毛乳頭細胞増殖促進剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、アンドロゲン受容体結合阻害剤、血管内皮増殖因子産生促進剤、骨形成タンパク質−２産生促進剤、インスリン様増殖因子−１産生促進剤、育毛剤及び頭髪化粧料
【課題】優れた作用を有し、安全性の高い、毛乳頭細胞増殖促進剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、アンドロゲン受容体結合阻害剤、血管内皮増殖因子産生促進剤、骨形成タンパク質−２産生促進剤、インスリン様増殖因子−１産生促進剤、育毛剤及び頭髪化粧料を提供すること。
【解決手段】チライトからの抽出物、アマロゲンチン及び／又はアマロスウェリンを有効成分として含有することを特徴とする毛乳頭細胞増殖促進剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、アンドロゲン受容体結合阻害剤、血管内皮増殖因子産生促進剤、骨形成タンパク質−２産生促進剤、インスリン様増殖因子−１産生促進剤、育毛剤及び頭髪化粧料である。
【解決手段】チライトからの抽出物、アマロゲンチン及び／又はアマロスウェリンを有効成分として含有することを特徴とする毛乳頭細胞増殖促進剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、アンドロゲン受容体結合阻害剤、血管内皮増殖因子産生促進剤、骨形成タンパク質−２産生促進剤、インスリン様増殖因子−１産生促進剤、育毛剤及び頭髪化粧料である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、毛乳頭細胞増殖促進作用を有する毛乳頭細胞増殖促進剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用を有するテストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、アンドロゲン受容体結合阻害作用を有するアンドロゲン受容体結合阻害剤、血管内皮増殖因子産生促進作用を有する血管内皮増殖因子産生促進剤、骨形成タンパク質−２産生促進作用を有する骨形成タンパク質−２産生促進剤、インスリン様増殖因子−１産生促進作用を有するインスリン様増殖因子−１産生促進剤、育毛剤及び頭髪化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
毛髪の成長は、成長期、退行期、休止期からなる周期的なヘアサイクル（毛周期）に従って成長及び脱落を繰り返している。このヘアサイクルのうち、休止期から成長期へかけての新たな毛包が形成されるステージが、発毛に最も重要であると考えられている。そして、このステージにおける毛包上皮系細胞の増殖・分化に重要な役割を果たしているのが、毛乳頭細胞であると考えられている。毛乳頭細胞は、毛根近傍にある外毛根鞘細胞とマトリックス細胞とからなる毛包上皮系細胞の内側にあって、基底膜に包まれている毛根の根幹部分に位置する細胞であり、毛包上皮系細胞へ働きかけてその増殖を促すなど、毛髪への分化に重要な役割を担っている（例えば、非特許文献１参照）。
【０００３】
このように、毛乳頭細胞は、毛包上皮系細胞の増殖・分化及び毛髪の形成において最も重要な役割を果たしており、従来、毛乳頭細胞に被験試料を接触させて、その細胞の増殖活性の有無及び／または強弱を測定することで、その被験試料の育毛効果を検定する方法が提案されている（例えば、特許文献１参照）。また、従来、毛乳頭細胞増殖促進作用を有する生薬としては、例えばハトムギ抽出物、ワイルドタイム抽出物、スギナ抽出物、ショウブ抽出物、ローズマリー抽出物、ウコン抽出物、シラカバ抽出物及びコウチャ抽出物などが提案されている（例えば、特許文献２参照）。
【０００４】
多くのステロイドホルモンは、産生臓器から分泌された分子型のまま、受容体と結合してその作用を発現するが、アンドロゲンと総称される男性ホルモンの場合、例えばテストステロンは、標的臓器の細胞内に入ってテストステロン５α−レダクターゼにより５α−ジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）に還元されてから受容体と結合し、アンドロゲンとしての作用を発現する。
【０００５】
アンドロゲンは重要なホルモンであるが、それが過度に作用すると、男性型禿頭、多毛症、脂漏症、座瘡、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟など、さまざまな好ましくない症状を誘発する。そこで、過剰のアンドロゲンの作用を抑制することによりこれら好ましくない症状を改善する手法が検討されている。具体的には、テストステロンを活性型５α−ＤＨＴに還元するテストステロン５α−レダクターゼの作用を阻害することにより、活性型５α−ＤＨＴが生じるのを抑制する方法と、テストステロンから生じた５α−ＤＨＴが受容体と結合するのを阻害することにより、アンドロゲン活性を発現させない方法とが提案されている。
【０００６】
前記方法が検証された結果、シプロテンアセテート、オキセンドロン、酢酸クロマジノンなどの有効性が確認された。しかしながら、前記化合物は、ステロイド類似構造を有しているために、ホルモン様作用などの好ましくない副作用を有するという欠点がある。また、従来、テストステロン−５αリダクターゼ阻害作用を有する生薬としては、例えばＣｈｏｅｒｏｓｐｏｎｄｉａｓ属に属する植物（例えば、特許文献３参照）、五斂子（例えば、特許文献４参照）、紅豆杉、鳥欖、幌傘楓、穿心蓮（例えば、特許文献５参照）などが知られている。また、これまでに、５α−ＤＨＴとその受容体との結合を阻害する作用を有する生薬としては、例えばマジト、カチュア（例えば、特許文献６参照）、藤茶（例えば、特許文献７参照）などが報告されている。
【０００７】
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は、分子量３４〜４６ｋＤａの糖蛋白質であり、血管内皮細胞に特異的な増殖因子として脳下垂体の濾胞細胞の培養液から発見され、血管透過性因子（ＶＰＦ）と同一物質であることがわかった。ＶＥＧＦは、下垂体細胞以外に、平滑筋細胞、マクロファージ、肺胞上皮細胞、肝細胞、毛乳頭細胞などの正常細胞で産生され、また、グリオーマ（神経膠腫）、乳癌、胃癌、大腸癌などの多くの腫瘍細胞からも産生されることが知られている。ＶＥＧＦは、血管内皮細胞に働き、細胞の増殖、遊走を促進させたり、血管新生を促進させたりする作用がある。ＶＥＧＦは、胎生期の心臓の形成時期に、強い発現が認められることが知られている。ＶＥＧＦ遺伝子が欠損すると血管系の異常が起こり、胎生期に死亡することが報告されており、ＶＥＧＦが、個体の発達、組織形成において極めて重要なはたらきを持つことが示唆されている。最近では、ＶＥＧＦファミリーの新しいメンバーであるＶＥＧＦ−Ｃが、強力なリンパ管新生因子として皮膚におけるリンパ管の成長を仲介していることが報告された。
【０００８】
ところで、毛包においては、外毛根鞘細胞及び毛乳頭細胞が、ＶＥＧＦを産生することが知られている（例えば、非特許文献２，３参照）。毛包においてＶＥＧＦの産生を阻害することは、ヘアサイクルの成長期の遅れと毛包サイズの矮小化に繋がることが見出され（例えば、非特許文献４参照）、このことから、毛包の発達や再生にＶＥＧＦが重要であることが示された。これまでに、ＶＥＧＦ産生の促進作用を有する植物エキスとして、ヒルガオ科のアサガオカラクサ属植物（例えば、特許文献８参照）、ローヤルゼリー（例えば、特許文献９参照）、Ｌ−グルタミン酸又はその塩、Ｌ−セリン、ＰＣＡ（ピロリドンカルボン酸）又はその塩、モノニトログアヤコールナトリウム、クロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｖｕｌｇａｒｉｓ）の抽出物、ユズ（Ｃｉｔｒｕｓ ｊｕｎｏｓ）の果実の抽出物、ウンシュウミカン（Ｃｉｔｒｕｓ ｕｎｓｈｉｕ）の果皮の抽出物、エイジツ（Ｒｏｓａ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）の果実の抽出物、イチョウ（Ｇｉｎｋｇｏ ｂｉｌｏｂａ）の葉の抽出物より選択されるもの（例えば、特許文献１１参照）などが知られている。
【０００９】
骨形成蛋白質（ＢＭＰ）は、異所的に骨形成を誘導するタンパク質として発見されたが、その後の研究によって、細胞増殖や分化調節を介して、体軸形成やほとんど全ての器官形成に必須の役割を果たす多機能因子であることが知られるようになった。皮膚においては、ＢＭＰが体毛を形成する器官である毛包の形成に促進的に関与することが報告されている。ＢＭＰは、約２０種のサブユニットの存在が報告されている。前記サブユニットは、幅広い生物種において基本的に配列が保存されており、各生物種の形態形成に関与することが示されている。
前記サブユニットの中で、骨形成タンパク質−２（ＢＭＰ−２）は、男性型脱毛症部位の毛乳頭細胞において、その遺伝子発現が低下していることが報告されている。そのため、この遺伝子に着目した育毛剤研究が注目されている（例えば、非特許文献１１参照）。
【００１０】
インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）は、インスリンに非常に良く似た構造及び作用を持つ分子量約７，５００のペプチドホルモンである。ＩＧＦ−１は、細胞の分化を促し、細胞の増殖を助けるなど、積極的に細胞を健康な状態に維持し（例えば、非特許文献５，６参照）、老化の進行を阻止することが知られている（例えば、非特許文献７参照）。
【００１１】
また、毛包の毛乳頭細胞において、ＩＧＦ−１が発現していることが示され（例えば、非特許文献８参照）、ＩＧＦ−１が毛根の活発化を介した育毛効果を有することが明らかになった。現在、ＩＧＦ−１を有効成分とする育毛剤が既に知られている（例えば、特許文献１２参照）。しかしながら、ＩＧＦ−１は動物由来成分であって分子量が大きいために、外用塗布による経皮吸収が困難であるなどの問題がある。また、ＩＧＦ−１産生促進作用を示す植物由来抽出物も見つかってはいるが、より優れたＩＧＦ−１産生促進作用を有する植物由来の物質が求められている。
【００１２】
以上のように、毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用及び育毛効果を有する各剤に対する需要は極めて高い。また、これらの作用及び効果を有する頭髪化粧料に対する需要も極めて高い。
しかしながら、従来においては、前記作用及び効果を有する具体的な有効成分が、未だに提案されていないという問題があった。また、具体的な有効成分が提案されているものについても、植物由来のものでなかったり、植物由来のものであっても前記作用及び効果が充分ではなかったりする、という問題があった。なお、植物由来であると、比較的安全性が高いので、日常的に摂取しやすいという利点がある。
【００１３】
一方、チライトは、（Ｃｈｉｒａｉｔｏ）とは、リンドウ科の植物であって、学名は「Ｓｗｅｒｔｉａ ｃｈｉｒａｔａ Ｂｕｃｈ−Ｈａｍ．ｅｘ．Ｃ．Ｂ．Ｃｌａｒｋｅ（Ｆｌ．Ｂｒ．Ｉｎｄ）」である。また、チライトは、「チレッタセンブリ」（Ｓｗｅｒｉｔｉａ ｃｈｉｒａｔａ）と称されることもある。チライトは、胃痛、下痢のほか消化不良や食欲不振、胃痛、腹痛、下痢にも使用されている。また、チライトは、苦味健胃薬、解熱に用いられ、ビルマ、マレーシア地方ではさらに緩下、強壮薬としたり、キナ皮の代用としてマラリアにも用い、熱病や腸チフスなどに広く応用されている（例えば、非特許文献９参照）。
【００１４】
【特許文献１】特開平１０−２２９９７８号公報
【特許文献２】特開２００６−２１９４０７号公報
【特許文献３】特開２００３−０５５１６２号公報
【特許文献４】特開２００２−２４１２９６号公報
【特許文献５】特開２００２−０８７９７６号公報
【特許文献６】特開２００２−２４１２９７号公報
【特許文献７】特開２００２−３０８７９０号公報
【特許文献８】特開２００３−１６０５０３号公報
【特許文献９】特開２００３−１９２５４１号公報
【特許文献１０】特開２００６−２８２５９７号公報
【特許文献１１】特開２００５−００２０６８号公報
【特許文献１２】特公平４−６０５６７号公報
【非特許文献１】「Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ」，１９９２年，第８巻，ｐ．５６−６１
【非特許文献２】Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１０６，１７−２３（１９９６）
【非特許文献３】Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．，２０９，６６１−６６８（１９９８）
【非特許文献４】Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０７，４０９−４１７（２００１）
【非特許文献５】アンチエイジングシリーズ１白髪・脱毛・育毛の実際，第６章
【非特許文献５】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１，２８８５３−２８８６０（１９９６）
【非特許文献６】Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，２０，３２５−３２９（２００２）
【非特許文献７】Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．，１１５，５０１−５０２（２００３）
【非特許文献８】Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，９９，３４３−３４９（１９９２）
【非特許文献９】原色牧野和漢薬草大図鑑、北隆館（２００２）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れた毛乳頭細胞増殖促進作用を有し、安全性の高い毛乳頭細胞増殖促進剤を提供することを目的とする。また、本発明は、優れたテストステロン５α−リダクターゼ阻害作用を有し、安全性の高いテストステロン５α−リダクターゼ阻害剤を提供することを目的とする。また、本発明は、優れたアンドロゲン受容体結合阻害作用を有し、安全性の高いアンドロゲン受容体結合阻害剤を提供することを目的とする。また、本発明は、優れたＶＥＧＦ産生促進作用を有し、安全性の高いＶＥＧＦ産生促進剤を提供することを目的とする。また、本発明は、ＢＭＰ−２産生促進作用を有し、安全性の高いＢＭＰ−２産生促進剤を提供することを目的とする。また、本発明は、優れたＩＧＦ−１産生促進作用産生促進作用を有し、安全性の高いＩＧＦ−１産生促進剤を提供することを目的とする。また、本発明は、優れた育毛効果を有し、安全性が高い育毛剤を提供することを目的とする。また、本発明は、頭髪に使用した場合に使用感が良く、優れた毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用及び育毛効果を発揮することができる頭髪化粧料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
前記課題を解決するため、本発明者らは鋭意検討した結果、以下のような知見を得た。即ち、チライトからの抽出物、アマロゲンチン又はアマロスウェリンが、優れた毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用及び育毛効果を有していた、という知見である。
【００１７】
前記したように、チライトは、胃痛、下痢のほか消化不良や食欲不振、胃痛、腹痛、下痢にも使用されていることは知られている。また、チライトは、苦味健胃薬、解熱に用いられ、ビルマ、マレーシア地方ではさらに緩下、強壮薬としたり、キナ皮の代用としてマラリアにも用い、熱病や腸チフスなどに広く応用されていることは知られている。
しかしながら、チライトからの抽出物、アマロゲンチン又はアマロスウェリンが、前記各作用及び効果を有していることは従来全く知られておらず、本発明者らの新たな知見である。
【００１８】
本発明は、本発明者らによる前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする毛乳頭細胞増殖促進剤である。
＜２＞ アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とするテストステロン５α−リダクターゼ阻害剤である。
＜３＞ アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とするアンドロゲン受容体結合阻害剤である。
＜４＞ チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤である。
＜５＞ チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする骨形成タンパク質−２（ＢＭＰ−２）産生促進剤である。
＜６＞ アマロゲンチンを有効成分として含有することを特徴とするインスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進剤である。
＜７＞ アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする育毛剤である。
＜８＞ アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを、毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進作用、骨形成タンパク質−２（ＢＭＰ−２）産生促進作用、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進作用及び育毛効果のうち少なくとも１つの有効成分として含有することを特徴とする頭髪化粧料である。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によると、従来における諸問題を解決することができ、優れた毛乳頭細胞増殖促進作用を有し、安全性の高い毛乳頭細胞増殖促進剤を提供することができる。また、本発明によると、優れたテストステロン５α−リダクターゼ阻害作用を有し、安全性の高いテストステロン５α−リダクターゼ阻害剤を提供することができる。また、本発明によると、優れたアンドロゲン受容体結合阻害作用を有し、安全性の高いアンドロゲン受容体結合阻害剤を提供することができる。また、本発明によると、優れたＶＥＧＦ産生促進作用を有し、安全性の高いＶＥＧＦ産生促進剤を提供することができる。また、本発明によると、ＢＭＰ−２産生促進作用を有し、安全性の高いＢＭＰ−２産生促進剤を提供することができる。また、本発明によると、優れたＩＧＦ−１産生促進作用産生促進作用を有し、安全性の高いＩＧＦ−１産生促進剤を提供することができる。また、本発明は、優れた育毛効果を奏することができ、安全性が高い育毛剤を提供することができる。また、本発明は、頭髪に使用した場合に使用感が良く、優れた毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用及び育毛効果を発揮することができる頭髪化粧料を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
（毛乳頭細胞増殖促進剤）
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
【００２１】
＜チライトからの抽出物＞
