抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤、並びに皮膚化粧料、及び飲食品
【課題】優れた抗酸化作用を有し、かつ安全性の高い抗酸化剤、優れた抗炎症作用を有し、かつ安全性の高い抗炎症剤、及び優れた抗老化作用を有し、かつ安全性の高い抗老化剤、並びに、前記抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを利用した皮膚化粧料、及び飲食品の提供。
【解決手段】スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物を含有する抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤、並びに、前記抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを含有する皮膚化粧料、及び飲食品である。
【解決手段】スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物を含有する抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤、並びに、前記抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを含有する皮膚化粧料、及び飲食品である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スオウの抽出物を含有する抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤、並びに、前記抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを利用した皮膚化粧料、及び飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、生体成分を酸化させる要因として、活性酸素が注目されており、その生体への悪影響が問題となっている。活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、スーパーオキサイド〔即ち、酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン（・Ｏ２−）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、一重項酸素（１Ｏ２）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）〕等がある。このような活性酸素は食細胞の殺菌機構にとって必須であり、ウイルスや癌細胞の除去に重要な働きを果たしている。
しかし、前記活性酸素の過剰な生成は、生体内の膜及び組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発する。生体内で生産され、他の活性酸素の出発物質ともなっているスーパーオキサイドは、通常、細胞内に含まれているスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）の触媒作用により逐次消去されている。しかし、スーパーオキサイドの産生が過剰な場合、あるいはＳＯＤの作用が低下している場合には、スーパーオキサイドの消去が不十分になってスーパーオキサイド濃度が高くなる。このことが、関節リウマチ、ベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、シミ、ソバカス、しわ、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性、皮膚の老化などを起こす原因の一つであると考えられている。
【０００３】
これらの中でも、皮膚は紫外線等の環境因子の刺激を直接受けるため、スーパーオキサイドが生成し易い器官であるから、スーパーオキサイド濃度の上昇により、例えば、コラーゲン等の生体組織を分解、変性、又は架橋したり、また油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成して、皮膚のしわを形成したり、皮膚の弾力性低下等の老化、炎症、肌の色素沈着を引き起こすという問題がある（非特許文献１参照）。
そこで、活性酸素消去物質、ラジカル消去物質、過酸化水素消去物質等を安全性の点で有利な天然物から得る試みがなされており、アブラナ科ブラシカ属植物の抽出物（特許文献１参照）、ベンケイソウ科リュウキュウベンケイ属植物の抽出物（特許文献２参照）、タマコチョウの抽出物（特許文献３参照）、スイオウの抽出物（特許文献４参照）、などに有効性が確認されている。
【０００４】
また、炎症性の疾患、例えば接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種皮膚疾患等の原因及び発症機構は多種多様である。その原因として、例えば、一酸化窒素（ＮＯ）産生、血小板凝集によるものなどが知られている。
【０００５】
前記一酸化窒素（ＮＯ）は、大気汚染、酸性雨等の要因となる窒素酸化物である。また、近年、一酸化窒素（ＮＯ）は、血管内皮由来弛緩因子（ＥＤＲＦ）、神経伝達物質、生体防御における微生物、腫瘍細胞の障害因子等、生体内で多彩な機能を示す生理活性物質であることが報告されている。生理活性物質としては、マクロファージから産生される一酸化窒素が細菌及びウイルスの感染を防御することが知られている。しかし、前記マクロファージから産生される一酸化窒素が大量に生合成されると、生体にとって無毒ではなく、自己組織の破壊を引き起こし、炎症の悪化、リューマチ、糖尿病等の病態の原因となることがある。また、大量に生合成された一酸化窒素が血管平滑筋の弛緩と過剰な透過性の増大をもたらし、著しい血圧の低下によってエンドトキシン・ショックを引き起こすこともある。
このような炎症性疾患において、一酸化窒素（ＮＯ）の過剰な産生を抑制することが重要となる。このような一酸化窒素の産生抑制作用を有する生薬としては、例えば、ローズマリー抽出液、カルノソール、カルノシン酸、コーヒー豆の抽出液、サクラダソウ抽出液、オウレン抽出液、オウバク抽出液、カンゾウ抽出液、イヌノイバラの抽出液、センキュウ抽出液、トウニン抽出液、シャクヤク抽出液、ヨクイニン抽出液、アカブドウ抽出液（特許文献５参照）、唐独活、タラ根皮、和続断、車前子、遠子、茜草根、半枝連、槐花、花椒（非特許文献２参照）、などが報告されている。
【０００６】
また、皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、皮膚線維芽細胞、及び、これらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲン等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては、これら皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより、水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
ところが、紫外線（ＵＶ−Ａ、ＵＶ−Ｂ）の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄、過酸化水素との接触等の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンの産生量が減少すると共に、架橋による弾力低下を起こす。その結果、皮膚は保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始めるため、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。更に、外的因子の影響や加齢に伴い、線維芽細胞の増殖率が低下すると、天然保湿因子であるヒアルロン酸の産生量が低下する。
このように皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、コラーゲン等の真皮マトリックス成分の減少乃至変性が関与していることが知られている。
また、コラーゲンの中でもＩ型コラーゲンは、最も多く体内に含まれるコラーゲンであり、皮膚の真皮にも多く含まれ、皮膚の強さを生み出す役割を果たしていることが知られている。
【０００７】
また、近年、真皮マトリックス成分の減少乃至変性を誘導する因子として、マトリックスメタロプロテアーゼ類（以下、「ＭＭＰｓ」と称することもある）と呼ばれるタンパク質分解酵素群の分解及び再構築がある。
前記ＭＭＰｓは、その一次構造と基質特異性の違いから、（１）コラゲナーゼ群(ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−８及びＭＭＰ−１３)、（２）ゼラチナーゼ群(ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９)、（３）ストロメライシン群(ＭＭＰ−３及びＭＭＰ−１０)、（４）膜結合型マトリックスメタロプロテアーゼ群（ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、及びＭＭＰ−１７）、（５）その他（ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−１１、及びＭＭＰ−１２）の５つのグループに分類されている（特許文献６参照）。
前記ＭＭＰｓの中でも、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−１４は、皮膚の真皮マトリックスの主な構成成分であるＩ型コラーゲン、ＩＩ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲンを分解する酵素として知られている。また、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線によるコラーゲンの減少乃至変性の一因となり、皮膚のシワ形成等の大きな要因であると考えられる。
【０００８】
また角層は、表皮角化細胞が終末分化して形成された角質細胞と、細胞間を埋める細胞間脂質から形成される。セラミドを主成分とする細胞間脂質は、ラメラ構造を形成することにより、角層バリア機能を担っている。一方、角質細胞は、ケラチン線維を主成分とし、膜の裏打ち蛋白であるコーニファイドエンベロープ（角質肥厚膜、以下「ＣＥ」と略す。）という疎水的で強靭な細胞膜様構造物に覆われている。ＣＥは、表皮角化細胞の分化に従って細胞内で産生されるインボルクリン、ロリクリンなど複数のＣＥ前駆体蛋白質が、酵素トランスグルタミナーゼ−１により架橋され、不溶化して形成され、このＣＥが皮膚のバリア機能に密接に関与している。さらに、その一部にはセラミド等が共有結合し、疎水的な構造をとることで細胞間脂質のラメラ構造の土台を供給し、角層バリア機能及び皮膚の水分保持機能の基礎が形成される。
【０００９】
しかしながら、加齢、乾燥、紫外線（ＵＶ−Ａ、ＵＶ−Ｂ）などの影響によりターンオーバー速度に異常が生じると、ラメラ構造の乱れやＣＥが不完全な状態で形成された、いわゆる不全角化が誘発され、角質細胞や細胞間脂質の構造に異常が生じ、角層の水分保持機能及びバリア機能は低下する。このことが肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状につながると考えられる。また、乾癬やアトピー性皮膚炎の患者では、バリア機能が低下した皮疹部で未熟なＣＥが高頻度に観察され、ＣＥが正しく形成されることが皮膚のバリア機能に非常に重要であると考えられている（非特許文献３参照）。
【００１０】
また、加齢に伴う皮膚老化の一因として、女性ホルモンの一種であるエストロゲンの分泌が減退することがある。エストロゲンは成人女性の健康維持に深く関わっており、その分泌不足は種々の内科的疾患を招く他、肌の過敏症、弾力性低下、潤いの減少等の好ましくない肌の変化の原因となることが知られている。
【００１１】
したがって、ヒアルロン酸の産生促進、Ｉ型コラーゲンの産生促進、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害、ＵＶ−Ｂダメージからの回復を補うこと、加齢によるエストロゲン分泌減退を補うことなどにより、皮膚のしわの形成、弾力性低下等の皮膚の老化を予防乃至治療できると考えられる。
これまでにヒアルロン酸産生促進作用を有するものとしては、例えば、アメリカニガキ抽出物（特許文献７参照）などが報告されている。
また、エストロゲン様作用剤としては、例えば、ステロイド系エストロゲン、非ステロイド系エストロゲン、フラボン系化合物（特許文献８〜１０参照）などが報告されている。
【００１２】
しかしながら、現在までのところ、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、皮膚化粧料及び飲食品に広く使用可能な抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤は未だ提供されておらず、その速やかな提供が強く求められているのが現状である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】特開２００３−８１８４８号公報
【特許文献２】特開２００５−２９４８３号公報
【特許文献３】特開２００６−３２１７３０号公報
【特許文献４】特開２００７−８９０２号公報
【特許文献５】特開２００２−８７９７５号公報
【特許文献６】特開２０００−３４４６７２号公報
【特許文献７】特開２００３−０８１８５０号公報
【特許文献８】特開２００２−２２６３２３号公報
【特許文献９】特開２００１−３１６２４０号公報
【特許文献１０】特開２００３−５５２４５号公報
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】「フレグランスジャーナル」臨時増刊Ｎｏ．１４、ｐ１５６、１９９５年
【非特許文献２】「和漢医薬学雑誌」，Ｖｏｌ．１５，ｐ．３０２−３０３，１９９８年発行
【非特許文献３】Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ １２：５９１−６０１（２００３）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れた抗酸化作用を有し、かつ安全性の高い抗酸化剤、優れた抗炎症作用を有し、かつ安全性の高い抗炎症剤、及び優れた抗老化作用を有し、かつ安全性の高い抗老化剤、並びに、前記抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを利用した皮膚化粧料、及び飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者らは、前記課題を解決するために鋭意検討を行ったところ、スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物が、優れた抗酸化作用、抗炎症作用、及び抗老化作用を有することを知見し、本発明を完成するに至った。
【００１７】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤である。
＜２＞ スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有する前記＜１＞に記載の抗酸化剤である。
＜３＞ スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物を含有することを特徴とする抗炎症剤である。
＜４＞ 一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を有する前記＜３＞に記載の抗炎症剤である。
＜５＞ スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤である。
＜６＞ マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有する前記＜５＞に記載の抗老化剤である。
＜７＞ 前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の抗酸化剤、前記＜３＞から＜４＞のいずれかに記載の抗炎症剤、及び前記＜５＞から＜６＞のいずれかに記載の抗老化剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする皮膚化粧料である。
＜８＞ 前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の抗酸化剤、前記＜３＞から＜４＞のいずれかに記載の抗炎症剤、及び前記＜５＞から＜６＞のいずれかに記載の抗老化剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする飲食品である。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によると、従来における諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた抗酸化作用を有し、かつ安全性の高い抗酸化剤、優れた抗炎症作用を有し、かつ安全性の高い抗炎症剤、及び優れた抗老化作用を有し、かつ安全性の高い抗老化剤、並びに、前記抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを利用した皮膚化粧料、及び飲食品を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
（抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤）
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤は、スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
