サバイビン発現の刺激による抗老化美容ケアの方法
【課題】表皮の基底層の幹細胞におけるサバイビン発現を活性化又は刺激させることにより皮膚加齢の徴候の出現を予防又は遅延し、又はそれを治療することが可能となる化粧品組成物の提供。
【解決手段】フォルスコリン又はフォルスコリンを含有する抽出物、特に、コレウス・フォルスコリ（Ｃｏｌｅｕｓ ｆｏｒｓｋｏｌｉｉ）の抽出物、レペチニア・カウレセンスの抽出物、リムノフィラ・コンフェルタの抽出物、ダニエリア・オリベリの抽出物、イシクラゲの抽出物、スセネデスムス・ジモルファスの抽出物、ウコンの抽出物及びサフランの抽出物から構成される群から選択されるものを含有する化粧品組成物。
【解決手段】フォルスコリン又はフォルスコリンを含有する抽出物、特に、コレウス・フォルスコリ（Ｃｏｌｅｕｓ ｆｏｒｓｋｏｌｉｉ）の抽出物、レペチニア・カウレセンスの抽出物、リムノフィラ・コンフェルタの抽出物、ダニエリア・オリベリの抽出物、イシクラゲの抽出物、スセネデスムス・ジモルファスの抽出物、ウコンの抽出物及びサフランの抽出物から構成される群から選択されるものを含有する化粧品組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、サバイビン発現の刺激による抗老化美容ケアの方法に関する。
より具体的には、本発明の主題は、皮膚においてサバイビン発現を刺激する、特に植物由来の分子又は抽出物、化粧品組成物又は皮膚科用組成物中の活性剤としてのその使用、及び前記組成物を用いる美容ケアの方法又は皮膚科的治療法である。
【０００２】
〔技術的背景〕
アポトーシスは、断片化による、生物の特定の細胞の排除の能動的な生物学的過程である。
【０００３】
それは、遺伝制御下の生物学的組織レベルでの細胞のプログラムされた排出に相当する。排出は自然なものである場合も（組織における余剰な細胞）、又は種々の形のストレスによって誘導される場合もある。
【０００４】
アポトーシスの生物学的カスケードは、公知であり、カスパーゼ、特に、アポトーシスプログラムを実行するエフェクターカスパーゼ３又は７並びにそれを誘発する開始カスパーゼ８及び／又は９などのいくつかのエフェクターを用いる。
【０００５】
特定の数のアポトーシス阻害剤も知られており（Ｄｅｖｅｒａｕｘら、Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ、１３（１９９９）、２３９〜２５２頁）、その中にサバイビンがある。したがって、これらの阻害剤は、細胞生存を調節し、ひいては、生物学的組織における細胞ホメオスタシスに関与する。
【０００６】
ＩＡＰ（アポトーシスタンパク質の阻害剤）ファミリーの唯一のメンバーであるサバイビンは、細胞のアポトーシスのバランスをとることもでき、その細胞周期を調節することもできる二機能性タンパク質である。
【０００７】
サバイビンは、特に、特定のカスパーゼ、特に、カスパーゼ３、７及び９の活性化を阻害する。
【０００８】
このタンパク質は、強力に増殖する胚組織において発現されるが、成体の分化した組織では、生理学的細胞再生を有する組織及び／又は修復プロセスに関与する組織において以外は発現されない。したがって、皮膚レベルでは、このタンパク質は、表皮の基底層のケラチノサイトにおいて最も著しく発現され、後者の形成及び再生を提供する。
【０００９】
表皮幹ケラチノサイトが見られるのは、この基底層においてであり、これらは、この組織の新生に対して高い可能性を有する細胞であり、完全な表皮の形成において最も有効であると実証されている（ＪＬ Ｘｉｅら、Ｊ Ｐｌａｓｔ Ｒｅｃｏｎｓｔｒ．Ａｅｓｔｈｅｔ．Ｓｕｒｇ．２００７年、６０（９）、９８３〜９０頁）。
【００１０】
今では、サバイビンは、表皮の幹細胞において主に発現されることがわかっている（Ｍａｒｃｏｎｉ Ａ、Ｄａｌｌａｇｌｉｏ Ｋ、Ｌｏｔｔｉ Ｒ、Ｖａｓｃｈｉｅｒｉ Ｃ、Ｔｒｕｚｚｉ Ｆ、Ｆａｎｔｉｎｉ Ｆ、Ｐｉｎｃｅｌｌｉ Ｃ、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ２００７年、２５、１４９〜１５５頁）。
【００１１】
逆に、サバイビンの過剰発現は、紫外照射に対する曝露後の表皮におけるアポトーシス細胞数の相当な減少を示す（Ｇｒｏｓｓｍａｎら、２００１年、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １０８、９９１〜９９９頁）。
【００１２】
β−１インテグリンの不活性化は、サバイビンの細胞発現を完全に無効にし（Ｍａｒｃｏｎｉ Ａら、Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ２００７年、２５、１４９〜１５５頁）、細胞をアポトーシスへと導くことも実証されている。
【００１３】
β−１インテグリンは、それを介して、表皮基底層のケラチノサイトが、皮膚−表皮接合部のタンパク質と接着する接着タンパク質である。
【００１４】
β−１インテグリンは、表皮の幹細胞によって最も強力に発現され（Ｐ．Ｊｏｎｅｓ、Ｃｅｌｌ １９９３年、７３、７１３〜７２４頁、Ｋａｕｒ Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ２００６年、１２６、１４５０〜１４５８頁）、このことは、これらの細胞におけるサバイビンの強力な発現の観察結果を裏付けるものである。
【００１５】
今では、加齢の間に、ケラチノサイトにおける（Ｂ Ｌｅ Ｖａｒｌｅｔら、Ｊ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｅｒｍａｔｏｌ Ｓｙｍｐ Ｐｒｏｃ．１９９８年、３、１７２〜１７９頁）及び光に曝露されたしわの多い皮膚領域における（Ｓ Ｂｏｓｓｅｔら、Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ２００３年、１４８、７７７０〜７７８頁）β−１インテグリンの発現の低下が観察されている。
【００１６】
したがって、表皮の基底細胞におけるサバイビンの維持を確実にするタンパク質が、加齢に伴って減少し、並行して、アポトーシスに対するこれらの細胞の感受性の増大及び循環細胞の減少が観察され（Ｚｕｌｉａｎｉら、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００４年、１２３、２、Ａ５０、３０２）、これらの観察結果が、加齢した皮膚におけるサバイビン欠乏の可能性を示すように集中している。
【００１７】
サバイビンは、そのアポトーシス調節の役割のほかにも、有糸分裂の際に染色体を細胞骨格と協調させる「染色体パッセンジャー複合体」の成分として同定されており（Ｖａｄｅｒら、ＥＭＢＯ ｒｅｐｏｒｔｓ、２００６年、７、１、８５〜９２頁）、したがって、サバイビンは、正常な細胞分裂において必須の役割を果たし、この分裂は、加齢の間に損なわれ、結果として、表皮の再生が少なくなり、薄くなり、しわが発生する。
【００１８】
したがって、サバイビンは、生存の、及びケラチノサイトの抵抗性のレギュレーターであり、幹細胞を含む、表皮の基底層に位置するケラチノサイトのアポトーシスの感受性を調節することによって作用する。また、サバイビンは、表皮の再生及び新生能力も調節する。
【００１９】
したがって、サバイビンは、表皮の細胞ストックを残し、効率的な表皮細胞再生を維持することが可能である。
【００２０】
〔先行技術〕
文書国際公開第２００６／０６９１９２号パンフレット（ＧＩＬＬＥＴＴＥ Ｃｏ）は、毛髪及び体毛増殖減少効果のための、サバイビン阻害剤の化粧品における使用を開示している。
【００２１】
今日までに、皮膚科又は化粧品において使用するための、サバイビン発現刺激剤として作用する化合物は記載されていない。
【００２２】
本発明の発明者らは、単離された分子又は抽出物、より具体的には、植物由来の材料から得られた抽出物が、正常ヒトケラチノサイト培養物においてサバイビン発現を刺激することを実証した。
【００２３】
したがって、これらの活性剤は、ヒト表皮の新生細胞、最も具体的には、表皮の基底層の幹細胞に関して保護的役割を果たす。
【００２４】
これらの分子又は抽出物は、特に、皮膚加齢の徴候の出現の予防若しくは遅延又はその効果の減少を目的として、又は細胞若しくは組織寿命を促進することを目的として、損傷を受けた表皮の再構築並びにまた、正常皮膚における皮膚創傷及び治癒しにくい潰瘍性創傷の治癒の促進を目的として、脱毛の予防若しくは減速を目的として、毛髪の再成長若しくは毛髪強化の促進を目的として、化粧品組成物又は皮膚科用組成物における活性剤として、治療目的のための、例えば、移植における、培養表皮（再構築された表皮）の製造を目的としたｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養の延長のための、又は治療若しくは研究目的のためのｉｎ ｖｉｔｒｏでの表皮の幹細胞若しくは毛嚢の精製集団の維持においてアジュバントとして使用できる。
【００２５】
〔発明の目的〕
本発明の主目的は、皮膚においてサバイビン発現を刺激する、特に植物由来の分子又は抽出物、化粧品組成物又は皮膚科用組成物中の活性剤としてのその使用、及び前記組成物を用いる美容ケアの方法又は皮膚科的治療法を提供することである。
【００２６】
本発明の主目的はまた、皮膚におけるサバイビン発現の刺激による抗老化美容ケアの方法を提供することである。
【００２７】
本発明の主目的は、化粧剤又は皮膚病薬としての、化粧品上又は皮膚科上許容される分子又は植物から得られた分子若しくは植物抽出物の使用を提案することである。
【００２８】
本発明の目的はまた、
ａ）皮膚加齢の徴候の出現を予防若しくは遅延し、又はその効果を減速するため、及び／又は、
ｂ）特に紫外線照射によって損傷を受けた場合の、表皮若しくはその角質層を再構築するため、及び／又は、
ｃ）特に、脱毛症の場合において、脱毛を予防若しくは減速するために、又は毛髪の再成長を加速若しくは促進するために、又は脆弱毛を強化するために、毛周期の機能を回復させるため、及び／又は、
ｄ）爪の成長を促進する、及び／又はその強度を強化するための、
化粧剤若しくは皮膚病薬としての、又は化粧品組成物若しくは皮膚科用組成物中の活性剤としての、前記分子又は前記抽出物の使用、及び前記組成物を用いる美容ケアの方法若しくは皮膚科的方法である。
【００２９】
本発明の主目的はまた、特に、上記に示される美容ケア又は皮膚科的ケアの種類を実施するための、化粧品上許容される植物抽出物を用いる美容ケアの方法を提供することである。
【００３０】
最後に、本発明の主目的は、基礎的研究の目的のため、又は例えば、やけど若しくは治癒しにくい潰瘍性創傷後の移植の場合における、治療目的のための、培養表皮、例えば、再構築された表皮の製造の目的のための、幹細胞及び／又は高いクローン形成能を有する細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ培養法を提供することであり、これは、植物から得られた前記細胞培養物に関して許容される植物抽出物の使用を含む。
