補酵素Ｑ１０粒子の製造方法
【課題】 簡単な設備及び簡便な操作で、高含有量でかつ粉体流動特性に優れた原末並みに微細な補酵素Ｑ１０粒子を効率的に工業生産できる製造方法を提供すること。
【解決手段】 下記（１）および（２）の工程を含有する、補酵素Ｑ１０粒子の製造方法。
（１）補酵素Ｑ１０と水とを、界面活性剤存在下で補酵素Ｑ１０の融点以上の温度で乳化分散し、Ｏ／Ｗエマルジョンを調製する、（２）該Ｏ／Ｗエマルジョンを、水溶性分散剤存在下、撹拌にて流動させながら補酵素Ｑ１０の固化温度以下まで冷却して、固形粒子を得る。
【解決手段】 下記（１）および（２）の工程を含有する、補酵素Ｑ１０粒子の製造方法。
（１）補酵素Ｑ１０と水とを、界面活性剤存在下で補酵素Ｑ１０の融点以上の温度で乳化分散し、Ｏ／Ｗエマルジョンを調製する、（２）該Ｏ／Ｗエマルジョンを、水溶性分散剤存在下、撹拌にて流動させながら補酵素Ｑ１０の固化温度以下まで冷却して、固形粒子を得る。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、補酵素Ｑ１０粒子の製造方法に関する。補酵素Ｑ１０は、優れた、食品、栄養機能食品、特定保健用食品、栄養補助剤、栄養剤、動物薬、飲料、飼料、化粧品、医薬品、治療薬、予防薬等として有用な化合物である。
【背景技術】
【０００２】
補酵素Ｑ１０は、人の生体内の細胞中におけるミトコンドリアの電子伝達系構成成分であり、ミトコンドリア内において酸化と還元を繰り返すことで、電子伝達系における伝達成分としての機能を担っているほか、還元型補酵素Ｑ１０は抗酸化作用を持つことが知られている。
【０００３】
補酵素Ｑ１０のうち、酸化型補酵素Ｑ１０は、欧米では健康食品として、日本では鬱血性心不全薬として用いられており、近年では、日本でも健康食品、栄養補助食品や化粧品としても用いられてきている。特に、健康食品、栄養補助食品の分野においては、酸化型補酵素Ｑ１０をソフトカプセル化した商品が主流となっている。
【０００４】
また還元型補酵素Ｑ１０を含有する補酵素Ｑ１０は、従来の酸化型のみの補酵素Ｑ１０よりも、経口吸収性に優れること等、近年、その有効性が知られるようになった。
【０００５】
補酵素Ｑ１０の原末は、例えば、合成、発酵、天然物からの抽出等の方法により補酵素Ｑ１０粗精製物を得た後、クロマトグラフィーにより流出液中の補酵素Ｑ１０区分を濃縮し、晶析により結晶化して得ることができる。しかしながら、このようにして得られる補酵素Ｑ１０の原末は、板状結晶、または針状結晶の形態をとっており、固体表面へのハリツキや原末の凝集が生じやすく、粉体流動特性が非常に悪いことが知られている。また補酵素Ｑ１０を打錠用途やソフトカプセル用途として使用する場合には、製剤充填時の均一性を確保するため、最大粒子径を３００μｍ以下とする必要がある。そのため補酵素Ｑ１０の原末を改良し、微細で粉体流動特性に優れた粒子を造粒できる技術の開発が望まれていた。
【０００６】
補酵素Ｑ１０のうち、酸化型補酵素Ｑ１０の造粒または顆粒化方法には、例えば流動層装置等において、賦形剤を酸化型補酵素Ｑ１０に混合させながら、被覆物質で噴霧コーティングした例（特許文献１）が知られている。しかしながら、このようにして得られる酸化型補酵素Ｑ１０の粒子は、賦形剤やコーティングに使用した物質を多量に含有しているため、粒子中の酸化型補酵素Ｑ１０含有量は高くない。
【０００７】
補酵素Ｑ１０のうち、酵素Ｑ１０を対象とした造粒方法には、貧溶媒中に還元型補酵素Ｑ１０の高濃度液相を添加し、造粒する方法（特許文献２）が知られているが、同造粒方法では微細な粒子を製造することが難しい上、高濃度液相を調製するタンクや送液するポンプ等の付帯設備が必要となる。
【０００８】
ところで、一般的な脂溶性物質の固化造粒方法を対象とした報告の中には、水中に低融点物質を融点以上の温度で溶融、液滴化させた後、冷却固化して造粒した例（特許文献３）がある。
【特許文献１】特開２００６−２１３６０１
【特許文献２】特開２００４−１３０２０１
【特許文献３】特開平９−１２４４０５
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上述したように、補酵素Ｑ１０の原末は板状結晶、または針状結晶の形態をとっているため、静電気が発生しやすく、これにより製剤装置等、固体表面へのハリツキや原末の凝集が生じ、計量時の作業効率が低下したり、打錠時やカプセル充填時に原末容器や製剤装置への付着が起こり、補酵素Ｑ１０の製剤化がスムーズにできない等、生産性や操作性において問題があった。
【００１０】
また、従来の補酵素Ｑ１０の造粒方法は、多量の賦形剤を使用するため、得られる粒子における補酵素Ｑ１０の含有量の低下を招き、食品や医薬品用途に混合する際、製造効率が悪化したり、粉体流動特性が十分でない等の問題があった。
【００１１】
本発明の課題は、簡単な設備及び簡便な操作で、高含有量かつ粉体流動特性に優れた原末並みに微細な補酵素Ｑ１０粒子を効率的に工業生産できる製造方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、補酵素Ｑ１０を水に乳化分散し、油状化した補酵素Ｑ１０をＯ／Ｗエマルジョンに調製する工程と、該Ｏ／Ｗエマルジョンを水溶性分散剤存在下で流動させながら、補酵素Ｑ１０の固化温度以下まで冷却し、固形粒子を得る工程という撹拌・分散条件が異なる２つの工程の操作を行うことで、高含有量で粉体流動特性に優れ、なおかつ原末並みに微細な補酵素Ｑ１０粒子を効率的に工業的に可能な方法で生産できることを見出し、本発明を完成させた。
【００１３】
すなわち本発明は、（１）補酵素Ｑ１０と水とを、界面活性剤存在下で補酵素Ｑ１０の融点以上の温度で乳化分散し、Ｏ／Ｗエマルジョンを調製する、（２）該Ｏ／Ｗエマルジョンを水溶性分散剤存在下で撹拌にて流動させながら補酵素Ｑ１０の固化温度以下まで冷却して固形粒子を得る、という２つの工程を含有することを特徴とする補酵素Ｑ１０粒子の製造方法である。また、本発明は、Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指標が８０以上で、平均粒子径が１〜３００μｍの球形粒子であることを特徴とする補酵素Ｑ１０粒子に関する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明により得られる補酵素Ｑ１０の粒子は、粒度が均一で粉体流動特性に優れており、原末容器や製剤装置への付着、原末の凝集が生じにくく、装置への充填性に優れている。また、本発明の製造方法は、簡単な設備を用いて、簡便な操作で実施できるだけでなく、補酵素Ｑ１０を高含有し、かつ原末並みに微細な補酵素Ｑ１０の粒子の製造が可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下に本発明の実施形態を詳細に説明する。
【００１６】
本発明における補酵素Ｑ１０の粒子の製造方法は、下記（１）および（２）の工程を含有する補酵素Ｑ１０粒子の製造方法である。
【００１７】
（１）補酵素Ｑ１０と水とを、界面活性剤存在下で補酵素Ｑ１０の融点以上の温度で乳化分散し、Ｏ／Ｗエマルジョンを調製する。
【００１８】
（２）該Ｏ／Ｗエマルジョンを、水溶性分散剤存在下、撹拌にて流動させながら補酵素Ｑ１０の固化温度以下まで冷却して、固形粒子を得る。
【００１９】