前記「チライト」（Ｃｈｉｒａｉｔｏ）とは、リンドウ科の植物であって、学名は「Ｓｗｅｒｔｉａ ｃｈｉｒａｔａ Ｂｕｃｈ−Ｈａｍ．ｅｘ．Ｃ．Ｂ．Ｃｌａｒｋｅ（Ｆｌ．Ｂｒ．Ｉｎｄ）」である。また、チライトは、「チレッタセンブリ」（Ｓｗｅｒｉｔｉａ ｃｈｉｒａｔａ）と称されることもある。
本発明において抽出される前記チライトの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、地上部や地中部が挙げられる。中でも、抽出効率や毛乳頭細胞の増殖促進効果などの観点から、地上部が好ましい。
【００２２】
前記「チライトからの抽出物」としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、チライトを抽出原料として得られる抽出液、前記抽出液の希釈液、前記抽出液の濃縮液、前記抽出液を乾燥して得られる乾燥物が挙げられる。中でも、取扱い易さの点から、濃縮液又は乾燥物が好ましい。また、前記チライトからの抽出物として、前記抽出液、希釈液、濃縮液及び乾燥物の、粗精製物又は精製物を利用してもよい。前記粗精製物又は精製物を利用する理由の一つとして、チライトからの抽出物が有する特有の匂いを、低減又は除去するための脱色や脱臭が挙げられるが、前記特有の匂いは、チライトからの抽出物を特に大量に使用しない限り、未精製のままでも実用上支障がないことが多い。
なお、前記精製物とは、毛乳頭細胞増殖促進作用を有する単一の化合物を意味するが、前記単一の化合物としては、後記するアマロゲンチンであってもよく、アマロスウェリンであってもよく、これら以外の化合物であってもよい。
【００２３】
＜アマロゲンチン＞
本発明における前記アマロゲンチン（ａｍａｒｏｇｅｎｔｉｎ）とは、ＩＵＰＡＣ命名法で、［（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−２−［［（１Ｓ，９Ｓ，１０Ｓ）−１０−ｅｔｈｅｎｙｌ−５−ｏｘｏ−４，８−ｄｉｏｘａｂｉｃｙｃｌｏ［４．４．０］ｄｅｃ−６−ｅｎ−９−ｙｌ］ｏｘｙ］−４，５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−６−（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｏｘａｎ−３−ｙｌ］ ２，４−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−６−（３−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｂｅｎｚｏａｔｅ）として表現される化合物である。アマロゲンチンの分子構造は、下記構造式（１）で表される。
【００２４】
【化１】
【００２５】
前記アマロゲンチンの由来としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、チライトからの抽出物に含有されていたものであってもよく、化学合成されたものであってもよい。前記アマロゲンチンが、チライトからの抽出物に含有されていた場合には、前記抽出物からアマロゲンチンを単離・精製して使用される。
【００２６】
なお、前記毛乳頭細胞増殖促進剤の有効成分として、前記アマロゲンチンそのものが含まれていてもよく、その薬理学的に許容される塩が含まれていてもよい。また、前記アマロゲンチン又はその薬理学的に許容される塩の、水和物又は溶媒和物が含まれていてもよい。また、前記アマロゲンチンは、毛乳頭細胞の増殖促進作用を損なわない限り、修飾又は置換されていてもよい。
【００２７】
前記薬理学的に許容される塩としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、塩酸塩、硫酸塩、臭化水素塩、硝酸塩、硫酸水素酸塩、リン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ-トルエンスルホン酸塩、樟脳スルホン酸塩、スルファミン酸塩、マンデル酸塩、プロピオン酸塩、グリコール酸塩、ステアリン酸塩、リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩、パモン酸塩、フェニル酢酸塩、グルタミン酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、スルファニル酸塩、２−アセトキシ安息香酸塩、エタンジスルホン酸塩、シュウ酸塩、イセチオン酸塩、ギ酸塩、トリフルオロ酢酸塩、エチルコハク酸塩、ラクトビオン酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、パラトルエンスルホン酸塩、ラウリル硫酸塩、アスパラギン酸塩、アジピン酸塩、ヨウ化水素酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、ピクリン酸塩、チオシアン酸塩、ウンデカン酸塩などが挙げられる。
【００２８】
＜アマロスウェリン＞
本発明における前記アマロスウェリン（ａｍａｒｏｓｗｅｒｉｎ）とは、ＩＵＰＡＣ命名法で、［（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−２−［（１０−ｅｔｈｅｎｙｌ−１−ｈｙｄｒｏｘｙ−５−ｏｘｏ−４，８−ｄｉｏｘａｂｉｃｙｃｌｏ［４．４．０］ｄｅｃ−６−ｅｎ−９−ｙｌ）ｏｘｙ］−４，５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−６−（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｏｘａｎ−３−ｙｌ］ ２，４−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−６−（３−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｂｅｎｚｏａｔｅ）として表現される化合物である。アマロスウェリンの分子構造は、下記構造式（２）で表される。
【００２９】
【化２】
【００３０】
前記アマロスウェリンの由来としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、チライトからの抽出物に含有されていたものであってもよく、化学合成されたものであってもよい。前記アマロスウェリンがチライトからの抽出物に含有されていた場合には、前記抽出物からアマロスウェリンを単離・精製して、使用される。
【００３１】
なお、前記毛乳頭細胞増殖促進剤の有効成分として、前記アマロスウェリンそのものが含まれていてもよく、その薬理学的に許容される塩が含まれていてもよい。また、前記アマロスウェリン又はその薬理学的に許容される塩の、水和物又は溶媒和物が含まれていてもよい。また、前記アマロスウェリンは、毛乳頭細胞の増殖促進作用を損なわない限り、修飾又は置換されていてもよい。前記薬理学的に許容される塩は、前記したものと同様であるので説明を省略する。
【００３２】
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤における有効成分としては、前記チライトからの抽出物、アマロゲンチン又はアマロスウェリンを１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
前記毛乳頭細胞増殖促進剤中の有効成分の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。また、前記毛乳頭細胞増殖促進剤は、前記有効成分そのものであってもよい。
【００３３】
＜その他の成分＞
前記毛乳頭細胞増殖促進剤における前記その他の成分としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、薬理学的に許容される担体が挙げられる。前記担体としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、例えば、前記有効成分を各種の剤型として用いる場合において、その剤型に応じて適宜選択することができる。前記剤型としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、投与方法に応じて適宜選択することができ、例えば、経口固形剤（錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、トローチ剤など）、経口液剤（内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤など）、注射剤（溶液、懸濁液、用事溶解用固形剤など）、吸入散剤、軟膏剤、外用液剤、貼付剤、点眼剤、点鼻剤及び点耳剤が挙げられる。
【００３４】
前記経口固形剤としては、例えば、前記有効成分に賦形剤、必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味・矯臭剤などの添加剤を加え、常法により製造することができる。
【００３５】
前記賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸などが挙げられる。
【００３６】
前記添加剤としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。また、前記結合剤としては、例えば、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドンなどが挙げられ、前記崩壊剤としては、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖などが挙げられ、前記滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコールなどが挙げられ、前記着色剤としては、酸化チタン、酸化鉄などが挙げられ、前記矯味・矯臭剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸などが挙げられる。
【００３７】
前記経口液剤としては、例えば、前記有効成分に、矯味・矯臭剤、緩衝剤、安定化剤などの添加剤を加え、常法により製造することができる。ここで、前記添加剤としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。前記矯味・矯臭剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸などが挙げられ、緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウムなどが挙げられ、安定剤としては、例えば、トラガント、アラビアゴム、ゼラチンなどが挙げられる。
【００３８】
前記注射剤としては、例えば、前記有効成分に、ｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤などを添加し、常法により皮下、筋肉内及び静脈内用注射剤を製造することができる。ここで、前記ｐＨ調節剤及び前記緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウムなどが挙げられる。
【００３９】
また、前記安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸などが挙げられる。前記等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、ブドウ糖などが挙げられる。前記局所麻酔剤としては、例えば、塩酸プロカイン、塩酸リドカインなどが挙げられる。
【００４０】
＜製造方法＞
−チライトから抽出物を抽出する方法−
チライトから抽出物を抽出する方法としては、特に制限はなく、一般に植物からその成分を抽出する際に用いられる抽出方法を適用することができ、例えば、抽出原料を乾燥した後、乾燥物をそのまま又は粗砕機を用いて粉砕して、抽出溶媒による抽出に供する方法が挙げられる。前記乾燥方法としては、特に制限はなく、例えば、天日で乾燥してもよく、通常使用される乾燥機を用いて乾燥してもよい。前記抽出原料としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、採取したままのチライトを抽出原料として用いてもよく、また、採取したチライトを、ヘキサン、ベンゼンなどの非極性溶媒によって脱脂などの前処理を施した後に、抽出原料として使用してもよい。抽出溶媒として極性溶媒を用いた場合には、チライトからの抽出処理が効率よく行うことができる点で、前記脱脂などの前処理を施すことが好ましい。
【００４１】
前記抽出溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、水、親水性有機溶媒、又は、水と親水性有機溶媒との混合液を、室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
前記水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水、これらの水に各種処理を施したものなどが挙げられる。前記各種処理としては、特に制限はなく、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化などが挙げられる。したがって、前記水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水なども含まれる。
【００４２】
前記親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール（ＥｔＯＨ）、プロピルアルコール、イソプロピルアルコールなどの炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトンなどの低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリンなどの炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられる。
【００４３】
前記水と親水性有機溶媒との混合液としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、前記親水性有機溶媒が低級アルコールの場合には、水１０質量部に対して１〜９０質量部添加することが好ましく、前記親水性有機溶媒が低級脂肪族ケトンの場合には、水１０質量部に対して１〜４０質量部添加することが好ましく、前記親水性有機溶媒が多価アルコールの場合には、水１０質量部に対して１〜９質量部添加することが好ましい。
【００４４】
前記抽出溶媒の量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、抽出原料の５〜１５倍量（重量比）が好ましい。
【００４５】
チライトから抽出物を抽出する際の抽出手順としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、室温又は還流加熱下で、任意の装置を用いて抽出することができる。具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、必要に応じて時々攪拌しながら、３０分から３時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより、抽出物を得ることができる。
【００４６】
前記室温又は還流加熱下における温度（抽出温度）としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、常温〜９５℃が好ましい。
また、前記任意の装置としては、例えば、ジムロート冷却管、ナス型フラスコ、三角フラスコ、マントルヒーターなどを組み合わせた装置などが挙げられる。
【００４７】
前記抽出液から希釈液、濃縮液、乾燥物、又は、これらの粗精製物若しくは精製物の調製方法としては、特に制限はなく、常法に従って前記抽出液を希釈、濃縮、乾燥、精製することで調製することができる。前記精製の方法としては、特に制限はなく、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理が挙げられる。
【００４８】
−アマロゲンチン及びアマロスウェリンの製造方法−
前記アマロゲンチン及びアマロスウェリンの製造方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、チライトからの抽出物からの単離・精製や、化学合成などにより製造することができる。
【００４９】
前記単離・精製する方法としては、特に制限はなく、常法により行うことができる。以下に、前記単離・精製する方法の具体例を示す。
まず、乾燥したチライトをエタノールなどの抽出溶媒に浸漬して得られた抽出液を濃縮し、多孔性樹脂などを用いたカラムクロマトグラフィーに供して、水、アルコール（メタノールなど）の順で溶出させ、アルコール（メタノールなど）で溶出される分画物として得る。このとき、前記分画物に対して、さらにＯＤＳ（オクタデシルシリル化シリカゲル）を用いた逆相シリカゲルクロマトグラフィーや再結晶などに供することで、粗精製物を得ることができる。
そして、前記分画物又は粗精製物を、例えば、液体クロマトグラフィーなどを用いて分離・精製することにより、精製されたアマロゲンチン及びアマロスウェリンを得ることができる。
【００５０】
また、前記合成方法としては、特に制限はなく、従来公知の方法により合成することができる。
【００５１】
＜用途＞
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有し、前記有効成分は毛乳頭細胞の増殖促進作用を有するものである。また、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、毛乳頭細胞の増殖促進作用を介して、毛乳頭を活性化することができる。したがって、前記毛乳頭細胞増殖促進剤は、毛乳頭細胞増殖促進作用を発揮すること、又は、毛乳頭を活性化することに意義のある、全ての用途に用いることができる。例えば、前記毛乳頭細胞増殖促進剤は、毛乳頭細胞の増殖促進機構、毛乳頭細胞の増殖促進により改善される症状の研究、毛乳頭細胞の増殖促進により改善される症状の予防や治療に利用することができる。
【００５２】
前記毛乳頭細胞増殖促進剤の具体的な態様としては、例えば、試薬用途の促進剤や、症状（疾患や、脱毛などの「好ましくない症状」を含む）の予防・治療用途の促進剤が挙げられる。
前記症状としては、例えば、薄毛、脱毛、男性型脱毛症などが挙げられる。
また、前記毛乳頭細胞増殖促進剤は、例えば、毛包上皮細胞の増殖や分化、毛乳頭細胞の増殖促進を介したＶＥＧＦの産生促進などに好適に利用することができる。
前記毛乳頭細胞増殖促進剤の使用対象となる動物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することできるが、特に哺乳類が好ましい。前記哺乳類としては、例えば、ヒト、サル、ウシ、ウマ、ブタ、マウス、ラットなどが挙げられ、中でも、ヒトが好ましい。
【００５３】
前記毛乳頭細胞増殖促進剤の使用方法としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、毛乳頭細胞に任意の方法で直接接触させることにより使用したり、頭髪（頭皮）に任意の方法で接触させることにより使用したりすることができる。
【００５４】
