙げることができ、具体的には、水、エチルアルコール、ブチルアルコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセリン、ジグリセリン、ポリグリセリン、アロエベラ、ウイッチヘーゼル、ハマメリス、キュウリ、レモン、ラベンダー、ローズ、グアーガム、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、アラビアガム、アルギン酸ナトリウム、カラギーナン、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、アルキル付加カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリル酸ナトリウム等を挙げることができる。
【００２９】
さらに、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物に配合することができる酸化防止剤としては、例えば、α−トコフェロール、アスコルビン酸等を挙げることができ、防腐剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸エステル、フェノキシエタノール等を挙げることができるが、皮膚外用剤に一般に用いられる酸化防止剤や防腐剤であれば特に制限されない。
【００３０】
なお、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物に、皮膚老化防止に効果があるといわれている化合物を配合してエラスターゼ阻害剤を含有する皮膚外用剤とすることが、肌のしわ、たるみ、ざらつきなどの老化現象を防止するために相乗効果が期待できる点から望ましい。かかる皮膚老化防止剤としては、皮膚外用剤に一般に用いられる皮膚老化防止剤であれば特に制限されず、例えば、レチノール、レチノイン酸、コエンザイムＱ１０、スーパーオキサイドディスムターゼ、マンニトール、クエルセチン、カテキン及びその誘導体、ルチン及びその誘導体、ボタンピ抽出物、ヤシャジツ抽出物、メリッサ抽出物、羅漢果抽出物、カロチノイド等のビタミンＡ類、チアミン及びその誘導体、リボフラビン及びその誘導体、ピリドキシン及びその誘導体、ニコチン酸及びその誘導体等のビタミンＢ類、トコフェロール及びその誘導体等のビタミンＥ類、ジブチルヒドロキシトルエン並びにブチルヒドロキシアニソールを挙げることができる。
【００３１】
また、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物に、紫外線防御剤を配合してエラスターゼ阻害剤を含有する皮膚外用剤とすることが、紫外線によるエラスチン繊維の分解を防ぐ点で好ましい。紫外線防御剤としては、皮膚外用剤に一般に用いられる紫外線防御剤であれば特に制限されず、例えばベンゾフェノン系化合物、ＰＡＢＡ系化合物、ケイ皮酸系化合物、サリチル酸系化合物、４−ｔｅｒｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン、ｐ−メトキシ桂皮酸−２−エチルへキシル、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−硫酸ナトリウム、２−フェニル−ベンズイミダゾール−５−硫酸、酸化チタン、酸化亜鉛を挙げることができる。
【００３２】
さらに、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物に、抗炎症剤を配合してエラスターゼ阻害剤を含有する皮膚外用剤とすることが、皮膚、特に真皮の炎症を抑えて、エラスターゼ活性を低下させるために望ましい。かかる抗炎症剤としては、皮膚外用剤に一般に用いられる抗炎症剤であれば特に制限されず、例えば、アラントイン、イオウ及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体、グリチルレチン酸及びその誘導体、アルテア抽出物、アシタバ抽出物、アルニカ抽出物、インチンコウ抽出物、イラクサ抽出物、オウバク抽出物、オトギリソウ抽出物、カミツレ抽出物、キンギンカ抽出物、クレソン抽出物、コンフリー抽出物、サルビア抽出物、シコン抽出物、シソ抽出物、シラカバ抽出物、ゲンチアナ抽出物を挙げることができる。
【００３３】
本発明の２，３−ジヒドロキシ安息香酸又はその塩の皮膚外用剤中への配合割合としては、本発明の効果が奏される限り特に制限されないが、通常、皮膚外用剤全体に対して２，３−ジヒドロキシ安息香酸換算で、０．０１〜４０質量％が好ましく、０．１〜１０質量％がより好ましく、中でも０．５〜３質量％が特に好ましい。
【００３４】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に制限されるものではない。
【実施例１】
【００３５】
（エラスターゼ活性抑制効果評価試験）
２，３−ジヒドロキシ安息香酸（関東化学株式会社製）（図１Ａ参照）について、エラスターゼ活性抑制試験を行った。エラスチン様合成基質としては、Ｎ−サクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−ｐ−ニトロアニリド（SIGMA社製）を用い、エラスターゼとしては、豚膵臓由来のエラスターゼ酵素（SIGMA社製）を用いた。
【００３６】
上記２，３−ジヒドロキシ安息香酸をＮａＯＨ水溶液に溶解して中和し、１％濃度の試料溶液として調製した。上記Ｎ−サクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−ｐ−ニトロアニリドを、ジメチルスルフォキサイド（ＤＭＳＯ）に溶解し、０．１ｍｏｌ／Ｌ濃度の溶液とした後、０．０５ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ−ＨＣＬ（ｐＨ８．８）緩衝液で希釈し、１ｍｍｏｌ／Ｌ濃度の基質溶液として調製した。また、上記豚膵臓由来のエラスターゼ酵素は、０．０５ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ−ＨＣＬ（ｐＨ８．８）で希釈し、０．０５ｕｎｉｔｓ／ｍＬ濃度の酵素溶液として調製した。
【００３７】
上記試料溶液５０μＬと上記基質溶液１００μＬとを混合した後、上記酵素溶液５０μＬを添加し、３７℃にて３０分間反応させた。分光光度計（BIO-TEK INSTRUMENTS社製）により波長４０５ｎｍにおける吸光度を測定し、生成したニトロアニリン量を定量して、以下の式に示すように、試料未添加の場合の吸光度を１００％とした相対値でエラスターゼ酵素活性抑制率を算出した。結果を図１に示す。
エラスターゼ活性抑制率＝｛１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）｝×１００
Ａ：基質溶液と試料溶液とを混合した混合液に酵素溶液を添加した後３０分経過時の該混合液の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｂ：基質溶液と試料溶液とを混合した混合液の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｃ：試料溶液の代わりに、該溶液の溶媒を基質溶液と上記割合で混合した後、酵素溶液を添加した時の混合液の波長４０５ｎｍの吸光度
Ｄ：試料溶液も酵素溶液も添加していない、基質溶液の波長４０５ｎｍの吸光度
【００３８】
［比較例］
２，４−ジヒドロキシ安息香酸（関東化学株式会社製）（図１Ｂ参照）、２，５−ジヒドロキシ安息香酸（関東化学株式会社製）（図１Ｃ参照）、３，４−ジヒドロキシ安息香酸（和光純薬工業株式会社製）（図１Ｄ参照）、３，５−ジヒドロキシ安息香酸（和光純薬工業株式会社製）（図１Ｅ参照）をそれぞれ、ＮａＯＨ水溶液に溶解して中和し、１％濃度の試料溶液として調製し、上記実施例同様、エラスターゼ活性抑制試験を行った。
【００３９】
［結果］
図２に示すように、２，３−ジヒドロキシ安息香酸において、４０．２１％のエラスターゼ活性化抑制率を示し、他のジヒドロキシ安息香酸と比較して、有意にエラスターゼ活性抑制効果が認められた。
【００４０】
２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウムを用いて以下の化粧料を作製した。
