免疫グロブリンキメラ単量体−二量体ハイブリッド
本発明はキメラ単量体−二量体ハイブリッド蛋白に関し、ここで該蛋白は第１および第２のポリペプチド鎖を含み、該第１のポリペプチド鎖は免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分および生物学的に活性な分子を含み、そして該第２のポリペプチド鎖は第１の鎖の生物学的に活性な分子を結う差なり免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分を含む上記蛋白に関する。本発明はまた、本発明のキメラ単量体−二量体ハイブリッドの使用方法および作成方法に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖が、生物学的に活性な分子および免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部分を含み、そして該第２の鎖が、生物学的に活性な分子も免疫グロブリンの可変領域も有さない免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分を含む、キメラ蛋白。
【請求項２】
該第２の鎖が更にアフィニティータグを含む、請求項１に記載のキメラ蛋白。
【請求項３】
アフィニティータグがＦＬＡＧタグである、請求項２に記載のキメラ蛋白。
【請求項４】
免疫グロブリンの部分がＦｃフラグメントである、請求項１に記載のキメラ蛋白。
【請求項５】
免疫グロブリンの部分がＦｃＲｎ結合相手である、請求項４に記載のキメラ蛋白。
【請求項６】
ＦｃＲｎ結合相手が免疫グロブリンのＦｃフラグメントのペプチド模倣物である、請求項５に記載のキメラ蛋白。
【請求項７】
免疫グロブリンがＩｇＧである、請求項１または５に記載のキメラ蛋白。
【請求項８】
生物学的に活性な分子がポリペプチドである、請求項１または５に記載のキメラ蛋白。
【請求項９】
ＩｇＧがＩｇＧ１またはＩｇＧ２である、請求項７に記載のキメラ蛋白。
【請求項１０】
生物学的に活性な分子がウィルス融合抑制剤である、請求項１または５に記載のキメラ蛋白。
【請求項１１】
ウィルス融合抑制剤がＨＩＶ融合抑制剤である、請求項１０に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２】
ＨＩＶ融合抑制剤がＴ２０（配列番号１）、Ｔ２１（配列番号２）またはＴ１２４９（配列番号３）である、請求項１１に記載のキメラ蛋白。
【請求項１３】
生物学的に活性な分子が凝固因子である、請求項１または５に記載のキメラ蛋白。
【請求項１４】
凝固因子が第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子である、請求項１３に記載のキメラ蛋白。
【請求項１５】
凝固因子が第ＩＸ因子である、請求項１３に記載のキメラ蛋白。
【請求項１６】
生物学的に活性な分子が低分子である、請求項１または５に記載のキメラ蛋白。
【請求項１７】
生物学的に活性な分子がロイプロリドである、請求項１６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１８】
生物学的に活性な分子がインターフェロンである、請求項１または５に記載のキメラ蛋白。
【請求項１９】
インターフェロンがインターフェロンαであり、１５〜２５アミノ酸のリンカーを有する、請求項１８に記載のキメラ蛋白。
【請求項２０】
インターフェロンαが１５〜２０アミノ酸のリンカーを有する、請求項１９に記載のキメラ蛋白。
【請求項２１】
生物学的に活性な分子が核酸である、請求項１または５に記載のキメラ蛋白。
【請求項２２】
核酸がＤＮＡまたはＲＮＡである、請求項２１に記載のキメラ蛋白。
【請求項２３】
核酸がアンチセンス分子である、請求項２１に記載のキメラ蛋白。
【請求項２４】
核酸がリボザイムである、請求項２１に記載のキメラ蛋白。
【請求項２５】
生物学的に活性な分子が成長因子である、請求項１または５に記載のキメラ蛋白。
【請求項２６】
成長因子がエリスロポエチンである、請求項２５に記載のキメラ蛋白。
【請求項２７】
低分子がＶＬＡ４拮抗剤である、請求項１６に記載のキメラ蛋白。
【請求項２８】
第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖が、生物学的に活性な分子および免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部分を含み、そして該第２の鎖が、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分および必要に応じてアフィニティータグよりなる、キメラ蛋白。
【請求項２９】
アフィニティータグがＦＬＡＧタグである、請求項２８に記載のキメラ蛋白。
【請求項３０】
第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖が、生物学的に活性な分子および免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部分を含み、そして該第２の鎖が、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分および必要に応じてアフィニティータグより本質的になる、キメラ蛋白。
【請求項３１】
アフィニティータグがＦＬＡＧタグである、請求項３０に記載のキメラ蛋白。
【請求項３２】
第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、
ａ）該第１の鎖が、生物学的に活性な分子、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分、および少なくとも１つの特異的な結合相手を有する第１のドメインを含み；そして、
ｂ）該第２の鎖が、生物学的に活性な分子も免疫グロブリンの可変領域も有さない免疫グロブリンの少なくとも一部分を含み、そして更に第２のドメインを含み、該第２のドメインは、該第１のドメインの特異的結合相手である、キメラ蛋白。
【請求項３３】
該第２の鎖が更にアフィニティータグを含む、請求項３２に記載のキメラ蛋白。
【請求項３４】
アフィニティータグがＦＬＡＧタグである、請求項３３に記載のキメラ蛋白。
【請求項３５】
免疫グロブリンの部分がＦｃフラグメントである、請求項３２に記載のキメラ蛋白。
【請求項３６】
免疫グロブリンがＩｇＧである、請求項３２または３５に記載のキメラ蛋白。
【請求項３７】
免疫グロブリンの部分がＦｃＲｎ結合相手である、請求項３５に記載のキメラ蛋白。
【請求項３８】
ＦｃＲｎ結合相手が免疫グロブリンのＦｃフラグメントのペプチド模倣物である、請求項３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項３９】
第１のドメインが非共有結合的に第２のドメインに結合する、請求項３２または３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項４０】
第１のドメインがロイシンジッパーコイルドコイルの半分であり、そして該第２のドメインが該ロイシンジッパーコイルドコイルの相補的な結合相手である、請求項３２または３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項４１】
生物学的に活性な分子がペプチドである、請求項３２または３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項４２】
生物学的に活性な分子がインターフェロンである、請求項３２または３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項４３】
インターフェロンがインターフェロンαであり、１５〜２５アミノ酸のリンカーを有する、請求項４２に記載のキメラ蛋白。
【請求項４４】
インターフェロンαが１５〜２０アミノ酸のリンカーを有する、請求項４３に記載のキメラ蛋白。
【請求項４５】
生物学的に活性な分子がロイプロリドである、請求項４１に記載のキメラ蛋白。
【請求項４６】
生物学的に活性な分子がウィルス融合抑制剤である、請求項３２または３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項４７】
ウィルス融合抑制剤がＨＩＶ融合抑制剤である、請求項４６に記載のキメラ蛋白。
【請求項４８】
ＨＩＶ融合抑制剤がＴ２０（配列番号１）、Ｔ２１（配列番号２）またはＴ１２４９（配列番号３）である、請求項４７に記載のキメラ蛋白。
【請求項４９】
生物学的に活性な分子が凝固因子である、請求項３２または３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項５０】
凝固因子が第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子である、請求項４９に記載のキメラ蛋白。
【請求項５１】
凝固因子が第ＩＸ因子である、請求項４９に記載のキメラ蛋白。
【請求項５２】
生物学的に活性な分子が低分子である、請求項３２または３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項５３】
低分子がＶＬＡ４拮抗剤である、請求項５２に記載のキメラ蛋白。
【請求項５４】
生物学的に活性な分子が核酸を含む、請求項３２または３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項５５】
核酸がＤＮＡまたはＲＮＡである、請求項５４に記載のキメラ蛋白。
【請求項５６】
核酸がアンチセンス核酸である、請求項５４に記載のキメラ蛋白。
【請求項５７】
核酸がリボザイムである、請求項５４に記載のキメラ蛋白。
【請求項５８】
生物学的に活性な分子が成長因子またはホルモンである、請求項３２または３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項５９】
成長因子がエリスロポエチンである、請求項５８に記載のキメラ蛋白。
【請求項６０】
請求項１、５、３２または３７に記載のキメラ蛋白、および薬学的に受容可能な賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項６１】
第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、
