Ｓ１００−ｐ５３タンパク質間相互作用のインヒビター、およびそれを使用して癌を阻害する方法
Ｓ１００に結合し、かつＳ１００−ｐ５３タンパク質間相互作用を阻害し、かつｐ５３の腫瘍サプレッサー活性を活性化し、従って、抗新生物効果を有する、化合物が、本出願において、開示される。これらの化合物を同定する方法もまた、本出願において開示される。この方法は、Ｓ１００とｐ５３とを試験化合物の存在下で接触させる工程、および
ｐ５３へのＳ１００の結合の阻害についてアッセイする工程を包含する。これらの化合物を含む組成物もまた、本出願において開示される。これらの化合物を使用して癌を処置する方法もまた、本出願において開示される。
ｐ５３へのＳ１００の結合の阻害についてアッセイする工程を包含する。これらの化合物を含む組成物もまた、本出願において開示される。これらの化合物を使用して癌を処置する方法もまた、本出願において開示される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書中に記載される研究は、ＮＩＨからの助成金（助成金番号ＧＭ５８８８８）およびＡｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙからの助成金（ＲＰＧ０００４００１−ＣＣＧ）によって支援された。連邦政府は、本発明において特定の権利を有する。
【０００２】
（関連出願の援用）
本出願は、２００２年３月２９日出願の米国仮特許出願番号６０／３６８，８３５の３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）（１）の下での利益を主張する。この米国仮特許出願の開示は、その全体が参考として本明細書中に援用される。
【０００３】
（発明の分野）
本発明は、例えば、Ｓ１００に結合し、Ｓ１００−ｐ５３相互作用を阻害し、そしてｐ５３の腫瘍サプレッサーを活性化し、従って、抗新生物効果を有する、低分子化合物に関する。そして本発明は、これらの化合物を、例えば、Ｓ１００へのｐ５３の結合の阻害についてアッセイすることによって同定する方法、これらの化合物を含む組成物、およびこれらを使用して黒色腫および他の癌を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
（発明の背景）
（Ｉ．Ｓ１００タンパク質）
現在、Ｓ１００ファミリーのＥＦ−ハンドＣａ２＋結合タンパク質の２０個より多くのメンバーが存在する。それらは、ヒト組織中に広く分布していることが公知である（Ｚｉｍｍｅｒら、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．Ｂｕｌｌ．，３７：４１７−４２９（１９９５）；Ｄｏｎａｔｏ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，３３：６３７−６６８（２００１）；およびＨｅｉｚｍａｎｎら、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ７：１３５６−１３６８（２００２））。Ｓ１００タンパク質は、１００％飽和硫酸アンモニウム中で可溶性（ｓｏｌｕｂｌｅ）であるので、この名前を与えられた（Ｍｏｏｒｅ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍ．，１９：７３９−７４４（１９６５））。１メンバーであるＳ１００Ｂは、２１．５ｋＤａの対称ホモダイマーであり、哺乳動物間で高度に保存されている（＞９５％）（Ｚｉｍｍｅｒら、上記；およびＭｏｏｒｅ，上記）。カルモジュリンと類似する様式で、Ｃａ２＋依存性コンフォメーション変化が、Ｓ１００Ｂが標的タンパク質に結合するために必要である（図１；Ｒｕｓｔａｎｄｉら、Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，７：５７０−５７４（２０００）；Ｒｕｓｔａｎｄｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．，３７：１９５１−１９６０（１９９８）；Ｗｅｂｅｒら、「Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｍｅｒｉｃ Ｓ１００Ｂ（ββ） ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｔｕｍｏｒ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ：Ａ Ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ Ｃａ２＋−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｓ１００−Ｔａｒｇｅｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ」，Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｃａｌｃｉｕｍ Ａｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｐｏｃｈｅｔ，Ｒ．，Ｅｄ．），Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｄｏｒｄｒｅｃｈｔ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ（２０００）；およびＫｌｉｇｍａｎら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，１３：４３７−４４３（１９８８））。
【０００５】
一般に、低レベルのＳ１００Ｂは、栄養（ｔｒｏｐｈｉｃ）効果を有し、そして高レベルのＳ１００Ｂは、毒性であり、制御されない細胞増殖を生じる（Ｃａｓｔｅｔｓら、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．，４６：２０８−２１６（１９９７）；Ｖａｎ Ｅｌｄｉｋら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，１２２３：３９８−４０３（１９９４）；Ｍａｒｉｇｇｉｏら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，６０：２９−３５（１９９４）；およびＭｃＬｅｎｄｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｕｓｉｎｇ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｋｕｂｃｈｉｋ，Ｈ．Ｚ．編）Ｖｏｌ．３９，ｐｐ．３１−６６，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８））。Ｓ１００Ｂレベルの増加が、腎細胞腫瘍において見出され（Ｔａｋａｓｈｉら、．Ｕｒｏｌ．Ｒｅｓ．，２２：２５１−２５５（１９９４））、そして悪性成熟Ｔ細胞において見出される（例えば、白血病患者における二重ネガティブＣＤ４−／ＣＤ８−成熟Ｔ細胞）（Ｓｕｚｕｓｈｉｍａら、Ｌｅｕｋ．Ｌｙｍｐｈ．，１３：２５７−２６２（１９９４））。さらに、Ｓ１００Ｂは、神経膠症を刺激する他のサイトカイン（例えば、インターロイキン−１βおよび塩基性線維芽細胞増殖因子）によって、アップレギュレートされる（Ｈｉｎｋｌｅら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，８２：３３−４１（１９９８））。
【０００６】
Ｓ１００Ｂの場合と同様に、多数の他のＳ１００タンパク質が、組織特異的様式で調節される（Ｋｌｉｇｍａｎら、上記）。Ｓ１００Ａ１、カルサイクリン（ｃａｌｃｙｃｌｉｎ）（Ｓ１００Ａ６）、およびＳ１００Ｂのレベルは、転移性ヒト乳房上皮細胞において有意に上昇され（Ｐｅｄｒｏｃｃｈｉら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，５７：６８４−６９０（１９９４））、そしてトランスジェニックマウスにおけるＳ１００Ａ４マウス（ｍｔｓ１）のレベル増加は、転移性乳房腫瘍を誘導する（Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２：２０２８３−２０２９０（１９９７））。ｍｔｓ１の場合、タンパク質レベルは、ラットｍｔｓ１開始部位の１３００塩基上流にあるシス作用性エレメントを介して良性細胞株において制御され（Ｃｈｅｎら、上記）、そしてｍｔｓ１に対するアンチセンスＲＮＡの発現は、高転移性Ｌｅｗｉｓ肺癌腫の転移能を抑制する（Ｔａｋｅｎａｇａら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１４：３３１〜３３７（１９９７））。Ｓ１００Ｂ、ｍｔｓ１、およびカルサイクリンのタンパク質レベルは、悪性黒色腫と相関する。従って、Ｓ１００タンパク質は、この癌のマーカーとして使用される（Ｍａｅｌａｎｄｓｍｏら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，７４：４６４−４６９（１９９７）；Ｂｏｎｉら、Ｊ．Ｃｕｔａｎ．Ｐａｔｈｏｌ．，２４：７６−８０（１９９７）；Ｘｉａら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，５７：３０５５−３０６２（１９９７）；Ｈａｎｓｓｏｎら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１７：３０７１〜３０７３（１９９７）；および図２Ｂ）。
【０００７】
Ｓ１００抗体は、とりわけ、脳、肺、膀胱、腸、腎臓、頸部、乳房、皮膚、頭部および頸部、リンパ、精巣、咽頭、、および口を含む、いくつかの組織において悪性腫瘍を同定し分類するために臨床的に使用される（Ｔａｋａｓｈｉら、上記；Ｓｕｚｕｓｈｉｍａら、上記；Ｐｅｄｒｏｃｃｈｉｅら、上記；Ｆｉｓｈｅｒら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈ．，４７：８６８−８６９（１９９４）；Ｉｎｉｕｅら、Ｊ．Ｕｒｏｌ．，８５：４９５−５０３（１９９４）；Ｋｅｒｒｅｂｉｊｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，３８：３１〜３７（１９９４）；Ｃｏｌａｓａｎｔｅら、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐ．Ｄｉｓ．，１４８：７５２−７５９（１９９３）；Ｚｅｉｄら、Ｐａｔｈ．，２５：３３８−３４３（１９９３）；Ｇａｌｌｏら、Ａｒｃｈ．Ｏｔｏｌａｒｎ．，１１７：１００１−１０１０（１９９１）；Ｗｉｌｓｏｎら、Ｊ．Ｐａｔｈ．，１６３：２５−３０（１９９１）；Ｌｅｅら；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：２５０４−２５０８（１９９２）；Ｌｅｏｎｇら、Ｊ．Ｐａｔｈ．，１６２：３５−４１（１９９０）；Ｎａｋａｎｏら、Ａｒｃｈ．Ｐａｔｈ．Ｌａｂ．Ｍｅｄ．，１１３：５０７−５１１（１９８９）；Ｋｕｒｉｈａｒａら、Ｊ．Ｏｒａｌ．Ｐａｔｈ．，１４：２８９−２９８（１９８５）；Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａら、Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃ．，５５：１０８−１１３（１９９４）；Ｒｅｎｓｈａｗら、Ｍｏｄ．Ｐａｔｈ．，１０：６９３−７００（１９９７）；Ｌａｒｏｃｋら、Ｖｅｔ．Ｐａｔｈ．，３４：３０３−３１１（１９９７）；およびＨｕｒｌｅｙら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｐｒｉｍａｔ．，２６：１７２−１８０（１９９７））。
【０００８】
（ＩＩ．ｐ５３）
ｐ５３は、転写アクチベーターであり、細胞周期の停止およびアポトーシスについてシグナル伝達をし、そして正常な細胞機能の維持および調節において中心的役割を果す（Ｌｅｖｉｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ，３５１：４５３−４５６（１９９１）；およびＬｅｖｉｎｅ，Ｃｅｌｌ，８８：３２３−３３１（１９９７））。ｐ５３の不活化は、細胞周期チェックポイント、アポトーシス、遺伝子増幅、中心体複製、および倍数性に影響を与える（Ｌｅｖｉｎｅ（１９９７），上記；Ｗｏｏｄｓら、Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ．Ｒｅｓ．，２６４：５６−６６（２００１）；Ｂｕｒｎｓら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１８１：２３１−２３９（２００１）；Ａｐｐｅｌｌａら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２６８：２７６４−２７７２（２００１）；Ａｒｒｏｗｓｍｉｔｈら、Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．，６：１１６９−１１７３（１９９９）；Ｐｒｉｖｅｓら、Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１８７：１１２−１２６（１９９９）；Ｖｏｕｓｄｅｎ，Ｃｅｌｌ，１０３：６９１−６９４（２０００）；およびＲｙａｎら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１３：３３２−３３７（２００１））。ヒト癌のうちの５０％より多くで見出されるように、ｐ５３が変異によって不活化される場合、その細胞周期は、調節されずに進行し、そして細胞成長が増殖する。同様に、アポトーシス経路が誘導されない場合、増殖中の細胞は、癌性細胞へと形質転換する（Ｗｏｏｄｓら、上記；Ｂｕｒｎｓ，上記；Ａｐｐｅｌｌａら、上記；Ａｒｒｏｗｓｍｉｔｈら、上記；Ｐｒｉｖｅｓら（１９９９），上記；Ｖｏｕｓｄｅｎ，上記；Ｒｙａｎら、上記；およびＡｇａｒｗａｌら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７３：１−４（１９９８））。一方、ｐ５３のレベルが高すぎる場合、加齢に関連する問題が生じる（Ｔｙｎｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，４１５：４５−５３（２００２））。ｐ５３は、翻訳後修飾および細胞中の他のタンパク質との相互作用によって高度に調節される（Ａｐｐｅｌｌａら、上記；Ｍｉｎａｍｏｔｏら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２０：３３４１〜３３４７（２００１）；Ｊａｙａｒａｍａｎら、Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．，５５：７６−８７（１９９９）；Ｊｉｍｅｎｅｚら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １８：７６５６−７６６５（１９９９）；およびＭｅｅｋ，Ｐａｔｈｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４５：８０４−８１４（１９９７））。
【０００９】
（ＩＩＩ．Ｓ１００−ｐ５３相互作用）
Ｓ１００Ｂおよびいくつかの他のＳ１００タンパク質（すなわち、Ｓ１００Ａ１およびｍｔｓ１）は、腫瘍サプレッサータンパク質であるｐ５３と、癌細胞中で相互作用し、有意に減少したｐ５３レベルを生じ、そして標的遺伝子のｐ５３依存性転写活性化は、阻害される（Ｇｒｉｇｏｒｉａｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６：２２６９９−２２７０８（２００１）；Ｌｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６：３５０３７−３５０４１（２００１）；およびＣａｒｒｉｅｒら、Ｐｒｏｃ．ＡＡＣＲ，４０：１０２（１９９９））。
【００１０】
ｐ５３のＣ末端とＳ１００カルシウム結合タンパク質（例えば、Ｓ１００Ｂ）との間の相互作用は、特に興味深い。なぜなら、ｐ５３と同様に、Ｓ１００タンパク質は、細胞周期進行に影響を与え、多数の腫瘍細胞において過剰発現され、そして腫瘍進行に関連するからである（Ｉｌｇら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６８：３２５−３３２（１９９６））。これらの結果は、ｐ５３およびＳ１００Ｂが、（ｉ）インビトロで緊密に相互作用し（ＫＤ＝２４±１０ｎＭ；Ｄｅｌｐｈｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７４：１０５３９−１０５４４（１９９９））、（ｉｉ）Ｓ１００Ｂは、ｐ５３のＰＫＣ依存性リン酸化を阻害し（Ｗｉｌｄｅｒら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．，７：７９４−７９８（１９９８）；およびＢａｕｄｉｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８９：１１６２７−１１６３１（１９９２））、（ｉｉｉ）Ｓ１００Ｂは、ｐ５３テトラマーを解離し（Ｂａｕｄｉｅｒら、上記）、（ｉｖ）Ｓ１００Ｂおよびｐ５３のＣ末端の両方のサブユニットは、Ｘ型の４ヘリックスバンドル（ｂｕｎｄｌｅ）構造モチーフを介して会合し（Ｗｅｂｅｒら、上記；Ｊｅｆｆｒｅｙら、上記；およびＬｅｅら、上記）、そして（ｖ）３つのＳ１００タンパク質（Ｓ１００Ｂ、Ｓ１００Ａ１、ｍｔｓ１）は、インビボでｐ５３の機能を阻害する（Ｇｒｉｇｏｒｉａｎら、上記；Ｌｉｎら、上記；およびＣａｒｒｉｅｒら（１９９９），上記）という知見と相関する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明において、原発性悪性黒色腫癌細胞において、Ｓ１００Ｂが、細胞周期依存性様式で、ｐ５３と直接相互作用して、より低レベルの野生型ｐ５３を生じることが、示される。さらに、本発明において、Ｓ１００Ｂプロモーターが、ｐ５３に結合する３つの配列を有することが見出された。このことは、その後、Ｓ１００Ｂ転写が、ｐ５３自体の分解を誘発するフィードバックループにおいてｐ５３によって調節されるという知見を支持する。
【００１２】
（発明の要旨）
１つの実施形態において、本発明は、Ｓ１００タンパク質（例えば、Ｓ１００Ｂ、Ｓ１００Ａ１およびＳ１００Ａ４）に結合し、かつ阻害タンパク質（例えば、Ｓ１００タンパク質）がｐ５３に結合するのを阻害する、化合物を同定する方法に関する。
【００１３】
別の実施形態において、本発明は、ｐ５３の機能（特に、ｐ５３活性化に起因するＳ１００Ｂおよび他のＳ１００タンパク質の過剰発現）を測定することによって、ｐ５３を活性化する化合物を同定する方法に関する。
【００１４】
なお別の実施形態において、本発明は、上記の同定した化合物（ペンタミジンおよびその誘導体が挙げられるが、これらに限定されない）を、Ｓ１００Ｂおよび他のＳ１００タンパク質のｐ５３との結合を阻害する（すなわち、ｐ５３を活性化する）ために使用する方法に関する。
【００１５】
なお別の実施形態において、本発明は、上記の同定された化合物（ペンタミジンおよびその誘導体が挙げられるが、これらに限定されない）を、癌を処置するために使用する方法に関する。
【００１６】
いかなる特定の機構にも拘束されることは望まないが、本発明の化合物は、Ｓ１００Ｂおよび他のＳ１００タンパク質（特に、そのｐ５３結合ドメイン）と相互作用することによって、ｐ５３の不活化を阻害し、それによって新生物細胞増殖を減少または阻害すると考えられる。従って、本発明は、例えば、ｐ５３を活性化する化合物（特に、Ｓ１００タンパク質ファミリーのメンバーと特異的に相互作用する化合物、より特に、Ｓ１００タンパク質（例えば、Ｓ１００Ｂ）がｐ５３に結合するのを阻害する化合物）に関する。
【００１７】
本発明のこれらの目的およびさらなる目的は、本発明の詳細な説明から明らかであり、本明細書中に規定される式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）により示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩およびその使用によって満たされる。
【００１８】
（発明の詳細な説明）
上記のように、１つの実施形態において、本発明は、阻害タンパク質（例えば、Ｓ１００Ｂおよび他のＳ１００タンパク質）がｐ５３に結合するのを阻害する化合物を同定する方法に関する。
【００１９】
別の実施形態において、本発明は、ｐ５３機能（特に、ｐ５３活性化に起因するＳ１００の過剰発現）を測定することによって、ｐ５３を活性化する化合物を同定する方法に関する。
【００２０】
なお別の実施形態において、本発明は、ｐ５３を活性化するために上記同定された化合物を使用する方法に関する。
【００２１】
なお別の実施形態において、本発明は、癌を処置するために上記同定された化合物を使用する方法に関する。
【００２２】
ペンタミジンが、Ｓ１００−ｐ５３相互作用を阻害することが、本発明において見出された。ペンタミジンは、活性であり、かつＦＤＡが（別の用途について）認可した薬物であるので、本発明はまた、Ｓ１００に対して増加した結合親和性を有するペンタミジン誘導体に関する。従って、本発明の化合物は、式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）により示されるかまたはその薬学的に受容可能な塩であり、
式（Ｉ）は
【００２３】
【化１４】
【００２４】
であり、
式（Ｉ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、およびＹ８は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｘは、１〜８個の炭素原子を有するアルキルであり、そして
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり；
例えば、ペンタミジン
【００２５】
【化１５】
【００２６】
であり、
式（ＩＩ）は
【００２７】
【化１６】
【００２８】
であり、式（ＩＩ）において、Ｙ１およびＹ２は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１１、Ｒ１２、およびＲ１３は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、メチルエステル、フェニルケトン、アリールエーテル、アリールチオ、アリールメチレン、酸素、カルボニル、カルボキシレート、エチレン、アミド、エステル、チオエステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より独立して選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり、そして
必要に応じてＲ１１とＲ１２と、またはＲ１２とＲ１３とは、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはＳを含む５員縮合芳香環を形成し得；
例えば、｛［（２，３−ジクロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド（化合物３）
【００２９】
【化１７】
【００３０】
であり、
式（ＩＩＩ）は
【００３１】
【化１８】
【００３２】
であり、式（ＩＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８およびＹ９は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトンおよびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、イミン、エチレン、アミド、エステル、およびチオエステルからなる群より選択され、そして
フェニル芳香環のうちの１つ以上は、芳香環のうちの１つ以上の１〜３個の炭素原子をＮ原子で置換することによって、縮合芳香環、ヘテロ芳香環、または縮合芳香環（例えば、ナフチル環、ピリジニル環、キノリニル環、およびイソキノリニル環）によって置換され得、
例えば、｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド（化合物９）
【００３３】
【化１９】
【００３４】
であり、
式（ＩＶ）は
【００３５】
【化２０】
【００３６】
であり、式（ＩＶ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、およびＹ７は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトンおよびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり、
Ｒ１５は、窒素またはＮＯであり、そして
Ｒ１６は、負に荷電した官能基（例えば、ＮＯ２、またはＳＯ２）であり、
例えば、２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレート）（化合物１）
【００３７】
【化２１】
【００３８】
であり；
式（Ｖ）は
【００３９】
【化２２】
【００４０】
であり、式（Ｖ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、およびＹ１０は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、そして
Ｒ１およびＲ２は、同じであってもまたは異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり、
例えば、２−クロロ−５−［Ｎ’−（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２−イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸（化合物３１）
【００４１】
【化２３】
【００４２】
であり；
式（ＶＩ）は
【００４３】
【化２４】
【００４４】
であり、式（ＶＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、およびＹ９は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ５およびＲ６は、各々（ＣＨ２）ｎ１であり、（ＣＨ２）ｎ１においてｎ１は０〜３であり、かつ（ＣＨ２）ｎ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、ベンズアミジン、フェニル環に連結した１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、カルボキシレート、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺ１ｎＨ３−ｎからなる群より選択される要素に連結されており、ＣＺ１ｎＨ３−ｎにおいて、Ｚ１は、ハロゲン、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチルからなる群より選択され、ｎは、１〜３であり、
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、そして
Ｒ７およびＲ８は、各々、ハロゲン、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチル、およびＣＺ１ｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺ１ｎＨ３−ｎにおいて、Ｚ１は、ハロゲンであり、ｎは、１〜３であり；
例えば、４−（４−｛[１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸（化合物４）
【００４５】
【化２５】
【００４６】
であり、
式（ＶＩＩ）は
【００４７】
【化２６】
【００４８】
であり、式（ＶＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、およびＹ７は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、そして
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、カルボキシレート、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり；
例えば、１，２−（３−メチルチオトリアジン）−３，４−フェニル−６−［（２−メトキシフェノキシ）酢酸］モルホリン（化合物３３）
【００４９】
【化２７】
【００５０】
であり、
式（ＶＩＩＩ）は
【００５１】
【化２８】
【００５２】
であり、式（ＶＩＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、およびＹ４は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され；
例えば、４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル）−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸（化合物５１）
【００５３】
【化２９】
【００５４】
であり、
式（ＩＸ）は
【００５５】
【化３０】
【００５６】
であり、式（ＩＸ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、およびＹ８は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、
Ｒ９は、メチル、エチル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチルからなる群より選択され、および
Ｒ１０は、負に荷電した官能基（例えば、ＮＯ２またはＳＯ２）であり；
例えば、１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸（化合物２４）
【００５７】
【化３１】
【００５８】
であり、
式（Ｘ）は
【００５９】
【化３２】
【００６０】
であり、式（Ｘ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、Ｙ１０、およびＹ１１は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、そして
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、
例えば、（３−ベンゾイック）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸（化合物３８）
【００６１】
【化３３】
【００６２】
であり、
式（ＸＩ）は
【００６３】
【化３４】
【００６４】
であり、式（ＸＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、Ｙ１０、およびＹ１ｌは、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、アミン、１〜３個の隣接するアミン、グアニジン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、そして
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、
例えば、２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸（化合物３９）
【００６５】
【化３５】
【００６６】
であり、
式（ＸＩＩ）は
【００６７】
【化３６】
【００６８】
であり、式（ＸＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、およびＹ７は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、そして
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり；
例えば、２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸（化合物４４）
【００６９】
【化３７】
【００７０】
であり、
式（ＸＩＩＩ）は
【００７１】
【化３８】
【００７２】
であり、式（ＸＩＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、およびＹ１０は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、そして
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、
例えば、５−｛［２−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸（化合物４５）
【００７３】
【化３９】
【００７４】
である。
【００７５】
ペンタミジン（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ；カタログ番号Ｐ０５４７）、化合物１（Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｌｔｄ．；カタログ番号ＳＰＢ０３１０２）、化合物３（Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｌｔｄ．；カタログ番号ＲＪＦ０１３７０）、化合物４（Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｌｔｄ．；カタログ番号ＢＴＢ１２１５１）、化合物９（Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｌｔｄ．；カタログ番号ＲＦＪ００７０６）、化合物２４（Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号５９５４０２９）、化合物３１（Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号５６５８０９２）、化合物３３（Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号５７２０３５８）、化合物３８（Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号５７４０１３２）、化合物３９（Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号５７４８７５０）、化合物４４（Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号５７７４２１１）、化合物４５（Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号５７６４５８９）および化合物５１（Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号６０５０４３３）は、商業的供給源から入手可能である。
【００７６】
式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）の化合物は、公知の反応化学を使用して、公知の材料または従来から調製可能である材料から開始して、従来通り調製され得（Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ，Ｍｅｔｈｏｄｅｎ ｄｅｒ Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ Ｃｈｅｍｉｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｇｅｏｒｇ−Ｔｈｉｅｍｅ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔを参照のこと）、そして／または慣用的化学修飾によって、市販の化合物から調製され得る。
【００７７】
例えば、式（Ｉ）のペンタミジンの誘導体は、図１５において示されるように、Ｎａｎｄｉら、Ｊ．Ｉｎｄ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，７０：５２７（１９９３）により記載されるように調製され得る。４−シアノフェノールが、一連のポリメチレンジブロミドを用いてアルキル化されて、対応するビス（４−シアノフェニルオキシ）アルカン（１ａ〜１ｅ）が生じる。この後、そのシアノ中間体から一連のイミデートヒドロクロリドへの転換が行われ、この一連のイミデートヒドロクロリドは、水酸化ナトリウム水溶液を用いる処理によって、対応する遊離塩基（２ａ〜２ｅ）へと転換される。その後、イミデート２ａ〜２ｅが、イセチオン酸のアンモニウム塩を用いて処理されて、最終標的化合物３ａ〜３ｅが得られる（図１５を参照のこと）。この合成経路における出発化合物および／またはこの反応スキームにおける種々の段階の反応物を変化することによって、種々の置換基（Ｙ１〜Ｙ８；Ｒ１〜Ｒ２；および種々の長さのＸ，ｎ＝１〜８）は、式（Ｉ）において示されるペンタミジンの誘導体を生成するために慣用的に置換され得る。
