皮膚外用剤及び食品
【課題】 天然物の新規抽出物について、皮膚外用剤や食品への用途を見出す。
【解決手段】 オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有する皮膚外用剤、細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、脂肪蓄積抑制剤、アディポネクチン産生促進剤、血管新生抑制剤及び食品を提供する。
【解決手段】 オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有する皮膚外用剤、細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、脂肪蓄積抑制剤、アディポネクチン産生促進剤、血管新生抑制剤及び食品を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚外用剤及び食品に関し、より詳しくは、皮膚外用剤、細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、脂肪蓄積抑制剤、アディポネクチン産生促進剤、血管新生抑制剤及び食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
加齢に伴い、皮膚にはシワ、タルミ、シミ等の老化症状が見られる。皮膚のシワ及びタルミの原因としては、細胞の機能低下や、コラーゲン、ヒアルロン酸等の細胞外マトリックス成分の減少又は変性による皮膚の弾性低下が挙げられ、シミの原因としては、紫外線によるメラニン産生及び細胞の酸化傷害が挙げられる。
【０００３】
このような皮膚の老化症状を防止又は改善するために、従来、様々な有効成分の検索及び皮膚外用剤や食品への配合検討がなされてきた。細胞賦活剤としてはポンカンのエッセンス（特許文献１参照）、コラーゲン産生促進剤としてはブナ科ブナ属植物の木の芽からの抽出物（特許文献２参照）、ヒアルロン酸産生促進剤としてはミカン科に属する植物の抽出物（特許文献３参照）、抗酸化剤としてはサルオガセ科サルオガセ属植物の抽出物（特許文献４参照）、メラニン産生抑制剤としてはダイウイキョウ（大茴香）のエッセンス（特許文献５参照）が知られている。
【０００４】
また、近年、高血圧、高脂血症、糖尿病等の生活習慣病を引き起こす要因として注目されているメタボリックシンドローム（内臓脂肪症候群）の改善因子として、アディポネクチンが発見された。アディポネクチンは、脂肪細胞から分泌されるホルモンであり、肝臓や骨格筋において脂肪酸の燃焼及び糖の取り込みを促進することにより、メタボリックシンドローム改善作用を有する。加えて、アディポネクチンは強力な抗癌作用をも有することが報告されている（非特許文献１参照）。
【０００５】
そこで、メタボリックシンドロームや癌の予防又は治療のために、アディポネクチンの産生を促進する素材が求められている。これまでに知られているアディポネクチン産生促進剤としては、ショウガ科ウコン属直物の根茎の抽出物（特許文献６参照）がある。なお、メタボリックシンドローム改善作用を有する脂肪蓄積抑制剤としてクエルシトリンを有効成分とするもの（特許文献７参照）が知られており、抗癌作用を有する血管新生抑制剤としてＬ−アスコルビン酸誘導体を有効成分とするもの（特許文献８参照）が知られている。
【特許文献１】特開２００１−１３１０４５号公報
【特許文献２】特開平１０−２０３９５２号公報
【特許文献３】特開２０００−０９６０５０号公報
【特許文献４】特開平１０−１８２４１３号公報
【特許文献５】特開平１１−３０２１４９号公報
【特許文献６】特開２００５−６０３０８号公報
【特許文献７】特開２０００−３４４６７３号公報
【特許文献８】特開平０６−２１９９４３号公報
【非特許文献１】「Ｃａｎｓｅｒ Ｒｅｖｉｅｗ」、日経メディカル、２００６年、１２月号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
このように、天然物や天然物由来の成分で各種機能を発揮させる試みがなされており、上記以外の天然物についても有効成分を探索して新たな機能を見出すことが期待されている。そこで、本発明の目的は、天然物の新規抽出物について、皮膚外用剤や食品への用途を見出すことにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記の課題を解決するため、種々の天然物について検討を行った結果、オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物に優れた細胞賦活剤作用、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、抗酸化作用、メラニン産生抑制作用、アディポネクチン産生促進作用、及び血管新生抑制作用を見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物について、皮膚外用剤や食品への用途を提供する。すなわち、本発明は、オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有する皮膚外用剤、細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、アディポネクチン産生促進剤、血管新生抑制剤及び食品を提供するものである。
【０００８】
オオズキンカブリタケの抽出物としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝液、極性有機溶媒、超臨界流体及び亜臨界流体からなる群より選ばれる少なくとも１種でオオズキンカブリタケを抽出した抽出物が適用できる。
【０００９】
なかでも、（１）常温常圧下、低級アルコール水溶液で抽出した抽出物、（２）高温高圧下、水で抽出した抽出物が好適である。低級アルコール水溶液や水で抽出した後、凍結乾燥等を行って水分を除去してもよい。
【００１０】
更に、オオズキンカブリタケの抽出物としては、オオズキンカブリタケの子実体をエタノールによって抽出して得られる抽出物又はオオズキンカブリタケの子実体を熱水によって抽出して得られる抽出物であることが好ましい。
【００１１】
細胞賦活剤、コラーゲン産生促進、ヒアルロン酸産生促進、抗酸化、メラニン産生抑制、アディポネクチン産生促進、及び血管新生抑制の効果がより優れることから、オオズキンカブリタケとしてオオズキンカブリタケの子実体の乾燥粉砕物を用いることが好ましい。
【００１２】
オオズキンカブリタケの抽出物は、細胞賦活剤及びコラーゲン産生促進剤として機能することにより、抗老化効果を生じるものと考えられる。また、ヒアルロン酸産生促進剤として機能することにより、抗老化効果及び保湿効果を生じるものと考えられる。更に、ＤＰＰＨラジカル消去剤として機能することにより抗酸化効果を生じ、メラニン産生抑制剤として機能することにより美白効果を生じ、脂肪蓄積抑制剤として機能することにより痩身効果及びメタボリックシンドローム改善効果を生じ、アディポネクチン産生促進剤として機能することにより、メタボリックシンドローム改善効果及び抗癌効果を生じ、血管新生抑制剤として機能することにより抗癌効果を生じるものと考えられる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、優れた効果を有する細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、アディポネクチン産生促進剤、血管新生抑制剤を提供することができる。また、オオズキンカブリタケの抽出物を皮膚外用剤に配合することにより、シワ、タルミ、肌のハリ、シミ、クスミといった皮膚老化症状の防止又は改善に優れた効果を発揮する老化防止改善用皮膚外用剤や、メラニン産生抑制に優れた効果を発揮する美白用皮膚外用剤を提供することができる。更に、オオズキンカブリタケの抽出物を食品に配合することにより、美容、健康維持や栄養補給に優れた効果を発揮する食品を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明の好適な実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の実施形態に限定されるものではない。
【００１５】
本発明において用いられるオオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）は、アミガサタケ科オオズキンカブリタケ属の植物である。オオズキンカブリタケ（大頭巾被り茸）は、春に、開放的な広葉樹の林や河川敷の草地等、日当りの良い場所に発生し、これらの場所で入手可能である。
【００１６】
オオズキンカブリタケの抽出物は、オオズキンカブリタケ原料（抽出の対象であるオオズキンカブリタケをいう。）を抽出して得られるものである。抽出には、オオズキンカブリタケのいずれの組織も利用できるが、抽出が容易且つ効率的になることから、オオズキンカブリタケの子実体を用いるとよい。オオズキンカブリタケは、生のままで抽出してもよいが、抽出効率を考えると、細切、乾燥、粉砕等の処理を施してから抽出することが好ましい。
【００１７】
抽出方法としては、抽出溶媒に浸漬する方法か、超臨界流体又は亜臨界流体を用いる方法が適用できる。抽出効率を上げるため、撹拌しながら抽出するか、抽出溶媒中においてオオズキンカブリタケ原料をホモジナイザーやミキサー等によって均一化しながら抽出してもよい。
【００１８】
抽出溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール（炭素数６以下のアルコールをいう。）；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール；エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル；酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル；アセトン、エチルメチルケトン等のケトン等の溶媒を用いることができ、これらより１種又は２種以上を選択して用いる。なお、水を除く上記抽出溶媒は極性有機溶媒に該当する。
【００１９】
抽出溶媒としてはまた、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。更に、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニア等の１種又は２種以上の超臨界流体又は亜臨界流体を用いてもよい。すなわち、水、二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニア等を用いて、オオズキンカブリタケの超臨界抽出又は亜臨界抽出を行ってもよい。
【００２０】
抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
【００２１】
また、抽出は常温（室温、例えば１０〜４０℃）、常圧（１気圧＝約１００ｋＰａ）で行うことも、オートクレーブ等を用いて高温（例えば、５０℃〜２００℃、好ましくは５０〜１５０℃）高圧（例えば、１００ｋＰａ超５００ｋＰａ以下、好ましくは１００ｋＰａ超３００ｋＰａ以下）で行うこともできる。
【００２２】
超臨界抽出、亜臨界抽出を行う際は、用いる流体の臨界温度以上且つ臨界圧力以上にて抽出することが好ましい。例えば、超臨界流体として二酸化炭素を用いる場合は、３１℃以上且つ７．３ＭＰａ以上にて、メタノールを用いる場合は、２３９℃以上且つ８．１ＭＰａ以上にて、水を用いる場合は、３７４℃以上且つ２２．１ＭＰａ以上にて抽出することが好ましい。
【００２３】
オオズキンカブリタケの抽出として特に好ましいのは、常温常圧下における低級アルコール水溶液（例えば、メタノール水溶液又はエタノール水溶液、特には、エタノール水溶液）による抽出、高温（例えば、５０〜２００℃、好ましくは、５０〜１５０℃、特には、１２０℃）高圧（例えば、１００ｋＰａ超５００ｋＰａ以下、好ましくは１００ｋＰａ超３００ｋＰａ以下）下における水による抽出である。このような抽出を行うことで、細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、脂肪蓄積抑制剤、アディポネクチン産生促進剤及び血管新生抑制剤としての機能に優れた抽出物を効果的且つ確実に得ることができる。
【００２４】
オオズキンカブリタケの抽出物としては、（１）オオズキンカブリタケの抽出液、（２）オオズキンカブリタケの抽出液を濃縮及び／又は乾固した後に水又は極性有機溶媒に再度溶解したもの、（３）オオズキンカブリタケの抽出液に生理作用を損なわない範囲で脱色、脱臭、脱塩等の精製処理又はカラムクロマトグラフィー等による分画処理を施したもの、（４）オオズキンカブリタケの抽出液及び／又は上記処理を施したオオズキンカブリタケの抽出液を凍結乾燥し、使用時に水又は極性有機溶媒に再度溶解して用いられる状態にしたもの等が挙げられる。
【００２５】
ここで、オオズキンカブリタケの抽出液とは、オオズキンカブリタケ原料から抽出された成分が抽出溶媒中に分散又は溶解した状態のものをいう。また、上記極性有機溶媒としては、上述した低級アルコール、多価アルコール、エーテル、エステル、ケトン等が挙げられる。
【００２６】
オオズキンカブリタケの抽出物は、優れた細胞賦活作用、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、抗酸化作用、メラニン産生抑制作用、脂肪蓄積抑制作用、アディポネクチン産生促進作用及び血管新生抑制作用を有し、皮膚外用剤、細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、脂肪蓄積抑制剤、アディポネクチン産生促進剤、血管新生抑制剤及び食品として利用することができる。
【００２７】
