抗肥満作用を有する低分子多糖類を含む組成物、およびその性質を利用した組成物
【課題】サプリメントとして利用され得る抗肥満作用を有する組成物を提供する。
【解決手段】動物の肥満を防ぐための組成物であって、低分子多糖類を含み、該組成物は、該動物が摂取する食品または飼料と該低分子多糖類との重量比が１：１３０〜２０：８０の割合になるように該食品または飼料とともに摂取され、該低分子多糖類が約１６個のＤ−グルコースからなり、かつ約６個のＤ−グルコースのホモグルコース鎖を単位とする螺旋構造をもつ組成物を提供する。好ましくは、この組成物は、さらにヒスチジン、カツオ抽出物または食物繊維を含む。
【解決手段】動物の肥満を防ぐための組成物であって、低分子多糖類を含み、該組成物は、該動物が摂取する食品または飼料と該低分子多糖類との重量比が１：１３０〜２０：８０の割合になるように該食品または飼料とともに摂取され、該低分子多糖類が約１６個のＤ−グルコースからなり、かつ約６個のＤ−グルコースのホモグルコース鎖を単位とする螺旋構造をもつ組成物を提供する。好ましくは、この組成物は、さらにヒスチジン、カツオ抽出物または食物繊維を含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗肥満作用または抗肥満作用を増強する性質をもつ、螺旋構造を備えた低分子多糖類を含む組成物に関する。本発明はまた、この低分子多糖類の抗肥満作用または抗肥満作用を増強する性質を利用した組成物に関する。本発明さらに、これら組成物を用いた肥満を防ぐ方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒスチジンを多く含むタンパク質、例えば、魚介類タンパク質が有する摂食抑制作用は、その作用機序の解明も進み、ヒスチジンが体内で代謝され誘導体化されて生じるヒスタミンが、ヒスタミンニューロンを活性化することにより過食予防に寄与するとされている（非特許文献１〜１２）。
【０００３】
例えば、非特許文献１は、食事調査から、ヒスチジン高含有タンパク質が摂食量を抑制していることを示唆している。また、非特許文献２は、摂取されたヒスチジンが体内でヒスタミンに変換され、ヒスタミンニューロンを活性化することにより摂食抑制作用を示し、その傾向は女性の方が男性より顕著であったと記載している。非特許文献３は、ＢＭＩと体重当たりのヒスチジン摂取量との間に有意な負の相関があることを認めている。また、非特許文献４は、魚介類を摂取するとタンパク質摂取量当たりのヒスチジン摂取量が多くなり、正の相関関係が成立したことを認めている。非特許文献５は、体脂肪率の低い人ほどヒスチジン摂取量が多く、神経ヒスタミンを介した摂食抑制作用や脂肪分解作用によって体脂肪減少が起こり、肥満防止に繋がることを報告している。非特許文献６は、カゼイン、煮干しとあこや貝を与えた１週間のラット飼育結果から、ヒスチジンリッチの煮干しを与えた場合、体重増加が相対的に最も少なかったと報告している。非特許文献７は、ヒスチジン食（ヒスチジン４ｇ／ｋｇ）とアルギニン食（アルギニン４ｇ／ｋｇ）によるラット飼育実験から、体内に吸収されたヒスチジンが約１日で摂食抑制作用を示すことを報告している。非特許文献８は、ヒスチジン食（ヒスチジン４ｇ／ｋｇ）とアルギニン食（アルギニン４ｇ／ｋｇ）によるラット飼育実験から、飼料摂取量に有意差は認められないにもかかわらず、肝臓組織中の中性脂肪量がヒスチジン飼料群で有意に低い値を示したことから、ヒスチジンはエネルギー消費を亢進している可能性があることを記載している。非特許文献９は、ヒスタミンが摂食抑制作用を発現する濃度が、２９ｍｇ／ｇ飼料であると報告している。非特許文献１０は、カツオ熱水抽出物を添加した飼料（ヒスタミン３７ｍｇ／ｇ）による摂食抑制および脂肪分解の促進を実証している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】中島滋、濱田稔ほか：低エネルギー摂取者に観察されたヒスチジン高含有タンパク質摂取による摂食抑制、日栄・食糧会誌 ２０００、５３：２０７−２１４．
【非特許文献２】中島滋、田中香ほか：瀬戸内海浜地区の女性におけるエネルギー摂取量とヒスチジン摂取量との相関、肥満研究 ２００１、７：２７６−２８２．
【非特許文献３】辻真紀子、中島滋ほか：ＢＭＩとヒスチジン摂取量との相関、肥満研究 ２００２、８：３０２−３０５．
【非特許文献４】中島滋、田中香ほか：タンパク質を供給する食品群別にみたヒスチジン摂取量に関する調査研究、肥満研究 ２００４、１０：６６−７２．
【非特許文献５】辻真紀子、笠岡誠一ほか：体脂肪率と体重当たりのヒスチジン摂取量との相関、肥満研究 ２００４、１０：１７３−１７６．
【非特許文献６】中島滋、濱田稔ほか：Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎｉｂｏｓｈｉ ｏｎ ｆｏｏｄ ｉｎｔａｋｅ．Ｆｉｓｈｅｒｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０００、６６：７９５−７９７．
【非特許文献７】中島滋、笠岡誠一ほか：カフェテリア方式を用いたヒスチジン添加飼料によるラットの摂食抑制作用、肥満研究 ２００２、８：５５−６０．
【非特許文献８】笠岡誠一、中島滋ほか：ヒスチジン添加飼料によるラット肝組織の中性脂肪低下作用、肥満研究 ２００２、８：１６８−１７２．
【非特許文献９】Ｋａｓａｏｋａ Ｓ．Ｋａｓａｏｋａ Ｔら：Ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｆｏｏｄ ｉｎｔａｋｅ ａｎｄ ｆａｔ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｔｓ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ２００４、２０：９９１−９９６．
【非特許文献１０】笠岡誠一、鍋島美佳ほか：カツオ節製造工程で得られたヒスチジン高含有物質の摂食抑制および脂肪分解促進、肥満研究 ２００５、１：６３−６８．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記のような過食予防効果にもかかわらず、ヒスチジンは、体内に摂取されると、代謝を受けてヒスタミンに変換され、ヒスタミンが過剰になればアレルギー症状を発現し、過剰のヒスタミンとアレルギー症状発現との間には有意な相関があることが示されている。従って、ヒスチジンの過剰摂取を避けると同時にヒスチジンを利用した過食予防効果を得ることが望まれる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、上記のヒスチジンの過剰摂取に付随する課題を解決するために、例えばデンプンから調製される、螺旋構造を備える低分子多糖類を利用する。本発明者らは、特定の螺旋構造を備える低分子多糖類が、抗肥満作用または抗肥満作用を増強する性質を有することを見出し、本発明を完成するに至った。この低分子多糖類は、それ自体抗肥満作用を有するとともに、ヒスチジンとともに存在することによって互いのもつ抗肥満作用を相乗的に増大する。
【０００７】
より特定すれば、本発明は以下の項目に関し得る。
（項目１）動物の肥満を防ぐための組成物であって、低分子多糖類を含み、上記組成物は、上記動物が摂取する食品または飼料と上記低分子多糖類との重量比が１：１３０〜２０：８０の割合になるように上記食品または飼料とともに摂取され、上記低分子多糖類が約１６個のＤ−グルコースからなり、かつ約６個のＤ−グルコースのホモグルコース鎖を単位とする螺旋構造をもつ、組成物。
（項目２）さらにヒスチジン、カツオ抽出物または食物繊維を含む、項目１に記載の組成物。
（項目３）上記ヒスチジンと上記低分子多糖類とを、約１：１０〜約１：１２７の割合の重量比で含む、項目２に記載の組成物。
（項目４）上記低分子多糖類と上記食物繊維とを、約１：１の重量比で含む、項目２に記載の組成物。
（項目５）錠剤、顆粒カプセル製剤およびクッキーからなる群から選択される形態である、項目１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【０００８】
上記低分子多糖類は、約１６個のＤ−グルコースからなり、約３、０００の分子量を有し、約６個のＤ−グルコースのホモグルコース鎖を単位とする螺旋構造を備えるホモグルコース体であって、水溶性であり、例えば、デンプンから調製され得る。
【０００９】
