オキアミ油およびミールの製造方法
本発明は，新鮮なオキアミから実質的にすべての脂質画分を調製する方法，リン脂質を他の脂質から分離する方法，およびオキアミミールを製造する方法に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は，新鮮なオキアミから実質的にすべての脂質画分を製造するためのプロセス，およびリン脂質を他の脂質から分離するプロセスに関する。本発明はまた，高品質のオキアミミールを製造するプロセスに関する。
【背景技術】
【０００２】
水産物リン脂質は，医療品，健康食品およびヒトの栄養として，ならびに，魚の餌として，およびタラ，オヒョウおよびターボット等の海産種の幼生魚および稚魚の生存率を増加させる手段として有用である。
【０００３】
海洋生物からのリン脂質は，オメガ−３脂肪酸を含む。水産物リン脂質に結合したオメガ−３脂肪酸は特に有用な特性を有すると想定される。
【０００４】
魚精および魚卵等の産品は伝統的な水産物リン脂質の原材料である。しかし，これらの原材料は，限定された量でしか入手できず，その価格は高い。
【０００５】
オキアミは小さい，エビに似た動物であり，比較的高い濃度のリン脂質を含む。Ｅｕｐｈａｓｉｉｄｓの群には８０を越える種があり，南極オキアミはその種の１つである。商業的な有用性について現在最も可能性が高いものは南極のＥｕｐｈａｕｓｉａ ｓｕｐｅｒｂａである。Ｅ．ｓｕｐｅｒｂａは体長２−６ｃｍである。別の南極オキアミ種はＥ．ｃｒｙｓｔａｌｌｏｒｐｈｉａｓである。Ｍｅｇａｎｙｃｔｉｐｈａｎｅｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃａ，Ｔｈｙｓａｎｏｅｓｓａ ｉｎｅｒｍｉｓおよびＴ．ｒａｓｃｈｉｉは，北洋オキアミの例である。
【０００６】
Ｅｕｐｈａｕｓｉａ ｓｕｐｅｒｂａでは，新鮮なオキアミは，約１０％までの脂質を含み，このうち約５０％はリン脂質である。オキアミからのリン脂質は非常に高いレベルのオメガ−３脂肪酸を含み，そのうち，エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）の含有量は約４０％を越える。南極オキアミの２つの主要な種からの脂質のおよその組成を表１に示す。
【０００７】
【表１】
【０００８】
さらに，南極オキアミは，伝統的な魚油より環境汚染物質のレベルが低い。
【０００９】
オキアミは，０℃で非常に活性なリパーゼ等の酵素による消化系を有する。リパーゼはオキアミが死亡した後も活性なままであり，オキアミの脂質の一部を加水分解する。これによる望ましくない影響は，オキアミ油が通常は数パーセントの遊離脂肪酸を含むことである。加工前にオキアミをより小さい断片に切断しなければならないのであれば，当業者はただちに，このことは加水分解の程度を増加させるであろうと理解する。すなわち，新鮮なオキアミの全身，またはオキアミからの全身部分を利用することができるプロセスを見いだすことが望まれている。これは，そのようなプロセスは，品質が改良された，脂質の加水分解の程度が低い生成物を与えるためである。この改良された品質は，オキアミ脂質のすべてのグループ，例えば，リン脂質，トリグリセリドおよびアスタキサンチンエステルに影響を及ぼす。
【００１０】
オキアミ脂質は，その大部分が頭部に存在する。したがって，新鮮なオキアミを利用するプロセスは，頭部を除去したオキアミからの副生成物を速やかに加工するのに非常に適しており，そのような製品は漁船の船上で製造することができる。
【００１１】
Ｂｅａｕｄｉｏｎらの米国特許６，８００，２９９では，アセトンおよびエタノール等の有機溶媒を用いて低温で連続して抽出することにより，オキアミから総脂質画分を抽出する方法が開示されている。このプロセスでは大量の有機溶媒を用いて抽出しており，これはあまり望ましくない。
【００１２】
Ｋ．Ｙａｍａｇｕｃｈｉら（Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．１９８６ ３４，９０４−９０７）は，凍結乾燥南極オキアミを超臨界液体抽出の最も一般的な溶媒である二酸化炭素を用いて超臨界液体抽出すると，主として非極性脂質（ほとんどはトリグリセリド）からなりリン脂質を含まない生成物が得られることを示した。Ｙａｍａｇｕｃｈｉらは，オキアミミール中の油は酸化または重合により，超臨界ＣＯ2ではわずかに限定された抽出しか生じない程度に劣化していることを報告した。
【００１３】
Ｙ．ＴａｎａｋａおよびＴ．Ｏｈｋｕｂｏ（Ｊ．Ｏｌｅｏ．Ｓｃｉ．（２００３），５２，２９５−３０１）は，イクラから脂質を抽出する彼ら自身の研究との関係において，Ｙａｍａｇｕｃｉらの研究を引用している。より新しい論文（Ｙ．Ｔａｎａｋａ ｅｔ ａｌ．（２００４），Ｊ．Ｏｌｅｏ．Ｓｃｉ．，５３，４１７−４２４）において，同じ著者は，リン脂質の抽出にエタノールとＣＯ2との混合物を用いることによりこの問題を解決しようとした。ＣＯ2を５％エタノールとともに用いると，凍結乾燥サケ卵からリン脂質は除去されなかったが，１０％エタノールを加えると，リン脂質の３０％が除去され，３０％ものエタノールを加えると，リン脂質の８０％以上が除去された。凍結乾燥は費用がかかりエネルギーを消費するプロセスであり，商業的なオキアミ漁業から入手可能となる非常に大量の生鮮物質の処理には適していない。
【００１４】
Ｔａｎａｋａらは，抽出の温度を変化させることによりプロセスの最適化を試みて，低温が最もよい結果を与えることを見いだした。ＣＯ2の臨界温度のすぐ上の温度である３３℃が，最もよい結果を与えるとして選択された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】米国特許６，８００，２９９
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Ｋ．Ｙａｍａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ａｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ．１９８６３４，９０４−９０７）
【非特許文献２】Ｙ．Ｔａｎａｋａ ａｎｄ Ｔ．Ｏｈｋｕｂｏ，Ｊ．Ｏｌｅｏ．Ｓｃｉ．（２００３），５２，２９５−３０１
【非特許文献３】Ｙ．Ｔａｎａｋａ ｅｔ ａｌ．（２００４），Ｊ．Ｏｌｅｏ．Ｓｃｉ．，５３，４１７−４２４
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１７】
これらの知見に反して，我々は，驚くべきことに，大量の凍結乾燥等の複雑かつ費用のかかる前処理を必要とせずに，新鮮なオキアミから実質的にすべての脂質画分を抽出するプロセスを見いだした。脂質画分はトリグリセリド，アスタキサンチンおよびリン脂質を含んでいた。加工前に原材料を乾燥または脱油する必要はなかった。Ｔａｎａｋａらとは異なり，我々は，海産物原材料を短時間加熱することは抽出収率を高めることを見いだした。また，オキアミを中程度の温度での短時間の加熱やモレキュラーシーブ等の固体乾燥剤との接触等によって前処理することにより，新鮮なオキアミからリン脂質を除去するのにエタノール洗浄のみでも十分であることが見いだされた。
【００１８】
発明の概要
新鮮なオキアミからアセトンなどの有機溶媒を用いずに実質的にすべての脂質画分を調製するプロセスを提供することが本発明の主な目的である。
【００１９】
超臨界圧で液体に暴露することにより酸化が防止され，二酸化炭素／エタノールの組み合わせはオキアミ脂質の酵素的加水分解を不活性化させると予測される。本発明にしたがうプロセスは，原材料の取り扱いが最小でよいため，例えば漁船上で新鮮なオキアミに対して用いるのに非常に適している。本発明にしたがう生成物は，加水分解されたおよび／または酸化された脂質を，慣用のプロセスにより製造される脂質より実質的に少ない量で含むと予測される。このことはまた，慣用のプロセスからのものより，オキアミ脂質抗酸化物質の劣化がより少ないと予測されることを意味する。任意に，新鮮なオキアミを短時間加熱して前処理することにより，脂質の酵素分解を不活性化し，このことにより，製品中の遊離脂肪酸のレベルを確実に非常に低くすることができる。
【００２０】
本発明の別の目的は，他の海産物原材料，例えば，魚生殖腺，Ｃａｌａｎｕｓ種，または高品質オキアミミールから実質的にすべての脂質画分を調製するプロセスを提供することである。
【００２１】
