免疫保護性刺激物質としてカチオン性抗菌ペプチド発現を誘導するためのＰＰＡＲ−γアゴニスト
ＰＰＡＲ−γ受容体を有する組織においてＣＡＭＰ発現を誘導するための、ロシグリタゾン、５−ＡＳＡ又は構造的に類似の一般式（Ｉ）の化合物又は一般式（Ｉａ）の化合物。このような組織として、ＰＰＡＲ−γ受容体を有する上皮又は粘膜組織が挙げられ、腸管におけるＣＡＭＰ発現が特に注目される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＰＰＡＲ−γアゴニストによるデフェンシンの誘導に関する。デフェンシンは、皮膚、口腔、鼻、眼の上皮及び、膣粘膜を含むその他の上皮粘膜に免疫保護を提供する。特に、本発明は、上皮及び／又は粘膜におけるＰＰＡＲ受容体の活性化を介した、このようなアゴニストによる防御生成の刺激に関係している。より詳しくは、本発明は、腸管ＰＰＡＲ受容体の活性化による、このようなアゴニストによる腸デフェンシン生成の刺激に関係している。
【背景技術】
【０００２】
クローン病（ＣＤ）及び潰瘍性大腸炎（ＵＣ）をはじめとする炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、寛解及び増悪を伴う慢性再発性疾患であり、主に若年患者において発症する。炎症は、腸のすべての領域及び腸管粘膜のすべての層に、例えば、ＣＤでは、隣接する腸間膜脂肪組織及び肛門周辺部に影響を及ぼすことがある。これらの疾患は、臨床的には、長期の、変動する経過、多様な腸の症状、並びに重篤な局所合併症及び全身合併症の発生を特徴とする。ＣＤ及びＵＣの病因はまだわかっていないが、病的な腸の炎症反応は、遺伝的に素因のある個体の消化管における細菌叢耐性の崩壊の結果であると考えられている１。
【０００３】
ＩＢＤは、先進国において、特に、西ヨーロッパ、北アメリカ及びオーストラリアにおいて、より顕著である。ＣＤ及びＵＣの有病率は、約１〜２人／住民１０００人である。特に、２００５年には、フランスでは、合計１２００００人のＣＤ及び８００００人のＵＣが推定されており、米国では、約２５０万人のＩＢＤ患者が推定されている。利用可能な治癒的治療分子がまったくなく、治療管理は対症療法（鎮痛剤、抗生物質、栄養物）、抗炎症剤及び免疫抑制剤（アミノサリチレート、ステロイド、アザチオプリン、メトトレキサート、シクロスポリン、モノクローナル抗ＴＮＦ抗体、例えば、インフリキシマブ）及び外科治療と関連している。したがって、総合すると、新規治療分子の開発は、臨床管理にとって極めて重要である。
【０００４】
消化粘膜は、種々の免疫戦略を発達させて、親密に接触する共生生物を許容し、病原菌が宿主組織に蔓延するのを防いできた。食物由来の常在性及び病原性微生物の認識は、昆虫及び哺乳類の生存にとって必須のバリア機能である。特に、病原体に対する哺乳類の耐性は、主に、膜結合型Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）１及び細胞質ヌクレオチド結合性オリゴマー形成ドメインロイシンリッチリピート含有タンパク質（ＮＯＤＬＲＲ）２の最近同定されたファミリーによって付与される。ＮＯＤ１及びＮＯＤ２は、Ｎ末端カスパーゼ補充ドメイン（ＣＡＲＤ）、中心ヌクレオチド結合性ドメイン（ＮＯＤ）及びＣ末端ロイシンリッチリピートドメイン（ＬＲＲ）２を有する。
【０００５】
ＮＯＤ２遺伝子の突然変異はクローン病（ＣＤ）と関連していたために３、４、ＮＯＤ２シグナル伝達は相当な注目を集めてきた。ＮＯＤ２は、細菌増殖の際に放出され、再循環される主要なムロペプチド−ムラミルジペプチドＭｕｒＮＡｃ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イソＧｌｎ（ＭＤＰ）６〜８を検出することによって、細菌ペプチドグリカンの細胞質パターン認識分子（ＰＲＭ）として作用する５。ＮＯＤ２は、ＭＤＰを認識した後、転写因子及びキナーゼ活性化を介して自然免疫及び獲得免疫の両方を促進及び調節する２。したがって、マウスでは、ＮＯＤ２シグナル伝達がないことは、理解できるように、特定の腸内カチオン性抗菌ペプチド（ＣＡＭＰ）の調節を介してリステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）に対する経口感受性を付与する８。最近の研究によって、ＮＯＤ１がメソ−ジアミノピメリン酸を含有するペプチドグリカン（主にグラム陰性菌で見られる）に対する応答性を付与するという証拠が提供されている９、１０。ＮＯＤ１は、ＮＯＤ２の生理学的役割と同様に、ピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）感染の際の胃上皮細胞による特定のβ−デフェンシンの発現に必要とされる１１。
【０００６】
胃腸管の抗菌ペプチド（ＣＡＭＰ：デフェンシン、カスレリシジン（ｃａｔｈｌｅｌｉｃｉｄｉｎｓ））：炎症性疾患への影響
最近の報告書によって、腸管上皮を補充する幹細胞が、持続的な抗菌性保護を必要とするために、腸管ホメオスタシスの監視及び侵入する微生物の包含におけるＣＡＭＰのエフェクターの役割が明らかにされた。ＣＡＭＰ発現のレベルは、妊娠の間の局所防御機構の未熟性から誕生後の腸管の細菌定着への、後生動物における腸の発達に対応している１２。哺乳類の腸管に蔓延している２種類のＣＡＭＰ、即ち、デフェンシン及びカテリシジンのＮＦ−κＢ依存性及び非依存性調節は特に注目される。
【０００７】
α−及びβ−デフェンシンは、小さなポリペプチドであり、空間的に分離している疎水性の、正に帯電した残基を有する。６個の不変のシステインが３つの特異的な分子内ジスルフィド結合を形成し、このようにしてタンパク質を複雑にフォールディングされた三重鎖βシート立体配置で安定化する１２、１３。α−デフェンシンＨＤ−１〜ＨＤ−４（ヒト好中球タンパク質１〜４としても知られる）は、好中球によって発現されるが、ＨＤ−５及びＨＤ−６（マウスではクリプトジンとしても知られる）は、パネート細胞と呼ばれる、特定化された腸の上皮細胞によって産生される。後者は、主に、小腸のリーベルキューンの陰窩の基部に位置し、微生物及び／又は微生物産物に対する曝露に続いて、タンパク質性顆粒を合成し、管腔中に放出することによって回腸粘膜の自然免疫において主要な役割を有する。これらの分泌顆粒は、膜の完全性を破壊することによって微生物の壊死を引き起こし得る両親媒性ペプチドに富んでいる１２。
【０００８】
パネート細胞は、共生動物に対する寛容の維持において、また、抗菌ペプチド、例えば、デフェンシンを産生することによる病原性感染の忌避において重要な役割を果たす。Ｗｎｔ／Ｔｃｆ／β−カテニンシグナル伝達経路は、腸のホメオスタシス及びパネート細胞分化の制御において必須である。
【０００９】
興味深いことに、ＣＤにおいて、腸α−デフェンシン（即ち、ＨＤ−５）の損なわれた腸での発現が報告されており、これが管腔細菌叢の変化の一因となり、且つ／又は腸管病原体４、例えば、付着侵入性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）５９及びパラ結核菌（Ｍ．ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）６０（図２）の感染に対する上皮性関門全体の脆弱性を生じさせる可能性がある。結腸における生理学的細菌負荷は、小腸においてよりも高いので、結腸疾患の発生に対するその他の微生物センサー及びＣＡＭＰの影響も解明される必要がある。最後に、突然変異ＣＡＭＰを有するマウス及び主要なＣＤ関連ＮＯＤ２突然変異を保持する最近開発されたマウスモデル６１の使用も、損なわれた腸のデフェンシン機能及び／又は自然ＮＯＤ突然変異が、腸の炎症性疾患の発生を引き起こすのに十分であるかどうかを調べるのに役立つ可能性がある。α−デフェンシンのｉｎ ｖｉｖｏ抗菌機能は、胃腸の管腔における優勢細菌叢の組成の著しい変化が同時に起こった、ＨＤ−５トランスジェニックマウスにおいて、ネズミチフス菌（ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）感染に対するより大きな耐性が観察されたことによって実験的に調べられている１４。パネート細胞によって産生されたα−デフェンシンは、β−デフェンシンとは異なり、細胞外プロテアーゼ１５、例えば、マウス及びヒトではそれぞれ、マトリックスメタロプロテイナーゼ−７（ＭＭＰ−７、マトリライシン）及びトリプシン１６、１７によって転写後レベルで主に調節される。したがって、ＭＭＰ−７−／−マウスは、クリプトジンの不活性型を蓄積し、ネズミチフス菌（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）の経口感染に、野生型の動物よりも容易に屈する１７。６種のヒトβ−デフェンシン（ｈＢＤ−１〜ｈＢＤ−６）は、ほとんどの上皮細胞によって主に合成される。ｈＢＤ１相同分子種を欠くマウスは、黄色ブドウ球菌（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）感染に対する感受性の増大を示し１８、このことは、自然免疫におけるこのタンパク質の役割を支持する。
【００１０】
カテリシジンは、デフェンシンとは構造的及び進化的に別個であるが、消化管において同様の存在量及び分布を有するＣＡＭＰである１２。それらは、抗菌活性を有するＣ末端ペプチドに結合された、高度に保存されたＮ末端ドメイン（カテリン（ｃａｔｈｅｌｉｎ））を含有する大きな前駆体ペプチドとして合成される。デフェンシンと同様に、カテリシジンは、細胞外、部分タンパク質分解によって活性化される１９。その他の哺乳類種では、このファミリーのいくつかのメンバーが同定されているが、ヒト及びマウスは、単一のカテリシジン遺伝子（それぞれ、ＬＬ３７／ＦＡＬＬ３９／ｈＣＡＰ１８及びカテリン関連抗菌ペプチド（ＣＲＡＭＰ）と呼ばれる）を有する２０。実験的証拠によって、ＣＲＡＭＰを欠くマウスは、Ａ群連鎖球菌による皮膚感染及び侵襲性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）による尿路感染に対してより感受性であるということが示されている２１、２２。さらに、ＣＲＡＭＰ欠損マクロファージは、ネズミチフス菌（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）の複製を制御できなかった２３。
【００１１】
ＮＦ−κＢ及びＭｙＤ８８シグナル伝達経路に突然変異を有するマウスは、それぞれ、ヘリコバクター誘導性大腸炎２４及び共生動物誘発性大腸炎２５に対する感受性の増大を示し、このことは、細菌に対する腸管寛容／耐性におけるＮＦ−κＢの必須の役割及びＣＡＭＰ産生の調節における関与の可能性を示す。ヒトでは、ｈＢＤ−１発現は、小腸及び結腸では構成的であるが、ｈＢＤ−２〜−４の結腸での合成は、消化管における感染性病原体（例えば、ピロリ菌（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ））及び／又は炎症性サイトカインによるＮＦ−κＢ活性化に強力に依存している１２。ＴＬＲシグナル伝達の調節的影響に加え、ＮＯＤ１及びＮＯＤ２シグナル伝達経路が、ｈＢＤ−２発現を誘発することがわかっている１１、２７。さらに、最近の知見により、ｈＢＤ−２及び／又は−３発現には、ＭＡＰキナーゼ経路の活性化も必要であることがわかっている１１、２６。
【００１２】
ＮＯＤ２遺伝子における３つの突然変異（即ち、Ｒ７０２Ｗ、Ｇ９０８Ｒ及び１００７ｆｓ）は、ＣＤに対する素因につながることがわかっている３、４。遺伝子型−表現型相関性から、ＮＯＤ２突然変異は、主に回腸ＣＤと関連していることが立証されている４２。よく見られる突然変異及び稀な突然変異の両方が、ＭＤＰ誘導性ＮＦ−κＢ活性化の低下５、７及び末梢血単球におけるサイトカイン産生と関連している７、４３〜４５。Ｌａｌａらは、ＮＯＤ２はパネート細胞において高度に発現されること４６、４７、ＮＯＤ２突然変異と回腸炎症病変の発生の間の関連を説明し得る知見４２を最近報告した。回腸におけるＮＯＤ２の保護効果と一致して、Ｎｏｄ２−ノックアウトマウスは、（ｉ）グラム陽性通性細胞内細菌リステリア菌（Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）の経口感染（全身感染ではない）に対する感受性の増大及び（ｉｉ）クリプトジン遺伝子のサブグループの発現の著しい減少を示した８。
【００１３】
重要なことに、回腸ＣＤ患者から得た外科的切除試料及び生検においてＨＤ−５及びＨＤ−６の産生の減少が見られ１４、４８、４９、報告によれば、ＣＤ関連ＮＯＤ２突然変異がこの障害の一因であった。他方、結腸クローン病の個体は、正常なα−デフェンシンレベルを示したが、かなり減少したコピー数のβ−デフェンシン遺伝子ｈＢＤ−２を有し、これが結腸における発現の低下をもたらす５０。ＮＯＤ２突然変異と同様に、ＮＯＤ１遺伝子の複雑なイントロン多型は、ＩＢＤの発病と関連している５１。さらに、Ｎｏｄ１欠損マウスは、ピロリ菌（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）感染に対する感受性の増大５２及び特定のβ−デフェンシンの発現の減少を示す１１。
【００１４】
回腸ＣＤにおけるデフェンシンの発現の減少は、管腔細菌叢の変化の一因となり、ひいては、ＣＤ関連病原体、例えば、付着侵入大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）５９及びパラ結核菌（Ｍ．ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）６０の感染に対する上皮性関門全体の脆弱性を生じさせ得る。
【００１５】
同時に、ＮＦ−κＢ非依存性シグナル伝達経路は、上皮細胞再生、分化及び／又は分化系列決定を調節することによって、ＣＡＭＰ産生を制御し得る。興味深いことに、Ｗｉｎｇｌｅｓｓ（Ｗｎｔ）シグナル伝達の障害は、胎児小腸上皮における増殖細胞の完全な欠損と関連しており２８、このことは、この経路が腸の上皮細胞の増殖／未分化状態の維持において必須の役割を有するということを示唆する。エフリンＢ３遺伝子（Ｗｎｔシグナル伝達経路によってダウンレギュレートされる）がないことは、異常なパネート細胞分化系列決定をもたらすことがわかった２９。さらに、Ｗｎｔシグナル伝達経路は、パネート細胞由来の細胞におけるデフェンシン遺伝子発現を監視し得るが（転写因子４、Ｔｃｆ４を介して）、これは、クリプトジンが、胎児Ｔｃｆ４−／−マウスの小腸又はＷｎｔ受容体Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−５を欠く成体のものでは検出されなかったからである３０。逆に、クリプトジン遺伝子は、マウスにおいて過剰発現され、このことは、Ｗｎｔシグナル伝達経路の突然変異による活性化を示す３０、３１。
【００１６】
α−デフェンシンプロモーターの部位特異的突然変異分析によって、ＴＣＦ結合部位の必須の調節的役割が示された３０。総じて、これらの知見は、パネート細胞由来ＣＡＭＰの産生にはＷｎｔシグナル伝達の活性化が必要であるということを示す。したがって、パネート細胞決定要因（例えば、Ｍｔｇｒ１及びＧｆｉ１）は、慢性炎症性疾患に対する感受性の可能性ある候補と考えられるべきである３２、３３。
【００１７】
最後に、免疫、細菌誘導性炎症及び細胞増殖／成熟における特定の核受容体の重要な役割を考えると、これらの受容体は、ＣＡＭＰ生合成を調節することによって胃腸の自然免疫において可能性ある役割を有し得るということが示唆されている。興味深いことに、グルココルチコイド受容体アゴニスト（デキサメタゾン）は、ｈＢＤ−２発現を増強することがわかったが、機序は調べられていないままである３４。より最近、カテリシジンをコードする遺伝子及びｈＢＤ２をコードする遺伝子が、ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）３５、ウシ結核菌（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）感染に対する耐性に必要な核受容体３６の標的として同定された。単球の、合成ＶＤＲリガンドでの処理が、カテリシジン遺伝子転写の用量依存性アップレギュレーションにつながり、これが結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）に対する直接抗菌効果を発揮した３７。これらの知見と一致して、内因性ＶＤＲリガンドレベルが低下した個体は、結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）感染に対する感受性の増大を示す３７。
【００１８】
微生物（一般に、病原体）は、ＣＡＭＰの殺菌活性を回避するために、抗生物質耐性に関与しているものを彷彿とさせるさまざまな戦略を発達させてきた３９。不活化を達成するための１つの方法は、ＣＡＭＰを分解するプロテアーゼを産生することであるが、デフェンシンの場合には、分子内ジスルフィド橋が、ペプチドを酵素的タンパク質分解に対して相対的に耐性にしている。別の戦略は、細菌エンベロープの正味の正電化を低下させ、ＣＡＭＰに対するその親和性を低下させることからなり、これは、正に帯電した基を細菌細胞壁中のタイコ酸ポリマー（Ｄ−アラニン）中及び脂質Ａ（アミノアラビノース）中に組み込むことによって達成される。ＣＡＭＰ耐性へのその他の細菌アプローチは、分泌タンパク質によって細胞外捕獲すること及び細胞膜を越えてペプチドを活発に供給することによって、宿主エフェクターがその標的に接近するのを防ぐことを含む３９。しかし、これらの種々の保護的武器をもってしても（互いに排他的ではない）、微生物は、宿主がデフェンシンの場合と同様に多量のＣＡＭＰを腸の管腔中に放出できる場合には、ＣＡＭＰによって、おそらくはやはり阻害される。このような状況では、細菌成分による（細菌性赤痢の患者において４０、また、ネズミチフス菌（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）に経口感染したマウスにおいて４１報告されるような）転写レベルでのＣＡＭＰをコードする遺伝子のダウンレギュレーションは、極めて洗練された対向機構である（図２）。
【００１９】
特定の腸内微生物による微生物の検知及び攻撃の障害は、腸管におけるＣＡＭＰ機能に影響を及ぼし、慢性炎症性疾患、例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の発生をもたらし得る。これらの知見は、古くから、微生物免疫原による異常なＴ細胞活性化に起因すると考えられていたＣＤの発病を新たに明らかにする。
【００２０】
ＣＡＭＰの抗菌活性に加え、多面的機能は、デフェンシン及びカテリシジンによるものであった（表１）５３。両ＣＡＭＰは、自然免疫に関与している免疫細胞（好中球及び単球／マクロファージ）、獲得免疫に関与している免疫細胞（樹状細胞及びＴリンパ球）及びアレルギー／炎症反応に関与している免疫細胞（肥満細胞）を化学的に誘引する能力を有する。さらに、ｈＢＤ２は、樹状細胞においてＴＬＲ４依存性シグナル伝達経路を活性化し得る５４。
【００２１】
他方、Ｈａｎｃｏｃｋらは、最近、ＬＬ−３７は、ヒト単球におけるＴＬＲ依存性活性化の勢いを弱め５５、樹状細胞の成熟を促進し、Ｔ細胞のＴｈ１極性化をもたらし得る５６と報告した。総じて、これらの知見は、ＣＡＭＰ相互作用は、自然免疫と獲得免疫を関連づけることによって炎症反応を開始及び制御し得るということを示す（表１）。最後に、ＬＬ−３７などのＣＡＭＰは、血管新生を促進する能力を有することが、ＣＲＡＭＰ欠損マウスにおける皮膚損傷修復の際の血管新生の減少によって実証された５７。パネート細胞生物学が、共生動物の認識を介して腸の血管新生に影響を及ぼすので５８、これらの知見は、ＩＢＤの発病への洞察を提供する。腸内ＣＡＭＰは、微生物耐性、血管新生、走化性及び体液性反応の活性化／成熟を調節することによって、消化管の自然免疫及び獲得免疫の両方において、いくつかの必須の、新たな役割を有する（表１）。特に、ＣＡＭＰの管腔中への放出は、有糸分裂的に活性な陰窩細胞（上皮細胞単層を再生する）を、病原微生物によるコロニー形成から保護すると考えられる。トランスジェニック動物の使用は、生理学的役割及びこれらのエフェクターの調節のより良好な理解をもたらす。ＮＯＤ１／２は、デフェンシンの上皮産生を調節することによって、殺菌活性を発揮することがわかっており、これは、ＰＲＭパターン認識分子（Ｐａｔｔｅｒｎ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）が宿主をＣＤの発生から保護し得る、可能性ある機構を示唆する（図２）。
【００２２】
上皮抗菌ペプチド：免疫系刺激への影響
いくつかの最近の研究によって、デフェンシンを含めた抗菌ペプチドが、皮膚、口腔、鼻、眼の上皮及びその他の上皮粘膜、例えば、膣粘膜における保護的役割に関与しているとされている。すべてが同一の胚層から始まるので、すべての粘膜は、共通の胚発生起源を共有し、保護的デフェンシン発現を含めた類似の生化学的反応を示すと予測され得る。
【００２３】
２００３年には、Ｄｉｎｕｌｏｓらは、皮膚の免疫防御におけるβ−デフェンシン−２のケラチノサイト発現の抗菌活性を調べた。β−デフェンシン−２発現は、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、ストレプトコッカス・エピデルミディス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）及び緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）によって誘導されるとわかったが、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）は弱いβ−デフェンシン−２誘導物質であるとわかった。この研究によって、抗菌効果と組み合わせた、β−デフェンシン−２発現を誘導する能力が、グラム陰性菌生物による皮膚感染の希少性の一因となっている可能性がある一方で、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）によって与えられる刺激がないことが、免疫系防御を回避し、皮膚疾患を引き起こす化膿性連鎖球菌の能力を指し示し得ると示された６７。
【００２４】
過去１年以内に、Ｈｕａｎｇらは、抗菌アッセイを実施して、ＮａＣｌ又は涙の存在下で、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｇｉｎｏｓａ）（ＰＡ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）（ＳＡ）及び表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）（ＳＥ）などの微生物に対する、いくつかのヒト眼表面に発現された抗菌ペプチド、例えば、β−デフェンシン１〜３の抗菌活性を調べた。β−デフェンシン−３は、ＳＡ及びＳＥの両方に対して強力な活性を有するとわかったが、β−デフェンシン−２は中程度の活性を有し、β−デフェンシン−１はこれらの株に対して活性を示さなかった。活性は、ＮａＣｌによって減弱され、涙は、β−デフェンシン−１及び２の活性を完全に阻害したが、β−デフェンシン−３活性には影響を及ぼさなかった。この研究によって、いくつかのデフェンシンのｉｎ ｖｉｖｏ抗菌剤としての役割が確認された６８。
【００２５】
２００７年後半に向けて、Ｖａｎｈｉｎｓｂｅｒｇｈは、特定の免疫調節性遺伝子発現、特に、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＲＬ）及びデフェンシンのレベルの低下が、アレルギー発生、例えば、アレルギー性及び非アレルギー性鼻炎発生と関連していると示した６９。
【００２６】
最後に、Ｃｈｕｎｇらは、皮膚、口腔粘膜及びその他の上皮において、病原体及び共生動物が、デフェンシン及びカテリシジンなどの抗菌ペプチドの刺激を受け取る特異的シグナル伝達経路を同定し、歯周病のため新規治療薬の開発でこれらの経路を同定した７０。
【００２７】
このような研究によって、ヒト免疫系におけるデフェンシンの保護的役割が強められ、身体においてデフェンシン産生を刺激する経路を提供することによる病原体に対する免疫応答の増大の重要性が強調される。
【００２８】
その他の背景技術