好ましくは、上記低分子多糖類は、螺旋の１巻きがＤ−グルコース残基６個からなる右巻き螺旋構造を有し得、その結果、その螺旋の中央にヨウ素分子Ｉ３が取り込まれてヨウ素呈色反応で発色するような構造を有している。このような低分子多糖類は、例えば、備前化成株式会社（岡山県赤磐市徳富３６３）からポタコーゲン（登録商標）として市販され入手可能である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、ヒスチジンと、螺旋構造を有する低分子多糖体、代表的にはポタコーゲン（登録商標）との組み合わせによって、従来知られている摂食抑制を発現し、抗肥満作用を得るためのヒスチジンの使用量の低減化を可能とし、かつ同時に動物の組織の脂肪量を相乗的に低減することができる。
【００１１】
このポタコーゲン（登録商標）は、体重増加作用があることが知られるフルクトースを利用したフルクトース負荷ラットにおいても、動物の皮下脂肪低下作用（下腹部皮下脂肪；１９％低下、腹腔内脂肪；２４％低下）を示すことが明らかとなり、ヒスチジンとポタコーゲン（登録商標）との併用により、抗肥満作用を得るためのヒスチジンの使用量の低減化とともに、動物の皮下脂肪を相乗的に低減する効果を期待できる。また同様に、ポタコーゲン（登録商標）は、おからなどの食物繊維と組み合わせることにより動物の皮下脂肪量または体脂肪量を相乗的に減少する作用を期待できる。従って、本発明をヒトおよびペットを含む動物に応用して、肥満解消に役立てることができる。
【００１２】
本発明の水溶性多糖類は、それ自体が抗肥満作用を有し、さらに、ヒスチジンと併用することによって、抗肥満効果を得るために必要なヒスチジンの使用量を低減し、体脂肪を相乗的に低減する。本発明によれば、この水溶性多糖類を用いて、抗肥満作用が増強された複合製剤または食品組成物が製造される。
【００１３】
本発明により、抗肥満作用のあるヒスチジンとポタコーゲン（登録商標）との組み合わせにより相乗作用を発現して、抗肥満作用を得るためのそれぞれの成分の使用量を低減して、体脂肪減少作用を示す錠剤、顆粒カプセル製剤またはクッキーなどのパン・菓子類を製造する方法で、ヒトおよびペットなどに適用して健康維持に役立て得る。
【００１４】
本発明により、ヒスチジンの体脂肪減少作用を相乗的に増強するために、低分子多糖類とヒスチジン、またはおからなどの食物繊維とを含む食品組成物を提供し得る。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明の組成物の抗肥満作用を示す図である。図に示されるグラフの縦軸は、実験に用いたラットの下腹部皮下脂肪含量を表し、図の横軸は実験群を表し、図中左から、普通群、対照群、試験対照群、ＰｏＧ群をそれぞれ示す。
【図２】本発明の組成物の抗肥満作用を示す図である。図に示されるグラフの縦軸は、実験に用いたラットの腹腔内白色脂肪含量を表し、図の横軸は実験群を表し、図中左から、普通群、対照群、試験対照群、ＰｏＧ群をそれぞれ示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本明細書で用いる用語「抗肥満作用」は、食物もしくは飼料、または食物もしくは飼料の一部として動物に摂取された場合、この動物の摂食量を適正に抑制し、その結果として、この動物の体重の増加を抑制または減少する作用、またはこの動物の体脂肪または組織の皮下脂肪含量を増加を抑制または減少する作用をいう。本発明の組成物は、通常、摂取される飼料または食物のサプリメント（本明細書では「食品類または食品添加物類」とも称される）として摂取され得る。
【００１７】
好ましくは、本発明の組成物は、摂取される飼料または食物のサプリメントとして用いられ、この組成物は、上記動物が摂取する食品または飼料と該低分子多糖類との重量比が１：１３０〜２０：８０の割合になるように該食品または飼料とともに摂取される。
【００１８】
好ましくは、本発明の組成物は、上記ヒスチジンと上記低分子量多糖類とを、約１：５〜約１：１２７の重量比の割合で含み、さらに好ましくは、本発明の組成物は、上記ヒスチジンと上記低分子量多糖類とを、約１：１０重量比の割合で含む。
【００１９】
また好ましくは、本発明の組成物は、上記低分子量多糖類と上記カツオ抽出物または食物繊維とを、約１：２〜２：１の範囲の重量比の割合で含み、さらに好ましくは、本発明の組成物は、上記低分子量多糖類と上記カツオ抽出物または食物繊維とを、約１：１の重量比の割合で含む。なお、本明細書で％について言及する場合、特に指定がなければ、重量％を意味する。
【００２０】
本発明の組成物が適用される上記「動物」は、制限されずに、霊長類、哺乳類、は虫類、両生類または鳥類に属する動物、ペット動物、家畜類などを含む。
【００２１】
本発明の組成物の抗肥満作用を示すに有効な量は、適切な哺乳動物モデルによって容易に確認され得る。次に、このような情報を用いて、さらにはヒトにおける摂取に有用な量を決定し得る。ヒトにおける「抗肥満作用を示すに有効な量」は、例えば、本明細書に記載されるラットを用いた実験に準じて容易に決定され得る。または、本発明の組成物は、有害成分を含まないので、ヒトにおける「抗肥満作用を示すに有効な量」はヒトに摂取されて容易に確認され得る。
【００２２】
実際に飼料または食物とともに摂取されて抗肥満作用を示す上記低分子多糖類、上記低分子多糖類、およびヒスチジン、カツオ抽出物または食物繊維の量は、適用される個体の体重、健康状態などに依存し得、抗肥満作用が最適に達成されるように調整され得る。
【００２３】
上記錠剤、顆粒カプセル製剤は、打錠加工助剤、顆粒加工助剤、カプセル加工助剤を用いて調製され得る。
【００２４】
本明細書で用いられる用語「打錠加工助剤」は、制限されずに、グラニュー糖、上白糖、粉糖、還元麦芽糖水飴粉末、乳糖、ブドウ糖、プルラン、エリスリトール、デンプン、デキストリンなどあらゆる糖類、結晶セルロース、アラビアガム、おからなどの食物繊維類、トウモロコシタンパク、リン酸カルシウムなどの食品カルシウム、食品エキス類、食品乾燥粉末類、天然果汁末類、ショ糖脂肪酸エステルなどの界面活性剤、粉末油脂類、グリセリン、脂肪酸エステルなどの油脂類、またはチュワブル錠（食べる錠剤）に使用する各種甘味料、各種酸味料、各種香料などの味付け素材、コーティング素材またはとしてのシェラック、トウモロコシタンパク、酵母細胞壁、デンプン、還元麦芽糖水飴、シュガーレス糖衣、マルチトール、グリセリン、ソルビトール、ＨＰＭＣ、ＨＰＣを含む。
【００２５】
本明細書で用いられる用語「顆粒加工助剤」は、制限されずに、グラニュー糖、上白糖、粉糖、還元麦芽糖水飴粉末、乳糖、ブドウ糖、プルラン、エリスリトール、デンプン、デキストリンなどあらゆる糖類、結晶セルロース、アラビアガムなどの食物繊維類、トウモロコシタンパク、リン酸カルシウムなどの食品カルシウム、食品エキス類、食品乾燥粉末類、天然果汁末類を含む。
【００２６】
本明細書で用いられる用語「カプセル加工助剤」は、制限されずに、ハードカプセルタイプのカプセルを調製するための、グラニュー糖、上白糖、粉糖、還元麦芽糖水飴粉末、乳糖、ブドウ糖、プルラン、エリスリトール、デンプン、デキストリンなどあらゆる糖類、結晶セルロース、アラビアガムなどの食物繊維類、トウモロコシタンパク、リン酸カルシウムなどの食品カルシウム、食品エキス類、食品乾燥粉末類、天然果汁末類を、そしてソフトカプセルタイプのカプセルを調製するための、食品油脂、ミツロウ、グリセリン脂肪酸エステルなどの内容物粘度調整剤を含む。
【００２７】
打錠製剤は、通常、打錠機を使用して調製される。そして打錠製剤に味付け素材をブレンドしてチュワブル錠にしたり、錠剤表面を自動コーティング機、噴霧顆粒機または手掛けパンを用いてコーティングされる。顆粒製剤の成形には、噴霧顆粒機タイプ、練りだし（押し出し）タイプまたは高速撹拌顆粒機タイプの各種顆粒機が使用され得る。カプセル製剤の調製には、カプセル助剤を混合してカプセル充填機（ハードタイプおよびソフトタイプ）が使用され得る。
【実施例】
【００２８】
本発明を、以下の記載の実施例を用いて説明する。以下の実施例は、本発明を制限する意図はなく、本発明の単なる例示に過ぎない。
【００２９】
（実施例１）低分子多糖類の抗肥満効果
１．検体、飼料および動物
ＭＦ標準飼料（オリエンタル酵母工業（株））にポタコーゲン（登録商標）２０％を添加して検体とした。ＳＤ系ラット（雌性、７週齢）は、日本チャールズ・リバー（株））から購入した。
【００３０】
２．実験方法