本発明の別の目的は，長鎖ポリ不飽和オメガ−３脂肪酸の豊富な実質的にすべての脂質画分を提供することである。
【００２２】
これらのおよび他の目的は，特許請求の範囲において定義されるプロセスおよび脂質画分により達成される。
【００２３】
本発明にしたがえば，新鮮なオキアミから実質的にすべての脂質画分を抽出する方法が提供され，この方法は，
ａ）オキアミ原材料の含水量を低下させ；そして
ｂ）脂質画分を単離する
の各工程を含む。
【００２４】
任意に，上述の方法は，
ａ−１）工程ａ）からの含水量低下オキアミ原料を，エタノール，メタノール，プロパノールまたはイソプロパノールを含む超臨界圧のＣＯ2で抽出する追加の工程を含む。この工程ａ−１）は，工程ａ）に引き続いて行う。
【００２５】
本発明の好ましい態様においては，新鮮なオキアミから実質的にすべての脂質画分を抽出する方法が提供され，この方法は，
ａ）オキアミ原材料の含水量を低下させ；
ａ−１）工程ａ）からの含水量低下オキアミ原料をエタノールを含むＣＯ2で抽出し，該抽出は超臨界圧で実施し；そして
ｂ）エタノールから脂質画分を単離する
の各工程を含む。
【００２６】
本発明の好ましい態様においては，工程ａ）は，オキアミ原材料を１：０．５〜１：５の重量比のエタノール，メタノール，プロパノールおよび／またはイソプロパノールで洗浄することを含む。好ましくは，オキアミ原材料は，洗浄前に，６０−１００℃，より好ましくは７０−１００℃，最も好ましくは８０−９５℃で加熱する。さらに，オキアミ原材料は，洗浄前に，好ましくは約１−４０分間，より好ましくは約１−１５分間，最も好ましくは約１−５分間加熱する。
【００２７】
本発明の別の好ましい態様においては，工程ａ）は，水を除去するために，オキアミ原材料をモレキュラーシーブまたは他の形の膜，例えば水吸収膜と接触させることを含む。
【００２８】
好ましくは，工程ａ−１）におけるエタノール，メタノール，プロパノールおよび／またはイソプロパノールの量は，５−２０重量％，より好ましくは１０−１５重量％である。
【００２９】
オキアミの総脂質を含む生成物の製造に加えて，本発明は，リン脂質を他の脂質から分離するためにも用いることができる。本発明にしたがう超臨界圧における抽出により得られる総脂質を異なる種類の脂質に分離するためには，前記総脂質を純粋な二酸化炭素で抽出することにより，オメガ−３の豊富なリン脂質から非極性脂質を除去することができる。総脂質を５％未満のエタノールまたはメタノールを含む二酸化炭素で抽出することは別の選択肢である。
【００３０】
リン脂質は，有益なオメガ−３脂肪酸が他の種類の脂質よりはるかに多いため，本発明はオメガ−３脂肪酸の高濃縮物を製造するのに有用である。市販されている魚油は１１−３３％の総オメガ−３脂肪酸を含むが（Ｈｊａｌｔａｓｏｎ，Ｂ ａｎｄ Ｈａｒａｌｄｓｓｏｎ，ＧＧ（２００６）Ｆｉｓｈｏｉｌｓ ａｎｄ ｌｉｐｉｄｓ ｆｒｏｍ ｍａｒｉｎｅ ｓｏｕｒｃｅｓ，Ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ Ｌｉｐｉｄｓ ｆｏｒ Ｕｓｅ ｉｎ Ｆｏｏｄ（ＦＤ Ｇｕｎｓｔｏｎｅ，ｅｄ），Ｗｏｏｄｈｅａｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｌｔｄ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ｐｐ．５６−７９），オキアミのリン脂質はこれをはるかに高いレベルで含む（Ｅｌｌｉｎｇｓｅｎ，ＴＥ（１９８２）Ｂｉｏｋｊｅｍｉｓｋｅ ｓｔｕｄｉｅｒ ｏｖｅｒ ａｎｔａｒｋｔｉｓｋ ｋｒｉｌｌ，ＰｈＤ ｔｈｅｓｉｓ，Ｎｏｒｇｅｓ ｔｅｋｎｉｓｋｅ ｈｏｙｓｋｏｌｅ，Ｔｒｏｎｄｈｅｉｍ．Ｅｎｇｌｉｓｈ ｓｕｍｍａｒｙ ｉｎ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｎｏ．５２ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｒｗｅｇｉａｎ Ａｎｔａｒｃｔｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｅｘｐｅｄｉｔｉｏｎｓ（１９７６／７７ ａｎｄ １９７８／７９）），表１も参照のこと。オメガ−３の豊富なリン脂質はそのまま用いてもよく，オメガ−３含有リン脂質に起因する種々のポジティブな生物学的効果を得ることができる。あるいは，エステル（典型的にはエチルエステル）または遊離脂肪酸，またはオメガ−３脂肪酸をさらに濃縮するのに適した他の誘導体を得るために，リン脂質をエステル交換するかまたは加水分解することができる。一例として，オキアミリン脂質のエチルエステルはＥｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ ｎｏ．１２５０（オメガ−３−酸エチルエステル９０），２０６２（オメガ−３−酸エチルエステル６０）および１３５２（オメガ−３−酸トリグリセリド）の基準に適合した濃縮物を製造するための中間体生成物として有益である。同時に，残りの脂質（アスタキサンチン，抗酸化剤，トリグリセリド，ワックスエステル）をそのまま，水産養殖の餌等の種々の用途に用いることができ，または脂質の種類をさらに分離することができる。
【００３１】
すなわち，本発明のさらに別の目的は，上述のように，リン脂質を他の脂質から分離するプロセスを提供することである。
【００３２】
本発明の別の目的は，高品質のオキアミミールを製造することである。脂質はこのプロセスの最初の工程で除去されるため，ミールは酸化された脂質および重合した脂質を実質的に含まない。このため，ミールは，酸化的ストレスを回避することが重要な用途，例えば，養殖用飼料における使用，特に海生魚類種の開始時の餌として非常に適している。したがって，本発明のオキアミミールは，幼生魚および稚魚，ならびに魚類および甲殻類の餌として非常に適している。さらに，本発明のオキアミミールは，高品質のキトサンの製造用の供給源として用いることもできる。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】図１は，抽出の原材料として用いたＥ．ｓｕｐｅｒｂａの写真を示す。
【図２】図２は，下記の実施例７に記載されるようにして抽出した後の材料を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
発明の詳細な説明
加工は，広範な種類の加工条件で行うことができ，そのうちのいくつかを下記に例示する。
【００３５】
下記において，“新鮮な”オキアミとは，収穫後直ちに，または収穫後脂質の加水分解または酸化等の品質の劣化を防ぐのに十分に短い時間で処理されるオキアミ，または収穫後ただちに凍結したオキアミとして定義される。新鮮なオキアミは，全オキアミであってもよく，または新鮮なオキアミからの副生成物（例えば皮をむいた後の材料）であってもよい。新鮮なオキアミはまた，収穫後短時間で凍結したオキアミ，またはオキアミからの副生成物であってもよい。
【００３６】
さらに，“オキアミ”にはオキアミミールも含まれる。
【実施例】
【００３７】
実施例１
凍結乾燥オキアミの加工
凍結乾燥オキアミを，ＣＯ2で超臨界圧で抽出した。これにより，９０ｇ／ｋｇの生成物を得た。分析は，抽出物がＥＰＡ＋ＤＨＡの合計をわずか５．４％しか含まないことを示しており，有意な量のオメガ−３リッチリン脂質を含んでいなかったことを示す。１０％エタノールを含むＣＯ2を用いる第２の抽出により，１００ｇ／ｋｇ（出発サンプル重量から計算）の抽出物が得られた。31Ｐ ＮＭＲは，生成物がリン脂質を含むことを示した。抽出物は，ＥＰＡとＤＨＡを合計で３３．５％含んでいた。
【００３８】
両方の工程において，抽出条件は３００ｂａｒ，５０℃であった。
【００３９】
すなわち，よりオメガ−３の含有量の少ないオキアミ脂質からオメガ−３の豊富なリン脂質を実質的に分離することが可能である。
【００４０】
第２の実験においては，凍結乾燥オキアミを上述と同じ圧力および温度で，最初に１６７部（重量）の純粋なＣＯ2で，次に１０％エタノールを含む１６７部（重量）のＣＯ2で２回抽出した。合わせた抽出物（２８０ｇ／ｋｇの原材料）を13Ｃおよび31Ｐ ＮＭＲにより分析した。分析により，生成物は主要成分としてトリグリセリドおよびリン脂質を含むことが示された。先の抽出物と同様に，暗赤色は抽出物がアスタキサンチンを含むことを示した。
【００４１】
