コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、並びにコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤
【課題】安全でかつ簡便に用いることができる、ヒト等の哺乳類におけるコラーゲン産生能、ヒアルロン酸産生能を促進させる、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、並びにコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤を提供する。
【解決手段】マメ科シカクマメ（Psophocarpus）属に属する植物の中から選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物からなるコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、並びにコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤。
【解決手段】マメ科シカクマメ（Psophocarpus）属に属する植物の中から選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物からなるコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、並びにコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はシカクマメ（Psophocarpus）属に属する植物またはその抽出物からなるコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、並びにコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は外側から角層、表皮、基底膜および真皮より構成されており、真皮はその中でも最も領域の広い部分であり、表皮ほど細胞が密に詰まっておらず、むしろ細胞外空間が多く、「細胞外マトリックス」と呼ばれる巨大分子の網目構造によって満たされている。この細胞外マトリックスは、真皮内の線維芽細胞等において産生され、ヒアルロン酸やデルマタン硫酸等の酸性ムコ多糖と呼ばれる多糖類と、コラーゲン、エラスチン等の線維性タンパク質で構成されている。細胞外マトリックスは、皮膚の弾力性、はり、みずみずしさ、新陳代謝等に直接的に関わっており、線維芽細胞等における細胞外マトリックスの産生が鈍ると、皮膚の弾力性やみずみずしさが失われ、シワ、小ジワ、肌荒れが発生しやすくなり、皮膚老化がもたらされる一因になる。
【０００３】
上記線維性タンパク質は主にコラーゲンからなり、その中でもＩ型コラーゲンが全体の８０％を占める。Ｉ型コラーゲンのほかにはIII、Ｖ、XII、およびXIV型コラーゲンの存在が知られている。老化皮膚に見られるシワ・たるみの成因の一つは、皮膚組織が加齢に伴ない菲薄化することによる。老化した皮膚において、真皮の主要なマトリックス成分であるコラーゲン線維の減少が著しく、このことが皮膚の厚さが減少する主たる原因となっている可能性が高い。したがって、コラーゲンの産生を促進させてコラーゲン量を維持することが、シワ・たるみの予防・改善に有効であると考えられる。
【０００４】
またコラーゲンの産生促進は、上記以外にも、皮膚の創傷治癒の改善のほか、骨粗しょう症、関節炎、腱鞘炎等の治療、高血圧の防止などにも有効である。
【０００５】
一方、上記多糖類中のヒアルロン酸は、細胞間隙への水分の保持、組織内にジェリー状のマトリックスを形成することに基づく細胞の保持、組織の潤滑性と柔軟性の保持、機械的障害等の外力に対する抵抗、および細菌感染の防止など、多くの機能を有している。昨今、癌転移との関連についても多くの研究がなされている。そして、真皮での線維芽細胞等におけるヒアルロン酸の産生促進剤として、例えばブプレウルム属植物抽出物を含む細胞外マトリックス産生促進剤が報告されている（例えば、特許文献１参照）。
【０００６】
ヒアルロン酸はまた、上記した真皮での線維芽細胞等における産生のほかに、表皮（特には表皮基底細胞など）での産生も知られており、表皮におけるヒアルロン酸量を増大させるヒアルロン酸産生促進剤も報告されている（例えば、特許文献２〜３参照）。
【０００７】
ヒアルロン酸は皮膚のほか、関節液、硝子体、靱帯等、生体に広く分布しており、ヒアルロン酸の産生促進は、保湿効果向上に加え、関節痛（変形性膝関節症）治療、皮膚のたるみ改善、ドライアイを主とした角結膜上皮障害治療、白内障・角膜移植手術時における前房保持などにも有効である。
【０００８】
このようにコラーゲン、ヒアルロン酸は、シワ、小ジワ、肌のたるみ、肌荒れ等の改善・防止、皮膚老化の防止のほか、膝関節症の改善剤や眼科手術用製剤などに適用し得ることから、コラーゲン、ヒアルロン酸の両者の産生促進効果のある物質が見出せれば、１つの物質で上記の症状改善や予防・治療等に広く適用することができるという利点がある。
【０００９】
なお後述するように、本発明はシカクマメ属植物の抽出物を利用した技術であるが、シカクマメ抽出物については、これまでに、表皮細胞におけるラミニン５の産生能を有することや、女性・妊婦用の薬草由来の健康保護、促進および栄養補助剤に用いられることなどが報告されている（例えば特許文献４〜５参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第９９／１７７１５号パンフレット
【特許文献２】特開平９−１７６０３６号公報
【特許文献３】特開２００７−２６２０１２号公報
【特許文献４】特開２００３−３１３１３５号公報
【特許文献５】特表２００５−５０００７４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
上記従来の事情に鑑み、本発明は、安全でかつ簡便に用いることができる、ヒト等の哺乳類におけるコラーゲン産生能、ヒアルロン酸産生能を促進させる、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、並びにコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは上記課題の解決を解決するために広く種々の物質についてヒト皮膚由来線維芽細胞のコラーゲンの産生促進作用およびヒアルロン酸産生促進作用、並びに、ヒト表皮におけるヒアルロン酸産生促進作用を調べた結果、マメ科シカクマメ属の植物またはその抽出物に、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用（線維芽細胞、表皮細胞の両者による産生促進作用）をすべて併せもつという極めて優れた効果があることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち本発明によれば、マメ科シカクマメ（Psophocarpus）属に属する植物の中から選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物からなるコラーゲン産生促進剤が提供される。
【００１４】
また本発明によれば、マメ科シカクマメ（Psophocarpus）属に属する植物の中から選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物からなるヒアルロン酸産生促進剤が提供される。
【００１５】
また本発明によれば、マメ科シカクマメ（Psophocarpus）属に属する植物の中から選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物からなるコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤が提供される。
【００１６】
なお、シカクマメ抽出物の作用については、上記従来技術の欄で記載したように、特許文献４〜５等に示されているが、シカクマメまたはその抽出物がコラーゲン産生促進作用およびヒアルロン酸産生促進作用（線維芽細胞、表皮細胞の両者による産生促進作用）をすべて併せもつということは、本発明者らが知る限りにおいて、これまで報告されていない。
【発明の効果】
【００１７】
