（３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−１−（２，２−ジフルオロエチル）−Ｎ’−［２−フルオロ−４−（２−オキソ−１（２Ｈ）−ピリジニル）フェニル］−３，４−ピロリジンジカルボキサミドの製造方法
本発明は、式（Ｉ）で示されるピロリジン−３，４−ジカルボキサミド誘導体の製造方法及びこの方法に有用な中間体に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式（Ｘ）：
【０００２】
【化１】
で示されるピロリジン−３，４−ジカルボキサミド誘導体、すなわち（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２，２−ジフルオロエチル）−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸 ３−［（５−クロロピリジン−２−イル）−アミド］ ４−｛［２−フルオロ−４−（２−オキソ−２Ｈ−ピリジン−１−イル）−フェニル］−アミド｝の製造方法に関する。さらに、本発明は、この方法に有用な中間体に関する。
【０００３】
国際公開第２００５／０９２８８１号に開示される式（Ｘ）で示される化合物は、活性化合物であり、そして凝固第Ｘａ因子を阻害する。その結果として、この化合物は血液凝固に影響を及ぼし、それゆえトロンビンの形成を阻害し、そしてとりわけ動脈及び静脈血栓、深部静脈血栓、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、不安定狭心症、心筋梗塞、冠動脈疾患、肺塞栓、心房細動に起因する脳卒中（脳血栓）、炎症及び動脈硬化などの血栓障害の治療及び／又は予防に使用することができる。この化合物は、例えば経腔的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）又は冠動脈もしくは末梢動脈のバイパス移植後の、血栓溶解療法及び再狭窄に関連する急性血管閉鎖の治療、ならびに長期血液透析患者における血管アクセス開存性の維持における利益を潜在的に有する。式（Ｘ）で示される化合物は、異なる作用様式を有する抗凝固剤との、又は血小板凝集阻害剤のと、又は血栓溶解剤との併用療法の一部を形成しうる。さらに、式（Ｘ）で示される化合物は、腫瘍細胞に対する効果を有し、そして転移を防止する。それゆえ、この化合物を、抗腫瘍剤として使用することもできる。
【０００４】
国際公開第２００５／０９２８８１号は、式（Ｘ）で示される化合物の製造方法を開示する。しかし、国際公開第２００５／０９２８８１号に（実施例に）記載される方法は、式（Ｘ）で示される化合物の調製について低い全収率をもたらした。また、［３＋２］付加環化反応のためのジエチルフマラートの熱溶液へのパラホルムアルデヒド／Ｎ−Ｂｎ−グリシン混合物の多回固体添加、自然発火性トリメチルアルミニウムを使用するワインレブアミド化工程の低くそして変動する収率、最終工程における大過剰のアルキル化剤（ジフルオロエチルトリフラート）の使用および中程度の収率、ならびに高温での（Ｎ−アリール化工程のための）Ｋ２ＣＯ３及びＤＭＳＯの潜在的に安全でない組み合わせなどのいくつかの問題が、この方法のスケールアップに適切ではない。
【０００５】
従って、本発明は、式（Ｘ）で示される化合物を製造するための改良法を提供する。
【０００６】
別段示さない限り、本明細書において本発明を記載するために使用する種々の用語の意味及び範囲を例示及び定義するために、以下の定義を示す。
【０００７】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を指し、フッ素、塩素及び臭素が好ましい。
【０００８】
「Ｃ１−５アルキル」という用語は、単独で又は他の基と組み合わせて、１〜５個の炭素原子の、分岐又は直鎖の一価アルキル基を指す。この用語は、さらに、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチルなどの基により例示される。「Ｃ１−３アルキル」という用語は、単独で又は他の基と組み合わせて、１〜３個の炭素原子の、分岐又は直鎖の一価アルキル基を指す。
【０００９】
「シクロアルキル」という用語は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、又はシクロヘキシルなどの、３〜１０個の炭素原子、好ましくは３〜６個の炭素原子の一価炭素環基を指す。
【００１０】
「アルコキシ」という用語は、基Ｒ’−Ｏ−を指し、ここで、Ｒ’は、アルキルである。「低級アルコキシ」という用語は、基Ｒ’−Ｏ−を指し、ここで、Ｒ’は、低級アルキルである。
【００１１】
「チオ−アルコキシ」という用語は、基Ｒ’−Ｓ−を指し、ここで、Ｒ’は、アルキルである。「チオ−低級アルコキシ」という用語は、基Ｒ’−Ｓ−を指し、ここで、Ｒ’は、低級アルキルである。
【００１２】
「フルオロ−低級アルコキシ」という用語は、基Ｒ”−Ｏ−を指し、ここで、Ｒ”は、フルオロ−低級アルキルである。フルオロ−低級アルコキシ基の例は、例えばＣＦＨ２−Ｏ、ＣＦ２Ｈ−Ｏ、ＣＦ３−Ｏ、ＣＦ３ＣＨ２−Ｏ、ＣＦ３（ＣＨ２）２−Ｏ、（ＣＦ３）２ＣＨ−Ｏ、及びＣＦ２Ｈ−ＣＦ２−Ｏである。
【００１３】
「アルケニル」という用語は、単独で又は他の基と組み合わせて、オレフィン結合及び２〜２０個、好ましくは２〜１６個の炭素原子、より好ましくは２〜１０個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐の炭化水素残基を意味する。下記の低級アルケニル基もまた、好ましいアルケニル基である。「低級アルケニル」という用語は、オレフィン結合及び２〜７個、好ましくは２〜４個の炭素原子を含む直鎖又は分岐の炭化水素残基、例えば２−プロペニルを指す。
【００１４】
「アルキニル」という用語は、単独で又は他の基と組み合わせて、三重結合及び２０個まで、好ましくは１６個までの炭素原子を含む、直鎖又は分岐の炭化水素残基を意味する。「低級アルキニル」という用語は、三重結合及び２〜７個、好ましくは２〜４個の炭素原子を含む直鎖又は分岐の炭化水素残基、例えば２−プロピニルを指す。低級アルキニル基は、例えばヒドロキシにより置換されることができる。
【００１５】
「アルキレン」という用語は、１〜２０個の炭素原子、好ましくは１〜１６個の炭素原子、より好ましくは１０個までの炭素原子の、直鎖又は分岐の二価飽和脂肪族炭化水素基を指す。下記の低級アルキレン基もまた、好ましいアルキレン基である。「低級アルキレン」という用語は、１〜７個、好ましくは１〜６個又は３〜６個の炭素原子の、直鎖又は分岐の二価飽和脂肪族炭化水素基を指す。直鎖アルキレン基又は低級アルキレン基が好ましい。
【００１６】
「アリール」という用語は、フェニル又はナフチル基、好ましくはフェニル基に関し、これらの基は、低級アルケニル、低級アルキニル、ジオキソ−低級アルキレン（例えばベンゾジオキシル基を形成する）、ハロゲン、ヒドロキシ、ＣＮ、ＣＦ３、ＮＨ２、Ｎ（Ｈ，低級アルキル）、Ｎ（低級アルキル）２、アミノカルボニル、カルボキシ、ＮＯ２、低級アルコキシ、チオ−低級アルコキシ、低級アルキルスルホニル、アミノスルホニル、低級アルキルカルボニル、低級アルキルカルボニルオキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル−カルボニル−ＮＨ、フルオロ−低級アルキル、フルオロ−低級アルコキシ、低級アルコキシ−カルボニル−低級アルコキシ、カルボキシ−低級アルコキシ、カルバモイル−低級アルコキシ、ヒドロキシ−低級アルコキシ、ＮＨ２−低級アルコキシ、Ｎ（Ｈ，低級アルキル）−低級アルコキシ、Ｎ（低級アルキル）２−低級アルコキシ、ベンジルオキシ−低級アルコキシ、及び低級アルキル（これらは、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ２、Ｎ（Ｈ，低級アルキル）又はＮ（低級アルキル）２によって場合により置換されることができる）からなる群より独立して選択される１〜５個、好ましくは１〜３個の置換基によって場合により置換されることができる。好ましい置換基は、ハロゲン、低級アルコキシ、フルオロ−低級アルコキシ、チオ−低級アルコキシ、及びアミノである。
【００１７】
本明細書において使用する「ヘテロシクリル」という用語は、窒素、酸素及び硫黄より選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含む、４又は６個の環員を有する非芳香族単環式複素環を表す。適切な複素環の例は、ピロリジニル、オキソピロリジニル、イソオキサゾリジニル、イソオキサゾリニル、ピロリニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペリジニル、２−オキソ−ピペリジニル、３−オキソ−モルホリニル、２−オキソ−ピペラジニル、２−オキソ−オキサゾリジニル、２−オキソ−アゼチジニル、ピペラジニル、モルホリニル、ピラニル、テトラヒドロピラニル、４，５−ジヒドロ−オキサゾリル、４，５−ジヒドロ−チアゾリルである。好ましい複素環は、モルホリニル、３−オキソ−モルホリニル、２−オキソ−ピペラジニル及び２−オキソ−ピペリジニルである。ヘテロシクリル基は、「アリール」という用語に関連して前述した置換パターンを有してもよい。
【００１８】
「ヘテロアリール」という用語は、窒素、酸素及び／又は硫黄より選択される１、２又は３個の原子を含みうる、芳香族の５〜６員単環又は９〜１０員二環、例えばフリル、ピリジル、ピリダジニル、オキソ−ピリダジニル、ピリミジニル、２−オキソ−ピリジニル、２−オキソ−ピリミジニル、ピラジニル、チエニル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イミダゾリル、ピロリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、１，２，３−チアジアゾリル、ベンゾイミダゾリル、インドリル、インダゾリルを指す。好ましいヘテロアリール基は、２−オキソ−ピリジニル、２−オキソ−ピリミジニル、ピリジニル、及びインドリルである。ヘテロアリール基は、「アリール」という用語に関連して前述した置換パターンを有してもよい。好ましい置換基は、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシ又はＣＮである。
【００１９】
一般的合成法
本発明によれば、式（Ｘ）で示される化合物は、以下のように製造される：
Ｉ 酵素的経路Ａ
【００２０】
【化２】
【００２１】
スキーム１において、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルを意味する。式（６）で示される化合物は水和物であることができる。特に、式（６）［式中、Ｒは、Ｅｔである］で示される化合物の水和物（６’）：
【００２２】
【化３】
を、対応する含水結晶（６’）として容易に単離することができる。
【００２３】
この経路は、以下の工程を含む：
１． ベンジル保護されたピロリジン２を提供するための、インサイチュで生成したアゾメチンイリドの間の双極［３＋２］付加環化。
２． ３を提供するための、ピロリジン２の脱ベンジル化。
３． ラセミ体ジエステル４を提供するための、３のＢｏｃ保護。
４． （Ｒ，Ｒ）−ジエステル５を提供する、（Ｓ，Ｓ）−鏡像異性体を加水分解しそして洗浄する酵素的分割。
５． （Ｒ，Ｒ）−一酸６を提供する、選択的モノ加水分解（monohydrolysis）。
６． アミドエステル７を与える、アニリン１１とのアミドカップリング。
７． ビス−アミド８を提供する、２−アミノ−５−クロロピリジンとの塩基性アミド化。
８． ピロリジン９を提供する、Ｂｏｃ脱保護。
９． ジフルオロエチルアミン１０を提供する、アルキル化。
【００２４】
１−１． 付加環化工程
文献に見出されるように（Rodriguez Sarmiento et al., Tetrahedron: Asymm. 2003, 1547-1551；M. Joucla, J. Mortier, Bull. Soc. Chim. Fr. 1988, 579；O. Tsuge, S. Kanemasa, M. Ohe, S. Takenaka, Bull. Chem. Soc. Jpn. 1987, 4079；O. Tsuge, S. Kanemasa, M. Ohe, S. Takenaka, Chem. Letters 1986, 973；M. Joucal, J. Mortier, J. Chem. Soc. Chem. Comm. 1985, 1566.）、付加環化を、フマル酸ジエステルの、Ｎ−ベンジルグリシン及びホルムアルデヒド（パラホルムアルデヒド）との反応により行うことができる。付加環化を、フマル酸ジエステルをＮ−ベンジル−トリメチルシリルメチルアミン１のＮ−（アルコキシメチル）又はＮ−（ベンゾトリアゾール−メチル）誘導体などのアゾメチンイリド前駆体と、一般に酸／ルイス酸触媒作用又は熱条件下で反応させることによって行うこともできる（Hosomi et al., Chemistry Letters 1984, 1117；Katritzky et al., Tetrahedron 1994, 12571；Karlsson and Horberg, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 2002, 1076；Kazuo et al., Chem. & Pharm. Bull. 1985, 896；I.F. Cottrell, D. Hands, D.J. Kennedy, K.J. Paul, S.H.B. Wright, K. Hoogsteen, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 1991, 1091；J. S. Cavey, J. Org. Chem. 2001 2526；C. Savarin, "Organic Process Research and Development", Scientific Update conference proceedings, Nice, March 30th 2006)。イリド前駆体は一般に単離されており、そしてインサイチュで生成したイリドのクエンチを防止するために、水は一般に反応混合物から排除される。
【００２５】
しかし、Ｎ−ベンジル−トリメチルシリルメチルアミン１をホルムアルデヒド水溶液と反応させることにより、アゾメチンイリド前駆体が提供され、これを事前乾燥なしにフマル酸ジエステルとの付加環化に直接使用することができることが見出された。実際、適切な条件下で、フマル酸エステルを用いた生成したイリドの付加環化と、水を用いたイリドのクエンチとの間の競合は、付加環化に有利であり、環付加物（水を用いた競合的イリドクエンチの指標であるＮ−メチル−Ｎ−ベンジルアミンが粗反応混合物中に検出される）の優れた収率を与える。これは、Ｎ−ベンジル−トリメチルシリルメチルアミン１及びホルムアルデヒド水溶液からの単純な方法を提供し、そしてイリド前駆体の単離を回避する。
【００２６】
そこで、まずＮ−ベンジル−トリメチルシリルメチルアミン１を、ＴＨＦ、ジオキサン、トルエン、酢酸エチル及びＤＭＥなどの適切な溶媒に溶解させる。ＴＨＦが好ましい。ホルムアルデヒド水溶液（好ましくは濃溶液、典型的には約３６％溶液、少なくとも１当量）を室温で添加する（イリドの生成に続いて水を用いたイリドクエンチが起こりうるので、フマル酸ジエステルの不在下でこの溶液を加熱することは不利益である）。
【００２７】
得られた混合物を、例えば純粋に熱の条件下で、好ましくは５０℃超でフマル酸ジエステルと反応させる。
【００２８】
フマル酸ジエステルとの反応を、より低い温度（例えば室温）で行うこともでき、この場合、反応を、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、塩酸、硫酸、リン酸、トリフリン酸（triflic acid）、ギ酸及び酢酸などの適切な酸の添加により触媒する必要がありうる。トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、塩酸、硫酸又はリン酸が好ましい。トリフルオロ酢酸がより好ましい。酸触媒反応を、上昇した温度で、例えば還流ＴＨＦ中で行ってもよい。
【００２９】
好ましい条件は、ＴＨＦ中のＮ−ベンジル−トリメチルシリルメチルアミン１の溶液への濃ホルムアルデヒド溶液（少なくとも１当量、好ましくは１〜１．５当量）の添加を含む。付加環化は、得られた反応混合物を、フマル酸ジエステルのＴＨＦ溶液及び触媒量のトリフルオロ酢酸（好ましくは１当量より低い、より好ましくは１〜５mol％）と室温で反応させることにより行われる。これらの条件下で、付加環化部分を、０℃〜６０℃、好ましくは２０℃〜６０℃、より好ましくは室温で行うことができる。
【００３０】
他の添加順序、例えばＴＨＦ中の、フマル酸ジエステル、トリフルオロ酢酸、及びホルムアルデヒドの混合物へのＮ−ベンジル−トリメチルシリルメチルアミン１の添加、またはＴＨＦ中の、Ｎ−ベンジル−トリメチルシリルメチルアミン１、トリフルオロ酢酸及びフマル酸ジエステルの混合物へのホルムアルデヒドの添加、又は対応する逆の添加様式が可能である。