オオズキンカブリタケの抽出物を皮膚外用剤に配合することにより、細胞賦活作用及びコラーゲン産生促進作用に基づき皮膚老化症状の防止又は改善に優れた効果を発揮する老化防止改善用の皮膚外用剤、ヒアルロン酸産生促進作用に基づき肌の保湿に優れた効果を発揮する保湿用皮膚外用剤、抗酸化作用に基づき皮膚の細胞傷害からの保護に優れた効果を発揮する皮膚保護用皮膚外用剤、メラニン産生抑制作用に基づき美白に優れた効果を発揮する美白用皮膚外用剤を得ることができる。皮膚外用剤に配合する際のオオズキンカブリタケの抽出物の配合量は、皮膚外用剤の種類や使用目的等によって調整することができるが、効果や安定性等の点から、皮膚外用剤全量基準で、固形分換算にて、０．０００１〜１０．０質量％が好ましく、より好ましくは、０．００１〜５．０質量％である。
【００２８】
オオズキンカブリタケの抽出物を配合する皮膚外用剤（細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤等として適用できる皮膚外用剤）の剤形は任意であり、例えば、ローション等の可溶化系、クリームや乳液等の乳化系、カラミンローション等の分散系として提供することができる。更に、噴射剤と共に充填したエアゾール、軟膏剤、粉末、顆粒等の種々の剤形で提供することもできる。
【００２９】
なお、オオズキンカブリタケの抽出物を配合する皮膚外用剤には、オオズキンカブリタケの抽出物の他に、必要に応じて、通常医薬品、医薬部外品、皮膚化粧料、毛髪用化粧料及び洗浄料に配合される、油性成分、保湿剤、粉体、色素、乳化剤、可溶化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、増粘剤、薬剤、香料、樹脂、防菌防黴剤、アルコール類等を適宜配合することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲において、他の細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、アロマターゼ活性促進剤又はプロテアーゼ活性促進剤との併用も可能である。
【００３０】
オオズキンカブリタケの抽出物を有効成分とする細胞賦活剤は、種々の細胞に対する細胞賦活作用を有するが、特に真皮線維芽細胞及び表皮角化細胞に対して優れた細胞賦活作用を有し、それに基づく抗老化効果を発揮する。細胞賦活剤に用いるオオズキンカブリタケの抽出物としては、種々の抽出物が適用でき、エタノール水溶液による抽出により得られる抽出物（以下「エタノール抽出物」という。）又は高温高圧下における水による抽出により得られる抽出物（以下「熱水抽出物」という。）が好適である。
【００３１】
オオズキンカブリタケの抽出物を有効成分とするコラーゲン産生促進剤は、種々の細胞において種々のコラーゲン産生促進作用を有するが、特に真皮線維芽細胞におけるコラーゲンI産生に対して優れたコラーゲン産生促進作用を有し、それに基づく抗老化効果を発揮する。コラーゲン産生促進剤に用いるオオズキンカブリタケの抽出物としては、種々の抽出物が適用でき、エタノール抽出物又は熱水抽出物が好適である。
【００３２】
オオズキンカブリタケの抽出物を有効成分とするヒアルロン酸産生促進剤は、種々の細胞に対するヒアルロン酸産生促進作用を有するが、特に真皮線維芽細胞に対して優れたヒアルロン酸産生促進作用を有し、それに基づく抗老化効果及び保湿効果を発揮する。ヒアルロン酸産生促進剤に用いられるオオズキンカブリタケの抽出物としては、種々の抽出物が適用でき、特にエタノール抽出物が好適である。
【００３３】
オオズキンカブリタケの抽出物を有効成分とする抗酸化剤は、ＤＰＰＨラジカル消去作用に基づき優れた抗酸化効果を発揮する。抗酸化剤に用いられるオオズキンカブリタケの抽出物としては、種々の抽出物が適用でき、エタノール抽出物又は熱水抽出物が好適である。
【００３４】
オオズキンカブリタケの抽出物を有効成分とするメラニン産生抑制剤は、メラニン産生抑制作用に基づく美白作用によって、シミ・ソバカスといった色素沈着症状の改善に優れた効果を発揮する。メラニン産生抑制剤に用いられるオオズキンカブリタケの抽出物としては、種々の抽出物が適用でき、エタノール抽出物又は熱水抽出物が好適である。
【００３５】
オオズキンカブリタケの抽出物を有効成分とする脂肪蓄積抑制剤は、種々の細胞において種々の脂肪蓄積抑制作用を有するが、特に前駆脂肪細胞における中性脂肪に対して優れた脂肪蓄積抑制作用を有し、それに基づく痩身効果及びメタボリックシンドローム改善効果を発揮する。脂肪蓄積抑制剤に用いられるオオズキンカブリタケの抽出物としては、種々の抽出物が適用でき、特に熱水抽出物が好適である。
【００３６】
オオズキンカブリタケの抽出物を有効成分とするアディポネクチン産生促進剤は、種々の細胞に対してアディポネクチン産生促進作用を有するが、特に前駆脂肪細胞に対して優れたアディポネクチン産生促進作用を有し、それに基づくメタボリックシンドローム改善効果及び抗癌効果を発揮する。アディポネクチン産生促進剤に用いられるオオズキンカブリタケの抽出物としては、種々の抽出物が適用でき、特に熱水抽出物が好適である。
【００３７】
オオズキンカブリタケの抽出物を有効成分とする血管新生抑制剤は、優れた血管新生抑制作用を有し、それに基づく抗癌効果を発揮する。血管新生抑制剤に用いられるオオズキンカブリタケの抽出物としては、種々の抽出物が適用でき、エタノール抽出物又は熱水抽出物が好適であり、特にエタノール抽出物が好適である。
【００３８】
また、オオズキンカブリタケの抽出物は、美容、健康維持や栄養補給を目的とする食品、飲料及び医薬品にも用いることができる。オオズキンカブリタケの抽出物を配合する食品、飲料及び医薬品の剤形は任意であり、例えば、ドリンク剤や点滴剤などの液剤、ガムや飴などの固形剤、又はカプセル、粉末、顆粒、錠剤などの一般的な剤形で提供することができる。
【００３９】
なお、オオズキンカブリタケの抽出物を配合する食品、飲料及び医薬品には、オオズキンカブリタケの抽出物の他に、必要に応じて、通常食品、飲料、医薬品及び医薬部外品に配合される、糖類、塩類、アルコール類、アミノ酸、着色料、香料、甘味料、酸味料、防腐剤、増粘剤、薬剤等を適宜配合することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲において、他の細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、アロマターゼ活性促進剤又はプロテアーゼ活性促進剤との併用も可能である。
【実施例】
【００４０】
以下に、オオズキンカブリタケの抽出物の製造例、及び各作用を評価するための実験について更に詳細に説明するが、本発明はこれによって何ら限定されるものではない。
【００４１】
［製造例１］ エタノール抽出物
オオズキンカブリタケの子実体の乾燥粉砕物に、質量比で２０倍量のエタノール（２５容量％、５０容量％又は７５容量％）を加え、室温にて撹拌しながら３時間抽出した。抽出液中の不溶物を濾過により取り除き、上清を減圧濃縮後、凍結乾燥して、オオズキンカブリタケの２５容量％エタノール抽出物、５０容量％エタノール抽出物又は７５容量％エタノール抽出物を得た。
【００４２】
［製造例２］ 熱水抽出物
オオズキンカブリタケの子実体の乾燥粉砕物に、質量比で２０倍量の精製水を加え、オートクレーブを用いて１２０℃にて２０分間加熱抽出した。抽出液中の不溶物を濾過により取り除き、上清を凍結乾燥して、オオズキンカブリタケの熱水抽出物を得た。
【００４３】
上記製造例によって得られたオオズキンカブリタケの抽出物を用いて、各作用を評価するための実験を行った。
【００４４】
［実施例１］ 真皮線維芽細胞に対する細胞賦活作用の評価実験
この評価実験には、製造例１に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの２５容量％エタノール抽出物及び７５％容量エタノール抽出物並びに製造例２に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの熱水抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、培地を、１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、更に４８時間培養した。
【００４５】
培養後、サンプル培養液を、ＭＴＴ試薬を４００μｇ／ｍＬ含有するように調整した培地に交換し、更に２時間培養した。ＭＴＴ（３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）は、細胞内の脱水素酵素により還元されると、テトラゾリウム環が開環して青色の不溶性フォルマザンを生じる。そこで、生じたフォルマザンを２−プロパノールで抽出し、マイクロプレートリーダーで５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍの吸光度を測定し、両測定値の差によって真皮線維芽細胞に対する細胞賦活作用を評価した。なお、サンプル培養液の代わりに１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いたものを（ネガティブ）コントロールとし、５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いたものをポジティブコントロールとした。
【００４６】
表１は、オオズキンカブリタケの各抽出物における真皮線維芽細胞に対する細胞賦活作用を、（ネガティブ）コントロールにおける細胞賦活作用を１００としたときの相対値として評価した結果を示すものである。表中、ｔ検定における有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊で、１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊で表している。
【００４７】
【表１】
【００４８】
表１に示されるように、各抽出物において、試料濃度が高くなるにつれて細胞賦活作用が向上する傾向が見られた。特に、試料濃度０．０６〜１ｍｇ／ｍＬの２５容量％エタノール抽出物、及び試料濃度０．２５〜１ｍｇ／ｍＬの熱水抽出物においては、コントロールと比較して危険率１％未満で有意な細胞賦活作用が認められた。このことから、オオズキンカブリタケのエタノール抽出物及び熱水抽出物は、真皮線維芽細胞に対する優れた細胞賦活作用及びそれに基づく抗老化効果を有することが明らかとなった。
【００４９】
［実施例２］ ＨａＣａＴ（表皮角化細胞）に対する細胞賦活作用の評価実験
この評価実験には、製造例２に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの熱水抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。ヒト表皮角化細胞株ＨａＣａＴを１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、培地を、５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、更に２４時間培養した。
【００５０】
培養後、サンプル培養液を、ＭＴＴ試薬を１００μｇ／ｍＬ含有するように調整した培地に交換し、更に２時間培養した。生じたフォルマザンを２−プロパノールで抽出し、マイクロプレートリーダーで５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍの吸光度を測定し、両測定値の差によってＨａＣａＴ（表皮角化細胞）に対する細胞賦活作用を評価した。なお、サンプル培養液の代わりに１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いたものをコントロールとした。
【００５１】
表２は、オオズキンカブリタケの熱水抽出物におけるＨａＣａＴ（表皮角化細胞）に対する細胞賦活作用を、コントロールにおける細胞賦活作用を１００としたときの相対値として評価した結果を示すものである。表中、ｔ検定における有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊で、１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊で表している。
【００５２】
【表２】
【００５３】
表２に示されるように、試料濃度が高くなるに連れて細胞賦活作用が向上した。特に、試料濃度０．５〜１％の熱水抽出物においては、コントロールと比較して危険率１％未満で有意な細胞賦活作用が認められた。このことから、オオズキンカブリタケの熱水抽出物は、ＨａＣａＴ（表皮角化細胞）に対する優れた細胞賦活作用及びそれに基づく抗老化効果を有することが明らかとなった。
【００５４】
［実施例３］ Ｉ型コラーゲン産生促進作用の評価実験
この評価実験には、製造例１に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの５０容量％エタノール抽出物及び製造例２に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの熱水抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当たり２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、培地を、０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、更に２４時間培養した。
【００５５】