補酵素Ｑ１０は広く生体に分布する必須成分であり、上述したように、酸化型と還元型が存在する。本発明においては、補酵素Ｑ１０として、酸化型補酵素Ｑ１０、還元型補酵素Ｑ１０のいずれを用いた場合においても、粉体流動特性に優れた粒子を得ることができる。もちろん、補酵素Ｑ１０として酸化型補酵素Ｑ１０と還元型補酵素Ｑ１０の混合物であっても構わない。 本発明の製造方法は上記いずれの形態にも適用できるが、還元型補酵素Ｑ１０の方が酸化型補酵素Ｑ１０より、経口吸収性やその他薬理効果において優れていることから、補酵素Ｑ１０として還元型補酵素Ｑ１０あるいは酸化型補酵素Ｑ１０と還元型補酵素Ｑ１０の混合物に適用するのが一般的には好ましい。混合物である場合の酸化型補酵素Ｑ１０と還元型補酵素Ｑ１０の混合比は特に限定されないが、好ましくは補酵素Ｑ１０中の還元型補酵素Ｑ１０の割合が２０重量％以上、より好ましくは４０重量％以上、さらに好ましくは６０重量％以上、特に好ましくは８０重量％以上である。なお、本明細書において、補酵素Ｑ１０とのみ記載した場合は、酸化型、還元型を問わず、両者が混在する場合には混合物全体も表すものである。
【００２０】
本発明の製造方法における補酵素Ｑ１０の仕込み濃度は特に限定されないが、生産性の観点からは、水に対する補酵素Ｑ１０の仕込み濃度が高いほど好ましく、例えば、上記工程（１）における、水に対する補酵素Ｑ１０の割合が、１重量％以上、特に５重量％以上であることが好ましい。一方、水に対する補酵素Ｑ１０の仕込み濃度が３０重量％以上となる場合は、粒子径のコントロールが困難で、均一な粒子を得ることが難しいため、それ以下とするのが好ましい。
【００２１】
本発明の製造方法では、上記工程（１）において、補酵素Ｑ１０の油状物を、Ｏ／Ｗエマルジョンに調製するために、ＨＬＢが６以上の界面活性剤存在下で乳化分散を行うのが好ましく、水相中における油滴分散形成の観点から、そのＨＬＢは８以上がより好ましく、特に１０以上が好ましい。また、上記、界面活性剤としては、食品用又は医薬品用として使用できるものが好ましく、例えば、グリセリン脂肪酸エステル類、ショ糖脂肪酸エステル類、ソルビタン脂肪酸エステル類、およびレシチン類を挙げることができる。
上記グリセリン脂肪酸エステル類としては、例えば、モノグリセリン脂肪酸有機酸エステル、モノグリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル等が挙げられる。モノグリセリン脂肪酸有機酸エステルとしては、具体的には、モノグリセリンステアリン酸クエン酸エステル、モノグリセリンステアリン酸酢酸エステル、モノグリセリンステアリン酸コハク酸エステル、モノグリセリンカプリル酸コハク酸エステル、モノグリセリンステアリン酸乳酸エステル、モノグリセリンステアリン酸ジアセチル酒石酸エステル等が挙げられる。モノグリセリン脂肪酸エステルとしては、モノグリセリンラウリン酸エステル、モノグリセリンミリスチン酸エステル、モノグリセリンオレイン酸エステル、モノグリセリンステアリン酸エステル等が挙げられる。ポリグリセリン脂肪酸エステルとしては、具体的には、トリグリセリンモノラウリン酸エステル、トリグリセリンモノミリスチン酸エステル、トリグリセリンモノオレイン酸エステル、トリグリセリンモノステアリン酸エステル、ペンタグリセリンモノミリスチン酸エステル、ペンタグリセリントリミリスチン酸エステル、ペンタグリセリンモノオレイン酸エステル、ペンタグリセリントリオレイン酸エステル、ペンタグリセリンモノステアリン酸エステル、ペンタグリセリントリステアリン酸エステル、ペンタグリセリンモノステアリン酸エステル、ヘキサグリセリンモノカプリル酸エステル、ヘキサグリセリンジカプリル酸エステル、ヘキサグリセリンモノラウリン酸エステル、ヘキサグリセリンモノミリスチン酸エステル、ヘキサグリセリンモノオレイン酸エステル、ヘキサグリセリンモノステアリン酸エステル、デカグリセリンモノラウリン酸エステル、デカグリセリンモノミリスチン酸エステル、デカグリセリンモノオレイン酸エステル、デカグリセリンモノパルミチン酸エステル、デカグリセリンモノステアリン酸エステル、デカグリセリンジステアリン酸エステル等が挙げられる。
【００２２】
上記ショ糖脂肪酸エステル類としては、ショ糖の水酸基の１つ以上に炭素数が各々６〜１８、好ましくは６〜１２の脂肪酸をエステル化したものが挙げられる。具体的には、ショ糖パルミチン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステル等が挙げられる。
【００２３】
上記ソルビタン脂肪酸エステル類としては、ソルビタン類の水酸基の１つ以上に炭素数が各々６〜１８、好ましくは６〜１２の脂肪酸をエステル化したものが挙げられる。具体的には、ソルビタンモノステアリン酸エステル、ソルビタンモノオレイン酸エステル等が挙げられる。
【００２４】
上記レシチン類としては、例えば、卵黄レシチン、精製大豆レシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、スフィンゴミエリン、ジセチルリン酸、ステアリルアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルイノシトールアミン、カルジオリピン、セラミドホスホリルエタノールアミン、セラミドホスホリルグリセロール、リゾレシチン、及びこれらの混合物等を挙げることができる。
【００２５】
言うまでもなく、ここで示した界面活性剤は２種以上を合わせて使用することもできる。
【００２６】
工程（１）において、これらの界面活性剤を水相中に添加する濃度は特に限定されないが、その濃度が０．００１〜５重量％となる範囲で含まれることが好ましく、より好ましくは、濃度０．０１〜１重量％の範囲である。
【００２７】
本発明の製造方法の工程（１）において、油状化した補酵素Ｑ１０をＯ／Ｗエマルジョンに調製する際、補酵素Ｑ１０が溶融する温度、すなわち補酵素Ｑ１０の融点以上の温度とする必要がある。補酵素Ｑ１０が十分に溶融し、固形成分が存在しない状態とするためには、上記工程（１）において、補酵素Ｑ１０と水との混合物を、５０℃〜８０℃の温度条件下で乳化分散するのが好ましく、さらには５５℃〜６０℃の温度条件下で乳化分散するのが好ましい。
【００２８】
上記補酵素Ｑ１０のＯ／Ｗエマルジョンを調製するため行う乳化分散には、各種の汎用されている乳化分散機、例えばホモミキサー、ホモディスパー、ホモジナイザー、高圧ホモジナイザー、コロイドミル、超音波乳化機等を用いることができる。
【００２９】
本発明の製造方法では、工程（１）において前述の方法で調製した補酵素Ｑ１０のＯ／Ｗエマルジョンを、次の工程（２）において、水溶性分散剤の添加された水相中で流動させながら冷却し、補酵素Ｑ１０の固形粒子を得る。
【００３０】
本発明の製造方法の工程（２）において使用できる水溶性分散剤としては、特に限定されないが、食品用又は医薬品用として使用できるものが好ましい。そのような水溶性分散剤としては、例えば、アラビアガム、ゼラチン、寒天、澱粉、ペクチン、カラギーナン、カゼイン、アルギン酸類、大豆多糖類、プルラン、セルロース類、およびキサンタンガム等を挙げることができる。
【００３１】
上記アルギン酸類としては、例えば、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム等が挙げられる。
【００３２】
上記大豆多糖類は、大豆より抽出した水溶性の多糖類で、ガラクトース、アラビノース、ガラクツロン酸、キシロース、フルコース、グルコース、ラムノース等の多糖類から構成されるものである。
【００３３】
上記セルロース類としては、例えば、結晶セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース等が挙げられる。
【００３４】
ここで示した水溶性分散剤は２種以上を合わせて使用することもできる。
