肥満防止剤
【課題】生体内の脂質代謝を改善し、蓄積された脂肪を能動的に減少させ、健康的に体重を減少させる肥満防止剤を提供する。
【解決手段】本わさび、好ましくは本わさび葉等のアブラナ科植物の植物体、もしくはアブラナ科植物を粉砕処理、すりおろし処理、溶媒による抽出処理、乾燥処理を単独で、または組み合わせて行うことにより得られる抽出物を有効成分として含有し、生体内の脂質代謝を改善して体内の脂肪量・体重を健康的に低減させることから構成される。
【解決手段】本わさび、好ましくは本わさび葉等のアブラナ科植物の植物体、もしくはアブラナ科植物を粉砕処理、すりおろし処理、溶媒による抽出処理、乾燥処理を単独で、または組み合わせて行うことにより得られる抽出物を有効成分として含有し、生体内の脂質代謝を改善して体内の脂肪量・体重を健康的に低減させることから構成される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はアブラナ科植物およびその成分を摂取することにより、肥満を予防または改善する肥満防止剤に係り、特に生体内の脂質代謝を改善して生体内脂肪を減少させ、体重を減少させる肥満防止剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在わが国は７４０万人の糖尿病患者、１５００万人の高血圧症および２３００万人の高脂血症患者を抱え、生活習慣病全体での推定患者数は数千人に上る。これら生活習慣病の原因としては、食習慣が動物性脂肪など高カロリー摂取になっていることや、慢性的な運動不足が大きいと指摘されている。これらの生活習慣が続くことにより、体脂肪量が増大し、体重増加および肥満につながると考えられる。
【０００３】
このような状態を放置しておくと、糖尿病や動脈硬化などを引き起こし、虚血性心疾患や脳血管障害により死に至ることもある。こうした疾患を未然に防ぐことは非常に重要である。
【０００４】
一般に肥満の予防・改善には、適度な運動と摂取カロリーのコントロールが奨励されるが、現代の多忙な生活習慣ではなかなか思うような運動ができないのが現状である。そのため、容易な経口摂取により肥満を予防・改善する素材の開発が望まれていた。
【０００５】
ダイエット素材として一般に用いられているものに、食物繊維が挙げられる。食物繊維は食物の腸内滞留時間を短縮させ、さらに糖質の吸収を抑制し血糖値の上昇を穏やかにする。結果として、糖質の中性脂肪への変換を促進するインシュリン分泌を低減させ、脂肪の蓄積を抑制する。これらの効果を期待した素材として、グルコマンナン（特開２００２−１８６４６９）、プリックリィペアカクタス（特開２００３−７０４４４）等が考案されている。
【０００６】
また、脂肪の消化吸収に必須の酵素であるリパーゼの活性を阻害する素材として、柑橘類（特開２００５−４０１０７）、カトゥアバ（特開２００４−２９２３６８）等が考案されている。
【０００７】
しかし、これらの素材はいずれも糖質や脂質の消化・吸収を抑制し、体内への蓄積を防ぐものであり、吸収され、蓄積された脂肪を能動的に燃焼または排泄させるものではない。
【０００８】
そこで、日常的な食習慣の中で無理なく継続的に摂取でき、能動的に体内の脂肪を減少
させ、体重を健康的に低減させる素材が望まれていた。
【０００９】
一般に、体内の脂肪細胞が肥大してくるとぺプチドホルモンの一種のレプチンが分泌され、脳の視床下部にある摂食中枢に作用し食欲を抑制する一方、褐色脂肪細胞にも作用しエネルギー代謝の増大を促すと考えられている。肥満の予防・改善には、レプチンやその他の脂質代謝ホルモンや褐色脂肪細胞の働きの制御が重要である。
【００１０】
本発明者らは鋭意研究の結果、アブラナ科植物の植物体、もしくはその抽出物に肥満予防・改善効果、特に生体内の脂質代謝を改善し、体重を低減させる効果があることを見出し、本発明を完成するに至った。
【特許文献１】特開２００２−１８６４６９号公報
【特許文献２】特開２００３−７０４４４号公報
【特許文献３】特開２００４−１５９６３７号公報
【特許文献４】特開２００５−４０１０７号公報
【特許文献５】特開２００４−２９２３６８号公報
【特許文献６】特開２００５−８５７２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の課題は生体内の脂質代謝を改善し、蓄積された脂肪を能動的に減少させて健康的に体重を減少させ、上述の公知技術に存する欠点を改良した肥満防止剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上述の目的を達成するため、本発明の肥満防止剤によれば、アブラナ科植物の植物体またその抽出物を有効成分として含有し、生体内の脂質代謝を改善し、あるいは脂肪の分解を阻害して吸収を抑制して蓄積された脂肪を能動的に減少させ、健康的に体重を減少させることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１３】
本発明はアブラナ科植物の植物体あるいはその抽出物を有効成分として含有し、これを食品として、あるいは医薬品や医薬部外品として摂取するととにより生体内の脂質代謝を改善し、健康的に体重を低減させるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明を具体的に詳述する。
