強化食品の調製のための天然生物活性成分の油状混合物
本発明は、ＥＰＡおよびＤＨＡで強化されたサーモン油と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物とを含む強化食品の調製において使用される天然生物活性成分に基づく油状混合物に関する。必要に応じて、本発明の混合物は微細藻類デュナリエラ・サリナを含むことができる。本発明はまた、天然生物活性成分に基づく前記油状混合物で強化され、ω−３およびω−６の比率が５未満のポリ不飽和脂肪酸、α−トコフェロール、超臨界ローズマリー抽出物由来のフェノール性ジテルペン類、および必要に応じて、デュナリエラ・サリナ微細藻類由来のカロテノイド類、これらの中での濃度が安定しているために、ヒトの健康に著しく有益な食品に関する。最後に、本発明は前記強化食品を調製する方法に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然生物活性成分で強化された食品分野に属する。より特定的には、本発明は、食品、とりわけ肉製品に添加され、陸生動物由来の食品の脂質不均衡を効果的に補償し、とりわけ、疾患の予防において、人の健康に有益な効果を与え、これらの食品の品質または安全性を損なわない、天然生物活性成分に基づく油状混合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ここ数年、動物起源の食品が市場に現れており、(中には肉製品もあるが)主に乳製品であり、これは、少量の魚油を添加することにより、オメガ−３（ω-３）ポリ不飽和脂肪酸を組み入れている。ω-３脂肪酸は、陸生動物由来の肉中にはそれらの天然形態では存在しておらず、健康効果を求めて動物起源の食品に組み入れるのは、長年の科学的経験に基づく。
【０００３】
従来、動物性脂肪は健康によくないと考えられている。数十年間、それらの脂質組成物は、心血管疾患にかかる確率と関連していた。実際、心血管危険のある個人は、食事中の乳製品および肉製品の全体量を制限するように推奨されている。長年、この観点に研究の焦点が合わせられ、これらの事象に対する科学的な説明を確立しようと試みられている。この関連に対する説が、とりわけ近年、かなり発達している。長年、動物性脂肪は、血清コレステロールレベルの上昇の一因であると考えられており、コレステロールレベルと心血管疾患との間には直接の関連が確立されている。最近になって、トリグリセリド類、とりわけ血液中のトリグリセリドレベル、および血液中のこれらのレベルの期間が、心血管危険因子の起源を構築すると考えられている。
【０００４】
前世紀の中頃あたりから、研究は、血清コレステロールレベルおよび心血管疾患の減少に対するポリ不飽和脂肪酸またはＰＵＦＡの効果を確立することに基づいていた。この領域での最も重要な研究は１９５４年にアーレンス（Ａｈｒｅｎｓ）ら（アーレンスＥ．Ｈ．，Ｄ．Ｈ．ブランケンホーン（Ｂｌａｎｋｅｎｈｏｒｎ）、Ｔ．Ｔ．テイスタス（Ｔａｓｔａｓ）（１９５４）、「食事における、動物の代わりに植物を代用するヒト血清脂質への効果」、Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．８６、８７２．）および１９５７年にケイズ（Ｋｅｙｓ）ら（ケイズＡ．，Ｊ．Ｔ．アンダーソン（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）、Ｆ．グランド（Ｇｒａｎｄｅ）（１９５７）、「食事脂肪に対する血清コレステロール応答」、ランセット（Ｌａｎｃｅｔ）１、７８７）により実施された研究であり、これらは、心血管疾患の予防におけるＰＵＦＡの重要性に対し、明確な証拠を確立した。その時以来、多くの研究がこの観点に焦点を合わせられており、これらのほとんどが、心臓に対するω−３の有益な効果を確認している。例えば、米国臨床栄養協会の米国臨床栄養ジャーナル（Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ ７６（２００２）３２６−３３０）において公表された、メルボルンのベイカー（Ｂａｋｅｒ）医学研究所の心血管栄養研究所、トキオ（Ｔｏｋｉｏ）の医学防御大学（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｅｆｅｎｓｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ）の医学部、アデレードの健康科学および栄養部のＣＳＩＲＯ（オーストラリア）およびＦホフマン（Ｈｏｆｆｍａｎ）−ラロシェ（Ｌａ Ｒｏｃｈｅ）のビタミン研究所（スイス）の研究員により、最近実施された臨床試験では、ω−３脂肪酸、とりわけ長鎖脂肪酸、言い換えると、ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）およびＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）が動脈の弾性、結果的には正常な血圧レベルを維持し、心血管危険性を減少させるのを助けることができることが示されている。この研究は、コレステロール血症患者に数週間の間ＤＨＡまたはＥＰＡまたはプラセボを投与することにあった。その後、超音波を使用して研究者らは参加者の動脈の弾性を測定した。ω−３脂肪酸を摂取した参加者は、動脈硬化の著しい減少を示し、プラセボを摂取した参加者は有意の変化を示さなかった。ＥＰＡを摂取したものは、大動脈の弾性を反映する、３６％の動脈全身抵抗の増加を示し、一方、ＤＨＡを摂取したものは２７％の増加を示した。
【０００５】
ω−３脂肪酸（ＥＰＡ／ＨＤＡ）は、弾性を増加させ、ＬＤＬコレステロールを低下させ、ＨＤＬを増加させ、動脈トリグリセリドレベルを減少させ、かつ抗血栓性であるので、血液脂質プロファイルを改善する。Ａｄｅｅｍｉａ（ロペス（Ｌｏｐｅｚ）−フエルトラス（Ｈｕｅｒｔｒａｓ）−Ｅ；バロ（Ｂａｒｏ）、−Ｌ；カレロ（Ｃａｒｒｅｒｏ）、−Ｊ−Ｊ；フォノラ（Ｆｏｎｏｌｌａ）、−Ｊ（２００３）「ｎ−３脂肪酸：健康効果および摂取を増加させるための機会」、アグロフードインダストリハイテック（Ａｇｒｏ Ｆｏｏｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ ｈｉ ｔｅｃｈ．）２００３；１４（３）；１８−２１；デュワイリィ（Ｄｅｗａｉｌｌｙ）、−Ｅ；ブランシェット（Ｂｌａｎｃｈｅｔ）、−Ｃ；ギングラス（Ｇｉｎｇｒａｓ）、−Ｓ；レミオイクス（Ｌｅｍｉｕｅｘ）、−Ｓ；ホルブ、−Ｂ−Ｊ（２００２）、「ジェームスベイクリー族（Ｊａｍｅｓ Ｂａｙ Ｃｒｅｅ）の大人の集団における心血管疾患危険因子およびｎ−３脂肪酸状態」、米国臨床栄養ジャーナル（Ａｍｅｒｉｃａｎ−Ｊｏｕｒｎａｌ−ｏｆ−Ｃｌｉｎｉｃａｌ−Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）．２００２；７６（１）：８５−９２）。
【０００６】
本文の前の部分において述べた、ω−３の有益な心血管効果の他に、これらの脂肪酸は、遺伝子発現および他の生物化学的身体プロセスに重要な効果を有する。ω−３の最も重要な役割の１つは、細胞膜の形成におけるものである。脳組織のほとんどが、ω−３脂肪酸リッチである。これらの効果の現在の知識は、米国生物化学・分子生物化学学会の生物化学ジャーナルにおいて発表されている、ミシガン州立大学の生理学・生物化学・分子生物学部のドナルド（Ｄｏｎａｌｄ）Ｂ．ジャンプ（Ｊｕｍｐ）による論文にまとめてある（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２２７（２００２）８７５５−８７５８）。
【０００７】
今日では、ポリ不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）ω−３およびω−６がヒト体内での重要な生物学的プロセスに関連すること、これらの比率は、多くの慢性疾患の予防において重要な因子となること知られており（シモポーロス（Ｓｉｍｏｐｏｕｌｏｓ）Ａ．Ｐ．（２００２）、「ω−６／ω−３必須脂肪酸の比率の重要性」、生物医学および薬物療法５６、３６５）、慢性疾患には癌が含まれる（ヌコンジョック（Ｎｋｏｎｄｊｏｃｋ）Ａ．，Ｂ．シャテンステイン（Ｓｈａｔｅｎｓｔｅｉｎ）、Ｐ．メイソヌーボ（Ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ）、Ｐ．ガジリアン（Ｇｈａｄｉｒｉａｎ）（２００３）、「特定脂肪酸およびヒト結腸直腸癌：概説」、癌検出および予防２７、５５）。推奨比は、１に近い（シモポーロスＡ．Ｐ．（１９９９）、「食品サプリプロスタグランジン類、ロイコトリエン類および必須脂肪酸類中のω−３脂肪酸の進化的観点」、６０、４２１）。豚肉中のω−６／ω−３比は平均して１０を超え、豚肉の脂身中ではさらに高くなる。そのため、どちらの場合も、推奨値よりもずっと高い。
【０００８】
Ａ．Ｐ．シモポーロスにより実施された興味深い研究［生物医学＆薬物療法５６（２００２）３６５−３７９］は、異なるω−６／ω−３比の利益を記述している。この研究によれば、下記の通りである：
ω−６／ω−３＝５は喘息に効果がある。
ω−６／ω−３＝４は心血管危険を減少させるのに効果があることが証明されている。
ω−６／ω−３＝２〜３の間は結腸癌および関節リウマチを予防する。
ω−６／ω−３比が低いほど、乳癌に対する予防効果が良好である。
ω−６／ω−３比が１０を超えると、有害作用が生じ始める。
ω−６の悪影響をω−３を添加することにより効果的に補償するためには、抗酸化活性を有する化合物を同時に投与しなければならない［Ｂ．デミッグ−アダムス（Ｄｅｍｍｉｇ−Ａｄａｍｓ）ｙＷ．Ｗ．アダムス、ＩＩＩ．［サイエンス２９８（２００２）２１４９−２１５３］。
【０００９】
１９５０年代の始まりから香辛料の抗酸化特性は公知である（チポルト（Ｃｈｉｐａｕｌｔ）Ｊ．Ｒ．，ムズモ（Ｍｕｚｕｍｏ）Ｇ．Ｒ．，ホーキンス（Ｈａｗｋｉｎｓ）Ｊ．Ｍ．，ランドバーグ（Ｌｕｎｄｂｅｒｇ）Ｗ．Ｏ．（１９５２）、「天然香辛料の抗酸化特性」、食品（Ｆｏｏｄ）Ｒｅｓ．１７，４６）。１９５５年には、ローズマリーがもっと優れた抗酸化活性を有する薬草の１つであることが始めて発見された（Ｒａｃ Ｍ．，オストリック−マチジャセビック（Ｏｓｔｒｉｃ−Ｍａｔｉｊａｓｅｖｉｃ）Ｂ．（１９５５）、「ローズマリーの抗酸化剤としての特性」、Ｒｅｖ．Ｆｒ．コープスグラス（Ｃｏｒｐｓ Ｇｒａｓ）２，７９６）。この一因となる化合物はすでに確立されている。１９６６年には、カルノソールが単離され（ブリースコーン（Ｂｒｉｅｓｃｏｒｎ）Ｃ．Ｈ．，フクス（Ｆｕｃｈｓ）Ａ．，ブリーデンバーグ（Ｂｒｅｄｅｎｂｅｒｇ）Ｊ．Ｂ．，マッケスニー（ＭａＣｈｅｓｎｅｙ）Ｊ．Ｄ．，ウェンカート（Ｗｅｎｋｅｒｔ）Ｅ．（１９６６）、「カルノソールの構造」、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２９、２２９３）、植物の抗酸化特性はこのフェノールジテルペンに起因した。その構造、およびカルノシン酸の構造が、１９８２年に確認され（Ｗｕ Ｊ．Ｗ．，リー（Ｌｅｅ） Ｍ．Ｈ．，ホ（Ｈｏ）Ｃ．Ｔ．，チャン（Ｃｈａｎ）Ｓ．Ｓ．（１９８２）、「ローズマリーから単離した天然抗酸化剤の化学構造の解明」、ＪＡＯＣＳ ５９、３３９）、同じ年に、ローズマノールおよびローズマリー酸が識別された（イナタニ（Ｉｎａｔａｎｉ）Ｒ．，ナカタニ（Ｎａｋａｔａｎｉ）Ｎ．，フワ（Ｆｕｗａ）Ｈ．，セト（Ｓｅｔｏ）Ｈ．（１９８２）、「ローズマリーから単離した新規抗酸化フェノール性ジテルペンの構造」、Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．４６，１６６６）。この後、ロスマジアール（イナタニ Ｒ．，ナカタニ Ｎ．，フワ Ｈ．（１９８３）、「ローズマリーの成分およびそれらの誘導体の抗酸化効果」、Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．４７，５２１）、エピロスマノールおよびイソロスマノール（ナカタニ Ｎ．、イナタニ Ｒ．（１９８４）、「ローズマリー由来の２つの抗酸化ジテルペン類およびローズマノールに対する修正した構造」、Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．４８、２０８１）、ローズマリジフェノールおよびローズマリキノン（ホウリハン（Ｈｏｕｌｉｈａｎ Ｃ．Ｍ．）、ホ Ｃ．Ｔ．、チャン Ｓ．Ｓ．（１９８５）、「ローズマリキノンの構造。ロスマリヌス・オフィシナリス（Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）Ｌ．から単離した新規抗酸化剤」、ＪＡＯＣＳ６２、１９８５）が確認された。これらの化合物に加えて、ローズマリーの葉は、抗酸化活性を有するフラボノイド類を含む（オカムラ（Ｏｋａｍｕｒａ）Ｎ．、ハラグチ（Ｈａｒａｇｕｃｈｉ）Ｈ．、ハシモト（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ）Ｋ．、ヤギ（Ｙａｇｉ）Ａ．（１９９４）、「ロスマリヌス・オフィシナリスの葉中のフラボノイド類」、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ．３７、１４６３）。
【００１０】
一般論として、これらの化合物を個々に考慮すると、カルノシン酸が、最も高い抗酸化活性を有し、続いてカルノソール、ローズマリー酸、ローズマノールおよびロスマジアールと続くことがわかっている（クベリエール（Ｃｕｖｅｌｉｅｒ）Ｍ．Ｅ．、リチャード（Ｒｉｃｈａｒｄ）Ｈ．、ベルセット（Ｂｅｒｓｅｔ）Ｃ．（１９９６）、「セージおよびローズマリーのパイロットプラントおよび市販の抽出物の抗酸化活性およびフェノール組成物」、ＪＡＯＣＳ ７３、６４５）。カルノソールが通常、主化合物であり、しばしば抽出物の９０％もの量に対応する。実際、カルノソースは、ローズマリー中で見いだされる他のフェノール化合物と共に、抽出操作中に、カルノシン酸の酸化により生成する。
【００１１】
ローズマリーのフェノール性ジテルペン類は、主な抗酸化剤として作用する（バサガ（Ｂａｓａｇａ）Ｈ．、テッカヤ（Ｔｅｋｋａｙａ）Ｃ．、アシケル（Ａｃｉｋｅｌ）Ｆ．（１９９７）、「ローズマリー抽出物の抗酸化およびフリーラジカル捕捉特性」、Ｌｅｂｅｎｓｍ．Ｗｉｓｓ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．３０、１０５；フランケルＥ．Ｎ．、シュー（Ｓｈｕ）Ｗ．Ｈ．、エシュバッチ（Ａｅｓｃｈｂａｔｃｈ）Ｒ．、Ｐｒｉｏｒ Ｅ．（１９９６）
「ローズマリー抽出物ならびにバルク油および水中油エマルジョン中のその成分類、カルノシン酸、カルノソール、およびローズマリー酸の抗酸化活性」Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．４４、１３１；ｙ ハラグチ Ｈ．、サイトー（Ｓａｉｔｏ）Ｔ．、オクムラ Ｎ．、ヤギ Ａ．（１９９５）、「ローズマリーオフィシナリス由来のジテルペノイド類による脂質過酸化およびスーパーオキシド発生の阻害」、Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄｉｃａ ６１、３３３）。これらの生成物がスーパーオキシド・ジスムターゼに対し同様の活性（セオク（Ｓｅｏｋ）Ｊ．Ｋ．、ダエセオク（Ｄａｅｓｅｏｋ）Ｈ．、クワング（Ｋｗａｎｇ）Ｄ．Ｍ．、ジューン（Ｊｏｏｎ）Ｓ．Ｒ．（１９９５）、「天然抗酸化剤のスーパーオキシド・ジスムターゼ様活性の測定」、Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９、８２２）および、酵素類、グルタチオンレダクターゼおよびＮＡＤＰＨ−キノンレダクターゼとの相乗効果を有することも示されており、酵素類はそれらを再生させ、それらの有するフリーラジカルブロック効果を増大させる。上記酵素類とのこれらの相乗効果は、肺、肝臓、および胃における発癌性薬剤に対する保護効果に起因しており、近年、マウスで証明されている（シングレタリー（Ｓｉｎｇｌｅｔａｒｙ）Ｋ．Ｗ．、ロクセック（Ｒｏｋｕｓｅｋ）Ｊ．Ｔ．（１９９７）、「食事由来のローズマリー抽出物によるマウスにおける生体異物解毒酵素の組織特異的増強」、ヒト栄養のための植物性食品（Ｐｌａｎｔ Ｆｏｏｄｓ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）５０、４７；オフォード（Ｏｆｆｏｒｄ）、Ｅ．Ａ．，Ｋ．Ｍａｃｅ、Ｏ．Ａｖａｎｔｉ、Ａ．Ｍ．Ａ．フェイファー（Ｐｆｅｉｆｅｒ）（１９９７）、「ヒト肝臓および気管支細胞において研究したローズマリー抽出物の化学的予防効果に関与する機構」、癌レター（Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ）１１４、２７５）。血液リポタンパク質の過酸化に対する抗酸化剤の作用機構もまた公知であり、動脈硬化の発症における重要な因子である（ピンチャク（Ｐｉｎｃｈｕｋ）Ｉ．、Ｄ．リヒテンバーグ（Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇ）（２００２）、「リポタンパク質過酸化に対する抗酸化剤作用の機序、速度論的実験に基づく評価」、脂質研究における進歩（Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ４１、２７９）。
【００１２】
ローズマリーは調理において非常に一般的な材料である。しかしながら、その強烈な香りおよびその風合いのために、所望の効果が得られるのに十分な量で肉製品に添加することができない。これが、抽出物を使用する理由である。
【００１３】
超臨界抽出が、抗酸化剤を得るのに、溶媒を用いた抽出にとって代わる良好な代替案である。異なる植物の香りおよび天然染料、ホップおよび含油樹脂を抽出する複数のプロセスが存在する。極端でない、非酸化状態での抽出により、溶媒残留物のない、完全な自然特性を有する高品質製品を製造することができる。
【００１４】
含油樹脂の場合は注目に値し、これらは一般に、同じ超臨界抽出プロセスにおいて分画することができ、異なる機能を有する生成物が生じる。シソ科植物（ローズマリー、タイム、オレガノ、セージなど）からの抽出物を用いて、いくつかの応用が実施されている（グエン（Ｎｇｕｙｅｎ）Ｕ．、エバンス（Ｅｖａｎｓ）Ｄ．Ｄ．、フラクマン（Ｆｒａｋｍａｎ）Ｇ．（１９９４）、「超臨界流体抽出により生成した天然抗酸化剤」、「食品および生体材料の超臨界流体処理」中、Ｅｄ．Ｓ．Ｓ．Ｈ．リズヴィ（Ｒｉｚｖｉ）．チャップマン（Ｃｈａｐｍａｎ）＆ホール（Ｈａｌｌ）、ロンドン、ｐ１０３）。これらの場合において、超臨界流体による抽出またはＳＦＥ（超臨界流体抽出）を用いると含油樹脂が得られ、これは２つの生成物、一般に芳香族特性および抗菌特性を有する精油および抗酸化剤に容易に分割できる。
【００１５】
現在では、ＳＦＥにより得られる天然抗酸化剤は、溶媒で抽出したものよりも大きな活性を有することは周知である。ドジャルマティ（Ｄｊａｒｍａｔｉ）および同僚（ドジャルマティ Ｚ．、ジャンコブ（Ｊａｎｋｏｖ）Ｒ．Ｍ．、シュウィルトリッヒ（Ｓｃｈｗｉｒｔｌｉｃｈ）Ｅ．、ドジュリナク（Ｄｊｕｌｉｎａｃ）Ｂ．、ドジョルドジェビク（Ｄｊｏｒｄｊｅｖｉｃ）Ａ．（１９９１）、「超臨界ＣＯ２抽出によりセージから得られた抽出物の高い抗酸化活性」、ＪＡＯＣＳ ６８、７３１）は、超臨界ＣＯ２を用いた抽出により得られたセージの抗酸化抽出物がＢＨＴよりも効果的であることを示した。より最近では、同じことが、黒コショウの抽出物でも起きることが見いだされた（チプスリスコンド（Ｔｉｐｓｒｉｓｕｋｏｎｄ）Ｎ．、フェルナンド（Ｆｅｒｎａｎｄｏ）Ｌ．Ｎ．、クラーク（Ｃｌａｒｋｅ）Ａ．Ｄ．（１９９８）、「豚の挽肉における、超臨界二酸化炭素抽出由来の黒コショウの精油および含油樹脂の抗酸化効果」、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．４６、４３２９）。
【００１６】
ローズマリー抗酸化抽出物中の植物化学物質類が重要な生物活性を有する。それらの不飽和脂肪酸への効果がとりわけ興味深い。
【００１７】
