新規ステビオール配糖体
新たなステビア甘味料成分を提供する。新規ステビオール配糖体成分とそれらを含むステビア抽出物、結晶品の成分分析により、甘味料の品質管理を容易にすると共にＲＡを主成分とする甘味料の原料を特定でき、ステビア品種の産地表示の適切性や権利侵害の判断が容易となる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規ステビオール配糖体、レバウディオサイドＡを多く含むステビア・レバウディアナ・ベルトニー品種に含まれる新規ステビオール配糖体とそれらを含む甘味料、食品、医薬品、医薬部外品、化粧品の製造、ステビア品種の確認、及び新規ステビオール配糖体分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ステビアは南米パラグアイを原産地とする菊科多年生植物で、学名をステビア・レバウディアナ・ベルトニー(Stevia Rebaudiana Bertoni)という。ステビアは砂糖の３００倍以上の甘味を持つ成分を含むので、この甘味成分を抽出して天然甘味料として用いる為に栽培されている。
ステビアの甘味成分としては、ステビオサイド(Ｃ３８Ｈ６０Ｏ１８)、レバウディオサイドＡ(Ｃ４４Ｈ７０Ｏ２３)、レバウディオサイドＣ、Ｄ、Ｅ、ズルコサイドＡ等が知られている。一般に栽培されているステビア品種では上記甘味成分の内ステビオサイド(以下、ＳＴ)が主成分で、ＳＴ１００重量部に対してレバウディオサイドＡ(以下、ＲＡ)の含有量は４０重量部程度、レバウディオサイドＣの含量はそれよりやや少ないが、品種によってはレバウディオサイドＣを主成分とするものなど様々である。
【０００３】
ＳＴは砂糖の３００倍の甘味度を有するので天然甘味料として食品工業界で広く用いられており、その甘味は比較的砂糖に似ているが、ＲＡと比較すると苦み等の不快味が後味に残ることが知られている。これに対して、ＲＡは良質の甘味質とＳＴに対して１.３倍〜１.５倍の甘味度を有するので、一般にはＳＴよりもＲＡの含有率の高いステビア甘味料が好ましいとされている。そこで、本発明者らは従来品種から交配選抜を繰り返して品種改良を行い、ＲＡに対してＳＴを少量しか含有しないステビア品種を得、それら品種から甘味料を開発した（例えば後記特許出願１参照）。
しかしながら、渋み、辛み、まろやか味等の舌で知覚される味の中でもまろやか味は非常に微妙である。微妙なまろやか味はＳＴとＲＡの比率のみに依存するものではなく、ステビアに含まれる種々の甘味成分の化学構造にグルコースを付加するとまろやか味が改善されることから、ステビア甘味成分にグルコースを付加してまろやか味、コク味を改善する方法が開発されている（後記特許文献２および３）。
【０００４】
従って、たとえ含有量は少なくてもステビアに含まれる未知成分を解析することは非常に重要なことであり、取り分けＳＴよりも多くのグルコースが付加した成分を把握し、それらに付加するグルコースを精査することは味質の管理上極めて重要である。
同時に原料である植物自身に含まれる甘味成分の種類により味質が左右されることから優れたステビア品種を開発してこれを利用するためには、含まれる甘味成分を細かく把握することが重要である。今後原料植物の改良はますます盛んとなるであろうが、開発された植物に含まれる甘味成分を丹念に特定することで品種改良結果を詳細に把握することが可能となる。
一方、新たに開発された植物品種については本発明者等が遺伝子を利用する品種確定方法（後記特許文献４および５）を開発しているが、これら原料植物から抽出加工された甘味料またはこれを利用した製品については原料植物を特定する手段がないのが実情であった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００２−２６２８２２号公報
【特許文献２】特公昭５７−１８７７９号公報
【特許文献３】特開平９−１０７９１３号公報
【特許文献４】特開２００３−００９８７８号公報
【特許文献５】ＰＣＴ国際公開ＷＯ０６／０９３２２９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従来、ステビア甘味料はＳＴとＲＡ、レバウディオサイドＡ、ズルコサイドＡ、ステビオールバイオサイドなどの５成分を分析して規格を定められてきたが、その他の未知成分に関しては何の知見も得られていなかった。また、甘味成分としては既知であっても分析方法が確定していないため、その存在を確認する方法がなかった。しかし最近では７成分のステビオール配糖体によるＪＥＣＦＡ規格が設定されるなど、ステビアに含まれる甘味成分を確認し、未知成分を明らかにしてそれら成分による微妙な味の影響を知る重要性が認識されるようになった。
本発明の目的はステビア品種に含まれる微量の甘味成分の構造を決定し、ステビア甘味料への味覚の影響を確認することである。
また、さらにはステビア甘味料およびこれを利用した製品について、原料となったステビア植物体を特定する手段を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らはＲＡを主成分とするステビア品種に含まれる新規ステビオール配糖体を検索し、味質に微妙な影響を与え得る新規ステビオール配糖体１０成分を見出した。さらには、それら成分が品種間で含有量に差があり、また特定の成分がＲＡを主成分とするステビア品種のみに存在する事実を見出してそれが当該植物由来甘味料のマーカーとして利用することが可能であることを確認し、本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のステビオール配糖体はＳＴ、ＲＡよりも多くのグルコースが付加した構造を有していて、これらを含むことによりコク味の優れたステビア甘味料が提供される。
