新規カテキン誘導体及びその用途
【課題】ジャンボリーキ泡成分に含まれる有効成分を単離、精製し、その化学構造を決定して作用機序を明らかにすると共に、当該化合物を用いて種々の医薬品又は機能性食品を提供する。
【解決手段】ジャンボリーキ泡成分から単離された、エピガロカテキン誘導体若しくはその塩、カテキン配糖体又はそれらの２種以上からなるカテキン誘導体混合物。これら混合物はアルコール吸収抑制剤として、肝障害予防剤、血糖降下剤として有用である。
【解決手段】ジャンボリーキ泡成分から単離された、エピガロカテキン誘導体若しくはその塩、カテキン配糖体又はそれらの２種以上からなるカテキン誘導体混合物。これら混合物はアルコール吸収抑制剤として、肝障害予防剤、血糖降下剤として有用である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なカテキン誘導体及びその用途に関し、より詳細には、無臭ニンニク（英名：Jumbo Leek、和名：大粒ニラネギ）の有効成分として同定された新規なカテキン誘導体及びその医薬品、健康食品への用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
有臭ニンニクに比べ球根の大きさが数倍有り、茎の長さは１６０ｃｍ、根の長さは約２ｍにも達するジャンボリーキ（大粒ニラネギ）が知られている。本食材の形態はニンニクに類似しているが、染色体数とフレーバーが玉ねぎやニンニクとは異なり、リーキに一致することから、その学名はAllium ampeloprasum L.とされ、一般にはジャンボリーキ（大粒ニラネギ）と称される。このジャンボリーキを洗浄・粉砕して除菌・凍結乾燥した粉末ムシューリック（登録商標）ＰＳＩＩは、大蔵製薬株式会社から販売され、ヒト又は小動物（マウス、ラット）に対し、生体防御機構の活性化作用、高脂血症軽減効果、抗酸化活性のあることが明らかにされている（例えば、非特許文献１参照）。
【０００３】
本発明者らは、ジャンボリーキの工業的加工プロセスにおいて多量に発生する泡成分の有効利用を目的として、この泡成分の生理作用を研究した結果、種々の肝障害を著しく改善する効果を見出している（例えば、特許文献１参照）。一般に、食品由来の泡成分にはサポニンが含まれることが知られている。サポニンは、植物界に広く分布している化合物の総称である。トリテルペン及びステロイド配糖体として検出されており、これらの配糖体の糖部分は水酸基が多いため親水性があり、アグリコン（非糖部）には親油性があるため、多くは界面活性作用を示す。サポニンの共通した性質には水溶液の気泡性があり、また、脂質の酸化抑制作用、肝障害防御活性等の生理作用が認められているが、大豆、アスパラガス、エレファントガーリック等のサポニンの含有量は数ｍｇ／ｋｇと微量である。
【０００４】
自然界では、大部分の糖質は多糖類(polysaccharides)として存在しており、多くのオリゴ糖や単糖あるいはそれらの誘導体は、これらの多糖類が酸あるいは各種の酵素によって加水分解を受けることにより生成する。多糖類には、ヒトの消化管で消化・吸収され、エネルギー貯蔵体や細胞壁の構成成分の役割をもつ多糖類と、ヒトの消化酵素で消化されにくい食物繊維の２種類がある。「第六の栄養素」と呼ばれる食物繊維はエネルギー源にならないが、動脈硬化や糖尿病の予防、ガンの予防といった食物繊維としての機能をもつ。このように多糖類は、生体調節機能の面からの研究も盛んに行われている。ジャンボリーキの７１．９％は水分が占めており、炭水化物は２０．７％である。従って、ジャンボリーキの炭水化物の乾燥物換算では７４．６％となる。しかし、これまでの研究で、糖の種類は明らかにされていない。
【０００５】
【特許文献１】特開２００５−１９４２１６号公報
【非特許文献１】内田あゆみ、「天然ニンニク様植物（無臭ニンニク）の生体防御機構の活性化作用」、ＦＯＯＤ Ｓｔｙｌｅ ２１、１９９８年７月、第２巻、第７号、ｐ．４５−４８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ジャンボリーキ鱗片の工業的な洗浄工程で大量に発生する泡成分の有効利用が企図されているが、その化学物質としての構造は未だ明らかではない。本発明は、上記泡成分に含まれる有効成分を単離、精製し、その化学構造を決定して作用機序を明らかにすると共に、当該化合物を用いて種々の医薬品又は機能性食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決するために、本発明者らは長野産無臭ジャンボリーキに含まれていると考えられる有効成分を探索するために、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による有効成分の分析や単離方法の検討を行い、精製した有効成分を高速液体クロマトグラフ質量分析計（ＬＣ−ＭＳ）により分析した。また、ジャンボリーキ中から粗多糖を抽出し、糖の性質を調べると共に、加水分解法や酵素分解法を用い、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）及びＨＰＬＣによりジャンボリーキ中に含まれる糖の分析を行った。その結果、ジャンボリーキ泡粉末から有効成分と考えられる下記の新規なカテキン誘導体を見出した。また、ジャンボリーキに含有される主要な糖としてイヌリンを同定した。本発明はこれらの結果に基づいてなされたものであって、少なくとも以下の発明を包含する。
【０００８】
（１）ジャンボリーキ泡成分から単離され、下記式（Ｉ）〜（ＩＶ）で示される化合物の何れか１種のカテキン誘導体若しくはその塩、又はそれらの２種以上からなるカテキン誘導体混合物。
【０００９】
【化１】
【００１０】
【化２】
【００１１】
【化３】
【００１２】
【化４】
【００１３】
（２）上記（１）に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物と、生理的に許容しうる担体とを含む医薬組成物。
（３）有効量の上記（１）に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物を含むアルコール吸収抑制剤。
（４）有効量の上記（１）に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物を含むアルコール性肝障害予防治療剤。
（５）有効量の上記（１）に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物を含む血糖降下剤。
（６）上記（１）に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物とイヌリンとを有効成分として含む肝障害改善用及び／又は糖尿病改善用機能性食品。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、ジャンボリーキ中の有効成分の化学構造が明らかとなり、これらの有効成分の薬理効果や作用機序をより明らかにすることが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
（新規カテキン誘導体）
本発明に係るカテキン誘導体は、上記（Ｉ）〜（ＩＶ）で示される化合物である。式（Ｉ）の化合物は、エピガロカテキンの３位と７位に酸素原子を介してイソカプリル酸と、プロトカテク酸がそれぞれ結合したものである(Epigallocatechin hydrate-3-O-isocaprylic acid-7-O-protocatechuic acid)。イソカプリル酸の末端カルボキシル基は塩の形態でも良い。式（ＩＩ）の化合物は、カテキンの３位に２つのグルコースがβ配位で結合したものである(Catechin-3-O-β-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranoside)。式（ＩＩＩ）の化合物は、エピガロカテキンの３位にアピゲニンが付加されたものである(Epigallocatechin-3-O-apigenin)。エピガロカテキン及びアピゲニンの水酸基は塩の形態であってもよい。式（ＩＶ）の化合物は、エピガロカテキンの３位にロイコシアニジンが付加したものである(Epigallocatechin hydrate-3-O-leucocyanidin)。上記化合物は何れも特定の水酸基がナトリウム、カリウム又はカルシウム等との塩の形態であってもよく、中でも１又は２ナトリウム塩が好ましい。これらのカテキン誘導体は１種又は２種以上の混合物の形態であってもよく、好ましくは４種類のカテキン誘導体を含む組成物が医薬又は機能性食品用途として適している。
【００１６】
上記カテキン誘導体の製造方法としては、これらの化合物の構成単位であるカテキンやエピガロカテキン及びグルコース等は入手可能であり、これらをもとにして通常の有機合成方法にて製造することができるが、天然物、好ましくはジャンボリーキ泡成分から抽出することが好ましい。抽出、精製方法については特に制限はなく、溶媒抽出、液体クロマトグラフィー等公知の方法を組み合わせて行うことができる。
【００１７】
（医薬組成物又は機能性食品組成物）
本発明に係るカテキン誘導体は、医薬組成物又は機能性食品組成物として投与又は摂取することができ、例えば錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、散剤、顆粒剤、カプセル剤（ソフトカプセルを含む）、シロップ剤、液剤等として、経口的に安全に投与することができる。経口投与用製剤とするには、公知の方法に従い、有効成分であるサポニンを例えば、賦形剤（例、乳糖、白糖、デンプン等）、崩壊剤（例、デンプン、炭酸カルシウム等）、結合剤（例、デンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース等）又は滑沢剤（例、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール ６０００等）等を添加して圧縮成形し、次いで必要により、味のマスキング、腸溶性あるいは持続性の目的のため公知の方法でコーティングすることにより経口投与製剤とすることができる。そのコーティング剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリオキシエチレングリコール、ツイーン ８０、プルロニック Ｆ６８、セルロースアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシメチルセルロースアセテートサクシネート、オイドラギット（ローム社製、ドイツ、メタアクリル酸・アクリル酸共重合）及び色素（例、ベンガラ、二酸化チタン等）等が用いられる。経口投与用製剤は速放性製剤、徐放性製剤のいずれであってもよい。あるいは、一般の飲食品の形態として摂取することができ、例えば、清涼飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料、ゼリー、菓子、ジャム、クリーム等の菓子類、かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産、畜産加工食品、その他種々の形態の健康、栄養補助食品等が考えられるがこれらに限定されるものではない。
【００１８】
本発明の組成物を肝障害の予防治療剤として、又は糖尿病の予防改善剤として用いる場合の投与量は、患者の年齢、疾病の種類、程度などにより変動し、一概に規定することはできないが、一般成人に対して、経口投与の場合は、１日量０．１〜１００ｇ、好ましくは１〜１０ｇである。非経口投与の場合は、１日量２０〜１０００ｍｇ、好ましくは５０〜５００ｍｇであり、症状に応じて必要により１〜３回に分けて投与することが好ましい。
【００１９】
（機能性食品としての用途）
ジャンボリーキは玉ねぎに似た臭気を持つため、肉類、例えばソーセージ等に添加することで肉の臭味を低下させることができる。また、上記カテキン誘導体及びジャンボリーキ中の糖の主要成分であるイヌリンは、肝障害に対してその機能低下を改善する効果及び高脂血症に対し予防効果を有しており、機能性食品又は健康補助食品としての開発が期待される。
【実施例】
【００２０】
［実施例１］高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によるジャンボリーキとジャンボリーキ泡成分の分析
１ 実験材料および方法
１−１ 実験材料
日本大学産ジャンボリーキは、日本大学生物資源科学部が所有する農場にて栽培し、２００５年７月に収穫した鱗片を−２０℃で保存したものを使用した。以下これを日本大学産ジャンボリーキとする。
【００２１】
１−２ サンプルの調製
（１）ジャンボリーキ鱗片の調製
日本大学産ジャンボリーキ鱗片１００ｇに７０％メタノール１００ｍｌを加えてミキサー（ＢＭ−ＦＴ０８−ＧＡ、象印マホービン株式会社、大阪）でホモジネートし、一晩放置後、濾過した。その溶液をロータリーエバポレーターで濃縮し、フィルター濾過したものをＨＰＬＣに供した。
【００２２】
（２）ジャンボリーキ泡粉末の調製
ジャンボリーキ鱗片１ｋｇに純水１Ｌを加えミキサーで粉砕した。次に、ガーゼで濾過し、得られた濾液を加熱した。出てくる泡を柄杓で回収し、冷却後凍結乾燥して日本大学産ジャンボリーキ泡粉末を得た。収率は１．５％〜３％であった。ジャンボリーキ泡粉末３ｇに７０％メタノール３０ｍｌを加え、（１）と同様の方法で調製し、ＨＰＬＣに供した。
【００２３】
１−３ ＨＰＬＣ分析条件
高速液体クロマトグラフ（Ｃ−Ｒ４Ａ、株式会社島津製作所、京都）を使用し、ジャンボリーキ鱗片成分およびジャンボリーキ泡成分を分析した。
