皮膚外用剤
【目的】ファニスラマ（Ｃａｌｅａ ｕｒｔｉｃｉｆｏｌｉａ）の抽出物を含有する皮膚外用剤、美白剤、抗酸化剤、ヒアルロン酸産生促進剤及びヒアルロニダーゼ阻害剤を提供する。
【構成】本発明のファニスラマ（Ｃａｌｅａ ｕｒｔｉｃｉｆｏｌｉａ）の抽出物は、優れたメラニン生成抑制作用、抗酸化作用、ヒアルロン酸産生促進作用及びヒアルロニダーゼ阻害作用を有し、安定性にも優れていた。よって、本発明のファニスラマの抽出物を含有する皮膚外用剤は、老化防止用皮膚外用剤あるいは美白用皮膚外用剤として有効である。
【構成】本発明のファニスラマ（Ｃａｌｅａ ｕｒｔｉｃｉｆｏｌｉａ）の抽出物は、優れたメラニン生成抑制作用、抗酸化作用、ヒアルロン酸産生促進作用及びヒアルロニダーゼ阻害作用を有し、安定性にも優れていた。よって、本発明のファニスラマの抽出物を含有する皮膚外用剤は、老化防止用皮膚外用剤あるいは美白用皮膚外用剤として有効である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な老化防止と美白作用に優れた皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、生体成分を酸化させる要因として、フリーラジカルや活性酸素がとりあげられ、その悪影響が問題となっている。フリーラジカルや活性酸素は、生体内で生じ、コラーゲン等の生体組織を分解あるいは架橋し、また、油脂類を酸化して、細胞に障害を与える過酸化脂質をつくると言われている。この様な障害は、肌のシワやハリが低下する等の老化の原因になると考えられており、老化を防ぐ方法の一つにフリーラジカルや活性酸素を除去する抗酸化剤を配合する方法が知られている。従来、老化防止を目的として用いられるフリーラジカル消去剤にはアスコルビン酸（ビタミンＣ）、トコフェロール（ビタミンＥ）、３，５−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）等が用いられてきた（特許文献１、２参照）。
【０００３】
皮膚は、表皮、真皮、皮下組織からなるが、中でも真皮は皮膚の構造維持に極めて重要であり、線維芽細胞およびマトリックス成分からなっている。線維芽細胞はコラーゲンなどのタンパク質およびヒアルロン酸などのグリコサミノグリカンを産生して真皮結合組織を形成し、皮膚のハリを保っている。この結合組織が収縮力を失い、さらに弾力性を失う結果として皮膚のシワやタルミが発生すると考えられている。
【０００４】
特にヒアルロン酸は結合組織に広く分布する高分子多糖体として知られており、皮膚中の水分を大量に保持し、ゲル状の形態を呈している。従って、ヒアルロン酸の変質や減少が皮膚老化において重要であると考えられている。また、ヒアルロン酸は高分子であるため、それを配合した化粧料を皮膚に直接塗布しても吸収されにくいという問題があった。そこで、これまで、線維芽細胞を活性化することで、細胞自らのコラーゲンやヒアルロン酸の合成を促進させることができる皮膚外用剤が模索されてきた（特許文献３参照）。
【０００５】
また、炎症時に活性化されるヒアルロニダーゼは、高分子のヒアルロン酸を低分子化することにより、皮膚のハリを低下させてシワ等の老化を引き起こすことが知られている。この皮膚のシワやタルミを防ぐ方法の一つに、ヒアルロニダーゼ阻害剤を配合することが知られている（特許文献４、５参照）。
【０００６】
一般にシミ、ソバカス、日焼け等に見られる皮膚の色素沈着は、ホルモンの異常や紫外線の刺激により、皮膚内に存在するメラニン色素生成細胞がメラニン色素を過剰に生成し、これが皮膚内に沈着することが原因と考えられている。このような色素沈着を防ぐ方法の一つに、メラニンの過剰な生成を抑制する方法が知られている。従来、色素沈着の治療にはハイドロキノンやアスコルビン酸（ビタミンＣ）等を外用する処置が行われてきた。
【０００７】
しかしながら、これらの抗酸化効果、ヒアルロン酸産生促進効果、ヒアルロニダーゼ阻害効果及びメラニン生成抑制効果を有する植物由来の天然原料として、本発明に用いたファニスラマは検討されていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開昭６１−３０５１０号
【特許文献２】特開昭６２−１９５１１号
【特許文献３】特開２００７−１９２４号
【特許文献４】特開平０２−１１５２０号
【特許文献５】特開平０６−８０５５３号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
皮膚の老化防止又は抗酸化を目的として用いられるＳＯＤは不安定であり、製剤化が難しく、トコフェロールも効果が充分であるとは言えない。また、合成化合物であるＢＨＴ等は安定性に問題があり、配合量に制限があることから、化学合成品ではなく、安定でかつ副作用の少ない天然原料が望まれている。同様に、天然物由来で安定なヒアルロニダーゼ阻害作用やヒアルロン酸産生促進作用を有することが老化防止に好ましい。また、美白剤及び抗酸化剤として用いられるアスコルビン酸は経時的に分解しやすい等の欠点があるため、同様に安定性が高く、効果の優れた天然物由来の皮膚外用剤が望まれている。
【００１０】
以上のことから、安定性に優れた天然物由来の老化防止及び美白作用に優れた皮膚外用剤が望まれている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
このような事情により、本発明者らは鋭意検討した結果、ファニスラマより得られた抽出物が優れた抗酸化作用、ヒアルロン酸産生促進作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用及びメラニン生成抑制作用をもち、安定性についても優れていることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、ファニスラマの抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤、美白剤、抗酸化剤、ヒアルロン酸産生促進剤及びヒアルロニダーゼ阻害剤である。
【発明の効果】
【００１２】