また、本件発明によるステビオール配糖体Ｘを抽出物、結晶品で確認することにより用いた原料起源を推測できることから、最終製品を分析することで原料植物が特許等の権利に抵触するか否かの判断が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】ＲＡ−Ｃ抽出物のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【図２】ＲＡ−Ａ結晶のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【図３】ＲＡ−Ｂ結晶のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【図４】ＲＡ−Ｃ結晶のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【図５】ＲＡ−Ａ抽出物のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【図６】ＲＡ−Ｂ抽出物のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【図７】ＲＡ−Ｃ抽出物のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【図８】ＳＴ抽出物のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【図９】ＳＴ―ＳＴ結晶のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【図１０】ＳＴ−ＲＡ結晶のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明で言うＲＡ主成分とするステビア品種はＳＴよりＲＡが多く含まれる品種、並びに特許出願２００１−２００９４４号、特願２００７−５０６００４号などに記載された品種で、乾燥葉より得られる抽出物はＳＴの含量よりＲＡの含量が高く、レバウディオサイドＤ（Ｒ−Ｄ）、ステビオール配糖体ＩＩＩ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、Ｘが含まれ、ＳＴ、ＲＡよりグルコースを多く付加した成分が含有されることによりコク味の優れた甘味料が得られる。更にそれらを再結晶すればＳＴ、ステビオール配糖体Ｘを極微量含む高純度のＲＡ甘味料が効率よく得られる。
【００１１】
本発明の第１の態様は、下式
【化１】
（式中、Ｒ１およびＲ２は水素原子または下表
の糖鎖を表す。）
で示される新規なステビオール配糖体Ｉ〜Ｘである。
なお、式中の記号はそれぞれ以下の糖を表す。
glc：Ｄ−グルコピラノシル（D-glucopyranosyl）
rha：Ｌ−ラムノピラノシル（L-rhamnopyranosyl）
xyl: キシロピラノシル（xylopyranosyl）
また、Ｘはグルコース結合部位が未確定であることを示している。
【００１２】
本発明の第２の態様は、レバウディオサイドＡを主成分とする菊科植物ステビア・レバウディアナ・ベルトニーの植物体またはその乾燥葉を水、または含水溶媒で抽出して得られる、ステビオール配糖体Ｘ（レバウディオサイドＯ）を含む抽出物である。
【００１３】
本発明の第３の態様は、上記態様の抽出物から再結晶等により、ステビオール配糖体Ｘ（レバウディオサイドＯ）を含む高純度レバウディオサイドＡを得る方法である。
【００１４】
本発明の第４の態様は、上記第２の態様の方法で得られた抽出物を食品に対して１％以下添加する食品の製造方法である。
【００１５】
本発明の第５の態様は、上記第３の態様で得られた高純度レバウディオサイドＡを食品に対して１％以下添加する食品の製造方法である。
【００１６】
ＳＴを主成分とする原料品種から得られた抽出物にはステビオール配糖体Ｘが存在しないが、ＲＡを主成分とする原料品種から得られた抽出物は配糖体Ｘが存在することからＳＴ、ＲＡのいずれを主成分とする原料品種かの判定が可能となる。つまり、ＳＴを主成分とする品種から得られた抽出物よりＳＴを結晶化により除去しＲＡを主成分とする抽出物、またはそれらから再結晶により得られた高純度製品には配糖体Ｘが存在しないことから原料品種の確認が可能となる。本発明の第６の態様はステビオール配糖体Ｘによるステビア品種確認方法である。
【００１７】
本発明の第７の態様は、高速液体クロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣ）によるステビオール配糖体Ｉ〜Ｘの分析方法である。
【００１８】
これら目的を達成するために本発明者らはＲＡ主成分とする品種、並びに特願２００１−２００９４４号、特願２００７−５０６００４号などの品種に含まれる甘味成分を探索し、新規甘味成分を見出しその化学構造を決定した。さらにこれら成分が甘味料として有用であることを確認すると共に、それらの成分による品種確認方法、分析方法を完成させた。
【００１９】
新規成分の確認は実施例１におけるＲＡを主成分とする品種（以下Ａ品種）、特願２００１−２００９４４号（以下Ｂ品種）、特願２００７−５０６００４号（以下Ｃ品種）の乾燥葉から水、または含水有機溶媒にて抽出を行う。
次いで抽出液をそのまま濃縮するか、または必要に応じて陽イオン交換樹脂、陰イオン交換樹脂、活性炭等でイオン性不純物を除去し、吸着樹脂に甘味成分を吸着させ親水性溶媒で溶離して，必要に応じて溶離液を再度陽イオン交換樹脂、陰イオン交換樹脂、活性炭等で処理し、溶離液を濃縮、乾燥して得られた抽出物、またはその他脱色等の慣用精製手段を適宣施すことにより得られた抽出物でも確認ができる。
【００２０】
後記実施例１（１）で得られたＲＡ-Ｃ抽出物の新規ステビオール配糖体を実施例５に従って高速液体クロマトグラフィー質量分析装置にて分離、質量分析することにより、各配糖体の構造
【化２】
（式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ水素原子または前記の糖鎖を示す）
を決定した。
ステビオール配糖体Ｉ（ズルコサイドＢ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムの保持時間（以下Ｒ．Ｔ．）13分付近に確認される分子量788の構造を有する配糖体である。
ステビオール配糖体II（レバウディオサイドＧ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムのＲ．Ｔ．15分付近に確認される分子量804の構造を有する配糖体である。
ステビオール配糖体III（レバウディオサイドＩ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムのＲ．Ｔ．28分付近に確認される分子量1112の構造を有する配糖体である。
ステビオール配糖体IV（レバウディオサイドＨ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムのＲ．Ｔ．29分付近に確認される分子量1128の構造を有する配糖体である。
ステビオール配糖体Ｖ（レバウディオサイドＬ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムのＲ．Ｔ．34分付近に確認される分子量1112の構造を有する配糖体である。
ステビオール配糖体VI（レバウディオサイドＫ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムのＲ．Ｔ．34分付近に確認される分子量1112の構造を有する配糖体である。
