植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの抽出物を含む、特に抗老化活性を有する化粧料組成物
本発明は、化粧料組成物に関する。前記組成物は、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物を活性成分として、場合により化粧料として許容可能な担体中に含むことを特徴とする。前記化粧料組成物は、良好な抗老化活性を示す。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物を活性成分として含むことを特徴とする、特に抗老化活性を有する化粧料組成物に本質的に関する。
【０００２】
本発明は、特に抗老化活性を有する化粧料組成物を特に製造するための、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物の化粧料剤としての使用にも関する。
【０００３】
以下の説明及び特許請求の範囲では、簡潔さのために用語「ロンゴザ（Ｌｏｎｇｏｚａ）」を使用するのが好ましいであろうが、この用語は、当然、差異を示唆することなく植物のアフラモムムアングスチホリウムも意味する。
【０００４】
［従来技術］
Ｒｅｖｕｅ ｆｒａｎｃａｉｓｅ ｄｅｓ Ｃｏｒｐｓ Ｇｒａｓ ［Ｆｒｅｎｃｈ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｆａｔｔｙ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ］、Ｎｏ．１ ｏｆ Ｊａｎｕａｒｙ １９８３、ｐａｇｅｓ ２１ ｔｏ ２５に所載のＥ．Ｍ．Ｇａｙｄｏｕらによる論文では、植物のアフラモムムアングスチホリウムを含めたマダガスカルのいくつかの植物（Ｔａｂｌｅ １、ｃｏｎｔｉｎｕａｔｉｏｎ ２、ｐａｇｅ ２４参照）からの種子から抽出した油の脂肪酸組成物に関する研究について記載している。この組成物は、無極性溶媒、特にヘキサンを使用したこの植物の種子の抽出物である（ｐａｇｅ ２４、「Ｐａｒｔｉｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｅ」［Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｓｅｃｔｉｏｎ］、１ｓｔ ｐａｒａｇｒａｐｈ参照）。
【０００５】
［発明の目的］
本発明の目的は、良好な抗老化活性、若しくは以前から知られている抗老化用化粧料剤と比較して改善された抗老化活性を有し、及び／又は化粧料用の、特に皮膚への局所塗布に関して非常に良好な適合性を有し、及び／又は副作用及び刺激作用がないか若しくは実質的にない化粧料剤としての新規の活性成分を見出す解決策の提供からなる技術的課題を解決することである。
【０００６】
本発明の目的は、広範に入手可能であるか又は容易に栽培可能な天然資源から得られる活性成分を用いて、上述の技術的課題を解決することである。
【０００７】
本発明の目的は、工業規模で、特に化粧料規模で使用するのに十分な量の調製を可能にする活性成分を得る方法を提供することによって上述の技術的課題を解決することでもある。
【０００８】
［発明の概要］
本発明は、工業規模で、特に化粧料規模で使用し得る、簡単で、比較的安価な方法で、上述の技術的課題に対する解決策を提供する。
【０００９】
第１の態様によれば、本発明は、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物を活性成分として、化粧料として許容可能な賦形剤中に含むことを特徴とする化粧料組成物を提供する。
【００１０】
第２の態様によれば、本発明は、化粧料組成物を製造するために、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物を化粧料剤として使用することにも関する。
【００１１】
本発明の有利な実施形態によれば、ロンゴザの抽出物は、抗老化活性を有する化粧料剤として使用される。
【００１２】
本発明の有利な変形形態及び実施によれば、植物のロンゴザの種子の抽出物は、抗しわ活性用に使用され、特にしわの出現を減らすか、なくすか、又は遅らせるために、即ち、特に、真皮表皮接合部（ｄｅｒｍａｌ−ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｊｕｎｃｔｉｏｎ）つまりＤＥＪ部に存在するコラーゲン、特にＶＩＩ型コラーゲンの合成を刺激する作用による、並びに／又はオキシタラン線維及び／若しくはエラウニン線維での作用による、皮膚の構造を保つか又は再生する作用のために使用される。したがって、本発明は、抗しわ効果、即ち、皮膚の弾性及び／又は引締まりの保護、修復又は再生からなる効果を有することを可能にする。本発明は、化学線の作用による、特に紫外線による老化に対して皮膚を保護することも可能にする。
【００１３】
本発明に関しては、許容可能な化粧料用溶媒、特にアルコール溶媒又は水性アルコール溶媒を用いて調製した、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物が、有利に使用されよう。
【００１４】
本発明の具体的な実施形態によれば、植物の種子の抽出物は、粉砕した種子をアルコール溶媒又は水性アルコール溶媒で抽出するステップからなる少なくとも１つのステップを含む抽出方法によって得られる。
【００１５】
この粉砕は、微粉が得られるまで行うことが好ましい。この粉末の粒は、約０．０１〜１ｍｍの直径を有することが有利である。
【００１６】
本発明による方法の有利な実施形態によれば、１〜４個の炭素原子を含有する一価アルコール又はポリオールであるアルコール溶媒又は水性アルコール溶媒が使用される。このアルコールは、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、エチレングリコール、プロピレングリコール及びブチレングリコール、好ましくはエタノールから選択されることが有利である。この抽出プロセスは、大気圧か、又はより高圧下であっても沸点が約１２０℃を超えないような圧力で、周囲温度か、又は最大で溶媒の沸点までの範囲に及び得る温度で行うことができる。アルコールと水との相対容量比は、３０／７０〜１００／０の範囲内で選択されることが好ましい。
【００１７】
連続するいくつかの抽出ステップは、抽出するべき材料が検討中の溶媒によって完全に枯渇するまで行うことができる。
【００１８】
抽出時間は、抽出する材料が結果として完全に枯渇するように、検討中の溶媒、温度、場合により使用圧力に従って変わる。実際には、この時間は、有益な工業的利用のために、半時間未満に制限されよう。この時間は、一般的に３０分程度であろう。
【００１９】
この抽出法の実施の具体的変法によれば、無極性有機溶媒、例えばヘキサン又はｎ−ヘプタンを使用する抽出ステップからなる少なくとも１つのステップでの脂質の除去により、得られたアルコール又は水性アルコール抽出物を脱脂されることによって、脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物を得ることが有利である。
【００２０】
この抽出法の具体的な実施形態によれば、脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物は、それ自体で、本発明による活性成分又は活性薬剤を構成し得る。
【００２１】
本発明による抽出法の実施の別の具体的な変法によれば、脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物を炭などの適切な脱色剤上での濾過による脱色ステップ、次いで炭を除去した後、最初の抽出ステップに使用した溶液と同じでも異なっていてもよいアルコール又は水性アルコール溶媒の溶液で洗浄するステップからなるステップに供することができる。
【００２２】
別の具体的な変法によれば、上述の活性成分の別の形態を得るために、抽出溶媒を実質的に完全に蒸発させて、上述の活性成分としてそのまま使用し得るか、又は化粧料として許容可能な溶媒、特にアルコール若しくは水性アルコール混合液の中に再度溶解し得る乾燥抽出物を得ることができる。
【００２３】
本発明の別の有利な変法によれば、抽出ステップに使用するアルコールはエタノールである。
【００２４】
本発明に関しては、得られる抽出物は、化粧料剤として使用しやすく、それが水相中に組み込まれるためであろうが、脂相中に組み込まれるためであろうかに関係なく、化粧料組成物の調製すべき他の成分と混合しやすい。
【００２５】
第３の態様によれば、本発明は、上記で定義した植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物の、化粧料として有効な量を、美容ケアの必要がある個人の皮膚に局所塗布することを含むことを特徴とする美容ケア方法にも関する。
【００２６】
本発明の有利な実施形態によれば、この美容ケア方法は、特に、化学線、とりわけ紫外線の作用から生じる老化作用を抑制する目的で、抗老化ケアの必要がある皮膚の領域に、上述の植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物を塗布するために使用される。
