カテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤
【課題】ＣＯＭＴによるＮＥの代謝能力を高めることのできるＣＯＭＴ活性化剤の提供。
【解決手段】次の一般式（１）
（式中、Ｒ1は水素原子又は置換基を有していてもよい低級ヒドロキシアルキル基を示し；Ｒ2は水素原子、低級アルキル基又は複素環基を示し；Ｒ3は水素原子又は低級アルキル基を示し；Ｒ4及びＲ5は同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基を示すか、或いはＲ4及びＲ5が結合する原子と一緒になって置換基を有していてもよい脂環式不飽和炭化水素基又は複素環基を形成してもよく；Ｒ6は水素原子又は低級アルキル基を示し；Ａ1は酸素原子又はＮ−Ｒ7；Ａ2は炭素原子又は窒素原子を示し；破線は単結合又は二重結合を示す）で表される化合物又はその塩を有効成分とするカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【解決手段】次の一般式（１）
（式中、Ｒ1は水素原子又は置換基を有していてもよい低級ヒドロキシアルキル基を示し；Ｒ2は水素原子、低級アルキル基又は複素環基を示し；Ｒ3は水素原子又は低級アルキル基を示し；Ｒ4及びＲ5は同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基を示すか、或いはＲ4及びＲ5が結合する原子と一緒になって置換基を有していてもよい脂環式不飽和炭化水素基又は複素環基を形成してもよく；Ｒ6は水素原子又は低級アルキル基を示し；Ａ1は酸素原子又はＮ−Ｒ7；Ａ2は炭素原子又は窒素原子を示し；破線は単結合又は二重結合を示す）で表される化合物又はその塩を有効成分とするカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビシクロ化合物、含窒素五員環化合物等を有効成分とするカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
生活習慣病（糖尿病）に起因する腎不全患者数は年々増加を続けており、既に従来の慢性腎炎を起因とする患者数を上回っている。我が国における慢性腎不全（ＣＫＤ）発症者は１３００万人と見積もられ、透析医療費は総医療費（３３兆円）の５％にまで拡大し（非特許文献１）、病態進展による透析への移行は、社会的に大きな問題となっている。
【０００３】
ＣＫＤ患者に代表される腎機能障害患者では交感神経系が亢進し、血中ノルエピネフリン（ＮＥ）濃度が上昇していることは古くから知られている（非特許文献２，３）。大規模な疫学的研究により、末期腎不全患者の透析導入開始から３６ヶ月後生存率は、透析導入時の血中ＮＥ濃度が５．５７ｎｍｏｌ／Ｌを越える群で４５％、越えない群で７５％であると報告されている（非特許文献４）。また、透析患者の死因の多くは感染症と心血管病変（ＣＶＤ、特に心不全）によるものであるが、血中ＮＥ濃度は特にＣＶＤによる死亡と強く相関している。すなわち交感神経の亢進は、腎機能障害の進行・増悪のみならず、ＣＶＤにも関連していると考えられる。
かつて、腎機能障害者の血中ＮＥが高い理由は、腎機能が低下しているためと考えられていたが、今日ではＮＥの代謝能力が低下しているためと考えられている。
【０００４】
ＮＥの代謝酵素として、神経節のモノアミン酸化酵素（ＭＡＯ）、腎臓が血中に分泌しているＭＡＯのリナラーゼ（非特許文献５）、肝臓・肺に存在するカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ（ＣＯＭＴ）の３つが知られている。
ＭＡＯは末梢でのＮＥ代謝には影響力がなく、リナラーゼは不活性型タンパク質として腎から分泌されて血中を循環し、血中ＮＥの上昇により３０秒程度で活性化され、血中ＮＥを代謝することが判明しているが、腎機能不全とともに失われることが報告されている（非特許文献６、７）。そのため、末梢循環のＮＥ代謝にはＣＯＭＴが最も重要と考えられる。
ヒトＣＯＭＴは、分子量約２４ｋＤａの酵素であり、活性中心にＳＨ基を有し、反応を行うためには第一基質のカテコールアミン（ＣＡ）、第二基質のＳ−アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）と、２価金属イオンであるＭｇ2+が必要である（非特許文献８）。ＮＥはＣＯＭＴによる代謝を受けるとノルメタネフリン（ＮＭＮ）となり、これは本来の受容体への親和性を示さない（非特許文献８）。
【０００５】
現在、ＣＫＤの治療薬としては、レニン―アンギオテンシン系（ＲＡＳ）を抑制するアンギオテンシン受容体遮断薬、アンギオテンシン変換酵素阻害薬等の降圧剤が使用されているが、心血管病変（ＣＶＤ）に対する効果は満足度が低い。また、アドレナリン受容体遮断薬は臨床で試みられたが、ＲＡＳの抑制効果と比較して明確な腎保護効果が得られていない（非特許文献９）。
そこで、腎保護作用を有し、透析導入の抑制、心血管病変（ＣＶＤ）の予防等が可能な新たな薬剤が強く望まれている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】エビデンスに基づくＣＫＤ診療ガイドライン２００９（２００９）東京医学社、社団法人日本人腎臓学会編１−８
【非特許文献２】Ｂｅｒｅｔｔａ−Ｐｉｃｃｏｌｉ Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｋｉｎｄｎｅｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（１９８２）２２，２９７−３０３
【非特許文献３】Ｉｓｈｉｉ Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ（１９８３）５，５４５−５５１
【非特許文献４】Ｚｏｃｃａｌｉ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ（２００２），１０５，１３５４−１３５９
【非特許文献５】Ｘｕ Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ（２００５）１１５，１２７５−１２８０
【非特許文献６】Ｌｉ Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ（２００８）１１７，１２７７−１２８２
【非特許文献７】Ｄｅｓｉｒ ＧＶ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ（２００７）１，９９−１０３
【非特許文献８】第３版 酵素バンドブック（２００８）朝倉書店八木ら編、２４７−２４８，６１７
【非特許文献９】Ｋｏｏｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ（２００４）１５，５２４−５３７
【非特許文献１０】Ｉｉｊｉｍａ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ｎｅｐｈｒｏｎ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｉｎ ｐｒｅｓｓ（２０１０）１１６，９−１６
【非特許文献１１】Ｓ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（２００５）４６，２５−３５
【非特許文献１２】Ｔｓｕｎｏｄａ Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００３）２６，９２３−９２７
【非特許文献１３】蘓武 高行，高宮 知子，角田 誠，今井 一洋，飯島 洋 日本薬学会第１３０年会 ２９ＴＧ−ａｍ１４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
アドレナリン受容体遮断薬は、ＮＥが亢進しているＣＫＤ患者への有効性は小さいとされてきた。そこで本発明者らは、先ず血中ＮＥ濃度が高濃度となるのは、ＮＥの代謝低下によるものであるという可能性を検証する目的で、腎障害時におけるＮＥのＣＯＭＴ代謝物であるＮＭＮに注目し、糖尿病由来の腎不全並びに腎傷害の二種類の動物モデルにおける腎機能低下と、動物の血中ＮＥとＮＭＮの量比を測定した。その結果、ＣＯＭＴ代謝物の量比（ＮＭＮの血中濃度を、ＮＥとＮＭＮの和で割った比）と、血中尿素窒素量、クレアチニンクリアランス等の腎機能のパラメーターとが有為な相関を示し、どちらのモデル動物においても腎機能低下とＣＯＭＴの活性低下に相関があることが示唆された（非特許文献１０）。また、ＣＯＭＴは２−水酸化エストラジオール（２−ＨＥ）から２−メトキシエストラジオール（２−ＭＥ）を生じるが、この２−ＭＥには強力な心臓血管・毛細血管の保護作用があることが報告されている（非特許文献１１）。これらのことから、ＣＯＭＴの活性低下がＣＫＤ患者における心血管系保護能力の低下につながる可能性が考えられた。
したがって、ＣＫＤ患者におけるＮＥクリアランスの鍵となるＣＯＭＴを活性化し、末梢血中のＮＥ代謝能力を高める物質（酵素代謝賦活化物質）は新しい作用メカニズムを持った新規ＣＫＤ治療薬となりうる。
本発明は、斯かる実情に鑑み、ＣＯＭＴによるＮＥの代謝能力を高めることのできるＣＯＭＴ活性化剤を提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
ＣＯＭＴには膜結合型ＣＯＭＴ（ＭＢ‐ＣＯＭＴ）と可溶型ＣＯＭＴ（Ｓ‐ＣＯＭＴ）が存在する。ＭＢ−ＣＯＭＴのＮＥに対するＫｍ値は、Ｓ−ＣＯＭＴに比べて１００倍ほど小さいことが分かっているが、ヒトの本態性高血圧のモデルラットである自然発症型高血圧ラットでは、コントロール群のＷｉｓｔａｒ−Ｋｙｏｔｏラットと比較して、ＭＢ−ＣＯＭＴの発現量・活性が低下し、Ｓ−ＣＯＭＴの発現量・活性が増加しているという報告がある（非特許文献１２）。この結果は、ＭＢ−ＣＯＭＴの高い触媒能力はＣＡのメチル代謝において、触媒能力の低いＳ−ＣＯＭＴよりも寄与が大きいことを示唆すると同時に、高血圧患者のＮＥの代謝ではＳ−ＣＯＭＴにより大きく依存せざるを得ないことを示唆している。
そこで、本発明者らは、組換えヒトＣＯＭＴを用いたノルメタネフリン（ＮＭＮ）酵素活性の評価系を構築し（非特許文献１３）、Ｓ‐ＣＯＭＴ（以下、ＣＯＭＴともいう）の活性を高める物質について鋭意研究したところ、下記式（１）で表されるビシクロ化合物、下記式（２）で表される含窒素五員環化合物、及び下記式で表される化合物等に優れたＣＯＭＴ活性化作用があることを見出した。
【０００９】
すなわち、本発明は、次の一般式（１）
【００１０】
【化１】
【００１１】
（式中、Ｒ1は水素原子又は置換基を有していてもよい低級ヒドロキシアルキル基を示し；
Ｒ2は水素原子、低級アルキル基又は複素環基を示し；
Ｒ3は水素原子又は低級アルキル基を示し；
Ｒ4及びＲ5は同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基を示すか、或いはＲ4及びＲ5が結合する原子と一緒になって置換基を有していてもよい脂環式不飽和炭化水素基又は複素環基を形成してもよく；
Ｒ6は水素原子又は低級アルキル基を示し；
Ａ1は酸素原子又はＮ−Ｒ7（Ｒ7は、水素原子、置換基を有していてもよい低級アルキルチオ低級アルキル基又は置換基を有していてもよい低級アルカノイル基を示し；
Ａ2は炭素原子又は窒素原子を示し；
破線は単結合又は二重結合を示す）
で表される化合物又はその塩を有効成分とするカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤を提供するものである。
また、本発明は、次の一般式（２）
【００１２】
【化２】
【００１３】
（式中、Ｒ10は置換基を有していてもよい低級アルキル基又は置換基を有していてもよい低級アルキルチオ基を示し；
Ｒ11は水素原子、ハロゲン原子又はハロ低級アルキル基を示し；
Ｘは置換基を有していてもよいフェニル基又は複素環基を示し；
Ｙは基−Ｃ（＝Ｏ）−、基−Ｒ12−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、基−Ｓ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ12−又は基−Ｒ12−Ｏ−（基中、Ｒ12は低級アルキレン基を示す）を示し；
Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4及びＺ5で構成される環は窒素を１〜３個有する５員の複素環基を示し、Ｚ3及びＺ4上にはヒドロキシ基又はオキソ基（＝Ｏ）が置換されていてもよい）
で表される化合物又はその塩を有効成分とするカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤を提供するものである。
また、本発明は、次の化合物又はその塩を有効成分とするカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤を提供するものである。
【００１４】
【化３】
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、ＣＯＭＴを活性化し、末梢血中のＮＥ代謝能力を強化することにより、腎機能障害の進展・増悪の抑制、ひいては透析への移行抑制や、心血管系リスクの低減が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】ＣＯＭＴ活性測定法の手順を示す図である。
【図２】ＳＡＨａｓｅ共存でのＣＯＭＴ活性を示す図である。
【図３】ＳＡＨとサンプル化合物共存での反応阻害曲線を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明のＣＯＭＴ活性化剤の第一の有効成分は、一般式（１）で表される化合物又はその塩である。
