魚油由来のグリセリド油脂組成物及びその製造方法
多価不飽和脂肪酸であるＤＨＡ及びＤＰＡをグリセリド形態で多量含有しているので、栄養・生理学的な長所を有し、ＥＰＡの含量が低いので、ω−６脂肪酸の代謝抑制を始めとするＥＰＡの短所を最小化することができ、１、３位の飽和脂肪酸、特にステアリン酸とパルミチン酸の含量が低いので、人体内消化吸収性に優れている魚油由来のグリセリド油脂組成物を提供する。（ａ）構成脂肪酸のうちドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の含量が４５乃至９５重量％、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の含量が０．００１乃至１３重量％で、（ｂ）構成脂肪酸のうち１、３位に結合された炭素数１６乃至１８の飽和脂肪酸の含量が０．００１乃至５重量％で、（ｃ）ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の重量比が０．５乃至８、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の重量比が３．５乃至１５である魚油由来のグリセリド油脂組成物を構成する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、魚油由来のグリセリド油脂組成物及びその製造方法に関するもので、より詳細には、多価不飽和脂肪酸であるＤＨＡ及びＤＰＡをグリセリド形態で多量含有しているので、栄養・生理学的な長所を有し、ＥＰＡの含量が低いので、ω−６脂肪酸の代謝抑制を始めとするＥＰＡの短所を最小化することができ、１、３位の飽和脂肪酸の含量が低いので、多価不飽和脂肪酸の人体内消化吸収性に優れているだけでなく、酸化安定度、水分散性を始めとする加工特性に優れている魚油由来のグリセリド油脂組成物及びその製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
多価不飽和脂肪酸、すなわち、ＰＵＦＡｓは、体内で合成されないので、食物による摂取が必要であり、細胞血漿膜の構成分として、特に、乳児の脳において必ず必要な重要な生物学的構成分であると長い間認識されてきた。
【０００３】
１９７０年代にグリーンランドのエスキモー人たちを観察した結果、低い心臓病発病率と長鎖ω−３ＰＵＦＡｓの多量摂取との間には互いに連関性があった［参照：Ｄｙｅｒｂｅｒｇ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｃｌ一ｎ Ｎｕｔｒ．２８：９５８−９６６（１９７５）；Ｄｙｅｒｂｅｒｇ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ２（８０８１）：１１７−１１９（Ｊｕｌｙ １５、１９７８）］。より最近の研究によって、ω−３ＰＵＦＡｓの心血管系保護効果が確認された［参照：Ｓｈｉｍｏｋａｗａ，Ｈ．，Ｗｏｒｌｄ Ｒｅｖ Ｎｕｔｒ Ｄｉｅｔ，８８：１００−１０８（２００１）；ｖｏｎ Ｓｃｈａｃｋｙ，Ｃ．，ａｎｄ Ｄｙｅｒｂｅｒｇ，Ｊ．，Ｗｏｒｌｄ Ｒｅｖ Ｎｕｔｒ Ｄｉｅｔ，８８：９０−９９（２００１）］。そして、ω−３脂肪酸を用いた処置に反応するいくつかの障害、例えば、血管形成術後のある程度の再発狭窄症、炎症及びリウマチ性関節炎症状、喘息、乾癬及び湿疹が発見された。γ−リノレン酸（ＧＬＡ；ω−６ＰＵＦＡ）は、ストレスと関連した血圧上昇を低下させ、算術試験上での性能を改善させるものと確認された。ＧＬＡ及びジホモ−γ−リノレン酸（ＤＧＬＡ；他のω−６ＰＵＦＡ）は、血小板凝集を抑制させ、血管拡張を誘発させ、コレステロール水準を低下させ、血管壁平滑筋及び繊維状組織の増殖を抑制させるものと確認された［参照：Ｂｒｅｎｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．８３：８５−１０１（１９７６）］。ＧＬＡまたはＤＧＬＡを単独でまたはエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ；ω−３ＰＵＦＡ）と組み合わせて投与することにより、胃腸出血を低下または防止させ、非ステロイド性消炎剤によって誘発された他の副作用を低下または防止させることが明らかになった（Ｕ．Ｓ．４，６６６，７０１）。さらに、ＧＬＡ及びＤＧＬＡは、子宮内膜症と月経前症候群を予防または治療し（Ｕ．Ｓ．４，７５８，５９２）、筋痛性脳脊髄炎及びウイルス感染後の慢性疲労を治療するものと確認された（Ｕ．Ｓ．５，１１６，８７１）。その他の証拠は、ＰＵＦＡｓがカルシウム代謝調節に関与可能であることを指示するが、これは、ＰＵＦＡｓが骨多孔症と腎臓または尿路結石を治療または予防するのに有用であることを提示する。最終的に、ＰＵＦＡｓは、癌及び糖尿病の治療に使用することができる［参照：Ｕ．Ｓ．４,８２６,８７７；Ｈｏｒｒｏｂｉｎ ｅｔ ａｌ．,Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ,Ｎｕｔｒ．５７（Ｓｕｐｐｌ．）：７３２Ｓ−７３７Ｓ（１９９３）］。
【０００４】
ＰＵＦＡｓは、一般的に、必須脂肪酸であるリノール酸（ＬＡ）及びα−リノレン酸（ＡＬＡ）をそれぞれ不飽和化及び延長させることで誘導させたω−６脂肪酸及びω−３脂肪酸に分類される。ここで、ωは、脂肪酸のメチル基末端から数えて最初の二重結合がある炭素までの数を表す。
【０００５】
ω−６系のリノール酸、ジホモ−γ−リノレン酸及びアラキドン酸などと、ω−３系のα−リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸などの各種の脂肪酸は、それぞれ異なる生理作用を表すものと確認された。
【０００６】
このようなω−６とω−３脂肪酸は、全て健康維持のために必ず必要であり、約４：１の割合で摂取されるべきである。しかしながら、現在の西欧式食事のために、ω−３よりω−６を平均２０倍以上消費する深刻な不均衡がもたらされている。したがって、このような不均衡を回復するために、ω−３脂肪酸の摂取が必要である。
【０００７】
ドコサヘキサエン酸（ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、以下、‘ＤＨＡ'という。）は、炭素数２２個、６個の二重結合を有するω−３脂肪酸で、その効能としては、主に頭脳機能の強化と視覚発達に寄与することが明らかになっている。このようなＤＨＡは、健康補助食品として愛用されており、高純度製品の場合、高脂血症治療剤などとして使用されている。
【０００８】
ドコサペンタエン酸（ｄｏｃｏｓａｐｅｔａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、以下、‘ＤＰＡ'という。）は、炭素数２２個、５個の二重結合を有するω−３脂肪酸で、血栓生成抑制能、糖質代謝機能、血管内皮細胞の柔軟性改善効果を有するものとして知られている。
【０００９】
エイコサペンタエン酸（ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、以下、‘ＥＰＡ'という。）は、炭素数２０個、５個の二重結合を有するω−３脂肪酸で、人体内で血小板凝集を抑制させ、血漿内のトリグリセリドの水準を低下させ、ＶＬＤＬ（ｖｅｒｙ ｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）とＬＤＬ（ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）の水準を低下させ、ＨＤＬ（ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）の水準を高め、血液粘性及び血圧を低下させ、消炎作用と抗腫瘍作用をするなどの多様な生理活性を表している。
【００１０】
このような多価不飽和脂肪酸を用いた油脂に関する一例として、日本特許第２５７２６９２号はＤＨＡ含有トリグリセリド及びその製造方法に対して開示しており、日本特許第２６０２７４３号はＥＰＡ含有トリグリセリド及びその製造方法に対して開示しており、日本特許公開第２００３−１６０７９４号はオメガ−３系不飽和脂肪酸含有トリグリセリドに対して開示している。また、米国特許第６,８５２,７５８号はオメガ−３不飽和脂肪酸を含有したジグリセリドに対して開示しており、米国特許第６,４１０,０７８号は高度不飽和脂肪酸含有トリグリセリドに対して開示しており、米国特許第６,２００,６２４はオメガ−６脂肪酸であるＡＲＡ及びＤＨＡを含有するトリグリセリドに対して開示しており、ヨーロッパ特許第１５４４２８１号はＤＨＡを含有したモノグリセリドに対して開示しており、国際公開第ＷＯ００／１８９４４号はＣＬＡを含有するトリグリセリド形態の組成物を開示している。
【００１１】
また、国際公開第ＷＯ２００５／５１４４号は、アラキドン酸の不足状態を改善し、アラキドン酸を増加させるためにＤＰＡを含有する油脂を使用することを提示しているが、ＤＰＡの含量が極めて低い濃度で、製造費用の高い微生物由来の油脂に対するもので、国際公開第ＷＯ２００３／２４２３７号は、体脂肪蓄積を防止可能なω−３脂肪酸を含有する油脂組成物に対して記述しているが、ジグリセリドの構成脂肪酸のうちω−３脂肪酸の含量が１５重量％未満で低い。
【００１２】
上述した多数の特許ではω−３脂肪酸を使用しているが、炭素数１８個以上の広範囲な脂肪酸に対する接近であり、多価不飽和脂肪酸を多量含有した例を探すことができない。特に、多価不飽和脂肪酸を含有したトリグリセリドに関するものがほとんどであり、多価不飽和脂肪酸を含有するジグリセリドに関するほとんどの特許の場合にも、ＤＰＡの機能性を適用した例がない。さらに、ＥＰＡの含量を制限した例がない。
【００１３】
一方、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の重要なω−３脂肪酸は、異なる類型の魚油と海洋プランクトンで発見される。また、微生物［例えば、ポルフィリディウム（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ）、モルティエラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）］から生産可能であるが、費用が多くかかり、商業的規模での培養が困難であるという短所がある。したがって、魚油から多価不飽和脂肪酸を含有する油脂組成物を製造する方法が大いに開発されている。
【００１４】
その一例として、日本特許公開第８−２１４８９１号は、変形された固定化酵素を使用して多価不飽和脂肪酸を豊富に含有する構造脂質の製造方法に対して開示しており、日本特許公開第６−２８７５９３号は、魚油などに含有された多価不飽和脂肪酸の酸化防止のためにエステル交換反応を行い、油脂を安定化する方法を提示している。
【００１５】
しかしながら、上述した特許は、多価不飽和脂肪酸を４５重量％以上の高含量で濃縮させることができなく、生産単価が高いので効率的でない。
【発明の開示】
【００１６】
［発明が解決しようとする課題］
本発明は、上述した問題点を解決するためのもので、その目的は、多価不飽和脂肪酸であるＤＨＡ及びＤＰＡをグリセリド形態で多量含有しているので、栄養・生理学的な長所を有し、ＥＰＡの含量が低いので、ω−６脂肪酸の代謝抑制を始めとするＥＰＡの短所を最小化することができ、１、３位の飽和脂肪酸、特にステアリン酸とパルミチン酸の含量が低いので、人体内消化吸収性に優れている魚油由来のグリセリド油脂組成物を提供することにある。
【００１７】
本発明の他の目的は、魚油から多価不飽和脂肪酸を高含量で濃縮可能であり、生産単価が低いので経済的な前記魚油由来のグリセリド油脂組成物の製造方法を提供することにある。
【００１８】
［課題を解決するための手段］
上記のような目的を達成するために、本発明は、（ａ）構成脂肪酸のうちドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の含量が４５乃至９５重量％、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の含量が０．００１乃至１３重量％で、（ｂ）構成脂肪酸のうち１、３位に結合された炭素数１６乃至１８の飽和脂肪酸の含量が０．００１乃至５重量％で、（ｃ）ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の重量比が０．５乃至８、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の重量比が３．５乃至１５である魚油由来のグリセリド油脂組成物を提供する。
【００１９】