ステビオール配糖体VII（レバウディオサイドＪ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムのＲ．Ｔ．35分付近に確認される分子量1128の構造を有する配糖体である。
ステビオール配糖体VIII（レバウディオサイドＭ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムのＲ．Ｔ．35分付近にレバウディオサイドＤと重複して確認される分子量1290の構造を有する配糖体である。
ステビオール配糖体IX（レバウディオサイドＮ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムのＲ．Ｔ．43分付近に確認される分子量1274の構造を有する配糖体である。
ステビオール配糖体Ｘ（レバウディオサイドＯ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムのＲ．Ｔ．51分付近に確認される分子量1436の構造を有する配糖体である。ただし、上記のＲ．Ｔ．はグラジエント溶出による分析の為に変動することは当業者が周知の通りである。
【００２１】
上述の通り、最終製品におけるステビオール配糖体Ｘの存在の有無は原料品種の特定に重要な情報を提供することとなる。
同時にこれら新規ステビオール配糖体は高速液体クロマトグラフィーにより確認することができるので、甘味料として使用する場合にもそれら甘味成分の存在を把握することにより総合的な味質管理および／または品質管理が可能となる。
【００２２】
得られた抽出物、及びその結晶はキャンデー、ゼリー、飲料、粉末飲料、インスタント麺、ジャム、冷菓、チューインガム、和菓子、健康食品、チョコレート、卓状甘味料、焼き菓子、珍味，水練り食品、乳酸飲料、乳酸菌飲料、コーヒー飲料、ココア飲料、茶飲料、リキュール、ワイン、シャーベット、シリアル食品、植物繊維含有食品、ソース、醤油、味噌、食酢，ドレッシング、マヨネーズ、ケチャップ、カレー、スープ、米菓、アラレ類、パン類、ビスケット、クラッカー、ホットケーキの素、果物缶詰、野菜缶詰、食肉製品、魚肉練り製品、塩性食品、漬物、複合調味料、嗜好性食品、化粧品などに甘味料として使用することが出来、カロリー低下、糖類削減、融点降下、甘味質改善、およびマスキング効果等が得られ、また他の天然、人工甘味料、希釈剤等をさらに添加することもできる。
【実施例】
【００２３】
実施例１ ＲＡ抽出物の製造
（１）抽出
ＲＡを主成分とするＡ品種、同Ｂ品種、同Ｃ品種から得られた乾燥葉各１００ｇを２０倍量の水で甘味が感じられなくなるまで数回抽出した。抽出液を吸着樹脂(ダイヤイオンＨＰ−２０)３００ml充填したカラムに通して甘味成分を吸着させ、十分水洗後メタノール９００mlで溶離した。イオン交換樹脂（ダイヤイオンWA-30）２００mlを充填したカラムに当該溶離液を通し、通過液に活性炭１０ｇを加え攪拌した。混合物を濾過し、濃縮、乾燥して淡黄白色のレバウディオサイドＡを主成分とするＲＡ-Ａ抽出物１３．０ｇ（ＳＴ３５．４%、ＲＡ４１．７％、ＲＣ９．８％）、ＲＡ-Ｂ抽出物１１．５ｇ（ＳＴ１９．５%、ＲＡ５８．１％、ＲＣ８．８％）およびＲＡ-Ｃ抽出物１２ｇ（ＳＴ５．４%、ＲＡ７２．３％、ＲＣ８．１％）をそれぞれ得た。
（２）ＲＡ再結晶
上記のＲＡ-Ｂ抽出物、ＲＡ-Ｃ抽出物５ｇを１０倍量の９0％メタノールに加熱溶解した後に、４℃に６日間冷却放置し、得られた結晶を分離し、冷メタノールで洗浄後、減圧乾燥し、白色のＲＡ-Ｂ結晶３．９ｇ（ＳＴ０．２%、ＲＡ９５．０％、ＲＣ０．２％）およびＲＡ-Ｃ結晶４．５ｇ（ＳＴ０．２%、ＲＡ９５．６％、ＲＣ０．1％）をそれぞれ得た。
【００２４】
実施例２ ＳＴ抽出物の製造
比較のためにＳＴを主成分とする品種からも同様の処理をしてＳＴ抽出物１１．３ｇ（ＳＴ５１．９％、ＲＡ２３．７％、ＲＣ７．４％）を得た。
【００２５】
実施例３ ＲＡ-Ａ母液、ＳＴ母液
上記のＲＡ-Ａ抽出物およびＳＴ抽出物各１０ｇを１０倍量の９0％メタノール水溶液に加熱溶解した後に、４℃に６日間冷却放置し、得られた結晶を分離し、冷９８％メタノールで洗浄後、減圧乾燥し、ステビオサイドの白色結晶であるＲＡ-ＳＴ結晶を２．１ｇおよびＳＴ−ＳＴ結晶３.８ｇをそれぞれ得た。ＲＡを主成分とするＲＡ-Ａ母液８．8ｇ（ＳＴ１５．７%、ＲＡ４3．８％、ＲＣ６．９％）およびＳＴ母液６．1ｇ（ＳＴ２０．０%、ＲＡ３７.1％、ＲＣ１１．２％）を濃縮、乾燥して、それぞれ淡黄色のＲＡを主成分とする母液粉末を得た。
【００２６】
実施例４ ＲＡ−Ａ結晶、ＳＴ−ＲＡ結晶
実施例３の母液粉末をそれぞれ１０倍量の９0％にメタノール水溶液に加熱溶解し、４℃に６日間冷却放置し、得られた結晶を分離し、冷９８％メタノールで洗浄後、減圧乾燥し、白色のＲＡ-Ａ結晶２．２ｇ（ＳＴ１．６%、ＲＡ９０．４％、ＲＣ１．４％）およびＳＴ−ＲＡ結晶１．２ｇ（ＳＴ１．６%、ＲＡ９６．９％、ＲＣ１．４％）を得た。
【００２７】
実施例５ ステビオール配糖体の構造決定
下記の通り高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて、分析を行った。
各抽出物中のステビオール配糖体の分離は島津LC-10ADvp液体クロマトグラフを用い、カラムはTSKgel Amide-80（4.6 x 250 mm、東ソー）を用いて行った。溶媒は、アセトニトリルと水とを用い、60分でアセトニトリルと水の濃度が82:18から66:34になるようなグラジエント溶出を行った。流速は0.65ml/minで、カラム温度は40℃で、検出は210 nmの紫外線吸収スペクトルで行った。
分子量測定は、ウォーターズ Alliance HPLCシステム2695とウォーターズQuattro micro（トリプル四重極）エレクトロスプレーイオン化（ESI）-質量分析計を使用した。高速液体クロマトグラフィーは、カラムにTSKgel Amide-80（2.0 x 250 mm、東ソー）を用い、溶媒は、アセトニトリルと水とを用い、60分でアセトニトリルと水の濃度が82:18から66:34になるようなグラジエント溶出を行った。流速は0.2 ml/minで、カラム温度は40℃で行った。デゾルベーションガスには窒素ガスを、コリジョンガスにはアルゴンガスを用いた。キャピラリー電圧は、ステビオール配糖体の分析ではネガティブモードで 15.0 kVを用い、ABEE-オリゴ糖の分析ではポジティブモードで13.5 kVを用いた。コーン電圧およびMS/MS分析時のコリジョン電圧は、10〜80V の電圧を使用した。ソース温度は100℃、デゾルベーション温度は400℃、コーンガス流量は50 l/hr、デゾルベーションガス流量は900 l/hrで行った。