［例１：化粧水（１）］
（製法）
Ａ．下記成分（３）、（４）及び（８）〜（１０）を混合溶解した。
Ｂ．下記成分（１）、（２）、（５）〜（７）及び（１１）を混合溶解した。
Ｃ．ＡにＢを添加し混合して、化粧水を得た。
（成分） （質量％）
（１）グリセリン ５．０
（２）１，３−ブチレングリコール ６．５
（３）ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）ソルビタン
モノラウリン酸エステル １．２
（４）エチルアルコール ８．０
（５）２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウム １．０
（６）乳酸 ０．０５
（７）乳酸ナトリウム ０．１
（８）パラメトキシケイ皮酸−２−エチルヘキシル ３．０
（９）防腐剤 適量
（１０）香料 適量
（１１）精製水 残量
【００４１】
［例２：水中油型乳液（１）］
（製法）
Ａ．下記成分（８）〜（９）を下記成分（１２）に添加し膨潤後、下記成分（１０）を添加し混合して、７０℃に加温し水相を調製した。
Ｂ．下記成分（１）〜（６）を７０℃に加温した。
Ｃ．ＡにＢを添加し乳化した。
Ｄ．Ｃを室温まで冷却後、下記成分（７）、（１１）及び（１３）を添加し混合して、乳液を得た。
（成分） （質量％）
（１）ポリオキシエチレン（１０Ｅ．Ｏ．）ソルビタン
モノステアレート １．０
（２）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）ソルビット
テトラオレエート ０．５
（３）グリセリルモノステアレート １．０
（４）ステアリン酸 ０．５
（５）ベヘニルアルコール ０．５
（６）スクワラン ８．０
（７）２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウム １．０
（８）防腐剤 ０．１
（９）カルボキシビニルポリマー ０．１
（１０）水酸化ナトリウム ０．０５
（１１）エチルアルコール ５．０
（１２）精製水 残量
（１３）香料 適量
【００４２】
［例３：洗顔料］
(製法)
Ａ．下記成分（１）〜（７）を加熱溶解した。
Ｂ．下記成分（８）〜（１１）を加熱溶解した。
Ｃ．ＡにＢを添加し混合した。
Ｄ．Ｃを冷却後、下記成分（１２）〜（１４）を添加し混合して、洗顔料を得た。
（成分） （質量％）
（１）ラウリン酸 ５．０
（２）ミリスチン酸 １８．５
（３）ステアリン酸 ６．０
（４）グリセリン １２．０
（５）ポリエチレングリコール１５００ ５．０
（６）水酸化カリウム ６．５
（７）精製水 残量
（８）ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ５．０
（９）ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム １．８
（１０）ポリオキシエチレン（７．５Ｅ．Ｏ．）ラウリルエーテル ２．０
（１１）ジステアリン酸エチレングリコール １．０
（１２）ヒドロキシプロピルメチルセルロース１％水溶液 ５．０
（１３）２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウム ０．１
（１４）香料 適量
【００４３】
［例４：化粧水（２）］
（製法）
Ａ．下記成分（１）〜（６）を混合溶解した。
Ｂ．下記成分（７）〜（１２）を混合溶解した。
Ｃ．ＡにＢを添加し混合して、化粧水を得た。
（成分） (質量％)
（１）クエン酸 ０．０５
（２）クエン酸ナトリウム ０．２
（３）ピロリドンカルボン酸ナトリウム（５０％）液 ０．５
（４）グリチルリチン酸ジカリウム ０．１
（５）グリセリン ３．０
（６）１，３−ブチレングリコール ８．０
（７）精製水 残量
（８）エチルアルコール １０．０
（９）２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウム ０．１
（１０）香料 適量
（１１）防腐剤 適量
（１２）モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）
ソルビタン ０．５
【００４４】
［例５：水中油型乳液（２）］
（製法）
Ａ．下記成分（１）〜（１３）を加熱溶解し、７０℃に保った。
Ｂ．下記成分（１４）〜（１９）を加熱溶解し、７０℃に保った。
Ｃ．ＡにＢを添加し乳化して、さらに下記成分（２０）を添加し混合した。
Ｄ．Ｃを冷却後、下記成分（２１）を添加し混合して、乳液を得た。
（成分） （質量％）
（１）ステアリン酸 １．０
（２）セタノール ０．５
（３）親油型モノステアリン酸グリセリン ０．５
（４）流動パラフィン ２．０
（５）スクワラン ３．０
（６）ホホバ油 ３．０
（７）パルミチン酸セチル ０．２
（８）パルミチン酸レチノール ０．２
（９）酢酸トコフェロール ０．０５
（１０）防腐剤 適量
（１１）モノステアリン酸ソルビタン ０．３
（１２）モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）
ソルビタン ０．５
（１３）ジブチルヒドロキシトルエン ０．１
（１４）トリエタノールアミン ０．５
（１５）１，３−ブチレングリコール １５．０
（１６）グリセリン ３．０
（１７）ポリエチレングリコール６０００ ０．５
（１８）２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウム ０．１
（１９）精製水 残量
（２０）カルボキシビニルポリマー１％溶液 ８．０
（２１）香料 適量
【００４５】
［例６：クリーム］
（製法）
Ａ．下記成分（１）〜（１４）を加熱溶解し、７０℃に保った。
Ｂ．下記成分（１５）〜（２０）を加熱溶解し、７０℃に保った。
Ｃ．ＡにＢを添加し乳化して、さらに下記成分（２１）を添加し混合した。
Ｄ．Ｃを冷却後、下記成分（２２）を添加し混合して、クリームを得た。
（成分） （質量％）
（１）ステアリン酸 ２．５
（２）セタノール ２．５
（３）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（４）ワセリン ２．０
（５）ジペンタエリトリット脂肪酸エステル ２．０
（６）ミリスチン酸イソトリデシル ５．０
（７）流動パラフィン ８．０
（８）スクワラン ５．０
（９）ミツロウ １．０
（１０）パルミチン酸セチル ２．０
（１１）セスキオレイン酸ソルビタン ０．５
（１２）モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）
ソルビタン １．５
（１３）コエンザイムＱ１０ ０．１
（１４）防腐剤 適量
（１５）トリエタノールアミン １．２
（１６）１，３−ブチレングリコール ８．０
（１７）グリセリン ２．０
（１８）ポリエチレングリコール２００００ ０．５
（１９）２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウム ２．０
（２０）精製水 残量
（２１）カルボキシビニルポリマー１％水溶液 １０．０
（２２）香料 適量
【００４６】
［例７：油中水型日焼け止めクリーム］
（製法）
Ａ．下記成分（１）〜（８）を７０℃で加熱混合した。
Ｂ．下記成分（９）〜（１２）及び（１４）〜（１５）を５０℃で加温混合した。
Ｃ．ＡにＢを添加し乳化して、冷却後下記成分（１３）を添加し混合して、油中水型日焼け止めクリームを得た。
（成分） （質量％）
（１）ポリオキシアルキレン変性オルガノポリシロキサン＊１ ２．０
（２）パルミチン酸オクチル １５．０
（３）デカメチルシクロペンタシロキサン ２０．０
（４）トリベヘン酸グリセリル １．０
（５）微粒子酸化亜鉛 １２．０
（６）微粒子酸化チタン ３．０
（７）パラメトキシケイ皮酸２−エチルヘキシル＊２ ７．０
（８）４−ｔｅｒｔブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン＊３ １．０
（９）ジプロピレングリコール ５．０
（１０）エタノール ５．０
（１１）ポリエチレン末 ３．０
（１２）防腐剤 適量
（１３）香料 適量
（１４）２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウム ０．５
