グリコーゲンシンターゼキナーゼ３のインヒビター
式（Ｉ）の新規な炭素環式化合物
【化１】
、グリコゲンシンターゼキナーゼ（ＧＳＫ３）の活性をインビトロで阻害する組成物および方法、ならびにＧＳＫ３媒介傷害をインビボで処置する組成物および方法が、提供される。本発明の方法、化合物および組成物は、ＧＳＫ３活性によって媒介される障害を処置する際に、単独でか、または他の薬学的に活性な薬剤と組み合わせて使用され得る。この処置は、例えば、糖尿病、アルツハイマー病、他の神経変性障害（例えば、パーキンソン病およびハンティントン病）、肥満症、アテローム性動脈硬化症心血管疾患、本態的高血圧症、多嚢胞性卵巣症候群、Ｘ症候群、虚血、外傷性脳傷害、双極性傷害、免疫不全または癌の処置である。
【化１】
、グリコゲンシンターゼキナーゼ（ＧＳＫ３）の活性をインビトロで阻害する組成物および方法、ならびにＧＳＫ３媒介傷害をインビボで処置する組成物および方法が、提供される。本発明の方法、化合物および組成物は、ＧＳＫ３活性によって媒介される障害を処置する際に、単独でか、または他の薬学的に活性な薬剤と組み合わせて使用され得る。この処置は、例えば、糖尿病、アルツハイマー病、他の神経変性障害（例えば、パーキンソン病およびハンティントン病）、肥満症、アテローム性動脈硬化症心血管疾患、本態的高血圧症、多嚢胞性卵巣症候群、Ｘ症候群、虚血、外傷性脳傷害、双極性傷害、免疫不全または癌の処置である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）の活性を阻害する炭素環式化合物誘導体、この化合物を含む薬学的組成物、ならびに単独でかまたは他の薬学的に活性な薬剤と組み合わせた化合物および組成物の使用に関する。本発明により提供される化合物および組成物は、ＧＳＫ３活性により媒介される障害（例えば、糖尿病、アルツハイマー病、他の神経変性障害（例えば、パーキンソン病およびハンティングトン病）、肥満、アテローム硬化性心臓血管疾患、本態性高血圧症、多嚢胞性卵巣症候群、Ｘ症候群、虚血、特に大脳虚血、外傷性脳損傷、双極性障害、免疫不全および癌）の処置において有用性を有する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）は、セリン／スレオニンキナーゼであり、これについては２つの異性体（αおよびβ）が同定されている。Ｗｏｏｄｇｅｔｔ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，１６：１７７−８１（１９９１）。両方のＧＳＫ３異性体は、休止細胞において構成的に活性である。ＧＳＫ３は、もともと、直接リン酸化により、グリコーゲンシンターゼを阻害するキナーゼとして同定された。インスリンの活性化の際、ＧＳＫ３は、不活性化され、それにより、グリコーゲンシンターゼの活性化およびおそらく他のインスリン依存性事象（例えば、グルコース輸送）を可能にする。続いて、ＧＳＫ３活性がまた、レセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を介してシグナルを発する他の増殖因子（例えば、インスリン）によって不活性化されることが示された。このようなシグナル伝達分子の例としては、ＩＧＦ−１およびＥＧＦが挙げられる。Ｓａｉｔｏら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，３０３：２７−３１（１９９４）；Ｗｅｌｓｈら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２９４：６２５−２９（１９９３）；およびＣｒｏｓｓら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０３：２１−２６（１９９４）。
【０００３】
ＧＳＫ３活性を阻害する薬剤は、ＧＳＫ３活性により媒介される障害を処置する際に有用である。さらに、ＧＳＫ３の阻害は、増殖因子シグナル伝達経路の活性化を模倣し、従って、ＧＳＫ３インヒビターは、このような経路が不十分に活性である疾患の処置において有用である。ＧＳＫ３インヒビターを用いて処置され得る疾患の例は、以下に記載される。
【０００４】
（糖尿病）
２型糖尿病は、加齢と共に罹患率が上がる疾患である。これは最初に、インスリンに対する上昇した感受性、および循環インスリン濃度の代償的な上昇により特徴付けられ、この後者は、正常な血液グルコースレベルを維持することを必要とする。上昇したインスリンレベルは、膵臓β細胞からの増加した分泌により生じ、そして生じる高インスリン血症は、糖尿病の心臓血管合併症に関連する。インスリン耐性が悪化するにつれて、膵臓β細胞の需要は、膵臓が、もはや適切なレベルのインスリンを供給できなくなるまで確実に増加し、血液中の上昇したグルコースレベルを生じる。最終的に、顕性高血糖症および高脂血症が生じ、糖尿病に関連する壊滅的な長期の合併症（心臓血管疾患、腎不全および失明を含む）に至る。２型糖尿病を生じる正確な機構は、未知であるが、不適切なインスリン応答に加えて、骨格筋への障害性のグルコース輸送および増加した肝臓グルコース産生が生じる。食餌変更は、しばしば効果が無く、従って最終的に、大部分の患者は、この疾患の合併症の進行を予防および／または遅らせる試みにおいて、薬学的介入を必要とする。多くの患者は、インスリン分泌を増加するために入手可能な多くの経口抗糖尿病剤（スルホニルウレアを含む）の１つ以上で処置され得る。スルホニルウレア薬物の例としては、膵臓グルコース産生の抑制のためのメトホルミン、およびトログリタゾン（ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）（インスリン感作薬）が挙げられる。これらの薬剤の有用性にもかかわらず、糖尿病の３０〜４０％は、これらの医薬を使用して適切には制御されず、そして皮下インスリン注射を必要とする。さらに、これらの治療の各々は、関連する副作用を有する。例えば、スルホニルウレアは、低血糖症を生じ得、そしてトログリタゾンは、重篤な肝毒性を生じ得る。現在、糖尿病前症患者および糖尿病患者の処置のための新しく改良された薬物の必要性が存在する。
【０００５】
上記のように、ＧＳＫ３阻害は、インスリン依存性プロセスを刺激し、従って２型糖尿病の処置において有用である。リチウム塩を使用して得られた最近のデータは、この概念の証拠を提供する。リチウムイオンは、最近、ＧＳＫ３活性を阻害することが報告されている。Ｋｌｅｉｎら、ＰＮＡＳ ９３：８４５５−９（１９９６）。１９２４年から、リチウムは、抗糖尿病効果（血漿グルコースレベルを下げる能力、グリコーゲン取込みを増加する能力、インスリンを増強する能力、グルコースシンターゼ活性を上方制御する能力、ならびに皮膚、筋肉および脂肪細胞におけるグリコーゲン合成を刺激する能力を含む）を有することが報告された。しかし、リチウムは、おそらく、ＧＳＫ３以外の分子標的に対する実証された効果のために、ＧＳＫ活性の阻害における使用が広くは受け入れられていない。ＧＳＫ３インヒビターでもあるプリンアナログ５−ヨードツベルジシン（ｉｏｄｏｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）は、同様に、グリコーゲン合成を刺激し、そしてラット肝臓細胞において、グルカゴンおよびバソプレシンによるグリコーゲンシンターゼの不活化を拮抗する。Ｆｌｕｃｋｉｇｅｒ−Ｉｓｌｅｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ２９２：８５−９１（１９９３）；およびＭａｓｓｉｌｌｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ２９９：１２３−８（１９９４）。しかし、この化合物はまた、他のセリン／スレオニンおよびチロシンキナーゼを阻害することが示された。Ｍａｓｓｉｌｌｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ２９９：１２３−８（１９９４）。
【０００６】
（アルツハイマー病）
ＧＳＫ３はまた、アルツハイマー（ＡＤ）に関連する生物学的経路に関与する。ＡＤの特徴的な病理学的特徴は、異常にプロセシングされた形態のアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）（いわゆる、β−アミロイドペプチド（β−ＡＰ））の細胞外プラーク、ならびに大部分が過リン酸化されたτタンパク質からなる対螺旋フィラメント（ＰＨＦ）を含む細胞内の神経原線維変化の発達である。ＧＳＫ３は、ＰＨＦτに特徴的な異常な部位で、インビトロにおいてτタンパク質をリン酸化することが見出された多数のキナーゼの１つであり、そしてこれは、生きた細胞および動物においてτタンパク質をリン酸化することもまた示された唯一のキナーゼである。Ｌｏｖｅｓｔｏｎｅら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ ４：１０７７−８６（１９９４）；およびＢｒｏｗｎｌｅｅｓら、Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ ８：３２５１−３２５５（１９９７）。さらに、ＧＳＫ３キナーゼインヒビターであるＬｉＣｌは、細胞において、τ過リン酸化をブロックする。Ｓｔａｍｂｏｌｉｃら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ ６：１６６４−８（１９９６）。従ってＧＳＫ３活性は、神経原線維変化の生成、従って、疾患の進行に寄与し得る。最近、ＧＳＫ３βは、ＡＤ病因における別の重要なタンパク質、プレセニリン１（ＰＳ１）と会合することが示された。Ｔａｋａｓｈｉｍａら、ＰＮＡＳ ９５：９６３７−９６４１（１９９８）。ＰＳ１遺伝子における変異は、β−ＡＰの増加した産生を導くが、著者らはまた、変異体ＰＳ１タンパク質が、ＧＳＫ３βにより強固に結合し、そしてＰＳ１の同じ領域に結合するτのリン酸化を増強することを示す。
【０００７】
興味深いことに、別のＧＳＫ３基質であるβ−カテニンが、ＰＳ１に結合することもまた示された。Ｚｈｏｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ ３９５：６９８−７０２（１９９８）。細胞質ゾルβカテニンは、ＧＳＫ３によるリン酸化の際の分解に対して標的化され、そして減少したβ−カテニン活性は、β−ＡＰの誘導性ニューロンアポトーシスに対するニューロン細胞の増加した感受性に関連する。従って、ＧＳＫ３βと変異体ＰＳ１との増加した会合は、ＰＳ１変異体ＡＤ患者の脳において観察されたβ−カテニンの低下したレベルの原因であり得、そしてニューロン細胞の死におけるこの疾患に関連した増加の原因である。これらの観察と一致して、ＧＳＫ３センスではなくＧＳＫ３アンチセンスの注射が、インビトロにおけるニューロンに対するβ−ＡＰの病理学的効果をブロックし、細胞死の発生における２４時間の遅延および１時間における１２から３５％への細胞生存の増加をもたらすことが示された。Ｔａｋａｓｈｉｍａら、ＰＮＡＳ ９０：７７８９−９３（１９９３）。これらの後者の研究において、細胞死に対する効果が、細胞内ＧＳＫ３活性を２倍にすることによって（β−ＡＰ投与の３〜６時間以内に）先行し、このことは、ＧＳＫ３の近位にその基質を増やす遺伝的機構に加えて、β−ＡＰが、ＧＳＫ活性を実際に上昇させ得ることを示唆する。ＡＤにおけるＧＳＫ３の役割のさらなる証拠は、ＧＳＫ３のタンパク質発現レベル（しかし、この場合、特異的活性ではない）が、正常な脳組織と比較して、ＡＤのポストシナプトソーム上清において５０％上昇するという観察によって提供される。Ｐｅｉら、Ｊ Ｎｅｕｒｏｐｈａｔｈｏｌ Ｅｘｐ ５６：７０−７８（１９９７）。
【０００８】
さらにより最近では、公知のＧＳＫ３インヒビターである治療濃度のリチウムが、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）切断を妨害することにより、β−ＡＰ産生をブロックすることが示された。Ｐｈｉｅｌら，Ｎａｔｕｒｅ ４２３（２２）：４３５−４３８（２００３）。ＧＳＫ３はまた、神経原線維変化の主な成分であるτタンパク質をリン酸化するので、ＧＳＫ３の阻害は、アミロイド斑および神経原線維変化の両方の減少をもたらし、そしてアルツハイマー病の処置において有用である。
【０００９】
（他のＣＮＳ障害）
上記のリチウムの効果に加えて、双極性障害（躁鬱性症候群）を処置するためのリチウムの使用の長い歴史がある。リチウムに対するこの臨床的応答は、双極性障害の病因におけるＧＳＫ３活性の関与を反映し得、この場合、ＧＳＫ３インヒビターは、この適応症に適切であり得る。この意見を支持して、双極性障害の処置において一般に使用される別の薬物である、バルプロエートもまた、ＧＳＫ３インヒビターであることが、最近示された。Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ７２：１３２７−１３３０（１９９９）。リチウムおよび他のＧＳＫ３インヒビターが双極性障害を処置するように作用し得る１つの機構は、神経伝達物質であるグルタメートにより引き起こされる異常に高レベルの励起に供されたニューロンの生存を増加することである。Ｎｏｎａｋａら、ＰＮＡＳ ９５：２６４２−２６４７（１９９８）。グルタメート誘導性ニューロン興奮毒性はまた、急性損傷（例えば、大脳虚血、外傷性脳損傷および細菌感染におけるような）に関連する神経変性の主な原因であると考えられる。さらに、過剰なグルタメートシグナル伝達は、アルツハイマー病、ハンティングトン病、パーキンソン病、ＡＩＤＳ関連痴呆、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）および多発性硬化症（ＭＳ）のような疾患において見られる慢性ニューロン損傷における因子であると考えられる。Ｔｈｏｍａｓ，Ｊ．Ａｍ．Ｇｅｒｉａｔｒ．Ｓｏｃ．４３：１２７９−８９（１９９５）。従って、ＧＳＫ３インヒビターは、これらおよび他の神経変性障害の有用な処置であると考えられる。
【００１０】
（免疫増強）
ＧＳＫ３は、転写因子ＮＦ−ＡＴをリン酸化し、そしてカルシニューリンの効果とは逆に、その核からの輸送を促進する。Ｂｅａｌｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７５：１９３０−３３（１９９７）。従って、ＧＳＫ３は、ＮＦ−ＡＴを介する早期の免疫応答遺伝子活性化をブロックし、そしてＧＳＫ３インヒビターは、免疫応答の活性化を可能にするかまたは延長する傾向があり得る。従って、ＧＳＫ３インヒビターは、特定のサイトカインの免疫刺激効果を延長し増強すると考えられ、そしてこのような効果は、これらのサイトカインの腫瘍免疫治療、または実際の一般的な免疫治療の可能性を上昇させ得る。
【００１１】
（他の障害）
リチウムはまた、他の生物学的効果を有する。これは、インビトロおよびインビボの両方における造血の強力な刺激因子である。Ｈａｍｍｏｎｄら、Ｂｌｏｏｄ ５５：２６−２８（１９８０）。イヌにおいて、炭酸リチウムは、再発性好中球減少症を排除し、そして他の血球細胞数を正常化した。Ｄｏｕｋａｓら、Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ １４：２１５−２２１（１９８）。リチウムのこれらの効果が、ＧＳＫ３の阻害により媒介される場合、ＧＳＫ３特異的インヒビターは、さらに広い適用を有し得る。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
ＧＳＫ３のインヒビターは、多くの疾患の処置において有用であるため、ＧＳＫ３の新たなインヒビターの同定が非常に所望される。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
（発明の要旨）
グリコゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）活性が、本発明によって提供される特定の炭素環式ベースの誘導体によって、インビトロまたはインビボで阻害され得ることが、驚くべきことに、発見された。本発明の炭素環誘導体は、ＧＳＫ３の特異性をプロセシングすることが見出された。従って、本発明は、グリコゲンシンターゼキナーゼ（ＧＳＫ３）の活性をインビトロで阻害する新規化合物、組成物および方法、ならびにＧＳＫ３媒介傷害をインビボで処置する新規化合物、組成物および方法を提供する。１つの局面において、本発明は、以下の式（Ｉ）の、ＧＳＫ３阻害活性を有する新規化合物：
【００１４】
【化７】
およびその薬学的に受容可能な塩を提供し、ここで：
ＸおよびＹは、独立して、窒素、酸素、および必要に応じて置換された炭素からなる群より選択され；
Ａ１およびＡ２は、必要に応じて置換された、アリール、アリールアミノ、アリールオキシまたはヘテロアリールであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、独立して、水素、ヒドロキシル、ならびに必要に応じて置換された低級アルキル、シクロ低級アルキル、アルキルアミノアルキル、低級アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アリールおよびへテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ’１、Ｒ’２、Ｒ’３およびＲ’４は、独立して、水素、および必要に応じて置換された低級アルキルからなる群より選択され；
Ｒ’２およびＲ’３は、水素、および必要に応じて置換された低級アルキルからなる群より選択され；
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、独立して、水素、ヒドロキシ、ハロ、カルボニル、ニトロ、アミノ、アミド、アミジノ、イミド、シアノ、ならびに置換または非置換の低級アルキル、低級アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシ、アルキルアミノカルボニルオキシ、アリールアミノカルボニルオキシ、ホルミル、低級アルキルカルボニル、低級アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アミノアリール、アルキルスルホニル、スルホンアミド、アミノアルコキシ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アラルキルアミノ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロアラルキルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルキルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、アミジノ、シクロアルキル、シクロアミド、シクロチオアミド、シクロアミジノ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロアミジノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、グアニジニル、アリール、ビアリール、ヘテロアリール、ヘテロビアリール、ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、アリールスルホニルおよびアリールスルホンアミドからなる群より選択される。
【００１５】
本発明の方法、化合物および組成物は、ＧＳＫ３活性によって媒介される障害を処置する際に、単独でか、または他の薬学的に活性な薬剤と組み合わせて使用され得る。この処置は、例えば、糖尿病、アルツハイマー病、他の神経変性障害（例えば、パーキンソン病およびハンティントン病）、肥満症、アテローム性動脈硬化症心血管疾患、本態的高血圧症、多嚢胞性卵巣症候群、Ｘ症候群、虚血、外傷性脳傷害、双極性傷害、免疫不全または癌の処置である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
本発明に従って、グリコゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）活性を、インビトロまたはインビボのいずれかで阻害するための、化合物、組成物および方法が提供される。１つの局面において、本発明は、以下の式（Ｉ）：
【００１７】
【化８】
の、ＧＳＫ３阻害活性を有する新規化合物、およびその薬学的に受容可能な塩を提供する。ここで：
ＸおよびＹは、独立して、窒素、酸素、および必要に応じて置換された炭素からなる群より選択され；
Ａ１およびＡ２は、必要に応じて置換された、アリール、アリールアミノ、アリールオキシまたはヘテロアリールであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、独立して、水素、ヒドロキシル、ならびに必要に応じて置換された低級アルキル、シクロ低級アルキル、アルキルアミノアルキル、低級アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アリールおよびへテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ’１、Ｒ’２、Ｒ’３およびＲ’４は、独立して、水素、および必要に応じて置換された低級アルキルからなる群より選択され；
Ｒ’２およびＲ’３は、水素、および必要に応じて置換された低級アルキルからなる群より選択され；
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、独立して、水素、ヒドロキシ、ハロ、カルボニル、ニトロ、アミノ、アミド、アミジノ、イミド、シアノ、ならびに置換または非置換の低級アルキル、低級アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシ、アルキルアミノカルボニルオキシ、アリールアミノカルボニルオキシ、ホルミル、低級アルキルカルボニル、低級アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アミノアリール、アルキルスルホニル、スルホンアミド、アミノアルコキシ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アラルキルアミノ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロアラルキルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルキルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、アミジノ、シクロアルキル、シクロアミド、シクロチオアミド、シクロアミジノ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロアミジノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、グアニジニル、アリール、ビアリール、ヘテロアリール、ヘテロビアリール、ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、アリールスルホニルおよびアリールスルホンアミドからなる群より選択される。
【００１８】
本発明の１つの現在好ましい実施形態において、ＸおよびＹのうちの少なくとも１つは、窒素である。この群の代表的な化合物としては、ＸおよびＹのうちの一方が窒素であり、そしてＸおよびＹのうちの他方が、酸素、または必要に応じて置換された窒素である、化合物が挙げられる。好ましくは、ＸとＹとの両方が、窒素である。
【００１９】
構成要素Ａ１およびＡ２は、独立して、３〜１０個の炭素環原子および必要に応じて１つ以上のヘテロ原子を有する、芳香族環を構成し得る。従って、１つの実施形態において、Ａ１および／またはＡ２は、必要に応じて置換された、炭素環式アリール、アリールアミノまたはアリールオキシであり得、例えば、置換または非置換のフェニル、フェニルアミノ、フェニルオキシであり得る。あるいは、Ａ１および／またはＡ２は、必要に応じて置換されたヘテロアリールであり得、例えば、置換または非置換のピリジル、ピリミジニル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、トリアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、プリニル、ナフチル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジル、およびベンゾイミダゾリルであり得、これらは、少なくとも１個でありかつ３個未満の置換基で置換され得る。代表的な置換基は、例えば、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、アミジノ、オキサミジノ、アルコキシアミジノ、イミジノ、グアニジノ、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、低級アルキルアミノ低級アルコキシ、低級アルキルカルボニル、低級アラルキルカルボニル、低級ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アミノアルキルおよびシアノアルキルからなる群より独立して選択され得る。
【００２０】
本発明の他の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうちの少なくとも１つは、ｍａｙ ｂｅ 水素、またはハロ低級アルキル、ヘテロシクロアミノアルキル、および低級アルキルアミノ低級アルキルからなる群より選択される、非置換もしくは置換された低級アルキルであり得る。現在好ましい本発明の実施形態は、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３が、水素であり、そしてＲ４が、水素、メチル、エチル、アミノエチル、ジメチルアミノエチル、ピリジルエチル、ピペリジニルエチル、ピロリジニルエチル、ピペラジニルエチルおよびモルホリニルエチルからなる群より選択される化合物を含む。
【００２１】
置換基Ａ１は、３〜１０個の炭素環原子および必要に応じて１つ以上の環ヘテロ原子を有する芳香族環であり得る。従って、１つの実施形態において、Ａ１は、必要に応じて置換された炭素環式アリールであり得る。あるいは、Ａ１は、必要に応じて置換されたヘテロアリール（例えば、置換または非置換のピリジル、ピリミジニル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、トリアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、プリニル、ナフチル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジル、およびベンゾイミダゾリル）であり得、これらは、少なくとも１個でありかつ３個未満の置換基で置換され得る。代表的な置換基は、例えば、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、アミジノ、オキサミジノ、アルコキシアミジノ、イミジノ、グアニジノ、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、低級アルキルアミノ低級アルコキシ、低級アルキルカルボニル、低級アラルキルカルボニル、低級ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アミノアルキルおよびシアノアルキルからなる群より独立して選択され得る。
【００２２】
現在特に好ましい本発明の実施形態において、Ａ１は、以下の式：
【００２３】
【化９】
を有し、ここで、Ｒ８およびＲ９は、水素、ヒドロキシ、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、アミジノ、オキサミジノ、アルコキシアミジノ、イミジノ、グアニジニル、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、アミノ低級アルキル、低級アルキルアミノ低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、低級アルキルアミノ低級アルコキシ、低級アルキルカルボニル、低級アラルキルカルボニル、低級ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アリール、およびアラルキルからなる群より独立して選択される。最も好ましくは、Ａ１は、アミノピリジル、ニトロピリジル、アミノニトロピリジル、シアノピリジル、シアノチアゾリル、アミノシアノピリジル、トリフルオロメチルピリジル、メトキシピリジル、メトキシニトロピリジル、メトキシシアノピリジルおよびニトロチアゾリルからなる群より選択される。
【００２４】
本発明の他の現在好ましい化合物は、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のうちの少なくとも１つが、置換および非置換のアリール、ヘテロアリールおよびビアリールからなる群より選択されるｂｉアリール式（Ｉ）の化合物を含む。現在好ましい実施形態において、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のうちの少なくとも１つは、置換または非置換の、以下の式の部分である：
【００２５】
【化１０】
ここで、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、カルボキシル、ヒドロキシ、ならびに必要に応じて置換された低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、ハロ低級アルキル、ハロ低級アルコキシ、アミノアルキル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アルキルカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアラルキルカルボニルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ アミノカルボニル、低級アルキルアミノカルボニル、アミノアラルキル、低級アルキルアミノアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロヘテロアリール、アラルキル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシアルキル、アルキルカルボニルオキシアルキル、ヘテロアリールカルボニルオキシアルキル、アラルキルカルボニルオキシアルキル、およびヘテロアラルキルカルボニルオキシアルキルからなる群より独立して選択される。Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素であり、そしてＲ１２が、ハロ、低級アルキル、ヒドロキシル、低級アルコキシ、ハロ低級アルキル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、モルホリノ、ピペリジノおよびシアノからなる群より選択される化合物；Ｒ１１、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素であり、そしてＲ１０およびＲ１２が、ハロ、低級アルキル、ヒドロキシル、低級アルコキシ、ハロ低級アルキル、モルホリノ、ピペリジノおよびシアノからなる群より独立して選択される化合物；Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素であり、そしてＲ１２がヘテロアリールである化合物；Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素であり、そしてＲ１２がヘテロシクロアルキルである化合物；ならびにＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４のうちの少なくとも１つが、ハロであり、そしてＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４の残りのものが、水素である化合物という、現在特に好ましい化合物が得られる。好ましくは、Ｒ５およびＲ７のうちの少なくとも１つは、クロロフェニル、ジクロロフェニル、フルオロフェニル、ジフルオロフェニル、ブロモフェニル、ジクロロフルオロフェニル、トリフルオロメチルフェニル、クロロフルオロフェニル、ブロモクロロフェニル、ブロモフルオロフェニル、エチルフェニル、メチルクロロフェニル、エチルクロロフェニル、イミダゾリルフェニル、シアノフェニル、モルホリノフェニルおよびシアノクロロフェニルからなる群より選択される。
【００２６】
本発明の代表的な実施形態において、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、置換されたアルキル（例えば、アラルキル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アミノアラルキル、カルボニルアミノアルキル、アルキルカルボニルアミノアルキル、アリールカルボニルアミノアルキル、アラルキルカルボニルアミノアルキル、アミノアルコキシアルキルおよびアリールアミノアルキル；置換されたアミノ（例えば、アルキルアミノ、アルキルカルボニルアミノ，アルコキシカルボニルアミノ、アリールアルキルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アルキルチオカルボニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、およびヘテロアラルキルカルボニルアミノ）；または置換されたカルボニル（例えば、非置換もしくは置換されたアミノカルボニル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニルおよびアルキルアミノアルキルオキシカルボニル）であり得る。他の実施形態において、Ｒ６は、アミジノ、グアニジノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、シクロアミド、ヘテロシクロアミド、シクロチオアミドおよびヘテロシクロ低級アルキルからなる群より選択され得る。なお他の実施形態において、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のうちの少なくとも１つは、アリール、ヘテロアリール、ｏｒ ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｙｌ ｓｕｃｈ ａｓ，例えば、置換または非置換のピリジル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリニル、ピラジニル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、イミダゾリジニル、オキサジアゾリル、オキサゾリニル、オキサゾリジノニル、テトラゾリル、ピラジニル、ピラゾリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリニル、トリアゾリル、チエニル、フラニル、キノリニル、ピロロピリジル、ピラゾロニル、ピリダジニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジル、ベンゾトリアゾリル、およびベンゾイミダゾリルであり得る。なお他の実施形態において、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のうちの少なくとも１つは、以下の構造：
【００２７】
【化１１】
を有するモノケトピペラジニル基であり、ここで、Ｒ１５およびＲ１６は、水素、低級アルキル、低級アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アリール低級アルキル、低級アルキルアリール低級アルキル、ハロ低級アルキル、ハロアリール低級アルキル炭素環式およびハロアリール低級アルキル複素環式からなる群より独立して選択されるか；またはＲ１６は、別のＲ１６またはＲ１５と一緒になって、炭素環式環、複素環式環またはアリール環を形成し得；そしてｏは、１と３との間の整数である。本発明のこの局面の例示的な実施形態において、Ｒ１５は、低級アルキル（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、およびｔ−ブチル）であるか、または Ｒ１５は、Ｒ１６と一緒になって、以下の構造：
【００２８】
【化１２】
を有する基を形成する。
【００２９】
本明細書中において使用される場合、他の例示的なヘテロシクロ基としては、例えば、以下に示されるものが挙げられる（ここで、置換基の付着点、および以下に示されるほかの置換基は、左上の結合を介する）。これらのヘテロシクロ基は、さらに置換され得、そして本明細書中の開示と組み合わせて、有機化学および医化学の分野の当業者に明らかであるように、種々の位置で付着され得る。
【００３０】
【化１３】
【００３１】
【化１４】
代表的なヘテロアリール基としては、例えば、以下に示されるものが挙げられる。これらのヘテロアリール基は、さらに置換され得、そして本明細書中の開示と組み合わせて、有機化学および医化学の分野の当業者に明らかであるように、種々の位置で付着され得る。
【００３２】
【化１５】
代表的なシクロイミド基およびヘテロシクロイミド基としては、例えば、以下に示されるものが挙げられる。これらのシクロイミド基およびヘテロシクロイミド基は、さらに置換され得、そして本明細書中の開示と組み合わせて、有機化学および医化学の分野の当業者に明らかであるように、種々の位置で付着され得る。
【００３３】
【化１６】
代表的な置換されたアミジノ基およびヘテロシクロアミジノ基としては、例えば、以下に示されるものが挙げられる。これらのアミジノ基およびヘテロシクロアミジノ基は、さらに置換され得、そして本明細書中の開示と組み合わせて、有機化学および医化学の分野の当業者に明らかであるように、種々の位置で付着され得る。
【００３４】
【化１７】
例示的な置換されたアルキルカルボニルアミノ基、アルキルオキシカルボニルアミノ基、アミノアルキルオキシカルボニルアミノ基、およびアリールカルボニルアミノ基としては、例えば、以下に示されるものが挙げられる。これらの基は、さらに置換され得、そして本明細書中の開示と組み合わせて、有機化学および医化学の分野の当業者に明らかであるように、種々の位置で付着され得る。
【００３５】
【化１８】
代表的な置換されたアミノカルボニル基としては、例えば、以下に示されるものが挙げられる。これらのヘテロシクロ基は、さらに置換され得、そして本明細書中の開示と組み合わせて、有機化学および医化学の分野の当業者に明らかであるように、種々の位置で付着され得る。
【００３６】
【化１９】
代表的な置換されたアルコキシカルボニル基としては、例えば、以下に示されるものが挙げられる。これらのアルコキシカルボニル基は、さらに置換され得、そして本明細書中の開示と組み合わせて、有機化学および医化学の分野の当業者に明らかであるように、種々の位置で付着され得る。
【００３７】
【化２０】
この群の現在好ましい例示的な化合物としては、例えば、［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−ニトロフェニル］｛２−［（５−ニトロ （２−ピリジル）アミノ］ エチル｝アミン，｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル）アミノ］ エチル｝［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−ニトロフェニル］−アミン，６−［（２−｛［３−（２，４ジクロロフェニル）−４−ニトロフェニル］ アミノ｝エチルアミノピリジン−３−カルボニトリル、Ｎ−［２−（２，４ジクロロフェニル）−４−（｛２−［（５−シアノ（２−ピリジル））アミノ］ エチル｝−アミノ）フェニル］ アセトアミド、６−［（２−｛［４−アミノ−３−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］ アミノ｝−エチル）アミノピリジン−３−カルボニトリル、Ｎ−［２−（２，４−ジクロロフェニル）−４−（｛２−［（５−シアノ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）フェニル］−２−（メチルアミノ）アセトアミド、［３−（２，４−ジクロロ−フェニル）−４−ニトロフェニル］ メチル｛２−［（５−ニトロ （２−ピリジル））アミノ］ エチル｝アミンおよび｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））アミノ］ エチル｝［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−ニトロフェニル］ メチル−アミンが挙げられる。
【００３８】
別の局面において、本発明は、ある量の式（Ｉ）の化合物を含有する組成物を提供し、この量は、ヒト被験体または動物被験体に、薬学的に受容可能なキャリアと一緒に投与される場合に、ヒト被験体または動物被験体において、ＧＳＫ３活性を調節するために有効な量である。
【００３９】
なお他の実施形態において、本発明は、ヒト被験体または動物被験体において、ＧＳＫ３活性を阻害する方法を提供し、この方法は、ヒト被験体または動物被験体に、式（Ｉ）の化合物を投与する工程を包含する。
【００４０】
本発明は、さらに、ヒト被験体または動物被験体において、ＧＳＫ３媒介障害を処置するための方法であって、該方法は、該ヒト被験体または動物被験体に、該被験体におけるＧＳＫ３活性を阻害するために有効な量の、上記式（Ｉ）の化合物を、単独でか、または他の薬学的に活性な薬剤と組み合わせて投与する工程を包含する。
【００４１】
なお他の実施形態において、本発明は、薬剤として使用するための上記のような式Ｉの化合物、および糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンティントン病、肥満症、アテローム性動脈硬化症の心血管疾患、本態的高血圧症、多嚢胞性卵巣症候群、Ｘ症候群、虚血、外傷性脳傷害、双極性傷害、免疫不全または癌処置のための医薬におけるこれらの化合物の使用方法を提供する。
【００４２】
上記および本明細書中の他の場所において用いられる場合、以下の用語は、以下で定義された意味を有する：
「グリコーゲンシンターゼキナーゼ３」および「ＧＳＫ３」は、本明細書中交換可能に使用され、ヒトＧＳＫ３βアミノ酸配列（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｌ３３８０１）の５６位と３４０位との間のアミノ酸に６０％より多い配列相同性を有する任意のタンパク質をいう。２つのアミノ酸配列または２つの核酸の相同性のパーセントを決定するために、これらの配列は、最適比較の目的のために整列される（例えば、ギャップは、他のポリペプチドまたは核酸との最適配置について１つのポリペプチドまたは核酸の配列に導入され得る）。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置でアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。１つの配列でのある位置が、他の配列の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められる場合、それらの分子は、その位置で相同である（すなわち、本明細書中で使用される場合、アミノ酸または核酸の「相同性」は、アミノ酸または核酸の「同一性」と等しい）。２つの配列間の相同性のパーセントは、これらの配列によって共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、％相同性＝同位置の数／位置の総数×１００）。ＧＳＫ３は、Ｗｏｏｄｇｅｔｔら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，１６：１７７−８１（１９９１）（本明細書中で参考として援用される）に記載されるグリコーゲンシンターゼのリン酸化によってもともと同定された。ＧＳＫ３キナーゼ活性を調節することによって、ＧＳＫ３活性の下流の活性は、阻害され得るか、あるいは刺激され得る。例えば、ＧＳＫ３活性が阻害される場合、グリコーゲンシンターゼは、活性化され得、グリコーゲン産生の増加を生じ得る。ＧＳＫ３はまた、種々の他の状況（例えば、ｃ−ｊｕｎ、β−カテニンおよびτタンパク質のリン酸化を含む）においてキナーゼとして作用することが公知である。ＧＳＫ３キナーゼ活性の阻害が種々の生物学的状況において種々の効果を導き得ることが理解される。しかし、本発明は、本発明が作用する方法に関しての機構の任意の理論によって限定されない。
【００４３】
