治療剤
本発明は、一酸化窒素抑制作用又はアルドースレダクターゼ阻害作用を有する、新規なカルコン類化合物、その誘導体またはそれらの塩を提供する。また本発明は、該化合物の生理作用を利用した、該化合物に感受性を示す疾患に対する治療又は予防効果を有する医薬、食品、飲料または飼料を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規なカルコン類化合物、および当該化合物の生理作用を利用した医薬、飲食品等に関する。
【背景技術】
【０００２】
カルコン類化合物とは、下記式（化１）のカルコン骨格を有する化合物の総称であり、これらの化合物として、天然物からの抽出や合成によって得られたさまざまな化合物が知られている。
【０００３】
【化１】
【０００４】
また、これらの化合物の生理活性については、化合物によってそれぞれ多種多様であり、例えば細胞毒性、抗がん活性、化学防御、抗変異原性、抗菌活性、抗ウィルス活性、抗原虫性、殺虫作用等が知られている（例えば、非特許文献１）。また、本発明者らは、これらのカルコン類化合物に神経成長因子（ＮＧＦ）産生増強作用があることを見出している（例えば、特許文献１）。
【特許文献１】国際公開第０１／５４６８２号パンフレット
【非特許文献１】Ｊ．Ｒ．Ｄｉｍｍｏｃｋ 他３名，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（オランダ），１９９９年，Ｖｏｌ．６，ｐ．１１２５〜１１４９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、新規なカルコン類化合物とその生理作用を利用した医薬、もしくは飲食品等を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明を概説すれば、本発明の第１の発明は、下記式（１）〜（９）のいずれかで表されるカルコン類化合物、その誘導体又はそれらの塩に関する。
【０００７】
【化２】
【０００８】
【化３】
【０００９】
【化４】
【００１０】
【化５】
【００１１】
【化６】
【００１２】
【化７】
【００１３】
【化８】
【００１４】
【化９】
【００１５】
【化１０】
【００１６】
本発明の第２の発明は、本発明の第１の発明の化合物、その誘導体又はそれらの塩を有効成分として含有することを特徴とする当該化合物に感受性を示す疾患の治療剤又は予防剤に関する。本発明の第２の発明において当該化合物に感受性を示す疾患としては、治療又は予防に一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制又はアルドースレダクターゼ阻害を要する疾患が例示される。
【００１７】
本発明の第３の発明は、本発明の第１の発明の化合物、その誘導体又はそれらの塩を有効成分として含有することを特徴とする、ＮＯ産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤に関する。
【００１８】
本発明の第４の発明は、本発明の第１の発明の化合物、その誘導体又はそれらの塩を含有することを特徴とする食品、飲料又は飼料に関する。本発明の第４の発明の食品、飲料又は飼料は、当該化合物に感受性を示す疾患の治療又は予防に有用である。また、ここで当該化合物に感受性を示す疾患としては、例えばＮＯ産生抑制又はアルドースレダクターゼ阻害を要する疾患が例示される。
【発明の効果】
【００１９】
本発明により、新規なカルコン類化合物、その誘導体又はそれらの塩が提供される。当該化合物はＮＯ産生抑制作用又はアルドースレダクターゼ阻害作用を有するため、該化合物、その誘導体又はそれらの塩は当該生理活性を利用した医薬、食品、飲料または飼料の有効成分として有用である。また、本発明により提供される医薬等は、例えばＮＯ産生抑制又はアルドースレダクターゼ阻害を要する疾患などの、該化合物に感受性を示す疾患に対する治療または予防効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】ＴＢ３の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図２】ＴＢ３の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図３】ＴＢ４の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図４】ＴＢ４の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図５】ＴＢ５の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図６】ＴＢ５の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図７】ＴＢ６の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図８】ＴＢ６の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図９】ＴＢ７の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１０】ＴＢ７の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１１】ＴＢ８の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１２】ＴＢ８の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１３】ＴＢ９の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１４】ＴＢ９の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１５】化合物（Ｃ０８１）の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１６】化合物（Ｃ０８１）の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１７】化合物（Ｃ０４２）の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本発明者らは上記式（１）〜（９）のいずれかで表される新規なカルコン類化合物、その誘導体又はそれらの塩（本明細書において、本発明の化合物と称することがある）と、当該化合物の有するＮＯ産生抑制作用およびアルドースレダクターゼ阻害作用を見出し、該化合物を有効成分とする医薬、飲食品、飼料の提供が可能になった。なお、本発明の化合物と、その誘導体又はそれらの塩とは同等の作用を有し得る。上記式（１）〜（７）は食用植物であるセリ科のアシタバより単離された新規なカルコン類化合物である。
【００２２】
本発明の化合物は、天然物由来でもよく、合成品、半合成品でもよい。天然物としては食用植物由来が好ましく、食用植物としてはセリ科植物のアシタバが例示される。また、本発明の化合物に種々の異性体が存在する場合、いずれも任意に本発明において使用することができる。本発明の化合物は、単独で、若しくは２種以上を混合して使用することができる。
【００２３】
例えば、天然物からの本発明の化合物の製造は、公知の製造方法を組み合わせて行うことができる。例えば、本発明の化合物の天然物からの調製については、本発明の化合物含有物、例えばアシタバ等の植物から当該化合物を精製することができる。精製手段としては化学的方法、物理的方法等の公知の精製手段を用いればよく、ゲルろ過法、分子量分画膜による分画法、溶媒抽出法、イオン交換樹脂、シリカゲル、逆相系樹脂等を用いた各種クロマトグラフィー法等の従来公知の精製方法を組合せて本発明の化合物を精製すればよい。例えば、本発明の化合物である上記式（１）〜（７）の製造は、下記実施例１〜７を参考にして行うことができる。
【００２４】
また、合成による本発明の化合物の製造は、公知の製造方法を組み合わせて行うことができる。例えば、合成の方法はＡｌｅｓｓａｎｄｒａ Ｌａｔｔａｎｚｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｌｅｔｔ．２００２，Ｎｏ．６，ｐ９４２−９４６；Ｌ．Ｃｌａｉｓｅｎ Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｅｒ．１８８１，Ｎｏ．１４，ｐ２４６０等を参照すればよい。例えば、本発明の化合物である上記式（９）で表される化合物の製造は、下記実施例９を参考にして化学合成することで得ることができる。
【００２５】
また、半合成による本発明の化合物の製造は、例えば、天然物由来のカルコン類化合物を原料として有機合成することにより得ることができる。例えば、本発明の化合物である上記式（８）で表される化合物は、下記実施例８を参考にして上記式（６）で表される化合物を還元処理することにより得ることができる。還元処理以外の有機合成の方法については、特に限定はないが、例えばＡｌｅｓｓａｎｄｒａ Ｌａｔｔａｎｚｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｌｅｔｔ．２００２，Ｎｏ．６，ｐ９４２−９４６；Ｌ．Ｃｌａｉｓｅｎ Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｅｒ．１８８１，Ｎｏ．１４，ｐ２４６０等を参照すればよい。
【００２６】
本明細書において上記式（１）〜（９）で表される化合物の誘導体とは、該化合物を元化合物として合成される化合物であって、上記式（１）〜（９）で表される化合物と同等の作用、すなわち、ＮＯ産生抑制作用またはアルドースレダクターゼ阻害作用を有する化合物である。かかる誘導体としては、例えば上記式（１）〜（９）で表される化合物のエステル体、エーテル体、配糖体など、体内で容易に加水分解し、所望の効果を発揮し得る化合物（プロドラッグ）を挙げることができる。かかるプロドラッグの調製は公知の方法に従えばよい。なお、かかる誘導体は、それらの塩であってもよい。
【００２７】
また、本発明の化合物において、塩としては薬理学的に許容される塩が好ましい。本発明で使用される塩としては、例えば、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、有機塩基との塩などが例示される。かかる塩としては薬理学的に許容される塩が好ましい。なお、本発明において使用される薬理学的に許容される塩とは生物に対して実質的に無毒である塩を意味する。当該塩としては、たとえば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウムまたはプロトン化されたベンザチン（Ｎ，Ｎ′−ジ−ベンジルエチレンジアミン）、コリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグラミン（Ｎ−メチルグルカミン）、ベネタミン（Ｎ−ベンジルフェネチルアミン）、ピペラジンもしくはトロメタミン（２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオール）との塩が挙げられる。
【００２８】
本発明により、本発明の化合物を有効成分として含有する、当該化合物に感受性を示す疾患の治療剤又は予防剤（本明細書において、本発明の治療剤又は予防剤と称することがある）が提供される。ここで当該化合物に感受性を示す疾患とは、当該化合物により治療効果若しくは予防効果が得られ得る疾患をいい、該疾患としては、例えばＮＯ産生抑制又はアルドースレダクターゼ阻害を要する疾患が挙げられる。
【００２９】
固形がんの増大に血管新生は必須であるが、血管内皮増殖因子／血管透過性亢進因子（ＶＥＧＦ）はこの過程に重要な役割を演じている。さまざまながん細胞においてＶＥＧＦはＮＯによって誘導される。すなわち、がん細胞のＮＯ産生を抑制することによって、ＶＥＧＦ産生が抑制され、その結果、がん組織周辺での血管新生が阻害され、がんを脱落させることができる。
【００３０】
また、ＮＯはｐＨ中性の生理的条件下でアミンと反応してニトロソアミンを生成する。このニトロソアミンはＤＮＡに損傷を与えることにより発がん性を示すことが知られている。また、疫学的にがんとの関連が高い肝吸虫感染患者や肝硬変患者においてＮＯ産生は亢進している。したがって、ＮＯ産生を抑制することによりハイリスクグループの発がんを予防することができる。
【００３１】
ＮＯはまた、炎症性病変に特徴的に認められる浮腫、すなわち血管透過性亢進作用を誘発し〔Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、第８５巻、Ｐ３３１〜３３４（１９９４）〕、また炎症性メディエーターであるプロスタグランジン類の生合成を亢進させる〔Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ＵＳＡ、第９０巻、Ｐ７２４０〜７２４４（１９９３）〕。一方、ＮＯはスーパーオキシドラジカルと速やかに反応してペルオキシ亜硝酸イオンを生じ、ペルオキシ亜硝酸イオンが炎症性の細胞、組織障害を引き起こすとも考えられている。
【００３２】
また、慢性関節性リウマチ、変形性関節リウマチ、痛風性関節炎、ベーチェット病などの関節炎患者の病変部の関節液には同患者の正常な関節や健常人の関節の関節液に比べて高濃度のＮＯが含まれている。
【００３３】
本発明の化合物は実施例１１に記載のとおり、ＮＯ産生抑制作用を有することから、上記のがん性疾患および炎症性疾患に対して有用な化合物である。本発明の化合物が有効なＮＯ産生抑制を要する疾患としては、例えばがん性疾患、炎症性疾患、慢性関節性リウマチ、変形性関節リウマチ、痛風性関節炎、ベーチェット病等の疾患が挙げられる。
【００３４】
アルドースレダクターゼ（Ａｌｄｏｓｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ：以下、ＡＲと称することがある。）は生体内においてグルコース代謝経路の一つであるポリオール経路に関与する酵素である。該経路はＡＲが関与するグルコースからソルビトール系の還元経路、およびソルビトールデヒドロゲナーゼ（以下、ＳＤＨと称することがある。）が関与するソルビトールからＤ−フルクトースへの脱水素反応経路からなる。細胞内に流入するグルコース量が増大すると、解糖系で処理できないグルコースがポリオール経路を亢進させる。ところが、ＳＤＨ活性はＡＲ活性より低いことから、グルコースの流入が続くと中間代謝物のソルビトールが大量に産生されることになる。このようなソルビトールの蓄積に起因するさまざまな疾患、すなわち糖尿病合併症として起こる疾患としては、例えば白内障、末梢神経疾患、腎疾患、白血球の食菌作用の低下に起因する感染症、糖尿病性昏睡、大血管壁におけるアテローム変性による動脈硬化等の疾患が知られている。
【００３５】
本発明の化合物は実施例１０に記載のとおり、ＡＲ阻害作用を有することから、上記の糖尿病合併症に対して有用な化合物である。本発明の化合物が有効なＡＲ阻害作用を要する疾患としては、例えば糖尿病合併症として引き起こされる疾患、例えば白内障、末梢神経疾患、腎疾患、白血球の食菌作用の低下に起因する感染症、糖尿病性昏睡、大血管壁におけるアテローム変性による動脈硬化等の疾患が例示される。また、本発明の化合物は、他の糖尿病治療剤と併用することもできる。
【００３６】
上記した本発明の治療剤又は予防剤は、本発明の化合物を有効成分とし、これを公知の医薬用担体と組合せて製剤化することにより製造できる。一般的には、これらの化合物を薬学的に許容できる液状または固体状の担体と配合し、かつ所望により溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を加えて、錠剤、顆粒剤、散剤、粉末剤、カプセル剤等の固形剤、通常液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤とすることができる。また、使用前に適当な担体の添加によって液状となし得る乾燥品とすることができる。
【００３７】
医薬用担体は、治療剤または予防剤の投与形態および剤型に応じて選択することができる。固体組成物からなる経口剤とする場合は、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤等とすることができ、たとえば、デンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩などが利用される。また経口剤の調製に当っては、更に結合剤、崩壊剤、界面活性剤、潤沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料などを配合することもできる。たとえば、錠剤または丸剤とする場合は、所望によりショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロースなどの糖衣または胃溶性もしくは腸溶性物質のフィルムで被覆してもよい。液体組成物からなる経口剤とする場合は、薬理学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤などとすることができ、たとえば、精製水、エタノールなどが担体として利用される。また、さらに所望により湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、防腐剤などを添加してもよい。
【００３８】
一方、非経口剤とする場合は、常法に従い本発明の前記有効成分を希釈剤としての注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射用植物油、ゴマ油、落花生油、大豆油、トウモロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどに溶解ないし懸濁させ、必要に応じ、殺菌剤、安定剤、等張化剤、無痛化剤などを加えることにより調製することができる。また、固体組成物を製造し、使用前に無菌水または無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。
【００３９】
また、本発明の予防剤または治療剤は、外用剤とすることもできる。外用剤としては、経皮投与用または経粘膜（口腔内、鼻腔内）投与用の、固体、半固体状または液状の製剤が含まれる。また、座剤なども含まれる。このような外用剤としては、たとえば、乳剤、ローション剤などの乳濁剤、外用チンキ剤、経粘膜投与用液剤などの液状製剤、油性軟膏、親水性軟膏などの軟膏剤、フィルム剤、テープ剤、パップ剤などの経皮投与用または経粘膜投与用の貼付剤などが挙げられる。
【００４０】
上記のような各種製剤形態での治療剤または予防剤は、それぞれ公知の医薬用担体などを利用して、適宜、常法により製造することができる。また、かかる治療剤または予防剤における有効成分の含有量は、その投与形態、投与方法などを考慮し、好ましくは後述の投与量範囲で当該有効成分を投与できるような量であれば特に限定されるものではない。
【００４１】
本発明の治療剤または予防剤における前記有効成分の含有量は、特に限定はないが、通常、０．００１〜８０重量％が好適であり、より好適には０．０１〜５０重量％、特に好適には０．１〜２０重量％が例示される。
【００４２】
本発明の治療剤又は予防剤の投与量は、その製剤形態、投与方法、使用目的およびこれに適用される患者の年齢、体重、症状などによって適宜設定され、一定ではないが、一般には製剤中に含有される有効成分の量で、ヒト（例えば成人）１日当り好ましくは１０μｇ〜１ｇ／ｋｇ体重、より好ましくは５０μｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ体重、更に好ましくは１００μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重である。もちろん、投与量は、種々の条件によって変動するので、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、あるいは範囲を超えて必要な場合もある。また、本発明の治療剤又は予防剤の投与方法は特に限定されるものではなく、使用目的および患者の年齢、症状などによって適宜設定すればよい。例えば、経口投与、静脈内投与、経皮投与等が挙げられる。経口投与の場合、本発明の治療剤又は予防剤はそのまま経口投与するほか、任意の飲食品に添加して日常的に摂取させることもできる。
【００４３】
なお、本明細書において、医薬とは、便宜的に、上記の本発明の治療剤又は予防剤を指すのみでなく、以下に記載される本発明のＮＯ産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤をも指す場合がある。
【００４４】