【００７８】
第２の例（すなわち、化合物４について）において、化合物４の慣用的合成が、下記に概説される：
【００７９】
【化４０】
【００８０】
この合成経路（すなわち、化合物４について）における出発化合物および／またはこの反応スキームにおける種々の段階での反応物を変化することによって、種々の置換基（Ｙ１〜Ｙ９；Ｒ５〜Ｒ８；およびＸ２リンカー）が、式（ＶＩ）により示される化合物４の誘導体を生成するために慣用的に置換され得る。これらの２つの例（式（Ｉ）および（ＶＩ））により記載されるアプローチと同様のアプローチを使用して、他の合成経路（すなわち、化合物１、３、９、２４、３１、３３、３８、３９、４４、４５および５１の調製について）に対する慣用的改変が、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）および（ＸＩＩＩ）に示される化合物を調製するためになされ得る。
【００８１】
特定の薬学的に受容可能な塩は、本発明にとって重要ではなく、そのような塩としては、イセチオネート、ＨＣｌ、オキサールアセテート、または他の塩が挙げられ得る。
【００８２】
本発明の化合物は、癌を処置するために有用な組成物（例えば、薬学的組成物）中に、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤とともに存在し得る。
【００８３】
本発明において使用される特定の薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤は、本発明にとって重要ではない。このようなキャリアまたは希釈剤の例が、Ｔｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，Ａ．ＷａｄｅおよびＰ．Ｊ．Ｗｅｌｌｅｒ編、第２版、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ（１９９４）（これは、本明細書中に参考として援用される）に列挙される。クレモフォアＥＬが、好ましい。
【００８４】
本発明の式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）により示される化合物の特定の投与様式は、本発明にとって重要ではない。例えば、本化合物は、軟膏またはクリーム中にて、皮膚癌に局所投与され得る。リン酸緩衝液生理食塩水溶液を使用する静脈内投与は、別の選択肢である。
【００８５】
本発明に従って投与されるべき式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）により示される化合物の特定の量は、投与様式、処置されるべき癌、単独投与されるかまたは他の薬物と組み合わせて投与されるか、ならびに処置されるべき被験体の年齢、体重および性別に依存して変動する。一般に、局所投与されるべき量は、約１〜３００ｍｇ／ｍ２体表面、好ましくは、２０〜３００ｍｇ／ｍ２体表面の範囲内にある。
【００８６】
本発明の化合物が薬学的効果を示す癌は、特に限定されない。しかし、本発明の化合物は、黒色腫、星状細胞腫、神経膠腫、ならびにＳ１００Ｂタンパク質または他のＳ１００タンパク質が増加している他の癌（例えば、脳、肺、膀胱、腸、腎臓、頸部、乳房、皮膚、頭部および頸部、リンパ、精巣、咽頭、および口の癌）に対して、特に有効である。
【００８７】
ｐ５３へのＳ１００タンパク質の結合の阻害は、蛍光結合／競合アッセイによってアッセイされ得る。例えば、Ｓ１００Ｂへの結合は、蛍光ペプチド（例えば、Ｆ４３Ｗ ｐ５３ペプチド（ＳＨＬＫＳＫＫＧＱＳＴＳＲＨＫＫＬＭＷＫＴＥ（配列番号１））またはＴＲＴＫ−１２ペプチド（ＴＲＴＫＩＤＷＮＫＩＬ（配列番号２））であり、両方とも、蛍光トリプトファン残基を含む（実施例７を参照のこと））を用いてモニターされる。このようなアッセイにおいて、このペプチドの結合は、１０〜２０ ｍＭの塩化カルシウム（ｐＨ ７．４）の存在下で、３５０〜３７０ｎｍにおけるその蛍光強度の変化によってモニターされる。その後、試験化合物によるそのペプチドの置換が、対応する蛍光強度の減少によってモニターされ、そしてＳ１００Ｂからの試験化合物の解離定数は、標準的競合式（ＫＤ＝Ｋａｐｐ／（１＋［蛍光ペプチド］／ＫＤペプチド）を使用して、計算される。その後、試験化合物が結合するＳ１００Ｂ上のアミノ酸残基が、ＮＭＲ分光法を使用して、化学シフト変動（ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ）によってモニターされ得る。
【００８８】
ｐ５３活性化に起因するＳ１００タンパク質（例えば、Ｓ１００Ｂ）の過剰発現は、ウェスタンブロッティング技術によって測定され得る（図１１および実施例１を参照のこと）。
【００８９】
以下の実施例は、例示だけのために提供され、本発明の範囲を限定することは全く意図されない。
【実施例】
【００９０】
（実施例１）
（原発性悪性黒色腫細胞における野生型のＳ１００Ｂおよびｐ５３のタンパク質レベル）
先述のように（Ｌｉｎら、前出）、１００μｇの原発性ヒト黒色腫Ｃ８１４６Ａのタンパク質抽出物または１００μｇのヒト神経膠芽細胞腫Ｕ１１８のタンパク質抽出物に対して、ウェスタンブロット解析を行った。
【００９１】
Ｃ８１４６Ａ細胞は、Ｆｒａｎｋ Ｌ．Ｍｅｙｓｋｅｎｓ博士（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、Ｉｒｖｉｎｅ）から得た。そして、それを１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清（ＦＣＳ、ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）を含有するＦ−１０培地で増殖させた。
【００９２】
Ｕ１１８細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から購入した。そして、１０％（ｖ／ｖ）ＦＣＳを含有するＤ−ＭＥＭで増殖させた。
【００９３】
５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１．０％（ｖ／ｖ）Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０、０．５％（ｗ／ｖ）デオキシコール酸ナトリウム、０．１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ、１．０ｍＭ ＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌアプロチニン、２．０μｇ／ｍｌロイペプチンおよび５．０ｍＭ ＤＴＴを含むＲＩＰＡ緩衝液中で、細胞を溶解して、細胞抽出物を得た。
【００９４】
この細胞抽出物中のタンパク質を１２％（ｗ／ｖ）ポリアクリルアミドゲル上で泳動し、ニトロセルロースに転写し、そしてｐ５３マウスモノクローナル抗体（ＤＯ−１、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）（１：１０００希釈）、Ｓ１００Ｂウサギポリクローナル抗体（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｉｎｃ．、Ｆｌａｎｄｅｒｓ、ＮＪ）（１：５００希釈）、サイクリンＤ１モノクローナル抗体（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）（１：１００希釈）、またはタンパク質の使用量のための基準として、アクチンマウスモノクローナル抗体（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）（１：５０００希釈）のいずれかと反応させた。次いで、ブロットを、セイヨウワサビペルオキシダーゼと結合体化したそれぞれの２次抗体と反応させ、製造者が推奨するように、化学発光基質（ＥＣＬ、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）と反応させた。先述のように（Ｌｉｎら、前出）、組換えＳ１００Ｂタンパク質コントロールを生産し、そして均一になるまで精製した。その結果を、図２Ａ〜２Ｂに示す。
【００９５】
図２Ａ〜２Ｂに示すように、原発性悪性黒色腫細胞（Ｃ８１４６）は、相対的に高レベルのＳ１００Ｂを確立したが、これらの癌細胞において、ｐ５３のレベルは、Ｓ１００Ｂをほとんど含まないか、または全く含まない細胞（すなわち、Ｕ１１８）と比較して、著しく低かった。このインビボでの知見は、Ｓ１００Ｂおよびｐ５３の一過性の同時トランスフェクションにおいて見出されることと一致し、この場合、Ｓ１００Ｂの添加によって、腫瘍サプレッサータンパク質のレベルが、有意に減少した（＞１００倍）（Ｌｉｎら、既出）。漸増量の組換えＳ１００Ｂタンパク質を使用して、Ｃ８１４６細胞中のＳ１００Ｂのレベルが、Ｕ１１８細胞よりも、少なくとも５０倍は高いと推定された。
【００９６】
（実施例２）
（Ｓ１００Ｂとｐ５３との相互作用は、カルシウム依存的である）
（Ａ）アポ−Ｓ１００ＢおよびＣａ２＋が結合したＳ１００Ｂの溶液構造
距離制限、双極子カップリング制限、二面角制限を使用して、ダイマーアポ−Ｓ１００Ｂの３次元構造を決定した。アポ−Ｓ１００Ｂのα−へリックス含量（Ａｍｂｕｒｇｅｙら、Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．ＮＭＲ、６：１７１〜１７９（１９９５））およびその対称的なダイマー境界面から生じる曖昧さのために、ＮＯＥの割当てが困難であった。そのため、２次元および３次元のＮＯＥＳＹスペクトルに、４次元ＮＯＥＳＹ実験を補足し、重複する問題を解決した。そして、非対称的に標識されたＳ１００Ｂ（すなわち、非標識Ｓ１００Ｂ：１３Ｃ、１５Ｎ標識Ｓ１００Ｂの１：１混合物）を用いる１３Ｃ−エディットの１２Ｃ−フィルター実験を使用し、ダイマー境界面において、分子内ＮＯＥ相関を分子間ＮＯＥ相関から区別した（Ｄｒｏｈａｔら、前出）。結果として、化学シフト値のみに基づいて、ロングレンジの分子間ＮＯＥ相関の７０％よりも多くが、割当てられた。ＮＯＥベースの構造は、ショートレンジの距離制限にのみ基づくので、この構造を、ロングレンジの双極子カップリング制限を使用して、精緻化した（Ｔｊａｎｄｒａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７８：１１１１〜１１１４（１９９７）；Ｔｊａｎｄｒａら、Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．、４：４４３〜４４９（１９９７）；およびＤｒｏｈａｔら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３７：２７２９〜２７４０（１９９８））。アポ−Ｓ１００Ｂの溶液構造が、非常に高い解像度（Ｑは約０．３）で、公表された（Ｄｒｏｈａｔら（１９９６）、前出；および、Ｄｒｏｈａｔら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、８：８００〜８０９（１９９９））。そして、それを図３に示す。実際は、動的特性がほとんどない領域においては、クオリティファクターは、さらに良好である（Ｑ＜０．２）。アポ−Ｓ１００Ｂの最終構造（約１５ＮＭＲ制限距離／残基）は、Ｘ型の４へリックスバンドルを形成する逆平行のヘリックス対同士の垂直的結合を有する対称的なダイマー境界面を示す（図３）。このフォールディングの結果として、アポ−Ｓ１００ＢのＣ末端のＥＦハンドは、カルモジュリン、トロポニンＣ、カルビンジン（Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ）Ｄ９Ｋ、カルサイクリン（Ｃａｌｃｙｃｌｉｎ）、およびパルブアルブミンのＥＦハンドとは異なる（Ｄｒｏｈａｔら（１９９６）、前出；およびＤｒｏｈａｔら（１９９９）、前出）。それはまた、広範囲の疎水性コアおよび、その高い可溶性と一致する荷電表面を有する。このアポ−タンパク質に関して、Ｃａ２＋が結合したＳ１００Ｂの溶液構造（図１）が、ＮＭＲを使用して解明された。これは、Ｄｒｏｈａｔら（１９９８、前出）および図４に示される。
【００９７】
（Ｂ） Ｓ１００Ｂダイマーおよびそのコンフォメーション変化
Ｓ１００Ｂのアポ構造（図３）とＣａ２＋が結合した構造（図４）との比較により、Ｘ型４へリックスバンドルのダイマー境界面におけるへリックス（１、１’、４、または４’）の方向に違いがないことが示された（図１）。これらの知見により、Ｄｒｏｈａｔら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、６：８００〜８０９（１９９７）；Ｌａｎｄａｒら、Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ、１３４３：１１７〜１２９（１９９７）；およびＬａｎｄａｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、３７：１７４２９〜１７４３８（１９９８）に記載された、ゲル濾過データ、光散乱データ、および分析的超遠心分離データが、確認される。これらの文献は、Ｓ１００Ｂダイマーが、Ｃａ２＋の存在下および非存在下の両方において、１．０ｎＭ未満の濃度において安定であることを示す（Ｄｒｏｈａｔら（１９９７）前出；Ｌａｎｄａｒら（１９９７）、前出；およびＬａｎｄａｒら（１９９８）、前出）。従って、非共有結合性のダイマーが、細胞内でのＳ１００タンパク質の状態であり、ＮＭＲ構造は、生理学的に妥当なオリゴマー化状態である。しかし、第２ＥＦハンド（典型的なＥＦハンド）において、Ｃａ２＋が添加された場合、へリックス３の位置に大きな変化が存在する（図１）。このＥＦハンドにおいて、Ｃａ２＋が添加された場合、ヘリックス３とヘリックス４との間のへリックス間角度において、９０°の変化が観測される。このＣａ２＋依存的なコンフォメーション変化によって、ヒンジ領域中の残基、Ｃ末端ループ中の残基、およびヘリックス３中の残基によって規定される裂溝（アポ構造中には、存在しない）が、露出される（図１）。Ｃａ２＋が結合したＳ１００Ｂ上のこの表面（図１で黄色）が露出されることが、ｐ５３の結合にとって必要である（図１および図４）。
【００９８】
（Ｃ）Ｃａ２＋−Ｓ１００Ｂ−ｐ５３ペプチド複合体の溶液構造
Ｓ１００Ｂとｐ５３のＣ末端との間の相互作用の詳細を調査するために、ｐ５３３６７〜３８８ペプチドによるＣａ２＋が結合したＳ１００Ｂの力価測定を、Ｒｕｓｔａｎｄｉら（２０００）、前出；Ｒｕｓｔａｎｄｉら（１９９８）；前出；およびＲｕｓｔａｎｄｉら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、８：１７４３〜１７５１（１９９９）に記載されるように、ＮＭＲ分光法によりモニタリングした。Ｃａ２＋の存在下において、ｐ５３３６７〜３８８が添加された場合に、ＨＳＱＣスペクトル中のＳ１００Ｂからの非常に多くの共鳴が、有意にシフトした。しかし、Ｃａ２＋の非存在下では、変化は、測定されなかった。これらのデータによって、ｐ５３ペプチドのＳ１００Ｂとの相互作用のＣａ２＋依存性が、確認された。Ｓ１００Ｂ−ｐ５３ ４量体（Ｓ１００Ｂダイマーにつき２つのｐ５３ペプチド）の大きさ（２６ｋＤａ）および複雑性のために、対称的に標識したサンプル（Ｓ１００Ｂサブユニットの両方を、完全に同位体標識する；ｐ５３は非標識）および非対称的に標識したサンプル（標識Ｓ１００βサブユニットと非標識Ｓ１００βサブユニットの５０：５０混合物；ｐ５３は標識しない）の両方を使用する、異核多次元（２Ｄ〜４Ｄ）ＮＭＲデータ（Ｃｌｏｒｅら、Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｌａｒｇｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｒｅｅ− ａｎｄ ｆｏｕｒ−ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ． ＮＭＲ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ（Ｃｌｏｒｅら編）、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、ＦＬ（１９９３）；およびＷａｌｔｅｒｓら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．、３３９：２３８〜２５８（２００１））を収集することが必要であった。これらのＮＭＲデータおよびＳ１００Ｂ−ｐ５３ペプチド複合体の構造が、Ｒｕｓｔａｎｄｉら（２０００）（前出）に記載されている。総じて、３，４６６個の実験的制限（約１５個／残基）を使用して、Ｃａ２＋−Ｓ１００Ｂに結合したｐ５３３６７〜３８８の構造を計算した（図４）。
【００９９】
（Ｄ）ｐ５３−Ｓ１００Ｂ相互作用のＣａ２＋依存性
ｐ５３−Ｓ１００Ｂ相互作用のＣａ２＋依存性は、３つ全てのＳ１００Ｂ複合体（アポ−Ｓ１００Ｂ、Ｃａ２＋が結合したＳ１００Ｂ、およびｐ５３が結合したＳ１００Ｂ；図１）の構造を比較することにより、観測され得る。ｐ５３と相互作用する残基のほとんど（２１個のうち１８個）は、アポ−Ｓ１００Ｂ構造中に埋没している（図１中の黄色）。しかし、Ｃａ２＋がＳ１００Ｂに結合した場合、これらの同じ残基が、へリックス３の位置の大きな変化に起因して、露出される。このコンフォメーション変化が、ｐ５３との相互作用に必要である（図１）。この構造はまた、Ｓ１００Ｂタンパク質の標的中で見出された（すなわち、ファージペプチドライブラリーのスクリーニングに由来する）コンセンサス配列を理解するために、有用であった。「Ｓ１００Ｂ−コンセンサス配列」の多くが、ｐ５３のＣ末端において、見出され（Ｉｖａｎｅｎｋｏｖら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７０：１４６５１〜１４６５８（１９９５））、そして、ｐ５３ペプチドを、この配列により一致するように変異させた（Ｆ３８５Ｗ）場合、このｐ５３ペプチドのＳ１００Ｂに対する親和性は、５倍上昇する（Ｒｕｓｔａｎｄｉら（１９９８）、前出）。コンセンサス配列全体を含む１２残基のペプチド（ＴＲＴＫ−１２ペプチド）に結合したＳ１００Ｂの３次元構造研究／動力学的研究が、Ｉｎｍａｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３２４：１００３〜１０１４（２００２）に記載されており、従って、ＴＲＴＫ−Ｓ１００Ｂの構造およびｐ５３ Ｓ１００Ｂの構造の両方を、本明細書中で、薬物設計の仕事において使用した。
【０１００】
（実施例３）
（悪性黒色腫におけるＳ１００Ｂとｐ５３との間の相互作用は、細胞周期依存的である。）
悪性黒色腫におけるＳ１００Ｂとｐ５３との間の相互作用は、細胞周期依存的であるかどうかを研究するために、Ｃ８１４６Ａ原発性悪性黒色腫を、血清飢餓（０．５％（ｗ／ｖ））によって、同調化した。詳細には、黒色腫細胞の同調化は、血清飢餓により行った。この血清飢餓は、０．５％（ｖ／ｖ）ＦＣＳ中で、４８時間、細胞を増殖させ、次いで、ＦＣＳレベルを１５％（ｖ／ｖ）まで上げ、そして次いで、収集する前に、種々の期間（すなわち、０時間と４８時間との間）、細胞を増殖させることで行った。次いで、細胞を収集し、氷冷ＰＢＳで２回洗浄した。次に、この細胞のペレットを、溶解緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２．０ｍＭ ＣａＣｌ２、１．０ｍＭ ＰＭＳＦ、２．０μｇ/ ｍｌ ロイペプチンおよび５．０ｍＭ ＤＴＴを含む）中で、溶解した。細胞（１／２容積の０．１ｍｍ ガラスビーズを含む）を、３回、凍結および融解させ、そして１５，０００ｒｐｍで遠心分離した。上清（１．０ｍｇ）を、ｐ５３抗体（ＤＯ−１）またはＳ１００Ｂ抗体のいずれかと共に、４℃で２時間、インキュベートした。次いで、プロテインＡ−アガロースビーズ（５０μｌ、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ）を添加し、サンプルを、４℃で一晩、インキュベートした。このビーズを、スピンダウンし、溶解緩衝液で６回、洗浄した。そして、１２％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上にローディングした。このサンプルを、ニトロセルロース膜に転写し、インキュベートした（すなわち、上記のように、Ｓ１００Ｂ抗体またはｐ５３抗体を使用して共免疫沈降した）。その結果を、図５Ａ〜５Ｂに示す。
【０１０１】
図５Ａ〜５Ｂに示すように、直接的Ｓ１００Ｂ−ｐ５３相互作用が、インビボで起きる。Ｓ１００Ｂは、ほとんどの細胞において、主に細胞質ゾル性であるが、ｐ５３は、Ｇ１の間は細胞質に局在し、Ｓの間は核に入り、転写活性化を開始する。図５Ａに示したデータは、サイクリンＤ１（Ｇ１マーカー）の発現が、１５％（ｖ／ｖ）血清中への黒色腫の放出後６〜８時間の間に最大であったことを示す。この理由により、６時間の時点を選択して、癌細胞の同調化したＧ１抽出物を調製した。同調していない指数増殖している癌細胞の、ｐ５３抗体を使用した免疫沈降（図５Ｂ、レーン１）は、たとえあったとしても、少しの量のＳ１００Ｂしか、ｐ５３によって共免疫沈降され得ないことを示す。しかし、細胞をＧ１に同調化した場合（図５Ｂ、レーン３）、ｐ５３抗体によって免疫沈降され得るＳ１００Ｂの量が、著しく上昇した。Ｓ１００Ｂ抗体を使用して行われた相互免疫沈降実験（図５Ｂ、レーン２）によって、Ｇ１の間のｐ５３とＳ１００Ｂとの間の複合体の形成が確認された。Ｇ１において、この相互作用が起こるという事実は、重要である。なぜなら、この相は、ＤＮＡの複製の前に存在し、そしてｐ５３が、傷害を受けたＤＮＡに応答するための重要なチェックポイントであるからである。ほとんどの細胞では、ｐ５３は、Ｇ１の間は細胞質に局在し、Ｓの間は核に入って、その転写活性を提供する。１つの重要なｐ５３の下流エフェクター遺伝子が、サイクリン依存性キナーゼインヒビターｐ２１である。このインヒビターは、ＤＮＡ損傷に応答して、ｐＲＢのリン酸化を防止し、細胞をＧ１に停止させる。このＧ１での停止によって、そのＤＮＡを修復し損傷ＤＮＡが娘細胞に伝達するのを防止するための時間が、細胞に与えられると考えられる。Ｇ１の間の細胞質でのＳ１００Ｂとｐ５３との相互作用によって、Ｓの間の核へのｐ５３の進入が防止され、ｐ５３の転写活性が阻害され得る。野生型ｐ５３に対するＳ１００Ｂの総合的な効果によって、細胞の異常（例えば、非機能的なｐ５３が生じる遺伝子増幅および遺伝子変異）を模倣し得る。ｐ５３のＣ末端と結合するかまたはｐ５３のＣ末端を改変するほとんどのタンパク質は、腫瘍サプレッサーを活性化する。一方で、Ｓ１００Ｂに対しては、逆の効果が観測された。Ｓ１００Ｂが結合した場合、ｐ５３の機能は低下した（Ｌｉｎら、前出）。
【０１０２】
（実施例４）
（ｐ５３の機能のＳ１００Ｂ阻害）
Ｓ１００Ｂは、ｐ５３のリン酸化を阻害し（Ｗｉｌｄｅｒら、前出；およびＲｕｓｔａｎｄｉら（１９９８）、前出）、そしてｐ５３テトラマーを破壊する（Ｂａｕｄｉｅｒら、前出）。これらの２つの機能は、ｐ５３の転写活性にとって重要である（Ｇｉａｃｃｉａら、Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐ．、１２：２９７３〜２９８３（１９９８））。Ｓ１００Ｂは、ｐ５３のＤＮＡ結合活性を低下させる（Ｌｉｎら、前出）。このことは、阻害的リン酸化およびテトラマーの形成の防止に加えて、Ｓ１００Ｂは、ｐ５３の転写活性にも影響し得ることを示唆する（Ｌｉｎら、前出）。このことを立証するために、一過性トランスフェクションを、Ｈ１２９９ヒト大細胞肺癌細胞において、ｐ５３レポーター遺伝子構築物（ｐＧ１３−ＣＡＴ）（Ｋｅｒｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５６：８２７〜８３０（１９９２））と同時に、Ｓ１００Ｂ発現ベクターおよびｐ５３発現ベクターを使用して、実行した。Ｓ１００Ｂ単独でのトランスフェクションは、レポーター遺伝子に影響しなかったが、Ｓ１００Ｂのｐ５３との同時トランスフェクションは、転写活性を有意に低下させた（Ｌｉｎら、前出）。Ｓ１００Ａ１を使用したこれらの研究およびＳ１００Ｂに関する研究おいて、Ｓ１００Ａ１が、ｐ５３の機能を阻害した（Ｃａｒｒｉｅｒら、前出）。ｍｔｓｌを使用して行われた研究は、このＳ１００タンパク質もまた、ｐ５３に結合し、その転写活性化を有意に阻害することを示す（Ｇｒｉｇｏｒｉａｎら、前出）。
【０１０３】
Ｓ１００Ｂのｐ５３との相互作用の重要性をさらに評価するために、ｐ５３およびその下流エフェクターの内の２つであるｍｄｍ２（または、ヒトについてはｈｄｍ２）およびｐ２１のタンパク質レベルを試験した。詳細には、ヒト大細胞肺癌細胞（Ｈ１２９９）を、ｐ５３発現ベクターおよびＳ１００Ｂ発現ベクターを使用して、一過的に同時トランスフェクションした。Ｈ１２９９細胞株は、Ｂｅｒｔ Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ博士から得た。これらの細胞は、ｐ５３遺伝子のホモ接合性欠失に起因して、ｐ５３のヌル遺伝子型を有する。それゆえ、存在する唯一のｐ５３は、トランスフェクションを介して導入された野生型のタンパク質である（Ｆｕｎｋ、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．、１２：２８６６〜２８７１（１９９２））。この結果を、図６Ａに示す。
【０１０４】
図６Ａに示すように、ｐ５３は、ｐ５３発現ベクターの非存在下では、検出されなかった（レーン１、２；図６Ａ）；その結果、ｍｄｍ２タンパク質およびｐ２１タンパク質の内因性レベルは、低かった。予想どおり、ｐ５３の発現によって、ｍｄｍ２およびｐ２１の発現が引き起こされた（図６Ａ、レーン３）が、Ｓ１００Ｂタンパク質との共発現によって、ｐ５３タンパク質の蓄積（１００分の１未満に）、ｍｄｍ２タンパク質レベルおよびｐ２１タンパク質レベルは、著しく減少した（図６Ａ、レーン４）。ｐ５３の非存在下（すなわち、コントロール実験）でのＳ１００Ｂの発現（図６Ａ、レーン２）は、基礎レベルのｍｄｍ２にもｐ２１にも、有意には影響しなかった（図６Ａ）。このデータは、ｐ５３レベル、ｍｄｍ２レベルおよびｐ２１レベルの減少は、Ｓ１００Ｂに依存することを示す。
【０１０５】
次に、Ｓ１００Ｂが、内因性のｐ５３と相互作用し、ｍｄｍ２およびｐ２１の発現に影響し得るかどうかを研究した。ヒト乳癌細胞株ＭＣＦ−７（野生型ｐ５３の遺伝子型を有する（Ｋａｓｔａｎら、Ｃｅｌｌ、７１：５８７〜５９７（１９９２））を、Ｓ１００Ｂを使用して、一過的にトランスフェクトした。Ｓ１００Ｂのトランスフェクションの後で、内因性ｐ５３の生産を誘導するために、Ｘ線模倣試薬ブレオマイシンで細胞を処置した（または、処置しなかった）。その結果を、図６Ｂに示す。
【０１０６】
図６Ｂに示すように、基礎レベルのｐ５３、ｍｄｍ２およびｐ２１が、ブレオマイシンへの曝露によって誘導され得る（図６Ｂ、レーン２）。内因性Ｓ１００Ｂは、ＭＣＦ−７では検出できないが（図６Ｂ、レーン１）、Ｓ１００Ｂタンパク質の過剰発現により、ｐ５３のレベルが減少し、ｍｄｍ２の蓄積およびｐ２１の蓄積が、阻止された（図６Ｂ、レーン４）。これらのデータは、Ｓ１００Ｂが、インビボで、ｐ５３の下流エフェクター遺伝子の内在性の発現を阻害することを示す。
【０１０７】
（実施例５）
（Ｓ１００Ｂプロモーターの領域は、ｐ５３に結合する）
活性ｐ５３レベルが上昇した場合、細胞周期およびアポトーシスに関与する多数の遺伝子の転写が、活性化される。１つの周知の場合において、ｐ５３は、フィードバックループの一部としてｐ５３自体のユビキチン依存性分解に関与するタンパク質である、ｍｄｍ２の転写を活性化する（Ｐｒｉｖｅｓら（１９９９），上記；Ｆｒｅｅｄｍａｎら、Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．，５５：９６−１０７（１９９９）；およびＭｏｍａｎｄら、Ｇｅｎｅ，２４２：１５−２９（２０００））。ｍｄｍ２と同様の状況（ヒトにおけるｈｄｍ２）において、Ｓ１００Ｂのプロモーターは、ｐ５３結合についてのコンセンサス配列に対応する３つの配列を有する（図７）。実際、このＳ１００Ｂプロモーター中の一配列は、ｐ５３結合コンセンサス配列と完全に適合する（２０／２０ヌクレオチド適合；図７）。
【０１０８】
従って、移動度シフトアッセイを、精製ｐ５３を用いて実施して、Ｓ１００Ｂのプロモーター中のこれらの配列が真正にｐ５３結合部位であるか否かを、ＧＡＤＤ４５配列をポジティブコントロールとして使用して決定する。電気泳動移動度シフトアッセイを、本質的にはＣａｒｒｉｅｒら、Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｒｅｓ．，３５２：７９−８６（１９９６）により記載されるのと同様に実施した。但し、サケ精子ＤＮＡ（１．０μｇ）および精製組換えｐ５３を使用した。バキュロウイルスにより発現されたｐ５３を、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ）から得た。バキュロウイルスにより発現されたｐ５３（０．６μｇおよび３．０μｇ）を、それぞれ、ＧＡＤＤ４５オリゴヌクレオチドおよびＳ１００Ｂオリゴヌクレオチドへの結合のために使用した。以前に記載された通り（Ｃａｒｒｉｅｒら（１９９６），上記）に、これらのプローブを、逆相ＨＰＬＣ（Ｖｙｄａｃ Ｃ−４）により精製し、そしてＴ４ポリヌクレオチドキナーゼ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ）を用いて標識した。Ｓｌ００βプロモーター由来のオリゴヌクレオチド配列は、２０個のコンセンサスｐ５３結合部位の２０ヌクレオチド、１７ヌクレオチド、および１６ヌクレオチドと適合し、それは以下の通りであった：
センス ５’−ＧＣＣ ＴＧＧ ＧＣＡ ＡＧＣ ＴＣＴ ＧＴＧ ＣＴＴ ＣＡＣ ＡＧＡ ＧＣＡ ＡＧＣ ＣＴＧ ＴＧＴ−３’（配列番号３）；
センス ５’−ＧＴＴ ＣＴＧ ＧＧＡ ＣＴＴ ＴＣＡ ＣＴＡ ＡＡＣ ＴＴＣ ＴＣＣ ＴＡＣ ＣＡＴ−３’（配列番号４）；および
センス ５’−ＣＡＧ ＡＧＧ ＧＣＡ ＧＧＣ ＣＣＧ ＧＣＴ ＧＧＧ ＣＣＣ ＴＣＣ ＴＧＣ ＴＧＡ−３’（配列番号５）。
【０１０９】
結果は、図８において示される。
【０１１０】
図８において示されるように、より低移動度の複合体が、ＧＡＤＤ４５およびＳ１００Ｂ（２０／２０ヌクレオチド）プローブ（それぞれ、レーン２および５）とともに生成された。さらに、両方のバンドは、ｐ５３抗体（それぞれ、レーン３および６）によってスーパーシフトされた。従って、これは、真正のｐ５３複合体を示す。しかし、コンセンサス配列が完全に適合するにも関わらず、ＧＡＤＤ４５配列と比較した場合、５倍多くのタンパク質およびＤＮＡが、Ｓ１００Ｂプロモーター配列とのタンパク質−ＤＮＡ複合体を生成するためには必要であった。このことは、コンセンサス配列中のＴ／Ａ改変体のうちの２つが、ＧＡＤＤ４５配列（これは好ましい）においてＴであるが、Ｓ１００Ｂ配列においてはＡであるという事実（図７）に起因し得る。これらのｐ５３結合部位間の別の差異は、ｐ５３と相互作用する２つの１０ヌクレオチドＤＮＡストレッチを連結する、介在ＤＮＡ配列の長さである（１１ヌクレオチド 対 ０ヌクレオチド；図７）。同様のデータが、Ｓ１００Ｂプロモーター中の他の２つのｐ５３コンセンサス部位を用いて得られた；しかし、これらの部位は、２０／２０配列よりもさらに低いｐ５３親和性を有した。まとめると、これらのデータは、ｐ５３によるＳ１００Ｂ転写の誘導は、それらのプロモーター中により高親和性のｐ５３部位を含む遺伝子が占められた後にのみ生じることを示唆する。さらに、ｐ５３は、他のＳ１００タンパク質（Ｓ１００Ａ２）（Ｔａｎら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒ，４４５：２６５−２６８（１９９９））の転写を、それらのプロモーター領域において見出されるｐ５３結合コンセンサス配列に結合することによって調節する可能性もまたある（図７）。
【０１１１】
（実施例６）
（Ｓ１００Ｂ−ｐ５３相互作用の阻害は、ｐ５３腫瘍サプレッサー機能を回復する）
原発性悪性黒色腫細胞Ｃ８１４６は、比較的高いレベルのＳ１００Ｂを有するが、ｐ５３レベルは、Ｓ１００Ｂをほとんど含まないかまたは全く含まない細胞（すなわち、Ｕ１１８；図２Ａ〜２Ｂ）と比較して、これらの癌細胞において顕著に低い。このインビボでの知見は、Ｓ１００Ｂおよびｐ５３の一過性同時トランスフェクションにおいて見出されるものと一致する。ここで、腫瘍サプレッサータンパク質のレベルは、Ｓ１００Ｂの添加によって有意に減少された（＞１００分の１）（Ｌｉｎら、上記）。漸増量のＳ１００Ｂ組換えタンパク質を使用すると、Ｃ８１４６細胞におけるＳ１００Ｂのレベルは、Ｕ１１８細胞において少なくとも５０倍高いと推定された。Ｓ１００Ｂが、黒色腫癌細胞において低いｐ５３レベルに対して直接寄与するか否かを決定するために、Ｓ１００ＢのＣ末端に対応する小干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を調製し、黒色腫細胞中に導入した。
【０１１２】
使用した小干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、２３ヌクレオチド（ｎｔ）の二本鎖ＲＮＡからなった。これは、Ｘｅｒａｇｏｎ Ｉｎｃ．（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，Ａｌ）によって合成された。このｓｉＲＮＡの配列（すなわち、５’−ＡＣＵ ＡＣＵ ＧＣＣ ＵＧＣ ＣＡＣ ＧＡＧ ＵＵＣ−３（配列番号６））は、Ｓ１００β Ｃ末端（ヌクレオチド２４４〜２６５）＋２つのｄＴ ３’突出に対応する。
【０１１３】
種々の濃度のｓｉＲＮＡ（２．０ｎＭ、２０ｎＭ）を、２．０μｇのｐＣＭＶ．３空ベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）とともにこれらの細胞に添加した。これらのｓｉＲＮＡを、ＦｕＧＥＮＥ試薬（Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を製造業者の推奨に従ってを使用して、Ｃ８１４６Ａ黒色腫細胞においてトランスフェクトした。これらの細胞を２４時間後に収集し、そして上記のようにウェスタンブロットによって分析した。これらの結果が、図９に示される。
【０１１４】
図９において示されるように、Ｓ１００ＢアンチセンスＲＮＡの添加によって、Ｓ１００Ｂレベルが低下し（３分の１）、対応して、ｐ５３レベルの増加（２．３倍）が観察された。同様に、ｐ５３により活性化される遺伝子であるｐ２１のタンパク質レベルもまた、ｐ５３レベルが上昇した場合に、予期された通り、ｓｉＳ１００Ｂの添加によってアップレギュレートされた（２．６倍）（図９）。まとめると、アンチセンスＲＮＡを用いたこれらの結果は、Ｓ１００Ｂが、原発性悪性黒色腫癌細胞内部での機能的ｐ５３のダウンレギュレーションに寄与することを示す。
【０１１５】
（実施例７）
（Ｓ１００Ｂの低分子インヒビター）
上記の研究は、Ｓ１００タンパク質レベルが上昇しておりかつｐ５３レベルが減少している細胞（例えば、多くの癌（すなわち、悪性黒色腫）中の細胞）において、野生型ｐ５３活性を回復するためのＳ１００Ｂの低分子インヒビターの設計を動機付けた。
【０１１６】
この低分子は、Ｓ１００Ｂ上のｐ５３結合部位に結合することによってＳ１００Ｂ−ｐ５３相互作用を阻害し、そしてｐ５３結合を阻害するように、設計した。従って、このようなインヒビターは、ｐ５３をＳ１００Ｂ依存性分解経路から保護し、そして細胞内部における野生型ｐ５３機能を回復すると考えられる。本発明において、コンピューター支援型薬物設計（ｃｏｍｐｕｔｅｒ−ａｉｄｅｄ ｄｒｕｇ ｄｅｓｉｇｎ）（ＣＡＤＤ）（Ｍａｒｔｉｎ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３５：２１４５−２１５４（１９９２）；Ｅｗｉｎｇら、Ｊ．Ｃｏｍｐｕｔ．Ｃｈｅｍ．，１８：１１７５−１１８９（１９９７）；Ｍａｋｉｎｏら、Ｊ．Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｉｄｅｄ Ｍｏｌ．Ｄｅｓ．，１３：５１３−５３２（１９９９）；およびＨｉｃｋｓら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ．＆ Ｄｅｖｅｌ．，１：２２３−２３４（１９９８））を、ＮＭＲによる構造活性関連研究（ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｓｔｕｄｉｅｓ ｂｙ ＮＭＲ）（ＳＡＲ ｂｙ ＮＭＲ）（Ｈａｊｄｕｋら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７８：４９７−４９９（１９９７）；およびＦｅｓｉｋ，Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ ＮＭＲ，３：２６１−２６９（１９９４）（図１０））と合わせることは、Ｓ１００Ｂと結合した後にＳ１００Ｂ−ｐ５３相互作用をブロックする新規な低分子を同定するための有効な方法であることが、見出された。ＣＡＤＤは、魅力的である。なぜなら、この研究は、利用可能な化合物に対して焦点を合わせ、それによって開始段階における化学合成を回避するからである。分子を、１００万個の化合物の３Ｄデータベースからコンピューターにより選択し、そしてＳ１００Ｂのｐ５３結合部位に「配置」した（図１０）。これらの低分子の方向およびコンフォメーションを、その後、Ｓ１００Ｂ構造への適合が最大となるように調節した。好ましい相互作用エネルギーと多数の可能なリガンド−レセプター水素結合とを含む分子を、試験のために選択した。有望な化合物のＮＭＲ技術によるＳＡＲ（Ｈａｊｄｕｋら、上記；およびＦｅｓｉｋ，上記）および熱力学的結合研究を使用して、Ｓ１００Ｂについての結合部位および親和性を評価した。