【００１５】
本発明では用いられるアブラナ科植物は、本わさび、西洋わさび、キャベツ、クレソン、芽キャベツ、カリフラワー、大根、からみ大根、ナタネ、ブロッコリー、タカナ、カラシナ、カブ、ハクサイが挙げられる。その中でも本わさびが好ましく、さらに本わさびの葉が特に好ましい。本発明においては、これらアブラナ科植物は単独で、あるいは複数種組み合わせて用いる。
【００１６】
上述のアブラナ科植物の有効成分は、植物体の粉砕またはすりおろし等の物理的処理手段により、あるいは水、メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、ジクロロエタン等の溶媒抽出処理手段により、さらには、熱風乾燥、凍結乾燥等の乾燥処理手段により、またはこれらの処理を組み合わせることにより得られる。
【００１７】
本発明に用いられるアブラナ科植物の有効成分は、アピゲニンやルテオリン、ケンフェロールといったフラボノイド類やそれらの配糖体・多量体、フェルラ酸やシナピン酸といったフェニルプロパノイド類やそれらの配糖体・多量体、その他のポリフェノール類を含む。
【００１８】
ポリフェノール類以外の有効成分としては、イソチオシアネート類、具体的には、アリルイソチオシアネート、第２級ブチルイソチオシアネート、３−ブテニルイソチオシアネート、４−ペンテニルイソチオシアネート、５−ヘキセニルイソチオシアネート、５−メチルチオペンチルイソチオシアネート、６−メチルチオヘキシルイソチオシアネート、７−メチルチオヘプチルイソチオシアネート、８−メチルチオオクチルイソチオシアネート、４−メチルスルフィニルブチルイソチオシアネート、５−メチルスルフィニルペンチルイソチオシアネート、６−メチルスルフィニルヘキシルイソチオシアネート、７−メチルスルフィニルヘプチルイソチオシアネート、８−メチルスルフィニルオクチルイソチオシアネートである。
【００１９】
さらに、有効成分として、５−メトキシーインドール−３−アセトニトリル等のインドール類、クロロフィル等を含有する。
【００２０】
本発明の肥満防止剤は、それ単独で摂取することも可能であるが、各種飲食品あるいは医薬品に添加して使用することもできる。具体的には、清涼飲料水、茶飲料、ドリンク剤、アルコール飲料等の液体食品、菓子、パン類、麺類、調味料等の固形食品、粉末状、顆粒状、カプセル状、錠剤等の医薬品・医薬部外品等に添加することができる。
【実施例１】
【００２１】
本わさび葉に含まれるポリフェノール類の抽出
本わさび葉抽出物の調製を行った。細かく裁断した本わさびは４ｋｇに５０％エタノール１６ｋｇを加え、攪拌しつつ１時間抽出を行った。抽出液をろ過し、エバポレーターで濃縮後凍結乾燥したものをフードミルで粉砕し、７０ｇの緑色粉末を得た。これを本わさび葉抽出物として試験に供した。
【００２２】
本わさび葉抽出物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に供した結果を図１に示す。図１に示されるように、本わさび葉抽出物から複数種のフラボノイド類とフェニルプロパノイド類が検出された。
【実施例２】
【００２３】
本わさび根茎に含まれるイソチオシアネート類の抽出
本わさび根茎抽出物の調製を行った。すりおろした本わさび根茎１ｋｇをステンレス製の密封容器内に入れ、２５℃で３時間保温し、イソチオシアネート類を発生させた。その後、この容器内の空気を真空ポンプで吸引しながら、１時間辛味成分を除去した。辛味を除去した本わさび根茎に５０％エタノール３リットルを加え、１時間室温で攪拌抽出した後、加圧ろ過器でろ過し、抽出液を得た。この抽出液をエバポレーターで濃縮後、凍結乾燥したものをフードミルにて粉砕し、５５ｇの茶褐色粉末を得た。これを本わさび根茎抽出物として試験に供した。
【００２４】
本わさび葉抽出物をマススペクトルガスクロマトグラフィー（ＧＣＭＳ）に供した結果を図２に示す。図２に示されるように、本わさび葉抽出物から複数種のイソチオシアネート類が複検出された。
【実施例３】
【００２５】
食事誘発肥満ラットを用いた抗肥満作用の検討
実施例１に記載の方法で本わさび葉抽出物を得、また、実施例２に記載の方法で本わさび根茎抽出物を得た。
【００２６】
Std Wister系ラット（オス、６齢週）３０匹をステンレス製個別ケージで２８日間飼育した。動物室の温度は２４±１℃に保ち、湿度５０％、明期０８：００−２０：００、暗期２０：００−０８：００で飼育した。
【００２７】
ラットは平均体重が均等になるように高脂肪食群（対照群）、実施例１の本わさび葉抽出物を５％含有した高脂肪食群（実施例１群）、実施例２の本わさび根茎抽出物を５％含有した高脂肪食群（実施例２群）に分け、飼料組成は表１に示した。飼料摂取量は全ての群で等しくなるように、制限摂取させた。
【００２８】
【表１】
【００２９】
体重および飼料摂取量は週に３回測定し、水は自由摂取とした。飼育２８日目に一晩絶食後、エーテル麻酔下で断頭により屠殺した。
【００３０】
試験に供したラットの解剖を行った。膵臓、腎臓、肝臓、ひ腹筋、鼠径周囲脂肪組織、腎周囲脂肪組織、副精巣周囲脂肪組織、褐色脂肪組織を摘出し、秤量した。肝臓の一部は中性緩衝ホルマリン溶液に入れ病理標本とした。他の臓器はすばやく液体窒素で凍結し、血清とともに−８０℃で保存した。