【００２７】
より具体的には、この抗老化活性は、特に、しわの出現を減らすか、なくすか、又は遅らせるための抗しわ活性に定められる。
【００２８】
本発明は、特に、真皮表皮接合部つまりＤＥＪ部に存在するコラーゲン、特にＶＩＩ型コラーゲンの合成を刺激する作用並びに／又はオキシタラン線維及び／若しくはエラウニン線維での修復作用による皮膚の構造を保つか又は再生する作用、即ち皮膚の弾性並びに／又は引締まりの保護、修復又は再生からなる効果も有する。
【００２９】
本発明の態様のいずれか１つに関しては、前記抽出物は、組成物の全重量に対して０．００１重量％〜５重量％、好ましくは０．０１重量％〜１重量％の、乾燥抽出物ベースで表される濃度で存在する。
【００３０】
当業者であれば、本発明の他の目的、特性及び利点は、添付図を参照して示される以下の説明から明白であろう。
【００３１】
以下の実施例では、特に示されない限り、すべての比率（％）は重量によって示され、温度は、室温、即ち２５℃であるか又は摂氏温度で示され、圧力は大気圧である。
【００３２】
実施例１
本発明による、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の、脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物の調製の実施例
フランスのＳＯＴＲＡＭＥＸ社から入手できる様々な市販バッチから植物のロンゴザの種子１００ｋｇを使用して以下の抽出手順を行う。
【００３３】
ａ）まず、市販の乾燥種子を、例えば０．０１ｍｍ〜１ｍｍの平均粒径が得られるまで粉砕する。
【００３４】
ｂ）次いで、粉砕した種子の３連続の抽出ステップを、各回、水性アルコール混合液（例えば体積比７０／３０のエタノール／水混合液）５００リットル（Ｌ）を使用して行うが、例えば５０℃に少し加熱し、約３０分間攪拌するのが有利である。好ましいアルコールは、その周知の生体適合性のため、エタノールである。この抽出ステップが、純アルコールを使用してまったく容易に行い得ることは明らかに理解される。
【００３５】
洗浄処置である抽出ケークの濾過を各抽出ステップ後に行う。この濾過は、例えば、０．７０μｍの孔径を有するフィルターを通して行い、洗浄ステップを、体積／体積が７０／３０の水性アルコール混合液３０Ｌを使用して行う。
【００３６】
ｃ）次いで、濾過された全容量が約１５００Ｌに達するまで、各濾液を混合し、得られた溶液は不透明である。
【００３７】
ｄ）次いで、脂質の除去からなるステップ、即ち脱脂ステップを、無極性有機溶媒、例えばｎ−ヘプタンを使用する液／液抽出ステップ階によって有利に行う。
【００３８】
３つの抽出ステップを、各回、約５００Ｌのｎ−ヘプタンを使用し、激しく攪拌して行うことが有利である。
【００３９】
水性アルコール相からヘプタン相が分離されるように、沈殿による分離を実施し、このヘプタン相を廃棄する。
【００４０】
こうして得られた脱脂水性アルコール相は、実質的に透明であり、約１５００Ｌの容量を有する。
【００４１】
本発明の現在の好ましい実施形態によれば、以下の実施例に示されるように、この脱脂水性アルコール相は、それ自体で、化粧料組成物を製造するための化粧料剤又は活性成分として使用できる、本発明によるロンゴザ又はアフラモムムアングスチホリウムの種子の抽出物（抽出物１ｄ）を構成する。この水性アルコール溶液は、０．４７重量％の乾燥抽出物を含有する。
【００４２】
使用する抽出溶媒の量及び水性アルコール混合液中のアルコールの比率などの抽出ステップのパラメータを改変することによって、様々な含量、例えばより高い含量、特に約１重量％の乾燥抽出物を得ることができ、乾燥抽出物の重量濃度は、一定の限界まで変化し得ることが理解される。
【００４３】
ｅ）実施の変法によれば、例えば、水性アルコール相を、最大温度５０℃まで、場合により減圧下で加熱することによる蒸留ステップによって、ｎ−ヘプタンなどの使用される微量の無極性有機溶媒を除去するステップからなるステップを行うことができる。
【００４４】
ｆ）次いで、無極性有機溶媒をもはや含んでいない脱脂アルコール又は水性アルコール溶液の希釈は、アルコール又は水性アルコール溶媒の溶液を添加することによって、１５００Ｌの容量が再度得られるまで行うことができる。
【００４５】
ｇ）また、脱脂溶液の脱色ステップは、当業者に周知であるように、周囲温度で１時間、攪拌しながら炭で処理することによって行うことができる。
【００４６】
次いで、０．４５μｍの孔径を有するフィルターにより炭の濾過し、次いでアルコール又は水性アルコール溶液を３Ｌ使用して、濾過された炭を洗浄できる。
【００４７】
この脱脂及び脱色されたアルコール又は水性アルコール溶液は、透明であり、約１５００Ｌの容量を有する。
【００４８】
ｈ）次いで、前記溶液の濃縮ステップは、特に、最大５０℃の適温まで、場合により減圧下で加熱することにより、アルコールを蒸発させて本質的に水性の相を得ることによって主に行うことができる。この本質的に水性の溶液は、そのままでも、この溶液による活性成分として使用できる。
【００４９】
ｉ）さらなる別の実施の変法によれば、本質的に水性の前記溶液の凍結乾燥は、そのままでも本発明による活性成分として使用し得る乾燥抽出物が得られるように行うことができる。
【００５０】
ｊ）本発明に従ってこの乾燥抽出物を化粧料組成物中に組み込むために、前記組成物の製造時に、化粧料として許容可能な溶媒中で、特に、水、アルコール若しくは１，３−ブチレングリコール中か又はこれらの溶媒の混合液中で、その用時調製溶液を調製することもできる。したがって、この実施形態によれば、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの乾燥抽出物の溶液を所望の濃度で調製することが可能である。
【００５１】
ｋ）最後に、所望の化粧料組成物を製造するための、上記抽出物の様々な溶液の使用を待つ間、これらの溶液を詰めるステップからなるプロセスを行うことができる。これに関しては、適切な容量の瓶の中に詰める前に、予め、０．２２μｍの孔径を有するフィルターを通しての滅菌濾過を実施し、次いで、冷蔵室中に例えば４℃で保管することが好ましい。
【００５２】
本発明による実施例２
活着条件下で維持され、紫外線を用いて人為的に老化させたヒトの皮膚の実験モデルに関する、ロンゴザ（アフラモムムアングスチホリウム）の抽出物の抗老化活性の決定
本発明によるロンゴザの抽出物の抗老化活性を決定するために、活着条件下で維持し、紫外線（「ＵＶ」）を用いて人為的に老化させた皮膚の実験モデルを使用することによって、抗老化効果を評価した。
【００５３】
この試験は、ＶＩＩ型コラーゲンの免疫組織化学的評価による真皮表皮接合部の質の再生の分析と、オキシタラン−エラウニン網目構造を研究することによる真皮表層の弾性線維の質の再生の分析と、画像分析での形態計測定量化による真皮中層／深層の弾性線維の質の再生の分析とによって評価した。
【００５４】
この試験を行うために、８人の異なるドナーを使用して、形成手術後に女性から皮膚の断片を取った。これらの断片を、それ自体、培養ウェル上の懸濁液中に入ったインサートの中に入れた。
【００５５】
ゲンタマイシン抗生物質、ウシ下垂体抽出物、ウシ胎児血清及びヒドロコルチゾンを補充した、当業者に周知のＭＥＭ培地を、該ウェルの底に添加する。この培地は、該ウェルの底からの拡散によって、１２μｍ厚の多孔質膜を通り抜ける。この培地を、３日毎に除去した。
【００５６】
実験的に老化させたモデルは、それぞれ、１日後（「Ｄ１」）及び３日目（「Ｄ３」）での、ＵＶＡ要素（８Ｊ／ｃｍ２）及びＵＶＢ要素（２Ｊ／ｃｍ２）を含む２つの紫外線照射を実施することにより、老化中に観察される変化と同じ皮膚の変化を生じさせることによって実現する。
【００５７】
上記実施例１のステップｄ）の終了時に得られる、ロンゴザの抽出物（抽出物１ｄ）の溶液の、培地中の５％溶液を調製する。１日目（「Ｄ０」）から１０日目（「Ｄ１０」）まで、この５％溶液を、週に３回、皮膚断片の表面に塗布する。
【００５８】
したがって、この実験に関しては、
ａ）活着条件下に単に置いた対照皮膚と、
ｂ）活着条件下に維持し、ＵＶＡ及びＵＶＢ照射により実験的に老化させた皮膚（参照の対照皮膚）と、
ｃ）上記に示すようにロンゴザの抽出物を塗布して、活着条件下に維持し、紫外線Ａ／Ｂ照射により人為的に老化させた皮膚と
の比較を行う。
【００５９】
いくつかの皮膚培養を、ＶＩ型コラーゲンの免疫組織化学的分析のために４日目（「Ｄ４」）に中止し、その他を、弾性線維の形態計測分析のために１０日目（「Ｄ１０」）に中止する。
【００６０】
得られた結果は、以下の通りである。
１）弾性線維の組織学的定量化
弾性線維は、（＋）カテキン染色によって可視化し、カメラプロダクションから提供されたソフトウェアをそのコンピュータに備えたコンピュータ支援Ｌｅｉｔｚ ＸＣ−７５ＣＥカメラにより得られるコンピュータ処理画像分析によって形態計測的に定量化する。
【００６１】
真皮表層のオキシタラン線維及びエラウニン線維の平均長（μｍ）を評価し、これらの平均表面積（μｍ２）も評価する。
【００６２】
