ビカルタミドおよびそのアナログの製造方法
【課題】前立腺肥大治療薬（抗男性ホルモン剤）またはその他の医薬品中間体として有用な、ビカルタミドまたはそのアナログをラセミ体または光学活性体の形態で効率良く製造し得る方法を提供する。
【解決手段】式（ＩＩ）と、式（ＩＩＩ）で表される化合物とを
溶媒中で反応させることにより行われる。これにより、効率良くビカルタミドまたはそのアナログを得ることができる。得られたビカルタミドまたはそのアナログは、例えば、前立腺肥大治療薬（抗男性ホルモン剤）またはその他の医薬品中間体として有用である。
【解決手段】式（ＩＩ）と、式（ＩＩＩ）で表される化合物とを
溶媒中で反応させることにより行われる。これにより、効率良くビカルタミドまたはそのアナログを得ることができる。得られたビカルタミドまたはそのアナログは、例えば、前立腺肥大治療薬（抗男性ホルモン剤）またはその他の医薬品中間体として有用である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビカルタミドおよびそのアナログの製造方法に関し、より詳細には、ビカルタミドおよびそのアナログを簡易かつ優れた収率で製造し得る方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アンドロゲン遮断は、前立腺癌患者のための一般的な治療方法である。種々の非ステロイド抗アンドロゲン剤が前立腺癌を治療する際に使用することが知られている。ビカルタミド（Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−（４−フルオロフェニルスルホニル）−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロパンアミド］は、例えば、非ステロイド抗アンドロゲン剤の１つであり、前立腺肥大治療薬（抗男性ホルモン剤）として世界的に典型的に使用されている。
【０００３】
ビカルタミドは、以下のような構造：
【０００４】
【化１】
【０００５】
を有する。上記構造におけるプロパンアミドのα−炭素はキラル炭素であるため、ビカルタミドはキラルな物質である。
【０００６】
上記前立腺肥大治療薬としての使用においては、例えば、ビカルタミドはＲ体がＳ体の約６０倍もの活性を示すことが報告されており（非特許文献１）、当該分野においてはＲ体のビカルタミドを効率良く製造するための研究開発が多く行われてきた。
【０００７】
例えば、非特許文献１〜５は、上記ビカルタミドおよびそのアナログをそれぞれ効率良く、あるいは新規な合成ルートを通じて製造するための方法を開示している。しかし、これらの文献に記載の方法はいずれも、上記ビカルタミドを得るためには、比較的多くの反応工程を要する、充分な収率で製造することが困難である、などの工業的観点からの問題が指摘されている。また、これらの文献のうち、非特許文献１および３で製造され得るビカルタミドはラセミ体となるため、当該ビカルタミドを得た後に当該分野において公知の手段を用いて光学分割することが事実上必須となり、この工程を通じて所望の（Ｒ）−ビカルタミドのみを取り出さざるを得ない。
【０００８】
一方、特許文献１は、（Ｒ）−ビカルタミドのみを選択的に合成する手法として（Ｒ）−プロリンを出発物質に使用することを開示している。しかし、（Ｒ）−プロリンは一般に入手し難く、高価な物質である。このため、（Ｒ）−ビカルタミドの工業的製造においては生産性（価格効率）の観点から、当該技術は必ずしも適切なものともいえない。
【０００９】
さらに、特許文献２は、上記（Ｒ）−プロリンの使用に代えて、例えば、４−フルオロベンゼンチオールに所定のブロモラクトンを反応させることなどの工程を通じて、所望の（Ｒ）−ビカルタミドを製造する方法が開示されている。しかし、当該方法によっても、目的のビカルタミドを工業的観点から効率よく製造し得るものであるということができない。
【００１０】
【特許文献１】米国特許第６，０１９，９５７号明細書
【特許文献２】特表２００３−５１２３５１号公報
【非特許文献１】タッカー，エイチ．（Ｔｕｃｋｅｒ，Ｈ.）ら、「ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），１９８８年，３１巻、ｐ．８８５−８８７
【非特許文献２】タッカー，エイチ．（Ｔｕｃｋｅｒ，Ｈ.）ら、「ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），１９８８年，３１巻、ｐ．９５４−９５９
【非特許文献３】ジェイムス，ケイ．（Ｊａｍｅｓ，Ｋ.）ら、「シンセシス（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ），２００２年，第７号、ｐ．８５０−８５２
【非特許文献４】ネア，ヴィ．（Ｎａｉｒ，Ｖ.）ら、「テトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ），２００４年，第４５号、ｐ．９４７５−９４７７
【非特許文献５】マーエフカ，シー．（Ｍａｒｈｅｆｋａ，Ｃ.）ら、「ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），２００４年，４７巻、ｐ．９９３−９９８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、上記問題の解決を課題とするものであり、その目的とするところは、前立腺肥大治療薬（抗男性ホルモン剤）またはその他の医薬品中間体として有用な、ビカルタミドまたはそのアナログをラセミ体または光学活性体の形態で効率良く製造し得る方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、以下の式（Ｉ）：
【００１３】
【化２】
【００１４】
で表されるビカルタミドまたはそのアナログの製造方法であって、
以下の式（ＩＩ）：
【００１５】
【化３】
【００１６】
で表される化合物を、溶媒中、以下の式（ＩＩＩ）：
【００１７】
【化４】
【００１８】
で表される化合物と反応させる工程；
を包含し、
Ｒ１は、ハロゲン原子、水素原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４のアルキル基、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４のアルコキシ基、ニトロ基、シアノ基、−Ｓ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、−ＣＯ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、
【００１９】
【化５】
【００２０】
（ここで、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ独立して、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、または−ＮＣＳであり；
Ｒ２は、硫黄原子、酸素原子、または−ＮＨ−であり；
Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；
Ｒ５は、硫黄原子、酸素原子、−ＮＨ−、または−ＳＯ２−であり；そして
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である、方法である。
【００２１】
本発明はまた、以下の式（ＩＩ）：
【００２２】
【化６】
【００２３】
で表される化合物の製造方法であって、
以下の式（ＩＶ）：
【００２４】
【化７】
【００２５】
で表される化合物を脱保護する工程；および
該脱保護して得られた生成物をさらに脱アセチル化する工程；
を包含し、
ここで、
Ｒ３は保護基であり、
Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；そして
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である、方法である。
【００２６】
本発明はまた、以下の式（ＩＶ）：
【００２７】
【化８】
【００２８】
で表される化合物の製造方法であって、
以下の式（Ｖ）：
【００２９】
【化９】
【００３０】
で表される化合物を、縮合剤および溶媒の存在下、以下の式（ＶＩ）：
【００３１】
【化１０】
【００３２】
で表される化合物と反応させ、かつアセチル化する工程；
を包含し、
ここで、
Ｒ３は保護基であり；
Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；そして
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である、方法である。
【００３３】
本発明はまた、光学活性な、以下の式（ＩＸ）：
【００３４】
【化１１】
【００３５】
で表されるジオールの製造方法であって、
以下の式（ＶＩＩ）：
【００３６】
【化１２】
【００３７】
で表されるエポキシドのラセミ体に、エポキシド加水分解活性を有する微生物または該微生物に由来する酵素を作用させて、該ラセミ体の一方の鏡像体を加水分解することにより、第一のジオールを生成する工程；
該加水分解の工程によって残存した他方の鏡像体を酸で処理することにより、該第一のジオールと同様のジオールを生成する工程；
該第一のジオールと該酸処理工程で生成したジオールとを合わせ、溶媒中でトシル化することにより、トシル体を生成する工程；
該トシル体に塩基を作用させることにより鏡像体が偏って存在するエポキシドを生成する工程；および
該鏡像体が偏って存在するエポキシドを、該エポキシド加水分解活性を有する微生物または該微生物に由来する酵素を作用させる工程；
を包含し、
ここで、
Ｒ３は保護基であり；
Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；
＊は不斉中心であり；そして
該微生物が、バチルス・サブチリスＪＣＭ１０６２９株、バチルス・サブチリスＩＡＭ１１８６株、クロモバクテリウム・ビオラセウムＪＣＭ１２４９株、バチルス・リケニホルミスＡＴＣＣ３９３０７株、ノカルディア・フスカＮＢＲＣ１４３４０株、ステノトロホモナス・マルトフィリアＪＣＭ１９７５株、バチルス・プミリスＮＢＲＣ１４３５８株、ミクロバクテリウム・ラクチカムＪＣＭ１３７９株、シュードモナス・クロロラフィスＪＣＭ２７７８株、ノカルディア・アステロイデスＮＢＲＣ３３８４株、ゴルドナ・テラエＪＣＭ３２０６株、バチルス・アネウリノリティカスＩＡＭ１０７７株、クレブシエラ・オキシトカＳＮＳＭ−８７（微工研菌寄第１２９５３号）株、キャンディダ・コリカロサＪＣＭ２１９９株、キャンディダ・エルノビＪＣＭ９９４８株、キャンディダ・ルゴサＪＣＭ１６１９株、ガラクトマイセス・ゲオトリカムＪＣＭ６３５９株、キャンディダ・インタメディアＮＢＲＣ０７６１株、サッカロマイセス・セレビシエＪＣＭ２２２３株、スポリジオボラス・サルモニカラＮＢＲＣ１０３５株、キャンディダ・クルセイＮＢＲＣ００１１株、ロドスポリジウム・ジオボバタムＮＢＲＣ０６８８株、ピチア・ブルトニＪＣＭ３７０８株、キャンディダ・アンタラクチカＪＣＭ３９４１株、ロドトルラ・ルブラＪＣＭ８１１７株、キャンディダ・グイリエルモンジＮＢＲＣ０５６６株、キャンディダ・ケフィアＮＢＲＣ１０２８７株、ロドトルラ・ミヌタＮＢＲＣ０８７９株、およびキャンディダ・パラプシロシスＪＣＭ１７８５株からなる群より選択される少なくとも１種の菌株が挙げられる。特に、バチルス・サブチリスＩＡＭ１１８６株、クロモバクテリウム・ビオラセウムＪＣＭ１２４９株、キャンディダ・コリカロサＪＣＭ２１９９株、キャンディダ・エルノビＪＣＭ９９４８株、キャンディダ・ルゴサＪＣＭ１６１９株、ガラクトマイセス・ゲオトリカムＪＣＭ６３５９株、およびキャンディダ・インタメディアＮＢＲＣ０７６１株からなる群より選択される少なくとも１種の菌株である、方法である。
【００３８】
１つの実施態様では、上記微生物は、バチルス・サブチリスＪＣＭ１０６２９株、バチルス・サブチリスＩＡＭ１１８６株、クロモバクテリウム・ビオラセウムＪＣＭ１２４９株、キャンディダ・コリカロサＪＣＭ２１９９株、キャンディダ・エルノビＪＣＭ９９４８株、キャンディダ・ルゴサＪＣＭ１６１９株、ガラクトマイセス・ゲオトリカムＪＣＭ６３５９株、およびキャンディダ・インタメディアＮＢＲＣ０７６１株からなる群より選択される少なくとも１種の菌株である。
【００３９】
１つの実施態様では、上記微生物はデンプン含有培地で培養された微生物である。
【発明の効果】
【００４０】
本発明によれば、目的に応じ、ラセミ体または光学活性体としてのビカルタミドまたはそのアナログを効率良く製造することができる。特に、本発明の方法によれば、製造工程で副生成物が生じる可能性を低減することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４１】
以下、本発明について詳述する。
【００４２】
本発明の方法を用いて製造され得る化合物は以下の式（Ｉ）：
【００４３】
【化１３】
【００４４】
（ここで、Ｒ１は、ハロゲン原子、水素原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４のアルキル基、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４のアルコキシ基、ニトロ基、シアノ基、−Ｓ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、−ＣＯ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、
【００４５】
【化１４】
【００４６】
（ここで、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ独立して、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、または−ＮＣＳであり；
Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；
Ｒ５は、硫黄原子、酸素原子、−ＮＨ−、または−ＳＯ２−であり；そして
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である）で表されるビカルタミドまたはそのアナログである。
【００４７】
上記式（Ｉ）で表される化合物は、以下の式（ＩＩ）：
【００４８】
【化１５】
【００４９】
（ここで、 Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；そしてＲ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である）で表されるビカルタミドまたはそのアナログである）で表される化合物を、溶媒中、以下の式（ＩＩＩ）：
【００５０】
【化１６】
【００５１】
（ここで、Ｒ１は、ハロゲン原子、水素原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４のアルキル基、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４のアルコキシ基、ニトロ基、シアノ基、−Ｓ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、−ＣＯ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、
【００５２】
【化１７】
【００５３】
（ここで、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ独立して、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、または−ＮＣＳであり；そしてＲ２は、硫黄原子、酸素原子、または−ＮＨ−である）で表される化合物と反応させることにより製造され得る。
【００５４】
本発明に用いられる式（ＩＩ）の化合物は、光学活性な化合物またはラセミ体の化合物のいずれを用いることもできる。本発明の方法により製造される式（Ｉ）のビカルタミドまたはその誘導体を、光学活性体（すなわち、Ｒ体またはＳ体のいずれか）の形態で得ることを所望する場合は、式（ＩＩ）の化合物は光学活性体（すなわち、Ｒ体またはＳ体のいずれか）であることが好ましい。
【００５５】
本発明に用いられる式（ＩＩ）の化合物は、例えば、以下の方法を用いて製造することができる。以下、本発明の用いられる式（ＩＩ）の化合物を製造するための方法の一例について説明する。
【００５６】
本発明に用いられる式（ＩＩ）の化合物は、後述するような方法を用いて製造された式（ＩＶ）：
【００５７】
【化１８】
【００５８】