【００３１】
摘出した肝臓の中性脂質を測定した。肝臓２．５ｇにFolch液を約１５ｍ添加し、ホモジネートした。よく混濁したホモジ液を５０ｍｌメスフラスコで１日抽出した。抽出後、Folch液でメスアップし、混合した後、Ｎo.2のろ紙でろ過し試料とした。対象群は１５０μｌ、他の群は１２０μｌを試験管に入れ、室温で放置して溶媒を揮発させた。
【００３２】
肝臓中のコレステロール、トリアシルグリセロール、およびリン脂質濃度を、それぞれコレステロール ＣＩＩキットワコー、トリグリセライドＧ−テストワコー、リン脂質テストワコーの各キットにて測定した。
【００３３】
血清中のコレステロール、トリアシルグリセロール、リン脂質、尿素窒素、クレアチニン、遊離脂肪酸、ＧＯＴ、ＧＰＴの各濃度を、それぞれコレステロールＣＩＩキットワコー、トリグリセライドＧ−テストワコー、リン脂質テストワコー、尿素窒素Ｂテストワコー、クレアチニンーテストワコー、ＮＥＦＡ−Ｃテストワコー、ＧＯＴ−ＵＶテストワコー、ＧＰＴ−ＵＶテストワコーの各キットにて測定した。
【００３４】
血清中のアディポネクチン、レプチン、およびTNF−αの濃度を、それぞれMouse/rat adiponectine ELISA kit, Rat Leptin ELISA kit, Yanaihara, Rat TNF−α ELISA kit, TFBの各キットにて測定した。
【００３５】
褐色脂肪組織のβ３−アドレナリンレセプター（以下、β３−ＡＲと記す）、ペルオキシゾーム増殖促進受容体γ（以下、ＰＰＡＲγと記す）、ＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質α（以下、Ｃ／ＥＢＰαと記す）、ＰＰＡＲγコアクチベーター１（ＰＧＣ−１）、中鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ（以下、ＭＣＡＤと記す）のｍＲＮＡ発現量と、白色脂肪組織のＭＣＡＤのｍＲＮＡ発現量を、リアルタイムＰＣＲ（ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ (R)7000 Sequence Detection System）で測定した。
【００３６】
次に結果を示す。摂取制限のため、飼育期間中の摂食量は３群間に差は見られなかった。実施例１群および実施例２群の最終体重は対照群と比較して有意に少なかった。（表２）
【００３７】
【表２】
【００３８】
膵臓、腎臓、肝臓、ひ腹筋重量は３群間で有意差はなかった。腎周囲白色脂肪組織、副精巣周囲白色脂肪組織重量に３群間で有意差はなかったが、実施例１群および実施例２群の鼠径周囲白色脂肪組織は対照群と比較して減少傾向にあった。実施例１群および実施例２群の褐色脂肪組織は対照群と比較して有意に増加した。（表３）。
【００３９】
【表３】
【００４０】
血清中の総コレステロール、トリアシルグリセロール、リン脂質、遊離脂肪酸、クレアチニン、尿素窒素、ＧＰＴ、ＧＯＴ濃度は３群間で有意差はなかった。実施例１群の肝臓ＴＢＡＲＳ、腎臓ＴＢＡＲＳ濃度は、対照群と比較して減少傾向にあった。(表４)
【００４１】
【表４】
【００４２】
血清中のTNF−α、アディポネクチンの濃度は３群間で大差はなかったが、実施例１群および実施例２群のレプチンは増加傾向にあった。（表５）
【００４３】
【表５】
【００４４】
褐色脂肪組織のβ３−ＡＲ（図３）、ＰＰＡＲγ（図４）、ＰＧＣ−１（図５）、ＭＣＡＤ（図６）が有意に増加し、Ｃ／ＥＢＰα（図７）が増加傾向にあった。白色脂肪組織のＭＣＡＤ（図８）は増加傾向にあった。
【００４５】
本試験で用いた食事誘発肥満ラットは、生活習慣によって誘発されるヒト内臓型肥満と類似しており、本わさび葉が生活習慣病による肥満を予防・改善する肥満予防食品として有効であることが確認された。
【実施例４】
【００４６】
インヴィトロでのリパーゼ阻害活性の測定を行った。本わさび葉、西洋わさび葉、本わさび根茎各２ｇをそれぞれ凍結乾燥し、粉砕した。
【００４７】
上記試料にヘキサン１０ｍｌを加え、ガラス・ポリトロンホモジナイザーでホモジネートした。これを室温で２４時間放置した。これをろ過後、濃縮しテトラヒドロフランを１０ｍｌ加え脂溶性画分とした。
【００４８】
ろ過後の残渣にテトラヒドロフランを１０ｍｌ加えて攪拌し、さらに２４時間抽出し、この上清を水溶性画分とした。
【００４９】
上記試料０．０１ｍｇを含む１００μｌテトラヒドロフランにテトラヒドロフラン８５
μｌ、０．１M Macilvan 緩衝液PH７．０を４００μｌ加え、小型試験管で攪拌した。
【００５０】
テトラヒドロフランに溶解した０．１５ｍＭ ４−methylumbelliferon oleate (4-MU oleate)を加えさらに攪拌し、プレインキュベートした０．０５ｍｌ（０．０５units）のPorisine pancreatic lipaseを加え、３７℃で２０分間加熱した後に、０．１Ｎ塩酸を加え反応を停止した。これにクエン酸緩衝液を２ｍｌ加え、ＰＨ４．３に調製した。
【００５１】
