炎症性疾患治療のための大環状ラクトン誘導体の使用
本発明は、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための、式（１）で表される化合物（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4は、明細書中に記載の通りである）、全ての式（１）で表される化合物の立体異性体及び互変異性体、及び全ての比率のこれらの混合物、及びそれらの薬理学的に許容される塩、薬理学的に許容される溶媒和物、薬理学的に許容される多形体及びプロドラッグ、及びこれらを含有する医薬組成物の使用を提供する。また、本発明は、炎症性疾患の治療での使用に適した医薬組成物に関する。本発明は更に、式（１）の化合物又は該医薬組成物の治療有効量を、それを必要とする哺乳類に投与することによる、炎症性疾患の治療方法を提供する。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、本出願と同じ日付で出願された「癌治療のための大環状ラクトン誘導体（ＭＡＣＲＯＣＹＣＬＩＣ ＬＡＣＴＯＮＥ ＤＥＲＩＶＡＴＩＶＥＳ ＦＯＲ ＴＨＥ ＴＲＥＡＴＭＥＮＴ ＯＦ ＣＡＮＣＥＲ）」と題された本出願人の同時係属中であるＰＣＴ出願に関する。
（発明の分野）
本発明は、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための、大環状ラクトン誘導体、及び大環状ラクトン誘導体を含有する医薬組成物の使用に関する。
（発明の背景）
炎症は、感染又は組織損傷に対する身体の生物学的反応である。炎症は、生理学的条件下において、身体が侵入する病原体を排除し損傷した組織を治癒するための主要な手段である。異常炎症反応は、組織の損傷、及び破壊をもたらす可能性がある。慢性の制御されない炎症は、関節リウマチ、変形性関節症、乾癬、アテローム性動脈硬化症、ぜんそく、及び（潰瘍性大腸炎及びクローン病を含む）炎症性腸疾患などの疾病をもたらす可能性がある。
【０００２】
自己免疫疾患である関節リウマチ（ＲＡ）は、慢性の全身性関節炎疾患である。炎症過程を原因とする関節の腫れ及び痛みに加え、ＲＡの最終的な顕著な特徴は関節の破壊である。実際に、ＲＡでは、正常では薄い関節の滑膜被覆は、軟骨と骨の両方に対して破壊的である炎症性の高度に血管新生化した浸潤性フィブロコラゲナーゼ組織（パンヌス）に置き換えられる。ＲＡの顕著な症状は、滑膜関節に生じる。ＲＡにおける軟骨破壊は、炎症誘発性サイトカイン［腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、及びその他のインターロイキン（ＩＬ−１β、及びＩＬ−８）を含む］の異常産生、及び患部関節における成長因子の発現と関係している。
【０００３】
乾癬は、自己免疫性／炎症性疾患であり、乾癬の病因は依然として未知のままであり、乾癬においてＴ細胞が破壊的役割を果たしていることが確立されている。皮膚に流れるリンパ節内で抗原提示細胞によって活性化されると、Ｔ細胞は、皮膚内に移動する。乾癬性病変において、Ｔ細胞は１型サイトカイン［例えば、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、及びインターフェロン−γ（ＩＦＮ−α）］を放出し、近辺の白血球を刺激する。分泌された炎症誘発性メディエータ（例えば、ＴＮＦ−α）は、ケラチノサイトの過剰増殖を促し、ケラチノサイトの過剰増殖によって乾癬プラークにおける炎症性損傷を増大させる。
【０００４】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、腸の炎症を引き起こす一群の疾患である。炎症は、長期間続き、通常は再発する。ＩＢＤの２つ主要な型は、クローン病と潰瘍性大腸炎である。クローン病は、腸の内膜及び壁が炎症を起こし、その結果潰瘍が生じるときに発症する。クローン病は消化器系のいずれの部分にも生じ得るが、多くの場合、結腸につながる小腸の下方部分に生じる。潰瘍性大腸炎は、大腸を侵す病因不明の慢性の自己免疫性／炎症性疾患である。大腸炎をもたらし且つ持続させる初期事象も、および一連の伝播事象も、まだ完全には解明されていない。しかしながら、正常の胃腸グラム−陰性菌の構成成分が関与する免疫反応の機能不全、及び炎症性サイトカイン、ケモカイン、内皮細胞接着分子（ＥＣＡＭ）の発現の増加、及び結腸間質への白血球浸潤の拡大が、大腸炎の発症に重要な役割を果たしていることが確立されている。本疾病の経過は、連続的又は再発性、軽症又は
重症であり得る。本疾病の兆候及び症状は、筋けいれん、下腹痛、直腸出血、及び少量の糞便粒子と供に主として血液、膿汁、及び粘液からなる頻繁な緩い排泄物を含む。
【０００５】
炎症性疾患の治療の第一方針は、イブプロフェン、ナプロキセンなどの非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を使用して、痛みなどの症状を和らげることを含む。しかし、ＮＳＡＩＤは胃びらんの原因となることが知られているため、ＮＳＡＩＤの使用が広まっているにも拘わらず、多くの人々が疾患を治療するために必要な投与量に長期にわたって耐えることができない。その上、ＮＳＡＩＤは疾患の症状を治療するだけで、原因を治療しない。患者がＮＳＡＩＤに反応しない場合、メトトレキサート、金塩類、Ｄ−ペニシラミン、及びコルチコステロイドなどのその他の薬物を使用する。これらの薬物もまた、顕著な毒性効果を有する。
【０００６】
炎症性疾患をもたらす分子事象の理解の深まりは、病因を標的とした新しい手法をもたらした。種々の炎症性疾患をもたらし及び持続させる全体的な一連の発症事象はまだ完全に明らかにされていないが、炎症誘発性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−１β）の環境が、関節リウマチ、変形性関節症、乾癬、アテローム性動脈硬化症、ぜんそく、及び（潰瘍性大腸炎及びクローン病を含む）炎症性腸疾患などの炎症性疾患の発症において重要な役割を果たしていることが確立されている。実際に、炎症（例えば、ＲＡ／大腸炎／乾癬）の動物モデルを使用した幾つかの研究、及びより重要には、活動性のＲＡ／大腸炎／乾癬に罹患した患者を対象とした臨床関連の研究で、例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−１βなどのサイトカインは、患者の炎症組織並びに末梢血の両方において高レベルで発現することが示された。例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−１βなどの炎症誘発性媒介物質は、微少血管内皮に接着分子の発現を誘導し／上方制御し、炎症性白血球の補充及び浸潤をもたらす。さらに、ＲＡの状態では、例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−１βなどのサイトカインは、活性化破骨細胞のおかげで、炎症の永続化に関与し、最終的には軟骨分解及び骨侵食をもたらす。
【０００７】
多面発現性サイトカインであるＴＮＦ−αは、主としてマクロファージにより生成される。ＴＮＦ−αは、有益な活性並びに病理学的活性を示す。ＴＮＦ−αは、自己制御を行う他、成長刺激効果及び成長抑制特性の両方を有する。ＴＮＦ−αは、種々の自己免疫性／炎症性疾患に寄与する種々の遺伝子の発現を誘導する。
【０００８】
ＴＮＦ−αは、先天性及び後天性の免疫反応において重要な役割を果たすが、ＴＮＦ−αの産生の増加は、慢性炎症、及び組織損傷をもたらす病理学的変化を引き起こすことができる。ＴＮＦ−αは、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、冠状動脈性心疾患、血管炎、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、成人呼吸窮迫症候群、糖尿病、乾癬、皮膚遅延型過敏症疾患、及びアルツハイマー病などの多くの慢性炎症性疾患の発症に非常に重要な役割を果たすことが示されている。具体的な実施例として、ＴＮＦ−αはＲＡにおける炎症誘発性サイトカイン・ネットワークの頂点にあることが十分に認識されている。実際に、ＴＮＦ−αは、その他のサイトカインの産生を制御し、滑膜における炎症／免疫反応を編成する。ＴＮＦ−αが、その他のサイトカインの産生を制御し、滑膜における炎症／免疫反応を編成することと一致して、脱調節化ＴＮＦ遺伝子を有するトランスジェニックマウスは、慢性炎症性関節炎を自然発症し、ＴＮＦ−αの中和はＲＡの動物モデルにおける炎症性関節炎の発症及び重症度を低減する。これらの研究や幾つかのその他の研究は、ＲＡ（さらに乾癬及びＩＢＤなどのその他の疾病）における異常免疫／炎症反応を制御することにおいて、ＴＮＦ−αが魅力的な治療標的であることを示した。最も重要には、活動性のＲＡ、乾癬、及びＩＢＤを治療するための臨床的に承認された治療法は、ＴＮＦ−α阻害物質［エタネルセプト（エンブレル（Ｅｎｂｒｅｌ））、インフリキシマブ（レミケード（Ｒｅｍｉｃａｄｅ））、及びアダリムマブ（ヒュミラ（Ｈｕｍｉｒａ）
）］を含む。これらのＴＮＦ−α阻害物質の使用が広まっているにも拘わらず、ＴＮＦ遮断剤で治療を受けた患者の５０％以下で、病状の著しい改善が見られない。さらに、（ＲＡ患者における）この治療法の目的は、病気の寛解を達成し関節破壊を止めることであるが、ＴＮＦ−αを標的とした従来の生物学的製剤は、一定割合のＲＡ患者では病気の進行を止めるが、全てのＲＡ患者の病気の進行を止めないことが示されている。
【０００９】
インターロイキン−６（ＩＬ−６）は、概説されているように（Ｂｌｏｏｄ，７４（１），１−１０，（１９８９））、宿主防御に伴う免疫反応、炎症、造血、発癌を調節する多面発現性サイトカインである。
【００１０】
ＩＬ−６は、炎症性疾患、多発性骨髄腫、形質細胞腫、キャッスルマン病、多クローン性Ｂ細胞活性化、Ｔ細胞増殖、自己免疫疾患、ＡＩＤＳ、成人呼吸窮迫症候群、癌、糖尿病、虚血−再潅流傷害、多発性硬化症、関節リウマチ、及びＳＬＥにおける媒介物質として関係づけられている（Ｂｌｏｏｄ，７４（１），１−１０，（１９８９））。近年、ＩＬ−６の過剰産生はＲＡの発症に深く関与することが蓄積されている。従って、このサイトカインの機能の調節が、ＲＡ、及びその他の慢性の難治性自己免疫／炎症性疾患に対して有効である可能性があり得る。実際に、抗インターロイキン６受容体抗体治療は、ＩＬ−６トランスジェニックマウスおいて、及びＤＢＡ／１Ｊマウスのコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）において、顕著な有効性を示している（Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，５９（ｓｕｐｐｌ １），ｉ２１−ｉ２７（２０００））。
【００１１】
ＴＮＦ−αに対する生物学的阻害物質の治療における成功は、その他の標的の生物学的修飾物質の開発を推進した。近年、可溶性ＩＬ−６受容体及び膜結合ＩＬ−６受容体の両方に結合するヒト化抗体であるトシリズマブは、関節リウマチの臨床試験において並外れた治療有効性を示している。トシリズマブは、日本では活動性ＲＡ患者の治療用として認可されおり、またＦＤＡの諮問委員会の認可も得ている。このデータに基づいて、インターロイキン−６は、新しい治療標的として推薦される（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，８（ｓｕｐｐｌ ２），Ｓ５，（２００６））。トシリズマブとは別に、トシリズマブのような生物学的薬剤の使用は、重要な制限（例えば、非経口の投与経路、高額な治療費用、日和見感染症のリスク、アレルギー反応の誘発、潜伏結核の活性化、癌リスクの上昇、欝血性心臓疾患を悪化させるリスク）と関連する。したがって、生物学的薬剤と同じ効果を有するが望ましくない副作用は伴わない、ＩＬ−６／ＴＮＦ−αの低分子阻害物質の必要性は満たされていない。
【００１２】
ＩＬ−６産生のブロッキング及び／又はＩＬ−６の中和により、ＩＬ−６の生物活性への介在を達成することができる（Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，５９（ｓｕｐｐｌ １），ｉ２１−ｉ２７（２０００））。
【００１３】
関節リウマチ、炎症性疾患、及びその他の炎症状態の病因は、無阻害のＴ−細胞増殖によっても特徴づけられる（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，３５：７２９−７３５，（１９９２））。注目を集めている１つの部類の化合物は、Ｔ−細胞増殖を阻害する化合物である。Ｔ細胞活性化が抑制されると、Ｔ細胞増殖、並びにリウマチ又は滑膜環境における単核細胞マクロファージ系の活性化に関係づけられるＴｈ１サイトカインの産生が制限される（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４（ｓｕｐｐｌ ３）：Ｓ１９７−Ｓ２１１，（２００２））。
【００１４】
Ｔ細胞活性化は、その効果又は機能を支援する特定のタンパク質の発現を特徴とする。発現する第１タンパク質の中に、インターロイキン−２（ＩＬ−２）とＩＬ−２受容体αのサブユニットがある。ＩＬ−２は、Ｔ細胞増殖のために必要とされる強力なＴ細胞分裂
促進因子である。ＩＬ−２シグナル伝達は、Ｔ細胞にとって免疫反応を開始するために必要とされる。ＩＬ−２は、Ｔ細胞活性化において、抗原に刺激されたばかりのＴ細胞の成長、増殖、及び分化を促進するために、自己分泌に作用する強力なＴ細胞成長サイトカインである。実際に、不適切なシグナル伝達を受容するＴ細胞は、反応不顕性、即ち、不活性となる。これは、Ｔ細胞がＩＬ−２を合成できないようにすることにより達成される。Ｔ細胞がＩＬ−２を合成できないようにすることにより、Ｔ細胞を将来受容し得るいかなる抗原刺激に対しても潜在的に不活性な状態にする。臨床的に、シクロスポリン、ＦＫ５０６、及びラパマイシンなどの化合物は、異なる経路を介してこのＩＬ−２シグナル伝達をブロッキングすることにより連続的な抗原刺激に対してアネルギーを生じさせることが知られている。
【００１５】
Ｔ細胞上に発現する主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）対立遺伝子と滑膜マクロファージとの間の強力な連携が、関節リウマチの進行を決定する。このようなＴ細胞エフェクター応答は、滑膜細胞マクロファージ及び樹枝状細胞上の抗原発現によって起こる。接触媒介Ｔ細胞の単核細胞相互作用により、滑膜細胞の接合部で炎症誘導性サイトカインカスケードの刺激が起こる（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４（ｓｕｐｐｌ ３）：Ｓ１６９−Ｓ１７６，（２００２））。Ｔ細胞はさらに、刺激の種類に基づいて、１型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ１）と２型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ２）に分化する。１型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ１）と２型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ２）は、それらのサイトカイン発現プロファイルに基づいて特徴づけられる。Ｔｈ１細胞はＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αを分泌し、これに対して、Ｔｈ２細胞はＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１０を分泌する（Ｎａｔｕｒｅ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，７（３）：２４７−２５５，（２００６））。
【００１６】
Ｔｈ１細胞は、マクロファージ活性化を高め、炎症細胞カスケードの更なる活性化を起こす。このシグナル伝達は、両方の細胞型の細胞表面上に発現する共刺激分子（Ｂ７．１、Ｂ７．２、Ｂ７．３）間の相互作用によって高められる。これらの相互作用は、ＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αの分泌を伴う（Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２（３）：２６９−２７４，（２００１））。全ての増殖Ｔ細胞は構成的にＩＬ−２を発現し、従って、これらのサイトカインを阻害することにより、任意の炎症状態の進行に対する推定上の負のシグナルが提供される。
【００１７】
従って、Ｔ細胞増殖をブロッキングする化合物は、炎症性疾患を抑制する可能性が高い。Ｔ細胞増殖をブロッキングするような化合物は、免疫抑制特性も示し得る。ＦＫ５０６（タクロリムス）は、具体的にはＴ細胞活性化を抑止する免疫抑制剤である。ＦＫ５０６は、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）と称される細胞内タンパク質に結合した後、該免疫抑制効果を発揮する（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４０，１２５６−１２６５，（１９８７）、Ｊ．ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１３９，１７９７−１８０３，（１９８７））。ＦＫ５０６はまた、ＣＩＡの治療においても効果的であった。場合により、ＦＫ５０６は、Ｔ細胞活性化及びその後のＴＮＦ−αなどの炎症性サイトカインの産生を阻害することにより、ＣＩＡにおける足の腫れを抑止し並びに骨及び軟骨の破壊を防止する。
【００１８】
本発明に記載の化合物は、Ｔ−細胞増殖を阻害し、サイトカインの産生をブロックする。Ｔ−細胞増殖を阻害し、サイトカインの産生をブロックする効果は、治療有効性に貢献し得る。
【００１９】
転写コアクチベーターは、真核転写において非常に重要な役割を有する。マクロファージの転写因子を活性化できる因子の１つは、細菌リポ多糖（ＬＰＳ）である。ＬＰＳなどの細菌内毒素は、マクロファージ活性化の誘導因子の１つとして知られている。マクロファージの活性化は、例えば、関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、及びその他の疾病などの、幾つかの炎症状態の増大に関与する。マクロファージのＬＰＳ活性化は、Ｔｏｌｌ
様受容体４（ＴＬＲ４）を誘発する。ＴＬＲ４は、ヒトにおいてＴＬＲ４遺伝子によってコードされるタンパク質である。ＴＬＲ４シグナル伝達及びＴＬＲの活性化は、炎症誘導性遺伝子発現の誘発と関連する。
【００２０】
また、ＬＰＳは、ＩｋＢキナーゼ複合体（ＩＫＫ）を介して転写因子核因子−ｋＢ（ＮＦ−ｋＢ）を活性化する。ＮＦ−ｋＢは、炎症及び宿主反応を制御する転写因子である（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｖｏｌ．２８１，Ｎｏ．４１，３１１４２−３１１５１，（２００６））。核転写因子の大きなファミリーであるＮＦ−ｋＢの他、インターフェロン制御因子（ＩＲＦ）が、炎症誘導性遺伝子発現をもたらすＴＬＲシグナル伝達に関係づけられている（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．８３，１２４９−１２５７，（２００８））。ＩＲＦ−１及びＩＲＦ−２は、多くの遺伝子転写活性を逆調節する。従って、ＩＲＦ−１及びＩＲＦ−２誘導シグナル伝達は、ｃＡＭＰ応答配列結合タンパク質（ＣＲＥＢ）経路と関連する。コアクチベーターの１つであるＣＲＥＢ結合タンパク質（ＣＢＰ）は、２つのメカニズムを介して多数の転写因子による遺伝子発現を調節する。１つは、プロモーターへの基本の転写機構の補充である。リウマチ滑膜細胞にＣＢＰ複合体が存在することが報告されている（Ｍｏｄ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，１４，６−１１，（２００４））。こうした関連性は、ＲＡ患者における増殖及びアポトーシスを調節し得る。また、ＣＲＥＢ活性化は、ミトコンドリア機能不全によって誘導され、細胞増殖のシグナル伝達に関係づけられることが過去に報告されている（ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ，２１，Ｎｏｓ．１ ａｎｄ ２，５３−６３，（２００２））。ヒトＩＬ−６のプロモーター領域は、４つの主要な結合部位を有する（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，５４１，３，３３−３９，（２００３））。ＣＥＢＰファミリーの２つの構成要素、即ちＣ／ＥＢＰβ及びＣ／ＥＢＰδは、共同でＩＬ−６転写の責任を担い（Ｃｅｌｌｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｖｏｌ．２，Ｎｏ．２，ＩＳＳＮ１７４２（２００５））、ＣＲＥＢのｃＡＭＰ媒介リン酸化の転写標的である（Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｇｕｌ．Ｉｎｔｅｇｒ．Ｃｏｍｐ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８３：Ｒ１１４０−Ｒ１１４８，（２００２））、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｍ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｄ．Ｖｏｌ．２９ Ｎｏ．（１２）．１４０１ １４１８．（１９９７））。
【００２１】
ヒトＩＬ−６のプロモーター領域は、（ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、及びフォルスコリン結合のための）ＭＲＥ領域、ＮＦ−ｋＢ結合領域、ＡＰ１結合領域、及びＣ／ＥＢＰｂ結合領域の、４つの主要な結合部位を有する。
【００２２】
マトリックスメタロタンパク質（Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏ ｐｒｏｔｅｉｎｓ（ＭＭＰ））は、ＲＡで重要な役割を果たし、ＭＭＰ１、ＭＭＰ３、ＭＭＰ１３、及びＴＩＭＰ２のような種々のＭＭＰがＲＡにおいて過剰発現する（Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ，６９，８９８−９０２，（２０１０），Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ Ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，１５０２，３０７−３１８，（２０００））。ＴＬＲ４依存タンパク質である骨髄細胞分化初期応答遺伝子（８８）（ＭｙＤ８８）は、リウマチ滑膜細胞によって構成的に発現されることが知られている（Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，４５，５２７−５３２、（２００６））。
【００２３】
ＭＭＰ１３、グアニル酸結合タンパク質１（ＧＢＰ−１）、及びＭｙＤ８８は、ＲＡの炎症性破壊プロセスに貢献し、治療計画の治療指数の決定において重要なシグナル伝達分子である。
（発明の概要）
本発明は、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための
大環状ラクトン誘導体の使用に関する。
【００２４】
更なる態様によれば、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための、（本明細書中で以下に提供する）式（１）の化合物の使用が提供される。
【００２５】
本発明の別の態様によれば、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための、１種以上の式（１）の化合物を有効成分として含む医薬組成物が提供される。
【００２６】
本発明の別の態様によれば、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療方法が提供される。本方法は、１種以上の一般式（１）の化合物の治療有効量を、１種以上の一般式（１）の化合物を必要とする哺乳類へ投与することを含む。
【００２７】
本発明の別の態様によれば、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療に有用である１種以上の式（１）の化合物を含む薬剤の製造方法が提供される。
【００２８】
本発明のさらに別の態様によれば、ＢＣＬ２、ＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ｃＭｙｃ、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、及びＭｙＤ８８から選択される１つ以上の遺伝子を下方制御することによる炎症性疾患の治療方法が提供される。
【００２９】
本発明の別の態様によれば、式（Ｉ）の化合物で治療された炎症性疾患の患者の薬物反応を監視するための方法が提供され、本監視するための方法は、患者からの試料中におけるＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃから選択される１つ以上の遺伝子の発現を同定することを含む。
［発明の詳細な説明］
本発明は、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための、以下の式（１）で表される化合物と、
【００３０】
【化１】
式（１）で表される化合物の立体異性体及び互変異性体の全て、並びにこれらの全ての比率の混合物、並びにこれらの薬理学的に許容される塩、薬理学的に許容される溶媒和物、薬理学的に許容される多形体及びプロドラッグを提供する。
式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−Ｏ（ＣＯ）Ｒ13、−ＳＲ14、及び−ＮＲ14Ｒ15から選択され、
Ｒ2は、水素であり、又は
任意にＲ1は存在せず、Ｒ2は＝Ｏであり、
Ｒ3は、アルキルであり
Ｒ4は、以下の式から選択され、
【００３１】
【化２】
【００３２】
【化３】
【００３３】
【化４】
【００３４】
【化５】
【００３５】
【化６】
【００３６】
【化７】
【００３７】
【化８】
【００３８】
【化９】
*は、付着点（接続点）を示す
Ｒ5は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、アルキル、及びアルコキシから選択され、
Ｒ7は、水素、アルキル、及び−（ＣＯ）Ｒ16から選択され、
Ｒ8は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ9は、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アリール、アラルキル、アリールオキシ、ベンジルオキシ、ヘテロシクリル、−Ｏ−ヘテロシクリル、−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17、及び−ＯＣＨ2ＣＯＲ18から選択され、
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−ＳＲ14、−ＮＲ14Ｒ15、及び−Ｏ（ＣＯ）Ｒ19から選択され、
Ｒ11は、水素、及びハロゲンから選択され、
Ｒ12は、水素、ハロゲン、及びヒドロキシから選択され、
Ｒ13は、アルキル、及びアリールから選択され、
Ｒ14は、水素、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ15は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ16は、アルキル、及びアリールから選択され、
Ｒ17は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ18は、アルキル、−ＮＨＣＨ2Ｒ20、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ19は、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、及び、
Ｒ20は、非置換、又は水素、アルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、ヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
［定義］
明細書及び添付の特許請求の範囲において、個別に又はより大きなグループの一部として使用される用語に、（特定の例において別途制限されない限り）適用される定義を以下に記載する。
【００３９】
本発明で使用する場合、「アルキル」という用語は、単独で使用される場合又は置換基の一部として使用される場合に拘わらず、１〜６個の炭素原子を含有する直鎖又は分岐鎖を含む飽和脂肪族基を意味する。好適なアルキル基は、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、及びｔ−ブチルなど、１〜４個の炭素原子
を含有する。アルキル基は、任意に、１つ以上の同一の又は異なった置換基で置換される。置換アルキル基中に存在する任意の種類の置換基は、置換が不安定な分子をもたらさなければ、任意の所望の位置に存在することが可能である。置換アルキルとは、１個以上の、例えば１、２、３、４、又は５個の水素原子が、例えばハロゲン基、ヒドロキシ基、アミノ基、アルコキシ基、ヒドロキシアルキル基、アリールオキシ基、アシルオキシ基、アリール基、ヘテロアリール基、又はヘテロシクリル基などの置換基により置き換えられた、アルキル基を意味する。
【００４０】
本発明で使用する場合、「アルコキシ」という用語は、酸素が付着したアルキル基を意味し、この場合、アルキルは上記の定義に従う。代表的なアルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、及び第三級ブトキシ基を含む。従って、上記の用語は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１つ以上の同一の又は異なった基で置換されたアルコキシ基を含む。
【００４１】
本発明で使用する場合、「アリール」という用語は、１０個以下の環炭素原子を有する一環式又は二環式の炭化水素基を意味し、この場合、共役π電子系を有する炭素環が少なくとも１個存在する。アリール基の例としては、フェニル及びナフチルを含む。置換アリールとは、１つ以上の置換基によって、例えば、ハロゲン基、ヒドロキシ基、アミノ基、アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アリール基、及びヘテロシクリル基から成る群から選択される５個以下の同一の又は異なった置換基によって、置換されたアリール基を意味する。アリール基は任意の所望の位置で置換することができる。例えば、一置換フェニル基では、置換基は、２−位、３−位、４−位、又は５−位に配置することができる。フェニル基が２つの置換基を担持する場合、これらの置換基は、２，３−位、２，４−位、２，５−位、２，６−位、３，４−位、又は３，５−位に配置することができる。
【００４２】
本発明で使用する場合、「アリールオキシ」という用語は、アリール−Ｏ−を意味し、この場合、「アリール」という用語は、上記の定義に従う。例示的なアリールオキシ基としては、フェノキシ及びナフトキシを含むが、これらに限定されない。
【００４３】
「へテロ原子」という用語は、窒素、酸素、及び硫黄を意味する。満たされない原子価を有する任意のへテロ原子は、原子価を満たすために水素原子を有するとみなす点に留意すべきである。環ヘテロ原子は、得られる複素環式系が安定である限り、任意の所望の数で、及び各ヘテロ原子が相互に任意の位置に存在することが可能である。
【００４４】
「ヘテロシクリル」及び「複素環式」という用語は、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の環原子を含有する、飽和した、部分的に不飽和の、又は芳香族の、一環式系もしくは二環式系を意味する。これらの環原子のうちの１、２、３、又は４個は、窒素、酸素、及び硫黄から選択される同一の又は異なったヘテロ原子である。ヘテロシクリル基は、例えば、その環内に、１個あるいは２個の酸素原子、及び／又は１個もしくは２個の硫黄原子、及び／又は１〜４個の窒素原子を有してもよい。ヘテロシクリルは、得られた環系が安定的である限り、その環内に任意の二重結合を含有しない飽和複素環系、並びにその環内に１以上５以下の二重結合を含有する不飽和複素環系を含む。不飽和環は、非芳香族又は芳香族であり得る。芳香族ヘテロシクリル基は、「ヘテロアリール」という習慣的用語で呼んでもよい。この用語には、ヘテロシクリルに関する上記及び下記の全ての定義及び説明が適用され得る。単環式ヘテロシクリル基は、３−員環、４−員環、５−員環、６−員環、及び７−員環を含む。このようなヘテロシクリル基の好適な例としては、ピロリル、イミダゾリル、ピロリジニル、ピリジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピペリジニル、ピペラジニル、及びモルホリニルが挙げられる。二環式ヘテロシクリル基は、２つの縮合環を含み、一方は、５
−、６−又は７−員の複素環であり、他方は、５−、６−、又は７−員の炭素環又は複素環である。例示的な二環式複素環基は、ベンズオキサゾリル、キノリル、イソキノリル、インドリル、イソインドリル、及びベンゾフラザニルを含む。
【００４５】
置換ヘテロシクリルとは、１つ以上（５つ以下）の同一の又は異なった置換基で置換されたヘテロシクリル基を意味する。環炭素原子、及び環窒素原子の置換基の例は、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アリール、及びヘテロシクリル等がある。これらの置換基は、安定した分子が得られる限り、１つ以上の位置で存在することができる。
【００４６】
本発明で使用する場合、「アラルキル」という用語は、アリール基又はヘテロアリール基で置換されたアルキル基を意味する。この場合、アルキル、アリール、及びヘテロアリールという用語は、上記の定義に従う。例示的なアラルキル基は、−（ＣＨ2）p-フェニル、−（ＣＨ2）p−ピリジルを含み、式中、ｐは、１〜３の整数である。アラルキル基は、更に、ヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、アルキル、アリール、又はヘテロアリールで置換され得る。
【００４７】
本発明で使用する場合、−Ｏ−ヘテロシクリルという用語は、酸素原子に直接付着した複素環を意味し、式中、ヘテロシクリルという用語は、上記に定義される。
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素を意味する。
【００４８】
「アミノ」という用語は、非置換、一置換、及び二置換のアミノ基を意味する。本発明で使用する場合、一置換又は二置換のアミノという用語はそれぞれ、同一又は異なり得る１種又は２種の基で置換されたアミノ基を意味する。アミノ基上の置換基は、アルキル、ヒドロキシアルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから独立して選択される。適切な場合、アミノ基上の各部分は、部分自体を置換することが可能であることが当業者には理解されるだろう。
【００４９】
「プロドラッグ」という表現は、投与後、化学的又は生理学的プロセスを介して生体内に薬物を放出する薬物前駆体である化合物を意味し、例えば、プロドラッグは、生理学的ｐＨにされる際に、又は酵素作用により、所望の薬物形態へ変換される。
【００５０】
「置換」又は「で置換される」は、このような置換は、置換される原子と置換基の許容される原子価に従うと同時に、転位、環化、脱離等によって容易に変換されない安定した化合物をもたらすという暗黙の条件を含むことが理解されるであろう。
【００５１】
本発明で使用される「被検者」という用語は、動物、好ましくは哺乳類、最も好ましくはヒトを意味する。
本明細書で使用される「哺乳類」という用語は、肌を覆う体毛、及びメスの場合子に与えるための乳汁を分泌する乳腺を特徴とする、ヒトを含む哺乳綱の温血脊椎動物を意味する。哺乳類という用語は、ネコ、イヌ、ウサギ、クマ、キツネ、オオカミ、サル、シカ、ネズミ、ブタ、並びにヒトなどの動物を含む。
【００５２】
「試験用試料」という用語は、検体を含有することが疑われる生体物質を意味する。試験用試料は、血液、組織液、唾液、接眼レンズ液、脳脊髄液、汗、尿、乳汁、腹水液、粘液、鼻汁、唾、滑液、腹膜液、腟液、経血、羊水、精液、胆汁、脳脊髄液、糞便、胃、又は腸分泌物などを含む生理液などの任意の生物源から取り出し得る。
【００５３】
試料の好ましい種類は、血液、及び滑液である。
本発明で使用される「治療すること」、「治療する」、又は「治療」という用語は、既
存の疾病（例えば、関節リウマチ）の緩和、進行の減速、低減、又は治癒を意味する。
【００５４】
「薬理学的に許容される」により、担体、希釈剤、賦形剤、及び／又は塩は前記化合物の製剤のその他の成分と適合する必要があり、及び該製剤の受容者に有害ではないことが意味される。
【００５５】
本発明で使用される「薬理学的に許容される担体」という用語は、任意の種類の無害、不活性、固体、半固体、希釈のカプセル封入材料又は製剤補助剤を意味する。薬理学的に許容される担体として機能することができる材料のいくつかの例は、乳糖、ブドウ糖、及びショ糖などの糖類；トウモロコシデンプン、及びバレイショデンプンなどのデンプン類；セルロース、並びにカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロースなどのセルロース誘導体；麦芽；ゼラチン；タルク；並びにラウリル硫酸ナトリウム、及びステアリン酸マグネシウムなどのその他の無害の適合性のある潤滑剤、並びに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味料、香味剤、及び芳香剤である；防腐剤及び酸化防止剤も、配合者の判断により組成物内に存在することが可能である。
【００５６】
本発明で使用される「治療有効量」という用語は、健全な医学的判断の範囲内において、調節または治療すべき状態に正の変化を顕著に生じさせるのに十分であるが、過度の又は重度の副作用を回避するために十分に低い、化合物又は組成物（例えば、式（１）の化合物）の量を意味する。化合物又は組成物の治療有効量は、治療される特定の状態、エンドユーザの年齢及び健康状態、治療／予防される状態の重症度、治療期間、併用治療法の性質、用いられる特定の化合物又は組成物、使用される特定の薬理学的に許容される担体等の要因により変化する。本発明で使用する場合、全ての百分率は、別途記載のない限り、重量に基づく。
【００５７】
腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上の炎症性サイトカインとの関連で本発明及び添付の特許請求の範囲で使用される「異常」という用語は、炎症性サイトカインレベルの上昇又は増加を意味する。
［本発明の実施形態］
本発明は、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための、以下の式（１）で表される化合物と、
【００５８】
【化１０】
式（１）で表される化合物の立体異性体及び互変異性体の全て、並びに式（１）で表される化合物の全ての比率の混合物、並びに式（１）で表される化合物の薬理学的に許容される塩、薬理学的に許容される溶媒和物、薬理学的に許容される多形体及びプロドラッグを提供し、
式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−Ｏ（ＣＯ）Ｒ13、−ＳＲ14、及び−ＮＲ14Ｒ15から選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、以下の式から選択され、
【００５９】
【化１１】
【００６０】
【化１２】
【００６１】
【化１３】
【００６２】
【化１４】
【００６３】
【化１５】
【００６４】
【化１６】
【００６５】
【化１７】
【００６６】
【化１８】
*は、付着点を示す
Ｒ5は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、アルキル、及びアルコキシから選択され、
Ｒ7は、水素、アルキル、及び−（ＣＯ）Ｒ16から選択され、
Ｒ8は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ9は、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アリール、アラルキル、アリールオキシ、ベンジルオキシ、ヘテロシクリル、−Ｏ−ヘテロシクリル、−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17、及び−ＯＣＨ2ＣＯＲ18から選択され、
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−ＳＲ14、−ＮＲ14Ｒ15、及び−Ｏ（ＣＯ）Ｒ19から選択され、
Ｒ11は、水素、及びハロゲンから選択され、
Ｒ12は、水素、ハロゲン、及びヒドロキシから選択され、
Ｒ13は、アルキル、及びアリールから選択され、
Ｒ14は、水素、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ15は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ16は、アルキル、及びアリールから選択され、
Ｒ17は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ18は、アルキル、−ＮＨＣＨ2Ｒ20、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ19は、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、及び、
Ｒ20は、水素、アルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、ハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって非置換又は置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【００６７】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、
式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ2は、水素であり
Ｒ3は、アルキルであり
Ｒ4は、式（３）であり、
【００６８】
【化１９】
*は、付着点を示す
Ｒ8は、ヒドロキシであり、
Ｒ9は、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アリール、アラルキル、アリールオキシ、ベンジルオキシ、−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17、及び−ＯＣＨ2ＣＯＲ18から選択され、
Ｒ17は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ18は、アルキル、−ＮＨＣＨ2Ｒ20、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、及び
Ｒ20は、水素、アルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一の
もしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【００６９】
更なる実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（３）であり、
【００７０】
【化２０】
*は、付着点を示す
Ｒ8は、ヒドロキシであり、及び
Ｒ9は、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、及びベンジルオキシから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【００７１】
更なる実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供すし、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（３）であり、
【００７２】
【化２１】
*は、付着点を示す
Ｒ8は、ヒドロキシであり、且つ
Ｒ9は、ヒドロキシ、メトキシ、及びベンジルオキシから選択される。
【００７３】
更なる実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（３）であり、
【００７４】
【化２２】
*は、付着点を示す
Ｒ8は、ヒドロキシであり、及び
Ｒ9は、ヒドロキシである。
【００７５】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（３）であり、
【００７６】
【化２３】
*は、付着点を示す
Ｒ8は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ9は、−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17、及び−ＯＣＨ2ＣＯＲ18から選択され、
Ｒ17は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ18は、アルキル、ヘテロシクリル、及び−ＮＨＣＨ2Ｒ20から選択され、及び、
Ｒ20は、水素、アルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【００７７】
更なる実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（３）であり、
【００７８】
【化２４】
*は、付着点を示す
Ｒ8は、ヒドロキシであり、
Ｒ9は、−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17であり、且つ
Ｒ17は、水素、及びアルキルから選択される。
【００７９】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（３）であり、
【００８０】
【化２５】
*は、付着点を示す
Ｒ8は、ヒドロキシであり、
Ｒ9は、−ＯＣＨ2ＣＯＲ18であり、及び
Ｒ18は、４−メチルピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、及び１，４’−ビピペリジン−１’−イルから選択される。
【００８１】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（３）であり、
【００８２】
【化２６】
*は、付着点を示す
Ｒ8は、ヒドロキシであり、
Ｒ9は、−ＯＣＨ2ＣＯＲ18であり、
Ｒ18は、−ＮＨＣＨ2Ｒ20であり、及び、
Ｒ20はアルキル、及びアリールから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【００８３】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（３）であり、
【００８４】
【化２７】
*は、付着点を示す
Ｒ8は、ヒドロキシであり、
Ｒ9は、−ＯＣＨ2ＣＯＲ18であり、
Ｒ18は、−ＮＨＣＨ2Ｒ20であり、及び、
Ｒ20は、−ＣＨ2ＯＨ、及び４−フルオロフェニルから選択される。
【００８５】
別の実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（６）であり、
【００８６】
【化２８】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【００８７】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（６）であり、
【００８８】
【化２９】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ヒドロキシ、及びアルコキシである。
【００８９】
別の実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（７）であり、
【００９０】
【化３０】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ11は、水素、及びハロゲンから選択され、及び
Ｒ12は、水素、ハロゲン、及びヒドロキシから選択される。
【００９１】
別の実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（７）であり、
【００９２】
【化３１】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ヒドロキシ、及びアルコキシであり、
Ｒ11は、水素であり、及び
Ｒ12は、ヒドロキシである。
【００９３】
別の実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（７）であり、
【００９４】