米国特許第６，３２６，３６４号には、５−ＡＳＡなどの５−アミノサリチレート化合物が、ｉｎ ｖｉｔｒｏで選択的抗菌効果を有するとして記載されている。実施例は、好気条件及び嫌気条件でアガープレート上の一連のクロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）細菌培養物に対して阻害効果を示す。乳酸桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、腸球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）又はバクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）のコロニーに対しては、効果は観察されなかった。
【００２９】
ＰＰＡＲ−γの役割
最近、核受容体ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲ−γ）が、ＩＢＤの治療において用いられる抗炎症薬の標的として同定され、このことは、腸管において核受容体ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γがｉｎ ｖｉｖｏ抗炎症効果を媒介する機構を示す２。しかし、ＰＰＡＲ受容体発現は、おそらくは、共通の粘膜胚発生起源のために、腸管以外の種々の粘膜領域において実証されている。最近の研究によって、ＰＰＡＲ−γは、通年性アレルギー性鼻炎における鼻腔粘膜の慢性炎症の一因であり得ることが示唆されている７０。
【００３０】
ＰＰＡＲ−γは、β−カテニン及びＴ細胞転写因子（Ｔｃｆ−４）と相互作用することによって腸のホメオスタシスを制御する必須の核受容体である。Ｔｃｆ−４は、腸の細胞の運命の決定において、またパネート細胞による天然抗生物質の発現の調節において必須の転写因子である３。
【００３１】
５−アミノサリチレート（５−ＡＳＡ）は、炎症性腸疾患の治療において広く用いられる抗炎症薬（メサラジン）であるが、その腸内効果の根底にある機序はまだあまり理解されていない。最近、核受容体ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲ−γが、５−ＡＳＡの標的として同定され、このことは、５−ＡＳＡがｉｎ ｖｉｖｏで腸管におけるその抗炎症効果を媒介する機序を示す２。したがって、５−ＡＳＡの抗菌特性を考えると、このような化合物及びその誘導体は、ＰＰＡＲ−γ活性化を介して抗菌遺伝子の発現を調節する可能性がある。ロシグリタゾンもまた、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）、具体的には、ＰＰＡＲ−γの活性化を達成し、ロシグリタゾンは抗炎症効果を有する。
【００３２】
定義
本発明の理解を容易にするために、いくつかの用語を以下に定義する。
【００３３】
本明細書において、用語「抗菌ペプチド」とは、α−又はβ−デフェンシン（例えば、ヒトデフェンシン５についてはＨＤ−５）、又は空間的に分離している疎水性の、正に帯電した残基を有する小さなポリペプチドのいずれかを指す。
【００３４】
本明細書において、用語「デフェンシンを活性化する」とは、デフェンシンを活性化する任意の分子に関連して用いられる場合、α−又はβ−デフェンシンの遺伝子発現を誘導する分子（即ち、ＰＰＡＲ−γアゴニスト）を指す。
【００３５】
本明細書において、用語「プライマー」とは、核酸鎖に対して相補的であるプライマー伸長産物の合成が誘導される条件下に置かれた場合に、合成の開始点として作用できる合成オリゴヌクレオチドを指す。
【００３６】
本明細書において、用語「ポリメラーゼ連鎖反応」（本明細書において以下、「ＰＣＲ」）とは、クローニング又は精製を伴わず、ゲノムＤＮＡの混合物中で標的配列のセグメントを増幅するための方法である。２種のプライマーは、二本鎖標的配列のそれらのそれぞれの鎖に対して相補的である。
【００３７】
本明細書において、用語「構造類似体」とは、分子構造が、そのＰＰＡＲ−γ受容体との結合能力に関して５−ＡＳＡの模倣体として作用する化合物に関する。特に、その構造が類似の種類の水素結合及びＰＰＡＲ−γ受容体での静電相互作用を可能にする化合物。
【００３８】
本明細書において、用語「Ｃａｃｏ−２細胞」とは、ヒトコーカサス人種結腸腺癌細胞を指す。
【００３９】
本明細書において、用語「ロシグリタゾン」とは、ＰＰＡＲ−γの高度に選択的な、強力な化学アゴニストを指す。本明細書において、用語「上皮」とは、皮膚の表面及び消化管の内壁などの臓器表面を覆う細胞層からなる身体組織を指す。
【００４０】
本明細書において、用語「粘膜」とは、吸収及び分泌に関与している、ほとんど内胚葉起源の内張りであり、上皮で覆われている粘液性の膜を指す。粘膜は、外部環境に曝されている種々の身体の腔及び内臓の内側を覆っている。それらは、鼻孔、唇、耳、生殖器部及び肛門で皮膚と接続して見られる。
【００４１】
本発明の目的
ＰＰＡＲ−γ受容体を刺激して、腸管において腸内デフェンシン発現を誘導できるＰＰＡＲ−γアゴニストを提供することが本発明の一目的である。
【００４２】
ＰＰＡＲ−γ受容体を刺激して、上皮又はＰＰＡＲ−γ受容体が見られるその他の組織、特に、皮膚、口腔、鼻、眼の上皮及びその他の上皮粘膜、例えば、膣粘膜においてデフェンシン発現を誘導できるＰＰＡＲ−γアゴニストを提供することが本発明のさらなる目的である。
【００４３】
５−ＡＳＡ、ロシグリタゾン、それらの誘導体及び腸管における腸内ＣＡＭＰ発現、特に、デフェンシン発現を誘導するための刺激物質として使用するためにＰＰＡＲ受容体に対して活性であるとわかった一連の化合物を含むそれらの一連の構造類似体などのＰＰＡＲ−γアゴニストを提供することが本発明の一目的である。
【００４４】
ＰＰＡＲ−γ受容体を刺激して、上皮又はＰＰＡＲ−γ受容体が見られるその他の組織、特に、皮膚、口腔、鼻、眼の上皮及びその他の上皮粘膜、例えば、膣粘膜においてデフェンシン発現を誘導できるＰＰＡＲ−γアゴニストを提供することが本発明のさらなる目的である。
【００４５】
ＣＡＭＰ発現を刺激することによって微生物を死滅させることができる化合物を提供することが、本発明のもう１つの目的である。ＣＡＭＰは、デフェンシン及び／又はカテリシジンであり得る。微生物とは、細菌、ウイルス、真菌及びその他の感染性病原体を死滅させることができる物質である。
【００４６】
ＣＡＭＰの発現によって身体の防御機構を増強する化合物をさらに提供することがさらなる目的である。ＣＡＭＰは、デフェンシン及び／又はカテリシジンであり得る。
【００４７】
クローン病、潰瘍性大腸炎、インテスティナル・バウエル・シンドローム（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｂｏｗｅｌ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）及び急性憩室炎などの消化管の状態の治療介入において使用するための化合物を提供することが、本発明のなおさらなる目的である。
【００４８】
結腸憩室症、分類不能大腸炎及び感染性大腸炎に冒されている患者において、急性憩室炎などの状態の予防のための治療介入を提供することが、本発明のさらなる目的である。
【００４９】
膿痂疹、丹毒、皮膚炎、毛包炎及び尋常性ざ瘡などの皮膚炎症状態及び感染の治療介入において使用するための化合物を提供することが、本発明のなおさらなる目的である。
【００５０】
眼、口腔、鼻又は膣粘膜を侵すものなどの粘膜の炎症状態及び感染、特に、眼の炎症及び感染、歯周病、アレルギー性及び非アレルギー性鼻炎及び細菌性膣疾患などの状態の治療介入において使用するための化合物を提供することが、本発明のなおさらなる目的である。
【００５１】
このような疾患の治療及び予防のための薬剤の調製において使用するための化合物を提供することが、本発明のさらなる目的である。
【００５２】
感受性個体の消化管におけるＣＡＭＰ発現の調節に基づいた新規治療戦略の開発を可能にする方法を提供することが、本発明のさらなる目的である。抗炎症効果、抗生物質効果及び／又は抗菌効果を有する化合物は、ＣＡＭＰ発現、特に、デフェンシン発現の刺激によって同定できる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００５３】
ＣＡＭＰ発現のモジュレーターを提供することが、本発明の一目的である。
【課題を解決するための手段】
【００５４】
本発明によれば、ＰＰＡＲ−γに対して作用するさまざまな化学物質を使用して、ＣＡＭＰ産生を誘導する方法が提供される。このような化合物を、ＰＰＡＲ−γ受容体を有する組織、例えば、上皮及び／又は粘膜におけるＣＡＭＰ発現の誘導に使用できる。特に、これらの化合物を用いて腸管において腸内ＣＡＭＰ発現を誘導できる。デフェンシンは、ＣＡＭＰの例である。
【００５５】
本発明によれば、５−ＡＳＡ、ロシグリタゾン、誘導体及び組織におけるＣＡＭＰ発現、特に、デフェンシン発現を誘導するための刺激物質として使用するためにＰＰＡＲ−γ受容体に対して活性であるとわかった一連の化合物を含む一連の構造類似体などのＰＰＡＲ−γアゴニストが提供される。
【００５６】
本発明によれば、５−ＡＳＡ、ロシグリタゾン、誘導体並びにＰＰＡＲ−γ受容体を有する上皮及び／又は粘膜におけるＣＡＭＰ発現、特に、デフェンシン発現を誘導するための刺激物質として使用するためにＰＰＡＲ−γ受容体に対して活性であるとわかった一連の化合物を含む一連の構造類似体などのＰＰＡＲ−γアゴニストが提供される。
【００５７】
本発明によれば、５−ＡＳＡ、ロシグリタゾン、誘導体及び腸管における腸内ＣＡＭＰ発現、特に、デフェンシン発現を誘導するための刺激物質として使用するためにＰＰＡＲ−γ受容体に対して活性であるとわかった一連の化合物を含む一連の構造類似体などのＰＰＡＲ−γアゴニストが提供される。
【００５８】
本明細書に記載される化合物は、以下の一般式（Ｉ）：
【化１】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、−Ｈ又は１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択されるか、或いは、一緒になって５又は６個の原子を有する芳香族又は脂肪族環を形成し；
同一であっても異なっていてもよいＹ及びＺは、−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＯＲ３、−ＣＨ（ＯＲ３）ＣＯＯＨを含む群から選択され、ここで、Ｒ３は、Ｈ、フェニル、ベンジル、−ＣＦ３又は−ＣＦ２ＣＦ３、ビニル、アリル及び１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基から選択される］
或いは、
一般式（Ｉａ）の化合物：
【化２】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、Ｈ、−ＣｎＨ２ｎ−１（ここで、ｎ＝１〜６である）、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択されるか、或いは、一緒になって５又は６個の原子を有する芳香族又は脂肪族環を形成し；
Ｒ３は、−ＣＯ−ＣＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＨ、−ＯＲ６から選択され、ここで、Ｒ６は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基であり；
Ｒ４は、Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基、フェニル、ベンジル、−ＣＦ３又は−ＣＦ２ＣＦ３、ビニル又はアリルから選択され；Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８は、水素原子であるか、
或いは、
Ｒ３及びＲ４、Ｒ４及びＲ５、又はＲ７及びＲ８は一緒になって、Ｎ、Ｏを含む群から独立に選択される１〜２個のヘテロ原子を含む５又は６個の原子を有する、ベンゼン、芳香族又は脂肪族環と縮合している環を形成する］
に従って定義できる。
【００５９】
これらの化合物を、ＰＰＡＲ−γ受容体を有する組織、例えば、上皮及び／又は粘膜におけるＣＡＭＰ発現の誘導に使用できる。特に、これらの化合物を使用して、腸管において腸内ＣＡＭＰ発現を誘導できる。
【００６０】
一態様では、本発明によれば、このような方法において使用できる化合物として、以下の一般式（Ｉ）を含む化合物が挙げられる
【化３】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、−Ｈ又は１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択されるか、或いは、一緒になって５又は６個の原子を有する芳香族又は脂肪族環を形成し；
同一であっても異なっていてもよいＹ及びＺは、−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＯＲ３、−ＣＨ（ＯＲ３）ＣＯＯＨを含む群から選択され、ここで、Ｒ３は、Ｈ、フェニル、ベンジル、−ＣＦ３又は−ＣＦ２ＣＦ３、ビニル、アリル及び１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基から選択される］。
【００６１】
別の態様では、本発明はまた、以下の一般式（Ｉ＊）の化合物のサブグループの使用に関する
【化４】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、−Ｈ又は１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択され、
同一であっても異なっていてもよいＹ及びＺは、−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＯＲ３、−ＣＨ（ＯＲ３）ＣＯＯＨを含む群から選択され、ここで、Ｒ３は、Ｈ及び１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基から選択される］。
【００６２】
本発明のいくつかの実施形態では、Ｚ及びＹは異なっている。本発明のいくつかの実施形態では、Ｙ又はＺの少なくとも一方は、−ＣＯＯＨで終結する。したがって、本発明のいくつかの実施形態では、Ｙ又はＺ（また、いくつかの実施形態では、Ｙ又はＺの少なくとも一方、また、いくつかの実施形態では、Ｙ又はＺの一方のみ）が−ＣＯＯＨである。本発明のいくつかの実施形態では、Ｙ又はＺ（また、いくつかの実施形態では、Ｙ又はＺの少なくとも一方、また、いくつかの実施形態では、Ｙ又はＺの一方のみ）が−ＣＨ（ＯＲ３）ＣＯＯＨである。
【００６３】
さらに別の態様では、本発明はまた、同一であっても異なっていてもよいＹ及びＺが、−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＯＲ３、−ＣＨ（ＯＲ３）ＣＯＯＨを含む群から選択される点を除いて式（Ｉ）及び（Ｉ＊）の両方に従う、本発明の方法における化合物の使用に関する。
【００６４】
本発明のいくつかの実施形態では、Ｙが−Ｈであり、Ｚが−ＣＨ（ＯＨ）ＣＯＯＨである場合は、基ＮＲ１Ｒ２は３’位で接続していてもよい。
【００６５】
本発明のその他の実施形態では、Ｚが−ＯＣＨ３であり、Ｙが−ＣＯＯＨである場合は、基ＮＲ１Ｒ２は４’位で接続していてもよい。
【００６６】
本発明のいくつかの実施形態では、Ｙが−Ｈであり、Ｚが−ＣＨ（ＯＣＨ３）ＣＯＯＨである場合には、基ＮＲ１Ｒ２は４’位で接続していてもよい。
【００６７】
特に、前記の１〜６個の炭素原子を有する直鎖又は分岐アルキル基は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣｎＨ２ｎ−１（ここで、ｎ＝１〜６である）から選択され得る。
【００６８】
式（Ｉ）及び（Ｉ＊）の化合物は、以下を含む群から選択され得る：
３−（３’−アミノフェニル）２−ヒドロキシプロパン酸（化合物２０）
２−（４−アミノフェニル）２−メトキシ酢酸（化合物２３）
２−（３−アミノフェニル）２−エトキシ酢酸（化合物３２）
２−（４−アミノフェニル）２−エトキシ酢酸（化合物３３）
３−（４’−アミノフェニル）２−メトキシプロピオン酸（化合物３４）「Ｒ３４」
３−（４’−アミノフェニル）２−エトキシプロピオン酸（化合物３９）
３−（３’−アミノフェニル）２−エトキシプロピオン酸（化合物４０）。
【００６９】
上記の化合物名は、以下のように標準化学命名法でも書くことができる（この命名法を本文を通じて用いる）：
（±）−２−ヒドロキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物２０）
（±）−２−メトキシ−２−（４’−アミノフェニル）酢酸（化合物２３）
（±）−２−エトキシ−２−（３’−アミノフェニル）酢酸（化合物３２）
（±）−２−エトキシ−２−（４’−アミノフェニル）酢酸（化合物３３）
（±）−２−メトキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「Ｒ３４」（ラセミ体）
（±）−２−エトキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３９）
（±）−２−エトキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物４０）。
【００７０】
特に、本発明の方法で用いられる化合物は、以下のラセミ混合物のエナンチオマーであり得る：
（Ｒ，Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−（３−アミノフェニル）酢酸（化合物１０）
（Ｒ，Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−（４−アミノフェニル）酢酸（化合物１１）
（Ｒ，Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物２１）
（Ｒ，Ｓ）−２−メトキシ−２−（３’−アミノフェニル）酢酸（化合物２２）
（Ｒ，Ｓ）−２−メトキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３５）
（Ｒ，Ｓ）−２−メトキシ−３−（３−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「Ｒ３４」（ラセミ体）
【００７１】
Ｒ３４のエナンチオマー：
（＋）２−Ｓ−メトキシ−３−（３−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「３４−Ｅ１」又は「Ｅ−１」。
（−）２−Ｒ−メトキシ−３−（３−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「３４−Ｅ２」又は「Ｅ−２」
【００７２】
化合物のラセミ混合物も、本明細書に記載される方法において使用してよい。ラセミ混合物の例として、それだけには限らないが以下が挙げられる：
（±）−２−ヒドロキシ−２−（３’−アミノフェニル）酢酸（化合物１０）
（±）−２−ヒドロキシ−２−（４’−アミノフェニル）酢酸（化合物１１）
（±）−２−ヒドロキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物２１）
（±）−２−メトキシ−２−（３’−アミノフェニル）酢酸（化合物２２）
（±）−２−メトキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３５）
（±）−２−メトキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「Ｒ３４」（ラセミ体）。
【００７３】
本明細書に記載される任意の立体異性化合物について、一方のエナンチオマーを、もう一方を上回って過剰に含有する組成物も、本明細書に記載される方法において使用してよい。
【００７４】
一実施形態によれば、本発明の方法において使用してよい化合物として、以下の式（ＩＩ）に従う、式（Ｉ）の化合物のＲ３がＨであり得るものが挙げられる
【化５】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＹは、上記に定義のとおりである］。
【００７５】
別の実施形態によれば、使用してよい化合物として、以下の式（ＩＩＩ）に従う、式（Ｉ）の化合物のＲ３が−ＣＨ３であり得るものが挙げられる
【化６】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＹは、上記に定義のとおりである］。
【００７６】
さらに別の実施形態によれば、使用してよい化合物として、以下の式（ＩＶ）に従う、式（Ｉ）の化合物のＲ３が−ＣＨ２ＣＨ３であり得るものが挙げられる
【化７】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＹは、上記に定義のとおりである］。
【００７７】
さらに別の実施形態によれば、使用してよい化合物として、以下の式（Ｖ）に従う、式（Ｉ）の化合物のＲ３が−ＣＨ２ＣＨ３であり得るものが挙げられる
【化８】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＹは、上記に定義のとおりである］。
【００７８】
さらに別の実施形態によれば、使用してよい化合物として、以下の式（ＶＩ）に従う、式（Ｉ）の化合物のＲ３が−ＣＨ３であり得るものが挙げられる
【化９】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＹは、上記に定義のとおりである］。
【００７９】
本発明によれば、式（ＶＩ）を有する（Ｒ，Ｓ）−２−メトキシ−３−（３−アミノフェニル）プロピオン酸、即ち、（−）２−Ｒ−メトキシ−３−（３−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「３４−Ｅ２」又は「Ｅ−２」の１種のエナンチオマーは、腸管におけるデフェンシン発現誘導において特に有効であるとわかった（図８＆９）。本発明によれば、一部のエナンチオマーは、その立体異性体よりも優れたＣＡＭＰ発現を提供し得る。その他の実施形態では、一部のラセミ混合物は、その個々の立体異性体よりも優れたＣＡＭＰ発現を提供し得る。
【００８０】
さらに別の実施形態によれば、使用してよい化合物として、以下の式（ＶＩＩ）に従う、式（Ｉ）の化合物のＲ３が−ＣＨ３であり得るものが挙げられる
【化１０】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＹは、上記に定義のとおりである］。
【００８１】
さらに別の実施形態によれば、使用してよい化合物として、以下の式（ＶＩＩＩ）に従う、式（Ｉ）の化合物のＲ３が−ＣＨ２ＣＨ３であり得るものが挙げられる
【化１１】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＹは、上記に定義のとおりである］。
【００８２】
さらに別の実施形態によれば、使用してよい化合物として、以下の式（ＩＸ）に従う、式（Ｉ）の化合物のＲ３が−ＣＨ２ＣＨ３であり得るものが挙げられる
【化１２】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＹは、上記に定義のとおりである］。
【００８３】
別の実施形態によれば、使用してよい化合物として、以下の式（Ｘ）に従う、式（Ｉ）の化合物のＲ３が−ＣＨ３であり得るものが挙げられる
【化１３】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＹは、上記に定義のとおりである］。
【００８４】
本発明の方法において使用してよい式（Ｉａ）の化合物は、以下を含む群から選択され得ることが好ましく：
（±）−２−ヒドロキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物２０）
（±）−２−メトキシ−２−（４’−アミノフェニル）酢酸（化合物２３）
（±）−２−エトキシ−２−（３’−アミノフェニル）酢酸（化合物３２）
（±）−２−エトキシ−２−（４’−アミノフェニル）酢酸（化合物３３）
（±）−２−メトキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「Ｒ３４」
（＋）２−Ｓ−メトキシ−３−（３−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「３４−Ｅ１」又は「Ｅ−１」
（−）２−Ｒ−メトキシ−３−（３−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「３４−Ｅ２」又は「Ｅ−２」