「ＧＳＫ３インヒビター」とは、本明細書中以下に一般的に記載されるＧＳＫ３阻害性活性についての無細胞アッセイにおいて測定した場合に、約１００μＭ以下、そしてより代表的には約５０μＭ以下のＧＳＫ３に関するＩＣ５０を示す化合物をいうために本明細書中で使用される。「ＩＣ５０」は、酵素（例えば、ＧＳＫ３）の活性を最大レベルの半分へ減少させるインヒビターの濃度である。本発明の代表的な化合物は、ＧＳＫ３に対する阻害性活性を示すことを発見した。本発明の化合物は、好ましくは、無細胞ＧＳＫ３キナーゼアッセイにおいて測定した場合に、約１０μＭ以下、そしてより好ましくは約５μＭ以下、なおより好ましくは約１μＭ以下、最も好ましくは、約２００ｎＭのＧＳＫ３に関するＩＣ５０を示す。
【００４４】
「必要に応じて置換される」とは、水素の、一価または二価のラジカルでの置換をいう。適切な置換基としては、例えば、ヒドロキシル、ニトロ、アミノ、イミノ、シアノ、ハロ、チオ、チオアミド、アミジノ、イミジノ、オキソ、オキソアミジノ、メトキシアミジノ、イミジノ、グアニジノ、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アミノアルキル、シアノアルキルなどが挙げられる。
【００４５】
置換基は、それ自身置換され得る。置換基上で置換される基は、カルボキシル、ハロ；ニトロ、アミノ、シアノ、ヒドロキシル、低級アルキル、低級アルコキシ、アミノカルボニル、−ＳＲ、チオアミド、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２Ｒ、またはシクロアルキルであり得、ここで、Ｒは、代表的に、水素、ヒドロキシルまたは低級アルキルである。
【００４６】
置換された置換基が直鎖基を含む場合、この置換は鎖内（例えば、２−ヒドロキシプロピル、２−アミノブチルなど）または鎖の末端（例えば、２−ヒドロキシエチル、３−シアノプロピルなど）のいずれかで起こり得る。置換された置換基は、共有結合した炭素またはヘテロ原子の直鎖状、分枝状または環状の構造であり得る。
【００４７】
「低級アルキル」は、本明細書中で使用される場合、１〜１０個の炭素原子を含む分枝状または直鎖状のアルキル基であって、非置換であるか、または、例えば１つ以上のハロゲン、ヒドロキシルまたは他の基（例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ネオペンチル、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチルなどが挙げられる）で置換されている基をいう。
【００４８】
語句「アルキル」とは、ヘテロ原子を含まないアルキル基をいう。従って、この語句は、直鎖アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシルなど）を包含する。この語句はまた、直鎖アルキル基の分枝鎖異性体を包含し、この異性体としては、例として提供される以下：−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）などが挙げられるが、これらに限定されない。この語句はまた、環状アルキル基（例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチル）、ならびに上記に規定されるような直鎖アルキル基および分枝鎖アルキル基を包含する。この語句はまた、多環式アルキル基（例えば、アダマンチルノルボルニル、ならびにビシクロ［２．２．０］オクチルならびに上記のような直鎖アルキル基および分枝鎖アルキル基で置換されているような基であるがこれらに限定されない）を包含する。従って、語句非置換アルキル基は、一級アルキル基、二級アルキル基および三級アルキル基を包含する。非置換アルキル基は、親化合物における１以上の炭素原子、酸素原子、窒素原子および／または硫黄原子に結合され得る。好ましい非置換のアルキル基としては、１〜２０個の炭素原子を有する、直鎖アルキル基および分枝鎖アルキル基、ならびに環式アルキル基が挙げられる。より好ましいこのような非置換アルキル基は、１〜１０個の炭素原子を有するが、より好ましくはこのような基は、１〜５個の炭素原子を有する。最も好ましい非置換アルキル基としては、１〜３個の炭素原子を有する、直鎖アルキル基および分枝鎖アルキル基が挙げられ、これらとしては、メチル、エチル、プロピルおよび−ＣＨ（ＣＨ３）２が挙げられる。
【００４９】
「アルキレニル」とは、１〜２０個の炭素原子を有する二価の直鎖状または分枝鎖状の飽和脂肪族ラジカルをいう。本発明の化合物において使用される代表的なアルキレニル基は、その骨格に１〜約６個の炭素原子を有する低級アルキレニル基である。「アルケニル」とは、本明細書中では、１つ以上の二重結合および２〜２０個の炭素原子を有する、直鎖状、分枝状、または環状のラジカルをいう。「アルキニル」とは、本明細書中では、１つ以上の三重結合および２〜２０個の炭素原子を有する、直鎖状、分枝状または環状のラジカルをいう。
【００５０】
「低級アルコキシ」とは、本明細書中で使用される場合、ＲＯ−をいい、ここでＲは低級アルキルである。低級アルコキシ基の代表例としては、メトキシ、エトキシ、ｔ−ブトキシ、トリフルオロメトキシなどが挙げられる。
【００５１】
「シクロアルキル」とは、単環式または多環式の、複素環式または炭素環式のアルキル置換基をいう。代表的なシクロアルキル置換基は、３〜８個の骨格（すなわち、環の）原子を有し、ここで各骨格原子は、炭素またはヘテロ原子のいずれかである。用語「ヘテロシクロアルキル」とは、本明細書中では、１〜５個、そしてより代表的には１〜４個のヘテロ原子をその環構造に有するシクロアルキル置換基をいう。本発明の化合物中で用いられる適切なヘテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄である。代表的なヘテロシクロアルキル部分としては、例えば、モルホリノ、ピペラジニル、ピペラジニルなどが挙げられる。カルボシクロアルキル基は、全ての環原子が炭素であるシクロアルキル基である。シクロアルキル置換基と関連して使用される場合、用語「多環式」とは、本明細書中では、縮合または非縮合のアルキル環式構造をいう。
【００５２】
「ハロ」とは、本明細書中ではハロゲンラジカル（例えば、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素）をいう。「ハロアルキル」とは、１つ以上のハロゲン原子で置換されたアルキルラジカルをいう。用語「ハロ低級アルキル」とは、１つ以上のハロゲン原子で置換された低級アルキルラジカルをいう。用語「ハロアルコキシ」とは、１つ以上のハロゲン原子で置換されたアルコキシラジカルをいう。用語「ハロ低級アルコキシ」とは、１つ以上のハロゲン原子で置換された低級アルコキシラジカルをいう。
【００５３】
「アリール」とは、３〜１４個の骨格炭素またはヘテロ原子を有する、単環式および多環式の芳香族基をいい、そして炭素環式アリール基および複素環式アリール基の両方が含まれる。炭素環式アリール基は、芳香族環の全ての環原子が炭素であるアリール基である。用語「ヘテロアリール」とは、本明細書中では、環原子として１〜４個のヘテロ原子を芳香族環中に有し、この環原子の残りが炭素原子であるアリール基をいう。アリール置換基と関連して使用される場合、用語「多環式」とは、本明細書中では、少なくとも１つの環構造が芳香族（例えば、ベンゾジオキソゾロ（これは、フェニル基に縮合した複素環式構造、すなわち
【００５４】
【化２０Ａ】
、ナフチルなどを有する））である、縮合および非縮合の環状構造をいう。本発明の化合物で置換基として用いられる例示的アリール部分としては、フェニル、ピリジル、ピリミジニル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、チアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、プリニル、ナフチル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジル、およびベンズイミダゾリルなどが挙げられる。
【００５５】
「アラルキル」とは、アリール基で置換されたアルキル基をいう。代表的に、本発明の化合物で用いられるアラルキル基は、このアラルキル基のアルキル部分に組み込まれた１〜６個の炭素原子を有する。本発明の化合物において用いられる適切なアラルキル基としては、例えば、ベンジル、ピコリルなどが挙げられる。
【００５６】
「アミノ」とは、本明細書中では基−ＮＨ２をいう。用語「アルキルアミノ」とは、本明細書中では基−ＮＲＲ’をいい、ここでＲおよびＲ’は、水素または低級アルキルから各々独立して選択される。用語「アリールアミノ」とは、本明細書中では基−ＮＲＲ’をいい、ここでＲはアリールでありそしてＲ’は、水素、低級アルキル、またはアリールである。用語「アラルキルアミノ」とは、本明細書中では基−ＮＲＲ’をいい、ここでＲは低級アラルキルであり、そしてＲ’は、水素、低級アルキル、アリール、または低級アラルキルである。
【００５７】
用語「アリールシクロアルキルアミノ」とは、本明細書中では、基アリール−シクロアルキル−ＮＨ−をいい、ここでシクロアルキルは二価のシクロアルキル基である。代表的に、シクロアルキルは３〜６個の骨格原子を有し、このうち、必要に応じて１〜約４個はへテロ原子である。用語「アミノアルキル」とは、アミノ基で末端置換されたアルキル基をいう。
【００５８】
用語「アルコキシアルキル」とは、基−ａｌｋ１−Ｏ−ａｌｋ２をいい、ここでａｌｋ１は、アルキレニルまたはアルケニルであり、そしてａｌｋ２は、アルキルまたはアルケニルである。用語「低級アルコキシアルキル」とは、アルコキシアルキルをいい、ここでａｌｋ１は、低級アルキレニルまたは低級アルケニルであり、そしてａｌｋ２は、低級アルキルまたは低級アルケニルである。用語「アリールオキシアルキル」とは、基−アルキレニル−Ｏ−アリールをいう。用語「アラルコキシアルキル」とは、基−アルキレニル−Ｏ−アラルキルをいい、ここでアラルキルは低級アラルキルである。
【００５９】
用語「アルコキシアルキルアミノ」とは、本明細書中では、基−ＮＲ−（アルコキシルアルキル）をいい、ここでＲは、代表的には水素、低級アラルキル、または低級アルキルである。用語「アミノ低級アルコキシアルキル」とは、本明細書中ではアミノアルコキシアルキルをいい、ここでこのアルコキシアルキルは低級アルコキシアルキルである。
【００６０】
用語「アミノカルボニル」とは、本明細書中では基−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２をいう。「置換アミノカルボニル」とは、本明細書中では基−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ’をいい、ここでＲは低級アルキルであり、そしてＲ’は水素または低級アルキルである。用語「アリールアミノカルボニル」とは、本明細書中では基−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ’をいい、ここでＲはアリールであり、そしてＲ’は、水素、低級アルキルまたはアリールである。「アラルキルアミノカルボニル」とは、本明細書中では基−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ’をいい、ここでＲは低級アラルキルであり、そしてＲ’は、水素、低級アルキル、アリール、または低級アラルキルである。
【００６１】
「アミノスルホニル」とは、本明細書中では基−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ２をいう。「置換アミノスルホニル」とは、本明細書中では基−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲＲ’をいい、ここでＲは低級アルキルであり、そしてＲ’は水素または低級アルキルである。用語「アラルキルアミノスルホニルアリール」とは、本明細書中では基−アリール−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ−アラルキルをいい、ここで、アラルキルは低級アラルキルである。
【００６２】
「カルボニル」とは、二価の基−Ｃ（Ｏ）−をいう。
【００６３】
「カルボニルオキシ」とは、一般に基−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−をいう。このような基としては、エステル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒが挙げられ、ここでＲは、水素、低級アルキル、シクロアルキル、アリールまたは低級アラルキルである。用語「カルボニルオキシシクロアルキル」とは、本明細書中では一般に「カルボニルオキシカルボシクロアルキル」および「カルボニルオキシヘテロシクロアルキル」（すなわち、ここでＲが、それぞれカルボシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルである）の両方をいう。用語「アリールカルボニルオキシ」とは、本明細書中では基−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−アリールをいい、ここでアリールは単環式または多環式のカルボシクロアリールまたはヘテロシクロアリールである。用語「アラルキルカルボニルオキシ」とは、本明細書中では基−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−アラルキルをいい、ここでアラルキルは低級アラルキルである。
【００６４】
用語「スルホニル」とは、本明細書中では基−ＳＯ２−をいう。「アルキルスルホニル」とは、構造−ＳＯ２Ｒ−の置換スルホニルをいい、ここでＲはアルキルである。本発明の化合物で用いられるアルキルスルホニル基は、代表的に１〜６個の炭素原子をその骨格構造に有する低級アルキルスルホニル基である。したがって、本発明の化合物において用いられる代表的なアルキルスルホニル基としては、例えば、メチルスルホニル（すなわち、Ｒがメチル）、エチルスルホニル（すなわち、Ｒがエチル）、プロピルスルホニル（すなわち、Ｒがプロピル）などが挙げられる。用語「アリールスルホニル」とは、本明細書中では基−ＳＯ２−アリールをいう。用語「アラルキルスルホニル」とは、本明細書中では基−ＳＯ２−アラルキルをいい、ここでアラルキルは低級アラルキルである。用語「スルホンアミド」とは、本明細書中では−ＳＯ２ＮＨ２をいう。
【００６５】
本明細書中で使用される場合、用語「カルボニルアミノ」とは、二価の基−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−をいい、ここでカルボニルアミノ基のアミド窒素の水素原子は、低級アルキル、アリール、または低級アラルキル基に置換され得る。このような基としては、カルバメートエステル（−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ）およびアミド−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＮＲ’−Ｒ（ここで、ＲおよびＲ’は、直鎖または分枝鎖の低級アルキル、シクロアルキル、またはアリール、あるいは低級アラルキルである）のような部分が挙げられる。用語「低級アルキルカルボニルアミノ」とは、アルキルカルボニルアミノをいい、ここでＲは、その骨格構造に１〜約６個の炭素原子を有する低級アルキルである。用語「アリールカルボニルアミノ」とは、基−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒをいい、ここでＲはアリールである。同様に、用語「アラルキルカルボニルアミノ」とは、カルボニルアミノをいい、ここでＲは低級アラルキルである。
【００６６】
本明細書中で使用される場合、用語「グアニジノ」または「グアニジル」とは、グアニジン（Ｈ２Ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２）から誘導された部分をいう。このような部分としては、形式的な（ｆｏｒｍａｌ）二重結合を有する窒素原子で結合したもの（グアニジンの「２」位、例えば、ジアミノメチレンアミノ（Ｈ２Ｎ）２Ｃ＝ＮＨ−））、および形式的な単結合を有する窒素原子のいずれかで結合したもの（グアニジンの「１」位および／または「３」位、例えば、Ｈ２Ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−）が挙げられる。この窒素の任意の水素原子は、低級アルキル、アリールまた低級アラルキルのような適切な置換基で置換され得る。
【００６７】
本明細書中で使用される場合、用語「アミジノ」とは、Ｒ−Ｃ（＝Ｎ）−ＮＲ’−（この基は「Ｎ１」窒素にある）およびＲ（ＮＲ’）Ｃ＝Ｎ−（この基は、「Ｎ２」窒素にある）の部分をいい、ここで、ＲおよびＲ’は、水素、低級アルキル、アリール、または低級アラルキルであり得る。
【００６８】
本発明の化合物は、本明細書中に記載の方法、または当該分野で周知の他の方法を使用して容易に合成され得る。
【００６９】
本発明のＧＳＫ３インヒビター化合物は、例えば、クロマトグラフィー、結晶化などのような公知の方法を使用して精製され得る。
【００７０】
本発明の化合物は、好ましくは、少なくとも他の１つの型のキナーゼと比較して、ＧＳＫ３に対して相対的に実質的に選択的である阻害活性を示す。本明細書中で使用される場合、用語「選択的」とは、少なくとも他の１つの型のキナーゼと比較して、ＧＳＫ３に対する阻害についての相対的により高い効力をいう。好ましくは、本発明のＧＳＫ３インヒビターは、少なくとも２つの他の型のキナーゼと比較して、ＧＳＫ３について選択的である。ＧＳＫ３以外のキナーゼについてのキナーゼ活性アッセイは、一般に公知である。例えば、Ｈａｖｌｉｃｅｋら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４０：４０８−１２（１９９７）（これは、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。ＧＳＫ３選択性は、以下に従って定量化され得る：ＧＳＫ３選択性＝ＩＣ５０（他のキナーゼ）÷ＩＣ５０（ＧＳＫ３）、ここで、ＧＳＫ３インヒビターは、ＩＣ５０（他のキナーゼ）＞ＩＣ５０（ＧＳＫ３）の場合に、ＧＳＫ３について選択的である。したがって、ＧＳＫ３に対して選択的なインヒビターは、ＧＳＫ３以外のキナーゼの阻害に関して１倍より高いＧＳＫ３選択性を示す。本明細書中で使用される場合、用語「他のキナーゼ」とは、ＧＳＫ３以外のキナーゼをいう。このような選択性は、一般に実施例２０に記載される無細胞アッセイで測定される。
【００７１】
代表的に、本発明のＧＳＫ３インヒビターは、他のキナーゼと比較して、ＧＳＫ３について少なくとも約２倍（すなわち、ＩＣ５０（他のキナーゼ）÷ＩＣ５０（ＧＳＫ３））の選択性を示し、より代表的には、これらは少なくとも約５倍の選択性を示す。通常、本発明のＧＳＫ３インヒビターは、少なくとも１つの他のキナーゼと比較して、ＧＳＫ３に対して少なくとも約１０倍、望ましくは少なくとも約１００倍、そしてより好ましくは少なくとも約１０００倍の、選択性を示す。
【００７２】
ＧＳＫ３阻害活性は、本明細書中に記載されるアッセイ、ならびに当業者に一般に公知のアッセイを使用して、容易に検出され得る。ＧＳＫ３の特異的インヒビターを同定するための例示的な方法としては、無細胞アッセイおよび細胞ベースのＧＳＫ３キナーゼアッセイの両方が含まれる。無細胞ＧＳＫ３キナーゼアッセイは、ポリペプチドＧＳＫ３と直接相互作用することによって作用するインヒビターを検出し、一方、細胞ベースのＧＳＫ３キナーゼアッセイは、ＧＳＫ３それ自体との直接相互作用、あるいは、ＧＳＫ３発現の妨害または成熟した活性ＧＳＫ３の産生に必要な翻訳後プロセシングの妨害によって機能するインヒビターを同定し得る。
【００７３】
一般に、無細胞ＧＳＫ３キナーゼアッセイは、以下によって容易に実施され得る：（１）ＧＳＫ３を、ペプチド基質、放射性標識されたＡＴＰ（例えば、γ３３Ｐ−またはγ３２Ｐ−ＡＴＰ、この両方はＡｍｅｒｓｈａｍ，Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ Ｈｅｉｇｈｔｓ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓから入手可能）、マグネシウムイオン、および必要に応じて１つ以上の候補インヒビターと共にインキュベートすること；（２）この混合物を、ＧＳＫ３活性によって放射標識ホスフェートをペプチド基質に取り込むことを可能とする時間インキュベートすること；（３）この酵素反応混合物の全てまたは一部を、均一量の捕捉リガンド（これは、ペプチド基質上のアンカーリガンドに結合し得る）を含む別の容器（代表的には、マイクロタイターウェル）に移すこと；（４）未反応の放射標識ＡＴＰを除去するために洗浄すること；次いで（５）各ウェルに残存する３３Ｐまたは３２Ｐの量を定量すること。この量は、このペプチド基質に取り込まれた放射標識ホスフェートの量を示す。阻害は、このペプチド基質への放射標識ホスフェートの取り込みにおける減少として観察される。
【００７４】
無細胞アッセイにおける使用に適切なペプチド基質は、適切な量のＡＴＰの存在下でＧＳＫ３によってリン酸化され得る、任意のペプチド、ポリペプチドまたは合成ペプチド誘導体であり得る。適切なペプチド基質は、ＧＳＫ３の種々の天然のタンパク質基質の配列の一部に基づき得、そしてまた、Ｎ末端またはＣ末端での改変または伸長（スペーサー配列およびアンカーリガンドを含む）を含み得る。したがって、このペプチド基質は、より大きなポリペプチドに存在し得るか、またはＧＳＫ３によるリン酸化のために設計された単離ペプチドであり得る。
【００７５】
例えば、ペプチド基質は、ＤＮＡ結合タンパク質ＣＲＥＢ（例えば、Ｗａｎｇら，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２２０：３９７−４０２（１９９４）（これは、本明細書中に参考として援用される）に記載されるＣＲＥＢ ＤＮＡ結合タンパク質のＳＧＳＧ連結ＣＲＥＢペプチド配列）の部分配列に基づいて設計され得る。Ｗａｎｇらによって報告されるアッセイにおいて、ＣＲＥＢペプチドのＳＸＸＸＳモチーフのＣ末端セリンは、ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼ（ＰＫＡ）によって酵素的に前リン酸化され、この工程は、Ｎ末端セリンをＧＳＫ３によってリン酸化可能なモチーフにするために必要である。代替として、同じＳＸＸＸＳモチーフを有し、そしてＮ末端アンカーリガンドもまた含むが、その前リン酸化されたＣ末端セリンを用いて合成される、改変されたＣＲＥＢペプチド基質が用いられ得る（このような基質は、Ｃｈｉｒｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＰＴＹ Ｌｔｄ．，Ｃｌａｙｔｏｎ，Ａｕｓｔｒａｌｉａから市販されている）。ペプチド合成の間のＳＸＸＸＳモチーフの第２のセリンのリン酸化は、分離工程としてＰＫＡを残す酵素的リン酸化の必要性を排除し、そしてアンカーリガンドの組み込みは、ＧＳＫ３との反応後のペプチド基質の捕捉を容易にする。
【００７６】
一般に、キナーゼ活性アッセイに使用されるペプチド基質は、ＧＳＫ３によってリン酸化可能な１つ以上の部位、および他のキナーゼによってリン酸化されるがＧＳＫ３によってはリン酸化されない１つ以上の他の部位を含み得る。したがって、これらの他の部位は、ＧＳＫ３によってリン酸化可能なモチーフを作製するために前リン酸化され得る。用語「前リン酸化された」とは、本明細書中では、基質ペプチドを用いるキナーゼアッセイを行う前の、非放射標識ホスフェートでのこの基質ペプチドのリン酸化をいう。このような前リン酸化は、ペプチド基質の合成の間に、好都合に行われ得る。
【００７７】
ＳＧＳＧ結合ＣＲＥＢペプチドは、ビオチンのようなアンカーリガンドに結合され得、ここでＰとＹとの間のＣ末端付近のセリンが前リン酸化される。本明細書中で使用される場合、用語「アンカーリガンド」とは、捕捉リガンド上のペプチド基質の捕捉を容易にするためにペプチド基質に結合し得るリガンドをいい、そしてこれは、洗浄工程の間にこのペプチド基質を適切な位置に保持するように機能し、なお未反応の放射標識ＡＴＰの除去を可能にする。例示的なアンカーリガンドはビオチンである。用語「捕捉リガンド」とは、本明細書中では、高親和性でアンカーリガンドに結合し得る分子をいい、そしてこれは固体構造体に結合される。結合捕捉リガンドの例としては、例えば、アビジンコーティングまたはストレプトアビジンコーティングされたマイクロタイターウェルまたはアガロースビーズが挙げられる。捕捉リガンドを保有するビーズは、シンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）にさらに結合し得、捕捉された放射標識基質ペプチドの検出手段を提供するか、または後の工程で捕捉したペプチドにシンチラントが加えられ得る。
【００７８】
捕捉された放射標識ペプチド基質は、公知の方法を使用してシンチレーションカウンターで定量化され得る。このシンチレーションカウンターで検出されるシグナルは、このペプチド基質の制限された部分のみ（例えば、２０％未満）がリン酸化される条件下でこの酵素反応がなされた場合、ＧＳＫ３活性に比例する。この反応の間にインヒビターが存在する場合、ＧＳＫ３活性は減少し、したがってより少量の放射標識ホスフェートがペプチド基質に取り込まれる。そのため、より低いシンチレーションシグナルが検出される。結果的に、ＧＳＫ３阻害活性は、反応の間にインヒビターが存在しないネガティブコントロールで観測されるものと比較した、シンチレーションシグナルの減少として検出される。このアッセイは、本明細書中以下の実施例２６５により詳細に記載される。
【００７９】
細胞ベースのＧＳＫ３キナーゼ活性アッセイは、代表的には、ＧＳＫ３およびＧＳＫ３基質の両方（例えば、ＧＳＫ３をコードする遺伝子で形質転換された細胞およびその基質）（この遺伝子の発現のための調節制御配列を含む）を発現し得る細胞を用いる。細胞ベースのアッセイの実施において、この遺伝子を発現し得る細胞は、本発明の化合物の存在下でインキュベートされる。この細胞は溶解され、そしてこのリン酸化形態における基質の割合が決定される（例えば、ＳＤＳ ＰＡＧＥ上で非リン酸化形態と比較したその移動度を観察することによって、または基質のリン酸化形態に特異的な抗体によって認識される基質の量を決定することによって）。基質のリン酸化の量は、この化合物の阻害活性を示す（すなわち、阻害は、インヒビターが存在せずに行われたアッセイと比較した、リン酸化の減少として検出される）。細胞ベースのアッセイにおいて検出されたＧＳＫ３阻害活性は、例えば、ＧＳＫ３の発現の阻害に起因し得るか、またはＧＳＫ３のキナーゼ活性の阻害によるものであり得る。
【００８０】
従って、細胞ベースアッセイはまた、ＧＳＫ３阻害（例えば、τタンパク質リン酸化、インシュリン信号伝達の相乗作用などの阻害）によって影響を与えられる活性について特異的にアッセイするために使用され得る。例えば、ＧＳＫ３インヒビターが微小管結合τタンパク質のアルツハイマー様リン酸化を阻害する能力を評価するために、細胞は、ヒトＧＣＫ３βおよびヒトτタンパク質を用いて同時トランスフェクトされ得、次いで１つ以上の候補インヒビターと共にインキュベートされ得る。種々の哺乳動物細胞株および発現ベクターは、このタイプのアッセイに対して使用され得る。例えば、ＣＯＳ細胞は、Ｓｔａｍｂｏｌｉｃら、１９９６、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ ６：１１６４−６８（本明細書中に参考として援用される）に記載のプロトコルに従うヒトＧＳＫ３β発現プラスミド、およびｐＳＧ５などの発現プラスミド（初期ＳＶ４０プロモーターの元でヒトτタンパク質をコードする配列を含む）の両方を用いてトランスフェクトされ得る。本明細書中に参考として援用されるＧｏｅｄｅｒｔら、ＥＭＢＯ Ｊ．，８：３９３−３９９（１９８９）をまた参照のこと。τのアルツハイマー様リン酸化は、細胞を溶解後、例えばＰｏｌｙｍｅｄｃｏ Ｉｎｃ．（Ｃｏｒｔｌａｎｄｔ Ｍａｎｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）から入手可能なＡＴ８などの特異的な抗体を用いてたやすく検出され得る。このアッセイは、本明細書中、以下の実施例においてさらに詳細に記載される。
【００８１】
同様に、ＧＳＫ３インヒビター化合物がグリコーゲンシンターゼを活性化するによってインシュリンシグナル伝達を強化する能力は、細胞ベースグリコーゲンシンターゼ活性アッセイを使用してたやすく確かめられ得る。このアッセイは、グリコーゲンシンターゼ活性を増加することによってインシュリン刺激に応答する細胞（例えば、野生型インシュリンレセプターを過剰発現するＣＨＯ−ＨＩＲＣ細胞株（約１００，０００結合部位／細胞））を使用する。ＣＨＯ−ＨＩＲＣ細胞株は、Ｍｏｌｌｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６５：１４９７９−１４９８５（１９９０）およびＭｏｌｌｅｒら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，４：１１８３−１１９１（１９９０）（共に本明細書中に参考として援用される）に記載されるように産生され得る。アッセイは、血清枯渇ＣＨＯ−ＨＩＲＣ細胞を培地において本発明の種々の濃度の化合物の存在下でインキュベートし、引き続きインキュベーション期間の終わりに細胞を溶解することによって実施され得る。グリコーゲンシンターゼ活性は、Ｔｈｏｍａｓら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２５：４８６−４９９（１９６８）に記載のように溶解物中において検出され得る。グリコーゲンシンターゼ活性は、各サンプルに対して、Ｔｈｏｍａｓら（上記）に記載のように最大グリコーゲンシンターゼ活性のパーセンテージとして見積もられ、そして候補ＧＳＫ３インヒビター濃度の関数としてプロットされ得る。グリコーゲンシンターゼ活性を増加する候補ＧＳＫ３インヒビターの最大濃度の半分の濃度（すなわちＥＣ５０）は、当業者に周知の慣用的な曲線適合方法を使用して４つのパラメーターＳ字状曲線に合うようにすることによって計算され得る。このことは、本明細書中下の実施例２６６により詳細に記載される。
【００８２】
ＧＳＫ３インヒビターは、例えば、当業者に周知の方法を使用してインビボ活性についてたやすくスクリーニングされ得る。例えば、２型糖尿病の処置において強力な治療活性を有する候補化合物は、２型糖尿病の動物モデルにおいてグルコース耐性を改善する能力を検出することによってたやすく同定され得る。特に、候補化合物は、糖尿病のマウス（例えば、ＫＫ、ｄｂ／ｄｂ、ｏｂ／ｏｂ）または糖尿病ラット（例えば、Ｚｕｃｋｅｒ Ｆａ／ＦａまたはＧＫ）のいずれかにおいてグルコースボーラスの投与の前に任意のいくつかの経路を使用して投薬され得る。候補化合物およびグルコースの投与に引き続いて、血液サンプルが、前もって選択された時間間隔で取り出され、そして血清グルコースおよびインシュリンレベルについて評価される。上昇した分泌レベルの内因性のインシュリンが存在しない改善されたグルコースの処理は、インシュリン感作と考察され得、そして化合物効果を示し得る。本アッセイの詳細な記載は、本明細書中以下の実施例において提供される。
【００８３】
同様に、ＧＳＫインヒビターは、例えば、当業者に周知の方法を使用して、神経保護活性について容易にスクリーニングされ得る。例えば、潜在的な神経保護活性を有する候補化合物は、Ｍａｉｅｒら（Ｍａｉｅｒ、Ｃ．Ｍ．ら、「Ｏｐｔｉｍａｌ ｄｅｐｔｈ ａｎｄ ｄｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｌｄ ｈｕｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｉｎ ａ ｆｏｃａｌ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ」Ｓｔｒｏｋｅ ２９：２１７１−２１８０（１９９８））の中脳動脈閉塞によって容易に同定され得る。このモデルにおいて、成体雄性ラットは、麻酔される。右大腿動脈は、血圧をモニタリングすること、血液サンプルを回収すること、ならびに生理食塩水の注入および実験化合物の導入について特徴付けられる。発作は、中脳動脈を閉塞するためにモノフィラメント縫合糸を挿入することによって作られる。縫合糸は２時間そのままにしておく。縫合糸を除去した後、組織を２２〜７２時間再灌流する。化合物は、虚血の発症前、発症中、または発症後に投与され得る。２４〜７２時間後、生存する動物を安楽死させ、脳を直ぐに取り出し、切り出す。脳の切片を、塩化テトラゾリウム、ヘマトキシリンおよびエオジン、クリスタルバイオレットならびに免疫組織学について処理する。梗塞領域は、光学顕微鏡によって決定し、そして全左半球領域の割合として表す。本発明の好ましいＧＳＫ２インヒビターは、ＭＣＡＯモデルにおける梗塞のサイズを減少させる。
【００８４】
本発明のＧＳＫインヒビターは、Ｍａｎｄｉｒら（Ｍａｎｄｉｒ，Ａ．Ｓ．ら、「Ｐｏｌｙ（ＡＤＲ−ｒｉｂｏｓｅ）ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａｔｅｓ１−ｍｅｔｈｙｌ−４−ｐｈｅｎｙｌ−１，２，３，６−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒｉｄｉｎｅ（ＭＰＴＰ）−ｉｎｄｕｃｅｄ ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ」、Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．９６（１０）：５７７４−５７７９（１９９９）のメチルフェニルテトラヒドロピリジン（ＭＰＴＰ）モデルを用いて、抗パーキンソン病活性について容易にスクリーニングされる。パーキンソン病は、黒質における神経の選択的変性によって特徴付けられる。インビトロでは、活性代謝産物ＭＰＰ＋に転換されるＭＰＴＰは、霊長類において亜急性のパーキンソンニズムを引き起こし、げっ歯類において黒質ニューロンの変性を引き起こす。この疾患の進行を混乱させるかまたは遅延させ得る化合物を評価するために、ＭＰＴＰげっ歯類モデルが使用される。成体ラットまたはマウスは、ＭＰＴＰの２〜４回の腹腔内注射を、２〜１２時間間隔（３０ｍｇ／ｋｇ）で与えられることにより、ドーパミン黒質線条体（ｎｉｇｏｓｔｒｉａｔａｌ）経路の破壊を引き起こす。ＧＫＳインヒビターは、浸透圧性ミニポンプを介して静脈内に連続的に７日間にわたって投与される。動物を安楽死させ、脳を取りだす。脳の領域を、チロシンヒドロキシラーゼ線維、アポトーシス細胞、およびドーパミンの存在について分析する。本発明の好ましいＧＳＫ３インヒビターは、黒質におけるニューロンおよび線維の生存の増加を実証する。
【００８５】
本発明のＧＳＫ３インヒビターは、Ａｎｄｅｒｓｏｎら（Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｄ．ら、「Ｃｉｌｉａｒｙ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｓｔｒｉａｔａｌ ｏｕｔｐｕｔ ｎｅｕｒｏｎｓ ｉｎ ａｎ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ ｄｉｓｅａｓｅ」、Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．９３：７３４６−７３５１（１９９６））のキノリン酸傷害モデルを用いて、抗ハンチントン活性について容易にスクリーニングされる。このモデル系において、成体ラットにキノリン酸の一側性線条体注射を与える。これは、７日後に線条体において著しい細胞喪失を引き起こす。ＡＱ注射時および７日間の回復期間の間でのＧＳＫ３インヒビターを用いた処置は、ＯＡが組織学的に評価されるような線条体損傷を誘発することを阻害するはずである。
【００８６】
本発明のＧＳＫ３インヒビターの活性はまた、Ａｌｂｅｒｉら（Ａｌｂｅｒｉ，Ｓ．ら、「Ａｘｏｔｏｍｉｚｅｄ ｎｅｏｎａｔａｌ ｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎｓ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｔｈｅ ｂｃｌ−２ ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ ｒｅｔａｉｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｐｐｅｒｔｉｅｓ」、Ｐ．Ｎ．Ｓ．Ａ．９３：３９７８−３９８３（１９９６））の運動神経変性モデルを用いて評価され得る。このモデルにおいて、２〜４週齢のラットにおける顔面神経の一側性軸策は、顔面神経核において運動神経の４０〜９０％の死を生じる。ＧＫＳ３インヒビターは、ゲルフォームスポンジまたは注射によって傷害部位に導入される。傷害から７〜１０日後、動物を安楽死させ、顔面神経核の運動神経を染色（クリスタルバイオレット）し、そしてカウントする。本発明の好ましいＧＳＫ３インヒビターは、顔面神経を傷害誘導性死から保護する。
【００８７】
本発明の化合物は、無機酸または有機酸由来の塩の形態で使用され得る。これらの塩として、以下が挙げられるがそれらに限定されない：アセテート、アジパート、アルギナート、シトラート、アスパルテート、ベンゾアート、ベンゼンスルホナート、重硫酸塩、ブチラート、ショウノウ酸塩（ｃａｍｐｈｏｒａｔｅ）、ショウノウスルホン酸塩（ｃａｍｐｈｏｒｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、ジグルコナート（ｄｉｇｌｕｃｏｎａｔｅ）、シクロペンタンプロピオナート、ドデシル硫酸塩、エタン硫酸塩、グルコノヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、エキサノン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタン硫酸塩、ラクタート、マレアート、メタン硫酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレン硫酸塩、オキザラート、パモエート、ペクチン酸塩（ｐｅｃｔｉｎａｔｅ）、硫酸塩、３−フェニルポリピオナート、ピクリン酸塩、ピバレート、プロピオナート、スクシナート、タータラート、チオシアン酸塩、ｐ−トルエン硫酸塩、およびウンデカン酸塩。また、塩基性窒素含有基は、以下のような因子で４級化され得る：低級アルキルハロゲン化物（例えば、塩化、臭化、およびヨウ化のメチル、エチル、プロピル、およびブチル）；硫酸ジアルキル（硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸ジブチル、および硫酸ジアミルのような）、長鎖ハロゲン化物（例えば、塩化、臭化、およびヨウ化のデシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリル）、アラルキルハロゲン化物（臭化ベンジル、および臭化フェネチルおよび他のような）。これによって、水または油溶解性または分散性の生成物が得られる。
【００８８】
薬学的に受容可能な酸付加塩を形成するために使用され得る酸の例として、塩酸、硫酸およびリン酸などの無機酸ならびにシュウ酸、マレイン酸、コハク酸およびクエン酸などの有機酸が挙げられる。塩基付加塩は、最終単離および式（Ｉ）の化合物の精製の間にインサイチュにおいて、またはカルボン酸部分を適切な塩基（例えば、薬学的に受容可能な金属カチオンの水酸化物、炭酸塩もしくは重炭酸塩）またはアンモニア、または有機一級、二級もしくは三級アミンと別個に反応することによって調製され得る。薬学的に受容可能な塩として以下が挙げられるがそれらに限定されない：アルカリ金属およびアルカリ土類金属に基づくカチオン（例えばナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム塩など）、ならびに非毒性アンモニウム、四級アンモニウム、およびアミンカチオン（アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリエチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどが挙げられるがこれらに限定されない）。塩基付加塩の形成に有用である他の代表的な有機アミンとして、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ピペラジンなどが挙げられる。
【００８９】
本発明の化合物は、経腸経路、非経口経路および局所的経路を含む種々の投与法で投与され得る。例えば、適切な投与形態としては、経口、皮下、経皮、経粘膜、イオン導入、静脈内、筋内、腹腔内、鼻腔内、硬膜下、直腸などが挙げられる。
【００９０】
本発明の他の実施形態に従って、薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤と一緒に、本発明のＧＳＫ３インヒビター化合物を含有する組成物が提供される。
【００９１】
適切な薬学的に受容可能な賦形剤は、プロセシング剤および薬物送達調節剤および増強剤（例えば、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、単糖、二糖、デンプン、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デキストロース、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、ポリビニルピロリドン、低融点ワックス、イオン交換樹脂など、ならびにこれらの任意の２種以上の組み合わせ）を含む。他の適切な薬学的に受容可能な賦形剤は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ Ｐｕｂ，Ｃｏ．、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ（１９９１）（これは、本明細書中で参考として援用される）に記載される。
【００９２】
本発明のＧＳＫ３インヒビター化合物を含有する薬学的組成物は、意図された投与方法に適切な任意の形態（例えば、溶液、懸濁液または乳濁液）であり得る。液体キャリアは、代表的に、溶液、懸濁液、および乳濁液を調製する際に使用される。本発明の実施において使用するために意図された液体キャリアとしては、例えば、水、生理食塩水、薬学的に受容可能な有機溶媒、薬学的に受容可能な油または脂肪など、ならびにこれらの２種以上の混合物が挙げられる。液体キャリアは、他の適切な薬学的に受容可能な添加剤（例えば、可溶化剤、乳化剤、栄養素、緩衝液、保存剤、懸濁剤、増粘剤、粘度調節剤、安定剤など）を含み得る。適切な有機溶媒としては、例えば、一価アルコール（例えば、エタノール）および多価アルコール（例えば、グリコール）が挙げられる。適切な油としては、例えば、大豆油、ココナツ油、オリーブ油、ベニバナ油、綿実油などが挙げられる。非経口投与について、キャリアはまた、油性エステル（例えば、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピルなど）であり得る。本発明の組成物は、微粒子、マイクロカプセル、リポソーム封入など、ならびにこれらの２種以上の組み合わせの形態であり得る。
【００９３】
本発明の化合物は、所望のように、従来の非毒性の薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントおよびビヒクルを含有する投薬単位処方物で、経口的に、非経口的に、舌下で、吸入スプレーによって、直腸的に、または局所的に投与され得る。局所的投与はまた、経皮的投与（例えば、経皮パッチまたはイオン導入デバイス）の使用を含み得る。本明細書中で使用される場合、用語、非経口とは、皮下注射、静脈内、筋内、胸骨内注射または注入技術を含む。
【００９４】
注射可能な調製物（例えば、滅菌の注射可能な水性または油性の懸濁液）は、適切な分散剤、潤滑剤および懸濁剤を使用して、公知技術に従って処方され得る。滅菌の注射可能な調製物はまた、非毒性の非経口的に受容可能な希釈剤または溶媒中の、滅菌の注射可能な溶液または懸濁液（例えば、１，３−プロパンジオール中の溶液）であり得る。受容可能なビヒクルおよび溶媒の中で、水、リンガー溶液および等張塩化ナトリウム溶液が使用され得る。さらに、滅菌の不揮発油は、溶媒または懸濁媒体として従来使用される。この目的のために、任意の無刺激の不揮発油（合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含む）が使用され得る。さらに、脂肪酸（例えば、オレイン酸）は、注射可能な調製物において用途を見出す。
【００９５】
薬物の直腸投与のための坐剤は、通常の温度では固体であるが、直腸温度では液体であり、従って、直腸中で溶解して薬物を放出する、適切な非刺激性賦形剤（例えば、ココアバターおよびポリエチレングリコール）と、この薬物とを混合することによって調製され得る。
【００９６】
