Ｏ−結合型グリコシル化配列によるペプチドのグリコシル化
本発明は、１種または複数の本発明の外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列を含むアミノ酸配列を有するシークオンポリペプチドを提供する。さらに、本発明は、ポリペプチド結合体の作製方法、ならびにこのような結合体およびそれらの医薬組成物の使用方法を提供する。本発明は、シークオンポリペプチドのライブラリーをさらに提供し、このようなライブラリーの各メンバーは、少なくとも１つの本発明の外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列を含む。このようなライブラリーの作製方法および使用方法も提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリコシル化または非グリコシル化シークオンポリペプチドとポリマー修飾基との間の共有結合体であって、前記シークオンポリペプチドは、親ポリペプチドに相当し、かつ外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列を含み、前記ポリマー修飾基は、前記シークオンポリペプチドに前記Ｏ−結合型グリコシル化配列においてグリコシル連結基を介して結合しており、前記グリコシル連結基は、前記シークオンポリペプチドおよび前記ポリマー修飾基の両方の間に介在しかつ共有結合しており、ただし、前記親ポリペプチドは、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン−α（ＩＮＦ−α）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）および繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）から選択されるメンバーではない共有結合体。
【請求項２】
前記ポリマー修飾基が、直鎖状および分枝状から選択されるメンバーであり、かつ１つまたは複数のポリマー部分を含み、各ポリマー部分が独立して選択される、請求項１に記載の共有結合体。
【請求項３】
前記ポリマー部分が、ポリ（エチレングリコール）およびメトキシ−ポリ（エチレングリコール）（ｍ−ＰＥＧ）から選択されるメンバーである、請求項２に記載の共有結合体。
【請求項４】
前記グリコシル連結基が、損傷のないグリコシル連結基である、請求項１に記載の共有結合体。
【請求項５】
式（ＩＩＩ）
【化１】
（式中、
Ｒ９は、Ｈ、負の電荷または塩対イオンであり、
Ｒｐは、
【化２】
（式中、ｎは、１〜２０から選択される整数であり、ｆおよびｅは、１〜２５００から独立して選択される整数である）から選択されるメンバーである）による部分を含む、請求項４に記載の共有結合体。
【請求項６】
前記親ポリペプチドが、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害剤）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮアーゼ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ−２、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、α−ガラクトシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、β−グルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸性マルターゼ）、アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、濾胞成熟ホルモン（ＦＳＨ）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、プロキネチシン、エキセンディン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存性細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスモノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスタンパク質Ｆモノクローナル抗体、抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体、抗糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、抗ＶＥＧＦ−Ａモノクローナル抗体、抗ＰＳＧＬ−１モノクローナル抗体、抗ＣＤ４モノクローナル抗体、抗ａ−ＣＤ３モノクローナル抗体、抗ＥＧＦモノクローナル抗体、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）モノクローナル抗体および抗ＩＬ−２受容体モノクローナル抗体から選択されるメンバーである、請求項１に記載の共有結合体。
【請求項７】
前記外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列が、（Ｘ）ｍＰＴＰ、（Ｘ）ｍＰＴＥＩ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＩＮＴ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＶＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＶＬ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＧＡＭ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＴＥＴ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＶＬ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＬＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＤＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＥＮ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＤ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＡＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＧＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＳＡＶ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＬＹＶ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＳＳＧ（Ｐ）ｎおよび（Ｘ）ｍＰＳＤＧ（Ｐ）ｎ
（式中、
ｍおよびｎは、０および１から独立して選択される整数であり、
Ｐは、プロリンであり、
Ｘは、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーである）から選択されるメンバーである、請求項１に記載の共有結合体。
【請求項８】
前記外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列が、ＰＴＰ、ＰＴＥＩ、ＰＴＥＩＰ、ＰＴＱＡ、ＰＴＱＡＰ、ＰＴＩＮＴ、ＰＴＩＮＴＰ、ＰＴＴＶＳ、ＰＴＴＶＬ、ＰＴＱＧＡＭ、ＰＴＱＧＡＭＰおよびＴＥＴＰから選択されるメンバーである、請求項７に記載の共有結合体。
【請求項９】
請求項１に記載の共有結合体と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
【請求項１０】
シークオンポリペプチドを含むポリペプチド結合体であって、前記シークオンポリペプチドは、親ポリペプチドに相当し、かつ外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列を有し、前記ポリペプチド結合体は、式（Ｖ）
【化３】
（式中、
ｗは、０および１から選択される整数であり、
ｑは、０および１から選択される整数であり、
ＡＡ−Ｏ−は、ヒドロキシル基によって置換されている側鎖を有するアミノ酸から誘導される部分であり、前記アミノ酸は前記Ｏ−結合型グリコシル化配列中に位置し、
Ｚ＊は、グリコシル部分およびグリコシル連結基から選択されるメンバーであり、
Ｘ＊は、ポリマー修飾基およびポリマー修飾基に共有結合しているグリコシル連結基から選択されるメンバーである）による部分を含み、ただし、前記親ポリペプチドは、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン−α（ＩＮＦ−α）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）および繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）から選択されるメンバーではないポリペプチド結合体。
【請求項１１】
前記アミノ酸が、セリン（Ｓ）またはスレオニン（Ｔ）である、請求項１０に記載のポリペプチド結合体。
【請求項１２】
前記外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列が、
（Ｘ）ｍＰＴＰ、（Ｘ）ｍＰＴＥＩ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＩＮＴ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＶＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＶＬ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＧＡＭ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＴＥＴ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＶＬ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＬＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＤＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＥＮ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＤ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＡＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＧＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＳＡＶ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＬＹＶ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＳＳＧ（Ｐ）ｎおよび（Ｘ）ｍＰＳＤＧ（Ｐ）ｎ
（式中、
ｍおよびｎは、０および１から独立して選択される整数であり、
Ｐは、プロリンであり、
Ｘは、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーである）から選択されるメンバーである、請求項１０に記載のポリペプチド結合体。
【請求項１３】
前記外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列が、ＰＴＰ、ＰＴＥＩ、ＰＴＥＩＰ、ＰＴＱＡ、ＰＴＱＡＰ、ＰＴＩＮＴ、ＰＴＩＮＴＰ、ＰＴＴＶＳ、ＰＴＴＶＬ、ＰＴＱＧＡＭ、ＰＴＱＧＡＭＰおよびＴＥＴＰから選択されるメンバーである、請求項１２に記載のポリペプチド結合体。
【請求項１４】
Ｚ＊が、ＧａｌＮＡｃ、ＧａｌＮＡｃ−Ｇａｌ、ＧａｌＮＡｃ−Ｇａｌ−ＳｉａおよびＧａｌＮＡｃ−Ｓｉａから選択されるメンバーである、請求項１０に記載のポリペプチド結合体。
【請求項１５】
前記ポリマー修飾基が、直鎖状および分枝状から選択されるメンバーであり、かつ１つまたは複数のポリマー部分を含み、前記ポリマー部分の各々が独立して選択される、請求項１０に記載のポリペプチド結合体。
【請求項１６】
前記ポリマー部分が、ポリ（エチレングリコール）およびその誘導体から選択されるメンバーである、請求項１５に記載のポリペプチド結合体。
【請求項１７】
ｗが１である、請求項１０に記載のポリペプチド結合体。
【請求項１８】
Ｘ＊が、シアリルトランスフェラーゼ（Ｓｉａ）部分、ガラクトシル（Ｇａｌ）部分、ＧａｌＮＡｃ部分およびＧａｌ−Ｓｉａ部分から選択されるメンバーである部分を含む、請求項１７に記載のポリペプチド結合体。
【請求項１９】