【化３２】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ヒドロキシ、及びアルコキシであり、
Ｒ11は、ハロゲンであり、及び
Ｒ12は、ハロゲンである。
【００９５】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（２）であり、
【００９６】
【化３３】
*は、付着点を示す
Ｒ5は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ6は、水素、アルキル、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ7は、水素、アルキル、及び−（ＣＯ）Ｒ16から選択され、及び
Ｒ16は、アルキル、及びアリールから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【００９７】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（２）であり、
【００９８】
【化３４】
*は、付着点を示す
Ｒ5は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ6は、水素、及びヒドロキシから選択され、
Ｒ7は、水素、アルキル、及び−（ＣＯ）Ｒ16から選択され、及び
Ｒ16は、アルキルであり、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【００９９】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（２）であり、
【０１００】
【化３５】
*は、付着点を示す
Ｒ5は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ6は、水素であり、
Ｒ7は、水素、及び−（ＣＯ）Ｒ16から選択され、及び
Ｒ16は、アルキルである。
【０１０１】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−Ｏ（ＣＯ）Ｒ13、−ＳＲ14、及び−ＮＲ14Ｒ15から選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１０２】
【化３６】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−ＳＲ14、−ＮＲ14Ｒ15、及び−Ｏ（ＣＯ）Ｒ19から選択され、
Ｒ13は、アルキル、及びアリールから選択され、
Ｒ14は、水素、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ15は、水素、及びアルキルから選択され、及び
Ｒ19は、アルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１０３】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、−ＳＲ14であり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１０４】
【化３７】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、−ＳＲ14であり、及び
Ｒ14は、水素、及びアルキルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１０５】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、−ＮＲ14Ｒ15であり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１０６】
【化３８】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−ＳＲ14、−ＮＲ14Ｒ15、及び−Ｏ（ＣＯ）Ｒ19から選択され、
Ｒ14は、水素、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ15は、水素、及びアルキルから選択され、及び
Ｒ19は、アルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１０７】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、−ＮＲ14Ｒ15であり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１０８】
【化３９】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、−ＮＲ14Ｒ15であり、
Ｒ14は、水素、及びアルキルから選択され、及び
Ｒ15は、水素、及びアルキルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１０９】
一実施形態において、本発明は、式（１）の化合物の使用に関し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１１０】
【化４０】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ヒドロキシである。
【０１１１】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチル、エチル、プロピル、及びブチルから選択され、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１１２】
【化４１】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ヒドロキシである。
【０１１３】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、−Ｏ（ＣＯ）Ｒ13であり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１１４】
【化４２】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、−Ｏ（ＣＯ）Ｒ19であり、
Ｒ13は、アルキル、及びアリールから選択され、且つ
Ｒ19は、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１１５】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、−Ｏ（ＣＯ）Ｒ13であり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１１６】
【化４３】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ヒドロキシであり、及び
Ｒ13は、アルキル、及びアリールから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１１７】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ハロゲンであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１１８】
【化４４】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−ＳＲ14、−ＮＲ14Ｒ15、及び−Ｏ（ＣＯ）Ｒ19から選択され、
Ｒ14は、水素、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ15は、水素、及びアルキルから選択され、及び
Ｒ19は、アルキル、及びアリールから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１１９】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、
式中、
Ｒ1は、ハロゲンであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１２０】
【化４５】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ハロゲンであり、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１２１】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、
式中、
Ｒ1は、存在せず、Ｒ2は、＝Ｏであり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１２２】
【化４６】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−ＳＲ14、−ＮＲ14Ｒ15、及び−Ｏ（ＣＯ）Ｒ19から選択され、
Ｒ14は、水素、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ15は、水素、及びアルキルから選択され、及び
Ｒ19は、アルキル、アリール、アラルキル、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキ
シアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１２３】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、
式中、
Ｒ1は、存在せず、Ｒ2は、＝Ｏであり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１２４】
【化４７】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択される。
【０１２５】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、
式中、
Ｒ1は、存在せず、Ｒ2は、＝Ｏであり、
Ｒ3は、アルキルであり、及び
Ｒ4は、式（５）である。
【０１２６】
【化４８】
*は、付着点を示す
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、
式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（８）であり、
【０１２７】
【化４９】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ハロゲン、及びヒドロキシから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１２８】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、
式中、
Ｒ1は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（８）であり、
【０１２９】
【化５０】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ヒドロキシである。
【０１３０】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、
式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、及び
Ｒ4は、式（９）であり、
【０１３１】
【化５１】
*は、付着点を示す
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１３２】
本発明は、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための、（上記に提示された全ての実施形態で記載された）式（１）の化合物、並びに式（１）の化合物の立体異性体及び互変異性体の全て、並びにこれらの全ての比率の混合物、並びにこれらの薬理学的に許容される塩、薬理学的に許容される溶媒和物、薬理学的に許容される多形体及びプロドラッグを提供する。
【０１３３】
本発明は、ＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃから選択される１つ以上の遺伝子によって媒介される炎症性疾患の治療のための、（上記に提示された全ての実施形態で記載された）式（１）の化合物、並びに式（１）の化合物の立体異性体及び互変異性体の全て、並びにこれらの全ての比率の混合物、並びにこれらの薬理学的に許容される塩、薬理学的に許容される溶媒和物、薬理学的に許容される多形体及びプロドラッグを提供する。
【０１３４】
本発明は、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための、
【０１３５】
【化５２】
【０１３６】
【化５３】
【０１３７】
【化５４】
【０１３８】
【化５５】
【０１３９】
【化５６】
【０１４０】
【化５７】
【０１４１】
【化５８】
【０１４２】
【化５９】
【０１４３】
【化６０】
【０１４４】
【化６１】
【０１４５】
【化６２】
【０１４６】
【化６３】
から選択されるがこれらに限定されない式（１）の化合物と、
前記式（１）の化合物の立体異性体及び互変異性体、薬理学的に許容される塩、溶媒和
物及びプロドラッグ、の使用に関する。
【０１４７】
本発明の別の更なる態様において、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のために、式（１）の化合物は、
【０１４８】
【化６４】
【０１４９】
【化６５】
【０１５０】
【化６６】
【０１５１】
【化６７】
【０１５２】
【化６８】
、並びに前記式（１）の化合物の立体異性体及び互変異性体、これらの薬理学的に許容される塩、溶媒和物並びにプロドラッグから選択される。
【０１５３】
本発明のさらに別の更なる態様において、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のために、式（１）の化合物は、
【０１５４】
【化６９】
、その立体異性体及び互変異性体、薬理学的に許容される塩、溶媒和物及びプロドラッグである。
［スキームの詳細な説明］
本発明の化合物は、更に、上記式（１）の化合物の全ての立体異性体及び混合物、並びにこれらの薬理学的に許容される塩、溶媒和物及び多形体も含む。さらに、本明細書中及び特許請求の範囲に記載の化合物の全てのプロドラッグ及び誘導体は、本発明の主題であ
る。
【０１５５】
本発明の別の態様によれば、当業者に既知の方法を使用した多数の方法で、式（１）の化合物を調製することができる。本化合物の調製方法の例を以下に説明し、スキーム１〜４で示すが、スキーム１〜４に示す方法に限定されるものではない。本明細書中で記載されるプロセス、採用される合成工程の順番は、様々であってよく、とりわけ特定の基質中に存在する官能基の性質、及び採用される保護基戦略（もしあれば）などの要因によって決まり得ること、さらに合成工程にて使用される試薬の選択にも影響を与え得ることは、当業者によって理解されるであろう。
【０１５６】
以下のプロセスにて使用される試薬、反応物質、及び中間体は、微生物の発酵物から分離されるか、市販されているか、又は当該技術分野において公知の標準的な文献手順に従って調製することが可能であるか、又はこれらの組み合わせのいずれかである。本発明の化合物の合成に使用される出発化合物及び中間体は、一般記号（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）、（Ｇ）、（Ｈ）、（Ｋ）、（Ｌ）、（Ｍ）、（Ｎ）、（Ｏ）、（Ｑ）、（Ｒ）、（Ｓ）、（Ｔ）、及び（Ｕ）を用いて示される。プロセスの説明全体を通して、出発化合物及び中間体を表す種々の式における対応する置換基は、詳細な説明に記載されている式（１）の化合物に関するものと同一の意味を有する。
【０１５７】
本発明の種々のスキームにて使用されるプロセスは、一般記号１ａ、１ｂ、１ｃ、１ｄ、１ｅ、１ｆ、１ｇ、２ａ、２ｂ、２ｃ、２ｄ、３ａ、３ｂ、３ｃ、４ａ、４ｂ、４ｃ、及び４ｄを用いて示される。本発明の化合物の調製のためのプロセスは、以下のスキームで説明される。
【０１５８】
スキーム１
（スキーム１における）粗コンカナマイシンは、培養物（ＰＭ０２２４３５５）の発酵によって得られる。酢酸エチル、クロロホルム、及びジクロロメタンから選択される溶媒を使用して、全ブロスを抽出する。粗コンカナマイシンは、カラムクロマトグラフィーによって分離され、スペクトル比較により同定される（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．４５，Ｎｏ．７，１１０８−１１１６，（１９９２））。
【０１５９】
工程１ａ
参照文献（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．３９，３８５７−６０，（１９８１））に記載されている手順に従い、（スキーム１における）粗コンカナマイシンにアルカリ加水分解を実施し、式（１）の化合物を得る（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである；スキーム１の式（Ａ）に記載されている）。
【０１６０】
工程１ｂ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、Ｒ8はヒドロキシであり、及びＲ9はヒドロキシである；スキーム１の式（Ｂ）に記載されている）は、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、１，４−ジオキサン、及びアセトニトリルから選択される溶媒を使用して、ピリジン、置換ピリジン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、及びＮ−エチルモルホリンから選択される塩基の存在下で、式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、且つＲ10はヒドロキシである）をヒドロキシルアミン塩酸塩などのアミン塩酸塩と反応させることにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で、０℃〜４５℃の温度で４時間〜１６時間攪
拌される。
【０１６１】
工程１ｃ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（６）であり、且つＲ10は、ヒドロキシである；スキーム１の式（Ｃ）に記載されている）は、窒素などの不活性雰囲気中で、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムから選択される塩基の存在下で、０℃にて２時間、アセトン、アセトニトリル、及び１，４−ジオキサンから選択される溶媒中の式（Ｂ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、Ｒ8はヒドロキシであり、且つＲ9はヒドロキシである）を塩化トシル又は２，４，６−トリクロロ−１，３，５−トリアジン（ＴＣＴ）と反応することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で、２時間〜８時間、２５℃〜４５℃の温度で更に攪拌することも可能である。
【０１６２】
工程１ｄ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、Ｒ8はヒドロキシであり、及びＲ9はメトキシ又はベンジルオキシである；スキーム１の式（Ｄ）に記載されている）は、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、ジオキサン、及びアセトニトリルから選択される溶媒を使用して、ピリジン、置換ピリジン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、及びＮ−エチルモルホリンから選択される塩基の存在下で、式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである）をメトキシアミン塩酸塩及びベンジルオキシアミン塩酸塩から選択されるアミン塩酸塩と反応することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で、０℃〜４５℃の温度で４時間〜１６時間攪拌される。
【０１６３】
工程１ｅ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、及びＲ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、Ｒ8はヒドロキシであり、Ｒ9は−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17であり、及びＲ17は水素である；スキーム１の式（Ｅ）に記載されている）は、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、１，４−ジオキサン、及びアセトニトリルから選択される溶媒を使用して、ピリジン、置換ピリジン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、及びＮ−エチルモルホリンから選択される塩基の存在下で、式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである）をカルボキシメチルヒドロキシルアミンヘミ塩酸塩などのアミン塩酸塩と反応することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で、０℃〜４５℃の温度で４時間〜１６時間攪拌される。
【０１６４】
工程１ｆ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、Ｒ8はヒドロキシであり、Ｒ9は−ＯＣＨ2ＣＯＲ18であり、Ｒ18はヘテロシクリル、及び−ＮＨＣＨ2Ｒ20から選択され、及びＲ20は、アルキル、及びアリールから選択される；スキーム１の式（Ｆ）に記載されている）は、ジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、酢酸エチル、及びジメチルホルムアミドから選択される溶媒中に式（Ｅ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、Ｒ8はヒドロキシであり、Ｒ9は−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17であり、及びＲ17は水素である）を溶解し、及びジシクロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ ＨＣ
ｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、又はＯ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウラニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）、及びＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）から選択されるカップリング試薬と反応することにより調製される。更に、反応混合物は、Ｎ−メチル−ピペラジン、エタノールアミン、ピペリジン、４−ピペリジノ−ピペリジン、及び４−フルオロフェニルアミンなどのアミンで処理される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で、２５℃〜４５℃の温度で４時間〜１８時間攪拌される。
【０１６５】
工程１ｇ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（７）であり、Ｒ10はヒドロキシであり、Ｒ11は水素であり、及びＲ12は、ヒドロキシである；スキーム１の式（Ｇ）で記載されている）は、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、アセトン、メタノール、及びエタノールから選択される溶媒中に式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、且つＲ10はヒドロキシである）を溶解し、及び窒素などの不活性雰囲気中で０℃にて２０分間水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤と反応することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で、２５℃〜４５℃の温度で２時間〜８時間更に攪拌される。
【０１６６】
【化７０】
スキーム２
工程２ａ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（８）であり、及びＲ10はヒドロキシである；スキーム２の式（Ｈ）で記載されている）は、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムから選択される塩基の存在下で、窒素などの不活性雰囲気中で０℃にて２時間、アセトン、アセトニトリル、１，４−ジオキサンから選択される溶媒中に、塩化トシルなどの試薬とともに、式（Ｂ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、Ｒ8はヒドロキシであり、及びＲ9はヒドロキシである；スキーム１の工程１ｂにより調製される）を溶解することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で、２５℃〜４５℃の温度で２時間〜８時間更に攪拌することができる。
【０１６７】
工程２ｂ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルで
あり、及びＲ4は式（９）である；スキーム２の式（Ｋ）で記載されている）は、ジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、酢酸エチル、及びジメチルホルムアミドから選択される溶媒中に式（Ｅ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、Ｒ8はヒドロキシであり、及びＲ9は−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17であり、Ｒ17は水素である；スキーム１の工程１ｅにより調製される）を溶解し、及びジシクロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ ＨＣｌ）、及びＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）から選択されるカップリング試薬並びに４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）などの触媒と反応することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で、２５℃〜４５℃の温度で４時間〜１８時間攪拌される。
【０１６８】
工程２ｃ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1は存在せず、Ｒ2は＝Ｏであり、Ｒ3はメチルであり、及びＲ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである；スキーム２の式（Ｌ）で記載されている）は、窒素などの不活性雰囲気中で０℃にて２時間、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、及びテトラヒドロフランから選択される溶媒中の式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである）を、デス−マーチンペルヨージナン、二クロム酸ピリジニウム、クロロクロム酸ピリジニウム、及びスワン酸化剤から選択される酸化剤と反応することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気下にて、２５℃〜４５℃の温度で２時間〜８時間更に攪拌される。
【０１６９】
工程２ｄ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1は存在せず、Ｒ2は＝Ｏであり、Ｒ3はメチルであり、及びＲ4は式（５）である；スキーム２の式（ｍ）で記載されている）は、窒素などの不活性雰囲気中で０℃にて２時間、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、及びテトラヒドロフランから選択される溶媒中の式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである）を、デス−マーチンペルヨージナン、二クロム酸ピリジニウム、クロロクロム酸ピリジニウム、及びスワン酸化剤から選択される酸化剤と反応することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気下にて、２５℃〜４５℃の温度で２時間〜８時間更に攪拌される。
【０１７０】
【化７１】
スキーム３
工程３ａ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10は−ＯＣ（Ｏ）Ｒ19であり、Ｒ19はアルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択される；スキーム３の式（Ｎ）で記載されている）は、式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである）をジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、酢酸エチル、及びジメチルホルムアミドから選択される溶媒中に溶解し、及びＤＭＡＰなどの触媒の存在下でジシクロヘキシルカルボジイミド又はＥＤＣ ＨＣｌ又はＤＩＣから選択されるカップリング試薬と反応することにより調製される。更に、反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で２５℃〜４５℃の温度にて４時間〜１８時間、反応混合物に添加されるＲ19−ＣＯＯＨ（Ｒ19は、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択される）で処理される。
【０１７１】
工程３ｂ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はエチル、
ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、及びｎ−ペンチルから選択され、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである；スキーム３の式（Ｏ）で記載されている）は、式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、及びＲ10はヒドロキシである）をジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、酢酸エチル、及びジメチルホルムアミドから選択される溶媒中に溶解し、パラ−トルエンスルホン酸の存在下でＲ3−ＯＨ（式中、Ｒ3はエチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、及びｎ−ペンチルから選択される）と反応することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気下にて、２５℃〜４５℃の温度で４時間〜１８時間攪拌される。
【０１７２】
工程３ｃ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（２）であり、Ｒ5はヒドロキシであり、Ｒ6は水素であり、及びＲ7は水素又はアルキルから選択される；スキーム３の式（Ｑ）で記載されている）は、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、及びＮ−エチルモルホリンから選択される塩基の存在下で、式（Ｂ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、Ｒ8はヒドロキシであり、及びＲ9はヒドロキシである；スキーム１工程１ｂにより調製される）をジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、酢酸エチル、及びジメチルホルムアミドから選択される溶媒中に溶解し、Ｒ7−ハロゲン化物（式中、Ｒ7は水素又はアルキルである）と反応することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で、２５℃〜４５℃の温度で４時間〜１８時間攪拌される。
【０１７３】
【化７２】
スキーム４
工程４ａ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（７）であり、Ｒ10はヒドロキシであり、Ｒ11はハロゲンであり、及びＲ12はハロゲンである；スキーム４の式（Ｒ）で記載されている）は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で０℃〜４５℃の温度で２時間〜８時間、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、１，４−ジオキサン、及びアセトニトリルから選択される溶媒中で、式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はアルキルであり、Ｒ4は式（４）であり、且つＲ10はヒドロキシである）を三フッ化ジエチルアミノ硫黄（ＤＡＳＴ）などのハロゲン化剤と反応することにより調製される。
【０１７４】
工程４ｂ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はハロゲンであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はハロゲンである；スキーム４の式（Ｓ）で記載されている）は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で０℃〜４５℃の温度にて２時間〜８時間、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、１，４−ジオキサン、及びアセトニトリルから選択される溶媒中で、式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである）を、三フッ化ジエチルアミノ硫黄（ＤＡＳＴ）などのハロゲン化剤と反応することにより調製される。
【０１７５】
工程４ｃ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はアミノであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、Ｒ10は−ＮＲ14Ｒ15であり、Ｒ14はアルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、及びＲ15は水素、及びアルキルから選択される；スキーム４の式（Ｔ）で記載されている）は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で０℃〜４５℃の温度にて２時間〜８時間、ベンゼン、トルエン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、１，４−ジオキサン、及びアセトニトリルから選択される溶媒中で、式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである）を、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム又はシアノ水素化ホウ素ナトリウム、並びにＲ14−ＮＨ2及びＲ14−ＮＨ−アルキル（式中、Ｒ14はアルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択される）から選択されるアミンと反応することにより調製される。
【０１７６】
工程４ｄ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はＳＨであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10は−ＳＲ14であり、Ｒ14はアルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択される；スキーム４の式（Ｕ）で記載されている）は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で０℃〜４５℃の温度にて２時間〜８時間、溶媒ベンゼン又はトルエン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、１，４−ジオキサン、及びアセトニトリルから選択される溶媒の存在下で、式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである）を、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム及びＲ14−ＳＨ（式中、Ｒ14はアルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択される）から選択される還元剤と反応することにより調製される。
【０１７７】
【化７３】
上記のスキーム１〜４の全てにおいて、適用可能な場合、化合物は任意に、それらのプロドラッグ及び塩に変換され得る。加えて、化合物は、カラムクロマトグラフィーなどの当該技術分野において周知の技術によって、個々の異性体に分離することができる。
【０１７８】
本発明の化合物は、本発明の化合物の薬理学的に許容される塩又は溶媒和物の形態で利用することもできることが当業者であれば理解されよう。
式（１）の化合物に関して、本発明は、式（１）の化合物の全ての立体異性体及びそれらの全ての比率の混合物、及びそれらの薬理学的に許容される塩を更に含む。
【０１７９】
本発明の化合物は、続いて、本発明の化合物の有機塩又は無機塩に変換することができる。
したがって、式（１）で表される本発明の化合物が１つ以上の塩基性基、即ちプロトン化されることができる基を含有する場合、好適な無機酸又は有機酸でさらなる塩を形成することができる。好適な無機酸の例としては、ホウ酸、過塩素酸、塩酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸、及びその他の当業者に既知の無機酸が挙げられる。好適な有機酸の例としては、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレ
イン酸、ヒドロキシマレイン酸、フマル酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸、ケトグルタル酸、グリセロリン酸、アスパラギン酸、ピクリン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、コール酸、パントテン酸、アルギン酸、ナフトエ酸、マンデル酸、タンニン酸、樟脳酸、及びその他の当業者に既知の有機酸が挙げられる。
【０１８０】
式（１）で表される本発明の化合物は、好適な塩基でさらなる塩を形成可能な１つ以上の酸性基を含有する。例えば、本発明の化合物のこのような塩は、Ｌｉ塩、Ｎａ塩、及びＫ塩などのアルカリ金属塩、又はＣａ塩、Ｍｇ塩、又はアルミニウム塩のようなアルカリ土類金属塩、又はアンモニアを有する塩、又はリジン、リシン、アルギニン、グアニジン、ジエタノールアミン、コリン、及びトロメタミンなどの有機塩基の塩を含んでもよい。
【０１８１】
本発明はさらに、式（１）の化合物の溶媒和物、例えば、水を有する水和物、及びアルコール、エーテル、酢酸エチル、ジオキサン、ジメチルホルムアミド、又はアセトンなどの低級アルキルケトン、又はこれらの混合物などのその他の結晶化溶媒で形成された溶媒和物を含む。
【０１８２】
本発明はさらに、式（１）の化合物の多形体を含む。多形体は、徐冷却又は急冷却に続いて本発明の化合物を加熱又は溶融することにより得られうる。多形体の存在は、ＩＲ分光法、固体プローブＮＭＲ分光法、示差走査熱量測定法、又は粉末Ｘ線回折などの技術により同定し得る。
【０１８３】
また、本発明は、式（１）の化合物のプロドラッグ、例えばエステル、アミド、及びその他の誘導体も含む。
式（１）で表される本発明の化合物は、ＴＮＦ−α阻害物質であり、炎症性腸疾患、炎症、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、クローン病、敗血症性ショック、内毒素性ショック、アテローム性動脈硬化症、虚血−再潅流傷害、冠状動脈性心疾患、血管炎、アミロイド症、多発性硬化症、敗血症、慢性の再発性ぶどう膜炎、Ｃ型肝炎ウイルス感染症、マラリア、潰瘍性大腸炎、悪液質、乾癬、形質細胞腫、子宮内膜症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、髄膜炎、ＡＩＤＳ、ＨＩＶ感染症、自己免疫疾患、免疫不全症、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、慢性移植片対宿主病、外傷及び移植拒絶反応、成人呼吸窮迫症候群、肺線維症、再発性卵巣癌、リンパ増殖性疾患、難治性多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、糖尿病、若年性糖尿病、強直性脊椎炎、皮膚遅延型過敏症疾患、アルツハイマー病、全身性エリテマトーデス、及びアレルギー性喘息を含む、異常ＴＮＦ−α活性に伴う疾患の治療に使用を見出す。
【０１８４】
ある種の実施形態において、式（１）で表される本発明の化合物は、インターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８）阻害物質であり、関節リウマチ、変形性関節症、及びその他の自己免疫疾患を含む、異常インターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８）活性に伴う疾患の治療に使用を見出す。
【０１８５】
ある種の実施形態において、式（１）で表される本発明の化合物は、ＩＦＮ−γ阻害物質であり、関節リウマチ、変形性関節症、及びその他の自己免疫疾患を含む、異常インターロイキン（ＩＦＮ−γ）活性に伴う疾患の治療に使用を見出す。
【０１８６】
ある種の実施形態において、式（１）で表される本発明の化合物は、ＢＣＬ２、ＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ｃＭｙｃ、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、及びＭｙＤ８８から選択される１つ以上の遺伝子を下方制御し、バーキットリンパ
腫又はポイツ・イエーガー症候群を含む炎症性疾患の治療に使用を見出す。
【０１８７】
ある実施形態によれば、式（１）で表される本発明の化合物は、滑膜細胞中のＩＬ−１βなどのＣＲＥＢの転写標的を下方制御し、ＣＲＥＢ経路によって媒介される炎症性疾患の治療に有用である。
【０１８８】
ある実施形態によれば、本発明は、式（Ｉ）の化合物で治療される炎症性疾患の患者の薬物反応の監視方法を提供し、監視方法は、治療を受けた患者からの試験用試料中のＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃから選択される１つ以上の遺伝子の発現を同定することと、同定された遺伝子の発現を式（Ｉ）の化合物で治療する前の患者から入手した試験用試料中のＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃから選択される同一の１つ以上の遺伝子の発現と、又は未治療の対照と、比較することを含む。
【０１８９】
別の実施形態において、薬物反応の監視方法において、治療後のＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃから選択される１つ以上の遺伝子の発現の変化は、薬物反応を示す。
【０１９０】
別の実施形態において、式（１）の化合物を用いた治療後の薬物反応の監視方法では、ＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃから選択される１つ以上の遺伝子の発現は下方制御される。
【０１９１】
ある実施形態によれば、式（１）で表される本発明の化合物は、炎症性腸疾患、炎症、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、クローン病、潰瘍性大腸炎、難治性多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、乾癬、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、皮膚遅延型過敏症疾患、及びアルツハイマー病を含む、炎症性疾患の治療に使用を見出す。
【０１９２】
ある実施形態によれば、式（１）で表される本発明の化合物は、関節リウマチ及び潰瘍性大腸炎を含む炎症性疾患の治療に使用を見出す。
ある実施形態によれば、式（１）で表される本発明の化合物は、関節リウマチの治療に使用を見出す。
【０１９３】
ある実施形態によれば、式（１）で表される本発明の化合物は、潰瘍性大腸炎の治療に使用を見出す。
ある実施形態によれば、式（１）で表される本発明の化合物は、乾癬の治療に使用を見出す。
【０１９４】
ある実施形態によれば、本発明は、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を必要とする哺乳類へ投与することにより、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患を治療する方法を提供する。
【０１９５】
ある実施形態によれば、本発明は、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を必要とする哺乳類へ投与することにより、炎症性腸疾患、炎症、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、クローン病、敗血症性ショッ
ク、内毒素性ショック、アテローム性動脈硬化症、虚血−再潅流傷害、冠状動脈性心疾患、血管炎、アミロイド症、多発性硬化症、敗血症、慢性の再発性ぶどう膜炎、Ｃ型肝炎ウイルス感染症、マラリア、潰瘍性大腸炎、悪液質、乾癬、形質細胞腫、子宮内膜症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、髄膜炎、ＡＩＤＳ、ＨＩＶ感染症、自己免疫疾患、免疫不全症、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、慢性移植片対宿主病、外傷、及び移植拒絶反応、成人呼吸窮迫症候群、肺線維症、再発性卵巣癌、リンパ増殖性疾患、難治性多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、糖尿病、若年性糖尿病、強直性脊椎炎、皮膚遅延型過敏症疾患、アルツハイマー病、全身性エリテマトーデス、及びアレルギー性喘息を含む、異常ＴＮＦ−α活性に伴う炎症性疾患を治療する方法を提供する。
【０１９６】
別の実施形態によれば、本発明は、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を必要とする哺乳類へ投与することにより、関節リウマチ、変形性関節症、及びその他の自己免疫疾患を含む、異常インターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８）に伴う炎症性疾患を治療する方法を提供する。
【０１９７】
別の実施形態によれば、本発明は、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を必要とする哺乳類へ投与することにより、関節リウマチ、変形性関節症、及びその他の自己免疫疾患を含む、異常インターロイキン（ＩＦＮ−γ）活性に伴う炎症性疾患を治療する方法を提供する。
【０１９８】
ある実施形態によれば、本発明は、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を必要とする哺乳類へ投与することにより、炎症性腸疾患、炎症、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、クローン病、潰瘍性大腸炎、難治性多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、乾癬、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、皮膚遅延型過敏症疾患、バーキットリンパ腫又はポイツ・イエーガー症候群、及びアルツハイマー病を含む、炎症性疾患を治療する方法を提供する。
【０１９９】
ある実施形態によれば、本発明は、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を必要とする哺乳類へ投与することにより、関節リウマチ及び潰瘍性大腸炎を含む炎症性疾患を治療する方法を提供する。
【０２００】