また、本発明の化合物を有効成分として含有するＮＯ産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤を提供することもできる。本発明のＮＯ産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤としては、前記有効成分そのものであってもよく、また、前記有効成分を含む組成物であってもよい。本発明の態様においては、有効成分としての塩は薬理学的に許容される塩が好適である。本発明のＮＯ産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤は、たとえば、前記有効成分を当該有効成分と同じ用途に使用可能な他の成分などと配合し、上記治療剤または予防剤の製造方法に準じて通常使用される試薬の形態に製造すればよい。本発明のＮＯ産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤における前記有効成分の含有量は、これらの投与方法、使用目的などを考慮し、本発明の所望の効果の発現が得られ得るような量であればよく、特に限定されるものではないが、通常、０．００１〜１００重量％が好適であり、より好適には０．０１〜８０重量％、特に好適には０．１〜８０重量％が例示される。また、使用量も本発明の所望の効果の発現が得られ得るようであれば特に限定されるものではない。特に、生体に投与して使用する場合には、好ましくは前記治療剤または予防剤における有効成分の投与量範囲内で有効成分を投与できるような量で使用すればよい。投与方法についても特に限定されるものではなく、前記治療剤または予防剤と同様に適宜設定すればよい。本発明のＮＯ産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤は、ＮＯ産生抑制又はアルドースレダクターゼ阻害を必要とする疾患において有用である。また、本発明のＮＯ産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤はこれらの疾患に対する薬物のスクリーニングにも有用である。さらに本発明のＮＯ産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤は、これらの疾患の物理的変化に関する機能研究にも有用である。
【００４５】
また、本発明により本発明の化合物を含有してなる食品、飲料又は飼料（本明細書において、本発明の食品、飲料又は飼料と称することがある。また便宜的に、本発明の飲食品等と称することもある。）が提供される。本発明の食品、飲料又は飼料は、当該化合物に感受性を示す疾患の治療用又は予防用の食品、飲料又は飼料として有用である。なお、本発明の食品、飲料又は飼料とは、当該疾患の治療又は予防を目的とすることを付した機能性食品（特定保健用食品）を包含するものである。該化合物に感受性を示す疾患としては、例えば前述の本発明の治療剤又は予防剤が適用される疾患が例示される。例えば、本発明の化合物を含有、添加および／または希釈してなる食品、飲料又は飼料は、そのＮＯ産生抑制作用又はアルドースレダクターゼ阻害作用により、ＮＯ産生抑制又はアルドースレダクターゼ阻害を要する疾患の症状改善、予防に極めて有用である。よって、本発明の食品又は飲料は、血糖値が気になる方や、手足・関節に痛み・違和感がある方、視力の低下、体のむくみ、しびれを感じる方が摂取するのに好適である。
【００４６】
なお、本明細書において、前記「含有」とは食品、飲料または飼料中に本発明で使用される有効成分が含まれるという態様を、前記「添加」とは食品、飲料または飼料の原料に、本発明で使用される有効成分を添加するという態様を、前記「希釈」とは本発明で使用される有効成分に、食品、飲料または飼料の原料を添加するという態様をいうものである。
【００４７】
本発明の食品、飲料又は飼料の製造方法は、特に限定はないが、一般に用いられている食品、飲料又は飼料の製造方法を採用でき、製造された食品、飲料又は飼料に、本発明の化合物が有効成分として含有されていれば良く、好適には本発明の有効成分が高含有されている食品、飲料又は飼料が例示される。なお、本明細書において、高含有とは、原料、例えばアシタバの単位重量あたりの本発明の化合物重量よりも本発明の食品、飲料又は飼料の単位重量あたりの本発明の化合物重量の方が多いことを意味する。
【００４８】
本発明の食品又は飲料は、特に限定するものではないが、例えば、穀物加工品、油脂加工品、大豆加工品、食肉加工品、水産製品、乳製品、野菜・果実加工品、菓子類、アルコール類、嗜好飲料、調味料、缶詰・瓶詰・袋詰食品、半乾燥または濃縮食品、乾燥食品、冷凍食品、固形食品、液体食品、香辛料類等の農産・林産加工品、畜産加工品、水産加工品等が挙げられる。
【００４９】
本発明の食品または飲料には前記有効成分が含有、添加および／または希釈されていれば特にその形状に限定はなく、タブレット状、顆粒状、カプセル状等の形状の経口的に摂取が容易な形状物も包含する。
【００５０】
本発明の食品又は飲料中の前記有効成分の含有量は特に限定されず、その官能と活性発現の観点から適宜選択できるが、例えば食品１００重量％中、０．００００１重量％以上、好ましくは０．０００１〜１０重量％、更に好ましくは０．０００６〜６重量％であり、例えば飲料１００重量％中、０．００００１重量％以上、好ましくは０．０００１〜１０重量％、更に好ましくは０．０００６〜６重量％である。また、本発明の有効成分が高含有されている食品又は飲料の場合は、例えば食品１００重量％中、０．０００１重量％以上、好ましくは０．０００５〜１０重量％、さらに好ましくは０．００１〜１０重量％、例えば飲料１００重量％中、０．０００１重量％以上、好ましくは０．０００５〜１０重量％、さらに好ましくは０．００１〜１０重量％が好適である。また本発明の食品又は飲料は、好ましくは、それらに含有される有効成分が、ヒト（例えば成人）１日当たり１０μｇ〜１ｇ／ｋｇ体重、好ましくは５０μｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ体重、更に好ましくは１００μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重となるように摂取すればよい。
【００５１】
また、本発明は、前記有効成分を含有してなる生物用の飼料を提供するものであり、さらに、別の一態様として、前記有効成分を生物に投与することを特徴とする生物の飼育方法をも提供する。また、本発明の別の一態様として、前記有効成分を含有することを特徴とする生物飼育用剤が提供される。ここで、「含有」の語は、含有、添加及び／又は希釈の意味を有し、含有、添加及び希釈は前記の通りの意味を有する。
【００５２】
本明細書において、生物としては、限定はないが、たとえば養殖動物、ペット動物などが挙げられる。養殖動物としてはウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ラマなどの家畜、マウス、ラット、モルモット、ウサギなどの実験動物、ニワトリ、アヒル、七面鳥、駝鳥などの家禽、魚類、甲殻類または貝類が例示される。ペット動物としてはイヌ、ネコなどが例示される。また、飼料としては体調の維持および／または改善用飼料が例示される。生物飼育用剤としては浸漬用剤、飼料添加剤、飲料用添加剤が例示される。
【００５３】
これらの発明によれば、それらを適用する前記例示するような生物において、本発明に使用される前記有効成分のＮＯ産生抑制作用又はアルドースレダクターゼ阻害作用に基づき、本発明の前記治療剤または予防剤によるのと同様の効果の発現が期待できる。すなわち、本発明の飼料、生物用飼育用剤は、それらが適用される生物におけるＮＯ産生抑制又はアルドースレダクターゼ阻害を要する疾患の治療または予防効果を有する。
【００５４】
本発明に使用される前記有効成分は通常、対象生物に１日当たり１０μｇ〜１ｇ／ｋｇ体重、好ましくは５０μｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは１００μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重投与される。投与は、たとえば、当該有効成分を、対象生物に供する人工配合飼料の原料中に添加混合しておくか、人工配合飼料の粉末原料と混合した後、その他の原料にさらに添加混合することで行うことができる。また、前記有効成分の飼料中の含有量は特に限定されるものではなく、目的に応じて適宜設定すれば良いが、例えば飼料１００重量％中、０．００００１重量％以上、好ましくは０．０００１〜３０重量％、さらに好ましくは０．００１〜１５重量％の割合が好適である。また、本発明の有効成分が高含有されている飼料の場合は、例えば飼料１００重量％中、０．０００１重量％以上、好ましくは０．０００５〜３０重量％、さらに好ましくは０．００１〜３０重量％が好適である。
【００５５】
本発明の飼料の製造法に特に限定はなく、また配合も一般の飼料に準ずるものであればよく、製造された飼料中に本発明の前記有効成分が含まれていればよい。生物飼育用剤は、前記飼料の場合に準じて、製造、使用等すればよい。
【００５６】
ＮＯ産生抑制作用又はアルドースレダクターゼ阻害作用を有する本発明に使用される前記有効成分を含んでなる飼料を摂取させること、またはＮＯ産生抑制作用又はアルドースレダクターゼ阻害作用を有する本発明に使用される前記有効成分の含有液に対象生物を浸漬することにより、家畜、実験動物、家禽、ペット動物などの体調を良好に維持し、または、改善させたりすることができる。なお、ここに例示する態様は、本発明により提供される生物の飼育方法の一態様をなす。
【００５７】
本発明において医薬、飲食品、飼料中の本発明の化合物含有量はその投与、摂取等により、生体内で所望の効果が得られ得る濃度であればよく、対応する公知の飲食品等に比べて高含有されているものが好ましい。
【００５８】
本発明で使用される前記有効成分は、その作用発現にとっての有効量の投与を行っても毒性は認められない。たとえば経口投与の場合、前述の上記式（１）〜（９）で表される化合物、もしくはこれらの光学活性体又はそれらの塩のいずれかを、それぞれ１ｇ／ｋｇ体重でマウスに単回投与しても死亡例は認められない。また、前記有効成分は、ラットへの経口投与において１ｇ／ｋｇ体重を経口単回投与しても死亡例は認められない。
【実施例】
【００５９】
以下、実施例を挙げて、本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの記載に何ら限定されるものではない。なお、実施例における％は特に記載がなければすべて容量％を意味する。なお、本明細書において、上記式（１）で表される化合物をＴＢ３、上記式（２）で表される化合物をＴＢ４、上記式（３）で表される化合物をＴＢ５、上記式（４）で表される化合物をＴＢ６、上記式（５）で表される化合物をＴＢ７、上記式（６）で表される化合物をＴＢ８、上記式（７）で表される化合物をＴＢ９、上記式（８）で表される化合物を化合物（Ｃ０８１）、上記式（９）で表される化合物を化合物（Ｃ０４２）と称することがある。
【００６０】
実施例１ ＴＢ３の調製
（１）アシタバ根部の乾燥粉末５ｋｇに１５Ｌのエタノールを加え、室温で３０分間抽出を行い、吸引ろ過後、エタノール抽出液と残渣に分けた。残渣に対して同様の抽出を２回行った後、エタノール抽出液を合わせ減圧濃縮し、エタノール抽出濃縮液を得た。
【００６１】
（２）実施例１−（１）で得られたエタノール抽出濃縮液を２Ｌの２５％エタノール水溶液に溶解し、ついで逆相クロマトグラフィーを用いて分画した。樹脂はコスモシール１４０ Ｃ１８−ＯＰＮ（ナカライテスク社製：４００ｍＬ）を用い、１Ｌの３０％エタノール水溶液、５Ｌの４０％エタノール水溶液、４Ｌの７５％エタノール水溶液、３Ｌの１００％エタノール水溶液の順に溶出を行った。
【００６２】
（３）実施例１−（２）で得られた７５％エタノール水溶液溶出画分を減圧濃縮し、シリカゲル（ＢＷ−３００ＳＰ：富士シリシア化学社製、３５０ｍＬ）に吸着させた。溶出はクロロホルム：ヘキサンの溶媒比を２：１（８００ｍＬ）、１０：４（１８００ｍＬ）、および酢酸エチル（１４００ｍＬ）の順に段階的に行った。溶出液はフラクション１から５まで２００ｍＬごと、フラクション６は１５０ｍＬ、フラクション７から１０は１００ｍＬごと、フラクション１１から１６は２００ｍＬごと、フラクション１７は１０００ｍＬの順に分画した。
【００６３】
（４）実施例１−（３）で得られたフラクションの番号１７を減圧濃縮し、シリカゲル（３５０ｍＬ）に吸着させた。溶出はクロロホルム：ヘキサンの溶媒比を１０：３（１０００ｍＬ）、１０：１（２１００ｍＬ）、２０：１（１０００ｍＬ）、酢酸エチル（５００ｍＬ）の順に段階的に行い、最初の２３００ｍＬを溶出の後、１００ｍＬごとに分画した。
【００６４】
（５）実施例１−（４）で得られたフラクションの番号２３，２４を減圧濃縮後、クロロホルムに溶解し、ヘキサンによる再結晶を行い、黄色物質を得た。
【００６５】
（６）実施例１−（５）で得られた黄色物質について、核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル装置（ＡＶＡＮＣＥ６００型：ブルカ・バイオスピン社製）を用い、各種ＮＭＲスペクトルを測定し構造解析した。以下にＮＭＲの帰属の信号を示す。なお、ピークの番号は下記式（化１１）のとおりである。
【００６６】
【化１１】
【００６７】
１Ｈ−ＮＭＲ（重クロロホルム）：δ１．３４（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），１．５７（２Ｈ，ｍ，Ｈ−４”），１．６５（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．７１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．７９（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−３”），２．１１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），２．１９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），３．１９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｈ−１”），４．８２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｈ−２”），５．１５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−６”），５．２１（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４），６．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−３およびＨ−５），７．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−α），７．５８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−２およびＨ−６），７．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−６’），７．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−β），１３．５１（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−２’）
図１に１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【００６８】
１３Ｃ−ＮＭＲ（重クロロホルム）：δ１８．１（ＣＨ３−７”），２２．４（Ｃ−５”），２３．２（ＣＨ３−３”），２６．１（ＣＨ３−７”），２７．３（Ｃ−１”），３７．１（Ｃ−４”），７４．２（Ｃ−３”），９１．６（Ｃ−２”），１０２．１（Ｃ−５’），１１４．２（Ｃ−３’），１１５．４（Ｃ−１’），１１６．４（Ｃ−３およびＣ−５），１１８．６（Ｃ−α），１２４．４（Ｃ−６”），１２８．２（Ｃ−１），１３０．９（Ｃ−２およびＣ−６），１３２．１（Ｃ−６’），１３２．７（Ｃ−７”），１４４．３（Ｃ−β），１５８．３（Ｃ−４），１６１．９（Ｃ−２’），１６７．０（Ｃ−４’），１９２．５（Ｃ＝Ｏ）
図２にＣ１３−ＮＭＲスペクトルを示す。
【００６９】
次いで、実施例１−（５）で得られた黄色物質の質量スペクトル（ＭＳ）を質量分析計（ＤＸ３０２：日本電子社製）によりＦＡＢ−ＭＳの手法で測定した。
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４０７（Ｍ−Ｈ）−メタニトロベンジルアルコールをマトリックスに用いた。
【００７０】
以上、ＮＭＲスペクトル、質量スペクトル解析の結果、実施例１−（５）で得られた黄色物質が１−［２，３−ｄｉｈｙｄｒｏ−４−ｈｙｄｒｏｘｙ−２−（１−ｈｙｄｒｏｘｙ−１，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−４−ｈｅｘｅｎｙｌ）−ｂｅｎｚｏｆｕｒａｎ−５−ｙｌ］−３−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅ（分子量４０８，ＴＢ３）であることを確定した。
【００７１】
実施例２ ＴＢ４の調製
（１）実施例１−（２）で得られた４０％エタノール水溶液溶出画分を減圧濃縮し、シリカゲル（３５０ｍＬ）に吸着させた。溶出はクロロホルム：メタノールの溶媒比を５０：１（９６０ｍＬ）、４０：１（５２０ｍＬ）、２０：１（１０００ｍＬ）、１０：１（８４０ｍＬ）、５：１（５２０ｍＬ）の順に段階的に行い、溶出液を８ｍＬごとに分画した。
【００７２】
（２）実施例２−（１）で得られたシリカフラクションの番号１１８から１３２を集めて濃縮乾固して黄色物質を得た。
【００７３】
（３）実施例２−（２）で得られた黄色物質のＮＭＲスペクトルと質量スペクトルを実施例１−（６）と同様の方法で測定した。以下にＮＭＲの帰属の信号を示す。なお、ピークの帰属の番号は以下の下記式（化１２）のとおりである。
【００７４】
【化１２】
【００７５】
１Ｈ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１．１８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），１．２８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），３．０７（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），３．８７（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３−４’），４．７２（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−３”），４．７８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｈ−２”），６．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−３およびＨ−５），７．５７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−２およびＨ−６），７．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，Ｈ−β），７．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−６’），７．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，Ｈ−α），１０．０２（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４）
図３に１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【００７６】
１３Ｃ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ２６．２（ＣＨ３−３”），２６．８（ＣＨ３−３”），２７．６（Ｃ−１”），５６．５（ＯＣＨ３−４’），７０．９（Ｃ−３”），９１．５（Ｃ−２”），１０５．２（Ｃ−５’），１１５．７（Ｃ−３’），１１６．０（Ｃ−１’），１１６．７（Ｃ−３およびＣ−５），１２３．８（Ｃ−α），１２７．０（Ｃ−１），１３１．０（Ｃ−２およびＣ−６），１３１．３（Ｃ−６’），１４２．７（Ｃ−β），１６０．５（Ｃ−４’），１６０．６（Ｃ−４），１６１．８（Ｃ−２’），１８６．５（Ｃ＝Ｏ）
図４に１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【００７７】
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ３５３（Ｍ−Ｈ）−メタニトロベンジルアルコールをマトリックスに用いた。
【００７８】
以上、ＮＭＲスペクトル、質量スペクトル解析の結果、実施例２−（２）で得られた黄色物質が１−［２，３−ｄｉｈｙｄｒｏ−２−（１−ｈｙｄｒｏｘｙ−１−ｍｅｔｈｙｌｅｔｈｙｌ）−４−ｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｏｆｕｒａｎ−７−ｙｌ］−３−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅ（分子量３５４、ＴＢ４）であることを確定した。
【００７９】
実施例３ ＴＢ５の調製
（１）実施例２−（１）で得られたシリカフラクションの番号３３５から３４９を集めて減圧濃縮後、逆相クロマトグラフィーを用いて分画した。樹脂はコスモシール１４０ Ｃ１８−ＯＰＮ（３０ｍＬ）を用いた。それぞれ２００ｍＬの１０％エタノール水溶液、１５％エタノール水溶液、２０％エタノール水溶液、２５％エタノール水溶液、３０％エタノール水溶液、５００ｍＬの３５％エタノール水溶液、２００ｍＬの７５％エタノール水溶液の順に溶出を行い、１００ｍＬごとに溶出液を分画した。
【００８０】
（２）実施例３−（１）で得られたフラクションの番号６、７を集めて濃縮乾固後、黄色物質を得た。
【００８１】
（３）実施例３−（２）で得られた黄色物質のＮＭＲスペクトルと質量スペクトルを実施例１−（６）と同様の方法で測定した。以下にＮＭＲの帰属の信号を示す。なお、ピークの帰属の番号は以下の下記式（化１３）のとおりである。
【００８２】