前記親ポリペプチドが、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害剤）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮアーゼ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ−２、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、α−ガラクトシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、β−グルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸性マルターゼ）、アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、濾胞成熟ホルモン、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、プロキネチシン、エキセンディン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存性細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスモノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスタンパク質Ｆモノクローナル抗体、抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体、抗糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、抗ＶＥＧＦ−Ａモノクローナル抗体、抗ＰＳＧＬ−１モノクローナル抗体、抗ＣＤ４モノクローナル抗体、抗ａ−ＣＤ３モノクローナル抗体、抗ＥＧＦモノクローナル抗体、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）モノクローナル抗体および抗ＩＬ−２受容体モノクローナル抗体から選択されるメンバーである、請求項１０に記載のポリペプチド結合体。
【請求項２０】
Ｘ＊が、式（ＶＩ）
【化４】
（式中、
Ｅは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ２７およびＣＨＲ２８から選択されるメンバーであり、
Ｒ２７およびＲ２８は、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリールおよび置換または非置換ヘテロシクロアルキルから独立して選択されるメンバーであり、
Ｅ１は、ＯおよびＳから選択されるメンバーであり、
Ｒ２は、Ｈ、−Ｒ１、−ＣＨ２Ｒ１、および−Ｃ（Ｘ１）Ｒ１から選択されるメンバーであり、
Ｒ１は、ＯＲ９、ＳＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１、置換または非置換アルキルおよび置換または非置換ヘテロアルキルから選択されるメンバーであり、
Ｒ９は、Ｈ、負の電荷、金属イオン、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキルおよびアシルから選択されるメンバーであり、
Ｒ１０およびＲ１１は、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキルおよびアシルから独立して選択されるメンバーであり、
Ｘ１は、置換または非置換アルケニル、Ｏ、ＳおよびＮＲ８から選択されるメンバーであり、
Ｒ８は、Ｈ、ＯＨ、置換または非置換アルキルおよび置換または非置換ヘテロアルキルから選択されるメンバーであり、
Ｙは、ＣＨ２、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２、ＣＨ、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ、ＣＨ（ＯＨ）、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）、およびＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）から選択されるメンバーであり、
Ｙ２は、Ｈ、ＯＲ６、Ｒ６、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキル、
【化５】
から選択されるメンバーであり、
Ｒ６およびＲ７は、Ｈ、Ｌａ−Ｒ６ｂ、Ｃ（Ｏ）Ｒ６ｂ、Ｃ（Ｏ）−Ｌａ−Ｒ６ｂ、置換または非置換アルキルおよび置換または非置換ヘテロアルキルから独立して選択されるメンバーであり、
Ｒ６ｂは、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキルおよび修飾基から選択されるメンバーであり、
Ｒ３、Ｒ３’およびＲ４は、Ｈ、ＯＲ３”、ＳＲ３”、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキル、−Ｌａ−Ｒ６ｃ、−Ｃ（Ｏ）−Ｌａ−Ｒ６ｃ、−ＮＨ−Ｌａ−Ｒ６ｃ、＝Ｎ−Ｌａ−Ｒ６ｃおよび−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｌａ−Ｒ６ｃから独立して選択されるメンバーであり、
Ｒ３”は、Ｈ、置換または非置換アルキルおよび置換または非置換ヘテロアルキルから選択されるメンバーであり、
Ｒ６ｃは、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換ヘテロシクロアルキル、ＮＲ１３Ｒ１４および修飾基から選択されるメンバーであり、
Ｒ１３およびＲ１４は、Ｈ、置換または非置換アルキルおよび置換または非置換ヘテロアルキルから独立して選択されるメンバーであり、
各Ｌａは、結合およびリンカー基から独立して選択されるメンバーである）による部分を含む、請求項１７に記載のポリペプチド結合体。
【請求項２１】
Ｘ＊が、式（ＶＩＩ）
【化６】
による部分を含む、請求項２０に記載のポリペプチド結合体。
【請求項２２】
Ｒ６ｂおよびＲ６ｃの少なくとも１つが、
【化７】
（式中、
ｓ、ｊおよびｋは、０〜２０から独立して選択される整数であり、
各ｎは、０〜２５００から独立して選択される整数であり、
ｍは、１〜５の整数であり、
Ｑは、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択されるメンバーであり、
Ｒ１６およびＲ１７は、独立して選択されるポリマー部分であり、
Ｘ２およびＸ４は、ポリマー部分Ｒ１６およびＲ１７をＣに結合させる独立して選択される連結フラグメントであり、
Ｘ５は、ポリマー部分以外の非反応性基であり、
Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５、Ａ６、Ａ７、Ａ８、Ａ９、Ａ１０およびＡ１１は、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキル、置換または非置換ヘテロシクロアルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、−ＮＡ１２Ａ１３、−ＯＡ１２および−ＳｉＡ１２Ａ１３から選択されるメンバーであり、
Ａ１２およびＡ１３は、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキル、置換または非置換ヘテロシクロアルキル、置換または非置換アリール、および置換または非置換ヘテロアリールから独立して選択されるメンバーである）から独立して選択されるメンバーである、請求項２０に記載のポリペプチド結合体。
【請求項２３】
請求項１０に記載のポリペプチド結合体と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
【請求項２４】
親ポリペプチドに相当するシークオンポリペプチドであって、
配列番号１および配列番号２
（Ｘ）ｍＰＯ＊Ｕ（Ｂ）ｐ（Ｚ）ｒ（Ｊ）ｓ（Ｏ）ｔ（Ｐ）ｎ（配列番号１）、および
（Ｘ）ｍ（Ｂ１）ｐＴＵＢ（Ｚ）ｒ（Ｊ）ｓ（Ｐ）ｎ（配列番号２）
（式中、
ｍ、ｎ、ｐ、ｒ、ｓおよびｔは、０および１から独立して選択される整数であり、
Ｐは、プロリンであり、
Ｏ＊は、セリン（Ｓ）およびスレオニン（Ｔ）から選択されるメンバーであり、
Ｕは、プロリン（Ｐ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から選択されるメンバーであり、
Ｘ、ＢおよびＢ１は、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーであり、
Ｚ、ＪおよびＯは、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）、チロシン（Ｙ）、メチオニン（Ｍ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーである）から選択される外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列を含み、ただし、前記親ポリペプチドは、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン−α（ＩＮＦ−α）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）および繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）から選択されるメンバーではないシークオンポリペプチド。
【請求項２５】
前記外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列が、（Ｘ）ｍＰＴＰ、（Ｘ）ｍＰＴＥＩ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＩＮＴ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＶＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＶＬ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＧＡＭ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＴＥＴ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＶＬ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＬＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＤＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＥＮ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＤ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＡＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＧＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＳＡＶ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＬＹＶ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＳＳＧ（Ｐ）ｎおよび（Ｘ）ｍＰＳＤＧ（Ｐ）ｎ
（式中、ｍおよびｎは、０および１から独立して選択される整数であり、
Ｐは、プロリンであり、
Ｘは、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーである）から選択されるメンバーである、請求項２４に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項２６】
前記外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列が、ＰＴＰ、ＰＴＥＩ、ＰＴＥＩＰ、ＰＴＱＡ、ＰＴＱＡＰ、ＰＴＩＮＴ、ＰＴＩＮＴＰ、ＰＴＴＶＳ、ＰＴＴＶＬ、ＰＴＱＧＡＭ、ＰＴＱＧＡＭＰおよびＴＥＴＰから選択されるメンバーである、請求項２５に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項２７】
前記外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列が、ＧａｌＮＡｃ−トランスフェラーゼのための基質である、請求項２４に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項２８】
少なくとも３個のアミノ酸が、前記Ｏ＊と、リシン（Ｋ）またはアルギニン（Ｒ）残基との間に見出される、請求項２４に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項２９】
前記親ポリペプチドが治療用ポリペプチドである、請求項２４に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項３０】