同様に、当技術分野の状態では、有益な特性が、微細藻類デュナリエラ・サリナ（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｓａｌｉｎａ）、微小緑藻類属に属する単細胞藻類（緑色植物）で公知である。この微細藻類は、高い塩分により、培養維持が著しく単純となり、病原体による外部からの汚染の危険がないので、精製化学製品を製造するのに商業的に初めて使用されたものであった（ボロウィツカ（Ｂｏｒｏｗｉｔｚｋａ）Ｌ．Ｊ．、モルトン（Ｍｏｕｌｔｏｎ）Ｔ．Ｐ．、ボロウィツカ Ｍ．Ａ．（１９８５）、「デュナリエラ・サリナ由来のβ−カロテンの塩分および商業生産」、バークレイ（Ｂａｒｃｌａｙ）Ｗ．Ｊ．、マキントッシュ（ＭｃＩｎｔｏｓｈ）Ｒ．、編、アルガスバイオマス（Ａｌｇａｓ Ｂｉｏｍａｓｓ）および学際的展望Ｊ．クラマーベルラグ（Ｃｒａｍｅｒ Ｖｅｒｌａｇ）、ベルダズ（Ｖｅｒｄｕｚ）中）。現在、デュナリエラ・サリナはβ−カロテンがリッチな食品サプリメントとして消費されている（モカディ（Ｍｏｋａｄｙ）Ｓ．、アブラモビシ（Ａｂｒａｍｏｖｉｃｉ）Ａ．、コーガン（Ｃｏｇａｎ）Ｕ．（１９８９）、「デュナリエラ・バルダウイル（ｂａｒｄａｗｉｌ）の潜在的食品サプリメントとしての安全性評価」、Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．２７、２２１；タナカ Ｙ．（１９９０）「デュナリエラ藻類を含むカプセル化食料の製造プロセス」、米国特許第ＵＳ４．９１５，９６５号、および日本特許第ＪＰ８８−４０７５５号；リーチ（Ｌｅａｃｈ）Ｇ．、オリベイラ（Ｏｌｉｖｅｉｒａ）Ｇ．、モライス（Ｍｏｒａｉｓ）Ｒ．（１９９８）、「β−カロテンリッチ粉末を製造するためのデュナリエラ・サリナの噴霧乾燥」、Ｊ．Ｉｎｄ．Ｍｉｃｒｏｂ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０、８２；オルセット（Ｏｒｓｅｔ）Ｓ．、リーチ（Ｌｅａｃｈ）Ｇ．Ｃ．、モライス（Ｍｏｒａｉｓ）Ｒ．、ヤング（Ｙｏｕｎｇ）Ａ．Ｊ．（１９９９）、「微細藻類デュナリエラ・サリナの噴霧乾燥：β−カロテン量および異性体組成への影響」、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．４７，４７８２）。オーストラリアは世界中で消費されているβ−カロテンの８０％を超えるものを製造しており、それらは全て、デュナリエラ・サリナの培養物由来である。β−カロテンはこの微細藻類中、その乾燥重量の１４重量％までの濃度で見いだされており、このため、この化合物を最も高い量で有する藻類ということになり、その蓄積量は培養条件に依存する（塩分、温度、光度）。最近の研究により、異なるβ−カロテン異性体、例えば９−シスの単離および精製が達成されており（ヤマノ（Ｙａｍａｎｏ）Ｙ．、ヨシザワ（Ｙｏｓｈｉｚａｗａ）Ｍ．，イトウ（Ｉｔｏ）Ｍ．（１９９９）、「デュナリエラ・バルダウィルからの９Ｚ−βカロテンの単離およびその立体選択的合成」、Ｊ．Ｎｕｔｒ．Ｓｃｉ．Ｖｉｔａｍｉｎ．４５、４９）、合成β−カロテン（主に「オールトランス」組成）と比較したその抗酸化活性が確立されている。機能特性を有する、この微細藻類中に存在する別の化合物はトコフェノール類（それらの異性体組成は知られていないので通常α−トコフェノールとして定量されている）、ポリ不飽和脂肪酸類（ＰＵＦＡ）（フランク（Ｆｒａｎｋｅ）Ｈ．、スプリンガー（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｍ．、プルズ（Ｐｕｌｚ）Ｏ．、チエツ（Ｔｉｅｔｚ）Ｕ．、ミュラー（Ｍｕｅｌｌｅｒ）Ｕ．（１９９４）、「微細藻類由来のポリ不飽和脂肪酸類」、Ｉｎｔ．Ｆｏｏｄ Ｉｎｇｒ．４，４１）、ステロール類（例えばエルゴステロール）、および水溶性ビタミン類（例えばチアミン、ピリドキシン、ビオチン、リボフラビン、など）である。この藻類では、フラボノイド類またはフェノール性化合物の存在は記述されていない。しかしながら、フラボノイド類またはフェノール性化合物が同様の微細藻類種において検出されているので、それらの存在が予測できる（ローハ（Ｒａｕｈａ）、ＪＰ；リームス（Ｒｅｍｅｓ）、Ｓ；ハイノネン（Ｈｅｉｎｏｎｅｎ）、Ｍ；ホピア、Ａ；カーコーネン（Ｋａｈｋｏｎｅｎ）、Ｍ；クジャラ（Ｋｕｊａｌａ）、Ｔ；ピーラジャ（Ｐｉｈｌａｊａ）、Ｋ；ブオレラ（Ｖｕｏｒｅｌａ）、Ｈ；ブオレラ、Ｐ．（２０００）、「フラボノイド類および他のフェノール性化合物を含むフィンランド植物抽出物の抗菌効果」、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５６、ｐ．３−１２）。
【００１８】
前に記述したもの以外のカロテノイド類の効果に関しては、ごく最近、ルテインなどのカロテノイド類の効果が、例えば、加齢黄斑変性症の予防において証明されている。これらの効果は、これらのカロテノイド類が別の非カロテノイド抗酸化剤と組み合わされると、より顕著になる（ビーティ（Ｂｅａｔｔｙ）Ｓら、Ｓｕｒｖ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ ２０００；４５：１１５−１３４；カイト（Ｃａｉｔ）ら、Ｐｒｏｇ Ｒｅｔｉｎ Ｅｙｅ Ｒｅｓ ２０００；１０：２０５−２１１）（ジャンケイラ（Ｊｕｎｑｕｅｉｒａ）ＶＢら、Ｍｏｌ Ａｓｐｅｃｔｓ Ｍｅｄ ２００４；２５：５−１６）（コー（Ｋｏｈ）ＨＨら、目の実験研究（Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）２００４；７９：２１−２７；ビーティＳら、Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ ２００４；４３０：７０−７６）。
【００１９】
最後に、当技術分野の状態では、α−トコフェロールは、栄養の観点から、および体内において、抗酸化剤としての有益な効果で公知である。
【００２０】
【非特許文献１】Ａｈｒｅｎｓ Ｅ．Ｈ．，Ｄ．Ｈ．Ｂｌａｎｋｅｎｈｏｒｎ，Ｔ．Ｔ．Ｔａｓｔａｓ（１９５４）“Ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｓｅｒｕｍ ｌｉｐｉｄｓ ｏｆ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｎｇ ｐｌａｎｔ ｆｏｒ ａｎｉｍａｌ ｆａｒ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉｅｔ”，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．８６、８７２．
【非特許文献２】Ｋｅｙｓ Ａ．，Ｊ．Ｔ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｆ．Ｇｒａｎｄｅ（１９５７）、“Ｓｅｒｕｍ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｄｉｅｔａｒｙ ｆａｔ”，Ｌａｎｃｅｔ １，７８７
【非特許文献３】Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ（Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ ７６（２００２）３２６−３３０） ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ
【非特許文献４】Ａｄｅｅｍｉａ（Ｌｏｐｅｚ−Ｈｕｅｒｔｒａｓ−Ｅ；Ｂａｒｏ，−Ｌ；Ｃａｒｒｅｒｏ，−Ｊ−Ｊ；Ｆｏｎｏｌｌａ，−Ｊ（２００３）“ｎ−３ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ：ｈｅａｌｔｈ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｎｄ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ ｔｏ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎｔａｋｅ”，Ａｇｒｏ Ｆｏｏｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ ｈｉ ｔｅｃｈ．）２００３；１４（３）；１８−２１
【非特許文献５】Ｄｅｗａｉｌｌｙ，−Ｅ；Ｂｌａｎｃｈｅｔ，−Ｃ；Ｇｉｎｇｒａｓ，−Ｓ；Ｌｅｍｉｕｅｘ，−Ｓ；Ｈｏｌｕｂ，−Ｂ−Ｊ（２００２）、“Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅｓａｓｅ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｎ−３ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｄｕｌｔ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｊａｍｅｓ Ｂａｙ Ｃｒｅｅ”，Ａｍｅｒｉｃａｎ−Ｊｏｕｒｎａｌ−ｏｆ−Ｃｌｉｎｉｃａｌ−Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）．２００２；７６（１）：８５−９２）
【非特許文献６】ミシガン州立大学の生理学・生物化学・分子生物学部のＤｏｎａｌｄ Ｂ．Ｊｕｍｐ著、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２２７（２００２）８７５５−８７５８
【非特許文献７】Ｓｉｍｏｐｏｕｌｏｓ Ａ．Ｐ．（２００２）、“Ｔｈｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｍｅｇａ−６／ｏｍｅｇａ−３ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ”，Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ ５６，３６５−３７９
【非特許文献８】Ｎｋｏｎｄｊｏｃｋ Ａ．，Ｂ．Ｓｈａｔｅｎｓｔｅｉｎ，Ｐ．Ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ，Ｐ．Ｇｈａｄｉｒｉａｎ（２００３），“Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ：ａｎ ｏｖｅｒｖｉｅｗ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ２７，５５
【非特許文献９】Ｓｉｍｏｐｏｕｌｏｓ Ａ．Ｐ．（１９９９），“Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ ｏｍｅｇａ−３ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｏｄ ｓｕｐｌｉ Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ，Ｌｅｕｃｏｔｒｉｅｎｅｓ ａｎｄ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄｓ”，６０，４２１
【非特許文献１０】Ｂ．Ｄｅｍｍｉｇ−Ａｄａｍｓ ｙ Ｗ．Ｗ．Ａｄａｍｓ，ＩＩＩ著、Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００２）２１４９−２１５３
【非特許文献１１】Ｃｈｉｐａｕｌｔ Ｊ．Ｒ．，Ｍｕｚｕｍｏ Ｇ．Ｒ．，Ｈａｗｋｉｎｓ Ｊ．Ｍ．，Ｌｕｎｄｂｅｒｇ Ｗ．Ｏ．（１９５２）、“Ｔｈｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌ ｓｐｉｃｅｓ”，Ｆｏｏｄ Ｒｅｓ． １７，４６
【非特許文献１２】Ｒａｃ Ｍ．，Ｏｓｔｒｉｃ−Ｍａｔｉｊａｓｅｖｉｃ Ｂ．（１９５５）、“Ｔｈｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｒｏｓｅｍａｒｙ ａｓ ａｎ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ”，Ｒｅｖ．Ｆｒ．Ｃｏｒｐｓ Ｇｒａｓ ２，７９６
【非特許文献１３】Ｂｒｉｅｓｃｏｒｎ Ｃ．Ｈ．，Ｆｕｃｈｓ Ａ．，Ｂｒｅｄｅｎｂｅｒｇ Ｊ．Ｂ．，ＭａＣｈｅｓｎｅｙ Ｊ．Ｄ．，Ｗｅｎｋｅｒｔ Ｅ．（１９６６），“Ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｃａｒｎｏｓｏｌ”，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２９，２２９３
【非特許文献１４】Ｗｕ Ｊ．Ｗ．，Ｌｅｅ Ｍ．Ｈ．，Ｈｏ Ｃ．Ｔ．，Ｃｈａｎ Ｓ．Ｓ．（１９８２），“Ｅｌｕｃｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｒｏｓｅｍａｒｙ”，ＪＡＯＣＳ ５９，３３９
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【非特許文献１７】Ｎａｋａｔａｎｉ Ｎ．，Ｉｎａｔａｎｉ Ｒ．（１９８４），“Ｔｗｏ ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｄｉｔｅｒｐｅｎｅｓ ｆｒｏｍ Ｒｏｓｅｍａｒｙ ａｎｄ ａ ｒｅｖｉｓｅｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｆｏｒ ｒｅｓｍａｎｏｌ”，Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．４８，２０８１
【非特許文献１８】Ｈｏｕｌｉｈａｎ Ｃ．Ｍ．，Ｈｏ Ｃ．Ｔ．，Ｃｈａｎｇ Ｓ．Ｓ．（１９８５），“Ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｒｏｓｍａｒｉｑｕｉｎｏｎｅ．Ａ ｎｅｗ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ Ｌ．”，ＪＡＯＣＳ ６２，１９８５
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【非特許文献２１】Ｂａｓａｇａ Ｈ．，Ｔｅｋｋａｙａ Ｃ．，Ａｃｉｋｅｌ Ｆ．（１９９７）、“Ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ ａｎｄ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｒｏｓｅｍａｒｙ ｅｘｔｒａｃｔ”，Ｌｅｂｅｎｓｍ．Ｗｉｓｓ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．３０，１０５
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【非特許文献２９】Ｄｊａｒｍａｔｉ Ｚ．，Ｊａｎｋｏｖ Ｒ．Ｍ．，Ｓｃｈｗｉｒｔｌｉｃｈ Ｅ．，Ｄｊｕｌｉｎａｃ Ｂ．，Ｄｊｏｒｄｊｅｖｉｃ Ａ．（１９９１），“Ｈｉｇｈ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｓａｇｅ ｂｙ ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ ＣＯ２ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ”、ＪＡＯＣＳ ６８，７３１
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【非特許文献３１】Ｂｏｒｏｗｉｔｚｋａ Ｌ．Ｊ．，Ｍｏｕｌｔｏｎ Ｔ．Ｐ．，Ｂｏｒｏｗｉｔｚｋａ Ｍ．Ａ．（１９８５），“Ｓａｌｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂｅｔａ−ｃａｒｏｔｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｓａｌｉｎａ”，Ｂａｒｃｌａｙ Ｗ．Ｊ．，ＭｃＩｎｔｏｓｈ Ｒ．、編、Ａｌｇａｓ Ｂｉｏｍａｓｓ：ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｄｉｓｃｉｐｌｉｎａｒｙ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ． Ｊ．Ｃｒａｍｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、Ｖｅｒｄｕｚ中
【非特許文献３２】Ｍｏｋａｄｙ Ｓ．，Ａｂｒａｍｏｖｉｃｉ Ａ．，Ｃｏｇａｎ Ｕ．（１９８９）、“Ｔｈｅ ｓａｆｅｔｙ ｅｖａｌｕｔｉｏｎ ｏｆＤｕｎａｌｉｅｌｌａ ｂａｒｄａｗｉｌ ａｓ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｆｏｏｄ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ”，Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．２７，２２１
【特許文献１】米国特許第４．９１５，９６５号および日本特願昭６３−４０７５５号；Ｔａｎａｋａ Ｙ．（１９９０），“Ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ ｆｏｏｄｓｔｕｆｆ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ａｌｇａｅ”
【非特許文献３３】Ｌｅａｃｈ Ｇ．，Ｏｌｉｖｅｉｒａ Ｇ．，Ｍｏｒａｉｓ Ｒ．（１９９８）、“Ｓｐｒａｙ−ｄｒｙｉｎｇ ｏｆ Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｓａｌｉｎａ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ａ ｂｅｔａ−ｃａｒｏｔｅｎｅ ｒｉｃｈ ｐｏｗｄｅｒ”，Ｊ．Ｉｎｄ．Ｍｉｃｒｏｂ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０，８２
【非特許文献３４】Ｏｒｓｅｔ Ｓ．，Ｌｅａｃｈ Ｇ．Ｃ．，Ｍｏｒａｉｓ Ｒ．，Ｙｏｕｎｇ Ａ．Ｊ．（１９９９），“Ｓｐｒａｙ−ｄｒｙｉｎｇ ｏｆ ｍｉｃｒｏａｌｇａ Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｓａｌｉｎａ： Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｂｅｔａ−ｃａｒｏｔｅｎｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｎｄ ｉｓｏｍｅｒ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ”，Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．４７，４７８２
【非特許文献３５】Ｙａｍａｎｏ Ｙ．，Ｙｏｓｈｉｚａｗａ Ｍ．，Ｉｔｏ Ｍ．（１９９９）、“Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ９Ｚ ｂｅｔａ−ｃａｒｏｔｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｂａｒｄａｗｉｌ ａｎｄ ｉｔｓ ｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｊ．Ｎｕｔｒ．Ｓｃｉ．Ｖｉｔａｍｉｎ．４５，４９
【非特許文献３６】Ｆｒａｎｋｅ Ｈ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｍ．，Ｐｕｌｚ Ｏ．，Ｔｉｅｔｚ Ｕ．，Ｍｕｅｌｌｅｒ Ｕ．（１９９４），“Ｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｆｒｏｍ ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ”，Ｉｎｔ．Ｆｏｏｄ Ｉｎｇｒ．４，４１
【非特許文献３７】Ｒａｕｈａ，ＪＰ；Ｒｅｍｅｓ，Ｓ；Ｈｅｉｎｏｎｅｎ，Ｍ；Ｈｏｐｉａ，Ａ；Ｋａｈｋｏｎｅｎ，Ｍ；Ｋｕｊａｌａ，Ｔ；Ｐｉｈｌａｊａ，Ｋ；Ｖｕｏｒｅｌａ，Ｈ；Ｖｕｏｒｅｌａ，Ｐ．（２０００）、“Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｆｉｎｎｉｓｈ ｐｌａｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｐｈｅｎｏｌｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５６、ｐ．３−１２
【非特許文献３８】Ｂｅａｔｔｙ Ｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｕｒｖ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ ２０００；４５：１１５−１３４
【非特許文献３９】Ｃａｉｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｇ Ｒｅｔｉｎ Ｅｙｅ Ｒｅｓ ２０００；１０：２０５−２１１
【非特許文献４０】Ｊｕｎｑｕｅｉｒａ ＶＢ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ａｓｐｅｃｔｓ Ｍｅｄ ２００４；２５：５−１６