【００３１】
代替の方法は、フマル酸ジエステルの熱混合物に、Ｎ−ベンジル−トリメチルシリルメチルアミン１とホルムアルデヒドとの混合物を添加することにある（例えばＴＨＦ中で４０℃〜還流温度で、好ましくは還流で）。イリドが生成し、そして水によりクエンチされるので、フマル酸ジエステルの非存在下でＮ−ベンジル−トリメチルシリルメチルアミン、ホルムアルデヒド及びトリフルオロ酢酸を混合することは、好ましくない。
【００３２】
適切な条件下で、環付加物の純度は、それが次の工程に直接導入されるために十分である。しかし、必要であれば、環付加物を、当業者に公知の方法、例えば蒸留、クロマトグラフィー又は塩形成により精製することができる。
【００３３】
１−２．及び３． 脱ベンジル化−Ｂｏｃ保護
化合物２を、例えばパラジウム担持炭又は水酸化パラジウム担持炭などの触媒の存在下での水素化分解を含む、当業者に公知の標準条件下で脱ベンジル化することができる。水素化分解を、エタノール、ＴＨＦ、酢酸エチル及び酢酸などの適切な溶媒中で行うことができる。エタノールが好ましい。塩酸などの酸を添加することができるが、反応は、好ましくは遊離塩基に対して行われる。脱保護されたアミン３を、当業者に公知の標準条件により、Ｂｏｃ保護して、化合物４を提供することができる。好ましい条件は、エタノール、ＴＨＦ、ＭＴＢＥ、酢酸エチル及びトルエンなどの溶媒中で、好ましくはエタノール又はＴＨＦ中で、０℃〜１００℃、好ましくは２０℃〜４０℃の間の温度で、より好ましくは室温で、化合物３をＢｏｃ２Ｏと反応させることを含む。過剰のＢｏｃ２Ｏを破壊するために、粗生成物を、水性ＴＨＦ中で、ＤＭＡＰ又はグリシンと、好ましくはＤＭＡＰと反応させることができる。
【００３４】
適切な条件下で（実験の部参照）、粗生成物は、それが次の工程に直接導入されるために適切な純度のものである。しかし、必要であれば、当業者に公知の方法により、例えば蒸留又はクロマトグラフィーによりそれを精製することができる。
【００３５】
１−４．及び５． 酵素的分割／モノ加水分解
【００３６】
【化４】
【００３７】
スキーム２において、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである。式（６）で示される化合物は、水和物でありうる。特に、式６［式中、Ｒは、Ｅｔである］で示される化合物を、対応する水和物６’：
【００３８】
【化５】
として容易に単離することができる。
【００３９】
式（６）で示される（Ｒ，Ｒ）−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸モノエステルは、式（Ｘ）で示される化合物を調製するための中間体として使用される。Ｒについて好ましいＣ１−５アルキルは、メチル、エチル又はｎ−プロピルであり、より好ましくはメチル又はエチル、特にエチルである。式（４）で示されるジエステルは、前記のように調製される。
【００４０】
中間体（６）を、下記の動力学的ラセミ分割に基づく化学酵素的手順により調製することができる。
１． スキーム２に概略を示すような、trans−ラセミ体Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエステル（４）のエナンチオ選択的酵素的加水分解
及び
２． スキーム２による、水性緩衝液中での保持された（Ｒ，Ｒ）−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエステル（５）の選択的モノ加水分解。
【００４１】
エナンチオ選択的加水分解は、保持されたジエステル（５）が鏡像異性体の高い過剰（＞５０％の転換）に達するまで、水性緩衝液中に乳化したジエステル基質（４）と酵素を激しい撹拌によって接触させることにより実施される。
【００４２】
文献（Rodriguez Sarmiento, Wirz & Iding (2003) Tetrahedron: Asymm. 14, 1547-1551）に記載される専用酵素 ESP-ESL 1199（Diversa Corporation）を用いたジエチルエステル４の分割に加えて、適切な反応条件を適用すれば、以下のさらなるエナンチオ選択的酵素を見出すことができる：Esterase NE09（Selectchemie AG [Etzelstrasse 42, P.O. Box 772, CH-8038 Zurich, Switzerland]から購入されるThermogen）、リゾプス・オリゼ（Rhizopus oryzae）由来リパーゼ及びサーモミセス・ラヌギノサス（Thermomyces lanuginosus）由来リパーゼ。好ましいのは、リゾプス・オリゼ由来リパーゼ（その市販調製物は、Amano Enzymes Inc.（Nagoya, Japan）からのLipase Dである）及びサーモミセス・ラヌギノサス由来リパーゼであり、もっとも好ましいのは、サーモミセス・ラヌギノサス由来リパーゼであり、その市販されている代表は、Novozymes（Bagsvaerd, Denmark）からのLipolase 100L Type EXであり、これは、基質の質に関してEsterase 1199よりも強いことが判明した廉価商品酵素である。
【００４３】
適切な緩衝液は、ｐＨ５〜１０、好ましくは６〜９の範囲の、生化学において一般に使用される従来の緩衝液である。反応の過程で、反応混合物のｐＨは、塩基、優先的にはＮａＯＨ又はＫＯＨ溶液の添加により、選択された値で一定に保たれる。
【００４４】
Lipolase 100L Type EXの場合、ｎ−ヘプタン（例えば５％v/v）又は塩化アンモニウム（例えば０．５M）などの非極性有機溶媒の存在下でのリン酸緩衝液（例えばｐＨ７）の使用は、選択性に正の影響を及ぼす（Ｅ≧２５）。より高濃度のリン酸緩衝液（例えば１００mM）は、酵素活性を強く増強し、それが今度は、エナンチオ選択性の増加のために温度を低下させる。基質濃度は、１〜２０％w/w、好ましくは５〜１５％w/wの範囲でありうる。
【００４５】
エナンチオ選択性を増強するために、全ての酵素を、より低い温度（０〜２５℃）で適用しうる。より高い温度で作業することによって酵素の活性を増加させることができるが、しかし選択性が犠牲にされる。代替として、酵素を固定化形態で使用してもよい。反応の終了後、ジエステル生成物を抽出により従来どおりに処理する。
【００４６】
次いで、保持された鏡像異性的に純粋な（典型的には９９％ e.e.超で得られる）（Ｒ，Ｒ）−ジエステル（５）を、文献に記載されるように（Rodriguez Sarmiento, Wirz & Iding (2003) Tetrahedron: Asymm. 14, 1547-1551）、カンジダ・シリンドラセ（Candida cylindracea）由来の市販酵素であるLipase OF（Ｃ．ルゴサ（C. rugosa）；Meito Sangyo; Tokyo, Japan）を使用して鏡像異性的に純粋な（Ｒ，Ｒ）−モノエステル（６）にモノ加水分解する。より高く、技術的により関連する５〜１５％の基質濃度では、二酸の形成がより顕著であったが、酵素の性能を改善することができた。
【００４７】
より高い基質濃度でのLipase OFの選択性は、水性緩衝液に糖（例えば１M Ｄ−グルコース）を添加することにより引き起こされた。抽出剤（例えば酢酸エチル）として技術的に関連する溶媒を用いる生成物の単離のために、生成物であるモノエステル及び二酸副生成物を含有する水相のｐＨを、４．０〜４．５に調整した。
【００４８】
場合により、（Ｒ，Ｒ）−モノエステル６を、高度に（Ｒ，Ｒ）選択性の酵素を使用して、エナンチオ選択的モノ加水分解によりジエステル４から直接合成しうる。
【００４９】
１−６． 第１のアミドカップリング
アミドエステル７を提供するための、式６で示される化合物（無水形態として）および化合物１１の反応に適切な条件は、当業者に周知である。このような反応を、ジクロロメタン、ＤＭＦ、アセトニトリル、ＴＨＦ、ＮＭＰ及びＤＭＡなどの適切な溶媒中で、好ましくはＴＨＦ又はアセトニトリル中で、より好ましくはＴＨＦ中で、ＥＤＣ、ＤＩＣ、ＤＣＣ、ＣＤＩ、ＴＢＴＵ、ＨＢＴＵ、ＥＥＤＱ、ＣＩＰ、ＨＯＢｔ、ＨＡＴＵ、ＰｙＢＯＰ、ＰｙＢｒＯＰ、ＢＯＰ、ＢＯＰ−Ｃｌ及びＴＦＦＨなどの適切なカップリング剤の存在下で、−２０℃〜１２０℃の範囲で選択されうる適切な温度で実施することができる。さらなる反応条件は、ＣＤＭＴ（２−クロロ−４，６−ジメトキシ−［１，３，５］トリアジン）、トリクロロトリアジン又はそれらの対応するＮ−メチルモルホリン付加物（すなわち、４−（４，６−ジメトキシ−［１，３，５］トリアジン−２−イル）−４−メチル−モルホリニウムクロリド）などのカップリング剤の使用を含んでもよい。
【００５０】
あるいは、酸６を、クロロギ酸アルキル又はクロロギ酸アリール、好ましくはクロロギ酸アルキル、好ましくはクロロギ酸低級アルキル、より好ましくはクロロギ酸イソブチルの使用により、ジクロロメタン、ＤＭＦ、アセトニトリル、ＴＨＦ、ＮＭＰ及びＤＭＡなどの溶媒中で、好ましくはＤＭＦ、ＴＨＦ又はアセトニトリル中で、より好ましくはＴＨＦ中で、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン及びコリジンなどの塩基と組み合わせて、好ましくはＮ−メチルモルホリン又はコリジンと組み合わせて、より好ましくはＮ−メチルモルホリンと組み合わせて活性化しうる。活性化は、−５０℃〜５０℃、好ましくは−２０℃〜４０℃、より好ましくは−１０℃〜２０℃より選択される適切な温度で行われる。クロロギ酸エステルを、酸６と適切なアミンとの混合物に添加することができるか、またはクロロギ酸エステルへのアミンと酸６との混合物の逆の添加によることができ、好ましくは後者の添加順序である。
【００５１】
次いで、活性化した酸を、０℃〜１２０℃、好ましくは２０℃〜６０℃、好ましくは５０℃〜６０℃より選択される温度で、アニリン１１と反応させる。反応を室温で容易に行わせる塩化リチウムなどの無機塩の添加により、反応速度を劇的に増加させることができることが見出された。塩化リチウムは、１，３−ジカルボニルフラグメントの錯体化により混合無水物を活性化する見込みが高い。
【００５２】
あるいは、酸を、当業者に周知の条件下でアニリン１１と反応させる前に、対応する酸塩化物に転換することができる。好ましい条件は、ＳＯＣｌ２、ＯＰＣｌ３、オキサリルクロリド又はテトラメチルケテンイミニウムクロリド、好ましくはオキサリルクロリドを用いた活性化を含む。使用する試薬に応じて、Ｂｏｃ脱保護を回避するために、生成した塩酸を第三級塩基の使用によりクエンチすることが必要でありうる。
【００５３】
１−７． 第２のアミドカップリング
アミドエステル７を、２−アミノ−５−クロロピリジンを用いて、当業者に公知の条件下で、トリアルキルアラン又はジアルキルアルミニウムクロリド又はアルキルアルミニウムジクロリドの存在下で、好ましくはトリアルキルアランの存在下で、ＴＨＦ、ジオキサン、ＤＭＥ及びトルエンなどの適切な溶媒中で、好ましくはジオキサン又はトルエン中で、より好ましくはトルエン中で、−１０℃〜１２０℃、好ましくは５０℃〜１２０℃、より好ましくは９０℃〜１１０℃の範囲で選択される適切な温度で、ビス−アミド８に直接転換することができる。
【００５４】
あるいは、アミドエステル７を、当業者に公知の条件下で、ＮａＨ、ＬｉＨ、ＫＨ、ＬＤＡ、ＬｉＨＭＤＳ、ＫＨＭＤＳ、ＮａＨＭＤＳ、ＬｉＯｔＢｕ、ＫＯｔＢｕ、ＮａＯｔＢｕ、リチウムｔ−アミラート、カリウムｔ−アミラート及びナトリウムｔ−アミラートなどの強塩基の存在下で、好ましくはＬｉＨＭＤＳ、ＬＤＡ又はリチウムｔ−アミラートの存在下で、より好ましくはＬｉＨＭＤＳ又はリチウムｔ−アミラートの存在下で、さらにより好ましくはＬｉＨＭＤＳの存在下で、ＴＨＦ、ジオキサン、ＤＭＥ、トルエン又はＤＭＳＯなどの適切な溶媒中で、好ましくはＴＨＦ、ジオキサン又はＤＭＥ中で、より好ましくはＴＨＦ中で、例えば−２０℃〜８０℃から選択することのできる適切な温度で、ビス−アミド８に直接転換することができる。好ましい条件は、−１０℃〜６０℃、好ましくは０℃〜４０℃、より好ましくは０℃〜室温の温度でのＴＨＦ中のＬｉＨＭＤＳの使用を含む。
【００５５】
反応混合物の処理後に、生成物８は、最良にはエタノールから結晶化される。
【００５６】
あるいは、ビス−アミド８を、アミドエステル７から、対応する酸アミドにけん化し、続いて５−クロロ−２−アミノ−ピリジンとカップリングさせることにより得ることができる。エステルのけん化に使用すべき条件は、当業者に周知である。同じことは５−クロロ−２−アミノ−ピリジンとのカップリングに当てはまり、このための一般的な条件も本発明の説明中に見出すことができる。
【００５７】
１−８．及び９． Ｂｏｃ脱保護−アルキル化
ビス−アミド８を、当業者に周知の条件下で、トルエン、エタノール、酢酸エチル、アセトン、ジオキサン、ＴＨＦ、イソプロパノール及び水などの適切な溶媒中で、好ましくはＴＨＦ、イソプロパノール又は水中で、より好ましくは水中で、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、リン酸、ＨＢｒ、硫酸、トリフリン酸、トリフルオロ酢酸及び塩酸などの酸の存在下で、好ましくはトリフルオロ酢酸又は塩酸の存在下で、より好ましくは塩酸の存在下で、Ｂｏｃ−脱保護することができる。
【００５８】
脱保護されたアミン９を、当業者に公知の処理により、塩として（例えば、ｉＰｒＯＨ中でＨＣｌを用いてＢｏｃ脱保護を行う場合に、塩酸塩９・ｎＨＣｌ（ｎは典型的には１．８〜２．６）が濾過により単離されうる）、又は遊離塩基として、単離することができる。しかし、遊離塩基の水溶性に起因して、生成物は、好ましくは後の工程、すなわちアルキル化工程に直接導入される。適切な反応条件下で、粗反応混合物を、次の工程に直接導入することができる（下記参照）。
【００５９】
アミン９を、アセトニトリル、ＴＨＦ、ジオキサン、ジクロロメタン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ＤＭＡ、ＮＭＰ及び酢酸エチルなどの適切な溶媒中で、好ましくはＴＨＦ、ＤＭＳＯ、ジクロロメタン又はアセトニトリル中で、より好ましくはジクロロメタン又はアセトニトリル中で、さらにより好ましくはアセトニトリル中で、２，２−ジフルオロエチルハロゲニド（ヨージド、ブロミド、クロリド）、２，２−ジフルオロエチルトシラート、２，２−ジフルオロエチルメタンスルホナート、２，２−ジフルオロエチルｎ−ニトロベンゼンスルホナート（ｎ＝２、３もしくは４）又は２，２−ジフルオロエチルトリフラートなどのアルキル化剤を用いて、好ましくは２，２−ジフルオロエチルｎ−ニトロベンゼンスルホナート（ｎ＝２、３、４）又は２，２−ジフルオロエチルトリフラートを用いて、より好ましくは２，２−ジフルオロエチル３−ニトロベンゼンスルホナート又は２，２−ジフルオロエチルトリフラートを用いて、例えば２０℃〜１３０℃より選択される適切な温度で、トリエチルアミン、エチル−ジイソプロピルアミン、コリジン、ピリジン、ルチジン、Ｎａ２ＣＯ３、ＮａＨＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３及びＣs２ＣＯ３などの適切な塩基の存在下で、好ましくはエチル−ジイソプロピルアミン又はコリジンの存在下で、より好ましくはエチル−ジイソプロピルアミンの存在下で、アルキル化することができる。遊離塩基のアルキル化のための好ましい条件は、アセトニトリル中で、２０℃〜８０℃、好ましくは５０℃〜８０℃の温度で、より好ましくは還流アセトニトリル中で、エチル−ジイソプロピルアミンなどの第三級アミンの存在下で、２，２−ジフルオロエチル−３−ニトロベンゼンスルホナートと反応させることを含む。アミン９のアルキル化のための他の好ましい条件は、ＴＨＦ、アセトニトリル、酢酸エチル又はジクロロメタン中で、好ましくはＴＨＦ、アセトニトリル又はジクロロメタン中で、より好ましくはジクロロメタン中で、−１０℃〜８０℃、好ましくは０℃〜５０℃、より好ましくは０℃〜室温の温度で、エチル−ジイソプロピルアミンなどの第三級アミンの存在下で、２，２−ジフルオロエチルトリフラートと反応させることを含む。
【００６０】
酸塩としての脱保護されたアミンを、遊離塩基について上記したのと同様の条件下でアルキル化することができ、後者は、適切な塩基の作用によりインサイチュで生成する。しかし、この塩の対陰イオン部分が求核剤として作用し（塩化物イオンのように）、そしてアルキル化剤と競合的に反応することもできる場合、過剰のアルキル化剤を導入することが必要である。この場合、二相性の水性／有機溶媒条件下で作用させることが好ましくありうる。適切な条件下で、対陰イオンを、水相中に隔離することができ、そしてこれは有機相に存在するアルキル化剤と反応することができない。適切な塩基の使用によりインサイチュで生成した遊離アミンは、部分的に水溶性であるが、有機相中に連続的に抽出され、ここでそれは適切なアルキル化剤によりアルキル化される。
【００６１】