前記親ポリペプチドが、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害剤）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮアーゼ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ−２、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、α−ガラクトシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、β−グルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸性マルターゼ）、アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、濾胞成熟ホルモン、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、プロキネチシン、エキセンディン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存性細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスモノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスタンパク質Ｆモノクローナル抗体、抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体、抗糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、抗ＶＥＧＦ−Ａモノクローナル抗体、抗ＰＳＧＬ−１モノクローナル抗体、抗ＣＤ４モノクローナル抗体、抗ａ−ＣＤ３モノクローナル抗体、抗ＥＧＦモノクローナル抗体、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）モノクローナル抗体および抗ＩＬ−２受容体モノクローナル抗体から選択されるメンバーである、請求項２４に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項３１】
請求項２４に記載の前記シークオンポリペプチドをコードする単離された核酸。
【請求項３２】
請求項３１に記載の前記核酸を含む発現ベクター。
【請求項３３】
請求項３１に記載の前記核酸を含む細胞。
【請求項３４】
ＸＰＯ＊Ｐ、ＸＰＯ＊ＥＩ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＥＩ、ＸＰＯ＊ＱＡ（Ｐ）ｎ、ＸＰＯ＊ＴＶＳ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＴＶＳＰ、ＸＰＯ＊ＱＧＡ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＱＧＡＰ、ＸＰＯ＊ＱＧＡＭ（Ｐ）ｎ、ＸＴＥＯ＊Ｐ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＶＬ、ＸＰＯ＊ＶＬ（Ｐ）ｎ、ＸＰＯ＊ＴＶＬ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＴＶＬＰ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＴＬＹＶＰ、ＸＰＯ＊ＴＬＹＶ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＬＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＤＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＥＮ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＱＤ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＡＳ（Ｐ）ｎ、ＸＰＯ＊ＳＡＶ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＳＡＶＰ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＳＧ（Ｐ）ｎ、ＸＴＥＯ＊Ｐおよび（Ｘ）ｍＰＯ＊ＤＧ（Ｐ）ｎ
（式中、
ｍおよびｎは、０および１から独立して選択される整数であり、
Ｏ＊は、セリン（Ｓ）およびスレオニン（Ｔ）から選択されるメンバーであり、
Ｘは、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から選択されるメンバーであり、
各Ｓ（セリン）は、Ｔ（スレオニン）によって独立して置換されてもよく、
各Ｔ（スレオニン）は、Ｓ（セリン）によって独立して置換されてもよい）から選択される外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列を含む親ポリペプチドに相当するシークオンポリペプチド。
【請求項３５】
前記Ｏ−結合型グリコシル化配列が、ＧａｌＮＡｃ−トランスフェラーゼのための基質である、請求項３４に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項３６】
少なくとも３個のアミノ酸が、前記Ｏ＊と、リシン（Ｋ）またはアルギニン（Ｒ）残基との間に見出される、請求項３４に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項３７】
前記親ポリペプチドが治療用ポリペプチドである、請求項３４に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項３８】
前記親ポリペプチドが、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害剤）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮアーゼ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ−２、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、α−ガラクトシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、β−グルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸性マルターゼ）、アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、濾胞成熟ホルモン（ＦＳＨ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、繊維芽細胞増殖因子７（ＦＧＦ−７）、繊維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ−２１）、繊維芽細胞増殖因子２３（ＦＧＦ−２３）、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、プロキネチシン、エキセンディン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存性細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスモノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスタンパク質Ｆモノクローナル抗体、抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体、抗糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、抗ＶＥＧＦ−Ａモノクローナル抗体、抗ＰＳＧＬ−１モノクローナル抗体、抗ＣＤ４モノクローナル抗体、抗ａ−ＣＤ３モノクローナル抗体、抗ＥＧＦモノクローナル抗体、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）モノクローナル抗体および抗ＩＬ−２受容体モノクローナル抗体から選択されるメンバーである、請求項３４に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項３９】
請求項３４に記載の前記シークオンポリペプチドをコードする単離された核酸。
【請求項４０】
請求項３９に記載の前記核酸を含む発現ベクター。
【請求項４１】
請求項３９に記載の前記核酸を含む細胞。
【請求項４２】
複数の異なるメンバーを含むシークオンポリペプチドのライブラリーであって、前記ライブラリーの各メンバーは、共通の親ポリペプチドに相当し、かつ外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列を含み、前記Ｏ−結合型グリコシル化配列の各々は、配列番号１および配列番号２
（Ｘ）ｍＰＯ＊Ｕ（Ｂ）ｐ（Ｚ）ｒ（Ｊ）ｓ（Ｏ）ｔ（Ｐ）ｎ（配列番号１）、および
（Ｘ）ｍ（Ｂ１）ｐＴＵＢ（Ｚ）ｒ（Ｊ）ｓ（Ｐ）ｎ（配列番号２）
（式中、
ｍ、ｎ、ｐ、ｒ、ｓおよびｔは、０および１から独立して選択される整数であり、
Ｐは、プロリンであり、
Ｏ＊は、セリン（Ｓ）およびスレオニン（Ｔ）から選択されるメンバーであり、
Ｕは、プロリン（Ｐ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から選択されるメンバーであり、
Ｘ、ＢおよびＢ１は、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーであり、
Ｚ、ＪおよびＯは、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）、チロシン（Ｙ）、メチオニン（Ｍ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーである）から独立して選択されるメンバーであるライブラリー。
【請求項４３】
前記外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列が、
（Ｘ）ｍＰＴＰ、（Ｘ）ｍＰＴＥＩ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＩＮＴ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＶＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＶＬ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＧＡＭ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＴＥＴ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＶＬ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＬＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＤＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＥＮ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＤ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＡＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＧＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＳＡＶ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＬＹＶ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＳＳＧ（Ｐ）ｎおよび（Ｘ）ｍＰＳＤＧ（Ｐ）ｎ、
（式中、
ｍおよびｎは、０および１から独立して選択される整数であり、
Ｐは、プロリンであり、
Ｘは、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーである）から選択されるメンバーである、請求項４２に記載のライブラリー。
【請求項４４】
前記外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列が、ＰＴＰ、ＰＴＥＩ、ＰＴＥＩＰ、ＰＴＱＡ、ＰＴＱＡＰ、ＰＴＩＮＴ、ＰＴＩＮＴＰ、ＰＴＴＶＳ、ＰＴＴＶＬ、ＰＴＱＧＡＭ、ＰＴＱＧＡＭＰおよびＴＥＴＰから選択されるメンバーである、請求項４３に記載のライブラリー。
【請求項４５】
前記ライブラリーの各メンバーが、同一のＯ−結合型グリコシル化配列を前記親ポリペプチド中の異なるアミノ酸位置で含む、請求項４２に記載のライブラリー。
【請求項４６】
前記ライブラリーの各メンバーが、異なるＯ−結合型グリコシル化配列を前記親ポリペプチド中の同一のアミノ酸位置で含む、請求項４２に記載のライブラリー。
【請求項４７】
前記親ポリペプチドがｍアミノ酸を有し、各アミノ酸がアミノ酸位置に相当し、前記ライブラリーが、
（ａ）第１のアミノ酸位置（ＡＡ）ｎ（式中、ｎは、１〜ｍから選択されるメンバーである）で前記Ｏ−結合型グリコシル化配列を有する第１のシークオンポリペプチドと、
（ｃ）各々のさらなるシークオンポリペプチドが、（ＡＡ）ｎ＋ｘおよび（ＡＡ）ｎ−ｘ（式中、ｘは、１〜（ｍ−ｎ）から選択されるメンバーである）から選択されるメンバーであるさらなるアミノ酸位置で前記Ｏ−結合型グリコシル化配列を有する、少なくとも１つのさらなるシークオンポリペプチドと
を含む、請求項４２に記載のライブラリー。
【請求項４８】
（ＡＡ）ｎ＋ｐおよび（ＡＡ）ｎ−ｐ（式中、ｐは１〜１０から選択される）から選択される第２のアミノ酸位置で前記Ｏ−結合型グリコシル化配列を有する第２のシークオンポリペプチドを含む、請求項４７に記載のライブラリー。
【請求項４９】
前記さらなるアミノ酸位置の各々が、予め選択したアミノ酸位置に隣接した、請求項４７に記載のライブラリー。
【請求項５０】
前記Ｏ−結合型グリコシル化配列が、ＧａｌＮＡｃ−トランスフェラーゼのための基質である、請求項４２に記載のライブラリー。
【請求項５１】
前記ＧａｌＮＡｃ−トランスフェラーゼが、レクチン−ドメイン欠失ＧａｌＮＡｃ−Ｔ２およびレクチンドメイン切断型ＧａｌＮＡｃ−Ｔ２から選択されるメンバーである、請求項５０に記載のライブラリー。
【請求項５２】
前記親ポリペプチドが治療用ポリペプチドである、請求項４２に記載のライブラリー。