【００２０】
前記抗酸化剤は、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかに基づく抗酸化作用を有するものである。
前記抗炎症剤は、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用に基づく抗炎症作用を有するものである。
前記抗老化剤は、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかに基づく抗老化作用を有するものである。
前記スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物が含有する、抗酸化作用、抗炎症作用、及び抗老化作用の少なくともいずれかを発揮する物質の詳細については不明であるが、前記スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物がこのような優れた作用を有し、抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤として有用であることは、従来には全く知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。
【００２１】
前記スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）は、スホウ、風流子ともいい、マメ科の植物であり、インドからマレー半島等に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記スオウの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、種子が好ましい。
【００２２】
抽出原料である前記スオウは、例えば、乾燥した後に、そのままの状態で又は粗砕機等を用いて粉砕した状態で、溶媒抽出に供することができる。中でも、前記抽出原料としては、採取後ただちに乾燥し、粉砕したものが好ましい。前記乾燥は、例えば、天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。なお、前記スオウは、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、前記スオウの極性溶媒による抽出処理を、効率よく行うことができる。
【００２３】
前記スオウの抽出物は、植物の抽出に一般に用いられる方法を利用することによって、容易に得ることができる。また、前記スオウの抽出物としては、市販品を使用してもよい。なお、前記スオウの抽出物には、前記スオウの抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又は、これらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００２４】
前記抽出に用いる溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性有機溶媒、又は、これらの混合溶媒を、室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。前記スオウに含まれる抗酸化作用、抗炎症作用、及び抗老化作用の少なくともいずれかを示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって、容易に抽出することができる。
【００２５】
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。したがって、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２６】
前記抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、該親水性有機溶媒と水との混合溶媒なども用いることができる。なお、前記水と前記親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する際には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部を混合したものを使用することが好ましい。また、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部を混合したものを使用することが好ましい。
【００２７】
抽出原料である前記スオウから、抗酸化作用、抗炎症作用、及び抗老化作用の少なくともいずれかを有する抽出物を抽出するにあたって、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、前記各抽出原料を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分〜４時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物を得ることができる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５倍量〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０℃〜９５℃にて１時間〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０℃〜８０℃にて３０分間〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の有効成分として用いることができる。
【００２８】
抽出により得られる前記スオウの抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るため、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。なお、得られる前記スオウの抽出液は、そのままでも抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、常法を利用することができ、また、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、抽出原料である前記スオウは特有の匂いと味を有している場合があり、そのため、前記スオウの抽出物に対しては、生理活性の低下を招かない範囲で、脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、例えば皮膚化粧料に添加する場合などには大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製は、具体的には、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００２９】
以上のようにして得られる前記スオウの抽出物は、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、ラジカル消去作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、及びＵＶ−Ｂダメージからの回復作用の少なくともいずれかを有し、これらの作用に基づき、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかの有効成分として好適に利用可能なものである。
なお、前記スオウの抽出物は、前記した各作用に基づき、スーパーオキサイド消去剤、過酸化水素消去剤、ラジカル消去剤、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制剤、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害剤、エストロゲン様作用剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、及びＵＶ−Ｂダメージからの回復作用剤としても、それぞれ好適に利用可能である。
【００３０】
本発明の抗酸化剤における抗酸化作用は、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。これらの中でも、前記抗酸化剤は、スーパーオキサイド消去作用を少なくとも有していることが好ましい。
本発明の抗炎症剤における抗炎症作用は、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用に基づいて発揮される。
本発明の抗老化剤における抗老化作用は、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。これらの中でも、前記抗老化剤は、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用を少なくとも有していることが好ましい。
前記スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用に基づく抗老化作用によれば、例えば、皮膚において過剰に生成された活性酸素による皮膚のしわの形成や皮膚の弾力性の低下を抑制することができる。
【００３１】
前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤中の前記スオウの抽出物の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、また、前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤は、前記スオウの抽出物そのものであってもよい。
【００３２】
また、前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤中に含まれ得る、前記スオウの抽出物以外のその他の成分としても、本発明の効果を損なわない範囲内であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記スオウの抽出物を所望の濃度に希釈等するための、生理食塩液などが挙げられる。また、前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤中の前記その他の成分の含有量にも、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
また、前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤は、必要に応じて製剤化することにより、粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。
【００３３】
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤は、優れた抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用を有すると共に、安全性に優れるため、例えば、後述する本発明の皮膚化粧料、本発明の飲食品などへの利用に好適である。
【００３４】
（皮膚化粧料）
本発明の皮膚化粧料は、前記した本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
前記皮膚化粧料は、前記スオウの抽出物を、その活性を妨げないように任意の皮膚化粧料に配合したものであってもよいし、前記スオウの抽出物を主成分とした皮膚化粧料であってもよい。また、前記皮膚化粧料は、前記スオウの抽出物そのものであってもよい。
【００３５】
本発明の皮膚化粧料は、皮膚に使用した場合に高い安全性を有し、優れたスーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、ラジカル消去作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、及びＵＶ−Ｂダメージからの回復作用の少なくともいずれかを発揮するものである。
【００３６】
ここで、前記皮膚化粧料の用途としては、特に制限はなく、各種用途から適宜選択することができ、例えば、軟膏、クリーム、乳液、化粧水、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼントなどが挙げられる。
【００３７】
前記皮膚化粧料は、更に必要に応じて本発明の目的及び作用効果を損なわない範囲で、その皮膚化粧料の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他の成分を添加することができる。
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、収斂剤、殺菌剤、抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料、などが挙げられる。
【００３８】
前記皮膚化粧料中の、前記抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかの含有量としては、特に制限はなく、皮膚化粧料の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、例えば、前記スオウの抽出物の量として、０．０００１質量％〜１０質量％が好ましく、０．００１質量％〜５質量％がより好ましい。
【００３９】
（飲食品）
本発明の飲食品は、前記した本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
ここで、前記飲食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品などの区分に制限されるものではなく、例えば、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものを意味する。
前記飲食品は、前記スオウの抽出物を、その活性を妨げないように任意の飲食物に配合したものであってもよいし、前記スオウの抽出物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。また、前記飲食品は、前記スオウの抽出物そのものであってもよい。
【００４０】
本発明の飲食品は、高い安全性を有し、優れたスーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、ラジカル消去作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、及びＵＶ−Ｂダメージからの回復作用の少なくともいずれかを発揮するものである。
【００４１】
前記飲食品としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品；種々の形態の健康食品や栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品などが挙げられる。
【００４２】
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、飲食品を製造するにあたって通常用いられる、補助的原料又は添加物などが挙げられる。
前記補助的原料又は添加物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤などが挙げられる。
【００４３】
前記飲食品中の、前記抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかの含有量としては、対象となる飲食品の種類に応じて異なり、一概には規定することができないが、例えば、飲食品本来の味を損なわない範囲で任意の飲食物に配合することを目的とする場合には、有効成分である前記スオウの抽出物の量として、０．００１質量％〜５０質量％が好ましく、０．０１質量％〜２０質量％がより好ましい。また、例えば、前記スオウの抽出物を主成分とする顆粒、錠剤、カプセル形態等の栄養補助飲食品を製造することを目的とする場合には、有効成分である前記スオウの抽出物の量として、０．０１質量％〜１００質量％が好ましく、５質量％〜１００質量％がより好ましい。
【００４４】
（効果）
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤、並びに、皮膚化粧料及び飲食品は、日常的に使用することが可能であり、有効成分である前記スオウの抽出物の働きによって、抗酸化作用、抗炎症作用、及び抗老化作用の少なくともいずれかを、極めて効果的に発揮させることができるものである。
【００４５】
なお、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤、並びに、皮膚化粧料及び飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、その作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することも可能である。また、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤、並びに、皮膚化粧料及び飲食品は、天然由来の前記スオウの抽出物を有効成分としたものであり、安全性に優れる点でも、有利である。
【実施例】
【００４６】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００４７】
（製造例１）
−スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の水抽出物の製造−
スオウの種子の粉砕物に、質量比で１０倍量の水を加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の水を加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、スオウの水抽出物（凍結乾燥品）を得た。なお、得られたスオウの水抽出物の抽出率は、１８．４％であった。