【化１３】
【００８３】
１Ｈ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ０．９６（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．０２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．１６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），１．６１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），１．７３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），１．８５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４”），２．１５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４”），３．０１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６”），３．２４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），３．３１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），４．００（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−７”），４．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＯＨ−６”），５．１９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−２”），６．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−３およびＨ−５），７．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，Ｈ−α），７．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，Ｈ−β），７．７５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−２およびＨ−６），８．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−６’），１０．１１（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４），１０．５５（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４’），１４．００（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−２’）
図５に１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【００８４】
１３Ｃ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１７．０（ＣＨ３−３”），２２．１（Ｃ−１”），２５．４（ＣＨ３−７”），２７．２（ＣＨ３−７”），３０．３（Ｃ−５”），３７．５（Ｃ−４”），７２．４（Ｃ−７”），７８．０（Ｃ−６”），１０８．２（Ｃ−５’），１１３．６（Ｃ−１’），１１５．４（Ｃ−３’），１１６．７（Ｃ−３およびＣ−５），１１８．３（Ｃ−α），１２２．４（Ｃ−２”），１２６．７（Ｃ−１），１３０．７（Ｃ−６’），１３２．０（Ｃ−２およびＣ−６），１３５．７（Ｃ−３”），１４５．０（Ｃ−β），１６１．１（Ｃ−４），１６３．２（Ｃ−４’），１６４．４（Ｃ−２’），１９２．６（Ｃ＝Ｏ）
図６に１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【００８５】
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４２５（Ｍ−Ｈ）−メタニトロベンジルアルコールをマトリックスに用いた。
【００８６】
以上、ＮＭＲスペクトル，質量スペクトル解析の結果、実施例３−（２）で得られた黄色物質が１−［２，４−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−３−（６，７−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−３，７−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｏｃｔｅｎｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ］−３−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅ（分子量４２６，ＴＢ５）であることを確定した。
【００８７】
実施例４ ＴＢ６の調製
（１）実施例２−（１）で得られたシリカフラクションの番号１４２から１６４を集めて濃縮乾固後、酢酸エチルに溶解した。続いてヘキサンによる再結晶を行い、生じた沈殿と上清とを分けた。
【００８８】
（２）実施例４−（１）で得られた上清の濃縮物をシリカゲル（１００ｍＬ）に吸着させた。溶出はヘキサン：酢酸エチル＝７：５の溶媒を用い、溶出液を８ｍＬごとに分画した。
【００８９】
（３）実施例４−（２）で得られたシリカフラクションの番号４１から５１を集めて濃縮乾固して黄色物質を得た。
【００９０】
（４）実施例４−（３）で得られた黄色物質のＮＭＲスペクトルと質量スペクトルを実施例１−（６）と同様の方法で測定した。以下にＮＭＲの帰属の信号を示す。なお、ピークの帰属の番号は以下の下記式（化１４）のとおりである。
【００９１】
【化１４】
【００９２】
１Ｈ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ０．９６（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），０．９９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３），１．０４（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．１５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），１．６０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），１．７２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），１．８９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４”），２．１３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４”），３．１８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６”），３．２４（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），３．２９（２Ｈ，ｍ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３），４．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＯＨ−６”），５．２０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２”），６．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−３およびＨ−５），７．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｈ−α），７．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｈ−β），７．７５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−２およびＨ−６），８．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−６’），１０．１１（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４），１０．５５（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４’），１４．００（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−２’）
図７に１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【００９３】
１３Ｃ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１７．０（ＣＨ３−３”），１７．０（−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３），２１．１（ＣＨ３−７”），２２．１（Ｃ−１”），２３．３（ＣＨ３−７”），２９．９（Ｃ−５”），３７．２（Ｃ−４”），５６．６（−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３），７５．１（Ｃ−６”），７７．５（Ｃ−７”），１０８．２（Ｃ−５’），１１３．６（Ｃ−１’），１１５．４（Ｃ−３’），１１６．７（Ｃ−３およびＣ−５），１１８．３（Ｃ−α），１２２．７（Ｃ−２”），１２６．７（Ｃ−１），１３０．６（Ｃ−６’），１３２．０（Ｃ−２およびＣ−６），１３５．５（Ｃ−３”），１４５．０（Ｃ−β），１６１．１（Ｃ−４），１６３．１（Ｃ−４’），１６４．４（Ｃ−２’），１９２．６（Ｃ＝Ｏ）
図８に１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【００９４】
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４５３（Ｍ−Ｈ）−メタニトロベンジルアルコールをマトリックスに用いた。
【００９５】
以上、ＮＭＲスペクトル、質量スペクトル解析の結果、実施例４−（３）で得られた黄色物質が１−［３−（７−ｅｔｈｏｘｙ−６−ｈｙｄｒｏｘｙ−３，７−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｏｃｔｅｎｙｌ）−２，４−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ］−３−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅ（分子量４５４、ＴＢ６）であることを確定した。
【００９６】
実施例５ ＴＢ７の調製
（１）実施例１−（４）で得られたフラクションの番号４から２２を減圧濃縮後、クロロホルムに溶解した。続いてヘキサンによる再結晶を行い、生じた沈殿と上清とを分けた。
【００９７】
（２）実施例５−（１）で得られた上清の濃縮物をシリカゲル（３５０ｍＬ）に吸着させた。溶出はクロロホルム：ヘキサンの溶媒比を１００：１（１５００ｍＬ）、５０：１（２６００ｍＬ）、２０：１（２６００ｍＬ）、酢酸エチル（３００ｍＬ）の順に段階的に行い、溶出液を８ｍＬごとに分画した。
【００９８】
（３）実施例５−（２）で得られたフラクションの２１から３０を集めて濃縮乾固して黄色物質を得た。
【００９９】
（４）実施例５−（３）で得られた黄色物質のＮＭＲスペクトルと質量スペクトルを実施例１−（６）と同様の方法で測定した。以下にＮＭＲの帰属の信号を示す。なお、ピークの帰属の番号は以下の下記式（化１５）のとおりである。
【０１００】
【化１５】
【０１０１】
１Ｈ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ０．９１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），０．９６（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．２１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），１．２６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４”），１．４３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４”），１．５３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），１．８５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），２．１２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−２”），２．５２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），２．５６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），３．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，Ｈ−６”），３．９１（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３−４’），６．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−３およびＨ−５），７．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，Ｈ−β），７．７８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−２およびＨ−６），７．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，Ｈ−α），８．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−６’），１０．１５（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４），１３．９９（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−２’）
図９に１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１０２】
１３Ｃ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１９．０（ＣＨ３−３”），２１．３（Ｃ−１”），２４．５（ＣＨ３−７”），２６．０（ＣＨ３−７”），２６．４（Ｃ−５”），３９．９（Ｃ−４”），４６．３（Ｃ−７”），５３．５（Ｃ−２”），５６．８（ＯＣＨ３−４’），８５．８（Ｃ−６”），８６．９（Ｃ−３”），１０３．７（Ｃ−５’），１１４．８（Ｃ−１’），１１６．７（Ｃ−３およびＣ−５），１１７．４（Ｃ−３’），１１８．２（Ｃ−α），１２６．６（Ｃ−１），１３１．３（Ｃ−６’），１３２．２（Ｃ−２およびＣ−６），１４５．７（Ｃ−β），１６１．３（Ｃ−４），１６３．５（Ｃ−２’），１６４．１（Ｃ−４’），１９３．４（Ｃ＝Ｏ）
図１０に１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１０３】
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４２１（Ｍ−Ｈ）−メタニトロベンジルアルコールをマトリックスに用いた。
【０１０４】
以上、ＮＭＲスペクトル、質量スペクトル解析の結果、実施例５−（３）で得られた黄色物質が１−［３−（２，５−ｅｐｏｘｙ−２，６，６−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｍｅｔｈｙｌ）−２−ｈｙｄｒｏｘｙ−４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ］−３−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅ（分子量４２２、ＴＢ７）であることを確定した。
【０１０５】
実施例６ ＴＢ８の調製
（１）実施例１−（３）で得られたシリカフラクションの番号１０から１５を集めて減圧濃縮後、クロロホルムに溶解した。続いてヘキサンによる再結晶を行い、生じた沈殿と上清とを分けた。
【０１０６】
（２）実施例６−（１）で得られた上清を減圧濃縮後、逆相クロマトグラフィーを用いて分画した。カラムはＴＳＫ ｇｅｌ ＯＤＳ−８０Ｔｓ（２１．５ｍｍ×３０ｃｍ：東ソー社製）を用いた。溶媒は蒸留水：アセトニトリル＝１５：８５、溶出速度は５ｍＬ／分、検出は２１５ｎｍで行った。溶出液の紫外線吸収を指標に溶出液を分画した。
【０１０７】
（３）実施例６−（２）で得られた逆相クロマトフラクション２（保持時間５７．６分の検出ピークを含むフラクション）を濃縮乾固して黄色物質を得た。
【０１０８】
（４）実施例６−（３）で得られた黄色物質のＮＭＲスペクトルと質量スペクトルを実施例１−（６）と同様の方法で測定した。以下にＮＭＲの帰属の信号を示す。なお、ピークの帰属の番号は以下の下記式（化１６）のとおりである。
【０１０９】
【化１６】
【０１１０】
１Ｈ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１．１９（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．１９（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．７０（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），２．６２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ−４”），３．２９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），３．３１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），３．９１（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３−４’），５．１９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２”），５．４７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），５．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，Ｈ−６”），６．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−３およびＨ−５），７．７８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−２およびＨ−６），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，Ｈ−β），７．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，Ｈ−α），８．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−６’），１０．１４（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４），１０．８１（１Ｈ，ｓ，ＯＯＨ−７”），１３．８１（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−２’）
図１１に１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１１１】
１３Ｃ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１６．８（ＣＨ３−３”），２２．１（Ｃ−１”），２５．５（ＣＨ３−７”），２５．５（ＣＨ３−７”），４３．０（Ｃ−４”），５６．９（ＯＣＨ３−４’），８１．１（Ｃ−７”），１０３．７（Ｃ−５’），１１４．９（Ｃ−１’），１１６．６（Ｃ−３’），１１６．７（Ｃ−３およびＣ−５），１１８．１（Ｃ−α），１２３．５（Ｃ−２”），１２６．５（Ｃ−１），１２７．９（Ｃ−５”），１３１．４（Ｃ−６’），１３２．３（Ｃ−２およびＣ−６），１３４．３（Ｃ−３”），１３７．０（Ｃ−６”），１４５．７（Ｃ−β），１６１．３（Ｃ−４），１６３．０（Ｃ−２’），１６３．９（Ｃ−４’），１９３．３（Ｃ＝Ｏ）
図１２に１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１１２】
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４３７（Ｍ−Ｈ）−メタニトロベンジルアルコールをマトリックスに用いた。
【０１１３】