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標）５Ｃ１８−ＭＳ−ＩＩ（ナカライテスク株式会社、京都）５μｍ、４．６ｍｍ×２５０ｍｍ；
カラム温度：４０℃
検出波長：２８０ｎｍ
分析時間：３０分
サンプル注入量：１０μｌ
流速：０．７ｍｌ／ｍｉｎ
移動相：１０％アセトニトリル＋０．１％酢酸または、２０％アセトニトリル＋０．１％酢酸
【００２４】
２ 結果および考察
日本大学産ジャンボリーキのＵＶクロマトグラム（以下、「ＵＶＣ」という。）を図１に示した。移動相に１０％アセトニトリルを用いたところ、ピークの数が増え分離が良くなり、リテンションタイム８．１５ｍｉｎにピークが検出された。日本大学産ジャンボリーキ泡粉末のＵＶＣを図２に示した。先ほどと同様に移動相を変えて検討を行った。ジャンボリーキ鱗片と同様、１０％アセトニトリルを用いたときに、リテンションタイム８．３０ｍｉｎにピークを検出できた。
【００２５】
また、抽出条件において、水、メタノール、エタノールの中では、メタノール抽出がより多い成分をジャンボリーキ中から抽出でき、５０％、７０％、１００％メタノールの中では、７０％メタノール抽出がリテンションタイム８．０ｍｉｎ付近に大きなピークを検出できたことが判明した。
【００２６】
［実施例２］ジャンボリーキ含有成分からカテキン化合物の分離
１ 実験材料および方法
１−１ 実験材料
日本大学産ジャンボリーキ鱗片および泡粉末は、実施例１と同様のものを用いた。
【００２７】
１−２ サンプルの調製
ジャンボリーキ鱗片５００ｇに７０％メタノール８００ｍｌを加えミキサーですり潰し、一晩放置後、濾過した。その溶液をヘキサンで脱脂した。得られたメタノール層に水＋水飽和ブタノールを加えて分配し、ブタノール層をロータリーエバポレーターで乾涸後、ＨＰＬＣ用１００％メタノールに溶解し、フィルター濾過したものをＬＨ−２０カラムに供した。ジャンボリーキ泡粉末においても、同様の方法でサンプルを調製し、ＬＨ−２０カラムに供した。
【００２８】
１−３ カラムの条件
カラムはＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０を用い、ジャンボリーキ鱗片ブタノール層および泡粉末ブタノール層をメタノールで流し、４ｍｌずつ分画し、計５０本分取した。そして、分光光度計（ＵＶｍｉｎｉ１２４０、株式会社島津製作所、東京）を用いて、各フラクションの２８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
−カラムの条件−
カラム：ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ−２０（ファルマシアバイオテク社、スウェーデン）
３ｃｍ×２６．５ｃｍ
流速：２．０ｍｌ／ｍｉｎ
溶出：１００％メタノール
【００２９】
１−４ 液体クロマトグラフ質量分析（ＬＣ−ＭＳ）条件
高速液体クロマトグラフ（ＨＰ１１００、ヒューレットパッカード株式会社、アメリカ）に質量分析計（ＡＱＡ、サーモクエスト、東京）を接続したものを使用した。Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０カラムで精製したジャンボリーキ鱗片成分フラクションＮｏ．２８とジャンボリーキ泡成分フラクションＮｏ．３５をＬＣ−ＭＳにより分析した。
【００３０】
−ＬＣ部−
カラム：ＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ−８０Ａ（ジーエルサイエンス株式会社、東京）
５μｍ，４．６ｍｍ×２５０ｍｍ；
カラム温度：４０℃
検出波長：２８０ｎｍ
流速：０．７ｍｌ／ｍｉｎ
溶出：１０％アセトニトリル＋０．１％酢酸
【００３１】
−ＭＳ部−
イオン化法：エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）法ｐｏｓｉｔｉｖｅモード
スキャン範囲：ｍ／ｚ ０ｔｏ１０００
プローブ電圧：３．５ｋＶ
イオン化温度：３５０℃
【００３２】
２ 結果および考察
ブタノール抽出法によるジャンボリーキ鱗片成分およびジャンボリーキ泡粉末成分のＬＨ−２０カラム処理後の２８０ｎｍにおける各フラクションの吸光度を、図３および図４に示した。ＬＨ−２０カラム処理により、ブタノール層をさらに分画できた。ジャンボリーキ鱗片成分の各フラクションの中で、２８０ｎｍにおいて、ＨＰＬＣにより２８番がジャンボリーキに含まれる有効成分を多く含有することが判明した。日本大学産ジャンボリーキ鱗片成分のブタノール抽出後のＵＶＣと、ブタノール抽出後さらにＬＨ−２０カラムで精製したフラクション２８番のＵＶＣを図５に示した。ジャンボリーキ鱗片成分フラクション２８番のＵＶＣには、主要ピークが４本検出された。リテンションタイム３．１８７、４．０３４、５．７７１および８．５４８ｍｉｎをＥＳＩによりＬＣ−ＭＳで分析したが、解析不能であった。これは、ブタノール抽出の際、熱により有効成分が分解され、有効成分を検出できなかったことが考えられる。
【００３３】
ジャンボリーキ泡粉末成分の各フラクションの中で２８０ｎｍにおいて、ＨＰＬＣにより１７、２３および３５番がジャンボリーキに含まれる有効成分を多く含有することが判明した。しかしながら、１７および２３番のピークは、イオン化が困難であった。日本大学産ジャンボリーキ泡粉末のブタノール抽出後のＵＶＣと、ブタノール抽出後さらにＬＨ−２０カラムで精製したフラクション３５番のＵＶＣを図６に示した。ＬＨ−２０カラム処理で分離され、単一のピークを４本検出できた。また、ＬＣ−ＭＳで測定したジャンボリーキ泡粉末成分フラクション３５番のＵＶＣを図７に示した。その結果、４本の主要ピークを確認できた。リテンションタイム５．０３（ピークＮｏ．１）、７．０６（ピークＮｏ．２）、１５．６８（ピークＮｏ．３）および１９．９８ｍｉｎ（ピークＮｏ．４）のＥＳＩによるマススペクトルを図８〜１１に示した。
【００３４】
ピークＮｏ．１においては、ｍ／ｚ＝６１２．０に分子イオンピーク（Ｃ２８Ｈ３０Ｏ１４Ｎａ）が、ｍ／ｚ＝２６４．６に基準イオンピークが、またｍ／ｚ＝４７４．６にフラグメントイオンピークが認められた。したがって、本物質はEpigallocatechin hydrate-3-O-isocaprylic acid-7-O-protocatechuic acid＋Naと推定した。したがって、観察されたマススペクトグラムの擬似分子イオンピークのフラグメントイオンへの開裂様式から、カテキンの基本骨格（ｍ／ｚ＝２９０）の３位にイソカプリル酸、及び７位にプロトカテク酸が付加された分子構造を推定した（図８）。
【００３５】
ピークＮｏ．２においては、ｍ／ｚ＝６１７．０に分子イオンピーク（Ｃ２７Ｈ３５Ｏ１６）が、ｍ／ｚ＝１８０．９に基準イオンピークが、またｍ／ｚ＝４５３．８にフラグメントイオンピークが認められた。したがって、本物質はCatechin-3-O-β-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranosideと推定した。したがって、観察されたマススペクトグラムの擬似分子イオンピークのフラグメントイオンへの開裂様式から、カテキンの基本骨格（ｍ／ｚ＝２９０）にβ−Ｄ−ジグルコースが付加された分子構造を推定した（図９）。
【００３６】
ピークＮｏ．３においては、ｍ／ｚ＝６０３．０に分子イオンピーク（Ｃ１５Ｈ１２Ｏ７Ｎａ）が、ｍ／ｚ＝２９０．６に基準イオンピークが、またｍ／ｚ＝１８９．９にフラグメントイオンピークが認められた。したがって、本物質はEpigallocatechin-3-O-apigenin+2Naと推定した。したがって、観察されたマススペクトグラムの擬似分子イオンピークのフラグメントイオンへの開裂様式から、カテキンの基本骨格（ｍ／ｚ＝２９０）にアピゲニンが付加された分子構造を推定した（図１０）。
【００３７】
ピークＮｏ．４においては、ｍ／ｚ＝６５７．２に分子イオンピーク（Ｃ２８Ｈ２６Ｏ１４Ｎａ２）が、ｍ／ｚ＝１８９．９に基準イオンピークが、またｍ／ｚ＝４５３．８にフラグメントイオンピークが認められた。したがって、本物質はEpigallocatechin hydrate-3-O-leucocyanidin+2Naと推定した。したがって、観察されたマススペクトグラムの擬似分子イオンピークのフラグメントイオンへの開裂様式から、カテキンの基本骨格（ｍ／ｚ＝２９０）にロイコシアニジンが付加された分子構造を推定した（図１１）。
【００３８】
［実施例３］ジャンボリーキ含有糖の調製
１ 実験材料および方法
１−１ 実験材料
日本大学産ジャンボリーキは、実施例１と同様のものを用いた。
【００３９】
１−２ サンプルの調製
日本大学産ジャンボリーキ鱗片５００ｇに１００％エタノールを加え、ミキサーでホモジネートし、石油エーテルを加え一晩放置後、濾過した。その残渣を４時間熱水抽出し、冷却後、濾過した。その溶液に４倍量の１００％メタノールを加えて粗多糖を沈殿させた。沈殿物を乾燥させ、ミル（ＢＭ−ＦＴ０８−ＧＡ、象印マホービン株式会社、大阪）で粉砕した。収率は０．４〜０．６％であった。以下これを日本大学産ジャンボリーキ含有糖とし、糖分析に供した。
【００４０】
１−３ 溶解性の検討
純水、メタノール、エタノールにジャンボリーキ糖を加え可溶化の測定を行った。
【００４１】
１−４ 糖度の測定
日本大学産ジャンボリーキをすり潰して溶液を分取し、手持屈折系糖業用（５００型、株式会社アタゴ、東京）を用いて、ジャンボリーキ中の糖度を測定した。
測定範囲：０〜９０％
最小目盛：０．２％
【００４２】
２ 結果および考察
得られた日本大学産ジャンボリーキ含有糖の収率は、０．４％〜０．６％であり、白色や黄土色を呈した。これは、皮の有無やサンプルの状況、大きさ等によって違いが生じるのだと考えられる。ジャンボリーキ含有糖は、水溶液中では可溶し透明に呈した。また、糖の量を増やすと白く濁り、粘り気を生じた。メタノール、エタノールにはほぼ不溶であり、糖は沈殿した。このことから、日本大学産ジャンボリーキ含有糖は水溶性であると考えられる。ジャンボリーキ中の糖度は２３％であり、さくらんぼ（１７％）やすいか（１０％）など一般的に甘いとされている果物よりも高い数値を示した。比較としてニンニクの糖度を測定したところ３３％を示し、ジャンボリーキと同様、鱗片中に多量の糖を含有することが判明した。ジャンボリーキよりも高い数値を示したのは、ニンニクの水分が少なかったためであると考えられる。
【００４３】
［実施例４］ジャンボリーキ含有糖の分析
１ 実験材料および方法
１−１ 実験材料
日本大学産ジャンボリーキ及びジャンボリーキ泡粉末は、実施例１と同様のものを用いた。また、中国産有臭ニンニク、イヌリン（和光純薬工業株式会社、大阪）、イヌリナーゼ（和光純薬工業株式会社、大阪）も使用した。
【００４４】
１−２ サンプルの調製
実施例３、１−２と同様の方法で、ジャンボリーキ中の糖を抽出した。また、中国産ニンニク含有糖においても、ジャンボリーキと同様の方法で調製した。
【００４５】
１−３ 加水分解法による糖の同定
（１）強酸による加水分解
ジャンボリーキ含有糖１００ｍｇに１０Ｎ塩酸を５ｍｌ加えた。真空加水分解管に移して脱気し、ドライサーモバス（ＭＧ−２１００、東京理化器械株式会社、東京）中で１１０℃、１，２，６，１０時間加水分解を行った。分解後の溶液を水酸化ナトリウムで中和し、ＨＰＬＣに供した。
（２）ＨＰＬＣ分析条件
高速液体クロマトグラフ（Ｌ−３３００、株式会社日立製作所、東京）を使用し、加水分解前および加水分解１，２，６，１０時間後のジャンボリーキ中の糖成分を分析した。
カラム：島津１０１Ｎ
カラム温度：４０℃
流速：０．７ｍｌ／ｍｉｎ
溶出：超純水装置：検出器（Ｌ−３３００、株式会社日立製作所、東京）、ポンプ（ＬＣ−１０ＡＴ、島津製作所、京都）、脱気装置（ＤＧＵ−３Ａ、島津製作所、京都）、カラムオーブン（ＣＴＯ−１０ＡＲＰ、島津製作所、京都）、クロマトパック（Ｃ−Ｒ４ＡＸ、島津製作所、京都）
【００４６】
１−４ 酵素分解法による糖の同定
（１）イヌリナーゼによる酵素分解
サンプル：
(a)イヌリン５０ｍｇ／ｍｌ：水に溶解
(b)イヌリン５０ｍｇ／ｍｌ：水に溶解し、イヌリナーゼで反応させたもの
(c)ジャンボリーキ含有糖５０ｍｇ／ｍｌ：水に溶解
(d)ジャンボリーキ含有糖５０ｍｇ／ｍｌ：水に溶解し、イヌリナーゼで反応させたもの
(e)ニンニク含有糖５０ｍｇ／ｍｌ：水に溶解
(f)ニンニク含有糖５０ｍｇ／ｍｌ：水に溶解し、イヌリナーゼで反応させたもの
(g)泡粉末５０ｍｇ／ｍｌ：水に溶解
(h)泡粉末５０ｍｇ／ｍｌ：水に溶解し、イヌリナーゼで反応させたもの
(a)、(c)、(e)、(g)は、各試料５０ｍｇを水に溶解して調製した。(b)、(d)、(f)、(h)は、各試料５０ｍｇを水に溶解し、イヌリナーゼを添加し調製した。(a)〜(h)を恒温槽にて３７℃で１時間酵素反応させた。１時間後、(a)〜(h)を恒温槽にて８０℃で５分反応させ、酵素反応を停止させた。
【００４７】
（２）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）による糖の同定
固定相：Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ６０（メルク株式会社、東京）
展開溶媒：クロロホルム：酢酸：水＝３０：３５：５
発色剤：５％リンモリブデン酸
サンプル：１−３、（１）で調製した(a)〜(h)を用いた
サンプル(a)〜(h)は、薄層板Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ６０にスポットし、クロロホルム：酢酸：水＝３０：３５：５の展開溶媒で展開した。その後、５％リンモリブデン酸をスプレーし、１８０℃で加熱して発色させた。