（１５）精製水 残量
＊１：ＫＦ−６０１７（信越化学工業社製）
＊２：ユビナールＭＣ８０（ＢＡＳＦ社製）
＊３：ＰＡＲＳＯＬ １７８９（Ｌ．Ｃ．ＵＮＩＴＥＤ社製）
【００４７】
［例８：パック化粧料］
（製法）
Ａ．下記成分（１）〜（５）及び（１５）を７０℃で加熱混合し、室温まで冷却した。
Ｂ．Ａに下記成分（６）〜（１４）を添加し混合して、パック化粧料を得た。
（成分） （質量％）
（１）ポリビニルアルコール １５．０
（２）グリセリン １０．０
（３）ポリオキシエチレン（１０）メチルグルコール ３．０
（４）トリオクタン酸グリセリル ５．０
（５）ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸ナトリウム １．０
（６）エタノール ２０．０
（７）カオリン ２．０
（８）酸化チタン ２．０
（９）グリチルリチン酸ジカリウム ０．１
（１０）乳酸（５０％水溶液） ０．５
（１１）乳酸ナトリウム（５０％水溶液） ０．５
（１２）防腐剤 適量
（１３）香料 適量
（１４）２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウム ０．２
（１５）精製水 残量
【００４８】
［例９：リキッドファンデーション］
（製法）
Ａ．下記成分（１）〜（７）を７０℃で加熱混合し、この混合物に下記成分（１３）〜（１８）を添加し混合して７０℃に保った。
Ｂ．下記成分（８）〜（１２）を７０℃で加熱混合した。
Ｃ．ＢにＡを添加し乳化して、冷却後、下記成分（１９）〜（２０）を添加し混合して、リキッドファンデーションを得た。
（成分） （質量％）
（１）ジペンタエリトリット脂肪酸エステル ２．０
（２）流動パラフィン ５．０
（３）ステアリン酸 ２．０
（４）セタノール １．０
（５）自己乳化型モノステアリン酸グリセリル １．０
（６）パラメトキシケイ皮酸２−エチルヘキシル ８．０
（７）防腐剤 適量
（８）グリセリン ５．０
（９）トリエタノールアミン １．０
（１０）カルボキシメチルセルロース ０．２
（１１）ベントナイト ０．５
（１２）精製水 残量
（１３）酸化チタン ６．０
（１４）微粒子酸化チタン ２．０
（１５）微粒子酸化亜鉛 ４．０
（１６）マイカ ２．０
（１７）タルク ４．０
（１８）着色顔料 適量
（１９）２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウム ０．１
（２０）香料 適量
【００４９】
上記で調製した種々の化粧料は、いずれも経時安定性に優れ、皮膚に適用することにより、肌のしわやたるみを改善し、張りのある美しい肌にする、老化防止効果に優れたものである。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】図１（Ａ）は、２，３−ジヒドロキシ安息香酸を表す。図１（Ｂ）は、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、図１（Ｃ）は、２，５−ジヒドロキシ安息香酸、図１（Ｄ）は、３，４−ジヒドロキシ安息香酸、図１（Ｅ）は、３，５−ジヒドロキシ安息香酸をそれぞれ表す。
【図２】エラスターゼ活性抑制効果評価試験の結果を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分とするエラスターゼ阻害組成物や、かかるエラスターゼ阻害組成物を含有する皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
エラスチン線維は、ヒト等のほ乳類や魚類などの体内の血管・靭帯・肺・皮膚をはじめとする、ほぼ全身の臓器・組織に分布する細胞外マトリックスの結合組織の線維の一種で、伸縮可能なαへリックス構造が架橋することによって形成され、組織の柔軟性維持に重要な役割を担っていることが知られている。一方、皮膚は表皮、真皮、皮下組織からなり、表皮は外部の乾燥や異物から体を守り、皮下組織は皮下脂肪等により外部からの衝撃を和らげ、真皮は線維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持する真皮細胞外マトリックスによって構成されており、皮膚の構造維持に重要な役割を果たしている。エラスチン線維は、皮膚では乳頭層の最下部で表皮面に平行に走る線維と乳頭層の中ほどの線維（elaunin fiber）、さらにそこから細い終末の線維が出て表皮の基底膜まで垂直に上がるもの（oxytalan fiber）があるとされている。
【０００３】
皮膚のしわ形成、くすみ、きめの消失、弾力性の低下といった肌の老化といわれる現象は、加齢による線維芽細胞の増殖能の低下によるエラスチン線維等の産生能の低下が一因とされているが、皮膚の紫外線への曝露、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等の外部刺激などが、エラスチン線維の分解を引き起こす結果、しわ形成、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等を原因とする肌荒れや皮膚の老化などの症状が現れるともいわれている。
【０００４】
エラスチン線維が分解する一因として、エラスターゼによる分解があると考えられている。エラスターゼはセリンプロテアーゼファミリーに属する酵素であり、例えば、膵エラスターゼは、膵の病変によって血中値が高くなることから各種膵疾患のマーカーとなっており、白血球由来のエラスターゼは、肉眼で確認できない初期の微小炎症においても血中濃度が上昇することが知られている。皮膚においては、例えば紫外線Ａ波が照射された場合に微小炎症の蓄積があることが推察され、エラスターゼ活性が増加することが確認されている（例えば、特許文献１参照）。
【０００５】
従って、真皮におけるエラスターゼの作用を抑制し、エラスチン線維の分解を防止することが、しわやたるみ等の肌の老化防止に有効であるとされ、例えば、ブルセラ ランシフォリア抽出物（例えば、特許文献２参照）、スイートピーの花の抽出物（例えば、特許文献３参照）、アイスランドモスの抽出物（例えば、特許文献４参照）、マンネンタケの抽出物（例えば、特許文献５参照）等、植物・真菌抽出物などを有効成分として含有するエラスターゼ活性阻害剤が提案されている。
【０００６】
また、例えば、グルコサミン、グルコサミン誘導体又はそれらの塩（例えば、特許文献６参照）や、ホスホン酸誘導体、メルカプトプロピオンアミド誘導体等（例えば、特許文献７参照）や、コロソリン酸（例えば、特許文献８参照）や、１，６−ヘプタジエン−３，５−ジオン誘導体（例えば、特許文献９参照）などの化合物を有効成分として含有するエラスターゼ阻害剤が提案されている。
【０００７】
一方、皮膚組織内のエラスターゼ活性が、毛周期と対応し、皮膚組織内エラスターゼ活性の上昇が毛包形成及びその成長に不可欠であることが報告されており（例えば、特許文献１０参照）、エラスターゼ活性阻害剤を有効成分とする発毛抑制剤が提案されている（例えば、特許文献１１参照）。
【０００８】
【特許文献１】特許第３７４９７６９号公報
【特許文献２】特開２００２−２５５７３４号公報
【特許文献３】特開２００６−２８２６１７号公報
【特許文献４】特開２００７−３０２６０７号公報
【特許文献５】特開２００５−２３０２１号公報
【特許文献６】特開２００４−８３４３２号公報
【特許文献７】特開２００６−１０４２０９号公報
【特許文献８】特開２００６−２６５２３２号公報
【特許文献９】特開２００６−３４７８９７号公報
【特許文献１０】特開平１１−１９９４５０号公報
【特許文献１１】特開２００５−３４３８８７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上記の種々のエラスターゼ活性阻害剤は、安全性、安定性等が確認されていないものもあり、エラスターゼ阻害活性効果が十分確認されていない場合もある。したがって、本発明の課題は、エラスターゼ阻害活性の高い化合物を有効成分とするエラスターゼ阻害組成物や皮膚外用剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは上記課題を解決するため、従来のエラスターゼ阻害剤とは全く異なった化学構造を有するエラスターゼ阻害作用を有する化合物を同定すべく鋭意研究を重ねていたところ、今回、ポリフェノールの一種である特定のジヒドロキシ安息香酸、すなわち２，３−ジヒドロキシ安息香酸のみがエラスターゼ阻害活性効果を有し、他のジヒドロキシ安息香酸の異性体はエラスターゼ阻害活性効果を有さないことを見い出した。また、ジヒドロキシ安息香酸の異性体について先行技術を調査したところ、２，５−ジヒドロキシ安息香酸が、スクアリン酸と併用される有機酸として、エラスターゼ阻害活性ではなくエラスターゼ産生抑制作用を有する化粧料組成物の一構成要素として提案されている（特開２００５−１４５８８３号公報参照）にすぎないことを確認し、本発明を完成した。