【００２８】
図１〜１０に各抽出物および結晶についてのＨＰＬＣ分析結果を示す。
下記の表１〜表９はそれぞれ図２〜１０に示したクロマトグラフィーの各ピークの分析結果を示す。
【表１】
【００２９】
【表２】
【００３０】
【表３】
【００３１】
【表４】
【００３２】
【表５】
【００３３】
【表６】
【００３４】
【表７】
【００３５】
【表８】
【００３６】
【表９】
【００３７】
上記の各表中で用いた略号は次の通りである。
ＰＫＮＯ：ピーク番号
Ｔ：時間（分）
Ａ：ピーク面積
Ｈ：ピーク高さ
ＣＯＮＣ：濃度（％）
Ｎ：配糖体名
ＴＯＴ：合計
Stev mono：ステビオールモノサイド
Stev bio：ステビオールビオサイド
Rebuso：ルブソサイド
Rebau：レバウディオサイド
Stev：ステビオサイド
Dulco：ズルコサイド
濃度は紫外線２１０ｎｍ吸収スペクトルのトータル面積から算出した濃度であり、含量を測定するには分子量補正をする必要がある。尚、クロマトグラム中のＩ〜Ｘは新規ステビオール配糖体Ｉ〜Ｘを示す。
【００３８】
実施例６ 味質の評価
各抽出物の０．０５％水溶液および結晶体の０．０３％水溶液をステビアの官能検査に周知した者１０人で評価し、その評価結果の平均を下記の表１０に示した。
評価は次の五段階で行った。
評価 5；大変良い、4：良い、3；普通、2；やや悪い、１；悪い
【表１０】
新規ステビオール配糖体II〜Ｘ（レバウディオサイドＧ〜Ｏ）を含む３種のＲＡ抽出物はまろやか味が３種のＲＡ結晶より優れているが、ＲＡ結晶はまろやか味以外の評価は３種のＲＡ抽出物より優れている。ＳＴ抽出物はまろやか味以外の評価はＳＴ−ＲＡ結晶より劣る。これらの結果から新規配糖体II〜Ｘはまろやか味に影響を与えることが分かる。
【００３９】
実施例７ 品種の確定
各抽出物または各結晶体をＨＰＬＣで分析すると、ＲＡを主成分とする品種（以下、ＲＡ品種）から得られた抽出物にはＳＴを主成分とする品種（以下、ＳＴ品種）から得られた抽出物に比較してレバウディオサイドＤが多く含有され、さらにステビオール配糖体Ｘ（レバウディオサイドＯ）が含まれている。そしてこのステビオール配糖体ＸはＲＡ品種の抽出物から精製して得られるＲＡ結晶体にも微量ながら含まれることが分かった。
一方、ＳＴ品種から得られた抽出物にはステビオール配糖体Ｘが含まれていない。当然ながら、ＳＴ品種から得られたＳＴ―ＲＡ結晶にもステビオール配糖体Ｘが含まれないことから、ステビオール配糖体Ｘの存在を確認すればＲＡ品種から得られた抽出物若しくはそれから得られる結晶体であることを確定できる。
【００４０】
実施例８ ステビオール配糖体の分析方法
上記実施例５に記載した高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）の測定条件から各ステビオール配糖体Ｉ〜Ｘを確認することができる。原則的にはＨＰＬＣ分析チャートのリテンションタイム（以下Ｒ．Ｔ．）からステビオール配糖体の存在を確認することができるが、必要であればそれら成分を分取して分子量を測定することにより各ステビオール配糖体Ｉ〜Ｘを確認することができる。
【００４１】
実施例９ テーブルシュガー
１）ＲＡ‐Ａ結晶体１ｇおよび粉糖９９ｇを混合してテーブルシュガーを調製した。
２）ＲＡ−Ｂ結晶体1ｇおよびエリスリトール ９９ｇを混合してテーブルシュガーを調製した。
３）ＲＡ−Ｃ結晶体１ｇおよびブドウ糖果糖液糖９９ｇを混合してテーブルシュガーを調製した。
【００４２】
実施例１０ 飴
ＲＡ−Ｃ抽出物０．３ｇ、パラチニット１００ｇおよび適量の香料にて飴を調製した。
【００４３】
実施例１１ ミルクゼリー
砂糖１５ｇ、ＲＡ−Ｂ抽出物０．０８ｇ、牛乳２５０ｇ、ゼラチン５ｇおよび適量のミルクフレーバーにてミルクゼリーを調製した。
【００４４】
実施例１２ スポーツ飲料
ＲＡ−Ｂ結晶体０．０７５％、乳酸カルシウム０．１１％、クエン酸０．０４５％、クエン酸三ナトリウム０．０３％、塩化マグネシウム０．０１５％、グルタミン酸０．００５５％および水９９．７２％でスポーツ飲料を調製した。
【００４５】
実施例１３ 炭酸飲料
ＲＡ−Ｂ結晶体０．０１２％、果糖８．４％、クエン酸０．６％、アルギニン０．１２％、イノシトール０．１％、カフェイン０．００２５％、パントテン酸カルシュウム０．００３４％、ナイアシンアミド０．００３％、ビタミンＢ6 ０．００２％，ビタミンＢ2 ０．００００９％、ビタミンＢ12 ０．０００００２％、適量の香料および水で１００％とし、炭酸ガスを注入して炭酸飲料を調製した。
【産業上の利用可能性】
【００４６】
本発明により提供される甘味料に含まれる新規ステビオール配糖体成分をＨＰＬＣにて測定することで、甘味料の製造において一定の甘味度、甘味質、まろやか味を有する甘味料その他食品を製造することができ、更に原料品種の推測が可能となって、ステビア品種に関する産地表示の適切性や権利侵害の判断が容易となる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規ステビオール配糖体、レバウディオサイドＡを多く含むステビア・レバウディアナ・ベルトニー品種に含まれる新規ステビオール配糖体とそれらを含む甘味料、食品、医薬品、医薬部外品、化粧品の製造、ステビア品種の確認、及び新規ステビオール配糖体分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ステビアは南米パラグアイを原産地とする菊科多年生植物で、学名をステビア・レバウディアナ・ベルトニー(Stevia Rebaudiana Bertoni)という。ステビアは砂糖の３００倍以上の甘味を持つ成分を含むので、この甘味成分を抽出して天然甘味料として用いる為に栽培されている。
ステビアの甘味成分としては、ステビオサイド(Ｃ３８Ｈ６０Ｏ１８)、レバウディオサイドＡ(Ｃ４４Ｈ７０Ｏ２３)、レバウディオサイドＣ、Ｄ、Ｅ、ズルコサイドＡ等が知られている。一般に栽培されているステビア品種では上記甘味成分の内ステビオサイド(以下、ＳＴ)が主成分で、ＳＴ１００重量部に対してレバウディオサイドＡ(以下、ＲＡ)の含有量は４０重量部程度、レバウディオサイドＣの含量はそれよりやや少ないが、品種によってはレバウディオサイドＣを主成分とするものなど様々である。
【０００３】
