抗原提示細胞の機能制御剤
【課題】 抗原提示細胞の機能制御剤の提供。
【解決手段】 細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質、具体的には亜鉛イオン、亜鉛イオンキレーター、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質、あるいは亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質を有効成分として含有する抗原提示細胞の機能制御剤。
【解決手段】 細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質、具体的には亜鉛イオン、亜鉛イオンキレーター、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質、あるいは亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質を有効成分として含有する抗原提示細胞の機能制御剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は抗原提示細胞の機能を制御し得る薬剤に関する。より具体的には抗原提示細胞の活性化を介した免疫応答反応を制御し得る薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
人間の健康を維持するシステムの一つに免疫系がある。免疫応答の制御は感染防御を目的としたワクチン開発、自己免疫疾患の治療、ガン等の克服、臓器移植の際の拒絶反応の抑制の点からも極めて重要である。これまで、この免疫応答の制御を目的に様々な免疫賦活化剤、例えばＢＣＧ等の菌体成分が使用されたり、また菌体成分由来の免疫抑制剤や合成ステロイド剤が人体に投与されたりしてきた。しかしながら、これらの菌体成分や合成ステロイド剤は様々な副作用が存在し、人体にとって有害な一面を潜在的に持っている。また長期使用によりその効果が減弱する等、薬剤として使用する際には、これまでにいくつかの問題が指摘されていた。
樹状細胞等の抗原提示細胞は免疫応答の強さと質の制御の中心的存在であり、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、癌の免疫療法等への利用がすすめられている。又、抗原提示細胞の増殖や活性化を制御する培養法等の研究がすすめられているが、依然、効率よく且つ特異的に抗原提示細胞の機能を制御する方法が求められているのが現状である。
従来技術については非特許文献５〜７に詳述されている。
【非特許文献１】Peinado, H., Quintanilla, M. & Cano, A. Transforming growth factor beta-1 induces snail transcription factor in epithelial cell lines: mechanisms for epithelial mesenchymal transitions. J. Biol. Chem. 278, 21113-23 (2003)
【非特許文献２】Yamashita, S., Miyagi, C., Fukada, T., Kagara, N., Che, Y.-S. & Hirano, T. Zinc transporter LIVI controls epithelial-mesenchymal transition in zebrafish gastrula organizer. Nature 429, 298-302 (2004)
【非特許文献３】Taylor, K. M. & Nicholson, R. I. The LZT proteins; the LIV-1 subfamily of zinc transporters. Biochim. Biophys. Acta 1611, 16-30 (2003)
【非特許文献４】Taylor, K. M., Morgan, H. E., Johnson, A., Hadley, L. J. & Nicholson, R. I. Structure-function analysis of LIV-1, the breast cancer-associated protein that belongs to a new subfamily of zinc transporters. Biochem. J. 375, 51-9 (2003)
【非特許文献５】Guermonprez P, Valladeau J, Zitvogel L, Thery C, Amigorena S. Antigen presentation and T cell stimulation by dendritic cells. Annu Rev. Immunol. 20, 621-627 (2002)
【非特許文献６】Banchereau J, Briere F, Caux C, Davoust J, Lebecque S, Liu YJ, Pulendran B, Palucka K. Immunobiology of dendritic cells. Annu Rev. Immunol. 18, 761-781 (2000)
【非特許文献７】Steinman RM, Mellman I. Immunotherapy: bewitched, bothered, and bewildered no more. Science 305, 197-200 (2004)
【非特許文献８】Jirakulaporn T, Muslin AJ. Cation diffusion facilitator proteins modulate Raf-1 activity. J. Biol. Chem. 279, 27807-15 (2004)
【非特許文献９】Krendel M, Zenke FT, Bokoch GM. Nucleotide exchange factor GEF-H1 mediates cross-talk between microtubules and the actin cytoskeleton. Nature Cell Biology 4, 294-301 (2002)
【非特許文献１０】Korichneva I, Hoyos B, Chua R, Levi E, Hammerling U. Zinc release from protein kinase C as the common event during activation by lipid second messenger or reactive oxygen. J. Biol. Chem. 277, 44327-31 (2002)
【非特許文献１１】Haase H, Maret W. Intracellular zinc fluctuations modulate protein tyrosine phosphatase activity in insulin/insulin-like growth factor-1 signaling. Exp. Cell Research 291, 289-298 (2003)
【非特許文献１２】生化学辞典（第３版），（株）東京化学同人発行，第１３９３頁（１９９８）
【非特許文献１３】Kobayashi N, Kadono Y, Naito A, Matsumoto K, Yamamoto T, Tanaka S, Inoue J. Segregation of TRAF6-mediated signaling pathways clarifies its role in osteoclastogenesis. The EMBO J. 20, 1271-1280 (2001)
【非特許文献１４】Brown MC, Perrotta JA, Turner CE. Identification of LIM3 as the principal determinant of paxillin focal adhesion localization and characterization of a novel motif on paxillin directing vinculin and focal adhesion kinase binding. J. Cell Biol. 135, 1109-1123 (1996)
【非特許文献１５】Sadler I, Crawford AW, Michelsen JW, Beckerle MC. Zyxin and cCRP: two interactive LIM domain proteins associated with the cytoskeleton. J. Cell Biol. 119, 1573-1587 (1992)
【非特許文献１６】Panchenko MV, Zhou MI, Cohen HT. von Hippel-Lindau partner Jade-1 is a transcriptional co-activator associated with histone acetyltransferase activity. J. Biol. Chem. 279, 56032-56041 (2004)
【非特許文献１７】Joung I, Strominger JL, Shin J. Molecular cloning of a phosphotyrosine-independent ligand of the p56lck SH2 domain. Proc Natl Acad Sci USA, 93, 5991-5995 (1996)
【非特許文献１８】Kawaguchi Y, Kovacs JJ, McLaurin A, Vance JM, Ito A, Yao TP. The deacetylase HDAC6 regulates aggresome formation and cell viability in response to misfolded protein stress. Cell 115, 727-738 (2003)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、新規な抗原提示細胞の機能制御剤の提供を目的とし、具体的には抗原提示細胞の活性化を介した免疫応答を制御（ここで言う制御とは、目的に応じて増強と抑制を含む）し得る薬剤の提供を目的とする。さらに本発明は、当該薬剤を自己免疫疾患の治療、アレルギー性疾患の治療、臓器移植の際の拒絶反応の抑制等の各種疾患への適用、さらに癌に対する免疫応答の増強法の開発や、効率的なワクチンの開発を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、上記課題に鑑み、鋭意検討を行った結果、亜鉛イオンレベルを制御することにより樹状細胞等の抗原提示細胞の機能を制御できることを見出した。さらに亜鉛イオン濃度の制御による抗原提示細胞の機能制御が可逆的であることを確認して本発明を完成するに至った。すなわち本発明は以下の通りである。
【０００５】
〔１〕細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を有効成分として含有する、抗原提示細胞の機能制御剤。
〔２〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンである、上記〔１〕記載の機能制御剤。
〔３〕亜鉛イオンが亜鉛イオノフォアによって細胞内に導入される、上記〔２〕記載の機能制御剤。
〔４〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンキレーターである、上記〔１〕記載の機能制御剤。
〔５〕亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔４〕記載の機能制御剤。
〔６〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質である、上記〔１〕記載の機能制御剤。
〔７〕亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔６〕記載の機能制御剤。
〔８〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質である、上記〔１〕記載の機能制御剤。
〔９〕亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔８〕記載の機能制御剤。
〔１０〕抗原提示細胞が樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、Ｂ細胞、胸腺上皮細胞、滑膜細胞、血管内皮細胞及びケラチノサイトからなる群より選ばれる少なくとも１種である、上記〔１〕〜〔９〕に記載の機能制御剤。
【０００６】
〔１１〕抗原提示細胞が樹状細胞である、上記〔１０〕記載の機能制御剤。
〔１２〕上記〔１〕〜〔１１〕に記載の機能制御剤を含む、免疫システムが関与する疾患の予防・治療薬。
〔１３〕免疫システムが関与する疾患が、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、臓器移植の際の拒絶反応、感染や腫瘍形成による免疫応答の低下及びワクチン使用時の異常な免疫応答からなる群より選ばれる少なくとも１種である、上記〔１２〕記載の予防・治療薬。
〔１４〕細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を有効成分として含有する、免疫システムが関与する疾患の予防・治療薬。
〔１５〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンである、上記〔１４〕記載の予防・治療薬。
〔１６〕亜鉛イオンが亜鉛イオノフォアによって細胞内に導入されるものである、上記〔１５〕記載の予防・治療薬。
〔１７〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンキレーターである、上記〔１４〕記載の予防・治療薬。
〔１８〕亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔１７〕記載の予防・治療薬。
〔１９〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質である、上記〔１４〕記載の予防・治療薬。
〔２０〕亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔１９〕記載の予防・治療薬。
【０００７】
〔２１〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質である、上記〔１４〕記載の予防・治療薬。
〔２２〕亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔２１〕記載の予防・治療薬。
〔２３〕免疫システムが関与する疾患が、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、臓器移植の際の拒絶反応、感染や腫瘍形成による免疫応答の低下及びワクチン使用時の異常な免疫応答からなる群より選ばれる少なくとも１種である、上記〔１４〕〜〔２２〕に記載の予防・治療薬。
〔２４〕抗原提示細胞が樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、Ｂ細胞、胸腺上皮細胞、滑膜細胞、血管内皮細胞及びケラチノサイトからなる群より選ばれる少なくとも１種である、上記〔１４〕〜〔２３〕に記載の予防・治療薬。
〔２５〕抗原提示細胞が樹状細胞である、上記〔２４〕記載の予防・治療薬。
〔２６〕インビトロで、細胞内の亜鉛イオン濃度を制御することを含む、抗原提示細胞の機能を制御する方法。
〔２７〕亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオンの細胞内への導入によって行われるものである、上記〔２６〕記載の方法。
〔２８〕亜鉛イオンの細胞内への導入が亜鉛イオノフォアによって行われるものである、上記〔２７〕記載の方法。
〔２９〕亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオンキレーターによって行われるものである、上記〔２６〕記載の方法。
〔３０〕亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔２９〕記載の方法。
【０００８】
〔３１〕亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節することによって行われるものである、上記〔２６〕記載の方法。
〔３２〕亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔３１〕記載の方法。
〔３３〕亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節することによって行われるものである、上記〔２６〕記載の方法。
〔３４〕亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔３３〕記載の方法。
〔３５〕抗原提示細胞が樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、Ｂ細胞、胸腺上皮細胞、滑膜細胞、血管内皮細胞及びケラチノサイトからなる群より選ばれる少なくとも１種である、上記〔２６〕〜〔３４〕に記載の方法。
〔３６〕細胞内の亜鉛イオン濃度を測定することを含む、抗原提示細胞の機能を制御し得る化合物のスクリーニング方法。
〔３７〕抗原提示細胞が樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、Ｂ細胞、胸腺上皮細胞、滑膜細胞、血管内皮細胞及びケラチノサイトからなる群より選ばれる少なくとも１種である、上記〔３６〕記載の方法。
〔３８〕抗原提示細胞が樹状細胞である、上記〔３７〕記載の方法。
【発明の効果】
【０００９】
抗原提示細胞において、亜鉛イオン濃度を制御したり、亜鉛イオン要求性のタンパク質及び亜鉛イオントランスポーターの発現や機能を調節したりすることで抗原提示に関係する分子（例えばＭＨＣクラスＩ、クラスＩＩ、またＣＤ８６分子等）を発現増強することができる。さらに亜鉛イオノフォア等の薬剤により亜鉛イオンを抗原提示細胞内に導入することでリポポリサッカライド（ＬＰＳ）等による抗原提示細胞の活性化、サイトカイン産生を抑制することができる。従って、菌体の構成成分や合成ステロイドといった従来の免疫賦活化分子や免疫抑制剤等を使用することなしに、元来体の中に存在している亜鉛の細胞内レベルを調節することだけで、例えば樹状細胞等の抗原提示細胞の活性化を介した免疫系を増強したり抑制したりすることが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明において「亜鉛イオン濃度の制御」とは亜鉛イオンの細胞内での濃度（量）を増加させる、あるいは減少させるという文言通りの意味に加え、最終的に細胞内で亜鉛イオン濃度が増減することによって生じる現象と同様な現象を誘導することができる作用をも意味し、そのような場合には細胞内での亜鉛イオンの濃度の多少には拘束されない。本発明において、亜鉛イオン濃度の制御の対象となる細胞は、樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、Ｂ細胞、胸腺上皮細胞等の抗原提示細胞、さらには滑膜細胞、血管内皮細胞、ケラチノサイト等の抗原提示能を獲得することが予想される細胞である。好ましくは樹状細胞である。本明細書では制御の対象となる細胞を便宜上「抗原提示細胞」と称することもある。