また、本発明は、（ａ）１、３位に特異的な固定化酵素を使用して精製魚油の１、３位に特異的な加水分解を行う段階；（ｂ）前記（ａ）段階で加水分解された加水分解物を脂肪酸部分とグリセリド部分に分画し、分画された脂肪酸の分子蒸留によって多価不飽和脂肪酸を分離する段階；（ｃ）前記（ｂ）段階で分画されたグリセリドの冷却結晶化を行って液体脂を分画する段階；（ｄ）前記（ｂ）段階で分離された多価不飽和脂肪酸と前記（ｃ）段階で分画された液体脂を５．０〜８０．０：２０．０〜９５．０の重量比で混合し、２５乃至８０℃の温度条件、１０乃至４００ｒｐｍの撹拌条件及び０．００１乃至１０Ｔｏｒｒの減圧下で１乃至４８時間の間１、３位に特異的な固定化酵素を使用してエステル交換反応を行う段階；及び（ｅ）蒸留及び一般精製過程で未反応残留物質を除去する段階を含む魚油由来のグリセリド油脂組成物の製造方法を提供する。
【００２０】
さらに、本発明は、（ａ）位置非特異的な固定化酵素を使用して精製魚油の位置非特異的な加水分解を行う段階；（ｂ）前記（ａ）段階で加水分解された加水分解物を脂肪酸部分とグリセリド部分に分画し、分画された脂肪酸の分子蒸留によって多価不飽和脂肪酸を分離する段階；（ｃ）精製魚油の冷却結晶化を行って液体脂を分画する段階；（ｄ）前記（ｂ）段階で分離された多価不飽和脂肪酸と前記（ｃ）段階で分画された液体脂を３０．０〜８０．０：２０．０〜７０．０の重量比で混合し、２５乃至８０℃の温度条件、１０乃至４００ｒｐｍの撹拌条件及び常圧下で１乃至４８時間の間１、３位に特異的な固定化酵素を使用してエステル交換反応を行う段階；及び（ｅ）蒸留及び一般精製過程で未反応残留物質を除去する段階を含む魚油由来のグリセリド油脂組成物の製造方法を提供する。
【００２１】
［発明の効果］
本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物は、多価不飽和脂肪酸であるＤＨＡ及びＤＰＡをグリセリド形態で多量含有しているので、栄養・生理学的な長所を有し、ＥＰＡの含量が低いので、ω−６脂肪酸の代謝抑制を始めとするＥＰＡ摂取による短所を最小化することができ、１、３位の飽和脂肪酸の含量が低いので、多価不飽和脂肪酸の人体内消化吸収性に優れているだけでなく、酸化安定度、水分散性を始めとする加工特性に優れている。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
以下、本発明をより詳細に説明する。
【００２３】
本発明者たちは、多価不飽和脂肪酸を高含量で含有しながら、人体内消化吸収性に優れている魚油由来のグリセリド油脂組成物に対して鋭意研究した結果、１、３位に結合された炭素数１６乃至１８の飽和脂肪酸の含量が低い場合、多価不飽和脂肪酸の消化吸収性が増加するだけでなく、飽和脂肪酸によって引き起こされる味感低下、高い融点温度などの問題点が解決できることを確認し、これに基づいて本発明を完成するようになった。
【００２４】
本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物は、構成脂肪酸として、多価不飽和脂肪酸であるドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）を４５乃至９５重量％、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を０.００１乃至１３重量％含有し、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の重量比が０.５乃至８、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の重量比が３.５乃至１５であることを特徴とする。
【００２５】
本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物は、構成脂肪酸としてＤＨＡ及びＤＰＡを高含量で含有し、認知能力向上、視力発達、抗癌作用、学習強化効果を始めとする多様な生理作用を有するＤＨＡ、及び血栓生成抑制能、糖質代謝機能及び血管系疾患予防効果を有するＤＰＡの機能性付与が可能である。
【００２６】
また、血小板凝集抑制作用と出血時間の延長作用があり、摂取時に注意が必要なＥＰＡの含量が１３重量％未満で低い。ＥＰＡは、血漿内のトリグリセリドの水準を低下させ、ＶＬＤＬ（ｖｅｒｙ ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）とＬＤＬ（ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）の水準を低下させ、ＨＤＬ（ｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）の水準を高め、血液粘性及び血圧を低下させ、消炎作用と抗腫瘍作用をするなどの多様な生理活性を有するが、エイコサノイド合成過程中にω−６脂肪酸の代謝を抑制し、乳幼児の場合、ＥＰＡによって体内のアラキドン酸が減少し、成長が鈍化する結果をもたらす。本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物は、ＥＰＡの含量が０.００１乃至１３％、ＤＨＡ／ＥＰＡの重量比が３.５乃至１５で、ＥＰＡの含量を低下させることで、ＥＰＡ摂取による上記のような短所を最小化することができる。
【００２７】
また、ＤＨＡ／ＤＰＡの重量比が０.５乃至８、ＤＨＡ／ＥＰＡの重量比が３.５乃至１５で、魚油に存在するω−３脂肪酸のうちエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の含量を低下させ、ＤＨＡ及びＤＰＡの含量を高めた。
【００２８】
本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物は、１、３位に結合された炭素数１６乃至１８の飽和脂肪酸の含量が０.００１乃至５重量％であることを特徴とする。
【００２９】
すなわち、本発明は、飽和脂肪酸の含量が低いことから酸化安定度を確保可能であり、健康上に利点を有するだけでなく、飽和脂肪酸によって引き起こされる味感低下、高い融点温度などの問題点を解決することで、加工特性を改善させることができる、
このとき、前記飽和脂肪酸がパルミチン酸（Ｃ１６：０）またはステアリン酸（Ｃ１８：０）であると、酸化安定度、多価不飽和脂肪酸の消化吸収側面で好ましい。
【００３０】
１、３位のパルミチン酸とステアリン酸は、小腸でリパーゼによって分解された後、ケン化物の形態をなし、結局、エネルギー源として使用されるべき脂肪酸の吸収減少を引き起こすだけでなく、不溶性塩を形成することで、多価不飽和脂肪酸の吸収を減少させる。したがって、１、３位のパルミチン酸とステアリン酸の含量は、０.００１乃至５重量％であることが好ましい。
【００３１】
ここで、前記グリセリドは、消化吸収性、油脂の安定性及び生理効果面で２０乃至９８重量％のトリグリセリド及び２乃至８０重量％のジグリセリド２乃至８０重量％を含むことが好ましい。さらに、本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物は、（ｉ）構成脂肪酸のうちドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の含量が４５乃至９５重量％、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の含量が０.００１乃至１３重量％で、構成脂肪酸のうち１、３位に結合されたステアリン酸及びパルミチン酸の含量が０.００１乃至５重量％で、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の重量比が０.５乃至８、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の重量比が３.５乃至１５である２０乃至９８重量％のトリグリセリド；及び（ｉｉ）構成脂肪酸のうちドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の含量が５５乃至９５重量％、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の含量が０.００１乃至１０重量％で、構成脂肪酸のうち１、３位に結合されたステアリン酸及びパルミチン酸の含量が０.００１乃至３重量％で、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の重量比が０.５乃至８、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の重量比が３.５乃至１５で、１，３−ジグリセリド／１，２−ジグリセリドの重量比が０．４乃至４．５である２乃至８０重量％のジグリセリドを含むことが最も好ましい。
【００３２】
本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物は、トリグリセリドより水分散性が良好なジグリセリドを含有しており、酸化安定度を増加させるために使用するＢＨＡ（ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｘｙａｎｉｓｏｌｅ）、ＢＨＴ（ｂｕｔｙｌａｔｅｄ ｈｙｄｒｏｘｙ ｔｏｌｕｅｎｅ）、ＴＢＨＱ（ｔｅｒｔ−Ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）、天然抗酸化剤、カテキン、ビタミンＣまたはこれらの誘導体、またはビタミンＥなどの抗酸化剤の溶解が容易であるという長所がある。
【００３３】
本発明に係る魚油由来のグリセリド油脂組成物は、抗酸化剤をさらに含むことが好ましい。このとき、抗酸化剤は、酸化安定性の面で０．００１乃至５重量％の含量でさらに添加されることが好ましく、通常、食品に添加可能なものを使用することができる。好ましくは、ＢＨＡ（ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｘｙａｎｉｓｏｌｅ）、ＢＨＴ（ｂｕｔｙｌａｔｅｄ ｈｙｄｒｏｘｙ ｔｏｌｕｅｎｅ）、ＴＢＨＱ（ｔｅｒｔ−Ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）、天然抗酸化剤、カテキン、ビタミンＣまたはこれらの誘導体、またはビタミンＥを使用する。
【００３４】
上記のように本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物は、必須栄養成分であるとともに、多様な生理活性を有する多価不飽和脂肪酸であるＤＨＡ及びＤＰＡを高含量で含有しているので、栄養・生理学的な長所を有し、ＥＰＡ含量が小さいので、ＥＰＡ摂取による副作用を最小化することができ、１、３位に結合された飽和脂肪酸の含量が低いので、酸化安定度及び人体内消化吸収性が改善され、ジグリセリドを適正比率で含有しているので、水分散性に優れている。
【００３５】
したがって、本発明に係る魚油由来のグリセリド油脂組成物は、食用油、サラダ油、フライ用油脂、マーガリン、ファット・スプレッド、ショートニング、アイスクリーム、生クリームの代替物、ドレッシング、マヨネーズ、製菓用油脂食品または乳幼児食として使用される。
【００３６】
本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物は、下記の二つの方法で製造することができる。
【００３７】
第一の方法では、精製魚油の１、３位に特異的な加水分解を行い、その加水分解物からグリセリド、脂肪酸を分画した後、分画した脂肪酸の分子蒸留を再び行い、多価不飽和脂肪酸を分離する。一方、分画されたグリセリドの冷却結晶化を行い、不飽和脂肪酸を含有する油脂である液体脂を分画する。その後、１、３位に特異的な固定化酵素を使用して、分離された多価不飽和脂肪酸と分画された液体脂のエステル交換反応を行う。
【００３８】
このとき、分離された多価不飽和脂肪酸及び分画された液体脂は、５．０〜８０．０：２０．０〜９５．０の重量比で混合されるが、前記混合比を逸脱する場合、残留脂肪酸またはモノグリセリドの重量比が高くなり、以後、精製工程上の収率が低下し、エステル交換反応速度が著しく低下するという問題点がある。
【００３９】
エステル交換反応は、１、３位に特異的な固定化酵素を使用して０．００１乃至１０Ｔｏｒｒの減圧、２５乃至８０℃の温度条件及び１０乃至４００ｒｐｍの撹拌条件下で１乃至４８時間の間行われる。このとき、０．００１Ｔｏｒｒ未満の減圧条件では、エステル交換反応速度が増加しないだけでなく、必要以上の真空度を提供するために過多の真空設備を備えるべきであって非経済的であり、１０Ｔｏｒｒを超える場合、合成中に生成される水分が円滑に除去されないので、合成進行率が低下し、２５℃未満の温度では効果的な反応が形成されなく、８０℃超過の温度では、酵素の不活性化の発生によって反応速度が著しく低下する。また、１０ｒｐｍ未満の撹拌条件では円滑に混合されず、４００ｒｐｍ超過の条件では、強力な撹拌によって乳化現象が発生するが、このような乳化現象は、反応体積の増加とともに著しく発生するようになる。エステル交換反応時間が１時間未満である場合、反応が不完全な状態で製造工程が終了し、４８時間を超える場合、これ以上反応が進行されないという問題点がある。
【００４０】