【００４８】
（製造例２）
−スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の５０質量％エタノール抽出物の製造−
スオウの種子の粉砕物に、質量比で１０倍量の５０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の５０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、スオウの５０質量％エタノール抽出物（凍結乾燥品）を得た。なお、得られたスオウの５０質量％エタノール抽出物の抽出率は、１０．６％であった。
【００４９】
（製造例３）
−スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の８０質量％エタノール抽出物の製造−
スオウの種子の粉砕物に、質量比で１０倍量（質量比）の８０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の８０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、スオウの８０質量％エタノール抽出物（凍結乾燥品）を得た。なお、得られたスオウの８０質量％エタノール抽出物の抽出率は、７．１％であった。
【００５０】
（実施例１：スーパーオキサイド消去作用試験（ＮＢＴ法））
前記製造例１から３で得られた各スオウの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりスーパーオキサイド消去作用を試験した。
【００５１】
３ｍｍｏｌ／Ｌのキサンチン、３ｍｍｏｌ／ＬのＥＤＴＡ、１．５ｍｇ／ｍＬの牛血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液、０．７５ｍｍｏｌ／Ｌのニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）各０．１ｍＬ、及び０．０５ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３緩衝液（ｐＨ１０．２）２．４ｍＬを試験管にとり、これに各試料溶液０．１ｍＬを添加し、２５℃で１０分間放置した。次いで、キサンチンオキシダーゼ溶液を加えて素早く攪拌し、２５℃で２０分間静置した。その後、６ｍｍｏｌ／Ｌの塩化銅０．１ｍＬを加えて反応を停止させ、波長５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。このとき測定した吸光度を「試料溶液添加、酵素溶液添加時の吸光度」とした。
また、同様の操作と吸光度の測定を、酵素溶液を添加せずに行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液添加、酵素溶液無添加時の吸光度」とした。
また、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液無添加、酵素溶液添加時の吸光度」とした。
また、酵素溶液を添加せず、更に試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液無添加、酵素溶液無添加時の吸光度」とした。
そして、測定結果から、下記数式１によりスーパーオキサイド消去率を求めた。結果を表１に示す。なお、被験試料は、試料濃度１００μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬ、１２．５μｇ／ｍＬで使用した。
＜数式１＞
スーパーオキサイド消去率（％）＝｛１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）｝×１００
Ａ：試料溶液添加、酵素溶液添加時の吸光度
Ｂ：試料溶液添加、酵素溶液無添加時の吸光度
Ｃ：試料溶液無添加、酵素溶液添加時の吸光度
Ｄ：試料溶液無添加、酵素溶液無添加時の吸光度
【００５２】
次に、試料濃度を段階的に減少させて上記スーパーオキサイド消去率の測定を行い、スーパーオキサイドの消去率が５０％になる試料濃度（以下、「ＩＣ５０」と称することがある。）（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表２に示す。
【００５３】
【表１】
【表２】
表１から２の結果から、製造例１から３のスオウの抽出物が、中〜強度のスーパーオキサイド消去作用を有することが確認できた。
【００５４】
（実施例２：過酸化水素消去作用試験）
前記製造例１から３で得られた各スオウの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により過酸化水素消去作用を試験した。
【００５５】
１．５ｍｍｏｌ／Ｌの過酸化水素溶液１０μＬに、各試料溶液１０μＬを加え、３７℃で２０分間反応した後、発色溶液〔１００μｍｏｌ／ＬのＤＡ−６４、０．５質量％のトライトンＸ−１００含有０．１ｍｏｌ／ＬのＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）１００ｍＬに１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬのペルオキシダーゼ１ｍＬを添加〕２．９８ｍＬを添加し、３７℃で５分間反応した。反応終了後、波長７２７ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、測定結果から、下記数式２により過酸化水素消去率を求めた。結果を表３に示す。なお、被験試料は、試料濃度５０μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬ、１２．５μｇ／ｍＬで使用した。
＜数式２＞
過酸化水素消去率（％）＝｛１−（Ｓｔ−Ｓｂ）／（Ｃｔ−Ｃｂ）｝×１００
Ｓｔ：被験試料溶液の波長７２７ｎｍにおける吸光度
Ｓｂ：被験試料溶液ブランクの波長７２７ｎｍにおける吸光度
Ｃｔ：コントロール溶液の波長７２７ｎｍにおける吸光度
Ｃｂ：コントロール溶液ブランクの波長７２７ｎｍにおける吸光度
【００５６】
【表３】
表３の結果から、製造例１から３のスオウの抽出物が、強い過酸化水素消去作用を有することが確認できた。
【００５７】
（実施例３：ＤＰＰＨに対するラジカル消去作用試験）
前記製造例１から３で得られた各スオウの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により非常に安定なラジカルである１，１−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ ｒａｄｉｃａｌ（ＤＰＰＨ）を使用してラジカル消去作用を試験した。
【００５８】
１．５×１０−４ｍｏｌ／ＬのＤＰＰＨエタノール溶液３ｍＬに各試料溶液３ｍＬを加え、直ちに容器を密栓して振り混ぜ、３０分間静置した後、波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。
コントロールとして、試料溶液の代わりに試料溶液を溶解した溶媒を用いて同様に操作し、波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。また、ブランクとして、エタノールに試料溶液３ｍＬを加えた後、直ちに波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。
そして、測定結果から、下記数式３によりラジカル消去率（％）を求めた。結果を表４に示す。なお、被験試料は、試料濃度１００μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬで使用した。
＜数式３＞
ラジカル消去率（％）＝｛１−（Ｂ−Ｃ）／Ａ｝×１００
Ａ：コントロールの吸光度
Ｂ：試料溶液を添加した場合の吸光度
Ｃ：ブランクの吸光度
【００５９】
次に、試料濃度を段階的に減少させて上記ラジカル消去率の測定を行い、ＤＰＰＨラジカルの消去率が５０％になる試料濃度（以下、「ＩＣ５０」と称することがある。）（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表５に示す。
【００６０】
【表４】
【表５】
表４から５の結果から、製造例１から３のスオウの抽出物が、ＤＰＰＨに対するラジカル消去作用を有することが確認できた。
【００６１】
実施例１から３の結果から、スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物は、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有することが確認され、スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物が、抗酸化剤、及び抗老化剤の有効成分として、好適に利用可能であることが示唆された。
【００６２】
（実施例４：一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用試験）
前記製造例１から３で得られた各スオウの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を試験した。
【００６３】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を１０質量％の牛胎児血清（ＦＢＳ）含有ダルベッコＭＥＭを用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を３．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるように１０質量％のＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、終濃度０．５質量％のＤＭＳＯを含む１０質量％のＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭで溶解した各試料溶液を各穴に１００μＬ添加し、終濃度１μｇ／ｍＬで１０質量％のＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ、Ｅ．ｃｏｌｉ ０１１１；Ｂ４、ＤＩＦＣＯ社製）を１００μＬ加え、４８時間培養した。ＮＯ産生量は亜硝酸イオン（ＮＯ２−）量を指標に測定した。培養終了後、各穴の培養液に、同量のグリス試薬（１質量％のスルファニルアミド、０．１質量％のＮ−１−ｎａｐｈｔｈｙｌ ｅｔｈｙｌｅｎｄｉａｍｉｎｅ ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｉｎ ５質量％のリン酸溶液）を添加し、１０分間室温にて反応した。反応後、波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。コントロールの一酸化窒素（ＮＯ）産生量を基にして、下記数式４からＮＯ産生抑制率を求めた。結果を表６に示す。なお、被験試料は、試料濃度２００μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬで使用した。
＜数式４＞
ＮＯ産生抑制率（％）＝{１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）}×１００
Ａ：試料添加、ＬＰＳ刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度
Ｂ：試料添加、ＬＰＳ無刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度
Ｃ：コントロールのＬＰＳ刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度
Ｄ：コントロールのＬＰＳ無刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度
【００６４】
次に、試料濃度を段階的に減少させて上記ＮＯ産生抑制率の測定を行い、ＮＯ産生抑制率が５０％になる試料濃度（以下、「ＩＣ５０」と称することがある。）（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた（このＩＣ５０値が小さいほどＮＯ産生抑制作用が強い）。結果を表７に示す。
【００６５】
【表６】
【表７】
表６から７の結果から、製造例１から３のスオウの抽出物が、強い一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を有することが確認できた。
【００６６】
実施例４の結果から、スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物は、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を有することが確認され、スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物が、抗炎症剤の有効成分として、好適に利用可能であることが示唆された。
【００６７】
（実施例５：マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用試験）
前記製造例１から３で得られた各スオウの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりマトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用を試験した。この試験方法は、Ｗｕｎｓｃｈ ａｎｄ Ｈｅｉｄｒｉｃｈ法を一部改変したものである。
【００６８】
蓋付試験管にて、２０ｍｍｏｌ／ｍＬの塩化カルシウム含有０．１ｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．１）に溶解した各試料溶液５０μＬ、ＭＭＰ−１溶液５０μＬ、及びＰｚ−ｐｅｐｔｉｄｅ溶液４００μＬを混合し、３７℃にて３０分間反応させた後、２５ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸溶液１ｍＬを加え反応を停止した。その後、酢酸エチル５ｍＬを加え、激しく振とうした。これを遠心（１，６００×ｇ、１０分）し、酢酸エチル層の波長３２０ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
なお、ＭＭＰ−１としては、ＣＯＬＬＡＧＥＮＡＳＥ Ｔｙｐｅ ＩＶ ｆｒｏｍ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ（シグマ社製）を使用した。
Ｐｚ−ｐｅｐｔｉｄｅとしては、Ｐｚ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｒｇ−ＯＨ（ＢＡＣＨＥＭ Ｆｅｎｉｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ ＡＧ社製）を使用した。
そして、得られた結果から、下記数式５によりＭＭＰ−１活性阻害率を求めた。結果を表８に示す。なお、被験試料は、試料濃度４００μｇ／ｍＬ、２００μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬで使用した。
＜数式５＞
ＭＭＰ−１活性阻害率（％）＝｛１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）｝×１００
Ａ：試料溶液無添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度
Ｂ：試料溶液無添加、酵素無添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度
Ｃ：試料溶液添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度
Ｄ：試料溶液添加、酵素無添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度
【００６９】
次に、試料濃度を段階的に減少させて上記ＭＭＰ−１活性阻害率を測定し、ＭＭＰ−１活性阻害率が５０％になる濃度（以下、「ＩＣ５０」と称することがある。）（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表９に示す。
【００７０】
【表８】
【表９】
表８から９の結果から、製造例１から３のスオウの抽出物が、中程度のマトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用を有することが確認できた。
【００７１】
（実施例６：エストロゲン様作用試験）
前記製造例１から３で得られた各スオウの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりエストロゲン様作用を試験した。
【００７２】
ヒト乳癌由来細胞（ＭＣＦ−７）を１０％の牛胎児血清（ＦＢＳ）、１質量％のＮＥＡＡ、及び１ｍｍｏｌ／Ｌのピルビン酸ナトリウムを含有するＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を活性炭処理した１０％のＦＢＳ、１質量％のＮＥＡＡ、及び１ｍｍｏｌ／Ｌのピルビン酸ナトリウムを含有するフェノールレッド不含ＭＥＭ（Ｔ−ＭＥＭ）を用いて３．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、４８穴マイクロプレートに１穴あたり４５０μＬずつ播種し、細胞を定着させるため培養した。６時間後（０日目）にＴ−ＭＥＭで終濃度の１０倍に調製した各試料溶液を各穴に５０μＬずつ添加し、培養を続けた。３日目に培地を抜き、Ｔ−ＭＥＭで終濃度に調製した試料溶液を各穴に０．５ｍＬ添加し、更に培養を続けた。
