バシルス種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）菌株ＴＳ‐２３アルファ‐アミラーゼの変異体は、増加される熱安定性、カルシウム依存性の低減、増加される洗浄／クリーニング性能、及び焼成能力を含む改善される酵素性能を有する。これらの変異体を有する組成物はデンプン処理、デンプン液状化、発酵、デンプン糖化、洗浄、洗濯、繊維の湯通し、焼成、及びバイオフィルム除去の方法に有用である。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
親バシルス種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）ＴＳ‐２３アルファ‐アミラーゼの変異体であって、前記変異体が配列番号４に対して９０％の相同性を有し、前記変異体が、配列番号１に存在する下記ａ）ｂ）、又はｃ）の少なくとも二つを含み、及び任意に下記ｄ）からｋ）いずれかの一以上を含むことを特徴とする変異体。
ａ）Ｃ末端の欠失、
ｂ）Ｒ１８０及び／又はＳ１８１の欠失、
ｃ）Ｍ２０１Ｌ、
ｄ）Ｑ８７からＥ、Ｒへ、
ｅ）Ｎ２２５からＥ、Ｒへ、
ｆ）Ｎ２７２からＥ又はＲへ、
ｇ）Ｎ２８２からＥ又はＲへ、
ｈ）Ｔ１８２の欠失、
ｉ）Ｇ１８３の欠失、
ｊ）Ｑ９８Ｒ，Ｍ２０１Ｌ，Ｓ２４３Ｑ、Ｒ３０９Ａ、Ｑ３２０Ｒ、Ｑ３５９Ｅ、及びＫ４４４Ｅ、又は
ｋ）Ｓ２４３Ｑ、Ａ、Ｅ、Ｄ
【請求項２】
変異体が、配列番号４に対して少なくとも約９０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し、配列番号４の１８０‐１８１位にてΔＲＳ欠失及び配列番号４のＭ２０１Ｌ、及び少なくとも次のひとつ、即ち
ａ）Ｑ８７からＥ、Ｒへ、
ｂ）Ｎ２２５からＥ、Ｒへ、
ｃ）Ｎ２７２からＥ又はＲへ、
ｄ）Ｎ２８２からＥ又はＲへ、
ｅ）Ｔ１８２の欠失、
ｆ）Ｇ１８３の欠失、
ｇ）Ｑ９８Ｒ，Ｍ２０１Ｌ，Ｓ２４３Ｑ、Ｒ３０９Ａ、Ｑ３２０Ｒ、Ｑ３５９Ｅ、及びＫ４４４Ｅ、又は
ｈ）Ｓ２４３Ｑ、Ａ、Ｅ、Ｄ
を含むことを特徴とする、請求項１に記載の変異体。
【請求項３】
前記変異体が配列番号４に対して少なくとも約９５％の配列相同性を有することを特徴とする、請求項１に記載の変異体。
【請求項４】
前記変異体が配列番号４に対して少なくとも約９８％の配列相同性を有することを特徴とする、請求項３に記載の変異体。
【請求項５】
前記変異体が次の特徴、即ち
ａ）酵素活性についてカルシウムイオンの必要性が６０ｐｐｍ未満であり、
ｂ）親バシルス種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）ＴＳ‐２３アルファ‐アミラーゼに比較して改善される酸化安定性があり、及び／又は
ｃ）親バシルス種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）ＴＳ‐２３アルファ‐アミラーゼに比較して改善される熱安定性があるという
特徴を有する、請求項１に記載の変異体。
【請求項６】
前記Ｃ末端の欠失が１アミノ酸から１００アミノ酸であることを特徴とする、請求項１に記載の変異体。
【請求項７】
親バシルス種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）ＴＳ‐２３アルファ‐アミラーゼの変異体をコードする単離される核酸であって、前記変異体が少なくとも下記ａ）ｂ）、又はｃ）を含み及び任意に下記ｄ）からｋ）いずれかの一以上を含み、ａ）からｋ）は
ａ）Ｃ末端の欠失、
ｂ）Ｒ１８０及び／又はＳ１８１の欠失、
ｃ）Ｍ２０１Ｌ、
ｄ）Ｑ８７からＥ、Ｒへ、
ｅ）Ｎ２２５からＥ、Ｒへ、
ｆ）Ｎ２７２からＥ又はＲへ、
ｇ）Ｎ２８２からＥ又はＲへ、
ｈ）Ｔ１８２の欠失、
ｉ）Ｇ１８３の欠失、
ｊ）Ｑ９８Ｒ，Ｍ２０１Ｌ，Ｓ２４３Ｑ、Ｒ３０９Ａ、Ｑ３２０Ｒ、Ｑ３５９Ｅ、及びＫ４４４Ｅ、
ｋ）Ｓ２４３Ｑ、Ａ、Ｅ、Ｄ
であり、配列番号１に相当し、配列番号１に対して少なくとも約９０％配列相同性を有し、前記変異体がアルファ‐アミラーゼ活性を有することを特徴とする核酸。
【請求項８】
請求項１から６のいずれかの請求項に記載の変異体をコードする核酸配列を含むことを特徴とする単離される核酸。
【請求項９】
前記核酸が前記変異体をコードする核酸配列からなることを特徴とする、請求項８に記載の単離される核酸。
【請求項１０】
請求項７又は８のいずれかの請求項に記載の核酸を含むことを特徴とするベクター。
【請求項１１】
請求項７又は８のいずれかの請求項に記載の核酸を含むことを特徴とする単離される宿主細胞。
【請求項１２】
単離される宿主細胞が請求項１１に記載のベクターを含み、前記宿主細胞が原核細胞又は真核細胞であることを特徴とする宿主細胞。
【請求項１３】
前記単離される宿主細胞が細菌類又は菌類であることを特徴とする、請求項１２に記載の単離される宿主細胞。
【請求項１４】
前記細菌類がバシルス ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バシルス リチェニフォルミス（Ｂ． ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バシルス レンツス（Ｂ． ｌｅｎｔｕｓ）、 バシルス ブレビス（Ｂ． ｂｒｅｖｉｓ）、バシルス ステアロテルモフィルス（Ｂ． ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、バシルス アルカロフィリス（Ｂ． ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、バシルス アミロリケファシエンス（Ｂ． ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バシルス コアグランス（Ｂ． ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バシルス シルクランス（Ｂ． ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バシルス ランツス（Ｂ． ｌａｕｔｕｓ）、 バシルス ツリンギエンシス（Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ストレプトミセス リビダンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｉｖｉｄａｎｓ）及びストレプトミセス ムリナス（Ｓ． ｍｕｒｉｎｕｓ）からなる群から選択されるグラム陽性菌又はグラム陰性菌であり、前記グラム陰性菌は大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）及びシュードモナス種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）であることを特徴とする、請求項１３に記載の単離される宿主細胞。