蛍光光度計（波長４５０ｎｍ、励起波長３２０ｎｍ）にてリパーゼによる４−ＭＵへの分解率を測定した。阻害率は対照を１００％とし、ＩＣ５０を算出した。阻害活性は以下の式にて算出した。
【００５２】
阻害率％＝（対照４―MU蛍光度―試料添加時４−MU蛍光度）／対照４−MU蛍光度×１００
【００５３】
次に結果を示す。いずれの抽出成分もインヴィトロでのリパーゼ阻害活性は弱いながも認められた。（図９）
【００５４】
以上の結果から、ラットにおける抗肥満作用は、主に褐色脂肪組織の増加が伴うエネルギー代謝の亢進によるものであり、さらに消化管内でのリパーゼ阻害作用等の効果も関与していると考えられた。
【実施例５】
【００５５】
本わさび葉の肥満予防・改善作用をヒトにおいて確認した。実施例１に記載の方法にて抽出した本わさび葉抽出物１５０ｍｇを封入したハードカプセルを作製した。
【００５６】
健康な男性６名に３ケ月間にわたり本わさび葉抽出物入りハードカプセルを１日３回摂取させた。
【００５７】
次に結果を示す。本わさび葉を摂取後３ケ月目において、摂取前と比較して有意に体重が減少した。（図１０）このことから、ヒトにおいても本わさび葉の摂取は体重の抑制に有効であることが確認された。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】本わさび葉５０％エタノール抽出物のＨＰＬＣクロマトグラフである。
【図２】本わさび葉５０％エタノール抽出物のＧＣＭＳクロマトグラフである。
【図３】褐色脂肪組織β３−ＡＲの対照との比較グラフである。
【図４】褐色脂肪組織ＰＰＡＲγの対照との比較グラフである。
【図５】褐色脂肪組織ＰＧＣ−１の対照との比較グラフである。
【図６】白色脂肪組織ＭＣＡＤの対照との比較グラフである。
【図７】褐色脂肪組織Ｃ／ＥＢＰαの対照との比較グラフである。
【図８】褐色脂肪組織ＭＣＡＤの対照との比較グラフである。
【図９】本わさび葉、西洋わさび葉のリパーゼ阻害活性を表したグラフである。
【図１０】ヒトに本わさび葉を摂取したときの体重の推移を表したグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明はアブラナ科植物およびその成分を摂取することにより、肥満を予防または改善する肥満防止剤に係り、特に生体内の脂質代謝を改善して生体内脂肪を減少させ、体重を減少させる肥満防止剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在わが国は７４０万人の糖尿病患者、１５００万人の高血圧症および２３００万人の高脂血症患者を抱え、生活習慣病全体での推定患者数は数千人に上る。これら生活習慣病の原因としては、食習慣が動物性脂肪など高カロリー摂取になっていることや、慢性的な運動不足が大きいと指摘されている。これらの生活習慣が続くことにより、体脂肪量が増大し、体重増加および肥満につながると考えられる。
【０００３】
このような状態を放置しておくと、糖尿病や動脈硬化などを引き起こし、虚血性心疾患や脳血管障害により死に至ることもある。こうした疾患を未然に防ぐことは非常に重要である。
【０００４】
一般に肥満の予防・改善には、適度な運動と摂取カロリーのコントロールが奨励されるが、現代の多忙な生活習慣ではなかなか思うような運動ができないのが現状である。そのため、容易な経口摂取により肥満を予防・改善する素材の開発が望まれていた。
【０００５】
ダイエット素材として一般に用いられているものに、食物繊維が挙げられる。食物繊維は食物の腸内滞留時間を短縮させ、さらに糖質の吸収を抑制し血糖値の上昇を穏やかにする。結果として、糖質の中性脂肪への変換を促進するインシュリン分泌を低減させ、脂肪の蓄積を抑制する。これらの効果を期待した素材として、グルコマンナン（特開２００２−１８６４６９）、プリックリィペアカクタス（特開２００３−７０４４４）等が考案されている。
【０００６】
また、脂肪の消化吸収に必須の酵素であるリパーゼの活性を阻害する素材として、柑橘類（特開２００５−４０１０７）、カトゥアバ（特開２００４−２９２３６８）等が考案されている。
【０００７】
しかし、これらの素材はいずれも糖質や脂質の消化・吸収を抑制し、体内への蓄積を防ぐものであり、吸収され、蓄積された脂肪を能動的に燃焼または排泄させるものではない。
【０００８】
そこで、日常的な食習慣の中で無理なく継続的に摂取でき、能動的に体内の脂肪を減少
させ、体重を健康的に低減させる素材が望まれていた。
【０００９】
一般に、体内の脂肪細胞が肥大してくるとぺプチドホルモンの一種のレプチンが分泌され、脳の視床下部にある摂食中枢に作用し食欲を抑制する一方、褐色脂肪細胞にも作用しエネルギー代謝の増大を促すと考えられている。肥満の予防・改善には、レプチンやその他の脂質代謝ホルモンや褐色脂肪細胞の働きの制御が重要である。
【００１０】
本発明者らは鋭意研究の結果、アブラナ科植物の植物体、もしくはその抽出物に肥満予防・改善効果、特に生体内の脂質代謝を改善し、体重を低減させる効果があることを見出し、本発明を完成するに至った。
【特許文献１】特開２００２−１８６４６９号公報
【特許文献２】特開２００３−７０４４４号公報
【特許文献３】特開２００４−１５９６３７号公報
【特許文献４】特開２００５−４０１０７号公報