エストロゲン様作用は、ＭＴＴアッセイを用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、１質量％のＮＥＡＡ、１ｍｍｏｌ／Ｌのピルビン酸ナトリウムを含有するＭＥＭに終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで溶解したＭＴＴ〔３−(４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ)−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ〕を各穴に２００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。ポジティブコントロールとして、１０−９ｍｏｌ／Ｌのエストラジオールを使用した。
そして、得られた測定結果から、下記数式６によりエストロゲン様作用（エストロゲン依存性増殖作用）率を求めた。なお、エストロゲン様作用の強さは、試料溶液無添加の場合の吸光度を１００％として算出した。結果を表１０に示す。
なお、被験試料は、試料濃度５０μｇ／ｍＬ、１２．５μｇ／ｍＬ、３．１２５μｇ／ｍＬで使用した。
＜数式６＞
エストロゲン様作用率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００
Ａ：試料溶液添加の場合の吸光度
Ｂ：試料溶液無添加の場合の吸光度
【００７３】
【表１０】
表１０の結果から、製造例１から３のスオウの抽出物が、エストロゲン様作用を有することが確認できた。
【００７４】
（実施例７：Ｉ型コラーゲン産生促進作用試験）
前記製造例１から３で得られた各スオウの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりＩ型コラーゲン産生促進作用を試験した。
【００７５】
ヒト正常線維芽細胞（Ｄｅｔｒｏｉｔ ５５１）を、１０質量％ＦＢＳ、１質量％ＮＥＡＡ（ｎｏｎ−ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ）、及び１ｍｍｏｌ／Ｌピルビン酸含有ダルベッコＭＥＭを用いて３７℃、５％ＣＯ２下で培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に上記培地で希釈した後、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、０．５質量％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解した各試料溶液を各穴に１５０μＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で３日間培養した。培養後、以下のようにして各穴の培地中のコラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。
前記培養後の上清９０μＬをＥＬＩＳＡプレートに移し換え、４℃、一晩でプレートに吸着させた後、溶液を捨て、０．０５質量％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行った。その後、１質量％ウシ血清アルブミンを含むリン酸生理緩衝液で、ブロッキング操作を行った。溶液を捨て、０．０５質量％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、抗ヒトコラーゲンタイプＩ抗体（ウサギＩｇＧ；ケミコン社製）を反応させた。溶液を捨て、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、ＨＲＰ標識抗ウサギＩｇＧ抗体と反応させた後、同様の洗浄操作を行い、発色反応を行った。
Ｉ型コラーゲン産生促進作用は下記数式７から求めた。Ｉ型コラーゲン産生促進作用の強さは、標準品を用いて上記ＥＬＩＳＡを行い、検量線を作成し、被験試料無添加時のＩ型コラーゲン量を１００％として算出した。結果を表１１に示す。
なお、被験試料は、試料濃度１００μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬで使用した。
＜数式７＞
Ｉ型コラーゲン産生促進率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００
Ａ：被験試料添加時のＩ型コラーゲン量
Ｂ：被験試料無添加時のＩ型コラーゲン量
【００７６】
【表１１】
表１１の結果から、製造例１から３のスオウの抽出物が、Ｉ型コラーゲン産生促進作用を有することが確認できた。
【００７７】
（実施例８：ヒアルロン酸産生促進作用試験）
前記製造例１から３で得られた各スオウの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりヒアルロン酸産生促進作用を試験した。
【００７８】
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ、理化学研究所より入手）を１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭ（ｍｉｎｉｍｕｍ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉｕｍ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで希釈した後、９６穴プレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。培養終了後、０．５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭに溶解した被験試料を各穴に１００μＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で３日間培養した。培養後、各穴の培地中のヒアルロン酸量を間接的ＥＬＩＳＡ法により測定した。
ヒアルロン酸産生促進作用は、下記数式８により求めた。なお、ヒアルロン酸産生促進作用の強さは、被験試料無添加時のヒアルロン酸量を１００％として算出した。結果を表１２に示す。なお、被験試料は、試料濃度２００μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬで使用した。
＜数式８＞
ヒアルロン酸産生促進率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００
Ａ：被験試料添加時のヒアルロン酸量
Ｂ：被験試料無添加時のヒアルロン酸量
【００７９】
【表１２】
表１２の結果から、製造例１から３のスオウの抽出物が、ヒアルロン酸産生促進作用を有することが確認できた。
【００８０】
（実施例９：ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用試験）
前記製造例１から３で得られた各スオウの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりＵＶ−Ｂダメージからの回復作用を試験した。
【００８１】
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞をα−ＭＥＭを用いて２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、４８穴プレートに１穴あたり２００μＬずつ播種した。２４時間培養後、培地を１００μＬのＰＢＳ（−）へ交換し、１．０Ｊ／ｃｍ２のＵＶ−Ｂを照射した。照射後、直ちに、ＰＢＳ（−）を抜き、１０％ＦＢＳ含有Ｄ−ＭＥＭに溶解した各試料溶液を各穴に４００μＬ添加し、２４時間培養した。紫外線ＵＶ−Ｂダメージからの回復効果は、ＭＴＴアッセイを用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで溶解したＭＴＴを各穴に２００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、細胞播種した後、ＵＶ−Ｂを照射しない細胞、及び細胞播種後ＵＶ−Ｂを照射し被験試料を添加しない細胞についても同様に測定し、それぞれ非照射群と照射群とした。
ＵＶ−Ｂダメージ回復率は、下記数式９により求めた。結果を表１３に示す。なお、被験試料は、試料濃度１００μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬ、６．２５μｇ／ｍＬで使用した。
＜数式９＞
ＵＶ−Ｂダメージ回復率（％）＝｛（Ｎｔ−Ｃ）−（Ｎｔ−Ｓａ）｝／（Ｎｔ−Ｃ）×１００
Ｎｔ：ＵＶ−Ｂを照射しない細胞での吸光度
Ｃ：ＵＶ−Ｂを照射し被験試料を添加しない細胞での吸光度
Ｓａ：ＵＶ−Ｂを照射し被験試料を添加した細胞での吸光度
【００８２】
【表１３】
表１３の結果から、製造例１から３のスオウの抽出物が、ＵＶ−Ｂダメージ回復作用を有することが確認できた。
【００８３】
実施例５から９の結果から、スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物は、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、及びＵＶ−Ｂダメージ回復作用の少なくともいずれかを有することが確認され、スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物が、抗老化剤の有効成分として、好適に利用可能であることが示唆された。
【００８４】
（配合例１）
−乳液−
下記組成に従い、乳液を常法により製造した。
・スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の種子の５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．１０ｇ
・ホホバオイル・・・４．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・アルブチン・・・３．００ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．５０ｇ
・オリーブオイル・・・２．００ｇ
・スクワラン・・・２．００ｇ
・セタノール・・・２．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・グリチルリチン酸ステアリル・・・０．１０ｇ
・黄杞エキス・・・０．１０ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１０ｇ
・イチョウ葉エキス・・・０．１０ｇ
・コンキオリン・・・０．１０ｇ
・オウバクエキス・・・０．１０ｇ
・カミツレエキス・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計１００．００ｇ）
【００８５】
（配合例２）
−化粧水−
下記組成に従い、化粧水を常法により製造した。
・スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の種子の水抽出物（製造例１）・・・０．１０ｇ
・グリセリン・・・３．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・アスコルビン酸グルコシド・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・グリチルリチン酸二カリウム・・・０．１０ｇ
・クエン酸・・・０．１０ｇ
・クエン酸ソーダ・・・０．１０ｇ
・油溶性甘草エキス・・・０．１０ｇ
・海藻エキス・・・０．１０ｇ
・クジンエキス・・・０．１０ｇ
・キシロビオースミクスチャー・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【００８６】
（配合例３）
−クリーム−
下記組成に従い、クリームを常法により製造した。
・スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の種子の８０質量％エタノール抽出物（製造例３）・・・０．１０ｇ
・スクワラン・・・１０．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・６．００ｇ
・流動パラフィン・・・５．００ｇ
・サラシミツロウ・・・４．００ｇ
・セタノール・・・３．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・３．００ｇ
・ラノリン・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．５０ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・１．５０ｇ
・ステアリン酸・・・１．００ｇ
・アスコルビン酸リン酸マグネシウム・・・０．１０ｇ
・グリチルレチン酸・・・０．１０ｇ
・酵母抽出液・・・０．１０ｇ
・シソ抽出液・・・０．１０ｇ
・シナノキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ジユ抽出液・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．１０ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【００８７】
（配合例４）
−パック−
下記組成に従い、パックを常法により製造した。
・スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の種子の５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．２０ｇ
・ポリビニルアルコール・・・１５．００ｇ
・エタノール・・・１０．００ｇ
・プロピレングリコール・・・７．００ｇ
・ポリエチレングリコール・・・３．００ｇ
・セージ抽出液・・・０．１０ｇ
・トウキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ニンジン抽出液・・・０．１０ｇ
・パラオキシ安息香酸エチル・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【００８８】
（配合例５）
−錠剤状栄養補助食品−
下記の混合物を打錠して、錠剤状栄養補助食品を製造した。
・スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の種子の５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・３０ｇ
・粉糖（ショ糖）・・・１７８ｇ
・ソルビット・・・１０ｇ
・グリセリン脂肪酸エステル・・・１２ｇ
【００８９】
（配合例６）
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、顆粒状栄養補助食品を製造した。
・スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の種子の８０質量％エタノール抽出物（製造例３）・・・２０ｇ
・ビートオリゴ糖・・・１，０００ｇ
・ビタミンＣ・・・１６７ｇ
・ステビア抽出物・・・１０ｇ
【００９０】
（配合例７）
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、顆粒状栄養補助食品を製造した。
・スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の種子の水抽出物（製造例１）・・・２０ｇ
・ビートオリゴ糖・・・１，０００ｇ
・ビタミンＣ・・・１６７ｇ
・ステビア抽出物・・・１０ｇ
【産業上の利用可能性】
【００９１】
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを配合した皮膚化粧料は、優れた抗酸化作用、抗炎症作用、及び抗老化作用の少なくともいずれかを有し、かつ安全性にも優れているので、例えば、軟膏、クリーム、乳液、化粧水、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼントなどに好適に利用可能である。
また、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを配合した飲食品は、経口摂取によっても優れた抗酸化作用、抗炎症作用、及び抗老化作用の少なくともいずれかを有し、かつ安全性にも優れているので、例えば、健康食品、栄養補助食品などに好適に利用可能である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スオウの抽出物を含有する抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤、並びに、前記抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを利用した皮膚化粧料、及び飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、生体成分を酸化させる要因として、活性酸素が注目されており、その生体への悪影響が問題となっている。活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、スーパーオキサイド〔即ち、酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン（・Ｏ２−）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、一重項酸素（１Ｏ２）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）〕等がある。このような活性酸素は食細胞の殺菌機構にとって必須であり、ウイルスや癌細胞の除去に重要な働きを果たしている。
