生活習慣病予防・改善用の油脂加工組成物
本発明は、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を含有し、健康食品や保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）などの飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などに利用することができ、インスリン抵抗性の改善、並びに、内臓脂肪型肥満、２型糖尿病、高脂血症、高血圧症などの生活習慣病の予防及び／又は改善に有効である油脂加工組成物を提供する。 本発明の油脂加工組成物は、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を油脂、特に中鎖脂肪酸トリグリセリド及び／又は部分グリセリドに溶解させることによって、該化合物の安定性を向上させ、また、飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などへの加工性も向上させたものである。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
本発明は、健康食品や保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）などの飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などに使用することができる生活習慣病予防及び／又は改善用の油脂加工組成物に関する。
【背景技術】
栄養過多や運動不足などの生活習慣の悪化による生活習慣病は大きな社会問題になっている。ここでの生活習慣病としては、内臓脂肪型肥満、２型糖尿病、高脂血症、高血圧症などが挙げられ、やがて動脈硬化症へと悪化していくマルチプル・リスク・ファクター症候群である。そこで、これらの生活習慣病を予防及び／又は改善する効果を有する組成物が望まれており、その組成物の形態は、日常的に摂取できる健康食品や保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）などの飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などが望まれている。
マルチプル・リスク・ファクター症候群は、ＲｅａｖｅｎによるシンドロームＸ（Ｄｉａｂｅｔｅｓ，３７，１５９５〜１６０７，１９８８）、Ｋａｐｌａｎによる死の四重奏（Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１４９，１５１４〜１５２０，１９８９）、ＤｅＦｒｏｎｚｏによるインスリン抵抗性症候群（Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ，１４，１７３〜１９４，１９９１）、松澤による内臓脂肪症候群（Ｄｉａｂｅｔｅｓ／Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｒｅｖｉｅｗｓ，１３，３〜１３，１９９７）と同じ病態概念であると考えられ、これら症候群に共通する原因因子はインスリン抵抗性であると考えられている。
近年、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γ（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ γ：ＰＰＡＲγ）のリガンドであるトログリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾンなどのチアゾリジン誘導体の研究により、これらの薬剤は２型糖尿病患者において、インスリン抵抗性を改善し、血糖低下作用を示すことが明らかにされており、インスリン抵抗性改善薬・２型糖尿病治療薬として臨床応用されている。さらに、これらのチアゾリジン誘導体は、皮下脂肪を増加させるが内臓脂肪を低減させること、血中遊離脂肪酸低下作用、血圧低下作用、抗炎症作用などを示すことが明らかにされている（Ｍａｒｔｅｎｓ，Ｆ．Ｍ，，ｅｔ ａｌ，Ｄｒｕｇｓ，６２，１４６３〜１４８０，２００２）。すなわち、ＰＰＡＲγリガンド活性を有する化合物は、インスリン抵抗性を改善し、内臓脂肪型肥満、２型糖尿病、高脂血症、高血圧症などの生活習慣病の予防及び／又は改善に有効である。
甘草はマメ科カンゾウ属（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ属）の植物であり、食用や医薬用（生薬）として利用されており、主な品種としてグリキルリーザ・グラブラ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｇｌａｂｒａ）、Ｇ．ウラレンシス（Ｇ．ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）、Ｇ．インフラータ（Ｇ．ｉｎｆｌａｔａ）などが挙げられる。いずれの品種にも親水性成分であるグリチルリチン（グリチルリチン酸）は含まれているが、疎水性成分のフラボノイドは品種によって特異的な化合物が含まれている。この品種特異的なフラボノイドは、甘草の品種同定に利用されることもある。
甘草から得られる抽出物のうち、甘草フラボノイドを多く含み、グリチルリチン含量が極微量である甘草疎水性抽出物は、マルチプル・リスク・ファクター症候群の予防及び／又は改善に有用であることが見出されている（ＷＯ０２／４７６９９）。さらに最新の研究において、甘草疎水性抽出物にＰＰＡＲγリガンド活性があり、その活性成分はフラボノイド、特にプレニルフラボノイドであることが見出されている（ＷＯ０３／０３７３１６）。中でもＧ．ウラレンシス由来の抽出物のＰＰＡＲγリガンド活性が高いこと、その抽出物に含まれるプレニルフラボノイドであるグリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤが高い活性を有する成分であることも見出されている（ＷＯ０３／０３７３１６）。なお、デヒドログリアスペリンＤはＷＯ０３／０３７３１６において新規に見出された化合物である。
一方、甘草疎水性フラボノイドは、水にほとんど溶解せず、また、有機溶媒抽出物のままでは固結し易く、着色の進行も早いなど、経時的変化が著しいという性質があるため、利用し難い。それを解決するために、甘草疎水性フラボノイドを中鎖脂肪酸トリグリセリドに溶解し、その甘草疎水性フラボノイド製剤を酸化防止剤、抗菌剤、酵素阻害剤、着色料、抗腫瘍剤、抗アレルギー剤、抗ウイルス剤等として利用している（特許２７９４４３３号）。しかし、特許２７９４４３３号では、化合物の限定がなく、また、生活習慣病の予防及び／又は改善剤としての利用も知られていない。
発明の要約
上記に鑑み、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤは、ＰＰＡＲγリガンド活性を有しており、インスリン抵抗性を改善し、内臓脂肪型肥満、２型糖尿病、高脂血症、高血圧症などの生活習慣病の予防及び／又は改善に有効である。しかし、該化合物は、水への溶解性や安定性が良くないことから、飲食品や医薬品などへの利用が困難であるという欠点があった。よって、本発明は、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を含有し、健康食品や保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）などの飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などに利用することができる生活習慣病予防及び／又は改善用の組成物を提供することを課題とする。
本発明者らは、上記実情に鑑み鋭意研究を行った結果、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤをある種の油脂に特異的に溶解することができ、その油脂への溶解によってこれら化合物の安定性が向上し、また、飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などへの加工性も向上することを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有することを特徴とする、生活習慣病予防及び／又は改善用の油脂加工組成物、並びに、インスリン抵抗性改善用の油脂加工組成物に関する。