実施例１にしたがうプロセスが凍結乾燥オキアミについて用いられてきたか否かは不明である。これはＹ．Ｔａｎａｋａら，（２００４）Ｊ．Ｏｌｅｏ Ｓｃｉ．５３，４１７−４２４から予期されたであろうと主張できるかもしれない。しかし，この従来技術においてはＣＯ2を１０％エタノールとともに用いると，リン脂質のわずか３０％しか抽出されなかった。リン脂質の８０％を抽出するためには，２０％エタノールを用いる必要があった。
【００４２】
本発明にしたがう実施例：
実施例２
新鮮なＥ．ｓｕｐｅｒｂａ（２００ｇ）をエタノール（１：１，２００ｇ）で約０℃で洗浄した。エタノール抽出物（１．５％）は，無機塩（主としてＮａＣｌ）および多少の有機物質を含んでいた。
【００４３】
エタノール洗浄オキアミを１０％エタノールを含むＣＯ2で抽出した。これにより，１２ｇ（出発オキアミに基づいて６％）の抽出物が得られた。分析（ＴＬＣおよびＮＭＲ）は，抽出物がリン脂質，トリグリセリドおよびアスタキサンチンを含むことを示した。
【００４４】
当業者は，超臨界圧における二酸化炭素は，エタノールの溶媒として作用することができることを認識するであろう。すなわち，ＣＯ2の溶解力を調節する代替法は，エタノール含有オキアミ原材料からエタノールを直接溶解させるように，圧力／温度条件を利用することであり，ＣＯ2の前処理によって加える必要はない。このことは，以下の実施例でも適用される。
【００４５】
実施例３
新鮮なＥ．ｓｕｐｅｒｂａ（２００ｇ）をエタノール（１：３，６００ｇ）で約０℃で洗浄した。エタノール抽出物（７．２％）は，リン脂質，トリグリセリドおよびアスタキサンチン，ならびに多少の無機塩を含んでいた。抽出物は，２６．３％（ＥＰＡ＋ＤＨＡ）を含んでおり，このことは，リン脂質の相対含量が高いことを示す。
【００４６】
エタノールで洗浄したオキアミを１０％エタノールを含むＣＯ2で抽出した。これにより，オキアミ出発材料に基づいて２．２％の抽出物が得られた。分析（ＴＬＣおよびＮＭＲ）により，抽出物はリン脂質，トリグリセリドおよびアスタキサンチンを含むことが示された。しかし，抽出物はわずか８．１％（ＥＰＡ＋ＤＨＡ）しか含まないため，リン脂質含有量は低いと結論づけられた。
【００４７】
実施例４
新鮮なＥ．ｓｕｐｅｒｂａを，上述と同じ２工程プロセスで，ただし，洗浄工程におけるエタノールの量を４：１に増加させて処理した。エタノール抽出物は出発材料と比較して７．２％であり，一方，超臨界液体抽出物は２．６％であった。
【００４８】
実施例５
オキアミ原材料から水を除去するために，新鮮なＥ．ｓｕｐｅｒｂａ（２００ｇ）をモレキュラーシーブ（Ａ３，２８０ｇ）と接触させた。１０％エタノールを含むＣＯ2で抽出すると，オキアミの出発重量から計算して５．２％の抽出物が得られた。分析により，この抽出物は，トリグリセリド，リン脂質およびアスタキサンチンを含むことが示された。抽出された全オキアミは黒色の眼を除き完全に白色であった。
【００４９】
実施例５は，水を除去したときの影響を示す。エタノールの代替物としてモレキュラーシーブを選択した。これらの実施例は，水を除去するために用いることができる薬剤を限定することを意図するものではない。モレキュラーシーブおよび他の乾燥剤は，凍結乾燥の代替物として，穏和であり費用効果的である。
【００５０】
実施例６
新鮮なＥ．ｓｕｐｅｒｂａ（２００ｇ）を実施例２と同様にしてエタノール（１：１）で洗浄したが，ただし，原材料を８０℃で５分間前処理した点が異なっていた。これにより，７．３％のエタノール抽出物が得られた。さらに１０％エタノールを含むＣＯ2による超臨界液体抽出により，新鮮な原材料から出発して２．６％の抽出物が得られた。総抽出物は９．９％であり，分析（ＴＬＣ，ＮＭＲ）は，抽出物がリン脂質を豊富に含み，トリグリセリドおよびアスタキサンチンも含むことを示した。残留の全オキアミは，黒色の眼を除き完全に白色であった。
【００５１】
実施例７
新鮮なＥ．ｓｕｐｅｒｂａ（１２ｋｇ）を８０℃で数分間加熱した後，エタノール（２６ｋｇ）で抽出した。これにより，０．８２ｋｇ（７％）のエタノール抽出物が得られた。脂質の種類を分析したところ（ＨＰＬＣ；カラム：Ａｌｌｔｉｍａ ＨＰシリカ３μｍ；検出器：ＤＥＤＬ Ｓｅｄｅｒｅ；溶媒：クロロホルム／メタノール）リン脂質含有量が５８％であることが示された。ＧＣ（面積％）による分析は，２４．０％ＥＰＡおよび１１．４％ＤＨＡ，ＥＰＡ＋ＤＨＡの合計＝３５．４％の含有量を示した。
【００５２】
残りのオキアミをエタノール（１５ｋｇ）を含むＣＯ2（１５６ｋｇ）で２８０ｂａｒおよび５０℃で抽出した。これにより０．２４ｋｇ（２％）の抽出物を得た。残留のオキアミは，黒色の眼を除き白色であった。脂質分類の分析は，１９％のリン脂質含有量を示した。抽出物は８．９％ＥＰＡおよび４．８％ＤＨＡ（合計１３．７％）を含んでいた。残りのオキアミ原料の抽出（Ｆｏｌｃｈ法）は，わずか０．０８ｋｇの脂質含有量を示した（最初のオキアミ重量と比較して０．７％）。このことは，実質的に全ての脂質が抽出されたことを意味する。
【００５３】
実施例８
新鮮なＥ．ｓｕｐｅｒｂａ（１２ｋｇ）を熱処理なしでエタノール（３３ｋｇ）で抽出した。これにより，０．２９ｋｇ（２．４％）の抽出物を得た。上述のように脂質分類を分析すると，２８．５％のリン脂質含有量を示した。
【００５４】
この結果は，熱処理により加熱しないで同じ処理をした場合と比較して，脂質の収率が増加したことを示す。原材料を熱処理した後，１部（重量）のエタノールで処理したところ，加熱せずに４部のエタノールを用いた場合と同じ結果が得られた。また，加熱せずにエタノール処理した場合と比較して，リン脂質およびオメガ−３脂肪酸がより豊富なエタノール抽出物が得られた。
【００５５】
実施例で用いた加熱時間は本発明を限定するものではない。当業者は，大量の生物学的材料については，正確な加熱時間をモニターすることが困難であることを認識するであろう。すなわち，加熱時間は，特定の時間に加工すべきオキアミの量により様々でありうる。また，予熱に用いる温度も実施例の温度に限定されない。実験は，８０℃での予熱よりさらに高い９５℃で予熱することにより，工程ａ）における脂質の収量を増加させる傾向を示した。また，大量のオキアミについては，すべてのオキアミ原料について正確に同じ温度を得ることが困難である。
【００５６】
熱処理は，非常に活性なオキアミ消化酵素が不活性化され，脂質の加水分解の可能性を低下させるという付加的な結果を与える。
【００５７】
実施例９
図１は，抽出の原材料として用いたＥ．ｓｕｐｅｒｂａの写真である。図２は，実施例７に記載されるように抽出した後の材料を示す。他の実施例も，抽出後に非常に似た材料を与えた。抽出した後のオキアミは乾燥しており，指の間で加圧することによって手動でも簡単に粉体とすることができる。脱脂粉体は，オキアミからの蛋白質ならびにキトサンおよび他の非脂質成分を含む。粉体は乾燥タラに似た臭いがする。この粉体は実質的に脂質を含まないため，酸化したポリ不飽和脂肪酸を実質的に含まないミールが得られる。これは，伝統的なプロセスにしたがって製造した，リン脂質画分の実質的にすべてがミール中に残留して，酸化され重合した材料が生ずるオキアミミールとは全く異なる。したがって，本発明のプロセスにしたがって製造したオキアミミールは，水産養殖の餌として使用したとき，伝統的なオキアミミールまたはフィッシュミールと比較して酸化的ストレスがはるかに少ない。オキアミミールはまた，ロブスター等の甲殻類の餌として，および野生のタラバガニ（Ｐａｒａｌｉｔｈｏｄｅｓ ｃａｍｔｓｃｈａｔｉｃａ）のカニの身の質および量を増加させるための餌として非常に適している。ミールは重合した脂質を実質的に含まないため，高い品質のキトサンの製造用に，および高品質のミールを必要とする他のプロセスにおいても有用である。
【００５８】
オキアミ脂質は非常に速く酸化されて，一般の溶媒に溶解しにくくなるため，当業者は，例えば有機溶媒を用いる伝統的なオキアミミールの脱脂によっては同様の高品質オキアミミールを得ることができないことを理解するであろう。
【００５９】
当業者は，上述のプロセスはオキアミ以外の原材料，例えば，魚類生殖腺から，またはＣａｌａｎｕｓ種からのオメガ−３の豊富なリン脂質の単離についても用いることができることを理解するであろう。ある種のオキアミ種は，ワックスエステル（例として，Ｅ．ｃｒｙｓｔａｌｌｏｒｐｈｉａｓ）が豊富であり，Ｃａｌａｎｕｓ種についても同じである。当業者は，上述のように加工することにより，非極性脂質画分中でワックスエステルを濃縮することができることを理解するであろう。