【０１１７】
１００万個を超える化合物を、ＣＡＤＤを使用してスクリーニングし、これから、生物物理学的スクリーニングおよび生物学的スクリーニングを使用して、Ｓ１００Ｂに結合する５０個より多くの分子が同定された（ＫＤ＝５００ｎＭ−１０ｕＭ；蛍光結合アッセイから）。１つのこのような分子であるペンタミジンは、特に興味深い。なぜなら、（ｉ）ペンタミジンは、別の用途についてＦＤＡが認可しており；そして本明細書中で、（ｉｉ）ＮＭＲおよび蛍光分光法により決定した場合に、ｐ５３結合部位においてＳ１００Ｂに結合することが（ＫＤ＝７００ｎＭ）見出され（下記を参照のこと）；（ｉｉｉ）ペンタミジンは、原発性ヒト悪性黒色腫細胞（野生型ｐ５３）中に入り、そしてその増殖を、８分の１より低く阻害し、正常なメラニン形成細胞に対してかなり低い効果（８分の１）を有し；（ｉｖ）ペンタミジンを用いる処理により、ｐ５３タンパク質レベルが部分的に回復した（このことは、これらが、Ｓ１００−ｐ５３複合体を破壊することを示唆する）；（ｖ）放出されたｐ５３は、ウェスタンブロットによって検出された場合、ｍｄｍ２およびｐ２１をアップレギュレートし、そして（ｖｉ）Ｓ１００Ｂタンパク質レベルが、原発性黒色腫において１０倍より大きく増加された（図１１）からである。Ｓ１００Ｂのアップレギュレーションは、驚くべきことではない。なぜなら、Ｓ１００Ｂ遺伝子は、ｐ５３の転写調節下にあること、Ｓ１００Ｂプロモーターにおいて、ｐ５３ＤＮＡ結合コンセンサス配列と正確に適合する（２０のうち２０）ヌクレオチド配列（ヌクレオチド１７０５〜１７３５）が存在することが、本明細書中で発見されたからである。ＤＮＡバンドシフトアッセイは、ｐ５３が、Ｓ１００Ｂプロモーター中のこの部位および他の２つのｐ５３部位に結合し、これは、完全に適合する配列についてより特異的であることを示す（図７）。これらのデータは、この薬物が、Ｓ１００Ｂ−ｐ５３相互作用を破壊すること、およびｐ５３の回復は、ｐ５３標的遺伝子（例えば、ｐ２１、ｍｄｍ２、およびＳ１００Ｂ）を転写活性化することを暗示する。
【０１１８】
（（ａ）結合力価測定）
ＣＡＤＤ探索において同定したＳ１００Ｂへのこの低分子の結合を、蛍光分光法を使用して測定した。同定した化合物は、以下の通りである：
ペンタミジンイセチオネート（Ｋｄ＝１．４±１μＭ ＩＣ５０約５００ｎＭ）；｛［（２，３−ジクロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド（Ｋｄ＜１μＭ ＩＣ５０＜２．５）（化合物３）；｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド（Ｋｄ＝４＋／−１μＭ）（化合物９）；２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレエート（Ｋｄ＝２．７＋／−１μＭ ＩＣ５０＝２．５μＭ）（化合物１）；２−クロロ−５−［Ｎ’（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸（Ｋｄ約６μＭ ＩＣ５０約２５μＭ）（化合物３１）；４−（４−｛［（１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸（Ｋｄ＝２＋／−１μＭ）（化合物４）；１，２−（３−メチルチオトリアジン），３，４−フェニル，６−［（２−メトキシフェノキシ）酢酸］モルホリン（Ｋｄ＜１０μＭ ＩＣ５０約２５μＭ）（化合物３３）；４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル］−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸（Ｋｄ＜１０μＭ）（化合物５１）；２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸（Ｋｄ約２４μＭ）（化合物４４）；５−｛［２−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸（Ｋｄ約１２μＭ）（化合物４５）；１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸（Ｋｄ＜２００μＭ）（化合物２４）；（３−ベンゾイック）−１，３，ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸（Ｋｄ＜２００μＭ）（化合物３８）；および２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸（Ｋｄ＜２００μＭ）（化合物３９）。
【０１１９】
蛍光を発する化合物（すなわち、化合物９、３１および３３について）を、蛍光強度の変化を介して、Ｓ１００Ｂへの直接結合アッセイによって測定した。蛍光を発しなかった化合物（化合物１、３、４（ペンタミジン）、２４、３８、３９、４４、４５および５１）について、２つのアプローチを使用した。第１に、チロシン蛍光の変化（Ｓ１００ＢのＴｙｒ−１７について）は、いくつかの場合において、結合を評価するために十分であった（Ｒｕｓｔａｎｄｉら（１９９８），上記；およびＳｚａｂｏら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，９４：２４９−２５２（１９７８））。しかし、低収量のチロシン残基と関連する問題を克復するために、Ｓ１００ＢのＦ４３Ｗ変異体を使用し（図１２Ａ）、その後、野生型Ｓ１００Ｂを用いて競合研究を行った（図１２Ｂ）。このＳ１００Ｂ構築物において（Ｆ４３ＷＳ１００Ｂにおいて）、トリプトファン残基が、標的タンパク質結合部位に位置し、その結果、トリプトファン変異体の放射は、添加化合物の関数として、３３８ｎｍにて簡単な様式で測定された。このＦ４３Ｗ変異体は、野生型Ｓ１００Ｂの同様の構造、Ｃａ２＋結合特性および標的結合特性を有する。別のアプローチは、野生型Ｓ１００Ｂに蛍光プローブを結合し、この化合物との競合結合アッセイを行うことであった。この場合、蛍光プローブとしてｐ５３から誘導した蛍光ペプチド（Ｆ３８５Ｗ）（ＫＤ＝３．０μＭ）またはＴＲＴＫ−１２ペプチド（ＫＤ＝０．２μＭ）を、化合物との競合研究におけるプローブとして使用した。結合定数を決定するための定常状態実験を、２５℃にて維持した細胞（水晶キュベット）の温度を用いるＡｍｉｎｃｏ Ｂｏｗｍａｎ Ｓｅｒｉｅｓ ２ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒにて実施した。２つの内部コントロールを、すべての力価測定において実施した。ＥＧＴＡをＳ１００Ｂに添加して、カルシウムをキレート化し、そしてその薬物との相互作用が、多数のタンパク質標的について観察されるＣａ２＋依存性コンフォメーション変化を必要とするか否かを決定した（Ｗｅｂｅｒら、上記）。さらに、この力価測定を、コントロールとしてカルシウムの非存在下において実施した。蛍光放射スペクトルを有するすべての化合物をまた、進行前に光脱色について慣用的に評価した。緩衝液もまた、蛍光を発し得るいかなる混入物についても慣用的にチェックした。
【０１２０】
（（ｂ）細胞アッセイ）
化合物が原発性悪性黒色腫細胞（細胞株：Ｃ８１４６ＡおよびＨＴＢ ６４）および正常メラニン形成細胞（Ｃｅｌｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｉｎｃ．新生児包皮からの１０４−０５）の増殖に対して有する効果を、測定した。ペンタミジンは、悪性黒色腫細胞の増殖をむしろ強力に（ＩＣ５０＝５００ｎＭ）阻害することが見出された。正常メラニン形成細胞に対しての効果は弱かった（図１３）。この増殖阻害定数（ＩＣ５０値）は、上記に列挙された他の化合物から生じる。これらの研究において、代表的には約１０，０００個の細胞を、Ｔ２５バイアル全体にわたり均しく分布させた。１日後、上記低分子（２．５μＭまたは２５μＭ）を含むかまたは含まない新しい培地を添加し、そしてその細胞を、さらに１３日間増殖させた。いくつかの分子をＤＭＳＯ中で送達したので、細胞増殖に対するＤＭＳＯ（０．１〜０．２％（ｖ／ｖ））の効果もまた、チェックし、それが、これらのレベルに対して影響を有さないことが見出された（図１３）。この時点において、これらの細胞をリン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）中で洗浄し、トリプシンを用いる処理によって収集し、そして５．０％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、５．０％（ｖ／ｖ）新生仔ウシ血清（ＮＣＳ）、および２．０％（ｗ／ｖ）ペニシリン／ストレプトマイシンを含むＦ１０培地中に配置した。これらの細胞を、４連の試行において、血球計を用いて計数した。
【０１２１】
（（ｃ）ＮＭＲ分光法）
ＮＭＲ分光法実験を、実行して、Ｓ１００Ｂのどのアミノ酸残基と、この低分子とが相互作用しているのかを決定した（図１４）。この低分子と相互作用するＳ１００Ｂの共鳴を、ホロ−Ｓ１００Ｂ中に化合物を力価測定すること、および１５Ｎ編集ＨＳＱＣスペクトルにおいて骨格アミド−プロトン相関関係の化学シフトの変動（ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ）をモニターすること（Ｍｏｒｉら、Ｊ．Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ，Ｂ１０８：９４−９８（１９９５））によって、同定した。試験した低分子すべては、これらのＨＳＱＣ化学シフト変動研究によって決定した場合、ｐ５３結合部位においてＳ１００Ｂと結合することが見出された（図１および図１４を参照のこと）。この化合物−Ｓｌ００Ｂ境界面をマッピングする例が、ホロ−Ｓ１００Ｂと化合物４との間の相互作用について、図１４Ａ〜１４Ｃにおいて提供される。研究した化合物すべての場合と同様に、化合物４は、Ｓ１００ＢのＣ末端（ループ４）および「ヒンジ」と呼ばれるＳ１００Ｂの別の領域（ループ２）と相互作用する。これらの残基は、化合物４との力価測定について、図１４Ｃにおいて赤く強調されている。この低分子に結合したＳ１００Ｂの共鳴割り当てを、３Ｄ ＮＯＥＳＹ−ＨＳＱＣ実験を使用して確認し、Ｄｒｏｈａｔら（１９９８），上記；Ｒｕｓｔａｄｎｉら（２０００），上記；およびＲｕｓｔａｄｎｉら（１９９８），上記に記載されるようなＣａ２＋負荷Ｓ１００Ｂおよびｐ５３ペプチドに結合したＳ１００Ｂの骨格および側鎖の化学シフトもまた、この割当て手順において役立った。Ｓ１００Ｂと相互作用するこのインヒビターの領域を、Ｍａｙｅｒら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１２３：６１０８−６１１７（２００１）により記載された通り、飽和移動差実験（ＳＴＤ）を介するエピトープマッピングを使用して同定した。図１４Ａにおいて、Ｓ１００Ｂ近傍にあるこの化合物のプロトンが、矢印により示される。ＳＴＤを割当てるために、１Ｄ Ｗａｔｅｒｇａｔｅおよび２Ｄ ＴＯＣＳＹ（水抑制を備えるＭＬＥＶパルストレイン（ｐｕｌｓｅ ｔｒａｉｎ）の両方を得た。
【０１２２】
すべてのＮＭＲスペクトルを、４つの振動数チャネルおよび三重共鳴３軸勾配プローブを備えた、Ｂｒｕｋｅｒ ＤＭＸ６００ ＮＭＲ分光計（プロトンについて６００．１３ＭＨｚ）を用いて、３７℃にて得た。すべての場合において、１秒の弛緩遅延を使用した。間接的次元における求積検出を、Ｓｔａｔｅｓ−ＴＰＰＩフェーズサイクリングを用いて得た（Ｍａｒｉｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２８：６１５０−６１５６（１９８９））。
【０１２３】
サンプルは、代表的には、１００〜３００μＭ Ｓ１００Ｂ、３０ ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ ６．５〜７．４）、１０ｍＭ ＣａＣｌ２、０．３ ｍＭ ＮａＮ３、０．４ｍＭ ＥＤＴＡ、５．０ｍＭ ＤＴＴ、５．０％（ｖ／ｖ）Ｄ２Ｏ（ｐＨ ６．５）からなった。サンプル条件を変化することが必要な場合、コントロールＣａ２＋−Ｓ１００Ｂ ＨＳＱＣスペクトルを収集した。すべてのＮＭＲデータを、処理プログラムｎｍｒＰｉｐｅ（Ｄｅｌａｇｌｉｏら、Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．ＮＭＲ，６：２７７−２９３（１９９５））；およびｎｍｒＶｉｅｗ（Ｍｅｒｃｋ））を使用して、コンピューターワークステーションにて処理した。間接次元における時間ドメインデータを、標準的な線形予測ルーチン（Ｚｈｕら、Ｊ．Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ，９８：１９２−１９９（１９９２））を使用して、３分の１以下の分だけ拡張した。すべてのプロトン化学シフトを、３７℃での外部ＴＳＰ（０．０ｐｐｍ）と比較して、４．６５８ｐｐｍとして得たＨ２ＯシグナルまたはＨＤＯシグナルに関して報告した。１５Ｎ化学シフトを、３７℃での０点振動数の以下の比を使用して、間接的に参照した：１５Ｎ対１Ｈについて０．１０１３２９０５（Ｓｐｅｒａら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１３：５４９０−５４９２（１９９１）；Ｌｉｖｅら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１０６：１９３９−１９４１（１９８４）；およびＥｄｉｓｏｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２３９：３−７９（１９９４））．
（（ｄ）構造ベースモデリング）
上記に列挙した化合物の結合、ＨＳＱＣ ＮＭＲ力価測定、飽和移動差測定（ＳＴＤ）、およびＮＭＲドッキング手順に基づいて、合成改変から利益を得る種々の低分子の領域を同定することが、可能であった。最初に、可変リンカー領域を備えるペンタミジン誘導体を、調製した（図１５）。これは、より小さいＳＴＤが、Ｓ１００Ｂとペンタミジンリンカー領域との間で検出されるので、可能であった。最適なサイズのリンカー（すなわち、最も強力なＩＣ５０，ＫＤを生じるリンカー）を、その後、他の「ペンタミジン」様誘導体（上記式（Ｉ）および（ＩＩ）ならびに図１５を参照のこと）の簡単な合成において使用した。
【０１２４】
同様に、ドッキング方法を使用して、Ｓ１００Ｂに緊密に結合する（ＫＤ＜２μＭ）他の化合物の誘導体（化合物３の誘導体および化合物４の誘導体を含む）を誘導した。
【０１２５】
化合物４について、癌細胞中への侵入を容易にするためにより弱い電荷を有する化合物を得るために、強調を与えた。
【０１２６】
（（ｅ）要旨）
Ｓ１００タンパク質は、多数の癌においてアップレギュレートされるので、Ｓ１００タンパク質は、腫瘍進行についてのマーカーとして臨床的に使用される。Ｓ１００Ｂと腫瘍サプレッサーであるｐ５３とのカルシウム依存性相互作用がインビボで生じること、およびこの相互作用がｐ５３機能を阻害することが、本明細書中で発見された。従って、高レベルのＳ１００タンパク質（例えば、Ｓ１００Ｂ）は、Ｓ１００Ｂレベルが上昇した細胞（例えば、悪性黒色腫）における制御されていない細胞増殖に寄与する。原理の証明として、Ｓｌ００Ｂ−ｐ５３相互作用の阻害が、野生型ｐ５３機能を回復することが、示された。従って、Ｓ１００Ｂに結合しｐ５３相互作用を阻害する低分子アナログが、ｐ５３機能を回復することを目的として開発された。このことは達成され、Ｓ１００Ｂに結合し、Ｓ１００Ｂ−ｐ５３複合体形成を阻害し、そして癌細胞（すなわち、悪性黒色腫）の増殖速度をｐ５３機能の回復によって減少するいくつかの化合物が、見出された。これらの化合物の１つであるペンタミジンは、別の目的についてＦＤＡによって認可された薬物であり、従って、この化合物は、徹底的に特徴付けられている。
【０１２７】
（実施例８）
（ｐ５３機能のＳ１００Ｂによる調節についてのモデル）
Ｓ１００Ｂがいかにしてｐ５３機能を調節するかについてのモデルが、図１６において示される。その活性形態で、テトラマーｐ５３の各サブユニットは、Ｚｎ２＋と結合し、そしてループ−シート−ヘリックスＤＮＡ結合ドメインのための足場として役立つ２つの逆平行βシートのサンドイッチを含む（Ｃｈｏら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６５：３４６−３５５（１９９４））。特定のＤＮＡ配列に結合する際（図１６）、ｐ５３は、サイクリン依存性キナーゼインヒビター（ｐ２１ＷＡＦ／ＣＩＰ１）、細胞周期制御タンパク質（サイクリンＧ、ＧＡＤＤ４５）、アポトーシスに関与する遺伝子（すなわち、Ｂａｘ）、および次いでフィードバック制御を介して細胞内部のｐ５３タンパク質を負に調節するタンパク質（例えば、Ｓ１００Ｂおよびｈｄｍ２）（Ｌｅｖｉｎｅら（１９９１），上記；Ｌｅｖｉｎｅ（１９９７），上記；およびＦｒｅｅｄｍａｎら、上記）を含む、下流標的の転写を活性化する。Ｓ１００Ｂについて、そのプロモーター領域に対するｐ５３の親和性は、比較的低く（図８）、このことは、ｐ５３によるＳ１００Ｂの誘導が、より高親和性のプロモーター部位が占められた後（すなわち、ＧＡＤＤ４５、ｐ２１などについて）にだけ生じることを示唆する。ｈｄｍ２について、ｐ５３タンパク質レベルは、ユビキチン媒介経路によってダウンレギュレートされ、そしてｈｄｍ２−ｐ５３相互作用は、Ｎ末端トランス活性化ドメインにおけるｐ５３のリン酸化状態に依存する（Ｓｃｈｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３２３：４９１−５０１（２００２））。ｈｄｍ２と同様に、Ｓ１００Ｂもまた、ｐ５３に直接結合し、そして癌細胞におけるより低いｐ５３タンパク質レベルに寄与する（図１および４、ならびに図６Ａ−６Ｂ）。Ｓ１００Ｂがいかにして細胞内部のｐ５３レベルを低下することに寄与するかについての機構は未だ確立されていないが、ｐ５３テトラマーを解離し（Ｂａｕｄｉｅｒら、上記）そして／またはｐ５３の最もＣ末端側のドメイン（Ｒｕｓｔａｎｄｉら（１９９９）；上記）およびテトラマー化ドメインにおけるにおけるコンフォメーション変化を引き起こすその能力に関連する（図１６）と、考えられる。従って、現在、Ｓ１００Ｂは、（ｉ）ｐ５３により転写レベルで活性化され、かつその後で、（ｉｉ）フィードバック制御を介してｐ５３機能を阻害する、２番目の公知のタンパク質である（図１６）。
【０１２８】
ｈｄｍ２（マウスにおけるｍｄｍ２）とＳ１００Ｂとの間の別の類似性は、両方のタンパク質とｐ５３との相互作用が、リン酸化によって調節されることである（Ｒｕｓｔａｎｄｉら（２０００），上記；Ｓｃｈｏｎら、上記；Ｗｉｌｄｅｒら、上記；およびＢｕｓｃｈｍａｎｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，６０：８９６−９００（２０００））。ｍｄｍ２について、ｐ５３における１つの残基（Ｔ１８）のリン酸化は、ｍｄｍ２結合を阻害し（＞１０倍）、これはその後、ｐ５３が、ｍｄｍ２／ユビキチン依存性分解するのを防ぐ（Ｓｃｈｏｎら、上記；およびＰｉｅｔｔｅら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１５：１００１−１０１０（１９９７））。同様に、ｐ５３のＣ末端におけるリン酸化およびアセチル化は、腫瘍サプレッサーがＳ１００Ｂと相互作用するのを防ぎ得る（Ｒｕｓｔａｎｄｉら（２０００），上記；およびＹｏｕｍｅｌｌら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２４５：５１４−５１８（１９９８））。これもまた顕著であるのは、ｍｄｍ２のＮ末端ドメインの３Ｄ構造が、これはカルシウムに結合しないという事実（Ｍｉｌｎｅｒ−Ｗｈｉｔｅ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２８６：９５７−９６３（１９９９））にも関わらず、Ｓ１００Ｂおよび他のＥＦ−ハンド結合タンパク質（例えば、カルモジュリン）に似ていることである。Ｓ１００タンパク質と同様に、ｍｄｍ２は、構造的ホモログ（ｍｄｍＸ）とヘテロダイマーを形成し、このことは、それ自体の発癌活性を調節する（Ｓｔａｄら、ＥＭＢＯ Ｒｅｐ．，２：１０２９−１０３４（２００１））．その最も活性な形態で、ｐ５３は、Ｘ型４ヘリックスバンドル（ｂｕｎｄｌｅ）を形成するようにダイマーのダイマーとしてＣ末端領域中に保持される、テトラマーである（Ｊｅｆｆｒｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６７：１４９８−１５０２（１９９５）；Ｌｅｅら、Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，１：８７７−８９０（１９９４）；およびＣｌｏｒｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６５：３８６−３９１（１９９４））。このテトラマードメインに対して直接的にＣ末端は、「最もＣ末端」または「Ｃ末端負調節ドメイン」と呼ばれる塩基性領域である。従って、これらのタンパク質（ｈｄｍ２ 対 Ｓ１００Ｂ）の間での重要な区別は、ｐ５３のＣ末端とのＳ１００Ｂの相互作用が、Ｃａ２＋依存性であり（Ｒｕｓｔａｎｄｉら（１９９８），上記；およびＢａｕｄｉｅｒら、上記）、そしてｐ５３生物学をカルシウム媒介性シグナル伝達経路および細胞外増殖応答に連結し得（図１７）；一方で、ｈｄｍ２は、カルシウム非依存性様式でｐ５３のＮ末端に結合することである（Ｍｏｍａｎｄら、上記；およびＰｒｉｖｅｓ，Ｃｅｌｌ，９５：５−８（１９９８））。
【０１２９】
Ｓ１００Ｂとｐ５３との間の相互作用は、細胞周期依存性様式で（すなわち、Ｇ１の間に；図５Ｂ）生じ、さらに、その細胞の内側でリン酸化およびカルシウムレベルによって調節される。この知見は、重要である。なぜなら、Ｇ１期は、ＤＮＡ合成の前に存在し、そしてＤＮＡ損傷に応答してｐ５３についての重要なチェックポイントを構成するからである。このｐ５３ Ｇ１チェックポイントは、ｐ５３下流エフェクター遺伝子のうちの１つであるサイクリン依存性キナーゼインヒビターｐ２１によって媒介される（Ａｐｐｅｌｌａら、上記；Ｐｒｉｖｅｓら（１９９９），上記；およびＶｏｕｓｄｅｎ，上記）。このインヒビターは、ＤＮＡ損傷に応答して、ｐＲｂのリン酸化を阻害しそしてＧ１において細胞を停止する。Ｇ１におけるこの停止は、細胞がそのＤＮＡを修復する時間を可能にし、そして損傷したＤＮＡが娘細胞へと伝達するのを妨げると、考えられる（Ｐｒｉｖｅｓら（１９９９）、上記；およびＶｏｕｓｄｅｎ，上記）。Ｓ１００Ｂは、ｐ５３によるｐ２１のアップレギュレーションを阻害し（Ｌｉｎら，上記）、その結果、細胞周期の停止は、その存在が減少し、そしてその細胞周期は調節されないで進行することが、以前に示された。さらに、Ｇ１の間のＳ１００Ｂとｐ５３との間の相互作用は、Ｓの間にｐ５３が核に侵入するのを阻害し得、そしてさらに、ｐ５３の転写活性を阻害し得る。従って、野生型ｐ５３に対するＳ１００Ｂの全体的効果は、細胞異常（例えば、ｐ５３の非機能性変異体を生じる遺伝子増幅および変異を模倣し得る。
【０１３０】
野生型ｐ５３が存在する場合に癌がいかにして進行するかは完全には明らかではないが、このパラダイムについての１つの可能な説明は、ｐ５３を負に調節するタンパク質（例えば、Ｓ１００Ｂ）のレベルの上昇が妥当であることである。野生型ｐ５３および高レベルのＳ１００Ｂを伴う癌の例は、悪性黒色腫である。興味深いことに、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質（例えば、Ｓ１００Ｂ）は、これらの細胞において上昇し、そして皮膚癌についてのマーカーとして使用される（Ｃｏｃｈｒａｎら、Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｒｅｓ．，３：３２５−３３０（１９９３）；Ｂｏｎｉら、上記；およびＭａｒｋｓら、Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．，１８７：５９−６４（１９９０））。さらに、野生型ｐ５３タンパク質レベルは、Ｓ１００タンパク質を含まない細胞と比較した場合、悪性黒色腫において比較的低い（図２Ａ〜２Ｂ）。原発性皮膚癌細胞について、ｐ５３とＳ１００Ｂとの間に、細胞周期のＧ１の間に直接的相互作用が存在すること、および野生型ｐ５３レベルが、Ｓ１００ＢのＲＮＡに対してアンチセンスであるＲＮＡの添加の際に回復され得ること（図９）が、本発明において示された。この結果は、インビボにおける野生型ｐ５３のダウンレギュレーションにＳ１００Ｂを直接関連つけ、そしてこれは、ｐ５３およびＳ１００Ｂの一過性同時トランスフェクションにおいて以前に観察されたｐ５３タンパク質レベルの大きな減少（Ｌｉｎら、上記）と一致する。これらの結果を心に留めると、Ｓ１００Ｂ−ｐ５３相互作用をブロックして野生型ｐ５３をより正常レベルへと回復する低分子インヒビターは、癌（例えば、悪性黒色腫）の処置のための治療剤として有用であると考えられる。
【０１３１】
本発明は、その特定の実施形態に関して詳細に記載されてきたが、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、種々の変更および改変が本発明においてなされ得ることが、当業者にとって明らかである。
【図面の簡単な説明】
【０１３２】
（図面の詳細な説明）
本特許または本出願のファイルは、色付きで作成された少なくとも１つの図面を含む。色付き図面を含む本特許または本特許出願公開物のコピーは、請求しそして必要な費用を支払えば、特許庁によって提供される。
【図１】図１は、腫瘍サプレッサータンパク質であるｐ５３（標的タンパク質）のＣ末端（アミノ酸３６７〜３８８）とＳ１００ＢとのＣａ２＋依存性相互作用を示す。リボン図が、アポ結合状態、カルシウム結合状態（ホロ結合状態）、およびｐ５３結合状態（ＰＤＢエントリー：アポ−Ｓ１００Ｂ；ホロ−Ｓ１００Ｂ，１Ｂ４Ｃ；ｐ５３結合Ｓ１００Ｂ，１ＤＴ７）におけるＳ１００Ｂの原子解像３次元溶液構造について示される。赤および青で示されるのは、ダイマーＳ１００Ｂのサブユニットであり、腫瘍サプレッサータンパク質であるｐ５３のＣ末端の負調節ドメイン（残基３６７〜３８８）（緑色）と直接相互作用する残基について影を付けた領域（黄色）を含む。大きなコンフォメーション変化が、アポ−Ｓ１００Ｂにカルシウムが付加する際に生じる。このコンフォメーション変化は、ｐ５３（緑色）との結合に関与する残基（黄色）を露出させる。そしてこれは、ホロ−Ｓ１００Ｂへの腫瘍サプレッサーの結合のために必要とされる（Ｒｕｓｔａｎｄｉら（２０００），上記；およびＷｅｂｅｒら、上記）。
【図２】図２Ａおよび２Ｂは、原発性悪性黒色腫細胞（Ｃ８１４６）、およびＳ１００Ｂをほとんど含まないかまたは全く含まないコントロール細胞（神経膠芽細胞腫、Ｕ１１８）における、Ｓ１００Ｂ（図２Ａ）およびｐ５３（図２Ｂ）のウェスタンブロットを示す。Ｓ１００Ｂの量を評価するために使用した組換えＳ１００Ｂのブロットもまた、示される。この図は、黒色腫がＳ１００Ｂレベルを増加させ、そしてｐ５３レベルを減少させたことを示す。
【図３】図３は、ダイマーのアポ−Ｓ１００Ｂ（ββ）の２０個のＮＭＲ構造の立体図であり、２つのＳ１００βサブユニットが、青色および赤色で示されている。
【図４】図４は、Ｃａ２＋負荷Ｓ１００Ｂダイマーと複合体化したｐ５３の負調節ドメインの４０個のＮＭＲ構造の骨格重層の立体図である。２つの異なるＳ１００βサブユニットのヘリックスが、青色および赤色で着色されており、Ｃａ２＋イオンが、藤色であり、そしてｐ５３の２つのサブユニットからのＣ末端（残基３６７−３８８）が、緑色である。
【図５】図５Ａ〜５Ｂは、共免疫沈降実験によって検出された、原発性悪性黒色腫癌細胞における、細胞周期Ｇ１の間のＳ１００Ｂとｐ５３との相互作用を示す。図５Ａは、Ｇ１についてのマーカーとして使用される細胞周期タンパク質であるサイクリンＤ１のウェスタンブロットを示す。図５Ｂは、Ｓ１００Ｂ抗体およびｐ５３抗体を用いる共免疫沈降を示す。Ｓ１００Ｂとｐ５３との相互作用は、非同調化細胞においては（たとえあったとしても）最小限である（図５Ｂ、レーン１）が、その細胞が血清枯渇によって同調化された場合には、有意に増加され、そして１５％（ｖ／ｖ）血清の添加６時間後に、Ｇ１において解放される（図５Ｂ；レーン２、３）。
【図６】図６Ａ〜６Ｂは、Ｓ１００Ｂが、ｐ５３、ｍｄｍ２およびｐ２１のタンパク質レベルを減少することを示す。図６Ａは、ｐ５３でトランスフェクトされ、Ｓ１００Ｂでトランスフェクトされた（＋）かまたはされていない（−）、Ｈ１２９９肺癌細胞のウェスタンブロットを示す。図６Ｂは、Ｓ１００Ｂ（＋）またはｐＣＭＶ（−）で一過性トランスフェクトされ、そして１０ｍｇ／ｍｌブレオマイシンで処理されたかまたはされていない、乳癌ＭＣＦ−７細胞のウェスタンブロットを示す。ｐ５３タンパク質、ｍｄｍ２タンパク質、ｐ２１タンパク質、Ｓ１００Ｂタンパク質およびアクチンタンパク質の位置が、示される。これらの結果は、Ｓ１００Ｂの一過性トランスフェクションが、癌細胞においてｐ５３の機能を阻害することを示す。
【図７】図７は、ｐ５３結合コンセンサス配列と適合するＳ１００Ｂプロモーター領域を示す。ヌクレオチド１７０５〜１７３５は、ｐ５３結合についての２０個のコンセンサスヌクレオチドのうちの２０個に適合する。２つのさらなるｐ５３結合部位が、Ｓ１００Ｂプロモーター中に存在する；ヌクレオチド１４５５〜１４７８は、１６個の部位に適合し、一方、ヌクレオチド１４９〜１６９は、１７個の部位に適合する。ｍｄｍ２（１８／２０）プロモーターおよびＧＡＤＤ４５（１９／２０）プロモーター中のｐ５３結合領域もまた、示される。この図は、３つのｐ５３結合部位が、Ｓ１００Ｂプロモーター中に存在することを示す。
【図８】図８は、ＧＡＤＤ４５遺伝子の３番目のイントロン由来のＤＮＡ（レーン１〜３）およびＳ１００Ｂのプロモーター（２０／２０適合）由来のＤＮＡ（レーン４〜６）に対する、精製ｐ５３の移動度シフトアッセイの結果を示す。遊離プローブ、ｐ５３シフト、およびスーパーシフトバンドが、示される。ＧＡＤＤ４５シフトについて、０．３μｇのｐ５３および５．０ｎｇの標識ＤＮＡが使用され、一方、６．０μｇのｐ５３および２５ｎｇのＳ１００Ｂ標識ＤＮＡが、使用された。これらの結果は、ｐ５３が、Ｓ１００Ｂプロモーターに結合し、そしておそらく、遺伝子（ＧＡＤＤ４５）後にＳ１００Ｂレベルを調節することを示す。これは、ｐ５３が、ＧＡＤＤ４５遺伝子の３番目のイントロン由来のＤＮＡに、Ｓ１００Ｂプロモーター由来のＤＮＡについて見出されるよりも低いｐ５３レベルおよびＤＮＡレベルで結合するからである。
【図９】図９は、小干渉Ｓ１００βアンチセンスＲＮＡ（ｓｉＳ１００β）を用いて黒色腫細胞をトランスフェクションした後の、ｐ５３、Ｓ１００Ｂ、ｐ２１およびアクチンのウェスタンブロット分析を示す。Ｓ１００β＝ダイマーＳ１００Ｂのサブユニット。使用したトランスフェクトＲＮＡの量が、示される。これらの細胞は、トランスフェクションの２４時間後に収集した。これらの結果は、悪性黒色腫細胞における阻害性Ｓ１００Ｂタンパク質生成が、野生型ｐ５３機能を回復することを示す。この実験は、本発明の原理の証明を示す。
【図１０】図１０は、ＣＡＤＤおよびＮＭＲから誘導した構造データおよび動的データを使用する、Ｓ１００Ｂの合理的薬物設計を示す（左図）。本発明において、このアプローチからの研究は、薬物開発のために必要な、Ｓ１００Ｂと結合しかつＳ１００Ｂ−ｐ５３相互作用を阻害するリード化合物（右図、青色）を提供した。
【図１１】図１１は、薬物ペンタミジン（２．５μＭ）の添加によって、コントロール（１．０％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯ；および未処理）に対して、ヒト悪性黒色腫細胞におけるＳ１００Ｂレベルが増加することを示す。野生型ｐ５３レベルは、Ｓ１００Ｂ−ｐ５３相互作用を阻害することを介して、この薬物によって回復される。その後、上昇したｐ５３は、フィードバック機構の一部として、Ｓ１００Ｂをアップレギュレートする（図１６）。このデータは、Ｓ１００Ｂレベルの上昇をモニタリングすることが、特定の薬物がｐ５３機能を回復する能力についてのアッセイとして使用され得ることを、示す。
【図１２】図１２Ａ〜１２Ｂは、ホロ−Ｓ１００Ｂへのペンタミジンイセチオネートの結合研究を示す。図１２Ａは、４．０μＭ Ｆ４３Ｗ Ｓ１００Ｂ、１０ ｍＭ ＣａＣｌ２、４０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ ７．５）を含む溶液中へのペンタミジンイセチオネートの力価測定を示す。図１２Ｂは、Ｆ４３Ｗ Ｓ１００Ｂに結合したペンタミジンの、野生型Ｓ１００Ｂとの競合研究を示す。これらの力価測定において、Ｓ１００Ｂ変異体、Ｆ４３Ｗ、およびペンタミジンイセチオネートの濃度が、この力価測定全体を通して一定に維持された。この競合研究は、野生型ホロ−Ｓ１００Ｂとペンタミジンとの間で、結合定数（ＫＤ）７００ｎＭを生じた。
【図１３】図１３は、原発性悪性黒色腫細胞（Ｃ８１４６Ａ）の増殖に対するペンタミジンイセチオネートの効果を示す。化合物（例えば、ペンタミジンイセチオネート）が、２種類の濃度の薬物（２．５μＭ，２５μＭ）にて原発性黒色腫細胞株を使用して、４連試行でスクリーニングされた。ペンタミジンによる細胞増殖の阻害についてのＩＣ５０が、約５００ｎＭであることが見出された。対照的に、７．５分の１の効果（２５μＭの薬物にて）が、正常新生児メラニン形成細胞における増殖において見出された。これらのデータは、ペンタミジンイセチオネートが、正常なメラニン形成細胞よりも効率的に、原発性悪性黒色腫細胞増殖を阻害し得ることを示す。
【図１４】図１４Ａ〜１４Ｄは、ＮＭＲ分光法を使用するホロ−Ｓ１００Ｂ化合物４結合境界面のマッピングを示す。図１４Ａは、化合物４の構造を示し、これは、飽和移動差（ＳＴＤ）ＮＭＲ実験において決定された、Ｓ１００Ｂと相互作用する化合物の領域を示す（太い矢印）。図１４Ｂは、ホロ−Ｓ１００Ｂに結合する化合物４についてのＳＴＤデータを示す。黒色で示されるのは、ＳＴＤスペクトルであり、赤色で示されるのは、コントロールスペクトルである。図１４Ｃは、ＳＴＤ実験および化学シフト変動（ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ）実験によって決定された、ホロ−Ｓ１００Ｂに結合した化合物４を示すリボン図を示す。ホロ−Ｓ１００Ｂ上にて赤色で示されるのは、化合物４の結合の際の化学シフトの大きな変化を有することが見出された残基である。図１４Ｄは、Ｓ１００Ｂ中の各残基についての化学シフト変化を示し、各残基についての化学シフト変化の大きさを示す。これらのＮＭＲ実験についてのサンプル条件は、１．５ｍＭ 化合物４、０．１５０ｍＭ Ｃａ２＋−Ｓ１００Ｂ、１０ｍＭ ＣａＣｌ２、３０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ ６．５）、５．０ｍＭ ＤＴＴ、０．３ｍＭ ＮａＮ３、および５．０％（ｖ／ｖ）Ｄ２Ｏからなった。化合物４の構造は、下記に示される。これらのデータは、Ｓ１００Ｂ−薬物相互作用を最適化するために必要な、原子解像度でのＳ１００Ｂ−薬物相互作用を特徴付けるための方法を示す。
【図１５】図１５は、種々のサイズのリンカー領域を用いてペンタミジンの誘導体を調製するための合成反応を示す。
【図１６】図１６は、野生型ｐ５３の活性化および不活化についてのモデルを示す。潜伏性（ｌａｔｅｎｔ）ｐ５３の活性化は、ストレス応答依存性共有結合改変（Ｍ）（すなわち、リン酸化、スモイレーション（ｓｕｍｏｙｌａｔｉｏｎ）およびアセチル化）によって達成される。これらの改変は、ｐ５３のＣ末端の負調節ドメイン（緑色のヘリックス）およびｐ５３テトラマードメインを、Ｓ１００タンパク質結合および／または非特異的ＤＮＡ結合から保護すると考えられる。活性化ｐ５３は、核に局在化し、核において、活性化ｐ５３は、アポトーシスに関与する遺伝子（すなわち、ｂａｘ）および細胞周期依存性増殖停止に関与する遺伝子（すなわち、ｐ２１）の転写を、アップレギュレートする。フィードバックコントロール機構の一部として、ｐ５３はまた、それ自体の不活化に関与する遺伝子（すなわち、ｈｄｍ２およびＳ１００Ｂ）の転写をアップレギュレートする。増殖応答の一部として（↑Ｃａ２＋）、Ｓ１００Ｂとｐ５３との間のＣａ２＋依存性相互作用は、ｐ５３におけるコンフォメーション変化およびその腫瘍サプレッサーのテトラマー解離を誘導し、これは、その分解に（すなわち、おそらくｈｄｍ２／ユビキチン依存性経路および／またはプロテアーゼ依存性経路を介する）に寄与する。
【図１７】図１７は、Ｘ線結晶学および／またはＮＭＲ（Ｉｋｕｒａら、Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，７：５２５−５２７（２０００））によって決定された、色付きのコード化された３Ｄ構造とともに、ｐ５３のドメインを示す。ｐ５３ドメインの構造は、溶液中で遊離しているか、あるいはｐ５３結合タンパク質またはｐ５３結合ＤＮＡに結合しているかのいずれかである。
【配列表】
【技術分野】
【０００１】