【００３５】
工程（２）において、上記水溶性分散剤を水相中に添加する濃度は特に限定されないが、水に対して濃度０．００１〜１０重量％となる範囲で含まれることが好ましく、より好ましくは、濃度０．００５〜３重量％の範囲である。
【００３６】
本発明においては、工程（２）において、水溶性分散剤を、補酵素Ｑ１０を分散する水相に添加することで、得られる粒子中の補酵素Ｑ１０を高含有率に維持したまま、粉体流動特性に優れた原末並みに微細な補酵素Ｑ１０粒子を得ることができる。
【００３７】
本発明の製造方法の工程（２）においては、工程（１）で調製したＯ／Ｗエマルジョンの形状を維持したまま、補酵素Ｑ１０の融点以下の温度で補酵素Ｑ１０を固化させる必要がある。工程（２）において、固化させるためには、補酵素Ｑ１０の融点以下とすればよいが、得られる補酵素Ｑ１０粒子の物性の観点からは、４０℃以下の温度まで冷却することが好ましく、さらには３５℃以下の温度まで冷却することが好ましい。
【００３８】
上記工程（２）において、Ｏ／Ｗエマルジョンを冷却する際、冷却速度が速すぎると、得られる補酵素Ｑ１０粒子の均一度は低くなり、粒子径をコントロールすることが困難になることから、冷却速度は、０．５℃／ｍｉｎ以下であることが好ましく、さらには０．２℃／ｍｉｎ以下であることが好ましい。冷却速度の下限は特に限定されないが、冷却速度が極端に遅い場合は、粒子生成時に微粉発生が多くなる等、生産性の問題が生じるため、冷却速度は０．０１℃／ｍｉｎ以上が好ましく、０．０５℃／ｍｉｎ以上であることがより好ましい。
【００３９】
本発明の製造方法の工程（２）においては、工程（１）で調製したＯ／Ｗエマルジョンの形状を維持したまま冷却する必要があるため、該Ｏ／Ｗエマルジョンを冷却する場合の撹拌を、単位容積当たりの所要動力が０．０１ｋＷ／ｍ３以上の条件で行うことが好ましく、０．０５ｋＷ／ｍ３以上の条件で行うことがより好ましい。撹拌所要動力の上限は特に限定されないが、所要動力が著しく大きい場合、液自由表面からの気泡の巻き込みが激しくなり、補酵素Ｑ１０が固化する際に、変形等の障害が生じるため、撹拌所要動力の上限は１．５ｋＷ／ｍ３以下であることが好ましく、より好ましくは１．０ｋＷ／ｍ３以下である。
【００４０】
本発明の製造方法において、工程（１）でのＯ／Ｗエマルジョンを調製する際の界面活性剤の仕込み方法、および、工程（２）での水溶性分散剤の仕込み方法は、補酵素Ｑ１０のＯ／Ｗエマルジョンの調製が可能で、Ｏ／Ｗエマルジョンを冷却して微細な固形粒子が得られる範囲内であれば特に制限は無く、先に工程（１）において界面活性剤と水溶性分散剤とを一括で仕込むこともできる。
【００４１】
本発明の製造方法では、補酵素Ｑ１０のＯ／Ｗエマルジョンの調製工程（工程（１））、および補酵素Ｑ１０の固形粒子を得るための冷却工程（工程（２））において、使用する装置の組み合わせを限定するものでは無く、これら２つの独立した工程がそれぞれ実施できれば、例えば、撹拌槽の外部循環ラインに乳化分散機を組み合わせた、単一の装置にて実施することも可能である。
【００４２】
本発明の製造方法において、このようにして得られた補酵素Ｑ１０固形粒子は、例えば、遠心分離、加圧濾過、減圧濾過等による固液分離、さらに、必要に応じてケーキ洗浄を行い、さらに、真空乾燥などの乾燥処理を行って、乾燥粒子として取得される。
【００４３】
特に、還元型補酵素Ｑ１０は、分子酸素によって酸化され、酸化型補酵素Ｑ１０を副生しやすいため、本発明において、補酵素Ｑ１０として還元型補酵素Ｑ１０や還元型補酵素Ｑ１０と酸化型補酵素Ｑ１０の混合物を使用する場合、上記一連の操作は、脱酸素雰囲気下で実施するのが好ましい。脱酸素雰囲気は、不活性ガスによる置換、減圧、沸騰やこれらを組み合わせることにより達成できる。上記不活性ガスとしては、例えば窒素ガス、ヘリウムガス、アルゴンガス、水素ガス、炭酸ガスを挙げることができ、好ましくは窒素ガスである。
【００４４】
本発明の製造方法により得られる補酵素Ｑ１０粒子は、球形で粉体流動特性に優れた粒子である。具体的には、Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数が８０以上の補酵素Ｑ１０粒子である。粉体流動特性の観点から、その指数は高いほど好ましく、上記好ましい製造条件を適宜選択することで、８０以上の補酵素Ｑ１０粒子を得ることが出来る。公知の晶析方法で得られる補酵素Ｑ１０原末のように、Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数が５０を下回る場合、流動性が悪くなり、補酵素Ｑ１０粒子の移送時の効率が悪化したり、装置充填がスムーズにできない等、生産性や操作性の問題がある。
【００４５】
なお、Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数は、粒子の安息角、圧縮度、スパチュラ角、均一度を総合的に評価した指数であり、ＣＨＥＮＩＣＡＬ ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ−Ｊａｎｕａｒｙ １８、１９６５において定義されたものである。Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数に関する定義を表１に示す。
【００４６】
【表１】
【００４７】
本発明の製造方法によって得られる補酵素Ｑ１０粒子の形状は上述したように球形となる。その平均粒子径としては、製造時の撹拌速度や冷却速度等によって特に限定されず、適宜調製できるが、打錠用途やソフトカプセル用途として使用する場合には平均粒子径が１〜３００μｍとすることが好ましい。補酵素Ｑ１０粒子の平均粒子径が３００μｍを超える場合、例えば打錠時やソフトカプセルの充填時に充填量が均一にならない等の問題がある。
【００４８】
本発明の製造方法においては、微量の界面活性剤や水溶性分散剤以外に、造粒のための賦形剤やコーティング剤を必要としないことから、得られる補酵素Ｑ１０粒子における補酵素Ｑ１０含有量は高く、例えば、粒子中の補酵素Ｑ１０含有量が９０重量％以上、より好ましくは９５重量％以上となる。粒子中の補酵素Ｑ１０の含有量が高いほど、食品や医薬品用途に混合する際、製造効率が向上し、また製剤化における設計の自由度が高くなるため好ましい。但し、必要に応じて、本発明の製造方法によって得られた補酵素Ｑ１０粒子に、賦形剤を添加・混合したり、コーティングを行うことを排除するものではない。
【００４９】
本発明の製造方法により得られる補酵素Ｑ１０粒子は、そのままの形態で、打錠やソフトカプセルへの充填が可能であるほか、親和性のある油脂類等に溶解、混合する等、補酵素Ｑ１０原末と同様に加工して使用することができる。
【実施例】
【００５０】
次に本発明を実施例により具体的に説明する。実施例および比較例においては、補酵素Ｑ１０粒子の原料として、株式会社カネカ製の酸化型補酵素Ｑ１０（原末）および還元型補酵素Ｑ１０（原末）を使用した。実施例中の粒子中の補酵素Ｑ１０の含有量は、下記ＨＰＬＣ分析により求めたが、得られた補酵素Ｑ１０の含有量は本発明における含有量の限界値を規定するものではない。
【００５１】
（ＨＰＬＣ分析条件）
カラム：ＳＹＭＭＥＴＲＹ Ｃ１８（Ｗａｔｅｒｓ製）２５０ｍｍ（長さ）４．６ｍｍ（内径）、移動相；Ｃ２Ｈ５ＯＨ：ＣＨ３ＯＨ＝４：３（ｖ：ｖ）、検出波長；２１０ｎｍ、流速；１ｍＬ／ｍｉｎ、還元型補酵素Ｑ１０の保持時間；９．１ｍｉｎ、酸化型補酵素Ｑ１０の保持時間；１３．３ｍｉｎ。
【００５２】
（実施例１）