【００１１】
「細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質」としては「亜鉛イオン」、「亜鉛イオンキレーター」、「亜鉛イオノフォア」、「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」、「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」等が挙げられるが、「亜鉛イオン」や「亜鉛イオノフォア」はそれを添加することにより抗原提示細胞内の亜鉛イオン濃度を直接増加させることができ、一方、「亜鉛イオンキレーター」はそれを添加することにより抗原提示細胞内の亜鉛イオン濃度を直接低減することができ、それによって抗原提示細胞の機能を制御することができる。「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」や「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」は、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節することによって、あるいは亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節することによって、亜鉛イオンの抗原提示細胞に及ぼす作用に変化を生じさせて抗原提示細胞の機能を制御することができる。「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」あるいは「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」において、発現あるいは機能を促進する方向に調節する物質であれば当該細胞の亜鉛イオンに対する応答性をより高め、発現あるいは機能を抑制する方向に調節する物質であれば当該細胞の亜鉛イオンに対する応答性をより抑制することができる。本発明において亜鉛イオン濃度の「制御」とは、正及び負のいずれの調節をも意味する。
【００１２】
抗原提示細胞は、１）感染等に由来する外来物質（異物）、並びに２）自己若しくは細胞の腫瘍化、ウイルス感染等に起因する内在性タンパク質をＴＣＲを持つ細胞（例えばＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＤＮＴ細胞、ＮＫＴ細胞等）に提示する。そこで自己、非自己の区別により感染防御や自己にとって好ましくない細胞の除去を行う。本発明では、これらの抗原提示細胞の機能を「制御する」ことにより、生命の維持にとってより好ましい免疫応答を惹起する。抗原提示細胞の機能を「制御する」こととは、より具体的には抗原提示後の免疫応答の質と量を規定することを意味する。ここでの「質」とは、ＣＤ４＋Ｔ細胞においてＴｈ１とＴｈ２細胞の応答制御と免疫寛容等、又ＣＤ８＋Ｔ細胞においては抗原特異的細胞障害活性を持つＣＴＬの応答制御と免疫寛容等を意味し、「量」とは文言通り免疫応答の強さを意味する。又、抗原提示細胞の機能を「制御する」こととは、抗原提示細胞そのものの活性化若しくは不活性化を意味する。具体的には、１）ＭＨＣクラスＩ、ＩＩ分子の発現制御、２）ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０等の副刺激分子の発現制御、３）ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−α／β、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β等のサイトカインの発現制御、４）外来若しくは内在性抗原の取り込み制御、５）抗原提示細胞の遊走能の制御等から選ばれる１以上の項目の機能を制御することを意味する。
【００１３】
「亜鉛イオン」は亜鉛イオノフォアによって抗原提示細胞内に導入される。すなわち亜鉛イオンは亜鉛イオノフォアとの錯体の形で抗原提示細胞内に導入される。亜鉛イオノフォアとしては当分野で通常用いられている、好ましくは市販されている種々の化合物が挙げられる。亜鉛ピリチオン、複素環アミン、ジチオカルバメート、ビタミン類等が例示される。
【００１４】
「亜鉛イオンキレーター」とは、抗原提示細胞内で亜鉛イオンと錯体を形成することによって細胞内から亜鉛イオンを除去することができる物質であって、例えば、２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）等が挙げられる。いずれも商業的に入手可能である。また、本発明の抗原提示細胞の機能制御剤、本発明の免疫システムが関与する疾患の予防・治療薬（以下、単に予防・治療薬と称することもある）に有効成分として含められる亜鉛イオン濃度を制御し得る物質としての亜鉛イオンキレーターの量は、それぞれ細胞内での亜鉛イオン濃度の制御が可能な範囲で適宜決定される。また、含める亜鉛イオンキレーターは１種類であっても２種類以上であってもよい。２種類以上含める場合にはその種類に応じて配合量を適宜設定する。
【００１５】
「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」とは亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を結果的に調節することができればその作用機序は特に限定されず、遺伝子レベルでの調節であってもタンパク質レベルでの調節であってもよい。遺伝子レベルでの調節としては、転写調節、遺伝子発現調節等が挙げられる。タンパク質レベルでの調節としては、代謝調節、リン酸化、脱リン酸化、糖付加、脂質付加、亜鉛との配位結合、分解、ユビキチン化、アセチル化等が挙げられる。「亜鉛イオン要求性タンパク質」は、抗原提示細胞の機能発現に亜鉛が必要なタンパク質であって、例えば亜鉛フィンガーを有するタンパク質、ＲＩＮＧフィンガーを有するタンパク質、ＬＩＭドメインを有するタンパク質、ＰＨＤ亜鉛フィンガーを有するタンパク質等が挙げられる。亜鉛フィンガーは、システインやヒスチジンといったアミノ酸が亜鉛と配位することによって初めて高次構造を有することができるユニークな核酸結合能を有するモチーフであり、亜鉛フィンガーを有するタンパク質としては、例えば、上皮−間葉転換と呼ばれる現象（ヒトやその他の生物の初期発生における体の形作りや、傷口の治癒・癌の転移等の際に、通常密に結合している細胞同士が隣の細胞との接着を解除し可動性を獲得し他へ移動する現象）のマスターレギュレーターである転写因子Ｓｎａｉｌ、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１等が例示される。ＲＩＮＧフィンガーは、亜鉛フィンガーの変形ともいえ、タンパク質間の相互作用に関与しているものと示唆されており、ＲＩＮＧフィンガーを有するタンパク質としては、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｇａｓｅ Ｅ３）活性を有するものや、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ｃｏｎｊｕｇａｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅｓ Ｅ２）、ＴＲＡＦ６（ＴＮＦαのシグナル伝達分子）との結合を示すものが報告されている。ＬＩＭドメインは、６つのシステインと１つのヒスチジンの位置が保存された６０アミノ酸からなり、亜鉛フィンガーとよく似た構造をとるもののＤＮＡ結合能は知られていない。ＰＫＣとの結合を介在するドメインとしても機能する。ＬＩＭドメインを有するタンパク質としては、細胞骨格制御に関与するＰａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ等が例示される。ＰＨＤ亜鉛フィンガーは、クロマチンを媒介した転写調節に関与すことが示唆される核タンパクである亜鉛フィンガー様ドメインであり、ＤＮＡ結合能を有するものと予測されている。ＰＨＤ亜鉛フィンガーを有するタンパク質としては、ヒストンのアセチル化に関与するＪａｄｅ−１等が例示される。
【００１６】
「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」は、公知の化合物であっても今後開発される新規な化合物であってもよい。また、低分子化合物であっても高分子化合物であってもかまわない。ここで低分子化合物とは分子量３０００未満程度の化合物であって、例えば医薬品として通常使用し得る有機化合物及びその誘導体や無機化合物が挙げられ、有機合成法等を駆使して製造される化合物やその誘導体、天然由来の化合物やその誘導体、プロモーター等の小さな核酸分子や各種の金属等であり、望ましくは医薬品として使用し得る有機化合物及びその誘導体、核酸分子をいう。また、高分子化合物としては分子量３０００以上程度の化合物であって、タンパク質、ポリ核酸類、多糖類、及びこれらを組み合わせたもの等が挙げられ、望ましくはタンパク質である。これらの低分子化合物あるいは高分子化合物は、公知のものであれば商業的に入手可能であるか、各報告文献に従って採取、製造、精製等の工程を経て得ることができる。これらは、天然由来であっても、また遺伝子工学的に調製されるものであってもよく、また半合成等によっても得ることができる。具体的には、亜鉛イオン要求性タンパク質Ｓｎａｉｌは、ＴＧＦ−β又はＦＧＦを通してＭＡＰＫによりその発現が調節される（非特許文献１）。また、Ｓｎａｉｌは亜鉛トランスポーターであるＬＩＶ１(後述)により活性化される（非特許文献２）。他の亜鉛イオン要求性タンパク質として例示されるＲａｆ１、ＧＥＦ−Ｈ１、ＰＫＣα、フォスファターゼ、メタロチオネインについてはそれぞれ非特許文献８、非特許文献９、非特許文献１０、非特許文献１１、非特許文献１２に詳細が記載されている。ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ、Ｊａｄｅ−１についてはそれぞれ非特許文献１３、非特許文献１４、非特許文献１５、非特許文献１６に詳細が記載されている。さらにＳＱＳＴＭ１及びＨＤＡＣについてはそれぞれ非特許文献１７及び非特許文献１８に詳細が記載されている。
【００１７】
「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」とは亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を結果的に調節することができればその作用機序は特に限定されず、遺伝子レベルでの調節であってもタンパク質レベルでの調節であってもよい。遺伝子レベルでの調節としては、転写調節、遺伝子発現調節等が挙げられる。タンパク質レベルでの調節としては、代謝調節、リン酸化、脱リン酸化、糖付加、脂質付加、亜鉛との配位結合、分解、ユビキチン化、アセチル化等が挙げられる。「亜鉛イオントランスポーター」としては、例えば、ＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類（ＢＡＢ７０８４８、ｈＺｉｐ４、ＢＩＧＭ１０３、ＫＩＡＡ００６２、ＫＩＡＡ１２６５、ｈＬｉｖ−１、ＡＡＨ０８８５３、ｈＫＥ４、ＸＰ＿２０８６４９、ｈＺＩＰ１、ｈＺＩＰ２、ｈＺＩＰ３、ＢＡＡ９２１００、ＢＡＣ０４５０４等）、ヒトＣＤＦ類（ｈＺｎｔ−５、ｈＺｎｔ−７、ｈＺｎｔ−１、ｈＺｎｔ−６、ｈＺｎｔ−３、ｈＺｎｔ−２、ｈＺｎｔ−８、ｈＺｎｔ−４、ｈＺｎｔ−９等）等が挙げられる。ＬＩＶ１は、当初はエストロゲン制御を受ける乳がんタンパク質として同定され、最近になってＬＺＴ（ＺＩＰ亜鉛トランスポーターのＬＩＶ１サブファミリー）と称されるＺＩＰ亜鉛トランスポーターサブファミリー（Ｚｒｔ−、Ｉｒｔ様タンパク質）に属し（非特許文献３）、亜鉛イオントランスポーターとして機能することが明らかになった（非特許文献４）。他にＣＤＦ（ｃａｔｉｏｎ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｆａｃｉｌｉｔａｔｏｒ）等が挙げられる。例えば、亜鉛イオントランスポーターであるＬＩＶ１は、ＳＴＡＴ３により発現調節を受ける（非特許文献２）。
【００１８】
「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」は、公知の化合物であっても今後開発される新規な化合物であってもよい。また、低分子化合物であっても高分子化合物であってもかまわない。ここで低分子化合物とは分子量３０００未満程度の化合物であって、例えば医薬品として通常使用し得る有機化合物及びその誘導体や無機化合物が挙げられ、有機合成法等を駆使して製造される化合物やその誘導体、天然由来の化合物やその誘導体、プロモーター等の小さな核酸分子や各種の金属等であり、望ましくは医薬品として使用し得る有機化合物及びその誘導体、核酸分子をいう。また、高分子化合物としては分子量３０００以上程度の化合物であって、タンパク質、ポリ核酸類、多糖類、及びこれらを組み合わせたもの等が挙げられ、望ましくはタンパク質である。これらの低分子化合物あるいは高分子化合物は、公知のものであれば商業的に入手可能であるか、各報告文献に従って採取、製造、精製等の工程を経て得ることができる。これらは、天然由来であっても、また遺伝子工学的に調製されるものであってもよく、また半合成等によっても得ることができる。
【００１９】
亜鉛イオントランスポーターであるＬＩＶ１は亜鉛イオン要求性タンパク質であるＳｎａｉｌの活性（特にレプレッサー活性）を増強することから（非特許文献２）、本発明における「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」の一例として以下のものが挙げられる。
（１）下記ａ）〜ｄ）のいずれかに記載のＤＮＡ
ａ）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列を有するタンパク質（ＬＩＶ１タンパク質）をコードするＤＮＡ
ｂ）配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡ（ＬＩＶ１遺伝子）
ｃ）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸配列が置換、欠失、挿入及び／又は付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質（ＬＩＶ１に類似するタンパク質）をコードしたＤＮＡ
ｄ）配列番号１、３又は５記載の配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡ
（２）下記ａ）〜ｄ）のいずれかに記載のＤＮＡが挿入されたベクター
ａ）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするＤＮＡ
ｂ）配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡ
ｃ）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸配列が置換、欠失、挿入及び／又は付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質をコードしたＤＮＡ
ｄ）配列番号１、３又は５記載の配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡ
（３）下記ａ）〜ｄ）のいずれかに記載のＤＮＡによってコードされたタンパク質
ａ）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするＤＮＡ
ｂ）配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡ
ｃ）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸配列が置換、欠失、挿入及び／又は付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質をコードしたＤＮＡ
ｄ）配列番号１、３又は５記載の配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡ
（４）配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡを標的配列としたアンチセンスオリゴヌクレオチド
（５）配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡの一部と同一又は類似する配列を有する二本鎖ＲＮＡ
（６）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列を有するタンパク質に対する抗体
（７）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列を有するタンパク質と会合し、その機能を調節する物質（天然物、非天然物を含む）
（１）〜（３）は亜鉛イオン要求性タンパク質であるＳｎａｉｌの発現及び／又は機能を正に調節する（発現を増強する、及び／又は機能を活性化する）物質であり、（４）及び（５）はＳｎａｉｌの発現及び／又は機能を負に調節する（発現を減少させる、及び／又は機能を抑制する）物質である。
【００２０】
ＬＩＶ１タンパク質の調製は、当業者に周知の各種方法によって行うことが可能である。例えば、配列番号１、３又は５に記載の塩基配列からなるＤＮＡ（ＬＩＶ１遺伝子）が挿入されたベクターを保持した形質転換体にタンパク質を生産させ、精製することによって調製できる。使用するベクターはタンパク質生産に用いる翻訳系により適宜選択することができる。またＬＩＶ１は、乳房、前立腺、脳下垂体、脳等のホルモン系組織に発現することが知られている（非特許文献３）。抗ＬＩＶ１タンパク質抗体を周知方法で調製し、該抗体でアフィニティカラムを作製すれば、ＬＩＶ１を発現する細胞抽出物からＬＩＶ１タンパク質を精製することができる。
【００２１】
ＬＩＶ１に類似するタンパク質は亜鉛イオン要求性タンパク質（例えばＳｎａｉｌ）の活性を調節し得るタンパク質であって、例として、配列番号２、４又は６に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸配列が置換、欠失、挿入及び／又は付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１、３又は５に記載の塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡによってコードされるタンパク質を挙げることができる。
【００２２】
ＬＩＶ１に類似するタンパク質の調製は、例えば、ＬＩＶ１をコードする塩基配列を利用してハイブリダイゼーションを行い、得られた相同性の高いＤＮＡによって形質転換体を作製し、該形質転換体に所望のタンパク質を生産させる方法をとることができる。相同性の高いＤＮＡを得る方法の一例として、配列番号１、３又は５に記載された塩基配列の一部をプローブとし、ヒトやヒト以外の脊椎動物の細胞等からストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする方法を挙げることができる。
【００２３】