本明細書中に記載される研究は、ＮＩＨからの助成金（助成金番号ＧＭ５８８８８）およびＡｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙからの助成金（ＲＰＧ０００４００１−ＣＣＧ）によって支援された。連邦政府は、本発明において特定の権利を有する。
【０００２】
（関連出願の援用）
本出願は、２００２年３月２９日出願の米国仮特許出願番号６０／３６８，８３５の３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）（１）の下での利益を主張する。この米国仮特許出願の開示は、その全体が参考として本明細書中に援用される。
【０００３】
（発明の分野）
本発明は、例えば、Ｓ１００に結合し、Ｓ１００−ｐ５３相互作用を阻害し、そしてｐ５３の腫瘍サプレッサーを活性化し、従って、抗新生物効果を有する、低分子化合物に関する。そして本発明は、これらの化合物を、例えば、Ｓ１００へのｐ５３の結合の阻害についてアッセイすることによって同定する方法、これらの化合物を含む組成物、およびこれらを使用して黒色腫および他の癌を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
（発明の背景）
（Ｉ．Ｓ１００タンパク質）
現在、Ｓ１００ファミリーのＥＦ−ハンドＣａ２＋結合タンパク質の２０個より多くのメンバーが存在する。それらは、ヒト組織中に広く分布していることが公知である（Ｚｉｍｍｅｒら、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．Ｂｕｌｌ．，３７：４１７−４２９（１９９５）；Ｄｏｎａｔｏ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，３３：６３７−６６８（２００１）；およびＨｅｉｚｍａｎｎら、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ７：１３５６−１３６８（２００２））。Ｓ１００タンパク質は、１００％飽和硫酸アンモニウム中で可溶性（ｓｏｌｕｂｌｅ）であるので、この名前を与えられた（Ｍｏｏｒｅ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍ．，１９：７３９−７４４（１９６５））。１メンバーであるＳ１００Ｂは、２１．５ｋＤａの対称ホモダイマーであり、哺乳動物間で高度に保存されている（＞９５％）（Ｚｉｍｍｅｒら、上記；およびＭｏｏｒｅ，上記）。カルモジュリンと類似する様式で、Ｃａ２＋依存性コンフォメーション変化が、Ｓ１００Ｂが標的タンパク質に結合するために必要である（図１；Ｒｕｓｔａｎｄｉら、Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，７：５７０−５７４（２０００）；Ｒｕｓｔａｎｄｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．，３７：１９５１−１９６０（１９９８）；Ｗｅｂｅｒら、「Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｍｅｒｉｃ Ｓ１００Ｂ（ββ） ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｔｕｍｏｒ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ：Ａ Ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ Ｃａ２＋−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｓ１００−Ｔａｒｇｅｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ」，Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｃａｌｃｉｕｍ Ａｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｐｏｃｈｅｔ，Ｒ．，Ｅｄ．），Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｄｏｒｄｒｅｃｈｔ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ（２０００）；およびＫｌｉｇｍａｎら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，１３：４３７−４４３（１９８８））。
【０００５】
一般に、低レベルのＳ１００Ｂは、栄養（ｔｒｏｐｈｉｃ）効果を有し、そして高レベルのＳ１００Ｂは、毒性であり、制御されない細胞増殖を生じる（Ｃａｓｔｅｔｓら、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．，４６：２０８−２１６（１９９７）；Ｖａｎ Ｅｌｄｉｋら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，１２２３：３９８−４０３（１９９４）；Ｍａｒｉｇｇｉｏら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，６０：２９−３５（１９９４）；およびＭｃＬｅｎｄｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｕｓｉｎｇ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｋｕｂｃｈｉｋ，Ｈ．Ｚ．編）Ｖｏｌ．３９，ｐｐ．３１−６６，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８））。Ｓ１００Ｂレベルの増加が、腎細胞腫瘍において見出され（Ｔａｋａｓｈｉら、．Ｕｒｏｌ．Ｒｅｓ．，２２：２５１−２５５（１９９４））、そして悪性成熟Ｔ細胞において見出される（例えば、白血病患者における二重ネガティブＣＤ４−／ＣＤ８−成熟Ｔ細胞）（Ｓｕｚｕｓｈｉｍａら、Ｌｅｕｋ．Ｌｙｍｐｈ．，１３：２５７−２６２（１９９４））。さらに、Ｓ１００Ｂは、神経膠症を刺激する他のサイトカイン（例えば、インターロイキン−１βおよび塩基性線維芽細胞増殖因子）によって、アップレギュレートされる（Ｈｉｎｋｌｅら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，８２：３３−４１（１９９８））。
【０００６】
Ｓ１００Ｂの場合と同様に、多数の他のＳ１００タンパク質が、組織特異的様式で調節される（Ｋｌｉｇｍａｎら、上記）。Ｓ１００Ａ１、カルサイクリン（ｃａｌｃｙｃｌｉｎ）（Ｓ１００Ａ６）、およびＳ１００Ｂのレベルは、転移性ヒト乳房上皮細胞において有意に上昇され（Ｐｅｄｒｏｃｃｈｉら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，５７：６８４−６９０（１９９４））、そしてトランスジェニックマウスにおけるＳ１００Ａ４マウス（ｍｔｓ１）のレベル増加は、転移性乳房腫瘍を誘導する（Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２：２０２８３−２０２９０（１９９７））。ｍｔｓ１の場合、タンパク質レベルは、ラットｍｔｓ１開始部位の１３００塩基上流にあるシス作用性エレメントを介して良性細胞株において制御され（Ｃｈｅｎら、上記）、そしてｍｔｓ１に対するアンチセンスＲＮＡの発現は、高転移性Ｌｅｗｉｓ肺癌腫の転移能を抑制する（Ｔａｋｅｎａｇａら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１４：３３１〜３３７（１９９７））。Ｓ１００Ｂ、ｍｔｓ１、およびカルサイクリンのタンパク質レベルは、悪性黒色腫と相関する。従って、Ｓ１００タンパク質は、この癌のマーカーとして使用される（Ｍａｅｌａｎｄｓｍｏら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，７４：４６４−４６９（１９９７）；Ｂｏｎｉら、Ｊ．Ｃｕｔａｎ．Ｐａｔｈｏｌ．，２４：７６−８０（１９９７）；Ｘｉａら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，５７：３０５５−３０６２（１９９７）；Ｈａｎｓｓｏｎら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１７：３０７１〜３０７３（１９９７）；および図２Ｂ）。
【０００７】
Ｓ１００抗体は、とりわけ、脳、肺、膀胱、腸、腎臓、頸部、乳房、皮膚、頭部および頸部、リンパ、精巣、咽頭、、および口を含む、いくつかの組織において悪性腫瘍を同定し分類するために臨床的に使用される（Ｔａｋａｓｈｉら、上記；Ｓｕｚｕｓｈｉｍａら、上記；Ｐｅｄｒｏｃｃｈｉｅら、上記；Ｆｉｓｈｅｒら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈ．，４７：８６８−８６９（１９９４）；Ｉｎｉｕｅら、Ｊ．Ｕｒｏｌ．，８５：４９５−５０３（１９９４）；Ｋｅｒｒｅｂｉｊｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，３８：３１〜３７（１９９４）；Ｃｏｌａｓａｎｔｅら、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐ．Ｄｉｓ．，１４８：７５２−７５９（１９９３）；Ｚｅｉｄら、Ｐａｔｈ．，２５：３３８−３４３（１９９３）；Ｇａｌｌｏら、Ａｒｃｈ．Ｏｔｏｌａｒｎ．，１１７：１００１−１０１０（１９９１）；Ｗｉｌｓｏｎら、Ｊ．Ｐａｔｈ．，１６３：２５−３０（１９９１）；Ｌｅｅら；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：２５０４−２５０８（１９９２）；Ｌｅｏｎｇら、Ｊ．Ｐａｔｈ．，１６２：３５−４１（１９９０）；Ｎａｋａｎｏら、Ａｒｃｈ．Ｐａｔｈ．Ｌａｂ．Ｍｅｄ．，１１３：５０７−５１１（１９８９）；Ｋｕｒｉｈａｒａら、Ｊ．Ｏｒａｌ．Ｐａｔｈ．，１４：２８９−２９８（１９８５）；Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａら、Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃ．，５５：１０８−１１３（１９９４）；Ｒｅｎｓｈａｗら、Ｍｏｄ．Ｐａｔｈ．，１０：６９３−７００（１９９７）；Ｌａｒｏｃｋら、Ｖｅｔ．Ｐａｔｈ．，３４：３０３−３１１（１９９７）；およびＨｕｒｌｅｙら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｐｒｉｍａｔ．，２６：１７２−１８０（１９９７））。
【０００８】
（ＩＩ．ｐ５３）
ｐ５３は、転写アクチベーターであり、細胞周期の停止およびアポトーシスについてシグナル伝達をし、そして正常な細胞機能の維持および調節において中心的役割を果す（Ｌｅｖｉｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ，３５１：４５３−４５６（１９９１）；およびＬｅｖｉｎｅ，Ｃｅｌｌ，８８：３２３−３３１（１９９７））。ｐ５３の不活化は、細胞周期チェックポイント、アポトーシス、遺伝子増幅、中心体複製、および倍数性に影響を与える（Ｌｅｖｉｎｅ（１９９７），上記；Ｗｏｏｄｓら、Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ．Ｒｅｓ．，２６４：５６−６６（２００１）；Ｂｕｒｎｓら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１８１：２３１−２３９（２００１）；Ａｐｐｅｌｌａら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２６８：２７６４−２７７２（２００１）；Ａｒｒｏｗｓｍｉｔｈら、Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．，６：１１６９−１１７３（１９９９）；Ｐｒｉｖｅｓら、Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１８７：１１２−１２６（１９９９）；Ｖｏｕｓｄｅｎ，Ｃｅｌｌ，１０３：６９１−６９４（２０００）；およびＲｙａｎら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１３：３３２−３３７（２００１））。ヒト癌のうちの５０％より多くで見出されるように、ｐ５３が変異によって不活化される場合、その細胞周期は、調節されずに進行し、そして細胞成長が増殖する。同様に、アポトーシス経路が誘導されない場合、増殖中の細胞は、癌性細胞へと形質転換する（Ｗｏｏｄｓら、上記；Ｂｕｒｎｓ，上記；Ａｐｐｅｌｌａら、上記；Ａｒｒｏｗｓｍｉｔｈら、上記；Ｐｒｉｖｅｓら（１９９９），上記；Ｖｏｕｓｄｅｎ，上記；Ｒｙａｎら、上記；およびＡｇａｒｗａｌら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７３：１−４（１９９８））。一方、ｐ５３のレベルが高すぎる場合、加齢に関連する問題が生じる（Ｔｙｎｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，４１５：４５−５３（２００２））。ｐ５３は、翻訳後修飾および細胞中の他のタンパク質との相互作用によって高度に調節される（Ａｐｐｅｌｌａら、上記；Ｍｉｎａｍｏｔｏら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２０：３３４１〜３３４７（２００１）；Ｊａｙａｒａｍａｎら、Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．，５５：７６−８７（１９９９）；Ｊｉｍｅｎｅｚら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １８：７６５６−７６６５（１９９９）；およびＭｅｅｋ，Ｐａｔｈｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４５：８０４−８１４（１９９７））。
【０００９】
（ＩＩＩ．Ｓ１００−ｐ５３相互作用）
Ｓ１００Ｂおよびいくつかの他のＳ１００タンパク質（すなわち、Ｓ１００Ａ１およびｍｔｓ１）は、腫瘍サプレッサータンパク質であるｐ５３と、癌細胞中で相互作用し、有意に減少したｐ５３レベルを生じ、そして標的遺伝子のｐ５３依存性転写活性化は、阻害される（Ｇｒｉｇｏｒｉａｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６：２２６９９−２２７０８（２００１）；Ｌｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６：３５０３７−３５０４１（２００１）；およびＣａｒｒｉｅｒら、Ｐｒｏｃ．ＡＡＣＲ，４０：１０２（１９９９））。
【００１０】
ｐ５３のＣ末端とＳ１００カルシウム結合タンパク質（例えば、Ｓ１００Ｂ）との間の相互作用は、特に興味深い。なぜなら、ｐ５３と同様に、Ｓ１００タンパク質は、細胞周期進行に影響を与え、多数の腫瘍細胞において過剰発現され、そして腫瘍進行に関連するからである（Ｉｌｇら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６８：３２５−３３２（１９９６））。これらの結果は、ｐ５３およびＳ１００Ｂが、（ｉ）インビトロで緊密に相互作用し（ＫＤ＝２４±１０ｎＭ；Ｄｅｌｐｈｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７４：１０５３９−１０５４４（１９９９））、（ｉｉ）Ｓ１００Ｂは、ｐ５３のＰＫＣ依存性リン酸化を阻害し（Ｗｉｌｄｅｒら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．，７：７９４−７９８（１９９８）；およびＢａｕｄｉｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８９：１１６２７−１１６３１（１９９２））、（ｉｉｉ）Ｓ１００Ｂは、ｐ５３テトラマーを解離し（Ｂａｕｄｉｅｒら、上記）、（ｉｖ）Ｓ１００Ｂおよびｐ５３のＣ末端の両方のサブユニットは、Ｘ型の４ヘリックスバンドル（ｂｕｎｄｌｅ）構造モチーフを介して会合し（Ｗｅｂｅｒら、上記；Ｊｅｆｆｒｅｙら、上記；およびＬｅｅら、上記）、そして（ｖ）３つのＳ１００タンパク質（Ｓ１００Ｂ、Ｓ１００Ａ１、ｍｔｓ１）は、インビボでｐ５３の機能を阻害する（Ｇｒｉｇｏｒｉａｎら、上記；Ｌｉｎら、上記；およびＣａｒｒｉｅｒら（１９９９），上記）という知見と相関する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明において、原発性悪性黒色腫癌細胞において、Ｓ１００Ｂが、細胞周期依存性様式で、ｐ５３と直接相互作用して、より低レベルの野生型ｐ５３を生じることが、示される。さらに、本発明において、Ｓ１００Ｂプロモーターが、ｐ５３に結合する３つの配列を有することが見出された。このことは、その後、Ｓ１００Ｂ転写が、ｐ５３自体の分解を誘発するフィードバックループにおいてｐ５３によって調節されるという知見を支持する。
【００１２】
（発明の要旨）
１つの実施形態において、本発明は、Ｓ１００タンパク質（例えば、Ｓ１００Ｂ、Ｓ１００Ａ１およびＳ１００Ａ４）に結合し、かつ阻害タンパク質（例えば、Ｓ１００タンパク質）がｐ５３に結合するのを阻害する、化合物を同定する方法に関する。
【００１３】
別の実施形態において、本発明は、ｐ５３の機能（特に、ｐ５３活性化に起因するＳ１００Ｂおよび他のＳ１００タンパク質の過剰発現）を測定することによって、ｐ５３を活性化する化合物を同定する方法に関する。
【００１４】
なお別の実施形態において、本発明は、上記の同定した化合物（ペンタミジンおよびその誘導体が挙げられるが、これらに限定されない）を、Ｓ１００Ｂおよび他のＳ１００タンパク質のｐ５３との結合を阻害する（すなわち、ｐ５３を活性化する）ために使用する方法に関する。
【００１５】
なお別の実施形態において、本発明は、上記の同定された化合物（ペンタミジンおよびその誘導体が挙げられるが、これらに限定されない）を、癌を処置するために使用する方法に関する。
【００１６】
いかなる特定の機構にも拘束されることは望まないが、本発明の化合物は、Ｓ１００Ｂおよび他のＳ１００タンパク質（特に、そのｐ５３結合ドメイン）と相互作用することによって、ｐ５３の不活化を阻害し、それによって新生物細胞増殖を減少または阻害すると考えられる。従って、本発明は、例えば、ｐ５３を活性化する化合物（特に、Ｓ１００タンパク質ファミリーのメンバーと特異的に相互作用する化合物、より特に、Ｓ１００タンパク質（例えば、Ｓ１００Ｂ）がｐ５３に結合するのを阻害する化合物）に関する。
【００１７】
本発明のこれらの目的およびさらなる目的は、本発明の詳細な説明から明らかであり、本明細書中に規定される式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）により示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩およびその使用によって満たされる。
【００１８】
（発明の詳細な説明）
上記のように、１つの実施形態において、本発明は、阻害タンパク質（例えば、Ｓ１００Ｂおよび他のＳ１００タンパク質）がｐ５３に結合するのを阻害する化合物を同定する方法に関する。
【００１９】
別の実施形態において、本発明は、ｐ５３機能（特に、ｐ５３活性化に起因するＳ１００の過剰発現）を測定することによって、ｐ５３を活性化する化合物を同定する方法に関する。
【００２０】
なお別の実施形態において、本発明は、ｐ５３を活性化するために上記同定された化合物を使用する方法に関する。
【００２１】
なお別の実施形態において、本発明は、癌を処置するために上記同定された化合物を使用する方法に関する。
【００２２】
ペンタミジンが、Ｓ１００−ｐ５３相互作用を阻害することが、本発明において見出された。ペンタミジンは、活性であり、かつＦＤＡが（別の用途について）認可した薬物であるので、本発明はまた、Ｓ１００に対して増加した結合親和性を有するペンタミジン誘導体に関する。従って、本発明の化合物は、式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）により示されるかまたはその薬学的に受容可能な塩であり、
式（Ｉ）は
【００２３】
【化１４】
【００２４】
であり、
式（Ｉ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、およびＹ８は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｘは、１〜８個の炭素原子を有するアルキルであり、そして
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり；
例えば、ペンタミジン
【００２５】
【化１５】
【００２６】
であり、
式（ＩＩ）は
【００２７】
【化１６】
【００２８】
であり、式（ＩＩ）において、Ｙ１およびＹ２は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１１、Ｒ１２、およびＲ１３は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、メチルエステル、フェニルケトン、アリールエーテル、アリールチオ、アリールメチレン、酸素、カルボニル、カルボキシレート、エチレン、アミド、エステル、チオエステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より独立して選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり、そして
必要に応じてＲ１１とＲ１２と、またはＲ１２とＲ１３とは、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはＳを含む５員縮合芳香環を形成し得；
例えば、｛［（２，３−ジクロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド（化合物３）
【００２９】
【化１７】
【００３０】
であり、
式（ＩＩＩ）は
【００３１】
【化１８】
【００３２】
であり、式（ＩＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８およびＹ９は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトンおよびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、イミン、エチレン、アミド、エステル、およびチオエステルからなる群より選択され、そして
フェニル芳香環のうちの１つ以上は、芳香環のうちの１つ以上の１〜３個の炭素原子をＮ原子で置換することによって、縮合芳香環、ヘテロ芳香環、または縮合芳香環（例えば、ナフチル環、ピリジニル環、キノリニル環、およびイソキノリニル環）によって置換され得、
例えば、｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド（化合物９）
【００３３】
【化１９】
【００３４】
であり、
式（ＩＶ）は
【００３５】
【化２０】
【００３６】
であり、式（ＩＶ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、およびＹ７は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトンおよびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり、
Ｒ１５は、窒素またはＮＯであり、そして
Ｒ１６は、負に荷電した官能基（例えば、ＮＯ２、またはＳＯ２）であり、
例えば、２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレート）（化合物１）
【００３７】
【化２１】
【００３８】
であり；
式（Ｖ）は
【００３９】
【化２２】
【００４０】
であり、式（Ｖ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、およびＹ１０は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、そして
Ｒ１およびＲ２は、同じであってもまたは異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり、
例えば、２−クロロ−５−［Ｎ’−（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２−イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸（化合物３１）
【００４１】
【化２３】
【００４２】
であり；
式（ＶＩ）は
【００４３】
【化２４】
【００４４】
であり、式（ＶＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、およびＹ９は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ５およびＲ６は、各々（ＣＨ２）ｎ１であり、（ＣＨ２）ｎ１においてｎ１は０〜３であり、かつ（ＣＨ２）ｎ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、ベンズアミジン、フェニル環に連結した１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、カルボキシレート、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺ１ｎＨ３−ｎからなる群より選択される要素に連結されており、ＣＺ１ｎＨ３−ｎにおいて、Ｚ１は、ハロゲン、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチルからなる群より選択され、ｎは、１〜３であり、
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、そして
Ｒ７およびＲ８は、各々、ハロゲン、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチル、およびＣＺ１ｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺ１ｎＨ３−ｎにおいて、Ｚ１は、ハロゲンであり、ｎは、１〜３であり；
例えば、４−（４−｛[１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸（化合物４）
【００４５】
【化２５】
【００４６】
であり、
式（ＶＩＩ）は
【００４７】
【化２６】
【００４８】
であり、式（ＶＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、およびＹ７は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、そして
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、カルボキシレート、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり；
例えば、１，２−（３−メチルチオトリアジン）−３，４−フェニル−６−［（２−メトキシフェノキシ）酢酸］モルホリン（化合物３３）
【００４９】
【化２７】
【００５０】
であり、
式（ＶＩＩＩ）は
【００５１】
【化２８】
【００５２】
であり、式（ＶＩＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、およびＹ４は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され；
例えば、４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル）−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸（化合物５１）
【００５３】
【化２９】
【００５４】
であり、
式（ＩＸ）は
【００５５】
【化３０】
【００５６】
であり、式（ＩＸ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、およびＹ８は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、
Ｒ９は、メチル、エチル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチルからなる群より選択され、および
Ｒ１０は、負に荷電した官能基（例えば、ＮＯ２またはＳＯ２）であり；
例えば、１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸（化合物２４）
【００５７】
【化３１】
【００５８】
であり、
式（Ｘ）は
【００５９】
【化３２】
【００６０】
であり、式（Ｘ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、Ｙ１０、およびＹ１１は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、そして
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、
例えば、（３−ベンゾイック）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸（化合物３８）
【００６１】
【化３３】
【００６２】
であり、
式（ＸＩ）は
【００６３】
【化３４】
【００６４】
であり、式（ＸＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、Ｙ１０、およびＹ１ｌは、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、アミン、１〜３個の隣接するアミン、グアニジン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、そして
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、
例えば、２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸（化合物３９）
【００６５】
【化３５】
【００６６】
であり、
式（ＸＩＩ）は
【００６７】
【化３６】
【００６８】
であり、式（ＸＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、およびＹ７は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、そして
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり；
例えば、２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸（化合物４４）
【００６９】
【化３７】
【００７０】
であり、
式（ＸＩＩＩ）は
【００７１】
【化３８】
【００７２】
であり、式（ＸＩＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、およびＹ１０は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル（例えば、アルキルエステル、アシルエステル、アリールエステル、アルキルチオエステル、アシルチオエステル、またはアリールチオエステル）、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、そして
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、
例えば、５−｛［２−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸（化合物４５）
【００７３】
【化３９】
【００７４】
である。
【００７５】
ペンタミジン（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ；カタログ番号Ｐ０５４７）、化合物１（Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｌｔｄ．；カタログ番号ＳＰＢ０３１０２）、化合物３（Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｌｔｄ．；カタログ番号ＲＪＦ０１３７０）、化合物４（Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｌｔｄ．；カタログ番号ＢＴＢ１２１５１）、化合物９（Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｌｔｄ．；カタログ番号ＲＦＪ００７０６）、化合物２４（Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号５９５４０２９）、化合物３１（Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号５６５８０９２）、化合物３３（Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号５７２０３５８）、化合物３８（Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号５７４０１３２）、化合物３９（Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号５７４８７５０）、化合物４４（Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号５７７４２１１）、化合物４５（Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号５７６４５８９）および化合物５１（Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号６０５０４３３）は、商業的供給源から入手可能である。
【００７６】
式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）の化合物は、公知の反応化学を使用して、公知の材料または従来から調製可能である材料から開始して、従来通り調製され得（Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ，Ｍｅｔｈｏｄｅｎ ｄｅｒ Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ Ｃｈｅｍｉｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｇｅｏｒｇ−Ｔｈｉｅｍｅ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔを参照のこと）、そして／または慣用的化学修飾によって、市販の化合物から調製され得る。
【００７７】
例えば、式（Ｉ）のペンタミジンの誘導体は、図１５において示されるように、Ｎａｎｄｉら、Ｊ．Ｉｎｄ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，７０：５２７（１９９３）により記載されるように調製され得る。４−シアノフェノールが、一連のポリメチレンジブロミドを用いてアルキル化されて、対応するビス（４−シアノフェニルオキシ）アルカン（１ａ〜１ｅ）が生じる。この後、そのシアノ中間体から一連のイミデートヒドロクロリドへの転換が行われ、この一連のイミデートヒドロクロリドは、水酸化ナトリウム水溶液を用いる処理によって、対応する遊離塩基（２ａ〜２ｅ）へと転換される。その後、イミデート２ａ〜２ｅが、イセチオン酸のアンモニウム塩を用いて処理されて、最終標的化合物３ａ〜３ｅが得られる（図１５を参照のこと）。この合成経路における出発化合物および／またはこの反応スキームにおける種々の段階の反応物を変化することによって、種々の置換基（Ｙ１〜Ｙ８；Ｒ１〜Ｒ２；および種々の長さのＸ，ｎ＝１〜８）は、式（Ｉ）において示されるペンタミジンの誘導体を生成するために慣用的に置換され得る。
【００７８】
第２の例（すなわち、化合物４について）において、化合物４の慣用的合成が、下記に概説される：
【００７９】
【化４０】
【００８０】
この合成経路（すなわち、化合物４について）における出発化合物および／またはこの反応スキームにおける種々の段階での反応物を変化することによって、種々の置換基（Ｙ１〜Ｙ９；Ｒ５〜Ｒ８；およびＸ２リンカー）が、式（ＶＩ）により示される化合物４の誘導体を生成するために慣用的に置換され得る。これらの２つの例（式（Ｉ）および（ＶＩ））により記載されるアプローチと同様のアプローチを使用して、他の合成経路（すなわち、化合物１、３、９、２４、３１、３３、３８、３９、４４、４５および５１の調製について）に対する慣用的改変が、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）および（ＸＩＩＩ）に示される化合物を調製するためになされ得る。