ａ）該第１の鎖が、生物学的に活性な分子、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分、および少なくとも１つの特異的な結合相手を有する第１のドメインを含み；そして、
ｂ）該第２の鎖が、免疫グロブリンの少なくとも一部分、第２のドメインおよび必要に応じてアフィニティータグよりなり、該第２のドメインは、該第１のドメインの特異的結合相手である、キメラ蛋白。
【請求項６２】
アフィニティータグがＦＬＡＧタグである、請求項６１に記載のキメラ蛋白。
【請求項６３】
第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、
ａ）該第１の鎖が、生物学的に活性な分子、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分および少なくとも１つの特異的な結合相手を有する第１のドメインを含み；そして、
ｂ）該第２の鎖が、免疫グロブリンの少なくとも一部分、第２のドメイン、および必要に応じてアフィニティータグより本質的になり、該第２のドメインは、該第１のドメインの特異的結合相手である、キメラ蛋白。
【請求項６４】
アフィニティータグがＦＬＡＧタグである、請求項６３に記載のキメラ蛋白。
【請求項６５】
生物学的に活性なキメラ蛋白の製造方法であって、該方法が、下記工程：
ａ）免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分をコードする第２のＤＮＡ分子に作動可能に連結した生物学的に活性な分子を含むポリペプチドをコードするＤＮＡ分子を含む第１のＤＮＡコンストラクトで、第１の細胞をトランスフェクトすること；
ｂ）生物学的に活性な分子も免疫グロブリンの可変領域も有さない免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分を含むポリペプチドをコードするＤＮＡ分子を含む第２のＤＮＡコンストラクトで、第２の細胞をトランスフェクトすること；
ｃ）該第１のＤＮＡコンストラクトおよび該第２のＤＮＡコンストラクトによりコードされるポリペプチドが発現されるような条件下で、ａ）およびｂ）の細胞を培養すること；ならびに、
ｄ）該トランスフェクトされた細胞からａ）およびｂ）の二量体を単離すること、
を含む、方法。
【請求項６６】
免疫グロブリン定常領域の該部分がＦｃＲｎ結合相手である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
生物学的に活性な分子がポリペプチドである、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項６８】
生物学的に活性な分子がインターフェロンである、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項６９】
インターフェロンがインターフェロンαであり、１５〜２５アミノ酸のリンカーを有する、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
インターフェロンαが１５〜２０アミノ酸のリンカーを有する、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
生物学的に活性な分子がペプチドである、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項７２】
生物学的に活性な分子がウィルス融合抑制剤である、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項７３】
ウィルス融合抑制剤がＨＩＶウイルス融合抑制剤である、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
ＨＩＶウイルス融合抑制剤がＴ２０（配列番号１）、Ｔ２１（配列番号２）またはＴ１２４９（配列番号３）である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
生物学的に活性な分子が凝固因子である、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項７６】
凝固因子が第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
凝固因子が第ＩＸ因子である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
生物学的に活性な分子が低分子である、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項７９】
生物学的に活性な分子が核酸を含む、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項８０】
核酸がＤＮＡまたはＲＮＡである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
核酸がアンチセンス分子である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８２】
核酸がリボザイムである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８３】
生物学的に活性な分子が成長因子またはホルモンを含む、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項８４】
成長因子がエリスロポエチンである、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
二量体がクロマトグラフィーにより単離される、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項８６】
細胞が真核細胞である、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項８７】
真核細胞がＣＨＯ細胞である、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
細胞が原核細胞である、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項８９】
原核細胞がＥ．ｃｏｌｉである、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
疾患または状態が治療されるように対象にキメラ蛋白を投与することを含む、該疾患または状態を有する試験対象の治療方法であって、該キメラ蛋白は第１および第２のポリペプチド鎖を含み、
ａ）該第１の鎖は、ＦｃＲｎ結合相手および生物学的に活性な分子を含み、そして
ｂ）該第２の鎖は、生物学的に活性な分子も免疫グロブリンの可変領域も有さないＦｃＲｎ結合相手を含む、方法。
【請求項９１】
該キメラ蛋白が静脈内、皮下、経口、口内、舌下、経鼻、非経腸、直腸内、膣内または肺経路を介して投与される、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
該疾患または状態がウィルス感染である、請求項９０に記載の方法。
【請求項９３】
生物学的に活性な分子がインターフェロンである、請求項９０に記載の方法。
【請求項９４】
インターフェロンがインターフェロンαであり、そして１５〜２５アミノ酸のリンカーを有する、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
インターフェロンαが１５〜２０アミノ酸のリンカーを有する、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
該疾患または状態がＨＩＶである、請求項９０に記載の方法。
【請求項９７】
該生物学的に活性な分子がウィルス融合抑制剤である、請求項９０に記載の方法。
【請求項９８】
該ウィルス融合抑制剤がＴ２０、Ｔ２１またはＴ１２４９である、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
該疾患または状態が止血障害である、請求項９０に記載の方法。
【請求項１００】
該疾患または状態が血友病Ａである、請求項９０に記載の方法。
【請求項１０１】
該疾患または状態が血友病Ｂである、請求項９０に記載の方法。
【請求項１０２】
該生物学的に活性な分子が第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子である、請求項９０に記載の方法。
【請求項１０３】
該生物学的に活性な分子が第ＩＸ因子である、請求項９０に記載の方法。
【請求項１０４】
該疾患または状態が貧血である、請求項９０に記載の方法。
【請求項１０５】
該生物学的に活性な分子がエリスロポエチンである、請求項９０に記載の方法。
【請求項１０６】
下記式のキメラ蛋白：
Ｘ−Ｌａ−Ｆ：ＦまたはＦ：Ｆ−Ｌａ−Ｘ
式中、Ｘは生物学的に活性な分子であり、Ｌはリンカーであり、Ｆは免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分であり、そして、ａは任意の整数またはゼロである、キメラ蛋白。
【請求項１０７】
ＦがＦｃＲｎ結合相手である、請求項１０６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１０８】
ＦｃＲｎが免疫グロブリンのＦｃフラグメントのペプチド模倣物である、請求項１０６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１０９】
各Ｆが他のＦと化学的に会合している、請求項１０６または１０７に記載のキメラ蛋白。
【請求項１１０】
化学的会合が非共有結合性の相互作用である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
化学的結合が共有結合である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１２】
化学的結合がジスルフィド結合である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１３】
Ｆがジスルフィド結合ではない結合によりＦに連結されている、請求項１０６または１０７に記載のキメラ蛋白。
【請求項１１４】