上記ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、当業者であれば、適宜選択することができる。一例を示せば２５％ホルムアミド、より厳しい条件では５０％ホルムアミド、４×ＳＳＣ、５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ７．０、１０×デンハルト溶液、２０μｇ／ｍＬ変性サケ精子ＤＮＡを含むハイブリダイゼーション溶液中、４２℃で一晩プレハイブリダイゼーションを行った後、標識したプローブを添加し、４２℃で一晩保温することによりハイブリダイゼーションを行う。その後の洗浄における洗浄液及び温度条件は「１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、３７℃」程度で、より厳しい条件としては「０．５×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、４２℃」程度で、さらに厳しい条件としては「０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃」程度で実施することができる。このようにハイブリダイゼーションの洗浄の条件が厳しくなるほどプローブ配列と高い相同性を有するＤＮＡの単離を期待し得る。但しＳＳＣ、ＳＤＳ及び温度の条件の組み合わせは例示であり、当業者であれば、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーを決定する上記若しくは他の要素（例えばプローブ濃度、プローブの長さ、ハイブリダイゼーション反応時間等）を適宜組み合わせることにより、上記と同様のストリンジェンシーを実現することが可能である。
【００２４】
このようなハイブリダイゼーション技術を利用して単離されるＤＮＡがコードするポリペプチドは、通常、ＬＩＶ１とアミノ酸配列において高い相同性を有する。高い相同性とは、少なくとも４０％以上、好ましくは６０％以上、さらに好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、さらに好ましくは９７％以上（例えば９８〜９９％）の配列の相同性を指す。アミノ酸配列の同一性は、例えばＫａｒｌｉｎ ａｎｄ ＡｌｔｓｃｈｕｌによるアルゴリズムＢＬＡＳＴ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２６４−２２６８，１９９０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３−５８７７，１９９３）によって決定することができる。このアルゴリズムに基づいてＢＬＡＳＴＸと呼ばれるプログラムが開発されている（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ． Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． ２１５：４０３−４１０，１９９０）。ＢＬＡＳＴＸによってアミノ酸配列を解析する場合にはパラメーターは例えばｓｃｏｒｅ＝５０、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝３とする。ＢＬＡＳＴとＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを用いる場合には、各プログラムのデフォルトパラメーターを用いる。これらの解析方法の具体的な手法は公知である（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．）。
【００２５】
ＬＩＶ１に類似するタンパク質の調製は、別の公知手段によることも可能である。例えば、エキソヌクレアーゼを用いるｄｅｌｅｔｉｏｎ ｍｕｔａｎｔ作製法、カセット変異法等のｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓによってＬＩＶ１ ＤＮＡを人為的に改変させ、該改変ＬＩＶ１ ＤＮＡを用いて、所望タンパク質を調製することができる。
【００２６】
「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」として利用可能な物質の別の好適な例として、配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡを挙げることができる。上記ＤＮＡはタンパク質ＬＩＶ１をコードしており、細胞内に導入されればＬＩＶ１タンパク質発現を通じて間接的に亜鉛イオン要求性タンパク質、例えばＳｎａｉｌの活性を調製し得る物質である。
【００２７】
上記ＤＮＡは、配列番号１、３又は５記載の配列の一部をプローブとし、当業者に周知のハイブリダイゼーション技術によって、ＬＩＶ１が発現している細胞のｃＤＮＡから調製することができる。また、配列番号１、３又は５記載の配列の一部をプライマーとし、ｍＲＮＡからＲＴ−ＰＣＲを実施して得ることもできる。あるいは市販のＤＮＡ合成機を用いて人工的に合成してもよい。
【００２８】
さらに、上記ＤＮＡに類似するＤＮＡもまた、「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」の一例である。該類似するＤＮＡとして、配列番号１、３又は５記載の配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡであって、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質、例えばＳｎａｉｌの活性を調節し得るタンパク質をコードしたＤＮＡを挙げることができる。このＤＮＡの調製法は既に上述したとおりである。
【００２９】
上述した各ＤＮＡを使用するときは、適当なベクターに挿入して用いることができる。ベクターに挿入したものも本発明の態様の一つである。使用するベクターは、目的に応じて適当なベクターを選択することができる。具体的には、哺乳動物由来のベクター（例えば、ｐｃＤＮＡ３（インビトロジェン社製）やｐＥＧＦ−ＢＯＳ（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，１８（１７），ｐ．５３２２，１９９０）、ｐＥＦ、ｐＣＤＭ８、ｐＣＸＮ、昆虫細胞由来のベクター（例えば「Ｂａｃ−ｔｏ−ＢＡＣ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ」（インビトロジェン社製）、ｐＢａｃＰＡＫ８）、植物由来の発現ベクター（例えばｐＭＨ１、ｐＭＨ２）、動物ウイルス由来のベクター（例えば、ｐＨＳＶ、ｐＭＶ、ｐＡｄｅｘＬｃｗ）、レトロウイルス由来のベクター（例えば、ｐＺＩＰｎｅｏ）、酵母由来のベクター（例えば「Ｐｉｃｈｉａ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｋｉｔ」（インビトロジェン社製）、ｐＮＶ１１、ＳＰ−Ｑ０１）、枯草菌由来のベクター（例えばｐＰＬ６０８、ｐＫＴＨ５０）、大腸菌ベクター（Ｍ１３系ベクター、ｐＵＣ系ベクター、ｐＢＲ３２２、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＣＲ−Ｓｃｒｉｐｔ）等を挙げることができる。本発明において、哺乳動物細胞内で発現可能なベクターを用いることが好ましく、又、発現ベクターを用いることが好ましい。ベクターを細胞へ導入するには、例えば、リン酸カルシウム法（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．５２，ｐ．４５６，１９７３）、ＤＥＡＥデキストラン法、カチオニックリポソームＤＯＴＡＰ（ロッシュ・ダイアグノスティックス社製）を用いた方法、エレクトロポレーション法（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．１５，ｐ．１３１１，１９８７）、リポフェクション法（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｎｕｔｒ．，Ｖｏｌ．７，ｐ．１７５，１９８９）、ウイルスによる感染導入方法（ｐＭＸ、ｐＭＳＣＶ等；Ｓｃｉ．Ａｍ．，ｐ．３４，１９９４）、パーティクルガン等から選択することにより行うことができる。
【００３０】
「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」、例えばＳｎａｉｌの活性を抑制する剤の一例として、ＬＩＶ１をコードするＤＮＡ又はｍＲＮＡを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを挙げることができる。ＬＩＶ１をコードするＤＮＡに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドは、内在するＬＩＶ１遺伝子の発現を妨げ、Ｓｎａｉｌ活性を負に制御すると考えられる。このようなアンチセンスオリゴヌクレオチドとして、配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡ又は該ＤＮＡから生成されるｍＲＮＡを標的配列とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを挙げることができる。一例としては、配列番号７又は８に記載するオリゴヌクレオチドを挙げることができる。これ以外にも、上記配列番号１、３又は５に記載の配列からなるＤＮＡ等のいずれかの箇所にハイブリダイズしＬＩＶ１の発現を有効に阻害できれば、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドに含まれ、上記配列番号１、３又は５に記載の配列からなるＤＮＡ又は対応するｍＲＮＡと完全に相補的でなくてもよい。
【００３１】
上記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、目的に応じ、適当なベクターに挿入して用いることができる。例えば遺伝子治療に応用する目的であれば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター等のウイルスベクターや、カチオニックリポソーム、リガンドＤＮＡ複合体等の非ウイルスベクター等の中から、適宜選択可能である。また、キャリアーを用いずに、裸のプラスミドＤＮＡ（ｎａｋｅｄ ｐＤＮＡ）として大容量の水溶液とともに投与する方法をとることも考えられる。
【００３２】
別の「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」、特にＳｎａｉｌの活性を抑制する剤の例として、ＬＩＶ１をコードするＤＮＡの一部と同一又は類似する配列を有する二本鎖ＲＮＡを挙げることができる。標的遺伝子配列と同一又は類似した配列を有する二本鎖ＲＮＡは、標的遺伝子の発現を妨げるＲＮＡ干渉（ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ；ＲＮＡｉ）を引き起こし得る。ＲＮＡｉは、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を細胞内に導入した際に、そのＲＮＡ配列に対応する細胞内のｍＲＮＡが特異的に分解され、タンパク質として発現されなくなる現象をいう。二本鎖を形成する領域は、すべての領域において二本鎖を形成していてもよいし、一部の領域（例えば両末端又は片方の末端等）が一本鎖等になっていてもよい。従って、本発明の二本鎖ＲＮＡにおいても、二本鎖でない領域が含まれていてよい。ＲＮＡｉに用いられるオリゴＲＮＡは１０〜１００ｂｐのＲＮＡが用いられることが多く、通常１９〜２３ｂｐのＲＮＡが用いられる。ＲＮＡｉ法は、Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．３９１，ｐ．８０６，１９９８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ Ｖｏｌ．９５，ｐ．１５５０２，１９９８、Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．３９５，ｐ．８５４，１９９８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ Ｖｏｌ．９６，ｐ．５０４９，１９９９、Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌ．９５，ｐ．１０１７，１９９８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ Ｖｏｌ．９６，ｐ．１４５１，１９９９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ Ｖｏｌ．９５，ｐ．１３９５９，１９９８、Ｎａｔｕｒｅ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ．２，ｐ．７０，２０００等の記載に従って行うことができる。
【００３３】
「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」としては、例えば該物質がＬＩＶ１の場合、上記した「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」と同様なものが例示される。
【００３４】
「亜鉛トランスポーター」がＬＩＶ１以外の場合、例えば、ｈＺｎｔ−１、ｈＺｎｔ−２、ｈＺｎｔ−５、ｈＺｎｔ−６、ｈＺｎｔ−７、ｈＺＩＰ１、ｈＺＩＰ２、ｈＺＩＰ３、ＢＡＡ９２１００、ＢＡＣ０４５０４、ｈＬｉｖ−１、ｈＫＥ４、ＫＩＡＡ１２６５、ＫＩＡＡ００６２、ｈＺｉｐ４の場合には、該亜鉛イオントランスポーターの既知のアミノ酸配列あるいは塩基配列をもとにして、ＬＩＶ１の場合と同様にして各種の「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」あるいは「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」を調製することができる。
各種アミノ酸配列及び塩基配列の情報は、ＮＣＢＩ等で閲覧可能な種々のデータベースから入手することができる。
【００３５】
本発明の抗原提示細胞の機能制御剤並びに免疫システムが関与する疾患の予防・治療薬は、上記した一連の有効成分（亜鉛イオン、亜鉛イオノフォア、亜鉛イオンキレーター、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質、亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質）に加え、所望により薬学的に許容される賦形剤、添加剤を含む。薬学的に許容される賦形剤、添加剤としては、担体、結合剤、香料、緩衝剤、増粘剤、着色剤、安定剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、防腐剤等が挙げられる。又、有効成分として異なる種類の「亜鉛イオン濃度を制御する物質」を併用することもできる。
【００３６】
薬学的に許容される担体としては、例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、砂糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、澱粉、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、カカオバター等が挙げられる。
【００３７】
さらに、錠剤は必要に応じて通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、腸溶性コーティング錠、フィルムコーティング錠あるいは二層錠、多層錠とすることができる。散剤は、薬学的に許容される散剤の基剤と共に製剤化される。基剤としては、タルク、ラクトース、澱粉等が挙げられる。ドロップは水性又は非水性の基剤と一種またはそれ以上の薬学的に許容される拡散剤、懸濁化剤、溶解剤等と共に製剤化できる。カプセルは、有効成分となる化合物を薬学的に許容される担体と共に中に充填することにより製造できる。当該化合物は薬学的に許容される賦形剤と共に混合し、または賦形剤なしでカプセルの中に充填することができる。カシェ剤も同様の方法で製造できる。本発明を座剤として調製する場合、植物油（ひまし油、オリーブ油、ピーナッツ油等）や鉱物油（ワセリン、白色ワセリン等）、ロウ類、部分合成もしくは全合成グリセリン脂肪酸エステル等の基剤と共に通常用いられる手法によって製剤化される。
【００３８】
注射用液剤としては、溶液、懸濁液、乳剤等が挙げられる。例えば、水溶液、水−プロピレングリコール溶液等が挙げられる。液剤は、水を含んでも良い、ポリエチレングリコール及び／またはプロピレングリコールの溶液の形で製造することもできる。
【００３９】
経口投与に適切な液剤は、有効成分となる化合物を水に加え、着色剤、香料、安定化剤、甘味剤、溶解剤、増粘剤等を必要に応じて加え製造することができる。また経口投与に適切な液剤は、当該化合物を分散剤とともに水に加え、粘重にすることによっても製造できる。増粘剤としては、例えば、薬学的に許容される天然または合成ガム、レジン、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースまたは公知の懸濁化剤等が挙げられる。
【００４０】
局所投与剤としては、上記の液剤及び、クリーム、エアロゾル、スプレー、粉剤、ローション、軟膏等が挙げられる。上記の局所投与剤は、有効成分となる化合物と薬学的に許容される希釈剤及び担体と混合することによって製造できる。軟膏及びクリームは、例えば、水性または油性の基剤に増粘剤及び／またはゲル化剤を加えて製剤化する。該基剤としては、例えば、水、液体パラフィン、植物油等が挙げられる。増粘剤としては、例えばソフトパラフィン、ステアリン酸アルミニウム、セトステアリルアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ラノリン、水素添加ラノリン、蜜蝋等が挙げられる。局所投与剤には、必要に応じて、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、クロロクレゾール、ベンザルコニウムクロリド等の防腐剤、細菌増殖防止剤を添加することもできる。ローションは、水性又は油性の基剤に、一種類またはそれ以上の薬学的に許容される安定剤、懸濁化剤、乳化剤、拡散剤、増粘剤、着色剤、香料等を加えることができる。
【００４１】
かくして得られる本発明の抗原提示細胞の機能制御剤並びに免疫システムが関与する疾患の予防・治療薬は、経口または非経口的に投与される。
経口的に投与する場合、通常当分野で用いられる投与形態で投与することができる。非経口的に投与する場合には、局所投与剤（経皮剤等）、直腸投与剤、注射剤、経鼻剤等の投与形態で投与することができる。
【００４２】
経口剤または直腸投与剤としては、例えばカプセル、錠剤、ピル、散剤、ドロップ、カシェ剤、座剤、液剤等が挙げられる。注射剤としては、例えば、無菌の溶液又は懸濁液等が挙げられる。局所投与剤としては、例えば、クリーム、軟膏、ローション、経皮剤（通常のパッチ剤、マトリクス剤）等が挙げられる。
【００４３】
投与量、投与回数は使用する亜鉛イオン濃度を制御し得る物質の種類、患者の症状、年齢、体重、投与形態等によって異なり適宜設定され得る。
【００４４】
