クロマン化合物およびその製造方法
【課題】daedalinAよりもさらに安定な化合物であって、美白作用、抗酸化作用、活性酸素除去作用などを有する物質を提供すること、および、daedalin Aまたは本発明の化合物を効率的に有機合成する方法を提供することを、本発明の課題とする。
【解決手段】daedalinA の3位、4位の二重結合に水素付加した化合物は、予想外にdaedalin Aよりも安定性、機能性に優れた美白剤、抗酸化剤などの有効成分となることを見いだして、上記課題を解決した。また、daedalinAの有機合成法を改善することにより、上記課題を解決した。
【解決手段】daedalinA の3位、4位の二重結合に水素付加した化合物は、予想外にdaedalin Aよりも安定性、機能性に優れた美白剤、抗酸化剤などの有効成分となることを見いだして、上記課題を解決した。また、daedalinAの有機合成法を改善することにより、上記課題を解決した。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、強い美白作用および抗酸化作用を有し、かつ、高い安定性を有するクロマン化合物、およびその製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
肌の黒色化の原因は、肌に蓄積したメラニン色素である。このメラニン色素の合成を阻害する美白剤は、化粧品や食品、医薬品の有効成分として様々な化合物が開発されている。美白作用を示す化合物として、これまでにアルブチンやコウジ酸、ルシノール、アスコルビン酸およびその誘導体が開発されている。アルブチンやコウジ酸、ルシノールのような美白剤は、メラニン合成におけるキー酵素であるチロシナーゼの活性を阻害することで、メラニンの合成を阻害し肌の黒色化を防ぐ。アスコルビン酸やその誘導体はメラニンやメラニン生成における中間体を還元することによりメラニンの蓄積を阻害する。
【０００３】
しかしながら、これらの美白剤は、いずれも美白作用が不十分であり、より効果的な美白剤の開発が期待されている。
【０００４】
抗酸化剤とは、物質の酸化を阻害する還元作用に優れた物質である。この還元作用により、他の物質の酸化を防ぐことができる。抗酸化剤は、生体に対して大きな損傷を与え、炎症や老化、発癌などの原因となるスーパーオキシドラジカルやヒドロキシラジカルのような活性酸素や過酸化脂質などのラジカルを消去することができる。また、メラニン合成における生合成経路において、抗酸化物質はメラニンやメラニン生成における中間体に対して還元作用を示し、メラニン合成をも阻害する。
【０００５】
抗酸化剤として、これまでにいくつかの化合物が開発されている。これまでに開発された抗酸化剤として代表的な化合物にはブチルヒドロキシトルエン(BHT)、α-トコフェロール (ビタミンE) などがある。特にα-トコフェロールは優れた抗酸化活性を示し、化粧品や食品、医薬品の有効成分として多用されている抗酸化剤である。しかし、α-トコフェロールやブチルヒドロキシトルエンは水に不溶な油溶性の化合物であり、水性の製剤への配合は困難である。また、既存の抗酸化剤は安定性にも欠け、着色や変色、においの変化の原因となる。また、既存の抗酸化剤では効果の不十分なものも多い。従って、より効果的で安定な水溶性の抗酸化剤の開発が期待されている。
【０００６】
本発明者らは、ホウロクタケ(daedalea dickinsii)の菌糸体が下記の分子構造を持つ化合物 (daedalin A) を比較的多量に生産することを明らかにし、美白作用、抗酸化作用等を併せ持つ水溶性のdaedalin A を、新しいタイプの美白剤や抗酸化剤等として開示している (特許文献１)。
【０００７】
【化１０１】
【０００８】
このdaedalin Aは、ホウロクタケ由来であることから、安全に人体に適用できると考えられる。しかしながら、このdaedalinAは、従前の美白剤などの有効成分と比較すると安定ではあるが、長期保存の際に、黄色に変色することが明らかとなった。化粧品などの皮膚外用品の成分に用いる化合物には、より高い安定性が望まれることから、このdaedalinAよりもさらに安定であり、かつ、効果的な、美白作用、抗酸化作用、活性酸素除去作用などを有する物質が求められている。
【０００９】
また、daedalinAの製造方法として、本発明者らはホウロクタケの菌糸体の代謝産物より分離する方法を開示している。
【００１０】
その他の製造方法としては、非特許文献2において、有機合成によりdaealin Aのラセミ体を製造する方法が開示されている。しかし、非特許文献2に開示されている製造方法は合成収率が低く製造手順も複雑となり、実用的ではない。そのため、より効率的な合成法が求められている。
【００１１】
この出願の発明に関連する先行技術文献情報としては、次のものがある。
【特許文献１】特開2006-124386
【非特許文献１】SynlettNo.2. 322-324 (2002)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の課題は、daedalinAよりもさらに安定な化合物であって、美白作用、抗酸化作用、活性酸素除去作用などを有する物質を提供することにある。また、本発明のさらなる課題は、daedalinAまたは本発明の化合物を効率的に有機合成する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らはホウロクタケ菌糸体による daedalin A の製造方法の向上および、化学変換による daedalin A の機能性の向上、実用的な daedalin A ラセミ体の合成法の確立のための開発に着手した。
【００１４】
その結果、daedalin A は，ホウロクタケの菌糸体の成長過程で生産され、成長に応じて他の物質へ代謝（変換）される物質であることを見出した。従って、daedalinA をホウロクタケにより、効率的に生産するにはホウロクタケの菌糸体を一定期間培養後、daedalin A が他の物質に構造変換される前にホウロクタケの菌糸体と代謝生産物質を分離する必要がある。
【００１５】
また、daedalinA の3位、4位の二重結合に水素付加した下記の分子構造を持つ化合物は daedalin A よりも安定性、機能性に優れた美白剤、抗酸化剤を提供できることを見出した。
【００１６】
【化１０２】
さらには、daedalinA は有機合成によって得られる daedalin A のラセミ体においても daedalin A と同等の抗酸化作用、美白作用を示すことを見出すとともに、非特許文献１において開示されている既存の合成方法よりも優れたdaedalin A の合成方法を新たに開発し、本発明の完成に至った。
【００１７】
したがって、本発明では以下を提供する。
【００１８】
（項目１） 以下の構造式：
【００１９】
【化２０１】
を有する化合物。
【００２０】
（項目２） 項目１に記載の化合物を含有する美白剤。
【００２１】
（項目３） 項目１に記載の化合物を含有する抗酸化剤。
【００２２】
（項目４） 項目１に記載の化合物を含有する活性酸素除去剤。
【００２３】
（項目５） 項目１に記載の化合物を含有する皮膚外用剤。
【００２４】
（項目６） 以下の構造式：
【００２５】
【化２０２】
に表される化合物のラセミ混合物、または、
以下の構造式：
【００２６】
【化２０３】
に表される化合物のラセミ混合物を含有する、美白剤。
【００２７】
（項目７） 以下の構造式：
【００２８】
【化２０４】
に表される化合物のラセミ混合物、または、
以下の構造式：
【００２９】
【化２０５】
に表される化合物のラセミ混合物を含有する、抗酸化剤。
【００３０】
（項目８） 以下の構造式：
【００３１】
【化２０６】
に表される化合物のラセミ混合物、または、
以下の構造式：
【００３２】
【化２０７】
に表される化合物のラセミ混合物を含有する、活性酸素除去剤。
【００３３】
（項目９） 以下の構造式：
【００３４】
【化２０８】
に表される化合物のラセミ混合物、または、
以下の構造式：
【００３５】
【化２０９】
に表される化合物のラセミ混合物を含有する、皮膚外用剤。
【００３６】
（項目１０） 以下の構造式：
【００３７】
【化２１０】
に表される化合物を製造する方法であって、以下：
（ａ）ホウロクタケ (daedalea dickinsii) の菌糸体を10日から50日間培養する工程、
を包含する、方法。
【００３８】
（項目１１） 以下の構造式：
【００３９】
【化２１１】
に表される化合物を製造する方法であって、以下：
ａ）ホウロクタケ(daedalea dickinsii) の菌糸体を10日から50日間培養する工程；
ｂ）工程（ａ）の培養物から、以下の構造式
【００４０】
【化２１２】
に表される化合物を抽出する工程；および、
ｃ）工程（ｂ）で抽出された化合物に水素を付加する工程、
を包含する、方法。
【００４１】
（項目１２） 以下の構造式：
【００４２】
【化２１３】
に表される化合物のラセミ混合物を製造する方法であって、以下：
（ａ）パラトルエンスルホン酸と以下の構造式
【００４３】
【化２１４】
に表される化合物とを、1,2-ジクロロエタン中で反応させる工程、
を包含する、方法。
【００４４】
（項目１３） 以下の構造式：
【００４５】
【化２１５】
に表される化合物のラセミ混合物を製造する方法であって、以下：
（ａ）パラトルエンスルホン酸と以下の構造式
【００４６】
【化２１６】
に表される化合物とを、1,2-ジクロロエタン中で反応させる工程、
（ｂ）工程（ａ）で生成された化合物に水素を付加する工程、
を包含する、方法。
【００４７】
本発明の化合物は、チロシナーゼ阻害活性、美白作用、抗酸化作用、活性酸素除去作用などを有し、かつ、非常に安定している。従って、本発明の化合物を用いて、チロシナーゼ活性阻害剤、美白剤、抗酸化剤、活性酸素（フリーラジカル）除去剤などを調製することができる。さらには、本発明の化合物は、抗炎症作用をも有するため、抗炎症剤としても有用である。チロシナーゼ活性を阻害する作用により、メラニン合成が阻害され、その結果、美白作用がもたらされる。また、フリーラジカル消去作用は、皮膚の老化を防ぐので、皮膚のシワやタルミなどの改善に有効である。
【発明の効果】
【００４８】
本発明によって、美白剤、抗酸化剤、活性酸素除去剤、抗炎症剤、チロシナーゼ阻害剤などの有効成分として優れた化合物が提供される。そのため、本発明によって、優れた美白剤、抗酸化剤、活性酸素除去剤、抗炎症剤、チロシナーゼ阻害剤が提供される。また、この有効成分の効率的な生産方法が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４９】
以下、本発明を説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
【００５０】
（用語の定義）
本明細書において使用される用語「子実体」とは、菌類において胞子を生じる生殖体であって、用語「担胞子体」と互換可能に使用され得る。子嚢菌類および担子菌類では、それぞれ、子嚢果・担子器果のように、菌糸組織からなる種々の形のものをいう。
【００５１】
本明細書において使用される用語「菌糸体」は、用語「菌糸」と互換可能に使用され、糸状菌類の栄養体を構成する基本構造であり、多細胞のものと多核体のものがある。菌糸は、胞子の発芽管から発達し、先端成長によって伸長する。
【００５２】
本発明において使用する場合、用語「有効量」とは、ヒトが摂取または、ヒトに対して投与した場合に、目的の、美白効果、抗酸化効果、活性酸素除去効果などの本発明の化合物の効果を有意に奏する量をいう。代表的には、本発明の化合物の有効量は、１回の投与あたり、０．１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは０．２ｍｇ〜５０ｍｇ、より好ましくは０．５ｍｇ〜３０ｍｇ、さらにより好ましくは０．８ｍｇ〜２０ｍｇ、最も好ましくは１ｍｇ〜１０ｍｇであるが、これらは、目的の効果および対象の状態に応じて変化し得る。
【００５３】
（実験手法）
本発明において美白作用はチロシナーゼ阻害試験、および B16 メラノーマ細胞を用いたメラニン産生抑制試験により確認した。
【００５４】
チロシナーゼ阻害試験とは試験物質のチロシナーゼ阻害活性を吸光度の変化より測定する方法である。チロシナーゼは色素沈着の原因となるメラニン合成の律速段階の反応であるチロシンと DOPA ( 3,4-ジハイドロキシフェニルアラニン) の酸化反応を触媒する。よって、このチロシナーゼ活性を阻害する物質はメラニン合成を阻害し、その結果、美白作用がもたらされる。
【００５５】
Ｂ１６メラノーマ細胞を用いたメラニン産生抑制試験とは、試験物質のＢ１６メラノーマ細胞によるメラニン産生抑制効果を測定する試験方法である。メラノーマ細胞内では活発なメラニン合成が行われており、このメラニン合成を阻害する物質は優れた美白効果を示す。
【００５６】
本発明の抗酸化作用はＤＰＰＨラジカル消去率測定試験により評価した。ＤＰＰＨラジカル消去率測定試験に用いた１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（以下ＤＰＰＨと略記する）は分子内に安定なフリーラジカルを持つ。ＤＰＰＨラジカル消去率測定では、このフリーラジカルの消去率を吸光度の測定により測定する。ＤＰＰＨラジカル消去活性を持つ物質は、一重項酸素やヒドロキシラジカル、過酸化脂質のラジカルを除去するとともに、炎症や皮膚のシワやタルミなどの老化や細胞の癌化なども防ぐことが期待できる。
【００５７】
さらに、本発明に従って、以下の構造式：
【００５８】
【化１０３】
に表される化合物、ならびに、以下の構造式：
【００５９】
【化１０４】
および
【００６０】
【化１０５】
に表される化合物のラセミ混合物、あるいは、これらを１種または２種以上を、皮膚外用剤および食品、医薬品に配合することで優れた美白剤、抗酸化剤、活性酸素除去剤を提供することができる。また、本発明に従って、これらの化合物を効率的に生産することも可能となる。
【００６１】
本発明に用いる美白剤および抗酸化剤は、有機合成または特定の菌類から抽出および精製することにより得ることができるが、これらの方法に限定されない。
【００６２】
本発明の美白剤および抗酸化剤の有効成分は、ホウロクタケの菌糸体の培養液から、以下に示す方法によっても得ることができるが、これに限定されない。
【００６３】
ホウロクタケの菌糸体は、野生もしくは人工栽培の子実体もしくは菌糸体そのもの、もしくは継代培養、凍結、凍結乾燥、乾燥等の手段により保存されている菌体から無菌的に培地上で培養した菌体を用いることができる。
【００６４】
ホウロクタケの菌体はいずれであっても良い。例えば、日本国内だけでなく、世界各地に自生している菌体の他、世界各地の保存施設において保存されている菌体を使用することもできる。また、ホウロクタケと近縁の菌種であれば同様に用いることもできる。また人工栽培された子実体の菌体を用いることもできる。