培養上清中に分泌されたI型コラーゲンの定量は、酵素免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ法）を用いて行なった。ＥＬＩＳＡ法の最終工程で、標識されたペルオキシダーゼに対して、２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）ジアンモニア塩（ＡＢＴＳ）及び過酸化水素を添加し反応させ、マイクロプレートリーダーにて４０５ｎｍの吸光度を測定した。更に、ＰＩＥＲＣＥ社製「ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ」（商品名）にて各ウェルのタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのI型コラーゲン産生量を求めることにより、Ｉ型コラーゲン産生促進作用を評価した。
【００５６】
なお、サンプル培養液の代わりに０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いたものを（ネガティブ）コントロールとし、５０μＭのＬ−アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩（ＶＣＰＭｇ）を含有する０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いたものをポジティブコントロールとした。
【００５７】
表３は、オオズキンカブリタケの各抽出物における真皮線維芽細胞に対するＩ型コラーゲン産生促進作用を、（ネガティブ）コントロールにおける単位タンパク量当りＩ型コラーゲン産生量を１００としたときの相対値として評価した結果を示すものである。表中、ｔ検定における有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊で、１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊で表している。
【００５８】
【表３】
【００５９】
表３に示されるように、各抽出物において、試料濃度が高くなるにつれてＩ型コラーゲン産生促進作用が向上した。特に、試料濃度１ｍｇ／ｍＬの５０容量％エタノール抽出物、及び試料濃度０．２５〜１ｍｇ／ｍＬの熱水抽出物においては、コントロールと比較して危険率１％未満で有意なＩ型コラーゲン産生促進作用が認められた。このことから、オオズキンカブリタケのエタノール抽出物及び熱水抽出物は、真皮線維芽細胞に対する優れたＩ型コラーゲン産生促進作用及びそれに基づく抗老化効果を有することが明らかとなった。
【００６０】
［実施例４］ ヒアルロン酸産生促進作用の評価実験
この評価実験には、製造例１に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの５０容量％エタノール抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当たり２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に０．５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、培地を、０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、更に５日間培養した。
【００６１】
培養上清中に分泌されたヒアルロン酸の定量は、プロテオグリカンモノマーを用いた間接ＥＬＳＡ法によって行なった。間接ＥＬＩＳＡ法の最終工程で、標識されたペルオキシダーゼに対して、２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）ジアンモニア塩（ＡＢＴＳ）及び過酸化水素を添加し反応させ、マイクロプレートリーダーにて４０５ｎｍの吸光度を測定した。
【００６２】
更に、ＢＥＣＫＭＡＮ社製「Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕｎｔｅｒ」（商品名）にて各ウェルの細胞数を測定し、又はＰＩＥＲＣＥ社製「ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ」（商品名）にて各ウェルのタンパク量を測定して、単位細胞数又は単位タンパク量当りのヒアルロン酸産生量を求めることにより、ヒアルロン酸産生促進作用を評価した。
【００６３】
なお、サンプル培養液の代わりに０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いたものを（ネガティブ）コントロールとし、５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いたものをポジティブコントロールとした。
【００６４】
表４は、オオズキンカブリタケの５０容量％エタノール抽出物における真皮線維芽細胞に対するヒアルロン酸産生促進作用を、コントロールにおける単位細胞数又は単位タンパク量当りのヒアルロン酸産生量を１００としたときの相対値として評価した結果を示すものである。表中、ｔ検定における有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊で表している。
【００６５】
【表４】
【００６６】
表４に示されるように、試料濃度が高くなるにつれてヒアルロン酸産生促進作用が向上した。特に、試料濃度０．１３〜０．２５ｍｇ／ｍＬの熱水抽出物においては、コントロールと比較して危険率５％未満で有意なヒアルロン酸産生促進作用が認められた。このことから、オオズキンカブリタケのエタノール抽出物は、真皮線維芽細胞に対する優れたヒアルロン酸産生促進作用並びにそれに基づく抗老化効果及び保湿効果を有することが明らかとなった。
【００６７】
［実施例５］ ＤＰＰＨラジカル消去作用の評価実験
この評価実験には、製造例１に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの５０容量％エタノール抽出物、及び製造例２に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの熱水抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。５０容量％エタノールによって各試料濃度に調整したサンプル溶液を、９６ウェルマイクロプレートに１００μＬずつ添加した。そこへ、０．２ｍＭの１，１‐ジフェニル‐２‐ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）を含むエタノール溶液を１００μＬずつ添加し、よく混合した後、室温且つ暗所にて１０分間又は２４時間静置した。その後、ＤＰＰＨラジカルに由来する５１６ｎｍの吸光度を測定した。
【００６８】
サンプル溶液の代わりに５０容量％エタノールを添加した場合の吸光度を（Ａ）、サンプル溶液を添加した場合の吸光度を（Ｂ）として、下記式によりラジカル消去率を求めた。
ラジカル消去率＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００
【００６９】
表５は、オオズキンカブリタケの各抽出物におけるＤＰＰＨラジカル消去作用を、ＤＰＰＨを添加してから１０分後のラジカル消去率及びＤＰＰＨを添加してから２４時間後のラジカル消去率によって評価した結果を示すものである。
【００７０】
【表５】
【００７１】
表５に示されるように、各抽出物におけるラジカル消去率は、ＤＰＰＨを添加してから１０分後よりも２４時間後の方が高かった。また、試料濃度が高くなるにつれてラジカル消去率も高くなる傾向が見られた。試料濃度１〜１０（ｍｇ／ｍＬ）の５０容量％エタノール抽出物においては、ＤＰＰＨを添加してから２４時間後に、ラジカル消去率が７５％以上という強い抗酸化効果が認められた。また、試料濃度１〜１０（ｍｇ／ｍＬ）の熱水抽出物においても、ＤＰＰＨを添加してから２４時間後に、ラジカル消去率が５０％以上となり、抗酸化効果が認められた。このことから、オオズキンカブリタケのエタノール抽出物及び熱水抽出物は、優れたＤＰＰＨラジカル消去作用及びそれに基づく抗酸化効果を有することが明らかとなった。
【００７２】
［実施例６］ メラニン産生抑制作用の評価実験
この評価実験には、製造例１に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの７５容量％エタノール抽出物、及び製造例２に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの熱水抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。
Ｂ１６マウスメラノーマ（Ｂ１６Ｆ０）細胞を、１ディッシュ当たり１８０００個となるように９０ｍｍディッシュに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、培地を、５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、更に５日間培養した。
【００７３】
サンプル培養液の代わりに５質量％ＦＢＳ添加ＤＥＭＥ培地を用いたものをネガティブコントロールとし、乳酸ナトリウムを５０ｍＭの濃度で含有する５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いたものをポジディブコントロールとして培養した。
【００７４】
培養終了後、トリプシン処理にて細胞を回収し、１．５ｍＬマイクロチューブに移して遠心操作して細胞沈殿物を得た。得られた沈殿物の黒化状況を肉眼にて目視判定した。表６は、目視判定の基準を示すものである。なお、ネガディブコントロールを判定５、ポジディブコントロールを判定１とし、目視判定の基準とした。
【００７５】
また、上記得られた沈殿物に組織溶解剤「Ｓｏｌｖａｂｌｅ」（商品名）を添加して煮沸した後、室温まで冷却し、分光光度計（ＨＩＴＡＣＨＩ製分光光度計Ｕ−３０１０）により５００ｎｍの吸光度を測定した。表７は、オオズキンカブリタケの各抽出物におけるメラニン産生抑制作用を、上記判定及び５００ｎｍ吸光度によって評価した結果を示すものである。
【００７６】
【表６】
【００７７】
【表７】
【００７８】
表７に示されるように、各抽出物において、試料濃度が高くなるにつれて吸光度の値が減少し、判定結果はポジティブコントロールに近いものとなった。試料濃度０．１ｍｇ／ｍＬの７５容量％エタノール抽出物及び試料濃度１ｍｇ／ｍＬ熱水抽出物においては、ポジティブコントロールと比べて僅かな黒化しか見られなかった。このことから、オオズキンカブリタケのエタノール抽出物及び熱水抽出物は、優れたメラニン産生抑制作用及びそれに基づく美白効果を有することが明らかとなった。
【００７９】
［実施例７］ 中性脂肪蓄積抑制作用の評価実験
この評価実験には、製造例２に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの熱水抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。三光純薬株式会社製の皮下脂肪由来正常ヒト前駆脂肪細胞「Ｃｒｙｏ ＨＰＲＡＤ−ＳＱ」（商品名）を１ウェル当り５．０×１０３個となるように９６ウェルプレートに播種した。播種培地には、１０質量％のＦＢＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬのペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを含むＰＧＭ培地を用いた。
【００８０】
細胞が増殖して密集した状態（コンフリクト）になる直前に、培地交換を行なった。新たな培地としては、１０μｇ／ｍＬのインシュリン、１μＭのデキサメタゾン、２００μＭのインドメタシン、及び５００μＭの３−イソブチル−１−メチルキサンチンを含むＰＧＭ−分化用培地にて各試料濃度に調整したサンプル培養液を用いた。ここで、サンプル培養液の代わりに試料無添加のＰＧＭ−分化用培地を用いたものをコントロールとした。
【００８１】
この培地にて前駆脂肪細胞の脂肪細胞への分化誘導を開始し、コントロールの細胞が成熟して細胞内に多数の脂肪滴が蓄積されるまで、１０日〜１４日間培養した。細胞を回収し、１０容量％中性緩衝ホルムアルデヒド液を用いて細胞を固定し、ＰＢＳ（−）にて洗浄した。細胞に０．５質量対容量％のオイルレッドＯ溶液を添加して、３７℃にて２時間培養し、脂肪を染色した。細胞をＰＢＳ（−）にて洗浄した後、メタノールによって色素を抽出した。
【００８２】
抽出液について、マイクロプレートリーダーで５５０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍの吸光度を測定し、両測定値の差を用いて中性脂肪蓄積量を求めた。更に中性脂肪蓄積量を基に中性脂肪蓄積抑制作用を評価した。表８は、オオズキンカブリタケの熱水抽出物における中性脂肪蓄積抑制作用を、コントロールにおける中性脂肪蓄積抑制作用を１００としたときの相対値として評価した結果を示すものである。表中、ｔ検定における有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊で表している。
【００８３】
【表８】
【００８４】
表８に示されるように、試料濃度１ｍｇ／ｍＬの熱水抽出物においては、コントロールと比較して危険率１％未満で有意な中性脂肪蓄積抑制作用が認められた。このことから、オオズキンカブリタケの熱水抽出物は、優れた中性脂肪蓄積抑制作用並びにそれに基づく痩身効果及びメタボリックシンドローム改善効果を有することが明らかとなった。
【００８５】
［実施例８］ アディポネクチン産生促進作用の評価実験
この評価実験には、製造例２に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの熱水抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。三光純薬株式会社製の皮下脂肪由来正常ヒト前駆脂肪細胞「Ｃｒｙｏ ＨＰＲＡＤ−ＳＱ」（商品名）を１ウェル当り５．０×１０３個となるように９６ウェルプレートに播種した。播種培地には、１０質量％のＦＢＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬのペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを含むＰＧＭ培地を用いた。