経口投与のための固体投薬形態としては、カプセル、錠剤、丸剤、粉末および顆粒が挙げられ得る。このような固体投薬形態において、活性化合物は、少なくとも１種の不活性な希釈剤（例えば、スクロース、ラクトースまたはデンプン）と混合され得る。このような投薬形態はまた、通常の使用の場合、不活性な希釈剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤）以外に、さらなる物質を含み得る。カプセル、錠剤および丸剤の場合、投薬形態はまた、緩衝剤を含み得る。錠剤および丸剤は、腸溶性コーティングを用いてさらに調製され得る。
【００９７】
経口投与のための液体投薬形態としては、水のような、当該分野で一般的な不活性な希釈剤を含む、薬学的に受容可能な乳濁液、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシル剤が挙げられ得る。このような組成物はまた、アジュバント（例えば、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤）、シクロデキストリンならびに甘味剤、香味料および香料を含み得る。
【００９８】
なお他の実施形態に従って、本発明は、ヒトまたは動物の被験体においてＧＳＫ３活性を阻害するための方法を提供し、この方法は、被験体においてＧＳＫ３活性を阻害するに有効な量の、構造（Ｉ）を有するＧＳＫ３インヒビター化合物（またはこのような化合物を含有する組成物）を、被験体に投与する工程を包含する。他の実施形態は、細胞または、ヒトもしくは動物の被験体におけるＧＳＫ３媒介性の障害を処置するための方法を提供し、この方法は、細胞または被験体におけるＧＳＫ３活性を阻害するに有効な量の、本発明の化合物または組成物を、細胞またはヒトもしくは動物の被験体に投与する工程を包含する。好ましくは、この被験体は、ヒトまたは非ヒト動物の被験体である。ＧＳＫ３活性の阻害は、コントロールと比較したか、または予測されるＧＳＫ３活性と比較した、ＧＳＫ３活性の検出可能な抑制を含む。
【００９９】
有効量の本発明の化合物は、一般に、本明細書中に記載される任意のアッセイによってか、当業者に公知の他のＧＳＫ３キナーゼ活性アッセイによってか、またはＧＳＫ３媒介性の障害に罹患した被験体における症状の緩和を検出することによって、ＧＳＫ３活性を検出可能に阻害するに十分な、任意の量を含む。
【０１００】
本発明に従って処置され得るＧＳＫ３媒介性障害としては、ＧＳＫ３活性が関係するか、または処置される疾患において特徴的に欠損する経路を通じて、ＧＳＫ３の阻害がシグナル伝達を増強する、任意の生物学的障害または医学的障害が挙げられる。この状態または障害は、異常なＧＳＫ３活性によって引き起こされるかまたは特徴付けられるかのいずれかであり得る。代表的なＧＳＫ３媒介性障害としては、例えば、２型糖尿病、アルツハイマー病および他の神経変性障害（例えば、パーキンソン病、ハンティングトン病）、肥満、アテローム硬化症心血管疾患、本態性高血圧症、多嚢胞性卵巣症候群、Ｘ症候群（ｓｙｎｄｒｏｍｅ Ｘ）、虚血、特に脳虚血、外傷性脳損傷、双極性障害、免疫不全、癌などが挙げられる。
【０１０１】
本発明に従う、被験体の首尾よい処置は、医学的または生物学的障害を罹患した被験体における症状の低減または緩和の誘導を生じ、例えば、障害のさらなる進行を停止するか、または障害を予防し得る。従って、例えば、糖尿病の処置は、患者におけるグルコースレベルまたはＨｂＡ１ｃレベルの減少を生じ得る。同様に、アルツハイマー病の処置は、例えば、痴呆の進行速度の減少を測定することによって検出される、疾患の進行速度の減少を生じ得る。
【０１０２】
キャリア材料と合わされて単回投薬形態を生成し得る活性成分の量は、処置される宿主および特定の投与様式に依存して異なる。しかし、任意の特定の患者についての特定の用量レベルが、使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、全体的健康、性別、食餌、投与回数、投与経路、排泄速度、薬物の組み合わせ、および治療を受ける特定の疾患の重篤度を含む種々の因子に依存することが理解される。所定の状況についての治療的有効量は、慣用的な実験によって容易に決定され得、そして通常の臨床医の技術および判断の範囲内である。
【０１０３】
本発明の目的のために、治療的有効用量は、一般に、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約２０ｍｇ／ｋｇ／日、そして最も好ましくは約２ｍｇ／ｋｇ／日〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日の本発明のＧＳＫ３インヒビター化合物であり、これは、１つまたは複数の用量で投与され得る。
【０１０４】
本発明の化合物はまた、リポソーム形態で投与され得る。当該分野で公知のように、リポソームは、一般に、リン脂質または他の脂質物質に由来する。リポソームは、水性媒体中に分散された単層または多層の水和液晶によって形成される。リポソームを形成し得る、任意の非毒性の生理的に受容可能かつ代謝可能な脂質が使用され得る。リポソーム形態の本発明の組成物は、本発明の化合物に加えて、安定剤、保存剤、賦形剤などを含み得る。好ましい脂質は、天然および合成両方の、リン脂質およびホスファチジルコリン（レシチン）である。リポソームを形成する方法は、当該分野で公知である。例えば、Ｐｒｅｓｃｏｔｔ、編、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌｕｍｅ ＸＩＶ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｗ．、３３頁以下参照（１９７６）。
【０１０５】
本発明の化合物は、単独で活性な薬学的薬剤として投与され得るが、これらはまた、障害の処置において使用される１以上の他の薬剤と組み合わせて使用され得る。２型糖尿病の処置のために、本発明の化合物と組み合わせて有用な代表的薬剤としては、例えば、インスリン、トログリタゾン、ロジグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、グリピジド、メトホルミン、アカルボースなどが挙げられる。アルツハイマー病の処置のために、本発明の化合物と組み合わせて有用な代表的薬剤としては、例えば、ドネペジル（ｄｏｎｅｐｅｚｉｌ）、タクリンなどが挙げられる。双極性疾患の処置のために、本発明の化合物と組み合わせて有用な代表的薬剤としては、例えば、リチウム塩、バルプロエート、カルバマゼピンなどが挙げられる。発作の処置のために、本発明の化合物と組み合わせて有用な代表的薬剤は、例えば、組織プラスミノゲン活性化因子である。
【０１０６】
さらなる活性薬剤が、本発明の化合物と組み合わせて使用される場合、このさらなる活性薬剤は、一般に、ＰＨＹＳＩＣＩＡＮＳ’ ＤＥＳＫ ＲＥＦＥＲＥＮＣＥ（ＰＤＲ）第５３版（１９９９）（これは、本明細書中で参考として援用される）に示されるような治療的量で使用され得るか、または当業者に公知であるような治療的に有用な量で使用され得る。
【０１０７】
本発明の化合物および他の治療的に活性な薬剤は、推奨される最大の臨床的投薬量またはより低い用量で投与され得る。本発明の組成物中の活性化合物の投薬レベルは、投薬経路、疾患の重篤度および患者の応答に依存して、所望の治療応答を獲得するように、変化され得る。組み合わせは、別個の組成物としてか、または両方の薬剤を含有する単一投薬形態として、投与され得る。組み合わせとして投与される場合、この治療剤は、同時もしくは異なる時点で与えられる別個の組成物として処方され得るか、またはこの治療剤は、単一組成物として与えられ得る。
【０１０８】
上記は、以下の各実施例と関連して、よりよく理解され得、これらは、説明のために提示され、本発明の概念の範囲を制限しない。
【実施例】
【０１０９】
（実施例１）
（特徴付けおよび精製方法）
本発明の化合物は、２６９０ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｍｏｄｕｌｅ（Ｍｉｌｆｏｒｄ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を用いて、Ｗａｔｅｒｓ Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍクロマトグラフィーシステムを使用して、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって特徴づけられた。分析カラムは、Ｃｏｌｕｍｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ５μ Ｒｅｌｉａｓｉｌ Ｃ１８カラム（５０×４．６ｍｍ）であり、１８分で水中５％〜８０％アセトニトリルの傾斜の勾配であった。全ての溶媒は、０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含んでいた。化合物を、２２０ｎｍまたは２５４ｎｍのいずれかでの紫外線（ＵＶ）吸収によって検出した。ＨＰＬＣ溶液は、Ｂｕｒｄｉｃｋ ａｎｄ Ｊａｃｋｓｏｎ（Ｍｕｓｋｅｇａｎ、Ｍｉｃｈｉｇａｎ）またはＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）製であった。いくつかの例において、純度を、裏がガラスまたはプラスチックのゲルプレート（例えば、Ｂａｋｅｒ−Ｆｌｅｘ Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ １Ｂ２−Ｆ可撓性シート）を使用して、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって評価した。ＴＬＣの結果を、紫外線光の下で、または周知のヨウ素蒸気および他の種々の染色技術を使用することによって、容易に可視的に検出した。
【０１１０】
質量分析を、Ｆｉｓｏｎｓ ＶＧ Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒで実行した。全ての質量は、プロトン化された親イオンの質量として報告される。
【０１１１】
核磁気共鳴（ＮＭＲ）分析を、Ｖａｒｉａｎ ３００ＭＨｚ ＮＭＲ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）で実行した。スペクトル基準は、ＴＭＳまたは溶媒の公知の化学的シフトのいずれかであった。いくつかの化合物サンプルを、上昇した温度（すなわち、７５℃）で実行して、サンプルの溶解性の増大を促進した。
【０１１２】
本発明のいくつかの化合物の純度を、元素分析（Ｄｅｓｅｒｔ Ａｎａｌｙｔｉｃｓ、Ｔｕｃｓｏｎ、Ａｒｉｚｏｎａ）によって評価した。
【０１１３】
融点を、Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｍｅｌ−Ｔｅｍｐ ａｐｐａｒａｔｕｓ（Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）で決定した。
【０１１４】
（実施例２）
（２−（２，４−ジクロロフェニル）−４−フルオロ−１−ニトロベンゼンの合成）
ベンゼンおよび３ｍｌの水中の、１−ブロモ−５−フルオロ−２−ニトロベンゼン（１ｇ、４．５ｍｍｏｌ）、２，４−ジクロロベンゼンボロン酸（９０７ｍｇ、４．７ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（１，４４ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）を含む混合物を、３０分間、窒素でパージした。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２６４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を、この混合物に添加し、そして一晩、７５℃に加熱した。反応混合物を酢酸エチルと水との間で分割した。有機層を分離し、そしてブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過し、そして減圧下で濃縮して、褐色の固体を得、これを再結晶化させて、１ｇ（収率８０％）の白色の固体を得た。生成物は、満足なＮＭＲを与えた。
ＨＰＬＣ：１３．２分（１００％）
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ／Ｚ）、２６６。
【０１１５】
（実施例３）
（Ｎ−（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）−Ｎ’−（５−ニトロピリジン−２−イル）エタン−１，２−ジアミンの合成）
【０１１６】
【化２１】
アセトニトリル中の２−（２，４−ジクロロフェニル）−４−フルオロ−１−ニトロベンゼン（３０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）に、２−（２−アミノエチルアミノ）−５−ニトロピリジン（１９ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１８μｌ、０．１ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を、８０℃で一晩加熱した。この混合物を酢酸エチルと水との間で分割し、有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濃縮した。溶出液としてジクロロメタン中の５％メタノールを用いて、シリカゲル上で精製して、３２ｍｇのＮ−（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）−Ｎ’−（５−ニトロピリジン−２−イル）エタン−１，２−ジアミンを得た。
ＨＰＬＣ：１２．６分（９０％）
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ／Ｚ）、４４８。
【０１１７】
（実施例４）
（Ｎ〜６〜−｛２−［（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）アミノ］エチル｝−３−ニトロピリジン−２，６−ジアミンの合成）
【０１１８】
【化２２】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２−（２，４−ジクロロフェニル）−４−フルオロ−１−ニトロベンゼン（２０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）に、２−アミノ−３−ニトロ−６−（２−アミノエチルアミノ）ピリジン（１４ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１６μｌ、０．０７ｍｍｏｌ）を添加し、８０℃で一晩加熱した。この混合物を酢酸エチルと水との間で分割し、有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濃縮した。溶出液としてジクロロメタン中の５％メタノールを用いて、シリカゲル上で精製して、７ｍｇのＮ〜６〜−｛２−［（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）アミノ］エチル｝−３−ニトロピリジン−２，６−ジアミンを得た。
ＨＰＬＣ：１１．５分（１００％）
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ／Ｚ）、４６３。
【０１１９】
（実施例５）
（６−（｛２−［（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）アミノ］エチル｝アミノ）ニコチノニトリルの合成）
【０１２０】
【化２３】
アセトニトリル中の２−（２，４−ジクロロフェニル）−４−フルオロ−１−ニトロベンゼン（３２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）に、２−（２−アミノエチルアミノ）−５−シアノピリジン（１９．２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１８μｌ、０．１ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を８５℃で一晩加熱した。この混合物を酢酸エチルと水との間で分割し、有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濃縮した。溶出液としてジクロロメタン中の５％メタノールを用いて、シリカゲル上で精製して、２５ｍｇの６−（｛２−［（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）アミノ］エチル｝アミノ）ニコチノニトリルを得た。
ＨＰＬＣ：１３．１分（９０％）
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ／Ｚ）、４２８。
【０１２１】
（実施例６）
（Ｎ−［２’，４’−ジクロロ−５−（｛２−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］エチル｝アミノ）−１，１’−ビフェニル−２−イル］アセトアミドの合成）
【０１２２】
【化２４】
ジクロロメタン中の６−［（２−｛［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−ニトロフェニル］アミノ｝エチルアミノピリジン−３−カルボニトリル（４０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）に、５０μｌの無水トリフルオロ酢酸を添加し、この混合物を１０分間撹拌した。この溶液を濃縮し、これに、ＳｎＣｌ２（９０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）および（１：４）ジオキサン：Ｈ２Ｏ中の１００μｌ塩酸の溶液の２ｍｌを添加した。この溶液を１時間撹拌した。この混合物を酢酸エチルと水との間で分割し、４４ｍｇのＮ−［４−アミノ−３−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］−Ｎ−｛２−［（５−シアノ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝−２，２，２−トリフルオロアセトアミドを単離した。ジクロロメタン中のこれに、１０μｌの塩化アセチルおよび１３μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加し、３０分で、アセチル化生成物をＬＣ／ＭＳで観察する。水性ワークアップ後、（１：１）水：ジオキサン中の生成物に、１０ｍｇのＫ２ＣＯ３を添加し、２時間撹拌した。この混合物を酢酸エチルと水との間で分割し、有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、エーテルで粉砕して、２０ｍｇのＮ−［２’，４’−ジクロロ−５−（｛２−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］エチル｝アミノ）−１，１’−ビフェニル−２−イル］アセトアミドをを得た。
ＨＰＬＣ：７．２分（９９％）
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ／Ｚ），４４０。
【０１２３】
（実施例７）
（６−（｛２−［（６−アミノ−２’，４’−ジクロロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）アミノ］エチル｝アミノ）ニコチノニトリルの合成）
【０１２４】
【化２５】
触媒量の１０％Ｐｄ／Ｃを伴う、エチルアルコール中の４０ｍｇの６−［（２−｛［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−ニトロフェニル］アミノ｝エチルアミノピリジン−３−カルボニトリルに、５００μｌのヒドラジンを添加し、そして２時間溶液を還流させた。触媒を濾過して除き、濾液を減圧下で濃縮して、２２ｍｇの６−（｛２−［（６−アミノ−２’，４’−ジクロロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）アミノ］エチル｝アミノ）ニコチノニトリルを得た。
ＨＰＬＣ：６．７分（８０％）
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ／Ｚ），３９８。
【０１２５】
（実施例８）
（Ｎ〜１〜−［２’，４’−ジクロロ−５−（｛２−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］エチル｝アミノ）−１，１’−ビフェニル−２−イル］−Ｎ〜２〜−メチルグリシンアミドの合成）
【０１２６】
【化２６】
テトラヒドロフラン中の２０ｍｇの６−［（２−｛［４−アミノ−３−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］アミノ｝エチル）−アミノピリジン−３−カルボニトリルに、１９ｍｇのＢＯＣ−サルコシン、３８ｍｇのＨＢＴＵおよび２４μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加し、そしてこの混合物を室温で一晩撹拌した。この混合物を酢酸エチルと水との間で分割した後、有機層を濃縮した。これに、ジクロロメタンおよびＴＦＡを添加し、ＨＰＬＣ後に、ＴＦＡ塩として、１．２ｍｇの９３％純粋Ｎ〜１〜−［２’，４’−ジクロロ−５−（｛２−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］エチル｝アミノ）−１，１’−ビフェニル−２−イル］−Ｎ〜２〜−メチルグリシンアミドを、得た。
ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ／Ｚ），４６９。
【０１２７】
（実施例９）
（Ｎ−（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）−Ｎ−メチル−Ｎ’−（５−ニトロピリジン−２−イル］エタン−１，２−ジアミンの合成）
【０１２８】
【化２７】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２２ｍｇの２−（２，４−ジクロロフェニル）−４−フルオロ−１−ニトロベンゼンに、１５ｍｇの［２−（メチルアミノエチル］ （５−ニトロ （２−ピリジル））−アミンおよび３０μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加し、そしてこの混合物を、８５℃に一晩加熱した。この混合物を酢酸エチルと水との間で分配した後に、その有機層を濃縮し、そして乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして再結晶して、６ｍｇのＮ−（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）−Ｎ−メチル−Ｎ’−（５−ニトロピリジン−２−イル）エタン−１，２−ジアミンを得た。
ＨＰＬＣ： １３．２分（１００％）
ＭＳ： ＭＳ （Ｍ＋Ｈ／Ｚ），４６２。
【０１２９】
（実施例１０）
（Ｎ〜６〜−｛２−［（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）（メチル）アミノ］エチル｝−３−ニトロピリジン−２，６−ジアミンの合成）
【０１３０】
【化２８】
アセト二トリル中の１０ｍｇの２−（２，４−ジクロロフェニル）−４−フルオロ−１−ニトロベンゼンに、１０ｍｇの（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））［２−（メチルアミノ）エチル］ アミンおよび７μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加し、そしてこの混合物を、８５℃に一晩加熱した。水での後処理後に、その組成物質を、溶出液としてヘキサン中３０％のアセトンを用いるシリカゲルカラムで精製して、６ｍｇのＮ〜６〜−｛２−［（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）（メチル）アミノ］ エチル｝−３−ニトロピリジン−２，６−ジアミンを得た。
ＨＰＬＣ，１２．１分（８５％）
ＭＳ （Ｍ＋Ｈ／Ｚ），４７７。
【０１３１】
（実施例１１）
（ｌ−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロピリジン−２−イル）アミノ］エチル｝アミノ）−２’，４’−ジクロロ−１，１’−ビフェニル−２−イルｌ−４−メチルピペラジン−２−オンの合成）
【０１３２】
【化２９】
（Ａ．Ｎ−［４−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−２−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］−２−ブロモアセトアミドの調製）
水性ＮａＨＣＯ３（８当量）を、最少量のＥｔＯＡｃ中の［４−アミノ−３−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］ エチル｝アミン（１当量）攪拌溶液に室温で添加した。最少量のＥｔＯＡｃ中の２−ブロモアセチルクロリド（１．５当量）を、激しく攪拌している反応溶液にゆっくりと添加した。この反応を、ＬＣ／ＭＳで追跡し、そして ３０分以内で完了したことを決定した。その有機層を分離し、そして水、ブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして濃縮乾固して、粗製Ｎ−［４−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））アミノ］ エチル｝アミノ）−２−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］ −２−ブロモアセトアミドをａｓ ａ ｄａｒｋ ｙｅｌｌｏｗ ｇｌａｓｓ ｉｎ 暗黄色のガラス状物を７６％の収率で得た。（〜９０％純粋、ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ ５５５．２ＭＨ＋）。この生成物を、分解を防ぐために、−４℃で保存した。
【０１３３】
（Ｂ．Ｎ−［４−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−２−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］−２−［（２−ヒドロキシエチルメチルアミノ１アセトアミドの調製）
Ｎ−メチルエタノールアミン （２当量）を、ＣＨ３ＣＮ中のＮ−［４−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））アミノ］ エチル｝アミノ）−２−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］−２−ブロモアセトアミド （８．６５当量）の攪拌溶液に、室温で添加した。この反応をＬＣ／ＭＳにより追跡し、そして１２時間後に完了したことを決定した。この反応物を濃縮し、そしてＣＨ２Ｃｌ２中ＭｅＯＨ（５： ９５，ｖ／ｖ）で溶出するシリカカラムクロマトグラフィーによって精製した。精製した画分を収集および濃縮した後に、Ｎ−［４−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−２−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］−２−［（２−ヒドロキシエチル）メチルアミノ］ アセトアミドを、淡黄色のガラス状物（２１％ ｙｉｅｌｄ，ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ ５４９．４ ＭＨ＋）として、９５％の純度で得た。
【０１３４】
（Ｃ．１−［５−（｛２−［Ｃ６−アミノ−５−ニトロピリジン−２−イル）アミノ］ エチル｝アミノ）−２’４’−ジクロロ−１，１’−ビフェニル−２−イル］−４−メチルピペラジン−２−オンの調製）
ＤＥＡＤ （２．５当量）およびＰＰｈ３（２当量）を、ＴＨＦに溶解したＮ−［４−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））アミノ］ エチル｝アミノ）−２−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］−２−［（２−ヒドロキシエチル）−メチルアミノ］ アセトアミド （１当量）に室温で添加した。この反応物をＬＣ／ＭＳによって完了が決定されるまで、５５℃で１時間加熱した。この反応物を濃縮し、そしてＣＨ２Ｃｌ２中ＭｅＯＨ（５： ９５，ｖ／ｖ）で溶出するシリカカラムクロマトグラフィーで精製した。精製した画分を収集し、そして濃縮した後に、１−［５−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロピリジン−２−イル）アミノ］ エチル｝アミノ）−２’，４’−ジクロロ−ｌ，１’−ビフェニル−２−イル］−４−メチルピペラジン−２−オンを、淡黄色ガラス状物として（ＬＣ／ＭＳ ｍｌｚ ５３１．４ ＭＨ＋）定量的な収率で得た。
【０１３５】
（実施例１２−１５）
本明細書中に記載される一般的手順に従って、以下のさらなる化合物を合成した：
【０１３６】
【表１−１】
【０１３７】
【表１−２】
（実施例１６）
（酸およびアルキル炭素環式アナログの合成）
【０１３８】
【化３０】
（２−ブロモ−４−フルオロベンゼンカルボニトリル （１）の準備）
出発物質である２−ブロモ−４−フルオロベンゼンカルボニトリル （１）を、Ｅｓｐｒｉｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｏｆ Ｓａｒａｓｏｔａ ＦＬから購入する。あるいはこれは、Ｅｎｇｅｌｈａｒｄｔ，Ｅ．Ｌ．； Ｃｈｒｉｓｔｙ，Ｍ．Ｅ．Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ ＵＳ ３８１２１７７，１９７６ ； ＵＳ ３９７８１２７ １９７６０８３１の方法によって調製され得る。
【０１３９】
（２−（２４−ジクロロフェニル］−４−フルオロベンゼンカルボニトリル （２）の調製）
この材料を、この出願の実施例２ についてのＳｕｚｕｋｉ方法によって調製し得る−２−（２，４−ジクロロフェニル）−４−フルオロ−１−ニトロベンゼンを参照のこと。
【０１４０】
（４−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））アミノエチル｝アミノ’）−２−（２，４−ジクロロフェニル）ベンゼンカルボニトリル （３）の調製）
この材料を、この出願における実施例３ についての芳香族交換方法によって調製し得る−［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−ニトロフェニル］｛２−［（５−ニトロ （２−ピリジル）アミノ］ エチル｝アミンを参照のこと。ただし、より高い温度（９０〜１２０℃）およびより長い反応時間（１２〜４８ｈ）が必要とされる。また、これらの反応は、水素をパージされ、そして窒素雰囲気下で実施される。水（２×）、飽和水性Ｎａ２ＣＯ３（３×）およびブライン（１×）での抽出後、この反応物を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。
【０１４１】
出発物質である（２−アミノエチル）（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））アミンを、以下の様式で調製する。２−アミノ−６−クロロ−３−ニトロピリジン （６５ｇ，３７６ ｍｍｏｌ），アセトニトリル（４００ ｍｌ）、およびエチレンジアミン （５００ ｍｌ）の混合物を、アルゴン下７５〜８０℃で一晩（約２０時間）攪拌する。ジアミンを添加すると、この反応は発熱反応になる。このエチレンジアミンを減圧下で除去し、次いで真空中で除去する（１２ｈ）。この完全に乾燥した材料を、２Ｍの水酸化ナトリウム溶液（５００ｍｌ）に、激しく攪拌しながら３０分間懸濁させる。その固体を濾過する。この黄色の固体を、激しく攪拌しながら、水（５００ ｍｌ）中に３０分間懸濁させ、その後、その固体を濾過する。水での洗浄および濾過をもう１回繰り返して、塩の蓋を得る。この黄色固体を、減圧下で乾燥させる。その粗製黄色固体を、エーテル（３×５００ｍｌ）で粉砕し、そして減圧下で一晩乾燥させて、 ５９ｇの２−（２−アミノエチル）アミノ−６−アミノ−５−ニトロピリジンを、９９％を超える純度で得る。
【０１４２】
（４−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））アミノ１エチル｝アミノ）−２−（２，４−ジクロロフェニル］ 安息香酸 （４）の調製）
水（５ｍｌ）およびＴＦＡ（１５ｍｌ）を、ベンゾニトリル（３）（ｌ００ｍｇ，
０．２ ｍｍｏｌ）室温で攪拌しながら添加し、溶液を形成する。この攪拌している黄色溶液に、濃ＨＣｌ（１０ｍｌ）を、Ｎ２下で加える。この反応物を、ＬＣＭＳによって完了が確認されるまで、９０℃で約２日間加熱する。この反応物を凍結乾燥により乾燥させ、ＴＦＡ塩としてカルボン酸（４）を得る。この生成物４を、ＨＰＬＣおよびＬＣＭＳによって、黄色粉末として、８５％の純度で得る。質量回収は、ほぼ定量的である。この生成物を、さらに精製することなく使用する。
【０１４３】
（［４−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））アミノ］ エチル｝アミノ）−２−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル−Ｎ−（２−ピロリジニルエチル）カルボキサミド（５）の調製）
アミン（１．５〜２．０当量）を、酸４ （１．０当量、２５ｍｇ）、ＨＢＴＵ（１．５当量）、Ｈｕｎｉｇ塩基（２．０当量）およびＤＭＦ（０．４ｍｌ）の攪拌溶液に添加する。 酸４、ＨＢＴＵ、Ｈｕｎｉｇ塩基およびＤＭＦを、バイアル中でこの順序で順番に、アルゴン下、室温で予め一緒に混合するによって、酸４を予め活性化させる。この反応物を、ＬＣＭＳおよびＨＰＬＣによって完了が示されるまで、３〜４時間攪拌する。この反応を完了させるために、時々、さらに０．２５当量または０．５当量のカップリング剤を添加することが必要である。この反応物を、分取ＨＰＬＣによって精製する。この反応物全体を、分取ＨＰＬＣに直接注入する。精製した画分をプールし、そして凍結乾燥して、アミド５を８５％より高い純度および５０−７０％の収率で、黄色粉末として得る。
【０１４４】
【化３１】
（Ｎ−（２−｛［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−シアノフェニル］アミノ｝エチル）（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボキサミド（６）の調製）
この材料を、１００℃で１２時間、ＤＭＦ中の巣ラリーを加熱することによって、調製する。過剰のＢｏｃ−エチレンジアミン を使用して、この反応の完了に導き得る（実施例４を参照のこと）。
【０１４５】
（Ｎ−（２−｛［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−（ヒドロキシメチル）フェニル］アミノ｝−エチル （ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボキサミド （７）の調製）
ＴＨＦ （１０ｍｌ）中のＮ−（２−｛［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−シアノフェニル］−アミノ｝エチル）（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボキサミド （２．１３ｇ）の攪拌溶液に、窒素下室温で、ＤＩＢＡＬ−Ｈ （５当量）（ＴＨＦ中１Ｍ）を滴下する。１時間後、得られた溶液をさらに７時間、７０℃で加熱する。次いで、この反応物を冷却し、そしてＲｏｃｈｅｌｌｅ塩の添加によってクエンチする。この得られた懸濁物を、塩化メチレン（１２０ｍｌ）と水（３０ｍｌ）との間で分配する。その水層を塩化メチレン（２５ｍｌ）で２回抽出し、そして合わせた有機層を、ブライン（３０ｍｌ）で洗浄し、そして硫酸ナトリウムで乾燥させる。濃縮により、２．０５ｇの黄色泡状物が得られる。溶出液としてメタノール／ＥｔＯＡｃ（約２０％）を使用するシリカゲル（１１０ ｇ）でのクロマトグラフィーにより、生成物７を得る。
【０１４６】
（Ｎ−（２−｛［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−カルボニルフェニル］アミノ｝エチル）（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボキサミド （８）の調製）
Ｓｗｅｒｎらの方法を使用して、Ｎ−（２−｛［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−（ヒドロキシ−メチル）フェニル］ アミノ｝エチル）（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボキサミド（１００ｍｇ）を、無水塩化メチレン（ｌｍｌ）中に溶解し、そして塩化オキサリル（１．５当量）およびＤＭＳＯ （３当量）の、塩化メチレン（２５ｍｌ）中の、−７８℃で１５分間攪拌した予め混合した溶液に添加した。この得られた溶液を、さらに３０分間、−７８℃で攪拌し、この時点で、トリエチルアミン （６当量）を添加する。この得られた懸濁物を、室温まで温める。１５分後、水（１ｍｌ）を添加し、そして層を分離する。その水層を塩化メチレン（２×１Ｏｍｌ）で抽出し、そして合わせた有機層を、乾燥し（硫酸ナトリウム）そして濃縮して、アルデヒド８を７０−８０％の収率で、淡黄色泡状物として得る。この生成物は、不安定であることが示され、そしてさらなる操作なしで使用する。
【０１４７】
（Ｎ−（２−｛［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−（モルホリン−４−イルメチル）フェニル］アミノ｝エチル）（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボキサミド （９）の調製）
シアノホウ素化水素ナトリウム（２当量）（ＴＨＦ中１Ｍ）を、 ＴＨＦ（５ｍｌ）に溶解したアルデヒド８ （５０ ｍｇ，０．１２１ ｍｍｏｌ）、モルホリン（２当量）および氷酢酸（５ｍｌ）の溶液に、室温で、攪拌しながら添加する。この混合物を７０℃で１８時間加熱し、その後、水（１ｍｌ）をゆっくりと添加して、過剰の試薬を分解する。この混合物を、酢酸エチル（３０ｍｌ）と飽和クエン酸溶液（１０ｍｏｌ）との間で分配する。その有機層を処分し、そしてその水層を、１Ｍ水性水酸化ナトリウムでｐＨ ９に注意深く塩基性化する。次いで、この塩基性の水層を、酢酸エチル（２×２５ｍｌ）で抽出する。合わせた有機層を乾燥し（硫酸ナトリウム）、濃縮し、そしてクロマトグラフィー（シリカゲル、１０％メタノール／塩化メチレン）によって精製して、純粋な生成物９を得る（収率５２％）。
【０１４８】
（（２−アミノエチル］３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−（モルホリン−４−イルメチル）−フェニル］ アミン （１０）の調製）
Ｂｏｃ材料９ （４０ ｍｇ）の、メタノール（１ｍｌ）中の溶液を、ジオキサン中１Ｎ ＨＣｌ（１ ｍｌ）で攪拌する。この溶液を室温で一晩攪拌し、そして蒸発乾固させる。この混合物を無水トルエン（２ ｍｌ）と共沸したメタノール （２ ｍｌ）中に再溶解する。この黄色固体を、エーテル（２×２ ｍｌ）、酢酸エチル（２×２ｍｌ）で粉砕し、そして減圧下で乾燥させる。生成物１０のＨＣｌ塩は、さらに精製していない。
【０１４９】
（Ｎ６−２’−｛（２−４’−ジクロロ−６−（モルホリン−４−イルメチル）−１，１’−ビフェニル−３−イル］−アミノ｝エチル）−３−ニトロピリジン−２，６−ジアミン（１２）の調製）
【０１５０】
【化３２】
アセトニトリル（２ｍｌ）中のアミン塩酸塩１０ （３５ｍｇ）を、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン （５４当量）および６−クロロ−３−ニトロ−２−ピリジルアミン １１ （１．２当量）で処理し、そして９０℃で２時間攪拌する。この混合物を減圧下で濃縮し、そして減圧下で乾燥させる。その粗製生成物を、塩化メチレン中３％ＭｅＯＨと一緒に攪拌しながらクロマトグラフィーによって精製し、そして塩化メチレン中５％ＭｅＯＨで仕上げて、１２を黄色固体（５０−７０％）として得る。この材料を、２当量のＨＣｌで酸性化し、そして凍結乾燥して、乾燥粉末にする。
【０１５１】
（実施例１７）
（［５−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロピリジン−２−イル）アミノ］エチル｝アミノ）−２’，４’−ジクロロ−１，１’−ビフェニル−２−イル］ （フェニル）メタノール （１５）の調製）
【０１５２】
【化３３】
（Ｎ−（２−｛［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−（ヒドロキシフェニルメチル）フェニル］−アミノ｝エチル）（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボキサミド （１３）の調製）
フェニルマグネシウムブロミド（ＴＨＦ中１Ｍ）（２当量）を、 ＴＨＦ （１０ｍｌ）中８ （５０ｍｇ）の溶液に、７８℃アルゴン下で、攪拌しながら添加する。この反応物を、Ｇｒｉｇｎａｒｄの添加後１５分間、７８℃で攪拌し、この時点で、飽和水性ＮＨ４Ｃｌ（４ｍｌ）を添加して、この反応をクエンチする。この混合物をＥｔＯＡｃ（６０ｍｌ）および水（２ｍｌ）で希釈し、そして層を分離する。その有機層を飽和水性ＮＨ４Ｃｌ（ｌＯｍｌ）、水（ｌＯｍｌ）、ブライン（ｌＯｍｌ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）濾過し、そして濃縮する。その残渣を、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカカラムクロマトグラフィーによって精製して、１３を得る、
｛４−［（２−アリニノエチル）アミノｌ−２−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル３フェニルメタン−１−オール（１当量）および６−クロロ−３−ニトロ−２−ピリジルアミン （１．２当量）を、攪拌しながらアルゴン下室温で、ＤＭＡに溶解する。Ｈuｎｉｇ塩基（１．５当量）を、この透明な暗褐色の溶液に添加し、これを、ＬＣ／ＭＳおよびＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３： ２，ｖ／ｖ）で溶出、（Ｒｆ＝０．３））によって完了が決定されるまで、８０℃で１２時間加熱する。ＥｔＯＡｃをこの反応混合物に添加し、これを次いで、水、ブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４），濾過し、そして濃縮乾固して、粗製褐色生成物を得る。この褐色の残渣を、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２４ ： ２６，ｖ／ｖ）で溶出するシリカカラムクロマトグラフィーによって精製する。精製した画分を収集し、そして濃縮した後に、その生成物を、淡黄色固体として単離する（収率７５％、ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＭＨ ５２５．４）。
【０１５３】
（実施例１８）
（６−［（２−｛［２’，４’−ジクロロ−６−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１，１’−ビフェニル−３−イル）アミノ｝エチル，アミノ］ニコチノにトリルの合成）
【０１５４】
【化３４】
６−［（２−｛［２’，４’−ジクロロ−６−（ｌＨ−イミダゾール−１−イル）−１，１’−ビフェニル−３−イル］ アミノ｝エチル）アミノ］ニコチノニトリル（化合物Ａ）を、実施例７の化合物を、ホルムアルデヒド、グリオキサール、およびＮＨ４Ｃｌを処理することによって、形成し得る （Ｐｅｒｒｙ，Ｍ．Ｃ．ら，「Ｏｐｔｉｃａｌｌｙ Ａｃｔｉｖｅ ＩｒｉｄｉｕｍＩｍｉｄａｚｏｌ−２−ｙｌｉｄｅｎｅ−ｏｘａｚｏｌｉｎｅ Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ： Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ ｉｎ Ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ Ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｙｌａｌｋｅｎｅｓ」、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２５（１）： １１３−１２３ （２００３））。