「亜鉛イオン」、「亜鉛イオンキレーター」、「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」及び「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」はいずれも、ヒトをはじめウシ、ウマ、イヌ、マウス、ラット等の哺乳動物において、抗原提示細胞の機能、具体的には抗原提示に関係する分子の発現、ＬＰＳ等による抗原提示細胞の活性化、サイトカイン産生、抗原の取り込み、遊走能等を制御することが可能であり、従って、抗原提示細胞の機能に関与する疾患、具体的には免疫システムが関与する疾患を予防・治療することが可能となる。免疫システムが関与する疾患としては、自己免疫疾患、アレルギー疾患、癌、臓器移植の際の拒絶反応、感染や腫瘍形成による免疫応答の低下、ワクチン使用時の異常な免疫応答（例えば副作用）等が挙げられる。例えば本発明は、ＳＩＲＳ（全身性炎症反応症候群）、全身性エリテマトーデス、混合型結合組織病、慢性関節リウマチ、シェーグレン症候群、リウマチ熱、グッドパスチャー症候群、バセドウ病、橋本病、アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、潰瘍性大腸炎、クローン病、交換性眼炎、多発性硬化症、乾癬、アナフィラキシーショック、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、気管支喘息、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎等を処置するため、臓器移植時の拒絶反応の抑制のため移植前処理、移植後投与のため、さらには癌に対する免疫応答制御等のために使用できると期待される。癌としては、乳癌、前立腺癌、膵癌、胃癌、肺癌、大腸癌（結腸癌、直腸癌、肛門癌）、食道癌、十二指腸癌、頭頚部癌（舌癌、咽頭癌）、脳腫瘍、神経鞘腫、非小細胞肺癌、肺小細胞癌、肝臓癌、腎臓癌、胆管癌、子宮癌（子宮体癌、子宮頸癌）、卵巣癌、膀胱癌、皮膚癌、血管腫、悪性リンパ腫、悪性黒色腫、甲状腺癌、骨腫瘍、血管腫、血管線維腫、網膜肉腫、陰茎癌、小児固形癌、カポジ肉腫、ＡＩＤＳに起因するカポジ肉腫、上顎洞腫瘍、線維性組織球腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫の癌並びに白血病等の悪性腫瘍等がそれぞれ挙げられる。
また、亜鉛イオノフォア等の薬剤により亜鉛イオンを抗原提示細胞内に導入することによりＬＰＳ等による抗原提示細胞の活性化を抑制したり、サイトカイン産生を抑制したりすることが可能となり、さらにＴｈ１及びＴｈ２のバランス、ＣＴＬ、Ｂ細胞活性化の制御も可能となる。すなわち、本発明の抗原提示細胞の機能制御剤並びに免疫システムが関与する疾患の予防・治療薬は、抗原提示細胞内への亜鉛イオンの導入により治療効果が認められるような各種疾患に対する適用をも投与対象とすることができる。
【００４５】
さらに、亜鉛イオン濃度を制御することによって抗原提示細胞の機能を制御することができる、という本発明者らが得た知見により、細胞内の亜鉛イオン濃度を測定することによって抗原提示細胞の機能制御が可能な化合物をスクリーニングすることができる。例えば以下の工程により本スクリーニング方法は実施される。
１）抗原提示細胞を２群に分け一方を試験化合物で処理する工程（未処理の残る一方を対照とする）
２）処理後の細胞、及び未処理の対照細胞についてそれぞれ細胞内の亜鉛イオン濃度を測定する工程
３）対照細胞の亜鉛イオン濃度と比較して有意に亜鉛イオン濃度に変動があったものを選択し抗原提示細胞の機能を制御し得る化合物と認定する工程。
抗原提示細胞としては、上記のものが用いられる。好ましくは樹状細胞である。適当に２群に分け一方を試験化合物で処理する。もう一方は処理せず対照細胞として使用する。さらに亜鉛イオン濃度に影響を及ぼすことが知られている化合物、例えば亜鉛イオンキレーターであるＴＰＥＮ等をポジティブな対照化合物として用いてもよい。試験化合物は、公知の化合物であっても今後開発される新規な化合物であってもよい。また、低分子化合物であっても高分子化合物であってもかまわない。ここで低分子化合物とは分子量３０００未満程度の化合物であって、例えば医薬品として通常使用し得る有機化合物及びその誘導体や無機化合物が挙げられ、有機合成法等を駆使して製造される化合物やその誘導体、天然由来の化合物やその誘導体、プロモーター等の小さな核酸分子や各種の金属等であり、望ましくは医薬品として使用し得る有機化合物及びその誘導体、核酸分子をいう。また、高分子化合物としては分子量３０００以上程度の化合物であって、タンパク質、ポリ核酸類、多糖類、及びこれらを組み合わせたもの等が挙げられ、望ましくはタンパク質である。これらの低分子化合物あるいは高分子化合物は、公知のものであれば商業的に入手可能であるか、各報告文献に従って採取、製造、精製等の工程を経て得ることができる。これらは、天然由来であっても、また遺伝子工学的に調製されるものであってもよく、また半合成等によっても得ることができる。
【００４６】
細胞の試験化合物での処理時間は、用いる細胞や試験化合物の種類や濃度によって適宜設定される。ＴＰＥＮ等のポジティブな対照化合物を用いる場合にはその対照化合物で処理した場合に亜鉛イオン濃度に変動が確認されることを目安にして行うことができる。細胞を処理する試験化合物の濃度もまた、用いる細胞や試験化合物の種類、処理時間によって適宜設定される。
【００４７】
細胞内の亜鉛イオン濃度の測定は、通常当分野で実施されている方法を利用して、またそれに準じて行うことができる。例えば原子吸光法（フレーム法）による直接測定、特異プローブ（例えば蛍光試薬）を用いた蛍光分光光度計によって測定することができる。
【実施例】
【００４８】
以下、実施例にそって本発明をさらに詳細に説明するが、これら実施例は本発明の範囲を何ら限定するものではない。本出願全体を通して引用されたすべての刊行物は参照として本明細書に組み入れられる。また、本発明において使用する試薬や装置、材料は特に言及されない限り、商業的に入手可能である。
【００４９】
実施例１
抗原提示細胞の一つである樹状細胞を亜鉛イオンキレーターであるＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）で処理した場合の、細胞表面上のＭＨＣクラスＩ分子、クラスＩＩ分子及びＣＤ８６分子の発現状況を調べた。
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（日本クレアより入手）より骨髄細胞を得、１０％ＦＣＳ（ＥＱＵＩＴＥＣＨ−ＢＩＯ Ｉｎｃ．，♯ＳＦＢ−３０−１３８８）、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を加えたＲＰＭＩ培地（ＳＩＧＭＡ，Ｒ８７５８）で６日間３７℃、５％ＣＯ２環境下で細胞培養し、骨髄由来の樹状細胞（ＢＭＤＣ）を分化誘導した。このＢＭＤＣにＴＰＥＮ（ＳＩＧＭＡ，Ｐ４４１３）を６時間から１２時間、０〜２μＭの濃度になるように培地に添加した。同時に抗原提示細胞の活性化のコントロールの条件としてリポポリサッカライド（ＬＰＳ；１００ｎｇ／ｍＬ；ＳＩＧＭＡ，Ｌ２６３７，Ｅ．Ｃｏｌｉ Ｏ５５：Ｂ５）を加えた群も作成した。１２時間（若しくは６時間)後に細胞表面に発現してきたＭＨＣクラスＩ、クラスＩＩ及びＣＤ８６分子を、ＦＡＣＳ解析により評価した。結果を図１に示す。図１中の数値はそれぞれの分子を高発現している細胞の割合を示す。亜鉛イオンキレーターで処理することによりＬＰＳと同様にＢＭＤＣ上のＭＨＣクラスＩＩ分子の発現が増強した。この発現増強は薬剤の投与量依存的（処理時間１２時間）、処理時間依存的（処理濃度１．５μＭ）に見られた。
【００５０】
実施例２
実施例１と同様にして調製したＢＭＤＣに亜鉛イオノフォアであるピリチオン（５μＭ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｒｏｂｅｓ，ｐ−２４１９３）とＺｎ２＋（ＺｎＳＯ４）を培養液中に最終濃度５μＭになるように加え、さらにＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）で刺激した。６時間後、細胞表面に発現してきたＭＨＣクラスＩＩ及びＣＤ８６分子を、ＦＡＣＳ解析により評価した。結果を図２に示す。図２中の数値はそれぞれの分子を高発現している細胞の割合を示す。また同時にＢＭＤＣのＩＬ−１２産生を４％パラホルムアルデヒドで固定化した後に抗ＩＬ−１２ｐ４０抗体（ＢＤ．Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，＃５５４４７９）とアイソタイプコントロール抗体（ＢＤ．Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，＃５５３９２５）を用いて細胞内染色法により検出した。図中の数値はＩＬ−１２を産生している細胞群の割合を示す。
ＬＰＳ刺激によるＢＭＤＣの活性化に伴うＭＨＣＩＩ、ＣＤ８６分子の細胞表面での発現増強やＩＬ−１２のサイトカイン産生が亜鉛イオノフォアの存在下では全く見られなかった。
実施例１及び２と同様な実験（ｉｎ ｖｉｔｒｏ系）において１〜１０μＭの亜鉛イオン若しくはＴＰＥＮ処理で樹状細胞の活性化若しくは不活性化が見られた。
【００５１】
実施例３
亜鉛イオン濃度を制御する物質としてマウスのＬｉｖ１を発現するレトロウイルスベクターを用いてＬＰＳ刺激によるＭＨＣクラスＩＩ分子の発現増強に及ぼす影響を調べた。
理研より提供されたマウスＬｉｖ１遺伝子（ｍＬｉｖ１、遺伝子配列：配列番号５、アミノ酸配列：配列番号６）を含むクローン（ｍｆｊ０４６２３）から制限酵素ＸｈｏＩ及びＮｏｔＩによりｍＬｉｖ１遺伝子を切断回収し、東大医科研の北村俊雄教授が作成し、提供されたｐＭＸ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰレトロウイルスベクターに組み込んだ。このｐＭＸ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰ−ｍＬｉｖ１ベクターを米国スタンフォード大学のＧａｒｒｙ Ｐ． Ｎｏｌａｎ博士より提供されたＰｈｏｅｎｉｘ細胞にリポフェクトアミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて導入しウイルスを発現させた。２４時間から４８時間後に、このウイルスを含む培養上澄みを回収し、ＧＭ−ＣＳＦ〔ＧＭ−ＣＳＦ産生細胞株（ＧＭ−ＣＳＦ／ＣＨＯ）を培養し、その培養上清を０．３％になるように培地に加える〕、ＦＣＳ（１０％）、ｐｒｏｔａｍｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ（ＳＩＧＭＡ；２μｇ／ｍＬ）を添加して、ウイルス感染液とした。Ｃ５７／ＢＬ６マウス（日本クレア）骨髄より調製したＢＭＤＣにＤａｙ２及びＤａｙ４に培地をウイルス感染液に交換しＢＭＤＣに感染させた。Ｄａｙ６でウイルスフリーの培地に交換し、さらにＬＰＳ（ＳＩＧＭＡ；１００ｎｇ／ｍＬ）で刺激した。刺激後６時間で細胞を回収し、細胞表面のＭＨＣクラスＩＩ分子の発現レベルをＦＡＣＳにより調べた。ここで、ＬＰＳ刺激しない細胞群をコントロールとして、またＧＦＰ陽性細胞をｍＬｉｖ１が強制発現している細胞として扱った。
ＬＰＳ刺激によるＭＨＣクラスＩＩ分子の発現増強がｍＬｉｖ１強制発現細胞では抑制されることがわかった。
【配列表フリーテキスト】
【００５２】
配列番号７：アンチセンス配列
配列番号８：アンチセンス配列
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】樹状細胞を亜鉛イオンキレーターで処理すると、その細胞表面にＭＨＣクラスＩ、クラスＩＩ、ＣＤ８６分子が発現増強することを示す図である。
【図２】樹状細胞を亜鉛イオン及び亜鉛イオノフォアとで処理すると、ＬＰＳ刺激による樹状細胞のＭＨＣＩＩ及びＣＤ８６分子の発現増強やＩＬ−１２の産生が抑制されることを示す図である。
【図３】レトロウイルスベクターを用いてｍＬｉｖ１を発現させた樹状細胞では、ＬＰＳ刺激によるＭＨＣクラスＩＩ分子の発現増強が抑制されることを示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は抗原提示細胞の機能を制御し得る薬剤に関する。より具体的には抗原提示細胞の活性化を介した免疫応答反応を制御し得る薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
人間の健康を維持するシステムの一つに免疫系がある。免疫応答の制御は感染防御を目的としたワクチン開発、自己免疫疾患の治療、ガン等の克服、臓器移植の際の拒絶反応の抑制の点からも極めて重要である。これまで、この免疫応答の制御を目的に様々な免疫賦活化剤、例えばＢＣＧ等の菌体成分が使用されたり、また菌体成分由来の免疫抑制剤や合成ステロイド剤が人体に投与されたりしてきた。しかしながら、これらの菌体成分や合成ステロイド剤は様々な副作用が存在し、人体にとって有害な一面を潜在的に持っている。また長期使用によりその効果が減弱する等、薬剤として使用する際には、これまでにいくつかの問題が指摘されていた。
樹状細胞等の抗原提示細胞は免疫応答の強さと質の制御の中心的存在であり、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、癌の免疫療法等への利用がすすめられている。又、抗原提示細胞の増殖や活性化を制御する培養法等の研究がすすめられているが、依然、効率よく且つ特異的に抗原提示細胞の機能を制御する方法が求められているのが現状である。
従来技術については非特許文献５〜７に詳述されている。
【非特許文献１】Peinado, H., Quintanilla, M. & Cano, A. Transforming growth factor beta-1 induces snail transcription factor in epithelial cell lines: mechanisms for epithelial mesenchymal transitions. J. Biol. Chem. 278, 21113-23 (2003)
【非特許文献２】Yamashita, S., Miyagi, C., Fukada, T., Kagara, N., Che, Y.-S. & Hirano, T. Zinc transporter LIVI controls epithelial-mesenchymal transition in zebrafish gastrula organizer. Nature 429, 298-302 (2004)
【非特許文献３】Taylor, K. M. & Nicholson, R. I. The LZT proteins; the LIV-1 subfamily of zinc transporters. Biochim. Biophys. Acta 1611, 16-30 (2003)
【非特許文献４】Taylor, K. M., Morgan, H. E., Johnson, A., Hadley, L. J. & Nicholson, R. I. Structure-function analysis of LIV-1, the breast cancer-associated protein that belongs to a new subfamily of zinc transporters. Biochem. J. 375, 51-9 (2003)
【非特許文献５】Guermonprez P, Valladeau J, Zitvogel L, Thery C, Amigorena S. Antigen presentation and T cell stimulation by dendritic cells. Annu Rev. Immunol. 20, 621-627 (2002)
【非特許文献６】Banchereau J, Briere F, Caux C, Davoust J, Lebecque S, Liu YJ, Pulendran B, Palucka K. Immunobiology of dendritic cells. Annu Rev. Immunol. 18, 761-781 (2000)
【非特許文献７】Steinman RM, Mellman I. Immunotherapy: bewitched, bothered, and bewildered no more. Science 305, 197-200 (2004)
【非特許文献８】Jirakulaporn T, Muslin AJ. Cation diffusion facilitator proteins modulate Raf-1 activity. J. Biol. Chem. 279, 27807-15 (2004)
【非特許文献９】Krendel M, Zenke FT, Bokoch GM. Nucleotide exchange factor GEF-H1 mediates cross-talk between microtubules and the actin cytoskeleton. Nature Cell Biology 4, 294-301 (2002)
【非特許文献１０】Korichneva I, Hoyos B, Chua R, Levi E, Hammerling U. Zinc release from protein kinase C as the common event during activation by lipid second messenger or reactive oxygen. J. Biol. Chem. 277, 44327-31 (2002)
【非特許文献１１】Haase H, Maret W. Intracellular zinc fluctuations modulate protein tyrosine phosphatase activity in insulin/insulin-like growth factor-1 signaling. Exp. Cell Research 291, 289-298 (2003)
【非特許文献１２】生化学辞典（第３版），（株）東京化学同人発行，第１３９３頁（１９９８）
【非特許文献１３】Kobayashi N, Kadono Y, Naito A, Matsumoto K, Yamamoto T, Tanaka S, Inoue J. Segregation of TRAF6-mediated signaling pathways clarifies its role in osteoclastogenesis. The EMBO J. 20, 1271-1280 (2001)
【非特許文献１４】Brown MC, Perrotta JA, Turner CE. Identification of LIM3 as the principal determinant of paxillin focal adhesion localization and characterization of a novel motif on paxillin directing vinculin and focal adhesion kinase binding. J. Cell Biol. 135, 1109-1123 (1996)
【非特許文献１５】Sadler I, Crawford AW, Michelsen JW, Beckerle MC. Zyxin and cCRP: two interactive LIM domain proteins associated with the cytoskeleton. J. Cell Biol. 119, 1573-1587 (1992)