ＦがＩｇＧ免疫グロブリン定常領域である、請求項１０６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１１５】
ＦがＩｇＧ１である、請求項１０６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１１６】
ＦがＦｃフラグメントである、請求項１０６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１１７】
Ｘがポリペプチドである、請求項１０６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１１８】
Ｘがロイプロリドである、請求項１０６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１１９】
Ｘが低分子である、請求項１０６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２０】
低分子がＶＬＡ４拮抗剤である、請求項１１９に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２１】
Ｘがウィルス融合抑制剤である、請求項１０６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２２】
ウィルス融合抑制剤がＨＩＶ融合抑制剤である、請求項１２１に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２３】
ＨＩＶ融合抑制剤がＴ２０（配列番号１）、Ｔ２１（配列番号２）またはＴ１２４９（配列番号３）である、請求項１２２に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２４】
Ｘが凝固因子である、請求項１０６または１０７に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２５】
凝固因子が第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子である、請求項１２４に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２６】
凝固因子が第ＩＸ因子である、請求項１２４に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２７】
Ｘが核酸である、請求項１０６または１０７に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２８】
核酸がＤＮＡまたはＲＮＡ分子である、請求項１２７に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２９】
Ｘが成長因子である、請求項１０６または１０７に記載のキメラ蛋白。
【請求項１３０】
成長因子がエリスロポエチンである、請求項１２９に記載のキメラ蛋白。
【請求項１３１】
請求項１、５、３２、３７、１０６または１０７のキメラ蛋白を対象に投与することを含む、該対象における疾患または状態の治療方法。
【請求項１３２】
疾患または状態がウィルス感染である、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３３】
生物学的に活性な分子がインターフェロンである、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３４】
インターフェロンがインターフェロンαであり、そして１５〜２５アミノ酸のリンカーを有する、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１３５】
インターフェロンαが１５〜２０アミノ酸のリンカーを有する、請求項１３４に記載の方法。
【請求項１３６】
ウィルス感染がＨＩＶである、請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３７】
疾患または状態が出血障害である、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３８】
出血障害が血友病Ａである、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
出血障害が血友病Ｂである、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４０】
疾患または状態が貧血である、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１４１】
キメラ蛋白が静脈内、筋肉内、皮下、経口、口内、舌下、経鼻、直腸内、膣内、エアロゾルを介して、または肺経路を介して投与される、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１４２】
キメラ蛋白が肺経路を介して投与される、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
キメラ蛋白が経口投与される、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４４】
免疫グロブリンがＩｇＧである、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１４５】
免疫グロブリンの部分がＦｃフラグメントである、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１４６】
共に連結された第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖が生物学的に活性な分子および免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分を含み、そして該第２の鎖が第１の鎖の生物学的に活性な分子を有さない免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分を含み、そして、該第２の鎖が２ｋＤより大きい分子量を有する如何なる分子にも共有結合していない、キメラ蛋白。
【請求項１４７】
免疫グロブリン定常領域の部分がＦｃＲｎ結合相手である、請求項１４６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１４８】
共に連結された第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖が生物学的に活性な分子および免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分を含み、そして該第２の鎖が該第１のポリペプチド鎖の免疫グロブリンの部分を除き如何なる他の分子にも共有結合的に連結していない免疫グロブリンの定常領域の少なくとも部分を含む、キメラ蛋白。
【請求項１４９】
免疫グロブリン定常領域の部分がＦｃＲｎ結合相手である、請求項１４８に記載のキメラ蛋白。
【請求項１５０】
共に連結された第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖が生物学的に活性な分子および免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分を含み、そして該第２の鎖が免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分よりなる、キメラ蛋白。
【請求項１５１】
免疫グロブリン定常領域の部分がＦｃＲｎ結合相手である、請求項１５０に記載のキメラ蛋白。
【請求項１５２】
共に連結された第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖が生物学的に活性な分子および免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分を含み、そして該第２の鎖が第１の鎖の生物学的に活性な分子を有さない免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分および共有結合した２ｋＤ未満の分子量を有する分子を含む、キメラ蛋白。
【請求項１５３】
免疫グロブリン定常領域の部分がＦｃＲｎ結合相手である、請求項１５２に記載のキメラ蛋白。
【請求項１５４】
生物学的に活性な分子に連結された免疫グロブリンのＦｃフラグメントを含むキメラ蛋白の製造方法であって、該方法が、下記工程：
ａ）免疫グロブリンのＦｃフラグメントをコードするＤＮＡ配列およびインテインをコードする第２のＤＮＡ配列を含むＤＮＡコンストラクトで細胞をトランスフェクトすること；
ｂ）Ｆｃフラグメントおよびインテインが発現される条件下で該細胞を培養すること；
ｃ）該細胞から該Ｆｃフラグメントおよびインテインを単離すること；
ｄ）Ｎ末端Ｃｙｓを有する生物学的に活性な分子を化学合成すること；
ｅ）ｃ）の単離されたインテインＦｃをＭＥＳＮＡと反応させることによりＣ末端チオエステルを発生させること；
ｆ）ｄ）の生物学的に活性な分子をｅ）のＦｃと反応させることにより生物学的に活性な分子に連結したＦｃを含むキメラ蛋白を作成すること；
を含む、方法。
【請求項１５５】
生物学的に活性な分子に連結された免疫グロブリンのＦｃフラグメントを含むキメラ蛋白の製造方法であって、該方法が、下記工程：
ａ）免疫グロブリンのＦｃフラグメントをコードするＤＮＡ配列およびシグナルペプチドをコードする第２のＤＮＡ配列を含むＤＮＡコンストラクトで細胞をトランスフェクトすること、ここで該シグナルペプチドはＦｃフラグメントシステインに隣接するものである；
ｂ）Ｆｃフラグメントおよびシグナルペプチドが発現され、そして、Ｆｃフラグメントがシグナルペプチドを有さずＮ末端システインを伴って細胞から分泌されるような条件下で該細胞を培養すること；
ｃ）該細胞からＮ末端システインを有する該Ｆｃフラグメントの二量体を単離すること；
ｄ）チオエステルを有する生物学的に活性な分子を化学合成すること；
ｅ）生物学的に活性な分子がｃ）の二量体の１つの鎖に連結できるような条件下でｃ）のＦｃにｄ）の生物学的に活性な分子を反応させることにより生物学的に活性な分子に連結されたＦｃを含むキメラ蛋白を作成すること；
を含む、方法。
【請求項１５６】
チオエステルがＣ末端チオエステルである、請求項１５５に記載の方法。