【０１５５】
（実施例１９）
（６−ｆ （２−｛［２’，４’−ジクロロ−６−（２−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１，１’−ビフェニル−３−イル］ アミノ｝エチル）アミノ］ニコチノにトリルの合成）
【０１５６】
【化３５】
６−［（２−｛［２’，４’−ジクロロ−６−（２−フェニル−１ Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１，１’−ビフェニル−３−イル］−アミノ）エチル）アミノ］ ニコチノニトリル（化合物Ｂ）を、実施例７ の化合物を、塩化ベンゾイル、２−アミノアセトアルデヒドジエチルアセタール、ＰＣｌ３、ｐ−トルエンスルホン酸および過酸化水素で処理することによって、形成し得る（Ｒｏｍｉｎｅ，Ｊ．Ｌ．ら，「４，５−Ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｒｉａｚｏｌ−３−ｏｎｓ： Ｏｐｅｎｅｒｓ ｏｆ Ｌａｒｇｅ−Ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ Ｃａ２＋−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ （Ｍａｘｉ−Ｋ）Ｃｈａｎｎｅｌｓ，”Ｊ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５ （１４）： ２９４２−２９５２ （２００２））。
【０１５７】
（実施例２０）
（６−［（２−｛［２’，４’−ジクロロ−６−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１，１’−ビフェニル−３−イル］ アミノ｝エチル）アミノｌニコチノニトリルの合成）
【０１５８】
【化３６】
６−［（２−｛［２’，４’−ジクロロ−６−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１，１’−ビフェニル−３−イル］アミノ｝エチル）−アミノ］ ニコチノニトリル（化合物Ｃ）を、実施例１７の化合物８をグリオキサールおよびアンモニアで処理することによって、形成し得る（Ｈａｇｅｄｏｒｎ ＩＩＩ Ａ．Ａ．ら、「Ｃａｒｄｉｏｔｏｎｉｃ ａｇｅｎｔｓ．２．（Ｉｍｉｄａｚｏｌｙｌ）ａｒｏｙｌｉｍｉｄａｚｏｌｏｎｅｓ，ｈｉｇｈｌｙ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｉｎｏｔｒｏｐｉｃａｇｅｎｔｓ」、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０ （８）： １３４２−７ （１９８７））。
【０１５９】
（実施例２１）
（無細胞アッセイを用いるＧＳＫ３阻害活性のスクリーニング）
本発明のピリミジン化合物およびピリジン化合物を、ＤＭＳＯに溶解し、次いでヒトＧＳＫ３β（ＧｅｎＢａｎｋに受託番号Ｌ３３８０１で現れる、ヒトＨＳＫ３βに対するヌクレオチド配列）の阻害について試験した。ＧＳＫ３βの発現は、例えば、Ｈｕｇｈｅｓら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２０３：３０５−１１（１９９２）に記載されており、これは、本明細書中に参考として援用される。
【０１６０】
基質緩衝液（３０ ｍＭ ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１０ｍＭ ＭｇＣｌ２，２ｍＭ ＤＴＴ，３μｇ／ｍｌ ＧＳＫ３βおよび０．５μＭの先にリン酸化し、ビオチン化した（ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ ｐｒｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ）ＳＧＳＧ連結ＣＲＥＢペプチド（Ｃｈｉｒｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＰＴＹ Ｌｔｄ．，Ｃｌａｙｔｏｎ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）３００μｌのアリコートを、９６ウェルポリプロピレンマイクロタイタープレートのウェルへ分配した。アッセイされるべき種々の濃度の各化合物、またはスタウロスポリン（ポジティブコントロール、またはネガティブコントロールとして使用される公知のキナーゼインヒビター（すなわち、ＤＭＳＯのみ）を含むＤＭＳＯ３．５μｌ／ウェルを、添加し、そして徹底的に混合した。次いで、反応を、１μＭの標識されていないＡＴＰおよび１〜２×１０７ｃｐｍ γ３３Ｐで標識されたＡＴＰ ５０μｌ／ウェルを添加することによって開始し、そして反応を、室温で約３時間続けさせた。
【０１６１】
反応を続けさせる間、ストレプトアビジンでコーティングしたＬａｂｓｙｓｔｅｍｓ「Ｃｏｍｂｉｐｌａｔｅ ８」捕捉プレート（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ，Ｈｅｌｓｉｎｋｉ，Ｆｉｎｌａｎｄ）を、１％のウシ血清アルブミンを含むＰＢＳ ３００μｌ／ウェルと共に室温で少なくとも１時間インキュベートすることによってブロッキングした。次いで、ブロッキング溶液を吸引によって除去し、そして捕捉プレートを１００μｌ／ウェルの停止試薬（５０μＭ ＡＴＰ／２０ｍＭ ＥＤＴＡ）で満たした。
【０１６２】
３時間の酵素反応が完了したとき、各反応混合物の３連の１００μｌのアリコートを停止溶液を含む３つのウェルに移し（３つの捕捉プレートの各々に１ウェル）、そしてウェル内容物をよく混合した。室温で１時間後、捕捉プレートのウェルを吸引によって空にし、そしてＰＢＳ、および１２チャネルＣｏｒｎｉｎｇ４３０４７４ ＥＬＩＳＡプレートウォッシャーを用いて５回洗浄した。最終的に、２００μｌのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−２０シンチレーション液体を、プレートの各ウェルに添加した。プレートをプレートシーラーでコーティングし、次いで、振盪器に３０分間置いた。各捕捉プレートをＰａｃｋａｒｄ ＴｏｐＣｏｕｎｔシンチレーションカウンター（Ｍｅｒｉｄｉａｎ，Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ）内でカウントし、そして結果を化合物濃度の関数としてプロットした。
【０１６３】
次いで、本発明の化合物を、このアッセイに従ってＧＳＫ３に対する阻害活性についてスクリーニングした。実施例３〜１１の化合物は、この細胞遊離アッセイにおいて、ＧＳＫ３に関して１μＭ以下のＩＣ５０を示した。
【０１６４】
従って、これらの結果は、本発明の化合物がＧＳＫ３に対する阻害活性を示すことを示した。
【０１６５】
（実施例２２）
（細胞ベースのグリコーゲンシンターゼアッセイを用いるＧＳＫ３阻害活性についてのスクリーニング）
ＣＨＯ−ＨＩＲＣ細胞を、ハムＦ１２培地／１０％ 透析したウシ胎仔血清を含む１０ｃｍ組織培養プレートに保持する。コンフルエントな１０ｃｍプレートからの細胞を回収し、そして６ウェル組織培養プレートの６つのウェルに、培地２ｍｌの最終容量まで分ける。細胞を３７℃で２４時間増殖させる。次いで、細胞を、ウシ胎仔血清を含まないハム１２培地中で３回洗浄し、そして最後に、細胞をさらに２４時間３７℃で２ｍｌの無血清培地中に置いた。
【０１６６】
このとき最後に、ＤＭＳＯ中に溶解した化合物２０μｌを各ウェルに添加し、そして３７℃でインキュベートする。２０分後、培地を除去し、そして細胞をＰＢＳで室温で一回洗浄し、次いで、液体窒素中でプレート上に急速に凍結する。次いで、細胞を、ウェル当たり１４０μｌの溶解緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ ７．８；１ｍＭ ＥＤＴＡ，１００ｍＭ ＮａＦ，２５μｇ／ｍｌ ロイペプチン，１ｍＭ ＤＴＴ，１ｍＭ ＰＭＳＦ）の存在下で、氷上で解凍する。細胞をプレートからすくい取り、そしてＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ内でドライアイスによって凍結する。次いで、溶解物を解凍し、そしてドライアイスによって再凍結する。
【０１６７】
再解凍後、溶解物を１４，０００ｇで１５分間スピンダウンする。次いで、上清を取り出し、そして氷上に置く。各上清（４５μｌ）を反応緩衝液（６５ ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ ７．８；２６ ｍＭ ＥＤＴＡ，３２．５ ｍＭ ＫＦ，９．３ｍＭ ＵＤＰ−グルコース；１１ｍｇ／ｍｌグリコーゲン；５００ｎＣｉ／ｍＩ １４Ｃ−ＵＤＰ−グルコース）４５μｌに添加し、そしてさらに４５μｌを、４５μｌ 反応緩衝液／２０ｍＭ グルコース−６−リン酸に添加する。反応物を３０℃で３０分間インキュベートし、次いで、２ｃｍ平方の３１ＥＴクロマトグラフ紙（Ｗｈａｔｍａｎ）上にスポットする。濾紙を６６％ エタノール中で２０分間２回洗浄し、アセトン中で簡単にリンスし、そして室温で１時間乾燥する。
【０１６８】
濾液を５ｍｌの液体シンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）に添加し、液体シンチレーションカウンター内でカウントする。任意の溶解物中で活性である全グルコーゲンシンターゼの百分率を、１００×（ｃｍｐ −グルコース−６−リン酸）／（ｃｍｐ ＋ グルコース−６−リン酸）として示す。この値は、５つの異なる濃度の化合物について、およびＤＭＳＯ単独について、２連で決定し、次いで、値を濃度の対数に対してプロットする。最大レベルの５０％までグリコーゲンシンターゼを刺激する化合物の濃度は、Ｓ状曲線をプロットされたデータに合致させることによって決定される。最大レベルは、試験化合物の濃度が実質的にＥＣ５０を超えて増える場合、グリコーゲンシンターゼ活性が、漸近的に（ａｓｙｍｔｏｔｉｃａｌｌｙ）向かうレベルとして規定される。
【０１６９】
（実施例２３）
（ｔａｕタンパク質リン酸化の阻害についてのスクリーニング）
（Ａ．ＧＳＫ３発現プラスミドおよびｔａｕ発現によるＣＯＳ細胞の一時的トランスフェクション）
プラスミド構築
ＣＯＳ細胞を、高グリコースＭＥＭ培地／５％ウシ胎仔血清を含むＴ２５組織培養フラスコ内に保持する。コンフルエントなＴ２５フラスコからの細胞を回収し、そして、最終容量２ｍｌ／ウェルの培地で、８０，０００細胞／ウェルをＣｏｒｎｉｎｇ ６ウェル組織培養プレートに接種する。細胞を３７℃で４８時間増殖させる。次いで、細胞を、ウシ胎仔血清を含まないＯｐｔｉ−ＭＥＭ中で２回洗浄し、そして最後に、細胞を１ｍｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭ中に置く。
【０１７０】
ｔａｕタンパク質をコードするポリヌクレオチドを、初期ＳＶ４０プロモーターの下、プラスミドｐＳＧ５にサブクローニングし、ｔａｕ発現プラスミドを生成する。ｔａｕタンパク質をコードするｃＤＮＡのクローニングは、通常、Ｇｏｅｄｅｒｔら，ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ，８（２）：３９３−３９９（１９８９）に記載され、これは、本明細書中で参考として援用される。ＧＳＫ３発現プラスミドを、ＧＳＫ３βをコードするポリヌクレオチドをｐＣＧにサブクローニングすることによって調製する（これは、Ｇｉｅｓｅら，Ｇｅｎｅｓ ＆ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，９：９９５−１００８（１９９５）およびＭａｔｔｈｉａｓら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１７：６４１８ （１９８９）（これらの両方は、本明細書中で参考として援用される）に記載されるＡｐＥＶＲＦ誘導体である）。
【０１７１】
以下の溶液を、１．５ｍｌのＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ内で調製する：溶液Ａ：各トランスフェクションに対して、２μｇのＤＮＡ（ｔａｕ発現プラスミド）および０．７μｇのＤＮＡ（ＧＳＫ３発現プラスミド）を１００μｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）中に希釈する；溶液Ｂ：各トランスフェクションに対して、８μｌのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ試薬を、１００μｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭ中に希釈する。この２つの溶液を混ぜ合わせ、穏やかに混合し、そして室温で４５分間インキュベートし、ＤＮＡ−リポソーム複合体を形成させる。各トランスフェクションに対して、０．８ｍｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭをこの複合体を含む管に添加する。希釈溶液を穏やかに混合し、そしてリンスした細胞上にオーバーレイする。細胞を複合型ＤＮＡ／Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅと共に、ＣＯ２インキュベータ内で室温で６時間インキュベートする。インキュベーション後、２０％のＦＢＳを含む増殖培地（高グルコースＭＥＭ）１ｍｌを、各ウェルに添加し、そして３７℃で一晩インキュベートする。トランスフェクション開始１８時間後に、培地を新鮮な完全培地と交換し、そして細胞を３７℃でさらに４８時間増殖させる。
【０１７２】
（Ｂ．ｔａｕリン酸化阻害アッセイ）
回収の２時間前に、ＤＭＳＯ中に溶解した試験化合物（ＧＳＫ３インヒビター）２μｌを各ウェルに添加し、そして３７℃でインキュベートする。２時間後、培地を除去し、そして細胞を、プレート上でドライアイスによって急速に凍結し、そして−７０℃で貯蔵する。細胞を溶解緩衝液（％ Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００，２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ ７．５，１３７ｍＭ ＮａＣｌ，１５％グリセロール，２５μｇ／ロイペプチン，１μｇ ｍｌ ペプスタチン−Ａ，１μＭ ＰＭＳＦ，２１μｇ／ｍｌアプロチニン，５０ｍＭ ＮａＦ，５０ｍＭ β−グリセロリン酸，１５ｍＭ ピロリン酸ナトリウム，１ｍＭ オルトバナデン酸ナトリウム２００μｌの存在下で、氷上で溶解する。各ウェルの内容物を１４，０００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、そして上清を清潔な管に移す。この時点で、溶解物を−２０℃で貯蔵し得る。
【０１７３】
（Ｃ．細胞溶解物におけるリン酸化ｔａｕを検出するためのＥＬＩＳＡ）
Ｉｍｍｕｌｏｎ ４小片（ｓｔｒｉｐｓ）（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）を、Ｃａ＋＋およびＭｇ＋＋，１００μｌ／ウェルを含むＰＢＳ中で５μｇ／ｍｌでモノクローナル抗リン酸化ｔａｕ（ＡＴ８，Ｐｏｌｙｍｅｄｃｏ，Ｉｎｃ．）でコーティングする。４℃で一晩インキュベートした後、この小片をウォッシャー緩衝液（０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を含むＰＢＳ）で２回洗浄し、そして１％ＢＳＡ、５％正常マウス血清および０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を含むＰＢＳで、室温で１時間ブロックする。小片をウォッシャー緩衝液で５回洗浄する。１％ ＢＳＡ、０．１％ ＮａＮ３を含むＰＢＳ中で１：１０に希釈した溶解物（１００μｌ）を、各ウェルに添加し、そして室温で１時間インキュベートする。洗浄後、ＰＢＳ−ＢＳＡ中の０．５μｇ／ｍｌのビオチン化モノクローナル抗（非リン酸化）ｔａｕ（ＨＴ７，Ｐｏｌｙｍｅｄｃｏ，Ｉｎｃ．）１００μｌを各ウェルに添加する。小片を５回洗浄し、そしてＨＲＰ連結ストレプトアビジンを添加し、室温で３０分間インキュベートし、そしてウォッシャー緩衝液で大規模に洗浄する。ＴＭＢ基質（Ｐｉｅｒｃｅ）を発色のために使用し、そして等容量の０．８Ｍの硫酸を添加することによって反応を停止する。小片を４５０ｎｍフィルターを用いて、ＥＬＩＳＡプレートリーダー上で読む。ｔａｕリン酸化を最大レベルの５０％（すなわち、ＩＣ５０）まで阻害する化合物の濃度を、Ｓ状曲線をプロットされたデータに合致させることによって決定する。
【０１７４】
（実施例２４）
（ＧＳＫ３インヒビターがグルタミン酸興奮毒性から初代海馬細胞を保護する可能性の試験）
海馬を胎齢１８〜１９日のラットから解剖した。組織をＨｉｂｅｍａｔｅ ＴＭ培地（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）中に収集し、そして約１ｍｍ片に細かく刻んだ。組織を、Ｐａｐａｉｎ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いて分離した。単離後に、細胞を、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ ＴＭ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）、２％ Ｂ２７サプリメント（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）、Ｌ−グルタミンおよび抗生物質からなる無血清培地に再懸濁した。細胞を、ディッシュ当たり７．５×１０４細胞の濃度で、ポリ−Ｌ−リシンでコーティングした３５ｍｍ組織培養ディッシュにプレーティングした。５％ ＣＯ２中で３７℃で１０〜１４日後に、細胞をリンスし、そして新鮮な培地を与えた。翌日、本発明の代表的化合物を、１ｎＭと１００μＭとの間の最終濃度まで添加した。化合物の添加後４〜８時間目に、馴化培地を細胞から除去し、そして３７℃で貯蔵した。培養物を、１０μＭのグリシンを含むＨＥＰＥＳ緩衝化平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）で２回リンスしたＧｒａｂｂおよびＣｈｏｉ、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ １９：１６５７−６２（１９９９）。次いで、耐用物を室温で５分間、同じＨＢＳＳ中で２００μＭグルタミン酸に暴露した。暴露後、培養物を緩衝液で３回リンスし、次いで、化合物を含むそれらの本来の馴化培地に戻した。グルタミン酸暴露後２０〜２４時間目に、培養物をＨＢＳＳ中でリンスし、そしてＴｒｙｐａｎ Ｂｌｕｅに１０分間暴露した。この染料は、死細胞によって取り込まれる。培養物をリンスし、次いで、４％パラホルムアルデヒド中で３０分間固定した。生きているニューロンと死んだ（青い核）の大きなニューロンの数（少なくとも各培養物から２００細胞）を、位相差顕微鏡によってカウントし、そして写真を撮った。この方法を用いて、本発明の化合物は、グルタミン酸塩のニューロン細胞死を誘導する可能性を有意に減少し得ることが示された。
【０１７５】
（実施例２５）
（糖尿病げっ歯類における有効性の評価）
（グルコース耐性試験：）
（経口投薬のための化合物処方）
試験化合物を、典型的に、投与前日に、１％ カルボキシメチルセルロース／０．１％ ｔｗｅｅｎ−８０（両方ともＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍ，ＭＯから）中の水または懸濁液中の溶液として、経口栄養のために処方した。いくつかの初期化合物を、以下の手順と共通の手順に従って、１５％ Ｃａｐｔｉｓｏｌ（ＣｙＤｅｘ Ｃｏ．，ＩＬによって改変されたシクロデキストリン）中の溶液として処方した。水溶液のために、乾燥および凍結乾燥した試験化合物粉末を、蒸留水に可溶化し、そしてボルテックスおよび超音波処理することによってよく混合する。必要ならば、試験化合物を１Ｎ ＮａＯＨまたは１Ｎ ＨＣｌでｐＨ調節し、そして最後に、０．２ミクロンのセルロースアセテート膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏ．，ＭＡ）を付けた注射器を介して滅菌濾過する。経口懸濁液のために、試験化合物粉末を、１％カルボキシメチルセルロース／０．１％ ｔｗｅｅｎ−８０の新鮮な懸濁液と混合し、そして大規模に超音波処理し、必要ならば、上記のようにｐＨ調節し、そして粒子サイズが均一になり、そしてサイズが１０ミクロンより小さくなるまでボルテックスする。
【０１７６】
（糖尿病マウスグルコース耐性試験：）
肥満ｄｂ／ｄｂ（雌性 Ｃ５７ＢｌＫｓ／Ｊ）マウスを、８週齢でＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ（ＢａｒＨａｒｂｏｒ，ＭＥ）から得て、そして１〜２週間後に有効性試験のために使用した。試験をモニターするとき、食餌を朝早く（グルコースボーラスの７〜８時間前）に除去した。局所麻酔（ＥＭＬＡ ｃｒｅｍｅ，Ａｓｔｒａ Ｐｈａｒｍ．，ＭＡ）を尾の末端に適用し、そして５００〜１００μｌの血液サンプルを尾先端の少量断片（ｓｎｉｐ）から得て、そして５００Ｕ／ｍｌのナトリウムヘパリン（Ｅｌｋｉｎｓ−Ｓｉｎｎ，ＮＪ）５μｌを含むＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブへ収集し、続いて血漿を単離した。サンプルを、その日の間、種々の間隔で、合計で６〜８の時間点で得た。マウスを処置群へと無作為化し、そして試験化合物の第１の経口用量（０．２ｍｌ用量）をグルコースの４．５時間前に、および再び経口栄養（ｏＧＴＴ）または腹腔内注射によって、５０％ブドウ糖（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂ，ＩＬ）０．２ｍｌの投与０．５時間前に投与した。グルコース投与の約２時間後の最終血液サンプル採取後に、食餌を動物に戻した。
【０１７７】
（基本的な糖血症およびインスリン血症の調節：）
試験化合物を、典型的に、複数の日の状況で、複数の投薬レジメンまたは一回のボーラスで、ｄｂ／ｄｂマウス（上を参照）またはＺＤＦラット（Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍｏｄｅｌｓ，Ｉｎｃ．；Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）に経口投与した。ＺＤＦラットを８週齢で受け取り、そして１〜２週間後に、有効性試験のために使用した。食餌を投薬の約３０分前に除去し、そして試験化合物の一回のボーラス（投薬用量は１〜８ｍｇ／ｍｌの範囲）を投与した。血液を上記のように、続く２〜３時間にわたって１〜６個の時間点でサンプリングした。食餌を血液サンプリング後に動物のケージに戻した。
【０１７８】
（最初の終末点：）
グルコースおよびインスリンのレベルを血漿および／または血液サンプルから測定する。グルコースレベルをＯｎｅ−Ｔｏｕｃｈグルコメーター（Ｌｉｆｅｓｃａｎ Ｃｏ．，ＣＡ）によって白血球から、およびＢｅｃｋｍａｎグルコースアナライザによって血漿から測定する。グルコースの結果は、典型的に、マウスについての血液値およびラット研究についての血漿値を反映する。インスリンレベルの測定は、供給者のプロトコルに従って、ＥＬＩＳＡ（Ｃｒｙｓｔａｌ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，ＩＬ）によった。
【０１７９】
（結果の定量化：）
有効性は、ｍｇ／ｄＬグルコースまたはｎｇ／ｍｌインスリンとして表され得るか、あるいは、（１００ｍｇ／ｄＬの正常血糖の基線を超えて取られた）血漿グルコースおよび（１ｎｇ／ｍＬの正常血糖の基線を超えて取られた）インスリンについての曲線下の領域（ＡＵＣ）として表される。典型的には、ＡＵＣとして表される場合、結果は、実際に、減少したＡＵＣとして示される（［（ビヒクルコントロールＡＵＣ −試験群ＡＵＣ）／ビヒクルコントロールＡＵＣ×１００］）。このような表現は、プラシーボコントロール群と比較して、改善されたグルコースの処理（ｄｉｓｐｏｓａｌ）および／または減少された基本的な高血糖値またはインスリン保存の大きさの単一の量的表現を提供する。
【０１８０】
（結果：）
本発明の代表的な化合物は、よいインビトロ力価を示し、そしてカプセルで処方され、そしてマウスに皮下投与（３０ｍｇ／ｋｇ）される場合、インビボで高いバイオアベイラビリティおよび組織浸透度を示した。グルコース耐性試験直前の基本的な高血糖症における有意な減少、およびグルコースチャレンジに続く有意に改善されたグルコース処分が観察された。グルコース応答が、−６０分〜＋１２０分の血液グルコース曲線の下の領域（ＡＵＣ）を決定することによって定量化される場合、コントロール群と比較して、ＡＵＣにおける４５〜５０％の減少が観察される。これは、Ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅによって得られる有効性と矛盾しない（６０または１００ｍｇ／ｋｇ／日のいずれかで少なくとも数日間経口的に投薬される場合）。また、処置された動物におけるインスリンレベルは、コントロールマウスより低いままであるという観察は、重要であった。
【０１８１】
本発明の好ましい実施形態が、説明および記載されたが、種々の変化が、本発明の精神および範囲から逸脱することなく本発明になされ得ることが理解される。
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）の活性を阻害する炭素環式化合物誘導体、この化合物を含む薬学的組成物、ならびに単独でかまたは他の薬学的に活性な薬剤と組み合わせた化合物および組成物の使用に関する。本発明により提供される化合物および組成物は、ＧＳＫ３活性により媒介される障害（例えば、糖尿病、アルツハイマー病、他の神経変性障害（例えば、パーキンソン病およびハンティングトン病）、肥満、アテローム硬化性心臓血管疾患、本態性高血圧症、多嚢胞性卵巣症候群、Ｘ症候群、虚血、特に大脳虚血、外傷性脳損傷、双極性障害、免疫不全および癌）の処置において有用性を有する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）は、セリン／スレオニンキナーゼであり、これについては２つの異性体（αおよびβ）が同定されている。Ｗｏｏｄｇｅｔｔ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，１６：１７７−８１（１９９１）。両方のＧＳＫ３異性体は、休止細胞において構成的に活性である。ＧＳＫ３は、もともと、直接リン酸化により、グリコーゲンシンターゼを阻害するキナーゼとして同定された。インスリンの活性化の際、ＧＳＫ３は、不活性化され、それにより、グリコーゲンシンターゼの活性化およびおそらく他のインスリン依存性事象（例えば、グルコース輸送）を可能にする。続いて、ＧＳＫ３活性がまた、レセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を介してシグナルを発する他の増殖因子（例えば、インスリン）によって不活性化されることが示された。このようなシグナル伝達分子の例としては、ＩＧＦ−１およびＥＧＦが挙げられる。Ｓａｉｔｏら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，３０３：２７−３１（１９９４）；Ｗｅｌｓｈら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２９４：６２５−２９（１９９３）；およびＣｒｏｓｓら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０３：２１−２６（１９９４）。
【０００３】
ＧＳＫ３活性を阻害する薬剤は、ＧＳＫ３活性により媒介される障害を処置する際に有用である。さらに、ＧＳＫ３の阻害は、増殖因子シグナル伝達経路の活性化を模倣し、従って、ＧＳＫ３インヒビターは、このような経路が不十分に活性である疾患の処置において有用である。ＧＳＫ３インヒビターを用いて処置され得る疾患の例は、以下に記載される。
【０００４】
（糖尿病）
２型糖尿病は、加齢と共に罹患率が上がる疾患である。これは最初に、インスリンに対する上昇した感受性、および循環インスリン濃度の代償的な上昇により特徴付けられ、この後者は、正常な血液グルコースレベルを維持することを必要とする。上昇したインスリンレベルは、膵臓β細胞からの増加した分泌により生じ、そして生じる高インスリン血症は、糖尿病の心臓血管合併症に関連する。インスリン耐性が悪化するにつれて、膵臓β細胞の需要は、膵臓が、もはや適切なレベルのインスリンを供給できなくなるまで確実に増加し、血液中の上昇したグルコースレベルを生じる。最終的に、顕性高血糖症および高脂血症が生じ、糖尿病に関連する壊滅的な長期の合併症（心臓血管疾患、腎不全および失明を含む）に至る。２型糖尿病を生じる正確な機構は、未知であるが、不適切なインスリン応答に加えて、骨格筋への障害性のグルコース輸送および増加した肝臓グルコース産生が生じる。食餌変更は、しばしば効果が無く、従って最終的に、大部分の患者は、この疾患の合併症の進行を予防および／または遅らせる試みにおいて、薬学的介入を必要とする。多くの患者は、インスリン分泌を増加するために入手可能な多くの経口抗糖尿病剤（スルホニルウレアを含む）の１つ以上で処置され得る。スルホニルウレア薬物の例としては、膵臓グルコース産生の抑制のためのメトホルミン、およびトログリタゾン（ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）（インスリン感作薬）が挙げられる。これらの薬剤の有用性にもかかわらず、糖尿病の３０〜４０％は、これらの医薬を使用して適切には制御されず、そして皮下インスリン注射を必要とする。さらに、これらの治療の各々は、関連する副作用を有する。例えば、スルホニルウレアは、低血糖症を生じ得、そしてトログリタゾンは、重篤な肝毒性を生じ得る。現在、糖尿病前症患者および糖尿病患者の処置のための新しく改良された薬物の必要性が存在する。
【０００５】
上記のように、ＧＳＫ３阻害は、インスリン依存性プロセスを刺激し、従って２型糖尿病の処置において有用である。リチウム塩を使用して得られた最近のデータは、この概念の証拠を提供する。リチウムイオンは、最近、ＧＳＫ３活性を阻害することが報告されている。Ｋｌｅｉｎら、ＰＮＡＳ ９３：８４５５−９（１９９６）。１９２４年から、リチウムは、抗糖尿病効果（血漿グルコースレベルを下げる能力、グリコーゲン取込みを増加する能力、インスリンを増強する能力、グルコースシンターゼ活性を上方制御する能力、ならびに皮膚、筋肉および脂肪細胞におけるグリコーゲン合成を刺激する能力を含む）を有することが報告された。しかし、リチウムは、おそらく、ＧＳＫ３以外の分子標的に対する実証された効果のために、ＧＳＫ活性の阻害における使用が広くは受け入れられていない。ＧＳＫ３インヒビターでもあるプリンアナログ５−ヨードツベルジシン（ｉｏｄｏｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）は、同様に、グリコーゲン合成を刺激し、そしてラット肝臓細胞において、グルカゴンおよびバソプレシンによるグリコーゲンシンターゼの不活化を拮抗する。Ｆｌｕｃｋｉｇｅｒ−Ｉｓｌｅｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ２９２：８５−９１（１９９３）；およびＭａｓｓｉｌｌｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ２９９：１２３−８（１９９４）。しかし、この化合物はまた、他のセリン／スレオニンおよびチロシンキナーゼを阻害することが示された。Ｍａｓｓｉｌｌｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ２９９：１２３−８（１９９４）。
【０００６】
（アルツハイマー病）
ＧＳＫ３はまた、アルツハイマー（ＡＤ）に関連する生物学的経路に関与する。ＡＤの特徴的な病理学的特徴は、異常にプロセシングされた形態のアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）（いわゆる、β−アミロイドペプチド（β−ＡＰ））の細胞外プラーク、ならびに大部分が過リン酸化されたτタンパク質からなる対螺旋フィラメント（ＰＨＦ）を含む細胞内の神経原線維変化の発達である。ＧＳＫ３は、ＰＨＦτに特徴的な異常な部位で、インビトロにおいてτタンパク質をリン酸化することが見出された多数のキナーゼの１つであり、そしてこれは、生きた細胞および動物においてτタンパク質をリン酸化することもまた示された唯一のキナーゼである。Ｌｏｖｅｓｔｏｎｅら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ ４：１０７７−８６（１９９４）；およびＢｒｏｗｎｌｅｅｓら、Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ ８：３２５１−３２５５（１９９７）。さらに、ＧＳＫ３キナーゼインヒビターであるＬｉＣｌは、細胞において、τ過リン酸化をブロックする。Ｓｔａｍｂｏｌｉｃら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ ６：１６６４−８（１９９６）。従ってＧＳＫ３活性は、神経原線維変化の生成、従って、疾患の進行に寄与し得る。最近、ＧＳＫ３βは、ＡＤ病因における別の重要なタンパク質、プレセニリン１（ＰＳ１）と会合することが示された。Ｔａｋａｓｈｉｍａら、ＰＮＡＳ ９５：９６３７−９６４１（１９９８）。ＰＳ１遺伝子における変異は、β−ＡＰの増加した産生を導くが、著者らはまた、変異体ＰＳ１タンパク質が、ＧＳＫ３βにより強固に結合し、そしてＰＳ１の同じ領域に結合するτのリン酸化を増強することを示す。
【０００７】
興味深いことに、別のＧＳＫ３基質であるβ−カテニンが、ＰＳ１に結合することもまた示された。Ｚｈｏｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ ３９５：６９８−７０２（１９９８）。細胞質ゾルβカテニンは、ＧＳＫ３によるリン酸化の際の分解に対して標的化され、そして減少したβ−カテニン活性は、β−ＡＰの誘導性ニューロンアポトーシスに対するニューロン細胞の増加した感受性に関連する。従って、ＧＳＫ３βと変異体ＰＳ１との増加した会合は、ＰＳ１変異体ＡＤ患者の脳において観察されたβ−カテニンの低下したレベルの原因であり得、そしてニューロン細胞の死におけるこの疾患に関連した増加の原因である。これらの観察と一致して、ＧＳＫ３センスではなくＧＳＫ３アンチセンスの注射が、インビトロにおけるニューロンに対するβ−ＡＰの病理学的効果をブロックし、細胞死の発生における２４時間の遅延および１時間における１２から３５％への細胞生存の増加をもたらすことが示された。Ｔａｋａｓｈｉｍａら、ＰＮＡＳ ９０：７７８９−９３（１９９３）。これらの後者の研究において、細胞死に対する効果が、細胞内ＧＳＫ３活性を２倍にすることによって（β−ＡＰ投与の３〜６時間以内に）先行し、このことは、ＧＳＫ３の近位にその基質を増やす遺伝的機構に加えて、β−ＡＰが、ＧＳＫ活性を実際に上昇させ得ることを示唆する。ＡＤにおけるＧＳＫ３の役割のさらなる証拠は、ＧＳＫ３のタンパク質発現レベル（しかし、この場合、特異的活性ではない）が、正常な脳組織と比較して、ＡＤのポストシナプトソーム上清において５０％上昇するという観察によって提供される。Ｐｅｉら、Ｊ Ｎｅｕｒｏｐｈａｔｈｏｌ Ｅｘｐ ５６：７０−７８（１９９７）。
【０００８】
さらにより最近では、公知のＧＳＫ３インヒビターである治療濃度のリチウムが、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）切断を妨害することにより、β−ＡＰ産生をブロックすることが示された。Ｐｈｉｅｌら，Ｎａｔｕｒｅ ４２３（２２）：４３５−４３８（２００３）。ＧＳＫ３はまた、神経原線維変化の主な成分であるτタンパク質をリン酸化するので、ＧＳＫ３の阻害は、アミロイド斑および神経原線維変化の両方の減少をもたらし、そしてアルツハイマー病の処置において有用である。
【０００９】
（他のＣＮＳ障害）
上記のリチウムの効果に加えて、双極性障害（躁鬱性症候群）を処置するためのリチウムの使用の長い歴史がある。リチウムに対するこの臨床的応答は、双極性障害の病因におけるＧＳＫ３活性の関与を反映し得、この場合、ＧＳＫ３インヒビターは、この適応症に適切であり得る。この意見を支持して、双極性障害の処置において一般に使用される別の薬物である、バルプロエートもまた、ＧＳＫ３インヒビターであることが、最近示された。Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ７２：１３２７−１３３０（１９９９）。リチウムおよび他のＧＳＫ３インヒビターが双極性障害を処置するように作用し得る１つの機構は、神経伝達物質であるグルタメートにより引き起こされる異常に高レベルの励起に供されたニューロンの生存を増加することである。Ｎｏｎａｋａら、ＰＮＡＳ ９５：２６４２−２６４７（１９９８）。グルタメート誘導性ニューロン興奮毒性はまた、急性損傷（例えば、大脳虚血、外傷性脳損傷および細菌感染におけるような）に関連する神経変性の主な原因であると考えられる。さらに、過剰なグルタメートシグナル伝達は、アルツハイマー病、ハンティングトン病、パーキンソン病、ＡＩＤＳ関連痴呆、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）および多発性硬化症（ＭＳ）のような疾患において見られる慢性ニューロン損傷における因子であると考えられる。Ｔｈｏｍａｓ，Ｊ．Ａｍ．Ｇｅｒｉａｔｒ．Ｓｏｃ．４３：１２７９−８９（１９９５）。従って、ＧＳＫ３インヒビターは、これらおよび他の神経変性障害の有用な処置であると考えられる。
【００１０】
（免疫増強）
ＧＳＫ３は、転写因子ＮＦ−ＡＴをリン酸化し、そしてカルシニューリンの効果とは逆に、その核からの輸送を促進する。Ｂｅａｌｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７５：１９３０−３３（１９９７）。従って、ＧＳＫ３は、ＮＦ−ＡＴを介する早期の免疫応答遺伝子活性化をブロックし、そしてＧＳＫ３インヒビターは、免疫応答の活性化を可能にするかまたは延長する傾向があり得る。従って、ＧＳＫ３インヒビターは、特定のサイトカインの免疫刺激効果を延長し増強すると考えられ、そしてこのような効果は、これらのサイトカインの腫瘍免疫治療、または実際の一般的な免疫治療の可能性を上昇させ得る。
【００１１】
（他の障害）
リチウムはまた、他の生物学的効果を有する。これは、インビトロおよびインビボの両方における造血の強力な刺激因子である。Ｈａｍｍｏｎｄら、Ｂｌｏｏｄ ５５：２６−２８（１９８０）。イヌにおいて、炭酸リチウムは、再発性好中球減少症を排除し、そして他の血球細胞数を正常化した。Ｄｏｕｋａｓら、Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ １４：２１５−２２１（１９８）。リチウムのこれらの効果が、ＧＳＫ３の阻害により媒介される場合、ＧＳＫ３特異的インヒビターは、さらに広い適用を有し得る。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
ＧＳＫ３のインヒビターは、多くの疾患の処置において有用であるため、ＧＳＫ３の新たなインヒビターの同定が非常に所望される。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
（発明の要旨）
グリコゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）活性が、本発明によって提供される特定の炭素環式ベースの誘導体によって、インビトロまたはインビボで阻害され得ることが、驚くべきことに、発見された。本発明の炭素環誘導体は、ＧＳＫ３の特異性をプロセシングすることが見出された。従って、本発明は、グリコゲンシンターゼキナーゼ（ＧＳＫ３）の活性をインビトロで阻害する新規化合物、組成物および方法、ならびにＧＳＫ３媒介傷害をインビボで処置する新規化合物、組成物および方法を提供する。１つの局面において、本発明は、以下の式（Ｉ）の、ＧＳＫ３阻害活性を有する新規化合物：
【００１４】
【化７】
およびその薬学的に受容可能な塩を提供し、ここで：
ＸおよびＹは、独立して、窒素、酸素、および必要に応じて置換された炭素からなる群より選択され；
Ａ１およびＡ２は、必要に応じて置換された、アリール、アリールアミノ、アリールオキシまたはヘテロアリールであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、独立して、水素、ヒドロキシル、ならびに必要に応じて置換された低級アルキル、シクロ低級アルキル、アルキルアミノアルキル、低級アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アリールおよびへテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ’１、Ｒ’２、Ｒ’３およびＲ’４は、独立して、水素、および必要に応じて置換された低級アルキルからなる群より選択され；
Ｒ’２およびＲ’３は、水素、および必要に応じて置換された低級アルキルからなる群より選択され；
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、独立して、水素、ヒドロキシ、ハロ、カルボニル、ニトロ、アミノ、アミド、アミジノ、イミド、シアノ、ならびに置換または非置換の低級アルキル、低級アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシ、アルキルアミノカルボニルオキシ、アリールアミノカルボニルオキシ、ホルミル、低級アルキルカルボニル、低級アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アミノアリール、アルキルスルホニル、スルホンアミド、アミノアルコキシ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アラルキルアミノ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロアラルキルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルキルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、アミジノ、シクロアルキル、シクロアミド、シクロチオアミド、シクロアミジノ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロアミジノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、グアニジニル、アリール、ビアリール、ヘテロアリール、ヘテロビアリール、ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、アリールスルホニルおよびアリールスルホンアミドからなる群より選択される。
【００１５】
本発明の方法、化合物および組成物は、ＧＳＫ３活性によって媒介される障害を処置する際に、単独でか、または他の薬学的に活性な薬剤と組み合わせて使用され得る。この処置は、例えば、糖尿病、アルツハイマー病、他の神経変性障害（例えば、パーキンソン病およびハンティントン病）、肥満症、アテローム性動脈硬化症心血管疾患、本態的高血圧症、多嚢胞性卵巣症候群、Ｘ症候群、虚血、外傷性脳傷害、双極性傷害、免疫不全または癌の処置である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
本発明に従って、グリコゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）活性を、インビトロまたはインビボのいずれかで阻害するための、化合物、組成物および方法が提供される。１つの局面において、本発明は、以下の式（Ｉ）：
【００１７】
【化８】
の、ＧＳＫ３阻害活性を有する新規化合物、およびその薬学的に受容可能な塩を提供する。ここで：
ＸおよびＹは、独立して、窒素、酸素、および必要に応じて置換された炭素からなる群より選択され；