【００６０】
さらに，当業者は，上述のプロセスの工程を用いて，オキアミの極性脂質（すなわち，リン脂質）と非極性脂質を分離することができることを理解するであろう。また，上述の例の１つにしたがって，オキアミの総脂質の抽出物を製造し，次にこの中間生成物に２回目の抽出を行って，脂質の種類により分離することも可能である。例えば，純粋な二酸化炭素による抽出により，オメガ−３が豊富なリン脂質から非極性脂質を除去することができる。
【００６１】
別の態様においては，本発明にしたがうプロセスを用いてオキアミミールを抽出し，得られるオキアミミールはオキアミ脂質の劣化を回避するのに十分に穏和な方法で製造されたものである。
【００６２】
当業者はまた，上述のプロセスは魚生殖腺およびＣａｌａｎｕｓ種などの他の海産物原材料を抽出するために用いることができることを理解するであろう。
【００６３】
本発明の方法により得られる脂質画分または脂質生成物は，既知のオキアミ油製品（慣用の方法により製造）と比較して，その品質に関してさらに別の利点を有する。例えば，Ｎｅｐｔｕｎｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＆Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓによる，日本産オキアミ（種は特定されていない）から抽出されたオキアミ油は下記の組成を有する。
【００６４】
【表２】
【００６５】
本発明にしたがう脂質生成物または画分は，
・加水分解および／または酸化された脂質が慣用の方法により製造される脂質より実質的に少なく，
・慣用の方法よりオキアミ脂質抗酸化剤の劣化が少なく，
・非常に低いレベルの遊離脂肪酸を含み，および／または
・有機溶媒の痕跡を実質的に含まない，
ことが期待される。
【００６６】
“酸化された”脂質とは，一次酸化生成物（典型的には過酸化物値により測定される），二次酸化生成物（典型的にはカルボニル生成物であって，しばしばアニシジン値により分析される）および三次酸化生成物（オリゴマーおよびポリマー）のいずれをも意味する。
【００６７】
すなわち，本発明は，本発明にしたがう方法の１つにより製造される，市販用の脂質またはオキアミ油製品を含む。
【００６８】
栄養補助食品であるＳｕｐｅｒｂａ（商標）（Ａｋｅｒ Ｂｉｏ Ｍａｒｉｎｅ，Ｎｏｒｗａｙ）等の製品は，本発明の方法にしたがって製造することができる。
【００６９】
当業者は，本発明の方法により製造される製品の品質は，伝統的なオキアミミールの抽出により製造される製品と比較して改良されることを認識するであろう。
【００７０】
さらに，本発明にしたがうプロセスにより得られる脂質組成物の例を下記の表に示す。
【００７１】
【表３】
【００７２】
本発明にしたがえば，抽出物は，リン脂質の含量に関して濃縮することができる。いくつかの典型的な脂質組成物を表３−５に例示する。
【００７３】
【表４】
【００７４】
実施例７に見られるように，表３に記載される脂質組成物は，本発明の工程ａ）にしたがう抽出のみを適用することによっても得ることができる。
【００７５】
【表５】
【００７６】
【表６】
【００７７】
本発明は，示される態様および実施例に限定されない。
【技術分野】
【０００１】
本発明は，新鮮なオキアミから実質的にすべての脂質画分を製造するためのプロセス，およびリン脂質を他の脂質から分離するプロセスに関する。本発明はまた，高品質のオキアミミールを製造するプロセスに関する。
【背景技術】
【０００２】
水産物リン脂質は，医療品，健康食品およびヒトの栄養として，ならびに，魚の餌として，およびタラ，オヒョウおよびターボット等の海産種の幼生魚および稚魚の生存率を増加させる手段として有用である。
【０００３】
海洋生物からのリン脂質は，オメガ−３脂肪酸を含む。水産物リン脂質に結合したオメガ−３脂肪酸は特に有用な特性を有すると想定される。
【０００４】
魚精および魚卵等の産品は伝統的な水産物リン脂質の原材料である。しかし，これらの原材料は，限定された量でしか入手できず，その価格は高い。
【０００５】
オキアミは小さい，エビに似た動物であり，比較的高い濃度のリン脂質を含む。Ｅｕｐｈａｓｉｉｄｓの群には８０を越える種があり，南極オキアミはその種の１つである。商業的な有用性について現在最も可能性が高いものは南極のＥｕｐｈａｕｓｉａ ｓｕｐｅｒｂａである。Ｅ．ｓｕｐｅｒｂａは体長２−６ｃｍである。別の南極オキアミ種はＥ．ｃｒｙｓｔａｌｌｏｒｐｈｉａｓである。Ｍｅｇａｎｙｃｔｉｐｈａｎｅｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃａ，Ｔｈｙｓａｎｏｅｓｓａ ｉｎｅｒｍｉｓおよびＴ．ｒａｓｃｈｉｉは，北洋オキアミの例である。
【０００６】
Ｅｕｐｈａｕｓｉａ ｓｕｐｅｒｂａでは，新鮮なオキアミは，約１０％までの脂質を含み，このうち約５０％はリン脂質である。オキアミからのリン脂質は非常に高いレベルのオメガ−３脂肪酸を含み，そのうち，エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）の含有量は約４０％を越える。南極オキアミの２つの主要な種からの脂質のおよその組成を表１に示す。
【０００７】
【表１】
【０００８】
さらに，南極オキアミは，伝統的な魚油より環境汚染物質のレベルが低い。
【０００９】
オキアミは，０℃で非常に活性なリパーゼ等の酵素による消化系を有する。リパーゼはオキアミが死亡した後も活性なままであり，オキアミの脂質の一部を加水分解する。これによる望ましくない影響は，オキアミ油が通常は数パーセントの遊離脂肪酸を含むことである。加工前にオキアミをより小さい断片に切断しなければならないのであれば，当業者はただちに，このことは加水分解の程度を増加させるであろうと理解する。すなわち，新鮮なオキアミの全身，またはオキアミからの全身部分を利用することができるプロセスを見いだすことが望まれている。これは，そのようなプロセスは，品質が改良された，脂質の加水分解の程度が低い生成物を与えるためである。この改良された品質は，オキアミ脂質のすべてのグループ，例えば，リン脂質，トリグリセリドおよびアスタキサンチンエステルに影響を及ぼす。
【００１０】
オキアミ脂質は，その大部分が頭部に存在する。したがって，新鮮なオキアミを利用するプロセスは，頭部を除去したオキアミからの副生成物を速やかに加工するのに非常に適しており，そのような製品は漁船の船上で製造することができる。
【００１１】
Ｂｅａｕｄｉｏｎらの米国特許６，８００，２９９では，アセトンおよびエタノール等の有機溶媒を用いて低温で連続して抽出することにより，オキアミから総脂質画分を抽出する方法が開示されている。このプロセスでは大量の有機溶媒を用いて抽出しており，これはあまり望ましくない。
【００１２】
Ｋ．Ｙａｍａｇｕｃｈｉら（Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．１９８６ ３４，９０４−９０７）は，凍結乾燥南極オキアミを超臨界液体抽出の最も一般的な溶媒である二酸化炭素を用いて超臨界液体抽出すると，主として非極性脂質（ほとんどはトリグリセリド）からなりリン脂質を含まない生成物が得られることを示した。Ｙａｍａｇｕｃｈｉらは，オキアミミール中の油は酸化または重合により，超臨界ＣＯ2ではわずかに限定された抽出しか生じない程度に劣化していることを報告した。
【００１３】
Ｙ．ＴａｎａｋａおよびＴ．Ｏｈｋｕｂｏ（Ｊ．Ｏｌｅｏ．Ｓｃｉ．（２００３），５２，２９５−３０１）は，イクラから脂質を抽出する彼ら自身の研究との関係において，Ｙａｍａｇｕｃｉらの研究を引用している。より新しい論文（Ｙ．Ｔａｎａｋａ ｅｔ ａｌ．（２００４），Ｊ．Ｏｌｅｏ．Ｓｃｉ．，５３，４１７−４２４）において，同じ著者は，リン脂質の抽出にエタノールとＣＯ2との混合物を用いることによりこの問題を解決しようとした。ＣＯ2を５％エタノールとともに用いると，凍結乾燥サケ卵からリン脂質は除去されなかったが，１０％エタノールを加えると，リン脂質の３０％が除去され，３０％ものエタノールを加えると，リン脂質の８０％以上が除去された。凍結乾燥は費用がかかりエネルギーを消費するプロセスであり，商業的なオキアミ漁業から入手可能となる非常に大量の生鮮物質の処理には適していない。
【００１４】