Ｂｏｃ脱保護／二相性アルキル化のために最も好ましい条件は、酢酸エチル、ＴＨＦ、イソプロパノール又は水中での、好ましくはＴＨＦ、イソプロパノール又は水中での、より好ましくは水中でのＢｏｃ脱保護を含む。アルキル化工程は、粗Ｂｏｃ脱保護反応混合物から、水、ならびにエチル−ジイソプロピルアミン、Ｎａ２ＣＯ３、ＮａＨＣＯ３、ＫＨＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、ＮａＯＨ、ＫＯＨなどの適切な塩基、又はその混合物、例えばエチル−ジイソプロピルアミンとＮａＯＨ（又はＫＯＨ）との混合物、エチル−ジイソプロピルアミンとＮａＨＣＯ３（又はＫＨＣＯ３）との混合物、ＮａＨＣＯ３とＮａＯＨ（ＫＯＨ）との混合物及びＫＨＣＯ３とＫＯＨ（又はＮａＯＨ）との混合物の存在下で、より好ましくはＮａＨＣＯ３の存在下で、ならびに酢酸エチル、酢酸イソプロピル、２−メチル−ＴＨＦ、ＭＴＢＥ及びトルエンなどのさらなる有機溶媒の存在下で、好ましくは酢酸エチル、酢酸イソプロピル又は２−メチル−ＴＨＦの存在下で、より好ましくは酢酸エチルの存在下で、ならびに２，２−ジフルオロエチルｎ−ニトロベンゼンスルホナート（ｎ＝２、３、４）及び２，２−ジフルオロエチルトリフラートなどのアルキル化剤の存在下で、好ましくはジフルオロエチル３−ニトロベンゼンスルホナート又は２，２−ジフルオロエチルトリフラートの存在下で、より好ましくは２，２−ジフルオロエチルトリフラートの存在下で、０℃〜１００℃、好ましくは２０℃〜５０℃より選択される適切な温度で行われる。
【００６２】
至適条件下で、等量又はほんのわずかに過剰のアルキル化剤を使用することが可能である（反応及び類似の例の実験の説明を参照されたい）。
【００６３】
II 付加環化／Ｂｏｃ保護によりＢｏｃ−ピロリジン中間体４を得るための代替経路
Ｂｏｃ−ピロリジン中間体４の調製のための代替方法は、トリメチルシリルメチル−アミン１２から［３＋２］付加環化して、アミナール１３を提供することからなり、これを、所望のＢｏｃ−ピロリジンに直接転換するか、またはピロリジン３に遊離させることができ、これは、上記のように容易にＢｏｃ保護されて、４を提供する。この順序は、脱ベンジル化工程を不要にし、そしてより原子効率的でもある。
【００６４】
【化６】
【００６５】
スキーム３において、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである。
【００６６】
II−１． 新たな［３＋２］付加環化
トリメチルシリルメチルアミンとフマル酸ジエステルとの間の［３＋２］付加環化を、１から２への転換について記載した付加環化に類似した条件下で行うことができる。しかし、同一条件下では、低〜中程度の収率が得られる。反応の最良の成果に重要なのは、使用するホルムアルデヒドの量である。反応は、１．３当量を超える、好ましくは１．５〜３当量、より好ましくは２当量の過剰のホルムアルデヒドを使用して最良に行われる。１から２への転換について記載した酸触媒作用による活性化は可能ではあるが、反応は、４０℃〜１２０℃、好ましくは５０℃〜８０℃、より好ましくは５５℃〜６５℃より選択される温度での純粋な熱条件下で、ＴＨＦ、ジオキサン、ＮＭＰ、ＤＭＳＯ、ＤＭＡ、ＤＭＥ、ＤＭＦ、酢酸エチル及びトルエンなどの溶媒中で、好ましくはＴＨＦ、ジオキサン、ＤＭＳＯ又はトルエン中で、より好ましくはＴＨＦ又はジオキサン中で最良に行われる。
【００６７】
II−２． Ｂｏｃ保護
アミナールを、水／有機溶媒混合物中でＢｏｃ２Ｏとの反応によりＢｏｃ保護されたピロリジン４に直接転換することができる。反応の間に、アミナールは、対応するピロリジン３にインサイチュで加水分解され、これは、次いでＢｏｃ２Ｏと反応して４を与える。反応は、水と、ＴＨＦ、ジオキサン、トルエン、酢酸エチル、ＭＴＢＥ、酢酸イソプロピル、アセトン及びジクロロメタンなどの有機溶媒との混合物中で最良に行われる。好ましい有機溶媒は、ＴＨＦ、ジオキサン、トルエン、酢酸エチル、ＭＴＢＥ又は酢酸イソプロピル、より好ましくは酢酸エチル、ＭＴＢＥ又はＴＨＦである。反応を、ＮａＨＣＯ３、ＫＨＣＯ３、トリエチルアミン、Ｎａ２ＣＯ３及びＫ２ＣＯ３などの塩基の存在下で行うこともできる。好ましい塩基は、ＮａＨＣＯ３又はＫＨＣＯ３、特にＮａＨＣＯ３である。あるいは、アミナールを、例えば水／有機溶媒混合物中で、塩酸ヒドロキシルアミンと反応させて、処理後にピロリジン３を提供することができる。この反応は、場合により、ＮａＨＣＯ３、ＫＨＣＯ３、トリエチルアミン、Ｎａ２ＣＯ３及びＫ２ＣＯ３などの塩基の存在下で行われる。好ましい塩基は、ＮａＨＣＯ３又はＫＨＣＯ３、特にＮａＨＣＯ３である。必要であれば、Ｂｏｃ−ピロリジン４を、当業者に公知の方法、例えばクロマトグラフィー又は蒸留により精製することができる。
【００６８】
III 脱保護／遊離塩基形成／アルキル化／アミド形成によりアミドエステル７を化合物（Ｘ）に転換するための代替経路
【００６９】
【化７】
【００７０】
スキーム４において、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである。
【００７１】
アミドエステル７を化合物（Ｘ）に転換するための代替法は、ａ）Ｂｏｃ脱保護、ｂ）アルキル化（好ましくは遊離塩基に対する）、及び第２のアミド形成を含む反応順序にある。
【００７２】
Ｂｏｃ脱保護は、当業者に公知の条件下で行われる。脱保護されたピロリジンを、適切な処理により塩酸塩又は遊離塩基として単離することができる。例えば、ＲがＥｔである塩酸塩１４を、適切な溶媒中でＮＨ３（例えばエタノール溶液として）との反応により遊離アミン１５に転換することができる。適切な溶媒は、エタノール、又はエタノールと、酢酸エチル、トルエン、ＭＴＢＥ、アセトン、酢酸イソプロピル、ジイソプロピルエーテル及びＴＨＦなどの有機溶媒との、好ましくは酢酸エチルとの混合物を含む。
【００７３】
次いで、遊離アミン１５を、類似の基質についてすでに上記した条件によりアルキル化する。好ましい条件は、適切な溶媒又は溶媒混合物中で、適切な塩基の存在下で、ジフルオロエチルトリフラート及びジフルオロエチル３−ニトロベンゼンスルホナートを使用することを含む。
【００７４】
IV 酵素的経路Ｂ
【００７５】
【化８】
【００７６】
スキーム５において、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである。Ｒは、好ましくは、場合によりハロゲン、メトキシ又はヒドロキシにより置換されているＣ１−３アルキル、より好ましくはＣ１−３アルキル、特にメチルである。
【００７７】
化合物（Ｘ）はまた、先のスキームに概略を示すようなＮ−（２，２−ジフルオロエチル）−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエステルの酵素的分割によって入手可能である。経路を、上記で定義するようなエステル系列で実施することができるが、好ましくはメチルエステル系列で行う。
【００７８】
ラセミ体エステルを、すでに上記した条件下で、適切なフマル酸ジエステルと、アミン１及びホルムアルデヒドの組み合わせに由来するアゾメチンイリドとの間の［３＋２］付加環化により調製する。得られたＮ−ベンジル−ピロリジンジカルボン酸ジエステルを、当業者に公知の条件下で脱保護する。次いで、ピロリジンを、類似の基質について先に記載した条件下で（すなわち、適切な溶媒又は溶媒混合物中で、適切な塩基の存在下で、ジフルオロエチルトリフラート又はジフルオロエチル３−ニトロベンゼンスルホナートとの反応により）アルキル化する。次いで、ラセミ体ジエステルを分割し、所望の（Ｒ，Ｒ）−ピロリジンジエステルをもたらす。次いで、後者を、一酸モノエステルにモノ加水分解し、これを、今度は類似の基質について本特許において記載する条件下で、化合物（Ｘ）に転換する。
【００７９】
この順序は、以下を含む：
１． ピロリジン１７を提供するための、フマル酸ジエステルと、アミン１及びホルムアルデヒドの組み合わせに由来するアゾメチンイリドとの間の［３＋２］付加環化
２． １８を提供するための、１７の脱ベンジル化。
３． 化合物１９を提供する、ピロリジン１８のアルキル化
４． （rac）−ピロリジンジエステル１９の（Ｒ，Ｒ）−ピロリジンジエステル２０への分割
５． ピロリジンジエステル２０の（Ｒ，Ｒ）−一酸モノエステル２１へのモノ加水分解。
６． モノアミドモノエステル２２を得るための、一酸モノエステル２１のアニリン１１とのカップリング
７． モノエステルモノアミド２２の２−アミノ−５−クロロピリジンとの直接カップリング。
【００８０】
あるいは、ピロリジン１９を、以下を含む工程により直接入手することができる：
１． トリメチルシリルメチルアミンを、２，２−ジフルオロエチルトリフラート、２，２−ジフルオロエチルトシラート、２，２−ジフルオロエチルｎ−ニトロベンゼンスルホナート（ｎ＝２，３，４）、２，２−ジフルオロエチル２，４−ジクロロベンゼンスルホナート及び２，２−ジフルオロエチルメシラートなどのアルキル化剤、好ましくは２，２−ジフルオロエチルトリフラート又は２，２−ジフルオロエチル３−ニトロベンゼンスルホナート、より好ましくは２，２−ジフルオロエチルトリフラートを用いてアルキル化し、Ｎ，Ｎ，−（トリメチルシリルメチル）−（ジフルオロエチル）−アミン２９をもたらす。
２． 今度は、試薬２９を、酸（アルキル化工程で使用する任意の過剰の塩基を少なくともプロトン化するために十分な量の）の存在下で、ホルムアルデヒド、フマル酸ジエステルと反応させ、対応する［３＋２］付加環化生成物、すなわちピロリジン１９をもたらす。あるいは、付加環化工程を、熱条件下で行うことができる。
【００８１】
【化９】
【００８２】
スキーム６において、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである。Ｒは、好ましくは、場合によりハロゲン、メトキシ又はヒドロキシにより置換されているＣ１−３アルキル、より好ましくはＣ１−３アルキル、特にメチルである。
【００８３】
あるいは、アミドエステル２２を、当業者に公知の条件下で、対応するアミド酸へのエステル加水分解及び酸官能基の２−アミノ−５−クロロピリジンとのカップリングにより、１０に転換することができる。
【００８４】
酵素的分割／モノ加水分解
【００８５】
【化１０】
【００８６】
スキーム７において、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである。Ｒは、好ましくは、場合によりハロゲン、メトキシ又はヒドロキシにより置換されているＣ１−３アルキル、より好ましくはＣ１−３アルキル、特にメチルである。
【００８７】
式２１の（Ｒ，Ｒ）−Ｎ−（２，２−ジフルオロエチル）−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸モノエステルは、式（Ｘ）で示される化合物を調製するための中間体として使用される。Ｒについての好ましいＣ１−３アルキルは、メチル又はエチルである。式１９、２０及び２１において、Ｒは、優先的にエチル又はメチルであり、最も好ましいのはメチルである。
【００８８】
中間体２１を、下記の動力学的ラセミ分割に基づく化学酵素的手順により調製することができる。
１． スキーム７に概略を示すような、trans−ラセミ体Ｎ−（２，２−ジフルオロエチル−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエステル１９のエナンチオ選択的酵素的加水分解
および
２． スキーム７による、水性緩衝液中での保持された（Ｒ，Ｒ）−Ｎ−（２，２−ジフルオロエチル）−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエステル２０の選択的モノ加水分解。
【００８９】
エナンチオ選択的加水分解（スキーム７）を、保持されたジエステル２０が高い鏡像異性体過剰（＞５０％の転換）に達するまで、水性緩衝液中に乳化したジエステル基質１９と酵素を激しい撹拌よって接触させることにより実施する。
【００９０】
適切な反応条件を適用すれば、いくつかのエナンチオ選択的酵素を見出すことができる：カンジダ・アンタルクチカＢ型（Candida antarctica form B）由来リパーゼ、フィコミセス・ニテンス（Phycomyces nitens）由来リパーゼ、バチルス種（Bacillus sp.）由来プロテアーゼ（Esperase 4.0 T; Novozymes）、バチルス種由来ズブチリシン（Alcalase 2.5L; Novozymes）及びエステラーゼ ESP-ESL-1199。好ましいのは、カンジダ・アンタルクチカＢ型由来リパーゼ、フィコミセス・ニテンス由来リパーゼ（Lipase PN, Wako Pure Chemical Industries Ltd.; Osaka, Japan）及びエステラーゼ ESP-ESL-1199（Diverasa Corporation; San Diego, USA）であり、最も好ましいのは、カンジダ・アンタルクチカＢ型由来リパーゼ（その市販調製物はLipozyme CALB L又はNovozyme CALB L; Novozymes; Bagsvaerd, Denmarkである）である。
【００９１】
適切な緩衝液は、ｐＨ５〜９、好ましくは６〜８の範囲の、生化学において一般に使用される従来の緩衝液である。反応の過程で、反応混合物のｐＨは、塩基、優先的にはＮａＯＨ又はＫＯＨ溶液の添加により、選択された値で一定に保たれる。
【００９２】
エステラーゼ ESP-ESL-1199の場合、ｐＨ７．２のリン酸緩衝液（例えば３０mM）を、酢酸マグネシウム（例えば飽和）、アセトニトリル（例えば５％v/v）及びエタノール（例えば５％v/v）などの添加剤と共に使用することが、選択性にとって有益である（Ｅ≫４０）。また、７未満のｐＨ（例えばＭＥＳ緩衝液、ｐＨ６．２）は、選択性を増強する。
【００９３】
カンジダ・アンタルクチカＢ型由来リパーゼの場合、ｐＨ７．２のリン酸緩衝液（例えば３０mM）を、硫酸カリウム（例えば０．５M）、塩化カリウム（例えば０．５M）、ロダンリチウム（例えば０．１M）、酢酸マグネシウム（例えば飽和）、ポリエチレングリコール6000（例えば１０％w/v）、塩化グアニジウム（例えば０．１M）、Ｄ−グルコース（例えば０．５M）、ＤＭＳＯ（例えば５％v/v）及びエタノール（例えば５％v/v）などの添加剤と共に使用することが、選択性にとって有益である（Ｅ≫４０）。また、７未満のｐＨ（例えば酢酸緩衝液又はＭＥＳ緩衝液）は、選択性を増強する。
【００９４】
エナンチオ選択性を増強するために、全ての酵素を、より低い温度（０〜２５℃）で適用しうる。より高い温度で作業することによって酵素の活性を増加させることができるが、しかし選択性が犠牲にされる。代替として、固定化形態で酵素を使用してもよい。
【００９５】
反応の終了後に、ジエステル生成物を抽出により従来どおりに処理する。
【００９６】
次いで、保持された鏡像異性的に純粋な（Ｒ，Ｒ）−ジエステル２０を、それを水性系中でリパーゼ、エステラーゼ、コレステラーゼ又はプロテアーゼと接触させることにより、鏡像異性的に純粋な（Ｒ，Ｒ）−モノエステル２１にモノ加水分解する。ブタ肝臓エステラーゼ（その市販調製物は、例えばRoche Applied SciencesからのPLE Technical Grade（３．１２MU/L；カタログ番号10491228；Penzberg, Germany)である）及びカンジダ・シリンドラセ由来Lipase OF（Ｃ．ルゴサ；Meito Sangyo; Tokyo, Japan）が最も適切な酵素であると判明した。
【００９７】
基質濃度は、１〜２０％w/w、好ましくは５〜１５％w/wの範囲でありうる。
【００９８】
モノエステル生成物を、酢酸エチルを用いたｐＨ３．５〜４での（抽出工程の間にｐＨを調整して、又は強ｐＨ３．５〜４リン酸緩衝液を使用して）反復した抽出により、水相から抽出する。
【００９９】
場合により、（Ｒ，Ｒ）−モノエステル２１を、高度に（Ｒ，Ｒ）選択的な酵素を使用するエナンチオ選択的モノ加水分解により、ジエステル１９から直接合成してもよい。
【０１００】
Ｖ 環状無水物経路
【０１０１】
【化１１】
【０１０２】
スキーム８において、Ｒ１は、メチル、エチル、シンナミル、ベンジル又はフェネチルである。
【０１０３】
この経路は、以下の工程を含む：
１． ジフルオロエチルピロリジン２３をもたらす、［３＋２］付加環化反応
２． cis−ビス−酸２４を提供する、ベンジルエステル水素化分解
３． 環状無水物２５の形成
４． cis一酸モノエステル２６を形成させるための、無水物脱対称化（desymmetrization）
５． αエステル中心の対応するtrans一酸モノエステル２７へのエピマー化
６． アミドエステル２８を与える、アニリン１１を用いた第１のアミドカップリング
７． 化合物１０をもたらす、エステルアミド２８の２−アミノ−５−クロロピリジンとの直接カップリング
【０１０４】
付加環化工程（２３の形成）のための条件は、試薬２９による（トリメチルシリル−メチル）−アミンからのピロリジン１９の調製について記載したものと同様である。