【００１１】
すなわち本発明は、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分とするエラスターゼ阻害組成物や、該エラスターゼ阻害組成物の有効成分である２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物を含有する皮膚外用剤や、老化防止用であることを特徴とする上記皮膚外用剤に関する。その他、本発明は、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物をエラスターゼ阻害剤や皮膚外用剤として使用する方法や、皮膚外用剤の製造における２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物の使用方法を包含する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の２，３−ジヒドロキシ安息香酸又はその塩を有効成分とする本発明のエラスターゼ阻害組成物（阻害剤）は、真皮細胞外マトリックスのエラスチン線維のエラスターゼによる分解を原因とするしわ、たるみ等の肌の老化防止剤として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明のエラスターゼ阻害組成物としては、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分とするものであれば特に制限されず、本発明の皮膚外用剤としては、前記エラスターゼ阻害剤としての２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物を含有する皮膚外用剤であれば特に制限されず、本発明の皮膚外用剤の種類としては、日焼け止め、化粧水、乳液、クリーム、美容液、パック等の顔、手足又はボディ用の基礎化粧料、ファンデーション、コンシーラー、白粉、頬紅、口紅、アイシャドウ等のメーキャップ化粧料、発毛抑制剤等の毛髪・頭皮用化粧料などからなる化粧料を挙げることができ、また、かかる皮膚外用剤の形態としては液状、粉末状、固形状、棒状、水中油型・油中水型乳液状、クリーム状、ジェル状等を挙げることができる。
【００１４】
上記２，３−ジヒドロキシ安息香酸とは、式（Ｉ）で表されるポリフェノールの一種であり、ｏ−ピロカテク酸（o-pyrocatechuic acid）と称されることもある。
【００１５】
【化１】
【００１６】
本発明に用いられる上記式（Ｉ）で表される２，３−ジヒドロキシ安息香酸又はその塩等の本発明の化合物、あるいは該化合物含有組成物の製法や入手方法としては、該化合物又は該化合物含有組成物を、植物体から分離・抽出する方法や、微生物の代謝物より分離・抽出する方法や、酵素的に生産する方法や、カテコールのジナトリウム塩を二酸化炭素でカルボキシル化する方法等化学的に合成する方法や、市販品を購入する方法などの公知の方法を含め特に制限されない。
【００１７】
上記２，３−ジヒドロキシ安息香酸は、各種の生物に分布することが知られており、かかる２，３−ジヒドロキシ安息香酸を含有する植物体としては、例えば、ボレエバ・オリエンタリス（Boreava orientalis）（Sakushima et al., Phytochemistry Vol. 40 No. 1 pp.257-261, 1995参照）や、ツツジ科のゴールセリア・プロカンベンズ（gaultheria procumbens）（Nature 184, 1803, 1959参照）等を挙げることができ、これら植物体から２，３−ジヒドロキシ安息香酸を分離・抽出する方法としては常法を用いることができる。例えば、植物体原料を乾燥後粉砕し溶媒抽出した後、遠心分離、ろ過等を行うことにより抽出することができ、必要に応じてカラムクロマトグラフィー等の通常の精製手段を用いて精製することができる。また、２，３−ジヒドロキシ安息香酸を生産する微生物としては、例えば、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）(Terui et al., The Society for Bioscience and Bioengineering, Japan Vol.31, No.2 pp.65-71, 1953参照)、アゾトバクター・ヴィネランディ（Azotobacter vinelandii）（Corbin et al., Biochemistry Vol.8, No.3, 1969参照）、リゾビウム・ラジオバクター（Rhizobium radiobacter）（特開２００５−１１８００２号公報参照）等を挙げることができ、これら微生物から２，３−ジヒドロキシ安息香酸を分離・抽出する方法としては常法を用いることができる。例えば、上記微生物の培養物を溶媒抽出した後、遠心分離、ろ過等を行うことにより抽出することができ、必要に応じてカラムクロマトグラフィー等の通常の精製手段を用いて精製することができる。また、２，３−ジヒドロキシ安息香酸を産生する微生物から単離された２，３−ジヒドロキシ安息香酸の産生を触媒しうる酵素と適当な基質を含む酵素反応液から２，３−ジヒドロキシ安息香酸を抽出してもよい。
【００１８】
本発明の２，３−ジヒドロキシ安息香酸の塩としては、本発明のエラスターゼ阻害組成物における阻害活性が２，３−ジヒドロキシ安息香酸と同効であれば特に制限されず、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、アルミニウム塩、アンモニウム塩等のカチオン塩などを挙げることができ、ナトリウム塩を好適に例示することができる。なお、本発明の２，３−ジヒドロキシ安息香酸の塩としては、使用時において水溶液、懸濁液、粉体等として用いることができ、２，３−ジヒドロキシ安息香酸とその塩は単独でも２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００１９】
本発明のエラスターゼ阻害組成物としては、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有する組成物であれば特に制限されず、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物に、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、希釈剤、緩衝剤、等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤等を配合した組成物や、前述の植物体や微生物からの精製過程における２，３−ジヒドロキシ安息香酸の抽出・濃縮物を例示することができる。
【００２０】
本発明のエラスターゼ阻害組成物における阻害活性としては、エラスターゼとその基質タンパク質であるエラスチン線維との結合を阻害するなど、エラスターゼの作用を抑制する活性をいい、上記エラスターゼとしては、ヒト等のほ乳類や魚類の体内の血管・靭帯・肺・皮膚をはじめとする、ほぼ全身の臓器・組織に分布する細胞外マトリックスの結合組織のエラスチン線維の分解活性を有するものであれば特に制限されず、例えば、ほ乳動物の結合組織から抽出したエラスターゼや、ヒトの真皮細胞外マトリックスに存在するエラスターゼを挙げることができ、具体的には、白血球に由来するエラスターゼ（ＥＣ３．４．２１．３７）や、膵臓に由来するエラスターゼ（ＥＣ３．４．２１．３６）を例示することができる。また、本発明のエラスターゼ阻害組成物における阻害活性の程度としては、Ｎ−サクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−ｐ−ニトロアニリドを基質とした以下の方法において、エラスターゼ活性抑制率が、２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは３５％以上、最も好ましくは４０％以上の阻害活性を具体的に例示することができる。