一般式（１）中、Ｒ1で示される低級ヒドロキシアルキル基としては、炭素数１〜６の直鎖又は分岐鎖のヒドロキシアルキル基が挙げられ、具体的にはヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、１−ヒドロキシプロピル基等が挙げられる。このうちヒドロキシメチル基が特に好ましい。
【００１８】
当該ヒドロキシアルキル基の置換基としては、低級アルカノイル基、置換基を有していてもよいカルバモイル基が挙げられる。
低級アルカノイル基としては、炭素数１〜８のアルカノイル基が挙げられ、例えば、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、マロニル基、スクシニル基等が挙げられる。このうちアセチル基が好ましい。
【００１９】
置換基を有していてもよいカルバモイル基としては、次の一般式（３）
【００２０】
【化４】
【００２１】
（式中、Ｒ8及びＲ9は同一又は異なって水素原子、炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐鎖のアルキル基、又は置換基を有していてもよい炭素数３〜６のシクロアルキル基を示す）
で表される基が挙げられる。炭素数３〜６のシクロアルキル基に置換し得る基としては、フリル基、フルフリル基等が挙げられる。
なかでもＮ−Ｃ1-6アルキルカルバモイル基、Ｎ−Ｃ3-6シクロアルキルカルバモイル基が好ましく、特にＮ−プロピルカルバモイル基、Ｎ−シクロヘキシルカルバモイル基が好ましい。
【００２２】
Ｒ2で示される低級アルキル基としては、炭素数１〜６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が挙げられ、具体的にはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ジメチル基、トリメチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等が挙げられる。なかでもｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基が好ましい。
【００２３】
Ｒ2で示される複素環基としては、酸素、窒素又は硫黄原子等を１又は２個含み、芳香環と縮合していてもよい脂環族あるいは芳香族の複素環基が挙げられ、具体的にはフリル基、チエニル基、ピロリル基、ピリジル基、ピラジル基、ピリミジル基、イミダゾリル基、インドリル基、キノリル基、イソキノリル基、ピペリジノ基、ピペラジニル基、ピロリジニル基、モルホリノ基等が挙げられる。なかでもフリル基、チエニル基、ピリジル基が好ましい。
【００２４】
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5及びＲ6で示される低級アルキル基は、前述と同義である。なかでも、メチル基が好ましい。
【００２５】
Ｒ4及びＲ5は、それらが結合する原子と一緒になって置換基を有していてもよい脂環式不飽和炭化水素基又は複素環基を形成するが、置換基を有していてもよい脂環式不飽和炭化水素基を形成する場合、Ｒ4が結合する原子は炭素原子である（すなわち、Ａ2は炭素原子を示す）。
ここで、置換基を有していてもよい脂環式不飽和炭化水素基としては、シクロペンテニル基、シクロヘキセニル基、シクロヘプテニル基、シクロオクテニル基等が挙げられる。
当該脂環式不飽和炭化水素基の置換基としては、前述と同義の低級アルキル基が挙げられ、なかでもジメチル基が好ましい。
【００２６】
Ｒ4及びＲ5が結合する原子と一緒になって形成される複素環基は、前述と同義である。
ここでの複素環基においては、同一の炭素原子上に２つの水素原子を有する複素環の場合、それらの水素原子がオキソ基と置換して、２−ピリドン、２−ピラジノン等の複素環式ケトンを形成してもよい。すなわち、Ｒ4及びＲ5が結合する原子と一緒になって形成される複素環基としては、ピリジル基、又は２−ピリドン等の複素環式ケトンが好ましい。この場合、Ｒ4が結合する原子は窒素原子、すなわちＡ2は窒素原子であることが好ましい。
【００２７】
Ａ1で示されるＮ−Ｒ7におけるＲ7は、水素原子、置換基を有していてもよい低級アルキルチオ低級アルキル基、又は置換基を有していてもよい低級アルカノイル基であり、当該低級アルカノイル基は前述と同義である。
低級アルキルチオ低級アルキル基は、炭素数１〜６のアルキルチオ基を有する前述と同義の低級アルキル基が挙げられ、なかでもブチルチオプロピル基が好ましい。
Ｒ7における低級アルキルチオ低級アルキル基の置換基としては、ヒドロキシ基が挙げられる。
【００２８】
Ｒ7における低級アルカノイル基の置換基としては、置換基を有していてもよいカルバモイル基が挙げられる。ここで、置換基を有していてもよいカルバモイル基は前述と同義である。なかでもＮ−Ｃ1-6アルキルカルバモイル基、置換基を有していてもよいＮ−Ｃ3-6シクロアルキルカルバモイル基が好ましく、特にフルフリル基で置換されていてもよいＮ−シクロヘキシルカルバモイル基が好ましい。
【００２９】
一般式（１）中、Ａ1がＮ−Ｒ7である場合、Ｒ1は水素原子が好ましい。また、Ａ1が酸素原子である場合、Ｒ1は置換基を有していてもよい低級ヒドロキシアルキル基が好ましい。
【００３０】
一般式（１）中、破線は、この部分に二重結合があってもよいことを示す。
【００３１】
一般式（１）において、好ましい置換基の組み合わせの一例として、例えば、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ6が水素原子であり、Ｒ4及びＲ5がそれらと結合する原子と一緒になって芳香族複素環基を形成し、Ａ1がＮ−Ｒ7であり、Ａ2が窒素原子であることを挙げることができる。
また、Ｒ1が置換基を有していてもよい低級ヒドロキシアルキル基であり、Ｒ2が低級アルキル基又は芳香族複素環基であり、Ｒ3及びＲ6が低級アルキル基であり、Ｒ4及びＲ5が同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基であり、Ａ1が酸素原子であり、Ａ2が炭素原子であること；Ｒ1が置換基を有していてもよい低級ヒドロキシアルキル基であり、Ｒ2及びＲ3が水素原子であり、Ｒ4及びＲ5がそれらと結合する原子と一緒になって置換基を有していてもよい脂環式不飽和炭化水素基を形成し、Ｒ6が低級アルキル基であり、Ａ1が酸素原子であり、Ａ2が炭素原子であることを挙げることができる。
【００３２】
さらに、好ましい置換基の組合せの一例として、例えば、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ6が水素原子であり、Ｒ4及びＲ5がそれらと結合する原子と一緒になって複素環式ケトンを形成しを形成し、Ａ1がＮ−Ｒ7であり、Ｒ7が置換基を有していてもよい低級アルキルチオ低級アルキル基又は置換基を有していてもよい低級アルカノイル基であり、Ａ2で窒素原子であり、破線が単結合であることを挙げることができる。
また、Ｒ1がＮ−低級アルキルカルバモイル基で置換されていてもよい低級ヒドロキシアルキル基であり、Ｒ2が低級アルキル基又はフリル基であり、Ｒ3及びＲ6が低級アルキル基であり、Ｒ4及びＲ5が同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基であり、Ａ1が酸素原子であり、Ａ2が炭素原子であり、破線が二重結合であること；Ｒ1が低級アルカノイル基で置換されていてもよい低級ヒドロキシアルキル基であり、Ｒ2、Ｒ3及びＲ6が低級アルキル基であり、Ｒ4及びＲ5が同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基であり、Ａ1が酸素原子であり、Ａ2が炭素原子であり、破線が二重結合であること；Ｒ1が低級アルカノイル基で置換されていてもよい低級ヒドロキシアルキル基であり、Ｒ2及びＲ3が水素原子であり、Ｒ4及びＲ5がそれらと結合する原子と一緒になって置換基を有していてもよい脂環式不飽和炭化水素基を形成し、Ｒ6が低級アルキル基であり、Ａ1が酸素原子であり、Ａ2が炭素原子であり、破線が単結合であることを挙げることができる。
【００３３】
一般式（１）の化合物のうち、特に好ましい化合物は次の化合物１〜７である。
【００３４】
【化５】
【００３５】
本発明のＣＯＭＴ活性化剤の第二の有効成分は、一般式（２）で表される化合物又はその塩である。
一般式（２）中、Ｒ10で示される低級アルキル基としては、前述と同義である。なかでもメチル基、ｎ−プロピル基が好ましい。
当該低級アルキル基の置換基としては、前述と同義の複素環基が挙げられ、ピペリジノ基、ピペラジニル基、ピロリジニル基、モルホリノ基が好ましく、特にモルホリノ基が好ましい。
【００３６】
Ｒ10で示される低級アルキルチオ基としては、炭素数１〜６のアルキルチオ基が挙げられ、例えば、メチルチオ基、エチルチオ基、プロピルチオ基等が挙げられる。このうちメチルチオ基が特に好ましい。
当該低級アルキルチオ基の置換基としては、カルボキシル基又は低級アルコキシカルボニル基が挙げられる。ここで、低級アルコキシカルボニル基としては、炭素数１〜６の直鎖状又は分岐鎖状のアルコキシ基を有するカルボニル基で、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ブトキシカルボニル基等が挙げられる。なかでもメトキシカルボニル基が好ましい。
【００３７】
Ｒ11で示されるハロゲン原子としては、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素が挙げられ、なかでもフッ素又は塩素好ましい。置換位置は特に限定されないが、メタ位又はパラ位が好ましく、特にパラ位が好ましい。
【００３８】
Ｒ11で示されるハロ低級アルキル基としては、前記ハロゲン原子で置換された前記低級アルキル基を意味し、例えば、フルオロメチル基、ジフルオロメチル基、トリフルオロメチル基、クロロメチル基、ジクロロメチル基、トリクロロメチル基、２−クロロ−１，１−ジメチルエチル基等が挙げられる。なかでもトリフルオロメチル基が好ましい。
【００３９】
Ｘで示される置換基を有していてもよいフェニル基とは、１〜３個の置換基を任意の位置に有していてもよいフェニル基を意味する。ここで置換基としては、前述と同義の低級アルキル基、低級アルコキシ基が挙げられる。低級アルキル基としては、メチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基が好ましい。低級アルコキシ基は、炭素数１〜６の直鎖状又は分岐鎖状のアルコキシ基が挙げられ、なかでもエトキシ基が好ましい。
置換基の数としては、１又は２が好ましい。なお、置換基が２個以上の時は相異なる基の組合せであってもよい。
【００４０】
Ｘで示される複素環基としては、前述と同義の複素環基が挙げられ、なかでもキノリル基、イソキノリル基が好ましい。
【００４１】
Ｙは、基−Ｃ（＝Ｏ）−、基−Ｒ12−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、基−Ｓ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ12−又は基−Ｒ12−Ｏ−（基中、Ｒ12は低級アルキレン基を示す）を示すが、ここで、Ｒ12で示される低級アルキレン基としては、炭素数１〜６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基が挙げられ、例えば、メチレン基、エチレン基、プロピレン基等が挙げられる。なかでもメチレン基が好ましい。
【００４２】
Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4及びＺ5で構成される窒素を１〜３個有する５員の複素環基としては、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、ピロリニル基、ピロリジニル基、トリアゾリル基等が挙げられる。なかでもピロリル基、トリアゾリル基が好ましい。トリアゾリル基の具体例としては、１，３，４−トリアゾール−１−イル基、１，２，４−トリアゾール−１−イル基、１，２，３−トリアゾール−１−イル基等が挙げられる。
【００４３】
Ｚ3及びＺ4上にはヒドロキシ基又はオキソ基（＝Ｏ）が置換されていてもよい。すなわち、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4及びＺ5で構成される窒素を１〜３個有する５員の複素環基において、同一の炭素原子上に２つの水素原子を有する複素環の場合、それらの水素原子がオキソ基と置換して、２−オキソピロリン、２−オキソピロリジン等の複素環式ケトンを形成してもよい。
本発明において、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4及びＺ5で構成される環としては、１，３，４−トリアゾール−１−イル基又は３−ヒドロキシ−２−オキソピロリン−５−イル基が好ましい。
【００４４】