（±）−２−エトキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３９）
（±）−２−エトキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物４０）、それらの式は先に示されている。
【００８５】
本発明によれば、以下の一般式（Ｉａ）の化合物を、本明細書に記載される本発明の方法において使用してよい：
【化１４】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、Ｈ、−ＣｎＨ２ｎ−１（ここで、ｎ＝１〜６である）、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択されるか、或いは、一緒になって５又は６個の原子を有する芳香族又は脂肪族環を形成し；
Ｒ３は、−ＣＯ−ＣＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＨ、−ＯＲ６から選択され、ここで、Ｒ６は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基であり；
Ｒ４は、Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基、フェニル、ベンジル、−ＣＦ３又は−ＣＦ２ＣＦ３、ビニル又はアリルから選択され；Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８は、水素原子であるか、
或いは、
Ｒ３及びＲ４、Ｒ４及びＲ５、又はＲ７及びＲ８は一緒になって、Ｎ、Ｏを含む群から独立に選択される１〜２個のヘテロ原子を含む５又は６個の原子を有する、ベンゼン、芳香族又は脂肪族環と縮合している環を形成する］。
【００８６】
本発明はまた、以下の一般式（Ｉａ＊）の化合物の特定のサブグループの本発明の方法における使用に関する
【化１５】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、Ｈ、−ＣＯ−ＣＨ３、−ＣｎＨ２ｎ−１（ここで、ｎ＝１〜６である）、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択されるか、或いは、一緒になって５又は６個の原子を有する芳香族又は脂肪族環を形成し；
Ｒ３は、−ＮＨＯＨ、−ＯＨ、−ＯＲ６から選択され、ここで、Ｒ６は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基であり；
Ｒ４は、Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基から選択され；Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８は、水素原子であるか、
或いは、
Ｒ３及びＲ４、Ｒ４及びＲ５、又はＲ７及びＲ８は一緒になって、Ｎ、Ｏを含む群から独立に選択される１〜２個のヘテロ原子を含む５又は６個の原子を有する、ベンゼン、芳香族又は脂肪族環と縮合している環を形成する］。
【００８７】
１〜６個の炭素原子を有する式（Ｉａ）又は（Ｉａ＊）の前記の直鎖若しくは分岐アルキル基は、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、イソプロピル、プロピル、ＣｎＨ２ｎ−１（ここで、ｎ＝１〜６である）から選択され得る。
【００８８】
本発明の式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のいくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ７及びＲ８が環を形成し得るものが挙げられる。したがって、Ｒ３及びＲ４又はＲ４及びＲ５は一緒になって、Ｎ、Ｏを含む群から独立に選択される１〜２個のヘテロ原子を含む５又は６個の原子を有する、ベンゼン、芳香族又は脂肪族環と縮合している環を形成してもよい。
【００８９】
本発明の式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のいくつかの実施形態では、Ｒ７及びＲ８は、Ｒ４がＣＨ３である場合を除いて環を形成してもよい。本発明の式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のいくつかの実施形態では、Ｒ７及びＲ８は、Ｒ４がＨから選択される場合に環を形成し得る。いくつかの実施形態では、本発明は、本発明によって提供されるケトレン（ｋｅｔｏｌｅｎｅ）に関する。
【００９０】
いくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ１及びＲ２が環を形成し得る式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のものが挙げられる。したがって、同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、−Ｈ、−ＣｎＨ２ｎ−１、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基（ここで、ｎ＝１〜６である）を含む群から選択され得る。
【００９１】
いくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ４が分岐していてもよい式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のものが挙げられる。したがって、Ｒ４は、Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖アルキル基から選択されてもよく；Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８は水素原子である。
【００９２】
いくつかの実施形態では、アミノ基がフェニル環の４’位にある場合にＲ４は分岐していてもよい。
【００９３】
いくつかの実施形態では、直鎖アルキル基は１個のみの炭素原子を有し得る（即ち、ＣＨ３）。
【００９４】
本発明の式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のいくつかの実施形態では、Ｒ１及びＲ２が−Ｈである。本発明の式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のいくつかの実施形態では、Ｒ２はＲ１と異なっていなくてもよい。
【００９５】
いくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ３が−ＯＨであり、Ｒ４が、−Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する分岐アルキル基からなる群から選択される式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のもの、又はＲ３及びＲ４が一緒になって、Ｎ、Ｏを含む群から独立に選択される１〜２個のヘテロ原子を含む５又は６個の原子を有する、ベンゼン、芳香族環又は環と縮合している環を形成する式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のものが挙げられる。いくつかの実施形態では、分岐アルキル基は、−ＣＨ（ＣＨ３）２であり得る。いくつかの実施形態では、分岐アルキル基は、Ｒ８位の−ＣＨ（ＣＨ３）２であり得る。いくつかの実施形態では、Ｒ３及びＲ４は、単一のＯ原子を含む５員の脂肪族環を形成する。
【００９６】
いくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ３が−ＯＨであり、Ｒ４が−Ｈであり、基ＮＲ１Ｒ２が４位であり得る（Ｒ５又はＲ８であるはずである）、式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のものが挙げられる。いくつかの実施形態では、これは特に、Ｒ１及びＲ２が−ＣＨ３である場合であり得る。
【００９７】
いくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ１及びＲ２が同一である式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のものが挙げられる。
【００９８】
いくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ３が−ＯＨであり、Ｒ４が−Ｈであり、基ＮＲ１Ｒ２がＲ５であり得る（Ｒ８であるはずである）、式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のものが挙げられる。いくつかの実施形態では、これはＲ１及びＲ２が−Ｈであるものであり得る。
【００９９】
いくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ３が−ＮＨＯＨであり、Ｒ４が１〜６個の炭素原子を有する直鎖又は分岐アルキル基である（又は、式（Ｉ）の場合には、フェニル、ベンジル、−ＣＦ３又は−ＣＦ２ＣＦ３、ビニル又はアリル）式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のもの、Ｒ３及びＲ４が一緒になって、Ｎ、Ｏを含む群から独立に選択される１〜２個のヘテロ原子を含む５又は６個の原子を有する、ベンゼン、芳香族又は脂肪族環と縮合している環を形成する式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のものが挙げられる。
【０１００】
いくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ３が−ＮＨＯＨであり、Ｒ４が２個の炭素原子を有する直鎖又は分岐アルキル基であり、基ＮＲ１Ｒ２が４位であってもよく、Ｒ８位であり得る、式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のものが挙げられる。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ３が−ＮＨＯＨであり、Ｒ４が−Ｈであり、基ＮＲ１Ｒ２がＲ８であってもよく、４’位であるはずである、式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のものが挙げられる。一実施形態によれば、式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）の化合物のＲ３及びＲ４が、以下の式（ＸＩＩ）の環を形成し得る
【化１６】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ７及びＲ８は、上記に定義のとおりである］。
【０１０２】
別の実施形態によれば、式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）の使用される化合物のＲ４及びＲ５は、以下の式（ＸＩＩ）の環を形成し得る
【化１７】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ７及びＲ８は、上記に定義のとおりである］。
【０１０３】
さらなる実施形態によれば、式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）の使用される化合物のＲ７及びＲ８は、以下の式（ＸＩＩＩ）又は（ＸＩＶ）の環を形成し得る
【化１８】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、上記に定義のとおりである］。
【０１０４】
特に、式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）の化合物は、本発明に記載される方法に従って使用でき、以下を含む群から選択され得る：
４−アミノ−Ｎ−ヒドロキシ−２−メトキシベンズアミド（化合物１３）
５−アミノ−Ｎ−ヒドロキシ−２−メトキシベンズアミド（化合物１４）
５−アミノ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−カルボン酸（化合物１７）
５−アミノ−２−エトキシ−Ｎ−ヒドロキシベンズアミド（化合物２６）
６−アミノ−２，２−ジメチル−４Ｈ−ベンゾ［１，３］ジオキシン−４−オン（化合物２８）
１，２，３，４−テトラヒドロ−６−ヒドロキシキノリン−５−カルボン酸（化合物２９）
５−アミノ−２−イソプロポキシ安息香酸（化合物３１）
６−メトキシキノリン−５−カルボン酸（化合物３６）
６−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−５−カルボン酸（化合物３７）
５−ジイソプロピルアミノサリチル酸（化合物３８）
４−ジイソプロピルアミノサリチル酸（化合物４２）。
【０１０５】
本発明はまた、Ｒ１及びＲ２が、−Ｈ及び−ＣＨ（ＣＨ３）２からなる群から選択される化合物の使用を提供する。Ｒ１及びＲ２は、両方とも同一であってもよい。いくつかの実施形態では、Ｒ１及びＲ２は、−ＣＨ（ＣＨ３）２であり得る。
【０１０６】
一実施例は、以下の化合物（化合物３８）の使用を含む：
【化１９】
【０１０７】
本発明のその他の実施形態では、Ｒ１及びＲ２は、両方とも−Ｈである。
【０１０８】
本発明はまた、Ｒ３が−ＮＨＯＨ及び−ＯＨからなる群から選択される化合物の使用を提供する。いくつかの実施形態では、Ｒ３は−ＮＨＯＨであり得る。一実施例は、以下の化合物（化合物１３）を含む：
【化２０】
【０１０９】
さらなる実施例は、以下の化合物（化合物１４）の使用を含む：
【化２１】
【０１１０】
さらなる実施例は、以下の化合物（化合物２６）の使用を含む：
【化２２】
【０１１１】
本発明のいくつかの実施形態では、Ｒ３は、−ＯＨであり得る。
【０１１２】
適した実施例は、以下の化合物（化合物１７）の使用を含む：
【化２３】
【０１１３】
さらなる実施例は、以下の化合物（化合物３１）の使用を含む：
【化２４】
【０１１４】
本発明のいくつかの実施形態では、Ｒ４は−Ｈであり得る。本発明のいくつかの実施形態では、Ｒ４はＣＨ３であり得る。本発明のいくつかの実施形態では、Ｒ４は−ＣＨ２ＣＨ３であり得る。本発明のいくつかの実施形態では、Ｒ４は−ＣＨ（ＣＨ３）２であり得る。
【０１１５】
さらなる実施例は、以下の化合物（化合物２８）の使用を含む：
【化２５】
【０１１６】
本発明のいくつかの実施形態では、Ｒ３及びＲ４は一緒になって、１個のヘテロ原子Ｏ（酸素）を含む５又は６個の原子のベンゼンと縮合している脂肪族環を形成し得る。
【０１１７】
本発明はまた、ヒト及び／又は哺乳類（例えば、げっ歯類、家畜、家庭内ペット、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ヒツジ、ウシ、ウマ）の治療の方法に関する。
【０１１８】
特に、上記の具体的な化合物の使用は別として、以下の化合物を本明細書に記載される方法及び適用に使用できる：
５−アミノサリチロ−ヒドロキサム酸（化合物５）
３−ジメチルアミノサリチル酸（化合物６）
２−メトキシ−４−アミノ安息香酸（化合物７）
２−メトキシ−５−アミノ安息香酸（化合物８）
５−メチルアミノサリチル酸（化合物９）
４−メチルアミノサリチル酸（化合物１２）
４−アセチルアミノサリチル酸（化合物１６）
２−エトキシ−４−アミノ安息香酸（化合物１８）
２−エトキシ−５−アミノ安息香酸（化合物１９）
４−ジメチルアミノサリチル酸（化合物２４）
２−エトキシ−４−アミノベンゾイルヒドロキサム酸（化合物２５）
６−ヒドロキシキノリン−５−カルボン酸（化合物２７）
２−（２−プロピル）オキシ−４−アミノ安息香酸（化合物３０）
４−（１−ピペラジニル）サリチル酸（化合物４１）。
【０１１９】
上記の化合物の使用に加え、本発明は、以下の化合物（接頭辞「２＿」に続く化合物番号）の使用を提供する：
【化２６】
【０１２０】
本発明によれば、クローン病、潰瘍性大腸炎、インテスティナル・バウエル・シンドローム（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｂｏｗｅｌ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）及び急性憩室炎などの消化管の状態の治療介入において使用するための化合物が提供される。
【０１２１】
本発明の一態様では、結腸憩室症、分類不能大腸炎及び感染性大腸炎に冒されている患者において、急性憩室炎などの状態の予防において使用するための化合物が提供される。
【０１２２】
本発明の別の態様では、膿痂疹、丹毒、皮膚炎、毛包炎及び尋常性ざ瘡などの皮膚炎症状態及び感染の治療介入において使用するための化合物が提供される。
【０１２３】
本発明の別の態様では、眼、口腔、鼻又は膣粘膜を侵すもの、例えば、眼の炎症及び感染、歯周病、アレルギー性及び非アレルギー性鼻炎及び細菌性膣疾患などの粘膜の炎症状態及び感染の治療介入において使用するための化合物が提供される。
【０１２４】
本発明の化合物は、ＰＰＡＲ−γを刺激してＣＡＭＰを産生するために、医療分野において使用できることが有利である。ＣＡＭＰＳとして、デフェンシン及び／又はカテリシジンが挙げられる。したがって、本発明の別の態様は、有効成分として上記で定義される１種又は複数の化合物を、１種又は複数の製薬上許容される賦形剤又はアジュバントと組み合わせて含む医薬組成物に関する。
【０１２５】
別の態様では、本発明は、クローン病、潰瘍性大腸炎、インテスティナル・バウエル・シンドローム（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｂｏｗｅｌ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、急性憩室炎などの疾患の治療及び予防、並びに結腸憩室症、分類不能大腸炎及び感染性大腸炎に冒されている患者における急性憩室炎などの状態の予防のための薬剤の調製において使用するための化合物を提供する。
【０１２６】
別の態様では、本発明は、膿痂疹、丹毒、皮膚炎、毛包炎及び尋常性ざ瘡などの皮膚炎症状態及び感染を含む疾患の治療及び予防のための薬剤の調製において使用するための化合物を提供する。
【０１２７】
別の態様では、本発明は、眼、口腔、鼻又は膣粘膜を侵すもの、例えば、眼の炎症及び感染、歯周病、アレルギー性及び非アレルギー性鼻炎及び細菌性膣疾患などの粘膜の炎症状態及び感染の治療及び予防のための薬剤の調製において使用するための化合物を提供する。
【０１２８】
本発明はまた、ヒト及び／又は哺乳類（例えば、げっ歯類、家畜、家庭内ペット、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ヒツジ、ウシ、ウマ）の治療の方法に関する。
【０１２９】
さらに別の態様では、本発明は、感受性個体の消化管におけるＣＡＭＰ発現の調節に基づいた新規治療戦略の開発を可能にする方法を提供する。本発明は、抗炎症効果及び／又は抗菌効果を有する可能性がある化合物のスクリーニングを提供する。このような化合物リードは、ＣＡＭＰ発現、特に、デフェンシン発現の刺激によって同定できる。
【０１３０】
特定の態様では、本発明は、ＣＡＭＰ発現、特に、デフェンシン発現のモジュレーター及びアップレギュレーターを提供する。ＣＡＭＰ発現、特に、デフェンシン発現のアップレギュレーション又は刺激は、身体における抗炎症効果及び抗菌効果につながる。これは特に、抗菌効果を引き起こすデフェンシン産生に関する場合であり、これでは刺激性化合物が、デフェンシン産生をもたらし、身体の生理学的／生化学的経路を用いて、抗菌効果が誘導される。
【図面の簡単な説明】
【０１３１】
【図１】定量ＰＣＲ分析によって確認されるが、ロシグリタゾンは、Ｃａｃｏ−２細胞においてＨＤ−５を活性化することを示す図である。
【図２】定量ＰＣＲ分析によって確認されるが、化合物１４は、Ｃａｃｏ−２細胞においてＨＤ−５を活性化することを示す図である。
【図３】定量ＰＣＲ分析によって確認されるが、化合物４０は、Ｃａｃｏ−２細胞においてＨＤ−５を活性化することを示す図である。
【図４】定量ＰＣＲ分析によって確認されるが、化合物３９は、Ｃａｃｏ−２細胞においてＨＤ−５を活性化することを示す図である。
【図５】定量ＰＣＲ分析によって確認されるが、メサラジンは、Ｃａｃｏ−２細胞においてＨＤ−５を活性化することを示す図である。
【図６】ヒトデフェンシン及びカテリシジンの構造を示す図である。 Ａ．腸α−デフェンシンＨＤ−５、β−デフェンシンＨＢＤ−２及びカテリシジンｈＣＡＰ−１８のヒト配列を示す図である。灰色の矢印は、ＨＤ−５及びカテリシジンの切断部位を表す。概略図と三次元構造（青色の棒）の両方で、α及びβ−デフェンシンの３つの分子内ジスルフィド結合（Ｓ−Ｓ）のパターンが記されている。 Ｂ．デフェンシン及びカテリシジンの三次元解（ｈ−ＢＤ２及びカテリシジン）又は結晶（ＨＤ−５）構造を示す図である。例示のために用いられたタンパク質データバンク受託番号は、以下のとおりである：ＨＤ−５の１ＺＭＰ、ｈ−ＢＤ２の１Ｅ４Ｑ及びＬＬ−３７の２ＦＣＧ（ｈＣＡＰ−１８のＣ末端断片）。βターンは橙で表されており、αヘリックスは赤で表されている。分子の疎水性が示されている。
【図７】慢性的腸炎の病態生理学モデルを示す図である。微生物及び／又はその産物が、ＴＬＲ及び／又はＮＯＤによって検知されると（図の左側）、ＮＦ−κＢ及び／又はその他の転写因子（本文参照のこと）の作用によってＣＡＭＰが合成される。ＣＡＭＰは、その分泌及び細胞外プロセシングの後、（ｉ）炎症細胞の寛容及び補充を促進し、（ｉｉ）微生物病原体の浸潤を防ぎ、（ｉｉｉ）慢性的腸炎の発生から保護する。異常な抗菌ペプチド合成及び／又は機能は、獲得免疫系の異常な活性化、及び微生物の脅威及び／又は自然免疫の低下（即ち、ＮＯＤ２突然変異）による腸炎につながり得る（図の右側）。
【図８】５−ＡＳＡ、ロシグリタゾン、ラセミＲ３４＆エナンチオマー３４−Ｅ２は、Ｃａｃｏ−２細胞においてｈＢＤ１（ヒトデフェンシン−１）の発現を誘導することを示す図である。
【図９】健常マウス（ｎ＝５）における、ｍＲＮＡレベルでの、ＰＰＡＲ−γ及びＬＬ３７（デフェンシン）レベルに対するラセミＲ３４＆エナンチオマー３４−Ｅ１＆３４−Ｅ２の効果を示す図である。健常マウスにおける１０日間の間の浣腸による５−ＡＳＡ（３０ｍＭ）、Ｒ３４（１ｍＭ）、Ｅｌ及びＥ２（１ｍＭ）の投与は、結腸ＰＰＡＲγ ｍＲＮＡ及びデフェンシン発現を誘導した。
【図１０】表１を示す図である。デフェンシン及びカテリシジンの多用途の機能。α／β−デフェンシン及びカテリシジンの機能が、表に列挙されており、本文において論じられている。
【発明を実施するための形態】
【０１３２】
Ｗｎｔ／Ｔｃｆ／β−カテニンシグナル伝達経路に対する、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲ−γ）の直接的な負の役割を考え、デフェンシン生合成を調査するためにＰＰＡＲ−γ活性化を調べた。
【０１３３】
実験データ
定量ＰＣＲ分析によって調べられるように、試験したＰＰＡＲ−γアゴニスト、ロシグリタゾン（１μＭで、１、３又は６時間）及びその他のものは、Ｃａｃｏ−２細胞においてＨＤ−５を活性化する（図１〜５）。
【０１３４】
方法
培養腸上皮細胞系、即ち、Ｃａｃｏ−２（ヒト起源の）及びＩＣｃｌ２（マウス起源の）を、ＧＳＫ−３阻害剤ＬｉＣｌ（２０μＭ）又はホスファターゼ阻害剤カリクリン（５０ｎＭ）で処理し、続いて、ＰＰＡＲ−γアゴニスト、例えば、ロシグリタゾン（１μＭ）で刺激した、又はしなかった。
【０１３５】
デフェンシン並びにＷｎｔ及びＰＰＡＲ−γシグナル伝達経路両方の既知標的遺伝子の発現を、定量的リアルタイムＰＣＲによって調査した。ＧＳＫ３、β−カテニン、ＮＦ−κＢ、ＥＲＫ１／２、ＳＡＰＫ／ＪＮＫ及びｐ３８の活性化を、特異的免疫ブロット法によって測定した。
【０１３６】
ＰＰＡＲ−γの抗菌的役割を調査するために、Ｒａｗマクロファージ細胞系において、クローン病関連大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）（ＬＦ８２）の細胞内複製を、ロシグリタゾンでの刺激時又は非刺激時に測定した。
【０１３７】
結果
ロシグリタゾン及びその他のＰＰＡＲ−γアクチベーターととものインキュベーションによって、腸上皮細胞によるα−（ＨＤ−５及びＨＤ−６）及びβ−（Ｄｅｆｂ１０）デフェンシンの両方の発現が大幅に増加した（図３）。このような抗菌遺伝子発現は、β−カテニン分解を促進するカリクリンによる同時刺激後に相乗作用を与えられた。したがって、ロシグリタゾンによるＰＰＡＲ−γ活性化を介するＬＦ８２の細胞内複製の減少が観察された。