【００２１】
上記エラスターゼ活性抑制率を算出する方法としては、基質としてＮ−サクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−ｐ−ニトロアニリドを用い、エラスターゼ酵素が該基質に作用するとニトロアニリンを遊離して発色して、波長４０５ｎｍにおける吸光度が上昇するが、エラスターゼの酵素活性が阻害されると遊離ニトロアニリン量が低下して該吸光度が低下する性質を利用して、試料溶液と１ｍｍｏｌ／Ｌ濃度のＮ−サクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−ｐ−ニトロアニリド１００μＬとを混合した後、０．０５ｕｎｉｔｓ／ｍＬ濃度のエラスターゼ５０μＬを添加し、３７℃にて３０分間反応させ、波長４０５ｎｍにおける吸光度を測定し、生成したニトロアニリンを定量して、試料未添加の場合の吸光度を１００％とした相対値により、エラスターゼ酵素活性抑制率を以下の式により計算する方法を挙げることができる；
エラスターゼ活性抑制率＝｛１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）｝×１００
（式中：
Ａ：基質溶液と試料溶液とを混合した混合液に酵素溶液を添加した後３０分経過時の該混合液の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｂ：基質溶液と試料溶液とを混合した混合液の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｃ：試料溶液の代わりに、該溶液の溶媒を基質溶液と上記割合で混合した後、酵素溶液を添加した時の混合液の波長４０５ｎｍの吸光度
Ｄ：試料溶液も酵素溶液も添加していない、基質溶液の波長４０５ｎｍの吸光度）。
【００２２】
本発明のエラスターゼ阻害組成物は、エラスチン線維のエラスターゼによる分解を原因とする状態を改善する手段として用いられる用途、例えば、皮膚外用剤や、肺気腫、アテローム性動脈硬化、リュウマチ性関節炎等の治療・予防剤、皮膚の弾力が減退または消失し、しわやたるみが生じるとともに肺気腫、大動脈瘤、腸管拡張症などを引き起こす一連の症候群である皮膚弛緩症、及び主に日光に連続曝露された部位において、外観所見でなめし皮様の皮膚肥厚、深いしわ、黄変色などが認められる日光弾性線維症等の一連の皮膚疾患等の治療・予防剤等の医薬品、医薬部外品などの用途に用いることができるが、化粧料等の皮膚外用剤をその用途として特に好適に例示することができる。
【００２３】
また、本発明のエラスターゼ阻害組成物を医薬品、医薬部外品等として調製するに際しては、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、希釈剤、緩衝剤、等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤等の医薬品添加物と適宜混合、希釈又は溶解して配合してもよく、かかる剤型としては、軟膏、外用液剤、貼付剤、乳液、ローション、溶液、ゲル等の剤型やパック、パウダー、スティック等を挙げることができ、また、治療目的に応じて非経口的又は経口的に用いることができる。
【００２４】
さらに、本発明のエラスターゼ阻害組成物は、上記必須成分としての２，３−ジヒドロキシ安息香酸又はその塩の他に、通常皮膚外用剤に配合される成分として、以下の油性成分、粉体成分、界面活性剤、水性成分、酸化防止剤、防腐剤、皮膚老化防止に効果があるといわれている化合物、紫外線吸収剤、紫外線防御剤、抗炎症剤成分から選択される１種又は２種以上を本発明の効果を妨げない範囲で適宜配合することで、本発明のエラスターゼ阻害剤を含有する化粧料を中心とした皮膚外用剤を製造することができる。
【００２５】
２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物に配合することができる油性成分としては、皮膚外用剤に一般に用いられる油性成分であれば特に制限されず、例えば、動物油、植物油、合成油等を起源とする炭化水素類、油脂類、ロウ類、硬化油類、エステル油類、脂肪酸類、高級アルコール類、シリコーン油類、フッ素系油類、ラノリン誘導体類、油性ゲル化剤類などを挙げることができ、具体的には、流動パラフィン、スクワラン、ワセリン、ポリエチレンワックス、エチレン・プロピレンコポリマー、パラフィンワックス、モンタンワックス、フィッシャートロプシュワックス、ポリイソブチレン、ポリブテン、セレシンワックス、オゾケライトワックス等の炭化水素類、モクロウ、オリーブ油、ヒマシ油、ミンク油、マカデミアンナッツ油等の油脂類、ミツロウ、ゲイロウ、カルナウバワックス、キャンデリラワックス等のロウ類、ホホバ油、２−エチルヘキサン酸セチル、乳酸イソステアリル、乳酸オクチルドデシル、乳酸オレイル、乳酸ステアリル、ジイソステアリン酸グリセリル、トリイソステアリン酸ジグリセリル、リンゴ酸ジイソステアリル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ロジン酸ペンタエリトリットエステル、ジオクタン酸ネオペンチルグリコール、ジオクタン酸ネオペンチルグリコール、コレステロール脂肪酸エステル、フィトステロール脂肪酸エステル、トリグリセライド等のエステル類、ステアリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、ベヘニン酸、イソステアリン酸、オレイン酸等の脂肪酸類、ステアリルアルコール、セチルアルコール、ラウリルアルコール、オレイルアルコール、イソステアリルアルコール、ベヘニルアルコール等の高級アルコール類、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、オクタメチルシクロテトラシロキサン、トリメチルシロキシケイ酸、高重合度メチルフェニルポリシロキサン、架橋型メチルポリシロキサン、ポリオキシアルキレン変性オルガノポリシロキサン、架橋型ポリエーテル変性メチルポリシロキサン、メタクリル変性ポリシロキサン、ステアリル変性メチルポリシロキサン、オレイル変性メチルポリシロキサン、ベヘニル変性メチルポリシロキサン、ポリビニルピロリドン変性メチルポリシロキサン、高重合度ジメチルポリシロキサン、ポリオキシアルキレン・アルキルメチルポリシロキサン・メチルポリシロキサン共重合体、アルコキシ変性ポリシロキサン、架橋型オルガノポリシロキサン、フッ素変性ポリシロキサン等のシリコーン類、パーフルオロデカン、パーフルオロオクタン、パーフルオロポリエーテル等のフッ素系油剤類、ラノリン、酢酸ラノリン、ラノリン脂肪酸イソプロピル、ラノリンアルコール等のラノリン誘導体、オクタン酸デキストリン、ラウリン酸デキストリン、パルミチン酸デキストリン、ミリスチン酸デキストリン、ステアリン酸デキストリン、ベヘニン酸デキストリン、ヤシ油脂肪酸デキストリン、（パルミチン酸／オクタン酸）デキストリン、蔗糖脂肪酸エステル、デンプン脂肪酸エステル、イソステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸カリウム、１２−ヒドロキシステアリン酸等の油性ゲル化剤類などを挙げることができる。
【００２６】