第二の方法では、精製魚油の位置非特異的な加水分解を行い、その加水分解物からグリセリドと脂肪酸を分画した後、分画された脂肪酸の分子蒸留を再び行い、多価不飽和脂肪酸を分離する。一方、精製魚油の冷却結晶化を行い、不飽和脂肪酸を含有する油脂である液体脂を分画する。その後、１、３位に特異的な固定化酵素を使用して、分離された多価不飽和脂肪酸と分画された液体脂のエステル交換反応を行う。
【００４１】
このとき、分離された多価不飽和脂肪酸と分画された液体脂は、３０．０〜８０．０：２０．０〜７０．０の重量比で混合されるが、前記混合比を逸脱する場合、残留脂肪酸またはモノグリセリドの重量比が高くなり、以後、精製工程上の収率が低下し、エステル交換反応速度が著しく低下するという問題点がある。
【００４２】
エステル交換反応は、１、３位に特異的な固定化酵素を使用して２５乃至８０℃の温度、１０乃至４００ｒｐｍの撹拌条件及び常圧下で１乃至４８時間の間行われる。エステル交換反応温度が２５℃未満である場合、飽和脂肪酸の融点に近接して結晶が発生し、反応液が濁るという問題点があり、８０℃を超える場合、酵素活性が制限を受けることで合成収率が低下し、生産単価が高くなり、撹拌条件によって乳化現象が発生するという問題点がある。また、撹拌条件が１０ｒｐｍ未満である場合、円滑に混合されなく、４００ｒｐｍ超過の条件では、強力な撹拌によって固定化酵素に加えられる物理的な強度が増加し、酵素不活性化促進現象が深化される。また、反応時間が１時間未満である場合、反応が不完全な状態で製造工程が終了し、４８時間を超える場合、これ以上反応が進行されない。
【００４３】
本発明の方法のうち酵素反応に使用される酵素としては、従来に公知された１、３位特異性リパーゼであるクモノスカビ属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｓｐ．）微生物、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．）微生物及びケカビ属（Ｍｕｃｏｒ ｓｐ．）微生物などの微生物由来のリパーゼ、または位置非特異性リパーゼであるカンジダシリンドラセア（Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）、膵臓リパーゼなどが好ましいが、特に何れか一種の酵素に限定されることはない。本発明の実施例では、１、３−位特異性リパーゼ（Ｌｉｐｏｚｙｍｅ ＲＭ ＩＭ）をノボノルディスク社から購入して使用した。
【００４４】
前記酵素の使用量は、酵素反応の反応物質１００重量部に対して０．１乃至２０重量部であることが好ましい。このとき、酵素の使用量が０．１重量部未満である場合には、反応転換率が著しく低下し、２０重量部を超える場合には、これ以上反応が進行されないので、経済性が低下するという問題点がある。
【００４５】
以下、本発明の製造方法を詳細に説明する。
【００４６】
（１）１、３位に特異的な加水分解反応段階
反応条件をより詳しく説明すると、まず、精製魚油と水を混合し、１、３位に特異的な固定化酵素を使用して全体的または部分的な加水分解反応を行う。本加水分解段階では、精製魚油１００重量部に対して水を４０乃至１５０重量部添加することが好ましく、全体の脂肪酸のうち１０乃至９０重量％の脂肪酸をグリセリドから分離する工程を行う。
【００４７】
（２）位置非特異的な加水分解反応段階
本段階は、（ａ）段階を代替可能な加水分解方法で、上述した（ａ）段階と同一量の精製魚油と水を使用して、油脂内脂肪酸の一部分、すなわち、全体の脂肪酸のうち０．１乃至９９重量％の脂肪酸をグリセリドから分離する工程を行う。
【００４８】
加水分解条件は、前記混合された油脂と水の混合物を１０乃至４００ｒｐｍで撹拌することが好ましく、撹拌速度が１０ｒｐｍ未満であると、弱い撹拌力によって油脂と水との層分離が形成され、加水分解率が低下するという問題点があり、４００ｒｐｍを超えると、油脂と水との乳化現象が発生し、後ほどの水と油脂の分離が難しくなるという問題点があって好ましくない。
【００４９】
（３）脂肪酸、グリセリド分画段階
また、前記（１）または（２）から獲得した加水分解された油脂は、反応終末点を確認した後、撹拌を停止し、定置条件を提供することで、水と分離した油脂部分を収得する。このように収得された油脂には脂肪酸、モノグリセリド、トリグリセリドが混合されているので、本段階では、脂肪酸、特に飽和脂肪酸を除去する。
【００５０】
脂肪酸除去方法としては、蒸留法、結晶法、低温結晶法、尿素添加法、クロマトグラフィー法などを使用することができ、特に、尿素添加法を使用して飽和脂肪酸を選択的に結晶化して析出する方法、常圧蒸留または減圧蒸留を通した脂肪酸除去方法、または、低温条件を提供することで、脂肪酸特有の融点温度差を用いた結晶化法が好ましい。このような分画法は、単独でまたは混用によって脂肪酸除去率を高めることができる。特に、減圧蒸留法は、最終分画法として使用可能であり、減圧蒸留条件が０．００１ｔｏｒｒ未満であると、蒸留時に脂肪酸、モノグリセリド及びジグリセリドが一緒に蒸留されるという問題点があり、１０ｔｏｒｒを超えると、脂肪酸の蒸留が難しいので、減圧蒸留条件の適用において真空度調節が非常に重要である。
【００５１】
（４）液体脂分画段階
本段階は、精製魚油のグリセリドまたは分画されたグリセリドの融点を用いて多価不飽和脂肪酸を多く含有するグリセリドと飽和脂肪酸を多く含有するグリセリドを分離することを目的とする。精製魚油を５０℃で約１時間の間１０〜３００ｒｐｍで撹拌しながら結晶化に影響を与えられる粒子を除去した後、−１０℃まで５乃至１０℃／ｈｒの冷却速度で精製魚油の温度を低下させ、固体脂を生成させる。このとき、冷却速度は、５〜１０℃／ｈｒであることが最も適切である。これより冷却速度が速い場合には、部分的に油脂が硬くなって分離が難しくなり、これより冷却速度が低い場合には、固体脂の選択性低下によって収率が低下し、長い工程時間が要求され、生産性が低下するようになる。
【００５２】
一方、撹拌速度が３００ｒｐｍを越える場合、結晶形成に支障を与えることで収率が低下し、１０ｒｐｍ未満である場合、熱伝逹の阻害によって固体脂の形成が難しくなる。また、結晶形成を促進するために結晶促進剤である多様な乳化剤を添加することで、高い収率を達成することができる。
【００５３】
（５）エステル交換反応段階
１、３位置特異的な固定化酵素を使用して多価不飽和脂肪酸と液体脂のエステル交換反応を行い、本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物を得る。
【００５４】
エステル交換反応段階は、分画されたグリセリド、適切な比率の脂肪酸または分画された多価不飽和脂肪酸及び液体脂を混合した後、２５乃至８０℃の温度、１０乃至４００ｒｐｍの撹拌条件及び０．００１乃至１０Ｔｏｒｒの減圧下で１乃至４８時間の間１、３位置特異的な固定化酵素を使用したエステル交換反応を行う段階である。
【００５５】
前記交換反応の経済性と効率性を確保するために、固定化酵素用反応器の選定が非常に重要であるが、反応方式、溶媒、基質、反応器の配列、リパーゼ、固定化方法、固定化補助剤の使用可否及び種類、支持物質を考慮した上で、次のような反応器が生産可能である。すなわち、回分式撹拌反応器（Ｂａｔｃｈ ｓｔｉｒｒｅｄ ｔａｎｋ ｒｅａｃｔｏｒ：ＢＳＴＲ）、パックドベッド反応器（Ｐａｃｋｅｄ−ｂｅｄ ｒｅａｃｔｏｒ：ＰＢＲ）、膜反応器（Ｍｅｍｂｒａｎｅ ｒｅａｃｔｏｒ：ＭＲ）などのように、固定化酵素の損失を最小化しながらエステル交換反応の最適化を誘導する反応器の運営技術が非常に重要である。１０乃至３００ｒｐｍ、特に１５０ｒｐｍの撹拌速度、２５乃至８０℃、特に４５℃の温度で実施されることが好ましく、移送速度として、生産品の品質を確認しながら適切な運転条件を提供しなければならない。撹拌速度または移送速度が過度に遅いと、転換率が低下するという問題点があり、撹拌速度または移送速度が適正な水準を超えると、固定化酵素の破損が大きくなるだけでなく、生産品の品質が悪化されるので、撹拌速度または移送速度の制御が重要である。また、反応温度が２５℃未満であると、酵素による転換率が遅くなるという問題点があり、８０℃を超えると、初期反応は速いが、酵素などが熱によって影響を受けられるという問題点がある。また、反応時間が１時間未満であると、反応時間が短くなるので転換率がよくない。
【００５６】
上記のように、本発明に係る製造方法は、製造工程が比較的簡単であり、生産性に優れているだけでなく、低い生産単価で高機能性油脂の生産が可能である。
【００５７】
以下、本発明の理解を助けるために実施例と実験例を提示する。
【００５８】
下記の実施例は、本発明をより容易に理解するために提供されるものに過ぎなく、本発明が下記の実施例に限定されることはない。
【００５９】
（実施例１）
１．位置非特異的な加水分解反応
撹拌器が設置された３Ｌの反応器に精製魚油（１０００ｇ）、精製水（１０００ｇ）及び位置非特異性リパーゼ（Ｌｉｐａｓｅ−ＯＦ、Ｍｅｉｔｏ ｓａｎｇｙｏ）４ｇを混合した後、３００ＲＰＭの撹拌速度で撹拌しながら４０℃で１０時間の間非選択的な加水分解を行い、加水分解された油脂組成物を製造した。 ２．脂肪酸分画
前記製造された加水分解された油脂のうちモノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドなどのグリセリドと脂肪酸を分画するために、収得した加水分解油脂の減圧蒸留を１Ｔｏｒｒ真空条件下で行って脂肪酸（８２０ｇ）を獲得し、獲得した遊離脂肪酸の分子蒸留を２２０℃で再び行い、炭素数が２２個以上である多価不飽和脂肪酸（３４０ｇ）を分画した。
【００６０】
３．液体脂分画
別途の工程で精製魚油（１０００ｇ）を５０℃で充分に溶かした後、−５℃まで１５ＲＰＭで徐々に撹拌しながら冷却させる冷却結晶化工程を経て固体脂（６５０ｇ）を除去し、多価不飽和脂肪酸がより多く含有された液体脂（１５０ｇ）を獲得した。
【００６１】
４．エステル交換反応及び精製
前記２．段階で分画した多価不飽和脂肪酸（３３０ｇ）と前記３．段階で分画した液体脂（１１０ｇ）を混合し、ノボザイム（Ｎｏｖｏｚｙｍｅ）４３５ ６．６ｇを添加し、５Ｔｏｒｒの減圧、２５０ＲＰＭの撹拌条件及び４０℃の温度で２０時間の間エステル交換反応を実施した。その後、前記酵素をフィルターで除去し、約４３０ｇの工程油を得た後、分子蒸留によって残留遊離脂肪酸を除去した後、脱色及び脱臭を行うことで本発明に係る油脂組成物を収得した。
【００６２】
前記油脂組成物の脂肪酸及びグリセリドは、分析例に記載された方法で分析し、下記の表１乃至表４に示した。
【００６３】
（実施例２） １．１、３位に特異的な加水分解反応
撹拌器が設置された３Ｌの反応器に精製魚油（１０００ｇ）、精製水（１０００ｇ）及び１、３位置特異性リパーゼ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅ ＣＡＬＢ Ｌ、ノボノルディスク社）８ｇを混合した後、１５０ＲＰＭの撹拌速度で撹拌しながら４５℃で１０時間の間反応させ、１、３位特異的に加水分解された油脂組成物を製造した。 ２．グリセリドと脂肪酸の分画
前記製造された加水分解された油脂のうちモノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドなどのグリセリドと脂肪酸を分画するために、収得した加水分解油脂の減圧蒸留を１Ｔｏｒｒ真空条件下で行い、脂肪酸（６２０ｇ）とグリセリド（３００ｇ）を獲得し、獲得した遊離脂肪酸の分子蒸留を２２０℃で再び行い、炭素数が２２個以上である多価不飽和脂肪酸（２５０ｇ）を分画した。
【００６４】
３．液体脂分画
別途の工程で前記２．段階で得たグリセリド（３００ｇ）を５０℃で充分に溶かした後、−５℃まで１５ＲＰＭで徐々に撹拌しながら冷却させる冷却結晶化工程を経て固体脂（６５０ｇ）を除去し、多価不飽和脂肪酸がより多く含有された液体脂（１５０ｇ）を獲得した。
【００６５】
４．エステル交換反応及び精製
前記２．段階で分画した多価不飽和脂肪酸の濃縮物（２５０ｇ）と液体脂（８０ｇ）を混合し、ノボザイム（Ｎｏｖｏｚｙｍｅ）４３５ ５．０ｇを添加し、５Ｔｏｒｒの減圧、２５０ＲＰＭの撹拌条件及び４０℃の温度で２０時間の間エステル交換反応を実施した。その後、前記酵素をフィルターで除去し、約４３０ｇの工程油を得た後、分子蒸留によって残留遊離脂肪酸を除去した後、脱色及び脱臭を行って本発明に係る油脂組成物を収得した。
【００６６】
前記油脂組成物の脂肪酸及びグリセリドは、分析例に記載された方法で分析し、下記の表１乃至表４に示した。
【００６７】
（比較例）
（比較例１）
前記実施例と同一の方法で製造した魚油由来のグリセリド油脂組成物（１００ｇ）、パルミチン酸１９．５ｇ及びステアリン酸１０．５ｇを混合した後、リポザイムＲＭ ＩＭ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅ）４．０ｇを添加し、５Ｔｏｒｒの減圧、２５０ＲＰＭの撹拌条件及び４０℃の温度で８時間の間エステル交換反応を実施した。その後、前記酵素をフィルターで除去し、約１２７ｇの工程油を得た後、分子蒸留によって残留遊離脂肪酸を除去した後、脱色及び脱臭を行って油脂組成物９７ｇを収得した。
【００６８】