一般式（１）において、好ましい置換基の組み合わせの一例として、例えば、Ｒ10が置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ11がハロゲン原子であり、Ｘが置換基を有していてもよいフェニル基であり、Ｙが基−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4及びＺ5で構成される環が３−ヒドロキシ−２−オキソピロリン−５−イル基であること；Ｒ10が置換基を有していてもよい低級アルキルチオ基であり、Ｒ11がハロゲン原子であり、Ｘが置換基を有していてもよいフェニル基であり、Ｙが基−Ｒ12−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4及びＺ5で構成される環が１，３，４−トリアゾール−１−イル基であること；Ｒ10が置換基を有していてもよい低級アルキルチオ基であり、Ｒ11がハロ低級アルキル基であり、Ｘが複素環基であり、Ｙが基−Ｒ12−Ｏ−であり、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4及びＺ5で構成される環が１，３，４−トリアゾール−１−イル基であること；Ｒ10が置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ11がハロゲン原子であり、Ｘは置換基を有していてもよいフェニル基であり、Ｙが基−Ｓ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ12−であり、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4及びＺ5で構成される環が１，３，４−トリアゾール−１−イル基であることを挙げることができる。
【００４５】
一般式（２）の化合物のうち、特に好ましい化合物は次の化合物８〜１１である。
【００４６】
【化６】
【００４７】
本発明のＣＯＭＴ活性化剤の第三の有効成分は、次の化合物又はその塩である。
【００４８】
【化７】
【００４９】
本発明において、化合物の塩としては、薬学的に許容できるものであれば特に制限はない。例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩、トリアルキルアミン塩等の有機塩基塩；塩酸塩、硫酸塩等の鉱酸塩；酢酸塩等の有機酸塩等が挙げられる。
【００５０】
また、本発明の化合物もしくはその塩は溶媒和物であってもよい。溶媒和物としては、水和物、アルコール和物（例えば、エタノール和物）等が挙げられる。さらに、本発明の化合物には、立体異性体或いは不斉炭素原子に由来する光学異性体が存在することもあるが、これらの立体異性体、光学異性体及びこれらの混合物のいずれも本発明に含まれる。
【００５１】
本発明の化合物は、天然物から抽出することにより又は公知の化学合成法により製造することができる。また、Ｉｎｔｅｒ Ｂｉｏ Ｓｃｒｅｅｎ社等から市販品として入手することができる。
【００５２】
後述する実施例において示されるように、本発明で用いられる化合物は、組換えヒトＣＯＭＴを用いた酵素活性の評価系において、ＣＯＭＴ活性を有意に上昇させる作用を示した。
従って、本発明の薬剤は、ＣＯＭＴ活性化、末梢血中のＮＥ代謝能力の強化を通じ、腎機能障害の進展・増悪の抑制、透析導入の遅延や抑制、心血管病変（ＣＶＤ）リスクの低減に有用である。
【００５３】
本発明のＣＯＭＴ活性化剤の投与形態としては、特に限定されず治療目的に応じて適宜選択でき、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤、シロップ剤等による経口投与や、注射剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、点眼剤、点鼻剤等による非経口投与が挙げられる。
斯かる製剤は、本発明で用いられる化合物又はその塩を単独、又は他の薬学的に許容される担体を用いて、公知の方法で製造することができる。
【００５４】
薬学的に許容される担体としては、特に限定されないが、例えば、乳糖、マンニトール、無水リン酸水素カルシウム等の賦形剤；ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン等の結合剤；でんぷん、カルボキシメチルセルロース等の崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤；塩化ナトリウム等の等張化剤；リン酸水素ナトリウム、リン酸一水素ナトリウム等の緩衝剤；溶解補助剤、着色剤、保存剤、矯味剤、香料等が挙げられる。
【００５５】
本発明で用いられる化合物又はその塩の成人１日当たりの投与量は、患者の症状や体重、年齢、化合物の種類、投与経路等によって変動し得るが、経口投与の場合には、投与量は約１〜１，０００ｍｇが適切であり、約１０〜３００ｍｇが好ましい。非経口投与の場合は、経口投与の場合の１０分の１量〜２分の１量を投与すればよい。これらの投与量は、患者の症状や体重、年齢等により適宜増減することが可能である。
投与対象者としては、それを必要としている者であれば特に限定されないが、本発明のＣＯＭＴ活性化剤はＮＥの代謝能力を高めることができることから、特にＮＥが亢進している腎機能障害患者における投与が有効である。
【実施例】
【００５６】
以下、本発明について実施例をあげて具体的に説明するが、本発明はこれらによって何等限定されるものではない。
【００５７】
参考例１
＜組換えヒトＣＯＭＴの調製＞
完全長のヒトＣＯＭＴｃＤＮＡ（ＮＣＢＩ登録受入番号：ＢＣ０１１９３５）が挿入されたプラスミドｐＯＴＢ７を有する大腸菌（ＭＧＣ Ｃｏｌｅｃｔｉｏｎ ＦＬ１００２）をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社より購入し、特開２００６−２３号公報を参考に組換えヒトＣＯＭＴをグルタチオン-S-トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合蛋白質として発現させ、グルタチオンアフィニティーカラムで精製し、トロンビン処理によりＧＳＴ部分を除去して精製した。
【００５８】
参考例２
＜ＨＰＬＣ−蛍光検出法＞
ＣＡとそれらの３−Ｏ−メチル代謝物を同時に測定するために、角田ら（Ｔｓｕｎｏｄａ Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ａｎａｌｙｓｔ（２００１）１２６，６３７−６４０）によって開発されたＣＡ分析法を適用した。
具体的には、サンプルをオートサンプラー（ＡＳ−９５０，Ｊａｓｃｏ，Ｊａｐａｎ）より注入し、前処理用溶媒（１０ｍＭ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．５））により前処理カラム（陽イオン交換カラム）に導入する。このとき、ＣＡとそれらの３ −Ｏ−メチル代謝物を含むアミンのみが前処理カラムに吸着される。次に、カラムセレクション（ＨＶ−１５９２−０１，Ｊａｓｃｏ，Ｊａｐａｎ）によりバルブを切り替え、前処理カラムに分離用溶媒（７５ｍＭ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ，７５ｍＭ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ，４ｍＭ １−ｈｅｘａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｓｏｄｉｕｍ ｓａｌｔ，６％ ａｃｅｔｎｉｔｒｉｌｅ（ｐＨ３．２））を流すことにより、前処理カラムからＣＡとそれらの３−Ｏ−メチル代謝物を脱離させ、分離カラム（ｏｃｔａｄｅｃｙｌｓｉｌｉｃａカラム：ＯＤＳカラム）にて、ＣＡとそれらの３−Ｏ−メチル代謝物を分離する。分離されたＣＡとそれらの３−Ｏ−メチル代謝物を電気化学酸化ユニット（Ｇｕａｒｄ Ｃｅｌｌ ５０２０，ＥＳＡ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）によりｏ−キノン体に導き、次に、ｏ−キノン体とエチレンジアミン溶液（１０５ｍＭ ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ，１７５ｍＭ ｉｍｉｄａｚｏｌｅを含むａｃｅｔｎｉｔｒｉｌｅ：ｅｔｈａｎｏｌ：Ｄ．Ｗ．ｆｏｒＨＰＬＣ＝８５．２５：４．７５：１０の溶液）を反応オーブン（ＲＯ−２０６１，Ｊａｓｃｏ，Ｊａｐａｎ）内で反応させ（９０℃、１０ｍ）、蛍光物質（キノキサリン誘導体）に導き、蛍光検出器（ＦＰ−１５２０，Ｊａｓｃｏ，Ｊａｐａｎ，励起波長Ｅｘ：４１０ｎｍ，蛍光波長Ｅｍ：５００ｎｍ）にて検出する。
前処理用溶媒の流速は１ｍＬ／ｍｉｎに、分離用溶媒の流速は０．５ｍＬ／ｍｉｎに、エチレンジアミン溶液の流速は０．３２ｍＬ／ｍｉｎに設定した。
前処理カラムは陽イオン交換カラム（ＣＡＰＣＥＬＬ ＭＦ ＳＣＸ Ｓ−５，ＳＨＩＳＥＩＤＯ，Ｊａｐａｎ）を、分離カラムはＯＤＳカラム（ＵＫ−Ｃ１８ １５０×４．６ｍｍ， Ｉｍｔａｋｔ，Ｊａｐａｎ）を使用した。ＯＤＳカラムはカラムオーブン（ＣＯ−１５６０，Ｊａｓｃｏ，Ｊａｐａｎ）により、４０℃に保温した。
【００５９】
なお、上記分析法により、ＣＯＭＴの基質であるＮＥとその３−Ｏ−メチル代謝物であるＮＭＮ、４−Ｏ−メチル代謝物である４−メトキシノルエピネフリン（４−ＯＭｅ）が２０分以内に十分に分離可能であることが確認された。検出限界は１０〜２０ｐｍｏｌｅ程度であり、ＮＭＮのピーク面積における日内変動は２．７％、日間変動は３．６％であった。
【００６０】
参考例３
＜ＣＯＭＴ活性測定法＞
（１）酵素反応条件の至適化
ＣＯＭＴ活性測定の至適化を行うため、酵素反応の反応時間、酵素量、基質量に対する直線性を確認し、かつＫｍ等の酵素の触媒反応に関する諸性質を確認した。
酵素濃度を２８，８３，２５０，５００，１０００ｎＭに、かつ反応時間を１〜５，８，１０，１５，２０，２５，３０，４０，５０，６０ｍｉｎに変化させ検討したところ、［ＣＯＭＴ］＝２５０ｎＭでは、検出限界以上のＮＭＮの生成が［ＮＥ］0＝２０００μＭ、［ＳＡＭｅ］0＝４００μＭという条件下で（［Ｘ］0は物質Ｘの初期濃度を示す）、反応開始直後（１ｍｉｎ）から、反応開始２０分まで反応時間と生成物の生成量に直線性が見られた。なお、酵素濃度２８ｎＭは０．３３μｇタンパク質／５００μＬ反応液に相当する。
【００６１】
２）至適ＮＥ濃度を決定するため、［ＣＯＭＴ］＝２５０ｎＭ、反応時間：１５ｍｉｎの条件で、ＮＥ濃度を１０，２０，５０，１００，２００，５００，１０００，２０００μＭに変化させてＣＯＭＴ活性測定を行い、ＮＥのＫｍ値を算出した。
その結果、ＫｍNEは１２４〜１８８μＭであり、文献値（ブタ肝臓ＣＯＭＴ：４８８μＭ，組換えヒトＳ−ＣＯＭＴ：３６９μＭ，ラット赤血球Ｓ−ＣＯＭＴ：３６６μＭ，ヒト赤血球：９１．３μＭ，Ｔｓｕｎｏｄａ Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ａｎａｌｙｓｔ（２００１）１２６，６３７−６４０；Ｍａｓｕｄａ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００２）３９，５８９−５９４；Ｔｉｍｏ Ｌ．ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９５）３４，４２０２−４２１０；Ａｏｙａｍａ Ｎ．ｅｔ ａｌ．ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＨＲＯＭＡＴＯＧＲＡＰＨＹ Ａ（２００５）１０７４，４７−５１）と実験精度内で一致し、Ｓ−ＣＯＭＴ活性測定のためには［ＮＥ］0は１０００μＭ程度で十分と考えられた。
【００６２】
３）至適ＳＡＭ濃度を決定するため、［ＣＯＭＴ］＝２５０ｎＭ、反応時間：１５ｍｉｎの条件で、ＳＡＭ濃度を３，１０，３０，１００，３００，４００，１０００，２０００，３０００μＭに変化させてＣＯＭＴ活性測定を行い、ＳＡＭのＫｍ値を算出した。
その結果、ＫｍSAMは７０〜１６０μＭ程度と推定され、文献値（組換えヒトＳ−ＣＯＭＴ：４７μＭ，ヒト赤血球：７μＭ，Ｍａｓｕｄａ Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００２）３９，５８９−５９４；Ｔｉｍｏ Ｌ．ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９５）３４，４２０２−４２１０）との乖離は１．５〜２０倍程度となり、実験精度内で一致していると考えられた。また、［ＳＡＭ］0＝２０００μＭ以上では反応速度ｖの低下が見られたが、これはＳＡＭの代謝物であり、ＣＯＭＴの阻害物質であるＳＡＨの影響によるものと考えられた。よって、Ｓ−ＣＯＭＴ活性測定のためには［ＳＡＭ］0は１０００μＭ程度で十分であると考えられた。
【００６３】
４）上記決定した活性測定条件にて、ＣＯＭＴの阻害剤として多くの研究報告がある３，５−ｄｉｎｉｔｒｏｃａｔｅｃｈｏｌ（３，５−ＤＮＣ）のＩＣ50値およびＫｉ値、ＳＡＨのＩＣ50値およびＫｉ値を算出した。
３，５−ＤＮＣは終濃度が１〜３，６，１０，２０，３０，６０，１００，２００，３００，６００，１０００ｎＭとなるようにＤＭＳＯを用いて調製し、反応系では予めＣＯＭＴ、３，５−ＤＮＣ及びＮＥを共存させ、ＳＡＭを加えることで反応を開始した。また、ＳＡＨは終濃度が０．３，０．５，１，３，５，１０，３０，５０，１００，３００，５００，１０００μＭとなるようにＤＭＳＯを用いて調製し、反応系では予めＣＯＭＴ、ＳＡＭ及びＳＡＨを共存させ、ＮＥを加えることで反応を開始した。
その結果、ＩＣ503,5-DNCは３０〜６０ｎＭ、Ｋｉ3,5-DNCは４ｎＭであり、ＩＣ50は文献値（組み換えラットＳ−ＣＯＭＴ：４４ｎＭ，Ｍａｒｉａ Ｊ Ｂ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（２００１）２３，１０６−１１２）と実験精度内でほぼ一致した値となった。また、ＩＣ50SAHはＳＡＭ濃度：３００μＭの場合に５０〜１００μＭ、ＳＡＭ濃度：１０００μＭの場合に１００〜３００μＭ、ＫｉSAHは１４μＭであり、ＩＣ50は文献値（ラット肝臓ＣＯＭＴ：１３３μＭ，Ｍ．Ａ．Ｖｉｅｉｒａ−Ｃｏｅｌｈｏ．ｅｔ ａｌ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９９）８２１，６９−７８）と実験精度内でほぼ一致した値となった。
【００６４】