Ｔａｎａｋａらは，抽出の温度を変化させることによりプロセスの最適化を試みて，低温が最もよい結果を与えることを見いだした。ＣＯ2の臨界温度のすぐ上の温度である３３℃が，最もよい結果を与えるとして選択された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】米国特許６，８００，２９９
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Ｋ．Ｙａｍａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ａｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ．１９８６３４，９０４−９０７）
【非特許文献２】Ｙ．Ｔａｎａｋａ ａｎｄ Ｔ．Ｏｈｋｕｂｏ，Ｊ．Ｏｌｅｏ．Ｓｃｉ．（２００３），５２，２９５−３０１
【非特許文献３】Ｙ．Ｔａｎａｋａ ｅｔ ａｌ．（２００４），Ｊ．Ｏｌｅｏ．Ｓｃｉ．，５３，４１７−４２４
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１７】
これらの知見に反して，我々は，驚くべきことに，大量の凍結乾燥等の複雑かつ費用のかかる前処理を必要とせずに，新鮮なオキアミから実質的にすべての脂質画分を抽出するプロセスを見いだした。脂質画分はトリグリセリド，アスタキサンチンおよびリン脂質を含んでいた。加工前に原材料を乾燥または脱油する必要はなかった。Ｔａｎａｋａらとは異なり，我々は，海産物原材料を短時間加熱することは抽出収率を高めることを見いだした。また，オキアミを中程度の温度での短時間の加熱やモレキュラーシーブ等の固体乾燥剤との接触等によって前処理することにより，新鮮なオキアミからリン脂質を除去するのにエタノール洗浄のみでも十分であることが見いだされた。
【００１８】
発明の概要
新鮮なオキアミからアセトンなどの有機溶媒を用いずに実質的にすべての脂質画分を調製するプロセスを提供することが本発明の主な目的である。
【００１９】
超臨界圧で液体に暴露することにより酸化が防止され，二酸化炭素／エタノールの組み合わせはオキアミ脂質の酵素的加水分解を不活性化させると予測される。本発明にしたがうプロセスは，原材料の取り扱いが最小でよいため，例えば漁船上で新鮮なオキアミに対して用いるのに非常に適している。本発明にしたがう生成物は，加水分解されたおよび／または酸化された脂質を，慣用のプロセスにより製造される脂質より実質的に少ない量で含むと予測される。このことはまた，慣用のプロセスからのものより，オキアミ脂質抗酸化物質の劣化がより少ないと予測されることを意味する。任意に，新鮮なオキアミを短時間加熱して前処理することにより，脂質の酵素分解を不活性化し，このことにより，製品中の遊離脂肪酸のレベルを確実に非常に低くすることができる。
【００２０】
本発明の別の目的は，他の海産物原材料，例えば，魚生殖腺，Ｃａｌａｎｕｓ種，または高品質オキアミミールから実質的にすべての脂質画分を調製するプロセスを提供することである。
【００２１】
本発明の別の目的は，長鎖ポリ不飽和オメガ−３脂肪酸の豊富な実質的にすべての脂質画分を提供することである。
【００２２】
これらのおよび他の目的は，特許請求の範囲において定義されるプロセスおよび脂質画分により達成される。
【００２３】
本発明にしたがえば，新鮮なオキアミから実質的にすべての脂質画分を抽出する方法が提供され，この方法は，
ａ）オキアミ原材料の含水量を低下させ；そして
ｂ）脂質画分を単離する
の各工程を含む。
【００２４】
任意に，上述の方法は，
ａ−１）工程ａ）からの含水量低下オキアミ原料を，エタノール，メタノール，プロパノールまたはイソプロパノールを含む超臨界圧のＣＯ2で抽出する追加の工程を含む。この工程ａ−１）は，工程ａ）に引き続いて行う。
【００２５】
本発明の好ましい態様においては，新鮮なオキアミから実質的にすべての脂質画分を抽出する方法が提供され，この方法は，
ａ）オキアミ原材料の含水量を低下させ；
ａ−１）工程ａ）からの含水量低下オキアミ原料をエタノールを含むＣＯ2で抽出し，該抽出は超臨界圧で実施し；そして
ｂ）エタノールから脂質画分を単離する
の各工程を含む。
【００２６】
本発明の好ましい態様においては，工程ａ）は，オキアミ原材料を１：０．５〜１：５の重量比のエタノール，メタノール，プロパノールおよび／またはイソプロパノールで洗浄することを含む。好ましくは，オキアミ原材料は，洗浄前に，６０−１００℃，より好ましくは７０−１００℃，最も好ましくは８０−９５℃で加熱する。さらに，オキアミ原材料は，洗浄前に，好ましくは約１−４０分間，より好ましくは約１−１５分間，最も好ましくは約１−５分間加熱する。
【００２７】
本発明の別の好ましい態様においては，工程ａ）は，水を除去するために，オキアミ原材料をモレキュラーシーブまたは他の形の膜，例えば水吸収膜と接触させることを含む。
【００２８】
好ましくは，工程ａ−１）におけるエタノール，メタノール，プロパノールおよび／またはイソプロパノールの量は，５−２０重量％，より好ましくは１０−１５重量％である。
【００２９】
オキアミの総脂質を含む生成物の製造に加えて，本発明は，リン脂質を他の脂質から分離するためにも用いることができる。本発明にしたがう超臨界圧における抽出により得られる総脂質を異なる種類の脂質に分離するためには，前記総脂質を純粋な二酸化炭素で抽出することにより，オメガ−３の豊富なリン脂質から非極性脂質を除去することができる。総脂質を５％未満のエタノールまたはメタノールを含む二酸化炭素で抽出することは別の選択肢である。
【００３０】
リン脂質は，有益なオメガ−３脂肪酸が他の種類の脂質よりはるかに多いため，本発明はオメガ−３脂肪酸の高濃縮物を製造するのに有用である。市販されている魚油は１１−３３％の総オメガ−３脂肪酸を含むが（Ｈｊａｌｔａｓｏｎ，Ｂ ａｎｄ Ｈａｒａｌｄｓｓｏｎ，ＧＧ（２００６）Ｆｉｓｈｏｉｌｓ ａｎｄ ｌｉｐｉｄｓ ｆｒｏｍ ｍａｒｉｎｅ ｓｏｕｒｃｅｓ，Ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ Ｌｉｐｉｄｓ ｆｏｒ Ｕｓｅ ｉｎ Ｆｏｏｄ（ＦＤ Ｇｕｎｓｔｏｎｅ，ｅｄ），Ｗｏｏｄｈｅａｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｌｔｄ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ｐｐ．５６−７９），オキアミのリン脂質はこれをはるかに高いレベルで含む（Ｅｌｌｉｎｇｓｅｎ，ＴＥ（１９８２）Ｂｉｏｋｊｅｍｉｓｋｅ ｓｔｕｄｉｅｒ ｏｖｅｒ ａｎｔａｒｋｔｉｓｋ ｋｒｉｌｌ，ＰｈＤ ｔｈｅｓｉｓ，Ｎｏｒｇｅｓ ｔｅｋｎｉｓｋｅ ｈｏｙｓｋｏｌｅ，Ｔｒｏｎｄｈｅｉｍ．Ｅｎｇｌｉｓｈ ｓｕｍｍａｒｙ ｉｎ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｎｏ．５２ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｒｗｅｇｉａｎ Ａｎｔａｒｃｔｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｅｘｐｅｄｉｔｉｏｎｓ（１９７６／７７ ａｎｄ １９７８／７９）），表１も参照のこと。オメガ−３の豊富なリン脂質はそのまま用いてもよく，オメガ−３含有リン脂質に起因する種々のポジティブな生物学的効果を得ることができる。あるいは，エステル（典型的にはエチルエステル）または遊離脂肪酸，またはオメガ−３脂肪酸をさらに濃縮するのに適した他の誘導体を得るために，リン脂質をエステル交換するかまたは加水分解することができる。一例として，オキアミリン脂質のエチルエステルはＥｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ ｎｏ．１２５０（オメガ−３−酸エチルエステル９０），２０６２（オメガ−３−酸エチルエステル６０）および１３５２（オメガ−３−酸トリグリセリド）の基準に適合した濃縮物を製造するための中間体生成物として有益である。同時に，残りの脂質（アスタキサンチン，抗酸化剤，トリグリセリド，ワックスエステル）をそのまま，水産養殖の餌等の種々の用途に用いることができ，または脂質の種類をさらに分離することができる。
【００３１】
すなわち，本発明のさらに別の目的は，上述のように，リン脂質を他の脂質から分離するプロセスを提供することである。
