細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤
【課題】 本発明は、優れた細胞賦活作用、美白作用、抗酸化作用、アミラーゼ阻害作用、及び保湿作用などを有する有効成分を見出し、皮膚外用剤や飲食品などの分野に幅広く応用が可能な細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤を提供することを目的とする。
【解決手段】 優れた細胞賦活作用、美白作用、抗酸化作用、アミラーゼ阻害作用、及び保湿作用等を有するエラエアギナス・ラティフォリア抽出物を細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤として用いる。また、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を皮膚外用剤や食品等の組成物に配合することにより、シワ、タルミ、肌のハリ、シミ、クスミといった種々の皮膚症状や糖尿病、肥満症、動脈硬化症等の血糖値上昇が原因となる疾患の予防・改善に優れた効果を発揮する様々な組成物を提供することができる。
【解決手段】 優れた細胞賦活作用、美白作用、抗酸化作用、アミラーゼ阻害作用、及び保湿作用等を有するエラエアギナス・ラティフォリア抽出物を細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤として用いる。また、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を皮膚外用剤や食品等の組成物に配合することにより、シワ、タルミ、肌のハリ、シミ、クスミといった種々の皮膚症状や糖尿病、肥満症、動脈硬化症等の血糖値上昇が原因となる疾患の予防・改善に優れた効果を発揮する様々な組成物を提供することができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤に関する。さらに詳しくは、エラエアギナス・ラティフォリア（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）を有効成分とすることを特徴とする細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然由来成分は、様々な薬理作用や美容効果を有することが知られ、これまでにも数多くの植物や菌類などが皮膚外用剤や飲食品などの分野に幅広く応用されている。特に、シワ、シミ、クスミ、皮膚の弾性低下といった皮膚症状の予防・改善のために、細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤などの様々な有効成分の検索及び配合検討が従来なされている。また、飲食品の分野においても、血糖上昇を抑制することによって糖尿病、肥満症、動脈硬化症等を予防・改善するために、アミラーゼ阻害剤として様々な有効成分の検討がなされている。これまでに知られている細胞賦活剤としては、ポンカンのエッセンス（特許文献１参照）、美白剤としては、白鶴霊芝の水および／または有機溶媒抽出物（特許文献２参照）、抗酸化剤としては、キク科へテロテカ属植物抽出物（特許文献３参照）、アミラーゼ阻害剤としては、月桂樹葉の親水性溶媒抽出物質（特許文献４参照）が知られている。
【０００３】
【特許文献１】特開２００１−１３１０４５号公報
【特許文献２】特開２００３−８９６３０号公報
【特許文献３】特開平１１−１８０８８６号公報
【特許文献４】特開平４−２７３８９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
上記の通り、天然由来成分は様々な薬理作用や美容効果を有することが知られているが、天然由来成分の中には未だその効果が知られていないものも数多く存在し、優れた細胞賦活作用、美白作用、アミラーゼ阻害作用などを有する有効成分の開発が期待されていた。本発明は、このような有効成分を見出すためになされたものであり、皮膚外用剤や飲食品などの分野に幅広く応用が可能な細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、皮膚外用剤や飲食品などの分野に幅広く応用が可能な細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤を見出すために、天然由来の種々の物質について検討を行った。その結果、エラエアギナス・ラティフォリア（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）の抽出物に優れた細胞賦活作用、美白作用、抗酸化作用、アミラーゼ阻害作用、及び保湿作用を見出し、さらに検討を重ね、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、エラエアギナス・ラティフォリア（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）の抽出物を有効成分とする細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、優れた効果を有する細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤を提供することができ、これらを皮膚外用剤や食品等の組成物に配合することにより、シワ、タルミ、肌のハリ、シミ、クスミといった種々の皮膚症状や糖尿病、肥満症、動脈硬化症等の予防・改善に優れた効果を発揮する組成物を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明の原料として用いられる植物は、グミ科グミ属の植物であるエラエアギナス・ラティフォリア（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）を用いる。使用する際は、そのまま乾燥・粉砕して使用することもできるが、通常は抽出物を用いるとよい。抽出には、植物の幹、枝、葉、花、実、樹皮、樹液、根、茎、芽などのいずれの部位を用いても構わないが、葉や実を用いるのが簡便であり、有効性の点からは実を用いるとよい。抽出の際は、生のまま用いてもよいが、抽出効率を考えると、細切、乾燥、粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。抽出は、抽出溶媒に浸漬するか、超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法でも行うことができる。抽出効率を上げるため、撹拌や抽出溶媒中でホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
【０００８】
抽出溶媒としては、水の他、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール、１、３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール、エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル類、アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類などの溶媒を用いることができ、これらより１種又は２種以上を選択して用いる。また、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニアなどの１種又は２種以上の超臨界流体や亜臨界流体を用いてもよい。
【０００９】
エラエアギナス・ラティフォリアの上記溶媒による抽出物は、そのままでも使用することができるが、濃縮、乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解して使用することもでき、これらの生理作用を損なわない範囲で脱色、脱臭、脱塩等の精製処理やカラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。また、その処理物及び分画物は、各処理及び分画後に凍結乾燥し、用時に溶媒に溶解して用いることもできる。
【００１０】
このようにして得られるエラエアギナス・ラティフォリアの抽出物は、優れた細胞賦活作用、美白作用、抗酸化作用、アミラーゼ阻害作用、及び保湿作用を有し、細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤として利用することができる。また、エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を有効成分とする細胞賦活剤、美白剤、抗酸化、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤は、皮膚や毛髪に外用することができ、経口摂取も可能である。このため、エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を有効成分とする細胞賦活剤、美白剤、抗酸化、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤は、皮膚外用剤、食品、飲料として、医薬品、医薬部外品、化粧品などの様々な分野の製品に応用することが可能である。
【００１１】
エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を有効成分とする細胞賦活剤は、種々の細胞に対して優れた賦活作用を発揮するが、特に真皮線維芽細胞と表皮細胞に対して優れた効果を発揮する。
【００１２】
エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を有効成分とする美白剤は、シミ・ソバカスといった色素沈着症状の改善に効果を発揮し、特にメラニンの産生抑制に対して優れた効果を発揮する。
【００１３】
エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を有効成分とする抗酸化剤は、優れた抗酸化作用を発揮するが、特にＤＰＰＨラジカル消去作用やスーパーオキサイドアニオンの消去作用に優れた効果を発揮する。
【００１４】
エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を有効成分とするアミラーゼ阻害剤は、優れたアミラーゼ阻害作用を発揮するが、特にα−アミラーゼの阻害作用に優れた効果を発揮する。
【００１５】
また、エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を皮膚外用剤に配合することにより、シワ、タルミ、肌のハリ、シミ、クスミ、乾燥、小じわ等の皮膚症状の防止・改善に優れた効果を発揮する皮膚外用剤を得ることができ、老化防止改善用皮膚外用剤、細胞賦活用皮膚外用剤、抗酸化用皮膚外用剤、あるいは美白用皮膚外用剤としても用いることができる。さらに、エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物は、糖尿病、肥満症、動脈硬化症等の予防・改善や一般的な健康維持や栄養補給を目的とするような医薬品、食品、及び飲料にも用いることもできる。
【００１６】
エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を皮膚外用剤や食品などの組成物に配合する際の配合量は、種類や使用目的等によって調整することができるが、効果や安定性などの点から、全量に対して０．０００１〜５０．０重量％が好ましく、より好ましくは、０．００１〜２５．０重量％である。
【００１７】
エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を配合する組成物の剤型は任意であり、皮膚外用剤，洗浄剤，浴用剤などの場合には、ローションなどの可溶化系，乳液などの乳化系，カラミンローションなどの分散系，噴射剤と共に充填したエアゾール，軟膏剤，粉末，顆粒などの種々の剤型として提供することができる。また、組成物が経口用医薬品や食品の場合には、ドリンク剤・点滴剤などの液剤，ガム・飴のような固形剤，カプセル，粉末，顆粒，錠剤などの一般的な剤型とすることができる。
【００１８】
なお、エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を配合する組成物には、エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物の他に、必要に応じて、通常医薬品，医薬部外品，皮膚化粧料，浴用剤，洗浄剤，食品などに配合される油性成分，保湿剤，粉体，色素，乳化剤，可溶化剤，洗浄剤，紫外線吸収剤，増粘剤，薬剤，香料，樹脂，アルコール類，栄養強化物質，調味料などを適宜配合することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲において、他の細胞賦活剤、美白剤、抗酸化、アミラーゼ阻害剤との併用も可能である。
【実施例】
【００１９】
以下に、エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物の製造例、各作用を評価するための試験、皮膚外用剤や食品としての処方例、使用試験についてさらに詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれによって何ら限定されるものではない。
【００２０】
［製造例１］
エラエアギナス・ラティフォリアの実の乾燥粉砕物１ｋｇに５０重量％エタノール水溶液を４０リットル加え、室温で２時間攪拌した。抽出液をろ過して回収し、再度同様の抽出を行った後、溶媒を除去してエラエアギナス・ラティフォリア抽出物を得た。
【００２１】
［製造例２］
エラエアギナス・ラティフォリアの実の乾燥粉砕物１ｋｇに水を２０リットル加え、９０℃にて１時間還流して抽出した。抽出液をろ過して回収し、溶媒を除去した後、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を得た。
【００２２】
［製造例３］
エラエアギナス・ラティフォリアの葉の乾燥粉砕物１ｋｇにメタノールを９リットル加え、室温で７日間浸漬した。抽出液をろ過して回収し、溶媒を除去した後、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を得た。
【００２３】
［製造例４］
超臨界抽出装置にエラエアギナス・ラティフォリアの実を投入し、４０℃において１５ＭＰａの気圧下で二酸化炭素の超臨界流体を用いて抽出した。抽出物を回収し、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を得た。
【００２４】
まず、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物の真皮線維芽細胞の賦活作用について示す。試料には、エラエアギナス・ラティフォリアの実を製造例１に従って抽出したものを試料１とし、製造例２に従って抽出したものを試料２として評価を行った。
【００２５】
評価は、以下の手順で行った。正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当たり２．０×１０４個となるように９６穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１％のウシ胎児血清を添加したものを用いた。２４時間培養後、任意の濃度の試料を添加した試験培地に交換し、さらに４８時間培養した。次いで３−(４，５−ジメチル−２−チアゾリル)−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を４００μｇ／ｍＬ含有する培地に交換して２時間培養し、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価結果を、試料無添加のブランクにおける細胞賦活作用を１００とした相対値にて表１に示す。なお、表中の*及び**は、ｔ検定における有意確率Ｐ値に対し、有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を*で、有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を**で表したものである（以下の表においても同様とする）。
【００２６】
【表１】
【００２７】
表１より明らかなように、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を添加した培地では、有意な真皮線維芽細胞賦活作用が認められた。特に、試料１，２を０．０６ｍｇ／ｍＬ添加した場合には、ブランクと比較して、危険率１％未満で有意な真皮線維芽細胞賦活作用が認められた。このことから、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物は、優れた真皮線維芽細胞賦活作用を有することが明らかとなった。
【００２８】
次に、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物の表皮細胞の賦活作用について示す。
【００２９】
評価は、以下の手順で行った。正常ヒト表皮細胞を１ウェル当たり２．０×１０４個となるように９６穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、市販のクラボウ社製Ｈｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２を用いた。２４時間培養後、試料を添加した試験培地に交換し、さらに２４時間培養した。次いで３−(４,５−ジメチル−２−チアゾリル)−２,５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を１００μｇ／ｍＬ含有する培地に交換して２時間培養し、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価結果を、細胞賦活剤が無添加の場合の細胞賦活作用を１００とした場合の相対値にて表２に示す。
【００３０】
【表２】
【００３１】
表２より明らかなように、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を添加した培地では、有意な表皮細胞賦活作用が認められた。特に、試料を０．２５ｍｇ／ｍＬ添加した場合には、ブランクと比較して、危険率１％未満で有意な表皮細胞賦活作用が認められた。このことから、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物は、優れた表皮細胞賦活作用を有することが明らかとなった。
【００３２】
次に、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物のメラニン産生抑制作用の評価を示す。
【００３３】
評価は、以下の手順で行った。Ｂ１６マウスメラノーマＦ０ストレイン（Ｂ１６Ｆ０）細胞を３５ｍｍディッシュに１ディッシュあたり２０００個にて播種した。２４時間培養後、任意の濃度の試料を添加した５重量％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）添加ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に交換した。７日間培養後、０．２５％トリプシンを用いて細胞を回収し、１．５ｍＬマイクロチューブに移して遠心操作して細胞沈殿物を得た。さらに、試料を添加した培地の代わりに、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５重量％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を添加したものをブランクとし、同様に目視判定を行った。また、目視判定は、表３に示す通り、５段階評価によって行った。表４に判定の結果を示した。