【請求項５３】
前記親ポリペプチドが、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害剤）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮアーゼ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ−２、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、α−ガラクトシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、β−グルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸性マルターゼ）、アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、濾胞成熟ホルモン（ＦＳＨ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、繊維芽細胞増殖因子７（ＦＧＦ−７）、繊維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ−２１）、繊維芽細胞増殖因子２３（ＦＧＦ−２３）、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、プロキネチシン、エキセンディン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存性細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスモノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスタンパク質Ｆモノクローナル抗体、抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体、抗糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、抗ＶＥＧＦ−Ａモノクローナル抗体、抗ＰＳＧＬ−１モノクローナル抗体、抗ＣＤ４モノクローナル抗体、抗ａ−ＣＤ３モノクローナル抗体、抗ＥＧＦモノクローナル抗体、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）モノクローナル抗体および抗ＩＬ−２受容体モノクローナル抗体から選択されるメンバーである、請求項４２に記載のライブラリー。
【請求項５４】
宿主細胞中でシークオンポリペプチドを発現させるステップを含み、前記シークオンポリペプチドは、親ポリペプチドに相当し、配列番号１および配列番号２
（Ｘ）ｍＰＯ＊Ｕ（Ｂ）ｐ（Ｚ）ｒ（Ｊ）ｓ（Ｏ）ｔ（Ｐ）ｎ（配列番号１）、および
（Ｘ）ｍ（Ｂ１）ｐＴＵＢ（Ｚ）ｒ（Ｊ）ｓ（Ｐ）ｎ（配列番号２）
（式中、
ｍ、ｎ、ｐ、ｒ、ｓおよびｔは、０および１から独立して選択される整数であり、
Ｐは、プロリンであり、
Ｏ＊は、セリン（Ｓ）およびスレオニン（Ｔ）から選択されるメンバーであり、
Ｕは、プロリン（Ｐ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から選択されるメンバーであり、
Ｘ、ＢおよびＢ１は、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーであり、
Ｚ、ＪおよびＯは、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）、チロシン（Ｙ）、メチオニン（Ｍ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーである）から選択される外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列を含み、ただし、前記親ポリペプチドは、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン−α（ＩＮＦ−α）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）および繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）から選択されるメンバーではない方法。
【請求項５５】
前記シークオンポリペプチドを単離するステップをさらに含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記シークオンポリペプチドを前記Ｏ−結合型グリコシル化配列において酵素によってグリコシル化するステップをさらに含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
前記酵素によってグリコシル化するステップが、グリコシルトランスフェラーゼを使用して達成される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記グリコシルトランスフェラーゼが、ＧａｌＮＡｃ−Ｔ２である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＧａｌＮＡｃ−Ｔ２が、レクチン−ドメイン欠失ＧａｌＮＡｃ−Ｔ２およびレクチンドメイン切断型ＧａｌＮＡｃ−Ｔ２から選択されるメンバーである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記シークオンポリペプチドをコードする核酸配列を含む発現ベクターを作製するステップをさらに含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項６１】
前記宿主細胞に前記発現ベクターをトランスフェクトするステップをさらに含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記親ポリペプチドが治療用ポリペプチドである、請求項５４に記載の方法。
【請求項６３】
前記親ポリペプチドが、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害剤）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮアーゼ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ−２、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、α−ガラクトシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、β−グルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸性マルターゼ）、アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、濾胞成熟ホルモン（ＦＳＨ）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、プロキネチシン、エキセンディン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存性細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスモノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスタンパク質Ｆモノクローナル抗体、抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体、抗糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、抗ＶＥＧＦ−Ａモノクローナル抗体、抗ＰＳＧＬ−１モノクローナル抗体、抗ＣＤ４モノクローナル抗体、抗ａ−ＣＤ３モノクローナル抗体、抗ＥＧＦモノクローナル抗体、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）モノクローナル抗体および抗ＩＬ−２受容体モノクローナル抗体から選択されるメンバーである、請求項５４に記載の方法。
【請求項６４】
（ｉ）前記シークオンポリペプチドを組換えで生成するステップと、
（ｉｉ）前記シークオンポリペプチドを前記Ｏ−結合型グリコシル化配列において酵素によってグリコシル化するステップと
を含む、請求項１０に記載のポリペプチド結合体の作製方法。
【請求項６５】
ステップ（ｉｉ）の前記酵素によるグリコシル化が、ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼを使用して達成される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼが、ヒトＧａｌＮＡｃ−Ｔ２である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記ＧａｌＮＡｃ−Ｔ２が、レクチン−ドメイン欠失ＧａｌＮＡｃ−Ｔ２およびレクチンドメイン切断型ＧａｌＮＡｃ−Ｔ２から選択されるメンバーである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
（ｉ）前記Ｏ−結合型グリコシル化配列を、第１のアミノ酸位置（ＡＡ）ｎに導入することによって、第１のシークオンポリペプチドを組換えで生成するステップと、
（ｉｉ）前記Ｏ−結合型グリコシル化配列を、（ＡＡ）ｎ＋ｘおよび（ＡＡ）ｎ−ｘ（式中、ｘは、１〜（ｍ−ｎ）から選択されるメンバーである）から選択されるさらなるアミノ酸位置に導入することによって、少なくとも１つのさらなるシークオンポリペプチドを組換えで生成するステップと
を含む、請求項４７に記載のシークオンポリペプチドのライブラリーの作製方法。
【請求項６９】
（ｉ）請求項４２に記載のシークオンポリペプチドのライブラリーを生成するステップと、
（ｉｉ）前記ライブラリーの少なくとも１つのメンバーを酵素によるグリコシル化反応に供し、修飾基によって誘導体化されていてもよいグリコシル部分をグリコシル供与体分子から前記Ｏ−結合型グリコシル化配列の少なくとも１つに転移させ、それによって前記リードポリペプチドを同定するステップと
を含む、リードポリペプチドを同定する方法。
【請求項７０】
前記ライブラリーの少なくとも１つのメンバーについての前記酵素によるグリコシル化反応の収率を測定するステップをさらに含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記測定が、質量分析、ゲル電気泳動、核磁気共鳴（ＮＭＲ）およびＨＰＬＣから選択されるメンバーによって行われる、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記リードポリペプチドの前記収率が、約５０％〜約１００％である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
ステップ（ｉｉ）の前に、前記ライブラリーの少なくとも１つのメンバーを精製するステップをさらに含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項７４】
ステップ（ｉｉ）の前記グリコシル部分が、ガラクトース部分およびＧａｌＮＡｃ部分から選択されるメンバーを含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項７５】
ステップ（ｉｉ）の前記酵素によるグリコシル化反応が、前記ライブラリーの前記少なくとも１つのメンバーが発現している宿主細胞中で起こる、請求項６９に記載の方法。
【請求項７６】
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の生成物をＰＥＧ化反応に供し、前記ＰＥＧ化反応が、化学的ＰＥＧ化反応および酵素によるグリコＰＥＧ化反応から選択されるメンバーである、請求項６９に記載の方法。
【請求項７７】
ステップ（ｉｉ）およびステップ（ｉｉｉ）が単一の反応容器中で行われる、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記ＰＥＧ化反応の収率を測定するステップをさらに含む、請求項７６に記載の方法。
【請求項７９】
前記測定が、質量分析、ゲル電気泳動、核磁気共鳴（ＮＭＲ）およびＨＰＬＣから選択されるメンバーによって行われる、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記リードポリペプチドの前記ＰＥＧ化反応の前記収率が約５０％〜約１００％である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８１】
前記リードポリペプチドが、前記ＰＥＧ化反応時に前記親ポリペプチドの治療活性と本質的に同一の治療活性を有する、請求項７６に記載の方法。
【請求項８２】
前記リードポリペプチドが、前記ＰＥＧ化反応時に前記親ポリペプチドの治療活性と異なる治療活性を有する、請求項７６に記載の方法。
【請求項８３】
前記シークオンポリペプチドをコードする核酸配列を含む発現ベクターを作製するステップをさらに含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項８４】
前記宿主細胞に前記発現ベクターをトランスフェクトするステップをさらに含む、請求項８３に記載の方法。
【請求項１】