本発明者らにより得られた結果の状況から、使用した皮膚老化モデルでは、オキシタラン線維の平均長（４２．７μｍ）並びに真皮のオキシタラン線維及びエラウニン線維の平均表面積（２３３９μｍ２）の、対照皮膚（長さ６４μｍ及び表面積２８０８．９μｍ２）と比較した統計的に有意な減少を、偏差ｐ＜０．０５の統計的に有意な値で実証することができた。
【００６３】
この結果は、添付書類に添付した図１で報告し、Ｌｅｉｔｚ ＸＣ−７５ＣＥカメラを備えたＬｅｉｔｚ電子顕微鏡で撮った写真は、図２Ａ（対照皮膚）、２Ｂ（皮膚＋ＵＶ）及び２Ｃ（皮膚＋ＵＶ＋ロンゴザ）と題する。
【００６４】
本発明による、実施例１で得られた脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物形態のロンゴザの抽出物では、オキシタラン線維及びエラウニン線維による修復効果が有意であることが認められよう。
【００６５】
具体的には、本発明によるロンゴザの抽出物で治療した皮膚のオキシタラン線維の平均長は、７５μｍ（ｐ＜０．０５）である。エラウニン線維の平均長は、その長さが２００μｍまで減少する実験的に老化させた皮膚と比較して、２６７．４μｍまで増加する。同様に、エラウニン線維の平均表面積は、偏差ｐ＜０．０５で３３９７．２μｍ２まで有意に増加する。
【００６６】
したがって、真皮中層及び真皮深層の老熟した弾性線維に関する修復効果も、それ自体、対照＋紫外線と比較して有意である（真皮中層については＋７．７％、及び真皮深層については＋８．４％）。
【００６７】
これらのすべての結果は、添付書類に付けた図１から見て明らかである。
【００６８】
２）ＶＩＩ型コラーゲンの免疫組織化学的分析
上記に示すように、形成手術後に女性から採取して冷凍した皮膚の断片を使用して、免疫組織検査によって、基底膜レベルに位置するＶＩＩ型コラーゲンを検出できる。
【００６９】
この免疫検出は、Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＵＳＡから入手でき、ＤＡＢ（ジアミノベンジジン）などの可視化剤で可視化される、ＡＢＣペルオキシダーゼと称する市販のキットを使用する３層間接酵素抗体法によって行う。
【００７０】
この評価は、標識の強度及びその形状、即ち真皮表皮接合部での多かれ少なかれ有意な伸びを特定する、０〜３の範囲の半定量的評点によって行う。
【００７１】
皮膚を紫外線老化させた上述の実験モデルは、真皮表皮接合（ＤＥＪ）部でＶＩＩ型コラーゲンを変質させることができた。
【００７２】
実際には、１．６７の評点は、対照皮膚の場合の２．４に比して得られた。
【００７３】
この差は、偏差ｐ＜０．０５で統計的有意性がある。
【００７４】
本発明によるロンゴザの抽出物を使用する場合、ＶＩＩ型コラーゲンに関する有意な修復効果は、上述の条件下で紫外線を使用して実験的に老化させた皮膚と比較して、偏差ｐ＜０．０５で認められる。
【００７５】
ＶＩＩ型コラーゲンのこの免疫組織化学的評価の得られた結果を、添付書類中に添付した図３に報告する。
【００７６】
さらに、図３Ａは、電子顕微鏡下で撮った対照皮膚の断面の写真を示し、図３Ｂは、紫外線照射により人為的に老化させた皮膚についての同様の写真を示し、図３Ｃは、紫外線照射により人為的に老化させ、本発明によるロンゴザの抽出物で治療した皮膚についての同条件下で撮った写真を示す。
【００７７】
ＵＶの存在下では、ＶＩＩ型コラーゲンの標識強度の低下が、ＤＥＪ部で認められる。
【００７８】
他方では、上記に示されるように、本発明によるロンゴザの抽出物で皮膚を治療する場合では、ＵＶなしの対照皮膚の標識強度と同様の標識強度が認められるため、本発明によるロンゴザの抽出物により示される保護の有効性が示される。
【００７９】
上記の結論としては、活着条件下で維持されるヒトの皮膚に関し、使用した実験的老化モデル効果によって、真皮表層のオキシタラン線維及びエラウニン線維と、真皮中層／深層の弾性網目構造と、真皮表皮接合部中のＶＩＩ型コラーゲンとに対する、本発明によるロンゴザの抽出物の有意な修復効果を実証することができた。
【００８０】
したがって、本発明は、コラーゲン又はエラスチンなどの構造タンパク質の保護、さらに真皮表皮接合の強化も目的として、局所使用向けの化粧料組成物を調製するための化粧料剤として使用できる。
【００８１】
化粧料組成物の配合の様々な例は、例示として以下に示されるものであり、したがって、本発明の範囲を限定できない。
【００８２】
本説明のすべての実施例では、特に示されない限り、すべての比率（％）は、重量によって示される。
【００８３】
本発明による実施例３
顔の引締めを改善するためのゲル化粧料
− 実施例１のｄ）で得られたロンゴザの脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物
２％
− グリコール ３％
− 市販のＡＭＰＳポリマー（商標Ｓｅｐｉｇｅｌ３０５（登録商標）） ３％
− 水素化ひまし油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＣＯ−６０（登録商標）） ２％
− ポリエチレングリコール １．５％
− 防腐剤 ０．５％
− 濃縮香料 ０．３％
− ＵＶ遮蔽剤（ベンゾフェノン−４） １％
− 水、１００％までの適量
【００８４】
このゲルは、顔面皮膚の引締めの改善を得るために、顔に、特にしわを含む領域に１日１回数週間塗布することができ、したがって、この治療の終了時には、皮膚に対する明らかな若返り効果及びのこれらのしわの減少又は消失の明らかな効果による柔軟性の再生が認められる。
【００８５】
本発明による実施例４
エマルジョン形態の抗しわ用デイクリーム
− 実施例１のｄ）で得られたロンゴザの脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物
２％
− ステアレス−２１（Ｂｒｉｊ７２１） ２．５％
− グリセリルステアレート（Ｔｅｇｒｉｎ） １．１％
− ステアリルアルコール ５％
− グリセロールトリカプレート／カプリレート １２．５％
− ブチレングリコール ３％
− グリセロール ２％
− 防腐剤 ０．５％
− 濃縮香料 ０．５％
− ＵＶ遮蔽剤（オクチルメトキシシンナメート） ７．５％
− 水、１００％までの適量
【００８６】
本発明による実施例５
抗しわ用トニックローション
− 実施例１のｄ）で得られたロンゴザの脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物
２％
− ブチレングリコール ３％
− ＥＤＴＡ ０．１％
− 可溶化剤 １％
− 濃縮香料 ０．３％
− エタノール ５％
− ＵＶ遮蔽剤（ベンゾフェノン−４） ０．１３％
− 水、１００％までの適量
【００８７】
本発明による実施例６
対紫外線保護向け顔面メイクアップ用パウダー
− 実施例１のｄ）で得られたロンゴザの脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物
０．２５％
− タルク １７％
− マイカ ２０％
− 絹雲母 ２０％
− 顔料 ８％
− 有機粉末（ナイロン） ２０％
− シリカ ８．７５％
− シリコーン油又は鉱油 ３％
− ＵＶ遮蔽剤（オクチルメトキシシンナメート） ３％
【００８８】
本発明による実施例７
抗しわ処置用ファンデーション
− 実施例１のｄ）で得られたロンゴザの脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物
２％
− ポリグリセリル−４イソステアレート及びセチルジメチコンコポリオール及びヘキシルラウレート ５．１％
− シクロペンタシロキサン及びシクロヘキサシロキサン ５．０％
− セチルジメチコン １．０％
− カプリル／カプリントリグリセリド ２．２％
− オクチルステアレート １．４％
− 鉱油 ３．５％
− 水素化ひまし油 １．２％
− 蜜ろう ０．８％
− ポリ（メチルメタクリレート） １．１％
− 酸化鉄 ０．４５％
− 二酸化チタン ５．２％
− ＮａＣｌ ０．６％
− 濃縮香料 ０．１％
− ＵＶ遮蔽剤（オクチルシンナメート） ３％
− 水、１００％までの適量
【図面の簡単な説明】
【００８９】
【図１】ｘ軸に沿って報告される、対照皮膚を形成する同じヒトの皮膚（「対照皮膚」の名称で報告される結果）、又は紫外線を用いて人為的に老化させた同じヒトの皮膚（「＋ＵＶ」と称する）と比較した、活着条件下で維持し、紫外線を用いて人為的に老化させたヒトの皮膚上に植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物（「ＵＶ＋ロンゴザ」の名称で報告される結果）と、ｙ軸に沿って示される、マイクロメートル単位で０〜３５０の範囲の尺度の弾性線維の平均長とから得られる、コンピュータ処理画像分析でのオキシタラン−エラウニン網目構造の分析を通じた弾性線維の組織学的定量化による試験の結果を表すグラフである。
【図２Ａ】図２Ａは、電子顕微鏡で撮った、倍率４００倍の対照皮膚の写真を示し、図２Ｂは、同一条件下で撮った、紫外線を用いて人為的に老化させた皮膚の写真を示し、図２Ｃは、本発明に関して、オキシタラン−エラウニン網目構造及び老熟した弾性線維の再生を示す、以下の実施例１に従って調製した本発明によるロンゴザの種子のアルコール又は水性アルコール抽出物の存在中でＵＶ老化処理を組み合わせることによって得られた結果を示す写真である。