【０１０５】
２３の２４への水素化分解は、当業者に公知の条件下で行われる。使用する条件に応じて、水素化分解の間に結晶化が起こりうる。これを、トリエチルアミン及びジイソプロピルエチルアミンなどの第三級アミンの存在下で、好ましくはトリエチルアミンの存在下で水素化分解を行うことにより、回避することができる。ビス酸２４は、酢酸、又は酢酸と、トルエン、酢酸エチル、酢酸イソプロピル及びＭＴＢＥなどの溶媒との混合物から、好ましくは酢酸とＭＴＢＥの混合物中で最良に結晶化される。対応するtrans 酸へのエピマー化が、例えばcis 酸２４を酢酸中で加熱した場合に起こりうることに留意しなければならない。このエピマー化を回避するために、処理条件を慎重に選択しなければならない。しかし、より強烈な条件下ではあるが、２４のtrans 異性体を環状無水物に転換することが可能である（下記参照）。
【０１０６】
環状無水物の形成は、cisビス酸２４を、塩化スルホニル、酸化リン（ＯＰＣｌ３、Ｐ２Ｏ５）、ハロゲン化リン（ＰＣｌ３、ＰＣｌ５、ＰＢｒ３）又は無水プロピオン酸及び無水酢酸などの無水カルボン酸などの脱水剤と反応させることにより行われる。好ましい条件は、適切な溶媒、好ましくは酢酸中で無水酢酸を使用することを含む。
【０１０７】
式２６で示される化合物は、式２５のメソ環状無水物の脱対称化反応により入手される（例えばBolm et al, Tetrahedron: Asymmetry 2003, 3455；Bolm et al, J. Org. Chem. 2000, 6984；Deng et al., 米国特許出願公開第２００４／００８２８０９号；Deng et al, J. Am. Chem. Soc. 2000、9542を参照されたい）。
【０１０８】
アルコールを用いた選択的開環による環状無水物脱対称化は、キラルアミン、特にキナアルカロイド又はその誘導体などのキラル試薬の存在下で、好ましくはキニーネの存在下で行われる。反応を、ＴＨＦ、トルエン、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、アセトン、ＭＴＢＥ、２−メチル−ＴＨＦ及びアセトニトリルなどの有機溶媒中で、好ましくはＴＨＦ、トルエン又は２−メチル−ＴＨＦ中で、より好ましくはトルエン又はＴＨＦ中で行うことができる（以下の表を参照されたい）。
【０１０９】
プロモーターとしてのキニーネ及び求核剤としてのＢｎＯＨを用いて行ったスクリーニングからの結果：
【０１１０】
【表１】
【０１１１】
溶媒の混合物もまた可能である。しかし、試薬の溶解度、反応性及び選択性の間の至適バランスを見出さなければならない。
【０１１２】
この反応を、準化学量論的な量のキニーネを用いて行うことができる。しかし、この場合、反応は、添加剤、好ましくはヒューニッヒ塩基及びテトラメチルピペリジンなどの非求核塩基の存在下で、好ましくはヒューニッヒ塩基の存在下で最良に行われる。反応は、−８０℃〜５０℃、好ましくは−４０℃〜２５℃、より好ましくは約−２０℃より選択される温度で行われる。
【０１１３】
キニーネがプロモーターとして使用される場合、無水物を、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ベンジルアルコール、シンナミルアルコール及び２−フェニル−エタノールなどのアルコールを用いて、好ましくはメタノール、エタノール、ベンジルアルコール、シンナアミルアルコール又は２−フェニル−エタノールを用いて、より好ましくはエタノール、ベンジルアルコール又は２−フェニル−エタノールを用いて、より好ましくは２−フェニル−エタノールを用いて開環することができる。至適条件下で、生成物は、９０〜９５：１０〜５の鏡像異性体比で得られる。
【０１１４】
生成物を、抽出などの、当業者に公知の処理により単離することができる。いくつかの場合、そのキニーネ塩を、反応混合物から直接に、又は適切な溶媒交換後に、単離することができる。
【０１１５】
一酸モノエステルの鏡像異性体純度を、場合によっては、アミン、例えばキニーネを用いるそれらの塩の結晶化／再結晶化により向上させることができる。鏡像異性体純度を、一酸モノエステル２６（ここで、Ｒは、ＰｈＣＨ２ＣＨ２である）の場合と同様に、水から酸を結晶化することにより向上させることができる。
【０１１６】
cis一酸モノエステル２６の対応するtrans一酸モノエステル２７へのエピマー化は、＞１当量、好ましくは１．０５〜３当量、より好ましくは１．１〜２当量、より好ましくは１．３〜１．６当量の強塩基、例えばＬｉＨＭＤＳ、ＫＨＭＤＳ、ＮａＨＭＤＳ、ＬＤＡ、ＫＯｔＢｕ、ＮａＯｔＢｕ、ＬｉＯｔＢｕ、リチウムｔ−アミラート、カリウムｔ−アミラート及びナトリウムｔ−アミラートを使用して、塩基性条件下で行われる。好ましい塩基は、ＫＯｔＢｕ又はカリウムｔ−アミラート、特にＫＯｔＢｕである。反応は、トルエン、ＴＨＦ、ＤＭＥ及びジオキサンなどの溶媒中で、好ましくはトルエン又はＴＨＦ中で、より好ましくはＴＨＦ中で行われる。反応は、−８０℃〜５０℃、好ましくは−８０℃〜室温、より好ましくは−８０℃〜−１５℃、さらにより好ましくは−８０℃〜−６０℃より選択される温度で行われる。
【０１１７】
出発一酸モノエステル２６の塩基との反応を可能にするように、それが完全に溶解しているか、又は少なくとも十分な溶解度を示すことに注意を払わなければならない。好ましくない溶解度の場合、可溶性塩を形成する第三級アミンの添加で、問題が解決されうる。好ましいアミンは、例えばトリエチルアミン、トリブチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン、より好ましくはトリエチルアミンである。
【０１１８】
ジアステレオマー純度（trans：cis）は、一般に粗混合物中約９９％である。ＲがＰｈＣＨ２ＣＨ２の場合、これは、処理及び水からの結晶化後にさらに増加しうる。
【０１１９】
ＲがＰｈＣＨ２ＣＨ２の場合、エナンチオ純度とジアステレオマー純度の両方を、例えば酢酸エチルとヘプタンとの混合物中で（再）結晶化することにより向上させることができる。
【０１２０】
２７の１０への転換は、類似の基質について本特許においてすでに記載した条件下で行われる。
【０１２１】
環状無水物２５を、以下のスキームに示す順序により入手することもでき、以下の工程を含む：
１． アミナール３０（異性体の混合物、隣接エステル基の間ですべてtransの相対立体配置、ここでＲはベンジルである）をもたらす、１２の１３への転換についてすでに記載した条件と同様の条件下でのトリメチルシリルメチルアミン／ホルムアルデヒド／ジベンジルフマラートの間での付加環化。
２． アミナールの対応するアミンへのインサイチュでの開裂（これは塩酸塩３１として単離される）。
３． 類似の基質について本特許においてすでに記載した条件下での、３２をもたらす、３１の対応する遊離アミンのアルキル化。
４． transビス酸３３をもたらす、ベンジルエステル水素化分解
５． 無水物形成。
【０１２２】
【化１２】
【０１２３】
trans ビス酸３３を、cis 無水物２５に直接転換することができる。実際、適切な反応条件下で、３３のcis及びtrans異性体の間に平衡が存在する。次いで、cis 異性体を無水酢酸によりトラップし、所望の無水物に転換する。反応条件は、十分に速やかにtrans−cis 異性化をさせるために反応温度を上げなければならない以外、２４から２５への転換に使用する条件と同様である。好ましい条件は、６０℃〜１４０℃、好ましくは８０℃〜１２０℃、より好ましくは１００℃〜１１０℃の温度で、適切な溶媒、好ましくは酢酸中で、ビス酸３３を無水酢酸と反応させることを含む。
【０１２４】
ビス酸３３を、対応するエステル（例えばジメチル−、ジエチル−、ジ−ベンジル−、ジプロピル、ジイソプロピル−、ジブチル−エステル）の加水分解及びｐＨ３〜３．５の水からの結晶化により得ることもできる。
【０１２５】
１−（４−アミノ−３−フルオロ−フェニル）−１Ｈ−ピリジン−２−オン（化合物１１）の調製
米国特許出願公開第２００５／０２１５５９９号に記載される方法、すなわち４−ブロモ−２−フルオロアニリンを用いた２−ヒドロキシピリジンの銅触媒Ｎ−アリール化は、重大な安全上の問題を抱えている。
【０１２６】
【化１３】
【０１２７】
実際、Ｋ２ＣＯ３とＤＭＳＯとの混合物は高温で潜在的に暴走事象（runaway event）をもたらし、これは、非常に高い断熱温度上昇を伴う。暴走事象についての最大速度までの時間（ＡＲＣの測定から）はおよそ反応時間であり、従ってこのような方法を、そのままスケールアップすることができない。この方法の第１の改変は、ＤＭＳＯをＮＭＰ又はＤＭＡに、好ましくはＤＭＡに置き換えることを含んだ。
【０１２８】
銅（Ｉ）供給源は、ＣｕＩ、ＣｕＣｌ、ＣｕＢｒ、Ｃｕ２Ｏ、好ましくはＣｕＩ及びＣｕ２Ｏ、より好ましくはＣｕ２Ｏでありうる。
【０１２９】
Ｎ−アリール化のための好ましい条件は、ＤＭＡ中、Ｋ２ＣＯ３の存在下で、１１０℃〜１５０℃、より好ましくは１２０〜１４０℃、さらにより好ましくは１３０〜１４０℃の温度で、０．０５〜１当量、好ましくは０．０５〜０．５当量、より好ましくは０．１〜０．２当量のＣｕ２Ｏを使用することを含む。
【０１３０】
他の好ましい条件は、１００〜１５０℃、好ましくは１００〜１２０℃（沸点を超える温度についてはオートクレーブを使用する）の温度で、溶媒としてのピリジン及び０．１〜１当量、より好ましくは０．２５〜０．７５当量、さらにより好ましくは約０．５当量のＣｕ２Ｏを使用することを含む。
【０１３１】
両方の場合に、生成物は、水の添加により、結晶化により単離される。
【０１３２】
必要であれば、生成物を、活性炭処理及び／又はエタノールもしくはメタノール、好ましくはメタノール中の再結晶化によりさらに精製することができる。
【０１３３】
Ｎ−アリール化を、トルエン中で、trans−シクロヘキシル−１，２−ジアミン、ＴＭＥＤＡ、エチレンジアミン、trans−Ｎ，Ｎ’−ジメチル−シクロヘキシル−１，２−ジアミン、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレン−１，２−ジアミン、好ましくはtrans−Ｎ，Ｎ’−ジメチル−シクロヘキシル−１，２−ジアミン及びＴＭＥＤＡなどのリガンド、好ましくはＴＭＥＤＡの存在下で行うこともできる。
【０１３４】
アニリン１１を、まず４−ブロモ−２−フルオロアニリンの保護、続いてＮ−アリール化（非保護アニリンに関して上記したものと同様の条件下で）、続いて脱保護を含む順序により調製することもできる。４−ブロモ−２−フルオロアニリンは、好ましくはビス−ベンジル化により保護される。結晶性中間体を、各工程で得る。ピリドン環の水素化を回避するために、脱保護工程は、水素化分解の慎重なモニタリングを必要とする。触媒の適切な選択もまた重要であり、本発明者らの手持ちでは、Johnson Mattheyからの５％ Ｐｄ／Ｃが最良の結果を与えた。
【０１３５】
【化１４】
【０１３６】
実施例
下記の実施例は、本発明を更に詳細に説明するために役立つ。しかし、これらは本発明の範囲をどのようにも制限することを意図しない。
【０１３７】
実施例１ 酵素的経路Ａ
工程１：［３＋２］付加環化
【０１３８】
【化１５】
【０１３９】
Ｎ−ベンジル−Ｎ−トリメチルシリルメチル−アミン９００ｇ（４６５４mmol）を、ＴＨＦ ５．６Ｌに２０〜２５℃で溶解した。温度を２０〜２５℃の間に保持しながら、３６％ホルムアルデヒド水溶液４５０ml（５８８０mmol、１．２６当量）を１５分間かけて加えた。１５分後、ジエチルフマラート７６０ml（１当量）、ＴＨＦ ２．２５Ｌ及びトリフルオロ酢酸１１．２ml（０．０３当量）の混合物を１５分間かけて加えた。温度を２０〜３０℃に保持しながら、反応混合物を一晩撹拌した（ＧＣによる工程内管理（in process control））。１N ＨＣｌ ３．５Ｌを加え、続いてヘプタン２．３Ｌを加えた。水相を分離し、ヘプタン３．４Ｌで洗浄した。ヘプタン相を１N ＨＣｌ ３．５Ｌで順次洗浄した。ＭＴＢＥ ４．５Ｌを、合わせた水相に加えた。３２％ ＮａＯＨ水溶液７２０mlを激しく撹拌しながら加えた（ｐＨ １３）。水相を分離し、ＭＴＢＥ ４．５Ｌで再抽出した。ＭＴＢＥ相を水２．２Ｌで順次洗浄し、合わせ、４５℃で濃縮乾固して、粗（rac）−trans−Ｎ−ベンジル−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエチルエステル１．２９５kgを得た。必要であれば、粗環付加物を蒸留することができる。
【０１４０】
工程１：［３＋２］付加環化（代替条件）
Ｎ−ベンジル−Ｎ−トリメチルシリルメチル−アミン２００ｇ（１０３５mmol）を、ＴＨＦ ８００mlに溶解した。この溶液に、３７％ホルムアルデヒド水溶液９８．３ml（１．２６当量）を室温で加えた。室温で１５分間撹拌した後、得られた溶液をジエチルフマラート１８１．８ｇ（１０３５mmol）、ＴＨＦ １．２Ｌ及びトリフルオロ酢酸２．５ml（０．０３当量）からなる熱（５０〜５５℃）溶液に２時間かけて加えた。反応が完了した後（ＧＣ又はＨＰＬＣによるＩＰＣ）、反応混合物を室温に冷まし、先の実施例に記載されているように処理して、予想される環付加物３０１．８ｇを得た。
【０１４１】
工程２〜３：脱ベンジル化／Ｂｏｃ保護
【０１４２】
【化１６】
【０１４３】
（rac）−trans−１−ベンジル−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエチルエステル１．２９５kgを、ＥｔＯＨ ６．５Ｌ中で、１０％ Ｐｄ／Ｃ 触媒１００ｇを用いて室温にて水素化した。反応が完了した後、触媒を濾過し、ＥｔＯＨ ４８０ml中のジ−ｔ−ブチル−ジカルボナート９３５ｇ（１．０１当量）の溶液を加えた。反応が完了した後（ＧＣによる工程内管理）、反応混合物を蒸発させ、ＴＨＦ ９．７Ｌに溶解した。水８mlを加え、続いてＤＭＡＰ ５．３ｇ（０．０１当量）を加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、濃縮乾固した。残留物をＭＴＢＥ ６．５Ｌに溶解し、５％クエン酸水溶液１．２９Ｌ、１０％ ＮａＨＣＯ３水溶液３．３Ｌ及び水３．３Ｌで洗浄した。水相をＭＴＢＥ ６．５Ｌで順次再抽出した。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、４０℃で濃縮乾固して、粗（rac）−trans−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエチルエステル１．２３３kgを得た。
【０１４４】
注： 酵素的分割をLipolase 100L Type EX 酵素を用いて実施する場合、ＤＭＡＰクエンチを省略してもよい。
【０１４５】
工程４：酵素的分割（Lipolase）
【０１４６】
【化１７】
【０１４７】
（rac）−trans−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエチルエステル ３２ｇ（９６．１９mmol、９５ａ％ ＧＣ）を、ヘプタン３２ml及び０．１M リン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ ７．０ ２５６ml中で激しく撹拌しながら乳化した。エマルションを０〜１℃に冷却した。Novozyme Lipolase 100L Type EX（Novozyme）２．３０mlを加え、１．０M ＮａＯＨ溶液の自動添加（ｐＨ−スタット）によりｐＨを７．０で一定に保持した。目標の鏡像異性体過剰に達した後（典型的には＞９９％、反応時間約４５時間、０．５５当量 ＮａＯＨを添加、ＧＣ工程内管理）、ジクロロメタン２５０mlを加えた。水相を分離し、ジクロロメタン５００mlで２回抽出した。合わせた有機相を蒸発させ、その間に白色の沈殿物が形成された。残留物を酢酸エチル２５０mlに再溶解し、白色の沈殿物を濾別した。濾液を重炭酸ナトリウム飽和水溶液７５mlで洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させ、高真空下で一晩乾燥させて、（３Ｒ，４Ｒ）−trans−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエチルエステル １３．４７ｇを明黄色の油状物（ＧＣにより純度９６％）として得た。
【０１４８】
あるいは、生成物をヘプタン又はＭＴＢＥで、好ましくはヘプタンで抽出することができる。相分離を促進するために、ＮａＣｌもまた水相に加えることができる。
【０１４９】
工程５：選択的モノ加水分解
【０１５０】
【化１８】
【０１５１】