以上、ＮＭＲスペクトル，質量スペクトル解析の結果、実施例６−（３）で得られた黄色物質が１−［２−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−（７−ｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｙ−３，７−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２，５−ｏｃｔａｄｉｅｎｙｌ）−４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ］−３−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅ（分子量４３８，ＴＢ８）であることを確定した。
【０１１４】
実施例７ ＴＢ９の調製
（１）実施例６−（２）で得られた逆相クロマトフラクション３（保持時間６１．２分の検出ピークを含むフラクション）を濃縮乾固して黄色物質を得た。
【０１１５】
（２）実施例７−（１）で得られた黄色物質のＮＭＲスペクトルと質量スペクトルを実施例１−（６）と同様の方法で測定した。以下にＮＭＲの帰属の信号を示す。なお、ピークの帰属の番号は以下の下記式（化１７）のとおりである。
【０１１６】
【化１７】
【０１１７】
１Ｈ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１．４０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），１．５６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），１．６２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．７２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），１．８９（２Ｈ，ｍ，Ｈ−４”），３．２７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），３．３１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），３．９１（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３−４’），４．０７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−６”），４．７９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８”），４．８４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８”），５．１４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ−２”），６．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−３およびＨ−５），７．７８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−２およびＨ−６），７．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−β），７．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−α），８．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−６’），１０．１５（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４），１１．２５（１Ｈ，ｓ，ＯＯＨ−６”），１３．８１（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−２’）
図１３に１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１１８】
１３Ｃ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１６．７（ＣＨ３−３”），１７．７（ＣＨ３−７”），２２．０（Ｃ−１”），２９．５（Ｃ−５”），３６．０（Ｃ−４”），５６．９（ＯＣＨ３−４’），８８．２（Ｃ−６”），１０３．６（Ｃ−５’），１１４．０（Ｃ−８”），１１４．９（Ｃ−１’），１１６．７（Ｃ−３’），１１６．７（Ｃ−３およびＣ−５），１１８．１（Ｃ−α），１２２．９（Ｃ−２”），１２６．５（Ｃ−１），１３１．３（Ｃ−６’），１３２．３（Ｃ−２およびＣ−６），１３４．９（Ｃ−３”），１４５．３（Ｃ−７”），１４５．７（Ｃ−β），１６１．３（Ｃ−４），１６３．０（Ｃ−２’），１６３．８（Ｃ−４’），１９３．３（Ｃ＝Ｏ）
図１４に１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１１９】
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４３７（Ｍ−Ｈ）−メタニトロベンジルアルコールをマトリックスに用いた。
【０１２０】
以上、ＮＭＲスペクトル，質量スペクトル解析の結果、実施例７−（１）で得られた黄色物質が１−［２−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−（６−ｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｙ−３，７−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２，７−ｏｃｔａｄｉｅｎｙｌ）−４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ］−３−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅ（分子量４３８，ＴＢ９）であることを確定した。
【０１２１】
実施例８ 化合物（Ｃ０８１）の調製
（１）実施例６−（３）で得られたＴＢ８ １００ｍｇをメタノール５０ｍＬに溶解し、トリフェニルホスフィン（東京化成工業社製：６０ｍｇ）を加え室温で１時間反応した。反応液を減圧濃縮し、クロロホルム：メタノール＝１０：１を展開溶媒とした薄層クロマトグラフィーに供した。次に、紫外線吸収部分をかきとり、展開溶媒で抽出後、濃縮乾固することにより、黄色物質５７．２ｍｇを得た。
【０１２２】
（２）実施例８−（１）で得られた黄色物質のＮＭＲスペクトルと質量スペクトルを実施例１−（６）と同様の方法で測定した。以下にＮＭＲの帰属の信号を示す。なお、ピークの帰属の番号は以下の式（化１８）のとおりである。
【０１２３】
【化１８】
【０１２４】
１Ｈ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１．１３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．１３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．７０（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），２．５９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−４”），３．２８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−１”），３．９１（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３−４’），４．４２（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−７”），５．１７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−２”），５．４２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），５．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−６”），６．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−３およびＨ−５），７．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−β），７．７８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−２およびＨ−６），７．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−α），８．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−６’），１０．１７（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４），１３．８０（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−２’）
図１５に１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１２５】
１３Ｃ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１６．８（ＣＨ３−３”），２２．１（Ｃ−１”），３１．０（ＣＨ３−７”），３１．０（ＣＨ３−７”），４２．７（Ｃ−４”），５６．９（ＯＣＨ３−４’），６９．７（Ｃ−７”），１０３．６（Ｃ−５’），１１４．９（Ｃ−１’），１１６．７（Ｃ−３’），１１６．７（Ｃ−３およびＣ−５），１１８．１（Ｃ−α），１２３．２（Ｃ−２”），１２３．９（Ｃ−５”），１２６．６（Ｃ−１），１３１．３（Ｃ−６’），１３２．３（Ｃ−２およびＣ−６），１３４．６（Ｃ−３”），１４１．５（Ｃ−６”），１４５．７（Ｃ−β），１６１．３（Ｃ−４），１６３．０（Ｃ−２’），１６３．８（Ｃ−４’），１９３．３（Ｃ＝Ｏ）
図１６に１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１２６】
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４２１（Ｍ−Ｈ）−メタニトロベンジルアルコールをマトリックスに用いた。
【０１２７】
以上、ＮＭＲスペクトル、質量スペクトル解析の結果、実施例８−（１）で得られた黄色物質が１−［２−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−（７−ｈｙｄｒｏｘｙ−３，７−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２，５−ｏｃｔａｄｉｅｎｙｌ）−４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ］−３−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅ（分子量４２２、化合物（Ｃ０８１））であることを確定した。
【０１２８】
実施例９ 化合物（Ｃ０４２）の調製
（１）２’，４’−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅ（和光純薬社製）を２Ｍ水酸化カリウムメタノール溶液中、氷冷下１−Ｂｒｏｍｏ−２−ｍｅｔｈｙｌ−２−ｂｕｔｅｎｅ（アルドリッチ社製）で処理した後、メタノール中、パラジウム黒（ナカライテスク社製）存在下、水素還元することで２’，４’−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−３’−（３−ｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｌ）ａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅを得た。続いて、２’，４’−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−３’−（３−ｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｌ）ａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅと４−Ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅ（アルドリッチ社製）とクライゼン縮合することにより、黄色物質を得た。
【０１２９】
（２）実施例９−（１）で得られた黄色物質のＮＭＲスペクトルと質量スペクトルを実施例１−（６）と同様の方法で測定した。以下にＮＭＲの帰属の信号を示す。なお、ピークの帰属の番号は以下の式（化１９）のとおりである。
【０１３０】
【化１９】
【０１３１】
１Ｈ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ０．９１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），０．９２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），１．３４（２Ｈ，ｍ，Ｈ−２”），１．５４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３”），２．５５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），６．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−３およびＨ−５），７．７４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−２およびＨ−６），７．７４（２Ｈ，ｓ，Ｈ−α，Ｈ−β），８．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−６’），１０．１０（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４），１０．４６（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４’）１３．９８（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−２’）
図１７に１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１３２】
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ３２７（Ｍ＋Ｈ）＋メタニトロベンジルアルコールをマトリックスに用いた。
【０１３３】
以上、ＮＭＲスペクトル、質量スペクトル解析の結果、実施例９−（１）で得られた黄色物質が１−［２，４−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−３−（３−ｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ］−３−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅ（分子量３２６、化合物（Ｃ０４２））であることを確定した。
【０１３４】
実施例１０ アルドースレダクターゼ阻害活性
実施例１〜９で調製した化合物（ＴＢ３、ＴＢ４、ＴＢ５、ＴＢ６、ＴＢ７、ＴＢ８、ＴＢ９、化合物（Ｃ０８１）又は化合物（Ｃ０４２））のアルドースレダクターゼ阻害活性を以下の方法により測定した。試料（各化合物を５０％ジメチルスルホキシド水溶液に溶解したもの）１０μＬ、０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．２）１００μＬ、１ｍＭ ＮＡＤＰＨ（リン酸緩衝液）２０μＬ、人筋肉細胞由来アルドースレダクターゼ溶液（０．１Ｕ／ｍＬ、和光純薬工業社製、リン酸緩衝液）１０μＬに１００ｍＭメチルグリオキサール２０μＬを加え、３０秒経過の後より１８０秒間、ＮＡＤＰＨの３４０ｎｍにおける吸光度の変化を測定した。陰性対照試料として試料の代わりに５０％ジメチルスルホキシド水溶液を使用した。また、各試料のブランクとしてメチルグリオキサール溶液の代わりに蒸留水を使用して吸光度を測定した。測定値は２回の実験値の平均値で示した。アルドースレダクターゼ阻害率（％）は以下の式により算出した。
阻害率（％）＝［１−（△Ａｓ−△Ａｓｂ）／（△Ａｃ−△Ａｃｂ）］×１００
ここで、△Ａｓ及び△Ａｃはそれぞれ試料溶液、陰性対照溶液の１分間あたりの吸光度変化を示し、△Ａｓｂ及び△Ａｃｂはそれぞれ試料溶液、陰性対照溶液のブランク溶液の１分間あたりの吸光度変化を示す。
試料の添加量は各化合物の最終濃度を表１に示す通りとした。その結果、ＴＢ３、ＴＢ４、ＴＢ５、ＴＢ６、ＴＢ７、ＴＢ８、ＴＢ９、化合物（Ｃ０８１）及び化合物（Ｃ０４２）に濃度依存的にアルドースレダクターゼ阻害活性のあることが明らかになった。表１にその結果を示す。
【０１３５】
【表１】
【０１３６】
実施例１１ ＮＯ産生抑制活性
実施例１〜９で調製した化合物（ＴＢ３、ＴＢ４、ＴＢ５、ＴＢ６、ＴＢ７、ＴＢ８、ＴＢ９、化合物（Ｃ０８１）及び化合物（Ｃ０４２））のＮＯ産生抑制活性を以下の方法により測定した。１０％ウシ胎児血清（バイオウィタカー社製、１４−５０６Ｆ）含有、ダルベッコ改良イーグル培地（シグマ社製、Ｄ５７９６）にＲＡＷ２６４．７細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ ７１）を４ｘ１０５個／ｍＬになるように懸濁し、４８穴マイクロタイタープレートのウェルに５００μＬずつ加えて５％炭酸ガス存在下、３７℃で培養した。２４時間後に、１０％ウシ胎児血清（バイオウィタカー社製）含有、フェノールレッド不含、２ｍＭ Ｌ−グルタミン（ライフテックオリエンタル社製、２５０３０−１４９）含有ダルベッコ改良イーグル培地（バイオウィタカー社製，１２−９１７Ｆ）に交換し、各ウェルにそれぞれ１μＬの１０ｍＭ、５ｍＭ、２．５ｍＭのＴＢ３、ＴＢ４、ＴＢ５、ＴＢ６、ＴＢ７、ＴＢ８、ＴＢ９、化合物（Ｃ０８１）又は化合物（Ｃ０４２）（いずれもジメチルスルホキシド溶液）を添加した。さらに１時間培養した後、各ウェルに５μＬの１００μｇ／ｍＬリポポリサッカライド（ＬＰＳ、シグマ社製、Ｌ−２０１０）水溶液を添加して１６時間培養した後、ＮＯが培地中で酸化されることによって生じるＮＯ２−濃度を測定した。なお、対照として各化合物の代わりにジメチルスルホキシドを添加した区分を設定した。上記培養後、１００μＬの培養上清に１００μＬの４％グリース試薬（シグマ社製、Ｇ４４１０）を加え、室温で１５分間放置した後、５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。既知の濃度のＮａＮＯ２（シグマ社製、Ｓ２２５２）で作製した検量線から培地中のＮＯ２−濃度を計算した。測定はすべて２連で行った。各化合物のＮＯ産生抑制能は以下の式に従い算出した。
Ｘ：各化合物存在下のＮＯ２−量
Ｙ：対照におけるＮＯ２−量
ＮＯ産生抑制能（％）＝［１−Ｘ／Ｙ］×１００
その結果、ＴＢ３、ＴＢ４、ＴＢ５、ＴＢ６、ＴＢ７、ＴＢ８、ＴＢ９、化合物（Ｃ０８１）及び化合物（Ｃ０４２）はＬＰＳによるＮＯ産生誘導を濃度依存的に抑制した。その結果を表２に示す。
【０１３７】
【表２】
【産業上の利用可能性】
【０１３８】
本発明により、新規なカルコン類化合物が提供される。当該化合物はそのＮＯ産生抑制作用又はアルドースレダクターゼ阻害作用を有しており、当該生理活性を利用した医薬、食品、飲料または飼料の有効成分として有用である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規なカルコン類化合物、および当該化合物の生理作用を利用した医薬、飲食品等に関する。
【背景技術】
【０００２】
カルコン類化合物とは、下記式（化１）のカルコン骨格を有する化合物の総称であり、これらの化合物として、天然物からの抽出や合成によって得られたさまざまな化合物が知られている。
【０００３】
【化１】
【０００４】
また、これらの化合物の生理活性については、化合物によってそれぞれ多種多様であり、例えば細胞毒性、抗がん活性、化学防御、抗変異原性、抗菌活性、抗ウィルス活性、抗原虫性、殺虫作用等が知られている（例えば、非特許文献１）。また、本発明者らは、これらのカルコン類化合物に神経成長因子（ＮＧＦ）産生増強作用があることを見出している（例えば、特許文献１）。
【特許文献１】国際公開第０１／５４６８２号パンフレット
【非特許文献１】Ｊ．Ｒ．Ｄｉｍｍｏｃｋ 他３名，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（オランダ），１９９９年，Ｖｏｌ．６，ｐ．１１２５〜１１４９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、新規なカルコン類化合物とその生理作用を利用した医薬、もしくは飲食品等を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明を概説すれば、本発明の第１の発明は、下記式（１）〜（９）のいずれかで表されるカルコン類化合物、その誘導体又はそれらの塩に関する。
【０００７】
【化２】
【０００８】
【化３】
【０００９】
【化４】
【００１０】
【化５】
【００１１】
【化６】
【００１２】
【化７】
【００１３】
【化８】