【００４８】
（３）ＨＰＬＣ分析条件
高速液体クロマトグラフ（Ｌ−３３００、株式会社日立製作所、東京）を使用してサンプル(a)〜(d)中の糖成分を分析した。
カラム：島津１０１Ｎ
カラム温度：４０℃
流速：０．７ｍｌ／ｍｉｎ
溶出：超純水装置：検出器（Ｌ−３３００、株式会社日立製作所、東京）、ポンプ（ＬＣ−１０ＡＴ、島津製作所、京都）、脱気装置（ＤＧＵ−３Ａ、島津製作所、京都）、カラムオーブン（ＣＴＯ−１０ＡＲＰ、島津製作所、京都）、クロマトパック（Ｃ−Ｒ４ＡＸ、島津製作所、京都）
【００４９】
結果および考察
日本大学産ジャンボリーキ含有糖の加水分解前、加水分解１，２，６，１０時間後のクロマトグラムを図１２に示した。加水分解前と加水分解後のピークに変化がなく、また、時間毎の変化も見られなかった。このことから、ジャンボリーキ中には多量の多糖類を含有するのではないかと考えた。ニンニクには、イヌリンという水溶性で難消化性多糖類の多糖類を含むことが明らかにされている。そこで１−４では、イヌリンを分解するイヌリナーゼを用いて、ＴＬＣ及びＨＰＬＣによりジャンボリーキ中に含まれている糖の分析を行った。
【００５０】
未酵素分解および酵素分解したジャンボリーキ含有糖、ニンニク含有糖、ジャンボリーキ泡粉末およびイヌリンのＴＬＣ結果を図１３に示した。酵素未分解のイヌリン（ａ）はＲｆ値０を示し、酵素分解したイヌリン（ｂ）はＲｆ値０．３０を示した。酵素未分解のジャンボリーキ含有糖（ｃ）は展開されなかったのに対し酵素分解したジャンボリーキ含有糖（ｄ）は展開され、Ｒｆ値は０．２９を示した。この結果よりジャンボリーキ糖には、イヌリンを含有していることが判明した。また、比較として用いた酵素未分解のニンニク含有糖（ｅ）は展開されなかったが、酵素分解したニンニク含有糖（ｆ）にイヌリンのスポットが発見され、Ｒｆ値は０．２９を示した。泡粉末においては、酵素未分解のジャンボリーキ泡粉末（ｇ）は展開されなかったのに対し酵素分解したジャンボリーキ泡粉末（ｈ）は展開され、Ｒｆ値は０．３０を示した。泡粉末中にもイヌリンを含有することが判明した。しかし、（ｂ）が酵素分解後、白濁の溶液が透明に呈したのに対し、（ｈ）は酵素分解後も沈殿が生じた。この沈殿は、水に不溶で、メタノールに一部不溶だった。また、（ｈ）はＲｆ値０．３０以外にも０．３０〜１．００の間にスポットが検出された。これらのことから、ジャンボリーキ泡粉末中にはイヌリン以外にも、ビタミンＥ、ポリフェノールなどの成分を含有することが考えられる。
【００５１】
ＨＰＬＣで分析を行ったところ、（ｄ）のリテンションタイム１１．４４６ｍｉｎのピークが、（ｂ）のリテンションタイム１１．４４６ｍｉｎのピークと同じであると推察され、ＨＰＬＣの結果からも、ジャンボリーキ糖には、イヌリンを含有していることが判明した（図１４）。しかし、（ｄ）は完全に酵素分解されなかった。使用した糖が完全に精製されなかったため、イヌリン以外の物質も含有するか、イヌリン以外の多糖類を含有するためであると考えられる。
【００５２】
［実施例５］ジャンボリーキおよびジャンボリーキ泡粉末のアルコール吸収抑制作用
１ 実験材料および方法
１−１ 実験材料
日本大学産ジャンボリーキ泡粉末および長野県産無臭ジャンボリーキ粉末（商品名：ムシューリックパウダーＰＳII（大蔵製薬（株）ヘルスウェイ事業部、東京））を使用した。
【００５３】
１−２ 実験動物および飼育条件
６週齢のＷｉｓｔａｒ系ＳＰＦ雄性ラット（ＣＬＥＡ、東京）を一週間予備飼育した後実験に使用した。ラットは、温度２２±１℃、湿度５５±５％、光サイクルを１２時間毎明暗という条件で流路にて飼育を行った。食餌は、マウス、ラット、ハムスター用飼育繁殖固形飼料ＣＥ−２（株式会社日本生物材料センター）を、飲料水は水道水をともに自由摂取させた。ただし、採血前１８時間は絶食状態に保った。
【００５４】
１−３ ラットへのエタノール投与
ジャンボリーキ泡粉末によるエタノール吸収抑制作用の検討の実験方法は、図１５に示したように、４０％エタノール１ｍｌを胃ゾンデを用いて投与し、飲酒状態とした。日本大学産ジャンボリーキ泡粉末、クルクミンおよび長野県産無臭ジャンボリーキ粉末は、１５ｍｇ／ｋｇになるようにそれぞれ４０％エタノール１ｍｌに懸濁させ、胃ゾンデを用いて経口胃内投与した。ノーマル群には生理食塩水のみ、コントロール群には４０％エタノールのみ経口胃内投与した。エタノール投与時間を０時間とし、１、２、４時間後にウレタン麻酔下で頚静脈より０．５ｍｌ採血した。各種血液サンプルに、０．３３ ｍｏｌ／Ｌ過塩素酸を加え上清分離（４７００Ｇ、１５ｍｉｎ）後、血中エタノール濃度の測定に供した。
【００５５】
１−４ 実験群の作製
動物は、次の４群、各４匹に分けて以下の方法で実施した。
第１群（ノーマル群：無処理群）：生理食塩水のみを投与
第２群（コントロール群：エタノール投与群）：４０％エタノール１ｍｌ投与
第３群（泡粉末投与群）：４０％エタノール１ｍｌ投与＋日本大学産ジャンボリーキ泡粉末１５ｍｇ／ｋｇ投与
第４群（クルクミン投与群）：４０％エタノール１ｍｌ投与＋クルクミン１５ｍｇ／ｋｇ投与
第５群（ＰＳII投与群）：４０％エタノール１ｍｌ投与＋ＰＳII１５ｍｇ／ｋｇ投与
【００５６】
１−５ 測定方法
分光光度計（ＵＶｍｉｎｉ１２４０、島津、東京）を用いて、血中アルコール濃度を測定した。測定には、Ｆ−キットエタノール（Ｊ．Ｋ．インターナショナル、東京）を用いた。測定方法は、溶液Ａ（二リン酸カリウム、ＮＡＤ４ｍｇ、アルデヒドデヒドロゲナーゼ（Ａｌ−ＤＨ）０．８Ｕ）３ｍｌと１０倍希釈した上清０．１ｍｌを混和し、３分静置後３４０ｎｍの波長で吸光度を測定した。これをＥ１とした。その後溶液Ｂ（アルコールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ）７０００Ｕ）０．０５ｍｌと混和し、１０分静置後３４０ｎｍの波長で吸光度を測定した。これをＥ２とした。測定した値を、血中エタノール濃度Ｅ［ｇ／Ｌ］＝試料（Ｅ２−Ｅ１）−ブランク（Ｅ２−Ｅ１）×０．１１５２×８．９８×１０の計算式により血中エタノール濃度を測定した。
【００５７】
２ 結果および考察
エタノール投与ラットの血中エタノール濃度の経時変化を図１６に示した。エタノール投与ラットと比べると、日本大学産ジャンボリーキ泡粉末およびＰＳIIはクルクミンと同様に、エタノール吸収を抑制した。４０％エタノールを投与してから２時間後位からラットの血中エタノール濃度が減少した。よって、日本大学産ジャンボリーキ泡粉末およびＰＳIIは血中アルコール濃度の上昇を、軽減・緩和することが判明した。また、日本大学産のジャンボリーキ泡粉末でも長野県産のジャンボリーキ泡粉末でも同様の効果を示すことから、産地によって効果の生じ方に差異はないことが判明した。ＰＳIIと日本大学産ジャンボリーキ泡粉末の効果の生じ方は、ほぼ同じように起こったことから、血中アルコール濃度の上昇を抑制している成分は、ほとんどジャンボリーキ中の泡成分中に含まれていると推察される。
【００５８】
［実施例６］ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）誘発糖尿病ラットに対するジャンボリーキおよびジャンボリーキ泡粉末の効果
１ 実験材料および方法
１−１ 実験材料
日本大学産ジャンボリーキ泡粉末および日本大学産ジャンボリーキ粉末（ムシューリックパウダーＰＳII、大蔵製薬株式会社ヘルスウェイ事業部、東京）を使用した。試薬においては、以下の通りに調製した。
０．９％生理食塩水
ＮａＣｌ（和光純薬工業株式会社、大阪、特級）９００ｍｇに純水１００ｍｌを加えたものを０．９％生理食塩水とした。
１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸ナトリウム緩衝液
クエン酸ナトリウム（和光純薬工業株式会社、大阪）１７７ｍｇに純水６０ｍｌを加えた後０．１ｍｏｌ／ｌ塩酸でｐＨ４．０に調製した。
ネンブタール麻酔
２５ｍｇのペントバルビタール（和光純薬工業株式会社、大阪）を、２０ｍｌのプロピレングルコールと５ｍｌエタノールで溶解後、純水で５０ｍｌにｆｉｌｌ ｕｐした。
【００５９】
１−２ 実験動物および飼育条件
５週齢のＷｉｓｔａｒ系ＳＰＦ雄性ラット（日本クレア株式会社、東京）を一週間予備飼育した後、実験に使用した。ラットは、温度２２±１℃、湿度５５±５％、光サイクルを１２時間毎明暗という条件で金網製個別ゲージにて飼育を行った。食餌は、マウス、ラット、ハムスター用飼育繁殖固形飼料ＣＥ−２（株式会社日本生物材料センター、東京）を、飲料水は水道水をともに自由摂取させた。ただし、採血前１８時間は絶食状態に保った。
【００６０】
１−３ ＳＴＺ誘発糖尿病モデルの作製
ＳＴＺ（シグマアルドリッチジャパン株式会社、東京）を１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸ナトリウムｂｕｆｆｅｒに溶解し、腹腔内投与することにより糖尿病を誘発した。ノーマル群には同量の１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸ナトリウム緩衝液を投与した。
【００６１】
１−４ 実験群の作製
動物は以下の作成方法で実施した。
第１群（ノーマル群：無処理群）：生理食塩水のみを投与
第２群（コントロール群：ＳＴＺ群）：ＳＴＺ７０ｍｇ／ｋｇ／ｍｌ投与
第３群（ＳＴＺ処理＋泡粉末１００ｍｇ／ｋｇ／ｍｌ投与群）：ＳＴＺ７０ｍｇ／ｋｇ／ｍｌ投与＋泡粉末１００ｍｇ／ｋｇ／ｍｌ投与
第４群（ＳＴＺ処理＋ＰＳII１００ｍｇ／ｋｇ／ｍｌ投与群）：ＳＴＺ７０ｍｇ／ｋｇ／ｍｌ投与＋ＰＳII１００ｍｇ／ｋｇ／ｍｌ投与
【００６２】
ＳＴＺ処理後の泡粉末投与実験の実験方法を図１７に示した。すなわち、予備飼育後、試験−５日目にノーマル群以外の計３群に７０ｍｇ／ｋｇのＳＴＺを腹腔内投与し、試験０日目より各サンプルを胃ゾンデにより用いて経口胃内投与した。日本大学産ジャンボリーキ泡粉末１００ｍｇ／ｋｇ／ｍｌおよびジャンボリーキ粉末（ＰＳII）１００ｍｇ／ｋｇ／ｍｌは、生理食塩水に懸濁し、無処理群（ノーマル群）および対照群（コントロール群）には、生理食塩水のみをそれぞれ１ｍｌ与えた。試験１４日後にネンブタール麻酔下で頸静脈より採血し、それぞれの血液サンプルは、血清分離（３０００ｒｐｍ、４℃、１５ｍｉｎ）後、各種成分の測定に供した。また、試験０日目、７日目、１４日目に尾静脈より得た血液を得て、血糖値の測定に供した。体重は試験０日目より毎日一定時刻に測定し、摂食量および摂水量も毎日一定時刻に秤量した。
【００６３】
１−５ 測定方法
ＤＥＸＴＥＲ−ＺII（バイエルメディカル株式会社、ドイツ）を用いて血糖値を測定した。また、乾式臨床自動分析装置ＳＰＯＴＣＨＥＭＴＭＥＺ（ＳＰ−４４３０、アークレイ株式会社、京都）を用いて、血清中の総コレステロール（Ｔ−Ｃｈｏ）、グルコース（Ｇｌｕ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、尿素窒素（ＢＵＮ）、および総ビリルビン（Ｔ−Ｂｉｌ）の５項目について測定した。なお、測定キットとしてスポットケムＴＭIIマルチ肝機能−２（アークレイ株式会社、京都）を用いた。
【００６４】
２ 結果および考察
ラット体重の経日変化を図１８に示した。体重はいずれの群も経日とともに増加し、各群とともに順調な成長がみられた。群間での差は、ＳＴＺ無処理群（ノーマル群）およびＳＴＺ処理群（コントロール群、泡粉末群、ＰＳII群）での差がみられ、ＳＴＺ処理群は体重の増加が緩やかであった。糖尿病になると、インスリン欠乏により、脂肪動員の増加、タンパク質の分解促進、大量のブドウ糖の尿中排泄および水分喪失が生じ、体重減少に至る。ラットの摂食量の経日変化を図１９示した。摂食量は、経日および群間での差にばらつきがみられたことから、いずれの飼料もラットに忌避されることなく十分に摂取されなかったと考えられた。本来インスリン欠乏状態では、背内側核中でブドウ糖の代謝が減少し、ブドウ糖がブドウ糖受容体細胞内に侵入できない。これにより血糖が少ないと感じ、実際は血糖が高いにもかかわらず空腹感が出現する。腹内側核中では、刺激の閾値の上昇し、満腹による摂食中止が不能になる。これらによって多食が生じる。
ラットの摂水量の経日変化を図２０に示した。摂水量はいずれの群も経日とともに増加し、各群とともに順調な成長がみられた。群間での差は、ＳＴＺ無処理群およびＳＴＺ処理群での差がみられ、ＳＴＺ処理群は摂水量が高かったことから、糖尿病の典型的な症状の一つである口渇・多飲を生じたと考えられる。また、多尿もみられた。インスリン作用不足により代謝異常が生じると、空腹時・食後の血糖値が上昇し、末梢組織で糖の利用が低下する。血中のブドウ糖は腎糸球体から多量に排泄する（血糖約１８０ｍｇ／ｄｌ以上になると尿糖として排泄）。尿の浸透圧が上昇し、多量の水分も排泄されることにより多尿（頻尿）が生じる。体内では脱水状態になり、視床下部の渇中枢が刺激され、口渇が生じる。
【００６５】
ＳＴＺ処理ラットの血糖値に対するジャンボリーキ泡粉末の変化を以下の表１、及び図２１に示した。
【００６６】
【表１】
【００６７】
５週齢ＳＰＦ Ｗｉｓｔａｒ系雄ラットにＳＴＺを腹腔内投与させ（コントロール群）、生理食塩水を胃ゾンデで経口投与させると、ＳＴＺ無処理群と比べ、血糖値が有意に上昇した。これに対し、ＳＴＺ誘発ラットに泡粉末１００ｍｇ／ｋｇおよびＰＳII１００ｍｇ／ｋｇを経口投与すると、いずれも有意に血糖値を減少させ、ジャンボリーキ泡粉末およびＰＳIIが血糖値に予防効果を示すことが判明した。ブドウ糖が血液中に取り込まれると、すい臓から分泌されたインスリンが血液中のブドウ糖に働きかけ、エネルギーとして活用できるように細胞に取り込まれる。しかし、ストレスなどの環境的要因によりインスリン分泌が低下すると、血液中のブドウ糖はエネルギーに変わらず、次々に体内へ蓄積し、血糖値が上昇する。