本発明はコラーゲン産生促進効果およびヒアルロン酸産生促進効果（線維芽細胞、表皮細胞の両者による産生促進効果）が高いため、それを利用した皮膚外用剤、経口用組成物（例えば機能剤、飲食品など）、医薬製剤等を提供することができ、コラーゲンやヒアルロン酸が関与する種々の症状や疾病、病態等の治療、予防、改善等に役立つ。具体的適用例としては、例えば、肌荒れ改善、シワ予防・防止、皮膚のたるみ改善、関節痛（変形性膝関節症）治療、ドライアイを主とした角結膜上皮障害治療、白内障・角膜移植手術時における前房保持、皮膚の創傷治癒の改善、骨粗しょう症、関節炎、腱鞘炎等の治療、高血圧の防止等が挙げられる。ただしこれら例示に適用が限定されるものでない。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、本発明について詳述する。
【００１９】
本発明で用いるシカクマメ（Psophocarpus）属に属する植物は、マメ科の熱帯産つる性の草本である。本発明ではシカクマメ属に属する植物であれば特に限定されるものでなく、各種、亜種、品種等、任意に用いることができる。本発明では中でもシカクマメ（P. tetragonolobus）が好ましく用いられる。シカクマメ（P. tetragonolobus）は日本にも移入され、栽培されている。改良品種として「ウリズン」等が知られている。本発明ではこれら改良品種も含むことはもちろんである。
【００２０】
シカクマメは生のままでも乾燥したものでも使用することができるが、使用性、製剤化等の点から乾燥粉末あるいは溶媒抽出物として用いることが好ましい。
【００２１】
シカクマメの使用部位としては、種子、葉、花、根、全草等、任意に用いられ得る。中でも種子が好ましく用いられる。シカクマメの抽出物は常法より得ることができ、例えば、シカクマメを必要により乾燥した後、抽出溶媒に一定期間浸漬するか、あるいは加熱還流している抽出溶媒と接触させ、次いで濾過し、濃縮して得ることができる。抽出溶媒としては、通常抽出に用いられる溶媒であれば任意に用いることができ、例えば、水、メタノール、エタノール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン等のアルコール類、クロロホルム、ジクロルエタン、四塩化炭素、アセトン、酢酸エチル等の有機溶媒を、それぞれ単独あるいは組み合わせて用いることができる。上記溶媒で抽出して得た抽出液をそのまま、あるいは濃縮したエキスを用いるか、あるいはこれらエキスを吸着法、例えばイオン交換樹脂を用いて不純物を除去したものや、ポーラスポリマー（例えばアンバーライトＸＡＤ−２）のカラムにて吸着させた後、メタノールまたはエタノールで溶出し、濃縮したものも使用することができる。また分配法、例えば水／酢酸エチルで抽出した抽出物等も用いられる。
【００２２】
このようにして得たシカクマメ抽出物は、安全性が高く、優れたコラーゲン産生促進作用およびヒアルロン酸産生促進作用を有する。シカクマメおよびその抽出物にコラーゲン産生促進作用およびヒアルロン酸産生促進作用があることはこれまで全く知られておらず、本発明者らによってこれら作用をもつことが初めて確認されたものである。
【００２３】
本発明のコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、あるいはコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤は、皮膚外用剤に配合してヒトおよび動物に用いることができる他、各種飲食品、飼料（ペットフード等）に配合して摂取させることができる。また医薬製剤としてヒトおよび動物に投与することができる。
【００２４】
本発明のコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、あるいはコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤を皮膚外用剤に配合する場合、シカクマメ抽出物の配合量（乾燥質量）は外用剤全量中、０．０００１〜５０質量％が好ましく、より好ましくは０．０１〜１０質量％である。０．０００１質量％未満であると、本発明の効果が十分に発揮されず、一方、５０質量％を超えて配合しても効果のさらなる増加は実質上望めないし、皮膚外用剤への配合も難しくなる傾向にある。
【００２５】
本発明を皮膚外用剤に適用する場合、上記成分に加えて、さらに必要により、本発明の効果を損なわない範囲内で、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば酸化防止剤、油分、紫外線防御剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色材、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００２６】
さらに、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属イオン封鎖剤、メチルパラベン、エチルパラベン、ブチルパラベン等の防腐剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、カリンの果実の熱水抽出物、各種生薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、ビタミンＣ、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸等の美白剤、グルコース、フルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類なども適宜配合することができる。
【００２７】
またこの皮膚外用剤は、外皮に適用される化粧料、医薬部外品等、特に好適には化粧料に広く適用することが可能であり、その剤型も、皮膚に適用できるものであればいずれでもよく、溶液系、可溶化系、乳化系、粉末分散系、水−油二層系、水−油−粉末三層系、軟膏、化粧水、ゲル、エアゾール等、任意の剤型が適用される。
【００２８】
使用形態も任意であり、例えば化粧水、乳液、クリーム、パック等のフェーシャル化粧料やファンデーション、口紅、アイシャドウ等のメーキャップ化粧料、芳香化粧料、浴用剤等に用いることができる。
【００２９】
また、メーキャップ化粧品であれば、ファンデーション等、トイレタリー製品としてはボディーソープ、石けん等の形態に広く適用可能である。さらに、医薬部外品であれば、各種の軟膏剤等の形態に広く適用が可能である。そして、これらの剤型及び形態に、本発明のコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、並びにコラーゲン促進およびヒアルロン酸産生促進剤の採り得る形態が限定されるものではない。
【００３０】
本発明のコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、あるいはコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤を飲食品や飼料等に配合する場合、シカクマメ抽出物の配合量（乾燥質量）は、それらの種類、目的、形態、利用方法などに応じて、適宜決めることができ、例えば、飲食品全量中に０．０００１〜５０質量％程度とすることができる。特に、保健用飲食品等として利用する場合には、本発明の有効成分を所定の効果が十分発揮されるような量で含有させることが好ましい。
【００３１】
飲食品や飼料の形態としては、例えば、顆粒状、粒状、ペースト状、ゲル状、固形状、または、液体状に任意に成形することができる。これらには、飲食品等に含有することが認められている公知の各種物質、例えば、結合剤、崩壊剤、増粘剤、分散剤、再吸収促進剤、矯味剤、緩衝剤、界面活性剤、溶解補助剤、保存剤、乳化剤、等張化剤、安定化剤やｐＨ調製剤などの賦形剤を適宜含有させることができる。
【００３２】
本発明のコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、あるいはコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤を医薬製剤として用いる場合、該製剤は経口的にあるいは非経口的（静脈投与、腹腔内投与、等）に適宜に使用される。剤型も任意で、例えば錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等の経口用固形製剤や、内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤、または、注射剤などの非経口用液体製剤など、いずれの形態にも公知の方法により適宜調製することができる。これらの医薬製剤には、通常用いられる結合剤、崩壊剤、増粘剤、分散剤、再吸収促進剤、矯味剤、緩衝剤、界面活性剤、溶解補助剤、保存剤、乳化剤、等張化剤、安定化剤やｐＨ調製剤などの賦形剤を適宜使用してもよい。