以上により、組換えヒトＣＯＭＴの至適反応条件は［酵素濃度：２５０ｎＭ，反応時間：１５ｍｉｎ］であり、酵素反応速度論定数は、基質に対しては［ＫｍNE：１６０μＭ，ＫｍSAM：１００μＭ］、ＮＥの代表的な競合阻害剤である３，５−ＤＮＣに対しては［ＩＣ503,5-DNC：３０〜６０ｎＭ，Ｋｉ3,5-DNC：４ｎＭ］、ＣＯＭＴのプロダクト阻害剤であるＳＡＨに対しては［ＩＣ50SAHはＳＡＭ濃度が３００μＭの場合：５０〜１００μＭ，ＳＡＭ濃度が１０００μＭの場合：１００〜３００μＭとなった。またＫｉSAH＝１４μＭ］となり、既に報告されている天然型ＣＯＭＴの酵素反応速度論的定数と同等であることが確認された。
【００６５】
５）サンプル化合物によるＣＯＭＴ活性化を定量的に測定できる系を決定するため、任意化合物を用いて、酵素反応至適条件［酵素濃度：２５０ｎＭ，反応時間：１５ｍｉｎ］を保ったまま［ＮＥ］と［ＳＡＭ］の初期濃度を変化させ、ＣＯＭＴ活性を評価した。
その結果、反応条件が［ＮＥ］0＝１０００μＭ、［ＳＡＭ］0＝１００μＭの場合に最大のＣＯＭＴ活性化が確認され、ＮＥの濃度によらずＳＡＭの濃度が低濃度（Ｋｍ値の１倍の濃度）である場合に、安定したＣＯＭＴ活性化が確認された。それに対して、ＳＡＭが飽和濃度（Ｋｍ値の１０倍の濃度）の条件では、ＣＯＭＴの活性化はほとんど確認できなかった。よって、ＣＯＭＴ活性作用を有する化合物は、ＳＡＭの酵素への親和性あるいは触媒反応速度に影響を与えることでその作用を示す可能性が示唆された。
【００６６】
以上より、ＣＯＭＴ活性測定法は、［酵素濃度］＝２５０ｎＭ、反応時間：１５ｍｉｎ、［ＮＥ］0＝１０００μＭ（Ｋｍ値の６倍の濃度）、［ＳＡＭ］0＝１００μＭ（Ｋｍ値の１倍の濃度）の条件を用いることに決定した。
【００６７】
（２）ＣＯＭＴ活性測定法
具体的な手順は図１に示した。
反応液Ａ（Ａ１＋Ａ２）と反応液Ｂをそれぞれの調製し、反応液Ａ及びサンプル化合物を４７５μＬずつ１．５ｍＬチューブに分注し、ヒートブロック上で３７℃にて、１０分間のプレインキュベーションを行った後、反応液Ｂを２５μＬ加えて、ヒートブロック上で３７℃にて、１５分間の酵素反応を行った。反応開始から１５分後、氷冷した４Ｍ ＨＣｌＯ4 ５０μＬを加えて反応を停止し、１０，０００ｒ／ｍｉｎ（１０，０００ｇ）、４℃にて、１０分間の遠心分離を行った。次に、得られた上清４００μＬを、氷冷した希釈溶液（１０ｍＭ Ｒｅｄｕｃｅｄ Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ，１０ｍＭ Ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ，０．１％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００，０．１ｍｇ／ｍＬ ＥＤＴＡ−２Ｎａ）４００μＬの入った２．０ｍＬチューブに回収し、その一部（３０μＬ）をＨＰＬＣに導入し、ＣＯＭＴ活性を測定した。
【００６８】
試験例１
サンプル化合物として、Ｉｎｔｅｒ Ｂｉｏ Ｓｃｒｅｅｎ社（ＩＢＳ社）から購入した化合物１〜７（表１）、化合物８〜１１（表３）、化合物１２〜２３（表５）並びに参考化合物（表２、４）を用いた。
サンプル化合物はＤＭＳＯに溶解し、終濃度１００μＭとなるように反応液に加えた。ＣＯＭＴ賦活化の評価はコントロールであるＤＭＳＯをサンプル化合物の代わりに用いた場合と比較した。
その結果を表１〜５に示す。
【００６９】
【表１】
【００７０】
【表２−１】
【００７１】
【表２−２】
【００７２】
【表３】
【００７３】
【表４−１】
【００７４】
【表４−２】
【００７５】
【表４−３】
【００７６】
【表５−１】
【００７７】
【表５−２】
【００７８】
表１、３及び５より、一般式（１）で表される化合物、一般式（２）で表される化合物及び上記表５に示す化合物は優れたＣＯＭＴ活性化作用を有することが確認された。
【００７９】
試験例２ ＣＯＭＴに対する生成物阻害の影響
１）ＳＡＨａｓｅ共存下におけるＳＡＨのＣＯＭＴへの影響
ＣＯＭＴはＳＡＨによる生成物阻害を受ける。反応系からＳＡＨを消去するべく、ＳＡＨａｓｅを共存させてＣＯＭＴ活性測定を行い、反応系からｉｎ ｓｉｔｕにＳＡＨを除去することによるＣＯＭＴ活性への影響を検討した。
ＳＡＨａｓｅはＳＡＨをアデノシンとホモシステインに分解する酵素である。ＳＡＨａｓｅによる加水分解反応の平衡は合成方向に著しく傾いているが、生体内では生成物がアデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）等により速やかに代謝されるため、実際には分解系に作用する（第３版 酵素バンドブック（２００８）朝倉書店（東京）八木ら編、２４７−２４８，６１７）。
まず、Ｊｏｈｎ Ｌ．ｐａｌｍｅｒら（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９７９）２５４，１２１７−１２２６）の文献を参考に、Ｓｉｇｍａ社より購入したＳＡＨａｓｅの活性を下記方法により測定すると、５０［ｎｍｏｌｅ／ｍｉｎ／ｍｇｐｒｏｔｅｉｎ］となった。
【００８０】
＜ＳＡＨａｓｅの活性測定＞
反応液Ａならびに反応液Ｂをそれぞれ表６に示す通りに調製した。１ｍＬ石英セルに反応液Ａを９７５μＬ加えて、３７℃に設定した分光光度計（Ｖ−５５０，Ｊａｓｃｏ，Ｊａｐａｎ）に１０分間静置した。次に、反応液Ｂを２５μＬ加え、３７℃に設定した分光光度計に静置して、２５４ｎｍにおける吸光度を５分おきに２時間測定した。
【００８１】
【表６】
【００８２】
共存させるＳＡＨａｓｅの量を０．２５，０．５，１，２，４ｕｎｉｔｓに決定し、ＣＯＭＴの活性測定を行った。この条件では、ＮＭＮとＳＡＨは反応時間１５分の間におよそ７ｎｍｏｌｅ生じている。つまり、ＣＯＭＴの反応に共役してＳＡＨの供給は０．５ｎｍｏｌｅ／ｍｉｎで行われている。
ＳＡＨａｓｅの量を横軸（ｕｎｉｔ）、ＳＡＨａｓｅが存在した場合の見かけの反応速度比を縦軸（％）にプロットを示した（図２）。ＳＡＨａｓｅの共存下でＣＯＭＴ活性測定を行うと、ＳＡＨａｓｅの用量依存的にＣＯＭＴの見かけの反応速度が上昇した。つまり、ＣＯＭＴの反応系からＳＡＨを除去することで、ＣＯＭＴの見かけの活性が上昇することが示唆された。
【００８３】
２）ＳＡＨのＣＯＭＴへの影響
上記試験例１で用いた化合物と、終濃度５，３０，１８０，１０００μＭとなるようにＤＭＳＯを用いて調製したＳＡＨを反応開始時から反応系へ共存させ、ＣＯＭＴへの影響を検討した。
ＳＡＨ濃度（横軸，μＭ）と反応速度ｖ（縦軸，ｎｍｏｌｅ／１５ｍｉｎ／ｍｇｐｒｏｔｅｉｎ）をプロットした結果を図３に示した。その結果、本発明で用いられる化合物は、反応初期からＳＡＨが存在している場合でも、ＣＯＭＴを活性化した。共存ＳＡＨ濃度が５μＭでは最大４９％、ＳＡＨが３０μＭで最大５５％、ＳＡＨが１８０μＭで最大７５％の見かけの活性の上昇が見られ、賦活化の割合は反応初期から存在していたＳＡＨ濃度が高くなるほどに大きくなった。本発明のＣＯＭＴ活性化剤はＳＡＨによるＣＯＭＴ活性の低下を抑制している。
以上より、本発明の化合物はＣＯＭＴのＳＡＨに対する親和性を低下させたと考えることができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビシクロ化合物、含窒素五員環化合物等を有効成分とするカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
生活習慣病（糖尿病）に起因する腎不全患者数は年々増加を続けており、既に従来の慢性腎炎を起因とする患者数を上回っている。我が国における慢性腎不全（ＣＫＤ）発症者は１３００万人と見積もられ、透析医療費は総医療費（３３兆円）の５％にまで拡大し（非特許文献１）、病態進展による透析への移行は、社会的に大きな問題となっている。
【０００３】
ＣＫＤ患者に代表される腎機能障害患者では交感神経系が亢進し、血中ノルエピネフリン（ＮＥ）濃度が上昇していることは古くから知られている（非特許文献２，３）。大規模な疫学的研究により、末期腎不全患者の透析導入開始から３６ヶ月後生存率は、透析導入時の血中ＮＥ濃度が５．５７ｎｍｏｌ／Ｌを越える群で４５％、越えない群で７５％であると報告されている（非特許文献４）。また、透析患者の死因の多くは感染症と心血管病変（ＣＶＤ、特に心不全）によるものであるが、血中ＮＥ濃度は特にＣＶＤによる死亡と強く相関している。すなわち交感神経の亢進は、腎機能障害の進行・増悪のみならず、ＣＶＤにも関連していると考えられる。
かつて、腎機能障害者の血中ＮＥが高い理由は、腎機能が低下しているためと考えられていたが、今日ではＮＥの代謝能力が低下しているためと考えられている。
【０００４】
ＮＥの代謝酵素として、神経節のモノアミン酸化酵素（ＭＡＯ）、腎臓が血中に分泌しているＭＡＯのリナラーゼ（非特許文献５）、肝臓・肺に存在するカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ（ＣＯＭＴ）の３つが知られている。
ＭＡＯは末梢でのＮＥ代謝には影響力がなく、リナラーゼは不活性型タンパク質として腎から分泌されて血中を循環し、血中ＮＥの上昇により３０秒程度で活性化され、血中ＮＥを代謝することが判明しているが、腎機能不全とともに失われることが報告されている（非特許文献６、７）。そのため、末梢循環のＮＥ代謝にはＣＯＭＴが最も重要と考えられる。
ヒトＣＯＭＴは、分子量約２４ｋＤａの酵素であり、活性中心にＳＨ基を有し、反応を行うためには第一基質のカテコールアミン（ＣＡ）、第二基質のＳ−アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）と、２価金属イオンであるＭｇ2+が必要である（非特許文献８）。ＮＥはＣＯＭＴによる代謝を受けるとノルメタネフリン（ＮＭＮ）となり、これは本来の受容体への親和性を示さない（非特許文献８）。
【０００５】
現在、ＣＫＤの治療薬としては、レニン―アンギオテンシン系（ＲＡＳ）を抑制するアンギオテンシン受容体遮断薬、アンギオテンシン変換酵素阻害薬等の降圧剤が使用されているが、心血管病変（ＣＶＤ）に対する効果は満足度が低い。また、アドレナリン受容体遮断薬は臨床で試みられたが、ＲＡＳの抑制効果と比較して明確な腎保護効果が得られていない（非特許文献９）。
そこで、腎保護作用を有し、透析導入の抑制、心血管病変（ＣＶＤ）の予防等が可能な新たな薬剤が強く望まれている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】エビデンスに基づくＣＫＤ診療ガイドライン２００９（２００９）東京医学社、社団法人日本人腎臓学会編１−８
【非特許文献２】Ｂｅｒｅｔｔａ−Ｐｉｃｃｏｌｉ Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｋｉｎｄｎｅｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（１９８２）２２，２９７−３０３
【非特許文献３】Ｉｓｈｉｉ Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ（１９８３）５，５４５−５５１
【非特許文献４】Ｚｏｃｃａｌｉ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ（２００２），１０５，１３５４−１３５９
【非特許文献５】Ｘｕ Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ（２００５）１１５，１２７５−１２８０
【非特許文献６】Ｌｉ Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ（２００８）１１７，１２７７−１２８２
【非特許文献７】Ｄｅｓｉｒ ＧＶ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ（２００７）１，９９−１０３
【非特許文献８】第３版 酵素バンドブック（２００８）朝倉書店八木ら編、２４７−２４８，６１７
【非特許文献９】Ｋｏｏｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ（２００４）１５，５２４−５３７
【非特許文献１０】Ｉｉｊｉｍａ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ｎｅｐｈｒｏｎ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｉｎ ｐｒｅｓｓ（２０１０）１１６，９−１６
【非特許文献１１】Ｓ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（２００５）４６，２５−３５
【非特許文献１２】Ｔｓｕｎｏｄａ Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００３）２６，９２３−９２７
【非特許文献１３】蘓武 高行，高宮 知子，角田 誠，今井 一洋，飯島 洋 日本薬学会第１３０年会 ２９ＴＧ−ａｍ１４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
アドレナリン受容体遮断薬は、ＮＥが亢進しているＣＫＤ患者への有効性は小さいとされてきた。そこで本発明者らは、先ず血中ＮＥ濃度が高濃度となるのは、ＮＥの代謝低下によるものであるという可能性を検証する目的で、腎障害時におけるＮＥのＣＯＭＴ代謝物であるＮＭＮに注目し、糖尿病由来の腎不全並びに腎傷害の二種類の動物モデルにおける腎機能低下と、動物の血中ＮＥとＮＭＮの量比を測定した。その結果、ＣＯＭＴ代謝物の量比（ＮＭＮの血中濃度を、ＮＥとＮＭＮの和で割った比）と、血中尿素窒素量、クレアチニンクリアランス等の腎機能のパラメーターとが有為な相関を示し、どちらのモデル動物においても腎機能低下とＣＯＭＴの活性低下に相関があることが示唆された（非特許文献１０）。また、ＣＯＭＴは２−水酸化エストラジオール（２−ＨＥ）から２−メトキシエストラジオール（２−ＭＥ）を生じるが、この２−ＭＥには強力な心臓血管・毛細血管の保護作用があることが報告されている（非特許文献１１）。これらのことから、ＣＯＭＴの活性低下がＣＫＤ患者における心血管系保護能力の低下につながる可能性が考えられた。