グリコシル化または非グリコシル化シークオンポリペプチドとポリマー修飾基との間の共有結合体であって、前記シークオンポリペプチドは、親ポリペプチドに相当し、かつ外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列を含み、前記ポリマー修飾基は、前記シークオンポリペプチドに前記Ｏ−結合型グリコシル化配列においてグリコシル連結基を介して結合しており、前記グリコシル連結基は、前記シークオンポリペプチドおよび前記ポリマー修飾基の両方の間に介在しかつ共有結合しており、ただし、前記親ポリペプチドは、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン−α（ＩＮＦ−α）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）および繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）から選択されるメンバーではない共有結合体。
【請求項２】
前記ポリマー修飾基が、直鎖状および分枝状から選択されるメンバーであり、かつ１つまたは複数のポリマー部分を含み、各ポリマー部分が独立して選択される、請求項１に記載の共有結合体。
【請求項３】
前記ポリマー部分が、ポリ（エチレングリコール）およびメトキシ−ポリ（エチレングリコール）（ｍ−ＰＥＧ）から選択されるメンバーである、請求項２に記載の共有結合体。
【請求項４】
前記グリコシル連結基が、損傷のないグリコシル連結基である、請求項１に記載の共有結合体。
【請求項５】
式（ＩＩＩ）
【化１】
（式中、
Ｒ９は、Ｈ、負の電荷または塩対イオンであり、
Ｒｐは、
【化２】
（式中、ｎは、１〜２０から選択される整数であり、ｆおよびｅは、１〜２５００から独立して選択される整数である）から選択されるメンバーである）による部分を含む、請求項４に記載の共有結合体。
【請求項６】
前記親ポリペプチドが、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害剤）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮアーゼ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ−２、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、α−ガラクトシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、β−グルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸性マルターゼ）、アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、濾胞成熟ホルモン（ＦＳＨ）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、プロキネチシン、エキセンディン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存性細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスモノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスタンパク質Ｆモノクローナル抗体、抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体、抗糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、抗ＶＥＧＦ−Ａモノクローナル抗体、抗ＰＳＧＬ−１モノクローナル抗体、抗ＣＤ４モノクローナル抗体、抗ａ−ＣＤ３モノクローナル抗体、抗ＥＧＦモノクローナル抗体、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）モノクローナル抗体および抗ＩＬ−２受容体モノクローナル抗体から選択されるメンバーである、請求項１に記載の共有結合体。
【請求項７】
前記外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列が、（Ｘ）ｍＰＴＰ、（Ｘ）ｍＰＴＥＩ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＩＮＴ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＶＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＶＬ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＧＡＭ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＴＥＴ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＶＬ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＬＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＤＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＥＮ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＤ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＡＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＧＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＳＡＶ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＬＹＶ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＳＳＧ（Ｐ）ｎおよび（Ｘ）ｍＰＳＤＧ（Ｐ）ｎ
（式中、
ｍおよびｎは、０および１から独立して選択される整数であり、
Ｐは、プロリンであり、
Ｘは、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーである）から選択されるメンバーである、請求項１に記載の共有結合体。
【請求項８】
前記外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列が、ＰＴＰ、ＰＴＥＩ、ＰＴＥＩＰ、ＰＴＱＡ、ＰＴＱＡＰ、ＰＴＩＮＴ、ＰＴＩＮＴＰ、ＰＴＴＶＳ、ＰＴＴＶＬ、ＰＴＱＧＡＭ、ＰＴＱＧＡＭＰおよびＴＥＴＰから選択されるメンバーである、請求項７に記載の共有結合体。
【請求項９】
請求項１に記載の共有結合体と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
【請求項１０】
シークオンポリペプチドを含むポリペプチド結合体であって、前記シークオンポリペプチドは、親ポリペプチドに相当し、かつ外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列を有し、前記ポリペプチド結合体は、式（Ｖ）
【化３】
（式中、
ｗは、０および１から選択される整数であり、
ｑは、０および１から選択される整数であり、
ＡＡ−Ｏ−は、ヒドロキシル基によって置換されている側鎖を有するアミノ酸から誘導される部分であり、前記アミノ酸は前記Ｏ−結合型グリコシル化配列中に位置し、
Ｚ＊は、グリコシル部分およびグリコシル連結基から選択されるメンバーであり、
Ｘ＊は、ポリマー修飾基およびポリマー修飾基に共有結合しているグリコシル連結基から選択されるメンバーである）による部分を含み、ただし、前記親ポリペプチドは、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン−α（ＩＮＦ−α）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）および繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）から選択されるメンバーではないポリペプチド結合体。
【請求項１１】
前記アミノ酸が、セリン（Ｓ）またはスレオニン（Ｔ）である、請求項１０に記載のポリペプチド結合体。
【請求項１２】
前記外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列が、
（Ｘ）ｍＰＴＰ、（Ｘ）ｍＰＴＥＩ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＩＮＴ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＶＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＶＬ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＧＡＭ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＴＥＴ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＶＬ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＬＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＤＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＥＮ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＤ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＡＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＧＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＳＡＶ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＬＹＶ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＳＳＧ（Ｐ）ｎおよび（Ｘ）ｍＰＳＤＧ（Ｐ）ｎ
（式中、
ｍおよびｎは、０および１から独立して選択される整数であり、
Ｐは、プロリンであり、
Ｘは、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーである）から選択されるメンバーである、請求項１０に記載のポリペプチド結合体。
【請求項１３】
前記外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列が、ＰＴＰ、ＰＴＥＩ、ＰＴＥＩＰ、ＰＴＱＡ、ＰＴＱＡＰ、ＰＴＩＮＴ、ＰＴＩＮＴＰ、ＰＴＴＶＳ、ＰＴＴＶＬ、ＰＴＱＧＡＭ、ＰＴＱＧＡＭＰおよびＴＥＴＰから選択されるメンバーである、請求項１２に記載のポリペプチド結合体。
【請求項１４】
Ｚ＊が、ＧａｌＮＡｃ、ＧａｌＮＡｃ−Ｇａｌ、ＧａｌＮＡｃ−Ｇａｌ−ＳｉａおよびＧａｌＮＡｃ−Ｓｉａから選択されるメンバーである、請求項１０に記載のポリペプチド結合体。
【請求項１５】
前記ポリマー修飾基が、直鎖状および分枝状から選択されるメンバーであり、かつ１つまたは複数のポリマー部分を含み、前記ポリマー部分の各々が独立して選択される、請求項１０に記載のポリペプチド結合体。
【請求項１６】
前記ポリマー部分が、ポリ（エチレングリコール）およびその誘導体から選択されるメンバーである、請求項１５に記載のポリペプチド結合体。
【請求項１７】
ｗが１である、請求項１０に記載のポリペプチド結合体。
【請求項１８】
Ｘ＊が、シアリルトランスフェラーゼ（Ｓｉａ）部分、ガラクトシル（Ｇａｌ）部分、ＧａｌＮＡｃ部分およびＧａｌ−Ｓｉａ部分から選択されるメンバーである部分を含む、請求項１７に記載のポリペプチド結合体。
【請求項１９】
前記親ポリペプチドが、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害剤）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮアーゼ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ−２、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、α−ガラクトシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、β−グルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸性マルターゼ）、アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、濾胞成熟ホルモン、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、プロキネチシン、エキセンディン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存性細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスモノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスタンパク質Ｆモノクローナル抗体、抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体、抗糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、抗ＶＥＧＦ−Ａモノクローナル抗体、抗ＰＳＧＬ−１モノクローナル抗体、抗ＣＤ４モノクローナル抗体、抗ａ−ＣＤ３モノクローナル抗体、抗ＥＧＦモノクローナル抗体、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）モノクローナル抗体および抗ＩＬ−２受容体モノクローナル抗体から選択されるメンバーである、請求項１０に記載のポリペプチド結合体。