しかし、前記活性酸素の過剰な生成は、生体内の膜及び組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発する。生体内で生産され、他の活性酸素の出発物質ともなっているスーパーオキサイドは、通常、細胞内に含まれているスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）の触媒作用により逐次消去されている。しかし、スーパーオキサイドの産生が過剰な場合、あるいはＳＯＤの作用が低下している場合には、スーパーオキサイドの消去が不十分になってスーパーオキサイド濃度が高くなる。このことが、関節リウマチ、ベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、シミ、ソバカス、しわ、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性、皮膚の老化などを起こす原因の一つであると考えられている。
【０００３】
これらの中でも、皮膚は紫外線等の環境因子の刺激を直接受けるため、スーパーオキサイドが生成し易い器官であるから、スーパーオキサイド濃度の上昇により、例えば、コラーゲン等の生体組織を分解、変性、又は架橋したり、また油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成して、皮膚のしわを形成したり、皮膚の弾力性低下等の老化、炎症、肌の色素沈着を引き起こすという問題がある（非特許文献１参照）。
そこで、活性酸素消去物質、ラジカル消去物質、過酸化水素消去物質等を安全性の点で有利な天然物から得る試みがなされており、アブラナ科ブラシカ属植物の抽出物（特許文献１参照）、ベンケイソウ科リュウキュウベンケイ属植物の抽出物（特許文献２参照）、タマコチョウの抽出物（特許文献３参照）、スイオウの抽出物（特許文献４参照）、などに有効性が確認されている。
【０００４】
また、炎症性の疾患、例えば接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種皮膚疾患等の原因及び発症機構は多種多様である。その原因として、例えば、一酸化窒素（ＮＯ）産生、血小板凝集によるものなどが知られている。
【０００５】
前記一酸化窒素（ＮＯ）は、大気汚染、酸性雨等の要因となる窒素酸化物である。また、近年、一酸化窒素（ＮＯ）は、血管内皮由来弛緩因子（ＥＤＲＦ）、神経伝達物質、生体防御における微生物、腫瘍細胞の障害因子等、生体内で多彩な機能を示す生理活性物質であることが報告されている。生理活性物質としては、マクロファージから産生される一酸化窒素が細菌及びウイルスの感染を防御することが知られている。しかし、前記マクロファージから産生される一酸化窒素が大量に生合成されると、生体にとって無毒ではなく、自己組織の破壊を引き起こし、炎症の悪化、リューマチ、糖尿病等の病態の原因となることがある。また、大量に生合成された一酸化窒素が血管平滑筋の弛緩と過剰な透過性の増大をもたらし、著しい血圧の低下によってエンドトキシン・ショックを引き起こすこともある。
このような炎症性疾患において、一酸化窒素（ＮＯ）の過剰な産生を抑制することが重要となる。このような一酸化窒素の産生抑制作用を有する生薬としては、例えば、ローズマリー抽出液、カルノソール、カルノシン酸、コーヒー豆の抽出液、サクラダソウ抽出液、オウレン抽出液、オウバク抽出液、カンゾウ抽出液、イヌノイバラの抽出液、センキュウ抽出液、トウニン抽出液、シャクヤク抽出液、ヨクイニン抽出液、アカブドウ抽出液（特許文献５参照）、唐独活、タラ根皮、和続断、車前子、遠子、茜草根、半枝連、槐花、花椒（非特許文献２参照）、などが報告されている。
【０００６】
また、皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、皮膚線維芽細胞、及び、これらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲン等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては、これら皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより、水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
ところが、紫外線（ＵＶ−Ａ、ＵＶ−Ｂ）の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄、過酸化水素との接触等の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンの産生量が減少すると共に、架橋による弾力低下を起こす。その結果、皮膚は保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始めるため、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。更に、外的因子の影響や加齢に伴い、線維芽細胞の増殖率が低下すると、天然保湿因子であるヒアルロン酸の産生量が低下する。
このように皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、コラーゲン等の真皮マトリックス成分の減少乃至変性が関与していることが知られている。
また、コラーゲンの中でもＩ型コラーゲンは、最も多く体内に含まれるコラーゲンであり、皮膚の真皮にも多く含まれ、皮膚の強さを生み出す役割を果たしていることが知られている。
【０００７】
また、近年、真皮マトリックス成分の減少乃至変性を誘導する因子として、マトリックスメタロプロテアーゼ類（以下、「ＭＭＰｓ」と称することもある）と呼ばれるタンパク質分解酵素群の分解及び再構築がある。
前記ＭＭＰｓは、その一次構造と基質特異性の違いから、（１）コラゲナーゼ群(ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−８及びＭＭＰ−１３)、（２）ゼラチナーゼ群(ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９)、（３）ストロメライシン群(ＭＭＰ−３及びＭＭＰ−１０)、（４）膜結合型マトリックスメタロプロテアーゼ群（ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、及びＭＭＰ−１７）、（５）その他（ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−１１、及びＭＭＰ−１２）の５つのグループに分類されている（特許文献６参照）。
前記ＭＭＰｓの中でも、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−１４は、皮膚の真皮マトリックスの主な構成成分であるＩ型コラーゲン、ＩＩ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲンを分解する酵素として知られている。また、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線によるコラーゲンの減少乃至変性の一因となり、皮膚のシワ形成等の大きな要因であると考えられる。
【０００８】
また角層は、表皮角化細胞が終末分化して形成された角質細胞と、細胞間を埋める細胞間脂質から形成される。セラミドを主成分とする細胞間脂質は、ラメラ構造を形成することにより、角層バリア機能を担っている。一方、角質細胞は、ケラチン線維を主成分とし、膜の裏打ち蛋白であるコーニファイドエンベロープ（角質肥厚膜、以下「ＣＥ」と略す。）という疎水的で強靭な細胞膜様構造物に覆われている。ＣＥは、表皮角化細胞の分化に従って細胞内で産生されるインボルクリン、ロリクリンなど複数のＣＥ前駆体蛋白質が、酵素トランスグルタミナーゼ−１により架橋され、不溶化して形成され、このＣＥが皮膚のバリア機能に密接に関与している。さらに、その一部にはセラミド等が共有結合し、疎水的な構造をとることで細胞間脂質のラメラ構造の土台を供給し、角層バリア機能及び皮膚の水分保持機能の基礎が形成される。
【０００９】
しかしながら、加齢、乾燥、紫外線（ＵＶ−Ａ、ＵＶ−Ｂ）などの影響によりターンオーバー速度に異常が生じると、ラメラ構造の乱れやＣＥが不完全な状態で形成された、いわゆる不全角化が誘発され、角質細胞や細胞間脂質の構造に異常が生じ、角層の水分保持機能及びバリア機能は低下する。このことが肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状につながると考えられる。また、乾癬やアトピー性皮膚炎の患者では、バリア機能が低下した皮疹部で未熟なＣＥが高頻度に観察され、ＣＥが正しく形成されることが皮膚のバリア機能に非常に重要であると考えられている（非特許文献３参照）。
【００１０】
また、加齢に伴う皮膚老化の一因として、女性ホルモンの一種であるエストロゲンの分泌が減退することがある。エストロゲンは成人女性の健康維持に深く関わっており、その分泌不足は種々の内科的疾患を招く他、肌の過敏症、弾力性低下、潤いの減少等の好ましくない肌の変化の原因となることが知られている。
【００１１】
したがって、ヒアルロン酸の産生促進、Ｉ型コラーゲンの産生促進、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害、ＵＶ−Ｂダメージからの回復を補うこと、加齢によるエストロゲン分泌減退を補うことなどにより、皮膚のしわの形成、弾力性低下等の皮膚の老化を予防乃至治療できると考えられる。
これまでにヒアルロン酸産生促進作用を有するものとしては、例えば、アメリカニガキ抽出物（特許文献７参照）などが報告されている。
また、エストロゲン様作用剤としては、例えば、ステロイド系エストロゲン、非ステロイド系エストロゲン、フラボン系化合物（特許文献８〜１０参照）などが報告されている。
【００１２】
しかしながら、現在までのところ、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、皮膚化粧料及び飲食品に広く使用可能な抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤は未だ提供されておらず、その速やかな提供が強く求められているのが現状である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】特開２００３−８１８４８号公報
【特許文献２】特開２００５−２９４８３号公報
【特許文献３】特開２００６−３２１７３０号公報
【特許文献４】特開２００７−８９０２号公報
【特許文献５】特開２００２−８７９７５号公報
【特許文献６】特開２０００−３４４６７２号公報
【特許文献７】特開２００３−０８１８５０号公報
【特許文献８】特開２００２−２２６３２３号公報
【特許文献９】特開２００１−３１６２４０号公報
【特許文献１０】特開２００３−５５２４５号公報
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】「フレグランスジャーナル」臨時増刊Ｎｏ．１４、ｐ１５６、１９９５年
【非特許文献２】「和漢医薬学雑誌」，Ｖｏｌ．１５，ｐ．３０２−３０３，１９９８年発行
【非特許文献３】Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ １２：５９１−６０１（２００３）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れた抗酸化作用を有し、かつ安全性の高い抗酸化剤、優れた抗炎症作用を有し、かつ安全性の高い抗炎症剤、及び優れた抗老化作用を有し、かつ安全性の高い抗老化剤、並びに、前記抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを利用した皮膚化粧料、及び飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者らは、前記課題を解決するために鋭意検討を行ったところ、スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物が、優れた抗酸化作用、抗炎症作用、及び抗老化作用を有することを知見し、本発明を完成するに至った。
【００１７】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤である。
＜２＞ スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有する前記＜１＞に記載の抗酸化剤である。
＜３＞ スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物を含有することを特徴とする抗炎症剤である。
＜４＞ 一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を有する前記＜３＞に記載の抗炎症剤である。
＜５＞ スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤である。
＜６＞ マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有する前記＜５＞に記載の抗老化剤である。
＜７＞ 前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の抗酸化剤、前記＜３＞から＜４＞のいずれかに記載の抗炎症剤、及び前記＜５＞から＜６＞のいずれかに記載の抗老化剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする皮膚化粧料である。
＜８＞ 前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の抗酸化剤、前記＜３＞から＜４＞のいずれかに記載の抗炎症剤、及び前記＜５＞から＜６＞のいずれかに記載の抗老化剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする飲食品である。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によると、従来における諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた抗酸化作用を有し、かつ安全性の高い抗酸化剤、優れた抗炎症作用を有し、かつ安全性の高い抗炎症剤、及び優れた抗老化作用を有し、かつ安全性の高い抗老化剤、並びに、前記抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを利用した皮膚化粧料、及び飲食品を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
（抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤）
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤は、スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
【００２０】
前記抗酸化剤は、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかに基づく抗酸化作用を有するものである。
前記抗炎症剤は、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用に基づく抗炎症作用を有するものである。
前記抗老化剤は、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかに基づく抗老化作用を有するものである。
前記スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物が含有する、抗酸化作用、抗炎症作用、及び抗老化作用の少なくともいずれかを発揮する物質の詳細については不明であるが、前記スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物がこのような優れた作用を有し、抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤として有用であることは、従来には全く知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。
【００２１】
前記スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）は、スホウ、風流子ともいい、マメ科の植物であり、インドからマレー半島等に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記スオウの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、種子が好ましい。
【００２２】
抽出原料である前記スオウは、例えば、乾燥した後に、そのままの状態で又は粗砕機等を用いて粉砕した状態で、溶媒抽出に供することができる。中でも、前記抽出原料としては、採取後ただちに乾燥し、粉砕したものが好ましい。前記乾燥は、例えば、天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。なお、前記スオウは、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、前記スオウの極性溶媒による抽出処理を、効率よく行うことができる。
【００２３】
前記スオウの抽出物は、植物の抽出に一般に用いられる方法を利用することによって、容易に得ることができる。また、前記スオウの抽出物としては、市販品を使用してもよい。なお、前記スオウの抽出物には、前記スオウの抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又は、これらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００２４】