ＳＴは砂糖の３００倍の甘味度を有するので天然甘味料として食品工業界で広く用いられており、その甘味は比較的砂糖に似ているが、ＲＡと比較すると苦み等の不快味が後味に残ることが知られている。これに対して、ＲＡは良質の甘味質とＳＴに対して１.３倍〜１.５倍の甘味度を有するので、一般にはＳＴよりもＲＡの含有率の高いステビア甘味料が好ましいとされている。そこで、本発明者らは従来品種から交配選抜を繰り返して品種改良を行い、ＲＡに対してＳＴを少量しか含有しないステビア品種を得、それら品種から甘味料を開発した（例えば後記特許出願１参照）。
しかしながら、渋み、辛み、まろやか味等の舌で知覚される味の中でもまろやか味は非常に微妙である。微妙なまろやか味はＳＴとＲＡの比率のみに依存するものではなく、ステビアに含まれる種々の甘味成分の化学構造にグルコースを付加するとまろやか味が改善されることから、ステビア甘味成分にグルコースを付加してまろやか味、コク味を改善する方法が開発されている（後記特許文献２および３）。
【０００４】
従って、たとえ含有量は少なくてもステビアに含まれる未知成分を解析することは非常に重要なことであり、取り分けＳＴよりも多くのグルコースが付加した成分を把握し、それらに付加するグルコースを精査することは味質の管理上極めて重要である。
同時に原料である植物自身に含まれる甘味成分の種類により味質が左右されることから優れたステビア品種を開発してこれを利用するためには、含まれる甘味成分を細かく把握することが重要である。今後原料植物の改良はますます盛んとなるであろうが、開発された植物に含まれる甘味成分を丹念に特定することで品種改良結果を詳細に把握することが可能となる。
一方、新たに開発された植物品種については本発明者等が遺伝子を利用する品種確定方法（後記特許文献４および５）を開発しているが、これら原料植物から抽出加工された甘味料またはこれを利用した製品については原料植物を特定する手段がないのが実情であった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００２−２６２８２２号公報
【特許文献２】特公昭５７−１８７７９号公報
【特許文献３】特開平９−１０７９１３号公報
【特許文献４】特開２００３−００９８７８号公報
【特許文献５】ＰＣＴ国際公開ＷＯ０６／０９３２２９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従来、ステビア甘味料はＳＴとＲＡ、レバウディオサイドＡ、ズルコサイドＡ、ステビオールバイオサイドなどの５成分を分析して規格を定められてきたが、その他の未知成分に関しては何の知見も得られていなかった。また、甘味成分としては既知であっても分析方法が確定していないため、その存在を確認する方法がなかった。しかし最近では７成分のステビオール配糖体によるＪＥＣＦＡ規格が設定されるなど、ステビアに含まれる甘味成分を確認し、未知成分を明らかにしてそれら成分による微妙な味の影響を知る重要性が認識されるようになった。
本発明の目的はステビア品種に含まれる微量の甘味成分の構造を決定し、ステビア甘味料への味覚の影響を確認することである。
また、さらにはステビア甘味料およびこれを利用した製品について、原料となったステビア植物体を特定する手段を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らはＲＡを主成分とするステビア品種に含まれる新規ステビオール配糖体を検索し、味質に微妙な影響を与え得る新規ステビオール配糖体１０成分を見出した。さらには、それら成分が品種間で含有量に差があり、また特定の成分がＲＡを主成分とするステビア品種のみに存在する事実を見出してそれが当該植物由来甘味料のマーカーとして利用することが可能であることを確認し、本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のステビオール配糖体はＳＴ、ＲＡよりも多くのグルコースが付加した構造を有していて、これらを含むことによりコク味の優れたステビア甘味料が提供される。
また、本件発明によるステビオール配糖体Ｘを抽出物、結晶品で確認することにより用いた原料起源を推測できることから、最終製品を分析することで原料植物が特許等の権利に抵触するか否かの判断が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】ＲＡ−Ｃ抽出物のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【図２】ＲＡ−Ａ結晶のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【図３】ＲＡ−Ｂ結晶のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【図４】ＲＡ−Ｃ結晶のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【図５】ＲＡ−Ａ抽出物のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【図６】ＲＡ−Ｂ抽出物のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【図７】ＲＡ−Ｃ抽出物のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【図８】ＳＴ抽出物のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【図９】ＳＴ―ＳＴ結晶のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【図１０】ＳＴ−ＲＡ結晶のＨＰＬＣ分析チャートを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明で言うＲＡ主成分とするステビア品種はＳＴよりＲＡが多く含まれる品種、並びに特許出願２００１−２００９４４号、特願２００７−５０６００４号などに記載された品種で、乾燥葉より得られる抽出物はＳＴの含量よりＲＡの含量が高く、レバウディオサイドＤ（Ｒ−Ｄ）、ステビオール配糖体ＩＩＩ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、Ｘが含まれ、ＳＴ、ＲＡよりグルコースを多く付加した成分が含有されることによりコク味の優れた甘味料が得られる。更にそれらを再結晶すればＳＴ、ステビオール配糖体Ｘを極微量含む高純度のＲＡ甘味料が効率よく得られる。
【００１１】
本発明の第１の態様は、下式
【化１】
（式中、Ｒ１およびＲ２は水素原子または下表
の糖鎖を表す。）
で示される新規なステビオール配糖体Ｉ〜Ｘである。
なお、式中の記号はそれぞれ以下の糖を表す。