したがって、ＣＫＤ患者におけるＮＥクリアランスの鍵となるＣＯＭＴを活性化し、末梢血中のＮＥ代謝能力を高める物質（酵素代謝賦活化物質）は新しい作用メカニズムを持った新規ＣＫＤ治療薬となりうる。
本発明は、斯かる実情に鑑み、ＣＯＭＴによるＮＥの代謝能力を高めることのできるＣＯＭＴ活性化剤を提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
ＣＯＭＴには膜結合型ＣＯＭＴ（ＭＢ‐ＣＯＭＴ）と可溶型ＣＯＭＴ（Ｓ‐ＣＯＭＴ）が存在する。ＭＢ−ＣＯＭＴのＮＥに対するＫｍ値は、Ｓ−ＣＯＭＴに比べて１００倍ほど小さいことが分かっているが、ヒトの本態性高血圧のモデルラットである自然発症型高血圧ラットでは、コントロール群のＷｉｓｔａｒ−Ｋｙｏｔｏラットと比較して、ＭＢ−ＣＯＭＴの発現量・活性が低下し、Ｓ−ＣＯＭＴの発現量・活性が増加しているという報告がある（非特許文献１２）。この結果は、ＭＢ−ＣＯＭＴの高い触媒能力はＣＡのメチル代謝において、触媒能力の低いＳ−ＣＯＭＴよりも寄与が大きいことを示唆すると同時に、高血圧患者のＮＥの代謝ではＳ−ＣＯＭＴにより大きく依存せざるを得ないことを示唆している。
そこで、本発明者らは、組換えヒトＣＯＭＴを用いたノルメタネフリン（ＮＭＮ）酵素活性の評価系を構築し（非特許文献１３）、Ｓ‐ＣＯＭＴ（以下、ＣＯＭＴともいう）の活性を高める物質について鋭意研究したところ、下記式（１）で表されるビシクロ化合物、下記式（２）で表される含窒素五員環化合物、及び下記式で表される化合物等に優れたＣＯＭＴ活性化作用があることを見出した。
【０００９】
すなわち、本発明は、次の一般式（１）
【００１０】
【化１】
【００１１】
（式中、Ｒ1は水素原子又は置換基を有していてもよい低級ヒドロキシアルキル基を示し；
Ｒ2は水素原子、低級アルキル基又は複素環基を示し；
Ｒ3は水素原子又は低級アルキル基を示し；
Ｒ4及びＲ5は同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基を示すか、或いはＲ4及びＲ5が結合する原子と一緒になって置換基を有していてもよい脂環式不飽和炭化水素基又は複素環基を形成してもよく；
Ｒ6は水素原子又は低級アルキル基を示し；
Ａ1は酸素原子又はＮ−Ｒ7（Ｒ7は、水素原子、置換基を有していてもよい低級アルキルチオ低級アルキル基又は置換基を有していてもよい低級アルカノイル基を示し；
Ａ2は炭素原子又は窒素原子を示し；
破線は単結合又は二重結合を示す）
で表される化合物又はその塩を有効成分とするカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤を提供するものである。
また、本発明は、次の一般式（２）
【００１２】
【化２】
【００１３】
（式中、Ｒ10は置換基を有していてもよい低級アルキル基又は置換基を有していてもよい低級アルキルチオ基を示し；
Ｒ11は水素原子、ハロゲン原子又はハロ低級アルキル基を示し；
Ｘは置換基を有していてもよいフェニル基又は複素環基を示し；
Ｙは基−Ｃ（＝Ｏ）−、基−Ｒ12−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、基−Ｓ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ12−又は基−Ｒ12−Ｏ−（基中、Ｒ12は低級アルキレン基を示す）を示し；
Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4及びＺ5で構成される環は窒素を１〜３個有する５員の複素環基を示し、Ｚ3及びＺ4上にはヒドロキシ基又はオキソ基（＝Ｏ）が置換されていてもよい）
で表される化合物又はその塩を有効成分とするカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤を提供するものである。
また、本発明は、次の化合物又はその塩を有効成分とするカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤を提供するものである。
【００１４】
【化３】
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、ＣＯＭＴを活性化し、末梢血中のＮＥ代謝能力を強化することにより、腎機能障害の進展・増悪の抑制、ひいては透析への移行抑制や、心血管系リスクの低減が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】ＣＯＭＴ活性測定法の手順を示す図である。
【図２】ＳＡＨａｓｅ共存でのＣＯＭＴ活性を示す図である。
【図３】ＳＡＨとサンプル化合物共存での反応阻害曲線を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明のＣＯＭＴ活性化剤の第一の有効成分は、一般式（１）で表される化合物又はその塩である。
一般式（１）中、Ｒ1で示される低級ヒドロキシアルキル基としては、炭素数１〜６の直鎖又は分岐鎖のヒドロキシアルキル基が挙げられ、具体的にはヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、１−ヒドロキシプロピル基等が挙げられる。このうちヒドロキシメチル基が特に好ましい。
【００１８】
当該ヒドロキシアルキル基の置換基としては、低級アルカノイル基、置換基を有していてもよいカルバモイル基が挙げられる。
低級アルカノイル基としては、炭素数１〜８のアルカノイル基が挙げられ、例えば、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、マロニル基、スクシニル基等が挙げられる。このうちアセチル基が好ましい。
【００１９】
置換基を有していてもよいカルバモイル基としては、次の一般式（３）
【００２０】
【化４】
【００２１】
（式中、Ｒ8及びＲ9は同一又は異なって水素原子、炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐鎖のアルキル基、又は置換基を有していてもよい炭素数３〜６のシクロアルキル基を示す）
で表される基が挙げられる。炭素数３〜６のシクロアルキル基に置換し得る基としては、フリル基、フルフリル基等が挙げられる。
なかでもＮ−Ｃ1-6アルキルカルバモイル基、Ｎ−Ｃ3-6シクロアルキルカルバモイル基が好ましく、特にＮ−プロピルカルバモイル基、Ｎ−シクロヘキシルカルバモイル基が好ましい。
【００２２】
Ｒ2で示される低級アルキル基としては、炭素数１〜６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が挙げられ、具体的にはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ジメチル基、トリメチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等が挙げられる。なかでもｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基が好ましい。
【００２３】
Ｒ2で示される複素環基としては、酸素、窒素又は硫黄原子等を１又は２個含み、芳香環と縮合していてもよい脂環族あるいは芳香族の複素環基が挙げられ、具体的にはフリル基、チエニル基、ピロリル基、ピリジル基、ピラジル基、ピリミジル基、イミダゾリル基、インドリル基、キノリル基、イソキノリル基、ピペリジノ基、ピペラジニル基、ピロリジニル基、モルホリノ基等が挙げられる。なかでもフリル基、チエニル基、ピリジル基が好ましい。
【００２４】
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5及びＲ6で示される低級アルキル基は、前述と同義である。なかでも、メチル基が好ましい。
【００２５】
Ｒ4及びＲ5は、それらが結合する原子と一緒になって置換基を有していてもよい脂環式不飽和炭化水素基又は複素環基を形成するが、置換基を有していてもよい脂環式不飽和炭化水素基を形成する場合、Ｒ4が結合する原子は炭素原子である（すなわち、Ａ2は炭素原子を示す）。
ここで、置換基を有していてもよい脂環式不飽和炭化水素基としては、シクロペンテニル基、シクロヘキセニル基、シクロヘプテニル基、シクロオクテニル基等が挙げられる。
当該脂環式不飽和炭化水素基の置換基としては、前述と同義の低級アルキル基が挙げられ、なかでもジメチル基が好ましい。
【００２６】
Ｒ4及びＲ5が結合する原子と一緒になって形成される複素環基は、前述と同義である。
ここでの複素環基においては、同一の炭素原子上に２つの水素原子を有する複素環の場合、それらの水素原子がオキソ基と置換して、２−ピリドン、２−ピラジノン等の複素環式ケトンを形成してもよい。すなわち、Ｒ4及びＲ5が結合する原子と一緒になって形成される複素環基としては、ピリジル基、又は２−ピリドン等の複素環式ケトンが好ましい。この場合、Ｒ4が結合する原子は窒素原子、すなわちＡ2は窒素原子であることが好ましい。
【００２７】
Ａ1で示されるＮ−Ｒ7におけるＲ7は、水素原子、置換基を有していてもよい低級アルキルチオ低級アルキル基、又は置換基を有していてもよい低級アルカノイル基であり、当該低級アルカノイル基は前述と同義である。
低級アルキルチオ低級アルキル基は、炭素数１〜６のアルキルチオ基を有する前述と同義の低級アルキル基が挙げられ、なかでもブチルチオプロピル基が好ましい。
Ｒ7における低級アルキルチオ低級アルキル基の置換基としては、ヒドロキシ基が挙げられる。
【００２８】
Ｒ7における低級アルカノイル基の置換基としては、置換基を有していてもよいカルバモイル基が挙げられる。ここで、置換基を有していてもよいカルバモイル基は前述と同義である。なかでもＮ−Ｃ1-6アルキルカルバモイル基、置換基を有していてもよいＮ−Ｃ3-6シクロアルキルカルバモイル基が好ましく、特にフルフリル基で置換されていてもよいＮ−シクロヘキシルカルバモイル基が好ましい。
【００２９】
一般式（１）中、Ａ1がＮ−Ｒ7である場合、Ｒ1は水素原子が好ましい。また、Ａ1が酸素原子である場合、Ｒ1は置換基を有していてもよい低級ヒドロキシアルキル基が好ましい。
【００３０】
一般式（１）中、破線は、この部分に二重結合があってもよいことを示す。
【００３１】
一般式（１）において、好ましい置換基の組み合わせの一例として、例えば、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ6が水素原子であり、Ｒ4及びＲ5がそれらと結合する原子と一緒になって芳香族複素環基を形成し、Ａ1がＮ−Ｒ7であり、Ａ2が窒素原子であることを挙げることができる。
また、Ｒ1が置換基を有していてもよい低級ヒドロキシアルキル基であり、Ｒ2が低級アルキル基又は芳香族複素環基であり、Ｒ3及びＲ6が低級アルキル基であり、Ｒ4及びＲ5が同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基であり、Ａ1が酸素原子であり、Ａ2が炭素原子であること；Ｒ1が置換基を有していてもよい低級ヒドロキシアルキル基であり、Ｒ2及びＲ3が水素原子であり、Ｒ4及びＲ5がそれらと結合する原子と一緒になって置換基を有していてもよい脂環式不飽和炭化水素基を形成し、Ｒ6が低級アルキル基であり、Ａ1が酸素原子であり、Ａ2が炭素原子であることを挙げることができる。
【００３２】
さらに、好ましい置換基の組合せの一例として、例えば、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ6が水素原子であり、Ｒ4及びＲ5がそれらと結合する原子と一緒になって複素環式ケトンを形成しを形成し、Ａ1がＮ−Ｒ7であり、Ｒ7が置換基を有していてもよい低級アルキルチオ低級アルキル基又は置換基を有していてもよい低級アルカノイル基であり、Ａ2で窒素原子であり、破線が単結合であることを挙げることができる。
また、Ｒ1がＮ−低級アルキルカルバモイル基で置換されていてもよい低級ヒドロキシアルキル基であり、Ｒ2が低級アルキル基又はフリル基であり、Ｒ3及びＲ6が低級アルキル基であり、Ｒ4及びＲ5が同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基であり、Ａ1が酸素原子であり、Ａ2が炭素原子であり、破線が二重結合であること；Ｒ1が低級アルカノイル基で置換されていてもよい低級ヒドロキシアルキル基であり、Ｒ2、Ｒ3及びＲ6が低級アルキル基であり、Ｒ4及びＲ5が同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基であり、Ａ1が酸素原子であり、Ａ2が炭素原子であり、破線が二重結合であること；Ｒ1が低級アルカノイル基で置換されていてもよい低級ヒドロキシアルキル基であり、Ｒ2及びＲ3が水素原子であり、Ｒ4及びＲ5がそれらと結合する原子と一緒になって置換基を有していてもよい脂環式不飽和炭化水素基を形成し、Ｒ6が低級アルキル基であり、Ａ1が酸素原子であり、Ａ2が炭素原子であり、破線が単結合であることを挙げることができる。
【００３３】
一般式（１）の化合物のうち、特に好ましい化合物は次の化合物１〜７である。
【００３４】
【化５】
【００３５】
本発明のＣＯＭＴ活性化剤の第二の有効成分は、一般式（２）で表される化合物又はその塩である。
一般式（２）中、Ｒ10で示される低級アルキル基としては、前述と同義である。なかでもメチル基、ｎ−プロピル基が好ましい。
当該低級アルキル基の置換基としては、前述と同義の複素環基が挙げられ、ピペリジノ基、ピペラジニル基、ピロリジニル基、モルホリノ基が好ましく、特にモルホリノ基が好ましい。
【００３６】