（ここで、Ｒ３は保護基（例えば、ベンジル、４−メトキシフェニルメチル、メトキシメチル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、アセチル、ベンゾイル、および９−フルオレニルメトキシカルボニルが包含される）であり、Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；そしてＲ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である）で表される化合物を脱保護し、かつその後、当該脱保護して得られた生成物をさらに脱アセチル化することによって製造され得る。
【００５９】
上記脱保護および脱アセチル化に要する反応条件等は当該分野において周知であり、当業者によって任意に設定することができる。
【００６０】
上記式（ＩＶ）の化合物はまた、例えば、以下の式（Ｖ）：
【００６１】
【化１９】
【００６２】
（ここで、Ｒ３は保護基であり、そしてＲ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基である）で表される化合物を、縮合剤および溶媒の存在下、以下の式（ＶＩ）：
【００６３】
【化２０】
【００６４】
（ここで、Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である）で表される化合物と反応させ、かつアセチル化することによって製造され得る。
【００６５】
上記に使用される縮合剤は、縮合反応一般に用いられる縮合剤であれば特に限定されないが、例えば、塩化チオニル、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド ヒドロクロリド）（ＥＤＣｌ）およびそれらの組合せが挙げられる。反応性に優れ、式（ＩＶ）の化合物をさらに効率良く製造することができる点から塩化チオニルを用いることが好ましい。当該縮合剤の量は、当業者によって適宜設定され得る。
【００６６】
上記縮合剤とともに使用される溶媒には、有機溶媒として任意の溶媒（例えば、テトラヒドロフラン、ジメチルアセトアミドなど）が使用され得る。しかし、式（ＩＶ）の化合物をさらに効率よく製造することを考慮すれば、テトラヒドロフランを使用することが好ましい。
【００６７】
また、上記式（ＶＩ）で表される化合物は、好ましくは以下の式（ＶＩ’）：
【００６８】
【化２１】
【００６９】
（ここで、Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して上記に定義した基と同様である）で表される化合物であり、具体的な例としては、４−シアノ−３−トリフルオロメチル−アニリンが挙げられる。
【００７０】
式（ＶＩ）の化合物の使用量は、特に限定されないが、例えば、式（Ｖ）の化合物と当モルまたはそれ以上の量が使用され得る。
【００７１】
これらに対し、式（Ｖ）の化合物は、将来的に製造が所望されるビカルタミドまたはそのアナログが光学活性体であるかあるいはラセミ体であるかに応じて、任意の絶対配置を有する化合物（光学活性体またはラセミ体）が選択される。以下、光学活性な式（Ｖ）の化合物を得るための方法について、例として２つの方法を示し、説明する。
【００７２】
第一の方法として、当該光学活性な式（Ｖ）の化合物を得るにあたっては、まず、例えば、以下の式（ＶＩＩ）：
【００７３】
【化２２】
【００７４】
（ここで、Ｒ３は保護基（例えば、ベンジル、４−メトキシフェニルメチル、４−メトキシフェニル、メチルメトキシメチル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、アセチル、ベンゾイル、および９−フルオレニルメトキシカルボニルが包含される）であり；そしてＲ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基である）で表されるキラルなエポキシドのラセミ体（これは当該分野において当業者に周知の方法を用いて製造することができ、あるいは市販されている）をエポキシド加水分解活性を有する微生物または該微生物に由来する酵素を作用させて、該ラセミ体の一方の鏡像体を加水分解すること、ならびに当該加水分解後に得られた反応液を酸で処理することによって入手可能である。
【００７５】
ここで、上記微生物または上記酵素を産生する微生物の例としては、バチルス・サブチリスＪＣＭ１０６２９株、バチルス・サブチリスＩＡＭ１１８６株、クロモバクテリウム・ビオラセウムＪＣＭ１２４９株、バチルス・リケニホルミスＡＴＣＣ３９３０７株、ノカルディア・フスカＮＢＲＣ１４３４０株、ステノトロホモナス・マルトフィリアＪＣＭ１９７５株、バチルス・プミリスＮＢＲＣ１４３５８株、ミクロバクテリウム・ラクチカムＪＣＭ１３７９株、シュードモナス・クロロラフィスＪＣＭ２７７８株、ノカルディア・アステロイデスＮＢＲＣ３３８４株、ゴルドナ・テラエＪＣＭ３２０６株、バチルス・アネウリノリティカスＩＡＭ１０７７株、クレブシエラ・オキシトカＳＮＳＭ−８７（微工研菌寄第１２９５３号）株、キャンディダ・コリカロサＪＣＭ２１９９株、キャンディダ・エルノビＪＣＭ９９４８株、キャンディダ・ルゴサＪＣＭ１６１９株、ガラクトマイセス・ゲオトリカムＪＣＭ６３５９株、キャンディダ・インタメディアＮＢＲＣ０７６１株、サッカロマイセス・セレビシエＪＣＭ２２２３株、スポリジオボラス・サルモニカラＮＢＲＣ１０３５株、キャンディダ・クルセイＮＢＲＣ００１１株、ロドスポリジウム・ジオボバタムＮＢＲＣ０６８８株、ピチア・ブルトニＪＣＭ３７０８株、キャンディダ・アンタラクチカＪＣＭ３９４１株、ロドトルラ・ルブラＪＣＭ８１１７株、キャンディダ・グイリエルモンジＮＢＲＣ０５６６株、キャンディダ・ケフィアＮＢＲＣ１０２８７株、ロドトルラ・ミヌタＮＢＲＣ０８７９株、およびキャンディダ・パラプシロシスＪＣＭ１７８５株からなる群より選択される少なくとも１種の菌株が挙げられる。特に、バチルス・サブチリスＩＡＭ１１８６株、クロモバクテリウム・ビオラセウムＪＣＭ１２４９株、キャンディダ・コリカロサＪＣＭ２１９９株、キャンディダ・エルノビＪＣＭ９９４８株、キャンディダ・ルゴサＪＣＭ１６１９株、ガラクトマイセス・ゲオトリカムＪＣＭ６３５９株、およびキャンディダ・インタメディアＮＢＲＣ０７６１株からなる群より選択される少なくとも１種の菌株が好ましい。
【００７６】
上記微生物に由来する酵素とは、上記のエポキシド加水分解活性を有する微生物から得られたエポキシド加水分解活性を有する酵素をいう。例えば、上記の菌体を超音波などで破砕した後、不溶物を除去して得られる破砕上清液を、粗酵素液として用いることができる。あるいは、この粗酵素液から、さらに当業者が通常用いる精製方法、例えば、カラムクロマトグラフィーなどの手段によって精製または単離されたエポキシドハイドロラーゼ（ＥＨ）であってもよい。あるいは、エポキシド加水分解活性を発揮し得るならば、上記の天然のＥＨの改変体または誘導体であってもよい。ここで、「改変体」とは、天然のＥＨと、少なくとも７０、または少なくとも８０、あるいは少なくとも９０パーセントのアミノ酸配列相同性を有し、かつＥＨ活性を有するタンパク質をいう。例えば、天然のＥＨにおいて、１以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換を有するタンパク質が挙げられる。「誘導体」とは、天然のＥＨと他のペプチドとの融合タンパク質をいう。融合される他のペプチドは、ＥＨの基本的な折りたたみおよびコンホメーション構造を妨害しない。
【００７７】
上記微生物は、上記微生物に由来するエポキシド加水分解活性を有するならば、野生型または形質転換体のいずれであってもよい。例えば、形質転換体は、上記の酵素（例えば、ＥＨ）をコードする遺伝子が組み込まれている他の宿主微生物（例えば、大腸菌、枯草菌など）であってもよい、さらに、例えば、ＥＨの発現を促進するように、適切なプロモーター、エンハンサー、ターミネーターなどの発現調節因子が導入されている形質転換体であってもよい。
【００７８】
これらの微生物は、デンプン含有培地で培養することにより、より高いエポキシド加水分解活性を示す。ここで、デンプン含有培地とは、当業者が微生物の培養に通常用いる培地よりも、デンプンを豊富に含有する培養培地をいう。含有されるデンプンは、どのような由来のものであってもよい。デンプンの液化は、当業者に公知の方法（例えば、α−アミラーゼで処理する方法）によって行われ得る。培地中のデンプンの濃度は、特に制限はなく、４ｗ／ｖ％〜２０ｗ／ｖ％であり得、あるいは８ｗ／ｖ％〜１２ｗ／ｖ％であり得る。
【００７９】
あるいは、上記においてエポキシド加水分解活性を有する微生物は、バチルス属、クロモバクテリウム属、ノカルディア属、ステノトロホモナス属、ミクロバクテリウム属、シュードモナス属、ゴルドナ属、クレブシエラ属、キャンディダ属、ガラクトマイセス属、サッカロマイセス属、スポリジオボラス属、ロドスポリジウム属、ピチア属、またはロドドルラ属に属し、かつ上記のデンプン含有培地で培養された微生物であり得る。
【００８０】
これらの微生物は、どのような形態で使用してもよい。例えば、培地などに懸濁した菌液、乾燥菌体、固定化菌体、または固定化乾燥菌体の形態で使用され得る。これらはいずれも、当業者が通常行う手段によって調製され得る。例えば、乾燥菌体は、凍結乾燥、風乾、アセトン乾燥などによって調製され得る。乾燥菌体を調製する場合、安定性を向上させる目的で、２０ｗ／ｖ％グリセロールとともに乾燥させてもよい。固定化菌体は、アクリルアミド、カラギーナン、アルギン酸カルシウムなどを用いて調製し得る。さらに、固定化菌体は、ポリエチレンイミンとグルタルアルデヒドとの組合せまたはヘキサメチレンジアミンとグルタルアルデヒドとの組合せを用いて架橋することによって、さらに安定化させることもできる。固定化乾燥菌体は、当業者が通常用いる手段を用いて、固定化菌体を乾燥させることによって調製され得る。固定化乾燥菌体は、反復使用することが可能である。例えば、少なくとも１０回繰り返して使用しても、固定化乾燥菌体の活性の低下は認められない。
【００８１】
上記の微生物または該微生物由来の酵素によって、上記式（ＶＩＩ）で表されるエポキシドのラセミ体の一方の鏡像体のみが加水分解を受ける。そのため、加水分解によって光学活性なジオールが生じ、そして加水分解されなかった（微生物または酵素の作用を受けなかった）もう一方の鏡像体であるエポキシドが残存する。
【００８２】
この工程は、具体的には、適切な緩衝液または培地に微生物または酵素を添加し、さらに上記式（ＶＩＩ）で表されるエポキシドのラセミ体を添加して、攪拌または振盪することによって行われる。この工程における反応液中の基質（エポキシド）濃度と、菌体量または酵素量とは、適宜決定され得る。使用する微生物または酵素は、単独でもちいてもよく、あるいは数種の微生物または異なる起源の酵素を混合して用いてもよい。また、通常、反応液の至適ｐＨは約６．５〜８．０であり、そして反応温度は約３０℃〜３５℃である。反応時間は特に限定されず、通常は少なくとも５分であり、３０分間〜９６時間であってもよく、３時間〜７２時間であってもよく、６時間〜４８時間であってもよい。
【００８３】
次いで、上記の酵素反応液から目的の式（ＶＩＩ）で表される光学活性なエポキシドが回収される。上記の酵素を作用させる工程においては、上記の微生物または該微生物由来の酵素によってエポキシドのラセミ体の一方の鏡像体のみが立体選択的に加水分解される。そのため、酵素反応液中には加水分解によって生じた光学活性なジオールと加水分解されなかった光学活性なエポキシドとが存在し得るので、ここでは、目的の光学活性なエポキシドを当業者が通常用いる適切な手段によって回収する。具体的には、酵素反応液に適切な有機溶媒を加えてエポキシドおよびジオールを有機層に抽出し、抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーなどに供することによって、これらを分離して回収することができる。なお後述のように、エポキシドとジオールとの分離は必ずしも必要ではなく、混合物のまま酸で処理することによって、酵素反応で生じたジオールと同じ立体配置を有する光学活性ジオールに変換することもできる。
【００８４】
その後、加水分解されなかった光学活性なエポキシドについて、所定濃度（例えば、約０．１Ｍ）に調製された無機酸（例えば、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、過塩素酸など）を用いて処理すれば、酵素の作用によって生じたジオールと同じ立体配置をもつジオールを生成する。同様の反応は、酵素反応で得られた光学活性なエポキシドと光学活性なジオールの混合物に対しても実施することができる。この場合、当該混合物が、酵素反応で生じたジオールと同じ立体配置を有する光学活性ジオールに変換される。これを当該酸処理反応液にアルカリ性溶液を添加して中和した後、適切な有機溶媒で抽出し、例えば、ＴＥＭＰＯ（２，２，６，６，−テトラメチルピペラジニル−１−オキシ）の存在下、亜塩素酸ナトリウムおよび次亜塩素酸ナトリウムで処理することによって光学活性な式（Ｖ）の化合物を得ることができる。上記酵素反応で生じたジオールについても同様の方法を行うことによって光学活性な式（Ｖ）の化合物を得ることができる。
【００８５】
あるいは、より光学純度の高い式（Ｖ）の化合物を得るための方法としては、例えば、以下の反応スキーム（工程Ａ〜Ｅ）に基づく第二の方法（いわゆる、二重光学分割方法）が挙げられる。
【００８６】
【化２３】
【００８７】
当該第二の方法としては、まず工程Ａとして、上記式（ＶＩＩ）で表されるキラルなエポキシドのラセミ体（例えば（±）−２）を、上記第一の方法と同様にして、所定の微生物または該微生物由来の酵素と作用させ光学活性なジオール（例えば、（Ｒ）−３）が生成する。
【００８８】
次いで、上記工程Ａで光学活性なジオールが生成した結果、当該工程Ａで生成した光学活性なエポキシド（例えば、（Ｒ）−２）を希硫酸などの酸と作用させることにより、構造内に立体反転を生じさせ、光学活性なジオール（例えば、（Ｒ）−３）が生成する。
【００８９】
その後、上記工程ＡおよびＢでそれぞれ生成した光学活性なジオールは、好ましくは合わせて一緒にされ、その後、ピリジンなどの有機溶媒中でトシル化されることにより、光学活性なトシル体（例えば、（Ｒ）−８）が生成される（工程Ｃ）。このトシル体を、さらにメタノールなどの溶媒中、塩基で処理することによって、一方の鏡像体に偏った基質であるエポキシド（例えば、（Ｓ）体を過剰に含む２）が生成する。
【００９０】
最終的に、工程Ｅとして、この一方の鏡像体に偏った基質を、上記第一の方法と同様にして、所定の微生物または該微生物由来の酵素と作用させることによって、光学活性なジオール（例えば、（Ｒ）−３）が生成される。
【００９１】
このような工程Ａ〜Ｅを経て生成される光学活性なジオールでは、上記第一の方法により生成するジオールまたは上記工程Ａのみを経て生成されるジオールと比較して、光学純度を著しく高めることができる。
【００９２】
次いで、光学純度が著しく高められたジオールは、上記第一の方法と同様にして、例えば、ＴＥＭＰＯ（２，２，６，６，−テトラメチルピペラジニル−１−オキシ）の存在下、亜塩素酸ナトリウムおよび次亜塩素酸ナトリウムで処理することによって、光学純度が著しく高められた、光学活性な式（Ｖ）の化合物を得ることができる。
【００９３】
このように、上記第一の方法または第二の方法を用いて得られた式（Ｖ）の化合物を用い、かつ上述の操作を行うことで、光学活性な式（ＩＶ）の化合物を得ることができ、その結果上記操作を通じて本発明に用いられる式（ＩＩ）の化合物を光学活性体として得ることができる。
【００９４】
再び、本発明の式（Ｉ）で表されるビカルタミドまたはそのアナログの製造方法について説明すると、上記のようにして得られた式（ＩＩ）の化合物に対応して使用される、式（ＩＩＩ）の化合物は、好ましくは式（ＩＩＩ’）：
【００９５】
【化２４】
【００９６】
（ここで、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、上記に定義される基と同様である）で表される化合物である。式（ＩＩＩ）の化合物の具体的な例としては、具体的な例としては、４−フルオロベンゼンチオールが挙げられる。
【００９７】
本発明のビカルタミドまたはそのアナログの製造方法において、上記式（ＩＩ）の化合物と式（ＩＩＩ）の化合物との反応に使用される溶媒は、好ましくは有機溶媒である。使用可能な有機溶媒の例としては、テトラヒドロフラン、ジメチルアセトアミドなどが挙げられる。
【００９８】