前記抽出に用いる溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性有機溶媒、又は、これらの混合溶媒を、室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。前記スオウに含まれる抗酸化作用、抗炎症作用、及び抗老化作用の少なくともいずれかを示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって、容易に抽出することができる。
【００２５】
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。したがって、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２６】
前記抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、該親水性有機溶媒と水との混合溶媒なども用いることができる。なお、前記水と前記親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する際には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部を混合したものを使用することが好ましい。また、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部を混合したものを使用することが好ましい。
【００２７】
抽出原料である前記スオウから、抗酸化作用、抗炎症作用、及び抗老化作用の少なくともいずれかを有する抽出物を抽出するにあたって、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、前記各抽出原料を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分〜４時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物を得ることができる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５倍量〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０℃〜９５℃にて１時間〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０℃〜８０℃にて３０分間〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の有効成分として用いることができる。
【００２８】
抽出により得られる前記スオウの抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るため、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。なお、得られる前記スオウの抽出液は、そのままでも抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、常法を利用することができ、また、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、抽出原料である前記スオウは特有の匂いと味を有している場合があり、そのため、前記スオウの抽出物に対しては、生理活性の低下を招かない範囲で、脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、例えば皮膚化粧料に添加する場合などには大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製は、具体的には、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００２９】
以上のようにして得られる前記スオウの抽出物は、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、ラジカル消去作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、及びＵＶ−Ｂダメージからの回復作用の少なくともいずれかを有し、これらの作用に基づき、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかの有効成分として好適に利用可能なものである。
なお、前記スオウの抽出物は、前記した各作用に基づき、スーパーオキサイド消去剤、過酸化水素消去剤、ラジカル消去剤、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制剤、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害剤、エストロゲン様作用剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、及びＵＶ−Ｂダメージからの回復作用剤としても、それぞれ好適に利用可能である。
【００３０】
本発明の抗酸化剤における抗酸化作用は、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。これらの中でも、前記抗酸化剤は、スーパーオキサイド消去作用を少なくとも有していることが好ましい。
本発明の抗炎症剤における抗炎症作用は、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用に基づいて発揮される。
本発明の抗老化剤における抗老化作用は、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。これらの中でも、前記抗老化剤は、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用を少なくとも有していることが好ましい。
前記スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用に基づく抗老化作用によれば、例えば、皮膚において過剰に生成された活性酸素による皮膚のしわの形成や皮膚の弾力性の低下を抑制することができる。
【００３１】
前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤中の前記スオウの抽出物の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、また、前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤は、前記スオウの抽出物そのものであってもよい。
【００３２】
また、前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤中に含まれ得る、前記スオウの抽出物以外のその他の成分としても、本発明の効果を損なわない範囲内であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記スオウの抽出物を所望の濃度に希釈等するための、生理食塩液などが挙げられる。また、前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤中の前記その他の成分の含有量にも、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
また、前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤は、必要に応じて製剤化することにより、粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。
【００３３】
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤は、優れた抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用を有すると共に、安全性に優れるため、例えば、後述する本発明の皮膚化粧料、本発明の飲食品などへの利用に好適である。
【００３４】
（皮膚化粧料）
本発明の皮膚化粧料は、前記した本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
前記皮膚化粧料は、前記スオウの抽出物を、その活性を妨げないように任意の皮膚化粧料に配合したものであってもよいし、前記スオウの抽出物を主成分とした皮膚化粧料であってもよい。また、前記皮膚化粧料は、前記スオウの抽出物そのものであってもよい。
【００３５】
本発明の皮膚化粧料は、皮膚に使用した場合に高い安全性を有し、優れたスーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、ラジカル消去作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、及びＵＶ−Ｂダメージからの回復作用の少なくともいずれかを発揮するものである。
【００３６】
ここで、前記皮膚化粧料の用途としては、特に制限はなく、各種用途から適宜選択することができ、例えば、軟膏、クリーム、乳液、化粧水、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼントなどが挙げられる。
【００３７】
前記皮膚化粧料は、更に必要に応じて本発明の目的及び作用効果を損なわない範囲で、その皮膚化粧料の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他の成分を添加することができる。
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、収斂剤、殺菌剤、抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料、などが挙げられる。
【００３８】
前記皮膚化粧料中の、前記抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかの含有量としては、特に制限はなく、皮膚化粧料の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、例えば、前記スオウの抽出物の量として、０．０００１質量％〜１０質量％が好ましく、０．００１質量％〜５質量％がより好ましい。
【００３９】
（飲食品）
本発明の飲食品は、前記した本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
ここで、前記飲食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品などの区分に制限されるものではなく、例えば、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものを意味する。
前記飲食品は、前記スオウの抽出物を、その活性を妨げないように任意の飲食物に配合したものであってもよいし、前記スオウの抽出物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。また、前記飲食品は、前記スオウの抽出物そのものであってもよい。
【００４０】
本発明の飲食品は、高い安全性を有し、優れたスーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、ラジカル消去作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、及びＵＶ−Ｂダメージからの回復作用の少なくともいずれかを発揮するものである。
【００４１】
前記飲食品としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品；種々の形態の健康食品や栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品などが挙げられる。
【００４２】
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、飲食品を製造するにあたって通常用いられる、補助的原料又は添加物などが挙げられる。
前記補助的原料又は添加物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤などが挙げられる。
【００４３】
前記飲食品中の、前記抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかの含有量としては、対象となる飲食品の種類に応じて異なり、一概には規定することができないが、例えば、飲食品本来の味を損なわない範囲で任意の飲食物に配合することを目的とする場合には、有効成分である前記スオウの抽出物の量として、０．００１質量％〜５０質量％が好ましく、０．０１質量％〜２０質量％がより好ましい。また、例えば、前記スオウの抽出物を主成分とする顆粒、錠剤、カプセル形態等の栄養補助飲食品を製造することを目的とする場合には、有効成分である前記スオウの抽出物の量として、０．０１質量％〜１００質量％が好ましく、５質量％〜１００質量％がより好ましい。
【００４４】
（効果）
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤、並びに、皮膚化粧料及び飲食品は、日常的に使用することが可能であり、有効成分である前記スオウの抽出物の働きによって、抗酸化作用、抗炎症作用、及び抗老化作用の少なくともいずれかを、極めて効果的に発揮させることができるものである。
【００４５】
なお、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤、並びに、皮膚化粧料及び飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、その作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することも可能である。また、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤、並びに、皮膚化粧料及び飲食品は、天然由来の前記スオウの抽出物を有効成分としたものであり、安全性に優れる点でも、有利である。
【実施例】
【００４６】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００４７】
（製造例１）
−スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の水抽出物の製造−
スオウの種子の粉砕物に、質量比で１０倍量の水を加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の水を加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、スオウの水抽出物（凍結乾燥品）を得た。なお、得られたスオウの水抽出物の抽出率は、１８．４％であった。
【００４８】
（製造例２）
−スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の５０質量％エタノール抽出物の製造−
スオウの種子の粉砕物に、質量比で１０倍量の５０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の５０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、スオウの５０質量％エタノール抽出物（凍結乾燥品）を得た。なお、得られたスオウの５０質量％エタノール抽出物の抽出率は、１０．６％であった。
【００４９】
（製造例３）
−スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の８０質量％エタノール抽出物の製造−
スオウの種子の粉砕物に、質量比で１０倍量（質量比）の８０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の８０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、スオウの８０質量％エタノール抽出物（凍結乾燥品）を得た。なお、得られたスオウの８０質量％エタノール抽出物の抽出率は、７．１％であった。
【００５０】
（実施例１：スーパーオキサイド消去作用試験（ＮＢＴ法））
前記製造例１から３で得られた各スオウの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりスーパーオキサイド消去作用を試験した。
【００５１】
３ｍｍｏｌ／Ｌのキサンチン、３ｍｍｏｌ／ＬのＥＤＴＡ、１．５ｍｇ／ｍＬの牛血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液、０．７５ｍｍｏｌ／Ｌのニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）各０．１ｍＬ、及び０．０５ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３緩衝液（ｐＨ１０．２）２．４ｍＬを試験管にとり、これに各試料溶液０．１ｍＬを添加し、２５℃で１０分間放置した。次いで、キサンチンオキシダーゼ溶液を加えて素早く攪拌し、２５℃で２０分間静置した。その後、６ｍｍｏｌ／Ｌの塩化銅０．１ｍＬを加えて反応を停止させ、波長５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。このとき測定した吸光度を「試料溶液添加、酵素溶液添加時の吸光度」とした。