【００６５】
菌糸体の培養に用いる培地は、ポテトデキストロース寒天培地、ポテトスクロース寒天培地、ペプトンデキストロース寒天培地、等の寒天培地の他、ポテトデキストロース培地、ポテトスクロース培地、ペプトンデキストロース培地、等の液体培地の他、菌類の培養に使用できる培地であれば、いずれであっても良い。菌糸体の培養方法、培養条件なども特に限定されないが、２０〜３０℃で１０〜５０日間、静置培養もしくは通気培養、振とう培養等により培養することで十分成長した菌糸体を用いることが望ましい。
【００６６】
野生の子実体または人工栽培された子実体から菌糸体を誘導する場合は、子実体の内部の組織または子実体の胞子から無菌的に上記の培地上で培養することで菌糸体に誘導することができる。また、既に単離され、継代培養、凍結、凍結乾燥、乾燥等の手段により保存されている菌体であれば、そのまま上記の培地上で培養することができる。
【００６７】
ホウロクタケの菌糸体の培養液または抽出液、菌糸体そのものから、抽出または各種クロマトグラフィーにより分離、精製することにより、本発明に使用する化合物を得ることができる。ホウロクタケの菌糸体から本発明の化合物を精製または単離する方法は、特に限定されない。いかなる方法においてもホウロクタケの菌糸体から抽出、精製することにより得られるdaedalin Aまたは、daedalin Aに示す化合物を高濃度に含む画分から、水素付加により、以下の構造式
【００６８】
【化１０６】
に表される化合物Aを誘導し、美白剤および抗酸化剤として使用することができる。
【００６９】
daedalinA に水素を付加する方法は特に限定されない。好ましい製造方法としては、daedalin A を有機溶媒または水に溶解し、パラジウムカーボンと水素ガスをともに混合し、数時間、室温で反応させることで、ほぼ100 % の収率で daedalin A に水素が付加した化合物A を得ることができる。
【００７０】
また、有機合成などの簡便な手段により得られる daedalin A のラセミ体混合物および daedalin A に水素が付加させることで得られる化合物Aのラセミ体混合物であっても、本発明における美白剤や抗酸化剤として使用することができる。
【００７１】
本発明に使用するdaedalin A のラセミ体混合物および化合物Aのラセミ体混合物の製造方法は特に限定されない。
【００７２】
本発明の製造方法により daedalin A のラセミ体混合物を合成する場合、本発明の好ましい実施形態では以下の工程：
（１）製造に使用する以下の構造式
【００７３】
【化１０７】
を有する化合物１を提供する工程、
（２）化合物1とメタクロロパーベンゾイックアシッド（ｍＣＰＢＡ）とを反応させ、以下の構造式：
【００７４】
【化１０８】
を有する化合物２を調製する工程、
（３）上記の化合物２から、以下の構造式：
【００７５】
【化１０９】
で表される化合物３を調製する工程、
を包含する調製法が行われる。
【００７６】
本発明の製造方法に使用する化合物１の製造方法は特に限定されない。好ましい製造方法としては、２，５−ジヒドロキシベンズアルデヒドを５０％ＴＨＦ／Ｈ２Ｏの溶液に溶解し、インジウムと３−クロロ−２−メチル−１−プロペンを加えて反応混合物を得ることができる。反応時間は特に限定されないが、好ましい反応時間は１〜３６時間、さらに好ましくは６〜２４時間である。その後、ろ過、抽出、溶媒分画、各種クロマトグラフィーなどの分離手法により、化合物１を反応混合物から分離することができる。また化合物１を分離せずに、次の合成反応に使用することもできる。
【００７７】
本発明の製造方法に使用する２，５−ジヒドロキシベンズアルデヒドはＣａｓ番号１１９４−９８−５として登録されている。２，５−ジヒドロキシベンズアルデヒドとしては試薬メーカーから市販されているものをそのまま使用することができる。
【００７８】
このようにして得られた化合物１をジクロロメタンに溶解し、メタクロロパーベンゾイックアシッドと反応させることで化合物２を合成することができる。反応温度は特に限定されないが、好ましい反応温度は０〜−５℃である。反応時間についても特に限定されないが、好ましい反応時間は１〜４時間である。その後、ろ過、抽出、溶媒分画、各種クロマトグラフィーなどの分離手法により、化合物２を反応混合物から分離することができる。また化合物２を分離せずに、次の合成反応に使用することもできる。
【００７９】
本発明の製造方法に使用するジクロロメタンはＣａｓ番号７５−０９−２として登録されている。ジクロロメタンとしては試薬メーカーから市販されているものをそのまま使用することができる。
【００８０】
本発明の製造方法に使用するメタクロロパーベンゾイックアシッドはＣａｓ番号９３７−１４−４として登録されている。メタクロロパーベンゾイックアシッドとしては試薬メーカーから市販されているものをそのまま使用することができる。
【００８１】
このようにして得られた化合物２を１，２−ジクロロエタンに溶解し、触媒量のパラトルエンスルホン酸を加えて反応させることで、化合物３（（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡ）をラセミ体で得ることができる。反応温度は特に限定されないが、好ましい反応温度は６０〜１００℃である。反応時間についても特に限定されないが、好ましい反応時間は２〜８時間である。その後、ろ過、抽出、溶媒分画、各種クロマトグラフィーなどの分離手法により、化合物３を反応混合物から分離することができる。
【００８２】
本発明の美白剤および抗酸化剤は、皮膚外用剤および食品、医薬品として使用することができる。皮膚外用剤および食品、医薬品の形状は特に問わない。その投与方法に応じて如何なる形状をも選択することができる。例えば、液状、ゲル状、クリーム状、顆粒状、個体、エアロゾルのような気体などのような形態で使用できる。本発明の美白剤および抗酸化剤として使用する場合、化粧水、クリーム、ゲル、軟膏、乳液、美容液、パック、洗顔料、クレンジング剤、ヘアケア剤、石鹸、浴用剤、シャンプー、リンス、リップスティック、口紅、ファンデーション等の化粧品や医薬部外品、医薬品に配合することができる。
【００８３】
本発明の美白剤および抗酸化剤を配合した皮膚外用剤は、油脂類、ロウ類、炭化水素類、シリコーン類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、増粘剤、粉末等の化粧品の基材の他、医薬品および医薬部外品の有効成分、ｐＨ調整剤、防腐剤、色素、香料、酸化防止剤、天然エキス等も必要に応じて配合することができる。
【００８４】
本発明の化合物を皮膚外用剤として調製する方法としては、周知の手段を用いることができる。代表的な調製法を以下に例示するが、これらに限定されるものではない。
【００８５】
（化粧用クリーム処方物の調製）
化粧用クリームを以下の成分と製法を用いて処方することができる：
・（Ａ）ステアリン酸 ８．０（重量％）、
・（Ｂ）ステアリルアルコール ４．０（重量％）、
・（Ｃ）ステアリン酸ブチル ６．０（重量％）、
・（Ｄ）モノステアリン酸グリセリン ２．０（重量％）、
・（Ｅ）プロピレングリコール ５．０（重量％）、
・（Ｆ）水酸化カリウム ０．４（重量％）、
・（Ｇ）防腐剤（パラオキシ安息香酸エステル） ０．１〜０．５（重量％）、
・（Ｈ）香料 ０．００１〜０．１（重量％）、
・（Ｉ）酸化防止剤（ジブチルヒドロキシトルエン） ０．０５〜０．１５（重量％）、
・（Ｊ）エタノール ５．０（重量％）、
・（Ｋ）本発明の化合物の有効量、
・（Ｌ）上記の残部として添加する精製水。
（製法）
１．上記（Ａ）〜（Ｄ）、（Ｅ）〜（Ｉ）、および（Ｌ）の一部を別々に加熱調製し、８０℃で混合し、ホモミキサーで攪拌し、その後、５０℃まで冷却する。
２．（Ｌ）の一部に（Ｊ）を添加し、（Ｋ）を溶解する。
３．上記１の溶液と２の溶液を混合し、３０℃まで冷却する。
【００８６】
（乳液処方物の調製）
乳液を以下の成分と製法を用いて処方することができる：
・（Ａ）ステアリン酸 ２．０（重量％）、
・（Ｂ）セチルアルコール １．５（重量％）、
・（Ｃ）ワセリン ４．０（重量％）、
・（Ｄ）スクワラン ５．０（重量％）、
・（Ｅ）グリセロールトリ−２−エチルヘキサン酸エステル ２．０（重量％）、
・（Ｆ）ソルビタンモノオレイン酸エステル ２．０（重量％）、
・（Ｇ）グリセリン ９．０（重量％）、
・（Ｈ）水酸化カリウム ０．１（重量％）、
・（Ｉ）防腐剤（パラオキシ安息香酸エステル） ０．１〜０．５（重量％）、
・（Ｊ）香料 ０．００１〜０．１（重量％）、
・（Ｋ）酸化防止剤（ジブチルヒドロキシトルエン） ０．０５〜０．１５（重量％）、
・（Ｌ）エタノール ５．０（重量％）
・（Ｍ）本発明の化合物の有効量、
・（Ｎ）上記の残部として添加する精製水。
（製法）
１．（Ａ）〜（Ｆ）、（Ｇ）〜（Ｋ）、および（Ｎ）の一部を別々に加熱調製し、８０℃で混合し、ホモミキサーで攪拌し、その後、５０℃まで冷却する。
２．（Ｎ）の一部に（Ｌ）を添加し、（Ｍ）を溶解する。
３．上記１の溶液と２の溶液を混合し、３０℃まで冷却する。
【００８７】
（化粧水の調製）
化粧水を以下の成分と製法を用いて処方することができる：
・（Ａ）ＰＯＥ（２０）オレイルアルコールエーテル ０．５（重量％）、
・（Ｂ）グリセリン １０（重量％）、
・（Ｃ）メチルセルロース ０．２（重量％）、
・（Ｄ）防腐剤（パラオキシ安息香酸エステル） ０．１〜０．５（重量％）、
・（Ｅ）香料 ０．００１〜０．１（重量％）、
・（Ｆ）酸化防止剤（ジブチルヒドロキシトルエン） ０．０５〜０．１５（重量％）、
・（Ｇ）エタノール ５．０（重量％）
・（Ｈ）本発明の化合物の有効量、
・（Ｉ）上記の残部として添加する精製水。
（製法）
上記（Ａ）〜（Ｉ）までを均一に溶解する。
【００８８】
（パック剤の調製）
パック剤を以下の成分と製法を用いて処方することができる：
・（Ａ）グリセリン １２（重量％）、
・（Ｂ）モンモリロナイト １０．０（重量％）、
・（Ｃ）酸化チタン ８．０（重量％）、
・（Ｄ）カオリン １０．０（重量％）、
・（Ｅ）防腐剤（パラオキシ安息香酸エステル） ０．１〜０．５（重量％）、
・（Ｆ）香料 ０．００１〜０．１（重量％）、
・（Ｇ）酸化防止剤（ジブチルヒドロキシトルエン） ０．０５〜０．１５（重量％）、
・（Ｈ）エタノール ５．０（重量％）
・（Ｉ）本発明の化合物の有効量、
・（Ｊ）上記の残部として添加する精製水。
（製法）
上記（Ａ）〜（Ｊ）を均一に溶解する。
【００８９】
本発明の美白剤および抗酸化剤を医薬品として用いる場合、薬学的に受容可能なキャリア型（例えば、滅菌キャリア）と組み合わせて処方され得る。「薬学的に受容可能なキャリア」とは、非毒性の個体、または液体の充填剤、希釈液、被包剤、または任意の型の処方補助剤をいう。
【００９０】
本発明の化合物を含有する組成物を医薬として使用する場合は、個々の個体、投与方法、投与計画および当業者に公知の因子を考慮に入れ、医療実施基準 (GMP = good medical practice) を遵守する方式で処方および投薬する。従って、本明細書において「有効量」は、このような考慮を行って決定される。
【００９１】
治療剤を、経口的、直腸内、非経口的、槽内、膣内、膜腔内、局所的（粉剤、軟膏、ゲル、点滴剤、または経皮パッチによるなど）、口内あるいは経口または鼻腔内スプレーとして投与し得る。本明細書で用いる用語「非経口的」とは、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下および間接内の注射および注入を含む投与方式をいう。
【００９２】
以下に、実施例に基づいて本発明を説明するが、以下の実施例は、例示の目的のみに提供される。従って、本発明の範囲は、上記発明の詳細な説明にも下記実施例にも限定されるものではなく、請求の範囲によってのみ限定される。
【実施例】
【００９３】
（実施例1：ホウロクタケの子実体から菌糸体の培養）
日本国内で自生するホウロクタケの子実体を採取し、子実体から内部の組織を無菌的に切り出した。この組織をペプトンデキストロース寒天平板培地に移し、２５℃で２０日間培養した。２０日後、成長したホウロクタケの菌糸体を新しい寒天培地移した。この操作を２度繰り返し得られたホウロクタケの菌糸体をペプトンデキストロース液体培地（１０ｌ）中で、４０日間、２５℃で培養した。４０日後、培養後の培養液から菌糸体をろ別し、菌糸体を取り除いた。このホウロクタケ培養菌糸体の培養ろ液を減圧濃縮し、濃縮物（５０ｇ）を得た。以下にペプトンデキストロース寒天培地とペプトンデキストロース液体培地の組成を示す。
【００９４】
（ペプトンデキストロース寒天培地の組成）
ポリペプトン：５ｇ
グルコース：２０ｇ
酵母エキス：２ｇ
硫酸マグネシウム七水和物：０．５ｇ
リン酸二水素カリウム：１ｇ
粉末寒天：２０ｇ
水：１０００ｇ。
【００９５】
（ペプトンデキストロース液体培地の組成）
ポリペプトン：５ｇ
グルコース：３０ｇ
酵母エキス：２ｇ
硫酸マグネシウム七水和物：０．５ｇ
リン酸二水素カリウム：１ｇ
水：１０００ｇ。
【００９６】
（実施例２：ホウロクタケ菌糸体の培養ろ液からの活性物質の精製）
ホウロクタケ培養菌糸体の培養ろ液の濃縮物５０ｇを酢酸エチルと水で分配することで、酢酸エチル溶出画分（５ｇ）を得た。この酢酸エチル溶出画分をシリカゲルとしてＷａｋｏｇｅｌＣ３００，１５０ｇを使用したシリカゲルクロマトグラフィーにより分離した。溶出溶媒には、１０％，２０％，３０％，４０％，５０％，６０％，７０％，８０％，９０％，１００％酢酸エチル／ヘキサン溶出溶媒を４５０ｍｌずつ使用し、それぞれ１０の画分に分離した。
【００９７】
得られた画分の内、５０％酢酸エチル／ヘキサン画分（０．８５ｇ）をシリカゲルとしてＷａｋｏｇｅｌＣ３００，１６０ｇを使用したシリカゲルクロマトグラフィーによりさらに分離した。溶出溶媒には３０％アセトン／ヘキサンを使用して分離精製することで、下記の化学式
【００９８】
【化１１０】
に示す化合物ｄａｅｄａｌｉｎＡを３８４ｍｇの収率で得た。
【００９９】
（実施例３：スペクトルデータの測定）
参考までにｄａｅｄａｌｉｎＡの質量分析（ＭＳ）、旋光度、赤外吸収スペクトル（ＩＲ）、紫外吸収スペクトル（ＵＶ）、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ，１３Ｃ−ＮＭＲ）スペクトルデータを以下に示す。
【０１００】
（スペクトルデータ）
性状：黄色油状物質
質量分析：１９１．０７１２［Ｍ＋−Ｈ］（計算値１９１．０７０８：Ｃ１１Ｈ１１Ｏ３）
旋光度：［α］２９Ｄ＋１５．４°（ｃ１．４９，ＥｔＯＨ）
紫外線吸収スペクトル：２６３ｎｍ，ε：２．６×１０３，λ：３３３ｎｍ，ε：２．４×１０３
赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３３８９，２９２８，２３６０，２３４２，１４９０，１４５９，１２２７，１０５１，８１６，７６４，７１１
核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ，５００．１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ６．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），δ６．６０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，８．６Ｈｚ），δ６．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ），δ６．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ），δ５．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ），δ３．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），δ３．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），δ１．３５（１Ｈ，ｓ）
核磁気共鳴スペクトル（１３Ｃ−ＮＭＲ，１２５．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４９．８（Ｃ），δ１４６．８（Ｃ），δ１２８．０（ＣＨ），δ１２４．７（ＣＨ），δ１２１．７（Ｃ），δ１１６．８（ＣＨ），δ１１５．８（ＣＨ），δ１１３．２（ＣＨ），δ７９．０（Ｃ），δ６８．５（ＣＨ２），δ２２．３（ＣＨ３）
これらのスペクトルデータはこれまでに単離しているｄａｅｄａｌｉｎ Ａのスペクトルデータと一致した。
【０１０１】
（実施例４：ｄａｄａｌｉｎＡへの水素添加）
２１ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）のｄａｅｄａｌｉｎＡをエタノール中に溶解し、パラジウムカーボン（０．１ｍｇ，０．０１ｍｍｏｌ）と水素ガスとともに混合した。８時間後、パラジウムカーボンを除き、得られたエタノール溶液を濃縮した。この濃縮物を、溶出溶媒として５０％酢酸エチル／ヘキサンをによるシリカゲルクロマトグラフィーを実施することで、下記の化学式
【０１０２】
【化１１１】
に示す化合物Ａを１００％の収率で得た。
【０１０３】
（実施例５：スペクトルデータの測定）
参考までに、この化合物Ａのスペクトルデータを下記に示す。
性状：無色油状物質
質量分析：ＨＲＥＩＭＳ：１９４．０９４９（理論値Ｃ１１Ｈ１４Ｏ３，１９４．０９４３））
旋光度：［α］１９Ｄ−９．９°（ｃ０．２１，Ａｃｅｔｏｎｅ）
赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３３５３，２９３０，１６１８，１４９４，１４５４，１３５１，１２８５，１２２２，１１５２，１０９７，１０５０，９２３，８９８，８０９，７３７，７０５
核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ，５００．１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ６．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），δ６．５９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，８．７Ｈｚ），δ６．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ），δ５．４０（１Ｈ，ｂｒｓ），δ３．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ），δ３．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ），δ２．７９（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１１Ｈｚ，１４Ｈｚ），δ２．６８（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１７Ｈｚ），δ２．２７（１Ｈ，ｂｒｓ），δ１．９９（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１１Ｈｚ，１４Ｈｚ），δ１．６７（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，６．２Ｈｚ，１４Ｈｚ），δ１．２４（３Ｈ，ｓ）
核磁気共鳴スペクトル（１３Ｃ−ＮＭＲ，１２５．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４９．０，δ１４７．１，δ１２１．９，δ１１７．７，δ１１５．４，δ１１４．６，δ７６．２，δ６９．１，δ２７．５，δ２１．８，δ２０．４。
【０１０４】
（実施例６：化合物Ａの安定性の確認）
化合物Ａを１ｍｇ／ｍｌに調整し５０％エタノール水溶液中で６ヶ月、２５℃で保存したところ、化合物Ａの溶液には着色等の変化は認められなかった。一方、ｄａｅｄａｌｉｎＡを同一条件で同一期間保存したところ、ｄａｅｄａｌｉｎＡには黄色の着色が認められた。従って、化合物Ａは溶液中でｄａｅｄａｌｉｎＡよりも優れた安定性を示す。
【０１０５】
（実施例７：基質としてチロシンを使用した場合のチロシナーゼ阻害試験）
化合物Ａの美白作用を調べるため、化合物Ａについてチロシナーゼ阻害試験を実施した。本試験においては反応基質としてチロシンを使用した。チロシナーゼ阻害試験は以下の試験方法により実施した。基質としてチロシンを使用した化合物Ａのチロシナーゼ阻害活性を美白剤として市販されているアルブチンやｄａｅｄａｌｉｎＡと比較した。
【０１０６】
（試験方法）
１．リン酸緩衝液（ＰＨ６．８）に、最終添加量としてチロシナーゼが４０Ｕ／ｍｌ，Ｌ−チロシンが１ｍＭになるように溶解し、試験物質はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解後、混合した。
２．混合後、３７℃で６０分間インキュベートした。
３．４７５ｎｍの吸光度の値を次式に代入してチロシナーゼ阻害率を算出した。
チロシナーゼ阻害率＝１００×｛（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−Ｄ）｝／（Ａ−Ｂ）
この式において、Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄは以下を意味する。
Ａ：コントロール（試験物質無添加）の反応６０分後の吸光度
Ｂ：コントロール（試験物質無添加）の反応前の吸光度の値
Ｃ：試験物質添加試料の反応６０分後の吸光度の値
Ｄ：試験物質添加試料の反応前の吸光度の値。
【０１０７】
次の表１に化合物ＡとｄａｅｄａｌｉｎＡ、アルブチンの添加量毎のチロシナーゼ阻害活性を示す。
【０１０８】
【表１】
いずれの化合物も０．４ｍＭ，０．２ｍＭ，０．１ｍＭ，０．０５ｍＭの添加量で濃度依存的にチロシナーゼの活性を阻害した。５０％阻害活性を示す添加濃度であるＩＣ５０を計算すると、それぞれ化合物Ａは２８９μＭ，ｄａｅｄａｌｉｎＡは１９４μＭ，アルブチンは６７２μＭであった。ＩＣ５０で比較すると化合物Ａのチロシナーゼ阻害作用はアルブチンよりも強いが、ｄａｅｄａｌｉｎＡよりも少し弱い阻害作用であった。本試験においてｄａｅｄａｌｉｎＡはチロシナーゼの添加により黄色に変色するが、化合物Ａには変色は認められず、チロシナーゼに対する安定性はｄａｅｄａｌｉｎＡよりも化合物Ａの方が優れていることを確認した。
【０１０９】
（実施例８：基質としてＤＯＰＡを使用した場合のチロシナーゼ阻害試験）
次に反応基質としてＤＯＰＡを使用してチロシナーゼ阻害試験を実施した。ＤＯＰＡを使用したチロシナーゼ阻害試験を行うことにより、メラニン合成におけるＤＯＰＡからＤＯＰＡキノンへの酸化反応に対する披見物質の阻害作用を測定できる。本試験における化合物Ａのチロシナーゼ阻害作用をｄａｅｄａｌｉｎＡ、化合物Ａと比較した。
【０１１０】
（試験方法）
１．リン酸緩衝液（ＰＨ６．８）に、最終添加量としてチロシナーゼが２０Ｕ／ｍｌ，Ｌ−ＤＯＰＡが１ｍＭになるように溶解し、試験物質はＤＭＳＯに溶解後、混合した。
２．混合後、２５℃で３０分間インキュベートした。
３．４７５ｎｍの吸光度の値を次式に代入してチロシナーゼ阻害率を算出した。
チロシナーゼ阻害率＝１００×｛（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−Ｄ）｝／（Ａ−Ｂ）
この式において、Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄは以下を意味する。
Ａ：コントロール（試験物質無添加）の反応６０分後の吸光度
Ｂ：コントロール（試験物質無添加）の反応前の吸光度の値
Ｃ：試験物質添加試料の反応３０分後の吸光度の値
Ｄ：試験物質添加試料の反応前の吸光度の値。
【０１１１】
次の表２に化合物ＡとｄａｅｄａｌｉｎＡ、アルブチンの添加量毎のチロシナーゼ阻害活性を示す。
【０１１２】
【表２】
本試験においては化合物Ａだけが０．２ｍＭ，０．４ｍＭ，０．８ｍＭの添加濃度で濃度依存的にチロシナーゼ活性を阻害したが、ｄａｅｄａｌｉｎＡとアルブチンは全くチロシナーゼ阻害作用を示さなかった。従って、化合物ＡだけがＤＯＰＡが基質であっても、これらの添加濃度においてチロシナーゼ活性を阻害した。従って、化合物ＡはｄａｅｄａｌｉｎＡやアルブチンよりも効果的な美白作用を示すことが期待できる。
【０１１３】
（実施例９：化合物ＡのＤＰＰＨラジカル消去試験）
化合物Ａの抗酸化作用を調べるため、化合物ＡについてＤＰＰＨラジカル消去試験を実施した。化合物ＡのＤＰＰＨラジカル消去作用をｄａｅａｄａｌｉｎＡ及び、強い抗酸化剤として市販されているトロロックスと比較した。
【０１１４】
（試験方法）
１．ＤＰＰＨをエタノールに溶解し、０．１ｍｍｏｌに調整した。
２．５０％エタノール水溶液に溶解した試験物質をトリス塩酸緩衝液（ＰＨ７．４）に溶解した。
３．上記１，２の溶液を１対１で混合し、２０分間、２５℃で暗所において反応させた。
４．５１７ｎｍの吸光度の値を次式に代入して、ＤＰＰＨラジカル消去率を算出した。
ＤＰＰＨラジカル消去率＝１００×（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）
この式において、Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄは以下を意味する。
Ａ：試験物質添加試料の反応後の吸光度の値
Ｂ：試験物質添加試料のＤＰＰＨの代わりにエタノールを添加した時の吸光度の値。
Ｃ：コントロール（試験物質無添加）の反応後の吸光度の値。
Ｄ：コントロール（試験物質無添加）のＤＰＰＨの代わりにエタノールを添加した時の吸光度の値。
【０１１５】
表３に，化合物Aと daedalin A, トロロックスの添加濃度毎の DPPH ラジカル消去率を示す。
【０１１６】
【表３】
化合物A のDPPHラジカル消去作用はdaedalin A とほぼ同等であり，トロロックス よりも若干弱いが十分なラジカル消去作用であった。化合物A は十分な効果と安定性を持つ優れた抗酸化剤である。
【０１１７】
（実施例１０：ｄａｅｄａｌｉｎＡのラセミ体（（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡ）の化学合成）
（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡは以下の合成方法により合成することができる。
２，５−ジヒドロキシベンズアルデヒド（２２．５ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１／１，６．０ｍｌ）の溶液にインジウム（１８．４ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）と３−クロロ−２−メチル−１−プロペン（０．０５ｍｌ，０．４８ｍｍｏｌ）を順次加えた。室温にて１２時間攪拌後、飽和食塩水を加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した後、減圧濃縮することで溶媒を除去した。この濃縮物を５０％酢酸エチル／ヘキサン溶液によるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、化合物１（３１．６ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）を得た。下記に化合物１を合成するためのスキームを示す。
【０１１８】
【化１１２】
次に，化合物１（３１．６ｍｇ，０．１６ｍＭ）のジクロロメタン溶液にｍＣＰＢＡ（８５．０ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）を加え、室温にて２時間撹拌した。半飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液を加えて反応を停止し、ジエチルエーテルを用いて抽出した。抽出したジエチルエーテル溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和食塩水で順次洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した後、減圧濃縮することで溶媒を除去し，化合物２を含む混合物を得た。この濃縮物を精製することなく次の反応に使用した。下記に化合物２を合成するためのスキームを示す。
【０１１９】
【化１１３】
１，２−ジクロロエタンに化合物２を含む濃縮物を溶解し、触媒量のパラトルエンスルホン酸を加え、８３℃にて６時間撹拌した。反応液を室温まで冷却後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液にて反応を停止し、酢酸エチルにて抽出した。酢酸エチル抽出液を飽和食塩水で洗浄後，硫酸マグネシウムで乾燥し，ろ過した後、減圧濃縮して溶媒を除去した。この濃縮物を５０％酢酸エチル／ヘキサン溶液によるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡ（１１．０ｍｇ，０．０５７ｍｍｏｌ）を得た。化合物１から２段階の反応における（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡの反応収率は３５％であった。（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡを合成するためのスキームは、