また、本発明は、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有する組成物を用いた、生活習慣病を予防及び／又は改善する方法、インスリン抵抗性を改善する方法、高血糖を予防及び／又は改善する方法、並びに、腹腔内脂肪を減少させる方法に関する。
発明の詳細な開示
以下に、本発明の実施の形態を詳しく説明する。
本発明の生活習慣病予防及び／又は改善用の油脂加工組成物は、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有することを特徴としている。
また、本発明のインスリン抵抗性改善用の油脂加工組成物は、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有することを特徴としている。
本発明の油脂加工組成物は、該化合物の中でも、デヒドログリアスペリンＤを含み、かつグリシクマリン、グリシリン及びデヒドログリアスペリンＣからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を含むことが好ましい。さらに、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤを含み、かつグリシクマリン又はグリシリンのいずれかを含むことがより好ましい。とりわけ、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤをすべて含むのが最も好ましい。該化合物は、トログリタゾンやピオグリタゾンなどのチアゾリジン誘導体と同様に、ＰＰＡＲγリガンド活性を有していることから、インスリン抵抗性の改善、並びに、内臓脂肪型肥満、２型糖尿病、高脂血症、高血圧症などの生活習慣病の予防及び／又は改善に有効である。
本発明で使用されるグリシクマリン（ｇｌｙｃｙｃｏｕｍａｒｉｎ）及びグリシリン（ｇｌｙｃｙｒｉｎ）は、３−アリルクマリン（３−ａｒｙｌｃｏｕｍａｒｉｎ）に分類されるフラボノイドであり、下記一般式（１）で表される化合物である。
〔式中、Ｒ＝Ｈである場合はグリシクマリン、Ｒ＝ＣＨ３である場合はグリシリンである。〕
本発明で使用されるデヒドログリアスペリンＣ（ｄｅｈｙｄｒｏｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ Ｃ）及びデヒドログリアスペリンＤ（ｄｅｈｙｄｒｏｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ Ｄ）は、イソフラブ−３−エン（ｉｓｏｆｌａｖ−３−ｅｎｅ）に分類されるフラボノイドであり、下記一般式（２）で表される化合物である。
〔式中、Ｒ＝Ｈである場合はデヒドログリアスペリンＣ、Ｒ＝ＣＨ３である場合はデヒドログリアスペリンＤである。〕
グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤは、甘草の中でもグリキルリーザ・ウラレンシス（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）に特異的に含まれている成分であり、他品種にはほとんど含まれていない。ただし、Ｇ．ウラレンシスと他品種との雑種においては含まれる場合もある。該化合物は、ＯＤＳ（シリカゲル担体にオクタデシルシリル基を化学結合した充填剤）などの逆相カラムを用いた高速液体カラムクロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析により、他のフラボノイド成分と分離して検出、定量することができる。
本発明において、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤを得る方法は、特に限定されないが、Ｇ．ウラレンシス種の甘草より得ることができる。該化合物を甘草から得る場合、その方法は特に限定されないが、エタノール、酢酸エチル、アセトンなどの有機溶媒による抽出等が挙げられる。上記抽出で得られる甘草疎水性抽出物に該化合物は含まれ、抽出物のまま使用してもよいが、さらにカラム処理、脱臭処理、脱色処理などにより粗精製又は精製したものを使用してもよい。勿論、該化合物は、その他植物等の天然由来のもの、化学合成のもの、あるいは培養細胞などにより生合成したもののいずれも本発明において使用することができる。また、該化合物は、精製したものを使用することができるが、飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などとして不適当な不純物を含有しない限り粗精製したものを使用することもできる。
本発明で使用される油脂としては、グリセリン脂肪酸エステルを挙げることができる。グリセリン脂肪酸エステルとしては、中鎖脂肪酸トリグリセリドを含むグリセリン脂肪酸エステル、及び／又は、部分グリセリドを含むグリセリン脂肪酸エステルが好ましい。この場合、中鎖脂肪酸トリグリセリド、部分グリセリドの何れかが、グリセリン脂肪酸エステル全体の５０重量％以上を占めることが好ましく、７０重量％以上を占めることが特に好ましい。また、中鎖脂肪酸トリグリセリド５０重量％、部分グリセリド５０重量％を含むグリセリン脂肪酸エステルも用いることができる。
ここでの中鎖脂肪酸トリグリセリドは、炭素原子数６〜１２の脂肪酸を構成脂肪酸とするものである。その脂肪酸の構成比率は特に限定されないが、炭素原子数８〜１０の脂肪酸の構成比率は５０重量％以上が好ましく、７０重量％以上がより好ましい。とりわけ、２０℃での比重が０．９４〜０．９６、２０℃での粘度が２３〜２８ｃＰの中鎖脂肪酸トリグリセリドがさらに好ましい。また、中鎖脂肪酸トリグリセリドは、天然由来のものやエステル交換などにより調製したものなど、いずれも使用することができる。
ここでの部分グリセリドとは、ジグリセリド（１，２−ジアシルグリセロール、１，３−ジアシルグリセロール）又はモノグリセリド（１−モノアシルグリセロール、２−モノアシルグリセロール）である。部分グリセリドとしては、いずれを用いても良いし、両者が混合されたものを用いても良いが、加工性の観点からジグリセリドが好ましい。また、部分グリセリドは、天然由来のものやエステル交換などにより調製したものなど、いずれも使用することができる。なお、部分グリセリドとしては、構成脂肪酸の炭素原子数が６〜２４であるものが好ましい。
さらに、本発明で使用される部分グリセリドは、中鎖脂肪酸の部分グリセリドを用いることもできる。
本発明において、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤを油脂に溶解する方法は、特に限定されず、通常の撹拌、混合などの操作により実施できる。該化合物を含む抽出物、あるいは該化合物の粗精製品を用いる場合、該化合物以外の不純物が含まれているため、撹拌、混合などの操作により該化合物を油脂に溶解した後に、濾過、遠心分離などの操作により油脂に不溶な不純物を除去することが望ましい。該化合物の精製品を用いる場合、容易に均一な溶液を得ることができる。また、該化合物を含む抽出物、あるいは該化合物の粗精製品を用いる場合、予めエタノールなどの有機溶媒に溶解し、その溶液と油脂を混合した後に、有機溶媒を留去する方法を用いることもできる。
一般に、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤは、粉末状態では４０℃以上において不安定であり、エタノールなどの有機溶媒での溶液状態では２５℃以上において不安定である。しかし、該化合物を本発明で使用される油脂に溶解した状態では２５℃以上においても安定である。
本発明の生活習慣病予防及び／又は改善用の油脂加工組成物は、生活習慣病のなかでも内臓脂肪型肥満、２型糖尿病、高脂血症及び高血圧症からなる群より選ばれた少なくとも１つの疾患に好ましく用いることができ、内臓脂肪型肥満及び／又は２型糖尿病により好ましく用いることができる。より具体的には、高血糖の予防及び／又は改善、腹腔内脂肪の減少に好ましく用いることができる。