また、同様の操作と吸光度の測定を、酵素溶液を添加せずに行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液添加、酵素溶液無添加時の吸光度」とした。
また、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液無添加、酵素溶液添加時の吸光度」とした。
また、酵素溶液を添加せず、更に試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液無添加、酵素溶液無添加時の吸光度」とした。
そして、測定結果から、下記数式１によりスーパーオキサイド消去率を求めた。結果を表１に示す。なお、被験試料は、試料濃度１００μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬ、１２．５μｇ／ｍＬで使用した。
＜数式１＞
スーパーオキサイド消去率（％）＝｛１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）｝×１００
Ａ：試料溶液添加、酵素溶液添加時の吸光度
Ｂ：試料溶液添加、酵素溶液無添加時の吸光度
Ｃ：試料溶液無添加、酵素溶液添加時の吸光度
Ｄ：試料溶液無添加、酵素溶液無添加時の吸光度
【００５２】
次に、試料濃度を段階的に減少させて上記スーパーオキサイド消去率の測定を行い、スーパーオキサイドの消去率が５０％になる試料濃度（以下、「ＩＣ５０」と称することがある。）（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表２に示す。
【００５３】
【表１】
【表２】
表１から２の結果から、製造例１から３のスオウの抽出物が、中〜強度のスーパーオキサイド消去作用を有することが確認できた。
【００５４】
（実施例２：過酸化水素消去作用試験）
前記製造例１から３で得られた各スオウの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により過酸化水素消去作用を試験した。
【００５５】
１．５ｍｍｏｌ／Ｌの過酸化水素溶液１０μＬに、各試料溶液１０μＬを加え、３７℃で２０分間反応した後、発色溶液〔１００μｍｏｌ／ＬのＤＡ−６４、０．５質量％のトライトンＸ−１００含有０．１ｍｏｌ／ＬのＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）１００ｍＬに１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬのペルオキシダーゼ１ｍＬを添加〕２．９８ｍＬを添加し、３７℃で５分間反応した。反応終了後、波長７２７ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、測定結果から、下記数式２により過酸化水素消去率を求めた。結果を表３に示す。なお、被験試料は、試料濃度５０μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬ、１２．５μｇ／ｍＬで使用した。
＜数式２＞
過酸化水素消去率（％）＝｛１−（Ｓｔ−Ｓｂ）／（Ｃｔ−Ｃｂ）｝×１００
Ｓｔ：被験試料溶液の波長７２７ｎｍにおける吸光度
Ｓｂ：被験試料溶液ブランクの波長７２７ｎｍにおける吸光度
Ｃｔ：コントロール溶液の波長７２７ｎｍにおける吸光度
Ｃｂ：コントロール溶液ブランクの波長７２７ｎｍにおける吸光度
【００５６】
【表３】
表３の結果から、製造例１から３のスオウの抽出物が、強い過酸化水素消去作用を有することが確認できた。
【００５７】
（実施例３：ＤＰＰＨに対するラジカル消去作用試験）
前記製造例１から３で得られた各スオウの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により非常に安定なラジカルである１，１−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ ｒａｄｉｃａｌ（ＤＰＰＨ）を使用してラジカル消去作用を試験した。
【００５８】
１．５×１０−４ｍｏｌ／ＬのＤＰＰＨエタノール溶液３ｍＬに各試料溶液３ｍＬを加え、直ちに容器を密栓して振り混ぜ、３０分間静置した後、波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。
コントロールとして、試料溶液の代わりに試料溶液を溶解した溶媒を用いて同様に操作し、波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。また、ブランクとして、エタノールに試料溶液３ｍＬを加えた後、直ちに波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。
そして、測定結果から、下記数式３によりラジカル消去率（％）を求めた。結果を表４に示す。なお、被験試料は、試料濃度１００μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬで使用した。
＜数式３＞
ラジカル消去率（％）＝｛１−（Ｂ−Ｃ）／Ａ｝×１００
Ａ：コントロールの吸光度
Ｂ：試料溶液を添加した場合の吸光度
Ｃ：ブランクの吸光度
【００５９】
次に、試料濃度を段階的に減少させて上記ラジカル消去率の測定を行い、ＤＰＰＨラジカルの消去率が５０％になる試料濃度（以下、「ＩＣ５０」と称することがある。）（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表５に示す。
【００６０】
【表４】
【表５】
表４から５の結果から、製造例１から３のスオウの抽出物が、ＤＰＰＨに対するラジカル消去作用を有することが確認できた。
【００６１】
実施例１から３の結果から、スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物は、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有することが確認され、スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物が、抗酸化剤、及び抗老化剤の有効成分として、好適に利用可能であることが示唆された。
【００６２】
（実施例４：一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用試験）
前記製造例１から３で得られた各スオウの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を試験した。
【００６３】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を１０質量％の牛胎児血清（ＦＢＳ）含有ダルベッコＭＥＭを用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を３．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるように１０質量％のＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、終濃度０．５質量％のＤＭＳＯを含む１０質量％のＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭで溶解した各試料溶液を各穴に１００μＬ添加し、終濃度１μｇ／ｍＬで１０質量％のＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ、Ｅ．ｃｏｌｉ ０１１１；Ｂ４、ＤＩＦＣＯ社製）を１００μＬ加え、４８時間培養した。ＮＯ産生量は亜硝酸イオン（ＮＯ２−）量を指標に測定した。培養終了後、各穴の培養液に、同量のグリス試薬（１質量％のスルファニルアミド、０．１質量％のＮ−１−ｎａｐｈｔｈｙｌ ｅｔｈｙｌｅｎｄｉａｍｉｎｅ ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｉｎ ５質量％のリン酸溶液）を添加し、１０分間室温にて反応した。反応後、波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。コントロールの一酸化窒素（ＮＯ）産生量を基にして、下記数式４からＮＯ産生抑制率を求めた。結果を表６に示す。なお、被験試料は、試料濃度２００μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬで使用した。
＜数式４＞
ＮＯ産生抑制率（％）＝{１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）}×１００
Ａ：試料添加、ＬＰＳ刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度
Ｂ：試料添加、ＬＰＳ無刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度
Ｃ：コントロールのＬＰＳ刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度
Ｄ：コントロールのＬＰＳ無刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度
【００６４】
次に、試料濃度を段階的に減少させて上記ＮＯ産生抑制率の測定を行い、ＮＯ産生抑制率が５０％になる試料濃度（以下、「ＩＣ５０」と称することがある。）（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた（このＩＣ５０値が小さいほどＮＯ産生抑制作用が強い）。結果を表７に示す。
【００６５】
【表６】
【表７】
表６から７の結果から、製造例１から３のスオウの抽出物が、強い一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を有することが確認できた。
【００６６】
実施例４の結果から、スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物は、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を有することが確認され、スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物が、抗炎症剤の有効成分として、好適に利用可能であることが示唆された。
【００６７】
（実施例５：マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用試験）
前記製造例１から３で得られた各スオウの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりマトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用を試験した。この試験方法は、Ｗｕｎｓｃｈ ａｎｄ Ｈｅｉｄｒｉｃｈ法を一部改変したものである。
【００６８】
蓋付試験管にて、２０ｍｍｏｌ／ｍＬの塩化カルシウム含有０．１ｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．１）に溶解した各試料溶液５０μＬ、ＭＭＰ−１溶液５０μＬ、及びＰｚ−ｐｅｐｔｉｄｅ溶液４００μＬを混合し、３７℃にて３０分間反応させた後、２５ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸溶液１ｍＬを加え反応を停止した。その後、酢酸エチル５ｍＬを加え、激しく振とうした。これを遠心（１，６００×ｇ、１０分）し、酢酸エチル層の波長３２０ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
なお、ＭＭＰ−１としては、ＣＯＬＬＡＧＥＮＡＳＥ Ｔｙｐｅ ＩＶ ｆｒｏｍ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ（シグマ社製）を使用した。
Ｐｚ−ｐｅｐｔｉｄｅとしては、Ｐｚ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｒｇ−ＯＨ（ＢＡＣＨＥＭ Ｆｅｎｉｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ ＡＧ社製）を使用した。
そして、得られた結果から、下記数式５によりＭＭＰ−１活性阻害率を求めた。結果を表８に示す。なお、被験試料は、試料濃度４００μｇ／ｍＬ、２００μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬで使用した。
＜数式５＞
ＭＭＰ−１活性阻害率（％）＝｛１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）｝×１００
Ａ：試料溶液無添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度
Ｂ：試料溶液無添加、酵素無添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度
Ｃ：試料溶液添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度
Ｄ：試料溶液添加、酵素無添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度
【００６９】
次に、試料濃度を段階的に減少させて上記ＭＭＰ−１活性阻害率を測定し、ＭＭＰ−１活性阻害率が５０％になる濃度（以下、「ＩＣ５０」と称することがある。）（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表９に示す。
【００７０】
【表８】
【表９】
表８から９の結果から、製造例１から３のスオウの抽出物が、中程度のマトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用を有することが確認できた。
【００７１】
（実施例６：エストロゲン様作用試験）
前記製造例１から３で得られた各スオウの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりエストロゲン様作用を試験した。
【００７２】
ヒト乳癌由来細胞（ＭＣＦ−７）を１０％の牛胎児血清（ＦＢＳ）、１質量％のＮＥＡＡ、及び１ｍｍｏｌ／Ｌのピルビン酸ナトリウムを含有するＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を活性炭処理した１０％のＦＢＳ、１質量％のＮＥＡＡ、及び１ｍｍｏｌ／Ｌのピルビン酸ナトリウムを含有するフェノールレッド不含ＭＥＭ（Ｔ−ＭＥＭ）を用いて３．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、４８穴マイクロプレートに１穴あたり４５０μＬずつ播種し、細胞を定着させるため培養した。６時間後（０日目）にＴ−ＭＥＭで終濃度の１０倍に調製した各試料溶液を各穴に５０μＬずつ添加し、培養を続けた。３日目に培地を抜き、Ｔ−ＭＥＭで終濃度に調製した試料溶液を各穴に０．５ｍＬ添加し、更に培養を続けた。
エストロゲン様作用は、ＭＴＴアッセイを用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、１質量％のＮＥＡＡ、１ｍｍｏｌ／Ｌのピルビン酸ナトリウムを含有するＭＥＭに終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで溶解したＭＴＴ〔３−(４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ)−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ〕を各穴に２００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。ポジティブコントロールとして、１０−９ｍｏｌ／Ｌのエストラジオールを使用した。
そして、得られた測定結果から、下記数式６によりエストロゲン様作用（エストロゲン依存性増殖作用）率を求めた。なお、エストロゲン様作用の強さは、試料溶液無添加の場合の吸光度を１００％として算出した。結果を表１０に示す。
なお、被験試料は、試料濃度５０μｇ／ｍＬ、１２．５μｇ／ｍＬ、３．１２５μｇ／ｍＬで使用した。
＜数式６＞
エストロゲン様作用率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００
Ａ：試料溶液添加の場合の吸光度
Ｂ：試料溶液無添加の場合の吸光度
【００７３】
【表１０】
表１０の結果から、製造例１から３のスオウの抽出物が、エストロゲン様作用を有することが確認できた。
【００７４】
（実施例７：Ｉ型コラーゲン産生促進作用試験）
前記製造例１から３で得られた各スオウの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりＩ型コラーゲン産生促進作用を試験した。
【００７５】
ヒト正常線維芽細胞（Ｄｅｔｒｏｉｔ ５５１）を、１０質量％ＦＢＳ、１質量％ＮＥＡＡ（ｎｏｎ−ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ）、及び１ｍｍｏｌ／Ｌピルビン酸含有ダルベッコＭＥＭを用いて３７℃、５％ＣＯ２下で培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に上記培地で希釈した後、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、０．５質量％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解した各試料溶液を各穴に１５０μＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で３日間培養した。培養後、以下のようにして各穴の培地中のコラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。