【００８１】
特定の薬学的に受容可能な塩は、本発明にとって重要ではなく、そのような塩としては、イセチオネート、ＨＣｌ、オキサールアセテート、または他の塩が挙げられ得る。
【００８２】
本発明の化合物は、癌を処置するために有用な組成物（例えば、薬学的組成物）中に、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤とともに存在し得る。
【００８３】
本発明において使用される特定の薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤は、本発明にとって重要ではない。このようなキャリアまたは希釈剤の例が、Ｔｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，Ａ．ＷａｄｅおよびＰ．Ｊ．Ｗｅｌｌｅｒ編、第２版、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ（１９９４）（これは、本明細書中に参考として援用される）に列挙される。クレモフォアＥＬが、好ましい。
【００８４】
本発明の式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）により示される化合物の特定の投与様式は、本発明にとって重要ではない。例えば、本化合物は、軟膏またはクリーム中にて、皮膚癌に局所投与され得る。リン酸緩衝液生理食塩水溶液を使用する静脈内投与は、別の選択肢である。
【００８５】
本発明に従って投与されるべき式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）により示される化合物の特定の量は、投与様式、処置されるべき癌、単独投与されるかまたは他の薬物と組み合わせて投与されるか、ならびに処置されるべき被験体の年齢、体重および性別に依存して変動する。一般に、局所投与されるべき量は、約１〜３００ｍｇ／ｍ２体表面、好ましくは、２０〜３００ｍｇ／ｍ２体表面の範囲内にある。
【００８６】
本発明の化合物が薬学的効果を示す癌は、特に限定されない。しかし、本発明の化合物は、黒色腫、星状細胞腫、神経膠腫、ならびにＳ１００Ｂタンパク質または他のＳ１００タンパク質が増加している他の癌（例えば、脳、肺、膀胱、腸、腎臓、頸部、乳房、皮膚、頭部および頸部、リンパ、精巣、咽頭、および口の癌）に対して、特に有効である。
【００８７】
ｐ５３へのＳ１００タンパク質の結合の阻害は、蛍光結合／競合アッセイによってアッセイされ得る。例えば、Ｓ１００Ｂへの結合は、蛍光ペプチド（例えば、Ｆ４３Ｗ ｐ５３ペプチド（ＳＨＬＫＳＫＫＧＱＳＴＳＲＨＫＫＬＭＷＫＴＥ（配列番号１））またはＴＲＴＫ−１２ペプチド（ＴＲＴＫＩＤＷＮＫＩＬ（配列番号２））であり、両方とも、蛍光トリプトファン残基を含む（実施例７を参照のこと））を用いてモニターされる。このようなアッセイにおいて、このペプチドの結合は、１０〜２０ ｍＭの塩化カルシウム（ｐＨ ７．４）の存在下で、３５０〜３７０ｎｍにおけるその蛍光強度の変化によってモニターされる。その後、試験化合物によるそのペプチドの置換が、対応する蛍光強度の減少によってモニターされ、そしてＳ１００Ｂからの試験化合物の解離定数は、標準的競合式（ＫＤ＝Ｋａｐｐ／（１＋［蛍光ペプチド］／ＫＤペプチド）を使用して、計算される。その後、試験化合物が結合するＳ１００Ｂ上のアミノ酸残基が、ＮＭＲ分光法を使用して、化学シフト変動（ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ）によってモニターされ得る。
【００８８】
ｐ５３活性化に起因するＳ１００タンパク質（例えば、Ｓ１００Ｂ）の過剰発現は、ウェスタンブロッティング技術によって測定され得る（図１１および実施例１を参照のこと）。
【００８９】
以下の実施例は、例示だけのために提供され、本発明の範囲を限定することは全く意図されない。
【実施例】
【００９０】
（実施例１）
（原発性悪性黒色腫細胞における野生型のＳ１００Ｂおよびｐ５３のタンパク質レベル）
先述のように（Ｌｉｎら、前出）、１００μｇの原発性ヒト黒色腫Ｃ８１４６Ａのタンパク質抽出物または１００μｇのヒト神経膠芽細胞腫Ｕ１１８のタンパク質抽出物に対して、ウェスタンブロット解析を行った。
【００９１】
Ｃ８１４６Ａ細胞は、Ｆｒａｎｋ Ｌ．Ｍｅｙｓｋｅｎｓ博士（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、Ｉｒｖｉｎｅ）から得た。そして、それを１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清（ＦＣＳ、ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）を含有するＦ−１０培地で増殖させた。
【００９２】
Ｕ１１８細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から購入した。そして、１０％（ｖ／ｖ）ＦＣＳを含有するＤ−ＭＥＭで増殖させた。
【００９３】
５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１．０％（ｖ／ｖ）Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０、０．５％（ｗ／ｖ）デオキシコール酸ナトリウム、０．１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ、１．０ｍＭ ＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌアプロチニン、２．０μｇ／ｍｌロイペプチンおよび５．０ｍＭ ＤＴＴを含むＲＩＰＡ緩衝液中で、細胞を溶解して、細胞抽出物を得た。
【００９４】
この細胞抽出物中のタンパク質を１２％（ｗ／ｖ）ポリアクリルアミドゲル上で泳動し、ニトロセルロースに転写し、そしてｐ５３マウスモノクローナル抗体（ＤＯ−１、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）（１：１０００希釈）、Ｓ１００Ｂウサギポリクローナル抗体（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｉｎｃ．、Ｆｌａｎｄｅｒｓ、ＮＪ）（１：５００希釈）、サイクリンＤ１モノクローナル抗体（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）（１：１００希釈）、またはタンパク質の使用量のための基準として、アクチンマウスモノクローナル抗体（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）（１：５０００希釈）のいずれかと反応させた。次いで、ブロットを、セイヨウワサビペルオキシダーゼと結合体化したそれぞれの２次抗体と反応させ、製造者が推奨するように、化学発光基質（ＥＣＬ、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）と反応させた。先述のように（Ｌｉｎら、前出）、組換えＳ１００Ｂタンパク質コントロールを生産し、そして均一になるまで精製した。その結果を、図２Ａ〜２Ｂに示す。
【００９５】
図２Ａ〜２Ｂに示すように、原発性悪性黒色腫細胞（Ｃ８１４６）は、相対的に高レベルのＳ１００Ｂを確立したが、これらの癌細胞において、ｐ５３のレベルは、Ｓ１００Ｂをほとんど含まないか、または全く含まない細胞（すなわち、Ｕ１１８）と比較して、著しく低かった。このインビボでの知見は、Ｓ１００Ｂおよびｐ５３の一過性の同時トランスフェクションにおいて見出されることと一致し、この場合、Ｓ１００Ｂの添加によって、腫瘍サプレッサータンパク質のレベルが、有意に減少した（＞１００倍）（Ｌｉｎら、既出）。漸増量の組換えＳ１００Ｂタンパク質を使用して、Ｃ８１４６細胞中のＳ１００Ｂのレベルが、Ｕ１１８細胞よりも、少なくとも５０倍は高いと推定された。
【００９６】
（実施例２）
（Ｓ１００Ｂとｐ５３との相互作用は、カルシウム依存的である）
（Ａ）アポ−Ｓ１００ＢおよびＣａ２＋が結合したＳ１００Ｂの溶液構造
距離制限、双極子カップリング制限、二面角制限を使用して、ダイマーアポ−Ｓ１００Ｂの３次元構造を決定した。アポ−Ｓ１００Ｂのα−へリックス含量（Ａｍｂｕｒｇｅｙら、Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．ＮＭＲ、６：１７１〜１７９（１９９５））およびその対称的なダイマー境界面から生じる曖昧さのために、ＮＯＥの割当てが困難であった。そのため、２次元および３次元のＮＯＥＳＹスペクトルに、４次元ＮＯＥＳＹ実験を補足し、重複する問題を解決した。そして、非対称的に標識されたＳ１００Ｂ（すなわち、非標識Ｓ１００Ｂ：１３Ｃ、１５Ｎ標識Ｓ１００Ｂの１：１混合物）を用いる１３Ｃ−エディットの１２Ｃ−フィルター実験を使用し、ダイマー境界面において、分子内ＮＯＥ相関を分子間ＮＯＥ相関から区別した（Ｄｒｏｈａｔら、前出）。結果として、化学シフト値のみに基づいて、ロングレンジの分子間ＮＯＥ相関の７０％よりも多くが、割当てられた。ＮＯＥベースの構造は、ショートレンジの距離制限にのみ基づくので、この構造を、ロングレンジの双極子カップリング制限を使用して、精緻化した（Ｔｊａｎｄｒａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７８：１１１１〜１１１４（１９９７）；Ｔｊａｎｄｒａら、Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．、４：４４３〜４４９（１９９７）；およびＤｒｏｈａｔら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３７：２７２９〜２７４０（１９９８））。アポ−Ｓ１００Ｂの溶液構造が、非常に高い解像度（Ｑは約０．３）で、公表された（Ｄｒｏｈａｔら（１９９６）、前出；および、Ｄｒｏｈａｔら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、８：８００〜８０９（１９９９））。そして、それを図３に示す。実際は、動的特性がほとんどない領域においては、クオリティファクターは、さらに良好である（Ｑ＜０．２）。アポ−Ｓ１００Ｂの最終構造（約１５ＮＭＲ制限距離／残基）は、Ｘ型の４へリックスバンドルを形成する逆平行のヘリックス対同士の垂直的結合を有する対称的なダイマー境界面を示す（図３）。このフォールディングの結果として、アポ−Ｓ１００ＢのＣ末端のＥＦハンドは、カルモジュリン、トロポニンＣ、カルビンジン（Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ）Ｄ９Ｋ、カルサイクリン（Ｃａｌｃｙｃｌｉｎ）、およびパルブアルブミンのＥＦハンドとは異なる（Ｄｒｏｈａｔら（１９９６）、前出；およびＤｒｏｈａｔら（１９９９）、前出）。それはまた、広範囲の疎水性コアおよび、その高い可溶性と一致する荷電表面を有する。このアポ−タンパク質に関して、Ｃａ２＋が結合したＳ１００Ｂの溶液構造（図１）が、ＮＭＲを使用して解明された。これは、Ｄｒｏｈａｔら（１９９８、前出）および図４に示される。
【００９７】
（Ｂ） Ｓ１００Ｂダイマーおよびそのコンフォメーション変化
Ｓ１００Ｂのアポ構造（図３）とＣａ２＋が結合した構造（図４）との比較により、Ｘ型４へリックスバンドルのダイマー境界面におけるへリックス（１、１’、４、または４’）の方向に違いがないことが示された（図１）。これらの知見により、Ｄｒｏｈａｔら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、６：８００〜８０９（１９９７）；Ｌａｎｄａｒら、Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ、１３４３：１１７〜１２９（１９９７）；およびＬａｎｄａｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、３７：１７４２９〜１７４３８（１９９８）に記載された、ゲル濾過データ、光散乱データ、および分析的超遠心分離データが、確認される。これらの文献は、Ｓ１００Ｂダイマーが、Ｃａ２＋の存在下および非存在下の両方において、１．０ｎＭ未満の濃度において安定であることを示す（Ｄｒｏｈａｔら（１９９７）前出；Ｌａｎｄａｒら（１９９７）、前出；およびＬａｎｄａｒら（１９９８）、前出）。従って、非共有結合性のダイマーが、細胞内でのＳ１００タンパク質の状態であり、ＮＭＲ構造は、生理学的に妥当なオリゴマー化状態である。しかし、第２ＥＦハンド（典型的なＥＦハンド）において、Ｃａ２＋が添加された場合、へリックス３の位置に大きな変化が存在する（図１）。このＥＦハンドにおいて、Ｃａ２＋が添加された場合、ヘリックス３とヘリックス４との間のへリックス間角度において、９０°の変化が観測される。このＣａ２＋依存的なコンフォメーション変化によって、ヒンジ領域中の残基、Ｃ末端ループ中の残基、およびヘリックス３中の残基によって規定される裂溝（アポ構造中には、存在しない）が、露出される（図１）。Ｃａ２＋が結合したＳ１００Ｂ上のこの表面（図１で黄色）が露出されることが、ｐ５３の結合にとって必要である（図１および図４）。
【００９８】
（Ｃ）Ｃａ２＋−Ｓ１００Ｂ−ｐ５３ペプチド複合体の溶液構造
Ｓ１００Ｂとｐ５３のＣ末端との間の相互作用の詳細を調査するために、ｐ５３３６７〜３８８ペプチドによるＣａ２＋が結合したＳ１００Ｂの力価測定を、Ｒｕｓｔａｎｄｉら（２０００）、前出；Ｒｕｓｔａｎｄｉら（１９９８）；前出；およびＲｕｓｔａｎｄｉら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、８：１７４３〜１７５１（１９９９）に記載されるように、ＮＭＲ分光法によりモニタリングした。Ｃａ２＋の存在下において、ｐ５３３６７〜３８８が添加された場合に、ＨＳＱＣスペクトル中のＳ１００Ｂからの非常に多くの共鳴が、有意にシフトした。しかし、Ｃａ２＋の非存在下では、変化は、測定されなかった。これらのデータによって、ｐ５３ペプチドのＳ１００Ｂとの相互作用のＣａ２＋依存性が、確認された。Ｓ１００Ｂ−ｐ５３ ４量体（Ｓ１００Ｂダイマーにつき２つのｐ５３ペプチド）の大きさ（２６ｋＤａ）および複雑性のために、対称的に標識したサンプル（Ｓ１００Ｂサブユニットの両方を、完全に同位体標識する；ｐ５３は非標識）および非対称的に標識したサンプル（標識Ｓ１００βサブユニットと非標識Ｓ１００βサブユニットの５０：５０混合物；ｐ５３は標識しない）の両方を使用する、異核多次元（２Ｄ〜４Ｄ）ＮＭＲデータ（Ｃｌｏｒｅら、Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｌａｒｇｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｒｅｅ− ａｎｄ ｆｏｕｒ−ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ． ＮＭＲ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ（Ｃｌｏｒｅら編）、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、ＦＬ（１９９３）；およびＷａｌｔｅｒｓら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．、３３９：２３８〜２５８（２００１））を収集することが必要であった。これらのＮＭＲデータおよびＳ１００Ｂ−ｐ５３ペプチド複合体の構造が、Ｒｕｓｔａｎｄｉら（２０００）（前出）に記載されている。総じて、３，４６６個の実験的制限（約１５個／残基）を使用して、Ｃａ２＋−Ｓ１００Ｂに結合したｐ５３３６７〜３８８の構造を計算した（図４）。
【００９９】
（Ｄ）ｐ５３−Ｓ１００Ｂ相互作用のＣａ２＋依存性
ｐ５３−Ｓ１００Ｂ相互作用のＣａ２＋依存性は、３つ全てのＳ１００Ｂ複合体（アポ−Ｓ１００Ｂ、Ｃａ２＋が結合したＳ１００Ｂ、およびｐ５３が結合したＳ１００Ｂ；図１）の構造を比較することにより、観測され得る。ｐ５３と相互作用する残基のほとんど（２１個のうち１８個）は、アポ−Ｓ１００Ｂ構造中に埋没している（図１中の黄色）。しかし、Ｃａ２＋がＳ１００Ｂに結合した場合、これらの同じ残基が、へリックス３の位置の大きな変化に起因して、露出される。このコンフォメーション変化が、ｐ５３との相互作用に必要である（図１）。この構造はまた、Ｓ１００Ｂタンパク質の標的中で見出された（すなわち、ファージペプチドライブラリーのスクリーニングに由来する）コンセンサス配列を理解するために、有用であった。「Ｓ１００Ｂ−コンセンサス配列」の多くが、ｐ５３のＣ末端において、見出され（Ｉｖａｎｅｎｋｏｖら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７０：１４６５１〜１４６５８（１９９５））、そして、ｐ５３ペプチドを、この配列により一致するように変異させた（Ｆ３８５Ｗ）場合、このｐ５３ペプチドのＳ１００Ｂに対する親和性は、５倍上昇する（Ｒｕｓｔａｎｄｉら（１９９８）、前出）。コンセンサス配列全体を含む１２残基のペプチド（ＴＲＴＫ−１２ペプチド）に結合したＳ１００Ｂの３次元構造研究／動力学的研究が、Ｉｎｍａｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３２４：１００３〜１０１４（２００２）に記載されており、従って、ＴＲＴＫ−Ｓ１００Ｂの構造およびｐ５３ Ｓ１００Ｂの構造の両方を、本明細書中で、薬物設計の仕事において使用した。
【０１００】
（実施例３）
（悪性黒色腫におけるＳ１００Ｂとｐ５３との間の相互作用は、細胞周期依存的である。）
悪性黒色腫におけるＳ１００Ｂとｐ５３との間の相互作用は、細胞周期依存的であるかどうかを研究するために、Ｃ８１４６Ａ原発性悪性黒色腫を、血清飢餓（０．５％（ｗ／ｖ））によって、同調化した。詳細には、黒色腫細胞の同調化は、血清飢餓により行った。この血清飢餓は、０．５％（ｖ／ｖ）ＦＣＳ中で、４８時間、細胞を増殖させ、次いで、ＦＣＳレベルを１５％（ｖ／ｖ）まで上げ、そして次いで、収集する前に、種々の期間（すなわち、０時間と４８時間との間）、細胞を増殖させることで行った。次いで、細胞を収集し、氷冷ＰＢＳで２回洗浄した。次に、この細胞のペレットを、溶解緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２．０ｍＭ ＣａＣｌ２、１．０ｍＭ ＰＭＳＦ、２．０μｇ/ ｍｌ ロイペプチンおよび５．０ｍＭ ＤＴＴを含む）中で、溶解した。細胞（１／２容積の０．１ｍｍ ガラスビーズを含む）を、３回、凍結および融解させ、そして１５，０００ｒｐｍで遠心分離した。上清（１．０ｍｇ）を、ｐ５３抗体（ＤＯ−１）またはＳ１００Ｂ抗体のいずれかと共に、４℃で２時間、インキュベートした。次いで、プロテインＡ−アガロースビーズ（５０μｌ、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ）を添加し、サンプルを、４℃で一晩、インキュベートした。このビーズを、スピンダウンし、溶解緩衝液で６回、洗浄した。そして、１２％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上にローディングした。このサンプルを、ニトロセルロース膜に転写し、インキュベートした（すなわち、上記のように、Ｓ１００Ｂ抗体またはｐ５３抗体を使用して共免疫沈降した）。その結果を、図５Ａ〜５Ｂに示す。
【０１０１】
図５Ａ〜５Ｂに示すように、直接的Ｓ１００Ｂ−ｐ５３相互作用が、インビボで起きる。Ｓ１００Ｂは、ほとんどの細胞において、主に細胞質ゾル性であるが、ｐ５３は、Ｇ１の間は細胞質に局在し、Ｓの間は核に入り、転写活性化を開始する。図５Ａに示したデータは、サイクリンＤ１（Ｇ１マーカー）の発現が、１５％（ｖ／ｖ）血清中への黒色腫の放出後６〜８時間の間に最大であったことを示す。この理由により、６時間の時点を選択して、癌細胞の同調化したＧ１抽出物を調製した。同調していない指数増殖している癌細胞の、ｐ５３抗体を使用した免疫沈降（図５Ｂ、レーン１）は、たとえあったとしても、少しの量のＳ１００Ｂしか、ｐ５３によって共免疫沈降され得ないことを示す。しかし、細胞をＧ１に同調化した場合（図５Ｂ、レーン３）、ｐ５３抗体によって免疫沈降され得るＳ１００Ｂの量が、著しく上昇した。Ｓ１００Ｂ抗体を使用して行われた相互免疫沈降実験（図５Ｂ、レーン２）によって、Ｇ１の間のｐ５３とＳ１００Ｂとの間の複合体の形成が確認された。Ｇ１において、この相互作用が起こるという事実は、重要である。なぜなら、この相は、ＤＮＡの複製の前に存在し、そしてｐ５３が、傷害を受けたＤＮＡに応答するための重要なチェックポイントであるからである。ほとんどの細胞では、ｐ５３は、Ｇ１の間は細胞質に局在し、Ｓの間は核に入って、その転写活性を提供する。１つの重要なｐ５３の下流エフェクター遺伝子が、サイクリン依存性キナーゼインヒビターｐ２１である。このインヒビターは、ＤＮＡ損傷に応答して、ｐＲＢのリン酸化を防止し、細胞をＧ１に停止させる。このＧ１での停止によって、そのＤＮＡを修復し損傷ＤＮＡが娘細胞に伝達するのを防止するための時間が、細胞に与えられると考えられる。Ｇ１の間の細胞質でのＳ１００Ｂとｐ５３との相互作用によって、Ｓの間の核へのｐ５３の進入が防止され、ｐ５３の転写活性が阻害され得る。野生型ｐ５３に対するＳ１００Ｂの総合的な効果によって、細胞の異常（例えば、非機能的なｐ５３が生じる遺伝子増幅および遺伝子変異）を模倣し得る。ｐ５３のＣ末端と結合するかまたはｐ５３のＣ末端を改変するほとんどのタンパク質は、腫瘍サプレッサーを活性化する。一方で、Ｓ１００Ｂに対しては、逆の効果が観測された。Ｓ１００Ｂが結合した場合、ｐ５３の機能は低下した（Ｌｉｎら、前出）。
【０１０２】
（実施例４）
（ｐ５３の機能のＳ１００Ｂ阻害）
Ｓ１００Ｂは、ｐ５３のリン酸化を阻害し（Ｗｉｌｄｅｒら、前出；およびＲｕｓｔａｎｄｉら（１９９８）、前出）、そしてｐ５３テトラマーを破壊する（Ｂａｕｄｉｅｒら、前出）。これらの２つの機能は、ｐ５３の転写活性にとって重要である（Ｇｉａｃｃｉａら、Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐ．、１２：２９７３〜２９８３（１９９８））。Ｓ１００Ｂは、ｐ５３のＤＮＡ結合活性を低下させる（Ｌｉｎら、前出）。このことは、阻害的リン酸化およびテトラマーの形成の防止に加えて、Ｓ１００Ｂは、ｐ５３の転写活性にも影響し得ることを示唆する（Ｌｉｎら、前出）。このことを立証するために、一過性トランスフェクションを、Ｈ１２９９ヒト大細胞肺癌細胞において、ｐ５３レポーター遺伝子構築物（ｐＧ１３−ＣＡＴ）（Ｋｅｒｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５６：８２７〜８３０（１９９２））と同時に、Ｓ１００Ｂ発現ベクターおよびｐ５３発現ベクターを使用して、実行した。Ｓ１００Ｂ単独でのトランスフェクションは、レポーター遺伝子に影響しなかったが、Ｓ１００Ｂのｐ５３との同時トランスフェクションは、転写活性を有意に低下させた（Ｌｉｎら、前出）。Ｓ１００Ａ１を使用したこれらの研究およびＳ１００Ｂに関する研究おいて、Ｓ１００Ａ１が、ｐ５３の機能を阻害した（Ｃａｒｒｉｅｒら、前出）。ｍｔｓｌを使用して行われた研究は、このＳ１００タンパク質もまた、ｐ５３に結合し、その転写活性化を有意に阻害することを示す（Ｇｒｉｇｏｒｉａｎら、前出）。
【０１０３】
Ｓ１００Ｂのｐ５３との相互作用の重要性をさらに評価するために、ｐ５３およびその下流エフェクターの内の２つであるｍｄｍ２（または、ヒトについてはｈｄｍ２）およびｐ２１のタンパク質レベルを試験した。詳細には、ヒト大細胞肺癌細胞（Ｈ１２９９）を、ｐ５３発現ベクターおよびＳ１００Ｂ発現ベクターを使用して、一過的に同時トランスフェクションした。Ｈ１２９９細胞株は、Ｂｅｒｔ Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ博士から得た。これらの細胞は、ｐ５３遺伝子のホモ接合性欠失に起因して、ｐ５３のヌル遺伝子型を有する。それゆえ、存在する唯一のｐ５３は、トランスフェクションを介して導入された野生型のタンパク質である（Ｆｕｎｋ、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．、１２：２８６６〜２８７１（１９９２））。この結果を、図６Ａに示す。
【０１０４】
図６Ａに示すように、ｐ５３は、ｐ５３発現ベクターの非存在下では、検出されなかった（レーン１、２；図６Ａ）；その結果、ｍｄｍ２タンパク質およびｐ２１タンパク質の内因性レベルは、低かった。予想どおり、ｐ５３の発現によって、ｍｄｍ２およびｐ２１の発現が引き起こされた（図６Ａ、レーン３）が、Ｓ１００Ｂタンパク質との共発現によって、ｐ５３タンパク質の蓄積（１００分の１未満に）、ｍｄｍ２タンパク質レベルおよびｐ２１タンパク質レベルは、著しく減少した（図６Ａ、レーン４）。ｐ５３の非存在下（すなわち、コントロール実験）でのＳ１００Ｂの発現（図６Ａ、レーン２）は、基礎レベルのｍｄｍ２にもｐ２１にも、有意には影響しなかった（図６Ａ）。このデータは、ｐ５３レベル、ｍｄｍ２レベルおよびｐ２１レベルの減少は、Ｓ１００Ｂに依存することを示す。
【０１０５】
次に、Ｓ１００Ｂが、内因性のｐ５３と相互作用し、ｍｄｍ２およびｐ２１の発現に影響し得るかどうかを研究した。ヒト乳癌細胞株ＭＣＦ−７（野生型ｐ５３の遺伝子型を有する（Ｋａｓｔａｎら、Ｃｅｌｌ、７１：５８７〜５９７（１９９２））を、Ｓ１００Ｂを使用して、一過的にトランスフェクトした。Ｓ１００Ｂのトランスフェクションの後で、内因性ｐ５３の生産を誘導するために、Ｘ線模倣試薬ブレオマイシンで細胞を処置した（または、処置しなかった）。その結果を、図６Ｂに示す。
【０１０６】
図６Ｂに示すように、基礎レベルのｐ５３、ｍｄｍ２およびｐ２１が、ブレオマイシンへの曝露によって誘導され得る（図６Ｂ、レーン２）。内因性Ｓ１００Ｂは、ＭＣＦ−７では検出できないが（図６Ｂ、レーン１）、Ｓ１００Ｂタンパク質の過剰発現により、ｐ５３のレベルが減少し、ｍｄｍ２の蓄積およびｐ２１の蓄積が、阻止された（図６Ｂ、レーン４）。これらのデータは、Ｓ１００Ｂが、インビボで、ｐ５３の下流エフェクター遺伝子の内在性の発現を阻害することを示す。
【０１０７】
（実施例５）
（Ｓ１００Ｂプロモーターの領域は、ｐ５３に結合する）
活性ｐ５３レベルが上昇した場合、細胞周期およびアポトーシスに関与する多数の遺伝子の転写が、活性化される。１つの周知の場合において、ｐ５３は、フィードバックループの一部としてｐ５３自体のユビキチン依存性分解に関与するタンパク質である、ｍｄｍ２の転写を活性化する（Ｐｒｉｖｅｓら（１９９９），上記；Ｆｒｅｅｄｍａｎら、Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．，５５：９６−１０７（１９９９）；およびＭｏｍａｎｄら、Ｇｅｎｅ，２４２：１５−２９（２０００））。ｍｄｍ２と同様の状況（ヒトにおけるｈｄｍ２）において、Ｓ１００Ｂのプロモーターは、ｐ５３結合についてのコンセンサス配列に対応する３つの配列を有する（図７）。実際、このＳ１００Ｂプロモーター中の一配列は、ｐ５３結合コンセンサス配列と完全に適合する（２０／２０ヌクレオチド適合；図７）。
【０１０８】
従って、移動度シフトアッセイを、精製ｐ５３を用いて実施して、Ｓ１００Ｂのプロモーター中のこれらの配列が真正にｐ５３結合部位であるか否かを、ＧＡＤＤ４５配列をポジティブコントロールとして使用して決定する。電気泳動移動度シフトアッセイを、本質的にはＣａｒｒｉｅｒら、Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｒｅｓ．，３５２：７９−８６（１９９６）により記載されるのと同様に実施した。但し、サケ精子ＤＮＡ（１．０μｇ）および精製組換えｐ５３を使用した。バキュロウイルスにより発現されたｐ５３を、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ）から得た。バキュロウイルスにより発現されたｐ５３（０．６μｇおよび３．０μｇ）を、それぞれ、ＧＡＤＤ４５オリゴヌクレオチドおよびＳ１００Ｂオリゴヌクレオチドへの結合のために使用した。以前に記載された通り（Ｃａｒｒｉｅｒら（１９９６），上記）に、これらのプローブを、逆相ＨＰＬＣ（Ｖｙｄａｃ Ｃ−４）により精製し、そしてＴ４ポリヌクレオチドキナーゼ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ）を用いて標識した。Ｓｌ００βプロモーター由来のオリゴヌクレオチド配列は、２０個のコンセンサスｐ５３結合部位の２０ヌクレオチド、１７ヌクレオチド、および１６ヌクレオチドと適合し、それは以下の通りであった：
センス ５’−ＧＣＣ ＴＧＧ ＧＣＡ ＡＧＣ ＴＣＴ ＧＴＧ ＣＴＴ ＣＡＣ ＡＧＡ ＧＣＡ ＡＧＣ ＣＴＧ ＴＧＴ−３’（配列番号３）；
センス ５’−ＧＴＴ ＣＴＧ ＧＧＡ ＣＴＴ ＴＣＡ ＣＴＡ ＡＡＣ ＴＴＣ ＴＣＣ ＴＡＣ ＣＡＴ−３’（配列番号４）；および
センス ５’−ＣＡＧ ＡＧＧ ＧＣＡ ＧＧＣ ＣＣＧ ＧＣＴ ＧＧＧ ＣＣＣ ＴＣＣ ＴＧＣ ＴＧＡ−３’（配列番号５）。
【０１０９】
結果は、図８において示される。
【０１１０】
図８において示されるように、より低移動度の複合体が、ＧＡＤＤ４５およびＳ１００Ｂ（２０／２０ヌクレオチド）プローブ（それぞれ、レーン２および５）とともに生成された。さらに、両方のバンドは、ｐ５３抗体（それぞれ、レーン３および６）によってスーパーシフトされた。従って、これは、真正のｐ５３複合体を示す。しかし、コンセンサス配列が完全に適合するにも関わらず、ＧＡＤＤ４５配列と比較した場合、５倍多くのタンパク質およびＤＮＡが、Ｓ１００Ｂプロモーター配列とのタンパク質−ＤＮＡ複合体を生成するためには必要であった。このことは、コンセンサス配列中のＴ／Ａ改変体のうちの２つが、ＧＡＤＤ４５配列（これは好ましい）においてＴであるが、Ｓ１００Ｂ配列においてはＡであるという事実（図７）に起因し得る。これらのｐ５３結合部位間の別の差異は、ｐ５３と相互作用する２つの１０ヌクレオチドＤＮＡストレッチを連結する、介在ＤＮＡ配列の長さである（１１ヌクレオチド 対 ０ヌクレオチド；図７）。同様のデータが、Ｓ１００Ｂプロモーター中の他の２つのｐ５３コンセンサス部位を用いて得られた；しかし、これらの部位は、２０／２０配列よりもさらに低いｐ５３親和性を有した。まとめると、これらのデータは、ｐ５３によるＳ１００Ｂ転写の誘導は、それらのプロモーター中により高親和性のｐ５３部位を含む遺伝子が占められた後にのみ生じることを示唆する。さらに、ｐ５３は、他のＳ１００タンパク質（Ｓ１００Ａ２）（Ｔａｎら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒ，４４５：２６５−２６８（１９９９））の転写を、それらのプロモーター領域において見出されるｐ５３結合コンセンサス配列に結合することによって調節する可能性もまたある（図７）。
【０１１１】
（実施例６）
（Ｓ１００Ｂ−ｐ５３相互作用の阻害は、ｐ５３腫瘍サプレッサー機能を回復する）
原発性悪性黒色腫細胞Ｃ８１４６は、比較的高いレベルのＳ１００Ｂを有するが、ｐ５３レベルは、Ｓ１００Ｂをほとんど含まないかまたは全く含まない細胞（すなわち、Ｕ１１８；図２Ａ〜２Ｂ）と比較して、これらの癌細胞において顕著に低い。このインビボでの知見は、Ｓ１００Ｂおよびｐ５３の一過性同時トランスフェクションにおいて見出されるものと一致する。ここで、腫瘍サプレッサータンパク質のレベルは、Ｓ１００Ｂの添加によって有意に減少された（＞１００分の１）（Ｌｉｎら、上記）。漸増量のＳ１００Ｂ組換えタンパク質を使用すると、Ｃ８１４６細胞におけるＳ１００Ｂのレベルは、Ｕ１１８細胞において少なくとも５０倍高いと推定された。Ｓ１００Ｂが、黒色腫癌細胞において低いｐ５３レベルに対して直接寄与するか否かを決定するために、Ｓ１００ＢのＣ末端に対応する小干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を調製し、黒色腫細胞中に導入した。
【０１１２】
使用した小干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、２３ヌクレオチド（ｎｔ）の二本鎖ＲＮＡからなった。これは、Ｘｅｒａｇｏｎ Ｉｎｃ．（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，Ａｌ）によって合成された。このｓｉＲＮＡの配列（すなわち、５’−ＡＣＵ ＡＣＵ ＧＣＣ ＵＧＣ ＣＡＣ ＧＡＧ ＵＵＣ−３（配列番号６））は、Ｓ１００β Ｃ末端（ヌクレオチド２４４〜２６５）＋２つのｄＴ ３’突出に対応する。
【０１１３】
種々の濃度のｓｉＲＮＡ（２．０ｎＭ、２０ｎＭ）を、２．０μｇのｐＣＭＶ．３空ベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）とともにこれらの細胞に添加した。これらのｓｉＲＮＡを、ＦｕＧＥＮＥ試薬（Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を製造業者の推奨に従ってを使用して、Ｃ８１４６Ａ黒色腫細胞においてトランスフェクトした。これらの細胞を２４時間後に収集し、そして上記のようにウェスタンブロットによって分析した。これらの結果が、図９に示される。
【０１１４】
図９において示されるように、Ｓ１００ＢアンチセンスＲＮＡの添加によって、Ｓ１００Ｂレベルが低下し（３分の１）、対応して、ｐ５３レベルの増加（２．３倍）が観察された。同様に、ｐ５３により活性化される遺伝子であるｐ２１のタンパク質レベルもまた、ｐ５３レベルが上昇した場合に、予期された通り、ｓｉＳ１００Ｂの添加によってアップレギュレートされた（２．６倍）（図９）。まとめると、アンチセンスＲＮＡを用いたこれらの結果は、Ｓ１００Ｂが、原発性悪性黒色腫癌細胞内部での機能的ｐ５３のダウンレギュレーションに寄与することを示す。
【０１１５】
（実施例７）
（Ｓ１００Ｂの低分子インヒビター）
上記の研究は、Ｓ１００タンパク質レベルが上昇しておりかつｐ５３レベルが減少している細胞（例えば、多くの癌（すなわち、悪性黒色腫）中の細胞）において、野生型ｐ５３活性を回復するためのＳ１００Ｂの低分子インヒビターの設計を動機付けた。
【０１１６】
この低分子は、Ｓ１００Ｂ上のｐ５３結合部位に結合することによってＳ１００Ｂ−ｐ５３相互作用を阻害し、そしてｐ５３結合を阻害するように、設計した。従って、このようなインヒビターは、ｐ５３をＳ１００Ｂ依存性分解経路から保護し、そして細胞内部における野生型ｐ５３機能を回復すると考えられる。本発明において、コンピューター支援型薬物設計（ｃｏｍｐｕｔｅｒ−ａｉｄｅｄ ｄｒｕｇ ｄｅｓｉｇｎ）（ＣＡＤＤ）（Ｍａｒｔｉｎ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３５：２１４５−２１５４（１９９２）；Ｅｗｉｎｇら、Ｊ．Ｃｏｍｐｕｔ．Ｃｈｅｍ．，１８：１１７５−１１８９（１９９７）；Ｍａｋｉｎｏら、Ｊ．Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｉｄｅｄ Ｍｏｌ．Ｄｅｓ．，１３：５１３−５３２（１９９９）；およびＨｉｃｋｓら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ．＆ Ｄｅｖｅｌ．，１：２２３−２３４（１９９８））を、ＮＭＲによる構造活性関連研究（ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｓｔｕｄｉｅｓ ｂｙ ＮＭＲ）（ＳＡＲ ｂｙ ＮＭＲ）（Ｈａｊｄｕｋら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７８：４９７−４９９（１９９７）；およびＦｅｓｉｋ，Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ ＮＭＲ，３：２６１−２６９（１９９４）（図１０））と合わせることは、Ｓ１００Ｂと結合した後にＳ１００Ｂ−ｐ５３相互作用をブロックする新規な低分子を同定するための有効な方法であることが、見出された。ＣＡＤＤは、魅力的である。なぜなら、この研究は、利用可能な化合物に対して焦点を合わせ、それによって開始段階における化学合成を回避するからである。分子を、１００万個の化合物の３Ｄデータベースからコンピューターにより選択し、そしてＳ１００Ｂのｐ５３結合部位に「配置」した（図１０）。これらの低分子の方向およびコンフォメーションを、その後、Ｓ１００Ｂ構造への適合が最大となるように調節した。好ましい相互作用エネルギーと多数の可能なリガンド−レセプター水素結合とを含む分子を、試験のために選択した。有望な化合物のＮＭＲ技術によるＳＡＲ（Ｈａｊｄｕｋら、上記；およびＦｅｓｉｋ，上記）および熱力学的結合研究を使用して、Ｓ１００Ｂについての結合部位および親和性を評価した。
【０１１７】