【００３４】
【表３】
【００３５】
【表４】
【００３６】
表４より明らかなように、試料１を０．１ｍｇ／ｍＬ、試料２を１．０ｍｇ／ｍＬ添加した場合には、全く黒化は認められなかった。このことから、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物は、優れたメラニン産生抑制作用を有することが明らかとなった。
【００３７】
次に、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物の抗酸化作用について示す。
【００３８】
評価は、以下の手順で行った。５０重量％エタノール水溶液にて任意の濃度に希釈した試料溶液を９６穴マイクロプレートに１００μＬ添加した。次に、０．２ｍＭの濃度になるようにエタノールにて調製した１、１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）溶液を９６穴マイクロプレートに１００μＬ添加した。攪拌しながら暗所に放置し、２４時間後に５１６ｎｍの吸光度を測定した。試料が無添加のブランクの吸光度を（Ａ）、試料を添加したときの吸光度を（Ｂ）としたとき、式（１）の値をラジカル消去率とした。評価結果を表４に示した。
式（１） ｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００（％）
【００３９】
【表５】
【００４０】
表５より明らかなように、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を添加した場合には、高いラジカル消去率を示した。このことから、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物は、優れたラジカル消去に基づく抗酸化作用を有することが分かった。
【００４１】
次に、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物のアミラーゼ阻害作用について示す。
【００４２】
評価は、以下の手順で行った。２％デンプン溶液（０．１Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液ｐＨ７．０）１ｍＬに同じ緩衝液で溶解した試料溶液１ｍＬを添加し、３７℃で５分間インキュベーションした。α−アミラーゼ（豚膵臓由来，ＳＩＧＭＡ社製）溶液を０．１ｍＬ（１０Ｕｎｉｔｓ）加え、３７℃で６０分間インキュベーションした。その後、発色液（０．０１Ｎヨウ素液）１ｍＬを添加後、蒸留水にて２０倍希釈し、６６０ｎｍの吸光度を測定した。緩衝液のみを添加した場合の吸光度を（Ａ）、試料溶液を添加した場合の吸光度を（Ｂ）としたとき、以下の式を用いてアミラーゼ阻害率を算出した。それぞれの評価結果を表６に示す。
アミラーゼ阻害率（％）＝［１−（Ｂ）／（Ａ）］×１００
【００４３】
【表６】
【００４４】
表６より明らかなように、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物はα−アミラーゼ阻害作用に基づいて、優れたアミラーゼ阻害作用を有することが明らかとなった。
【００４５】
続いて、本発明に係るエラエアギナス・ラティフォリア抽出物を配合した皮膚外用剤及び食品の処方例を示す。
【００４６】
［処方例１］乳液
（１）スクワラン １０．０（重量％）
（２）メチルフェニルポリシロキサン ４．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）モノステアリン酸ポリオキシエチレン
ソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン １．０
（７）グリセリン ４．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）カルボキシビニルポリマー ０．１５
（10）精製水 １００とする残余
（11）アルギニン（１重量％水溶液） ２０．０
（12）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例１］ ５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、冷却を開始し、（11）と（12）を順次加え、均一に混合する。
【００４７】
［処方例２］化粧水
（１）エタノール １５．０（重量％）
（２）ポリオキシエチレン（４０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油 ０．３
（３）香料 ０．１
（４）精製水 １００とする残余
（５）クエン酸 ０．０２
（６）クエン酸ナトリウム ０．１
（７）グリセリン １．０
（８）ヒドロキシエチルセルロース ０．１
（９）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例３］ ５．０
製法：（１）に（２）及び（３）を溶解する。溶解後、（４）〜（８）を順次添加した後、十分に攪拌し、（９）を加え、均一に混合する。
【００４８】
［処方例３］クリーム
（１）スクワラン １０．０（重量％）
（２）ステアリン酸 ２．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）セタノール ３．６
（６）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（７）グリセリン １０．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）アルギニン（２０重量％水溶液） １５．０
（10）精製水 １００とする残余
（11）カルボキシビニルポリマー（１重量％水溶液） １５．０
（12）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例１］ １．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、（11）を加え、冷却を開始し、４０℃にて（12）を加え、均一に混合する。
【００４９】
［処方例４］美容液
（１）精製水 １００とする残余(重量％)
（２）グリセリン １０．０
（３）ショ糖脂肪酸エステル １．３
（４）カルボキシビニルポリマー（１重量％水溶液） １７．５
（５）アルギン酸ナトリウム(１重量％水溶液) １５．０
（６）モノラウリン酸ポリグリセリル １．０
（７）マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル ３．０
（８）N-ラウロイル-L-グルタミン酸
ジ（フィトステリル−２−オクチルドデシル） ２．０
（９）硬化パーム油 ２．０
（10）スクワラン（オリーブ由来） １．０
（11）ベヘニルアルコール ０．７５
（12）ミツロウ １．０
（13）ホホバ油 １．０
（14）１、３−ブチレングリコール １０．０
（15）Ｌ−アルギニン（１０重量％水溶液） ２．０
（16）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例１］ ５．０
製法：（１）〜（６）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（14）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化を行った後、ホモミキサーにて均一に乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、５０℃にて（15）を加える。さらに４０℃まで冷却し、（16）を加え、均一に混合する。
【００５０】
［処方例５］水性ジェル
（１）カルボキシビニルポリマー ０．５（重量％）
（２）精製水 １００とする残余
（３）水酸化ナトリウム（１０重量％水溶液） ０．５
（４）エタノール １０．０
（５）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（６）香料 ０．１
（７）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例４］ ２．０
（８）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油 ０．１
製法：（１）を（２）に加え、均一に攪拌した後、（３）を加える。均一に攪拌した後、（４）に予め溶解した（５）を加える。均一に攪拌した後、予め混合しておいた（６）〜（８）を加え、均一に攪拌混合する。
【００５１】
［処方例６］クレンジング料
（１）スクワラン ８１．０（重量％）
（２）イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル １５．０
（３）精製水 ３．０
（４）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例４］ １．０
製法：（１）と（２）を均一に溶解する。これに、（３）と（４）を順次加え、均一に混合する。
【００５２】
［処方例７］洗顔フォーム
（１）ステアリン酸 １６．０（重量％）
（２）ミリスチン酸 １６．０
（３）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（４）グリセリン ２０．０
（５）水酸化ナトリウム ７．５
（６）ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン １．０
（７）精製水 １００とする残余
（８）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例３］ １．０