１群６匹のＳＤ系メスラットを３群用意した。対照群およびポタコーゲン（登録商標）投与群（実験群）には２５％フルクトース水溶液を、正常群には水道水を飲料水として４週間自由摂取させた。その間、実験群には２０％ポタコーゲン（登録商標）含有飼料を、対照群および正常群には標準飼料を自由に摂取させた。
【００３１】
３．実験結果
飼育開始１５日以降は実験群の体重は、対照群に比較して僅かに減少傾向を示した。対照群と実験群は、２７日間の飼育期間におけるラット一匹当たりの一日平均攝餌量は９．２７ｇで、約１４ｇであった正常群の一日平均攝餌量より少なかった。また、フルクトースの一日平均摂取量は、対照群では実験群よりやや高めに推移したものの、２３〜２５ｍＬ／日／匹であった。
【００３２】
実験最終日にラットを犠牲にし、下腹部皮下脂肪および腹腔内脂肪を摘出してこれらの重量を測定比較した。その結果、対照群と比較して実験群では、下腹部皮下脂肪が２４．８％、そして腹腔内白色脂肪が１９．３％少なかった。この結果より、ポタコーゲン（登録商標）は、体重増加作用のあることが知られるフルクトースの存在下でも、体重減少作用および皮下脂肪含量を減少する作用を示し、抗肥満効果を有することが明らかとなった。
【００３３】
（実施例２）
１．検体、飼料および動物
ポタコーゲン（登録商標）５０％、Ｌ−ヒスチジン５％、Ｌ−シトルリン７．５％、粉末マビット５０Ｍ ３５．５％、シュガーエステル１％および第三リン酸カルシウム１％配合の粉末（以下、ＰｏＧ−Ｈｉｓ配合末という。）を作製して検体とした。
【００３４】
高脂肪高ショ糖食（牛脂、ラードなどの脂肪含量３０％、オリエンタル酵母工業（株））、ＭＦ標準飼料（オリエンタル酵母工業（株））およびＳＤ系メスラット（７週齢、日本チャールズ・リバー（株））をそれぞれ購入して準備した。
【００３５】
２．実験方法
ＳＤ系メスラットを４群（各５匹）に分け、対照群には高脂肪高ショ糖食餌を、試験対照群にはラットＭＦ標準飼料を１０％となるように高脂肪高ショ糖食餌に混合した餌を、ＰｏＧ群として検体であるＰｏＧ−Ｈｉｓ配合末を高脂肪高ショ糖食餌に１０％混合した餌を、そして普通群としてラットＭＦ標準飼料をそれぞれ自由摂取させ、下記の項目（１〜４）について試験した。ＰｏＧ群の餌１ｇ中にはポタコーゲン（登録商標）５０ｍｇ、Ｌ−ヒスチジン５ｍｇが含まれている。
（１）体重を、実験開始日と実験開始後３日間おきに連続３９日間測定した。
（２）実験最終日に、ラットを犠牲にして下腹部皮下脂肪、腹腔内白色脂肪を摘出し、これらの脂肪を測定した。
（３）各群の餌摂取量は、実験開始前一週間から実験終了までに三日間おきにラット一匹当たりの平均摂取量を算出した。
（４）統計解析は、平均値の差の検定をＤｕｎｎｅｔｔ，ｔ−試験により行い、ｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１をそれぞれ有意差あり＊、＊＊とした。
【００３６】
３．結果
高脂肪高ショ糖食投与群（対照群）のラットは、３９日間の飼育によって、ＭＦ標準飼料投与群（普通群）のラットと比較して、平均で２．５倍以上の体重増加を示した。そして１０％ＭＦ標準飼料を添加した高脂肪高ショ糖食投与群（試験対照群）は、高脂肪高ショ糖食投与群（対照群）より平均体重が約１１％減少したにもかかわらず、１０％ＰｏＧ−Ｈｉｓ配合末添加の高脂肪高ショ糖食投与群（ＰｏＧ群）では約２６％の体重減少を認めた。
【００３７】
その体重減少の中身として体脂肪含量を調べた結果次のようであった。すなわち、ＰｏＧ群の下腹部皮下脂肪含量は、試験対照群のそれより平均で約３４％減少していた（図１）。また、ＰｏＧ群の腹腔内白色脂肪含量は試験対照群のそれより平均で約４８％減少していた（図２）。このようにＰｏＧ−Ｈｉｓ配合末添加の高脂肪高ショ糖食投与により、ラット下腹部皮下脂肪および腹腔内白色脂肪の増加を有意に減少させることが明らかとなった。ラットの餌の１日平均摂取量は普通群で約１６．４ｇであり、その一方、対照群と試験対照群実験群の２群のいずれとも約１４ｇであり、高脂肪高ショ糖食餌群では摂食抑制作用が認められた。これはＭＦ標準飼料より高脂肪高ショ糖食の方が高エネルギーであることによると考えられる。
【００３８】
（実施例３）
１．検体、飼料および動物
クッキーの基剤として薄力粉２４．４７％、砂糖１０％、無塩バター３１．５５％、甘味料（ステビア）０．１％、トレハロース５．６２％、全卵５．２６％、デキストリン３．８５％を混合した。別にポタコーゲン（登録商標）とカツオ抽出物（ヒスチジン含有：以下に記載のように調製した。）、および、おから（スーパーマーケットなどで市販されているもの）を１５０：７５：１５０の比率で混合したサンプルＡとポタコーゲン（登録商標）とおからを１５０：１５０の比率で混合したサンプルＢを調整した。サンプルＡおよびサンプルＢのそれぞれを、上述の基剤に１９．１５％添加して全体として１００％となったものをそれぞれサンプルＩおよびサンプルＩＩのクッキーとして作製した。
【００３９】
−カツオ抽出物の調製法−
花かつお５００ｇを蒸留水４Ｌに入れ、沸騰させて２時間加温抽出した。放冷後、濾過して濾液を集めた。濾別した花かつおに再び蒸留水４Ｌを加え沸騰させてさらに１時間加温抽出した。放冷後、同様に濾過して濾液を集め、先の濾液と合わせた後、２４０ｍＬまで減圧濃縮した。得られた濃縮液にエタノールを添加し、生じた沈殿物を濾過によって集め、カツオ抽出物を得た（１１．４ｇ）。沈殿物の一部を水に溶かし、薄層クロマトグラフィー（展開液；ｎ−ブタノール：氷酢酸：エタノール：蒸留水＝４：１：１：２で展開し、ヒスチジンのスポットを確認した。）
サンプルＩおよびサンプルＩＩを粉砕して粉末としたものを一定の割合で高脂肪高ショ糖食に添加した。サンプルＩ中のヒスチジン含量はアミノ酸自動測定器による測定結果０．６ｍｇ／ｇであった。ポタコーゲン（登録商標）はサンプルＩの１ｇ中に７６．６ｍｇ含まれる。
【００４０】
高脂肪高ショ糖食（牛脂、ラードなどの脂肪含量３０％、オリエンタル酵母工業（株））、ＭＦ標準飼料（オリエンタル酵母工業（株））およびＳＤ系メスラット（６週齢、日本チャールズ・リバー（株））をそれぞれ購入して準備した。
【００４１】
２．実験方法
ＳＤ系メスラットを４群（各６匹）に分け、対照群にはラットＭＦ標準飼料が１０％となるように、高脂肪高ショ糖食餌に混合して自由摂取させた。また、検体であるサンプルＩおよびサンプルＩＩのクッキーを粉砕後それぞれ高脂肪高ショ糖食餌に１０％混合した餌を実験群群とし、普通群にはラットＭＦ標準飼料をそれぞれ自由摂取させ、下記の項目（１〜４）を試験した。
（１）体重を実験開始日と実験開始後１週間おきに連続６週間測定した。
（２）実験最終日にラットを犠牲にして下腹部皮下脂肪、腹腔内白色脂肪を摘出し、これらの重量を測定した。
（３）各群の餌摂取量は実験開始前一週間から実験終了までに三日間おきにラット一匹当たりの平均摂取量を算出した。
（４）統計解析は、平均値の差の検定をＤｕｎｎｅｔｔ，ｔ−試験により行い、ｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１をそれぞれ有意差あり＊、＊＊とした。
【００４２】
３．結果
高脂肪高ショ糖食投与によるラット体脂肪蓄積に対する、ポタコーゲン（登録商標）とヒスチジンとを含有するクッキーの抗肥満作用を検討した。
【００４３】
高脂肪高ショ糖食投与群（対照群）のラットは、６週間の飼育により、ＭＦ標準飼料投与群（普通群）のラットと比較して、平均で約２．３倍の体重増加を示した。これに対し、サンプルＩおよびサンプルＩＩ添加の実験群では、対照群のラットと比較して、それぞれ、平均で３４．３％および２７．８％の体重減少が認められた。また、腹部皮下脂肪含量の変化は、サンプルＩおよびサンプルＩＩのクッキー添加実験群のラットでは、対照群のラットと比較して、それぞれ平均で３９．２％と３１．７％の減少が認められた。腹腔内白色脂肪の変化は、サンプルＩおよびサンプルＩＩのクッキー添加実験群のラットでは、対照群のラットと比較して、それぞれ平均で５４．９％と４９．３％と著しい減少が認められた。
【００４４】
このようにサンプルＩおよびサンプルＩＩのクッキーを添加した高脂肪高ショ糖食摂取により、ラット下腹部皮下脂肪および腹腔内白色脂肪の増加を有意に減少させることが明らかとなった。
【００４５】