【０１２０】
【化１１４】
である。
【０１２１】
（実施例１１：化合物１のスペクトルデータの測定）
参考までに、化合物1のスペクトルデータを下記に示す。
性状：褐色結晶
質量分析：ＨＲＥＩＭＳ：１９４．０９２５（理論値Ｃ１１Ｈ１４Ｏ３，１９４．０９４３）
赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３３８８，２９２９，１４５４，１４１９，１２５７，１０８６，１０４７
核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ，５００．１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１．３１（１Ｈ，ｓ），δ１．８３（３Ｈ，ｓ），δ２．４５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．５，１４Ｈｚ），δ２．６１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．５，１４Ｈｚ），δ４．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ），δ４．８７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．５，１０．５Ｈｚ），δ４．９２（１Ｈ，ｓ），δ５．０１（１Ｈ，ｓ），δ６．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），δ６．６６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．０，８．５Ｈｚ），δ６．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），δ７．６１（１Ｈ，ｓ）
核磁気共鳴スペクトル（１３Ｃ−ＮＭＲ，１２５．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４９．４，δ１４８．５，δ１４１．７，δ１２７．２，δ１１８．０，δ１１５．５，δ１１５．１，δ１１３．７，δ７２．４，δ４６．２，δ２２．２。
【０１２２】
（実施例１２：（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡのスペクトルデータの測定）
参考までに、化合物３（（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡ）のスペクトルデータを下記に示す。
性状：無色油状物質
質量分析：ＨＲＥＩＭＳ：１９２．０７５４（理論値Ｃ１１Ｈ１４Ｏ３，１９２．０７８６）
赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３３３７，２９７９，１４８９，１４５９，１２２３，１０４７
核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ，５００．１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１．３６（３Ｈ，ｓ），δ３．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ），δ３．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ），δ５．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），δ６．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），δ６．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），δ６．６０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），δ６．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）
核磁気共鳴スペクトル（１３Ｃ−ＮＭＲ，１２５．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４９．８，δ１４６．１，δ１２７．９，δ１２４．７，δ１２１．７，δ１１６．８，δ１１５．８，δ１１３．２，δ７９．０，δ６８．５，δ２２．３。
【０１２３】
（実施例１３反応溶媒による（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡの化学合成の収率）
反応溶媒による（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡの合成収率を調べるため，反応溶媒としてベンゼンまたは、トルエン、ジクロロメタン、ジクロロエタンを使用し、化合物１から（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡを合成した。合成方法は実施例１０で記載した方法によって合成した。各種反応溶媒毎に、化合物１から（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡを合成した時の反応収率を比較した。その結果を下表に示す。
【０１２４】
【表４】
ベンゼンを使用した場合の反応収率は０．５％、トルエンを使用した場合の反応収率は０．６％、ジクロロメタンを使用した場合の反応収率は０．５％と、ジクロロエタンを使用した場合の反応収率（３５％）よりも大きく劣り、実用にはそぐわない。
【０１２５】
従って、化合物２よりｄａｄｅａｌｉｎＡを得る反応において、反応溶媒として１，２−ジクロロエタンを使用することで（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡを高収率で得ることができる。
【０１２６】
（実施例１４：（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡのチロシナーゼ阻害試験）
（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡの美白作用を調べるため、（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡについてチロシナーゼ阻害試験を実施した。本試験においては反応基質としてチロシンを使用した。チロシナーゼ阻害試験は実施例７に示す試験方法により実施した。（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡのチロシナーゼ阻害作用を美白剤として市販されているアルブチン及びｄａｅｄａｌｉｎＡと比較した。
【０１２７】
次の表４に化合物ＡとｄａｅｄａｌｉｎＡ、アルブチンの添加量毎のチロシナーゼ阻害活性を示す。
【０１２８】
【表５】
本試験から、(±)-daedalinA は市販の美白剤であるアルブチン以上のチロシナーゼ阻害作用を示すと共に、そのチロシナーゼ阻害活性はdaedalin A とほぼ同等であった。従って、簡便な合成法による製造法によって製造できるラセミ体の(±)-daedalin A であっても、光学活性を持つdaedalin A の代替使用が可能である。
【０１２９】
（実施例１５：（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡのＤＰＰＨラジカル消去率測定試験）
（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡの抗酸化作用を調べるため、（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡについてＤＰＰＨラジカル消去率測定試験を実施した。化合物ＡのＤＰＰＨラジカル消去作用をｄａｅａｄａｌｉｎＡ及び、強い抗酸化剤として市販されているトロロックスと比較した。
【０１３０】
【表６】
本試験から、（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡの抗酸化作用はｄａｅｄａｌｉｎＡとほぼ同等であった。従って、簡便な合成法による製造法によって製造できるラセミ体の（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡであっても、光学活性を持つｄａｅｄａｌｉｎＡの代替使用が可能である。
【０１３１】
（実施例１５：ホウロクタケの培養期間とｄａｅｄａｌｉｎＡの生産量の測定）
ホウロクタケの培養期間とｄａｅｄａｌｉｎＡの生産量の関係を，ＨＰＬＣ分析により調査した。
（方法）
（ｉ）実施例１に記載した方法で分離したホウロクタケの菌糸体を，実施例１に示すペプトンデキストロース液体培地中で、２５℃で静置培養した。
（ｉｉ）ホウロクタケの培養開始後１０日毎に、ホウロクタケの培養ろ液をサンプリングした。
（ｉｉｉ）５０％メタノール水溶液で培養ろ液１０％に希釈し、メンブレンフィルターでろ過した。
（ｉｖ）このようにして調整した培養ろ液を以下の分析条件でＨＰＬＣ分析を実施した。
（ｖ）ｄａｅｄａｌｉｎＡの（１ｍｇ／ｍｌ）におけるＨＰＬＣ分析の保持時間と吸光度を比較することにより、ホウロクタケの菌糸体が培養液１Ｌ中に含有するｄａｅｄａｌｉｎＡの含有量（ｍｇ）を算出した。
（ｖｉ）本試験におけるｄａｅｄａｌｉｎＡの生産量は，内部標準物質としてクマリン（１ｍｇ／ｍｌ）を添加し、このピークを標準として算出した。
（分析条件）
１）カラム：ＯＤＳカラム、内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍ、粒子経５μｍ
２）移動相：５０％メタノール／水
３）流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
４）検出器：ＵＶ３３３ｎｍ
５）温度：３０℃
６）ループ：２０μｌ
７）サンプル：５ｍｌ投入。
【０１３２】
（結果）
上記試験の結果を、以下の表に示す。
【０１３３】
【表７】
ホウロクタケ菌糸体による daedalin A の生産量を培養期間毎に測定すると、ホウロクタケは 30 日まで培養期間が経過すると daedalin A の生産量は増加するが、30日目以降は時間の経過とともにdaedalin A の含有量は減少する。
【０１３４】
以上の結果から、daedalinA は、ホウロクタケの菌糸体の成長とともに生産され、その後、菌糸体成長によって代謝分解される物質であると考えられる。
【０１３５】
従ってdaedalin A を効率よく生産するには、ホウロクタケの菌糸体を一定期間培養後、ホウロクタケ菌糸体の代謝過程で daedalin A が分解される前に、速やかに菌糸体からdaedalin A を分離する必要がある。
【０１３６】
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、この実施形態に限定して解釈されるべきものではない。本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。当業者は、本発明の具体的な好ましい実施形態の記載から、本発明の記載および技術常識に基づいて等価な範囲を実施することができることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
【産業上の利用可能性】
【０１３７】
ホウロクタケの菌糸体の培養代謝産物中に含有する daedalin A に水素添加することで、より安定性に優れた抗酸化剤、美白剤を提供することができる。
【０１３８】
また、本発明の合成方法により作成したラセミ体の (±)-daedalin A であっても十分な抗酸化作用と美白作用を示すことを明らかにするとともに，効率的な(±)-daedalinA および daedalin A の製造方法を明らかにした。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、強い美白作用および抗酸化作用を有し、かつ、高い安定性を有するクロマン化合物、およびその製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
肌の黒色化の原因は、肌に蓄積したメラニン色素である。このメラニン色素の合成を阻害する美白剤は、化粧品や食品、医薬品の有効成分として様々な化合物が開発されている。美白作用を示す化合物として、これまでにアルブチンやコウジ酸、ルシノール、アスコルビン酸およびその誘導体が開発されている。アルブチンやコウジ酸、ルシノールのような美白剤は、メラニン合成におけるキー酵素であるチロシナーゼの活性を阻害することで、メラニンの合成を阻害し肌の黒色化を防ぐ。アスコルビン酸やその誘導体はメラニンやメラニン生成における中間体を還元することによりメラニンの蓄積を阻害する。
【０００３】
しかしながら、これらの美白剤は、いずれも美白作用が不十分であり、より効果的な美白剤の開発が期待されている。
【０００４】
抗酸化剤とは、物質の酸化を阻害する還元作用に優れた物質である。この還元作用により、他の物質の酸化を防ぐことができる。抗酸化剤は、生体に対して大きな損傷を与え、炎症や老化、発癌などの原因となるスーパーオキシドラジカルやヒドロキシラジカルのような活性酸素や過酸化脂質などのラジカルを消去することができる。また、メラニン合成における生合成経路において、抗酸化物質はメラニンやメラニン生成における中間体に対して還元作用を示し、メラニン合成をも阻害する。
【０００５】
抗酸化剤として、これまでにいくつかの化合物が開発されている。これまでに開発された抗酸化剤として代表的な化合物にはブチルヒドロキシトルエン(BHT)、α-トコフェロール (ビタミンE) などがある。特にα-トコフェロールは優れた抗酸化活性を示し、化粧品や食品、医薬品の有効成分として多用されている抗酸化剤である。しかし、α-トコフェロールやブチルヒドロキシトルエンは水に不溶な油溶性の化合物であり、水性の製剤への配合は困難である。また、既存の抗酸化剤は安定性にも欠け、着色や変色、においの変化の原因となる。また、既存の抗酸化剤では効果の不十分なものも多い。従って、より効果的で安定な水溶性の抗酸化剤の開発が期待されている。
【０００６】
本発明者らは、ホウロクタケ(daedalea dickinsii)の菌糸体が下記の分子構造を持つ化合物 (daedalin A) を比較的多量に生産することを明らかにし、美白作用、抗酸化作用等を併せ持つ水溶性のdaedalin A を、新しいタイプの美白剤や抗酸化剤等として開示している (特許文献１)。
【０００７】
【化１０１】