１００万個を超える化合物を、ＣＡＤＤを使用してスクリーニングし、これから、生物物理学的スクリーニングおよび生物学的スクリーニングを使用して、Ｓ１００Ｂに結合する５０個より多くの分子が同定された（ＫＤ＝５００ｎＭ−１０ｕＭ；蛍光結合アッセイから）。１つのこのような分子であるペンタミジンは、特に興味深い。なぜなら、（ｉ）ペンタミジンは、別の用途についてＦＤＡが認可しており；そして本明細書中で、（ｉｉ）ＮＭＲおよび蛍光分光法により決定した場合に、ｐ５３結合部位においてＳ１００Ｂに結合することが（ＫＤ＝７００ｎＭ）見出され（下記を参照のこと）；（ｉｉｉ）ペンタミジンは、原発性ヒト悪性黒色腫細胞（野生型ｐ５３）中に入り、そしてその増殖を、８分の１より低く阻害し、正常なメラニン形成細胞に対してかなり低い効果（８分の１）を有し；（ｉｖ）ペンタミジンを用いる処理により、ｐ５３タンパク質レベルが部分的に回復した（このことは、これらが、Ｓ１００−ｐ５３複合体を破壊することを示唆する）；（ｖ）放出されたｐ５３は、ウェスタンブロットによって検出された場合、ｍｄｍ２およびｐ２１をアップレギュレートし、そして（ｖｉ）Ｓ１００Ｂタンパク質レベルが、原発性黒色腫において１０倍より大きく増加された（図１１）からである。Ｓ１００Ｂのアップレギュレーションは、驚くべきことではない。なぜなら、Ｓ１００Ｂ遺伝子は、ｐ５３の転写調節下にあること、Ｓ１００Ｂプロモーターにおいて、ｐ５３ＤＮＡ結合コンセンサス配列と正確に適合する（２０のうち２０）ヌクレオチド配列（ヌクレオチド１７０５〜１７３５）が存在することが、本明細書中で発見されたからである。ＤＮＡバンドシフトアッセイは、ｐ５３が、Ｓ１００Ｂプロモーター中のこの部位および他の２つのｐ５３部位に結合し、これは、完全に適合する配列についてより特異的であることを示す（図７）。これらのデータは、この薬物が、Ｓ１００Ｂ−ｐ５３相互作用を破壊すること、およびｐ５３の回復は、ｐ５３標的遺伝子（例えば、ｐ２１、ｍｄｍ２、およびＳ１００Ｂ）を転写活性化することを暗示する。
【０１１８】
（（ａ）結合力価測定）
ＣＡＤＤ探索において同定したＳ１００Ｂへのこの低分子の結合を、蛍光分光法を使用して測定した。同定した化合物は、以下の通りである：
ペンタミジンイセチオネート（Ｋｄ＝１．４±１μＭ ＩＣ５０約５００ｎＭ）；｛［（２，３−ジクロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド（Ｋｄ＜１μＭ ＩＣ５０＜２．５）（化合物３）；｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド（Ｋｄ＝４＋／−１μＭ）（化合物９）；２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレエート（Ｋｄ＝２．７＋／−１μＭ ＩＣ５０＝２．５μＭ）（化合物１）；２−クロロ−５−［Ｎ’（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸（Ｋｄ約６μＭ ＩＣ５０約２５μＭ）（化合物３１）；４−（４−｛［（１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸（Ｋｄ＝２＋／−１μＭ）（化合物４）；１，２−（３−メチルチオトリアジン），３，４−フェニル，６−［（２−メトキシフェノキシ）酢酸］モルホリン（Ｋｄ＜１０μＭ ＩＣ５０約２５μＭ）（化合物３３）；４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル］−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸（Ｋｄ＜１０μＭ）（化合物５１）；２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸（Ｋｄ約２４μＭ）（化合物４４）；５−｛［２−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸（Ｋｄ約１２μＭ）（化合物４５）；１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸（Ｋｄ＜２００μＭ）（化合物２４）；（３−ベンゾイック）−１，３，ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸（Ｋｄ＜２００μＭ）（化合物３８）；および２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸（Ｋｄ＜２００μＭ）（化合物３９）。
【０１１９】
蛍光を発する化合物（すなわち、化合物９、３１および３３について）を、蛍光強度の変化を介して、Ｓ１００Ｂへの直接結合アッセイによって測定した。蛍光を発しなかった化合物（化合物１、３、４（ペンタミジン）、２４、３８、３９、４４、４５および５１）について、２つのアプローチを使用した。第１に、チロシン蛍光の変化（Ｓ１００ＢのＴｙｒ−１７について）は、いくつかの場合において、結合を評価するために十分であった（Ｒｕｓｔａｎｄｉら（１９９８），上記；およびＳｚａｂｏら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，９４：２４９−２５２（１９７８））。しかし、低収量のチロシン残基と関連する問題を克復するために、Ｓ１００ＢのＦ４３Ｗ変異体を使用し（図１２Ａ）、その後、野生型Ｓ１００Ｂを用いて競合研究を行った（図１２Ｂ）。このＳ１００Ｂ構築物において（Ｆ４３ＷＳ１００Ｂにおいて）、トリプトファン残基が、標的タンパク質結合部位に位置し、その結果、トリプトファン変異体の放射は、添加化合物の関数として、３３８ｎｍにて簡単な様式で測定された。このＦ４３Ｗ変異体は、野生型Ｓ１００Ｂの同様の構造、Ｃａ２＋結合特性および標的結合特性を有する。別のアプローチは、野生型Ｓ１００Ｂに蛍光プローブを結合し、この化合物との競合結合アッセイを行うことであった。この場合、蛍光プローブとしてｐ５３から誘導した蛍光ペプチド（Ｆ３８５Ｗ）（ＫＤ＝３．０μＭ）またはＴＲＴＫ−１２ペプチド（ＫＤ＝０．２μＭ）を、化合物との競合研究におけるプローブとして使用した。結合定数を決定するための定常状態実験を、２５℃にて維持した細胞（水晶キュベット）の温度を用いるＡｍｉｎｃｏ Ｂｏｗｍａｎ Ｓｅｒｉｅｓ ２ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒにて実施した。２つの内部コントロールを、すべての力価測定において実施した。ＥＧＴＡをＳ１００Ｂに添加して、カルシウムをキレート化し、そしてその薬物との相互作用が、多数のタンパク質標的について観察されるＣａ２＋依存性コンフォメーション変化を必要とするか否かを決定した（Ｗｅｂｅｒら、上記）。さらに、この力価測定を、コントロールとしてカルシウムの非存在下において実施した。蛍光放射スペクトルを有するすべての化合物をまた、進行前に光脱色について慣用的に評価した。緩衝液もまた、蛍光を発し得るいかなる混入物についても慣用的にチェックした。
【０１２０】
（（ｂ）細胞アッセイ）
化合物が原発性悪性黒色腫細胞（細胞株：Ｃ８１４６ＡおよびＨＴＢ ６４）および正常メラニン形成細胞（Ｃｅｌｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｉｎｃ．新生児包皮からの１０４−０５）の増殖に対して有する効果を、測定した。ペンタミジンは、悪性黒色腫細胞の増殖をむしろ強力に（ＩＣ５０＝５００ｎＭ）阻害することが見出された。正常メラニン形成細胞に対しての効果は弱かった（図１３）。この増殖阻害定数（ＩＣ５０値）は、上記に列挙された他の化合物から生じる。これらの研究において、代表的には約１０，０００個の細胞を、Ｔ２５バイアル全体にわたり均しく分布させた。１日後、上記低分子（２．５μＭまたは２５μＭ）を含むかまたは含まない新しい培地を添加し、そしてその細胞を、さらに１３日間増殖させた。いくつかの分子をＤＭＳＯ中で送達したので、細胞増殖に対するＤＭＳＯ（０．１〜０．２％（ｖ／ｖ））の効果もまた、チェックし、それが、これらのレベルに対して影響を有さないことが見出された（図１３）。この時点において、これらの細胞をリン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）中で洗浄し、トリプシンを用いる処理によって収集し、そして５．０％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、５．０％（ｖ／ｖ）新生仔ウシ血清（ＮＣＳ）、および２．０％（ｗ／ｖ）ペニシリン／ストレプトマイシンを含むＦ１０培地中に配置した。これらの細胞を、４連の試行において、血球計を用いて計数した。
【０１２１】
（（ｃ）ＮＭＲ分光法）
ＮＭＲ分光法実験を、実行して、Ｓ１００Ｂのどのアミノ酸残基と、この低分子とが相互作用しているのかを決定した（図１４）。この低分子と相互作用するＳ１００Ｂの共鳴を、ホロ−Ｓ１００Ｂ中に化合物を力価測定すること、および１５Ｎ編集ＨＳＱＣスペクトルにおいて骨格アミド−プロトン相関関係の化学シフトの変動（ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ）をモニターすること（Ｍｏｒｉら、Ｊ．Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ，Ｂ１０８：９４−９８（１９９５））によって、同定した。試験した低分子すべては、これらのＨＳＱＣ化学シフト変動研究によって決定した場合、ｐ５３結合部位においてＳ１００Ｂと結合することが見出された（図１および図１４を参照のこと）。この化合物−Ｓｌ００Ｂ境界面をマッピングする例が、ホロ−Ｓ１００Ｂと化合物４との間の相互作用について、図１４Ａ〜１４Ｃにおいて提供される。研究した化合物すべての場合と同様に、化合物４は、Ｓ１００ＢのＣ末端（ループ４）および「ヒンジ」と呼ばれるＳ１００Ｂの別の領域（ループ２）と相互作用する。これらの残基は、化合物４との力価測定について、図１４Ｃにおいて赤く強調されている。この低分子に結合したＳ１００Ｂの共鳴割り当てを、３Ｄ ＮＯＥＳＹ−ＨＳＱＣ実験を使用して確認し、Ｄｒｏｈａｔら（１９９８），上記；Ｒｕｓｔａｄｎｉら（２０００），上記；およびＲｕｓｔａｄｎｉら（１９９８），上記に記載されるようなＣａ２＋負荷Ｓ１００Ｂおよびｐ５３ペプチドに結合したＳ１００Ｂの骨格および側鎖の化学シフトもまた、この割当て手順において役立った。Ｓ１００Ｂと相互作用するこのインヒビターの領域を、Ｍａｙｅｒら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１２３：６１０８−６１１７（２００１）により記載された通り、飽和移動差実験（ＳＴＤ）を介するエピトープマッピングを使用して同定した。図１４Ａにおいて、Ｓ１００Ｂ近傍にあるこの化合物のプロトンが、矢印により示される。ＳＴＤを割当てるために、１Ｄ Ｗａｔｅｒｇａｔｅおよび２Ｄ ＴＯＣＳＹ（水抑制を備えるＭＬＥＶパルストレイン（ｐｕｌｓｅ ｔｒａｉｎ）の両方を得た。
【０１２２】
すべてのＮＭＲスペクトルを、４つの振動数チャネルおよび三重共鳴３軸勾配プローブを備えた、Ｂｒｕｋｅｒ ＤＭＸ６００ ＮＭＲ分光計（プロトンについて６００．１３ＭＨｚ）を用いて、３７℃にて得た。すべての場合において、１秒の弛緩遅延を使用した。間接的次元における求積検出を、Ｓｔａｔｅｓ−ＴＰＰＩフェーズサイクリングを用いて得た（Ｍａｒｉｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２８：６１５０−６１５６（１９８９））。
【０１２３】
サンプルは、代表的には、１００〜３００μＭ Ｓ１００Ｂ、３０ ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ ６．５〜７．４）、１０ｍＭ ＣａＣｌ２、０．３ ｍＭ ＮａＮ３、０．４ｍＭ ＥＤＴＡ、５．０ｍＭ ＤＴＴ、５．０％（ｖ／ｖ）Ｄ２Ｏ（ｐＨ ６．５）からなった。サンプル条件を変化することが必要な場合、コントロールＣａ２＋−Ｓ１００Ｂ ＨＳＱＣスペクトルを収集した。すべてのＮＭＲデータを、処理プログラムｎｍｒＰｉｐｅ（Ｄｅｌａｇｌｉｏら、Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．ＮＭＲ，６：２７７−２９３（１９９５））；およびｎｍｒＶｉｅｗ（Ｍｅｒｃｋ））を使用して、コンピューターワークステーションにて処理した。間接次元における時間ドメインデータを、標準的な線形予測ルーチン（Ｚｈｕら、Ｊ．Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ，９８：１９２−１９９（１９９２））を使用して、３分の１以下の分だけ拡張した。すべてのプロトン化学シフトを、３７℃での外部ＴＳＰ（０．０ｐｐｍ）と比較して、４．６５８ｐｐｍとして得たＨ２ＯシグナルまたはＨＤＯシグナルに関して報告した。１５Ｎ化学シフトを、３７℃での０点振動数の以下の比を使用して、間接的に参照した：１５Ｎ対１Ｈについて０．１０１３２９０５（Ｓｐｅｒａら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１３：５４９０−５４９２（１９９１）；Ｌｉｖｅら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１０６：１９３９−１９４１（１９８４）；およびＥｄｉｓｏｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２３９：３−７９（１９９４））．
（（ｄ）構造ベースモデリング）
上記に列挙した化合物の結合、ＨＳＱＣ ＮＭＲ力価測定、飽和移動差測定（ＳＴＤ）、およびＮＭＲドッキング手順に基づいて、合成改変から利益を得る種々の低分子の領域を同定することが、可能であった。最初に、可変リンカー領域を備えるペンタミジン誘導体を、調製した（図１５）。これは、より小さいＳＴＤが、Ｓ１００Ｂとペンタミジンリンカー領域との間で検出されるので、可能であった。最適なサイズのリンカー（すなわち、最も強力なＩＣ５０，ＫＤを生じるリンカー）を、その後、他の「ペンタミジン」様誘導体（上記式（Ｉ）および（ＩＩ）ならびに図１５を参照のこと）の簡単な合成において使用した。
【０１２４】
同様に、ドッキング方法を使用して、Ｓ１００Ｂに緊密に結合する（ＫＤ＜２μＭ）他の化合物の誘導体（化合物３の誘導体および化合物４の誘導体を含む）を誘導した。
【０１２５】
化合物４について、癌細胞中への侵入を容易にするためにより弱い電荷を有する化合物を得るために、強調を与えた。
【０１２６】
（（ｅ）要旨）
Ｓ１００タンパク質は、多数の癌においてアップレギュレートされるので、Ｓ１００タンパク質は、腫瘍進行についてのマーカーとして臨床的に使用される。Ｓ１００Ｂと腫瘍サプレッサーであるｐ５３とのカルシウム依存性相互作用がインビボで生じること、およびこの相互作用がｐ５３機能を阻害することが、本明細書中で発見された。従って、高レベルのＳ１００タンパク質（例えば、Ｓ１００Ｂ）は、Ｓ１００Ｂレベルが上昇した細胞（例えば、悪性黒色腫）における制御されていない細胞増殖に寄与する。原理の証明として、Ｓｌ００Ｂ−ｐ５３相互作用の阻害が、野生型ｐ５３機能を回復することが、示された。従って、Ｓ１００Ｂに結合しｐ５３相互作用を阻害する低分子アナログが、ｐ５３機能を回復することを目的として開発された。このことは達成され、Ｓ１００Ｂに結合し、Ｓ１００Ｂ−ｐ５３複合体形成を阻害し、そして癌細胞（すなわち、悪性黒色腫）の増殖速度をｐ５３機能の回復によって減少するいくつかの化合物が、見出された。これらの化合物の１つであるペンタミジンは、別の目的についてＦＤＡによって認可された薬物であり、従って、この化合物は、徹底的に特徴付けられている。
【０１２７】
（実施例８）
（ｐ５３機能のＳ１００Ｂによる調節についてのモデル）
Ｓ１００Ｂがいかにしてｐ５３機能を調節するかについてのモデルが、図１６において示される。その活性形態で、テトラマーｐ５３の各サブユニットは、Ｚｎ２＋と結合し、そしてループ−シート−ヘリックスＤＮＡ結合ドメインのための足場として役立つ２つの逆平行βシートのサンドイッチを含む（Ｃｈｏら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６５：３４６−３５５（１９９４））。特定のＤＮＡ配列に結合する際（図１６）、ｐ５３は、サイクリン依存性キナーゼインヒビター（ｐ２１ＷＡＦ／ＣＩＰ１）、細胞周期制御タンパク質（サイクリンＧ、ＧＡＤＤ４５）、アポトーシスに関与する遺伝子（すなわち、Ｂａｘ）、および次いでフィードバック制御を介して細胞内部のｐ５３タンパク質を負に調節するタンパク質（例えば、Ｓ１００Ｂおよびｈｄｍ２）（Ｌｅｖｉｎｅら（１９９１），上記；Ｌｅｖｉｎｅ（１９９７），上記；およびＦｒｅｅｄｍａｎら、上記）を含む、下流標的の転写を活性化する。Ｓ１００Ｂについて、そのプロモーター領域に対するｐ５３の親和性は、比較的低く（図８）、このことは、ｐ５３によるＳ１００Ｂの誘導が、より高親和性のプロモーター部位が占められた後（すなわち、ＧＡＤＤ４５、ｐ２１などについて）にだけ生じることを示唆する。ｈｄｍ２について、ｐ５３タンパク質レベルは、ユビキチン媒介経路によってダウンレギュレートされ、そしてｈｄｍ２−ｐ５３相互作用は、Ｎ末端トランス活性化ドメインにおけるｐ５３のリン酸化状態に依存する（Ｓｃｈｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３２３：４９１−５０１（２００２））。ｈｄｍ２と同様に、Ｓ１００Ｂもまた、ｐ５３に直接結合し、そして癌細胞におけるより低いｐ５３タンパク質レベルに寄与する（図１および４、ならびに図６Ａ−６Ｂ）。Ｓ１００Ｂがいかにして細胞内部のｐ５３レベルを低下することに寄与するかについての機構は未だ確立されていないが、ｐ５３テトラマーを解離し（Ｂａｕｄｉｅｒら、上記）そして／またはｐ５３の最もＣ末端側のドメイン（Ｒｕｓｔａｎｄｉら（１９９９）；上記）およびテトラマー化ドメインにおけるにおけるコンフォメーション変化を引き起こすその能力に関連する（図１６）と、考えられる。従って、現在、Ｓ１００Ｂは、（ｉ）ｐ５３により転写レベルで活性化され、かつその後で、（ｉｉ）フィードバック制御を介してｐ５３機能を阻害する、２番目の公知のタンパク質である（図１６）。
【０１２８】
ｈｄｍ２（マウスにおけるｍｄｍ２）とＳ１００Ｂとの間の別の類似性は、両方のタンパク質とｐ５３との相互作用が、リン酸化によって調節されることである（Ｒｕｓｔａｎｄｉら（２０００），上記；Ｓｃｈｏｎら、上記；Ｗｉｌｄｅｒら、上記；およびＢｕｓｃｈｍａｎｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，６０：８９６−９００（２０００））。ｍｄｍ２について、ｐ５３における１つの残基（Ｔ１８）のリン酸化は、ｍｄｍ２結合を阻害し（＞１０倍）、これはその後、ｐ５３が、ｍｄｍ２／ユビキチン依存性分解するのを防ぐ（Ｓｃｈｏｎら、上記；およびＰｉｅｔｔｅら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１５：１００１−１０１０（１９９７））。同様に、ｐ５３のＣ末端におけるリン酸化およびアセチル化は、腫瘍サプレッサーがＳ１００Ｂと相互作用するのを防ぎ得る（Ｒｕｓｔａｎｄｉら（２０００），上記；およびＹｏｕｍｅｌｌら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２４５：５１４−５１８（１９９８））。これもまた顕著であるのは、ｍｄｍ２のＮ末端ドメインの３Ｄ構造が、これはカルシウムに結合しないという事実（Ｍｉｌｎｅｒ−Ｗｈｉｔｅ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２８６：９５７−９６３（１９９９））にも関わらず、Ｓ１００Ｂおよび他のＥＦ−ハンド結合タンパク質（例えば、カルモジュリン）に似ていることである。Ｓ１００タンパク質と同様に、ｍｄｍ２は、構造的ホモログ（ｍｄｍＸ）とヘテロダイマーを形成し、このことは、それ自体の発癌活性を調節する（Ｓｔａｄら、ＥＭＢＯ Ｒｅｐ．，２：１０２９−１０３４（２００１））．その最も活性な形態で、ｐ５３は、Ｘ型４ヘリックスバンドル（ｂｕｎｄｌｅ）を形成するようにダイマーのダイマーとしてＣ末端領域中に保持される、テトラマーである（Ｊｅｆｆｒｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６７：１４９８−１５０２（１９９５）；Ｌｅｅら、Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，１：８７７−８９０（１９９４）；およびＣｌｏｒｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６５：３８６−３９１（１９９４））。このテトラマードメインに対して直接的にＣ末端は、「最もＣ末端」または「Ｃ末端負調節ドメイン」と呼ばれる塩基性領域である。従って、これらのタンパク質（ｈｄｍ２ 対 Ｓ１００Ｂ）の間での重要な区別は、ｐ５３のＣ末端とのＳ１００Ｂの相互作用が、Ｃａ２＋依存性であり（Ｒｕｓｔａｎｄｉら（１９９８），上記；およびＢａｕｄｉｅｒら、上記）、そしてｐ５３生物学をカルシウム媒介性シグナル伝達経路および細胞外増殖応答に連結し得（図１７）；一方で、ｈｄｍ２は、カルシウム非依存性様式でｐ５３のＮ末端に結合することである（Ｍｏｍａｎｄら、上記；およびＰｒｉｖｅｓ，Ｃｅｌｌ，９５：５−８（１９９８））。
【０１２９】
Ｓ１００Ｂとｐ５３との間の相互作用は、細胞周期依存性様式で（すなわち、Ｇ１の間に；図５Ｂ）生じ、さらに、その細胞の内側でリン酸化およびカルシウムレベルによって調節される。この知見は、重要である。なぜなら、Ｇ１期は、ＤＮＡ合成の前に存在し、そしてＤＮＡ損傷に応答してｐ５３についての重要なチェックポイントを構成するからである。このｐ５３ Ｇ１チェックポイントは、ｐ５３下流エフェクター遺伝子のうちの１つであるサイクリン依存性キナーゼインヒビターｐ２１によって媒介される（Ａｐｐｅｌｌａら、上記；Ｐｒｉｖｅｓら（１９９９），上記；およびＶｏｕｓｄｅｎ，上記）。このインヒビターは、ＤＮＡ損傷に応答して、ｐＲｂのリン酸化を阻害しそしてＧ１において細胞を停止する。Ｇ１におけるこの停止は、細胞がそのＤＮＡを修復する時間を可能にし、そして損傷したＤＮＡが娘細胞へと伝達するのを妨げると、考えられる（Ｐｒｉｖｅｓら（１９９９）、上記；およびＶｏｕｓｄｅｎ，上記）。Ｓ１００Ｂは、ｐ５３によるｐ２１のアップレギュレーションを阻害し（Ｌｉｎら，上記）、その結果、細胞周期の停止は、その存在が減少し、そしてその細胞周期は調節されないで進行することが、以前に示された。さらに、Ｇ１の間のＳ１００Ｂとｐ５３との間の相互作用は、Ｓの間にｐ５３が核に侵入するのを阻害し得、そしてさらに、ｐ５３の転写活性を阻害し得る。従って、野生型ｐ５３に対するＳ１００Ｂの全体的効果は、細胞異常（例えば、ｐ５３の非機能性変異体を生じる遺伝子増幅および変異を模倣し得る。
【０１３０】
野生型ｐ５３が存在する場合に癌がいかにして進行するかは完全には明らかではないが、このパラダイムについての１つの可能な説明は、ｐ５３を負に調節するタンパク質（例えば、Ｓ１００Ｂ）のレベルの上昇が妥当であることである。野生型ｐ５３および高レベルのＳ１００Ｂを伴う癌の例は、悪性黒色腫である。興味深いことに、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質（例えば、Ｓ１００Ｂ）は、これらの細胞において上昇し、そして皮膚癌についてのマーカーとして使用される（Ｃｏｃｈｒａｎら、Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｒｅｓ．，３：３２５−３３０（１９９３）；Ｂｏｎｉら、上記；およびＭａｒｋｓら、Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．，１８７：５９−６４（１９９０））。さらに、野生型ｐ５３タンパク質レベルは、Ｓ１００タンパク質を含まない細胞と比較した場合、悪性黒色腫において比較的低い（図２Ａ〜２Ｂ）。原発性皮膚癌細胞について、ｐ５３とＳ１００Ｂとの間に、細胞周期のＧ１の間に直接的相互作用が存在すること、および野生型ｐ５３レベルが、Ｓ１００ＢのＲＮＡに対してアンチセンスであるＲＮＡの添加の際に回復され得ること（図９）が、本発明において示された。この結果は、インビボにおける野生型ｐ５３のダウンレギュレーションにＳ１００Ｂを直接関連つけ、そしてこれは、ｐ５３およびＳ１００Ｂの一過性同時トランスフェクションにおいて以前に観察されたｐ５３タンパク質レベルの大きな減少（Ｌｉｎら、上記）と一致する。これらの結果を心に留めると、Ｓ１００Ｂ−ｐ５３相互作用をブロックして野生型ｐ５３をより正常レベルへと回復する低分子インヒビターは、癌（例えば、悪性黒色腫）の処置のための治療剤として有用であると考えられる。
【０１３１】
本発明は、その特定の実施形態に関して詳細に記載されてきたが、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、種々の変更および改変が本発明においてなされ得ることが、当業者にとって明らかである。
【図面の簡単な説明】
【０１３２】
（図面の詳細な説明）
本特許または本出願のファイルは、色付きで作成された少なくとも１つの図面を含む。色付き図面を含む本特許または本特許出願公開物のコピーは、請求しそして必要な費用を支払えば、特許庁によって提供される。
【図１】図１は、腫瘍サプレッサータンパク質であるｐ５３（標的タンパク質）のＣ末端（アミノ酸３６７〜３８８）とＳ１００ＢとのＣａ２＋依存性相互作用を示す。リボン図が、アポ結合状態、カルシウム結合状態（ホロ結合状態）、およびｐ５３結合状態（ＰＤＢエントリー：アポ−Ｓ１００Ｂ；ホロ−Ｓ１００Ｂ，１Ｂ４Ｃ；ｐ５３結合Ｓ１００Ｂ，１ＤＴ７）におけるＳ１００Ｂの原子解像３次元溶液構造について示される。赤および青で示されるのは、ダイマーＳ１００Ｂのサブユニットであり、腫瘍サプレッサータンパク質であるｐ５３のＣ末端の負調節ドメイン（残基３６７〜３８８）（緑色）と直接相互作用する残基について影を付けた領域（黄色）を含む。大きなコンフォメーション変化が、アポ−Ｓ１００Ｂにカルシウムが付加する際に生じる。このコンフォメーション変化は、ｐ５３（緑色）との結合に関与する残基（黄色）を露出させる。そしてこれは、ホロ−Ｓ１００Ｂへの腫瘍サプレッサーの結合のために必要とされる（Ｒｕｓｔａｎｄｉら（２０００），上記；およびＷｅｂｅｒら、上記）。
【図２】図２Ａおよび２Ｂは、原発性悪性黒色腫細胞（Ｃ８１４６）、およびＳ１００Ｂをほとんど含まないかまたは全く含まないコントロール細胞（神経膠芽細胞腫、Ｕ１１８）における、Ｓ１００Ｂ（図２Ａ）およびｐ５３（図２Ｂ）のウェスタンブロットを示す。Ｓ１００Ｂの量を評価するために使用した組換えＳ１００Ｂのブロットもまた、示される。この図は、黒色腫がＳ１００Ｂレベルを増加させ、そしてｐ５３レベルを減少させたことを示す。
【図３】図３は、ダイマーのアポ−Ｓ１００Ｂ（ββ）の２０個のＮＭＲ構造の立体図であり、２つのＳ１００βサブユニットが、青色および赤色で示されている。
【図４】図４は、Ｃａ２＋負荷Ｓ１００Ｂダイマーと複合体化したｐ５３の負調節ドメインの４０個のＮＭＲ構造の骨格重層の立体図である。２つの異なるＳ１００βサブユニットのヘリックスが、青色および赤色で着色されており、Ｃａ２＋イオンが、藤色であり、そしてｐ５３の２つのサブユニットからのＣ末端（残基３６７−３８８）が、緑色である。
【図５】図５Ａ〜５Ｂは、共免疫沈降実験によって検出された、原発性悪性黒色腫癌細胞における、細胞周期Ｇ１の間のＳ１００Ｂとｐ５３との相互作用を示す。図５Ａは、Ｇ１についてのマーカーとして使用される細胞周期タンパク質であるサイクリンＤ１のウェスタンブロットを示す。図５Ｂは、Ｓ１００Ｂ抗体およびｐ５３抗体を用いる共免疫沈降を示す。Ｓ１００Ｂとｐ５３との相互作用は、非同調化細胞においては（たとえあったとしても）最小限である（図５Ｂ、レーン１）が、その細胞が血清枯渇によって同調化された場合には、有意に増加され、そして１５％（ｖ／ｖ）血清の添加６時間後に、Ｇ１において解放される（図５Ｂ；レーン２、３）。
【図６】図６Ａ〜６Ｂは、Ｓ１００Ｂが、ｐ５３、ｍｄｍ２およびｐ２１のタンパク質レベルを減少することを示す。図６Ａは、ｐ５３でトランスフェクトされ、Ｓ１００Ｂでトランスフェクトされた（＋）かまたはされていない（−）、Ｈ１２９９肺癌細胞のウェスタンブロットを示す。図６Ｂは、Ｓ１００Ｂ（＋）またはｐＣＭＶ（−）で一過性トランスフェクトされ、そして１０ｍｇ／ｍｌブレオマイシンで処理されたかまたはされていない、乳癌ＭＣＦ−７細胞のウェスタンブロットを示す。ｐ５３タンパク質、ｍｄｍ２タンパク質、ｐ２１タンパク質、Ｓ１００Ｂタンパク質およびアクチンタンパク質の位置が、示される。これらの結果は、Ｓ１００Ｂの一過性トランスフェクションが、癌細胞においてｐ５３の機能を阻害することを示す。
【図７】図７は、ｐ５３結合コンセンサス配列と適合するＳ１００Ｂプロモーター領域を示す。ヌクレオチド１７０５〜１７３５は、ｐ５３結合についての２０個のコンセンサスヌクレオチドのうちの２０個に適合する。２つのさらなるｐ５３結合部位が、Ｓ１００Ｂプロモーター中に存在する；ヌクレオチド１４５５〜１４７８は、１６個の部位に適合し、一方、ヌクレオチド１４９〜１６９は、１７個の部位に適合する。ｍｄｍ２（１８／２０）プロモーターおよびＧＡＤＤ４５（１９／２０）プロモーター中のｐ５３結合領域もまた、示される。この図は、３つのｐ５３結合部位が、Ｓ１００Ｂプロモーター中に存在することを示す。
【図８】図８は、ＧＡＤＤ４５遺伝子の３番目のイントロン由来のＤＮＡ（レーン１〜３）およびＳ１００Ｂのプロモーター（２０／２０適合）由来のＤＮＡ（レーン４〜６）に対する、精製ｐ５３の移動度シフトアッセイの結果を示す。遊離プローブ、ｐ５３シフト、およびスーパーシフトバンドが、示される。ＧＡＤＤ４５シフトについて、０．３μｇのｐ５３および５．０ｎｇの標識ＤＮＡが使用され、一方、６．０μｇのｐ５３および２５ｎｇのＳ１００Ｂ標識ＤＮＡが、使用された。これらの結果は、ｐ５３が、Ｓ１００Ｂプロモーターに結合し、そしておそらく、遺伝子（ＧＡＤＤ４５）後にＳ１００Ｂレベルを調節することを示す。これは、ｐ５３が、ＧＡＤＤ４５遺伝子の３番目のイントロン由来のＤＮＡに、Ｓ１００Ｂプロモーター由来のＤＮＡについて見出されるよりも低いｐ５３レベルおよびＤＮＡレベルで結合するからである。
【図９】図９は、小干渉Ｓ１００βアンチセンスＲＮＡ（ｓｉＳ１００β）を用いて黒色腫細胞をトランスフェクションした後の、ｐ５３、Ｓ１００Ｂ、ｐ２１およびアクチンのウェスタンブロット分析を示す。Ｓ１００β＝ダイマーＳ１００Ｂのサブユニット。使用したトランスフェクトＲＮＡの量が、示される。これらの細胞は、トランスフェクションの２４時間後に収集した。これらの結果は、悪性黒色腫細胞における阻害性Ｓ１００Ｂタンパク質生成が、野生型ｐ５３機能を回復することを示す。この実験は、本発明の原理の証明を示す。
【図１０】図１０は、ＣＡＤＤおよびＮＭＲから誘導した構造データおよび動的データを使用する、Ｓ１００Ｂの合理的薬物設計を示す（左図）。本発明において、このアプローチからの研究は、薬物開発のために必要な、Ｓ１００Ｂと結合しかつＳ１００Ｂ−ｐ５３相互作用を阻害するリード化合物（右図、青色）を提供した。
【図１１】図１１は、薬物ペンタミジン（２．５μＭ）の添加によって、コントロール（１．０％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯ；および未処理）に対して、ヒト悪性黒色腫細胞におけるＳ１００Ｂレベルが増加することを示す。野生型ｐ５３レベルは、Ｓ１００Ｂ−ｐ５３相互作用を阻害することを介して、この薬物によって回復される。その後、上昇したｐ５３は、フィードバック機構の一部として、Ｓ１００Ｂをアップレギュレートする（図１６）。このデータは、Ｓ１００Ｂレベルの上昇をモニタリングすることが、特定の薬物がｐ５３機能を回復する能力についてのアッセイとして使用され得ることを、示す。
【図１２】図１２Ａ〜１２Ｂは、ホロ−Ｓ１００Ｂへのペンタミジンイセチオネートの結合研究を示す。図１２Ａは、４．０μＭ Ｆ４３Ｗ Ｓ１００Ｂ、１０ ｍＭ ＣａＣｌ２、４０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ ７．５）を含む溶液中へのペンタミジンイセチオネートの力価測定を示す。図１２Ｂは、Ｆ４３Ｗ Ｓ１００Ｂに結合したペンタミジンの、野生型Ｓ１００Ｂとの競合研究を示す。これらの力価測定において、Ｓ１００Ｂ変異体、Ｆ４３Ｗ、およびペンタミジンイセチオネートの濃度が、この力価測定全体を通して一定に維持された。この競合研究は、野生型ホロ−Ｓ１００Ｂとペンタミジンとの間で、結合定数（ＫＤ）７００ｎＭを生じた。
【図１３】図１３は、原発性悪性黒色腫細胞（Ｃ８１４６Ａ）の増殖に対するペンタミジンイセチオネートの効果を示す。化合物（例えば、ペンタミジンイセチオネート）が、２種類の濃度の薬物（２．５μＭ，２５μＭ）にて原発性黒色腫細胞株を使用して、４連試行でスクリーニングされた。ペンタミジンによる細胞増殖の阻害についてのＩＣ５０が、約５００ｎＭであることが見出された。対照的に、７．５分の１の効果（２５μＭの薬物にて）が、正常新生児メラニン形成細胞における増殖において見出された。これらのデータは、ペンタミジンイセチオネートが、正常なメラニン形成細胞よりも効率的に、原発性悪性黒色腫細胞増殖を阻害し得ることを示す。
【図１４】図１４Ａ〜１４Ｄは、ＮＭＲ分光法を使用するホロ−Ｓ１００Ｂ化合物４結合境界面のマッピングを示す。図１４Ａは、化合物４の構造を示し、これは、飽和移動差（ＳＴＤ）ＮＭＲ実験において決定された、Ｓ１００Ｂと相互作用する化合物の領域を示す（太い矢印）。図１４Ｂは、ホロ−Ｓ１００Ｂに結合する化合物４についてのＳＴＤデータを示す。黒色で示されるのは、ＳＴＤスペクトルであり、赤色で示されるのは、コントロールスペクトルである。図１４Ｃは、ＳＴＤ実験および化学シフト変動（ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ）実験によって決定された、ホロ−Ｓ１００Ｂに結合した化合物４を示すリボン図を示す。ホロ−Ｓ１００Ｂ上にて赤色で示されるのは、化合物４の結合の際の化学シフトの大きな変化を有することが見出された残基である。図１４Ｄは、Ｓ１００Ｂ中の各残基についての化学シフト変化を示し、各残基についての化学シフト変化の大きさを示す。これらのＮＭＲ実験についてのサンプル条件は、１．５ｍＭ 化合物４、０．１５０ｍＭ Ｃａ２＋−Ｓ１００Ｂ、１０ｍＭ ＣａＣｌ２、３０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ ６．５）、５．０ｍＭ ＤＴＴ、０．３ｍＭ ＮａＮ３、および５．０％（ｖ／ｖ）Ｄ２Ｏからなった。化合物４の構造は、下記に示される。これらのデータは、Ｓ１００Ｂ−薬物相互作用を最適化するために必要な、原子解像度でのＳ１００Ｂ−薬物相互作用を特徴付けるための方法を示す。
【図１５】図１５は、種々のサイズのリンカー領域を用いてペンタミジンの誘導体を調製するための合成反応を示す。
【図１６】図１６は、野生型ｐ５３の活性化および不活化についてのモデルを示す。潜伏性（ｌａｔｅｎｔ）ｐ５３の活性化は、ストレス応答依存性共有結合改変（Ｍ）（すなわち、リン酸化、スモイレーション（ｓｕｍｏｙｌａｔｉｏｎ）およびアセチル化）によって達成される。これらの改変は、ｐ５３のＣ末端の負調節ドメイン（緑色のヘリックス）およびｐ５３テトラマードメインを、Ｓ１００タンパク質結合および／または非特異的ＤＮＡ結合から保護すると考えられる。活性化ｐ５３は、核に局在化し、核において、活性化ｐ５３は、アポトーシスに関与する遺伝子（すなわち、ｂａｘ）および細胞周期依存性増殖停止に関与する遺伝子（すなわち、ｐ２１）の転写を、アップレギュレートする。フィードバックコントロール機構の一部として、ｐ５３はまた、それ自体の不活化に関与する遺伝子（すなわち、ｈｄｍ２およびＳ１００Ｂ）の転写をアップレギュレートする。増殖応答の一部として（↑Ｃａ２＋）、Ｓ１００Ｂとｐ５３との間のＣａ２＋依存性相互作用は、ｐ５３におけるコンフォメーション変化およびその腫瘍サプレッサーのテトラマー解離を誘導し、これは、その分解に（すなわち、おそらくｈｄｍ２／ユビキチン依存性経路および／またはプロテアーゼ依存性経路を介する）に寄与する。
【図１７】図１７は、Ｘ線結晶学および／またはＮＭＲ（Ｉｋｕｒａら、Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，７：５２５−５２７（２０００））によって決定された、色付きのコード化された３Ｄ構造とともに、ｐ５３のドメインを示す。ｐ５３ドメインの構造は、溶液中で遊離しているか、あるいはｐ５３結合タンパク質またはｐ５３結合ＤＮＡに結合しているかのいずれかである。
【配列表】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｐ５３へのＳ１００の結合を阻害する化合物を同定する方法であって、
Ｓ１００とｐ５３とを試験化合物の存在下で接触させる工程、および
ｐ５３へのＳ１００の結合の阻害についてアッセイする工程、
を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項３】
ｐ５３を活性化する化合物を同定する方法であって、
試験化合物を、Ｓ１００を発現する細胞と接触させる工程、および
Ｓ１００の過剰発現についてアッセイする工程、
を包含し、該過剰発現は、ｐ５３活性化を示す、方法。
【請求項４】
請求項３に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項５】
ｐ５３を活性化する方法であって、
Ｓ１００およびｐ５３を発現する細胞を、請求項１または請求項３の方法により同定される化合物と接触させる工程、
を包含する、方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項７】