また、サンプルＩＩのクッキー添加実験群の結果から、ラット下腹部皮下脂肪量および腹腔内白色脂肪量が減少していることから、ポタコーゲン（登録商標）とおからの組み合わせによっても、体脂肪の増加を有意に減少させることが明らかとなった。ラットの餌の１日平均摂取量は、普通群で約１６ｇであり、対照群と実験群の２群のいずれとも約１４ｇであり、高脂肪高ショ糖食餌群では摂食抑制作用が認められた。
【００４６】
（実施例４）
ポタコーゲン（登録商標）：Ｌ−ヒスチジン：Ｌ−シトルリン＝１０：１：１．５の比率混合物を作り、混合粉末Ａとした。混合粉末Ａを６２％、還元麦芽糖水飴粉末３５．５％、ショ糖脂肪酸エステル１％、第三リン酸カルシウム１％を混合し、直径８ｍｍ、２５０ｍｇ／粒の打錠品を成形した。一粒の数値は平均重量２４９．７ｇ／粒、錠剤硬度平均値１２．５ｋｇ／ｃｍ２、錠厚平均値４．９ｍｍであった。
【００４７】
混合粉末Ａの添加量は９５％〜１０％で打錠可能であり、錠剤の重量形状に合わせて含有量をコントロールできる。１錠中のポタコーゲン（登録商標）、Ｌ−ヒスチジンおよびＬ−シトルリンの計算上の含量は、それぞれ１２４ｍｇ、１２．４ｍｇ、および１８．６ｍｇである。
【００４８】
（実施例５）
混合粉末Ａを３４％、還元麦芽糖水飴粉末２５％、トレハロース１０％、酸味料５％、高甘味料０．２％ミルクカルシウム３％、フルーツ香料１％、果汁粉末３％、デキストリン４８．８％の重量割合で噴霧顆粒機を使用し、その際の噴霧液として水を使用して顆粒化した。本品は流動性のよい酸味と甘味のあるフルーツ系の顆粒が製造できた。混合粉末Ａは１％〜９０％の含量で増粘剤である糊剤溶液９０〜１０％を添加して噴霧顆粒化は可能である。
【００４９】
（実施例６）
混合粉末Ａ９８％、第三リン酸カルシウム１％、ショ糖脂肪酸エステル１％の混合物をハードカプセル充填機にてカプセル錠を製造した。
【００５０】
（実施例７）
混合粉末Ａ３７％、植物油５５％、ミツロウ・グリセリン脂肪酸エステル８％の重量割合で混合しソフトカプセル充填製剤が得られた。
【００５１】
（まとめ）
１．先ず、ポタコーゲン（登録商標）の脂肪の低減効果を実施例１によって検討した。その結果、４週間の飼育期間中に、２５％フルクトース水溶液を自由摂取させた実験群において、ポタコーゲン（登録商標）０．２ｇ／餌１ｇを含む飼料を与えた群のラットでは、ポタコーゲン（登録商標）を含まない飼料を与えた対照群と比較して、下腹部皮下脂肪が２４．８％、腹腔内白色脂肪が１９．３％減少していた。この結果よりポタコーゲン（登録商標）は体重増加作用のあるフルクトースの存在下においても体重減少作用および動物の組織の皮下脂肪含量を減少する作用を示すことが明らかとなった。
【００５２】
ポタコーゲン（登録商標）の脂肪を減少されるメカニズムは、ポタコーゲン（登録商標）の投与により、インスリンが上昇し、インスリン感受性ホルモンのレプチンに作用して、ＡＭＰキナーゼを活性化し、活性化されたＡＭＰキナーゼが脂質代謝を調節し（Ｍｉｎｏｋｏｓｈｉ、Ｙら：Ｌｅｐｔｉｎ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ＡＭＰ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ、Ｎａｔｕｒｅ、４１５：３３９−３４３、２００２）、脂肪酸を燃焼させて脂肪分を減少したと推測される。
【００５３】
２．ヒスチジンとポタコーゲン（登録商標）との組み合わせによって、ヒスチジンの使用量を非特許文献９に記載されるヒスタミンの摂食抑制作用発現濃度２９ｍｇ／ｇより低い濃度で体脂肪減少効果を示すか否かを検討した（実施例２）。実施例２では、ＳＤ系メスラットを４群（各５匹）に分け、対照群には高脂肪高ショ糖食餌、試験対照群にはラットＭＦ標準飼料を１０％高脂肪高ショ糖食餌に混合し自由摂取させた。また、検体であるヒスチジンとポタコーゲン（登録商標）の配合末を高脂肪高ショ糖食餌に１０％混合した餌をＰｏＧ群とし、普通群にはラットＭＦ標準飼料をそれぞれ自由摂取させ、４群のラットを連続３９日間飼育後犠牲にして体重、腹部皮下脂肪含量、腹部皮下脂肪含量を測定した。ＰｏＧ群の餌１ｇ中にはポタコーゲン（登録商標）５０ｍｇ、Ｌ−ヒスチジン５ｍｇが含まれる（実施例２）。ポタコーゲン（登録商標）５０ｍｇとＬ−ヒスチジン５ｍｇでその比率は１０：１となっているが、その比率に限定されるものではない。
【００５４】
高脂肪高ショ糖食投与群（対照群）のラットはＭＦ標準飼料投与群（普通群）のラットより３９日間の飼育により２．５倍以上の体重増加を示した。そして１０％ＭＦ標準飼料添加高脂肪高ショ糖食投与群（試験対照群）は、高脂肪高ショ糖食投与群（対照群）より体重が約１１％減少にもかかわらず、１０％ＰｏＧ−Ｈｉｓ配合末添加の高脂肪高ショ糖食投与群（ＰｏＧ群）では約２６％の体重減少を認めた。その体重減少の中身として脂肪含量を調べた結果次のようであった。すなわち、ＰｏＧ群の腹部皮下脂肪含量は試験対照群のそれよりより約３４％減少した。また、ＰｏＧ群の腹腔内白色脂肪含量は試験対照群のそれよりより約４８％減少した。このようにＰｏＧ−Ｈｉｓ配合末添加の高脂肪高ショ糖食投与によりラット下腹部皮下脂肪および腹腔内白色脂肪の増加を有意に減少させることが明らかとなった。
【００５５】
この結果、餌１ｇ中にポタコーゲン（登録商標）５０ｍｇ、Ｌ−ヒスチジン５ｍｇが含まれている。これは実施例１で示したポタコーゲン（登録商標）含有量０．２ｇ／餌１ｇより低含量であり、また、非特許文献９記載のヒスタミンの摂食抑制作用発現濃度２９ｍｇ／ｇより低含量で体脂肪減少効果を示している。このことより、ヒスチジンとポタコーゲン（登録商標）との組み合わせによって体脂肪減少に対して相乗効果を示すことが明らかになった。
【００５６】
３．さらに、ヒスチジンとポタコーゲン（登録商標）の相乗効果を明らかにするために、ヒスチジンとポタコーゲン（登録商標）とを添加したクッキーによるラットに対する影響（６週間飼育）を調べて次のような結果を得た（実施例３）。
【００５７】
高脂肪高ショ糖食投与群（対照群）のラットはＭＦ標準飼料投与群（普通群）のラットより６週間の飼育により約２．３倍の体重増加を示した。それに対して、餌１ｇ中にヒスチジン含量０．６ｍｇ／ｇとポタコーゲン（登録商標）は７６．６ｍｇ含量のクッキーでは対照群のそれの３４．３％の体重減少がみとめられた。また、腹部皮下脂肪含量と腹腔内白色脂肪の変化は対照群のそれぞれ３９．２％と５４．９％と著しい減少が認められ、ヒスチジンとポタコーゲン（登録商標）との組み合わせによって体脂肪減少に対してヒスチジンとポタコーゲン（登録商標）の両者とも低含量で相乗効果を示すことが明らかになった。
【００５８】
実施例３の餌には廃棄物利用の目的で食物繊維高含有量のおからを増量の目的で使用したが、ポタコーゲン（登録商標）とおからを共に餌１ｇ中に７６．６ｍｇ添加したクッキーによって、対照群のそれの２７．８％の体重減少がみとめられた。また、腹部皮下脂肪含量と腹腔内白色脂肪の変化は対照群のそれぞれ３１．７％と４９．３％と著しい減少が認められた。これにより、ラットの体脂肪減少に対してポタコーゲン（登録商標）とおからの組み合わせも有効であることが明らかになった。おからの代わりに結晶セルロース、アラビアガムおよびアルギン酸などの水溶性植物繊維を含む食物繊維類を利用することも考えられる。
【産業上の利用可能性】
【００５９】
抗肥満作用を有する組成物が提供される。この組成物は、飼料または食品のサプリメントとして添加されて、ヒトおよびペットを含む動物に応用して、肥満解消に役立てることができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗肥満作用または抗肥満作用を増強する性質をもつ、螺旋構造を備えた低分子多糖類を含む組成物に関する。本発明はまた、この低分子多糖類の抗肥満作用または抗肥満作用を増強する性質を利用した組成物に関する。本発明さらに、これら組成物を用いた肥満を防ぐ方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒスチジンを多く含むタンパク質、例えば、魚介類タンパク質が有する摂食抑制作用は、その作用機序の解明も進み、ヒスチジンが体内で代謝され誘導体化されて生じるヒスタミンが、ヒスタミンニューロンを活性化することにより過食予防に寄与するとされている（非特許文献１〜１２）。
【０００３】