【請求項１５７】
生物学的に活性な分子に連結された免疫グロブリンのＦｃフラグメントを含むキメラ蛋白の製造方法であって、該方法が、下記工程：
ａ）免疫グロブリンのＦｃフラグメントをコードするＤＮＡ配列およびシグナルペプチドをコードする第２のＤＮＡ配列を含むＤＮＡコンストラクトで細胞をトランスフェクトすること、ここで該シグナルペプチドはＦｃフラグメントシステインに隣接するものである；
ｂ）Ｆｃフラグメントおよびシグナルペプチドが共に連結されて発現され、そして該シグナルペプチドがシステインに隣接する第１の位置またはバリンに隣接する第２の位置において細胞によりＦｃフラグメントから脱離されるような条件下で該細胞を培養すること；
ｃ）Ｎ末端システイン２つまたはＮ末端バリン２つまたはＮ末端システインとＮ末端バリンを有する該Ｆｃフラグメントの二量体を該細胞から単離すること；
ｄ）チオエステルを有する生物学的に活性な分子を化学合成すること；
ｅ）ｃ）の二量体にｄ）の生物学的に活性な分子を反応させることにより、生物学的に活性な分子に連結したＦｃを含む第１の鎖および如何なる生物学的に活性な分子にも免疫グロブリンの可変領域にも連結していないＦｃを含む第２の鎖を含むキメラ蛋白を作成すること、
を含む、方法。
【請求項１５８】
チオエステルがＣ末端チオエステルである、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１５９】
リンカーが（ＧＧＧＧＳ）３である、請求項２０に記載のキメラ蛋白。
【請求項１６０】
混合物から単量体−二量体ハイブリッドを単離する方法であって、混合物が下記成分：
ａ）第１および第２のポリペプチド鎖を含む単量体−二量体ハイブリッドであって、ここで第１の鎖は生物学的に活性な分子および免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分を含み、そして第２の鎖は生物学的に活性な分子を有さない免疫グロブリン定常領域または免疫グロブリン可変領域の少なくとも部分を含むもの；
ｂ）第１および第２のポリペプチド鎖を含む二量体であって、ここで第１および第２の鎖は両方とも生物学的に活性な分子および免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分を含むもの；
ｃ）免疫グロブリン定常領域の部分；
を含み；該方法は
１）単量体−二量体ハイブリッドおよび二量体の両方が固体支持体に連結した染料リガンドに結合するような適当な条件下で染料リガンドに混合物を接触させること；
２）免疫グロブリン定常領域の未結合の部分を除去すること：
３）単量体−二量体ハイブリッドと固体支持体に連結した染料リガンドとの間の結合が破壊されるように１）の適当な条件を改変すること；
４）単量体−二量体ハイブリッドを単離すること；
を含む、方法。
【請求項１６１】
免疫グロブリンの部分がＦｃフラグメントである、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６２】
染料リガンドがバイオ模倣物分子である、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６３】
染料リガンドがＭｉｍｅｔｉｃ Ｒｅｄ １ＴＭ、Ｍｉｍｅｔｉｃ Ｒｅｄ ２ＴＭ、Ｍｉｍｅｔｉｃ Ｏｒａｎｇｅ １ＴＭ、Ｍｉｍｅｔｉｃ Ｏｒａｎｇｅ ２ＴＭ、Ｍｉｍｅｔｉｃ Ｏｒａｎｇｅ ３ＴＭ、Ｍｉｍｅｔｉｃ Ｙｅｌｌｏｗ １ＴＭ、Ｍｉｍｅｔｉｃ Ｙｅｌｌｏｗ ２ＴＭ、Ｍｉｍｅｔｉｃ Ｇｒｅｅｎ １ＴＭ、Ｍｉｍｅｔｉｃ Ｂｌｕｅ １ＴＭおよびＭｉｍｅｔｉｃ Ｂｌｕｅ ２ＴＭから選択される、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６４】
キメラ蛋白がＥｐｏを含む、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６５】
染料リガンドがＭｉｍｅｔｉｃ Ｒｅｄ ２ＴＭである、請求項１６３または１６４に記載の方法。
【請求項１６６】
キメラ蛋白が第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子を含む、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６７】
キメラ蛋白が第ＩＸ因子を含む、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６８】
キメラ蛋白がインターフェロンを含む、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６９】
キメラ蛋白がＨＩＶ融合抑制剤を含む、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１７０】
染料リガンドがＭｉｍｅｔｉｃ Ｇｒｅｅｎ １ＴＭである、請求項１６３または１６７に記載の方法。
【請求項１７１】
適当な条件が４〜９の範囲のｐＨを有する緩衝液を含む、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１７２】
適当な条件を改変することが、染料リガンドへの単量体−二量体ハイブリッドの結合を破壊することにより単量体−二量体ハイブリッドを単離するのに十分な濃度で緩衝液に塩少なくとも１つを添加することを含む、請求項１７１に記載の方法。
【請求項１７３】
少なくとも１つの塩がＮａＣｌである、請求項１７２に記載の方法。
【請求項１７４】
緩衝液がｐＨ８を有する、請求項１７１に記載の方法。
【請求項１７５】
塩濃度が４００ｍＭであり、そしてキメラ蛋白がＥｐｏを含む、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７６】
より高濃度の塩が染料リガンドへの二量体の結合を破壊することにより二量体を単離するように、染料リガンドへの単量体−二量体ハイブリッドの結合を破壊する塩の濃度と比較してより高い濃度の塩を添加することを更に含む、請求項１７２に記載の方法。
【請求項１７７】
生物学的に活性な分子がインターフェロンαである、請求項１８に記載のキメラ蛋白。
【請求項１７８】
生物学的に活性な分子がインターフェロンβである、請求項１８に記載のキメラ蛋白。
【請求項１７９】
生物学的に活性な分子がインターフェロンαである、請求項４２に記載のキメラ蛋白。
【請求項１８０】
生物学的に活性な分子がインターフェロンβである、請求項４２に記載のキメラ蛋白。
【請求項１８１】
生物学的に活性な分子がインターフェロンαである、請求項６８に記載の方法。
【請求項１８２】
生物学的に活性な分子がインターフェロンβである、請求項６８に記載の方法。
【請求項１８３】
生物学的に活性な分子がインターフェロンαである、請求項９３に記載の方法。
【請求項１８４】
生物学的に活性な分子がインターフェロンβである、請求項９３に記載の方法。
【請求項１８５】
生物学的に活性な分子がインターフェロンαである、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１８６】
生物学的に活性な分子がインターフェロンβである、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１８７】
生物学的に活性な分子がインターフェロンαである、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１８８】
生物学的に活性な分子がインターフェロンβである、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１８９】
第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖はＥＰＯ、アミノ酸配列ＥＦＡＧＡＡＡＶを有する８アミノ酸リンカー、および、２９７位にアスパラギンからアラニンへの突然変異を含む免疫グロブリン定常領域のＦｃフラグメントを含み；そして、
該第２の鎖は２９７位にアスパラギンからアラニンへの突然変異を含む免疫グロブリン定常領域のＦｃフラグメントを含む、キメラ蛋白。
【請求項１９０】
アフィニティータグを更に含む、請求項１８９に記載のキメラ蛋白。
【請求項１９１】
第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖はＩＦＮβ、アミノ酸配列ＥＦＡＧＡＡＡＶを有する８アミノ酸リンカー、および、２９７位にアスパラギンからアラニンへの突然変異を含む免疫グロブリン定常領域のＦｃフラグメントを含み；そして、
該第２の鎖は２９７位にアスパラギンからアラニンへの突然変異を含む免疫グロブリン定常領域のＦｃフラグメントを含む、キメラ蛋白。
【請求項１９２】
アフィニティータグを更に含む、請求項１９１に記載のキメラ蛋白。
【請求項１９３】
第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖は第ＩＸ因子、アミノ酸配列ＥＦＡＧＡＡＡＶを有する８アミノ酸リンカー、および、２９７位にアスパラギンからアラニンへの突然変異を含む免疫グロブリン定常領域のＦｃフラグメントを含み；そして、
該第２の鎖は２９７位にアスパラギンからアラニンへの突然変異を含む免疫グロブリン定常領域のＦｃフラグメントを含む、キメラ蛋白。
【請求項１９４】
アフィニティータグを更に含む、請求項１９３に記載のキメラ蛋白。
【請求項１】
第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖が、生物学的に活性な分子および免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部分を含み、そして該第２の鎖が、生物学的に活性な分子も免疫グロブリンの可変領域も有さない免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分を含む、キメラ蛋白。
【請求項２】
該第２の鎖が更にアフィニティータグを含む、請求項１に記載のキメラ蛋白。
【請求項３】
アフィニティータグがＦＬＡＧタグである、請求項２に記載のキメラ蛋白。
【請求項４】
免疫グロブリンの部分がＦｃフラグメントである、請求項１に記載のキメラ蛋白。
【請求項５】
免疫グロブリンの部分がＦｃＲｎ結合相手である、請求項４に記載のキメラ蛋白。
【請求項６】