【００３１】
〔発明の説明〕
本発明の第１の主題は、皮膚加齢の徴候の出現を予防若しくは遅延し、又はその効果を低減するための美容ケアの方法であり、前記方法は、顔面又は身体の皮膚の少なくとも一部への、皮膚におけるサバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の化粧品上許容される作用剤の有効量の送達を含むことを特徴とする。
【００３２】
本発明の第１の実施形態によれば、前記美容ケアの方法は、表皮の、特に、しわのくぼみにおける細胞の再高密度化という現象によって、及びその再生の加速又は維持によって抗しわ効果を得ることを目的とした、皮膚加齢の徴候を示しているか、示す傾向がある顔面又は身体の皮膚の少なくとも一部への、その活性剤の１種として、サバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の作用剤を含む化粧品組成物の塗布を含む。
【００３３】
本発明の別の実施形態によれば、前記美容ケアの方法は、表皮の基底レベルのケラチノサイトの抵抗性を強化して、この日光に対する曝露に起因する基底レベルで細胞喪失を低減し、このようにして、紫外線による老化を抑えるための、顔面又は身体の皮膚の少なくとも一部の日光に曝露された皮膚の領域への、その活性剤の１種として、サバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の作用剤を含む組成物の塗布を含む。
【００３４】
本発明の第２の主題は、特に紫外線照射によって損傷を受けた表皮又はその角質層を再構築するための美容ケアの方法に関し、前記方法は、顔面又は身体の皮膚の少なくとも一部への、皮膚におけるサバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の化粧品上許容される作用剤の有効量の送達を含むことを特徴とする。
【００３５】
前記方法は、皮膚の治癒を加速又は促進することを目的とした、顔面又は身体の皮膚の損傷を受けた領域の少なくとも一部への、その活性剤の１種として、サバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の作用剤を含む化粧品組成物又は皮膚科用組成物の塗布を含む。
【００３６】
本発明の第３の主題は、特に、脱毛症の場合において、脱毛を減速又は予防するために、毛髪の再成長を促進若しくは加速するために、又は脆弱毛を強化するために、毛周期の機能を回復させることを目的とした美容ケアの方法に関し、前記方法は、頭皮の少なくとも一部への、皮膚におけるサバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の化粧品上許容される作用剤の有効量の送達を含むことを特徴とする。
【００３７】
本発明の一変法によれば、前記ケア方法は、所望の効果を得ることを目的とした、頭皮の皮膚の少なくとも一部への、その活性剤の１種として、サバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の作用剤を含む化粧品組成物の塗布を含む。
【００３８】
本発明の第４の主題は、爪の成長の促進及び／又はその強度の強化のための美容ケアの方法に関し、前記方法は、爪又は周囲の領域の少なくとも一部への、サバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の化粧品上許容される作用剤の有効量の送達を含むことを特徴とする。
【００３９】
本発明の実施形態の一変法によれば、前記方法は、所望の効果を得ることを目的とした、爪又は周囲の領域への、その活性剤の１種として、サバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の作用剤を含む化粧品組成物の塗布を含む。
【００４０】
本発明の第５の主題は、基礎的研究、又は例えば、やけど若しくは治癒しにくい潰瘍性創傷後の移植の場合における、治療目的のための、培養表皮、例えば、再構築された表皮の製造の目的のための、幹細胞及び／又は高いクローン形成能を有する細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ培養のための方法に関し、培養培地への、培養において前記細胞を維持するためにサバイビン発現を活性化又は刺激する作用剤の有効量の添加を含むことを特徴とする。
【００４１】
サバイビン発現を活性化又は刺激する、本発明の化粧品上又は皮膚科上許容される活性剤は、精製された分子であってもよく、天然又は合成由来のものであってもよく、又は植物、無機物若しくは動物由来の出発材料からの抽出方法の生成物であってもよい。
この活性剤は、特に、抽出物又は精油であり得る。
【００４２】
本発明の特定の一実施形態によれば、サバイビン発現を刺激する活性剤は、フォルスコリン又はそれを含有する抽出物、特に、コレウス・フォルスコリ（Ｃｏｌｅｕｓ ｆｏｒｓｋｏｌｉｉ）の抽出物である。
【００４３】
したがって、本発明はまた、皮膚加齢の徴候の出現を予防若しくは遅延し、又はそれを治療するための、フォルスコリン又はそれを含有する抽出物の、化粧剤としての使用を対象とする。
【００４４】
抽出生成物によってサバイビン発現の刺激の所望の効果を得ることが可能になるその他の植物種は、より具体的には、イシクラゲ（Ｎｏｓｔｏｃ ｃｏｍｍｕｎｅ）、スセネデスムス・ジモルファス（Ｓｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓ ｄｉｍｏｒｐｈｕｓ）、ウコン（Ｃｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ）、サフラン（Ｃｒｏｃｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ）、ダニエリア・オリベリ（Ｄａｎｉｅｌｌｉａ ｏｌｉｖｅｒｉ）、レペチニア・カウレセンス（Ｌｅｐｅｃｈｉｎｉａ ｃａｕｌｅｓｃｅｎｓ）及びリムノフィラ・コンフェルタ（Ｌｉｍｎｏｐｈｉｌａ ｃｏｎｆｅｒｔａ）を含む群から選択される。
【００４５】
本発明の活性剤は、単一の植物種からであっても、又は同一属若しくは異なる属に属する植物種の混合物から形成される植物材料から得られる植物抽出物であってもよく、新たに収穫されたものであっても乾燥状態のものであってもよい。
【００４６】
前記植物抽出物は、当業者に公知の任意の抽出法によって、特に、以下に、また、実施例２及び３においても記載される抽出法を実施することによって得ることができる。
【００４７】
抽出物を調製するために用いられる植物材料は、全植物体であってもよく、植物体の一部、例えば、根、根茎又は地上部、特に、茎、葉、花、種子若しくは花芽であってもよい。
【００４８】
抽出ステップ自体に先立って、植物材料を乾燥及び／又は粉末にしてもよい。抽出の１つの好ましい実施形態によれば、植物材料は、乾燥及び粉末にされた状態である。
【００４９】
抽出物は、当業者に公知の種々の抽出法によって調製してよい。
【００５０】
しかし、抽出は、具体的には、選択された植物材料を極性溶媒又は極性溶媒の混合物と接触させることによって、実施される。
【００５１】
本発明によれば、表現「極性溶媒」は、溶媒が４の値以上の極性指数値Ｐ’を有することを示す。極性指数は、（可溶性及び状態の変化の）熱力学的値に基づいて算出された値であり、多かれ少なかれ分子の極性性質を示す。溶媒の極性指数については、参照により本願に含まれる、Ｌ．Ｒ．ＳＮＹＤＥＲによる論文、Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｏｌｖｅｎｔ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｃｏｍｍｏｎ ｌｉｑｕｉｄｓ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、９２（１９７４年）、２２３〜２３０が参照される。
【００５２】
抽出ステップに使用できる極性溶媒又は極性溶媒の混合物として、水、好ましくは、エタノール又はブタノールから選択されるＣ１〜Ｃ４アルコール、好ましくは、グリセロール、ブチレングリコール及びプロピレングリコールから選択されるグリコール並びに任意の割合のそれらの混合物から選択される溶媒が選択されることが有利である。
【００５３】
本発明の好ましい一実施形態によれば、植物種コレウス・フォルスコリ、イシクラゲ、スセネデスムス・ジモルファス、ウコン、サフラン、ダニエリア・オリベリ、レペチニア・カウレセンス及びリムノフィラ・コンフェルタから得られる抽出物は、水、Ｃ１〜Ｃ４アルコール、特に、エタノール又はブタノール、グリセロール、ブチレングリコール及びプロピレングリコールから選択されることが好ましいグリコール及びそれらの混合物から選択されることが有利である極性溶媒又は極性溶媒の混合物をベースとする抽出物である。
【００５４】
好ましい混合物は、少なくとも１種のアルコール及び水の、又は少なくとも１種のグリコール及び水の混合物であって、少なくとも１０％ｖ／ｖのアルコール又はグリコールを含み、残部が水で構成されている。
【００５５】
これらの植物種から抽出する方法の好ましい一実施形態によれば、抽出ステップ自体は、熱還流によって少なくとも３０分間実施される。
【００５６】
抽出はまた、植物材料又は植物抽出物の部分若しくは完全変色すること又は精製することを目的とした、その処理を含むさらなるステップを場合により含んでなってもよい。この変色ステップは、例えば、植物材料の、又は抽出物の、無極性溶媒若しくは無極性溶媒の混合物の溶液での処理、又は抽出物を活性炭の粒子と接触させることからなる処理、或いは、ＣＯ２を未臨界状態で用いる処理を含む場合もある。
【００５７】
抽出は、抽出溶媒の部分又は全排除のステップによって完了してもよい。第１の場合では、抽出物は、通常、相当な量の有機溶媒を欠く水性濃縮物が得られるまで濃縮され、第２の場合では、乾燥残渣が得られる。或いは、抽出ステップの生成物は、粉末の形であるよう凍結乾燥又は微粉化されてもよい。
【００５８】
粉末は、本発明の化粧品組成物又は皮膚科用組成物中でそのままに使用してもよく、又は溶媒若しくは溶媒混合物中に再分散してもよい。
【００５９】
通常、抽出ステップの生成物は、本発明の化粧品組成物又は皮膚科用組成物中で活性剤として使用されるよう、溶媒又は溶媒混合物中に溶解又は分散してもよい。抽出物が溶解又は分散される溶媒又は溶媒混合物は、抽出に使用されたものと同一であってもよく、異なっていてもよい。
【００６０】