本発明のファニスラマの抽出物は、優れた抗酸化作用、ヒアルロン酸産生促進作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用及びメラニン生成抑制作用を有し、安定性にも優れていた。よって、本発明のファニスラマの抽出物を含有する皮膚外用剤は、老化防止用皮膚外用剤あるいは美白用皮膚外用剤として特に有効である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明に用いるファニスラマ（学名：Ｃａｌｅａ ｕｒｔｉｃｉｆｏｌｉａ）は、主に中南米に生息するキク科の植物である。この植物は、自生しているものや、栽培されているものを用いることができる。
【００１４】
本発明に用いるファニスラマの抽出物とは、ファニスラマの葉、枝、樹皮、花、果実、種子、根等の植物体の一部又は全草から抽出したものである。その抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温抽出したものであっても良い。本発明のファニスラマの抽出物は、ファニスラマ植物体の全部あるいは任意の部位から抽出して得ることができるが、特に全草から抽出されたものが好ましい。
【００１５】
抽出する溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１‐プロパノール、２‐プロパノール、１‐ブタノール、２‐ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３‐ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、流動パラフィン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級アルコール及び液状多価アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３‐ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。
【００１６】
上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈及び濾過処理、活性炭等による脱色、脱臭処理等をして用いても良い。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。
【００１７】
本発明の皮膚外用剤には、上記抽出物をそのまま使用しても良く、効果を損なわない範囲内で、外用剤に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤等の成分を配合することができる。
【００１８】
本発明の皮膚外用剤は、化粧品、医薬部外品、医薬品のいずれにも用いることができ、その剤形としては、例えば、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤等の皮膚に適用されるものが挙げられる。
【００１９】
本発明に用いる上記抽出物の配合量は、本発明の皮膚外用剤に対し、固形物に換算して０．０００００１重量％以上、好ましくは０．００００１〜１０重量％の配合が良い。０．０００００１重量％未満では十分な効果は望みにくい。１０重量％を越えて配合した場合、効果の増強は認められにくく不経済である。また、添加の方法については、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【００２０】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量の部とは重量部を、％とは重量％を示す。
【実施例１】
【００２１】
製造例１ ファニスラマの熱水抽出物
ファニスラマの全草の乾燥物２５ｇに精製水５００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してファニスラマの熱水抽出物を４．９ｇ得た。
【００２２】
製造例２ ファニスラマの５０％エタノール抽出物
ファニスラマの全草の乾燥物２５ｇに５０％エタノール５００ｍＬを加え、常温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ファニスラマの５０％エタノール抽出物を４．５ｇ得た。
【００２３】
製造例３ ファニスラマのエタノール抽出物
ファニスラマの全草の乾燥物２５ｇにエタノール５００ｍＬを加え、常温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ファニスラマのエタノール抽出物を０．７ｇ得た。
【００２４】
製造例４ ファニスラマの５０％１，３‐ブチレングリコール抽出物
ファニスラマの全草の乾燥物２５ｇに５０％１，３‐ブチレングリコール５００ｍＬを加え、常温で３日間抽出した後、濾過し、ファニスラマの５０％１，３‐ブチレングリコール抽出物を４５０ｇ得た。
【実施例２】
【００２５】
処方例１ 化粧水
処方 配合量(部)
１．ファニスラマの熱水抽出物（製造例１） １．０
２．１，３‐ブチレングリコール ８．０
３．グリセリン ２．０
４．キサンタンガム ０．０２
５．クエン酸 ０．０１
６．クエン酸ナトリウム ０．１
７．エタノール ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．） ０．１
１０．香料 適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００２６】
処方例２ クリーム
処方 配合量(部)
１．ファニスラマの５０％エタノール抽出物（製造例２） ０．５
２．スクワラン ５．５
３．オリーブ油 ３．０
４．ステアリン酸 ２．０
５．ミツロウ ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ベヘニルアルコール １．５
９．モノステアリン酸グリセリン ２．５
１０．香料 ０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１２．パラオキシ安息香酸エチル ０．０５
１３．１，３‐ブチレングリコール ８．５
１４．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２７】
処方例３ 乳液
処方 配合量(部)
１．ファニスラマの熱水抽出物（製造例１） ０．００１
２．スクワラン ５．０
３．オリーブ油 ５．０
４．ホホバ油 ５．０
５．セタノール １．５
６．モノステアリン酸グリセリン ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．） ２．０
９．香料 ０．１
１０．プロピレングリコール １．０