製法：（１）〜（４）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（５）〜（７）の水相成分を８０℃にて加熱溶解し、油相成分と均一に混合撹拌する。冷却を開始し、４０℃にて（８）を加え、均一に混合する。
【００５３】
［処方例８］メイクアップベースクリーム
（１）スクワラン １０．０(重量％)
（２）セタノール ２．０
（３）グリセリントリ−２−エチルヘキサン酸エステル ２．５
（４）親油型モノステアリン酸グリセリル １．０
（５）プロピレングリコール １１．０
（６）ショ糖脂肪酸エステル １．３
（７）精製水 １００とする残余
（８）酸化チタン １．０
（９）ベンガラ ０．１
（10）黄酸化鉄 ０．４
（11）香料 ０．１
（12）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例２］ １．２
製法：（１）〜（４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（５）〜（７）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（８）〜（10）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（11）と（12）の成分を加え、均一に混合する。
【００５４】
［処方例９］乳液状ファンデーション
（１）メチルポリシロキサン ２．０(重量％)
（２）スクワラン ５．０
（３）ミリスチン酸オクチルドデシル ５．０
（４）セタノール １．０
（５）ポリオキシエチレン(２０Ｅ．Ｏ．)
ソルビタンモノステアリン酸エステル １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン ０．７
（７）１、３−ブチレングリコール ８．０
（８）キサンタンガム ０．１
（９）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（10）精製水 １００とする残余
（11）酸化チタン ９．０
（12）タルク ７．４
（13）ベンガラ ０．５
（14）黄酸化鉄 １．１
（15）黒酸化鉄 ０．１
（16）香料 ０．１
（17）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例４］ １．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（10）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（11）〜（15）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散する。油相成分を加え、乳化を行う。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（16）と（17）の成分を順次加え、均一に混合する。
【００５５】
［処方例１０］油中水型エモリエントクリーム
（１）流動パラフィン ３０．０(重量％)
（２）マイクロクリスタリンワックス ２．０
（３）ワセリン ５．０
（４）ジグリセリンオレイン酸エステル ５．０
（５）塩化ナトリウム １．３
（６）塩化カリウム ０．１
（７）プロピレングリコール ３．０
（８）１、３−ブチレングリコール ５．０
（９）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（10）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例１］ １．０
（11）精製水 １００とする残余
（12）香料 ０．１
製法：（５）と（６）を（11）の一部に溶解して５０℃とし、５０℃に加熱した（４）に撹拌しながら徐々に加える。これを混合した後、７０℃にて加熱溶解した（１）〜（３）に均一に分散する。これに（７）〜（10）を（11）の残部に７０℃にて加熱溶解したものを撹拌しながら加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（12）を加え、均一に混合する。
【００５６】
［処方例１１］パック
（１）精製水 １００とする残余(重量％)
（２）ポリビニルアルコール １２．０
（３）エタノール １７．０
（４）グリセリン ５．０
（５）ポリエチレングリコール（平均分子量１０００） ２．０
（６）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例２］ ５．０
（７）香料 ０．１
製法：（２）と（３）を混合し、８０℃に加温した後、８０℃に加温した（１）に溶解する。均一に溶解した後、（４）と（５）を加え、攪拌しながら冷却を開始する。４０℃まで冷却し、（６）と（７）を加え、均一に混合する。
【００５７】
［処方例１２］入浴剤
（１）香料 ０．３(重量％)
（２）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例１］ １．０
（３）炭酸水素ナトリウム ５０．０
（４）硫酸ナトリウム １００とする残余
製法：（１）〜（４）を均一に混合する。
【００５８】
［処方例１３］ヘアーワックス
（１）ステアリン酸 ３．０(重量％)
（２）マイクロクリスタリンワックス ２．０
（３）セチルアルコール ３．０
（４）高重合メチルポリシロキサン ２．０
（５）メチルポリシロキサン ５．０
（６）ポリ（オキシエチレン・オキシプロピレン）
メチルポリシロキサン共重合体 １．０
（７）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（８）１、３−ブチレングリコール ７．５
（９）アルギニン ０．７
（10）精製水 １００とする残余
（11）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例１］ ２．０
（12）香料 ０．１
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解後する。一方、（７）〜（10）の水相成分を７５℃にて加熱溶解し、前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（11）と（12）の成分を加え、均一に混合する。
【００５９】
［処方例１４］ヘアートニック
（１）エタノール ５０．０(重量％)
（２）精製水 １００とする残余
（３）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例３］ １．０
（４）香料 ０．１
製法：（１）〜（４）の成分を混合、均一化する。
【００６０】
［処方例１５］飲料
（１）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例１］ ８．０(重量％)
（２）エリスリトール １．０
（３）クエン酸 ０．１
（４）ステビア ０．０１
（５）精製水 １００とする残余
製法：（１）〜（５）を均一に混合する。
【００６１】
次に、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を配合した処方を用いて使用試験を行い、乾燥による肌荒れについて改善効果を評価した。その際、処方例１に示した乳液の処方に表７に記載するエラエアギナス・ラティフォリア抽出物をそれぞれ配合し、実施例１〜５として使用試験を行った。また、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を精製水に代替し、比較例１として同時に使用試験を行った。
【００６２】
【表７】
【００６３】
各試料について、肌荒れ症状が顕著に認められる３０〜５０才代の乾燥肌の女性パネラー２０名をそれぞれ一群とし、ブラインドにて１週間使用させ、使用前後の皮膚状態の変化を観察して評価した。皮膚症状の指標として、乾燥による肌荒れについて、「改善」、「やや改善」、「変化なし」の三段階で評価し、表８に各評価を得たパネラー数にて示した。
【００６４】
【表８】
【００６５】
表８より、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を含有しない比較例使用群においては、６割以上のパネラーに改善は認められなかったが、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を配合した実施例使用群においては、６割以上のパネラーに明確な肌荒れの改善が認められた。このことから、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物は優れた保湿効果を有することが明らかとなった。
【００６６】
以上のことから、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物は、優れた細胞賦活作用、美白作用、抗酸化作用、アミラーゼ阻害作用、並びに保湿作用を有し、細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、並びに保湿剤として有用であることが示された。また、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を皮膚外用剤や食品等の組成物に配合することにより、シワ、タルミ、肌のハリ、シミ、クスミといった種々の皮膚症状や糖尿病、肥満症、動脈硬化症等の予防・改善に優れた効果を発揮する組成物を提供が可能となることが分かった。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤に関する。さらに詳しくは、エラエアギナス・ラティフォリア（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）を有効成分とすることを特徴とする細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然由来成分は、様々な薬理作用や美容効果を有することが知られ、これまでにも数多くの植物や菌類などが皮膚外用剤や飲食品などの分野に幅広く応用されている。特に、シワ、シミ、クスミ、皮膚の弾性低下といった皮膚症状の予防・改善のために、細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤などの様々な有効成分の検索及び配合検討が従来なされている。また、飲食品の分野においても、血糖上昇を抑制することによって糖尿病、肥満症、動脈硬化症等を予防・改善するために、アミラーゼ阻害剤として様々な有効成分の検討がなされている。これまでに知られている細胞賦活剤としては、ポンカンのエッセンス（特許文献１参照）、美白剤としては、白鶴霊芝の水および／または有機溶媒抽出物（特許文献２参照）、抗酸化剤としては、キク科へテロテカ属植物抽出物（特許文献３参照）、アミラーゼ阻害剤としては、月桂樹葉の親水性溶媒抽出物質（特許文献４参照）が知られている。