ＦｃＲｎ結合相手が免疫グロブリンのＦｃフラグメントのペプチド模倣物である、請求項５に記載のキメラ蛋白。
【請求項７】
免疫グロブリンがＩｇＧである、請求項１または５に記載のキメラ蛋白。
【請求項８】
生物学的に活性な分子がポリペプチドである、請求項１または５に記載のキメラ蛋白。
【請求項９】
ＩｇＧがＩｇＧ１またはＩｇＧ２である、請求項７に記載のキメラ蛋白。
【請求項１０】
生物学的に活性な分子がウィルス融合抑制剤である、請求項１または５に記載のキメラ蛋白。
【請求項１１】
ウィルス融合抑制剤がＨＩＶ融合抑制剤である、請求項１０に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２】
ＨＩＶ融合抑制剤がＴ２０（配列番号１）、Ｔ２１（配列番号２）またはＴ１２４９（配列番号３）である、請求項１１に記載のキメラ蛋白。
【請求項１３】
生物学的に活性な分子が凝固因子である、請求項１または５に記載のキメラ蛋白。
【請求項１４】
凝固因子が第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子である、請求項１３に記載のキメラ蛋白。
【請求項１５】
凝固因子が第ＩＸ因子である、請求項１３に記載のキメラ蛋白。
【請求項１６】
生物学的に活性な分子が低分子である、請求項１または５に記載のキメラ蛋白。
【請求項１７】
生物学的に活性な分子がロイプロリドである、請求項１６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１８】
生物学的に活性な分子がインターフェロンである、請求項１または５に記載のキメラ蛋白。
【請求項１９】
インターフェロンがインターフェロンαであり、１５〜２５アミノ酸のリンカーを有する、請求項１８に記載のキメラ蛋白。
【請求項２０】
インターフェロンαが１５〜２０アミノ酸のリンカーを有する、請求項１９に記載のキメラ蛋白。
【請求項２１】
生物学的に活性な分子が核酸である、請求項１または５に記載のキメラ蛋白。
【請求項２２】
核酸がＤＮＡまたはＲＮＡである、請求項２１に記載のキメラ蛋白。
【請求項２３】
核酸がアンチセンス分子である、請求項２１に記載のキメラ蛋白。
【請求項２４】
核酸がリボザイムである、請求項２１に記載のキメラ蛋白。
【請求項２５】
生物学的に活性な分子が成長因子である、請求項１または５に記載のキメラ蛋白。
【請求項２６】
成長因子がエリスロポエチンである、請求項２５に記載のキメラ蛋白。
【請求項２７】
低分子がＶＬＡ４拮抗剤である、請求項１６に記載のキメラ蛋白。
【請求項２８】
第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖が、生物学的に活性な分子および免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部分を含み、そして該第２の鎖が、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分および必要に応じてアフィニティータグよりなる、キメラ蛋白。
【請求項２９】
アフィニティータグがＦＬＡＧタグである、請求項２８に記載のキメラ蛋白。
【請求項３０】
第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖が、生物学的に活性な分子および免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部分を含み、そして該第２の鎖が、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分および必要に応じてアフィニティータグより本質的になる、キメラ蛋白。
【請求項３１】
アフィニティータグがＦＬＡＧタグである、請求項３０に記載のキメラ蛋白。
【請求項３２】
第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、
ａ）該第１の鎖が、生物学的に活性な分子、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分、および少なくとも１つの特異的な結合相手を有する第１のドメインを含み；そして、
ｂ）該第２の鎖が、生物学的に活性な分子も免疫グロブリンの可変領域も有さない免疫グロブリンの少なくとも一部分を含み、そして更に第２のドメインを含み、該第２のドメインは、該第１のドメインの特異的結合相手である、キメラ蛋白。
【請求項３３】
該第２の鎖が更にアフィニティータグを含む、請求項３２に記載のキメラ蛋白。
【請求項３４】
アフィニティータグがＦＬＡＧタグである、請求項３３に記載のキメラ蛋白。
【請求項３５】
免疫グロブリンの部分がＦｃフラグメントである、請求項３２に記載のキメラ蛋白。
【請求項３６】
免疫グロブリンがＩｇＧである、請求項３２または３５に記載のキメラ蛋白。
【請求項３７】
免疫グロブリンの部分がＦｃＲｎ結合相手である、請求項３５に記載のキメラ蛋白。
【請求項３８】
ＦｃＲｎ結合相手が免疫グロブリンのＦｃフラグメントのペプチド模倣物である、請求項３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項３９】
第１のドメインが非共有結合的に第２のドメインに結合する、請求項３２または３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項４０】
第１のドメインがロイシンジッパーコイルドコイルの半分であり、そして該第２のドメインが該ロイシンジッパーコイルドコイルの相補的な結合相手である、請求項３２または３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項４１】
生物学的に活性な分子がペプチドである、請求項３２または３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項４２】
生物学的に活性な分子がインターフェロンである、請求項３２または３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項４３】
インターフェロンがインターフェロンαであり、１５〜２５アミノ酸のリンカーを有する、請求項４２に記載のキメラ蛋白。
【請求項４４】
インターフェロンαが１５〜２０アミノ酸のリンカーを有する、請求項４３に記載のキメラ蛋白。
【請求項４５】
生物学的に活性な分子がロイプロリドである、請求項４１に記載のキメラ蛋白。
【請求項４６】
生物学的に活性な分子がウィルス融合抑制剤である、請求項３２または３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項４７】
ウィルス融合抑制剤がＨＩＶ融合抑制剤である、請求項４６に記載のキメラ蛋白。
【請求項４８】
ＨＩＶ融合抑制剤がＴ２０（配列番号１）、Ｔ２１（配列番号２）またはＴ１２４９（配列番号３）である、請求項４７に記載のキメラ蛋白。
【請求項４９】
生物学的に活性な分子が凝固因子である、請求項３２または３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項５０】
凝固因子が第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子である、請求項４９に記載のキメラ蛋白。
【請求項５１】
凝固因子が第ＩＸ因子である、請求項４９に記載のキメラ蛋白。
【請求項５２】
生物学的に活性な分子が低分子である、請求項３２または３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項５３】
低分子がＶＬＡ４拮抗剤である、請求項５２に記載のキメラ蛋白。
【請求項５４】
生物学的に活性な分子が核酸を含む、請求項３２または３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項５５】
核酸がＤＮＡまたはＲＮＡである、請求項５４に記載のキメラ蛋白。
【請求項５６】
核酸がアンチセンス核酸である、請求項５４に記載のキメラ蛋白。
【請求項５７】
核酸がリボザイムである、請求項５４に記載のキメラ蛋白。
【請求項５８】
生物学的に活性な分子が成長因子またはホルモンである、請求項３２または３７に記載のキメラ蛋白。
【請求項５９】
成長因子がエリスロポエチンである、請求項５８に記載のキメラ蛋白。
【請求項６０】
請求項１、５、３２または３７に記載のキメラ蛋白、および薬学的に受容可能な賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項６１】
第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、
ａ）該第１の鎖が、生物学的に活性な分子、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分、および少なくとも１つの特異的な結合相手を有する第１のドメインを含み；そして、
ｂ）該第２の鎖が、免疫グロブリンの少なくとも一部分、第２のドメインおよび必要に応じてアフィニティータグよりなり、該第２のドメインは、該第１のドメインの特異的結合相手である、キメラ蛋白。
【請求項６２】
アフィニティータグがＦＬＡＧタグである、請求項６１に記載のキメラ蛋白。
【請求項６３】
第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、
ａ）該第１の鎖が、生物学的に活性な分子、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分および少なくとも１つの特異的な結合相手を有する第１のドメインを含み；そして、
ｂ）該第２の鎖が、免疫グロブリンの少なくとも一部分、第２のドメイン、および必要に応じてアフィニティータグより本質的になり、該第２のドメインは、該第１のドメインの特異的結合相手である、キメラ蛋白。
【請求項６４】
アフィニティータグがＦＬＡＧタグである、請求項６３に記載のキメラ蛋白。
【請求項６５】
生物学的に活性なキメラ蛋白の製造方法であって、該方法が、下記工程：
ａ）免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分をコードする第２のＤＮＡ分子に作動可能に連結した生物学的に活性な分子を含むポリペプチドをコードするＤＮＡ分子を含む第１のＤＮＡコンストラクトで、第１の細胞をトランスフェクトすること；