本発明の抽出物はまた、多孔性又は無孔性ナイロン粉末及びマイカ又は任意の層状鉱物から選択されることが有利である支持体に吸着されてもよい。この場合には、用いられる抽出物は、水性抽出物であることが好ましい。
【００６１】
本発明の実施形態の一変法によれば、サバイビン発現を活性化又は刺激する作用剤は、その活性剤の１種として前記のサバイビン発現を刺激する作用剤を含有し、また、少なくとも１種の化粧品上許容される賦形剤も含む化粧品組成物の形で、身体の若しくは顔面の皮膚、又は表面的な身体の腫瘍へのこの組成物の塗布によって局所送達される。
【００６２】
本発明の化粧品組成物又は皮膚科用組成物は、所望の効果を得るための、本発明の抽出物の有効量を含む。
【００６３】
本発明の任意の態様について、用語「有効量」は、
ａ）皮膚加齢の徴候の出現を予防若しくは遅延し、又はその効果を減速するため、及び／又は
ｂ）特に紫外線照射によって損傷を受けた場合に、表皮若しくはその角質層を再構築するため、及び／又は
ｃ）特に、脱毛症の場合において、毛周期の機能を回復させるために、脱毛を減速若しくは予防し、毛髪の再成長を加速若しくは促進するために、又は脆弱毛を強化するため、及び／又は、
ｄ）爪の成長を促進する、及び／又はその強度を強化するため、
ｅ）幹細胞及び／又は高クローン形成能を有する細胞を、培養で維持し、これらの培養を、良好な条件下での培養を実施するのに、また、必要な場合には表皮の製造を実施するのにも十分な一定期間保存するのを可能にするために、
必要な量と少なくとも同等である量を意味するよう意図される。
【００６４】
実際、この量は、当業者によって容易に決定できる。例として、組成物又は培養倍地中の、サバイビン産生を活性化及び／又は刺激する作用剤の濃度は、０．００１重量％〜５重量％となると示すことができる。
【００６５】
培養培地は、培養培地の重量で０．０１％〜３％の、サバイビン産生を活性化及び／又は刺激する作用剤を含むことが好ましい。
【００６６】
本発明の化粧品組成物又は皮膚科用組成物は、１％〜３％の、サバイビン産生を活性化及び／又は刺激する作用剤を含むことが有利である。
【００６７】
本発明の化粧品組成物又は皮膚科用組成物はまた、１種又は複数のその他の化粧品上又は皮膚科上許容される薬剤を含む場合もある。
【００６８】
実施例１〜３において実施され、報告された具体的な試験によって実証されるように、本発明の化粧剤又は皮膚病薬は、特に、予期しないことに、表皮の基底層の幹細胞におけるサバイビン発現を刺激することによって有効である。
【００６９】
本発明者らによって実施された試験によって、本発明のサバイビン発現を刺激する化粧用又は皮膚科用活性剤の特性はまた、前記作用剤を、本発明の抽出物と同様の及び／又は補完的な美容効果を有するその他の活性剤と組み合わせた化粧品組成物又は皮膚科用組成物において、得られる又は改善され得ることも示された。
【００７０】
本発明のサバイビン発現を刺激する化粧用又は皮膚科用活性剤の活性化有効性は、表皮ケラチノサイトのβ−１インテグリンなどの接着タンパク質の発現を、及びこれらの細胞の接着自体を刺激する分子又は抽出物（アスパラギン酸マグネシウム、マンガン塩及び誘導体）、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸のひと続きなどのインテグリンによって認識される特定のペプチド、又はＫＧＦなどの特定の増殖因子によって改善されることが特に有利である。
【００７１】
本発明のサバイビン発現を刺激する化粧用又は皮膚科用活性剤の活性化有効性はまた、ｃＡＭＰを分解するホスホジエステラーゼを阻害する分子又は抽出物、例えば、メチルキサンチン、特に、カフェインによって改善され、これによって細胞内ｃＡＭＰレベルの増大がもたらされることも有利であり得る。
【００７２】
本発明の化粧品組成物又は皮膚科用組成物はまた、皮膚美白活性を有する物質、減量活性を有する物質、水分を補給する活性を有する物質、鎮静、鎮痛又は弛緩活性を有する物質、皮膚の微小循環を刺激して、肌の色の、特に、顔の輝きを改善する活性を有する物質、脂性の皮膚のケアのための皮脂調節活性を有する物質、皮膚を洗浄又は浄化する物質、フリーラジカル捕捉活性を有する物質、皮膚構造の維持を促進すること及び／若しくは真皮の表層の、及び表皮の細胞外マトリックスの分解を制限することを目的とした、及び／又は皮膚保護、矯正又は再構築効果を得ることを目的とした活性によって、皮膚加齢の効果、特に、しわの形成を低減又は遅延する物質、抗炎症活性を有する物質から選択され得る１種又は複数のその他の活性剤を含む場合もある。
【００７３】
前記化粧品組成物又は皮膚科用組成物は、本発明の抽出物に加え、顔料、色素、ポリマー、界面活性剤、レオロジー剤、芳香、電解質、ｐＨ調整剤、抗酸化物質及び保存料並びにこれらの混合物から選択され得る少なくとも１種の化粧品上又は皮膚科上許容される賦形剤を含む。
【００７４】
本発明の化粧品組成物又は皮膚科用組成物は、例えば、美容液、ローション、エマルジョン、例えば、クリーム或いはヒドロゲル、好ましくは、マスクであってもよく、又は、スティック若しくはパッチ若しくは頭皮用の衛生製品、例えば、シャンプー若しくはコンディショナー或いはメイクアップ製品、特に、爪に塗布することを意図する組成物、例えば、マニキュア液の形であってもよい。
【００７５】
最後に、本発明は、皮膚加齢の徴候の出現を予防若しくは遅延し、又はそれを治療するための、化粧剤又は皮膚病薬として上記で定義される活性剤の使用に関し、前記化粧剤又は皮膚病薬は、表皮の基底層の幹細胞においてサバイビン発現を刺激する。
【００７６】
本発明はまた、皮膚加齢の徴候の出現を予防若しくは遅延し、又はそれを治療するため、化粧剤又は皮膚病薬として、又は化粧品組成物の製造のための本発明の活性剤の使用に関する。
【００７７】
本発明のその他の目的、特徴及び利点は、以下の、本発明のいくつかの例示的実施形態に関してなされており、例示として簡単になされており、決して本発明の範囲を制限するものではない説明的な記載から明確に明らかになる。実施例では、特に断りのない限り、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧であり、量又はパーセンテージは重量で与えられている。
【００７８】
〔実施例〕
材料及び方法
【００７９】
１）細胞培養
正常ヒトケラチノサイトを、ＥＧＦ（表皮増殖因子）及びＢＰＥ（ウシ下垂体抽出物）（ＫＳＦＭｃ）（Ｇｉｂｃｏ参照、１７００５−０３４＋３７０００−０１５）を補給した血清不含ケラチノサイト培地で、５％ＣＯ２を含有する加湿雰囲気下、３７℃のインキュベーター中で、７５ｃｍ２フラスコで培養する。細胞を、ウェルあたり５００μｌの培地中５００００個細胞の割合で４８ウェルマイクロプレートに播種する（Ｄ０日）。
【００８０】
２４時間インキュベートした後（Ｄ１日）、細胞が接着し、次いで、処理ステップを実施する。次いで、播種培地を除去し、種々の濃度の、評価される成分、又はその賦形剤（例えば、ＤＭＳＯ）を含有する処理培地を、同じ割合で各培養ウェルに添加する。
【００８１】
１６時間処理した後、細胞によるサバイビン発現のピークを観察する。次いで、ウェルをＰＢＳですすぐ。マイクロプレートのウェルの半分を用いて、ケラチノサイトを溶解し、細胞内サバイビンをアッセイする。マイクロプレートのウェルのその他の半分を用いて、ＢＣＡ法によって総タンパク質をアッセイし、それによって、アッセイされるサバイビンの量を、タンパク質の単位量のもとへと関連付けることが可能となる。
【００８２】
非細胞傷害性用量での活性剤の効果を続いて評価することができるよう、試験した各活性剤の細胞傷害性を測定する相は、事前に必要である。
【００８３】
この目的を達成するために、活性剤の細胞傷害性用量を、ＸＴＴ試験によって調べる（参照、Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ ＩＩ、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ）。テトラゾリウム塩（ＸＴＴ試薬）は、ミトコンドリアの呼吸鎖に位置するデヒドロゲナーゼによってホルマザンに変換される。生細胞のみが、その呼吸鎖が機能的であり、ホルマザンを生成することができ、４５０ｎｍで橙色の化合物が検出される。
【００８４】
試験した各活性剤を希釈し、２倍希釈範囲を調製し、試験サンプルの活性剤の濃度は、５０ｍｇ／ｍｌ〜０．１９５ｍｇ／ｍｌの範囲とする。予め調製した希釈液の各々を、最後にＫＳＦＭ−Ｃ培地で１／１０００に希釈し、次いで、ケラチノサイトと４８時間接触させ、その時点で、細胞傷害性試験が実施される。
【００８５】
２）サバイビンのアッセイ
サバイビンを、正常ヒトケラチノサイトの培養物で、ＥＬＩＳＡ酵素免疫測定法（参照、Ｄｕｏｓｅｔ Ｓｕｒｖｉｖｉｎ ＥＬＩＳＡ ｆｒｏｍ Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてアッセイする。
【００８６】
総タンパク質を、ＢＣＡ比色試験（参照、ＢＣ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ、Ｕｐｔｉｍａ Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ）を用いて、５７０ｎｍの吸光度を測定することによってアッセイする。
【００８７】
１６時間処理した後、ＥＬＩＳＡによってサバイビンをアッセイするために、ウェルをＰＢＳですすぎ、次いで、１００μｌ／ウェルの溶解バッファーを加え、続いて、穏やかに振盪しながら１０分間インキュベートする。このバッファーは、アンチプロテアーゼを含み、これが、細胞溶解の間のサバイビンを含めたタンパク質の分解を防ぐ。
【００８８】
ＥＬＩＳＡマイクロプレートを調製する（参照Ｃｌｅａｒ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ ＤＹ９９２）：
【００８９】
ヒトサバイビンを用いた標準範囲を、細胞溶解物を用いたものと同条件下で０〜２０００ｐｇ／ｍｌで調製する。
【００９０】
酵素反応を硫酸で遮断した後、４５０ｎｍの吸光度を測定することによってサバイビンを定量する。
【００９１】
実施例１：サバイビン発現に対するフォルスコリンの活性
フォルスコリンは、供給業者ＳＩＧＭＡ、Ｆｒａｎｃｅから市販されており、植物コレウス・フォルスコリの抽出物から単離されていると示されている。
【００９２】
まず、フォルスコリンを、すべてＤＭＳＯで希釈して、４ｍｇ／ｍｌの溶液を調製する。
【００９３】
細胞を処理する間に、先に調製しておいた溶液を、培養培地で希釈して、１０μＭ、すなわち４μｇ／ｍｌの終濃度を得る。対照もまた、この同じ溶媒を用い、同じ割合で調製する。
【００９４】
以下の表Ｉに示される結果は、１００％を構成する、溶媒対照によって表される、サバイビン発現の基礎レベルと比較されている：