本発明における上記式（ＩＩ）の化合物と式（ＩＩＩ）の化合物との反応は、必ずしも限定されないが、上記式（ＩＩ）の化合物の１級水酸基をトシラートなどの脱離基に変換した後、不活性な溶媒中、塩基の存在下に上記式（ＩＩＩ）の化合物を作用させて行なわれ得る。上記式（ＩＩ）の化合物の１級水酸基をトシラートなどの脱離基に変換する反応は、−１０℃〜２５℃、より好ましくは−５℃〜２５℃の範囲の温度下で行われ得る。当該反応の生成物と上記式（ＩＩＩ）の化合物との反応は、−１０℃〜２５℃、より好ましくは−５℃〜２５℃の範囲の温度下で行われ得るさらに、上記二つの反応は、必ずしも限定されないが、好ましくは３０分間〜１２時間、より好ましくは１時間〜５時間かけて行われ得る。
【００９９】
上記反応後、生成物を有機層に抽出し、洗浄および乾燥を経て粗生成物を得、必要に応じてシリカゲルカラムクロマトグラフィーなどの手段を用いて精製が行われる。なお、本発明において製造するビカルタミドまたはそのアナログについて、上記式（Ｉ）のＲ５基を−ＳＯ２−にすることが所望される場合は、上記式（ＩＩＩ）の化合物のうち、Ｒ２が硫黄原子である化合物（例えば、４−フルオロベンゼンチオール）を使用し、上記反応により得られた化合物を当該分野において周知方法を用いて酸化条件に付すことにより、目的の化合物を得ることができる。
【０１００】
このようにして、目的のビカルタミドまたはそのアナログを良好な収率で製造することができる。
【０１０１】
反応後、得られたビカルタミドまたはそのアナログは、必要に応じ、当業者に周知の方法および手段を用いて、有機層への抽出、洗浄、精製が行われてもよい。
【０１０２】
なお、本発明では、上記式（ＩＩ）の化合物としてラセミ体がそのまま使用された場合、得られた当該ビカルタミドまたはそのアナログは、ラセミ体を構成する。その後、当該分野において周知の光学分割方法を用いることにより、（Ｒ）−ビカルタミドのような光学活性な化合物のみを取り出すことができる。
【０１０３】
あるいは、本発明において上記式（ＩＩ）の化合物として光学活性体が使用された場合、その絶対配置は反応を通じて引き継がれ、同様の絶対配置を有する光学活性なビカルタミドまたはそのアナログを得ることができる。このことにより、後に得られた生成物に対して光学分割などの操作が不要となり、結果として、所望の絶対配置を有するビカルタミドまたはそのアナログを効率良く製造することができる。
【実施例】
【０１０４】
以下、本発明を実施例によって具体的に記述する。しかし、これらによって本発明は制限されるものではない。
【０１０５】
＜参考例１：３−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（１０）（ラセミ体）の合成＞
【０１０６】
【化２５】
【０１０７】
３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール（３）（０．５１０ｇ，２．６０ｍｍｏｌ；ラセミ体）をアセトニトリル（１３ｍＬ）、リン酸緩衝溶液（ｐＨ６．７，０．６７Ｍ，９．７ｍＬ）に溶解し、ＴＥＭＰＯ（２，２，６，６，−テトラメチルピペラジニル−１−オキシ（２８．４ｍｇ，０．１８２ｍｍｏｌ）を添加して、室温にて撹拌した。この混合物を、３５℃まで加熱し、亜塩素酸ナトリウム水溶液（８０％ＮａＣｌＯ５８８ｍｇを２．６ｍＬの水に溶解したもの，５．２０ｍｍｏｌを含む）、および次亜塩素酸ナトリウム水溶液（３９．２μＬ，１０％次亜塩素酸ナトリウム水溶液を１．４ｍＬに希釈したもの、２．０ｍｏｌ％）を、互いに混合することなく、それぞれ全体量の１／５を別々に添加した後、残り（すなわち、それぞれ全体量の４／５づつ）を１時間かけて同時に滴下した。２４時間撹拌した後、ＴＥＭＰＯ（２８．４ｍｇ，０．１８２ｍｍｏｌ）、上記の、亜塩素酸ナトリウム水溶液（２．６ｍＬ）、および次亜塩素酸ナトリウム水溶液（１．４ｍＬ） を同様に添加し、３５℃にて２４時間撹拌を継続した。次いで、再び同様の試薬を同量追加し、さらに３５℃にて２４時間撹拌した。温度を３５℃から室温まで低下させ、２５ｍＬの水を添加し、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨ８に調整した。氷冷した亜硫酸ナトリウム水溶液（２．１ｇ，１６．７ｍｍｏｌを４０ｍＬの水に溶解したもの）を氷浴下にて添加した後（水層を２０℃以下、ｐＨ８．５〜９．０の範囲に保持した)、室温で３０分間撹拌した。３ｍＬのＭＴＢＥ（メチルｔ−ブチルエーテル）を加え抽出し、有機層を分離した。この有機層に２Ｎ塩酸を加え、ｐＨを２まで低下させ、さらにＭＴＢＥで抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した後に減圧濃縮し、標題の３−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（１０）（０．５３１ｇ，２．５２ｍｍｏｌ；ラセミ体）を収率９７％で得た。
【０１０８】
本参考例で得られた化合物の分析結果を表１に示す。
【０１０９】
【表１】
【０１１０】
＜実施例１：Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−ベンジルオキシ−２−アセトキシ−２−メチルプロパンアミド（１１）（ラセミ体）の合成＞
【０１１１】
【化２６】
【０１１２】
参考例１で得られた３−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（１０）（３２．６ｍｇ，０．１５５ｍｍｏｌ；ラセミ体）を０．１６０ｍＬのＴＨＦで希釈し、塩化チオニル（０．１１３ｍＬ，１．５６ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。この混合物を０℃で２時間撹拌し、０．１８０ｍＬのＴＨＦに溶解した４−シアノ−３−トリフルオロメチルアニリン（３４．６ｍｇ，０．１８６ｍｍｏｌ）を滴下した。さらに２時間後、４−ジメチルアミノピリジン（５６．８ｍｇ，０．４６５ｍｍｏｌ）を添加し、４日間撹拌した。
【０１１３】
次いで、この混合物を、ダイヤフラムポンプで減圧し、系内の塩化チオニルとＴＨＦを除去した後、０．８ｍＬの無水酢酸と０．８ｍＬのピリジンとを添加し、反応系内をそのままアセチル化した。２４時間後、氷を添加し、反応を終了した。混合物を酢酸エチルによって抽出し、有機層を１Ｎ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮し、１２０．３ｍｇの粗生成物を得た。この粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１，２：１，１：２（容量比）の順；シリカゲル体積２５ｍＬ）により精製して、標題のＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−ベンジルオキシ−２−アセトキシ−２−メチルプロパンアミド（１１）（５４．１ｍｇ，０．１２９ｍｍｏｌ；ラセミ体）を収率８３％で得た。
【０１１４】
本実施例で得られた化合物の分析結果を表２に示す。
【０１１５】
【表２】
【０１１６】
＜実施例２：Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−アセトキシ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１２）（ラセミ体）の合成＞
【０１１７】
【化２７】
【０１１８】
実施例１で得られたＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−ベンジルオキシ−２−アセトキシ−２−メチルプロパンアミド（１１）（３７．５ｍｇ，０．０８９２ｍｍｏｌ；ラセミ体）に、３ｍＬのエタノールを添加し、アルゴン気下で撹拌した。この混合物に、水酸化パラジウム（１５ｍｇ，アルドリッチ社製、ウェット，デグッサタイオプ（Ｄｅｇｕｓｓａ ｔｙｐｅ））を添加し、水素で置換した後、４８時間室温で撹拌した。さらに１５ｍｇの水酸化パラジウムを添加し、２４時間撹拌後、原料が消失したことを確認し、桐山漏斗用いて、ろ紙（Ｎｏ．５Ｃ）で濾過し、濾液を濃縮した後、標題のＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−アセトキシ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１２）（１３．６ｍｇ，０．０４１１ｍｍｏｌ；ラセミ体）を収率４６％で得た。
【０１１９】
本実施例で得られた化合物の分析結果を表３に示す。
【０１２０】
【表３】
【０１２１】
＜実施例３：Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］２，３，−ジヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１３）（ラセミ体）の合成＞
【０１２２】
【化２８】
【０１２３】
溶媒としての０．２ｍＬのメタノールに、実施例２で得られたＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−アセトキシ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１２）（９．０ｍｇ，０．０２７３ｍｍｏｌ；ラセミ体）および炭酸カリウム（７ｍｇ，０．０５０６ｍｍｏｌ）を添加し、３時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液を添加した後、反応を終了し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮して、４．３ｍｇの粗生成物を得た。この粗生成物をプレパラティブＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル＝１：２（容量比））により精製して、標題のＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］２，３，−ジヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１３）（６．７ｍｇ，０．０２３２ｍｍｏｌ；ラセミ体）を収率８５％で得た。また、これと合わせて、原料である化合物（１２）（０．７ｍｇ、回収率８％）で回収した。
【０１２４】
本実施例で得られた化合物の分析結果を表４に示す。
【０１２５】
【表４】
【０１２６】
＜実施例４：Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［（４− フルオロフェニル）スルホニル］−２−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１）（ビカルタミド（１））（ラセミ体）の合成＞
【０１２７】
【化２９】
【０１２８】
１０ｍＬのヘキサンで３回洗った５５％ＮａＨ（０．２１８ｇ，４．９９ｍｍｏｌ）を６．２ｍＬのＴＨＦに懸濁し、１０分間撹拌する。次いで、４−フルオロベンゼンチオール（０．４９ｍｌ，４．５９ｍｍｏｌ）を溶媒希釈することなくそのまま滴下し、室温で９０分間撹拌する。さらに、これに６．２ｍＬのＴＨＦに溶解した実施例３で得られたＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］２，３，−ジヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１３）（４．１６ｍｍｏｌ；ラセミ体）を添加し、２４時間室温で撹拌する。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液で中和した後、酢酸エチルで抽出する。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した後に減圧濃縮し、粗生成物を得る。この粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝５：１（容量比），ゲル体積５０ｍＬ）により精製する。
【０１２９】
次いで、この精製した化合物に、３０％過酸化水素水を添加し、所定量の酢酸を氷浴下にて滴下する。この混合物を６０℃にまで昇温し、２４時間撹拌する。次いで、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で中和し、酢酸エチルによって抽出する。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した後減圧濃縮し、粗生成物を得た。この粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１（容量比））により精製して、標題のＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［（４− フルオロフェニル）スルホニル］−２−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１）（ラセミ体）を得る。
【０１３０】
得られた化合物（１）について、１Ｈ−ＮＭＲによりビカルタミド（１）であることを確認する。
【０１３１】
＜実施例５−Ａ：光学純度が高められた（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール（（Ｒ）−３）を得るための準備工程（工程Ａ）＞
【０１３２】
【化３０】
【０１３３】
５ｍＬのＬＢ培地にバチルス・サブチリスＪＣＭ１０６２９株を摂取し、３０℃で終夜前培養を行った。前培養液（１ｍＬ）を、デンプン培地に添加し、３０℃にて１６０ｒｐｍで９２時間培養した。培養菌体を遠心分離（３０００ｒｐｍ，２０分間）によって濃縮し、半量の標準緩衝液（５０ｍＭ，ｐＨ８，トリス緩衝液）に再懸濁し、二倍の濃縮菌体を調製した。反応容器に、２倍濃縮菌体２ｍＬ、終濃度約２０％（ｖ／ｖ）になるように調製したグリセロール（８ｍＬ）、および２− ベンジルオキシメチル−２−メチルオキシラン（２）（１．５ｇ，８．４２ｍｍｏｌ；ラセミ体）を添加し、室温で７日間反応させた。食塩で飽和した後、酢酸エチルを添加して充分撹拌し、桐山漏斗を用いてセライト濾過を行った。濾液を酢酸エチルによって抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮して、１．８９ｇの粗生成物を得た。この粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１（容量比），ゲル体積２００ｍＬ）により精製して、化合物（（Ｒ）−３）（（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール）（０．８３ｇ，４．２３ｍｍｏｌ）を収率５０％で得、かつ化合物（（Ｒ）−２）（（Ｒ）−２−ベンジルオキシメチル−２−メチルオキシラン）（０．５２ｇ，２．９４ｍｍｏｌ）を収率３５％で得た。
【０１３４】
本実施例で得られた化合物（（Ｒ）−３および（Ｒ）−２））の分析結果を表５に示す。
【０１３５】
【表５】
【０１３６】
＜実施例５−Ｂ：光学純度が高められた（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール（（Ｒ）−３）を得るための準備工程（工程Ｂ）＞
【０１３７】
【化３１】
【０１３８】
実施例５−Ａで得られた（Ｒ）−２−ベンジルオキシメチル−２−メチルオキシラン（（Ｒ９−２）（０．２６ｇ，１．４６ｍｍｏｌ）に４４ｍＬの水を添加し、氷浴で撹拌しながら濃硫酸（３．４ｍＬ）を添加した。１０分間氷上で撹拌した後、室温にて３０分間撹拌した。冷却した飽和炭酸ナトリウム水溶液（２６ｍＬ）を添加した後、水を加え、酢酸エチルによって抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮して、０．２６ｇの粗生成物を得た。この粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１、２：１、１：１の順（容量比），ゲル体積２３ｍＬ）により精製して、化合物（（Ｒ）−３）（（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール）（０．２４ｇ，１．２２ｍｍｏｌ）を収率８３％で得た。
【０１３９】
＜実施例５−Ｃ：光学純度が高められた（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール（（Ｒ）−３）を得るための準備工程（工程Ｃ）＞
【０１４０】
【化３２】
【０１４１】