本発明の別の態様によれば、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療において有用である、有効成分である１種以上の式（１）の化合物の治療有効量と、薬理学的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。
【０２０１】
本発明の別の態様によれば、本明細書中で上述した上記の組成物を使用して、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患を治療する方法が提供される。
【０２０２】
本発明の別の態様によれば、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療に有用である、１種以上の式（１）の化合物を含む製剤の製造方法が提供される。
【０２０３】
本発明の医薬組成物は、調製方法自体既知であり当業者に周知の方法によって調製され
る。薬理学的に許容される不活性の無機及び／又は有機担体及び／又は添加剤は、式（１）の化合物、及び／又は該生理学的に許容範囲内の塩、及び／又は該プロドラッグに加えて使用されることができる。丸剤、錠剤、コーティングされた錠剤、及びゼラチン硬カプセルの製造には、例えば乳糖、トウモロコシデンプン又はトウモロコシデンプンの誘導体、アラビアゴム、マグネシア又はブドウ糖等を使用することが可能である。ゼラチン軟カプセル及び座薬の担体は、例えば脂肪、ワックス、天然油又は硬化油等である。例えば注射液などの溶液の製造又はエマルジョンもしくはシロップ剤の製造に好適な担体は、例えば水、生理食塩液、又は例えばエタノール、プロパノールもしくはグリセロールなどのアルコール類、ブドウ糖液もしくはマンニトール溶液などの糖液、又はこれまでに説明してきた種々の溶媒の混合物である。
【０２０４】
式（１）の化合物及び／又は該生理学的に許容できる塩及び／又はプロドラッグに含有する有効成分、並びに担体物質に加えて、本医薬組成物は、例えば充填剤、酸化防止剤、分散剤、乳化剤、脱泡剤、芳香剤、防腐剤、可溶化剤、又は着色剤などの添加剤を含有することができる。また、本発明の医薬組成物は、２種以上の式（１）の化合物、及び／又は該生理学的に許容可能な塩、及び／又はそれらのプロドラッグも含有することができる。さらに、少なくとも１種の式（１）の化合物、及び／又は該生理学的に許容可能な塩、及び／又は該プロドラッグに加えて、本医薬組成物は、１つ以上のその他の治療的有効成分又は予防的有効成分も含有することができる。
【０２０５】
医薬組成物は通常、約１〜９９重量％、例えば約５〜７０重量％、又は約１０〜約３０重量％の式（１）の化合物又は、式（１）の化合物の生理学的に許容可能な塩又はそれらのプロドラッグを含有する。本医薬組成物中に含まれる式（１）、及び／又は該生理学的に許容可能な塩、及び／又は該プロドラッグの有効成分の量は、例えば約５〜５００ｍｇであることができる。投与されるべき本発明の化合物の投与量は、広範であることができる。一日当たりの投与量は、所望の効果に合わせて選択されるべきである。式（１）の化合物又は式（１）の化合物のプロドラッグの約０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の用量は毎日投与され得る。必要であれば、一日当たりの投与量を増減して投与することもできる。
【０２０６】
本発明の医薬組成物中の有効成分の実際の用量レベルは、特定の患者、組成物、及び投与方法において患者に有毒ではない所望の治療反応を達成するために有効な有効成分の量が得られるように、変化させることができる。
【０２０７】
選択される用量レベルは、用いられる本発明の特定の化合物の活性、投与経路、投与時期、用いられる特定の化合物の排泄率、治療期間、用いられる特定の化合物と組み合わせて使用されるその他の薬物、化合物及び／又は材料、治療される患者の年齢、性別、体重、体調、全身の健康状態、及び病歴、並びに医学分野で周知の同様の要因などを含む種々の要因に依存するであろう。
【０２０８】
本発明の医薬組成物は、例えば丸剤、錠剤、コーティングされた錠剤、カプセル剤、顆粒又はエリキシル剤の形態で、経口投与することができる。しかし、例えば座薬の形態で直腸的に投与することもでき、又は滅菌注射液もしくは懸濁液の形態で例えば静脈内、筋肉内、もしくは皮下など非経口的に投与することもでき、又は例えば溶液もしくは貼付剤の形態で局所的に投与することもでき、又は例えばエアゾールもしくは鼻スプレーの形態でその他の方法で投与することもできる。
【０２０９】
本発明の種々の実施形態の活性に実質的に影響を及ぼさない修正は、本明細書中に開示された発明の範囲に含まれると理解される。
実施例
以下の用語／略称／化学式が実施例で用いられる。
Ｌ ：リットル
ｍＬ ：ミリリットル
μＬ ：マイクロリットル
ｇ ：グラム
ｍｇ ：ミリグラム
μｇ ：マイクログラム
ｎｇ ：ナノグラム
ｍＭ ：ミリモル
μＭ ：マイクロモル
Ｈ ：時間
ｍｉｎ ：分
ｌｐｍ ：リットル／分
ｒｐｍ ：毎分回転数
ＨＰＬＣ ：高速液体クロマトグラフィー
ＴＬＣ ：薄層クロマトグラフィー
ＨＯＢｔ ：Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＣＯ2 ：二酸化炭素
ＮａＯＨ ：水酸化ナトリウム
ＫＯＨ ：水酸化カリウム
ＮａＨＣＯ3 ：炭酸水素ナトリウム
Ｎａ2ＣＯ3 ：炭酸ナトリウム
ＮａＣｌ ：塩化ナトリウム
ＨＣｌ ：塩酸
ＥｔＯＨ ：エタノール
ＤＭＳＯ ：ジメチルスルホキシド
ＰＥＧ ：ポリエチレングリコール
ＬＰＳ ：リポ多糖体
ＲＰＭＩ ：ローズウェル・パーク・メモリアル・インスティテュート
ＦＢＳ ：ウシ胎児血清
ＰＭＡ ：ホルボールミリステートアセテート
ＥＬＩＳＡ ：酵素結合免疫測定法
ＩＣ50 ：５０％阻害濃度
ＰＢＳ ：リン酸緩衝食塩水生理食塩水
ＤＰＢＳ ：ダルベッコリン酸緩衝液
ＮＢＦ ：基準緩衝ホルマリン
ＫＲＰＨ緩衝液 ：クレブス−リンゲル−リン酸緩衝液
トリス−ＨＣｌ ：２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール塩酸塩
Ｔｈ１サイトカイン ：Ｔヘルパー１サイトカイン
μＣｉ ：マイクロキュリー
ＰＨＡ ：フィトヘムアグルチニン
ＣＰＭ ：カウント毎分
ｈＰＢＭＣ ：ヒト末梢血単核球
ＥＤＴＡ ：エチレンジアミン四酢酸
ＭＴＳ ：（３−（４，５−ジメチルチアゾル−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホニル）−２Ｈ−テトラゾリウム）
ＰＭＳ ：フェナジン メトスルホン酸塩
ＦＣＳ ：ウシ胎児血清
ＲＴＱ−ＰＣＲ ：リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応
抗−ＣＤ３ ：抗−分化抗原群３
抗−ＣＤ２８ ：抗−分化抗原群２８
ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム
ＴＢＳ ：トリス−緩衝生理食塩水
ＨＲＰ ：西洋ワサビペルオキシダーゼ
ｗ／ｖ ：重量／体積
ｖ／ｖ ：（溶質の）体積／（溶媒の）体積
ＤＳＳ ：デキストラン硫酸ナトリウム
ＭＡＰＫ ：マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ
ＡＴＣＣ ：アメリカ培養細胞コレクション
Ｈｂ ：ヘモグロビン
ＣＭＣ ：カルボキシメチルセルロース
ＤＡＩ ：疾病活性指数
ｐ．ｏ． ：経口投与
ｓ．ｃ． ：皮下投与
ｂ．ｉ．ｄ ：１日２回
室温 ：２５±５℃
化合物の調製
実施例１
工程１
培養物Ｎｏ．ＰＭ０２２４３５５の単離
ａ）培地（ＣＳＰＹＭＥ寒天）の組成：
ブドウ糖１５ｇ、コーンスティープリカー５ｇ、ペプトン７．５ｇ、酵母菌抽出物７．５ｇ、炭酸カルシウム２．０ｇ、塩化ナトリウム５ｇ、脱塩水１．０Ｌ、最終ｐＨ（２５℃）７．０。
ｂ）インドのカルナータカ州ＢｅｌｌａｒｙのＨｏｓａｌｉｎｇｐｕｒ村近辺の作物畑から黒色土試料を収集し、滅菌プラスチック袋に移した。試料を４〜８℃で維持した。
ｃ）上記土からの放線菌の単離：
土（約１ｇ）を滅菌脱塩水（１０ｍＬ）に加え、得られた混合物を５５℃で６分間加熱し、放線菌胞子を豊富に形成し、真正細菌を制限した。加熱した試料の１０-3希釈液１００μＬを、バルク種子法（ｂｕｌｋ ｓｅｅｄ ｍｅｔｈｏｄ）で、トウモロコシデンプンペプトン酵母菌マルツエキス（ＣＳＰＹＭＥ）寒天（アンホテリシンＢを含有する、２０μｇ／ｍＬ）培地上に蒔いた。１６８時間後に目に見えるコロニーを採取して純化し、使用するためにＣＳＰＹＭＥスラント上に維持した。この培養物には、培養物Ｎｏ．ＰＭ０２２４３５５が割り振られた。
【０２１０】
培養物Ｎｏ．ＰＭ０２２４３５５は、世界知的所有権機関（ＷＩＰＯ）が承認した国際寄託当局（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｙ Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ（ＩＤＡ））である微生物工学研究所（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）（Ｓｅｃｔｏｒ ３９−Ａ，Ｃｈａｎｄｉｇａｒｈ−１６０ ０３６，Ｉｎｄｉａ）の微生物タイプ培養物コレクション（Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｙｐｅ
Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＭＴＣＣ）に寄託され、受入番号ＭＴＣＣ
５３４０が与えられた。
【０２１１】
工程２
培養物Ｎｏ．ＰＭ０２２４３５５の維持
ａ）培地（ＩＳＰ２）の組成：
酵母菌抽出物４ｇ、マルツエキス１０ｇ、ブドウ糖４ｇ、寒天２０ｇ、脱塩水１．０Ｌ、最終ｐＨ（２５℃）７．０〜７．２。
ｂ）培養物Ｎｏ．ＰＭ０２２４３５５は、長期間保存するため、グリセロールバイアル瓶
に−７０℃で維持された。定期的に、ＩＳＰ−２培地を使用して、該生存度を調べた。
【０２１２】
実施例２
振とうフラスコ内でのＰＭ０２２４３５５培養物の発酵
ａ）種培地の組成：
ブドウ糖１５ｇ、コーンスティープリカー５ｇ、大豆粕１５ｇ、炭酸カルシウム２ｇ、塩化ナトリウム５ｇ、脱塩水１．０Ｌ、最終ｐＨ（２５℃）６．５〜７．５。
ｂ）種培地（４０ｍＬ）を三角フラスコ（５００ｍＬ）中に分散させ、フラスコを１２１℃で３０分間加圧滅菌した。フラスコを室温まで冷却し、各フラスコに、スラント上のループ一杯の成長が良好な産生株（培養物Ｎｏ．ＰＭ０２２４３５５）を接種し、回転振とう器上で７０〜７４時間、２３０〜２５０ｒｐｍ、３０℃（±１℃）で振とうさせ、種培養物を得た。
ｃ）産生培地の組成：
グリセロール３０ｇ、ブドウ糖３ｇ、酵母菌抽出物２ｇ、塩化ナトリウム３ｇ、硝酸ナトリウム１ｇ、炭酸カルシウム３ｇ、ペプトン３ｇ、微量食塩水（ｔｒａｃｅ ｓａｌｔ
ｓｏｌｕｔｉｏｎ）１ｍＬ／Ｌ、脱塩水１．０Ｌ、最終ｐＨ（２５℃）６．５〜７．５。
ｄ）産生培地（２００ｍＬ）を三角フラスコ（１０００ｍＬ）中に分散させ、フラスコを１２１℃で３０分間加圧滅菌して２９℃〜３０℃まで冷却し、（実施例２（ｂ）で得られた）種培養物５ｍＬを各フラスコに播種した。
ｅ）発酵パラメーター：
温度２９℃〜３０℃、攪拌２３０〜２５０ｒｐｍ、及び採取時間４６〜５０時間。培養ブロスの採取ｐＨは６．０〜７．０であった。
【０２１３】
実施例３
工程１
酢酸エチルを使った培養ブロスの抽出
酢酸エチル（１Ｌ）を使用して、（実施例２で得られた）全ブロス（１Ｌ）を抽出した。有機層を分離して濃縮し、粗酢酸エチル抽出物を得た。
【０２１４】
工程２
粗酢酸エチル抽出物の精製
カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム中メタノール）によって、（実施例３工程１で得られた）粗酢酸エチル抽出物を精製した。ＴＬＣ（シリカゲル、クロロホルム−メタノール ９：１、検出：２５４ｎｍ）により、フラクションを監視した。クロロホルム中３％メタノールを用いて溶出したフラクションを濃縮し、粉末を得た。メタノールを使用して得られた粉末を結晶化し、白色の化合物を得た。
【０２１５】
1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，５００ＭＨｚ）：δ６．６２（ｄｄ，１Ｈ），６．２６（ｓ，１Ｈ），６．１２（ｄｄ，１Ｈ），５．６９（ｂｒ ｄ，１Ｈ），５．５５（ｂｒ ｄ，１Ｈ），５．３１（ｄｄｑ，１Ｈ），５．１２（ｄｄ，１Ｈ），５．１１（ｂｒ ｄ，１Ｈ），４．９３（ｓ，２Ｈ）４．５８（ｄｄ，１Ｈ），４．２５（ｔ，１Ｈ），４．１（ｄｄ，１Ｈ）３．９０（ｔ，１Ｈ），３．８８（ｍ，１Ｈ）３．８２（ｄｄ，１Ｈ），３．６３（ｍ，１Ｈ），３．５８（ｄｄ，１Ｈ），３．５４（ｓ，３Ｈ），３．３５（ｄｑ，１Ｈ），３．３２（ｂｒ ｄ，１Ｈ），３．３０（ｓ，１Ｈ），２．５（ｍ，１Ｈ），２．２３（ｍ，．１Ｈ），．２．２１（ｍ，２Ｈ），２．０８（ｍ，１Ｈ）２．０７（ｂｒ３Ｈ），１．９０（ｍ，１Ｈ），１．８４（ｂｒ Ｓ，３Ｈ），１．６２（ｍ，１Ｈ），１．６０（ｍ，２Ｈ），１．５９（ｄｑ，１Ｈ）１．５７（ｄ，３Ｈ），１．３７（ｄ，３Ｈ），１．２８（ｍ，１Ｈ），）１．２３（ｍ，２Ｈ），１．１２（ｄ，３Ｈ），１．１０（ｄ，３Ｈ），１．０７（ｄ，３Ｈ），１．０１（ｄ，３Ｈ），０．８９（ｔ
，３Ｈ），０．８２（ｄ，３Ｈ）；ＭＳ：ｍ／ｅ８６５。
【０２１６】
プロトンＮＭＲデータを報告されたデータと比較することにより、化合物をコンカナマイシンであると特徴づけた（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．４５，Ｎｏ．７，１１０８−１１１６，（１９９２））。
【０２１７】
実施例３で得られた化合物を標準化合物として使用した。
実施例４
発酵槽内での培養物Ｎｏ．ＰＭ０２２４３５５の培養
工程１
振とうフラスコ内での種培養物の調製
ａ）培地の組成：
ブドウ糖１５ｇ、コーンスティープリカー５ｇ、大豆粕１５ｇ、炭酸カルシウム２ｇ、塩化ナトリウム５ｇ、脱塩水１．０Ｌ、ｐＨ（２５℃）６．５〜７．５。
ｂ）種培地（２００ｍＬ）を三角フラスコ（１０００ｍＬ）内に分散させ、フラスコを１２１℃で３０分間加圧滅菌した。フラスコを室温まで冷却し、各フラスコに、スラント上のループ一杯の成長が良好な産生株（培養物Ｎｏ．ＰＭ０２２４３５５）を接種し、回転振とう器上で７０〜７４時間、２３０〜２５０ｒｐｍ、２９℃〜３０℃で振とうさせ、種培養物を得た。
【０２１８】
工程２
発酵
ａ）産生培地の組成：
グリセロール３０ｇ、ブドウ糖３ｇ、酵母菌抽出物２ｇ、塩化ナトリウム３ｇ、硝酸ナトリウム１ｇ、炭酸カルシウム３ｇ、ペプトン３ｇ、微量食塩水１ｍＬ／Ｌ、脱塩水１．０Ｌ、ｐＨ（２５℃）６．５〜７．５。
ｂ）発酵槽（１５０Ｌ）内において、上記の産生培地（１００Ｌ）を除泡剤であるデスモフェン（ｄｅｓｍｏｐｈｅｎ）（３０ｍＬ）とともに系内で３０分間１２１℃にて滅菌し、２９℃〜３０℃まで冷却し、（実施例４の工程１（ｂ）で得られた）種培養物２．５〜３．５Ｌを播種した。
ｃ）発酵パラメーター：
温度２９℃〜３０℃、攪拌１００ｒｐｍ、通気６０ｌｐｍ、採取時間４６〜５０時間。発酵ブロス内でのコンカナマイシンの生成は、ＴＬＣ（シリカゲル、クロロホルム―メタノール９：１、検出：２５４ｎｍ）で標準化合物のコンカナマイシンＡと比較することにより同定された。培養ブロスの採取ｐＨは６．０〜７．０であった。
【０２１９】
実施例５
培養ブロスＰＭ０２２４３５５の単離及び精製
工程１
抽出
酢酸エチル（９０Ｌ）を使用して、（実施例４の工程２（ｃ）で得られた）全ブロス（９０Ｌ）を抽出した。有機層を分離して濃縮し、粗酢酸エチル抽出物を得た。収量：１２ｇ。
【０２２０】
工程２
精製
カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム中メタノール）によって（実施例５の工程１で得られた）粗酢酸エチル抽出物を精製した。コンカナマイシンを参照基準として使用して、ＴＬＣ（シリカゲル、クロロホルム−メタノール９：１、検出：２５４ｎｍ）により、フラクションを監視した。クロロホルム中３％メタノールを使って溶出し
たフラクションを濃縮し、コンカナマイシン（５ｇ）を含む濃縮抽出物を得た。コンカナマイシンを含む濃縮抽出物をメタノール中に溶解し、１０〜１２時間４℃で維持し、濾過して粉末（収量：０．６ｇ）を得た。ＬＣＭＳにより、この粉末は、コンカナマイシンＡとコンカナマイシンＣの混合物（分子量８６５及び８２２）を含有することが同定された。これは、粗コンカナマイシン原料として参照される。
【０２２１】
実施例６
（３Ｚ，５Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−１８−（（６Ｅ，１０Ｅ）−３，９−ジヒドロキシ−４，８−ジメチル−５−オキソドデカ−６，１０−ジエン−２−イル）−９−エチル−８，１０−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−５，７，１１，１３−テトラメチルオキサシクロオクタデカ−３，５，１３，１５−テトラエン−２−オン
【０２２２】
【化７４】
１０℃でＮａＯＨのメタノール溶液（０．０３Ｍ）を（実施例５工程２で得られた）粉末（１００ｍｇ）に加え、得られた混合物を２０分間攪拌した。ＨＣｌ（１Ｎ）を使用して反応混合物を中和し、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、石油エーテル中３０％酢酸エチル）により粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：５５ｍｇ。
【０２２３】
ＨＰＬＣ：９５％純度［ＲＰ−１８（４ｍｍ×２５０ｍｍ）カラム、３５分間２５℃にて水中にアセトニトリル２〜１００％勾配、検出：２２０ｎｍ］；ＭＳ：ｍ／ｅ６７４；
1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，５００ＭＨｚ）：δ６．７７（ｄｄ，１Ｈ），６．６（ｄｄ，１Ｈ），６．２７（ｓ，１Ｈ），６．１２（ｄｄ，１Ｈ），５．６７（ｂｒ．ｄ，１Ｈ），５．６４（ｂｒ．ｄ，１Ｈ），５．４９（ｄｄ，１Ｈ），５．３８（ｄｄ．ｑ，１Ｈ），５．１２（ｄｄ，１Ｈ），５．１０（ｄｑ，１Ｈ），３，８９（ｔ，１Ｈ），３．８０（ｄｄ，１Ｈ），３．６４（ｄｄ，１Ｈ），３．５３（ｓ，３Ｈ），３．４８（ｔ，１Ｈ），３．２３（ｓ，３Ｈ），２．９７（ｂｒ．ｄ，１Ｈ），２．９２（ｄ，１Ｈ），２．５８（ｍ，１Ｈ），２．４３（ｍ，１Ｈ），２．３１（ｍ，１Ｈ），１．９９（ｓ，３Ｈ），１．９（ｂｒ．ｓ，３Ｈ），１．８８（ｍ，１Ｈ），１．８６（ｍ，２Ｈ），１．６３（ｄｄ，３Ｈ），１．４５（ｍ，１Ｈ），１．２３（ｍ，２Ｈ），１．１５（ｄ，３Ｈ），１．０１（ｄ，３Ｈ），１．００（ｄ，３Ｈ）０．９２（ｄ，３Ｈ），０．９１（ｔ，３Ｈ），０．８９（ｄ，３Ｈ）。
【０２２４】
13ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１２５ＭＨｚ）：δ２００．２，１６２．４，１４７．４，１４０．７，１４０．４，１４０．２，１３９．４，１３１．７，１３１．５，１２８．６，１２６．６，１２５．５，１２４．１，１２１．３，８０．９，７６．８，７３．３，７２．９，７０．８，７０．０，５８．３，５７．３，４４．８，４４．１，４１．９，４０．９，３７．８，３４．１，３３．３，２０．８，２０．６，１９．２，１６．１，１４．９，１３．８，１２．７，１０．５，９．０，７．９。
【０２２５】
得られた化合物を、プロトンＮＭＲデータを報告されたデータ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏ
ｎ ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．３９，３８５７−６０，（１９８１））と比較することにより、
（３Ｚ，５Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−１８−（（６Ｅ，１０Ｅ）−３，９−ジヒドロキシ−４，８−ジメチル−５−オキソドデカ−６，１０−ジエン−２−イル）−９−エチル−８，１０−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−５，７，１１，１３−テトラメチルオキサシクロオクタデカ−３，５，１３，１５−テトラエン−２−オンと特徴づけた。
【０２２６】
実施例７
（３Ｚ，５Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−１８−（（５Ｚ，６Ｅ，１０Ｅ）−３，９−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシミノ）−４，８−ジメチルドデカ−６，１０−ジエン−２−イル）−９−エチル−８，１０−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−５，７，１１，１３−テトラメチルオキサシクロオクタデカ−３，５，１３，１５−テトラエン−２−オン
【０２２７】
【化７５】
実施例６の化合物（１２ｍｇ）を、ピリジン（１ｍＬ）とエタノール（１ｍＬ）の混合物中に溶解し、窒素下で２５℃にて４時間ヒドロキシルアミン塩酸塩（３．１７ｍｇ）と反応させた。水を反応混合物に加え、得られた反応混合物を酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、石油エーテル中４０％酢酸エチル）により粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：１０ｍｇ。ＨＰＬＣ：９９．２％純度、保持時間２５．２分間［ＲＰ−１８（４ｍｍ×．２５０ｍｍ）カラム、３５分間２５℃にて水中にアセトニトリル２〜１００％勾配、検出：２２０ｎｍ］；ＭＳ：ｍ／ｅ６８９；
1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，５００ＭＨｚ）：δ１０．７８（ｓ，１Ｈ），６．６４（ｄｄ，１Ｈ），６．５４（ｄｄ，１Ｈ），６．２７（ｓ，１Ｈ），６．０５（ｄｄ，１Ｈ），５．６７（ｂ ｒｄ，１Ｈ），５．６２（ｄ，１Ｈ），５．４９（ｄｄ，１Ｈ），５．３８（ｄｄｑ，１Ｈ），５．２５（ｄ，１Ｈ），５．０９（ｄｑ，１Ｈ），３，８８（ｔ，１Ｈ），３．７８（ｄｄ，１Ｈ），３．６４（ｄｄ，１Ｈ），３．４８（ｓ，３Ｈ），３．４８（ｔ，１Ｈ），３．４２（ｓ，３Ｈ），２．９７（ｂｒ ｄ，１Ｈ），２．８９（ｄ，１Ｈ），２．５４（ｍ，１Ｈ），２．４２（ｍ，１Ｈ），２．２８（ｍ，１Ｈ），２．０１（ｓ，３Ｈ），１．９６（ｍ，２Ｈ），１．８７（ｍ，１Ｈ），１．８３（ｂｒ Ｓ，３Ｈ），１．６２（ｄｄ，３Ｈ），１．４７（ｍ，１Ｈ），１．２３（ｍ，２Ｈ），１．０７（ｄ，３Ｈ），１．０１（ｄ，３Ｈ），０．９９（ｄ，３Ｈ），０．９４（ｄ，３Ｈ），０．９１（ｔ，３Ｈ），０．８５（ｄ，３Ｈ）。
【０２２８】
13Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１２５ＭＨｚ）：δ１６４．０，１５７．０，１４２．３，１４１．１，１４０．０，１３３．７，１３３．１，１３０．４，１２９．５，１２７．１，１２５．６，１２２．９，１２０．４，１１８．５，８２．９，７８．６，７５．０，７４．７，７２．７，７２．４，５９．４，５５．６，４３．７，４０．４，３９．９，３９．４，３６．１，３５．３，３３．２，２２．７，２２．３，１７．９，１７．８，１６．８，１６．３，１４．４，１２．４，１１．９，１０．７。
【０２２９】
実施例７Ａ
分析的ＨＰＬＣ［溶出溶媒としてクロロホルム中２％メタノールを使用したシリカゲルカラム（２５０ｍｍ×４ｍｍ）；流量１ｍＬ／分］で、実施例７の化合物のオキシム異性体類を分離した。異性体類は、それぞれ８．９分及び１０．２分の保持時間を有する。両方の異性体類は、６８９の同一の分子量を有する。
【０２３０】
実施例８
（３Ｚ，５Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−１８−（（５Ｅ，６Ｅ，１０Ｅ）−３，９−ジヒドロキシ−５−（メトキシイミノ）−４，８−ジメチルドデカ−６，１０−ジエン−２−イル）−９−エチル−８，１０−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−５，７，１１，１３−テトラメチルオキサシクロオクタデカ−３，５，１３，１５−テトラエン−２−オン
【０２３１】
【化７６】
実施例６の化合物（１０ｍｇ）を、ピリジン（５００μＬ）とエタノール（５００μＬ）の混合物中に溶解し、窒素下で２５℃にて４時間、メトキシアミン塩酸塩（６．５ｍｇ）と反応させた。水を反応混合物に加え、反応混合物を酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。分取ＨＰＬＣ［Ｅｕｒｏｓｐｅｒｅ−１００、Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×８ｍｍ）、移動相：アセトニトリル―水（１：１無勾配）］によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：６．５ｍｇ；ＭＳ：ｍ／ｅ：７０３。
【０２３２】
実施例９
（３Ｚ，５Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−１８−（（５Ｅ，６Ｅ，１０Ｅ）−５−（ベンジルオキシイミノ）−３，９−ジヒドロキシ−４，８−ジメチルドデカ−６，１０−ジエン−２−イル）−９−エチル−８，１０−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−５，７，１１，１３−テトラメチルオキサシクロオクタデカ−３，５，１３，１５−テトラエン−２−オン
【０２３３】
【化７７】
実施例６の化合物（１０ｍｇ）をピリジン（３００μＬ）とエタノール（７００μＬ）の混合物中に溶解し、窒素下で２５℃にて４時間ピリジン中ベンジルオキシアミン塩酸塩（８．４ｍｇ）と反応させた。水を反応混合物に加え反応混合物を酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させて濃縮した。分取ＨＰ
ＬＣ［Ｅｕｒｏｓｐｅｒｅ−１００、Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×８ｍｍ）、移動相：アセトニトリル−水（１：１無勾配）］によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：７．２ｍｇ；ＭＳ：ｍ／ｅ：７７９。
【０２３４】
実施例１０
（（Ｚ）−（（６Ｅ，１０Ｅ）−２−（（４Ｅ，６Ｅ，１４Ｅ，１６Ｚ）−１１−エチル−１０，１２−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−７，９，１３，１５−テトラメチル−１８−オキソオキサシクロオクタデカ−４，６，１４，１６−テトラエン−２−イル）−３，９−ジヒドロキシ−４，８−ジメチルドデカ−６，１０−ジエン−５−イリデン）アミノオキシ）酢酸
【０２３５】
【化７８】
実施例６の化合物（１０ｍｇ）を、窒素下で２５℃にて１４時間、ピリジン（２ｍＬ）及びメタノール（４ｍＬ）中でカルボキシメチルヒドロキシルアミンヘミ塩酸塩（４．８ｍｇ）と反応させた。水を反応混合物に加え、反応混合物を酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。分取ＨＰＬＣ［Ｅｕｒｏｓｐｅｒｅ−１００、Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×８ｍｍ）、移動相：アセトニトリル−水（１：１無勾配）］によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：７．８ｍｇ；ＭＳ：ｍ／ｅ７４７。
【０２３６】
実施例１１
（３Ｚ，５Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−１８−（（５Ｚ，６Ｅ，１０Ｅ）−３，９−ジヒドロキシ−４，８−ジメチル−５−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−２−オキソエトキシイミノ）ドデカ−６，１０−ジエン−２−イル）−９−エチル−８，１０−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−５，７，１１，１３−テトラメチルオキサシクロオクタデカ−３，５，１３，１５−テトラエン−２−オン
【０２３７】
【化７９】
ジクロロメタン（２ｍＬ）中に実施例１０（１０ｍｇ）の化合物を含む溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（３ｍｇ）及びＨＯＢｔ（２ｍｇ）を添加した。２０分間後、
Ｎ−メチル−ピペラジン（１．５ｍｇ）を添加した。反応混合物を１８時間窒素雰囲気下にて攪拌した。冷水を反応混合物に加え、有機層を分離した。反応混合物をジクロロメタン（３×５ｍＬ）で抽出した。混合有機層を水（２×５ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。分取ＨＰＬＣ［Ｅｕｒｏｓｐｅｒｅ−１００、Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×８ｍｍ）、移動相：アセトニトリル−水（１：１無勾配）］によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：７．７ｍｇ；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｅ８３０（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２３８】
実施例１２
２−（（Ｚ）−（（６Ｅ，１０Ｅ）−２−（（４Ｅ，６Ｅ，１４Ｅ，１６Ｚ）−１１−エチル−１０，１２−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−７，９，１３，１５−テトラメチル−１８−オキソオキサシクロオクタデカ−４，６，１４，１６−テトラエン−２−イル）−３，９−ジヒドロキシ−４，８−ジメチルドデカ−６，１０−ジエン−５−イリデン）アミノオキシ）−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アセトアミド
【０２３９】
【化８０】
ジクロロメタン（２ｍＬ）中に実施例１０の化合物（１０ｍｇ）を含む溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（３ｍｇ）及びＨＯＢｔ（２ｍｇ）を添加した。２０分後、エタノールアミン（１ｍｇ）を添加した。反応混合物を１８時間窒素雰囲気下にて攪拌した。冷水を反応混合物に加え、有機層を分離した。反応混合物をジクロロメタン（３×５ｍＬ）で抽出した。混合された有機層を水（２×５ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。分取ＨＰＬＣ［Ｅｕｒｏｓｐｅｒｅ−１００、Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×８ｍｍ）、移動相：アセトニトリル−水（１：１無勾配）］によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：５．８ｍｇ；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｅ７９１（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２４０】
実施例１３
（３Ｚ，５Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−１８−（（５Ｚ，６Ｅ，１０Ｅ）−３，９−ジヒドロキシ−４，８−ジメチル−５−（２−オキソ−２−（ピペリジン−１−イル）エトキシイミノ）ドデカ−６，１０−ジエン−２−イル）−９−エチル−８，１０−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−５，７，１１，１３−テトラメチルオキサシクロオクタデカ−３，５，１３，１５−テトラエン−２−オン
【０２４１】
【化８１】
ジクロロメタン（２ｍＬ）中に実施例１０の化合物（１０ｍｇ）を含む溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（３ｍｇ）及びＨＯＢｔ（２ｍｇ）を添加した。２０分後、ピペリジン（１．３ｍｇ）を添加した。反応混合物を１８時間窒素雰囲気下にて攪拌した。冷水を反応混合物に加え、有機層を分離した。反応混合物をジクロロメタン（３×５ｍＬ）で抽出した。混合された有機層を水（２×５ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。分取ＨＰＬＣ［Ｅｕｒｏｓｐｅｒｅ−１００、Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×８ｍｍ）、移動相：アセトニトリル−水（１：１無勾配）］によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：８．０ｍｇ；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｅ８１５（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２４２】
実施例１４
（３Ｚ，５Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−１８−（（５Ｚ，６Ｅ，１０Ｅ）−５−（２−（１，４’−ビピペリジン−１’−イル）−２−オキソエトキシイミノ）−３，９−ジヒドロキシ−４，８−ジメチルドデカ−６，１０−ジエン−２−イル）−９−エチル−８，１０−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−５，７，１１，１３−テトラメチルオキサシクロオクタデカ−３，５，１３，１５−テトラエン−２−オン
【０２４３】
【化８２】
ジクロロメタン（２ｍＬ）中に実施例１０の化合物（１０ｍｇ）を含む溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（３ｍｇ）及びＨＯＢＴ（２ｍｇ）を添加した。２０分後、４−ピペリジノ−ピペリジン２．５ｍｇ）を添加した。反応混合物を１８時間窒素雰囲気下にて攪拌した。冷水を反応混合物に加え、有機層を分離した。反応混合物をジクロロメタン（３×５ｍＬ）で抽出した。混合された有機層を水（２×５ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。分取ＨＰＬＣ［Ｅｕｒｏｓｐｅｒｅ−１００、Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×８ｍｍ）、移動相：アセトニトリル−水（１：１無勾配）］
によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：７．５ｍｇ；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｅ８９８（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２４４】
実施例１５
２−（（Ｚ）−（（６Ｅ，１０Ｅ）−２−（（４Ｅ，６Ｅ，１４Ｅ，１６Ｚ）−１１−エチル−１０，１２−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−７，９，１３，１５−テトラメチル−１８−オキソオキサシクロオクタデカ−４，６，１４，１６−テトラエン−２−イル）−３，９−ジヒドロキシ−４，８−ジメチルドデカ−６，１０−ジエン−５−イリデン）アミノオキシ）−Ｎ−（４−フルオロベンジル）アセトアミド
【０２４５】
【化８３】
ジクロロメタン（２ｍＬ）中に実施例１０の化合物（１０ｍｇ）を含む溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（３ｍｇ）及びＨＯＢｔ（２ｍｇ）を添加した。２０分後、４−フルオロベンジルアミン（１．５ｍｇ）を添加した。反応混合物を１８時間窒素雰囲気下にて攪拌した。冷水を反応混合物に加え、有機層を分離した。反応混合物をジクロロメタン（３×５ｍＬ）で抽出した。混合された有機層を水（２×５ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。分取ＨＰＬＣ［Ｅｕｒｏｓｐｅｒｅ−１００、Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×８ｍｍ）、移動相：アセトニトリル−水（１：１無勾配）］によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：８．８ｍｇ；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｅ８５５（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２４６】
実施例１６
（２Ｅ，６Ｅ）−Ｎ−（４−（（４Ｅ，６Ｅ，１４Ｅ，１６Ｚ）−１１−エチル−１０，１２−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−７，９，１３，１５−テトラメチル−１８−オキソオキサシクロオクタデカ−４，６，１４，１６−テトラエン−２−イル）−３−ヒドロキシペンタン−２−イル）−５−ヒドロキシ−４−メチルオクタ−２，６−ジエンアミド
【０２４７】
【化８４】
実施例６の化合物（３ｍｇ）をアセトン（１ｍＬ）中に溶解させ、窒素下で０℃にて２
時間、ＫＯＨ（１ｍｇ）及び塩化トシル（１．８ｍｇ）と反応させた。室温にて１時間攪拌を続けた。冷水を反応混合物に加え、反応混合物を酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。分取ＴＬＣ［シリカゲル、移動相：酢酸エチル−ヘキサン（１：１）］によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：０．７ｍｇ。ＭＳ：ｍ／ｅ：６８９。
【０２４８】
実施例１７
（３Ｚ，５Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−９−エチル−８，１０−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−５，７，１１，１３−テトラメチル−１８−（（６Ｅ，１０Ｅ）−３，５，９−トリヒドロキシ−４，８−ジメチルドデカ−６，１０−ジエン−２−イル）オキサシクロオクタデカ−３，５，１３，１５−テトラエン−２−オン
【０２４９】
【化８５】
実施例６の化合物（５ｍｇ）をテトラヒドロフラン（１ｍＬ）中に溶解させ、窒素下で０℃にて２０分間水素化ホウ素ナトリウム（０．５６ｍｇ）及び塩化セリウム（ＩＩＩ）（ＣｅＣｌ3）（０．９ｍｇ）と反応させ、次に室温にて２０分間攪拌した。冷水を反応混合物に加え、酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。分取ＴＬＣ［シリカゲル、移動相：ヘキサン−酢酸エチル（１：１）］によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：２．７ｍｇ；ＭＳ：ｍ／ｅ６７６。
【０２５０】
薬理学
ＴＮＦ−α、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、及びインターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８）から選択される１つ以上のサイトカインの活性阻害における式（１）の化合物及び製剤の有効性は、当該技術分野において周知の薬理学的分析によって決定され、以下に説明される。
【０２５１】
実施例１８
ＬＰＳ刺激ＴＨＰ−１細胞のスクリーニング
「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５１，５６３１−５６３８，（１９９３」）を参照して、ＴＨＰ−１細胞（ＡＴＣＣ番号：ＴＩＢ２０２）におけるＬＰＳ（Ｅｓｃｈｅｒｃｈｉａ ｃｏｌｉ ０１２７：Ｂ８，米国Ｓｉｇｍａ社）によるＩＬ−６（米国ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）産生を設計し、本参照文献の開示は、本分析の教示のために参照することにより本明細書に含まれる。
【０２５２】
１０％ＦＢＳ（米国ＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を含有する、１００Ｕ／ｍＬペニシリン及び１００ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン（１００倍溶液、米国Ｓｉｇｍａ社）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地（英国Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ社）でＴＨＰ−１細胞を培養した。９６−ウェルプレート（米国Ｎｕｎｃ社）に１ウェル当たり２５，０００個の細胞を接種した。ＰＭＡ（米国Ｓｉｇｍａ社、ＲＰＭＩ中１００μｇ／ｍＬストックとして調製し、５ｎｇ／ｍＬまで希釈した）を用いて細胞を分化した。試験化合物（ＤＭＳＯ中２０ｍＭストックとして調製し、分析では次の終濃度が得られるようにＤＭＳＯで希釈し
た：１００、１０、１、０．１、０．０１、０．００１、及び０．０００１μＭ）又は溶媒（０．５％ＤＭＳＯ）を細胞に添加し、これらの細胞を３０分間３７℃にて保温した。終濃度１μｇ／ｍＬが得られるように、ＬＰＳ（米国Ｓｉｇｍａ社、ＰＢＳ中１ｍｇ／ｍＬストックとして調製した）を加えた。３７℃にて２４時間、５％ＣＯ2でプレートを保温した。上清を回収し、製造者（米国ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）の記載に従ってＥＬＩＳＡによりＴＮＦ−α及びＩＬ−６の分析を行った。対照と比較したサイトカイン放出のパーセント阻害を計算した。非線形回帰法によりＩＣ50値を計算した。得られた結果を表１にまとめた。
【０２５３】
【表１】
本実験の標準物質として、デキサメタゾンが使用される。
【０２５４】
結論：本発明の代表的な化合物は、好ましくは、ＴＨＰ−１細胞におけるＬＰＳ誘導ＩＬ−６産生を阻止した。
実施例１９
正常なｈＰＢＭＣのＴ−細胞増殖
「Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５３，１−９，（１９９４）」、及び「Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，７，６８７−６９２，（２０００）」を参照して、本分析方法を設計し、これらの参照文献の開示は、本分析の教示のために参照することにより本明細書に含まれる。
【０２５５】
工程１
ｈＰＢＭＣの分離
フィコール／ハイパック液（Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ−１０７７，米国Ｓｉｇｍａ社）でヘパリン化静脈血を遠心分離することにより、健康なドナーからｈＰＢＭＣを得た。１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ１６４０培地中に、分離したｈＰＢＭＣを懸濁し、５０，０００細胞／ウェルの密度で９６−ウェルプレート（米国Ｎｕｎｃ社）に接種した。細胞を３７℃にて５％ＣＯ2で２４時間保温した。これらの細胞を使用して、リンパ球増殖並びにサイトカイン放出の分析を行った。
【０２５６】
工程２
リンパ球増殖分析
異なる濃度の試験化合物（ＤＭＳＯ中２０ｍＭストックとして調製され、分析において次
の終濃度が得られるようにＤＭＳＯで希釈した：１００、１０、１、０．１、０．０１、０．００１、及び０．０００１μＭ）を、工程１で得られたプレートに蒔いた細胞に処理し、３０分間保温した。次に、ＰＭＡ５ｎｇ／ｍＬ（米国Ｓｉｇｍａ社、ＲＰＭＩ中１００μｇ／ｍＬストックとして調製し、５ｎｇ／ｍＬまで希釈した）及びＰＨＡ５μｇ／ｍＬ（米国Ｓｉｇｍａ社、ＲＰＭＩ中１ｍｇ／ｍＬストックとして調製した）で、細胞を刺激した。プレートを３７℃にて５％ＣＯ2で４８時間保温した。１ウェル当たり０．１μＣｉのトリチウムチミジン（インドのＢＡＲＣから入手；１ｍＣｉ／ｍＬのストックとして調製し、ＫＲＰＨ緩衝液中で１０μＣｉ／ｍＬに希釈し、１ウェル当たり２０μＬを添加し、終濃度０．１μＣｉ／ウェルを得た）で細胞を一晩処理し、４８時間後、以下の式を使用して化合物の抗増殖効果を測定した：
【０２５７】
【数１】
対照は、ＰＨＡ及びＰＭＡを有する（刺激された）ｈＰＢＭＣ、ＲＰＭＩを有する（刺激されていない）ｈＰＢＭＣ、ＦＫ５０６を有するｈＰＢＭＣ（正の対照、米国のＳｉｇｍａ社、ＤＭＳＯ中２０ｍＭストックとして調製し、分析において次の終濃度が得られるようにＤＭＳＯで希釈した：１００、１０、１、０．１、０．０１、０．００１、及び０．０００１μＭ）を含む。得られた結果は表２にまとめられる。
【０２５８】
【表２】
実験を実証するための標準物質として、ＦＫ５０６を使用した。
【０２５９】
工程３
サイトカイン放出分析
異なる濃度の試験化合物（ＤＭＳＯ中２０ｍＭストックとして調製し、分析において次の終濃度が得られるようにＤＭＳＯで希釈した：１００、１０、１、０．１、０．０１、０．００１、０．０００１、０．００００１、及び０．０００００１μＭ）を、工程１で得られたプレートに蒔いた細胞に処理し、３０分間保温した。次に、ＰＨＡ（ＲＰＭＩ１６４０培地中１ｍｇ／ｍＬストックとして調製し、５μｇ／ｍＬの最終濃度にて使用）で細胞を刺激した。標準物質として、ＦＫ５０６を使用した。プレートを３７℃にて５％ＣＯ2で４８時間保温した。ＥＬＩＳＡキット（米国ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を使用して、収集した上清中のサイトカインを検出した。分析で評価したサイトカインは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＦＮ−γであった。得られた結は表３及び表４にまとめられる。
【０２６０】
【表３】
実験を実証するための標準物質として、ＦＫ５０６を使用した。
【０２６１】
【表４】
工程４
ｈＰＢＭＣからのコンカナバリン−Ａ−誘導ＩＦＮ−γ産生
フィコール・ハイパック密度勾配遠心分離（１．０７７ｇ／ｍＬ；シグマ−アルドリッチ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）社）を使用して、末梢血単核球（ｈＰＢＭＣ）を回収した。１０％ＦＣＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン（ミズーリ州セントルイスのシグマ・ケミカル（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）社）及び１００ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン（ミズーリ州セントルイスのシグマ・ケミカル（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）社）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地（英国ＰａｓｌｅｙのＧｉｂｃｏ ＢＲＬ社）中に、ｈＰＢＭＣを１×１０6細胞／ｍＬで再懸濁した。試験化合物又は０．５％ＤＭＳＯ（担体対照）を１×１０5ｈＰＢＭＣ／ウェルを３７℃にて３０分間前処理した。その後コンカナバリンＡ（ミズーリ州セントルイスのシグマ・ケミカル（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）社）１μｇ／ｍＬで、前処理した細胞を刺激した。３７℃にて１８時間インキュベーション後、上清を収集し、製造者の記載に従ってＥＬＩＳＡ（ＯｐｔｉＥＩＡ ＥＬＩＳＡセット、ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ社）でヒトＩＦＮ−γの分析を行うまで−７０℃にて保存した。各実験では、誘導ＩＦＮ−γ産生を阻害する正の対照としてシクロスポリン（１μＭ）を使用した。得られた結果を表５にまとめる。
【０２６２】
【表５】
結論：本発明の代表的な化合物は、Ｔｈ１サイトカイン、即ちＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−αの産生を著しく阻止し、さらにＩＬ−６産生を阻害した。
【０２６３】
実施例２０
ヒト単核細胞分析
「Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５２，５９３−５９８，（２００３）」を参照して本分析を設計し、本文献の開示は、分析の教示のために参照することにより本明細書に含まれる。
【０２６４】
本分析の目的は、本発明の化合物の媒介による単球性ＴＨＰ−１細胞株からのＬＰＳ−誘導サイトカインの阻害が、生理学的に関連するヒト細胞に変換されるか否かを決定することである。従って、新たに分離したヒト単核細胞からのＬＰＳ−誘導サイトカイン産生に対する本発明の化合物の効果を確認した。
【０２６５】