デカグリセリンモノオレイン酸エステル（理研ビタミン製、ポエムＪ−０３８１Ｖ）０．０１重量％を含有するイオン交換水５００ｍＬを５５℃に加温し、酸化型補酵素Ｑ１０（原末）３０ｇを加え、補酵素Ｑ１０が十分に溶融した状態で、ホモジナイザーで乳化分散し、酸化型補酵素Ｑ１０のＯ／Ｗエマルジョンを調製した。つづいて、該Ｏ／Ｗエマルジョンを内容積１０００ｍＬの撹拌装置付きセパラブルフラスコに仕込み、さらに液中のアラビアガム濃度が１重量％となるよう、アラビアガム水溶液を添加し、総液量を６００ｍＬとした上で、ディスクタービン翼を用いて撹拌した（単位容積当たりの撹拌所要動力 ０．３４ｋＷ／ｍ３）。その後、該Ｏ／Ｗエマルジョンをその撹拌条件のまま０．２℃／ｍｉｎの冷却速度で３５℃まで冷却してから、吸引濾過、真空乾燥して補酵素Ｑ１０粒子を得た。得られた粒子の補酵素Ｑ１０含有量は９９．４重量％であった。得られた補酵素Ｑ１０粒子をマイクロスコープ（キーエンス製デジタルマイクロスコープＶＨ−６２００、以下同じ）で観察したところ、平均粒子径約４２μｍの球状粒子となっていた。また、得られた還元型補酵素Ｑ１０粒子を走査型電子顕微鏡（日立製作所製Ｓ−８００、以下ＳＥＭと称する）で観察したところ、図１に示したような球形の粒子形状が観察された。さらに、得られた補酵素Ｑ１０粒子をパウダーテスタ（ホソカワミクロン製パウダーテスタＰＴ?Ｒ型、以下同じ）により、粉体流動特性の評価を行ったところ、Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数は８３．５となり、流動特性の程度は「良好（Ｇｏｏｄ）」となった。
【００５３】
（実施例２）
酸化型補酵素Ｑ１０の代わりに還元型補酵素Ｑ１０（原末）３０ｇを用い、すべて窒素雰囲気下による操作のもとで、その他は実施例１と同じ方法・条件により還元型補酵素Ｑ１０粒子を得た。得られた粒子の還元型補酵素Ｑ１０含有量は９９．２重量％であった。得られた還元型補酵素Ｑ１０粒子をマイクロスコープで観察したところ、平均粒子径約２８μｍの球状粒子となっていた。また、得られた還元型補酵素Ｑ１０粒子をパウダーテスタにより、粉体流動特性の評価を行ったところ、Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数は８１．０となり、流動特性の程度は「良好（Ｇｏｏｄ）」となった。
【００５４】
（比較例１）
実施例１の原料として使用した酸化型補酵素Ｑ１０原末をマイクロスコープで観察したところ、平均粒子径約４０μｍの結晶形であった。また、酸化型補酵素Ｑ１０原末をＳＥＭで観察したところ、図２に示したような板状の結晶形が観察された。さらに、酸化型補酵素Ｑ１０原末をパウダーテスタにより、粉体流動特性の評価を行ったところ、Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数は４１．０となり、流動特性の程度は「やや不良（Ｐｏｏｒ）」となった。
【００５５】
（比較例２）
実施例２の原料として使用した還元型補酵素Ｑ１０原末をマイクロスコープで観察したところ、平均粒子径約４５μｍの微粉であった。また、還元型補酵素Ｑ１０原末をパウダーテスタにより、粉体流動特性の評価を行ったところＤｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数は４８となり、流動特性の程度は「やや不良（Ｐｏｏｒ）」となった。
【００５６】
（比較例３）
内容積１０００ｍＬの撹拌装置付きセパラブルフラスコに、酸化型補酵素Ｑ１０（原末）を１０ｇと、９９．５％エタノールを２００ｍＬ仕込み、補助溶剤としてハイオレイックサフラワー油３ｍＬを加えて４５℃で完全に溶解した後、マックスブレンド翼を用いて１５０ｒｐｍで回転撹拌しながら、０．２℃／ｍｉｎの冷却速度で１０℃まで冷却した。吸引濾過、真空乾燥して得られた補酵素Ｑ１０粒子の補酵素Ｑ１０含有量は９９．５重量％であった。得られた補酵素Ｑ１０粒子をマイクロスコープで観察したところ、平均粒子径約１３０μｍの球状の凝集結晶となっていた。また、得られた補酵素Ｑ１０粒子をパウダーテスタにより、粉体流動特性の評価を行ったところ、Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数は７４．５となり、流動特性の程度は「やや良好（Ｆａｉｒ）」となった。
【００５７】
表２に実施例１〜２において得られた補酵素Ｑ１０粒子、および比較例１〜３の補酵素Ｑ１０原末および補酵素Ｑ１０粒子の平均粒子径、補酵素Ｑ１０含有量、粉体流動特性の評価結果を示す。
【００５８】
【表２】
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】実施例１により得られた本発明の補酵素Ｑ１０粒子のＳＥＭ写真である。
【図２】比較例１の補酵素Ｑ１０原末のＳＥＭ写真である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、補酵素Ｑ１０粒子の製造方法に関する。補酵素Ｑ１０は、優れた、食品、栄養機能食品、特定保健用食品、栄養補助剤、栄養剤、動物薬、飲料、飼料、化粧品、医薬品、治療薬、予防薬等として有用な化合物である。
【背景技術】
【０００２】
補酵素Ｑ１０は、人の生体内の細胞中におけるミトコンドリアの電子伝達系構成成分であり、ミトコンドリア内において酸化と還元を繰り返すことで、電子伝達系における伝達成分としての機能を担っているほか、還元型補酵素Ｑ１０は抗酸化作用を持つことが知られている。
【０００３】
補酵素Ｑ１０のうち、酸化型補酵素Ｑ１０は、欧米では健康食品として、日本では鬱血性心不全薬として用いられており、近年では、日本でも健康食品、栄養補助食品や化粧品としても用いられてきている。特に、健康食品、栄養補助食品の分野においては、酸化型補酵素Ｑ１０をソフトカプセル化した商品が主流となっている。
【０００４】
また還元型補酵素Ｑ１０を含有する補酵素Ｑ１０は、従来の酸化型のみの補酵素Ｑ１０よりも、経口吸収性に優れること等、近年、その有効性が知られるようになった。
【０００５】
補酵素Ｑ１０の原末は、例えば、合成、発酵、天然物からの抽出等の方法により補酵素Ｑ１０粗精製物を得た後、クロマトグラフィーにより流出液中の補酵素Ｑ１０区分を濃縮し、晶析により結晶化して得ることができる。しかしながら、このようにして得られる補酵素Ｑ１０の原末は、板状結晶、または針状結晶の形態をとっており、固体表面へのハリツキや原末の凝集が生じやすく、粉体流動特性が非常に悪いことが知られている。また補酵素Ｑ１０を打錠用途やソフトカプセル用途として使用する場合には、製剤充填時の均一性を確保するため、最大粒子径を３００μｍ以下とする必要がある。そのため補酵素Ｑ１０の原末を改良し、微細で粉体流動特性に優れた粒子を造粒できる技術の開発が望まれていた。
【０００６】
補酵素Ｑ１０のうち、酸化型補酵素Ｑ１０の造粒または顆粒化方法には、例えば流動層装置等において、賦形剤を酸化型補酵素Ｑ１０に混合させながら、被覆物質で噴霧コーティングした例（特許文献１）が知られている。しかしながら、このようにして得られる酸化型補酵素Ｑ１０の粒子は、賦形剤やコーティングに使用した物質を多量に含有しているため、粒子中の酸化型補酵素Ｑ１０含有量は高くない。
【０００７】
補酵素Ｑ１０のうち、酵素Ｑ１０を対象とした造粒方法には、貧溶媒中に還元型補酵素Ｑ１０の高濃度液相を添加し、造粒する方法（特許文献２）が知られているが、同造粒方法では微細な粒子を製造することが難しい上、高濃度液相を調製するタンクや送液するポンプ等の付帯設備が必要となる。
【０００８】