【００３２】
本発明の別の目的は，高品質のオキアミミールを製造することである。脂質はこのプロセスの最初の工程で除去されるため，ミールは酸化された脂質および重合した脂質を実質的に含まない。このため，ミールは，酸化的ストレスを回避することが重要な用途，例えば，養殖用飼料における使用，特に海生魚類種の開始時の餌として非常に適している。したがって，本発明のオキアミミールは，幼生魚および稚魚，ならびに魚類および甲殻類の餌として非常に適している。さらに，本発明のオキアミミールは，高品質のキトサンの製造用の供給源として用いることもできる。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】図１は，抽出の原材料として用いたＥ．ｓｕｐｅｒｂａの写真を示す。
【図２】図２は，下記の実施例７に記載されるようにして抽出した後の材料を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
発明の詳細な説明
加工は，広範な種類の加工条件で行うことができ，そのうちのいくつかを下記に例示する。
【００３５】
下記において，“新鮮な”オキアミとは，収穫後直ちに，または収穫後脂質の加水分解または酸化等の品質の劣化を防ぐのに十分に短い時間で処理されるオキアミ，または収穫後ただちに凍結したオキアミとして定義される。新鮮なオキアミは，全オキアミであってもよく，または新鮮なオキアミからの副生成物（例えば皮をむいた後の材料）であってもよい。新鮮なオキアミはまた，収穫後短時間で凍結したオキアミ，またはオキアミからの副生成物であってもよい。
【００３６】
さらに，“オキアミ”にはオキアミミールも含まれる。
【実施例】
【００３７】
実施例１
凍結乾燥オキアミの加工
凍結乾燥オキアミを，ＣＯ2で超臨界圧で抽出した。これにより，９０ｇ／ｋｇの生成物を得た。分析は，抽出物がＥＰＡ＋ＤＨＡの合計をわずか５．４％しか含まないことを示しており，有意な量のオメガ−３リッチリン脂質を含んでいなかったことを示す。１０％エタノールを含むＣＯ2を用いる第２の抽出により，１００ｇ／ｋｇ（出発サンプル重量から計算）の抽出物が得られた。31Ｐ ＮＭＲは，生成物がリン脂質を含むことを示した。抽出物は，ＥＰＡとＤＨＡを合計で３３．５％含んでいた。
【００３８】
両方の工程において，抽出条件は３００ｂａｒ，５０℃であった。
【００３９】
すなわち，よりオメガ−３の含有量の少ないオキアミ脂質からオメガ−３の豊富なリン脂質を実質的に分離することが可能である。
【００４０】
第２の実験においては，凍結乾燥オキアミを上述と同じ圧力および温度で，最初に１６７部（重量）の純粋なＣＯ2で，次に１０％エタノールを含む１６７部（重量）のＣＯ2で２回抽出した。合わせた抽出物（２８０ｇ／ｋｇの原材料）を13Ｃおよび31Ｐ ＮＭＲにより分析した。分析により，生成物は主要成分としてトリグリセリドおよびリン脂質を含むことが示された。先の抽出物と同様に，暗赤色は抽出物がアスタキサンチンを含むことを示した。
【００４１】
実施例１にしたがうプロセスが凍結乾燥オキアミについて用いられてきたか否かは不明である。これはＹ．Ｔａｎａｋａら，（２００４）Ｊ．Ｏｌｅｏ Ｓｃｉ．５３，４１７−４２４から予期されたであろうと主張できるかもしれない。しかし，この従来技術においてはＣＯ2を１０％エタノールとともに用いると，リン脂質のわずか３０％しか抽出されなかった。リン脂質の８０％を抽出するためには，２０％エタノールを用いる必要があった。
【００４２】
本発明にしたがう実施例：
実施例２
新鮮なＥ．ｓｕｐｅｒｂａ（２００ｇ）をエタノール（１：１，２００ｇ）で約０℃で洗浄した。エタノール抽出物（１．５％）は，無機塩（主としてＮａＣｌ）および多少の有機物質を含んでいた。
【００４３】
エタノール洗浄オキアミを１０％エタノールを含むＣＯ2で抽出した。これにより，１２ｇ（出発オキアミに基づいて６％）の抽出物が得られた。分析（ＴＬＣおよびＮＭＲ）は，抽出物がリン脂質，トリグリセリドおよびアスタキサンチンを含むことを示した。
【００４４】
当業者は，超臨界圧における二酸化炭素は，エタノールの溶媒として作用することができることを認識するであろう。すなわち，ＣＯ2の溶解力を調節する代替法は，エタノール含有オキアミ原材料からエタノールを直接溶解させるように，圧力／温度条件を利用することであり，ＣＯ2の前処理によって加える必要はない。このことは，以下の実施例でも適用される。
【００４５】
実施例３
新鮮なＥ．ｓｕｐｅｒｂａ（２００ｇ）をエタノール（１：３，６００ｇ）で約０℃で洗浄した。エタノール抽出物（７．２％）は，リン脂質，トリグリセリドおよびアスタキサンチン，ならびに多少の無機塩を含んでいた。抽出物は，２６．３％（ＥＰＡ＋ＤＨＡ）を含んでおり，このことは，リン脂質の相対含量が高いことを示す。
【００４６】
エタノールで洗浄したオキアミを１０％エタノールを含むＣＯ2で抽出した。これにより，オキアミ出発材料に基づいて２．２％の抽出物が得られた。分析（ＴＬＣおよびＮＭＲ）により，抽出物はリン脂質，トリグリセリドおよびアスタキサンチンを含むことが示された。しかし，抽出物はわずか８．１％（ＥＰＡ＋ＤＨＡ）しか含まないため，リン脂質含有量は低いと結論づけられた。
【００４７】
実施例４
新鮮なＥ．ｓｕｐｅｒｂａを，上述と同じ２工程プロセスで，ただし，洗浄工程におけるエタノールの量を４：１に増加させて処理した。エタノール抽出物は出発材料と比較して７．２％であり，一方，超臨界液体抽出物は２．６％であった。
【００４８】
実施例５
オキアミ原材料から水を除去するために，新鮮なＥ．ｓｕｐｅｒｂａ（２００ｇ）をモレキュラーシーブ（Ａ３，２８０ｇ）と接触させた。１０％エタノールを含むＣＯ2で抽出すると，オキアミの出発重量から計算して５．２％の抽出物が得られた。分析により，この抽出物は，トリグリセリド，リン脂質およびアスタキサンチンを含むことが示された。抽出された全オキアミは黒色の眼を除き完全に白色であった。
【００４９】
実施例５は，水を除去したときの影響を示す。エタノールの代替物としてモレキュラーシーブを選択した。これらの実施例は，水を除去するために用いることができる薬剤を限定することを意図するものではない。モレキュラーシーブおよび他の乾燥剤は，凍結乾燥の代替物として，穏和であり費用効果的である。
【００５０】
実施例６
新鮮なＥ．ｓｕｐｅｒｂａ（２００ｇ）を実施例２と同様にしてエタノール（１：１）で洗浄したが，ただし，原材料を８０℃で５分間前処理した点が異なっていた。これにより，７．３％のエタノール抽出物が得られた。さらに１０％エタノールを含むＣＯ2による超臨界液体抽出により，新鮮な原材料から出発して２．６％の抽出物が得られた。総抽出物は９．９％であり，分析（ＴＬＣ，ＮＭＲ）は，抽出物がリン脂質を豊富に含み，トリグリセリドおよびアスタキサンチンも含むことを示した。残留の全オキアミは，黒色の眼を除き完全に白色であった。
【００５１】
実施例７
新鮮なＥ．ｓｕｐｅｒｂａ（１２ｋｇ）を８０℃で数分間加熱した後，エタノール（２６ｋｇ）で抽出した。これにより，０．８２ｋｇ（７％）のエタノール抽出物が得られた。脂質の種類を分析したところ（ＨＰＬＣ；カラム：Ａｌｌｔｉｍａ ＨＰシリカ３μｍ；検出器：ＤＥＤＬ Ｓｅｄｅｒｅ；溶媒：クロロホルム／メタノール）リン脂質含有量が５８％であることが示された。ＧＣ（面積％）による分析は，２４．０％ＥＰＡおよび１１．４％ＤＨＡ，ＥＰＡ＋ＤＨＡの合計＝３５．４％の含有量を示した。
【００５２】
残りのオキアミをエタノール（１５ｋｇ）を含むＣＯ2（１５６ｋｇ）で２８０ｂａｒおよび５０℃で抽出した。これにより０．２４ｋｇ（２％）の抽出物を得た。残留のオキアミは，黒色の眼を除き白色であった。脂質分類の分析は，１９％のリン脂質含有量を示した。抽出物は８．９％ＥＰＡおよび４．８％ＤＨＡ（合計１３．７％）を含んでいた。残りのオキアミ原料の抽出（Ｆｏｌｃｈ法）は，わずか０．０８ｋｇの脂質含有量を示した（最初のオキアミ重量と比較して０．７％）。このことは，実質的に全ての脂質が抽出されたことを意味する。
【００５３】
実施例８
新鮮なＥ．ｓｕｐｅｒｂａ（１２ｋｇ）を熱処理なしでエタノール（３３ｋｇ）で抽出した。これにより，０．２９ｋｇ（２．４％）の抽出物を得た。上述のように脂質分類を分析すると，２８．５％のリン脂質含有量を示した。
【００５４】