実施例５−Ａで得られた１，２−ジオール（（Ｒ）−３）（０．４２ｇ，２．１２ｍｍｏｌ）と、実施例５−Ｂで得られた１，２−ジオール（（Ｒ）−３）（０．２４ｇ，１．２２ｍｍｏｌ）とを合わせた基質（０．６５ｇ，３．３１ｍｍｏｌ，９０．７％ｅｅ（Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ−Ｈ，ヘキサン／イソプロピルアルコール＝１５／１（容量比）））に、１４ｍＬの脱水ピリジン、モレキュラーシーブス４Ａ（１ｇ）を添加し、２時間撹拌した。次いで、この混合物に、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（２．８５ｇ，１４．９ｍｍｏｌ）を氷浴下にて添加し、室温で２４時間反応した。その後、氷浴下にて水を添加し、酢酸エチルによって抽出した。有機層を１Ｎ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。それを減圧濃縮して、１．２０ｇの粗生成物を得た。この粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１、１：１の順（容量比），ゲル体積５０ｍＬ）により精製して、化合物（（Ｒ）−８）（（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル−ｐ−トルエンスルホナート）（１．１５ｇ，３．２７ｍｍｏｌ）を収率９８％で得た。
【０１４２】
本実施例で得られた化合物の分析結果を表６に示す。
【０１４３】
【表６】
【０１４４】
＜実施例５−Ｄ：光学純度が高められた（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール（（Ｒ）−３）を得るための準備工程（工程Ｄ）＞
【０１４５】
【化３３】
【０１４６】
実施例５−Ｃで得られた化合物（（Ｒ）−８）（（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル−ｐ−トルエンスルホナート（０．１０７ｇ，０．３０５ｍｍｏｌ）を、４ｍＬのメタノールに溶解し、炭酸カリウム（０．３６ｇ，２．５６ｍｍｏｌ）を添加し、室温で４８時間撹拌した。次いで、ｐＨ７のリン酸緩衝液を入れ、冷却したヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した後減圧濃縮し、０．０７９０ｇの粗生成物を得た。この粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー （ヘキサン：酢酸エチル＝３：１、２：１、１：１の順（容量比），ゲル体積６ｍＬ）により精製して、Ｓ体過剰の化合物（（Ｓ）−２）（（Ｓ）−２−ベンジルオキシメチル−２−メチルオキシラン）（４７．３ｍｇ，０．２６５ｍｍｏｌ）を収率８７％で得た。
【０１４７】
＜実施例５−Ｅ：光学純度が高められた（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール（（Ｒ）−３）の合成（工程Ｅ）＞
【０１４８】
【化３４】
【０１４９】
５ｍＬのＬＢ培地にバチルス・サブチリスＪＣＭ１０６２９株を摂取し、３０℃で終夜前培養を行った。前培養液（１ｍＬ）を、デンプン培地に添加し、３０℃にて１６０ｒｐｍで９２時間培養した。培養菌体を遠心分離（３０００ｒｐｍ，２０分間）によって濃縮し、半量の標準緩衝液（５０ｍＭ，ｐＨ８，トリス緩衝液）に再懸濁し、二倍の濃縮菌体を調製した。反応容器に、２倍濃縮菌体０．０６３ｍＬ、終濃度約２０％（ｖ／ｖ）になるように調製したグリセロール（０．３２ｍＬ）、および実施例５−Ｄで得られた化合物（（Ｓ）−２）（（Ｓ）−２−ベンジルオキシメチル−２−メチルオキシラン）（４７．３ｍｇ，０．２６５ｍｍｏｌ）を添加し、室温で７日間反応させた。食塩で飽和した後、酢酸エチルを入れて充分撹拌し、桐山漏斗を用いてセライト濾過を行った。濾液を酢酸エチルによって抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した後に減圧濃縮し、０．０３１９ｇの粗生成物を得た。この粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（(ヘキサン：酢酸エチル＝２：１（容量比），ゲル体積３ｍＬ)により精製して標題の化合物（（Ｒ）−３）（（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール）（２７．６ｍｇ，０．１４３ｍｍｏｌ）を収率５３％で得た。
【０１５０】
本実施例で得られた化合物の分析結果を表７に示す。
【０１５１】
【表７】
【０１５２】
＜参考例２：光学活性な３−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（（Ｒ）−１０）の合成＞
参考例１で使用したラセミ体の３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール（３）の代わりに、同量の実施例５−Ｅで得られた（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール（（Ｒ）−３）を用いたこと以外は、参考例１と同様にして、（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（（Ｒ）−１０）を得る。
【０１５３】
＜実施例６：光学活性なＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−ベンジルオキシ−２−アセトキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１１）の合成＞
参考例１で得られたラセミ体の３−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（１０）の代わりに、同量の参考例２で得られた（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（（Ｒ）−１０）を用い、かつ得られた粗生成物を適切なＨＰＬＣ条件にて精製することにより、（Ｒ）−Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−ベンジルオキシ−２−アセトキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１１）を得る。
【０１５４】
＜実施例７：光学活性なＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−アセトキシ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１２）の合成＞
実施例１で得られたラセミ体のＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−ベンジルオキシ−２−アセトキシ−２−メチルプロパンアミド（１１）の代わりに、同量の実施例６で得られた（Ｒ）−Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−ベンジルオキシ−２−アセトキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１１）を用いたこと以外は、実施例２と同様にして、（Ｒ）−Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−アセトキシ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１２）を得る。
【０１５５】
＜実施例８：光学活性なＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］２，３，−ジヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１３）の合成＞
実施例２で得られたラセミ体のＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−アセトキシ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１２）の代わりに、同量の実施例７で得られた（Ｒ）−Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−アセトキシ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１２）を用い、かつ得られた粗生成物を適切な条件下クロマトグラフィーにて精製することにより、（Ｒ）−Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］２，３，−ジヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１３）を得る。
【０１５６】
＜実施例９：光学活性なＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［（４− フルオロフェニル）スルホニル］−２−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１）（（Ｒ）−ビカルタミド（（Ｒ）−１））の合成＞
実施例３で得られたラセミ体のＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］２，３，−ジヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１３）の代わりに、同量の実施例８で得られたＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］２，３，−ジヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１３）を用い、かつ得られた粗生成物を適切な条件下クロマトグラフィーにて精製することにより、（Ｒ）−Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［（４− フルオロフェニル）スルホニル］−２−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１）（（Ｒ）−ビカルタミド（（Ｒ）−１））を得る。
【０１５７】
上記のように、本発明の方法を用いて、前立腺肥大治療薬（抗男性ホルモン剤）として有用な（Ｒ）−ビカルタミドを、特に光学分割等の手法を用いることなく、直接合成し得たことを確認する。
【産業上の利用可能性】
【０１５８】
本発明を用いて得られたビカルタミドまたはそのアナログは、例えば、前立腺肥大治療薬（抗男性ホルモン剤）またはその他の医薬品中間体として有用である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビカルタミドおよびそのアナログの製造方法に関し、より詳細には、ビカルタミドおよびそのアナログを簡易かつ優れた収率で製造し得る方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アンドロゲン遮断は、前立腺癌患者のための一般的な治療方法である。種々の非ステロイド抗アンドロゲン剤が前立腺癌を治療する際に使用することが知られている。ビカルタミド（Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−（４−フルオロフェニルスルホニル）−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロパンアミド］は、例えば、非ステロイド抗アンドロゲン剤の１つであり、前立腺肥大治療薬（抗男性ホルモン剤）として世界的に典型的に使用されている。
【０００３】
ビカルタミドは、以下のような構造：
【０００４】
【化１】
【０００５】
を有する。上記構造におけるプロパンアミドのα−炭素はキラル炭素であるため、ビカルタミドはキラルな物質である。
【０００６】
上記前立腺肥大治療薬としての使用においては、例えば、ビカルタミドはＲ体がＳ体の約６０倍もの活性を示すことが報告されており（非特許文献１）、当該分野においてはＲ体のビカルタミドを効率良く製造するための研究開発が多く行われてきた。
【０００７】
例えば、非特許文献１〜５は、上記ビカルタミドおよびそのアナログをそれぞれ効率良く、あるいは新規な合成ルートを通じて製造するための方法を開示している。しかし、これらの文献に記載の方法はいずれも、上記ビカルタミドを得るためには、比較的多くの反応工程を要する、充分な収率で製造することが困難である、などの工業的観点からの問題が指摘されている。また、これらの文献のうち、非特許文献１および３で製造され得るビカルタミドはラセミ体となるため、当該ビカルタミドを得た後に当該分野において公知の手段を用いて光学分割することが事実上必須となり、この工程を通じて所望の（Ｒ）−ビカルタミドのみを取り出さざるを得ない。
【０００８】
一方、特許文献１は、（Ｒ）−ビカルタミドのみを選択的に合成する手法として（Ｒ）−プロリンを出発物質に使用することを開示している。しかし、（Ｒ）−プロリンは一般に入手し難く、高価な物質である。このため、（Ｒ）−ビカルタミドの工業的製造においては生産性（価格効率）の観点から、当該技術は必ずしも適切なものともいえない。
【０００９】
さらに、特許文献２は、上記（Ｒ）−プロリンの使用に代えて、例えば、４−フルオロベンゼンチオールに所定のブロモラクトンを反応させることなどの工程を通じて、所望の（Ｒ）−ビカルタミドを製造する方法が開示されている。しかし、当該方法によっても、目的のビカルタミドを工業的観点から効率よく製造し得るものであるということができない。
【００１０】
【特許文献１】米国特許第６，０１９，９５７号明細書
【特許文献２】特表２００３−５１２３５１号公報
【非特許文献１】タッカー，エイチ．（Ｔｕｃｋｅｒ，Ｈ.）ら、「ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），１９８８年，３１巻、ｐ．８８５−８８７
【非特許文献２】タッカー，エイチ．（Ｔｕｃｋｅｒ，Ｈ.）ら、「ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），１９８８年，３１巻、ｐ．９５４−９５９
【非特許文献３】ジェイムス，ケイ．（Ｊａｍｅｓ，Ｋ.）ら、「シンセシス（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ），２００２年，第７号、ｐ．８５０−８５２
【非特許文献４】ネア，ヴィ．（Ｎａｉｒ，Ｖ.）ら、「テトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ），２００４年，第４５号、ｐ．９４７５−９４７７
【非特許文献５】マーエフカ，シー．（Ｍａｒｈｅｆｋａ，Ｃ.）ら、「ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），２００４年，４７巻、ｐ．９９３−９９８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、上記問題の解決を課題とするものであり、その目的とするところは、前立腺肥大治療薬（抗男性ホルモン剤）またはその他の医薬品中間体として有用な、ビカルタミドまたはそのアナログをラセミ体または光学活性体の形態で効率良く製造し得る方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、以下の式（Ｉ）：
【００１３】
【化２】
【００１４】
で表されるビカルタミドまたはそのアナログの製造方法であって、
以下の式（ＩＩ）：
【００１５】
【化３】
【００１６】
で表される化合物を、溶媒中、以下の式（ＩＩＩ）：
【００１７】
【化４】
【００１８】
で表される化合物と反応させる工程；
を包含し、
Ｒ１は、ハロゲン原子、水素原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４のアルキル基、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４のアルコキシ基、ニトロ基、シアノ基、−Ｓ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、−ＣＯ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、
【００１９】
【化５】
【００２０】
（ここで、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ独立して、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、または−ＮＣＳであり；
Ｒ２は、硫黄原子、酸素原子、または−ＮＨ−であり；
Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；
Ｒ５は、硫黄原子、酸素原子、−ＮＨ−、または−ＳＯ２−であり；そして
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である、方法である。
【００２１】
本発明はまた、以下の式（ＩＩ）：
【００２２】
【化６】
【００２３】