前記油脂組成物の脂肪酸及びグリセリドは、分析例に記載された方法で分析し、下記の表１乃至表４に示した。
【００６９】
（比較例２）
前記実施例２と同一の方法で製造した魚油由来のグリセリド油脂組成物（１００ｇ）、パルミチン酸１９．５ｇ及びステアリン酸１０．５ｇを混合した後、リポザイムＲＭ ＩＭ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅ）４．０ｇを添加し、５Ｔｏｒｒの減圧、２５０ＲＰＭの撹拌条件及び４０℃の温度で８時間の間エステル交換反応を実施した。その後、前記酵素をフィルターで除去し、約１２７ｇの工程油を得た後、分子蒸留によって残留遊離脂肪酸を除去した後、脱色及び脱臭を行って油脂組成物９７ｇを収得した。
【００７０】
前記油脂組成物の脂肪酸及びグリセリドは、分析例に記載された方法で分析し、下記の表１乃至表４に示した。
【００７１】
（比較例３）
市販されたイワシ原油（１０００ｇ）を購入し、脱酸、脱色及び脱臭を行って油脂組成物（８５０ｇ）を収得した。
【００７２】
前記油脂組成物の脂肪酸及びグリセリドは、分析例に記載された方法で分析し、下記の表１乃至表４に示した。
【００７３】
【表１】
【００７４】
【表２】
【００７５】
【表３】
【００７６】
【表４】
（実験例）
（魚油由来のグリセリド油脂組成物の風味）
前記実施例１及び実施例２、比較例１乃至比較例３の魚油由来のグリセリド油脂組成物を使用して一定の条件に露出した後、風味及び色価を評価した。
【００７７】
各油脂組成物１００ｇに抗酸化剤を添加しない条件で行った。
【００７８】
自動酸化測定機械であるＲａｎｃｉｍａｔ（Ｒａｎｃｉｍａｔ ７４３、Ｍｅｔｒｏｈｍ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用し、８０℃の試料の温度、２０Ｌ／ｈｒのガス流速、１時間露出の条件で実施した。その結果を下記の表５に示した。
【００７９】
【表５】
前記表５に示すように、色価の変化程度と風味に対して、多価不飽和脂肪酸を高含量で含有し、１、３位に飽和脂肪酸を低含量で含有した本発明に係る実施例１及び実施例２が、１、３位に飽和脂肪酸をより多く含有した比較例１乃至３よりも良好であった。特に、抑制された着色は、多様な適用分野に応用したとき、優れた加工特性を期待することができる。
【００８０】
不ケン化物とケン化物の脂肪酸量を比較すると同時に、体重の変化を測定した。
【００８１】
下記の表６のような組成の飼料を２週間給与し、ラットの消化吸収率及び成長率変化を測定して下記の表７に示した。
【００８２】
【表６】
【００８３】
【表７】
前記表７に示すように、実施例１及び実施例２を使用して配合した飼料を口腔で摂取した各実験群の便で、比較例１及び比較例２と比較してケン化物の量が有意に３０％程度減少し、精製魚油である比較例３の半分水準であった。また、このような傾向は、不ケン化物の量と全体の脂肪酸のうち、特にＤＨＡ、ＤＰＡの排出量を通しても同一であった。このような結果は、油脂の１、３位の飽和脂肪酸、特にパルミチン酸（Ｃ１６：０）とステアリン酸（Ｃ１８：０）の含量と密接な関係があった。すなわち、パルミチン酸とステアリン酸が小腸でリパーゼによって分解された後、ケン化物の形態をなし、結局、エネルギー源として使用されるべき脂肪酸の吸収減少を引き起こすだけでなく、不溶性塩を形成することで、多価不飽和脂肪酸の吸収減少につながることを確認することができた。結果的に、体重の変化を通して分かるように、１、３位のパルミチン酸とステアリン酸の含量は、脂肪酸の吸収を減少させる。
【００８４】
【表８】
（分析例）
１．脂肪酸組成分析のための気体クロマトグラフィー
カラムはＨＰ−ＩＮＮＯＷＡＸ（Ａｇｉｌｅｎｔ社、米国）で、搬送ガスはヘリウム（２．１ｍｌ／分）で、オーブン温度は１５０〜２６０℃で、水素炎イオン化検出器（ＦＩＤ）が２７５℃に設定された条件で、サンプルを２５ｇ／Ｌの濃度で注入して分析した。
【００８５】
２．グリセリド組成分析のための液体クロマトグラフィー
カラムはＳｕｐｅｌｃｏｓｉｌ ＬＣ−Ｓｉ ５μm、２５cm［Ｓｕｐｅｌｃｏ社、米国］で、移動相溶媒は溶媒Ａ（ベンゼン７０：クロロホルム３０：酢酸２）と溶媒Ｂ（エチルアセテート）で、サンプルの注入濃度は１ｍｇ／ｍｌ（クロロホルム溶媒）である条件で、蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ）を使用して２．３ｍｌ／分の流速で分析した。
【００８６】
３．グリセリドの位置異性体分析のための液体クロマトグラフィー
カラムはＣｈｒｏｍＳｐｈｅｒ Ｌｉｐｉｄｓ、５μm、２５cm［ｖａｒｉａｎ、ＵＳＡ］で、移動相溶媒は０．５％アセトニトリルを含むノルマル−ヘキサン（ｎ−ｈｅｘａｎｅ）で、サンプルの注入濃度は１ｍｇ／ｍｌ（クロロホルム溶媒）である条件で、蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ）を使用して２．３ｍｌ／分の流速で分析した。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、魚油由来のグリセリド油脂組成物及びその製造方法に関するもので、より詳細には、多価不飽和脂肪酸であるＤＨＡ及びＤＰＡをグリセリド形態で多量含有しているので、栄養・生理学的な長所を有し、ＥＰＡの含量が低いので、ω−６脂肪酸の代謝抑制を始めとするＥＰＡの短所を最小化することができ、１、３位の飽和脂肪酸の含量が低いので、多価不飽和脂肪酸の人体内消化吸収性に優れているだけでなく、酸化安定度、水分散性を始めとする加工特性に優れている魚油由来のグリセリド油脂組成物及びその製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
多価不飽和脂肪酸、すなわち、ＰＵＦＡｓは、体内で合成されないので、食物による摂取が必要であり、細胞血漿膜の構成分として、特に、乳児の脳において必ず必要な重要な生物学的構成分であると長い間認識されてきた。
【０００３】
１９７０年代にグリーンランドのエスキモー人たちを観察した結果、低い心臓病発病率と長鎖ω−３ＰＵＦＡｓの多量摂取との間には互いに連関性があった［参照：Ｄｙｅｒｂｅｒｇ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｃｌ一ｎ Ｎｕｔｒ．２８：９５８−９６６（１９７５）；Ｄｙｅｒｂｅｒｇ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ２（８０８１）：１１７−１１９（Ｊｕｌｙ １５、１９７８）］。より最近の研究によって、ω−３ＰＵＦＡｓの心血管系保護効果が確認された［参照：Ｓｈｉｍｏｋａｗａ，Ｈ．，Ｗｏｒｌｄ Ｒｅｖ Ｎｕｔｒ Ｄｉｅｔ，８８：１００−１０８（２００１）；ｖｏｎ Ｓｃｈａｃｋｙ，Ｃ．，ａｎｄ Ｄｙｅｒｂｅｒｇ，Ｊ．，Ｗｏｒｌｄ Ｒｅｖ Ｎｕｔｒ Ｄｉｅｔ，８８：９０−９９（２００１）］。そして、ω−３脂肪酸を用いた処置に反応するいくつかの障害、例えば、血管形成術後のある程度の再発狭窄症、炎症及びリウマチ性関節炎症状、喘息、乾癬及び湿疹が発見された。γ−リノレン酸（ＧＬＡ；ω−６ＰＵＦＡ）は、ストレスと関連した血圧上昇を低下させ、算術試験上での性能を改善させるものと確認された。ＧＬＡ及びジホモ−γ−リノレン酸（ＤＧＬＡ；他のω−６ＰＵＦＡ）は、血小板凝集を抑制させ、血管拡張を誘発させ、コレステロール水準を低下させ、血管壁平滑筋及び繊維状組織の増殖を抑制させるものと確認された［参照：Ｂｒｅｎｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．８３：８５−１０１（１９７６）］。ＧＬＡまたはＤＧＬＡを単独でまたはエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ；ω−３ＰＵＦＡ）と組み合わせて投与することにより、胃腸出血を低下または防止させ、非ステロイド性消炎剤によって誘発された他の副作用を低下または防止させることが明らかになった（Ｕ．Ｓ．４，６６６，７０１）。さらに、ＧＬＡ及びＤＧＬＡは、子宮内膜症と月経前症候群を予防または治療し（Ｕ．Ｓ．４，７５８，５９２）、筋痛性脳脊髄炎及びウイルス感染後の慢性疲労を治療するものと確認された（Ｕ．Ｓ．５，１１６，８７１）。その他の証拠は、ＰＵＦＡｓがカルシウム代謝調節に関与可能であることを指示するが、これは、ＰＵＦＡｓが骨多孔症と腎臓または尿路結石を治療または予防するのに有用であることを提示する。最終的に、ＰＵＦＡｓは、癌及び糖尿病の治療に使用することができる［参照：Ｕ．Ｓ．４,８２６,８７７；Ｈｏｒｒｏｂｉｎ ｅｔ ａｌ．,Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ,Ｎｕｔｒ．５７（Ｓｕｐｐｌ．）：７３２Ｓ−７３７Ｓ（１９９３）］。
【０００４】
ＰＵＦＡｓは、一般的に、必須脂肪酸であるリノール酸（ＬＡ）及びα−リノレン酸（ＡＬＡ）をそれぞれ不飽和化及び延長させることで誘導させたω−６脂肪酸及びω−３脂肪酸に分類される。ここで、ωは、脂肪酸のメチル基末端から数えて最初の二重結合がある炭素までの数を表す。
【０００５】
ω−６系のリノール酸、ジホモ−γ−リノレン酸及びアラキドン酸などと、ω−３系のα−リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸などの各種の脂肪酸は、それぞれ異なる生理作用を表すものと確認された。
【０００６】
このようなω−６とω−３脂肪酸は、全て健康維持のために必ず必要であり、約４：１の割合で摂取されるべきである。しかしながら、現在の西欧式食事のために、ω−３よりω−６を平均２０倍以上消費する深刻な不均衡がもたらされている。したがって、このような不均衡を回復するために、ω−３脂肪酸の摂取が必要である。
【０００７】
ドコサヘキサエン酸（ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、以下、‘ＤＨＡ'という。）は、炭素数２２個、６個の二重結合を有するω−３脂肪酸で、その効能としては、主に頭脳機能の強化と視覚発達に寄与することが明らかになっている。このようなＤＨＡは、健康補助食品として愛用されており、高純度製品の場合、高脂血症治療剤などとして使用されている。
【０００８】
ドコサペンタエン酸（ｄｏｃｏｓａｐｅｔａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、以下、‘ＤＰＡ'という。）は、炭素数２２個、５個の二重結合を有するω−３脂肪酸で、血栓生成抑制能、糖質代謝機能、血管内皮細胞の柔軟性改善効果を有するものとして知られている。
【０００９】
エイコサペンタエン酸（ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、以下、‘ＥＰＡ'という。）は、炭素数２０個、５個の二重結合を有するω−３脂肪酸で、人体内で血小板凝集を抑制させ、血漿内のトリグリセリドの水準を低下させ、ＶＬＤＬ（ｖｅｒｙ ｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）とＬＤＬ（ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）の水準を低下させ、ＨＤＬ（ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）の水準を高め、血液粘性及び血圧を低下させ、消炎作用と抗腫瘍作用をするなどの多様な生理活性を表している。
【００１０】
このような多価不飽和脂肪酸を用いた油脂に関する一例として、日本特許第２５７２６９２号はＤＨＡ含有トリグリセリド及びその製造方法に対して開示しており、日本特許第２６０２７４３号はＥＰＡ含有トリグリセリド及びその製造方法に対して開示しており、日本特許公開第２００３−１６０７９４号はオメガ−３系不飽和脂肪酸含有トリグリセリドに対して開示している。また、米国特許第６,８５２,７５８号はオメガ−３不飽和脂肪酸を含有したジグリセリドに対して開示しており、米国特許第６,４１０,０７８号は高度不飽和脂肪酸含有トリグリセリドに対して開示しており、米国特許第６,２００,６２４はオメガ−６脂肪酸であるＡＲＡ及びＤＨＡを含有するトリグリセリドに対して開示しており、ヨーロッパ特許第１５４４２８１号はＤＨＡを含有したモノグリセリドに対して開示しており、国際公開第ＷＯ００／１８９４４号はＣＬＡを含有するトリグリセリド形態の組成物を開示している。
【００１１】
また、国際公開第ＷＯ２００５／５１４４号は、アラキドン酸の不足状態を改善し、アラキドン酸を増加させるためにＤＰＡを含有する油脂を使用することを提示しているが、ＤＰＡの含量が極めて低い濃度で、製造費用の高い微生物由来の油脂に対するもので、国際公開第ＷＯ２００３／２４２３７号は、体脂肪蓄積を防止可能なω−３脂肪酸を含有する油脂組成物に対して記述しているが、ジグリセリドの構成脂肪酸のうちω−３脂肪酸の含量が１５重量％未満で低い。
【００１２】