glc：Ｄ−グルコピラノシル（D-glucopyranosyl）
rha：Ｌ−ラムノピラノシル（L-rhamnopyranosyl）
xyl: キシロピラノシル（xylopyranosyl）
また、Ｘはグルコース結合部位が未確定であることを示している。
【００１２】
本発明の第２の態様は、レバウディオサイドＡを主成分とする菊科植物ステビア・レバウディアナ・ベルトニーの植物体またはその乾燥葉を水、または含水溶媒で抽出して得られる、ステビオール配糖体Ｘ（レバウディオサイドＯ）を含む抽出物である。
【００１３】
本発明の第３の態様は、上記態様の抽出物から再結晶等により、ステビオール配糖体Ｘ（レバウディオサイドＯ）を含む高純度レバウディオサイドＡを得る方法である。
【００１４】
本発明の第４の態様は、上記第２の態様の方法で得られた抽出物を食品に対して１％以下添加する食品の製造方法である。
【００１５】
本発明の第５の態様は、上記第３の態様で得られた高純度レバウディオサイドＡを食品に対して１％以下添加する食品の製造方法である。
【００１６】
ＳＴを主成分とする原料品種から得られた抽出物にはステビオール配糖体Ｘが存在しないが、ＲＡを主成分とする原料品種から得られた抽出物は配糖体Ｘが存在することからＳＴ、ＲＡのいずれを主成分とする原料品種かの判定が可能となる。つまり、ＳＴを主成分とする品種から得られた抽出物よりＳＴを結晶化により除去しＲＡを主成分とする抽出物、またはそれらから再結晶により得られた高純度製品には配糖体Ｘが存在しないことから原料品種の確認が可能となる。本発明の第６の態様はステビオール配糖体Ｘによるステビア品種確認方法である。
【００１７】
本発明の第７の態様は、高速液体クロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣ）によるステビオール配糖体Ｉ〜Ｘの分析方法である。
【００１８】
これら目的を達成するために本発明者らはＲＡ主成分とする品種、並びに特願２００１−２００９４４号、特願２００７−５０６００４号などの品種に含まれる甘味成分を探索し、新規甘味成分を見出しその化学構造を決定した。さらにこれら成分が甘味料として有用であることを確認すると共に、それらの成分による品種確認方法、分析方法を完成させた。
【００１９】
新規成分の確認は実施例１におけるＲＡを主成分とする品種（以下Ａ品種）、特願２００１−２００９４４号（以下Ｂ品種）、特願２００７−５０６００４号（以下Ｃ品種）の乾燥葉から水、または含水有機溶媒にて抽出を行う。
次いで抽出液をそのまま濃縮するか、または必要に応じて陽イオン交換樹脂、陰イオン交換樹脂、活性炭等でイオン性不純物を除去し、吸着樹脂に甘味成分を吸着させ親水性溶媒で溶離して，必要に応じて溶離液を再度陽イオン交換樹脂、陰イオン交換樹脂、活性炭等で処理し、溶離液を濃縮、乾燥して得られた抽出物、またはその他脱色等の慣用精製手段を適宣施すことにより得られた抽出物でも確認ができる。
【００２０】
後記実施例１（１）で得られたＲＡ-Ｃ抽出物の新規ステビオール配糖体を実施例５に従って高速液体クロマトグラフィー質量分析装置にて分離、質量分析することにより、各配糖体の構造
【化２】
（式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ水素原子または前記の糖鎖を示す）
を決定した。
ステビオール配糖体Ｉ（ズルコサイドＢ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムの保持時間（以下Ｒ．Ｔ．）13分付近に確認される分子量788の構造を有する配糖体である。
ステビオール配糖体II（レバウディオサイドＧ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムのＲ．Ｔ．15分付近に確認される分子量804の構造を有する配糖体である。
ステビオール配糖体III（レバウディオサイドＩ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムのＲ．Ｔ．28分付近に確認される分子量1112の構造を有する配糖体である。
ステビオール配糖体IV（レバウディオサイドＨ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムのＲ．Ｔ．29分付近に確認される分子量1128の構造を有する配糖体である。
ステビオール配糖体Ｖ（レバウディオサイドＬ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムのＲ．Ｔ．34分付近に確認される分子量1112の構造を有する配糖体である。
ステビオール配糖体VI（レバウディオサイドＫ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムのＲ．Ｔ．34分付近に確認される分子量1112の構造を有する配糖体である。
ステビオール配糖体VII（レバウディオサイドＪ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムのＲ．Ｔ．35分付近に確認される分子量1128の構造を有する配糖体である。
ステビオール配糖体VIII（レバウディオサイドＭ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムのＲ．Ｔ．35分付近にレバウディオサイドＤと重複して確認される分子量1290の構造を有する配糖体である。
ステビオール配糖体IX（レバウディオサイドＮ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムのＲ．Ｔ．43分付近に確認される分子量1274の構造を有する配糖体である。
ステビオール配糖体Ｘ（レバウディオサイドＯ）は図１の高速液体クロマトグラフィーのクロマトグラムのＲ．Ｔ．51分付近に確認される分子量1436の構造を有する配糖体である。ただし、上記のＲ．Ｔ．はグラジエント溶出による分析の為に変動することは当業者が周知の通りである。
【００２１】
上述の通り、最終製品におけるステビオール配糖体Ｘの存在の有無は原料品種の特定に重要な情報を提供することとなる。
同時にこれら新規ステビオール配糖体は高速液体クロマトグラフィーにより確認することができるので、甘味料として使用する場合にもそれら甘味成分の存在を把握することにより総合的な味質管理および／または品質管理が可能となる。
【００２２】