（３Ｒ，４Ｒ）−trans−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエチルエステル２．９５kgを、５mM リン酸カリウム／１M Ｄ−グルコース緩衝液の水溶液２６．５Ｌ中で撹拌して、エマルションを形成した。水０．５Ｌに溶解したLipase OF（Meito Sangyo）５．９ｇを加えた。１M ＮａＯＨを加えることによりｐＨを７．２に保持した。反応が完了した後（１M ＮａＯＨ ８．４kg、反応時間２４時間、ＧＣ工程内管理）、ＭＴＢＥ １０Ｌを加えた。有機層を分離し、廃棄した。酢酸エチル４０Ｌを加え、Ｈ２ＳＯ４を加えることによりｐＨを４に調整した。有機層を分離し、水相を酢酸エチル４０Ｌで再抽出した。合わせた有機相を蒸発乾固して、（３Ｒ，４Ｒ）−trans−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸モノエチルエステル２．３５kgを得た。
【０１５２】
（３Ｒ，４Ｒ）−trans−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸モノエチルエステルをアセトン／水中で結晶化させることができる：
（３Ｒ，４Ｒ）−trans−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸モノエチルエステル３．２kgを、アセトン３．２Ｌに溶解した。この溶液に、０．１％酢酸水溶液３．２Ｌを室温で加えた。混濁した溶液に播種した。結晶化が１５分後に開始した。さらなる３０分の後、水３０Ｌを加え、懸濁液を室温で２２時間撹拌した。懸濁液を濾過した。フィルターケーキを合計７Ｌの水少量ずつで洗浄し、恒量に乾燥させて、（３Ｒ，４Ｒ）−trans−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸モノエチルエステル一水和物３．２９５kgを白色の粉末として得た。
【０１５３】
工程６：第１のアミドカップリング
【０１５４】
【化１９】
【０１５５】
trans−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸モノエチルエステル一水和物１３５ｇを、トルエン７００mlに懸濁し、１５０〜２００mlに濃縮した（約１００mbar下、ジャケット温度６０℃；水の共沸除去、カールフィッシャー分析により残留含水量をチェック）。ＴＨＦ ４００mlを加え、続いてＮ−メチルモルホリン ５５ml（１．１１当量）を加えた。得られた溶液を、ＴＨＦ ９００ml中のクロロギ酸イソブチル６０ml（１．０４当量）の冷（０〜５℃）溶液に３０分間かけて加えた。添加漏斗をＴＨＦ ５０mlで洗浄した。白色の懸濁液を０〜５℃で１５分間撹拌した。フルオロアニリン９０ｇ（１．０当量）を一度に加え、反応混合物を加熱還流した。反応が完了した後（ＨＰＬＣ工程内管理）、反応混合物を室温に冷ました。トルエン９００mlを加え、続いて１M ＨＣｌ ５００mlを加えた。水相を分離し、トルエン９００mlで抽出した。有機相を１M ＨＣｌ ５００ml及び５％ ＮａＨＣＯ３水溶液５００mlで順次洗浄した。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、約５００mlに濃縮した（ジャケット温度６０℃）。イソブタノールを、トルエン約１Ｌを用いる定容量での共沸蒸留により除去した（イソブタノール除去をＧＣによりチェック）。次に、粗生成物溶液を３３７ｇに濃縮した（トルエン中の６０％ m/m 溶液、それを次の工程に直接使用した、収率９７％に対応）。
【０１５６】
あるいは、反応をＬｉＣｌ活性化で室温にて実施することができる：一水和物としての一酸モノエステル １０ｇ（３２．７５mmol １当量）を、ＴＨＦ １００mlに溶解し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、ＴＨＦ ３０mlにＮ−メチルモルホリン４．１５ml（１．１５当量）と一緒に再溶解した。この溶液を、ＴＨＦ ５０ml中のクロロギ酸イソブチル４．４６ml（１．０当量）の冷０〜５℃溶液に１５分間かけて加えた。０〜５℃での１．５時間の後（活性化工程は主に供給制御されるので、保持時間をより短くすることができる。これはまた、いかなる混合無水物の分解も減少させる）、塩化リチウム１．４ｇ（１．０当量）を加え、続いてアニリン６．８８ｇを加えた（最初にアニリンを、続いてＬｉＣｌを加えることも可能である）。室温で１８時間反応させた後、トルエン １５０mlを加えた。反応混合物を、１N ＨＣｌ ６０ml、５％ ＮａＨＣＯ３水溶液 ６０ml及びＮａＣｌ半飽和水溶液６０mlで２回洗浄した。水相をトルエン１００mlで順次再抽出した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下４５℃で濃縮乾固して、泡状物１５．９２ｇを得た（収率約９７％、約４％トルエンを含有する）。イソブタノール除去を確実にしなければならない。さらなる共沸除去が可能である。先の実施例を参照のこと。
【０１５７】
工程７：第２のアミドカップリング
【０１５８】
【化２０】
【０１５９】
トルエン中の６０％ m/m アミドエステル（前記工程を参照）溶液３３７ｇ（４３１mmol、１当量）を反応器に入れ、続いてＴＨＦ ６５０mlを入れた。５−クロロ−２−アミノピリジン８６ｇ（１．５当量）を加えた。温度を２０〜２５℃の間に保持しながら、ＴＨＦ中の１M ＬｉＨＭＤＳ溶液１．２Ｌを３０分間かけて加えた。反応が完了した後（ＨＰＬＣ工程内管理）、水１．２Ｌ中の３７％ ＨＣｌ水溶液３００mlからなる溶液を加えた（ｐＨ １〜２）。ジクロロメタン２Ｌを加え、有機相を分離し、水１Ｌで洗浄した。水相をジクロロメタン１Ｌで順次抽出した。合わせたジクロロメタン相を２．５〜３．５Ｌの容量に濃縮した。エタノールへの溶媒交換を定容量で実施し（ジャケット温度６０℃、４００〜１００mbar、合計でエタノール５Ｌ）、その間に結晶化が開始した。懸濁液を室温に冷まし、室温で一晩撹拌し、０〜５℃で２時間撹拌した。懸濁液を濾過し、フィルターケーキを冷（−２０℃）ＥｔＯＨ ２５０mlで４回洗浄した。結晶を減圧下４５℃で恒量に乾燥させて、予想されるＢｏｃ−ピロリジンビス−アミド１８０ｇを白色の粉末として得た（収率７５％）。
【０１６０】
工程８〜９：Ｂｏｃ脱保護／アルキル化
【０１６１】
【化２１】
【０１６２】
Ｂｏｃ−ピロリジンビス−アミド５３．２ｇ（９５．７mmol、１当量）を、水１６０ml及び３７％ ＨＣｌ水溶液１６０ml（２０当量）からなる溶液に室温で少量ずつ加えた。反応が完了した後（約３０分間、ＨＰＬＣ工程内管理）、得られた溶液を重炭酸ナトリウム１９７ｇ（２４．５当量）、水３２０ml、酢酸エチル５３０ml及び２，２−ジフルオロエチルトリフラート２３ｇ（１．１当量）からなる熱（５０℃）溶液に１時間かけて加えた。添加漏斗を水１５mlで洗浄した。反応が完了した後（約３０分間、ＨＰＬＣ工程内管理）、反応混合物を室温に冷ました。水相を分離し、酢酸エチル５３０mlで再抽出した。有機相をＮａＣｌ半飽和溶液２６５mlで順次洗浄した。合わせた酢酸エチル相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過した。Ｎａ２ＳＯ４フィルターケーキを酢酸エチル２３０mlで洗浄した。エタノールに溶媒交換し、室温で一晩結晶化させた後、得られた懸濁液を−２０℃に冷却した。−２０℃での１時間の後、懸濁液を濾過し、冷（−２０℃）エタノール合計１００mlで少量ずつ洗浄した。結晶を恒量に乾燥させて（５０℃／減圧）、白色の粉末４０ｇを得た（収率７８％）。
【０１６３】
実施例２ 付加環化／Ｂｏｃ保護によるＢｏｃ−ピロリジン中間体４を得るための代替経路
１． 新たな［３＋２］付加環化
【０１６４】
【化２２】
【０１６５】
トリメチルシリルメチルアミン５０ｇ（４７５mmol、１当量）を、ＴＨＦ ５００mlに溶解し、３７％ホルムアルデヒド水溶液７１．７ml（２当量）で室温にて処理した。この温度での１５分の後、得られた溶液を、ＴＨＦ ５００ml中のジエチルフマラート８３．４mlの６０℃の熱溶液に１０分間かけて加えた。反応混合物を一晩還流した。反応混合物を室温に冷まし、濃縮乾固した。残留物をＭＴＢＥ １Ｌに再溶解し、１M ＨＣｌ水溶液５００mlで抽出した。ＭＴＢＥ ５００mlを水相に加え、続いて１M ＮａＯＨ ５００mlを激しく撹拌しながら加えた。水相を分離し、ＭＴＢＥ ２５０mlで再抽出した。合わせた有機相をＮａＣｌ飽和水溶液２５０mlで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、粗環付加物アミナール８３．３ｇを油状物として得た（収率８０％）。生成物は、いくらかの量の加水分解したアミナールを含有してもよい。
【０１６６】
２． アミナールからの直接Ｂｏｃ保護
【０１６７】
【化２３】
【０１６８】
前記工程からの環付加物アミナール７９．８ｇ（１８０mmol、１当量）を、ＴＨＦ ７９８mlに溶解した。水３２０ml及びジ−ｔ−ブチル−ジカルボナート８６．８ｇ（２．１６当量）を、撹拌しながら連続して室温で加えた。清澄で二相性の反応混合物を室温で一晩撹拌した（ＴＬＣ工程内管理）。反応が完了した後、ＤＭＡＰ ２２５mgを加えて過剰量のジ−ｔ−ブチル−ジカルボナートを破壊した。ＴＨＦを減圧下で蒸発させ、ＭＴＢＥ １Ｌを加えた。粗生成物溶液を１N ＨＣｌ水溶液０．８Ｌで洗浄した。水相をＭＴＢＥ １Ｌで再抽出した。合わせた有機相を水５００mlで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮乾固して、予想されるＢｏｃ保護ピロリジン９６．６ｇを油状物として得た（収率８７％）。
【０１６９】
あるいは、Ｂｏｃ保護を、容易な直接的抽出を可能にするＭＴＢＥ／水混合物中で実施することができる。しかし、この場合、ＤＭＡＰを用いたＢｏｃ２Ｏクエンチは上記のように可能ではない。しかし、実施例１：工程４のLipolaseを用いた分割に記載されるように、粗生成物を続く酵素の工程に直接使用することができるのでこれは問題ではない。
【０１７０】
実施例３ 酵素的経路Ｂ
工程１：付加環化
【０１７１】
【化２４】
【０１７２】
Ｎ−ベンジル−トリメチルシリルメチル−アミン１８０ｇ（９０３mmol、１当量）を、ＴＨＦ １．２５Ｌに溶解し、３７％ホルムアルデヒド水溶液８７．２ml（１．２８当量）で処理した。室温での１５分の後、ＴＨＦ ６２５ml中のジメチルフマラート１３４ｇ（１当量）及びトリフルオロ酢酸１．４ml（０．０２当量）の懸濁液を加えた。温度を２０〜３５℃の間に保持しながら、反応混合物を完了するまで（ＧＣ工程内管理、約５時間）撹拌した。ヘプタン１Ｌを加え、続いて１M ＨＣｌ水溶液９６６mlと水２００mlのと混合物を加えた。有機相を分離し、１M ＨＣｌ水溶液４５０mlと水１Ｌとの混合物で抽出した。ＭＴＢＥ １Ｌを、合わせた水相に加え、続いて３２％ ＮａＯＨ水溶液１５０mlを激しく撹拌しながら加えた。水相を分離し、ＭＴＢＥ １Ｌで再抽出した。合わせた有機相を水５００mlで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、環付加物２３８ｇを黄色の油状物として得た（収率９５％）。
【０１７３】
工程２：脱ベンジル化
【０１７４】
【化２５】
【０１７５】
Ｎ−ベンジルピロリジン２３５ｇを、ＭｅＯＨ ２．３５Ｌに溶解し、２０％ Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ ４７ｇの存在下、大気水素圧下、室温で水素化した。反応が完了した後、触媒を濾別し、濾液を減圧下で濃縮乾固して、アミン１４７．７ｇを得た（収率９３％）。あるいは、Ｐｄ担持炭もまた使用できる。
【０１７６】
工程３：アルキル化
【０１７７】
【化２６】
【０１７８】
アミン１２５ｇ（６６８mmol、１当量）を、アセトニトリル６２５mlに溶解した。ジフルオロエチル ３−ニトロベンゼンスルホナート１７８ｇ（１当量）及びエチルジイソプロピルアミン１１４ml（１当量）を加えた。反応が完了するまで（ＧＣ工程内管理、約２０時間）、反応混合物を加熱還流した。反応混合物を室温に冷まし、濃縮乾固した。ＭＴＢＥ ５００ml及び１０％ Ｎａ２ＣＯ３水溶液２５０mlを加えた。有機相を分離し、２５％ ＮＨ４Ｃｌ水溶液で２回洗浄した。水相をＭＴＢＥ ５００mlで順次再抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、ジフルオロエチルアミン生成物１６２．８ｇを得た（収率８４％、ＧＣにより約８６ａ％）。
【０１７９】
生成物を、必要であれば精製することができ、又は次の工程に直接使用することができる。
【０１８０】
工程４：酵素的分割
【０１８１】
【化２７】
【０１８２】
例ａ）：
（rac）−trans−ジメチルエステル１３２．５ｇ（４５４mmol、１当量、ＧＣにより純度８６％）を、０．０５M 酢酸マグネシウムｐＨ６水溶液１．２Ｌ中で撹拌した。酢酸を加えることにより、得られたエマルション（ｐＨ ８．２）のｐＨを６．５に調整した。次にNovozyme CALB L（Novozyme）９．７mlを加え、反応を引き起こした。１M ＮａＯＨの自動添加により（ｐＨ−スタット）、ｐＨを６．５で一定に保持した。反応が完了した後（目標のｅ．ｅ．に到達、典型的には＞９９％ｅ．ｅ．、反応時間約９０時間、ＮａＯＨ ０．５７当量添加、ＧＣ工程内管理）、ジクロロメタン１Ｌを加えた。ｐＨを７に調整した。水相を分離し、ジクロロメタン１Ｌで３回再抽出した。有機相をＮａＨＣＯ３飽和溶液４００ml及び水４００mlで洗浄した。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固して、粗（Ｒ，Ｒ）−ジエステル６４．２ｇを得た（収率４９％、ＧＣにより純度８８％）。
【０１８３】
例ｂ）：
（rac）−trans−ジメチルエステル５００ｇ（１．８３９mol、１当量、ＧＣにより純度９２．４％）を、０．０５M 酢酸マグネシウムｐＨ ６水溶液４．５Ｌ中で撹拌した。酢酸を加えることにより、得られたエマルションのｐＨを６．５に調整した。次にNovozymes CALB L（Novozyme）４０mlを加え、反応を引き起こした。１M ＮａＯＨの自動添加により（ｐＨスタット）、ｐＨを６．５で一定に保持した。反応が完了した後（目標のｅ．ｅ．に到達、典型的には＞９９％ｅ．ｅ．、反応時間約６９時間、ＮａＯＨ ０．５５当量添加、ＧＣ工程内管理）、ジクロロメタン１００mlを加えた。塩化ナトリウム１kgを加え、反応混合物をＭＴＢＥ ５Ｌで２回抽出した。合わせた有機相をＮａＨＣＯ３飽和溶液２Ｌ及び水２Ｌで洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固して、粗（Ｒ，Ｒ）−ジエステル２１５．５ｇを得た（収率４３％、ＧＣにより純度９２％）。
【０１８４】
工程５：酵素的モノ加水分解
【０１８５】
【化２８】
【０１８６】
例ａ）：
粗（Ｒ，Ｒ）−ジエステル ６３．１ｇを、０．１M ＮａＣｌ水溶液／３．８M リン酸ナトリウム ｐＨ ７緩衝液７３０ml中で撹拌した。得られたエマルションに、工業グレードのブタ肝臓エステラーゼ ２１０μl（Technical grade；Catalogue No. 10491228; Roche Applied Sciences）を室温で加えた。１M ＮａＯＨ水溶液の自動添加により、ｐＨを７．０で保持した。反応が完了した後（１M ＮａＯＨ ２４０ml消費、反応時間約７５時間、ＧＣ工程内管理）、ジクロロメタン１Ｌを加えた。有機相を分離し、廃棄した。２５％ ＨＣｌ水溶液を加えることにより水相のｐＨを３．５に調整した。水相を酢酸エチル１Ｌで抽出した。ｐＨ調整及び抽出の工程を４回繰り返した。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、一酸モノエステル４１．８ｇを得た（ＧＣにより純度９８％、収率７８％）。
【０１８７】
例ｂ）：
機械式撹拌機、温度計、ｐＨプローブ及びｐＨ−スタットに接続された滴定薬剤注入口を備えた７５０mlの４つ口フラスコ中で、（Ｒ，Ｒ）−ジエステル３８ｇ（１４１．３mmol；ＧＣ−純度９３．４％）を、０．１M 塩化ナトリウム／３．８mM リン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ ７．０ ３４０ml中で激しく撹拌しながら乳化した。ブタ肝臓エステラーゼ（Technical Grade、３．１２M U/L; Roche Applied Sciences）２４０μlを加えることにより反応を開始し、激しく撹拌しながら１．０M ＮａＯＨ溶液の自動添加により（ｐＨ−スタット）、ｐＨを７．０で一定に保持した。１．０M ＮａＯＨ溶液１３７．３ml（１３７mmol、９７．２％転換、４６時間後）の消費後、ジクロロメタン２０mlを加えることにより反応を停止し、ＭＴＢＥ ７６０mlで洗浄した。濃リン酸ナトリウム溶液１３９ml（２８％ ＮａＯＨ ７６mlに対してリン酸６３ml）を加えることにより、水相をｐＨ ３．６に調整し、酢酸エチル３×７６０mlで抽出した。合わせた酢酸エチル相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させ、乾燥させて、（Ｒ，Ｒ）−一酸２９．４ｇ（８６％）を白色の固体として得た。
【０１８８】