１１．グリセリン ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２８】
処方例４ ゲル剤
処方 配合量(部)
１．ファニスラマの熱水抽出物（製造例１） １．０
２．エタノール ５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．） ０．１
５．香料 適量
６．１，３‐ブチレングリコール ５．０
７．グリセリン ５．０
８．キサンタンガム ０．１
９．カルボキシビニルポリマー ０．２
１０．水酸化カリウム ０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜５と、成分１及び６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【００２９】
処方例５ パック
処方 配合量(部)
１．ファニスラマの熱水抽出物（製造例１） ０．１
２．ファニスラマの５０％エタノール抽出物（製造例２） ０．１
３．ポリビニルアルコール １２．０
４．エタノール ５．０
５．１，３‐ブチレングリコール ８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．） ０．５
８．クエン酸 ０．１
９．クエン酸ナトリウム ０．３
１０．香料 適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。
【００３０】
処方例６ ファンデーション
処方 配合量(部)
１．ファニスラマのエタノール抽出物（製造例３） １．０
２．ステアリン酸 ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．） １．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ２．０
５．セタノール １．０
６．液状ラノリン ２．０
７．流動パラフィン ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル ６．５
９．カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．１
１０．ベントナイト ０．５
１１．プロピレングリコール ４．０
１２．トリエタノールアミン １．１
１３．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１４．二酸化チタン ８．０
１５．タルク ４．０
１６．ベンガラ １．０
１７．黄酸化鉄 ２．０
１８．香料 適量
１９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分１９に成分９をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１０〜１３を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１４〜１７を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この水相に油相をかき混ぜながら加え、冷却し、４５℃で成分１８を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３１】
処方例７ 浴用剤
処方 配合量(部)
１．ファニスラマの熱水抽出物（製造例１） ５．０
２．炭酸水素ナトリウム ５０．０
３．黄色２０２号（１） 適量
４．香料 適量
５．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５を均一に混合し製品とする。
【００３２】
処方例８ 軟膏
処方 配合量(部)
１．ファニスラマの熱水抽出物（製造例１） ０．０１
２．ファニスラマの５０％１，３‐ブチレングリコール抽出物
（製造例４） ０．５
３．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．） ２．０
４．モノステアリン酸グリセリン １０．０
５．流動パラフィン ５．０
６．セタノール ６．０
７．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
８．プロピレングリコール １０．０
９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分３〜６を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１、２及び７〜９を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３３】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【実施例３】
【００３４】
実験例１ フリーラジカル消去作用
フリーラジカル消去作用の評価を行った。フリーラジカルのモデルとしては、安定なフリーラジカルであるα，α‐ジフェニル‐β‐ピクリルヒドラジル（以下ＤＰＰＨとする）を用い、試料と一定の割合で一定時間反応させ、減少するラジカルの量を波長５１７ｎｍの吸光度の減少量から求めた。
【００３５】
フリーラジカル消去作用の測定方法
試料は、製造例１〜３に記載の抽出物を用いた。
各試料を、最終濃度０．１ｍｇ／ｍＬとなるように加えた０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）２ｍＬに無水エタノール２ｍＬ及び０．５ｍＭ ＤＰＰＨ無水エタノール溶液１ｍＬを加えて反応液とした。また、油溶性の試料の場合は無水エタノール２ｍＬに試料を加えて反応液とした。その後、３７℃で３０分間反応させ、水を対照として波長５１７ｎｍの吸光度（Ａ）を測定した。また、ブランクとして試料の代わりに精製水を用いて吸光度（Ｂ）を測定した。フリーラジカル消去率は、以下に示す式より算出した。
フリーラジカル消去率（％）＝（１−Ａ／Ｂ）×１００
【００３６】
これらの試験結果を表１に示した。本発明のファニスラマの抽出物は、フリーラジカル消去作用による優れた抗酸化作用を示した。その効果は熱水、５０％エタノール及びエタノール抽出物の全てにおいて高かった。
【００３７】
【表１】
【００３８】
実験例２ Ｂ１６マウスメラノーマを用いたメラニン生成抑制試験
試料は、製造例１〜３に記載の抽出物を用いた。