【図２Ｂ】図２Ａは、電子顕微鏡で撮った、倍率４００倍の対照皮膚の写真を示し、図２Ｂは、同一条件下で撮った、紫外線を用いて人為的に老化させた皮膚の写真を示し、図２Ｃは、本発明に関して、オキシタラン−エラウニン網目構造及び老熟した弾性線維の再生を示す、以下の実施例１に従って調製した本発明によるロンゴザの種子のアルコール又は水性アルコール抽出物の存在中でＵＶ老化処理を組み合わせることによって得られた結果を示す写真である。
【図２Ｃ】図２Ａは、電子顕微鏡で撮った、倍率４００倍の対照皮膚の写真を示し、図２Ｂは、同一条件下で撮った、紫外線を用いて人為的に老化させた皮膚の写真を示し、図２Ｃは、本発明に関して、オキシタラン−エラウニン網目構造及び老熟した弾性線維の再生を示す、以下の実施例１に従って調製した本発明によるロンゴザの種子のアルコール又は水性アルコール抽出物の存在中でＵＶ老化処理を組み合わせることによって得られた結果を示す写真である。
【図３】ｘ軸に沿って、それぞれ、「対照皮膚」、紫外線のみを受けた皮膚（「＋ＵＶ」と称する）、及び本発明によるロンゴザの同じ抽出物の存在中で紫外線処理を受けた皮膚（「ＵＶ＋ロンゴザ」）と、ｙ軸に沿って、０〜３．５の範囲の尺度に従って得られる評点とで得られた結果を示した、真皮表皮接合部で見出されるＶＩＩ型コラーゲンの免疫組織化学的評価の測定結果であって、紫外線照射することにより実験的に老化させた皮膚と比較した、本発明のロンゴザの抽出物による、ＶＩＩ型コラーゲンに関する有意な修復効果を実証する前記結果を表すグラフである。
【図４Ａ】図４Ａは、真皮表皮接合部又はＤＥＪ部（「対照皮膚」）でのＶＩＩ型コラーゲンの標識強度を示す皮膚の真皮表皮接合部での断面を示す写真であり、図４Ｂは、同条件下で、紫外線を受けた皮膚（「皮膚＋ＵＶ」）を表し、図４Ｃは、本発明によるロンゴザの種子の抽出物の存在中で紫外線を受けた同じ皮膚（「皮膚＋ＵＶ＋ロンゴザ」）を表し、本発明によるロンゴザの抽出物では、観察される標識強度が、ＵＶを受けない対照皮膚の強度に近いことを示す写真である。
【図４Ｂ】図４Ａは、真皮表皮接合部又はＤＥＪ部（「対照皮膚」）でのＶＩＩ型コラーゲンの標識強度を示す皮膚の真皮表皮接合部での断面を示す写真であり、図４Ｂは、同条件下で、紫外線を受けた皮膚（「皮膚＋ＵＶ」）を表し、図４Ｃは、本発明によるロンゴザの種子の抽出物の存在中で紫外線を受けた同じ皮膚（「皮膚＋ＵＶ＋ロンゴザ」）を表し、本発明によるロンゴザの抽出物では、観察される標識強度が、ＵＶを受けない対照皮膚の強度に近いことを示す写真である。
【図４Ｃ】図４Ａは、真皮表皮接合部又はＤＥＪ部（「対照皮膚」）でのＶＩＩ型コラーゲンの標識強度を示す皮膚の真皮表皮接合部での断面を示す写真であり、図４Ｂは、同条件下で、紫外線を受けた皮膚（「皮膚＋ＵＶ」）を表し、図４Ｃは、本発明によるロンゴザの種子の抽出物の存在中で紫外線を受けた同じ皮膚（「皮膚＋ＵＶ＋ロンゴザ」）を表し、本発明によるロンゴザの抽出物では、観察される標識強度が、ＵＶを受けない対照皮膚の強度に近いことを示す写真である。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物を活性成分として含むことを特徴とする、特に抗老化活性を有する化粧料組成物に本質的に関する。
【０００２】
本発明は、特に抗老化活性を有する化粧料組成物を特に製造するための、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物の化粧料剤としての使用にも関する。
【０００３】
以下の説明及び特許請求の範囲では、簡潔さのために用語「ロンゴザ（Ｌｏｎｇｏｚａ）」を使用するのが好ましいであろうが、この用語は、当然、差異を示唆することなく植物のアフラモムムアングスチホリウムも意味する。
【０００４】
［従来技術］
Ｒｅｖｕｅ ｆｒａｎｃａｉｓｅ ｄｅｓ Ｃｏｒｐｓ Ｇｒａｓ ［Ｆｒｅｎｃｈ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｆａｔｔｙ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ］、Ｎｏ．１ ｏｆ Ｊａｎｕａｒｙ １９８３、ｐａｇｅｓ ２１ ｔｏ ２５に所載のＥ．Ｍ．Ｇａｙｄｏｕらによる論文では、植物のアフラモムムアングスチホリウムを含めたマダガスカルのいくつかの植物（Ｔａｂｌｅ １、ｃｏｎｔｉｎｕａｔｉｏｎ ２、ｐａｇｅ ２４参照）からの種子から抽出した油の脂肪酸組成物に関する研究について記載している。この組成物は、無極性溶媒、特にヘキサンを使用したこの植物の種子の抽出物である（ｐａｇｅ ２４、「Ｐａｒｔｉｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｅ」［Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｓｅｃｔｉｏｎ］、１ｓｔ ｐａｒａｇｒａｐｈ参照）。
【０００５】
［発明の目的］
本発明の目的は、良好な抗老化活性、若しくは以前から知られている抗老化用化粧料剤と比較して改善された抗老化活性を有し、及び／又は化粧料用の、特に皮膚への局所塗布に関して非常に良好な適合性を有し、及び／又は副作用及び刺激作用がないか若しくは実質的にない化粧料剤としての新規の活性成分を見出す解決策の提供からなる技術的課題を解決することである。
【０００６】
本発明の目的は、広範に入手可能であるか又は容易に栽培可能な天然資源から得られる活性成分を用いて、上述の技術的課題を解決することである。
【０００７】
本発明の目的は、工業規模で、特に化粧料規模で使用するのに十分な量の調製を可能にする活性成分を得る方法を提供することによって上述の技術的課題を解決することでもある。
【０００８】
［発明の概要］
本発明は、工業規模で、特に化粧料規模で使用し得る、簡単で、比較的安価な方法で、上述の技術的課題に対する解決策を提供する。
【０００９】
第１の態様によれば、本発明は、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物を活性成分として、化粧料として許容可能な賦形剤中に含むことを特徴とする化粧料組成物を提供する。
【００１０】
第２の態様によれば、本発明は、化粧料組成物を製造するために、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物を化粧料剤として使用することにも関する。
【００１１】
本発明の有利な実施形態によれば、ロンゴザの抽出物は、抗老化活性を有する化粧料剤として使用される。
【００１２】
本発明の有利な変形形態及び実施によれば、植物のロンゴザの種子の抽出物は、抗しわ活性用に使用され、特にしわの出現を減らすか、なくすか、又は遅らせるために、即ち、特に、真皮表皮接合部（ｄｅｒｍａｌ−ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｊｕｎｃｔｉｏｎ）つまりＤＥＪ部に存在するコラーゲン、特にＶＩＩ型コラーゲンの合成を刺激する作用による、並びに／又はオキシタラン線維及び／若しくはエラウニン線維での作用による、皮膚の構造を保つか又は再生する作用のために使用される。したがって、本発明は、抗しわ効果、即ち、皮膚の弾性及び／又は引締まりの保護、修復又は再生からなる効果を有することを可能にする。本発明は、化学線の作用による、特に紫外線による老化に対して皮膚を保護することも可能にする。
【００１３】
本発明に関しては、許容可能な化粧料用溶媒、特にアルコール溶媒又は水性アルコール溶媒を用いて調製した、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物が、有利に使用されよう。
【００１４】
本発明の具体的な実施形態によれば、植物の種子の抽出物は、粉砕した種子をアルコール溶媒又は水性アルコール溶媒で抽出するステップからなる少なくとも１つのステップを含む抽出方法によって得られる。
【００１５】
この粉砕は、微粉が得られるまで行うことが好ましい。この粉末の粒は、約０．０１〜１ｍｍの直径を有することが有利である。
【００１６】
本発明による方法の有利な実施形態によれば、１〜４個の炭素原子を含有する一価アルコール又はポリオールであるアルコール溶媒又は水性アルコール溶媒が使用される。このアルコールは、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、エチレングリコール、プロピレングリコール及びブチレングリコール、好ましくはエタノールから選択されることが有利である。この抽出プロセスは、大気圧か、又はより高圧下であっても沸点が約１２０℃を超えないような圧力で、周囲温度か、又は最大で溶媒の沸点までの範囲に及び得る温度で行うことができる。アルコールと水との相対容量比は、３０／７０〜１００／０の範囲内で選択されることが好ましい。
【００１７】
連続するいくつかの抽出ステップは、抽出するべき材料が検討中の溶媒によって完全に枯渇するまで行うことができる。