【非特許文献４１】Ｋｏｈ ＨＨ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００４；７９：２１−２７
【非特許文献４２】Ｂｅａｔｔｙ Ｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ ２００４；４３０：７０−７６
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
本発明者らは、長鎖ω−３ポリ不飽和酸、例えばＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物との組み合わせを、食品に添加すると、抗酸化剤とポリ不飽和脂肪酸との間に予想外の相乗反応が生じることを発見した。これは、予測よりも抗酸化活性が大きく増加したと言い換えられる。これはまた、強化食品の製造、貯蔵および調理中の生物活性物質のレベルを維持するのを助け、その後、それらが消費されるとヒト健康に対し有益な効果が得られる。
【００２２】
そのため、本発明は、強化食品の調製で使用するための、ＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物とに基づく相乗的油状組成物を提供する。この組成物はまた、例えば、カロテノイド類ルテインまたはβ−カロテンなどの健康のために有益な成分も含む微細藻類デュナリエラ・サリナもまた含むことができる。
【００２３】
同様に、本発明はまた、喘息、癌または異なる心血管疾患などの疾患の予防に有益な、ω−３のω−６ポリ不飽和脂肪酸に対する比率が５未満である、この油状混合物で強化した食品を提供する。この比率はまた、これらのポリ不飽和脂肪酸類とα−トコフェロールと超臨界ローズマリー抽出物由来のフェノール性ジテルペン類との間の相乗作用により、食品の製造、貯蔵および調理中に維持される。これらの強化食品は、また、感覚特性に関する品質特性および安全性を保持する。
【００２４】
そのため、本発明により提供される強化食品は、ポリ不飽和脂肪酸のレベルが安定であり、ω−３のω−６に対する比率が５未満であり、α−トコフェロールと、ローズマリーの超臨界抽出物由来のフェノール性ジテルペン類と、必要に応じて用いる、微細藻類デュナリエラ・サリナ由来のカロテノイド類の量が安定なため、ヒトの健康に対し有益である。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
そのため、本発明の目的は、ＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモンと、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物と、を含む強化食品の調製において使用される天然生物活性成分に基づく相乗的油状混合物を提供することである。
【００２６】
本発明の別の目的は、天然生物活性成分に基づくこの油状混合物で強化した食品を提供することである。
【００２７】
最後に、本発明の別の目的は、この強化食品を調製するための方法を提供することである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
本発明は、ＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物とを含むことを特徴とする、強化食品の調製において使用される天然生物活性成分に基づく油状混合物を提供する。
【００２９】
本出願の中では、「強化食品」という用語は、組成に、天然では含まれていない、または少量しか含まれていない物質が添加された食品を示す。
【００３０】
同様に、「天然生物活性成分」という用語は、科学的知識の当技術分野の現状に従い、健康にとって有益な生物活性を有する、天然起源の化合物を示す。
【００３１】
前に述べたように、ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）およびＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）が強化されたサーモン油は、ω−３ポリ不飽和脂肪酸を提供する。これらは、食品業界で使用される周知の機能性成分であり、そのため、それらの使用の危険性は非常に低い。ω−３脂肪酸を組み入れると、陸生動物由来、とりわけブタ由来の脂肪の好ましくない脂質プロファイルが補われる。豚肉の消費によりω−６脂肪酸が上昇することがあるからである。細胞レベルでの酸化還元不均衡のこれらのω−６脂肪酸の介入により、癌において起きるもののような、細胞増殖の増加；心血管、自己免疫および神経系疾患において起きるもののような炎症過程の誘発；および、神経障害を引き起こす神経伝達の欠如に至ることがある。同様に、細胞酸化還元均衡は、生命過程のレギュレータにおける遺伝子発現および主遺伝子の突然変異が生じるＤＮＡ損傷発生に影響する。
【００３２】
このように、ＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油を、強化のために陸生動物由来の食品に添加すると、それらの天然のω−６／ω−３不均衡の補償が助けられる。例えば、豚および七面鳥などの陸生動物の動物脂肪中のω−６／ω−３比率は、平均、１０より高いためである（が、七面鳥肉は、豚の４０％脂肪量に比べ、１％の脂肪量のみを示す）。豚脂肪では、ω−６／ω−３比はさらに高く、これらの動物の肉中のこの比率は、推奨値よりもずっと高い。
【００３３】
しかしながら、ω−３脂肪酸の消費は酸化的ストレスを増加させることがあるので、これらの脂肪酸の食品への添加は、超臨界ローズマリー抽出物またはα−トコフェロールなどの抗酸化剤の同時添加と組み合わされなければならない。前に言及した、これらの抗酸化剤は、当技術分野の状況では公知であるが、現在まで、ＥＰＡおよびＤＨＡで強化されたサーモン油と組み合わせた場合の、重要な相乗作用は知られていなかった。
【００３４】
超臨界ローズマリー抽出物は、不飽和脂肪酸により引き起こされる酸化的ストレスを減少させるのを助け、ならびに、非常に重篤な疾患に対し潜在的な予防効果を有し、かつ優れた天然食品保存剤である。この発明の目的のために、例えば、フラベックス（Ｆｌａｖｅｘ）（オーストリア）により販売されている超臨界ローズマリー抽出物を使用することができ、または超臨界ＣＯ２により、１５０〜２５０バール（１５〜２５ＭＰａ）の範囲の圧力および４０〜７０℃の間の温度で抽出することにより調製されたものを使用することができる。
【００３５】
他方、α−トコフェロールは、前述したように、抗酸化剤として重要な利益を提供する。本発明のために、例えば、ロシュ（Ｒｏｃｈｅ）により市販されているα−トコフェロールを使用することができる。
【００３６】
強化サーモン油のポリ不飽和脂肪酸と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物の相乗的相互作用により、５未満のω−３／ω−６比率を達成することができ、これが、油状混合物が添加される食品の製造、貯蔵および調理中に維持される。この相乗的作用により、α−トコフェロールおよび超臨界ローズマリー抽出物の抗酸化活性が維持され、本発明の油状混合物が添加される食品中で、α−トコフェロール量および超臨界ローズマリー抽出物由来のフェノール性ジテルペン量が維持される。
【００３７】
本発明の１つの特定の態様では、油状混合物は、７０〜９９．９％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００１〜１％のα−トコフェロールと、０．１〜５％の超臨界ローズマリー抽出物と、を含み、ここで、これらは、油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００３８】
好ましい態様では、油状混合物は、８０〜９７％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００１〜０．１％のα−トコフェロールと、１〜３％の超臨界ローズマリー抽出物と、を含み、ここで、これらは、油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００３９】
より好ましい態様では、油状混合物は、８２％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．０８％のα−トコフェロールと、１．６％の超臨界ローズマリー抽出物と、を含み、ここで、これらは、油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００４０】
本発明の別の特定の態様では、油状混合物はまた、微細藻類デュナリエラ・サリナを含む。前述したように、この微細藻類は、食品で最もよく使われるものの１つであり、そのため、その毒性はよく研究されており、使用しても健康上のリスクとはならない。微細藻類デュナリエラ・サリナはα−トコフェロールおよび超臨界ローズマリー抽出物の抗酸化作用を増強することができ、また、選択した疾患、例えば、視覚に影響するもののいくつかに対し予防作用を有するかなりのカロテノイド含有量を有する。α−トコフェロールと超臨界ローズマリー抽出物との間の相乗作用のため、本発明の油状混合物が添加される食品中で、このカロテノイド含有量を維持することが可能である。
【００４１】
本発明の目的は、例えば、ネイチャーβテクノロジーズ（Ｎａｔｕｒｅ Ｂｅｔａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ＮＢＴ））社（イスラエル）により市販されている微細藻類デュナリエラ・サリナを用いて達成することができる。
【００４２】
本発明の好ましい態様では、油状混合物は、０．１〜２０％、好ましくは３〜１８％、さらに好ましくは１６％の微細藻類デュナリエラ・サリナを含み、ここで、これらは、油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００４３】
別の観点では、本発明は、前述したように、ＥＰＡおよびＤＨＡで強化されたサーモン油と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物とを含む天然生物活性成分に基づく油状混合物で強化した食品を提供する。
【００４４】
特定の態様では、この食品は、ＥＰＡおよびＤＨＡが強化されたサーモン油と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物と、ならびに微細藻類デュナリエラ・サリナとを含む天然生物活性成分に基づく油状混合物で強化される。
【００４５】
本発明の好ましい態様では、この食品は、０．１〜２０％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００００１〜１％のα−トコフェロールと、０．００１〜５％の超臨界ローズマリー抽出物と、必要に応じて、０．０１〜５％の微細藻類デュナリエラ・サリナと、を含み、ここで、これらは、食品の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００４６】
本発明のより好ましい態様では、この強化食品は、１〜１０％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００１〜０．５％のα−トコフェロールと、０．０１〜３％の超臨界ローズマリー抽出物と、必要に応じて、０．１〜３％の微細藻類デュナリエラ・サリナと、を含み、ここで、これらは、食品の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００４７】
同様に、本発明のさらに好ましい態様では、この強化食品は、５％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００５％のα−トコフェロールと、０．１％の超臨界ローズマリー抽出物と、必要に応じて、１％の微細藻類デュナリエラ・サリナと、を含み、ここで、これらは、食品の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００４８】
サーモン油は、油の総重量に対し、１０〜４０重量％の範囲の割合のＥＰＡおよびＤＨＡで強化される。好ましい態様では、サーモン油は、油の総重量の対し１８重量％のＥＰＡと１２重量％のＤＨＡで強化される。
【００４９】
本発明のために、プロダクトスキミコスドムルシア（Ｐｒｏｄｕｃｔｏｓ Ｑｕｉｍｉｃｏｓ ｄｅ Ｍｕｒｃｉａ）Ｓ．Ａ．により市販されている１８％のＥＰＡと１２％のＤＨＡで強化されたサーモン油を使用することができる。
【００５０】
本発明の強化食品は、ω−６／ω−３ポリ不飽和脂肪酸の比率が５未満であるポリ不飽和脂肪酸含量を示し、これは、前述したように、ヒトの健康に対し重要な利益となる。ω−３脂肪酸と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物との相乗的相互作用のために、この比率は、このように強化された食品の製造、貯蔵およびその後の調理の間維持される。
【００５１】
１つの特定の態様では、本発明の強化食品は肉製品である。好ましくは、本発明の強化食品は、フランクフルト型ソーセージ、加熱ハム（ゆでたハム）、調理済み七面鳥胸肉、加工「チョリーゾ」ソーセージ、加工「サルチチョン」ソーセージ、加工豚ロイン、および塩漬けハムからなる群より選択される肉製品である。
【００５２】
別の観点では、本発明は、
ａ）天然生物活性成分を混合することにより、これらの天然生物活性成分に基づく油状混合物を調製する工程と、
ｂ）工程ａ）で調製した油状混合物を強化すべき食品に組み入れる工程と、
を含む、この強化食品を調製するための方法に対応する。
【００５３】
本発明の１つの特定態様では、天然生物活性成分は、７０〜９９．９％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油、０．００１〜１％のα−トコフェロール、０．１〜５％の超臨界ローズマリー抽出物、必要に応じて、０．１〜２０％の微細藻類デュナリエラ・サリナの割合で組み合わせられ、ここで、これらは、油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００５４】
本発明の好ましい態様では、天然生物活性成分は、８０〜９７％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油、０．００１〜０．１％のα−トコフェロール、１〜３％の超臨界ローズマリー抽出物、必要に応じて、３〜１８％の微細藻類デュナリエラ・サリナの割合で組み合わせられ、ここで、これらは、油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００５５】
本発明の方法のさらに好ましい態様では、天然生物活性成分は、８２％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油、０．０８％のα−トコフェロール、１．６％の超臨界ローズマリー抽出物、必要に応じて、１６％の微細藻類デュナリエラ・サリナの割合で組み合わせられ、ここで、これらは、油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００５６】
このように、本発明の強化食品を調製するために、適した量の、機能性成分の各々の重さを量り、その後、混合して、油状のわずかに着色した製品を得る。
【００５７】
強化される食品が、フランクフルトソーセージなどの肉製品に対応する場合、生物活性成分の油状混合物を、混合プロセス中に添加し、肉エマルジョンが製造される。その後、肉エマルジョンを使用してソーセージ外皮を満たし、ソーセージを調理し、真空パックし、３０〜９０日間の最大期間の間、冷蔵する。
【００５８】
強化加熱ハムでは、生物活性成分の油状混合物を、生カットハム中に塩類溶液（例えば塩水）と共に注入する。この後、カット（肉片）をマッサージドラムに入れ、生物活性化合物の混合物が、均一に肉全体に、内部で広がるように支援する。カット（肉片）をその後、調理し、真空パックし、３０〜９０日の間の範囲の最大時間の間、冷蔵庫で維持する。
【００５９】
強化した調理済み七面鳥胸肉を調製するために、生物活性成分の油状混合物を生の胸カット肉に塩類溶液（例えば塩水）と共に注入する。次に、カット（肉片）をマッサージドラムに入れ、生物活性化合物の混合物が、均一に肉全体に、内部で広がるように支援する。次に、カット肉を調理し、真空パックし、３０〜９０日の間の範囲の最大時間の間、冷蔵庫で保存する。
【００６０】
強化加工ロインを調製するために、生物活性成分の油状混合物を生の豚ロインカット肉に注入する。次に、外皮を肉で充填し、加工する。
【００６１】
強化塩漬けハムを調製するために、生物活性成分の油状混合物を、生ハムカットの表面に塩と共に広げる。カットをその後、穏やかに加圧し、加工する。
【００６２】
強化加工チョリーゾを調製するために、生物活性成分の油状混合物を挽肉およびスパイスと混合する。次に、混合物を用いてソーセージを製造し、これを加工する。
【００６３】
強化加工「サルチチョン」を調製するために、生物活性成分の油状混合物を挽肉およびスパイスと混合する。その後、混合物を用いてソーセージを製造し、これを加工する。
【００６４】
このように、まとめると、本発明の相乗的油状混合物の添加により、強化食品は下記利点を提供する：
１． ５未満のω−６／ω−３比を有し、この脂肪酸プロファイルが製造プロセスを通して、その貯蔵期間中、およびこれらの製品の調理プロセス、例えばフライ加工中、維持される。
２． ＰＵＦＡが組み入れられているため、酸化指数の有意の増加を示さず、これは、その製造、貯蔵および調理中にほとんど変化しないままである。
３． 製造、貯蔵および調理中に添加された抗酸化製品の抗酸化活性の有意の減少を示さない。
４． 製造、貯蔵よび調理中にα−トコフェロール量の有意の変化を示さない。
５． 製造、貯蔵よび調理中に、超臨界ローズマリー抽出物により提供されるフェノールジテルペン量の有意の変化を示さない。
６． 製造、貯蔵よび調理中に、微細藻類デュナリエラ・サリナにより提供されるカロテノイド類の有意の変化を示さない。
【００６５】
下記は、肉製品に対する全ての可能な処理作業を含む強化食品の２つの例である：
実施例１．フランクフルト型ソーセージ、調理および６０日の冷蔵および真空下の貯蔵、ならびにその後のフライ処理を含むプロセスにおいて、記述した特性がどのように得られ、保存されるのかを証明する。
実施例２．加工イベリアチョリーゾ、５０日間の加工を有するプロセスにおいて、記述した特性がどのように得られ、保存されるのかを証明する。
【００６６】
これらの実施例は、本発明の明確な理解を助けるために提供される。本発明の範囲は、全く、これらに限定されない。
【００６７】
方法
１．脂肪酸プロファイル
抽出：サンプル中に存在する脂質画分を抽出するために、異なる方法を評価した：ａ）ヘキサン、ｂ）ヘキサン／メタノール、およびｃ）ヘキサン／水（５／１）。方法ａ）およびｂ）では、相間が生じ、これにより、ヘキサン相を分離するのが困難になった。方法ｃ）は試験したものの中では、ヘキサン相を正確に分離することができた唯一の方法であり、そのため、残りの抽出のために選択した。
【００６８】
脂質抽出プロトコル：５ｇのサンプルを前もって粉砕し、サンプルをホモジナイズする。その後、１ｇの各サンプルを５０ｍｌファルコンバイアルに入れ、５ｍｌのミリ（ｍｉｌｌｉ）−Ｑ Ｈ２Ｏを添加し、続いて２５ｍｌのヘキサンを添加した。サンプルをウルトラタラックス（Ｕｌｔｒａ Ｔｕｒｒａｘ）により１分間激しく振盪させ、上清を収集した。場合によっては、水相とヘキサン相とを完全に分離するために遠心分離工程が必要となった。この遠心分離は、３８００ｒｐｍで５分間実施した。確実に、サンプル中の脂肪のほとんどを抽出するために、第２抽出を２５ｍｌのヘキサンを用いて実施した。各抽出物中、ヘキサンをロタベイパー（ｒｏｔａ−ｖａｐｏｒ）中、４０℃で蒸発させ一定重量とし、得られた残留物を、バイアル中で、窒素雰囲気下、太陽光から保護して維持した。
【００６９】
抽出物誘導体化プロトコル：クロロホルム／メタノール２／１（ｖ／ｖ）に溶解した、２５ｍｇ／ｍｌ（サーモン油を含まないサンプルに対し）および５０ｍｇ／ｍｌ（サーモン油を含むサンプルに対し）の抽出物濃度の溶液を調製した。これらの溶液の計０．５ｍｌを、ＮａＯＨを含むメタノール（０．１Ｍ）を用い、６０℃で３０分間メチル化した。次に、０．２ｍｌのｍＱ水を添加することにより誘導体化を中止させた。その後、形成したメチルエステル脂肪酸を２度、１ｍｌのヘキサンで抽出した。ヘキサン相から残留水を除去するために、画分を無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥させた。
【００７０】