前記培養後の上清９０μＬをＥＬＩＳＡプレートに移し換え、４℃、一晩でプレートに吸着させた後、溶液を捨て、０．０５質量％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行った。その後、１質量％ウシ血清アルブミンを含むリン酸生理緩衝液で、ブロッキング操作を行った。溶液を捨て、０．０５質量％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、抗ヒトコラーゲンタイプＩ抗体（ウサギＩｇＧ；ケミコン社製）を反応させた。溶液を捨て、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、ＨＲＰ標識抗ウサギＩｇＧ抗体と反応させた後、同様の洗浄操作を行い、発色反応を行った。
Ｉ型コラーゲン産生促進作用は下記数式７から求めた。Ｉ型コラーゲン産生促進作用の強さは、標準品を用いて上記ＥＬＩＳＡを行い、検量線を作成し、被験試料無添加時のＩ型コラーゲン量を１００％として算出した。結果を表１１に示す。
なお、被験試料は、試料濃度１００μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬで使用した。
＜数式７＞
Ｉ型コラーゲン産生促進率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００
Ａ：被験試料添加時のＩ型コラーゲン量
Ｂ：被験試料無添加時のＩ型コラーゲン量
【００７６】
【表１１】
表１１の結果から、製造例１から３のスオウの抽出物が、Ｉ型コラーゲン産生促進作用を有することが確認できた。
【００７７】
（実施例８：ヒアルロン酸産生促進作用試験）
前記製造例１から３で得られた各スオウの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりヒアルロン酸産生促進作用を試験した。
【００７８】
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ、理化学研究所より入手）を１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭ（ｍｉｎｉｍｕｍ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉｕｍ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで希釈した後、９６穴プレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。培養終了後、０．５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭに溶解した被験試料を各穴に１００μＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で３日間培養した。培養後、各穴の培地中のヒアルロン酸量を間接的ＥＬＩＳＡ法により測定した。
ヒアルロン酸産生促進作用は、下記数式８により求めた。なお、ヒアルロン酸産生促進作用の強さは、被験試料無添加時のヒアルロン酸量を１００％として算出した。結果を表１２に示す。なお、被験試料は、試料濃度２００μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬで使用した。
＜数式８＞
ヒアルロン酸産生促進率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００
Ａ：被験試料添加時のヒアルロン酸量
Ｂ：被験試料無添加時のヒアルロン酸量
【００７９】
【表１２】
表１２の結果から、製造例１から３のスオウの抽出物が、ヒアルロン酸産生促進作用を有することが確認できた。
【００８０】
（実施例９：ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用試験）
前記製造例１から３で得られた各スオウの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりＵＶ−Ｂダメージからの回復作用を試験した。
【００８１】
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞をα−ＭＥＭを用いて２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、４８穴プレートに１穴あたり２００μＬずつ播種した。２４時間培養後、培地を１００μＬのＰＢＳ（−）へ交換し、１．０Ｊ／ｃｍ２のＵＶ−Ｂを照射した。照射後、直ちに、ＰＢＳ（−）を抜き、１０％ＦＢＳ含有Ｄ−ＭＥＭに溶解した各試料溶液を各穴に４００μＬ添加し、２４時間培養した。紫外線ＵＶ−Ｂダメージからの回復効果は、ＭＴＴアッセイを用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで溶解したＭＴＴを各穴に２００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、細胞播種した後、ＵＶ−Ｂを照射しない細胞、及び細胞播種後ＵＶ−Ｂを照射し被験試料を添加しない細胞についても同様に測定し、それぞれ非照射群と照射群とした。
ＵＶ−Ｂダメージ回復率は、下記数式９により求めた。結果を表１３に示す。なお、被験試料は、試料濃度１００μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬ、６．２５μｇ／ｍＬで使用した。
＜数式９＞
ＵＶ−Ｂダメージ回復率（％）＝｛（Ｎｔ−Ｃ）−（Ｎｔ−Ｓａ）｝／（Ｎｔ−Ｃ）×１００
Ｎｔ：ＵＶ−Ｂを照射しない細胞での吸光度
Ｃ：ＵＶ−Ｂを照射し被験試料を添加しない細胞での吸光度
Ｓａ：ＵＶ−Ｂを照射し被験試料を添加した細胞での吸光度
【００８２】
【表１３】
表１３の結果から、製造例１から３のスオウの抽出物が、ＵＶ−Ｂダメージ回復作用を有することが確認できた。
【００８３】
実施例５から９の結果から、スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物は、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、及びＵＶ−Ｂダメージ回復作用の少なくともいずれかを有することが確認され、スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物が、抗老化剤の有効成分として、好適に利用可能であることが示唆された。
【００８４】
（配合例１）
−乳液−
下記組成に従い、乳液を常法により製造した。
・スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の種子の５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．１０ｇ
・ホホバオイル・・・４．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・アルブチン・・・３．００ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．５０ｇ
・オリーブオイル・・・２．００ｇ
・スクワラン・・・２．００ｇ
・セタノール・・・２．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・グリチルリチン酸ステアリル・・・０．１０ｇ
・黄杞エキス・・・０．１０ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１０ｇ
・イチョウ葉エキス・・・０．１０ｇ
・コンキオリン・・・０．１０ｇ
・オウバクエキス・・・０．１０ｇ
・カミツレエキス・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計１００．００ｇ）
【００８５】
（配合例２）
−化粧水−
下記組成に従い、化粧水を常法により製造した。
・スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の種子の水抽出物（製造例１）・・・０．１０ｇ
・グリセリン・・・３．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・アスコルビン酸グルコシド・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・グリチルリチン酸二カリウム・・・０．１０ｇ
・クエン酸・・・０．１０ｇ
・クエン酸ソーダ・・・０．１０ｇ
・油溶性甘草エキス・・・０．１０ｇ
・海藻エキス・・・０．１０ｇ
・クジンエキス・・・０．１０ｇ
・キシロビオースミクスチャー・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【００８６】
（配合例３）
−クリーム−
下記組成に従い、クリームを常法により製造した。
・スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の種子の８０質量％エタノール抽出物（製造例３）・・・０．１０ｇ
・スクワラン・・・１０．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・６．００ｇ
・流動パラフィン・・・５．００ｇ
・サラシミツロウ・・・４．００ｇ
・セタノール・・・３．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・３．００ｇ
・ラノリン・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．５０ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・１．５０ｇ
・ステアリン酸・・・１．００ｇ
・アスコルビン酸リン酸マグネシウム・・・０．１０ｇ
・グリチルレチン酸・・・０．１０ｇ
・酵母抽出液・・・０．１０ｇ
・シソ抽出液・・・０．１０ｇ
・シナノキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ジユ抽出液・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．１０ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【００８７】
（配合例４）
−パック−
下記組成に従い、パックを常法により製造した。
・スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の種子の５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．２０ｇ
・ポリビニルアルコール・・・１５．００ｇ
・エタノール・・・１０．００ｇ
・プロピレングリコール・・・７．００ｇ
・ポリエチレングリコール・・・３．００ｇ
・セージ抽出液・・・０．１０ｇ
・トウキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ニンジン抽出液・・・０．１０ｇ
・パラオキシ安息香酸エチル・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【００８８】
（配合例５）
−錠剤状栄養補助食品−
下記の混合物を打錠して、錠剤状栄養補助食品を製造した。
・スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の種子の５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・３０ｇ
・粉糖（ショ糖）・・・１７８ｇ
・ソルビット・・・１０ｇ
・グリセリン脂肪酸エステル・・・１２ｇ
【００８９】
（配合例６）
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、顆粒状栄養補助食品を製造した。
・スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の種子の８０質量％エタノール抽出物（製造例３）・・・２０ｇ
・ビートオリゴ糖・・・１，０００ｇ
・ビタミンＣ・・・１６７ｇ
・ステビア抽出物・・・１０ｇ
【００９０】
（配合例７）
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、顆粒状栄養補助食品を製造した。
・スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の種子の水抽出物（製造例１）・・・２０ｇ
・ビートオリゴ糖・・・１，０００ｇ
・ビタミンＣ・・・１６７ｇ
・ステビア抽出物・・・１０ｇ
【産業上の利用可能性】
【００９１】
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを配合した皮膚化粧料は、優れた抗酸化作用、抗炎症作用、及び抗老化作用の少なくともいずれかを有し、かつ安全性にも優れているので、例えば、軟膏、クリーム、乳液、化粧水、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼントなどに好適に利用可能である。
また、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを配合した飲食品は、経口摂取によっても優れた抗酸化作用、抗炎症作用、及び抗老化作用の少なくともいずれかを有し、かつ安全性にも優れているので、例えば、健康食品、栄養補助食品などに好適に利用可能である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
【請求項２】
スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有する請求項１に記載の抗酸化剤。
【請求項３】
スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物を含有することを特徴とする抗炎症剤。
【請求項４】
一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を有する請求項３に記載の抗炎症剤。
【請求項５】
スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤。
【請求項６】
マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有する請求項５に記載の抗老化剤。
【請求項７】
請求項１から２のいずれかに記載の抗酸化剤、請求項３から４のいずれかに記載の抗炎症剤、及び請求項５から６のいずれかに記載の抗老化剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする皮膚化粧料。
【請求項８】
請求項１から２のいずれかに記載の抗酸化剤、請求項３から４のいずれかに記載の抗炎症剤、及び請求項５から６のいずれかに記載の抗老化剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする飲食品。
【請求項１】
スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
【請求項２】
スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有する請求項１に記載の抗酸化剤。
【請求項３】
スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物を含有することを特徴とする抗炎症剤。
【請求項４】
一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を有する請求項３に記載の抗炎症剤。
【請求項５】
スオウ（Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ）の抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤。
【請求項６】
マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有する請求項５に記載の抗老化剤。
【請求項７】
請求項１から２のいずれかに記載の抗酸化剤、請求項３から４のいずれかに記載の抗炎症剤、及び請求項５から６のいずれかに記載の抗老化剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする皮膚化粧料。
【請求項８】
請求項１から２のいずれかに記載の抗酸化剤、請求項３から４のいずれかに記載の抗炎症剤、及び請求項５から６のいずれかに記載の抗老化剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする飲食品。
【公開番号】特開２０１０−２８０６２１（Ｐ２０１０−２８０６２１Ａ）
【公開日】平成２２年１２月１６日（２０１０．１２．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−１３５９７８（Ｐ２００９−１３５９７８）
【出願日】平成２１年６月５日（２００９．６．５）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年１２月１６日（２０１０．１２．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年６月５日（２００９．６．５）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
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