【００１４】
【化９】
【００１５】
【化１０】
【００１６】
本発明の第２の発明は、本発明の第１の発明の化合物、その誘導体又はそれらの塩を有効成分として含有することを特徴とする当該化合物に感受性を示す疾患の治療剤又は予防剤に関する。本発明の第２の発明において当該化合物に感受性を示す疾患としては、治療又は予防に一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制又はアルドースレダクターゼ阻害を要する疾患が例示される。
【００１７】
本発明の第３の発明は、本発明の第１の発明の化合物、その誘導体又はそれらの塩を有効成分として含有することを特徴とする、ＮＯ産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤に関する。
【００１８】
本発明の第４の発明は、本発明の第１の発明の化合物、その誘導体又はそれらの塩を含有することを特徴とする食品、飲料又は飼料に関する。本発明の第４の発明の食品、飲料又は飼料は、当該化合物に感受性を示す疾患の治療又は予防に有用である。また、ここで当該化合物に感受性を示す疾患としては、例えばＮＯ産生抑制又はアルドースレダクターゼ阻害を要する疾患が例示される。
【発明の効果】
【００１９】
本発明により、新規なカルコン類化合物、その誘導体又はそれらの塩が提供される。当該化合物はＮＯ産生抑制作用又はアルドースレダクターゼ阻害作用を有するため、該化合物、その誘導体又はそれらの塩は当該生理活性を利用した医薬、食品、飲料または飼料の有効成分として有用である。また、本発明により提供される医薬等は、例えばＮＯ産生抑制又はアルドースレダクターゼ阻害を要する疾患などの、該化合物に感受性を示す疾患に対する治療または予防効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】ＴＢ３の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図２】ＴＢ３の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図３】ＴＢ４の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図４】ＴＢ４の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図５】ＴＢ５の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図６】ＴＢ５の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図７】ＴＢ６の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図８】ＴＢ６の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図９】ＴＢ７の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１０】ＴＢ７の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１１】ＴＢ８の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１２】ＴＢ８の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１３】ＴＢ９の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１４】ＴＢ９の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１５】化合物（Ｃ０８１）の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１６】化合物（Ｃ０８１）の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１７】化合物（Ｃ０４２）の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本発明者らは上記式（１）〜（９）のいずれかで表される新規なカルコン類化合物、その誘導体又はそれらの塩（本明細書において、本発明の化合物と称することがある）と、当該化合物の有するＮＯ産生抑制作用およびアルドースレダクターゼ阻害作用を見出し、該化合物を有効成分とする医薬、飲食品、飼料の提供が可能になった。なお、本発明の化合物と、その誘導体又はそれらの塩とは同等の作用を有し得る。上記式（１）〜（７）は食用植物であるセリ科のアシタバより単離された新規なカルコン類化合物である。
【００２２】
本発明の化合物は、天然物由来でもよく、合成品、半合成品でもよい。天然物としては食用植物由来が好ましく、食用植物としてはセリ科植物のアシタバが例示される。また、本発明の化合物に種々の異性体が存在する場合、いずれも任意に本発明において使用することができる。本発明の化合物は、単独で、若しくは２種以上を混合して使用することができる。
【００２３】
例えば、天然物からの本発明の化合物の製造は、公知の製造方法を組み合わせて行うことができる。例えば、本発明の化合物の天然物からの調製については、本発明の化合物含有物、例えばアシタバ等の植物から当該化合物を精製することができる。精製手段としては化学的方法、物理的方法等の公知の精製手段を用いればよく、ゲルろ過法、分子量分画膜による分画法、溶媒抽出法、イオン交換樹脂、シリカゲル、逆相系樹脂等を用いた各種クロマトグラフィー法等の従来公知の精製方法を組合せて本発明の化合物を精製すればよい。例えば、本発明の化合物である上記式（１）〜（７）の製造は、下記実施例１〜７を参考にして行うことができる。
【００２４】
また、合成による本発明の化合物の製造は、公知の製造方法を組み合わせて行うことができる。例えば、合成の方法はＡｌｅｓｓａｎｄｒａ Ｌａｔｔａｎｚｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｌｅｔｔ．２００２，Ｎｏ．６，ｐ９４２−９４６；Ｌ．Ｃｌａｉｓｅｎ Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｅｒ．１８８１，Ｎｏ．１４，ｐ２４６０等を参照すればよい。例えば、本発明の化合物である上記式（９）で表される化合物の製造は、下記実施例９を参考にして化学合成することで得ることができる。
【００２５】
また、半合成による本発明の化合物の製造は、例えば、天然物由来のカルコン類化合物を原料として有機合成することにより得ることができる。例えば、本発明の化合物である上記式（８）で表される化合物は、下記実施例８を参考にして上記式（６）で表される化合物を還元処理することにより得ることができる。還元処理以外の有機合成の方法については、特に限定はないが、例えばＡｌｅｓｓａｎｄｒａ Ｌａｔｔａｎｚｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｌｅｔｔ．２００２，Ｎｏ．６，ｐ９４２−９４６；Ｌ．Ｃｌａｉｓｅｎ Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｅｒ．１８８１，Ｎｏ．１４，ｐ２４６０等を参照すればよい。
【００２６】
本明細書において上記式（１）〜（９）で表される化合物の誘導体とは、該化合物を元化合物として合成される化合物であって、上記式（１）〜（９）で表される化合物と同等の作用、すなわち、ＮＯ産生抑制作用またはアルドースレダクターゼ阻害作用を有する化合物である。かかる誘導体としては、例えば上記式（１）〜（９）で表される化合物のエステル体、エーテル体、配糖体など、体内で容易に加水分解し、所望の効果を発揮し得る化合物（プロドラッグ）を挙げることができる。かかるプロドラッグの調製は公知の方法に従えばよい。なお、かかる誘導体は、それらの塩であってもよい。
【００２７】
また、本発明の化合物において、塩としては薬理学的に許容される塩が好ましい。本発明で使用される塩としては、例えば、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、有機塩基との塩などが例示される。かかる塩としては薬理学的に許容される塩が好ましい。なお、本発明において使用される薬理学的に許容される塩とは生物に対して実質的に無毒である塩を意味する。当該塩としては、たとえば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウムまたはプロトン化されたベンザチン（Ｎ，Ｎ′−ジ−ベンジルエチレンジアミン）、コリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグラミン（Ｎ−メチルグルカミン）、ベネタミン（Ｎ−ベンジルフェネチルアミン）、ピペラジンもしくはトロメタミン（２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオール）との塩が挙げられる。
【００２８】
本発明により、本発明の化合物を有効成分として含有する、当該化合物に感受性を示す疾患の治療剤又は予防剤（本明細書において、本発明の治療剤又は予防剤と称することがある）が提供される。ここで当該化合物に感受性を示す疾患とは、当該化合物により治療効果若しくは予防効果が得られ得る疾患をいい、該疾患としては、例えばＮＯ産生抑制又はアルドースレダクターゼ阻害を要する疾患が挙げられる。
【００２９】
固形がんの増大に血管新生は必須であるが、血管内皮増殖因子／血管透過性亢進因子（ＶＥＧＦ）はこの過程に重要な役割を演じている。さまざまながん細胞においてＶＥＧＦはＮＯによって誘導される。すなわち、がん細胞のＮＯ産生を抑制することによって、ＶＥＧＦ産生が抑制され、その結果、がん組織周辺での血管新生が阻害され、がんを脱落させることができる。
【００３０】
また、ＮＯはｐＨ中性の生理的条件下でアミンと反応してニトロソアミンを生成する。このニトロソアミンはＤＮＡに損傷を与えることにより発がん性を示すことが知られている。また、疫学的にがんとの関連が高い肝吸虫感染患者や肝硬変患者においてＮＯ産生は亢進している。したがって、ＮＯ産生を抑制することによりハイリスクグループの発がんを予防することができる。
【００３１】
ＮＯはまた、炎症性病変に特徴的に認められる浮腫、すなわち血管透過性亢進作用を誘発し〔Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、第８５巻、Ｐ３３１〜３３４（１９９４）〕、また炎症性メディエーターであるプロスタグランジン類の生合成を亢進させる〔Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ＵＳＡ、第９０巻、Ｐ７２４０〜７２４４（１９９３）〕。一方、ＮＯはスーパーオキシドラジカルと速やかに反応してペルオキシ亜硝酸イオンを生じ、ペルオキシ亜硝酸イオンが炎症性の細胞、組織障害を引き起こすとも考えられている。
【００３２】
また、慢性関節性リウマチ、変形性関節リウマチ、痛風性関節炎、ベーチェット病などの関節炎患者の病変部の関節液には同患者の正常な関節や健常人の関節の関節液に比べて高濃度のＮＯが含まれている。
【００３３】
本発明の化合物は実施例１１に記載のとおり、ＮＯ産生抑制作用を有することから、上記のがん性疾患および炎症性疾患に対して有用な化合物である。本発明の化合物が有効なＮＯ産生抑制を要する疾患としては、例えばがん性疾患、炎症性疾患、慢性関節性リウマチ、変形性関節リウマチ、痛風性関節炎、ベーチェット病等の疾患が挙げられる。
【００３４】
アルドースレダクターゼ（Ａｌｄｏｓｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ：以下、ＡＲと称することがある。）は生体内においてグルコース代謝経路の一つであるポリオール経路に関与する酵素である。該経路はＡＲが関与するグルコースからソルビトール系の還元経路、およびソルビトールデヒドロゲナーゼ（以下、ＳＤＨと称することがある。）が関与するソルビトールからＤ−フルクトースへの脱水素反応経路からなる。細胞内に流入するグルコース量が増大すると、解糖系で処理できないグルコースがポリオール経路を亢進させる。ところが、ＳＤＨ活性はＡＲ活性より低いことから、グルコースの流入が続くと中間代謝物のソルビトールが大量に産生されることになる。このようなソルビトールの蓄積に起因するさまざまな疾患、すなわち糖尿病合併症として起こる疾患としては、例えば白内障、末梢神経疾患、腎疾患、白血球の食菌作用の低下に起因する感染症、糖尿病性昏睡、大血管壁におけるアテローム変性による動脈硬化等の疾患が知られている。
【００３５】
本発明の化合物は実施例１０に記載のとおり、ＡＲ阻害作用を有することから、上記の糖尿病合併症に対して有用な化合物である。本発明の化合物が有効なＡＲ阻害作用を要する疾患としては、例えば糖尿病合併症として引き起こされる疾患、例えば白内障、末梢神経疾患、腎疾患、白血球の食菌作用の低下に起因する感染症、糖尿病性昏睡、大血管壁におけるアテローム変性による動脈硬化等の疾患が例示される。また、本発明の化合物は、他の糖尿病治療剤と併用することもできる。
【００３６】
上記した本発明の治療剤又は予防剤は、本発明の化合物を有効成分とし、これを公知の医薬用担体と組合せて製剤化することにより製造できる。一般的には、これらの化合物を薬学的に許容できる液状または固体状の担体と配合し、かつ所望により溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を加えて、錠剤、顆粒剤、散剤、粉末剤、カプセル剤等の固形剤、通常液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤とすることができる。また、使用前に適当な担体の添加によって液状となし得る乾燥品とすることができる。
【００３７】
医薬用担体は、治療剤または予防剤の投与形態および剤型に応じて選択することができる。固体組成物からなる経口剤とする場合は、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤等とすることができ、たとえば、デンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩などが利用される。また経口剤の調製に当っては、更に結合剤、崩壊剤、界面活性剤、潤沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料などを配合することもできる。たとえば、錠剤または丸剤とする場合は、所望によりショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロースなどの糖衣または胃溶性もしくは腸溶性物質のフィルムで被覆してもよい。液体組成物からなる経口剤とする場合は、薬理学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤などとすることができ、たとえば、精製水、エタノールなどが担体として利用される。また、さらに所望により湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、防腐剤などを添加してもよい。
【００３８】
一方、非経口剤とする場合は、常法に従い本発明の前記有効成分を希釈剤としての注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射用植物油、ゴマ油、落花生油、大豆油、トウモロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどに溶解ないし懸濁させ、必要に応じ、殺菌剤、安定剤、等張化剤、無痛化剤などを加えることにより調製することができる。また、固体組成物を製造し、使用前に無菌水または無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。
【００３９】
また、本発明の予防剤または治療剤は、外用剤とすることもできる。外用剤としては、経皮投与用または経粘膜（口腔内、鼻腔内）投与用の、固体、半固体状または液状の製剤が含まれる。また、座剤なども含まれる。このような外用剤としては、たとえば、乳剤、ローション剤などの乳濁剤、外用チンキ剤、経粘膜投与用液剤などの液状製剤、油性軟膏、親水性軟膏などの軟膏剤、フィルム剤、テープ剤、パップ剤などの経皮投与用または経粘膜投与用の貼付剤などが挙げられる。
【００４０】
上記のような各種製剤形態での治療剤または予防剤は、それぞれ公知の医薬用担体などを利用して、適宜、常法により製造することができる。また、かかる治療剤または予防剤における有効成分の含有量は、その投与形態、投与方法などを考慮し、好ましくは後述の投与量範囲で当該有効成分を投与できるような量であれば特に限定されるものではない。
【００４１】
本発明の治療剤または予防剤における前記有効成分の含有量は、特に限定はないが、通常、０．００１〜８０重量％が好適であり、より好適には０．０１〜５０重量％、特に好適には０．１〜２０重量％が例示される。
【００４２】
本発明の治療剤又は予防剤の投与量は、その製剤形態、投与方法、使用目的およびこれに適用される患者の年齢、体重、症状などによって適宜設定され、一定ではないが、一般には製剤中に含有される有効成分の量で、ヒト（例えば成人）１日当り好ましくは１０μｇ〜１ｇ／ｋｇ体重、より好ましくは５０μｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ体重、更に好ましくは１００μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重である。もちろん、投与量は、種々の条件によって変動するので、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、あるいは範囲を超えて必要な場合もある。また、本発明の治療剤又は予防剤の投与方法は特に限定されるものではなく、使用目的および患者の年齢、症状などによって適宜設定すればよい。例えば、経口投与、静脈内投与、経皮投与等が挙げられる。経口投与の場合、本発明の治療剤又は予防剤はそのまま経口投与するほか、任意の飲食品に添加して日常的に摂取させることもできる。
【００４３】
なお、本明細書において、医薬とは、便宜的に、上記の本発明の治療剤又は予防剤を指すのみでなく、以下に記載される本発明のＮＯ産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤をも指す場合がある。
【００４４】
また、本発明の化合物を有効成分として含有するＮＯ産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤を提供することもできる。本発明のＮＯ産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤としては、前記有効成分そのものであってもよく、また、前記有効成分を含む組成物であってもよい。本発明の態様においては、有効成分としての塩は薬理学的に許容される塩が好適である。本発明のＮＯ産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤は、たとえば、前記有効成分を当該有効成分と同じ用途に使用可能な他の成分などと配合し、上記治療剤または予防剤の製造方法に準じて通常使用される試薬の形態に製造すればよい。本発明のＮＯ産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤における前記有効成分の含有量は、これらの投与方法、使用目的などを考慮し、本発明の所望の効果の発現が得られ得るような量であればよく、特に限定されるものではないが、通常、０．００１〜１００重量％が好適であり、より好適には０．０１〜８０重量％、特に好適には０．１〜８０重量％が例示される。また、使用量も本発明の所望の効果の発現が得られ得るようであれば特に限定されるものではない。特に、生体に投与して使用する場合には、好ましくは前記治療剤または予防剤における有効成分の投与量範囲内で有効成分を投与できるような量で使用すればよい。投与方法についても特に限定されるものではなく、前記治療剤または予防剤と同様に適宜設定すればよい。本発明のＮＯ産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤は、ＮＯ産生抑制又はアルドースレダクターゼ阻害を必要とする疾患において有用である。また、本発明のＮＯ産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤はこれらの疾患に対する薬物のスクリーニングにも有用である。さらに本発明のＮＯ産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤は、これらの疾患の物理的変化に関する機能研究にも有用である。
【００４５】
また、本発明により本発明の化合物を含有してなる食品、飲料又は飼料（本明細書において、本発明の食品、飲料又は飼料と称することがある。また便宜的に、本発明の飲食品等と称することもある。）が提供される。本発明の食品、飲料又は飼料は、当該化合物に感受性を示す疾患の治療用又は予防用の食品、飲料又は飼料として有用である。なお、本発明の食品、飲料又は飼料とは、当該疾患の治療又は予防を目的とすることを付した機能性食品（特定保健用食品）を包含するものである。該化合物に感受性を示す疾患としては、例えば前述の本発明の治療剤又は予防剤が適用される疾患が例示される。例えば、本発明の化合物を含有、添加および／または希釈してなる食品、飲料又は飼料は、そのＮＯ産生抑制作用又はアルドースレダクターゼ阻害作用により、ＮＯ産生抑制又はアルドースレダクターゼ阻害を要する疾患の症状改善、予防に極めて有用である。よって、本発明の食品又は飲料は、血糖値が気になる方や、手足・関節に痛み・違和感がある方、視力の低下、体のむくみ、しびれを感じる方が摂取するのに好適である。