Ｒ10で示される低級アルキルチオ基としては、炭素数１〜６のアルキルチオ基が挙げられ、例えば、メチルチオ基、エチルチオ基、プロピルチオ基等が挙げられる。このうちメチルチオ基が特に好ましい。
当該低級アルキルチオ基の置換基としては、カルボキシル基又は低級アルコキシカルボニル基が挙げられる。ここで、低級アルコキシカルボニル基としては、炭素数１〜６の直鎖状又は分岐鎖状のアルコキシ基を有するカルボニル基で、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ブトキシカルボニル基等が挙げられる。なかでもメトキシカルボニル基が好ましい。
【００３７】
Ｒ11で示されるハロゲン原子としては、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素が挙げられ、なかでもフッ素又は塩素好ましい。置換位置は特に限定されないが、メタ位又はパラ位が好ましく、特にパラ位が好ましい。
【００３８】
Ｒ11で示されるハロ低級アルキル基としては、前記ハロゲン原子で置換された前記低級アルキル基を意味し、例えば、フルオロメチル基、ジフルオロメチル基、トリフルオロメチル基、クロロメチル基、ジクロロメチル基、トリクロロメチル基、２−クロロ−１，１−ジメチルエチル基等が挙げられる。なかでもトリフルオロメチル基が好ましい。
【００３９】
Ｘで示される置換基を有していてもよいフェニル基とは、１〜３個の置換基を任意の位置に有していてもよいフェニル基を意味する。ここで置換基としては、前述と同義の低級アルキル基、低級アルコキシ基が挙げられる。低級アルキル基としては、メチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基が好ましい。低級アルコキシ基は、炭素数１〜６の直鎖状又は分岐鎖状のアルコキシ基が挙げられ、なかでもエトキシ基が好ましい。
置換基の数としては、１又は２が好ましい。なお、置換基が２個以上の時は相異なる基の組合せであってもよい。
【００４０】
Ｘで示される複素環基としては、前述と同義の複素環基が挙げられ、なかでもキノリル基、イソキノリル基が好ましい。
【００４１】
Ｙは、基−Ｃ（＝Ｏ）−、基−Ｒ12−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、基−Ｓ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ12−又は基−Ｒ12−Ｏ−（基中、Ｒ12は低級アルキレン基を示す）を示すが、ここで、Ｒ12で示される低級アルキレン基としては、炭素数１〜６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基が挙げられ、例えば、メチレン基、エチレン基、プロピレン基等が挙げられる。なかでもメチレン基が好ましい。
【００４２】
Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4及びＺ5で構成される窒素を１〜３個有する５員の複素環基としては、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、ピロリニル基、ピロリジニル基、トリアゾリル基等が挙げられる。なかでもピロリル基、トリアゾリル基が好ましい。トリアゾリル基の具体例としては、１，３，４−トリアゾール−１−イル基、１，２，４−トリアゾール−１−イル基、１，２，３−トリアゾール−１−イル基等が挙げられる。
【００４３】
Ｚ3及びＺ4上にはヒドロキシ基又はオキソ基（＝Ｏ）が置換されていてもよい。すなわち、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4及びＺ5で構成される窒素を１〜３個有する５員の複素環基において、同一の炭素原子上に２つの水素原子を有する複素環の場合、それらの水素原子がオキソ基と置換して、２−オキソピロリン、２−オキソピロリジン等の複素環式ケトンを形成してもよい。
本発明において、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4及びＺ5で構成される環としては、１，３，４−トリアゾール−１−イル基又は３−ヒドロキシ−２−オキソピロリン−５−イル基が好ましい。
【００４４】
一般式（１）において、好ましい置換基の組み合わせの一例として、例えば、Ｒ10が置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ11がハロゲン原子であり、Ｘが置換基を有していてもよいフェニル基であり、Ｙが基−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4及びＺ5で構成される環が３−ヒドロキシ−２−オキソピロリン−５−イル基であること；Ｒ10が置換基を有していてもよい低級アルキルチオ基であり、Ｒ11がハロゲン原子であり、Ｘが置換基を有していてもよいフェニル基であり、Ｙが基−Ｒ12−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4及びＺ5で構成される環が１，３，４−トリアゾール−１−イル基であること；Ｒ10が置換基を有していてもよい低級アルキルチオ基であり、Ｒ11がハロ低級アルキル基であり、Ｘが複素環基であり、Ｙが基−Ｒ12−Ｏ−であり、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4及びＺ5で構成される環が１，３，４−トリアゾール−１−イル基であること；Ｒ10が置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ11がハロゲン原子であり、Ｘは置換基を有していてもよいフェニル基であり、Ｙが基−Ｓ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ12−であり、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4及びＺ5で構成される環が１，３，４−トリアゾール−１−イル基であることを挙げることができる。
【００４５】
一般式（２）の化合物のうち、特に好ましい化合物は次の化合物８〜１１である。
【００４６】
【化６】
【００４７】
本発明のＣＯＭＴ活性化剤の第三の有効成分は、次の化合物又はその塩である。
【００４８】
【化７】
【００４９】
本発明において、化合物の塩としては、薬学的に許容できるものであれば特に制限はない。例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩、トリアルキルアミン塩等の有機塩基塩；塩酸塩、硫酸塩等の鉱酸塩；酢酸塩等の有機酸塩等が挙げられる。
【００５０】
また、本発明の化合物もしくはその塩は溶媒和物であってもよい。溶媒和物としては、水和物、アルコール和物（例えば、エタノール和物）等が挙げられる。さらに、本発明の化合物には、立体異性体或いは不斉炭素原子に由来する光学異性体が存在することもあるが、これらの立体異性体、光学異性体及びこれらの混合物のいずれも本発明に含まれる。
【００５１】
本発明の化合物は、天然物から抽出することにより又は公知の化学合成法により製造することができる。また、Ｉｎｔｅｒ Ｂｉｏ Ｓｃｒｅｅｎ社等から市販品として入手することができる。
【００５２】
後述する実施例において示されるように、本発明で用いられる化合物は、組換えヒトＣＯＭＴを用いた酵素活性の評価系において、ＣＯＭＴ活性を有意に上昇させる作用を示した。
従って、本発明の薬剤は、ＣＯＭＴ活性化、末梢血中のＮＥ代謝能力の強化を通じ、腎機能障害の進展・増悪の抑制、透析導入の遅延や抑制、心血管病変（ＣＶＤ）リスクの低減に有用である。
【００５３】
本発明のＣＯＭＴ活性化剤の投与形態としては、特に限定されず治療目的に応じて適宜選択でき、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤、シロップ剤等による経口投与や、注射剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、点眼剤、点鼻剤等による非経口投与が挙げられる。
斯かる製剤は、本発明で用いられる化合物又はその塩を単独、又は他の薬学的に許容される担体を用いて、公知の方法で製造することができる。
【００５４】
薬学的に許容される担体としては、特に限定されないが、例えば、乳糖、マンニトール、無水リン酸水素カルシウム等の賦形剤；ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン等の結合剤；でんぷん、カルボキシメチルセルロース等の崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤；塩化ナトリウム等の等張化剤；リン酸水素ナトリウム、リン酸一水素ナトリウム等の緩衝剤；溶解補助剤、着色剤、保存剤、矯味剤、香料等が挙げられる。
【００５５】
本発明で用いられる化合物又はその塩の成人１日当たりの投与量は、患者の症状や体重、年齢、化合物の種類、投与経路等によって変動し得るが、経口投与の場合には、投与量は約１〜１，０００ｍｇが適切であり、約１０〜３００ｍｇが好ましい。非経口投与の場合は、経口投与の場合の１０分の１量〜２分の１量を投与すればよい。これらの投与量は、患者の症状や体重、年齢等により適宜増減することが可能である。
投与対象者としては、それを必要としている者であれば特に限定されないが、本発明のＣＯＭＴ活性化剤はＮＥの代謝能力を高めることができることから、特にＮＥが亢進している腎機能障害患者における投与が有効である。
【実施例】
【００５６】
以下、本発明について実施例をあげて具体的に説明するが、本発明はこれらによって何等限定されるものではない。
【００５７】
参考例１
＜組換えヒトＣＯＭＴの調製＞
完全長のヒトＣＯＭＴｃＤＮＡ（ＮＣＢＩ登録受入番号：ＢＣ０１１９３５）が挿入されたプラスミドｐＯＴＢ７を有する大腸菌（ＭＧＣ Ｃｏｌｅｃｔｉｏｎ ＦＬ１００２）をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社より購入し、特開２００６−２３号公報を参考に組換えヒトＣＯＭＴをグルタチオン-S-トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合蛋白質として発現させ、グルタチオンアフィニティーカラムで精製し、トロンビン処理によりＧＳＴ部分を除去して精製した。
【００５８】
参考例２
＜ＨＰＬＣ−蛍光検出法＞
ＣＡとそれらの３−Ｏ−メチル代謝物を同時に測定するために、角田ら（Ｔｓｕｎｏｄａ Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ａｎａｌｙｓｔ（２００１）１２６，６３７−６４０）によって開発されたＣＡ分析法を適用した。
具体的には、サンプルをオートサンプラー（ＡＳ−９５０，Ｊａｓｃｏ，Ｊａｐａｎ）より注入し、前処理用溶媒（１０ｍＭ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．５））により前処理カラム（陽イオン交換カラム）に導入する。このとき、ＣＡとそれらの３ −Ｏ−メチル代謝物を含むアミンのみが前処理カラムに吸着される。次に、カラムセレクション（ＨＶ−１５９２−０１，Ｊａｓｃｏ，Ｊａｐａｎ）によりバルブを切り替え、前処理カラムに分離用溶媒（７５ｍＭ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ，７５ｍＭ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ，４ｍＭ １−ｈｅｘａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｓｏｄｉｕｍ ｓａｌｔ，６％ ａｃｅｔｎｉｔｒｉｌｅ（ｐＨ３．２））を流すことにより、前処理カラムからＣＡとそれらの３−Ｏ−メチル代謝物を脱離させ、分離カラム（ｏｃｔａｄｅｃｙｌｓｉｌｉｃａカラム：ＯＤＳカラム）にて、ＣＡとそれらの３−Ｏ−メチル代謝物を分離する。分離されたＣＡとそれらの３−Ｏ−メチル代謝物を電気化学酸化ユニット（Ｇｕａｒｄ Ｃｅｌｌ ５０２０，ＥＳＡ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）によりｏ−キノン体に導き、次に、ｏ−キノン体とエチレンジアミン溶液（１０５ｍＭ ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ，１７５ｍＭ ｉｍｉｄａｚｏｌｅを含むａｃｅｔｎｉｔｒｉｌｅ：ｅｔｈａｎｏｌ：Ｄ．Ｗ．ｆｏｒＨＰＬＣ＝８５．２５：４．７５：１０の溶液）を反応オーブン（ＲＯ−２０６１，Ｊａｓｃｏ，Ｊａｐａｎ）内で反応させ（９０℃、１０ｍ）、蛍光物質（キノキサリン誘導体）に導き、蛍光検出器（ＦＰ−１５２０，Ｊａｓｃｏ，Ｊａｐａｎ，励起波長Ｅｘ：４１０ｎｍ，蛍光波長Ｅｍ：５００ｎｍ）にて検出する。
前処理用溶媒の流速は１ｍＬ／ｍｉｎに、分離用溶媒の流速は０．５ｍＬ／ｍｉｎに、エチレンジアミン溶液の流速は０．３２ｍＬ／ｍｉｎに設定した。
前処理カラムは陽イオン交換カラム（ＣＡＰＣＥＬＬ ＭＦ ＳＣＸ Ｓ−５，ＳＨＩＳＥＩＤＯ，Ｊａｐａｎ）を、分離カラムはＯＤＳカラム（ＵＫ−Ｃ１８ １５０×４．６ｍｍ， Ｉｍｔａｋｔ，Ｊａｐａｎ）を使用した。ＯＤＳカラムはカラムオーブン（ＣＯ−１５６０，Ｊａｓｃｏ，Ｊａｐａｎ）により、４０℃に保温した。
【００５９】
なお、上記分析法により、ＣＯＭＴの基質であるＮＥとその３−Ｏ−メチル代謝物であるＮＭＮ、４−Ｏ−メチル代謝物である４−メトキシノルエピネフリン（４−ＯＭｅ）が２０分以内に十分に分離可能であることが確認された。検出限界は１０〜２０ｐｍｏｌｅ程度であり、ＮＭＮのピーク面積における日内変動は２．７％、日間変動は３．６％であった。
【００６０】
参考例３
＜ＣＯＭＴ活性測定法＞