例えば、非特許文献１は、食事調査から、ヒスチジン高含有タンパク質が摂食量を抑制していることを示唆している。また、非特許文献２は、摂取されたヒスチジンが体内でヒスタミンに変換され、ヒスタミンニューロンを活性化することにより摂食抑制作用を示し、その傾向は女性の方が男性より顕著であったと記載している。非特許文献３は、ＢＭＩと体重当たりのヒスチジン摂取量との間に有意な負の相関があることを認めている。また、非特許文献４は、魚介類を摂取するとタンパク質摂取量当たりのヒスチジン摂取量が多くなり、正の相関関係が成立したことを認めている。非特許文献５は、体脂肪率の低い人ほどヒスチジン摂取量が多く、神経ヒスタミンを介した摂食抑制作用や脂肪分解作用によって体脂肪減少が起こり、肥満防止に繋がることを報告している。非特許文献６は、カゼイン、煮干しとあこや貝を与えた１週間のラット飼育結果から、ヒスチジンリッチの煮干しを与えた場合、体重増加が相対的に最も少なかったと報告している。非特許文献７は、ヒスチジン食（ヒスチジン４ｇ／ｋｇ）とアルギニン食（アルギニン４ｇ／ｋｇ）によるラット飼育実験から、体内に吸収されたヒスチジンが約１日で摂食抑制作用を示すことを報告している。非特許文献８は、ヒスチジン食（ヒスチジン４ｇ／ｋｇ）とアルギニン食（アルギニン４ｇ／ｋｇ）によるラット飼育実験から、飼料摂取量に有意差は認められないにもかかわらず、肝臓組織中の中性脂肪量がヒスチジン飼料群で有意に低い値を示したことから、ヒスチジンはエネルギー消費を亢進している可能性があることを記載している。非特許文献９は、ヒスタミンが摂食抑制作用を発現する濃度が、２９ｍｇ／ｇ飼料であると報告している。非特許文献１０は、カツオ熱水抽出物を添加した飼料（ヒスタミン３７ｍｇ／ｇ）による摂食抑制および脂肪分解の促進を実証している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】中島滋、濱田稔ほか：低エネルギー摂取者に観察されたヒスチジン高含有タンパク質摂取による摂食抑制、日栄・食糧会誌 ２０００、５３：２０７−２１４．
【非特許文献２】中島滋、田中香ほか：瀬戸内海浜地区の女性におけるエネルギー摂取量とヒスチジン摂取量との相関、肥満研究 ２００１、７：２７６−２８２．
【非特許文献３】辻真紀子、中島滋ほか：ＢＭＩとヒスチジン摂取量との相関、肥満研究 ２００２、８：３０２−３０５．
【非特許文献４】中島滋、田中香ほか：タンパク質を供給する食品群別にみたヒスチジン摂取量に関する調査研究、肥満研究 ２００４、１０：６６−７２．
【非特許文献５】辻真紀子、笠岡誠一ほか：体脂肪率と体重当たりのヒスチジン摂取量との相関、肥満研究 ２００４、１０：１７３−１７６．
【非特許文献６】中島滋、濱田稔ほか：Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎｉｂｏｓｈｉ ｏｎ ｆｏｏｄ ｉｎｔａｋｅ．Ｆｉｓｈｅｒｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０００、６６：７９５−７９７．
【非特許文献７】中島滋、笠岡誠一ほか：カフェテリア方式を用いたヒスチジン添加飼料によるラットの摂食抑制作用、肥満研究 ２００２、８：５５−６０．
【非特許文献８】笠岡誠一、中島滋ほか：ヒスチジン添加飼料によるラット肝組織の中性脂肪低下作用、肥満研究 ２００２、８：１６８−１７２．
【非特許文献９】Ｋａｓａｏｋａ Ｓ．Ｋａｓａｏｋａ Ｔら：Ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｆｏｏｄ ｉｎｔａｋｅ ａｎｄ ｆａｔ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｔｓ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ２００４、２０：９９１−９９６．
【非特許文献１０】笠岡誠一、鍋島美佳ほか：カツオ節製造工程で得られたヒスチジン高含有物質の摂食抑制および脂肪分解促進、肥満研究 ２００５、１：６３−６８．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記のような過食予防効果にもかかわらず、ヒスチジンは、体内に摂取されると、代謝を受けてヒスタミンに変換され、ヒスタミンが過剰になればアレルギー症状を発現し、過剰のヒスタミンとアレルギー症状発現との間には有意な相関があることが示されている。従って、ヒスチジンの過剰摂取を避けると同時にヒスチジンを利用した過食予防効果を得ることが望まれる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、上記のヒスチジンの過剰摂取に付随する課題を解決するために、例えばデンプンから調製される、螺旋構造を備える低分子多糖類を利用する。本発明者らは、特定の螺旋構造を備える低分子多糖類が、抗肥満作用または抗肥満作用を増強する性質を有することを見出し、本発明を完成するに至った。この低分子多糖類は、それ自体抗肥満作用を有するとともに、ヒスチジンとともに存在することによって互いのもつ抗肥満作用を相乗的に増大する。
【０００７】
より特定すれば、本発明は以下の項目に関し得る。
（項目１）動物の肥満を防ぐための組成物であって、低分子多糖類を含み、上記組成物は、上記動物が摂取する食品または飼料と上記低分子多糖類との重量比が１：１３０〜２０：８０の割合になるように上記食品または飼料とともに摂取され、上記低分子多糖類が約１６個のＤ−グルコースからなり、かつ約６個のＤ−グルコースのホモグルコース鎖を単位とする螺旋構造をもつ、組成物。
（項目２）さらにヒスチジン、カツオ抽出物または食物繊維を含む、項目１に記載の組成物。
（項目３）上記ヒスチジンと上記低分子多糖類とを、約１：１０〜約１：１２７の割合の重量比で含む、項目２に記載の組成物。
（項目４）上記低分子多糖類と上記食物繊維とを、約１：１の重量比で含む、項目２に記載の組成物。
（項目５）錠剤、顆粒カプセル製剤およびクッキーからなる群から選択される形態である、項目１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【０００８】
上記低分子多糖類は、約１６個のＤ−グルコースからなり、約３、０００の分子量を有し、約６個のＤ−グルコースのホモグルコース鎖を単位とする螺旋構造を備えるホモグルコース体であって、水溶性であり、例えば、デンプンから調製され得る。
【０００９】
好ましくは、上記低分子多糖類は、螺旋の１巻きがＤ−グルコース残基６個からなる右巻き螺旋構造を有し得、その結果、その螺旋の中央にヨウ素分子Ｉ３が取り込まれてヨウ素呈色反応で発色するような構造を有している。このような低分子多糖類は、例えば、備前化成株式会社（岡山県赤磐市徳富３６３）からポタコーゲン（登録商標）として市販され入手可能である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、ヒスチジンと、螺旋構造を有する低分子多糖体、代表的にはポタコーゲン（登録商標）との組み合わせによって、従来知られている摂食抑制を発現し、抗肥満作用を得るためのヒスチジンの使用量の低減化を可能とし、かつ同時に動物の組織の脂肪量を相乗的に低減することができる。
【００１１】
このポタコーゲン（登録商標）は、体重増加作用があることが知られるフルクトースを利用したフルクトース負荷ラットにおいても、動物の皮下脂肪低下作用（下腹部皮下脂肪；１９％低下、腹腔内脂肪；２４％低下）を示すことが明らかとなり、ヒスチジンとポタコーゲン（登録商標）との併用により、抗肥満作用を得るためのヒスチジンの使用量の低減化とともに、動物の皮下脂肪を相乗的に低減する効果を期待できる。また同様に、ポタコーゲン（登録商標）は、おからなどの食物繊維と組み合わせることにより動物の皮下脂肪量または体脂肪量を相乗的に減少する作用を期待できる。従って、本発明をヒトおよびペットを含む動物に応用して、肥満解消に役立てることができる。
【００１２】
本発明の水溶性多糖類は、それ自体が抗肥満作用を有し、さらに、ヒスチジンと併用することによって、抗肥満効果を得るために必要なヒスチジンの使用量を低減し、体脂肪を相乗的に低減する。本発明によれば、この水溶性多糖類を用いて、抗肥満作用が増強された複合製剤または食品組成物が製造される。
【００１３】
本発明により、抗肥満作用のあるヒスチジンとポタコーゲン（登録商標）との組み合わせにより相乗作用を発現して、抗肥満作用を得るためのそれぞれの成分の使用量を低減して、体脂肪減少作用を示す錠剤、顆粒カプセル製剤またはクッキーなどのパン・菓子類を製造する方法で、ヒトおよびペットなどに適用して健康維持に役立て得る。
【００１４】