【請求項２０】
Ｘ＊が、式（ＶＩ）
【化４】
（式中、
Ｅは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ２７およびＣＨＲ２８から選択されるメンバーであり、
Ｒ２７およびＲ２８は、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリールおよび置換または非置換ヘテロシクロアルキルから独立して選択されるメンバーであり、
Ｅ１は、ＯおよびＳから選択されるメンバーであり、
Ｒ２は、Ｈ、−Ｒ１、−ＣＨ２Ｒ１、および−Ｃ（Ｘ１）Ｒ１から選択されるメンバーであり、
Ｒ１は、ＯＲ９、ＳＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１、置換または非置換アルキルおよび置換または非置換ヘテロアルキルから選択されるメンバーであり、
Ｒ９は、Ｈ、負の電荷、金属イオン、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキルおよびアシルから選択されるメンバーであり、
Ｒ１０およびＲ１１は、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキルおよびアシルから独立して選択されるメンバーであり、
Ｘ１は、置換または非置換アルケニル、Ｏ、ＳおよびＮＲ８から選択されるメンバーであり、
Ｒ８は、Ｈ、ＯＨ、置換または非置換アルキルおよび置換または非置換ヘテロアルキルから選択されるメンバーであり、
Ｙは、ＣＨ２、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２、ＣＨ、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ、ＣＨ（ＯＨ）、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）、およびＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）から選択されるメンバーであり、
Ｙ２は、Ｈ、ＯＲ６、Ｒ６、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキル、
【化５】
から選択されるメンバーであり、
Ｒ６およびＲ７は、Ｈ、Ｌａ−Ｒ６ｂ、Ｃ（Ｏ）Ｒ６ｂ、Ｃ（Ｏ）−Ｌａ−Ｒ６ｂ、置換または非置換アルキルおよび置換または非置換ヘテロアルキルから独立して選択されるメンバーであり、
Ｒ６ｂは、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキルおよび修飾基から選択されるメンバーであり、
Ｒ３、Ｒ３’およびＲ４は、Ｈ、ＯＲ３”、ＳＲ３”、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキル、−Ｌａ−Ｒ６ｃ、−Ｃ（Ｏ）−Ｌａ−Ｒ６ｃ、−ＮＨ−Ｌａ−Ｒ６ｃ、＝Ｎ−Ｌａ−Ｒ６ｃおよび−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｌａ−Ｒ６ｃから独立して選択されるメンバーであり、
Ｒ３”は、Ｈ、置換または非置換アルキルおよび置換または非置換ヘテロアルキルから選択されるメンバーであり、
Ｒ６ｃは、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換ヘテロシクロアルキル、ＮＲ１３Ｒ１４および修飾基から選択されるメンバーであり、
Ｒ１３およびＲ１４は、Ｈ、置換または非置換アルキルおよび置換または非置換ヘテロアルキルから独立して選択されるメンバーであり、
各Ｌａは、結合およびリンカー基から独立して選択されるメンバーである）による部分を含む、請求項１７に記載のポリペプチド結合体。
【請求項２１】
Ｘ＊が、式（ＶＩＩ）
【化６】
による部分を含む、請求項２０に記載のポリペプチド結合体。
【請求項２２】
Ｒ６ｂおよびＲ６ｃの少なくとも１つが、
【化７】
（式中、
ｓ、ｊおよびｋは、０〜２０から独立して選択される整数であり、
各ｎは、０〜２５００から独立して選択される整数であり、
ｍは、１〜５の整数であり、
Ｑは、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択されるメンバーであり、
Ｒ１６およびＲ１７は、独立して選択されるポリマー部分であり、
Ｘ２およびＸ４は、ポリマー部分Ｒ１６およびＲ１７をＣに結合させる独立して選択される連結フラグメントであり、
Ｘ５は、ポリマー部分以外の非反応性基であり、
Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５、Ａ６、Ａ７、Ａ８、Ａ９、Ａ１０およびＡ１１は、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキル、置換または非置換ヘテロシクロアルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、−ＮＡ１２Ａ１３、−ＯＡ１２および−ＳｉＡ１２Ａ１３から選択されるメンバーであり、
Ａ１２およびＡ１３は、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキル、置換または非置換ヘテロシクロアルキル、置換または非置換アリール、および置換または非置換ヘテロアリールから独立して選択されるメンバーである）から独立して選択されるメンバーである、請求項２０に記載のポリペプチド結合体。
【請求項２３】
請求項１０に記載のポリペプチド結合体と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
【請求項２４】
親ポリペプチドに相当するシークオンポリペプチドであって、
配列番号１および配列番号２
（Ｘ）ｍＰＯ＊Ｕ（Ｂ）ｐ（Ｚ）ｒ（Ｊ）ｓ（Ｏ）ｔ（Ｐ）ｎ（配列番号１）、および
（Ｘ）ｍ（Ｂ１）ｐＴＵＢ（Ｚ）ｒ（Ｊ）ｓ（Ｐ）ｎ（配列番号２）
（式中、
ｍ、ｎ、ｐ、ｒ、ｓおよびｔは、０および１から独立して選択される整数であり、
Ｐは、プロリンであり、
Ｏ＊は、セリン（Ｓ）およびスレオニン（Ｔ）から選択されるメンバーであり、
Ｕは、プロリン（Ｐ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から選択されるメンバーであり、
Ｘ、ＢおよびＢ１は、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーであり、
Ｚ、ＪおよびＯは、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）、チロシン（Ｙ）、メチオニン（Ｍ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーである）から選択される外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列を含み、ただし、前記親ポリペプチドは、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン−α（ＩＮＦ−α）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）および繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）から選択されるメンバーではないシークオンポリペプチド。
【請求項２５】
前記外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列が、（Ｘ）ｍＰＴＰ、（Ｘ）ｍＰＴＥＩ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＩＮＴ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＶＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＶＬ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＧＡＭ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＴＥＴ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＶＬ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＬＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＤＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＥＮ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＤ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＡＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＧＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＳＡＶ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＬＹＶ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＳＳＧ（Ｐ）ｎおよび（Ｘ）ｍＰＳＤＧ（Ｐ）ｎ
（式中、ｍおよびｎは、０および１から独立して選択される整数であり、
Ｐは、プロリンであり、
Ｘは、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーである）から選択されるメンバーである、請求項２４に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項２６】
前記外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列が、ＰＴＰ、ＰＴＥＩ、ＰＴＥＩＰ、ＰＴＱＡ、ＰＴＱＡＰ、ＰＴＩＮＴ、ＰＴＩＮＴＰ、ＰＴＴＶＳ、ＰＴＴＶＬ、ＰＴＱＧＡＭ、ＰＴＱＧＡＭＰおよびＴＥＴＰから選択されるメンバーである、請求項２５に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項２７】
前記外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列が、ＧａｌＮＡｃ−トランスフェラーゼのための基質である、請求項２４に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項２８】
少なくとも３個のアミノ酸が、前記Ｏ＊と、リシン（Ｋ）またはアルギニン（Ｒ）残基との間に見出される、請求項２４に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項２９】
前記親ポリペプチドが治療用ポリペプチドである、請求項２４に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項３０】
前記親ポリペプチドが、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害剤）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮアーゼ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ−２、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、α−ガラクトシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、β−グルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸性マルターゼ）、アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、濾胞成熟ホルモン、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、プロキネチシン、エキセンディン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存性細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスモノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスタンパク質Ｆモノクローナル抗体、抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体、抗糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、抗ＶＥＧＦ−Ａモノクローナル抗体、抗ＰＳＧＬ−１モノクローナル抗体、抗ＣＤ４モノクローナル抗体、抗ａ−ＣＤ３モノクローナル抗体、抗ＥＧＦモノクローナル抗体、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）モノクローナル抗体および抗ＩＬ−２受容体モノクローナル抗体から選択されるメンバーである、請求項２４に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項３１】