【表１】
【００９５】
結論：フォルスコリンは、タンパク質の発現の基礎レベル（対照）と比較して、ケラノサイト内サバイビン発現を大幅に増大させる。
【００９６】
実施例２：リムノフィラ・コンフェルタの地中部分の抽出物の調製及びサバイビン発現に関するその活性の測定
【００９７】
Ａ−抽出物の調製
乾燥状態のリムノフィラ・コンフェルタの茎及び葉を含む地中部分から形成された、供給業者ＩＤＶＰ、Ｆｒａｎｃｅから市販されている植物材料を、実験室ミル−ミキサーを用いて、０．１〜１ｍｍの程度の平均粒径に即座に粉末にする。
【００９８】
１０ｇの粉末にした植物材料を、２５０ｍｌの丸底フラスコに入れ、それに、１５０ｍｌのエタノール／水混合物（９０／１０ｖ／ｖ）を加える。
【００９９】
バルブコンデンサーを載せた丸底フラスコを、恒温槽中で磁気的に撹拌し、次いで、溶媒の還流に加熱する。
還流を撹拌しながら３０分間維持する。
加熱を停止すると、丸底フラスコを、槽の外で周囲温度に放冷させる。
【０１００】
次いで、混合物を、７０μｍ Ｗｈａｔｍａｎ ＧＦ／Ｆフィルターを備えたブフナー漏斗及び風袋計量された（ｔａｒｅｄ）フラスコを通して真空濾過し、このようにして濾液１が得られる。ブフナー漏斗上のケーキを、５０ｍｌの抽出溶媒で洗浄し、濾液２が得られる。
【０１０１】
次いで、２種の濾液を合わせ、秤量する。
得られた濾液を、予め風袋計量した丸底フラスコに入れ、次いで、最高温度５０℃の水浴中真空下で、ロータリーエバポレーターで濃縮乾固する。
【０１０２】
乾燥残渣を定量し、乾燥粉末化状態の１００ｇの出発植物材料あたりの得られた乾燥抽出物の質量として表される、質量による抽出率を求める。
抽出率は２１％である。
【０１０３】
Ｂ−サバイビン発現に対する活性
段落Ａで調製した乾燥抽出物を、１２．５ｍｇ／ｍｌ又は２５ｍｇ／ｍｌの濃度にＤＭＳＯで希釈する。
【０１０４】
細胞に対する処理の際に、０．１％ｖ／ｖ、すなわち、抽出の第１の溶液について１２．５μｇ／ｍｌ及び第２の溶液について２５μｇ／ｍｌの終濃度が得られるよう、培養培地に抽出物を添加する。この同じ溶媒を用いて対照もまた調製し、０．１％ｖ／ｖの終濃度とする。
【０１０５】
以下の表ＩＩは、１００％を構成する、溶媒対照によって表される、この同じタンパク質の発現の基礎レベルと比較した、総タンパク質１ｍｇあたりのサバイビンのピコグラムとして表される、サバイビン発現に対する実施例１の抽出物の平均活性を示す。
【０１０６】
得られた結果は、以下の表ＩＩに示されている：
【表２】
【０１０７】
結論：リムノフィラ・コンフェルタの抽出物は、タンパク質の発現の基礎レベル（対照）と比較して、ケラノサイト内サバイビン発現を大幅に増大させる。
【０１０８】
実施例３：レペチニア・カウレセンスの地中部分の抽出物の調製及びサバイビン発現に対するその活性の測定
【０１０９】
Ａ−抽出物の調製
乾燥した、粉末状態のレペチニア・カウレセンスの葉を、出発植物材料として用い、実施例２−Ａに従って、抽出物を調製する。
【０１１０】
この方法に用いられる抽出溶媒は、５０／５０（ｖ／ｖ）エタノール／水混合物である。
【０１１１】
乾燥残渣を定量し、乾燥粉末化状態の１００ｇの出発植物材料あたりの得られた乾燥抽出物の質量として表される、質量による抽出率を求める。
得られた質量による抽出率は２９％である。
【０１１２】
Ｂ−サバイビン発現に対する活性
本実施例の段落Ａで調製した乾燥抽出物を、３．１２５ｍｇ／ｍｌの濃度にＤＭＳＯで希釈する。
【０１１３】
細胞に対する処理の際に、０．１％ｖ／ｖ、すなわち、３．１２５μｇ／ｍｌの終濃度が得られるよう、培養培地に抽出物を添加する。終濃度０．１％ｖ／ｖを有する溶媒対照（ＤＭＳＯ）も調製する。
【０１１４】
以下の表ＩＩは、１００％を構成する、溶媒対照によって表される、発現の基礎レベルと比較した、サバイビンに対する、試験したレペチニア・カウレセンスの抽出物の活性を示す。
【表３】
【０１１５】
結論：レペチニア・カウレセンスの抽出物は、タンパク質の発現の基礎レベル（対照）と比較して、ケラチノサイト内サバイビン発現を大幅に増大する。
【０１１６】
実施例４：レペチニア・カウレセンスの葉の抽出物を含む化粧品組成物
【０１１７】
実施例３Ａで得られた乾燥抽出物を、エタノール／水混合物に１質量％で可溶化する。
乾燥抽出物の１質量％の溶液を得、以下の化粧品組成物において用いる：
【０１１８】
−レペチニア・カウレセンスの植物抽出物（実施例３Ａ） ０．１％
−界面活性剤（アラセル（Ａｒｌａｃｅｌ）（登録商標）１６５ＶＰ）
５％
−９５％セチルアルコール １％
−ステアリルアルコール １％
−蜜蝋 １．５％
−オイル（パーリーム（Ｐｅｒｌｅａｍ）（登録商標）） ８．５％
−トリカプレート／カプリレートグリセリド ３％
−シリコーンオイル（ジメチコン１００ＣＳ） １％
−ポリマー（カルトロール（Ｋｅｌｔｒｏｌ）（登録商標）） ０．３５％
−水酸化ナトリウム ０．０４％
−ＥＤＴＡ四ナトリウム粉末 ０．１％
−保存料 ０．５％
−水 適量１００
【０１１９】
化粧品組成物を、１又は複数のステップで種々の成分を混合することによって、当業者に周知の通常の方法で調製する。
【０１２０】
この組成物は、皮膚又は頭皮或いは爪に数週間の間、毎日塗布し、上記の美容効果を得ることができる。
【０１２１】
実施例５：フォルスコリンを含む化粧品組成物
【０１２２】
以下の化粧品組成物中には、コレウス・フォルスコリ（Ｃｏｌｅｕｓ ｆｏｒｓｋｏｌｉｉ）の抽出物から単離された実施例１のフォルスコリン（ＳＩＧＭＡ由来）が用いられている：
【０１２３】
−フォルスコリン（ＳＩＧＭＡ、実施例１） ２％
−Ｓｔｅａｒｅｔｈ−２１（Ｂｒｉｊ７２１） ２．５％
−ステアリン酸グリセリル（Ｔｅｇｒｉｎ） １．１％
−ステアリルアルコール ５％
−グリセロールトリカプレート／カプリレート １２．５％
−ブチレングリコール ３％
−グリセロール ２％
−保存料 ０．５％
−香料濃縮物 ０．５％
−ＵＶスクリーン（オクチルメトキシシンナメート） ７．５％
−水 適量１００
【０１２４】
化粧品組成物を、１又は複数のステップで種々の成分を混合することによって、当業者に周知の通常の方法で調製する。
【０１２５】
この組成物は、しわを含む皮膚の領域に数週間の間、毎日塗布し、前記しわの減少又は完全な消失の効果を得ることができる。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、サバイビン発現の刺激による抗老化美容ケアの方法に関する。
より具体的には、本発明の主題は、皮膚においてサバイビン発現を刺激する、特に植物由来の分子又は抽出物、化粧品組成物又は皮膚科用組成物中の活性剤としてのその使用、及び前記組成物を用いる美容ケアの方法又は皮膚科的治療法である。
【０００２】
〔技術的背景〕
アポトーシスは、断片化による、生物の特定の細胞の排除の能動的な生物学的過程である。
【０００３】
それは、遺伝制御下の生物学的組織レベルでの細胞のプログラムされた排出に相当する。排出は自然なものである場合も（組織における余剰な細胞）、又は種々の形のストレスによって誘導される場合もある。
【０００４】
アポトーシスの生物学的カスケードは、公知であり、カスパーゼ、特に、アポトーシスプログラムを実行するエフェクターカスパーゼ３又は７並びにそれを誘発する開始カスパーゼ８及び／又は９などのいくつかのエフェクターを用いる。
【０００５】
特定の数のアポトーシス阻害剤も知られており（Ｄｅｖｅｒａｕｘら、Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ、１３（１９９９）、２３９〜２５２頁）、その中にサバイビンがある。したがって、これらの阻害剤は、細胞生存を調節し、ひいては、生物学的組織における細胞ホメオスタシスに関与する。
【０００６】
ＩＡＰ（アポトーシスタンパク質の阻害剤）ファミリーの唯一のメンバーであるサバイビンは、細胞のアポトーシスのバランスをとることもでき、その細胞周期を調節することもできる二機能性タンパク質である。
【０００７】
サバイビンは、特に、特定のカスパーゼ、特に、カスパーゼ３、７及び９の活性化を阻害する。
【０００８】
このタンパク質は、強力に増殖する胚組織において発現されるが、成体の分化した組織では、生理学的細胞再生を有する組織及び／又は修復プロセスに関与する組織において以外は発現されない。したがって、皮膚レベルでは、このタンパク質は、表皮の基底層のケラチノサイトにおいて最も著しく発現され、後者の形成及び再生を提供する。
【０００９】
表皮幹ケラチノサイトが見られるのは、この基底層においてであり、これらは、この組織の新生に対して高い可能性を有する細胞であり、完全な表皮の形成において最も有効であると実証されている（ＪＬ Ｘｉｅら、Ｊ Ｐｌａｓｔ Ｒｅｃｏｎｓｔｒ．Ａｅｓｔｈｅｔ．Ｓｕｒｇ．２００７年、６０（９）、９８３〜９０頁）。
【００１０】
今では、サバイビンは、表皮の幹細胞において主に発現されることがわかっている（Ｍａｒｃｏｎｉ Ａ、Ｄａｌｌａｇｌｉｏ Ｋ、Ｌｏｔｔｉ Ｒ、Ｖａｓｃｈｉｅｒｉ Ｃ、Ｔｒｕｚｚｉ Ｆ、Ｆａｎｔｉｎｉ Ｆ、Ｐｉｎｃｅｌｌｉ Ｃ、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ２００７年、２５、１４９〜１５５頁）。
【００１１】
逆に、サバイビンの過剰発現は、紫外照射に対する曝露後の表皮におけるアポトーシス細胞数の相当な減少を示す（Ｇｒｏｓｓｍａｎら、２００１年、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １０８、９９１〜９９９頁）。
【００１２】
β−１インテグリンの不活性化は、サバイビンの細胞発現を完全に無効にし（Ｍａｒｃｏｎｉ Ａら、Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ２００７年、２５、１４９〜１５５頁）、細胞をアポトーシスへと導くことも実証されている。
【００１３】
β−１インテグリンは、それを介して、表皮基底層のケラチノサイトが、皮膚−表皮接合部のタンパク質と接着する接着タンパク質である。
【００１４】
β−１インテグリンは、表皮の幹細胞によって最も強力に発現され（Ｐ．Ｊｏｎｅｓ、Ｃｅｌｌ １９９３年、７３、７１３〜７２４頁、Ｋａｕｒ Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ２００６年、１２６、１４５０〜１４５８頁）、このことは、これらの細胞におけるサバイビンの強力な発現の観察結果を裏付けるものである。
【００１５】