（１）酵素反応条件の至適化
ＣＯＭＴ活性測定の至適化を行うため、酵素反応の反応時間、酵素量、基質量に対する直線性を確認し、かつＫｍ等の酵素の触媒反応に関する諸性質を確認した。
酵素濃度を２８，８３，２５０，５００，１０００ｎＭに、かつ反応時間を１〜５，８，１０，１５，２０，２５，３０，４０，５０，６０ｍｉｎに変化させ検討したところ、［ＣＯＭＴ］＝２５０ｎＭでは、検出限界以上のＮＭＮの生成が［ＮＥ］0＝２０００μＭ、［ＳＡＭｅ］0＝４００μＭという条件下で（［Ｘ］0は物質Ｘの初期濃度を示す）、反応開始直後（１ｍｉｎ）から、反応開始２０分まで反応時間と生成物の生成量に直線性が見られた。なお、酵素濃度２８ｎＭは０．３３μｇタンパク質／５００μＬ反応液に相当する。
【００６１】
２）至適ＮＥ濃度を決定するため、［ＣＯＭＴ］＝２５０ｎＭ、反応時間：１５ｍｉｎの条件で、ＮＥ濃度を１０，２０，５０，１００，２００，５００，１０００，２０００μＭに変化させてＣＯＭＴ活性測定を行い、ＮＥのＫｍ値を算出した。
その結果、ＫｍNEは１２４〜１８８μＭであり、文献値（ブタ肝臓ＣＯＭＴ：４８８μＭ，組換えヒトＳ−ＣＯＭＴ：３６９μＭ，ラット赤血球Ｓ−ＣＯＭＴ：３６６μＭ，ヒト赤血球：９１．３μＭ，Ｔｓｕｎｏｄａ Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ａｎａｌｙｓｔ（２００１）１２６，６３７−６４０；Ｍａｓｕｄａ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００２）３９，５８９−５９４；Ｔｉｍｏ Ｌ．ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９５）３４，４２０２−４２１０；Ａｏｙａｍａ Ｎ．ｅｔ ａｌ．ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＨＲＯＭＡＴＯＧＲＡＰＨＹ Ａ（２００５）１０７４，４７−５１）と実験精度内で一致し、Ｓ−ＣＯＭＴ活性測定のためには［ＮＥ］0は１０００μＭ程度で十分と考えられた。
【００６２】
３）至適ＳＡＭ濃度を決定するため、［ＣＯＭＴ］＝２５０ｎＭ、反応時間：１５ｍｉｎの条件で、ＳＡＭ濃度を３，１０，３０，１００，３００，４００，１０００，２０００，３０００μＭに変化させてＣＯＭＴ活性測定を行い、ＳＡＭのＫｍ値を算出した。
その結果、ＫｍSAMは７０〜１６０μＭ程度と推定され、文献値（組換えヒトＳ−ＣＯＭＴ：４７μＭ，ヒト赤血球：７μＭ，Ｍａｓｕｄａ Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００２）３９，５８９−５９４；Ｔｉｍｏ Ｌ．ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９５）３４，４２０２−４２１０）との乖離は１．５〜２０倍程度となり、実験精度内で一致していると考えられた。また、［ＳＡＭ］0＝２０００μＭ以上では反応速度ｖの低下が見られたが、これはＳＡＭの代謝物であり、ＣＯＭＴの阻害物質であるＳＡＨの影響によるものと考えられた。よって、Ｓ−ＣＯＭＴ活性測定のためには［ＳＡＭ］0は１０００μＭ程度で十分であると考えられた。
【００６３】
４）上記決定した活性測定条件にて、ＣＯＭＴの阻害剤として多くの研究報告がある３，５−ｄｉｎｉｔｒｏｃａｔｅｃｈｏｌ（３，５−ＤＮＣ）のＩＣ50値およびＫｉ値、ＳＡＨのＩＣ50値およびＫｉ値を算出した。
３，５−ＤＮＣは終濃度が１〜３，６，１０，２０，３０，６０，１００，２００，３００，６００，１０００ｎＭとなるようにＤＭＳＯを用いて調製し、反応系では予めＣＯＭＴ、３，５−ＤＮＣ及びＮＥを共存させ、ＳＡＭを加えることで反応を開始した。また、ＳＡＨは終濃度が０．３，０．５，１，３，５，１０，３０，５０，１００，３００，５００，１０００μＭとなるようにＤＭＳＯを用いて調製し、反応系では予めＣＯＭＴ、ＳＡＭ及びＳＡＨを共存させ、ＮＥを加えることで反応を開始した。
その結果、ＩＣ503,5-DNCは３０〜６０ｎＭ、Ｋｉ3,5-DNCは４ｎＭであり、ＩＣ50は文献値（組み換えラットＳ−ＣＯＭＴ：４４ｎＭ，Ｍａｒｉａ Ｊ Ｂ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（２００１）２３，１０６−１１２）と実験精度内でほぼ一致した値となった。また、ＩＣ50SAHはＳＡＭ濃度：３００μＭの場合に５０〜１００μＭ、ＳＡＭ濃度：１０００μＭの場合に１００〜３００μＭ、ＫｉSAHは１４μＭであり、ＩＣ50は文献値（ラット肝臓ＣＯＭＴ：１３３μＭ，Ｍ．Ａ．Ｖｉｅｉｒａ−Ｃｏｅｌｈｏ．ｅｔ ａｌ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９９）８２１，６９−７８）と実験精度内でほぼ一致した値となった。
【００６４】
以上により、組換えヒトＣＯＭＴの至適反応条件は［酵素濃度：２５０ｎＭ，反応時間：１５ｍｉｎ］であり、酵素反応速度論定数は、基質に対しては［ＫｍNE：１６０μＭ，ＫｍSAM：１００μＭ］、ＮＥの代表的な競合阻害剤である３，５−ＤＮＣに対しては［ＩＣ503,5-DNC：３０〜６０ｎＭ，Ｋｉ3,5-DNC：４ｎＭ］、ＣＯＭＴのプロダクト阻害剤であるＳＡＨに対しては［ＩＣ50SAHはＳＡＭ濃度が３００μＭの場合：５０〜１００μＭ，ＳＡＭ濃度が１０００μＭの場合：１００〜３００μＭとなった。またＫｉSAH＝１４μＭ］となり、既に報告されている天然型ＣＯＭＴの酵素反応速度論的定数と同等であることが確認された。
【００６５】
５）サンプル化合物によるＣＯＭＴ活性化を定量的に測定できる系を決定するため、任意化合物を用いて、酵素反応至適条件［酵素濃度：２５０ｎＭ，反応時間：１５ｍｉｎ］を保ったまま［ＮＥ］と［ＳＡＭ］の初期濃度を変化させ、ＣＯＭＴ活性を評価した。
その結果、反応条件が［ＮＥ］0＝１０００μＭ、［ＳＡＭ］0＝１００μＭの場合に最大のＣＯＭＴ活性化が確認され、ＮＥの濃度によらずＳＡＭの濃度が低濃度（Ｋｍ値の１倍の濃度）である場合に、安定したＣＯＭＴ活性化が確認された。それに対して、ＳＡＭが飽和濃度（Ｋｍ値の１０倍の濃度）の条件では、ＣＯＭＴの活性化はほとんど確認できなかった。よって、ＣＯＭＴ活性作用を有する化合物は、ＳＡＭの酵素への親和性あるいは触媒反応速度に影響を与えることでその作用を示す可能性が示唆された。
【００６６】
以上より、ＣＯＭＴ活性測定法は、［酵素濃度］＝２５０ｎＭ、反応時間：１５ｍｉｎ、［ＮＥ］0＝１０００μＭ（Ｋｍ値の６倍の濃度）、［ＳＡＭ］0＝１００μＭ（Ｋｍ値の１倍の濃度）の条件を用いることに決定した。
【００６７】
（２）ＣＯＭＴ活性測定法
具体的な手順は図１に示した。
反応液Ａ（Ａ１＋Ａ２）と反応液Ｂをそれぞれの調製し、反応液Ａ及びサンプル化合物を４７５μＬずつ１．５ｍＬチューブに分注し、ヒートブロック上で３７℃にて、１０分間のプレインキュベーションを行った後、反応液Ｂを２５μＬ加えて、ヒートブロック上で３７℃にて、１５分間の酵素反応を行った。反応開始から１５分後、氷冷した４Ｍ ＨＣｌＯ4 ５０μＬを加えて反応を停止し、１０，０００ｒ／ｍｉｎ（１０，０００ｇ）、４℃にて、１０分間の遠心分離を行った。次に、得られた上清４００μＬを、氷冷した希釈溶液（１０ｍＭ Ｒｅｄｕｃｅｄ Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ，１０ｍＭ Ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ，０．１％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００，０．１ｍｇ／ｍＬ ＥＤＴＡ−２Ｎａ）４００μＬの入った２．０ｍＬチューブに回収し、その一部（３０μＬ）をＨＰＬＣに導入し、ＣＯＭＴ活性を測定した。
【００６８】
試験例１
サンプル化合物として、Ｉｎｔｅｒ Ｂｉｏ Ｓｃｒｅｅｎ社（ＩＢＳ社）から購入した化合物１〜７（表１）、化合物８〜１１（表３）、化合物１２〜２３（表５）並びに参考化合物（表２、４）を用いた。
サンプル化合物はＤＭＳＯに溶解し、終濃度１００μＭとなるように反応液に加えた。ＣＯＭＴ賦活化の評価はコントロールであるＤＭＳＯをサンプル化合物の代わりに用いた場合と比較した。
その結果を表１〜５に示す。
【００６９】
【表１】
【００７０】
【表２−１】
【００７１】
【表２−２】
【００７２】
【表３】
【００７３】
【表４−１】
【００７４】
【表４−２】
【００７５】
【表４−３】
【００７６】
【表５−１】
【００７７】
【表５−２】
【００７８】
表１、３及び５より、一般式（１）で表される化合物、一般式（２）で表される化合物及び上記表５に示す化合物は優れたＣＯＭＴ活性化作用を有することが確認された。
【００７９】
試験例２ ＣＯＭＴに対する生成物阻害の影響
１）ＳＡＨａｓｅ共存下におけるＳＡＨのＣＯＭＴへの影響
ＣＯＭＴはＳＡＨによる生成物阻害を受ける。反応系からＳＡＨを消去するべく、ＳＡＨａｓｅを共存させてＣＯＭＴ活性測定を行い、反応系からｉｎ ｓｉｔｕにＳＡＨを除去することによるＣＯＭＴ活性への影響を検討した。
ＳＡＨａｓｅはＳＡＨをアデノシンとホモシステインに分解する酵素である。ＳＡＨａｓｅによる加水分解反応の平衡は合成方向に著しく傾いているが、生体内では生成物がアデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）等により速やかに代謝されるため、実際には分解系に作用する（第３版 酵素バンドブック（２００８）朝倉書店（東京）八木ら編、２４７−２４８，６１７）。
まず、Ｊｏｈｎ Ｌ．ｐａｌｍｅｒら（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９７９）２５４，１２１７−１２２６）の文献を参考に、Ｓｉｇｍａ社より購入したＳＡＨａｓｅの活性を下記方法により測定すると、５０［ｎｍｏｌｅ／ｍｉｎ／ｍｇｐｒｏｔｅｉｎ］となった。
【００８０】
＜ＳＡＨａｓｅの活性測定＞
反応液Ａならびに反応液Ｂをそれぞれ表６に示す通りに調製した。１ｍＬ石英セルに反応液Ａを９７５μＬ加えて、３７℃に設定した分光光度計（Ｖ−５５０，Ｊａｓｃｏ，Ｊａｐａｎ）に１０分間静置した。次に、反応液Ｂを２５μＬ加え、３７℃に設定した分光光度計に静置して、２５４ｎｍにおける吸光度を５分おきに２時間測定した。
【００８１】
【表６】
【００８２】
共存させるＳＡＨａｓｅの量を０．２５，０．５，１，２，４ｕｎｉｔｓに決定し、ＣＯＭＴの活性測定を行った。この条件では、ＮＭＮとＳＡＨは反応時間１５分の間におよそ７ｎｍｏｌｅ生じている。つまり、ＣＯＭＴの反応に共役してＳＡＨの供給は０．５ｎｍｏｌｅ／ｍｉｎで行われている。
ＳＡＨａｓｅの量を横軸（ｕｎｉｔ）、ＳＡＨａｓｅが存在した場合の見かけの反応速度比を縦軸（％）にプロットを示した（図２）。ＳＡＨａｓｅの共存下でＣＯＭＴ活性測定を行うと、ＳＡＨａｓｅの用量依存的にＣＯＭＴの見かけの反応速度が上昇した。つまり、ＣＯＭＴの反応系からＳＡＨを除去することで、ＣＯＭＴの見かけの活性が上昇することが示唆された。
【００８３】
２）ＳＡＨのＣＯＭＴへの影響
上記試験例１で用いた化合物と、終濃度５，３０，１８０，１０００μＭとなるようにＤＭＳＯを用いて調製したＳＡＨを反応開始時から反応系へ共存させ、ＣＯＭＴへの影響を検討した。
ＳＡＨ濃度（横軸，μＭ）と反応速度ｖ（縦軸，ｎｍｏｌｅ／１５ｍｉｎ／ｍｇｐｒｏｔｅｉｎ）をプロットした結果を図３に示した。その結果、本発明で用いられる化合物は、反応初期からＳＡＨが存在している場合でも、ＣＯＭＴを活性化した。共存ＳＡＨ濃度が５μＭでは最大４９％、ＳＡＨが３０μＭで最大５５％、ＳＡＨが１８０μＭで最大７５％の見かけの活性の上昇が見られ、賦活化の割合は反応初期から存在していたＳＡＨ濃度が高くなるほどに大きくなった。本発明のＣＯＭＴ活性化剤はＳＡＨによるＣＯＭＴ活性の低下を抑制している。
以上より、本発明の化合物はＣＯＭＴのＳＡＨに対する親和性を低下させたと考えることができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（１）
【化１】
（式中、Ｒ1は水素原子又は置換基を有していてもよい低級ヒドロキシアルキル基を示し；
Ｒ2は水素原子、低級アルキル基又は複素環基を示し；
Ｒ3は水素原子又は低級アルキル基を示し；
Ｒ4及びＲ5は同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基を示すか、或いはＲ4及びＲ5が結合する原子と一緒になって置換基を有していてもよい脂環式不飽和炭化水素基又は複素環基を形成してもよく；
Ｒ6は水素原子又は低級アルキル基を示し；
Ａ1は酸素原子又はＮ−Ｒ7（Ｒ7は、水素原子、置換基を有していてもよい低級アルキルチオ低級アルキル基又は置換基を有していてもよい低級アルカノイル基を示し；
Ａ2は炭素原子又は窒素原子を示し；
破線は単結合又は二重結合を示す）
で表される化合物又はその塩を有効成分とするカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項２】
Ｒ1が水素原子、又は低級アルカノイル基もしくは次の一般式（３）
【化２】
（式中、Ｒ8及びＲ9は同一又は異なって水素原子、炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐鎖のアルキル基又は炭素数３〜６のシクロアルキル基を示す）
で表されるカルバモイル基で置換されていてもよい低級ヒドロキシアルキル基である、請求項１記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項３】
Ａ1が酸素原子又はＮ−Ｒ7（Ｒ7は、水素原子、ヒドロキシ基で置換されていてもよい低級アルキルチオ低級アルキル基又は次の一般式（３）
【化３】