脂質分析のためのクロマトグラフィー法：パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）自動システムＸＬクロマトグラフにおいて、長さ３０ｍ、内径２５０μｍ、膜厚（ｐｈａｓｅ ｔｈｉｃｋｅｎｅｒ）０．２５μｍの寸法のＢＴＲ−カルボワックス（Ｃａｒｂｏｗａｘ）カラムを用いて、分析を実施した。使用したクロマトグラフィー法は下記の通りであった：
注入器温度：２２０℃
炉温度プログラム：１００℃−−−１８０℃（２０℃／分で）−−−２２０℃（１５℃／分で）（３３分）
ＦＩＤ検出器温度：２３０℃
総分析時間：４０分
Ｈｅ圧：４ｂａｒ（４×１０５Ｐａ）
合成空気圧：４ｂａｒ（４×１０５Ｐａ）
水素圧：２ｂａｒ（２×１０５Ｐａ）
カラムヘッド温度：１２ｂａｒ（１２×１０５Ｐａ）
Ｈｅ流：１ｍｌ／分
分割比：２０：１
注入体積：１μｌ
【００７１】
ＰＵＦＡ Ｎ°１ マリンソース（Ｍａｒｉｎｅ Ｓｏｕｒｃｅ）、スペルコ（Ｓｕｐｅｌｃｏ）（４−７０３３）の２０ｍｇ／ｍｌ（ヘキサン中）溶液を注入することにより、異なるメチルエステル脂肪酸の保持時間を決定した。
【００７２】
２．酸化指数
この方法は、脂質酸化の最終化合物として生成するマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）の定量に基づく。この化合物を測定するために、トリクロロ酢酸を用いてサンプルから抽出し、その後、チオバルビツール酸との比色反応により定量すると、ピンク色の付加物が形成し、最大吸光度ピークは５３１ｎｍに存在した。定量法のために：１０ｇのサンプルを取り出し（±０．００５ｇ）、重量を記録し、２０ｍｌの１０％トリクロロ酢酸を添加し、サンプルを３０秒間２００００ｒｐｍでホモジナイズした。その後、これを３０分間４０００ｒｐｍ、１０℃で遠心分離した。遠心分離後、サンプルを濾過し、２ｍｌの上清を試験管中に収集した。これらの２ｍｌの上清に、さらに２ｍｌのチオバルビツール酸溶液を添加し（ＴＢＡ、３００ｍｇ／１００ｍｌ）；溶液をボルテックス中で混合し、銀箔で被覆し、２０分間、沸騰水を有する水浴に入れた。その後、放置して室温まで冷却させ、形成した色を５３１ｎｍで測定した。サンプル自体の色を測定するために、２ｍｌの水の代わりに２ｍｌのＴＢＡを使用して、サンプルに対して実施したものと同じ試験をブランクに対し実施した。
【００７３】
３．抗酸化活性
エタノール（１０ｇのサンプルあたり２０ｍｌのエタノール）を添加することにより添加した化合物の抽出を実施し、遠心分離後に得られた濾液を乾燥させた。それぞれの場合において得られた乾燥残留物をエタノールに１５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解させた。この溶液を計０．１ｍｌ使用して、β−カロテン漂白（ｂｌｅａｃｈｉｎｇ）試験により、異なる化合物の抗酸化能力を評価した。これにより、反応媒質中の試験化合物濃度が６０μｇ／ｍｌとなった。β−カロテン漂白試験は、潜在的に抗酸化効果を有する物質が、酸化促進条件のリノール酸と共にエマルジョン中に存在する場合の、この物質のβ−カロテン酸化を阻害する能力を評価する。
【００７４】
４．トコフェロールの分析
サンプルの調製
混合物に添加したサーモン油のトコフェロール量を定量するために、２０μｌの油を直接ＨＰＬＣに注入した。各サンプルから、１０ｇを取り出し、２０ｍｌのエタノールと混合した。これをウルトラタラックス中１分間、ホモジナイズし、遠心分離した。上清をフィルタに通し、ロタベイパーで濃縮乾燥させた。その後、２ｍｌのエタノールを添加した。濃縮物をフィルタに通し、逆相カラム（ノバ−パック（Ｎｏｖａ−Ｐａｋ）Ｃ１８ ６０Ａ ４μｍ ３．９×１５０ｍｍ、ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ））を使用して分析用ＨＰＬＣに注入し、１ｍｌ／分の流速で展開させ、その後、９７％メタノールを含む１％酢酸（ｖ／ｖ）の混合物の均一法を２０分間実施した。ピークを、フォトダイオード検出器で検出し、言及した標準に対する保持時間およびそのスペクトルによりピークを識別し、ほとんどの化合物に対し、最大波長（２９５ｎｍ）で定量した。
【００７５】
検出した面積を定量するために、トコフェロール標準を用いて検量線を作成し、サンプルに対応するピークを定量した。
【００７６】
５．ローズマリー抽出物の抗酸化剤
抽出法：計１０ｇの各サンプルの重さを量り、２０ｍｌのアセトンをそれぞれに添加した。１分間ウルトラタラックス中でホモジナイズした後、２時間放置し、相分離を促進した。次に、３５００ｒ．ｐ．ｍで３０分間遠心分離した。上清を濾紙に通して濾過し、その後ロタベイパーで蒸発させた。
【００７７】
クロマトグラフィー法：長さ１５０ｍｍ、内径４．６ｍｍ、および粒子サイズ３．５μｍのノバパックＣ１８カラムを備えたＨＰＬＣシステムで分析を実施した。分離で使用した移動相は、溶媒Ａ（１％酢酸を含むアセトニトリル）とＢ（１％酢酸を含む水）の混合物で構成した。移動相の組成は、３０分グラジエントと共に変動し、５０％のＢ、５分間で開始し、１５分で３０％のＢ、３０分で０％のＢに到達した。流速は分離全体で、０．７ｍｌ／分で維持した。化合物は２００〜４５０ｎｍの範囲の波長のダイオードビーム検出器を用いて検出した。検出スリットは４ｎｍで確立し、サンプリング間隔は２００ｍｓとした。化合物の検出のために選択した波長は２３０ｎｍであった。装置には２０μｌ注入器を取り付けた。
【００７８】
６．カロテノイドプロファイル
微細藻類からのカロテノイド類の抽出：０．０５ｇ／ｍｌのスピルリナ（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ）およびデュナリエラ抽出物を、石油エーテル：アセトン（１：１）中で調製し、両方の藻類のカロテノイド濃度を比較した。ｔｅｒｃ−ブチルメチルエーテル中で０．０５ｇ／ｍｌ（サンプルに添加した１％に対応する）のデュナリエラ抽出物を調製し、カロテノイドの抽出において生成したカロテノイド類の損失を定量した。サンプルからの抽出は１度のみであるからである。第２の抽出を実施し、実験データを文献中のデータを用いて確認した。
【００７９】
サンプルからのカロテノイド類の抽出．計５ｇの各サンプルの重さを量り、家庭用フードプロセッサ中で、１分間粉砕し、５秒休止した。計５ｇの粉砕混合物を１０ｍｌのｔｅｒｃ−ブチルメチルエーテルと混合した。混合物をウルトラタラックス中で１分間ホモジナイズし、２相が分離するまで放置した（暗所で）。上清（２０μｌ）を直ちにＨＰＬＣシステムに注入し、分析した。
【００８０】
ＨＰＬＣ分析：サンプルおよび標準を、逆相カラム（ミクロソーブ（Ｍｉｃｒｏｓｏｒｂ）Ｃ１８、バリアン（Ｖａｒｉａｎ）の２５０×４．６ｍｍ）を用いてＨＰＬＣに注入し、１ｍｌ／分の流速で展開させ、グラジエントは５０％の混合物Ｂで開始し、１４分で１００％Ｂまで増加させ、５３分の展開終了時まで一定に維持した。使用した溶媒混合物は混合物Ａ：ジクロロメタン：メタノール：アセトニトリル：水（０：６０：５：３５）および混合物Ｂ：ジクロロメタン：メタノール：アセトニトリル：水（２５：２８：４２．５：４．５）に対応する。ピーク検出はフォトダイオード検出器を使用して実施し、言及した標準に対する保持時間およびスペクトルからピークを識別し、ほとんどの化合物に対し最大波長（４５０ｎｍ）で定量した。検出した面積を定量するために、ルテインを用いて検量線を作成し、サンプルのルテインピークを定量した。β−カロテンおよび９−シス−β−カロテンのピークを、それらのスペクトルが類似しているため、β−カロテン曲線から得られた直線を用いて定量した。
【００８１】
実施例１．フランクフルト型ソーセージ
調製
フランクフルト型ソーセージを製造するための標準肉エマルジョンを獲得した後、肉ペースト１ｋｇあたり、下記量の油状混合物成分を添加した：５０ｇの、脱臭し、１８％ＥＰＡおよび１２％ＤＨＡで強化したサーモン油と、１ｇの超臨界ローズマリー抽出物と、０．０５ｇのα−トコフェロールと、１０ｇのデュナリエラ・サリナ。
【００８２】
油状混合物を、ミキサ中の肉ペーストに添加し、油状混合物成分が均一に分布したエマルジョンを獲得した。その後、これをソーセージにし、７０℃で６０分間調理した。次に、ソーセージを真空パックし、５℃で９０日間冷蔵した。フライ加工を１８０℃で３分間実施した。
【００８３】
結果
下記表１．１は、処理作業後、異なる貯蔵時間で決定したソーセージに対する脂質プロファイルを示す。
【表１】
表１．１．から得られるデータより、まず第一に、５０ｇ／ｋｇの、EPAおよびDHAを強化したサーモン油を添加すると、ω−６／ω−３比が１７．９から２未満の値まで減少し、これが、製造、貯蔵および調理の全プロセスで維持されることが推測できる。さらに、脂質プロファイルもまた、安定なままである。
【００８４】
所期の目的を達成するには、処理および貯蔵中に油状混合物の抗酸化活性を維持することが不可欠である。さらに、ＰＵＦＡは酸化しやすいので、抗酸化活性は脂質プロファイルを安定に維持するのに寄与する。
【００８５】
表１．２．はソーセージに対する酸化指数データを示す。
【表２】
相当の量のＰＵＦＡを添加しても、酸化指数は全処理期間および貯蔵中、低いままであった。この結果は、提示した他のものと一致し、ＰＵＦＡの脂質プロファイル、およびこれにより、ω−３／ω−６比の維持、および油状混合物成分の抗酸化活性の維持が確認される。
【００８６】
表１．３はソーセージに対する抗酸化活性分析の結果を示す。
【表３】
油状混合物を添加すると、抗酸化活性が、処理前のソーセージで決定した値の３．４倍に増加する。この抗酸化活性は、処理および貯蔵期間中、わずかに減少するが、賞味期間中、油状混合物を有さない製品に対し得られた値の２．５倍未満には決して低下しない。
【００８７】
フライ処理後の抗酸化活性の上昇は、使用した油（バージンオリーブ油）の吸着効果によるものとすることができる。
【００８８】
表１．４．は、ソーセージ中のα−トコフェロール分析の結果を示す。処理および貯蔵の終わりに、ソーセージ中にα−トコフェロールフェロールが存在すると、油状混合物の高い抗酸化活性の別の指標となる。
【００８９】
実際、サーモン油＋α−トコフェロールのみをソーセージに添加した平行実験では、調理前に、α−トコフェロールは検出さえされなかった。この時点では、抗酸化活性は３２．９２％であり、言い換えれば、完全な油状混合物を添加した時に得られるものの半分より少なかった。これにより、α−トコフェロールと超臨界ローズマリー抽出物との間の相乗効果が証明される。
【表４】
【００９０】
超臨界ローズマリー抽出物の成分の存在は、プロセス中のソーセージの永続性の指標である。表１．５は、カルノシン酸、超臨界ローズマリー抽出物の最も活性で、最も不安定な抗酸化成分の分析結果を示す。
【表５】
【００９１】
ソーセージ中に存在するカルノシン酸の量は、プロセスが進むにつれ、かつ貯蔵中に減少することがわかったが、プロセスの終了時、調理後でさえも、この化合物がかなりの量存在することが証明された。
【００９２】
表１．６はソーセージ中のカロテノイドの分析結果を示す。これらの化合物は微細藻類デュナリエラ・サリナに由来する。
【表６】
【００９３】
いくらかの振幅が観察されることがあるが、カロテノイド類はプロセスを通して安定なままであることがわかった。最終工程中の増加は、微細藻類細胞の内部のこれらの化合物の放出によるものと考えられる。
【００９４】
結論
フランクフルトソーセージ中に油状混合物を混入させると、抗酸化活性、一定量の天然抗酸化剤および＞５のω−６／ω−３比が付与され、これらは製造プロセス、貯蔵および調理を通して安定なままである。
【００９５】
実施例２．加工イベリアチョリーゾ
調製
従来のイベリアチョリーゾの標準成分に、肉ペースト１ｋｇあたり、下記量の油状混合物成分を添加する：５０ｇの、脱臭し、１８％ＥＰＡおよび１２％ＤＨＡを補充したサーモン油と、１ｇの超臨界ローズマリー抽出物と、０．０５ｇのα−トコフェロールと、１０ｇのデュナリエラ・サリナ。
【００９６】
次に、混合物を、工業用ミキサ中、真空下で混合し、外皮中に導入し、最大５０日まで加工する。
【００９７】
結果
下記表２．１．は、処理作業後および異なる貯蔵時間で決定した加工チョリーゾの脂質プロファイルを示す。
【表７】
【００９８】
表２．１．のデータから、最初に、ＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油を５０ｇ／ｋｇ添加すると、ω−６／ω−３比は、１４．２から１に近い値まで減少し、これは、５０日の加工プロセスを含む全製造プロセス中、維持されることが推定できる。
【００９９】
抗酸化活性、α−トコフェロール、カルノシン酸、カロテノイド類および酸化指数の決定に関しては、結果はソーセージに対して提示したものと類似する。
【０１００】
結果
油状混合物を加工イベリアチョリーゾに混入させると、抗酸化活性、一定量の天然抗酸化剤および＞５のω−６／ω−３比が付与され、これらは５０日の加工時間を含む全プロセスを通して安定なままである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然生物活性成分で強化された食品分野に属する。より特定的には、本発明は、食品、とりわけ肉製品に添加され、陸生動物由来の食品の脂質不均衡を効果的に補償し、とりわけ、疾患の予防において、人の健康に有益な効果を与え、これらの食品の品質または安全性を損なわない、天然生物活性成分に基づく油状混合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ここ数年、動物起源の食品が市場に現れており、(中には肉製品もあるが)主に乳製品であり、これは、少量の魚油を添加することにより、オメガ−３（ω-３）ポリ不飽和脂肪酸を組み入れている。ω-３脂肪酸は、陸生動物由来の肉中にはそれらの天然形態では存在しておらず、健康効果を求めて動物起源の食品に組み入れるのは、長年の科学的経験に基づく。
【０００３】
従来、動物性脂肪は健康によくないと考えられている。数十年間、それらの脂質組成物は、心血管疾患にかかる確率と関連していた。実際、心血管危険のある個人は、食事中の乳製品および肉製品の全体量を制限するように推奨されている。長年、この観点に研究の焦点が合わせられ、これらの事象に対する科学的な説明を確立しようと試みられている。この関連に対する説が、とりわけ近年、かなり発達している。長年、動物性脂肪は、血清コレステロールレベルの上昇の一因であると考えられており、コレステロールレベルと心血管疾患との間には直接の関連が確立されている。最近になって、トリグリセリド類、とりわけ血液中のトリグリセリドレベル、および血液中のこれらのレベルの期間が、心血管危険因子の起源を構築すると考えられている。
【０００４】
前世紀の中頃あたりから、研究は、血清コレステロールレベルおよび心血管疾患の減少に対するポリ不飽和脂肪酸またはＰＵＦＡの効果を確立することに基づいていた。この領域での最も重要な研究は１９５４年にアーレンス（Ａｈｒｅｎｓ）ら（アーレンスＥ．Ｈ．，Ｄ．Ｈ．ブランケンホーン（Ｂｌａｎｋｅｎｈｏｒｎ）、Ｔ．Ｔ．テイスタス（Ｔａｓｔａｓ）（１９５４）、「食事における、動物の代わりに植物を代用するヒト血清脂質への効果」、Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．８６、８７２．）および１９５７年にケイズ（Ｋｅｙｓ）ら（ケイズＡ．，Ｊ．Ｔ．アンダーソン（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）、Ｆ．グランド（Ｇｒａｎｄｅ）（１９５７）、「食事脂肪に対する血清コレステロール応答」、ランセット（Ｌａｎｃｅｔ）１、７８７）により実施された研究であり、これらは、心血管疾患の予防におけるＰＵＦＡの重要性に対し、明確な証拠を確立した。その時以来、多くの研究がこの観点に焦点を合わせられており、これらのほとんどが、心臓に対するω−３の有益な効果を確認している。例えば、米国臨床栄養協会の米国臨床栄養ジャーナル（Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ ７６（２００２）３２６−３３０）において公表された、メルボルンのベイカー（Ｂａｋｅｒ）医学研究所の心血管栄養研究所、トキオ（Ｔｏｋｉｏ）の医学防御大学（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｅｆｅｎｓｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ）の医学部、アデレードの健康科学および栄養部のＣＳＩＲＯ（オーストラリア）およびＦホフマン（Ｈｏｆｆｍａｎ）−ラロシェ（Ｌａ Ｒｏｃｈｅ）のビタミン研究所（スイス）の研究員により、最近実施された臨床試験では、ω−３脂肪酸、とりわけ長鎖脂肪酸、言い換えると、ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）およびＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）が動脈の弾性、結果的には正常な血圧レベルを維持し、心血管危険性を減少させるのを助けることができることが示されている。この研究は、コレステロール血症患者に数週間の間ＤＨＡまたはＥＰＡまたはプラセボを投与することにあった。その後、超音波を使用して研究者らは参加者の動脈の弾性を測定した。ω−３脂肪酸を摂取した参加者は、動脈硬化の著しい減少を示し、プラセボを摂取した参加者は有意の変化を示さなかった。ＥＰＡを摂取したものは、大動脈の弾性を反映する、３６％の動脈全身抵抗の増加を示し、一方、ＤＨＡを摂取したものは２７％の増加を示した。
【０００５】
ω−３脂肪酸（ＥＰＡ／ＨＤＡ）は、弾性を増加させ、ＬＤＬコレステロールを低下させ、ＨＤＬを増加させ、動脈トリグリセリドレベルを減少させ、かつ抗血栓性であるので、血液脂質プロファイルを改善する。Ａｄｅｅｍｉａ（ロペス（Ｌｏｐｅｚ）−フエルトラス（Ｈｕｅｒｔｒａｓ）−Ｅ；バロ（Ｂａｒｏ）、−Ｌ；カレロ（Ｃａｒｒｅｒｏ）、−Ｊ−Ｊ；フォノラ（Ｆｏｎｏｌｌａ）、−Ｊ（２００３）「ｎ−３脂肪酸：健康効果および摂取を増加させるための機会」、アグロフードインダストリハイテック（Ａｇｒｏ Ｆｏｏｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ ｈｉ ｔｅｃｈ．）２００３；１４（３）；１８−２１；デュワイリィ（Ｄｅｗａｉｌｌｙ）、−Ｅ；ブランシェット（Ｂｌａｎｃｈｅｔ）、−Ｃ；ギングラス（Ｇｉｎｇｒａｓ）、−Ｓ；レミオイクス（Ｌｅｍｉｕｅｘ）、−Ｓ；ホルブ、−Ｂ−Ｊ（２００２）、「ジェームスベイクリー族（Ｊａｍｅｓ Ｂａｙ Ｃｒｅｅ）の大人の集団における心血管疾患危険因子およびｎ−３脂肪酸状態」、米国臨床栄養ジャーナル（Ａｍｅｒｉｃａｎ−Ｊｏｕｒｎａｌ−ｏｆ−Ｃｌｉｎｉｃａｌ−Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）．２００２；７６（１）：８５−９２）。
【０００６】
本文の前の部分において述べた、ω−３の有益な心血管効果の他に、これらの脂肪酸は、遺伝子発現および他の生物化学的身体プロセスに重要な効果を有する。ω−３の最も重要な役割の１つは、細胞膜の形成におけるものである。脳組織のほとんどが、ω−３脂肪酸リッチである。これらの効果の現在の知識は、米国生物化学・分子生物化学学会の生物化学ジャーナルにおいて発表されている、ミシガン州立大学の生理学・生物化学・分子生物学部のドナルド（Ｄｏｎａｌｄ）Ｂ．ジャンプ（Ｊｕｍｐ）による論文にまとめてある（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２２７（２００２）８７５５−８７５８）。
【０００７】
今日では、ポリ不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）ω−３およびω−６がヒト体内での重要な生物学的プロセスに関連すること、これらの比率は、多くの慢性疾患の予防において重要な因子となること知られており（シモポーロス（Ｓｉｍｏｐｏｕｌｏｓ）Ａ．Ｐ．（２００２）、「ω−６／ω−３必須脂肪酸の比率の重要性」、生物医学および薬物療法５６、３６５）、慢性疾患には癌が含まれる（ヌコンジョック（Ｎｋｏｎｄｊｏｃｋ）Ａ．，Ｂ．シャテンステイン（Ｓｈａｔｅｎｓｔｅｉｎ）、Ｐ．メイソヌーボ（Ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ）、Ｐ．ガジリアン（Ｇｈａｄｉｒｉａｎ）（２００３）、「特定脂肪酸およびヒト結腸直腸癌：概説」、癌検出および予防２７、５５）。推奨比は、１に近い（シモポーロスＡ．Ｐ．（１９９９）、「食品サプリプロスタグランジン類、ロイコトリエン類および必須脂肪酸類中のω−３脂肪酸の進化的観点」、６０、４２１）。豚肉中のω−６／ω−３比は平均して１０を超え、豚肉の脂身中ではさらに高くなる。そのため、どちらの場合も、推奨値よりもずっと高い。