Ａ１およびＡ２は、必要に応じて置換された、アリール、アリールアミノ、アリールオキシまたはヘテロアリールであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、独立して、水素、ヒドロキシル、ならびに必要に応じて置換された低級アルキル、シクロ低級アルキル、アルキルアミノアルキル、低級アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アリールおよびへテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ’１、Ｒ’２、Ｒ’３およびＲ’４は、独立して、水素、および必要に応じて置換された低級アルキルからなる群より選択され；
Ｒ’２およびＲ’３は、水素、および必要に応じて置換された低級アルキルからなる群より選択され；
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、独立して、水素、ヒドロキシ、ハロ、カルボニル、ニトロ、アミノ、アミド、アミジノ、イミド、シアノ、ならびに置換または非置換の低級アルキル、低級アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシ、アルキルアミノカルボニルオキシ、アリールアミノカルボニルオキシ、ホルミル、低級アルキルカルボニル、低級アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アミノアリール、アルキルスルホニル、スルホンアミド、アミノアルコキシ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アラルキルアミノ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロアラルキルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルキルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、アミジノ、シクロアルキル、シクロアミド、シクロチオアミド、シクロアミジノ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロアミジノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、グアニジニル、アリール、ビアリール、ヘテロアリール、ヘテロビアリール、ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、アリールスルホニルおよびアリールスルホンアミドからなる群より選択される。
【００１８】
本発明の１つの現在好ましい実施形態において、ＸおよびＹのうちの少なくとも１つは、窒素である。この群の代表的な化合物としては、ＸおよびＹのうちの一方が窒素であり、そしてＸおよびＹのうちの他方が、酸素、または必要に応じて置換された窒素である、化合物が挙げられる。好ましくは、ＸとＹとの両方が、窒素である。
【００１９】
構成要素Ａ１およびＡ２は、独立して、３〜１０個の炭素環原子および必要に応じて１つ以上のヘテロ原子を有する、芳香族環を構成し得る。従って、１つの実施形態において、Ａ１および／またはＡ２は、必要に応じて置換された、炭素環式アリール、アリールアミノまたはアリールオキシであり得、例えば、置換または非置換のフェニル、フェニルアミノ、フェニルオキシであり得る。あるいは、Ａ１および／またはＡ２は、必要に応じて置換されたヘテロアリールであり得、例えば、置換または非置換のピリジル、ピリミジニル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、トリアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、プリニル、ナフチル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジル、およびベンゾイミダゾリルであり得、これらは、少なくとも１個でありかつ３個未満の置換基で置換され得る。代表的な置換基は、例えば、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、アミジノ、オキサミジノ、アルコキシアミジノ、イミジノ、グアニジノ、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、低級アルキルアミノ低級アルコキシ、低級アルキルカルボニル、低級アラルキルカルボニル、低級ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アミノアルキルおよびシアノアルキルからなる群より独立して選択され得る。
【００２０】
本発明の他の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうちの少なくとも１つは、ｍａｙ ｂｅ 水素、またはハロ低級アルキル、ヘテロシクロアミノアルキル、および低級アルキルアミノ低級アルキルからなる群より選択される、非置換もしくは置換された低級アルキルであり得る。現在好ましい本発明の実施形態は、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３が、水素であり、そしてＲ４が、水素、メチル、エチル、アミノエチル、ジメチルアミノエチル、ピリジルエチル、ピペリジニルエチル、ピロリジニルエチル、ピペラジニルエチルおよびモルホリニルエチルからなる群より選択される化合物を含む。
【００２１】
置換基Ａ１は、３〜１０個の炭素環原子および必要に応じて１つ以上の環ヘテロ原子を有する芳香族環であり得る。従って、１つの実施形態において、Ａ１は、必要に応じて置換された炭素環式アリールであり得る。あるいは、Ａ１は、必要に応じて置換されたヘテロアリール（例えば、置換または非置換のピリジル、ピリミジニル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、トリアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、プリニル、ナフチル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジル、およびベンゾイミダゾリル）であり得、これらは、少なくとも１個でありかつ３個未満の置換基で置換され得る。代表的な置換基は、例えば、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、アミジノ、オキサミジノ、アルコキシアミジノ、イミジノ、グアニジノ、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、低級アルキルアミノ低級アルコキシ、低級アルキルカルボニル、低級アラルキルカルボニル、低級ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アミノアルキルおよびシアノアルキルからなる群より独立して選択され得る。
【００２２】
現在特に好ましい本発明の実施形態において、Ａ１は、以下の式：
【００２３】
【化９】
を有し、ここで、Ｒ８およびＲ９は、水素、ヒドロキシ、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、アミジノ、オキサミジノ、アルコキシアミジノ、イミジノ、グアニジニル、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、アミノ低級アルキル、低級アルキルアミノ低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、低級アルキルアミノ低級アルコキシ、低級アルキルカルボニル、低級アラルキルカルボニル、低級ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アリール、およびアラルキルからなる群より独立して選択される。最も好ましくは、Ａ１は、アミノピリジル、ニトロピリジル、アミノニトロピリジル、シアノピリジル、シアノチアゾリル、アミノシアノピリジル、トリフルオロメチルピリジル、メトキシピリジル、メトキシニトロピリジル、メトキシシアノピリジルおよびニトロチアゾリルからなる群より選択される。
【００２４】
本発明の他の現在好ましい化合物は、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のうちの少なくとも１つが、置換および非置換のアリール、ヘテロアリールおよびビアリールからなる群より選択されるｂｉアリール式（Ｉ）の化合物を含む。現在好ましい実施形態において、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のうちの少なくとも１つは、置換または非置換の、以下の式の部分である：
【００２５】
【化１０】
ここで、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、カルボキシル、ヒドロキシ、ならびに必要に応じて置換された低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、ハロ低級アルキル、ハロ低級アルコキシ、アミノアルキル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アルキルカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアラルキルカルボニルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ アミノカルボニル、低級アルキルアミノカルボニル、アミノアラルキル、低級アルキルアミノアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロヘテロアリール、アラルキル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシアルキル、アルキルカルボニルオキシアルキル、ヘテロアリールカルボニルオキシアルキル、アラルキルカルボニルオキシアルキル、およびヘテロアラルキルカルボニルオキシアルキルからなる群より独立して選択される。Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素であり、そしてＲ１２が、ハロ、低級アルキル、ヒドロキシル、低級アルコキシ、ハロ低級アルキル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、モルホリノ、ピペリジノおよびシアノからなる群より選択される化合物；Ｒ１１、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素であり、そしてＲ１０およびＲ１２が、ハロ、低級アルキル、ヒドロキシル、低級アルコキシ、ハロ低級アルキル、モルホリノ、ピペリジノおよびシアノからなる群より独立して選択される化合物；Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素であり、そしてＲ１２がヘテロアリールである化合物；Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素であり、そしてＲ１２がヘテロシクロアルキルである化合物；ならびにＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４のうちの少なくとも１つが、ハロであり、そしてＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４の残りのものが、水素である化合物という、現在特に好ましい化合物が得られる。好ましくは、Ｒ５およびＲ７のうちの少なくとも１つは、クロロフェニル、ジクロロフェニル、フルオロフェニル、ジフルオロフェニル、ブロモフェニル、ジクロロフルオロフェニル、トリフルオロメチルフェニル、クロロフルオロフェニル、ブロモクロロフェニル、ブロモフルオロフェニル、エチルフェニル、メチルクロロフェニル、エチルクロロフェニル、イミダゾリルフェニル、シアノフェニル、モルホリノフェニルおよびシアノクロロフェニルからなる群より選択される。
【００２６】
本発明の代表的な実施形態において、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、置換されたアルキル（例えば、アラルキル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アミノアラルキル、カルボニルアミノアルキル、アルキルカルボニルアミノアルキル、アリールカルボニルアミノアルキル、アラルキルカルボニルアミノアルキル、アミノアルコキシアルキルおよびアリールアミノアルキル；置換されたアミノ（例えば、アルキルアミノ、アルキルカルボニルアミノ，アルコキシカルボニルアミノ、アリールアルキルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アルキルチオカルボニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、およびヘテロアラルキルカルボニルアミノ）；または置換されたカルボニル（例えば、非置換もしくは置換されたアミノカルボニル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニルおよびアルキルアミノアルキルオキシカルボニル）であり得る。他の実施形態において、Ｒ６は、アミジノ、グアニジノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、シクロアミド、ヘテロシクロアミド、シクロチオアミドおよびヘテロシクロ低級アルキルからなる群より選択され得る。なお他の実施形態において、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のうちの少なくとも１つは、アリール、ヘテロアリール、ｏｒ ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｙｌ ｓｕｃｈ ａｓ，例えば、置換または非置換のピリジル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリニル、ピラジニル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、イミダゾリジニル、オキサジアゾリル、オキサゾリニル、オキサゾリジノニル、テトラゾリル、ピラジニル、ピラゾリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリニル、トリアゾリル、チエニル、フラニル、キノリニル、ピロロピリジル、ピラゾロニル、ピリダジニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジル、ベンゾトリアゾリル、およびベンゾイミダゾリルであり得る。なお他の実施形態において、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のうちの少なくとも１つは、以下の構造：
【００２７】
【化１１】
を有するモノケトピペラジニル基であり、ここで、Ｒ１５およびＲ１６は、水素、低級アルキル、低級アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アリール低級アルキル、低級アルキルアリール低級アルキル、ハロ低級アルキル、ハロアリール低級アルキル炭素環式およびハロアリール低級アルキル複素環式からなる群より独立して選択されるか；またはＲ１６は、別のＲ１６またはＲ１５と一緒になって、炭素環式環、複素環式環またはアリール環を形成し得；そしてｏは、１と３との間の整数である。本発明のこの局面の例示的な実施形態において、Ｒ１５は、低級アルキル（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、およびｔ−ブチル）であるか、または Ｒ１５は、Ｒ１６と一緒になって、以下の構造：
【００２８】
【化１２】
を有する基を形成する。
【００２９】
本明細書中において使用される場合、他の例示的なヘテロシクロ基としては、例えば、以下に示されるものが挙げられる（ここで、置換基の付着点、および以下に示されるほかの置換基は、左上の結合を介する）。これらのヘテロシクロ基は、さらに置換され得、そして本明細書中の開示と組み合わせて、有機化学および医化学の分野の当業者に明らかであるように、種々の位置で付着され得る。
【００３０】
【化１３】
【００３１】
【化１４】
代表的なヘテロアリール基としては、例えば、以下に示されるものが挙げられる。これらのヘテロアリール基は、さらに置換され得、そして本明細書中の開示と組み合わせて、有機化学および医化学の分野の当業者に明らかであるように、種々の位置で付着され得る。
【００３２】
【化１５】
代表的なシクロイミド基およびヘテロシクロイミド基としては、例えば、以下に示されるものが挙げられる。これらのシクロイミド基およびヘテロシクロイミド基は、さらに置換され得、そして本明細書中の開示と組み合わせて、有機化学および医化学の分野の当業者に明らかであるように、種々の位置で付着され得る。
【００３３】
【化１６】
代表的な置換されたアミジノ基およびヘテロシクロアミジノ基としては、例えば、以下に示されるものが挙げられる。これらのアミジノ基およびヘテロシクロアミジノ基は、さらに置換され得、そして本明細書中の開示と組み合わせて、有機化学および医化学の分野の当業者に明らかであるように、種々の位置で付着され得る。
【００３４】
【化１７】
例示的な置換されたアルキルカルボニルアミノ基、アルキルオキシカルボニルアミノ基、アミノアルキルオキシカルボニルアミノ基、およびアリールカルボニルアミノ基としては、例えば、以下に示されるものが挙げられる。これらの基は、さらに置換され得、そして本明細書中の開示と組み合わせて、有機化学および医化学の分野の当業者に明らかであるように、種々の位置で付着され得る。
【００３５】
【化１８】
代表的な置換されたアミノカルボニル基としては、例えば、以下に示されるものが挙げられる。これらのヘテロシクロ基は、さらに置換され得、そして本明細書中の開示と組み合わせて、有機化学および医化学の分野の当業者に明らかであるように、種々の位置で付着され得る。
【００３６】
【化１９】
代表的な置換されたアルコキシカルボニル基としては、例えば、以下に示されるものが挙げられる。これらのアルコキシカルボニル基は、さらに置換され得、そして本明細書中の開示と組み合わせて、有機化学および医化学の分野の当業者に明らかであるように、種々の位置で付着され得る。
【００３７】
【化２０】
この群の現在好ましい例示的な化合物としては、例えば、［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−ニトロフェニル］｛２−［（５−ニトロ （２−ピリジル）アミノ］ エチル｝アミン，｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル）アミノ］ エチル｝［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−ニトロフェニル］−アミン，６−［（２−｛［３−（２，４ジクロロフェニル）−４−ニトロフェニル］ アミノ｝エチルアミノピリジン−３−カルボニトリル、Ｎ−［２−（２，４ジクロロフェニル）−４−（｛２−［（５−シアノ（２−ピリジル））アミノ］ エチル｝−アミノ）フェニル］ アセトアミド、６−［（２−｛［４−アミノ−３−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］ アミノ｝−エチル）アミノピリジン−３−カルボニトリル、Ｎ−［２−（２，４−ジクロロフェニル）−４−（｛２−［（５−シアノ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）フェニル］−２−（メチルアミノ）アセトアミド、［３−（２，４−ジクロロ−フェニル）−４−ニトロフェニル］ メチル｛２−［（５−ニトロ （２−ピリジル））アミノ］ エチル｝アミンおよび｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））アミノ］ エチル｝［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−ニトロフェニル］ メチル−アミンが挙げられる。
【００３８】
別の局面において、本発明は、ある量の式（Ｉ）の化合物を含有する組成物を提供し、この量は、ヒト被験体または動物被験体に、薬学的に受容可能なキャリアと一緒に投与される場合に、ヒト被験体または動物被験体において、ＧＳＫ３活性を調節するために有効な量である。
【００３９】
なお他の実施形態において、本発明は、ヒト被験体または動物被験体において、ＧＳＫ３活性を阻害する方法を提供し、この方法は、ヒト被験体または動物被験体に、式（Ｉ）の化合物を投与する工程を包含する。
【００４０】
本発明は、さらに、ヒト被験体または動物被験体において、ＧＳＫ３媒介障害を処置するための方法であって、該方法は、該ヒト被験体または動物被験体に、該被験体におけるＧＳＫ３活性を阻害するために有効な量の、上記式（Ｉ）の化合物を、単独でか、または他の薬学的に活性な薬剤と組み合わせて投与する工程を包含する。
【００４１】
なお他の実施形態において、本発明は、薬剤として使用するための上記のような式Ｉの化合物、および糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンティントン病、肥満症、アテローム性動脈硬化症の心血管疾患、本態的高血圧症、多嚢胞性卵巣症候群、Ｘ症候群、虚血、外傷性脳傷害、双極性傷害、免疫不全または癌処置のための医薬におけるこれらの化合物の使用方法を提供する。
【００４２】
上記および本明細書中の他の場所において用いられる場合、以下の用語は、以下で定義された意味を有する：
「グリコーゲンシンターゼキナーゼ３」および「ＧＳＫ３」は、本明細書中交換可能に使用され、ヒトＧＳＫ３βアミノ酸配列（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｌ３３８０１）の５６位と３４０位との間のアミノ酸に６０％より多い配列相同性を有する任意のタンパク質をいう。２つのアミノ酸配列または２つの核酸の相同性のパーセントを決定するために、これらの配列は、最適比較の目的のために整列される（例えば、ギャップは、他のポリペプチドまたは核酸との最適配置について１つのポリペプチドまたは核酸の配列に導入され得る）。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置でアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。１つの配列でのある位置が、他の配列の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められる場合、それらの分子は、その位置で相同である（すなわち、本明細書中で使用される場合、アミノ酸または核酸の「相同性」は、アミノ酸または核酸の「同一性」と等しい）。２つの配列間の相同性のパーセントは、これらの配列によって共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、％相同性＝同位置の数／位置の総数×１００）。ＧＳＫ３は、Ｗｏｏｄｇｅｔｔら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，１６：１７７−８１（１９９１）（本明細書中で参考として援用される）に記載されるグリコーゲンシンターゼのリン酸化によってもともと同定された。ＧＳＫ３キナーゼ活性を調節することによって、ＧＳＫ３活性の下流の活性は、阻害され得るか、あるいは刺激され得る。例えば、ＧＳＫ３活性が阻害される場合、グリコーゲンシンターゼは、活性化され得、グリコーゲン産生の増加を生じ得る。ＧＳＫ３はまた、種々の他の状況（例えば、ｃ−ｊｕｎ、β−カテニンおよびτタンパク質のリン酸化を含む）においてキナーゼとして作用することが公知である。ＧＳＫ３キナーゼ活性の阻害が種々の生物学的状況において種々の効果を導き得ることが理解される。しかし、本発明は、本発明が作用する方法に関しての機構の任意の理論によって限定されない。
【００４３】
「ＧＳＫ３インヒビター」とは、本明細書中以下に一般的に記載されるＧＳＫ３阻害性活性についての無細胞アッセイにおいて測定した場合に、約１００μＭ以下、そしてより代表的には約５０μＭ以下のＧＳＫ３に関するＩＣ５０を示す化合物をいうために本明細書中で使用される。「ＩＣ５０」は、酵素（例えば、ＧＳＫ３）の活性を最大レベルの半分へ減少させるインヒビターの濃度である。本発明の代表的な化合物は、ＧＳＫ３に対する阻害性活性を示すことを発見した。本発明の化合物は、好ましくは、無細胞ＧＳＫ３キナーゼアッセイにおいて測定した場合に、約１０μＭ以下、そしてより好ましくは約５μＭ以下、なおより好ましくは約１μＭ以下、最も好ましくは、約２００ｎＭのＧＳＫ３に関するＩＣ５０を示す。
【００４４】
「必要に応じて置換される」とは、水素の、一価または二価のラジカルでの置換をいう。適切な置換基としては、例えば、ヒドロキシル、ニトロ、アミノ、イミノ、シアノ、ハロ、チオ、チオアミド、アミジノ、イミジノ、オキソ、オキソアミジノ、メトキシアミジノ、イミジノ、グアニジノ、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アミノアルキル、シアノアルキルなどが挙げられる。
【００４５】
置換基は、それ自身置換され得る。置換基上で置換される基は、カルボキシル、ハロ；ニトロ、アミノ、シアノ、ヒドロキシル、低級アルキル、低級アルコキシ、アミノカルボニル、−ＳＲ、チオアミド、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２Ｒ、またはシクロアルキルであり得、ここで、Ｒは、代表的に、水素、ヒドロキシルまたは低級アルキルである。
【００４６】
置換された置換基が直鎖基を含む場合、この置換は鎖内（例えば、２−ヒドロキシプロピル、２−アミノブチルなど）または鎖の末端（例えば、２−ヒドロキシエチル、３−シアノプロピルなど）のいずれかで起こり得る。置換された置換基は、共有結合した炭素またはヘテロ原子の直鎖状、分枝状または環状の構造であり得る。
【００４７】
「低級アルキル」は、本明細書中で使用される場合、１〜１０個の炭素原子を含む分枝状または直鎖状のアルキル基であって、非置換であるか、または、例えば１つ以上のハロゲン、ヒドロキシルまたは他の基（例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ネオペンチル、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチルなどが挙げられる）で置換されている基をいう。
【００４８】
語句「アルキル」とは、ヘテロ原子を含まないアルキル基をいう。従って、この語句は、直鎖アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシルなど）を包含する。この語句はまた、直鎖アルキル基の分枝鎖異性体を包含し、この異性体としては、例として提供される以下：−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）などが挙げられるが、これらに限定されない。この語句はまた、環状アルキル基（例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチル）、ならびに上記に規定されるような直鎖アルキル基および分枝鎖アルキル基を包含する。この語句はまた、多環式アルキル基（例えば、アダマンチルノルボルニル、ならびにビシクロ［２．２．０］オクチルならびに上記のような直鎖アルキル基および分枝鎖アルキル基で置換されているような基であるがこれらに限定されない）を包含する。従って、語句非置換アルキル基は、一級アルキル基、二級アルキル基および三級アルキル基を包含する。非置換アルキル基は、親化合物における１以上の炭素原子、酸素原子、窒素原子および／または硫黄原子に結合され得る。好ましい非置換のアルキル基としては、１〜２０個の炭素原子を有する、直鎖アルキル基および分枝鎖アルキル基、ならびに環式アルキル基が挙げられる。より好ましいこのような非置換アルキル基は、１〜１０個の炭素原子を有するが、より好ましくはこのような基は、１〜５個の炭素原子を有する。最も好ましい非置換アルキル基としては、１〜３個の炭素原子を有する、直鎖アルキル基および分枝鎖アルキル基が挙げられ、これらとしては、メチル、エチル、プロピルおよび−ＣＨ（ＣＨ３）２が挙げられる。
【００４９】
「アルキレニル」とは、１〜２０個の炭素原子を有する二価の直鎖状または分枝鎖状の飽和脂肪族ラジカルをいう。本発明の化合物において使用される代表的なアルキレニル基は、その骨格に１〜約６個の炭素原子を有する低級アルキレニル基である。「アルケニル」とは、本明細書中では、１つ以上の二重結合および２〜２０個の炭素原子を有する、直鎖状、分枝状、または環状のラジカルをいう。「アルキニル」とは、本明細書中では、１つ以上の三重結合および２〜２０個の炭素原子を有する、直鎖状、分枝状または環状のラジカルをいう。
【００５０】
「低級アルコキシ」とは、本明細書中で使用される場合、ＲＯ−をいい、ここでＲは低級アルキルである。低級アルコキシ基の代表例としては、メトキシ、エトキシ、ｔ−ブトキシ、トリフルオロメトキシなどが挙げられる。
【００５１】
「シクロアルキル」とは、単環式または多環式の、複素環式または炭素環式のアルキル置換基をいう。代表的なシクロアルキル置換基は、３〜８個の骨格（すなわち、環の）原子を有し、ここで各骨格原子は、炭素またはヘテロ原子のいずれかである。用語「ヘテロシクロアルキル」とは、本明細書中では、１〜５個、そしてより代表的には１〜４個のヘテロ原子をその環構造に有するシクロアルキル置換基をいう。本発明の化合物中で用いられる適切なヘテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄である。代表的なヘテロシクロアルキル部分としては、例えば、モルホリノ、ピペラジニル、ピペラジニルなどが挙げられる。カルボシクロアルキル基は、全ての環原子が炭素であるシクロアルキル基である。シクロアルキル置換基と関連して使用される場合、用語「多環式」とは、本明細書中では、縮合または非縮合のアルキル環式構造をいう。
【００５２】
「ハロ」とは、本明細書中ではハロゲンラジカル（例えば、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素）をいう。「ハロアルキル」とは、１つ以上のハロゲン原子で置換されたアルキルラジカルをいう。用語「ハロ低級アルキル」とは、１つ以上のハロゲン原子で置換された低級アルキルラジカルをいう。用語「ハロアルコキシ」とは、１つ以上のハロゲン原子で置換されたアルコキシラジカルをいう。用語「ハロ低級アルコキシ」とは、１つ以上のハロゲン原子で置換された低級アルコキシラジカルをいう。
【００５３】
「アリール」とは、３〜１４個の骨格炭素またはヘテロ原子を有する、単環式および多環式の芳香族基をいい、そして炭素環式アリール基および複素環式アリール基の両方が含まれる。炭素環式アリール基は、芳香族環の全ての環原子が炭素であるアリール基である。用語「ヘテロアリール」とは、本明細書中では、環原子として１〜４個のヘテロ原子を芳香族環中に有し、この環原子の残りが炭素原子であるアリール基をいう。アリール置換基と関連して使用される場合、用語「多環式」とは、本明細書中では、少なくとも１つの環構造が芳香族（例えば、ベンゾジオキソゾロ（これは、フェニル基に縮合した複素環式構造、すなわち
【００５４】
【化２０Ａ】
、ナフチルなどを有する））である、縮合および非縮合の環状構造をいう。本発明の化合物で置換基として用いられる例示的アリール部分としては、フェニル、ピリジル、ピリミジニル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、チアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、プリニル、ナフチル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジル、およびベンズイミダゾリルなどが挙げられる。
【００５５】
「アラルキル」とは、アリール基で置換されたアルキル基をいう。代表的に、本発明の化合物で用いられるアラルキル基は、このアラルキル基のアルキル部分に組み込まれた１〜６個の炭素原子を有する。本発明の化合物において用いられる適切なアラルキル基としては、例えば、ベンジル、ピコリルなどが挙げられる。
【００５６】
「アミノ」とは、本明細書中では基−ＮＨ２をいう。用語「アルキルアミノ」とは、本明細書中では基−ＮＲＲ’をいい、ここでＲおよびＲ’は、水素または低級アルキルから各々独立して選択される。用語「アリールアミノ」とは、本明細書中では基−ＮＲＲ’をいい、ここでＲはアリールでありそしてＲ’は、水素、低級アルキル、またはアリールである。用語「アラルキルアミノ」とは、本明細書中では基−ＮＲＲ’をいい、ここでＲは低級アラルキルであり、そしてＲ’は、水素、低級アルキル、アリール、または低級アラルキルである。
【００５７】
用語「アリールシクロアルキルアミノ」とは、本明細書中では、基アリール−シクロアルキル−ＮＨ−をいい、ここでシクロアルキルは二価のシクロアルキル基である。代表的に、シクロアルキルは３〜６個の骨格原子を有し、このうち、必要に応じて１〜約４個はへテロ原子である。用語「アミノアルキル」とは、アミノ基で末端置換されたアルキル基をいう。
【００５８】
用語「アルコキシアルキル」とは、基−ａｌｋ１−Ｏ−ａｌｋ２をいい、ここでａｌｋ１は、アルキレニルまたはアルケニルであり、そしてａｌｋ２は、アルキルまたはアルケニルである。用語「低級アルコキシアルキル」とは、アルコキシアルキルをいい、ここでａｌｋ１は、低級アルキレニルまたは低級アルケニルであり、そしてａｌｋ２は、低級アルキルまたは低級アルケニルである。用語「アリールオキシアルキル」とは、基−アルキレニル−Ｏ−アリールをいう。用語「アラルコキシアルキル」とは、基−アルキレニル−Ｏ−アラルキルをいい、ここでアラルキルは低級アラルキルである。
【００５９】
用語「アルコキシアルキルアミノ」とは、本明細書中では、基−ＮＲ−（アルコキシルアルキル）をいい、ここでＲは、代表的には水素、低級アラルキル、または低級アルキルである。用語「アミノ低級アルコキシアルキル」とは、本明細書中ではアミノアルコキシアルキルをいい、ここでこのアルコキシアルキルは低級アルコキシアルキルである。
【００６０】
用語「アミノカルボニル」とは、本明細書中では基−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２をいう。「置換アミノカルボニル」とは、本明細書中では基−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ’をいい、ここでＲは低級アルキルであり、そしてＲ’は水素または低級アルキルである。用語「アリールアミノカルボニル」とは、本明細書中では基−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ’をいい、ここでＲはアリールであり、そしてＲ’は、水素、低級アルキルまたはアリールである。「アラルキルアミノカルボニル」とは、本明細書中では基−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ’をいい、ここでＲは低級アラルキルであり、そしてＲ’は、水素、低級アルキル、アリール、または低級アラルキルである。
【００６１】
「アミノスルホニル」とは、本明細書中では基−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ２をいう。「置換アミノスルホニル」とは、本明細書中では基−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲＲ’をいい、ここでＲは低級アルキルであり、そしてＲ’は水素または低級アルキルである。用語「アラルキルアミノスルホニルアリール」とは、本明細書中では基−アリール−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ−アラルキルをいい、ここで、アラルキルは低級アラルキルである。
【００６２】
「カルボニル」とは、二価の基−Ｃ（Ｏ）−をいう。
【００６３】
「カルボニルオキシ」とは、一般に基−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−をいう。このような基としては、エステル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒが挙げられ、ここでＲは、水素、低級アルキル、シクロアルキル、アリールまたは低級アラルキルである。用語「カルボニルオキシシクロアルキル」とは、本明細書中では一般に「カルボニルオキシカルボシクロアルキル」および「カルボニルオキシヘテロシクロアルキル」（すなわち、ここでＲが、それぞれカルボシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルである）の両方をいう。用語「アリールカルボニルオキシ」とは、本明細書中では基−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−アリールをいい、ここでアリールは単環式または多環式のカルボシクロアリールまたはヘテロシクロアリールである。用語「アラルキルカルボニルオキシ」とは、本明細書中では基−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−アラルキルをいい、ここでアラルキルは低級アラルキルである。
【００６４】
用語「スルホニル」とは、本明細書中では基−ＳＯ２−をいう。「アルキルスルホニル」とは、構造−ＳＯ２Ｒ−の置換スルホニルをいい、ここでＲはアルキルである。本発明の化合物で用いられるアルキルスルホニル基は、代表的に１〜６個の炭素原子をその骨格構造に有する低級アルキルスルホニル基である。したがって、本発明の化合物において用いられる代表的なアルキルスルホニル基としては、例えば、メチルスルホニル（すなわち、Ｒがメチル）、エチルスルホニル（すなわち、Ｒがエチル）、プロピルスルホニル（すなわち、Ｒがプロピル）などが挙げられる。用語「アリールスルホニル」とは、本明細書中では基−ＳＯ２−アリールをいう。用語「アラルキルスルホニル」とは、本明細書中では基−ＳＯ２−アラルキルをいい、ここでアラルキルは低級アラルキルである。用語「スルホンアミド」とは、本明細書中では−ＳＯ２ＮＨ２をいう。
【００６５】
本明細書中で使用される場合、用語「カルボニルアミノ」とは、二価の基−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−をいい、ここでカルボニルアミノ基のアミド窒素の水素原子は、低級アルキル、アリール、または低級アラルキル基に置換され得る。このような基としては、カルバメートエステル（−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ）およびアミド−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＮＲ’−Ｒ（ここで、ＲおよびＲ’は、直鎖または分枝鎖の低級アルキル、シクロアルキル、またはアリール、あるいは低級アラルキルである）のような部分が挙げられる。用語「低級アルキルカルボニルアミノ」とは、アルキルカルボニルアミノをいい、ここでＲは、その骨格構造に１〜約６個の炭素原子を有する低級アルキルである。用語「アリールカルボニルアミノ」とは、基−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒをいい、ここでＲはアリールである。同様に、用語「アラルキルカルボニルアミノ」とは、カルボニルアミノをいい、ここでＲは低級アラルキルである。
【００６６】
本明細書中で使用される場合、用語「グアニジノ」または「グアニジル」とは、グアニジン（Ｈ２Ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２）から誘導された部分をいう。このような部分としては、形式的な（ｆｏｒｍａｌ）二重結合を有する窒素原子で結合したもの（グアニジンの「２」位、例えば、ジアミノメチレンアミノ（Ｈ２Ｎ）２Ｃ＝ＮＨ−））、および形式的な単結合を有する窒素原子のいずれかで結合したもの（グアニジンの「１」位および／または「３」位、例えば、Ｈ２Ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−）が挙げられる。この窒素の任意の水素原子は、低級アルキル、アリールまた低級アラルキルのような適切な置換基で置換され得る。
【００６７】
本明細書中で使用される場合、用語「アミジノ」とは、Ｒ−Ｃ（＝Ｎ）−ＮＲ’−（この基は「Ｎ１」窒素にある）およびＲ（ＮＲ’）Ｃ＝Ｎ−（この基は、「Ｎ２」窒素にある）の部分をいい、ここで、ＲおよびＲ’は、水素、低級アルキル、アリール、または低級アラルキルであり得る。
【００６８】
本発明の化合物は、本明細書中に記載の方法、または当該分野で周知の他の方法を使用して容易に合成され得る。
【００６９】
本発明のＧＳＫ３インヒビター化合物は、例えば、クロマトグラフィー、結晶化などのような公知の方法を使用して精製され得る。
【００７０】
本発明の化合物は、好ましくは、少なくとも他の１つの型のキナーゼと比較して、ＧＳＫ３に対して相対的に実質的に選択的である阻害活性を示す。本明細書中で使用される場合、用語「選択的」とは、少なくとも他の１つの型のキナーゼと比較して、ＧＳＫ３に対する阻害についての相対的により高い効力をいう。好ましくは、本発明のＧＳＫ３インヒビターは、少なくとも２つの他の型のキナーゼと比較して、ＧＳＫ３について選択的である。ＧＳＫ３以外のキナーゼについてのキナーゼ活性アッセイは、一般に公知である。例えば、Ｈａｖｌｉｃｅｋら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４０：４０８−１２（１９９７）（これは、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。ＧＳＫ３選択性は、以下に従って定量化され得る：ＧＳＫ３選択性＝ＩＣ５０（他のキナーゼ）÷ＩＣ５０（ＧＳＫ３）、ここで、ＧＳＫ３インヒビターは、ＩＣ５０（他のキナーゼ）＞ＩＣ５０（ＧＳＫ３）の場合に、ＧＳＫ３について選択的である。したがって、ＧＳＫ３に対して選択的なインヒビターは、ＧＳＫ３以外のキナーゼの阻害に関して１倍より高いＧＳＫ３選択性を示す。本明細書中で使用される場合、用語「他のキナーゼ」とは、ＧＳＫ３以外のキナーゼをいう。このような選択性は、一般に実施例２０に記載される無細胞アッセイで測定される。
【００７１】
代表的に、本発明のＧＳＫ３インヒビターは、他のキナーゼと比較して、ＧＳＫ３について少なくとも約２倍（すなわち、ＩＣ５０（他のキナーゼ）÷ＩＣ５０（ＧＳＫ３））の選択性を示し、より代表的には、これらは少なくとも約５倍の選択性を示す。通常、本発明のＧＳＫ３インヒビターは、少なくとも１つの他のキナーゼと比較して、ＧＳＫ３に対して少なくとも約１０倍、望ましくは少なくとも約１００倍、そしてより好ましくは少なくとも約１０００倍の、選択性を示す。
【００７２】
ＧＳＫ３阻害活性は、本明細書中に記載されるアッセイ、ならびに当業者に一般に公知のアッセイを使用して、容易に検出され得る。ＧＳＫ３の特異的インヒビターを同定するための例示的な方法としては、無細胞アッセイおよび細胞ベースのＧＳＫ３キナーゼアッセイの両方が含まれる。無細胞ＧＳＫ３キナーゼアッセイは、ポリペプチドＧＳＫ３と直接相互作用することによって作用するインヒビターを検出し、一方、細胞ベースのＧＳＫ３キナーゼアッセイは、ＧＳＫ３それ自体との直接相互作用、あるいは、ＧＳＫ３発現の妨害または成熟した活性ＧＳＫ３の産生に必要な翻訳後プロセシングの妨害によって機能するインヒビターを同定し得る。
【００７３】
一般に、無細胞ＧＳＫ３キナーゼアッセイは、以下によって容易に実施され得る：（１）ＧＳＫ３を、ペプチド基質、放射性標識されたＡＴＰ（例えば、γ３３Ｐ−またはγ３２Ｐ−ＡＴＰ、この両方はＡｍｅｒｓｈａｍ，Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ Ｈｅｉｇｈｔｓ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓから入手可能）、マグネシウムイオン、および必要に応じて１つ以上の候補インヒビターと共にインキュベートすること；（２）この混合物を、ＧＳＫ３活性によって放射標識ホスフェートをペプチド基質に取り込むことを可能とする時間インキュベートすること；（３）この酵素反応混合物の全てまたは一部を、均一量の捕捉リガンド（これは、ペプチド基質上のアンカーリガンドに結合し得る）を含む別の容器（代表的には、マイクロタイターウェル）に移すこと；（４）未反応の放射標識ＡＴＰを除去するために洗浄すること；次いで（５）各ウェルに残存する３３Ｐまたは３２Ｐの量を定量すること。この量は、このペプチド基質に取り込まれた放射標識ホスフェートの量を示す。阻害は、このペプチド基質への放射標識ホスフェートの取り込みにおける減少として観察される。