【００４６】
なお、本明細書において、前記「含有」とは食品、飲料または飼料中に本発明で使用される有効成分が含まれるという態様を、前記「添加」とは食品、飲料または飼料の原料に、本発明で使用される有効成分を添加するという態様を、前記「希釈」とは本発明で使用される有効成分に、食品、飲料または飼料の原料を添加するという態様をいうものである。
【００４７】
本発明の食品、飲料又は飼料の製造方法は、特に限定はないが、一般に用いられている食品、飲料又は飼料の製造方法を採用でき、製造された食品、飲料又は飼料に、本発明の化合物が有効成分として含有されていれば良く、好適には本発明の有効成分が高含有されている食品、飲料又は飼料が例示される。なお、本明細書において、高含有とは、原料、例えばアシタバの単位重量あたりの本発明の化合物重量よりも本発明の食品、飲料又は飼料の単位重量あたりの本発明の化合物重量の方が多いことを意味する。
【００４８】
本発明の食品又は飲料は、特に限定するものではないが、例えば、穀物加工品、油脂加工品、大豆加工品、食肉加工品、水産製品、乳製品、野菜・果実加工品、菓子類、アルコール類、嗜好飲料、調味料、缶詰・瓶詰・袋詰食品、半乾燥または濃縮食品、乾燥食品、冷凍食品、固形食品、液体食品、香辛料類等の農産・林産加工品、畜産加工品、水産加工品等が挙げられる。
【００４９】
本発明の食品または飲料には前記有効成分が含有、添加および／または希釈されていれば特にその形状に限定はなく、タブレット状、顆粒状、カプセル状等の形状の経口的に摂取が容易な形状物も包含する。
【００５０】
本発明の食品又は飲料中の前記有効成分の含有量は特に限定されず、その官能と活性発現の観点から適宜選択できるが、例えば食品１００重量％中、０．００００１重量％以上、好ましくは０．０００１〜１０重量％、更に好ましくは０．０００６〜６重量％であり、例えば飲料１００重量％中、０．００００１重量％以上、好ましくは０．０００１〜１０重量％、更に好ましくは０．０００６〜６重量％である。また、本発明の有効成分が高含有されている食品又は飲料の場合は、例えば食品１００重量％中、０．０００１重量％以上、好ましくは０．０００５〜１０重量％、さらに好ましくは０．００１〜１０重量％、例えば飲料１００重量％中、０．０００１重量％以上、好ましくは０．０００５〜１０重量％、さらに好ましくは０．００１〜１０重量％が好適である。また本発明の食品又は飲料は、好ましくは、それらに含有される有効成分が、ヒト（例えば成人）１日当たり１０μｇ〜１ｇ／ｋｇ体重、好ましくは５０μｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ体重、更に好ましくは１００μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重となるように摂取すればよい。
【００５１】
また、本発明は、前記有効成分を含有してなる生物用の飼料を提供するものであり、さらに、別の一態様として、前記有効成分を生物に投与することを特徴とする生物の飼育方法をも提供する。また、本発明の別の一態様として、前記有効成分を含有することを特徴とする生物飼育用剤が提供される。ここで、「含有」の語は、含有、添加及び／又は希釈の意味を有し、含有、添加及び希釈は前記の通りの意味を有する。
【００５２】
本明細書において、生物としては、限定はないが、たとえば養殖動物、ペット動物などが挙げられる。養殖動物としてはウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ラマなどの家畜、マウス、ラット、モルモット、ウサギなどの実験動物、ニワトリ、アヒル、七面鳥、駝鳥などの家禽、魚類、甲殻類または貝類が例示される。ペット動物としてはイヌ、ネコなどが例示される。また、飼料としては体調の維持および／または改善用飼料が例示される。生物飼育用剤としては浸漬用剤、飼料添加剤、飲料用添加剤が例示される。
【００５３】
これらの発明によれば、それらを適用する前記例示するような生物において、本発明に使用される前記有効成分のＮＯ産生抑制作用又はアルドースレダクターゼ阻害作用に基づき、本発明の前記治療剤または予防剤によるのと同様の効果の発現が期待できる。すなわち、本発明の飼料、生物用飼育用剤は、それらが適用される生物におけるＮＯ産生抑制又はアルドースレダクターゼ阻害を要する疾患の治療または予防効果を有する。
【００５４】
本発明に使用される前記有効成分は通常、対象生物に１日当たり１０μｇ〜１ｇ／ｋｇ体重、好ましくは５０μｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは１００μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重投与される。投与は、たとえば、当該有効成分を、対象生物に供する人工配合飼料の原料中に添加混合しておくか、人工配合飼料の粉末原料と混合した後、その他の原料にさらに添加混合することで行うことができる。また、前記有効成分の飼料中の含有量は特に限定されるものではなく、目的に応じて適宜設定すれば良いが、例えば飼料１００重量％中、０．００００１重量％以上、好ましくは０．０００１〜３０重量％、さらに好ましくは０．００１〜１５重量％の割合が好適である。また、本発明の有効成分が高含有されている飼料の場合は、例えば飼料１００重量％中、０．０００１重量％以上、好ましくは０．０００５〜３０重量％、さらに好ましくは０．００１〜３０重量％が好適である。
【００５５】
本発明の飼料の製造法に特に限定はなく、また配合も一般の飼料に準ずるものであればよく、製造された飼料中に本発明の前記有効成分が含まれていればよい。生物飼育用剤は、前記飼料の場合に準じて、製造、使用等すればよい。
【００５６】
ＮＯ産生抑制作用又はアルドースレダクターゼ阻害作用を有する本発明に使用される前記有効成分を含んでなる飼料を摂取させること、またはＮＯ産生抑制作用又はアルドースレダクターゼ阻害作用を有する本発明に使用される前記有効成分の含有液に対象生物を浸漬することにより、家畜、実験動物、家禽、ペット動物などの体調を良好に維持し、または、改善させたりすることができる。なお、ここに例示する態様は、本発明により提供される生物の飼育方法の一態様をなす。
【００５７】
本発明において医薬、飲食品、飼料中の本発明の化合物含有量はその投与、摂取等により、生体内で所望の効果が得られ得る濃度であればよく、対応する公知の飲食品等に比べて高含有されているものが好ましい。
【００５８】
本発明で使用される前記有効成分は、その作用発現にとっての有効量の投与を行っても毒性は認められない。たとえば経口投与の場合、前述の上記式（１）〜（９）で表される化合物、もしくはこれらの光学活性体又はそれらの塩のいずれかを、それぞれ１ｇ／ｋｇ体重でマウスに単回投与しても死亡例は認められない。また、前記有効成分は、ラットへの経口投与において１ｇ／ｋｇ体重を経口単回投与しても死亡例は認められない。
【実施例】
【００５９】
以下、実施例を挙げて、本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの記載に何ら限定されるものではない。なお、実施例における％は特に記載がなければすべて容量％を意味する。なお、本明細書において、上記式（１）で表される化合物をＴＢ３、上記式（２）で表される化合物をＴＢ４、上記式（３）で表される化合物をＴＢ５、上記式（４）で表される化合物をＴＢ６、上記式（５）で表される化合物をＴＢ７、上記式（６）で表される化合物をＴＢ８、上記式（７）で表される化合物をＴＢ９、上記式（８）で表される化合物を化合物（Ｃ０８１）、上記式（９）で表される化合物を化合物（Ｃ０４２）と称することがある。
【００６０】
実施例１ ＴＢ３の調製
（１）アシタバ根部の乾燥粉末５ｋｇに１５Ｌのエタノールを加え、室温で３０分間抽出を行い、吸引ろ過後、エタノール抽出液と残渣に分けた。残渣に対して同様の抽出を２回行った後、エタノール抽出液を合わせ減圧濃縮し、エタノール抽出濃縮液を得た。
【００６１】
（２）実施例１−（１）で得られたエタノール抽出濃縮液を２Ｌの２５％エタノール水溶液に溶解し、ついで逆相クロマトグラフィーを用いて分画した。樹脂はコスモシール１４０ Ｃ１８−ＯＰＮ（ナカライテスク社製：４００ｍＬ）を用い、１Ｌの３０％エタノール水溶液、５Ｌの４０％エタノール水溶液、４Ｌの７５％エタノール水溶液、３Ｌの１００％エタノール水溶液の順に溶出を行った。
【００６２】
（３）実施例１−（２）で得られた７５％エタノール水溶液溶出画分を減圧濃縮し、シリカゲル（ＢＷ−３００ＳＰ：富士シリシア化学社製、３５０ｍＬ）に吸着させた。溶出はクロロホルム：ヘキサンの溶媒比を２：１（８００ｍＬ）、１０：４（１８００ｍＬ）、および酢酸エチル（１４００ｍＬ）の順に段階的に行った。溶出液はフラクション１から５まで２００ｍＬごと、フラクション６は１５０ｍＬ、フラクション７から１０は１００ｍＬごと、フラクション１１から１６は２００ｍＬごと、フラクション１７は１０００ｍＬの順に分画した。
【００６３】
（４）実施例１−（３）で得られたフラクションの番号１７を減圧濃縮し、シリカゲル（３５０ｍＬ）に吸着させた。溶出はクロロホルム：ヘキサンの溶媒比を１０：３（１０００ｍＬ）、１０：１（２１００ｍＬ）、２０：１（１０００ｍＬ）、酢酸エチル（５００ｍＬ）の順に段階的に行い、最初の２３００ｍＬを溶出の後、１００ｍＬごとに分画した。
【００６４】
（５）実施例１−（４）で得られたフラクションの番号２３，２４を減圧濃縮後、クロロホルムに溶解し、ヘキサンによる再結晶を行い、黄色物質を得た。
【００６５】
（６）実施例１−（５）で得られた黄色物質について、核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル装置（ＡＶＡＮＣＥ６００型：ブルカ・バイオスピン社製）を用い、各種ＮＭＲスペクトルを測定し構造解析した。以下にＮＭＲの帰属の信号を示す。なお、ピークの番号は下記式（化１１）のとおりである。
【００６６】
【化１１】
【００６７】
１Ｈ−ＮＭＲ（重クロロホルム）：δ１．３４（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），１．５７（２Ｈ，ｍ，Ｈ−４”），１．６５（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．７１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．７９（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−３”），２．１１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），２．１９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），３．１９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｈ−１”），４．８２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｈ−２”），５．１５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−６”），５．２１（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４），６．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−３およびＨ−５），７．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−α），７．５８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−２およびＨ−６），７．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−６’），７．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−β），１３．５１（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−２’）
図１に１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【００６８】
１３Ｃ−ＮＭＲ（重クロロホルム）：δ１８．１（ＣＨ３−７”），２２．４（Ｃ−５”），２３．２（ＣＨ３−３”），２６．１（ＣＨ３−７”），２７．３（Ｃ−１”），３７．１（Ｃ−４”），７４．２（Ｃ−３”），９１．６（Ｃ−２”），１０２．１（Ｃ−５’），１１４．２（Ｃ−３’），１１５．４（Ｃ−１’），１１６．４（Ｃ−３およびＣ−５），１１８．６（Ｃ−α），１２４．４（Ｃ−６”），１２８．２（Ｃ−１），１３０．９（Ｃ−２およびＣ−６），１３２．１（Ｃ−６’），１３２．７（Ｃ−７”），１４４．３（Ｃ−β），１５８．３（Ｃ−４），１６１．９（Ｃ−２’），１６７．０（Ｃ−４’），１９２．５（Ｃ＝Ｏ）
図２にＣ１３−ＮＭＲスペクトルを示す。
【００６９】
次いで、実施例１−（５）で得られた黄色物質の質量スペクトル（ＭＳ）を質量分析計（ＤＸ３０２：日本電子社製）によりＦＡＢ−ＭＳの手法で測定した。
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４０７（Ｍ−Ｈ）−メタニトロベンジルアルコールをマトリックスに用いた。
【００７０】
以上、ＮＭＲスペクトル、質量スペクトル解析の結果、実施例１−（５）で得られた黄色物質が１−［２，３−ｄｉｈｙｄｒｏ−４−ｈｙｄｒｏｘｙ−２−（１−ｈｙｄｒｏｘｙ−１，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−４−ｈｅｘｅｎｙｌ）−ｂｅｎｚｏｆｕｒａｎ−５−ｙｌ］−３−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅ（分子量４０８，ＴＢ３）であることを確定した。
【００７１】
実施例２ ＴＢ４の調製
（１）実施例１−（２）で得られた４０％エタノール水溶液溶出画分を減圧濃縮し、シリカゲル（３５０ｍＬ）に吸着させた。溶出はクロロホルム：メタノールの溶媒比を５０：１（９６０ｍＬ）、４０：１（５２０ｍＬ）、２０：１（１０００ｍＬ）、１０：１（８４０ｍＬ）、５：１（５２０ｍＬ）の順に段階的に行い、溶出液を８ｍＬごとに分画した。
【００７２】
（２）実施例２−（１）で得られたシリカフラクションの番号１１８から１３２を集めて濃縮乾固して黄色物質を得た。
【００７３】
（３）実施例２−（２）で得られた黄色物質のＮＭＲスペクトルと質量スペクトルを実施例１−（６）と同様の方法で測定した。以下にＮＭＲの帰属の信号を示す。なお、ピークの帰属の番号は以下の下記式（化１２）のとおりである。
【００７４】
【化１２】
【００７５】
１Ｈ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１．１８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），１．２８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），３．０７（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），３．８７（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３−４’），４．７２（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−３”），４．７８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｈ−２”），６．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−３およびＨ−５），７．５７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−２およびＨ−６），７．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，Ｈ−β），７．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−６’），７．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，Ｈ−α），１０．０２（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４）
図３に１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【００７６】
１３Ｃ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ２６．２（ＣＨ３−３”），２６．８（ＣＨ３−３”），２７．６（Ｃ−１”），５６．５（ＯＣＨ３−４’），７０．９（Ｃ−３”），９１．５（Ｃ−２”），１０５．２（Ｃ−５’），１１５．７（Ｃ−３’），１１６．０（Ｃ−１’），１１６．７（Ｃ−３およびＣ−５），１２３．８（Ｃ−α），１２７．０（Ｃ−１），１３１．０（Ｃ−２およびＣ−６），１３１．３（Ｃ−６’），１４２．７（Ｃ−β），１６０．５（Ｃ−４’），１６０．６（Ｃ−４），１６１．８（Ｃ−２’），１８６．５（Ｃ＝Ｏ）
図４に１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【００７７】
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ３５３（Ｍ−Ｈ）−メタニトロベンジルアルコールをマトリックスに用いた。
【００７８】
以上、ＮＭＲスペクトル、質量スペクトル解析の結果、実施例２−（２）で得られた黄色物質が１−［２，３−ｄｉｈｙｄｒｏ−２−（１−ｈｙｄｒｏｘｙ−１−ｍｅｔｈｙｌｅｔｈｙｌ）−４−ｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｏｆｕｒａｎ−７−ｙｌ］−３−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅ（分子量３５４、ＴＢ４）であることを確定した。
【００７９】
実施例３ ＴＢ５の調製
（１）実施例２−（１）で得られたシリカフラクションの番号３３５から３４９を集めて減圧濃縮後、逆相クロマトグラフィーを用いて分画した。樹脂はコスモシール１４０ Ｃ１８−ＯＰＮ（３０ｍＬ）を用いた。それぞれ２００ｍＬの１０％エタノール水溶液、１５％エタノール水溶液、２０％エタノール水溶液、２５％エタノール水溶液、３０％エタノール水溶液、５００ｍＬの３５％エタノール水溶液、２００ｍＬの７５％エタノール水溶液の順に溶出を行い、１００ｍＬごとに溶出液を分画した。
【００８０】
（２）実施例３−（１）で得られたフラクションの番号６、７を集めて濃縮乾固後、黄色物質を得た。
【００８１】
（３）実施例３−（２）で得られた黄色物質のＮＭＲスペクトルと質量スペクトルを実施例１−（６）と同様の方法で測定した。以下にＮＭＲの帰属の信号を示す。なお、ピークの帰属の番号は以下の下記式（化１３）のとおりである。
【００８２】
【化１３】
【００８３】
１Ｈ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ０．９６（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．０２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．１６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），１．６１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），１．７３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），１．８５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４”），２．１５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４”），３．０１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６”），３．２４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），３．３１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），４．００（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−７”），４．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＯＨ−６”），５．１９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−２”），６．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−３およびＨ−５），７．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，Ｈ−α），７．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，Ｈ−β），７．７５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−２およびＨ−６），８．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−６’），１０．１１（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４），１０．５５（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４’），１４．００（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−２’）