【００８６】
２日間培養後、培地交換を行なった。新たな培地としては、１０μｇ／ｍＬのインシュリン、１μＭのデキサメタゾン、２００μＭのインドメタシン、及び５００μＭの３−イソブチル−１−メチルキサンチンを含むＰＧＭ−分化用培地にて各試料濃度に調整したサンプル培養液を用いた。ここで、サンプル培養液の代わりに試料無添加のＰＧＭ−分化用培地を用いたものをコントロールとした。
【００８７】
この培地にて前駆脂肪細胞の脂肪細胞への分化誘導を開始し、コントロールの細胞が成熟して細胞内に多数の脂肪滴が蓄積されるまで、１０日〜１４日間培養した。培養後、培養上清を回収し、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製「Ｈｕｍａｎ Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ／Ａｃｒｐ ３０ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ」（商品名）を用いて、上清中のアディポネクチンを定量した。表９は、オオズキンカブリタケの熱水抽出物におけるアディポネクチン産生促進作用を、コントロールにおけるアディポネクチン量を１００としたときの相対値として評価した結果を示すものである。表中、ｔ検定における有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊で、１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊で表している。
【００８８】
【表９】
【００８９】
表９に示されるように、試料濃度が高くなるにつれアディポネクチン産生促進作用が向上した。特に、試料濃度１ｍｇ／ｍＬの熱水抽出物においては、コントロールと比較して危険率１％未満で有意なアディポネクチン産生促進作用が認められた。このことから、オオズキンカブリタケの熱水抽出物は、優れたアディポネクチン産生促進作用並びにそれに基づくメタボリックシンドローム改善効果及び抗癌効果を有することが明らかとなった。
【００９０】
［実施例９］ 血管新生抑制作用の評価実験
この評価実験には、製造例１に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの５０容量％エタノール抽出物、及び製造例２に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの熱水抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。２４ウェルプレートで培養されたクラボウ(株)製の血管新生キットの培地を、血管新生専用培地にて各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、１１日間培養した。その間の４日目及び７日目にサンプル培養液の交換を行なった。培養後、７０容量％エタノールにて細胞を固定し、１質量％ＦＢＳを含む緩衝液にてブロッキングを行なった。
【００９１】
抗ＣＤ３１を用いた酵素抗体法により管腔染色を行ない、画像処理によって、形成された管腔の面積及び長さを求めた。サンプル培養液の代わりに血管新生専用培地を用いたものを（ネガティブ）コントロールとし、１０ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦ−Ａを添加した血管新生専用培地を用いたものをポジティブコントロールとした。表１０は、オオズキンカブリタケの５０容量％エタノール抽出物及び熱水抽出物における管腔の面積及び長さを、（ネガティブ）コントロールにおける管腔の面積及び長さを１００としたときの相対値として評価した結果を示すものである。
【００９２】
【表１０】
【００９３】
表１０に示されるように、試料濃度０．１ｍｇ／ｍＬの５０容量％エタノール抽出物においては、コントロールと比較して管腔の面積及び長さの値が著しく低下した。また、熱水抽出物においても、管腔の面積及び長さの値はコントロールよりも低い値を示し、その値は試料濃度が高くなるにつれて低下した。このことから、オオズキンカブリタケのエタノール抽出物及び熱水抽出物は、優れた血管新生抑制作用及びそれに基づく抗癌効果を有することが明らかとなった。
【００９４】
実施例１〜９より、オオズキンカブリタケのエタノール抽出物又は熱水抽出物は、優れた細胞賦活作用、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、ＤＰＰＨラジカル消去作用、メラニン産生抑制作用、脂肪蓄積抑制作用、アディポネクチン産生促進作用又は血管新生抑制作用を有し、それらに基づく抗老化効果、保湿効果、抗酸化効果、美白効果、痩身効果、メタボリックシンドローム改善効果又は抗癌効果を有することが明らかとなった。
【００９５】
続いて、本発明に係るオオズキンカブリタケの抽出物を配合した皮膚外用剤（細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤等として適用できる皮膚外用剤）及び飲料の処方例を示す。なお、以下、特に明記しない限り、それぞれの成分の配合量は質量％を意味する。
【００９６】
［処方例１］乳液
【表１１】
【００９７】
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（１０）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を撹拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、冷却を開始し、（１１）と（１２）を順次加え、均一に混合する。
【００９８】
［処方例２］化粧水
【表１２】
【００９９】
［処方例３］クリーム
【表１３】
【０１００】
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（１０）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を撹拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、（１１）を加え、冷却を開始し、４０℃にて（１２）を加え、均一に混合する。
【０１０１】
［処方例４］美容液
【表１４】
【０１０２】
製法：（１）〜（６）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（１３）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化を行った後、ホモミキサーにて均一に乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、５０℃にて（１４）と（１５）を加える。更に４０℃まで冷却し、（１６）を加え、均一に混合する。
【０１０３】
［処方例５］水性ジェル
【表１５】
【０１０４】
製法：（１）を（２）に加え、均一に撹拌した後、（３）を加える。均一に撹拌した後，（４）に予め溶解した（５）を加える。均一に撹拌した後、予め混合しておいた（６）〜（８）を加え、均一に撹拌混合する。
【０１０５】
［処方例６］クレンジング料
【表１６】
【０１０６】
製法：（１）と（２）を均一に溶解する。これに、（３）と（４）を順次加え、均一に混合する。
【０１０７】
［処方例７］洗顔フォーム
【表１７】
【０１０８】
製法：（１）〜（４）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（５）〜（７）の水相成分を８０℃にて加熱溶解し、油相成分と均一に混合撹拌する。冷却を開始し、４０℃にて（８）を加え、均一に混合する。
【０１０９】
［処方例８］メイクアップベースクリーム
【表１８】
【０１１０】
製法：（１）〜（４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（５）〜（７）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（８）〜（１０）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１１）と（１２）の成分を加え、均一に混合する。
【０１１１】
［処方例９］乳液状ファンデーション
【表１９】
【０１１２】
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（１０）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（１１）〜（１５）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散する。油相成分を加え、乳化を行う。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１６）と（１７）の成分を順次加え、均一に混合する。
【０１１３】
［処方例１０］油中水型エモリエントクリーム
【表２０】
【０１１４】
製法：（５）と（６）を（１１）の一部に溶解して５０℃とし、５０℃に加熱した（４）に撹拌しながら徐々に加える。これを混合した後、７０℃にて加熱溶解した（１）〜（３）に均一に分散する。これに（７）〜（１０）を（１１）の残部に７０℃にて加熱溶解したものを撹拌しながら加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１２）を加え、均一に混合する。
【０１１５】
［処方例１１］パック
【表２１】
【０１１６】
製法：（２）と（３）を混合し、８０℃に加温した後、８０℃に加温した（１）に溶解する。均一に溶解した後、（４）と（５）を加え、撹拌しながら冷却を開始する。４０℃まで冷却し、（６）と（７）を加え、均一に混合する。
【０１１７】
［処方例１２］入浴剤
【表２２】
【０１１８】
製法：（１）〜（４）を均一に混合する。
【０１１９】
［処方例１３］ヘアーワックス
【表２３】
【０１２０】
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解後する。一方、（７）〜（１０）の水相成分を７５℃にて加熱溶解し、前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１１）と（１２）の成分を加え、均一に混合する。
【０１２１】
［処方例１４］ヘアートニック
【表２４】
【０１２２】
製法：（１）〜（４）の成分を混合、均一化する。
【０１２３】
［処方例１５］錠剤
【表２５】
【０１２４】
製法：（１）〜（６）を均一に混合し、打錠機にて圧縮成型して、1錠２００ｍｇの錠
剤を得る。
【０１２５】
［処方例１６］散剤
【表２６】
【０１２６】
製法：（１）〜（３）の粉体を混合後、粉砕機にて粉砕し、均一に分散する。
【０１２７】
［処方例１７］ドリンク剤
【表２７】
【０１２８】
製法：（１）〜（９）を順次（１０）に添加し、均質化する。
【０１２９】
以上に示したとおり、本発明によれば、優れた効果を有する細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、脂肪蓄積抑制剤、アディポネクチン産生促進剤及び血管新生抑制剤を提供することができる。また、オオズキンカブリタケの抽出物を皮膚外用剤に配合することにより、細胞賦活作用及びコラーゲン産生促進作用に基づき皮膚老化症状の防止又は改善に優れた効果を発揮する老化防止改善用の皮膚外用剤や、ヒアルロン酸産生促進作用に基づき肌の保湿に優れた効果を発揮する保湿用皮膚外用剤や、抗酸化作用に基づき皮膚の細胞傷害からの保護に優れた効果を発揮する皮膚保護用皮膚外用剤や、メラニン産生抑制作用に基づき美白に優れた効果を発揮する美白用皮膚外用剤を提供することができる。更に、オオズキンカブリタケの抽出物を食品、飲料及び医薬品に配合することにより、美容、健康維持や栄養補給に優れた効果を発揮する食品、飲料及び医薬品を提供することができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚外用剤及び食品に関し、より詳しくは、皮膚外用剤、細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、脂肪蓄積抑制剤、アディポネクチン産生促進剤、血管新生抑制剤及び食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
加齢に伴い、皮膚にはシワ、タルミ、シミ等の老化症状が見られる。皮膚のシワ及びタルミの原因としては、細胞の機能低下や、コラーゲン、ヒアルロン酸等の細胞外マトリックス成分の減少又は変性による皮膚の弾性低下が挙げられ、シミの原因としては、紫外線によるメラニン産生及び細胞の酸化傷害が挙げられる。
【０００３】
このような皮膚の老化症状を防止又は改善するために、従来、様々な有効成分の検索及び皮膚外用剤や食品への配合検討がなされてきた。細胞賦活剤としてはポンカンのエッセンス（特許文献１参照）、コラーゲン産生促進剤としてはブナ科ブナ属植物の木の芽からの抽出物（特許文献２参照）、ヒアルロン酸産生促進剤としてはミカン科に属する植物の抽出物（特許文献３参照）、抗酸化剤としてはサルオガセ科サルオガセ属植物の抽出物（特許文献４参照）、メラニン産生抑制剤としてはダイウイキョウ（大茴香）のエッセンス（特許文献５参照）が知られている。
【０００４】