【０１３８】
逆に、Ｗｎｔ／Ｔｃｆ／β−カテニン標的遺伝子、サイクリン−Ｄ１の発現及びβ−カテニンの安定性は、カリクリン及びロシグリタゾン両方による刺激時に著しく低下した。
【０１３９】
最後に、ＬｉＣｌ、Ｗｎｔ／ＴＣＦ／β−カテニン依存性シグナル伝達経路のアクチベーターは、同時刺激時に、ロシグリタゾン誘導性デフェンシン遺伝子発現を妨げた。
【０１４０】
試験物質とのインキュベーションによって、腸上皮細胞によるα−（ＨＤ−５及びＨＤ−６）及びβ−（Ｄｅｆｂ１０）デフェンシン両方の発現が大幅に増大した（図３は、ロシグリタゾンの効果を示す）。したがって、ロシグリタゾンによるＰＰＡＲ−γ活性化による、ＬＦ８２の細胞内複製の減少が観察された。
【０１４１】
結論
総じて、結果は、ＰＰＡＲ−γ活性化は、Ｔｃｆ／β−カテニン複合体の形成を負に調節することによって抗菌性遺伝子プログラムの誘導を促進することを示す。これらの知見は、クローン病、潰瘍性大腸炎、インテスティナル・バウエル・シンドローム（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｂｏｗｅｌ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、急性憩室炎などの多数の胃腸障害におけるデフェンシン欠乏を補完することにおける、また、結腸憩室症、分類不能大腸炎及び感染性大腸炎に冒されている患者における急性憩室炎などの状態の予防ための、ＰＰＡＲ−γの治療的可能性を強調する。
【０１４２】
さらに、これらの知見は、その他の粘膜障害、例えば、それだけには限らないが、眼の炎症及び感染、歯周病、アレルギー性及び非アレルギー性鼻炎及び細菌性膣疾患などのもの及び膿痂疹、丹毒、皮膚炎、毛包炎及び尋常性ざ瘡などの皮膚炎症状態及び感染において、デフェンシン欠乏を補完することにおけるＰＰＡＲ−γアゴニストの治療的可能性を強調する。
【０１４３】
ラセミ化合物３４及びエナンチオマー３４−Ｅ１及び３４−Ｅ２を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ研究
材料
５−ＡＳＡは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ Ｑｕｅｎｔｉｎ Ｆａｌｌａｖｉｅｒ、Ｆｒａｎｃｅ）で購入した。ロシグリタゾンは、標準手順に従って実験室で合成した。ラセミ化合物３４及び化合物の２種のエナンチオマー、３４−Ｅｌ及び３４−Ｅ２は、Ｇｉｕｌｉａｎｉ ＳｐＡ（Ｍｉｌａｎｏ、Ｉｔａｌｙ）によって提供された。化合物は、ＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ）に再懸濁し、必要に応じて、１０Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨ＝７に調整した。
【０１４４】
結腸上皮細胞におけるｈＢＤ１デフェンシンの発現の調節
細胞系
結腸癌腫細胞系Ｃａｃｏ−２（ＡＴＣＣ ＨＴＢ−３９）を、それぞれ１０％又は２０％加熱−ＦＣＳ及び抗生物質を補給したＤＭＥＭで通常どおり増殖させた。細胞を、５％ ＣＯ２及び９５％相対湿度中、３７℃で、単層で増殖させ、インキュベートした。
【０１４５】
細胞を、５−ＡＳＡ、Ｒ３４、３４−Ｅ１及び３４−Ｅ２によって２４時間刺激した。製造業者の使用説明書に従ってＲｎｅａｓｙキット（Ｍａｃｈｅｒｅｙ Ｎａｇｅｌ、Ｈｏｅｒｄｔ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いて細胞から全ＲＮＡを単離した。ＲＮＡ定量は、分光光度法を用いて実施した。２０〜５０ユニットのＲＮアーゼ不含ＤＮアーゼＩ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ、ＵＳＡ）を用い、３７℃で３０分間処理した後、オリゴ−ｄＴプライマー（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＵＳＡ）を用いて一本鎖ｃＤＮＡを合成した。ＧｅｎｅＡｍｐ Ａｂｉｐｒｉｓｍ ７０００（Ａｐｐｌｅｒａ、Ｃｏｕｒｔａｂｏｅｕｆ、Ｆｒａｎｃｅ）で、ｈＢＤ１のヒト特異的オリゴヌクレオチド（Ｓ：５’−ＡＴＡＣＴＴＣＡＡＡＡＧＣＡＡＴＴＴＴＣＣＴＴＴＡＴ−３’；ＡＳ：５’−ＴＴｇＴＣＴＧＡＧＡＴＧＧＣＣＴＣＡｇｇＴｇｇＴＡＡＣ−３’）とともにＳＹＢＲグリーンＭａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｅｒａ、Ｃｏｕｒｔａｂｏｅｕｆ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いてｍＲＮＡを定量した。各アッセイにおいて、較正される対照及び鋳型を含まない対照を含めた。各サンプルを３連で実施した。ＳＹＢＲグリーン色素強度は、Ａｂｉｐｒｉｓｍ ７０００ ＳＤＳソフトウェア（Ａｐｐｌｅｒａ、Ｃｏｕｒｔａｂｏｅｕｆ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いて分析した。すべての結果は、影響を受けないヒトβ−アクチンのハウスキーピング遺伝子（Ｓ：５’−ＴＣＡＣＣＣＡＣＡＣＴｇＴｇＣＣＣＡＴＣＴＡＣｇ−３’；ＡＳ：５’−ＣＡｇＣｇｇＡＡＣＣｇＣＴＣＡＴＴｇＣＣＡＡＴｇ−３’）に対して標準化した。
【０１４６】
健常マウスにおけるβ−デフェンシン発現の評価
５−ＡＳＡ（３０ｍＭ）、ラセミＲ３４及び３４−Ｅ１＆３４−Ｅ２（１ｍＭ）を、８日間の直腸点滴注入によって投与した。死後、製造業者の使用説明書に従ってＲｎｅａｓｙキット（Ｍａｃｈｅｒｅｙ Ｎａｇｅｌ、Ｈｏｅｒｄｔ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いて、全マウス結腸組織から全ＲＮＡを単離した。ＲＮＡ定量は、分光光度法を用いて実施した。２０〜５０ユニットのＲＮアーゼ不含ＤＮアーゼＩ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ、ＵＳＡ）を用い、３７℃で３０分間処理した後、オリゴ−ｄＴプライマー（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＵＳＡ）を用いて一本鎖ｃＤＮＡを合成した。ＧｅｎｅＡｍｐ Ａｂｉｐｒｉｓｍ ７０００ （Ａｐｐｌｅｒａ、Ｃｏｕｒｔａｂｏｅｕｆ、Ｆｒａｎｃｅ）で、ＬＬ３７のマウス特異的オリゴヌクレオチド（Ｓ：５’−ｇＣＴｇＡＴＴＣＴＴＴＴｇＡＣＡＴＣＡｇＣＴｇＴＡＡ−３’ＡＳ：５’−ｇＣＣＡｇＣＣｇｇｇＡＡＡＴＴＴＴＣＴ−３’）とともにＳＹＢＲグリーンＭａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｅｒａ、Ｃｏｕｒｔａｂｏｅｕｆ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いてｍＲＮＡを定量した。各アッセイにおいて、較正された対照及び鋳型を含まない対照を含めた。各サンプルを３連で実施した。ＳＹＢＲグリーン色素強度は、Ａｂｉｐｒｉｓｍ ７０００ ＳＤＳソフトウェア（Ａｐｐｌｅｒａ、Ｃｏｕｒｔａｂｏｅｕｆ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いて分析した。すべての結果は、影響を受けないハウスキーピング遺伝子β−アクチン（Ｓ：５’−ｇｇｇＴＣＡｇＡＡｇｇＡＴＴＣＣＴＡＴｇ−３’；ＡＳ：５’ｇｇＴＣＴＣＡＡＡＣＡＴｇＡＴＣＴｇｇｇ−３’）に対して標準化した。
【０１４７】
ｉｎ ｖｉｖｏ研究
ラットにおける内臓痛の調節
動物
この研究には、体重１７５〜２００ｇの雄のスプラーグ−ドーリーラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、Ｉ’Ａｒｂｒｅｓｌｅ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いた。ラットは、実験前に実験室条件で１週間維持した。これらの動物を、ケージあたり５匹収容し、餌及び水は随意利用可能にした。すべての研究は、疼痛の研究のための国際協会の研究及び倫理問題）（Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｅｔｈｉｃａｌ Ｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｐａｉｎ）の委員会の提案（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ Ｍ、Ｐａｉｎ １９８３年；１６：１０９〜１１０頁）に従って実施した。動物への不快感を避ける又は最小にするために、特に、収容条件に関して十分な注意を払った。
【０１４８】
結腸感受性の評価
結腸に入れたバルーンの膨張による結腸直腸膨満（ＣＲＤ）の際の行動反応を誘導するのに必要な結腸内圧を測定することによって、動物における痛覚を評価した。この反応は、動物の身体の後部の上昇及び重篤な収縮に対応する明確に視認できる腹部収縮を特徴とする（Ａｌ Ｃｈａｅｒ、ｇａｓｔｒｏ ２０００年；Ｔａｒｒｅｒｉａｓ、ｐａｉｎ２００２年；Ｂｏｕｒｄｕら、２００５年）。手短には、ラットに、揮発性麻酔（２％イソフルラン）で麻酔し、バルーン（Ｂｏｕｒｄｕら、２００５年に先に記載されたように調製した）を、最小の侵襲的方法で、肛門から７ｃｍに直腸内挿入し、カテーテルを尾の付け根にテープで貼った。５分後、ラットを４０×４０ｃｍのプレキシグラスボックスの中央に入れ、カテーテルを電子バロスタット装置（Ｇ＆Ｊ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ Ｉｎｃ．、Ｔｏｒｏｎｔｏ、Ｃａｎａｄａ）に接続した。疼痛行動が示されるまで、又は８０ｍｍＨｇのカットオフ圧力に達するまで漸増圧力を連続的にかけた。
【０１４９】
動物の治療
化合物は、直腸内点滴注入によって毎日投与した。各浣腸のために、カテーテル（２ｍｍフォガティー（Ｆｏｇａｒｔｙ）カテーテル）を肛門から７ｃｍの結腸中に入れ、動物に、ＤＭＥＭ培地に最適濃度で再懸濁し、必要に応じて１０Ｎ ＮａＯＨによってｐＨ７に調整した５００μｌの化合物を２１日間与えた。対照動物には、培地単独を与えた。処理の２及び３週間後、内臓痛に対する化合物の効果を評価した。
【０１５０】
統計
すべての比較は、２つの独立サンプルの並べかえ検定を用いて分析した。統計は、ソフトウェアＳｔａｔＸａｃｔ（Ｃｙｔｅｌ Ｉｎｃ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ、ＵＳＡ）を用いて計算した。差異は、Ｐ値が＜０．０５である場合に統計的に有意と考えた。
【０１５１】
結論
得られたｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ結果は、５−ＡＳＡ及びＲ３４、Ｅ１及びＥ２が用いられた場合のデフェンシン発現の誘導を明らかに示す。特に、驚くべきことに、Ｅ１及びＥ２は、５−ＡＳＡと比較して高い効力を示した。
【０１５２】
（参考文献）
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＰＰＡＲ−γアゴニストによるデフェンシンの誘導に関する。デフェンシンは、皮膚、口腔、鼻、眼の上皮及び、膣粘膜を含むその他の上皮粘膜に免疫保護を提供する。特に、本発明は、上皮及び／又は粘膜におけるＰＰＡＲ受容体の活性化を介した、このようなアゴニストによる防御生成の刺激に関係している。より詳しくは、本発明は、腸管ＰＰＡＲ受容体の活性化による、このようなアゴニストによる腸デフェンシン生成の刺激に関係している。
【背景技術】
【０００２】
クローン病（ＣＤ）及び潰瘍性大腸炎（ＵＣ）をはじめとする炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、寛解及び増悪を伴う慢性再発性疾患であり、主に若年患者において発症する。炎症は、腸のすべての領域及び腸管粘膜のすべての層に、例えば、ＣＤでは、隣接する腸間膜脂肪組織及び肛門周辺部に影響を及ぼすことがある。これらの疾患は、臨床的には、長期の、変動する経過、多様な腸の症状、並びに重篤な局所合併症及び全身合併症の発生を特徴とする。ＣＤ及びＵＣの病因はまだわかっていないが、病的な腸の炎症反応は、遺伝的に素因のある個体の消化管における細菌叢耐性の崩壊の結果であると考えられている１。
【０００３】
ＩＢＤは、先進国において、特に、西ヨーロッパ、北アメリカ及びオーストラリアにおいて、より顕著である。ＣＤ及びＵＣの有病率は、約１〜２人／住民１０００人である。特に、２００５年には、フランスでは、合計１２００００人のＣＤ及び８００００人のＵＣが推定されており、米国では、約２５０万人のＩＢＤ患者が推定されている。利用可能な治癒的治療分子がまったくなく、治療管理は対症療法（鎮痛剤、抗生物質、栄養物）、抗炎症剤及び免疫抑制剤（アミノサリチレート、ステロイド、アザチオプリン、メトトレキサート、シクロスポリン、モノクローナル抗ＴＮＦ抗体、例えば、インフリキシマブ）及び外科治療と関連している。したがって、総合すると、新規治療分子の開発は、臨床管理にとって極めて重要である。
【０００４】
消化粘膜は、種々の免疫戦略を発達させて、親密に接触する共生生物を許容し、病原菌が宿主組織に蔓延するのを防いできた。食物由来の常在性及び病原性微生物の認識は、昆虫及び哺乳類の生存にとって必須のバリア機能である。特に、病原体に対する哺乳類の耐性は、主に、膜結合型Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）１及び細胞質ヌクレオチド結合性オリゴマー形成ドメインロイシンリッチリピート含有タンパク質（ＮＯＤＬＲＲ）２の最近同定されたファミリーによって付与される。ＮＯＤ１及びＮＯＤ２は、Ｎ末端カスパーゼ補充ドメイン（ＣＡＲＤ）、中心ヌクレオチド結合性ドメイン（ＮＯＤ）及びＣ末端ロイシンリッチリピートドメイン（ＬＲＲ）２を有する。
【０００５】
ＮＯＤ２遺伝子の突然変異はクローン病（ＣＤ）と関連していたために３、４、ＮＯＤ２シグナル伝達は相当な注目を集めてきた。ＮＯＤ２は、細菌増殖の際に放出され、再循環される主要なムロペプチド−ムラミルジペプチドＭｕｒＮＡｃ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イソＧｌｎ（ＭＤＰ）６〜８を検出することによって、細菌ペプチドグリカンの細胞質パターン認識分子（ＰＲＭ）として作用する５。ＮＯＤ２は、ＭＤＰを認識した後、転写因子及びキナーゼ活性化を介して自然免疫及び獲得免疫の両方を促進及び調節する２。したがって、マウスでは、ＮＯＤ２シグナル伝達がないことは、理解できるように、特定の腸内カチオン性抗菌ペプチド（ＣＡＭＰ）の調節を介してリステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）に対する経口感受性を付与する８。最近の研究によって、ＮＯＤ１がメソ−ジアミノピメリン酸を含有するペプチドグリカン（主にグラム陰性菌で見られる）に対する応答性を付与するという証拠が提供されている９、１０。ＮＯＤ１は、ＮＯＤ２の生理学的役割と同様に、ピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）感染の際の胃上皮細胞による特定のβ−デフェンシンの発現に必要とされる１１。
【０００６】
胃腸管の抗菌ペプチド（ＣＡＭＰ：デフェンシン、カスレリシジン（ｃａｔｈｌｅｌｉｃｉｄｉｎｓ））：炎症性疾患への影響
最近の報告書によって、腸管上皮を補充する幹細胞が、持続的な抗菌性保護を必要とするために、腸管ホメオスタシスの監視及び侵入する微生物の包含におけるＣＡＭＰのエフェクターの役割が明らかにされた。ＣＡＭＰ発現のレベルは、妊娠の間の局所防御機構の未熟性から誕生後の腸管の細菌定着への、後生動物における腸の発達に対応している１２。哺乳類の腸管に蔓延している２種類のＣＡＭＰ、即ち、デフェンシン及びカテリシジンのＮＦ−κＢ依存性及び非依存性調節は特に注目される。
【０００７】
α−及びβ−デフェンシンは、小さなポリペプチドであり、空間的に分離している疎水性の、正に帯電した残基を有する。６個の不変のシステインが３つの特異的な分子内ジスルフィド結合を形成し、このようにしてタンパク質を複雑にフォールディングされた三重鎖βシート立体配置で安定化する１２、１３。α−デフェンシンＨＤ−１〜ＨＤ−４（ヒト好中球タンパク質１〜４としても知られる）は、好中球によって発現されるが、ＨＤ−５及びＨＤ−６（マウスではクリプトジンとしても知られる）は、パネート細胞と呼ばれる、特定化された腸の上皮細胞によって産生される。後者は、主に、小腸のリーベルキューンの陰窩の基部に位置し、微生物及び／又は微生物産物に対する曝露に続いて、タンパク質性顆粒を合成し、管腔中に放出することによって回腸粘膜の自然免疫において主要な役割を有する。これらの分泌顆粒は、膜の完全性を破壊することによって微生物の壊死を引き起こし得る両親媒性ペプチドに富んでいる１２。
【０００８】
パネート細胞は、共生動物に対する寛容の維持において、また、抗菌ペプチド、例えば、デフェンシンを産生することによる病原性感染の忌避において重要な役割を果たす。Ｗｎｔ／Ｔｃｆ／β−カテニンシグナル伝達経路は、腸のホメオスタシス及びパネート細胞分化の制御において必須である。
【０００９】
興味深いことに、ＣＤにおいて、腸α−デフェンシン（即ち、ＨＤ−５）の損なわれた腸での発現が報告されており、これが管腔細菌叢の変化の一因となり、且つ／又は腸管病原体４、例えば、付着侵入性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）５９及びパラ結核菌（Ｍ．ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）６０（図２）の感染に対する上皮性関門全体の脆弱性を生じさせる可能性がある。結腸における生理学的細菌負荷は、小腸においてよりも高いので、結腸疾患の発生に対するその他の微生物センサー及びＣＡＭＰの影響も解明される必要がある。最後に、突然変異ＣＡＭＰを有するマウス及び主要なＣＤ関連ＮＯＤ２突然変異を保持する最近開発されたマウスモデル６１の使用も、損なわれた腸のデフェンシン機能及び／又は自然ＮＯＤ突然変異が、腸の炎症性疾患の発生を引き起こすのに十分であるかどうかを調べるのに役立つ可能性がある。α−デフェンシンのｉｎ ｖｉｖｏ抗菌機能は、胃腸の管腔における優勢細菌叢の組成の著しい変化が同時に起こった、ＨＤ−５トランスジェニックマウスにおいて、ネズミチフス菌（ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）感染に対するより大きな耐性が観察されたことによって実験的に調べられている１４。パネート細胞によって産生されたα−デフェンシンは、β−デフェンシンとは異なり、細胞外プロテアーゼ１５、例えば、マウス及びヒトではそれぞれ、マトリックスメタロプロテイナーゼ−７（ＭＭＰ−７、マトリライシン）及びトリプシン１６、１７によって転写後レベルで主に調節される。したがって、ＭＭＰ−７−／−マウスは、クリプトジンの不活性型を蓄積し、ネズミチフス菌（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）の経口感染に、野生型の動物よりも容易に屈する１７。６種のヒトβ−デフェンシン（ｈＢＤ−１〜ｈＢＤ−６）は、ほとんどの上皮細胞によって主に合成される。ｈＢＤ１相同分子種を欠くマウスは、黄色ブドウ球菌（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）感染に対する感受性の増大を示し１８、このことは、自然免疫におけるこのタンパク質の役割を支持する。
【００１０】
カテリシジンは、デフェンシンとは構造的及び進化的に別個であるが、消化管において同様の存在量及び分布を有するＣＡＭＰである１２。それらは、抗菌活性を有するＣ末端ペプチドに結合された、高度に保存されたＮ末端ドメイン（カテリン（ｃａｔｈｅｌｉｎ））を含有する大きな前駆体ペプチドとして合成される。デフェンシンと同様に、カテリシジンは、細胞外、部分タンパク質分解によって活性化される１９。その他の哺乳類種では、このファミリーのいくつかのメンバーが同定されているが、ヒト及びマウスは、単一のカテリシジン遺伝子（それぞれ、ＬＬ３７／ＦＡＬＬ３９／ｈＣＡＰ１８及びカテリン関連抗菌ペプチド（ＣＲＡＭＰ）と呼ばれる）を有する２０。実験的証拠によって、ＣＲＡＭＰを欠くマウスは、Ａ群連鎖球菌による皮膚感染及び侵襲性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）による尿路感染に対してより感受性であるということが示されている２１、２２。さらに、ＣＲＡＭＰ欠損マクロファージは、ネズミチフス菌（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）の複製を制御できなかった２３。
【００１１】
ＮＦ−κＢ及びＭｙＤ８８シグナル伝達経路に突然変異を有するマウスは、それぞれ、ヘリコバクター誘導性大腸炎２４及び共生動物誘発性大腸炎２５に対する感受性の増大を示し、このことは、細菌に対する腸管寛容／耐性におけるＮＦ−κＢの必須の役割及びＣＡＭＰ産生の調節における関与の可能性を示す。ヒトでは、ｈＢＤ−１発現は、小腸及び結腸では構成的であるが、ｈＢＤ−２〜−４の結腸での合成は、消化管における感染性病原体（例えば、ピロリ菌（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ））及び／又は炎症性サイトカインによるＮＦ−κＢ活性化に強力に依存している１２。ＴＬＲシグナル伝達の調節的影響に加え、ＮＯＤ１及びＮＯＤ２シグナル伝達経路が、ｈＢＤ−２発現を誘発することがわかっている１１、２７。さらに、最近の知見により、ｈＢＤ−２及び／又は−３発現には、ＭＡＰキナーゼ経路の活性化も必要であることがわかっている１１、２６。
【００１２】
ＮＯＤ２遺伝子における３つの突然変異（即ち、Ｒ７０２Ｗ、Ｇ９０８Ｒ及び１００７ｆｓ）は、ＣＤに対する素因につながることがわかっている３、４。遺伝子型−表現型相関性から、ＮＯＤ２突然変異は、主に回腸ＣＤと関連していることが立証されている４２。よく見られる突然変異及び稀な突然変異の両方が、ＭＤＰ誘導性ＮＦ−κＢ活性化の低下５、７及び末梢血単球におけるサイトカイン産生と関連している７、４３〜４５。Ｌａｌａらは、ＮＯＤ２はパネート細胞において高度に発現されること４６、４７、ＮＯＤ２突然変異と回腸炎症病変の発生の間の関連を説明し得る知見４２を最近報告した。回腸におけるＮＯＤ２の保護効果と一致して、Ｎｏｄ２−ノックアウトマウスは、（ｉ）グラム陽性通性細胞内細菌リステリア菌（Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）の経口感染（全身感染ではない）に対する感受性の増大及び（ｉｉ）クリプトジン遺伝子のサブグループの発現の著しい減少を示した８。
【００１３】
重要なことに、回腸ＣＤ患者から得た外科的切除試料及び生検においてＨＤ−５及びＨＤ−６の産生の減少が見られ１４、４８、４９、報告によれば、ＣＤ関連ＮＯＤ２突然変異がこの障害の一因であった。他方、結腸クローン病の個体は、正常なα−デフェンシンレベルを示したが、かなり減少したコピー数のβ−デフェンシン遺伝子ｈＢＤ−２を有し、これが結腸における発現の低下をもたらす５０。ＮＯＤ２突然変異と同様に、ＮＯＤ１遺伝子の複雑なイントロン多型は、ＩＢＤの発病と関連している５１。さらに、Ｎｏｄ１欠損マウスは、ピロリ菌（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）感染に対する感受性の増大５２及び特定のβ−デフェンシンの発現の減少を示す１１。
【００１４】
回腸ＣＤにおけるデフェンシンの発現の減少は、管腔細菌叢の変化の一因となり、ひいては、ＣＤ関連病原体、例えば、付着侵入大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）５９及びパラ結核菌（Ｍ．ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）６０の感染に対する上皮性関門全体の脆弱性を生じさせ得る。
【００１５】