【０００８】
Ａ．Ｐ．シモポーロスにより実施された興味深い研究［生物医学＆薬物療法５６（２００２）３６５−３７９］は、異なるω−６／ω−３比の利益を記述している。この研究によれば、下記の通りである：
ω−６／ω−３＝５は喘息に効果がある。
ω−６／ω−３＝４は心血管危険を減少させるのに効果があることが証明されている。
ω−６／ω−３＝２〜３の間は結腸癌および関節リウマチを予防する。
ω−６／ω−３比が低いほど、乳癌に対する予防効果が良好である。
ω−６／ω−３比が１０を超えると、有害作用が生じ始める。
ω−６の悪影響をω−３を添加することにより効果的に補償するためには、抗酸化活性を有する化合物を同時に投与しなければならない［Ｂ．デミッグ−アダムス（Ｄｅｍｍｉｇ−Ａｄａｍｓ）ｙＷ．Ｗ．アダムス、ＩＩＩ．［サイエンス２９８（２００２）２１４９−２１５３］。
【０００９】
１９５０年代の始まりから香辛料の抗酸化特性は公知である（チポルト（Ｃｈｉｐａｕｌｔ）Ｊ．Ｒ．，ムズモ（Ｍｕｚｕｍｏ）Ｇ．Ｒ．，ホーキンス（Ｈａｗｋｉｎｓ）Ｊ．Ｍ．，ランドバーグ（Ｌｕｎｄｂｅｒｇ）Ｗ．Ｏ．（１９５２）、「天然香辛料の抗酸化特性」、食品（Ｆｏｏｄ）Ｒｅｓ．１７，４６）。１９５５年には、ローズマリーがもっと優れた抗酸化活性を有する薬草の１つであることが始めて発見された（Ｒａｃ Ｍ．，オストリック−マチジャセビック（Ｏｓｔｒｉｃ−Ｍａｔｉｊａｓｅｖｉｃ）Ｂ．（１９５５）、「ローズマリーの抗酸化剤としての特性」、Ｒｅｖ．Ｆｒ．コープスグラス（Ｃｏｒｐｓ Ｇｒａｓ）２，７９６）。この一因となる化合物はすでに確立されている。１９６６年には、カルノソールが単離され（ブリースコーン（Ｂｒｉｅｓｃｏｒｎ）Ｃ．Ｈ．，フクス（Ｆｕｃｈｓ）Ａ．，ブリーデンバーグ（Ｂｒｅｄｅｎｂｅｒｇ）Ｊ．Ｂ．，マッケスニー（ＭａＣｈｅｓｎｅｙ）Ｊ．Ｄ．，ウェンカート（Ｗｅｎｋｅｒｔ）Ｅ．（１９６６）、「カルノソールの構造」、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２９、２２９３）、植物の抗酸化特性はこのフェノールジテルペンに起因した。その構造、およびカルノシン酸の構造が、１９８２年に確認され（Ｗｕ Ｊ．Ｗ．，リー（Ｌｅｅ） Ｍ．Ｈ．，ホ（Ｈｏ）Ｃ．Ｔ．，チャン（Ｃｈａｎ）Ｓ．Ｓ．（１９８２）、「ローズマリーから単離した天然抗酸化剤の化学構造の解明」、ＪＡＯＣＳ ５９、３３９）、同じ年に、ローズマノールおよびローズマリー酸が識別された（イナタニ（Ｉｎａｔａｎｉ）Ｒ．，ナカタニ（Ｎａｋａｔａｎｉ）Ｎ．，フワ（Ｆｕｗａ）Ｈ．，セト（Ｓｅｔｏ）Ｈ．（１９８２）、「ローズマリーから単離した新規抗酸化フェノール性ジテルペンの構造」、Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．４６，１６６６）。この後、ロスマジアール（イナタニ Ｒ．，ナカタニ Ｎ．，フワ Ｈ．（１９８３）、「ローズマリーの成分およびそれらの誘導体の抗酸化効果」、Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．４７，５２１）、エピロスマノールおよびイソロスマノール（ナカタニ Ｎ．、イナタニ Ｒ．（１９８４）、「ローズマリー由来の２つの抗酸化ジテルペン類およびローズマノールに対する修正した構造」、Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．４８、２０８１）、ローズマリジフェノールおよびローズマリキノン（ホウリハン（Ｈｏｕｌｉｈａｎ Ｃ．Ｍ．）、ホ Ｃ．Ｔ．、チャン Ｓ．Ｓ．（１９８５）、「ローズマリキノンの構造。ロスマリヌス・オフィシナリス（Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）Ｌ．から単離した新規抗酸化剤」、ＪＡＯＣＳ６２、１９８５）が確認された。これらの化合物に加えて、ローズマリーの葉は、抗酸化活性を有するフラボノイド類を含む（オカムラ（Ｏｋａｍｕｒａ）Ｎ．、ハラグチ（Ｈａｒａｇｕｃｈｉ）Ｈ．、ハシモト（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ）Ｋ．、ヤギ（Ｙａｇｉ）Ａ．（１９９４）、「ロスマリヌス・オフィシナリスの葉中のフラボノイド類」、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ．３７、１４６３）。
【００１０】
一般論として、これらの化合物を個々に考慮すると、カルノシン酸が、最も高い抗酸化活性を有し、続いてカルノソール、ローズマリー酸、ローズマノールおよびロスマジアールと続くことがわかっている（クベリエール（Ｃｕｖｅｌｉｅｒ）Ｍ．Ｅ．、リチャード（Ｒｉｃｈａｒｄ）Ｈ．、ベルセット（Ｂｅｒｓｅｔ）Ｃ．（１９９６）、「セージおよびローズマリーのパイロットプラントおよび市販の抽出物の抗酸化活性およびフェノール組成物」、ＪＡＯＣＳ ７３、６４５）。カルノソールが通常、主化合物であり、しばしば抽出物の９０％もの量に対応する。実際、カルノソースは、ローズマリー中で見いだされる他のフェノール化合物と共に、抽出操作中に、カルノシン酸の酸化により生成する。
【００１１】
ローズマリーのフェノール性ジテルペン類は、主な抗酸化剤として作用する（バサガ（Ｂａｓａｇａ）Ｈ．、テッカヤ（Ｔｅｋｋａｙａ）Ｃ．、アシケル（Ａｃｉｋｅｌ）Ｆ．（１９９７）、「ローズマリー抽出物の抗酸化およびフリーラジカル捕捉特性」、Ｌｅｂｅｎｓｍ．Ｗｉｓｓ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．３０、１０５；フランケルＥ．Ｎ．、シュー（Ｓｈｕ）Ｗ．Ｈ．、エシュバッチ（Ａｅｓｃｈｂａｔｃｈ）Ｒ．、Ｐｒｉｏｒ Ｅ．（１９９６）
「ローズマリー抽出物ならびにバルク油および水中油エマルジョン中のその成分類、カルノシン酸、カルノソール、およびローズマリー酸の抗酸化活性」Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．４４、１３１；ｙ ハラグチ Ｈ．、サイトー（Ｓａｉｔｏ）Ｔ．、オクムラ Ｎ．、ヤギ Ａ．（１９９５）、「ローズマリーオフィシナリス由来のジテルペノイド類による脂質過酸化およびスーパーオキシド発生の阻害」、Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄｉｃａ ６１、３３３）。これらの生成物がスーパーオキシド・ジスムターゼに対し同様の活性（セオク（Ｓｅｏｋ）Ｊ．Ｋ．、ダエセオク（Ｄａｅｓｅｏｋ）Ｈ．、クワング（Ｋｗａｎｇ）Ｄ．Ｍ．、ジューン（Ｊｏｏｎ）Ｓ．Ｒ．（１９９５）、「天然抗酸化剤のスーパーオキシド・ジスムターゼ様活性の測定」、Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９、８２２）および、酵素類、グルタチオンレダクターゼおよびＮＡＤＰＨ−キノンレダクターゼとの相乗効果を有することも示されており、酵素類はそれらを再生させ、それらの有するフリーラジカルブロック効果を増大させる。上記酵素類とのこれらの相乗効果は、肺、肝臓、および胃における発癌性薬剤に対する保護効果に起因しており、近年、マウスで証明されている（シングレタリー（Ｓｉｎｇｌｅｔａｒｙ）Ｋ．Ｗ．、ロクセック（Ｒｏｋｕｓｅｋ）Ｊ．Ｔ．（１９９７）、「食事由来のローズマリー抽出物によるマウスにおける生体異物解毒酵素の組織特異的増強」、ヒト栄養のための植物性食品（Ｐｌａｎｔ Ｆｏｏｄｓ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）５０、４７；オフォード（Ｏｆｆｏｒｄ）、Ｅ．Ａ．，Ｋ．Ｍａｃｅ、Ｏ．Ａｖａｎｔｉ、Ａ．Ｍ．Ａ．フェイファー（Ｐｆｅｉｆｅｒ）（１９９７）、「ヒト肝臓および気管支細胞において研究したローズマリー抽出物の化学的予防効果に関与する機構」、癌レター（Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ）１１４、２７５）。血液リポタンパク質の過酸化に対する抗酸化剤の作用機構もまた公知であり、動脈硬化の発症における重要な因子である（ピンチャク（Ｐｉｎｃｈｕｋ）Ｉ．、Ｄ．リヒテンバーグ（Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇ）（２００２）、「リポタンパク質過酸化に対する抗酸化剤作用の機序、速度論的実験に基づく評価」、脂質研究における進歩（Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ４１、２７９）。
【００１２】
ローズマリーは調理において非常に一般的な材料である。しかしながら、その強烈な香りおよびその風合いのために、所望の効果が得られるのに十分な量で肉製品に添加することができない。これが、抽出物を使用する理由である。
【００１３】
超臨界抽出が、抗酸化剤を得るのに、溶媒を用いた抽出にとって代わる良好な代替案である。異なる植物の香りおよび天然染料、ホップおよび含油樹脂を抽出する複数のプロセスが存在する。極端でない、非酸化状態での抽出により、溶媒残留物のない、完全な自然特性を有する高品質製品を製造することができる。
【００１４】
含油樹脂の場合は注目に値し、これらは一般に、同じ超臨界抽出プロセスにおいて分画することができ、異なる機能を有する生成物が生じる。シソ科植物（ローズマリー、タイム、オレガノ、セージなど）からの抽出物を用いて、いくつかの応用が実施されている（グエン（Ｎｇｕｙｅｎ）Ｕ．、エバンス（Ｅｖａｎｓ）Ｄ．Ｄ．、フラクマン（Ｆｒａｋｍａｎ）Ｇ．（１９９４）、「超臨界流体抽出により生成した天然抗酸化剤」、「食品および生体材料の超臨界流体処理」中、Ｅｄ．Ｓ．Ｓ．Ｈ．リズヴィ（Ｒｉｚｖｉ）．チャップマン（Ｃｈａｐｍａｎ）＆ホール（Ｈａｌｌ）、ロンドン、ｐ１０３）。これらの場合において、超臨界流体による抽出またはＳＦＥ（超臨界流体抽出）を用いると含油樹脂が得られ、これは２つの生成物、一般に芳香族特性および抗菌特性を有する精油および抗酸化剤に容易に分割できる。
【００１５】
現在では、ＳＦＥにより得られる天然抗酸化剤は、溶媒で抽出したものよりも大きな活性を有することは周知である。ドジャルマティ（Ｄｊａｒｍａｔｉ）および同僚（ドジャルマティ Ｚ．、ジャンコブ（Ｊａｎｋｏｖ）Ｒ．Ｍ．、シュウィルトリッヒ（Ｓｃｈｗｉｒｔｌｉｃｈ）Ｅ．、ドジュリナク（Ｄｊｕｌｉｎａｃ）Ｂ．、ドジョルドジェビク（Ｄｊｏｒｄｊｅｖｉｃ）Ａ．（１９９１）、「超臨界ＣＯ２抽出によりセージから得られた抽出物の高い抗酸化活性」、ＪＡＯＣＳ ６８、７３１）は、超臨界ＣＯ２を用いた抽出により得られたセージの抗酸化抽出物がＢＨＴよりも効果的であることを示した。より最近では、同じことが、黒コショウの抽出物でも起きることが見いだされた（チプスリスコンド（Ｔｉｐｓｒｉｓｕｋｏｎｄ）Ｎ．、フェルナンド（Ｆｅｒｎａｎｄｏ）Ｌ．Ｎ．、クラーク（Ｃｌａｒｋｅ）Ａ．Ｄ．（１９９８）、「豚の挽肉における、超臨界二酸化炭素抽出由来の黒コショウの精油および含油樹脂の抗酸化効果」、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．４６、４３２９）。
【００１６】
ローズマリー抗酸化抽出物中の植物化学物質類が重要な生物活性を有する。それらの不飽和脂肪酸への効果がとりわけ興味深い。
【００１７】
同様に、当技術分野の状態では、有益な特性が、微細藻類デュナリエラ・サリナ（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｓａｌｉｎａ）、微小緑藻類属に属する単細胞藻類（緑色植物）で公知である。この微細藻類は、高い塩分により、培養維持が著しく単純となり、病原体による外部からの汚染の危険がないので、精製化学製品を製造するのに商業的に初めて使用されたものであった（ボロウィツカ（Ｂｏｒｏｗｉｔｚｋａ）Ｌ．Ｊ．、モルトン（Ｍｏｕｌｔｏｎ）Ｔ．Ｐ．、ボロウィツカ Ｍ．Ａ．（１９８５）、「デュナリエラ・サリナ由来のβ−カロテンの塩分および商業生産」、バークレイ（Ｂａｒｃｌａｙ）Ｗ．Ｊ．、マキントッシュ（ＭｃＩｎｔｏｓｈ）Ｒ．、編、アルガスバイオマス（Ａｌｇａｓ Ｂｉｏｍａｓｓ）および学際的展望Ｊ．クラマーベルラグ（Ｃｒａｍｅｒ Ｖｅｒｌａｇ）、ベルダズ（Ｖｅｒｄｕｚ）中）。現在、デュナリエラ・サリナはβ−カロテンがリッチな食品サプリメントとして消費されている（モカディ（Ｍｏｋａｄｙ）Ｓ．、アブラモビシ（Ａｂｒａｍｏｖｉｃｉ）Ａ．、コーガン（Ｃｏｇａｎ）Ｕ．（１９８９）、「デュナリエラ・バルダウイル（ｂａｒｄａｗｉｌ）の潜在的食品サプリメントとしての安全性評価」、Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．２７、２２１；タナカ Ｙ．（１９９０）「デュナリエラ藻類を含むカプセル化食料の製造プロセス」、米国特許第ＵＳ４．９１５，９６５号、および日本特許第ＪＰ８８−４０７５５号；リーチ（Ｌｅａｃｈ）Ｇ．、オリベイラ（Ｏｌｉｖｅｉｒａ）Ｇ．、モライス（Ｍｏｒａｉｓ）Ｒ．（１９９８）、「β−カロテンリッチ粉末を製造するためのデュナリエラ・サリナの噴霧乾燥」、Ｊ．Ｉｎｄ．Ｍｉｃｒｏｂ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０、８２；オルセット（Ｏｒｓｅｔ）Ｓ．、リーチ（Ｌｅａｃｈ）Ｇ．Ｃ．、モライス（Ｍｏｒａｉｓ）Ｒ．、ヤング（Ｙｏｕｎｇ）Ａ．Ｊ．（１９９９）、「微細藻類デュナリエラ・サリナの噴霧乾燥：β−カロテン量および異性体組成への影響」、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．４７，４７８２）。オーストラリアは世界中で消費されているβ−カロテンの８０％を超えるものを製造しており、それらは全て、デュナリエラ・サリナの培養物由来である。β−カロテンはこの微細藻類中、その乾燥重量の１４重量％までの濃度で見いだされており、このため、この化合物を最も高い量で有する藻類ということになり、その蓄積量は培養条件に依存する（塩分、温度、光度）。最近の研究により、異なるβ−カロテン異性体、例えば９−シスの単離および精製が達成されており（ヤマノ（Ｙａｍａｎｏ）Ｙ．、ヨシザワ（Ｙｏｓｈｉｚａｗａ）Ｍ．，イトウ（Ｉｔｏ）Ｍ．（１９９９）、「デュナリエラ・バルダウィルからの９Ｚ−βカロテンの単離およびその立体選択的合成」、Ｊ．Ｎｕｔｒ．Ｓｃｉ．Ｖｉｔａｍｉｎ．４５、４９）、合成β−カロテン（主に「オールトランス」組成）と比較したその抗酸化活性が確立されている。機能特性を有する、この微細藻類中に存在する別の化合物はトコフェノール類（それらの異性体組成は知られていないので通常α−トコフェノールとして定量されている）、ポリ不飽和脂肪酸類（ＰＵＦＡ）（フランク（Ｆｒａｎｋｅ）Ｈ．、スプリンガー（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｍ．、プルズ（Ｐｕｌｚ）Ｏ．、チエツ（Ｔｉｅｔｚ）Ｕ．、ミュラー（Ｍｕｅｌｌｅｒ）Ｕ．（１９９４）、「微細藻類由来のポリ不飽和脂肪酸類」、Ｉｎｔ．Ｆｏｏｄ Ｉｎｇｒ．４，４１）、ステロール類（例えばエルゴステロール）、および水溶性ビタミン類（例えばチアミン、ピリドキシン、ビオチン、リボフラビン、など）である。この藻類では、フラボノイド類またはフェノール性化合物の存在は記述されていない。しかしながら、フラボノイド類またはフェノール性化合物が同様の微細藻類種において検出されているので、それらの存在が予測できる（ローハ（Ｒａｕｈａ）、ＪＰ；リームス（Ｒｅｍｅｓ）、Ｓ；ハイノネン（Ｈｅｉｎｏｎｅｎ）、Ｍ；ホピア、Ａ；カーコーネン（Ｋａｈｋｏｎｅｎ）、Ｍ；クジャラ（Ｋｕｊａｌａ）、Ｔ；ピーラジャ（Ｐｉｈｌａｊａ）、Ｋ；ブオレラ（Ｖｕｏｒｅｌａ）、Ｈ；ブオレラ、Ｐ．（２０００）、「フラボノイド類および他のフェノール性化合物を含むフィンランド植物抽出物の抗菌効果」、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５６、ｐ．３−１２）。
【００１８】
前に記述したもの以外のカロテノイド類の効果に関しては、ごく最近、ルテインなどのカロテノイド類の効果が、例えば、加齢黄斑変性症の予防において証明されている。これらの効果は、これらのカロテノイド類が別の非カロテノイド抗酸化剤と組み合わされると、より顕著になる（ビーティ（Ｂｅａｔｔｙ）Ｓら、Ｓｕｒｖ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ ２０００；４５：１１５−１３４；カイト（Ｃａｉｔ）ら、Ｐｒｏｇ Ｒｅｔｉｎ Ｅｙｅ Ｒｅｓ ２０００；１０：２０５−２１１）（ジャンケイラ（Ｊｕｎｑｕｅｉｒａ）ＶＢら、Ｍｏｌ Ａｓｐｅｃｔｓ Ｍｅｄ ２００４；２５：５−１６）（コー（Ｋｏｈ）ＨＨら、目の実験研究（Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）２００４；７９：２１−２７；ビーティＳら、Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ ２００４；４３０：７０−７６）。
【００１９】
最後に、当技術分野の状態では、α−トコフェロールは、栄養の観点から、および体内において、抗酸化剤としての有益な効果で公知である。
【００２０】
【非特許文献１】Ａｈｒｅｎｓ Ｅ．Ｈ．，Ｄ．Ｈ．Ｂｌａｎｋｅｎｈｏｒｎ，Ｔ．Ｔ．Ｔａｓｔａｓ（１９５４）“Ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｓｅｒｕｍ ｌｉｐｉｄｓ ｏｆ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｎｇ ｐｌａｎｔ ｆｏｒ ａｎｉｍａｌ ｆａｒ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉｅｔ”，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．８６、８７２．
【非特許文献２】Ｋｅｙｓ Ａ．，Ｊ．Ｔ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｆ．Ｇｒａｎｄｅ（１９５７）、“Ｓｅｒｕｍ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｄｉｅｔａｒｙ ｆａｔ”，Ｌａｎｃｅｔ １，７８７
【非特許文献３】Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ（Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ ７６（２００２）３２６−３３０） ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ
【非特許文献４】Ａｄｅｅｍｉａ（Ｌｏｐｅｚ−Ｈｕｅｒｔｒａｓ−Ｅ；Ｂａｒｏ，−Ｌ；Ｃａｒｒｅｒｏ，−Ｊ−Ｊ；Ｆｏｎｏｌｌａ，−Ｊ（２００３）“ｎ−３ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ：ｈｅａｌｔｈ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｎｄ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ ｔｏ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎｔａｋｅ”，Ａｇｒｏ Ｆｏｏｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ ｈｉ ｔｅｃｈ．）２００３；１４（３）；１８−２１
【非特許文献５】Ｄｅｗａｉｌｌｙ，−Ｅ；Ｂｌａｎｃｈｅｔ，−Ｃ；Ｇｉｎｇｒａｓ，−Ｓ；Ｌｅｍｉｕｅｘ，−Ｓ；Ｈｏｌｕｂ，−Ｂ−Ｊ（２００２）、“Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅｓａｓｅ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｎ−３ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｄｕｌｔ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｊａｍｅｓ Ｂａｙ Ｃｒｅｅ”，Ａｍｅｒｉｃａｎ−Ｊｏｕｒｎａｌ−ｏｆ−Ｃｌｉｎｉｃａｌ−Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）．２００２；７６（１）：８５−９２）
【非特許文献６】ミシガン州立大学の生理学・生物化学・分子生物学部のＤｏｎａｌｄ Ｂ．Ｊｕｍｐ著、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２２７（２００２）８７５５−８７５８