また、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物に配合することができる粉体としては、皮膚外用剤に一般に用いられる粉体であれば、球状、板状、針状等の形状、煙霧状、微粒子、顔料級等の粒子径、多孔質、無孔質等の粒子構造等により特に制限されず、例えば、無機粉体類、光輝性粉体類、有機粉体類、色素粉体類、金属粉体類、複合粉体類等を挙げることができ、具体的には、酸化チタン、酸化亜鉛、酸化セリウム、硫酸バリウム等の白色無機顔料、酸化鉄、カーボンブラック、チタン・酸化チタン焼結物、酸化クロム、水酸化クロム、紺青、群青等の有色無機顔料、タルク、白雲母、金雲母、紅雲母、黒雲母、合成雲母、絹雲母（セリサイト）、合成セリサイト、カオリン、炭化珪素、ベントナイト、スメクタイト、無水ケイ酸、酸化アルミニウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、珪ソウ土、ケイ酸アルミニウム、メタケイ酸アルミニウムマグネシウム、ケイ酸カルシウム、ケイ酸バリウム、ケイ酸マグネシウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、ヒドロキシアパタイト、窒化ホウ素等の白色体質粉体、二酸化チタン被覆雲母、二酸化チタン被覆オキシ塩化ビスマス、酸化鉄雲母チタン、紺青処理雲母チタン、カルミン処理雲母チタン、オキシ塩化ビスマス、魚鱗箔、ポリエチレンテレフタレート・アルミニウム・エポキシ積層末、ポリエチレンテレフタレート・ポリオレフィン積層フィルム末、ポリエチレンテレフタレート・ポリメチルメタクリレート積層フィルム末等の光輝性粉体、ポリアミド系樹脂、ポリエチレン系樹脂、ポリアクリル系樹脂、ポリエステル系樹脂、フッ素系樹脂、セルロース系樹脂、ポリスチレン系樹脂、スチレン−アクリル共重合樹脂等のコポリマー樹脂、ポリプロピレン系樹脂、シリコーン樹脂、ウレタン樹脂等の有機高分子樹脂粉体、ステアリン酸亜鉛、Ｎ−アシルリジン等の有機低分子性粉体、シルク粉末、セルロース粉末等の天然有機粉体、赤色２０１号、赤色２０２号、赤色２０５号、赤色２２６号、赤色２２８号、橙色２０３号、橙色２０４号、青色４０４号、黄色４０１号等の有機顔料粉体、赤色３号、赤色１０４号、赤色１０６号、橙色２０５号、黄色４号、黄色５号、緑色３号、青色１号等のジルコニウム、バリウム又はアルミニウムレーキ等の有機顔料粉体あるいはさらにアルミニウム粉、金粉、銀粉等の金属粉体、微粒子酸化チタン被覆雲母チタン、微粒子酸化亜鉛被覆雲母チタン、硫酸バリウム被覆雲母チタン、酸化チタン含有二酸化珪素、酸化亜鉛含有二酸化珪素等の複合粉体などを挙げることができる。
【００２７】
また、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物に配合することができる界面活性剤としては、皮膚外用剤に一般に用いられる界面活性剤であれば特に制限されず、例えば、非イオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤等を挙げることができ、具体的には、グリセリン脂肪酸エステル及びそのアルキレングリコール付加物、ポリグリセリン脂肪酸エステル及びそのアルキレングリコール付加物、ソルビタン脂肪酸エステル及びそのアルキレングリコール付加物、蔗糖脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシアルキレンアルキル共変性オルガノポリシロキサン、ポリエーテル変性オルガノポリシロキサン、レシチン等を挙げることができる。
【００２８】
また、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物に配合することができる水性成分としては、皮膚外用剤に一般に用いられる水及び水に可溶な成分であれば特に制限されず、例えば、低級アルコール、グリコール類、グリセロール類、植物抽出液、水溶性高分子等を挙げることができ、具体的には、水、エチルアルコール、ブチルアルコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセリン、ジグリセリン、ポリグリセリン、アロエベラ、ウイッチヘーゼル、ハマメリス、キュウリ、レモン、ラベンダー、ローズ、グアーガム、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、アラビアガム、アルギン酸ナトリウム、カラギーナン、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、アルキル付加カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリル酸ナトリウム等を挙げることができる。
【００２９】
さらに、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物に配合することができる酸化防止剤としては、例えば、α−トコフェロール、アスコルビン酸等を挙げることができ、防腐剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸エステル、フェノキシエタノール等を挙げることができるが、皮膚外用剤に一般に用いられる酸化防止剤や防腐剤であれば特に制限されない。
【００３０】
なお、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物に、皮膚老化防止に効果があるといわれている化合物を配合してエラスターゼ阻害剤を含有する皮膚外用剤とすることが、肌のしわ、たるみ、ざらつきなどの老化現象を防止するために相乗効果が期待できる点から望ましい。かかる皮膚老化防止剤としては、皮膚外用剤に一般に用いられる皮膚老化防止剤であれば特に制限されず、例えば、レチノール、レチノイン酸、コエンザイムＱ１０、スーパーオキサイドディスムターゼ、マンニトール、クエルセチン、カテキン及びその誘導体、ルチン及びその誘導体、ボタンピ抽出物、ヤシャジツ抽出物、メリッサ抽出物、羅漢果抽出物、カロチノイド等のビタミンＡ類、チアミン及びその誘導体、リボフラビン及びその誘導体、ピリドキシン及びその誘導体、ニコチン酸及びその誘導体等のビタミンＢ類、トコフェロール及びその誘導体等のビタミンＥ類、ジブチルヒドロキシトルエン並びにブチルヒドロキシアニソールを挙げることができる。
【００３１】
また、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物に、紫外線防御剤を配合してエラスターゼ阻害剤を含有する皮膚外用剤とすることが、紫外線によるエラスチン繊維の分解を防ぐ点で好ましい。紫外線防御剤としては、皮膚外用剤に一般に用いられる紫外線防御剤であれば特に制限されず、例えばベンゾフェノン系化合物、ＰＡＢＡ系化合物、ケイ皮酸系化合物、サリチル酸系化合物、４−ｔｅｒｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン、ｐ−メトキシ桂皮酸−２−エチルへキシル、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−硫酸ナトリウム、２−フェニル−ベンズイミダゾール−５−硫酸、酸化チタン、酸化亜鉛を挙げることができる。
【００３２】
さらに、２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物に、抗炎症剤を配合してエラスターゼ阻害剤を含有する皮膚外用剤とすることが、皮膚、特に真皮の炎症を抑えて、エラスターゼ活性を低下させるために望ましい。かかる抗炎症剤としては、皮膚外用剤に一般に用いられる抗炎症剤であれば特に制限されず、例えば、アラントイン、イオウ及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体、グリチルレチン酸及びその誘導体、アルテア抽出物、アシタバ抽出物、アルニカ抽出物、インチンコウ抽出物、イラクサ抽出物、オウバク抽出物、オトギリソウ抽出物、カミツレ抽出物、キンギンカ抽出物、クレソン抽出物、コンフリー抽出物、サルビア抽出物、シコン抽出物、シソ抽出物、シラカバ抽出物、ゲンチアナ抽出物を挙げることができる。
【００３３】
本発明の２，３−ジヒドロキシ安息香酸又はその塩の皮膚外用剤中への配合割合としては、本発明の効果が奏される限り特に制限されないが、通常、皮膚外用剤全体に対して２，３−ジヒドロキシ安息香酸換算で、０．０１〜４０質量％が好ましく、０．１〜１０質量％がより好ましく、中でも０．５〜３質量％が特に好ましい。
【００３４】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に制限されるものではない。
【実施例１】
【００３５】
（エラスターゼ活性抑制効果評価試験）