請求項２４に記載の前記シークオンポリペプチドをコードする単離された核酸。
【請求項３２】
請求項３１に記載の前記核酸を含む発現ベクター。
【請求項３３】
請求項３１に記載の前記核酸を含む細胞。
【請求項３４】
ＸＰＯ＊Ｐ、ＸＰＯ＊ＥＩ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＥＩ、ＸＰＯ＊ＱＡ（Ｐ）ｎ、ＸＰＯ＊ＴＶＳ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＴＶＳＰ、ＸＰＯ＊ＱＧＡ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＱＧＡＰ、ＸＰＯ＊ＱＧＡＭ（Ｐ）ｎ、ＸＴＥＯ＊Ｐ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＶＬ、ＸＰＯ＊ＶＬ（Ｐ）ｎ、ＸＰＯ＊ＴＶＬ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＴＶＬＰ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＴＬＹＶＰ、ＸＰＯ＊ＴＬＹＶ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＬＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＤＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＥＮ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＱＤ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＡＳ（Ｐ）ｎ、ＸＰＯ＊ＳＡＶ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＳＡＶＰ、（Ｘ）ｍＰＯ＊ＳＧ（Ｐ）ｎ、ＸＴＥＯ＊Ｐおよび（Ｘ）ｍＰＯ＊ＤＧ（Ｐ）ｎ
（式中、
ｍおよびｎは、０および１から独立して選択される整数であり、
Ｏ＊は、セリン（Ｓ）およびスレオニン（Ｔ）から選択されるメンバーであり、
Ｘは、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から選択されるメンバーであり、
各Ｓ（セリン）は、Ｔ（スレオニン）によって独立して置換されてもよく、
各Ｔ（スレオニン）は、Ｓ（セリン）によって独立して置換されてもよい）から選択される外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列を含む親ポリペプチドに相当するシークオンポリペプチド。
【請求項３５】
前記Ｏ−結合型グリコシル化配列が、ＧａｌＮＡｃ−トランスフェラーゼのための基質である、請求項３４に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項３６】
少なくとも３個のアミノ酸が、前記Ｏ＊と、リシン（Ｋ）またはアルギニン（Ｒ）残基との間に見出される、請求項３４に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項３７】
前記親ポリペプチドが治療用ポリペプチドである、請求項３４に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項３８】
前記親ポリペプチドが、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害剤）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮアーゼ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ−２、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、α−ガラクトシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、β−グルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸性マルターゼ）、アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、濾胞成熟ホルモン（ＦＳＨ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、繊維芽細胞増殖因子７（ＦＧＦ−７）、繊維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ−２１）、繊維芽細胞増殖因子２３（ＦＧＦ−２３）、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、プロキネチシン、エキセンディン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存性細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスモノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスタンパク質Ｆモノクローナル抗体、抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体、抗糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、抗ＶＥＧＦ−Ａモノクローナル抗体、抗ＰＳＧＬ−１モノクローナル抗体、抗ＣＤ４モノクローナル抗体、抗ａ−ＣＤ３モノクローナル抗体、抗ＥＧＦモノクローナル抗体、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）モノクローナル抗体および抗ＩＬ−２受容体モノクローナル抗体から選択されるメンバーである、請求項３４に記載のシークオンポリペプチド。
【請求項３９】
請求項３４に記載の前記シークオンポリペプチドをコードする単離された核酸。
【請求項４０】
請求項３９に記載の前記核酸を含む発現ベクター。
【請求項４１】
請求項３９に記載の前記核酸を含む細胞。
【請求項４２】
複数の異なるメンバーを含むシークオンポリペプチドのライブラリーであって、前記ライブラリーの各メンバーは、共通の親ポリペプチドに相当し、かつ外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列を含み、前記Ｏ−結合型グリコシル化配列の各々は、配列番号１および配列番号２
（Ｘ）ｍＰＯ＊Ｕ（Ｂ）ｐ（Ｚ）ｒ（Ｊ）ｓ（Ｏ）ｔ（Ｐ）ｎ（配列番号１）、および
（Ｘ）ｍ（Ｂ１）ｐＴＵＢ（Ｚ）ｒ（Ｊ）ｓ（Ｐ）ｎ（配列番号２）
（式中、
ｍ、ｎ、ｐ、ｒ、ｓおよびｔは、０および１から独立して選択される整数であり、
Ｐは、プロリンであり、
Ｏ＊は、セリン（Ｓ）およびスレオニン（Ｔ）から選択されるメンバーであり、
Ｕは、プロリン（Ｐ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から選択されるメンバーであり、
Ｘ、ＢおよびＢ１は、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーであり、
Ｚ、ＪおよびＯは、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）、チロシン（Ｙ）、メチオニン（Ｍ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーである）から独立して選択されるメンバーであるライブラリー。
【請求項４３】
前記外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列が、
（Ｘ）ｍＰＴＰ、（Ｘ）ｍＰＴＥＩ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＩＮＴ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＶＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＶＬ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＧＡＭ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＴＥＴ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＶＬ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＬＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＤＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＥＮ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＤ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＡＳ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＱＧＡ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＳＡＶ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＴＴＬＹＶ（Ｐ）ｎ、（Ｘ）ｍＰＳＳＧ（Ｐ）ｎおよび（Ｘ）ｍＰＳＤＧ（Ｐ）ｎ、
（式中、
ｍおよびｎは、０および１から独立して選択される整数であり、
Ｐは、プロリンであり、
Ｘは、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーである）から選択されるメンバーである、請求項４２に記載のライブラリー。
【請求項４４】
前記外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列が、ＰＴＰ、ＰＴＥＩ、ＰＴＥＩＰ、ＰＴＱＡ、ＰＴＱＡＰ、ＰＴＩＮＴ、ＰＴＩＮＴＰ、ＰＴＴＶＳ、ＰＴＴＶＬ、ＰＴＱＧＡＭ、ＰＴＱＧＡＭＰおよびＴＥＴＰから選択されるメンバーである、請求項４３に記載のライブラリー。
【請求項４５】
前記ライブラリーの各メンバーが、同一のＯ−結合型グリコシル化配列を前記親ポリペプチド中の異なるアミノ酸位置で含む、請求項４２に記載のライブラリー。
【請求項４６】
前記ライブラリーの各メンバーが、異なるＯ−結合型グリコシル化配列を前記親ポリペプチド中の同一のアミノ酸位置で含む、請求項４２に記載のライブラリー。
【請求項４７】
前記親ポリペプチドがｍアミノ酸を有し、各アミノ酸がアミノ酸位置に相当し、前記ライブラリーが、
（ａ）第１のアミノ酸位置（ＡＡ）ｎ（式中、ｎは、１〜ｍから選択されるメンバーである）で前記Ｏ−結合型グリコシル化配列を有する第１のシークオンポリペプチドと、
（ｃ）各々のさらなるシークオンポリペプチドが、（ＡＡ）ｎ＋ｘおよび（ＡＡ）ｎ−ｘ（式中、ｘは、１〜（ｍ−ｎ）から選択されるメンバーである）から選択されるメンバーであるさらなるアミノ酸位置で前記Ｏ−結合型グリコシル化配列を有する、少なくとも１つのさらなるシークオンポリペプチドと
を含む、請求項４２に記載のライブラリー。
【請求項４８】
（ＡＡ）ｎ＋ｐおよび（ＡＡ）ｎ−ｐ（式中、ｐは１〜１０から選択される）から選択される第２のアミノ酸位置で前記Ｏ−結合型グリコシル化配列を有する第２のシークオンポリペプチドを含む、請求項４７に記載のライブラリー。
【請求項４９】
前記さらなるアミノ酸位置の各々が、予め選択したアミノ酸位置に隣接した、請求項４７に記載のライブラリー。
【請求項５０】
前記Ｏ−結合型グリコシル化配列が、ＧａｌＮＡｃ−トランスフェラーゼのための基質である、請求項４２に記載のライブラリー。
【請求項５１】
前記ＧａｌＮＡｃ−トランスフェラーゼが、レクチン−ドメイン欠失ＧａｌＮＡｃ−Ｔ２およびレクチンドメイン切断型ＧａｌＮＡｃ−Ｔ２から選択されるメンバーである、請求項５０に記載のライブラリー。
【請求項５２】
前記親ポリペプチドが治療用ポリペプチドである、請求項４２に記載のライブラリー。
【請求項５３】
前記親ポリペプチドが、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害剤）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮアーゼ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ−２、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、α−ガラクトシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、β−グルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸性マルターゼ）、アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、濾胞成熟ホルモン（ＦＳＨ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、繊維芽細胞増殖因子７（ＦＧＦ−７）、繊維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ−２１）、繊維芽細胞増殖因子２３（ＦＧＦ−２３）、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、プロキネチシン、エキセンディン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存性細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスモノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスタンパク質Ｆモノクローナル抗体、抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体、抗糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、抗ＶＥＧＦ−Ａモノクローナル抗体、抗ＰＳＧＬ−１モノクローナル抗体、抗ＣＤ４モノクローナル抗体、抗ａ−ＣＤ３モノクローナル抗体、抗ＥＧＦモノクローナル抗体、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）モノクローナル抗体および抗ＩＬ−２受容体モノクローナル抗体から選択されるメンバーである、請求項４２に記載のライブラリー。