【非特許文献７】Ｓｉｍｏｐｏｕｌｏｓ Ａ．Ｐ．（２００２）、“Ｔｈｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｍｅｇａ−６／ｏｍｅｇａ−３ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ”，Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ ５６，３６５−３７９
【非特許文献８】Ｎｋｏｎｄｊｏｃｋ Ａ．，Ｂ．Ｓｈａｔｅｎｓｔｅｉｎ，Ｐ．Ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ，Ｐ．Ｇｈａｄｉｒｉａｎ（２００３），“Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ：ａｎ ｏｖｅｒｖｉｅｗ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ２７，５５
【非特許文献９】Ｓｉｍｏｐｏｕｌｏｓ Ａ．Ｐ．（１９９９），“Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ ｏｍｅｇａ−３ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｏｄ ｓｕｐｌｉ Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ，Ｌｅｕｃｏｔｒｉｅｎｅｓ ａｎｄ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄｓ”，６０，４２１
【非特許文献１０】Ｂ．Ｄｅｍｍｉｇ−Ａｄａｍｓ ｙ Ｗ．Ｗ．Ａｄａｍｓ，ＩＩＩ著、Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００２）２１４９−２１５３
【非特許文献１１】Ｃｈｉｐａｕｌｔ Ｊ．Ｒ．，Ｍｕｚｕｍｏ Ｇ．Ｒ．，Ｈａｗｋｉｎｓ Ｊ．Ｍ．，Ｌｕｎｄｂｅｒｇ Ｗ．Ｏ．（１９５２）、“Ｔｈｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌ ｓｐｉｃｅｓ”，Ｆｏｏｄ Ｒｅｓ． １７，４６
【非特許文献１２】Ｒａｃ Ｍ．，Ｏｓｔｒｉｃ−Ｍａｔｉｊａｓｅｖｉｃ Ｂ．（１９５５）、“Ｔｈｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｒｏｓｅｍａｒｙ ａｓ ａｎ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ”，Ｒｅｖ．Ｆｒ．Ｃｏｒｐｓ Ｇｒａｓ ２，７９６
【非特許文献１３】Ｂｒｉｅｓｃｏｒｎ Ｃ．Ｈ．，Ｆｕｃｈｓ Ａ．，Ｂｒｅｄｅｎｂｅｒｇ Ｊ．Ｂ．，ＭａＣｈｅｓｎｅｙ Ｊ．Ｄ．，Ｗｅｎｋｅｒｔ Ｅ．（１９６６），“Ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｃａｒｎｏｓｏｌ”，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２９，２２９３
【非特許文献１４】Ｗｕ Ｊ．Ｗ．，Ｌｅｅ Ｍ．Ｈ．，Ｈｏ Ｃ．Ｔ．，Ｃｈａｎ Ｓ．Ｓ．（１９８２），“Ｅｌｕｃｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｒｏｓｅｍａｒｙ”，ＪＡＯＣＳ ５９，３３９
【非特許文献１５】Ｉｎａｔａｎｉ Ｒ．，Ｎａｋａｔａｎｉ Ｎ．，Ｆｕｗａ Ｈ．，Ｓｅｔｏ Ｈ．（１９８２），“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ａ ｎｅｗ ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｐｈｅｎｏｌｉｃ ｄｉｔｅｒｐｅｎｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｒｏｓｅｍａｒｙ”，Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．４６，１６６６
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【非特許文献１７】Ｎａｋａｔａｎｉ Ｎ．，Ｉｎａｔａｎｉ Ｒ．（１９８４），“Ｔｗｏ ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｄｉｔｅｒｐｅｎｅｓ ｆｒｏｍ Ｒｏｓｅｍａｒｙ ａｎｄ ａ ｒｅｖｉｓｅｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｆｏｒ ｒｅｓｍａｎｏｌ”，Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．４８，２０８１
【非特許文献１８】Ｈｏｕｌｉｈａｎ Ｃ．Ｍ．，Ｈｏ Ｃ．Ｔ．，Ｃｈａｎｇ Ｓ．Ｓ．（１９８５），“Ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｒｏｓｍａｒｉｑｕｉｎｏｎｅ．Ａ ｎｅｗ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ Ｌ．”，ＪＡＯＣＳ ６２，１９８５
【非特許文献１９】Ｏｋａｍｕｒａ Ｎ．，Ｈａｒａｇｕｃｈｉ Ｈ．，Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ Ｋ．，Ｙａｇｉ Ａ．（１９９４），“Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ ｌｅａｖｅｓ”，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ．３７，１４６３
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【非特許文献２１】Ｂａｓａｇａ Ｈ．，Ｔｅｋｋａｙａ Ｃ．，Ａｃｉｋｅｌ Ｆ．（１９９７）、“Ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ ａｎｄ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｒｏｓｅｍａｒｙ ｅｘｔｒａｃｔ”，Ｌｅｂｅｎｓｍ．Ｗｉｓｓ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．３０，１０５
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【非特許文献２３】ｙ Ｈａｒａｇｕｃｈｉ Ｈ．，Ｓａｉｔｏ Ｔ．，Ｏｋｕｍｕｒａ Ｎ．，Ｙａｇｉ Ａ．（１９９５），“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｐｉｄ ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Ｒｏｓｅｍａｒｙ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ”，Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄｉｃａ ６１，３３３
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【非特許文献２９】Ｄｊａｒｍａｔｉ Ｚ．，Ｊａｎｋｏｖ Ｒ．Ｍ．，Ｓｃｈｗｉｒｔｌｉｃｈ Ｅ．，Ｄｊｕｌｉｎａｃ Ｂ．，Ｄｊｏｒｄｊｅｖｉｃ Ａ．（１９９１），“Ｈｉｇｈ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｓａｇｅ ｂｙ ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ ＣＯ２ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ”、ＪＡＯＣＳ ６８，７３１
【非特許文献３０】Ｔｉｐｓｒｉｓｕｋｏｎｄ Ｎ．，Ｆｅｒｎａｎｄｏ Ｌ．Ｎ．，Ｃｌａｒｋｅ Ａ．Ｄ．（１９９８），“Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｏｉｌ ａｎｄ Ｏｌｅｏｒｅｓｉｎ ｏｆ Ｂｌａｃｋ Ｐｅｐｐｅｒ ｆｒｏｍ Ｓｕｐｒｔｃｒｉｔｉｃａｌ． Ｃａｒｂｏｎ Ｄｉｏｘｉｄｅ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｇｒｏｕｎｄ Ｐｏｒｋ”，Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．４６，４３２９
【非特許文献３１】Ｂｏｒｏｗｉｔｚｋａ Ｌ．Ｊ．，Ｍｏｕｌｔｏｎ Ｔ．Ｐ．，Ｂｏｒｏｗｉｔｚｋａ Ｍ．Ａ．（１９８５），“Ｓａｌｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂｅｔａ−ｃａｒｏｔｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｓａｌｉｎａ”，Ｂａｒｃｌａｙ Ｗ．Ｊ．，ＭｃＩｎｔｏｓｈ Ｒ．、編、Ａｌｇａｓ Ｂｉｏｍａｓｓ：ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｄｉｓｃｉｐｌｉｎａｒｙ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ． Ｊ．Ｃｒａｍｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、Ｖｅｒｄｕｚ中
【非特許文献３２】Ｍｏｋａｄｙ Ｓ．，Ａｂｒａｍｏｖｉｃｉ Ａ．，Ｃｏｇａｎ Ｕ．（１９８９）、“Ｔｈｅ ｓａｆｅｔｙ ｅｖａｌｕｔｉｏｎ ｏｆＤｕｎａｌｉｅｌｌａ ｂａｒｄａｗｉｌ ａｓ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｆｏｏｄ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ”，Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．２７，２２１
【特許文献１】米国特許第４．９１５，９６５号および日本特願昭６３−４０７５５号；Ｔａｎａｋａ Ｙ．（１９９０），“Ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ ｆｏｏｄｓｔｕｆｆ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ａｌｇａｅ”
【非特許文献３３】Ｌｅａｃｈ Ｇ．，Ｏｌｉｖｅｉｒａ Ｇ．，Ｍｏｒａｉｓ Ｒ．（１９９８）、“Ｓｐｒａｙ−ｄｒｙｉｎｇ ｏｆ Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｓａｌｉｎａ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ａ ｂｅｔａ−ｃａｒｏｔｅｎｅ ｒｉｃｈ ｐｏｗｄｅｒ”，Ｊ．Ｉｎｄ．Ｍｉｃｒｏｂ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０，８２
【非特許文献３４】Ｏｒｓｅｔ Ｓ．，Ｌｅａｃｈ Ｇ．Ｃ．，Ｍｏｒａｉｓ Ｒ．，Ｙｏｕｎｇ Ａ．Ｊ．（１９９９），“Ｓｐｒａｙ−ｄｒｙｉｎｇ ｏｆ ｍｉｃｒｏａｌｇａ Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｓａｌｉｎａ： Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｂｅｔａ−ｃａｒｏｔｅｎｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｎｄ ｉｓｏｍｅｒ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ”，Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．４７，４７８２
【非特許文献３５】Ｙａｍａｎｏ Ｙ．，Ｙｏｓｈｉｚａｗａ Ｍ．，Ｉｔｏ Ｍ．（１９９９）、“Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ９Ｚ ｂｅｔａ−ｃａｒｏｔｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｂａｒｄａｗｉｌ ａｎｄ ｉｔｓ ｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｊ．Ｎｕｔｒ．Ｓｃｉ．Ｖｉｔａｍｉｎ．４５，４９
【非特許文献３６】Ｆｒａｎｋｅ Ｈ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｍ．，Ｐｕｌｚ Ｏ．，Ｔｉｅｔｚ Ｕ．，Ｍｕｅｌｌｅｒ Ｕ．（１９９４），“Ｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｆｒｏｍ ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ”，Ｉｎｔ．Ｆｏｏｄ Ｉｎｇｒ．４，４１
【非特許文献３７】Ｒａｕｈａ，ＪＰ；Ｒｅｍｅｓ，Ｓ；Ｈｅｉｎｏｎｅｎ，Ｍ；Ｈｏｐｉａ，Ａ；Ｋａｈｋｏｎｅｎ，Ｍ；Ｋｕｊａｌａ，Ｔ；Ｐｉｈｌａｊａ，Ｋ；Ｖｕｏｒｅｌａ，Ｈ；Ｖｕｏｒｅｌａ，Ｐ．（２０００）、“Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｆｉｎｎｉｓｈ ｐｌａｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｐｈｅｎｏｌｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５６、ｐ．３−１２
【非特許文献３８】Ｂｅａｔｔｙ Ｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｕｒｖ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ ２０００；４５：１１５−１３４
【非特許文献３９】Ｃａｉｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｇ Ｒｅｔｉｎ Ｅｙｅ Ｒｅｓ ２０００；１０：２０５−２１１
【非特許文献４０】Ｊｕｎｑｕｅｉｒａ ＶＢ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ａｓｐｅｃｔｓ Ｍｅｄ ２００４；２５：５−１６
【非特許文献４１】Ｋｏｈ ＨＨ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００４；７９：２１−２７
【非特許文献４２】Ｂｅａｔｔｙ Ｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ ２００４；４３０：７０−７６
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
本発明者らは、長鎖ω−３ポリ不飽和酸、例えばＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物との組み合わせを、食品に添加すると、抗酸化剤とポリ不飽和脂肪酸との間に予想外の相乗反応が生じることを発見した。これは、予測よりも抗酸化活性が大きく増加したと言い換えられる。これはまた、強化食品の製造、貯蔵および調理中の生物活性物質のレベルを維持するのを助け、その後、それらが消費されるとヒト健康に対し有益な効果が得られる。
【００２２】
そのため、本発明は、強化食品の調製で使用するための、ＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物とに基づく相乗的油状組成物を提供する。この組成物はまた、例えば、カロテノイド類ルテインまたはβ−カロテンなどの健康のために有益な成分も含む微細藻類デュナリエラ・サリナもまた含むことができる。
【００２３】
同様に、本発明はまた、喘息、癌または異なる心血管疾患などの疾患の予防に有益な、ω−３のω−６ポリ不飽和脂肪酸に対する比率が５未満である、この油状混合物で強化した食品を提供する。この比率はまた、これらのポリ不飽和脂肪酸類とα−トコフェロールと超臨界ローズマリー抽出物由来のフェノール性ジテルペン類との間の相乗作用により、食品の製造、貯蔵および調理中に維持される。これらの強化食品は、また、感覚特性に関する品質特性および安全性を保持する。
【００２４】
そのため、本発明により提供される強化食品は、ポリ不飽和脂肪酸のレベルが安定であり、ω−３のω−６に対する比率が５未満であり、α−トコフェロールと、ローズマリーの超臨界抽出物由来のフェノール性ジテルペン類と、必要に応じて用いる、微細藻類デュナリエラ・サリナ由来のカロテノイド類の量が安定なため、ヒトの健康に対し有益である。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
そのため、本発明の目的は、ＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモンと、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物と、を含む強化食品の調製において使用される天然生物活性成分に基づく相乗的油状混合物を提供することである。
【００２６】
本発明の別の目的は、天然生物活性成分に基づくこの油状混合物で強化した食品を提供することである。
【００２７】
最後に、本発明の別の目的は、この強化食品を調製するための方法を提供することである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
本発明は、ＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物とを含むことを特徴とする、強化食品の調製において使用される天然生物活性成分に基づく油状混合物を提供する。
【００２９】
本出願の中では、「強化食品」という用語は、組成に、天然では含まれていない、または少量しか含まれていない物質が添加された食品を示す。
【００３０】
同様に、「天然生物活性成分」という用語は、科学的知識の当技術分野の現状に従い、健康にとって有益な生物活性を有する、天然起源の化合物を示す。
【００３１】
前に述べたように、ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）およびＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）が強化されたサーモン油は、ω−３ポリ不飽和脂肪酸を提供する。これらは、食品業界で使用される周知の機能性成分であり、そのため、それらの使用の危険性は非常に低い。ω−３脂肪酸を組み入れると、陸生動物由来、とりわけブタ由来の脂肪の好ましくない脂質プロファイルが補われる。豚肉の消費によりω−６脂肪酸が上昇することがあるからである。細胞レベルでの酸化還元不均衡のこれらのω−６脂肪酸の介入により、癌において起きるもののような、細胞増殖の増加；心血管、自己免疫および神経系疾患において起きるもののような炎症過程の誘発；および、神経障害を引き起こす神経伝達の欠如に至ることがある。同様に、細胞酸化還元均衡は、生命過程のレギュレータにおける遺伝子発現および主遺伝子の突然変異が生じるＤＮＡ損傷発生に影響する。
【００３２】
このように、ＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油を、強化のために陸生動物由来の食品に添加すると、それらの天然のω−６／ω−３不均衡の補償が助けられる。例えば、豚および七面鳥などの陸生動物の動物脂肪中のω−６／ω−３比率は、平均、１０より高いためである（が、七面鳥肉は、豚の４０％脂肪量に比べ、１％の脂肪量のみを示す）。豚脂肪では、ω−６／ω−３比はさらに高く、これらの動物の肉中のこの比率は、推奨値よりもずっと高い。
【００３３】
しかしながら、ω−３脂肪酸の消費は酸化的ストレスを増加させることがあるので、これらの脂肪酸の食品への添加は、超臨界ローズマリー抽出物またはα−トコフェロールなどの抗酸化剤の同時添加と組み合わされなければならない。前に言及した、これらの抗酸化剤は、当技術分野の状況では公知であるが、現在まで、ＥＰＡおよびＤＨＡで強化されたサーモン油と組み合わせた場合の、重要な相乗作用は知られていなかった。
【００３４】