本発明の生活習慣病予防及び／又は改善用の油脂加工組成物、並びに、インスリン抵抗性改善用の油脂加工組成物は、その形態は特に限定されず、健康食品や保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）などの飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などに利用することができる。例えば、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂をそのまま単独で、調理用、ソフトカプセル製剤用、ローション用などとして利用することができる。また、油性の対象物と自由に混和することができるため、目的に応じて他の油脂と混合して物性を調整することが可能である。この場合、他の油脂は食用又は医薬用であることが好ましく、その種類及び使用量は製品に要求される個々の物性や使用温度域などの諸条件を考慮して決定され、その種類及び使用量を調整することにより稠度や融点などの特性をコントロールすることができる。他の油脂としては、例えば、コーン油、ナタネ油、ハイエルシンナタネ油、大豆油、オリーブ油、紅花油、綿実油、ヒマワリ油、米糠油、パーム油、パーム核油などの植物油；魚油、牛脂、豚脂、乳脂、卵黄油などの動物油；これらを原料として分別、水添、エステル交換などを行った油脂、これらの混合油等を使用することができる。
このようにして得られる本発明の油脂加工組成物は、サラダ油やフライ油などの液状油脂、マーガリンやショートニングなどの可塑性油脂としての利用や、油中水型エマルジョン、水中油型エマルジョン等へ利用することができる。また、これらを原材料にして製造される飲食用の油脂加工組成物として、チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ビスケット、クラッカーなどの菓子類；アイスクリーム、氷菓などの冷菓類；乳飲料、清涼飲料、栄養ドリンク、美容ドリンクなどの飲料；うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類；蒲鉾、竹輪、半片などの練り製品；ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料；パン、ハム、スープ、各種レトルト食品、各種冷凍食品などが例示され、ペットフードや家畜飼料などへも利用することができる。
さらに、栄養強化を目的として、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅなどの各種ビタミン類を添加、併用してもよいし、呈味剤としての各種塩類、各種香料、乳関連物質、例えば、全脂粉乳、脱脂粉乳、発酵乳、乳脂肪などを添加、併用してもよい。また、上記以外の原材料として、通常の油中水型エマルジョン、水中油型エマルジョン等に使用される酸化防止剤、着色剤などを全て使用することができる。
本発明の生活習慣病予防及び／又は改善用の油脂加工組成物、並びに、インスリン抵抗性改善用の油脂加工組成物におけるグリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤの含量は、該化合物の生活習慣病予防及び／又は改善の効果を発揮するためには、該化合物の総量として好ましくは成人一人一日当たり０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重を摂取できる量を油脂加工組成物中に含んでいることが望ましい。
また、本発明の生活習慣病を予防及び／又は改善する方法、インスリン抵抗性を改善する方法、高血糖を予防及び／又は改善する方法、並びに、腹腔内脂肪を減少させる方法は、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有する上記組成物を用いることを特徴とする。
【発明を実施するための最良の形態】
以下に、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
西北産甘草（Ｇ．ウラレンシス）３００ｋｇからエタノール抽出（１８４０Ｌのエタノールに浸し、３５〜４５℃、遮光条件下で２時間抽出する操作を２度繰り返し）、得られた抽出液を併せて、次いで濃縮、晶析、濾別、乾燥、粉砕により甘草疎水性抽出物１３．４６ｋｇを得た。
上記の甘草疎水性抽出物２０ｇと中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）であるアクターＭ−２（理研ビタミン株式会社：脂肪酸組成はＣ８：Ｃ１０＝９９：１）１８０ｇを混合し、約６０℃に保温しながら約１時間攪拌した。その後、遠心分離により不溶分を除去し、オイル層をＭＣＴ溶液（１８９．４ｇ）として得た。
得られたＭＣＴ溶液をＨＰＬＣ用メタノールにて１００倍希釈し、下記の条件にてＨＰＬＣ分析した結果、ＭＣＴ溶液１ｇ当たりグリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤをそれぞれ２．０ｍｇ、１．４ｍｇ、６．８ｍｇ、５．５ｍｇ含んでいた。
ＨＰＬＣ分析条件
分析カラムにはＪ’ｓｐｈｅｒｅ ＯＤＳ−Ｈ８０，４．６×２５０ｍｍ（ワイエムシィ社製）をカラム温度４０℃で用いた。移動相は、１０ｍＭリン酸水溶液に対してアセトニトリルの比率を分析開始から１５分まで３５％で一定とし、１５分以降６５分後に７０％となるように一定比率で上昇させ、６５分から７０分まで７０％で一定とするグラジェント条件で、流速１ｍｌ／分とした。注入量は２０μｌとし、検出波長は３５０ｎｍとした。保持時間は、グリシクマリンが３３．５分、デヒドログリアスペリンＣが３８．０分、グリシリンが４９．２分、デヒドログリアスペリンＤが５６．５分であった。
前記のＭＣＴ溶液をそれぞれ４℃、２５℃、４０℃にて４週間保存し、１週間毎にグリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤの含量を定量した。保存安定性は、保存開始時のそれぞれの含量を１００％とし、保存後／保存開始時の含量の比で表した。
４℃保存の結果を表１に、２５℃保存の結果を表２に、４０℃保存の結果を表３に示す。なお、表中の化合物１はグリシクマリン、化合物２はグリシリン、化合物３はデヒドログリアスペリンＣ、化合物４はデヒドログリアスペリンＤを表す。
（比較例１）
実施例１で用いた甘草疎水性抽出物をアクターＭ−２の代わりにエタノールに溶解して１００ｍｇ／ｍｌのエタノール溶液を得た。このエタノール溶液をＨＰＬＣ用メタノールにて１００倍希釈し、ＨＰＬＣ分析した結果、エタノール溶液１ｍｌ当たりグリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤをそれぞれ２．４ｍｇ、１．６ｍｇ、７．４ｍｇ、５．８ｍｇ含んでいた。
このエタノール溶液を用い、実施例１と同様に保存安定性試験を行った。その結果を表１〜表３に示す。
４℃保存においては、化合物１〜４はいずれもＭＣＴ溶液とエタノール溶液で安定であった。２５℃保存においては、化合物１〜４はいずれもＭＣＴ溶液で安定であるのに対し、エタノール溶液では特に化合物３が不安定であった。４０℃保存においては、化合物１〜４はいずれもＭＣＴ溶液で安定であるのに対し、エタノール溶液では特に化合物３及び４が不安定であった。
これらの結果から、エタノール溶液では化合物３及び４は２５〜４０℃保存で不安定であるが、ＭＣＴ溶液では保存温度にかかわらず化合物１〜４のいずれも安定であることが示された。
（実施例２）糖尿病予防作用
２型糖尿病モデル動物であるＫＫ−Ａｙマウス（雌、６週齢）を３群（各群５匹）に分けＡ群、Ｂ群、Ｃ群とし、表４に示す飼料をそれぞれ自由摂取にて４週間与えた。なお、基本飼料には、カゼイン２０重量％、コーンスターチ４９．９４８重量％、シュークロース１０重量％、セルロースパウダー５重量％、ＡＩＮ−９３ミネラル混合３．５重量％、ＡＩＮ−９３ビタミン混合１重量％、重酒石酸コリン０．２５重量％、第三ブチルヒドロキノン０．００２重量％及びＬ−シスチン０．３重量％の組成（合計９０重量％）である粉末精製飼料（ＡＩＮ−９３Ｇ改変、オリエンタル酵母株式会社）を用い、また、ＭＣＴにはアクターＭ−２（理研ビタミン株式会社）を用いた。