【００７４】
無細胞アッセイにおける使用に適切なペプチド基質は、適切な量のＡＴＰの存在下でＧＳＫ３によってリン酸化され得る、任意のペプチド、ポリペプチドまたは合成ペプチド誘導体であり得る。適切なペプチド基質は、ＧＳＫ３の種々の天然のタンパク質基質の配列の一部に基づき得、そしてまた、Ｎ末端またはＣ末端での改変または伸長（スペーサー配列およびアンカーリガンドを含む）を含み得る。したがって、このペプチド基質は、より大きなポリペプチドに存在し得るか、またはＧＳＫ３によるリン酸化のために設計された単離ペプチドであり得る。
【００７５】
例えば、ペプチド基質は、ＤＮＡ結合タンパク質ＣＲＥＢ（例えば、Ｗａｎｇら，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２２０：３９７−４０２（１９９４）（これは、本明細書中に参考として援用される）に記載されるＣＲＥＢ ＤＮＡ結合タンパク質のＳＧＳＧ連結ＣＲＥＢペプチド配列）の部分配列に基づいて設計され得る。Ｗａｎｇらによって報告されるアッセイにおいて、ＣＲＥＢペプチドのＳＸＸＸＳモチーフのＣ末端セリンは、ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼ（ＰＫＡ）によって酵素的に前リン酸化され、この工程は、Ｎ末端セリンをＧＳＫ３によってリン酸化可能なモチーフにするために必要である。代替として、同じＳＸＸＸＳモチーフを有し、そしてＮ末端アンカーリガンドもまた含むが、その前リン酸化されたＣ末端セリンを用いて合成される、改変されたＣＲＥＢペプチド基質が用いられ得る（このような基質は、Ｃｈｉｒｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＰＴＹ Ｌｔｄ．，Ｃｌａｙｔｏｎ，Ａｕｓｔｒａｌｉａから市販されている）。ペプチド合成の間のＳＸＸＸＳモチーフの第２のセリンのリン酸化は、分離工程としてＰＫＡを残す酵素的リン酸化の必要性を排除し、そしてアンカーリガンドの組み込みは、ＧＳＫ３との反応後のペプチド基質の捕捉を容易にする。
【００７６】
一般に、キナーゼ活性アッセイに使用されるペプチド基質は、ＧＳＫ３によってリン酸化可能な１つ以上の部位、および他のキナーゼによってリン酸化されるがＧＳＫ３によってはリン酸化されない１つ以上の他の部位を含み得る。したがって、これらの他の部位は、ＧＳＫ３によってリン酸化可能なモチーフを作製するために前リン酸化され得る。用語「前リン酸化された」とは、本明細書中では、基質ペプチドを用いるキナーゼアッセイを行う前の、非放射標識ホスフェートでのこの基質ペプチドのリン酸化をいう。このような前リン酸化は、ペプチド基質の合成の間に、好都合に行われ得る。
【００７７】
ＳＧＳＧ結合ＣＲＥＢペプチドは、ビオチンのようなアンカーリガンドに結合され得、ここでＰとＹとの間のＣ末端付近のセリンが前リン酸化される。本明細書中で使用される場合、用語「アンカーリガンド」とは、捕捉リガンド上のペプチド基質の捕捉を容易にするためにペプチド基質に結合し得るリガンドをいい、そしてこれは、洗浄工程の間にこのペプチド基質を適切な位置に保持するように機能し、なお未反応の放射標識ＡＴＰの除去を可能にする。例示的なアンカーリガンドはビオチンである。用語「捕捉リガンド」とは、本明細書中では、高親和性でアンカーリガンドに結合し得る分子をいい、そしてこれは固体構造体に結合される。結合捕捉リガンドの例としては、例えば、アビジンコーティングまたはストレプトアビジンコーティングされたマイクロタイターウェルまたはアガロースビーズが挙げられる。捕捉リガンドを保有するビーズは、シンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）にさらに結合し得、捕捉された放射標識基質ペプチドの検出手段を提供するか、または後の工程で捕捉したペプチドにシンチラントが加えられ得る。
【００７８】
捕捉された放射標識ペプチド基質は、公知の方法を使用してシンチレーションカウンターで定量化され得る。このシンチレーションカウンターで検出されるシグナルは、このペプチド基質の制限された部分のみ（例えば、２０％未満）がリン酸化される条件下でこの酵素反応がなされた場合、ＧＳＫ３活性に比例する。この反応の間にインヒビターが存在する場合、ＧＳＫ３活性は減少し、したがってより少量の放射標識ホスフェートがペプチド基質に取り込まれる。そのため、より低いシンチレーションシグナルが検出される。結果的に、ＧＳＫ３阻害活性は、反応の間にインヒビターが存在しないネガティブコントロールで観測されるものと比較した、シンチレーションシグナルの減少として検出される。このアッセイは、本明細書中以下の実施例２６５により詳細に記載される。
【００７９】
細胞ベースのＧＳＫ３キナーゼ活性アッセイは、代表的には、ＧＳＫ３およびＧＳＫ３基質の両方（例えば、ＧＳＫ３をコードする遺伝子で形質転換された細胞およびその基質）（この遺伝子の発現のための調節制御配列を含む）を発現し得る細胞を用いる。細胞ベースのアッセイの実施において、この遺伝子を発現し得る細胞は、本発明の化合物の存在下でインキュベートされる。この細胞は溶解され、そしてこのリン酸化形態における基質の割合が決定される（例えば、ＳＤＳ ＰＡＧＥ上で非リン酸化形態と比較したその移動度を観察することによって、または基質のリン酸化形態に特異的な抗体によって認識される基質の量を決定することによって）。基質のリン酸化の量は、この化合物の阻害活性を示す（すなわち、阻害は、インヒビターが存在せずに行われたアッセイと比較した、リン酸化の減少として検出される）。細胞ベースのアッセイにおいて検出されたＧＳＫ３阻害活性は、例えば、ＧＳＫ３の発現の阻害に起因し得るか、またはＧＳＫ３のキナーゼ活性の阻害によるものであり得る。
【００８０】
従って、細胞ベースアッセイはまた、ＧＳＫ３阻害（例えば、τタンパク質リン酸化、インシュリン信号伝達の相乗作用などの阻害）によって影響を与えられる活性について特異的にアッセイするために使用され得る。例えば、ＧＳＫ３インヒビターが微小管結合τタンパク質のアルツハイマー様リン酸化を阻害する能力を評価するために、細胞は、ヒトＧＣＫ３βおよびヒトτタンパク質を用いて同時トランスフェクトされ得、次いで１つ以上の候補インヒビターと共にインキュベートされ得る。種々の哺乳動物細胞株および発現ベクターは、このタイプのアッセイに対して使用され得る。例えば、ＣＯＳ細胞は、Ｓｔａｍｂｏｌｉｃら、１９９６、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ ６：１１６４−６８（本明細書中に参考として援用される）に記載のプロトコルに従うヒトＧＳＫ３β発現プラスミド、およびｐＳＧ５などの発現プラスミド（初期ＳＶ４０プロモーターの元でヒトτタンパク質をコードする配列を含む）の両方を用いてトランスフェクトされ得る。本明細書中に参考として援用されるＧｏｅｄｅｒｔら、ＥＭＢＯ Ｊ．，８：３９３−３９９（１９８９）をまた参照のこと。τのアルツハイマー様リン酸化は、細胞を溶解後、例えばＰｏｌｙｍｅｄｃｏ Ｉｎｃ．（Ｃｏｒｔｌａｎｄｔ Ｍａｎｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）から入手可能なＡＴ８などの特異的な抗体を用いてたやすく検出され得る。このアッセイは、本明細書中、以下の実施例においてさらに詳細に記載される。
【００８１】
同様に、ＧＳＫ３インヒビター化合物がグリコーゲンシンターゼを活性化するによってインシュリンシグナル伝達を強化する能力は、細胞ベースグリコーゲンシンターゼ活性アッセイを使用してたやすく確かめられ得る。このアッセイは、グリコーゲンシンターゼ活性を増加することによってインシュリン刺激に応答する細胞（例えば、野生型インシュリンレセプターを過剰発現するＣＨＯ−ＨＩＲＣ細胞株（約１００，０００結合部位／細胞））を使用する。ＣＨＯ−ＨＩＲＣ細胞株は、Ｍｏｌｌｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６５：１４９７９−１４９８５（１９９０）およびＭｏｌｌｅｒら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，４：１１８３−１１９１（１９９０）（共に本明細書中に参考として援用される）に記載されるように産生され得る。アッセイは、血清枯渇ＣＨＯ−ＨＩＲＣ細胞を培地において本発明の種々の濃度の化合物の存在下でインキュベートし、引き続きインキュベーション期間の終わりに細胞を溶解することによって実施され得る。グリコーゲンシンターゼ活性は、Ｔｈｏｍａｓら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２５：４８６−４９９（１９６８）に記載のように溶解物中において検出され得る。グリコーゲンシンターゼ活性は、各サンプルに対して、Ｔｈｏｍａｓら（上記）に記載のように最大グリコーゲンシンターゼ活性のパーセンテージとして見積もられ、そして候補ＧＳＫ３インヒビター濃度の関数としてプロットされ得る。グリコーゲンシンターゼ活性を増加する候補ＧＳＫ３インヒビターの最大濃度の半分の濃度（すなわちＥＣ５０）は、当業者に周知の慣用的な曲線適合方法を使用して４つのパラメーターＳ字状曲線に合うようにすることによって計算され得る。このことは、本明細書中下の実施例２６６により詳細に記載される。
【００８２】
ＧＳＫ３インヒビターは、例えば、当業者に周知の方法を使用してインビボ活性についてたやすくスクリーニングされ得る。例えば、２型糖尿病の処置において強力な治療活性を有する候補化合物は、２型糖尿病の動物モデルにおいてグルコース耐性を改善する能力を検出することによってたやすく同定され得る。特に、候補化合物は、糖尿病のマウス（例えば、ＫＫ、ｄｂ／ｄｂ、ｏｂ／ｏｂ）または糖尿病ラット（例えば、Ｚｕｃｋｅｒ Ｆａ／ＦａまたはＧＫ）のいずれかにおいてグルコースボーラスの投与の前に任意のいくつかの経路を使用して投薬され得る。候補化合物およびグルコースの投与に引き続いて、血液サンプルが、前もって選択された時間間隔で取り出され、そして血清グルコースおよびインシュリンレベルについて評価される。上昇した分泌レベルの内因性のインシュリンが存在しない改善されたグルコースの処理は、インシュリン感作と考察され得、そして化合物効果を示し得る。本アッセイの詳細な記載は、本明細書中以下の実施例において提供される。
【００８３】
同様に、ＧＳＫインヒビターは、例えば、当業者に周知の方法を使用して、神経保護活性について容易にスクリーニングされ得る。例えば、潜在的な神経保護活性を有する候補化合物は、Ｍａｉｅｒら（Ｍａｉｅｒ、Ｃ．Ｍ．ら、「Ｏｐｔｉｍａｌ ｄｅｐｔｈ ａｎｄ ｄｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｌｄ ｈｕｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｉｎ ａ ｆｏｃａｌ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ」Ｓｔｒｏｋｅ ２９：２１７１−２１８０（１９９８））の中脳動脈閉塞によって容易に同定され得る。このモデルにおいて、成体雄性ラットは、麻酔される。右大腿動脈は、血圧をモニタリングすること、血液サンプルを回収すること、ならびに生理食塩水の注入および実験化合物の導入について特徴付けられる。発作は、中脳動脈を閉塞するためにモノフィラメント縫合糸を挿入することによって作られる。縫合糸は２時間そのままにしておく。縫合糸を除去した後、組織を２２〜７２時間再灌流する。化合物は、虚血の発症前、発症中、または発症後に投与され得る。２４〜７２時間後、生存する動物を安楽死させ、脳を直ぐに取り出し、切り出す。脳の切片を、塩化テトラゾリウム、ヘマトキシリンおよびエオジン、クリスタルバイオレットならびに免疫組織学について処理する。梗塞領域は、光学顕微鏡によって決定し、そして全左半球領域の割合として表す。本発明の好ましいＧＳＫ２インヒビターは、ＭＣＡＯモデルにおける梗塞のサイズを減少させる。
【００８４】
本発明のＧＳＫインヒビターは、Ｍａｎｄｉｒら（Ｍａｎｄｉｒ，Ａ．Ｓ．ら、「Ｐｏｌｙ（ＡＤＲ−ｒｉｂｏｓｅ）ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａｔｅｓ１−ｍｅｔｈｙｌ−４−ｐｈｅｎｙｌ−１，２，３，６−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒｉｄｉｎｅ（ＭＰＴＰ）−ｉｎｄｕｃｅｄ ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ」、Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．９６（１０）：５７７４−５７７９（１９９９）のメチルフェニルテトラヒドロピリジン（ＭＰＴＰ）モデルを用いて、抗パーキンソン病活性について容易にスクリーニングされる。パーキンソン病は、黒質における神経の選択的変性によって特徴付けられる。インビトロでは、活性代謝産物ＭＰＰ＋に転換されるＭＰＴＰは、霊長類において亜急性のパーキンソンニズムを引き起こし、げっ歯類において黒質ニューロンの変性を引き起こす。この疾患の進行を混乱させるかまたは遅延させ得る化合物を評価するために、ＭＰＴＰげっ歯類モデルが使用される。成体ラットまたはマウスは、ＭＰＴＰの２〜４回の腹腔内注射を、２〜１２時間間隔（３０ｍｇ／ｋｇ）で与えられることにより、ドーパミン黒質線条体（ｎｉｇｏｓｔｒｉａｔａｌ）経路の破壊を引き起こす。ＧＫＳインヒビターは、浸透圧性ミニポンプを介して静脈内に連続的に７日間にわたって投与される。動物を安楽死させ、脳を取りだす。脳の領域を、チロシンヒドロキシラーゼ線維、アポトーシス細胞、およびドーパミンの存在について分析する。本発明の好ましいＧＳＫ３インヒビターは、黒質におけるニューロンおよび線維の生存の増加を実証する。
【００８５】
本発明のＧＳＫ３インヒビターは、Ａｎｄｅｒｓｏｎら（Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｄ．ら、「Ｃｉｌｉａｒｙ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｓｔｒｉａｔａｌ ｏｕｔｐｕｔ ｎｅｕｒｏｎｓ ｉｎ ａｎ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ ｄｉｓｅａｓｅ」、Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．９３：７３４６−７３５１（１９９６））のキノリン酸傷害モデルを用いて、抗ハンチントン活性について容易にスクリーニングされる。このモデル系において、成体ラットにキノリン酸の一側性線条体注射を与える。これは、７日後に線条体において著しい細胞喪失を引き起こす。ＡＱ注射時および７日間の回復期間の間でのＧＳＫ３インヒビターを用いた処置は、ＯＡが組織学的に評価されるような線条体損傷を誘発することを阻害するはずである。
【００８６】
本発明のＧＳＫ３インヒビターの活性はまた、Ａｌｂｅｒｉら（Ａｌｂｅｒｉ，Ｓ．ら、「Ａｘｏｔｏｍｉｚｅｄ ｎｅｏｎａｔａｌ ｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎｓ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｔｈｅ ｂｃｌ−２ ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ ｒｅｔａｉｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｐｐｅｒｔｉｅｓ」、Ｐ．Ｎ．Ｓ．Ａ．９３：３９７８−３９８３（１９９６））の運動神経変性モデルを用いて評価され得る。このモデルにおいて、２〜４週齢のラットにおける顔面神経の一側性軸策は、顔面神経核において運動神経の４０〜９０％の死を生じる。ＧＫＳ３インヒビターは、ゲルフォームスポンジまたは注射によって傷害部位に導入される。傷害から７〜１０日後、動物を安楽死させ、顔面神経核の運動神経を染色（クリスタルバイオレット）し、そしてカウントする。本発明の好ましいＧＳＫ３インヒビターは、顔面神経を傷害誘導性死から保護する。
【００８７】
本発明の化合物は、無機酸または有機酸由来の塩の形態で使用され得る。これらの塩として、以下が挙げられるがそれらに限定されない：アセテート、アジパート、アルギナート、シトラート、アスパルテート、ベンゾアート、ベンゼンスルホナート、重硫酸塩、ブチラート、ショウノウ酸塩（ｃａｍｐｈｏｒａｔｅ）、ショウノウスルホン酸塩（ｃａｍｐｈｏｒｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、ジグルコナート（ｄｉｇｌｕｃｏｎａｔｅ）、シクロペンタンプロピオナート、ドデシル硫酸塩、エタン硫酸塩、グルコノヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、エキサノン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタン硫酸塩、ラクタート、マレアート、メタン硫酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレン硫酸塩、オキザラート、パモエート、ペクチン酸塩（ｐｅｃｔｉｎａｔｅ）、硫酸塩、３−フェニルポリピオナート、ピクリン酸塩、ピバレート、プロピオナート、スクシナート、タータラート、チオシアン酸塩、ｐ−トルエン硫酸塩、およびウンデカン酸塩。また、塩基性窒素含有基は、以下のような因子で４級化され得る：低級アルキルハロゲン化物（例えば、塩化、臭化、およびヨウ化のメチル、エチル、プロピル、およびブチル）；硫酸ジアルキル（硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸ジブチル、および硫酸ジアミルのような）、長鎖ハロゲン化物（例えば、塩化、臭化、およびヨウ化のデシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリル）、アラルキルハロゲン化物（臭化ベンジル、および臭化フェネチルおよび他のような）。これによって、水または油溶解性または分散性の生成物が得られる。
【００８８】
薬学的に受容可能な酸付加塩を形成するために使用され得る酸の例として、塩酸、硫酸およびリン酸などの無機酸ならびにシュウ酸、マレイン酸、コハク酸およびクエン酸などの有機酸が挙げられる。塩基付加塩は、最終単離および式（Ｉ）の化合物の精製の間にインサイチュにおいて、またはカルボン酸部分を適切な塩基（例えば、薬学的に受容可能な金属カチオンの水酸化物、炭酸塩もしくは重炭酸塩）またはアンモニア、または有機一級、二級もしくは三級アミンと別個に反応することによって調製され得る。薬学的に受容可能な塩として以下が挙げられるがそれらに限定されない：アルカリ金属およびアルカリ土類金属に基づくカチオン（例えばナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム塩など）、ならびに非毒性アンモニウム、四級アンモニウム、およびアミンカチオン（アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリエチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどが挙げられるがこれらに限定されない）。塩基付加塩の形成に有用である他の代表的な有機アミンとして、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ピペラジンなどが挙げられる。
【００８９】
本発明の化合物は、経腸経路、非経口経路および局所的経路を含む種々の投与法で投与され得る。例えば、適切な投与形態としては、経口、皮下、経皮、経粘膜、イオン導入、静脈内、筋内、腹腔内、鼻腔内、硬膜下、直腸などが挙げられる。
【００９０】
本発明の他の実施形態に従って、薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤と一緒に、本発明のＧＳＫ３インヒビター化合物を含有する組成物が提供される。
【００９１】
適切な薬学的に受容可能な賦形剤は、プロセシング剤および薬物送達調節剤および増強剤（例えば、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、単糖、二糖、デンプン、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デキストロース、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、ポリビニルピロリドン、低融点ワックス、イオン交換樹脂など、ならびにこれらの任意の２種以上の組み合わせ）を含む。他の適切な薬学的に受容可能な賦形剤は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ Ｐｕｂ，Ｃｏ．、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ（１９９１）（これは、本明細書中で参考として援用される）に記載される。
【００９２】
本発明のＧＳＫ３インヒビター化合物を含有する薬学的組成物は、意図された投与方法に適切な任意の形態（例えば、溶液、懸濁液または乳濁液）であり得る。液体キャリアは、代表的に、溶液、懸濁液、および乳濁液を調製する際に使用される。本発明の実施において使用するために意図された液体キャリアとしては、例えば、水、生理食塩水、薬学的に受容可能な有機溶媒、薬学的に受容可能な油または脂肪など、ならびにこれらの２種以上の混合物が挙げられる。液体キャリアは、他の適切な薬学的に受容可能な添加剤（例えば、可溶化剤、乳化剤、栄養素、緩衝液、保存剤、懸濁剤、増粘剤、粘度調節剤、安定剤など）を含み得る。適切な有機溶媒としては、例えば、一価アルコール（例えば、エタノール）および多価アルコール（例えば、グリコール）が挙げられる。適切な油としては、例えば、大豆油、ココナツ油、オリーブ油、ベニバナ油、綿実油などが挙げられる。非経口投与について、キャリアはまた、油性エステル（例えば、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピルなど）であり得る。本発明の組成物は、微粒子、マイクロカプセル、リポソーム封入など、ならびにこれらの２種以上の組み合わせの形態であり得る。
【００９３】
本発明の化合物は、所望のように、従来の非毒性の薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントおよびビヒクルを含有する投薬単位処方物で、経口的に、非経口的に、舌下で、吸入スプレーによって、直腸的に、または局所的に投与され得る。局所的投与はまた、経皮的投与（例えば、経皮パッチまたはイオン導入デバイス）の使用を含み得る。本明細書中で使用される場合、用語、非経口とは、皮下注射、静脈内、筋内、胸骨内注射または注入技術を含む。
【００９４】
注射可能な調製物（例えば、滅菌の注射可能な水性または油性の懸濁液）は、適切な分散剤、潤滑剤および懸濁剤を使用して、公知技術に従って処方され得る。滅菌の注射可能な調製物はまた、非毒性の非経口的に受容可能な希釈剤または溶媒中の、滅菌の注射可能な溶液または懸濁液（例えば、１，３−プロパンジオール中の溶液）であり得る。受容可能なビヒクルおよび溶媒の中で、水、リンガー溶液および等張塩化ナトリウム溶液が使用され得る。さらに、滅菌の不揮発油は、溶媒または懸濁媒体として従来使用される。この目的のために、任意の無刺激の不揮発油（合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含む）が使用され得る。さらに、脂肪酸（例えば、オレイン酸）は、注射可能な調製物において用途を見出す。
【００９５】
薬物の直腸投与のための坐剤は、通常の温度では固体であるが、直腸温度では液体であり、従って、直腸中で溶解して薬物を放出する、適切な非刺激性賦形剤（例えば、ココアバターおよびポリエチレングリコール）と、この薬物とを混合することによって調製され得る。
【００９６】
経口投与のための固体投薬形態としては、カプセル、錠剤、丸剤、粉末および顆粒が挙げられ得る。このような固体投薬形態において、活性化合物は、少なくとも１種の不活性な希釈剤（例えば、スクロース、ラクトースまたはデンプン）と混合され得る。このような投薬形態はまた、通常の使用の場合、不活性な希釈剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤）以外に、さらなる物質を含み得る。カプセル、錠剤および丸剤の場合、投薬形態はまた、緩衝剤を含み得る。錠剤および丸剤は、腸溶性コーティングを用いてさらに調製され得る。
【００９７】
経口投与のための液体投薬形態としては、水のような、当該分野で一般的な不活性な希釈剤を含む、薬学的に受容可能な乳濁液、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシル剤が挙げられ得る。このような組成物はまた、アジュバント（例えば、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤）、シクロデキストリンならびに甘味剤、香味料および香料を含み得る。
【００９８】
なお他の実施形態に従って、本発明は、ヒトまたは動物の被験体においてＧＳＫ３活性を阻害するための方法を提供し、この方法は、被験体においてＧＳＫ３活性を阻害するに有効な量の、構造（Ｉ）を有するＧＳＫ３インヒビター化合物（またはこのような化合物を含有する組成物）を、被験体に投与する工程を包含する。他の実施形態は、細胞または、ヒトもしくは動物の被験体におけるＧＳＫ３媒介性の障害を処置するための方法を提供し、この方法は、細胞または被験体におけるＧＳＫ３活性を阻害するに有効な量の、本発明の化合物または組成物を、細胞またはヒトもしくは動物の被験体に投与する工程を包含する。好ましくは、この被験体は、ヒトまたは非ヒト動物の被験体である。ＧＳＫ３活性の阻害は、コントロールと比較したか、または予測されるＧＳＫ３活性と比較した、ＧＳＫ３活性の検出可能な抑制を含む。
【００９９】
有効量の本発明の化合物は、一般に、本明細書中に記載される任意のアッセイによってか、当業者に公知の他のＧＳＫ３キナーゼ活性アッセイによってか、またはＧＳＫ３媒介性の障害に罹患した被験体における症状の緩和を検出することによって、ＧＳＫ３活性を検出可能に阻害するに十分な、任意の量を含む。
【０１００】
本発明に従って処置され得るＧＳＫ３媒介性障害としては、ＧＳＫ３活性が関係するか、または処置される疾患において特徴的に欠損する経路を通じて、ＧＳＫ３の阻害がシグナル伝達を増強する、任意の生物学的障害または医学的障害が挙げられる。この状態または障害は、異常なＧＳＫ３活性によって引き起こされるかまたは特徴付けられるかのいずれかであり得る。代表的なＧＳＫ３媒介性障害としては、例えば、２型糖尿病、アルツハイマー病および他の神経変性障害（例えば、パーキンソン病、ハンティングトン病）、肥満、アテローム硬化症心血管疾患、本態性高血圧症、多嚢胞性卵巣症候群、Ｘ症候群（ｓｙｎｄｒｏｍｅ Ｘ）、虚血、特に脳虚血、外傷性脳損傷、双極性障害、免疫不全、癌などが挙げられる。
【０１０１】
本発明に従う、被験体の首尾よい処置は、医学的または生物学的障害を罹患した被験体における症状の低減または緩和の誘導を生じ、例えば、障害のさらなる進行を停止するか、または障害を予防し得る。従って、例えば、糖尿病の処置は、患者におけるグルコースレベルまたはＨｂＡ１ｃレベルの減少を生じ得る。同様に、アルツハイマー病の処置は、例えば、痴呆の進行速度の減少を測定することによって検出される、疾患の進行速度の減少を生じ得る。
【０１０２】
キャリア材料と合わされて単回投薬形態を生成し得る活性成分の量は、処置される宿主および特定の投与様式に依存して異なる。しかし、任意の特定の患者についての特定の用量レベルが、使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、全体的健康、性別、食餌、投与回数、投与経路、排泄速度、薬物の組み合わせ、および治療を受ける特定の疾患の重篤度を含む種々の因子に依存することが理解される。所定の状況についての治療的有効量は、慣用的な実験によって容易に決定され得、そして通常の臨床医の技術および判断の範囲内である。
【０１０３】
本発明の目的のために、治療的有効用量は、一般に、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約２０ｍｇ／ｋｇ／日、そして最も好ましくは約２ｍｇ／ｋｇ／日〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日の本発明のＧＳＫ３インヒビター化合物であり、これは、１つまたは複数の用量で投与され得る。
【０１０４】
本発明の化合物はまた、リポソーム形態で投与され得る。当該分野で公知のように、リポソームは、一般に、リン脂質または他の脂質物質に由来する。リポソームは、水性媒体中に分散された単層または多層の水和液晶によって形成される。リポソームを形成し得る、任意の非毒性の生理的に受容可能かつ代謝可能な脂質が使用され得る。リポソーム形態の本発明の組成物は、本発明の化合物に加えて、安定剤、保存剤、賦形剤などを含み得る。好ましい脂質は、天然および合成両方の、リン脂質およびホスファチジルコリン（レシチン）である。リポソームを形成する方法は、当該分野で公知である。例えば、Ｐｒｅｓｃｏｔｔ、編、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌｕｍｅ ＸＩＶ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｗ．、３３頁以下参照（１９７６）。
【０１０５】
本発明の化合物は、単独で活性な薬学的薬剤として投与され得るが、これらはまた、障害の処置において使用される１以上の他の薬剤と組み合わせて使用され得る。２型糖尿病の処置のために、本発明の化合物と組み合わせて有用な代表的薬剤としては、例えば、インスリン、トログリタゾン、ロジグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、グリピジド、メトホルミン、アカルボースなどが挙げられる。アルツハイマー病の処置のために、本発明の化合物と組み合わせて有用な代表的薬剤としては、例えば、ドネペジル（ｄｏｎｅｐｅｚｉｌ）、タクリンなどが挙げられる。双極性疾患の処置のために、本発明の化合物と組み合わせて有用な代表的薬剤としては、例えば、リチウム塩、バルプロエート、カルバマゼピンなどが挙げられる。発作の処置のために、本発明の化合物と組み合わせて有用な代表的薬剤は、例えば、組織プラスミノゲン活性化因子である。
【０１０６】
さらなる活性薬剤が、本発明の化合物と組み合わせて使用される場合、このさらなる活性薬剤は、一般に、ＰＨＹＳＩＣＩＡＮＳ’ ＤＥＳＫ ＲＥＦＥＲＥＮＣＥ（ＰＤＲ）第５３版（１９９９）（これは、本明細書中で参考として援用される）に示されるような治療的量で使用され得るか、または当業者に公知であるような治療的に有用な量で使用され得る。
【０１０７】
本発明の化合物および他の治療的に活性な薬剤は、推奨される最大の臨床的投薬量またはより低い用量で投与され得る。本発明の組成物中の活性化合物の投薬レベルは、投薬経路、疾患の重篤度および患者の応答に依存して、所望の治療応答を獲得するように、変化され得る。組み合わせは、別個の組成物としてか、または両方の薬剤を含有する単一投薬形態として、投与され得る。組み合わせとして投与される場合、この治療剤は、同時もしくは異なる時点で与えられる別個の組成物として処方され得るか、またはこの治療剤は、単一組成物として与えられ得る。
【０１０８】
上記は、以下の各実施例と関連して、よりよく理解され得、これらは、説明のために提示され、本発明の概念の範囲を制限しない。
【実施例】
【０１０９】
（実施例１）
（特徴付けおよび精製方法）
本発明の化合物は、２６９０ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｍｏｄｕｌｅ（Ｍｉｌｆｏｒｄ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を用いて、Ｗａｔｅｒｓ Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍクロマトグラフィーシステムを使用して、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって特徴づけられた。分析カラムは、Ｃｏｌｕｍｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ５μ Ｒｅｌｉａｓｉｌ Ｃ１８カラム（５０×４．６ｍｍ）であり、１８分で水中５％〜８０％アセトニトリルの傾斜の勾配であった。全ての溶媒は、０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含んでいた。化合物を、２２０ｎｍまたは２５４ｎｍのいずれかでの紫外線（ＵＶ）吸収によって検出した。ＨＰＬＣ溶液は、Ｂｕｒｄｉｃｋ ａｎｄ Ｊａｃｋｓｏｎ（Ｍｕｓｋｅｇａｎ、Ｍｉｃｈｉｇａｎ）またはＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）製であった。いくつかの例において、純度を、裏がガラスまたはプラスチックのゲルプレート（例えば、Ｂａｋｅｒ−Ｆｌｅｘ Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ １Ｂ２−Ｆ可撓性シート）を使用して、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって評価した。ＴＬＣの結果を、紫外線光の下で、または周知のヨウ素蒸気および他の種々の染色技術を使用することによって、容易に可視的に検出した。
【０１１０】
質量分析を、Ｆｉｓｏｎｓ ＶＧ Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒで実行した。全ての質量は、プロトン化された親イオンの質量として報告される。
【０１１１】
核磁気共鳴（ＮＭＲ）分析を、Ｖａｒｉａｎ ３００ＭＨｚ ＮＭＲ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）で実行した。スペクトル基準は、ＴＭＳまたは溶媒の公知の化学的シフトのいずれかであった。いくつかの化合物サンプルを、上昇した温度（すなわち、７５℃）で実行して、サンプルの溶解性の増大を促進した。
【０１１２】
本発明のいくつかの化合物の純度を、元素分析（Ｄｅｓｅｒｔ Ａｎａｌｙｔｉｃｓ、Ｔｕｃｓｏｎ、Ａｒｉｚｏｎａ）によって評価した。
【０１１３】
融点を、Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｍｅｌ−Ｔｅｍｐ ａｐｐａｒａｔｕｓ（Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）で決定した。
【０１１４】
（実施例２）
（２−（２，４−ジクロロフェニル）−４−フルオロ−１−ニトロベンゼンの合成）
ベンゼンおよび３ｍｌの水中の、１−ブロモ−５−フルオロ−２−ニトロベンゼン（１ｇ、４．５ｍｍｏｌ）、２，４−ジクロロベンゼンボロン酸（９０７ｍｇ、４．７ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（１，４４ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）を含む混合物を、３０分間、窒素でパージした。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２６４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を、この混合物に添加し、そして一晩、７５℃に加熱した。反応混合物を酢酸エチルと水との間で分割した。有機層を分離し、そしてブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過し、そして減圧下で濃縮して、褐色の固体を得、これを再結晶化させて、１ｇ（収率８０％）の白色の固体を得た。生成物は、満足なＮＭＲを与えた。
ＨＰＬＣ：１３．２分（１００％）
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ／Ｚ）、２６６。
【０１１５】
（実施例３）
（Ｎ−（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）−Ｎ’−（５−ニトロピリジン−２−イル）エタン−１，２−ジアミンの合成）
【０１１６】
【化２１】
アセトニトリル中の２−（２，４−ジクロロフェニル）−４−フルオロ−１−ニトロベンゼン（３０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）に、２−（２−アミノエチルアミノ）−５−ニトロピリジン（１９ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１８μｌ、０．１ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を、８０℃で一晩加熱した。この混合物を酢酸エチルと水との間で分割し、有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濃縮した。溶出液としてジクロロメタン中の５％メタノールを用いて、シリカゲル上で精製して、３２ｍｇのＮ−（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）−Ｎ’−（５−ニトロピリジン−２−イル）エタン−１，２−ジアミンを得た。
ＨＰＬＣ：１２．６分（９０％）
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ／Ｚ）、４４８。
【０１１７】
（実施例４）
（Ｎ〜６〜−｛２−［（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）アミノ］エチル｝−３−ニトロピリジン−２，６−ジアミンの合成）
【０１１８】
【化２２】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２−（２，４−ジクロロフェニル）−４−フルオロ−１−ニトロベンゼン（２０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）に、２−アミノ−３−ニトロ−６−（２−アミノエチルアミノ）ピリジン（１４ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１６μｌ、０．０７ｍｍｏｌ）を添加し、８０℃で一晩加熱した。この混合物を酢酸エチルと水との間で分割し、有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濃縮した。溶出液としてジクロロメタン中の５％メタノールを用いて、シリカゲル上で精製して、７ｍｇのＮ〜６〜−｛２−［（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）アミノ］エチル｝−３−ニトロピリジン−２，６−ジアミンを得た。
ＨＰＬＣ：１１．５分（１００％）
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ／Ｚ）、４６３。
【０１１９】
（実施例５）
（６−（｛２−［（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）アミノ］エチル｝アミノ）ニコチノニトリルの合成）
【０１２０】
【化２３】
アセトニトリル中の２−（２，４−ジクロロフェニル）−４−フルオロ−１−ニトロベンゼン（３２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）に、２−（２−アミノエチルアミノ）−５−シアノピリジン（１９．２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１８μｌ、０．１ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を８５℃で一晩加熱した。この混合物を酢酸エチルと水との間で分割し、有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濃縮した。溶出液としてジクロロメタン中の５％メタノールを用いて、シリカゲル上で精製して、２５ｍｇの６−（｛２−［（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）アミノ］エチル｝アミノ）ニコチノニトリルを得た。
ＨＰＬＣ：１３．１分（９０％）
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ／Ｚ）、４２８。
【０１２１】
（実施例６）
（Ｎ−［２’，４’−ジクロロ−５−（｛２−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］エチル｝アミノ）−１，１’−ビフェニル−２−イル］アセトアミドの合成）
【０１２２】
【化２４】
ジクロロメタン中の６−［（２−｛［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−ニトロフェニル］アミノ｝エチルアミノピリジン−３−カルボニトリル（４０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）に、５０μｌの無水トリフルオロ酢酸を添加し、この混合物を１０分間撹拌した。この溶液を濃縮し、これに、ＳｎＣｌ２（９０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）および（１：４）ジオキサン：Ｈ２Ｏ中の１００μｌ塩酸の溶液の２ｍｌを添加した。この溶液を１時間撹拌した。この混合物を酢酸エチルと水との間で分割し、４４ｍｇのＮ−［４−アミノ−３−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］−Ｎ−｛２−［（５−シアノ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝−２，２，２−トリフルオロアセトアミドを単離した。ジクロロメタン中のこれに、１０μｌの塩化アセチルおよび１３μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加し、３０分で、アセチル化生成物をＬＣ／ＭＳで観察する。水性ワークアップ後、（１：１）水：ジオキサン中の生成物に、１０ｍｇのＫ２ＣＯ３を添加し、２時間撹拌した。この混合物を酢酸エチルと水との間で分割し、有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、エーテルで粉砕して、２０ｍｇのＮ−［２’，４’−ジクロロ−５−（｛２−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］エチル｝アミノ）−１，１’−ビフェニル−２−イル］アセトアミドをを得た。
ＨＰＬＣ：７．２分（９９％）
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ／Ｚ），４４０。
【０１２３】
（実施例７）
（６−（｛２−［（６−アミノ−２’，４’−ジクロロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）アミノ］エチル｝アミノ）ニコチノニトリルの合成）
【０１２４】
【化２５】
触媒量の１０％Ｐｄ／Ｃを伴う、エチルアルコール中の４０ｍｇの６−［（２−｛［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−ニトロフェニル］アミノ｝エチルアミノピリジン−３−カルボニトリルに、５００μｌのヒドラジンを添加し、そして２時間溶液を還流させた。触媒を濾過して除き、濾液を減圧下で濃縮して、２２ｍｇの６−（｛２−［（６−アミノ−２’，４’−ジクロロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）アミノ］エチル｝アミノ）ニコチノニトリルを得た。
ＨＰＬＣ：６．７分（８０％）
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ／Ｚ），３９８。
【０１２５】
（実施例８）
（Ｎ〜１〜−［２’，４’−ジクロロ−５−（｛２−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］エチル｝アミノ）−１，１’−ビフェニル−２−イル］−Ｎ〜２〜−メチルグリシンアミドの合成）
【０１２６】