図５に１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【００８４】
１３Ｃ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１７．０（ＣＨ３−３”），２２．１（Ｃ−１”），２５．４（ＣＨ３−７”），２７．２（ＣＨ３−７”），３０．３（Ｃ−５”），３７．５（Ｃ−４”），７２．４（Ｃ−７”），７８．０（Ｃ−６”），１０８．２（Ｃ−５’），１１３．６（Ｃ−１’），１１５．４（Ｃ−３’），１１６．７（Ｃ−３およびＣ−５），１１８．３（Ｃ−α），１２２．４（Ｃ−２”），１２６．７（Ｃ−１），１３０．７（Ｃ−６’），１３２．０（Ｃ−２およびＣ−６），１３５．７（Ｃ−３”），１４５．０（Ｃ−β），１６１．１（Ｃ−４），１６３．２（Ｃ−４’），１６４．４（Ｃ−２’），１９２．６（Ｃ＝Ｏ）
図６に１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【００８５】
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４２５（Ｍ−Ｈ）−メタニトロベンジルアルコールをマトリックスに用いた。
【００８６】
以上、ＮＭＲスペクトル，質量スペクトル解析の結果、実施例３−（２）で得られた黄色物質が１−［２，４−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−３−（６，７−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−３，７−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｏｃｔｅｎｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ］−３−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅ（分子量４２６，ＴＢ５）であることを確定した。
【００８７】
実施例４ ＴＢ６の調製
（１）実施例２−（１）で得られたシリカフラクションの番号１４２から１６４を集めて濃縮乾固後、酢酸エチルに溶解した。続いてヘキサンによる再結晶を行い、生じた沈殿と上清とを分けた。
【００８８】
（２）実施例４−（１）で得られた上清の濃縮物をシリカゲル（１００ｍＬ）に吸着させた。溶出はヘキサン：酢酸エチル＝７：５の溶媒を用い、溶出液を８ｍＬごとに分画した。
【００８９】
（３）実施例４−（２）で得られたシリカフラクションの番号４１から５１を集めて濃縮乾固して黄色物質を得た。
【００９０】
（４）実施例４−（３）で得られた黄色物質のＮＭＲスペクトルと質量スペクトルを実施例１−（６）と同様の方法で測定した。以下にＮＭＲの帰属の信号を示す。なお、ピークの帰属の番号は以下の下記式（化１４）のとおりである。
【００９１】
【化１４】
【００９２】
１Ｈ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ０．９６（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），０．９９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３），１．０４（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．１５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），１．６０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），１．７２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），１．８９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４”），２．１３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４”），３．１８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６”），３．２４（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），３．２９（２Ｈ，ｍ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３），４．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＯＨ−６”），５．２０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２”），６．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−３およびＨ−５），７．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｈ−α），７．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｈ−β），７．７５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−２およびＨ−６），８．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−６’），１０．１１（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４），１０．５５（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４’），１４．００（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−２’）
図７に１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【００９３】
１３Ｃ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１７．０（ＣＨ３−３”），１７．０（−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３），２１．１（ＣＨ３−７”），２２．１（Ｃ−１”），２３．３（ＣＨ３−７”），２９．９（Ｃ−５”），３７．２（Ｃ−４”），５６．６（−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３），７５．１（Ｃ−６”），７７．５（Ｃ−７”），１０８．２（Ｃ−５’），１１３．６（Ｃ−１’），１１５．４（Ｃ−３’），１１６．７（Ｃ−３およびＣ−５），１１８．３（Ｃ−α），１２２．７（Ｃ−２”），１２６．７（Ｃ−１），１３０．６（Ｃ−６’），１３２．０（Ｃ−２およびＣ−６），１３５．５（Ｃ−３”），１４５．０（Ｃ−β），１６１．１（Ｃ−４），１６３．１（Ｃ−４’），１６４．４（Ｃ−２’），１９２．６（Ｃ＝Ｏ）
図８に１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【００９４】
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４５３（Ｍ−Ｈ）−メタニトロベンジルアルコールをマトリックスに用いた。
【００９５】
以上、ＮＭＲスペクトル、質量スペクトル解析の結果、実施例４−（３）で得られた黄色物質が１−［３−（７−ｅｔｈｏｘｙ−６−ｈｙｄｒｏｘｙ−３，７−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｏｃｔｅｎｙｌ）−２，４−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ］−３−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅ（分子量４５４、ＴＢ６）であることを確定した。
【００９６】
実施例５ ＴＢ７の調製
（１）実施例１−（４）で得られたフラクションの番号４から２２を減圧濃縮後、クロロホルムに溶解した。続いてヘキサンによる再結晶を行い、生じた沈殿と上清とを分けた。
【００９７】
（２）実施例５−（１）で得られた上清の濃縮物をシリカゲル（３５０ｍＬ）に吸着させた。溶出はクロロホルム：ヘキサンの溶媒比を１００：１（１５００ｍＬ）、５０：１（２６００ｍＬ）、２０：１（２６００ｍＬ）、酢酸エチル（３００ｍＬ）の順に段階的に行い、溶出液を８ｍＬごとに分画した。
【００９８】
（３）実施例５−（２）で得られたフラクションの２１から３０を集めて濃縮乾固して黄色物質を得た。
【００９９】
（４）実施例５−（３）で得られた黄色物質のＮＭＲスペクトルと質量スペクトルを実施例１−（６）と同様の方法で測定した。以下にＮＭＲの帰属の信号を示す。なお、ピークの帰属の番号は以下の下記式（化１５）のとおりである。
【０１００】
【化１５】
【０１０１】
１Ｈ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ０．９１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），０．９６（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．２１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），１．２６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４”），１．４３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４”），１．５３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），１．８５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），２．１２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−２”），２．５２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），２．５６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），３．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，Ｈ−６”），３．９１（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３−４’），６．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−３およびＨ−５），７．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，Ｈ−β），７．７８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−２およびＨ−６），７．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，Ｈ−α），８．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−６’），１０．１５（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４），１３．９９（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−２’）
図９に１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１０２】
１３Ｃ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１９．０（ＣＨ３−３”），２１．３（Ｃ−１”），２４．５（ＣＨ３−７”），２６．０（ＣＨ３−７”），２６．４（Ｃ−５”），３９．９（Ｃ−４”），４６．３（Ｃ−７”），５３．５（Ｃ−２”），５６．８（ＯＣＨ３−４’），８５．８（Ｃ−６”），８６．９（Ｃ−３”），１０３．７（Ｃ−５’），１１４．８（Ｃ−１’），１１６．７（Ｃ−３およびＣ−５），１１７．４（Ｃ−３’），１１８．２（Ｃ−α），１２６．６（Ｃ−１），１３１．３（Ｃ−６’），１３２．２（Ｃ−２およびＣ−６），１４５．７（Ｃ−β），１６１．３（Ｃ−４），１６３．５（Ｃ−２’），１６４．１（Ｃ−４’），１９３．４（Ｃ＝Ｏ）
図１０に１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１０３】
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４２１（Ｍ−Ｈ）−メタニトロベンジルアルコールをマトリックスに用いた。
【０１０４】
以上、ＮＭＲスペクトル、質量スペクトル解析の結果、実施例５−（３）で得られた黄色物質が１−［３−（２，５−ｅｐｏｘｙ−２，６，６−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｍｅｔｈｙｌ）−２−ｈｙｄｒｏｘｙ−４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ］−３−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅ（分子量４２２、ＴＢ７）であることを確定した。
【０１０５】
実施例６ ＴＢ８の調製
（１）実施例１−（３）で得られたシリカフラクションの番号１０から１５を集めて減圧濃縮後、クロロホルムに溶解した。続いてヘキサンによる再結晶を行い、生じた沈殿と上清とを分けた。
【０１０６】
（２）実施例６−（１）で得られた上清を減圧濃縮後、逆相クロマトグラフィーを用いて分画した。カラムはＴＳＫ ｇｅｌ ＯＤＳ−８０Ｔｓ（２１．５ｍｍ×３０ｃｍ：東ソー社製）を用いた。溶媒は蒸留水：アセトニトリル＝１５：８５、溶出速度は５ｍＬ／分、検出は２１５ｎｍで行った。溶出液の紫外線吸収を指標に溶出液を分画した。
【０１０７】
（３）実施例６−（２）で得られた逆相クロマトフラクション２（保持時間５７．６分の検出ピークを含むフラクション）を濃縮乾固して黄色物質を得た。
【０１０８】
（４）実施例６−（３）で得られた黄色物質のＮＭＲスペクトルと質量スペクトルを実施例１−（６）と同様の方法で測定した。以下にＮＭＲの帰属の信号を示す。なお、ピークの帰属の番号は以下の下記式（化１６）のとおりである。
【０１０９】
【化１６】
【０１１０】
１Ｈ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１．１９（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．１９（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．７０（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），２．６２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ−４”），３．２９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），３．３１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），３．９１（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３−４’），５．１９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２”），５．４７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），５．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，Ｈ−６”），６．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−３およびＨ−５），７．７８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−２およびＨ−６），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，Ｈ−β），７．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，Ｈ−α），８．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−６’），１０．１４（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４），１０．８１（１Ｈ，ｓ，ＯＯＨ−７”），１３．８１（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−２’）
図１１に１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１１１】
１３Ｃ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１６．８（ＣＨ３−３”），２２．１（Ｃ−１”），２５．５（ＣＨ３−７”），２５．５（ＣＨ３−７”），４３．０（Ｃ−４”），５６．９（ＯＣＨ３−４’），８１．１（Ｃ−７”），１０３．７（Ｃ−５’），１１４．９（Ｃ−１’），１１６．６（Ｃ−３’），１１６．７（Ｃ−３およびＣ−５），１１８．１（Ｃ−α），１２３．５（Ｃ−２”），１２６．５（Ｃ−１），１２７．９（Ｃ−５”），１３１．４（Ｃ−６’），１３２．３（Ｃ−２およびＣ−６），１３４．３（Ｃ−３”），１３７．０（Ｃ−６”），１４５．７（Ｃ−β），１６１．３（Ｃ−４），１６３．０（Ｃ−２’），１６３．９（Ｃ−４’），１９３．３（Ｃ＝Ｏ）
図１２に１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１１２】
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４３７（Ｍ−Ｈ）−メタニトロベンジルアルコールをマトリックスに用いた。
【０１１３】
以上、ＮＭＲスペクトル，質量スペクトル解析の結果、実施例６−（３）で得られた黄色物質が１−［２−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−（７−ｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｙ−３，７−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２，５−ｏｃｔａｄｉｅｎｙｌ）−４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ］−３−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅ（分子量４３８，ＴＢ８）であることを確定した。
【０１１４】
実施例７ ＴＢ９の調製
（１）実施例６−（２）で得られた逆相クロマトフラクション３（保持時間６１．２分の検出ピークを含むフラクション）を濃縮乾固して黄色物質を得た。
【０１１５】
（２）実施例７−（１）で得られた黄色物質のＮＭＲスペクトルと質量スペクトルを実施例１−（６）と同様の方法で測定した。以下にＮＭＲの帰属の信号を示す。なお、ピークの帰属の番号は以下の下記式（化１７）のとおりである。
【０１１６】
【化１７】
【０１１７】
