本発明によって、ナノ粒子と結合している生物活性ポリペプチドを含むナノ粒子−ポリペプチド複合体が提供され、ここで、その生物活性ポリペプチドは、そのタンパク質の細胞内取り込みを容易にする化学的部分の付加によって改変される。ここで、そのポリペプチドは、タンパク質またはペプチドであり得る。いくつかの実施形態において、そのタンパク質またはペプチドのアミノ酸配列は、腫瘍抑制遺伝子産物のアミノ酸配列に由来する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）ナノ粒子と結合している生物活性ポリペプチド、
ｂ）該ナノ粒子、
を含み、該生物活性ポリペプチドが、該ポリペプチドの細胞内取り込みを容易にする化学的部分の付加によって改変される、ナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項２】
前記ポリペプチドは、ペプチドである、請求項１に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項３】
前記ペプチドのアミノ酸配列は、腫瘍抑制遺伝子産物のアミノ酸配列に由来する、請求項２に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項４】
前記腫瘍抑制遺伝子は、表４に列挙される遺伝子、アポトーシス促進遺伝子、または細胞傷害性遺伝子である、請求項３に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項５】
前記生物活性ペプチドは、ＦＵＳ−１ペプチド、Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａホメオボックス遺伝子（Ａｎｔｐ）ペプチド、ＨＩＶ Ｔａｔペプチド、ヘルペスウイルスＶＰ２２ペプチド、モデル両親媒性ペプチド、トランスポータンペプチド、ＳＶ ４０ Ｔ抗原ペプチド、またはプロテグリンＩペプチドである、請求項１に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項６】
前記生物活性ペプチドは、ＦＵＳ−１ペプチドである、請求項５に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項７】
前記ＦＵＳ−１ペプチドは、配列番号１を含む、請求項５に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項８】
前記ＦＵＳ−１ペプチドは、配列番号１である、請求項５に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項９】
前記生物活性ペプチドは、ＫＬＡＬＫＬＡＬＫＡＬＫＡＡＬＫＬＡ（配列番号２）、ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号３）、ＧＷＴＬＮＳＡＧＹＬＬＧＫＩＮＬＫＡＬＡＡＬＡＫＫＩＬ（配列番号４）、ＭＧＬＧＬＨＬＬＶＬＡＡＡＬＱＧＡＷＳＱＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号５）、ＧＡＬＦＬＧＷＬＧＡＡＧＳＴＭＧＡＷＳＱＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号６）、ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＰＰＱ（配列番号７）、ＲＧＧＲＬＳＹＳＲＲＲＦＳＴＳＴＧＲ（配列番号８）またはＲＲＬＳＹＳＲＲＲＦ（配列番号９）を含む、請求項５に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項１０】
前記生物活性ペプチドは、ＫＬＡＬＫＬＡＬＫＡＬＫＡＡＬＫＬＡ（配列番号２）を含む、請求項９に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項１１】
前記ペプチドは、腫瘍抑制遺伝子産物のアミノ酸配列の機能性ドメインを含む、請求項３に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項１２】
前記ペプチドは、腫瘍抑制遺伝子産物のアミノ酸配列の予想される機能性ドメインを含む、請求項３に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項１３】
前記予想される機能性ドメインは、前記腫瘍抑制遺伝子産物のアミノ酸配列のコンピュータ支援配列分析によって同定される、請求項１２に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項１４】
前記ポリペプチドは、タンパク質である、請求項１に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項１５】
前記タンパク質のアミノ酸配列は、腫瘍抑制遺伝子産物のアミノ酸配列に由来する、請求項１３に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項１６】
前記腫瘍抑制遺伝子は、表４に列挙される遺伝子である、請求項１４に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項１７】
前記腫瘍抑制遺伝子は、ＦＵＳ−１である、請求項１６に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項１８】
前記ナノ粒子は、脂質ベースのナノ粒子、超常磁性ナノ粒子、ナノシェル、半導体ナノ結晶、量子ドット、ポリマーベースのナノ粒子、ケイ素ベースのナノ粒子、シリカベースのナノ粒子、金属ベースのナノ粒子、フラーレンまたはナノチューブである、請求項１に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項１９】
前記ナノ粒子は、脂質ベースのナノ粒子である、請求項１８に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項２０】
前記脂質ベースのナノ粒子は、リポソーム、中性リポソーム、ＤＯＰＣリポソームまたはＤＯＴＡＰ：コレステロール小胞である、請求項１８に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項２１】