超臨界ローズマリー抽出物は、不飽和脂肪酸により引き起こされる酸化的ストレスを減少させるのを助け、ならびに、非常に重篤な疾患に対し潜在的な予防効果を有し、かつ優れた天然食品保存剤である。この発明の目的のために、例えば、フラベックス（Ｆｌａｖｅｘ）（オーストリア）により販売されている超臨界ローズマリー抽出物を使用することができ、または超臨界ＣＯ２により、１５０〜２５０バール（１５〜２５ＭＰａ）の範囲の圧力および４０〜７０℃の間の温度で抽出することにより調製されたものを使用することができる。
【００３５】
他方、α−トコフェロールは、前述したように、抗酸化剤として重要な利益を提供する。本発明のために、例えば、ロシュ（Ｒｏｃｈｅ）により市販されているα−トコフェロールを使用することができる。
【００３６】
強化サーモン油のポリ不飽和脂肪酸と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物の相乗的相互作用により、５未満のω−３／ω−６比率を達成することができ、これが、油状混合物が添加される食品の製造、貯蔵および調理中に維持される。この相乗的作用により、α−トコフェロールおよび超臨界ローズマリー抽出物の抗酸化活性が維持され、本発明の油状混合物が添加される食品中で、α−トコフェロール量および超臨界ローズマリー抽出物由来のフェノール性ジテルペン量が維持される。
【００３７】
本発明の１つの特定の態様では、油状混合物は、７０〜９９．９％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００１〜１％のα−トコフェロールと、０．１〜５％の超臨界ローズマリー抽出物と、を含み、ここで、これらは、油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００３８】
好ましい態様では、油状混合物は、８０〜９７％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００１〜０．１％のα−トコフェロールと、１〜３％の超臨界ローズマリー抽出物と、を含み、ここで、これらは、油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００３９】
より好ましい態様では、油状混合物は、８２％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．０８％のα−トコフェロールと、１．６％の超臨界ローズマリー抽出物と、を含み、ここで、これらは、油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００４０】
本発明の別の特定の態様では、油状混合物はまた、微細藻類デュナリエラ・サリナを含む。前述したように、この微細藻類は、食品で最もよく使われるものの１つであり、そのため、その毒性はよく研究されており、使用しても健康上のリスクとはならない。微細藻類デュナリエラ・サリナはα−トコフェロールおよび超臨界ローズマリー抽出物の抗酸化作用を増強することができ、また、選択した疾患、例えば、視覚に影響するもののいくつかに対し予防作用を有するかなりのカロテノイド含有量を有する。α−トコフェロールと超臨界ローズマリー抽出物との間の相乗作用のため、本発明の油状混合物が添加される食品中で、このカロテノイド含有量を維持することが可能である。
【００４１】
本発明の目的は、例えば、ネイチャーβテクノロジーズ（Ｎａｔｕｒｅ Ｂｅｔａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ＮＢＴ））社（イスラエル）により市販されている微細藻類デュナリエラ・サリナを用いて達成することができる。
【００４２】
本発明の好ましい態様では、油状混合物は、０．１〜２０％、好ましくは３〜１８％、さらに好ましくは１６％の微細藻類デュナリエラ・サリナを含み、ここで、これらは、油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００４３】
別の観点では、本発明は、前述したように、ＥＰＡおよびＤＨＡで強化されたサーモン油と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物とを含む天然生物活性成分に基づく油状混合物で強化した食品を提供する。
【００４４】
特定の態様では、この食品は、ＥＰＡおよびＤＨＡが強化されたサーモン油と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物と、ならびに微細藻類デュナリエラ・サリナとを含む天然生物活性成分に基づく油状混合物で強化される。
【００４５】
本発明の好ましい態様では、この食品は、０．１〜２０％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００００１〜１％のα−トコフェロールと、０．００１〜５％の超臨界ローズマリー抽出物と、必要に応じて、０．０１〜５％の微細藻類デュナリエラ・サリナと、を含み、ここで、これらは、食品の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００４６】
本発明のより好ましい態様では、この強化食品は、１〜１０％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００１〜０．５％のα−トコフェロールと、０．０１〜３％の超臨界ローズマリー抽出物と、必要に応じて、０．１〜３％の微細藻類デュナリエラ・サリナと、を含み、ここで、これらは、食品の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００４７】
同様に、本発明のさらに好ましい態様では、この強化食品は、５％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００５％のα−トコフェロールと、０．１％の超臨界ローズマリー抽出物と、必要に応じて、１％の微細藻類デュナリエラ・サリナと、を含み、ここで、これらは、食品の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００４８】
サーモン油は、油の総重量に対し、１０〜４０重量％の範囲の割合のＥＰＡおよびＤＨＡで強化される。好ましい態様では、サーモン油は、油の総重量の対し１８重量％のＥＰＡと１２重量％のＤＨＡで強化される。
【００４９】
本発明のために、プロダクトスキミコスドムルシア（Ｐｒｏｄｕｃｔｏｓ Ｑｕｉｍｉｃｏｓ ｄｅ Ｍｕｒｃｉａ）Ｓ．Ａ．により市販されている１８％のＥＰＡと１２％のＤＨＡで強化されたサーモン油を使用することができる。
【００５０】
本発明の強化食品は、ω−６／ω−３ポリ不飽和脂肪酸の比率が５未満であるポリ不飽和脂肪酸含量を示し、これは、前述したように、ヒトの健康に対し重要な利益となる。ω−３脂肪酸と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物との相乗的相互作用のために、この比率は、このように強化された食品の製造、貯蔵およびその後の調理の間維持される。
【００５１】
１つの特定の態様では、本発明の強化食品は肉製品である。好ましくは、本発明の強化食品は、フランクフルト型ソーセージ、加熱ハム（ゆでたハム）、調理済み七面鳥胸肉、加工「チョリーゾ」ソーセージ、加工「サルチチョン」ソーセージ、加工豚ロイン、および塩漬けハムからなる群より選択される肉製品である。
【００５２】
別の観点では、本発明は、
ａ）天然生物活性成分を混合することにより、これらの天然生物活性成分に基づく油状混合物を調製する工程と、
ｂ）工程ａ）で調製した油状混合物を強化すべき食品に組み入れる工程と、
を含む、この強化食品を調製するための方法に対応する。
【００５３】
本発明の１つの特定態様では、天然生物活性成分は、７０〜９９．９％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油、０．００１〜１％のα−トコフェロール、０．１〜５％の超臨界ローズマリー抽出物、必要に応じて、０．１〜２０％の微細藻類デュナリエラ・サリナの割合で組み合わせられ、ここで、これらは、油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００５４】
本発明の好ましい態様では、天然生物活性成分は、８０〜９７％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油、０．００１〜０．１％のα−トコフェロール、１〜３％の超臨界ローズマリー抽出物、必要に応じて、３〜１８％の微細藻類デュナリエラ・サリナの割合で組み合わせられ、ここで、これらは、油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００５５】
本発明の方法のさらに好ましい態様では、天然生物活性成分は、８２％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油、０．０８％のα−トコフェロール、１．６％の超臨界ローズマリー抽出物、必要に応じて、１６％の微細藻類デュナリエラ・サリナの割合で組み合わせられ、ここで、これらは、油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する。
【００５６】
このように、本発明の強化食品を調製するために、適した量の、機能性成分の各々の重さを量り、その後、混合して、油状のわずかに着色した製品を得る。
【００５７】
強化される食品が、フランクフルトソーセージなどの肉製品に対応する場合、生物活性成分の油状混合物を、混合プロセス中に添加し、肉エマルジョンが製造される。その後、肉エマルジョンを使用してソーセージ外皮を満たし、ソーセージを調理し、真空パックし、３０〜９０日間の最大期間の間、冷蔵する。
【００５８】
強化加熱ハムでは、生物活性成分の油状混合物を、生カットハム中に塩類溶液（例えば塩水）と共に注入する。この後、カット（肉片）をマッサージドラムに入れ、生物活性化合物の混合物が、均一に肉全体に、内部で広がるように支援する。カット（肉片）をその後、調理し、真空パックし、３０〜９０日の間の範囲の最大時間の間、冷蔵庫で維持する。
【００５９】
強化した調理済み七面鳥胸肉を調製するために、生物活性成分の油状混合物を生の胸カット肉に塩類溶液（例えば塩水）と共に注入する。次に、カット（肉片）をマッサージドラムに入れ、生物活性化合物の混合物が、均一に肉全体に、内部で広がるように支援する。次に、カット肉を調理し、真空パックし、３０〜９０日の間の範囲の最大時間の間、冷蔵庫で保存する。
【００６０】
強化加工ロインを調製するために、生物活性成分の油状混合物を生の豚ロインカット肉に注入する。次に、外皮を肉で充填し、加工する。
【００６１】
強化塩漬けハムを調製するために、生物活性成分の油状混合物を、生ハムカットの表面に塩と共に広げる。カットをその後、穏やかに加圧し、加工する。
【００６２】
強化加工チョリーゾを調製するために、生物活性成分の油状混合物を挽肉およびスパイスと混合する。次に、混合物を用いてソーセージを製造し、これを加工する。
【００６３】
強化加工「サルチチョン」を調製するために、生物活性成分の油状混合物を挽肉およびスパイスと混合する。その後、混合物を用いてソーセージを製造し、これを加工する。
【００６４】
このように、まとめると、本発明の相乗的油状混合物の添加により、強化食品は下記利点を提供する：
１． ５未満のω−６／ω−３比を有し、この脂肪酸プロファイルが製造プロセスを通して、その貯蔵期間中、およびこれらの製品の調理プロセス、例えばフライ加工中、維持される。
２． ＰＵＦＡが組み入れられているため、酸化指数の有意の増加を示さず、これは、その製造、貯蔵および調理中にほとんど変化しないままである。
３． 製造、貯蔵および調理中に添加された抗酸化製品の抗酸化活性の有意の減少を示さない。
４． 製造、貯蔵よび調理中にα−トコフェロール量の有意の変化を示さない。
５． 製造、貯蔵よび調理中に、超臨界ローズマリー抽出物により提供されるフェノールジテルペン量の有意の変化を示さない。
６． 製造、貯蔵よび調理中に、微細藻類デュナリエラ・サリナにより提供されるカロテノイド類の有意の変化を示さない。
【００６５】
下記は、肉製品に対する全ての可能な処理作業を含む強化食品の２つの例である：
実施例１．フランクフルト型ソーセージ、調理および６０日の冷蔵および真空下の貯蔵、ならびにその後のフライ処理を含むプロセスにおいて、記述した特性がどのように得られ、保存されるのかを証明する。
実施例２．加工イベリアチョリーゾ、５０日間の加工を有するプロセスにおいて、記述した特性がどのように得られ、保存されるのかを証明する。
【００６６】
これらの実施例は、本発明の明確な理解を助けるために提供される。本発明の範囲は、全く、これらに限定されない。
【００６７】
方法
１．脂肪酸プロファイル
抽出：サンプル中に存在する脂質画分を抽出するために、異なる方法を評価した：ａ）ヘキサン、ｂ）ヘキサン／メタノール、およびｃ）ヘキサン／水（５／１）。方法ａ）およびｂ）では、相間が生じ、これにより、ヘキサン相を分離するのが困難になった。方法ｃ）は試験したものの中では、ヘキサン相を正確に分離することができた唯一の方法であり、そのため、残りの抽出のために選択した。
【００６８】
脂質抽出プロトコル：５ｇのサンプルを前もって粉砕し、サンプルをホモジナイズする。その後、１ｇの各サンプルを５０ｍｌファルコンバイアルに入れ、５ｍｌのミリ（ｍｉｌｌｉ）−Ｑ Ｈ２Ｏを添加し、続いて２５ｍｌのヘキサンを添加した。サンプルをウルトラタラックス（Ｕｌｔｒａ Ｔｕｒｒａｘ）により１分間激しく振盪させ、上清を収集した。場合によっては、水相とヘキサン相とを完全に分離するために遠心分離工程が必要となった。この遠心分離は、３８００ｒｐｍで５分間実施した。確実に、サンプル中の脂肪のほとんどを抽出するために、第２抽出を２５ｍｌのヘキサンを用いて実施した。各抽出物中、ヘキサンをロタベイパー（ｒｏｔａ−ｖａｐｏｒ）中、４０℃で蒸発させ一定重量とし、得られた残留物を、バイアル中で、窒素雰囲気下、太陽光から保護して維持した。
【００６９】
抽出物誘導体化プロトコル：クロロホルム／メタノール２／１（ｖ／ｖ）に溶解した、２５ｍｇ／ｍｌ（サーモン油を含まないサンプルに対し）および５０ｍｇ／ｍｌ（サーモン油を含むサンプルに対し）の抽出物濃度の溶液を調製した。これらの溶液の計０．５ｍｌを、ＮａＯＨを含むメタノール（０．１Ｍ）を用い、６０℃で３０分間メチル化した。次に、０．２ｍｌのｍＱ水を添加することにより誘導体化を中止させた。その後、形成したメチルエステル脂肪酸を２度、１ｍｌのヘキサンで抽出した。ヘキサン相から残留水を除去するために、画分を無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥させた。
【００７０】
脂質分析のためのクロマトグラフィー法：パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）自動システムＸＬクロマトグラフにおいて、長さ３０ｍ、内径２５０μｍ、膜厚（ｐｈａｓｅ ｔｈｉｃｋｅｎｅｒ）０．２５μｍの寸法のＢＴＲ−カルボワックス（Ｃａｒｂｏｗａｘ）カラムを用いて、分析を実施した。使用したクロマトグラフィー法は下記の通りであった：
注入器温度：２２０℃
炉温度プログラム：１００℃−−−１８０℃（２０℃／分で）−−−２２０℃（１５℃／分で）（３３分）
ＦＩＤ検出器温度：２３０℃
総分析時間：４０分
Ｈｅ圧：４ｂａｒ（４×１０５Ｐａ）
合成空気圧：４ｂａｒ（４×１０５Ｐａ）
水素圧：２ｂａｒ（２×１０５Ｐａ）
カラムヘッド温度：１２ｂａｒ（１２×１０５Ｐａ）
Ｈｅ流：１ｍｌ／分
分割比：２０：１
注入体積：１μｌ
【００７１】
ＰＵＦＡ Ｎ°１ マリンソース（Ｍａｒｉｎｅ Ｓｏｕｒｃｅ）、スペルコ（Ｓｕｐｅｌｃｏ）（４−７０３３）の２０ｍｇ／ｍｌ（ヘキサン中）溶液を注入することにより、異なるメチルエステル脂肪酸の保持時間を決定した。
【００７２】
２．酸化指数
この方法は、脂質酸化の最終化合物として生成するマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）の定量に基づく。この化合物を測定するために、トリクロロ酢酸を用いてサンプルから抽出し、その後、チオバルビツール酸との比色反応により定量すると、ピンク色の付加物が形成し、最大吸光度ピークは５３１ｎｍに存在した。定量法のために：１０ｇのサンプルを取り出し（±０．００５ｇ）、重量を記録し、２０ｍｌの１０％トリクロロ酢酸を添加し、サンプルを３０秒間２００００ｒｐｍでホモジナイズした。その後、これを３０分間４０００ｒｐｍ、１０℃で遠心分離した。遠心分離後、サンプルを濾過し、２ｍｌの上清を試験管中に収集した。これらの２ｍｌの上清に、さらに２ｍｌのチオバルビツール酸溶液を添加し（ＴＢＡ、３００ｍｇ／１００ｍｌ）；溶液をボルテックス中で混合し、銀箔で被覆し、２０分間、沸騰水を有する水浴に入れた。その後、放置して室温まで冷却させ、形成した色を５３１ｎｍで測定した。サンプル自体の色を測定するために、２ｍｌの水の代わりに２ｍｌのＴＢＡを使用して、サンプルに対して実施したものと同じ試験をブランクに対し実施した。
【００７３】
３．抗酸化活性
エタノール（１０ｇのサンプルあたり２０ｍｌのエタノール）を添加することにより添加した化合物の抽出を実施し、遠心分離後に得られた濾液を乾燥させた。それぞれの場合において得られた乾燥残留物をエタノールに１５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解させた。この溶液を計０．１ｍｌ使用して、β−カロテン漂白（ｂｌｅａｃｈｉｎｇ）試験により、異なる化合物の抗酸化能力を評価した。これにより、反応媒質中の試験化合物濃度が６０μｇ／ｍｌとなった。β−カロテン漂白試験は、潜在的に抗酸化効果を有する物質が、酸化促進条件のリノール酸と共にエマルジョン中に存在する場合の、この物質のβ−カロテン酸化を阻害する能力を評価する。
【００７４】
４．トコフェロールの分析
サンプルの調製
混合物に添加したサーモン油のトコフェロール量を定量するために、２０μｌの油を直接ＨＰＬＣに注入した。各サンプルから、１０ｇを取り出し、２０ｍｌのエタノールと混合した。これをウルトラタラックス中１分間、ホモジナイズし、遠心分離した。上清をフィルタに通し、ロタベイパーで濃縮乾燥させた。その後、２ｍｌのエタノールを添加した。濃縮物をフィルタに通し、逆相カラム（ノバ−パック（Ｎｏｖａ−Ｐａｋ）Ｃ１８ ６０Ａ ４μｍ ３．９×１５０ｍｍ、ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ））を使用して分析用ＨＰＬＣに注入し、１ｍｌ／分の流速で展開させ、その後、９７％メタノールを含む１％酢酸（ｖ／ｖ）の混合物の均一法を２０分間実施した。ピークを、フォトダイオード検出器で検出し、言及した標準に対する保持時間およびそのスペクトルによりピークを識別し、ほとんどの化合物に対し、最大波長（２９５ｎｍ）で定量した。
【００７５】
検出した面積を定量するために、トコフェロール標準を用いて検量線を作成し、サンプルに対応するピークを定量した。
【００７６】
５．ローズマリー抽出物の抗酸化剤
抽出法：計１０ｇの各サンプルの重さを量り、２０ｍｌのアセトンをそれぞれに添加した。１分間ウルトラタラックス中でホモジナイズした後、２時間放置し、相分離を促進した。次に、３５００ｒ．ｐ．ｍで３０分間遠心分離した。上清を濾紙に通して濾過し、その後ロタベイパーで蒸発させた。
【００７７】
クロマトグラフィー法：長さ１５０ｍｍ、内径４．６ｍｍ、および粒子サイズ３．５μｍのノバパックＣ１８カラムを備えたＨＰＬＣシステムで分析を実施した。分離で使用した移動相は、溶媒Ａ（１％酢酸を含むアセトニトリル）とＢ（１％酢酸を含む水）の混合物で構成した。移動相の組成は、３０分グラジエントと共に変動し、５０％のＢ、５分間で開始し、１５分で３０％のＢ、３０分で０％のＢに到達した。流速は分離全体で、０．７ｍｌ／分で維持した。化合物は２００〜４５０ｎｍの範囲の波長のダイオードビーム検出器を用いて検出した。検出スリットは４ｎｍで確立し、サンプリング間隔は２００ｍｓとした。化合物の検出のために選択した波長は２３０ｎｍであった。装置には２０μｌ注入器を取り付けた。
【００７８】
６．カロテノイドプロファイル
微細藻類からのカロテノイド類の抽出：０．０５ｇ／ｍｌのスピルリナ（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ）およびデュナリエラ抽出物を、石油エーテル：アセトン（１：１）中で調製し、両方の藻類のカロテノイド濃度を比較した。ｔｅｒｃ−ブチルメチルエーテル中で０．０５ｇ／ｍｌ（サンプルに添加した１％に対応する）のデュナリエラ抽出物を調製し、カロテノイドの抽出において生成したカロテノイド類の損失を定量した。サンプルからの抽出は１度のみであるからである。第２の抽出を実施し、実験データを文献中のデータを用いて確認した。
【００７９】