で表される化合物の製造方法であって、
以下の式（ＩＶ）：
【００２４】
【化７】
【００２５】
で表される化合物を脱保護する工程；および
該脱保護して得られた生成物をさらに脱アセチル化する工程；
を包含し、
ここで、
Ｒ３は保護基であり、
Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；そして
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である、方法である。
【００２６】
本発明はまた、以下の式（ＩＶ）：
【００２７】
【化８】
【００２８】
で表される化合物の製造方法であって、
以下の式（Ｖ）：
【００２９】
【化９】
【００３０】
で表される化合物を、縮合剤および溶媒の存在下、以下の式（ＶＩ）：
【００３１】
【化１０】
【００３２】
で表される化合物と反応させ、かつアセチル化する工程；
を包含し、
ここで、
Ｒ３は保護基であり；
Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；そして
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である、方法である。
【００３３】
本発明はまた、光学活性な、以下の式（ＩＸ）：
【００３４】
【化１１】
【００３５】
で表されるジオールの製造方法であって、
以下の式（ＶＩＩ）：
【００３６】
【化１２】
【００３７】
で表されるエポキシドのラセミ体に、エポキシド加水分解活性を有する微生物または該微生物に由来する酵素を作用させて、該ラセミ体の一方の鏡像体を加水分解することにより、第一のジオールを生成する工程；
該加水分解の工程によって残存した他方の鏡像体を酸で処理することにより、該第一のジオールと同様のジオールを生成する工程；
該第一のジオールと該酸処理工程で生成したジオールとを合わせ、溶媒中でトシル化することにより、トシル体を生成する工程；
該トシル体に塩基を作用させることにより鏡像体が偏って存在するエポキシドを生成する工程；および
該鏡像体が偏って存在するエポキシドを、該エポキシド加水分解活性を有する微生物または該微生物に由来する酵素を作用させる工程；
を包含し、
ここで、
Ｒ３は保護基であり；
Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；
＊は不斉中心であり；そして
該微生物が、バチルス・サブチリスＪＣＭ１０６２９株、バチルス・サブチリスＩＡＭ１１８６株、クロモバクテリウム・ビオラセウムＪＣＭ１２４９株、バチルス・リケニホルミスＡＴＣＣ３９３０７株、ノカルディア・フスカＮＢＲＣ１４３４０株、ステノトロホモナス・マルトフィリアＪＣＭ１９７５株、バチルス・プミリスＮＢＲＣ１４３５８株、ミクロバクテリウム・ラクチカムＪＣＭ１３７９株、シュードモナス・クロロラフィスＪＣＭ２７７８株、ノカルディア・アステロイデスＮＢＲＣ３３８４株、ゴルドナ・テラエＪＣＭ３２０６株、バチルス・アネウリノリティカスＩＡＭ１０７７株、クレブシエラ・オキシトカＳＮＳＭ−８７（微工研菌寄第１２９５３号）株、キャンディダ・コリカロサＪＣＭ２１９９株、キャンディダ・エルノビＪＣＭ９９４８株、キャンディダ・ルゴサＪＣＭ１６１９株、ガラクトマイセス・ゲオトリカムＪＣＭ６３５９株、キャンディダ・インタメディアＮＢＲＣ０７６１株、サッカロマイセス・セレビシエＪＣＭ２２２３株、スポリジオボラス・サルモニカラＮＢＲＣ１０３５株、キャンディダ・クルセイＮＢＲＣ００１１株、ロドスポリジウム・ジオボバタムＮＢＲＣ０６８８株、ピチア・ブルトニＪＣＭ３７０８株、キャンディダ・アンタラクチカＪＣＭ３９４１株、ロドトルラ・ルブラＪＣＭ８１１７株、キャンディダ・グイリエルモンジＮＢＲＣ０５６６株、キャンディダ・ケフィアＮＢＲＣ１０２８７株、ロドトルラ・ミヌタＮＢＲＣ０８７９株、およびキャンディダ・パラプシロシスＪＣＭ１７８５株からなる群より選択される少なくとも１種の菌株が挙げられる。特に、バチルス・サブチリスＩＡＭ１１８６株、クロモバクテリウム・ビオラセウムＪＣＭ１２４９株、キャンディダ・コリカロサＪＣＭ２１９９株、キャンディダ・エルノビＪＣＭ９９４８株、キャンディダ・ルゴサＪＣＭ１６１９株、ガラクトマイセス・ゲオトリカムＪＣＭ６３５９株、およびキャンディダ・インタメディアＮＢＲＣ０７６１株からなる群より選択される少なくとも１種の菌株である、方法である。
【００３８】
１つの実施態様では、上記微生物は、バチルス・サブチリスＪＣＭ１０６２９株、バチルス・サブチリスＩＡＭ１１８６株、クロモバクテリウム・ビオラセウムＪＣＭ１２４９株、キャンディダ・コリカロサＪＣＭ２１９９株、キャンディダ・エルノビＪＣＭ９９４８株、キャンディダ・ルゴサＪＣＭ１６１９株、ガラクトマイセス・ゲオトリカムＪＣＭ６３５９株、およびキャンディダ・インタメディアＮＢＲＣ０７６１株からなる群より選択される少なくとも１種の菌株である。
【００３９】
１つの実施態様では、上記微生物はデンプン含有培地で培養された微生物である。
【発明の効果】
【００４０】
本発明によれば、目的に応じ、ラセミ体または光学活性体としてのビカルタミドまたはそのアナログを効率良く製造することができる。特に、本発明の方法によれば、製造工程で副生成物が生じる可能性を低減することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４１】
以下、本発明について詳述する。
【００４２】
本発明の方法を用いて製造され得る化合物は以下の式（Ｉ）：
【００４３】
【化１３】
【００４４】
（ここで、Ｒ１は、ハロゲン原子、水素原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４のアルキル基、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４のアルコキシ基、ニトロ基、シアノ基、−Ｓ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、−ＣＯ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、
【００４５】
【化１４】
【００４６】
（ここで、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ独立して、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、または−ＮＣＳであり；
Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；
Ｒ５は、硫黄原子、酸素原子、−ＮＨ−、または−ＳＯ２−であり；そして
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である）で表されるビカルタミドまたはそのアナログである。
【００４７】
上記式（Ｉ）で表される化合物は、以下の式（ＩＩ）：
【００４８】
【化１５】
【００４９】
（ここで、 Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；そしてＲ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である）で表されるビカルタミドまたはそのアナログである）で表される化合物を、溶媒中、以下の式（ＩＩＩ）：
【００５０】
【化１６】
【００５１】
（ここで、Ｒ１は、ハロゲン原子、水素原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４のアルキル基、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４のアルコキシ基、ニトロ基、シアノ基、−Ｓ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、−ＣＯ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、
【００５２】
【化１７】
【００５３】
（ここで、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ独立して、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、または−ＮＣＳであり；そしてＲ２は、硫黄原子、酸素原子、または−ＮＨ−である）で表される化合物と反応させることにより製造され得る。
【００５４】
本発明に用いられる式（ＩＩ）の化合物は、光学活性な化合物またはラセミ体の化合物のいずれを用いることもできる。本発明の方法により製造される式（Ｉ）のビカルタミドまたはその誘導体を、光学活性体（すなわち、Ｒ体またはＳ体のいずれか）の形態で得ることを所望する場合は、式（ＩＩ）の化合物は光学活性体（すなわち、Ｒ体またはＳ体のいずれか）であることが好ましい。
【００５５】
本発明に用いられる式（ＩＩ）の化合物は、例えば、以下の方法を用いて製造することができる。以下、本発明の用いられる式（ＩＩ）の化合物を製造するための方法の一例について説明する。
【００５６】
本発明に用いられる式（ＩＩ）の化合物は、後述するような方法を用いて製造された式（ＩＶ）：
【００５７】
【化１８】
【００５８】
（ここで、Ｒ３は保護基（例えば、ベンジル、４−メトキシフェニルメチル、メトキシメチル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、アセチル、ベンゾイル、および９−フルオレニルメトキシカルボニルが包含される）であり、Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；そしてＲ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である）で表される化合物を脱保護し、かつその後、当該脱保護して得られた生成物をさらに脱アセチル化することによって製造され得る。
【００５９】
上記脱保護および脱アセチル化に要する反応条件等は当該分野において周知であり、当業者によって任意に設定することができる。
【００６０】
上記式（ＩＶ）の化合物はまた、例えば、以下の式（Ｖ）：
【００６１】
【化１９】
【００６２】
（ここで、Ｒ３は保護基であり、そしてＲ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基である）で表される化合物を、縮合剤および溶媒の存在下、以下の式（ＶＩ）：
【００６３】
【化２０】
【００６４】
（ここで、Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である）で表される化合物と反応させ、かつアセチル化することによって製造され得る。
【００６５】
上記に使用される縮合剤は、縮合反応一般に用いられる縮合剤であれば特に限定されないが、例えば、塩化チオニル、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド ヒドロクロリド）（ＥＤＣｌ）およびそれらの組合せが挙げられる。反応性に優れ、式（ＩＶ）の化合物をさらに効率良く製造することができる点から塩化チオニルを用いることが好ましい。当該縮合剤の量は、当業者によって適宜設定され得る。
【００６６】
上記縮合剤とともに使用される溶媒には、有機溶媒として任意の溶媒（例えば、テトラヒドロフラン、ジメチルアセトアミドなど）が使用され得る。しかし、式（ＩＶ）の化合物をさらに効率よく製造することを考慮すれば、テトラヒドロフランを使用することが好ましい。
【００６７】
また、上記式（ＶＩ）で表される化合物は、好ましくは以下の式（ＶＩ’）：
【００６８】
【化２１】
【００６９】
（ここで、Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して上記に定義した基と同様である）で表される化合物であり、具体的な例としては、４−シアノ−３−トリフルオロメチル−アニリンが挙げられる。
【００７０】
式（ＶＩ）の化合物の使用量は、特に限定されないが、例えば、式（Ｖ）の化合物と当モルまたはそれ以上の量が使用され得る。
【００７１】
これらに対し、式（Ｖ）の化合物は、将来的に製造が所望されるビカルタミドまたはそのアナログが光学活性体であるかあるいはラセミ体であるかに応じて、任意の絶対配置を有する化合物（光学活性体またはラセミ体）が選択される。以下、光学活性な式（Ｖ）の化合物を得るための方法について、例として２つの方法を示し、説明する。
【００７２】
第一の方法として、当該光学活性な式（Ｖ）の化合物を得るにあたっては、まず、例えば、以下の式（ＶＩＩ）：
【００７３】
【化２２】
【００７４】
（ここで、Ｒ３は保護基（例えば、ベンジル、４−メトキシフェニルメチル、４−メトキシフェニル、メチルメトキシメチル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、アセチル、ベンゾイル、および９−フルオレニルメトキシカルボニルが包含される）であり；そしてＲ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基である）で表されるキラルなエポキシドのラセミ体（これは当該分野において当業者に周知の方法を用いて製造することができ、あるいは市販されている）をエポキシド加水分解活性を有する微生物または該微生物に由来する酵素を作用させて、該ラセミ体の一方の鏡像体を加水分解すること、ならびに当該加水分解後に得られた反応液を酸で処理することによって入手可能である。
【００７５】
ここで、上記微生物または上記酵素を産生する微生物の例としては、バチルス・サブチリスＪＣＭ１０６２９株、バチルス・サブチリスＩＡＭ１１８６株、クロモバクテリウム・ビオラセウムＪＣＭ１２４９株、バチルス・リケニホルミスＡＴＣＣ３９３０７株、ノカルディア・フスカＮＢＲＣ１４３４０株、ステノトロホモナス・マルトフィリアＪＣＭ１９７５株、バチルス・プミリスＮＢＲＣ１４３５８株、ミクロバクテリウム・ラクチカムＪＣＭ１３７９株、シュードモナス・クロロラフィスＪＣＭ２７７８株、ノカルディア・アステロイデスＮＢＲＣ３３８４株、ゴルドナ・テラエＪＣＭ３２０６株、バチルス・アネウリノリティカスＩＡＭ１０７７株、クレブシエラ・オキシトカＳＮＳＭ−８７（微工研菌寄第１２９５３号）株、キャンディダ・コリカロサＪＣＭ２１９９株、キャンディダ・エルノビＪＣＭ９９４８株、キャンディダ・ルゴサＪＣＭ１６１９株、ガラクトマイセス・ゲオトリカムＪＣＭ６３５９株、キャンディダ・インタメディアＮＢＲＣ０７６１株、サッカロマイセス・セレビシエＪＣＭ２２２３株、スポリジオボラス・サルモニカラＮＢＲＣ１０３５株、キャンディダ・クルセイＮＢＲＣ００１１株、ロドスポリジウム・ジオボバタムＮＢＲＣ０６８８株、ピチア・ブルトニＪＣＭ３７０８株、キャンディダ・アンタラクチカＪＣＭ３９４１株、ロドトルラ・ルブラＪＣＭ８１１７株、キャンディダ・グイリエルモンジＮＢＲＣ０５６６株、キャンディダ・ケフィアＮＢＲＣ１０２８７株、ロドトルラ・ミヌタＮＢＲＣ０８７９株、およびキャンディダ・パラプシロシスＪＣＭ１７８５株からなる群より選択される少なくとも１種の菌株が挙げられる。特に、バチルス・サブチリスＩＡＭ１１８６株、クロモバクテリウム・ビオラセウムＪＣＭ１２４９株、キャンディダ・コリカロサＪＣＭ２１９９株、キャンディダ・エルノビＪＣＭ９９４８株、キャンディダ・ルゴサＪＣＭ１６１９株、ガラクトマイセス・ゲオトリカムＪＣＭ６３５９株、およびキャンディダ・インタメディアＮＢＲＣ０７６１株からなる群より選択される少なくとも１種の菌株が好ましい。
【００７６】
上記微生物に由来する酵素とは、上記のエポキシド加水分解活性を有する微生物から得られたエポキシド加水分解活性を有する酵素をいう。例えば、上記の菌体を超音波などで破砕した後、不溶物を除去して得られる破砕上清液を、粗酵素液として用いることができる。あるいは、この粗酵素液から、さらに当業者が通常用いる精製方法、例えば、カラムクロマトグラフィーなどの手段によって精製または単離されたエポキシドハイドロラーゼ（ＥＨ）であってもよい。あるいは、エポキシド加水分解活性を発揮し得るならば、上記の天然のＥＨの改変体または誘導体であってもよい。ここで、「改変体」とは、天然のＥＨと、少なくとも７０、または少なくとも８０、あるいは少なくとも９０パーセントのアミノ酸配列相同性を有し、かつＥＨ活性を有するタンパク質をいう。例えば、天然のＥＨにおいて、１以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換を有するタンパク質が挙げられる。「誘導体」とは、天然のＥＨと他のペプチドとの融合タンパク質をいう。融合される他のペプチドは、ＥＨの基本的な折りたたみおよびコンホメーション構造を妨害しない。
【００７７】