前記リポソームは、ＤＯＰＣリポソームである、請求項２０に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項２２】
前記ナノ粒子は、超常磁性ナノ粒子である、請求項１８に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項２３】
前記ナノ粒子は、超常磁性ナノ粒子であり、そして前記ナノ粒子−ポリペプチド複合体は、リポソーム内またはＤＯＴＡＰ：コレステロール小胞内にある、請求項１８に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項２４】
前記リポソームは、ＤＯＰＣリポソームである、請求項２３に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項２５】
前記化学的部分は、脂肪酸である、請求項１に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項２６】
前記脂肪酸は、Ｃ４〜Ｃ１８脂肪酸である、請求項２５に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項２７】
前記脂肪酸は、ステアレートまたはミリステートである、請求項２５に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項２８】
前記化学的部分は、細胞透過性ペプチドである、請求項１に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項２９】
前記細胞透過性ペプチドは、ＨＩＶ Ｔａｔ、ヘルペスウイルスＶＰ２２、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａホメオボックス遺伝子産物に由来する、請求項２８に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項３０】
前記ナノ粒子と結合している第２の生物活性ポリペプチドをさらに含む、請求項１に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項３１】
前記第１の生物活性ポリペプチドおよび前記第２の生物活性ポリペプチドは、生物活性ペプチドであり、該生物活性ペプチドの各々は、異なる腫瘍抑制遺伝子産物に由来するアミノ酸配列を含む、請求項３０に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項３２】
前記ナノ粒子−ポリペプチド複合体を組織または細胞を標的する標的化部分をさらに含む、請求項１に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項３３】
ａ）ナノ粒子と結合している生物活性ポリペプチド、
ｂ）該ナノ粒子、
を含み、該生物活性ポリペプチドが、ステアレート部分の付加によって改変され、そして該ナノ粒子が、ＤＯＴＡＰ：コレステロール小胞、ＤＯＰＣリポソームまたは超常磁性ナノ粒子である、ナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項３４】
ａ）アミノ酸配列ＫＬＲＲＶＨＫＮＬＩＰＱＧＩＶＫＬＤＨＰＲ（配列番号１）；または
ｂ）その生物学的に活性な改変体；
を含む、単離されたペプチド。
【請求項３５】
前記ペプチドは、１０アミノ酸残基長〜１００アミノ酸残基長である、請求項３４に記載のペプチド。
【請求項３６】
前記ペプチドは、１０アミノ酸残基長〜７５アミノ酸残基長である、請求項３５に記載のペプチド。
【請求項３７】
前記ペプチドは、１０アミノ酸残基長〜５０アミノ酸残基長である、請求項３６に記載のペプチド。
【請求項３８】
前記ペプチドは、１０アミノ酸残基長〜２５アミノ酸残基長である、請求項３７に記載のペプチド。
【請求項３９】
前記ペプチドは、１０アミノ酸残基長である、請求項３８に記載のペプチド。
【請求項４０】
前記ペプチドは、該ペプチドの細胞内取り込みを容易にする化学的部分の付加によって改変される、請求項３４に記載のペプチド。
【請求項４１】
前記化学的部分は、脂肪酸である、請求項４０に記載のペプチド。
【請求項４２】
前記化学的脂肪酸は、Ｃ４〜Ｃ１８脂肪酸である、請求項４１に記載のペプチド。
【請求項４３】
前記脂肪酸は、ステアレートまたはミリステートである、請求項４２に記載のペプチド。
【請求項４４】
前記化学的部分は、細胞透過性ペプチドである、請求項４０に記載のペプチド。
【請求項４５】
前記細胞透過性ペプチドは、ＨＩＶ Ｔａｔ、ヘルペスウイルスＶＰ２２、またはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａホメオボックス遺伝子産物に由来する、請求項４４に記載のペプチド。
【請求項４６】
ａ）請求項３４〜４５のうちのいずれか１項に記載の生物活性ペプチド、
ｂ）ナノ粒子、
を含む、ナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項４７】
前記ナノ粒子は、脂質ベースのナノ粒子、超常磁性ナノ粒子、ナノシェル、半導体ナノ結晶、量子ドット、ポリマーベースのナノ粒子、ケイ素ベースのナノ粒子、シリカベースのナノ粒子、金属ベースのナノ粒子、フラーレンまたはナノチューブである、請求項４６に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項４８】
前記ナノ粒子は、脂質ベースのナノ粒子である、請求項４７に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項４９】
前記脂質ベースのナノ粒子は、リポソームまたはＤＯＴＡＰ：コレステロール小胞である、請求項４８に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項５０】
前記ナノ粒子は、超常磁性ナノ粒子である、請求項４７に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項５１】
前記ナノ粒子は、超常磁性ナノ粒子であり、そして前記ナノ粒子−ポリペプチド複合体は、リポソーム内またはＤＯＴＡＰ：コレステロール小胞内にある、請求項４７に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項５２】