上述した多数の特許ではω−３脂肪酸を使用しているが、炭素数１８個以上の広範囲な脂肪酸に対する接近であり、多価不飽和脂肪酸を多量含有した例を探すことができない。特に、多価不飽和脂肪酸を含有したトリグリセリドに関するものがほとんどであり、多価不飽和脂肪酸を含有するジグリセリドに関するほとんどの特許の場合にも、ＤＰＡの機能性を適用した例がない。さらに、ＥＰＡの含量を制限した例がない。
【００１３】
一方、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の重要なω−３脂肪酸は、異なる類型の魚油と海洋プランクトンで発見される。また、微生物［例えば、ポルフィリディウム（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ）、モルティエラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）］から生産可能であるが、費用が多くかかり、商業的規模での培養が困難であるという短所がある。したがって、魚油から多価不飽和脂肪酸を含有する油脂組成物を製造する方法が大いに開発されている。
【００１４】
その一例として、日本特許公開第８−２１４８９１号は、変形された固定化酵素を使用して多価不飽和脂肪酸を豊富に含有する構造脂質の製造方法に対して開示しており、日本特許公開第６−２８７５９３号は、魚油などに含有された多価不飽和脂肪酸の酸化防止のためにエステル交換反応を行い、油脂を安定化する方法を提示している。
【００１５】
しかしながら、上述した特許は、多価不飽和脂肪酸を４５重量％以上の高含量で濃縮させることができなく、生産単価が高いので効率的でない。
【発明の開示】
【００１６】
［発明が解決しようとする課題］
本発明は、上述した問題点を解決するためのもので、その目的は、多価不飽和脂肪酸であるＤＨＡ及びＤＰＡをグリセリド形態で多量含有しているので、栄養・生理学的な長所を有し、ＥＰＡの含量が低いので、ω−６脂肪酸の代謝抑制を始めとするＥＰＡの短所を最小化することができ、１、３位の飽和脂肪酸、特にステアリン酸とパルミチン酸の含量が低いので、人体内消化吸収性に優れている魚油由来のグリセリド油脂組成物を提供することにある。
【００１７】
本発明の他の目的は、魚油から多価不飽和脂肪酸を高含量で濃縮可能であり、生産単価が低いので経済的な前記魚油由来のグリセリド油脂組成物の製造方法を提供することにある。
【００１８】
［課題を解決するための手段］
上記のような目的を達成するために、本発明は、（ａ）構成脂肪酸のうちドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の含量が４５乃至９５重量％、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の含量が０．００１乃至１３重量％で、（ｂ）構成脂肪酸のうち１、３位に結合された炭素数１６乃至１８の飽和脂肪酸の含量が０．００１乃至５重量％で、（ｃ）ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の重量比が０．５乃至８、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の重量比が３．５乃至１５である魚油由来のグリセリド油脂組成物を提供する。
【００１９】
また、本発明は、（ａ）１、３位に特異的な固定化酵素を使用して精製魚油の１、３位に特異的な加水分解を行う段階；（ｂ）前記（ａ）段階で加水分解された加水分解物を脂肪酸部分とグリセリド部分に分画し、分画された脂肪酸の分子蒸留によって多価不飽和脂肪酸を分離する段階；（ｃ）前記（ｂ）段階で分画されたグリセリドの冷却結晶化を行って液体脂を分画する段階；（ｄ）前記（ｂ）段階で分離された多価不飽和脂肪酸と前記（ｃ）段階で分画された液体脂を５．０〜８０．０：２０．０〜９５．０の重量比で混合し、２５乃至８０℃の温度条件、１０乃至４００ｒｐｍの撹拌条件及び０．００１乃至１０Ｔｏｒｒの減圧下で１乃至４８時間の間１、３位に特異的な固定化酵素を使用してエステル交換反応を行う段階；及び（ｅ）蒸留及び一般精製過程で未反応残留物質を除去する段階を含む魚油由来のグリセリド油脂組成物の製造方法を提供する。
【００２０】
さらに、本発明は、（ａ）位置非特異的な固定化酵素を使用して精製魚油の位置非特異的な加水分解を行う段階；（ｂ）前記（ａ）段階で加水分解された加水分解物を脂肪酸部分とグリセリド部分に分画し、分画された脂肪酸の分子蒸留によって多価不飽和脂肪酸を分離する段階；（ｃ）精製魚油の冷却結晶化を行って液体脂を分画する段階；（ｄ）前記（ｂ）段階で分離された多価不飽和脂肪酸と前記（ｃ）段階で分画された液体脂を３０．０〜８０．０：２０．０〜７０．０の重量比で混合し、２５乃至８０℃の温度条件、１０乃至４００ｒｐｍの撹拌条件及び常圧下で１乃至４８時間の間１、３位に特異的な固定化酵素を使用してエステル交換反応を行う段階；及び（ｅ）蒸留及び一般精製過程で未反応残留物質を除去する段階を含む魚油由来のグリセリド油脂組成物の製造方法を提供する。
【００２１】
［発明の効果］
本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物は、多価不飽和脂肪酸であるＤＨＡ及びＤＰＡをグリセリド形態で多量含有しているので、栄養・生理学的な長所を有し、ＥＰＡの含量が低いので、ω−６脂肪酸の代謝抑制を始めとするＥＰＡ摂取による短所を最小化することができ、１、３位の飽和脂肪酸の含量が低いので、多価不飽和脂肪酸の人体内消化吸収性に優れているだけでなく、酸化安定度、水分散性を始めとする加工特性に優れている。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
以下、本発明をより詳細に説明する。
【００２３】
本発明者たちは、多価不飽和脂肪酸を高含量で含有しながら、人体内消化吸収性に優れている魚油由来のグリセリド油脂組成物に対して鋭意研究した結果、１、３位に結合された炭素数１６乃至１８の飽和脂肪酸の含量が低い場合、多価不飽和脂肪酸の消化吸収性が増加するだけでなく、飽和脂肪酸によって引き起こされる味感低下、高い融点温度などの問題点が解決できることを確認し、これに基づいて本発明を完成するようになった。
【００２４】
本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物は、構成脂肪酸として、多価不飽和脂肪酸であるドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）を４５乃至９５重量％、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を０.００１乃至１３重量％含有し、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の重量比が０.５乃至８、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の重量比が３.５乃至１５であることを特徴とする。
【００２５】
本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物は、構成脂肪酸としてＤＨＡ及びＤＰＡを高含量で含有し、認知能力向上、視力発達、抗癌作用、学習強化効果を始めとする多様な生理作用を有するＤＨＡ、及び血栓生成抑制能、糖質代謝機能及び血管系疾患予防効果を有するＤＰＡの機能性付与が可能である。
【００２６】
また、血小板凝集抑制作用と出血時間の延長作用があり、摂取時に注意が必要なＥＰＡの含量が１３重量％未満で低い。ＥＰＡは、血漿内のトリグリセリドの水準を低下させ、ＶＬＤＬ（ｖｅｒｙ ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）とＬＤＬ（ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）の水準を低下させ、ＨＤＬ（ｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）の水準を高め、血液粘性及び血圧を低下させ、消炎作用と抗腫瘍作用をするなどの多様な生理活性を有するが、エイコサノイド合成過程中にω−６脂肪酸の代謝を抑制し、乳幼児の場合、ＥＰＡによって体内のアラキドン酸が減少し、成長が鈍化する結果をもたらす。本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物は、ＥＰＡの含量が０.００１乃至１３％、ＤＨＡ／ＥＰＡの重量比が３.５乃至１５で、ＥＰＡの含量を低下させることで、ＥＰＡ摂取による上記のような短所を最小化することができる。
【００２７】
また、ＤＨＡ／ＤＰＡの重量比が０.５乃至８、ＤＨＡ／ＥＰＡの重量比が３.５乃至１５で、魚油に存在するω−３脂肪酸のうちエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の含量を低下させ、ＤＨＡ及びＤＰＡの含量を高めた。
【００２８】
本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物は、１、３位に結合された炭素数１６乃至１８の飽和脂肪酸の含量が０.００１乃至５重量％であることを特徴とする。
【００２９】
すなわち、本発明は、飽和脂肪酸の含量が低いことから酸化安定度を確保可能であり、健康上に利点を有するだけでなく、飽和脂肪酸によって引き起こされる味感低下、高い融点温度などの問題点を解決することで、加工特性を改善させることができる、
このとき、前記飽和脂肪酸がパルミチン酸（Ｃ１６：０）またはステアリン酸（Ｃ１８：０）であると、酸化安定度、多価不飽和脂肪酸の消化吸収側面で好ましい。
【００３０】
１、３位のパルミチン酸とステアリン酸は、小腸でリパーゼによって分解された後、ケン化物の形態をなし、結局、エネルギー源として使用されるべき脂肪酸の吸収減少を引き起こすだけでなく、不溶性塩を形成することで、多価不飽和脂肪酸の吸収を減少させる。したがって、１、３位のパルミチン酸とステアリン酸の含量は、０.００１乃至５重量％であることが好ましい。
【００３１】
ここで、前記グリセリドは、消化吸収性、油脂の安定性及び生理効果面で２０乃至９８重量％のトリグリセリド及び２乃至８０重量％のジグリセリド２乃至８０重量％を含むことが好ましい。さらに、本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物は、（ｉ）構成脂肪酸のうちドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の含量が４５乃至９５重量％、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の含量が０.００１乃至１３重量％で、構成脂肪酸のうち１、３位に結合されたステアリン酸及びパルミチン酸の含量が０.００１乃至５重量％で、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の重量比が０.５乃至８、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の重量比が３.５乃至１５である２０乃至９８重量％のトリグリセリド；及び（ｉｉ）構成脂肪酸のうちドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の含量が５５乃至９５重量％、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の含量が０.００１乃至１０重量％で、構成脂肪酸のうち１、３位に結合されたステアリン酸及びパルミチン酸の含量が０.００１乃至３重量％で、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の重量比が０.５乃至８、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の重量比が３.５乃至１５で、１，３−ジグリセリド／１，２−ジグリセリドの重量比が０．４乃至４．５である２乃至８０重量％のジグリセリドを含むことが最も好ましい。
【００３２】
本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物は、トリグリセリドより水分散性が良好なジグリセリドを含有しており、酸化安定度を増加させるために使用するＢＨＡ（ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｘｙａｎｉｓｏｌｅ）、ＢＨＴ（ｂｕｔｙｌａｔｅｄ ｈｙｄｒｏｘｙ ｔｏｌｕｅｎｅ）、ＴＢＨＱ（ｔｅｒｔ−Ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）、天然抗酸化剤、カテキン、ビタミンＣまたはこれらの誘導体、またはビタミンＥなどの抗酸化剤の溶解が容易であるという長所がある。
【００３３】