得られた抽出物、及びその結晶はキャンデー、ゼリー、飲料、粉末飲料、インスタント麺、ジャム、冷菓、チューインガム、和菓子、健康食品、チョコレート、卓状甘味料、焼き菓子、珍味，水練り食品、乳酸飲料、乳酸菌飲料、コーヒー飲料、ココア飲料、茶飲料、リキュール、ワイン、シャーベット、シリアル食品、植物繊維含有食品、ソース、醤油、味噌、食酢，ドレッシング、マヨネーズ、ケチャップ、カレー、スープ、米菓、アラレ類、パン類、ビスケット、クラッカー、ホットケーキの素、果物缶詰、野菜缶詰、食肉製品、魚肉練り製品、塩性食品、漬物、複合調味料、嗜好性食品、化粧品などに甘味料として使用することが出来、カロリー低下、糖類削減、融点降下、甘味質改善、およびマスキング効果等が得られ、また他の天然、人工甘味料、希釈剤等をさらに添加することもできる。
【実施例】
【００２３】
実施例１ ＲＡ抽出物の製造
（１）抽出
ＲＡを主成分とするＡ品種、同Ｂ品種、同Ｃ品種から得られた乾燥葉各１００ｇを２０倍量の水で甘味が感じられなくなるまで数回抽出した。抽出液を吸着樹脂(ダイヤイオンＨＰ−２０)３００ml充填したカラムに通して甘味成分を吸着させ、十分水洗後メタノール９００mlで溶離した。イオン交換樹脂（ダイヤイオンWA-30）２００mlを充填したカラムに当該溶離液を通し、通過液に活性炭１０ｇを加え攪拌した。混合物を濾過し、濃縮、乾燥して淡黄白色のレバウディオサイドＡを主成分とするＲＡ-Ａ抽出物１３．０ｇ（ＳＴ３５．４%、ＲＡ４１．７％、ＲＣ９．８％）、ＲＡ-Ｂ抽出物１１．５ｇ（ＳＴ１９．５%、ＲＡ５８．１％、ＲＣ８．８％）およびＲＡ-Ｃ抽出物１２ｇ（ＳＴ５．４%、ＲＡ７２．３％、ＲＣ８．１％）をそれぞれ得た。
（２）ＲＡ再結晶
上記のＲＡ-Ｂ抽出物、ＲＡ-Ｃ抽出物５ｇを１０倍量の９0％メタノールに加熱溶解した後に、４℃に６日間冷却放置し、得られた結晶を分離し、冷メタノールで洗浄後、減圧乾燥し、白色のＲＡ-Ｂ結晶３．９ｇ（ＳＴ０．２%、ＲＡ９５．０％、ＲＣ０．２％）およびＲＡ-Ｃ結晶４．５ｇ（ＳＴ０．２%、ＲＡ９５．６％、ＲＣ０．1％）をそれぞれ得た。
【００２４】
実施例２ ＳＴ抽出物の製造
比較のためにＳＴを主成分とする品種からも同様の処理をしてＳＴ抽出物１１．３ｇ（ＳＴ５１．９％、ＲＡ２３．７％、ＲＣ７．４％）を得た。
【００２５】
実施例３ ＲＡ-Ａ母液、ＳＴ母液
上記のＲＡ-Ａ抽出物およびＳＴ抽出物各１０ｇを１０倍量の９0％メタノール水溶液に加熱溶解した後に、４℃に６日間冷却放置し、得られた結晶を分離し、冷９８％メタノールで洗浄後、減圧乾燥し、ステビオサイドの白色結晶であるＲＡ-ＳＴ結晶を２．１ｇおよびＳＴ−ＳＴ結晶３.８ｇをそれぞれ得た。ＲＡを主成分とするＲＡ-Ａ母液８．8ｇ（ＳＴ１５．７%、ＲＡ４3．８％、ＲＣ６．９％）およびＳＴ母液６．1ｇ（ＳＴ２０．０%、ＲＡ３７.1％、ＲＣ１１．２％）を濃縮、乾燥して、それぞれ淡黄色のＲＡを主成分とする母液粉末を得た。
【００２６】
実施例４ ＲＡ−Ａ結晶、ＳＴ−ＲＡ結晶
実施例３の母液粉末をそれぞれ１０倍量の９0％にメタノール水溶液に加熱溶解し、４℃に６日間冷却放置し、得られた結晶を分離し、冷９８％メタノールで洗浄後、減圧乾燥し、白色のＲＡ-Ａ結晶２．２ｇ（ＳＴ１．６%、ＲＡ９０．４％、ＲＣ１．４％）およびＳＴ−ＲＡ結晶１．２ｇ（ＳＴ１．６%、ＲＡ９６．９％、ＲＣ１．４％）を得た。
【００２７】
実施例５ ステビオール配糖体の構造決定
下記の通り高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて、分析を行った。
各抽出物中のステビオール配糖体の分離は島津LC-10ADvp液体クロマトグラフを用い、カラムはTSKgel Amide-80（4.6 x 250 mm、東ソー）を用いて行った。溶媒は、アセトニトリルと水とを用い、60分でアセトニトリルと水の濃度が82:18から66:34になるようなグラジエント溶出を行った。流速は0.65ml/minで、カラム温度は40℃で、検出は210 nmの紫外線吸収スペクトルで行った。
分子量測定は、ウォーターズ Alliance HPLCシステム2695とウォーターズQuattro micro（トリプル四重極）エレクトロスプレーイオン化（ESI）-質量分析計を使用した。高速液体クロマトグラフィーは、カラムにTSKgel Amide-80（2.0 x 250 mm、東ソー）を用い、溶媒は、アセトニトリルと水とを用い、60分でアセトニトリルと水の濃度が82:18から66:34になるようなグラジエント溶出を行った。流速は0.2 ml/minで、カラム温度は40℃で行った。デゾルベーションガスには窒素ガスを、コリジョンガスにはアルゴンガスを用いた。キャピラリー電圧は、ステビオール配糖体の分析ではネガティブモードで 15.0 kVを用い、ABEE-オリゴ糖の分析ではポジティブモードで13.5 kVを用いた。コーン電圧およびMS/MS分析時のコリジョン電圧は、10〜80V の電圧を使用した。ソース温度は100℃、デゾルベーション温度は400℃、コーンガス流量は50 l/hr、デゾルベーションガス流量は900 l/hrで行った。
【００２８】
図１〜１０に各抽出物および結晶についてのＨＰＬＣ分析結果を示す。
下記の表１〜表９はそれぞれ図２〜１０に示したクロマトグラフィーの各ピークの分析結果を示す。
【表１】
【００２９】
【表２】
【００３０】
【表３】
【００３１】
【表４】
【００３２】
【表５】
【００３３】
【表６】
【００３４】
【表７】
【００３５】
【表８】
【００３６】
【表９】
【００３７】
上記の各表中で用いた略号は次の通りである。
ＰＫＮＯ：ピーク番号
Ｔ：時間（分）
Ａ：ピーク面積
Ｈ：ピーク高さ
ＣＯＮＣ：濃度（％）
Ｎ：配糖体名
ＴＯＴ：合計
Stev mono：ステビオールモノサイド
Stev bio：ステビオールビオサイド
Rebuso：ルブソサイド
Rebau：レバウディオサイド
Stev：ステビオサイド
Dulco：ズルコサイド
濃度は紫外線２１０ｎｍ吸収スペクトルのトータル面積から算出した濃度であり、含量を測定するには分子量補正をする必要がある。尚、クロマトグラム中のＩ〜Ｘは新規ステビオール配糖体Ｉ〜Ｘを示す。
【００３８】
実施例６ 味質の評価
各抽出物の０．０５％水溶液および結晶体の０．０３％水溶液をステビアの官能検査に周知した者１０人で評価し、その評価結果の平均を下記の表１０に示した。
評価は次の五段階で行った。
評価 5；大変良い、4：良い、3；普通、2；やや悪い、１；悪い
【表１０】
新規ステビオール配糖体II〜Ｘ（レバウディオサイドＧ〜Ｏ）を含む３種のＲＡ抽出物はまろやか味が３種のＲＡ結晶より優れているが、ＲＡ結晶はまろやか味以外の評価は３種のＲＡ抽出物より優れている。ＳＴ抽出物はまろやか味以外の評価はＳＴ−ＲＡ結晶より劣る。これらの結果から新規配糖体II〜Ｘはまろやか味に影響を与えることが分かる。