同時に、ＮＦ−κＢ非依存性シグナル伝達経路は、上皮細胞再生、分化及び／又は分化系列決定を調節することによって、ＣＡＭＰ産生を制御し得る。興味深いことに、Ｗｉｎｇｌｅｓｓ（Ｗｎｔ）シグナル伝達の障害は、胎児小腸上皮における増殖細胞の完全な欠損と関連しており２８、このことは、この経路が腸の上皮細胞の増殖／未分化状態の維持において必須の役割を有するということを示唆する。エフリンＢ３遺伝子（Ｗｎｔシグナル伝達経路によってダウンレギュレートされる）がないことは、異常なパネート細胞分化系列決定をもたらすことがわかった２９。さらに、Ｗｎｔシグナル伝達経路は、パネート細胞由来の細胞におけるデフェンシン遺伝子発現を監視し得るが（転写因子４、Ｔｃｆ４を介して）、これは、クリプトジンが、胎児Ｔｃｆ４−／−マウスの小腸又はＷｎｔ受容体Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−５を欠く成体のものでは検出されなかったからである３０。逆に、クリプトジン遺伝子は、マウスにおいて過剰発現され、このことは、Ｗｎｔシグナル伝達経路の突然変異による活性化を示す３０、３１。
【００１６】
α−デフェンシンプロモーターの部位特異的突然変異分析によって、ＴＣＦ結合部位の必須の調節的役割が示された３０。総じて、これらの知見は、パネート細胞由来ＣＡＭＰの産生にはＷｎｔシグナル伝達の活性化が必要であるということを示す。したがって、パネート細胞決定要因（例えば、Ｍｔｇｒ１及びＧｆｉ１）は、慢性炎症性疾患に対する感受性の可能性ある候補と考えられるべきである３２、３３。
【００１７】
最後に、免疫、細菌誘導性炎症及び細胞増殖／成熟における特定の核受容体の重要な役割を考えると、これらの受容体は、ＣＡＭＰ生合成を調節することによって胃腸の自然免疫において可能性ある役割を有し得るということが示唆されている。興味深いことに、グルココルチコイド受容体アゴニスト（デキサメタゾン）は、ｈＢＤ−２発現を増強することがわかったが、機序は調べられていないままである３４。より最近、カテリシジンをコードする遺伝子及びｈＢＤ２をコードする遺伝子が、ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）３５、ウシ結核菌（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）感染に対する耐性に必要な核受容体３６の標的として同定された。単球の、合成ＶＤＲリガンドでの処理が、カテリシジン遺伝子転写の用量依存性アップレギュレーションにつながり、これが結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）に対する直接抗菌効果を発揮した３７。これらの知見と一致して、内因性ＶＤＲリガンドレベルが低下した個体は、結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）感染に対する感受性の増大を示す３７。
【００１８】
微生物（一般に、病原体）は、ＣＡＭＰの殺菌活性を回避するために、抗生物質耐性に関与しているものを彷彿とさせるさまざまな戦略を発達させてきた３９。不活化を達成するための１つの方法は、ＣＡＭＰを分解するプロテアーゼを産生することであるが、デフェンシンの場合には、分子内ジスルフィド橋が、ペプチドを酵素的タンパク質分解に対して相対的に耐性にしている。別の戦略は、細菌エンベロープの正味の正電化を低下させ、ＣＡＭＰに対するその親和性を低下させることからなり、これは、正に帯電した基を細菌細胞壁中のタイコ酸ポリマー（Ｄ−アラニン）中及び脂質Ａ（アミノアラビノース）中に組み込むことによって達成される。ＣＡＭＰ耐性へのその他の細菌アプローチは、分泌タンパク質によって細胞外捕獲すること及び細胞膜を越えてペプチドを活発に供給することによって、宿主エフェクターがその標的に接近するのを防ぐことを含む３９。しかし、これらの種々の保護的武器をもってしても（互いに排他的ではない）、微生物は、宿主がデフェンシンの場合と同様に多量のＣＡＭＰを腸の管腔中に放出できる場合には、ＣＡＭＰによって、おそらくはやはり阻害される。このような状況では、細菌成分による（細菌性赤痢の患者において４０、また、ネズミチフス菌（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）に経口感染したマウスにおいて４１報告されるような）転写レベルでのＣＡＭＰをコードする遺伝子のダウンレギュレーションは、極めて洗練された対向機構である（図２）。
【００１９】
特定の腸内微生物による微生物の検知及び攻撃の障害は、腸管におけるＣＡＭＰ機能に影響を及ぼし、慢性炎症性疾患、例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の発生をもたらし得る。これらの知見は、古くから、微生物免疫原による異常なＴ細胞活性化に起因すると考えられていたＣＤの発病を新たに明らかにする。
【００２０】
ＣＡＭＰの抗菌活性に加え、多面的機能は、デフェンシン及びカテリシジンによるものであった（表１）５３。両ＣＡＭＰは、自然免疫に関与している免疫細胞（好中球及び単球／マクロファージ）、獲得免疫に関与している免疫細胞（樹状細胞及びＴリンパ球）及びアレルギー／炎症反応に関与している免疫細胞（肥満細胞）を化学的に誘引する能力を有する。さらに、ｈＢＤ２は、樹状細胞においてＴＬＲ４依存性シグナル伝達経路を活性化し得る５４。
【００２１】
他方、Ｈａｎｃｏｃｋらは、最近、ＬＬ−３７は、ヒト単球におけるＴＬＲ依存性活性化の勢いを弱め５５、樹状細胞の成熟を促進し、Ｔ細胞のＴｈ１極性化をもたらし得る５６と報告した。総じて、これらの知見は、ＣＡＭＰ相互作用は、自然免疫と獲得免疫を関連づけることによって炎症反応を開始及び制御し得るということを示す（表１）。最後に、ＬＬ−３７などのＣＡＭＰは、血管新生を促進する能力を有することが、ＣＲＡＭＰ欠損マウスにおける皮膚損傷修復の際の血管新生の減少によって実証された５７。パネート細胞生物学が、共生動物の認識を介して腸の血管新生に影響を及ぼすので５８、これらの知見は、ＩＢＤの発病への洞察を提供する。腸内ＣＡＭＰは、微生物耐性、血管新生、走化性及び体液性反応の活性化／成熟を調節することによって、消化管の自然免疫及び獲得免疫の両方において、いくつかの必須の、新たな役割を有する（表１）。特に、ＣＡＭＰの管腔中への放出は、有糸分裂的に活性な陰窩細胞（上皮細胞単層を再生する）を、病原微生物によるコロニー形成から保護すると考えられる。トランスジェニック動物の使用は、生理学的役割及びこれらのエフェクターの調節のより良好な理解をもたらす。ＮＯＤ１／２は、デフェンシンの上皮産生を調節することによって、殺菌活性を発揮することがわかっており、これは、ＰＲＭパターン認識分子（Ｐａｔｔｅｒｎ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）が宿主をＣＤの発生から保護し得る、可能性ある機構を示唆する（図２）。
【００２２】
上皮抗菌ペプチド：免疫系刺激への影響
いくつかの最近の研究によって、デフェンシンを含めた抗菌ペプチドが、皮膚、口腔、鼻、眼の上皮及びその他の上皮粘膜、例えば、膣粘膜における保護的役割に関与しているとされている。すべてが同一の胚層から始まるので、すべての粘膜は、共通の胚発生起源を共有し、保護的デフェンシン発現を含めた類似の生化学的反応を示すと予測され得る。
【００２３】
２００３年には、Ｄｉｎｕｌｏｓらは、皮膚の免疫防御におけるβ−デフェンシン−２のケラチノサイト発現の抗菌活性を調べた。β−デフェンシン−２発現は、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、ストレプトコッカス・エピデルミディス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）及び緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）によって誘導されるとわかったが、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）は弱いβ−デフェンシン−２誘導物質であるとわかった。この研究によって、抗菌効果と組み合わせた、β−デフェンシン−２発現を誘導する能力が、グラム陰性菌生物による皮膚感染の希少性の一因となっている可能性がある一方で、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）によって与えられる刺激がないことが、免疫系防御を回避し、皮膚疾患を引き起こす化膿性連鎖球菌の能力を指し示し得ると示された６７。
【００２４】
過去１年以内に、Ｈｕａｎｇらは、抗菌アッセイを実施して、ＮａＣｌ又は涙の存在下で、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｇｉｎｏｓａ）（ＰＡ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）（ＳＡ）及び表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）（ＳＥ）などの微生物に対する、いくつかのヒト眼表面に発現された抗菌ペプチド、例えば、β−デフェンシン１〜３の抗菌活性を調べた。β−デフェンシン−３は、ＳＡ及びＳＥの両方に対して強力な活性を有するとわかったが、β−デフェンシン−２は中程度の活性を有し、β−デフェンシン−１はこれらの株に対して活性を示さなかった。活性は、ＮａＣｌによって減弱され、涙は、β−デフェンシン−１及び２の活性を完全に阻害したが、β−デフェンシン−３活性には影響を及ぼさなかった。この研究によって、いくつかのデフェンシンのｉｎ ｖｉｖｏ抗菌剤としての役割が確認された６８。
【００２５】
２００７年後半に向けて、Ｖａｎｈｉｎｓｂｅｒｇｈは、特定の免疫調節性遺伝子発現、特に、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＲＬ）及びデフェンシンのレベルの低下が、アレルギー発生、例えば、アレルギー性及び非アレルギー性鼻炎発生と関連していると示した６９。
【００２６】
最後に、Ｃｈｕｎｇらは、皮膚、口腔粘膜及びその他の上皮において、病原体及び共生動物が、デフェンシン及びカテリシジンなどの抗菌ペプチドの刺激を受け取る特異的シグナル伝達経路を同定し、歯周病のため新規治療薬の開発でこれらの経路を同定した７０。
【００２７】
このような研究によって、ヒト免疫系におけるデフェンシンの保護的役割が強められ、身体においてデフェンシン産生を刺激する経路を提供することによる病原体に対する免疫応答の増大の重要性が強調される。
【００２８】
その他の背景技術
米国特許第６，３２６，３６４号には、５−ＡＳＡなどの５−アミノサリチレート化合物が、ｉｎ ｖｉｔｒｏで選択的抗菌効果を有するとして記載されている。実施例は、好気条件及び嫌気条件でアガープレート上の一連のクロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）細菌培養物に対して阻害効果を示す。乳酸桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、腸球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）又はバクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）のコロニーに対しては、効果は観察されなかった。
【００２９】
ＰＰＡＲ−γの役割
最近、核受容体ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲ−γ）が、ＩＢＤの治療において用いられる抗炎症薬の標的として同定され、このことは、腸管において核受容体ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γがｉｎ ｖｉｖｏ抗炎症効果を媒介する機構を示す２。しかし、ＰＰＡＲ受容体発現は、おそらくは、共通の粘膜胚発生起源のために、腸管以外の種々の粘膜領域において実証されている。最近の研究によって、ＰＰＡＲ−γは、通年性アレルギー性鼻炎における鼻腔粘膜の慢性炎症の一因であり得ることが示唆されている７０。
【００３０】
ＰＰＡＲ−γは、β−カテニン及びＴ細胞転写因子（Ｔｃｆ−４）と相互作用することによって腸のホメオスタシスを制御する必須の核受容体である。Ｔｃｆ−４は、腸の細胞の運命の決定において、またパネート細胞による天然抗生物質の発現の調節において必須の転写因子である３。
【００３１】
５−アミノサリチレート（５−ＡＳＡ）は、炎症性腸疾患の治療において広く用いられる抗炎症薬（メサラジン）であるが、その腸内効果の根底にある機序はまだあまり理解されていない。最近、核受容体ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲ−γが、５−ＡＳＡの標的として同定され、このことは、５−ＡＳＡがｉｎ ｖｉｖｏで腸管におけるその抗炎症効果を媒介する機序を示す２。したがって、５−ＡＳＡの抗菌特性を考えると、このような化合物及びその誘導体は、ＰＰＡＲ−γ活性化を介して抗菌遺伝子の発現を調節する可能性がある。ロシグリタゾンもまた、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）、具体的には、ＰＰＡＲ−γの活性化を達成し、ロシグリタゾンは抗炎症効果を有する。
【００３２】
定義
本発明の理解を容易にするために、いくつかの用語を以下に定義する。
【００３３】
本明細書において、用語「抗菌ペプチド」とは、α−又はβ−デフェンシン（例えば、ヒトデフェンシン５についてはＨＤ−５）、又は空間的に分離している疎水性の、正に帯電した残基を有する小さなポリペプチドのいずれかを指す。
【００３４】
本明細書において、用語「デフェンシンを活性化する」とは、デフェンシンを活性化する任意の分子に関連して用いられる場合、α−又はβ−デフェンシンの遺伝子発現を誘導する分子（即ち、ＰＰＡＲ−γアゴニスト）を指す。
【００３５】
本明細書において、用語「プライマー」とは、核酸鎖に対して相補的であるプライマー伸長産物の合成が誘導される条件下に置かれた場合に、合成の開始点として作用できる合成オリゴヌクレオチドを指す。
【００３６】
本明細書において、用語「ポリメラーゼ連鎖反応」（本明細書において以下、「ＰＣＲ」）とは、クローニング又は精製を伴わず、ゲノムＤＮＡの混合物中で標的配列のセグメントを増幅するための方法である。２種のプライマーは、二本鎖標的配列のそれらのそれぞれの鎖に対して相補的である。
【００３７】
本明細書において、用語「構造類似体」とは、分子構造が、そのＰＰＡＲ−γ受容体との結合能力に関して５−ＡＳＡの模倣体として作用する化合物に関する。特に、その構造が類似の種類の水素結合及びＰＰＡＲ−γ受容体での静電相互作用を可能にする化合物。
【００３８】
本明細書において、用語「Ｃａｃｏ−２細胞」とは、ヒトコーカサス人種結腸腺癌細胞を指す。
【００３９】
本明細書において、用語「ロシグリタゾン」とは、ＰＰＡＲ−γの高度に選択的な、強力な化学アゴニストを指す。本明細書において、用語「上皮」とは、皮膚の表面及び消化管の内壁などの臓器表面を覆う細胞層からなる身体組織を指す。
【００４０】
本明細書において、用語「粘膜」とは、吸収及び分泌に関与している、ほとんど内胚葉起源の内張りであり、上皮で覆われている粘液性の膜を指す。粘膜は、外部環境に曝されている種々の身体の腔及び内臓の内側を覆っている。それらは、鼻孔、唇、耳、生殖器部及び肛門で皮膚と接続して見られる。
【００４１】
本発明の目的
ＰＰＡＲ−γ受容体を刺激して、腸管において腸内デフェンシン発現を誘導できるＰＰＡＲ−γアゴニストを提供することが本発明の一目的である。
【００４２】
ＰＰＡＲ−γ受容体を刺激して、上皮又はＰＰＡＲ−γ受容体が見られるその他の組織、特に、皮膚、口腔、鼻、眼の上皮及びその他の上皮粘膜、例えば、膣粘膜においてデフェンシン発現を誘導できるＰＰＡＲ−γアゴニストを提供することが本発明のさらなる目的である。
【００４３】
５−ＡＳＡ、ロシグリタゾン、それらの誘導体及び腸管における腸内ＣＡＭＰ発現、特に、デフェンシン発現を誘導するための刺激物質として使用するためにＰＰＡＲ受容体に対して活性であるとわかった一連の化合物を含むそれらの一連の構造類似体などのＰＰＡＲ−γアゴニストを提供することが本発明の一目的である。
【００４４】
ＰＰＡＲ−γ受容体を刺激して、上皮又はＰＰＡＲ−γ受容体が見られるその他の組織、特に、皮膚、口腔、鼻、眼の上皮及びその他の上皮粘膜、例えば、膣粘膜においてデフェンシン発現を誘導できるＰＰＡＲ−γアゴニストを提供することが本発明のさらなる目的である。
【００４５】
ＣＡＭＰ発現を刺激することによって微生物を死滅させることができる化合物を提供することが、本発明のもう１つの目的である。ＣＡＭＰは、デフェンシン及び／又はカテリシジンであり得る。微生物とは、細菌、ウイルス、真菌及びその他の感染性病原体を死滅させることができる物質である。
【００４６】
ＣＡＭＰの発現によって身体の防御機構を増強する化合物をさらに提供することがさらなる目的である。ＣＡＭＰは、デフェンシン及び／又はカテリシジンであり得る。
【００４７】
クローン病、潰瘍性大腸炎、インテスティナル・バウエル・シンドローム（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｂｏｗｅｌ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）及び急性憩室炎などの消化管の状態の治療介入において使用するための化合物を提供することが、本発明のなおさらなる目的である。
【００４８】
結腸憩室症、分類不能大腸炎及び感染性大腸炎に冒されている患者において、急性憩室炎などの状態の予防のための治療介入を提供することが、本発明のさらなる目的である。
【００４９】
膿痂疹、丹毒、皮膚炎、毛包炎及び尋常性ざ瘡などの皮膚炎症状態及び感染の治療介入において使用するための化合物を提供することが、本発明のなおさらなる目的である。
【００５０】
眼、口腔、鼻又は膣粘膜を侵すものなどの粘膜の炎症状態及び感染、特に、眼の炎症及び感染、歯周病、アレルギー性及び非アレルギー性鼻炎及び細菌性膣疾患などの状態の治療介入において使用するための化合物を提供することが、本発明のなおさらなる目的である。
【００５１】
このような疾患の治療及び予防のための薬剤の調製において使用するための化合物を提供することが、本発明のさらなる目的である。
【００５２】
感受性個体の消化管におけるＣＡＭＰ発現の調節に基づいた新規治療戦略の開発を可能にする方法を提供することが、本発明のさらなる目的である。抗炎症効果、抗生物質効果及び／又は抗菌効果を有する化合物は、ＣＡＭＰ発現、特に、デフェンシン発現の刺激によって同定できる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００５３】
ＣＡＭＰ発現のモジュレーターを提供することが、本発明の一目的である。
【課題を解決するための手段】
【００５４】
本発明によれば、ＰＰＡＲ−γに対して作用するさまざまな化学物質を使用して、ＣＡＭＰ産生を誘導する方法が提供される。このような化合物を、ＰＰＡＲ−γ受容体を有する組織、例えば、上皮及び／又は粘膜におけるＣＡＭＰ発現の誘導に使用できる。特に、これらの化合物を用いて腸管において腸内ＣＡＭＰ発現を誘導できる。デフェンシンは、ＣＡＭＰの例である。
【００５５】
本発明によれば、５−ＡＳＡ、ロシグリタゾン、誘導体及び組織におけるＣＡＭＰ発現、特に、デフェンシン発現を誘導するための刺激物質として使用するためにＰＰＡＲ−γ受容体に対して活性であるとわかった一連の化合物を含む一連の構造類似体などのＰＰＡＲ−γアゴニストが提供される。
【００５６】
本発明によれば、５−ＡＳＡ、ロシグリタゾン、誘導体並びにＰＰＡＲ−γ受容体を有する上皮及び／又は粘膜におけるＣＡＭＰ発現、特に、デフェンシン発現を誘導するための刺激物質として使用するためにＰＰＡＲ−γ受容体に対して活性であるとわかった一連の化合物を含む一連の構造類似体などのＰＰＡＲ−γアゴニストが提供される。
【００５７】
本発明によれば、５−ＡＳＡ、ロシグリタゾン、誘導体及び腸管における腸内ＣＡＭＰ発現、特に、デフェンシン発現を誘導するための刺激物質として使用するためにＰＰＡＲ−γ受容体に対して活性であるとわかった一連の化合物を含む一連の構造類似体などのＰＰＡＲ−γアゴニストが提供される。
【００５８】
本明細書に記載される化合物は、以下の一般式（Ｉ）：
【化１】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、−Ｈ又は１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択されるか、或いは、一緒になって５又は６個の原子を有する芳香族又は脂肪族環を形成し；
同一であっても異なっていてもよいＹ及びＺは、−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＯＲ３、−ＣＨ（ＯＲ３）ＣＯＯＨを含む群から選択され、ここで、Ｒ３は、Ｈ、フェニル、ベンジル、−ＣＦ３又は−ＣＦ２ＣＦ３、ビニル、アリル及び１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基から選択される］
或いは、
一般式（Ｉａ）の化合物：
【化２】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、Ｈ、−ＣｎＨ２ｎ−１（ここで、ｎ＝１〜６である）、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択されるか、或いは、一緒になって５又は６個の原子を有する芳香族又は脂肪族環を形成し；
Ｒ３は、−ＣＯ−ＣＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＨ、−ＯＲ６から選択され、ここで、Ｒ６は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基であり；
Ｒ４は、Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基、フェニル、ベンジル、−ＣＦ３又は−ＣＦ２ＣＦ３、ビニル又はアリルから選択され；Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８は、水素原子であるか、
或いは、
Ｒ３及びＲ４、Ｒ４及びＲ５、又はＲ７及びＲ８は一緒になって、Ｎ、Ｏを含む群から独立に選択される１〜２個のヘテロ原子を含む５又は６個の原子を有する、ベンゼン、芳香族又は脂肪族環と縮合している環を形成する］
に従って定義できる。
【００５９】
これらの化合物を、ＰＰＡＲ−γ受容体を有する組織、例えば、上皮及び／又は粘膜におけるＣＡＭＰ発現の誘導に使用できる。特に、これらの化合物を使用して、腸管において腸内ＣＡＭＰ発現を誘導できる。
【００６０】
一態様では、本発明によれば、このような方法において使用できる化合物として、以下の一般式（Ｉ）を含む化合物が挙げられる
【化３】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、−Ｈ又は１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択されるか、或いは、一緒になって５又は６個の原子を有する芳香族又は脂肪族環を形成し；
同一であっても異なっていてもよいＹ及びＺは、−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＯＲ３、−ＣＨ（ＯＲ３）ＣＯＯＨを含む群から選択され、ここで、Ｒ３は、Ｈ、フェニル、ベンジル、−ＣＦ３又は−ＣＦ２ＣＦ３、ビニル、アリル及び１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基から選択される］。
【００６１】
別の態様では、本発明はまた、以下の一般式（Ｉ＊）の化合物のサブグループの使用に関する
【化４】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、−Ｈ又は１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択され、
同一であっても異なっていてもよいＹ及びＺは、−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＯＲ３、−ＣＨ（ＯＲ３）ＣＯＯＨを含む群から選択され、ここで、Ｒ３は、Ｈ及び１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基から選択される］。
【００６２】