【非特許文献１６】Panchenko MV, Zhou MI, Cohen HT. von Hippel-Lindau partner Jade-1 is a transcriptional co-activator associated with histone acetyltransferase activity. J. Biol. Chem. 279, 56032-56041 (2004)
【非特許文献１７】Joung I, Strominger JL, Shin J. Molecular cloning of a phosphotyrosine-independent ligand of the p56lck SH2 domain. Proc Natl Acad Sci USA, 93, 5991-5995 (1996)
【非特許文献１８】Kawaguchi Y, Kovacs JJ, McLaurin A, Vance JM, Ito A, Yao TP. The deacetylase HDAC6 regulates aggresome formation and cell viability in response to misfolded protein stress. Cell 115, 727-738 (2003)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、新規な抗原提示細胞の機能制御剤の提供を目的とし、具体的には抗原提示細胞の活性化を介した免疫応答を制御（ここで言う制御とは、目的に応じて増強と抑制を含む）し得る薬剤の提供を目的とする。さらに本発明は、当該薬剤を自己免疫疾患の治療、アレルギー性疾患の治療、臓器移植の際の拒絶反応の抑制等の各種疾患への適用、さらに癌に対する免疫応答の増強法の開発や、効率的なワクチンの開発を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、上記課題に鑑み、鋭意検討を行った結果、亜鉛イオンレベルを制御することにより樹状細胞等の抗原提示細胞の機能を制御できることを見出した。さらに亜鉛イオン濃度の制御による抗原提示細胞の機能制御が可逆的であることを確認して本発明を完成するに至った。すなわち本発明は以下の通りである。
【０００５】
〔１〕細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を有効成分として含有する、抗原提示細胞の機能制御剤。
〔２〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンである、上記〔１〕記載の機能制御剤。
〔３〕亜鉛イオンが亜鉛イオノフォアによって細胞内に導入される、上記〔２〕記載の機能制御剤。
〔４〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンキレーターである、上記〔１〕記載の機能制御剤。
〔５〕亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔４〕記載の機能制御剤。
〔６〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質である、上記〔１〕記載の機能制御剤。
〔７〕亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔６〕記載の機能制御剤。
〔８〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質である、上記〔１〕記載の機能制御剤。
〔９〕亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔８〕記載の機能制御剤。
〔１０〕抗原提示細胞が樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、Ｂ細胞、胸腺上皮細胞、滑膜細胞、血管内皮細胞及びケラチノサイトからなる群より選ばれる少なくとも１種である、上記〔１〕〜〔９〕に記載の機能制御剤。
【０００６】
〔１１〕抗原提示細胞が樹状細胞である、上記〔１０〕記載の機能制御剤。
〔１２〕上記〔１〕〜〔１１〕に記載の機能制御剤を含む、免疫システムが関与する疾患の予防・治療薬。
〔１３〕免疫システムが関与する疾患が、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、臓器移植の際の拒絶反応、感染や腫瘍形成による免疫応答の低下及びワクチン使用時の異常な免疫応答からなる群より選ばれる少なくとも１種である、上記〔１２〕記載の予防・治療薬。
〔１４〕細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を有効成分として含有する、免疫システムが関与する疾患の予防・治療薬。
〔１５〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンである、上記〔１４〕記載の予防・治療薬。
〔１６〕亜鉛イオンが亜鉛イオノフォアによって細胞内に導入されるものである、上記〔１５〕記載の予防・治療薬。
〔１７〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンキレーターである、上記〔１４〕記載の予防・治療薬。
〔１８〕亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔１７〕記載の予防・治療薬。
〔１９〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質である、上記〔１４〕記載の予防・治療薬。
〔２０〕亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔１９〕記載の予防・治療薬。
【０００７】
〔２１〕亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質である、上記〔１４〕記載の予防・治療薬。
〔２２〕亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔２１〕記載の予防・治療薬。
〔２３〕免疫システムが関与する疾患が、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、臓器移植の際の拒絶反応、感染や腫瘍形成による免疫応答の低下及びワクチン使用時の異常な免疫応答からなる群より選ばれる少なくとも１種である、上記〔１４〕〜〔２２〕に記載の予防・治療薬。
〔２４〕抗原提示細胞が樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、Ｂ細胞、胸腺上皮細胞、滑膜細胞、血管内皮細胞及びケラチノサイトからなる群より選ばれる少なくとも１種である、上記〔１４〕〜〔２３〕に記載の予防・治療薬。
〔２５〕抗原提示細胞が樹状細胞である、上記〔２４〕記載の予防・治療薬。
〔２６〕インビトロで、細胞内の亜鉛イオン濃度を制御することを含む、抗原提示細胞の機能を制御する方法。
〔２７〕亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオンの細胞内への導入によって行われるものである、上記〔２６〕記載の方法。
〔２８〕亜鉛イオンの細胞内への導入が亜鉛イオノフォアによって行われるものである、上記〔２７〕記載の方法。
〔２９〕亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオンキレーターによって行われるものである、上記〔２６〕記載の方法。
〔３０〕亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔２９〕記載の方法。
【０００８】
〔３１〕亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節することによって行われるものである、上記〔２６〕記載の方法。
〔３２〕亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔３１〕記載の方法。
〔３３〕亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節することによって行われるものである、上記〔２６〕記載の方法。
〔３４〕亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、上記〔３３〕記載の方法。
〔３５〕抗原提示細胞が樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、Ｂ細胞、胸腺上皮細胞、滑膜細胞、血管内皮細胞及びケラチノサイトからなる群より選ばれる少なくとも１種である、上記〔２６〕〜〔３４〕に記載の方法。
〔３６〕細胞内の亜鉛イオン濃度を測定することを含む、抗原提示細胞の機能を制御し得る化合物のスクリーニング方法。
〔３７〕抗原提示細胞が樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、Ｂ細胞、胸腺上皮細胞、滑膜細胞、血管内皮細胞及びケラチノサイトからなる群より選ばれる少なくとも１種である、上記〔３６〕記載の方法。
〔３８〕抗原提示細胞が樹状細胞である、上記〔３７〕記載の方法。
【発明の効果】
【０００９】
抗原提示細胞において、亜鉛イオン濃度を制御したり、亜鉛イオン要求性のタンパク質及び亜鉛イオントランスポーターの発現や機能を調節したりすることで抗原提示に関係する分子（例えばＭＨＣクラスＩ、クラスＩＩ、またＣＤ８６分子等）を発現増強することができる。さらに亜鉛イオノフォア等の薬剤により亜鉛イオンを抗原提示細胞内に導入することでリポポリサッカライド（ＬＰＳ）等による抗原提示細胞の活性化、サイトカイン産生を抑制することができる。従って、菌体の構成成分や合成ステロイドといった従来の免疫賦活化分子や免疫抑制剤等を使用することなしに、元来体の中に存在している亜鉛の細胞内レベルを調節することだけで、例えば樹状細胞等の抗原提示細胞の活性化を介した免疫系を増強したり抑制したりすることが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明において「亜鉛イオン濃度の制御」とは亜鉛イオンの細胞内での濃度（量）を増加させる、あるいは減少させるという文言通りの意味に加え、最終的に細胞内で亜鉛イオン濃度が増減することによって生じる現象と同様な現象を誘導することができる作用をも意味し、そのような場合には細胞内での亜鉛イオンの濃度の多少には拘束されない。本発明において、亜鉛イオン濃度の制御の対象となる細胞は、樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、Ｂ細胞、胸腺上皮細胞等の抗原提示細胞、さらには滑膜細胞、血管内皮細胞、ケラチノサイト等の抗原提示能を獲得することが予想される細胞である。好ましくは樹状細胞である。本明細書では制御の対象となる細胞を便宜上「抗原提示細胞」と称することもある。
【００１１】
「細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質」としては「亜鉛イオン」、「亜鉛イオンキレーター」、「亜鉛イオノフォア」、「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」、「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」等が挙げられるが、「亜鉛イオン」や「亜鉛イオノフォア」はそれを添加することにより抗原提示細胞内の亜鉛イオン濃度を直接増加させることができ、一方、「亜鉛イオンキレーター」はそれを添加することにより抗原提示細胞内の亜鉛イオン濃度を直接低減することができ、それによって抗原提示細胞の機能を制御することができる。「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」や「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」は、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節することによって、あるいは亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節することによって、亜鉛イオンの抗原提示細胞に及ぼす作用に変化を生じさせて抗原提示細胞の機能を制御することができる。「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」あるいは「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」において、発現あるいは機能を促進する方向に調節する物質であれば当該細胞の亜鉛イオンに対する応答性をより高め、発現あるいは機能を抑制する方向に調節する物質であれば当該細胞の亜鉛イオンに対する応答性をより抑制することができる。本発明において亜鉛イオン濃度の「制御」とは、正及び負のいずれの調節をも意味する。
【００１２】
抗原提示細胞は、１）感染等に由来する外来物質（異物）、並びに２）自己若しくは細胞の腫瘍化、ウイルス感染等に起因する内在性タンパク質をＴＣＲを持つ細胞（例えばＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＤＮＴ細胞、ＮＫＴ細胞等）に提示する。そこで自己、非自己の区別により感染防御や自己にとって好ましくない細胞の除去を行う。本発明では、これらの抗原提示細胞の機能を「制御する」ことにより、生命の維持にとってより好ましい免疫応答を惹起する。抗原提示細胞の機能を「制御する」こととは、より具体的には抗原提示後の免疫応答の質と量を規定することを意味する。ここでの「質」とは、ＣＤ４＋Ｔ細胞においてＴｈ１とＴｈ２細胞の応答制御と免疫寛容等、又ＣＤ８＋Ｔ細胞においては抗原特異的細胞障害活性を持つＣＴＬの応答制御と免疫寛容等を意味し、「量」とは文言通り免疫応答の強さを意味する。又、抗原提示細胞の機能を「制御する」こととは、抗原提示細胞そのものの活性化若しくは不活性化を意味する。具体的には、１）ＭＨＣクラスＩ、ＩＩ分子の発現制御、２）ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０等の副刺激分子の発現制御、３）ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−α／β、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β等のサイトカインの発現制御、４）外来若しくは内在性抗原の取り込み制御、５）抗原提示細胞の遊走能の制御等から選ばれる１以上の項目の機能を制御することを意味する。
【００１３】
「亜鉛イオン」は亜鉛イオノフォアによって抗原提示細胞内に導入される。すなわち亜鉛イオンは亜鉛イオノフォアとの錯体の形で抗原提示細胞内に導入される。亜鉛イオノフォアとしては当分野で通常用いられている、好ましくは市販されている種々の化合物が挙げられる。亜鉛ピリチオン、複素環アミン、ジチオカルバメート、ビタミン類等が例示される。
【００１４】
「亜鉛イオンキレーター」とは、抗原提示細胞内で亜鉛イオンと錯体を形成することによって細胞内から亜鉛イオンを除去することができる物質であって、例えば、２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）等が挙げられる。いずれも商業的に入手可能である。また、本発明の抗原提示細胞の機能制御剤、本発明の免疫システムが関与する疾患の予防・治療薬（以下、単に予防・治療薬と称することもある）に有効成分として含められる亜鉛イオン濃度を制御し得る物質としての亜鉛イオンキレーターの量は、それぞれ細胞内での亜鉛イオン濃度の制御が可能な範囲で適宜決定される。また、含める亜鉛イオンキレーターは１種類であっても２種類以上であってもよい。２種類以上含める場合にはその種類に応じて配合量を適宜設定する。
【００１５】
「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」とは亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を結果的に調節することができればその作用機序は特に限定されず、遺伝子レベルでの調節であってもタンパク質レベルでの調節であってもよい。遺伝子レベルでの調節としては、転写調節、遺伝子発現調節等が挙げられる。タンパク質レベルでの調節としては、代謝調節、リン酸化、脱リン酸化、糖付加、脂質付加、亜鉛との配位結合、分解、ユビキチン化、アセチル化等が挙げられる。「亜鉛イオン要求性タンパク質」は、抗原提示細胞の機能発現に亜鉛が必要なタンパク質であって、例えば亜鉛フィンガーを有するタンパク質、ＲＩＮＧフィンガーを有するタンパク質、ＬＩＭドメインを有するタンパク質、ＰＨＤ亜鉛フィンガーを有するタンパク質等が挙げられる。亜鉛フィンガーは、システインやヒスチジンといったアミノ酸が亜鉛と配位することによって初めて高次構造を有することができるユニークな核酸結合能を有するモチーフであり、亜鉛フィンガーを有するタンパク質としては、例えば、上皮−間葉転換と呼ばれる現象（ヒトやその他の生物の初期発生における体の形作りや、傷口の治癒・癌の転移等の際に、通常密に結合している細胞同士が隣の細胞との接着を解除し可動性を獲得し他へ移動する現象）のマスターレギュレーターである転写因子Ｓｎａｉｌ、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１等が例示される。ＲＩＮＧフィンガーは、亜鉛フィンガーの変形ともいえ、タンパク質間の相互作用に関与しているものと示唆されており、ＲＩＮＧフィンガーを有するタンパク質としては、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｇａｓｅ Ｅ３）活性を有するものや、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ｃｏｎｊｕｇａｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅｓ Ｅ２）、ＴＲＡＦ６（ＴＮＦαのシグナル伝達分子）との結合を示すものが報告されている。ＬＩＭドメインは、６つのシステインと１つのヒスチジンの位置が保存された６０アミノ酸からなり、亜鉛フィンガーとよく似た構造をとるもののＤＮＡ結合能は知られていない。ＰＫＣとの結合を介在するドメインとしても機能する。ＬＩＭドメインを有するタンパク質としては、細胞骨格制御に関与するＰａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ等が例示される。ＰＨＤ亜鉛フィンガーは、クロマチンを媒介した転写調節に関与すことが示唆される核タンパクである亜鉛フィンガー様ドメインであり、ＤＮＡ結合能を有するものと予測されている。ＰＨＤ亜鉛フィンガーを有するタンパク質としては、ヒストンのアセチル化に関与するＪａｄｅ−１等が例示される。
【００１６】