粗一酸モノエステルの結晶化： 粗一酸モノエステル５６．３７ｇを、酢酸エチル２００mlに加熱しながら溶解した。溶液を室温に冷まし、ヘプタン４００mlをゆっくり加えた。混濁した溶液に播種した。室温での１時間の後、懸濁液を濾過した。フィルターケーキを減圧下４５℃で乾燥させて、白色の粉末４６．８２ｇを得た。母液を蒸発させ、酢酸エチル２０mlに再溶解した。ヘプタン６０mlを加えた。室温での３時間の後、懸濁液を濾過した。フィルターケーキを減圧下４５℃で乾燥させて、白色の粉末７．１２ｇを得た。合計で５３．９４ｇの一酸モノエステルを単離した。
【０１８９】
工程６：第１のアミドカップリング
【０１９０】
【化２９】
【０１９１】
例ａ）：
一酸モノエステル１ｇ（４．２mmol、１当量）を、Ｎ−メチルモルホリン４６５μl（１当量）と一緒にＴＨＦ ３mlに溶解した。この溶液を、ＴＨＦ ５ml中のクロロギ酸イソブチル５７５μlの冷０〜５℃溶液に２０分間かけて滴下した。０〜５℃での１時間の後、塩化リチウム１８１mg（１当量）を加え、続いてフルオロアニリン８６１mg（１当量）を加えた。反応が完了するまで（ＨＰＬＣ工程内管理、約１〜３時間）、反応混合物を室温で撹拌した。水７ml、酢酸エチル２０ml及び１M ＨＣｌ水溶液１０mlを加えた。有機相を分離し、１M ＨＣｌ水溶液１０mlで再抽出した。飽和Ｎａ２ＣＯ３を加えることにより、合わせた水相のｐＨを９〜１０に調整し、酢酸エチル５０mlで２回抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固して、アミドエステル１．７２ｇを得た（ＨＰＬＣにより純度９６％、収率９６％）。
【０１９２】
例ｂ）：
一酸モノエステル２０ｇ（８４．３mmol、１当量）を、Ｎ−メチルモルホリン（１当量）９．２９mlと一緒にＴＨＦ ６０mlに溶解した。得られた溶液を、ＴＨＦ １００ml中のクロロギ酸イソブチルの冷（０〜５℃）溶液１１．４９ml（１当量）に２０分間かけて滴下した。０〜５℃での１時間の後（活性化は供給制御されるので、この保持時間はより短くすることができる）、フルオロアニリン１７．２２ｇ（１当量）を加え、続いて塩化リチウム３．５７ｇ（１当量）を加えた。反応混合物を室温に温めた。３時間反応させた後、水１４０ml、酢酸エチル４００ml及び１M ＨＣｌ ２００を加えた。有機相を分離し、１M ＨＣｌ ２００mlで再抽出した。水相を合わせ、Ｎａ２ＣＯ３飽和水溶液１６０mlを加えることによりｐＨを約１０に調整した。得られた混合物を酢酸エチル４００mlで２回抽出した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で約１４０mlの容量に濃縮した（結晶化がすでに開始しうる）。ヘプタン４２０mlをゆっくり加えた。得られた懸濁液を室温で３時間撹拌し、濾過した。フィルターケーキを減圧下で乾燥させて、生成物３１．１ｇを得た（収率８７％）。
【０１９３】
工程７：第２のアミドカップリング
【０１９４】
【化３０】
【０１９５】
例ａ）：
５−クロロ−２−アミノピリジン４６５mg（１．５当量）を、アミドエステル１ｇ（２．３６mmol、１当量）と一緒にＴＨＦ ８mlに溶解した。溶液を０〜２℃に冷却し、ＴＨＦ中の１M ＬｉＨＭＤＳ溶液７．１ml（３当量）を滴下した。反応が完了した後（約２時間、ＨＰＬＣ工程内管理）、２M ＨＣｌ水溶液（約６ml、５当量）を加えることにより、ｐＨを３．５に調整した。反応混合物を酢酸エチル１５mlで２回抽出した。有機相を水１３mlで順次洗浄した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固して、式（Ｘ）の粗化合物１．２７ｇを得た。
【０１９６】
例ｂ）：
２−アミノ−５−クロロピリジン１３．９４ｇ（１．５当量）及びモノエステルモノアミド３０ｇ（７０．８５mmol、１当量）を、ＴＨＦ ２４０mlに溶解した。溶液を０〜２℃に冷却し、ＴＨＦ中の１M ＬｉＨＭＤＳ溶液２１２．６ml（３当量）を２０分間かけて加えた。１．５時間反応させた後（ＨＰＬＣによる工程内管理）、温度を０〜１０℃の間に保持しながら、２M ＨＣｌ水溶液２４５mlを１５分間かけて加えた（得られた混合物のｐＨ：３．２）。得られた混合物を酢酸エチル３５０mlで２回抽出した。有機相をＮａＣｌ半飽和水溶液２００mlで順次洗浄し、合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、次にそれを１：２ エタノール／ヘプタン混合物からの結晶化により精製した（収率８５％）。
【０１９７】
ブランチ１：ジフルオロエチル ３−ニトロ−ベンゼンスルホナート
【０１９８】
【化３１】
【０１９９】
３−ニトロ−ベンゼンスルホニルクロリド１９４ｇ（１．１３当量）を反応器に入れ、続いて酢酸イソプロピル１．３Ｌを入れて、溶液を０〜５℃に冷却した。２，２−ジフルオロエタノール６５ｇ（７５３mmol、１当量）、トリエチルアミン１６３ml（１．５５当量）及び酢酸イソプロピル３２５mlの溶液を、温度を０〜５℃の間に保持しながら３０分間かけて滴下した。４時間反応させた後（ＨＰＬＣ工程内管理）、反応混合物を水６５０mlで洗浄した。水相を酢酸イソプロピル６５０mlで再抽出した。有機相を１M ＨＣｌ水溶液６５０ml及び１０％ ＮａＣｌ水溶液６５０mlで洗浄した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固して、２，２−ジフルオロエチル ３−ニトロベンゼンスルホナート１９６ｇを粘性の油状物として得て（収率９７％）、それを静置して結晶化させた。生成物をイソプロパノール（３０℃で播種、濃度：約１３Ｌ／ｋｇ生成物）から結晶化させることもできる。
【０２００】
ブランチ２：フルオロアニリン法Ａ：
【０２０１】
【化３２】
【０２０２】
４−ブロモ−２−フルオロアニリン４４ｇ（２２９mmol、１当量）、２−ヒドロキシピリジン３１．５ｇ（１．４当量）、炭酸カリウム３４．８０ｇ（１．１当量）、ヨウ化銅（Ｉ）６．５５ｇ（０．１５当量）を反応器に入れ、続いてＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド１００mlを入れた。懸濁液を１５５℃（ジャケット温度）で４時間加熱した（ＨＰＬＣ工程内管理）。反応混合物を１２０℃（ジャケット温度）に冷却し、水４００mlを３０分間かけて加え、反応混合物を室温にゆっくり冷ました。３０分後、反応混合物を０〜５℃に冷却し、この温度で１時間保持して、濾過した。フィルターケーキを水（０〜５℃）２００mlで洗浄し、結晶を減圧下７０℃で一晩乾燥させて、粗生成物４３．１ｇを得た。粗生成物を活性炭Norit SX-3 ５ｇと一緒にエタノール１Ｌに懸濁し、３０分間加熱還流した。熱懸濁液を圧力濾過器（木炭プレートを有する）で濾過した。フィルターケーキを熱エタノール２００mlで洗浄した。濾液を約１８０mbar下、６０℃で約５００mlに濃縮した。次に懸濁液を室温で３０分間、続いて０〜２℃で３０分間撹拌し、最後に濾過した。結晶を冷０℃エタノール合計５０mlで少量ずつ洗浄し、減圧下６０℃で恒量まで乾燥させて、生成物３３．９ｇを得た（収率７２％）。
【０２０３】
ブランチ２：フルオロアニリン法Ｂ：
４−ブロモ−２−フルオロアニリン５０ｇ（２６３mmol）、２−ヒドロキシピリジン２５ｇ（２６３．１mmol）及び酸化銅（Ｉ）１９．４ｇ（０．５当量）を反応器に入れた。ピリジン１００mlを加え、懸濁液を１４時間加熱還流した（ＨＰＬＣ工程内管理、＜３ａ％ ４−ブロモ−２−フルオロアニリン）。温度を８５〜９５℃の間に保持しながら、ピリジン１００mlを暗反応混合物に加えた。水２００mlを８５〜９５℃で１５〜３０分間かけて加えた。暗溶液を０℃に３時間かけて冷却した（結晶化が４０℃で自発的に起こらない場合、溶液に種結晶０．５ｇを４０℃にて播種する − 播種を必要に応じて３０〜４０℃の間で繰り返すことができる）。暗懸濁液を０℃で３０分間〜１時間撹拌し、濾過した。フィルターケーキを冷（４〜１０℃）水１００mlで３回洗浄した。結晶を減圧下６０〜６５℃で恒量まで乾燥させて、生成物２８．９ｇを得た（純度９４％ m/m、収率５０％）。
【０２０４】
粗生成物の品質が適切でない場合、それを、熱ＭｅＯＨ中で活性炭処理し、続いて熱濾過し、そしてＭｅＯＨ中で結晶化させることにより、向上させることができる。
【０２０５】
ブランチ２：フルオロアニリン法Ｃ：
４−ブロモ−２−フルオロアニリン３．０ｇ（１５．８mmol）、２−ヒドロキシピリジン１．５ｇ（１５．８mmol．１．０当量）、酸化銅（Ｉ）０．４７ｇ（３．１６mol、０．２当量）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン３４７μl（３．１６mmol、０．２当量）及び炭酸カリウム２．４ｇ（１７．４当量、１．１当量）を反応器中に入れた。トルエン３４mlを加え、懸濁液を１６時間加熱還流した（ＨＰＬＣ工程内管理、＜１ａ％ ４−ブロモ−２−フルオロアニリン）。温度を８５〜９５℃に保持しながらトルエン１０mlを暗反応混合物に加えた。水４５mLを８５〜９５℃で１５〜３０分間かけて加えた。暗溶液を０℃に冷却することにより結晶化させ、０℃で３０分間〜１時間撹拌して、濾過した。フィルターケーキを冷（４〜１０℃）水２５mlで３回洗浄した。結晶を減圧下６０〜６５℃で恒量まで乾燥させて、生成物３．０ｇを得た（純度７９％ m/m、収率７５％）。
【０２０６】
粗生成物の品質が適切でない場合、それを、熱ＭｅＯＨ中で活性炭処理し、続いて熱濾過し、そしてＭｅＯＨ中で結晶化させることにより、向上させることができる。
【０２０７】
ブランチ２：フルオロアニリン法Ｄ：
４−ブロモ−２−フルオロアニリン２０ｇ（１０３mmol、１当量）及び２−ヒドロキシピリジン１５．１６ｇ（１５５mmol、１．５当量）を反応器に入れ、続いてジメチルアセトアミド４０mlを入れた。炭酸カリウム１５．７ｇ（１．１当量）及びＣｕ２Ｏ ７６０mg（０．０５当量）を加えた。懸濁液を１３０℃で１８時間加熱した（ＨＰＬＣ工程内管理）。Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド ７０mlを加えた。反応混合物を１００℃に冷却した。水６０mlを加え、反応混合物を室温にゆっくり冷ました（結晶化が約４０℃で開始した、必要に応じて播種を行うことができる）。２M ＨＣｌ水溶液２７mlを加えることにより、ｐＨを８に調整した。懸濁液を０℃に冷却し、０℃で２時間撹拌した。懸濁液を濾過し、フィルターケーキを水５０ml及びＭＴＢＥ ８０mlで洗浄した。結晶を６０℃で恒量まで乾燥させて、生成物１５．２ｇを得た（９３ａ％ 収率約６７％）。
【０２０８】
粗生成物の品質が適切でない場合、それを、熱ＭｅＯＨ中で活性炭処理し、続いて熱濾過し、そしてＭｅＯＨ中で結晶化させることにより、向上させることができる。
【０２０９】
ブランチ２：フルオロアニリン法Ｅ：
工程１：
【０２１０】
【化３３】
【０２１１】
４−ブロモ−２−フルオロアニリン１０ｇ（５１．６mmol、１当量）、Ｎａ２ＣＯ３ ８．２６ｇ（１．５当量）及びＤＭＦ ６０mlを反応器に入れ、続いて臭化ベンジル１３．１３ml（２．１当量）を入れた。反応混合物を１００〜１１０℃に約２〜４時間加熱し（ＨＰＬＣ工程内管理）、次に室温に冷ました。反応混合物を、水１２０mlとＭＴＢＥ ２００mlとの混合物に加えた（撹拌しながら）。有機相を分離し、水１２０mlで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させて、濾過した。溶媒を、約１：３ m/v 生成物／ヘプタンの最終濃度でヘプタンに交換した。得られた混合物を約７０℃で加熱し、そして室温に、次に０℃に１時間冷却した。得られた白色の懸濁液を濾過し、冷（０〜５℃）ヘプタンで洗浄し、恒量まで乾燥させて（５０℃／５〜１０mbar）、オフホワイトの粉末１４．４ｇを得た。
【０２１２】
工程２：
【０２１３】
【化３４】
【０２１４】
ジベンジルアニリン２０ｇ（４８．６４mmol、１当量）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド４０mlに室温で溶解した。２−ヒドロキシピリジン７．１５ｇ（１．５当量）、Ｃｕ２Ｏ ７１７mg（０．１当量）及びＫ２ＣＯ３ ７．３９ｇ（１．１当量）を順次加えた。反応混合物を１３０℃に約２３時間加熱し（ＨＰＬＣ工程内管理）、次に室温に冷ました。ジクロロメタン１００ml及び２M ＨＣｌ ２００mlを加えた。有機相を分離し、２M ＨＣｌ ２００mlで洗浄した。水相をジクロロメタン１００mlで抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下４５℃で恒量まで濃縮した。得られた粗固体（約２０ｇ）を、ＡｃＯＥｔ １５０ml中で溶解するまで加熱した。混濁した溶液が得られるまでヘプタン１００mlをゆっくり加えた。混合物を室温にゆっくり冷ました。約３０分後、結晶化が開始した（開始しない場合、播種を実行することができる）。室温でさらに１時間撹拌した後、懸濁液を濾過した。フィルターケーキをヘプタンとＡｃＯＥｔとの１：１の混合物４０mlで洗浄し、減圧下５０℃で恒量まで乾燥させて、オフホワイトの粉末１６ｇを得た（収率８３％）。
【０２１５】
工程３：
【０２１６】
【化３５】
【０２１７】
ジベンジルアミン４ｇを、ＭｅＯＨ ８０mlとＡｃＯＥｔ ８０mlとの混合物に溶解した。５％ Ｐｄ／Ｃ（Johnson Matthey）４００mgを入れた。水素化を大気圧のＨ2下、室温で実施した。過水素化（ピリドン環の）を回避するために、水素化をガス取り込み及びＨＰＬＣによりモニターした。反応が完了した後、反応混合物を濾過して触媒を除去し、フィルターケーキをＭｅＯＨ ４０mlで洗浄した。濾液を減圧下で濃縮して、粗生成物２ｇを得た。ＭｅＯＨ ２５mlを加え、溶解が完了するまで混合物を加熱した。溶液を室温に冷まし、４時間撹拌した。得られた懸濁液を濾過した。フィルターケーキを冷（０〜５℃）ＭｅＯＨ ２mlで洗浄し、減圧下５０℃で恒量まで乾燥させて、オフホワイトの粉末１．５ｇを得た（収率７２％）。
【０２１８】
実施例４ 脱保護／遊離塩基形成／アルキル化／アミド形成によりアミドエステルを化合物（Ｘ）に転換するための代替経路
工程１：Ｂｏｃ脱保護
【０２１９】
【化３６】
【０２２０】
粗Ｂｏｃ−ピロリジン１５ｇ（３１．６８mmol、１当量）を、エタノール１５０mlに溶解した。塩化アセチル１３．６４ml（６当量）を室温で２０分間かけて加えた。その間に懸濁液が形成される２０時間の反応の後、ＭＴＢＥ １５０mlを５分間かけて加えた。９０分後、懸濁液を濾過し、フィルターケーキを減圧下４５℃で乾燥させて、塩酸塩１２．０７ｇを得た（約２〜３ ＨＣｌ、収率約９０％）。
【０２２１】
工程２：遊離塩基形成
【０２２２】
【化３７】
【０２２３】
塩酸塩 １．７９ｇ（４mmol、１当量、ビス塩酸塩として取得、ｎ＝２）（前記工程を参照）を、ＡｃＯＥｔ ５０mlとエタノール９mlとの混合物に懸濁した。５M エタノールＮＨ３溶液１０ml（２０mmol、５当量）を加え、懸濁液を室温で７０時間撹拌して、濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、遊離アミン１．５ｇを得た（定量収率）。
【０２２４】
あるいは、アミン塩酸塩を塩基性ｐＨ下で抽出することにより遊離することができる。
【０２２５】
工程３：アルキル化
【０２２６】
【化３８】
【０２２７】
アミン３ｇ（８mmol、１当量）を、ジフルオロエチル−３−ニトロ−ベンゼンスルホナート２．３９ｇ（１当量）及びエチル−ジイソプロピルアミン１．５ml（１．１当量）と一緒に、アセトニトリル１５mlに溶解した。溶液を８０℃で２２時間加熱した（ＨＰＬＣ工程内管理）。反応混合物を室温に冷まし、減圧下で濃縮した。残留物をＡｃＯＥｔ ３０mlに再溶解した。１０％ Ｋ２ＣＯ３水溶液１５mlを加えた。混合物を濾過した。二相性の濾液からの有機相を分離し、１０％ Ｋ２ＣＯ３水溶液１５mlで２回洗浄した。水相をＡｃＯＥｔ ３０mlで順次再抽出した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で約１０mlの容量に濃縮した。ＭＴＢＥ ３５mlをゆっくり加え、混濁した溶液がもたらされた。混濁した溶液に播種し、室温で１時間撹拌して、部分的に濃縮すると、結晶化が開始した。室温で２時間撹拌した後、懸濁液を濾過した。フィルターケーキを減圧下４５℃で乾燥させて、明黄色の結晶２．５６ｇを得た（収率７２％）。
【０２２８】
あるいは、ａ）生成物を、例えばクロマトグラフィーにより精製することもできる。ｂ）Ｎａ２ＣＯ３水溶液を、抽出の間、炭酸カリウム溶液の代わりに使用することもできる。
【０２２９】
工程４：第２のアミド形成
【０２３０】
【化３９】
【０２３１】
５−クロロ−２−アミノピリジン１．０４ｇ（７．９mmol、１．５当量）、アミドエステル２．３ｇ（５．３mmol、１当量）及びＴＨＦ １８．４mlを反応器に入れ、得られた混合物を０〜５℃に冷却した。ＴＨＦ中の１M ＬｉＨＭＤＳ溶液１５．８ml（３当量）を２０分間かけて加えた。３時間反応させた後（ＨＰＬＣ工程内管理）、２M ＨＣｌ水溶液１８ml（６．８５当量）を加えた（ｐＨ ３．３）。得られた混合物をＡｃＯＥｔ ９２mlで２回抽出した。有機相をＮａＣｌ飽和水溶液２３mlで順次洗浄し、合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物２．７８ｇを得た。