【００６８】
ＳＴＺ処理ラットの血清中のＧｌｕ値、ＢＵＮ値、およびＡＳＴ活性の変化を以下の表２、及び図２２〜２４に示した。
【００６９】
【表２】
【００７０】
５週齢ＳＰＦ Ｗｉｓｔａｒ系雄ラットにＳＴＺを腹腔内投与させ（コントロール群）、生理食塩水を胃ゾンデで経口投与させると、ＳＴＺ無処理群と比べ、血清中のＧｌｕ値、ＢＵＮ値、およびＡＳＴ活性が有意に上昇した。これに対し、ＳＴＺ誘発ラットに泡粉末１００ ｍｇ／ｋｇを経口投与すると、いずれも有意に血清中のＧｌｕ値、ＢＵＮ値、およびＡＳＴ値を減少させ、ジャンボリーキ泡粉末が腎・肝障害および血糖値に予防効果を示すことが判明した。ＰＳIIにおいては、Ｇｌｕ値およびＢＵＮ値の上昇に対し有意な抑制効果が見られたが、ＡＳＴ活性に対しては有意な抑制効果が見られなかった。また、この時点でＴ−Ｂｉｌ値、Ｔ−Ｃｈｏ値に著しい差が認められなかった。これらのことから、泡粉末およびＰＳIIは高脂血症にも両者投与量は関与しなかったものと推察された。
【００７１】
［実施例７］ジャンボリーキ添加ソーセージの開発
１ 実験材料および方法
１−１ 実験材料およびソーセージ組成
日本大学産ジャンボリーキは、実施例１の実験材料と同様のものを用いた。ニンニクは、市販のニンニクを使用した。ジャンボリーキ泡粉末は、実施例１の１−２（２）と同様のものを用いた。ソーセージの組成は図２５に示した。
【００７２】
１−２ ソーセージ作製方法
ソーセージの作製方法は、塩せき肉、脂肪、調味料を混合後、バキュームミキサーで脱気し、羊腸に詰めた。これを燻製後、加熱・殺菌処理および冷却し、これをジャンボリーキ添加ソーセージとした。そのほか、ジャンボリーキ泡粉末およびニンニクにも同様に行った。
【００７３】
１−３ 官能検査
日本大学産ジャンボリーキ泡粉末０．２％添加ソーセージの官能検査をおこなった。男女約２０名に、ジャンボリーキ泡粉末０．２％添加ソーセージを、ジャンボリーキ無添加ソーセージ（コントロール）とジャンボリーキ７％添加ソーセージそれぞれとの比較による味覚テストを行った。
【００７４】
２ 結果および考察
外観に関しては、ジャンボリーキ無添加、添加および泡粉末添加での違いはほぼないが、ニンニク添加では、ほかの二つより若干白色味を帯びていた。また、ジャンボリーキ泡粉末添加ソーセージの官能検査の評価を行った結果は、ジャンボリーキ７％添加ソーセージと比べると、違いがあらわれた。味や香りが改善され、くさみがなくなった。ノーマルソーセージとの差がほとんどなく、ほとんどのひとは味や香りの違いを感じることができなかった。ノーマルソーセージとの評価がほぼ変わらなかったので、添加しても変わらないということを商品価値ととらえて、今後健康補助食品として、商品化が期待できる。
【００７５】
［実施例８］ジャンボリーキ添加ソーセージ投与によるＤ−ＧａｌＮ誘発肝障害ラットの効果
１ 実験材料および方法
１−１ 実験材料
実施例７で作成した日本大学産ジャンボリーキ添加したソーセージを用いた。
【００７６】
１−２実験動物および飼育条件
５週齢のＷｉｓｔａｒ系ＳＰＦ雄性ラット（ＣＬＥＡ、東京）を実験に使用した。ラットは、温度２２±１℃、湿度５５±５％、光サイクルを１２時間毎明暗という条件で金網製個別ゲージにて飼育を行った。食餌は、午前中にマウス、ラット、ハムスター用飼育繁殖固形飼料ＣＥ−２（株式会社日本生物材料センター）を与え、夕方にソーセージ（第一群には午前中と同様の固形試料）１０ｇを２週間与えた。飲料水は水道水をともに自由摂取させた。ただし、採血前１８時間は絶食状態に保った。
【００７７】
１−３ ＧａｌＮ誘発肝障害モデルの作製１５）
ＧａｌＮとしてＤ−ガラクトサミン塩酸塩（シグマアルドリッチ、東京）を用い、生理食塩水に溶解後、１ＮのＮａＯＨで中和、滅菌フィルターで濾過し、注射液を調製した。ＧａｌＮは７００ｍｇ／ｋｇを各群６匹のラットに１ｍｌを腹腔内投与した。ＧａｌＮ投与を０時間とし、４８時間後にネンブタール麻酔下で頸静脈より採血し、それぞれの血液サンプルは、血清分離（４７００Ｇ、４℃、１５ｍｉｎ）後、各種酵素活性の測定に供した。
【００７８】
１−４実験群の作製
動物は、次の４群、各６匹に分けて以下の方法で実施した。
第１群：ソーセージ無投与群 （ＧａｌＮ無投与）
第２群：ソーセージ無投与群 （ＧａｌＮ投与）
第３群：ノーマルソーセージ投与群 （ＧａｌＮ投与）
第４群：ジャンボリーキ添加ソーセージ投与群（ＧａｌＮ投与）
【００７９】
１−５ 測定方法
乾式臨床自動分析装置ＳＰＯＴＣＨＥＭＴＭＥＺ（ＳＰ−４４３０、アークレイ株式会社、京都）を用いて、アラニンアミノ基転移酵素（ＡＬＴ）と、アスパラギン酸アミノ基転移酵素（ＡＳＴ）、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性を測定した。なお、測定キットとして、スポットケムＴＭIIマルチ肝機能−２（アークレイ株式会社、京都）を用いた。
【００８０】
２ 結果および考察
ラットのＡＳＴ活性、ＡＬＴ活性、ＬＤＨ活性、ＡＬＰ活性の変化に対するジャンボリーキおよび泡粉末添加ソーセージの効果を以下の表３及び図２６〜２９に示した。
【００８１】
【表３】
【００８２】
ＧａｌＮ投与により、４８時間後に、コントロール群はノーマルソーセージ投与群に比べてＡＬＴ、ＡＳＴ活性が有意に上昇した。この上昇に対して、ジャンボリーキ添加ソーセージ投与群は、有意な抑制効果が見られた。ＧａｌＮ肝障害の発生機序としては、ＧａｌＮが肝細胞内においてｕｒｉｄｉｎｅｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ−Ｇｌｕｃｏｓｅ（ＵＤＰ−Ｇｌｕｃｏｓｅ）を消費してｕｒｉｄｉｎｅ ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ （ＵＤＰ−ＧａｌＮ）を生成することにより細胞内に蓄積されたｕｒｉｄｉｎｅ ｔｒｉｐｈｏｓｐａｔｅ（ＵＴＰ）が減少し、欠乏する。これに伴いＲＮＡ合成低下、タンパク合成阻害が生じ、さらに糖、脂質代謝障害も加わり、肝細胞膜障害から細胞壊死を惹起させるといわれている。（Keppler et al.,1970）。このような直接的な肝細胞障害に加えＧａｌＮ肝障害の発生には、腸管由来のエンドトキシンが重要な役割を果たしており、ガラクトサミンによって惹起された肝細胞膜障害に、エンドトキシン血症血中の肝細胞障害因子の作用が加わって、ＧａｌＮ肝障害が発生、進展するとされている。（岩城ら、１９８８）。すなわち、エンドトキシンによって肝マクロファージが活性化され、それによって生産される腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）やインターロイキン１（ＩＬ−１）などのサイトカイニン、ロイコトリエンＤ４などの関与が重要視されてきている。このように、肝臓はＧａｌＮにより直接的な障害を受ける。この障害により、ＡＳＴおよびＡＬＴは血液中に流出するので、血清中にこれら酵素の高い活性が認められるようになる。ＡＳＴ，ＡＬＴ活性は、両方とも肝臓や心筋、骨格筋、腎臓の細胞に存在するが、特に肝細胞の破壊がおこると、血液中の値が高くなる。急性肝炎や慢性肝炎では、ＡＳＴ，ＡＬＴ活性が共に高くなるが、ＡＬＴ活性の方が敏感に反応するため、ＡＳＴの値よりもＡＬＴの値の方がより高くなることが多い。今回ジャンボリーキ投与群は、血清ＡＳＴおよびＡＬＴ活性の上昇が抑制されたことより、ジャンボリーキ添加ソーセージは、肝障害に対しその機能低下を改善する効果を有していると推察された。
【００８３】
ＬＤＨ（乳酸脱水素酵素）は、ブドウ糖からエネルギーを産生するために行われる解糖系の最終段階の酵素である。生体内では腎臓に最も多量に存在し、骨格筋や、肝臓・心筋・膵臓・肺・脾臓などの細胞に含まれる。肝臓に障害が生じると、ＡＳＴ，ＡＬＴの上昇と共に高くなる。今回の実験では、ＬＤＨ活性は、有意な差はみられず、ＧａｌＮ投与により、４８時間後に、コントロール群はノーマルソーセージ投与群に比べて上昇傾向がみられた。この上昇に対して、ジャンボリーキ添加ソーセージ投与群は、抑制傾向が見られた。ＡＬＰ活性は、ＧａｌＮ投与により、４８時間後に、コントロール群はノーマルソーセージ投与群に比べて有意に上昇した。この上昇に対して、ジャンボリーキ添加ソーセージ群は、優位に抑制効果を示した。今回ジャンボリーキ添加ソーセージ群では、ＡＳＴ，ＡＬＴ活性およびＡＬＰ活性の値の上昇が抑制されたことより、ジャンボリーキ添加ソーセージが肝障害に対しその機能低下を改善する効果を有していると推察された。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１】ジャンボリーキ成分のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図２】ジャンボリーキ泡成分のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図３】ブタノール抽出法によるジャンボリーキ鱗片成分のＬＨ−２０カラム処理後の２８０ｎｍにおける各フラクションの吸光度を示す。
【図４】ブタノール抽出法によるジャンボリーキ泡粉末成分のＬＨ−２０カラム処理後の２８０ｎｍにおける各フラクションの吸光度を示す。
【図５】ブタノール抽出法によるジャンボリーキ鱗片成分のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図６】ブタノール抽出法によるジャンボリーキ泡粉末成分のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図７】ブタノール抽出法によるジャンボリーキ泡粉末成分カラム処理後フラクションＮｏ．３５のＵＶクロマトグラムである。
【図８】フラクションＮｏ．３５のピーク１のＥＳＩによるマススペクトルである。
【図９】フラクションＮｏ．３５のピーク２のＥＳＩによるマススペクトルである。
【図１０】フラクションＮｏ．３５のピーク３のＥＳＩによるマススペクトルである。
【図１１】フラクションＮｏ．３５のピーク４のＥＳＩによるマススペクトルである。
【図１２】加水分解法によるジャンボリーキ糖のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図１３】薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によるジャンボリーキ糖の分析結果である。
【図１４】酵素分解法によるジャンボリーキ糖のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図１５】ジャンボリーキによるアルコール吸収抑制作用の検討の実験方法である。
【図１６】ジャンボリーキ泡粉末によるエタノール吸収抑制作用を示す。
【図１７】ジャンボリーキの糖尿病に対する予防効果の検討方法を示す。
【図１８】ラットの体重量の経日変化を示す。
【図１９】ラットの摂食量の経日変化を示す。
【図２０】ラットの摂水量の経日変化を示す。
【図２１】ＳＴＺ処理ラットの血糖値に対するジャンボリーキ泡粉末の効果を示す。
【図２２】ＳＴＺ処理ラットのグルコース値に対するジャンボリーキ泡粉末の効果を示す。
【図２３】ＳＴＺ処理ラットの尿素窒素値に対するジャンボリーキ泡粉末の効果を示す。
【図２４】ＳＴＺ処理ラットのＡＳＴ活性に対するジャンボリーキ泡粉末の効果を示す。
【図２５】機能性食材添加ソーセージの組成を示す。
【図２６】ＧａｌＮ処理ラットのＡＬＴ活性に対するジャンボリーキ添加ソーセージの効果を示す。
【図２７】ＧａｌＮ処理ラットのＡＳＴ活性に対するジャンボリーキ添加ソーセージの効果を示す。
【図２８】ＧａｌＮ処理ラットのＬＤＨ活性に対するジャンボリーキ添加ソーセージの効果を示す。
【図２９】ＧａｌＮ処理ラットのＡＬＰ活性に対するジャンボリーキ添加ソーセージの効果を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なカテキン誘導体及びその用途に関し、より詳細には、無臭ニンニク（英名：Jumbo Leek、和名：大粒ニラネギ）の有効成分として同定された新規なカテキン誘導体及びその医薬品、健康食品への用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
有臭ニンニクに比べ球根の大きさが数倍有り、茎の長さは１６０ｃｍ、根の長さは約２ｍにも達するジャンボリーキ（大粒ニラネギ）が知られている。本食材の形態はニンニクに類似しているが、染色体数とフレーバーが玉ねぎやニンニクとは異なり、リーキに一致することから、その学名はAllium ampeloprasum L.とされ、一般にはジャンボリーキ（大粒ニラネギ）と称される。このジャンボリーキを洗浄・粉砕して除菌・凍結乾燥した粉末ムシューリック（登録商標）ＰＳＩＩは、大蔵製薬株式会社から販売され、ヒト又は小動物（マウス、ラット）に対し、生体防御機構の活性化作用、高脂血症軽減効果、抗酸化活性のあることが明らかにされている（例えば、非特許文献１参照）。
【０００３】
本発明者らは、ジャンボリーキの工業的加工プロセスにおいて多量に発生する泡成分の有効利用を目的として、この泡成分の生理作用を研究した結果、種々の肝障害を著しく改善する効果を見出している（例えば、特許文献１参照）。一般に、食品由来の泡成分にはサポニンが含まれることが知られている。サポニンは、植物界に広く分布している化合物の総称である。トリテルペン及びステロイド配糖体として検出されており、これらの配糖体の糖部分は水酸基が多いため親水性があり、アグリコン（非糖部）には親油性があるため、多くは界面活性作用を示す。サポニンの共通した性質には水溶液の気泡性があり、また、脂質の酸化抑制作用、肝障害防御活性等の生理作用が認められているが、大豆、アスパラガス、エレファントガーリック等のサポニンの含有量は数ｍｇ／ｋｇと微量である。