上記微生物は、上記微生物に由来するエポキシド加水分解活性を有するならば、野生型または形質転換体のいずれであってもよい。例えば、形質転換体は、上記の酵素（例えば、ＥＨ）をコードする遺伝子が組み込まれている他の宿主微生物（例えば、大腸菌、枯草菌など）であってもよい、さらに、例えば、ＥＨの発現を促進するように、適切なプロモーター、エンハンサー、ターミネーターなどの発現調節因子が導入されている形質転換体であってもよい。
【００７８】
これらの微生物は、デンプン含有培地で培養することにより、より高いエポキシド加水分解活性を示す。ここで、デンプン含有培地とは、当業者が微生物の培養に通常用いる培地よりも、デンプンを豊富に含有する培養培地をいう。含有されるデンプンは、どのような由来のものであってもよい。デンプンの液化は、当業者に公知の方法（例えば、α−アミラーゼで処理する方法）によって行われ得る。培地中のデンプンの濃度は、特に制限はなく、４ｗ／ｖ％〜２０ｗ／ｖ％であり得、あるいは８ｗ／ｖ％〜１２ｗ／ｖ％であり得る。
【００７９】
あるいは、上記においてエポキシド加水分解活性を有する微生物は、バチルス属、クロモバクテリウム属、ノカルディア属、ステノトロホモナス属、ミクロバクテリウム属、シュードモナス属、ゴルドナ属、クレブシエラ属、キャンディダ属、ガラクトマイセス属、サッカロマイセス属、スポリジオボラス属、ロドスポリジウム属、ピチア属、またはロドドルラ属に属し、かつ上記のデンプン含有培地で培養された微生物であり得る。
【００８０】
これらの微生物は、どのような形態で使用してもよい。例えば、培地などに懸濁した菌液、乾燥菌体、固定化菌体、または固定化乾燥菌体の形態で使用され得る。これらはいずれも、当業者が通常行う手段によって調製され得る。例えば、乾燥菌体は、凍結乾燥、風乾、アセトン乾燥などによって調製され得る。乾燥菌体を調製する場合、安定性を向上させる目的で、２０ｗ／ｖ％グリセロールとともに乾燥させてもよい。固定化菌体は、アクリルアミド、カラギーナン、アルギン酸カルシウムなどを用いて調製し得る。さらに、固定化菌体は、ポリエチレンイミンとグルタルアルデヒドとの組合せまたはヘキサメチレンジアミンとグルタルアルデヒドとの組合せを用いて架橋することによって、さらに安定化させることもできる。固定化乾燥菌体は、当業者が通常用いる手段を用いて、固定化菌体を乾燥させることによって調製され得る。固定化乾燥菌体は、反復使用することが可能である。例えば、少なくとも１０回繰り返して使用しても、固定化乾燥菌体の活性の低下は認められない。
【００８１】
上記の微生物または該微生物由来の酵素によって、上記式（ＶＩＩ）で表されるエポキシドのラセミ体の一方の鏡像体のみが加水分解を受ける。そのため、加水分解によって光学活性なジオールが生じ、そして加水分解されなかった（微生物または酵素の作用を受けなかった）もう一方の鏡像体であるエポキシドが残存する。
【００８２】
この工程は、具体的には、適切な緩衝液または培地に微生物または酵素を添加し、さらに上記式（ＶＩＩ）で表されるエポキシドのラセミ体を添加して、攪拌または振盪することによって行われる。この工程における反応液中の基質（エポキシド）濃度と、菌体量または酵素量とは、適宜決定され得る。使用する微生物または酵素は、単独でもちいてもよく、あるいは数種の微生物または異なる起源の酵素を混合して用いてもよい。また、通常、反応液の至適ｐＨは約６．５〜８．０であり、そして反応温度は約３０℃〜３５℃である。反応時間は特に限定されず、通常は少なくとも５分であり、３０分間〜９６時間であってもよく、３時間〜７２時間であってもよく、６時間〜４８時間であってもよい。
【００８３】
次いで、上記の酵素反応液から目的の式（ＶＩＩ）で表される光学活性なエポキシドが回収される。上記の酵素を作用させる工程においては、上記の微生物または該微生物由来の酵素によってエポキシドのラセミ体の一方の鏡像体のみが立体選択的に加水分解される。そのため、酵素反応液中には加水分解によって生じた光学活性なジオールと加水分解されなかった光学活性なエポキシドとが存在し得るので、ここでは、目的の光学活性なエポキシドを当業者が通常用いる適切な手段によって回収する。具体的には、酵素反応液に適切な有機溶媒を加えてエポキシドおよびジオールを有機層に抽出し、抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーなどに供することによって、これらを分離して回収することができる。なお後述のように、エポキシドとジオールとの分離は必ずしも必要ではなく、混合物のまま酸で処理することによって、酵素反応で生じたジオールと同じ立体配置を有する光学活性ジオールに変換することもできる。
【００８４】
その後、加水分解されなかった光学活性なエポキシドについて、所定濃度（例えば、約０．１Ｍ）に調製された無機酸（例えば、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、過塩素酸など）を用いて処理すれば、酵素の作用によって生じたジオールと同じ立体配置をもつジオールを生成する。同様の反応は、酵素反応で得られた光学活性なエポキシドと光学活性なジオールの混合物に対しても実施することができる。この場合、当該混合物が、酵素反応で生じたジオールと同じ立体配置を有する光学活性ジオールに変換される。これを当該酸処理反応液にアルカリ性溶液を添加して中和した後、適切な有機溶媒で抽出し、例えば、ＴＥＭＰＯ（２，２，６，６，−テトラメチルピペラジニル−１−オキシ）の存在下、亜塩素酸ナトリウムおよび次亜塩素酸ナトリウムで処理することによって光学活性な式（Ｖ）の化合物を得ることができる。上記酵素反応で生じたジオールについても同様の方法を行うことによって光学活性な式（Ｖ）の化合物を得ることができる。
【００８５】
あるいは、より光学純度の高い式（Ｖ）の化合物を得るための方法としては、例えば、以下の反応スキーム（工程Ａ〜Ｅ）に基づく第二の方法（いわゆる、二重光学分割方法）が挙げられる。
【００８６】
【化２３】
【００８７】
当該第二の方法としては、まず工程Ａとして、上記式（ＶＩＩ）で表されるキラルなエポキシドのラセミ体（例えば（±）−２）を、上記第一の方法と同様にして、所定の微生物または該微生物由来の酵素と作用させ光学活性なジオール（例えば、（Ｒ）−３）が生成する。
【００８８】
次いで、上記工程Ａで光学活性なジオールが生成した結果、当該工程Ａで生成した光学活性なエポキシド（例えば、（Ｒ）−２）を希硫酸などの酸と作用させることにより、構造内に立体反転を生じさせ、光学活性なジオール（例えば、（Ｒ）−３）が生成する。
【００８９】
その後、上記工程ＡおよびＢでそれぞれ生成した光学活性なジオールは、好ましくは合わせて一緒にされ、その後、ピリジンなどの有機溶媒中でトシル化されることにより、光学活性なトシル体（例えば、（Ｒ）−８）が生成される（工程Ｃ）。このトシル体を、さらにメタノールなどの溶媒中、塩基で処理することによって、一方の鏡像体に偏った基質であるエポキシド（例えば、（Ｓ）体を過剰に含む２）が生成する。
【００９０】
最終的に、工程Ｅとして、この一方の鏡像体に偏った基質を、上記第一の方法と同様にして、所定の微生物または該微生物由来の酵素と作用させることによって、光学活性なジオール（例えば、（Ｒ）−３）が生成される。
【００９１】
このような工程Ａ〜Ｅを経て生成される光学活性なジオールでは、上記第一の方法により生成するジオールまたは上記工程Ａのみを経て生成されるジオールと比較して、光学純度を著しく高めることができる。
【００９２】
次いで、光学純度が著しく高められたジオールは、上記第一の方法と同様にして、例えば、ＴＥＭＰＯ（２，２，６，６，−テトラメチルピペラジニル−１−オキシ）の存在下、亜塩素酸ナトリウムおよび次亜塩素酸ナトリウムで処理することによって、光学純度が著しく高められた、光学活性な式（Ｖ）の化合物を得ることができる。
【００９３】
このように、上記第一の方法または第二の方法を用いて得られた式（Ｖ）の化合物を用い、かつ上述の操作を行うことで、光学活性な式（ＩＶ）の化合物を得ることができ、その結果上記操作を通じて本発明に用いられる式（ＩＩ）の化合物を光学活性体として得ることができる。
【００９４】
再び、本発明の式（Ｉ）で表されるビカルタミドまたはそのアナログの製造方法について説明すると、上記のようにして得られた式（ＩＩ）の化合物に対応して使用される、式（ＩＩＩ）の化合物は、好ましくは式（ＩＩＩ’）：
【００９５】
【化２４】
【００９６】
（ここで、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、上記に定義される基と同様である）で表される化合物である。式（ＩＩＩ）の化合物の具体的な例としては、具体的な例としては、４−フルオロベンゼンチオールが挙げられる。
【００９７】
本発明のビカルタミドまたはそのアナログの製造方法において、上記式（ＩＩ）の化合物と式（ＩＩＩ）の化合物との反応に使用される溶媒は、好ましくは有機溶媒である。使用可能な有機溶媒の例としては、テトラヒドロフラン、ジメチルアセトアミドなどが挙げられる。
【００９８】
本発明における上記式（ＩＩ）の化合物と式（ＩＩＩ）の化合物との反応は、必ずしも限定されないが、上記式（ＩＩ）の化合物の１級水酸基をトシラートなどの脱離基に変換した後、不活性な溶媒中、塩基の存在下に上記式（ＩＩＩ）の化合物を作用させて行なわれ得る。上記式（ＩＩ）の化合物の１級水酸基をトシラートなどの脱離基に変換する反応は、−１０℃〜２５℃、より好ましくは−５℃〜２５℃の範囲の温度下で行われ得る。当該反応の生成物と上記式（ＩＩＩ）の化合物との反応は、−１０℃〜２５℃、より好ましくは−５℃〜２５℃の範囲の温度下で行われ得るさらに、上記二つの反応は、必ずしも限定されないが、好ましくは３０分間〜１２時間、より好ましくは１時間〜５時間かけて行われ得る。
【００９９】
上記反応後、生成物を有機層に抽出し、洗浄および乾燥を経て粗生成物を得、必要に応じてシリカゲルカラムクロマトグラフィーなどの手段を用いて精製が行われる。なお、本発明において製造するビカルタミドまたはそのアナログについて、上記式（Ｉ）のＲ５基を−ＳＯ２−にすることが所望される場合は、上記式（ＩＩＩ）の化合物のうち、Ｒ２が硫黄原子である化合物（例えば、４−フルオロベンゼンチオール）を使用し、上記反応により得られた化合物を当該分野において周知方法を用いて酸化条件に付すことにより、目的の化合物を得ることができる。
【０１００】
このようにして、目的のビカルタミドまたはそのアナログを良好な収率で製造することができる。
【０１０１】
反応後、得られたビカルタミドまたはそのアナログは、必要に応じ、当業者に周知の方法および手段を用いて、有機層への抽出、洗浄、精製が行われてもよい。
【０１０２】
なお、本発明では、上記式（ＩＩ）の化合物としてラセミ体がそのまま使用された場合、得られた当該ビカルタミドまたはそのアナログは、ラセミ体を構成する。その後、当該分野において周知の光学分割方法を用いることにより、（Ｒ）−ビカルタミドのような光学活性な化合物のみを取り出すことができる。
【０１０３】
あるいは、本発明において上記式（ＩＩ）の化合物として光学活性体が使用された場合、その絶対配置は反応を通じて引き継がれ、同様の絶対配置を有する光学活性なビカルタミドまたはそのアナログを得ることができる。このことにより、後に得られた生成物に対して光学分割などの操作が不要となり、結果として、所望の絶対配置を有するビカルタミドまたはそのアナログを効率良く製造することができる。
【実施例】
【０１０４】
以下、本発明を実施例によって具体的に記述する。しかし、これらによって本発明は制限されるものではない。
【０１０５】
＜参考例１：３−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（１０）（ラセミ体）の合成＞
【０１０６】
【化２５】
【０１０７】
３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール（３）（０．５１０ｇ，２．６０ｍｍｏｌ；ラセミ体）をアセトニトリル（１３ｍＬ）、リン酸緩衝溶液（ｐＨ６．７，０．６７Ｍ，９．７ｍＬ）に溶解し、ＴＥＭＰＯ（２，２，６，６，−テトラメチルピペラジニル−１−オキシ（２８．４ｍｇ，０．１８２ｍｍｏｌ）を添加して、室温にて撹拌した。この混合物を、３５℃まで加熱し、亜塩素酸ナトリウム水溶液（８０％ＮａＣｌＯ５８８ｍｇを２．６ｍＬの水に溶解したもの，５．２０ｍｍｏｌを含む）、および次亜塩素酸ナトリウム水溶液（３９．２μＬ，１０％次亜塩素酸ナトリウム水溶液を１．４ｍＬに希釈したもの、２．０ｍｏｌ％）を、互いに混合することなく、それぞれ全体量の１／５を別々に添加した後、残り（すなわち、それぞれ全体量の４／５づつ）を１時間かけて同時に滴下した。２４時間撹拌した後、ＴＥＭＰＯ（２８．４ｍｇ，０．１８２ｍｍｏｌ）、上記の、亜塩素酸ナトリウム水溶液（２．６ｍＬ）、および次亜塩素酸ナトリウム水溶液（１．４ｍＬ） を同様に添加し、３５℃にて２４時間撹拌を継続した。次いで、再び同様の試薬を同量追加し、さらに３５℃にて２４時間撹拌した。温度を３５℃から室温まで低下させ、２５ｍＬの水を添加し、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨ８に調整した。氷冷した亜硫酸ナトリウム水溶液（２．１ｇ，１６．７ｍｍｏｌを４０ｍＬの水に溶解したもの）を氷浴下にて添加した後（水層を２０℃以下、ｐＨ８．５〜９．０の範囲に保持した)、室温で３０分間撹拌した。３ｍＬのＭＴＢＥ（メチルｔ−ブチルエーテル）を加え抽出し、有機層を分離した。この有機層に２Ｎ塩酸を加え、ｐＨを２まで低下させ、さらにＭＴＢＥで抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した後に減圧濃縮し、標題の３−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（１０）（０．５３１ｇ，２．５２ｍｍｏｌ；ラセミ体）を収率９７％で得た。
【０１０８】
本参考例で得られた化合物の分析結果を表１に示す。
【０１０９】
【表１】
【０１１０】
＜実施例１：Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−ベンジルオキシ−２−アセトキシ−２−メチルプロパンアミド（１１）（ラセミ体）の合成＞
【０１１１】
【化２６】
【０１１２】
参考例１で得られた３−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（１０）（３２．６ｍｇ，０．１５５ｍｍｏｌ；ラセミ体）を０．１６０ｍＬのＴＨＦで希釈し、塩化チオニル（０．１１３ｍＬ，１．５６ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。この混合物を０℃で２時間撹拌し、０．１８０ｍＬのＴＨＦに溶解した４−シアノ−３−トリフルオロメチルアニリン（３４．６ｍｇ，０．１８６ｍｍｏｌ）を滴下した。さらに２時間後、４−ジメチルアミノピリジン（５６．８ｍｇ，０．４６５ｍｍｏｌ）を添加し、４日間撹拌した。
【０１１３】
次いで、この混合物を、ダイヤフラムポンプで減圧し、系内の塩化チオニルとＴＨＦを除去した後、０．８ｍＬの無水酢酸と０．８ｍＬのピリジンとを添加し、反応系内をそのままアセチル化した。２４時間後、氷を添加し、反応を終了した。混合物を酢酸エチルによって抽出し、有機層を１Ｎ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮し、１２０．３ｍｇの粗生成物を得た。この粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１，２：１，１：２（容量比）の順；シリカゲル体積２５ｍＬ）により精製して、標題のＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−ベンジルオキシ−２−アセトキシ−２−メチルプロパンアミド（１１）（５４．１ｍｇ，０．１２９ｍｍｏｌ；ラセミ体）を収率８３％で得た。
【０１１４】
本実施例で得られた化合物の分析結果を表２に示す。
【０１１５】
【表２】
【０１１６】
＜実施例２：Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−アセトキシ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１２）（ラセミ体）の合成＞
【０１１７】
【化２７】
【０１１８】