対数増殖期にあるＢ１６マウスメラノーマをφ６０ｍｍｄｉｓｈに３×１０４個の細胞を播種し、最終濃度０．１及び０．０１μｇ／ｍＬの試料を含むＥａｇｌｅｓ’ＭＥＭ（１０％牛胎児血清含有）培地を加え、３７℃、５％ＣＯ２の条件下にて培養した。培養５日後に細胞をｄｉｓｈから剥離し、細胞を超音波破砕した後、４ＮＮａＯＨを加え６０℃で２時間の処理を行い、分光光度計でＯ．Ｄ．４７５ｎｍを測定した。尚、超音波処理後の細胞破砕液をＬｏｗｒｙの方法（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９３，２６５‐２７５，１９５１）でタンパク定量し、タンパク量当りのメラニン量を比較することによって、メラニン生成抑制効果の指標とした。
【００３９】
これらの試験結果を表２に示した。本発明のファニスラマの抽出物は、メラニンの生成を抑制することにより、優れた美白効果を示した。特にエタノール抽出物に優れた美白効果が認められた。
【００４０】
【表２】
【００４１】
実験例３ ヒアルロン酸合成酵素ＩＩ ｍＲＮＡ発現量の測定
試料は、製造例１〜３に記載の抽出物を用いた。
ヒト線維芽細胞ＮＢ１ＲＧＢを６０ｍｍ ｄｉｓｈに１×１０５個播種し、コンフルエントになった時点で、１μｇ／ｍＬの試料を添加した。コントロールには、試料を希釈した溶媒を添加した。２４時間培養後、総ＲＮＡの抽出を行った。細胞からの総ＲＮＡの抽出はＴＲＩＺＯＬ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法には、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ３ Ｐｌａｔｉｎｕｍ Ｔｗｏ−Ｓｔｅｐ ｑＲＴ−ＰＣＲ Ｋｉｔ ｗｉｔｈ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いた。すなわち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：３０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。その他の操作は定められた方法に従い、ヒアルロン酸合成酵素ＩＩ ｍＲＮＡの発現量を、内部標準であるβ―ａｃｔｉｎ ｍＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。ヒアルロン酸合成酵素発現促進効果は、コントロールのヒアルロン酸合成酵素ＩＩ ｍＲＮＡの発現量に対する試料添加群のヒアルロン酸合成酵素ＩＩ ｍＲＮＡの発現量の比率として算出した。尚、各遺伝子の発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。
【００４２】
ヒアルロン酸合成酵素ＩＩ用のプライマーセット
ＴＧＧＡＴＧＡＣＣＴＡＣＧＡＡＧＣＧＡＴＴＡ（配列番号１）
ＧＣＴＧＧＡＴＴＡＣＴＧＴＧＧＣＡＡＴＧＡＧ（配列番号２）
β―Ａｃｔｉｎ用のプライマーセット
ＣＡＣＴＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣ（配列番号３）
ＧＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＣＡＧＧＴＣＴＴＴＧ（配列番号４）
【００４３】
これらの実験結果を表３に示した。その結果、本発明のファニスラマの抽出物には、優れたヒアルロン酸合成酵素発現促進効果が認められた。従って、ファニスラマの抽出物は、ヒアルロン酸の産生を促進することによる優れた老化防止効果を示した。その効果は熱水、５０％エタノール及びエタノール抽出物の全てにおいて高かった。
【００４４】
【表３】
【００４５】
実験例４ ヒアルロニダーゼ阻害試験
試料は、製造例１〜３に記載の抽出物を用いた。
試験はＭｏｒｇａｎ‐Ｅｌｓｏｎ法を応用した方法〔食品衛生学雑誌，３１，３（１９９０）〕に準じて行った。最終濃度１．０ｍｇ／ｍＬの試料液に０．１Ｍ酢酸バッファ（ｐＨ４．０）１７５μＬを加え、さらにヒアルロニダーゼの酵素活性を２５０Ｕ／ｍＬ、ヒアルロン酸の濃度を０．４ｍｇ／ｍＬ、活性化剤のコンパウンド４８／８０を０．０８ｍｇ／ｍＬになるようにして全量を５００μＬに調整した後、ヒアルロニダーゼ反応を３７℃で４０分間実施した。反応後にｐ‐ジメチルアミノベンズアルデヒド試薬を加えて発色させ、５８５ｎｍにおける吸光度を測定した。また、各試料の阻害作用は、次の式から求められる阻害率で算出した。なお、対照には試料液の代わりに精製水を用い、ブランクとしてヒアルロニダーゼの代わりに０．１Ｍ酢酸バッファ（ｐＨ４．０）を用いた。
阻害率（％）＝〔１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）〕×１００
Ａ：対照の５８５ｎｍにおける吸光度（Ｏ．Ｄ．５８５）
Ｂ：対照ブランクのＯ．Ｄ．５８５
Ｃ：試料のＯ．Ｄ．５８５
Ｄ：試料ブランクのＯ．Ｄ．５８５
【００４６】
これらの実験結果を表４に示した。本発明のファニスラマの抽出物には、優れたヒアルロニダーゼ阻害効果が認められた。従って、ファニスラマの抽出物は、ヒアルロニダーゼの活性を抑えることによるヒアルロン酸の分解を抑制することにより、優れた老化防止効果を示した。特に熱水抽出物に高い効果が認められた。
【００４７】
【表４】
【産業上の利用可能性】
【００４８】
以上のことから、ファニスラマの抽出物は、優れた抗酸化作用、ヒアルロン酸産生促進作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用及びメラニン生成抑制作用を有し、安定性にも優れていた。よって、本発明のファニスラマの抽出物を含有する皮膚外用剤は、老化防止用皮膚外用剤あるいは美白用皮膚外用剤として特に有効である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な老化防止と美白作用に優れた皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、生体成分を酸化させる要因として、フリーラジカルや活性酸素がとりあげられ、その悪影響が問題となっている。フリーラジカルや活性酸素は、生体内で生じ、コラーゲン等の生体組織を分解あるいは架橋し、また、油脂類を酸化して、細胞に障害を与える過酸化脂質をつくると言われている。この様な障害は、肌のシワやハリが低下する等の老化の原因になると考えられており、老化を防ぐ方法の一つにフリーラジカルや活性酸素を除去する抗酸化剤を配合する方法が知られている。従来、老化防止を目的として用いられるフリーラジカル消去剤にはアスコルビン酸（ビタミンＣ）、トコフェロール（ビタミンＥ）、３，５−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）等が用いられてきた（特許文献１、２参照）。