本発明のいくつかの実施形態では、Ｚ及びＹは異なっている。本発明のいくつかの実施形態では、Ｙ又はＺの少なくとも一方は、−ＣＯＯＨで終結する。したがって、本発明のいくつかの実施形態では、Ｙ又はＺ（また、いくつかの実施形態では、Ｙ又はＺの少なくとも一方、また、いくつかの実施形態では、Ｙ又はＺの一方のみ）が−ＣＯＯＨである。本発明のいくつかの実施形態では、Ｙ又はＺ（また、いくつかの実施形態では、Ｙ又はＺの少なくとも一方、また、いくつかの実施形態では、Ｙ又はＺの一方のみ）が−ＣＨ（ＯＲ３）ＣＯＯＨである。
【００６３】
さらに別の態様では、本発明はまた、同一であっても異なっていてもよいＹ及びＺが、−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＯＲ３、−ＣＨ（ＯＲ３）ＣＯＯＨを含む群から選択される点を除いて式（Ｉ）及び（Ｉ＊）の両方に従う、本発明の方法における化合物の使用に関する。
【００６４】
本発明のいくつかの実施形態では、Ｙが−Ｈであり、Ｚが−ＣＨ（ＯＨ）ＣＯＯＨである場合は、基ＮＲ１Ｒ２は３’位で接続していてもよい。
【００６５】
本発明のその他の実施形態では、Ｚが−ＯＣＨ３であり、Ｙが−ＣＯＯＨである場合は、基ＮＲ１Ｒ２は４’位で接続していてもよい。
【００６６】
本発明のいくつかの実施形態では、Ｙが−Ｈであり、Ｚが−ＣＨ（ＯＣＨ３）ＣＯＯＨである場合には、基ＮＲ１Ｒ２は４’位で接続していてもよい。
【００６７】
特に、前記の１〜６個の炭素原子を有する直鎖又は分岐アルキル基は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣｎＨ２ｎ−１（ここで、ｎ＝１〜６である）から選択され得る。
【００６８】
式（Ｉ）及び（Ｉ＊）の化合物は、以下を含む群から選択され得る：
３−（３’−アミノフェニル）２−ヒドロキシプロパン酸（化合物２０）
２−（４−アミノフェニル）２−メトキシ酢酸（化合物２３）
２−（３−アミノフェニル）２−エトキシ酢酸（化合物３２）
２−（４−アミノフェニル）２−エトキシ酢酸（化合物３３）
３−（４’−アミノフェニル）２−メトキシプロピオン酸（化合物３４）「Ｒ３４」
３−（４’−アミノフェニル）２−エトキシプロピオン酸（化合物３９）
３−（３’−アミノフェニル）２−エトキシプロピオン酸（化合物４０）。
【００６９】
上記の化合物名は、以下のように標準化学命名法でも書くことができる（この命名法を本文を通じて用いる）：
（±）−２−ヒドロキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物２０）
（±）−２−メトキシ−２−（４’−アミノフェニル）酢酸（化合物２３）
（±）−２−エトキシ−２−（３’−アミノフェニル）酢酸（化合物３２）
（±）−２−エトキシ−２−（４’−アミノフェニル）酢酸（化合物３３）
（±）−２−メトキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「Ｒ３４」（ラセミ体）
（±）−２−エトキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３９）
（±）−２−エトキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物４０）。
【００７０】
特に、本発明の方法で用いられる化合物は、以下のラセミ混合物のエナンチオマーであり得る：
（Ｒ，Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−（３−アミノフェニル）酢酸（化合物１０）
（Ｒ，Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−（４−アミノフェニル）酢酸（化合物１１）
（Ｒ，Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物２１）
（Ｒ，Ｓ）−２−メトキシ−２−（３’−アミノフェニル）酢酸（化合物２２）
（Ｒ，Ｓ）−２−メトキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３５）
（Ｒ，Ｓ）−２−メトキシ−３−（３−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「Ｒ３４」（ラセミ体）
【００７１】
Ｒ３４のエナンチオマー：
（＋）２−Ｓ−メトキシ−３−（３−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「３４−Ｅ１」又は「Ｅ−１」。
（−）２−Ｒ−メトキシ−３−（３−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「３４−Ｅ２」又は「Ｅ−２」
【００７２】
化合物のラセミ混合物も、本明細書に記載される方法において使用してよい。ラセミ混合物の例として、それだけには限らないが以下が挙げられる：
（±）−２−ヒドロキシ−２−（３’−アミノフェニル）酢酸（化合物１０）
（±）−２−ヒドロキシ−２−（４’−アミノフェニル）酢酸（化合物１１）
（±）−２−ヒドロキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物２１）
（±）−２−メトキシ−２−（３’−アミノフェニル）酢酸（化合物２２）
（±）−２−メトキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３５）
（±）−２−メトキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「Ｒ３４」（ラセミ体）。
【００７３】
本明細書に記載される任意の立体異性化合物について、一方のエナンチオマーを、もう一方を上回って過剰に含有する組成物も、本明細書に記載される方法において使用してよい。
【００７４】
一実施形態によれば、本発明の方法において使用してよい化合物として、以下の式（ＩＩ）に従う、式（Ｉ）の化合物のＲ３がＨであり得るものが挙げられる
【化５】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＹは、上記に定義のとおりである］。
【００７５】
別の実施形態によれば、使用してよい化合物として、以下の式（ＩＩＩ）に従う、式（Ｉ）の化合物のＲ３が−ＣＨ３であり得るものが挙げられる
【化６】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＹは、上記に定義のとおりである］。
【００７６】
さらに別の実施形態によれば、使用してよい化合物として、以下の式（ＩＶ）に従う、式（Ｉ）の化合物のＲ３が−ＣＨ２ＣＨ３であり得るものが挙げられる
【化７】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＹは、上記に定義のとおりである］。
【００７７】
さらに別の実施形態によれば、使用してよい化合物として、以下の式（Ｖ）に従う、式（Ｉ）の化合物のＲ３が−ＣＨ２ＣＨ３であり得るものが挙げられる
【化８】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＹは、上記に定義のとおりである］。
【００７８】
さらに別の実施形態によれば、使用してよい化合物として、以下の式（ＶＩ）に従う、式（Ｉ）の化合物のＲ３が−ＣＨ３であり得るものが挙げられる
【化９】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＹは、上記に定義のとおりである］。
【００７９】
本発明によれば、式（ＶＩ）を有する（Ｒ，Ｓ）−２−メトキシ−３−（３−アミノフェニル）プロピオン酸、即ち、（−）２−Ｒ−メトキシ−３−（３−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「３４−Ｅ２」又は「Ｅ−２」の１種のエナンチオマーは、腸管におけるデフェンシン発現誘導において特に有効であるとわかった（図８＆９）。本発明によれば、一部のエナンチオマーは、その立体異性体よりも優れたＣＡＭＰ発現を提供し得る。その他の実施形態では、一部のラセミ混合物は、その個々の立体異性体よりも優れたＣＡＭＰ発現を提供し得る。
【００８０】
さらに別の実施形態によれば、使用してよい化合物として、以下の式（ＶＩＩ）に従う、式（Ｉ）の化合物のＲ３が−ＣＨ３であり得るものが挙げられる
【化１０】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＹは、上記に定義のとおりである］。
【００８１】
さらに別の実施形態によれば、使用してよい化合物として、以下の式（ＶＩＩＩ）に従う、式（Ｉ）の化合物のＲ３が−ＣＨ２ＣＨ３であり得るものが挙げられる
【化１１】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＹは、上記に定義のとおりである］。
【００８２】
さらに別の実施形態によれば、使用してよい化合物として、以下の式（ＩＸ）に従う、式（Ｉ）の化合物のＲ３が−ＣＨ２ＣＨ３であり得るものが挙げられる
【化１２】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＹは、上記に定義のとおりである］。
【００８３】
別の実施形態によれば、使用してよい化合物として、以下の式（Ｘ）に従う、式（Ｉ）の化合物のＲ３が−ＣＨ３であり得るものが挙げられる
【化１３】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＹは、上記に定義のとおりである］。
【００８４】
本発明の方法において使用してよい式（Ｉａ）の化合物は、以下を含む群から選択され得ることが好ましく：
（±）−２−ヒドロキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物２０）
（±）−２−メトキシ−２−（４’−アミノフェニル）酢酸（化合物２３）
（±）−２−エトキシ−２−（３’−アミノフェニル）酢酸（化合物３２）
（±）−２−エトキシ−２−（４’−アミノフェニル）酢酸（化合物３３）
（±）−２−メトキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「Ｒ３４」
（＋）２−Ｓ−メトキシ−３−（３−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「３４−Ｅ１」又は「Ｅ−１」
（−）２−Ｒ−メトキシ−３−（３−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「３４−Ｅ２」又は「Ｅ−２」
（±）−２−エトキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３９）
（±）−２−エトキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物４０）、それらの式は先に示されている。
【００８５】
本発明によれば、以下の一般式（Ｉａ）の化合物を、本明細書に記載される本発明の方法において使用してよい：
【化１４】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、Ｈ、−ＣｎＨ２ｎ−１（ここで、ｎ＝１〜６である）、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択されるか、或いは、一緒になって５又は６個の原子を有する芳香族又は脂肪族環を形成し；
Ｒ３は、−ＣＯ−ＣＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＨ、−ＯＲ６から選択され、ここで、Ｒ６は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基であり；
Ｒ４は、Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基、フェニル、ベンジル、−ＣＦ３又は−ＣＦ２ＣＦ３、ビニル又はアリルから選択され；Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８は、水素原子であるか、
或いは、
Ｒ３及びＲ４、Ｒ４及びＲ５、又はＲ７及びＲ８は一緒になって、Ｎ、Ｏを含む群から独立に選択される１〜２個のヘテロ原子を含む５又は６個の原子を有する、ベンゼン、芳香族又は脂肪族環と縮合している環を形成する］。
【００８６】
本発明はまた、以下の一般式（Ｉａ＊）の化合物の特定のサブグループの本発明の方法における使用に関する
【化１５】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、Ｈ、−ＣＯ−ＣＨ３、−ＣｎＨ２ｎ−１（ここで、ｎ＝１〜６である）、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択されるか、或いは、一緒になって５又は６個の原子を有する芳香族又は脂肪族環を形成し；
Ｒ３は、−ＮＨＯＨ、−ＯＨ、−ＯＲ６から選択され、ここで、Ｒ６は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基であり；
Ｒ４は、Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基から選択され；Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８は、水素原子であるか、
或いは、
Ｒ３及びＲ４、Ｒ４及びＲ５、又はＲ７及びＲ８は一緒になって、Ｎ、Ｏを含む群から独立に選択される１〜２個のヘテロ原子を含む５又は６個の原子を有する、ベンゼン、芳香族又は脂肪族環と縮合している環を形成する］。
【００８７】
１〜６個の炭素原子を有する式（Ｉａ）又は（Ｉａ＊）の前記の直鎖若しくは分岐アルキル基は、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、イソプロピル、プロピル、ＣｎＨ２ｎ−１（ここで、ｎ＝１〜６である）から選択され得る。
【００８８】
本発明の式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のいくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ７及びＲ８が環を形成し得るものが挙げられる。したがって、Ｒ３及びＲ４又はＲ４及びＲ５は一緒になって、Ｎ、Ｏを含む群から独立に選択される１〜２個のヘテロ原子を含む５又は６個の原子を有する、ベンゼン、芳香族又は脂肪族環と縮合している環を形成してもよい。
【００８９】
本発明の式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のいくつかの実施形態では、Ｒ７及びＲ８は、Ｒ４がＣＨ３である場合を除いて環を形成してもよい。本発明の式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のいくつかの実施形態では、Ｒ７及びＲ８は、Ｒ４がＨから選択される場合に環を形成し得る。いくつかの実施形態では、本発明は、本発明によって提供されるケトレン（ｋｅｔｏｌｅｎｅ）に関する。
【００９０】
いくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ１及びＲ２が環を形成し得る式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のものが挙げられる。したがって、同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、−Ｈ、−ＣｎＨ２ｎ−１、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基（ここで、ｎ＝１〜６である）を含む群から選択され得る。
【００９１】
いくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ４が分岐していてもよい式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のものが挙げられる。したがって、Ｒ４は、Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖アルキル基から選択されてもよく；Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８は水素原子である。
【００９２】
いくつかの実施形態では、アミノ基がフェニル環の４’位にある場合にＲ４は分岐していてもよい。
【００９３】
いくつかの実施形態では、直鎖アルキル基は１個のみの炭素原子を有し得る（即ち、ＣＨ３）。
【００９４】
本発明の式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のいくつかの実施形態では、Ｒ１及びＲ２が−Ｈである。本発明の式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のいくつかの実施形態では、Ｒ２はＲ１と異なっていなくてもよい。
【００９５】
いくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ３が−ＯＨであり、Ｒ４が、−Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する分岐アルキル基からなる群から選択される式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のもの、又はＲ３及びＲ４が一緒になって、Ｎ、Ｏを含む群から独立に選択される１〜２個のヘテロ原子を含む５又は６個の原子を有する、ベンゼン、芳香族環又は環と縮合している環を形成する式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のものが挙げられる。いくつかの実施形態では、分岐アルキル基は、−ＣＨ（ＣＨ３）２であり得る。いくつかの実施形態では、分岐アルキル基は、Ｒ８位の−ＣＨ（ＣＨ３）２であり得る。いくつかの実施形態では、Ｒ３及びＲ４は、単一のＯ原子を含む５員の脂肪族環を形成する。
【００９６】
いくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ３が−ＯＨであり、Ｒ４が−Ｈであり、基ＮＲ１Ｒ２が４位であり得る（Ｒ５又はＲ８であるはずである）、式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のものが挙げられる。いくつかの実施形態では、これは特に、Ｒ１及びＲ２が−ＣＨ３である場合であり得る。
【００９７】
いくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ１及びＲ２が同一である式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のものが挙げられる。
【００９８】
いくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ３が−ＯＨであり、Ｒ４が−Ｈであり、基ＮＲ１Ｒ２がＲ５であり得る（Ｒ８であるはずである）、式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のものが挙げられる。いくつかの実施形態では、これはＲ１及びＲ２が−Ｈであるものであり得る。
【００９９】
いくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ３が−ＮＨＯＨであり、Ｒ４が１〜６個の炭素原子を有する直鎖又は分岐アルキル基である（又は、式（Ｉ）の場合には、フェニル、ベンジル、−ＣＦ３又は−ＣＦ２ＣＦ３、ビニル又はアリル）式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のもの、Ｒ３及びＲ４が一緒になって、Ｎ、Ｏを含む群から独立に選択される１〜２個のヘテロ原子を含む５又は６個の原子を有する、ベンゼン、芳香族又は脂肪族環と縮合している環を形成する式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のものが挙げられる。
【０１００】
いくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ３が−ＮＨＯＨであり、Ｒ４が２個の炭素原子を有する直鎖又は分岐アルキル基であり、基ＮＲ１Ｒ２が４位であってもよく、Ｒ８位であり得る、式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のものが挙げられる。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、使用してよい化合物として、Ｒ３が−ＮＨＯＨであり、Ｒ４が−Ｈであり、基ＮＲ１Ｒ２がＲ８であってもよく、４’位であるはずである、式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）両方のものが挙げられる。一実施形態によれば、式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）の化合物のＲ３及びＲ４が、以下の式（ＸＩＩ）の環を形成し得る
【化１６】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ７及びＲ８は、上記に定義のとおりである］。
【０１０２】
別の実施形態によれば、式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）の使用される化合物のＲ４及びＲ５は、以下の式（ＸＩＩ）の環を形成し得る
【化１７】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ７及びＲ８は、上記に定義のとおりである］。
【０１０３】
さらなる実施形態によれば、式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）の使用される化合物のＲ７及びＲ８は、以下の式（ＸＩＩＩ）又は（ＸＩＶ）の環を形成し得る
【化１８】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、上記に定義のとおりである］。
【０１０４】
特に、式（Ｉａ）及び（Ｉａ＊）の化合物は、本発明に記載される方法に従って使用でき、以下を含む群から選択され得る：
４−アミノ−Ｎ−ヒドロキシ−２−メトキシベンズアミド（化合物１３）
５−アミノ−Ｎ−ヒドロキシ−２−メトキシベンズアミド（化合物１４）
５−アミノ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−カルボン酸（化合物１７）
５−アミノ−２−エトキシ−Ｎ−ヒドロキシベンズアミド（化合物２６）
６−アミノ−２，２−ジメチル−４Ｈ−ベンゾ［１，３］ジオキシン−４−オン（化合物２８）
１，２，３，４−テトラヒドロ−６−ヒドロキシキノリン−５−カルボン酸（化合物２９）
５−アミノ−２−イソプロポキシ安息香酸（化合物３１）
６−メトキシキノリン−５−カルボン酸（化合物３６）
６−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−５−カルボン酸（化合物３７）
５−ジイソプロピルアミノサリチル酸（化合物３８）
４−ジイソプロピルアミノサリチル酸（化合物４２）。
【０１０５】
本発明はまた、Ｒ１及びＲ２が、−Ｈ及び−ＣＨ（ＣＨ３）２からなる群から選択される化合物の使用を提供する。Ｒ１及びＲ２は、両方とも同一であってもよい。いくつかの実施形態では、Ｒ１及びＲ２は、−ＣＨ（ＣＨ３）２であり得る。
【０１０６】
一実施例は、以下の化合物（化合物３８）の使用を含む：
【化１９】
【０１０７】
本発明のその他の実施形態では、Ｒ１及びＲ２は、両方とも−Ｈである。
【０１０８】
本発明はまた、Ｒ３が−ＮＨＯＨ及び−ＯＨからなる群から選択される化合物の使用を提供する。いくつかの実施形態では、Ｒ３は−ＮＨＯＨであり得る。一実施例は、以下の化合物（化合物１３）を含む：
【化２０】
【０１０９】
さらなる実施例は、以下の化合物（化合物１４）の使用を含む：
【化２１】
【０１１０】
さらなる実施例は、以下の化合物（化合物２６）の使用を含む：
【化２２】
【０１１１】
本発明のいくつかの実施形態では、Ｒ３は、−ＯＨであり得る。
【０１１２】
適した実施例は、以下の化合物（化合物１７）の使用を含む：