【請求項５４】
宿主細胞中でシークオンポリペプチドを発現させるステップを含み、前記シークオンポリペプチドは、親ポリペプチドに相当し、配列番号１および配列番号２
（Ｘ）ｍＰＯ＊Ｕ（Ｂ）ｐ（Ｚ）ｒ（Ｊ）ｓ（Ｏ）ｔ（Ｐ）ｎ（配列番号１）、および
（Ｘ）ｍ（Ｂ１）ｐＴＵＢ（Ｚ）ｒ（Ｊ）ｓ（Ｐ）ｎ（配列番号２）
（式中、
ｍ、ｎ、ｐ、ｒ、ｓおよびｔは、０および１から独立して選択される整数であり、
Ｐは、プロリンであり、
Ｏ＊は、セリン（Ｓ）およびスレオニン（Ｔ）から選択されるメンバーであり、
Ｕは、プロリン（Ｐ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から選択されるメンバーであり、
Ｘ、ＢおよびＢ１は、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーであり、
Ｚ、ＪおよびＯは、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）、チロシン（Ｙ）、メチオニン（Ｍ）および非荷電アミノ酸から独立して選択されるメンバーである）から選択される外因性Ｏ−結合型グリコシル化配列を含み、ただし、前記親ポリペプチドは、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン−α（ＩＮＦ−α）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）および繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）から選択されるメンバーではない方法。
【請求項５５】
前記シークオンポリペプチドを単離するステップをさらに含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記シークオンポリペプチドを前記Ｏ−結合型グリコシル化配列において酵素によってグリコシル化するステップをさらに含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
前記酵素によってグリコシル化するステップが、グリコシルトランスフェラーゼを使用して達成される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記グリコシルトランスフェラーゼが、ＧａｌＮＡｃ−Ｔ２である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＧａｌＮＡｃ−Ｔ２が、レクチン−ドメイン欠失ＧａｌＮＡｃ−Ｔ２およびレクチンドメイン切断型ＧａｌＮＡｃ−Ｔ２から選択されるメンバーである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記シークオンポリペプチドをコードする核酸配列を含む発現ベクターを作製するステップをさらに含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項６１】
前記宿主細胞に前記発現ベクターをトランスフェクトするステップをさらに含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記親ポリペプチドが治療用ポリペプチドである、請求項５４に記載の方法。
【請求項６３】
前記親ポリペプチドが、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害剤）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮアーゼ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ−２、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、α−ガラクトシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、β−グルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸性マルターゼ）、アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、濾胞成熟ホルモン（ＦＳＨ）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、プロキネチシン、エキセンディン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存性細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスモノクローナル抗体、抗呼吸器合胞体ウイルスタンパク質Ｆモノクローナル抗体、抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体、抗糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、抗ＶＥＧＦ−Ａモノクローナル抗体、抗ＰＳＧＬ−１モノクローナル抗体、抗ＣＤ４モノクローナル抗体、抗ａ−ＣＤ３モノクローナル抗体、抗ＥＧＦモノクローナル抗体、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）モノクローナル抗体および抗ＩＬ−２受容体モノクローナル抗体から選択されるメンバーである、請求項５４に記載の方法。
【請求項６４】
（ｉ）前記シークオンポリペプチドを組換えで生成するステップと、
（ｉｉ）前記シークオンポリペプチドを前記Ｏ−結合型グリコシル化配列において酵素によってグリコシル化するステップと
を含む、請求項１０に記載のポリペプチド結合体の作製方法。
【請求項６５】
ステップ（ｉｉ）の前記酵素によるグリコシル化が、ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼを使用して達成される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼが、ヒトＧａｌＮＡｃ−Ｔ２である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記ＧａｌＮＡｃ−Ｔ２が、レクチン−ドメイン欠失ＧａｌＮＡｃ−Ｔ２およびレクチンドメイン切断型ＧａｌＮＡｃ−Ｔ２から選択されるメンバーである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
（ｉ）前記Ｏ−結合型グリコシル化配列を、第１のアミノ酸位置（ＡＡ）ｎに導入することによって、第１のシークオンポリペプチドを組換えで生成するステップと、
（ｉｉ）前記Ｏ−結合型グリコシル化配列を、（ＡＡ）ｎ＋ｘおよび（ＡＡ）ｎ−ｘ（式中、ｘは、１〜（ｍ−ｎ）から選択されるメンバーである）から選択されるさらなるアミノ酸位置に導入することによって、少なくとも１つのさらなるシークオンポリペプチドを組換えで生成するステップと
を含む、請求項４７に記載のシークオンポリペプチドのライブラリーの作製方法。
【請求項６９】
（ｉ）請求項４２に記載のシークオンポリペプチドのライブラリーを生成するステップと、
（ｉｉ）前記ライブラリーの少なくとも１つのメンバーを酵素によるグリコシル化反応に供し、修飾基によって誘導体化されていてもよいグリコシル部分をグリコシル供与体分子から前記Ｏ−結合型グリコシル化配列の少なくとも１つに転移させ、それによって前記リードポリペプチドを同定するステップと
を含む、リードポリペプチドを同定する方法。
【請求項７０】
前記ライブラリーの少なくとも１つのメンバーについての前記酵素によるグリコシル化反応の収率を測定するステップをさらに含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記測定が、質量分析、ゲル電気泳動、核磁気共鳴（ＮＭＲ）およびＨＰＬＣから選択されるメンバーによって行われる、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記リードポリペプチドの前記収率が、約５０％〜約１００％である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
ステップ（ｉｉ）の前に、前記ライブラリーの少なくとも１つのメンバーを精製するステップをさらに含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項７４】
ステップ（ｉｉ）の前記グリコシル部分が、ガラクトース部分およびＧａｌＮＡｃ部分から選択されるメンバーを含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項７５】
ステップ（ｉｉ）の前記酵素によるグリコシル化反応が、前記ライブラリーの前記少なくとも１つのメンバーが発現している宿主細胞中で起こる、請求項６９に記載の方法。
【請求項７６】
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の生成物をＰＥＧ化反応に供し、前記ＰＥＧ化反応が、化学的ＰＥＧ化反応および酵素によるグリコＰＥＧ化反応から選択されるメンバーである、請求項６９に記載の方法。
【請求項７７】
ステップ（ｉｉ）およびステップ（ｉｉｉ）が単一の反応容器中で行われる、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記ＰＥＧ化反応の収率を測定するステップをさらに含む、請求項７６に記載の方法。
【請求項７９】
前記測定が、質量分析、ゲル電気泳動、核磁気共鳴（ＮＭＲ）およびＨＰＬＣから選択されるメンバーによって行われる、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記リードポリペプチドの前記ＰＥＧ化反応の前記収率が約５０％〜約１００％である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８１】
前記リードポリペプチドが、前記ＰＥＧ化反応時に前記親ポリペプチドの治療活性と本質的に同一の治療活性を有する、請求項７６に記載の方法。
【請求項８２】
前記リードポリペプチドが、前記ＰＥＧ化反応時に前記親ポリペプチドの治療活性と異なる治療活性を有する、請求項７６に記載の方法。
【請求項８３】
前記シークオンポリペプチドをコードする核酸配列を含む発現ベクターを作製するステップをさらに含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項８４】
前記宿主細胞に前記発現ベクターをトランスフェクトするステップをさらに含む、請求項８３に記載の方法。
【図３】
【図４】
【図５】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図６Ｃ】
【図６Ｄ】
【図６Ｅ】
【図６Ｆ】
【図４】
【図５】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図６Ｃ】
【図６Ｄ】
【図６Ｅ】
【図６Ｆ】
【公表番号】特表２００９−５４４３２７（Ｐ２００９−５４４３２７Ａ）
【公表日】平成２１年１２月１７日（２００９．１２．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５２１９３０（Ｐ２００９−５２１９３０）
【出願日】平成１９年７月２３日（２００７．７．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０７４１３９
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０１１６３３
【国際公開日】平成２０年１月２４日（２００８．１．２４）
【出願人】（５０９０９１８４８）ノヴォ ノルディスク アー／エス (42)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１２月１７日（２００９．１２．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年７月２３日（２００７．７．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０７４１３９
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０１１６３３
【国際公開日】平成２０年１月２４日（２００８．１．２４）
【出願人】（５０９０９１８４８）ノヴォ ノルディスク アー／エス (42)
【Ｆターム（参考）】
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