【０００４】
自然界では、大部分の糖質は多糖類(polysaccharides)として存在しており、多くのオリゴ糖や単糖あるいはそれらの誘導体は、これらの多糖類が酸あるいは各種の酵素によって加水分解を受けることにより生成する。多糖類には、ヒトの消化管で消化・吸収され、エネルギー貯蔵体や細胞壁の構成成分の役割をもつ多糖類と、ヒトの消化酵素で消化されにくい食物繊維の２種類がある。「第六の栄養素」と呼ばれる食物繊維はエネルギー源にならないが、動脈硬化や糖尿病の予防、ガンの予防といった食物繊維としての機能をもつ。このように多糖類は、生体調節機能の面からの研究も盛んに行われている。ジャンボリーキの７１．９％は水分が占めており、炭水化物は２０．７％である。従って、ジャンボリーキの炭水化物の乾燥物換算では７４．６％となる。しかし、これまでの研究で、糖の種類は明らかにされていない。
【０００５】
【特許文献１】特開２００５−１９４２１６号公報
【非特許文献１】内田あゆみ、「天然ニンニク様植物（無臭ニンニク）の生体防御機構の活性化作用」、ＦＯＯＤ Ｓｔｙｌｅ ２１、１９９８年７月、第２巻、第７号、ｐ．４５−４８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ジャンボリーキ鱗片の工業的な洗浄工程で大量に発生する泡成分の有効利用が企図されているが、その化学物質としての構造は未だ明らかではない。本発明は、上記泡成分に含まれる有効成分を単離、精製し、その化学構造を決定して作用機序を明らかにすると共に、当該化合物を用いて種々の医薬品又は機能性食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決するために、本発明者らは長野産無臭ジャンボリーキに含まれていると考えられる有効成分を探索するために、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による有効成分の分析や単離方法の検討を行い、精製した有効成分を高速液体クロマトグラフ質量分析計（ＬＣ−ＭＳ）により分析した。また、ジャンボリーキ中から粗多糖を抽出し、糖の性質を調べると共に、加水分解法や酵素分解法を用い、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）及びＨＰＬＣによりジャンボリーキ中に含まれる糖の分析を行った。その結果、ジャンボリーキ泡粉末から有効成分と考えられる下記の新規なカテキン誘導体を見出した。また、ジャンボリーキに含有される主要な糖としてイヌリンを同定した。本発明はこれらの結果に基づいてなされたものであって、少なくとも以下の発明を包含する。
【０００８】
（１）ジャンボリーキ泡成分から単離され、下記式（Ｉ）〜（ＩＶ）で示される化合物の何れか１種のカテキン誘導体若しくはその塩、又はそれらの２種以上からなるカテキン誘導体混合物。
【０００９】
【化１】
【００１０】
【化２】
【００１１】
【化３】
【００１２】
【化４】
【００１３】
（２）上記（１）に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物と、生理的に許容しうる担体とを含む医薬組成物。
（３）有効量の上記（１）に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物を含むアルコール吸収抑制剤。
（４）有効量の上記（１）に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物を含むアルコール性肝障害予防治療剤。
（５）有効量の上記（１）に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物を含む血糖降下剤。
（６）上記（１）に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物とイヌリンとを有効成分として含む肝障害改善用及び／又は糖尿病改善用機能性食品。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、ジャンボリーキ中の有効成分の化学構造が明らかとなり、これらの有効成分の薬理効果や作用機序をより明らかにすることが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
（新規カテキン誘導体）
本発明に係るカテキン誘導体は、上記（Ｉ）〜（ＩＶ）で示される化合物である。式（Ｉ）の化合物は、エピガロカテキンの３位と７位に酸素原子を介してイソカプリル酸と、プロトカテク酸がそれぞれ結合したものである(Epigallocatechin hydrate-3-O-isocaprylic acid-7-O-protocatechuic acid)。イソカプリル酸の末端カルボキシル基は塩の形態でも良い。式（ＩＩ）の化合物は、カテキンの３位に２つのグルコースがβ配位で結合したものである(Catechin-3-O-β-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranoside)。式（ＩＩＩ）の化合物は、エピガロカテキンの３位にアピゲニンが付加されたものである(Epigallocatechin-3-O-apigenin)。エピガロカテキン及びアピゲニンの水酸基は塩の形態であってもよい。式（ＩＶ）の化合物は、エピガロカテキンの３位にロイコシアニジンが付加したものである(Epigallocatechin hydrate-3-O-leucocyanidin)。上記化合物は何れも特定の水酸基がナトリウム、カリウム又はカルシウム等との塩の形態であってもよく、中でも１又は２ナトリウム塩が好ましい。これらのカテキン誘導体は１種又は２種以上の混合物の形態であってもよく、好ましくは４種類のカテキン誘導体を含む組成物が医薬又は機能性食品用途として適している。
【００１６】
上記カテキン誘導体の製造方法としては、これらの化合物の構成単位であるカテキンやエピガロカテキン及びグルコース等は入手可能であり、これらをもとにして通常の有機合成方法にて製造することができるが、天然物、好ましくはジャンボリーキ泡成分から抽出することが好ましい。抽出、精製方法については特に制限はなく、溶媒抽出、液体クロマトグラフィー等公知の方法を組み合わせて行うことができる。
【００１７】
（医薬組成物又は機能性食品組成物）
本発明に係るカテキン誘導体は、医薬組成物又は機能性食品組成物として投与又は摂取することができ、例えば錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、散剤、顆粒剤、カプセル剤（ソフトカプセルを含む）、シロップ剤、液剤等として、経口的に安全に投与することができる。経口投与用製剤とするには、公知の方法に従い、有効成分であるサポニンを例えば、賦形剤（例、乳糖、白糖、デンプン等）、崩壊剤（例、デンプン、炭酸カルシウム等）、結合剤（例、デンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース等）又は滑沢剤（例、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール ６０００等）等を添加して圧縮成形し、次いで必要により、味のマスキング、腸溶性あるいは持続性の目的のため公知の方法でコーティングすることにより経口投与製剤とすることができる。そのコーティング剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリオキシエチレングリコール、ツイーン ８０、プルロニック Ｆ６８、セルロースアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシメチルセルロースアセテートサクシネート、オイドラギット（ローム社製、ドイツ、メタアクリル酸・アクリル酸共重合）及び色素（例、ベンガラ、二酸化チタン等）等が用いられる。経口投与用製剤は速放性製剤、徐放性製剤のいずれであってもよい。あるいは、一般の飲食品の形態として摂取することができ、例えば、清涼飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料、ゼリー、菓子、ジャム、クリーム等の菓子類、かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産、畜産加工食品、その他種々の形態の健康、栄養補助食品等が考えられるがこれらに限定されるものではない。
【００１８】
本発明の組成物を肝障害の予防治療剤として、又は糖尿病の予防改善剤として用いる場合の投与量は、患者の年齢、疾病の種類、程度などにより変動し、一概に規定することはできないが、一般成人に対して、経口投与の場合は、１日量０．１〜１００ｇ、好ましくは１〜１０ｇである。非経口投与の場合は、１日量２０〜１０００ｍｇ、好ましくは５０〜５００ｍｇであり、症状に応じて必要により１〜３回に分けて投与することが好ましい。
【００１９】
（機能性食品としての用途）
ジャンボリーキは玉ねぎに似た臭気を持つため、肉類、例えばソーセージ等に添加することで肉の臭味を低下させることができる。また、上記カテキン誘導体及びジャンボリーキ中の糖の主要成分であるイヌリンは、肝障害に対してその機能低下を改善する効果及び高脂血症に対し予防効果を有しており、機能性食品又は健康補助食品としての開発が期待される。
【実施例】
【００２０】
［実施例１］高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によるジャンボリーキとジャンボリーキ泡成分の分析
１ 実験材料および方法
１−１ 実験材料
日本大学産ジャンボリーキは、日本大学生物資源科学部が所有する農場にて栽培し、２００５年７月に収穫した鱗片を−２０℃で保存したものを使用した。以下これを日本大学産ジャンボリーキとする。
【００２１】
１−２ サンプルの調製
（１）ジャンボリーキ鱗片の調製
日本大学産ジャンボリーキ鱗片１００ｇに７０％メタノール１００ｍｌを加えてミキサー（ＢＭ−ＦＴ０８−ＧＡ、象印マホービン株式会社、大阪）でホモジネートし、一晩放置後、濾過した。その溶液をロータリーエバポレーターで濃縮し、フィルター濾過したものをＨＰＬＣに供した。
【００２２】
（２）ジャンボリーキ泡粉末の調製
ジャンボリーキ鱗片１ｋｇに純水１Ｌを加えミキサーで粉砕した。次に、ガーゼで濾過し、得られた濾液を加熱した。出てくる泡を柄杓で回収し、冷却後凍結乾燥して日本大学産ジャンボリーキ泡粉末を得た。収率は１．５％〜３％であった。ジャンボリーキ泡粉末３ｇに７０％メタノール３０ｍｌを加え、（１）と同様の方法で調製し、ＨＰＬＣに供した。
【００２３】
１−３ ＨＰＬＣ分析条件
高速液体クロマトグラフ（Ｃ−Ｒ４Ａ、株式会社島津製作所、京都）を使用し、ジャンボリーキ鱗片成分およびジャンボリーキ泡成分を分析した。
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標）５Ｃ１８−ＭＳ−ＩＩ（ナカライテスク株式会社、京都）５μｍ、４．６ｍｍ×２５０ｍｍ；
カラム温度：４０℃
検出波長：２８０ｎｍ
分析時間：３０分
サンプル注入量：１０μｌ
流速：０．７ｍｌ／ｍｉｎ
移動相：１０％アセトニトリル＋０．１％酢酸または、２０％アセトニトリル＋０．１％酢酸
【００２４】
２ 結果および考察
日本大学産ジャンボリーキのＵＶクロマトグラム（以下、「ＵＶＣ」という。）を図１に示した。移動相に１０％アセトニトリルを用いたところ、ピークの数が増え分離が良くなり、リテンションタイム８．１５ｍｉｎにピークが検出された。日本大学産ジャンボリーキ泡粉末のＵＶＣを図２に示した。先ほどと同様に移動相を変えて検討を行った。ジャンボリーキ鱗片と同様、１０％アセトニトリルを用いたときに、リテンションタイム８．３０ｍｉｎにピークを検出できた。
【００２５】
また、抽出条件において、水、メタノール、エタノールの中では、メタノール抽出がより多い成分をジャンボリーキ中から抽出でき、５０％、７０％、１００％メタノールの中では、７０％メタノール抽出がリテンションタイム８．０ｍｉｎ付近に大きなピークを検出できたことが判明した。
【００２６】
［実施例２］ジャンボリーキ含有成分からカテキン化合物の分離
１ 実験材料および方法
１−１ 実験材料
日本大学産ジャンボリーキ鱗片および泡粉末は、実施例１と同様のものを用いた。
【００２７】
１−２ サンプルの調製
ジャンボリーキ鱗片５００ｇに７０％メタノール８００ｍｌを加えミキサーですり潰し、一晩放置後、濾過した。その溶液をヘキサンで脱脂した。得られたメタノール層に水＋水飽和ブタノールを加えて分配し、ブタノール層をロータリーエバポレーターで乾涸後、ＨＰＬＣ用１００％メタノールに溶解し、フィルター濾過したものをＬＨ−２０カラムに供した。ジャンボリーキ泡粉末においても、同様の方法でサンプルを調製し、ＬＨ−２０カラムに供した。
【００２８】
１−３ カラムの条件
カラムはＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０を用い、ジャンボリーキ鱗片ブタノール層および泡粉末ブタノール層をメタノールで流し、４ｍｌずつ分画し、計５０本分取した。そして、分光光度計（ＵＶｍｉｎｉ１２４０、株式会社島津製作所、東京）を用いて、各フラクションの２８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