本発明により、ヒスチジンの体脂肪減少作用を相乗的に増強するために、低分子多糖類とヒスチジン、またはおからなどの食物繊維とを含む食品組成物を提供し得る。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明の組成物の抗肥満作用を示す図である。図に示されるグラフの縦軸は、実験に用いたラットの下腹部皮下脂肪含量を表し、図の横軸は実験群を表し、図中左から、普通群、対照群、試験対照群、ＰｏＧ群をそれぞれ示す。
【図２】本発明の組成物の抗肥満作用を示す図である。図に示されるグラフの縦軸は、実験に用いたラットの腹腔内白色脂肪含量を表し、図の横軸は実験群を表し、図中左から、普通群、対照群、試験対照群、ＰｏＧ群をそれぞれ示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本明細書で用いる用語「抗肥満作用」は、食物もしくは飼料、または食物もしくは飼料の一部として動物に摂取された場合、この動物の摂食量を適正に抑制し、その結果として、この動物の体重の増加を抑制または減少する作用、またはこの動物の体脂肪または組織の皮下脂肪含量を増加を抑制または減少する作用をいう。本発明の組成物は、通常、摂取される飼料または食物のサプリメント（本明細書では「食品類または食品添加物類」とも称される）として摂取され得る。
【００１７】
好ましくは、本発明の組成物は、摂取される飼料または食物のサプリメントとして用いられ、この組成物は、上記動物が摂取する食品または飼料と該低分子多糖類との重量比が１：１３０〜２０：８０の割合になるように該食品または飼料とともに摂取される。
【００１８】
好ましくは、本発明の組成物は、上記ヒスチジンと上記低分子量多糖類とを、約１：５〜約１：１２７の重量比の割合で含み、さらに好ましくは、本発明の組成物は、上記ヒスチジンと上記低分子量多糖類とを、約１：１０重量比の割合で含む。
【００１９】
また好ましくは、本発明の組成物は、上記低分子量多糖類と上記カツオ抽出物または食物繊維とを、約１：２〜２：１の範囲の重量比の割合で含み、さらに好ましくは、本発明の組成物は、上記低分子量多糖類と上記カツオ抽出物または食物繊維とを、約１：１の重量比の割合で含む。なお、本明細書で％について言及する場合、特に指定がなければ、重量％を意味する。
【００２０】
本発明の組成物が適用される上記「動物」は、制限されずに、霊長類、哺乳類、は虫類、両生類または鳥類に属する動物、ペット動物、家畜類などを含む。
【００２１】
本発明の組成物の抗肥満作用を示すに有効な量は、適切な哺乳動物モデルによって容易に確認され得る。次に、このような情報を用いて、さらにはヒトにおける摂取に有用な量を決定し得る。ヒトにおける「抗肥満作用を示すに有効な量」は、例えば、本明細書に記載されるラットを用いた実験に準じて容易に決定され得る。または、本発明の組成物は、有害成分を含まないので、ヒトにおける「抗肥満作用を示すに有効な量」はヒトに摂取されて容易に確認され得る。
【００２２】
実際に飼料または食物とともに摂取されて抗肥満作用を示す上記低分子多糖類、上記低分子多糖類、およびヒスチジン、カツオ抽出物または食物繊維の量は、適用される個体の体重、健康状態などに依存し得、抗肥満作用が最適に達成されるように調整され得る。
【００２３】
上記錠剤、顆粒カプセル製剤は、打錠加工助剤、顆粒加工助剤、カプセル加工助剤を用いて調製され得る。
【００２４】
本明細書で用いられる用語「打錠加工助剤」は、制限されずに、グラニュー糖、上白糖、粉糖、還元麦芽糖水飴粉末、乳糖、ブドウ糖、プルラン、エリスリトール、デンプン、デキストリンなどあらゆる糖類、結晶セルロース、アラビアガム、おからなどの食物繊維類、トウモロコシタンパク、リン酸カルシウムなどの食品カルシウム、食品エキス類、食品乾燥粉末類、天然果汁末類、ショ糖脂肪酸エステルなどの界面活性剤、粉末油脂類、グリセリン、脂肪酸エステルなどの油脂類、またはチュワブル錠（食べる錠剤）に使用する各種甘味料、各種酸味料、各種香料などの味付け素材、コーティング素材またはとしてのシェラック、トウモロコシタンパク、酵母細胞壁、デンプン、還元麦芽糖水飴、シュガーレス糖衣、マルチトール、グリセリン、ソルビトール、ＨＰＭＣ、ＨＰＣを含む。
【００２５】
本明細書で用いられる用語「顆粒加工助剤」は、制限されずに、グラニュー糖、上白糖、粉糖、還元麦芽糖水飴粉末、乳糖、ブドウ糖、プルラン、エリスリトール、デンプン、デキストリンなどあらゆる糖類、結晶セルロース、アラビアガムなどの食物繊維類、トウモロコシタンパク、リン酸カルシウムなどの食品カルシウム、食品エキス類、食品乾燥粉末類、天然果汁末類を含む。
【００２６】
本明細書で用いられる用語「カプセル加工助剤」は、制限されずに、ハードカプセルタイプのカプセルを調製するための、グラニュー糖、上白糖、粉糖、還元麦芽糖水飴粉末、乳糖、ブドウ糖、プルラン、エリスリトール、デンプン、デキストリンなどあらゆる糖類、結晶セルロース、アラビアガムなどの食物繊維類、トウモロコシタンパク、リン酸カルシウムなどの食品カルシウム、食品エキス類、食品乾燥粉末類、天然果汁末類を、そしてソフトカプセルタイプのカプセルを調製するための、食品油脂、ミツロウ、グリセリン脂肪酸エステルなどの内容物粘度調整剤を含む。
【００２７】
打錠製剤は、通常、打錠機を使用して調製される。そして打錠製剤に味付け素材をブレンドしてチュワブル錠にしたり、錠剤表面を自動コーティング機、噴霧顆粒機または手掛けパンを用いてコーティングされる。顆粒製剤の成形には、噴霧顆粒機タイプ、練りだし（押し出し）タイプまたは高速撹拌顆粒機タイプの各種顆粒機が使用され得る。カプセル製剤の調製には、カプセル助剤を混合してカプセル充填機（ハードタイプおよびソフトタイプ）が使用され得る。
【実施例】
【００２８】
本発明を、以下の記載の実施例を用いて説明する。以下の実施例は、本発明を制限する意図はなく、本発明の単なる例示に過ぎない。
【００２９】
（実施例１）低分子多糖類の抗肥満効果
１．検体、飼料および動物
ＭＦ標準飼料（オリエンタル酵母工業（株））にポタコーゲン（登録商標）２０％を添加して検体とした。ＳＤ系ラット（雌性、７週齢）は、日本チャールズ・リバー（株））から購入した。
【００３０】
２．実験方法
１群６匹のＳＤ系メスラットを３群用意した。対照群およびポタコーゲン（登録商標）投与群（実験群）には２５％フルクトース水溶液を、正常群には水道水を飲料水として４週間自由摂取させた。その間、実験群には２０％ポタコーゲン（登録商標）含有飼料を、対照群および正常群には標準飼料を自由に摂取させた。
【００３１】
３．実験結果
飼育開始１５日以降は実験群の体重は、対照群に比較して僅かに減少傾向を示した。対照群と実験群は、２７日間の飼育期間におけるラット一匹当たりの一日平均攝餌量は９．２７ｇで、約１４ｇであった正常群の一日平均攝餌量より少なかった。また、フルクトースの一日平均摂取量は、対照群では実験群よりやや高めに推移したものの、２３〜２５ｍＬ／日／匹であった。
【００３２】
実験最終日にラットを犠牲にし、下腹部皮下脂肪および腹腔内脂肪を摘出してこれらの重量を測定比較した。その結果、対照群と比較して実験群では、下腹部皮下脂肪が２４．８％、そして腹腔内白色脂肪が１９．３％少なかった。この結果より、ポタコーゲン（登録商標）は、体重増加作用のあることが知られるフルクトースの存在下でも、体重減少作用および皮下脂肪含量を減少する作用を示し、抗肥満効果を有することが明らかとなった。
【００３３】
（実施例２）
１．検体、飼料および動物
ポタコーゲン（登録商標）５０％、Ｌ−ヒスチジン５％、Ｌ−シトルリン７．５％、粉末マビット５０Ｍ ３５．５％、シュガーエステル１％および第三リン酸カルシウム１％配合の粉末（以下、ＰｏＧ−Ｈｉｓ配合末という。）を作製して検体とした。
【００３４】
高脂肪高ショ糖食（牛脂、ラードなどの脂肪含量３０％、オリエンタル酵母工業（株））、ＭＦ標準飼料（オリエンタル酵母工業（株））およびＳＤ系メスラット（７週齢、日本チャールズ・リバー（株））をそれぞれ購入して準備した。
【００３５】
２．実験方法
ＳＤ系メスラットを４群（各５匹）に分け、対照群には高脂肪高ショ糖食餌を、試験対照群にはラットＭＦ標準飼料を１０％となるように高脂肪高ショ糖食餌に混合した餌を、ＰｏＧ群として検体であるＰｏＧ−Ｈｉｓ配合末を高脂肪高ショ糖食餌に１０％混合した餌を、そして普通群としてラットＭＦ標準飼料をそれぞれ自由摂取させ、下記の項目（１〜４）について試験した。ＰｏＧ群の餌１ｇ中にはポタコーゲン（登録商標）５０ｍｇ、Ｌ−ヒスチジン５ｍｇが含まれている。