【０００３】
皮膚は、表皮、真皮、皮下組織からなるが、中でも真皮は皮膚の構造維持に極めて重要であり、線維芽細胞およびマトリックス成分からなっている。線維芽細胞はコラーゲンなどのタンパク質およびヒアルロン酸などのグリコサミノグリカンを産生して真皮結合組織を形成し、皮膚のハリを保っている。この結合組織が収縮力を失い、さらに弾力性を失う結果として皮膚のシワやタルミが発生すると考えられている。
【０００４】
特にヒアルロン酸は結合組織に広く分布する高分子多糖体として知られており、皮膚中の水分を大量に保持し、ゲル状の形態を呈している。従って、ヒアルロン酸の変質や減少が皮膚老化において重要であると考えられている。また、ヒアルロン酸は高分子であるため、それを配合した化粧料を皮膚に直接塗布しても吸収されにくいという問題があった。そこで、これまで、線維芽細胞を活性化することで、細胞自らのコラーゲンやヒアルロン酸の合成を促進させることができる皮膚外用剤が模索されてきた（特許文献３参照）。
【０００５】
また、炎症時に活性化されるヒアルロニダーゼは、高分子のヒアルロン酸を低分子化することにより、皮膚のハリを低下させてシワ等の老化を引き起こすことが知られている。この皮膚のシワやタルミを防ぐ方法の一つに、ヒアルロニダーゼ阻害剤を配合することが知られている（特許文献４、５参照）。
【０００６】
一般にシミ、ソバカス、日焼け等に見られる皮膚の色素沈着は、ホルモンの異常や紫外線の刺激により、皮膚内に存在するメラニン色素生成細胞がメラニン色素を過剰に生成し、これが皮膚内に沈着することが原因と考えられている。このような色素沈着を防ぐ方法の一つに、メラニンの過剰な生成を抑制する方法が知られている。従来、色素沈着の治療にはハイドロキノンやアスコルビン酸（ビタミンＣ）等を外用する処置が行われてきた。
【０００７】
しかしながら、これらの抗酸化効果、ヒアルロン酸産生促進効果、ヒアルロニダーゼ阻害効果及びメラニン生成抑制効果を有する植物由来の天然原料として、本発明に用いたファニスラマは検討されていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開昭６１−３０５１０号
【特許文献２】特開昭６２−１９５１１号
【特許文献３】特開２００７−１９２４号
【特許文献４】特開平０２−１１５２０号
【特許文献５】特開平０６−８０５５３号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
皮膚の老化防止又は抗酸化を目的として用いられるＳＯＤは不安定であり、製剤化が難しく、トコフェロールも効果が充分であるとは言えない。また、合成化合物であるＢＨＴ等は安定性に問題があり、配合量に制限があることから、化学合成品ではなく、安定でかつ副作用の少ない天然原料が望まれている。同様に、天然物由来で安定なヒアルロニダーゼ阻害作用やヒアルロン酸産生促進作用を有することが老化防止に好ましい。また、美白剤及び抗酸化剤として用いられるアスコルビン酸は経時的に分解しやすい等の欠点があるため、同様に安定性が高く、効果の優れた天然物由来の皮膚外用剤が望まれている。
【００１０】
以上のことから、安定性に優れた天然物由来の老化防止及び美白作用に優れた皮膚外用剤が望まれている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
このような事情により、本発明者らは鋭意検討した結果、ファニスラマより得られた抽出物が優れた抗酸化作用、ヒアルロン酸産生促進作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用及びメラニン生成抑制作用をもち、安定性についても優れていることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、ファニスラマの抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤、美白剤、抗酸化剤、ヒアルロン酸産生促進剤及びヒアルロニダーゼ阻害剤である。
【発明の効果】
【００１２】
本発明のファニスラマの抽出物は、優れた抗酸化作用、ヒアルロン酸産生促進作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用及びメラニン生成抑制作用を有し、安定性にも優れていた。よって、本発明のファニスラマの抽出物を含有する皮膚外用剤は、老化防止用皮膚外用剤あるいは美白用皮膚外用剤として特に有効である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明に用いるファニスラマ（学名：Ｃａｌｅａ ｕｒｔｉｃｉｆｏｌｉａ）は、主に中南米に生息するキク科の植物である。この植物は、自生しているものや、栽培されているものを用いることができる。
【００１４】
本発明に用いるファニスラマの抽出物とは、ファニスラマの葉、枝、樹皮、花、果実、種子、根等の植物体の一部又は全草から抽出したものである。その抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温抽出したものであっても良い。本発明のファニスラマの抽出物は、ファニスラマ植物体の全部あるいは任意の部位から抽出して得ることができるが、特に全草から抽出されたものが好ましい。
【００１５】
抽出する溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１‐プロパノール、２‐プロパノール、１‐ブタノール、２‐ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３‐ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、流動パラフィン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級アルコール及び液状多価アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３‐ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。