健康なドナーから末梢血を収集し、カリウムＥＤＴＡバキュテイナー・チューブ（米国ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ社）に入れた。密度勾配分離（Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ−１０７７；米国Ｓｉｇｍａ社）を使用してｈＰＢＭＣを分離し、分析培地中に懸濁した。本分析培地は、１０％熱失活ＦＢＳ（オーストラリアＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン（米国Ｓｉｇｍａ社）、及び１００ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン（米国Ｓｉｇｍａ社）を含有するＲＰＭＩ培地（米国Ｓｉｇｍａ社）である。コールターカウンターを使用してｈＰＢＭＣの単核細胞をカウントし、続いて分析培地１ｍＬ当たり２×１０5単核細胞で細胞を再懸濁した。２×１０4単核細胞を含有する細胞懸濁液を、９６−ウェルプレート（米国Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに分注した。その後、ｈＰＢＭＣを４〜５時間３７℃にて５％ＣＯ2でインキュベートした。培養中、９６−ウェルプレートの底部に単核細胞が付着した。培養に続いて、非付着リンパ球を洗浄し、付着単核細胞に分析培地を加えた。３７℃にて５％ＣＯ2で培養を４８時間行った後、種々の濃度の試験化合物（ＤＭＳＯ中２０ｍＭストックとして調製；０．０３、０．１、０．３、１、３、１０、３０、及び１００μＭの終濃度が得られるように試験化合物の２０倍濃縮液１μＬを２００μＬ細胞懸濁液中に溶解させた）又は溶媒（０．５％ＤＭＳＯ）又は１０μＭデキサメタゾン（標準ＩＬ−６及びＴＮＦ−α阻害物質、米国Ｓｉｇｍａ社）を用いて、単核細胞を３０分間３７℃にて５％ＣＯ2で前処理し、１μｇ／ｍＬのＬＰＳ（Ｅｓｃｈｅｒｃｈｉａ ｃｏｌｉ ０１１１：Ｂ４，米国Ｓｉｇｍａ社）で刺激した。次に、３７℃にて５時間、５％ＣＯ2で細胞を培養し、続いて上清を収集して−７０℃で保存し、その後ＥＬＩＳＡ（ＯｐｔｉＥＩＡ ＥＬＩＳＡセット、米国ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）でＩＬ−６及びＴＮＦ−αの分析を行った。グラフパッド（Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ）ソフトウエア（プリズム（Ｐｒｉｓｍ）３．０３）を使用して、非線形回帰法によりＩＣ50値を計算した。
【０２６６】
全ての実験において、試験化合物の毒性を確認するため、平行プレートを実行した。ＭＴＳテトラゾリウム塩を含有する細胞増殖分析キット（米国Ｐｒｏｍｅｇａ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を使用して、単核細胞の生存度を評価した。生細胞はＭＴＳを減少させ、有色の生成物を形成する。使用したプロトコルは、製造者の使用説明書に従い、詳細は「Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２８５，Ｃ８１３−Ｃ
８２２，（２００３）」に記載されている。ＭＴＳ／ＰＭＳ保存溶液は、２ｍＬのＭＴＳを１００μＬのＰＭＳ（米国Ｓｉｇｍａ社）と混合することによって調製された。ＭＴＳの保存溶液は、次の様にして調製した：１ｇｍのＭＴＳをカルシウム及びマグネシウムとともに５００ｍＬのＤＰＢＳ中に溶解した。その後、０．２μＭフィルター（米国Ｎｕｎｃ社）を使用して溶液を濾過した。アリコートを−２０℃で保存した。ＰＭＳの保存溶液は、次の様にして調製された：２０ｍＬのＤＰＢＳ中に１８．４ｍｇのＰＭＳをカルシウム及びマグネシウムとともに溶解した。その後、０．２μＭ注射器フィルター（米国ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）社）を使用して滅菌した０．２μＭフィルターを使用して、溶液を濾過した。アリコートを−２０℃で保存した。その後、上述のＭＴＳ／ＰＭＳ溶液４０μＬを、２×１０4個の単核細胞（体積２００μＬ中に再懸濁した）を含有する９６−ウェルプレートの各ウェルに添加した。３７℃にて５％ＣＯ2で５時間培養した後、マイクロウェルプレート分光光度計を使用して、各ウェル内の流体の吸光度を４９０ｎｍで同定した。結果を表６にまとめている。
【０２６７】
【表６】
結論：本発明の代表的な化合物は、ＩＬ−６及びＴＮＦ−αのＬＰＳ−誘導産生を阻害した。
【０２６８】
実施例２１
滑膜組織分析
新たに分離したヒト滑膜組織細胞からのサイトカインの自然産生を阻害する本発明の化合物の能力は、Ｌａｎｃｅｔ，２９，２４４−２４７，（１９８９）を参照して設計され、本参照文献の開示は、分析の教示のために参照することにより本明細書に含まれる。
【０２６９】
滑膜組織は、膝関節置換手術を受ける関節リウマチ患者から入手した。滑膜組織を小試験片に分割し、１００Ｕ／ｍＬペニシリン−Ｇ、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、５０ｎｇ／ｍＬアンホテリシンＢ（米国Ｇｉｂｃｏ社）、１．３３ｍｇ／ｍＬコラゲナーゼ・タイプＩＩ（米国Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、０．５μｇ／ｍＬのＤＮＡｓｅタイプＩ（米国Ｓｉｇｍａ社）、及び８．３３Ｕ／ｍＬヘパリン（インドＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅ．Ｌｉｍｉｔｅｄ）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地（オーストラリアＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）において、３時間３７℃にて５％ＣＯ2で消化した。消化した滑膜組織は、膜（メッシュサイズ７０ミクロン；米国Ｓｉｇｍａ社）に通して濾過した。その後、細胞をＲＰＭＩ１６４０培地で３回洗浄し、完全培地（５％ＦＢＳ及び５％ヒト血清−ＡＢ＋（米国Ｓｉｇｍａ社）において１×１０6細胞／ｍＬの濃度で再懸濁した。トリパンブルー染料排除によって滑膜細胞の生存度を同定し、均一に≧９８％であった。本実験のために、９６−ウェル培養プレート（米国Ｎｕｎｃ社）のウェルに１００μＬの細胞懸濁液を加えた。細胞プレーティ
ングに引き続いて、１００μＬの培地及び１μＬの種々の濃度の試験化合物（試験化合物をＤＭＳＯ中に溶解させ２０ｍＭの保存溶液を得た。分析において０．０３、０．１、０．３、１、３、１０、３０、及び１００μＭの終濃度が得られるように試験化合物の２０倍濃縮液１μＬを２００μＬ細胞懸濁液中に溶解した）を細胞に添加した。ＤＭＳＯの終濃度を０．５％に調節した。対照として溶媒（０．５％ＤＭＳＯ）を使用した。プレートを１６時間３７℃にて５％ＣＯ2でインキュベートした。その後、上清を回収し、−７０℃で保存した。ＯｐｔｉＥＩＡ ＥＬＩＳＡセット（米国ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ社）を使用して、上清中のＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−８の量を分析した。製造者の使用説明書に従ったプロトコルを使用した。ＧｒａｐｈＰａｄソフトウエア（プリズム（Ｐｒｉｓｍ）３．０３）を使用して、非線形回帰法によりＩＣ50値を計算した。
【０２７０】
結果：実施例７の化合物は、関節リウマチ患者から新たに分離した滑膜組織細胞からのＩＬ−６、ＴＮＦ−α、及びＩＬ−８の自然産生を阻害した。ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−８阻害のＩＣ50はそれぞれ、１９、０．３、及び１．３μＭであった。滑膜組織細胞からのＴＮＦ−α及びＩＬ−６の阻害についてのＩＣ50は、ヒト単核細胞分析から得られたＩＣ50値と同等であった。
【０２７１】
実施例２２
ｈＰＢＭＣ膜−単核細胞接触分析
「Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１１７，１１４−１１８、（２００８）」を参照して本分析を設計し、本参照文献の開示は、分析の教示のために参照することにより本明細書に含まれる。
【０２７２】
炎症性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６）の産生をもたらす活性化Ｔ細胞接触媒介単核細胞活性化は、関節リウマチを含む慢性炎症性疾患の発症に寄与する。本分析の目的は、本発明の化合物が、単核細胞からの抗−ＣＤ３／抗−ＣＤ２８活性化ｈＰＢＭＣ媒介ＴＮＦ−α及びＩＬ−６産生を阻害するか否かを調査することである。
【０２７３】
工程１
抗−ＣＤ３／抗−ＣＤ２８でコートプレートの調製
６−ウェルプレート（米国Ｎｕｎｃ社）をヤギ抗−マウスＩｇＧ、Ｆｃ（米国Ｃｈｅｍｉｃｏｎ社）で、コーティング緩衝液（８．４ｇ／ｍＬ ＮａＨＣＯ3、３．５６ｇ Ｎａ2ＣＯ3、ｐＨ９．５）中１６．５μＬ／ｍＬの濃度でコーティングした。プレートを一晩４℃にて滅菌条件下でインキュベートした。２４時間後、プレートを無菌ＰＢＳ（カルシウム／マグネシウムは含まず）にて１回洗浄し、続いて、無菌ＰＢＳ中抗−ＣＤ３（５μｇ／ｍＬ；米国Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）及び抗−ＣＤ２８（１μｇ／ｍＬ；米国Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）カクテルを用いて３時間プレートをインキュベートした。３時間後、プレートをＰＢＳにて１回洗浄し、ｈＰＢＭＣ刺激に使用した。
【０２７４】
工程２
ｈＰＢＭＣ膜の調製
「Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１５，１１７（１）：１１４−１１８，（２００８）」に記載されているＴ−細胞膜の調製に類似の方法によって、ｈＰＢＭＣ膜を調製した。
【０２７５】
末梢血は正常の健康なボランティアから収集され、ｈＰＢＭＣはフィコール・ハイパック密度勾配遠心分離（１．０７７ｇ／ｍＬ；米国Ｓｉｇｍａ社）を使用して回収された。１０％ＦＣＳ（オーストラリアＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン（米国Ｓｉｇｍａ社）及び１００ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン（米国Ｓｉｇｍａ社）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地（英国Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ社）中で、ｈＰＢＭＣ
を３．３３×１０6細胞／ｍＬで再懸濁した。抗−ＣＤ３／抗−ＣＤ２８でコーティングしていない、又はコーティングした、６−ウェルプレート（米国Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに、５×１０6ｈＰＢＭＣを添加した。その後、プレート内のｈＰＢＭＣを３７℃にて５％ＣＯ2で２４時間インキュベートした。インキュベートに引き続いて、６−ウェルプレートの個々のウェル内のｈＰＢＭＣを回収し、まとめて貯蔵し、遠心分離にかけた。その後ｈＰＢＭＣの抗−ＣＤ３／抗−ＣＤ２８活性化を確認するサイトカイン産生の分析のために上清を収集して−７０℃で保存した。ペレットｈＰＢＭＣを低温ＰＢＳで２回洗浄し、トリス−ＨＣｌ緩衝液［５０ｍＭのトリス−ＨＣｌを含有するＰＢＳ、ｐＨ７．４；１ｍＭ ＥＤＴＡ；及びプロテアーゼ阻害薬カクテル（米国Ｒｏｃｈｅ社）］中に再懸濁した。活性化／不活性化ｈＰＢＭＣは、１０，０００〜１２，０００ｒｐｍで１分間均質化（Ｐｏｌｙｔｒｏｎ ＰＴ ３１００ホモジナイザー）することにより分解され、核フラクションは１５分間４０００ｘｇで遠心分離することにより得られ、上清は４５分間４８，０００ｘｇで遠心分離にかけられた。ｈＰＢＭＣ膜のペレットを溶解緩衝液（米国Ｓｉｇｍａ社）中に再懸濁し、Ｂｒａｄｆｏｒｄ（米国Ｓｉｇｍａ社）法よってタンパク質濃度を決定した。
【０２７６】
工程３
ｈＰＢＭＣ膜−単核細胞接触バイオエッセイ：
５ｘ１０5細胞／ｍＬで１ウェル当たり１００μＬの単核細胞を９６−ウェルプレート（米国Ｎｕｎｃ社）に添加し、４８時間３７℃にて培養した。その後、上清を除去し、非刺激ｈＰＢＭＣ膜、又は抗−ＣＤ３／抗−ＣＤ２８刺激ｈＰＢＭＣ膜（０．５〜１μｇ／ｍＬ）、又は正の対照であるＬＰＳ（ＬＰＳの保存溶液（１ｍｇ／ｍＬ）は、１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、及び１００ｍｇ／ｍＬストレプトマイシンを含有する完全培地のＲＰＭＩ１６４０培地中で調製した）のいずれかで、細胞を更に培養した。ＬＰＳを完全培地で希釈し、単核細胞を含有する各ウェルにおいてＬＰＳの終濃度が１μｇ／ｍＬとなるように、ＬＰＳの２０倍溶液を添加した。本発明の化合物の効果を決定するために、種々の濃度の試験化合物（ＤＭＳＯ中２０ｍＭストックとして調製し、分析において０．０３、０．１、０．３、１、３、１０、３０、及び１００μＭの試験化合物の終濃度が得られるように、試験化合物の２０倍濃縮液１μＬを２００μＬ細胞懸濁液中に溶解した）又は０．５％ＤＭＳＯ（溶媒対照）を用いて、単核細胞を３０分間３７℃にて前処理した。次に、刺激ｈＰＢＭＣ膜を培養物に加えた。２４時間後に上清を収集し、ＯｐｔｉＥＩＡ ＥＬＩＳＡセット（米国ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ社）を使用してＴＮＦ−α及びＩＬ−６産生を測定した。製造者の使用説明書に従ったプロトコルを使用した。各実験において、ｈＰＢＭＣ細胞膜を有さない単核細胞のみの培養液からの上清、又は単核細胞を有さないｈＰＢＭＣ膜も、負の対照として収集した。
【０２７７】
結果：実施例７の化合物は、活性化ｈＰＢＭＣ媒介ＩＬ−６産生を、０．３μＭで６６％、及び０．５μＭで１００％阻害したが、単核細胞からのＴＮＦ−α産生は阻害しなかった。
【０２７８】
結論：本発明の化合物７は、活性化ｈＰＢＭＣ媒介ＩＬ−６産生を阻害した。
実施例２３
ｐ３８ＭＡＰＫ分析
ｐ３８ＭＡＰＫ阻害物質は臨床試験において肝毒性を示したので、ｐ３８ＭＡＰＫの非阻害物質を選択するため分析を実施した。「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４０，１９１１−１９１９，（１９９９）」を参照して、ｐ３８ＭＡＰＫの阻害物質を特定する方法を設計し、本参照文献の開示は、分析の教示のために参照することにより本明細書中に含まれる。
【０２７９】
ヒトジャーカットＴ細胞（ＡＴＣＣ番号：ＴＩＢ−１５２，クローンＥ６−１，ＵＳＡ
）を培地（１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ１６４０培地）中で、３７℃にて５％ＣＯ2で培養した。２〜３日ごとに、及び必ず実験前日に、培地を変えた。実験当日、ジャーカット細胞を溶媒又は試験化合物を用いて、ヒト単核細胞分析におけるＩＬ−６阻害のためのＩＣ50値の１０倍である３μＭで、１時間３７℃にて前処理した。その後、アニソマイシン（１０μｇ／ｍＬ；米国Ｓｉｇｍａ社）を用いて３０分間細胞を刺激し、ＳＢ２０３５８０（１μＭ；米国Ｓｉｇｍａ社）を標準物質として使用した。試験化合物、アニソマイシン、及びＳＢ２０３５８０の試料調製は、次の通りである：試験化合物の保存溶液（２０ｍＭ）をＤＭＳＯで調製した。その後の全ての化合物の希釈は、ＤＭＳＯを使用して実施した。ウェル内で所望の終濃度が得られるように、適切な濃度の化合物１μＬを細胞懸濁液に添加した。
【０２８０】
刺激に引き続き、細胞を回収し、氷冷ＰＢＳで迅速に洗浄し、完全プロテアーゼ阻害剤カクテル（米国Ｒｏｃｈｅ社）及びオルトバナジン酸ナトリウム（米国Ｓｉｇｍａ社）を補充した低温細胞溶解緩衝液（米国Ｓｉｇｍａ社）で溶解した。１５，０００ｒｐｍで４℃にて２０分間遠心分離を行った後、タンパク質抽出物を得た。クマシープラスタンパク質分析試薬（Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ Ｐｌｕｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）（米国Ｐｉｅｒｃｅ社）を使用して、製造者の使用説明書に従って、得られた抽出物の一定分量において、タンパク質含有量を分析した。全ての実験において、等量のタンパク質（１０μｇ）をＳＤＳ／１２．５％−ポリアクリルアミド電気泳動ゲル上に載せ、１５０Ｖで２時間、緩衝溶液（２４．９ｍＭトリス塩基、２５０ｍＭグリシン、０．１％ＳＤＳ）中で分解した。電気泳動後、タンパク質は、２５Ｖで４５分間、転写緩衝液（４７．９ｍＭトリス塩基、３８．６ｍＭグリシン、０．０３７％ＳＤＳ、２０％メタノール；ｐＨ９．２〜９．４）中で、ゲルからニトロセルロース膜（米国Ｓｉｇｍａ社）に転写された。５％脱脂ドライミルク（米国Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を含有するＴＢＳ（２０ｍＭトリス塩基、０．９％ＮａＣｌ；ｐＨ７．４）中で、１時間１５分室温にてブロットをブロッキングし、ＴＢＳ（米国Ｓｉｇｍａ社のトリスを使用して調製されたＴＢＳ）中スーパーブロックブロッキング緩衝液中で、４℃にて一晩ゆっくりと揺動しながら調製された一次抗体を用いてインキュベートした。一次抗体は、燐光体−ｐ３８ＭＡＰＫ（米国Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社）及びβ−アクチン（米国Ｓｉｇｍａ社）に対する抗体を含んだ。インキュベートに引き続いて、膜を洗浄し、次にＨＲＰ−共役二次抗体（米国Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社）でプローブした。化学発光ペルオキシダーゼ基質（米国Ｓｉｇｍａ社）及びコダックイメージングステーション（Ｋｏｄａｋ Ｉｍａｇｉｎｇ ｓｔａｔｉｏｎ）を使用して、バンドを可視化した。ストリッピング（ｓｔｒｉｐｐｉｎｇ）緩衝液（５０ｍＭトリス−ＨＣｌ ｐＨ６．８、１％ＳＤＳ、及び１００ｍＭβ−メルカプトエタノール）を用いて、２０分間５０℃にてブロットを取り除き、洗浄を行い、ローディングコントロールとしてハウスキーピングタンパク質β−アクチンに対する一次抗体で再プローブした。
【０２８１】
結果：実施例７の化合物は、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼを阻害しなかった。
結論：本発明の代表的な化合物は、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼを阻害しなかった。
実施例２４
ＲＴＱ−ＰＣＲを使用した遺伝子発現プロファイル
単球性細胞株（ＴＨＰ−１）から刺激された未処理の細胞、ヒト単核細胞、及び関節リウマチ患者からの滑膜細胞における、実施例７の化合物の効果を測定した。ＴＨＰ−１細胞株における化合物の効果は、遺伝子発現を基準にして測定し、薬物処理を施していない細胞刺激対照と比較した倍率変化として表した。
【０２８２】
実施例７の化合物又は溶媒（０．５％ＤＭＳＯ）を用いて、ＴＨＰ−１細胞、ヒト単核細胞、及び滑膜細胞を処理した。市販のＲＮＡ抽出キット（ドイツＱｉａｇｅｎ Ｃｏｒ
ｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して全ＲＮＡ単離を行った。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（米国カリフォルニア州）製の第１鎖ｃＤＮＡ合成キットを使用して、全ＲＮＡから第１鎖ｃＤＮＡを合成した。その後、遺伝子特異的プライマーを使用したリアルタイムの定量ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴＱ ＰＣＲ）、及び９５℃５分間の初期変性、及び９５℃１０秒を４０サイクル、続いて６０℃３０秒間の標準的熱プログラムを行った（ドイツＥｐｐｅｎｄｏｒｆ社製リアルプレックス（Ｒｅａｌｐｌｅｘ）ＰＣＲ機器）。ＰＣＲサイクル中に行った生成物の定量的測定値をハウスキーピング遺伝子（Ａｃｔｉｎ）に対して正規化し、これを使用して、それぞれの対照と比較した倍率変化としての遺伝子発現を測定した。結果を表７Ａ及び表７Ｂにまとめている。
【０２８３】
【表７Ａ】
【０２８４】
【表７Ｂ】
結論：
遺伝子ＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃは、実施例７の化合物を用いた処置に反応して下方制御を示した。
【０２８５】
Ｉｎ Ｖｉｖｏ研究
実験にて使用される動物は、ＣＰＣＳＥＡ（Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｕｒｐｏｓｅ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｏｎ Ａｎｉｍａｌｓ）（インドＴａｍｉｌ Ｎａｄｕ）が発行した有効な指針に従って飼育された。実験用動物を使用する手順は、ピラマル・ライフ・サイエンシーズ・リミテッド（Ｐｉｒａｍａｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ）（インドのムンバイＧｏｒｅｇａｏｎ）のＩＡＥＣ（実験用動物倫理委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ））によって承認された。
【０２８６】
実施例２５
急性大腸炎のＤＳＳ誘導マウスモデル
「Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，８０，１５４１，（２０００）」、及び「Ｆａｓｅｂ Ｊｏｕｒｎａｌ，１９：７９２，（２００５）」を参照して分析を設計し、これらの参照文献の開示は、分析の教示のために参照することにより本明細書中に含まれる。
【０２８７】
工程１
大腸炎の誘導：
体重２０〜２４ｇ、生後８〜１０週の、屋内で飼育した正常なメスＣ５７ＢＬマウスを使用した。動物は、個別に換気されたケージに、１ケージ当たり３匹ずつ、全実験期間にわたって入れられた。
【０２８８】
飲用水を３％（ｗ／ｖ）ＤＳＳ（分子量３６，０００〜５０，０００、米国ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．）溶液と置き換えることにより、マウスにおける実験的大腸炎を誘導した。ＤＳＳ溶液は、隔日に新たに水で調製され、実験用動物は０日目〜１０日目に随時摂取することができた。６匹の非実験用動物群は上記期間中ＤＳＳの代わりに水が与えられた。
【０２８９】
工程２
処置：
毎日動物の体重を計り、体重の記録を保持した。試験化合物の懸濁液は、化合物を湿潤させるために最低限必要な量のＴｗｅｅｎ８０と混合した後、０．５％（ｗ／ｖ）ＣＭＣ中で０．０５ｍｇ／ｍＬの濃度で調製され、１日１回１０ｍＬ／ｋｇ（投与量＝０．５ｍｇ／ｋｇ）の体積で動物に経口投与された。この処置は６日目に開始され、１０日目まで継続された。この期間中、ＤＳＳ対照動物及び非実験用動物には、（１００μＬのＴｗｅｅｎ８０と同一比率で混合された）ＣＭＣが１０ｍＬ／ｋｇの投与量で１日１回与えられた。
【０２９０】
工程３
ターミナルサクリファイス：
１１日目に、動物を殺し、ヘパリン化チューブに血液を収集し、以下のパラメーターを調査した；
１．直腸の出血／糞便中の血液
２．糞便の粘度
３．結腸中の出血
４．結腸の重さ
５．結腸の長さ
６．０日目から１１日目までの体重の変化
７．血中ヘモグロビン濃度
データを定量化可能なパラメーター、記述的パラメーター、及び実際のスコアとして次表（表８、表９、及び表１０）に示す。記述的パラメーターは、ＤＡＩで表される。ＤＡＩは、大腸炎の動物の症状を数値化するために使用される研究用ツールである。ＤＡＩは、処置の反応又は病気の寛解を同定するために用いられる。処置の反応又は病気の寛解の同定を達成するため、各種因子が研究される。各種要因の幾つかは定量化可能であり（例えば、実験期間中の体重変化、結腸長さ、血中ヘモグロビン濃度）、従って、処置の有益な効果を評価するために直接使用することができる。その他の因子は単に記述的であり（例えば結腸中血液、直腸出血、糞便粘度）、病気の重症度に従ってスコアがつけられる。ＤＡＩは、全ての要因のスコアの合計である。
【０２９１】
結果を表８、９、及び１０にまとめる。
【０２９２】
【表８】
【０２９３】
【表９】
【０２９４】
【表１０】
結論：実施例７の化合物は、ＤＳＳ誘導大腸炎を有する実験用動物（マウス）に０．５ｍｇ／ｋｇの投与量で経口投与した場合、大腸炎の重症度を軽減する。
【０２９５】
工程４
組織病理学
化合物治療（実施例７の化合物、０．５ｍｇ／ｋｇ、ｐ．Ｏ．、ｂ．ｉ．ｄ）の最終日に、動物を人道的に安楽死させ、血液試料を収集し、結腸を摘出した。結腸の前側部分を通常の生理食塩水で洗浄し、糞便物質を除去し、次に１０％ＮＢＦ（中性緩衝ホルマリン）中に固定した。固定してから１０日後に、結腸試料を整え、自動組織処理装置を使用して一晩処理した。翌日、試料をパラフィンでブロックし、一晩−１８℃にて低温衝撃にさらした。結腸内腔の断面から切片（５μ）を作成し、所定のヘマトキシリン（Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｌｉｎ）（米国Ｓｉｇｍａ社）＆エオシン（インドＬｏｂａ Ｃｈｅｍｉｅ社）を用いて染色し、恒久的にマウントした。スライドを２４時間乾燥させ、次に組織学的に等級化した。得られた結果は組織的スコアとして表された。炎症細胞、びらん、陰窩破壊、浮腫の存在のような種々のパラメーターに基づいて組織学的分析を行い、全体的な構築的変化を０〜３のスコアで等級化した。この場合、０は存在しないことに相当し、１は結腸内腔周囲の２５％の変化に相当し、２は５０％以下に相当し、３は結腸周囲の５０％超が影響を受けたことに相当する。全てのスコアを合計し、各切片の合計組織学的スコアを得た。２つのランダム切片を等級化し、平均を計算した。
【０２９６】
結果：各グループの平均組織学的スコアは、ＤＳＳ対照で７．５０＋０．９６、及び実施例７の化合物で処置されたマウスで５．３３＋０．９９であった。
結論：本発明の化合物７は、ＤＳＳ誘導大腸炎のＣ５７ＢＬオスマウスに投与した場合、組織学的損傷を保護する。
【０２９７】
実施例２６
マウスにおけるコラーゲン誘導関節炎
「Ｊ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１６２，６３７−６４６（１９８５）」を参照して本実験を設計し、本参照文献の開示は、本実験の教示のために参照することにより明細書中に含まれる。
【０２９８】
生後８〜１０週の体重１８〜２２ｇのオスＤＢＡ／１Ｊマウスに、フロイント完全アジュバント（米国Ｓｉｇｍａ社）中タイプＩＩコラーゲン（米国Ｅｌａｓｔｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ社）２００μｇと同等のエマルジョンを尾部の付け根に皮内注射し、免疫性を与えた。動物は２１日目に、フロイント完全アジュバント（米国Ｓｉｇｍａ社）で乳化した新たに調製されたタイプＩＩコラーゲン・エマルジョン２００μｇで追加免疫を行った。非実験用マウスグループも横に並べて維持された。非実験用動物とは、関節炎の誘導に対する免疫性を与えられず、またいかなる処置も受けていない動物である。このグループは、年齢とともに足の厚さにおいて正常変化に注意しながら維持される。
【０２９９】
２３日目から、関節指数及び足の厚さをパラメーターとして使用し、関節リウマチの兆候についてマウスを１日１回調査した。以下の基準を採用して関節指数スコアリングを行った：
前肢：スケール０〜３
０：発赤又は腫れはない
１：発赤はあるが、腫れはない
２：発赤及び足の腫れがある
３：発赤及び足の重度の腫れがある
後脚：スケール０〜４
０：発赤又は腫れはない
１：発赤及び足の軽度の腫れがある
２：発赤及び足の中度の腫れ、及び／又は少なくとも１つの指の腫れがある
３：発赤及び足の中度／重度の腫れ、足首関節の腫れ、及び／又は１つ以上の指の腫れがある
４：発赤及び足、指、足首関節の重度の腫れがあり、関節硬直を伴う
最低後足スコアが２のマウスは、それが１つの足であっても、研究の対象となった。
【０３００】
マウスを種々の研究グループにランダムに分けた。各グループは少なくとも８匹の動物を有し、マウスには溶媒（０．５％ＣＭＣ、１０ｍＬ／ｋｇ ｐ．ｏ．及びｓ．ｃ．１日２回）、試験化合物（５ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．及びｓ．ｃ．、１日２回）、及び標準成分エンブレル（Ｅｎｂｒｅｌ）（英国Ｗｙｅｔｈ Ｌｉｍｉｔｅｄ）（３ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．、１日１回）を投与した。試験化合物は、ＣＭＣ中懸濁液として投与された。化合物の必要量は正確に計量し、乳鉢を使用して手で粉砕した。化合物を湿潤させるために最低限必要な量のＴｗｅｅｎ８０と混合した後、０．５％ＣＭＣ溶液の必要量を添加し、得られた化合物をＣＭＣとともに、均一の懸濁液が得られるまで粉砕した。標準成分「エンブレル（Ｅｎｂｒｅｌ）」は水溶液として使用した。１２日間連続して化合物の投薬を行った。
【０３０１】
以下のパラメーターを毎日観察し記録した。
１．体重
２．関節指数
３．後脚のみの足の厚さ（ｍｍ）、無張力ノギスを使用
４．動物の体調に関する任意の有意な観察。
【０３０２】
１３日目の朝、化合物処置の１時間後、動物を殺し、血液を回収し、薬物レベル分析のために血漿を収集した。また、病理組織学的評価のために全ての動物の後脚を保存した。
結果：実施例７の化合物は、投与量５．０ｍｇ／ｋｇでＣＭＣ懸濁液として１日２回コラーゲン誘導関節炎を有するマウスに１２日間連続して皮下投与すると、関節炎の重症度が軽減した。上記の効果は、エンブレル（Ｅｎｂｒｅｌ）処置（３ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．、１日１回）で得られた効果に等しい。
【０３０３】
組織病理学：実施例７の化合物（５ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．、ｎ＝１０）で処置されたマウスの足の切片の化合物の組織学的スコアは３．６＋１．５４であり、エンブレル（Ｅｎｂｒｅｌ）（３ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．、ｎ＝６）処置マウスのスコアは５．８＋０．９５であり、溶媒対照（ｎ＝７）のスコアは１５．１４＋１．０であった。
【０３０４】
観察結果：溶媒対照グループの動物は、滑膜の重度の過形成及びパンヌス形成を伴う関節構造の完全破壊を示した。実施例７の化合物で処置された動物は、滑膜の過形成は生じず、関節炎の変化に対して保護を示した。
【０３０５】
実施例２７
関節炎のマウスにおける試験化合物の評価：浸透圧ポンプによる投与
実施例２６で記載した、コラーゲンエマルジョンの注射により関節炎を発症したＤＢＡ／１Ｊマウスで実験を行った。
【０３０６】
動物は、対照グループと試験化合物治療グループの、それぞれ６匹の動物を有する２つのグループに分けられた。１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で試験化合物の透明溶液を調製し、次に適切な量のエタノール及びポリエチレングリコール４００（ＰＥＧ
４００）を添加することにより、ＤＭＳＯ濃度を２５％まで下げた。従って、最終溶液中の各溶媒の比率ｖ／ｖは２５：１５：６０：：ＤＭＳＯ：ＥｔＯＨ：ＰＥＧ−４００となった。この調製方法により、４０ｍｇ／ｍＬの終濃度を有する化合物の完全透明溶液を得た。得られた溶液を０．２μフィルターに通して濾過し、浸透圧ポンプ（Ａｌｚｅｔ微小浸透圧ポンプモデル１００２）に充填した。このポンプモデルの送出量は、毎時０．２５μＬであり、１４日間連続機能する。
【０３０７】
次に、試験化合物治療グループの動物に上記で得られたポンプを皮下に移植した（２４０μｇ／マウス／２４時間）。対照グループの動物において、ブランク溶媒を充填したポンプを皮下に移植した。その後、１日１回、対照グループの動物の足の厚さ測定に加えて、足の関節炎指数のスコアを付けた。１４日後、ポンプを新たに充填したポンプと置き換え、さらに１２日間実験を続けた（合計２６日）。
【０３０８】
結果：本発明の化合物７は、関節炎の動物に浸透圧ポンプを用いて皮下に投与される場合、対照グループの動物と比較して関節炎スコア及び足の厚さを低減することにより、関節炎の重症度を軽減する。
【０３０９】
結論：本発明の化合物７は、皮下に投与される場合、関節炎の重症度を軽減するのに効果的である。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、本出願と同じ日付で出願された「癌治療のための大環状ラクトン誘導体（ＭＡＣＲＯＣＹＣＬＩＣ ＬＡＣＴＯＮＥ ＤＥＲＩＶＡＴＩＶＥＳ ＦＯＲ ＴＨＥ ＴＲＥＡＴＭＥＮＴ ＯＦ ＣＡＮＣＥＲ）」と題された本出願人の同時係属中であるＰＣＴ出願に関する。
（発明の分野）
本発明は、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための、大環状ラクトン誘導体、及び大環状ラクトン誘導体を含有する医薬組成物の使用に関する。
（発明の背景）
炎症は、感染又は組織損傷に対する身体の生物学的反応である。炎症は、生理学的条件下において、身体が侵入する病原体を排除し損傷した組織を治癒するための主要な手段である。異常炎症反応は、組織の損傷、及び破壊をもたらす可能性がある。慢性の制御されない炎症は、関節リウマチ、変形性関節症、乾癬、アテローム性動脈硬化症、ぜんそく、及び（潰瘍性大腸炎及びクローン病を含む）炎症性腸疾患などの疾病をもたらす可能性がある。
【０００２】
自己免疫疾患である関節リウマチ（ＲＡ）は、慢性の全身性関節炎疾患である。炎症過程を原因とする関節の腫れ及び痛みに加え、ＲＡの最終的な顕著な特徴は関節の破壊である。実際に、ＲＡでは、正常では薄い関節の滑膜被覆は、軟骨と骨の両方に対して破壊的である炎症性の高度に血管新生化した浸潤性フィブロコラゲナーゼ組織（パンヌス）に置き換えられる。ＲＡの顕著な症状は、滑膜関節に生じる。ＲＡにおける軟骨破壊は、炎症誘発性サイトカイン［腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、及びその他のインターロイキン（ＩＬ−１β、及びＩＬ−８）を含む］の異常産生、及び患部関節における成長因子の発現と関係している。
【０００３】
乾癬は、自己免疫性／炎症性疾患であり、乾癬の病因は依然として未知のままであり、乾癬においてＴ細胞が破壊的役割を果たしていることが確立されている。皮膚に流れるリンパ節内で抗原提示細胞によって活性化されると、Ｔ細胞は、皮膚内に移動する。乾癬性病変において、Ｔ細胞は１型サイトカイン［例えば、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、及びインターフェロン−γ（ＩＦＮ−α）］を放出し、近辺の白血球を刺激する。分泌された炎症誘発性メディエータ（例えば、ＴＮＦ−α）は、ケラチノサイトの過剰増殖を促し、ケラチノサイトの過剰増殖によって乾癬プラークにおける炎症性損傷を増大させる。
【０００４】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、腸の炎症を引き起こす一群の疾患である。炎症は、長期間続き、通常は再発する。ＩＢＤの２つ主要な型は、クローン病と潰瘍性大腸炎である。クローン病は、腸の内膜及び壁が炎症を起こし、その結果潰瘍が生じるときに発症する。クローン病は消化器系のいずれの部分にも生じ得るが、多くの場合、結腸につながる小腸の下方部分に生じる。潰瘍性大腸炎は、大腸を侵す病因不明の慢性の自己免疫性／炎症性疾患である。大腸炎をもたらし且つ持続させる初期事象も、および一連の伝播事象も、まだ完全には解明されていない。しかしながら、正常の胃腸グラム−陰性菌の構成成分が関与する免疫反応の機能不全、及び炎症性サイトカイン、ケモカイン、内皮細胞接着分子（ＥＣＡＭ）の発現の増加、及び結腸間質への白血球浸潤の拡大が、大腸炎の発症に重要な役割を果たしていることが確立されている。本疾病の経過は、連続的又は再発性、軽症又は
重症であり得る。本疾病の兆候及び症状は、筋けいれん、下腹痛、直腸出血、及び少量の糞便粒子と供に主として血液、膿汁、及び粘液からなる頻繁な緩い排泄物を含む。
【０００５】
炎症性疾患の治療の第一方針は、イブプロフェン、ナプロキセンなどの非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を使用して、痛みなどの症状を和らげることを含む。しかし、ＮＳＡＩＤは胃びらんの原因となることが知られているため、ＮＳＡＩＤの使用が広まっているにも拘わらず、多くの人々が疾患を治療するために必要な投与量に長期にわたって耐えることができない。その上、ＮＳＡＩＤは疾患の症状を治療するだけで、原因を治療しない。患者がＮＳＡＩＤに反応しない場合、メトトレキサート、金塩類、Ｄ−ペニシラミン、及びコルチコステロイドなどのその他の薬物を使用する。これらの薬物もまた、顕著な毒性効果を有する。
【０００６】
炎症性疾患をもたらす分子事象の理解の深まりは、病因を標的とした新しい手法をもたらした。種々の炎症性疾患をもたらし及び持続させる全体的な一連の発症事象はまだ完全に明らかにされていないが、炎症誘発性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−１β）の環境が、関節リウマチ、変形性関節症、乾癬、アテローム性動脈硬化症、ぜんそく、及び（潰瘍性大腸炎及びクローン病を含む）炎症性腸疾患などの炎症性疾患の発症において重要な役割を果たしていることが確立されている。実際に、炎症（例えば、ＲＡ／大腸炎／乾癬）の動物モデルを使用した幾つかの研究、及びより重要には、活動性のＲＡ／大腸炎／乾癬に罹患した患者を対象とした臨床関連の研究で、例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−１βなどのサイトカインは、患者の炎症組織並びに末梢血の両方において高レベルで発現することが示された。例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−１βなどの炎症誘発性媒介物質は、微少血管内皮に接着分子の発現を誘導し／上方制御し、炎症性白血球の補充及び浸潤をもたらす。さらに、ＲＡの状態では、例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−１βなどのサイトカインは、活性化破骨細胞のおかげで、炎症の永続化に関与し、最終的には軟骨分解及び骨侵食をもたらす。
【０００７】
多面発現性サイトカインであるＴＮＦ−αは、主としてマクロファージにより生成される。ＴＮＦ−αは、有益な活性並びに病理学的活性を示す。ＴＮＦ−αは、自己制御を行う他、成長刺激効果及び成長抑制特性の両方を有する。ＴＮＦ−αは、種々の自己免疫性／炎症性疾患に寄与する種々の遺伝子の発現を誘導する。
【０００８】
ＴＮＦ−αは、先天性及び後天性の免疫反応において重要な役割を果たすが、ＴＮＦ−αの産生の増加は、慢性炎症、及び組織損傷をもたらす病理学的変化を引き起こすことができる。ＴＮＦ−αは、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、冠状動脈性心疾患、血管炎、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、成人呼吸窮迫症候群、糖尿病、乾癬、皮膚遅延型過敏症疾患、及びアルツハイマー病などの多くの慢性炎症性疾患の発症に非常に重要な役割を果たすことが示されている。具体的な実施例として、ＴＮＦ−αはＲＡにおける炎症誘発性サイトカイン・ネットワークの頂点にあることが十分に認識されている。実際に、ＴＮＦ−αは、その他のサイトカインの産生を制御し、滑膜における炎症／免疫反応を編成する。ＴＮＦ−αが、その他のサイトカインの産生を制御し、滑膜における炎症／免疫反応を編成することと一致して、脱調節化ＴＮＦ遺伝子を有するトランスジェニックマウスは、慢性炎症性関節炎を自然発症し、ＴＮＦ−αの中和はＲＡの動物モデルにおける炎症性関節炎の発症及び重症度を低減する。これらの研究や幾つかのその他の研究は、ＲＡ（さらに乾癬及びＩＢＤなどのその他の疾病）における異常免疫／炎症反応を制御することにおいて、ＴＮＦ−αが魅力的な治療標的であることを示した。最も重要には、活動性のＲＡ、乾癬、及びＩＢＤを治療するための臨床的に承認された治療法は、ＴＮＦ−α阻害物質［エタネルセプト（エンブレル（Ｅｎｂｒｅｌ））、インフリキシマブ（レミケード（Ｒｅｍｉｃａｄｅ））、及びアダリムマブ（ヒュミラ（Ｈｕｍｉｒａ）
）］を含む。これらのＴＮＦ−α阻害物質の使用が広まっているにも拘わらず、ＴＮＦ遮断剤で治療を受けた患者の５０％以下で、病状の著しい改善が見られない。さらに、（ＲＡ患者における）この治療法の目的は、病気の寛解を達成し関節破壊を止めることであるが、ＴＮＦ−αを標的とした従来の生物学的製剤は、一定割合のＲＡ患者では病気の進行を止めるが、全てのＲＡ患者の病気の進行を止めないことが示されている。
【０００９】
インターロイキン−６（ＩＬ−６）は、概説されているように（Ｂｌｏｏｄ，７４（１），１−１０，（１９８９））、宿主防御に伴う免疫反応、炎症、造血、発癌を調節する多面発現性サイトカインである。
【００１０】
ＩＬ−６は、炎症性疾患、多発性骨髄腫、形質細胞腫、キャッスルマン病、多クローン性Ｂ細胞活性化、Ｔ細胞増殖、自己免疫疾患、ＡＩＤＳ、成人呼吸窮迫症候群、癌、糖尿病、虚血−再潅流傷害、多発性硬化症、関節リウマチ、及びＳＬＥにおける媒介物質として関係づけられている（Ｂｌｏｏｄ，７４（１），１−１０，（１９８９））。近年、ＩＬ−６の過剰産生はＲＡの発症に深く関与することが蓄積されている。従って、このサイトカインの機能の調節が、ＲＡ、及びその他の慢性の難治性自己免疫／炎症性疾患に対して有効である可能性があり得る。実際に、抗インターロイキン６受容体抗体治療は、ＩＬ−６トランスジェニックマウスおいて、及びＤＢＡ／１Ｊマウスのコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）において、顕著な有効性を示している（Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，５９（ｓｕｐｐｌ １），ｉ２１−ｉ２７（２０００））。
【００１１】
ＴＮＦ−αに対する生物学的阻害物質の治療における成功は、その他の標的の生物学的修飾物質の開発を推進した。近年、可溶性ＩＬ−６受容体及び膜結合ＩＬ−６受容体の両方に結合するヒト化抗体であるトシリズマブは、関節リウマチの臨床試験において並外れた治療有効性を示している。トシリズマブは、日本では活動性ＲＡ患者の治療用として認可されおり、またＦＤＡの諮問委員会の認可も得ている。このデータに基づいて、インターロイキン−６は、新しい治療標的として推薦される（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，８（ｓｕｐｐｌ ２），Ｓ５，（２００６））。トシリズマブとは別に、トシリズマブのような生物学的薬剤の使用は、重要な制限（例えば、非経口の投与経路、高額な治療費用、日和見感染症のリスク、アレルギー反応の誘発、潜伏結核の活性化、癌リスクの上昇、欝血性心臓疾患を悪化させるリスク）と関連する。したがって、生物学的薬剤と同じ効果を有するが望ましくない副作用は伴わない、ＩＬ−６／ＴＮＦ−αの低分子阻害物質の必要性は満たされていない。
【００１２】
ＩＬ−６産生のブロッキング及び／又はＩＬ−６の中和により、ＩＬ−６の生物活性への介在を達成することができる（Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，５９（ｓｕｐｐｌ １），ｉ２１−ｉ２７（２０００））。
【００１３】
関節リウマチ、炎症性疾患、及びその他の炎症状態の病因は、無阻害のＴ−細胞増殖によっても特徴づけられる（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，３５：７２９−７３５，（１９９２））。注目を集めている１つの部類の化合物は、Ｔ−細胞増殖を阻害する化合物である。Ｔ細胞活性化が抑制されると、Ｔ細胞増殖、並びにリウマチ又は滑膜環境における単核細胞マクロファージ系の活性化に関係づけられるＴｈ１サイトカインの産生が制限される（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４（ｓｕｐｐｌ ３）：Ｓ１９７−Ｓ２１１，（２００２））。
【００１４】
Ｔ細胞活性化は、その効果又は機能を支援する特定のタンパク質の発現を特徴とする。発現する第１タンパク質の中に、インターロイキン−２（ＩＬ−２）とＩＬ−２受容体αのサブユニットがある。ＩＬ−２は、Ｔ細胞増殖のために必要とされる強力なＴ細胞分裂
促進因子である。ＩＬ−２シグナル伝達は、Ｔ細胞にとって免疫反応を開始するために必要とされる。ＩＬ−２は、Ｔ細胞活性化において、抗原に刺激されたばかりのＴ細胞の成長、増殖、及び分化を促進するために、自己分泌に作用する強力なＴ細胞成長サイトカインである。実際に、不適切なシグナル伝達を受容するＴ細胞は、反応不顕性、即ち、不活性となる。これは、Ｔ細胞がＩＬ−２を合成できないようにすることにより達成される。Ｔ細胞がＩＬ−２を合成できないようにすることにより、Ｔ細胞を将来受容し得るいかなる抗原刺激に対しても潜在的に不活性な状態にする。臨床的に、シクロスポリン、ＦＫ５０６、及びラパマイシンなどの化合物は、異なる経路を介してこのＩＬ−２シグナル伝達をブロッキングすることにより連続的な抗原刺激に対してアネルギーを生じさせることが知られている。
【００１５】
Ｔ細胞上に発現する主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）対立遺伝子と滑膜マクロファージとの間の強力な連携が、関節リウマチの進行を決定する。このようなＴ細胞エフェクター応答は、滑膜細胞マクロファージ及び樹枝状細胞上の抗原発現によって起こる。接触媒介Ｔ細胞の単核細胞相互作用により、滑膜細胞の接合部で炎症誘導性サイトカインカスケードの刺激が起こる（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４（ｓｕｐｐｌ ３）：Ｓ１６９−Ｓ１７６，（２００２））。Ｔ細胞はさらに、刺激の種類に基づいて、１型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ１）と２型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ２）に分化する。１型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ１）と２型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ２）は、それらのサイトカイン発現プロファイルに基づいて特徴づけられる。Ｔｈ１細胞はＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αを分泌し、これに対して、Ｔｈ２細胞はＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１０を分泌する（Ｎａｔｕｒｅ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，７（３）：２４７−２５５，（２００６））。
【００１６】
Ｔｈ１細胞は、マクロファージ活性化を高め、炎症細胞カスケードの更なる活性化を起こす。このシグナル伝達は、両方の細胞型の細胞表面上に発現する共刺激分子（Ｂ７．１、Ｂ７．２、Ｂ７．３）間の相互作用によって高められる。これらの相互作用は、ＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αの分泌を伴う（Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２（３）：２６９−２７４，（２００１））。全ての増殖Ｔ細胞は構成的にＩＬ−２を発現し、従って、これらのサイトカインを阻害することにより、任意の炎症状態の進行に対する推定上の負のシグナルが提供される。
【００１７】
従って、Ｔ細胞増殖をブロッキングする化合物は、炎症性疾患を抑制する可能性が高い。Ｔ細胞増殖をブロッキングするような化合物は、免疫抑制特性も示し得る。ＦＫ５０６（タクロリムス）は、具体的にはＴ細胞活性化を抑止する免疫抑制剤である。ＦＫ５０６は、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）と称される細胞内タンパク質に結合した後、該免疫抑制効果を発揮する（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４０，１２５６−１２６５，（１９８７）、Ｊ．ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１３９，１７９７−１８０３，（１９８７））。ＦＫ５０６はまた、ＣＩＡの治療においても効果的であった。場合により、ＦＫ５０６は、Ｔ細胞活性化及びその後のＴＮＦ−αなどの炎症性サイトカインの産生を阻害することにより、ＣＩＡにおける足の腫れを抑止し並びに骨及び軟骨の破壊を防止する。
【００１８】
本発明に記載の化合物は、Ｔ−細胞増殖を阻害し、サイトカインの産生をブロックする。Ｔ−細胞増殖を阻害し、サイトカインの産生をブロックする効果は、治療有効性に貢献し得る。