【特許文献５】特開２００４−２９２３６８号公報
【特許文献６】特開２００５−８５７２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の課題は生体内の脂質代謝を改善し、蓄積された脂肪を能動的に減少させて健康的に体重を減少させ、上述の公知技術に存する欠点を改良した肥満防止剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上述の目的を達成するため、本発明の肥満防止剤によれば、アブラナ科植物の植物体またその抽出物を有効成分として含有し、生体内の脂質代謝を改善し、あるいは脂肪の分解を阻害して吸収を抑制して蓄積された脂肪を能動的に減少させ、健康的に体重を減少させることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１３】
本発明はアブラナ科植物の植物体あるいはその抽出物を有効成分として含有し、これを食品として、あるいは医薬品や医薬部外品として摂取するととにより生体内の脂質代謝を改善し、健康的に体重を低減させるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明を具体的に詳述する。
【００１５】
本発明では用いられるアブラナ科植物は、本わさび、西洋わさび、キャベツ、クレソン、芽キャベツ、カリフラワー、大根、からみ大根、ナタネ、ブロッコリー、タカナ、カラシナ、カブ、ハクサイが挙げられる。その中でも本わさびが好ましく、さらに本わさびの葉が特に好ましい。本発明においては、これらアブラナ科植物は単独で、あるいは複数種組み合わせて用いる。
【００１６】
上述のアブラナ科植物の有効成分は、植物体の粉砕またはすりおろし等の物理的処理手段により、あるいは水、メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、ジクロロエタン等の溶媒抽出処理手段により、さらには、熱風乾燥、凍結乾燥等の乾燥処理手段により、またはこれらの処理を組み合わせることにより得られる。
【００１７】
本発明に用いられるアブラナ科植物の有効成分は、アピゲニンやルテオリン、ケンフェロールといったフラボノイド類やそれらの配糖体・多量体、フェルラ酸やシナピン酸といったフェニルプロパノイド類やそれらの配糖体・多量体、その他のポリフェノール類を含む。
【００１８】
ポリフェノール類以外の有効成分としては、イソチオシアネート類、具体的には、アリルイソチオシアネート、第２級ブチルイソチオシアネート、３−ブテニルイソチオシアネート、４−ペンテニルイソチオシアネート、５−ヘキセニルイソチオシアネート、５−メチルチオペンチルイソチオシアネート、６−メチルチオヘキシルイソチオシアネート、７−メチルチオヘプチルイソチオシアネート、８−メチルチオオクチルイソチオシアネート、４−メチルスルフィニルブチルイソチオシアネート、５−メチルスルフィニルペンチルイソチオシアネート、６−メチルスルフィニルヘキシルイソチオシアネート、７−メチルスルフィニルヘプチルイソチオシアネート、８−メチルスルフィニルオクチルイソチオシアネートである。
【００１９】
さらに、有効成分として、５−メトキシーインドール−３−アセトニトリル等のインドール類、クロロフィル等を含有する。
【００２０】
本発明の肥満防止剤は、それ単独で摂取することも可能であるが、各種飲食品あるいは医薬品に添加して使用することもできる。具体的には、清涼飲料水、茶飲料、ドリンク剤、アルコール飲料等の液体食品、菓子、パン類、麺類、調味料等の固形食品、粉末状、顆粒状、カプセル状、錠剤等の医薬品・医薬部外品等に添加することができる。
【実施例１】
【００２１】
本わさび葉に含まれるポリフェノール類の抽出
本わさび葉抽出物の調製を行った。細かく裁断した本わさびは４ｋｇに５０％エタノール１６ｋｇを加え、攪拌しつつ１時間抽出を行った。抽出液をろ過し、エバポレーターで濃縮後凍結乾燥したものをフードミルで粉砕し、７０ｇの緑色粉末を得た。これを本わさび葉抽出物として試験に供した。
【００２２】
本わさび葉抽出物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に供した結果を図１に示す。図１に示されるように、本わさび葉抽出物から複数種のフラボノイド類とフェニルプロパノイド類が検出された。
【実施例２】
【００２３】
本わさび根茎に含まれるイソチオシアネート類の抽出
本わさび根茎抽出物の調製を行った。すりおろした本わさび根茎１ｋｇをステンレス製の密封容器内に入れ、２５℃で３時間保温し、イソチオシアネート類を発生させた。その後、この容器内の空気を真空ポンプで吸引しながら、１時間辛味成分を除去した。辛味を除去した本わさび根茎に５０％エタノール３リットルを加え、１時間室温で攪拌抽出した後、加圧ろ過器でろ過し、抽出液を得た。この抽出液をエバポレーターで濃縮後、凍結乾燥したものをフードミルにて粉砕し、５５ｇの茶褐色粉末を得た。これを本わさび根茎抽出物として試験に供した。
【００２４】
本わさび葉抽出物をマススペクトルガスクロマトグラフィー（ＧＣＭＳ）に供した結果を図２に示す。図２に示されるように、本わさび葉抽出物から複数種のイソチオシアネート類が複検出された。