なお、本発明者らは、チライトからの抽出物、アマロゲンチン又はアマロスウェリンが、毛乳頭細胞促進作用だけでなく、例えば、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進作用、骨形成タンパク質−２（ＢＭＰ−２）産生促進作用、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進作用、育毛効果など、育毛に関する様々なメカニズムに関与することを明らかにした。
【００５５】
具体的には、チライトからの抽出物は、前記毛乳頭細胞促進作用以外に、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用などを有している。アマロゲンチンは、前記毛乳頭細胞促進作用以外に、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用、育毛効果などを有している。アマロスウェリンは、前記毛乳頭細胞促進作用だけでなく、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用、育毛効果などを有している。
【００５６】
したがって、前記チライトからの抽出物、アマロゲンチン又はアマロスウェリンは、毛乳頭細胞増殖促進剤の有効成分としてだけでなく、例えば、以下に示す用途の有効成分として使用することが出来る。なお、以下に示す各剤において、各有効成分やその他の成分の特性や製造方法については、前記した毛乳頭細胞増殖促進剤と同様であるので、重複する説明は省略する。
【００５７】
（テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤）
本発明のテストステロン５α−レダクターゼ阻害剤は、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくともいずれかを有効成分として含有することを特徴とする。もちろん、必要に応じて、その他の成分などを、適宜選択することができる。前記テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤は、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を発揮することに意義のある、全ての用途に用いることができる。例えば、前記テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤は、テストステロン５α−レダクターゼの阻害機構、テストステロン５α−レダクターゼの阻害により改善される症状の研究、テストステロン５α−レダクターゼの阻害により改善される症状の予防や治療に利用することができる。
【００５８】
前記テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤の具体的な態様としては、例えば、試薬用途の阻害剤や、症状の予防・治療用途の抑制剤が挙げられる。
前記症状としては、例えば、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟などが挙げられる。
また、前記テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤は、例えば、５α−ジヒドロテストステロンを介する性分化機構の研究などに好適に利用することができる。
【００５９】
（アンドロゲン受容体結合阻害剤）
本発明のアンドロゲン受容体結合阻害剤は、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくともいずれかを有効成分として含有することを特徴とする。もちろん、必要に応じて、その他の成分などを、適宜選択することができる。前記アンドロゲン受容体結合阻害剤は、アンドロゲン受容体結合阻害作用を発揮することに意義のある、全ての用途に用いることができる。例えば、前記アンドロゲン受容体結合阻害剤は、アンドロゲン受容体への結合を阻害する機構、アンドロゲン受容体への結合を阻害することにより改善される症状の研究、アンドロゲン受容体への結合を阻害することにより改善される症状の予防や治療に利用することができる。
【００６０】
前記アンドロゲン受容体結合阻害剤の具体的な態様としては、例えば、試薬用途の阻害剤や、症状の予防・治療用途の抑制剤が挙げられる。
前記症状としては、例えば、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟などが挙げられる。
また、前記アンドロゲン受容体結合阻害剤は、例えば、性分化機構の研究などに好適に利用することができる。
【００６１】
（ＶＥＧＦ産生促進剤）
本発明のＶＥＧＦ産生促進剤は、チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくともいずれかを有効成分として含有することを特徴とする。もちろん、必要に応じて、その他の成分などを、適宜選択することができる。前記ＶＥＧＦ産生促進剤は、ＶＥＧＦ産生促進作用を発揮することに意義のある、全ての用途に用いることができる。例えば、前記ＶＥＧＦ産生促進剤は、ＶＥＧＦ産生の促進機構、ＶＥＧＦ産生の促進により改善される症状の研究、ＶＥＧＦ産生の促進により改善される症状の予防や治療に利用することができる。
【００６２】
前記ＶＥＧＦ産生促進剤の具体的な態様としては、例えば、試薬用途の促進剤や、症状の予防・治療用途の促進剤が挙げられる。
前記症状としては、例えば、脱毛症、冠動脈疾患、閉塞性末梢動脈硬化症、軟骨損傷、血管形成不全、虚血性脚部疾患などが挙げられる。
また、前記ＶＥＧＦ産生促進剤は、例えば、血管内皮細胞の増殖や遊走の促進、血管新生の促進、血液凝固、血圧調節、皮膚におけるリンパ管の成長などに好適に利用することができる。
【００６３】
（ＢＭＰ−２産生促進剤）
本発明のＢＭＰ−２産生促進剤は、チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくともいずれかを有効成分として含有することを特徴とする。もちろん、必要に応じて、その他の成分などを、適宜選択することができる。前記ＢＭＰ−２産生促進剤は、ＢＭＰ−２産生促進作用を発揮することに意義のある、全ての用途に用いることができる。例えば、前記ＢＭＰ−２産生促進剤は、ＢＭＰ−２産生の促進機構、ＢＭＰ−２産生の促進により改善される症状の研究、ＢＭＰ−２産生の促進により改善される症状の予防や治療に利用することができる。
【００６４】
前記ＢＭＰ−２産生促進剤の具体的な態様としては、例えば、試薬用途の促進剤や、症状の予防・治療用途の促進剤が挙げられる。
前記症状としては、例えば、脱毛症、皮膚老化、骨粗鬆症や骨折などの骨疾患などが挙げられる。
また、前記ＢＭＰ−２産生促進剤は、例えば、骨形成の誘導、細胞全般の分化や増殖の調節、体軸形成やほとんど全ての器官形成、神経細胞の分化や機能維持などに好適に利用することができる。
【００６５】
（ＩＧＦ−１産生促進剤）
本発明のＶＥＧＦ産生促進剤は、アマロゲンチンを有効成分として含有することを特徴とする。もちろん、必要に応じて、その他の成分などを、適宜選択することができる。前記ＩＧＦ−１産生促進剤は、ＩＧＦ−１産生促進作用を発揮することに意義のある、全ての用途に用いることができる。例えば、前記ＩＧＦ−１産生促進剤は、ＩＧＦ−１産生の促進機構、ＩＧＦ−１産生の促進により改善される症状の研究、ＩＧＦ−１産生の促進により改善される症状の予防や治療に利用することができる。
【００６６】
前記ＩＧＦ−１産生促進剤の具体的な態様としては、例えば、試薬用途の促進剤や、症状の予防・治療用途の促進剤が挙げられる。
前記症状としては、例えば、脱毛症、皮膚老化、糖尿病、下垂体機能低下症、下垂体性小人症などが挙げられる。
また、前記ＩＧＦ−１産生促進剤は、例えば、細胞全般の分化・増殖・成長の促進、老化の進行抑制、血糖降下、生殖機能の調節、軟骨への硫酸イオンの取込みなどに好適に利用することができる。
【００６７】
（育毛剤）
本発明の育毛剤は、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする。もちろん、必要に応じて、その他の成分などを、適宜選択することができる。前記育毛剤は、育毛効果を発揮することに意義のある、全ての用途に用いることができる。例えば、前記育毛剤は、育毛機構、育毛により改善される症状の研究、育毛の促進により改善される症状の予防や治療に利用することができる。
【００６８】
前記育毛剤の具体的な態様としては、例えば、試薬用途の育毛剤や、症状の予防・治療用途の育毛剤が挙げられる。
前記症状としては、例えば、男性型脱毛症などが挙げられる。
【００６９】
なお、前記育毛剤は、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有しているので、前記したような、毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用及びＩＧＦ−１産生促進作用を有している。このような作用を介して、及び／又は、これら以外の作用を介して、前記育毛剤は、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟などの、疾患や好ましくない症状を予防又は治療することができる。なお、前記治療とは、改善の意味も含む。
【００７０】
（頭髪化粧料）
本発明の頭髪化粧料は、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを、毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用及び育毛効果のうち少なくとも１つの有効成分として含有することを特徴とする。もちろん、必要に応じて、その他の成分などを、適宜選択することができる。
【００７１】
前記したように、アマロゲンチン及びアマロスウェリンは、毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用及びＩＧＦ−１産生促進作用及び育毛効果を有している。このような作用を介して、及び／又は、これら以外の作用を介して、前記頭髪化粧料は、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟などの、疾患や好ましくない症状を予防又は治療に利用することができる。中でも、男性型脱毛症の予防又は治療に好適に利用することができる。さらに、前記有効成分は天然の成分であるので、頭髪（頭皮）に適用した場合の使用感と安全性とに優れている。
【００７２】
前記頭髪化粧料中の有効成分の配合率としては、特に制限はなく、頭髪化粧料の種類に応じて適宜選択することができるが、標準的な抽出物に換算して約０．０００１〜１０質量％が好ましく、標準的な抽出物に換算して約０．００１〜１質量％がより好ましい。前記標準的な抽出物としては、例えば、抽出溶媒として水、又は、水と親水性有機溶媒との混合液を用いた抽出物が挙げられる。
【００７３】
なお、前記頭髪化粧料における前記有効成分としては、アマロゲンチンやアマロスウェリンそのものが含まれていてもよく、前記毛乳頭細胞増殖促進剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、アンドロゲン受容体結合阻害剤、ＶＥＧＦ産生促進剤、ＢＭＰ−２産生促進剤、ＩＧＦ−１産生促進剤又は育毛剤として、一旦製剤化されたものが含有されていてもよい。
【００７４】
前記頭髪化粧料における前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、通常の頭髪化粧料の製造に用いられる主剤や助剤が挙げられる。また、前記その他の成分としては、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料などが挙げられる。
【００７５】
このように、前記頭髪化粧料に前記その他の成分が含有されることで、一般的に頭髪化粧料として好適とされている性質を付与することができる。さらに、前記頭髪化粧料に前記その他の成分が含有されることで、互いの効果を助長し合い、想像以上の相乗効果をもたらすことが期待される。
【００７６】
前記頭髪化粧料の種類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ヘアトニック、ヘアローション、ヘアリキッド、ヘアクリーム、整髪剤、シャンプー、リンス、トリートメント、ポマードなどが挙げられる。
【実施例】
【００７７】
以下に本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００７８】
（実施例１）
実施例１は、チライトから抽出物を抽出した実施例である。
チライトの地上部の乾燥物を粗砕したものそれぞれ１００ｇに対し、抽出溶媒（水、８０％エタノール又はエタノール）１，０００ｍｌを加え、還流抽出器で３時間加熱抽出し熱時濾過した。その後、得られた抽出液を４０℃で減圧下に濃縮し、凍結乾燥機で乾燥して、チライトからの抽出物を得た。なお、前記８０％エタノールにおけるエタノールと水との混合比は、重量基準による。
表１は、各抽出溶媒によるチライトからの抽出物の収率を示す表である。
【００７９】
【表１】
【００８０】
（実施例２）
実施例２は、実施例１で得られたチライトからの抽出物から、アマロゲンチン及びアマロスウェリンを精製した実施例である。
実施例１のチライトからの抽出物１００．０ｇに対して水５００ｍＬを加え、懸濁した。これを、多孔性樹脂（ＤＩＡＩＯＮ ＨＰ−２０，１．０Ｌ）上に付し、水５Ｌ、メタノール３Ｌの順で溶出させた。前記メタノール３Ｌで溶出させた画分からメタノールを留去して、メタノール溶出画分３２．０ｇを得た。このメタノール溶出画分のうち、１０．０ｇをメタノール：水＝４０：６０（容量比）の混合溶液に溶解し、ＯＤＳ（商品名：クロマトレックスＯＤＳ ＤＭ１０２０Ｔ、富士シリシア化学（株））を充填したガラス製のカラム上部より流入させて、前記ＯＤＳに吸着させた。移動相としてメタノール：水＝４０：６０（容量比）を流し、その溶出液を集め、脱溶媒して、分画物１．７ｇを得た。前記分画物１．７ｇをクロロホルム：メタノール＝１０：１（容量比）の混合溶液に溶解し、ＳｉＯ２（商品名：シリカゲル６０、富士シリシア化学（株）製）を充填したガラス製のカラム上部より流入させて、前記ＳｉＯ２に吸着させた。移動相として、クロロホルム：メタノール＝１０：１（容量比）を流し、その溶出液を集め、脱溶媒して、アマロゲンチンとアマロスウェリンの濃縮物１．０ｇを得た。前記濃縮物を、液体クロマトグラフィーを用いて分画した。前記液体クロマトグラフィーの条件は以下の通りである。
【００８１】
−液体クロマトグラフィーの条件−
固定相：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ Ｐｒｏ Ｃ１８（（株）ワイエムシィ製）
カラム径：２０ｍｍ
カラム長：２５０ｍｍ
移動相流量：９ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＲＩ（Ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ Ｉｎｄｅｘ、示差屈折率）
【００８２】
ここで、保持時間１４分〜１６分及び２０分〜２２分に流出する画分を分取し、アマロゲンチンとアマロスウェリンとを単離した。この操作を数回繰り返し、アマロゲンチンとアマロスウェリンを各々１８０ｍｇ、１５０ｍｇ得た。
前記アマロゲンチン及びアマロスウェリンについて、１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）分析を行った。下記にその結果を示す。
【００８３】
−アマロゲンチン−
〔１３Ｃ−ＮＭＲケミカルシフト・（帰属炭素，ＣＤ３ＯＤ）〕１７１．３（７’’−Ｃ），１６７．４（１１−Ｃ），１６５．８（５’’−Ｃ），１６３．７（３’’−Ｃ），１５７．３（３’’’−Ｃ），１５３．５（３−Ｃ），１４８．４（１’’−Ｃ），１４６．４（１’’’−Ｃ），１３２．７（８−Ｃ），１２９．２（５’’’−Ｃ），１２１．１（６’’’−Ｃ），１２０．９（１０−Ｃ），１１６．４（４’’’−Ｃ），１１４．４（２’’’−Ｃ），１１２．７（６’’−Ｃ），１０５．５（２’’−Ｃ），１０４．０（４−Ｃ），１０３．１（４’’−Ｃ），９７．１（１’−Ｃ），９６．７（１−Ｃ），７８．２（５’−Ｃ），７４．８（２’−Ｃ），７４．６（３’−Ｃ），７１．６（４’−Ｃ），６９．５（７−Ｃ），６２．４（６’−Ｃ），４３．４（９−Ｃ），２８．７（５−Ｃ），２５．８（６−Ｃ）．
【００８４】
−アマロスウェリン−
〔１３Ｃ−ＮＭＲケミカルシフト・（帰属炭素，ＣＤ３ＯＤ）〕１７１．３（７’’−Ｃ），１６７．２（１１−Ｃ），１６６．２（５’’−Ｃ），１６３．９（３’’−Ｃ），１５７．４（３’’’−Ｃ），１５３．７（３−Ｃ），１４８．６（１’’−Ｃ），１４６．４（１’’’−Ｃ），１３３．１（８−Ｃ），１２９．４（５’’’−Ｃ），１２１．３（１０−Ｃ），１２１．１（６’’’−Ｃ），１１６．４（４’’’−Ｃ），１１４．５（２’’’−Ｃ），１１２．６（６’’−Ｃ），１０９．３（２’’−Ｃ），１０３．９（４−Ｃ），１０３．２（４’’−Ｃ），９８．９（１’−Ｃ），９８．２（１−Ｃ），７８．４（５’−Ｃ），７４．９（２’−Ｃ），７４．８（３’−Ｃ），７１．３（４’−Ｃ），６５．７（７−Ｃ），６４．２（５−Ｃ），６２．３（６’−Ｃ），５１．９（９−Ｃ），３３．５（６−Ｃ）．
【００８５】
実施例２の結果によれば、チライトからの抽出物から、アマロスウェリンとアマロゲンチンとを精製できることが示され、さらに、前記精製されたアマロスウェリン及びアマロゲンチンは、それぞれ、前記構造式（１）及び（２）で表される化学構造を有していたことが示された。
【００８６】
（実施例３）
＜毛乳頭細胞増殖促進作用試験＞
実施例３は、実施例１、２で調製されたチライトからの抽出物、アマロスウェリン及びアマロゲンチンに対し、毛乳頭細胞増殖促進作用試験を行った実施例である。
【００８７】
毛乳頭細胞増殖促進作用試験の具体的な手順は、以下の通りである。
まず、正常ヒト頭髪毛乳頭細胞（ＴＯＹＯＢＯ社、ＣＡ６０２０５）を毛乳頭細胞増殖培地（ＴＯＹＯＢＯ社、ＴＰＧＭ−２５０）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞は１０％ＦＢＳ（Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ）含有ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｍｉｎｉｍａｌ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉｕｍ）を用いて１．０×１０４ ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、コラーゲンコートした９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当り２００μＬ播種し、３日間培養した。培養後、培地を抜き、無血清ＤＭＥＭに溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに２００μＬ添加し、さらに４日間培養した。
【００８８】
毛乳頭細胞増殖作用はＭＴＴアッセイを用いて測定した。具体的には、培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで無血清のＤＭＥＭに溶解したＭＴＴ（（３−（４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ、同仁化学研究所）を各ｗｅｌｌに１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。そして、毛乳頭細胞増殖促進率を、下記（１）式に従って算出した。