今では、加齢の間に、ケラチノサイトにおける（Ｂ Ｌｅ Ｖａｒｌｅｔら、Ｊ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｅｒｍａｔｏｌ Ｓｙｍｐ Ｐｒｏｃ．１９９８年、３、１７２〜１７９頁）及び光に曝露されたしわの多い皮膚領域における（Ｓ Ｂｏｓｓｅｔら、Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ２００３年、１４８、７７７０〜７７８頁）β−１インテグリンの発現の低下が観察されている。
【００１６】
したがって、表皮の基底細胞におけるサバイビンの維持を確実にするタンパク質が、加齢に伴って減少し、並行して、アポトーシスに対するこれらの細胞の感受性の増大及び循環細胞の減少が観察され（Ｚｕｌｉａｎｉら、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００４年、１２３、２、Ａ５０、３０２）、これらの観察結果が、加齢した皮膚におけるサバイビン欠乏の可能性を示すように集中している。
【００１７】
サバイビンは、そのアポトーシス調節の役割のほかにも、有糸分裂の際に染色体を細胞骨格と協調させる「染色体パッセンジャー複合体」の成分として同定されており（Ｖａｄｅｒら、ＥＭＢＯ ｒｅｐｏｒｔｓ、２００６年、７、１、８５〜９２頁）、したがって、サバイビンは、正常な細胞分裂において必須の役割を果たし、この分裂は、加齢の間に損なわれ、結果として、表皮の再生が少なくなり、薄くなり、しわが発生する。
【００１８】
したがって、サバイビンは、生存の、及びケラチノサイトの抵抗性のレギュレーターであり、幹細胞を含む、表皮の基底層に位置するケラチノサイトのアポトーシスの感受性を調節することによって作用する。また、サバイビンは、表皮の再生及び新生能力も調節する。
【００１９】
したがって、サバイビンは、表皮の細胞ストックを残し、効率的な表皮細胞再生を維持することが可能である。
【００２０】
〔先行技術〕
文書国際公開第２００６／０６９１９２号パンフレット（ＧＩＬＬＥＴＴＥ Ｃｏ）は、毛髪及び体毛増殖減少効果のための、サバイビン阻害剤の化粧品における使用を開示している。
【００２１】
今日までに、皮膚科又は化粧品において使用するための、サバイビン発現刺激剤として作用する化合物は記載されていない。
【００２２】
本発明の発明者らは、単離された分子又は抽出物、より具体的には、植物由来の材料から得られた抽出物が、正常ヒトケラチノサイト培養物においてサバイビン発現を刺激することを実証した。
【００２３】
したがって、これらの活性剤は、ヒト表皮の新生細胞、最も具体的には、表皮の基底層の幹細胞に関して保護的役割を果たす。
【００２４】
これらの分子又は抽出物は、特に、皮膚加齢の徴候の出現の予防若しくは遅延又はその効果の減少を目的として、又は細胞若しくは組織寿命を促進することを目的として、損傷を受けた表皮の再構築並びにまた、正常皮膚における皮膚創傷及び治癒しにくい潰瘍性創傷の治癒の促進を目的として、脱毛の予防若しくは減速を目的として、毛髪の再成長若しくは毛髪強化の促進を目的として、化粧品組成物又は皮膚科用組成物における活性剤として、治療目的のための、例えば、移植における、培養表皮（再構築された表皮）の製造を目的としたｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養の延長のための、又は治療若しくは研究目的のためのｉｎ ｖｉｔｒｏでの表皮の幹細胞若しくは毛嚢の精製集団の維持においてアジュバントとして使用できる。
【００２５】
〔発明の目的〕
本発明の主目的は、皮膚においてサバイビン発現を刺激する、特に植物由来の分子又は抽出物、化粧品組成物又は皮膚科用組成物中の活性剤としてのその使用、及び前記組成物を用いる美容ケアの方法又は皮膚科的治療法を提供することである。
【００２６】
本発明の主目的はまた、皮膚におけるサバイビン発現の刺激による抗老化美容ケアの方法を提供することである。
【００２７】
本発明の主目的は、化粧剤又は皮膚病薬としての、化粧品上又は皮膚科上許容される分子又は植物から得られた分子若しくは植物抽出物の使用を提案することである。
【００２８】
本発明の目的はまた、
ａ）皮膚加齢の徴候の出現を予防若しくは遅延し、又はその効果を減速するため、及び／又は、
ｂ）特に紫外線照射によって損傷を受けた場合の、表皮若しくはその角質層を再構築するため、及び／又は、
ｃ）特に、脱毛症の場合において、脱毛を予防若しくは減速するために、又は毛髪の再成長を加速若しくは促進するために、又は脆弱毛を強化するために、毛周期の機能を回復させるため、及び／又は、
ｄ）爪の成長を促進する、及び／又はその強度を強化するための、
化粧剤若しくは皮膚病薬としての、又は化粧品組成物若しくは皮膚科用組成物中の活性剤としての、前記分子又は前記抽出物の使用、及び前記組成物を用いる美容ケアの方法若しくは皮膚科的方法である。
【００２９】
本発明の主目的はまた、特に、上記に示される美容ケア又は皮膚科的ケアの種類を実施するための、化粧品上許容される植物抽出物を用いる美容ケアの方法を提供することである。
【００３０】
最後に、本発明の主目的は、基礎的研究の目的のため、又は例えば、やけど若しくは治癒しにくい潰瘍性創傷後の移植の場合における、治療目的のための、培養表皮、例えば、再構築された表皮の製造の目的のための、幹細胞及び／又は高いクローン形成能を有する細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ培養法を提供することであり、これは、植物から得られた前記細胞培養物に関して許容される植物抽出物の使用を含む。
【００３１】
〔発明の説明〕
本発明の第１の主題は、皮膚加齢の徴候の出現を予防若しくは遅延し、又はその効果を低減するための美容ケアの方法であり、前記方法は、顔面又は身体の皮膚の少なくとも一部への、皮膚におけるサバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の化粧品上許容される作用剤の有効量の送達を含むことを特徴とする。
【００３２】
本発明の第１の実施形態によれば、前記美容ケアの方法は、表皮の、特に、しわのくぼみにおける細胞の再高密度化という現象によって、及びその再生の加速又は維持によって抗しわ効果を得ることを目的とした、皮膚加齢の徴候を示しているか、示す傾向がある顔面又は身体の皮膚の少なくとも一部への、その活性剤の１種として、サバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の作用剤を含む化粧品組成物の塗布を含む。
【００３３】
本発明の別の実施形態によれば、前記美容ケアの方法は、表皮の基底レベルのケラチノサイトの抵抗性を強化して、この日光に対する曝露に起因する基底レベルで細胞喪失を低減し、このようにして、紫外線による老化を抑えるための、顔面又は身体の皮膚の少なくとも一部の日光に曝露された皮膚の領域への、その活性剤の１種として、サバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の作用剤を含む組成物の塗布を含む。
【００３４】
本発明の第２の主題は、特に紫外線照射によって損傷を受けた表皮又はその角質層を再構築するための美容ケアの方法に関し、前記方法は、顔面又は身体の皮膚の少なくとも一部への、皮膚におけるサバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の化粧品上許容される作用剤の有効量の送達を含むことを特徴とする。
【００３５】
前記方法は、皮膚の治癒を加速又は促進することを目的とした、顔面又は身体の皮膚の損傷を受けた領域の少なくとも一部への、その活性剤の１種として、サバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の作用剤を含む化粧品組成物又は皮膚科用組成物の塗布を含む。
【００３６】
本発明の第３の主題は、特に、脱毛症の場合において、脱毛を減速又は予防するために、毛髪の再成長を促進若しくは加速するために、又は脆弱毛を強化するために、毛周期の機能を回復させることを目的とした美容ケアの方法に関し、前記方法は、頭皮の少なくとも一部への、皮膚におけるサバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の化粧品上許容される作用剤の有効量の送達を含むことを特徴とする。
【００３７】
本発明の一変法によれば、前記ケア方法は、所望の効果を得ることを目的とした、頭皮の皮膚の少なくとも一部への、その活性剤の１種として、サバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の作用剤を含む化粧品組成物の塗布を含む。
【００３８】
本発明の第４の主題は、爪の成長の促進及び／又はその強度の強化のための美容ケアの方法に関し、前記方法は、爪又は周囲の領域の少なくとも一部への、サバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の化粧品上許容される作用剤の有効量の送達を含むことを特徴とする。
【００３９】
本発明の実施形態の一変法によれば、前記方法は、所望の効果を得ることを目的とした、爪又は周囲の領域への、その活性剤の１種として、サバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の作用剤を含む化粧品組成物の塗布を含む。
【００４０】
本発明の第５の主題は、基礎的研究、又は例えば、やけど若しくは治癒しにくい潰瘍性創傷後の移植の場合における、治療目的のための、培養表皮、例えば、再構築された表皮の製造の目的のための、幹細胞及び／又は高いクローン形成能を有する細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ培養のための方法に関し、培養培地への、培養において前記細胞を維持するためにサバイビン発現を活性化又は刺激する作用剤の有効量の添加を含むことを特徴とする。
【００４１】
サバイビン発現を活性化又は刺激する、本発明の化粧品上又は皮膚科上許容される活性剤は、精製された分子であってもよく、天然又は合成由来のものであってもよく、又は植物、無機物若しくは動物由来の出発材料からの抽出方法の生成物であってもよい。
この活性剤は、特に、抽出物又は精油であり得る。
【００４２】
本発明の特定の一実施形態によれば、サバイビン発現を刺激する活性剤は、フォルスコリン又はそれを含有する抽出物、特に、コレウス・フォルスコリ（Ｃｏｌｅｕｓ ｆｏｒｓｋｏｌｉｉ）の抽出物である。
【００４３】
したがって、本発明はまた、皮膚加齢の徴候の出現を予防若しくは遅延し、又はそれを治療するための、フォルスコリン又はそれを含有する抽出物の、化粧剤としての使用を対象とする。
【００４４】