サンプルからのカロテノイド類の抽出．計５ｇの各サンプルの重さを量り、家庭用フードプロセッサ中で、１分間粉砕し、５秒休止した。計５ｇの粉砕混合物を１０ｍｌのｔｅｒｃ−ブチルメチルエーテルと混合した。混合物をウルトラタラックス中で１分間ホモジナイズし、２相が分離するまで放置した（暗所で）。上清（２０μｌ）を直ちにＨＰＬＣシステムに注入し、分析した。
【００８０】
ＨＰＬＣ分析：サンプルおよび標準を、逆相カラム（ミクロソーブ（Ｍｉｃｒｏｓｏｒｂ）Ｃ１８、バリアン（Ｖａｒｉａｎ）の２５０×４．６ｍｍ）を用いてＨＰＬＣに注入し、１ｍｌ／分の流速で展開させ、グラジエントは５０％の混合物Ｂで開始し、１４分で１００％Ｂまで増加させ、５３分の展開終了時まで一定に維持した。使用した溶媒混合物は混合物Ａ：ジクロロメタン：メタノール：アセトニトリル：水（０：６０：５：３５）および混合物Ｂ：ジクロロメタン：メタノール：アセトニトリル：水（２５：２８：４２．５：４．５）に対応する。ピーク検出はフォトダイオード検出器を使用して実施し、言及した標準に対する保持時間およびスペクトルからピークを識別し、ほとんどの化合物に対し最大波長（４５０ｎｍ）で定量した。検出した面積を定量するために、ルテインを用いて検量線を作成し、サンプルのルテインピークを定量した。β−カロテンおよび９−シス−β−カロテンのピークを、それらのスペクトルが類似しているため、β−カロテン曲線から得られた直線を用いて定量した。
【００８１】
実施例１．フランクフルト型ソーセージ
調製
フランクフルト型ソーセージを製造するための標準肉エマルジョンを獲得した後、肉ペースト１ｋｇあたり、下記量の油状混合物成分を添加した：５０ｇの、脱臭し、１８％ＥＰＡおよび１２％ＤＨＡで強化したサーモン油と、１ｇの超臨界ローズマリー抽出物と、０．０５ｇのα−トコフェロールと、１０ｇのデュナリエラ・サリナ。
【００８２】
油状混合物を、ミキサ中の肉ペーストに添加し、油状混合物成分が均一に分布したエマルジョンを獲得した。その後、これをソーセージにし、７０℃で６０分間調理した。次に、ソーセージを真空パックし、５℃で９０日間冷蔵した。フライ加工を１８０℃で３分間実施した。
【００８３】
結果
下記表１．１は、処理作業後、異なる貯蔵時間で決定したソーセージに対する脂質プロファイルを示す。
【表１】
表１．１．から得られるデータより、まず第一に、５０ｇ／ｋｇの、EPAおよびDHAを強化したサーモン油を添加すると、ω−６／ω−３比が１７．９から２未満の値まで減少し、これが、製造、貯蔵および調理の全プロセスで維持されることが推測できる。さらに、脂質プロファイルもまた、安定なままである。
【００８４】
所期の目的を達成するには、処理および貯蔵中に油状混合物の抗酸化活性を維持することが不可欠である。さらに、ＰＵＦＡは酸化しやすいので、抗酸化活性は脂質プロファイルを安定に維持するのに寄与する。
【００８５】
表１．２．はソーセージに対する酸化指数データを示す。
【表２】
相当の量のＰＵＦＡを添加しても、酸化指数は全処理期間および貯蔵中、低いままであった。この結果は、提示した他のものと一致し、ＰＵＦＡの脂質プロファイル、およびこれにより、ω−３／ω−６比の維持、および油状混合物成分の抗酸化活性の維持が確認される。
【００８６】
表１．３はソーセージに対する抗酸化活性分析の結果を示す。
【表３】
油状混合物を添加すると、抗酸化活性が、処理前のソーセージで決定した値の３．４倍に増加する。この抗酸化活性は、処理および貯蔵期間中、わずかに減少するが、賞味期間中、油状混合物を有さない製品に対し得られた値の２．５倍未満には決して低下しない。
【００８７】
フライ処理後の抗酸化活性の上昇は、使用した油（バージンオリーブ油）の吸着効果によるものとすることができる。
【００８８】
表１．４．は、ソーセージ中のα−トコフェロール分析の結果を示す。処理および貯蔵の終わりに、ソーセージ中にα−トコフェロールフェロールが存在すると、油状混合物の高い抗酸化活性の別の指標となる。
【００８９】
実際、サーモン油＋α−トコフェロールのみをソーセージに添加した平行実験では、調理前に、α−トコフェロールは検出さえされなかった。この時点では、抗酸化活性は３２．９２％であり、言い換えれば、完全な油状混合物を添加した時に得られるものの半分より少なかった。これにより、α−トコフェロールと超臨界ローズマリー抽出物との間の相乗効果が証明される。
【表４】
【００９０】
超臨界ローズマリー抽出物の成分の存在は、プロセス中のソーセージの永続性の指標である。表１．５は、カルノシン酸、超臨界ローズマリー抽出物の最も活性で、最も不安定な抗酸化成分の分析結果を示す。
【表５】
【００９１】
ソーセージ中に存在するカルノシン酸の量は、プロセスが進むにつれ、かつ貯蔵中に減少することがわかったが、プロセスの終了時、調理後でさえも、この化合物がかなりの量存在することが証明された。
【００９２】
表１．６はソーセージ中のカロテノイドの分析結果を示す。これらの化合物は微細藻類デュナリエラ・サリナに由来する。
【表６】
【００９３】
いくらかの振幅が観察されることがあるが、カロテノイド類はプロセスを通して安定なままであることがわかった。最終工程中の増加は、微細藻類細胞の内部のこれらの化合物の放出によるものと考えられる。
【００９４】
結論
フランクフルトソーセージ中に油状混合物を混入させると、抗酸化活性、一定量の天然抗酸化剤および＞５のω−６／ω−３比が付与され、これらは製造プロセス、貯蔵および調理を通して安定なままである。
【００９５】
実施例２．加工イベリアチョリーゾ
調製
従来のイベリアチョリーゾの標準成分に、肉ペースト１ｋｇあたり、下記量の油状混合物成分を添加する：５０ｇの、脱臭し、１８％ＥＰＡおよび１２％ＤＨＡを補充したサーモン油と、１ｇの超臨界ローズマリー抽出物と、０．０５ｇのα−トコフェロールと、１０ｇのデュナリエラ・サリナ。
【００９６】
次に、混合物を、工業用ミキサ中、真空下で混合し、外皮中に導入し、最大５０日まで加工する。
【００９７】
結果
下記表２．１．は、処理作業後および異なる貯蔵時間で決定した加工チョリーゾの脂質プロファイルを示す。
【表７】
【００９８】
表２．１．のデータから、最初に、ＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油を５０ｇ／ｋｇ添加すると、ω−６／ω−３比は、１４．２から１に近い値まで減少し、これは、５０日の加工プロセスを含む全製造プロセス中、維持されることが推定できる。
【００９９】
抗酸化活性、α−トコフェロール、カルノシン酸、カロテノイド類および酸化指数の決定に関しては、結果はソーセージに対して提示したものと類似する。
【０１００】
結果
油状混合物を加工イベリアチョリーゾに混入させると、抗酸化活性、一定量の天然抗酸化剤および＞５のω−６／ω−３比が付与され、これらは５０日の加工時間を含む全プロセスを通して安定なままである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物とを含むことを特徴とする、強化食品の調製において使用される天然生物活性成分に基づく油状混合物。
【請求項２】
７０〜９９．９％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００１〜１％のα−トコフェロールと、０．１〜５％の超臨界ローズマリー抽出物と、を含むことを特徴とし、ここで、これらは、前記油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項１に記載の油状混合物。
【請求項３】
８０〜９７％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００１〜０．１％のα−トコフェロールと、１〜３％の超臨界ローズマリー抽出物と、を含むことを特徴とし、ここで、これらは、前記油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項２に記載の油状混合物。
【請求項４】
８２％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．０８％のα−トコフェロールと、１．６％の超臨界ローズマリー抽出物と、を含むことを特徴とし、ここで、これらは、前記油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項３に記載の油状混合物。
【請求項５】
微細藻類デュナリエラ・サリナもまた含むことを特徴する、請求項１から請求項４のいずれか１項に記載の油状混合物。
【請求項６】
０．１〜２０％、好ましくは３〜１８％、さらに好ましくは１６％の微細藻類デュナリエラ・サリナを含むことを特徴とし、ここで、これらは、油状油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項５に記載の油状混合物。
【請求項７】
ＥＰＡおよびＤＨＡで強化されたサーモン油と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物とを含む天然生物活性成分に基づく油状混合物で強化した食品。
【請求項８】
天然生物活性成分に基づく前記油状混合物はまた、微細藻類デュナリエラ・サリナも含むことを特徴とする、請求項７に記載の強化食品。
【請求項９】
０．１〜２０％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００００１〜１％のα−トコフェロールと、０．００１〜５％の超臨界ローズマリー抽出物と、必要に応じて、０．０１〜５％の微細藻類デュナリエラ・サリナと、を含むことを特徴とし、ここで、これらは、前記油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項７または請求項８に記載に強化食品。
【請求項１０】
１〜１０％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００１〜０．５％のα−トコフェロールと、０．０１〜３％の超臨界ローズマリー抽出物と、必要に応じて、０．１〜３％の微細藻類デュナリエラ・サリナと、を含むことを特徴とし、ここで、これらは、前記食品の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項９に記載の強化食品。
【請求項１１】
５％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００５％のα−トコフェロールと、０．１％の超臨界ローズマリー抽出物と、必要に応じて、１％の微細藻類デュナリエラ・サリナと、を含むことを特徴とし、ここで、これらは、前記食品の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項１０に記載の強化食品。
【請求項１２】
ω−６／ω−３ポリ不飽和脂肪酸の比率が５未満であるポリ不飽和脂肪酸含量を示すことを特徴とする、請求項７から請求項１１のいずれか１項に記載の食品。
【請求項１３】
肉製品であることを特徴とする、請求項１２に記載の強化食品。
【請求項１４】
前記肉製品は、フランクフルト型ソーセージ、加熱ハム、調理済み七面鳥胸肉、加工チョリーゾ、加工サルチチョン、加工豚ロイン、および塩漬けハムからなる群より選択される、請求項１３に記載の強化食品。
【請求項１５】
ａ）天然生物活性成分を混合することにより、これらの天然生物活性成分に基づく油状混合物を調製する工程と、
ｂ）工程ａ）で調製した前記油状混合物を強化すべき食品に組み入れる工程と、
を含むことを特徴とする、請求項７から請求項１４のいずれか１項に記載の強化食品を調製するための方法。
【請求項１６】
前記天然生物活性成分は、７０〜９９．９％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油、０．００１〜１％のα−トコフェロール、０．１〜５％の超臨界ローズマリー抽出物、必要に応じて、０．１〜２０％の微細藻類デュナリエラ・サリナの割合で組み合わせられることを特徴とし、ここで、これらは、前記油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記天然生物活性成分は、８０〜９７％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油、０．００１〜０．１％のα−トコフェロール、１〜３％の超臨界ローズマリー抽出物、必要に応じて、３〜１８％の微細藻類デュナリエラ・サリナの割合で組み合わせられることを特徴とし、ここで、これらは、前記油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記天然生物活性成分は、８２％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油、０．０８％のα−トコフェロール、１．６％の超臨界ローズマリー抽出物、必要に応じて、１６％の微細藻類デュナリエラ・サリナの割合で組み合わせられることを特徴とし、ここで、これらは、前記油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１】
ＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物とを含むことを特徴とする、強化食品の調製において使用される天然生物活性成分に基づく油状混合物。
【請求項２】
７０〜９９．９％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００１〜１％のα−トコフェロールと、０．１〜５％の超臨界ローズマリー抽出物と、を含むことを特徴とし、ここで、これらは、前記油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項１に記載の油状混合物。
【請求項３】
８０〜９７％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００１〜０．１％のα−トコフェロールと、１〜３％の超臨界ローズマリー抽出物と、を含むことを特徴とし、ここで、これらは、前記油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項２に記載の油状混合物。
【請求項４】
８２％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．０８％のα−トコフェロールと、１．６％の超臨界ローズマリー抽出物と、を含むことを特徴とし、ここで、これらは、前記油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項３に記載の油状混合物。
【請求項５】
微細藻類デュナリエラ・サリナもまた含むことを特徴する、請求項１から請求項４のいずれか１項に記載の油状混合物。
【請求項６】
０．１〜２０％、好ましくは３〜１８％、さらに好ましくは１６％の微細藻類デュナリエラ・サリナを含むことを特徴とし、ここで、これらは、油状油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項５に記載の油状混合物。
【請求項７】
ＥＰＡおよびＤＨＡで強化されたサーモン油と、α−トコフェロールと、超臨界ローズマリー抽出物とを含む天然生物活性成分に基づく油状混合物で強化した食品。
【請求項８】
天然生物活性成分に基づく前記油状混合物はまた、微細藻類デュナリエラ・サリナも含むことを特徴とする、請求項７に記載の強化食品。
【請求項９】
０．１〜２０％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００００１〜１％のα−トコフェロールと、０．００１〜５％の超臨界ローズマリー抽出物と、必要に応じて、０．０１〜５％の微細藻類デュナリエラ・サリナと、を含むことを特徴とし、ここで、これらは、前記油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項７または請求項８に記載に強化食品。
【請求項１０】
１〜１０％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００１〜０．５％のα−トコフェロールと、０．０１〜３％の超臨界ローズマリー抽出物と、必要に応じて、０．１〜３％の微細藻類デュナリエラ・サリナと、を含むことを特徴とし、ここで、これらは、前記食品の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項９に記載の強化食品。
【請求項１１】
５％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油と、０．００５％のα−トコフェロールと、０．１％の超臨界ローズマリー抽出物と、必要に応じて、１％の微細藻類デュナリエラ・サリナと、を含むことを特徴とし、ここで、これらは、前記食品の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項１０に記載の強化食品。
【請求項１２】
ω−６／ω−３ポリ不飽和脂肪酸の比率が５未満であるポリ不飽和脂肪酸含量を示すことを特徴とする、請求項７から請求項１１のいずれか１項に記載の食品。
【請求項１３】
肉製品であることを特徴とする、請求項１２に記載の強化食品。
【請求項１４】
前記肉製品は、フランクフルト型ソーセージ、加熱ハム、調理済み七面鳥胸肉、加工チョリーゾ、加工サルチチョン、加工豚ロイン、および塩漬けハムからなる群より選択される、請求項１３に記載の強化食品。
【請求項１５】
ａ）天然生物活性成分を混合することにより、これらの天然生物活性成分に基づく油状混合物を調製する工程と、
ｂ）工程ａ）で調製した前記油状混合物を強化すべき食品に組み入れる工程と、
を含むことを特徴とする、請求項７から請求項１４のいずれか１項に記載の強化食品を調製するための方法。
【請求項１６】
前記天然生物活性成分は、７０〜９９．９％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油、０．００１〜１％のα−トコフェロール、０．１〜５％の超臨界ローズマリー抽出物、必要に応じて、０．１〜２０％の微細藻類デュナリエラ・サリナの割合で組み合わせられることを特徴とし、ここで、これらは、前記油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記天然生物活性成分は、８０〜９７％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油、０．００１〜０．１％のα−トコフェロール、１〜３％の超臨界ローズマリー抽出物、必要に応じて、３〜１８％の微細藻類デュナリエラ・サリナの割合で組み合わせられることを特徴とし、ここで、これらは、前記油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記天然生物活性成分は、８２％の、１０〜４０％のＥＰＡおよびＤＨＡで強化したサーモン油、０．０８％のα−トコフェロール、１．６％の超臨界ローズマリー抽出物、必要に応じて、１６％の微細藻類デュナリエラ・サリナの割合で組み合わせられることを特徴とし、ここで、これらは、前記油状混合物の総重量に対する重量パーセントに対応する、請求項１７に記載の方法。
【公表番号】特表２００８−５２０２２１（Ｐ２００８−５２０２２１Ａ）
【公表日】平成２０年６月１９日（２００８．６．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５４２０１３（Ｐ２００７−５４２０１３）
【出願日】平成１７年１１月７日（２００５．１１．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＳ２００５／０００６００
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０５３９１７
【国際公開日】平成１８年５月２６日（２００６．５．２６）
【出願人】（５０７１５９５００）ウニベルシダッド アウトノマ デ マドリッド (1)
【出願人】（５０７１６０５７３）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年６月１９日（２００８．６．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１１月７日（２００５．１１．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＳ２００５／０００６００
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０５３９１７
【国際公開日】平成１８年５月２６日（２００６．５．２６）
【出願人】（５０７１５９５００）ウニベルシダッド アウトノマ デ マドリッド (1)
【出願人】（５０７１６０５７３）
【Ｆターム（参考）】
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