【０２３２】
生成物を、クロマトグラフィー、又はＥｔＯＨもしくはエタノール／ヘプタンからの結晶化により精製することができる。
【０２３３】
実施例５ 環状無水物アプローチ
工程１： 付加環化
【０２３４】
【化４０】
【０２３５】
ジフルオロエチルトリフラート２５ｇ（１１７mmol、１当量）を、ＴＨＦ ２２５ml中のトリメチルシリルメチル−アミン１６ml（１当量）及びエチルジイソプロピルアミン２０ml（１当量）の溶液に２０〜２５℃で滴下した。２時間後、反応混合物を３７％ホルムアルデヒド水溶液１１．４６ml（１．３当量）で処理した。室温での１０分の後、ジベンジルマレアート３４．６１ｇ（１当量）、ＴＨＦ １２．５ml及びトリフルオロ酢酸９１３μl（０．１当量）からなる溶液を加えた。１７時間反応させた後、反応混合物を約８０mlに濃縮した。ＭＴＢＥ １２５ml及び１M ＨＣｌ水溶液１０４ml（２．５当量）を加えた。水相を分離し、ＭＴＢＥ ６２．５mlで再抽出した。有機相を水１２５ml及びＮａＨＣＯ３半飽和水溶液１６７mlで洗浄し、合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固して、粗環付加物４５．５ｇを得た（収率約８６％、約１１％ m/m ジベンジルマレアートを含有）。
【０２３６】
粗生成物を、例えばクロマトグラフィーにより精製することができるが、より好都合にはこれを精製しないで次の工程に導入する。
【０２３７】
工程２：水素化
【０２３８】
【化４１】
【０２３９】
粗ジベンジルエステル４５．５ｇ（１００mmol、１当量、純度８９％ m/m、前記工程を参照）を、エタノール３６４mlに溶解し、続いてトリエチルアミン３２．１５ml（２．３当量）及び１０％ Ｐｄ／Ｃ ２．１ｇを加えた。ジベンジルエステルを大気水素圧下で水素化した。反応が完了した後、触媒を濾別し、酢酸８０．７mlを加え、続いて種結晶を加えた。エタノールを減圧下４０℃で留去した（６０℃で、有意なcisからtransへの異性化が観察される）。得られた懸濁液を室温で一晩撹拌し、濾過した。結晶を酢酸２０ml、ＭＴＢＥ ６０mlで洗浄し、減圧下で乾燥させて、ビス−酸 １４．６ｇを白色の粉末として得た（収率６０％、約９％m/m 残留酢酸を含有）。
【０２４０】
工程３：環状無水物形成：
【０２４１】
【化４２】
【０２４２】
ビス酸１４．３ｇ（５８．６mmol、１当量、９２％ m/m）を酢酸１４３mlに懸濁した。無水酢酸２７．７ml（５当量）を加え、反応混合物を６０℃に加熱した。１時間後、溶液を得た。３時間後、反応混合物を室温に冷まし、濃縮して無色の油状物とし、それにジイソプロピルエーテル５０mlを加えた。溶液に播種した。室温で１時間撹拌した後、懸濁液を濾過した。結晶をジイソプロピルエーテルで洗浄し、減圧下５０℃で乾燥させて、無水物７．８ｇを白色の粉末として得た。母液を濃縮乾固し、残留油状物をジイソプロピルエーテル５０ml及び種結晶で処理して、濾過、洗浄及び乾燥の後、無水物の第２産生物（３．２ｇ）を得た。合計収率：９１％。
【０２４３】
工程４：環状無水物開環：
【０２４４】
【化４３】
【０２４５】
例ａ）：
ＴＨＦ １２０ml中のキニーネ１６．９４ｇ（１当量）及び２−フェニルエタノール９．３ml（１．５当量）からなる溶液を、−２０〜−１５℃に冷却した。ＴＨＦ ３０ml中の無水物１０．５ｇ（５１．２mmol、１当量）の溶液を滴下した。４時間反応させた後（ＨＰＬＣ工程内管理、又は ReactIR iC10 システムを用いたインラインＦＴＩＲ分光法）、得られた懸濁液を室温に一晩温め、濃縮乾固して、キニーネ塩としての粗エステル酸４３．５ｇ（ＨＰＬＣにより９２：８ d.r.）を得た。粗塩を、酢酸イソプロピル５０mlと水５０mlとの混合物に懸濁した。２５％ ＨＣｌ水溶液２０mlを加えることによりｐＨを１に調整した。水相を分離し、酢酸イソプロピル５０mlで洗浄した。有機相を１M ＨＣｌ ２５mlで再抽出した。水相を合わせ、０〜２℃に冷却し、３２％ ＮａＯＨ水溶液を加えることによりｐＨを３．０に調整した。生成物が結晶し始めた。０〜２℃で２時間撹拌した後、懸濁液を濾過した。フィルターケーキを冷０〜２℃水５０mlで洗浄し、減圧下６０℃で乾燥させて、生成物１４．８ｇを白色の粉末を得た（収率８８％、９５：５ ｄ．ｒ．）。
【０２４６】
例ｂ）：
ＴＨＦ １５０ml中の無水物４０ｇ（１９５mmol、１当量）の溶液を、ＴＨＦ ７５０ml中のキニーネ７１ｇ（１．１当量）及び２−フェニルエタノール３６．１ｇ（１．５当量）からなる溶液に−２０〜−１５℃の間で滴下した。一晩反応させた後（ＨＰＬＣ工程内管理、又は ReactIR iC10 システムを用いたインラインＦＴＩＲ分光法）、得られた懸濁液を室温に温め、水２５０mlを加えた。ＴＨＦを減圧下４０℃で留去した。ＭＴＢＥ １２５mlを得られた水性懸濁液に加え、２５％ＨＣｌ水溶液１２５mlを加えることによりｐＨを約１に調整した。水相を分離し、ＭＴＢＥ １２５mlで洗浄した。有機相を１M ＨＣｌ水溶液６２．５mlで順次洗浄した。酸性の水相を合わせ、０〜５℃に冷却した。３２％ ＮａＯＨ水溶液 ５５mlを加えることによりｐＨを３．０に調整すると、生成物が沈殿した。懸濁液を０〜５℃で４時間撹拌し、濾過した。フィルターケーキを冷（０〜５℃）水１２５mlで２回洗浄し、減圧下６０℃で恒量まで乾燥させて、ヘミエステル５９．９ｇを白色の粉末として得た（９５：５ｅ．ｒ．、定量的ＨＰＬＣにより９８．７％w/w、収率９３％）。
【０２４７】
工程５：エピマー化
【０２４８】
【化４４】
【０２４９】
例ａ）
（cis）−酸エステル１０．６ｇ（３２．４mmol、１当量）を、ＴＨＦ ２１２ml（溶液を有するために重要である）に溶解した。溶液を−７０℃に冷却し、カリウム ｔ−ブトキシド５．５６ｇ（１．５当量）を加えた。３０分間反応させた後（ＨＰＬＣ工程内管理）、酢酸９．３ml（５当量）を加えた。反応混合物を水１００ml（ｐＨ ６．５）に加え、１M ＨＣｌ（約６０ml、１．８５当量）を加えることによりｐＨを３．０に調整した。ＴＨＦを減圧下４０℃で除去すると、結晶化が開始した。白色の懸濁液を室温で３０分間撹拌し、濾過した。フィルターケーキを冷水で洗浄した。結晶を減圧下５０℃で乾燥させて、trans−エステル一酸８．０ｇを白色の粉末として得た（収率７６％、＞９９％ trans：＜１％ cis）。
【０２５０】
あるいは、反応をジオキサン中のＨＣｌｇを加えることによりクエンチすることができる。
【０２５１】
ＫＯｔＢｕ添加の前に溶液を得るのは重要である。実際、出発物質溶液を−７０℃に冷却している間に、若干の沈殿が時々観察された。これらの場合、本発明者らは、出発物質の溶解度が非常に低いために出発物質が完全には反応せずに、低trans／cis 選択性がもたらされたことを後に示した。ここにこの問題を回避する改善方法がある。出発物質を、適切な可溶性アミン塩、例えばそのトリエチルアミン塩の形成により、ＴＨＦ中の溶液中に保持することができる：
【０２５２】
例ｂ）
cis−一酸モノエステル５０ｇ（１５１mmol、１当量）を反応器に入れ、続いてＴＨＦ ８５０ml及びトリエチルアミン２１ml（１当量）を入れた。得られた溶液を−７０℃に冷却し、ＴＨＦ １００ml中のＫＯｔＢｕ ２５．９ｇ（１．５当量）の溶液を、温度を＜−６５℃に維持しながら滴下した。４５分間反応させた後（ＨＰＬＣによる工程内管理）、酢酸１２．９ml（１．５当量）を加えることにより反応物をクエンチした。反応混合物を室温に温め、水２５０mlを加えた（得られたｐＨ約７．８）。ＴＨＦを減圧下４０℃で留去した。酢酸エチル３００mlを加え、２M ＨＣｌ（約１８０ml、２．４当量）を加えることによりｐＨを３．０に調整した。水相を分離し、酢酸エチル１５０mlで再抽出した。有機相を水２５０mlで洗浄し、合わせ、４０℃／約１５０mbarで約２５０mlに濃縮した。ヘプタン５００mlを加え、懸濁液を溶解するまで加熱還流した。加熱を停止し、溶液を室温にゆっくり冷まし、その間に結晶化が開始した。室温で一晩撹拌した後、懸濁液を濾過した。フィルターケーキを１：２ 酢酸エチル／ヘプタンの混合物２００mlで洗浄し、減圧下５０℃で恒量まで乾燥させて、trans ヘミエステル４２．５ｇを白色の粉末として得た（収率８６％、ＨＰＬＣによりｅ．ｒ．およびｄ．ｒ． ＞９９：＜１、検出限界未満）。
【０２５３】
工程６：第１のアミドカップリング
【０２５４】
【化４５】
【０２５５】
例ａ）
trans−酸エステル５００mg（１．５８mmol、１当量）を、Ｎ−メチルモルホリン１６８μl（１．０当量）と一緒にＴＨＦ １．５mlに溶解した。この溶液を、ＴＨＦ ２．５ml中のクロロギ酸イソブチル２０８μl（１当量）の冷０〜５℃溶液に加えた。３０分間反応させた後、塩化リチウム６５mg（１当量）を加え、続いてアニリン３１２mg（１当量）を加えた。次に反応混合物を室温で２時間撹拌した（ＴＬＣ又はＨＰＬＣ工程内管理）。水３．５ml、酢酸エチル１５ml及び１M ＨＣｌ水溶液 ５mlを加えた。有機相を分離し、１M ＨＣｌ水溶液３．６mlで再抽出して、廃棄した。Ｎａ２ＣＯ３ １．５mlを加えることにより、合わせた水相のｐＨを９〜１０に調整し、酢酸エチル２５mlで２回抽出した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固して、粗アミドエステル７２０mgを得た（収率９０％）。
【０２５６】
例ｂ）
ＴＨＦ １２０ml中のtrans 酸エステル４０ｇ（１２２mmol、１当量）及びＮ−メチル−モルホリン１３．４６ml（１当量）の溶液を、ＴＨＦ ２００ml中のクロロギ酸イソブチルの冷（０〜５℃）溶液に３０分間かけて加えた。０〜５℃での６０分の後（反応を供給制御し、それでこの保持時間を減ずることができる）、アニリン２４．９５ｇ（１当量）及び塩化リチウム５．２３ｇ（１当量）を加えた。反応混合物を室温に温めた。反応が完了した後（約３時間、ＨＰＬＣによる工程内管理）、水２８０ml、酢酸エチル４００ml及び１M ＨＣｌ ４００mlを加えた。有機相を分離し、１M ＨＣｌ ２００mlで抽出した。水相を合わせ、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液１７０mlを加えることによりｐＨを約９〜１０に調整して、酢酸エチル２００mlで２回抽出した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下４５℃で濃縮して、アミドエステル５４．２ｇを半固体の油状物として得た（収率８４％、２％残留酢酸エチルのために補正）。
【０２５７】
工程７：第２のアミドカップリング：
【０２５８】
【化４６】
【０２５９】
例ａ）
２−アミノ−５−クロロピリジン１９７mg（１．５当量）及びアミドエステル５００mg（０．９７mmol、１当量）を、ＴＨＦ ４mlに溶解した。溶液を０〜５℃に冷却した。ＴＨＦ中の１M ＬｉＨＭＤＳ溶液２．９ml（３当量）を５分間かけて加えた。反応が完了した後（ＨＰＬＣ工程内管理）、１M ＨＣｌ ２．５mlを１５分間かけて加えて反応をクエンチし、ｐＨを３．５に調整した。二相性の混合物を酢酸エチル７．５mlで２回抽出した。有機相をＮａＣｌ半飽和水溶液６．３mlで洗浄し、合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固して、式（Ｘ）の粗化合物７２０mgを得た。
【０２６０】
例ｂ）
２−アミノ−５−クロロピリジン８．９ｇ（１．５当量）及びアミドエステル２５ｇ（４５．３mmol、１当量）を、ＴＨＦ ２００mlに溶解した。溶液を０〜５℃に冷却した。ＴＨＦ中の１M ＬｉＨＭＤＳ溶液１３６ml（３当量）を２０分間かけて滴下した。１時間反応させた後（ＨＰＬＣ工程内管理）、２M ＨＣｌ水溶液１７１mlを加えることによりｐＨを３．５に調整した。反応混合物を酢酸エチル１００mlで２回抽出した。有機相を半飽和ＮａＣｌ １００mlで順次洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下４５℃で濃縮して、粗化合物Ｘ ３４．８ｇを得た。粗生成物をエタノール２６０mlに溶解し、ヘプタン２６０mlを１０分間かけて加えた。清澄な溶液に播種した。懸濁液を約１５分後に得た。室温での６０分の後、ヘプタン２６０mlを３０分間かけて加えた。懸濁液を室温で３０分間、０℃で２時間撹拌し、濾過した。フィルターケーキをエタノール／ヘプタンの冷（０〜５℃）１：３混合物５０mlで洗浄し、減圧下５０℃で乾燥させて、化合物Ｘ ２１．５ｇを白色の粉末として得た（収率８６％、３％残留ヘプタンのために補正、及び９７．５ａ％ＨＰＬＣ、（Ｓ，Ｓ）鏡像異性体及びcis 異性体はＨＰＬＣにより検出されない）。
【０２６１】
あるいは、環状無水物を下記の順序により調製することができる：
【０２６２】
工程１：［３＋２］付加環化：
【０２６３】
【化４７】
【０２６４】
（トリメチルシリルメチル）−アミン６９．５ｇ（６６０mmol、１当量）を、ＴＨＦ ７６５mlに溶解した。温度を２０〜２５℃の間に維持しながら、３７％ホルムアルデヒド水溶液９９．７ml（２当量）を加えた。室温で１５分間撹拌した後、得られた溶液をＴＨＦ ７６５ml中のジベンジルフマラート２００ｇ（１当量）の還流している溶液に４０分間かけて加えた。２０時間反応させた後、反応混合物を室温に冷まし、ＴＨＦ ４００ml中のヒドロキシルアミン塩酸塩５２．３ｇ（１．１４当量）の懸濁液に１０分間かけて加えた。得られた清澄な溶液に播種すると、混濁した溶液が得られた。結晶化がすぐに開始した。白色の懸濁液を室温で１時間撹拌し、Ｐ３ガラスフィルターで濾過した。フィルターケーキを水７２mlで、そしてＭＴＢＥ ４００mlで２回洗浄した。結晶を減圧下５０℃で恒量まで乾燥させて、ピロリジン塩酸塩２１５ｇを得た（収率８６％）。
【０２６５】
工程２：遊離塩基形成／アルキル化：
【０２６６】
【化４８】
【０２６７】
塩酸塩１８８．５ｇ（５０１．５mmol、１当量）を、ＭＴＢＥ ７００mlに懸濁した。１M ＮａＯＨ ５９７mlを０〜５℃で加えた。得られた清澄で二相性の混合物を分離し、水相（ｐＨ １３）をＭＴＢＥ ３５０mlで再抽出した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下４０℃で濃縮して、無色の油状物１６６ｇを得た（収率９８％）。
【０２６８】
得られた油状物１４５ｇ（４２７mmol、１当量）を、アセトニトリル１．１６Ｌに再溶解した。ジフルオロエチル−３−ベンゼンスルホナート１１４ｇ（４２７mmol、１当量）を加え、続いてエチル−ジイソプロピルアミン８７．８ml（１．２当量）を得た。溶液を２４時間加熱還流し（＞９０％転換）、室温に冷まし、減圧下で４０℃にて粘性で橙色の油状物に濃縮した。粗混合物をＡｃＯＥｔ ７５０mlに溶解し、Ｎａ２ＣＯ３水溶液、ＮＨ４Ｃｌ水溶液及び水で洗浄した。水相をＡｃＯＥｔで順次再抽出した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物１７８．５ｇを得た（８０〜８５％ m/m、収率＞９０％）。
【０２６９】
工程３：脱ベンジル化：
【０２７０】
【化４９】
【０２７１】
前記工程からの粗ビスエステル１７５ｇを酢酸１．６Ｌに溶解し、１０％ Ｐｄ／Ｃ ９．２ｇで大気圧にて６０℃で水素化した。水素化が完了した後、反応混合物を６０℃で濾過した。触媒を熱（６０℃）酢酸１７５mlで洗浄した。濾液を室温に冷まし、ＭＴＢＥ ８００mlを加え、混濁した溶液を得た。溶液に播種し、室温で１時間撹拌した。ＭＴＢＥ ９５０mlを懸濁液に加え、これを次に室温で一晩、次に０℃で３時間撹拌した。懸濁液を濾過し、フィルターケーキをＭＴＢＥ １００mlで２回洗浄した。結晶を減圧下６０℃で乾燥させて、生成物８９．７ｇを白色の粉末として得た（収率９０％）。
【０２７２】
ＭＴＢＥ／ＡｃＯＨ中の結晶化は、粗反応混合物の純度に感受性である。あるいは、反応混合物を濃縮し、生成物をＥｔＯＨ中で結晶化させることができる。水からの（再）結晶化もまた可能である。
【０２７３】
工程４：環状無水物形成：
【０２７４】
【化５０】
【０２７５】
ビス酸５０ｇ（２２１mmol、１当量）を、酢酸１５０mlと無水酢酸２４ml（１．１５当量）との混合物に懸濁し、１０５℃で加熱した。１時間後、清澄な溶液を得た。反応が完了した後（約５時間、ＮＭＲによるＩＰＣ）、反応混合物を５０℃に冷却し、約８０mbar下６０℃で約４０〜５０mlの容量（９０ｇの溶液）に濃縮した。ｔ−アミルアルコール４００mlを６０℃で加え、溶液を約８０mbar下６０℃で１５０ｇに濃縮した（溶媒をｔ−アミルアルコールに交換し、ＡｃＯＨを除去した）。橙色の溶液を４０℃にゆっくり冷却すると、結晶化が開始した。ヘプタン３００mlを４０℃で３０分間かけて加えた。懸濁液を室温で一晩撹拌し、濾過した。フィルターケーキをヘプタン１００mlで洗浄し、減圧下４５〜５０℃で恒量まで乾燥させて、明褐色の粉末４１ｇを得た（収率約９０％）。
【０２７６】
ビス酸３３の代替調製
【０２７７】
【化５１】