本発明に係る魚油由来のグリセリド油脂組成物は、抗酸化剤をさらに含むことが好ましい。このとき、抗酸化剤は、酸化安定性の面で０．００１乃至５重量％の含量でさらに添加されることが好ましく、通常、食品に添加可能なものを使用することができる。好ましくは、ＢＨＡ（ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｘｙａｎｉｓｏｌｅ）、ＢＨＴ（ｂｕｔｙｌａｔｅｄ ｈｙｄｒｏｘｙ ｔｏｌｕｅｎｅ）、ＴＢＨＱ（ｔｅｒｔ−Ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）、天然抗酸化剤、カテキン、ビタミンＣまたはこれらの誘導体、またはビタミンＥを使用する。
【００３４】
上記のように本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物は、必須栄養成分であるとともに、多様な生理活性を有する多価不飽和脂肪酸であるＤＨＡ及びＤＰＡを高含量で含有しているので、栄養・生理学的な長所を有し、ＥＰＡ含量が小さいので、ＥＰＡ摂取による副作用を最小化することができ、１、３位に結合された飽和脂肪酸の含量が低いので、酸化安定度及び人体内消化吸収性が改善され、ジグリセリドを適正比率で含有しているので、水分散性に優れている。
【００３５】
したがって、本発明に係る魚油由来のグリセリド油脂組成物は、食用油、サラダ油、フライ用油脂、マーガリン、ファット・スプレッド、ショートニング、アイスクリーム、生クリームの代替物、ドレッシング、マヨネーズ、製菓用油脂食品または乳幼児食として使用される。
【００３６】
本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物は、下記の二つの方法で製造することができる。
【００３７】
第一の方法では、精製魚油の１、３位に特異的な加水分解を行い、その加水分解物からグリセリド、脂肪酸を分画した後、分画した脂肪酸の分子蒸留を再び行い、多価不飽和脂肪酸を分離する。一方、分画されたグリセリドの冷却結晶化を行い、不飽和脂肪酸を含有する油脂である液体脂を分画する。その後、１、３位に特異的な固定化酵素を使用して、分離された多価不飽和脂肪酸と分画された液体脂のエステル交換反応を行う。
【００３８】
このとき、分離された多価不飽和脂肪酸及び分画された液体脂は、５．０〜８０．０：２０．０〜９５．０の重量比で混合されるが、前記混合比を逸脱する場合、残留脂肪酸またはモノグリセリドの重量比が高くなり、以後、精製工程上の収率が低下し、エステル交換反応速度が著しく低下するという問題点がある。
【００３９】
エステル交換反応は、１、３位に特異的な固定化酵素を使用して０．００１乃至１０Ｔｏｒｒの減圧、２５乃至８０℃の温度条件及び１０乃至４００ｒｐｍの撹拌条件下で１乃至４８時間の間行われる。このとき、０．００１Ｔｏｒｒ未満の減圧条件では、エステル交換反応速度が増加しないだけでなく、必要以上の真空度を提供するために過多の真空設備を備えるべきであって非経済的であり、１０Ｔｏｒｒを超える場合、合成中に生成される水分が円滑に除去されないので、合成進行率が低下し、２５℃未満の温度では効果的な反応が形成されなく、８０℃超過の温度では、酵素の不活性化の発生によって反応速度が著しく低下する。また、１０ｒｐｍ未満の撹拌条件では円滑に混合されず、４００ｒｐｍ超過の条件では、強力な撹拌によって乳化現象が発生するが、このような乳化現象は、反応体積の増加とともに著しく発生するようになる。エステル交換反応時間が１時間未満である場合、反応が不完全な状態で製造工程が終了し、４８時間を超える場合、これ以上反応が進行されないという問題点がある。
【００４０】
第二の方法では、精製魚油の位置非特異的な加水分解を行い、その加水分解物からグリセリドと脂肪酸を分画した後、分画された脂肪酸の分子蒸留を再び行い、多価不飽和脂肪酸を分離する。一方、精製魚油の冷却結晶化を行い、不飽和脂肪酸を含有する油脂である液体脂を分画する。その後、１、３位に特異的な固定化酵素を使用して、分離された多価不飽和脂肪酸と分画された液体脂のエステル交換反応を行う。
【００４１】
このとき、分離された多価不飽和脂肪酸と分画された液体脂は、３０．０〜８０．０：２０．０〜７０．０の重量比で混合されるが、前記混合比を逸脱する場合、残留脂肪酸またはモノグリセリドの重量比が高くなり、以後、精製工程上の収率が低下し、エステル交換反応速度が著しく低下するという問題点がある。
【００４２】
エステル交換反応は、１、３位に特異的な固定化酵素を使用して２５乃至８０℃の温度、１０乃至４００ｒｐｍの撹拌条件及び常圧下で１乃至４８時間の間行われる。エステル交換反応温度が２５℃未満である場合、飽和脂肪酸の融点に近接して結晶が発生し、反応液が濁るという問題点があり、８０℃を超える場合、酵素活性が制限を受けることで合成収率が低下し、生産単価が高くなり、撹拌条件によって乳化現象が発生するという問題点がある。また、撹拌条件が１０ｒｐｍ未満である場合、円滑に混合されなく、４００ｒｐｍ超過の条件では、強力な撹拌によって固定化酵素に加えられる物理的な強度が増加し、酵素不活性化促進現象が深化される。また、反応時間が１時間未満である場合、反応が不完全な状態で製造工程が終了し、４８時間を超える場合、これ以上反応が進行されない。
【００４３】
本発明の方法のうち酵素反応に使用される酵素としては、従来に公知された１、３位特異性リパーゼであるクモノスカビ属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｓｐ．）微生物、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．）微生物及びケカビ属（Ｍｕｃｏｒ ｓｐ．）微生物などの微生物由来のリパーゼ、または位置非特異性リパーゼであるカンジダシリンドラセア（Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）、膵臓リパーゼなどが好ましいが、特に何れか一種の酵素に限定されることはない。本発明の実施例では、１、３−位特異性リパーゼ（Ｌｉｐｏｚｙｍｅ ＲＭ ＩＭ）をノボノルディスク社から購入して使用した。
【００４４】
前記酵素の使用量は、酵素反応の反応物質１００重量部に対して０．１乃至２０重量部であることが好ましい。このとき、酵素の使用量が０．１重量部未満である場合には、反応転換率が著しく低下し、２０重量部を超える場合には、これ以上反応が進行されないので、経済性が低下するという問題点がある。
【００４５】
以下、本発明の製造方法を詳細に説明する。
【００４６】
（１）１、３位に特異的な加水分解反応段階
反応条件をより詳しく説明すると、まず、精製魚油と水を混合し、１、３位に特異的な固定化酵素を使用して全体的または部分的な加水分解反応を行う。本加水分解段階では、精製魚油１００重量部に対して水を４０乃至１５０重量部添加することが好ましく、全体の脂肪酸のうち１０乃至９０重量％の脂肪酸をグリセリドから分離する工程を行う。
【００４７】
（２）位置非特異的な加水分解反応段階
本段階は、（ａ）段階を代替可能な加水分解方法で、上述した（ａ）段階と同一量の精製魚油と水を使用して、油脂内脂肪酸の一部分、すなわち、全体の脂肪酸のうち０．１乃至９９重量％の脂肪酸をグリセリドから分離する工程を行う。
【００４８】
加水分解条件は、前記混合された油脂と水の混合物を１０乃至４００ｒｐｍで撹拌することが好ましく、撹拌速度が１０ｒｐｍ未満であると、弱い撹拌力によって油脂と水との層分離が形成され、加水分解率が低下するという問題点があり、４００ｒｐｍを超えると、油脂と水との乳化現象が発生し、後ほどの水と油脂の分離が難しくなるという問題点があって好ましくない。
【００４９】
（３）脂肪酸、グリセリド分画段階
また、前記（１）または（２）から獲得した加水分解された油脂は、反応終末点を確認した後、撹拌を停止し、定置条件を提供することで、水と分離した油脂部分を収得する。このように収得された油脂には脂肪酸、モノグリセリド、トリグリセリドが混合されているので、本段階では、脂肪酸、特に飽和脂肪酸を除去する。
【００５０】
脂肪酸除去方法としては、蒸留法、結晶法、低温結晶法、尿素添加法、クロマトグラフィー法などを使用することができ、特に、尿素添加法を使用して飽和脂肪酸を選択的に結晶化して析出する方法、常圧蒸留または減圧蒸留を通した脂肪酸除去方法、または、低温条件を提供することで、脂肪酸特有の融点温度差を用いた結晶化法が好ましい。このような分画法は、単独でまたは混用によって脂肪酸除去率を高めることができる。特に、減圧蒸留法は、最終分画法として使用可能であり、減圧蒸留条件が０．００１ｔｏｒｒ未満であると、蒸留時に脂肪酸、モノグリセリド及びジグリセリドが一緒に蒸留されるという問題点があり、１０ｔｏｒｒを超えると、脂肪酸の蒸留が難しいので、減圧蒸留条件の適用において真空度調節が非常に重要である。
【００５１】
（４）液体脂分画段階
本段階は、精製魚油のグリセリドまたは分画されたグリセリドの融点を用いて多価不飽和脂肪酸を多く含有するグリセリドと飽和脂肪酸を多く含有するグリセリドを分離することを目的とする。精製魚油を５０℃で約１時間の間１０〜３００ｒｐｍで撹拌しながら結晶化に影響を与えられる粒子を除去した後、−１０℃まで５乃至１０℃／ｈｒの冷却速度で精製魚油の温度を低下させ、固体脂を生成させる。このとき、冷却速度は、５〜１０℃／ｈｒであることが最も適切である。これより冷却速度が速い場合には、部分的に油脂が硬くなって分離が難しくなり、これより冷却速度が低い場合には、固体脂の選択性低下によって収率が低下し、長い工程時間が要求され、生産性が低下するようになる。
【００５２】
一方、撹拌速度が３００ｒｐｍを越える場合、結晶形成に支障を与えることで収率が低下し、１０ｒｐｍ未満である場合、熱伝逹の阻害によって固体脂の形成が難しくなる。また、結晶形成を促進するために結晶促進剤である多様な乳化剤を添加することで、高い収率を達成することができる。
【００５３】
（５）エステル交換反応段階
１、３位置特異的な固定化酵素を使用して多価不飽和脂肪酸と液体脂のエステル交換反応を行い、本発明の魚油由来のグリセリド油脂組成物を得る。
【００５４】
エステル交換反応段階は、分画されたグリセリド、適切な比率の脂肪酸または分画された多価不飽和脂肪酸及び液体脂を混合した後、２５乃至８０℃の温度、１０乃至４００ｒｐｍの撹拌条件及び０．００１乃至１０Ｔｏｒｒの減圧下で１乃至４８時間の間１、３位置特異的な固定化酵素を使用したエステル交換反応を行う段階である。
【００５５】
前記交換反応の経済性と効率性を確保するために、固定化酵素用反応器の選定が非常に重要であるが、反応方式、溶媒、基質、反応器の配列、リパーゼ、固定化方法、固定化補助剤の使用可否及び種類、支持物質を考慮した上で、次のような反応器が生産可能である。すなわち、回分式撹拌反応器（Ｂａｔｃｈ ｓｔｉｒｒｅｄ ｔａｎｋ ｒｅａｃｔｏｒ：ＢＳＴＲ）、パックドベッド反応器（Ｐａｃｋｅｄ−ｂｅｄ ｒｅａｃｔｏｒ：ＰＢＲ）、膜反応器（Ｍｅｍｂｒａｎｅ ｒｅａｃｔｏｒ：ＭＲ）などのように、固定化酵素の損失を最小化しながらエステル交換反応の最適化を誘導する反応器の運営技術が非常に重要である。１０乃至３００ｒｐｍ、特に１５０ｒｐｍの撹拌速度、２５乃至８０℃、特に４５℃の温度で実施されることが好ましく、移送速度として、生産品の品質を確認しながら適切な運転条件を提供しなければならない。撹拌速度または移送速度が過度に遅いと、転換率が低下するという問題点があり、撹拌速度または移送速度が適正な水準を超えると、固定化酵素の破損が大きくなるだけでなく、生産品の品質が悪化されるので、撹拌速度または移送速度の制御が重要である。また、反応温度が２５℃未満であると、酵素による転換率が遅くなるという問題点があり、８０℃を超えると、初期反応は速いが、酵素などが熱によって影響を受けられるという問題点がある。また、反応時間が１時間未満であると、反応時間が短くなるので転換率がよくない。
【００５６】
上記のように、本発明に係る製造方法は、製造工程が比較的簡単であり、生産性に優れているだけでなく、低い生産単価で高機能性油脂の生産が可能である。
【００５７】
以下、本発明の理解を助けるために実施例と実験例を提示する。
【００５８】
下記の実施例は、本発明をより容易に理解するために提供されるものに過ぎなく、本発明が下記の実施例に限定されることはない。
【００５９】
（実施例１）
１．位置非特異的な加水分解反応
撹拌器が設置された３Ｌの反応器に精製魚油（１０００ｇ）、精製水（１０００ｇ）及び位置非特異性リパーゼ（Ｌｉｐａｓｅ−ＯＦ、Ｍｅｉｔｏ ｓａｎｇｙｏ）４ｇを混合した後、３００ＲＰＭの撹拌速度で撹拌しながら４０℃で１０時間の間非選択的な加水分解を行い、加水分解された油脂組成物を製造した。 ２．脂肪酸分画
前記製造された加水分解された油脂のうちモノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドなどのグリセリドと脂肪酸を分画するために、収得した加水分解油脂の減圧蒸留を１Ｔｏｒｒ真空条件下で行って脂肪酸（８２０ｇ）を獲得し、獲得した遊離脂肪酸の分子蒸留を２２０℃で再び行い、炭素数が２２個以上である多価不飽和脂肪酸（３４０ｇ）を分画した。