【００１８】
抽出時間は、抽出する材料が結果として完全に枯渇するように、検討中の溶媒、温度、場合により使用圧力に従って変わる。実際には、この時間は、有益な工業的利用のために、半時間未満に制限されよう。この時間は、一般的に３０分程度であろう。
【００１９】
この抽出法の実施の具体的変法によれば、無極性有機溶媒、例えばヘキサン又はｎ−ヘプタンを使用する抽出ステップからなる少なくとも１つのステップでの脂質の除去により、得られたアルコール又は水性アルコール抽出物を脱脂されることによって、脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物を得ることが有利である。
【００２０】
この抽出法の具体的な実施形態によれば、脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物は、それ自体で、本発明による活性成分又は活性薬剤を構成し得る。
【００２１】
本発明による抽出法の実施の別の具体的な変法によれば、脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物を炭などの適切な脱色剤上での濾過による脱色ステップ、次いで炭を除去した後、最初の抽出ステップに使用した溶液と同じでも異なっていてもよいアルコール又は水性アルコール溶媒の溶液で洗浄するステップからなるステップに供することができる。
【００２２】
別の具体的な変法によれば、上述の活性成分の別の形態を得るために、抽出溶媒を実質的に完全に蒸発させて、上述の活性成分としてそのまま使用し得るか、又は化粧料として許容可能な溶媒、特にアルコール若しくは水性アルコール混合液の中に再度溶解し得る乾燥抽出物を得ることができる。
【００２３】
本発明の別の有利な変法によれば、抽出ステップに使用するアルコールはエタノールである。
【００２４】
本発明に関しては、得られる抽出物は、化粧料剤として使用しやすく、それが水相中に組み込まれるためであろうが、脂相中に組み込まれるためであろうかに関係なく、化粧料組成物の調製すべき他の成分と混合しやすい。
【００２５】
第３の態様によれば、本発明は、上記で定義した植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物の、化粧料として有効な量を、美容ケアの必要がある個人の皮膚に局所塗布することを含むことを特徴とする美容ケア方法にも関する。
【００２６】
本発明の有利な実施形態によれば、この美容ケア方法は、特に、化学線、とりわけ紫外線の作用から生じる老化作用を抑制する目的で、抗老化ケアの必要がある皮膚の領域に、上述の植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物を塗布するために使用される。
【００２７】
より具体的には、この抗老化活性は、特に、しわの出現を減らすか、なくすか、又は遅らせるための抗しわ活性に定められる。
【００２８】
本発明は、特に、真皮表皮接合部つまりＤＥＪ部に存在するコラーゲン、特にＶＩＩ型コラーゲンの合成を刺激する作用並びに／又はオキシタラン線維及び／若しくはエラウニン線維での修復作用による皮膚の構造を保つか又は再生する作用、即ち皮膚の弾性並びに／又は引締まりの保護、修復又は再生からなる効果も有する。
【００２９】
本発明の態様のいずれか１つに関しては、前記抽出物は、組成物の全重量に対して０．００１重量％〜５重量％、好ましくは０．０１重量％〜１重量％の、乾燥抽出物ベースで表される濃度で存在する。
【００３０】
当業者であれば、本発明の他の目的、特性及び利点は、添付図を参照して示される以下の説明から明白であろう。
【００３１】
以下の実施例では、特に示されない限り、すべての比率（％）は重量によって示され、温度は、室温、即ち２５℃であるか又は摂氏温度で示され、圧力は大気圧である。
【００３２】
実施例１
本発明による、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の、脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物の調製の実施例
フランスのＳＯＴＲＡＭＥＸ社から入手できる様々な市販バッチから植物のロンゴザの種子１００ｋｇを使用して以下の抽出手順を行う。
【００３３】
ａ）まず、市販の乾燥種子を、例えば０．０１ｍｍ〜１ｍｍの平均粒径が得られるまで粉砕する。
【００３４】
ｂ）次いで、粉砕した種子の３連続の抽出ステップを、各回、水性アルコール混合液（例えば体積比７０／３０のエタノール／水混合液）５００リットル（Ｌ）を使用して行うが、例えば５０℃に少し加熱し、約３０分間攪拌するのが有利である。好ましいアルコールは、その周知の生体適合性のため、エタノールである。この抽出ステップが、純アルコールを使用してまったく容易に行い得ることは明らかに理解される。
【００３５】
洗浄処置である抽出ケークの濾過を各抽出ステップ後に行う。この濾過は、例えば、０．７０μｍの孔径を有するフィルターを通して行い、洗浄ステップを、体積／体積が７０／３０の水性アルコール混合液３０Ｌを使用して行う。
【００３６】
ｃ）次いで、濾過された全容量が約１５００Ｌに達するまで、各濾液を混合し、得られた溶液は不透明である。
【００３７】
ｄ）次いで、脂質の除去からなるステップ、即ち脱脂ステップを、無極性有機溶媒、例えばｎ−ヘプタンを使用する液／液抽出ステップ階によって有利に行う。
【００３８】
３つの抽出ステップを、各回、約５００Ｌのｎ−ヘプタンを使用し、激しく攪拌して行うことが有利である。
【００３９】
水性アルコール相からヘプタン相が分離されるように、沈殿による分離を実施し、このヘプタン相を廃棄する。
【００４０】
こうして得られた脱脂水性アルコール相は、実質的に透明であり、約１５００Ｌの容量を有する。
【００４１】
本発明の現在の好ましい実施形態によれば、以下の実施例に示されるように、この脱脂水性アルコール相は、それ自体で、化粧料組成物を製造するための化粧料剤又は活性成分として使用できる、本発明によるロンゴザ又はアフラモムムアングスチホリウムの種子の抽出物（抽出物１ｄ）を構成する。この水性アルコール溶液は、０．４７重量％の乾燥抽出物を含有する。
【００４２】
使用する抽出溶媒の量及び水性アルコール混合液中のアルコールの比率などの抽出ステップのパラメータを改変することによって、様々な含量、例えばより高い含量、特に約１重量％の乾燥抽出物を得ることができ、乾燥抽出物の重量濃度は、一定の限界まで変化し得ることが理解される。
【００４３】
ｅ）実施の変法によれば、例えば、水性アルコール相を、最大温度５０℃まで、場合により減圧下で加熱することによる蒸留ステップによって、ｎ−ヘプタンなどの使用される微量の無極性有機溶媒を除去するステップからなるステップを行うことができる。
【００４４】
ｆ）次いで、無極性有機溶媒をもはや含んでいない脱脂アルコール又は水性アルコール溶液の希釈は、アルコール又は水性アルコール溶媒の溶液を添加することによって、１５００Ｌの容量が再度得られるまで行うことができる。
【００４５】
ｇ）また、脱脂溶液の脱色ステップは、当業者に周知であるように、周囲温度で１時間、攪拌しながら炭で処理することによって行うことができる。
【００４６】
次いで、０．４５μｍの孔径を有するフィルターにより炭の濾過し、次いでアルコール又は水性アルコール溶液を３Ｌ使用して、濾過された炭を洗浄できる。
【００４７】
この脱脂及び脱色されたアルコール又は水性アルコール溶液は、透明であり、約１５００Ｌの容量を有する。
【００４８】
ｈ）次いで、前記溶液の濃縮ステップは、特に、最大５０℃の適温まで、場合により減圧下で加熱することにより、アルコールを蒸発させて本質的に水性の相を得ることによって主に行うことができる。この本質的に水性の溶液は、そのままでも、この溶液による活性成分として使用できる。
【００４９】
ｉ）さらなる別の実施の変法によれば、本質的に水性の前記溶液の凍結乾燥は、そのままでも本発明による活性成分として使用し得る乾燥抽出物が得られるように行うことができる。
【００５０】
ｊ）本発明に従ってこの乾燥抽出物を化粧料組成物中に組み込むために、前記組成物の製造時に、化粧料として許容可能な溶媒中で、特に、水、アルコール若しくは１，３−ブチレングリコール中か又はこれらの溶媒の混合液中で、その用時調製溶液を調製することもできる。したがって、この実施形態によれば、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの乾燥抽出物の溶液を所望の濃度で調製することが可能である。
【００５１】
ｋ）最後に、所望の化粧料組成物を製造するための、上記抽出物の様々な溶液の使用を待つ間、これらの溶液を詰めるステップからなるプロセスを行うことができる。これに関しては、適切な容量の瓶の中に詰める前に、予め、０．２２μｍの孔径を有するフィルターを通しての滅菌濾過を実施し、次いで、冷蔵室中に例えば４℃で保管することが好ましい。
【００５２】
本発明による実施例２
活着条件下で維持され、紫外線を用いて人為的に老化させたヒトの皮膚の実験モデルに関する、ロンゴザ（アフラモムムアングスチホリウム）の抽出物の抗老化活性の決定