【化２３】
【０１１３】
さらなる実施例は、以下の化合物（化合物３１）の使用を含む：
【化２４】
【０１１４】
本発明のいくつかの実施形態では、Ｒ４は−Ｈであり得る。本発明のいくつかの実施形態では、Ｒ４はＣＨ３であり得る。本発明のいくつかの実施形態では、Ｒ４は−ＣＨ２ＣＨ３であり得る。本発明のいくつかの実施形態では、Ｒ４は−ＣＨ（ＣＨ３）２であり得る。
【０１１５】
さらなる実施例は、以下の化合物（化合物２８）の使用を含む：
【化２５】
【０１１６】
本発明のいくつかの実施形態では、Ｒ３及びＲ４は一緒になって、１個のヘテロ原子Ｏ（酸素）を含む５又は６個の原子のベンゼンと縮合している脂肪族環を形成し得る。
【０１１７】
本発明はまた、ヒト及び／又は哺乳類（例えば、げっ歯類、家畜、家庭内ペット、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ヒツジ、ウシ、ウマ）の治療の方法に関する。
【０１１８】
特に、上記の具体的な化合物の使用は別として、以下の化合物を本明細書に記載される方法及び適用に使用できる：
５−アミノサリチロ−ヒドロキサム酸（化合物５）
３−ジメチルアミノサリチル酸（化合物６）
２−メトキシ−４−アミノ安息香酸（化合物７）
２−メトキシ−５−アミノ安息香酸（化合物８）
５−メチルアミノサリチル酸（化合物９）
４−メチルアミノサリチル酸（化合物１２）
４−アセチルアミノサリチル酸（化合物１６）
２−エトキシ−４−アミノ安息香酸（化合物１８）
２−エトキシ−５−アミノ安息香酸（化合物１９）
４−ジメチルアミノサリチル酸（化合物２４）
２−エトキシ−４−アミノベンゾイルヒドロキサム酸（化合物２５）
６−ヒドロキシキノリン−５−カルボン酸（化合物２７）
２−（２−プロピル）オキシ−４−アミノ安息香酸（化合物３０）
４−（１−ピペラジニル）サリチル酸（化合物４１）。
【０１１９】
上記の化合物の使用に加え、本発明は、以下の化合物（接頭辞「２＿」に続く化合物番号）の使用を提供する：
【化２６】
【０１２０】
本発明によれば、クローン病、潰瘍性大腸炎、インテスティナル・バウエル・シンドローム（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｂｏｗｅｌ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）及び急性憩室炎などの消化管の状態の治療介入において使用するための化合物が提供される。
【０１２１】
本発明の一態様では、結腸憩室症、分類不能大腸炎及び感染性大腸炎に冒されている患者において、急性憩室炎などの状態の予防において使用するための化合物が提供される。
【０１２２】
本発明の別の態様では、膿痂疹、丹毒、皮膚炎、毛包炎及び尋常性ざ瘡などの皮膚炎症状態及び感染の治療介入において使用するための化合物が提供される。
【０１２３】
本発明の別の態様では、眼、口腔、鼻又は膣粘膜を侵すもの、例えば、眼の炎症及び感染、歯周病、アレルギー性及び非アレルギー性鼻炎及び細菌性膣疾患などの粘膜の炎症状態及び感染の治療介入において使用するための化合物が提供される。
【０１２４】
本発明の化合物は、ＰＰＡＲ−γを刺激してＣＡＭＰを産生するために、医療分野において使用できることが有利である。ＣＡＭＰＳとして、デフェンシン及び／又はカテリシジンが挙げられる。したがって、本発明の別の態様は、有効成分として上記で定義される１種又は複数の化合物を、１種又は複数の製薬上許容される賦形剤又はアジュバントと組み合わせて含む医薬組成物に関する。
【０１２５】
別の態様では、本発明は、クローン病、潰瘍性大腸炎、インテスティナル・バウエル・シンドローム（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｂｏｗｅｌ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、急性憩室炎などの疾患の治療及び予防、並びに結腸憩室症、分類不能大腸炎及び感染性大腸炎に冒されている患者における急性憩室炎などの状態の予防のための薬剤の調製において使用するための化合物を提供する。
【０１２６】
別の態様では、本発明は、膿痂疹、丹毒、皮膚炎、毛包炎及び尋常性ざ瘡などの皮膚炎症状態及び感染を含む疾患の治療及び予防のための薬剤の調製において使用するための化合物を提供する。
【０１２７】
別の態様では、本発明は、眼、口腔、鼻又は膣粘膜を侵すもの、例えば、眼の炎症及び感染、歯周病、アレルギー性及び非アレルギー性鼻炎及び細菌性膣疾患などの粘膜の炎症状態及び感染の治療及び予防のための薬剤の調製において使用するための化合物を提供する。
【０１２８】
本発明はまた、ヒト及び／又は哺乳類（例えば、げっ歯類、家畜、家庭内ペット、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ヒツジ、ウシ、ウマ）の治療の方法に関する。
【０１２９】
さらに別の態様では、本発明は、感受性個体の消化管におけるＣＡＭＰ発現の調節に基づいた新規治療戦略の開発を可能にする方法を提供する。本発明は、抗炎症効果及び／又は抗菌効果を有する可能性がある化合物のスクリーニングを提供する。このような化合物リードは、ＣＡＭＰ発現、特に、デフェンシン発現の刺激によって同定できる。
【０１３０】
特定の態様では、本発明は、ＣＡＭＰ発現、特に、デフェンシン発現のモジュレーター及びアップレギュレーターを提供する。ＣＡＭＰ発現、特に、デフェンシン発現のアップレギュレーション又は刺激は、身体における抗炎症効果及び抗菌効果につながる。これは特に、抗菌効果を引き起こすデフェンシン産生に関する場合であり、これでは刺激性化合物が、デフェンシン産生をもたらし、身体の生理学的／生化学的経路を用いて、抗菌効果が誘導される。
【図面の簡単な説明】
【０１３１】
【図１】定量ＰＣＲ分析によって確認されるが、ロシグリタゾンは、Ｃａｃｏ−２細胞においてＨＤ−５を活性化することを示す図である。
【図２】定量ＰＣＲ分析によって確認されるが、化合物１４は、Ｃａｃｏ−２細胞においてＨＤ−５を活性化することを示す図である。
【図３】定量ＰＣＲ分析によって確認されるが、化合物４０は、Ｃａｃｏ−２細胞においてＨＤ−５を活性化することを示す図である。
【図４】定量ＰＣＲ分析によって確認されるが、化合物３９は、Ｃａｃｏ−２細胞においてＨＤ−５を活性化することを示す図である。
【図５】定量ＰＣＲ分析によって確認されるが、メサラジンは、Ｃａｃｏ−２細胞においてＨＤ−５を活性化することを示す図である。
【図６】ヒトデフェンシン及びカテリシジンの構造を示す図である。 Ａ．腸α−デフェンシンＨＤ−５、β−デフェンシンＨＢＤ−２及びカテリシジンｈＣＡＰ−１８のヒト配列を示す図である。灰色の矢印は、ＨＤ−５及びカテリシジンの切断部位を表す。概略図と三次元構造（青色の棒）の両方で、α及びβ−デフェンシンの３つの分子内ジスルフィド結合（Ｓ−Ｓ）のパターンが記されている。 Ｂ．デフェンシン及びカテリシジンの三次元解（ｈ−ＢＤ２及びカテリシジン）又は結晶（ＨＤ−５）構造を示す図である。例示のために用いられたタンパク質データバンク受託番号は、以下のとおりである：ＨＤ−５の１ＺＭＰ、ｈ−ＢＤ２の１Ｅ４Ｑ及びＬＬ−３７の２ＦＣＧ（ｈＣＡＰ−１８のＣ末端断片）。βターンは橙で表されており、αヘリックスは赤で表されている。分子の疎水性が示されている。
【図７】慢性的腸炎の病態生理学モデルを示す図である。微生物及び／又はその産物が、ＴＬＲ及び／又はＮＯＤによって検知されると（図の左側）、ＮＦ−κＢ及び／又はその他の転写因子（本文参照のこと）の作用によってＣＡＭＰが合成される。ＣＡＭＰは、その分泌及び細胞外プロセシングの後、（ｉ）炎症細胞の寛容及び補充を促進し、（ｉｉ）微生物病原体の浸潤を防ぎ、（ｉｉｉ）慢性的腸炎の発生から保護する。異常な抗菌ペプチド合成及び／又は機能は、獲得免疫系の異常な活性化、及び微生物の脅威及び／又は自然免疫の低下（即ち、ＮＯＤ２突然変異）による腸炎につながり得る（図の右側）。
【図８】５−ＡＳＡ、ロシグリタゾン、ラセミＲ３４＆エナンチオマー３４−Ｅ２は、Ｃａｃｏ−２細胞においてｈＢＤ１（ヒトデフェンシン−１）の発現を誘導することを示す図である。
【図９】健常マウス（ｎ＝５）における、ｍＲＮＡレベルでの、ＰＰＡＲ−γ及びＬＬ３７（デフェンシン）レベルに対するラセミＲ３４＆エナンチオマー３４−Ｅ１＆３４−Ｅ２の効果を示す図である。健常マウスにおける１０日間の間の浣腸による５−ＡＳＡ（３０ｍＭ）、Ｒ３４（１ｍＭ）、Ｅｌ及びＥ２（１ｍＭ）の投与は、結腸ＰＰＡＲγ ｍＲＮＡ及びデフェンシン発現を誘導した。
【図１０】表１を示す図である。デフェンシン及びカテリシジンの多用途の機能。α／β−デフェンシン及びカテリシジンの機能が、表に列挙されており、本文において論じられている。
【発明を実施するための形態】
【０１３２】
Ｗｎｔ／Ｔｃｆ／β−カテニンシグナル伝達経路に対する、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲ−γ）の直接的な負の役割を考え、デフェンシン生合成を調査するためにＰＰＡＲ−γ活性化を調べた。
【０１３３】
実験データ
定量ＰＣＲ分析によって調べられるように、試験したＰＰＡＲ−γアゴニスト、ロシグリタゾン（１μＭで、１、３又は６時間）及びその他のものは、Ｃａｃｏ−２細胞においてＨＤ−５を活性化する（図１〜５）。
【０１３４】
方法
培養腸上皮細胞系、即ち、Ｃａｃｏ−２（ヒト起源の）及びＩＣｃｌ２（マウス起源の）を、ＧＳＫ−３阻害剤ＬｉＣｌ（２０μＭ）又はホスファターゼ阻害剤カリクリン（５０ｎＭ）で処理し、続いて、ＰＰＡＲ−γアゴニスト、例えば、ロシグリタゾン（１μＭ）で刺激した、又はしなかった。
【０１３５】
デフェンシン並びにＷｎｔ及びＰＰＡＲ−γシグナル伝達経路両方の既知標的遺伝子の発現を、定量的リアルタイムＰＣＲによって調査した。ＧＳＫ３、β−カテニン、ＮＦ−κＢ、ＥＲＫ１／２、ＳＡＰＫ／ＪＮＫ及びｐ３８の活性化を、特異的免疫ブロット法によって測定した。
【０１３６】
ＰＰＡＲ−γの抗菌的役割を調査するために、Ｒａｗマクロファージ細胞系において、クローン病関連大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）（ＬＦ８２）の細胞内複製を、ロシグリタゾンでの刺激時又は非刺激時に測定した。
【０１３７】
結果
ロシグリタゾン及びその他のＰＰＡＲ−γアクチベーターととものインキュベーションによって、腸上皮細胞によるα−（ＨＤ−５及びＨＤ−６）及びβ−（Ｄｅｆｂ１０）デフェンシンの両方の発現が大幅に増加した（図３）。このような抗菌遺伝子発現は、β−カテニン分解を促進するカリクリンによる同時刺激後に相乗作用を与えられた。したがって、ロシグリタゾンによるＰＰＡＲ−γ活性化を介するＬＦ８２の細胞内複製の減少が観察された。
【０１３８】
逆に、Ｗｎｔ／Ｔｃｆ／β−カテニン標的遺伝子、サイクリン−Ｄ１の発現及びβ−カテニンの安定性は、カリクリン及びロシグリタゾン両方による刺激時に著しく低下した。
【０１３９】
最後に、ＬｉＣｌ、Ｗｎｔ／ＴＣＦ／β−カテニン依存性シグナル伝達経路のアクチベーターは、同時刺激時に、ロシグリタゾン誘導性デフェンシン遺伝子発現を妨げた。
【０１４０】
試験物質とのインキュベーションによって、腸上皮細胞によるα−（ＨＤ−５及びＨＤ−６）及びβ−（Ｄｅｆｂ１０）デフェンシン両方の発現が大幅に増大した（図３は、ロシグリタゾンの効果を示す）。したがって、ロシグリタゾンによるＰＰＡＲ−γ活性化による、ＬＦ８２の細胞内複製の減少が観察された。
【０１４１】
結論
総じて、結果は、ＰＰＡＲ−γ活性化は、Ｔｃｆ／β−カテニン複合体の形成を負に調節することによって抗菌性遺伝子プログラムの誘導を促進することを示す。これらの知見は、クローン病、潰瘍性大腸炎、インテスティナル・バウエル・シンドローム（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｂｏｗｅｌ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、急性憩室炎などの多数の胃腸障害におけるデフェンシン欠乏を補完することにおける、また、結腸憩室症、分類不能大腸炎及び感染性大腸炎に冒されている患者における急性憩室炎などの状態の予防ための、ＰＰＡＲ−γの治療的可能性を強調する。
【０１４２】
さらに、これらの知見は、その他の粘膜障害、例えば、それだけには限らないが、眼の炎症及び感染、歯周病、アレルギー性及び非アレルギー性鼻炎及び細菌性膣疾患などのもの及び膿痂疹、丹毒、皮膚炎、毛包炎及び尋常性ざ瘡などの皮膚炎症状態及び感染において、デフェンシン欠乏を補完することにおけるＰＰＡＲ−γアゴニストの治療的可能性を強調する。
【０１４３】
ラセミ化合物３４及びエナンチオマー３４−Ｅ１及び３４−Ｅ２を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ研究
材料
５−ＡＳＡは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ Ｑｕｅｎｔｉｎ Ｆａｌｌａｖｉｅｒ、Ｆｒａｎｃｅ）で購入した。ロシグリタゾンは、標準手順に従って実験室で合成した。ラセミ化合物３４及び化合物の２種のエナンチオマー、３４−Ｅｌ及び３４−Ｅ２は、Ｇｉｕｌｉａｎｉ ＳｐＡ（Ｍｉｌａｎｏ、Ｉｔａｌｙ）によって提供された。化合物は、ＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ）に再懸濁し、必要に応じて、１０Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨ＝７に調整した。
【０１４４】
結腸上皮細胞におけるｈＢＤ１デフェンシンの発現の調節
細胞系
結腸癌腫細胞系Ｃａｃｏ−２（ＡＴＣＣ ＨＴＢ−３９）を、それぞれ１０％又は２０％加熱−ＦＣＳ及び抗生物質を補給したＤＭＥＭで通常どおり増殖させた。細胞を、５％ ＣＯ２及び９５％相対湿度中、３７℃で、単層で増殖させ、インキュベートした。
【０１４５】
細胞を、５−ＡＳＡ、Ｒ３４、３４−Ｅ１及び３４−Ｅ２によって２４時間刺激した。製造業者の使用説明書に従ってＲｎｅａｓｙキット（Ｍａｃｈｅｒｅｙ Ｎａｇｅｌ、Ｈｏｅｒｄｔ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いて細胞から全ＲＮＡを単離した。ＲＮＡ定量は、分光光度法を用いて実施した。２０〜５０ユニットのＲＮアーゼ不含ＤＮアーゼＩ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ、ＵＳＡ）を用い、３７℃で３０分間処理した後、オリゴ−ｄＴプライマー（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＵＳＡ）を用いて一本鎖ｃＤＮＡを合成した。ＧｅｎｅＡｍｐ Ａｂｉｐｒｉｓｍ ７０００（Ａｐｐｌｅｒａ、Ｃｏｕｒｔａｂｏｅｕｆ、Ｆｒａｎｃｅ）で、ｈＢＤ１のヒト特異的オリゴヌクレオチド（Ｓ：５’−ＡＴＡＣＴＴＣＡＡＡＡＧＣＡＡＴＴＴＴＣＣＴＴＴＡＴ−３’；ＡＳ：５’−ＴＴｇＴＣＴＧＡＧＡＴＧＧＣＣＴＣＡｇｇＴｇｇＴＡＡＣ−３’）とともにＳＹＢＲグリーンＭａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｅｒａ、Ｃｏｕｒｔａｂｏｅｕｆ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いてｍＲＮＡを定量した。各アッセイにおいて、較正される対照及び鋳型を含まない対照を含めた。各サンプルを３連で実施した。ＳＹＢＲグリーン色素強度は、Ａｂｉｐｒｉｓｍ ７０００ ＳＤＳソフトウェア（Ａｐｐｌｅｒａ、Ｃｏｕｒｔａｂｏｅｕｆ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いて分析した。すべての結果は、影響を受けないヒトβ−アクチンのハウスキーピング遺伝子（Ｓ：５’−ＴＣＡＣＣＣＡＣＡＣＴｇＴｇＣＣＣＡＴＣＴＡＣｇ−３’；ＡＳ：５’−ＣＡｇＣｇｇＡＡＣＣｇＣＴＣＡＴＴｇＣＣＡＡＴｇ−３’）に対して標準化した。
【０１４６】
健常マウスにおけるβ−デフェンシン発現の評価
５−ＡＳＡ（３０ｍＭ）、ラセミＲ３４及び３４−Ｅ１＆３４−Ｅ２（１ｍＭ）を、８日間の直腸点滴注入によって投与した。死後、製造業者の使用説明書に従ってＲｎｅａｓｙキット（Ｍａｃｈｅｒｅｙ Ｎａｇｅｌ、Ｈｏｅｒｄｔ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いて、全マウス結腸組織から全ＲＮＡを単離した。ＲＮＡ定量は、分光光度法を用いて実施した。２０〜５０ユニットのＲＮアーゼ不含ＤＮアーゼＩ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ、ＵＳＡ）を用い、３７℃で３０分間処理した後、オリゴ−ｄＴプライマー（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＵＳＡ）を用いて一本鎖ｃＤＮＡを合成した。ＧｅｎｅＡｍｐ Ａｂｉｐｒｉｓｍ ７０００ （Ａｐｐｌｅｒａ、Ｃｏｕｒｔａｂｏｅｕｆ、Ｆｒａｎｃｅ）で、ＬＬ３７のマウス特異的オリゴヌクレオチド（Ｓ：５’−ｇＣＴｇＡＴＴＣＴＴＴＴｇＡＣＡＴＣＡｇＣＴｇＴＡＡ−３’ＡＳ：５’−ｇＣＣＡｇＣＣｇｇｇＡＡＡＴＴＴＴＣＴ−３’）とともにＳＹＢＲグリーンＭａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｅｒａ、Ｃｏｕｒｔａｂｏｅｕｆ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いてｍＲＮＡを定量した。各アッセイにおいて、較正された対照及び鋳型を含まない対照を含めた。各サンプルを３連で実施した。ＳＹＢＲグリーン色素強度は、Ａｂｉｐｒｉｓｍ ７０００ ＳＤＳソフトウェア（Ａｐｐｌｅｒａ、Ｃｏｕｒｔａｂｏｅｕｆ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いて分析した。すべての結果は、影響を受けないハウスキーピング遺伝子β−アクチン（Ｓ：５’−ｇｇｇＴＣＡｇＡＡｇｇＡＴＴＣＣＴＡＴｇ−３’；ＡＳ：５’ｇｇＴＣＴＣＡＡＡＣＡＴｇＡＴＣＴｇｇｇ−３’）に対して標準化した。
【０１４７】
ｉｎ ｖｉｖｏ研究
ラットにおける内臓痛の調節
動物
この研究には、体重１７５〜２００ｇの雄のスプラーグ−ドーリーラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、Ｉ’Ａｒｂｒｅｓｌｅ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いた。ラットは、実験前に実験室条件で１週間維持した。これらの動物を、ケージあたり５匹収容し、餌及び水は随意利用可能にした。すべての研究は、疼痛の研究のための国際協会の研究及び倫理問題）（Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｅｔｈｉｃａｌ Ｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｐａｉｎ）の委員会の提案（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ Ｍ、Ｐａｉｎ １９８３年；１６：１０９〜１１０頁）に従って実施した。動物への不快感を避ける又は最小にするために、特に、収容条件に関して十分な注意を払った。
【０１４８】
結腸感受性の評価
結腸に入れたバルーンの膨張による結腸直腸膨満（ＣＲＤ）の際の行動反応を誘導するのに必要な結腸内圧を測定することによって、動物における痛覚を評価した。この反応は、動物の身体の後部の上昇及び重篤な収縮に対応する明確に視認できる腹部収縮を特徴とする（Ａｌ Ｃｈａｅｒ、ｇａｓｔｒｏ ２０００年；Ｔａｒｒｅｒｉａｓ、ｐａｉｎ２００２年；Ｂｏｕｒｄｕら、２００５年）。手短には、ラットに、揮発性麻酔（２％イソフルラン）で麻酔し、バルーン（Ｂｏｕｒｄｕら、２００５年に先に記載されたように調製した）を、最小の侵襲的方法で、肛門から７ｃｍに直腸内挿入し、カテーテルを尾の付け根にテープで貼った。５分後、ラットを４０×４０ｃｍのプレキシグラスボックスの中央に入れ、カテーテルを電子バロスタット装置（Ｇ＆Ｊ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ Ｉｎｃ．、Ｔｏｒｏｎｔｏ、Ｃａｎａｄａ）に接続した。疼痛行動が示されるまで、又は８０ｍｍＨｇのカットオフ圧力に達するまで漸増圧力を連続的にかけた。
【０１４９】
動物の治療
化合物は、直腸内点滴注入によって毎日投与した。各浣腸のために、カテーテル（２ｍｍフォガティー（Ｆｏｇａｒｔｙ）カテーテル）を肛門から７ｃｍの結腸中に入れ、動物に、ＤＭＥＭ培地に最適濃度で再懸濁し、必要に応じて１０Ｎ ＮａＯＨによってｐＨ７に調整した５００μｌの化合物を２１日間与えた。対照動物には、培地単独を与えた。処理の２及び３週間後、内臓痛に対する化合物の効果を評価した。
【０１５０】
統計
すべての比較は、２つの独立サンプルの並べかえ検定を用いて分析した。統計は、ソフトウェアＳｔａｔＸａｃｔ（Ｃｙｔｅｌ Ｉｎｃ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ、ＵＳＡ）を用いて計算した。差異は、Ｐ値が＜０．０５である場合に統計的に有意と考えた。
【０１５１】
結論
得られたｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ結果は、５−ＡＳＡ及びＲ３４、Ｅ１及びＥ２が用いられた場合のデフェンシン発現の誘導を明らかに示す。特に、驚くべきことに、Ｅ１及びＥ２は、５−ＡＳＡと比較して高い効力を示した。
【０１５２】
（参考文献）
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＡＭＰ発現の誘導における、ロシグリタゾン、５−ＡＳＡ又は以下の一般式（Ｉ）の化合物：
【化１】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、−Ｈ又は１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択されるか、或いは、一緒になって５又は６個の原子を有する芳香族又は脂肪族環を形成し；
同一であっても異なっていてもよいＹ及びＺは、−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＯＲ３、−ＣＨ（ＯＲ３）ＣＯＯＨを含む群から選択され、ここで、Ｒ３は、Ｈ、フェニル、ベンジル、−ＣＦ３又は−ＣＦ２ＣＦ３、ビニル、アリル及び１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基から選択される］
又は以下の一般式（Ｉａ）の化合物：
【化２】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、Ｈ、−ＣｎＨ２ｎ−１（ここで、ｎ＝１〜６である）、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択されるか、或いは、一緒になって５又は６個の原子を有する芳香族又は脂肪族環を形成し；
Ｒ３は、−ＣＯ−ＣＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＨ、−ＯＲ６から選択され、ここで、Ｒ６は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基であり；
Ｒ４は、Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基、フェニル、ベンジル、−ＣＦ３又は−ＣＦ２ＣＦ３、ビニル又はアリルから選択され；Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８は、水素原子であるか、
或いは、
Ｒ３及びＲ４、Ｒ４及びＲ５、又はＲ７及びＲ８は一緒になって、Ｎ、Ｏを含む群から独立に選択される１〜２個のヘテロ原子を含む５又は６個の原子を有する、ベンゼン、芳香族又は脂肪族環と縮合している環を形成する］
の使用。
【請求項２】
ＣＡＭＰ発現が、ＰＰＡＲ−γ受容体を有する組織におけるものである、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
ＣＡＭＰ発現が、ＰＰＡＲ−γ受容体を有する上皮又は粘膜組織におけるものである、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