【００１９】
転写コアクチベーターは、真核転写において非常に重要な役割を有する。マクロファージの転写因子を活性化できる因子の１つは、細菌リポ多糖（ＬＰＳ）である。ＬＰＳなどの細菌内毒素は、マクロファージ活性化の誘導因子の１つとして知られている。マクロファージの活性化は、例えば、関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、及びその他の疾病などの、幾つかの炎症状態の増大に関与する。マクロファージのＬＰＳ活性化は、Ｔｏｌｌ
様受容体４（ＴＬＲ４）を誘発する。ＴＬＲ４は、ヒトにおいてＴＬＲ４遺伝子によってコードされるタンパク質である。ＴＬＲ４シグナル伝達及びＴＬＲの活性化は、炎症誘導性遺伝子発現の誘発と関連する。
【００２０】
また、ＬＰＳは、ＩｋＢキナーゼ複合体（ＩＫＫ）を介して転写因子核因子−ｋＢ（ＮＦ−ｋＢ）を活性化する。ＮＦ−ｋＢは、炎症及び宿主反応を制御する転写因子である（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｖｏｌ．２８１，Ｎｏ．４１，３１１４２−３１１５１，（２００６））。核転写因子の大きなファミリーであるＮＦ−ｋＢの他、インターフェロン制御因子（ＩＲＦ）が、炎症誘導性遺伝子発現をもたらすＴＬＲシグナル伝達に関係づけられている（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．８３，１２４９−１２５７，（２００８））。ＩＲＦ−１及びＩＲＦ−２は、多くの遺伝子転写活性を逆調節する。従って、ＩＲＦ−１及びＩＲＦ−２誘導シグナル伝達は、ｃＡＭＰ応答配列結合タンパク質（ＣＲＥＢ）経路と関連する。コアクチベーターの１つであるＣＲＥＢ結合タンパク質（ＣＢＰ）は、２つのメカニズムを介して多数の転写因子による遺伝子発現を調節する。１つは、プロモーターへの基本の転写機構の補充である。リウマチ滑膜細胞にＣＢＰ複合体が存在することが報告されている（Ｍｏｄ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，１４，６−１１，（２００４））。こうした関連性は、ＲＡ患者における増殖及びアポトーシスを調節し得る。また、ＣＲＥＢ活性化は、ミトコンドリア機能不全によって誘導され、細胞増殖のシグナル伝達に関係づけられることが過去に報告されている（ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ，２１，Ｎｏｓ．１ ａｎｄ ２，５３−６３，（２００２））。ヒトＩＬ−６のプロモーター領域は、４つの主要な結合部位を有する（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，５４１，３，３３−３９，（２００３））。ＣＥＢＰファミリーの２つの構成要素、即ちＣ／ＥＢＰβ及びＣ／ＥＢＰδは、共同でＩＬ−６転写の責任を担い（Ｃｅｌｌｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｖｏｌ．２，Ｎｏ．２，ＩＳＳＮ１７４２（２００５））、ＣＲＥＢのｃＡＭＰ媒介リン酸化の転写標的である（Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｇｕｌ．Ｉｎｔｅｇｒ．Ｃｏｍｐ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８３：Ｒ１１４０−Ｒ１１４８，（２００２））、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｍ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｄ．Ｖｏｌ．２９ Ｎｏ．（１２）．１４０１ １４１８．（１９９７））。
【００２１】
ヒトＩＬ−６のプロモーター領域は、（ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、及びフォルスコリン結合のための）ＭＲＥ領域、ＮＦ−ｋＢ結合領域、ＡＰ１結合領域、及びＣ／ＥＢＰｂ結合領域の、４つの主要な結合部位を有する。
【００２２】
マトリックスメタロタンパク質（Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏ ｐｒｏｔｅｉｎｓ（ＭＭＰ））は、ＲＡで重要な役割を果たし、ＭＭＰ１、ＭＭＰ３、ＭＭＰ１３、及びＴＩＭＰ２のような種々のＭＭＰがＲＡにおいて過剰発現する（Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ，６９，８９８−９０２，（２０１０），Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ Ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，１５０２，３０７−３１８，（２０００））。ＴＬＲ４依存タンパク質である骨髄細胞分化初期応答遺伝子（８８）（ＭｙＤ８８）は、リウマチ滑膜細胞によって構成的に発現されることが知られている（Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，４５，５２７−５３２、（２００６））。
【００２３】
ＭＭＰ１３、グアニル酸結合タンパク質１（ＧＢＰ−１）、及びＭｙＤ８８は、ＲＡの炎症性破壊プロセスに貢献し、治療計画の治療指数の決定において重要なシグナル伝達分子である。
（発明の概要）
本発明は、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための
大環状ラクトン誘導体の使用に関する。
【００２４】
更なる態様によれば、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための、（本明細書中で以下に提供する）式（１）の化合物の使用が提供される。
【００２５】
本発明の別の態様によれば、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための、１種以上の式（１）の化合物を有効成分として含む医薬組成物が提供される。
【００２６】
本発明の別の態様によれば、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療方法が提供される。本方法は、１種以上の一般式（１）の化合物の治療有効量を、１種以上の一般式（１）の化合物を必要とする哺乳類へ投与することを含む。
【００２７】
本発明の別の態様によれば、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療に有用である１種以上の式（１）の化合物を含む薬剤の製造方法が提供される。
【００２８】
本発明のさらに別の態様によれば、ＢＣＬ２、ＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ｃＭｙｃ、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、及びＭｙＤ８８から選択される１つ以上の遺伝子を下方制御することによる炎症性疾患の治療方法が提供される。
【００２９】
本発明の別の態様によれば、式（Ｉ）の化合物で治療された炎症性疾患の患者の薬物反応を監視するための方法が提供され、本監視するための方法は、患者からの試料中におけるＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃから選択される１つ以上の遺伝子の発現を同定することを含む。
［発明の詳細な説明］
本発明は、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための、以下の式（１）で表される化合物と、
【００３０】
【化１】
式（１）で表される化合物の立体異性体及び互変異性体の全て、並びにこれらの全ての比率の混合物、並びにこれらの薬理学的に許容される塩、薬理学的に許容される溶媒和物、薬理学的に許容される多形体及びプロドラッグを提供する。
式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−Ｏ（ＣＯ）Ｒ13、−ＳＲ14、及び−ＮＲ14Ｒ15から選択され、
Ｒ2は、水素であり、又は
任意にＲ1は存在せず、Ｒ2は＝Ｏであり、
Ｒ3は、アルキルであり
Ｒ4は、以下の式から選択され、
【００３１】
【化２】
【００３２】
【化３】
【００３３】
【化４】
【００３４】
【化５】
【００３５】
【化６】
【００３６】
【化７】
【００３７】
【化８】
【００３８】
【化９】
*は、付着点（接続点）を示す
Ｒ5は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、アルキル、及びアルコキシから選択され、
Ｒ7は、水素、アルキル、及び−（ＣＯ）Ｒ16から選択され、
Ｒ8は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ9は、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アリール、アラルキル、アリールオキシ、ベンジルオキシ、ヘテロシクリル、−Ｏ−ヘテロシクリル、−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17、及び−ＯＣＨ2ＣＯＲ18から選択され、
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−ＳＲ14、−ＮＲ14Ｒ15、及び−Ｏ（ＣＯ）Ｒ19から選択され、
Ｒ11は、水素、及びハロゲンから選択され、
Ｒ12は、水素、ハロゲン、及びヒドロキシから選択され、
Ｒ13は、アルキル、及びアリールから選択され、
Ｒ14は、水素、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ15は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ16は、アルキル、及びアリールから選択され、
Ｒ17は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ18は、アルキル、−ＮＨＣＨ2Ｒ20、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ19は、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、及び、
Ｒ20は、非置換、又は水素、アルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、ヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
［定義］
明細書及び添付の特許請求の範囲において、個別に又はより大きなグループの一部として使用される用語に、（特定の例において別途制限されない限り）適用される定義を以下に記載する。
【００３９】
本発明で使用する場合、「アルキル」という用語は、単独で使用される場合又は置換基の一部として使用される場合に拘わらず、１〜６個の炭素原子を含有する直鎖又は分岐鎖を含む飽和脂肪族基を意味する。好適なアルキル基は、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、及びｔ−ブチルなど、１〜４個の炭素原子
を含有する。アルキル基は、任意に、１つ以上の同一の又は異なった置換基で置換される。置換アルキル基中に存在する任意の種類の置換基は、置換が不安定な分子をもたらさなければ、任意の所望の位置に存在することが可能である。置換アルキルとは、１個以上の、例えば１、２、３、４、又は５個の水素原子が、例えばハロゲン基、ヒドロキシ基、アミノ基、アルコキシ基、ヒドロキシアルキル基、アリールオキシ基、アシルオキシ基、アリール基、ヘテロアリール基、又はヘテロシクリル基などの置換基により置き換えられた、アルキル基を意味する。
【００４０】
本発明で使用する場合、「アルコキシ」という用語は、酸素が付着したアルキル基を意味し、この場合、アルキルは上記の定義に従う。代表的なアルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、及び第三級ブトキシ基を含む。従って、上記の用語は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１つ以上の同一の又は異なった基で置換されたアルコキシ基を含む。
【００４１】
本発明で使用する場合、「アリール」という用語は、１０個以下の環炭素原子を有する一環式又は二環式の炭化水素基を意味し、この場合、共役π電子系を有する炭素環が少なくとも１個存在する。アリール基の例としては、フェニル及びナフチルを含む。置換アリールとは、１つ以上の置換基によって、例えば、ハロゲン基、ヒドロキシ基、アミノ基、アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アリール基、及びヘテロシクリル基から成る群から選択される５個以下の同一の又は異なった置換基によって、置換されたアリール基を意味する。アリール基は任意の所望の位置で置換することができる。例えば、一置換フェニル基では、置換基は、２−位、３−位、４−位、又は５−位に配置することができる。フェニル基が２つの置換基を担持する場合、これらの置換基は、２，３−位、２，４−位、２，５−位、２，６−位、３，４−位、又は３，５−位に配置することができる。
【００４２】
本発明で使用する場合、「アリールオキシ」という用語は、アリール−Ｏ−を意味し、この場合、「アリール」という用語は、上記の定義に従う。例示的なアリールオキシ基としては、フェノキシ及びナフトキシを含むが、これらに限定されない。
【００４３】
「へテロ原子」という用語は、窒素、酸素、及び硫黄を意味する。満たされない原子価を有する任意のへテロ原子は、原子価を満たすために水素原子を有するとみなす点に留意すべきである。環ヘテロ原子は、得られる複素環式系が安定である限り、任意の所望の数で、及び各ヘテロ原子が相互に任意の位置に存在することが可能である。
【００４４】
「ヘテロシクリル」及び「複素環式」という用語は、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の環原子を含有する、飽和した、部分的に不飽和の、又は芳香族の、一環式系もしくは二環式系を意味する。これらの環原子のうちの１、２、３、又は４個は、窒素、酸素、及び硫黄から選択される同一の又は異なったヘテロ原子である。ヘテロシクリル基は、例えば、その環内に、１個あるいは２個の酸素原子、及び／又は１個もしくは２個の硫黄原子、及び／又は１〜４個の窒素原子を有してもよい。ヘテロシクリルは、得られた環系が安定的である限り、その環内に任意の二重結合を含有しない飽和複素環系、並びにその環内に１以上５以下の二重結合を含有する不飽和複素環系を含む。不飽和環は、非芳香族又は芳香族であり得る。芳香族ヘテロシクリル基は、「ヘテロアリール」という習慣的用語で呼んでもよい。この用語には、ヘテロシクリルに関する上記及び下記の全ての定義及び説明が適用され得る。単環式ヘテロシクリル基は、３−員環、４−員環、５−員環、６−員環、及び７−員環を含む。このようなヘテロシクリル基の好適な例としては、ピロリル、イミダゾリル、ピロリジニル、ピリジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピペリジニル、ピペラジニル、及びモルホリニルが挙げられる。二環式ヘテロシクリル基は、２つの縮合環を含み、一方は、５
−、６−又は７−員の複素環であり、他方は、５−、６−、又は７−員の炭素環又は複素環である。例示的な二環式複素環基は、ベンズオキサゾリル、キノリル、イソキノリル、インドリル、イソインドリル、及びベンゾフラザニルを含む。
【００４５】
置換ヘテロシクリルとは、１つ以上（５つ以下）の同一の又は異なった置換基で置換されたヘテロシクリル基を意味する。環炭素原子、及び環窒素原子の置換基の例は、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アリール、及びヘテロシクリル等がある。これらの置換基は、安定した分子が得られる限り、１つ以上の位置で存在することができる。
【００４６】
本発明で使用する場合、「アラルキル」という用語は、アリール基又はヘテロアリール基で置換されたアルキル基を意味する。この場合、アルキル、アリール、及びヘテロアリールという用語は、上記の定義に従う。例示的なアラルキル基は、−（ＣＨ2）p-フェニル、−（ＣＨ2）p−ピリジルを含み、式中、ｐは、１〜３の整数である。アラルキル基は、更に、ヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、アルキル、アリール、又はヘテロアリールで置換され得る。
【００４７】
本発明で使用する場合、−Ｏ−ヘテロシクリルという用語は、酸素原子に直接付着した複素環を意味し、式中、ヘテロシクリルという用語は、上記に定義される。
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素を意味する。
【００４８】
「アミノ」という用語は、非置換、一置換、及び二置換のアミノ基を意味する。本発明で使用する場合、一置換又は二置換のアミノという用語はそれぞれ、同一又は異なり得る１種又は２種の基で置換されたアミノ基を意味する。アミノ基上の置換基は、アルキル、ヒドロキシアルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから独立して選択される。適切な場合、アミノ基上の各部分は、部分自体を置換することが可能であることが当業者には理解されるだろう。
【００４９】
「プロドラッグ」という表現は、投与後、化学的又は生理学的プロセスを介して生体内に薬物を放出する薬物前駆体である化合物を意味し、例えば、プロドラッグは、生理学的ｐＨにされる際に、又は酵素作用により、所望の薬物形態へ変換される。
【００５０】
「置換」又は「で置換される」は、このような置換は、置換される原子と置換基の許容される原子価に従うと同時に、転位、環化、脱離等によって容易に変換されない安定した化合物をもたらすという暗黙の条件を含むことが理解されるであろう。
【００５１】
本発明で使用される「被検者」という用語は、動物、好ましくは哺乳類、最も好ましくはヒトを意味する。
本明細書で使用される「哺乳類」という用語は、肌を覆う体毛、及びメスの場合子に与えるための乳汁を分泌する乳腺を特徴とする、ヒトを含む哺乳綱の温血脊椎動物を意味する。哺乳類という用語は、ネコ、イヌ、ウサギ、クマ、キツネ、オオカミ、サル、シカ、ネズミ、ブタ、並びにヒトなどの動物を含む。
【００５２】
「試験用試料」という用語は、検体を含有することが疑われる生体物質を意味する。試験用試料は、血液、組織液、唾液、接眼レンズ液、脳脊髄液、汗、尿、乳汁、腹水液、粘液、鼻汁、唾、滑液、腹膜液、腟液、経血、羊水、精液、胆汁、脳脊髄液、糞便、胃、又は腸分泌物などを含む生理液などの任意の生物源から取り出し得る。
【００５３】
試料の好ましい種類は、血液、及び滑液である。
本発明で使用される「治療すること」、「治療する」、又は「治療」という用語は、既
存の疾病（例えば、関節リウマチ）の緩和、進行の減速、低減、又は治癒を意味する。
【００５４】
「薬理学的に許容される」により、担体、希釈剤、賦形剤、及び／又は塩は前記化合物の製剤のその他の成分と適合する必要があり、及び該製剤の受容者に有害ではないことが意味される。
【００５５】
本発明で使用される「薬理学的に許容される担体」という用語は、任意の種類の無害、不活性、固体、半固体、希釈のカプセル封入材料又は製剤補助剤を意味する。薬理学的に許容される担体として機能することができる材料のいくつかの例は、乳糖、ブドウ糖、及びショ糖などの糖類；トウモロコシデンプン、及びバレイショデンプンなどのデンプン類；セルロース、並びにカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロースなどのセルロース誘導体；麦芽；ゼラチン；タルク；並びにラウリル硫酸ナトリウム、及びステアリン酸マグネシウムなどのその他の無害の適合性のある潤滑剤、並びに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味料、香味剤、及び芳香剤である；防腐剤及び酸化防止剤も、配合者の判断により組成物内に存在することが可能である。
【００５６】
本発明で使用される「治療有効量」という用語は、健全な医学的判断の範囲内において、調節または治療すべき状態に正の変化を顕著に生じさせるのに十分であるが、過度の又は重度の副作用を回避するために十分に低い、化合物又は組成物（例えば、式（１）の化合物）の量を意味する。化合物又は組成物の治療有効量は、治療される特定の状態、エンドユーザの年齢及び健康状態、治療／予防される状態の重症度、治療期間、併用治療法の性質、用いられる特定の化合物又は組成物、使用される特定の薬理学的に許容される担体等の要因により変化する。本発明で使用する場合、全ての百分率は、別途記載のない限り、重量に基づく。
【００５７】
腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上の炎症性サイトカインとの関連で本発明及び添付の特許請求の範囲で使用される「異常」という用語は、炎症性サイトカインレベルの上昇又は増加を意味する。
［本発明の実施形態］
本発明は、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための、以下の式（１）で表される化合物と、
【００５８】
【化１０】
式（１）で表される化合物の立体異性体及び互変異性体の全て、並びに式（１）で表される化合物の全ての比率の混合物、並びに式（１）で表される化合物の薬理学的に許容される塩、薬理学的に許容される溶媒和物、薬理学的に許容される多形体及びプロドラッグを提供し、
式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−Ｏ（ＣＯ）Ｒ13、−ＳＲ14、及び−ＮＲ14Ｒ15から選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、以下の式から選択され、
【００５９】
【化１１】
【００６０】
【化１２】
【００６１】
【化１３】
【００６２】
【化１４】
【００６３】
【化１５】
【００６４】
【化１６】
【００６５】
【化１７】
【００６６】
【化１８】
*は、付着点を示す
Ｒ5は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、アルキル、及びアルコキシから選択され、
Ｒ7は、水素、アルキル、及び−（ＣＯ）Ｒ16から選択され、
Ｒ8は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ9は、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アリール、アラルキル、アリールオキシ、ベンジルオキシ、ヘテロシクリル、−Ｏ−ヘテロシクリル、−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17、及び−ＯＣＨ2ＣＯＲ18から選択され、
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−ＳＲ14、−ＮＲ14Ｒ15、及び−Ｏ（ＣＯ）Ｒ19から選択され、
Ｒ11は、水素、及びハロゲンから選択され、
Ｒ12は、水素、ハロゲン、及びヒドロキシから選択され、
Ｒ13は、アルキル、及びアリールから選択され、
Ｒ14は、水素、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ15は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ16は、アルキル、及びアリールから選択され、
Ｒ17は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ18は、アルキル、−ＮＨＣＨ2Ｒ20、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ19は、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、及び、
Ｒ20は、水素、アルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、ハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって非置換又は置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【００６７】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、
式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ2は、水素であり
Ｒ3は、アルキルであり
Ｒ4は、式（３）であり、
【００６８】
【化１９】
*は、付着点を示す
Ｒ8は、ヒドロキシであり、
Ｒ9は、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アリール、アラルキル、アリールオキシ、ベンジルオキシ、−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17、及び−ＯＣＨ2ＣＯＲ18から選択され、
Ｒ17は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ18は、アルキル、−ＮＨＣＨ2Ｒ20、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、及び
Ｒ20は、水素、アルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一の
もしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【００６９】
更なる実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（３）であり、
【００７０】
【化２０】
*は、付着点を示す
Ｒ8は、ヒドロキシであり、及び
Ｒ9は、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、及びベンジルオキシから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【００７１】
更なる実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供すし、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（３）であり、
【００７２】
【化２１】
*は、付着点を示す
Ｒ8は、ヒドロキシであり、且つ
Ｒ9は、ヒドロキシ、メトキシ、及びベンジルオキシから選択される。
【００７３】
更なる実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（３）であり、
【００７４】
【化２２】
*は、付着点を示す
Ｒ8は、ヒドロキシであり、及び
Ｒ9は、ヒドロキシである。
【００７５】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（３）であり、
【００７６】
【化２３】
*は、付着点を示す
Ｒ8は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ9は、−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17、及び−ＯＣＨ2ＣＯＲ18から選択され、
Ｒ17は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ18は、アルキル、ヘテロシクリル、及び−ＮＨＣＨ2Ｒ20から選択され、及び、
Ｒ20は、水素、アルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【００７７】
更なる実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（３）であり、
【００７８】
【化２４】
*は、付着点を示す
Ｒ8は、ヒドロキシであり、
Ｒ9は、−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17であり、且つ
Ｒ17は、水素、及びアルキルから選択される。
【００７９】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（３）であり、
【００８０】
【化２５】
*は、付着点を示す
Ｒ8は、ヒドロキシであり、
Ｒ9は、−ＯＣＨ2ＣＯＲ18であり、及び
Ｒ18は、４−メチルピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、及び１，４’−ビピペリジン−１’−イルから選択される。
【００８１】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（３）であり、
【００８２】
【化２６】
*は、付着点を示す
Ｒ8は、ヒドロキシであり、
Ｒ9は、−ＯＣＨ2ＣＯＲ18であり、
Ｒ18は、−ＮＨＣＨ2Ｒ20であり、及び、
Ｒ20はアルキル、及びアリールから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【００８３】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（３）であり、
【００８４】
【化２７】
*は、付着点を示す
Ｒ8は、ヒドロキシであり、
Ｒ9は、−ＯＣＨ2ＣＯＲ18であり、
Ｒ18は、−ＮＨＣＨ2Ｒ20であり、及び、
Ｒ20は、−ＣＨ2ＯＨ、及び４−フルオロフェニルから選択される。
【００８５】
別の実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（６）であり、
【００８６】
【化２８】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【００８７】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（６）であり、
【００８８】
【化２９】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ヒドロキシ、及びアルコキシである。
【００８９】
別の実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（７）であり、
【００９０】
【化３０】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ11は、水素、及びハロゲンから選択され、及び
Ｒ12は、水素、ハロゲン、及びヒドロキシから選択される。
【００９１】
別の実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（７）であり、
【００９２】
【化３１】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ヒドロキシ、及びアルコキシであり、
Ｒ11は、水素であり、及び
Ｒ12は、ヒドロキシである。
【００９３】
別の実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（７）であり、
【００９４】
【化３２】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ヒドロキシ、及びアルコキシであり、
Ｒ11は、ハロゲンであり、及び
Ｒ12は、ハロゲンである。
【００９５】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（２）であり、
【００９６】
【化３３】
*は、付着点を示す
Ｒ5は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ6は、水素、アルキル、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ7は、水素、アルキル、及び−（ＣＯ）Ｒ16から選択され、及び
Ｒ16は、アルキル、及びアリールから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【００９７】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（２）であり、
【００９８】
【化３４】
*は、付着点を示す
Ｒ5は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ6は、水素、及びヒドロキシから選択され、
Ｒ7は、水素、アルキル、及び−（ＣＯ）Ｒ16から選択され、及び
Ｒ16は、アルキルであり、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【００９９】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（２）であり、
【０１００】
【化３５】
*は、付着点を示す
Ｒ5は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ6は、水素であり、
Ｒ7は、水素、及び−（ＣＯ）Ｒ16から選択され、及び
Ｒ16は、アルキルである。
【０１０１】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−Ｏ（ＣＯ）Ｒ13、−ＳＲ14、及び−ＮＲ14Ｒ15から選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１０２】
【化３６】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−ＳＲ14、−ＮＲ14Ｒ15、及び−Ｏ（ＣＯ）Ｒ19から選択され、
Ｒ13は、アルキル、及びアリールから選択され、
Ｒ14は、水素、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ15は、水素、及びアルキルから選択され、及び
Ｒ19は、アルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１０３】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、−ＳＲ14であり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１０４】
【化３７】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、−ＳＲ14であり、及び
Ｒ14は、水素、及びアルキルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１０５】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、−ＮＲ14Ｒ15であり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１０６】
【化３８】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−ＳＲ14、−ＮＲ14Ｒ15、及び−Ｏ（ＣＯ）Ｒ19から選択され、
Ｒ14は、水素、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ15は、水素、及びアルキルから選択され、及び
Ｒ19は、アルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１０７】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、−ＮＲ14Ｒ15であり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１０８】
【化３９】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、−ＮＲ14Ｒ15であり、
Ｒ14は、水素、及びアルキルから選択され、及び
Ｒ15は、水素、及びアルキルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１０９】
一実施形態において、本発明は、式（１）の化合物の使用に関し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１１０】
【化４０】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ヒドロキシである。
【０１１１】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ヒドロキシであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチル、エチル、プロピル、及びブチルから選択され、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１１２】
【化４１】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ヒドロキシである。
【０１１３】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、−Ｏ（ＣＯ）Ｒ13であり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１１４】
【化４２】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、−Ｏ（ＣＯ）Ｒ19であり、
Ｒ13は、アルキル、及びアリールから選択され、且つ
Ｒ19は、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１１５】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、−Ｏ（ＣＯ）Ｒ13であり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１１６】
【化４３】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ヒドロキシであり、及び
Ｒ13は、アルキル、及びアリールから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１１７】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、式中、
Ｒ1は、ハロゲンであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１１８】
【化４４】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−ＳＲ14、−ＮＲ14Ｒ15、及び−Ｏ（ＣＯ）Ｒ19から選択され、
Ｒ14は、水素、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ15は、水素、及びアルキルから選択され、及び
Ｒ19は、アルキル、及びアリールから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１１９】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、
式中、
Ｒ1は、ハロゲンであり、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１２０】
【化４５】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ハロゲンであり、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１２１】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、
式中、
Ｒ1は、存在せず、Ｒ2は、＝Ｏであり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１２２】
【化４６】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−ＳＲ14、−ＮＲ14Ｒ15、及び−Ｏ（ＣＯ）Ｒ19から選択され、
Ｒ14は、水素、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ15は、水素、及びアルキルから選択され、及び
Ｒ19は、アルキル、アリール、アラルキル、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキ
シアルキル、及びアルコキシから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１２３】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、
式中、
Ｒ1は、存在せず、Ｒ2は、＝Ｏであり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（４）であり、
【０１２４】
【化４７】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択される。
【０１２５】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、
式中、
Ｒ1は、存在せず、Ｒ2は、＝Ｏであり、
Ｒ3は、アルキルであり、及び
Ｒ4は、式（５）である。
【０１２６】
【化４８】
*は、付着点を示す
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、
式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、
Ｒ4は、式（８）であり、
【０１２７】
【化４９】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ハロゲン、及びヒドロキシから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１２８】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、
式中、
Ｒ1は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、メチルであり、
Ｒ4は、式（８）であり、
【０１２９】
【化５０】
*は、付着点を示す
Ｒ10は、ヒドロキシである。
【０１３０】
一実施形態において、本発明は、式（１）で表される化合物を提供し、
式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり、及び
Ｒ4は、式（９）であり、
【０１３１】
【化５１】
*は、付着点を示す
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換される。
【０１３２】
本発明は、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための、（上記に提示された全ての実施形態で記載された）式（１）の化合物、並びに式（１）の化合物の立体異性体及び互変異性体の全て、並びにこれらの全ての比率の混合物、並びにこれらの薬理学的に許容される塩、薬理学的に許容される溶媒和物、薬理学的に許容される多形体及びプロドラッグを提供する。
【０１３３】
本発明は、ＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃから選択される１つ以上の遺伝子によって媒介される炎症性疾患の治療のための、（上記に提示された全ての実施形態で記載された）式（１）の化合物、並びに式（１）の化合物の立体異性体及び互変異性体の全て、並びにこれらの全ての比率の混合物、並びにこれらの薬理学的に許容される塩、薬理学的に許容される溶媒和物、薬理学的に許容される多形体及びプロドラッグを提供する。
【０１３４】
本発明は、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための、
【０１３５】
【化５２】
【０１３６】
【化５３】
【０１３７】
【化５４】
【０１３８】
【化５５】
【０１３９】
【化５６】
【０１４０】
【化５７】
【０１４１】
【化５８】
【０１４２】
【化５９】
【０１４３】
【化６０】
【０１４４】
【化６１】
【０１４５】
【化６２】
【０１４６】
【化６３】
から選択されるがこれらに限定されない式（１）の化合物と、
前記式（１）の化合物の立体異性体及び互変異性体、薬理学的に許容される塩、溶媒和
物及びプロドラッグ、の使用に関する。
【０１４７】
本発明の別の更なる態様において、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のために、式（１）の化合物は、
【０１４８】
【化６４】
【０１４９】
【化６５】
【０１５０】
【化６６】
【０１５１】
【化６７】
【０１５２】
【化６８】
、並びに前記式（１）の化合物の立体異性体及び互変異性体、これらの薬理学的に許容される塩、溶媒和物並びにプロドラッグから選択される。
【０１５３】
本発明のさらに別の更なる態様において、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のために、式（１）の化合物は、
【０１５４】
【化６９】
、その立体異性体及び互変異性体、薬理学的に許容される塩、溶媒和物及びプロドラッグである。
［スキームの詳細な説明］
本発明の化合物は、更に、上記式（１）の化合物の全ての立体異性体及び混合物、並びにこれらの薬理学的に許容される塩、溶媒和物及び多形体も含む。さらに、本明細書中及び特許請求の範囲に記載の化合物の全てのプロドラッグ及び誘導体は、本発明の主題であ
る。
【０１５５】
本発明の別の態様によれば、当業者に既知の方法を使用した多数の方法で、式（１）の化合物を調製することができる。本化合物の調製方法の例を以下に説明し、スキーム１〜４で示すが、スキーム１〜４に示す方法に限定されるものではない。本明細書中で記載されるプロセス、採用される合成工程の順番は、様々であってよく、とりわけ特定の基質中に存在する官能基の性質、及び採用される保護基戦略（もしあれば）などの要因によって決まり得ること、さらに合成工程にて使用される試薬の選択にも影響を与え得ることは、当業者によって理解されるであろう。
【０１５６】
以下のプロセスにて使用される試薬、反応物質、及び中間体は、微生物の発酵物から分離されるか、市販されているか、又は当該技術分野において公知の標準的な文献手順に従って調製することが可能であるか、又はこれらの組み合わせのいずれかである。本発明の化合物の合成に使用される出発化合物及び中間体は、一般記号（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）、（Ｇ）、（Ｈ）、（Ｋ）、（Ｌ）、（Ｍ）、（Ｎ）、（Ｏ）、（Ｑ）、（Ｒ）、（Ｓ）、（Ｔ）、及び（Ｕ）を用いて示される。プロセスの説明全体を通して、出発化合物及び中間体を表す種々の式における対応する置換基は、詳細な説明に記載されている式（１）の化合物に関するものと同一の意味を有する。
【０１５７】
本発明の種々のスキームにて使用されるプロセスは、一般記号１ａ、１ｂ、１ｃ、１ｄ、１ｅ、１ｆ、１ｇ、２ａ、２ｂ、２ｃ、２ｄ、３ａ、３ｂ、３ｃ、４ａ、４ｂ、４ｃ、及び４ｄを用いて示される。本発明の化合物の調製のためのプロセスは、以下のスキームで説明される。
【０１５８】
スキーム１
（スキーム１における）粗コンカナマイシンは、培養物（ＰＭ０２２４３５５）の発酵によって得られる。酢酸エチル、クロロホルム、及びジクロロメタンから選択される溶媒を使用して、全ブロスを抽出する。粗コンカナマイシンは、カラムクロマトグラフィーによって分離され、スペクトル比較により同定される（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．４５，Ｎｏ．７，１１０８−１１１６，（１９９２））。
【０１５９】
工程１ａ
参照文献（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．３９，３８５７−６０，（１９８１））に記載されている手順に従い、（スキーム１における）粗コンカナマイシンにアルカリ加水分解を実施し、式（１）の化合物を得る（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである；スキーム１の式（Ａ）に記載されている）。
【０１６０】