ｂ）生物学的に活性な分子も免疫グロブリンの可変領域も有さない免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分を含むポリペプチドをコードするＤＮＡ分子を含む第２のＤＮＡコンストラクトで、第２の細胞をトランスフェクトすること；
ｃ）該第１のＤＮＡコンストラクトおよび該第２のＤＮＡコンストラクトによりコードされるポリペプチドが発現されるような条件下で、ａ）およびｂ）の細胞を培養すること；ならびに、
ｄ）該トランスフェクトされた細胞からａ）およびｂ）の二量体を単離すること、
を含む、方法。
【請求項６６】
免疫グロブリン定常領域の該部分がＦｃＲｎ結合相手である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
生物学的に活性な分子がポリペプチドである、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項６８】
生物学的に活性な分子がインターフェロンである、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項６９】
インターフェロンがインターフェロンαであり、１５〜２５アミノ酸のリンカーを有する、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
インターフェロンαが１５〜２０アミノ酸のリンカーを有する、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
生物学的に活性な分子がペプチドである、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項７２】
生物学的に活性な分子がウィルス融合抑制剤である、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項７３】
ウィルス融合抑制剤がＨＩＶウイルス融合抑制剤である、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
ＨＩＶウイルス融合抑制剤がＴ２０（配列番号１）、Ｔ２１（配列番号２）またはＴ１２４９（配列番号３）である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
生物学的に活性な分子が凝固因子である、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項７６】
凝固因子が第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
凝固因子が第ＩＸ因子である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
生物学的に活性な分子が低分子である、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項７９】
生物学的に活性な分子が核酸を含む、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項８０】
核酸がＤＮＡまたはＲＮＡである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
核酸がアンチセンス分子である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８２】
核酸がリボザイムである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８３】
生物学的に活性な分子が成長因子またはホルモンを含む、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項８４】
成長因子がエリスロポエチンである、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
二量体がクロマトグラフィーにより単離される、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項８６】
細胞が真核細胞である、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項８７】
真核細胞がＣＨＯ細胞である、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
細胞が原核細胞である、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項８９】
原核細胞がＥ．ｃｏｌｉである、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
疾患または状態が治療されるように対象にキメラ蛋白を投与することを含む、該疾患または状態を有する試験対象の治療方法であって、該キメラ蛋白は第１および第２のポリペプチド鎖を含み、
ａ）該第１の鎖は、ＦｃＲｎ結合相手および生物学的に活性な分子を含み、そして
ｂ）該第２の鎖は、生物学的に活性な分子も免疫グロブリンの可変領域も有さないＦｃＲｎ結合相手を含む、方法。
【請求項９１】
該キメラ蛋白が静脈内、皮下、経口、口内、舌下、経鼻、非経腸、直腸内、膣内または肺経路を介して投与される、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
該疾患または状態がウィルス感染である、請求項９０に記載の方法。
【請求項９３】
生物学的に活性な分子がインターフェロンである、請求項９０に記載の方法。
【請求項９４】
インターフェロンがインターフェロンαであり、そして１５〜２５アミノ酸のリンカーを有する、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
インターフェロンαが１５〜２０アミノ酸のリンカーを有する、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
該疾患または状態がＨＩＶである、請求項９０に記載の方法。
【請求項９７】
該生物学的に活性な分子がウィルス融合抑制剤である、請求項９０に記載の方法。
【請求項９８】
該ウィルス融合抑制剤がＴ２０、Ｔ２１またはＴ１２４９である、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
該疾患または状態が止血障害である、請求項９０に記載の方法。
【請求項１００】
該疾患または状態が血友病Ａである、請求項９０に記載の方法。
【請求項１０１】
該疾患または状態が血友病Ｂである、請求項９０に記載の方法。
【請求項１０２】
該生物学的に活性な分子が第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子である、請求項９０に記載の方法。
【請求項１０３】
該生物学的に活性な分子が第ＩＸ因子である、請求項９０に記載の方法。
【請求項１０４】
該疾患または状態が貧血である、請求項９０に記載の方法。
【請求項１０５】
該生物学的に活性な分子がエリスロポエチンである、請求項９０に記載の方法。
【請求項１０６】
下記式のキメラ蛋白：
Ｘ−Ｌａ−Ｆ：ＦまたはＦ：Ｆ−Ｌａ−Ｘ
式中、Ｘは生物学的に活性な分子であり、Ｌはリンカーであり、Ｆは免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分であり、そして、ａは任意の整数またはゼロである、キメラ蛋白。
【請求項１０７】
ＦがＦｃＲｎ結合相手である、請求項１０６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１０８】
ＦｃＲｎが免疫グロブリンのＦｃフラグメントのペプチド模倣物である、請求項１０６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１０９】
各Ｆが他のＦと化学的に会合している、請求項１０６または１０７に記載のキメラ蛋白。
【請求項１１０】
化学的会合が非共有結合性の相互作用である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
化学的結合が共有結合である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１２】
化学的結合がジスルフィド結合である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１３】
Ｆがジスルフィド結合ではない結合によりＦに連結されている、請求項１０６または１０７に記載のキメラ蛋白。
【請求項１１４】
ＦがＩｇＧ免疫グロブリン定常領域である、請求項１０６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１１５】
ＦがＩｇＧ１である、請求項１０６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１１６】
ＦがＦｃフラグメントである、請求項１０６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１１７】
Ｘがポリペプチドである、請求項１０６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１１８】
Ｘがロイプロリドである、請求項１０６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１１９】
Ｘが低分子である、請求項１０６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２０】
低分子がＶＬＡ４拮抗剤である、請求項１１９に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２１】
Ｘがウィルス融合抑制剤である、請求項１０６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２２】
ウィルス融合抑制剤がＨＩＶ融合抑制剤である、請求項１２１に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２３】
ＨＩＶ融合抑制剤がＴ２０（配列番号１）、Ｔ２１（配列番号２）またはＴ１２４９（配列番号３）である、請求項１２２に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２４】