「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」は、公知の化合物であっても今後開発される新規な化合物であってもよい。また、低分子化合物であっても高分子化合物であってもかまわない。ここで低分子化合物とは分子量３０００未満程度の化合物であって、例えば医薬品として通常使用し得る有機化合物及びその誘導体や無機化合物が挙げられ、有機合成法等を駆使して製造される化合物やその誘導体、天然由来の化合物やその誘導体、プロモーター等の小さな核酸分子や各種の金属等であり、望ましくは医薬品として使用し得る有機化合物及びその誘導体、核酸分子をいう。また、高分子化合物としては分子量３０００以上程度の化合物であって、タンパク質、ポリ核酸類、多糖類、及びこれらを組み合わせたもの等が挙げられ、望ましくはタンパク質である。これらの低分子化合物あるいは高分子化合物は、公知のものであれば商業的に入手可能であるか、各報告文献に従って採取、製造、精製等の工程を経て得ることができる。これらは、天然由来であっても、また遺伝子工学的に調製されるものであってもよく、また半合成等によっても得ることができる。具体的には、亜鉛イオン要求性タンパク質Ｓｎａｉｌは、ＴＧＦ−β又はＦＧＦを通してＭＡＰＫによりその発現が調節される（非特許文献１）。また、Ｓｎａｉｌは亜鉛トランスポーターであるＬＩＶ１(後述)により活性化される（非特許文献２）。他の亜鉛イオン要求性タンパク質として例示されるＲａｆ１、ＧＥＦ−Ｈ１、ＰＫＣα、フォスファターゼ、メタロチオネインについてはそれぞれ非特許文献８、非特許文献９、非特許文献１０、非特許文献１１、非特許文献１２に詳細が記載されている。ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ、Ｊａｄｅ−１についてはそれぞれ非特許文献１３、非特許文献１４、非特許文献１５、非特許文献１６に詳細が記載されている。さらにＳＱＳＴＭ１及びＨＤＡＣについてはそれぞれ非特許文献１７及び非特許文献１８に詳細が記載されている。
【００１７】
「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」とは亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を結果的に調節することができればその作用機序は特に限定されず、遺伝子レベルでの調節であってもタンパク質レベルでの調節であってもよい。遺伝子レベルでの調節としては、転写調節、遺伝子発現調節等が挙げられる。タンパク質レベルでの調節としては、代謝調節、リン酸化、脱リン酸化、糖付加、脂質付加、亜鉛との配位結合、分解、ユビキチン化、アセチル化等が挙げられる。「亜鉛イオントランスポーター」としては、例えば、ＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類（ＢＡＢ７０８４８、ｈＺｉｐ４、ＢＩＧＭ１０３、ＫＩＡＡ００６２、ＫＩＡＡ１２６５、ｈＬｉｖ−１、ＡＡＨ０８８５３、ｈＫＥ４、ＸＰ＿２０８６４９、ｈＺＩＰ１、ｈＺＩＰ２、ｈＺＩＰ３、ＢＡＡ９２１００、ＢＡＣ０４５０４等）、ヒトＣＤＦ類（ｈＺｎｔ−５、ｈＺｎｔ−７、ｈＺｎｔ−１、ｈＺｎｔ−６、ｈＺｎｔ−３、ｈＺｎｔ−２、ｈＺｎｔ−８、ｈＺｎｔ−４、ｈＺｎｔ−９等）等が挙げられる。ＬＩＶ１は、当初はエストロゲン制御を受ける乳がんタンパク質として同定され、最近になってＬＺＴ（ＺＩＰ亜鉛トランスポーターのＬＩＶ１サブファミリー）と称されるＺＩＰ亜鉛トランスポーターサブファミリー（Ｚｒｔ−、Ｉｒｔ様タンパク質）に属し（非特許文献３）、亜鉛イオントランスポーターとして機能することが明らかになった（非特許文献４）。他にＣＤＦ（ｃａｔｉｏｎ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｆａｃｉｌｉｔａｔｏｒ）等が挙げられる。例えば、亜鉛イオントランスポーターであるＬＩＶ１は、ＳＴＡＴ３により発現調節を受ける（非特許文献２）。
【００１８】
「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」は、公知の化合物であっても今後開発される新規な化合物であってもよい。また、低分子化合物であっても高分子化合物であってもかまわない。ここで低分子化合物とは分子量３０００未満程度の化合物であって、例えば医薬品として通常使用し得る有機化合物及びその誘導体や無機化合物が挙げられ、有機合成法等を駆使して製造される化合物やその誘導体、天然由来の化合物やその誘導体、プロモーター等の小さな核酸分子や各種の金属等であり、望ましくは医薬品として使用し得る有機化合物及びその誘導体、核酸分子をいう。また、高分子化合物としては分子量３０００以上程度の化合物であって、タンパク質、ポリ核酸類、多糖類、及びこれらを組み合わせたもの等が挙げられ、望ましくはタンパク質である。これらの低分子化合物あるいは高分子化合物は、公知のものであれば商業的に入手可能であるか、各報告文献に従って採取、製造、精製等の工程を経て得ることができる。これらは、天然由来であっても、また遺伝子工学的に調製されるものであってもよく、また半合成等によっても得ることができる。
【００１９】
亜鉛イオントランスポーターであるＬＩＶ１は亜鉛イオン要求性タンパク質であるＳｎａｉｌの活性（特にレプレッサー活性）を増強することから（非特許文献２）、本発明における「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」の一例として以下のものが挙げられる。
（１）下記ａ）〜ｄ）のいずれかに記載のＤＮＡ
ａ）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列を有するタンパク質（ＬＩＶ１タンパク質）をコードするＤＮＡ
ｂ）配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡ（ＬＩＶ１遺伝子）
ｃ）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸配列が置換、欠失、挿入及び／又は付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質（ＬＩＶ１に類似するタンパク質）をコードしたＤＮＡ
ｄ）配列番号１、３又は５記載の配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡ
（２）下記ａ）〜ｄ）のいずれかに記載のＤＮＡが挿入されたベクター
ａ）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするＤＮＡ
ｂ）配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡ
ｃ）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸配列が置換、欠失、挿入及び／又は付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質をコードしたＤＮＡ
ｄ）配列番号１、３又は５記載の配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡ
（３）下記ａ）〜ｄ）のいずれかに記載のＤＮＡによってコードされたタンパク質
ａ）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするＤＮＡ
ｂ）配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡ
ｃ）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸配列が置換、欠失、挿入及び／又は付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質をコードしたＤＮＡ
ｄ）配列番号１、３又は５記載の配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡ
（４）配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡを標的配列としたアンチセンスオリゴヌクレオチド
（５）配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡの一部と同一又は類似する配列を有する二本鎖ＲＮＡ
（６）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列を有するタンパク質に対する抗体
（７）配列番号２、４又は６記載のアミノ酸配列を有するタンパク質と会合し、その機能を調節する物質（天然物、非天然物を含む）
（１）〜（３）は亜鉛イオン要求性タンパク質であるＳｎａｉｌの発現及び／又は機能を正に調節する（発現を増強する、及び／又は機能を活性化する）物質であり、（４）及び（５）はＳｎａｉｌの発現及び／又は機能を負に調節する（発現を減少させる、及び／又は機能を抑制する）物質である。
【００２０】
ＬＩＶ１タンパク質の調製は、当業者に周知の各種方法によって行うことが可能である。例えば、配列番号１、３又は５に記載の塩基配列からなるＤＮＡ（ＬＩＶ１遺伝子）が挿入されたベクターを保持した形質転換体にタンパク質を生産させ、精製することによって調製できる。使用するベクターはタンパク質生産に用いる翻訳系により適宜選択することができる。またＬＩＶ１は、乳房、前立腺、脳下垂体、脳等のホルモン系組織に発現することが知られている（非特許文献３）。抗ＬＩＶ１タンパク質抗体を周知方法で調製し、該抗体でアフィニティカラムを作製すれば、ＬＩＶ１を発現する細胞抽出物からＬＩＶ１タンパク質を精製することができる。
【００２１】
ＬＩＶ１に類似するタンパク質は亜鉛イオン要求性タンパク質（例えばＳｎａｉｌ）の活性を調節し得るタンパク質であって、例として、配列番号２、４又は６に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸配列が置換、欠失、挿入及び／又は付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１、３又は５に記載の塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡによってコードされるタンパク質を挙げることができる。
【００２２】
ＬＩＶ１に類似するタンパク質の調製は、例えば、ＬＩＶ１をコードする塩基配列を利用してハイブリダイゼーションを行い、得られた相同性の高いＤＮＡによって形質転換体を作製し、該形質転換体に所望のタンパク質を生産させる方法をとることができる。相同性の高いＤＮＡを得る方法の一例として、配列番号１、３又は５に記載された塩基配列の一部をプローブとし、ヒトやヒト以外の脊椎動物の細胞等からストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする方法を挙げることができる。
【００２３】
上記ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、当業者であれば、適宜選択することができる。一例を示せば２５％ホルムアミド、より厳しい条件では５０％ホルムアミド、４×ＳＳＣ、５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ７．０、１０×デンハルト溶液、２０μｇ／ｍＬ変性サケ精子ＤＮＡを含むハイブリダイゼーション溶液中、４２℃で一晩プレハイブリダイゼーションを行った後、標識したプローブを添加し、４２℃で一晩保温することによりハイブリダイゼーションを行う。その後の洗浄における洗浄液及び温度条件は「１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、３７℃」程度で、より厳しい条件としては「０．５×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、４２℃」程度で、さらに厳しい条件としては「０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃」程度で実施することができる。このようにハイブリダイゼーションの洗浄の条件が厳しくなるほどプローブ配列と高い相同性を有するＤＮＡの単離を期待し得る。但しＳＳＣ、ＳＤＳ及び温度の条件の組み合わせは例示であり、当業者であれば、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーを決定する上記若しくは他の要素（例えばプローブ濃度、プローブの長さ、ハイブリダイゼーション反応時間等）を適宜組み合わせることにより、上記と同様のストリンジェンシーを実現することが可能である。
【００２４】
このようなハイブリダイゼーション技術を利用して単離されるＤＮＡがコードするポリペプチドは、通常、ＬＩＶ１とアミノ酸配列において高い相同性を有する。高い相同性とは、少なくとも４０％以上、好ましくは６０％以上、さらに好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、さらに好ましくは９７％以上（例えば９８〜９９％）の配列の相同性を指す。アミノ酸配列の同一性は、例えばＫａｒｌｉｎ ａｎｄ ＡｌｔｓｃｈｕｌによるアルゴリズムＢＬＡＳＴ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２６４−２２６８，１９９０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３−５８７７，１９９３）によって決定することができる。このアルゴリズムに基づいてＢＬＡＳＴＸと呼ばれるプログラムが開発されている（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ． Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． ２１５：４０３−４１０，１９９０）。ＢＬＡＳＴＸによってアミノ酸配列を解析する場合にはパラメーターは例えばｓｃｏｒｅ＝５０、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝３とする。ＢＬＡＳＴとＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを用いる場合には、各プログラムのデフォルトパラメーターを用いる。これらの解析方法の具体的な手法は公知である（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．）。
【００２５】
ＬＩＶ１に類似するタンパク質の調製は、別の公知手段によることも可能である。例えば、エキソヌクレアーゼを用いるｄｅｌｅｔｉｏｎ ｍｕｔａｎｔ作製法、カセット変異法等のｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓによってＬＩＶ１ ＤＮＡを人為的に改変させ、該改変ＬＩＶ１ ＤＮＡを用いて、所望タンパク質を調製することができる。
【００２６】
「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」として利用可能な物質の別の好適な例として、配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡを挙げることができる。上記ＤＮＡはタンパク質ＬＩＶ１をコードしており、細胞内に導入されればＬＩＶ１タンパク質発現を通じて間接的に亜鉛イオン要求性タンパク質、例えばＳｎａｉｌの活性を調製し得る物質である。
【００２７】
上記ＤＮＡは、配列番号１、３又は５記載の配列の一部をプローブとし、当業者に周知のハイブリダイゼーション技術によって、ＬＩＶ１が発現している細胞のｃＤＮＡから調製することができる。また、配列番号１、３又は５記載の配列の一部をプライマーとし、ｍＲＮＡからＲＴ−ＰＣＲを実施して得ることもできる。あるいは市販のＤＮＡ合成機を用いて人工的に合成してもよい。
【００２８】
さらに、上記ＤＮＡに類似するＤＮＡもまた、「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」の一例である。該類似するＤＮＡとして、配列番号１、３又は５記載の配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡであって、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質、例えばＳｎａｉｌの活性を調節し得るタンパク質をコードしたＤＮＡを挙げることができる。このＤＮＡの調製法は既に上述したとおりである。
【００２９】
上述した各ＤＮＡを使用するときは、適当なベクターに挿入して用いることができる。ベクターに挿入したものも本発明の態様の一つである。使用するベクターは、目的に応じて適当なベクターを選択することができる。具体的には、哺乳動物由来のベクター（例えば、ｐｃＤＮＡ３（インビトロジェン社製）やｐＥＧＦ−ＢＯＳ（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，１８（１７），ｐ．５３２２，１９９０）、ｐＥＦ、ｐＣＤＭ８、ｐＣＸＮ、昆虫細胞由来のベクター（例えば「Ｂａｃ−ｔｏ−ＢＡＣ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ」（インビトロジェン社製）、ｐＢａｃＰＡＫ８）、植物由来の発現ベクター（例えばｐＭＨ１、ｐＭＨ２）、動物ウイルス由来のベクター（例えば、ｐＨＳＶ、ｐＭＶ、ｐＡｄｅｘＬｃｗ）、レトロウイルス由来のベクター（例えば、ｐＺＩＰｎｅｏ）、酵母由来のベクター（例えば「Ｐｉｃｈｉａ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｋｉｔ」（インビトロジェン社製）、ｐＮＶ１１、ＳＰ−Ｑ０１）、枯草菌由来のベクター（例えばｐＰＬ６０８、ｐＫＴＨ５０）、大腸菌ベクター（Ｍ１３系ベクター、ｐＵＣ系ベクター、ｐＢＲ３２２、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＣＲ−Ｓｃｒｉｐｔ）等を挙げることができる。本発明において、哺乳動物細胞内で発現可能なベクターを用いることが好ましく、又、発現ベクターを用いることが好ましい。ベクターを細胞へ導入するには、例えば、リン酸カルシウム法（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．５２，ｐ．４５６，１９７３）、ＤＥＡＥデキストラン法、カチオニックリポソームＤＯＴＡＰ（ロッシュ・ダイアグノスティックス社製）を用いた方法、エレクトロポレーション法（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．１５，ｐ．１３１１，１９８７）、リポフェクション法（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｎｕｔｒ．，Ｖｏｌ．７，ｐ．１７５，１９８９）、ウイルスによる感染導入方法（ｐＭＸ、ｐＭＳＣＶ等；Ｓｃｉ．Ａｍ．，ｐ．３４，１９９４）、パーティクルガン等から選択することにより行うことができる。
【００３０】
「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」、例えばＳｎａｉｌの活性を抑制する剤の一例として、ＬＩＶ１をコードするＤＮＡ又はｍＲＮＡを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを挙げることができる。ＬＩＶ１をコードするＤＮＡに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドは、内在するＬＩＶ１遺伝子の発現を妨げ、Ｓｎａｉｌ活性を負に制御すると考えられる。このようなアンチセンスオリゴヌクレオチドとして、配列番号１、３又は５記載の配列からなるＤＮＡ又は該ＤＮＡから生成されるｍＲＮＡを標的配列とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを挙げることができる。一例としては、配列番号７又は８に記載するオリゴヌクレオチドを挙げることができる。これ以外にも、上記配列番号１、３又は５に記載の配列からなるＤＮＡ等のいずれかの箇所にハイブリダイズしＬＩＶ１の発現を有効に阻害できれば、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドに含まれ、上記配列番号１、３又は５に記載の配列からなるＤＮＡ又は対応するｍＲＮＡと完全に相補的でなくてもよい。