【化２６】
テトラヒドロフラン中の２０ｍｇの６−［（２−｛［４−アミノ−３−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］アミノ｝エチル）−アミノピリジン−３−カルボニトリルに、１９ｍｇのＢＯＣ−サルコシン、３８ｍｇのＨＢＴＵおよび２４μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加し、そしてこの混合物を室温で一晩撹拌した。この混合物を酢酸エチルと水との間で分割した後、有機層を濃縮した。これに、ジクロロメタンおよびＴＦＡを添加し、ＨＰＬＣ後に、ＴＦＡ塩として、１．２ｍｇの９３％純粋Ｎ〜１〜−［２’，４’−ジクロロ−５−（｛２−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］エチル｝アミノ）−１，１’−ビフェニル−２−イル］−Ｎ〜２〜−メチルグリシンアミドを、得た。
ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ／Ｚ），４６９。
【０１２７】
（実施例９）
（Ｎ−（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）−Ｎ−メチル−Ｎ’−（５−ニトロピリジン−２−イル］エタン−１，２−ジアミンの合成）
【０１２８】
【化２７】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２２ｍｇの２−（２，４−ジクロロフェニル）−４−フルオロ−１−ニトロベンゼンに、１５ｍｇの［２−（メチルアミノエチル］ （５−ニトロ （２−ピリジル））−アミンおよび３０μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加し、そしてこの混合物を、８５℃に一晩加熱した。この混合物を酢酸エチルと水との間で分配した後に、その有機層を濃縮し、そして乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして再結晶して、６ｍｇのＮ−（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）−Ｎ−メチル−Ｎ’−（５−ニトロピリジン−２−イル）エタン−１，２−ジアミンを得た。
ＨＰＬＣ： １３．２分（１００％）
ＭＳ： ＭＳ （Ｍ＋Ｈ／Ｚ），４６２。
【０１２９】
（実施例１０）
（Ｎ〜６〜−｛２−［（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）（メチル）アミノ］エチル｝−３−ニトロピリジン−２，６−ジアミンの合成）
【０１３０】
【化２８】
アセト二トリル中の１０ｍｇの２−（２，４−ジクロロフェニル）−４−フルオロ−１−ニトロベンゼンに、１０ｍｇの（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））［２−（メチルアミノ）エチル］ アミンおよび７μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加し、そしてこの混合物を、８５℃に一晩加熱した。水での後処理後に、その組成物質を、溶出液としてヘキサン中３０％のアセトンを用いるシリカゲルカラムで精製して、６ｍｇのＮ〜６〜−｛２−［（２’，４’−ジクロロ−６−ニトロ−１，１’−ビフェニル−３−イル）（メチル）アミノ］ エチル｝−３−ニトロピリジン−２，６−ジアミンを得た。
ＨＰＬＣ，１２．１分（８５％）
ＭＳ （Ｍ＋Ｈ／Ｚ），４７７。
【０１３１】
（実施例１１）
（ｌ−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロピリジン−２−イル）アミノ］エチル｝アミノ）−２’，４’−ジクロロ−１，１’−ビフェニル−２−イルｌ−４−メチルピペラジン−２−オンの合成）
【０１３２】
【化２９】
（Ａ．Ｎ−［４−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−２−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］−２−ブロモアセトアミドの調製）
水性ＮａＨＣＯ３（８当量）を、最少量のＥｔＯＡｃ中の［４−アミノ−３−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］ エチル｝アミン（１当量）攪拌溶液に室温で添加した。最少量のＥｔＯＡｃ中の２−ブロモアセチルクロリド（１．５当量）を、激しく攪拌している反応溶液にゆっくりと添加した。この反応を、ＬＣ／ＭＳで追跡し、そして ３０分以内で完了したことを決定した。その有機層を分離し、そして水、ブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして濃縮乾固して、粗製Ｎ−［４−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））アミノ］ エチル｝アミノ）−２−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］ −２−ブロモアセトアミドをａｓ ａ ｄａｒｋ ｙｅｌｌｏｗ ｇｌａｓｓ ｉｎ 暗黄色のガラス状物を７６％の収率で得た。（〜９０％純粋、ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ ５５５．２ＭＨ＋）。この生成物を、分解を防ぐために、−４℃で保存した。
【０１３３】
（Ｂ．Ｎ−［４−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ（２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−２−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］−２−［（２−ヒドロキシエチルメチルアミノ１アセトアミドの調製）
Ｎ−メチルエタノールアミン （２当量）を、ＣＨ３ＣＮ中のＮ−［４−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））アミノ］ エチル｝アミノ）−２−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］−２−ブロモアセトアミド （８．６５当量）の攪拌溶液に、室温で添加した。この反応をＬＣ／ＭＳにより追跡し、そして１２時間後に完了したことを決定した。この反応物を濃縮し、そしてＣＨ２Ｃｌ２中ＭｅＯＨ（５： ９５，ｖ／ｖ）で溶出するシリカカラムクロマトグラフィーによって精製した。精製した画分を収集および濃縮した後に、Ｎ−［４−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））アミノ］エチル｝アミノ）−２−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］−２−［（２−ヒドロキシエチル）メチルアミノ］ アセトアミドを、淡黄色のガラス状物（２１％ ｙｉｅｌｄ，ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ ５４９．４ ＭＨ＋）として、９５％の純度で得た。
【０１３４】
（Ｃ．１−［５−（｛２−［Ｃ６−アミノ−５−ニトロピリジン−２−イル）アミノ］ エチル｝アミノ）−２’４’−ジクロロ−１，１’−ビフェニル−２−イル］−４−メチルピペラジン−２−オンの調製）
ＤＥＡＤ （２．５当量）およびＰＰｈ３（２当量）を、ＴＨＦに溶解したＮ−［４−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））アミノ］ エチル｝アミノ）−２−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル］−２−［（２−ヒドロキシエチル）−メチルアミノ］ アセトアミド （１当量）に室温で添加した。この反応物をＬＣ／ＭＳによって完了が決定されるまで、５５℃で１時間加熱した。この反応物を濃縮し、そしてＣＨ２Ｃｌ２中ＭｅＯＨ（５： ９５，ｖ／ｖ）で溶出するシリカカラムクロマトグラフィーで精製した。精製した画分を収集し、そして濃縮した後に、１−［５−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロピリジン−２−イル）アミノ］ エチル｝アミノ）−２’，４’−ジクロロ−ｌ，１’−ビフェニル−２−イル］−４−メチルピペラジン−２−オンを、淡黄色ガラス状物として（ＬＣ／ＭＳ ｍｌｚ ５３１．４ ＭＨ＋）定量的な収率で得た。
【０１３５】
（実施例１２−１５）
本明細書中に記載される一般的手順に従って、以下のさらなる化合物を合成した：
【０１３６】
【表１−１】
【０１３７】
【表１−２】
（実施例１６）
（酸およびアルキル炭素環式アナログの合成）
【０１３８】
【化３０】
（２−ブロモ−４−フルオロベンゼンカルボニトリル （１）の準備）
出発物質である２−ブロモ−４−フルオロベンゼンカルボニトリル （１）を、Ｅｓｐｒｉｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｏｆ Ｓａｒａｓｏｔａ ＦＬから購入する。あるいはこれは、Ｅｎｇｅｌｈａｒｄｔ，Ｅ．Ｌ．； Ｃｈｒｉｓｔｙ，Ｍ．Ｅ．Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ ＵＳ ３８１２１７７，１９７６ ； ＵＳ ３９７８１２７ １９７６０８３１の方法によって調製され得る。
【０１３９】
（２−（２４−ジクロロフェニル］−４−フルオロベンゼンカルボニトリル （２）の調製）
この材料を、この出願の実施例２ についてのＳｕｚｕｋｉ方法によって調製し得る−２−（２，４−ジクロロフェニル）−４−フルオロ−１−ニトロベンゼンを参照のこと。
【０１４０】
（４−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））アミノエチル｝アミノ’）−２−（２，４−ジクロロフェニル）ベンゼンカルボニトリル （３）の調製）
この材料を、この出願における実施例３ についての芳香族交換方法によって調製し得る−［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−ニトロフェニル］｛２−［（５−ニトロ （２−ピリジル）アミノ］ エチル｝アミンを参照のこと。ただし、より高い温度（９０〜１２０℃）およびより長い反応時間（１２〜４８ｈ）が必要とされる。また、これらの反応は、水素をパージされ、そして窒素雰囲気下で実施される。水（２×）、飽和水性Ｎａ２ＣＯ３（３×）およびブライン（１×）での抽出後、この反応物を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。
【０１４１】
出発物質である（２−アミノエチル）（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））アミンを、以下の様式で調製する。２−アミノ−６−クロロ−３−ニトロピリジン （６５ｇ，３７６ ｍｍｏｌ），アセトニトリル（４００ ｍｌ）、およびエチレンジアミン （５００ ｍｌ）の混合物を、アルゴン下７５〜８０℃で一晩（約２０時間）攪拌する。ジアミンを添加すると、この反応は発熱反応になる。このエチレンジアミンを減圧下で除去し、次いで真空中で除去する（１２ｈ）。この完全に乾燥した材料を、２Ｍの水酸化ナトリウム溶液（５００ｍｌ）に、激しく攪拌しながら３０分間懸濁させる。その固体を濾過する。この黄色の固体を、激しく攪拌しながら、水（５００ ｍｌ）中に３０分間懸濁させ、その後、その固体を濾過する。水での洗浄および濾過をもう１回繰り返して、塩の蓋を得る。この黄色固体を、減圧下で乾燥させる。その粗製黄色固体を、エーテル（３×５００ｍｌ）で粉砕し、そして減圧下で一晩乾燥させて、 ５９ｇの２−（２−アミノエチル）アミノ−６−アミノ−５−ニトロピリジンを、９９％を超える純度で得る。
【０１４２】
（４−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））アミノ１エチル｝アミノ）−２−（２，４−ジクロロフェニル］ 安息香酸 （４）の調製）
水（５ｍｌ）およびＴＦＡ（１５ｍｌ）を、ベンゾニトリル（３）（ｌ００ｍｇ，
０．２ ｍｍｏｌ）室温で攪拌しながら添加し、溶液を形成する。この攪拌している黄色溶液に、濃ＨＣｌ（１０ｍｌ）を、Ｎ２下で加える。この反応物を、ＬＣＭＳによって完了が確認されるまで、９０℃で約２日間加熱する。この反応物を凍結乾燥により乾燥させ、ＴＦＡ塩としてカルボン酸（４）を得る。この生成物４を、ＨＰＬＣおよびＬＣＭＳによって、黄色粉末として、８５％の純度で得る。質量回収は、ほぼ定量的である。この生成物を、さらに精製することなく使用する。
【０１４３】
（［４−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロ （２−ピリジル））アミノ］ エチル｝アミノ）−２−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル−Ｎ−（２−ピロリジニルエチル）カルボキサミド（５）の調製）
アミン（１．５〜２．０当量）を、酸４ （１．０当量、２５ｍｇ）、ＨＢＴＵ（１．５当量）、Ｈｕｎｉｇ塩基（２．０当量）およびＤＭＦ（０．４ｍｌ）の攪拌溶液に添加する。 酸４、ＨＢＴＵ、Ｈｕｎｉｇ塩基およびＤＭＦを、バイアル中でこの順序で順番に、アルゴン下、室温で予め一緒に混合するによって、酸４を予め活性化させる。この反応物を、ＬＣＭＳおよびＨＰＬＣによって完了が示されるまで、３〜４時間攪拌する。この反応を完了させるために、時々、さらに０．２５当量または０．５当量のカップリング剤を添加することが必要である。この反応物を、分取ＨＰＬＣによって精製する。この反応物全体を、分取ＨＰＬＣに直接注入する。精製した画分をプールし、そして凍結乾燥して、アミド５を８５％より高い純度および５０−７０％の収率で、黄色粉末として得る。
【０１４４】
【化３１】
（Ｎ−（２−｛［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−シアノフェニル］アミノ｝エチル）（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボキサミド（６）の調製）
この材料を、１００℃で１２時間、ＤＭＦ中の巣ラリーを加熱することによって、調製する。過剰のＢｏｃ−エチレンジアミン を使用して、この反応の完了に導き得る（実施例４を参照のこと）。
【０１４５】
（Ｎ−（２−｛［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−（ヒドロキシメチル）フェニル］アミノ｝−エチル （ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボキサミド （７）の調製）
ＴＨＦ （１０ｍｌ）中のＮ−（２−｛［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−シアノフェニル］−アミノ｝エチル）（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボキサミド （２．１３ｇ）の攪拌溶液に、窒素下室温で、ＤＩＢＡＬ−Ｈ （５当量）（ＴＨＦ中１Ｍ）を滴下する。１時間後、得られた溶液をさらに７時間、７０℃で加熱する。次いで、この反応物を冷却し、そしてＲｏｃｈｅｌｌｅ塩の添加によってクエンチする。この得られた懸濁物を、塩化メチレン（１２０ｍｌ）と水（３０ｍｌ）との間で分配する。その水層を塩化メチレン（２５ｍｌ）で２回抽出し、そして合わせた有機層を、ブライン（３０ｍｌ）で洗浄し、そして硫酸ナトリウムで乾燥させる。濃縮により、２．０５ｇの黄色泡状物が得られる。溶出液としてメタノール／ＥｔＯＡｃ（約２０％）を使用するシリカゲル（１１０ ｇ）でのクロマトグラフィーにより、生成物７を得る。
【０１４６】
（Ｎ−（２−｛［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−カルボニルフェニル］アミノ｝エチル）（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボキサミド （８）の調製）
Ｓｗｅｒｎらの方法を使用して、Ｎ−（２−｛［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−（ヒドロキシ−メチル）フェニル］ アミノ｝エチル）（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボキサミド（１００ｍｇ）を、無水塩化メチレン（ｌｍｌ）中に溶解し、そして塩化オキサリル（１．５当量）およびＤＭＳＯ （３当量）の、塩化メチレン（２５ｍｌ）中の、−７８℃で１５分間攪拌した予め混合した溶液に添加した。この得られた溶液を、さらに３０分間、−７８℃で攪拌し、この時点で、トリエチルアミン （６当量）を添加する。この得られた懸濁物を、室温まで温める。１５分後、水（１ｍｌ）を添加し、そして層を分離する。その水層を塩化メチレン（２×１Ｏｍｌ）で抽出し、そして合わせた有機層を、乾燥し（硫酸ナトリウム）そして濃縮して、アルデヒド８を７０−８０％の収率で、淡黄色泡状物として得る。この生成物は、不安定であることが示され、そしてさらなる操作なしで使用する。
【０１４７】
（Ｎ−（２−｛［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−（モルホリン−４−イルメチル）フェニル］アミノ｝エチル）（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボキサミド （９）の調製）
シアノホウ素化水素ナトリウム（２当量）（ＴＨＦ中１Ｍ）を、 ＴＨＦ（５ｍｌ）に溶解したアルデヒド８ （５０ ｍｇ，０．１２１ ｍｍｏｌ）、モルホリン（２当量）および氷酢酸（５ｍｌ）の溶液に、室温で、攪拌しながら添加する。この混合物を７０℃で１８時間加熱し、その後、水（１ｍｌ）をゆっくりと添加して、過剰の試薬を分解する。この混合物を、酢酸エチル（３０ｍｌ）と飽和クエン酸溶液（１０ｍｏｌ）との間で分配する。その有機層を処分し、そしてその水層を、１Ｍ水性水酸化ナトリウムでｐＨ ９に注意深く塩基性化する。次いで、この塩基性の水層を、酢酸エチル（２×２５ｍｌ）で抽出する。合わせた有機層を乾燥し（硫酸ナトリウム）、濃縮し、そしてクロマトグラフィー（シリカゲル、１０％メタノール／塩化メチレン）によって精製して、純粋な生成物９を得る（収率５２％）。
【０１４８】
（（２−アミノエチル］３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−（モルホリン−４−イルメチル）−フェニル］ アミン （１０）の調製）
Ｂｏｃ材料９ （４０ ｍｇ）の、メタノール（１ｍｌ）中の溶液を、ジオキサン中１Ｎ ＨＣｌ（１ ｍｌ）で攪拌する。この溶液を室温で一晩攪拌し、そして蒸発乾固させる。この混合物を無水トルエン（２ ｍｌ）と共沸したメタノール （２ ｍｌ）中に再溶解する。この黄色固体を、エーテル（２×２ ｍｌ）、酢酸エチル（２×２ｍｌ）で粉砕し、そして減圧下で乾燥させる。生成物１０のＨＣｌ塩は、さらに精製していない。
【０１４９】
（Ｎ６−２’−｛（２−４’−ジクロロ−６−（モルホリン−４−イルメチル）−１，１’−ビフェニル−３−イル］−アミノ｝エチル）−３−ニトロピリジン−２，６−ジアミン（１２）の調製）
【０１５０】
【化３２】
アセトニトリル（２ｍｌ）中のアミン塩酸塩１０ （３５ｍｇ）を、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン （５４当量）および６−クロロ−３−ニトロ−２−ピリジルアミン １１ （１．２当量）で処理し、そして９０℃で２時間攪拌する。この混合物を減圧下で濃縮し、そして減圧下で乾燥させる。その粗製生成物を、塩化メチレン中３％ＭｅＯＨと一緒に攪拌しながらクロマトグラフィーによって精製し、そして塩化メチレン中５％ＭｅＯＨで仕上げて、１２を黄色固体（５０−７０％）として得る。この材料を、２当量のＨＣｌで酸性化し、そして凍結乾燥して、乾燥粉末にする。
【０１５１】
（実施例１７）
（［５−（｛２−［（６−アミノ−５−ニトロピリジン−２−イル）アミノ］エチル｝アミノ）−２’，４’−ジクロロ−１，１’−ビフェニル−２−イル］ （フェニル）メタノール （１５）の調製）
【０１５２】
【化３３】
（Ｎ−（２−｛［３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−（ヒドロキシフェニルメチル）フェニル］−アミノ｝エチル）（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボキサミド （１３）の調製）
フェニルマグネシウムブロミド（ＴＨＦ中１Ｍ）（２当量）を、 ＴＨＦ （１０ｍｌ）中８ （５０ｍｇ）の溶液に、７８℃アルゴン下で、攪拌しながら添加する。この反応物を、Ｇｒｉｇｎａｒｄの添加後１５分間、７８℃で攪拌し、この時点で、飽和水性ＮＨ４Ｃｌ（４ｍｌ）を添加して、この反応をクエンチする。この混合物をＥｔＯＡｃ（６０ｍｌ）および水（２ｍｌ）で希釈し、そして層を分離する。その有機層を飽和水性ＮＨ４Ｃｌ（ｌＯｍｌ）、水（ｌＯｍｌ）、ブライン（ｌＯｍｌ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）濾過し、そして濃縮する。その残渣を、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカカラムクロマトグラフィーによって精製して、１３を得る、
｛４−［（２−アリニノエチル）アミノｌ−２−（２，４−ジクロロフェニル）フェニル３フェニルメタン−１−オール（１当量）および６−クロロ−３−ニトロ−２−ピリジルアミン （１．２当量）を、攪拌しながらアルゴン下室温で、ＤＭＡに溶解する。Ｈuｎｉｇ塩基（１．５当量）を、この透明な暗褐色の溶液に添加し、これを、ＬＣ／ＭＳおよびＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３： ２，ｖ／ｖ）で溶出、（Ｒｆ＝０．３））によって完了が決定されるまで、８０℃で１２時間加熱する。ＥｔＯＡｃをこの反応混合物に添加し、これを次いで、水、ブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４），濾過し、そして濃縮乾固して、粗製褐色生成物を得る。この褐色の残渣を、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２４ ： ２６，ｖ／ｖ）で溶出するシリカカラムクロマトグラフィーによって精製する。精製した画分を収集し、そして濃縮した後に、その生成物を、淡黄色固体として単離する（収率７５％、ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＭＨ ５２５．４）。
【０１５３】
（実施例１８）
（６−［（２−｛［２’，４’−ジクロロ−６−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１，１’−ビフェニル−３−イル）アミノ｝エチル，アミノ］ニコチノにトリルの合成）
【０１５４】
【化３４】
６−［（２−｛［２’，４’−ジクロロ−６−（ｌＨ−イミダゾール−１−イル）−１，１’−ビフェニル−３−イル］ アミノ｝エチル）アミノ］ニコチノニトリル（化合物Ａ）を、実施例７の化合物を、ホルムアルデヒド、グリオキサール、およびＮＨ４Ｃｌを処理することによって、形成し得る （Ｐｅｒｒｙ，Ｍ．Ｃ．ら，「Ｏｐｔｉｃａｌｌｙ Ａｃｔｉｖｅ ＩｒｉｄｉｕｍＩｍｉｄａｚｏｌ−２−ｙｌｉｄｅｎｅ−ｏｘａｚｏｌｉｎｅ Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ： Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ ｉｎ Ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ Ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｙｌａｌｋｅｎｅｓ」、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２５（１）： １１３−１２３ （２００３））。
【０１５５】
（実施例１９）
（６−ｆ （２−｛［２’，４’−ジクロロ−６−（２−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１，１’−ビフェニル−３−イル］ アミノ｝エチル）アミノ］ニコチノにトリルの合成）
【０１５６】
【化３５】
６−［（２−｛［２’，４’−ジクロロ−６−（２−フェニル−１ Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１，１’−ビフェニル−３−イル］−アミノ）エチル）アミノ］ ニコチノニトリル（化合物Ｂ）を、実施例７ の化合物を、塩化ベンゾイル、２−アミノアセトアルデヒドジエチルアセタール、ＰＣｌ３、ｐ−トルエンスルホン酸および過酸化水素で処理することによって、形成し得る（Ｒｏｍｉｎｅ，Ｊ．Ｌ．ら，「４，５−Ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｒｉａｚｏｌ−３−ｏｎｓ： Ｏｐｅｎｅｒｓ ｏｆ Ｌａｒｇｅ−Ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ Ｃａ２＋−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ （Ｍａｘｉ−Ｋ）Ｃｈａｎｎｅｌｓ，”Ｊ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５ （１４）： ２９４２−２９５２ （２００２））。
【０１５７】
（実施例２０）
（６−［（２−｛［２’，４’−ジクロロ−６−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１，１’−ビフェニル−３−イル］ アミノ｝エチル）アミノｌニコチノニトリルの合成）
【０１５８】
【化３６】
６−［（２−｛［２’，４’−ジクロロ−６−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１，１’−ビフェニル−３−イル］アミノ｝エチル）−アミノ］ ニコチノニトリル（化合物Ｃ）を、実施例１７の化合物８をグリオキサールおよびアンモニアで処理することによって、形成し得る（Ｈａｇｅｄｏｒｎ ＩＩＩ Ａ．Ａ．ら、「Ｃａｒｄｉｏｔｏｎｉｃ ａｇｅｎｔｓ．２．（Ｉｍｉｄａｚｏｌｙｌ）ａｒｏｙｌｉｍｉｄａｚｏｌｏｎｅｓ，ｈｉｇｈｌｙ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｉｎｏｔｒｏｐｉｃａｇｅｎｔｓ」、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０ （８）： １３４２−７ （１９８７））。
【０１５９】
（実施例２１）
（無細胞アッセイを用いるＧＳＫ３阻害活性のスクリーニング）
本発明のピリミジン化合物およびピリジン化合物を、ＤＭＳＯに溶解し、次いでヒトＧＳＫ３β（ＧｅｎＢａｎｋに受託番号Ｌ３３８０１で現れる、ヒトＨＳＫ３βに対するヌクレオチド配列）の阻害について試験した。ＧＳＫ３βの発現は、例えば、Ｈｕｇｈｅｓら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２０３：３０５−１１（１９９２）に記載されており、これは、本明細書中に参考として援用される。
【０１６０】
基質緩衝液（３０ ｍＭ ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１０ｍＭ ＭｇＣｌ２，２ｍＭ ＤＴＴ，３μｇ／ｍｌ ＧＳＫ３βおよび０．５μＭの先にリン酸化し、ビオチン化した（ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ ｐｒｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ）ＳＧＳＧ連結ＣＲＥＢペプチド（Ｃｈｉｒｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＰＴＹ Ｌｔｄ．，Ｃｌａｙｔｏｎ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）３００μｌのアリコートを、９６ウェルポリプロピレンマイクロタイタープレートのウェルへ分配した。アッセイされるべき種々の濃度の各化合物、またはスタウロスポリン（ポジティブコントロール、またはネガティブコントロールとして使用される公知のキナーゼインヒビター（すなわち、ＤＭＳＯのみ）を含むＤＭＳＯ３．５μｌ／ウェルを、添加し、そして徹底的に混合した。次いで、反応を、１μＭの標識されていないＡＴＰおよび１〜２×１０７ｃｐｍ γ３３Ｐで標識されたＡＴＰ ５０μｌ／ウェルを添加することによって開始し、そして反応を、室温で約３時間続けさせた。
【０１６１】
反応を続けさせる間、ストレプトアビジンでコーティングしたＬａｂｓｙｓｔｅｍｓ「Ｃｏｍｂｉｐｌａｔｅ ８」捕捉プレート（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ，Ｈｅｌｓｉｎｋｉ，Ｆｉｎｌａｎｄ）を、１％のウシ血清アルブミンを含むＰＢＳ ３００μｌ／ウェルと共に室温で少なくとも１時間インキュベートすることによってブロッキングした。次いで、ブロッキング溶液を吸引によって除去し、そして捕捉プレートを１００μｌ／ウェルの停止試薬（５０μＭ ＡＴＰ／２０ｍＭ ＥＤＴＡ）で満たした。
【０１６２】
３時間の酵素反応が完了したとき、各反応混合物の３連の１００μｌのアリコートを停止溶液を含む３つのウェルに移し（３つの捕捉プレートの各々に１ウェル）、そしてウェル内容物をよく混合した。室温で１時間後、捕捉プレートのウェルを吸引によって空にし、そしてＰＢＳ、および１２チャネルＣｏｒｎｉｎｇ４３０４７４ ＥＬＩＳＡプレートウォッシャーを用いて５回洗浄した。最終的に、２００μｌのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−２０シンチレーション液体を、プレートの各ウェルに添加した。プレートをプレートシーラーでコーティングし、次いで、振盪器に３０分間置いた。各捕捉プレートをＰａｃｋａｒｄ ＴｏｐＣｏｕｎｔシンチレーションカウンター（Ｍｅｒｉｄｉａｎ，Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ）内でカウントし、そして結果を化合物濃度の関数としてプロットした。
【０１６３】
次いで、本発明の化合物を、このアッセイに従ってＧＳＫ３に対する阻害活性についてスクリーニングした。実施例３〜１１の化合物は、この細胞遊離アッセイにおいて、ＧＳＫ３に関して１μＭ以下のＩＣ５０を示した。
【０１６４】
従って、これらの結果は、本発明の化合物がＧＳＫ３に対する阻害活性を示すことを示した。
【０１６５】
（実施例２２）
（細胞ベースのグリコーゲンシンターゼアッセイを用いるＧＳＫ３阻害活性についてのスクリーニング）
ＣＨＯ−ＨＩＲＣ細胞を、ハムＦ１２培地／１０％ 透析したウシ胎仔血清を含む１０ｃｍ組織培養プレートに保持する。コンフルエントな１０ｃｍプレートからの細胞を回収し、そして６ウェル組織培養プレートの６つのウェルに、培地２ｍｌの最終容量まで分ける。細胞を３７℃で２４時間増殖させる。次いで、細胞を、ウシ胎仔血清を含まないハム１２培地中で３回洗浄し、そして最後に、細胞をさらに２４時間３７℃で２ｍｌの無血清培地中に置いた。
【０１６６】
このとき最後に、ＤＭＳＯ中に溶解した化合物２０μｌを各ウェルに添加し、そして３７℃でインキュベートする。２０分後、培地を除去し、そして細胞をＰＢＳで室温で一回洗浄し、次いで、液体窒素中でプレート上に急速に凍結する。次いで、細胞を、ウェル当たり１４０μｌの溶解緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ ７．８；１ｍＭ ＥＤＴＡ，１００ｍＭ ＮａＦ，２５μｇ／ｍｌ ロイペプチン，１ｍＭ ＤＴＴ，１ｍＭ ＰＭＳＦ）の存在下で、氷上で解凍する。細胞をプレートからすくい取り、そしてＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ内でドライアイスによって凍結する。次いで、溶解物を解凍し、そしてドライアイスによって再凍結する。
【０１６７】
再解凍後、溶解物を１４，０００ｇで１５分間スピンダウンする。次いで、上清を取り出し、そして氷上に置く。各上清（４５μｌ）を反応緩衝液（６５ ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ ７．８；２６ ｍＭ ＥＤＴＡ，３２．５ ｍＭ ＫＦ，９．３ｍＭ ＵＤＰ−グルコース；１１ｍｇ／ｍｌグリコーゲン；５００ｎＣｉ／ｍＩ １４Ｃ−ＵＤＰ−グルコース）４５μｌに添加し、そしてさらに４５μｌを、４５μｌ 反応緩衝液／２０ｍＭ グルコース−６−リン酸に添加する。反応物を３０℃で３０分間インキュベートし、次いで、２ｃｍ平方の３１ＥＴクロマトグラフ紙（Ｗｈａｔｍａｎ）上にスポットする。濾紙を６６％ エタノール中で２０分間２回洗浄し、アセトン中で簡単にリンスし、そして室温で１時間乾燥する。
【０１６８】
濾液を５ｍｌの液体シンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）に添加し、液体シンチレーションカウンター内でカウントする。任意の溶解物中で活性である全グルコーゲンシンターゼの百分率を、１００×（ｃｍｐ −グルコース−６−リン酸）／（ｃｍｐ ＋ グルコース−６−リン酸）として示す。この値は、５つの異なる濃度の化合物について、およびＤＭＳＯ単独について、２連で決定し、次いで、値を濃度の対数に対してプロットする。最大レベルの５０％までグリコーゲンシンターゼを刺激する化合物の濃度は、Ｓ状曲線をプロットされたデータに合致させることによって決定される。最大レベルは、試験化合物の濃度が実質的にＥＣ５０を超えて増える場合、グリコーゲンシンターゼ活性が、漸近的に（ａｓｙｍｔｏｔｉｃａｌｌｙ）向かうレベルとして規定される。
【０１６９】
（実施例２３）
（ｔａｕタンパク質リン酸化の阻害についてのスクリーニング）
（Ａ．ＧＳＫ３発現プラスミドおよびｔａｕ発現によるＣＯＳ細胞の一時的トランスフェクション）
プラスミド構築
ＣＯＳ細胞を、高グリコースＭＥＭ培地／５％ウシ胎仔血清を含むＴ２５組織培養フラスコ内に保持する。コンフルエントなＴ２５フラスコからの細胞を回収し、そして、最終容量２ｍｌ／ウェルの培地で、８０，０００細胞／ウェルをＣｏｒｎｉｎｇ ６ウェル組織培養プレートに接種する。細胞を３７℃で４８時間増殖させる。次いで、細胞を、ウシ胎仔血清を含まないＯｐｔｉ−ＭＥＭ中で２回洗浄し、そして最後に、細胞を１ｍｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭ中に置く。
【０１７０】
ｔａｕタンパク質をコードするポリヌクレオチドを、初期ＳＶ４０プロモーターの下、プラスミドｐＳＧ５にサブクローニングし、ｔａｕ発現プラスミドを生成する。ｔａｕタンパク質をコードするｃＤＮＡのクローニングは、通常、Ｇｏｅｄｅｒｔら，ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ，８（２）：３９３−３９９（１９８９）に記載され、これは、本明細書中で参考として援用される。ＧＳＫ３発現プラスミドを、ＧＳＫ３βをコードするポリヌクレオチドをｐＣＧにサブクローニングすることによって調製する（これは、Ｇｉｅｓｅら，Ｇｅｎｅｓ ＆ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，９：９９５−１００８（１９９５）およびＭａｔｔｈｉａｓら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１７：６４１８ （１９８９）（これらの両方は、本明細書中で参考として援用される）に記載されるＡｐＥＶＲＦ誘導体である）。
【０１７１】
以下の溶液を、１．５ｍｌのＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ内で調製する：溶液Ａ：各トランスフェクションに対して、２μｇのＤＮＡ（ｔａｕ発現プラスミド）および０．７μｇのＤＮＡ（ＧＳＫ３発現プラスミド）を１００μｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）中に希釈する；溶液Ｂ：各トランスフェクションに対して、８μｌのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ試薬を、１００μｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭ中に希釈する。この２つの溶液を混ぜ合わせ、穏やかに混合し、そして室温で４５分間インキュベートし、ＤＮＡ−リポソーム複合体を形成させる。各トランスフェクションに対して、０．８ｍｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭをこの複合体を含む管に添加する。希釈溶液を穏やかに混合し、そしてリンスした細胞上にオーバーレイする。細胞を複合型ＤＮＡ／Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅと共に、ＣＯ２インキュベータ内で室温で６時間インキュベートする。インキュベーション後、２０％のＦＢＳを含む増殖培地（高グルコースＭＥＭ）１ｍｌを、各ウェルに添加し、そして３７℃で一晩インキュベートする。トランスフェクション開始１８時間後に、培地を新鮮な完全培地と交換し、そして細胞を３７℃でさらに４８時間増殖させる。
【０１７２】
（Ｂ．ｔａｕリン酸化阻害アッセイ）
回収の２時間前に、ＤＭＳＯ中に溶解した試験化合物（ＧＳＫ３インヒビター）２μｌを各ウェルに添加し、そして３７℃でインキュベートする。２時間後、培地を除去し、そして細胞を、プレート上でドライアイスによって急速に凍結し、そして−７０℃で貯蔵する。細胞を溶解緩衝液（％ Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００，２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ ７．５，１３７ｍＭ ＮａＣｌ，１５％グリセロール，２５μｇ／ロイペプチン，１μｇ ｍｌ ペプスタチン−Ａ，１μＭ ＰＭＳＦ，２１μｇ／ｍｌアプロチニン，５０ｍＭ ＮａＦ，５０ｍＭ β−グリセロリン酸，１５ｍＭ ピロリン酸ナトリウム，１ｍＭ オルトバナデン酸ナトリウム２００μｌの存在下で、氷上で溶解する。各ウェルの内容物を１４，０００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、そして上清を清潔な管に移す。この時点で、溶解物を−２０℃で貯蔵し得る。
【０１７３】
（Ｃ．細胞溶解物におけるリン酸化ｔａｕを検出するためのＥＬＩＳＡ）
Ｉｍｍｕｌｏｎ ４小片（ｓｔｒｉｐｓ）（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）を、Ｃａ＋＋およびＭｇ＋＋，１００μｌ／ウェルを含むＰＢＳ中で５μｇ／ｍｌでモノクローナル抗リン酸化ｔａｕ（ＡＴ８，Ｐｏｌｙｍｅｄｃｏ，Ｉｎｃ．）でコーティングする。４℃で一晩インキュベートした後、この小片をウォッシャー緩衝液（０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を含むＰＢＳ）で２回洗浄し、そして１％ＢＳＡ、５％正常マウス血清および０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を含むＰＢＳで、室温で１時間ブロックする。小片をウォッシャー緩衝液で５回洗浄する。１％ ＢＳＡ、０．１％ ＮａＮ３を含むＰＢＳ中で１：１０に希釈した溶解物（１００μｌ）を、各ウェルに添加し、そして室温で１時間インキュベートする。洗浄後、ＰＢＳ−ＢＳＡ中の０．５μｇ／ｍｌのビオチン化モノクローナル抗（非リン酸化）ｔａｕ（ＨＴ７，Ｐｏｌｙｍｅｄｃｏ，Ｉｎｃ．）１００μｌを各ウェルに添加する。小片を５回洗浄し、そしてＨＲＰ連結ストレプトアビジンを添加し、室温で３０分間インキュベートし、そしてウォッシャー緩衝液で大規模に洗浄する。ＴＭＢ基質（Ｐｉｅｒｃｅ）を発色のために使用し、そして等容量の０．８Ｍの硫酸を添加することによって反応を停止する。小片を４５０ｎｍフィルターを用いて、ＥＬＩＳＡプレートリーダー上で読む。ｔａｕリン酸化を最大レベルの５０％（すなわち、ＩＣ５０）まで阻害する化合物の濃度を、Ｓ状曲線をプロットされたデータに合致させることによって決定する。
【０１７４】
（実施例２４）
（ＧＳＫ３インヒビターがグルタミン酸興奮毒性から初代海馬細胞を保護する可能性の試験）
海馬を胎齢１８〜１９日のラットから解剖した。組織をＨｉｂｅｍａｔｅ ＴＭ培地（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）中に収集し、そして約１ｍｍ片に細かく刻んだ。組織を、Ｐａｐａｉｎ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いて分離した。単離後に、細胞を、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ ＴＭ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）、２％ Ｂ２７サプリメント（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）、Ｌ−グルタミンおよび抗生物質からなる無血清培地に再懸濁した。細胞を、ディッシュ当たり７．５×１０４細胞の濃度で、ポリ−Ｌ−リシンでコーティングした３５ｍｍ組織培養ディッシュにプレーティングした。５％ ＣＯ２中で３７℃で１０〜１４日後に、細胞をリンスし、そして新鮮な培地を与えた。翌日、本発明の代表的化合物を、１ｎＭと１００μＭとの間の最終濃度まで添加した。化合物の添加後４〜８時間目に、馴化培地を細胞から除去し、そして３７℃で貯蔵した。培養物を、１０μＭのグリシンを含むＨＥＰＥＳ緩衝化平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）で２回リンスしたＧｒａｂｂおよびＣｈｏｉ、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ １９：１６５７−６２（１９９９）。次いで、耐用物を室温で５分間、同じＨＢＳＳ中で２００μＭグルタミン酸に暴露した。暴露後、培養物を緩衝液で３回リンスし、次いで、化合物を含むそれらの本来の馴化培地に戻した。グルタミン酸暴露後２０〜２４時間目に、培養物をＨＢＳＳ中でリンスし、そしてＴｒｙｐａｎ Ｂｌｕｅに１０分間暴露した。この染料は、死細胞によって取り込まれる。培養物をリンスし、次いで、４％パラホルムアルデヒド中で３０分間固定した。生きているニューロンと死んだ（青い核）の大きなニューロンの数（少なくとも各培養物から２００細胞）を、位相差顕微鏡によってカウントし、そして写真を撮った。この方法を用いて、本発明の化合物は、グルタミン酸塩のニューロン細胞死を誘導する可能性を有意に減少し得ることが示された。
【０１７５】
（実施例２５）
（糖尿病げっ歯類における有効性の評価）
（グルコース耐性試験：）
（経口投薬のための化合物処方）
試験化合物を、典型的に、投与前日に、１％ カルボキシメチルセルロース／０．１％ ｔｗｅｅｎ−８０（両方ともＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍ，ＭＯから）中の水または懸濁液中の溶液として、経口栄養のために処方した。いくつかの初期化合物を、以下の手順と共通の手順に従って、１５％ Ｃａｐｔｉｓｏｌ（ＣｙＤｅｘ Ｃｏ．，ＩＬによって改変されたシクロデキストリン）中の溶液として処方した。水溶液のために、乾燥および凍結乾燥した試験化合物粉末を、蒸留水に可溶化し、そしてボルテックスおよび超音波処理することによってよく混合する。必要ならば、試験化合物を１Ｎ ＮａＯＨまたは１Ｎ ＨＣｌでｐＨ調節し、そして最後に、０．２ミクロンのセルロースアセテート膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏ．，ＭＡ）を付けた注射器を介して滅菌濾過する。経口懸濁液のために、試験化合物粉末を、１％カルボキシメチルセルロース／０．１％ ｔｗｅｅｎ−８０の新鮮な懸濁液と混合し、そして大規模に超音波処理し、必要ならば、上記のようにｐＨ調節し、そして粒子サイズが均一になり、そしてサイズが１０ミクロンより小さくなるまでボルテックスする。