【０００３】
【特許文献１】特開２００１−１３１０４５号公報
【特許文献２】特開２００３−８９６３０号公報
【特許文献３】特開平１１−１８０８８６号公報
【特許文献４】特開平４−２７３８９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
上記の通り、天然由来成分は様々な薬理作用や美容効果を有することが知られているが、天然由来成分の中には未だその効果が知られていないものも数多く存在し、優れた細胞賦活作用、美白作用、アミラーゼ阻害作用などを有する有効成分の開発が期待されていた。本発明は、このような有効成分を見出すためになされたものであり、皮膚外用剤や飲食品などの分野に幅広く応用が可能な細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、皮膚外用剤や飲食品などの分野に幅広く応用が可能な細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤を見出すために、天然由来の種々の物質について検討を行った。その結果、エラエアギナス・ラティフォリア（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）の抽出物に優れた細胞賦活作用、美白作用、抗酸化作用、アミラーゼ阻害作用、及び保湿作用を見出し、さらに検討を重ね、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、エラエアギナス・ラティフォリア（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）の抽出物を有効成分とする細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、優れた効果を有する細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤を提供することができ、これらを皮膚外用剤や食品等の組成物に配合することにより、シワ、タルミ、肌のハリ、シミ、クスミといった種々の皮膚症状や糖尿病、肥満症、動脈硬化症等の予防・改善に優れた効果を発揮する組成物を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明の原料として用いられる植物は、グミ科グミ属の植物であるエラエアギナス・ラティフォリア（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）を用いる。使用する際は、そのまま乾燥・粉砕して使用することもできるが、通常は抽出物を用いるとよい。抽出には、植物の幹、枝、葉、花、実、樹皮、樹液、根、茎、芽などのいずれの部位を用いても構わないが、葉や実を用いるのが簡便であり、有効性の点からは実を用いるとよい。抽出の際は、生のまま用いてもよいが、抽出効率を考えると、細切、乾燥、粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。抽出は、抽出溶媒に浸漬するか、超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法でも行うことができる。抽出効率を上げるため、撹拌や抽出溶媒中でホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
【０００８】
抽出溶媒としては、水の他、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール、１、３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール、エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル類、アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類などの溶媒を用いることができ、これらより１種又は２種以上を選択して用いる。また、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニアなどの１種又は２種以上の超臨界流体や亜臨界流体を用いてもよい。
【０００９】
エラエアギナス・ラティフォリアの上記溶媒による抽出物は、そのままでも使用することができるが、濃縮、乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解して使用することもでき、これらの生理作用を損なわない範囲で脱色、脱臭、脱塩等の精製処理やカラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。また、その処理物及び分画物は、各処理及び分画後に凍結乾燥し、用時に溶媒に溶解して用いることもできる。
【００１０】
このようにして得られるエラエアギナス・ラティフォリアの抽出物は、優れた細胞賦活作用、美白作用、抗酸化作用、アミラーゼ阻害作用、及び保湿作用を有し、細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤として利用することができる。また、エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を有効成分とする細胞賦活剤、美白剤、抗酸化、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤は、皮膚や毛髪に外用することができ、経口摂取も可能である。このため、エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を有効成分とする細胞賦活剤、美白剤、抗酸化、アミラーゼ阻害剤、及び保湿剤は、皮膚外用剤、食品、飲料として、医薬品、医薬部外品、化粧品などの様々な分野の製品に応用することが可能である。
【００１１】
エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を有効成分とする細胞賦活剤は、種々の細胞に対して優れた賦活作用を発揮するが、特に真皮線維芽細胞と表皮細胞に対して優れた効果を発揮する。
【００１２】
エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を有効成分とする美白剤は、シミ・ソバカスといった色素沈着症状の改善に効果を発揮し、特にメラニンの産生抑制に対して優れた効果を発揮する。
【００１３】
エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を有効成分とする抗酸化剤は、優れた抗酸化作用を発揮するが、特にＤＰＰＨラジカル消去作用やスーパーオキサイドアニオンの消去作用に優れた効果を発揮する。
【００１４】
エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を有効成分とするアミラーゼ阻害剤は、優れたアミラーゼ阻害作用を発揮するが、特にα−アミラーゼの阻害作用に優れた効果を発揮する。
【００１５】
また、エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を皮膚外用剤に配合することにより、シワ、タルミ、肌のハリ、シミ、クスミ、乾燥、小じわ等の皮膚症状の防止・改善に優れた効果を発揮する皮膚外用剤を得ることができ、老化防止改善用皮膚外用剤、細胞賦活用皮膚外用剤、抗酸化用皮膚外用剤、あるいは美白用皮膚外用剤としても用いることができる。さらに、エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物は、糖尿病、肥満症、動脈硬化症等の予防・改善や一般的な健康維持や栄養補給を目的とするような医薬品、食品、及び飲料にも用いることもできる。
【００１６】
エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を皮膚外用剤や食品などの組成物に配合する際の配合量は、種類や使用目的等によって調整することができるが、効果や安定性などの点から、全量に対して０．０００１〜５０．０重量％が好ましく、より好ましくは、０．００１〜２５．０重量％である。
【００１７】
エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を配合する組成物の剤型は任意であり、皮膚外用剤，洗浄剤，浴用剤などの場合には、ローションなどの可溶化系，乳液などの乳化系，カラミンローションなどの分散系，噴射剤と共に充填したエアゾール，軟膏剤，粉末，顆粒などの種々の剤型として提供することができる。また、組成物が経口用医薬品や食品の場合には、ドリンク剤・点滴剤などの液剤，ガム・飴のような固形剤，カプセル，粉末，顆粒，錠剤などの一般的な剤型とすることができる。
【００１８】