また、近年、高血圧、高脂血症、糖尿病等の生活習慣病を引き起こす要因として注目されているメタボリックシンドローム（内臓脂肪症候群）の改善因子として、アディポネクチンが発見された。アディポネクチンは、脂肪細胞から分泌されるホルモンであり、肝臓や骨格筋において脂肪酸の燃焼及び糖の取り込みを促進することにより、メタボリックシンドローム改善作用を有する。加えて、アディポネクチンは強力な抗癌作用をも有することが報告されている（非特許文献１参照）。
【０００５】
そこで、メタボリックシンドロームや癌の予防又は治療のために、アディポネクチンの産生を促進する素材が求められている。これまでに知られているアディポネクチン産生促進剤としては、ショウガ科ウコン属直物の根茎の抽出物（特許文献６参照）がある。なお、メタボリックシンドローム改善作用を有する脂肪蓄積抑制剤としてクエルシトリンを有効成分とするもの（特許文献７参照）が知られており、抗癌作用を有する血管新生抑制剤としてＬ−アスコルビン酸誘導体を有効成分とするもの（特許文献８参照）が知られている。
【特許文献１】特開２００１−１３１０４５号公報
【特許文献２】特開平１０−２０３９５２号公報
【特許文献３】特開２０００−０９６０５０号公報
【特許文献４】特開平１０−１８２４１３号公報
【特許文献５】特開平１１−３０２１４９号公報
【特許文献６】特開２００５−６０３０８号公報
【特許文献７】特開２０００−３４４６７３号公報
【特許文献８】特開平０６−２１９９４３号公報
【非特許文献１】「Ｃａｎｓｅｒ Ｒｅｖｉｅｗ」、日経メディカル、２００６年、１２月号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
このように、天然物や天然物由来の成分で各種機能を発揮させる試みがなされており、上記以外の天然物についても有効成分を探索して新たな機能を見出すことが期待されている。そこで、本発明の目的は、天然物の新規抽出物について、皮膚外用剤や食品への用途を見出すことにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記の課題を解決するため、種々の天然物について検討を行った結果、オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物に優れた細胞賦活剤作用、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、抗酸化作用、メラニン産生抑制作用、アディポネクチン産生促進作用、及び血管新生抑制作用を見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物について、皮膚外用剤や食品への用途を提供する。すなわち、本発明は、オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有する皮膚外用剤、細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、アディポネクチン産生促進剤、血管新生抑制剤及び食品を提供するものである。
【０００８】
オオズキンカブリタケの抽出物としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝液、極性有機溶媒、超臨界流体及び亜臨界流体からなる群より選ばれる少なくとも１種でオオズキンカブリタケを抽出した抽出物が適用できる。
【０００９】
なかでも、（１）常温常圧下、低級アルコール水溶液で抽出した抽出物、（２）高温高圧下、水で抽出した抽出物が好適である。低級アルコール水溶液や水で抽出した後、凍結乾燥等を行って水分を除去してもよい。
【００１０】
更に、オオズキンカブリタケの抽出物としては、オオズキンカブリタケの子実体をエタノールによって抽出して得られる抽出物又はオオズキンカブリタケの子実体を熱水によって抽出して得られる抽出物であることが好ましい。
【００１１】
細胞賦活剤、コラーゲン産生促進、ヒアルロン酸産生促進、抗酸化、メラニン産生抑制、アディポネクチン産生促進、及び血管新生抑制の効果がより優れることから、オオズキンカブリタケとしてオオズキンカブリタケの子実体の乾燥粉砕物を用いることが好ましい。
【００１２】
オオズキンカブリタケの抽出物は、細胞賦活剤及びコラーゲン産生促進剤として機能することにより、抗老化効果を生じるものと考えられる。また、ヒアルロン酸産生促進剤として機能することにより、抗老化効果及び保湿効果を生じるものと考えられる。更に、ＤＰＰＨラジカル消去剤として機能することにより抗酸化効果を生じ、メラニン産生抑制剤として機能することにより美白効果を生じ、脂肪蓄積抑制剤として機能することにより痩身効果及びメタボリックシンドローム改善効果を生じ、アディポネクチン産生促進剤として機能することにより、メタボリックシンドローム改善効果及び抗癌効果を生じ、血管新生抑制剤として機能することにより抗癌効果を生じるものと考えられる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、優れた効果を有する細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、アディポネクチン産生促進剤、血管新生抑制剤を提供することができる。また、オオズキンカブリタケの抽出物を皮膚外用剤に配合することにより、シワ、タルミ、肌のハリ、シミ、クスミといった皮膚老化症状の防止又は改善に優れた効果を発揮する老化防止改善用皮膚外用剤や、メラニン産生抑制に優れた効果を発揮する美白用皮膚外用剤を提供することができる。更に、オオズキンカブリタケの抽出物を食品に配合することにより、美容、健康維持や栄養補給に優れた効果を発揮する食品を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明の好適な実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の実施形態に限定されるものではない。
【００１５】
本発明において用いられるオオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）は、アミガサタケ科オオズキンカブリタケ属の植物である。オオズキンカブリタケ（大頭巾被り茸）は、春に、開放的な広葉樹の林や河川敷の草地等、日当りの良い場所に発生し、これらの場所で入手可能である。
【００１６】
オオズキンカブリタケの抽出物は、オオズキンカブリタケ原料（抽出の対象であるオオズキンカブリタケをいう。）を抽出して得られるものである。抽出には、オオズキンカブリタケのいずれの組織も利用できるが、抽出が容易且つ効率的になることから、オオズキンカブリタケの子実体を用いるとよい。オオズキンカブリタケは、生のままで抽出してもよいが、抽出効率を考えると、細切、乾燥、粉砕等の処理を施してから抽出することが好ましい。
【００１７】
抽出方法としては、抽出溶媒に浸漬する方法か、超臨界流体又は亜臨界流体を用いる方法が適用できる。抽出効率を上げるため、撹拌しながら抽出するか、抽出溶媒中においてオオズキンカブリタケ原料をホモジナイザーやミキサー等によって均一化しながら抽出してもよい。
【００１８】
抽出溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール（炭素数６以下のアルコールをいう。）；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール；エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル；酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル；アセトン、エチルメチルケトン等のケトン等の溶媒を用いることができ、これらより１種又は２種以上を選択して用いる。なお、水を除く上記抽出溶媒は極性有機溶媒に該当する。
【００１９】
抽出溶媒としてはまた、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。更に、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニア等の１種又は２種以上の超臨界流体又は亜臨界流体を用いてもよい。すなわち、水、二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニア等を用いて、オオズキンカブリタケの超臨界抽出又は亜臨界抽出を行ってもよい。
【００２０】
抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
【００２１】
また、抽出は常温（室温、例えば１０〜４０℃）、常圧（１気圧＝約１００ｋＰａ）で行うことも、オートクレーブ等を用いて高温（例えば、５０℃〜２００℃、好ましくは５０〜１５０℃）高圧（例えば、１００ｋＰａ超５００ｋＰａ以下、好ましくは１００ｋＰａ超３００ｋＰａ以下）で行うこともできる。
【００２２】
超臨界抽出、亜臨界抽出を行う際は、用いる流体の臨界温度以上且つ臨界圧力以上にて抽出することが好ましい。例えば、超臨界流体として二酸化炭素を用いる場合は、３１℃以上且つ７．３ＭＰａ以上にて、メタノールを用いる場合は、２３９℃以上且つ８．１ＭＰａ以上にて、水を用いる場合は、３７４℃以上且つ２２．１ＭＰａ以上にて抽出することが好ましい。
【００２３】
オオズキンカブリタケの抽出として特に好ましいのは、常温常圧下における低級アルコール水溶液（例えば、メタノール水溶液又はエタノール水溶液、特には、エタノール水溶液）による抽出、高温（例えば、５０〜２００℃、好ましくは、５０〜１５０℃、特には、１２０℃）高圧（例えば、１００ｋＰａ超５００ｋＰａ以下、好ましくは１００ｋＰａ超３００ｋＰａ以下）下における水による抽出である。このような抽出を行うことで、細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、脂肪蓄積抑制剤、アディポネクチン産生促進剤及び血管新生抑制剤としての機能に優れた抽出物を効果的且つ確実に得ることができる。
【００２４】
オオズキンカブリタケの抽出物としては、（１）オオズキンカブリタケの抽出液、（２）オオズキンカブリタケの抽出液を濃縮及び／又は乾固した後に水又は極性有機溶媒に再度溶解したもの、（３）オオズキンカブリタケの抽出液に生理作用を損なわない範囲で脱色、脱臭、脱塩等の精製処理又はカラムクロマトグラフィー等による分画処理を施したもの、（４）オオズキンカブリタケの抽出液及び／又は上記処理を施したオオズキンカブリタケの抽出液を凍結乾燥し、使用時に水又は極性有機溶媒に再度溶解して用いられる状態にしたもの等が挙げられる。
【００２５】
ここで、オオズキンカブリタケの抽出液とは、オオズキンカブリタケ原料から抽出された成分が抽出溶媒中に分散又は溶解した状態のものをいう。また、上記極性有機溶媒としては、上述した低級アルコール、多価アルコール、エーテル、エステル、ケトン等が挙げられる。
【００２６】
オオズキンカブリタケの抽出物は、優れた細胞賦活作用、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、抗酸化作用、メラニン産生抑制作用、脂肪蓄積抑制作用、アディポネクチン産生促進作用及び血管新生抑制作用を有し、皮膚外用剤、細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、脂肪蓄積抑制剤、アディポネクチン産生促進剤、血管新生抑制剤及び食品として利用することができる。
【００２７】
オオズキンカブリタケの抽出物を皮膚外用剤に配合することにより、細胞賦活作用及びコラーゲン産生促進作用に基づき皮膚老化症状の防止又は改善に優れた効果を発揮する老化防止改善用の皮膚外用剤、ヒアルロン酸産生促進作用に基づき肌の保湿に優れた効果を発揮する保湿用皮膚外用剤、抗酸化作用に基づき皮膚の細胞傷害からの保護に優れた効果を発揮する皮膚保護用皮膚外用剤、メラニン産生抑制作用に基づき美白に優れた効果を発揮する美白用皮膚外用剤を得ることができる。皮膚外用剤に配合する際のオオズキンカブリタケの抽出物の配合量は、皮膚外用剤の種類や使用目的等によって調整することができるが、効果や安定性等の点から、皮膚外用剤全量基準で、固形分換算にて、０．０００１〜１０．０質量％が好ましく、より好ましくは、０．００１〜５．０質量％である。
【００２８】
オオズキンカブリタケの抽出物を配合する皮膚外用剤（細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤等として適用できる皮膚外用剤）の剤形は任意であり、例えば、ローション等の可溶化系、クリームや乳液等の乳化系、カラミンローション等の分散系として提供することができる。更に、噴射剤と共に充填したエアゾール、軟膏剤、粉末、顆粒等の種々の剤形で提供することもできる。
【００２９】
なお、オオズキンカブリタケの抽出物を配合する皮膚外用剤には、オオズキンカブリタケの抽出物の他に、必要に応じて、通常医薬品、医薬部外品、皮膚化粧料、毛髪用化粧料及び洗浄料に配合される、油性成分、保湿剤、粉体、色素、乳化剤、可溶化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、増粘剤、薬剤、香料、樹脂、防菌防黴剤、アルコール類等を適宜配合することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲において、他の細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、アロマターゼ活性促進剤又はプロテアーゼ活性促進剤との併用も可能である。
【００３０】
オオズキンカブリタケの抽出物を有効成分とする細胞賦活剤は、種々の細胞に対する細胞賦活作用を有するが、特に真皮線維芽細胞及び表皮角化細胞に対して優れた細胞賦活作用を有し、それに基づく抗老化効果を発揮する。細胞賦活剤に用いるオオズキンカブリタケの抽出物としては、種々の抽出物が適用でき、エタノール水溶液による抽出により得られる抽出物（以下「エタノール抽出物」という。）又は高温高圧下における水による抽出により得られる抽出物（以下「熱水抽出物」という。）が好適である。