１Ｈ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１．４０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），１．５６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），１．６２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．７２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），１．８９（２Ｈ，ｍ，Ｈ−４”），３．２７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），３．３１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），３．９１（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３−４’），４．０７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−６”），４．７９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８”），４．８４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８”），５．１４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ−２”），６．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−３およびＨ−５），７．７８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−２およびＨ−６），７．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−β），７．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−α），８．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−６’），１０．１５（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４），１１．２５（１Ｈ，ｓ，ＯＯＨ−６”），１３．８１（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−２’）
図１３に１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１１８】
１３Ｃ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１６．７（ＣＨ３−３”），１７．７（ＣＨ３−７”），２２．０（Ｃ−１”），２９．５（Ｃ−５”），３６．０（Ｃ−４”），５６．９（ＯＣＨ３−４’），８８．２（Ｃ−６”），１０３．６（Ｃ−５’），１１４．０（Ｃ−８”），１１４．９（Ｃ−１’），１１６．７（Ｃ−３’），１１６．７（Ｃ−３およびＣ−５），１１８．１（Ｃ−α），１２２．９（Ｃ−２”），１２６．５（Ｃ−１），１３１．３（Ｃ−６’），１３２．３（Ｃ−２およびＣ−６），１３４．９（Ｃ−３”），１４５．３（Ｃ−７”），１４５．７（Ｃ−β），１６１．３（Ｃ−４），１６３．０（Ｃ−２’），１６３．８（Ｃ−４’），１９３．３（Ｃ＝Ｏ）
図１４に１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１１９】
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４３７（Ｍ−Ｈ）−メタニトロベンジルアルコールをマトリックスに用いた。
【０１２０】
以上、ＮＭＲスペクトル，質量スペクトル解析の結果、実施例７−（１）で得られた黄色物質が１−［２−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−（６−ｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｙ−３，７−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２，７−ｏｃｔａｄｉｅｎｙｌ）−４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ］−３−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅ（分子量４３８，ＴＢ９）であることを確定した。
【０１２１】
実施例８ 化合物（Ｃ０８１）の調製
（１）実施例６−（３）で得られたＴＢ８ １００ｍｇをメタノール５０ｍＬに溶解し、トリフェニルホスフィン（東京化成工業社製：６０ｍｇ）を加え室温で１時間反応した。反応液を減圧濃縮し、クロロホルム：メタノール＝１０：１を展開溶媒とした薄層クロマトグラフィーに供した。次に、紫外線吸収部分をかきとり、展開溶媒で抽出後、濃縮乾固することにより、黄色物質５７．２ｍｇを得た。
【０１２２】
（２）実施例８−（１）で得られた黄色物質のＮＭＲスペクトルと質量スペクトルを実施例１−（６）と同様の方法で測定した。以下にＮＭＲの帰属の信号を示す。なお、ピークの帰属の番号は以下の式（化１８）のとおりである。
【０１２３】
【化１８】
【０１２４】
１Ｈ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１．１３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．１３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−７”），１．７０（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），２．５９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−４”），３．２８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−１”），３．９１（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３−４’），４．４２（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−７”），５．１７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−２”），５．４２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５”），５．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−６”），６．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−３およびＨ−５），７．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−β），７．７８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−２およびＨ−６），７．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−α），８．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−６’），１０．１７（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４），１３．８０（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−２’）
図１５に１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１２５】
１３Ｃ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ１６．８（ＣＨ３−３”），２２．１（Ｃ−１”），３１．０（ＣＨ３−７”），３１．０（ＣＨ３−７”），４２．７（Ｃ−４”），５６．９（ＯＣＨ３−４’），６９．７（Ｃ−７”），１０３．６（Ｃ−５’），１１４．９（Ｃ−１’），１１６．７（Ｃ−３’），１１６．７（Ｃ−３およびＣ−５），１１８．１（Ｃ−α），１２３．２（Ｃ−２”），１２３．９（Ｃ−５”），１２６．６（Ｃ−１），１３１．３（Ｃ−６’），１３２．３（Ｃ−２およびＣ−６），１３４．６（Ｃ−３”），１４１．５（Ｃ−６”），１４５．７（Ｃ−β），１６１．３（Ｃ−４），１６３．０（Ｃ−２’），１６３．８（Ｃ−４’），１９３．３（Ｃ＝Ｏ）
図１６に１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１２６】
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４２１（Ｍ−Ｈ）−メタニトロベンジルアルコールをマトリックスに用いた。
【０１２７】
以上、ＮＭＲスペクトル、質量スペクトル解析の結果、実施例８−（１）で得られた黄色物質が１−［２−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−（７−ｈｙｄｒｏｘｙ−３，７−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２，５−ｏｃｔａｄｉｅｎｙｌ）−４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ］−３−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅ（分子量４２２、化合物（Ｃ０８１））であることを確定した。
【０１２８】
実施例９ 化合物（Ｃ０４２）の調製
（１）２’，４’−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅ（和光純薬社製）を２Ｍ水酸化カリウムメタノール溶液中、氷冷下１−Ｂｒｏｍｏ−２−ｍｅｔｈｙｌ−２−ｂｕｔｅｎｅ（アルドリッチ社製）で処理した後、メタノール中、パラジウム黒（ナカライテスク社製）存在下、水素還元することで２’，４’−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−３’−（３−ｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｌ）ａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅを得た。続いて、２’，４’−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−３’−（３−ｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｌ）ａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅと４−Ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅ（アルドリッチ社製）とクライゼン縮合することにより、黄色物質を得た。
【０１２９】
（２）実施例９−（１）で得られた黄色物質のＮＭＲスペクトルと質量スペクトルを実施例１−（６）と同様の方法で測定した。以下にＮＭＲの帰属の信号を示す。なお、ピークの帰属の番号は以下の式（化１９）のとおりである。
【０１３０】
【化１９】
【０１３１】
１Ｈ−ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド）：δ０．９１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），０．９２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−３”），１．３４（２Ｈ，ｍ，Ｈ−２”），１．５４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３”），２．５５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１”），６．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−３およびＨ−５），７．７４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−２およびＨ−６），７．７４（２Ｈ，ｓ，Ｈ−α，Ｈ−β），８．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−６’），１０．１０（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４），１０．４６（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−４’）１３．９８（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−２’）
図１７に１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１３２】
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ３２７（Ｍ＋Ｈ）＋メタニトロベンジルアルコールをマトリックスに用いた。
【０１３３】
以上、ＮＭＲスペクトル、質量スペクトル解析の結果、実施例９−（１）で得られた黄色物質が１−［２，４−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−３−（３−ｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ］−３−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅ（分子量３２６、化合物（Ｃ０４２））であることを確定した。
【０１３４】
実施例１０ アルドースレダクターゼ阻害活性
実施例１〜９で調製した化合物（ＴＢ３、ＴＢ４、ＴＢ５、ＴＢ６、ＴＢ７、ＴＢ８、ＴＢ９、化合物（Ｃ０８１）又は化合物（Ｃ０４２））のアルドースレダクターゼ阻害活性を以下の方法により測定した。試料（各化合物を５０％ジメチルスルホキシド水溶液に溶解したもの）１０μＬ、０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．２）１００μＬ、１ｍＭ ＮＡＤＰＨ（リン酸緩衝液）２０μＬ、人筋肉細胞由来アルドースレダクターゼ溶液（０．１Ｕ／ｍＬ、和光純薬工業社製、リン酸緩衝液）１０μＬに１００ｍＭメチルグリオキサール２０μＬを加え、３０秒経過の後より１８０秒間、ＮＡＤＰＨの３４０ｎｍにおける吸光度の変化を測定した。陰性対照試料として試料の代わりに５０％ジメチルスルホキシド水溶液を使用した。また、各試料のブランクとしてメチルグリオキサール溶液の代わりに蒸留水を使用して吸光度を測定した。測定値は２回の実験値の平均値で示した。アルドースレダクターゼ阻害率（％）は以下の式により算出した。
阻害率（％）＝［１−（△Ａｓ−△Ａｓｂ）／（△Ａｃ−△Ａｃｂ）］×１００
ここで、△Ａｓ及び△Ａｃはそれぞれ試料溶液、陰性対照溶液の１分間あたりの吸光度変化を示し、△Ａｓｂ及び△Ａｃｂはそれぞれ試料溶液、陰性対照溶液のブランク溶液の１分間あたりの吸光度変化を示す。
試料の添加量は各化合物の最終濃度を表１に示す通りとした。その結果、ＴＢ３、ＴＢ４、ＴＢ５、ＴＢ６、ＴＢ７、ＴＢ８、ＴＢ９、化合物（Ｃ０８１）及び化合物（Ｃ０４２）に濃度依存的にアルドースレダクターゼ阻害活性のあることが明らかになった。表１にその結果を示す。
【０１３５】
【表１】
【０１３６】
実施例１１ ＮＯ産生抑制活性
実施例１〜９で調製した化合物（ＴＢ３、ＴＢ４、ＴＢ５、ＴＢ６、ＴＢ７、ＴＢ８、ＴＢ９、化合物（Ｃ０８１）及び化合物（Ｃ０４２））のＮＯ産生抑制活性を以下の方法により測定した。１０％ウシ胎児血清（バイオウィタカー社製、１４−５０６Ｆ）含有、ダルベッコ改良イーグル培地（シグマ社製、Ｄ５７９６）にＲＡＷ２６４．７細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ ７１）を４ｘ１０５個／ｍＬになるように懸濁し、４８穴マイクロタイタープレートのウェルに５００μＬずつ加えて５％炭酸ガス存在下、３７℃で培養した。２４時間後に、１０％ウシ胎児血清（バイオウィタカー社製）含有、フェノールレッド不含、２ｍＭ Ｌ−グルタミン（ライフテックオリエンタル社製、２５０３０−１４９）含有ダルベッコ改良イーグル培地（バイオウィタカー社製，１２−９１７Ｆ）に交換し、各ウェルにそれぞれ１μＬの１０ｍＭ、５ｍＭ、２．５ｍＭのＴＢ３、ＴＢ４、ＴＢ５、ＴＢ６、ＴＢ７、ＴＢ８、ＴＢ９、化合物（Ｃ０８１）又は化合物（Ｃ０４２）（いずれもジメチルスルホキシド溶液）を添加した。さらに１時間培養した後、各ウェルに５μＬの１００μｇ／ｍＬリポポリサッカライド（ＬＰＳ、シグマ社製、Ｌ−２０１０）水溶液を添加して１６時間培養した後、ＮＯが培地中で酸化されることによって生じるＮＯ２−濃度を測定した。なお、対照として各化合物の代わりにジメチルスルホキシドを添加した区分を設定した。上記培養後、１００μＬの培養上清に１００μＬの４％グリース試薬（シグマ社製、Ｇ４４１０）を加え、室温で１５分間放置した後、５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。既知の濃度のＮａＮＯ２（シグマ社製、Ｓ２２５２）で作製した検量線から培地中のＮＯ２−濃度を計算した。測定はすべて２連で行った。各化合物のＮＯ産生抑制能は以下の式に従い算出した。
Ｘ：各化合物存在下のＮＯ２−量
Ｙ：対照におけるＮＯ２−量
ＮＯ産生抑制能（％）＝［１−Ｘ／Ｙ］×１００
その結果、ＴＢ３、ＴＢ４、ＴＢ５、ＴＢ６、ＴＢ７、ＴＢ８、ＴＢ９、化合物（Ｃ０８１）及び化合物（Ｃ０４２）はＬＰＳによるＮＯ産生誘導を濃度依存的に抑制した。その結果を表２に示す。
【０１３７】
【表２】
【産業上の利用可能性】
【０１３８】
本発明により、新規なカルコン類化合物が提供される。当該化合物はそのＮＯ産生抑制作用又はアルドースレダクターゼ阻害作用を有しており、当該生理活性を利用した医薬、食品、飲料または飼料の有効成分として有用である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）〜（９）のいずれかで表されるカルコン類化合物、その誘導体又はそれらの塩。
【化１】
【化２】
【化３】
【化４】
【化５】
【化６】
【化７】
【化８】
【化９】
【請求項２】
請求項１記載の化合物、その誘導体又はそれらの塩を有効成分として含有することを特徴とする、当該化合物に感受性を示す疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項３】
該化合物に感受性を示す疾患が、治療又は予防に一酸化窒素産生抑制又はアルドースレダクターゼ阻害を要する疾患である請求項２記載の治療剤又は予防剤。
【請求項４】
請求項１記載の化合物、その誘導体又はそれらの塩を有効成分として含有することを特徴とする、一酸化窒素産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤。
【請求項５】
請求項１記載の化合物、その誘導体又はそれらの塩を含有することを特徴とする食品、飲料又は飼料。
【請求項６】
該化合物に感受性を示す疾患の治療用又は予防用である請求項５記載の食品、飲料又は飼料。
【請求項７】
該化合物に感受性を示す疾患が、治療又は予防に一酸化窒素産生抑制又はアルドースレダクターゼ阻害を要する疾患である請求項６記載の食品、飲料又は飼料。
【請求項１】
下記式（１）〜（９）のいずれかで表されるカルコン類化合物、その誘導体又はそれらの塩。
【化１】
【化２】
【化３】
【化４】
【化５】
【化６】
【化７】
【化８】
【化９】
【請求項２】
請求項１記載の化合物、その誘導体又はそれらの塩を有効成分として含有することを特徴とする、当該化合物に感受性を示す疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項３】
該化合物に感受性を示す疾患が、治療又は予防に一酸化窒素産生抑制又はアルドースレダクターゼ阻害を要する疾患である請求項２記載の治療剤又は予防剤。
【請求項４】
請求項１記載の化合物、その誘導体又はそれらの塩を有効成分として含有することを特徴とする、一酸化窒素産生抑制剤又はアルドースレダクターゼ阻害剤。
【請求項５】
請求項１記載の化合物、その誘導体又はそれらの塩を含有することを特徴とする食品、飲料又は飼料。
【請求項６】
該化合物に感受性を示す疾患の治療用又は予防用である請求項５記載の食品、飲料又は飼料。
【請求項７】
該化合物に感受性を示す疾患が、治療又は予防に一酸化窒素産生抑制又はアルドースレダクターゼ阻害を要する疾患である請求項６記載の食品、飲料又は飼料。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０５４１７０
【国際公開日】平成１７年６月１６日（２００５．６．１６）
【発行日】平成１９年１２月６日（２００７．１２．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５１５９５０（Ｐ２００５−５１５９５０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１７８８７
【国際出願日】平成１６年１２月１日（２００４．１２．１）
【出願人】（３０２０１９２４５）タカラバイオ株式会社 (115)
【Ｆターム（参考）】
【国際公開日】平成１７年６月１６日（２００５．６．１６）
【発行日】平成１９年１２月６日（２００７．１２．６）
【国際特許分類】
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１７８８７
【国際出願日】平成１６年１２月１日（２００４．１２．１）
【出願人】（３０２０１９２４５）タカラバイオ株式会社 (115)
【Ｆターム（参考）】
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