【０００８】
このdaedalin Aは、ホウロクタケ由来であることから、安全に人体に適用できると考えられる。しかしながら、このdaedalinAは、従前の美白剤などの有効成分と比較すると安定ではあるが、長期保存の際に、黄色に変色することが明らかとなった。化粧品などの皮膚外用品の成分に用いる化合物には、より高い安定性が望まれることから、このdaedalinAよりもさらに安定であり、かつ、効果的な、美白作用、抗酸化作用、活性酸素除去作用などを有する物質が求められている。
【０００９】
また、daedalinAの製造方法として、本発明者らはホウロクタケの菌糸体の代謝産物より分離する方法を開示している。
【００１０】
その他の製造方法としては、非特許文献2において、有機合成によりdaealin Aのラセミ体を製造する方法が開示されている。しかし、非特許文献2に開示されている製造方法は合成収率が低く製造手順も複雑となり、実用的ではない。そのため、より効率的な合成法が求められている。
【００１１】
この出願の発明に関連する先行技術文献情報としては、次のものがある。
【特許文献１】特開2006-124386
【非特許文献１】SynlettNo.2. 322-324 (2002)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の課題は、daedalinAよりもさらに安定な化合物であって、美白作用、抗酸化作用、活性酸素除去作用などを有する物質を提供することにある。また、本発明のさらなる課題は、daedalinAまたは本発明の化合物を効率的に有機合成する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らはホウロクタケ菌糸体による daedalin A の製造方法の向上および、化学変換による daedalin A の機能性の向上、実用的な daedalin A ラセミ体の合成法の確立のための開発に着手した。
【００１４】
その結果、daedalin A は，ホウロクタケの菌糸体の成長過程で生産され、成長に応じて他の物質へ代謝（変換）される物質であることを見出した。従って、daedalinA をホウロクタケにより、効率的に生産するにはホウロクタケの菌糸体を一定期間培養後、daedalin A が他の物質に構造変換される前にホウロクタケの菌糸体と代謝生産物質を分離する必要がある。
【００１５】
また、daedalinA の3位、4位の二重結合に水素付加した下記の分子構造を持つ化合物は daedalin A よりも安定性、機能性に優れた美白剤、抗酸化剤を提供できることを見出した。
【００１６】
【化１０２】
さらには、daedalinA は有機合成によって得られる daedalin A のラセミ体においても daedalin A と同等の抗酸化作用、美白作用を示すことを見出すとともに、非特許文献１において開示されている既存の合成方法よりも優れたdaedalin A の合成方法を新たに開発し、本発明の完成に至った。
【００１７】
したがって、本発明では以下を提供する。
【００１８】
（項目１） 以下の構造式：
【００１９】
【化２０１】
を有する化合物。
【００２０】
（項目２） 項目１に記載の化合物を含有する美白剤。
【００２１】
（項目３） 項目１に記載の化合物を含有する抗酸化剤。
【００２２】
（項目４） 項目１に記載の化合物を含有する活性酸素除去剤。
【００２３】
（項目５） 項目１に記載の化合物を含有する皮膚外用剤。
【００２４】
（項目６） 以下の構造式：
【００２５】
【化２０２】
に表される化合物のラセミ混合物、または、
以下の構造式：
【００２６】
【化２０３】
に表される化合物のラセミ混合物を含有する、美白剤。
【００２７】
（項目７） 以下の構造式：
【００２８】
【化２０４】
に表される化合物のラセミ混合物、または、
以下の構造式：
【００２９】
【化２０５】
に表される化合物のラセミ混合物を含有する、抗酸化剤。
【００３０】
（項目８） 以下の構造式：
【００３１】
【化２０６】
に表される化合物のラセミ混合物、または、
以下の構造式：
【００３２】
【化２０７】
に表される化合物のラセミ混合物を含有する、活性酸素除去剤。
【００３３】
（項目９） 以下の構造式：
【００３４】
【化２０８】
に表される化合物のラセミ混合物、または、
以下の構造式：
【００３５】
【化２０９】
に表される化合物のラセミ混合物を含有する、皮膚外用剤。
【００３６】
（項目１０） 以下の構造式：
【００３７】
【化２１０】
に表される化合物を製造する方法であって、以下：
（ａ）ホウロクタケ (daedalea dickinsii) の菌糸体を10日から50日間培養する工程、
を包含する、方法。
【００３８】
（項目１１） 以下の構造式：
【００３９】
【化２１１】
に表される化合物を製造する方法であって、以下：
ａ）ホウロクタケ(daedalea dickinsii) の菌糸体を10日から50日間培養する工程；
ｂ）工程（ａ）の培養物から、以下の構造式
【００４０】
【化２１２】
に表される化合物を抽出する工程；および、
ｃ）工程（ｂ）で抽出された化合物に水素を付加する工程、
を包含する、方法。
【００４１】
（項目１２） 以下の構造式：
【００４２】
【化２１３】
に表される化合物のラセミ混合物を製造する方法であって、以下：
（ａ）パラトルエンスルホン酸と以下の構造式
【００４３】
【化２１４】
に表される化合物とを、1,2-ジクロロエタン中で反応させる工程、
を包含する、方法。
【００４４】
（項目１３） 以下の構造式：
【００４５】
【化２１５】
に表される化合物のラセミ混合物を製造する方法であって、以下：
（ａ）パラトルエンスルホン酸と以下の構造式
【００４６】
【化２１６】
に表される化合物とを、1,2-ジクロロエタン中で反応させる工程、
（ｂ）工程（ａ）で生成された化合物に水素を付加する工程、
を包含する、方法。
【００４７】
本発明の化合物は、チロシナーゼ阻害活性、美白作用、抗酸化作用、活性酸素除去作用などを有し、かつ、非常に安定している。従って、本発明の化合物を用いて、チロシナーゼ活性阻害剤、美白剤、抗酸化剤、活性酸素（フリーラジカル）除去剤などを調製することができる。さらには、本発明の化合物は、抗炎症作用をも有するため、抗炎症剤としても有用である。チロシナーゼ活性を阻害する作用により、メラニン合成が阻害され、その結果、美白作用がもたらされる。また、フリーラジカル消去作用は、皮膚の老化を防ぐので、皮膚のシワやタルミなどの改善に有効である。
【発明の効果】
【００４８】
本発明によって、美白剤、抗酸化剤、活性酸素除去剤、抗炎症剤、チロシナーゼ阻害剤などの有効成分として優れた化合物が提供される。そのため、本発明によって、優れた美白剤、抗酸化剤、活性酸素除去剤、抗炎症剤、チロシナーゼ阻害剤が提供される。また、この有効成分の効率的な生産方法が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４９】
以下、本発明を説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
【００５０】
（用語の定義）
本明細書において使用される用語「子実体」とは、菌類において胞子を生じる生殖体であって、用語「担胞子体」と互換可能に使用され得る。子嚢菌類および担子菌類では、それぞれ、子嚢果・担子器果のように、菌糸組織からなる種々の形のものをいう。
【００５１】
本明細書において使用される用語「菌糸体」は、用語「菌糸」と互換可能に使用され、糸状菌類の栄養体を構成する基本構造であり、多細胞のものと多核体のものがある。菌糸は、胞子の発芽管から発達し、先端成長によって伸長する。
【００５２】
本発明において使用する場合、用語「有効量」とは、ヒトが摂取または、ヒトに対して投与した場合に、目的の、美白効果、抗酸化効果、活性酸素除去効果などの本発明の化合物の効果を有意に奏する量をいう。代表的には、本発明の化合物の有効量は、１回の投与あたり、０．１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは０．２ｍｇ〜５０ｍｇ、より好ましくは０．５ｍｇ〜３０ｍｇ、さらにより好ましくは０．８ｍｇ〜２０ｍｇ、最も好ましくは１ｍｇ〜１０ｍｇであるが、これらは、目的の効果および対象の状態に応じて変化し得る。
【００５３】
（実験手法）
本発明において美白作用はチロシナーゼ阻害試験、および B16 メラノーマ細胞を用いたメラニン産生抑制試験により確認した。
【００５４】
チロシナーゼ阻害試験とは試験物質のチロシナーゼ阻害活性を吸光度の変化より測定する方法である。チロシナーゼは色素沈着の原因となるメラニン合成の律速段階の反応であるチロシンと DOPA ( 3,4-ジハイドロキシフェニルアラニン) の酸化反応を触媒する。よって、このチロシナーゼ活性を阻害する物質はメラニン合成を阻害し、その結果、美白作用がもたらされる。
【００５５】
Ｂ１６メラノーマ細胞を用いたメラニン産生抑制試験とは、試験物質のＢ１６メラノーマ細胞によるメラニン産生抑制効果を測定する試験方法である。メラノーマ細胞内では活発なメラニン合成が行われており、このメラニン合成を阻害する物質は優れた美白効果を示す。
【００５６】
本発明の抗酸化作用はＤＰＰＨラジカル消去率測定試験により評価した。ＤＰＰＨラジカル消去率測定試験に用いた１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（以下ＤＰＰＨと略記する）は分子内に安定なフリーラジカルを持つ。ＤＰＰＨラジカル消去率測定では、このフリーラジカルの消去率を吸光度の測定により測定する。ＤＰＰＨラジカル消去活性を持つ物質は、一重項酸素やヒドロキシラジカル、過酸化脂質のラジカルを除去するとともに、炎症や皮膚のシワやタルミなどの老化や細胞の癌化なども防ぐことが期待できる。
【００５７】
さらに、本発明に従って、以下の構造式：
【００５８】
【化１０３】
に表される化合物、ならびに、以下の構造式：
【００５９】
【化１０４】
および
【００６０】
【化１０５】
に表される化合物のラセミ混合物、あるいは、これらを１種または２種以上を、皮膚外用剤および食品、医薬品に配合することで優れた美白剤、抗酸化剤、活性酸素除去剤を提供することができる。また、本発明に従って、これらの化合物を効率的に生産することも可能となる。
【００６１】
本発明に用いる美白剤および抗酸化剤は、有機合成または特定の菌類から抽出および精製することにより得ることができるが、これらの方法に限定されない。
【００６２】
本発明の美白剤および抗酸化剤の有効成分は、ホウロクタケの菌糸体の培養液から、以下に示す方法によっても得ることができるが、これに限定されない。
【００６３】
ホウロクタケの菌糸体は、野生もしくは人工栽培の子実体もしくは菌糸体そのもの、もしくは継代培養、凍結、凍結乾燥、乾燥等の手段により保存されている菌体から無菌的に培地上で培養した菌体を用いることができる。
【００６４】
ホウロクタケの菌体はいずれであっても良い。例えば、日本国内だけでなく、世界各地に自生している菌体の他、世界各地の保存施設において保存されている菌体を使用することもできる。また、ホウロクタケと近縁の菌種であれば同様に用いることもできる。また人工栽培された子実体の菌体を用いることもできる。
【００６５】
菌糸体の培養に用いる培地は、ポテトデキストロース寒天培地、ポテトスクロース寒天培地、ペプトンデキストロース寒天培地、等の寒天培地の他、ポテトデキストロース培地、ポテトスクロース培地、ペプトンデキストロース培地、等の液体培地の他、菌類の培養に使用できる培地であれば、いずれであっても良い。菌糸体の培養方法、培養条件なども特に限定されないが、２０〜３０℃で１０〜５０日間、静置培養もしくは通気培養、振とう培養等により培養することで十分成長した菌糸体を用いることが望ましい。
【００６６】
野生の子実体または人工栽培された子実体から菌糸体を誘導する場合は、子実体の内部の組織または子実体の胞子から無菌的に上記の培地上で培養することで菌糸体に誘導することができる。また、既に単離され、継代培養、凍結、凍結乾燥、乾燥等の手段により保存されている菌体であれば、そのまま上記の培地上で培養することができる。
【００６７】
ホウロクタケの菌糸体の培養液または抽出液、菌糸体そのものから、抽出または各種クロマトグラフィーにより分離、精製することにより、本発明に使用する化合物を得ることができる。ホウロクタケの菌糸体から本発明の化合物を精製または単離する方法は、特に限定されない。いかなる方法においてもホウロクタケの菌糸体から抽出、精製することにより得られるdaedalin Aまたは、daedalin Aに示す化合物を高濃度に含む画分から、水素付加により、以下の構造式
【００６８】
【化１０６】
に表される化合物Aを誘導し、美白剤および抗酸化剤として使用することができる。
【００６９】
daedalinA に水素を付加する方法は特に限定されない。好ましい製造方法としては、daedalin A を有機溶媒または水に溶解し、パラジウムカーボンと水素ガスをともに混合し、数時間、室温で反応させることで、ほぼ100 % の収率で daedalin A に水素が付加した化合物A を得ることができる。
【００７０】
また、有機合成などの簡便な手段により得られる daedalin A のラセミ体混合物および daedalin A に水素が付加させることで得られる化合物Aのラセミ体混合物であっても、本発明における美白剤や抗酸化剤として使用することができる。
【００７１】
本発明に使用するdaedalin A のラセミ体混合物および化合物Aのラセミ体混合物の製造方法は特に限定されない。
【００７２】
本発明の製造方法により daedalin A のラセミ体混合物を合成する場合、本発明の好ましい実施形態では以下の工程：
（１）製造に使用する以下の構造式
【００７３】
【化１０７】
を有する化合物１を提供する工程、
（２）化合物1とメタクロロパーベンゾイックアシッド（ｍＣＰＢＡ）とを反応させ、以下の構造式：
【００７４】
【化１０８】
を有する化合物２を調製する工程、
（３）上記の化合物２から、以下の構造式：
【００７５】
【化１０９】
で表される化合物３を調製する工程、
を包含する調製法が行われる。
【００７６】
本発明の製造方法に使用する化合物１の製造方法は特に限定されない。好ましい製造方法としては、２，５−ジヒドロキシベンズアルデヒドを５０％ＴＨＦ／Ｈ２Ｏの溶液に溶解し、インジウムと３−クロロ−２−メチル−１−プロペンを加えて反応混合物を得ることができる。反応時間は特に限定されないが、好ましい反応時間は１〜３６時間、さらに好ましくは６〜２４時間である。その後、ろ過、抽出、溶媒分画、各種クロマトグラフィーなどの分離手法により、化合物１を反応混合物から分離することができる。また化合物１を分離せずに、次の合成反応に使用することもできる。