なお、エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物を配合する組成物には、エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物の他に、必要に応じて、通常医薬品，医薬部外品，皮膚化粧料，浴用剤，洗浄剤，食品などに配合される油性成分，保湿剤，粉体，色素，乳化剤，可溶化剤，洗浄剤，紫外線吸収剤，増粘剤，薬剤，香料，樹脂，アルコール類，栄養強化物質，調味料などを適宜配合することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲において、他の細胞賦活剤、美白剤、抗酸化、アミラーゼ阻害剤との併用も可能である。
【実施例】
【００１９】
以下に、エラエアギナス・ラティフォリアの抽出物の製造例、各作用を評価するための試験、皮膚外用剤や食品としての処方例、使用試験についてさらに詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれによって何ら限定されるものではない。
【００２０】
［製造例１］
エラエアギナス・ラティフォリアの実の乾燥粉砕物１ｋｇに５０重量％エタノール水溶液を４０リットル加え、室温で２時間攪拌した。抽出液をろ過して回収し、再度同様の抽出を行った後、溶媒を除去してエラエアギナス・ラティフォリア抽出物を得た。
【００２１】
［製造例２］
エラエアギナス・ラティフォリアの実の乾燥粉砕物１ｋｇに水を２０リットル加え、９０℃にて１時間還流して抽出した。抽出液をろ過して回収し、溶媒を除去した後、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を得た。
【００２２】
［製造例３］
エラエアギナス・ラティフォリアの葉の乾燥粉砕物１ｋｇにメタノールを９リットル加え、室温で７日間浸漬した。抽出液をろ過して回収し、溶媒を除去した後、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を得た。
【００２３】
［製造例４］
超臨界抽出装置にエラエアギナス・ラティフォリアの実を投入し、４０℃において１５ＭＰａの気圧下で二酸化炭素の超臨界流体を用いて抽出した。抽出物を回収し、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を得た。
【００２４】
まず、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物の真皮線維芽細胞の賦活作用について示す。試料には、エラエアギナス・ラティフォリアの実を製造例１に従って抽出したものを試料１とし、製造例２に従って抽出したものを試料２として評価を行った。
【００２５】
評価は、以下の手順で行った。正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当たり２．０×１０４個となるように９６穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１％のウシ胎児血清を添加したものを用いた。２４時間培養後、任意の濃度の試料を添加した試験培地に交換し、さらに４８時間培養した。次いで３−(４，５−ジメチル−２−チアゾリル)−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を４００μｇ／ｍＬ含有する培地に交換して２時間培養し、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価結果を、試料無添加のブランクにおける細胞賦活作用を１００とした相対値にて表１に示す。なお、表中の*及び**は、ｔ検定における有意確率Ｐ値に対し、有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を*で、有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を**で表したものである（以下の表においても同様とする）。
【００２６】
【表１】
【００２７】
表１より明らかなように、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を添加した培地では、有意な真皮線維芽細胞賦活作用が認められた。特に、試料１，２を０．０６ｍｇ／ｍＬ添加した場合には、ブランクと比較して、危険率１％未満で有意な真皮線維芽細胞賦活作用が認められた。このことから、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物は、優れた真皮線維芽細胞賦活作用を有することが明らかとなった。
【００２８】
次に、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物の表皮細胞の賦活作用について示す。
【００２９】
評価は、以下の手順で行った。正常ヒト表皮細胞を１ウェル当たり２．０×１０４個となるように９６穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、市販のクラボウ社製Ｈｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２を用いた。２４時間培養後、試料を添加した試験培地に交換し、さらに２４時間培養した。次いで３−(４,５−ジメチル−２−チアゾリル)−２,５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を１００μｇ／ｍＬ含有する培地に交換して２時間培養し、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価結果を、細胞賦活剤が無添加の場合の細胞賦活作用を１００とした場合の相対値にて表２に示す。
【００３０】
【表２】
【００３１】
表２より明らかなように、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を添加した培地では、有意な表皮細胞賦活作用が認められた。特に、試料を０．２５ｍｇ／ｍＬ添加した場合には、ブランクと比較して、危険率１％未満で有意な表皮細胞賦活作用が認められた。このことから、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物は、優れた表皮細胞賦活作用を有することが明らかとなった。
【００３２】
次に、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物のメラニン産生抑制作用の評価を示す。
【００３３】
評価は、以下の手順で行った。Ｂ１６マウスメラノーマＦ０ストレイン（Ｂ１６Ｆ０）細胞を３５ｍｍディッシュに１ディッシュあたり２０００個にて播種した。２４時間培養後、任意の濃度の試料を添加した５重量％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）添加ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に交換した。７日間培養後、０．２５％トリプシンを用いて細胞を回収し、１．５ｍＬマイクロチューブに移して遠心操作して細胞沈殿物を得た。さらに、試料を添加した培地の代わりに、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５重量％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を添加したものをブランクとし、同様に目視判定を行った。また、目視判定は、表３に示す通り、５段階評価によって行った。表４に判定の結果を示した。
【００３４】
【表３】
【００３５】
【表４】
【００３６】
表４より明らかなように、試料１を０．１ｍｇ／ｍＬ、試料２を１．０ｍｇ／ｍＬ添加した場合には、全く黒化は認められなかった。このことから、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物は、優れたメラニン産生抑制作用を有することが明らかとなった。
【００３７】
次に、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物の抗酸化作用について示す。
【００３８】
評価は、以下の手順で行った。５０重量％エタノール水溶液にて任意の濃度に希釈した試料溶液を９６穴マイクロプレートに１００μＬ添加した。次に、０．２ｍＭの濃度になるようにエタノールにて調製した１、１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）溶液を９６穴マイクロプレートに１００μＬ添加した。攪拌しながら暗所に放置し、２４時間後に５１６ｎｍの吸光度を測定した。試料が無添加のブランクの吸光度を（Ａ）、試料を添加したときの吸光度を（Ｂ）としたとき、式（１）の値をラジカル消去率とした。評価結果を表４に示した。
式（１） ｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００（％）
【００３９】
【表５】
【００４０】
表５より明らかなように、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を添加した場合には、高いラジカル消去率を示した。このことから、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物は、優れたラジカル消去に基づく抗酸化作用を有することが分かった。
【００４１】
次に、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物のアミラーゼ阻害作用について示す。
【００４２】
評価は、以下の手順で行った。２％デンプン溶液（０．１Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液ｐＨ７．０）１ｍＬに同じ緩衝液で溶解した試料溶液１ｍＬを添加し、３７℃で５分間インキュベーションした。α−アミラーゼ（豚膵臓由来，ＳＩＧＭＡ社製）溶液を０．１ｍＬ（１０Ｕｎｉｔｓ）加え、３７℃で６０分間インキュベーションした。その後、発色液（０．０１Ｎヨウ素液）１ｍＬを添加後、蒸留水にて２０倍希釈し、６６０ｎｍの吸光度を測定した。緩衝液のみを添加した場合の吸光度を（Ａ）、試料溶液を添加した場合の吸光度を（Ｂ）としたとき、以下の式を用いてアミラーゼ阻害率を算出した。それぞれの評価結果を表６に示す。