【００８９】
毛乳頭細胞増殖促進率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００ ・・・（１）
〔ただし、前記（１）式中、Ａは被験試料添加時の吸光度を表す。Ｂは被験試料無添加時の吸光度を表す。〕
【００９０】
表２は、各有効成分による毛乳頭細胞増殖促進率を示す表である。
【００９１】
【表２】
【００９２】
実施例３の結果によれば、チライトからの抽出物、アマロスウェリン及びアマロゲンチンが、毛乳頭細胞増殖促進作用を有することが示された。
【００９３】
（実施例４）
＜テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用試験＞
実施例４は、実施例１、２で調製されたチライトからの抽出物、アマロスウェリン及びアマロゲンチンに対し、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用試験を行った実施例である。
【００９４】
テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用試験の具体的な手順は、以下の通りである。
まず、蓋付Ｖ底試験管にて、プロピレングリコールで調製した４．２ｍｇ／ｍＬ テストステロン ２０μＬ、１ｍｇ／ｍＬ ＮＡＤＰＨ（還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸）含有５ｍｍｏｌ／ｍＬ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．１３）８２５μＬを混合した。これに、エタノール、８０％エタノール又は精製水で調製した被験試料８０μＬ及びＳ−９（オリエンタル酵母工業株式会社） ７５μＬを加え再び混合し、３７℃にて３０分反応させた後、塩化メチレン １ｍＬを加え反応を停止した。これを遠心（１，６００×ｇ、１０分）し、塩化メチレン層をガスクロマトグラフィーにより分析した。前記ガスクロマトグラフィーの条件は以下の通りである。また、同様の方法で空試験を行った。
なお、前記Ｓ−９とは、ＳＤラットの雄に酵素誘導剤（フェノバルビタール、５，６−ベンゾフラボン）を腹腔内投与したのち肝臓をすりつぶして、９，０００×ｇで遠心した上清である。
【００９５】
−ガスクロマトグラフィーの条件−
使用機器 ：Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＧＣ−７Ａ
カラム ：ＤＢ−１７０１（φ０．５３ｍｍ×３０ｍ，膜厚；１．０μｍ）
カラム／注入温度：２４０℃／３００℃
検出器 ：ＦＩＤ
キャリアガス ：窒素ガス
【００９６】
あらかじめ、３α−アンドロスタンジオール（ＳＩＧＭＡ社）、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ、東京化成工業株式会社）及びテストステロン（東京化成工業株式会社）の標準品の塩化メチレン溶液をガスクロマトグラフィーにより分析し、これら３化合物の精秤量とピーク面積よりピーク面積あたりの化合物量を算出した。
そして、Ｓ−９による反応後の３α−アンドロスタンジオール、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）及びテストステロンをガスクロマトグラフィーにより分析し、それぞれのピーク面積あたりの濃度を、下記の（２）式に従って算出した。次に、被験試料の変換率を下記の（３）式に従って算出した。そして、前記変換率に基づいて、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率を、下記の（４）式に従って算出した。
【００９７】
濃度（％）＝（被験試料のピーク面積×標準品濃度）／標準品のピーク面積 ・・・（２）
【００９８】
変換率（％）＝（Ａ＋Ｂ）／（Ａ＋Ｂ＋Ｃ） ・・・（３）
〔ただし、前記（３）式中、Ａは、３α−アンドロスタンジオールの濃度を表す。Ｂは、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）の濃度を表す。Ｃは、テストステロンの濃度を表す。〕
【００９９】
テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率（％）＝（１−Ｅ／Ｄ）×１００ ・・・（４）
〔ただし、前記（４）式中、Ｄは、空試験での変換率を表す。Ｅは、被験試料添加での変換率を表す。〕
【０１００】
表３は、各有効成分によるテストステロン５α−レダクターゼ活性阻害率を示す表である。
【０１０１】
【表３】
【０１０２】
実施例４の結果によれば、チライトからの抽出物、アマロスウェリン及びアマロゲンチンが、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用を有することが示された。また、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用の程度は、チライトからの抽出物、アマロスウェリン及びアマロゲンチンの濃度によって調節できることが示された。
【０１０３】
（実施例５）
＜アンドロゲン受容体結合阻害作用試験＞
実施例５は、実施例１、２で調製されたチライトからの抽出物、アマロスウェリン及びアマロゲンチンに対し、アンドロゲン受容体結合阻害作用試験を行った実施例である。
【０１０４】
アンドロゲン受容体結合阻害作用試験の具体的な手順は、以下の通りである。
まず、マウス自然発生乳がん（シオノギ癌：ＳＣ１１５）よりクローニングされたＳＣ−３細胞を２％ＤＣＣ−ＦＢＳ（Ｄｅｘｔｒａｎ−ｃｏａｔｅｄ ｃｈａｒｃｏａｌ ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ）及び１０−８ｍｏｌ／Ｌテストステロン含有ＭＥＭ（Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ、ＭＥＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に２％ＤＣＣ−ＦＢＳ含有ＭＥＭ（ＭＥＭ）で希釈し、９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、１０−９ｍｏｌ／Ｌ ＤＨＴを含む０．５％ＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ）含有Ｈａｍ Ｆ１２＋ＭＥＭ（ＨＭＢ）に溶解した被験試料を１００μＬ添加し、４８時間培養した。その後、終濃度０．４ｇ／ｍＬで２％ＤＣＣ−ＦＢＳ含有ＭＥＭに溶解したＭＴＴを各ｗｅｌｌに１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。空試験として、ＨＭＢのみで培養した細胞を、陽性対照として１０−９ｍｏｌ／Ｌ ＤＨＴのみを含有したＨＭＢで培養した細胞を用い、同様の方法で試験を行って補正した。
そして、アンドロゲンレセプター拮抗率を、下記（５）式に従って算出した。
【０１０５】
アンドロゲンレセプター拮抗率（％）＝［１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）］×１００ ・・・（５）
〔ただし、前記（５）式中、Ａは、ＤＨＴ添加、被験試料無添加での５７０−６５０ｎｍにおける吸光度を表す。Ｂは、ＤＨＴ無添加、被験試料無添加での５７０−６５０ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃは、ＤＨＴ添加、被験試料添加での５７０−６５０ｎｍにおける吸光度を表す。Ｄは、ＤＨＴ無添加、被験試料添加での５７０−６５０ｎｍにおける吸光度を表す。〕
【０１０６】
次いで、試料溶液の濃度を段階的に減少させて前記阻害率の測定を行い、各濃度におけるアンドロゲンの結合阻害率（％）を求めた。
表４は、各有効成分によるアンドロゲン結合阻害率を示す表である。
【０１０７】
【表４】
【０１０８】
実施例５の結果によれば、チライトからの抽出物、アマロスウェリン及びアマロゲンチンが、アンドロゲン受容体結合阻害作用を有することが示された。また、アンドロゲン受容体結合阻害作用の程度は、チライトからの抽出物、アマロスウェリン及びアマロゲンチンの濃度によって調節できることが示された。
【０１０９】
（実施例６）
＜ＶＥＧＦ、ＢＭＰ−２及びＩＧＦ−１の産生促進試験＞
実施例６は、実施例１、２で調製されたチライトからの抽出物、アマロスウェリン及びアマロゲンチンに対し、ＶＥＧＦ、ＢＭＰ−２及びＩＧＦ−１の産生促進試験を行った実施例である。前記産生促進試験は、ｍＲＮＡの発現を評価するｍＲＮＡ発現促進作用試験により行った。
各ｍＲＮＡ発現促進作用試験の具体的な手順は、以下の通りである。
【０１１０】
−一本鎖ＤＮＡの調製−
まず、正常ヒト頭髪毛乳頭細胞（ＴＯＹＯＢＯ社、ＣＡ６０２０５）を毛乳頭細胞増殖培地（ＴＯＹＯＢＯ社、ＴＰＧＭ−２５０）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２×１０５個／ｍＬの濃度になるように１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地で希釈した後、直径６０ｍｍシャーレに５ｍＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、被験試料を添加した無血清ＤＭＥＭ培地に交換し６時間培養した後、細胞を１ｍＬのＲＮＡ抽出用試薬（ＩＳＯＧＥＮ：株式会社ニッポンジーン）で溶解し、クロロホルムを２００μＬ添加後、遠心（１２，０００回転、４℃、１５分間）にて上層ＲＮＡ層を単離し、さらにイソプロパノールで濃縮を行った。濃縮沈殿させた総ＲＮＡをＴＥ溶液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ／１ｍＭ ＥＤＴＡ， ｐＨ８．０）に溶解して総ＲＮＡ標品とし、ＰＣＲ装置（ＴａＫａＲａ ＰＣＲ Ｔｈｅｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ ＭＰ：タカラバイオ社）及びリアルタイムＰＣＲキット（ＴａＫａＲａ ＥｘＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ，ＲＲ０３５Ａ：タカラバイオ社）を用いてＶＥＧＦ、ＢＭＰ−２及びＩＧＦ−１のｍＲＮＡ発現量を測定するための鋳型に使用する一本鎖ＤＮＡを合成した。
【０１１１】
−サイバーグリーン法を用いたリアルタイム−ＰＣＲ反応−
ＶＥＧＦ遺伝子増幅用プライマーとして下記の配列を有するセンスプライマー及びアンチセンスプライマーを作製した（タカラバイオ社）。
センスプライマー ：５’−ｇａｇｃｃｔｔｇｃｃｔｔｇｃｔｇｃｔｃｔａｃ−３’
アンチセンスプライマー：５’−ｃａｃｃａｇｇｇｔｃｔｃｇａｔｔｇｇａｔｇ−３’
【０１１２】
ＢＭＰ−２遺伝子増幅用プライマーとして下記の配列を有するセンスプライマー及びアンチセンスプライマーを作製した（タカラバイオ社）。
センスプライマー ：５’−ａａｃａｃｔｇｔｇｃｇｃａｇｃｔｔｃｃ−３’
アンチセンスプライマー：５’−ｃｃｔａａａｇｃａｔｃｔｔｇｃａｔｃｔｇｔｔｃｔｃ−３’
【０１１３】
ＩＧＦ−１遺伝子増幅用プライマーとして下記の配列を有するセンスプライマー及びアンチセンスプライマーを作製した（タカラバイオ社）。
センスプライマー ：５’−ｔｃｔｔｃａｇｔｔｃｇｔｇｔｇｔｇｇａｇａｃａｇ−３’
アンチセンスプライマー：５’−ｇｇｇｔｇｃｇｃａａｔａｃａｔｃｔｃｃａｇ−３’
【０１１４】
また、内部標準としてのＧ３ＰＤＨ（Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）遺伝子増幅用プライマーとして下記の配列を有するセンスプライマー及びアンチセンスプライマーを作製した（タカラバイオ社）。
センスプライマー ：５’−ｇｃａｃｃｇｔｃａａｇｇｃｔｇａｇａａｃ−３’
アンチセンスプライマー：５’−ａｔｇｇｔｇｇｔｇａａｇａｃｇｃｃａｇｔ−３’
【０１１５】
「被験試料無添加」、「被験試料添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品をもとに調製した一本鎖ＤＮＡ及び検量線作成用一本鎖ＤＮＡ溶液用いて、リアルタイムＰＣＲ装置（Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ ＩＩ：Ｃｅｐｈｅｉｄ社）及びリアルタイムＰＣＲキット（ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ ＴａｑＴＭ，ＲＲ０４１Ａ：タカラバイオ社）でリアルタイムＰＣＲ反応を行った。なお、検量線作成用一本鎖ＤＮＡ溶液は、原液濃度の相対値を便宜的に「１０，０００」とし、以降５倍希釈を繰り返して濃度値「２，０００」、「４００」、「８０」及び「１６」の５段階の希釈系列とした。反応は、９５℃で１０秒間保温の後、９５℃で５秒間、６０℃で２０秒間の反応を４５サイクル繰り返し、１サイクル毎にサイバーグリーン色素の発光量を測定した。
【０１１６】
−解析−
各サイクルのサイバーグリーン色素の発光量からＶＥＧＦ、ＢＭＰ−２、ＩＧＦ−１及びＧ３ＰＤＨのそれぞれをコードするＤＮＡ断片の増幅曲線を作成した。検量線作成用一本鎖ＤＮＡ溶液の希釈系列の増幅曲線から横軸に濃度、縦軸に増幅曲線の２次導関数が最大となるサイクル数をとった検量線を作成した。各発現定量用サンプルについては増幅曲線の２次導関数が最大となるサイクル数を検量線上にプロットし、相対的な発現量を算出した。ＶＥＧＦ、ＢＭＰ−２及びＩＧＦ−１の発現量は、同一サンプルにおけるＧ３ＰＤＨの発現量の値で補正を行った後、さらに「被験試料無添加」の補正値を１００とした時の「被験試料無添加」の補正値を算出した。
【０１１７】
ＶＥＧＦ、ＢＭＰ−２及びＩＧＦ−１のｍＲＮＡ発現促進率（％）は以下の式により求めた。
ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ｂ／Ａ×１００
Ａ ：「被験試料無添加」の補正値
Ｂ ：「被験試料添加」の補正値
【０１１８】
【表５】
【０１１９】
実施例６の結果によれば、チライトからの抽出物が、ＶＥＧＦ及びＢＭＰ−２のｍＲＮＡ発現を促進させる作用を有することが示された。また、アマロゲンチンが、ＶＥＧＦ、ＢＭＰ−２及びＩＧＦ−１のｍＲＮＡ発現を促進させる作用を有することが示された。また、アマロスウェリンが、ＶＥＧＦ及びＢＭＰ−２のｍＲＮＡ発現を促進させる作用を有することが示された。
【０１２０】
（実施例７）
下記組成の養毛用のヘアトニックを常法により製造した。
チライト８０％エタノール抽出物 １．０ｇ
塩酸ピリドキシン ０．１ｇ
レゾルシン ０．０１ｇ
Ｄ−パントテニルアルコール ０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
ｌ−メントール ０．０５ｇ
１，３−ブチレングリコール ４．０ｇ
ニンジンエキス ０．５ｇ
エタノール ２５．０ｇ
香料 適量
精製水 残部
合計 １００．０ｇ
【０１２１】
（実施例８）
下記組成の養毛用のヘアトニックを常法により製造した。
アマロゲンチン ０．１ｇ
酢酸トコフェロール 適量
セファランチン ０．００２ｇ
イソプロピルメチルフェノール ０．１ｇ
ヒアルロン酸ナトリウム ０．１５ｇ
ビワ葉エキス １．０ｇ
グリセリン １５ｇ
エタノール １５ｇ
香料 適量
キレート剤（エデト酸ナトリウム） 適量
防腐剤（ヒノキチオール） 適量
可溶化剤（ポリオキシエチレンセチルエーテル） 適量
精製水 残部
合計 １００．０ｇ
【０１２２】
（実施例９）
下記組成の育毛用の透明シャンプーを常法により製造した。
チライト水抽出物 １．０ｇ
ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム １０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン １０．０ｇ
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム ２０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ４．０ｇ
プロピレングリコール ２．０ｇ
香料 適量
防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル） ０．１５ｇ
精製水 残部
合計 １００．０ｇ
【０１２３】
（実施例１０）
下記組成の育毛用のコンディショニングシャンプーを常法により製造した。
アマロスウェリン ０．２ｇ
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム ３０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン ３０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム ２０．０ｇ
ヤシ油ジエタノールアミド ３．０ｇ
ジステアリン酸エチレングリコール ２．０ｇ
香料 適量
防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル） ０．１５ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．０ｇ
精製水 残部
合計 １００．０ｇ
【産業上の利用可能性】
【０１２４】
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、アンドロゲン受容体結合阻害剤、ＶＥＧＦ産生促進剤、ＢＭＰ−２産生促進剤、ＩＧＦ−１産生促進剤、育毛剤及び頭皮化粧料は、脱毛症をはじめとする好ましくない症状の予防及び治療に利用することができ、例えば、ヘアトニック、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンスなどに含有させることで、幅広く利用することができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、毛乳頭細胞増殖促進作用を有する毛乳頭細胞増殖促進剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用を有するテストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、アンドロゲン受容体結合阻害作用を有するアンドロゲン受容体結合阻害剤、血管内皮増殖因子産生促進作用を有する血管内皮増殖因子産生促進剤、骨形成タンパク質−２産生促進作用を有する骨形成タンパク質−２産生促進剤、インスリン様増殖因子−１産生促進作用を有するインスリン様増殖因子−１産生促進剤、育毛剤及び頭髪化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
毛髪の成長は、成長期、退行期、休止期からなる周期的なヘアサイクル（毛周期）に従って成長及び脱落を繰り返している。このヘアサイクルのうち、休止期から成長期へかけての新たな毛包が形成されるステージが、発毛に最も重要であると考えられている。そして、このステージにおける毛包上皮系細胞の増殖・分化に重要な役割を果たしているのが、毛乳頭細胞であると考えられている。毛乳頭細胞は、毛根近傍にある外毛根鞘細胞とマトリックス細胞とからなる毛包上皮系細胞の内側にあって、基底膜に包まれている毛根の根幹部分に位置する細胞であり、毛包上皮系細胞へ働きかけてその増殖を促すなど、毛髪への分化に重要な役割を担っている（例えば、非特許文献１参照）。