ａ）ナノ粒子と結合しているアミノ酸配列ＫＬＲＲＶＨＫＮＬＩＰＱＧＩＶＫＬＤＨＰＲ（配列番号１）のペプチド、
ｂ）該ナノ粒子、
を含み、該ペプチドは、ステアレート部分の付加によって改変され、そして該ナノ粒子は、リポソーム、ＤＯＴＡＰ：コレステロール小胞、ＤＯＰＣリポソームまたは超常磁性ナノ粒子である、ナノ粒子−ポリペプチド複合体。
【請求項５３】
疾患を処置する方法であって、被験体に、請求項１〜５２のうちのいずれか１項に記載のペプチドまたはナノ粒子−ポリペプチド複合体のうちのいずれか１つを薬学的に受容可能な希釈剤中に含む薬学的組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項５４】
前記疾患が、癌である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
化学療法剤を前記被験体に投与する工程をさらに包含する、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
前記化学療法剤は、イマチニブである、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記癌は、肺癌である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
前記肺癌は、ＮＳＣＬＣである、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
放射線を前記被験体に適用する工程をさらに包含する、請求項５３に記載の方法。
【請求項６０】
第２の生物活性ポリペプチドを前記被験体に投与する工程をさらに包含する、請求項５３に記載の方法。
【請求項６１】
ポリペプチドを細胞に送達する方法であって、
ａ）請求項１〜３３および請求項４６〜５２のうちのいずれか１項に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体のうちのいずれか１つを調製する工程；ならびに
ｂ）該細胞と該ナノ粒子−ポリペプチド複合体とを、該細胞による該生物活性ポリペプチドの取り込みを可能にするために十分な条件下で接触させる工程；
を包含する、方法。
【請求項６２】
被験体において腫瘍を処置する方法であって、該被験体に、請求項１〜５２に記載のペプチドまたはナノ粒子−ポリペプチド複合体のうちのいずれか１つの治療的に有効な量を投与する工程を包含し、該ナノ粒子複合体のポリペプチドが、腫瘍抑制遺伝子産物のアミノ酸配列に基づく、方法。
【請求項６３】
前記投与は、腹腔内注射である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記腫瘍は、胃腸の腫瘍である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
ナノ粒子−ポリペプチド複合体を作製する方法であって、
ａ）生物活性ポリペプチドの配列中の１個以上の機能性ドメインを同定する工程；
ｂ）該機能性ドメインのうちの少なくとも１個を含むペプチドを調製する工程；
ｃ）所望の生物学的活性を有するペプチドを選択する工程；および
ｄ）該ペプチドとナノ粒子とを結合させることによってナノ粒子−ポリペプチド複合体を調製する工程；
を包含する、方法。
【請求項６６】
前記同定する工程は、コンピュータ支援構造分析を使用する工程を包含する、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記コンピュータ支援構造分析は、推定上のプロテインキナーゼ相互作用部位、推定上のミリルトイル化部位、ＰＤＺクラスＩＩドメインモチーフまたはＡキナーゼアンカータンパク質（ＡＫＡＰ）モチーフの同定をもたらす、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記ペプチドの細胞内取り込みを容易にする化学的部分を付加することによって該ペプチドを改変する工程をさらに包含する、請求項６５に記載の方法。
【請求項６９】
前記機能性ドメインは、腫瘍抑制遺伝子のアミノ酸配列の予想される機能性ドメインである、請求項６５に記載の方法。
【請求項７０】
タンパク質チロシンキナーゼを阻害する方法であって、該キナーゼと、請求項３４〜４５のうちのいずれか１項に記載のペプチドのうちの１つとを接触させる工程を包含する、方法。
【請求項７１】
前記キナーゼは、ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ｃＫｉｔ、ｃＡｂｌ、またはＥｒｋである、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
腫瘍細胞においてアポトーシスを誘導する方法であって、該腫瘍細胞と、請求項３４〜４５のうちのいずれか１項に記載のペプチドのうちの１つとを接触させる工程を包含する、方法。
【請求項７３】
腫瘍細胞においてアポトーシスを誘導する方法であって、該腫瘍細胞と、請求項４６〜５１のうちのいずれか１項に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体のうちの１つとを接触させる工程を包含する、方法。
【請求項７４】
請求項１〜３２および請求項４６〜５１のうちのいずれか１項に記載のナノ粒子−ポリペプチド複合体のうちのいずれか１つを含み、該ナノ粒子が、超常磁性ナノ粒子である、磁気共鳴画像法のための組成物。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【公表番号】特表２００９−５０１２３７（Ｐ２００９−５０１２３７Ａ）
【公表日】平成２１年１月１５日（２００９．１．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５２２７６２（Ｐ２００８−５２２７６２）
【出願日】平成１８年３月１４日（２００６．３．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／００９０４４
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１４９０６２
【国際公開日】平成１９年１２月２７日（２００７．１２．２７）
【出願人】（５０５３５９３６６）ボード　オブ　リージェンツ　オブ　ザ　ユニバーシティー　オブ　テキサス　システム (6)
【Ｆターム（参考）】