【請求項１５】
請求項１から６のいずれかの請求項に記載の変異体を含むことを特徴とする洗剤添加剤。
【請求項１６】
さらに、セルラーゼ、プロテアーゼ、アミノペプチダーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、カルボキシペプチダーゼ、カタラーゼ、キチナーゼ、クチナーゼ、シクロデキストリン グルカノトランスフェラーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エステラーゼ、アルファ‐ガラクトシダーゼ、ベータ‐ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、アルファ‐グルコシダーゼ、ベータ‐グルコシダーゼ、ハロペルオキシダーゼ、インベルターゼ、ラッカーゼ、リパーゼ、マンノシダーゼ、オキシダーゼ、ペクチン分解酵素、ペプチドグルタミナーゼ、ペルオキシダーゼ、フィターゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、デンプン分解酵素、リボヌクレアーゼ、トランスグルタミナーゼ、キシラナーゼ、プルラナーゼ、イソアミラーゼ、カラギナーゼ、又はそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される酵素の一以上含むことを特徴とする請求項１５に記載の洗剤添加剤。
【請求項１７】
非粉塵化（ｄｕｓｔｉｎｇ）粒状、マイクロ粒状、被安定化液、又は被保護酵素の形態である請求項１６記載の洗剤添加剤。
【請求項１８】
請求項１６に記載の洗剤添加剤を含むことを特徴とする洗剤組成物。
【請求項１９】
界面活性剤及び請求項４から１０のいずれかの請求項に記載の変異体を含むことを特徴とする洗剤組成物。
【請求項２０】
前記洗剤組成物が洗濯洗剤又は食器洗剤であることを特徴とする、請求項１９に記載の洗剤組成物。
【請求項２１】
さらに、セルラーゼ、プロテアーゼ、アミノペプチダーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、カルボキシペプチダーゼ、カタラーゼ、キチナーゼ、クチナーゼ、シクロデキストリン グルカノトランスフェラーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エステラーゼ、アルファ‐ガラクトシダーゼ、ベータ‐ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、アルファ‐グルコシダーゼ、ベータ‐グルコシダーゼ、ハロペルオキシダーゼ、インベルターゼ、ラッカーゼ、リパーゼ、マンノシダーゼ、オキシダーゼ、ペクチン分解酵素、ペプチドグルタミナーゼ、ペルオキシダーゼ、フィターゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、デンプン分解酵素、リボヌクレアーゼ、トランスグルタミナーゼ、キシラナーゼ、プルラナーゼ、イソアミラーゼ、カラギナーゼ、又はそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される酵素の一以上を含むことを特徴とする請求項２０に記載の洗剤組成物。
【請求項２２】
洗濯洗剤組成物が、請求項２１に記載の洗濯添加剤を含むことを特徴とし、さらに界面活性剤、洗剤ビルダー、錯化剤、ポリマー、漂白システム、安定剤、泡増進剤、石鹸泡抑制剤、抗腐食剤、泥懸濁剤、抗泥再堆積剤、染料、抗菌剤、ハイドロトープ、蛍光増白剤、繊維コンディショナー、及び香料の一以上を含むことを特徴とする洗濯洗剤組成物。
【請求項２３】
バイオフィルム加水分解組成物が溶液又はゲル中に請求項１から６いずれかの請求項に記載の変異体を含むことを特徴とし、さらに任意にセルラーゼ、ヘミセルラーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、プロテアーゼ、ペクチナーゼ、抗菌剤、又はそれらの任意の組み合わせを含むことを特徴とするバイオフィルム加水分解組成物。
【請求項２４】
バイオフィルムを処理するために十分な時間請求項２４に記載の組成物を投与することを含むことを特徴とするバイオフィルムを加水分解する方法。
【請求項２５】
溶液又はゲル中に請求項１から６のいずれかの請求項に記載の変異体を含むことを特徴とする焼成組成物。
【請求項２６】
請求項２６に記載の焼成組成物を投与することを含むことを特徴とする焼成方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【公表番号】特表２０１１−５１７５４９（Ｐ２０１１−５１７５４９Ａ）
【公表日】平成２３年６月１６日（２０１１．６．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５３３０８０（Ｐ２０１０−５３３０８０）
【出願日】平成２０年１１月３日（２００８．１１．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０１２４１２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０６１３８０
【国際公開日】平成２１年５月１４日（２００９．５．１４）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ウィンドウズ
【出願人】（５０９２４０４７９）ダニスコ・ユーエス・インク (81)
【Ｆターム（参考）】