（式中、Ｒ8及びＲ9は同一又は異なって水素原子、炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐鎖のアルキル基、又はフリル基もしくはフルフリル基で置換されていてもよい炭素数３〜６のシクロアルキル基を示す）
で表されるカルバモイル基で置換されていてもよい低級アルカノイル基を示す）である、請求項１又は２記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項４】
Ｒ2が水素原子、低級アルキル基又はフリル基である、請求項１〜３のいずれか１項記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項５】
Ｒ4及びＲ5が同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基を示すか、或いはＲ4及びＲ5が結合する原子と一緒になって低級アルキル基で置換されていてもよい脂環式不飽和炭化水素基又は複素環基を形成してもよい、請求項１〜４のいずれか１項記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項６】
Ｒ4及びＲ5が同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基を示すか、或いはＲ4及びＲ5が結合する炭素原子と一緒になって低級アルキル基で置換されていてもよいシクロヘキセニル基を形成するか、又はＲ4及びＲ5が結合する窒素原子及び炭素原子と一緒になって２−ピリドンを形成する、請求項１〜４のいずれか１項記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項７】
一般式（１）で表される化合物が次の化合物である、請求項１記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【化４】
【請求項８】
次の一般式（２）
【化５】
（式中、Ｒ10は置換基を有していてもよい低級アルキル基又は置換基を有していてもよい低級アルキルチオ基を示し；
Ｒ11は水素原子、ハロゲン原子又はハロ低級アルキル基を示し；
Ｘは置換基を有していてもよいフェニル基又は複素環基を示し；
Ｙは基−Ｃ（＝Ｏ）−、基−Ｒ12−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、基−Ｓ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ12−又は基−Ｒ12−Ｏ−（基中、Ｒ12は低級アルキレン基を示す）を示し；
Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4及びＺ5で構成される環は窒素を１〜３個有する５員の複素環基を示し、Ｚ3及びＺ4上にはヒドロキシ基又はオキソ基（＝Ｏ）が置換されていてもよい）
で表される化合物又はその塩を有効成分とするカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項９】
Ｒ10が複素環基で置換されていてもよい低級アルキル基、又はカルボキシル基もしくは低級アルコキシカルボニル基で置換されていてもよい低級アルキルチオ基である、請求項８記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項１０】
Ｘが低級アルキル基もしくは低級アルコキシ基で置換されていてもよいフェニル基又は複素環基である、請求項８又は９記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項１１】
Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ４及びＺ5で構成させる環が、１，３，４−トリアゾール−１−イル基又は３−ヒドロキシ−２−オキソピロリン−５−イル基である請求項８〜１０のいずれか１項記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項１２】
Ｒ10がモルホルノ基で置換されていてもよい低級アルキル基又はカルボキシル基もしくは低級アルコキシカルボニル基で置換されていてもよい低級アルキルチオ基である、請求項８〜１１のいずれか１項記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項１３】
Ｘが低級アルキル基もしくは低級アルコキシ基で置換されていてもよいフェニル基、キノリル基又はイソキノリル基である、請求項８〜１２のいずれか１項記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項１４】
一般式（２）で表される化合物が次の化合物である、請求項８記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【化６】
【請求項１５】
次の化合物又はその塩を有効成分とするカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【化７】
【請求項１】
次の一般式（１）
【化１】
（式中、Ｒ1は水素原子又は置換基を有していてもよい低級ヒドロキシアルキル基を示し；
Ｒ2は水素原子、低級アルキル基又は複素環基を示し；
Ｒ3は水素原子又は低級アルキル基を示し；
Ｒ4及びＲ5は同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基を示すか、或いはＲ4及びＲ5が結合する原子と一緒になって置換基を有していてもよい脂環式不飽和炭化水素基又は複素環基を形成してもよく；
Ｒ6は水素原子又は低級アルキル基を示し；
Ａ1は酸素原子又はＮ−Ｒ7（Ｒ7は、水素原子、置換基を有していてもよい低級アルキルチオ低級アルキル基又は置換基を有していてもよい低級アルカノイル基を示し；
Ａ2は炭素原子又は窒素原子を示し；
破線は単結合又は二重結合を示す）
で表される化合物又はその塩を有効成分とするカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項２】
Ｒ1が水素原子、又は低級アルカノイル基もしくは次の一般式（３）
【化２】
（式中、Ｒ8及びＲ9は同一又は異なって水素原子、炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐鎖のアルキル基又は炭素数３〜６のシクロアルキル基を示す）
で表されるカルバモイル基で置換されていてもよい低級ヒドロキシアルキル基である、請求項１記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項３】
Ａ1が酸素原子又はＮ−Ｒ7（Ｒ7は、水素原子、ヒドロキシ基で置換されていてもよい低級アルキルチオ低級アルキル基又は次の一般式（３）
【化３】
（式中、Ｒ8及びＲ9は同一又は異なって水素原子、炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐鎖のアルキル基、又はフリル基もしくはフルフリル基で置換されていてもよい炭素数３〜６のシクロアルキル基を示す）
で表されるカルバモイル基で置換されていてもよい低級アルカノイル基を示す）である、請求項１又は２記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項４】
Ｒ2が水素原子、低級アルキル基又はフリル基である、請求項１〜３のいずれか１項記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項５】
Ｒ4及びＲ5が同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基を示すか、或いはＲ4及びＲ5が結合する原子と一緒になって低級アルキル基で置換されていてもよい脂環式不飽和炭化水素基又は複素環基を形成してもよい、請求項１〜４のいずれか１項記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項６】
Ｒ4及びＲ5が同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基を示すか、或いはＲ4及びＲ5が結合する炭素原子と一緒になって低級アルキル基で置換されていてもよいシクロヘキセニル基を形成するか、又はＲ4及びＲ5が結合する窒素原子及び炭素原子と一緒になって２−ピリドンを形成する、請求項１〜４のいずれか１項記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項７】
一般式（１）で表される化合物が次の化合物である、請求項１記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【化４】
【請求項８】
次の一般式（２）
【化５】
（式中、Ｒ10は置換基を有していてもよい低級アルキル基又は置換基を有していてもよい低級アルキルチオ基を示し；
Ｒ11は水素原子、ハロゲン原子又はハロ低級アルキル基を示し；
Ｘは置換基を有していてもよいフェニル基又は複素環基を示し；
Ｙは基−Ｃ（＝Ｏ）−、基−Ｒ12−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、基−Ｓ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ12−又は基−Ｒ12−Ｏ−（基中、Ｒ12は低級アルキレン基を示す）を示し；
Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4及びＺ5で構成される環は窒素を１〜３個有する５員の複素環基を示し、Ｚ3及びＺ4上にはヒドロキシ基又はオキソ基（＝Ｏ）が置換されていてもよい）
で表される化合物又はその塩を有効成分とするカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項９】
Ｒ10が複素環基で置換されていてもよい低級アルキル基、又はカルボキシル基もしくは低級アルコキシカルボニル基で置換されていてもよい低級アルキルチオ基である、請求項８記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項１０】
Ｘが低級アルキル基もしくは低級アルコキシ基で置換されていてもよいフェニル基又は複素環基である、請求項８又は９記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項１１】
Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ４及びＺ5で構成させる環が、１，３，４−トリアゾール−１−イル基又は３−ヒドロキシ−２−オキソピロリン−５−イル基である請求項８〜１０のいずれか１項記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項１２】
Ｒ10がモルホルノ基で置換されていてもよい低級アルキル基又はカルボキシル基もしくは低級アルコキシカルボニル基で置換されていてもよい低級アルキルチオ基である、請求項８〜１１のいずれか１項記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項１３】
Ｘが低級アルキル基もしくは低級アルコキシ基で置換されていてもよいフェニル基、キノリル基又はイソキノリル基である、請求項８〜１２のいずれか１項記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【請求項１４】
一般式（２）で表される化合物が次の化合物である、請求項８記載のカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【化６】
【請求項１５】
次の化合物又はその塩を有効成分とするカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ活性化剤。
【化７】
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２０１２−１９７２３４（Ｐ２０１２−１９７２３４Ａ）
【公開日】平成２４年１０月１８日（２０１２．１０．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−６１２３０（Ｐ２０１１−６１２３０）
【出願日】平成２３年３月１８日（２０１１．３．１８）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り （１）平成２３年２月１８日、日本大学大学院薬学研究科発行の「平成２３年３月博士前期課程修了予定者修士論文発表要旨集」に発表 （２）平成２３年２月１８日、日本大学大学院薬学研究科主催の「平成２２年度日本大学大学院薬学研究科修士論文発表会」に文書をもって発表
【出願人】（８９９００００５７）学校法人日本大学 (650)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１０月１８日（２０１２．１０．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年３月１８日（２０１１．３．１８）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り （１）平成２３年２月１８日、日本大学大学院薬学研究科発行の「平成２３年３月博士前期課程修了予定者修士論文発表要旨集」に発表 （２）平成２３年２月１８日、日本大学大学院薬学研究科主催の「平成２２年度日本大学大学院薬学研究科修士論文発表会」に文書をもって発表
【出願人】（８９９００００５７）学校法人日本大学 (650)
【Ｆターム（参考）】
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