【００３３】
本発明のコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、あるいはコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤を、皮膚外用剤、飲食品、飼料、医薬製剤等として用いる場合、コラーゲンやヒアルロン酸が関与する種々の症状や疾病、病態等の治療、予防、改善等に役立つ。具体的適用例としては、例えば、肌荒れ改善、シワ予防・防止、関節痛（変形性膝関節症）治療、皮膚のたるみ改善、ドライアイを主とした角結膜上皮障害治療、白内障・角膜移植手術時における前房保持、皮膚の創傷治癒の改善、骨粗しょう症、関節炎、腱鞘炎等の予防・治療、高血圧の予防・治療等に好適に用いられる。また上記症状や疾病、病態等の治療、予防、改善等の生理機能をコンセプトとして、その旨を表示した皮膚外用剤、機能性飲食品、疾病者用食品、特定保健用食品等に応用することができる。
【実施例】
【００３４】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００３５】
１．シカクマメ抽出物の調製
シカクマメ（Psophocarpus tetragonolobus）の種子部分５０ｇを、室温で１週間９０％エタノールに浸漬し、抽出液を濃縮し、９０％エタノール抽出物（乾燥物）２．９ｇを得た。
【００３６】
２．コラーゲン、ヒアルロン酸産生促進効果測定
（実施例１：Ｉ型コラーゲン産生評価）
９６穴プレートにヒト線維芽細胞を１０％牛胎児血清添加ＤＭＥＭ培地にて１×１０4ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ播種し、４時間後血清濃度を０．５％に置換した。１日後、シカクマメ抽出物を所定濃度添加した０．５％血清添加ＤＭＥＭ培地と交換した。細胞播種より４日目に、培地上清中のコラーゲン測定及び、細胞についてＤＮＡ量を測定し、細胞数の指標とした。
【００３７】
コラーゲン量は、ヒト線維芽細胞が産生するＩ型プロコラーゲンＣ末端ペプチド（ＰＩＰ：Procollagen type I carboxyterminal propeptide）を宝酒造社製キットＭＫ−１０１を用いてＥＬＩＳＡ法にて測定した。ＰＩＰ量はＤＮＡあたりに換算した。ＤＮＡ量の測定はＨｏｅｃｈｓｔ社のＨ３３３４２を用いた蛍光測定法で実施した。抽出液を添加していない試料（コントロール）のＤＮＡあたりのＰＩＰ量を１００としたときの、シカクマメ抽出物添加試料のＤＮＡあたりのＰＩＰ量を、コラーゲン産生促進率（％）とした。結果を表１に示す。
【００３８】
【表１】
【００３９】
（実施例２：真皮ヒアルロン酸産生評価）
９６穴プレートにヒト線維芽細胞を１０％牛胎児血清添加ＤＭＥＭ培地にて１×１０4ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ播種し、４時間後血清濃度を０．５％に置換した。１日後、シカクマメ抽出物を所定濃度添加した０．５％血清添加ＤＭＥＭ培地と交換した。細胞播種より４日目に、培地上清中のヒアルロン酸測定及び、細胞についてＤＮＡ量を測定し、細胞数の指標とした。
【００４０】
ヒアルロン酸量は、ヒアルロン酸測定キット（中外製薬（株）製）を用いて測定しＤＮＡあたりに換算した。ＤＮＡ量の測定はＨｏｅｃｈｓｔ社のＨ３３３４２を用いた蛍光測定法で実施した。抽出液を添加していない試料（コントロール）のＤＮＡあたりのＰＩＰ量を１００としたときの、シカクマメ抽出物添加試料のＤＮＡあたりのヒアルロン酸量を、ヒアルロン酸産生促進率（％）とした。結果を表２に示す。
【００４１】
【表２】
【００４２】
（実施例３：表皮ヒアルロン酸産生評価）
２４穴プレートに正常ヒト皮膚由来表皮細胞を４×１０4ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ播種し、シカクマメ抽出物を所定濃度添加したＤＭＥＭ／Ｆ１２培地で１日培養した。被験溶液の濃度は、ＤＭＳＯが培地に対して最終濃度０．５％になるように調整した。
【００４３】
培養後、培地を採取し、ヒアルロン酸測定キット（中外製薬（株）製）を用いてヒアルロン酸量を測定した。またプレート中のＤＮＡ量を測定し、細胞数の指標とした。ＤＮＡ量の測定はＨｏｅｃｈｓｔ社のＨ３３３４２を用いた蛍光測定法で行った。なお、上記実験濃度では細胞毒性は認められなかった。抽出物無添加群（コントロール）のＤＮＡあたりのヒアルロン酸量を１００とした時の、シカクマメ抽出物添加試料の値をヒアルロン酸産生促進率（％）とした。結果を表３に示す。
【００４４】
【表３】
【００４５】
表１〜３の結果から明らかなように、本発明に用いられるシカクマメ抽出物は、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用（線維芽細胞、表皮細胞の両者による産生促進作用）をすべて併せもつという極めて優れた効果があることが確認された。
【００４６】
以下にさらに処方例を示す。なお各処方例中、シカクマメ抽出物は上記１．で調製したものを使用した。抽出物の配合量は乾燥分（実分）を示す。
【００４７】
（配合処方例１：化粧水）
（配 合 成 分） （質量％）
水 残余
エタノール １０
ブチレングリコール ７
ジプロピレングリコール ５
グリセリン ２
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ−６） ０．５
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ−３２） ０．５
ヒドロキシエチルセルロース ０．１
コラーゲン産生促進剤（シカクマメ抽出物） ０．２
アルギニン ０．０１
イザヨイバラエキス ０．２
加水分解酵母エキス ０．０２
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
イチヤクソウエキス ０．２
水溶性コラーゲン ０．２
アセンヤクエキス ０．１
ポリプロピレングリコール−１３デシルテトラデセス−２４ ０．５
クエン酸ナトリウム ０．０５
メタリン酸ナトリウム ０．０５
クエン酸 ０．０５
防腐剤 適量
香料 適量
【００４８】
（配合処方例２：美容液）
（配 合 成 分） （質量％）
（Ａ相）
水 残余
グリセリン ６
エタノール ５
ジプロピレングリコール ５
ポリエチレングリコール／ポリプロピレングリコール
−１４／７ジメチルエーテル ３
ポリエチレングリコール−４００ １
ポリアクリル酸ナトリウム ０．１
キサンタンガム ０．０５
ヒアルロン酸産生促進剤（シカクマメ抽出物） ０．３
アルギニン ０．０１
ケイヒエキス ０．１
真珠蛋白エキス ０．２
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
水溶性コラーゲン ０．２
アセンヤクエキス ０．１
ノバラエキス ０．２
カルボキシビニルポリマー ０．３
ブチレングリコール ３
水酸化カリウム ０．１５
（アクリル酸／アクリル酸アルキル（Ｃ10-30）コポリマー ０．１
メタリン酸ナトリウム ０．０３
（Ｂ相）
シクロメチコン ２．５
ジメチコン ２
ポリエチレングリコール−６０水添ヒマシ油 ０．５
防腐剤 適量
香料 適量
（製法）
それぞれ均一に溶解したＡ相およびＢ相を室温にて混合し、ホモミキサー処理を行った。
【００４９】
（配合処方例３：乳液）
（配 合 成 分） （質量％）
（Ａ相）
水 残余
ブチレングリコール ８
エタノール ５
ジプロピレングリコール ５
グリセリン ５
ジメチコン ２
２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール（AMPD） ０．０８
カルボキシビニルポリマー ０．１５
ＥＤＴＡ−３Ｎａ ０．０５
キサンタンガム ０．１
コラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤
（シカクマメ抽出物） ０．１
アルギニン ０．０１
ユズ種子エキス ０．２
加水分解酵母エキス ０．２
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０５
イチヤクソウエキス ０．３
水溶性コラーゲン ０．２
（Ｂ相）
ベヘニルアルコール ０．４
テトラエチルヘキサン酸ペンタエリスリチル ５
ポリエチレングリコール−６０水添ヒマシ油 ０．５
水添ポリデセン ２
水添パーム油 ０．５
バチルアルコール ０．４
パーム核油 ０．４
パーム油 ０．１
防腐剤 適量
香料 適量
（製法）
Ａ相（油相部）とＢ相（水相部）をそれぞれ７０℃に加熱し、完全溶解した。Ａ相をＢ相に加えてよく撹拌した後、乳化機で乳化した。得られた乳化物を、熱交換器を用いて冷却した。
【００５０】
（配合処方例４：乳液）
（配 合 成 分） （質量％）
（Ａ相）
水 残余
グリセリン ８
エタノール ５
ジプロピレングリコール ４
水添ポリデセン ４
ポリエチレングリコール−２０ ３
カルボキシビニルポリマー ０．０９
キサンタンガム ０．０５
メタリン酸ナトリウム ０．０２
２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール（AMPD） ０．０３
コラーゲン産生促進剤（シカクマメ抽出物） ０．２
アルギニン ０．０１
セイヨウバラエキス ０．３
オクラエキス ０．２
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
水溶性コラーゲン ０．５
（Ｂ相）
テトラエチルヘキサン酸ペンタエリスリチル ３
エチルヘキサン酸セチル ２
水添パーム油 ２
ワセリン １．５
ジメチコン １
ステアリン酸ポリエチレングリコール−５グリセリル １
イソステアリン酸ポリエチレングリコール−６０グリセリル １
ベヘニルアルコール ０．５
ジイソステアリン酸グリセリル ０．４
バチルアルコール ０．２
防腐剤 適量
香料 適量
（製法）
Ａ相（油相部）とＢ相（水相部）をそれぞれ７０℃に加熱し、完全溶解した。Ａ相をＢ相に加えてよく撹拌した後、乳化機で乳化した。得られた乳化物を熱交換器を用いて冷却した。
【００５１】
（配合処方例５：キャンディー ４，０００ｍｇ／日 中）
（配 合 成 分） （ｍｇ） （質量％）
砂糖 ２，０００ ５０
水飴 １，９２０ ４８
ヒアルロン酸産生促進剤（シカクマメ抽出物） ４０ １
香料 ４０ １
【００５２】
（配合処方例６：錠剤 １，５００ｍｇ／日 中）
（配 合 成 分） （ｍｇ） （質量％）
ショ糖エステル ７０ ４．７
結晶セルロース ７４ ４．９
メチルセルロース ３６ ２．４
グリセリン ２５ １．７
コラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤
（シカクマメ抽出物） ４７５ ３１．７
Ｎ−アセチルグルコサミン ２００ １３．３
ヒアルロン酸 １５０ １０．０
ビタミンＥ ３０ ２．０
ビタミンＢ６ ２０ １．３
ビタミンＢ２ １０ ０．７
α−リポ酸 ２０ １．３
コエンザイムＱ ４０ ２．７
セラミド（コンニャク抽出物） ５０ ３．３
Ｌ−プロリン ３００ ２０．０
【００５３】
（配合処方例７：ソフトカプセル １，５００ｍｇ／日 中）
（配 合 成 分） （ｍｇ） （質量％）
食用大豆油 ５３０ ３５．３
トチュウエキス ５０ ３．３
ニンジンエキス ５０ ３．３
コラーゲン産生促進剤（シカクマメ抽出物） １００ ６．７
ローヤルゼリー ５０ ３．３
マカ ３０ ２．０
γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ） ３０ ２．０
ミツロウ ６０ ４．０
ゼラチン ３７５ ２５．０
グリセリン １２０ ８．０
グリセリン脂肪酸エステル １０５ ７．０
【００５４】
（配合処方例８：ソフトカプセル １，５００ｍｇ／日 中）
（配 合 成 分） （ｍｇ） （質量％）
玄米胚芽油 ６５９ ４３．９
ヒアルロン酸産生促進剤（シカクマメ抽出物） ５００ ３３．３
レスベラトロール １ ０．１
ハス胚芽エキス １００ ６．７
エラスチン １８０ １２．０
ＤＮＡ ３０ ２．０
葉酸 ３０ ２．０
【００５５】
（配合処方例９：顆粒 １，２００ｍｇ／日 中）
（配 合 成 分） （ｍｇ） （質量％）
コラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤
（シカクマメ抽出物） ４００ ３３．４
ビタミンＣ １００ ８．３
大豆イソフラボン ２５０ ２０．８
還元乳糖 ３００ ２５．０
大豆オリゴ糖 ３６ ３．０
エリスリトール ３６ ３．０
デキストリン ３０ ２．５
香料 ２４ ２．０
クエン酸 ２４ ２．０
【００５６】
（配合処方例１０：ドリンク ５０ｍＬ／日 中）
（配 合 成 分） （ｍＬ） （質量％）
トチュウエキス １．６ ３．２
ニンジンエキス １．６ ３．２
コラーゲン産生促進剤（シカクマメ抽出物） １．６ ３．２
還元麦芽糖水飴 ２８ ５６．０
エリスリトール ８ １６．０
クエン酸 ２ ４．０
香料 １．３ ２．６
Ｎ−アセチルグルコサミン １ ２．０
ヒアルロン酸 ０．５ １．０
ビタミンＥ ０．３ ０．６
ビタミンＢ６ ０．２ ０．４
ビタミンＢ２ ０．１ ０．２
α−リポ酸 ０．２ ０．４
セラミド（コンニャク抽出物） ０．４ ０．８
Ｌ−プロリン ２ ４．０
【００５７】
（配合処方例１１：クッキー）
（配 合 成 分） （質量％）
薄力粉 ４５．０
バター １７．５
グラニュー糖 ２０．０
ヒアルロン酸産生促進剤（シカクマメ抽出物） ４．０
卵 １２．５
香料 １．０
（製法）
バターを撹拌しながら、グラニュー糖を徐々に添加した後、卵、シカクマメエキス、および香料を添加し、さらに撹拌した。十分に撹拌した後、均一に振るった薄力粉を加え、低速にて撹拌し、塊状で冷蔵庫にて寝かせた。その後、成型し、１７０℃、１５分間焼成しクッキーとした。
【００５８】
（配合処方例１２：軟膏）
（配 合 成 分） （質量％）
コラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤
（シカクマメ抽出物） ２．０
ステアリルアルコール １８．０
モクロウ ２０．０
ポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸エステル ０．２５
グリセリンモノステアリン酸エステル ０．３
ワセリン ４０．０
精製水 残余
（製造方法）
精製水にシカクマメエキスを加えて溶解し、７０℃に保つ（水相）。残りの成分を７０℃にて混合溶解する（油相）。水相に油相を加え、ホモミキサーで均一に乳化後、冷却して軟膏を得た。
【００５９】
（配合処方例１３：貼付剤）
（配 合 成 分） （質量％）
ヒアルロン酸産生促進剤（シカクマメ抽出物） １．０
クロタミトン ３．２
エステル油（「パナセート８７５Ｒ」） ２．５
スクワラン １．０
ｄｌ−カンフル ０．０７
ポリオキシエチレン（６０モル）硬化ヒマシ油 １．２
濃グリセリン ５．０
ゼラチン １．２
ポリビニルピロリドン ０．６
メチルパラベン 適量
ｄ−ソルビトール液 ３５．０
水酸化アルミニウム ０．２
亜硫酸ナトリウム 適量
エデト酸ナトリウム 適量
クエン酸 適量
カルボキシビニルポリマー ０．２２
ポリアクリル酸ナトリウム ０．２４
カルボキシメチルセルロースナトリウム ２．８
カオリン １．０
精製水 残量
【産業上の利用可能性】
【００６０】
本発明はコラーゲン産生促進効果およびヒアルロン酸産生促進効果が高いため、それを利用した皮膚外用剤、経口用組成物（例えば機能剤、飲食品など）、医薬製剤等を提供することができ、コラーゲンやヒアルロン酸が関与する種々の症状や疾病、病態等の治療、予防、改善等に役立つ。
【技術分野】
【０００１】