【０００３】
このように、毛乳頭細胞は、毛包上皮系細胞の増殖・分化及び毛髪の形成において最も重要な役割を果たしており、従来、毛乳頭細胞に被験試料を接触させて、その細胞の増殖活性の有無及び／または強弱を測定することで、その被験試料の育毛効果を検定する方法が提案されている（例えば、特許文献１参照）。また、従来、毛乳頭細胞増殖促進作用を有する生薬としては、例えばハトムギ抽出物、ワイルドタイム抽出物、スギナ抽出物、ショウブ抽出物、ローズマリー抽出物、ウコン抽出物、シラカバ抽出物及びコウチャ抽出物などが提案されている（例えば、特許文献２参照）。
【０００４】
多くのステロイドホルモンは、産生臓器から分泌された分子型のまま、受容体と結合してその作用を発現するが、アンドロゲンと総称される男性ホルモンの場合、例えばテストステロンは、標的臓器の細胞内に入ってテストステロン５α−レダクターゼにより５α−ジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）に還元されてから受容体と結合し、アンドロゲンとしての作用を発現する。
【０００５】
アンドロゲンは重要なホルモンであるが、それが過度に作用すると、男性型禿頭、多毛症、脂漏症、座瘡、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟など、さまざまな好ましくない症状を誘発する。そこで、過剰のアンドロゲンの作用を抑制することによりこれら好ましくない症状を改善する手法が検討されている。具体的には、テストステロンを活性型５α−ＤＨＴに還元するテストステロン５α−レダクターゼの作用を阻害することにより、活性型５α−ＤＨＴが生じるのを抑制する方法と、テストステロンから生じた５α−ＤＨＴが受容体と結合するのを阻害することにより、アンドロゲン活性を発現させない方法とが提案されている。
【０００６】
前記方法が検証された結果、シプロテンアセテート、オキセンドロン、酢酸クロマジノンなどの有効性が確認された。しかしながら、前記化合物は、ステロイド類似構造を有しているために、ホルモン様作用などの好ましくない副作用を有するという欠点がある。また、従来、テストステロン−５αリダクターゼ阻害作用を有する生薬としては、例えばＣｈｏｅｒｏｓｐｏｎｄｉａｓ属に属する植物（例えば、特許文献３参照）、五斂子（例えば、特許文献４参照）、紅豆杉、鳥欖、幌傘楓、穿心蓮（例えば、特許文献５参照）などが知られている。また、これまでに、５α−ＤＨＴとその受容体との結合を阻害する作用を有する生薬としては、例えばマジト、カチュア（例えば、特許文献６参照）、藤茶（例えば、特許文献７参照）などが報告されている。
【０００７】
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は、分子量３４〜４６ｋＤａの糖蛋白質であり、血管内皮細胞に特異的な増殖因子として脳下垂体の濾胞細胞の培養液から発見され、血管透過性因子（ＶＰＦ）と同一物質であることがわかった。ＶＥＧＦは、下垂体細胞以外に、平滑筋細胞、マクロファージ、肺胞上皮細胞、肝細胞、毛乳頭細胞などの正常細胞で産生され、また、グリオーマ（神経膠腫）、乳癌、胃癌、大腸癌などの多くの腫瘍細胞からも産生されることが知られている。ＶＥＧＦは、血管内皮細胞に働き、細胞の増殖、遊走を促進させたり、血管新生を促進させたりする作用がある。ＶＥＧＦは、胎生期の心臓の形成時期に、強い発現が認められることが知られている。ＶＥＧＦ遺伝子が欠損すると血管系の異常が起こり、胎生期に死亡することが報告されており、ＶＥＧＦが、個体の発達、組織形成において極めて重要なはたらきを持つことが示唆されている。最近では、ＶＥＧＦファミリーの新しいメンバーであるＶＥＧＦ−Ｃが、強力なリンパ管新生因子として皮膚におけるリンパ管の成長を仲介していることが報告された。
【０００８】
ところで、毛包においては、外毛根鞘細胞及び毛乳頭細胞が、ＶＥＧＦを産生することが知られている（例えば、非特許文献２，３参照）。毛包においてＶＥＧＦの産生を阻害することは、ヘアサイクルの成長期の遅れと毛包サイズの矮小化に繋がることが見出され（例えば、非特許文献４参照）、このことから、毛包の発達や再生にＶＥＧＦが重要であることが示された。これまでに、ＶＥＧＦ産生の促進作用を有する植物エキスとして、ヒルガオ科のアサガオカラクサ属植物（例えば、特許文献８参照）、ローヤルゼリー（例えば、特許文献９参照）、Ｌ−グルタミン酸又はその塩、Ｌ−セリン、ＰＣＡ（ピロリドンカルボン酸）又はその塩、モノニトログアヤコールナトリウム、クロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｖｕｌｇａｒｉｓ）の抽出物、ユズ（Ｃｉｔｒｕｓ ｊｕｎｏｓ）の果実の抽出物、ウンシュウミカン（Ｃｉｔｒｕｓ ｕｎｓｈｉｕ）の果皮の抽出物、エイジツ（Ｒｏｓａ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）の果実の抽出物、イチョウ（Ｇｉｎｋｇｏ ｂｉｌｏｂａ）の葉の抽出物より選択されるもの（例えば、特許文献１１参照）などが知られている。
【０００９】
骨形成蛋白質（ＢＭＰ）は、異所的に骨形成を誘導するタンパク質として発見されたが、その後の研究によって、細胞増殖や分化調節を介して、体軸形成やほとんど全ての器官形成に必須の役割を果たす多機能因子であることが知られるようになった。皮膚においては、ＢＭＰが体毛を形成する器官である毛包の形成に促進的に関与することが報告されている。ＢＭＰは、約２０種のサブユニットの存在が報告されている。前記サブユニットは、幅広い生物種において基本的に配列が保存されており、各生物種の形態形成に関与することが示されている。
前記サブユニットの中で、骨形成タンパク質−２（ＢＭＰ−２）は、男性型脱毛症部位の毛乳頭細胞において、その遺伝子発現が低下していることが報告されている。そのため、この遺伝子に着目した育毛剤研究が注目されている（例えば、非特許文献１１参照）。
【００１０】
インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）は、インスリンに非常に良く似た構造及び作用を持つ分子量約７，５００のペプチドホルモンである。ＩＧＦ−１は、細胞の分化を促し、細胞の増殖を助けるなど、積極的に細胞を健康な状態に維持し（例えば、非特許文献５，６参照）、老化の進行を阻止することが知られている（例えば、非特許文献７参照）。
【００１１】
また、毛包の毛乳頭細胞において、ＩＧＦ−１が発現していることが示され（例えば、非特許文献８参照）、ＩＧＦ−１が毛根の活発化を介した育毛効果を有することが明らかになった。現在、ＩＧＦ−１を有効成分とする育毛剤が既に知られている（例えば、特許文献１２参照）。しかしながら、ＩＧＦ−１は動物由来成分であって分子量が大きいために、外用塗布による経皮吸収が困難であるなどの問題がある。また、ＩＧＦ−１産生促進作用を示す植物由来抽出物も見つかってはいるが、より優れたＩＧＦ−１産生促進作用を有する植物由来の物質が求められている。
【００１２】
以上のように、毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用及び育毛効果を有する各剤に対する需要は極めて高い。また、これらの作用及び効果を有する頭髪化粧料に対する需要も極めて高い。
しかしながら、従来においては、前記作用及び効果を有する具体的な有効成分が、未だに提案されていないという問題があった。また、具体的な有効成分が提案されているものについても、植物由来のものでなかったり、植物由来のものであっても前記作用及び効果が充分ではなかったりする、という問題があった。なお、植物由来であると、比較的安全性が高いので、日常的に摂取しやすいという利点がある。
【００１３】
一方、チライトは、（Ｃｈｉｒａｉｔｏ）とは、リンドウ科の植物であって、学名は「Ｓｗｅｒｔｉａ ｃｈｉｒａｔａ Ｂｕｃｈ−Ｈａｍ．ｅｘ．Ｃ．Ｂ．Ｃｌａｒｋｅ（Ｆｌ．Ｂｒ．Ｉｎｄ）」である。また、チライトは、「チレッタセンブリ」（Ｓｗｅｒｉｔｉａ ｃｈｉｒａｔａ）と称されることもある。チライトは、胃痛、下痢のほか消化不良や食欲不振、胃痛、腹痛、下痢にも使用されている。また、チライトは、苦味健胃薬、解熱に用いられ、ビルマ、マレーシア地方ではさらに緩下、強壮薬としたり、キナ皮の代用としてマラリアにも用い、熱病や腸チフスなどに広く応用されている（例えば、非特許文献９参照）。
【００１４】
【特許文献１】特開平１０−２２９９７８号公報
【特許文献２】特開２００６−２１９４０７号公報
【特許文献３】特開２００３−０５５１６２号公報
【特許文献４】特開２００２−２４１２９６号公報
【特許文献５】特開２００２−０８７９７６号公報
【特許文献６】特開２００２−２４１２９７号公報
【特許文献７】特開２００２−３０８７９０号公報
【特許文献８】特開２００３−１６０５０３号公報
【特許文献９】特開２００３−１９２５４１号公報
【特許文献１０】特開２００６−２８２５９７号公報
【特許文献１１】特開２００５−００２０６８号公報
【特許文献１２】特公平４−６０５６７号公報
【非特許文献１】「Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ」，１９９２年，第８巻，ｐ．５６−６１
【非特許文献２】Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１０６，１７−２３（１９９６）
【非特許文献３】Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．，２０９，６６１−６６８（１９９８）
【非特許文献４】Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０７，４０９−４１７（２００１）
【非特許文献５】アンチエイジングシリーズ１白髪・脱毛・育毛の実際，第６章
【非特許文献５】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１，２８８５３−２８８６０（１９９６）
【非特許文献６】Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，２０，３２５−３２９（２００２）
【非特許文献７】Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．，１１５，５０１−５０２（２００３）
【非特許文献８】Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，９９，３４３−３４９（１９９２）
【非特許文献９】原色牧野和漢薬草大図鑑、北隆館（２００２）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れた毛乳頭細胞増殖促進作用を有し、安全性の高い毛乳頭細胞増殖促進剤を提供することを目的とする。また、本発明は、優れたテストステロン５α−リダクターゼ阻害作用を有し、安全性の高いテストステロン５α−リダクターゼ阻害剤を提供することを目的とする。また、本発明は、優れたアンドロゲン受容体結合阻害作用を有し、安全性の高いアンドロゲン受容体結合阻害剤を提供することを目的とする。また、本発明は、優れたＶＥＧＦ産生促進作用を有し、安全性の高いＶＥＧＦ産生促進剤を提供することを目的とする。また、本発明は、ＢＭＰ−２産生促進作用を有し、安全性の高いＢＭＰ−２産生促進剤を提供することを目的とする。また、本発明は、優れたＩＧＦ−１産生促進作用産生促進作用を有し、安全性の高いＩＧＦ−１産生促進剤を提供することを目的とする。また、本発明は、優れた育毛効果を有し、安全性が高い育毛剤を提供することを目的とする。また、本発明は、頭髪に使用した場合に使用感が良く、優れた毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用及び育毛効果を発揮することができる頭髪化粧料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
前記課題を解決するため、本発明者らは鋭意検討した結果、以下のような知見を得た。即ち、チライトからの抽出物、アマロゲンチン又はアマロスウェリンが、優れた毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用及び育毛効果を有していた、という知見である。
【００１７】
前記したように、チライトは、胃痛、下痢のほか消化不良や食欲不振、胃痛、腹痛、下痢にも使用されていることは知られている。また、チライトは、苦味健胃薬、解熱に用いられ、ビルマ、マレーシア地方ではさらに緩下、強壮薬としたり、キナ皮の代用としてマラリアにも用い、熱病や腸チフスなどに広く応用されていることは知られている。
しかしながら、チライトからの抽出物、アマロゲンチン又はアマロスウェリンが、前記各作用及び効果を有していることは従来全く知られておらず、本発明者らの新たな知見である。
【００１８】
本発明は、本発明者らによる前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする毛乳頭細胞増殖促進剤である。
＜２＞ アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とするテストステロン５α−リダクターゼ阻害剤である。
＜３＞ アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とするアンドロゲン受容体結合阻害剤である。
＜４＞ チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤である。
＜５＞ チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする骨形成タンパク質−２（ＢＭＰ−２）産生促進剤である。
＜６＞ アマロゲンチンを有効成分として含有することを特徴とするインスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進剤である。
＜７＞ アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする育毛剤である。
＜８＞ アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを、毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進作用、骨形成タンパク質−２（ＢＭＰ−２）産生促進作用、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進作用及び育毛効果のうち少なくとも１つの有効成分として含有することを特徴とする頭髪化粧料である。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によると、従来における諸問題を解決することができ、優れた毛乳頭細胞増殖促進作用を有し、安全性の高い毛乳頭細胞増殖促進剤を提供することができる。また、本発明によると、優れたテストステロン５α−リダクターゼ阻害作用を有し、安全性の高いテストステロン５α−リダクターゼ阻害剤を提供することができる。また、本発明によると、優れたアンドロゲン受容体結合阻害作用を有し、安全性の高いアンドロゲン受容体結合阻害剤を提供することができる。また、本発明によると、優れたＶＥＧＦ産生促進作用を有し、安全性の高いＶＥＧＦ産生促進剤を提供することができる。また、本発明によると、ＢＭＰ−２産生促進作用を有し、安全性の高いＢＭＰ−２産生促進剤を提供することができる。また、本発明によると、優れたＩＧＦ−１産生促進作用産生促進作用を有し、安全性の高いＩＧＦ−１産生促進剤を提供することができる。また、本発明は、優れた育毛効果を奏することができ、安全性が高い育毛剤を提供することができる。また、本発明は、頭髪に使用した場合に使用感が良く、優れた毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用及び育毛効果を発揮することができる頭髪化粧料を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
（毛乳頭細胞増殖促進剤）
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
【００２１】
＜チライトからの抽出物＞
前記「チライト」（Ｃｈｉｒａｉｔｏ）とは、リンドウ科の植物であって、学名は「Ｓｗｅｒｔｉａ ｃｈｉｒａｔａ Ｂｕｃｈ−Ｈａｍ．ｅｘ．Ｃ．Ｂ．Ｃｌａｒｋｅ（Ｆｌ．Ｂｒ．Ｉｎｄ）」である。また、チライトは、「チレッタセンブリ」（Ｓｗｅｒｉｔｉａ ｃｈｉｒａｔａ）と称されることもある。
本発明において抽出される前記チライトの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、地上部や地中部が挙げられる。中でも、抽出効率や毛乳頭細胞の増殖促進効果などの観点から、地上部が好ましい。
【００２２】
前記「チライトからの抽出物」としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、チライトを抽出原料として得られる抽出液、前記抽出液の希釈液、前記抽出液の濃縮液、前記抽出液を乾燥して得られる乾燥物が挙げられる。中でも、取扱い易さの点から、濃縮液又は乾燥物が好ましい。また、前記チライトからの抽出物として、前記抽出液、希釈液、濃縮液及び乾燥物の、粗精製物又は精製物を利用してもよい。前記粗精製物又は精製物を利用する理由の一つとして、チライトからの抽出物が有する特有の匂いを、低減又は除去するための脱色や脱臭が挙げられるが、前記特有の匂いは、チライトからの抽出物を特に大量に使用しない限り、未精製のままでも実用上支障がないことが多い。
なお、前記精製物とは、毛乳頭細胞増殖促進作用を有する単一の化合物を意味するが、前記単一の化合物としては、後記するアマロゲンチンであってもよく、アマロスウェリンであってもよく、これら以外の化合物であってもよい。
【００２３】
＜アマロゲンチン＞
本発明における前記アマロゲンチン（ａｍａｒｏｇｅｎｔｉｎ）とは、ＩＵＰＡＣ命名法で、［（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−２−［［（１Ｓ，９Ｓ，１０Ｓ）−１０−ｅｔｈｅｎｙｌ−５−ｏｘｏ−４，８−ｄｉｏｘａｂｉｃｙｃｌｏ［４．４．０］ｄｅｃ−６−ｅｎ−９−ｙｌ］ｏｘｙ］−４，５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−６−（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｏｘａｎ−３−ｙｌ］ ２，４−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−６−（３−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｂｅｎｚｏａｔｅ）として表現される化合物である。アマロゲンチンの分子構造は、下記構造式（１）で表される。
【００２４】
【化１】
【００２５】
前記アマロゲンチンの由来としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、チライトからの抽出物に含有されていたものであってもよく、化学合成されたものであってもよい。前記アマロゲンチンが、チライトからの抽出物に含有されていた場合には、前記抽出物からアマロゲンチンを単離・精製して使用される。