ところで、一般的な脂溶性物質の固化造粒方法を対象とした報告の中には、水中に低融点物質を融点以上の温度で溶融、液滴化させた後、冷却固化して造粒した例（特許文献３）がある。
【特許文献１】特開２００６−２１３６０１
【特許文献２】特開２００４−１３０２０１
【特許文献３】特開平９−１２４４０５
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上述したように、補酵素Ｑ１０の原末は板状結晶、または針状結晶の形態をとっているため、静電気が発生しやすく、これにより製剤装置等、固体表面へのハリツキや原末の凝集が生じ、計量時の作業効率が低下したり、打錠時やカプセル充填時に原末容器や製剤装置への付着が起こり、補酵素Ｑ１０の製剤化がスムーズにできない等、生産性や操作性において問題があった。
【００１０】
また、従来の補酵素Ｑ１０の造粒方法は、多量の賦形剤を使用するため、得られる粒子における補酵素Ｑ１０の含有量の低下を招き、食品や医薬品用途に混合する際、製造効率が悪化したり、粉体流動特性が十分でない等の問題があった。
【００１１】
本発明の課題は、簡単な設備及び簡便な操作で、高含有量かつ粉体流動特性に優れた原末並みに微細な補酵素Ｑ１０粒子を効率的に工業生産できる製造方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、補酵素Ｑ１０を水に乳化分散し、油状化した補酵素Ｑ１０をＯ／Ｗエマルジョンに調製する工程と、該Ｏ／Ｗエマルジョンを水溶性分散剤存在下で流動させながら、補酵素Ｑ１０の固化温度以下まで冷却し、固形粒子を得る工程という撹拌・分散条件が異なる２つの工程の操作を行うことで、高含有量で粉体流動特性に優れ、なおかつ原末並みに微細な補酵素Ｑ１０粒子を効率的に工業的に可能な方法で生産できることを見出し、本発明を完成させた。
【００１３】
すなわち本発明は、（１）補酵素Ｑ１０と水とを、界面活性剤存在下で補酵素Ｑ１０の融点以上の温度で乳化分散し、Ｏ／Ｗエマルジョンを調製する、（２）該Ｏ／Ｗエマルジョンを水溶性分散剤存在下で撹拌にて流動させながら補酵素Ｑ１０の固化温度以下まで冷却して固形粒子を得る、という２つの工程を含有することを特徴とする補酵素Ｑ１０粒子の製造方法である。また、本発明は、Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指標が８０以上で、平均粒子径が１〜３００μｍの球形粒子であることを特徴とする補酵素Ｑ１０粒子に関する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明により得られる補酵素Ｑ１０の粒子は、粒度が均一で粉体流動特性に優れており、原末容器や製剤装置への付着、原末の凝集が生じにくく、装置への充填性に優れている。また、本発明の製造方法は、簡単な設備を用いて、簡便な操作で実施できるだけでなく、補酵素Ｑ１０を高含有し、かつ原末並みに微細な補酵素Ｑ１０の粒子の製造が可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下に本発明の実施形態を詳細に説明する。
【００１６】
本発明における補酵素Ｑ１０の粒子の製造方法は、下記（１）および（２）の工程を含有する補酵素Ｑ１０粒子の製造方法である。
【００１７】
（１）補酵素Ｑ１０と水とを、界面活性剤存在下で補酵素Ｑ１０の融点以上の温度で乳化分散し、Ｏ／Ｗエマルジョンを調製する。
【００１８】
（２）該Ｏ／Ｗエマルジョンを、水溶性分散剤存在下、撹拌にて流動させながら補酵素Ｑ１０の固化温度以下まで冷却して、固形粒子を得る。
【００１９】
補酵素Ｑ１０は広く生体に分布する必須成分であり、上述したように、酸化型と還元型が存在する。本発明においては、補酵素Ｑ１０として、酸化型補酵素Ｑ１０、還元型補酵素Ｑ１０のいずれを用いた場合においても、粉体流動特性に優れた粒子を得ることができる。もちろん、補酵素Ｑ１０として酸化型補酵素Ｑ１０と還元型補酵素Ｑ１０の混合物であっても構わない。 本発明の製造方法は上記いずれの形態にも適用できるが、還元型補酵素Ｑ１０の方が酸化型補酵素Ｑ１０より、経口吸収性やその他薬理効果において優れていることから、補酵素Ｑ１０として還元型補酵素Ｑ１０あるいは酸化型補酵素Ｑ１０と還元型補酵素Ｑ１０の混合物に適用するのが一般的には好ましい。混合物である場合の酸化型補酵素Ｑ１０と還元型補酵素Ｑ１０の混合比は特に限定されないが、好ましくは補酵素Ｑ１０中の還元型補酵素Ｑ１０の割合が２０重量％以上、より好ましくは４０重量％以上、さらに好ましくは６０重量％以上、特に好ましくは８０重量％以上である。なお、本明細書において、補酵素Ｑ１０とのみ記載した場合は、酸化型、還元型を問わず、両者が混在する場合には混合物全体も表すものである。
【００２０】
本発明の製造方法における補酵素Ｑ１０の仕込み濃度は特に限定されないが、生産性の観点からは、水に対する補酵素Ｑ１０の仕込み濃度が高いほど好ましく、例えば、上記工程（１）における、水に対する補酵素Ｑ１０の割合が、１重量％以上、特に５重量％以上であることが好ましい。一方、水に対する補酵素Ｑ１０の仕込み濃度が３０重量％以上となる場合は、粒子径のコントロールが困難で、均一な粒子を得ることが難しいため、それ以下とするのが好ましい。
【００２１】
本発明の製造方法では、上記工程（１）において、補酵素Ｑ１０の油状物を、Ｏ／Ｗエマルジョンに調製するために、ＨＬＢが６以上の界面活性剤存在下で乳化分散を行うのが好ましく、水相中における油滴分散形成の観点から、そのＨＬＢは８以上がより好ましく、特に１０以上が好ましい。また、上記、界面活性剤としては、食品用又は医薬品用として使用できるものが好ましく、例えば、グリセリン脂肪酸エステル類、ショ糖脂肪酸エステル類、ソルビタン脂肪酸エステル類、およびレシチン類を挙げることができる。
上記グリセリン脂肪酸エステル類としては、例えば、モノグリセリン脂肪酸有機酸エステル、モノグリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル等が挙げられる。モノグリセリン脂肪酸有機酸エステルとしては、具体的には、モノグリセリンステアリン酸クエン酸エステル、モノグリセリンステアリン酸酢酸エステル、モノグリセリンステアリン酸コハク酸エステル、モノグリセリンカプリル酸コハク酸エステル、モノグリセリンステアリン酸乳酸エステル、モノグリセリンステアリン酸ジアセチル酒石酸エステル等が挙げられる。モノグリセリン脂肪酸エステルとしては、モノグリセリンラウリン酸エステル、モノグリセリンミリスチン酸エステル、モノグリセリンオレイン酸エステル、モノグリセリンステアリン酸エステル等が挙げられる。ポリグリセリン脂肪酸エステルとしては、具体的には、トリグリセリンモノラウリン酸エステル、トリグリセリンモノミリスチン酸エステル、トリグリセリンモノオレイン酸エステル、トリグリセリンモノステアリン酸エステル、ペンタグリセリンモノミリスチン酸エステル、ペンタグリセリントリミリスチン酸エステル、ペンタグリセリンモノオレイン酸エステル、ペンタグリセリントリオレイン酸エステル、ペンタグリセリンモノステアリン酸エステル、ペンタグリセリントリステアリン酸エステル、ペンタグリセリンモノステアリン酸エステル、ヘキサグリセリンモノカプリル酸エステル、ヘキサグリセリンジカプリル酸エステル、ヘキサグリセリンモノラウリン酸エステル、ヘキサグリセリンモノミリスチン酸エステル、ヘキサグリセリンモノオレイン酸エステル、ヘキサグリセリンモノステアリン酸エステル、デカグリセリンモノラウリン酸エステル、デカグリセリンモノミリスチン酸エステル、デカグリセリンモノオレイン酸エステル、デカグリセリンモノパルミチン酸エステル、デカグリセリンモノステアリン酸エステル、デカグリセリンジステアリン酸エステル等が挙げられる。