ｐ５３を活性化する方法であって、
Ｓ１００およびｐ５３を発現する細胞を、式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）のいずれかにより示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩と接触させる工程、
を包含し、
式（Ｉ）は
【化１】
であり、
式（Ｉ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、およびＹ８は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｘは、１〜８個の炭素原子を有するアルキルであり、そして
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり；
式（ＩＩ）は
【化２】
であり、式（ＩＩ）において、Ｙ１およびＹ２は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１１、Ｒ１２、およびＲ１３は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、メチルエステル、フェニルケトン、アリールエーテル、アリールチオ、アリールメチレン、酸素、カルボニル、カルボキシレート、エチレン、アミド、エステル、チオエステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より独立して選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり、そして
必要に応じてＲ１１とＲ１２と、またはＲ１２とＲ１３とは、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはＳを含む５員縮合芳香環を形成し得；
式（ＩＩＩ）は
【化３】
であり、式（ＩＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８およびＹ９は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトンおよびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、イミン、エチレン、アミド、エステル、およびチオエステルからなる群より選択され、そして
該フェニル芳香環のうちの１つ以上は、該芳香環のうちの１つ以上の１〜３個の炭素原子をＮ原子で置換することによって、縮合芳香環、ヘテロ芳香環、または縮合芳香環によって置換され得、
式（ＩＶ）は
【化４】
であり、式（ＩＶ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、およびＹ７は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトンおよびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり、
Ｒ１５は、窒素またはＮＯであり、そして
Ｒ１６は、負に荷電した官能基であり；
式（Ｖ）は
【化５】
であり、式（Ｖ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、およびＹ１０は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、そして
Ｒ１およびＲ２は、同じであってもまたは異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり；
式（ＶＩ）は
【化６】
であり、式（ＶＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、およびＹ９は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ５およびＲ６は、各々（ＣＨ２）ｎ１であり、（ＣＨ２）ｎ１においてｎ１は０〜３であり、かつ該（ＣＨ２）ｎ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、ベンズアミジン、フェニル環に連結した１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺ１ｎＨ３−ｎからなる群より選択される要素に連結されており、該ＣＺ１ｎＨ３−ｎにおいて、Ｚ１は、ハロゲン、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチルからなる群より選択され、ｎは、１〜３であり、
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、そして
Ｒ７およびＲ８は、各々、ハロゲン、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチル、およびＣＺ１ｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺ１ｎＨ３−ｎにおいて、Ｚ１は、ハロゲンであり、ｎは、１〜３であり；
式（ＶＩＩ）は
【化７】
であり、式（ＶＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、およびＹ７は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、そして
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり；
式（ＶＩＩＩ）は
【化８】
であり、式（ＶＩＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、およびＹ４は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され；
式（ＩＸ）は
【化９】
であり、式（ＩＸ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、およびＹ８は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、
Ｒ９は、メチル、エチル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチルからなる群より選択され、および
Ｒ１０は、負に荷電した官能基であり；
式（Ｘ）は
【化１０】
であり、式（Ｘ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、Ｙ１０、およびＹ１１は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、そして
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、
式（ＸＩ）は
【化１１】
であり、式（ＸＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、Ｙ１０、およびＹ１ｌは、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、アミン、１〜３個の隣接するアミン、グアニジン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、そして
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、
式（ＸＩＩ）は
【化１２】
であり、式（ＸＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、およびＹ７は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、そして
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり；そして
式（ＸＩＩＩ）は
【化１３】
であり、式（ＸＩＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、およびＹ１０は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、そして
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択される、方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項９】
請求項７に記載の方法であって、前記化合物が、ペンタミジンイセチオネート；｛［（２，３−ジクロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレエート；２−クロロ−５−［Ｎ’（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２−イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸；４−（４−｛［（１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸；１，２−（３−メチルチオトリアジン），３，４−フェニル，６−［（２−メトキシ−フェノキシ）酢酸］モルホリン；４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル］−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸；２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸；５−｛［２−（３−メトキシフェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸；１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸；（３−ベンゾイック）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸；および２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸からなる群より選択される、方法。
【請求項１０】
ｐ５３へのＳ１００の結合を阻害する方法であって、
Ｓ１００およびｐ５３を発現する細胞を、請求項７において規定される式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）のうちのいずれかにより示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩と接触させる工程、
を包含する、方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項１２】
請求項１０に記載の方法であって、前記化合物が、ペンタミジンイセチオネート；｛［（２，３−ジクロロ−アニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレエート；２−クロロ−５−［Ｎ’（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２−イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸；４−（４−｛［（１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸；１，２−（３−メチルチオトリアジン），３，４−フェニル，６−［（２−メトキシ−フェノキシ）酢酸］モルホリン；４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル］−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸；２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸；５−｛［２−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸；１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸；（３−ベンゾイック）−１，３，ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸；および２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸である、方法。
【請求項１３】
癌を処置するための方法であって、
請求項１または３の方法により同定される化合物の有効量を、癌を保有する被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項１４】
癌を処置するための方法であって、
請求項７において規定される式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）のいずれかにより示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩の有効量を、癌を保有する被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法であって、前記化合物が、ペンタミジンイセチオネート；｛［（２，３−ジクロロ−アニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレエート；２−クロロ−５−［Ｎ’（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸；４−（４−｛［（１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸；１，２−（３−メチルチオトリアジン），３，４−フェニル，６−［（２−メトキシフェノキシ）酢酸］モルホリン；４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル］−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸；２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸；５−｛［２−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸；１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸；（３−ベンゾイック）−１，３，ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸；および２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸である、方法。
【請求項１６】
請求項１３または１４に記載の方法であって、前記癌が、黒色腫、星状細胞腫および神経膠腫からなる群より選択される、方法。
【請求項１７】
請求項１または３の方法により同定される化合物と、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤とを含む、抗癌組成物。
【請求項１８】
請求項７において規定される式（Ｉ）−（ＸＩＩＩ）のうちのいずれかにより示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む、抗癌組成物。
【請求項１９】
抗癌組成物であって、
化合物ペンタミジンイセチオネート；｛［（２，３−ジクロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレエート；２−クロロ−５−［Ｎ’（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸；４−（４−｛［（１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸；１，２−（３−メチルチオトリアジン），３，４−フェニル，６−［（２−メトキシフェノキシ）酢酸］モルホリン；４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル］−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸；２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸；５−｛［２−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸；１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸；（３−ベンゾイック）−１，３，ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸；および２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸と、
薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と、
を含む、抗癌組成物。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｐ５３へのＳ１００の結合を阻害する化合物を同定する方法であって、
Ｓ１００とｐ５３とを試験化合物の存在下で接触させる工程、および
ｐ５３へのＳ１００の結合の阻害についてアッセイする工程、
を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項３】
ｐ５３を活性化する化合物を同定する方法であって、
試験化合物を、Ｓ１００を発現する細胞と接触させる工程、および
Ｓ１００の過剰発現についてアッセイする工程、
を包含し、該過剰発現は、ｐ５３活性化を示す、方法。
【請求項４】
請求項３に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項５】
ｐ５３を活性化する方法であって、
Ｓ１００およびｐ５３を発現する細胞を、請求項１または請求項３の方法により同定される化合物と接触させる工程、
を包含する、方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項７】
ｐ５３を活性化する方法であって、
Ｓ１００およびｐ５３を発現する細胞を、式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）のいずれかにより示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩と接触させる工程、
を包含し、
式（Ｉ）は
【化１】
であり、
式（Ｉ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、およびＹ８は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｘは、１〜８個の炭素原子を有するアルキルであり、そして
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり；
式（ＩＩ）は
【化２】
であり、式（ＩＩ）において、Ｙ１およびＹ２は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１１、Ｒ１２、およびＲ１３は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、メチルエステル、フェニルケトン、アリールエーテル、アリールチオ、アリールメチレン、酸素、カルボニル、カルボキシレート、エチレン、アミド、エステル、チオエステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より独立して選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり、そして
必要に応じてＲ１１とＲ１２と、またはＲ１２とＲ１３とは、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはＳを含む５員縮合芳香環を形成し得；
式（ＩＩＩ）は
【化３】
であり、式（ＩＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８およびＹ９は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトンおよびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、イミン、エチレン、アミド、エステル、およびチオエステルからなる群より選択され、そして
該フェニル芳香環のうちの１つ以上は、該芳香環のうちの１つ以上の１〜３個の炭素原子をＮ原子で置換することによって、縮合芳香環、ヘテロ芳香環、または縮合芳香環によって置換され得、
式（ＩＶ）は
【化４】
であり、式（ＩＶ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、およびＹ７は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトンおよびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり、
Ｒ１５は、窒素またはＮＯであり、そして
Ｒ１６は、負に荷電した官能基であり；
式（Ｖ）は
【化５】
であり、式（Ｖ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、およびＹ１０は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、そして
Ｒ１およびＲ２は、同じであってもまたは異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり；
式（ＶＩ）は
【化６】
であり、式（ＶＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、およびＹ９は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ５およびＲ６は、各々（ＣＨ２）ｎ１であり、（ＣＨ２）ｎ１においてｎ１は０〜３であり、かつ該（ＣＨ２）ｎ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、ベンズアミジン、フェニル環に連結した１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺ１ｎＨ３−ｎからなる群より選択される要素に連結されており、該ＣＺ１ｎＨ３−ｎにおいて、Ｚ１は、ハロゲン、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチルからなる群より選択され、ｎは、１〜３であり、
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、そして
Ｒ７およびＲ８は、各々、ハロゲン、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチル、およびＣＺ１ｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺ１ｎＨ３−ｎにおいて、Ｚ１は、ハロゲンであり、ｎは、１〜３であり；
式（ＶＩＩ）は
【化７】
であり、式（ＶＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、およびＹ７は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、そして
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり；
式（ＶＩＩＩ）は
【化８】
であり、式（ＶＩＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、およびＹ４は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され；
式（ＩＸ）は
【化９】
であり、式（ＩＸ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、およびＹ８は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、
Ｒ９は、メチル、エチル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチルからなる群より選択され、および
Ｒ１０は、負に荷電した官能基であり；
式（Ｘ）は
【化１０】
であり、式（Ｘ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、Ｙ１０、およびＹ１１は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、そして
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、
式（ＸＩ）は
【化１１】
であり、式（ＸＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、Ｙ１０、およびＹ１ｌは、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、アミン、１〜３個の隣接するアミン、グアニジン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、そして
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、
式（ＸＩＩ）は
【化１２】
であり、式（ＸＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、およびＹ７は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、そして
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり；そして
式（ＸＩＩＩ）は
【化１３】
であり、式（ＸＩＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、およびＹ１０は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、そして
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択される、方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項９】
請求項７に記載の方法であって、前記化合物が、ペンタミジンイセチオネート；｛［（２，３−ジクロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレエート；２−クロロ−５−［Ｎ’（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２−イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸；４−（４−｛［（１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸；１，２−（３−メチルチオトリアジン），３，４−フェニル，６−［（２−メトキシ−フェノキシ）酢酸］モルホリン；４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル］−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸；２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸；５−｛［２−（３−メトキシフェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸；１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸；（３−ベンゾイック）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸；および２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸からなる群より選択される、方法。
【請求項１０】
ｐ５３へのＳ１００の結合を阻害する方法であって、
Ｓ１００およびｐ５３を発現する細胞を、請求項７において規定される式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）のうちのいずれかにより示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩と接触させる工程、
を包含する、方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項１２】
請求項１０に記載の方法であって、前記化合物が、ペンタミジンイセチオネート；｛［（２，３−ジクロロ−アニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレエート；２−クロロ−５−［Ｎ’（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２−イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸；４−（４−｛［（１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸；１，２−（３−メチルチオトリアジン），３，４−フェニル，６−［（２−メトキシ−フェノキシ）酢酸］モルホリン；４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル］−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸；２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸；５−｛［２−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸；１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸；（３−ベンゾイック）−１，３，ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸；および２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸である、方法。
【請求項１３】
癌を処置するための方法であって、
請求項１または３の方法により同定される化合物の有効量を、癌を保有する被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項１４】
癌を処置するための方法であって、
請求項７において規定される式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）のいずれかにより示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩の有効量を、癌を保有する被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法であって、前記化合物が、ペンタミジンイセチオネート；｛［（２，３−ジクロロ−アニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレエート；２−クロロ−５−［Ｎ’（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸；４−（４−｛［（１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸；１，２−（３−メチルチオトリアジン），３，４−フェニル，６−［（２−メトキシフェノキシ）酢酸］モルホリン；４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル］−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸；２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸；５−｛［２−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸；１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸；（３−ベンゾイック）−１，３，ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸；および２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸である、方法。
【請求項１６】
請求項１３または１４に記載の方法であって、前記癌が、黒色腫、星状細胞腫および神経膠腫からなる群より選択される、方法。
【請求項１７】
請求項１または３の方法により同定される化合物と、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤とを含む、抗癌組成物。
【請求項１８】
請求項７において規定される式（Ｉ）−（ＸＩＩＩ）のうちのいずれかにより示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む、抗癌組成物。
【請求項１９】
抗癌組成物であって、
化合物ペンタミジンイセチオネート；｛［（２，３−ジクロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレエート；２−クロロ−５−［Ｎ’（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸；４−（４−｛［（１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸；１，２−（３−メチルチオトリアジン），３，４−フェニル，６−［（２−メトキシフェノキシ）酢酸］モルホリン；４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル］−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸；２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸；５−｛［２−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸；１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸；（３−ベンゾイック）−１，３，ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸；および２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸と、
薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と、
を含む、抗癌組成物。
【請求項１】
ｐ５３へのＳ１００の結合を阻害する化合物を同定する方法であって、
Ｓ１００とｐ５３とを試験化合物の存在下で接触させる工程、および
ｐ５３へのＳ１００の結合の阻害についてアッセイする工程、
を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項３】
ｐ５３を活性化する化合物を同定する方法であって、
試験化合物を、Ｓ１００を発現する細胞と接触させる工程、および
Ｓ１００の過剰発現についてアッセイする工程、
を包含し、該過剰発現は、ｐ５３活性化を示す、方法。
【請求項４】
請求項３に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項５】
ｐ５３を活性化する方法であって、
Ｓ１００およびｐ５３を発現する細胞を、請求項１または請求項３の方法により同定される化合物と接触させる工程、
を包含する、方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項７】
ｐ５３を活性化する方法であって、
Ｓ１００およびｐ５３を発現する細胞を、式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）のいずれかにより示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩と接触させる工程、
を包含し、
式（Ｉ）は
【化１】
であり、
式（Ｉ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、およびＹ８は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｘは、１〜８個の炭素原子を有するアルキルであり、そして
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり；
式（ＩＩ）は
【化２】