この結果は，熱処理により加熱しないで同じ処理をした場合と比較して，脂質の収率が増加したことを示す。原材料を熱処理した後，１部（重量）のエタノールで処理したところ，加熱せずに４部のエタノールを用いた場合と同じ結果が得られた。また，加熱せずにエタノール処理した場合と比較して，リン脂質およびオメガ−３脂肪酸がより豊富なエタノール抽出物が得られた。
【００５５】
実施例で用いた加熱時間は本発明を限定するものではない。当業者は，大量の生物学的材料については，正確な加熱時間をモニターすることが困難であることを認識するであろう。すなわち，加熱時間は，特定の時間に加工すべきオキアミの量により様々でありうる。また，予熱に用いる温度も実施例の温度に限定されない。実験は，８０℃での予熱よりさらに高い９５℃で予熱することにより，工程ａ）における脂質の収量を増加させる傾向を示した。また，大量のオキアミについては，すべてのオキアミ原料について正確に同じ温度を得ることが困難である。
【００５６】
熱処理は，非常に活性なオキアミ消化酵素が不活性化され，脂質の加水分解の可能性を低下させるという付加的な結果を与える。
【００５７】
実施例９
図１は，抽出の原材料として用いたＥ．ｓｕｐｅｒｂａの写真である。図２は，実施例７に記載されるように抽出した後の材料を示す。他の実施例も，抽出後に非常に似た材料を与えた。抽出した後のオキアミは乾燥しており，指の間で加圧することによって手動でも簡単に粉体とすることができる。脱脂粉体は，オキアミからの蛋白質ならびにキトサンおよび他の非脂質成分を含む。粉体は乾燥タラに似た臭いがする。この粉体は実質的に脂質を含まないため，酸化したポリ不飽和脂肪酸を実質的に含まないミールが得られる。これは，伝統的なプロセスにしたがって製造した，リン脂質画分の実質的にすべてがミール中に残留して，酸化され重合した材料が生ずるオキアミミールとは全く異なる。したがって，本発明のプロセスにしたがって製造したオキアミミールは，水産養殖の餌として使用したとき，伝統的なオキアミミールまたはフィッシュミールと比較して酸化的ストレスがはるかに少ない。オキアミミールはまた，ロブスター等の甲殻類の餌として，および野生のタラバガニ（Ｐａｒａｌｉｔｈｏｄｅｓ ｃａｍｔｓｃｈａｔｉｃａ）のカニの身の質および量を増加させるための餌として非常に適している。ミールは重合した脂質を実質的に含まないため，高い品質のキトサンの製造用に，および高品質のミールを必要とする他のプロセスにおいても有用である。
【００５８】
オキアミ脂質は非常に速く酸化されて，一般の溶媒に溶解しにくくなるため，当業者は，例えば有機溶媒を用いる伝統的なオキアミミールの脱脂によっては同様の高品質オキアミミールを得ることができないことを理解するであろう。
【００５９】
当業者は，上述のプロセスはオキアミ以外の原材料，例えば，魚類生殖腺から，またはＣａｌａｎｕｓ種からのオメガ−３の豊富なリン脂質の単離についても用いることができることを理解するであろう。ある種のオキアミ種は，ワックスエステル（例として，Ｅ．ｃｒｙｓｔａｌｌｏｒｐｈｉａｓ）が豊富であり，Ｃａｌａｎｕｓ種についても同じである。当業者は，上述のように加工することにより，非極性脂質画分中でワックスエステルを濃縮することができることを理解するであろう。
【００６０】
さらに，当業者は，上述のプロセスの工程を用いて，オキアミの極性脂質（すなわち，リン脂質）と非極性脂質を分離することができることを理解するであろう。また，上述の例の１つにしたがって，オキアミの総脂質の抽出物を製造し，次にこの中間生成物に２回目の抽出を行って，脂質の種類により分離することも可能である。例えば，純粋な二酸化炭素による抽出により，オメガ−３が豊富なリン脂質から非極性脂質を除去することができる。
【００６１】
別の態様においては，本発明にしたがうプロセスを用いてオキアミミールを抽出し，得られるオキアミミールはオキアミ脂質の劣化を回避するのに十分に穏和な方法で製造されたものである。
【００６２】
当業者はまた，上述のプロセスは魚生殖腺およびＣａｌａｎｕｓ種などの他の海産物原材料を抽出するために用いることができることを理解するであろう。
【００６３】
本発明の方法により得られる脂質画分または脂質生成物は，既知のオキアミ油製品（慣用の方法により製造）と比較して，その品質に関してさらに別の利点を有する。例えば，Ｎｅｐｔｕｎｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＆Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓによる，日本産オキアミ（種は特定されていない）から抽出されたオキアミ油は下記の組成を有する。
【００６４】
【表２】
【００６５】
本発明にしたがう脂質生成物または画分は，
・加水分解および／または酸化された脂質が慣用の方法により製造される脂質より実質的に少なく，
・慣用の方法よりオキアミ脂質抗酸化剤の劣化が少なく，
・非常に低いレベルの遊離脂肪酸を含み，および／または
・有機溶媒の痕跡を実質的に含まない，
ことが期待される。
【００６６】
“酸化された”脂質とは，一次酸化生成物（典型的には過酸化物値により測定される），二次酸化生成物（典型的にはカルボニル生成物であって，しばしばアニシジン値により分析される）および三次酸化生成物（オリゴマーおよびポリマー）のいずれをも意味する。
【００６７】
すなわち，本発明は，本発明にしたがう方法の１つにより製造される，市販用の脂質またはオキアミ油製品を含む。
【００６８】
栄養補助食品であるＳｕｐｅｒｂａ（商標）（Ａｋｅｒ Ｂｉｏ Ｍａｒｉｎｅ，Ｎｏｒｗａｙ）等の製品は，本発明の方法にしたがって製造することができる。
【００６９】
当業者は，本発明の方法により製造される製品の品質は，伝統的なオキアミミールの抽出により製造される製品と比較して改良されることを認識するであろう。
【００７０】
さらに，本発明にしたがうプロセスにより得られる脂質組成物の例を下記の表に示す。
【００７１】
【表３】
【００７２】
本発明にしたがえば，抽出物は，リン脂質の含量に関して濃縮することができる。いくつかの典型的な脂質組成物を表３−５に例示する。
【００７３】
【表４】
【００７４】
実施例７に見られるように，表３に記載される脂質組成物は，本発明の工程ａ）にしたがう抽出のみを適用することによっても得ることができる。
【００７５】
【表５】
【００７６】
【表６】
【００７７】
本発明は，示される態様および実施例に限定されない。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
新鮮なオキアミから実質的にすべての脂質画分を抽出する方法であって，
ａ）オキアミ原材料の含水量を低下させ；そして
ｂ）脂質画分を単離する，
の各工程を含む方法。
【請求項２】
工程ａ）は，１：０．５〜１：５の重量比の，エタノール，メタノール，プロパノールまたはイソプロパノールを用いて洗浄することを含み，工程ｂ）はアルコールから脂質画分を単離することを含む，請求項１記載の方法。
【請求項３】
工程ａ）は，オキアミ原材料をエタノールで洗浄することを含み；および
工程ｂ）は，エタノールから脂質画分を単離することを含む，
請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
さらに，
ａ−１）工程ａ）からの含水量低下オキアミ原料を，エタノール，メタノール，プロパノールまたはイソプロパノールを含むＣＯ2で超臨界圧で抽出する，
の工程を含む，請求項１−３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
オキアミ原材料を洗浄する前に６０−１００℃で加熱する，請求項１−４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
オキアミ原材料を洗浄する前に７０−１００℃で加熱する，請求項５記載の方法。
【請求項７】
オキアミ原材料を洗浄する前に８０−９５℃で加熱する，請求項５または６に記載の方法。
【請求項８】
オキアミ原材料を洗浄する前に約１〜４０分間加熱する，請求項５−７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
オキアミ原材料を洗浄する前に約１〜１５分間加熱する，請求項８記載の方法。
【請求項１０】
オキアミ原材料を洗浄する前に約１〜５分間加熱する，請求項８または９に記載の方法。
【請求項１１】
工程ａ）は，原材料をモレキュラーシーブと接触させることを含む，請求項１記載の方法。