実施例１で得られたＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−ベンジルオキシ−２−アセトキシ−２−メチルプロパンアミド（１１）（３７．５ｍｇ，０．０８９２ｍｍｏｌ；ラセミ体）に、３ｍＬのエタノールを添加し、アルゴン気下で撹拌した。この混合物に、水酸化パラジウム（１５ｍｇ，アルドリッチ社製、ウェット，デグッサタイオプ（Ｄｅｇｕｓｓａ ｔｙｐｅ））を添加し、水素で置換した後、４８時間室温で撹拌した。さらに１５ｍｇの水酸化パラジウムを添加し、２４時間撹拌後、原料が消失したことを確認し、桐山漏斗用いて、ろ紙（Ｎｏ．５Ｃ）で濾過し、濾液を濃縮した後、標題のＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−アセトキシ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１２）（１３．６ｍｇ，０．０４１１ｍｍｏｌ；ラセミ体）を収率４６％で得た。
【０１１９】
本実施例で得られた化合物の分析結果を表３に示す。
【０１２０】
【表３】
【０１２１】
＜実施例３：Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］２，３，−ジヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１３）（ラセミ体）の合成＞
【０１２２】
【化２８】
【０１２３】
溶媒としての０．２ｍＬのメタノールに、実施例２で得られたＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−アセトキシ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１２）（９．０ｍｇ，０．０２７３ｍｍｏｌ；ラセミ体）および炭酸カリウム（７ｍｇ，０．０５０６ｍｍｏｌ）を添加し、３時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液を添加した後、反応を終了し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮して、４．３ｍｇの粗生成物を得た。この粗生成物をプレパラティブＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル＝１：２（容量比））により精製して、標題のＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］２，３，−ジヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１３）（６．７ｍｇ，０．０２３２ｍｍｏｌ；ラセミ体）を収率８５％で得た。また、これと合わせて、原料である化合物（１２）（０．７ｍｇ、回収率８％）で回収した。
【０１２４】
本実施例で得られた化合物の分析結果を表４に示す。
【０１２５】
【表４】
【０１２６】
＜実施例４：Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［（４− フルオロフェニル）スルホニル］−２−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１）（ビカルタミド（１））（ラセミ体）の合成＞
【０１２７】
【化２９】
【０１２８】
１０ｍＬのヘキサンで３回洗った５５％ＮａＨ（０．２１８ｇ，４．９９ｍｍｏｌ）を６．２ｍＬのＴＨＦに懸濁し、１０分間撹拌する。次いで、４−フルオロベンゼンチオール（０．４９ｍｌ，４．５９ｍｍｏｌ）を溶媒希釈することなくそのまま滴下し、室温で９０分間撹拌する。さらに、これに６．２ｍＬのＴＨＦに溶解した実施例３で得られたＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］２，３，−ジヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１３）（４．１６ｍｍｏｌ；ラセミ体）を添加し、２４時間室温で撹拌する。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液で中和した後、酢酸エチルで抽出する。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した後に減圧濃縮し、粗生成物を得る。この粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝５：１（容量比），ゲル体積５０ｍＬ）により精製する。
【０１２９】
次いで、この精製した化合物に、３０％過酸化水素水を添加し、所定量の酢酸を氷浴下にて滴下する。この混合物を６０℃にまで昇温し、２４時間撹拌する。次いで、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で中和し、酢酸エチルによって抽出する。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した後減圧濃縮し、粗生成物を得た。この粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１（容量比））により精製して、標題のＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［（４− フルオロフェニル）スルホニル］−２−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１）（ラセミ体）を得る。
【０１３０】
得られた化合物（１）について、１Ｈ−ＮＭＲによりビカルタミド（１）であることを確認する。
【０１３１】
＜実施例５−Ａ：光学純度が高められた（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール（（Ｒ）−３）を得るための準備工程（工程Ａ）＞
【０１３２】
【化３０】
【０１３３】
５ｍＬのＬＢ培地にバチルス・サブチリスＪＣＭ１０６２９株を摂取し、３０℃で終夜前培養を行った。前培養液（１ｍＬ）を、デンプン培地に添加し、３０℃にて１６０ｒｐｍで９２時間培養した。培養菌体を遠心分離（３０００ｒｐｍ，２０分間）によって濃縮し、半量の標準緩衝液（５０ｍＭ，ｐＨ８，トリス緩衝液）に再懸濁し、二倍の濃縮菌体を調製した。反応容器に、２倍濃縮菌体２ｍＬ、終濃度約２０％（ｖ／ｖ）になるように調製したグリセロール（８ｍＬ）、および２− ベンジルオキシメチル−２−メチルオキシラン（２）（１．５ｇ，８．４２ｍｍｏｌ；ラセミ体）を添加し、室温で７日間反応させた。食塩で飽和した後、酢酸エチルを添加して充分撹拌し、桐山漏斗を用いてセライト濾過を行った。濾液を酢酸エチルによって抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮して、１．８９ｇの粗生成物を得た。この粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１（容量比），ゲル体積２００ｍＬ）により精製して、化合物（（Ｒ）−３）（（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール）（０．８３ｇ，４．２３ｍｍｏｌ）を収率５０％で得、かつ化合物（（Ｒ）−２）（（Ｒ）−２−ベンジルオキシメチル−２−メチルオキシラン）（０．５２ｇ，２．９４ｍｍｏｌ）を収率３５％で得た。
【０１３４】
本実施例で得られた化合物（（Ｒ）−３および（Ｒ）−２））の分析結果を表５に示す。
【０１３５】
【表５】
【０１３６】
＜実施例５−Ｂ：光学純度が高められた（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール（（Ｒ）−３）を得るための準備工程（工程Ｂ）＞
【０１３７】
【化３１】
【０１３８】
実施例５−Ａで得られた（Ｒ）−２−ベンジルオキシメチル−２−メチルオキシラン（（Ｒ９−２）（０．２６ｇ，１．４６ｍｍｏｌ）に４４ｍＬの水を添加し、氷浴で撹拌しながら濃硫酸（３．４ｍＬ）を添加した。１０分間氷上で撹拌した後、室温にて３０分間撹拌した。冷却した飽和炭酸ナトリウム水溶液（２６ｍＬ）を添加した後、水を加え、酢酸エチルによって抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮して、０．２６ｇの粗生成物を得た。この粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１、２：１、１：１の順（容量比），ゲル体積２３ｍＬ）により精製して、化合物（（Ｒ）−３）（（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール）（０．２４ｇ，１．２２ｍｍｏｌ）を収率８３％で得た。
【０１３９】
＜実施例５−Ｃ：光学純度が高められた（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール（（Ｒ）−３）を得るための準備工程（工程Ｃ）＞
【０１４０】
【化３２】
【０１４１】
実施例５−Ａで得られた１，２−ジオール（（Ｒ）−３）（０．４２ｇ，２．１２ｍｍｏｌ）と、実施例５−Ｂで得られた１，２−ジオール（（Ｒ）−３）（０．２４ｇ，１．２２ｍｍｏｌ）とを合わせた基質（０．６５ｇ，３．３１ｍｍｏｌ，９０．７％ｅｅ（Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ−Ｈ，ヘキサン／イソプロピルアルコール＝１５／１（容量比）））に、１４ｍＬの脱水ピリジン、モレキュラーシーブス４Ａ（１ｇ）を添加し、２時間撹拌した。次いで、この混合物に、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（２．８５ｇ，１４．９ｍｍｏｌ）を氷浴下にて添加し、室温で２４時間反応した。その後、氷浴下にて水を添加し、酢酸エチルによって抽出した。有機層を１Ｎ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。それを減圧濃縮して、１．２０ｇの粗生成物を得た。この粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１、１：１の順（容量比），ゲル体積５０ｍＬ）により精製して、化合物（（Ｒ）−８）（（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル−ｐ−トルエンスルホナート）（１．１５ｇ，３．２７ｍｍｏｌ）を収率９８％で得た。
【０１４２】
本実施例で得られた化合物の分析結果を表６に示す。
【０１４３】
【表６】
【０１４４】
＜実施例５−Ｄ：光学純度が高められた（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール（（Ｒ）−３）を得るための準備工程（工程Ｄ）＞
【０１４５】
【化３３】
【０１４６】
実施例５−Ｃで得られた化合物（（Ｒ）−８）（（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル−ｐ−トルエンスルホナート（０．１０７ｇ，０．３０５ｍｍｏｌ）を、４ｍＬのメタノールに溶解し、炭酸カリウム（０．３６ｇ，２．５６ｍｍｏｌ）を添加し、室温で４８時間撹拌した。次いで、ｐＨ７のリン酸緩衝液を入れ、冷却したヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した後減圧濃縮し、０．０７９０ｇの粗生成物を得た。この粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー （ヘキサン：酢酸エチル＝３：１、２：１、１：１の順（容量比），ゲル体積６ｍＬ）により精製して、Ｓ体過剰の化合物（（Ｓ）−２）（（Ｓ）−２−ベンジルオキシメチル−２−メチルオキシラン）（４７．３ｍｇ，０．２６５ｍｍｏｌ）を収率８７％で得た。
【０１４７】
＜実施例５−Ｅ：光学純度が高められた（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール（（Ｒ）−３）の合成（工程Ｅ）＞
【０１４８】
【化３４】
【０１４９】
５ｍＬのＬＢ培地にバチルス・サブチリスＪＣＭ１０６２９株を摂取し、３０℃で終夜前培養を行った。前培養液（１ｍＬ）を、デンプン培地に添加し、３０℃にて１６０ｒｐｍで９２時間培養した。培養菌体を遠心分離（３０００ｒｐｍ，２０分間）によって濃縮し、半量の標準緩衝液（５０ｍＭ，ｐＨ８，トリス緩衝液）に再懸濁し、二倍の濃縮菌体を調製した。反応容器に、２倍濃縮菌体０．０６３ｍＬ、終濃度約２０％（ｖ／ｖ）になるように調製したグリセロール（０．３２ｍＬ）、および実施例５−Ｄで得られた化合物（（Ｓ）−２）（（Ｓ）−２−ベンジルオキシメチル−２−メチルオキシラン）（４７．３ｍｇ，０．２６５ｍｍｏｌ）を添加し、室温で７日間反応させた。食塩で飽和した後、酢酸エチルを入れて充分撹拌し、桐山漏斗を用いてセライト濾過を行った。濾液を酢酸エチルによって抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した後に減圧濃縮し、０．０３１９ｇの粗生成物を得た。この粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（(ヘキサン：酢酸エチル＝２：１（容量比），ゲル体積３ｍＬ)により精製して標題の化合物（（Ｒ）−３）（（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール）（２７．６ｍｇ，０．１４３ｍｍｏｌ）を収率５３％で得た。
【０１５０】
本実施例で得られた化合物の分析結果を表７に示す。
【０１５１】
【表７】
【０１５２】
＜参考例２：光学活性な３−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（（Ｒ）−１０）の合成＞
参考例１で使用したラセミ体の３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール（３）の代わりに、同量の実施例５−Ｅで得られた（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−メチルプロパン−１，２−ジオール（（Ｒ）−３）を用いたこと以外は、参考例１と同様にして、（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（（Ｒ）−１０）を得る。
【０１５３】
＜実施例６：光学活性なＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−ベンジルオキシ−２−アセトキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１１）の合成＞
参考例１で得られたラセミ体の３−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（１０）の代わりに、同量の参考例２で得られた（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（（Ｒ）−１０）を用い、かつ得られた粗生成物を適切なＨＰＬＣ条件にて精製することにより、（Ｒ）−Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−ベンジルオキシ−２−アセトキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１１）を得る。
【０１５４】
＜実施例７：光学活性なＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−アセトキシ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１２）の合成＞
実施例１で得られたラセミ体のＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−ベンジルオキシ−２−アセトキシ−２−メチルプロパンアミド（１１）の代わりに、同量の実施例６で得られた（Ｒ）−Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−ベンジルオキシ−２−アセトキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１１）を用いたこと以外は、実施例２と同様にして、（Ｒ）−Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−アセトキシ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１２）を得る。
【０１５５】
＜実施例８：光学活性なＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］２，３，−ジヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１３）の合成＞