抽出生成物によってサバイビン発現の刺激の所望の効果を得ることが可能になるその他の植物種は、より具体的には、イシクラゲ（Ｎｏｓｔｏｃ ｃｏｍｍｕｎｅ）、スセネデスムス・ジモルファス（Ｓｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓ ｄｉｍｏｒｐｈｕｓ）、ウコン（Ｃｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ）、サフラン（Ｃｒｏｃｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ）、ダニエリア・オリベリ（Ｄａｎｉｅｌｌｉａ ｏｌｉｖｅｒｉ）、レペチニア・カウレセンス（Ｌｅｐｅｃｈｉｎｉａ ｃａｕｌｅｓｃｅｎｓ）及びリムノフィラ・コンフェルタ（Ｌｉｍｎｏｐｈｉｌａ ｃｏｎｆｅｒｔａ）を含む群から選択される。
【００４５】
本発明の活性剤は、単一の植物種からであっても、又は同一属若しくは異なる属に属する植物種の混合物から形成される植物材料から得られる植物抽出物であってもよく、新たに収穫されたものであっても乾燥状態のものであってもよい。
【００４６】
前記植物抽出物は、当業者に公知の任意の抽出法によって、特に、以下に、また、実施例２及び３においても記載される抽出法を実施することによって得ることができる。
【００４７】
抽出物を調製するために用いられる植物材料は、全植物体であってもよく、植物体の一部、例えば、根、根茎又は地上部、特に、茎、葉、花、種子若しくは花芽であってもよい。
【００４８】
抽出ステップ自体に先立って、植物材料を乾燥及び／又は粉末にしてもよい。抽出の１つの好ましい実施形態によれば、植物材料は、乾燥及び粉末にされた状態である。
【００４９】
抽出物は、当業者に公知の種々の抽出法によって調製してよい。
【００５０】
しかし、抽出は、具体的には、選択された植物材料を極性溶媒又は極性溶媒の混合物と接触させることによって、実施される。
【００５１】
本発明によれば、表現「極性溶媒」は、溶媒が４の値以上の極性指数値Ｐ’を有することを示す。極性指数は、（可溶性及び状態の変化の）熱力学的値に基づいて算出された値であり、多かれ少なかれ分子の極性性質を示す。溶媒の極性指数については、参照により本願に含まれる、Ｌ．Ｒ．ＳＮＹＤＥＲによる論文、Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｏｌｖｅｎｔ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｃｏｍｍｏｎ ｌｉｑｕｉｄｓ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、９２（１９７４年）、２２３〜２３０が参照される。
【００５２】
抽出ステップに使用できる極性溶媒又は極性溶媒の混合物として、水、好ましくは、エタノール又はブタノールから選択されるＣ１〜Ｃ４アルコール、好ましくは、グリセロール、ブチレングリコール及びプロピレングリコールから選択されるグリコール並びに任意の割合のそれらの混合物から選択される溶媒が選択されることが有利である。
【００５３】
本発明の好ましい一実施形態によれば、植物種コレウス・フォルスコリ、イシクラゲ、スセネデスムス・ジモルファス、ウコン、サフラン、ダニエリア・オリベリ、レペチニア・カウレセンス及びリムノフィラ・コンフェルタから得られる抽出物は、水、Ｃ１〜Ｃ４アルコール、特に、エタノール又はブタノール、グリセロール、ブチレングリコール及びプロピレングリコールから選択されることが好ましいグリコール及びそれらの混合物から選択されることが有利である極性溶媒又は極性溶媒の混合物をベースとする抽出物である。
【００５４】
好ましい混合物は、少なくとも１種のアルコール及び水の、又は少なくとも１種のグリコール及び水の混合物であって、少なくとも１０％ｖ／ｖのアルコール又はグリコールを含み、残部が水で構成されている。
【００５５】
これらの植物種から抽出する方法の好ましい一実施形態によれば、抽出ステップ自体は、熱還流によって少なくとも３０分間実施される。
【００５６】
抽出はまた、植物材料又は植物抽出物の部分若しくは完全変色すること又は精製することを目的とした、その処理を含むさらなるステップを場合により含んでなってもよい。この変色ステップは、例えば、植物材料の、又は抽出物の、無極性溶媒若しくは無極性溶媒の混合物の溶液での処理、又は抽出物を活性炭の粒子と接触させることからなる処理、或いは、ＣＯ２を未臨界状態で用いる処理を含む場合もある。
【００５７】
抽出は、抽出溶媒の部分又は全排除のステップによって完了してもよい。第１の場合では、抽出物は、通常、相当な量の有機溶媒を欠く水性濃縮物が得られるまで濃縮され、第２の場合では、乾燥残渣が得られる。或いは、抽出ステップの生成物は、粉末の形であるよう凍結乾燥又は微粉化されてもよい。
【００５８】
粉末は、本発明の化粧品組成物又は皮膚科用組成物中でそのままに使用してもよく、又は溶媒若しくは溶媒混合物中に再分散してもよい。
【００５９】
通常、抽出ステップの生成物は、本発明の化粧品組成物又は皮膚科用組成物中で活性剤として使用されるよう、溶媒又は溶媒混合物中に溶解又は分散してもよい。抽出物が溶解又は分散される溶媒又は溶媒混合物は、抽出に使用されたものと同一であってもよく、異なっていてもよい。
【００６０】
本発明の抽出物はまた、多孔性又は無孔性ナイロン粉末及びマイカ又は任意の層状鉱物から選択されることが有利である支持体に吸着されてもよい。この場合には、用いられる抽出物は、水性抽出物であることが好ましい。
【００６１】
本発明の実施形態の一変法によれば、サバイビン発現を活性化又は刺激する作用剤は、その活性剤の１種として前記のサバイビン発現を刺激する作用剤を含有し、また、少なくとも１種の化粧品上許容される賦形剤も含む化粧品組成物の形で、身体の若しくは顔面の皮膚、又は表面的な身体の腫瘍へのこの組成物の塗布によって局所送達される。
【００６２】
本発明の化粧品組成物又は皮膚科用組成物は、所望の効果を得るための、本発明の抽出物の有効量を含む。
【００６３】
本発明の任意の態様について、用語「有効量」は、
ａ）皮膚加齢の徴候の出現を予防若しくは遅延し、又はその効果を減速するため、及び／又は
ｂ）特に紫外線照射によって損傷を受けた場合に、表皮若しくはその角質層を再構築するため、及び／又は
ｃ）特に、脱毛症の場合において、毛周期の機能を回復させるために、脱毛を減速若しくは予防し、毛髪の再成長を加速若しくは促進するために、又は脆弱毛を強化するため、及び／又は、
ｄ）爪の成長を促進する、及び／又はその強度を強化するため、
ｅ）幹細胞及び／又は高クローン形成能を有する細胞を、培養で維持し、これらの培養を、良好な条件下での培養を実施するのに、また、必要な場合には表皮の製造を実施するのにも十分な一定期間保存するのを可能にするために、
必要な量と少なくとも同等である量を意味するよう意図される。
【００６４】
実際、この量は、当業者によって容易に決定できる。例として、組成物又は培養倍地中の、サバイビン産生を活性化及び／又は刺激する作用剤の濃度は、０．００１重量％〜５重量％となると示すことができる。
【００６５】
培養培地は、培養培地の重量で０．０１％〜３％の、サバイビン産生を活性化及び／又は刺激する作用剤を含むことが好ましい。
【００６６】
本発明の化粧品組成物又は皮膚科用組成物は、１％〜３％の、サバイビン産生を活性化及び／又は刺激する作用剤を含むことが有利である。
【００６７】
本発明の化粧品組成物又は皮膚科用組成物はまた、１種又は複数のその他の化粧品上又は皮膚科上許容される薬剤を含む場合もある。
【００６８】
実施例１〜３において実施され、報告された具体的な試験によって実証されるように、本発明の化粧剤又は皮膚病薬は、特に、予期しないことに、表皮の基底層の幹細胞におけるサバイビン発現を刺激することによって有効である。
【００６９】
本発明者らによって実施された試験によって、本発明のサバイビン発現を刺激する化粧用又は皮膚科用活性剤の特性はまた、前記作用剤を、本発明の抽出物と同様の及び／又は補完的な美容効果を有するその他の活性剤と組み合わせた化粧品組成物又は皮膚科用組成物において、得られる又は改善され得ることも示された。
【００７０】
本発明のサバイビン発現を刺激する化粧用又は皮膚科用活性剤の活性化有効性は、表皮ケラチノサイトのβ−１インテグリンなどの接着タンパク質の発現を、及びこれらの細胞の接着自体を刺激する分子又は抽出物（アスパラギン酸マグネシウム、マンガン塩及び誘導体）、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸のひと続きなどのインテグリンによって認識される特定のペプチド、又はＫＧＦなどの特定の増殖因子によって改善されることが特に有利である。
【００７１】
本発明のサバイビン発現を刺激する化粧用又は皮膚科用活性剤の活性化有効性はまた、ｃＡＭＰを分解するホスホジエステラーゼを阻害する分子又は抽出物、例えば、メチルキサンチン、特に、カフェインによって改善され、これによって細胞内ｃＡＭＰレベルの増大がもたらされることも有利であり得る。
【００７２】
本発明の化粧品組成物又は皮膚科用組成物はまた、皮膚美白活性を有する物質、減量活性を有する物質、水分を補給する活性を有する物質、鎮静、鎮痛又は弛緩活性を有する物質、皮膚の微小循環を刺激して、肌の色の、特に、顔の輝きを改善する活性を有する物質、脂性の皮膚のケアのための皮脂調節活性を有する物質、皮膚を洗浄又は浄化する物質、フリーラジカル捕捉活性を有する物質、皮膚構造の維持を促進すること及び／若しくは真皮の表層の、及び表皮の細胞外マトリックスの分解を制限することを目的とした、及び／又は皮膚保護、矯正又は再構築効果を得ることを目的とした活性によって、皮膚加齢の効果、特に、しわの形成を低減又は遅延する物質、抗炎症活性を有する物質から選択され得る１種又は複数のその他の活性剤を含む場合もある。
【００７３】
前記化粧品組成物又は皮膚科用組成物は、本発明の抽出物に加え、顔料、色素、ポリマー、界面活性剤、レオロジー剤、芳香、電解質、ｐＨ調整剤、抗酸化物質及び保存料並びにこれらの混合物から選択され得る少なくとも１種の化粧品上又は皮膚科上許容される賦形剤を含む。
【００７４】
本発明の化粧品組成物又は皮膚科用組成物は、例えば、美容液、ローション、エマルジョン、例えば、クリーム或いはヒドロゲル、好ましくは、マスクであってもよく、又は、スティック若しくはパッチ若しくは頭皮用の衛生製品、例えば、シャンプー若しくはコンディショナー或いはメイクアップ製品、特に、爪に塗布することを意図する組成物、例えば、マニキュア液の形であってもよい。
【００７５】
最後に、本発明は、皮膚加齢の徴候の出現を予防若しくは遅延し、又はそれを治療するための、化粧剤又は皮膚病薬として上記で定義される活性剤の使用に関し、前記化粧剤又は皮膚病薬は、表皮の基底層の幹細胞においてサバイビン発現を刺激する。
【００７６】