【００７７】
本発明の製造方法に使用する２，５−ジヒドロキシベンズアルデヒドはＣａｓ番号１１９４−９８−５として登録されている。２，５−ジヒドロキシベンズアルデヒドとしては試薬メーカーから市販されているものをそのまま使用することができる。
【００７８】
このようにして得られた化合物１をジクロロメタンに溶解し、メタクロロパーベンゾイックアシッドと反応させることで化合物２を合成することができる。反応温度は特に限定されないが、好ましい反応温度は０〜−５℃である。反応時間についても特に限定されないが、好ましい反応時間は１〜４時間である。その後、ろ過、抽出、溶媒分画、各種クロマトグラフィーなどの分離手法により、化合物２を反応混合物から分離することができる。また化合物２を分離せずに、次の合成反応に使用することもできる。
【００７９】
本発明の製造方法に使用するジクロロメタンはＣａｓ番号７５−０９−２として登録されている。ジクロロメタンとしては試薬メーカーから市販されているものをそのまま使用することができる。
【００８０】
本発明の製造方法に使用するメタクロロパーベンゾイックアシッドはＣａｓ番号９３７−１４−４として登録されている。メタクロロパーベンゾイックアシッドとしては試薬メーカーから市販されているものをそのまま使用することができる。
【００８１】
このようにして得られた化合物２を１，２−ジクロロエタンに溶解し、触媒量のパラトルエンスルホン酸を加えて反応させることで、化合物３（（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡ）をラセミ体で得ることができる。反応温度は特に限定されないが、好ましい反応温度は６０〜１００℃である。反応時間についても特に限定されないが、好ましい反応時間は２〜８時間である。その後、ろ過、抽出、溶媒分画、各種クロマトグラフィーなどの分離手法により、化合物３を反応混合物から分離することができる。
【００８２】
本発明の美白剤および抗酸化剤は、皮膚外用剤および食品、医薬品として使用することができる。皮膚外用剤および食品、医薬品の形状は特に問わない。その投与方法に応じて如何なる形状をも選択することができる。例えば、液状、ゲル状、クリーム状、顆粒状、個体、エアロゾルのような気体などのような形態で使用できる。本発明の美白剤および抗酸化剤として使用する場合、化粧水、クリーム、ゲル、軟膏、乳液、美容液、パック、洗顔料、クレンジング剤、ヘアケア剤、石鹸、浴用剤、シャンプー、リンス、リップスティック、口紅、ファンデーション等の化粧品や医薬部外品、医薬品に配合することができる。
【００８３】
本発明の美白剤および抗酸化剤を配合した皮膚外用剤は、油脂類、ロウ類、炭化水素類、シリコーン類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、増粘剤、粉末等の化粧品の基材の他、医薬品および医薬部外品の有効成分、ｐＨ調整剤、防腐剤、色素、香料、酸化防止剤、天然エキス等も必要に応じて配合することができる。
【００８４】
本発明の化合物を皮膚外用剤として調製する方法としては、周知の手段を用いることができる。代表的な調製法を以下に例示するが、これらに限定されるものではない。
【００８５】
（化粧用クリーム処方物の調製）
化粧用クリームを以下の成分と製法を用いて処方することができる：
・（Ａ）ステアリン酸 ８．０（重量％）、
・（Ｂ）ステアリルアルコール ４．０（重量％）、
・（Ｃ）ステアリン酸ブチル ６．０（重量％）、
・（Ｄ）モノステアリン酸グリセリン ２．０（重量％）、
・（Ｅ）プロピレングリコール ５．０（重量％）、
・（Ｆ）水酸化カリウム ０．４（重量％）、
・（Ｇ）防腐剤（パラオキシ安息香酸エステル） ０．１〜０．５（重量％）、
・（Ｈ）香料 ０．００１〜０．１（重量％）、
・（Ｉ）酸化防止剤（ジブチルヒドロキシトルエン） ０．０５〜０．１５（重量％）、
・（Ｊ）エタノール ５．０（重量％）、
・（Ｋ）本発明の化合物の有効量、
・（Ｌ）上記の残部として添加する精製水。
（製法）
１．上記（Ａ）〜（Ｄ）、（Ｅ）〜（Ｉ）、および（Ｌ）の一部を別々に加熱調製し、８０℃で混合し、ホモミキサーで攪拌し、その後、５０℃まで冷却する。
２．（Ｌ）の一部に（Ｊ）を添加し、（Ｋ）を溶解する。
３．上記１の溶液と２の溶液を混合し、３０℃まで冷却する。
【００８６】
（乳液処方物の調製）
乳液を以下の成分と製法を用いて処方することができる：
・（Ａ）ステアリン酸 ２．０（重量％）、
・（Ｂ）セチルアルコール １．５（重量％）、
・（Ｃ）ワセリン ４．０（重量％）、
・（Ｄ）スクワラン ５．０（重量％）、
・（Ｅ）グリセロールトリ−２−エチルヘキサン酸エステル ２．０（重量％）、
・（Ｆ）ソルビタンモノオレイン酸エステル ２．０（重量％）、
・（Ｇ）グリセリン ９．０（重量％）、
・（Ｈ）水酸化カリウム ０．１（重量％）、
・（Ｉ）防腐剤（パラオキシ安息香酸エステル） ０．１〜０．５（重量％）、
・（Ｊ）香料 ０．００１〜０．１（重量％）、
・（Ｋ）酸化防止剤（ジブチルヒドロキシトルエン） ０．０５〜０．１５（重量％）、
・（Ｌ）エタノール ５．０（重量％）
・（Ｍ）本発明の化合物の有効量、
・（Ｎ）上記の残部として添加する精製水。
（製法）
１．（Ａ）〜（Ｆ）、（Ｇ）〜（Ｋ）、および（Ｎ）の一部を別々に加熱調製し、８０℃で混合し、ホモミキサーで攪拌し、その後、５０℃まで冷却する。
２．（Ｎ）の一部に（Ｌ）を添加し、（Ｍ）を溶解する。
３．上記１の溶液と２の溶液を混合し、３０℃まで冷却する。
【００８７】
（化粧水の調製）
化粧水を以下の成分と製法を用いて処方することができる：
・（Ａ）ＰＯＥ（２０）オレイルアルコールエーテル ０．５（重量％）、
・（Ｂ）グリセリン １０（重量％）、
・（Ｃ）メチルセルロース ０．２（重量％）、
・（Ｄ）防腐剤（パラオキシ安息香酸エステル） ０．１〜０．５（重量％）、
・（Ｅ）香料 ０．００１〜０．１（重量％）、
・（Ｆ）酸化防止剤（ジブチルヒドロキシトルエン） ０．０５〜０．１５（重量％）、
・（Ｇ）エタノール ５．０（重量％）
・（Ｈ）本発明の化合物の有効量、
・（Ｉ）上記の残部として添加する精製水。
（製法）
上記（Ａ）〜（Ｉ）までを均一に溶解する。
【００８８】
（パック剤の調製）
パック剤を以下の成分と製法を用いて処方することができる：
・（Ａ）グリセリン １２（重量％）、
・（Ｂ）モンモリロナイト １０．０（重量％）、
・（Ｃ）酸化チタン ８．０（重量％）、
・（Ｄ）カオリン １０．０（重量％）、
・（Ｅ）防腐剤（パラオキシ安息香酸エステル） ０．１〜０．５（重量％）、
・（Ｆ）香料 ０．００１〜０．１（重量％）、
・（Ｇ）酸化防止剤（ジブチルヒドロキシトルエン） ０．０５〜０．１５（重量％）、
・（Ｈ）エタノール ５．０（重量％）
・（Ｉ）本発明の化合物の有効量、
・（Ｊ）上記の残部として添加する精製水。
（製法）
上記（Ａ）〜（Ｊ）を均一に溶解する。
【００８９】
本発明の美白剤および抗酸化剤を医薬品として用いる場合、薬学的に受容可能なキャリア型（例えば、滅菌キャリア）と組み合わせて処方され得る。「薬学的に受容可能なキャリア」とは、非毒性の個体、または液体の充填剤、希釈液、被包剤、または任意の型の処方補助剤をいう。
【００９０】
本発明の化合物を含有する組成物を医薬として使用する場合は、個々の個体、投与方法、投与計画および当業者に公知の因子を考慮に入れ、医療実施基準 (GMP = good medical practice) を遵守する方式で処方および投薬する。従って、本明細書において「有効量」は、このような考慮を行って決定される。
【００９１】
治療剤を、経口的、直腸内、非経口的、槽内、膣内、膜腔内、局所的（粉剤、軟膏、ゲル、点滴剤、または経皮パッチによるなど）、口内あるいは経口または鼻腔内スプレーとして投与し得る。本明細書で用いる用語「非経口的」とは、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下および間接内の注射および注入を含む投与方式をいう。
【００９２】
以下に、実施例に基づいて本発明を説明するが、以下の実施例は、例示の目的のみに提供される。従って、本発明の範囲は、上記発明の詳細な説明にも下記実施例にも限定されるものではなく、請求の範囲によってのみ限定される。
【実施例】
【００９３】
（実施例1：ホウロクタケの子実体から菌糸体の培養）
日本国内で自生するホウロクタケの子実体を採取し、子実体から内部の組織を無菌的に切り出した。この組織をペプトンデキストロース寒天平板培地に移し、２５℃で２０日間培養した。２０日後、成長したホウロクタケの菌糸体を新しい寒天培地移した。この操作を２度繰り返し得られたホウロクタケの菌糸体をペプトンデキストロース液体培地（１０ｌ）中で、４０日間、２５℃で培養した。４０日後、培養後の培養液から菌糸体をろ別し、菌糸体を取り除いた。このホウロクタケ培養菌糸体の培養ろ液を減圧濃縮し、濃縮物（５０ｇ）を得た。以下にペプトンデキストロース寒天培地とペプトンデキストロース液体培地の組成を示す。
【００９４】
（ペプトンデキストロース寒天培地の組成）
ポリペプトン：５ｇ
グルコース：２０ｇ
酵母エキス：２ｇ
硫酸マグネシウム七水和物：０．５ｇ
リン酸二水素カリウム：１ｇ
粉末寒天：２０ｇ
水：１０００ｇ。
【００９５】
（ペプトンデキストロース液体培地の組成）
ポリペプトン：５ｇ
グルコース：３０ｇ
酵母エキス：２ｇ
硫酸マグネシウム七水和物：０．５ｇ
リン酸二水素カリウム：１ｇ
水：１０００ｇ。
【００９６】
（実施例２：ホウロクタケ菌糸体の培養ろ液からの活性物質の精製）
ホウロクタケ培養菌糸体の培養ろ液の濃縮物５０ｇを酢酸エチルと水で分配することで、酢酸エチル溶出画分（５ｇ）を得た。この酢酸エチル溶出画分をシリカゲルとしてＷａｋｏｇｅｌＣ３００，１５０ｇを使用したシリカゲルクロマトグラフィーにより分離した。溶出溶媒には、１０％，２０％，３０％，４０％，５０％，６０％，７０％，８０％，９０％，１００％酢酸エチル／ヘキサン溶出溶媒を４５０ｍｌずつ使用し、それぞれ１０の画分に分離した。
【００９７】
得られた画分の内、５０％酢酸エチル／ヘキサン画分（０．８５ｇ）をシリカゲルとしてＷａｋｏｇｅｌＣ３００，１６０ｇを使用したシリカゲルクロマトグラフィーによりさらに分離した。溶出溶媒には３０％アセトン／ヘキサンを使用して分離精製することで、下記の化学式
【００９８】
【化１１０】
に示す化合物ｄａｅｄａｌｉｎＡを３８４ｍｇの収率で得た。
【００９９】
（実施例３：スペクトルデータの測定）
参考までにｄａｅｄａｌｉｎＡの質量分析（ＭＳ）、旋光度、赤外吸収スペクトル（ＩＲ）、紫外吸収スペクトル（ＵＶ）、核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ，１３Ｃ−ＮＭＲ）スペクトルデータを以下に示す。
【０１００】
（スペクトルデータ）
性状：黄色油状物質
質量分析：１９１．０７１２［Ｍ＋−Ｈ］（計算値１９１．０７０８：Ｃ１１Ｈ１１Ｏ３）
旋光度：［α］２９Ｄ＋１５．４°（ｃ１．４９，ＥｔＯＨ）
紫外線吸収スペクトル：２６３ｎｍ，ε：２．６×１０３，λ：３３３ｎｍ，ε：２．４×１０３
赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３３８９，２９２８，２３６０，２３４２，１４９０，１４５９，１２２７，１０５１，８１６，７６４，７１１
核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ，５００．１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ６．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），δ６．６０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，８．６Ｈｚ），δ６．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ），δ６．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ），δ５．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ），δ３．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），δ３．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），δ１．３５（１Ｈ，ｓ）
核磁気共鳴スペクトル（１３Ｃ−ＮＭＲ，１２５．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４９．８（Ｃ），δ１４６．８（Ｃ），δ１２８．０（ＣＨ），δ１２４．７（ＣＨ），δ１２１．７（Ｃ），δ１１６．８（ＣＨ），δ１１５．８（ＣＨ），δ１１３．２（ＣＨ），δ７９．０（Ｃ），δ６８．５（ＣＨ２），δ２２．３（ＣＨ３）
これらのスペクトルデータはこれまでに単離しているｄａｅｄａｌｉｎ Ａのスペクトルデータと一致した。
【０１０１】
（実施例４：ｄａｄａｌｉｎＡへの水素添加）
２１ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）のｄａｅｄａｌｉｎＡをエタノール中に溶解し、パラジウムカーボン（０．１ｍｇ，０．０１ｍｍｏｌ）と水素ガスとともに混合した。８時間後、パラジウムカーボンを除き、得られたエタノール溶液を濃縮した。この濃縮物を、溶出溶媒として５０％酢酸エチル／ヘキサンをによるシリカゲルクロマトグラフィーを実施することで、下記の化学式
【０１０２】
【化１１１】
に示す化合物Ａを１００％の収率で得た。
【０１０３】
（実施例５：スペクトルデータの測定）
参考までに、この化合物Ａのスペクトルデータを下記に示す。
性状：無色油状物質
質量分析：ＨＲＥＩＭＳ：１９４．０９４９（理論値Ｃ１１Ｈ１４Ｏ３，１９４．０９４３））
旋光度：［α］１９Ｄ−９．９°（ｃ０．２１，Ａｃｅｔｏｎｅ）
赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３３５３，２９３０，１６１８，１４９４，１４５４，１３５１，１２８５，１２２２，１１５２，１０９７，１０５０，９２３，８９８，８０９，７３７，７０５