−カラムの条件−
カラム：ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ−２０（ファルマシアバイオテク社、スウェーデン）
３ｃｍ×２６．５ｃｍ
流速：２．０ｍｌ／ｍｉｎ
溶出：１００％メタノール
【００２９】
１−４ 液体クロマトグラフ質量分析（ＬＣ−ＭＳ）条件
高速液体クロマトグラフ（ＨＰ１１００、ヒューレットパッカード株式会社、アメリカ）に質量分析計（ＡＱＡ、サーモクエスト、東京）を接続したものを使用した。Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０カラムで精製したジャンボリーキ鱗片成分フラクションＮｏ．２８とジャンボリーキ泡成分フラクションＮｏ．３５をＬＣ−ＭＳにより分析した。
【００３０】
−ＬＣ部−
カラム：ＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ−８０Ａ（ジーエルサイエンス株式会社、東京）
５μｍ，４．６ｍｍ×２５０ｍｍ；
カラム温度：４０℃
検出波長：２８０ｎｍ
流速：０．７ｍｌ／ｍｉｎ
溶出：１０％アセトニトリル＋０．１％酢酸
【００３１】
−ＭＳ部−
イオン化法：エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）法ｐｏｓｉｔｉｖｅモード
スキャン範囲：ｍ／ｚ ０ｔｏ１０００
プローブ電圧：３．５ｋＶ
イオン化温度：３５０℃
【００３２】
２ 結果および考察
ブタノール抽出法によるジャンボリーキ鱗片成分およびジャンボリーキ泡粉末成分のＬＨ−２０カラム処理後の２８０ｎｍにおける各フラクションの吸光度を、図３および図４に示した。ＬＨ−２０カラム処理により、ブタノール層をさらに分画できた。ジャンボリーキ鱗片成分の各フラクションの中で、２８０ｎｍにおいて、ＨＰＬＣにより２８番がジャンボリーキに含まれる有効成分を多く含有することが判明した。日本大学産ジャンボリーキ鱗片成分のブタノール抽出後のＵＶＣと、ブタノール抽出後さらにＬＨ−２０カラムで精製したフラクション２８番のＵＶＣを図５に示した。ジャンボリーキ鱗片成分フラクション２８番のＵＶＣには、主要ピークが４本検出された。リテンションタイム３．１８７、４．０３４、５．７７１および８．５４８ｍｉｎをＥＳＩによりＬＣ−ＭＳで分析したが、解析不能であった。これは、ブタノール抽出の際、熱により有効成分が分解され、有効成分を検出できなかったことが考えられる。
【００３３】
ジャンボリーキ泡粉末成分の各フラクションの中で２８０ｎｍにおいて、ＨＰＬＣにより１７、２３および３５番がジャンボリーキに含まれる有効成分を多く含有することが判明した。しかしながら、１７および２３番のピークは、イオン化が困難であった。日本大学産ジャンボリーキ泡粉末のブタノール抽出後のＵＶＣと、ブタノール抽出後さらにＬＨ−２０カラムで精製したフラクション３５番のＵＶＣを図６に示した。ＬＨ−２０カラム処理で分離され、単一のピークを４本検出できた。また、ＬＣ−ＭＳで測定したジャンボリーキ泡粉末成分フラクション３５番のＵＶＣを図７に示した。その結果、４本の主要ピークを確認できた。リテンションタイム５．０３（ピークＮｏ．１）、７．０６（ピークＮｏ．２）、１５．６８（ピークＮｏ．３）および１９．９８ｍｉｎ（ピークＮｏ．４）のＥＳＩによるマススペクトルを図８〜１１に示した。
【００３４】
ピークＮｏ．１においては、ｍ／ｚ＝６１２．０に分子イオンピーク（Ｃ２８Ｈ３０Ｏ１４Ｎａ）が、ｍ／ｚ＝２６４．６に基準イオンピークが、またｍ／ｚ＝４７４．６にフラグメントイオンピークが認められた。したがって、本物質はEpigallocatechin hydrate-3-O-isocaprylic acid-7-O-protocatechuic acid＋Naと推定した。したがって、観察されたマススペクトグラムの擬似分子イオンピークのフラグメントイオンへの開裂様式から、カテキンの基本骨格（ｍ／ｚ＝２９０）の３位にイソカプリル酸、及び７位にプロトカテク酸が付加された分子構造を推定した（図８）。
【００３５】
ピークＮｏ．２においては、ｍ／ｚ＝６１７．０に分子イオンピーク（Ｃ２７Ｈ３５Ｏ１６）が、ｍ／ｚ＝１８０．９に基準イオンピークが、またｍ／ｚ＝４５３．８にフラグメントイオンピークが認められた。したがって、本物質はCatechin-3-O-β-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranosideと推定した。したがって、観察されたマススペクトグラムの擬似分子イオンピークのフラグメントイオンへの開裂様式から、カテキンの基本骨格（ｍ／ｚ＝２９０）にβ−Ｄ−ジグルコースが付加された分子構造を推定した（図９）。
【００３６】
ピークＮｏ．３においては、ｍ／ｚ＝６０３．０に分子イオンピーク（Ｃ１５Ｈ１２Ｏ７Ｎａ）が、ｍ／ｚ＝２９０．６に基準イオンピークが、またｍ／ｚ＝１８９．９にフラグメントイオンピークが認められた。したがって、本物質はEpigallocatechin-3-O-apigenin+2Naと推定した。したがって、観察されたマススペクトグラムの擬似分子イオンピークのフラグメントイオンへの開裂様式から、カテキンの基本骨格（ｍ／ｚ＝２９０）にアピゲニンが付加された分子構造を推定した（図１０）。
【００３７】
ピークＮｏ．４においては、ｍ／ｚ＝６５７．２に分子イオンピーク（Ｃ２８Ｈ２６Ｏ１４Ｎａ２）が、ｍ／ｚ＝１８９．９に基準イオンピークが、またｍ／ｚ＝４５３．８にフラグメントイオンピークが認められた。したがって、本物質はEpigallocatechin hydrate-3-O-leucocyanidin+2Naと推定した。したがって、観察されたマススペクトグラムの擬似分子イオンピークのフラグメントイオンへの開裂様式から、カテキンの基本骨格（ｍ／ｚ＝２９０）にロイコシアニジンが付加された分子構造を推定した（図１１）。
【００３８】
［実施例３］ジャンボリーキ含有糖の調製
１ 実験材料および方法
１−１ 実験材料
日本大学産ジャンボリーキは、実施例１と同様のものを用いた。
【００３９】
１−２ サンプルの調製
日本大学産ジャンボリーキ鱗片５００ｇに１００％エタノールを加え、ミキサーでホモジネートし、石油エーテルを加え一晩放置後、濾過した。その残渣を４時間熱水抽出し、冷却後、濾過した。その溶液に４倍量の１００％メタノールを加えて粗多糖を沈殿させた。沈殿物を乾燥させ、ミル（ＢＭ−ＦＴ０８−ＧＡ、象印マホービン株式会社、大阪）で粉砕した。収率は０．４〜０．６％であった。以下これを日本大学産ジャンボリーキ含有糖とし、糖分析に供した。
【００４０】
１−３ 溶解性の検討
純水、メタノール、エタノールにジャンボリーキ糖を加え可溶化の測定を行った。
【００４１】
１−４ 糖度の測定
日本大学産ジャンボリーキをすり潰して溶液を分取し、手持屈折系糖業用（５００型、株式会社アタゴ、東京）を用いて、ジャンボリーキ中の糖度を測定した。
測定範囲：０〜９０％
最小目盛：０．２％
【００４２】
２ 結果および考察
得られた日本大学産ジャンボリーキ含有糖の収率は、０．４％〜０．６％であり、白色や黄土色を呈した。これは、皮の有無やサンプルの状況、大きさ等によって違いが生じるのだと考えられる。ジャンボリーキ含有糖は、水溶液中では可溶し透明に呈した。また、糖の量を増やすと白く濁り、粘り気を生じた。メタノール、エタノールにはほぼ不溶であり、糖は沈殿した。このことから、日本大学産ジャンボリーキ含有糖は水溶性であると考えられる。ジャンボリーキ中の糖度は２３％であり、さくらんぼ（１７％）やすいか（１０％）など一般的に甘いとされている果物よりも高い数値を示した。比較としてニンニクの糖度を測定したところ３３％を示し、ジャンボリーキと同様、鱗片中に多量の糖を含有することが判明した。ジャンボリーキよりも高い数値を示したのは、ニンニクの水分が少なかったためであると考えられる。
【００４３】
［実施例４］ジャンボリーキ含有糖の分析
１ 実験材料および方法
１−１ 実験材料
日本大学産ジャンボリーキ及びジャンボリーキ泡粉末は、実施例１と同様のものを用いた。また、中国産有臭ニンニク、イヌリン（和光純薬工業株式会社、大阪）、イヌリナーゼ（和光純薬工業株式会社、大阪）も使用した。
【００４４】
１−２ サンプルの調製
実施例３、１−２と同様の方法で、ジャンボリーキ中の糖を抽出した。また、中国産ニンニク含有糖においても、ジャンボリーキと同様の方法で調製した。
【００４５】
１−３ 加水分解法による糖の同定
（１）強酸による加水分解
ジャンボリーキ含有糖１００ｍｇに１０Ｎ塩酸を５ｍｌ加えた。真空加水分解管に移して脱気し、ドライサーモバス（ＭＧ−２１００、東京理化器械株式会社、東京）中で１１０℃、１，２，６，１０時間加水分解を行った。分解後の溶液を水酸化ナトリウムで中和し、ＨＰＬＣに供した。
（２）ＨＰＬＣ分析条件
高速液体クロマトグラフ（Ｌ−３３００、株式会社日立製作所、東京）を使用し、加水分解前および加水分解１，２，６，１０時間後のジャンボリーキ中の糖成分を分析した。
カラム：島津１０１Ｎ
カラム温度：４０℃
流速：０．７ｍｌ／ｍｉｎ
溶出：超純水装置：検出器（Ｌ−３３００、株式会社日立製作所、東京）、ポンプ（ＬＣ−１０ＡＴ、島津製作所、京都）、脱気装置（ＤＧＵ−３Ａ、島津製作所、京都）、カラムオーブン（ＣＴＯ−１０ＡＲＰ、島津製作所、京都）、クロマトパック（Ｃ−Ｒ４ＡＸ、島津製作所、京都）
【００４６】
１−４ 酵素分解法による糖の同定
（１）イヌリナーゼによる酵素分解
サンプル：
(a)イヌリン５０ｍｇ／ｍｌ：水に溶解
(b)イヌリン５０ｍｇ／ｍｌ：水に溶解し、イヌリナーゼで反応させたもの
(c)ジャンボリーキ含有糖５０ｍｇ／ｍｌ：水に溶解
(d)ジャンボリーキ含有糖５０ｍｇ／ｍｌ：水に溶解し、イヌリナーゼで反応させたもの
(e)ニンニク含有糖５０ｍｇ／ｍｌ：水に溶解
(f)ニンニク含有糖５０ｍｇ／ｍｌ：水に溶解し、イヌリナーゼで反応させたもの
(g)泡粉末５０ｍｇ／ｍｌ：水に溶解
(h)泡粉末５０ｍｇ／ｍｌ：水に溶解し、イヌリナーゼで反応させたもの
(a)、(c)、(e)、(g)は、各試料５０ｍｇを水に溶解して調製した。(b)、(d)、(f)、(h)は、各試料５０ｍｇを水に溶解し、イヌリナーゼを添加し調製した。(a)〜(h)を恒温槽にて３７℃で１時間酵素反応させた。１時間後、(a)〜(h)を恒温槽にて８０℃で５分反応させ、酵素反応を停止させた。
【００４７】
（２）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）による糖の同定
固定相：Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ６０（メルク株式会社、東京）
展開溶媒：クロロホルム：酢酸：水＝３０：３５：５
発色剤：５％リンモリブデン酸
サンプル：１−３、（１）で調製した(a)〜(h)を用いた
サンプル(a)〜(h)は、薄層板Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ６０にスポットし、クロロホルム：酢酸：水＝３０：３５：５の展開溶媒で展開した。その後、５％リンモリブデン酸をスプレーし、１８０℃で加熱して発色させた。
【００４８】
（３）ＨＰＬＣ分析条件
高速液体クロマトグラフ（Ｌ−３３００、株式会社日立製作所、東京）を使用してサンプル(a)〜(d)中の糖成分を分析した。
カラム：島津１０１Ｎ
カラム温度：４０℃
流速：０．７ｍｌ／ｍｉｎ
溶出：超純水装置：検出器（Ｌ−３３００、株式会社日立製作所、東京）、ポンプ（ＬＣ−１０ＡＴ、島津製作所、京都）、脱気装置（ＤＧＵ−３Ａ、島津製作所、京都）、カラムオーブン（ＣＴＯ−１０ＡＲＰ、島津製作所、京都）、クロマトパック（Ｃ−Ｒ４ＡＸ、島津製作所、京都）
【００４９】
結果および考察
日本大学産ジャンボリーキ含有糖の加水分解前、加水分解１，２，６，１０時間後のクロマトグラムを図１２に示した。加水分解前と加水分解後のピークに変化がなく、また、時間毎の変化も見られなかった。このことから、ジャンボリーキ中には多量の多糖類を含有するのではないかと考えた。ニンニクには、イヌリンという水溶性で難消化性多糖類の多糖類を含むことが明らかにされている。そこで１−４では、イヌリンを分解するイヌリナーゼを用いて、ＴＬＣ及びＨＰＬＣによりジャンボリーキ中に含まれている糖の分析を行った。
【００５０】
未酵素分解および酵素分解したジャンボリーキ含有糖、ニンニク含有糖、ジャンボリーキ泡粉末およびイヌリンのＴＬＣ結果を図１３に示した。酵素未分解のイヌリン（ａ）はＲｆ値０を示し、酵素分解したイヌリン（ｂ）はＲｆ値０．３０を示した。酵素未分解のジャンボリーキ含有糖（ｃ）は展開されなかったのに対し酵素分解したジャンボリーキ含有糖（ｄ）は展開され、Ｒｆ値は０．２９を示した。この結果よりジャンボリーキ糖には、イヌリンを含有していることが判明した。また、比較として用いた酵素未分解のニンニク含有糖（ｅ）は展開されなかったが、酵素分解したニンニク含有糖（ｆ）にイヌリンのスポットが発見され、Ｒｆ値は０．２９を示した。泡粉末においては、酵素未分解のジャンボリーキ泡粉末（ｇ）は展開されなかったのに対し酵素分解したジャンボリーキ泡粉末（ｈ）は展開され、Ｒｆ値は０．３０を示した。泡粉末中にもイヌリンを含有することが判明した。しかし、（ｂ）が酵素分解後、白濁の溶液が透明に呈したのに対し、（ｈ）は酵素分解後も沈殿が生じた。この沈殿は、水に不溶で、メタノールに一部不溶だった。また、（ｈ）はＲｆ値０．３０以外にも０．３０〜１．００の間にスポットが検出された。これらのことから、ジャンボリーキ泡粉末中にはイヌリン以外にも、ビタミンＥ、ポリフェノールなどの成分を含有することが考えられる。