（１）体重を、実験開始日と実験開始後３日間おきに連続３９日間測定した。
（２）実験最終日に、ラットを犠牲にして下腹部皮下脂肪、腹腔内白色脂肪を摘出し、これらの脂肪を測定した。
（３）各群の餌摂取量は、実験開始前一週間から実験終了までに三日間おきにラット一匹当たりの平均摂取量を算出した。
（４）統計解析は、平均値の差の検定をＤｕｎｎｅｔｔ，ｔ−試験により行い、ｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１をそれぞれ有意差あり＊、＊＊とした。
【００３６】
３．結果
高脂肪高ショ糖食投与群（対照群）のラットは、３９日間の飼育によって、ＭＦ標準飼料投与群（普通群）のラットと比較して、平均で２．５倍以上の体重増加を示した。そして１０％ＭＦ標準飼料を添加した高脂肪高ショ糖食投与群（試験対照群）は、高脂肪高ショ糖食投与群（対照群）より平均体重が約１１％減少したにもかかわらず、１０％ＰｏＧ−Ｈｉｓ配合末添加の高脂肪高ショ糖食投与群（ＰｏＧ群）では約２６％の体重減少を認めた。
【００３７】
その体重減少の中身として体脂肪含量を調べた結果次のようであった。すなわち、ＰｏＧ群の下腹部皮下脂肪含量は、試験対照群のそれより平均で約３４％減少していた（図１）。また、ＰｏＧ群の腹腔内白色脂肪含量は試験対照群のそれより平均で約４８％減少していた（図２）。このようにＰｏＧ−Ｈｉｓ配合末添加の高脂肪高ショ糖食投与により、ラット下腹部皮下脂肪および腹腔内白色脂肪の増加を有意に減少させることが明らかとなった。ラットの餌の１日平均摂取量は普通群で約１６．４ｇであり、その一方、対照群と試験対照群実験群の２群のいずれとも約１４ｇであり、高脂肪高ショ糖食餌群では摂食抑制作用が認められた。これはＭＦ標準飼料より高脂肪高ショ糖食の方が高エネルギーであることによると考えられる。
【００３８】
（実施例３）
１．検体、飼料および動物
クッキーの基剤として薄力粉２４．４７％、砂糖１０％、無塩バター３１．５５％、甘味料（ステビア）０．１％、トレハロース５．６２％、全卵５．２６％、デキストリン３．８５％を混合した。別にポタコーゲン（登録商標）とカツオ抽出物（ヒスチジン含有：以下に記載のように調製した。）、および、おから（スーパーマーケットなどで市販されているもの）を１５０：７５：１５０の比率で混合したサンプルＡとポタコーゲン（登録商標）とおからを１５０：１５０の比率で混合したサンプルＢを調整した。サンプルＡおよびサンプルＢのそれぞれを、上述の基剤に１９．１５％添加して全体として１００％となったものをそれぞれサンプルＩおよびサンプルＩＩのクッキーとして作製した。
【００３９】
−カツオ抽出物の調製法−
花かつお５００ｇを蒸留水４Ｌに入れ、沸騰させて２時間加温抽出した。放冷後、濾過して濾液を集めた。濾別した花かつおに再び蒸留水４Ｌを加え沸騰させてさらに１時間加温抽出した。放冷後、同様に濾過して濾液を集め、先の濾液と合わせた後、２４０ｍＬまで減圧濃縮した。得られた濃縮液にエタノールを添加し、生じた沈殿物を濾過によって集め、カツオ抽出物を得た（１１．４ｇ）。沈殿物の一部を水に溶かし、薄層クロマトグラフィー（展開液；ｎ−ブタノール：氷酢酸：エタノール：蒸留水＝４：１：１：２で展開し、ヒスチジンのスポットを確認した。）
サンプルＩおよびサンプルＩＩを粉砕して粉末としたものを一定の割合で高脂肪高ショ糖食に添加した。サンプルＩ中のヒスチジン含量はアミノ酸自動測定器による測定結果０．６ｍｇ／ｇであった。ポタコーゲン（登録商標）はサンプルＩの１ｇ中に７６．６ｍｇ含まれる。
【００４０】
高脂肪高ショ糖食（牛脂、ラードなどの脂肪含量３０％、オリエンタル酵母工業（株））、ＭＦ標準飼料（オリエンタル酵母工業（株））およびＳＤ系メスラット（６週齢、日本チャールズ・リバー（株））をそれぞれ購入して準備した。
【００４１】
２．実験方法
ＳＤ系メスラットを４群（各６匹）に分け、対照群にはラットＭＦ標準飼料が１０％となるように、高脂肪高ショ糖食餌に混合して自由摂取させた。また、検体であるサンプルＩおよびサンプルＩＩのクッキーを粉砕後それぞれ高脂肪高ショ糖食餌に１０％混合した餌を実験群群とし、普通群にはラットＭＦ標準飼料をそれぞれ自由摂取させ、下記の項目（１〜４）を試験した。
（１）体重を実験開始日と実験開始後１週間おきに連続６週間測定した。
（２）実験最終日にラットを犠牲にして下腹部皮下脂肪、腹腔内白色脂肪を摘出し、これらの重量を測定した。
（３）各群の餌摂取量は実験開始前一週間から実験終了までに三日間おきにラット一匹当たりの平均摂取量を算出した。
（４）統計解析は、平均値の差の検定をＤｕｎｎｅｔｔ，ｔ−試験により行い、ｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１をそれぞれ有意差あり＊、＊＊とした。
【００４２】
３．結果
高脂肪高ショ糖食投与によるラット体脂肪蓄積に対する、ポタコーゲン（登録商標）とヒスチジンとを含有するクッキーの抗肥満作用を検討した。
【００４３】
高脂肪高ショ糖食投与群（対照群）のラットは、６週間の飼育により、ＭＦ標準飼料投与群（普通群）のラットと比較して、平均で約２．３倍の体重増加を示した。これに対し、サンプルＩおよびサンプルＩＩ添加の実験群では、対照群のラットと比較して、それぞれ、平均で３４．３％および２７．８％の体重減少が認められた。また、腹部皮下脂肪含量の変化は、サンプルＩおよびサンプルＩＩのクッキー添加実験群のラットでは、対照群のラットと比較して、それぞれ平均で３９．２％と３１．７％の減少が認められた。腹腔内白色脂肪の変化は、サンプルＩおよびサンプルＩＩのクッキー添加実験群のラットでは、対照群のラットと比較して、それぞれ平均で５４．９％と４９．３％と著しい減少が認められた。
【００４４】
このようにサンプルＩおよびサンプルＩＩのクッキーを添加した高脂肪高ショ糖食摂取により、ラット下腹部皮下脂肪および腹腔内白色脂肪の増加を有意に減少させることが明らかとなった。
【００４５】
また、サンプルＩＩのクッキー添加実験群の結果から、ラット下腹部皮下脂肪量および腹腔内白色脂肪量が減少していることから、ポタコーゲン（登録商標）とおからの組み合わせによっても、体脂肪の増加を有意に減少させることが明らかとなった。ラットの餌の１日平均摂取量は、普通群で約１６ｇであり、対照群と実験群の２群のいずれとも約１４ｇであり、高脂肪高ショ糖食餌群では摂食抑制作用が認められた。
【００４６】
（実施例４）
ポタコーゲン（登録商標）：Ｌ−ヒスチジン：Ｌ−シトルリン＝１０：１：１．５の比率混合物を作り、混合粉末Ａとした。混合粉末Ａを６２％、還元麦芽糖水飴粉末３５．５％、ショ糖脂肪酸エステル１％、第三リン酸カルシウム１％を混合し、直径８ｍｍ、２５０ｍｇ／粒の打錠品を成形した。一粒の数値は平均重量２４９．７ｇ／粒、錠剤硬度平均値１２．５ｋｇ／ｃｍ２、錠厚平均値４．９ｍｍであった。
【００４７】
混合粉末Ａの添加量は９５％〜１０％で打錠可能であり、錠剤の重量形状に合わせて含有量をコントロールできる。１錠中のポタコーゲン（登録商標）、Ｌ−ヒスチジンおよびＬ−シトルリンの計算上の含量は、それぞれ１２４ｍｇ、１２．４ｍｇ、および１８．６ｍｇである。
【００４８】
（実施例５）
混合粉末Ａを３４％、還元麦芽糖水飴粉末２５％、トレハロース１０％、酸味料５％、高甘味料０．２％ミルクカルシウム３％、フルーツ香料１％、果汁粉末３％、デキストリン４８．８％の重量割合で噴霧顆粒機を使用し、その際の噴霧液として水を使用して顆粒化した。本品は流動性のよい酸味と甘味のあるフルーツ系の顆粒が製造できた。混合粉末Ａは１％〜９０％の含量で増粘剤である糊剤溶液９０〜１０％を添加して噴霧顆粒化は可能である。
【００４９】
（実施例６）
混合粉末Ａ９８％、第三リン酸カルシウム１％、ショ糖脂肪酸エステル１％の混合物をハードカプセル充填機にてカプセル錠を製造した。
【００５０】
（実施例７）
混合粉末Ａ３７％、植物油５５％、ミツロウ・グリセリン脂肪酸エステル８％の重量割合で混合しソフトカプセル充填製剤が得られた。
【００５１】
（まとめ）
１．先ず、ポタコーゲン（登録商標）の脂肪の低減効果を実施例１によって検討した。その結果、４週間の飼育期間中に、２５％フルクトース水溶液を自由摂取させた実験群において、ポタコーゲン（登録商標）０．２ｇ／餌１ｇを含む飼料を与えた群のラットでは、ポタコーゲン（登録商標）を含まない飼料を与えた対照群と比較して、下腹部皮下脂肪が２４．８％、腹腔内白色脂肪が１９．３％減少していた。この結果よりポタコーゲン（登録商標）は体重増加作用のあるフルクトースの存在下においても体重減少作用および動物の組織の皮下脂肪含量を減少する作用を示すことが明らかとなった。