給餌期間中１週間毎にマウス尾静脈より少量採血し、簡易式血糖測定器グルテストエース（株式会社三和化学研究所）を用いて、血糖値を測定した。その結果を表５に示す。
Ａ群では、経時的にマウスの血糖値が上昇し、糖尿病の発症が認められた。Ｂ群では、Ａ群と同様にマウスの血糖値が上昇して糖尿病の発症が認められ、ＭＣＴの影響は認められなかった。一方、Ｃ群では、Ａ群及びＢ群と比較してマウスの血糖値の上昇が有意に抑制され、実施例１のＭＣＴ溶液による糖尿病予防作用が認められた。
この結果から、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤを含むＭＣＴ溶液は、糖尿病の予防に有効であることが示された。
（実施例３）内臓脂肪低減作用
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（雌、８週齢）に高脂肪・高糖分食を自由摂取にて８週間与え、食餌性の肥満状態にした。なお、高脂肪・高糖分食には、カゼイン２５重量％、コーンスターチ１４．８６９重量％、シュークロース２０重量％、大豆油２重量％、ラード１４重量％、牛脂１４重量％、セルロースパウダー５重量％、ＡＩＮ−９３ミネラル混合３．５重量％、ＡＩＮ−９３ビタミン混合１重量％、重酒石酸コリン０．２５重量％、第三ブチルヒドロキノン０．００６重量％及びＬ−シスチン０．３７５重量％の組成である半固形化精製飼料（オリエンタル酵母株式会社）を用いた。
その後マウスを３群（各群５匹）に分けＡ群、Ｂ群、Ｃ群とした。Ａ群にはＣＥ−２飼料（日本クレア株式会社）を、Ｂ群にはＭＣＴを３重量％添加したＣＥ−２飼料を、Ｃ群には実施例１のＭＣＴ溶液を３重量％添加したＣＥ−２飼料を、それぞれ自由摂取にて４週間与えた。なお、ＭＣＴにはアクターＭ−２（理研ビタミン株式会社）を用いた。一晩絶食したマウスをエーテル麻酔下で開腹し、腹大動脈から採血して屠殺した後、腸間膜脂肪、腎臓周辺脂肪、子宮周辺脂肪を摘出し、重量を測定した。なお、腸間膜脂肪重量、腎臓周辺脂肪重量、子宮周辺脂肪重量の和を腹腔内脂肪重量とした。その結果を表６に示す。
摂餌量及び体重は、Ａ群、Ｂ群、Ｃ群において差が認められなかった。Ｂ群では、Ａ群に比し、腸間膜脂肪重量、腎臓周辺脂肪重量、子宮周辺脂肪重量及び腹腔内脂肪重量に差は認められず、ＭＣＴの影響は認められなかった。一方、Ｃ群では、Ａ群及びＢ群に比して腸間膜脂肪重量が有意差はないが明らかに減少し、腎臓周辺脂肪重量、子宮周辺脂肪重量及び腹腔内脂肪重量が有意に減少した。すなわち、高脂肪・高糖分食の摂取によって蓄積した内臓脂肪が、実施例１のＭＣＴ溶液を含有する飼料を摂取することにより低減することが認められた。
この結果から、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤを含むＭＣＴ溶液は、内臓脂肪の低減に有効であることが示された。
（実施例４）ソフトカプセル剤の製造
実施例１のＭＣＴ溶液を、ロータリー式ソフトカプセル製造装置を用いてゼラチン皮膜に圧入し、内容量３５０ｍｇのソフトカプセル剤を得た。
（実施例５）マーガリンの製造
硬化綿実油（商品名：スノーライト、鐘淵化学工業株式会社）８０重量部、実施例１のＭＣＴ溶液２０重量部、無塩バター（四つ葉乳業株式会社）１０重量部に、グリセリンモノ脂肪酸エステル（商品名：エマルジーＭＳ、理研ビタミン株式会社）０．２重量部、レシチン０．２重量部を添加し、６０℃に加熱溶解し油相を調製した。
調製された油相８４．９重量部に撹拌しながら水１５．１重量部を添加し、２０分間乳化を行った後、コンビネーターで冷却捏和してマーガリンを得た。
（実施例６）濃縮乳の製造
実施例１のＭＣＴ溶液１０重量部を７０℃に加温溶解後、レシチン０．１重量部及びポリグリセリン脂肪酸エステル０．１重量部を順次溶解して油相を調製した。
脱脂粉乳２５重量部、グリセリン脂肪酸エステル０．１重量部、ショ糖脂肪酸エステル０．１重量部を６０℃の水６４．６重量部に溶解して水相を調製した。
調製した水相と油相を予備乳化した後、超高温瞬間（ＵＨＴ）殺菌機にて１４５℃で４秒間殺菌した。次いで真空冷却した後、均質化機により１０ＭＰａの圧力で均質化し、更に１０℃までプレート冷却して加工用濃縮乳を得た。
（実施例７）マヨネーズの製造
醸造酢１０重量部、食塩１重量部、砂糖０．６重量部、マスタード粉末０．２重量部、グルタミン酸ナトリウム０．２重量部を混合器の中に加え、１５〜２０℃下で攪拌・混合し水相を調製した。その後、米白絞油６８重量部、実施例１のＭＣＴ溶液１０重量部に卵黄１０重量部を加え、攪拌乳化して得た乳化液（１０〜１５℃）を少しずつ加えながら１５〜２０℃下で攪拌し、予備乳化した。次いで、コロイドミルを用いて仕上げ乳化を行いマヨネーズを得た。
【産業上の利用可能性】
本発明によれば、健康食品や保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）などの飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などに利用することができる油脂加工組成物を得ることができる。本発明の油脂加工組成物は、インスリン抵抗性の改善、並びに、内臓脂肪型肥満、２型糖尿病、高脂血症、高血圧症などの生活習慣病の予防及び／又は改善に有効である。
【技術分野】
本発明は、健康食品や保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）などの飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などに使用することができる生活習慣病予防及び／又は改善用の油脂加工組成物に関する。
【背景技術】
栄養過多や運動不足などの生活習慣の悪化による生活習慣病は大きな社会問題になっている。ここでの生活習慣病としては、内臓脂肪型肥満、２型糖尿病、高脂血症、高血圧症などが挙げられ、やがて動脈硬化症へと悪化していくマルチプル・リスク・ファクター症候群である。そこで、これらの生活習慣病を予防及び／又は改善する効果を有する組成物が望まれており、その組成物の形態は、日常的に摂取できる健康食品や保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）などの飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などが望まれている。
マルチプル・リスク・ファクター症候群は、ＲｅａｖｅｎによるシンドロームＸ（Ｄｉａｂｅｔｅｓ，３７，１５９５〜１６０７，１９８８）、Ｋａｐｌａｎによる死の四重奏（Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１４９，１５１４〜１５２０，１９８９）、ＤｅＦｒｏｎｚｏによるインスリン抵抗性症候群（Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ，１４，１７３〜１９４，１９９１）、松澤による内臓脂肪症候群（Ｄｉａｂｅｔｅｓ／Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｒｅｖｉｅｗｓ，１３，３〜１３，１９９７）と同じ病態概念であると考えられ、これら症候群に共通する原因因子はインスリン抵抗性であると考えられている。
近年、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γ（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ γ：ＰＰＡＲγ）のリガンドであるトログリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾンなどのチアゾリジン誘導体の研究により、これらの薬剤は２型糖尿病患者において、インスリン抵抗性を改善し、血糖低下作用を示すことが明らかにされており、インスリン抵抗性改善薬・２型糖尿病治療薬として臨床応用されている。さらに、これらのチアゾリジン誘導体は、皮下脂肪を増加させるが内臓脂肪を低減させること、血中遊離脂肪酸低下作用、血圧低下作用、抗炎症作用などを示すことが明らかにされている（Ｍａｒｔｅｎｓ，Ｆ．Ｍ，，ｅｔ ａｌ，Ｄｒｕｇｓ，６２，１４６３〜１４８０，２００２）。すなわち、ＰＰＡＲγリガンド活性を有する化合物は、インスリン抵抗性を改善し、内臓脂肪型肥満、２型糖尿病、高脂血症、高血圧症などの生活習慣病の予防及び／又は改善に有効である。