【請求項１２】
工程ａ）は，原材料を水吸収膜と接触させることを含む，請求項１記載の方法。
【請求項１３】
工程ａ−１）におけるエタノール，メタノール，プロパノールまたはイソプロパノールの量は５−２０重量％である，請求項１記載の方法。
【請求項１４】
工程ａ−１）におけるエタノール，メタノール，プロパノールまたはイソプロパノールの量は１０−１５重量％である，請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
請求項１−１４記載の方法により得られる，トリグリセリド，アスタキサンチンおよびリン脂質を含む実質的にすべての脂質画分。
【請求項１６】
酸化された脂質を実質的に含まない，請求項１５記載の脂質画分。
【請求項１７】
医薬品および／または栄養補助食品としての，請求項１５または１６に記載の総脂質画分。
【請求項１８】
リン脂質を他の脂質から分離する方法であって，請求項１−１４のいずれかに記載の方法により得られる総脂質画分を，純粋な二酸化炭素，または５％未満のエタノール，メタノール，プロパノールまたはイソプロパノールを含む二酸化炭素で抽出することを含む方法。
【請求項１９】
請求項１８記載の方法により得られるリン脂質画分。
【請求項２０】
リン脂質はさらにエステル交換または加水分解されたものである，請求項１９記載のリン脂質。
【請求項２１】
オメガ−３脂肪酸の濃度は少なくとも４０重量％である，請求項１９記載のリン脂質。
【請求項２２】
オキアミミールを製造する方法であって，請求項１−１４のいずれかに記載の方法にしたがって実質的にすべての脂質画分を抽出し，；そして
残留したオキアミ原材料を単離する，
ことを含む方法。
【請求項２３】
請求項２２記載の方法により得られるオキアミミールであって，酸化されたポリ不飽和脂肪酸および他の脂質を実質的に含まないオキアミミール。
【請求項２４】
請求項２３記載のオキアミミールの，動物飼料における使用。
【請求項２５】
請求項２３記載のオキアミミールの，養殖用飼料における使用。
【請求項２６】
請求項２３記載のオキアミミールの，幼生魚および稚魚を含む海生魚類の飼料としての使用。
【請求項２７】
請求項２６記載のオキアミミールの，甲殻類の飼料としての使用。
【請求項２８】
高品質キトサンを製造するための請求項２３記載のオキアミミールの使用。
【請求項１】
新鮮なオキアミから実質的にすべての脂質画分を抽出する方法であって，
ａ）オキアミ原材料の含水量を低下させ；そして
ｂ）脂質画分を単離する，
の各工程を含む方法。
【請求項２】
工程ａ）は，１：０．５〜１：５の重量比の，エタノール，メタノール，プロパノールまたはイソプロパノールを用いて洗浄することを含み，工程ｂ）はアルコールから脂質画分を単離することを含む，請求項１記載の方法。
【請求項３】
工程ａ）は，オキアミ原材料をエタノールで洗浄することを含み；および
工程ｂ）は，エタノールから脂質画分を単離することを含む，
請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
さらに，
ａ−１）工程ａ）からの含水量低下オキアミ原料を，エタノール，メタノール，プロパノールまたはイソプロパノールを含むＣＯ2で超臨界圧で抽出する，
の工程を含む，請求項１−３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
オキアミ原材料を洗浄する前に６０−１００℃で加熱する，請求項１−４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
オキアミ原材料を洗浄する前に７０−１００℃で加熱する，請求項５記載の方法。
【請求項７】
オキアミ原材料を洗浄する前に８０−９５℃で加熱する，請求項５または６に記載の方法。
【請求項８】
オキアミ原材料を洗浄する前に約１〜４０分間加熱する，請求項５−７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
オキアミ原材料を洗浄する前に約１〜１５分間加熱する，請求項８記載の方法。
【請求項１０】
オキアミ原材料を洗浄する前に約１〜５分間加熱する，請求項８または９に記載の方法。
【請求項１１】
工程ａ）は，原材料をモレキュラーシーブと接触させることを含む，請求項１記載の方法。
【請求項１２】
工程ａ）は，原材料を水吸収膜と接触させることを含む，請求項１記載の方法。
【請求項１３】
工程ａ−１）におけるエタノール，メタノール，プロパノールまたはイソプロパノールの量は５−２０重量％である，請求項１記載の方法。
【請求項１４】
工程ａ−１）におけるエタノール，メタノール，プロパノールまたはイソプロパノールの量は１０−１５重量％である，請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
請求項１−１４記載の方法により得られる，トリグリセリド，アスタキサンチンおよびリン脂質を含む実質的にすべての脂質画分。
【請求項１６】
酸化された脂質を実質的に含まない，請求項１５記載の脂質画分。
【請求項１７】
医薬品および／または栄養補助食品としての，請求項１５または１６に記載の総脂質画分。
【請求項１８】
リン脂質を他の脂質から分離する方法であって，請求項１−１４のいずれかに記載の方法により得られる総脂質画分を，純粋な二酸化炭素，または５％未満のエタノール，メタノール，プロパノールまたはイソプロパノールを含む二酸化炭素で抽出することを含む方法。
【請求項１９】
請求項１８記載の方法により得られるリン脂質画分。
【請求項２０】
リン脂質はさらにエステル交換または加水分解されたものである，請求項１９記載のリン脂質。
【請求項２１】
オメガ−３脂肪酸の濃度は少なくとも４０重量％である，請求項１９記載のリン脂質。
【請求項２２】
オキアミミールを製造する方法であって，請求項１−１４のいずれかに記載の方法にしたがって実質的にすべての脂質画分を抽出し，；そして
残留したオキアミ原材料を単離する，
ことを含む方法。
【請求項２３】
請求項２２記載の方法により得られるオキアミミールであって，酸化されたポリ不飽和脂肪酸および他の脂質を実質的に含まないオキアミミール。
【請求項２４】
請求項２３記載のオキアミミールの，動物飼料における使用。
【請求項２５】
請求項２３記載のオキアミミールの，養殖用飼料における使用。
【請求項２６】
請求項２３記載のオキアミミールの，幼生魚および稚魚を含む海生魚類の飼料としての使用。
【請求項２７】
請求項２６記載のオキアミミールの，甲殻類の飼料としての使用。
【請求項２８】
高品質キトサンを製造するための請求項２３記載のオキアミミールの使用。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２０１０−５１０２０８（Ｐ２０１０−５１０２０８Ａ）
【公表日】平成２２年４月２日（２０１０．４．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５３７１０６（Ｐ２００９−５３７１０６）
【出願日】平成１９年１１月１５日（２００７．１１．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＮＯ２００７／０００４０２
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０６０１６３
【国際公開日】平成２０年５月２２日（２００８．５．２２）
【出願人】（５０９１２３４７１）プロノヴァ バイオファーマ ノルゲ アーエス (5)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年４月２日（２０１０．４．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１１月１５日（２００７．１１．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＮＯ２００７／０００４０２
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０６０１６３
【国際公開日】平成２０年５月２２日（２００８．５．２２）
【出願人】（５０９１２３４７１）プロノヴァ バイオファーマ ノルゲ アーエス (5)
【Ｆターム（参考）】
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