工程１ｂ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、Ｒ8はヒドロキシであり、及びＲ9はヒドロキシである；スキーム１の式（Ｂ）に記載されている）は、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、１，４−ジオキサン、及びアセトニトリルから選択される溶媒を使用して、ピリジン、置換ピリジン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、及びＮ−エチルモルホリンから選択される塩基の存在下で、式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、且つＲ10はヒドロキシである）をヒドロキシルアミン塩酸塩などのアミン塩酸塩と反応させることにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で、０℃〜４５℃の温度で４時間〜１６時間攪
拌される。
【０１６１】
工程１ｃ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（６）であり、且つＲ10は、ヒドロキシである；スキーム１の式（Ｃ）に記載されている）は、窒素などの不活性雰囲気中で、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムから選択される塩基の存在下で、０℃にて２時間、アセトン、アセトニトリル、及び１，４−ジオキサンから選択される溶媒中の式（Ｂ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、Ｒ8はヒドロキシであり、且つＲ9はヒドロキシである）を塩化トシル又は２，４，６−トリクロロ−１，３，５−トリアジン（ＴＣＴ）と反応することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で、２時間〜８時間、２５℃〜４５℃の温度で更に攪拌することも可能である。
【０１６２】
工程１ｄ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、Ｒ8はヒドロキシであり、及びＲ9はメトキシ又はベンジルオキシである；スキーム１の式（Ｄ）に記載されている）は、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、ジオキサン、及びアセトニトリルから選択される溶媒を使用して、ピリジン、置換ピリジン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、及びＮ−エチルモルホリンから選択される塩基の存在下で、式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである）をメトキシアミン塩酸塩及びベンジルオキシアミン塩酸塩から選択されるアミン塩酸塩と反応することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で、０℃〜４５℃の温度で４時間〜１６時間攪拌される。
【０１６３】
工程１ｅ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、及びＲ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、Ｒ8はヒドロキシであり、Ｒ9は−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17であり、及びＲ17は水素である；スキーム１の式（Ｅ）に記載されている）は、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、１，４−ジオキサン、及びアセトニトリルから選択される溶媒を使用して、ピリジン、置換ピリジン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、及びＮ−エチルモルホリンから選択される塩基の存在下で、式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである）をカルボキシメチルヒドロキシルアミンヘミ塩酸塩などのアミン塩酸塩と反応することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で、０℃〜４５℃の温度で４時間〜１６時間攪拌される。
【０１６４】
工程１ｆ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、Ｒ8はヒドロキシであり、Ｒ9は−ＯＣＨ2ＣＯＲ18であり、Ｒ18はヘテロシクリル、及び−ＮＨＣＨ2Ｒ20から選択され、及びＲ20は、アルキル、及びアリールから選択される；スキーム１の式（Ｆ）に記載されている）は、ジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、酢酸エチル、及びジメチルホルムアミドから選択される溶媒中に式（Ｅ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、Ｒ8はヒドロキシであり、Ｒ9は−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17であり、及びＲ17は水素である）を溶解し、及びジシクロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ ＨＣ
ｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、又はＯ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウラニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）、及びＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）から選択されるカップリング試薬と反応することにより調製される。更に、反応混合物は、Ｎ−メチル−ピペラジン、エタノールアミン、ピペリジン、４−ピペリジノ−ピペリジン、及び４−フルオロフェニルアミンなどのアミンで処理される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で、２５℃〜４５℃の温度で４時間〜１８時間攪拌される。
【０１６５】
工程１ｇ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（７）であり、Ｒ10はヒドロキシであり、Ｒ11は水素であり、及びＲ12は、ヒドロキシである；スキーム１の式（Ｇ）で記載されている）は、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、アセトン、メタノール、及びエタノールから選択される溶媒中に式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、且つＲ10はヒドロキシである）を溶解し、及び窒素などの不活性雰囲気中で０℃にて２０分間水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤と反応することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で、２５℃〜４５℃の温度で２時間〜８時間更に攪拌される。
【０１６６】
【化７０】
スキーム２
工程２ａ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（８）であり、及びＲ10はヒドロキシである；スキーム２の式（Ｈ）で記載されている）は、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムから選択される塩基の存在下で、窒素などの不活性雰囲気中で０℃にて２時間、アセトン、アセトニトリル、１，４−ジオキサンから選択される溶媒中に、塩化トシルなどの試薬とともに、式（Ｂ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、Ｒ8はヒドロキシであり、及びＲ9はヒドロキシである；スキーム１の工程１ｂにより調製される）を溶解することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で、２５℃〜４５℃の温度で２時間〜８時間更に攪拌することができる。
【０１６７】
工程２ｂ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルで
あり、及びＲ4は式（９）である；スキーム２の式（Ｋ）で記載されている）は、ジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、酢酸エチル、及びジメチルホルムアミドから選択される溶媒中に式（Ｅ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、Ｒ8はヒドロキシであり、及びＲ9は−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17であり、Ｒ17は水素である；スキーム１の工程１ｅにより調製される）を溶解し、及びジシクロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ ＨＣｌ）、及びＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）から選択されるカップリング試薬並びに４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）などの触媒と反応することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で、２５℃〜４５℃の温度で４時間〜１８時間攪拌される。
【０１６８】
工程２ｃ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1は存在せず、Ｒ2は＝Ｏであり、Ｒ3はメチルであり、及びＲ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである；スキーム２の式（Ｌ）で記載されている）は、窒素などの不活性雰囲気中で０℃にて２時間、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、及びテトラヒドロフランから選択される溶媒中の式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである）を、デス−マーチンペルヨージナン、二クロム酸ピリジニウム、クロロクロム酸ピリジニウム、及びスワン酸化剤から選択される酸化剤と反応することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気下にて、２５℃〜４５℃の温度で２時間〜８時間更に攪拌される。
【０１６９】
工程２ｄ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1は存在せず、Ｒ2は＝Ｏであり、Ｒ3はメチルであり、及びＲ4は式（５）である；スキーム２の式（ｍ）で記載されている）は、窒素などの不活性雰囲気中で０℃にて２時間、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、及びテトラヒドロフランから選択される溶媒中の式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである）を、デス−マーチンペルヨージナン、二クロム酸ピリジニウム、クロロクロム酸ピリジニウム、及びスワン酸化剤から選択される酸化剤と反応することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気下にて、２５℃〜４５℃の温度で２時間〜８時間更に攪拌される。
【０１７０】
【化７１】
スキーム３
工程３ａ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10は−ＯＣ（Ｏ）Ｒ19であり、Ｒ19はアルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択される；スキーム３の式（Ｎ）で記載されている）は、式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである）をジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、酢酸エチル、及びジメチルホルムアミドから選択される溶媒中に溶解し、及びＤＭＡＰなどの触媒の存在下でジシクロヘキシルカルボジイミド又はＥＤＣ ＨＣｌ又はＤＩＣから選択されるカップリング試薬と反応することにより調製される。更に、反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で２５℃〜４５℃の温度にて４時間〜１８時間、反応混合物に添加されるＲ19−ＣＯＯＨ（Ｒ19は、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択される）で処理される。
【０１７１】
工程３ｂ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はエチル、
ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、及びｎ−ペンチルから選択され、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである；スキーム３の式（Ｏ）で記載されている）は、式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、及びＲ10はヒドロキシである）をジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、酢酸エチル、及びジメチルホルムアミドから選択される溶媒中に溶解し、パラ−トルエンスルホン酸の存在下でＲ3−ＯＨ（式中、Ｒ3はエチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、及びｎ−ペンチルから選択される）と反応することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気下にて、２５℃〜４５℃の温度で４時間〜１８時間攪拌される。
【０１７２】
工程３ｃ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（２）であり、Ｒ5はヒドロキシであり、Ｒ6は水素であり、及びＲ7は水素又はアルキルから選択される；スキーム３の式（Ｑ）で記載されている）は、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、及びＮ−エチルモルホリンから選択される塩基の存在下で、式（Ｂ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（３）であり、Ｒ8はヒドロキシであり、及びＲ9はヒドロキシである；スキーム１工程１ｂにより調製される）をジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、酢酸エチル、及びジメチルホルムアミドから選択される溶媒中に溶解し、Ｒ7−ハロゲン化物（式中、Ｒ7は水素又はアルキルである）と反応することにより調製される。反応混合物は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で、２５℃〜４５℃の温度で４時間〜１８時間攪拌される。
【０１７３】
【化７２】
スキーム４
工程４ａ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（７）であり、Ｒ10はヒドロキシであり、Ｒ11はハロゲンであり、及びＲ12はハロゲンである；スキーム４の式（Ｒ）で記載されている）は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で０℃〜４５℃の温度で２時間〜８時間、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、１，４−ジオキサン、及びアセトニトリルから選択される溶媒中で、式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はアルキルであり、Ｒ4は式（４）であり、且つＲ10はヒドロキシである）を三フッ化ジエチルアミノ硫黄（ＤＡＳＴ）などのハロゲン化剤と反応することにより調製される。
【０１７４】
工程４ｂ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はハロゲンであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はハロゲンである；スキーム４の式（Ｓ）で記載されている）は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で０℃〜４５℃の温度にて２時間〜８時間、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、１，４−ジオキサン、及びアセトニトリルから選択される溶媒中で、式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである）を、三フッ化ジエチルアミノ硫黄（ＤＡＳＴ）などのハロゲン化剤と反応することにより調製される。
【０１７５】
工程４ｃ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はアミノであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、Ｒ10は−ＮＲ14Ｒ15であり、Ｒ14はアルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、及びＲ15は水素、及びアルキルから選択される；スキーム４の式（Ｔ）で記載されている）は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で０℃〜４５℃の温度にて２時間〜８時間、ベンゼン、トルエン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、１，４−ジオキサン、及びアセトニトリルから選択される溶媒中で、式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである）を、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム又はシアノ水素化ホウ素ナトリウム、並びにＲ14−ＮＨ2及びＲ14−ＮＨ−アルキル（式中、Ｒ14はアルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択される）から選択されるアミンと反応することにより調製される。
【０１７６】
工程４ｄ
式（１）の化合物（式中、Ｒ1はＳＨであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10は−ＳＲ14であり、Ｒ14はアルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択される；スキーム４の式（Ｕ）で記載されている）は、窒素ガスなどの不活性雰囲気中で０℃〜４５℃の温度にて２時間〜８時間、溶媒ベンゼン又はトルエン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、１，４−ジオキサン、及びアセトニトリルから選択される溶媒の存在下で、式（Ａ）の化合物（式中、Ｒ1はヒドロキシであり、Ｒ2は水素であり、Ｒ3はメチルであり、Ｒ4は式（４）であり、及びＲ10はヒドロキシである）を、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム及びＲ14−ＳＨ（式中、Ｒ14はアルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択される）から選択される還元剤と反応することにより調製される。
【０１７７】
【化７３】
上記のスキーム１〜４の全てにおいて、適用可能な場合、化合物は任意に、それらのプロドラッグ及び塩に変換され得る。加えて、化合物は、カラムクロマトグラフィーなどの当該技術分野において周知の技術によって、個々の異性体に分離することができる。
【０１７８】
本発明の化合物は、本発明の化合物の薬理学的に許容される塩又は溶媒和物の形態で利用することもできることが当業者であれば理解されよう。
式（１）の化合物に関して、本発明は、式（１）の化合物の全ての立体異性体及びそれらの全ての比率の混合物、及びそれらの薬理学的に許容される塩を更に含む。
【０１７９】
本発明の化合物は、続いて、本発明の化合物の有機塩又は無機塩に変換することができる。
したがって、式（１）で表される本発明の化合物が１つ以上の塩基性基、即ちプロトン化されることができる基を含有する場合、好適な無機酸又は有機酸でさらなる塩を形成することができる。好適な無機酸の例としては、ホウ酸、過塩素酸、塩酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸、及びその他の当業者に既知の無機酸が挙げられる。好適な有機酸の例としては、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレ
イン酸、ヒドロキシマレイン酸、フマル酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸、ケトグルタル酸、グリセロリン酸、アスパラギン酸、ピクリン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、コール酸、パントテン酸、アルギン酸、ナフトエ酸、マンデル酸、タンニン酸、樟脳酸、及びその他の当業者に既知の有機酸が挙げられる。
【０１８０】
式（１）で表される本発明の化合物は、好適な塩基でさらなる塩を形成可能な１つ以上の酸性基を含有する。例えば、本発明の化合物のこのような塩は、Ｌｉ塩、Ｎａ塩、及びＫ塩などのアルカリ金属塩、又はＣａ塩、Ｍｇ塩、又はアルミニウム塩のようなアルカリ土類金属塩、又はアンモニアを有する塩、又はリジン、リシン、アルギニン、グアニジン、ジエタノールアミン、コリン、及びトロメタミンなどの有機塩基の塩を含んでもよい。
【０１８１】
本発明はさらに、式（１）の化合物の溶媒和物、例えば、水を有する水和物、及びアルコール、エーテル、酢酸エチル、ジオキサン、ジメチルホルムアミド、又はアセトンなどの低級アルキルケトン、又はこれらの混合物などのその他の結晶化溶媒で形成された溶媒和物を含む。
【０１８２】
本発明はさらに、式（１）の化合物の多形体を含む。多形体は、徐冷却又は急冷却に続いて本発明の化合物を加熱又は溶融することにより得られうる。多形体の存在は、ＩＲ分光法、固体プローブＮＭＲ分光法、示差走査熱量測定法、又は粉末Ｘ線回折などの技術により同定し得る。
【０１８３】
また、本発明は、式（１）の化合物のプロドラッグ、例えばエステル、アミド、及びその他の誘導体も含む。
式（１）で表される本発明の化合物は、ＴＮＦ−α阻害物質であり、炎症性腸疾患、炎症、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、クローン病、敗血症性ショック、内毒素性ショック、アテローム性動脈硬化症、虚血−再潅流傷害、冠状動脈性心疾患、血管炎、アミロイド症、多発性硬化症、敗血症、慢性の再発性ぶどう膜炎、Ｃ型肝炎ウイルス感染症、マラリア、潰瘍性大腸炎、悪液質、乾癬、形質細胞腫、子宮内膜症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、髄膜炎、ＡＩＤＳ、ＨＩＶ感染症、自己免疫疾患、免疫不全症、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、慢性移植片対宿主病、外傷及び移植拒絶反応、成人呼吸窮迫症候群、肺線維症、再発性卵巣癌、リンパ増殖性疾患、難治性多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、糖尿病、若年性糖尿病、強直性脊椎炎、皮膚遅延型過敏症疾患、アルツハイマー病、全身性エリテマトーデス、及びアレルギー性喘息を含む、異常ＴＮＦ−α活性に伴う疾患の治療に使用を見出す。
【０１８４】
ある種の実施形態において、式（１）で表される本発明の化合物は、インターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８）阻害物質であり、関節リウマチ、変形性関節症、及びその他の自己免疫疾患を含む、異常インターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８）活性に伴う疾患の治療に使用を見出す。
【０１８５】
ある種の実施形態において、式（１）で表される本発明の化合物は、ＩＦＮ−γ阻害物質であり、関節リウマチ、変形性関節症、及びその他の自己免疫疾患を含む、異常インターロイキン（ＩＦＮ−γ）活性に伴う疾患の治療に使用を見出す。
【０１８６】
ある種の実施形態において、式（１）で表される本発明の化合物は、ＢＣＬ２、ＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ｃＭｙｃ、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、及びＭｙＤ８８から選択される１つ以上の遺伝子を下方制御し、バーキットリンパ
腫又はポイツ・イエーガー症候群を含む炎症性疾患の治療に使用を見出す。
【０１８７】
ある実施形態によれば、式（１）で表される本発明の化合物は、滑膜細胞中のＩＬ−１βなどのＣＲＥＢの転写標的を下方制御し、ＣＲＥＢ経路によって媒介される炎症性疾患の治療に有用である。
【０１８８】
ある実施形態によれば、本発明は、式（Ｉ）の化合物で治療される炎症性疾患の患者の薬物反応の監視方法を提供し、監視方法は、治療を受けた患者からの試験用試料中のＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃから選択される１つ以上の遺伝子の発現を同定することと、同定された遺伝子の発現を式（Ｉ）の化合物で治療する前の患者から入手した試験用試料中のＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃから選択される同一の１つ以上の遺伝子の発現と、又は未治療の対照と、比較することを含む。
【０１８９】
別の実施形態において、薬物反応の監視方法において、治療後のＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃから選択される１つ以上の遺伝子の発現の変化は、薬物反応を示す。
【０１９０】
別の実施形態において、式（１）の化合物を用いた治療後の薬物反応の監視方法では、ＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃから選択される１つ以上の遺伝子の発現は下方制御される。
【０１９１】
ある実施形態によれば、式（１）で表される本発明の化合物は、炎症性腸疾患、炎症、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、クローン病、潰瘍性大腸炎、難治性多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、乾癬、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、皮膚遅延型過敏症疾患、及びアルツハイマー病を含む、炎症性疾患の治療に使用を見出す。
【０１９２】
ある実施形態によれば、式（１）で表される本発明の化合物は、関節リウマチ及び潰瘍性大腸炎を含む炎症性疾患の治療に使用を見出す。
ある実施形態によれば、式（１）で表される本発明の化合物は、関節リウマチの治療に使用を見出す。
【０１９３】
ある実施形態によれば、式（１）で表される本発明の化合物は、潰瘍性大腸炎の治療に使用を見出す。
ある実施形態によれば、式（１）で表される本発明の化合物は、乾癬の治療に使用を見出す。
【０１９４】
ある実施形態によれば、本発明は、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を必要とする哺乳類へ投与することにより、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患を治療する方法を提供する。
【０１９５】
ある実施形態によれば、本発明は、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を必要とする哺乳類へ投与することにより、炎症性腸疾患、炎症、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、クローン病、敗血症性ショッ
ク、内毒素性ショック、アテローム性動脈硬化症、虚血−再潅流傷害、冠状動脈性心疾患、血管炎、アミロイド症、多発性硬化症、敗血症、慢性の再発性ぶどう膜炎、Ｃ型肝炎ウイルス感染症、マラリア、潰瘍性大腸炎、悪液質、乾癬、形質細胞腫、子宮内膜症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、髄膜炎、ＡＩＤＳ、ＨＩＶ感染症、自己免疫疾患、免疫不全症、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、慢性移植片対宿主病、外傷、及び移植拒絶反応、成人呼吸窮迫症候群、肺線維症、再発性卵巣癌、リンパ増殖性疾患、難治性多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、糖尿病、若年性糖尿病、強直性脊椎炎、皮膚遅延型過敏症疾患、アルツハイマー病、全身性エリテマトーデス、及びアレルギー性喘息を含む、異常ＴＮＦ−α活性に伴う炎症性疾患を治療する方法を提供する。
【０１９６】
別の実施形態によれば、本発明は、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を必要とする哺乳類へ投与することにより、関節リウマチ、変形性関節症、及びその他の自己免疫疾患を含む、異常インターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８）に伴う炎症性疾患を治療する方法を提供する。
【０１９７】
別の実施形態によれば、本発明は、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を必要とする哺乳類へ投与することにより、関節リウマチ、変形性関節症、及びその他の自己免疫疾患を含む、異常インターロイキン（ＩＦＮ−γ）活性に伴う炎症性疾患を治療する方法を提供する。
【０１９８】
ある実施形態によれば、本発明は、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を必要とする哺乳類へ投与することにより、炎症性腸疾患、炎症、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、クローン病、潰瘍性大腸炎、難治性多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、乾癬、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、皮膚遅延型過敏症疾患、バーキットリンパ腫又はポイツ・イエーガー症候群、及びアルツハイマー病を含む、炎症性疾患を治療する方法を提供する。
【０１９９】
ある実施形態によれば、本発明は、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を、１種以上の式（１）の化合物の治療有効量を必要とする哺乳類へ投与することにより、関節リウマチ及び潰瘍性大腸炎を含む炎症性疾患を治療する方法を提供する。
【０２００】
本発明の別の態様によれば、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療において有用である、有効成分である１種以上の式（１）の化合物の治療有効量と、薬理学的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。
【０２０１】
本発明の別の態様によれば、本明細書中で上述した上記の組成物を使用して、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患を治療する方法が提供される。
【０２０２】
本発明の別の態様によれば、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療に有用である、１種以上の式（１）の化合物を含む製剤の製造方法が提供される。
【０２０３】
本発明の医薬組成物は、調製方法自体既知であり当業者に周知の方法によって調製され
る。薬理学的に許容される不活性の無機及び／又は有機担体及び／又は添加剤は、式（１）の化合物、及び／又は該生理学的に許容範囲内の塩、及び／又は該プロドラッグに加えて使用されることができる。丸剤、錠剤、コーティングされた錠剤、及びゼラチン硬カプセルの製造には、例えば乳糖、トウモロコシデンプン又はトウモロコシデンプンの誘導体、アラビアゴム、マグネシア又はブドウ糖等を使用することが可能である。ゼラチン軟カプセル及び座薬の担体は、例えば脂肪、ワックス、天然油又は硬化油等である。例えば注射液などの溶液の製造又はエマルジョンもしくはシロップ剤の製造に好適な担体は、例えば水、生理食塩液、又は例えばエタノール、プロパノールもしくはグリセロールなどのアルコール類、ブドウ糖液もしくはマンニトール溶液などの糖液、又はこれまでに説明してきた種々の溶媒の混合物である。
【０２０４】
式（１）の化合物及び／又は該生理学的に許容できる塩及び／又はプロドラッグに含有する有効成分、並びに担体物質に加えて、本医薬組成物は、例えば充填剤、酸化防止剤、分散剤、乳化剤、脱泡剤、芳香剤、防腐剤、可溶化剤、又は着色剤などの添加剤を含有することができる。また、本発明の医薬組成物は、２種以上の式（１）の化合物、及び／又は該生理学的に許容可能な塩、及び／又はそれらのプロドラッグも含有することができる。さらに、少なくとも１種の式（１）の化合物、及び／又は該生理学的に許容可能な塩、及び／又は該プロドラッグに加えて、本医薬組成物は、１つ以上のその他の治療的有効成分又は予防的有効成分も含有することができる。
【０２０５】
医薬組成物は通常、約１〜９９重量％、例えば約５〜７０重量％、又は約１０〜約３０重量％の式（１）の化合物又は、式（１）の化合物の生理学的に許容可能な塩又はそれらのプロドラッグを含有する。本医薬組成物中に含まれる式（１）、及び／又は該生理学的に許容可能な塩、及び／又は該プロドラッグの有効成分の量は、例えば約５〜５００ｍｇであることができる。投与されるべき本発明の化合物の投与量は、広範であることができる。一日当たりの投与量は、所望の効果に合わせて選択されるべきである。式（１）の化合物又は式（１）の化合物のプロドラッグの約０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の用量は毎日投与され得る。必要であれば、一日当たりの投与量を増減して投与することもできる。
【０２０６】
本発明の医薬組成物中の有効成分の実際の用量レベルは、特定の患者、組成物、及び投与方法において患者に有毒ではない所望の治療反応を達成するために有効な有効成分の量が得られるように、変化させることができる。
【０２０７】
選択される用量レベルは、用いられる本発明の特定の化合物の活性、投与経路、投与時期、用いられる特定の化合物の排泄率、治療期間、用いられる特定の化合物と組み合わせて使用されるその他の薬物、化合物及び／又は材料、治療される患者の年齢、性別、体重、体調、全身の健康状態、及び病歴、並びに医学分野で周知の同様の要因などを含む種々の要因に依存するであろう。
【０２０８】
本発明の医薬組成物は、例えば丸剤、錠剤、コーティングされた錠剤、カプセル剤、顆粒又はエリキシル剤の形態で、経口投与することができる。しかし、例えば座薬の形態で直腸的に投与することもでき、又は滅菌注射液もしくは懸濁液の形態で例えば静脈内、筋肉内、もしくは皮下など非経口的に投与することもでき、又は例えば溶液もしくは貼付剤の形態で局所的に投与することもでき、又は例えばエアゾールもしくは鼻スプレーの形態でその他の方法で投与することもできる。
【０２０９】
本発明の種々の実施形態の活性に実質的に影響を及ぼさない修正は、本明細書中に開示された発明の範囲に含まれると理解される。
実施例
以下の用語／略称／化学式が実施例で用いられる。
Ｌ ：リットル
ｍＬ ：ミリリットル
μＬ ：マイクロリットル
ｇ ：グラム
ｍｇ ：ミリグラム
μｇ ：マイクログラム
ｎｇ ：ナノグラム
ｍＭ ：ミリモル
μＭ ：マイクロモル
Ｈ ：時間
ｍｉｎ ：分
ｌｐｍ ：リットル／分
ｒｐｍ ：毎分回転数
ＨＰＬＣ ：高速液体クロマトグラフィー
ＴＬＣ ：薄層クロマトグラフィー
ＨＯＢｔ ：Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＣＯ2 ：二酸化炭素
ＮａＯＨ ：水酸化ナトリウム
ＫＯＨ ：水酸化カリウム
ＮａＨＣＯ3 ：炭酸水素ナトリウム
Ｎａ2ＣＯ3 ：炭酸ナトリウム
ＮａＣｌ ：塩化ナトリウム
ＨＣｌ ：塩酸
ＥｔＯＨ ：エタノール
ＤＭＳＯ ：ジメチルスルホキシド
ＰＥＧ ：ポリエチレングリコール
ＬＰＳ ：リポ多糖体
ＲＰＭＩ ：ローズウェル・パーク・メモリアル・インスティテュート
ＦＢＳ ：ウシ胎児血清
ＰＭＡ ：ホルボールミリステートアセテート
ＥＬＩＳＡ ：酵素結合免疫測定法
ＩＣ50 ：５０％阻害濃度
ＰＢＳ ：リン酸緩衝食塩水生理食塩水
ＤＰＢＳ ：ダルベッコリン酸緩衝液
ＮＢＦ ：基準緩衝ホルマリン
ＫＲＰＨ緩衝液 ：クレブス−リンゲル−リン酸緩衝液
トリス−ＨＣｌ ：２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール塩酸塩
Ｔｈ１サイトカイン ：Ｔヘルパー１サイトカイン
μＣｉ ：マイクロキュリー
ＰＨＡ ：フィトヘムアグルチニン
ＣＰＭ ：カウント毎分
ｈＰＢＭＣ ：ヒト末梢血単核球
ＥＤＴＡ ：エチレンジアミン四酢酸
ＭＴＳ ：（３−（４，５−ジメチルチアゾル−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホニル）−２Ｈ−テトラゾリウム）
ＰＭＳ ：フェナジン メトスルホン酸塩
ＦＣＳ ：ウシ胎児血清
ＲＴＱ−ＰＣＲ ：リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応
抗−ＣＤ３ ：抗−分化抗原群３
抗−ＣＤ２８ ：抗−分化抗原群２８
ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム
ＴＢＳ ：トリス−緩衝生理食塩水
ＨＲＰ ：西洋ワサビペルオキシダーゼ
ｗ／ｖ ：重量／体積
ｖ／ｖ ：（溶質の）体積／（溶媒の）体積
ＤＳＳ ：デキストラン硫酸ナトリウム
ＭＡＰＫ ：マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ
ＡＴＣＣ ：アメリカ培養細胞コレクション
Ｈｂ ：ヘモグロビン
ＣＭＣ ：カルボキシメチルセルロース
ＤＡＩ ：疾病活性指数
ｐ．ｏ． ：経口投与
ｓ．ｃ． ：皮下投与
ｂ．ｉ．ｄ ：１日２回
室温 ：２５±５℃
化合物の調製
実施例１
工程１
培養物Ｎｏ．ＰＭ０２２４３５５の単離
ａ）培地（ＣＳＰＹＭＥ寒天）の組成：
ブドウ糖１５ｇ、コーンスティープリカー５ｇ、ペプトン７．５ｇ、酵母菌抽出物７．５ｇ、炭酸カルシウム２．０ｇ、塩化ナトリウム５ｇ、脱塩水１．０Ｌ、最終ｐＨ（２５℃）７．０。
ｂ）インドのカルナータカ州ＢｅｌｌａｒｙのＨｏｓａｌｉｎｇｐｕｒ村近辺の作物畑から黒色土試料を収集し、滅菌プラスチック袋に移した。試料を４〜８℃で維持した。
ｃ）上記土からの放線菌の単離：
土（約１ｇ）を滅菌脱塩水（１０ｍＬ）に加え、得られた混合物を５５℃で６分間加熱し、放線菌胞子を豊富に形成し、真正細菌を制限した。加熱した試料の１０-3希釈液１００μＬを、バルク種子法（ｂｕｌｋ ｓｅｅｄ ｍｅｔｈｏｄ）で、トウモロコシデンプンペプトン酵母菌マルツエキス（ＣＳＰＹＭＥ）寒天（アンホテリシンＢを含有する、２０μｇ／ｍＬ）培地上に蒔いた。１６８時間後に目に見えるコロニーを採取して純化し、使用するためにＣＳＰＹＭＥスラント上に維持した。この培養物には、培養物Ｎｏ．ＰＭ０２２４３５５が割り振られた。
【０２１０】
培養物Ｎｏ．ＰＭ０２２４３５５は、世界知的所有権機関（ＷＩＰＯ）が承認した国際寄託当局（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｙ Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ（ＩＤＡ））である微生物工学研究所（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）（Ｓｅｃｔｏｒ ３９−Ａ，Ｃｈａｎｄｉｇａｒｈ−１６０ ０３６，Ｉｎｄｉａ）の微生物タイプ培養物コレクション（Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｙｐｅ
Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＭＴＣＣ）に寄託され、受入番号ＭＴＣＣ
５３４０が与えられた。
【０２１１】
工程２
培養物Ｎｏ．ＰＭ０２２４３５５の維持
ａ）培地（ＩＳＰ２）の組成：
酵母菌抽出物４ｇ、マルツエキス１０ｇ、ブドウ糖４ｇ、寒天２０ｇ、脱塩水１．０Ｌ、最終ｐＨ（２５℃）７．０〜７．２。
ｂ）培養物Ｎｏ．ＰＭ０２２４３５５は、長期間保存するため、グリセロールバイアル瓶
に−７０℃で維持された。定期的に、ＩＳＰ−２培地を使用して、該生存度を調べた。
【０２１２】
実施例２
振とうフラスコ内でのＰＭ０２２４３５５培養物の発酵
ａ）種培地の組成：
ブドウ糖１５ｇ、コーンスティープリカー５ｇ、大豆粕１５ｇ、炭酸カルシウム２ｇ、塩化ナトリウム５ｇ、脱塩水１．０Ｌ、最終ｐＨ（２５℃）６．５〜７．５。
ｂ）種培地（４０ｍＬ）を三角フラスコ（５００ｍＬ）中に分散させ、フラスコを１２１℃で３０分間加圧滅菌した。フラスコを室温まで冷却し、各フラスコに、スラント上のループ一杯の成長が良好な産生株（培養物Ｎｏ．ＰＭ０２２４３５５）を接種し、回転振とう器上で７０〜７４時間、２３０〜２５０ｒｐｍ、３０℃（±１℃）で振とうさせ、種培養物を得た。
ｃ）産生培地の組成：
グリセロール３０ｇ、ブドウ糖３ｇ、酵母菌抽出物２ｇ、塩化ナトリウム３ｇ、硝酸ナトリウム１ｇ、炭酸カルシウム３ｇ、ペプトン３ｇ、微量食塩水（ｔｒａｃｅ ｓａｌｔ
ｓｏｌｕｔｉｏｎ）１ｍＬ／Ｌ、脱塩水１．０Ｌ、最終ｐＨ（２５℃）６．５〜７．５。
ｄ）産生培地（２００ｍＬ）を三角フラスコ（１０００ｍＬ）中に分散させ、フラスコを１２１℃で３０分間加圧滅菌して２９℃〜３０℃まで冷却し、（実施例２（ｂ）で得られた）種培養物５ｍＬを各フラスコに播種した。
ｅ）発酵パラメーター：
温度２９℃〜３０℃、攪拌２３０〜２５０ｒｐｍ、及び採取時間４６〜５０時間。培養ブロスの採取ｐＨは６．０〜７．０であった。
【０２１３】
実施例３
工程１
酢酸エチルを使った培養ブロスの抽出
酢酸エチル（１Ｌ）を使用して、（実施例２で得られた）全ブロス（１Ｌ）を抽出した。有機層を分離して濃縮し、粗酢酸エチル抽出物を得た。
【０２１４】
工程２
粗酢酸エチル抽出物の精製
カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム中メタノール）によって、（実施例３工程１で得られた）粗酢酸エチル抽出物を精製した。ＴＬＣ（シリカゲル、クロロホルム−メタノール ９：１、検出：２５４ｎｍ）により、フラクションを監視した。クロロホルム中３％メタノールを用いて溶出したフラクションを濃縮し、粉末を得た。メタノールを使用して得られた粉末を結晶化し、白色の化合物を得た。
【０２１５】
1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，５００ＭＨｚ）：δ６．６２（ｄｄ，１Ｈ），６．２６（ｓ，１Ｈ），６．１２（ｄｄ，１Ｈ），５．６９（ｂｒ ｄ，１Ｈ），５．５５（ｂｒ ｄ，１Ｈ），５．３１（ｄｄｑ，１Ｈ），５．１２（ｄｄ，１Ｈ），５．１１（ｂｒ ｄ，１Ｈ），４．９３（ｓ，２Ｈ）４．５８（ｄｄ，１Ｈ），４．２５（ｔ，１Ｈ），４．１（ｄｄ，１Ｈ）３．９０（ｔ，１Ｈ），３．８８（ｍ，１Ｈ）３．８２（ｄｄ，１Ｈ），３．６３（ｍ，１Ｈ），３．５８（ｄｄ，１Ｈ），３．５４（ｓ，３Ｈ），３．３５（ｄｑ，１Ｈ），３．３２（ｂｒ ｄ，１Ｈ），３．３０（ｓ，１Ｈ），２．５（ｍ，１Ｈ），２．２３（ｍ，．１Ｈ），．２．２１（ｍ，２Ｈ），２．０８（ｍ，１Ｈ）２．０７（ｂｒ３Ｈ），１．９０（ｍ，１Ｈ），１．８４（ｂｒ Ｓ，３Ｈ），１．６２（ｍ，１Ｈ），１．６０（ｍ，２Ｈ），１．５９（ｄｑ，１Ｈ）１．５７（ｄ，３Ｈ），１．３７（ｄ，３Ｈ），１．２８（ｍ，１Ｈ），）１．２３（ｍ，２Ｈ），１．１２（ｄ，３Ｈ），１．１０（ｄ，３Ｈ），１．０７（ｄ，３Ｈ），１．０１（ｄ，３Ｈ），０．８９（ｔ
，３Ｈ），０．８２（ｄ，３Ｈ）；ＭＳ：ｍ／ｅ８６５。
【０２１６】
プロトンＮＭＲデータを報告されたデータと比較することにより、化合物をコンカナマイシンであると特徴づけた（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．４５，Ｎｏ．７，１１０８−１１１６，（１９９２））。
【０２１７】
実施例３で得られた化合物を標準化合物として使用した。
実施例４
発酵槽内での培養物Ｎｏ．ＰＭ０２２４３５５の培養
工程１
振とうフラスコ内での種培養物の調製
ａ）培地の組成：
ブドウ糖１５ｇ、コーンスティープリカー５ｇ、大豆粕１５ｇ、炭酸カルシウム２ｇ、塩化ナトリウム５ｇ、脱塩水１．０Ｌ、ｐＨ（２５℃）６．５〜７．５。
ｂ）種培地（２００ｍＬ）を三角フラスコ（１０００ｍＬ）内に分散させ、フラスコを１２１℃で３０分間加圧滅菌した。フラスコを室温まで冷却し、各フラスコに、スラント上のループ一杯の成長が良好な産生株（培養物Ｎｏ．ＰＭ０２２４３５５）を接種し、回転振とう器上で７０〜７４時間、２３０〜２５０ｒｐｍ、２９℃〜３０℃で振とうさせ、種培養物を得た。
【０２１８】
工程２
発酵
ａ）産生培地の組成：
グリセロール３０ｇ、ブドウ糖３ｇ、酵母菌抽出物２ｇ、塩化ナトリウム３ｇ、硝酸ナトリウム１ｇ、炭酸カルシウム３ｇ、ペプトン３ｇ、微量食塩水１ｍＬ／Ｌ、脱塩水１．０Ｌ、ｐＨ（２５℃）６．５〜７．５。
ｂ）発酵槽（１５０Ｌ）内において、上記の産生培地（１００Ｌ）を除泡剤であるデスモフェン（ｄｅｓｍｏｐｈｅｎ）（３０ｍＬ）とともに系内で３０分間１２１℃にて滅菌し、２９℃〜３０℃まで冷却し、（実施例４の工程１（ｂ）で得られた）種培養物２．５〜３．５Ｌを播種した。
ｃ）発酵パラメーター：
温度２９℃〜３０℃、攪拌１００ｒｐｍ、通気６０ｌｐｍ、採取時間４６〜５０時間。発酵ブロス内でのコンカナマイシンの生成は、ＴＬＣ（シリカゲル、クロロホルム―メタノール９：１、検出：２５４ｎｍ）で標準化合物のコンカナマイシンＡと比較することにより同定された。培養ブロスの採取ｐＨは６．０〜７．０であった。
【０２１９】
実施例５
培養ブロスＰＭ０２２４３５５の単離及び精製
工程１
抽出
酢酸エチル（９０Ｌ）を使用して、（実施例４の工程２（ｃ）で得られた）全ブロス（９０Ｌ）を抽出した。有機層を分離して濃縮し、粗酢酸エチル抽出物を得た。収量：１２ｇ。
【０２２０】
工程２
精製
カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム中メタノール）によって（実施例５の工程１で得られた）粗酢酸エチル抽出物を精製した。コンカナマイシンを参照基準として使用して、ＴＬＣ（シリカゲル、クロロホルム−メタノール９：１、検出：２５４ｎｍ）により、フラクションを監視した。クロロホルム中３％メタノールを使って溶出し
たフラクションを濃縮し、コンカナマイシン（５ｇ）を含む濃縮抽出物を得た。コンカナマイシンを含む濃縮抽出物をメタノール中に溶解し、１０〜１２時間４℃で維持し、濾過して粉末（収量：０．６ｇ）を得た。ＬＣＭＳにより、この粉末は、コンカナマイシンＡとコンカナマイシンＣの混合物（分子量８６５及び８２２）を含有することが同定された。これは、粗コンカナマイシン原料として参照される。
【０２２１】
実施例６
（３Ｚ，５Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−１８−（（６Ｅ，１０Ｅ）−３，９−ジヒドロキシ−４，８−ジメチル−５−オキソドデカ−６，１０−ジエン−２−イル）−９−エチル−８，１０−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−５，７，１１，１３−テトラメチルオキサシクロオクタデカ−３，５，１３，１５−テトラエン−２−オン
【０２２２】
【化７４】
１０℃でＮａＯＨのメタノール溶液（０．０３Ｍ）を（実施例５工程２で得られた）粉末（１００ｍｇ）に加え、得られた混合物を２０分間攪拌した。ＨＣｌ（１Ｎ）を使用して反応混合物を中和し、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、石油エーテル中３０％酢酸エチル）により粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：５５ｍｇ。
【０２２３】
ＨＰＬＣ：９５％純度［ＲＰ−１８（４ｍｍ×２５０ｍｍ）カラム、３５分間２５℃にて水中にアセトニトリル２〜１００％勾配、検出：２２０ｎｍ］；ＭＳ：ｍ／ｅ６７４；