【００５１】
ＨＰＬＣで分析を行ったところ、（ｄ）のリテンションタイム１１．４４６ｍｉｎのピークが、（ｂ）のリテンションタイム１１．４４６ｍｉｎのピークと同じであると推察され、ＨＰＬＣの結果からも、ジャンボリーキ糖には、イヌリンを含有していることが判明した（図１４）。しかし、（ｄ）は完全に酵素分解されなかった。使用した糖が完全に精製されなかったため、イヌリン以外の物質も含有するか、イヌリン以外の多糖類を含有するためであると考えられる。
【００５２】
［実施例５］ジャンボリーキおよびジャンボリーキ泡粉末のアルコール吸収抑制作用
１ 実験材料および方法
１−１ 実験材料
日本大学産ジャンボリーキ泡粉末および長野県産無臭ジャンボリーキ粉末（商品名：ムシューリックパウダーＰＳII（大蔵製薬（株）ヘルスウェイ事業部、東京））を使用した。
【００５３】
１−２ 実験動物および飼育条件
６週齢のＷｉｓｔａｒ系ＳＰＦ雄性ラット（ＣＬＥＡ、東京）を一週間予備飼育した後実験に使用した。ラットは、温度２２±１℃、湿度５５±５％、光サイクルを１２時間毎明暗という条件で流路にて飼育を行った。食餌は、マウス、ラット、ハムスター用飼育繁殖固形飼料ＣＥ−２（株式会社日本生物材料センター）を、飲料水は水道水をともに自由摂取させた。ただし、採血前１８時間は絶食状態に保った。
【００５４】
１−３ ラットへのエタノール投与
ジャンボリーキ泡粉末によるエタノール吸収抑制作用の検討の実験方法は、図１５に示したように、４０％エタノール１ｍｌを胃ゾンデを用いて投与し、飲酒状態とした。日本大学産ジャンボリーキ泡粉末、クルクミンおよび長野県産無臭ジャンボリーキ粉末は、１５ｍｇ／ｋｇになるようにそれぞれ４０％エタノール１ｍｌに懸濁させ、胃ゾンデを用いて経口胃内投与した。ノーマル群には生理食塩水のみ、コントロール群には４０％エタノールのみ経口胃内投与した。エタノール投与時間を０時間とし、１、２、４時間後にウレタン麻酔下で頚静脈より０．５ｍｌ採血した。各種血液サンプルに、０．３３ ｍｏｌ／Ｌ過塩素酸を加え上清分離（４７００Ｇ、１５ｍｉｎ）後、血中エタノール濃度の測定に供した。
【００５５】
１−４ 実験群の作製
動物は、次の４群、各４匹に分けて以下の方法で実施した。
第１群（ノーマル群：無処理群）：生理食塩水のみを投与
第２群（コントロール群：エタノール投与群）：４０％エタノール１ｍｌ投与
第３群（泡粉末投与群）：４０％エタノール１ｍｌ投与＋日本大学産ジャンボリーキ泡粉末１５ｍｇ／ｋｇ投与
第４群（クルクミン投与群）：４０％エタノール１ｍｌ投与＋クルクミン１５ｍｇ／ｋｇ投与
第５群（ＰＳII投与群）：４０％エタノール１ｍｌ投与＋ＰＳII１５ｍｇ／ｋｇ投与
【００５６】
１−５ 測定方法
分光光度計（ＵＶｍｉｎｉ１２４０、島津、東京）を用いて、血中アルコール濃度を測定した。測定には、Ｆ−キットエタノール（Ｊ．Ｋ．インターナショナル、東京）を用いた。測定方法は、溶液Ａ（二リン酸カリウム、ＮＡＤ４ｍｇ、アルデヒドデヒドロゲナーゼ（Ａｌ−ＤＨ）０．８Ｕ）３ｍｌと１０倍希釈した上清０．１ｍｌを混和し、３分静置後３４０ｎｍの波長で吸光度を測定した。これをＥ１とした。その後溶液Ｂ（アルコールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ）７０００Ｕ）０．０５ｍｌと混和し、１０分静置後３４０ｎｍの波長で吸光度を測定した。これをＥ２とした。測定した値を、血中エタノール濃度Ｅ［ｇ／Ｌ］＝試料（Ｅ２−Ｅ１）−ブランク（Ｅ２−Ｅ１）×０．１１５２×８．９８×１０の計算式により血中エタノール濃度を測定した。
【００５７】
２ 結果および考察
エタノール投与ラットの血中エタノール濃度の経時変化を図１６に示した。エタノール投与ラットと比べると、日本大学産ジャンボリーキ泡粉末およびＰＳIIはクルクミンと同様に、エタノール吸収を抑制した。４０％エタノールを投与してから２時間後位からラットの血中エタノール濃度が減少した。よって、日本大学産ジャンボリーキ泡粉末およびＰＳIIは血中アルコール濃度の上昇を、軽減・緩和することが判明した。また、日本大学産のジャンボリーキ泡粉末でも長野県産のジャンボリーキ泡粉末でも同様の効果を示すことから、産地によって効果の生じ方に差異はないことが判明した。ＰＳIIと日本大学産ジャンボリーキ泡粉末の効果の生じ方は、ほぼ同じように起こったことから、血中アルコール濃度の上昇を抑制している成分は、ほとんどジャンボリーキ中の泡成分中に含まれていると推察される。
【００５８】
［実施例６］ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）誘発糖尿病ラットに対するジャンボリーキおよびジャンボリーキ泡粉末の効果
１ 実験材料および方法
１−１ 実験材料
日本大学産ジャンボリーキ泡粉末および日本大学産ジャンボリーキ粉末（ムシューリックパウダーＰＳII、大蔵製薬株式会社ヘルスウェイ事業部、東京）を使用した。試薬においては、以下の通りに調製した。
０．９％生理食塩水
ＮａＣｌ（和光純薬工業株式会社、大阪、特級）９００ｍｇに純水１００ｍｌを加えたものを０．９％生理食塩水とした。
１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸ナトリウム緩衝液
クエン酸ナトリウム（和光純薬工業株式会社、大阪）１７７ｍｇに純水６０ｍｌを加えた後０．１ｍｏｌ／ｌ塩酸でｐＨ４．０に調製した。
ネンブタール麻酔
２５ｍｇのペントバルビタール（和光純薬工業株式会社、大阪）を、２０ｍｌのプロピレングルコールと５ｍｌエタノールで溶解後、純水で５０ｍｌにｆｉｌｌ ｕｐした。
【００５９】
１−２ 実験動物および飼育条件
５週齢のＷｉｓｔａｒ系ＳＰＦ雄性ラット（日本クレア株式会社、東京）を一週間予備飼育した後、実験に使用した。ラットは、温度２２±１℃、湿度５５±５％、光サイクルを１２時間毎明暗という条件で金網製個別ゲージにて飼育を行った。食餌は、マウス、ラット、ハムスター用飼育繁殖固形飼料ＣＥ−２（株式会社日本生物材料センター、東京）を、飲料水は水道水をともに自由摂取させた。ただし、採血前１８時間は絶食状態に保った。
【００６０】
１−３ ＳＴＺ誘発糖尿病モデルの作製
ＳＴＺ（シグマアルドリッチジャパン株式会社、東京）を１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸ナトリウムｂｕｆｆｅｒに溶解し、腹腔内投与することにより糖尿病を誘発した。ノーマル群には同量の１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸ナトリウム緩衝液を投与した。
【００６１】
１−４ 実験群の作製
動物は以下の作成方法で実施した。
第１群（ノーマル群：無処理群）：生理食塩水のみを投与
第２群（コントロール群：ＳＴＺ群）：ＳＴＺ７０ｍｇ／ｋｇ／ｍｌ投与
第３群（ＳＴＺ処理＋泡粉末１００ｍｇ／ｋｇ／ｍｌ投与群）：ＳＴＺ７０ｍｇ／ｋｇ／ｍｌ投与＋泡粉末１００ｍｇ／ｋｇ／ｍｌ投与
第４群（ＳＴＺ処理＋ＰＳII１００ｍｇ／ｋｇ／ｍｌ投与群）：ＳＴＺ７０ｍｇ／ｋｇ／ｍｌ投与＋ＰＳII１００ｍｇ／ｋｇ／ｍｌ投与
【００６２】
ＳＴＺ処理後の泡粉末投与実験の実験方法を図１７に示した。すなわち、予備飼育後、試験−５日目にノーマル群以外の計３群に７０ｍｇ／ｋｇのＳＴＺを腹腔内投与し、試験０日目より各サンプルを胃ゾンデにより用いて経口胃内投与した。日本大学産ジャンボリーキ泡粉末１００ｍｇ／ｋｇ／ｍｌおよびジャンボリーキ粉末（ＰＳII）１００ｍｇ／ｋｇ／ｍｌは、生理食塩水に懸濁し、無処理群（ノーマル群）および対照群（コントロール群）には、生理食塩水のみをそれぞれ１ｍｌ与えた。試験１４日後にネンブタール麻酔下で頸静脈より採血し、それぞれの血液サンプルは、血清分離（３０００ｒｐｍ、４℃、１５ｍｉｎ）後、各種成分の測定に供した。また、試験０日目、７日目、１４日目に尾静脈より得た血液を得て、血糖値の測定に供した。体重は試験０日目より毎日一定時刻に測定し、摂食量および摂水量も毎日一定時刻に秤量した。
【００６３】
１−５ 測定方法
ＤＥＸＴＥＲ−ＺII（バイエルメディカル株式会社、ドイツ）を用いて血糖値を測定した。また、乾式臨床自動分析装置ＳＰＯＴＣＨＥＭＴＭＥＺ（ＳＰ−４４３０、アークレイ株式会社、京都）を用いて、血清中の総コレステロール（Ｔ−Ｃｈｏ）、グルコース（Ｇｌｕ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、尿素窒素（ＢＵＮ）、および総ビリルビン（Ｔ−Ｂｉｌ）の５項目について測定した。なお、測定キットとしてスポットケムＴＭIIマルチ肝機能−２（アークレイ株式会社、京都）を用いた。
【００６４】
２ 結果および考察
ラット体重の経日変化を図１８に示した。体重はいずれの群も経日とともに増加し、各群とともに順調な成長がみられた。群間での差は、ＳＴＺ無処理群（ノーマル群）およびＳＴＺ処理群（コントロール群、泡粉末群、ＰＳII群）での差がみられ、ＳＴＺ処理群は体重の増加が緩やかであった。糖尿病になると、インスリン欠乏により、脂肪動員の増加、タンパク質の分解促進、大量のブドウ糖の尿中排泄および水分喪失が生じ、体重減少に至る。ラットの摂食量の経日変化を図１９示した。摂食量は、経日および群間での差にばらつきがみられたことから、いずれの飼料もラットに忌避されることなく十分に摂取されなかったと考えられた。本来インスリン欠乏状態では、背内側核中でブドウ糖の代謝が減少し、ブドウ糖がブドウ糖受容体細胞内に侵入できない。これにより血糖が少ないと感じ、実際は血糖が高いにもかかわらず空腹感が出現する。腹内側核中では、刺激の閾値の上昇し、満腹による摂食中止が不能になる。これらによって多食が生じる。
ラットの摂水量の経日変化を図２０に示した。摂水量はいずれの群も経日とともに増加し、各群とともに順調な成長がみられた。群間での差は、ＳＴＺ無処理群およびＳＴＺ処理群での差がみられ、ＳＴＺ処理群は摂水量が高かったことから、糖尿病の典型的な症状の一つである口渇・多飲を生じたと考えられる。また、多尿もみられた。インスリン作用不足により代謝異常が生じると、空腹時・食後の血糖値が上昇し、末梢組織で糖の利用が低下する。血中のブドウ糖は腎糸球体から多量に排泄する（血糖約１８０ｍｇ／ｄｌ以上になると尿糖として排泄）。尿の浸透圧が上昇し、多量の水分も排泄されることにより多尿（頻尿）が生じる。体内では脱水状態になり、視床下部の渇中枢が刺激され、口渇が生じる。
【００６５】
ＳＴＺ処理ラットの血糖値に対するジャンボリーキ泡粉末の変化を以下の表１、及び図２１に示した。
【００６６】
【表１】
【００６７】
５週齢ＳＰＦ Ｗｉｓｔａｒ系雄ラットにＳＴＺを腹腔内投与させ（コントロール群）、生理食塩水を胃ゾンデで経口投与させると、ＳＴＺ無処理群と比べ、血糖値が有意に上昇した。これに対し、ＳＴＺ誘発ラットに泡粉末１００ｍｇ／ｋｇおよびＰＳII１００ｍｇ／ｋｇを経口投与すると、いずれも有意に血糖値を減少させ、ジャンボリーキ泡粉末およびＰＳIIが血糖値に予防効果を示すことが判明した。ブドウ糖が血液中に取り込まれると、すい臓から分泌されたインスリンが血液中のブドウ糖に働きかけ、エネルギーとして活用できるように細胞に取り込まれる。しかし、ストレスなどの環境的要因によりインスリン分泌が低下すると、血液中のブドウ糖はエネルギーに変わらず、次々に体内へ蓄積し、血糖値が上昇する。
【００６８】
ＳＴＺ処理ラットの血清中のＧｌｕ値、ＢＵＮ値、およびＡＳＴ活性の変化を以下の表２、及び図２２〜２４に示した。
【００６９】
【表２】
【００７０】
５週齢ＳＰＦ Ｗｉｓｔａｒ系雄ラットにＳＴＺを腹腔内投与させ（コントロール群）、生理食塩水を胃ゾンデで経口投与させると、ＳＴＺ無処理群と比べ、血清中のＧｌｕ値、ＢＵＮ値、およびＡＳＴ活性が有意に上昇した。これに対し、ＳＴＺ誘発ラットに泡粉末１００ ｍｇ／ｋｇを経口投与すると、いずれも有意に血清中のＧｌｕ値、ＢＵＮ値、およびＡＳＴ値を減少させ、ジャンボリーキ泡粉末が腎・肝障害および血糖値に予防効果を示すことが判明した。ＰＳIIにおいては、Ｇｌｕ値およびＢＵＮ値の上昇に対し有意な抑制効果が見られたが、ＡＳＴ活性に対しては有意な抑制効果が見られなかった。また、この時点でＴ−Ｂｉｌ値、Ｔ−Ｃｈｏ値に著しい差が認められなかった。これらのことから、泡粉末およびＰＳIIは高脂血症にも両者投与量は関与しなかったものと推察された。
【００７１】
［実施例７］ジャンボリーキ添加ソーセージの開発
１ 実験材料および方法
１−１ 実験材料およびソーセージ組成
日本大学産ジャンボリーキは、実施例１の実験材料と同様のものを用いた。ニンニクは、市販のニンニクを使用した。ジャンボリーキ泡粉末は、実施例１の１−２（２）と同様のものを用いた。ソーセージの組成は図２５に示した。
【００７２】
１−２ ソーセージ作製方法
ソーセージの作製方法は、塩せき肉、脂肪、調味料を混合後、バキュームミキサーで脱気し、羊腸に詰めた。これを燻製後、加熱・殺菌処理および冷却し、これをジャンボリーキ添加ソーセージとした。そのほか、ジャンボリーキ泡粉末およびニンニクにも同様に行った。
【００７３】
１−３ 官能検査
日本大学産ジャンボリーキ泡粉末０．２％添加ソーセージの官能検査をおこなった。男女約２０名に、ジャンボリーキ泡粉末０．２％添加ソーセージを、ジャンボリーキ無添加ソーセージ（コントロール）とジャンボリーキ７％添加ソーセージそれぞれとの比較による味覚テストを行った。
【００７４】
２ 結果および考察