Ｘが凝固因子である、請求項１０６または１０７に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２５】
凝固因子が第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子である、請求項１２４に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２６】
凝固因子が第ＩＸ因子である、請求項１２４に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２７】
Ｘが核酸である、請求項１０６または１０７に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２８】
核酸がＤＮＡまたはＲＮＡ分子である、請求項１２７に記載のキメラ蛋白。
【請求項１２９】
Ｘが成長因子である、請求項１０６または１０７に記載のキメラ蛋白。
【請求項１３０】
成長因子がエリスロポエチンである、請求項１２９に記載のキメラ蛋白。
【請求項１３１】
請求項１、５、３２、３７、１０６または１０７のキメラ蛋白を対象に投与することを含む、該対象における疾患または状態の治療方法。
【請求項１３２】
疾患または状態がウィルス感染である、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３３】
生物学的に活性な分子がインターフェロンである、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３４】
インターフェロンがインターフェロンαであり、そして１５〜２５アミノ酸のリンカーを有する、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１３５】
インターフェロンαが１５〜２０アミノ酸のリンカーを有する、請求項１３４に記載の方法。
【請求項１３６】
ウィルス感染がＨＩＶである、請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３７】
疾患または状態が出血障害である、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３８】
出血障害が血友病Ａである、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
出血障害が血友病Ｂである、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４０】
疾患または状態が貧血である、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１４１】
キメラ蛋白が静脈内、筋肉内、皮下、経口、口内、舌下、経鼻、直腸内、膣内、エアロゾルを介して、または肺経路を介して投与される、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１４２】
キメラ蛋白が肺経路を介して投与される、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
キメラ蛋白が経口投与される、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４４】
免疫グロブリンがＩｇＧである、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１４５】
免疫グロブリンの部分がＦｃフラグメントである、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１４６】
共に連結された第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖が生物学的に活性な分子および免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分を含み、そして該第２の鎖が第１の鎖の生物学的に活性な分子を有さない免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分を含み、そして、該第２の鎖が２ｋＤより大きい分子量を有する如何なる分子にも共有結合していない、キメラ蛋白。
【請求項１４７】
免疫グロブリン定常領域の部分がＦｃＲｎ結合相手である、請求項１４６に記載のキメラ蛋白。
【請求項１４８】
共に連結された第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖が生物学的に活性な分子および免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分を含み、そして該第２の鎖が該第１のポリペプチド鎖の免疫グロブリンの部分を除き如何なる他の分子にも共有結合的に連結していない免疫グロブリンの定常領域の少なくとも部分を含む、キメラ蛋白。
【請求項１４９】
免疫グロブリン定常領域の部分がＦｃＲｎ結合相手である、請求項１４８に記載のキメラ蛋白。
【請求項１５０】
共に連結された第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖が生物学的に活性な分子および免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分を含み、そして該第２の鎖が免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分よりなる、キメラ蛋白。
【請求項１５１】
免疫グロブリン定常領域の部分がＦｃＲｎ結合相手である、請求項１５０に記載のキメラ蛋白。
【請求項１５２】
共に連結された第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖が生物学的に活性な分子および免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分を含み、そして該第２の鎖が第１の鎖の生物学的に活性な分子を有さない免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分および共有結合した２ｋＤ未満の分子量を有する分子を含む、キメラ蛋白。
【請求項１５３】
免疫グロブリン定常領域の部分がＦｃＲｎ結合相手である、請求項１５２に記載のキメラ蛋白。
【請求項１５４】
生物学的に活性な分子に連結された免疫グロブリンのＦｃフラグメントを含むキメラ蛋白の製造方法であって、該方法が、下記工程：
ａ）免疫グロブリンのＦｃフラグメントをコードするＤＮＡ配列およびインテインをコードする第２のＤＮＡ配列を含むＤＮＡコンストラクトで細胞をトランスフェクトすること；
ｂ）Ｆｃフラグメントおよびインテインが発現される条件下で該細胞を培養すること；
ｃ）該細胞から該Ｆｃフラグメントおよびインテインを単離すること；
ｄ）Ｎ末端Ｃｙｓを有する生物学的に活性な分子を化学合成すること；
ｅ）ｃ）の単離されたインテインＦｃをＭＥＳＮＡと反応させることによりＣ末端チオエステルを発生させること；
ｆ）ｄ）の生物学的に活性な分子をｅ）のＦｃと反応させることにより生物学的に活性な分子に連結したＦｃを含むキメラ蛋白を作成すること；
を含む、方法。
【請求項１５５】
生物学的に活性な分子に連結された免疫グロブリンのＦｃフラグメントを含むキメラ蛋白の製造方法であって、該方法が、下記工程：
ａ）免疫グロブリンのＦｃフラグメントをコードするＤＮＡ配列およびシグナルペプチドをコードする第２のＤＮＡ配列を含むＤＮＡコンストラクトで細胞をトランスフェクトすること、ここで該シグナルペプチドはＦｃフラグメントシステインに隣接するものである；
ｂ）Ｆｃフラグメントおよびシグナルペプチドが発現され、そして、Ｆｃフラグメントがシグナルペプチドを有さずＮ末端システインを伴って細胞から分泌されるような条件下で該細胞を培養すること；
ｃ）該細胞からＮ末端システインを有する該Ｆｃフラグメントの二量体を単離すること；
ｄ）チオエステルを有する生物学的に活性な分子を化学合成すること；
ｅ）生物学的に活性な分子がｃ）の二量体の１つの鎖に連結できるような条件下でｃ）のＦｃにｄ）の生物学的に活性な分子を反応させることにより生物学的に活性な分子に連結されたＦｃを含むキメラ蛋白を作成すること；
を含む、方法。
【請求項１５６】
チオエステルがＣ末端チオエステルである、請求項１５５に記載の方法。
【請求項１５７】
生物学的に活性な分子に連結された免疫グロブリンのＦｃフラグメントを含むキメラ蛋白の製造方法であって、該方法が、下記工程：
ａ）免疫グロブリンのＦｃフラグメントをコードするＤＮＡ配列およびシグナルペプチドをコードする第２のＤＮＡ配列を含むＤＮＡコンストラクトで細胞をトランスフェクトすること、ここで該シグナルペプチドはＦｃフラグメントシステインに隣接するものである；
ｂ）Ｆｃフラグメントおよびシグナルペプチドが共に連結されて発現され、そして該シグナルペプチドがシステインに隣接する第１の位置またはバリンに隣接する第２の位置において細胞によりＦｃフラグメントから脱離されるような条件下で該細胞を培養すること；
ｃ）Ｎ末端システイン２つまたはＮ末端バリン２つまたはＮ末端システインとＮ末端バリンを有する該Ｆｃフラグメントの二量体を該細胞から単離すること；
ｄ）チオエステルを有する生物学的に活性な分子を化学合成すること；
ｅ）ｃ）の二量体にｄ）の生物学的に活性な分子を反応させることにより、生物学的に活性な分子に連結したＦｃを含む第１の鎖および如何なる生物学的に活性な分子にも免疫グロブリンの可変領域にも連結していないＦｃを含む第２の鎖を含むキメラ蛋白を作成すること、
を含む、方法。
【請求項１５８】
チオエステルがＣ末端チオエステルである、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１５９】
リンカーが（ＧＧＧＧＳ）３である、請求項２０に記載のキメラ蛋白。
【請求項１６０】
混合物から単量体−二量体ハイブリッドを単離する方法であって、混合物が下記成分：
ａ）第１および第２のポリペプチド鎖を含む単量体−二量体ハイブリッドであって、ここで第１の鎖は生物学的に活性な分子および免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分を含み、そして第２の鎖は生物学的に活性な分子を有さない免疫グロブリン定常領域または免疫グロブリン可変領域の少なくとも部分を含むもの；