甘草はマメ科カンゾウ属（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ属）の植物であり、食用や医薬用（生薬）として利用されており、主な品種としてグリキルリーザ・グラブラ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｇｌａｂｒａ）、Ｇ．ウラレンシス（Ｇ．ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）、Ｇ．インフラータ（Ｇ．ｉｎｆｌａｔａ）などが挙げられる。いずれの品種にも親水性成分であるグリチルリチン（グリチルリチン酸）は含まれているが、疎水性成分のフラボノイドは品種によって特異的な化合物が含まれている。この品種特異的なフラボノイドは、甘草の品種同定に利用されることもある。
甘草から得られる抽出物のうち、甘草フラボノイドを多く含み、グリチルリチン含量が極微量である甘草疎水性抽出物は、マルチプル・リスク・ファクター症候群の予防及び／又は改善に有用であることが見出されている（ＷＯ０２／４７６９９）。さらに最新の研究において、甘草疎水性抽出物にＰＰＡＲγリガンド活性があり、その活性成分はフラボノイド、特にプレニルフラボノイドであることが見出されている（ＷＯ０３／０３７３１６）。中でもＧ．ウラレンシス由来の抽出物のＰＰＡＲγリガンド活性が高いこと、その抽出物に含まれるプレニルフラボノイドであるグリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤが高い活性を有する成分であることも見出されている（ＷＯ０３／０３７３１６）。なお、デヒドログリアスペリンＤはＷＯ０３／０３７３１６において新規に見出された化合物である。
一方、甘草疎水性フラボノイドは、水にほとんど溶解せず、また、有機溶媒抽出物のままでは固結し易く、着色の進行も早いなど、経時的変化が著しいという性質があるため、利用し難い。それを解決するために、甘草疎水性フラボノイドを中鎖脂肪酸トリグリセリドに溶解し、その甘草疎水性フラボノイド製剤を酸化防止剤、抗菌剤、酵素阻害剤、着色料、抗腫瘍剤、抗アレルギー剤、抗ウイルス剤等として利用している（特許２７９４４３３号）。しかし、特許２７９４４３３号では、化合物の限定がなく、また、生活習慣病の予防及び／又は改善剤としての利用も知られていない。
発明の要約
上記に鑑み、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤは、ＰＰＡＲγリガンド活性を有しており、インスリン抵抗性を改善し、内臓脂肪型肥満、２型糖尿病、高脂血症、高血圧症などの生活習慣病の予防及び／又は改善に有効である。しかし、該化合物は、水への溶解性や安定性が良くないことから、飲食品や医薬品などへの利用が困難であるという欠点があった。よって、本発明は、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を含有し、健康食品や保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）などの飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などに利用することができる生活習慣病予防及び／又は改善用の組成物を提供することを課題とする。
本発明者らは、上記実情に鑑み鋭意研究を行った結果、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤをある種の油脂に特異的に溶解することができ、その油脂への溶解によってこれら化合物の安定性が向上し、また、飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などへの加工性も向上することを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有することを特徴とする、生活習慣病予防及び／又は改善用の油脂加工組成物、並びに、インスリン抵抗性改善用の油脂加工組成物に関する。
また、本発明は、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有する組成物を用いた、生活習慣病を予防及び／又は改善する方法、インスリン抵抗性を改善する方法、高血糖を予防及び／又は改善する方法、並びに、腹腔内脂肪を減少させる方法に関する。
発明の詳細な開示
以下に、本発明の実施の形態を詳しく説明する。
本発明の生活習慣病予防及び／又は改善用の油脂加工組成物は、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有することを特徴としている。
また、本発明のインスリン抵抗性改善用の油脂加工組成物は、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有することを特徴としている。
本発明の油脂加工組成物は、該化合物の中でも、デヒドログリアスペリンＤを含み、かつグリシクマリン、グリシリン及びデヒドログリアスペリンＣからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を含むことが好ましい。さらに、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤを含み、かつグリシクマリン又はグリシリンのいずれかを含むことがより好ましい。とりわけ、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤをすべて含むのが最も好ましい。該化合物は、トログリタゾンやピオグリタゾンなどのチアゾリジン誘導体と同様に、ＰＰＡＲγリガンド活性を有していることから、インスリン抵抗性の改善、並びに、内臓脂肪型肥満、２型糖尿病、高脂血症、高血圧症などの生活習慣病の予防及び／又は改善に有効である。
本発明で使用されるグリシクマリン（ｇｌｙｃｙｃｏｕｍａｒｉｎ）及びグリシリン（ｇｌｙｃｙｒｉｎ）は、３−アリルクマリン（３−ａｒｙｌｃｏｕｍａｒｉｎ）に分類されるフラボノイドであり、下記一般式（１）で表される化合物である。
〔式中、Ｒ＝Ｈである場合はグリシクマリン、Ｒ＝ＣＨ３である場合はグリシリンである。〕
本発明で使用されるデヒドログリアスペリンＣ（ｄｅｈｙｄｒｏｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ Ｃ）及びデヒドログリアスペリンＤ（ｄｅｈｙｄｒｏｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ Ｄ）は、イソフラブ−３−エン（ｉｓｏｆｌａｖ−３−ｅｎｅ）に分類されるフラボノイドであり、下記一般式（２）で表される化合物である。
〔式中、Ｒ＝Ｈである場合はデヒドログリアスペリンＣ、Ｒ＝ＣＨ３である場合はデヒドログリアスペリンＤである。〕
グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤは、甘草の中でもグリキルリーザ・ウラレンシス（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）に特異的に含まれている成分であり、他品種にはほとんど含まれていない。ただし、Ｇ．ウラレンシスと他品種との雑種においては含まれる場合もある。該化合物は、ＯＤＳ（シリカゲル担体にオクタデシルシリル基を化学結合した充填剤）などの逆相カラムを用いた高速液体カラムクロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析により、他のフラボノイド成分と分離して検出、定量することができる。