外観に関しては、ジャンボリーキ無添加、添加および泡粉末添加での違いはほぼないが、ニンニク添加では、ほかの二つより若干白色味を帯びていた。また、ジャンボリーキ泡粉末添加ソーセージの官能検査の評価を行った結果は、ジャンボリーキ７％添加ソーセージと比べると、違いがあらわれた。味や香りが改善され、くさみがなくなった。ノーマルソーセージとの差がほとんどなく、ほとんどのひとは味や香りの違いを感じることができなかった。ノーマルソーセージとの評価がほぼ変わらなかったので、添加しても変わらないということを商品価値ととらえて、今後健康補助食品として、商品化が期待できる。
【００７５】
［実施例８］ジャンボリーキ添加ソーセージ投与によるＤ−ＧａｌＮ誘発肝障害ラットの効果
１ 実験材料および方法
１−１ 実験材料
実施例７で作成した日本大学産ジャンボリーキ添加したソーセージを用いた。
【００７６】
１−２実験動物および飼育条件
５週齢のＷｉｓｔａｒ系ＳＰＦ雄性ラット（ＣＬＥＡ、東京）を実験に使用した。ラットは、温度２２±１℃、湿度５５±５％、光サイクルを１２時間毎明暗という条件で金網製個別ゲージにて飼育を行った。食餌は、午前中にマウス、ラット、ハムスター用飼育繁殖固形飼料ＣＥ−２（株式会社日本生物材料センター）を与え、夕方にソーセージ（第一群には午前中と同様の固形試料）１０ｇを２週間与えた。飲料水は水道水をともに自由摂取させた。ただし、採血前１８時間は絶食状態に保った。
【００７７】
１−３ ＧａｌＮ誘発肝障害モデルの作製１５）
ＧａｌＮとしてＤ−ガラクトサミン塩酸塩（シグマアルドリッチ、東京）を用い、生理食塩水に溶解後、１ＮのＮａＯＨで中和、滅菌フィルターで濾過し、注射液を調製した。ＧａｌＮは７００ｍｇ／ｋｇを各群６匹のラットに１ｍｌを腹腔内投与した。ＧａｌＮ投与を０時間とし、４８時間後にネンブタール麻酔下で頸静脈より採血し、それぞれの血液サンプルは、血清分離（４７００Ｇ、４℃、１５ｍｉｎ）後、各種酵素活性の測定に供した。
【００７８】
１−４実験群の作製
動物は、次の４群、各６匹に分けて以下の方法で実施した。
第１群：ソーセージ無投与群 （ＧａｌＮ無投与）
第２群：ソーセージ無投与群 （ＧａｌＮ投与）
第３群：ノーマルソーセージ投与群 （ＧａｌＮ投与）
第４群：ジャンボリーキ添加ソーセージ投与群（ＧａｌＮ投与）
【００７９】
１−５ 測定方法
乾式臨床自動分析装置ＳＰＯＴＣＨＥＭＴＭＥＺ（ＳＰ−４４３０、アークレイ株式会社、京都）を用いて、アラニンアミノ基転移酵素（ＡＬＴ）と、アスパラギン酸アミノ基転移酵素（ＡＳＴ）、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性を測定した。なお、測定キットとして、スポットケムＴＭIIマルチ肝機能−２（アークレイ株式会社、京都）を用いた。
【００８０】
２ 結果および考察
ラットのＡＳＴ活性、ＡＬＴ活性、ＬＤＨ活性、ＡＬＰ活性の変化に対するジャンボリーキおよび泡粉末添加ソーセージの効果を以下の表３及び図２６〜２９に示した。
【００８１】
【表３】
【００８２】
ＧａｌＮ投与により、４８時間後に、コントロール群はノーマルソーセージ投与群に比べてＡＬＴ、ＡＳＴ活性が有意に上昇した。この上昇に対して、ジャンボリーキ添加ソーセージ投与群は、有意な抑制効果が見られた。ＧａｌＮ肝障害の発生機序としては、ＧａｌＮが肝細胞内においてｕｒｉｄｉｎｅｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ−Ｇｌｕｃｏｓｅ（ＵＤＰ−Ｇｌｕｃｏｓｅ）を消費してｕｒｉｄｉｎｅ ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ （ＵＤＰ−ＧａｌＮ）を生成することにより細胞内に蓄積されたｕｒｉｄｉｎｅ ｔｒｉｐｈｏｓｐａｔｅ（ＵＴＰ）が減少し、欠乏する。これに伴いＲＮＡ合成低下、タンパク合成阻害が生じ、さらに糖、脂質代謝障害も加わり、肝細胞膜障害から細胞壊死を惹起させるといわれている。（Keppler et al.,1970）。このような直接的な肝細胞障害に加えＧａｌＮ肝障害の発生には、腸管由来のエンドトキシンが重要な役割を果たしており、ガラクトサミンによって惹起された肝細胞膜障害に、エンドトキシン血症血中の肝細胞障害因子の作用が加わって、ＧａｌＮ肝障害が発生、進展するとされている。（岩城ら、１９８８）。すなわち、エンドトキシンによって肝マクロファージが活性化され、それによって生産される腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）やインターロイキン１（ＩＬ−１）などのサイトカイニン、ロイコトリエンＤ４などの関与が重要視されてきている。このように、肝臓はＧａｌＮにより直接的な障害を受ける。この障害により、ＡＳＴおよびＡＬＴは血液中に流出するので、血清中にこれら酵素の高い活性が認められるようになる。ＡＳＴ，ＡＬＴ活性は、両方とも肝臓や心筋、骨格筋、腎臓の細胞に存在するが、特に肝細胞の破壊がおこると、血液中の値が高くなる。急性肝炎や慢性肝炎では、ＡＳＴ，ＡＬＴ活性が共に高くなるが、ＡＬＴ活性の方が敏感に反応するため、ＡＳＴの値よりもＡＬＴの値の方がより高くなることが多い。今回ジャンボリーキ投与群は、血清ＡＳＴおよびＡＬＴ活性の上昇が抑制されたことより、ジャンボリーキ添加ソーセージは、肝障害に対しその機能低下を改善する効果を有していると推察された。
【００８３】
ＬＤＨ（乳酸脱水素酵素）は、ブドウ糖からエネルギーを産生するために行われる解糖系の最終段階の酵素である。生体内では腎臓に最も多量に存在し、骨格筋や、肝臓・心筋・膵臓・肺・脾臓などの細胞に含まれる。肝臓に障害が生じると、ＡＳＴ，ＡＬＴの上昇と共に高くなる。今回の実験では、ＬＤＨ活性は、有意な差はみられず、ＧａｌＮ投与により、４８時間後に、コントロール群はノーマルソーセージ投与群に比べて上昇傾向がみられた。この上昇に対して、ジャンボリーキ添加ソーセージ投与群は、抑制傾向が見られた。ＡＬＰ活性は、ＧａｌＮ投与により、４８時間後に、コントロール群はノーマルソーセージ投与群に比べて有意に上昇した。この上昇に対して、ジャンボリーキ添加ソーセージ群は、優位に抑制効果を示した。今回ジャンボリーキ添加ソーセージ群では、ＡＳＴ，ＡＬＴ活性およびＡＬＰ活性の値の上昇が抑制されたことより、ジャンボリーキ添加ソーセージが肝障害に対しその機能低下を改善する効果を有していると推察された。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１】ジャンボリーキ成分のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図２】ジャンボリーキ泡成分のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図３】ブタノール抽出法によるジャンボリーキ鱗片成分のＬＨ−２０カラム処理後の２８０ｎｍにおける各フラクションの吸光度を示す。
【図４】ブタノール抽出法によるジャンボリーキ泡粉末成分のＬＨ−２０カラム処理後の２８０ｎｍにおける各フラクションの吸光度を示す。
【図５】ブタノール抽出法によるジャンボリーキ鱗片成分のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図６】ブタノール抽出法によるジャンボリーキ泡粉末成分のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図７】ブタノール抽出法によるジャンボリーキ泡粉末成分カラム処理後フラクションＮｏ．３５のＵＶクロマトグラムである。
【図８】フラクションＮｏ．３５のピーク１のＥＳＩによるマススペクトルである。
【図９】フラクションＮｏ．３５のピーク２のＥＳＩによるマススペクトルである。
【図１０】フラクションＮｏ．３５のピーク３のＥＳＩによるマススペクトルである。
【図１１】フラクションＮｏ．３５のピーク４のＥＳＩによるマススペクトルである。
【図１２】加水分解法によるジャンボリーキ糖のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図１３】薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によるジャンボリーキ糖の分析結果である。
【図１４】酵素分解法によるジャンボリーキ糖のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図１５】ジャンボリーキによるアルコール吸収抑制作用の検討の実験方法である。
【図１６】ジャンボリーキ泡粉末によるエタノール吸収抑制作用を示す。
【図１７】ジャンボリーキの糖尿病に対する予防効果の検討方法を示す。
【図１８】ラットの体重量の経日変化を示す。
【図１９】ラットの摂食量の経日変化を示す。
【図２０】ラットの摂水量の経日変化を示す。
【図２１】ＳＴＺ処理ラットの血糖値に対するジャンボリーキ泡粉末の効果を示す。
【図２２】ＳＴＺ処理ラットのグルコース値に対するジャンボリーキ泡粉末の効果を示す。
【図２３】ＳＴＺ処理ラットの尿素窒素値に対するジャンボリーキ泡粉末の効果を示す。
【図２４】ＳＴＺ処理ラットのＡＳＴ活性に対するジャンボリーキ泡粉末の効果を示す。
【図２５】機能性食材添加ソーセージの組成を示す。
【図２６】ＧａｌＮ処理ラットのＡＬＴ活性に対するジャンボリーキ添加ソーセージの効果を示す。
【図２７】ＧａｌＮ処理ラットのＡＳＴ活性に対するジャンボリーキ添加ソーセージの効果を示す。
【図２８】ＧａｌＮ処理ラットのＬＤＨ活性に対するジャンボリーキ添加ソーセージの効果を示す。
【図２９】ＧａｌＮ処理ラットのＡＬＰ活性に対するジャンボリーキ添加ソーセージの効果を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジャンボリーキ泡成分から単離され、下記式（Ｉ）〜（ＩＶ）で示される化合物の何れか１種のカテキン誘導体若しくはその塩、又はそれらの２種以上からなるカテキン誘導体混合物。
【化１】
【化２】
【化３】
【化４】
【請求項２】
請求項１に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物と、生理的に許容しうる担体とを含む医薬組成物。
【請求項３】
有効量の請求項１に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物を含むアルコール吸収抑制剤。
【請求項４】
有効量の請求項１に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物を含むアルコール性肝障害予防治療剤。
【請求項５】
有効量の請求項１に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物を含む血糖降下剤。
【請求項６】
請求項１に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物とイヌリンとを有効成分として含む肝障害改善用及び／又は糖尿病改善用機能性食品。
【請求項１】
ジャンボリーキ泡成分から単離され、下記式（Ｉ）〜（ＩＶ）で示される化合物の何れか１種のカテキン誘導体若しくはその塩、又はそれらの２種以上からなるカテキン誘導体混合物。
【化１】
【化２】
【化３】
【化４】
【請求項２】
請求項１に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物と、生理的に許容しうる担体とを含む医薬組成物。
【請求項３】
有効量の請求項１に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物を含むアルコール吸収抑制剤。
【請求項４】
有効量の請求項１に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物を含むアルコール性肝障害予防治療剤。
【請求項５】
有効量の請求項１に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物を含む血糖降下剤。
【請求項６】
請求項１に記載のカテキン誘導体若しくはその塩又はそれらの混合物とイヌリンとを有効成分として含む肝障害改善用及び／又は糖尿病改善用機能性食品。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【公開番号】特開２００８−１９５６２２（Ｐ２００８−１９５６２２Ａ）
【公開日】平成２０年８月２８日（２００８．８．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２９６９０（Ｐ２００７−２９６９０）
【出願日】平成１９年２月８日（２００７．２．８）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 日本食品科学工学会第５３回大会事務局発行 「日本食品科学工学会第５３回大会講演集」 発行日：平成１８年８月２８日
【出願人】（５９７０８７８０４）大蔵製薬株式会社 (9)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年８月２８日（２００８．８．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年２月８日（２００７．２．８）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 日本食品科学工学会第５３回大会事務局発行 「日本食品科学工学会第５３回大会講演集」 発行日：平成１８年８月２８日
【出願人】（５９７０８７８０４）大蔵製薬株式会社 (9)
【Ｆターム（参考）】
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