本発明はシカクマメ（Psophocarpus）属に属する植物またはその抽出物からなるコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、並びにコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は外側から角層、表皮、基底膜および真皮より構成されており、真皮はその中でも最も領域の広い部分であり、表皮ほど細胞が密に詰まっておらず、むしろ細胞外空間が多く、「細胞外マトリックス」と呼ばれる巨大分子の網目構造によって満たされている。この細胞外マトリックスは、真皮内の線維芽細胞等において産生され、ヒアルロン酸やデルマタン硫酸等の酸性ムコ多糖と呼ばれる多糖類と、コラーゲン、エラスチン等の線維性タンパク質で構成されている。細胞外マトリックスは、皮膚の弾力性、はり、みずみずしさ、新陳代謝等に直接的に関わっており、線維芽細胞等における細胞外マトリックスの産生が鈍ると、皮膚の弾力性やみずみずしさが失われ、シワ、小ジワ、肌荒れが発生しやすくなり、皮膚老化がもたらされる一因になる。
【０００３】
上記線維性タンパク質は主にコラーゲンからなり、その中でもＩ型コラーゲンが全体の８０％を占める。Ｉ型コラーゲンのほかにはIII、Ｖ、XII、およびXIV型コラーゲンの存在が知られている。老化皮膚に見られるシワ・たるみの成因の一つは、皮膚組織が加齢に伴ない菲薄化することによる。老化した皮膚において、真皮の主要なマトリックス成分であるコラーゲン線維の減少が著しく、このことが皮膚の厚さが減少する主たる原因となっている可能性が高い。したがって、コラーゲンの産生を促進させてコラーゲン量を維持することが、シワ・たるみの予防・改善に有効であると考えられる。
【０００４】
またコラーゲンの産生促進は、上記以外にも、皮膚の創傷治癒の改善のほか、骨粗しょう症、関節炎、腱鞘炎等の治療、高血圧の防止などにも有効である。
【０００５】
一方、上記多糖類中のヒアルロン酸は、細胞間隙への水分の保持、組織内にジェリー状のマトリックスを形成することに基づく細胞の保持、組織の潤滑性と柔軟性の保持、機械的障害等の外力に対する抵抗、および細菌感染の防止など、多くの機能を有している。昨今、癌転移との関連についても多くの研究がなされている。そして、真皮での線維芽細胞等におけるヒアルロン酸の産生促進剤として、例えばブプレウルム属植物抽出物を含む細胞外マトリックス産生促進剤が報告されている（例えば、特許文献１参照）。
【０００６】
ヒアルロン酸はまた、上記した真皮での線維芽細胞等における産生のほかに、表皮（特には表皮基底細胞など）での産生も知られており、表皮におけるヒアルロン酸量を増大させるヒアルロン酸産生促進剤も報告されている（例えば、特許文献２〜３参照）。
【０００７】
ヒアルロン酸は皮膚のほか、関節液、硝子体、靱帯等、生体に広く分布しており、ヒアルロン酸の産生促進は、保湿効果向上に加え、関節痛（変形性膝関節症）治療、皮膚のたるみ改善、ドライアイを主とした角結膜上皮障害治療、白内障・角膜移植手術時における前房保持などにも有効である。
【０００８】
このようにコラーゲン、ヒアルロン酸は、シワ、小ジワ、肌のたるみ、肌荒れ等の改善・防止、皮膚老化の防止のほか、膝関節症の改善剤や眼科手術用製剤などに適用し得ることから、コラーゲン、ヒアルロン酸の両者の産生促進効果のある物質が見出せれば、１つの物質で上記の症状改善や予防・治療等に広く適用することができるという利点がある。
【０００９】
なお後述するように、本発明はシカクマメ属植物の抽出物を利用した技術であるが、シカクマメ抽出物については、これまでに、表皮細胞におけるラミニン５の産生能を有することや、女性・妊婦用の薬草由来の健康保護、促進および栄養補助剤に用いられることなどが報告されている（例えば特許文献４〜５参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第９９／１７７１５号パンフレット
【特許文献２】特開平９−１７６０３６号公報
【特許文献３】特開２００７−２６２０１２号公報
【特許文献４】特開２００３−３１３１３５号公報
【特許文献５】特表２００５−５０００７４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
上記従来の事情に鑑み、本発明は、安全でかつ簡便に用いることができる、ヒト等の哺乳類におけるコラーゲン産生能、ヒアルロン酸産生能を促進させる、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、並びにコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは上記課題の解決を解決するために広く種々の物質についてヒト皮膚由来線維芽細胞のコラーゲンの産生促進作用およびヒアルロン酸産生促進作用、並びに、ヒト表皮におけるヒアルロン酸産生促進作用を調べた結果、マメ科シカクマメ属の植物またはその抽出物に、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用（線維芽細胞、表皮細胞の両者による産生促進作用）をすべて併せもつという極めて優れた効果があることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち本発明によれば、マメ科シカクマメ（Psophocarpus）属に属する植物の中から選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物からなるコラーゲン産生促進剤が提供される。
【００１４】
また本発明によれば、マメ科シカクマメ（Psophocarpus）属に属する植物の中から選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物からなるヒアルロン酸産生促進剤が提供される。
【００１５】
また本発明によれば、マメ科シカクマメ（Psophocarpus）属に属する植物の中から選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物からなるコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤が提供される。
【００１６】
なお、シカクマメ抽出物の作用については、上記従来技術の欄で記載したように、特許文献４〜５等に示されているが、シカクマメまたはその抽出物がコラーゲン産生促進作用およびヒアルロン酸産生促進作用（線維芽細胞、表皮細胞の両者による産生促進作用）をすべて併せもつということは、本発明者らが知る限りにおいて、これまで報告されていない。
【発明の効果】
【００１７】
本発明はコラーゲン産生促進効果およびヒアルロン酸産生促進効果（線維芽細胞、表皮細胞の両者による産生促進効果）が高いため、それを利用した皮膚外用剤、経口用組成物（例えば機能剤、飲食品など）、医薬製剤等を提供することができ、コラーゲンやヒアルロン酸が関与する種々の症状や疾病、病態等の治療、予防、改善等に役立つ。具体的適用例としては、例えば、肌荒れ改善、シワ予防・防止、皮膚のたるみ改善、関節痛（変形性膝関節症）治療、ドライアイを主とした角結膜上皮障害治療、白内障・角膜移植手術時における前房保持、皮膚の創傷治癒の改善、骨粗しょう症、関節炎、腱鞘炎等の治療、高血圧の防止等が挙げられる。ただしこれら例示に適用が限定されるものでない。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、本発明について詳述する。
【００１９】
本発明で用いるシカクマメ（Psophocarpus）属に属する植物は、マメ科の熱帯産つる性の草本である。本発明ではシカクマメ属に属する植物であれば特に限定されるものでなく、各種、亜種、品種等、任意に用いることができる。本発明では中でもシカクマメ（P. tetragonolobus）が好ましく用いられる。シカクマメ（P. tetragonolobus）は日本にも移入され、栽培されている。改良品種として「ウリズン」等が知られている。本発明ではこれら改良品種も含むことはもちろんである。
【００２０】
シカクマメは生のままでも乾燥したものでも使用することができるが、使用性、製剤化等の点から乾燥粉末あるいは溶媒抽出物として用いることが好ましい。
【００２１】
シカクマメの使用部位としては、種子、葉、花、根、全草等、任意に用いられ得る。中でも種子が好ましく用いられる。シカクマメの抽出物は常法より得ることができ、例えば、シカクマメを必要により乾燥した後、抽出溶媒に一定期間浸漬するか、あるいは加熱還流している抽出溶媒と接触させ、次いで濾過し、濃縮して得ることができる。抽出溶媒としては、通常抽出に用いられる溶媒であれば任意に用いることができ、例えば、水、メタノール、エタノール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン等のアルコール類、クロロホルム、ジクロルエタン、四塩化炭素、アセトン、酢酸エチル等の有機溶媒を、それぞれ単独あるいは組み合わせて用いることができる。上記溶媒で抽出して得た抽出液をそのまま、あるいは濃縮したエキスを用いるか、あるいはこれらエキスを吸着法、例えばイオン交換樹脂を用いて不純物を除去したものや、ポーラスポリマー（例えばアンバーライトＸＡＤ−２）のカラムにて吸着させた後、メタノールまたはエタノールで溶出し、濃縮したものも使用することができる。また分配法、例えば水／酢酸エチルで抽出した抽出物等も用いられる。