２，３−ジヒドロキシ安息香酸（関東化学株式会社製）（図１Ａ参照）について、エラスターゼ活性抑制試験を行った。エラスチン様合成基質としては、Ｎ−サクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−ｐ−ニトロアニリド（SIGMA社製）を用い、エラスターゼとしては、豚膵臓由来のエラスターゼ酵素（SIGMA社製）を用いた。
【００３６】
上記２，３−ジヒドロキシ安息香酸をＮａＯＨ水溶液に溶解して中和し、１％濃度の試料溶液として調製した。上記Ｎ−サクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−ｐ−ニトロアニリドを、ジメチルスルフォキサイド（ＤＭＳＯ）に溶解し、０．１ｍｏｌ／Ｌ濃度の溶液とした後、０．０５ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ−ＨＣＬ（ｐＨ８．８）緩衝液で希釈し、１ｍｍｏｌ／Ｌ濃度の基質溶液として調製した。また、上記豚膵臓由来のエラスターゼ酵素は、０．０５ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ−ＨＣＬ（ｐＨ８．８）で希釈し、０．０５ｕｎｉｔｓ／ｍＬ濃度の酵素溶液として調製した。
【００３７】
上記試料溶液５０μＬと上記基質溶液１００μＬとを混合した後、上記酵素溶液５０μＬを添加し、３７℃にて３０分間反応させた。分光光度計（BIO-TEK INSTRUMENTS社製）により波長４０５ｎｍにおける吸光度を測定し、生成したニトロアニリン量を定量して、以下の式に示すように、試料未添加の場合の吸光度を１００％とした相対値でエラスターゼ酵素活性抑制率を算出した。結果を図１に示す。
エラスターゼ活性抑制率＝｛１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）｝×１００
Ａ：基質溶液と試料溶液とを混合した混合液に酵素溶液を添加した後３０分経過時の該混合液の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｂ：基質溶液と試料溶液とを混合した混合液の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｃ：試料溶液の代わりに、該溶液の溶媒を基質溶液と上記割合で混合した後、酵素溶液を添加した時の混合液の波長４０５ｎｍの吸光度
Ｄ：試料溶液も酵素溶液も添加していない、基質溶液の波長４０５ｎｍの吸光度
【００３８】
［比較例］
２，４−ジヒドロキシ安息香酸（関東化学株式会社製）（図１Ｂ参照）、２，５−ジヒドロキシ安息香酸（関東化学株式会社製）（図１Ｃ参照）、３，４−ジヒドロキシ安息香酸（和光純薬工業株式会社製）（図１Ｄ参照）、３，５−ジヒドロキシ安息香酸（和光純薬工業株式会社製）（図１Ｅ参照）をそれぞれ、ＮａＯＨ水溶液に溶解して中和し、１％濃度の試料溶液として調製し、上記実施例同様、エラスターゼ活性抑制試験を行った。
【００３９】
［結果］
図２に示すように、２，３−ジヒドロキシ安息香酸において、４０．２１％のエラスターゼ活性化抑制率を示し、他のジヒドロキシ安息香酸と比較して、有意にエラスターゼ活性抑制効果が認められた。
【００４０】
２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウムを用いて以下の化粧料を作製した。
［例１：化粧水（１）］
（製法）
Ａ．下記成分（３）、（４）及び（８）〜（１０）を混合溶解した。
Ｂ．下記成分（１）、（２）、（５）〜（７）及び（１１）を混合溶解した。
Ｃ．ＡにＢを添加し混合して、化粧水を得た。
（成分） （質量％）
（１）グリセリン ５．０
（２）１，３−ブチレングリコール ６．５
（３）ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）ソルビタン
モノラウリン酸エステル １．２
（４）エチルアルコール ８．０
（５）２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウム １．０
（６）乳酸 ０．０５
（７）乳酸ナトリウム ０．１
（８）パラメトキシケイ皮酸−２−エチルヘキシル ３．０
（９）防腐剤 適量
（１０）香料 適量
（１１）精製水 残量
【００４１】
［例２：水中油型乳液（１）］
（製法）
Ａ．下記成分（８）〜（９）を下記成分（１２）に添加し膨潤後、下記成分（１０）を添加し混合して、７０℃に加温し水相を調製した。
Ｂ．下記成分（１）〜（６）を７０℃に加温した。
Ｃ．ＡにＢを添加し乳化した。
Ｄ．Ｃを室温まで冷却後、下記成分（７）、（１１）及び（１３）を添加し混合して、乳液を得た。
（成分） （質量％）
（１）ポリオキシエチレン（１０Ｅ．Ｏ．）ソルビタン
モノステアレート １．０
（２）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）ソルビット
テトラオレエート ０．５
（３）グリセリルモノステアレート １．０
（４）ステアリン酸 ０．５
（５）ベヘニルアルコール ０．５
（６）スクワラン ８．０
（７）２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウム １．０
（８）防腐剤 ０．１
（９）カルボキシビニルポリマー ０．１
（１０）水酸化ナトリウム ０．０５
（１１）エチルアルコール ５．０
（１２）精製水 残量
（１３）香料 適量
【００４２】
［例３：洗顔料］
(製法)
Ａ．下記成分（１）〜（７）を加熱溶解した。
Ｂ．下記成分（８）〜（１１）を加熱溶解した。
Ｃ．ＡにＢを添加し混合した。
Ｄ．Ｃを冷却後、下記成分（１２）〜（１４）を添加し混合して、洗顔料を得た。
（成分） （質量％）
（１）ラウリン酸 ５．０
（２）ミリスチン酸 １８．５
（３）ステアリン酸 ６．０
（４）グリセリン １２．０
（５）ポリエチレングリコール１５００ ５．０
（６）水酸化カリウム ６．５
（７）精製水 残量
（８）ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ５．０
（９）ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム １．８
（１０）ポリオキシエチレン（７．５Ｅ．Ｏ．）ラウリルエーテル ２．０
（１１）ジステアリン酸エチレングリコール １．０
（１２）ヒドロキシプロピルメチルセルロース１％水溶液 ５．０
（１３）２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウム ０．１
（１４）香料 適量
【００４３】
［例４：化粧水（２）］
（製法）
Ａ．下記成分（１）〜（６）を混合溶解した。
Ｂ．下記成分（７）〜（１２）を混合溶解した。
Ｃ．ＡにＢを添加し混合して、化粧水を得た。
（成分） (質量％)
（１）クエン酸 ０．０５
（２）クエン酸ナトリウム ０．２
（３）ピロリドンカルボン酸ナトリウム（５０％）液 ０．５
（４）グリチルリチン酸ジカリウム ０．１
（５）グリセリン ３．０
（６）１，３−ブチレングリコール ８．０
（７）精製水 残量
（８）エチルアルコール １０．０
（９）２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウム ０．１
（１０）香料 適量
（１１）防腐剤 適量
（１２）モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）
ソルビタン ０．５
【００４４】
［例５：水中油型乳液（２）］
（製法）
Ａ．下記成分（１）〜（１３）を加熱溶解し、７０℃に保った。
Ｂ．下記成分（１４）〜（１９）を加熱溶解し、７０℃に保った。
Ｃ．ＡにＢを添加し乳化して、さらに下記成分（２０）を添加し混合した。
Ｄ．Ｃを冷却後、下記成分（２１）を添加し混合して、乳液を得た。
（成分） （質量％）
（１）ステアリン酸 １．０
（２）セタノール ０．５
（３）親油型モノステアリン酸グリセリン ０．５
（４）流動パラフィン ２．０
（５）スクワラン ３．０
（６）ホホバ油 ３．０
（７）パルミチン酸セチル ０．２
（８）パルミチン酸レチノール ０．２
（９）酢酸トコフェロール ０．０５
（１０）防腐剤 適量
（１１）モノステアリン酸ソルビタン ０．３
（１２）モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）