であり、式（ＩＩ）において、Ｙ１およびＹ２は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１１、Ｒ１２、およびＲ１３は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、メチルエステル、フェニルケトン、アリールエーテル、アリールチオ、アリールメチレン、酸素、カルボニル、カルボキシレート、エチレン、アミド、エステル、チオエステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より独立して選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり、そして
必要に応じてＲ１１とＲ１２と、またはＲ１２とＲ１３とは、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはＳを含む５員縮合芳香環を形成し得；
式（ＩＩＩ）は
【化３】
であり、式（ＩＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８およびＹ９は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトンおよびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、イミン、エチレン、アミド、エステル、およびチオエステルからなる群より選択され、そして
該フェニル芳香環のうちの１つ以上は、該芳香環のうちの１つ以上の１〜３個の炭素原子をＮ原子で置換することによって、縮合芳香環、ヘテロ芳香環、または縮合芳香環によって置換され得、
式（ＩＶ）は
【化４】
であり、式（ＩＶ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、およびＹ７は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトンおよびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり、
Ｒ１５は、窒素またはＮＯであり、そして
Ｒ１６は、負に荷電した官能基であり；
式（Ｖ）は
【化５】
であり、式（Ｖ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、およびＹ１０は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、そして
Ｒ１およびＲ２は、同じであってもまたは異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり；
式（ＶＩ）は
【化６】
であり、式（ＶＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、およびＹ９は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ５およびＲ６は、各々（ＣＨ２）ｎ１であり、（ＣＨ２）ｎ１においてｎ１は０〜３であり、かつ該（ＣＨ２）ｎ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、ベンズアミジン、フェニル環に連結した１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺ１ｎＨ３−ｎからなる群より選択される要素に連結されており、該ＣＺ１ｎＨ３−ｎにおいて、Ｚ１は、ハロゲン、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチルからなる群より選択され、ｎは、１〜３であり、
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、そして
Ｒ７およびＲ８は、各々、ハロゲン、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチル、およびＣＺ１ｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺ１ｎＨ３−ｎにおいて、Ｚ１は、ハロゲンであり、ｎは、１〜３であり；
式（ＶＩＩ）は
【化７】
であり、式（ＶＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、およびＹ７は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、そして
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり；
式（ＶＩＩＩ）は
【化８】
であり、式（ＶＩＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、およびＹ４は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され；
式（ＩＸ）は
【化９】
であり、式（ＩＸ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、およびＹ８は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、
Ｒ９は、メチル、エチル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチルからなる群より選択され、および
Ｒ１０は、負に荷電した官能基であり；
式（Ｘ）は
【化１０】
であり、式（Ｘ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、Ｙ１０、およびＹ１１は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、そして
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、
式（ＸＩ）は
【化１１】
であり、式（ＸＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、Ｙ１０、およびＹ１ｌは、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、アミン、１〜３個の隣接するアミン、グアニジン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、そして
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、
式（ＸＩＩ）は
【化１２】
であり、式（ＸＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、およびＹ７は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、そして
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり；そして
式（ＸＩＩＩ）は
【化１３】
であり、式（ＸＩＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、およびＹ１０は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、そして
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択される、方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項９】
請求項７に記載の方法であって、前記化合物が、ペンタミジンイセチオネート；｛［（２，３−ジクロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレエート；２−クロロ−５−［Ｎ’（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２−イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸；４−（４−｛［（１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸；１，２−（３−メチルチオトリアジン），３，４−フェニル，６−［（２−メトキシ−フェノキシ）酢酸］モルホリン；４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル］−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸；２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸；５−｛［２−（３−メトキシフェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸；１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸；（３−ベンゾイック）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸；および２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸からなる群より選択される、方法。
【請求項１０】
ｐ５３へのＳ１００の結合を阻害する方法であって、
Ｓ１００およびｐ５３を発現する細胞を、請求項７において規定される式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）のうちのいずれかにより示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩と接触させる工程、
を包含する、方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項１２】
請求項１０に記載の方法であって、前記化合物が、ペンタミジンイセチオネート；｛［（２，３−ジクロロ−アニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレエート；２−クロロ−５−［Ｎ’（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２−イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸；４−（４−｛［（１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸；１，２−（３−メチルチオトリアジン），３，４−フェニル，６−［（２−メトキシ−フェノキシ）酢酸］モルホリン；４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル］−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸；２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸；５−｛［２−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸；１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸；（３−ベンゾイック）−１，３，ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸；および２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸である、方法。
【請求項１３】
癌を処置するための方法であって、
請求項１または３の方法により同定される化合物の有効量を、癌を保有する被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項１４】
癌を処置するための方法であって、
請求項７において規定される式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）のいずれかにより示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩の有効量を、癌を保有する被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法であって、前記化合物が、ペンタミジンイセチオネート；｛［（２，３−ジクロロ−アニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレエート；２−クロロ−５−［Ｎ’（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸；４−（４−｛［（１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸；１，２−（３−メチルチオトリアジン），３，４−フェニル，６−［（２−メトキシフェノキシ）酢酸］モルホリン；４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル］−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸；２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸；５−｛［２−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸；１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸；（３−ベンゾイック）−１，３，ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸；および２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸である、方法。
【請求項１６】
請求項１３または１４に記載の方法であって、前記癌が、黒色腫、星状細胞腫および神経膠腫からなる群より選択される、方法。
【請求項１７】
請求項１または３の方法により同定される化合物と、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤とを含む、抗癌組成物。
【請求項１８】
請求項７において規定される式（Ｉ）−（ＸＩＩＩ）のうちのいずれかにより示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む、抗癌組成物。
【請求項１９】
抗癌組成物であって、
化合物ペンタミジンイセチオネート；｛［（２，３−ジクロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレエート；２−クロロ−５−［Ｎ’（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸；４−（４−｛［（１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸；１，２−（３−メチルチオトリアジン），３，４−フェニル，６−［（２−メトキシフェノキシ）酢酸］モルホリン；４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル］−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸；２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸；５−｛［２−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸；１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸；（３−ベンゾイック）−１，３，ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸；および２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸と、
薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と、
を含む、抗癌組成物。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｐ５３へのＳ１００の結合を阻害する化合物を同定する方法であって、
Ｓ１００とｐ５３とを試験化合物の存在下で接触させる工程、および
ｐ５３へのＳ１００の結合の阻害についてアッセイする工程、
を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項３】
ｐ５３を活性化する化合物を同定する方法であって、
試験化合物を、Ｓ１００を発現する細胞と接触させる工程、および
Ｓ１００の過剰発現についてアッセイする工程、
を包含し、該過剰発現は、ｐ５３活性化を示す、方法。
【請求項４】
請求項３に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項５】
ｐ５３を活性化する方法であって、
Ｓ１００およびｐ５３を発現する細胞を、請求項１または請求項３の方法により同定される化合物と接触させる工程、
を包含する、方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項７】
ｐ５３を活性化する方法であって、
Ｓ１００およびｐ５３を発現する細胞を、式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）のいずれかにより示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩と接触させる工程、
を包含し、
式（Ｉ）は
【化１】
であり、
式（Ｉ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、およびＹ８は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｘは、１〜８個の炭素原子を有するアルキルであり、そして
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり；
式（ＩＩ）は
【化２】
であり、式（ＩＩ）において、Ｙ１およびＹ２は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１１、Ｒ１２、およびＲ１３は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、メチルエステル、フェニルケトン、アリールエーテル、アリールチオ、アリールメチレン、酸素、カルボニル、カルボキシレート、エチレン、アミド、エステル、チオエステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より独立して選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり、そして
必要に応じてＲ１１とＲ１２と、またはＲ１２とＲ１３とは、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはＳを含む５員縮合芳香環を形成し得；
式（ＩＩＩ）は
【化３】
であり、式（ＩＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８およびＹ９は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトンおよびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、イミン、エチレン、アミド、エステル、およびチオエステルからなる群より選択され、そして
該フェニル芳香環のうちの１つ以上は、該芳香環のうちの１つ以上の１〜３個の炭素原子をＮ原子で置換することによって、縮合芳香環、ヘテロ芳香環、または縮合芳香環によって置換され得、
式（ＩＶ）は
【化４】
であり、式（ＩＶ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、およびＹ７は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトンおよびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり、
Ｒ１５は、窒素またはＮＯであり、そして
Ｒ１６は、負に荷電した官能基であり；
式（Ｖ）は
【化５】
であり、式（Ｖ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、およびＹ１０は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、そして
Ｒ１およびＲ２は、同じであってもまたは異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは１〜３であり；
式（ＶＩ）は
【化６】
であり、式（ＶＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、およびＹ９は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ５およびＲ６は、各々（ＣＨ２）ｎ１であり、（ＣＨ２）ｎ１においてｎ１は０〜３であり、かつ該（ＣＨ２）ｎ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、ベンズアミジン、フェニル環に連結した１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺ１ｎＨ３−ｎからなる群より選択される要素に連結されており、該ＣＺ１ｎＨ３−ｎにおいて、Ｚ１は、ハロゲン、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチルからなる群より選択され、ｎは、１〜３であり、
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、そして
Ｒ７およびＲ８は、各々、ハロゲン、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチル、およびＣＺ１ｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺ１ｎＨ３−ｎにおいて、Ｚ１は、ハロゲンであり、ｎは、１〜３であり；
式（ＶＩＩ）は
【化７】
であり、式（ＶＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、およびＹ７は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、そして
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり；
式（ＶＩＩＩ）は
【化８】
であり、式（ＶＩＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、およびＹ４は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され；
式（ＩＸ）は
【化９】
であり、式（ＩＸ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、およびＹ８は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、
Ｒ９は、メチル、エチル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチルからなる群より選択され、および
Ｒ１０は、負に荷電した官能基であり；
式（Ｘ）は
【化１０】
であり、式（Ｘ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、Ｙ１０、およびＹ１１は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、そして
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、
式（ＸＩ）は
【化１１】
であり、式（ＸＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、Ｙ１０、およびＹ１ｌは、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１およびＲ２は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、アミン、１〜３個の隣接するアミン、グアニジン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、そして
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択され、
式（ＸＩＩ）は
【化１２】
であり、式（ＸＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、およびＹ７は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、そして
Ｒ１は、１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり；そして
式（ＸＩＩＩ）は
【化１３】
であり、式（ＸＩＩＩ）において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、およびＹ１０は、各々、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン、メチルエーテル、メチルケトン、およびメチルエステルからなる群より独立して選択され、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、同じであっても異なっていてもよく、かつ１〜３個の隣接するアミジン、１〜３個の隣接するアミン、１〜３個の隣接するグアニジン、アミド、尿素、カルバミド、カルボネート、カルボキシレート、無水物、チオアミド、チオ尿素、チオカルバミド、チオカルボネート、チオ無水物、ヒドロキシル、エステル、およびＣＺｎＨ３−ｎからなる群より選択され、ＣＺｎＨ３−ｎにおいて、Ｚはハロゲンであり、ｎは、１〜３であり、そして
Ｘ２は、イオウ、ＳＯ２、ＳＯ、ＮＨＳＯ２、メチレン、酸素、カルボニル、エチレン、アミド、イミン、エステルおよびチオエステルからなる群より選択される、方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項９】
請求項７に記載の方法であって、前記化合物が、ペンタミジンイセチオネート；｛［（２，３−ジクロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレエート；２−クロロ−５−［Ｎ’（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２−イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸；４−（４−｛［（１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸；１，２−（３−メチルチオトリアジン），３，４−フェニル，６−［（２−メトキシ−フェノキシ）酢酸］モルホリン；４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル］−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸；２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸；５−｛［２−（３−メトキシフェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸；１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸；（３−ベンゾイック）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸；および２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸からなる群より選択される、方法。
【請求項１０】
ｐ５３へのＳ１００の結合を阻害する方法であって、
Ｓ１００およびｐ５３を発現する細胞を、請求項７において規定される式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）のうちのいずれかにより示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩と接触させる工程、
を包含する、方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、前記Ｓ１００がＳ１００Ｂである、方法。
【請求項１２】
請求項１０に記載の方法であって、前記化合物が、ペンタミジンイセチオネート；｛［（２，３−ジクロロ−アニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレエート；２−クロロ−５−［Ｎ’（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２−イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸；４−（４−｛［（１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸；１，２−（３−メチルチオトリアジン），３，４−フェニル，６−［（２−メトキシ−フェノキシ）酢酸］モルホリン；４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル］−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸；２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸；５−｛［２−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸；１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸；（３−ベンゾイック）−１，３，ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸；および２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸である、方法。
【請求項１３】
癌を処置するための方法であって、
請求項１または３の方法により同定される化合物の有効量を、癌を保有する被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項１４】
癌を処置するための方法であって、
請求項７において規定される式（Ｉ）〜（ＸＩＩＩ）のいずれかにより示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩の有効量を、癌を保有する被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法であって、前記化合物が、ペンタミジンイセチオネート；｛［（２，３−ジクロロ−アニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレエート；２−クロロ−５−［Ｎ’（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸；４−（４−｛［（１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸；１，２−（３−メチルチオトリアジン），３，４−フェニル，６−［（２−メトキシフェノキシ）酢酸］モルホリン；４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル］−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸；２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸；５−｛［２−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸；１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸；（３−ベンゾイック）−１，３，ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸；および２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸である、方法。
【請求項１６】
請求項１３または１４に記載の方法であって、前記癌が、黒色腫、星状細胞腫および神経膠腫からなる群より選択される、方法。
【請求項１７】
請求項１または３の方法により同定される化合物と、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤とを含む、抗癌組成物。
【請求項１８】
請求項７において規定される式（Ｉ）−（ＸＩＩＩ）のうちのいずれかにより示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む、抗癌組成物。
【請求項１９】
抗癌組成物であって、
化合物ペンタミジンイセチオネート；｛［（２，３−ジクロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；｛［（２−ベンゾイル−４−クロロアニリノ）（イミノ）メチル］アミノ｝メタンイミドアミド；２−［２−（３−ニトロフェニル）−２−オキソエトキシ］−５−（トリ−フルオロメチル）ピリジニウム−１−オレエート；２−クロロ−５−［Ｎ’（５−（３−クロロ−４−ベンゾイック）−フラン−２イルメチレン−ヒドラジノ］−安息香酸；４−（４−｛［（１，５−ジメチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ］スルホニル｝アニリノ）−４−オキソブタン酸；１，２−（３−メチルチオトリアジン），３，４−フェニル，６−［（２−メトキシフェノキシ）酢酸］モルホリン；４−｛［２−（３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアジン−６−イル）−アセチル］−ヒドラゾノメチル｝−安息香酸；２−（３−ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸；５−｛［２−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボニル］−アミノ｝−イソフタル酸；１−エチル−６−フルオロ−７−［Ｎ’−（２−ニトロ−ベンジリデン）−ヒドラジノ］−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸；（３−ベンゾイック）−１，３，ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−スルファニル−４−安息香酸；および２−［３−（３−ヒドロキシ−フェニルカルバモイル）−フェニル］−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸と、
薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と、
を含む、抗癌組成物。
【図１】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【公表番号】特表２００６−５０８３３０（Ｐ２００６−５０８３３０Ａ）
【公表日】平成１８年３月９日（２００６．３．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００３−５８１７１５（Ｐ２００３−５８１７１５）
【出願日】平成１５年３月２８日（２００３．３．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／００８６７８
【国際公開番号】ＷＯ２００３／０８４４７５
【国際公開日】平成１５年１０月１６日（２００３．１０．１６）
【出願人】（５０２３９９２３７）ユニバーシティ オブ メリーランド，ボルチモア (5)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年３月９日（２００６．３．９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１５年３月２８日（２００３．３．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／００８６７８
【国際公開番号】ＷＯ２００３／０８４４７５
【国際公開日】平成１５年１０月１６日（２００３．１０．１６）
【出願人】（５０２３９９２３７）ユニバーシティ オブ メリーランド，ボルチモア (5)
【Ｆターム（参考）】
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