【００２２】
上記ショ糖脂肪酸エステル類としては、ショ糖の水酸基の１つ以上に炭素数が各々６〜１８、好ましくは６〜１２の脂肪酸をエステル化したものが挙げられる。具体的には、ショ糖パルミチン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステル等が挙げられる。
【００２３】
上記ソルビタン脂肪酸エステル類としては、ソルビタン類の水酸基の１つ以上に炭素数が各々６〜１８、好ましくは６〜１２の脂肪酸をエステル化したものが挙げられる。具体的には、ソルビタンモノステアリン酸エステル、ソルビタンモノオレイン酸エステル等が挙げられる。
【００２４】
上記レシチン類としては、例えば、卵黄レシチン、精製大豆レシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、スフィンゴミエリン、ジセチルリン酸、ステアリルアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルイノシトールアミン、カルジオリピン、セラミドホスホリルエタノールアミン、セラミドホスホリルグリセロール、リゾレシチン、及びこれらの混合物等を挙げることができる。
【００２５】
言うまでもなく、ここで示した界面活性剤は２種以上を合わせて使用することもできる。
【００２６】
工程（１）において、これらの界面活性剤を水相中に添加する濃度は特に限定されないが、その濃度が０．００１〜５重量％となる範囲で含まれることが好ましく、より好ましくは、濃度０．０１〜１重量％の範囲である。
【００２７】
本発明の製造方法の工程（１）において、油状化した補酵素Ｑ１０をＯ／Ｗエマルジョンに調製する際、補酵素Ｑ１０が溶融する温度、すなわち補酵素Ｑ１０の融点以上の温度とする必要がある。補酵素Ｑ１０が十分に溶融し、固形成分が存在しない状態とするためには、上記工程（１）において、補酵素Ｑ１０と水との混合物を、５０℃〜８０℃の温度条件下で乳化分散するのが好ましく、さらには５５℃〜６０℃の温度条件下で乳化分散するのが好ましい。
【００２８】
上記補酵素Ｑ１０のＯ／Ｗエマルジョンを調製するため行う乳化分散には、各種の汎用されている乳化分散機、例えばホモミキサー、ホモディスパー、ホモジナイザー、高圧ホモジナイザー、コロイドミル、超音波乳化機等を用いることができる。
【００２９】
本発明の製造方法では、工程（１）において前述の方法で調製した補酵素Ｑ１０のＯ／Ｗエマルジョンを、次の工程（２）において、水溶性分散剤の添加された水相中で流動させながら冷却し、補酵素Ｑ１０の固形粒子を得る。
【００３０】
本発明の製造方法の工程（２）において使用できる水溶性分散剤としては、特に限定されないが、食品用又は医薬品用として使用できるものが好ましい。そのような水溶性分散剤としては、例えば、アラビアガム、ゼラチン、寒天、澱粉、ペクチン、カラギーナン、カゼイン、アルギン酸類、大豆多糖類、プルラン、セルロース類、およびキサンタンガム等を挙げることができる。
【００３１】
上記アルギン酸類としては、例えば、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム等が挙げられる。
【００３２】
上記大豆多糖類は、大豆より抽出した水溶性の多糖類で、ガラクトース、アラビノース、ガラクツロン酸、キシロース、フルコース、グルコース、ラムノース等の多糖類から構成されるものである。
【００３３】
上記セルロース類としては、例えば、結晶セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース等が挙げられる。
【００３４】
ここで示した水溶性分散剤は２種以上を合わせて使用することもできる。
【００３５】
工程（２）において、上記水溶性分散剤を水相中に添加する濃度は特に限定されないが、水に対して濃度０．００１〜１０重量％となる範囲で含まれることが好ましく、より好ましくは、濃度０．００５〜３重量％の範囲である。
【００３６】
本発明においては、工程（２）において、水溶性分散剤を、補酵素Ｑ１０を分散する水相に添加することで、得られる粒子中の補酵素Ｑ１０を高含有率に維持したまま、粉体流動特性に優れた原末並みに微細な補酵素Ｑ１０粒子を得ることができる。
【００３７】
本発明の製造方法の工程（２）においては、工程（１）で調製したＯ／Ｗエマルジョンの形状を維持したまま、補酵素Ｑ１０の融点以下の温度で補酵素Ｑ１０を固化させる必要がある。工程（２）において、固化させるためには、補酵素Ｑ１０の融点以下とすればよいが、得られる補酵素Ｑ１０粒子の物性の観点からは、４０℃以下の温度まで冷却することが好ましく、さらには３５℃以下の温度まで冷却することが好ましい。
【００３８】
上記工程（２）において、Ｏ／Ｗエマルジョンを冷却する際、冷却速度が速すぎると、得られる補酵素Ｑ１０粒子の均一度は低くなり、粒子径をコントロールすることが困難になることから、冷却速度は、０．５℃／ｍｉｎ以下であることが好ましく、さらには０．２℃／ｍｉｎ以下であることが好ましい。冷却速度の下限は特に限定されないが、冷却速度が極端に遅い場合は、粒子生成時に微粉発生が多くなる等、生産性の問題が生じるため、冷却速度は０．０１℃／ｍｉｎ以上が好ましく、０．０５℃／ｍｉｎ以上であることがより好ましい。
【００３９】
本発明の製造方法の工程（２）においては、工程（１）で調製したＯ／Ｗエマルジョンの形状を維持したまま冷却する必要があるため、該Ｏ／Ｗエマルジョンを冷却する場合の撹拌を、単位容積当たりの所要動力が０．０１ｋＷ／ｍ３以上の条件で行うことが好ましく、０．０５ｋＷ／ｍ３以上の条件で行うことがより好ましい。撹拌所要動力の上限は特に限定されないが、所要動力が著しく大きい場合、液自由表面からの気泡の巻き込みが激しくなり、補酵素Ｑ１０が固化する際に、変形等の障害が生じるため、撹拌所要動力の上限は１．５ｋＷ／ｍ３以下であることが好ましく、より好ましくは１．０ｋＷ／ｍ３以下である。
【００４０】
本発明の製造方法において、工程（１）でのＯ／Ｗエマルジョンを調製する際の界面活性剤の仕込み方法、および、工程（２）での水溶性分散剤の仕込み方法は、補酵素Ｑ１０のＯ／Ｗエマルジョンの調製が可能で、Ｏ／Ｗエマルジョンを冷却して微細な固形粒子が得られる範囲内であれば特に制限は無く、先に工程（１）において界面活性剤と水溶性分散剤とを一括で仕込むこともできる。
【００４１】
本発明の製造方法では、補酵素Ｑ１０のＯ／Ｗエマルジョンの調製工程（工程（１））、および補酵素Ｑ１０の固形粒子を得るための冷却工程（工程（２））において、使用する装置の組み合わせを限定するものでは無く、これら２つの独立した工程がそれぞれ実施できれば、例えば、撹拌槽の外部循環ラインに乳化分散機を組み合わせた、単一の装置にて実施することも可能である。
【００４２】
本発明の製造方法において、このようにして得られた補酵素Ｑ１０固形粒子は、例えば、遠心分離、加圧濾過、減圧濾過等による固液分離、さらに、必要に応じてケーキ洗浄を行い、さらに、真空乾燥などの乾燥処理を行って、乾燥粒子として取得される。
【００４３】
特に、還元型補酵素Ｑ１０は、分子酸素によって酸化され、酸化型補酵素Ｑ１０を副生しやすいため、本発明において、補酵素Ｑ１０として還元型補酵素Ｑ１０や還元型補酵素Ｑ１０と酸化型補酵素Ｑ１０の混合物を使用する場合、上記一連の操作は、脱酸素雰囲気下で実施するのが好ましい。脱酸素雰囲気は、不活性ガスによる置換、減圧、沸騰やこれらを組み合わせることにより達成できる。上記不活性ガスとしては、例えば窒素ガス、ヘリウムガス、アルゴンガス、水素ガス、炭酸ガスを挙げることができ、好ましくは窒素ガスである。