【００３１】
上記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、目的に応じ、適当なベクターに挿入して用いることができる。例えば遺伝子治療に応用する目的であれば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター等のウイルスベクターや、カチオニックリポソーム、リガンドＤＮＡ複合体等の非ウイルスベクター等の中から、適宜選択可能である。また、キャリアーを用いずに、裸のプラスミドＤＮＡ（ｎａｋｅｄ ｐＤＮＡ）として大容量の水溶液とともに投与する方法をとることも考えられる。
【００３２】
別の「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」、特にＳｎａｉｌの活性を抑制する剤の例として、ＬＩＶ１をコードするＤＮＡの一部と同一又は類似する配列を有する二本鎖ＲＮＡを挙げることができる。標的遺伝子配列と同一又は類似した配列を有する二本鎖ＲＮＡは、標的遺伝子の発現を妨げるＲＮＡ干渉（ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ；ＲＮＡｉ）を引き起こし得る。ＲＮＡｉは、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を細胞内に導入した際に、そのＲＮＡ配列に対応する細胞内のｍＲＮＡが特異的に分解され、タンパク質として発現されなくなる現象をいう。二本鎖を形成する領域は、すべての領域において二本鎖を形成していてもよいし、一部の領域（例えば両末端又は片方の末端等）が一本鎖等になっていてもよい。従って、本発明の二本鎖ＲＮＡにおいても、二本鎖でない領域が含まれていてよい。ＲＮＡｉに用いられるオリゴＲＮＡは１０〜１００ｂｐのＲＮＡが用いられることが多く、通常１９〜２３ｂｐのＲＮＡが用いられる。ＲＮＡｉ法は、Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．３９１，ｐ．８０６，１９９８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ Ｖｏｌ．９５，ｐ．１５５０２，１９９８、Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．３９５，ｐ．８５４，１９９８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ Ｖｏｌ．９６，ｐ．５０４９，１９９９、Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌ．９５，ｐ．１０１７，１９９８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ Ｖｏｌ．９６，ｐ．１４５１，１９９９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ Ｖｏｌ．９５，ｐ．１３９５９，１９９８、Ｎａｔｕｒｅ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ．２，ｐ．７０，２０００等の記載に従って行うことができる。
【００３３】
「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」としては、例えば該物質がＬＩＶ１の場合、上記した「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」と同様なものが例示される。
【００３４】
「亜鉛トランスポーター」がＬＩＶ１以外の場合、例えば、ｈＺｎｔ−１、ｈＺｎｔ−２、ｈＺｎｔ−５、ｈＺｎｔ−６、ｈＺｎｔ−７、ｈＺＩＰ１、ｈＺＩＰ２、ｈＺＩＰ３、ＢＡＡ９２１００、ＢＡＣ０４５０４、ｈＬｉｖ−１、ｈＫＥ４、ＫＩＡＡ１２６５、ＫＩＡＡ００６２、ｈＺｉｐ４の場合には、該亜鉛イオントランスポーターの既知のアミノ酸配列あるいは塩基配列をもとにして、ＬＩＶ１の場合と同様にして各種の「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」あるいは「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」を調製することができる。
各種アミノ酸配列及び塩基配列の情報は、ＮＣＢＩ等で閲覧可能な種々のデータベースから入手することができる。
【００３５】
本発明の抗原提示細胞の機能制御剤並びに免疫システムが関与する疾患の予防・治療薬は、上記した一連の有効成分（亜鉛イオン、亜鉛イオノフォア、亜鉛イオンキレーター、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質、亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質）に加え、所望により薬学的に許容される賦形剤、添加剤を含む。薬学的に許容される賦形剤、添加剤としては、担体、結合剤、香料、緩衝剤、増粘剤、着色剤、安定剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、防腐剤等が挙げられる。又、有効成分として異なる種類の「亜鉛イオン濃度を制御する物質」を併用することもできる。
【００３６】
薬学的に許容される担体としては、例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、砂糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、澱粉、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、カカオバター等が挙げられる。
【００３７】
さらに、錠剤は必要に応じて通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、腸溶性コーティング錠、フィルムコーティング錠あるいは二層錠、多層錠とすることができる。散剤は、薬学的に許容される散剤の基剤と共に製剤化される。基剤としては、タルク、ラクトース、澱粉等が挙げられる。ドロップは水性又は非水性の基剤と一種またはそれ以上の薬学的に許容される拡散剤、懸濁化剤、溶解剤等と共に製剤化できる。カプセルは、有効成分となる化合物を薬学的に許容される担体と共に中に充填することにより製造できる。当該化合物は薬学的に許容される賦形剤と共に混合し、または賦形剤なしでカプセルの中に充填することができる。カシェ剤も同様の方法で製造できる。本発明を座剤として調製する場合、植物油（ひまし油、オリーブ油、ピーナッツ油等）や鉱物油（ワセリン、白色ワセリン等）、ロウ類、部分合成もしくは全合成グリセリン脂肪酸エステル等の基剤と共に通常用いられる手法によって製剤化される。
【００３８】
注射用液剤としては、溶液、懸濁液、乳剤等が挙げられる。例えば、水溶液、水−プロピレングリコール溶液等が挙げられる。液剤は、水を含んでも良い、ポリエチレングリコール及び／またはプロピレングリコールの溶液の形で製造することもできる。
【００３９】
経口投与に適切な液剤は、有効成分となる化合物を水に加え、着色剤、香料、安定化剤、甘味剤、溶解剤、増粘剤等を必要に応じて加え製造することができる。また経口投与に適切な液剤は、当該化合物を分散剤とともに水に加え、粘重にすることによっても製造できる。増粘剤としては、例えば、薬学的に許容される天然または合成ガム、レジン、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースまたは公知の懸濁化剤等が挙げられる。
【００４０】
局所投与剤としては、上記の液剤及び、クリーム、エアロゾル、スプレー、粉剤、ローション、軟膏等が挙げられる。上記の局所投与剤は、有効成分となる化合物と薬学的に許容される希釈剤及び担体と混合することによって製造できる。軟膏及びクリームは、例えば、水性または油性の基剤に増粘剤及び／またはゲル化剤を加えて製剤化する。該基剤としては、例えば、水、液体パラフィン、植物油等が挙げられる。増粘剤としては、例えばソフトパラフィン、ステアリン酸アルミニウム、セトステアリルアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ラノリン、水素添加ラノリン、蜜蝋等が挙げられる。局所投与剤には、必要に応じて、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、クロロクレゾール、ベンザルコニウムクロリド等の防腐剤、細菌増殖防止剤を添加することもできる。ローションは、水性又は油性の基剤に、一種類またはそれ以上の薬学的に許容される安定剤、懸濁化剤、乳化剤、拡散剤、増粘剤、着色剤、香料等を加えることができる。
【００４１】
かくして得られる本発明の抗原提示細胞の機能制御剤並びに免疫システムが関与する疾患の予防・治療薬は、経口または非経口的に投与される。
経口的に投与する場合、通常当分野で用いられる投与形態で投与することができる。非経口的に投与する場合には、局所投与剤（経皮剤等）、直腸投与剤、注射剤、経鼻剤等の投与形態で投与することができる。
【００４２】
経口剤または直腸投与剤としては、例えばカプセル、錠剤、ピル、散剤、ドロップ、カシェ剤、座剤、液剤等が挙げられる。注射剤としては、例えば、無菌の溶液又は懸濁液等が挙げられる。局所投与剤としては、例えば、クリーム、軟膏、ローション、経皮剤（通常のパッチ剤、マトリクス剤）等が挙げられる。
【００４３】
投与量、投与回数は使用する亜鉛イオン濃度を制御し得る物質の種類、患者の症状、年齢、体重、投与形態等によって異なり適宜設定され得る。
【００４４】
「亜鉛イオン」、「亜鉛イオンキレーター」、「亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質」及び「亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質」はいずれも、ヒトをはじめウシ、ウマ、イヌ、マウス、ラット等の哺乳動物において、抗原提示細胞の機能、具体的には抗原提示に関係する分子の発現、ＬＰＳ等による抗原提示細胞の活性化、サイトカイン産生、抗原の取り込み、遊走能等を制御することが可能であり、従って、抗原提示細胞の機能に関与する疾患、具体的には免疫システムが関与する疾患を予防・治療することが可能となる。免疫システムが関与する疾患としては、自己免疫疾患、アレルギー疾患、癌、臓器移植の際の拒絶反応、感染や腫瘍形成による免疫応答の低下、ワクチン使用時の異常な免疫応答（例えば副作用）等が挙げられる。例えば本発明は、ＳＩＲＳ（全身性炎症反応症候群）、全身性エリテマトーデス、混合型結合組織病、慢性関節リウマチ、シェーグレン症候群、リウマチ熱、グッドパスチャー症候群、バセドウ病、橋本病、アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、潰瘍性大腸炎、クローン病、交換性眼炎、多発性硬化症、乾癬、アナフィラキシーショック、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、気管支喘息、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎等を処置するため、臓器移植時の拒絶反応の抑制のため移植前処理、移植後投与のため、さらには癌に対する免疫応答制御等のために使用できると期待される。癌としては、乳癌、前立腺癌、膵癌、胃癌、肺癌、大腸癌（結腸癌、直腸癌、肛門癌）、食道癌、十二指腸癌、頭頚部癌（舌癌、咽頭癌）、脳腫瘍、神経鞘腫、非小細胞肺癌、肺小細胞癌、肝臓癌、腎臓癌、胆管癌、子宮癌（子宮体癌、子宮頸癌）、卵巣癌、膀胱癌、皮膚癌、血管腫、悪性リンパ腫、悪性黒色腫、甲状腺癌、骨腫瘍、血管腫、血管線維腫、網膜肉腫、陰茎癌、小児固形癌、カポジ肉腫、ＡＩＤＳに起因するカポジ肉腫、上顎洞腫瘍、線維性組織球腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫の癌並びに白血病等の悪性腫瘍等がそれぞれ挙げられる。
また、亜鉛イオノフォア等の薬剤により亜鉛イオンを抗原提示細胞内に導入することによりＬＰＳ等による抗原提示細胞の活性化を抑制したり、サイトカイン産生を抑制したりすることが可能となり、さらにＴｈ１及びＴｈ２のバランス、ＣＴＬ、Ｂ細胞活性化の制御も可能となる。すなわち、本発明の抗原提示細胞の機能制御剤並びに免疫システムが関与する疾患の予防・治療薬は、抗原提示細胞内への亜鉛イオンの導入により治療効果が認められるような各種疾患に対する適用をも投与対象とすることができる。
【００４５】
さらに、亜鉛イオン濃度を制御することによって抗原提示細胞の機能を制御することができる、という本発明者らが得た知見により、細胞内の亜鉛イオン濃度を測定することによって抗原提示細胞の機能制御が可能な化合物をスクリーニングすることができる。例えば以下の工程により本スクリーニング方法は実施される。
１）抗原提示細胞を２群に分け一方を試験化合物で処理する工程（未処理の残る一方を対照とする）
２）処理後の細胞、及び未処理の対照細胞についてそれぞれ細胞内の亜鉛イオン濃度を測定する工程
３）対照細胞の亜鉛イオン濃度と比較して有意に亜鉛イオン濃度に変動があったものを選択し抗原提示細胞の機能を制御し得る化合物と認定する工程。
抗原提示細胞としては、上記のものが用いられる。好ましくは樹状細胞である。適当に２群に分け一方を試験化合物で処理する。もう一方は処理せず対照細胞として使用する。さらに亜鉛イオン濃度に影響を及ぼすことが知られている化合物、例えば亜鉛イオンキレーターであるＴＰＥＮ等をポジティブな対照化合物として用いてもよい。試験化合物は、公知の化合物であっても今後開発される新規な化合物であってもよい。また、低分子化合物であっても高分子化合物であってもかまわない。ここで低分子化合物とは分子量３０００未満程度の化合物であって、例えば医薬品として通常使用し得る有機化合物及びその誘導体や無機化合物が挙げられ、有機合成法等を駆使して製造される化合物やその誘導体、天然由来の化合物やその誘導体、プロモーター等の小さな核酸分子や各種の金属等であり、望ましくは医薬品として使用し得る有機化合物及びその誘導体、核酸分子をいう。また、高分子化合物としては分子量３０００以上程度の化合物であって、タンパク質、ポリ核酸類、多糖類、及びこれらを組み合わせたもの等が挙げられ、望ましくはタンパク質である。これらの低分子化合物あるいは高分子化合物は、公知のものであれば商業的に入手可能であるか、各報告文献に従って採取、製造、精製等の工程を経て得ることができる。これらは、天然由来であっても、また遺伝子工学的に調製されるものであってもよく、また半合成等によっても得ることができる。
【００４６】
細胞の試験化合物での処理時間は、用いる細胞や試験化合物の種類や濃度によって適宜設定される。ＴＰＥＮ等のポジティブな対照化合物を用いる場合にはその対照化合物で処理した場合に亜鉛イオン濃度に変動が確認されることを目安にして行うことができる。細胞を処理する試験化合物の濃度もまた、用いる細胞や試験化合物の種類、処理時間によって適宜設定される。
【００４７】
細胞内の亜鉛イオン濃度の測定は、通常当分野で実施されている方法を利用して、またそれに準じて行うことができる。例えば原子吸光法（フレーム法）による直接測定、特異プローブ（例えば蛍光試薬）を用いた蛍光分光光度計によって測定することができる。
【実施例】
【００４８】
以下、実施例にそって本発明をさらに詳細に説明するが、これら実施例は本発明の範囲を何ら限定するものではない。本出願全体を通して引用されたすべての刊行物は参照として本明細書に組み入れられる。また、本発明において使用する試薬や装置、材料は特に言及されない限り、商業的に入手可能である。
【００４９】
実施例１
抗原提示細胞の一つである樹状細胞を亜鉛イオンキレーターであるＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）で処理した場合の、細胞表面上のＭＨＣクラスＩ分子、クラスＩＩ分子及びＣＤ８６分子の発現状況を調べた。
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（日本クレアより入手）より骨髄細胞を得、１０％ＦＣＳ（ＥＱＵＩＴＥＣＨ−ＢＩＯ Ｉｎｃ．，♯ＳＦＢ−３０−１３８８）、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を加えたＲＰＭＩ培地（ＳＩＧＭＡ，Ｒ８７５８）で６日間３７℃、５％ＣＯ２環境下で細胞培養し、骨髄由来の樹状細胞（ＢＭＤＣ）を分化誘導した。このＢＭＤＣにＴＰＥＮ（ＳＩＧＭＡ，Ｐ４４１３）を６時間から１２時間、０〜２μＭの濃度になるように培地に添加した。同時に抗原提示細胞の活性化のコントロールの条件としてリポポリサッカライド（ＬＰＳ；１００ｎｇ／ｍＬ；ＳＩＧＭＡ，Ｌ２６３７，Ｅ．Ｃｏｌｉ Ｏ５５：Ｂ５）を加えた群も作成した。１２時間（若しくは６時間)後に細胞表面に発現してきたＭＨＣクラスＩ、クラスＩＩ及びＣＤ８６分子を、ＦＡＣＳ解析により評価した。結果を図１に示す。図１中の数値はそれぞれの分子を高発現している細胞の割合を示す。亜鉛イオンキレーターで処理することによりＬＰＳと同様にＢＭＤＣ上のＭＨＣクラスＩＩ分子の発現が増強した。この発現増強は薬剤の投与量依存的（処理時間１２時間）、処理時間依存的（処理濃度１．５μＭ）に見られた。
【００５０】
実施例２
実施例１と同様にして調製したＢＭＤＣに亜鉛イオノフォアであるピリチオン（５μＭ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｒｏｂｅｓ，ｐ−２４１９３）とＺｎ２＋（ＺｎＳＯ４）を培養液中に最終濃度５μＭになるように加え、さらにＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）で刺激した。６時間後、細胞表面に発現してきたＭＨＣクラスＩＩ及びＣＤ８６分子を、ＦＡＣＳ解析により評価した。結果を図２に示す。図２中の数値はそれぞれの分子を高発現している細胞の割合を示す。また同時にＢＭＤＣのＩＬ−１２産生を４％パラホルムアルデヒドで固定化した後に抗ＩＬ−１２ｐ４０抗体（ＢＤ．Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，＃５５４４７９）とアイソタイプコントロール抗体（ＢＤ．Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，＃５５３９２５）を用いて細胞内染色法により検出した。図中の数値はＩＬ−１２を産生している細胞群の割合を示す。
ＬＰＳ刺激によるＢＭＤＣの活性化に伴うＭＨＣＩＩ、ＣＤ８６分子の細胞表面での発現増強やＩＬ−１２のサイトカイン産生が亜鉛イオノフォアの存在下では全く見られなかった。
実施例１及び２と同様な実験（ｉｎ ｖｉｔｒｏ系）において１〜１０μＭの亜鉛イオン若しくはＴＰＥＮ処理で樹状細胞の活性化若しくは不活性化が見られた。