本発明はまた、皮膚加齢の徴候の出現を予防若しくは遅延し、又はそれを治療するため、化粧剤又は皮膚病薬として、又は化粧品組成物の製造のための本発明の活性剤の使用に関する。
【００７７】
本発明のその他の目的、特徴及び利点は、以下の、本発明のいくつかの例示的実施形態に関してなされており、例示として簡単になされており、決して本発明の範囲を制限するものではない説明的な記載から明確に明らかになる。実施例では、特に断りのない限り、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧であり、量又はパーセンテージは重量で与えられている。
【００７８】
〔実施例〕
材料及び方法
【００７９】
１）細胞培養
正常ヒトケラチノサイトを、ＥＧＦ（表皮増殖因子）及びＢＰＥ（ウシ下垂体抽出物）（ＫＳＦＭｃ）（Ｇｉｂｃｏ参照、１７００５−０３４＋３７０００−０１５）を補給した血清不含ケラチノサイト培地で、５％ＣＯ２を含有する加湿雰囲気下、３７℃のインキュベーター中で、７５ｃｍ２フラスコで培養する。細胞を、ウェルあたり５００μｌの培地中５００００個細胞の割合で４８ウェルマイクロプレートに播種する（Ｄ０日）。
【００８０】
２４時間インキュベートした後（Ｄ１日）、細胞が接着し、次いで、処理ステップを実施する。次いで、播種培地を除去し、種々の濃度の、評価される成分、又はその賦形剤（例えば、ＤＭＳＯ）を含有する処理培地を、同じ割合で各培養ウェルに添加する。
【００８１】
１６時間処理した後、細胞によるサバイビン発現のピークを観察する。次いで、ウェルをＰＢＳですすぐ。マイクロプレートのウェルの半分を用いて、ケラチノサイトを溶解し、細胞内サバイビンをアッセイする。マイクロプレートのウェルのその他の半分を用いて、ＢＣＡ法によって総タンパク質をアッセイし、それによって、アッセイされるサバイビンの量を、タンパク質の単位量のもとへと関連付けることが可能となる。
【００８２】
非細胞傷害性用量での活性剤の効果を続いて評価することができるよう、試験した各活性剤の細胞傷害性を測定する相は、事前に必要である。
【００８３】
この目的を達成するために、活性剤の細胞傷害性用量を、ＸＴＴ試験によって調べる（参照、Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ ＩＩ、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ）。テトラゾリウム塩（ＸＴＴ試薬）は、ミトコンドリアの呼吸鎖に位置するデヒドロゲナーゼによってホルマザンに変換される。生細胞のみが、その呼吸鎖が機能的であり、ホルマザンを生成することができ、４５０ｎｍで橙色の化合物が検出される。
【００８４】
試験した各活性剤を希釈し、２倍希釈範囲を調製し、試験サンプルの活性剤の濃度は、５０ｍｇ／ｍｌ〜０．１９５ｍｇ／ｍｌの範囲とする。予め調製した希釈液の各々を、最後にＫＳＦＭ−Ｃ培地で１／１０００に希釈し、次いで、ケラチノサイトと４８時間接触させ、その時点で、細胞傷害性試験が実施される。
【００８５】
２）サバイビンのアッセイ
サバイビンを、正常ヒトケラチノサイトの培養物で、ＥＬＩＳＡ酵素免疫測定法（参照、Ｄｕｏｓｅｔ Ｓｕｒｖｉｖｉｎ ＥＬＩＳＡ ｆｒｏｍ Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてアッセイする。
【００８６】
総タンパク質を、ＢＣＡ比色試験（参照、ＢＣ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ、Ｕｐｔｉｍａ Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ）を用いて、５７０ｎｍの吸光度を測定することによってアッセイする。
【００８７】
１６時間処理した後、ＥＬＩＳＡによってサバイビンをアッセイするために、ウェルをＰＢＳですすぎ、次いで、１００μｌ／ウェルの溶解バッファーを加え、続いて、穏やかに振盪しながら１０分間インキュベートする。このバッファーは、アンチプロテアーゼを含み、これが、細胞溶解の間のサバイビンを含めたタンパク質の分解を防ぐ。
【００８８】
ＥＬＩＳＡマイクロプレートを調製する（参照Ｃｌｅａｒ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ ＤＹ９９２）：
【００８９】
ヒトサバイビンを用いた標準範囲を、細胞溶解物を用いたものと同条件下で０〜２０００ｐｇ／ｍｌで調製する。
【００９０】
酵素反応を硫酸で遮断した後、４５０ｎｍの吸光度を測定することによってサバイビンを定量する。
【００９１】
実施例１：サバイビン発現に対するフォルスコリンの活性
フォルスコリンは、供給業者ＳＩＧＭＡ、Ｆｒａｎｃｅから市販されており、植物コレウス・フォルスコリの抽出物から単離されていると示されている。
【００９２】
まず、フォルスコリンを、すべてＤＭＳＯで希釈して、４ｍｇ／ｍｌの溶液を調製する。
【００９３】
細胞を処理する間に、先に調製しておいた溶液を、培養培地で希釈して、１０μＭ、すなわち４μｇ／ｍｌの終濃度を得る。対照もまた、この同じ溶媒を用い、同じ割合で調製する。
【００９４】
以下の表Ｉに示される結果は、１００％を構成する、溶媒対照によって表される、サバイビン発現の基礎レベルと比較されている：
【表１】
【００９５】
結論：フォルスコリンは、タンパク質の発現の基礎レベル（対照）と比較して、ケラノサイト内サバイビン発現を大幅に増大させる。
【００９６】
実施例２：リムノフィラ・コンフェルタの地中部分の抽出物の調製及びサバイビン発現に関するその活性の測定
【００９７】
Ａ−抽出物の調製
乾燥状態のリムノフィラ・コンフェルタの茎及び葉を含む地中部分から形成された、供給業者ＩＤＶＰ、Ｆｒａｎｃｅから市販されている植物材料を、実験室ミル−ミキサーを用いて、０．１〜１ｍｍの程度の平均粒径に即座に粉末にする。
【００９８】
１０ｇの粉末にした植物材料を、２５０ｍｌの丸底フラスコに入れ、それに、１５０ｍｌのエタノール／水混合物（９０／１０ｖ／ｖ）を加える。
【００９９】
バルブコンデンサーを載せた丸底フラスコを、恒温槽中で磁気的に撹拌し、次いで、溶媒の還流に加熱する。
還流を撹拌しながら３０分間維持する。
加熱を停止すると、丸底フラスコを、槽の外で周囲温度に放冷させる。
【０１００】
次いで、混合物を、７０μｍ Ｗｈａｔｍａｎ ＧＦ／Ｆフィルターを備えたブフナー漏斗及び風袋計量された（ｔａｒｅｄ）フラスコを通して真空濾過し、このようにして濾液１が得られる。ブフナー漏斗上のケーキを、５０ｍｌの抽出溶媒で洗浄し、濾液２が得られる。
【０１０１】
次いで、２種の濾液を合わせ、秤量する。
得られた濾液を、予め風袋計量した丸底フラスコに入れ、次いで、最高温度５０℃の水浴中真空下で、ロータリーエバポレーターで濃縮乾固する。
【０１０２】
乾燥残渣を定量し、乾燥粉末化状態の１００ｇの出発植物材料あたりの得られた乾燥抽出物の質量として表される、質量による抽出率を求める。
抽出率は２１％である。
【０１０３】
Ｂ−サバイビン発現に対する活性
段落Ａで調製した乾燥抽出物を、１２．５ｍｇ／ｍｌ又は２５ｍｇ／ｍｌの濃度にＤＭＳＯで希釈する。
【０１０４】
細胞に対する処理の際に、０．１％ｖ／ｖ、すなわち、抽出の第１の溶液について１２．５μｇ／ｍｌ及び第２の溶液について２５μｇ／ｍｌの終濃度が得られるよう、培養培地に抽出物を添加する。この同じ溶媒を用いて対照もまた調製し、０．１％ｖ／ｖの終濃度とする。
【０１０５】
以下の表ＩＩは、１００％を構成する、溶媒対照によって表される、この同じタンパク質の発現の基礎レベルと比較した、総タンパク質１ｍｇあたりのサバイビンのピコグラムとして表される、サバイビン発現に対する実施例１の抽出物の平均活性を示す。
【０１０６】
得られた結果は、以下の表ＩＩに示されている：
【表２】
【０１０７】
結論：リムノフィラ・コンフェルタの抽出物は、タンパク質の発現の基礎レベル（対照）と比較して、ケラノサイト内サバイビン発現を大幅に増大させる。
【０１０８】
実施例３：レペチニア・カウレセンスの地中部分の抽出物の調製及びサバイビン発現に対するその活性の測定
【０１０９】
Ａ−抽出物の調製
乾燥した、粉末状態のレペチニア・カウレセンスの葉を、出発植物材料として用い、実施例２−Ａに従って、抽出物を調製する。
【０１１０】
この方法に用いられる抽出溶媒は、５０／５０（ｖ／ｖ）エタノール／水混合物である。
【０１１１】
乾燥残渣を定量し、乾燥粉末化状態の１００ｇの出発植物材料あたりの得られた乾燥抽出物の質量として表される、質量による抽出率を求める。
得られた質量による抽出率は２９％である。
【０１１２】
Ｂ−サバイビン発現に対する活性
本実施例の段落Ａで調製した乾燥抽出物を、３．１２５ｍｇ／ｍｌの濃度にＤＭＳＯで希釈する。
【０１１３】
細胞に対する処理の際に、０．１％ｖ／ｖ、すなわち、３．１２５μｇ／ｍｌの終濃度が得られるよう、培養培地に抽出物を添加する。終濃度０．１％ｖ／ｖを有する溶媒対照（ＤＭＳＯ）も調製する。
【０１１４】
以下の表ＩＩは、１００％を構成する、溶媒対照によって表される、発現の基礎レベルと比較した、サバイビンに対する、試験したレペチニア・カウレセンスの抽出物の活性を示す。
【表３】
【０１１５】
結論：レペチニア・カウレセンスの抽出物は、タンパク質の発現の基礎レベル（対照）と比較して、ケラチノサイト内サバイビン発現を大幅に増大する。
【０１１６】
実施例４：レペチニア・カウレセンスの葉の抽出物を含む化粧品組成物
【０１１７】
実施例３Ａで得られた乾燥抽出物を、エタノール／水混合物に１質量％で可溶化する。
乾燥抽出物の１質量％の溶液を得、以下の化粧品組成物において用いる：
【０１１８】
−レペチニア・カウレセンスの植物抽出物（実施例３Ａ） ０．１％
−界面活性剤（アラセル（Ａｒｌａｃｅｌ）（登録商標）１６５ＶＰ）
５％
−９５％セチルアルコール １％
−ステアリルアルコール １％
−蜜蝋 １．５％
−オイル（パーリーム（Ｐｅｒｌｅａｍ）（登録商標）） ８．５％
−トリカプレート／カプリレートグリセリド ３％
−シリコーンオイル（ジメチコン１００ＣＳ） １％
−ポリマー（カルトロール（Ｋｅｌｔｒｏｌ）（登録商標）） ０．３５％
−水酸化ナトリウム ０．０４％
−ＥＤＴＡ四ナトリウム粉末 ０．１％
−保存料 ０．５％
−水 適量１００
【０１１９】
化粧品組成物を、１又は複数のステップで種々の成分を混合することによって、当業者に周知の通常の方法で調製する。
【０１２０】
この組成物は、皮膚又は頭皮或いは爪に数週間の間、毎日塗布し、上記の美容効果を得ることができる。
【０１２１】
実施例５：フォルスコリンを含む化粧品組成物
【０１２２】
以下の化粧品組成物中には、コレウス・フォルスコリ（Ｃｏｌｅｕｓ ｆｏｒｓｋｏｌｉｉ）の抽出物から単離された実施例１のフォルスコリン（ＳＩＧＭＡ由来）が用いられている：