【実施例３】
【００２５】
食事誘発肥満ラットを用いた抗肥満作用の検討
実施例１に記載の方法で本わさび葉抽出物を得、また、実施例２に記載の方法で本わさび根茎抽出物を得た。
【００２６】
Std Wister系ラット（オス、６齢週）３０匹をステンレス製個別ケージで２８日間飼育した。動物室の温度は２４±１℃に保ち、湿度５０％、明期０８：００−２０：００、暗期２０：００−０８：００で飼育した。
【００２７】
ラットは平均体重が均等になるように高脂肪食群（対照群）、実施例１の本わさび葉抽出物を５％含有した高脂肪食群（実施例１群）、実施例２の本わさび根茎抽出物を５％含有した高脂肪食群（実施例２群）に分け、飼料組成は表１に示した。飼料摂取量は全ての群で等しくなるように、制限摂取させた。
【００２８】
【表１】
【００２９】
体重および飼料摂取量は週に３回測定し、水は自由摂取とした。飼育２８日目に一晩絶食後、エーテル麻酔下で断頭により屠殺した。
【００３０】
試験に供したラットの解剖を行った。膵臓、腎臓、肝臓、ひ腹筋、鼠径周囲脂肪組織、腎周囲脂肪組織、副精巣周囲脂肪組織、褐色脂肪組織を摘出し、秤量した。肝臓の一部は中性緩衝ホルマリン溶液に入れ病理標本とした。他の臓器はすばやく液体窒素で凍結し、血清とともに−８０℃で保存した。
【００３１】
摘出した肝臓の中性脂質を測定した。肝臓２．５ｇにFolch液を約１５ｍ添加し、ホモジネートした。よく混濁したホモジ液を５０ｍｌメスフラスコで１日抽出した。抽出後、Folch液でメスアップし、混合した後、Ｎo.2のろ紙でろ過し試料とした。対象群は１５０μｌ、他の群は１２０μｌを試験管に入れ、室温で放置して溶媒を揮発させた。
【００３２】
肝臓中のコレステロール、トリアシルグリセロール、およびリン脂質濃度を、それぞれコレステロール ＣＩＩキットワコー、トリグリセライドＧ−テストワコー、リン脂質テストワコーの各キットにて測定した。
【００３３】
血清中のコレステロール、トリアシルグリセロール、リン脂質、尿素窒素、クレアチニン、遊離脂肪酸、ＧＯＴ、ＧＰＴの各濃度を、それぞれコレステロールＣＩＩキットワコー、トリグリセライドＧ−テストワコー、リン脂質テストワコー、尿素窒素Ｂテストワコー、クレアチニンーテストワコー、ＮＥＦＡ−Ｃテストワコー、ＧＯＴ−ＵＶテストワコー、ＧＰＴ−ＵＶテストワコーの各キットにて測定した。
【００３４】
血清中のアディポネクチン、レプチン、およびTNF−αの濃度を、それぞれMouse/rat adiponectine ELISA kit, Rat Leptin ELISA kit, Yanaihara, Rat TNF−α ELISA kit, TFBの各キットにて測定した。
【００３５】
褐色脂肪組織のβ３−アドレナリンレセプター（以下、β３−ＡＲと記す）、ペルオキシゾーム増殖促進受容体γ（以下、ＰＰＡＲγと記す）、ＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質α（以下、Ｃ／ＥＢＰαと記す）、ＰＰＡＲγコアクチベーター１（ＰＧＣ−１）、中鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ（以下、ＭＣＡＤと記す）のｍＲＮＡ発現量と、白色脂肪組織のＭＣＡＤのｍＲＮＡ発現量を、リアルタイムＰＣＲ（ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ (R)7000 Sequence Detection System）で測定した。
【００３６】
次に結果を示す。摂取制限のため、飼育期間中の摂食量は３群間に差は見られなかった。実施例１群および実施例２群の最終体重は対照群と比較して有意に少なかった。（表２）
【００３７】
【表２】
【００３８】
膵臓、腎臓、肝臓、ひ腹筋重量は３群間で有意差はなかった。腎周囲白色脂肪組織、副精巣周囲白色脂肪組織重量に３群間で有意差はなかったが、実施例１群および実施例２群の鼠径周囲白色脂肪組織は対照群と比較して減少傾向にあった。実施例１群および実施例２群の褐色脂肪組織は対照群と比較して有意に増加した。（表３）。
【００３９】
【表３】
【００４０】
血清中の総コレステロール、トリアシルグリセロール、リン脂質、遊離脂肪酸、クレアチニン、尿素窒素、ＧＰＴ、ＧＯＴ濃度は３群間で有意差はなかった。実施例１群の肝臓ＴＢＡＲＳ、腎臓ＴＢＡＲＳ濃度は、対照群と比較して減少傾向にあった。(表４)
【００４１】
【表４】
【００４２】
血清中のTNF−α、アディポネクチンの濃度は３群間で大差はなかったが、実施例１群および実施例２群のレプチンは増加傾向にあった。（表５）
【００４３】
【表５】
【００４４】
褐色脂肪組織のβ３−ＡＲ（図３）、ＰＰＡＲγ（図４）、ＰＧＣ−１（図５）、ＭＣＡＤ（図６）が有意に増加し、Ｃ／ＥＢＰα（図７）が増加傾向にあった。白色脂肪組織のＭＣＡＤ（図８）は増加傾向にあった。
【００４５】
本試験で用いた食事誘発肥満ラットは、生活習慣によって誘発されるヒト内臓型肥満と類似しており、本わさび葉が生活習慣病による肥満を予防・改善する肥満予防食品として有効であることが確認された。
【実施例４】
【００４６】