核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ，５００．１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ６．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），δ６．５９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，８．７Ｈｚ），δ６．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ），δ５．４０（１Ｈ，ｂｒｓ），δ３．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ），δ３．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ），δ２．７９（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１１Ｈｚ，１４Ｈｚ），δ２．６８（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１７Ｈｚ），δ２．２７（１Ｈ，ｂｒｓ），δ１．９９（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１１Ｈｚ，１４Ｈｚ），δ１．６７（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，６．２Ｈｚ，１４Ｈｚ），δ１．２４（３Ｈ，ｓ）
核磁気共鳴スペクトル（１３Ｃ−ＮＭＲ，１２５．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４９．０，δ１４７．１，δ１２１．９，δ１１７．７，δ１１５．４，δ１１４．６，δ７６．２，δ６９．１，δ２７．５，δ２１．８，δ２０．４。
【０１０４】
（実施例６：化合物Ａの安定性の確認）
化合物Ａを１ｍｇ／ｍｌに調整し５０％エタノール水溶液中で６ヶ月、２５℃で保存したところ、化合物Ａの溶液には着色等の変化は認められなかった。一方、ｄａｅｄａｌｉｎＡを同一条件で同一期間保存したところ、ｄａｅｄａｌｉｎＡには黄色の着色が認められた。従って、化合物Ａは溶液中でｄａｅｄａｌｉｎＡよりも優れた安定性を示す。
【０１０５】
（実施例７：基質としてチロシンを使用した場合のチロシナーゼ阻害試験）
化合物Ａの美白作用を調べるため、化合物Ａについてチロシナーゼ阻害試験を実施した。本試験においては反応基質としてチロシンを使用した。チロシナーゼ阻害試験は以下の試験方法により実施した。基質としてチロシンを使用した化合物Ａのチロシナーゼ阻害活性を美白剤として市販されているアルブチンやｄａｅｄａｌｉｎＡと比較した。
【０１０６】
（試験方法）
１．リン酸緩衝液（ＰＨ６．８）に、最終添加量としてチロシナーゼが４０Ｕ／ｍｌ，Ｌ−チロシンが１ｍＭになるように溶解し、試験物質はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解後、混合した。
２．混合後、３７℃で６０分間インキュベートした。
３．４７５ｎｍの吸光度の値を次式に代入してチロシナーゼ阻害率を算出した。
チロシナーゼ阻害率＝１００×｛（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−Ｄ）｝／（Ａ−Ｂ）
この式において、Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄは以下を意味する。
Ａ：コントロール（試験物質無添加）の反応６０分後の吸光度
Ｂ：コントロール（試験物質無添加）の反応前の吸光度の値
Ｃ：試験物質添加試料の反応６０分後の吸光度の値
Ｄ：試験物質添加試料の反応前の吸光度の値。
【０１０７】
次の表１に化合物ＡとｄａｅｄａｌｉｎＡ、アルブチンの添加量毎のチロシナーゼ阻害活性を示す。
【０１０８】
【表１】
いずれの化合物も０．４ｍＭ，０．２ｍＭ，０．１ｍＭ，０．０５ｍＭの添加量で濃度依存的にチロシナーゼの活性を阻害した。５０％阻害活性を示す添加濃度であるＩＣ５０を計算すると、それぞれ化合物Ａは２８９μＭ，ｄａｅｄａｌｉｎＡは１９４μＭ，アルブチンは６７２μＭであった。ＩＣ５０で比較すると化合物Ａのチロシナーゼ阻害作用はアルブチンよりも強いが、ｄａｅｄａｌｉｎＡよりも少し弱い阻害作用であった。本試験においてｄａｅｄａｌｉｎＡはチロシナーゼの添加により黄色に変色するが、化合物Ａには変色は認められず、チロシナーゼに対する安定性はｄａｅｄａｌｉｎＡよりも化合物Ａの方が優れていることを確認した。
【０１０９】
（実施例８：基質としてＤＯＰＡを使用した場合のチロシナーゼ阻害試験）
次に反応基質としてＤＯＰＡを使用してチロシナーゼ阻害試験を実施した。ＤＯＰＡを使用したチロシナーゼ阻害試験を行うことにより、メラニン合成におけるＤＯＰＡからＤＯＰＡキノンへの酸化反応に対する披見物質の阻害作用を測定できる。本試験における化合物Ａのチロシナーゼ阻害作用をｄａｅｄａｌｉｎＡ、化合物Ａと比較した。
【０１１０】
（試験方法）
１．リン酸緩衝液（ＰＨ６．８）に、最終添加量としてチロシナーゼが２０Ｕ／ｍｌ，Ｌ−ＤＯＰＡが１ｍＭになるように溶解し、試験物質はＤＭＳＯに溶解後、混合した。
２．混合後、２５℃で３０分間インキュベートした。
３．４７５ｎｍの吸光度の値を次式に代入してチロシナーゼ阻害率を算出した。
チロシナーゼ阻害率＝１００×｛（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−Ｄ）｝／（Ａ−Ｂ）
この式において、Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄは以下を意味する。
Ａ：コントロール（試験物質無添加）の反応６０分後の吸光度
Ｂ：コントロール（試験物質無添加）の反応前の吸光度の値
Ｃ：試験物質添加試料の反応３０分後の吸光度の値
Ｄ：試験物質添加試料の反応前の吸光度の値。
【０１１１】
次の表２に化合物ＡとｄａｅｄａｌｉｎＡ、アルブチンの添加量毎のチロシナーゼ阻害活性を示す。
【０１１２】
【表２】
本試験においては化合物Ａだけが０．２ｍＭ，０．４ｍＭ，０．８ｍＭの添加濃度で濃度依存的にチロシナーゼ活性を阻害したが、ｄａｅｄａｌｉｎＡとアルブチンは全くチロシナーゼ阻害作用を示さなかった。従って、化合物ＡだけがＤＯＰＡが基質であっても、これらの添加濃度においてチロシナーゼ活性を阻害した。従って、化合物ＡはｄａｅｄａｌｉｎＡやアルブチンよりも効果的な美白作用を示すことが期待できる。
【０１１３】
（実施例９：化合物ＡのＤＰＰＨラジカル消去試験）
化合物Ａの抗酸化作用を調べるため、化合物ＡについてＤＰＰＨラジカル消去試験を実施した。化合物ＡのＤＰＰＨラジカル消去作用をｄａｅａｄａｌｉｎＡ及び、強い抗酸化剤として市販されているトロロックスと比較した。
【０１１４】
（試験方法）
１．ＤＰＰＨをエタノールに溶解し、０．１ｍｍｏｌに調整した。
２．５０％エタノール水溶液に溶解した試験物質をトリス塩酸緩衝液（ＰＨ７．４）に溶解した。
３．上記１，２の溶液を１対１で混合し、２０分間、２５℃で暗所において反応させた。
４．５１７ｎｍの吸光度の値を次式に代入して、ＤＰＰＨラジカル消去率を算出した。
ＤＰＰＨラジカル消去率＝１００×（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）
この式において、Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄは以下を意味する。
Ａ：試験物質添加試料の反応後の吸光度の値
Ｂ：試験物質添加試料のＤＰＰＨの代わりにエタノールを添加した時の吸光度の値。
Ｃ：コントロール（試験物質無添加）の反応後の吸光度の値。
Ｄ：コントロール（試験物質無添加）のＤＰＰＨの代わりにエタノールを添加した時の吸光度の値。
【０１１５】
表３に，化合物Aと daedalin A, トロロックスの添加濃度毎の DPPH ラジカル消去率を示す。
【０１１６】
【表３】
化合物A のDPPHラジカル消去作用はdaedalin A とほぼ同等であり，トロロックス よりも若干弱いが十分なラジカル消去作用であった。化合物A は十分な効果と安定性を持つ優れた抗酸化剤である。
【０１１７】
（実施例１０：ｄａｅｄａｌｉｎＡのラセミ体（（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡ）の化学合成）
（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡは以下の合成方法により合成することができる。
２，５−ジヒドロキシベンズアルデヒド（２２．５ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１／１，６．０ｍｌ）の溶液にインジウム（１８．４ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）と３−クロロ−２−メチル−１−プロペン（０．０５ｍｌ，０．４８ｍｍｏｌ）を順次加えた。室温にて１２時間攪拌後、飽和食塩水を加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した後、減圧濃縮することで溶媒を除去した。この濃縮物を５０％酢酸エチル／ヘキサン溶液によるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、化合物１（３１．６ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）を得た。下記に化合物１を合成するためのスキームを示す。
【０１１８】
【化１１２】
次に，化合物１（３１．６ｍｇ，０．１６ｍＭ）のジクロロメタン溶液にｍＣＰＢＡ（８５．０ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）を加え、室温にて２時間撹拌した。半飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液を加えて反応を停止し、ジエチルエーテルを用いて抽出した。抽出したジエチルエーテル溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和食塩水で順次洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した後、減圧濃縮することで溶媒を除去し，化合物２を含む混合物を得た。この濃縮物を精製することなく次の反応に使用した。下記に化合物２を合成するためのスキームを示す。
【０１１９】
【化１１３】
１，２−ジクロロエタンに化合物２を含む濃縮物を溶解し、触媒量のパラトルエンスルホン酸を加え、８３℃にて６時間撹拌した。反応液を室温まで冷却後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液にて反応を停止し、酢酸エチルにて抽出した。酢酸エチル抽出液を飽和食塩水で洗浄後，硫酸マグネシウムで乾燥し，ろ過した後、減圧濃縮して溶媒を除去した。この濃縮物を５０％酢酸エチル／ヘキサン溶液によるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡ（１１．０ｍｇ，０．０５７ｍｍｏｌ）を得た。化合物１から２段階の反応における（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡの反応収率は３５％であった。（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡを合成するためのスキームは、
【０１２０】
【化１１４】
である。
【０１２１】
（実施例１１：化合物１のスペクトルデータの測定）
参考までに、化合物1のスペクトルデータを下記に示す。
性状：褐色結晶
質量分析：ＨＲＥＩＭＳ：１９４．０９２５（理論値Ｃ１１Ｈ１４Ｏ３，１９４．０９４３）
赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３３８８，２９２９，１４５４，１４１９，１２５７，１０８６，１０４７
核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ，５００．１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１．３１（１Ｈ，ｓ），δ１．８３（３Ｈ，ｓ），δ２．４５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．５，１４Ｈｚ），δ２．６１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．５，１４Ｈｚ），δ４．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ），δ４．８７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．５，１０．５Ｈｚ），δ４．９２（１Ｈ，ｓ），δ５．０１（１Ｈ，ｓ），δ６．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），δ６．６６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．０，８．５Ｈｚ），δ６．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），δ７．６１（１Ｈ，ｓ）
核磁気共鳴スペクトル（１３Ｃ−ＮＭＲ，１２５．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４９．４，δ１４８．５，δ１４１．７，δ１２７．２，δ１１８．０，δ１１５．５，δ１１５．１，δ１１３．７，δ７２．４，δ４６．２，δ２２．２。
【０１２２】
（実施例１２：（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡのスペクトルデータの測定）
参考までに、化合物３（（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡ）のスペクトルデータを下記に示す。
性状：無色油状物質
質量分析：ＨＲＥＩＭＳ：１９２．０７５４（理論値Ｃ１１Ｈ１４Ｏ３，１９２．０７８６）
赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３３３７，２９７９，１４８９，１４５９，１２２３，１０４７
核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ，５００．１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１．３６（３Ｈ，ｓ），δ３．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ），δ３．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ），δ５．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），δ６．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），δ６．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），δ６．６０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），δ６．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）