【００５１】
実施例３
亜鉛イオン濃度を制御する物質としてマウスのＬｉｖ１を発現するレトロウイルスベクターを用いてＬＰＳ刺激によるＭＨＣクラスＩＩ分子の発現増強に及ぼす影響を調べた。
理研より提供されたマウスＬｉｖ１遺伝子（ｍＬｉｖ１、遺伝子配列：配列番号５、アミノ酸配列：配列番号６）を含むクローン（ｍｆｊ０４６２３）から制限酵素ＸｈｏＩ及びＮｏｔＩによりｍＬｉｖ１遺伝子を切断回収し、東大医科研の北村俊雄教授が作成し、提供されたｐＭＸ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰレトロウイルスベクターに組み込んだ。このｐＭＸ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰ−ｍＬｉｖ１ベクターを米国スタンフォード大学のＧａｒｒｙ Ｐ． Ｎｏｌａｎ博士より提供されたＰｈｏｅｎｉｘ細胞にリポフェクトアミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて導入しウイルスを発現させた。２４時間から４８時間後に、このウイルスを含む培養上澄みを回収し、ＧＭ−ＣＳＦ〔ＧＭ−ＣＳＦ産生細胞株（ＧＭ−ＣＳＦ／ＣＨＯ）を培養し、その培養上清を０．３％になるように培地に加える〕、ＦＣＳ（１０％）、ｐｒｏｔａｍｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ（ＳＩＧＭＡ；２μｇ／ｍＬ）を添加して、ウイルス感染液とした。Ｃ５７／ＢＬ６マウス（日本クレア）骨髄より調製したＢＭＤＣにＤａｙ２及びＤａｙ４に培地をウイルス感染液に交換しＢＭＤＣに感染させた。Ｄａｙ６でウイルスフリーの培地に交換し、さらにＬＰＳ（ＳＩＧＭＡ；１００ｎｇ／ｍＬ）で刺激した。刺激後６時間で細胞を回収し、細胞表面のＭＨＣクラスＩＩ分子の発現レベルをＦＡＣＳにより調べた。ここで、ＬＰＳ刺激しない細胞群をコントロールとして、またＧＦＰ陽性細胞をｍＬｉｖ１が強制発現している細胞として扱った。
ＬＰＳ刺激によるＭＨＣクラスＩＩ分子の発現増強がｍＬｉｖ１強制発現細胞では抑制されることがわかった。
【配列表フリーテキスト】
【００５２】
配列番号７：アンチセンス配列
配列番号８：アンチセンス配列
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】樹状細胞を亜鉛イオンキレーターで処理すると、その細胞表面にＭＨＣクラスＩ、クラスＩＩ、ＣＤ８６分子が発現増強することを示す図である。
【図２】樹状細胞を亜鉛イオン及び亜鉛イオノフォアとで処理すると、ＬＰＳ刺激による樹状細胞のＭＨＣＩＩ及びＣＤ８６分子の発現増強やＩＬ−１２の産生が抑制されることを示す図である。
【図３】レトロウイルスベクターを用いてｍＬｉｖ１を発現させた樹状細胞では、ＬＰＳ刺激によるＭＨＣクラスＩＩ分子の発現増強が抑制されることを示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を有効成分として含有する、抗原提示細胞の機能制御剤。
【請求項２】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンである、請求項１記載の機能制御剤。
【請求項３】
亜鉛イオンが亜鉛イオノフォアによって細胞内に導入される、請求項２記載の機能制御剤。
【請求項４】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンキレーターである、請求項１記載の機能制御剤。
【請求項５】
亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項４記載の機能制御剤。
【請求項６】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質である、請求項１記載の機能制御剤。
【請求項７】
亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項６記載の機能制御剤。
【請求項８】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質である、請求項１記載の機能制御剤。
【請求項９】
亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項８記載の機能制御剤。
【請求項１０】
抗原提示細胞が樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、Ｂ細胞、胸腺上皮細胞、滑膜細胞、血管内皮細胞及びケラチノサイトからなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の機能制御剤。
【請求項１１】
抗原提示細胞が樹状細胞である、請求項１０記載の機能制御剤。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の機能制御剤を含む、免疫システムが関与する疾患の予防・治療薬。
【請求項１３】
免疫システムが関与する疾患が、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、臓器移植の際の拒絶反応、感染や腫瘍形成による免疫応答の低下及びワクチン使用時の異常な免疫応答からなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項１２記載の予防・治療薬。
【請求項１４】
細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を有効成分として含有する、免疫システムが関与する疾患の予防・治療薬。
【請求項１５】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンである、請求項１４記載の予防・治療薬。
【請求項１６】
亜鉛イオンが亜鉛イオノフォアによって細胞内に導入されるものである、請求項１５記載の予防・治療薬。
【請求項１７】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンキレーターである、請求項１４記載の予防・治療薬。
【請求項１８】
亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１７記載の予防・治療薬。
【請求項１９】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質である、請求項１４記載の予防・治療薬。
【請求項２０】
亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１９記載の予防・治療薬。
【請求項２１】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質である、請求項１４記載の予防・治療薬。
【請求項２２】
亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項２１記載の予防・治療薬。
【請求項２３】
免疫システムが関与する疾患が、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、臓器移植の際の拒絶反応、感染や腫瘍形成による免疫応答の低下及びワクチン使用時の異常な免疫応答からなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項１４〜２２のいずれか１項に記載の予防・治療薬。
【請求項２４】
抗原提示細胞が樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、Ｂ細胞、胸腺上皮細胞、滑膜細胞、血管内皮細胞及びケラチノサイトからなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項１４〜２３のいずれか１項に記載の予防・治療薬。
【請求項２５】
抗原提示細胞が樹状細胞である、請求項２４記載の予防・治療薬。
【請求項２６】
インビトロで、細胞内の亜鉛イオン濃度を制御することを含む、抗原提示細胞の機能を制御する方法。
【請求項２７】
亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオンの細胞内への導入によって行われるものである、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
亜鉛イオンの細胞内への導入が亜鉛イオノフォアによって行われるものである、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオンキレーターによって行われるものである、請求項２６記載の方法。
【請求項３０】
亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節することによって行われるものである、請求項２６記載の方法。
【請求項３２】
亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節することによって行われるものである、請求項２６記載の方法。
【請求項３４】
亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
抗原提示細胞が樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、Ｂ細胞、胸腺上皮細胞、滑膜細胞、血管内皮細胞及びケラチノサイトからなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項２６〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
細胞内の亜鉛イオン濃度を測定することを含む、抗原提示細胞の機能を制御し得る化合物のスクリーニング方法。
【請求項３７】
抗原提示細胞が樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、Ｂ細胞、胸腺上皮細胞、滑膜細胞、血管内皮細胞及びケラチノサイトからなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
抗原提示細胞が樹状細胞である、請求項３７記載の方法。
【請求項１】
細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を有効成分として含有する、抗原提示細胞の機能制御剤。
【請求項２】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンである、請求項１記載の機能制御剤。
【請求項３】
亜鉛イオンが亜鉛イオノフォアによって細胞内に導入される、請求項２記載の機能制御剤。
【請求項４】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンキレーターである、請求項１記載の機能制御剤。
【請求項５】
亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項４記載の機能制御剤。
【請求項６】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質である、請求項１記載の機能制御剤。
【請求項７】
亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項６記載の機能制御剤。
【請求項８】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質である、請求項１記載の機能制御剤。
【請求項９】
亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項８記載の機能制御剤。
【請求項１０】
抗原提示細胞が樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、Ｂ細胞、胸腺上皮細胞、滑膜細胞、血管内皮細胞及びケラチノサイトからなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の機能制御剤。
【請求項１１】
抗原提示細胞が樹状細胞である、請求項１０記載の機能制御剤。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の機能制御剤を含む、免疫システムが関与する疾患の予防・治療薬。
【請求項１３】
免疫システムが関与する疾患が、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、臓器移植の際の拒絶反応、感染や腫瘍形成による免疫応答の低下及びワクチン使用時の異常な免疫応答からなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項１２記載の予防・治療薬。
【請求項１４】
細胞内の亜鉛イオン濃度を制御し得る物質を有効成分として含有する、免疫システムが関与する疾患の予防・治療薬。
【請求項１５】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンである、請求項１４記載の予防・治療薬。
【請求項１６】
亜鉛イオンが亜鉛イオノフォアによって細胞内に導入されるものである、請求項１５記載の予防・治療薬。
【請求項１７】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が亜鉛イオンキレーターである、請求項１４記載の予防・治療薬。
【請求項１８】
亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１７記載の予防・治療薬。
【請求項１９】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節する物質である、請求項１４記載の予防・治療薬。
【請求項２０】
亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１９記載の予防・治療薬。
【請求項２１】
亜鉛イオン濃度を制御し得る物質が、亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節する物質である、請求項１４記載の予防・治療薬。
【請求項２２】
亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項２１記載の予防・治療薬。
【請求項２３】
免疫システムが関与する疾患が、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、臓器移植の際の拒絶反応、感染や腫瘍形成による免疫応答の低下及びワクチン使用時の異常な免疫応答からなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項１４〜２２のいずれか１項に記載の予防・治療薬。
【請求項２４】
抗原提示細胞が樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、Ｂ細胞、胸腺上皮細胞、滑膜細胞、血管内皮細胞及びケラチノサイトからなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項１４〜２３のいずれか１項に記載の予防・治療薬。
【請求項２５】
抗原提示細胞が樹状細胞である、請求項２４記載の予防・治療薬。
【請求項２６】
インビトロで、細胞内の亜鉛イオン濃度を制御することを含む、抗原提示細胞の機能を制御する方法。
【請求項２７】
亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオンの細胞内への導入によって行われるものである、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
亜鉛イオンの細胞内への導入が亜鉛イオノフォアによって行われるものである、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオンキレーターによって行われるものである、請求項２６記載の方法。
【請求項３０】
亜鉛イオンキレーターが２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、エチレンジアミン（ＥＤＴＡ）及びＮ−（６−メトキシ−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオン要求性タンパク質の発現及び／又は機能を調節することによって行われるものである、請求項２６記載の方法。
【請求項３２】
亜鉛イオン要求性タンパク質がＲａｆ−１、ＰＫＣα、ＧＥＦ−Ｈ１、ＨＤＡＣ、ＳＱＳＴＭ１、ユビキチン−タンパク質リガーゼＥ３、ユビキチン共役タンパク質Ｅ２、メタロチオネイン、フォスファターゼ、Ｓｎａｉｌ、ＴＲＡＦ６、Ｐａｘｉｌｌｉｎ、Ｚｙｘｉｎ及びＪａｄｅ−１からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
亜鉛イオン濃度の制御が亜鉛イオントランスポーターの発現及び／又は機能を調節することによって行われるものである、請求項２６記載の方法。
【請求項３４】
亜鉛イオントランスポーターがＬＩＶファミリーを含むヒトＺＩＰ類、ヒトＣＤＦ類からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
抗原提示細胞が樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、Ｂ細胞、胸腺上皮細胞、滑膜細胞、血管内皮細胞及びケラチノサイトからなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項２６〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
細胞内の亜鉛イオン濃度を測定することを含む、抗原提示細胞の機能を制御し得る化合物のスクリーニング方法。
【請求項３７】
抗原提示細胞が樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、Ｂ細胞、胸腺上皮細胞、滑膜細胞、血管内皮細胞及びケラチノサイトからなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
抗原提示細胞が樹状細胞である、請求項３７記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２００６−２０６５３８（Ｐ２００６−２０６５３８Ａ）
【公開日】平成１８年８月１０日（２００６．８．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−２３２００（Ｐ２００５−２３２００）
【出願日】平成１７年１月３１日（２００５．１．３１）
【出願人】（５０３３５９８２１）独立行政法人理化学研究所 (1,056)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年８月１０日（２００６．８．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１月３１日（２００５．１．３１）
【出願人】（５０３３５９８２１）独立行政法人理化学研究所 (1,056)
【Ｆターム（参考）】
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