【００２６】
なお、前記毛乳頭細胞増殖促進剤の有効成分として、前記アマロゲンチンそのものが含まれていてもよく、その薬理学的に許容される塩が含まれていてもよい。また、前記アマロゲンチン又はその薬理学的に許容される塩の、水和物又は溶媒和物が含まれていてもよい。また、前記アマロゲンチンは、毛乳頭細胞の増殖促進作用を損なわない限り、修飾又は置換されていてもよい。
【００２７】
前記薬理学的に許容される塩としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、塩酸塩、硫酸塩、臭化水素塩、硝酸塩、硫酸水素酸塩、リン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ-トルエンスルホン酸塩、樟脳スルホン酸塩、スルファミン酸塩、マンデル酸塩、プロピオン酸塩、グリコール酸塩、ステアリン酸塩、リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩、パモン酸塩、フェニル酢酸塩、グルタミン酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、スルファニル酸塩、２−アセトキシ安息香酸塩、エタンジスルホン酸塩、シュウ酸塩、イセチオン酸塩、ギ酸塩、トリフルオロ酢酸塩、エチルコハク酸塩、ラクトビオン酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、パラトルエンスルホン酸塩、ラウリル硫酸塩、アスパラギン酸塩、アジピン酸塩、ヨウ化水素酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、ピクリン酸塩、チオシアン酸塩、ウンデカン酸塩などが挙げられる。
【００２８】
＜アマロスウェリン＞
本発明における前記アマロスウェリン（ａｍａｒｏｓｗｅｒｉｎ）とは、ＩＵＰＡＣ命名法で、［（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−２−［（１０−ｅｔｈｅｎｙｌ−１−ｈｙｄｒｏｘｙ−５−ｏｘｏ−４，８−ｄｉｏｘａｂｉｃｙｃｌｏ［４．４．０］ｄｅｃ−６−ｅｎ−９−ｙｌ）ｏｘｙ］−４，５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−６−（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｏｘａｎ−３−ｙｌ］ ２，４−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−６−（３−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｂｅｎｚｏａｔｅ）として表現される化合物である。アマロスウェリンの分子構造は、下記構造式（２）で表される。
【００２９】
【化２】
【００３０】
前記アマロスウェリンの由来としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、チライトからの抽出物に含有されていたものであってもよく、化学合成されたものであってもよい。前記アマロスウェリンがチライトからの抽出物に含有されていた場合には、前記抽出物からアマロスウェリンを単離・精製して、使用される。
【００３１】
なお、前記毛乳頭細胞増殖促進剤の有効成分として、前記アマロスウェリンそのものが含まれていてもよく、その薬理学的に許容される塩が含まれていてもよい。また、前記アマロスウェリン又はその薬理学的に許容される塩の、水和物又は溶媒和物が含まれていてもよい。また、前記アマロスウェリンは、毛乳頭細胞の増殖促進作用を損なわない限り、修飾又は置換されていてもよい。前記薬理学的に許容される塩は、前記したものと同様であるので説明を省略する。
【００３２】
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤における有効成分としては、前記チライトからの抽出物、アマロゲンチン又はアマロスウェリンを１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
前記毛乳頭細胞増殖促進剤中の有効成分の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。また、前記毛乳頭細胞増殖促進剤は、前記有効成分そのものであってもよい。
【００３３】
＜その他の成分＞
前記毛乳頭細胞増殖促進剤における前記その他の成分としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、薬理学的に許容される担体が挙げられる。前記担体としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、例えば、前記有効成分を各種の剤型として用いる場合において、その剤型に応じて適宜選択することができる。前記剤型としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、投与方法に応じて適宜選択することができ、例えば、経口固形剤（錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、トローチ剤など）、経口液剤（内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤など）、注射剤（溶液、懸濁液、用事溶解用固形剤など）、吸入散剤、軟膏剤、外用液剤、貼付剤、点眼剤、点鼻剤及び点耳剤が挙げられる。
【００３４】
前記経口固形剤としては、例えば、前記有効成分に賦形剤、必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味・矯臭剤などの添加剤を加え、常法により製造することができる。
【００３５】
前記賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸などが挙げられる。
【００３６】
前記添加剤としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。また、前記結合剤としては、例えば、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドンなどが挙げられ、前記崩壊剤としては、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖などが挙げられ、前記滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコールなどが挙げられ、前記着色剤としては、酸化チタン、酸化鉄などが挙げられ、前記矯味・矯臭剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸などが挙げられる。
【００３７】
前記経口液剤としては、例えば、前記有効成分に、矯味・矯臭剤、緩衝剤、安定化剤などの添加剤を加え、常法により製造することができる。ここで、前記添加剤としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。前記矯味・矯臭剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸などが挙げられ、緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウムなどが挙げられ、安定剤としては、例えば、トラガント、アラビアゴム、ゼラチンなどが挙げられる。
【００３８】
前記注射剤としては、例えば、前記有効成分に、ｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤などを添加し、常法により皮下、筋肉内及び静脈内用注射剤を製造することができる。ここで、前記ｐＨ調節剤及び前記緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウムなどが挙げられる。
【００３９】
また、前記安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸などが挙げられる。前記等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、ブドウ糖などが挙げられる。前記局所麻酔剤としては、例えば、塩酸プロカイン、塩酸リドカインなどが挙げられる。
【００４０】
＜製造方法＞
−チライトから抽出物を抽出する方法−
チライトから抽出物を抽出する方法としては、特に制限はなく、一般に植物からその成分を抽出する際に用いられる抽出方法を適用することができ、例えば、抽出原料を乾燥した後、乾燥物をそのまま又は粗砕機を用いて粉砕して、抽出溶媒による抽出に供する方法が挙げられる。前記乾燥方法としては、特に制限はなく、例えば、天日で乾燥してもよく、通常使用される乾燥機を用いて乾燥してもよい。前記抽出原料としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、採取したままのチライトを抽出原料として用いてもよく、また、採取したチライトを、ヘキサン、ベンゼンなどの非極性溶媒によって脱脂などの前処理を施した後に、抽出原料として使用してもよい。抽出溶媒として極性溶媒を用いた場合には、チライトからの抽出処理が効率よく行うことができる点で、前記脱脂などの前処理を施すことが好ましい。
【００４１】
前記抽出溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、水、親水性有機溶媒、又は、水と親水性有機溶媒との混合液を、室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
前記水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水、これらの水に各種処理を施したものなどが挙げられる。前記各種処理としては、特に制限はなく、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化などが挙げられる。したがって、前記水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水なども含まれる。
【００４２】
前記親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール（ＥｔＯＨ）、プロピルアルコール、イソプロピルアルコールなどの炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトンなどの低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリンなどの炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられる。
【００４３】
前記水と親水性有機溶媒との混合液としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、前記親水性有機溶媒が低級アルコールの場合には、水１０質量部に対して１〜９０質量部添加することが好ましく、前記親水性有機溶媒が低級脂肪族ケトンの場合には、水１０質量部に対して１〜４０質量部添加することが好ましく、前記親水性有機溶媒が多価アルコールの場合には、水１０質量部に対して１〜９質量部添加することが好ましい。
【００４４】
前記抽出溶媒の量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、抽出原料の５〜１５倍量（重量比）が好ましい。
【００４５】
チライトから抽出物を抽出する際の抽出手順としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、室温又は還流加熱下で、任意の装置を用いて抽出することができる。具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、必要に応じて時々攪拌しながら、３０分から３時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより、抽出物を得ることができる。
【００４６】
前記室温又は還流加熱下における温度（抽出温度）としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、常温〜９５℃が好ましい。
また、前記任意の装置としては、例えば、ジムロート冷却管、ナス型フラスコ、三角フラスコ、マントルヒーターなどを組み合わせた装置などが挙げられる。
【００４７】
前記抽出液から希釈液、濃縮液、乾燥物、又は、これらの粗精製物若しくは精製物の調製方法としては、特に制限はなく、常法に従って前記抽出液を希釈、濃縮、乾燥、精製することで調製することができる。前記精製の方法としては、特に制限はなく、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理が挙げられる。
【００４８】
−アマロゲンチン及びアマロスウェリンの製造方法−
前記アマロゲンチン及びアマロスウェリンの製造方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、チライトからの抽出物からの単離・精製や、化学合成などにより製造することができる。
【００４９】
前記単離・精製する方法としては、特に制限はなく、常法により行うことができる。以下に、前記単離・精製する方法の具体例を示す。
まず、乾燥したチライトをエタノールなどの抽出溶媒に浸漬して得られた抽出液を濃縮し、多孔性樹脂などを用いたカラムクロマトグラフィーに供して、水、アルコール（メタノールなど）の順で溶出させ、アルコール（メタノールなど）で溶出される分画物として得る。このとき、前記分画物に対して、さらにＯＤＳ（オクタデシルシリル化シリカゲル）を用いた逆相シリカゲルクロマトグラフィーや再結晶などに供することで、粗精製物を得ることができる。
そして、前記分画物又は粗精製物を、例えば、液体クロマトグラフィーなどを用いて分離・精製することにより、精製されたアマロゲンチン及びアマロスウェリンを得ることができる。
【００５０】
また、前記合成方法としては、特に制限はなく、従来公知の方法により合成することができる。
【００５１】
＜用途＞
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有し、前記有効成分は毛乳頭細胞の増殖促進作用を有するものである。また、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、毛乳頭細胞の増殖促進作用を介して、毛乳頭を活性化することができる。したがって、前記毛乳頭細胞増殖促進剤は、毛乳頭細胞増殖促進作用を発揮すること、又は、毛乳頭を活性化することに意義のある、全ての用途に用いることができる。例えば、前記毛乳頭細胞増殖促進剤は、毛乳頭細胞の増殖促進機構、毛乳頭細胞の増殖促進により改善される症状の研究、毛乳頭細胞の増殖促進により改善される症状の予防や治療に利用することができる。
【００５２】
前記毛乳頭細胞増殖促進剤の具体的な態様としては、例えば、試薬用途の促進剤や、症状（疾患や、脱毛などの「好ましくない症状」を含む）の予防・治療用途の促進剤が挙げられる。
前記症状としては、例えば、薄毛、脱毛、男性型脱毛症などが挙げられる。
また、前記毛乳頭細胞増殖促進剤は、例えば、毛包上皮細胞の増殖や分化、毛乳頭細胞の増殖促進を介したＶＥＧＦの産生促進などに好適に利用することができる。
前記毛乳頭細胞増殖促進剤の使用対象となる動物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することできるが、特に哺乳類が好ましい。前記哺乳類としては、例えば、ヒト、サル、ウシ、ウマ、ブタ、マウス、ラットなどが挙げられ、中でも、ヒトが好ましい。
【００５３】
前記毛乳頭細胞増殖促進剤の使用方法としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、毛乳頭細胞に任意の方法で直接接触させることにより使用したり、頭髪（頭皮）に任意の方法で接触させることにより使用したりすることができる。
【００５４】
なお、本発明者らは、チライトからの抽出物、アマロゲンチン又はアマロスウェリンが、毛乳頭細胞促進作用だけでなく、例えば、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進作用、骨形成タンパク質−２（ＢＭＰ−２）産生促進作用、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進作用、育毛効果など、育毛に関する様々なメカニズムに関与することを明らかにした。
【００５５】
具体的には、チライトからの抽出物は、前記毛乳頭細胞促進作用以外に、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用などを有している。アマロゲンチンは、前記毛乳頭細胞促進作用以外に、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用、育毛効果などを有している。アマロスウェリンは、前記毛乳頭細胞促進作用だけでなく、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用、育毛効果などを有している。
【００５６】
したがって、前記チライトからの抽出物、アマロゲンチン又はアマロスウェリンは、毛乳頭細胞増殖促進剤の有効成分としてだけでなく、例えば、以下に示す用途の有効成分として使用することが出来る。なお、以下に示す各剤において、各有効成分やその他の成分の特性や製造方法については、前記した毛乳頭細胞増殖促進剤と同様であるので、重複する説明は省略する。
【００５７】
（テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤）
本発明のテストステロン５α−レダクターゼ阻害剤は、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくともいずれかを有効成分として含有することを特徴とする。もちろん、必要に応じて、その他の成分などを、適宜選択することができる。前記テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤は、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を発揮することに意義のある、全ての用途に用いることができる。例えば、前記テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤は、テストステロン５α−レダクターゼの阻害機構、テストステロン５α−レダクターゼの阻害により改善される症状の研究、テストステロン５α−レダクターゼの阻害により改善される症状の予防や治療に利用することができる。
【００５８】
前記テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤の具体的な態様としては、例えば、試薬用途の阻害剤や、症状の予防・治療用途の抑制剤が挙げられる。
前記症状としては、例えば、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟などが挙げられる。
また、前記テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤は、例えば、５α−ジヒドロテストステロンを介する性分化機構の研究などに好適に利用することができる。
【００５９】
（アンドロゲン受容体結合阻害剤）
本発明のアンドロゲン受容体結合阻害剤は、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくともいずれかを有効成分として含有することを特徴とする。もちろん、必要に応じて、その他の成分などを、適宜選択することができる。前記アンドロゲン受容体結合阻害剤は、アンドロゲン受容体結合阻害作用を発揮することに意義のある、全ての用途に用いることができる。例えば、前記アンドロゲン受容体結合阻害剤は、アンドロゲン受容体への結合を阻害する機構、アンドロゲン受容体への結合を阻害することにより改善される症状の研究、アンドロゲン受容体への結合を阻害することにより改善される症状の予防や治療に利用することができる。
【００６０】
前記アンドロゲン受容体結合阻害剤の具体的な態様としては、例えば、試薬用途の阻害剤や、症状の予防・治療用途の抑制剤が挙げられる。
前記症状としては、例えば、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟などが挙げられる。
また、前記アンドロゲン受容体結合阻害剤は、例えば、性分化機構の研究などに好適に利用することができる。
【００６１】
（ＶＥＧＦ産生促進剤）
本発明のＶＥＧＦ産生促進剤は、チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくともいずれかを有効成分として含有することを特徴とする。もちろん、必要に応じて、その他の成分などを、適宜選択することができる。前記ＶＥＧＦ産生促進剤は、ＶＥＧＦ産生促進作用を発揮することに意義のある、全ての用途に用いることができる。例えば、前記ＶＥＧＦ産生促進剤は、ＶＥＧＦ産生の促進機構、ＶＥＧＦ産生の促進により改善される症状の研究、ＶＥＧＦ産生の促進により改善される症状の予防や治療に利用することができる。
【００６２】
前記ＶＥＧＦ産生促進剤の具体的な態様としては、例えば、試薬用途の促進剤や、症状の予防・治療用途の促進剤が挙げられる。
前記症状としては、例えば、脱毛症、冠動脈疾患、閉塞性末梢動脈硬化症、軟骨損傷、血管形成不全、虚血性脚部疾患などが挙げられる。
また、前記ＶＥＧＦ産生促進剤は、例えば、血管内皮細胞の増殖や遊走の促進、血管新生の促進、血液凝固、血圧調節、皮膚におけるリンパ管の成長などに好適に利用することができる。
【００６３】
（ＢＭＰ−２産生促進剤）
本発明のＢＭＰ−２産生促進剤は、チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくともいずれかを有効成分として含有することを特徴とする。もちろん、必要に応じて、その他の成分などを、適宜選択することができる。前記ＢＭＰ−２産生促進剤は、ＢＭＰ−２産生促進作用を発揮することに意義のある、全ての用途に用いることができる。例えば、前記ＢＭＰ−２産生促進剤は、ＢＭＰ−２産生の促進機構、ＢＭＰ−２産生の促進により改善される症状の研究、ＢＭＰ−２産生の促進により改善される症状の予防や治療に利用することができる。
【００６４】
前記ＢＭＰ−２産生促進剤の具体的な態様としては、例えば、試薬用途の促進剤や、症状の予防・治療用途の促進剤が挙げられる。
前記症状としては、例えば、脱毛症、皮膚老化、骨粗鬆症や骨折などの骨疾患などが挙げられる。
また、前記ＢＭＰ−２産生促進剤は、例えば、骨形成の誘導、細胞全般の分化や増殖の調節、体軸形成やほとんど全ての器官形成、神経細胞の分化や機能維持などに好適に利用することができる。
【００６５】
（ＩＧＦ−１産生促進剤）
本発明のＶＥＧＦ産生促進剤は、アマロゲンチンを有効成分として含有することを特徴とする。もちろん、必要に応じて、その他の成分などを、適宜選択することができる。前記ＩＧＦ−１産生促進剤は、ＩＧＦ−１産生促進作用を発揮することに意義のある、全ての用途に用いることができる。例えば、前記ＩＧＦ−１産生促進剤は、ＩＧＦ−１産生の促進機構、ＩＧＦ−１産生の促進により改善される症状の研究、ＩＧＦ−１産生の促進により改善される症状の予防や治療に利用することができる。
【００６６】
前記ＩＧＦ−１産生促進剤の具体的な態様としては、例えば、試薬用途の促進剤や、症状の予防・治療用途の促進剤が挙げられる。
前記症状としては、例えば、脱毛症、皮膚老化、糖尿病、下垂体機能低下症、下垂体性小人症などが挙げられる。
また、前記ＩＧＦ−１産生促進剤は、例えば、細胞全般の分化・増殖・成長の促進、老化の進行抑制、血糖降下、生殖機能の調節、軟骨への硫酸イオンの取込みなどに好適に利用することができる。
【００６７】
（育毛剤）
本発明の育毛剤は、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする。もちろん、必要に応じて、その他の成分などを、適宜選択することができる。前記育毛剤は、育毛効果を発揮することに意義のある、全ての用途に用いることができる。例えば、前記育毛剤は、育毛機構、育毛により改善される症状の研究、育毛の促進により改善される症状の予防や治療に利用することができる。
【００６８】
前記育毛剤の具体的な態様としては、例えば、試薬用途の育毛剤や、症状の予防・治療用途の育毛剤が挙げられる。
前記症状としては、例えば、男性型脱毛症などが挙げられる。
【００６９】
なお、前記育毛剤は、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有しているので、前記したような、毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用及びＩＧＦ−１産生促進作用を有している。このような作用を介して、及び／又は、これら以外の作用を介して、前記育毛剤は、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟などの、疾患や好ましくない症状を予防又は治療することができる。なお、前記治療とは、改善の意味も含む。
【００７０】
（頭髪化粧料）
本発明の頭髪化粧料は、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを、毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用及び育毛効果のうち少なくとも１つの有効成分として含有することを特徴とする。もちろん、必要に応じて、その他の成分などを、適宜選択することができる。
【００７１】
前記したように、アマロゲンチン及びアマロスウェリンは、毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＢＭＰ−２産生促進作用及びＩＧＦ−１産生促進作用及び育毛効果を有している。このような作用を介して、及び／又は、これら以外の作用を介して、前記頭髪化粧料は、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟などの、疾患や好ましくない症状を予防又は治療に利用することができる。中でも、男性型脱毛症の予防又は治療に好適に利用することができる。さらに、前記有効成分は天然の成分であるので、頭髪（頭皮）に適用した場合の使用感と安全性とに優れている。
【００７２】
前記頭髪化粧料中の有効成分の配合率としては、特に制限はなく、頭髪化粧料の種類に応じて適宜選択することができるが、標準的な抽出物に換算して約０．０００１〜１０質量％が好ましく、標準的な抽出物に換算して約０．００１〜１質量％がより好ましい。前記標準的な抽出物としては、例えば、抽出溶媒として水、又は、水と親水性有機溶媒との混合液を用いた抽出物が挙げられる。
【００７３】
なお、前記頭髪化粧料における前記有効成分としては、アマロゲンチンやアマロスウェリンそのものが含まれていてもよく、前記毛乳頭細胞増殖促進剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、アンドロゲン受容体結合阻害剤、ＶＥＧＦ産生促進剤、ＢＭＰ−２産生促進剤、ＩＧＦ−１産生促進剤又は育毛剤として、一旦製剤化されたものが含有されていてもよい。
【００７４】
前記頭髪化粧料における前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、通常の頭髪化粧料の製造に用いられる主剤や助剤が挙げられる。また、前記その他の成分としては、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料などが挙げられる。
【００７５】
このように、前記頭髪化粧料に前記その他の成分が含有されることで、一般的に頭髪化粧料として好適とされている性質を付与することができる。さらに、前記頭髪化粧料に前記その他の成分が含有されることで、互いの効果を助長し合い、想像以上の相乗効果をもたらすことが期待される。
【００７６】
前記頭髪化粧料の種類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ヘアトニック、ヘアローション、ヘアリキッド、ヘアクリーム、整髪剤、シャンプー、リンス、トリートメント、ポマードなどが挙げられる。
【実施例】
【００７７】
以下に本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００７８】
（実施例１）
実施例１は、チライトから抽出物を抽出した実施例である。
チライトの地上部の乾燥物を粗砕したものそれぞれ１００ｇに対し、抽出溶媒（水、８０％エタノール又はエタノール）１，０００ｍｌを加え、還流抽出器で３時間加熱抽出し熱時濾過した。その後、得られた抽出液を４０℃で減圧下に濃縮し、凍結乾燥機で乾燥して、チライトからの抽出物を得た。なお、前記８０％エタノールにおけるエタノールと水との混合比は、重量基準による。
表１は、各抽出溶媒によるチライトからの抽出物の収率を示す表である。
【００７９】
【表１】
【００８０】
（実施例２）
実施例２は、実施例１で得られたチライトからの抽出物から、アマロゲンチン及びアマロスウェリンを精製した実施例である。
実施例１のチライトからの抽出物１００．０ｇに対して水５００ｍＬを加え、懸濁した。これを、多孔性樹脂（ＤＩＡＩＯＮ ＨＰ−２０，１．０Ｌ）上に付し、水５Ｌ、メタノール３Ｌの順で溶出させた。前記メタノール３Ｌで溶出させた画分からメタノールを留去して、メタノール溶出画分３２．０ｇを得た。このメタノール溶出画分のうち、１０．０ｇをメタノール：水＝４０：６０（容量比）の混合溶液に溶解し、ＯＤＳ（商品名：クロマトレックスＯＤＳ ＤＭ１０２０Ｔ、富士シリシア化学（株））を充填したガラス製のカラム上部より流入させて、前記ＯＤＳに吸着させた。移動相としてメタノール：水＝４０：６０（容量比）を流し、その溶出液を集め、脱溶媒して、分画物１．７ｇを得た。前記分画物１．７ｇをクロロホルム：メタノール＝１０：１（容量比）の混合溶液に溶解し、ＳｉＯ２（商品名：シリカゲル６０、富士シリシア化学（株）製）を充填したガラス製のカラム上部より流入させて、前記ＳｉＯ２に吸着させた。移動相として、クロロホルム：メタノール＝１０：１（容量比）を流し、その溶出液を集め、脱溶媒して、アマロゲンチンとアマロスウェリンの濃縮物１．０ｇを得た。前記濃縮物を、液体クロマトグラフィーを用いて分画した。前記液体クロマトグラフィーの条件は以下の通りである。
【００８１】
−液体クロマトグラフィーの条件−
固定相：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ Ｐｒｏ Ｃ１８（（株）ワイエムシィ製）
カラム径：２０ｍｍ
カラム長：２５０ｍｍ
移動相流量：９ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＲＩ（Ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ Ｉｎｄｅｘ、示差屈折率）
【００８２】
ここで、保持時間１４分〜１６分及び２０分〜２２分に流出する画分を分取し、アマロゲンチンとアマロスウェリンとを単離した。この操作を数回繰り返し、アマロゲンチンとアマロスウェリンを各々１８０ｍｇ、１５０ｍｇ得た。
前記アマロゲンチン及びアマロスウェリンについて、１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）分析を行った。下記にその結果を示す。
【００８３】
−アマロゲンチン−
〔１３Ｃ−ＮＭＲケミカルシフト・（帰属炭素，ＣＤ３ＯＤ）〕１７１．３（７’’−Ｃ），１６７．４（１１−Ｃ），１６５．８（５’’−Ｃ），１６３．７（３’’−Ｃ），１５７．３（３’’’−Ｃ），１５３．５（３−Ｃ），１４８．４（１’’−Ｃ），１４６．４（１’’’−Ｃ），１３２．７（８−Ｃ），１２９．２（５’’’−Ｃ），１２１．１（６’’’−Ｃ），１２０．９（１０−Ｃ），１１６．４（４’’’−Ｃ），１１４．４（２’’’−Ｃ），１１２．７（６’’−Ｃ），１０５．５（２’’−Ｃ），１０４．０（４−Ｃ），１０３．１（４’’−Ｃ），９７．１（１’−Ｃ），９６．７（１−Ｃ），７８．２（５’−Ｃ），７４．８（２’−Ｃ），７４．６（３’−Ｃ），７１．６（４’−Ｃ），６９．５（７−Ｃ），６２．４（６’−Ｃ），４３．４（９−Ｃ），２８．７（５−Ｃ），２５．８（６−Ｃ）．
【００８４】
−アマロスウェリン−
〔１３Ｃ−ＮＭＲケミカルシフト・（帰属炭素，ＣＤ３ＯＤ）〕１７１．３（７’’−Ｃ），１６７．２（１１−Ｃ），１６６．２（５’’−Ｃ），１６３．９（３’’−Ｃ），１５７．４（３’’’−Ｃ），１５３．７（３−Ｃ），１４８．６（１’’−Ｃ），１４６．４（１’’’−Ｃ），１３３．１（８−Ｃ），１２９．４（５’’’−Ｃ），１２１．３（１０−Ｃ），１２１．１（６’’’−Ｃ），１１６．４（４’’’−Ｃ），１１４．５（２’’’−Ｃ），１１２．６（６’’−Ｃ），１０９．３（２’’−Ｃ），１０３．９（４−Ｃ），１０３．２（４’’−Ｃ），９８．９（１’−Ｃ），９８．２（１−Ｃ），７８．４（５’−Ｃ），７４．９（２’−Ｃ），７４．８（３’−Ｃ），７１．３（４’−Ｃ），６５．７（７−Ｃ），６４．２（５−Ｃ），６２．３（６’−Ｃ），５１．９（９−Ｃ），３３．５（６−Ｃ）．
【００８５】
実施例２の結果によれば、チライトからの抽出物から、アマロスウェリンとアマロゲンチンとを精製できることが示され、さらに、前記精製されたアマロスウェリン及びアマロゲンチンは、それぞれ、前記構造式（１）及び（２）で表される化学構造を有していたことが示された。
【００８６】
（実施例３）
＜毛乳頭細胞増殖促進作用試験＞
実施例３は、実施例１、２で調製されたチライトからの抽出物、アマロスウェリン及びアマロゲンチンに対し、毛乳頭細胞増殖促進作用試験を行った実施例である。
【００８７】
毛乳頭細胞増殖促進作用試験の具体的な手順は、以下の通りである。
まず、正常ヒト頭髪毛乳頭細胞（ＴＯＹＯＢＯ社、ＣＡ６０２０５）を毛乳頭細胞増殖培地（ＴＯＹＯＢＯ社、ＴＰＧＭ−２５０）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞は１０％ＦＢＳ（Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ）含有ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｍｉｎｉｍａｌ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉｕｍ）を用いて１．０×１０４ ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、コラーゲンコートした９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当り２００μＬ播種し、３日間培養した。培養後、培地を抜き、無血清ＤＭＥＭに溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに２００μＬ添加し、さらに４日間培養した。
【００８８】
毛乳頭細胞増殖作用はＭＴＴアッセイを用いて測定した。具体的には、培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで無血清のＤＭＥＭに溶解したＭＴＴ（（３−（４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ、同仁化学研究所）を各ｗｅｌｌに１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。そして、毛乳頭細胞増殖促進率を、下記（１）式に従って算出した。
【００８９】
毛乳頭細胞増殖促進率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００ ・・・（１）
〔ただし、前記（１）式中、Ａは被験試料添加時の吸光度を表す。Ｂは被験試料無添加時の吸光度を表す。〕
【００９０】
表２は、各有効成分による毛乳頭細胞増殖促進率を示す表である。
【００９１】
【表２】
【００９２】
実施例３の結果によれば、チライトからの抽出物、アマロスウェリン及びアマロゲンチンが、毛乳頭細胞増殖促進作用を有することが示された。
【００９３】
（実施例４）
＜テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用試験＞
実施例４は、実施例１、２で調製されたチライトからの抽出物、アマロスウェリン及びアマロゲンチンに対し、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用試験を行った実施例である。
【００９４】
テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用試験の具体的な手順は、以下の通りである。
まず、蓋付Ｖ底試験管にて、プロピレングリコールで調製した４．２ｍｇ／ｍＬ テストステロン ２０μＬ、１ｍｇ／ｍＬ ＮＡＤＰＨ（還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸）含有５ｍｍｏｌ／ｍＬ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．１３）８２５μＬを混合した。これに、エタノール、８０％エタノール又は精製水で調製した被験試料８０μＬ及びＳ−９（オリエンタル酵母工業株式会社） ７５μＬを加え再び混合し、３７℃にて３０分反応させた後、塩化メチレン １ｍＬを加え反応を停止した。これを遠心（１，６００×ｇ、１０分）し、塩化メチレン層をガスクロマトグラフィーにより分析した。前記ガスクロマトグラフィーの条件は以下の通りである。また、同様の方法で空試験を行った。
なお、前記Ｓ−９とは、ＳＤラットの雄に酵素誘導剤（フェノバルビタール、５，６−ベンゾフラボン）を腹腔内投与したのち肝臓をすりつぶして、９，０００×ｇで遠心した上清である。
【００９５】
−ガスクロマトグラフィーの条件−
使用機器 ：Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＧＣ−７Ａ
カラム ：ＤＢ−１７０１（φ０．５３ｍｍ×３０ｍ，膜厚；１．０μｍ）
カラム／注入温度：２４０℃／３００℃
検出器 ：ＦＩＤ
キャリアガス ：窒素ガス
【００９６】