アミラーゼ阻害率（％）＝［１−（Ｂ）／（Ａ）］×１００
【００４３】
【表６】
【００４４】
表６より明らかなように、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物はα−アミラーゼ阻害作用に基づいて、優れたアミラーゼ阻害作用を有することが明らかとなった。
【００４５】
続いて、本発明に係るエラエアギナス・ラティフォリア抽出物を配合した皮膚外用剤及び食品の処方例を示す。
【００４６】
［処方例１］乳液
（１）スクワラン １０．０（重量％）
（２）メチルフェニルポリシロキサン ４．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）モノステアリン酸ポリオキシエチレン
ソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン １．０
（７）グリセリン ４．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）カルボキシビニルポリマー ０．１５
（10）精製水 １００とする残余
（11）アルギニン（１重量％水溶液） ２０．０
（12）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例１］ ５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、冷却を開始し、（11）と（12）を順次加え、均一に混合する。
【００４７】
［処方例２］化粧水
（１）エタノール １５．０（重量％）
（２）ポリオキシエチレン（４０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油 ０．３
（３）香料 ０．１
（４）精製水 １００とする残余
（５）クエン酸 ０．０２
（６）クエン酸ナトリウム ０．１
（７）グリセリン １．０
（８）ヒドロキシエチルセルロース ０．１
（９）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例３］ ５．０
製法：（１）に（２）及び（３）を溶解する。溶解後、（４）〜（８）を順次添加した後、十分に攪拌し、（９）を加え、均一に混合する。
【００４８】
［処方例３］クリーム
（１）スクワラン １０．０（重量％）
（２）ステアリン酸 ２．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）セタノール ３．６
（６）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（７）グリセリン １０．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）アルギニン（２０重量％水溶液） １５．０
（10）精製水 １００とする残余
（11）カルボキシビニルポリマー（１重量％水溶液） １５．０
（12）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例１］ １．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、（11）を加え、冷却を開始し、４０℃にて（12）を加え、均一に混合する。
【００４９】
［処方例４］美容液
（１）精製水 １００とする残余(重量％)
（２）グリセリン １０．０
（３）ショ糖脂肪酸エステル １．３
（４）カルボキシビニルポリマー（１重量％水溶液） １７．５
（５）アルギン酸ナトリウム(１重量％水溶液) １５．０
（６）モノラウリン酸ポリグリセリル １．０
（７）マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル ３．０
（８）N-ラウロイル-L-グルタミン酸
ジ（フィトステリル−２−オクチルドデシル） ２．０
（９）硬化パーム油 ２．０
（10）スクワラン（オリーブ由来） １．０
（11）ベヘニルアルコール ０．７５
（12）ミツロウ １．０
（13）ホホバ油 １．０
（14）１、３−ブチレングリコール １０．０
（15）Ｌ−アルギニン（１０重量％水溶液） ２．０
（16）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例１］ ５．０
製法：（１）〜（６）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（14）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化を行った後、ホモミキサーにて均一に乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、５０℃にて（15）を加える。さらに４０℃まで冷却し、（16）を加え、均一に混合する。
【００５０】
［処方例５］水性ジェル
（１）カルボキシビニルポリマー ０．５（重量％）
（２）精製水 １００とする残余
（３）水酸化ナトリウム（１０重量％水溶液） ０．５
（４）エタノール １０．０
（５）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（６）香料 ０．１
（７）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例４］ ２．０
（８）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油 ０．１
製法：（１）を（２）に加え、均一に攪拌した後、（３）を加える。均一に攪拌した後、（４）に予め溶解した（５）を加える。均一に攪拌した後、予め混合しておいた（６）〜（８）を加え、均一に攪拌混合する。
【００５１】
［処方例６］クレンジング料
（１）スクワラン ８１．０（重量％）
（２）イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル １５．０
（３）精製水 ３．０
（４）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例４］ １．０
製法：（１）と（２）を均一に溶解する。これに、（３）と（４）を順次加え、均一に混合する。
【００５２】
［処方例７］洗顔フォーム
（１）ステアリン酸 １６．０（重量％）
（２）ミリスチン酸 １６．０
（３）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（４）グリセリン ２０．０
（５）水酸化ナトリウム ７．５
（６）ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン １．０
（７）精製水 １００とする残余
（８）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例３］ １．０
製法：（１）〜（４）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（５）〜（７）の水相成分を８０℃にて加熱溶解し、油相成分と均一に混合撹拌する。冷却を開始し、４０℃にて（８）を加え、均一に混合する。
【００５３】
［処方例８］メイクアップベースクリーム
（１）スクワラン １０．０(重量％)
（２）セタノール ２．０
（３）グリセリントリ−２−エチルヘキサン酸エステル ２．５
（４）親油型モノステアリン酸グリセリル １．０
（５）プロピレングリコール １１．０
（６）ショ糖脂肪酸エステル １．３
（７）精製水 １００とする残余
（８）酸化チタン １．０
（９）ベンガラ ０．１
（10）黄酸化鉄 ０．４
（11）香料 ０．１
（12）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例２］ １．２
製法：（１）〜（４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（５）〜（７）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（８）〜（10）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（11）と（12）の成分を加え、均一に混合する。
【００５４】
［処方例９］乳液状ファンデーション
（１）メチルポリシロキサン ２．０(重量％)
（２）スクワラン ５．０
（３）ミリスチン酸オクチルドデシル ５．０
（４）セタノール １．０
（５）ポリオキシエチレン(２０Ｅ．Ｏ．)
ソルビタンモノステアリン酸エステル １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン ０．７
（７）１、３−ブチレングリコール ８．０
（８）キサンタンガム ０．１
（９）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（10）精製水 １００とする残余
（11）酸化チタン ９．０
（12）タルク ７．４
（13）ベンガラ ０．５
（14）黄酸化鉄 １．１
（15）黒酸化鉄 ０．１
（16）香料 ０．１
（17）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例４］ １．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（10）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（11）〜（15）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散する。油相成分を加え、乳化を行う。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（16）と（17）の成分を順次加え、均一に混合する。