1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，５００ＭＨｚ）：δ６．７７（ｄｄ，１Ｈ），６．６（ｄｄ，１Ｈ），６．２７（ｓ，１Ｈ），６．１２（ｄｄ，１Ｈ），５．６７（ｂｒ．ｄ，１Ｈ），５．６４（ｂｒ．ｄ，１Ｈ），５．４９（ｄｄ，１Ｈ），５．３８（ｄｄ．ｑ，１Ｈ），５．１２（ｄｄ，１Ｈ），５．１０（ｄｑ，１Ｈ），３，８９（ｔ，１Ｈ），３．８０（ｄｄ，１Ｈ），３．６４（ｄｄ，１Ｈ），３．５３（ｓ，３Ｈ），３．４８（ｔ，１Ｈ），３．２３（ｓ，３Ｈ），２．９７（ｂｒ．ｄ，１Ｈ），２．９２（ｄ，１Ｈ），２．５８（ｍ，１Ｈ），２．４３（ｍ，１Ｈ），２．３１（ｍ，１Ｈ），１．９９（ｓ，３Ｈ），１．９（ｂｒ．ｓ，３Ｈ），１．８８（ｍ，１Ｈ），１．８６（ｍ，２Ｈ），１．６３（ｄｄ，３Ｈ），１．４５（ｍ，１Ｈ），１．２３（ｍ，２Ｈ），１．１５（ｄ，３Ｈ），１．０１（ｄ，３Ｈ），１．００（ｄ，３Ｈ）０．９２（ｄ，３Ｈ），０．９１（ｔ，３Ｈ），０．８９（ｄ，３Ｈ）。
【０２２４】
13ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１２５ＭＨｚ）：δ２００．２，１６２．４，１４７．４，１４０．７，１４０．４，１４０．２，１３９．４，１３１．７，１３１．５，１２８．６，１２６．６，１２５．５，１２４．１，１２１．３，８０．９，７６．８，７３．３，７２．９，７０．８，７０．０，５８．３，５７．３，４４．８，４４．１，４１．９，４０．９，３７．８，３４．１，３３．３，２０．８，２０．６，１９．２，１６．１，１４．９，１３．８，１２．７，１０．５，９．０，７．９。
【０２２５】
得られた化合物を、プロトンＮＭＲデータを報告されたデータ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏ
ｎ ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．３９，３８５７−６０，（１９８１））と比較することにより、
（３Ｚ，５Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−１８−（（６Ｅ，１０Ｅ）−３，９−ジヒドロキシ−４，８−ジメチル−５−オキソドデカ−６，１０−ジエン−２−イル）−９−エチル−８，１０−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−５，７，１１，１３−テトラメチルオキサシクロオクタデカ−３，５，１３，１５−テトラエン−２−オンと特徴づけた。
【０２２６】
実施例７
（３Ｚ，５Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−１８−（（５Ｚ，６Ｅ，１０Ｅ）−３，９−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシミノ）−４，８−ジメチルドデカ−６，１０−ジエン−２−イル）−９−エチル−８，１０−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−５，７，１１，１３−テトラメチルオキサシクロオクタデカ−３，５，１３，１５−テトラエン−２−オン
【０２２７】
【化７５】
実施例６の化合物（１２ｍｇ）を、ピリジン（１ｍＬ）とエタノール（１ｍＬ）の混合物中に溶解し、窒素下で２５℃にて４時間ヒドロキシルアミン塩酸塩（３．１７ｍｇ）と反応させた。水を反応混合物に加え、得られた反応混合物を酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、石油エーテル中４０％酢酸エチル）により粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：１０ｍｇ。ＨＰＬＣ：９９．２％純度、保持時間２５．２分間［ＲＰ−１８（４ｍｍ×．２５０ｍｍ）カラム、３５分間２５℃にて水中にアセトニトリル２〜１００％勾配、検出：２２０ｎｍ］；ＭＳ：ｍ／ｅ６８９；
1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，５００ＭＨｚ）：δ１０．７８（ｓ，１Ｈ），６．６４（ｄｄ，１Ｈ），６．５４（ｄｄ，１Ｈ），６．２７（ｓ，１Ｈ），６．０５（ｄｄ，１Ｈ），５．６７（ｂ ｒｄ，１Ｈ），５．６２（ｄ，１Ｈ），５．４９（ｄｄ，１Ｈ），５．３８（ｄｄｑ，１Ｈ），５．２５（ｄ，１Ｈ），５．０９（ｄｑ，１Ｈ），３，８８（ｔ，１Ｈ），３．７８（ｄｄ，１Ｈ），３．６４（ｄｄ，１Ｈ），３．４８（ｓ，３Ｈ），３．４８（ｔ，１Ｈ），３．４２（ｓ，３Ｈ），２．９７（ｂｒ ｄ，１Ｈ），２．８９（ｄ，１Ｈ），２．５４（ｍ，１Ｈ），２．４２（ｍ，１Ｈ），２．２８（ｍ，１Ｈ），２．０１（ｓ，３Ｈ），１．９６（ｍ，２Ｈ），１．８７（ｍ，１Ｈ），１．８３（ｂｒ Ｓ，３Ｈ），１．６２（ｄｄ，３Ｈ），１．４７（ｍ，１Ｈ），１．２３（ｍ，２Ｈ），１．０７（ｄ，３Ｈ），１．０１（ｄ，３Ｈ），０．９９（ｄ，３Ｈ），０．９４（ｄ，３Ｈ），０．９１（ｔ，３Ｈ），０．８５（ｄ，３Ｈ）。
【０２２８】
13Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，１２５ＭＨｚ）：δ１６４．０，１５７．０，１４２．３，１４１．１，１４０．０，１３３．７，１３３．１，１３０．４，１２９．５，１２７．１，１２５．６，１２２．９，１２０．４，１１８．５，８２．９，７８．６，７５．０，７４．７，７２．７，７２．４，５９．４，５５．６，４３．７，４０．４，３９．９，３９．４，３６．１，３５．３，３３．２，２２．７，２２．３，１７．９，１７．８，１６．８，１６．３，１４．４，１２．４，１１．９，１０．７。
【０２２９】
実施例７Ａ
分析的ＨＰＬＣ［溶出溶媒としてクロロホルム中２％メタノールを使用したシリカゲルカラム（２５０ｍｍ×４ｍｍ）；流量１ｍＬ／分］で、実施例７の化合物のオキシム異性体類を分離した。異性体類は、それぞれ８．９分及び１０．２分の保持時間を有する。両方の異性体類は、６８９の同一の分子量を有する。
【０２３０】
実施例８
（３Ｚ，５Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−１８−（（５Ｅ，６Ｅ，１０Ｅ）−３，９−ジヒドロキシ−５−（メトキシイミノ）−４，８−ジメチルドデカ−６，１０−ジエン−２−イル）−９−エチル−８，１０−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−５，７，１１，１３−テトラメチルオキサシクロオクタデカ−３，５，１３，１５−テトラエン−２−オン
【０２３１】
【化７６】
実施例６の化合物（１０ｍｇ）を、ピリジン（５００μＬ）とエタノール（５００μＬ）の混合物中に溶解し、窒素下で２５℃にて４時間、メトキシアミン塩酸塩（６．５ｍｇ）と反応させた。水を反応混合物に加え、反応混合物を酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。分取ＨＰＬＣ［Ｅｕｒｏｓｐｅｒｅ−１００、Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×８ｍｍ）、移動相：アセトニトリル―水（１：１無勾配）］によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：６．５ｍｇ；ＭＳ：ｍ／ｅ：７０３。
【０２３２】
実施例９
（３Ｚ，５Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−１８−（（５Ｅ，６Ｅ，１０Ｅ）−５−（ベンジルオキシイミノ）−３，９−ジヒドロキシ−４，８−ジメチルドデカ−６，１０−ジエン−２−イル）−９−エチル−８，１０−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−５，７，１１，１３−テトラメチルオキサシクロオクタデカ−３，５，１３，１５−テトラエン−２−オン
【０２３３】
【化７７】
実施例６の化合物（１０ｍｇ）をピリジン（３００μＬ）とエタノール（７００μＬ）の混合物中に溶解し、窒素下で２５℃にて４時間ピリジン中ベンジルオキシアミン塩酸塩（８．４ｍｇ）と反応させた。水を反応混合物に加え反応混合物を酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させて濃縮した。分取ＨＰ
ＬＣ［Ｅｕｒｏｓｐｅｒｅ−１００、Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×８ｍｍ）、移動相：アセトニトリル−水（１：１無勾配）］によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：７．２ｍｇ；ＭＳ：ｍ／ｅ：７７９。
【０２３４】
実施例１０
（（Ｚ）−（（６Ｅ，１０Ｅ）−２−（（４Ｅ，６Ｅ，１４Ｅ，１６Ｚ）−１１−エチル−１０，１２−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−７，９，１３，１５−テトラメチル−１８−オキソオキサシクロオクタデカ−４，６，１４，１６−テトラエン−２−イル）−３，９−ジヒドロキシ−４，８−ジメチルドデカ−６，１０−ジエン−５−イリデン）アミノオキシ）酢酸
【０２３５】
【化７８】
実施例６の化合物（１０ｍｇ）を、窒素下で２５℃にて１４時間、ピリジン（２ｍＬ）及びメタノール（４ｍＬ）中でカルボキシメチルヒドロキシルアミンヘミ塩酸塩（４．８ｍｇ）と反応させた。水を反応混合物に加え、反応混合物を酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。分取ＨＰＬＣ［Ｅｕｒｏｓｐｅｒｅ−１００、Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×８ｍｍ）、移動相：アセトニトリル−水（１：１無勾配）］によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：７．８ｍｇ；ＭＳ：ｍ／ｅ７４７。
【０２３６】
実施例１１
（３Ｚ，５Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−１８−（（５Ｚ，６Ｅ，１０Ｅ）−３，９−ジヒドロキシ−４，８−ジメチル−５−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−２−オキソエトキシイミノ）ドデカ−６，１０−ジエン−２−イル）−９−エチル−８，１０−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−５，７，１１，１３−テトラメチルオキサシクロオクタデカ−３，５，１３，１５−テトラエン−２−オン
【０２３７】
【化７９】
ジクロロメタン（２ｍＬ）中に実施例１０（１０ｍｇ）の化合物を含む溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（３ｍｇ）及びＨＯＢｔ（２ｍｇ）を添加した。２０分間後、
Ｎ−メチル−ピペラジン（１．５ｍｇ）を添加した。反応混合物を１８時間窒素雰囲気下にて攪拌した。冷水を反応混合物に加え、有機層を分離した。反応混合物をジクロロメタン（３×５ｍＬ）で抽出した。混合有機層を水（２×５ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。分取ＨＰＬＣ［Ｅｕｒｏｓｐｅｒｅ−１００、Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×８ｍｍ）、移動相：アセトニトリル−水（１：１無勾配）］によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：７．７ｍｇ；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｅ８３０（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２３８】
実施例１２
２−（（Ｚ）−（（６Ｅ，１０Ｅ）−２−（（４Ｅ，６Ｅ，１４Ｅ，１６Ｚ）−１１−エチル−１０，１２−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−７，９，１３，１５−テトラメチル−１８−オキソオキサシクロオクタデカ−４，６，１４，１６−テトラエン−２−イル）−３，９−ジヒドロキシ−４，８−ジメチルドデカ−６，１０−ジエン−５−イリデン）アミノオキシ）−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アセトアミド
【０２３９】
【化８０】
ジクロロメタン（２ｍＬ）中に実施例１０の化合物（１０ｍｇ）を含む溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（３ｍｇ）及びＨＯＢｔ（２ｍｇ）を添加した。２０分後、エタノールアミン（１ｍｇ）を添加した。反応混合物を１８時間窒素雰囲気下にて攪拌した。冷水を反応混合物に加え、有機層を分離した。反応混合物をジクロロメタン（３×５ｍＬ）で抽出した。混合された有機層を水（２×５ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。分取ＨＰＬＣ［Ｅｕｒｏｓｐｅｒｅ−１００、Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×８ｍｍ）、移動相：アセトニトリル−水（１：１無勾配）］によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：５．８ｍｇ；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｅ７９１（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２４０】
実施例１３
（３Ｚ，５Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−１８−（（５Ｚ，６Ｅ，１０Ｅ）−３，９−ジヒドロキシ−４，８−ジメチル−５−（２−オキソ−２−（ピペリジン−１−イル）エトキシイミノ）ドデカ−６，１０−ジエン−２−イル）−９−エチル−８，１０−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−５，７，１１，１３−テトラメチルオキサシクロオクタデカ−３，５，１３，１５−テトラエン−２−オン
【０２４１】
【化８１】
ジクロロメタン（２ｍＬ）中に実施例１０の化合物（１０ｍｇ）を含む溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（３ｍｇ）及びＨＯＢｔ（２ｍｇ）を添加した。２０分後、ピペリジン（１．３ｍｇ）を添加した。反応混合物を１８時間窒素雰囲気下にて攪拌した。冷水を反応混合物に加え、有機層を分離した。反応混合物をジクロロメタン（３×５ｍＬ）で抽出した。混合された有機層を水（２×５ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。分取ＨＰＬＣ［Ｅｕｒｏｓｐｅｒｅ−１００、Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×８ｍｍ）、移動相：アセトニトリル−水（１：１無勾配）］によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：８．０ｍｇ；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｅ８１５（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２４２】
実施例１４
（３Ｚ，５Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−１８−（（５Ｚ，６Ｅ，１０Ｅ）−５−（２−（１，４’−ビピペリジン−１’−イル）−２−オキソエトキシイミノ）−３，９−ジヒドロキシ−４，８−ジメチルドデカ−６，１０−ジエン−２−イル）−９−エチル−８，１０−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−５，７，１１，１３−テトラメチルオキサシクロオクタデカ−３，５，１３，１５−テトラエン−２−オン
【０２４３】
【化８２】
ジクロロメタン（２ｍＬ）中に実施例１０の化合物（１０ｍｇ）を含む溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（３ｍｇ）及びＨＯＢＴ（２ｍｇ）を添加した。２０分後、４−ピペリジノ−ピペリジン２．５ｍｇ）を添加した。反応混合物を１８時間窒素雰囲気下にて攪拌した。冷水を反応混合物に加え、有機層を分離した。反応混合物をジクロロメタン（３×５ｍＬ）で抽出した。混合された有機層を水（２×５ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。分取ＨＰＬＣ［Ｅｕｒｏｓｐｅｒｅ−１００、Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×８ｍｍ）、移動相：アセトニトリル−水（１：１無勾配）］
によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：７．５ｍｇ；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｅ８９８（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２４４】
実施例１５
２−（（Ｚ）−（（６Ｅ，１０Ｅ）−２−（（４Ｅ，６Ｅ，１４Ｅ，１６Ｚ）−１１−エチル−１０，１２−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−７，９，１３，１５−テトラメチル−１８−オキソオキサシクロオクタデカ−４，６，１４，１６−テトラエン−２−イル）−３，９−ジヒドロキシ−４，８−ジメチルドデカ−６，１０−ジエン−５−イリデン）アミノオキシ）−Ｎ−（４−フルオロベンジル）アセトアミド
【０２４５】
【化８３】
ジクロロメタン（２ｍＬ）中に実施例１０の化合物（１０ｍｇ）を含む溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（３ｍｇ）及びＨＯＢｔ（２ｍｇ）を添加した。２０分後、４−フルオロベンジルアミン（１．５ｍｇ）を添加した。反応混合物を１８時間窒素雰囲気下にて攪拌した。冷水を反応混合物に加え、有機層を分離した。反応混合物をジクロロメタン（３×５ｍＬ）で抽出した。混合された有機層を水（２×５ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。分取ＨＰＬＣ［Ｅｕｒｏｓｐｅｒｅ−１００、Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×８ｍｍ）、移動相：アセトニトリル−水（１：１無勾配）］によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：８．８ｍｇ；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｅ８５５（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２４６】
実施例１６
（２Ｅ，６Ｅ）−Ｎ−（４−（（４Ｅ，６Ｅ，１４Ｅ，１６Ｚ）−１１−エチル−１０，１２−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−７，９，１３，１５−テトラメチル−１８−オキソオキサシクロオクタデカ−４，６，１４，１６−テトラエン−２−イル）−３−ヒドロキシペンタン−２−イル）−５−ヒドロキシ−４−メチルオクタ−２，６−ジエンアミド
【０２４７】
【化８４】
実施例６の化合物（３ｍｇ）をアセトン（１ｍＬ）中に溶解させ、窒素下で０℃にて２
時間、ＫＯＨ（１ｍｇ）及び塩化トシル（１．８ｍｇ）と反応させた。室温にて１時間攪拌を続けた。冷水を反応混合物に加え、反応混合物を酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。分取ＴＬＣ［シリカゲル、移動相：酢酸エチル−ヘキサン（１：１）］によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：０．７ｍｇ。ＭＳ：ｍ／ｅ：６８９。
【０２４８】
実施例１７
（３Ｚ，５Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−９−エチル−８，１０−ジヒドロキシ−３，１７−ジメトキシ−５，７，１１，１３−テトラメチル−１８−（（６Ｅ，１０Ｅ）−３，５，９−トリヒドロキシ−４，８−ジメチルドデカ−６，１０−ジエン−２−イル）オキサシクロオクタデカ−３，５，１３，１５−テトラエン−２−オン
【０２４９】
【化８５】
実施例６の化合物（５ｍｇ）をテトラヒドロフラン（１ｍＬ）中に溶解させ、窒素下で０℃にて２０分間水素化ホウ素ナトリウム（０．５６ｍｇ）及び塩化セリウム（ＩＩＩ）（ＣｅＣｌ3）（０．９ｍｇ）と反応させ、次に室温にて２０分間攪拌した。冷水を反応混合物に加え、酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。分取ＴＬＣ［シリカゲル、移動相：ヘキサン−酢酸エチル（１：１）］によって粗生成物を精製し、表題の化合物を得た。収量：２．７ｍｇ；ＭＳ：ｍ／ｅ６７６。
【０２５０】
薬理学
ＴＮＦ−α、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、及びインターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８）から選択される１つ以上のサイトカインの活性阻害における式（１）の化合物及び製剤の有効性は、当該技術分野において周知の薬理学的分析によって決定され、以下に説明される。
【０２５１】
実施例１８
ＬＰＳ刺激ＴＨＰ−１細胞のスクリーニング
「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５１，５６３１−５６３８，（１９９３」）を参照して、ＴＨＰ−１細胞（ＡＴＣＣ番号：ＴＩＢ２０２）におけるＬＰＳ（Ｅｓｃｈｅｒｃｈｉａ ｃｏｌｉ ０１２７：Ｂ８，米国Ｓｉｇｍａ社）によるＩＬ−６（米国ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）産生を設計し、本参照文献の開示は、本分析の教示のために参照することにより本明細書に含まれる。
【０２５２】
１０％ＦＢＳ（米国ＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を含有する、１００Ｕ／ｍＬペニシリン及び１００ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン（１００倍溶液、米国Ｓｉｇｍａ社）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地（英国Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ社）でＴＨＰ−１細胞を培養した。９６−ウェルプレート（米国Ｎｕｎｃ社）に１ウェル当たり２５，０００個の細胞を接種した。ＰＭＡ（米国Ｓｉｇｍａ社、ＲＰＭＩ中１００μｇ／ｍＬストックとして調製し、５ｎｇ／ｍＬまで希釈した）を用いて細胞を分化した。試験化合物（ＤＭＳＯ中２０ｍＭストックとして調製し、分析では次の終濃度が得られるようにＤＭＳＯで希釈し
た：１００、１０、１、０．１、０．０１、０．００１、及び０．０００１μＭ）又は溶媒（０．５％ＤＭＳＯ）を細胞に添加し、これらの細胞を３０分間３７℃にて保温した。終濃度１μｇ／ｍＬが得られるように、ＬＰＳ（米国Ｓｉｇｍａ社、ＰＢＳ中１ｍｇ／ｍＬストックとして調製した）を加えた。３７℃にて２４時間、５％ＣＯ2でプレートを保温した。上清を回収し、製造者（米国ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）の記載に従ってＥＬＩＳＡによりＴＮＦ−α及びＩＬ−６の分析を行った。対照と比較したサイトカイン放出のパーセント阻害を計算した。非線形回帰法によりＩＣ50値を計算した。得られた結果を表１にまとめた。
【０２５３】
【表１】
本実験の標準物質として、デキサメタゾンが使用される。
【０２５４】
結論：本発明の代表的な化合物は、好ましくは、ＴＨＰ−１細胞におけるＬＰＳ誘導ＩＬ−６産生を阻止した。
実施例１９
正常なｈＰＢＭＣのＴ−細胞増殖
「Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５３，１−９，（１９９４）」、及び「Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，７，６８７−６９２，（２０００）」を参照して、本分析方法を設計し、これらの参照文献の開示は、本分析の教示のために参照することにより本明細書に含まれる。
【０２５５】
工程１
ｈＰＢＭＣの分離
フィコール／ハイパック液（Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ−１０７７，米国Ｓｉｇｍａ社）でヘパリン化静脈血を遠心分離することにより、健康なドナーからｈＰＢＭＣを得た。１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ１６４０培地中に、分離したｈＰＢＭＣを懸濁し、５０，０００細胞／ウェルの密度で９６−ウェルプレート（米国Ｎｕｎｃ社）に接種した。細胞を３７℃にて５％ＣＯ2で２４時間保温した。これらの細胞を使用して、リンパ球増殖並びにサイトカイン放出の分析を行った。
【０２５６】
工程２
リンパ球増殖分析
異なる濃度の試験化合物（ＤＭＳＯ中２０ｍＭストックとして調製され、分析において次
の終濃度が得られるようにＤＭＳＯで希釈した：１００、１０、１、０．１、０．０１、０．００１、及び０．０００１μＭ）を、工程１で得られたプレートに蒔いた細胞に処理し、３０分間保温した。次に、ＰＭＡ５ｎｇ／ｍＬ（米国Ｓｉｇｍａ社、ＲＰＭＩ中１００μｇ／ｍＬストックとして調製し、５ｎｇ／ｍＬまで希釈した）及びＰＨＡ５μｇ／ｍＬ（米国Ｓｉｇｍａ社、ＲＰＭＩ中１ｍｇ／ｍＬストックとして調製した）で、細胞を刺激した。プレートを３７℃にて５％ＣＯ2で４８時間保温した。１ウェル当たり０．１μＣｉのトリチウムチミジン（インドのＢＡＲＣから入手；１ｍＣｉ／ｍＬのストックとして調製し、ＫＲＰＨ緩衝液中で１０μＣｉ／ｍＬに希釈し、１ウェル当たり２０μＬを添加し、終濃度０．１μＣｉ／ウェルを得た）で細胞を一晩処理し、４８時間後、以下の式を使用して化合物の抗増殖効果を測定した：
【０２５７】
【数１】
対照は、ＰＨＡ及びＰＭＡを有する（刺激された）ｈＰＢＭＣ、ＲＰＭＩを有する（刺激されていない）ｈＰＢＭＣ、ＦＫ５０６を有するｈＰＢＭＣ（正の対照、米国のＳｉｇｍａ社、ＤＭＳＯ中２０ｍＭストックとして調製し、分析において次の終濃度が得られるようにＤＭＳＯで希釈した：１００、１０、１、０．１、０．０１、０．００１、及び０．０００１μＭ）を含む。得られた結果は表２にまとめられる。
【０２５８】
【表２】
実験を実証するための標準物質として、ＦＫ５０６を使用した。
【０２５９】
工程３
サイトカイン放出分析
異なる濃度の試験化合物（ＤＭＳＯ中２０ｍＭストックとして調製し、分析において次の終濃度が得られるようにＤＭＳＯで希釈した：１００、１０、１、０．１、０．０１、０．００１、０．０００１、０．００００１、及び０．０００００１μＭ）を、工程１で得られたプレートに蒔いた細胞に処理し、３０分間保温した。次に、ＰＨＡ（ＲＰＭＩ１６４０培地中１ｍｇ／ｍＬストックとして調製し、５μｇ／ｍＬの最終濃度にて使用）で細胞を刺激した。標準物質として、ＦＫ５０６を使用した。プレートを３７℃にて５％ＣＯ2で４８時間保温した。ＥＬＩＳＡキット（米国ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を使用して、収集した上清中のサイトカインを検出した。分析で評価したサイトカインは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＦＮ−γであった。得られた結は表３及び表４にまとめられる。
【０２６０】
【表３】
実験を実証するための標準物質として、ＦＫ５０６を使用した。
【０２６１】
【表４】
工程４
ｈＰＢＭＣからのコンカナバリン−Ａ−誘導ＩＦＮ−γ産生
フィコール・ハイパック密度勾配遠心分離（１．０７７ｇ／ｍＬ；シグマ−アルドリッチ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）社）を使用して、末梢血単核球（ｈＰＢＭＣ）を回収した。１０％ＦＣＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン（ミズーリ州セントルイスのシグマ・ケミカル（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）社）及び１００ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン（ミズーリ州セントルイスのシグマ・ケミカル（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）社）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地（英国ＰａｓｌｅｙのＧｉｂｃｏ ＢＲＬ社）中に、ｈＰＢＭＣを１×１０6細胞／ｍＬで再懸濁した。試験化合物又は０．５％ＤＭＳＯ（担体対照）を１×１０5ｈＰＢＭＣ／ウェルを３７℃にて３０分間前処理した。その後コンカナバリンＡ（ミズーリ州セントルイスのシグマ・ケミカル（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）社）１μｇ／ｍＬで、前処理した細胞を刺激した。３７℃にて１８時間インキュベーション後、上清を収集し、製造者の記載に従ってＥＬＩＳＡ（ＯｐｔｉＥＩＡ ＥＬＩＳＡセット、ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ社）でヒトＩＦＮ−γの分析を行うまで−７０℃にて保存した。各実験では、誘導ＩＦＮ−γ産生を阻害する正の対照としてシクロスポリン（１μＭ）を使用した。得られた結果を表５にまとめる。
【０２６２】
【表５】
結論：本発明の代表的な化合物は、Ｔｈ１サイトカイン、即ちＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−αの産生を著しく阻止し、さらにＩＬ−６産生を阻害した。
【０２６３】
実施例２０
ヒト単核細胞分析
「Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５２，５９３−５９８，（２００３）」を参照して本分析を設計し、本文献の開示は、分析の教示のために参照することにより本明細書に含まれる。
【０２６４】
本分析の目的は、本発明の化合物の媒介による単球性ＴＨＰ−１細胞株からのＬＰＳ−誘導サイトカインの阻害が、生理学的に関連するヒト細胞に変換されるか否かを決定することである。従って、新たに分離したヒト単核細胞からのＬＰＳ−誘導サイトカイン産生に対する本発明の化合物の効果を確認した。
【０２６５】
健康なドナーから末梢血を収集し、カリウムＥＤＴＡバキュテイナー・チューブ（米国ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ社）に入れた。密度勾配分離（Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ−１０７７；米国Ｓｉｇｍａ社）を使用してｈＰＢＭＣを分離し、分析培地中に懸濁した。本分析培地は、１０％熱失活ＦＢＳ（オーストラリアＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン（米国Ｓｉｇｍａ社）、及び１００ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン（米国Ｓｉｇｍａ社）を含有するＲＰＭＩ培地（米国Ｓｉｇｍａ社）である。コールターカウンターを使用してｈＰＢＭＣの単核細胞をカウントし、続いて分析培地１ｍＬ当たり２×１０5単核細胞で細胞を再懸濁した。２×１０4単核細胞を含有する細胞懸濁液を、９６−ウェルプレート（米国Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに分注した。その後、ｈＰＢＭＣを４〜５時間３７℃にて５％ＣＯ2でインキュベートした。培養中、９６−ウェルプレートの底部に単核細胞が付着した。培養に続いて、非付着リンパ球を洗浄し、付着単核細胞に分析培地を加えた。３７℃にて５％ＣＯ2で培養を４８時間行った後、種々の濃度の試験化合物（ＤＭＳＯ中２０ｍＭストックとして調製；０．０３、０．１、０．３、１、３、１０、３０、及び１００μＭの終濃度が得られるように試験化合物の２０倍濃縮液１μＬを２００μＬ細胞懸濁液中に溶解させた）又は溶媒（０．５％ＤＭＳＯ）又は１０μＭデキサメタゾン（標準ＩＬ−６及びＴＮＦ−α阻害物質、米国Ｓｉｇｍａ社）を用いて、単核細胞を３０分間３７℃にて５％ＣＯ2で前処理し、１μｇ／ｍＬのＬＰＳ（Ｅｓｃｈｅｒｃｈｉａ ｃｏｌｉ ０１１１：Ｂ４，米国Ｓｉｇｍａ社）で刺激した。次に、３７℃にて５時間、５％ＣＯ2で細胞を培養し、続いて上清を収集して−７０℃で保存し、その後ＥＬＩＳＡ（ＯｐｔｉＥＩＡ ＥＬＩＳＡセット、米国ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）でＩＬ−６及びＴＮＦ−αの分析を行った。グラフパッド（Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ）ソフトウエア（プリズム（Ｐｒｉｓｍ）３．０３）を使用して、非線形回帰法によりＩＣ50値を計算した。
【０２６６】
全ての実験において、試験化合物の毒性を確認するため、平行プレートを実行した。ＭＴＳテトラゾリウム塩を含有する細胞増殖分析キット（米国Ｐｒｏｍｅｇａ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を使用して、単核細胞の生存度を評価した。生細胞はＭＴＳを減少させ、有色の生成物を形成する。使用したプロトコルは、製造者の使用説明書に従い、詳細は「Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２８５，Ｃ８１３−Ｃ
８２２，（２００３）」に記載されている。ＭＴＳ／ＰＭＳ保存溶液は、２ｍＬのＭＴＳを１００μＬのＰＭＳ（米国Ｓｉｇｍａ社）と混合することによって調製された。ＭＴＳの保存溶液は、次の様にして調製した：１ｇｍのＭＴＳをカルシウム及びマグネシウムとともに５００ｍＬのＤＰＢＳ中に溶解した。その後、０．２μＭフィルター（米国Ｎｕｎｃ社）を使用して溶液を濾過した。アリコートを−２０℃で保存した。ＰＭＳの保存溶液は、次の様にして調製された：２０ｍＬのＤＰＢＳ中に１８．４ｍｇのＰＭＳをカルシウム及びマグネシウムとともに溶解した。その後、０．２μＭ注射器フィルター（米国ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）社）を使用して滅菌した０．２μＭフィルターを使用して、溶液を濾過した。アリコートを−２０℃で保存した。その後、上述のＭＴＳ／ＰＭＳ溶液４０μＬを、２×１０4個の単核細胞（体積２００μＬ中に再懸濁した）を含有する９６−ウェルプレートの各ウェルに添加した。３７℃にて５％ＣＯ2で５時間培養した後、マイクロウェルプレート分光光度計を使用して、各ウェル内の流体の吸光度を４９０ｎｍで同定した。結果を表６にまとめている。
【０２６７】
【表６】
結論：本発明の代表的な化合物は、ＩＬ−６及びＴＮＦ−αのＬＰＳ−誘導産生を阻害した。
【０２６８】
実施例２１
滑膜組織分析
新たに分離したヒト滑膜組織細胞からのサイトカインの自然産生を阻害する本発明の化合物の能力は、Ｌａｎｃｅｔ，２９，２４４−２４７，（１９８９）を参照して設計され、本参照文献の開示は、分析の教示のために参照することにより本明細書に含まれる。
【０２６９】
滑膜組織は、膝関節置換手術を受ける関節リウマチ患者から入手した。滑膜組織を小試験片に分割し、１００Ｕ／ｍＬペニシリン−Ｇ、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、５０ｎｇ／ｍＬアンホテリシンＢ（米国Ｇｉｂｃｏ社）、１．３３ｍｇ／ｍＬコラゲナーゼ・タイプＩＩ（米国Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、０．５μｇ／ｍＬのＤＮＡｓｅタイプＩ（米国Ｓｉｇｍａ社）、及び８．３３Ｕ／ｍＬヘパリン（インドＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅ．Ｌｉｍｉｔｅｄ）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地（オーストラリアＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）において、３時間３７℃にて５％ＣＯ2で消化した。消化した滑膜組織は、膜（メッシュサイズ７０ミクロン；米国Ｓｉｇｍａ社）に通して濾過した。その後、細胞をＲＰＭＩ１６４０培地で３回洗浄し、完全培地（５％ＦＢＳ及び５％ヒト血清−ＡＢ＋（米国Ｓｉｇｍａ社）において１×１０6細胞／ｍＬの濃度で再懸濁した。トリパンブルー染料排除によって滑膜細胞の生存度を同定し、均一に≧９８％であった。本実験のために、９６−ウェル培養プレート（米国Ｎｕｎｃ社）のウェルに１００μＬの細胞懸濁液を加えた。細胞プレーティ
ングに引き続いて、１００μＬの培地及び１μＬの種々の濃度の試験化合物（試験化合物をＤＭＳＯ中に溶解させ２０ｍＭの保存溶液を得た。分析において０．０３、０．１、０．３、１、３、１０、３０、及び１００μＭの終濃度が得られるように試験化合物の２０倍濃縮液１μＬを２００μＬ細胞懸濁液中に溶解した）を細胞に添加した。ＤＭＳＯの終濃度を０．５％に調節した。対照として溶媒（０．５％ＤＭＳＯ）を使用した。プレートを１６時間３７℃にて５％ＣＯ2でインキュベートした。その後、上清を回収し、−７０℃で保存した。ＯｐｔｉＥＩＡ ＥＬＩＳＡセット（米国ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ社）を使用して、上清中のＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−８の量を分析した。製造者の使用説明書に従ったプロトコルを使用した。ＧｒａｐｈＰａｄソフトウエア（プリズム（Ｐｒｉｓｍ）３．０３）を使用して、非線形回帰法によりＩＣ50値を計算した。
【０２７０】
結果：実施例７の化合物は、関節リウマチ患者から新たに分離した滑膜組織細胞からのＩＬ−６、ＴＮＦ−α、及びＩＬ−８の自然産生を阻害した。ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−８阻害のＩＣ50はそれぞれ、１９、０．３、及び１．３μＭであった。滑膜組織細胞からのＴＮＦ−α及びＩＬ−６の阻害についてのＩＣ50は、ヒト単核細胞分析から得られたＩＣ50値と同等であった。
【０２７１】
実施例２２
ｈＰＢＭＣ膜−単核細胞接触分析
「Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１１７，１１４−１１８、（２００８）」を参照して本分析を設計し、本参照文献の開示は、分析の教示のために参照することにより本明細書に含まれる。
【０２７２】
炎症性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６）の産生をもたらす活性化Ｔ細胞接触媒介単核細胞活性化は、関節リウマチを含む慢性炎症性疾患の発症に寄与する。本分析の目的は、本発明の化合物が、単核細胞からの抗−ＣＤ３／抗−ＣＤ２８活性化ｈＰＢＭＣ媒介ＴＮＦ−α及びＩＬ−６産生を阻害するか否かを調査することである。
【０２７３】
工程１
抗−ＣＤ３／抗−ＣＤ２８でコートプレートの調製
６−ウェルプレート（米国Ｎｕｎｃ社）をヤギ抗−マウスＩｇＧ、Ｆｃ（米国Ｃｈｅｍｉｃｏｎ社）で、コーティング緩衝液（８．４ｇ／ｍＬ ＮａＨＣＯ3、３．５６ｇ Ｎａ2ＣＯ3、ｐＨ９．５）中１６．５μＬ／ｍＬの濃度でコーティングした。プレートを一晩４℃にて滅菌条件下でインキュベートした。２４時間後、プレートを無菌ＰＢＳ（カルシウム／マグネシウムは含まず）にて１回洗浄し、続いて、無菌ＰＢＳ中抗−ＣＤ３（５μｇ／ｍＬ；米国Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）及び抗−ＣＤ２８（１μｇ／ｍＬ；米国Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）カクテルを用いて３時間プレートをインキュベートした。３時間後、プレートをＰＢＳにて１回洗浄し、ｈＰＢＭＣ刺激に使用した。
【０２７４】
工程２
ｈＰＢＭＣ膜の調製
「Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１５，１１７（１）：１１４−１１８，（２００８）」に記載されているＴ−細胞膜の調製に類似の方法によって、ｈＰＢＭＣ膜を調製した。
【０２７５】
末梢血は正常の健康なボランティアから収集され、ｈＰＢＭＣはフィコール・ハイパック密度勾配遠心分離（１．０７７ｇ／ｍＬ；米国Ｓｉｇｍａ社）を使用して回収された。１０％ＦＣＳ（オーストラリアＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン（米国Ｓｉｇｍａ社）及び１００ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン（米国Ｓｉｇｍａ社）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地（英国Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ社）中で、ｈＰＢＭＣ
を３．３３×１０6細胞／ｍＬで再懸濁した。抗−ＣＤ３／抗−ＣＤ２８でコーティングしていない、又はコーティングした、６−ウェルプレート（米国Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに、５×１０6ｈＰＢＭＣを添加した。その後、プレート内のｈＰＢＭＣを３７℃にて５％ＣＯ2で２４時間インキュベートした。インキュベートに引き続いて、６−ウェルプレートの個々のウェル内のｈＰＢＭＣを回収し、まとめて貯蔵し、遠心分離にかけた。その後ｈＰＢＭＣの抗−ＣＤ３／抗−ＣＤ２８活性化を確認するサイトカイン産生の分析のために上清を収集して−７０℃で保存した。ペレットｈＰＢＭＣを低温ＰＢＳで２回洗浄し、トリス−ＨＣｌ緩衝液［５０ｍＭのトリス−ＨＣｌを含有するＰＢＳ、ｐＨ７．４；１ｍＭ ＥＤＴＡ；及びプロテアーゼ阻害薬カクテル（米国Ｒｏｃｈｅ社）］中に再懸濁した。活性化／不活性化ｈＰＢＭＣは、１０，０００〜１２，０００ｒｐｍで１分間均質化（Ｐｏｌｙｔｒｏｎ ＰＴ ３１００ホモジナイザー）することにより分解され、核フラクションは１５分間４０００ｘｇで遠心分離することにより得られ、上清は４５分間４８，０００ｘｇで遠心分離にかけられた。ｈＰＢＭＣ膜のペレットを溶解緩衝液（米国Ｓｉｇｍａ社）中に再懸濁し、Ｂｒａｄｆｏｒｄ（米国Ｓｉｇｍａ社）法よってタンパク質濃度を決定した。
【０２７６】
工程３
ｈＰＢＭＣ膜−単核細胞接触バイオエッセイ：
５ｘ１０5細胞／ｍＬで１ウェル当たり１００μＬの単核細胞を９６−ウェルプレート（米国Ｎｕｎｃ社）に添加し、４８時間３７℃にて培養した。その後、上清を除去し、非刺激ｈＰＢＭＣ膜、又は抗−ＣＤ３／抗−ＣＤ２８刺激ｈＰＢＭＣ膜（０．５〜１μｇ／ｍＬ）、又は正の対照であるＬＰＳ（ＬＰＳの保存溶液（１ｍｇ／ｍＬ）は、１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、及び１００ｍｇ／ｍＬストレプトマイシンを含有する完全培地のＲＰＭＩ１６４０培地中で調製した）のいずれかで、細胞を更に培養した。ＬＰＳを完全培地で希釈し、単核細胞を含有する各ウェルにおいてＬＰＳの終濃度が１μｇ／ｍＬとなるように、ＬＰＳの２０倍溶液を添加した。本発明の化合物の効果を決定するために、種々の濃度の試験化合物（ＤＭＳＯ中２０ｍＭストックとして調製し、分析において０．０３、０．１、０．３、１、３、１０、３０、及び１００μＭの試験化合物の終濃度が得られるように、試験化合物の２０倍濃縮液１μＬを２００μＬ細胞懸濁液中に溶解した）又は０．５％ＤＭＳＯ（溶媒対照）を用いて、単核細胞を３０分間３７℃にて前処理した。次に、刺激ｈＰＢＭＣ膜を培養物に加えた。２４時間後に上清を収集し、ＯｐｔｉＥＩＡ ＥＬＩＳＡセット（米国ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ社）を使用してＴＮＦ−α及びＩＬ−６産生を測定した。製造者の使用説明書に従ったプロトコルを使用した。各実験において、ｈＰＢＭＣ細胞膜を有さない単核細胞のみの培養液からの上清、又は単核細胞を有さないｈＰＢＭＣ膜も、負の対照として収集した。
【０２７７】
結果：実施例７の化合物は、活性化ｈＰＢＭＣ媒介ＩＬ−６産生を、０．３μＭで６６％、及び０．５μＭで１００％阻害したが、単核細胞からのＴＮＦ−α産生は阻害しなかった。
【０２７８】
結論：本発明の化合物７は、活性化ｈＰＢＭＣ媒介ＩＬ−６産生を阻害した。
実施例２３
ｐ３８ＭＡＰＫ分析
ｐ３８ＭＡＰＫ阻害物質は臨床試験において肝毒性を示したので、ｐ３８ＭＡＰＫの非阻害物質を選択するため分析を実施した。「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４０，１９１１−１９１９，（１９９９）」を参照して、ｐ３８ＭＡＰＫの阻害物質を特定する方法を設計し、本参照文献の開示は、分析の教示のために参照することにより本明細書中に含まれる。
【０２７９】
ヒトジャーカットＴ細胞（ＡＴＣＣ番号：ＴＩＢ−１５２，クローンＥ６−１，ＵＳＡ
）を培地（１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ１６４０培地）中で、３７℃にて５％ＣＯ2で培養した。２〜３日ごとに、及び必ず実験前日に、培地を変えた。実験当日、ジャーカット細胞を溶媒又は試験化合物を用いて、ヒト単核細胞分析におけるＩＬ−６阻害のためのＩＣ50値の１０倍である３μＭで、１時間３７℃にて前処理した。その後、アニソマイシン（１０μｇ／ｍＬ；米国Ｓｉｇｍａ社）を用いて３０分間細胞を刺激し、ＳＢ２０３５８０（１μＭ；米国Ｓｉｇｍａ社）を標準物質として使用した。試験化合物、アニソマイシン、及びＳＢ２０３５８０の試料調製は、次の通りである：試験化合物の保存溶液（２０ｍＭ）をＤＭＳＯで調製した。その後の全ての化合物の希釈は、ＤＭＳＯを使用して実施した。ウェル内で所望の終濃度が得られるように、適切な濃度の化合物１μＬを細胞懸濁液に添加した。
【０２８０】
刺激に引き続き、細胞を回収し、氷冷ＰＢＳで迅速に洗浄し、完全プロテアーゼ阻害剤カクテル（米国Ｒｏｃｈｅ社）及びオルトバナジン酸ナトリウム（米国Ｓｉｇｍａ社）を補充した低温細胞溶解緩衝液（米国Ｓｉｇｍａ社）で溶解した。１５，０００ｒｐｍで４℃にて２０分間遠心分離を行った後、タンパク質抽出物を得た。クマシープラスタンパク質分析試薬（Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ Ｐｌｕｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）（米国Ｐｉｅｒｃｅ社）を使用して、製造者の使用説明書に従って、得られた抽出物の一定分量において、タンパク質含有量を分析した。全ての実験において、等量のタンパク質（１０μｇ）をＳＤＳ／１２．５％−ポリアクリルアミド電気泳動ゲル上に載せ、１５０Ｖで２時間、緩衝溶液（２４．９ｍＭトリス塩基、２５０ｍＭグリシン、０．１％ＳＤＳ）中で分解した。電気泳動後、タンパク質は、２５Ｖで４５分間、転写緩衝液（４７．９ｍＭトリス塩基、３８．６ｍＭグリシン、０．０３７％ＳＤＳ、２０％メタノール；ｐＨ９．２〜９．４）中で、ゲルからニトロセルロース膜（米国Ｓｉｇｍａ社）に転写された。５％脱脂ドライミルク（米国Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を含有するＴＢＳ（２０ｍＭトリス塩基、０．９％ＮａＣｌ；ｐＨ７．４）中で、１時間１５分室温にてブロットをブロッキングし、ＴＢＳ（米国Ｓｉｇｍａ社のトリスを使用して調製されたＴＢＳ）中スーパーブロックブロッキング緩衝液中で、４℃にて一晩ゆっくりと揺動しながら調製された一次抗体を用いてインキュベートした。一次抗体は、燐光体−ｐ３８ＭＡＰＫ（米国Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社）及びβ−アクチン（米国Ｓｉｇｍａ社）に対する抗体を含んだ。インキュベートに引き続いて、膜を洗浄し、次にＨＲＰ−共役二次抗体（米国Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社）でプローブした。化学発光ペルオキシダーゼ基質（米国Ｓｉｇｍａ社）及びコダックイメージングステーション（Ｋｏｄａｋ Ｉｍａｇｉｎｇ ｓｔａｔｉｏｎ）を使用して、バンドを可視化した。ストリッピング（ｓｔｒｉｐｐｉｎｇ）緩衝液（５０ｍＭトリス−ＨＣｌ ｐＨ６．８、１％ＳＤＳ、及び１００ｍＭβ−メルカプトエタノール）を用いて、２０分間５０℃にてブロットを取り除き、洗浄を行い、ローディングコントロールとしてハウスキーピングタンパク質β−アクチンに対する一次抗体で再プローブした。