インヴィトロでのリパーゼ阻害活性の測定を行った。本わさび葉、西洋わさび葉、本わさび根茎各２ｇをそれぞれ凍結乾燥し、粉砕した。
【００４７】
上記試料にヘキサン１０ｍｌを加え、ガラス・ポリトロンホモジナイザーでホモジネートした。これを室温で２４時間放置した。これをろ過後、濃縮しテトラヒドロフランを１０ｍｌ加え脂溶性画分とした。
【００４８】
ろ過後の残渣にテトラヒドロフランを１０ｍｌ加えて攪拌し、さらに２４時間抽出し、この上清を水溶性画分とした。
【００４９】
上記試料０．０１ｍｇを含む１００μｌテトラヒドロフランにテトラヒドロフラン８５
μｌ、０．１M Macilvan 緩衝液PH７．０を４００μｌ加え、小型試験管で攪拌した。
【００５０】
テトラヒドロフランに溶解した０．１５ｍＭ ４−methylumbelliferon oleate (4-MU oleate)を加えさらに攪拌し、プレインキュベートした０．０５ｍｌ（０．０５units）のPorisine pancreatic lipaseを加え、３７℃で２０分間加熱した後に、０．１Ｎ塩酸を加え反応を停止した。これにクエン酸緩衝液を２ｍｌ加え、ＰＨ４．３に調製した。
【００５１】
蛍光光度計（波長４５０ｎｍ、励起波長３２０ｎｍ）にてリパーゼによる４−ＭＵへの分解率を測定した。阻害率は対照を１００％とし、ＩＣ５０を算出した。阻害活性は以下の式にて算出した。
【００５２】
阻害率％＝（対照４―MU蛍光度―試料添加時４−MU蛍光度）／対照４−MU蛍光度×１００
【００５３】
次に結果を示す。いずれの抽出成分もインヴィトロでのリパーゼ阻害活性は弱いながも認められた。（図９）
【００５４】
以上の結果から、ラットにおける抗肥満作用は、主に褐色脂肪組織の増加が伴うエネルギー代謝の亢進によるものであり、さらに消化管内でのリパーゼ阻害作用等の効果も関与していると考えられた。
【実施例５】
【００５５】
本わさび葉の肥満予防・改善作用をヒトにおいて確認した。実施例１に記載の方法にて抽出した本わさび葉抽出物１５０ｍｇを封入したハードカプセルを作製した。
【００５６】
健康な男性６名に３ケ月間にわたり本わさび葉抽出物入りハードカプセルを１日３回摂取させた。
【００５７】
次に結果を示す。本わさび葉を摂取後３ケ月目において、摂取前と比較して有意に体重が減少した。（図１０）このことから、ヒトにおいても本わさび葉の摂取は体重の抑制に有効であることが確認された。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】本わさび葉５０％エタノール抽出物のＨＰＬＣクロマトグラフである。
【図２】本わさび葉５０％エタノール抽出物のＧＣＭＳクロマトグラフである。
【図３】褐色脂肪組織β３−ＡＲの対照との比較グラフである。
【図４】褐色脂肪組織ＰＰＡＲγの対照との比較グラフである。
【図５】褐色脂肪組織ＰＧＣ−１の対照との比較グラフである。
【図６】白色脂肪組織ＭＣＡＤの対照との比較グラフである。
【図７】褐色脂肪組織Ｃ／ＥＢＰαの対照との比較グラフである。
【図８】褐色脂肪組織ＭＣＡＤの対照との比較グラフである。
【図９】本わさび葉、西洋わさび葉のリパーゼ阻害活性を表したグラフである。
【図１０】ヒトに本わさび葉を摂取したときの体重の推移を表したグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アブラナ科植物もしくはその成分を主成分として含有し、生体内の脂質代謝を改善し、あるいは脂肪の分解を阻害して吸収を抑制して生体内脂肪を減少させ、体重を減少させることを特徴とする肥満防止剤。
【請求項２】
請求項１において、アブラナ科植物が本わさびおよび／または本わさび葉である請求項１に記載の肥満防止剤。
【請求項３】
請求項１において、アブラナ科植物が西洋わさび、キャベツ、クレソン、芽キャベツ、カリフラワー、大根、からみ大根、ナタネ、ブロッコリー、タカナ、カラシナ、カブ、およびハクサイの群から選択される一種または複数種である請求項１に記載の肥満防止剤。
【請求項４】
請求項１において、アブラナ科植物に含まれる成分が、フラボノイド類、フェニルプロパノイド類、およびイソチオシアネート類の群うちの一種または複数種である請求項１に記載の肥満防止剤。
【請求項５】
請求項４において、イソチオシアネート類が、４−メチルスルフィニルブチルイソチオシアネート、５−メチルスルフィニルペンチルイソチオシアネート、６−メチルスルフィニルヘキシルイソチオシアネート、７−メチルスルフィニルヘプチルイソチオシアネートおよび８−メチルスルフィニルオクチルイソチオシアネートの群から選択される請求項４
に記載の肥満防止剤。
【請求項６】
請求項４において、イソチオシアネート類が、アリルイソチオシアネート、第２級ブチルイソチオシアネート、３−ブテニルイソチオシアネート、４−ペンテニルイソチオシアネート、５−ヘキセニルイソチオシアネート、５−メチルチオペンチルイソチオシアネート、６−メチルチオヘキシルイソチオシアネート、７−メチルチオヘプチルイソチオシアネートおよび８−メチルチオオクチルイソチオシアネートの群から選択される請求項４に
記載の肥満防止剤。
【請求項７】
請求項１において、アブラナ科植物の成分がアブラナ科植物を粉砕またはすりおろし処理、溶媒による抽出処理、または乾燥処理と単独で、または組み合わせて行うことにより得られる請求項１に記載の肥満防止剤。