【００４４】
本発明の製造方法により得られる補酵素Ｑ１０粒子は、球形で粉体流動特性に優れた粒子である。具体的には、Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数が８０以上の補酵素Ｑ１０粒子である。粉体流動特性の観点から、その指数は高いほど好ましく、上記好ましい製造条件を適宜選択することで、８０以上の補酵素Ｑ１０粒子を得ることが出来る。公知の晶析方法で得られる補酵素Ｑ１０原末のように、Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数が５０を下回る場合、流動性が悪くなり、補酵素Ｑ１０粒子の移送時の効率が悪化したり、装置充填がスムーズにできない等、生産性や操作性の問題がある。
【００４５】
なお、Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数は、粒子の安息角、圧縮度、スパチュラ角、均一度を総合的に評価した指数であり、ＣＨＥＮＩＣＡＬ ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ−Ｊａｎｕａｒｙ １８、１９６５において定義されたものである。Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数に関する定義を表１に示す。
【００４６】
【表１】
【００４７】
本発明の製造方法によって得られる補酵素Ｑ１０粒子の形状は上述したように球形となる。その平均粒子径としては、製造時の撹拌速度や冷却速度等によって特に限定されず、適宜調製できるが、打錠用途やソフトカプセル用途として使用する場合には平均粒子径が１〜３００μｍとすることが好ましい。補酵素Ｑ１０粒子の平均粒子径が３００μｍを超える場合、例えば打錠時やソフトカプセルの充填時に充填量が均一にならない等の問題がある。
【００４８】
本発明の製造方法においては、微量の界面活性剤や水溶性分散剤以外に、造粒のための賦形剤やコーティング剤を必要としないことから、得られる補酵素Ｑ１０粒子における補酵素Ｑ１０含有量は高く、例えば、粒子中の補酵素Ｑ１０含有量が９０重量％以上、より好ましくは９５重量％以上となる。粒子中の補酵素Ｑ１０の含有量が高いほど、食品や医薬品用途に混合する際、製造効率が向上し、また製剤化における設計の自由度が高くなるため好ましい。但し、必要に応じて、本発明の製造方法によって得られた補酵素Ｑ１０粒子に、賦形剤を添加・混合したり、コーティングを行うことを排除するものではない。
【００４９】
本発明の製造方法により得られる補酵素Ｑ１０粒子は、そのままの形態で、打錠やソフトカプセルへの充填が可能であるほか、親和性のある油脂類等に溶解、混合する等、補酵素Ｑ１０原末と同様に加工して使用することができる。
【実施例】
【００５０】
次に本発明を実施例により具体的に説明する。実施例および比較例においては、補酵素Ｑ１０粒子の原料として、株式会社カネカ製の酸化型補酵素Ｑ１０（原末）および還元型補酵素Ｑ１０（原末）を使用した。実施例中の粒子中の補酵素Ｑ１０の含有量は、下記ＨＰＬＣ分析により求めたが、得られた補酵素Ｑ１０の含有量は本発明における含有量の限界値を規定するものではない。
【００５１】
（ＨＰＬＣ分析条件）
カラム：ＳＹＭＭＥＴＲＹ Ｃ１８（Ｗａｔｅｒｓ製）２５０ｍｍ（長さ）４．６ｍｍ（内径）、移動相；Ｃ２Ｈ５ＯＨ：ＣＨ３ＯＨ＝４：３（ｖ：ｖ）、検出波長；２１０ｎｍ、流速；１ｍＬ／ｍｉｎ、還元型補酵素Ｑ１０の保持時間；９．１ｍｉｎ、酸化型補酵素Ｑ１０の保持時間；１３．３ｍｉｎ。
【００５２】
（実施例１）
デカグリセリンモノオレイン酸エステル（理研ビタミン製、ポエムＪ−０３８１Ｖ）０．０１重量％を含有するイオン交換水５００ｍＬを５５℃に加温し、酸化型補酵素Ｑ１０（原末）３０ｇを加え、補酵素Ｑ１０が十分に溶融した状態で、ホモジナイザーで乳化分散し、酸化型補酵素Ｑ１０のＯ／Ｗエマルジョンを調製した。つづいて、該Ｏ／Ｗエマルジョンを内容積１０００ｍＬの撹拌装置付きセパラブルフラスコに仕込み、さらに液中のアラビアガム濃度が１重量％となるよう、アラビアガム水溶液を添加し、総液量を６００ｍＬとした上で、ディスクタービン翼を用いて撹拌した（単位容積当たりの撹拌所要動力 ０．３４ｋＷ／ｍ３）。その後、該Ｏ／Ｗエマルジョンをその撹拌条件のまま０．２℃／ｍｉｎの冷却速度で３５℃まで冷却してから、吸引濾過、真空乾燥して補酵素Ｑ１０粒子を得た。得られた粒子の補酵素Ｑ１０含有量は９９．４重量％であった。得られた補酵素Ｑ１０粒子をマイクロスコープ（キーエンス製デジタルマイクロスコープＶＨ−６２００、以下同じ）で観察したところ、平均粒子径約４２μｍの球状粒子となっていた。また、得られた還元型補酵素Ｑ１０粒子を走査型電子顕微鏡（日立製作所製Ｓ−８００、以下ＳＥＭと称する）で観察したところ、図１に示したような球形の粒子形状が観察された。さらに、得られた補酵素Ｑ１０粒子をパウダーテスタ（ホソカワミクロン製パウダーテスタＰＴ?Ｒ型、以下同じ）により、粉体流動特性の評価を行ったところ、Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数は８３．５となり、流動特性の程度は「良好（Ｇｏｏｄ）」となった。
【００５３】
（実施例２）
酸化型補酵素Ｑ１０の代わりに還元型補酵素Ｑ１０（原末）３０ｇを用い、すべて窒素雰囲気下による操作のもとで、その他は実施例１と同じ方法・条件により還元型補酵素Ｑ１０粒子を得た。得られた粒子の還元型補酵素Ｑ１０含有量は９９．２重量％であった。得られた還元型補酵素Ｑ１０粒子をマイクロスコープで観察したところ、平均粒子径約２８μｍの球状粒子となっていた。また、得られた還元型補酵素Ｑ１０粒子をパウダーテスタにより、粉体流動特性の評価を行ったところ、Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数は８１．０となり、流動特性の程度は「良好（Ｇｏｏｄ）」となった。
【００５４】
（比較例１）
実施例１の原料として使用した酸化型補酵素Ｑ１０原末をマイクロスコープで観察したところ、平均粒子径約４０μｍの結晶形であった。また、酸化型補酵素Ｑ１０原末をＳＥＭで観察したところ、図２に示したような板状の結晶形が観察された。さらに、酸化型補酵素Ｑ１０原末をパウダーテスタにより、粉体流動特性の評価を行ったところ、Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数は４１．０となり、流動特性の程度は「やや不良（Ｐｏｏｒ）」となった。
【００５５】
（比較例２）
実施例２の原料として使用した還元型補酵素Ｑ１０原末をマイクロスコープで観察したところ、平均粒子径約４５μｍの微粉であった。また、還元型補酵素Ｑ１０原末をパウダーテスタにより、粉体流動特性の評価を行ったところＤｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数は４８となり、流動特性の程度は「やや不良（Ｐｏｏｒ）」となった。
【００５６】
（比較例３）