【００１６】
上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈及び濾過処理、活性炭等による脱色、脱臭処理等をして用いても良い。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。
【００１７】
本発明の皮膚外用剤には、上記抽出物をそのまま使用しても良く、効果を損なわない範囲内で、外用剤に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤等の成分を配合することができる。
【００１８】
本発明の皮膚外用剤は、化粧品、医薬部外品、医薬品のいずれにも用いることができ、その剤形としては、例えば、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤等の皮膚に適用されるものが挙げられる。
【００１９】
本発明に用いる上記抽出物の配合量は、本発明の皮膚外用剤に対し、固形物に換算して０．０００００１重量％以上、好ましくは０．００００１〜１０重量％の配合が良い。０．０００００１重量％未満では十分な効果は望みにくい。１０重量％を越えて配合した場合、効果の増強は認められにくく不経済である。また、添加の方法については、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【００２０】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量の部とは重量部を、％とは重量％を示す。
【実施例１】
【００２１】
製造例１ ファニスラマの熱水抽出物
ファニスラマの全草の乾燥物２５ｇに精製水５００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してファニスラマの熱水抽出物を４．９ｇ得た。
【００２２】
製造例２ ファニスラマの５０％エタノール抽出物
ファニスラマの全草の乾燥物２５ｇに５０％エタノール５００ｍＬを加え、常温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ファニスラマの５０％エタノール抽出物を４．５ｇ得た。
【００２３】
製造例３ ファニスラマのエタノール抽出物
ファニスラマの全草の乾燥物２５ｇにエタノール５００ｍＬを加え、常温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ファニスラマのエタノール抽出物を０．７ｇ得た。
【００２４】
製造例４ ファニスラマの５０％１，３‐ブチレングリコール抽出物
ファニスラマの全草の乾燥物２５ｇに５０％１，３‐ブチレングリコール５００ｍＬを加え、常温で３日間抽出した後、濾過し、ファニスラマの５０％１，３‐ブチレングリコール抽出物を４５０ｇ得た。
【実施例２】
【００２５】
処方例１ 化粧水
処方 配合量(部)
１．ファニスラマの熱水抽出物（製造例１） １．０
２．１，３‐ブチレングリコール ８．０
３．グリセリン ２．０
４．キサンタンガム ０．０２
５．クエン酸 ０．０１
６．クエン酸ナトリウム ０．１
７．エタノール ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．） ０．１
１０．香料 適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００２６】
処方例２ クリーム
処方 配合量(部)
１．ファニスラマの５０％エタノール抽出物（製造例２） ０．５
２．スクワラン ５．５
３．オリーブ油 ３．０
４．ステアリン酸 ２．０
５．ミツロウ ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ベヘニルアルコール １．５
９．モノステアリン酸グリセリン ２．５
１０．香料 ０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１２．パラオキシ安息香酸エチル ０．０５
１３．１，３‐ブチレングリコール ８．５
１４．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２７】
処方例３ 乳液
処方 配合量(部)
１．ファニスラマの熱水抽出物（製造例１） ０．００１
２．スクワラン ５．０
３．オリーブ油 ５．０
４．ホホバ油 ５．０
５．セタノール １．５
６．モノステアリン酸グリセリン ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．） ２．０
９．香料 ０．１
１０．プロピレングリコール １．０
１１．グリセリン ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２８】
処方例４ ゲル剤
処方 配合量(部)
１．ファニスラマの熱水抽出物（製造例１） １．０
２．エタノール ５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．） ０．１
５．香料 適量
６．１，３‐ブチレングリコール ５．０
７．グリセリン ５．０
８．キサンタンガム ０．１
９．カルボキシビニルポリマー ０．２
１０．水酸化カリウム ０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜５と、成分１及び６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【００２９】
処方例５ パック
処方 配合量(部)
１．ファニスラマの熱水抽出物（製造例１） ０．１
２．ファニスラマの５０％エタノール抽出物（製造例２） ０．１
３．ポリビニルアルコール １２．０
４．エタノール ５．０
５．１，３‐ブチレングリコール ８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．） ０．５
８．クエン酸 ０．１
９．クエン酸ナトリウム ０．３
１０．香料 適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。
【００３０】
処方例６ ファンデーション
処方 配合量(部)