【００３１】
オオズキンカブリタケの抽出物を有効成分とするコラーゲン産生促進剤は、種々の細胞において種々のコラーゲン産生促進作用を有するが、特に真皮線維芽細胞におけるコラーゲンI産生に対して優れたコラーゲン産生促進作用を有し、それに基づく抗老化効果を発揮する。コラーゲン産生促進剤に用いるオオズキンカブリタケの抽出物としては、種々の抽出物が適用でき、エタノール抽出物又は熱水抽出物が好適である。
【００３２】
オオズキンカブリタケの抽出物を有効成分とするヒアルロン酸産生促進剤は、種々の細胞に対するヒアルロン酸産生促進作用を有するが、特に真皮線維芽細胞に対して優れたヒアルロン酸産生促進作用を有し、それに基づく抗老化効果及び保湿効果を発揮する。ヒアルロン酸産生促進剤に用いられるオオズキンカブリタケの抽出物としては、種々の抽出物が適用でき、特にエタノール抽出物が好適である。
【００３３】
オオズキンカブリタケの抽出物を有効成分とする抗酸化剤は、ＤＰＰＨラジカル消去作用に基づき優れた抗酸化効果を発揮する。抗酸化剤に用いられるオオズキンカブリタケの抽出物としては、種々の抽出物が適用でき、エタノール抽出物又は熱水抽出物が好適である。
【００３４】
オオズキンカブリタケの抽出物を有効成分とするメラニン産生抑制剤は、メラニン産生抑制作用に基づく美白作用によって、シミ・ソバカスといった色素沈着症状の改善に優れた効果を発揮する。メラニン産生抑制剤に用いられるオオズキンカブリタケの抽出物としては、種々の抽出物が適用でき、エタノール抽出物又は熱水抽出物が好適である。
【００３５】
オオズキンカブリタケの抽出物を有効成分とする脂肪蓄積抑制剤は、種々の細胞において種々の脂肪蓄積抑制作用を有するが、特に前駆脂肪細胞における中性脂肪に対して優れた脂肪蓄積抑制作用を有し、それに基づく痩身効果及びメタボリックシンドローム改善効果を発揮する。脂肪蓄積抑制剤に用いられるオオズキンカブリタケの抽出物としては、種々の抽出物が適用でき、特に熱水抽出物が好適である。
【００３６】
オオズキンカブリタケの抽出物を有効成分とするアディポネクチン産生促進剤は、種々の細胞に対してアディポネクチン産生促進作用を有するが、特に前駆脂肪細胞に対して優れたアディポネクチン産生促進作用を有し、それに基づくメタボリックシンドローム改善効果及び抗癌効果を発揮する。アディポネクチン産生促進剤に用いられるオオズキンカブリタケの抽出物としては、種々の抽出物が適用でき、特に熱水抽出物が好適である。
【００３７】
オオズキンカブリタケの抽出物を有効成分とする血管新生抑制剤は、優れた血管新生抑制作用を有し、それに基づく抗癌効果を発揮する。血管新生抑制剤に用いられるオオズキンカブリタケの抽出物としては、種々の抽出物が適用でき、エタノール抽出物又は熱水抽出物が好適であり、特にエタノール抽出物が好適である。
【００３８】
また、オオズキンカブリタケの抽出物は、美容、健康維持や栄養補給を目的とする食品、飲料及び医薬品にも用いることができる。オオズキンカブリタケの抽出物を配合する食品、飲料及び医薬品の剤形は任意であり、例えば、ドリンク剤や点滴剤などの液剤、ガムや飴などの固形剤、又はカプセル、粉末、顆粒、錠剤などの一般的な剤形で提供することができる。
【００３９】
なお、オオズキンカブリタケの抽出物を配合する食品、飲料及び医薬品には、オオズキンカブリタケの抽出物の他に、必要に応じて、通常食品、飲料、医薬品及び医薬部外品に配合される、糖類、塩類、アルコール類、アミノ酸、着色料、香料、甘味料、酸味料、防腐剤、増粘剤、薬剤等を適宜配合することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲において、他の細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、アロマターゼ活性促進剤又はプロテアーゼ活性促進剤との併用も可能である。
【実施例】
【００４０】
以下に、オオズキンカブリタケの抽出物の製造例、及び各作用を評価するための実験について更に詳細に説明するが、本発明はこれによって何ら限定されるものではない。
【００４１】
［製造例１］ エタノール抽出物
オオズキンカブリタケの子実体の乾燥粉砕物に、質量比で２０倍量のエタノール（２５容量％、５０容量％又は７５容量％）を加え、室温にて撹拌しながら３時間抽出した。抽出液中の不溶物を濾過により取り除き、上清を減圧濃縮後、凍結乾燥して、オオズキンカブリタケの２５容量％エタノール抽出物、５０容量％エタノール抽出物又は７５容量％エタノール抽出物を得た。
【００４２】
［製造例２］ 熱水抽出物
オオズキンカブリタケの子実体の乾燥粉砕物に、質量比で２０倍量の精製水を加え、オートクレーブを用いて１２０℃にて２０分間加熱抽出した。抽出液中の不溶物を濾過により取り除き、上清を凍結乾燥して、オオズキンカブリタケの熱水抽出物を得た。
【００４３】
上記製造例によって得られたオオズキンカブリタケの抽出物を用いて、各作用を評価するための実験を行った。
【００４４】
［実施例１］ 真皮線維芽細胞に対する細胞賦活作用の評価実験
この評価実験には、製造例１に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの２５容量％エタノール抽出物及び７５％容量エタノール抽出物並びに製造例２に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの熱水抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、培地を、１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、更に４８時間培養した。
【００４５】
培養後、サンプル培養液を、ＭＴＴ試薬を４００μｇ／ｍＬ含有するように調整した培地に交換し、更に２時間培養した。ＭＴＴ（３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）は、細胞内の脱水素酵素により還元されると、テトラゾリウム環が開環して青色の不溶性フォルマザンを生じる。そこで、生じたフォルマザンを２−プロパノールで抽出し、マイクロプレートリーダーで５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍの吸光度を測定し、両測定値の差によって真皮線維芽細胞に対する細胞賦活作用を評価した。なお、サンプル培養液の代わりに１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いたものを（ネガティブ）コントロールとし、５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いたものをポジティブコントロールとした。
【００４６】
表１は、オオズキンカブリタケの各抽出物における真皮線維芽細胞に対する細胞賦活作用を、（ネガティブ）コントロールにおける細胞賦活作用を１００としたときの相対値として評価した結果を示すものである。表中、ｔ検定における有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊で、１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊で表している。
【００４７】
【表１】
【００４８】
表１に示されるように、各抽出物において、試料濃度が高くなるにつれて細胞賦活作用が向上する傾向が見られた。特に、試料濃度０．０６〜１ｍｇ／ｍＬの２５容量％エタノール抽出物、及び試料濃度０．２５〜１ｍｇ／ｍＬの熱水抽出物においては、コントロールと比較して危険率１％未満で有意な細胞賦活作用が認められた。このことから、オオズキンカブリタケのエタノール抽出物及び熱水抽出物は、真皮線維芽細胞に対する優れた細胞賦活作用及びそれに基づく抗老化効果を有することが明らかとなった。
【００４９】
［実施例２］ ＨａＣａＴ（表皮角化細胞）に対する細胞賦活作用の評価実験
この評価実験には、製造例２に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの熱水抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。ヒト表皮角化細胞株ＨａＣａＴを１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、培地を、５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、更に２４時間培養した。
【００５０】
培養後、サンプル培養液を、ＭＴＴ試薬を１００μｇ／ｍＬ含有するように調整した培地に交換し、更に２時間培養した。生じたフォルマザンを２−プロパノールで抽出し、マイクロプレートリーダーで５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍの吸光度を測定し、両測定値の差によってＨａＣａＴ（表皮角化細胞）に対する細胞賦活作用を評価した。なお、サンプル培養液の代わりに１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いたものをコントロールとした。
【００５１】
表２は、オオズキンカブリタケの熱水抽出物におけるＨａＣａＴ（表皮角化細胞）に対する細胞賦活作用を、コントロールにおける細胞賦活作用を１００としたときの相対値として評価した結果を示すものである。表中、ｔ検定における有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊で、１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊で表している。
【００５２】
【表２】
【００５３】
表２に示されるように、試料濃度が高くなるに連れて細胞賦活作用が向上した。特に、試料濃度０．５〜１％の熱水抽出物においては、コントロールと比較して危険率１％未満で有意な細胞賦活作用が認められた。このことから、オオズキンカブリタケの熱水抽出物は、ＨａＣａＴ（表皮角化細胞）に対する優れた細胞賦活作用及びそれに基づく抗老化効果を有することが明らかとなった。
【００５４】
［実施例３］ Ｉ型コラーゲン産生促進作用の評価実験
この評価実験には、製造例１に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの５０容量％エタノール抽出物及び製造例２に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの熱水抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当たり２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、培地を、０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、更に２４時間培養した。
【００５５】
培養上清中に分泌されたI型コラーゲンの定量は、酵素免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ法）を用いて行なった。ＥＬＩＳＡ法の最終工程で、標識されたペルオキシダーゼに対して、２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）ジアンモニア塩（ＡＢＴＳ）及び過酸化水素を添加し反応させ、マイクロプレートリーダーにて４０５ｎｍの吸光度を測定した。更に、ＰＩＥＲＣＥ社製「ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ」（商品名）にて各ウェルのタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのI型コラーゲン産生量を求めることにより、Ｉ型コラーゲン産生促進作用を評価した。
【００５６】
なお、サンプル培養液の代わりに０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いたものを（ネガティブ）コントロールとし、５０μＭのＬ−アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩（ＶＣＰＭｇ）を含有する０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いたものをポジティブコントロールとした。
【００５７】
表３は、オオズキンカブリタケの各抽出物における真皮線維芽細胞に対するＩ型コラーゲン産生促進作用を、（ネガティブ）コントロールにおける単位タンパク量当りＩ型コラーゲン産生量を１００としたときの相対値として評価した結果を示すものである。表中、ｔ検定における有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊で、１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊で表している。
【００５８】
【表３】
【００５９】
表３に示されるように、各抽出物において、試料濃度が高くなるにつれてＩ型コラーゲン産生促進作用が向上した。特に、試料濃度１ｍｇ／ｍＬの５０容量％エタノール抽出物、及び試料濃度０．２５〜１ｍｇ／ｍＬの熱水抽出物においては、コントロールと比較して危険率１％未満で有意なＩ型コラーゲン産生促進作用が認められた。このことから、オオズキンカブリタケのエタノール抽出物及び熱水抽出物は、真皮線維芽細胞に対する優れたＩ型コラーゲン産生促進作用及びそれに基づく抗老化効果を有することが明らかとなった。
【００６０】
［実施例４］ ヒアルロン酸産生促進作用の評価実験