実施例２で得られたラセミ体のＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−アセトキシ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１２）の代わりに、同量の実施例７で得られた（Ｒ）−Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−アセトキシ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１２）を用い、かつ得られた粗生成物を適切な条件下クロマトグラフィーにて精製することにより、（Ｒ）−Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］２，３，−ジヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１３）を得る。
【０１５６】
＜実施例９：光学活性なＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［（４− フルオロフェニル）スルホニル］−２−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１）（（Ｒ）−ビカルタミド（（Ｒ）−１））の合成＞
実施例３で得られたラセミ体のＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］２，３，−ジヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（１３）の代わりに、同量の実施例８で得られたＮ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］２，３，−ジヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１３）を用い、かつ得られた粗生成物を適切な条件下クロマトグラフィーにて精製することにより、（Ｒ）−Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［（４− フルオロフェニル）スルホニル］−２−ヒドロキシ−２−メチルプロパンアミド（（Ｒ）−１）（（Ｒ）−ビカルタミド（（Ｒ）−１））を得る。
【０１５７】
上記のように、本発明の方法を用いて、前立腺肥大治療薬（抗男性ホルモン剤）として有用な（Ｒ）−ビカルタミドを、特に光学分割等の手法を用いることなく、直接合成し得たことを確認する。
【産業上の利用可能性】
【０１５８】
本発明を用いて得られたビカルタミドまたはそのアナログは、例えば、前立腺肥大治療薬（抗男性ホルモン剤）またはその他の医薬品中間体として有用である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（Ｉ）：
【化１】
で表されるビカルタミドまたはそのアナログの製造方法であって、
以下の式（ＩＩ）：
【化２】
で表される化合物を、溶媒中、以下の式（ＩＩＩ）：
【化３】
で表される化合物と反応させる工程；
を包含し、
Ｒ１は、ハロゲン原子、水素原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４のアルキル基、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４のアルコキシ基、ニトロ基、シアノ基、−Ｓ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、−ＣＯ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、
【化４】
（ここで、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ独立して、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、または−ＮＣＳであり；
Ｒ２は、硫黄原子、酸素原子、または−ＮＨ−であり；
Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；
Ｒ５は、硫黄原子、酸素原子、−ＮＨ−、または−ＳＯ２−であり；そして
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である、方法。
【請求項２】
以下の式（ＩＩ）：
【化５】
で表される化合物の製造方法であって、
以下の式（ＩＶ）：
【化６】
で表される化合物を脱保護する工程；および
該脱保護して得られた生成物をさらに脱アセチル化する工程；
を包含し、
ここで、
Ｒ３は保護基であり、
Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；そして
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である、方法。
【請求項３】
以下の式（ＩＶ）：
【化７】
で表される化合物の製造方法であって、
以下の式（Ｖ）：
【化８】
で表される化合物を、縮合剤および溶媒の存在下、以下の式（ＶＩ）：
【化９】
で表される化合物と反応させ、かつアセチル化する工程；
を包含し、
ここで、
Ｒ３は保護基であり；
Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；そして
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である、方法。
【請求項４】
光学活性な、以下の式（ＩＸ）：
【化１０】
で表されるジオールの製造方法であって、
以下の式（ＶＩＩ）：
【化１１】
で表されるエポキシドのラセミ体に、エポキシド加水分解活性を有する微生物または該微生物に由来する酵素を作用させて、該ラセミ体の一方の鏡像体を加水分解することにより、第一のジオールを生成する工程；
該加水分解の工程によって残存した他方の鏡像体を酸で処理することにより、該第一のジオールと同様のジオールを生成する工程；
該第一のジオールと該酸処理工程で生成したジオールとを合わせ、溶媒中でトシル化することにより、トシル体を生成する工程；
該トシル体に塩基を作用させることにより鏡像体が偏って存在するエポキシドを生成する工程；および
該鏡像体が偏って存在するエポキシドを、該エポキシド加水分解活性を有する微生物または該微生物に由来する酵素を作用させる工程；
を包含し、
ここで、
Ｒ３は保護基であり；
Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；
＊は不斉中心であり；そして
該微生物が、バチルス・サブチリスＪＣＭ１０６２９株、バチルス・サブチリスＩＡＭ１１８６株、クロモバクテリウム・ビオラセウムＪＣＭ１２４９株、バチルス・リケニホルミスＡＴＣＣ３９３０７株、ノカルディア・フスカＮＢＲＣ１４３４０株、ステノトロホモナス・マルトフィリアＪＣＭ１９７５株、バチルス・プミリスＮＢＲＣ１４３５８株、ミクロバクテリウム・ラクチカムＪＣＭ１３７９株、シュードモナス・クロロラフィスＪＣＭ２７７８株、ノカルディア・アステロイデスＮＢＲＣ３３８４株、ゴルドナ・テラエＪＣＭ３２０６株、バチルス・アネウリノリティカスＩＡＭ１０７７株、クレブシエラ・オキシトカＳＮＳＭ−８７（微工研菌寄第１２９５３号）株、キャンディダ・コリカロサＪＣＭ２１９９株、キャンディダ・エルノビＪＣＭ９９４８株、キャンディダ・ルゴサＪＣＭ１６１９株、ガラクトマイセス・ゲオトリカムＪＣＭ６３５９株、キャンディダ・インタメディアＮＢＲＣ０７６１株、サッカロマイセス・セレビシエＪＣＭ２２２３株、スポリジオボラス・サルモニカラＮＢＲＣ１０３５株、キャンディダ・クルセイＮＢＲＣ００１１株、ロドスポリジウム・ジオボバタムＮＢＲＣ０６８８株、ピチア・ブルトニＪＣＭ３７０８株、キャンディダ・アンタラクチカＪＣＭ３９４１株、ロドトルラ・ルブラＪＣＭ８１１７株、キャンディダ・グイリエルモンジＮＢＲＣ０５６６株、キャンディダ・ケフィアＮＢＲＣ１０２８７株、ロドトルラ・ミヌタＮＢＲＣ０８７９株、およびキャンディダ・パラプシロシスＪＣＭ１７８５株からなる群より選択される少なくとも１種の菌株が挙げられる。特に、バチルス・サブチリスＩＡＭ１１８６株、クロモバクテリウム・ビオラセウムＪＣＭ１２４９株、キャンディダ・コリカロサＪＣＭ２１９９株、キャンディダ・エルノビＪＣＭ９９４８株、キャンディダ・ルゴサＪＣＭ１６１９株、ガラクトマイセス・ゲオトリカムＪＣＭ６３５９株、およびキャンディダ・インタメディアＮＢＲＣ０７６１株からなる群より選択される少なくとも１種の菌株である、方法。
【請求項５】
前記微生物が、バチルス・サブチリスＪＣＭ１０６２９株、バチルス・サブチリスＩＡＭ１１８６株、クロモバクテリウム・ビオラセウムＪＣＭ１２４９株、キャンディダ・コリカロサＪＣＭ２１９９株、キャンディダ・エルノビＪＣＭ９９４８株、キャンディダ・ルゴサＪＣＭ１６１９株、ガラクトマイセス・ゲオトリカムＪＣＭ６３５９株、およびキャンディダ・インタメディアＮＢＲＣ０７６１株からなる群より選択される少なくとも１種の菌株である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記微生物がデンプン含有培地で培養された微生物である、請求項４または５に記載の方法。
【請求項１】
以下の式（Ｉ）：
【化１】
で表されるビカルタミドまたはそのアナログの製造方法であって、
以下の式（ＩＩ）：
【化２】
で表される化合物を、溶媒中、以下の式（ＩＩＩ）：
【化３】
で表される化合物と反応させる工程；
を包含し、
Ｒ１は、ハロゲン原子、水素原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４のアルキル基、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４のアルコキシ基、ニトロ基、シアノ基、−Ｓ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、−ＣＯ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、
【化４】
（ここで、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ独立して、ハロゲン原子で置換されていてもよい、直鎖状または分岐鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルキル基である）、または−ＮＣＳであり；
Ｒ２は、硫黄原子、酸素原子、または−ＮＨ−であり；
Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；
Ｒ５は、硫黄原子、酸素原子、−ＮＨ−、または−ＳＯ２−であり；そして
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である、方法。
【請求項２】
以下の式（ＩＩ）：
【化５】
で表される化合物の製造方法であって、
以下の式（ＩＶ）：
【化６】
で表される化合物を脱保護する工程；および
該脱保護して得られた生成物をさらに脱アセチル化する工程；
を包含し、
ここで、
Ｒ３は保護基であり、
Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；そして
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である、方法。
【請求項３】
以下の式（ＩＶ）：
【化７】
で表される化合物の製造方法であって、
以下の式（Ｖ）：
【化８】
で表される化合物を、縮合剤および溶媒の存在下、以下の式（ＶＩ）：
【化９】
で表される化合物と反応させ、かつアセチル化する工程；
を包含し、
ここで、
Ｒ３は保護基であり；
Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；そして
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、シアノ基、またはニトロ基である、方法。
【請求項４】
光学活性な、以下の式（ＩＸ）：
【化１０】
で表されるジオールの製造方法であって、
以下の式（ＶＩＩ）：
【化１１】
で表されるエポキシドのラセミ体に、エポキシド加水分解活性を有する微生物または該微生物に由来する酵素を作用させて、該ラセミ体の一方の鏡像体を加水分解することにより、第一のジオールを生成する工程；
該加水分解の工程によって残存した他方の鏡像体を酸で処理することにより、該第一のジオールと同様のジオールを生成する工程；
該第一のジオールと該酸処理工程で生成したジオールとを合わせ、溶媒中でトシル化することにより、トシル体を生成する工程；
該トシル体に塩基を作用させることにより鏡像体が偏って存在するエポキシドを生成する工程；および
該鏡像体が偏って存在するエポキシドを、該エポキシド加水分解活性を有する微生物または該微生物に由来する酵素を作用させる工程；
を包含し、
ここで、
Ｒ３は保護基であり；
Ｒ４は、ハロゲン原子で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であり；
＊は不斉中心であり；そして
該微生物が、バチルス・サブチリスＪＣＭ１０６２９株、バチルス・サブチリスＩＡＭ１１８６株、クロモバクテリウム・ビオラセウムＪＣＭ１２４９株、バチルス・リケニホルミスＡＴＣＣ３９３０７株、ノカルディア・フスカＮＢＲＣ１４３４０株、ステノトロホモナス・マルトフィリアＪＣＭ１９７５株、バチルス・プミリスＮＢＲＣ１４３５８株、ミクロバクテリウム・ラクチカムＪＣＭ１３７９株、シュードモナス・クロロラフィスＪＣＭ２７７８株、ノカルディア・アステロイデスＮＢＲＣ３３８４株、ゴルドナ・テラエＪＣＭ３２０６株、バチルス・アネウリノリティカスＩＡＭ１０７７株、クレブシエラ・オキシトカＳＮＳＭ−８７（微工研菌寄第１２９５３号）株、キャンディダ・コリカロサＪＣＭ２１９９株、キャンディダ・エルノビＪＣＭ９９４８株、キャンディダ・ルゴサＪＣＭ１６１９株、ガラクトマイセス・ゲオトリカムＪＣＭ６３５９株、キャンディダ・インタメディアＮＢＲＣ０７６１株、サッカロマイセス・セレビシエＪＣＭ２２２３株、スポリジオボラス・サルモニカラＮＢＲＣ１０３５株、キャンディダ・クルセイＮＢＲＣ００１１株、ロドスポリジウム・ジオボバタムＮＢＲＣ０６８８株、ピチア・ブルトニＪＣＭ３７０８株、キャンディダ・アンタラクチカＪＣＭ３９４１株、ロドトルラ・ルブラＪＣＭ８１１７株、キャンディダ・グイリエルモンジＮＢＲＣ０５６６株、キャンディダ・ケフィアＮＢＲＣ１０２８７株、ロドトルラ・ミヌタＮＢＲＣ０８７９株、およびキャンディダ・パラプシロシスＪＣＭ１７８５株からなる群より選択される少なくとも１種の菌株が挙げられる。特に、バチルス・サブチリスＩＡＭ１１８６株、クロモバクテリウム・ビオラセウムＪＣＭ１２４９株、キャンディダ・コリカロサＪＣＭ２１９９株、キャンディダ・エルノビＪＣＭ９９４８株、キャンディダ・ルゴサＪＣＭ１６１９株、ガラクトマイセス・ゲオトリカムＪＣＭ６３５９株、およびキャンディダ・インタメディアＮＢＲＣ０７６１株からなる群より選択される少なくとも１種の菌株である、方法。
【請求項５】
前記微生物が、バチルス・サブチリスＪＣＭ１０６２９株、バチルス・サブチリスＩＡＭ１１８６株、クロモバクテリウム・ビオラセウムＪＣＭ１２４９株、キャンディダ・コリカロサＪＣＭ２１９９株、キャンディダ・エルノビＪＣＭ９９４８株、キャンディダ・ルゴサＪＣＭ１６１９株、ガラクトマイセス・ゲオトリカムＪＣＭ６３５９株、およびキャンディダ・インタメディアＮＢＲＣ０７６１株からなる群より選択される少なくとも１種の菌株である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記微生物がデンプン含有培地で培養された微生物である、請求項４または５に記載の方法。
【公開番号】特開２００７−２０４４２１（Ｐ２００７−２０４４２１Ａ）
【公開日】平成１９年８月１６日（２００７．８．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−２４９８８（Ｐ２００６−２４９８８）
【出願日】平成１８年２月１日（２００６．２．１）
【出願人】（０００２１４２７２）長瀬産業株式会社 (137)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年８月１６日（２００７．８．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年２月１日（２００６．２．１）
【出願人】（０００２１４２７２）長瀬産業株式会社 (137)
【Ｆターム（参考）】
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