１．ファニスラマのエタノール抽出物（製造例３） １．０
２．ステアリン酸 ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．） １．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ２．０
５．セタノール １．０
６．液状ラノリン ２．０
７．流動パラフィン ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル ６．５
９．カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．１
１０．ベントナイト ０．５
１１．プロピレングリコール ４．０
１２．トリエタノールアミン １．１
１３．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１４．二酸化チタン ８．０
１５．タルク ４．０
１６．ベンガラ １．０
１７．黄酸化鉄 ２．０
１８．香料 適量
１９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分１９に成分９をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１０〜１３を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１４〜１７を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この水相に油相をかき混ぜながら加え、冷却し、４５℃で成分１８を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３１】
処方例７ 浴用剤
処方 配合量(部)
１．ファニスラマの熱水抽出物（製造例１） ５．０
２．炭酸水素ナトリウム ５０．０
３．黄色２０２号（１） 適量
４．香料 適量
５．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５を均一に混合し製品とする。
【００３２】
処方例８ 軟膏
処方 配合量(部)
１．ファニスラマの熱水抽出物（製造例１） ０．０１
２．ファニスラマの５０％１，３‐ブチレングリコール抽出物
（製造例４） ０．５
３．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．） ２．０
４．モノステアリン酸グリセリン １０．０
５．流動パラフィン ５．０
６．セタノール ６．０
７．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
８．プロピレングリコール １０．０
９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分３〜６を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１、２及び７〜９を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３３】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【実施例３】
【００３４】
実験例１ フリーラジカル消去作用
フリーラジカル消去作用の評価を行った。フリーラジカルのモデルとしては、安定なフリーラジカルであるα，α‐ジフェニル‐β‐ピクリルヒドラジル（以下ＤＰＰＨとする）を用い、試料と一定の割合で一定時間反応させ、減少するラジカルの量を波長５１７ｎｍの吸光度の減少量から求めた。
【００３５】
フリーラジカル消去作用の測定方法
試料は、製造例１〜３に記載の抽出物を用いた。
各試料を、最終濃度０．１ｍｇ／ｍＬとなるように加えた０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）２ｍＬに無水エタノール２ｍＬ及び０．５ｍＭ ＤＰＰＨ無水エタノール溶液１ｍＬを加えて反応液とした。また、油溶性の試料の場合は無水エタノール２ｍＬに試料を加えて反応液とした。その後、３７℃で３０分間反応させ、水を対照として波長５１７ｎｍの吸光度（Ａ）を測定した。また、ブランクとして試料の代わりに精製水を用いて吸光度（Ｂ）を測定した。フリーラジカル消去率は、以下に示す式より算出した。
フリーラジカル消去率（％）＝（１−Ａ／Ｂ）×１００
【００３６】
これらの試験結果を表１に示した。本発明のファニスラマの抽出物は、フリーラジカル消去作用による優れた抗酸化作用を示した。その効果は熱水、５０％エタノール及びエタノール抽出物の全てにおいて高かった。
【００３７】
【表１】
【００３８】
実験例２ Ｂ１６マウスメラノーマを用いたメラニン生成抑制試験
試料は、製造例１〜３に記載の抽出物を用いた。
対数増殖期にあるＢ１６マウスメラノーマをφ６０ｍｍｄｉｓｈに３×１０４個の細胞を播種し、最終濃度０．１及び０．０１μｇ／ｍＬの試料を含むＥａｇｌｅｓ’ＭＥＭ（１０％牛胎児血清含有）培地を加え、３７℃、５％ＣＯ２の条件下にて培養した。培養５日後に細胞をｄｉｓｈから剥離し、細胞を超音波破砕した後、４ＮＮａＯＨを加え６０℃で２時間の処理を行い、分光光度計でＯ．Ｄ．４７５ｎｍを測定した。尚、超音波処理後の細胞破砕液をＬｏｗｒｙの方法（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９３，２６５‐２７５，１９５１）でタンパク定量し、タンパク量当りのメラニン量を比較することによって、メラニン生成抑制効果の指標とした。
【００３９】
これらの試験結果を表２に示した。本発明のファニスラマの抽出物は、メラニンの生成を抑制することにより、優れた美白効果を示した。特にエタノール抽出物に優れた美白効果が認められた。
【００４０】
【表２】
【００４１】
実験例３ ヒアルロン酸合成酵素ＩＩ ｍＲＮＡ発現量の測定
試料は、製造例１〜３に記載の抽出物を用いた。