【００３９】
実施例７ 品種の確定
各抽出物または各結晶体をＨＰＬＣで分析すると、ＲＡを主成分とする品種（以下、ＲＡ品種）から得られた抽出物にはＳＴを主成分とする品種（以下、ＳＴ品種）から得られた抽出物に比較してレバウディオサイドＤが多く含有され、さらにステビオール配糖体Ｘ（レバウディオサイドＯ）が含まれている。そしてこのステビオール配糖体ＸはＲＡ品種の抽出物から精製して得られるＲＡ結晶体にも微量ながら含まれることが分かった。
一方、ＳＴ品種から得られた抽出物にはステビオール配糖体Ｘが含まれていない。当然ながら、ＳＴ品種から得られたＳＴ―ＲＡ結晶にもステビオール配糖体Ｘが含まれないことから、ステビオール配糖体Ｘの存在を確認すればＲＡ品種から得られた抽出物若しくはそれから得られる結晶体であることを確定できる。
【００４０】
実施例８ ステビオール配糖体の分析方法
上記実施例５に記載した高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）の測定条件から各ステビオール配糖体Ｉ〜Ｘを確認することができる。原則的にはＨＰＬＣ分析チャートのリテンションタイム（以下Ｒ．Ｔ．）からステビオール配糖体の存在を確認することができるが、必要であればそれら成分を分取して分子量を測定することにより各ステビオール配糖体Ｉ〜Ｘを確認することができる。
【００４１】
実施例９ テーブルシュガー
１）ＲＡ‐Ａ結晶体１ｇおよび粉糖９９ｇを混合してテーブルシュガーを調製した。
２）ＲＡ−Ｂ結晶体1ｇおよびエリスリトール ９９ｇを混合してテーブルシュガーを調製した。
３）ＲＡ−Ｃ結晶体１ｇおよびブドウ糖果糖液糖９９ｇを混合してテーブルシュガーを調製した。
【００４２】
実施例１０ 飴
ＲＡ−Ｃ抽出物０．３ｇ、パラチニット１００ｇおよび適量の香料にて飴を調製した。
【００４３】
実施例１１ ミルクゼリー
砂糖１５ｇ、ＲＡ−Ｂ抽出物０．０８ｇ、牛乳２５０ｇ、ゼラチン５ｇおよび適量のミルクフレーバーにてミルクゼリーを調製した。
【００４４】
実施例１２ スポーツ飲料
ＲＡ−Ｂ結晶体０．０７５％、乳酸カルシウム０．１１％、クエン酸０．０４５％、クエン酸三ナトリウム０．０３％、塩化マグネシウム０．０１５％、グルタミン酸０．００５５％および水９９．７２％でスポーツ飲料を調製した。
【００４５】
実施例１３ 炭酸飲料
ＲＡ−Ｂ結晶体０．０１２％、果糖８．４％、クエン酸０．６％、アルギニン０．１２％、イノシトール０．１％、カフェイン０．００２５％、パントテン酸カルシュウム０．００３４％、ナイアシンアミド０．００３％、ビタミンＢ6 ０．００２％，ビタミンＢ2 ０．００００９％、ビタミンＢ12 ０．０００００２％、適量の香料および水で１００％とし、炭酸ガスを注入して炭酸飲料を調製した。
【産業上の利用可能性】
【００４６】
本発明により提供される甘味料に含まれる新規ステビオール配糖体成分をＨＰＬＣにて測定することで、甘味料の製造において一定の甘味度、甘味質、まろやか味を有する甘味料その他食品を製造することができ、更に原料品種の推測が可能となって、ステビア品種に関する産地表示の適切性や権利侵害の判断が容易となる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式
【化１】
（式中、Ｒ１およびＲ２は水素原子または下表
の糖鎖を表す。）
で示されるステビオール配糖体Ｉ〜Ｘ。
【請求項２】
レバウディオサイドＡを主成分とする菊科植物ステビア・レバウディアナ・ベルトニーの抽出物であって、ステビオール配糖体Ｘを含む抽出物。
【請求項３】
請求項２に記載の抽出物から高純度レバウディオサイドＡを得る製造方法。
【請求項４】
請求項２に記載の抽出物を１％以下添加することを特徴とする、食品の製造方法。
【請求項５】
請求項３に記載の製造法により得られた高純度レバウディオサイドＡを１％以下添加することを特徴とする、食品の製造方法。
【請求項６】
ステビオール配糖体Ｘによるステビア品種確認方法。
【請求項７】
ステビオール配糖体Ｉ〜Ｘの分析方法。
【請求項１】
下式
【化１】
（式中、Ｒ１およびＲ２は水素原子または下表
の糖鎖を表す。）
で示されるステビオール配糖体Ｉ〜Ｘ。
【請求項２】
レバウディオサイドＡを主成分とする菊科植物ステビア・レバウディアナ・ベルトニーの抽出物であって、ステビオール配糖体Ｘを含む抽出物。
【請求項３】
請求項２に記載の抽出物から高純度レバウディオサイドＡを得る製造方法。
【請求項４】
請求項２に記載の抽出物を１％以下添加することを特徴とする、食品の製造方法。
【請求項５】
請求項３に記載の製造法により得られた高純度レバウディオサイドＡを１％以下添加することを特徴とする、食品の製造方法。
【請求項６】
ステビオール配糖体Ｘによるステビア品種確認方法。
【請求項７】
ステビオール配糖体Ｉ〜Ｘの分析方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【公表番号】特表２０１２−５０４５５２（Ｐ２０１２−５０４５５２Ａ）
【公表日】平成２４年２月２３日（２０１２．２．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５１４９０９（Ｐ２０１１−５１４９０９）
【出願日】平成２１年１０月２日（２００９．１０．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００９／０６７５８５
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０３８９１１
【国際公開日】平成２２年４月８日（２０１０．４．８）
【出願人】（３９００００６９７）守田化学工業株式会社 (3)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年２月２３日（２０１２．２．２３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１０月２日（２００９．１０．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００９／０６７５８５
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０３８９１１
【国際公開日】平成２２年４月８日（２０１０．４．８）
【出願人】（３９００００６９７）守田化学工業株式会社 (3)
【Ｆターム（参考）】
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