【０２８１】
結果：実施例７の化合物は、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼを阻害しなかった。
結論：本発明の代表的な化合物は、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼを阻害しなかった。
実施例２４
ＲＴＱ−ＰＣＲを使用した遺伝子発現プロファイル
単球性細胞株（ＴＨＰ−１）から刺激された未処理の細胞、ヒト単核細胞、及び関節リウマチ患者からの滑膜細胞における、実施例７の化合物の効果を測定した。ＴＨＰ−１細胞株における化合物の効果は、遺伝子発現を基準にして測定し、薬物処理を施していない細胞刺激対照と比較した倍率変化として表した。
【０２８２】
実施例７の化合物又は溶媒（０．５％ＤＭＳＯ）を用いて、ＴＨＰ−１細胞、ヒト単核細胞、及び滑膜細胞を処理した。市販のＲＮＡ抽出キット（ドイツＱｉａｇｅｎ Ｃｏｒ
ｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して全ＲＮＡ単離を行った。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（米国カリフォルニア州）製の第１鎖ｃＤＮＡ合成キットを使用して、全ＲＮＡから第１鎖ｃＤＮＡを合成した。その後、遺伝子特異的プライマーを使用したリアルタイムの定量ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴＱ ＰＣＲ）、及び９５℃５分間の初期変性、及び９５℃１０秒を４０サイクル、続いて６０℃３０秒間の標準的熱プログラムを行った（ドイツＥｐｐｅｎｄｏｒｆ社製リアルプレックス（Ｒｅａｌｐｌｅｘ）ＰＣＲ機器）。ＰＣＲサイクル中に行った生成物の定量的測定値をハウスキーピング遺伝子（Ａｃｔｉｎ）に対して正規化し、これを使用して、それぞれの対照と比較した倍率変化としての遺伝子発現を測定した。結果を表７Ａ及び表７Ｂにまとめている。
【０２８３】
【表７Ａ】
【０２８４】
【表７Ｂ】
結論：
遺伝子ＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃは、実施例７の化合物を用いた処置に反応して下方制御を示した。
【０２８５】
Ｉｎ Ｖｉｖｏ研究
実験にて使用される動物は、ＣＰＣＳＥＡ（Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｕｒｐｏｓｅ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｏｎ Ａｎｉｍａｌｓ）（インドＴａｍｉｌ Ｎａｄｕ）が発行した有効な指針に従って飼育された。実験用動物を使用する手順は、ピラマル・ライフ・サイエンシーズ・リミテッド（Ｐｉｒａｍａｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ）（インドのムンバイＧｏｒｅｇａｏｎ）のＩＡＥＣ（実験用動物倫理委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ））によって承認された。
【０２８６】
実施例２５
急性大腸炎のＤＳＳ誘導マウスモデル
「Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，８０，１５４１，（２０００）」、及び「Ｆａｓｅｂ Ｊｏｕｒｎａｌ，１９：７９２，（２００５）」を参照して分析を設計し、これらの参照文献の開示は、分析の教示のために参照することにより本明細書中に含まれる。
【０２８７】
工程１
大腸炎の誘導：
体重２０〜２４ｇ、生後８〜１０週の、屋内で飼育した正常なメスＣ５７ＢＬマウスを使用した。動物は、個別に換気されたケージに、１ケージ当たり３匹ずつ、全実験期間にわたって入れられた。
【０２８８】
飲用水を３％（ｗ／ｖ）ＤＳＳ（分子量３６，０００〜５０，０００、米国ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．）溶液と置き換えることにより、マウスにおける実験的大腸炎を誘導した。ＤＳＳ溶液は、隔日に新たに水で調製され、実験用動物は０日目〜１０日目に随時摂取することができた。６匹の非実験用動物群は上記期間中ＤＳＳの代わりに水が与えられた。
【０２８９】
工程２
処置：
毎日動物の体重を計り、体重の記録を保持した。試験化合物の懸濁液は、化合物を湿潤させるために最低限必要な量のＴｗｅｅｎ８０と混合した後、０．５％（ｗ／ｖ）ＣＭＣ中で０．０５ｍｇ／ｍＬの濃度で調製され、１日１回１０ｍＬ／ｋｇ（投与量＝０．５ｍｇ／ｋｇ）の体積で動物に経口投与された。この処置は６日目に開始され、１０日目まで継続された。この期間中、ＤＳＳ対照動物及び非実験用動物には、（１００μＬのＴｗｅｅｎ８０と同一比率で混合された）ＣＭＣが１０ｍＬ／ｋｇの投与量で１日１回与えられた。
【０２９０】
工程３
ターミナルサクリファイス：
１１日目に、動物を殺し、ヘパリン化チューブに血液を収集し、以下のパラメーターを調査した；
１．直腸の出血／糞便中の血液
２．糞便の粘度
３．結腸中の出血
４．結腸の重さ
５．結腸の長さ
６．０日目から１１日目までの体重の変化
７．血中ヘモグロビン濃度
データを定量化可能なパラメーター、記述的パラメーター、及び実際のスコアとして次表（表８、表９、及び表１０）に示す。記述的パラメーターは、ＤＡＩで表される。ＤＡＩは、大腸炎の動物の症状を数値化するために使用される研究用ツールである。ＤＡＩは、処置の反応又は病気の寛解を同定するために用いられる。処置の反応又は病気の寛解の同定を達成するため、各種因子が研究される。各種要因の幾つかは定量化可能であり（例えば、実験期間中の体重変化、結腸長さ、血中ヘモグロビン濃度）、従って、処置の有益な効果を評価するために直接使用することができる。その他の因子は単に記述的であり（例えば結腸中血液、直腸出血、糞便粘度）、病気の重症度に従ってスコアがつけられる。ＤＡＩは、全ての要因のスコアの合計である。
【０２９１】
結果を表８、９、及び１０にまとめる。
【０２９２】
【表８】
【０２９３】
【表９】
【０２９４】
【表１０】
結論：実施例７の化合物は、ＤＳＳ誘導大腸炎を有する実験用動物（マウス）に０．５ｍｇ／ｋｇの投与量で経口投与した場合、大腸炎の重症度を軽減する。
【０２９５】
工程４
組織病理学
化合物治療（実施例７の化合物、０．５ｍｇ／ｋｇ、ｐ．Ｏ．、ｂ．ｉ．ｄ）の最終日に、動物を人道的に安楽死させ、血液試料を収集し、結腸を摘出した。結腸の前側部分を通常の生理食塩水で洗浄し、糞便物質を除去し、次に１０％ＮＢＦ（中性緩衝ホルマリン）中に固定した。固定してから１０日後に、結腸試料を整え、自動組織処理装置を使用して一晩処理した。翌日、試料をパラフィンでブロックし、一晩−１８℃にて低温衝撃にさらした。結腸内腔の断面から切片（５μ）を作成し、所定のヘマトキシリン（Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｌｉｎ）（米国Ｓｉｇｍａ社）＆エオシン（インドＬｏｂａ Ｃｈｅｍｉｅ社）を用いて染色し、恒久的にマウントした。スライドを２４時間乾燥させ、次に組織学的に等級化した。得られた結果は組織的スコアとして表された。炎症細胞、びらん、陰窩破壊、浮腫の存在のような種々のパラメーターに基づいて組織学的分析を行い、全体的な構築的変化を０〜３のスコアで等級化した。この場合、０は存在しないことに相当し、１は結腸内腔周囲の２５％の変化に相当し、２は５０％以下に相当し、３は結腸周囲の５０％超が影響を受けたことに相当する。全てのスコアを合計し、各切片の合計組織学的スコアを得た。２つのランダム切片を等級化し、平均を計算した。
【０２９６】
結果：各グループの平均組織学的スコアは、ＤＳＳ対照で７．５０＋０．９６、及び実施例７の化合物で処置されたマウスで５．３３＋０．９９であった。
結論：本発明の化合物７は、ＤＳＳ誘導大腸炎のＣ５７ＢＬオスマウスに投与した場合、組織学的損傷を保護する。
【０２９７】
実施例２６
マウスにおけるコラーゲン誘導関節炎
「Ｊ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１６２，６３７−６４６（１９８５）」を参照して本実験を設計し、本参照文献の開示は、本実験の教示のために参照することにより明細書中に含まれる。
【０２９８】
生後８〜１０週の体重１８〜２２ｇのオスＤＢＡ／１Ｊマウスに、フロイント完全アジュバント（米国Ｓｉｇｍａ社）中タイプＩＩコラーゲン（米国Ｅｌａｓｔｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ社）２００μｇと同等のエマルジョンを尾部の付け根に皮内注射し、免疫性を与えた。動物は２１日目に、フロイント完全アジュバント（米国Ｓｉｇｍａ社）で乳化した新たに調製されたタイプＩＩコラーゲン・エマルジョン２００μｇで追加免疫を行った。非実験用マウスグループも横に並べて維持された。非実験用動物とは、関節炎の誘導に対する免疫性を与えられず、またいかなる処置も受けていない動物である。このグループは、年齢とともに足の厚さにおいて正常変化に注意しながら維持される。
【０２９９】
２３日目から、関節指数及び足の厚さをパラメーターとして使用し、関節リウマチの兆候についてマウスを１日１回調査した。以下の基準を採用して関節指数スコアリングを行った：
前肢：スケール０〜３
０：発赤又は腫れはない
１：発赤はあるが、腫れはない
２：発赤及び足の腫れがある
３：発赤及び足の重度の腫れがある
後脚：スケール０〜４
０：発赤又は腫れはない
１：発赤及び足の軽度の腫れがある
２：発赤及び足の中度の腫れ、及び／又は少なくとも１つの指の腫れがある
３：発赤及び足の中度／重度の腫れ、足首関節の腫れ、及び／又は１つ以上の指の腫れがある
４：発赤及び足、指、足首関節の重度の腫れがあり、関節硬直を伴う
最低後足スコアが２のマウスは、それが１つの足であっても、研究の対象となった。
【０３００】
マウスを種々の研究グループにランダムに分けた。各グループは少なくとも８匹の動物を有し、マウスには溶媒（０．５％ＣＭＣ、１０ｍＬ／ｋｇ ｐ．ｏ．及びｓ．ｃ．１日２回）、試験化合物（５ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．及びｓ．ｃ．、１日２回）、及び標準成分エンブレル（Ｅｎｂｒｅｌ）（英国Ｗｙｅｔｈ Ｌｉｍｉｔｅｄ）（３ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．、１日１回）を投与した。試験化合物は、ＣＭＣ中懸濁液として投与された。化合物の必要量は正確に計量し、乳鉢を使用して手で粉砕した。化合物を湿潤させるために最低限必要な量のＴｗｅｅｎ８０と混合した後、０．５％ＣＭＣ溶液の必要量を添加し、得られた化合物をＣＭＣとともに、均一の懸濁液が得られるまで粉砕した。標準成分「エンブレル（Ｅｎｂｒｅｌ）」は水溶液として使用した。１２日間連続して化合物の投薬を行った。
【０３０１】
以下のパラメーターを毎日観察し記録した。
１．体重
２．関節指数
３．後脚のみの足の厚さ（ｍｍ）、無張力ノギスを使用
４．動物の体調に関する任意の有意な観察。
【０３０２】
１３日目の朝、化合物処置の１時間後、動物を殺し、血液を回収し、薬物レベル分析のために血漿を収集した。また、病理組織学的評価のために全ての動物の後脚を保存した。
結果：実施例７の化合物は、投与量５．０ｍｇ／ｋｇでＣＭＣ懸濁液として１日２回コラーゲン誘導関節炎を有するマウスに１２日間連続して皮下投与すると、関節炎の重症度が軽減した。上記の効果は、エンブレル（Ｅｎｂｒｅｌ）処置（３ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．、１日１回）で得られた効果に等しい。
【０３０３】
組織病理学：実施例７の化合物（５ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．、ｎ＝１０）で処置されたマウスの足の切片の化合物の組織学的スコアは３．６＋１．５４であり、エンブレル（Ｅｎｂｒｅｌ）（３ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．、ｎ＝６）処置マウスのスコアは５．８＋０．９５であり、溶媒対照（ｎ＝７）のスコアは１５．１４＋１．０であった。
【０３０４】
観察結果：溶媒対照グループの動物は、滑膜の重度の過形成及びパンヌス形成を伴う関節構造の完全破壊を示した。実施例７の化合物で処置された動物は、滑膜の過形成は生じず、関節炎の変化に対して保護を示した。
【０３０５】
実施例２７
関節炎のマウスにおける試験化合物の評価：浸透圧ポンプによる投与
実施例２６で記載した、コラーゲンエマルジョンの注射により関節炎を発症したＤＢＡ／１Ｊマウスで実験を行った。
【０３０６】
動物は、対照グループと試験化合物治療グループの、それぞれ６匹の動物を有する２つのグループに分けられた。１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で試験化合物の透明溶液を調製し、次に適切な量のエタノール及びポリエチレングリコール４００（ＰＥＧ
４００）を添加することにより、ＤＭＳＯ濃度を２５％まで下げた。従って、最終溶液中の各溶媒の比率ｖ／ｖは２５：１５：６０：：ＤＭＳＯ：ＥｔＯＨ：ＰＥＧ−４００となった。この調製方法により、４０ｍｇ／ｍＬの終濃度を有する化合物の完全透明溶液を得た。得られた溶液を０．２μフィルターに通して濾過し、浸透圧ポンプ（Ａｌｚｅｔ微小浸透圧ポンプモデル１００２）に充填した。このポンプモデルの送出量は、毎時０．２５μＬであり、１４日間連続機能する。
【０３０７】
次に、試験化合物治療グループの動物に上記で得られたポンプを皮下に移植した（２４０μｇ／マウス／２４時間）。対照グループの動物において、ブランク溶媒を充填したポンプを皮下に移植した。その後、１日１回、対照グループの動物の足の厚さ測定に加えて、足の関節炎指数のスコアを付けた。１４日後、ポンプを新たに充填したポンプと置き換え、さらに１２日間実験を続けた（合計２６日）。
【０３０８】
結果：本発明の化合物７は、関節炎の動物に浸透圧ポンプを用いて皮下に投与される場合、対照グループの動物と比較して関節炎スコア及び足の厚さを低減することにより、関節炎の重症度を軽減する。
【０３０９】
結論：本発明の化合物７は、皮下に投与される場合、関節炎の重症度を軽減するのに効果的である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症性疾患の治療に使用するための式（１）の化合物、
【化１】
であって、式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−Ｏ（ＣＯ）Ｒ13、−ＳＲ14、及び−ＮＲ14Ｒ15から選択され、
Ｒ2は、水素であり、又は
任意にＲ1は存在せず、Ｒ2は＝Ｏであり、
Ｒ3は、アルキルであり
Ｒ4は、以下の式から選択され、
【化２】
【化３】
【化４】
【化５】
【化６】
【化７】
【化８】
【化９】
（*は、付着点を示す）
Ｒ5は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、アルキル、及びアルコキシから選択され、
Ｒ7は、水素、アルキル、及び−（ＣＯ）Ｒ16から選択され、
Ｒ8は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ9は、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アリール、アラルキル、アリールオキシ、ベンジルオキシ、ヘテロシクリル、−Ｏ−ヘテロシクリル、−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17、及び−ＯＣＨ2ＣＯＲ18から選択され、
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−ＳＲ14、−ＮＲ14Ｒ15、及び−Ｏ（ＣＯ）Ｒ19から選択され、
Ｒ11は、水素、及びハロゲンから選択され、
Ｒ12は、水素、ハロゲン、及びヒドロキシから選択され、
Ｒ13は、アルキル、及びアリールから選択され、
Ｒ14は、水素、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ15は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ16は、アルキル、及びアリールから選択され、
Ｒ17は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ18は、アルキル、−ＮＨＣＨ2Ｒ20、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ19は、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、及び
Ｒ20は、水素、アルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換されたもの、
又は、上記化合物の立体異性体、互変異性体、薬理学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項２】
炎症性疾患の治療に使用するための、請求項１に記載の式（１）の化合物、
【化１０】
であって、式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−Ｏ（ＣＯ）Ｒ13、−ＳＲ14、及び−ＮＲ14Ｒ15から選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり
Ｒ4は、以下の式から選択され、
【化１１】
【化１２】
【化１３】
【化１４】
【化１５】
【化１６】
【化１７】
【化１８】
（*は、付着点を示す）
Ｒ5は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、アルキル、及びアルコキシから選択され、
Ｒ7は、水素、アルキル、及び−（ＣＯ）Ｒ16から選択され、
Ｒ8は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ9は、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アリール、アラルキル、アリールオキシ、ベンジルオキシ、ヘテロシクリル、−Ｏ−ヘテロシクリル、−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17、及び−ＯＣＨ2ＣＯＲ18から選択され、
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−ＳＲ14、−ＮＲ14Ｒ15、及び−Ｏ（ＣＯ）Ｒ19から選択され、
Ｒ11は、水素、及びハロゲンから選択され、
Ｒ12は、水素、ハロゲン、及びヒドロキシから選択され、
Ｒ13は、アルキル、及びアリールから選択され、
Ｒ14は、水素、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ15は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ16は、アルキル、及びアリールから選択され、
Ｒ17は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ18は、アルキル、−ＮＨＣＨ2Ｒ20、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ19は、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、及び
Ｒ20は、水素、アルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換されたもの、
又は、上記化合物の立体異性体、互変異性体、薬理学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項３】
請求項１又は請求項２に記載の炎症性疾患の治療に使用するための化合物であって、前記式（１）の化合物は、
【化１９】
【化２０】
【化２１】
【化２２】
【化２３】
【化２４】
【化２５】
【化２６】
【化２７】
【化２８】
【化２９】
【化３０】
から選択されたもの、
又は、上記化合物の立体異性体、互変異性体、薬理学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項４】
請求項１又は請求項２に記載の炎症性疾患の治療に使用するための化合物であって、前記式（１）の化合物は、
【化３１】
【化３２】
【化３３】
【化３４】
【化３５】
【化３６】
から選択されたもの、
又は、上記化合物の立体異性体、互変異性体、薬理学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項５】
請求項１又は請求項２に記載の炎症性疾患の治療に使用するための化合物であって、前記式（１）の化合物は、
【化３７】
であるもの、
又は、上記化合物の立体異性体、互変異性体、薬理学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項６】
請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の炎症性疾患の治療に使用するための化合物であって、前記炎症性疾患は、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、及びインターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８）から選択される１つ以上の炎症性サイトカインによって媒介される化合物。
【請求項７】
請求項１〜請求項６のいずれか一項に記載の炎症性疾患の治療に使用するための化合物であって、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）によって媒介される前記炎症性疾患は、炎症性腸疾患、炎症、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、クローン病、敗血症性ショック、内毒素性ショック、アテローム性動脈硬化症、虚血−再潅流傷害、冠状動脈性心疾患、血管炎、アミロイド症、多発性硬化症、敗血症、慢性の再発性ぶどう膜炎、Ｃ型肝炎ウイルス感染症、マラリア、潰瘍性大腸炎、悪液質、乾癬、形質細胞腫、子宮内膜症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、髄膜炎、ＡＩＤＳ、ＨＩＶ感染症、自己免疫疾患、免疫不全症、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、慢性移植片対宿主病、外傷及び移植拒絶反応、成人呼吸窮迫症候群、肺線維症、再発性卵巣癌、リンパ増殖性疾患、難治性多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、糖尿病、若年性糖尿病、強直性脊椎炎、皮膚遅延型過敏症疾患、アルツハイマー病、全身性エリテマトーデス、及びアレルギー性喘息からなる群
から選択される化合物。
【請求項８】
請求項１〜請求項６のいずれか一項に記載の炎症性疾患の治療に使用するための化合物であって、インターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８）によって媒介される前記炎症性疾患は、関節リウマチ、変形性関節症、及びその他の自己免疫疾患からなる群から選択される化合物。
【請求項９】
請求項１〜請求項６のいずれか一項に記載の炎症性疾患の治療に使用するための化合物であって、前記インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）によって媒介される炎症性疾患は、関節リウマチ、変形性関節症、及びその他の自己免疫疾患からなる群から選択される化合物。
【請求項１０】
請求項６〜請求項９のいずれか一項に記載の使用であって、前記炎症性疾患は、炎症性腸疾患、炎症、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、クローン病、潰瘍性大腸炎、難治性多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、乾癬、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、皮膚遅延型過敏症疾患、及びアルツハイマー病からなる群から選択される使用。
【請求項１１】
請求項６〜請求項１０のいずれか一項に記載の使用であって、前記炎症性疾患は、関節リウマチである使用。
【請求項１２】
請求項６、請求項７、又は請求項１０のいずれか一項に記載の使用であって、前記炎症性疾患は、潰瘍性大腸炎である使用。
【請求項１３】
腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための方法であって、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の式（１）の化合物の治療有効量を、該治療を必要とする被験者に投与することを含む方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法であって、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）によって媒介される前記炎症性疾患は、炎症性腸疾患、炎症、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、クローン病、敗血症性ショック、内毒素性ショック、アテローム性動脈硬化症、虚血−再潅流傷害、冠状動脈性心疾患、血管炎、アミロイド症、多発性硬化症、敗血症、慢性の再発性ぶどう膜炎、Ｃ型肝炎ウイルス感染症、マラリア、潰瘍性大腸炎、悪液質、乾癬、形質細胞腫、子宮内膜症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、髄膜炎、ＡＩＤＳ、ＨＩＶ感染症、自己免疫疾患、免疫不全症、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、慢性移植片対宿主病、外傷及び移植拒絶反応、成人呼吸窮迫症候群、肺線維症、再発性卵巣癌、リンパ増殖性疾患、難治性多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、糖尿病、若年性糖尿病、強直性脊椎炎、皮膚遅延型過敏症疾患、アルツハイマー病、全身性エリテマトーデス、及びアレルギー性喘息からなる群から選択される方法。
【請求項１５】
請求項１３に記載の方法であって、インターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８）によって媒介される前記炎症性疾患は、関節リウマチ、変形性関節症、及びその他の自己免疫疾患からなる群から選択される方法。
【請求項１６】
請求項１３に記載の方法であって、前記インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）によって媒介される炎症性疾患は、関節リウマチ、変形性関節症、及びその他の自己免疫疾患からなる群から選択される方法。
【請求項１７】
請求項１３〜請求項１６のいずれか一項に記載の方法であって、前記炎症性疾患は、炎症性腸疾患、炎症、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、クローン病、潰瘍性大腸炎、難治性多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、乾癬、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、皮膚遅延型過敏症疾患、及びアルツハイマー病から選択される方法。
【請求項１８】
請求項１３〜請求項１７のいずれか一項に記載の方法であって、前記炎症性疾患は、関節リウマチである方法。
【請求項１９】
請求項１３、請求項１４、又は請求項１７のいずれか一項に記載の方法であって、前記炎症性疾患は、潰瘍性大腸炎である方法。
【請求項２０】
請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の式（１）の化合物の使用であって、
腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための薬剤を製造するための使用。
【請求項２１】
腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療に使用するための医薬組成物であって、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の一種以上の式（１）の化合物又はこれらの立体異性体、互変異性体、もしくは薬理学的に許容される塩もしくは薬理学的に許容される溶媒和物の治療有効量、及び薬理学的に許容される担体又は希釈剤、を含む医薬組成物。
【請求項２２】
式（Ｉ）の化合物で治療された炎症性疾患患者の薬物反応を監視するための方法であって、前記治療された患者からの試験用試料中のＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃから選択される１以上の遺伝子の発現を同定すること、及び、これを、前記式（Ｉ）の化合物で治療する前に前記患者から入手した試料中の前記遺伝子と同一のＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃの１つ以上の発現と比較すること、を含む方法。
【請求項２３】
請求項２２に記載の方法であって、治療後のＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃから選択される１つ以上の遺伝子の発現の変化は、薬物反応を示す方法。
【請求項２４】
請求項２２に記載の方法であって、治療後のＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃから選択される１つ以上の遺伝子の発現は、下方制御される方法。
【請求項２５】
請求項２２に記載の方法であって、前記式（１）の化合物は、
【化３８】
であるもの、
又は、その立体異性体、互変異性体、薬理学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグである方法。
【請求項２６】
請求項２２に記載の方法であって、前記炎症性疾患は、ＣＲＥＢ経路によって媒介される方法。
【請求項１】
炎症性疾患の治療に使用するための式（１）の化合物、
【化１】
であって、式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−Ｏ（ＣＯ）Ｒ13、−ＳＲ14、及び−ＮＲ14Ｒ15から選択され、
Ｒ2は、水素であり、又は
任意にＲ1は存在せず、Ｒ2は＝Ｏであり、
Ｒ3は、アルキルであり
Ｒ4は、以下の式から選択され、
【化２】
【化３】
【化４】
【化５】
【化６】
【化７】
【化８】
【化９】
（*は、付着点を示す）
Ｒ5は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、アルキル、及びアルコキシから選択され、
Ｒ7は、水素、アルキル、及び−（ＣＯ）Ｒ16から選択され、
Ｒ8は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ9は、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アリール、アラルキル、アリールオキシ、ベンジルオキシ、ヘテロシクリル、−Ｏ−ヘテロシクリル、−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17、及び−ＯＣＨ2ＣＯＲ18から選択され、
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−ＳＲ14、−ＮＲ14Ｒ15、及び−Ｏ（ＣＯ）Ｒ19から選択され、
Ｒ11は、水素、及びハロゲンから選択され、
Ｒ12は、水素、ハロゲン、及びヒドロキシから選択され、
Ｒ13は、アルキル、及びアリールから選択され、
Ｒ14は、水素、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ15は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ16は、アルキル、及びアリールから選択され、
Ｒ17は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ18は、アルキル、−ＮＨＣＨ2Ｒ20、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ19は、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、及び
Ｒ20は、水素、アルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換されたもの、
又は、上記化合物の立体異性体、互変異性体、薬理学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項２】
炎症性疾患の治療に使用するための、請求項１に記載の式（１）の化合物、
【化１０】
であって、式中、
Ｒ1は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−Ｏ（ＣＯ）Ｒ13、−ＳＲ14、及び−ＮＲ14Ｒ15から選択され、
Ｒ2は、水素であり、
Ｒ3は、アルキルであり
Ｒ4は、以下の式から選択され、
【化１１】
【化１２】
【化１３】
【化１４】
【化１５】
【化１６】
【化１７】
【化１８】
（*は、付着点を示す）
Ｒ5は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、アルキル、及びアルコキシから選択され、
Ｒ7は、水素、アルキル、及び−（ＣＯ）Ｒ16から選択され、
Ｒ8は、ヒドロキシ、及びアルコキシから選択され、
Ｒ9は、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アリール、アラルキル、アリールオキシ、ベンジルオキシ、ヘテロシクリル、−Ｏ−ヘテロシクリル、−ＯＣＨ2ＣＯＯＲ17、及び−ＯＣＨ2ＣＯＲ18から選択され、
Ｒ10は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、−ＳＲ14、−ＮＲ14Ｒ15、及び−Ｏ（ＣＯ）Ｒ19から選択され、
Ｒ11は、水素、及びハロゲンから選択され、
Ｒ12は、水素、ハロゲン、及びヒドロキシから選択され、
Ｒ13は、アルキル、及びアリールから選択され、
Ｒ14は、水素、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ15は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ16は、アルキル、及びアリールから選択され、
Ｒ17は、水素、及びアルキルから選択され、
Ｒ18は、アルキル、−ＮＨＣＨ2Ｒ20、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
Ｒ19は、アルキル、アラルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、及び
Ｒ20は、水素、アルキル、アリール、及びヘテロシクリルから選択され、
式中、アルキルは、非置換、又はヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アルコキシは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、及びヒドロキシアルキルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
アリールは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換され、
ヘテロシクリルは、非置換、又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリール、及びヘテロシクリルから選択される１種又は２種の同一のもしくは異なる基によって置換されたもの、
又は、上記化合物の立体異性体、互変異性体、薬理学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項３】
請求項１又は請求項２に記載の炎症性疾患の治療に使用するための化合物であって、前記式（１）の化合物は、
【化１９】
【化２０】
【化２１】
【化２２】
【化２３】
【化２４】
【化２５】
【化２６】
【化２７】
【化２８】
【化２９】
【化３０】
から選択されたもの、
又は、上記化合物の立体異性体、互変異性体、薬理学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項４】
請求項１又は請求項２に記載の炎症性疾患の治療に使用するための化合物であって、前記式（１）の化合物は、
【化３１】
【化３２】
【化３３】
【化３４】
【化３５】
【化３６】
から選択されたもの、
又は、上記化合物の立体異性体、互変異性体、薬理学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項５】
請求項１又は請求項２に記載の炎症性疾患の治療に使用するための化合物であって、前記式（１）の化合物は、
【化３７】
であるもの、
又は、上記化合物の立体異性体、互変異性体、薬理学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項６】
請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の炎症性疾患の治療に使用するための化合物であって、前記炎症性疾患は、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、及びインターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８）から選択される１つ以上の炎症性サイトカインによって媒介される化合物。
【請求項７】
請求項１〜請求項６のいずれか一項に記載の炎症性疾患の治療に使用するための化合物であって、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）によって媒介される前記炎症性疾患は、炎症性腸疾患、炎症、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、クローン病、敗血症性ショック、内毒素性ショック、アテローム性動脈硬化症、虚血−再潅流傷害、冠状動脈性心疾患、血管炎、アミロイド症、多発性硬化症、敗血症、慢性の再発性ぶどう膜炎、Ｃ型肝炎ウイルス感染症、マラリア、潰瘍性大腸炎、悪液質、乾癬、形質細胞腫、子宮内膜症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、髄膜炎、ＡＩＤＳ、ＨＩＶ感染症、自己免疫疾患、免疫不全症、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、慢性移植片対宿主病、外傷及び移植拒絶反応、成人呼吸窮迫症候群、肺線維症、再発性卵巣癌、リンパ増殖性疾患、難治性多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、糖尿病、若年性糖尿病、強直性脊椎炎、皮膚遅延型過敏症疾患、アルツハイマー病、全身性エリテマトーデス、及びアレルギー性喘息からなる群
から選択される化合物。
【請求項８】
請求項１〜請求項６のいずれか一項に記載の炎症性疾患の治療に使用するための化合物であって、インターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８）によって媒介される前記炎症性疾患は、関節リウマチ、変形性関節症、及びその他の自己免疫疾患からなる群から選択される化合物。
【請求項９】
請求項１〜請求項６のいずれか一項に記載の炎症性疾患の治療に使用するための化合物であって、前記インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）によって媒介される炎症性疾患は、関節リウマチ、変形性関節症、及びその他の自己免疫疾患からなる群から選択される化合物。
【請求項１０】
請求項６〜請求項９のいずれか一項に記載の使用であって、前記炎症性疾患は、炎症性腸疾患、炎症、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、クローン病、潰瘍性大腸炎、難治性多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、乾癬、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、皮膚遅延型過敏症疾患、及びアルツハイマー病からなる群から選択される使用。
【請求項１１】
請求項６〜請求項１０のいずれか一項に記載の使用であって、前記炎症性疾患は、関節リウマチである使用。
【請求項１２】
請求項６、請求項７、又は請求項１０のいずれか一項に記載の使用であって、前記炎症性疾患は、潰瘍性大腸炎である使用。
【請求項１３】
腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための方法であって、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の式（１）の化合物の治療有効量を、該治療を必要とする被験者に投与することを含む方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法であって、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）によって媒介される前記炎症性疾患は、炎症性腸疾患、炎症、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、クローン病、敗血症性ショック、内毒素性ショック、アテローム性動脈硬化症、虚血−再潅流傷害、冠状動脈性心疾患、血管炎、アミロイド症、多発性硬化症、敗血症、慢性の再発性ぶどう膜炎、Ｃ型肝炎ウイルス感染症、マラリア、潰瘍性大腸炎、悪液質、乾癬、形質細胞腫、子宮内膜症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、髄膜炎、ＡＩＤＳ、ＨＩＶ感染症、自己免疫疾患、免疫不全症、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、慢性移植片対宿主病、外傷及び移植拒絶反応、成人呼吸窮迫症候群、肺線維症、再発性卵巣癌、リンパ増殖性疾患、難治性多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、糖尿病、若年性糖尿病、強直性脊椎炎、皮膚遅延型過敏症疾患、アルツハイマー病、全身性エリテマトーデス、及びアレルギー性喘息からなる群から選択される方法。
【請求項１５】
請求項１３に記載の方法であって、インターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８）によって媒介される前記炎症性疾患は、関節リウマチ、変形性関節症、及びその他の自己免疫疾患からなる群から選択される方法。
【請求項１６】
請求項１３に記載の方法であって、前記インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）によって媒介される炎症性疾患は、関節リウマチ、変形性関節症、及びその他の自己免疫疾患からなる群から選択される方法。
【請求項１７】
請求項１３〜請求項１６のいずれか一項に記載の方法であって、前記炎症性疾患は、炎症性腸疾患、炎症、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、クローン病、潰瘍性大腸炎、難治性多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、乾癬、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、皮膚遅延型過敏症疾患、及びアルツハイマー病から選択される方法。
【請求項１８】
請求項１３〜請求項１７のいずれか一項に記載の方法であって、前記炎症性疾患は、関節リウマチである方法。
【請求項１９】
請求項１３、請求項１４、又は請求項１７のいずれか一項に記載の方法であって、前記炎症性疾患は、潰瘍性大腸炎である方法。
【請求項２０】
請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の式（１）の化合物の使用であって、
腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療のための薬剤を製造するための使用。
【請求項２１】
腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、並びにＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、及びＩＬ−８などのインターロイキンから選択される１つ以上のサイトカインによって媒介される炎症性疾患の治療に使用するための医薬組成物であって、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の一種以上の式（１）の化合物又はこれらの立体異性体、互変異性体、もしくは薬理学的に許容される塩もしくは薬理学的に許容される溶媒和物の治療有効量、及び薬理学的に許容される担体又は希釈剤、を含む医薬組成物。
【請求項２２】
式（Ｉ）の化合物で治療された炎症性疾患患者の薬物反応を監視するための方法であって、前記治療された患者からの試験用試料中のＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃから選択される１以上の遺伝子の発現を同定すること、及び、これを、前記式（Ｉ）の化合物で治療する前に前記患者から入手した試料中の前記遺伝子と同一のＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃの１つ以上の発現と比較すること、を含む方法。
【請求項２３】
請求項２２に記載の方法であって、治療後のＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃから選択される１つ以上の遺伝子の発現の変化は、薬物反応を示す方法。
【請求項２４】
請求項２２に記載の方法であって、治療後のＣＥＢＰα、ＣＥＢＰβ、ＣＥＢＰδ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＢＰ−１、ＭＭＰ１３、ＭｙＤ８８、ＢＣＬ２、及びｃＭｙｃから選択される１つ以上の遺伝子の発現は、下方制御される方法。
【請求項２５】
請求項２２に記載の方法であって、前記式（１）の化合物は、
【化３８】
であるもの、
又は、その立体異性体、互変異性体、薬理学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグである方法。
【請求項２６】
請求項２２に記載の方法であって、前記炎症性疾患は、ＣＲＥＢ経路によって媒介される方法。
【公表番号】特表２０１３−５１０９００（Ｐ２０１３−５１０９００Ａ）
【公表日】平成２５年３月２８日（２０１３．３．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３９４５１（Ｐ２０１２−５３９４５１）
【出願日】平成２２年１１月１５日（２０１０．１１．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／０５５１６２
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０６１６６７
【国際公開日】平成２３年５月２６日（２０１１．５．２６）
【出願人】（５０２４３５６６１）ピラマル・ライフ・サイエンシーズ・リミテッド (15)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年３月２８日（２０１３．３．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１１月１５日（２０１０．１１．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／０５５１６２
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０６１６６７
【国際公開日】平成２３年５月２６日（２０１１．５．２６）
【出願人】（５０２４３５６６１）ピラマル・ライフ・サイエンシーズ・リミテッド (15)
【Ｆターム（参考）】
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