この評価実験には、製造例１に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの５０容量％エタノール抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当たり２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に０．５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、培地を、０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、更に５日間培養した。
【００６１】
培養上清中に分泌されたヒアルロン酸の定量は、プロテオグリカンモノマーを用いた間接ＥＬＳＡ法によって行なった。間接ＥＬＩＳＡ法の最終工程で、標識されたペルオキシダーゼに対して、２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）ジアンモニア塩（ＡＢＴＳ）及び過酸化水素を添加し反応させ、マイクロプレートリーダーにて４０５ｎｍの吸光度を測定した。
【００６２】
更に、ＢＥＣＫＭＡＮ社製「Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕｎｔｅｒ」（商品名）にて各ウェルの細胞数を測定し、又はＰＩＥＲＣＥ社製「ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ」（商品名）にて各ウェルのタンパク量を測定して、単位細胞数又は単位タンパク量当りのヒアルロン酸産生量を求めることにより、ヒアルロン酸産生促進作用を評価した。
【００６３】
なお、サンプル培養液の代わりに０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いたものを（ネガティブ）コントロールとし、５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いたものをポジティブコントロールとした。
【００６４】
表４は、オオズキンカブリタケの５０容量％エタノール抽出物における真皮線維芽細胞に対するヒアルロン酸産生促進作用を、コントロールにおける単位細胞数又は単位タンパク量当りのヒアルロン酸産生量を１００としたときの相対値として評価した結果を示すものである。表中、ｔ検定における有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊で表している。
【００６５】
【表４】
【００６６】
表４に示されるように、試料濃度が高くなるにつれてヒアルロン酸産生促進作用が向上した。特に、試料濃度０．１３〜０．２５ｍｇ／ｍＬの熱水抽出物においては、コントロールと比較して危険率５％未満で有意なヒアルロン酸産生促進作用が認められた。このことから、オオズキンカブリタケのエタノール抽出物は、真皮線維芽細胞に対する優れたヒアルロン酸産生促進作用並びにそれに基づく抗老化効果及び保湿効果を有することが明らかとなった。
【００６７】
［実施例５］ ＤＰＰＨラジカル消去作用の評価実験
この評価実験には、製造例１に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの５０容量％エタノール抽出物、及び製造例２に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの熱水抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。５０容量％エタノールによって各試料濃度に調整したサンプル溶液を、９６ウェルマイクロプレートに１００μＬずつ添加した。そこへ、０．２ｍＭの１，１‐ジフェニル‐２‐ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）を含むエタノール溶液を１００μＬずつ添加し、よく混合した後、室温且つ暗所にて１０分間又は２４時間静置した。その後、ＤＰＰＨラジカルに由来する５１６ｎｍの吸光度を測定した。
【００６８】
サンプル溶液の代わりに５０容量％エタノールを添加した場合の吸光度を（Ａ）、サンプル溶液を添加した場合の吸光度を（Ｂ）として、下記式によりラジカル消去率を求めた。
ラジカル消去率＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００
【００６９】
表５は、オオズキンカブリタケの各抽出物におけるＤＰＰＨラジカル消去作用を、ＤＰＰＨを添加してから１０分後のラジカル消去率及びＤＰＰＨを添加してから２４時間後のラジカル消去率によって評価した結果を示すものである。
【００７０】
【表５】
【００７１】
表５に示されるように、各抽出物におけるラジカル消去率は、ＤＰＰＨを添加してから１０分後よりも２４時間後の方が高かった。また、試料濃度が高くなるにつれてラジカル消去率も高くなる傾向が見られた。試料濃度１〜１０（ｍｇ／ｍＬ）の５０容量％エタノール抽出物においては、ＤＰＰＨを添加してから２４時間後に、ラジカル消去率が７５％以上という強い抗酸化効果が認められた。また、試料濃度１〜１０（ｍｇ／ｍＬ）の熱水抽出物においても、ＤＰＰＨを添加してから２４時間後に、ラジカル消去率が５０％以上となり、抗酸化効果が認められた。このことから、オオズキンカブリタケのエタノール抽出物及び熱水抽出物は、優れたＤＰＰＨラジカル消去作用及びそれに基づく抗酸化効果を有することが明らかとなった。
【００７２】
［実施例６］ メラニン産生抑制作用の評価実験
この評価実験には、製造例１に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの７５容量％エタノール抽出物、及び製造例２に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの熱水抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。
Ｂ１６マウスメラノーマ（Ｂ１６Ｆ０）細胞を、１ディッシュ当たり１８０００個となるように９０ｍｍディッシュに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、培地を、５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、更に５日間培養した。
【００７３】
サンプル培養液の代わりに５質量％ＦＢＳ添加ＤＥＭＥ培地を用いたものをネガティブコントロールとし、乳酸ナトリウムを５０ｍＭの濃度で含有する５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いたものをポジディブコントロールとして培養した。
【００７４】
培養終了後、トリプシン処理にて細胞を回収し、１．５ｍＬマイクロチューブに移して遠心操作して細胞沈殿物を得た。得られた沈殿物の黒化状況を肉眼にて目視判定した。表６は、目視判定の基準を示すものである。なお、ネガディブコントロールを判定５、ポジディブコントロールを判定１とし、目視判定の基準とした。
【００７５】
また、上記得られた沈殿物に組織溶解剤「Ｓｏｌｖａｂｌｅ」（商品名）を添加して煮沸した後、室温まで冷却し、分光光度計（ＨＩＴＡＣＨＩ製分光光度計Ｕ−３０１０）により５００ｎｍの吸光度を測定した。表７は、オオズキンカブリタケの各抽出物におけるメラニン産生抑制作用を、上記判定及び５００ｎｍ吸光度によって評価した結果を示すものである。
【００７６】
【表６】
【００７７】
【表７】
【００７８】
表７に示されるように、各抽出物において、試料濃度が高くなるにつれて吸光度の値が減少し、判定結果はポジティブコントロールに近いものとなった。試料濃度０．１ｍｇ／ｍＬの７５容量％エタノール抽出物及び試料濃度１ｍｇ／ｍＬ熱水抽出物においては、ポジティブコントロールと比べて僅かな黒化しか見られなかった。このことから、オオズキンカブリタケのエタノール抽出物及び熱水抽出物は、優れたメラニン産生抑制作用及びそれに基づく美白効果を有することが明らかとなった。
【００７９】
［実施例７］ 中性脂肪蓄積抑制作用の評価実験
この評価実験には、製造例２に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの熱水抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。三光純薬株式会社製の皮下脂肪由来正常ヒト前駆脂肪細胞「Ｃｒｙｏ ＨＰＲＡＤ−ＳＱ」（商品名）を１ウェル当り５．０×１０３個となるように９６ウェルプレートに播種した。播種培地には、１０質量％のＦＢＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬのペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを含むＰＧＭ培地を用いた。
【００８０】
細胞が増殖して密集した状態（コンフリクト）になる直前に、培地交換を行なった。新たな培地としては、１０μｇ／ｍＬのインシュリン、１μＭのデキサメタゾン、２００μＭのインドメタシン、及び５００μＭの３−イソブチル−１−メチルキサンチンを含むＰＧＭ−分化用培地にて各試料濃度に調整したサンプル培養液を用いた。ここで、サンプル培養液の代わりに試料無添加のＰＧＭ−分化用培地を用いたものをコントロールとした。
【００８１】
この培地にて前駆脂肪細胞の脂肪細胞への分化誘導を開始し、コントロールの細胞が成熟して細胞内に多数の脂肪滴が蓄積されるまで、１０日〜１４日間培養した。細胞を回収し、１０容量％中性緩衝ホルムアルデヒド液を用いて細胞を固定し、ＰＢＳ（−）にて洗浄した。細胞に０．５質量対容量％のオイルレッドＯ溶液を添加して、３７℃にて２時間培養し、脂肪を染色した。細胞をＰＢＳ（−）にて洗浄した後、メタノールによって色素を抽出した。
【００８２】
抽出液について、マイクロプレートリーダーで５５０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍの吸光度を測定し、両測定値の差を用いて中性脂肪蓄積量を求めた。更に中性脂肪蓄積量を基に中性脂肪蓄積抑制作用を評価した。表８は、オオズキンカブリタケの熱水抽出物における中性脂肪蓄積抑制作用を、コントロールにおける中性脂肪蓄積抑制作用を１００としたときの相対値として評価した結果を示すものである。表中、ｔ検定における有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊で表している。
【００８３】
【表８】
【００８４】
表８に示されるように、試料濃度１ｍｇ／ｍＬの熱水抽出物においては、コントロールと比較して危険率１％未満で有意な中性脂肪蓄積抑制作用が認められた。このことから、オオズキンカブリタケの熱水抽出物は、優れた中性脂肪蓄積抑制作用並びにそれに基づく痩身効果及びメタボリックシンドローム改善効果を有することが明らかとなった。
【００８５】
［実施例８］ アディポネクチン産生促進作用の評価実験
この評価実験には、製造例２に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの熱水抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。三光純薬株式会社製の皮下脂肪由来正常ヒト前駆脂肪細胞「Ｃｒｙｏ ＨＰＲＡＤ−ＳＱ」（商品名）を１ウェル当り５．０×１０３個となるように９６ウェルプレートに播種した。播種培地には、１０質量％のＦＢＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬのペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを含むＰＧＭ培地を用いた。
【００８６】
２日間培養後、培地交換を行なった。新たな培地としては、１０μｇ／ｍＬのインシュリン、１μＭのデキサメタゾン、２００μＭのインドメタシン、及び５００μＭの３−イソブチル−１−メチルキサンチンを含むＰＧＭ−分化用培地にて各試料濃度に調整したサンプル培養液を用いた。ここで、サンプル培養液の代わりに試料無添加のＰＧＭ−分化用培地を用いたものをコントロールとした。
【００８７】
この培地にて前駆脂肪細胞の脂肪細胞への分化誘導を開始し、コントロールの細胞が成熟して細胞内に多数の脂肪滴が蓄積されるまで、１０日〜１４日間培養した。培養後、培養上清を回収し、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製「Ｈｕｍａｎ Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ／Ａｃｒｐ ３０ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ」（商品名）を用いて、上清中のアディポネクチンを定量した。表９は、オオズキンカブリタケの熱水抽出物におけるアディポネクチン産生促進作用を、コントロールにおけるアディポネクチン量を１００としたときの相対値として評価した結果を示すものである。表中、ｔ検定における有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊で、１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊で表している。
【００８８】
【表９】
【００８９】
表９に示されるように、試料濃度が高くなるにつれアディポネクチン産生促進作用が向上した。特に、試料濃度１ｍｇ／ｍＬの熱水抽出物においては、コントロールと比較して危険率１％未満で有意なアディポネクチン産生促進作用が認められた。このことから、オオズキンカブリタケの熱水抽出物は、優れたアディポネクチン産生促進作用並びにそれに基づくメタボリックシンドローム改善効果及び抗癌効果を有することが明らかとなった。
【００９０】