本発明によるロンゴザの抽出物の抗老化活性を決定するために、活着条件下で維持し、紫外線（「ＵＶ」）を用いて人為的に老化させた皮膚の実験モデルを使用することによって、抗老化効果を評価した。
【００５３】
この試験は、ＶＩＩ型コラーゲンの免疫組織化学的評価による真皮表皮接合部の質の再生の分析と、オキシタラン−エラウニン網目構造を研究することによる真皮表層の弾性線維の質の再生の分析と、画像分析での形態計測定量化による真皮中層／深層の弾性線維の質の再生の分析とによって評価した。
【００５４】
この試験を行うために、８人の異なるドナーを使用して、形成手術後に女性から皮膚の断片を取った。これらの断片を、それ自体、培養ウェル上の懸濁液中に入ったインサートの中に入れた。
【００５５】
ゲンタマイシン抗生物質、ウシ下垂体抽出物、ウシ胎児血清及びヒドロコルチゾンを補充した、当業者に周知のＭＥＭ培地を、該ウェルの底に添加する。この培地は、該ウェルの底からの拡散によって、１２μｍ厚の多孔質膜を通り抜ける。この培地を、３日毎に除去した。
【００５６】
実験的に老化させたモデルは、それぞれ、１日後（「Ｄ１」）及び３日目（「Ｄ３」）での、ＵＶＡ要素（８Ｊ／ｃｍ２）及びＵＶＢ要素（２Ｊ／ｃｍ２）を含む２つの紫外線照射を実施することにより、老化中に観察される変化と同じ皮膚の変化を生じさせることによって実現する。
【００５７】
上記実施例１のステップｄ）の終了時に得られる、ロンゴザの抽出物（抽出物１ｄ）の溶液の、培地中の５％溶液を調製する。１日目（「Ｄ０」）から１０日目（「Ｄ１０」）まで、この５％溶液を、週に３回、皮膚断片の表面に塗布する。
【００５８】
したがって、この実験に関しては、
ａ）活着条件下に単に置いた対照皮膚と、
ｂ）活着条件下に維持し、ＵＶＡ及びＵＶＢ照射により実験的に老化させた皮膚（参照の対照皮膚）と、
ｃ）上記に示すようにロンゴザの抽出物を塗布して、活着条件下に維持し、紫外線Ａ／Ｂ照射により人為的に老化させた皮膚と
の比較を行う。
【００５９】
いくつかの皮膚培養を、ＶＩ型コラーゲンの免疫組織化学的分析のために４日目（「Ｄ４」）に中止し、その他を、弾性線維の形態計測分析のために１０日目（「Ｄ１０」）に中止する。
【００６０】
得られた結果は、以下の通りである。
１）弾性線維の組織学的定量化
弾性線維は、（＋）カテキン染色によって可視化し、カメラプロダクションから提供されたソフトウェアをそのコンピュータに備えたコンピュータ支援Ｌｅｉｔｚ ＸＣ−７５ＣＥカメラにより得られるコンピュータ処理画像分析によって形態計測的に定量化する。
【００６１】
真皮表層のオキシタラン線維及びエラウニン線維の平均長（μｍ）を評価し、これらの平均表面積（μｍ２）も評価する。
【００６２】
本発明者らにより得られた結果の状況から、使用した皮膚老化モデルでは、オキシタラン線維の平均長（４２．７μｍ）並びに真皮のオキシタラン線維及びエラウニン線維の平均表面積（２３３９μｍ２）の、対照皮膚（長さ６４μｍ及び表面積２８０８．９μｍ２）と比較した統計的に有意な減少を、偏差ｐ＜０．０５の統計的に有意な値で実証することができた。
【００６３】
この結果は、添付書類に添付した図１で報告し、Ｌｅｉｔｚ ＸＣ−７５ＣＥカメラを備えたＬｅｉｔｚ電子顕微鏡で撮った写真は、図２Ａ（対照皮膚）、２Ｂ（皮膚＋ＵＶ）及び２Ｃ（皮膚＋ＵＶ＋ロンゴザ）と題する。
【００６４】
本発明による、実施例１で得られた脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物形態のロンゴザの抽出物では、オキシタラン線維及びエラウニン線維による修復効果が有意であることが認められよう。
【００６５】
具体的には、本発明によるロンゴザの抽出物で治療した皮膚のオキシタラン線維の平均長は、７５μｍ（ｐ＜０．０５）である。エラウニン線維の平均長は、その長さが２００μｍまで減少する実験的に老化させた皮膚と比較して、２６７．４μｍまで増加する。同様に、エラウニン線維の平均表面積は、偏差ｐ＜０．０５で３３９７．２μｍ２まで有意に増加する。
【００６６】
したがって、真皮中層及び真皮深層の老熟した弾性線維に関する修復効果も、それ自体、対照＋紫外線と比較して有意である（真皮中層については＋７．７％、及び真皮深層については＋８．４％）。
【００６７】
これらのすべての結果は、添付書類に付けた図１から見て明らかである。
【００６８】
２）ＶＩＩ型コラーゲンの免疫組織化学的分析
上記に示すように、形成手術後に女性から採取して冷凍した皮膚の断片を使用して、免疫組織検査によって、基底膜レベルに位置するＶＩＩ型コラーゲンを検出できる。
【００６９】
この免疫検出は、Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＵＳＡから入手でき、ＤＡＢ（ジアミノベンジジン）などの可視化剤で可視化される、ＡＢＣペルオキシダーゼと称する市販のキットを使用する３層間接酵素抗体法によって行う。
【００７０】
この評価は、標識の強度及びその形状、即ち真皮表皮接合部での多かれ少なかれ有意な伸びを特定する、０〜３の範囲の半定量的評点によって行う。
【００７１】
皮膚を紫外線老化させた上述の実験モデルは、真皮表皮接合（ＤＥＪ）部でＶＩＩ型コラーゲンを変質させることができた。
【００７２】
実際には、１．６７の評点は、対照皮膚の場合の２．４に比して得られた。
【００７３】
この差は、偏差ｐ＜０．０５で統計的有意性がある。
【００７４】
本発明によるロンゴザの抽出物を使用する場合、ＶＩＩ型コラーゲンに関する有意な修復効果は、上述の条件下で紫外線を使用して実験的に老化させた皮膚と比較して、偏差ｐ＜０．０５で認められる。
【００７５】
ＶＩＩ型コラーゲンのこの免疫組織化学的評価の得られた結果を、添付書類中に添付した図３に報告する。
【００７６】
さらに、図３Ａは、電子顕微鏡下で撮った対照皮膚の断面の写真を示し、図３Ｂは、紫外線照射により人為的に老化させた皮膚についての同様の写真を示し、図３Ｃは、紫外線照射により人為的に老化させ、本発明によるロンゴザの抽出物で治療した皮膚についての同条件下で撮った写真を示す。
【００７７】
ＵＶの存在下では、ＶＩＩ型コラーゲンの標識強度の低下が、ＤＥＪ部で認められる。
【００７８】
他方では、上記に示されるように、本発明によるロンゴザの抽出物で皮膚を治療する場合では、ＵＶなしの対照皮膚の標識強度と同様の標識強度が認められるため、本発明によるロンゴザの抽出物により示される保護の有効性が示される。
【００７９】
上記の結論としては、活着条件下で維持されるヒトの皮膚に関し、使用した実験的老化モデル効果によって、真皮表層のオキシタラン線維及びエラウニン線維と、真皮中層／深層の弾性網目構造と、真皮表皮接合部中のＶＩＩ型コラーゲンとに対する、本発明によるロンゴザの抽出物の有意な修復効果を実証することができた。
【００８０】
したがって、本発明は、コラーゲン又はエラスチンなどの構造タンパク質の保護、さらに真皮表皮接合の強化も目的として、局所使用向けの化粧料組成物を調製するための化粧料剤として使用できる。
【００８１】
化粧料組成物の配合の様々な例は、例示として以下に示されるものであり、したがって、本発明の範囲を限定できない。
【００８２】
本説明のすべての実施例では、特に示されない限り、すべての比率（％）は、重量によって示される。
【００８３】
本発明による実施例３
顔の引締めを改善するためのゲル化粧料
− 実施例１のｄ）で得られたロンゴザの脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物
２％
− グリコール ３％
− 市販のＡＭＰＳポリマー（商標Ｓｅｐｉｇｅｌ３０５（登録商標）） ３％
− 水素化ひまし油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＣＯ−６０（登録商標）） ２％
− ポリエチレングリコール １．５％
− 防腐剤 ０．５％
− 濃縮香料 ０．３％
− ＵＶ遮蔽剤（ベンゾフェノン−４） １％
− 水、１００％までの適量
【００８４】
このゲルは、顔面皮膚の引締めの改善を得るために、顔に、特にしわを含む領域に１日１回数週間塗布することができ、したがって、この治療の終了時には、皮膚に対する明らかな若返り効果及びのこれらのしわの減少又は消失の明らかな効果による柔軟性の再生が認められる。
【００８５】
本発明による実施例４
エマルジョン形態の抗しわ用デイクリーム
− 実施例１のｄ）で得られたロンゴザの脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物
２％
− ステアレス−２１（Ｂｒｉｊ７２１） ２．５％
− グリセリルステアレート（Ｔｅｇｒｉｎ） １．１％
− ステアリルアルコール ５％
− グリセロールトリカプレート／カプリレート １２．５％
− ブチレングリコール ３％
− グリセロール ２％
− 防腐剤 ０．５％
− 濃縮香料 ０．５％
− ＵＶ遮蔽剤（オクチルメトキシシンナメート） ７．５％
− 水、１００％までの適量
【００８６】
本発明による実施例５
抗しわ用トニックローション
− 実施例１のｄ）で得られたロンゴザの脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物