ｂ）第１および第２のポリペプチド鎖を含む二量体であって、ここで第１および第２の鎖は両方とも生物学的に活性な分子および免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分を含むもの；
ｃ）免疫グロブリン定常領域の部分；
を含み；該方法は
１）単量体−二量体ハイブリッドおよび二量体の両方が固体支持体に連結した染料リガンドに結合するような適当な条件下で染料リガンドに混合物を接触させること；
２）免疫グロブリン定常領域の未結合の部分を除去すること：
３）単量体−二量体ハイブリッドと固体支持体に連結した染料リガンドとの間の結合が破壊されるように１）の適当な条件を改変すること；
４）単量体−二量体ハイブリッドを単離すること；
を含む、方法。
【請求項１６１】
免疫グロブリンの部分がＦｃフラグメントである、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６２】
染料リガンドがバイオ模倣物分子である、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６３】
染料リガンドがＭｉｍｅｔｉｃ Ｒｅｄ １ＴＭ、Ｍｉｍｅｔｉｃ Ｒｅｄ ２ＴＭ、Ｍｉｍｅｔｉｃ Ｏｒａｎｇｅ １ＴＭ、Ｍｉｍｅｔｉｃ Ｏｒａｎｇｅ ２ＴＭ、Ｍｉｍｅｔｉｃ Ｏｒａｎｇｅ ３ＴＭ、Ｍｉｍｅｔｉｃ Ｙｅｌｌｏｗ １ＴＭ、Ｍｉｍｅｔｉｃ Ｙｅｌｌｏｗ ２ＴＭ、Ｍｉｍｅｔｉｃ Ｇｒｅｅｎ １ＴＭ、Ｍｉｍｅｔｉｃ Ｂｌｕｅ １ＴＭおよびＭｉｍｅｔｉｃ Ｂｌｕｅ ２ＴＭから選択される、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６４】
キメラ蛋白がＥｐｏを含む、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６５】
染料リガンドがＭｉｍｅｔｉｃ Ｒｅｄ ２ＴＭである、請求項１６３または１６４に記載の方法。
【請求項１６６】
キメラ蛋白が第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子を含む、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６７】
キメラ蛋白が第ＩＸ因子を含む、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６８】
キメラ蛋白がインターフェロンを含む、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６９】
キメラ蛋白がＨＩＶ融合抑制剤を含む、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１７０】
染料リガンドがＭｉｍｅｔｉｃ Ｇｒｅｅｎ １ＴＭである、請求項１６３または１６７に記載の方法。
【請求項１７１】
適当な条件が４〜９の範囲のｐＨを有する緩衝液を含む、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１７２】
適当な条件を改変することが、染料リガンドへの単量体−二量体ハイブリッドの結合を破壊することにより単量体−二量体ハイブリッドを単離するのに十分な濃度で緩衝液に塩少なくとも１つを添加することを含む、請求項１７１に記載の方法。
【請求項１７３】
少なくとも１つの塩がＮａＣｌである、請求項１７２に記載の方法。
【請求項１７４】
緩衝液がｐＨ８を有する、請求項１７１に記載の方法。
【請求項１７５】
塩濃度が４００ｍＭであり、そしてキメラ蛋白がＥｐｏを含む、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７６】
より高濃度の塩が染料リガンドへの二量体の結合を破壊することにより二量体を単離するように、染料リガンドへの単量体−二量体ハイブリッドの結合を破壊する塩の濃度と比較してより高い濃度の塩を添加することを更に含む、請求項１７２に記載の方法。
【請求項１７７】
生物学的に活性な分子がインターフェロンαである、請求項１８に記載のキメラ蛋白。
【請求項１７８】
生物学的に活性な分子がインターフェロンβである、請求項１８に記載のキメラ蛋白。
【請求項１７９】
生物学的に活性な分子がインターフェロンαである、請求項４２に記載のキメラ蛋白。
【請求項１８０】
生物学的に活性な分子がインターフェロンβである、請求項４２に記載のキメラ蛋白。
【請求項１８１】
生物学的に活性な分子がインターフェロンαである、請求項６８に記載の方法。
【請求項１８２】
生物学的に活性な分子がインターフェロンβである、請求項６８に記載の方法。
【請求項１８３】
生物学的に活性な分子がインターフェロンαである、請求項９３に記載の方法。
【請求項１８４】
生物学的に活性な分子がインターフェロンβである、請求項９３に記載の方法。
【請求項１８５】
生物学的に活性な分子がインターフェロンαである、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１８６】
生物学的に活性な分子がインターフェロンβである、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１８７】
生物学的に活性な分子がインターフェロンαである、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１８８】
生物学的に活性な分子がインターフェロンβである、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１８９】
第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖はＥＰＯ、アミノ酸配列ＥＦＡＧＡＡＡＶを有する８アミノ酸リンカー、および、２９７位にアスパラギンからアラニンへの突然変異を含む免疫グロブリン定常領域のＦｃフラグメントを含み；そして、
該第２の鎖は２９７位にアスパラギンからアラニンへの突然変異を含む免疫グロブリン定常領域のＦｃフラグメントを含む、キメラ蛋白。
【請求項１９０】
アフィニティータグを更に含む、請求項１８９に記載のキメラ蛋白。
【請求項１９１】
第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖はＩＦＮβ、アミノ酸配列ＥＦＡＧＡＡＡＶを有する８アミノ酸リンカー、および、２９７位にアスパラギンからアラニンへの突然変異を含む免疫グロブリン定常領域のＦｃフラグメントを含み；そして、
該第２の鎖は２９７位にアスパラギンからアラニンへの突然変異を含む免疫グロブリン定常領域のＦｃフラグメントを含む、キメラ蛋白。
【請求項１９２】
アフィニティータグを更に含む、請求項１９１に記載のキメラ蛋白。
【請求項１９３】
第１および第２のポリペプチド鎖を含むキメラ蛋白であって、該第１の鎖は第ＩＸ因子、アミノ酸配列ＥＦＡＧＡＡＡＶを有する８アミノ酸リンカー、および、２９７位にアスパラギンからアラニンへの突然変異を含む免疫グロブリン定常領域のＦｃフラグメントを含み；そして、
該第２の鎖は２９７位にアスパラギンからアラニンへの突然変異を含む免疫グロブリン定常領域のＦｃフラグメントを含む、キメラ蛋白。
【請求項１９４】
アフィニティータグを更に含む、請求項１９３に記載のキメラ蛋白。
【図１】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図２Ｄ】
【図２Ｅ】
【図２Ｆ】
【図２Ｇ】
【図２Ｈ】
【図２Ｉ】
【図２Ｊ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図３Ｄ】
【図３Ｅ】
【図３Ｆ】
【図３Ｇ】
【図３Ｈ】
【図３Ｉ】
【図３Ｊ】
【図４】
【図５ａ】
【図５ｂ】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７ａ】
【図１７ｂ】
【図１８Ａ】
【図１８Ｂ】
【図１８Ｃ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図２Ｄ】
【図２Ｅ】
【図２Ｆ】
【図２Ｇ】
【図２Ｈ】
【図２Ｉ】
【図２Ｊ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図３Ｄ】
【図３Ｅ】
【図３Ｆ】
【図３Ｇ】
【図３Ｈ】
【図３Ｉ】
【図３Ｊ】
【図４】
【図５ａ】
【図５ｂ】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７ａ】
【図１７ｂ】
【図１８Ａ】
【図１８Ｂ】
【図１８Ｃ】
【公表番号】特表２００７−５００７４４（Ｐ２００７−５００７４４Ａ）
【公表日】平成１９年１月１８日（２００７．１．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５３２８０７（Ｐ２００６−５３２８０７）
【出願日】平成１６年５月６日（２００４．５．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１４０６４
【国際公開番号】ＷＯ２００５／００１０２５
【国際公開日】平成１７年１月６日（２００５．１．６）
【出願人】（５０５００７３６４）シントニックス・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド (7)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年１月１８日（２００７．１．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年５月６日（２００４．５．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１４０６４
【国際公開番号】ＷＯ２００５／００１０２５
【国際公開日】平成１７年１月６日（２００５．１．６）
【出願人】（５０５００７３６４）シントニックス・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド (7)
【Ｆターム（参考）】
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