内容積１０００ｍＬの撹拌装置付きセパラブルフラスコに、酸化型補酵素Ｑ１０（原末）を１０ｇと、９９．５％エタノールを２００ｍＬ仕込み、補助溶剤としてハイオレイックサフラワー油３ｍＬを加えて４５℃で完全に溶解した後、マックスブレンド翼を用いて１５０ｒｐｍで回転撹拌しながら、０．２℃／ｍｉｎの冷却速度で１０℃まで冷却した。吸引濾過、真空乾燥して得られた補酵素Ｑ１０粒子の補酵素Ｑ１０含有量は９９．５重量％であった。得られた補酵素Ｑ１０粒子をマイクロスコープで観察したところ、平均粒子径約１３０μｍの球状の凝集結晶となっていた。また、得られた補酵素Ｑ１０粒子をパウダーテスタにより、粉体流動特性の評価を行ったところ、Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数は７４．５となり、流動特性の程度は「やや良好（Ｆａｉｒ）」となった。
【００５７】
表２に実施例１〜２において得られた補酵素Ｑ１０粒子、および比較例１〜３の補酵素Ｑ１０原末および補酵素Ｑ１０粒子の平均粒子径、補酵素Ｑ１０含有量、粉体流動特性の評価結果を示す。
【００５８】
【表２】
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】実施例１により得られた本発明の補酵素Ｑ１０粒子のＳＥＭ写真である。
【図２】比較例１の補酵素Ｑ１０原末のＳＥＭ写真である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（１）および（２）の工程を含有する、補酵素Ｑ１０粒子の製造方法。
（１）補酵素Ｑ１０と水とを、界面活性剤存在下で補酵素Ｑ１０の融点以上の温度で乳化分散し、Ｏ／Ｗエマルジョンを調製する
（２）該Ｏ／Ｗエマルジョンを、水溶性分散剤存在下、撹拌にて流動させながら補酵素Ｑ１０の固化温度以下まで冷却して、固形粒子を得る
【請求項２】
工程（１）における、水に対する補酵素Ｑ１０の割合が１重量％以上である請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
工程（１）における、界面活性剤の水に対する割合が、０．００１〜５重量％であることを特徴とする請求項１又は２に記載の製造方法。
【請求項４】
界面活性剤が、ＨＬＢが６以上のグリセリン脂肪酸エステル類、ショ糖脂肪酸エステル類、ソルビタン脂肪酸エステル類、およびレシチン類からなる群より選択される少なくとも１種類であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５】
工程（２）における、水溶性分散剤の水に対する割合が０．００１〜１０重量％であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項６】
水溶性分散剤が、アラビアガム、ゼラチン、寒天、澱粉、ペクチン、カラギーナン、カゼイン、アルギン酸類、大豆多糖類、プルラン、セルロース類、およびキサンタンガムからなる群より選択される少なくとも１種類であることを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項７】
工程（２）における冷却速度が、０．０１〜０．５℃／ｍｉｎであることを特徴とする請求項１〜６のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項８】
工程（２）における冷却時の撹拌を、単位容積当たりの撹拌所要動力が０．０１〜１．５ｋＷ／ｍ３の条件で行うことを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項９】
補酵素Ｑ１０が還元型補酵素Ｑ１０を含有するものであることを特徴とする請求項１〜８のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１０】
平均粒子径が１〜３００μｍの球形粒子で、かつ、Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数が８０以上であることを特徴とする補酵素Ｑ１０粒子。
【請求項１１】
請求項１〜９いずれか記載の製造方法によって得られる、請求項１０記載の補酵素Ｑ１０粒子。
【請求項１】
下記（１）および（２）の工程を含有する、補酵素Ｑ１０粒子の製造方法。
（１）補酵素Ｑ１０と水とを、界面活性剤存在下で補酵素Ｑ１０の融点以上の温度で乳化分散し、Ｏ／Ｗエマルジョンを調製する
（２）該Ｏ／Ｗエマルジョンを、水溶性分散剤存在下、撹拌にて流動させながら補酵素Ｑ１０の固化温度以下まで冷却して、固形粒子を得る
【請求項２】
工程（１）における、水に対する補酵素Ｑ１０の割合が１重量％以上である請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
工程（１）における、界面活性剤の水に対する割合が、０．００１〜５重量％であることを特徴とする請求項１又は２に記載の製造方法。
【請求項４】
界面活性剤が、ＨＬＢが６以上のグリセリン脂肪酸エステル類、ショ糖脂肪酸エステル類、ソルビタン脂肪酸エステル類、およびレシチン類からなる群より選択される少なくとも１種類であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５】
工程（２）における、水溶性分散剤の水に対する割合が０．００１〜１０重量％であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項６】
水溶性分散剤が、アラビアガム、ゼラチン、寒天、澱粉、ペクチン、カラギーナン、カゼイン、アルギン酸類、大豆多糖類、プルラン、セルロース類、およびキサンタンガムからなる群より選択される少なくとも１種類であることを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項７】
工程（２）における冷却速度が、０．０１〜０．５℃／ｍｉｎであることを特徴とする請求項１〜６のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項８】
工程（２）における冷却時の撹拌を、単位容積当たりの撹拌所要動力が０．０１〜１．５ｋＷ／ｍ３の条件で行うことを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項９】
補酵素Ｑ１０が還元型補酵素Ｑ１０を含有するものであることを特徴とする請求項１〜８のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１０】
平均粒子径が１〜３００μｍの球形粒子で、かつ、Ｄｒ．ＣＡＲＲの粉体流動特性指数が８０以上であることを特徴とする補酵素Ｑ１０粒子。
【請求項１１】
請求項１〜９いずれか記載の製造方法によって得られる、請求項１０記載の補酵素Ｑ１０粒子。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２００９−２９７５５（Ｐ２００９−２９７５５Ａ）
【公開日】平成２１年２月１２日（２００９．２．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−１９７２１０（Ｐ２００７−１９７２１０）
【出願日】平成１９年７月３０日（２００７．７．３０）
【出願人】（００００００９４１）株式会社カネカ (3,932)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年２月１２日（２００９．２．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年７月３０日（２００７．７．３０）
【出願人】（００００００９４１）株式会社カネカ (3,932)
【Ｆターム（参考）】
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