【０１２３】
−フォルスコリン（ＳＩＧＭＡ、実施例１） ２％
−Ｓｔｅａｒｅｔｈ−２１（Ｂｒｉｊ７２１） ２．５％
−ステアリン酸グリセリル（Ｔｅｇｒｉｎ） １．１％
−ステアリルアルコール ５％
−グリセロールトリカプレート／カプリレート １２．５％
−ブチレングリコール ３％
−グリセロール ２％
−保存料 ０．５％
−香料濃縮物 ０．５％
−ＵＶスクリーン（オクチルメトキシシンナメート） ７．５％
−水 適量１００
【０１２４】
化粧品組成物を、１又は複数のステップで種々の成分を混合することによって、当業者に周知の通常の方法で調製する。
【０１２５】
この組成物は、しわを含む皮膚の領域に数週間の間、毎日塗布し、前記しわの減少又は完全な消失の効果を得ることができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚加齢の徴候の出現を予防若しくは遅延し、又はその効果を低減するための美容ケアの方法において、顔面又は身体の皮膚の少なくとも一部への、皮膚におけるサバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の化粧品上許容される作用剤の有効量の送達を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
特に紫外線照射によって損傷を受けた表皮又はその角質層の美容ケアの方法において、顔面又は身体の皮膚の少なくとも一部への、皮膚におけるサバイビン発現を活性化又は刺激する化粧品上許容される作用剤の有効量の送達を含むことを特徴とする方法。
【請求項３】
毛髪の再成長を加速若しくは促進する、又は脆弱毛を強化するために、毛周期の機能を回復させることを目的とした美容ケアの方法において、頭皮の少なくとも一部への、頭皮におけるサバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の化粧品上許容される作用剤の有効量の送達を含むことを特徴とする方法。
【請求項４】
爪の成長の促進及び／又はその強度の強化のための美容ケアの方法において、爪又は周囲の領域の少なくとも一部への、サバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の化粧品上許容される作用剤の有効量の送達を含むことを特徴とする方法。
【請求項５】
前記作用剤が、その活性剤の１種として前記作用剤を含み、また少なくとも１種の化粧品上許容される賦形剤も含む化粧品組成物の形で局所的に送達されることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
化粧品上活性な作用剤が、フォルスコリン又はフォルスコリンを含有する抽出物、特に、コレウス・フォルスコリ（Ｃｏｌｅｕｓ ｆｏｒｓｋｏｌｉｉ）の抽出物、レペチニア・カウレセンスの抽出物、リムノフィラ・コンフェルタの抽出物、ダニエリア・オリベリの抽出物、イシクラゲの抽出物、スセネデスムス・ジモルファスの抽出物、ウコンの抽出物及びサフランの抽出物から構成される群から選択されることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
化粧品上活性な作用剤が、レペチニア・カウレセンスの抽出物を含む、又は本質的にレペチニア・カウレセンスの抽出物から構成されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
化粧品上活性な作用剤が、リムノフィラ・コンフェルタの抽出物を含む、又は本質的にリムノフィラ・コンフェルタの抽出物から構成されることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
化粧品上活性な作用剤の濃度が、組成物の重量で０．００１％〜５％、好ましくは、１％〜３％であることを特徴とする、請求項５〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
上述のサバイビン発現を活性化又は刺激する作用剤を、表皮ケラチノサイトのβ−１インテグリンなどの接着タンパク質の発現、及び前記細胞の接着自体を刺激する分子又は抽出物、例えば、アスパラギン酸マグネシウム、マンガン塩及び誘導体、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸のひと続きなどのインテグリンによって認識されるペプチド、又はＫＧＦなどの増殖因子と組み合わせることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
サバイビン発現を活性化又は刺激する作用剤を、ジホスホジエステラーゼを阻害する分子又は抽出物、好ましくはカフェインと組み合わせることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
上述の化粧品組成物が、美容液、ローション、エマルジョン、ヒドロゲル、スティック若しくはパッチの形で、又は頭皮用の衛生製品、例えば、シャンプー若しくはコンディショナーの形で、或いは、メイクアップ製品、特に、爪に塗布することを意図する組成物、例えば、マニキュア液の形で配合されることを特徴とする、請求項５〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１】
皮膚加齢の徴候の出現を予防若しくは遅延し、又はその効果を低減するための美容ケアの方法において、顔面又は身体の皮膚の少なくとも一部への、皮膚におけるサバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の化粧品上許容される作用剤の有効量の送達を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
特に紫外線照射によって損傷を受けた表皮又はその角質層の美容ケアの方法において、顔面又は身体の皮膚の少なくとも一部への、皮膚におけるサバイビン発現を活性化又は刺激する化粧品上許容される作用剤の有効量の送達を含むことを特徴とする方法。
【請求項３】
毛髪の再成長を加速若しくは促進する、又は脆弱毛を強化するために、毛周期の機能を回復させることを目的とした美容ケアの方法において、頭皮の少なくとも一部への、頭皮におけるサバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の化粧品上許容される作用剤の有効量の送達を含むことを特徴とする方法。
【請求項４】
爪の成長の促進及び／又はその強度の強化のための美容ケアの方法において、爪又は周囲の領域の少なくとも一部への、サバイビン発現を活性化又は刺激する少なくとも１種の化粧品上許容される作用剤の有効量の送達を含むことを特徴とする方法。
【請求項５】
前記作用剤が、その活性剤の１種として前記作用剤を含み、また少なくとも１種の化粧品上許容される賦形剤も含む化粧品組成物の形で局所的に送達されることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
化粧品上活性な作用剤が、フォルスコリン又はフォルスコリンを含有する抽出物、特に、コレウス・フォルスコリ（Ｃｏｌｅｕｓ ｆｏｒｓｋｏｌｉｉ）の抽出物、レペチニア・カウレセンスの抽出物、リムノフィラ・コンフェルタの抽出物、ダニエリア・オリベリの抽出物、イシクラゲの抽出物、スセネデスムス・ジモルファスの抽出物、ウコンの抽出物及びサフランの抽出物から構成される群から選択されることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
化粧品上活性な作用剤が、レペチニア・カウレセンスの抽出物を含む、又は本質的にレペチニア・カウレセンスの抽出物から構成されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
化粧品上活性な作用剤が、リムノフィラ・コンフェルタの抽出物を含む、又は本質的にリムノフィラ・コンフェルタの抽出物から構成されることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
化粧品上活性な作用剤の濃度が、組成物の重量で０．００１％〜５％、好ましくは、１％〜３％であることを特徴とする、請求項５〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
上述のサバイビン発現を活性化又は刺激する作用剤を、表皮ケラチノサイトのβ−１インテグリンなどの接着タンパク質の発現、及び前記細胞の接着自体を刺激する分子又は抽出物、例えば、アスパラギン酸マグネシウム、マンガン塩及び誘導体、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸のひと続きなどのインテグリンによって認識されるペプチド、又はＫＧＦなどの増殖因子と組み合わせることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
サバイビン発現を活性化又は刺激する作用剤を、ジホスホジエステラーゼを阻害する分子又は抽出物、好ましくはカフェインと組み合わせることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
上述の化粧品組成物が、美容液、ローション、エマルジョン、ヒドロゲル、スティック若しくはパッチの形で、又は頭皮用の衛生製品、例えば、シャンプー若しくはコンディショナーの形で、或いは、メイクアップ製品、特に、爪に塗布することを意図する組成物、例えば、マニキュア液の形で配合されることを特徴とする、請求項５〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【公開番号】特開２００９−２９８７８７（Ｐ２００９−２９８７８７Ａ）
【公開日】平成２１年１２月２４日（２００９．１２．２４）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２００９−１３６４０４（Ｐ２００９−１３６４０４）
【出願日】平成２１年６月５日（２００９．６．５）
【出願人】（５０２１８９５７９）エルブイエムエイチ レシェルシェ (68)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１２月２４日（２００９．１２．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−１３６４０４（Ｐ２００９−１３６４０４）
【出願日】平成２１年６月５日（２００９．６．５）
【出願人】（５０２１８９５７９）エルブイエムエイチ レシェルシェ (68)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]