あらかじめ、３α−アンドロスタンジオール（ＳＩＧＭＡ社）、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ、東京化成工業株式会社）及びテストステロン（東京化成工業株式会社）の標準品の塩化メチレン溶液をガスクロマトグラフィーにより分析し、これら３化合物の精秤量とピーク面積よりピーク面積あたりの化合物量を算出した。
そして、Ｓ−９による反応後の３α−アンドロスタンジオール、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）及びテストステロンをガスクロマトグラフィーにより分析し、それぞれのピーク面積あたりの濃度を、下記の（２）式に従って算出した。次に、被験試料の変換率を下記の（３）式に従って算出した。そして、前記変換率に基づいて、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率を、下記の（４）式に従って算出した。
【００９７】
濃度（％）＝（被験試料のピーク面積×標準品濃度）／標準品のピーク面積 ・・・（２）
【００９８】
変換率（％）＝（Ａ＋Ｂ）／（Ａ＋Ｂ＋Ｃ） ・・・（３）
〔ただし、前記（３）式中、Ａは、３α−アンドロスタンジオールの濃度を表す。Ｂは、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）の濃度を表す。Ｃは、テストステロンの濃度を表す。〕
【００９９】
テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率（％）＝（１−Ｅ／Ｄ）×１００ ・・・（４）
〔ただし、前記（４）式中、Ｄは、空試験での変換率を表す。Ｅは、被験試料添加での変換率を表す。〕
【０１００】
表３は、各有効成分によるテストステロン５α−レダクターゼ活性阻害率を示す表である。
【０１０１】
【表３】
【０１０２】
実施例４の結果によれば、チライトからの抽出物、アマロスウェリン及びアマロゲンチンが、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用を有することが示された。また、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用の程度は、チライトからの抽出物、アマロスウェリン及びアマロゲンチンの濃度によって調節できることが示された。
【０１０３】
（実施例５）
＜アンドロゲン受容体結合阻害作用試験＞
実施例５は、実施例１、２で調製されたチライトからの抽出物、アマロスウェリン及びアマロゲンチンに対し、アンドロゲン受容体結合阻害作用試験を行った実施例である。
【０１０４】
アンドロゲン受容体結合阻害作用試験の具体的な手順は、以下の通りである。
まず、マウス自然発生乳がん（シオノギ癌：ＳＣ１１５）よりクローニングされたＳＣ−３細胞を２％ＤＣＣ−ＦＢＳ（Ｄｅｘｔｒａｎ−ｃｏａｔｅｄ ｃｈａｒｃｏａｌ ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ）及び１０−８ｍｏｌ／Ｌテストステロン含有ＭＥＭ（Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ、ＭＥＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に２％ＤＣＣ−ＦＢＳ含有ＭＥＭ（ＭＥＭ）で希釈し、９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、１０−９ｍｏｌ／Ｌ ＤＨＴを含む０．５％ＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ）含有Ｈａｍ Ｆ１２＋ＭＥＭ（ＨＭＢ）に溶解した被験試料を１００μＬ添加し、４８時間培養した。その後、終濃度０．４ｇ／ｍＬで２％ＤＣＣ−ＦＢＳ含有ＭＥＭに溶解したＭＴＴを各ｗｅｌｌに１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。空試験として、ＨＭＢのみで培養した細胞を、陽性対照として１０−９ｍｏｌ／Ｌ ＤＨＴのみを含有したＨＭＢで培養した細胞を用い、同様の方法で試験を行って補正した。
そして、アンドロゲンレセプター拮抗率を、下記（５）式に従って算出した。
【０１０５】
アンドロゲンレセプター拮抗率（％）＝［１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）］×１００ ・・・（５）
〔ただし、前記（５）式中、Ａは、ＤＨＴ添加、被験試料無添加での５７０−６５０ｎｍにおける吸光度を表す。Ｂは、ＤＨＴ無添加、被験試料無添加での５７０−６５０ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃは、ＤＨＴ添加、被験試料添加での５７０−６５０ｎｍにおける吸光度を表す。Ｄは、ＤＨＴ無添加、被験試料添加での５７０−６５０ｎｍにおける吸光度を表す。〕
【０１０６】
次いで、試料溶液の濃度を段階的に減少させて前記阻害率の測定を行い、各濃度におけるアンドロゲンの結合阻害率（％）を求めた。
表４は、各有効成分によるアンドロゲン結合阻害率を示す表である。
【０１０７】
【表４】
【０１０８】
実施例５の結果によれば、チライトからの抽出物、アマロスウェリン及びアマロゲンチンが、アンドロゲン受容体結合阻害作用を有することが示された。また、アンドロゲン受容体結合阻害作用の程度は、チライトからの抽出物、アマロスウェリン及びアマロゲンチンの濃度によって調節できることが示された。
【０１０９】
（実施例６）
＜ＶＥＧＦ、ＢＭＰ−２及びＩＧＦ−１の産生促進試験＞
実施例６は、実施例１、２で調製されたチライトからの抽出物、アマロスウェリン及びアマロゲンチンに対し、ＶＥＧＦ、ＢＭＰ−２及びＩＧＦ−１の産生促進試験を行った実施例である。前記産生促進試験は、ｍＲＮＡの発現を評価するｍＲＮＡ発現促進作用試験により行った。
各ｍＲＮＡ発現促進作用試験の具体的な手順は、以下の通りである。
【０１１０】
−一本鎖ＤＮＡの調製−
まず、正常ヒト頭髪毛乳頭細胞（ＴＯＹＯＢＯ社、ＣＡ６０２０５）を毛乳頭細胞増殖培地（ＴＯＹＯＢＯ社、ＴＰＧＭ−２５０）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２×１０５個／ｍＬの濃度になるように１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地で希釈した後、直径６０ｍｍシャーレに５ｍＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、被験試料を添加した無血清ＤＭＥＭ培地に交換し６時間培養した後、細胞を１ｍＬのＲＮＡ抽出用試薬（ＩＳＯＧＥＮ：株式会社ニッポンジーン）で溶解し、クロロホルムを２００μＬ添加後、遠心（１２，０００回転、４℃、１５分間）にて上層ＲＮＡ層を単離し、さらにイソプロパノールで濃縮を行った。濃縮沈殿させた総ＲＮＡをＴＥ溶液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ／１ｍＭ ＥＤＴＡ， ｐＨ８．０）に溶解して総ＲＮＡ標品とし、ＰＣＲ装置（ＴａＫａＲａ ＰＣＲ Ｔｈｅｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ ＭＰ：タカラバイオ社）及びリアルタイムＰＣＲキット（ＴａＫａＲａ ＥｘＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ，ＲＲ０３５Ａ：タカラバイオ社）を用いてＶＥＧＦ、ＢＭＰ−２及びＩＧＦ−１のｍＲＮＡ発現量を測定するための鋳型に使用する一本鎖ＤＮＡを合成した。
【０１１１】
−サイバーグリーン法を用いたリアルタイム−ＰＣＲ反応−
ＶＥＧＦ遺伝子増幅用プライマーとして下記の配列を有するセンスプライマー及びアンチセンスプライマーを作製した（タカラバイオ社）。
センスプライマー ：５’−ｇａｇｃｃｔｔｇｃｃｔｔｇｃｔｇｃｔｃｔａｃ−３’
アンチセンスプライマー：５’−ｃａｃｃａｇｇｇｔｃｔｃｇａｔｔｇｇａｔｇ−３’
【０１１２】
ＢＭＰ−２遺伝子増幅用プライマーとして下記の配列を有するセンスプライマー及びアンチセンスプライマーを作製した（タカラバイオ社）。
センスプライマー ：５’−ａａｃａｃｔｇｔｇｃｇｃａｇｃｔｔｃｃ−３’
アンチセンスプライマー：５’−ｃｃｔａａａｇｃａｔｃｔｔｇｃａｔｃｔｇｔｔｃｔｃ−３’
【０１１３】
ＩＧＦ−１遺伝子増幅用プライマーとして下記の配列を有するセンスプライマー及びアンチセンスプライマーを作製した（タカラバイオ社）。
センスプライマー ：５’−ｔｃｔｔｃａｇｔｔｃｇｔｇｔｇｔｇｇａｇａｃａｇ−３’
アンチセンスプライマー：５’−ｇｇｇｔｇｃｇｃａａｔａｃａｔｃｔｃｃａｇ−３’
【０１１４】
また、内部標準としてのＧ３ＰＤＨ（Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）遺伝子増幅用プライマーとして下記の配列を有するセンスプライマー及びアンチセンスプライマーを作製した（タカラバイオ社）。
センスプライマー ：５’−ｇｃａｃｃｇｔｃａａｇｇｃｔｇａｇａａｃ−３’
アンチセンスプライマー：５’−ａｔｇｇｔｇｇｔｇａａｇａｃｇｃｃａｇｔ−３’
【０１１５】
「被験試料無添加」、「被験試料添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品をもとに調製した一本鎖ＤＮＡ及び検量線作成用一本鎖ＤＮＡ溶液用いて、リアルタイムＰＣＲ装置（Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ ＩＩ：Ｃｅｐｈｅｉｄ社）及びリアルタイムＰＣＲキット（ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ ＴａｑＴＭ，ＲＲ０４１Ａ：タカラバイオ社）でリアルタイムＰＣＲ反応を行った。なお、検量線作成用一本鎖ＤＮＡ溶液は、原液濃度の相対値を便宜的に「１０，０００」とし、以降５倍希釈を繰り返して濃度値「２，０００」、「４００」、「８０」及び「１６」の５段階の希釈系列とした。反応は、９５℃で１０秒間保温の後、９５℃で５秒間、６０℃で２０秒間の反応を４５サイクル繰り返し、１サイクル毎にサイバーグリーン色素の発光量を測定した。
【０１１６】
−解析−
各サイクルのサイバーグリーン色素の発光量からＶＥＧＦ、ＢＭＰ−２、ＩＧＦ−１及びＧ３ＰＤＨのそれぞれをコードするＤＮＡ断片の増幅曲線を作成した。検量線作成用一本鎖ＤＮＡ溶液の希釈系列の増幅曲線から横軸に濃度、縦軸に増幅曲線の２次導関数が最大となるサイクル数をとった検量線を作成した。各発現定量用サンプルについては増幅曲線の２次導関数が最大となるサイクル数を検量線上にプロットし、相対的な発現量を算出した。ＶＥＧＦ、ＢＭＰ−２及びＩＧＦ−１の発現量は、同一サンプルにおけるＧ３ＰＤＨの発現量の値で補正を行った後、さらに「被験試料無添加」の補正値を１００とした時の「被験試料無添加」の補正値を算出した。
【０１１７】
ＶＥＧＦ、ＢＭＰ−２及びＩＧＦ−１のｍＲＮＡ発現促進率（％）は以下の式により求めた。
ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ｂ／Ａ×１００
Ａ ：「被験試料無添加」の補正値
Ｂ ：「被験試料添加」の補正値
【０１１８】
【表５】
【０１１９】
実施例６の結果によれば、チライトからの抽出物が、ＶＥＧＦ及びＢＭＰ−２のｍＲＮＡ発現を促進させる作用を有することが示された。また、アマロゲンチンが、ＶＥＧＦ、ＢＭＰ−２及びＩＧＦ−１のｍＲＮＡ発現を促進させる作用を有することが示された。また、アマロスウェリンが、ＶＥＧＦ及びＢＭＰ−２のｍＲＮＡ発現を促進させる作用を有することが示された。
【０１２０】
（実施例７）
下記組成の養毛用のヘアトニックを常法により製造した。
チライト８０％エタノール抽出物 １．０ｇ
塩酸ピリドキシン ０．１ｇ
レゾルシン ０．０１ｇ
Ｄ−パントテニルアルコール ０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
ｌ−メントール ０．０５ｇ
１，３−ブチレングリコール ４．０ｇ
ニンジンエキス ０．５ｇ
エタノール ２５．０ｇ
香料 適量
精製水 残部
合計 １００．０ｇ
【０１２１】
（実施例８）
下記組成の養毛用のヘアトニックを常法により製造した。
アマロゲンチン ０．１ｇ
酢酸トコフェロール 適量
セファランチン ０．００２ｇ
イソプロピルメチルフェノール ０．１ｇ
ヒアルロン酸ナトリウム ０．１５ｇ
ビワ葉エキス １．０ｇ
グリセリン １５ｇ
エタノール １５ｇ
香料 適量
キレート剤（エデト酸ナトリウム） 適量
防腐剤（ヒノキチオール） 適量
可溶化剤（ポリオキシエチレンセチルエーテル） 適量
精製水 残部
合計 １００．０ｇ
【０１２２】
（実施例９）
下記組成の育毛用の透明シャンプーを常法により製造した。
チライト水抽出物 １．０ｇ
ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム １０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン １０．０ｇ
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム ２０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ４．０ｇ
プロピレングリコール ２．０ｇ
香料 適量
防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル） ０．１５ｇ
精製水 残部
合計 １００．０ｇ
【０１２３】
（実施例１０）
下記組成の育毛用のコンディショニングシャンプーを常法により製造した。
アマロスウェリン ０．２ｇ
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム ３０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン ３０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム ２０．０ｇ
ヤシ油ジエタノールアミド ３．０ｇ
ジステアリン酸エチレングリコール ２．０ｇ
香料 適量
防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル） ０．１５ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．０ｇ
精製水 残部
合計 １００．０ｇ
【産業上の利用可能性】
【０１２４】
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、アンドロゲン受容体結合阻害剤、ＶＥＧＦ産生促進剤、ＢＭＰ−２産生促進剤、ＩＧＦ−１産生促進剤、育毛剤及び頭皮化粧料は、脱毛症をはじめとする好ましくない症状の予防及び治療に利用することができ、例えば、ヘアトニック、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンスなどに含有させることで、幅広く利用することができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする毛乳頭細胞増殖促進剤。
【請求項２】
アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とするテストステロン５α−リダクターゼ阻害剤。
【請求項３】
アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とするアンドロゲン受容体結合阻害剤。
【請求項４】
チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤。
【請求項５】
チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする骨形成タンパク質−２（ＢＭＰ−２）産生促進剤。
【請求項６】
アマロゲンチンを有効成分として含有することを特徴とするインスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進剤。
【請求項７】
アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする育毛剤。
【請求項８】
アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを、毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進作用、骨形成タンパク質−２（ＢＭＰ−２）産生促進作用、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進作用及び育毛効果のうち少なくとも１つの有効成分として含有することを特徴とする頭髪化粧料。
【請求項１】
チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする毛乳頭細胞増殖促進剤。
【請求項２】
アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とするテストステロン５α−リダクターゼ阻害剤。
【請求項３】
アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とするアンドロゲン受容体結合阻害剤。
【請求項４】
チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤。
【請求項５】
チライトからの抽出物、アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする骨形成タンパク質−２（ＢＭＰ−２）産生促進剤。
【請求項６】
アマロゲンチンを有効成分として含有することを特徴とするインスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進剤。
【請求項７】
アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする育毛剤。
【請求項８】
アマロゲンチン及びアマロスウェリンのうち少なくとも１つを、毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進作用、骨形成タンパク質−２（ＢＭＰ−２）産生促進作用、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進作用及び育毛効果のうち少なくとも１つの有効成分として含有することを特徴とする頭髪化粧料。
【公開番号】特開２００８−２８０３０８（Ｐ２００８−２８０３０８Ａ）
【公開日】平成２０年１１月２０日（２００８．１１．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−１２７３６６（Ｐ２００７−１２７３６６）
【出願日】平成１９年５月１１日（２００７．５．１１）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年１１月２０日（２００８．１１．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年５月１１日（２００７．５．１１）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
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