【００６０】
３．液体脂分画
別途の工程で精製魚油（１０００ｇ）を５０℃で充分に溶かした後、−５℃まで１５ＲＰＭで徐々に撹拌しながら冷却させる冷却結晶化工程を経て固体脂（６５０ｇ）を除去し、多価不飽和脂肪酸がより多く含有された液体脂（１５０ｇ）を獲得した。
【００６１】
４．エステル交換反応及び精製
前記２．段階で分画した多価不飽和脂肪酸（３３０ｇ）と前記３．段階で分画した液体脂（１１０ｇ）を混合し、ノボザイム（Ｎｏｖｏｚｙｍｅ）４３５ ６．６ｇを添加し、５Ｔｏｒｒの減圧、２５０ＲＰＭの撹拌条件及び４０℃の温度で２０時間の間エステル交換反応を実施した。その後、前記酵素をフィルターで除去し、約４３０ｇの工程油を得た後、分子蒸留によって残留遊離脂肪酸を除去した後、脱色及び脱臭を行うことで本発明に係る油脂組成物を収得した。
【００６２】
前記油脂組成物の脂肪酸及びグリセリドは、分析例に記載された方法で分析し、下記の表１乃至表４に示した。
【００６３】
（実施例２） １．１、３位に特異的な加水分解反応
撹拌器が設置された３Ｌの反応器に精製魚油（１０００ｇ）、精製水（１０００ｇ）及び１、３位置特異性リパーゼ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅ ＣＡＬＢ Ｌ、ノボノルディスク社）８ｇを混合した後、１５０ＲＰＭの撹拌速度で撹拌しながら４５℃で１０時間の間反応させ、１、３位特異的に加水分解された油脂組成物を製造した。 ２．グリセリドと脂肪酸の分画
前記製造された加水分解された油脂のうちモノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドなどのグリセリドと脂肪酸を分画するために、収得した加水分解油脂の減圧蒸留を１Ｔｏｒｒ真空条件下で行い、脂肪酸（６２０ｇ）とグリセリド（３００ｇ）を獲得し、獲得した遊離脂肪酸の分子蒸留を２２０℃で再び行い、炭素数が２２個以上である多価不飽和脂肪酸（２５０ｇ）を分画した。
【００６４】
３．液体脂分画
別途の工程で前記２．段階で得たグリセリド（３００ｇ）を５０℃で充分に溶かした後、−５℃まで１５ＲＰＭで徐々に撹拌しながら冷却させる冷却結晶化工程を経て固体脂（６５０ｇ）を除去し、多価不飽和脂肪酸がより多く含有された液体脂（１５０ｇ）を獲得した。
【００６５】
４．エステル交換反応及び精製
前記２．段階で分画した多価不飽和脂肪酸の濃縮物（２５０ｇ）と液体脂（８０ｇ）を混合し、ノボザイム（Ｎｏｖｏｚｙｍｅ）４３５ ５．０ｇを添加し、５Ｔｏｒｒの減圧、２５０ＲＰＭの撹拌条件及び４０℃の温度で２０時間の間エステル交換反応を実施した。その後、前記酵素をフィルターで除去し、約４３０ｇの工程油を得た後、分子蒸留によって残留遊離脂肪酸を除去した後、脱色及び脱臭を行って本発明に係る油脂組成物を収得した。
【００６６】
前記油脂組成物の脂肪酸及びグリセリドは、分析例に記載された方法で分析し、下記の表１乃至表４に示した。
【００６７】
（比較例）
（比較例１）
前記実施例と同一の方法で製造した魚油由来のグリセリド油脂組成物（１００ｇ）、パルミチン酸１９．５ｇ及びステアリン酸１０．５ｇを混合した後、リポザイムＲＭ ＩＭ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅ）４．０ｇを添加し、５Ｔｏｒｒの減圧、２５０ＲＰＭの撹拌条件及び４０℃の温度で８時間の間エステル交換反応を実施した。その後、前記酵素をフィルターで除去し、約１２７ｇの工程油を得た後、分子蒸留によって残留遊離脂肪酸を除去した後、脱色及び脱臭を行って油脂組成物９７ｇを収得した。
【００６８】
前記油脂組成物の脂肪酸及びグリセリドは、分析例に記載された方法で分析し、下記の表１乃至表４に示した。
【００６９】
（比較例２）
前記実施例２と同一の方法で製造した魚油由来のグリセリド油脂組成物（１００ｇ）、パルミチン酸１９．５ｇ及びステアリン酸１０．５ｇを混合した後、リポザイムＲＭ ＩＭ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅ）４．０ｇを添加し、５Ｔｏｒｒの減圧、２５０ＲＰＭの撹拌条件及び４０℃の温度で８時間の間エステル交換反応を実施した。その後、前記酵素をフィルターで除去し、約１２７ｇの工程油を得た後、分子蒸留によって残留遊離脂肪酸を除去した後、脱色及び脱臭を行って油脂組成物９７ｇを収得した。
【００７０】
前記油脂組成物の脂肪酸及びグリセリドは、分析例に記載された方法で分析し、下記の表１乃至表４に示した。
【００７１】
（比較例３）
市販されたイワシ原油（１０００ｇ）を購入し、脱酸、脱色及び脱臭を行って油脂組成物（８５０ｇ）を収得した。
【００７２】
前記油脂組成物の脂肪酸及びグリセリドは、分析例に記載された方法で分析し、下記の表１乃至表４に示した。
【００７３】
【表１】
【００７４】
【表２】
【００７５】
【表３】
【００７６】
【表４】
（実験例）
（魚油由来のグリセリド油脂組成物の風味）
前記実施例１及び実施例２、比較例１乃至比較例３の魚油由来のグリセリド油脂組成物を使用して一定の条件に露出した後、風味及び色価を評価した。
【００７７】
各油脂組成物１００ｇに抗酸化剤を添加しない条件で行った。
【００７８】
自動酸化測定機械であるＲａｎｃｉｍａｔ（Ｒａｎｃｉｍａｔ ７４３、Ｍｅｔｒｏｈｍ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用し、８０℃の試料の温度、２０Ｌ／ｈｒのガス流速、１時間露出の条件で実施した。その結果を下記の表５に示した。
【００７９】
【表５】
前記表５に示すように、色価の変化程度と風味に対して、多価不飽和脂肪酸を高含量で含有し、１、３位に飽和脂肪酸を低含量で含有した本発明に係る実施例１及び実施例２が、１、３位に飽和脂肪酸をより多く含有した比較例１乃至３よりも良好であった。特に、抑制された着色は、多様な適用分野に応用したとき、優れた加工特性を期待することができる。
【００８０】
不ケン化物とケン化物の脂肪酸量を比較すると同時に、体重の変化を測定した。
【００８１】
下記の表６のような組成の飼料を２週間給与し、ラットの消化吸収率及び成長率変化を測定して下記の表７に示した。
【００８２】
【表６】
【００８３】
【表７】
前記表７に示すように、実施例１及び実施例２を使用して配合した飼料を口腔で摂取した各実験群の便で、比較例１及び比較例２と比較してケン化物の量が有意に３０％程度減少し、精製魚油である比較例３の半分水準であった。また、このような傾向は、不ケン化物の量と全体の脂肪酸のうち、特にＤＨＡ、ＤＰＡの排出量を通しても同一であった。このような結果は、油脂の１、３位の飽和脂肪酸、特にパルミチン酸（Ｃ１６：０）とステアリン酸（Ｃ１８：０）の含量と密接な関係があった。すなわち、パルミチン酸とステアリン酸が小腸でリパーゼによって分解された後、ケン化物の形態をなし、結局、エネルギー源として使用されるべき脂肪酸の吸収減少を引き起こすだけでなく、不溶性塩を形成することで、多価不飽和脂肪酸の吸収減少につながることを確認することができた。結果的に、体重の変化を通して分かるように、１、３位のパルミチン酸とステアリン酸の含量は、脂肪酸の吸収を減少させる。
【００８４】
【表８】
（分析例）
１．脂肪酸組成分析のための気体クロマトグラフィー
カラムはＨＰ−ＩＮＮＯＷＡＸ（Ａｇｉｌｅｎｔ社、米国）で、搬送ガスはヘリウム（２．１ｍｌ／分）で、オーブン温度は１５０〜２６０℃で、水素炎イオン化検出器（ＦＩＤ）が２７５℃に設定された条件で、サンプルを２５ｇ／Ｌの濃度で注入して分析した。
【００８５】
２．グリセリド組成分析のための液体クロマトグラフィー
カラムはＳｕｐｅｌｃｏｓｉｌ ＬＣ−Ｓｉ ５μm、２５cm［Ｓｕｐｅｌｃｏ社、米国］で、移動相溶媒は溶媒Ａ（ベンゼン７０：クロロホルム３０：酢酸２）と溶媒Ｂ（エチルアセテート）で、サンプルの注入濃度は１ｍｇ／ｍｌ（クロロホルム溶媒）である条件で、蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ）を使用して２．３ｍｌ／分の流速で分析した。
【００８６】
３．グリセリドの位置異性体分析のための液体クロマトグラフィー
カラムはＣｈｒｏｍＳｐｈｅｒ Ｌｉｐｉｄｓ、５μm、２５cm［ｖａｒｉａｎ、ＵＳＡ］で、移動相溶媒は０．５％アセトニトリルを含むノルマル−ヘキサン（ｎ−ｈｅｘａｎｅ）で、サンプルの注入濃度は１ｍｇ／ｍｌ（クロロホルム溶媒）である条件で、蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ）を使用して２．３ｍｌ／分の流速で分析した。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）構成脂肪酸のうちドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の含量が４５乃至９５重量％、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の含量が０．００１乃至１３重量％で、
（ｂ）構成脂肪酸のうち１、３位に結合された炭素数１６乃至１８の飽和脂肪酸の含量が０．００１乃至５重量％で、
（ｃ）ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の重量比が０．５乃至８、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の重量比が３．５乃至１５である
魚油由来のグリセリド油脂組成物。
【請求項２】
前記飽和脂肪酸は、
パルミチン酸（Ｃ１６：０）またはステアリン酸（Ｃ１８：０）であることを特徴とする
請求項１に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物。
【請求項３】
前記グリセリドは、
２０乃至９８重量％のトリグリセリド及び２乃至８０重量％のジグリセリドを含むことを特徴とする
請求項１に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物。
【請求項４】
（ｉ）構成脂肪酸のうちドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の含量が４５乃至９５重量％、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の含量が０．００１乃至１３重量％で、構成脂肪酸のうち１、３位に結合されたステアリン酸及びパルミチン酸の含量が０．００１乃至５重量％で、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の重量比が０．５乃至８、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の重量比が３．５乃至１５である２０乃至９８重量％のトリグリセリド；及び
（ｉｉ）構成脂肪酸のうちドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の含量が５５乃至９５重量％、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の含量が０．００１乃至１０重量％で、構成脂肪酸のうち１、３位に結合されたステアリン酸及びパルミチン酸の含量が０．００１乃至３重量％で、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の重量比が０．５乃至８、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の重量比が３．５乃至１５で、１，３−ジグリセリド／１，２−ジグリセリドの重量比が０．４乃至４．５である２乃至８０重量％のジグリセリドを含むことを特徴とする
請求項３に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物。
【請求項５】
０．００１乃至５重量％の抗酸化剤をさらに含有することを特徴とする
請求項１に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物。
【請求項６】
前記抗酸化剤は、
ＢＨＡ（ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｘｙａｎｉｓｏｌｅ）、ＢＨＴ（ｂｕｔｙｌａｔｅｄ ｈｙｄｒｏｘｙ ｔｏｌｕｅｎｅ）、ＴＢＨＱ（ｔｅｒｔ−Ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）、天然抗酸化剤、カテキン、ビタミンＣ及びビタミンＥからなる群から選択されることを特徴とする
請求項５に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物。
【請求項７】
請求項１乃至請求項６に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物を含有する食品。
【請求項８】
前記食品は、