【０１７６】
（糖尿病マウスグルコース耐性試験：）
肥満ｄｂ／ｄｂ（雌性 Ｃ５７ＢｌＫｓ／Ｊ）マウスを、８週齢でＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ（ＢａｒＨａｒｂｏｒ，ＭＥ）から得て、そして１〜２週間後に有効性試験のために使用した。試験をモニターするとき、食餌を朝早く（グルコースボーラスの７〜８時間前）に除去した。局所麻酔（ＥＭＬＡ ｃｒｅｍｅ，Ａｓｔｒａ Ｐｈａｒｍ．，ＭＡ）を尾の末端に適用し、そして５００〜１００μｌの血液サンプルを尾先端の少量断片（ｓｎｉｐ）から得て、そして５００Ｕ／ｍｌのナトリウムヘパリン（Ｅｌｋｉｎｓ−Ｓｉｎｎ，ＮＪ）５μｌを含むＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブへ収集し、続いて血漿を単離した。サンプルを、その日の間、種々の間隔で、合計で６〜８の時間点で得た。マウスを処置群へと無作為化し、そして試験化合物の第１の経口用量（０．２ｍｌ用量）をグルコースの４．５時間前に、および再び経口栄養（ｏＧＴＴ）または腹腔内注射によって、５０％ブドウ糖（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂ，ＩＬ）０．２ｍｌの投与０．５時間前に投与した。グルコース投与の約２時間後の最終血液サンプル採取後に、食餌を動物に戻した。
【０１７７】
（基本的な糖血症およびインスリン血症の調節：）
試験化合物を、典型的に、複数の日の状況で、複数の投薬レジメンまたは一回のボーラスで、ｄｂ／ｄｂマウス（上を参照）またはＺＤＦラット（Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍｏｄｅｌｓ，Ｉｎｃ．；Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）に経口投与した。ＺＤＦラットを８週齢で受け取り、そして１〜２週間後に、有効性試験のために使用した。食餌を投薬の約３０分前に除去し、そして試験化合物の一回のボーラス（投薬用量は１〜８ｍｇ／ｍｌの範囲）を投与した。血液を上記のように、続く２〜３時間にわたって１〜６個の時間点でサンプリングした。食餌を血液サンプリング後に動物のケージに戻した。
【０１７８】
（最初の終末点：）
グルコースおよびインスリンのレベルを血漿および／または血液サンプルから測定する。グルコースレベルをＯｎｅ−Ｔｏｕｃｈグルコメーター（Ｌｉｆｅｓｃａｎ Ｃｏ．，ＣＡ）によって白血球から、およびＢｅｃｋｍａｎグルコースアナライザによって血漿から測定する。グルコースの結果は、典型的に、マウスについての血液値およびラット研究についての血漿値を反映する。インスリンレベルの測定は、供給者のプロトコルに従って、ＥＬＩＳＡ（Ｃｒｙｓｔａｌ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，ＩＬ）によった。
【０１７９】
（結果の定量化：）
有効性は、ｍｇ／ｄＬグルコースまたはｎｇ／ｍｌインスリンとして表され得るか、あるいは、（１００ｍｇ／ｄＬの正常血糖の基線を超えて取られた）血漿グルコースおよび（１ｎｇ／ｍＬの正常血糖の基線を超えて取られた）インスリンについての曲線下の領域（ＡＵＣ）として表される。典型的には、ＡＵＣとして表される場合、結果は、実際に、減少したＡＵＣとして示される（［（ビヒクルコントロールＡＵＣ −試験群ＡＵＣ）／ビヒクルコントロールＡＵＣ×１００］）。このような表現は、プラシーボコントロール群と比較して、改善されたグルコースの処理（ｄｉｓｐｏｓａｌ）および／または減少された基本的な高血糖値またはインスリン保存の大きさの単一の量的表現を提供する。
【０１８０】
（結果：）
本発明の代表的な化合物は、よいインビトロ力価を示し、そしてカプセルで処方され、そしてマウスに皮下投与（３０ｍｇ／ｋｇ）される場合、インビボで高いバイオアベイラビリティおよび組織浸透度を示した。グルコース耐性試験直前の基本的な高血糖症における有意な減少、およびグルコースチャレンジに続く有意に改善されたグルコース処分が観察された。グルコース応答が、−６０分〜＋１２０分の血液グルコース曲線の下の領域（ＡＵＣ）を決定することによって定量化される場合、コントロール群と比較して、ＡＵＣにおける４５〜５０％の減少が観察される。これは、Ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅによって得られる有効性と矛盾しない（６０または１００ｍｇ／ｋｇ／日のいずれかで少なくとも数日間経口的に投薬される場合）。また、処置された動物におけるインスリンレベルは、コントロールマウスより低いままであるという観察は、重要であった。
【０１８１】
本発明の好ましい実施形態が、説明および記載されたが、種々の変化が、本発明の精神および範囲から逸脱することなく本発明になされ得ることが理解される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造：
【化１】
を有する化合物、およびその薬学的に受容可能な塩であって、ここで：
ＸおよびＹは、窒素であり；
Ａ１およびＡ２は、必要に応じて置換された、アリール、アリールアミノ、アリールオキシまたはヘテロアリールであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、独立して、水素、ヒドロキシル、ならびに必要に応じて置換された低級アルキル、シクロ低級アルキル、アルキルアミノアルキル、低級アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アリールおよびへテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ’１およびＲ’４は、水素であり；
Ｒ’２およびＲ’３は、水素、および必要に応じて置換された低級アルキルからなる群より選択され；
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、独立して、水素、ヒドロキシ、ハロ、カルボニル、ニトロ、アミノ、アミド、アミジノ、イミド、シアノ、ならびに置換または非置換の低級アルキル、低級アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシ、アルキルアミノカルボニルオキシ、アリールアミノカルボニルオキシ、ホルミル、低級アルキルカルボニル、低級アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アミノアリール、アルキルスルホニル、スルホンアミド、アミノアルコキシ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アラルキルアミノ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロアラルキルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルキルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、アミジノ、シクロアルキル、シクロアミド、シクロチオアミド、シクロアミジノ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロアミジノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、グアニジニル、アリール、ビアリール、ヘテロアリール、ヘテロビアリール、ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、アリールスルホニルおよびアリールスルホンアミドからなる群より選択される、
化合物。
【請求項２】
Ａ１およびＡ２のうちの少なくとも１つが、３〜１０個の炭素環原子および必要に応じて１つ以上の環ヘテロ原子を有する芳香族環を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ａ１およびＡ２のうちの少なくとも１つが、必要に応じて置換された、炭素環式アリール、アリールアミノまたはアリールオキシである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ａ１およびＡ２のうちの少なくとも１つが、必要に応じて置換されたヘテロアリールである、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ａ１およびＡ２のうちの少なくとも１つが、置換または非置換のフェニル、フェニルアミノ、フェニルオキシ、ピリジル、ピリミジニル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、トリアゾニル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、プリニル、ナフチル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジル、およびベンゾイミダゾリルからなる群より選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
Ａ１およびＡ２のうちの少なくとも１つが、少なくとも１個でありかつ３個未満の置換基で置換されている、請求項２に記載の化合物。
【請求項７】
前記置換基が、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、アミジノ、オキサミジノ、アルコキシアミジノ、イミジノ、グアニジノ、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、低級アルキルアミノ低級アルコキシ、低級アルキルカルボニル、低級アラルキルカルボニル、低級ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アミノアルキルおよびシアノアルキルからなる群より独立して選択される、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ａ１が、以下の式：
【化２】
を有する、請求項４に記載の化合物であって、ここで、Ｒ８およびＲ９が、水素、ヒドロキシ、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、アミジノ、オキサミジノ、アルコキシアミジノ、イミジノ、グアニジニル、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、アミノ低級アルキル、低級アルキルアミノ低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、低級アルキルアミノ低級アルコキシ、低級アルキルカルボニル、低級アラルキルカルボニル、低級ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アリール、およびアラルキルからなる群より選択される、化合物。
【請求項９】
Ａ１が、アミノピリジル、ニトロピリジル、アミノニトロピリジル、シアノピリジル、シアノチアゾリル、アミノシアノピリジル、トリフルオロメチルピリジル、メトキシピリジル、メトキシニトロピリジル、メトキシシアノピリジルおよびニトロチアゾリルからなる群より選択される、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうちの少なくとも１つが、ハロ低級アルキル、ヘテロシクロアミノアルキル、および低級アルキルアミノ低級アルキルからなる群より選択される置換低級アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうちの少なくとも１つが、低級アルキルアミノ低級アルキルである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３が、水素であり、そしてＲ４が、水素、メチル、エチル、アミノエチル、ジメチルアミノエチル、ピリジルエチル、ピペリジニルエチル、ピロリジニルエチル、ピペラジニルエチルおよびモルホリニルエチルからなる群より選択される、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のうちの少なくとも１つが、置換および非置換のアリール、ヘテロアリールおよびビアリールからなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７のうちの少なくとも１つが、置換または非置換の、以下の式：
【化３】
の部分であり、ここで、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、カルボキシル、ヒドロキシ、ならびに必要に応じて置換された低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、ハロ低級アルキル、ハロ低級アルコキシ、アミノアルキル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アルキルカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアラルキルカルボニルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ アミノカルボニル、低級アルキルアミノカルボニル、アミノアラルキル、低級アルキルアミノアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロヘテロアリール、アラルキル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシアルキル、アルキルカルボニルオキシアルキル、ヘテロアリールカルボニルオキシアルキル、アラルキルカルボニルオキシアルキル、およびヘテロアラルキルカルボニルオキシアルキルからなる群より独立して選択される、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素であり、そしてＲ１２が、ハロ、低級アルキル、ヒドロキシル、低級アルコキシ、ハロ低級アルキル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、モルホリノ、ピペリジノおよびシアノからなる群より選択される、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ１１、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素であり、そしてＲ１０およびＲ１２が、ハロ、低級アルキル、ヒドロキシル、低級アルコキシ、ハロ低級アルキル、モルホリノ、ピペリジノおよびシアノからなる群より独立して選択される、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素であり、そしてＲ１２がヘテロアリールである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素であり、そしてＲ１２がヘテロシクロアルキルである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４のうちの少なくとも１つが、ハロであり、そしてＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４の残りのものが、水素である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４のうちの少なくとも１つが、モルホリノ、ピペリジノからなる群より選択され、そしてＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４の残りのものが、水素である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７のうちの少なくとも１つが、ジクロロフェニル、ジフルオロフェニル、トリフルオロメチルフェニル、クロロフルオロフェニル、ブロモクロロフェニル、ブロモフルオロフェニル、エチルフェニル、メチルクロロフェニル、エチルクロロフェニル、イミダゾリルフェニル、シアノフェニル、モルホリノフェニルおよびシアノクロロフェニルからなる群より選択される、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ６が、アラルキル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アミノアラルキル、カルボニルアミノアルキル、アルキルカルボニルアミノアルキル、アリールカルボニルアミノアルキル、アラルキルカルボニルアミノアルキル、アミノアルコキシアルキルおよびアリールアミノアルキルからなる群より選択される置換アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ６が、アルキルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルコキシカルボニルアミノ、アリールアルキルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アルキルチオカルボニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、およびヘテロアラルキルカルボニルアミノからなる群より選択される置換アミノである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ６が、非置換または置換のアミノカルボニル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、およびアルキルアミノアルキルオキシカルボニルからなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｒ６が、アミジノ、グアニジノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、シクロアミド、ヘテロシクロアミド、シクロチオアミドおよびヘテロシクロ低級アルキルからなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ６がアリールである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７のうちの少なくとも１つが、置換または非置換のヘテロアリール基またはヘテロシクリル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７のうちの少なくとも１つが、置換または非置換の、ピリジル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリニル、ピラジニル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、イミダゾリジニル、オキサジアゾリル、オキサゾリジニル、オキサゾリジノニル、テトラゾリル、ピラジニル、ピラゾリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリニル、チアゾリル、チエニル、フラニル、キノリニル、ピロリルピリジル、ピラゾロニル、ピリダジニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジル、ベンゾトリアゾリル、およびベンゾイミダゾリルからなる群より選択される、請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７のうちの少なくとも１つが、以下の構造：
【化４】
を有するモノケトピペラジニル基である、請求項２８に記載の化合物であって、
ここで、Ｒ１５およびＲ１６は、水素、低級アルキル、低級アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アリール低級アルキル、低級アルキルアリール低級アルキル、ハロ低級アルキル、ハロアリール低級アルキル炭素環式およびハロアリール低級アルキル複素環式からなる群より独立して選択されるか；またはＲ１６は、別のＲ１６またはＲ１５と一緒になって、炭素環式環、複素環式環またはアリール環を形成し得；そしてｏは、１と３との間の整数である、化合物。
【請求項３０】
Ｒ１５が低級アルキルである、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｒ１５が、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、およびｔ−ブチルからなる群より選択される、請求項３０に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｒ１５がＲ１６と一緒になって、以下の構造：
【化５】
を有する基を形成する、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３３】
Ｒ１５がＲ１６と一緒になって、以下の構造：
【化６】
を有する基を形成する、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３４】
ある量の請求項１に記載の化合物を含有する組成物であって、該量は、ヒト被験体または動物被験体に、薬学的に受容可能なキャリアと一緒に投与される場合に、該ヒト被験体または動物被験体において、ＧＳＫ３活性を調節するために有効な量である、組成物。
【請求項３５】
ヒト被験体または動物被験体において、ＧＳＫ３活性を阻害する方法であって、該方法は、該ヒト被験体または動物被験体に、請求項２９に記載の組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３６】
細胞を処理する方法であって、該方法は、該細胞に、該細胞においてＧＳＫ３活性を阻害するために有効な量の請求項１に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３７】
ヒト被験体または動物被験体において、ＧＳＫ３媒介障害を処置するための方法であって、該方法は、該ヒト被験体または動物被験体に、該被験体におけるＧＳＫ３活性を阻害するために有効な量の、請求項３４に記載の組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３８】
前記組成物が、経口投与、皮下投与、経皮投与、経粘膜投与、イオン導入法、静脈内投与、鞘内投与、頬投与、舌下投与、鼻腔内投与、および直腸投与からなる群より選択される投与様式によって投与される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＧＳＫ３媒介障害が、糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンティントン病、肥満症、アテローム性動脈硬化症の心血管疾患、本態的高血圧症、多嚢胞性卵巣症候群、Ｘ症候群、虚血、外傷性脳傷害、双極性傷害、免疫不全および癌からなる群より選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記被験体に、１種以上のさらなる活性薬剤を投与する工程をさらに包含する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＧＳＫ３媒介傷害が、糖尿病であり、そして前記さらなる活性薬剤が、インスリン、トログリタゾン、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、グリピジドおよびメトホルミンからなる群より選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
薬剤として使用するための、請求項１に記載の化合物。
【請求項４３】
糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンティントン病、肥満症、アテローム性動脈硬化症の心血管疾患、本態的高血圧症、多嚢胞性卵巣症候群、Ｘ症候群、虚血、外傷性脳傷害、双極性傷害または癌を処置するための医薬の製造における、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１】
以下の構造：
【化１】
を有する化合物、およびその薬学的に受容可能な塩であって、ここで：
ＸおよびＹは、窒素であり；
Ａ１およびＡ２は、必要に応じて置換された、アリール、アリールアミノ、アリールオキシまたはヘテロアリールであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、独立して、水素、ヒドロキシル、ならびに必要に応じて置換された低級アルキル、シクロ低級アルキル、アルキルアミノアルキル、低級アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アリールおよびへテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ’１およびＲ’４は、水素であり；
Ｒ’２およびＲ’３は、水素、および必要に応じて置換された低級アルキルからなる群より選択され；
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、独立して、水素、ヒドロキシ、ハロ、カルボニル、ニトロ、アミノ、アミド、アミジノ、イミド、シアノ、ならびに置換または非置換の低級アルキル、低級アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシ、アルキルアミノカルボニルオキシ、アリールアミノカルボニルオキシ、ホルミル、低級アルキルカルボニル、低級アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アミノアリール、アルキルスルホニル、スルホンアミド、アミノアルコキシ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アラルキルアミノ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロアラルキルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルキルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、アミジノ、シクロアルキル、シクロアミド、シクロチオアミド、シクロアミジノ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロアミジノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、グアニジニル、アリール、ビアリール、ヘテロアリール、ヘテロビアリール、ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、アリールスルホニルおよびアリールスルホンアミドからなる群より選択される、
化合物。
【請求項２】
Ａ１およびＡ２のうちの少なくとも１つが、３〜１０個の炭素環原子および必要に応じて１つ以上の環ヘテロ原子を有する芳香族環を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ａ１およびＡ２のうちの少なくとも１つが、必要に応じて置換された、炭素環式アリール、アリールアミノまたはアリールオキシである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ａ１およびＡ２のうちの少なくとも１つが、必要に応じて置換されたヘテロアリールである、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ａ１およびＡ２のうちの少なくとも１つが、置換または非置換のフェニル、フェニルアミノ、フェニルオキシ、ピリジル、ピリミジニル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、トリアゾニル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、プリニル、ナフチル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジル、およびベンゾイミダゾリルからなる群より選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
Ａ１およびＡ２のうちの少なくとも１つが、少なくとも１個でありかつ３個未満の置換基で置換されている、請求項２に記載の化合物。
【請求項７】
前記置換基が、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、アミジノ、オキサミジノ、アルコキシアミジノ、イミジノ、グアニジノ、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、低級アルキルアミノ低級アルコキシ、低級アルキルカルボニル、低級アラルキルカルボニル、低級ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アミノアルキルおよびシアノアルキルからなる群より独立して選択される、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ａ１が、以下の式：
【化２】
を有する、請求項４に記載の化合物であって、ここで、Ｒ８およびＲ９が、水素、ヒドロキシ、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、アミジノ、オキサミジノ、アルコキシアミジノ、イミジノ、グアニジニル、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、アミノ低級アルキル、低級アルキルアミノ低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、低級アルキルアミノ低級アルコキシ、低級アルキルカルボニル、低級アラルキルカルボニル、低級ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アリール、およびアラルキルからなる群より選択される、化合物。
【請求項９】
Ａ１が、アミノピリジル、ニトロピリジル、アミノニトロピリジル、シアノピリジル、シアノチアゾリル、アミノシアノピリジル、トリフルオロメチルピリジル、メトキシピリジル、メトキシニトロピリジル、メトキシシアノピリジルおよびニトロチアゾリルからなる群より選択される、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうちの少なくとも１つが、ハロ低級アルキル、ヘテロシクロアミノアルキル、および低級アルキルアミノ低級アルキルからなる群より選択される置換低級アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうちの少なくとも１つが、低級アルキルアミノ低級アルキルである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３が、水素であり、そしてＲ４が、水素、メチル、エチル、アミノエチル、ジメチルアミノエチル、ピリジルエチル、ピペリジニルエチル、ピロリジニルエチル、ピペラジニルエチルおよびモルホリニルエチルからなる群より選択される、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のうちの少なくとも１つが、置換および非置換のアリール、ヘテロアリールおよびビアリールからなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７のうちの少なくとも１つが、置換または非置換の、以下の式：
【化３】
の部分であり、ここで、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロ、チオアミド、カルボキシル、ヒドロキシ、ならびに必要に応じて置換された低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、ハロ低級アルキル、ハロ低級アルコキシ、アミノアルキル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アルキルカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアラルキルカルボニルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ アミノカルボニル、低級アルキルアミノカルボニル、アミノアラルキル、低級アルキルアミノアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロヘテロアリール、アラルキル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシアルキル、アルキルカルボニルオキシアルキル、ヘテロアリールカルボニルオキシアルキル、アラルキルカルボニルオキシアルキル、およびヘテロアラルキルカルボニルオキシアルキルからなる群より独立して選択される、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素であり、そしてＲ１２が、ハロ、低級アルキル、ヒドロキシル、低級アルコキシ、ハロ低級アルキル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、モルホリノ、ピペリジノおよびシアノからなる群より選択される、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ１１、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素であり、そしてＲ１０およびＲ１２が、ハロ、低級アルキル、ヒドロキシル、低級アルコキシ、ハロ低級アルキル、モルホリノ、ピペリジノおよびシアノからなる群より独立して選択される、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素であり、そしてＲ１２がヘテロアリールである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、およびＲ１４が、水素であり、そしてＲ１２がヘテロシクロアルキルである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４のうちの少なくとも１つが、ハロであり、そしてＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４の残りのものが、水素である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４のうちの少なくとも１つが、モルホリノ、ピペリジノからなる群より選択され、そしてＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４の残りのものが、水素である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７のうちの少なくとも１つが、ジクロロフェニル、ジフルオロフェニル、トリフルオロメチルフェニル、クロロフルオロフェニル、ブロモクロロフェニル、ブロモフルオロフェニル、エチルフェニル、メチルクロロフェニル、エチルクロロフェニル、イミダゾリルフェニル、シアノフェニル、モルホリノフェニルおよびシアノクロロフェニルからなる群より選択される、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ６が、アラルキル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アミノアラルキル、カルボニルアミノアルキル、アルキルカルボニルアミノアルキル、アリールカルボニルアミノアルキル、アラルキルカルボニルアミノアルキル、アミノアルコキシアルキルおよびアリールアミノアルキルからなる群より選択される置換アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ６が、アルキルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルコキシカルボニルアミノ、アリールアルキルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アルキルチオカルボニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、およびヘテロアラルキルカルボニルアミノからなる群より選択される置換アミノである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ６が、非置換または置換のアミノカルボニル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、およびアルキルアミノアルキルオキシカルボニルからなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｒ６が、アミジノ、グアニジノ、シクロイミド、ヘテロシクロイミド、シクロアミド、ヘテロシクロアミド、シクロチオアミドおよびヘテロシクロ低級アルキルからなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ６がアリールである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７のうちの少なくとも１つが、置換または非置換のヘテロアリール基またはヘテロシクリル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７のうちの少なくとも１つが、置換または非置換の、ピリジル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリニル、ピラジニル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、イミダゾリジニル、オキサジアゾリル、オキサゾリジニル、オキサゾリジノニル、テトラゾリル、ピラジニル、ピラゾリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリニル、チアゾリル、チエニル、フラニル、キノリニル、ピロリルピリジル、ピラゾロニル、ピリダジニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジル、ベンゾトリアゾリル、およびベンゾイミダゾリルからなる群より選択される、請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７のうちの少なくとも１つが、以下の構造：
【化４】
を有するモノケトピペラジニル基である、請求項２８に記載の化合物であって、
ここで、Ｒ１５およびＲ１６は、水素、低級アルキル、低級アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アリール低級アルキル、低級アルキルアリール低級アルキル、ハロ低級アルキル、ハロアリール低級アルキル炭素環式およびハロアリール低級アルキル複素環式からなる群より独立して選択されるか；またはＲ１６は、別のＲ１６またはＲ１５と一緒になって、炭素環式環、複素環式環またはアリール環を形成し得；そしてｏは、１と３との間の整数である、化合物。
【請求項３０】
Ｒ１５が低級アルキルである、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｒ１５が、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、およびｔ−ブチルからなる群より選択される、請求項３０に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｒ１５がＲ１６と一緒になって、以下の構造：
【化５】
を有する基を形成する、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３３】
Ｒ１５がＲ１６と一緒になって、以下の構造：
【化６】
を有する基を形成する、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３４】
ある量の請求項１に記載の化合物を含有する組成物であって、該量は、ヒト被験体または動物被験体に、薬学的に受容可能なキャリアと一緒に投与される場合に、該ヒト被験体または動物被験体において、ＧＳＫ３活性を調節するために有効な量である、組成物。
【請求項３５】
ヒト被験体または動物被験体において、ＧＳＫ３活性を阻害する方法であって、該方法は、該ヒト被験体または動物被験体に、請求項２９に記載の組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３６】
細胞を処理する方法であって、該方法は、該細胞に、該細胞においてＧＳＫ３活性を阻害するために有効な量の請求項１に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３７】
ヒト被験体または動物被験体において、ＧＳＫ３媒介障害を処置するための方法であって、該方法は、該ヒト被験体または動物被験体に、該被験体におけるＧＳＫ３活性を阻害するために有効な量の、請求項３４に記載の組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３８】
前記組成物が、経口投与、皮下投与、経皮投与、経粘膜投与、イオン導入法、静脈内投与、鞘内投与、頬投与、舌下投与、鼻腔内投与、および直腸投与からなる群より選択される投与様式によって投与される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＧＳＫ３媒介障害が、糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンティントン病、肥満症、アテローム性動脈硬化症の心血管疾患、本態的高血圧症、多嚢胞性卵巣症候群、Ｘ症候群、虚血、外傷性脳傷害、双極性傷害、免疫不全および癌からなる群より選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記被験体に、１種以上のさらなる活性薬剤を投与する工程をさらに包含する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＧＳＫ３媒介傷害が、糖尿病であり、そして前記さらなる活性薬剤が、インスリン、トログリタゾン、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、グリピジドおよびメトホルミンからなる群より選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
薬剤として使用するための、請求項１に記載の化合物。
【請求項４３】
糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンティントン病、肥満症、アテローム性動脈硬化症の心血管疾患、本態的高血圧症、多嚢胞性卵巣症候群、Ｘ症候群、虚血、外傷性脳傷害、双極性傷害または癌を処置するための医薬の製造における、請求項１に記載の化合物の使用。
【公表番号】特表２００６−５０６３８３（Ｐ２００６−５０６３８３Ａ）
【公表日】平成１８年２月２３日（２００６．２．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５４６９７８（Ｐ２００４−５４６９７８）
【出願日】平成１５年１０月２０日（２００３．１０．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０３３３７０
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０３７７９１
【国際公開日】平成１６年５月６日（２００４．５．６）
【出願人】（５９１０７６８１１）カイロン コーポレイション (265)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年２月２３日（２００６．２．２３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１５年１０月２０日（２００３．１０．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０３３３７０
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０３７７９１
【国際公開日】平成１６年５月６日（２００４．５．６）
【出願人】（５９１０７６８１１）カイロン コーポレイション (265)
【Ｆターム（参考）】
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