【請求項８】
請求項１において、アブラナ科植物もしくはその成分が白色脂肪組織重量の増加を抑制することにより、褐色脂肪組織重量の増加を促進することにより、または生体内のレプチンの増加を促進することにより、生体内の脂質代謝を改善する請求項１に記載の肥満防止剤。
【請求項９】
請求項１において、アブラナ科植物もしくはその成分が、生体内のレプチン、β３−アドレナリンレセプター、ぺルオキシゾーム増殖促進受容体γ、ＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質α、ＰＰＡＲγコアクチベーター１、中鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼからなる指標の１つ、もしくは複数種の増加を促進することにより、生体内の脂質代謝を改善する請求項１に記載の肥満防止剤。
【請求項１０】
アブラナ科植物もしくはその成分を主成分として含有した請求項１の肥満防止剤を含んでなる飲食品または医薬品。
【請求項１】
アブラナ科植物もしくはその成分を主成分として含有し、生体内の脂質代謝を改善し、あるいは脂肪の分解を阻害して吸収を抑制して生体内脂肪を減少させ、体重を減少させることを特徴とする肥満防止剤。
【請求項２】
請求項１において、アブラナ科植物が本わさびおよび／または本わさび葉である請求項１に記載の肥満防止剤。
【請求項３】
請求項１において、アブラナ科植物が西洋わさび、キャベツ、クレソン、芽キャベツ、カリフラワー、大根、からみ大根、ナタネ、ブロッコリー、タカナ、カラシナ、カブ、およびハクサイの群から選択される一種または複数種である請求項１に記載の肥満防止剤。
【請求項４】
請求項１において、アブラナ科植物に含まれる成分が、フラボノイド類、フェニルプロパノイド類、およびイソチオシアネート類の群うちの一種または複数種である請求項１に記載の肥満防止剤。
【請求項５】
請求項４において、イソチオシアネート類が、４−メチルスルフィニルブチルイソチオシアネート、５−メチルスルフィニルペンチルイソチオシアネート、６−メチルスルフィニルヘキシルイソチオシアネート、７−メチルスルフィニルヘプチルイソチオシアネートおよび８−メチルスルフィニルオクチルイソチオシアネートの群から選択される請求項４
に記載の肥満防止剤。
【請求項６】
請求項４において、イソチオシアネート類が、アリルイソチオシアネート、第２級ブチルイソチオシアネート、３−ブテニルイソチオシアネート、４−ペンテニルイソチオシアネート、５−ヘキセニルイソチオシアネート、５−メチルチオペンチルイソチオシアネート、６−メチルチオヘキシルイソチオシアネート、７−メチルチオヘプチルイソチオシアネートおよび８−メチルチオオクチルイソチオシアネートの群から選択される請求項４に
記載の肥満防止剤。
【請求項７】
請求項１において、アブラナ科植物の成分がアブラナ科植物を粉砕またはすりおろし処理、溶媒による抽出処理、または乾燥処理と単独で、または組み合わせて行うことにより得られる請求項１に記載の肥満防止剤。
【請求項８】
請求項１において、アブラナ科植物もしくはその成分が白色脂肪組織重量の増加を抑制することにより、褐色脂肪組織重量の増加を促進することにより、または生体内のレプチンの増加を促進することにより、生体内の脂質代謝を改善する請求項１に記載の肥満防止剤。
【請求項９】
請求項１において、アブラナ科植物もしくはその成分が、生体内のレプチン、β３−アドレナリンレセプター、ぺルオキシゾーム増殖促進受容体γ、ＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質α、ＰＰＡＲγコアクチベーター１、中鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼからなる指標の１つ、もしくは複数種の増加を促進することにより、生体内の脂質代謝を改善する請求項１に記載の肥満防止剤。
【請求項１０】
アブラナ科植物もしくはその成分を主成分として含有した請求項１の肥満防止剤を含んでなる飲食品または医薬品。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【公開番号】特開２００６−３２８０５６（Ｐ２００６−３２８０５６Ａ）
【公開日】平成１８年１２月７日（２００６．１２．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−１２０６５２（Ｐ２００６−１２０６５２）
【出願日】平成１８年４月２５日（２００６．４．２５）
【出願人】（５９１０１１００７）金印株式会社 (20)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年１２月７日（２００６．１２．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年４月２５日（２００６．４．２５）
【出願人】（５９１０１１００７）金印株式会社 (20)
【Ｆターム（参考）】
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