２％
− ブチレングリコール ３％
− ＥＤＴＡ ０．１％
− 可溶化剤 １％
− 濃縮香料 ０．３％
− エタノール ５％
− ＵＶ遮蔽剤（ベンゾフェノン−４） ０．１３％
− 水、１００％までの適量
【００８７】
本発明による実施例６
対紫外線保護向け顔面メイクアップ用パウダー
− 実施例１のｄ）で得られたロンゴザの脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物
０．２５％
− タルク １７％
− マイカ ２０％
− 絹雲母 ２０％
− 顔料 ８％
− 有機粉末（ナイロン） ２０％
− シリカ ８．７５％
− シリコーン油又は鉱油 ３％
− ＵＶ遮蔽剤（オクチルメトキシシンナメート） ３％
【００８８】
本発明による実施例７
抗しわ処置用ファンデーション
− 実施例１のｄ）で得られたロンゴザの脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物
２％
− ポリグリセリル−４イソステアレート及びセチルジメチコンコポリオール及びヘキシルラウレート ５．１％
− シクロペンタシロキサン及びシクロヘキサシロキサン ５．０％
− セチルジメチコン １．０％
− カプリル／カプリントリグリセリド ２．２％
− オクチルステアレート １．４％
− 鉱油 ３．５％
− 水素化ひまし油 １．２％
− 蜜ろう ０．８％
− ポリ（メチルメタクリレート） １．１％
− 酸化鉄 ０．４５％
− 二酸化チタン ５．２％
− ＮａＣｌ ０．６％
− 濃縮香料 ０．１％
− ＵＶ遮蔽剤（オクチルシンナメート） ３％
− 水、１００％までの適量
【図面の簡単な説明】
【００８９】
【図１】ｘ軸に沿って報告される、対照皮膚を形成する同じヒトの皮膚（「対照皮膚」の名称で報告される結果）、又は紫外線を用いて人為的に老化させた同じヒトの皮膚（「＋ＵＶ」と称する）と比較した、活着条件下で維持し、紫外線を用いて人為的に老化させたヒトの皮膚上に植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物（「ＵＶ＋ロンゴザ」の名称で報告される結果）と、ｙ軸に沿って示される、マイクロメートル単位で０〜３５０の範囲の尺度の弾性線維の平均長とから得られる、コンピュータ処理画像分析でのオキシタラン−エラウニン網目構造の分析を通じた弾性線維の組織学的定量化による試験の結果を表すグラフである。
【図２Ａ】図２Ａは、電子顕微鏡で撮った、倍率４００倍の対照皮膚の写真を示し、図２Ｂは、同一条件下で撮った、紫外線を用いて人為的に老化させた皮膚の写真を示し、図２Ｃは、本発明に関して、オキシタラン−エラウニン網目構造及び老熟した弾性線維の再生を示す、以下の実施例１に従って調製した本発明によるロンゴザの種子のアルコール又は水性アルコール抽出物の存在中でＵＶ老化処理を組み合わせることによって得られた結果を示す写真である。
【図２Ｂ】図２Ａは、電子顕微鏡で撮った、倍率４００倍の対照皮膚の写真を示し、図２Ｂは、同一条件下で撮った、紫外線を用いて人為的に老化させた皮膚の写真を示し、図２Ｃは、本発明に関して、オキシタラン−エラウニン網目構造及び老熟した弾性線維の再生を示す、以下の実施例１に従って調製した本発明によるロンゴザの種子のアルコール又は水性アルコール抽出物の存在中でＵＶ老化処理を組み合わせることによって得られた結果を示す写真である。
【図２Ｃ】図２Ａは、電子顕微鏡で撮った、倍率４００倍の対照皮膚の写真を示し、図２Ｂは、同一条件下で撮った、紫外線を用いて人為的に老化させた皮膚の写真を示し、図２Ｃは、本発明に関して、オキシタラン−エラウニン網目構造及び老熟した弾性線維の再生を示す、以下の実施例１に従って調製した本発明によるロンゴザの種子のアルコール又は水性アルコール抽出物の存在中でＵＶ老化処理を組み合わせることによって得られた結果を示す写真である。
【図３】ｘ軸に沿って、それぞれ、「対照皮膚」、紫外線のみを受けた皮膚（「＋ＵＶ」と称する）、及び本発明によるロンゴザの同じ抽出物の存在中で紫外線処理を受けた皮膚（「ＵＶ＋ロンゴザ」）と、ｙ軸に沿って、０〜３．５の範囲の尺度に従って得られる評点とで得られた結果を示した、真皮表皮接合部で見出されるＶＩＩ型コラーゲンの免疫組織化学的評価の測定結果であって、紫外線照射することにより実験的に老化させた皮膚と比較した、本発明のロンゴザの抽出物による、ＶＩＩ型コラーゲンに関する有意な修復効果を実証する前記結果を表すグラフである。
【図４Ａ】図４Ａは、真皮表皮接合部又はＤＥＪ部（「対照皮膚」）でのＶＩＩ型コラーゲンの標識強度を示す皮膚の真皮表皮接合部での断面を示す写真であり、図４Ｂは、同条件下で、紫外線を受けた皮膚（「皮膚＋ＵＶ」）を表し、図４Ｃは、本発明によるロンゴザの種子の抽出物の存在中で紫外線を受けた同じ皮膚（「皮膚＋ＵＶ＋ロンゴザ」）を表し、本発明によるロンゴザの抽出物では、観察される標識強度が、ＵＶを受けない対照皮膚の強度に近いことを示す写真である。
【図４Ｂ】図４Ａは、真皮表皮接合部又はＤＥＪ部（「対照皮膚」）でのＶＩＩ型コラーゲンの標識強度を示す皮膚の真皮表皮接合部での断面を示す写真であり、図４Ｂは、同条件下で、紫外線を受けた皮膚（「皮膚＋ＵＶ」）を表し、図４Ｃは、本発明によるロンゴザの種子の抽出物の存在中で紫外線を受けた同じ皮膚（「皮膚＋ＵＶ＋ロンゴザ」）を表し、本発明によるロンゴザの抽出物では、観察される標識強度が、ＵＶを受けない対照皮膚の強度に近いことを示す写真である。
【図４Ｃ】図４Ａは、真皮表皮接合部又はＤＥＪ部（「対照皮膚」）でのＶＩＩ型コラーゲンの標識強度を示す皮膚の真皮表皮接合部での断面を示す写真であり、図４Ｂは、同条件下で、紫外線を受けた皮膚（「皮膚＋ＵＶ」）を表し、図４Ｃは、本発明によるロンゴザの種子の抽出物の存在中で紫外線を受けた同じ皮膚（「皮膚＋ＵＶ＋ロンゴザ」）を表し、本発明によるロンゴザの抽出物では、観察される標識強度が、ＵＶを受けない対照皮膚の強度に近いことを示す写真である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物のアフラモムムアングスチホリウム（Ａｆｒａｍｏｍｕｍ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｍ）又はロンゴザの種子の抽出物を活性成分として、化粧料として許容可能な賦形剤中に含むことを特徴とする化粧料組成物。
【請求項２】
抽出物が、化粧料として許容可能な溶媒、特に、アルコール又は水性アルコール溶媒を用いて調製した、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
植物の種子の抽出物が、粉砕した種子をアルコール又は水性アルコール溶媒で抽出するステップからなる少なくとも１つのステップを含む抽出方法によって得られることを特徴とする、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
無極性有機溶媒、例えばヘキサン又はｎ−ヘプタンで抽出するステップからなる少なくとも１つのステップによる脂質の除去によって、得られたアルコール又は水性アルコール抽出物を脱脂して、脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物を得ることを特徴とする、請求項２又は３に記載の組成物。
【請求項５】
脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物が、それ自体、活性成分を構成することを特徴とする、請求項２〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物を炭などの適切な脱色剤上での濾過により脱色するステップ、次いで炭を除去した後、最初の抽出ステップに使用した溶液と同じでも異なっていてもよいアルコール又は水性アルコール溶媒の溶液で洗浄するステップからなるステップに供することを特徴とする、請求項４又は５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
抽出溶媒を、実質的に完全に蒸発させて、活性成分としてそのまま使用し得るか、又は活性成分の別の形態を得るために、化粧料として許容可能な溶媒、特にアルコール若しくは水性アルコール混合液の中に再度溶解し得る乾燥抽出物を得ることを特徴とする、請求項２〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
アルコール、又は水性アルコール混合液用に使用するアルコールが、１〜４個の炭素原子を含有する一価アルコール又はポリオールであることを特徴とする、請求項２〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記アルコールが、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、エチレングリコール、ポリプロピレングリコール及びブチレングリコールから選択されることを特徴とする、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記アルコールがエタノールであることを特徴とする、請求項８又は９に記載の組成物。