ＣＡＭＰ発現が腸管におけるものである、請求項１から３までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
化合物が、
５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）
ロシグリタゾン
２−ヒドロキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物２０）
２−メトキシ−２−（４’−アミノフェニル）酢酸（化合物２３）
２−エトキシ−２−（３’−アミノフェニル）酢酸（化合物３２）
２−エトキシ−２−（４’−アミノフェニル）酢酸（化合物３３）
２−メトキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「Ｒ３４」
２−エトキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３９）
２−エトキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物４０）
４−アミノ−Ｎ−ヒドロキシ−２−メトキシベンズアミド（化合物１３）
５−アミノ−Ｎ−ヒドロキシ−２−メトキシベンズアミド（化合物１４）
５−アミノ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−カルボン酸（化合物１７）
５−アミノ−２−エトキシ−Ｎ−ヒドロキシベンズアミド（化合物２６）
６−アミノ−２，２−ジメチル−４Ｈ−ベンゾ［１，３］ジオキシン−４−オン（化合物２８）
１，２，３，４−テトラヒドロ−６−ヒドロキシキノリン−５−カルボン酸（化合物２９）
５−アミノ−２−イソプロポキシ安息香酸（化合物３１）
６−メトキシキノリン−５−カルボン酸（化合物３６）
６−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−５−カルボン酸（化合物３７）
５−ジイソプロピルアミノサリチル酸（化合物３８）
４−ジイソプロピルアミノサリチル酸（化合物４２）
５−アミノサリチロ−ヒドロキサム酸（化合物５）
３−ジメチルアミノサリチル酸（化合物６）
２−メトキシ−４−アミノ安息香酸（化合物７）
２−メトキシ−５−アミノ安息香酸（化合物８）
５−メチルアミノサリチル酸（化合物９）
４−メチルアミノサリチル酸（化合物１２）
４−アセチルアミノサリチル酸（化合物１６）
２−エトキシ−４−アミノ安息香酸（化合物１８）
２−エトキシ−５−アミノ安息香酸（化合物１９）
４−ジメチルアミノサリチル酸（化合物２４）
２−エトキシ−４−アミノベンゾイルヒドロキサム酸（化合物２５）
６−ヒドロキシキノリン−５−カルボン酸（化合物２７）
２−（２−プロピル）オキシ−４−アミノ安息香酸（化合物３０）
４−（１−ピペラジニル）サリチル酸（化合物４１）
５−オキサ−キノリン６−カルボン酸（化合物１５）
２−ヒドロキシ−２−（３−アミノフェニル）酢酸（化合物１０）
２−ヒドロキシ−２−（４−アミノフェニル）酢酸（化合物１１）
２−ヒドロキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物２１）
２−メトキシ−２−（３’−アミノフェニル）酢酸（化合物２２）
２−メトキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３５）
及び２−メトキシ−３−（３−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）
を含む群から選択され得る、請求項１から４までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
化合物が、以下を含む群から選択される、請求項１から５までのいずれか一項に記載の使用。
【化３】
【請求項７】
化合物が、以下を含む群から選択される、請求項１から５までに記載の使用。
【化４】
【請求項８】
化合物が非立体特異的であり、エナンチオマー的に純粋な、ラセミ混合物又は一方のエナンチオマーをもう一方を上回って過剰に含む混合物である、請求項１から７までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
化合物が、クローン病、潰瘍性大腸炎、インテスティナル・バウエル・シンドローム及び急性憩室炎を含む群から選択される消化管の状態の治療又は予防においてＣＡＭＰ産生を誘導する、請求項１から８までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
憩室炎が、結腸憩室症、分類不能大腸炎及び感染性大腸炎を含む群から選択される、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
化合物が、膿痂疹、丹毒、皮膚炎、毛包炎及び尋常性ざ瘡などの皮膚炎症状態及び感染の治療又は予防においてＣＡＭＰ産生を誘導する、請求項１から８までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
化合物が、眼、口腔、鼻又は膣粘膜を侵すもの、例えば、眼の炎症及び感染、歯周病、アレルギー性及び非アレルギー性鼻炎及び細菌性膣疾患などの粘膜の炎症状態及び感染の治療又は予防においてＣＡＭＰ産生を誘導する、請求項１から８までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
クローン病、潰瘍性大腸炎、インテスティナル・バウエル・シンドローム、並びに結腸憩室症、分類不能大腸炎及び感染性大腸炎などの急性憩室炎をはじめとする消化管の状態；膿痂疹、丹毒、皮膚炎、毛包炎及び尋常性ざ瘡などの皮膚炎症状態及び感染；並びに眼の炎症及び感染、歯周病、アレルギー性及び非アレルギー性鼻炎及び細菌性膣疾患をはじめとする眼、口腔、鼻又は膣粘膜を侵すものなどの状態及び感染を含む群から選択される状態のいずれかの治療又は予防において、薬剤として使用するための組成物の調製における、請求項１から８までのいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１４】
化合物が被験体においてＣＡＭＰ発現を調節する、請求項１から１２までのいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１５】
抗炎症剤及び／又は抗菌剤を同定する方法であって、試験物質がＣＡＭＰ発現をアップレギュレートできるかどうかを判定することを含む方法。
【請求項１６】
ＣＡＭＰ発現が消化管におけるものである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
可能性ある抗炎症剤及び抗菌剤を同定する方法であって、試験物質がＰＰＡＲ−γを刺激してＣＡＭＰを産生できるかどうかを判定することを含む方法。
【請求項１８】
発現されるＣＡＭＰがデフェンシンである、請求項１から１７までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９】
発現されるＣＡＭＰがカテリシジンである、請求項１から１７に記載の使用。
【請求項２０】
ＣＡＭＰ発現の誘導に用いるための、ロシグリタゾン、５−ＡＳＡ又は以下の一般式（Ｉ）の化合物：
【化５】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、−Ｈ又は１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択されるか、或いは、一緒になって５又は６個の原子を有する芳香族又は脂肪族環を形成し；
同一であっても異なっていてもよいＹ及びＺは、−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＯＲ３、−ＣＨ（ＯＲ３）ＣＯＯＨを含む群から選択され、ここで、Ｒ３は、Ｈ、フェニル、ベンジル、−ＣＦ３又は−ＣＦ２ＣＦ３、ビニル、アリル及び１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基から選択される］
又は以下の一般式（Ｉａ）の化合物：
【化６】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、Ｈ、−ＣｎＨ２ｎ−１（ここで、ｎ＝１〜６である）、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択されるか、或いは、一緒になって５又は６個の原子を有する芳香族又は脂肪族環を形成し；
Ｒ３は、−ＣＯ−ＣＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＨ、−ＯＲ６から選択され、ここで、Ｒ６は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基であり；
Ｒ４は、Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基、フェニル、ベンジル、−ＣＦ３又は−ＣＦ２ＣＦ３、ビニル又はアリルから選択され；Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８は、水素原子であるか、
或いは、
Ｒ３及びＲ４、Ｒ４及びＲ５、又はＲ７及びＲ８は一緒になって、Ｎ、Ｏを含む群から独立に選択される１〜２個のヘテロ原子を含む５又は６個の原子を有する、ベンゼン、芳香族又は脂肪族環と縮合している環を形成する］
を含むＣＡＭＰ誘導性組成物。
【請求項２１】
クローン病、潰瘍性大腸炎、インテスティナル・バウエル・シンドローム、並びに結腸憩室症、分類不能大腸炎及び感染性大腸炎などの急性憩室炎をはじめとする消化管の状態；膿痂疹、丹毒、皮膚炎、毛包炎及び尋常性ざ瘡などの皮膚炎症状態及び感染；並びに眼の炎症及び感染、歯周病、アレルギー性及び非アレルギー性鼻炎及び細菌性膣疾患をはじめとする眼、口腔、鼻又は膣粘膜を侵すものなどの状態及び感染を含む群から選択される状態を患っている患者を治療する方法であって、製薬上許容される量の、請求項１から８までに記載される少なくとも１種の化合物を投与することを含む方法。
【請求項１】
ＣＡＭＰ発現の誘導における、ロシグリタゾン、５−ＡＳＡ又は以下の一般式（Ｉ）の化合物：
【化１】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、−Ｈ又は１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択されるか、或いは、一緒になって５又は６個の原子を有する芳香族又は脂肪族環を形成し；
同一であっても異なっていてもよいＹ及びＺは、−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＯＲ３、−ＣＨ（ＯＲ３）ＣＯＯＨを含む群から選択され、ここで、Ｒ３は、Ｈ、フェニル、ベンジル、−ＣＦ３又は−ＣＦ２ＣＦ３、ビニル、アリル及び１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基から選択される］
又は以下の一般式（Ｉａ）の化合物：
【化２】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、Ｈ、−ＣｎＨ２ｎ−１（ここで、ｎ＝１〜６である）、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択されるか、或いは、一緒になって５又は６個の原子を有する芳香族又は脂肪族環を形成し；
Ｒ３は、−ＣＯ−ＣＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＨ、−ＯＲ６から選択され、ここで、Ｒ６は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基であり；
Ｒ４は、Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基、フェニル、ベンジル、−ＣＦ３又は−ＣＦ２ＣＦ３、ビニル又はアリルから選択され；Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８は、水素原子であるか、
或いは、
Ｒ３及びＲ４、Ｒ４及びＲ５、又はＲ７及びＲ８は一緒になって、Ｎ、Ｏを含む群から独立に選択される１〜２個のヘテロ原子を含む５又は６個の原子を有する、ベンゼン、芳香族又は脂肪族環と縮合している環を形成する］
の使用。
【請求項２】
ＣＡＭＰ発現が、ＰＰＡＲ−γ受容体を有する組織におけるものである、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
ＣＡＭＰ発現が、ＰＰＡＲ−γ受容体を有する上皮又は粘膜組織におけるものである、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
ＣＡＭＰ発現が腸管におけるものである、請求項１から３までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
化合物が、
５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）
ロシグリタゾン
２−ヒドロキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物２０）
２−メトキシ−２−（４’−アミノフェニル）酢酸（化合物２３）
２−エトキシ−２−（３’−アミノフェニル）酢酸（化合物３２）
２−エトキシ−２−（４’−アミノフェニル）酢酸（化合物３３）
２−メトキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）「Ｒ３４」
２−エトキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３９）
２−エトキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物４０）
４−アミノ−Ｎ−ヒドロキシ−２−メトキシベンズアミド（化合物１３）
５−アミノ−Ｎ−ヒドロキシ−２−メトキシベンズアミド（化合物１４）
５−アミノ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−カルボン酸（化合物１７）
５−アミノ−２−エトキシ−Ｎ−ヒドロキシベンズアミド（化合物２６）
６−アミノ−２，２−ジメチル−４Ｈ−ベンゾ［１，３］ジオキシン−４−オン（化合物２８）
１，２，３，４−テトラヒドロ−６−ヒドロキシキノリン−５−カルボン酸（化合物２９）
５−アミノ−２−イソプロポキシ安息香酸（化合物３１）
６−メトキシキノリン−５−カルボン酸（化合物３６）
６−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−５−カルボン酸（化合物３７）
５−ジイソプロピルアミノサリチル酸（化合物３８）
４−ジイソプロピルアミノサリチル酸（化合物４２）
５−アミノサリチロ−ヒドロキサム酸（化合物５）
３−ジメチルアミノサリチル酸（化合物６）
２−メトキシ−４−アミノ安息香酸（化合物７）
２−メトキシ−５−アミノ安息香酸（化合物８）
５−メチルアミノサリチル酸（化合物９）
４−メチルアミノサリチル酸（化合物１２）
４−アセチルアミノサリチル酸（化合物１６）
２−エトキシ−４−アミノ安息香酸（化合物１８）
２−エトキシ−５−アミノ安息香酸（化合物１９）
４−ジメチルアミノサリチル酸（化合物２４）
２−エトキシ−４−アミノベンゾイルヒドロキサム酸（化合物２５）
６−ヒドロキシキノリン−５−カルボン酸（化合物２７）
２−（２−プロピル）オキシ−４−アミノ安息香酸（化合物３０）
４−（１−ピペラジニル）サリチル酸（化合物４１）
５−オキサ−キノリン６−カルボン酸（化合物１５）
２−ヒドロキシ−２−（３−アミノフェニル）酢酸（化合物１０）
２−ヒドロキシ−２−（４−アミノフェニル）酢酸（化合物１１）
２−ヒドロキシ−３−（４’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物２１）
２−メトキシ−２−（３’−アミノフェニル）酢酸（化合物２２）
２−メトキシ−３−（３’−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３５）
及び２−メトキシ−３−（３−アミノフェニル）プロピオン酸（化合物３４）
を含む群から選択され得る、請求項１から４までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
化合物が、以下を含む群から選択される、請求項１から５までのいずれか一項に記載の使用。
【化３】
【請求項７】
化合物が、以下を含む群から選択される、請求項１から５までに記載の使用。
【化４】
【請求項８】
化合物が非立体特異的であり、エナンチオマー的に純粋な、ラセミ混合物又は一方のエナンチオマーをもう一方を上回って過剰に含む混合物である、請求項１から７までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
化合物が、クローン病、潰瘍性大腸炎、インテスティナル・バウエル・シンドローム及び急性憩室炎を含む群から選択される消化管の状態の治療又は予防においてＣＡＭＰ産生を誘導する、請求項１から８までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
憩室炎が、結腸憩室症、分類不能大腸炎及び感染性大腸炎を含む群から選択される、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
化合物が、膿痂疹、丹毒、皮膚炎、毛包炎及び尋常性ざ瘡などの皮膚炎症状態及び感染の治療又は予防においてＣＡＭＰ産生を誘導する、請求項１から８までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
化合物が、眼、口腔、鼻又は膣粘膜を侵すもの、例えば、眼の炎症及び感染、歯周病、アレルギー性及び非アレルギー性鼻炎及び細菌性膣疾患などの粘膜の炎症状態及び感染の治療又は予防においてＣＡＭＰ産生を誘導する、請求項１から８までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
クローン病、潰瘍性大腸炎、インテスティナル・バウエル・シンドローム、並びに結腸憩室症、分類不能大腸炎及び感染性大腸炎などの急性憩室炎をはじめとする消化管の状態；膿痂疹、丹毒、皮膚炎、毛包炎及び尋常性ざ瘡などの皮膚炎症状態及び感染；並びに眼の炎症及び感染、歯周病、アレルギー性及び非アレルギー性鼻炎及び細菌性膣疾患をはじめとする眼、口腔、鼻又は膣粘膜を侵すものなどの状態及び感染を含む群から選択される状態のいずれかの治療又は予防において、薬剤として使用するための組成物の調製における、請求項１から８までのいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１４】
化合物が被験体においてＣＡＭＰ発現を調節する、請求項１から１２までのいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１５】
抗炎症剤及び／又は抗菌剤を同定する方法であって、試験物質がＣＡＭＰ発現をアップレギュレートできるかどうかを判定することを含む方法。
【請求項１６】
ＣＡＭＰ発現が消化管におけるものである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
可能性ある抗炎症剤及び抗菌剤を同定する方法であって、試験物質がＰＰＡＲ−γを刺激してＣＡＭＰを産生できるかどうかを判定することを含む方法。
【請求項１８】
発現されるＣＡＭＰがデフェンシンである、請求項１から１７までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９】
発現されるＣＡＭＰがカテリシジンである、請求項１から１７に記載の使用。
【請求項２０】
ＣＡＭＰ発現の誘導に用いるための、ロシグリタゾン、５−ＡＳＡ又は以下の一般式（Ｉ）の化合物：
【化５】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、−Ｈ又は１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択されるか、或いは、一緒になって５又は６個の原子を有する芳香族又は脂肪族環を形成し；
同一であっても異なっていてもよいＹ及びＺは、−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＯＲ３、−ＣＨ（ＯＲ３）ＣＯＯＨを含む群から選択され、ここで、Ｒ３は、Ｈ、フェニル、ベンジル、−ＣＦ３又は−ＣＦ２ＣＦ３、ビニル、アリル及び１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基から選択される］
又は以下の一般式（Ｉａ）の化合物：
【化６】
［式中、
同一であっても異なっていてもよいＲ１及びＲ２は、Ｈ、−ＣｎＨ２ｎ−１（ここで、ｎ＝１〜６である）、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基を含む群から選択されるか、或いは、一緒になって５又は６個の原子を有する芳香族又は脂肪族環を形成し；
Ｒ３は、−ＣＯ−ＣＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＨ、−ＯＲ６から選択され、ここで、Ｒ６は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基であり；
Ｒ４は、Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐アルキル基、フェニル、ベンジル、−ＣＦ３又は−ＣＦ２ＣＦ３、ビニル又はアリルから選択され；Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８は、水素原子であるか、
或いは、
Ｒ３及びＲ４、Ｒ４及びＲ５、又はＲ７及びＲ８は一緒になって、Ｎ、Ｏを含む群から独立に選択される１〜２個のヘテロ原子を含む５又は６個の原子を有する、ベンゼン、芳香族又は脂肪族環と縮合している環を形成する］
を含むＣＡＭＰ誘導性組成物。
【請求項２１】
クローン病、潰瘍性大腸炎、インテスティナル・バウエル・シンドローム、並びに結腸憩室症、分類不能大腸炎及び感染性大腸炎などの急性憩室炎をはじめとする消化管の状態；膿痂疹、丹毒、皮膚炎、毛包炎及び尋常性ざ瘡などの皮膚炎症状態及び感染；並びに眼の炎症及び感染、歯周病、アレルギー性及び非アレルギー性鼻炎及び細菌性膣疾患をはじめとする眼、口腔、鼻又は膣粘膜を侵すものなどの状態及び感染を含む群から選択される状態を患っている患者を治療する方法であって、製薬上許容される量の、請求項１から８までに記載される少なくとも１種の化合物を投与することを含む方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【公表番号】特表２０１０−５２０１６６（Ｐ２０１０−５２０１６６Ａ）
【公表日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５５１１９４（Ｐ２００９−５５１１９４）
【出願日】平成２０年２月２７日（２００８．２．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０５２３５４
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１０４５５７
【国際公開日】平成２０年９月４日（２００８．９．４）
【出願人】（５０５３６７０１７）ジュリアーニ インターナショナル リミテッド (9)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年２月２７日（２００８．２．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０５２３５４
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１０４５５７
【国際公開日】平成２０年９月４日（２００８．９．４）
【出願人】（５０５３６７０１７）ジュリアーニ インターナショナル リミテッド (9)
【Ｆターム（参考）】
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