ソルビタン ０．５
（１３）ジブチルヒドロキシトルエン ０．１
（１４）トリエタノールアミン ０．５
（１５）１，３−ブチレングリコール １５．０
（１６）グリセリン ３．０
（１７）ポリエチレングリコール６０００ ０．５
（１８）２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウム ０．１
（１９）精製水 残量
（２０）カルボキシビニルポリマー１％溶液 ８．０
（２１）香料 適量
【００４５】
［例６：クリーム］
（製法）
Ａ．下記成分（１）〜（１４）を加熱溶解し、７０℃に保った。
Ｂ．下記成分（１５）〜（２０）を加熱溶解し、７０℃に保った。
Ｃ．ＡにＢを添加し乳化して、さらに下記成分（２１）を添加し混合した。
Ｄ．Ｃを冷却後、下記成分（２２）を添加し混合して、クリームを得た。
（成分） （質量％）
（１）ステアリン酸 ２．５
（２）セタノール ２．５
（３）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（４）ワセリン ２．０
（５）ジペンタエリトリット脂肪酸エステル ２．０
（６）ミリスチン酸イソトリデシル ５．０
（７）流動パラフィン ８．０
（８）スクワラン ５．０
（９）ミツロウ １．０
（１０）パルミチン酸セチル ２．０
（１１）セスキオレイン酸ソルビタン ０．５
（１２）モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）
ソルビタン １．５
（１３）コエンザイムＱ１０ ０．１
（１４）防腐剤 適量
（１５）トリエタノールアミン １．２
（１６）１，３−ブチレングリコール ８．０
（１７）グリセリン ２．０
（１８）ポリエチレングリコール２００００ ０．５
（１９）２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウム ２．０
（２０）精製水 残量
（２１）カルボキシビニルポリマー１％水溶液 １０．０
（２２）香料 適量
【００４６】
［例７：油中水型日焼け止めクリーム］
（製法）
Ａ．下記成分（１）〜（８）を７０℃で加熱混合した。
Ｂ．下記成分（９）〜（１２）及び（１４）〜（１５）を５０℃で加温混合した。
Ｃ．ＡにＢを添加し乳化して、冷却後下記成分（１３）を添加し混合して、油中水型日焼け止めクリームを得た。
（成分） （質量％）
（１）ポリオキシアルキレン変性オルガノポリシロキサン＊１ ２．０
（２）パルミチン酸オクチル １５．０
（３）デカメチルシクロペンタシロキサン ２０．０
（４）トリベヘン酸グリセリル １．０
（５）微粒子酸化亜鉛 １２．０
（６）微粒子酸化チタン ３．０
（７）パラメトキシケイ皮酸２−エチルヘキシル＊２ ７．０
（８）４−ｔｅｒｔブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン＊３ １．０
（９）ジプロピレングリコール ５．０
（１０）エタノール ５．０
（１１）ポリエチレン末 ３．０
（１２）防腐剤 適量
（１３）香料 適量
（１４）２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウム ０．５
（１５）精製水 残量
＊１：ＫＦ−６０１７（信越化学工業社製）
＊２：ユビナールＭＣ８０（ＢＡＳＦ社製）
＊３：ＰＡＲＳＯＬ １７８９（Ｌ．Ｃ．ＵＮＩＴＥＤ社製）
【００４７】
［例８：パック化粧料］
（製法）
Ａ．下記成分（１）〜（５）及び（１５）を７０℃で加熱混合し、室温まで冷却した。
Ｂ．Ａに下記成分（６）〜（１４）を添加し混合して、パック化粧料を得た。
（成分） （質量％）
（１）ポリビニルアルコール １５．０
（２）グリセリン １０．０
（３）ポリオキシエチレン（１０）メチルグルコール ３．０
（４）トリオクタン酸グリセリル ５．０
（５）ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸ナトリウム １．０
（６）エタノール ２０．０
（７）カオリン ２．０
（８）酸化チタン ２．０
（９）グリチルリチン酸ジカリウム ０．１
（１０）乳酸（５０％水溶液） ０．５
（１１）乳酸ナトリウム（５０％水溶液） ０．５
（１２）防腐剤 適量
（１３）香料 適量
（１４）２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウム ０．２
（１５）精製水 残量
【００４８】
［例９：リキッドファンデーション］
（製法）
Ａ．下記成分（１）〜（７）を７０℃で加熱混合し、この混合物に下記成分（１３）〜（１８）を添加し混合して７０℃に保った。
Ｂ．下記成分（８）〜（１２）を７０℃で加熱混合した。
Ｃ．ＢにＡを添加し乳化して、冷却後、下記成分（１９）〜（２０）を添加し混合して、リキッドファンデーションを得た。
（成分） （質量％）
（１）ジペンタエリトリット脂肪酸エステル ２．０
（２）流動パラフィン ５．０
（３）ステアリン酸 ２．０
（４）セタノール １．０
（５）自己乳化型モノステアリン酸グリセリル １．０
（６）パラメトキシケイ皮酸２−エチルヘキシル ８．０
（７）防腐剤 適量
（８）グリセリン ５．０
（９）トリエタノールアミン １．０
（１０）カルボキシメチルセルロース ０．２
（１１）ベントナイト ０．５
（１２）精製水 残量
（１３）酸化チタン ６．０
（１４）微粒子酸化チタン ２．０
（１５）微粒子酸化亜鉛 ４．０
（１６）マイカ ２．０
（１７）タルク ４．０
（１８）着色顔料 適量
（１９）２，３−ジヒドロキシ安息香酸ナトリウム ０．１
（２０）香料 適量
【００４９】
上記で調製した種々の化粧料は、いずれも経時安定性に優れ、皮膚に適用することにより、肌のしわやたるみを改善し、張りのある美しい肌にする、老化防止効果に優れたものである。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】図１（Ａ）は、２，３−ジヒドロキシ安息香酸を表す。図１（Ｂ）は、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、図１（Ｃ）は、２，５−ジヒドロキシ安息香酸、図１（Ｄ）は、３，４−ジヒドロキシ安息香酸、図１（Ｅ）は、３，５−ジヒドロキシ安息香酸をそれぞれ表す。
【図２】エラスターゼ活性抑制効果評価試験の結果を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分とするエラスターゼ阻害組成物。
【請求項２】
２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物を含有する皮膚外用剤。
【請求項３】
老化防止用であることを特徴とする請求項２記載の皮膚外用剤。
【請求項１】
２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分とするエラスターゼ阻害組成物。
【請求項２】
２，３−ジヒドロキシ安息香酸及びその塩から選択される１種又は２種以上の化合物を含有する皮膚外用剤。
【請求項３】
老化防止用であることを特徴とする請求項２記載の皮膚外用剤。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２００９−１９６９３８（Ｐ２００９−１９６９３８Ａ）
【公開日】平成２１年９月３日（２００９．９．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−４０６９１（Ｐ２００８−４０６９１）
【出願日】平成２０年２月２１日（２００８．２．２１）
【出願人】（０００１４５８６２）株式会社コーセー (734)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年９月３日（２００９．９．３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年２月２１日（２００８．２．２１）
【出願人】（０００１４５８６２）株式会社コーセー (734)
【Ｆターム（参考）】
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