核磁気共鳴スペクトル（１３Ｃ−ＮＭＲ，１２５．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４９．８，δ１４６．１，δ１２７．９，δ１２４．７，δ１２１．７，δ１１６．８，δ１１５．８，δ１１３．２，δ７９．０，δ６８．５，δ２２．３。
【０１２３】
（実施例１３反応溶媒による（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡの化学合成の収率）
反応溶媒による（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡの合成収率を調べるため，反応溶媒としてベンゼンまたは、トルエン、ジクロロメタン、ジクロロエタンを使用し、化合物１から（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡを合成した。合成方法は実施例１０で記載した方法によって合成した。各種反応溶媒毎に、化合物１から（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡを合成した時の反応収率を比較した。その結果を下表に示す。
【０１２４】
【表４】
ベンゼンを使用した場合の反応収率は０．５％、トルエンを使用した場合の反応収率は０．６％、ジクロロメタンを使用した場合の反応収率は０．５％と、ジクロロエタンを使用した場合の反応収率（３５％）よりも大きく劣り、実用にはそぐわない。
【０１２５】
従って、化合物２よりｄａｄｅａｌｉｎＡを得る反応において、反応溶媒として１，２−ジクロロエタンを使用することで（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡを高収率で得ることができる。
【０１２６】
（実施例１４：（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡのチロシナーゼ阻害試験）
（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡの美白作用を調べるため、（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡについてチロシナーゼ阻害試験を実施した。本試験においては反応基質としてチロシンを使用した。チロシナーゼ阻害試験は実施例７に示す試験方法により実施した。（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡのチロシナーゼ阻害作用を美白剤として市販されているアルブチン及びｄａｅｄａｌｉｎＡと比較した。
【０１２７】
次の表４に化合物ＡとｄａｅｄａｌｉｎＡ、アルブチンの添加量毎のチロシナーゼ阻害活性を示す。
【０１２８】
【表５】
本試験から、(±)-daedalinA は市販の美白剤であるアルブチン以上のチロシナーゼ阻害作用を示すと共に、そのチロシナーゼ阻害活性はdaedalin A とほぼ同等であった。従って、簡便な合成法による製造法によって製造できるラセミ体の(±)-daedalin A であっても、光学活性を持つdaedalin A の代替使用が可能である。
【０１２９】
（実施例１５：（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡのＤＰＰＨラジカル消去率測定試験）
（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡの抗酸化作用を調べるため、（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡについてＤＰＰＨラジカル消去率測定試験を実施した。化合物ＡのＤＰＰＨラジカル消去作用をｄａｅａｄａｌｉｎＡ及び、強い抗酸化剤として市販されているトロロックスと比較した。
【０１３０】
【表６】
本試験から、（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡの抗酸化作用はｄａｅｄａｌｉｎＡとほぼ同等であった。従って、簡便な合成法による製造法によって製造できるラセミ体の（±）−ｄａｅｄａｌｉｎＡであっても、光学活性を持つｄａｅｄａｌｉｎＡの代替使用が可能である。
【０１３１】
（実施例１５：ホウロクタケの培養期間とｄａｅｄａｌｉｎＡの生産量の測定）
ホウロクタケの培養期間とｄａｅｄａｌｉｎＡの生産量の関係を，ＨＰＬＣ分析により調査した。
（方法）
（ｉ）実施例１に記載した方法で分離したホウロクタケの菌糸体を，実施例１に示すペプトンデキストロース液体培地中で、２５℃で静置培養した。
（ｉｉ）ホウロクタケの培養開始後１０日毎に、ホウロクタケの培養ろ液をサンプリングした。
（ｉｉｉ）５０％メタノール水溶液で培養ろ液１０％に希釈し、メンブレンフィルターでろ過した。
（ｉｖ）このようにして調整した培養ろ液を以下の分析条件でＨＰＬＣ分析を実施した。
（ｖ）ｄａｅｄａｌｉｎＡの（１ｍｇ／ｍｌ）におけるＨＰＬＣ分析の保持時間と吸光度を比較することにより、ホウロクタケの菌糸体が培養液１Ｌ中に含有するｄａｅｄａｌｉｎＡの含有量（ｍｇ）を算出した。
（ｖｉ）本試験におけるｄａｅｄａｌｉｎＡの生産量は，内部標準物質としてクマリン（１ｍｇ／ｍｌ）を添加し、このピークを標準として算出した。
（分析条件）
１）カラム：ＯＤＳカラム、内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍ、粒子経５μｍ
２）移動相：５０％メタノール／水
３）流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
４）検出器：ＵＶ３３３ｎｍ
５）温度：３０℃
６）ループ：２０μｌ
７）サンプル：５ｍｌ投入。
【０１３２】
（結果）
上記試験の結果を、以下の表に示す。
【０１３３】
【表７】
ホウロクタケ菌糸体による daedalin A の生産量を培養期間毎に測定すると、ホウロクタケは 30 日まで培養期間が経過すると daedalin A の生産量は増加するが、30日目以降は時間の経過とともにdaedalin A の含有量は減少する。
【０１３４】
以上の結果から、daedalinA は、ホウロクタケの菌糸体の成長とともに生産され、その後、菌糸体成長によって代謝分解される物質であると考えられる。
【０１３５】
従ってdaedalin A を効率よく生産するには、ホウロクタケの菌糸体を一定期間培養後、ホウロクタケ菌糸体の代謝過程で daedalin A が分解される前に、速やかに菌糸体からdaedalin A を分離する必要がある。
【０１３６】
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、この実施形態に限定して解釈されるべきものではない。本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。当業者は、本発明の具体的な好ましい実施形態の記載から、本発明の記載および技術常識に基づいて等価な範囲を実施することができることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
【産業上の利用可能性】
【０１３７】
ホウロクタケの菌糸体の培養代謝産物中に含有する daedalin A に水素添加することで、より安定性に優れた抗酸化剤、美白剤を提供することができる。
【０１３８】
また、本発明の合成方法により作成したラセミ体の (±)-daedalin A であっても十分な抗酸化作用と美白作用を示すことを明らかにするとともに，効率的な(±)-daedalinA および daedalin A の製造方法を明らかにした。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造式：
【化１】
を有する化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物を含有する美白剤。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物を含有する抗酸化剤。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物を含有する活性酸素除去剤。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物を含有する皮膚外用剤。
【請求項６】
以下の構造式：
【化２】
に表される化合物のラセミ混合物、または、
以下の構造式：
【化３】
に表される化合物のラセミ混合物を含有する、美白剤。
【請求項７】
以下の構造式：
【化４】
に表される化合物のラセミ混合物、または、
以下の構造式：
【化５】
に表される化合物のラセミ混合物を含有する、抗酸化剤。
【請求項８】
以下の構造式：
【化６】
に表される化合物のラセミ混合物、または、
以下の構造式：
【化７】
に表される化合物のラセミ混合物を含有する、活性酸素除去剤。
【請求項９】
以下の構造式：
【化８】
に表される化合物のラセミ混合物、または、
以下の構造式：
【化９】
に表される化合物のラセミ混合物を含有する、皮膚外用剤。
【請求項１０】
以下の構造式：
【化１０】
に表される化合物を製造する方法であって、以下：
（ａ）ホウロクタケ(daedalea dickinsii) の菌糸体を10日から50日間培養する工程、
を包含する、方法。
【請求項１１】
以下の構造式：
【化１１】
に表される化合物を製造する方法であって、以下：
ａ）ホウロクタケ(daedalea dickinsii) の菌糸体を10日から50日間培養する工程；
ｂ）工程（ａ）の培養物から、以下の構造式
【化１２】
に表される化合物を抽出する工程；および、
ｃ）工程（ｂ）で抽出された化合物に水素を付加する工程、
を包含する、方法。
【請求項１２】
以下の構造式：
【化１３】
に表される化合物のラセミ混合物を製造する方法であって、以下：
（ａ）パラトルエンスルホン酸と以下の構造式
【化１４】
に表される化合物とを、1,2-ジクロロエタン中で反応させる工程、
を包含する、方法。
【請求項１３】
以下の構造式：
【化１５】
に表される化合物のラセミ混合物を製造する方法であって、以下：
（ａ）パラトルエンスルホン酸と以下の構造式
【化１６】
に表される化合物とを、1,2-ジクロロエタン中で反応させる工程、
（ｂ）工程（ａ）で生成された化合物に水素を付加する工程、
を包含する、方法。
【請求項１】
以下の構造式：
【化１】
を有する化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物を含有する美白剤。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物を含有する抗酸化剤。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物を含有する活性酸素除去剤。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物を含有する皮膚外用剤。
【請求項６】
以下の構造式：
【化２】
に表される化合物のラセミ混合物、または、
以下の構造式：
【化３】
に表される化合物のラセミ混合物を含有する、美白剤。
【請求項７】
以下の構造式：
【化４】
に表される化合物のラセミ混合物、または、
以下の構造式：
【化５】
に表される化合物のラセミ混合物を含有する、抗酸化剤。
【請求項８】
以下の構造式：
【化６】
に表される化合物のラセミ混合物、または、
以下の構造式：
【化７】
に表される化合物のラセミ混合物を含有する、活性酸素除去剤。
【請求項９】
以下の構造式：
【化８】
に表される化合物のラセミ混合物、または、
以下の構造式：
【化９】
に表される化合物のラセミ混合物を含有する、皮膚外用剤。
【請求項１０】
以下の構造式：
【化１０】
に表される化合物を製造する方法であって、以下：
（ａ）ホウロクタケ(daedalea dickinsii) の菌糸体を10日から50日間培養する工程、
を包含する、方法。
【請求項１１】
以下の構造式：
【化１１】
に表される化合物を製造する方法であって、以下：
ａ）ホウロクタケ(daedalea dickinsii) の菌糸体を10日から50日間培養する工程；
ｂ）工程（ａ）の培養物から、以下の構造式
【化１２】
に表される化合物を抽出する工程；および、
ｃ）工程（ｂ）で抽出された化合物に水素を付加する工程、
を包含する、方法。
【請求項１２】
以下の構造式：
【化１３】
に表される化合物のラセミ混合物を製造する方法であって、以下：
（ａ）パラトルエンスルホン酸と以下の構造式
【化１４】
に表される化合物とを、1,2-ジクロロエタン中で反応させる工程、
を包含する、方法。
【請求項１３】
以下の構造式：
【化１５】
に表される化合物のラセミ混合物を製造する方法であって、以下：
（ａ）パラトルエンスルホン酸と以下の構造式
【化１６】
に表される化合物とを、1,2-ジクロロエタン中で反応させる工程、
（ｂ）工程（ａ）で生成された化合物に水素を付加する工程、
を包含する、方法。
【公開番号】特開２００９−７８９８９（Ｐ２００９−７８９８９Ａ）
【公開日】平成２１年４月１６日（２００９．４．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２４７７６０（Ｐ２００７−２４７７６０）
【出願日】平成１９年９月２５日（２００７．９．２５）
【出願人】（３０００２９５６９）ゲオール化学株式会社 (12)
【出願人】（５０４１８０２３９）国立大学法人信州大学 (759)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年４月１６日（２００９．４．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年９月２５日（２００７．９．２５）
【出願人】（３０００２９５６９）ゲオール化学株式会社 (12)
【出願人】（５０４１８０２３９）国立大学法人信州大学 (759)
【Ｆターム（参考）】
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