【００２２】
このようにして得たシカクマメ抽出物は、安全性が高く、優れたコラーゲン産生促進作用およびヒアルロン酸産生促進作用を有する。シカクマメおよびその抽出物にコラーゲン産生促進作用およびヒアルロン酸産生促進作用があることはこれまで全く知られておらず、本発明者らによってこれら作用をもつことが初めて確認されたものである。
【００２３】
本発明のコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、あるいはコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤は、皮膚外用剤に配合してヒトおよび動物に用いることができる他、各種飲食品、飼料（ペットフード等）に配合して摂取させることができる。また医薬製剤としてヒトおよび動物に投与することができる。
【００２４】
本発明のコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、あるいはコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤を皮膚外用剤に配合する場合、シカクマメ抽出物の配合量（乾燥質量）は外用剤全量中、０．０００１〜５０質量％が好ましく、より好ましくは０．０１〜１０質量％である。０．０００１質量％未満であると、本発明の効果が十分に発揮されず、一方、５０質量％を超えて配合しても効果のさらなる増加は実質上望めないし、皮膚外用剤への配合も難しくなる傾向にある。
【００２５】
本発明を皮膚外用剤に適用する場合、上記成分に加えて、さらに必要により、本発明の効果を損なわない範囲内で、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば酸化防止剤、油分、紫外線防御剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色材、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００２６】
さらに、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属イオン封鎖剤、メチルパラベン、エチルパラベン、ブチルパラベン等の防腐剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、カリンの果実の熱水抽出物、各種生薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、ビタミンＣ、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸等の美白剤、グルコース、フルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類なども適宜配合することができる。
【００２７】
またこの皮膚外用剤は、外皮に適用される化粧料、医薬部外品等、特に好適には化粧料に広く適用することが可能であり、その剤型も、皮膚に適用できるものであればいずれでもよく、溶液系、可溶化系、乳化系、粉末分散系、水−油二層系、水−油−粉末三層系、軟膏、化粧水、ゲル、エアゾール等、任意の剤型が適用される。
【００２８】
使用形態も任意であり、例えば化粧水、乳液、クリーム、パック等のフェーシャル化粧料やファンデーション、口紅、アイシャドウ等のメーキャップ化粧料、芳香化粧料、浴用剤等に用いることができる。
【００２９】
また、メーキャップ化粧品であれば、ファンデーション等、トイレタリー製品としてはボディーソープ、石けん等の形態に広く適用可能である。さらに、医薬部外品であれば、各種の軟膏剤等の形態に広く適用が可能である。そして、これらの剤型及び形態に、本発明のコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、並びにコラーゲン促進およびヒアルロン酸産生促進剤の採り得る形態が限定されるものではない。
【００３０】
本発明のコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、あるいはコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤を飲食品や飼料等に配合する場合、シカクマメ抽出物の配合量（乾燥質量）は、それらの種類、目的、形態、利用方法などに応じて、適宜決めることができ、例えば、飲食品全量中に０．０００１〜５０質量％程度とすることができる。特に、保健用飲食品等として利用する場合には、本発明の有効成分を所定の効果が十分発揮されるような量で含有させることが好ましい。
【００３１】
飲食品や飼料の形態としては、例えば、顆粒状、粒状、ペースト状、ゲル状、固形状、または、液体状に任意に成形することができる。これらには、飲食品等に含有することが認められている公知の各種物質、例えば、結合剤、崩壊剤、増粘剤、分散剤、再吸収促進剤、矯味剤、緩衝剤、界面活性剤、溶解補助剤、保存剤、乳化剤、等張化剤、安定化剤やｐＨ調製剤などの賦形剤を適宜含有させることができる。
【００３２】
本発明のコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、あるいはコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤を医薬製剤として用いる場合、該製剤は経口的にあるいは非経口的（静脈投与、腹腔内投与、等）に適宜に使用される。剤型も任意で、例えば錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等の経口用固形製剤や、内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤、または、注射剤などの非経口用液体製剤など、いずれの形態にも公知の方法により適宜調製することができる。これらの医薬製剤には、通常用いられる結合剤、崩壊剤、増粘剤、分散剤、再吸収促進剤、矯味剤、緩衝剤、界面活性剤、溶解補助剤、保存剤、乳化剤、等張化剤、安定化剤やｐＨ調製剤などの賦形剤を適宜使用してもよい。
【００３３】
本発明のコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、あるいはコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤を、皮膚外用剤、飲食品、飼料、医薬製剤等として用いる場合、コラーゲンやヒアルロン酸が関与する種々の症状や疾病、病態等の治療、予防、改善等に役立つ。具体的適用例としては、例えば、肌荒れ改善、シワ予防・防止、関節痛（変形性膝関節症）治療、皮膚のたるみ改善、ドライアイを主とした角結膜上皮障害治療、白内障・角膜移植手術時における前房保持、皮膚の創傷治癒の改善、骨粗しょう症、関節炎、腱鞘炎等の予防・治療、高血圧の予防・治療等に好適に用いられる。また上記症状や疾病、病態等の治療、予防、改善等の生理機能をコンセプトとして、その旨を表示した皮膚外用剤、機能性飲食品、疾病者用食品、特定保健用食品等に応用することができる。
【実施例】
【００３４】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００３５】
１．シカクマメ抽出物の調製
シカクマメ（Psophocarpus tetragonolobus）の種子部分５０ｇを、室温で１週間９０％エタノールに浸漬し、抽出液を濃縮し、９０％エタノール抽出物（乾燥物）２．９ｇを得た。
【００３６】
２．コラーゲン、ヒアルロン酸産生促進効果測定
（実施例１：Ｉ型コラーゲン産生評価）