食用油、サラダ油、フライ用油脂、マーガリン、ファット・スプレッド、ショートニング、アイスクリーム、生クリームの代替物、ドレッシング、マヨネーズ、製菓用油脂食品または乳幼児食であることを特徴とする
請求項７に記載の食品。
【請求項９】
（ａ）１、３位に特異的な固定化酵素を使用して精製魚油の１、３位に特異的な加水分解を行う段階；
（ｂ）前記（ａ）段階で加水分解された加水分解物を脂肪酸部分とグリセリド部分に分画し、分画された脂肪酸の分子蒸留によって多価不飽和脂肪酸を分離する段階；
（ｃ）前記（ｂ）段階で分画されたグリセリドの冷却結晶化を行って液体脂を分画する段階；
（ｄ）前記（ｂ）段階で分離された多価不飽和脂肪酸と前記（ｃ）段階で分画された液体脂を５．０〜８０．０：２０．０〜９５．０の重量比で混合し、２５乃至８０℃の温度条件、１０乃至４００ｒｐｍの撹拌条件及び０．００１乃至１０Ｔｏｒｒの減圧下で１乃至４８時間の間１、３位に特異的な固定化酵素を使用してエステル交換反応を行う段階；及び
（ｅ）蒸留及び一般精製過程で未反応残留物質を除去する段階
を含む
魚油由来のグリセリド油脂組成物の製造方法。
【請求項１０】
（ａ）位置非特異的な固定化酵素を使用して精製魚油の位置非特異的な加水分解を行う段階；
（ｂ）前記（ａ）段階で加水分解された加水分解物を脂肪酸部分とグリセリド部分に分画し、分画された脂肪酸の分子蒸留によって多価不飽和脂肪酸を分離する段階；
（ｃ）精製魚油の冷却結晶化を行って液体脂を分画する段階；
（ｄ）前記（ｂ）段階で分離された多価不飽和脂肪酸と前記（ｃ）段階で分画された液体脂を３０．０〜８０．０：２０．０〜７０．０の重量比で混合し、２５乃至８０℃の温度条件、１０乃至４００ｒｐｍの撹拌条件及び常圧下で１乃至４８時間の間１、３位に特異的な固定化酵素を使用してエステル交換反応を行う段階；及び
（ｅ）蒸留及び一般精製過程で未反応残留物質を除去する段階
を含む
魚油由来のグリセリド油脂組成物の製造方法。
【請求項１１】
前記（ｃ）段階の液体脂分画段階は、
５乃至１０℃／ｈｒの冷却速度、１００〜３００ｒｐｍの撹拌速度で行われることを特徴とする
請求項９または１０に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物の製造方法。
【請求項１２】
前記１、３位に特異的な固定化酵素は、
クモノスカビ属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｓｐ．）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．）またはケカビ属（Ｍｕｃｏｒ ｓｐ．）微生物由来のリパーゼであることを特徴とする
請求項９または１０に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物の製造方法。
【請求項１３】
前記位置非特異的な固定化酵素は、
カンジダシリンドラセア（Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）または膵臓リパーゼであることを特徴とする
請求項１０に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物の製造方法。
【請求項１４】
前記固定化酵素の使用量は、
酵素反応物質１００重量部に対して０．１乃至２０重量部であることを特徴とする請求項９または１０に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物の製造方法。
【請求項１】
（ａ）構成脂肪酸のうちドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の含量が４５乃至９５重量％、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の含量が０．００１乃至１３重量％で、
（ｂ）構成脂肪酸のうち１、３位に結合された炭素数１６乃至１８の飽和脂肪酸の含量が０．００１乃至５重量％で、
（ｃ）ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の重量比が０．５乃至８、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の重量比が３．５乃至１５である
魚油由来のグリセリド油脂組成物。
【請求項２】
前記飽和脂肪酸は、
パルミチン酸（Ｃ１６：０）またはステアリン酸（Ｃ１８：０）であることを特徴とする
請求項１に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物。
【請求項３】
前記グリセリドは、
２０乃至９８重量％のトリグリセリド及び２乃至８０重量％のジグリセリドを含むことを特徴とする
請求項１に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物。
【請求項４】
（ｉ）構成脂肪酸のうちドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の含量が４５乃至９５重量％、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の含量が０．００１乃至１３重量％で、構成脂肪酸のうち１、３位に結合されたステアリン酸及びパルミチン酸の含量が０．００１乃至５重量％で、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の重量比が０．５乃至８、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の重量比が３．５乃至１５である２０乃至９８重量％のトリグリセリド；及び
（ｉｉ）構成脂肪酸のうちドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の含量が５５乃至９５重量％、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の含量が０．００１乃至１０重量％で、構成脂肪酸のうち１、３位に結合されたステアリン酸及びパルミチン酸の含量が０．００１乃至３重量％で、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の重量比が０．５乃至８、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）／エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の重量比が３．５乃至１５で、１，３−ジグリセリド／１，２−ジグリセリドの重量比が０．４乃至４．５である２乃至８０重量％のジグリセリドを含むことを特徴とする
請求項３に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物。
【請求項５】
０．００１乃至５重量％の抗酸化剤をさらに含有することを特徴とする
請求項１に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物。
【請求項６】
前記抗酸化剤は、
ＢＨＡ（ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｘｙａｎｉｓｏｌｅ）、ＢＨＴ（ｂｕｔｙｌａｔｅｄ ｈｙｄｒｏｘｙ ｔｏｌｕｅｎｅ）、ＴＢＨＱ（ｔｅｒｔ−Ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）、天然抗酸化剤、カテキン、ビタミンＣ及びビタミンＥからなる群から選択されることを特徴とする
請求項５に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物。
【請求項７】
請求項１乃至請求項６に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物を含有する食品。
【請求項８】
前記食品は、
食用油、サラダ油、フライ用油脂、マーガリン、ファット・スプレッド、ショートニング、アイスクリーム、生クリームの代替物、ドレッシング、マヨネーズ、製菓用油脂食品または乳幼児食であることを特徴とする
請求項７に記載の食品。
【請求項９】
（ａ）１、３位に特異的な固定化酵素を使用して精製魚油の１、３位に特異的な加水分解を行う段階；
（ｂ）前記（ａ）段階で加水分解された加水分解物を脂肪酸部分とグリセリド部分に分画し、分画された脂肪酸の分子蒸留によって多価不飽和脂肪酸を分離する段階；
（ｃ）前記（ｂ）段階で分画されたグリセリドの冷却結晶化を行って液体脂を分画する段階；
（ｄ）前記（ｂ）段階で分離された多価不飽和脂肪酸と前記（ｃ）段階で分画された液体脂を５．０〜８０．０：２０．０〜９５．０の重量比で混合し、２５乃至８０℃の温度条件、１０乃至４００ｒｐｍの撹拌条件及び０．００１乃至１０Ｔｏｒｒの減圧下で１乃至４８時間の間１、３位に特異的な固定化酵素を使用してエステル交換反応を行う段階；及び
（ｅ）蒸留及び一般精製過程で未反応残留物質を除去する段階
を含む
魚油由来のグリセリド油脂組成物の製造方法。
【請求項１０】
（ａ）位置非特異的な固定化酵素を使用して精製魚油の位置非特異的な加水分解を行う段階；
（ｂ）前記（ａ）段階で加水分解された加水分解物を脂肪酸部分とグリセリド部分に分画し、分画された脂肪酸の分子蒸留によって多価不飽和脂肪酸を分離する段階；
（ｃ）精製魚油の冷却結晶化を行って液体脂を分画する段階；
（ｄ）前記（ｂ）段階で分離された多価不飽和脂肪酸と前記（ｃ）段階で分画された液体脂を３０．０〜８０．０：２０．０〜７０．０の重量比で混合し、２５乃至８０℃の温度条件、１０乃至４００ｒｐｍの撹拌条件及び常圧下で１乃至４８時間の間１、３位に特異的な固定化酵素を使用してエステル交換反応を行う段階；及び
（ｅ）蒸留及び一般精製過程で未反応残留物質を除去する段階
を含む
魚油由来のグリセリド油脂組成物の製造方法。
【請求項１１】
前記（ｃ）段階の液体脂分画段階は、
５乃至１０℃／ｈｒの冷却速度、１００〜３００ｒｐｍの撹拌速度で行われることを特徴とする
請求項９または１０に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物の製造方法。
【請求項１２】
前記１、３位に特異的な固定化酵素は、
クモノスカビ属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｓｐ．）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．）またはケカビ属（Ｍｕｃｏｒ ｓｐ．）微生物由来のリパーゼであることを特徴とする
請求項９または１０に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物の製造方法。
【請求項１３】
前記位置非特異的な固定化酵素は、
カンジダシリンドラセア（Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）または膵臓リパーゼであることを特徴とする
請求項１０に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物の製造方法。
【請求項１４】
前記固定化酵素の使用量は、
酵素反応物質１００重量部に対して０．１乃至２０重量部であることを特徴とする請求項９または１０に記載の魚油由来のグリセリド油脂組成物の製造方法。
【公表番号】特表２０１０−５０３７４８（Ｐ２０１０−５０３７４８Ａ）
【公表日】平成２２年２月４日（２０１０．２．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５２８１７２（Ｐ２００９−５２８１７２）
【出願日】平成１９年９月５日（２００７．９．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００７／００４２７２
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０３２９４９
【国際公開日】平成２０年３月２０日（２００８．３．２０）
【出願人】（５０９０７２７３３）イルシン ウェルズ カンパニー リミテッド (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年２月４日（２０１０．２．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年９月５日（２００７．９．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００７／００４２７２
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０３２９４９
【国際公開日】平成２０年３月２０日（２００８．３．２０）
【出願人】（５０９０７２７３３）イルシン ウェルズ カンパニー リミテッド (1)
【Ｆターム（参考）】
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