【００５５】
［処方例１０］油中水型エモリエントクリーム
（１）流動パラフィン ３０．０(重量％)
（２）マイクロクリスタリンワックス ２．０
（３）ワセリン ５．０
（４）ジグリセリンオレイン酸エステル ５．０
（５）塩化ナトリウム １．３
（６）塩化カリウム ０．１
（７）プロピレングリコール ３．０
（８）１、３−ブチレングリコール ５．０
（９）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（10）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例１］ １．０
（11）精製水 １００とする残余
（12）香料 ０．１
製法：（５）と（６）を（11）の一部に溶解して５０℃とし、５０℃に加熱した（４）に撹拌しながら徐々に加える。これを混合した後、７０℃にて加熱溶解した（１）〜（３）に均一に分散する。これに（７）〜（10）を（11）の残部に７０℃にて加熱溶解したものを撹拌しながら加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（12）を加え、均一に混合する。
【００５６】
［処方例１１］パック
（１）精製水 １００とする残余(重量％)
（２）ポリビニルアルコール １２．０
（３）エタノール １７．０
（４）グリセリン ５．０
（５）ポリエチレングリコール（平均分子量１０００） ２．０
（６）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例２］ ５．０
（７）香料 ０．１
製法：（２）と（３）を混合し、８０℃に加温した後、８０℃に加温した（１）に溶解する。均一に溶解した後、（４）と（５）を加え、攪拌しながら冷却を開始する。４０℃まで冷却し、（６）と（７）を加え、均一に混合する。
【００５７】
［処方例１２］入浴剤
（１）香料 ０．３(重量％)
（２）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例１］ １．０
（３）炭酸水素ナトリウム ５０．０
（４）硫酸ナトリウム １００とする残余
製法：（１）〜（４）を均一に混合する。
【００５８】
［処方例１３］ヘアーワックス
（１）ステアリン酸 ３．０(重量％)
（２）マイクロクリスタリンワックス ２．０
（３）セチルアルコール ３．０
（４）高重合メチルポリシロキサン ２．０
（５）メチルポリシロキサン ５．０
（６）ポリ（オキシエチレン・オキシプロピレン）
メチルポリシロキサン共重合体 １．０
（７）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（８）１、３−ブチレングリコール ７．５
（９）アルギニン ０．７
（10）精製水 １００とする残余
（11）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例１］ ２．０
（12）香料 ０．１
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解後する。一方、（７）〜（10）の水相成分を７５℃にて加熱溶解し、前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（11）と（12）の成分を加え、均一に混合する。
【００５９】
［処方例１４］ヘアートニック
（１）エタノール ５０．０(重量％)
（２）精製水 １００とする残余
（３）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例３］ １．０
（４）香料 ０．１
製法：（１）〜（４）の成分を混合、均一化する。
【００６０】
［処方例１５］飲料
（１）エラエアギナス・ラティフォリア抽出物［製造例１］ ８．０(重量％)
（２）エリスリトール １．０
（３）クエン酸 ０．１
（４）ステビア ０．０１
（５）精製水 １００とする残余
製法：（１）〜（５）を均一に混合する。
【００６１】
次に、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を配合した処方を用いて使用試験を行い、乾燥による肌荒れについて改善効果を評価した。その際、処方例１に示した乳液の処方に表７に記載するエラエアギナス・ラティフォリア抽出物をそれぞれ配合し、実施例１〜５として使用試験を行った。また、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を精製水に代替し、比較例１として同時に使用試験を行った。
【００６２】
【表７】
【００６３】
各試料について、肌荒れ症状が顕著に認められる３０〜５０才代の乾燥肌の女性パネラー２０名をそれぞれ一群とし、ブラインドにて１週間使用させ、使用前後の皮膚状態の変化を観察して評価した。皮膚症状の指標として、乾燥による肌荒れについて、「改善」、「やや改善」、「変化なし」の三段階で評価し、表８に各評価を得たパネラー数にて示した。
【００６４】
【表８】
【００６５】
表８より、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を含有しない比較例使用群においては、６割以上のパネラーに改善は認められなかったが、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を配合した実施例使用群においては、６割以上のパネラーに明確な肌荒れの改善が認められた。このことから、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物は優れた保湿効果を有することが明らかとなった。
【００６６】
以上のことから、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物は、優れた細胞賦活作用、美白作用、抗酸化作用、アミラーゼ阻害作用、並びに保湿作用を有し、細胞賦活剤、美白剤、抗酸化剤、アミラーゼ阻害剤、並びに保湿剤として有用であることが示された。また、エラエアギナス・ラティフォリア抽出物を皮膚外用剤や食品等の組成物に配合することにより、シワ、タルミ、肌のハリ、シミ、クスミといった種々の皮膚症状や糖尿病、肥満症、動脈硬化症等の予防・改善に優れた効果を発揮する組成物を提供が可能となることが分かった。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
エラエアギナス・ラティフォリア（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）を有効成分とすることを特徴とする細胞賦活剤。
【請求項２】
エラエアギナス・ラティフォリア（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）を有効成分とすることを特徴とする美白剤。
【請求項３】
エラエアギナス・ラティフォリア（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）を有効成分とすることを特徴とする抗酸化剤。
【請求項４】
エラエアギナス・ラティフォリア（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）を有効成分とすることを特徴とするアミラーゼ阻害剤。
【請求項５】
エラエアギナス・ラティフォリア（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）を有効成分とすることを特徴とする保湿剤。
【請求項１】
エラエアギナス・ラティフォリア（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）を有効成分とすることを特徴とする細胞賦活剤。
【請求項２】
エラエアギナス・ラティフォリア（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）を有効成分とすることを特徴とする美白剤。
【請求項３】
エラエアギナス・ラティフォリア（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）を有効成分とすることを特徴とする抗酸化剤。
【請求項４】
エラエアギナス・ラティフォリア（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）を有効成分とすることを特徴とするアミラーゼ阻害剤。
【請求項５】
エラエアギナス・ラティフォリア（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）を有効成分とすることを特徴とする保湿剤。
【公開番号】特開２００６−３４２０８０（Ｐ２００６−３４２０８０Ａ）
【公開日】平成１８年１２月２１日（２００６．１２．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−１６８１６３（Ｐ２００５−１６８１６３）
【出願日】平成１７年６月８日（２００５．６．８）
【出願人】（０００１３５３２４）株式会社ノエビア (258)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年１２月２１日（２００６．１２．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年６月８日（２００５．６．８）
【出願人】（０００１３５３２４）株式会社ノエビア (258)
【Ｆターム（参考）】
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