９６穴プレートにヒト線維芽細胞を１０％牛胎児血清添加ＤＭＥＭ培地にて１×１０4ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ播種し、４時間後血清濃度を０．５％に置換した。１日後、シカクマメ抽出物を所定濃度添加した０．５％血清添加ＤＭＥＭ培地と交換した。細胞播種より４日目に、培地上清中のコラーゲン測定及び、細胞についてＤＮＡ量を測定し、細胞数の指標とした。
【００３７】
コラーゲン量は、ヒト線維芽細胞が産生するＩ型プロコラーゲンＣ末端ペプチド（ＰＩＰ：Procollagen type I carboxyterminal propeptide）を宝酒造社製キットＭＫ−１０１を用いてＥＬＩＳＡ法にて測定した。ＰＩＰ量はＤＮＡあたりに換算した。ＤＮＡ量の測定はＨｏｅｃｈｓｔ社のＨ３３３４２を用いた蛍光測定法で実施した。抽出液を添加していない試料（コントロール）のＤＮＡあたりのＰＩＰ量を１００としたときの、シカクマメ抽出物添加試料のＤＮＡあたりのＰＩＰ量を、コラーゲン産生促進率（％）とした。結果を表１に示す。
【００３８】
【表１】
【００３９】
（実施例２：真皮ヒアルロン酸産生評価）
９６穴プレートにヒト線維芽細胞を１０％牛胎児血清添加ＤＭＥＭ培地にて１×１０4ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ播種し、４時間後血清濃度を０．５％に置換した。１日後、シカクマメ抽出物を所定濃度添加した０．５％血清添加ＤＭＥＭ培地と交換した。細胞播種より４日目に、培地上清中のヒアルロン酸測定及び、細胞についてＤＮＡ量を測定し、細胞数の指標とした。
【００４０】
ヒアルロン酸量は、ヒアルロン酸測定キット（中外製薬（株）製）を用いて測定しＤＮＡあたりに換算した。ＤＮＡ量の測定はＨｏｅｃｈｓｔ社のＨ３３３４２を用いた蛍光測定法で実施した。抽出液を添加していない試料（コントロール）のＤＮＡあたりのＰＩＰ量を１００としたときの、シカクマメ抽出物添加試料のＤＮＡあたりのヒアルロン酸量を、ヒアルロン酸産生促進率（％）とした。結果を表２に示す。
【００４１】
【表２】
【００４２】
（実施例３：表皮ヒアルロン酸産生評価）
２４穴プレートに正常ヒト皮膚由来表皮細胞を４×１０4ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ播種し、シカクマメ抽出物を所定濃度添加したＤＭＥＭ／Ｆ１２培地で１日培養した。被験溶液の濃度は、ＤＭＳＯが培地に対して最終濃度０．５％になるように調整した。
【００４３】
培養後、培地を採取し、ヒアルロン酸測定キット（中外製薬（株）製）を用いてヒアルロン酸量を測定した。またプレート中のＤＮＡ量を測定し、細胞数の指標とした。ＤＮＡ量の測定はＨｏｅｃｈｓｔ社のＨ３３３４２を用いた蛍光測定法で行った。なお、上記実験濃度では細胞毒性は認められなかった。抽出物無添加群（コントロール）のＤＮＡあたりのヒアルロン酸量を１００とした時の、シカクマメ抽出物添加試料の値をヒアルロン酸産生促進率（％）とした。結果を表３に示す。
【００４４】
【表３】
【００４５】
表１〜３の結果から明らかなように、本発明に用いられるシカクマメ抽出物は、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用（線維芽細胞、表皮細胞の両者による産生促進作用）をすべて併せもつという極めて優れた効果があることが確認された。
【００４６】
以下にさらに処方例を示す。なお各処方例中、シカクマメ抽出物は上記１．で調製したものを使用した。抽出物の配合量は乾燥分（実分）を示す。
【００４７】
（配合処方例１：化粧水）
（配 合 成 分） （質量％）
水 残余
エタノール １０
ブチレングリコール ７
ジプロピレングリコール ５
グリセリン ２
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ−６） ０．５
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ−３２） ０．５
ヒドロキシエチルセルロース ０．１
コラーゲン産生促進剤（シカクマメ抽出物） ０．２
アルギニン ０．０１
イザヨイバラエキス ０．２
加水分解酵母エキス ０．０２
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
イチヤクソウエキス ０．２
水溶性コラーゲン ０．２
アセンヤクエキス ０．１
ポリプロピレングリコール−１３デシルテトラデセス−２４ ０．５
クエン酸ナトリウム ０．０５
メタリン酸ナトリウム ０．０５
クエン酸 ０．０５
防腐剤 適量
香料 適量
【００４８】
（配合処方例２：美容液）
（配 合 成 分） （質量％）
（Ａ相）
水 残余
グリセリン ６
エタノール ５
ジプロピレングリコール ５
ポリエチレングリコール／ポリプロピレングリコール
−１４／７ジメチルエーテル ３
ポリエチレングリコール−４００ １
ポリアクリル酸ナトリウム ０．１
キサンタンガム ０．０５
ヒアルロン酸産生促進剤（シカクマメ抽出物） ０．３
アルギニン ０．０１
ケイヒエキス ０．１
真珠蛋白エキス ０．２
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
水溶性コラーゲン ０．２
アセンヤクエキス ０．１
ノバラエキス ０．２
カルボキシビニルポリマー ０．３
ブチレングリコール ３
水酸化カリウム ０．１５
（アクリル酸／アクリル酸アルキル（Ｃ10-30）コポリマー ０．１
メタリン酸ナトリウム ０．０３
（Ｂ相）
シクロメチコン ２．５
ジメチコン ２
ポリエチレングリコール−６０水添ヒマシ油 ０．５
防腐剤 適量
香料 適量
（製法）
それぞれ均一に溶解したＡ相およびＢ相を室温にて混合し、ホモミキサー処理を行った。
【００４９】
（配合処方例３：乳液）
（配 合 成 分） （質量％）
（Ａ相）
水 残余
ブチレングリコール ８
エタノール ５
ジプロピレングリコール ５
グリセリン ５
ジメチコン ２
２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール（AMPD） ０．０８
カルボキシビニルポリマー ０．１５
ＥＤＴＡ−３Ｎａ ０．０５
キサンタンガム ０．１
コラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤
（シカクマメ抽出物） ０．１
アルギニン ０．０１
ユズ種子エキス ０．２
加水分解酵母エキス ０．２
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０５
イチヤクソウエキス ０．３
水溶性コラーゲン ０．２
（Ｂ相）
ベヘニルアルコール ０．４
テトラエチルヘキサン酸ペンタエリスリチル ５
ポリエチレングリコール−６０水添ヒマシ油 ０．５
水添ポリデセン ２
水添パーム油 ０．５
バチルアルコール ０．４
パーム核油 ０．４
パーム油 ０．１
防腐剤 適量
香料 適量
（製法）
Ａ相（油相部）とＢ相（水相部）をそれぞれ７０℃に加熱し、完全溶解した。Ａ相をＢ相に加えてよく撹拌した後、乳化機で乳化した。得られた乳化物を、熱交換器を用いて冷却した。
【００５０】
（配合処方例４：乳液）
（配 合 成 分） （質量％）
（Ａ相）
水 残余
グリセリン ８
エタノール ５
ジプロピレングリコール ４
水添ポリデセン ４
ポリエチレングリコール−２０ ３
カルボキシビニルポリマー ０．０９
キサンタンガム ０．０５
メタリン酸ナトリウム ０．０２
２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール（AMPD） ０．０３
コラーゲン産生促進剤（シカクマメ抽出物） ０．２
アルギニン ０．０１
セイヨウバラエキス ０．３
オクラエキス ０．２
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
水溶性コラーゲン ０．５
（Ｂ相）
テトラエチルヘキサン酸ペンタエリスリチル ３
エチルヘキサン酸セチル ２
水添パーム油 ２
ワセリン １．５
ジメチコン １
ステアリン酸ポリエチレングリコール−５グリセリル １
イソステアリン酸ポリエチレングリコール−６０グリセリル １
ベヘニルアルコール ０．５
ジイソステアリン酸グリセリル ０．４
バチルアルコール ０．２
防腐剤 適量
香料 適量
（製法）
Ａ相（油相部）とＢ相（水相部）をそれぞれ７０℃に加熱し、完全溶解した。Ａ相をＢ相に加えてよく撹拌した後、乳化機で乳化した。得られた乳化物を熱交換器を用いて冷却した。