【請求項１１】
ロンゴザの種子の抽出物が、組成物の全重量に対して、０．００１重量％〜５重量％、好ましくは０．０１重量％〜１重量％の、乾燥抽出物ベースで表される濃度で存在することを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
化粧料組成物を製造するための、有利には請求項２〜１１のいずれか一項に記載の通りである、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物の、化粧料剤としての使用。
【請求項１３】
ロンゴザの抽出物が、抗老化活性のために使用されることを特徴とする、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
有利には請求項２〜１１のいずれか一項に記載の通りである、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物の、化粧料として有効な量を、美容ケアを必要とする個人の皮膚に局所塗布することを含むことを特徴とする美容ケア方法。
【請求項１５】
化学線、特に紫外線の作用から生ずる老化作用を特に抑制するために、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物を、抗老化ケアを必要とする皮膚の領域に塗布することを特徴とする、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
抗老化活性が、しわの出現を減らすか、なくすか、又は遅らせるための抗しわ活性、特に、真皮表皮接合部つまりＤＥＪ部に特に存在するコラーゲン、特にＶＩＩ型コラーゲンの合成を刺激する作用による、並びに／又はオキシタラン線維及び／若しくはエラウニン線維での修復作用による、皮膚の構造を保つ又は再生する作用、即ち、皮膚の弾性並びに／又は引締まりの保護、修復又は再生からなる効果を特に対象とすることを特徴とする、請求項１４に記載の方法。
【請求項１】
植物のアフラモムムアングスチホリウム（Ａｆｒａｍｏｍｕｍ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｍ）又はロンゴザの種子の抽出物を活性成分として、化粧料として許容可能な賦形剤中に含むことを特徴とする化粧料組成物。
【請求項２】
抽出物が、化粧料として許容可能な溶媒、特に、アルコール又は水性アルコール溶媒を用いて調製した、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
植物の種子の抽出物が、粉砕した種子をアルコール又は水性アルコール溶媒で抽出するステップからなる少なくとも１つのステップを含む抽出方法によって得られることを特徴とする、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
無極性有機溶媒、例えばヘキサン又はｎ−ヘプタンで抽出するステップからなる少なくとも１つのステップによる脂質の除去によって、得られたアルコール又は水性アルコール抽出物を脱脂して、脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物を得ることを特徴とする、請求項２又は３に記載の組成物。
【請求項５】
脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物が、それ自体、活性成分を構成することを特徴とする、請求項２〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
脱脂アルコール又は水性アルコール抽出物を炭などの適切な脱色剤上での濾過により脱色するステップ、次いで炭を除去した後、最初の抽出ステップに使用した溶液と同じでも異なっていてもよいアルコール又は水性アルコール溶媒の溶液で洗浄するステップからなるステップに供することを特徴とする、請求項４又は５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
抽出溶媒を、実質的に完全に蒸発させて、活性成分としてそのまま使用し得るか、又は活性成分の別の形態を得るために、化粧料として許容可能な溶媒、特にアルコール若しくは水性アルコール混合液の中に再度溶解し得る乾燥抽出物を得ることを特徴とする、請求項２〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
アルコール、又は水性アルコール混合液用に使用するアルコールが、１〜４個の炭素原子を含有する一価アルコール又はポリオールであることを特徴とする、請求項２〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記アルコールが、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、エチレングリコール、ポリプロピレングリコール及びブチレングリコールから選択されることを特徴とする、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記アルコールがエタノールであることを特徴とする、請求項８又は９に記載の組成物。
【請求項１１】
ロンゴザの種子の抽出物が、組成物の全重量に対して、０．００１重量％〜５重量％、好ましくは０．０１重量％〜１重量％の、乾燥抽出物ベースで表される濃度で存在することを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
化粧料組成物を製造するための、有利には請求項２〜１１のいずれか一項に記載の通りである、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物の、化粧料剤としての使用。
【請求項１３】
ロンゴザの抽出物が、抗老化活性のために使用されることを特徴とする、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
有利には請求項２〜１１のいずれか一項に記載の通りである、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物の、化粧料として有効な量を、美容ケアを必要とする個人の皮膚に局所塗布することを含むことを特徴とする美容ケア方法。
【請求項１５】
化学線、特に紫外線の作用から生ずる老化作用を特に抑制するために、植物のアフラモムムアングスチホリウム又はロンゴザの種子の抽出物を、抗老化ケアを必要とする皮膚の領域に塗布することを特徴とする、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
抗老化活性が、しわの出現を減らすか、なくすか、又は遅らせるための抗しわ活性、特に、真皮表皮接合部つまりＤＥＪ部に特に存在するコラーゲン、特にＶＩＩ型コラーゲンの合成を刺激する作用による、並びに／又はオキシタラン線維及び／若しくはエラウニン線維での修復作用による、皮膚の構造を保つ又は再生する作用、即ち、皮膚の弾性並びに／又は引締まりの保護、修復又は再生からなる効果を特に対象とすることを特徴とする、請求項１４に記載の方法。
【図１】
【図３】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図３】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【公表番号】特表２００９−５１０１５５（Ｐ２００９−５１０１５５Ａ）
【公表日】平成２１年３月１２日（２００９．３．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５３４０５７（Ｐ２００８−５３４０５７）
【出願日】平成１８年１０月２日（２００６．１０．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００６／０５０９８２
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０４２７０９
【国際公開日】平成１９年４月１９日（２００７．４．１９）
【出願人】（５０２１８９５７９）エルブイエムエイチ レシェルシェ (68)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年３月１２日（２００９．３．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１０月２日（２００６．１０．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００６／０５０９８２
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０４２７０９
【国際公開日】平成１９年４月１９日（２００７．４．１９）
【出願人】（５０２１８９５７９）エルブイエムエイチ レシェルシェ (68)
【Ｆターム（参考）】
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