本発明において、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤを得る方法は、特に限定されないが、Ｇ．ウラレンシス種の甘草より得ることができる。該化合物を甘草から得る場合、その方法は特に限定されないが、エタノール、酢酸エチル、アセトンなどの有機溶媒による抽出等が挙げられる。上記抽出で得られる甘草疎水性抽出物に該化合物は含まれ、抽出物のまま使用してもよいが、さらにカラム処理、脱臭処理、脱色処理などにより粗精製又は精製したものを使用してもよい。勿論、該化合物は、その他植物等の天然由来のもの、化学合成のもの、あるいは培養細胞などにより生合成したもののいずれも本発明において使用することができる。また、該化合物は、精製したものを使用することができるが、飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などとして不適当な不純物を含有しない限り粗精製したものを使用することもできる。
本発明で使用される油脂としては、グリセリン脂肪酸エステルを挙げることができる。グリセリン脂肪酸エステルとしては、中鎖脂肪酸トリグリセリドを含むグリセリン脂肪酸エステル、及び／又は、部分グリセリドを含むグリセリン脂肪酸エステルが好ましい。この場合、中鎖脂肪酸トリグリセリド、部分グリセリドの何れかが、グリセリン脂肪酸エステル全体の５０重量％以上を占めることが好ましく、７０重量％以上を占めることが特に好ましい。また、中鎖脂肪酸トリグリセリド５０重量％、部分グリセリド５０重量％を含むグリセリン脂肪酸エステルも用いることができる。
ここでの中鎖脂肪酸トリグリセリドは、炭素原子数６〜１２の脂肪酸を構成脂肪酸とするものである。その脂肪酸の構成比率は特に限定されないが、炭素原子数８〜１０の脂肪酸の構成比率は５０重量％以上が好ましく、７０重量％以上がより好ましい。とりわけ、２０℃での比重が０．９４〜０．９６、２０℃での粘度が２３〜２８ｃＰの中鎖脂肪酸トリグリセリドがさらに好ましい。また、中鎖脂肪酸トリグリセリドは、天然由来のものやエステル交換などにより調製したものなど、いずれも使用することができる。
ここでの部分グリセリドとは、ジグリセリド（１，２−ジアシルグリセロール、１，３−ジアシルグリセロール）又はモノグリセリド（１−モノアシルグリセロール、２−モノアシルグリセロール）である。部分グリセリドとしては、いずれを用いても良いし、両者が混合されたものを用いても良いが、加工性の観点からジグリセリドが好ましい。また、部分グリセリドは、天然由来のものやエステル交換などにより調製したものなど、いずれも使用することができる。なお、部分グリセリドとしては、構成脂肪酸の炭素原子数が６〜２４であるものが好ましい。
さらに、本発明で使用される部分グリセリドは、中鎖脂肪酸の部分グリセリドを用いることもできる。
本発明において、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤを油脂に溶解する方法は、特に限定されず、通常の撹拌、混合などの操作により実施できる。該化合物を含む抽出物、あるいは該化合物の粗精製品を用いる場合、該化合物以外の不純物が含まれているため、撹拌、混合などの操作により該化合物を油脂に溶解した後に、濾過、遠心分離などの操作により油脂に不溶な不純物を除去することが望ましい。該化合物の精製品を用いる場合、容易に均一な溶液を得ることができる。また、該化合物を含む抽出物、あるいは該化合物の粗精製品を用いる場合、予めエタノールなどの有機溶媒に溶解し、その溶液と油脂を混合した後に、有機溶媒を留去する方法を用いることもできる。
一般に、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤは、粉末状態では４０℃以上において不安定であり、エタノールなどの有機溶媒での溶液状態では２５℃以上において不安定である。しかし、該化合物を本発明で使用される油脂に溶解した状態では２５℃以上においても安定である。
本発明の生活習慣病予防及び／又は改善用の油脂加工組成物は、生活習慣病のなかでも内臓脂肪型肥満、２型糖尿病、高脂血症及び高血圧症からなる群より選ばれた少なくとも１つの疾患に好ましく用いることができ、内臓脂肪型肥満及び／又は２型糖尿病により好ましく用いることができる。より具体的には、高血糖の予防及び／又は改善、腹腔内脂肪の減少に好ましく用いることができる。
本発明の生活習慣病予防及び／又は改善用の油脂加工組成物、並びに、インスリン抵抗性改善用の油脂加工組成物は、その形態は特に限定されず、健康食品や保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）などの飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などに利用することができる。例えば、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂をそのまま単独で、調理用、ソフトカプセル製剤用、ローション用などとして利用することができる。また、油性の対象物と自由に混和することができるため、目的に応じて他の油脂と混合して物性を調整することが可能である。この場合、他の油脂は食用又は医薬用であることが好ましく、その種類及び使用量は製品に要求される個々の物性や使用温度域などの諸条件を考慮して決定され、その種類及び使用量を調整することにより稠度や融点などの特性をコントロールすることができる。他の油脂としては、例えば、コーン油、ナタネ油、ハイエルシンナタネ油、大豆油、オリーブ油、紅花油、綿実油、ヒマワリ油、米糠油、パーム油、パーム核油などの植物油；魚油、牛脂、豚脂、乳脂、卵黄油などの動物油；これらを原料として分別、水添、エステル交換などを行った油脂、これらの混合油等を使用することができる。
このようにして得られる本発明の油脂加工組成物は、サラダ油やフライ油などの液状油脂、マーガリンやショートニングなどの可塑性油脂としての利用や、油中水型エマルジョン、水中油型エマルジョン等へ利用することができる。また、これらを原材料にして製造される飲食用の油脂加工組成物として、チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ビスケット、クラッカーなどの菓子類；アイスクリーム、氷菓などの冷菓類；乳飲料、清涼飲料、栄養ドリンク、美容ドリンクなどの飲料；うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類；蒲鉾、竹輪、半片などの練り製品；ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料；パン、ハム、スープ、各種レトルト食品、各種冷凍食品などが例示され、ペットフードや家畜飼料などへも利用することができる。
さらに、栄養強化を目的として、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅなどの各種ビタミン類を添加、併用してもよいし、呈味剤としての各種塩類、各種香料、乳関連物質、例えば、全脂粉乳、脱脂粉乳、発酵乳、乳脂肪などを添加、併用してもよい。また、上記以外の原材料として、通常の油中水型エマルジョン、水中油型エマルジョン等に使用される酸化防止剤、着色剤などを全て使用することができる。
本発明の生活習慣病予防及び／又は改善用の油脂加工組成物、並びに、インスリン抵抗性改善用の油脂加工組成物におけるグリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤの含量は、該化合物の生活習慣病予防及び／又は改善の効果を発揮するためには、該化合物の総量として好ましくは成人一人一日当たり０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重を摂取できる量を油脂加工組成物中に含んでいることが望ましい。
また、本発明の生活習慣病を予防及び／又は改善する方法、インスリン抵抗性を改善する方法、高血糖を予防及び／又は改善する方法、並びに、腹腔内脂肪を減少させる方法は、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有する上記組成物を用いることを特徴とする。
【発明を実施するための最良の形態】
以下に、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
西北産甘草（Ｇ．ウラレンシス）３００ｋｇからエタノール抽出（１８４０Ｌのエタノールに浸し、３５〜４５℃、遮光条件下で２時間抽出する操作を２度繰り返し）、得られた抽出液を併せて、次いで濃縮、晶析、濾別、乾燥、粉砕により甘草疎水性抽出物１３．４６ｋｇを得た。