［実施例９］ 血管新生抑制作用の評価実験
この評価実験には、製造例１に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの５０容量％エタノール抽出物、及び製造例２に記載の製造方法によって得られたオオズキンカブリタケの熱水抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。２４ウェルプレートで培養されたクラボウ(株)製の血管新生キットの培地を、血管新生専用培地にて各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、１１日間培養した。その間の４日目及び７日目にサンプル培養液の交換を行なった。培養後、７０容量％エタノールにて細胞を固定し、１質量％ＦＢＳを含む緩衝液にてブロッキングを行なった。
【００９１】
抗ＣＤ３１を用いた酵素抗体法により管腔染色を行ない、画像処理によって、形成された管腔の面積及び長さを求めた。サンプル培養液の代わりに血管新生専用培地を用いたものを（ネガティブ）コントロールとし、１０ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦ−Ａを添加した血管新生専用培地を用いたものをポジティブコントロールとした。表１０は、オオズキンカブリタケの５０容量％エタノール抽出物及び熱水抽出物における管腔の面積及び長さを、（ネガティブ）コントロールにおける管腔の面積及び長さを１００としたときの相対値として評価した結果を示すものである。
【００９２】
【表１０】
【００９３】
表１０に示されるように、試料濃度０．１ｍｇ／ｍＬの５０容量％エタノール抽出物においては、コントロールと比較して管腔の面積及び長さの値が著しく低下した。また、熱水抽出物においても、管腔の面積及び長さの値はコントロールよりも低い値を示し、その値は試料濃度が高くなるにつれて低下した。このことから、オオズキンカブリタケのエタノール抽出物及び熱水抽出物は、優れた血管新生抑制作用及びそれに基づく抗癌効果を有することが明らかとなった。
【００９４】
実施例１〜９より、オオズキンカブリタケのエタノール抽出物又は熱水抽出物は、優れた細胞賦活作用、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、ＤＰＰＨラジカル消去作用、メラニン産生抑制作用、脂肪蓄積抑制作用、アディポネクチン産生促進作用又は血管新生抑制作用を有し、それらに基づく抗老化効果、保湿効果、抗酸化効果、美白効果、痩身効果、メタボリックシンドローム改善効果又は抗癌効果を有することが明らかとなった。
【００９５】
続いて、本発明に係るオオズキンカブリタケの抽出物を配合した皮膚外用剤（細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤等として適用できる皮膚外用剤）及び飲料の処方例を示す。なお、以下、特に明記しない限り、それぞれの成分の配合量は質量％を意味する。
【００９６】
［処方例１］乳液
【表１１】
【００９７】
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（１０）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を撹拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、冷却を開始し、（１１）と（１２）を順次加え、均一に混合する。
【００９８】
［処方例２］化粧水
【表１２】
【００９９】
［処方例３］クリーム
【表１３】
【０１００】
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（１０）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を撹拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、（１１）を加え、冷却を開始し、４０℃にて（１２）を加え、均一に混合する。
【０１０１】
［処方例４］美容液
【表１４】
【０１０２】
製法：（１）〜（６）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（１３）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化を行った後、ホモミキサーにて均一に乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、５０℃にて（１４）と（１５）を加える。更に４０℃まで冷却し、（１６）を加え、均一に混合する。
【０１０３】
［処方例５］水性ジェル
【表１５】
【０１０４】
製法：（１）を（２）に加え、均一に撹拌した後、（３）を加える。均一に撹拌した後，（４）に予め溶解した（５）を加える。均一に撹拌した後、予め混合しておいた（６）〜（８）を加え、均一に撹拌混合する。
【０１０５】
［処方例６］クレンジング料
【表１６】
【０１０６】
製法：（１）と（２）を均一に溶解する。これに、（３）と（４）を順次加え、均一に混合する。
【０１０７】
［処方例７］洗顔フォーム
【表１７】
【０１０８】
製法：（１）〜（４）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（５）〜（７）の水相成分を８０℃にて加熱溶解し、油相成分と均一に混合撹拌する。冷却を開始し、４０℃にて（８）を加え、均一に混合する。
【０１０９】
［処方例８］メイクアップベースクリーム
【表１８】
【０１１０】
製法：（１）〜（４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（５）〜（７）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（８）〜（１０）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１１）と（１２）の成分を加え、均一に混合する。
【０１１１】
［処方例９］乳液状ファンデーション
【表１９】
【０１１２】
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（１０）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（１１）〜（１５）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散する。油相成分を加え、乳化を行う。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１６）と（１７）の成分を順次加え、均一に混合する。
【０１１３】
［処方例１０］油中水型エモリエントクリーム
【表２０】
【０１１４】
製法：（５）と（６）を（１１）の一部に溶解して５０℃とし、５０℃に加熱した（４）に撹拌しながら徐々に加える。これを混合した後、７０℃にて加熱溶解した（１）〜（３）に均一に分散する。これに（７）〜（１０）を（１１）の残部に７０℃にて加熱溶解したものを撹拌しながら加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１２）を加え、均一に混合する。
【０１１５】
［処方例１１］パック
【表２１】
【０１１６】
製法：（２）と（３）を混合し、８０℃に加温した後、８０℃に加温した（１）に溶解する。均一に溶解した後、（４）と（５）を加え、撹拌しながら冷却を開始する。４０℃まで冷却し、（６）と（７）を加え、均一に混合する。
【０１１７】
［処方例１２］入浴剤
【表２２】
【０１１８】
製法：（１）〜（４）を均一に混合する。
【０１１９】
［処方例１３］ヘアーワックス
【表２３】
【０１２０】
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解後する。一方、（７）〜（１０）の水相成分を７５℃にて加熱溶解し、前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１１）と（１２）の成分を加え、均一に混合する。
【０１２１】
［処方例１４］ヘアートニック
【表２４】
【０１２２】
製法：（１）〜（４）の成分を混合、均一化する。
【０１２３】
［処方例１５］錠剤
【表２５】
【０１２４】
製法：（１）〜（６）を均一に混合し、打錠機にて圧縮成型して、1錠２００ｍｇの錠
剤を得る。
【０１２５】
［処方例１６］散剤
【表２６】
【０１２６】
製法：（１）〜（３）の粉体を混合後、粉砕機にて粉砕し、均一に分散する。
【０１２７】
［処方例１７］ドリンク剤
【表２７】
【０１２８】
製法：（１）〜（９）を順次（１０）に添加し、均質化する。
【０１２９】
以上に示したとおり、本発明によれば、優れた効果を有する細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、脂肪蓄積抑制剤、アディポネクチン産生促進剤及び血管新生抑制剤を提供することができる。また、オオズキンカブリタケの抽出物を皮膚外用剤に配合することにより、細胞賦活作用及びコラーゲン産生促進作用に基づき皮膚老化症状の防止又は改善に優れた効果を発揮する老化防止改善用の皮膚外用剤や、ヒアルロン酸産生促進作用に基づき肌の保湿に優れた効果を発揮する保湿用皮膚外用剤や、抗酸化作用に基づき皮膚の細胞傷害からの保護に優れた効果を発揮する皮膚保護用皮膚外用剤や、メラニン産生抑制作用に基づき美白に優れた効果を発揮する美白用皮膚外用剤を提供することができる。更に、オオズキンカブリタケの抽出物を食品、飲料及び医薬品に配合することにより、美容、健康維持や栄養補給に優れた効果を発揮する食品、飲料及び医薬品を提供することができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項２】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とする細胞賦活剤。
【請求項３】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とするコラーゲン産生促進剤。
【請求項４】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とするヒアルロン酸産生促進剤。
【請求項５】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
【請求項６】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とするメラニン産生抑制剤。
【請求項７】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とする脂肪蓄積抑制剤。
【請求項８】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とするアディポネクチン産生促進剤。
【請求項９】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とする血管新生抑制剤。
【請求項１０】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とする食品。
【請求項１】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項２】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とする細胞賦活剤。
【請求項３】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とするコラーゲン産生促進剤。
【請求項４】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とするヒアルロン酸産生促進剤。
【請求項５】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
【請求項６】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とするメラニン産生抑制剤。
【請求項７】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とする脂肪蓄積抑制剤。
【請求項８】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とするアディポネクチン産生促進剤。
【請求項９】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とする血管新生抑制剤。
【請求項１０】
オオズキンカブリタケ（Ｐｔｙｃｈｏｖｅｒｐａ ｂｏｈｅｍｉｃａ（Ｋｒｏｍｂｈ．）Ｂｏｎｄ．）の抽出物を含有することを特徴とする食品。
【公開番号】特開２００８−２２２６６４（Ｐ２００８−２２２６６４Ａ）
【公開日】平成２０年９月２５日（２００８．９．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−６５４８５（Ｐ２００７−６５４８５）
【出願日】平成１９年３月１４日（２００７．３．１４）
【出願人】（０００１３５３２４）株式会社ノエビア (258)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年９月２５日（２００８．９．２５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年３月１４日（２００７．３．１４）
【出願人】（０００１３５３２４）株式会社ノエビア (258)
【Ｆターム（参考）】
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