ヒト線維芽細胞ＮＢ１ＲＧＢを６０ｍｍ ｄｉｓｈに１×１０５個播種し、コンフルエントになった時点で、１μｇ／ｍＬの試料を添加した。コントロールには、試料を希釈した溶媒を添加した。２４時間培養後、総ＲＮＡの抽出を行った。細胞からの総ＲＮＡの抽出はＴＲＩＺＯＬ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法には、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ３ Ｐｌａｔｉｎｕｍ Ｔｗｏ−Ｓｔｅｐ ｑＲＴ−ＰＣＲ Ｋｉｔ ｗｉｔｈ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いた。すなわち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：３０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。その他の操作は定められた方法に従い、ヒアルロン酸合成酵素ＩＩ ｍＲＮＡの発現量を、内部標準であるβ―ａｃｔｉｎ ｍＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。ヒアルロン酸合成酵素発現促進効果は、コントロールのヒアルロン酸合成酵素ＩＩ ｍＲＮＡの発現量に対する試料添加群のヒアルロン酸合成酵素ＩＩ ｍＲＮＡの発現量の比率として算出した。尚、各遺伝子の発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。
【００４２】
ヒアルロン酸合成酵素ＩＩ用のプライマーセット
ＴＧＧＡＴＧＡＣＣＴＡＣＧＡＡＧＣＧＡＴＴＡ（配列番号１）
ＧＣＴＧＧＡＴＴＡＣＴＧＴＧＧＣＡＡＴＧＡＧ（配列番号２）
β―Ａｃｔｉｎ用のプライマーセット
ＣＡＣＴＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣ（配列番号３）
ＧＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＣＡＧＧＴＣＴＴＴＧ（配列番号４）
【００４３】
これらの実験結果を表３に示した。その結果、本発明のファニスラマの抽出物には、優れたヒアルロン酸合成酵素発現促進効果が認められた。従って、ファニスラマの抽出物は、ヒアルロン酸の産生を促進することによる優れた老化防止効果を示した。その効果は熱水、５０％エタノール及びエタノール抽出物の全てにおいて高かった。
【００４４】
【表３】
【００４５】
実験例４ ヒアルロニダーゼ阻害試験
試料は、製造例１〜３に記載の抽出物を用いた。
試験はＭｏｒｇａｎ‐Ｅｌｓｏｎ法を応用した方法〔食品衛生学雑誌，３１，３（１９９０）〕に準じて行った。最終濃度１．０ｍｇ／ｍＬの試料液に０．１Ｍ酢酸バッファ（ｐＨ４．０）１７５μＬを加え、さらにヒアルロニダーゼの酵素活性を２５０Ｕ／ｍＬ、ヒアルロン酸の濃度を０．４ｍｇ／ｍＬ、活性化剤のコンパウンド４８／８０を０．０８ｍｇ／ｍＬになるようにして全量を５００μＬに調整した後、ヒアルロニダーゼ反応を３７℃で４０分間実施した。反応後にｐ‐ジメチルアミノベンズアルデヒド試薬を加えて発色させ、５８５ｎｍにおける吸光度を測定した。また、各試料の阻害作用は、次の式から求められる阻害率で算出した。なお、対照には試料液の代わりに精製水を用い、ブランクとしてヒアルロニダーゼの代わりに０．１Ｍ酢酸バッファ（ｐＨ４．０）を用いた。
阻害率（％）＝〔１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）〕×１００
Ａ：対照の５８５ｎｍにおける吸光度（Ｏ．Ｄ．５８５）
Ｂ：対照ブランクのＯ．Ｄ．５８５
Ｃ：試料のＯ．Ｄ．５８５
Ｄ：試料ブランクのＯ．Ｄ．５８５
【００４６】
これらの実験結果を表４に示した。本発明のファニスラマの抽出物には、優れたヒアルロニダーゼ阻害効果が認められた。従って、ファニスラマの抽出物は、ヒアルロニダーゼの活性を抑えることによるヒアルロン酸の分解を抑制することにより、優れた老化防止効果を示した。特に熱水抽出物に高い効果が認められた。
【００４７】
【表４】
【産業上の利用可能性】
【００４８】
以上のことから、ファニスラマの抽出物は、優れた抗酸化作用、ヒアルロン酸産生促進作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用及びメラニン生成抑制作用を有し、安定性にも優れていた。よって、本発明のファニスラマの抽出物を含有する皮膚外用剤は、老化防止用皮膚外用剤あるいは美白用皮膚外用剤として特に有効である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ファニスラマの抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項２】
ファニスラマの抽出物を含有することを特徴とする美白剤。
【請求項３】
ファニスラマの抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
【請求項４】
ファニスラマの抽出物を含有することを特徴とするヒアルロン酸産生促進剤。
【請求項５】
ファニスラマの抽出物を含有することを特徴とするヒアルロニダーゼ阻害剤。
【請求項１】
ファニスラマの抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項２】
ファニスラマの抽出物を含有することを特徴とする美白剤。
【請求項３】
ファニスラマの抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
【請求項４】
ファニスラマの抽出物を含有することを特徴とするヒアルロン酸産生促進剤。
【請求項５】
ファニスラマの抽出物を含有することを特徴とするヒアルロニダーゼ阻害剤。
【公開番号】特開２０１１−１１６６６９（Ｐ２０１１−１１６６６９Ａ）
【公開日】平成２３年６月１６日（２０１１．６．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２７３００９（Ｐ２００９−２７３００９）
【出願日】平成２１年１２月１日（２００９．１２．１）
【出願人】（５９２２６２５４３）日本メナード化粧品株式会社 (223)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年６月１６日（２０１１．６．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１２月１日（２００９．１２．１）
【出願人】（５９２２６２５４３）日本メナード化粧品株式会社 (223)
【Ｆターム（参考）】
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