【００５１】
（配合処方例５：キャンディー ４，０００ｍｇ／日 中）
（配 合 成 分） （ｍｇ） （質量％）
砂糖 ２，０００ ５０
水飴 １，９２０ ４８
ヒアルロン酸産生促進剤（シカクマメ抽出物） ４０ １
香料 ４０ １
【００５２】
（配合処方例６：錠剤 １，５００ｍｇ／日 中）
（配 合 成 分） （ｍｇ） （質量％）
ショ糖エステル ７０ ４．７
結晶セルロース ７４ ４．９
メチルセルロース ３６ ２．４
グリセリン ２５ １．７
コラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤
（シカクマメ抽出物） ４７５ ３１．７
Ｎ−アセチルグルコサミン ２００ １３．３
ヒアルロン酸 １５０ １０．０
ビタミンＥ ３０ ２．０
ビタミンＢ６ ２０ １．３
ビタミンＢ２ １０ ０．７
α−リポ酸 ２０ １．３
コエンザイムＱ ４０ ２．７
セラミド（コンニャク抽出物） ５０ ３．３
Ｌ−プロリン ３００ ２０．０
【００５３】
（配合処方例７：ソフトカプセル １，５００ｍｇ／日 中）
（配 合 成 分） （ｍｇ） （質量％）
食用大豆油 ５３０ ３５．３
トチュウエキス ５０ ３．３
ニンジンエキス ５０ ３．３
コラーゲン産生促進剤（シカクマメ抽出物） １００ ６．７
ローヤルゼリー ５０ ３．３
マカ ３０ ２．０
γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ） ３０ ２．０
ミツロウ ６０ ４．０
ゼラチン ３７５ ２５．０
グリセリン １２０ ８．０
グリセリン脂肪酸エステル １０５ ７．０
【００５４】
（配合処方例８：ソフトカプセル １，５００ｍｇ／日 中）
（配 合 成 分） （ｍｇ） （質量％）
玄米胚芽油 ６５９ ４３．９
ヒアルロン酸産生促進剤（シカクマメ抽出物） ５００ ３３．３
レスベラトロール １ ０．１
ハス胚芽エキス １００ ６．７
エラスチン １８０ １２．０
ＤＮＡ ３０ ２．０
葉酸 ３０ ２．０
【００５５】
（配合処方例９：顆粒 １，２００ｍｇ／日 中）
（配 合 成 分） （ｍｇ） （質量％）
コラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤
（シカクマメ抽出物） ４００ ３３．４
ビタミンＣ １００ ８．３
大豆イソフラボン ２５０ ２０．８
還元乳糖 ３００ ２５．０
大豆オリゴ糖 ３６ ３．０
エリスリトール ３６ ３．０
デキストリン ３０ ２．５
香料 ２４ ２．０
クエン酸 ２４ ２．０
【００５６】
（配合処方例１０：ドリンク ５０ｍＬ／日 中）
（配 合 成 分） （ｍＬ） （質量％）
トチュウエキス １．６ ３．２
ニンジンエキス １．６ ３．２
コラーゲン産生促進剤（シカクマメ抽出物） １．６ ３．２
還元麦芽糖水飴 ２８ ５６．０
エリスリトール ８ １６．０
クエン酸 ２ ４．０
香料 １．３ ２．６
Ｎ−アセチルグルコサミン １ ２．０
ヒアルロン酸 ０．５ １．０
ビタミンＥ ０．３ ０．６
ビタミンＢ６ ０．２ ０．４
ビタミンＢ２ ０．１ ０．２
α−リポ酸 ０．２ ０．４
セラミド（コンニャク抽出物） ０．４ ０．８
Ｌ−プロリン ２ ４．０
【００５７】
（配合処方例１１：クッキー）
（配 合 成 分） （質量％）
薄力粉 ４５．０
バター １７．５
グラニュー糖 ２０．０
ヒアルロン酸産生促進剤（シカクマメ抽出物） ４．０
卵 １２．５
香料 １．０
（製法）
バターを撹拌しながら、グラニュー糖を徐々に添加した後、卵、シカクマメエキス、および香料を添加し、さらに撹拌した。十分に撹拌した後、均一に振るった薄力粉を加え、低速にて撹拌し、塊状で冷蔵庫にて寝かせた。その後、成型し、１７０℃、１５分間焼成しクッキーとした。
【００５８】
（配合処方例１２：軟膏）
（配 合 成 分） （質量％）
コラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤
（シカクマメ抽出物） ２．０
ステアリルアルコール １８．０
モクロウ ２０．０
ポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸エステル ０．２５
グリセリンモノステアリン酸エステル ０．３
ワセリン ４０．０
精製水 残余
（製造方法）
精製水にシカクマメエキスを加えて溶解し、７０℃に保つ（水相）。残りの成分を７０℃にて混合溶解する（油相）。水相に油相を加え、ホモミキサーで均一に乳化後、冷却して軟膏を得た。
【００５９】
（配合処方例１３：貼付剤）
（配 合 成 分） （質量％）
ヒアルロン酸産生促進剤（シカクマメ抽出物） １．０
クロタミトン ３．２
エステル油（「パナセート８７５Ｒ」） ２．５
スクワラン １．０
ｄｌ−カンフル ０．０７
ポリオキシエチレン（６０モル）硬化ヒマシ油 １．２
濃グリセリン ５．０
ゼラチン １．２
ポリビニルピロリドン ０．６
メチルパラベン 適量
ｄ−ソルビトール液 ３５．０
水酸化アルミニウム ０．２
亜硫酸ナトリウム 適量
エデト酸ナトリウム 適量
クエン酸 適量
カルボキシビニルポリマー ０．２２
ポリアクリル酸ナトリウム ０．２４
カルボキシメチルセルロースナトリウム ２．８
カオリン １．０
精製水 残量
【産業上の利用可能性】
【００６０】
本発明はコラーゲン産生促進効果およびヒアルロン酸産生促進効果が高いため、それを利用した皮膚外用剤、経口用組成物（例えば機能剤、飲食品など）、医薬製剤等を提供することができ、コラーゲンやヒアルロン酸が関与する種々の症状や疾病、病態等の治療、予防、改善等に役立つ。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マメ科シカクマメ（Psophocarpus）属に属する植物の中から選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物からなるコラーゲン産生促進剤。
【請求項２】
マメ科シカクマメ（Psophocarpus）属に属する植物の中から選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物からなるヒアルロン酸産生促進剤。
【請求項３】
マメ科シカクマメ（Psophocarpus）属に属する植物の中から選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物からなるコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤。
【請求項１】
マメ科シカクマメ（Psophocarpus）属に属する植物の中から選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物からなるコラーゲン産生促進剤。
【請求項２】
マメ科シカクマメ（Psophocarpus）属に属する植物の中から選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物からなるヒアルロン酸産生促進剤。
【請求項３】
マメ科シカクマメ（Psophocarpus）属に属する植物の中から選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物からなるコラーゲン産生促進およびヒアルロン酸産生促進剤。
【公開番号】特開２０１０−２４２２２（Ｐ２０１０−２４２２２Ａ）
【公開日】平成２２年２月４日（２０１０．２．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−９９５９１（Ｐ２００９−９９５９１）
【出願日】平成２１年４月１６日（２００９．４．１６）
【出願人】（０００００１９５９）株式会社資生堂 (1,748)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年２月４日（２０１０．２．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年４月１６日（２００９．４．１６）
【出願人】（０００００１９５９）株式会社資生堂 (1,748)
【Ｆターム（参考）】
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