上記の甘草疎水性抽出物２０ｇと中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）であるアクターＭ−２（理研ビタミン株式会社：脂肪酸組成はＣ８：Ｃ１０＝９９：１）１８０ｇを混合し、約６０℃に保温しながら約１時間攪拌した。その後、遠心分離により不溶分を除去し、オイル層をＭＣＴ溶液（１８９．４ｇ）として得た。
得られたＭＣＴ溶液をＨＰＬＣ用メタノールにて１００倍希釈し、下記の条件にてＨＰＬＣ分析した結果、ＭＣＴ溶液１ｇ当たりグリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤをそれぞれ２．０ｍｇ、１．４ｍｇ、６．８ｍｇ、５．５ｍｇ含んでいた。
ＨＰＬＣ分析条件
分析カラムにはＪ’ｓｐｈｅｒｅ ＯＤＳ−Ｈ８０，４．６×２５０ｍｍ（ワイエムシィ社製）をカラム温度４０℃で用いた。移動相は、１０ｍＭリン酸水溶液に対してアセトニトリルの比率を分析開始から１５分まで３５％で一定とし、１５分以降６５分後に７０％となるように一定比率で上昇させ、６５分から７０分まで７０％で一定とするグラジェント条件で、流速１ｍｌ／分とした。注入量は２０μｌとし、検出波長は３５０ｎｍとした。保持時間は、グリシクマリンが３３．５分、デヒドログリアスペリンＣが３８．０分、グリシリンが４９．２分、デヒドログリアスペリンＤが５６．５分であった。
前記のＭＣＴ溶液をそれぞれ４℃、２５℃、４０℃にて４週間保存し、１週間毎にグリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤの含量を定量した。保存安定性は、保存開始時のそれぞれの含量を１００％とし、保存後／保存開始時の含量の比で表した。
４℃保存の結果を表１に、２５℃保存の結果を表２に、４０℃保存の結果を表３に示す。なお、表中の化合物１はグリシクマリン、化合物２はグリシリン、化合物３はデヒドログリアスペリンＣ、化合物４はデヒドログリアスペリンＤを表す。
（比較例１）
実施例１で用いた甘草疎水性抽出物をアクターＭ−２の代わりにエタノールに溶解して１００ｍｇ／ｍｌのエタノール溶液を得た。このエタノール溶液をＨＰＬＣ用メタノールにて１００倍希釈し、ＨＰＬＣ分析した結果、エタノール溶液１ｍｌ当たりグリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤをそれぞれ２．４ｍｇ、１．６ｍｇ、７．４ｍｇ、５．８ｍｇ含んでいた。
このエタノール溶液を用い、実施例１と同様に保存安定性試験を行った。その結果を表１〜表３に示す。
４℃保存においては、化合物１〜４はいずれもＭＣＴ溶液とエタノール溶液で安定であった。２５℃保存においては、化合物１〜４はいずれもＭＣＴ溶液で安定であるのに対し、エタノール溶液では特に化合物３が不安定であった。４０℃保存においては、化合物１〜４はいずれもＭＣＴ溶液で安定であるのに対し、エタノール溶液では特に化合物３及び４が不安定であった。
これらの結果から、エタノール溶液では化合物３及び４は２５〜４０℃保存で不安定であるが、ＭＣＴ溶液では保存温度にかかわらず化合物１〜４のいずれも安定であることが示された。
（実施例２）糖尿病予防作用
２型糖尿病モデル動物であるＫＫ−Ａｙマウス（雌、６週齢）を３群（各群５匹）に分けＡ群、Ｂ群、Ｃ群とし、表４に示す飼料をそれぞれ自由摂取にて４週間与えた。なお、基本飼料には、カゼイン２０重量％、コーンスターチ４９．９４８重量％、シュークロース１０重量％、セルロースパウダー５重量％、ＡＩＮ−９３ミネラル混合３．５重量％、ＡＩＮ−９３ビタミン混合１重量％、重酒石酸コリン０．２５重量％、第三ブチルヒドロキノン０．００２重量％及びＬ−シスチン０．３重量％の組成（合計９０重量％）である粉末精製飼料（ＡＩＮ−９３Ｇ改変、オリエンタル酵母株式会社）を用い、また、ＭＣＴにはアクターＭ−２（理研ビタミン株式会社）を用いた。
給餌期間中１週間毎にマウス尾静脈より少量採血し、簡易式血糖測定器グルテストエース（株式会社三和化学研究所）を用いて、血糖値を測定した。その結果を表５に示す。
Ａ群では、経時的にマウスの血糖値が上昇し、糖尿病の発症が認められた。Ｂ群では、Ａ群と同様にマウスの血糖値が上昇して糖尿病の発症が認められ、ＭＣＴの影響は認められなかった。一方、Ｃ群では、Ａ群及びＢ群と比較してマウスの血糖値の上昇が有意に抑制され、実施例１のＭＣＴ溶液による糖尿病予防作用が認められた。
この結果から、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤを含むＭＣＴ溶液は、糖尿病の予防に有効であることが示された。
（実施例３）内臓脂肪低減作用
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（雌、８週齢）に高脂肪・高糖分食を自由摂取にて８週間与え、食餌性の肥満状態にした。なお、高脂肪・高糖分食には、カゼイン２５重量％、コーンスターチ１４．８６９重量％、シュークロース２０重量％、大豆油２重量％、ラード１４重量％、牛脂１４重量％、セルロースパウダー５重量％、ＡＩＮ−９３ミネラル混合３．５重量％、ＡＩＮ−９３ビタミン混合１重量％、重酒石酸コリン０．２５重量％、第三ブチルヒドロキノン０．００６重量％及びＬ−シスチン０．３７５重量％の組成である半固形化精製飼料（オリエンタル酵母株式会社）を用いた。
その後マウスを３群（各群５匹）に分けＡ群、Ｂ群、Ｃ群とした。Ａ群にはＣＥ−２飼料（日本クレア株式会社）を、Ｂ群にはＭＣＴを３重量％添加したＣＥ−２飼料を、Ｃ群には実施例１のＭＣＴ溶液を３重量％添加したＣＥ−２飼料を、それぞれ自由摂取にて４週間与えた。なお、ＭＣＴにはアクターＭ−２（理研ビタミン株式会社）を用いた。一晩絶食したマウスをエーテル麻酔下で開腹し、腹大動脈から採血して屠殺した後、腸間膜脂肪、腎臓周辺脂肪、子宮周辺脂肪を摘出し、重量を測定した。なお、腸間膜脂肪重量、腎臓周辺脂肪重量、子宮周辺脂肪重量の和を腹腔内脂肪重量とした。その結果を表６に示す。
摂餌量及び体重は、Ａ群、Ｂ群、Ｃ群において差が認められなかった。Ｂ群では、Ａ群に比し、腸間膜脂肪重量、腎臓周辺脂肪重量、子宮周辺脂肪重量及び腹腔内脂肪重量に差は認められず、ＭＣＴの影響は認められなかった。一方、Ｃ群では、Ａ群及びＢ群に比して腸間膜脂肪重量が有意差はないが明らかに減少し、腎臓周辺脂肪重量、子宮周辺脂肪重量及び腹腔内脂肪重量が有意に減少した。すなわち、高脂肪・高糖分食の摂取によって蓄積した内臓脂肪が、実施例１のＭＣＴ溶液を含有する飼料を摂取することにより低減することが認められた。
この結果から、グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤを含むＭＣＴ溶液は、内臓脂肪の低減に有効であることが示された。
（実施例４）ソフトカプセル剤の製造
実施例１のＭＣＴ溶液を、ロータリー式ソフトカプセル製造装置を用いてゼラチン皮膜に圧入し、内容量３５０ｍｇのソフトカプセル剤を得た。
（実施例５）マーガリンの製造
硬化綿実油（商品名：スノーライト、鐘淵化学工業株式会社）８０重量部、実施例１のＭＣＴ溶液２０重量部、無塩バター（四つ葉乳業株式会社）１０重量部に、グリセリンモノ脂肪酸エステル（商品名：エマルジーＭＳ、理研ビタミン株式会社）０．２重量部、レシチン０．２重量部を添加し、６０℃に加熱溶解し油相を調製した。
調製された油相８４．９重量部に撹拌しながら水１５．１重量部を添加し、２０分間乳化を行った後、コンビネーターで冷却捏和してマーガリンを得た。
（実施例６）濃縮乳の製造
実施例１のＭＣＴ溶液１０重量部を７０℃に加温溶解後、レシチン０．１重量部及びポリグリセリン脂肪酸エステル０．１重量部を順次溶解して油相を調製した。
脱脂粉乳２５重量部、グリセリン脂肪酸エステル０．１重量部、ショ糖脂肪酸エステル０．１重量部を６０℃の水６４．６重量部に溶解して水相を調製した。
調製した水相と油相を予備乳化した後、超高温瞬間（ＵＨＴ）殺菌機にて１４５℃で４秒間殺菌した。次いで真空冷却した後、均質化機により１０ＭＰａの圧力で均質化し、更に１０℃までプレート冷却して加工用濃縮乳を得た。
（実施例７）マヨネーズの製造