【００５２】
ポタコーゲン（登録商標）の脂肪を減少されるメカニズムは、ポタコーゲン（登録商標）の投与により、インスリンが上昇し、インスリン感受性ホルモンのレプチンに作用して、ＡＭＰキナーゼを活性化し、活性化されたＡＭＰキナーゼが脂質代謝を調節し（Ｍｉｎｏｋｏｓｈｉ、Ｙら：Ｌｅｐｔｉｎ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ＡＭＰ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ、Ｎａｔｕｒｅ、４１５：３３９−３４３、２００２）、脂肪酸を燃焼させて脂肪分を減少したと推測される。
【００５３】
２．ヒスチジンとポタコーゲン（登録商標）との組み合わせによって、ヒスチジンの使用量を非特許文献９に記載されるヒスタミンの摂食抑制作用発現濃度２９ｍｇ／ｇより低い濃度で体脂肪減少効果を示すか否かを検討した（実施例２）。実施例２では、ＳＤ系メスラットを４群（各５匹）に分け、対照群には高脂肪高ショ糖食餌、試験対照群にはラットＭＦ標準飼料を１０％高脂肪高ショ糖食餌に混合し自由摂取させた。また、検体であるヒスチジンとポタコーゲン（登録商標）の配合末を高脂肪高ショ糖食餌に１０％混合した餌をＰｏＧ群とし、普通群にはラットＭＦ標準飼料をそれぞれ自由摂取させ、４群のラットを連続３９日間飼育後犠牲にして体重、腹部皮下脂肪含量、腹部皮下脂肪含量を測定した。ＰｏＧ群の餌１ｇ中にはポタコーゲン（登録商標）５０ｍｇ、Ｌ−ヒスチジン５ｍｇが含まれる（実施例２）。ポタコーゲン（登録商標）５０ｍｇとＬ−ヒスチジン５ｍｇでその比率は１０：１となっているが、その比率に限定されるものではない。
【００５４】
高脂肪高ショ糖食投与群（対照群）のラットはＭＦ標準飼料投与群（普通群）のラットより３９日間の飼育により２．５倍以上の体重増加を示した。そして１０％ＭＦ標準飼料添加高脂肪高ショ糖食投与群（試験対照群）は、高脂肪高ショ糖食投与群（対照群）より体重が約１１％減少にもかかわらず、１０％ＰｏＧ−Ｈｉｓ配合末添加の高脂肪高ショ糖食投与群（ＰｏＧ群）では約２６％の体重減少を認めた。その体重減少の中身として脂肪含量を調べた結果次のようであった。すなわち、ＰｏＧ群の腹部皮下脂肪含量は試験対照群のそれよりより約３４％減少した。また、ＰｏＧ群の腹腔内白色脂肪含量は試験対照群のそれよりより約４８％減少した。このようにＰｏＧ−Ｈｉｓ配合末添加の高脂肪高ショ糖食投与によりラット下腹部皮下脂肪および腹腔内白色脂肪の増加を有意に減少させることが明らかとなった。
【００５５】
この結果、餌１ｇ中にポタコーゲン（登録商標）５０ｍｇ、Ｌ−ヒスチジン５ｍｇが含まれている。これは実施例１で示したポタコーゲン（登録商標）含有量０．２ｇ／餌１ｇより低含量であり、また、非特許文献９記載のヒスタミンの摂食抑制作用発現濃度２９ｍｇ／ｇより低含量で体脂肪減少効果を示している。このことより、ヒスチジンとポタコーゲン（登録商標）との組み合わせによって体脂肪減少に対して相乗効果を示すことが明らかになった。
【００５６】
３．さらに、ヒスチジンとポタコーゲン（登録商標）の相乗効果を明らかにするために、ヒスチジンとポタコーゲン（登録商標）とを添加したクッキーによるラットに対する影響（６週間飼育）を調べて次のような結果を得た（実施例３）。
【００５７】
高脂肪高ショ糖食投与群（対照群）のラットはＭＦ標準飼料投与群（普通群）のラットより６週間の飼育により約２．３倍の体重増加を示した。それに対して、餌１ｇ中にヒスチジン含量０．６ｍｇ／ｇとポタコーゲン（登録商標）は７６．６ｍｇ含量のクッキーでは対照群のそれの３４．３％の体重減少がみとめられた。また、腹部皮下脂肪含量と腹腔内白色脂肪の変化は対照群のそれぞれ３９．２％と５４．９％と著しい減少が認められ、ヒスチジンとポタコーゲン（登録商標）との組み合わせによって体脂肪減少に対してヒスチジンとポタコーゲン（登録商標）の両者とも低含量で相乗効果を示すことが明らかになった。
【００５８】
実施例３の餌には廃棄物利用の目的で食物繊維高含有量のおからを増量の目的で使用したが、ポタコーゲン（登録商標）とおからを共に餌１ｇ中に７６．６ｍｇ添加したクッキーによって、対照群のそれの２７．８％の体重減少がみとめられた。また、腹部皮下脂肪含量と腹腔内白色脂肪の変化は対照群のそれぞれ３１．７％と４９．３％と著しい減少が認められた。これにより、ラットの体脂肪減少に対してポタコーゲン（登録商標）とおからの組み合わせも有効であることが明らかになった。おからの代わりに結晶セルロース、アラビアガムおよびアルギン酸などの水溶性植物繊維を含む食物繊維類を利用することも考えられる。
【産業上の利用可能性】
【００５９】
抗肥満作用を有する組成物が提供される。この組成物は、飼料または食品のサプリメントとして添加されて、ヒトおよびペットを含む動物に応用して、肥満解消に役立てることができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物の肥満を防ぐための組成物であって、低分子多糖類を含み、該組成物は、該動物が摂取する食品または飼料と該低分子多糖類との重量比が１：１３０〜２０：８０の割合になるように該食品または飼料とともに摂取され、該低分子多糖類が約１６個のＤ−グルコースからなり、かつ約６個のＤ−グルコースのホモグルコース鎖を単位とする螺旋構造をもつ、組成物。
【請求項２】
さらにヒスチジン、カツオ抽出物または食物繊維を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ヒスチジンと前記低分子多糖類とを、約１：１０〜約１：１２７の割合の重量比で含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記低分子多糖類と前記食物繊維とを、約１：１の重量比で含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
錠剤、顆粒カプセル製剤およびクッキーからなる群から選択される形態である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１】
動物の肥満を防ぐための組成物であって、低分子多糖類を含み、該組成物は、該動物が摂取する食品または飼料と該低分子多糖類との重量比が１：１３０〜２０：８０の割合になるように該食品または飼料とともに摂取され、該低分子多糖類が約１６個のＤ−グルコースからなり、かつ約６個のＤ−グルコースのホモグルコース鎖を単位とする螺旋構造をもつ、組成物。
【請求項２】
さらにヒスチジン、カツオ抽出物または食物繊維を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ヒスチジンと前記低分子多糖類とを、約１：１０〜約１：１２７の割合の重量比で含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記低分子多糖類と前記食物繊維とを、約１：１の重量比で含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
錠剤、顆粒カプセル製剤およびクッキーからなる群から選択される形態である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１１−３２２３７（Ｐ２０１１−３２２３７Ａ）
【公開日】平成２３年２月１７日（２０１１．２．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−１８１５７４（Ｐ２００９−１８１５７４）
【出願日】平成２１年８月４日（２００９．８．４）
【出願人】（３９１００７３５６）備前化成株式会社 (16)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年２月１７日（２０１１．２．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年８月４日（２００９．８．４）
【出願人】（３９１００７３５６）備前化成株式会社 (16)
【Ｆターム（参考）】
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