醸造酢１０重量部、食塩１重量部、砂糖０．６重量部、マスタード粉末０．２重量部、グルタミン酸ナトリウム０．２重量部を混合器の中に加え、１５〜２０℃下で攪拌・混合し水相を調製した。その後、米白絞油６８重量部、実施例１のＭＣＴ溶液１０重量部に卵黄１０重量部を加え、攪拌乳化して得た乳化液（１０〜１５℃）を少しずつ加えながら１５〜２０℃下で攪拌し、予備乳化した。次いで、コロイドミルを用いて仕上げ乳化を行いマヨネーズを得た。
【産業上の利用可能性】
本発明によれば、健康食品や保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）などの飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などに利用することができる油脂加工組成物を得ることができる。本発明の油脂加工組成物は、インスリン抵抗性の改善、並びに、内臓脂肪型肥満、２型糖尿病、高脂血症、高血圧症などの生活習慣病の予防及び／又は改善に有効である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有することを特徴とする生活習慣病予防及び／又は改善用の油脂加工組成物。
【請求項２】
グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有することを特徴とするインスリン抵抗性改善用の油脂加工組成物。
【請求項３】
グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を、その総量として成人一人一日当たり０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を摂取できる量を含むことを特徴とする請求の範囲第１又は２項記載の油脂加工組成物。
【請求項４】
油脂が中鎖脂肪酸トリグリセリド及び／または部分グリセリドを含むグリセリン脂肪酸エステルである、請求の範囲第１〜３項のいずれか１項記載の油脂加工組成物。
【請求項５】
油脂が中鎖脂肪酸トリグリセリドを５０重量％以上含むグリセリン脂肪酸エステルである、請求の範囲第４項記載の油脂加工組成物。
【請求項６】
油脂が部分グリセリドを５０重量％以上含むグリセリン脂肪酸エステルである、請求の範囲第４項記載の油脂加工組成物。
【請求項７】
生活習慣病が内臓脂肪型肥満、２型糖尿病、高脂血症及び高血圧症からなる群より選ばれた少なくとも１種である、請求の範囲第１項記載の油脂加工組成物。
【請求項８】
生活習慣病が内臓脂肪型肥満及び／又は２型糖尿病である、請求の範囲第１項記載の油脂加工組成物。
【請求項９】
飲食用である請求の範囲第１〜８項のいずれか１項記載の油脂加工組成物。
【請求項１０】
医薬用である請求の範囲第１〜８項のいずれか１項記載の油脂加工組成物。
【請求項１１】
グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物が、グリキルリーザ・ウラレンシス（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）由来である請求の範囲第１〜１０項のいずれか１項記載の油脂加工組成物。
【請求項１２】
グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有する組成物を用いて生活習慣病を予防及び／又は改善する方法。
【請求項１３】
グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有する組成物を用いてインスリン抵抗性を改善する方法。
【請求項１４】
グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有する組成物を用いて高血糖を予防及び／又は改善する方法。
【請求項１５】
グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有する組成物を用いて腹腔内脂肪を減少させる方法。
【請求項１】
グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有することを特徴とする生活習慣病予防及び／又は改善用の油脂加工組成物。
【請求項２】
グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有することを特徴とするインスリン抵抗性改善用の油脂加工組成物。
【請求項３】
グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を、その総量として成人一人一日当たり０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を摂取できる量を含むことを特徴とする請求の範囲第１又は２項記載の油脂加工組成物。
【請求項４】
油脂が中鎖脂肪酸トリグリセリド及び／または部分グリセリドを含むグリセリン脂肪酸エステルである、請求の範囲第１〜３項のいずれか１項記載の油脂加工組成物。
【請求項５】
油脂が中鎖脂肪酸トリグリセリドを５０重量％以上含むグリセリン脂肪酸エステルである、請求の範囲第４項記載の油脂加工組成物。
【請求項６】
油脂が部分グリセリドを５０重量％以上含むグリセリン脂肪酸エステルである、請求の範囲第４項記載の油脂加工組成物。
【請求項７】
生活習慣病が内臓脂肪型肥満、２型糖尿病、高脂血症及び高血圧症からなる群より選ばれた少なくとも１種である、請求の範囲第１項記載の油脂加工組成物。
【請求項８】
生活習慣病が内臓脂肪型肥満及び／又は２型糖尿病である、請求の範囲第１項記載の油脂加工組成物。
【請求項９】
飲食用である請求の範囲第１〜８項のいずれか１項記載の油脂加工組成物。
【請求項１０】
医薬用である請求の範囲第１〜８項のいずれか１項記載の油脂加工組成物。
【請求項１１】
グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物が、グリキルリーザ・ウラレンシス（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）由来である請求の範囲第１〜１０項のいずれか１項記載の油脂加工組成物。
【請求項１２】
グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有する組成物を用いて生活習慣病を予防及び／又は改善する方法。
【請求項１３】
グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有する組成物を用いてインスリン抵抗性を改善する方法。
【請求項１４】
グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有する組成物を用いて高血糖を予防及び／又は改善する方法。
【請求項１５】
グリシクマリン、グリシリン、デヒドログリアスペリンＣ及びデヒドログリアスペリンＤからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を溶解している油脂を含有する組成物を用いて腹腔内脂肪を減少させる方法。
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６４８３０
【国際公開日】平成１６年８月５日（２００４．８．５）
【発行日】平成１８年５月１８日（２００６．５．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５０８１２６（Ｐ２００５−５０８１２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０００５９９
【国際出願日】平成１６年１月２３日（２００４．１．２３）
【出願人】（００００００９４１）株式会社カネカ (3,932)
【Ｆターム（参考）】
【国際公開日】平成１６年８月５日（２００４．８．５）
【発行日】平成１８年５月１８日（２００６．５．１８）
【国際特許分類】
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０００５９９
【国際出願日】平成１６年１月２３日（２００４．１．２３）
【出願人】（００００００９４１）株式会社カネカ (3,932)
【Ｆターム（参考）】
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