【０２７８】
ビスエステル２０ｇ（７４．７５mmol、１当量）を、ＴＨＦ４０mlと水２０mlとの混合物に溶解した。３２％ ＮａＯＨ水溶液２０．８ml（３当量）を加え、反応混合物を５０℃で２時間加熱した（ＴＬＣによるＩＰＣ、ＡｃＯＥｔ／ヘプタン ３：１、ＫＭｎＯ４を用いて可視化）。ＴＨＦを減圧下４０℃で蒸留により除去した。水相を室温に冷まし、ＡｃＯＥｔ ２０mlで洗浄した。水相中の残留有機溶媒を減圧下４０℃で蒸留により除去した。水相を室温に冷まし、２５％ ＨＣｌ水溶液（約２７ml）を加えることによりｐＨを３．５に調整すると、生成物が結晶化した。高粘度の懸濁液を室温で一晩撹拌し、濾過した。フィルターケーキを冷（０〜５℃）水２０mlで洗浄し、減圧下５０℃で恒量まで乾燥させて、予想されるビス−酸１３．５ｇを白色の粉末として得た（収率８１％）。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式（Ｘ）：
【０００２】
【化１】
で示されるピロリジン−３，４−ジカルボキサミド誘導体、すなわち（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２，２−ジフルオロエチル）−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸 ３−［（５−クロロピリジン−２−イル）−アミド］ ４−｛［２−フルオロ−４−（２−オキソ−２Ｈ−ピリジン−１−イル）−フェニル］−アミド｝の製造方法に関する。さらに、本発明は、この方法に有用な中間体に関する。
【０００３】
国際公開第２００５／０９２８８１号に開示される式（Ｘ）で示される化合物は、活性化合物であり、そして凝固第Ｘａ因子を阻害する。その結果として、この化合物は血液凝固に影響を及ぼし、それゆえトロンビンの形成を阻害し、そしてとりわけ動脈及び静脈血栓、深部静脈血栓、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、不安定狭心症、心筋梗塞、冠動脈疾患、肺塞栓、心房細動に起因する脳卒中（脳血栓）、炎症及び動脈硬化などの血栓障害の治療及び／又は予防に使用することができる。この化合物は、例えば経腔的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）又は冠動脈もしくは末梢動脈のバイパス移植後の、血栓溶解療法及び再狭窄に関連する急性血管閉鎖の治療、ならびに長期血液透析患者における血管アクセス開存性の維持における利益を潜在的に有する。式（Ｘ）で示される化合物は、異なる作用様式を有する抗凝固剤との、又は血小板凝集阻害剤のと、又は血栓溶解剤との併用療法の一部を形成しうる。さらに、式（Ｘ）で示される化合物は、腫瘍細胞に対する効果を有し、そして転移を防止する。それゆえ、この化合物を、抗腫瘍剤として使用することもできる。
【０００４】
国際公開第２００５／０９２８８１号は、式（Ｘ）で示される化合物の製造方法を開示する。しかし、国際公開第２００５／０９２８８１号に（実施例に）記載される方法は、式（Ｘ）で示される化合物の調製について低い全収率をもたらした。また、［３＋２］付加環化反応のためのジエチルフマラートの熱溶液へのパラホルムアルデヒド／Ｎ−Ｂｎ−グリシン混合物の多回固体添加、自然発火性トリメチルアルミニウムを使用するワインレブアミド化工程の低くそして変動する収率、最終工程における大過剰のアルキル化剤（ジフルオロエチルトリフラート）の使用および中程度の収率、ならびに高温での（Ｎ−アリール化工程のための）Ｋ２ＣＯ３及びＤＭＳＯの潜在的に安全でない組み合わせなどのいくつかの問題が、この方法のスケールアップに適切ではない。
【０００５】
従って、本発明は、式（Ｘ）で示される化合物を製造するための改良法を提供する。
【０００６】
別段示さない限り、本明細書において本発明を記載するために使用する種々の用語の意味及び範囲を例示及び定義するために、以下の定義を示す。
【０００７】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を指し、フッ素、塩素及び臭素が好ましい。
【０００８】
「Ｃ１−５アルキル」という用語は、単独で又は他の基と組み合わせて、１〜５個の炭素原子の、分岐又は直鎖の一価アルキル基を指す。この用語は、さらに、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチルなどの基により例示される。「Ｃ１−３アルキル」という用語は、単独で又は他の基と組み合わせて、１〜３個の炭素原子の、分岐又は直鎖の一価アルキル基を指す。
【０００９】
「シクロアルキル」という用語は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、又はシクロヘキシルなどの、３〜１０個の炭素原子、好ましくは３〜６個の炭素原子の一価炭素環基を指す。
【００１０】
「アルコキシ」という用語は、基Ｒ’−Ｏ−を指し、ここで、Ｒ’は、アルキルである。「低級アルコキシ」という用語は、基Ｒ’−Ｏ−を指し、ここで、Ｒ’は、低級アルキルである。
【００１１】
「チオ−アルコキシ」という用語は、基Ｒ’−Ｓ−を指し、ここで、Ｒ’は、アルキルである。「チオ−低級アルコキシ」という用語は、基Ｒ’−Ｓ−を指し、ここで、Ｒ’は、低級アルキルである。
【００１２】
「フルオロ−低級アルコキシ」という用語は、基Ｒ”−Ｏ−を指し、ここで、Ｒ”は、フルオロ−低級アルキルである。フルオロ−低級アルコキシ基の例は、例えばＣＦＨ２−Ｏ、ＣＦ２Ｈ−Ｏ、ＣＦ３−Ｏ、ＣＦ３ＣＨ２−Ｏ、ＣＦ３（ＣＨ２）２−Ｏ、（ＣＦ３）２ＣＨ−Ｏ、及びＣＦ２Ｈ−ＣＦ２−Ｏである。
【００１３】
「アルケニル」という用語は、単独で又は他の基と組み合わせて、オレフィン結合及び２〜２０個、好ましくは２〜１６個の炭素原子、より好ましくは２〜１０個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐の炭化水素残基を意味する。下記の低級アルケニル基もまた、好ましいアルケニル基である。「低級アルケニル」という用語は、オレフィン結合及び２〜７個、好ましくは２〜４個の炭素原子を含む直鎖又は分岐の炭化水素残基、例えば２−プロペニルを指す。
【００１４】
「アルキニル」という用語は、単独で又は他の基と組み合わせて、三重結合及び２０個まで、好ましくは１６個までの炭素原子を含む、直鎖又は分岐の炭化水素残基を意味する。「低級アルキニル」という用語は、三重結合及び２〜７個、好ましくは２〜４個の炭素原子を含む直鎖又は分岐の炭化水素残基、例えば２−プロピニルを指す。低級アルキニル基は、例えばヒドロキシにより置換されることができる。
【００１５】
「アルキレン」という用語は、１〜２０個の炭素原子、好ましくは１〜１６個の炭素原子、より好ましくは１０個までの炭素原子の、直鎖又は分岐の二価飽和脂肪族炭化水素基を指す。下記の低級アルキレン基もまた、好ましいアルキレン基である。「低級アルキレン」という用語は、１〜７個、好ましくは１〜６個又は３〜６個の炭素原子の、直鎖又は分岐の二価飽和脂肪族炭化水素基を指す。直鎖アルキレン基又は低級アルキレン基が好ましい。
【００１６】
「アリール」という用語は、フェニル又はナフチル基、好ましくはフェニル基に関し、これらの基は、低級アルケニル、低級アルキニル、ジオキソ−低級アルキレン（例えばベンゾジオキシル基を形成する）、ハロゲン、ヒドロキシ、ＣＮ、ＣＦ３、ＮＨ２、Ｎ（Ｈ，低級アルキル）、Ｎ（低級アルキル）２、アミノカルボニル、カルボキシ、ＮＯ２、低級アルコキシ、チオ−低級アルコキシ、低級アルキルスルホニル、アミノスルホニル、低級アルキルカルボニル、低級アルキルカルボニルオキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル−カルボニル−ＮＨ、フルオロ−低級アルキル、フルオロ−低級アルコキシ、低級アルコキシ−カルボニル−低級アルコキシ、カルボキシ−低級アルコキシ、カルバモイル−低級アルコキシ、ヒドロキシ−低級アルコキシ、ＮＨ２−低級アルコキシ、Ｎ（Ｈ，低級アルキル）−低級アルコキシ、Ｎ（低級アルキル）２−低級アルコキシ、ベンジルオキシ−低級アルコキシ、及び低級アルキル（これらは、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ２、Ｎ（Ｈ，低級アルキル）又はＮ（低級アルキル）２によって場合により置換されることができる）からなる群より独立して選択される１〜５個、好ましくは１〜３個の置換基によって場合により置換されることができる。好ましい置換基は、ハロゲン、低級アルコキシ、フルオロ−低級アルコキシ、チオ−低級アルコキシ、及びアミノである。
【００１７】
本明細書において使用する「ヘテロシクリル」という用語は、窒素、酸素及び硫黄より選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含む、４又は６個の環員を有する非芳香族単環式複素環を表す。適切な複素環の例は、ピロリジニル、オキソピロリジニル、イソオキサゾリジニル、イソオキサゾリニル、ピロリニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペリジニル、２−オキソ−ピペリジニル、３−オキソ−モルホリニル、２−オキソ−ピペラジニル、２−オキソ−オキサゾリジニル、２−オキソ−アゼチジニル、ピペラジニル、モルホリニル、ピラニル、テトラヒドロピラニル、４，５−ジヒドロ−オキサゾリル、４，５−ジヒドロ−チアゾリルである。好ましい複素環は、モルホリニル、３−オキソ−モルホリニル、２−オキソ−ピペラジニル及び２−オキソ−ピペリジニルである。ヘテロシクリル基は、「アリール」という用語に関連して前述した置換パターンを有してもよい。
【００１８】
「ヘテロアリール」という用語は、窒素、酸素及び／又は硫黄より選択される１、２又は３個の原子を含みうる、芳香族の５〜６員単環又は９〜１０員二環、例えばフリル、ピリジル、ピリダジニル、オキソ−ピリダジニル、ピリミジニル、２−オキソ−ピリジニル、２−オキソ−ピリミジニル、ピラジニル、チエニル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イミダゾリル、ピロリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、１，２，３−チアジアゾリル、ベンゾイミダゾリル、インドリル、インダゾリルを指す。好ましいヘテロアリール基は、２−オキソ−ピリジニル、２−オキソ−ピリミジニル、ピリジニル、及びインドリルである。ヘテロアリール基は、「アリール」という用語に関連して前述した置換パターンを有してもよい。好ましい置換基は、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシ又はＣＮである。
【００１９】
一般的合成法
本発明によれば、式（Ｘ）で示される化合物は、以下のように製造される：
Ｉ 酵素的経路Ａ
【００２０】
【化２】
【００２１】
スキーム１において、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルを意味する。式（６）で示される化合物は水和物であることができる。特に、式（６）［式中、Ｒは、Ｅｔである］で示される化合物の水和物（６’）：
【００２２】
【化３】
を、対応する含水結晶（６’）として容易に単離することができる。
【００２３】
この経路は、以下の工程を含む：
１． ベンジル保護されたピロリジン２を提供するための、インサイチュで生成したアゾメチンイリドの間の双極［３＋２］付加環化。
２． ３を提供するための、ピロリジン２の脱ベンジル化。
３． ラセミ体ジエステル４を提供するための、３のＢｏｃ保護。
４． （Ｒ，Ｒ）−ジエステル５を提供する、（Ｓ，Ｓ）−鏡像異性体を加水分解しそして洗浄する酵素的分割。
５． （Ｒ，Ｒ）−一酸６を提供する、選択的モノ加水分解（monohydrolysis）。
６． アミドエステル７を与える、アニリン１１とのアミドカップリング。
７． ビス−アミド８を提供する、２−アミノ−５−クロロピリジンとの塩基性アミド化。
８． ピロリジン９を提供する、Ｂｏｃ脱保護。
９． ジフルオロエチルアミン１０を提供する、アルキル化。
【００２４】
１−１． 付加環化工程
文献に見出されるように（Rodriguez Sarmiento et al., Tetrahedron: Asymm. 2003, 1547-1551；M. Joucla, J. Mortier, Bull. Soc. Chim. Fr. 1988, 579；O. Tsuge, S. Kanemasa, M. Ohe, S. Takenaka, Bull. Chem. Soc. Jpn. 1987, 4079；O. Tsuge, S. Kanemasa, M. Ohe, S. Takenaka, Chem. Letters 1986, 973；M. Joucal, J. Mortier, J. Chem. Soc. Chem. Comm. 1985, 1566.）、付加環化を、フマル酸ジエステルの、Ｎ−ベンジルグリシン及びホルムアルデヒド（パラホルムアルデヒド）との反応により行うことができる。付加環化を、フマル酸ジエステルをＮ−ベンジル−トリメチルシリルメチルアミン１のＮ−（アルコキシメチル）又はＮ−（ベンゾトリアゾール−メチル）誘導体などのアゾメチンイリド前駆体と、一般に酸／ルイス酸触媒作用又は熱条件下で反応させることによって行うこともできる（Hosomi et al., Chemistry Letters 1984, 1117；Katritzky et al., Tetrahedron 1994, 12571；Karlsson and Horberg, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 2002, 1076；Kazuo et al., Chem. & Pharm. Bull. 1985, 896；I.F. Cottrell, D. Hands, D.J. Kennedy, K.J. Paul, S.H.B. Wright, K. Hoogsteen, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 1991, 1091；J. S. Cavey, J. Org. Chem. 2001 2526；C. Savarin, "Organic Process Research and Development", Scientific Update conference proceedings, Nice, March 30th 2006)。イリド前駆体は一般に単離されており、そしてインサイチュで生成したイリドのクエンチを防止するために、水は一般に反応混合物から排除される。
【００２５】
しかし、Ｎ−ベンジル−トリメチルシリルメチルアミン１をホルムアルデヒド水溶液と反応させることにより、アゾメチンイリド前駆体が提供され、これを事前乾燥なしにフマル酸ジエステルとの付加環化に直接使用することができることが見出された。実際、適切な条件下で、フマル酸エステルを用いた生成したイリドの付加環化と、水を用いたイリドのクエンチとの間の競合は、付加環化に有利であり、環付加物（水を用いた競合的イリドクエンチの指標であるＮ−メチル−Ｎ−ベンジルアミンが粗反応混合物中に検出される）の優れた収率を与える。これは、Ｎ−ベンジル−トリメチルシリルメチルアミン１及びホルムアルデヒド水溶液からの単純な方法を提供し、そしてイリド前駆体の単離を回避する。
【００２６】
そこで、まずＮ−ベンジル−トリメチルシリルメチルアミン１を、ＴＨＦ、ジオキサン、トルエン、酢酸エチル及びＤＭＥなどの適切な溶媒に溶解させる。ＴＨＦが好ましい。ホルムアルデヒド水溶液（好ましくは濃溶液、典型的には約３６％溶液、少なくとも１当量）を室温で添加する（イリドの生成に続いて水を用いたイリドクエンチが起こりうるので、フマル酸ジエステルの不在下でこの溶液を加熱することは不利益である）。
【００２７】
得られた混合物を、例えば純粋に熱の条件下で、好ましくは５０℃超でフマル酸ジエステルと反応させる。
【００２８】
フマル酸ジエステルとの反応を、より低い温度（例えば室温）で行うこともでき、この場合、反応を、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、塩酸、硫酸、リン酸、トリフリン酸（triflic acid）、ギ酸及び酢酸などの適切な酸の添加により触媒する必要がありうる。トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、塩酸、硫酸又はリン酸が好ましい。トリフルオロ酢酸がより好ましい。酸触媒反応を、上昇した温度で、例えば還流ＴＨＦ中で行ってもよい。
【００２９】
好ましい条件は、ＴＨＦ中のＮ−ベンジル−トリメチルシリルメチルアミン１の溶液への濃ホルムアルデヒド溶液（少なくとも１当量、好ましくは１〜１．５当量）の添加を含む。付加環化は、得られた反応混合物を、フマル酸ジエステルのＴＨＦ溶液及び触媒量のトリフルオロ酢酸（好ましくは１当量より低い、より好ましくは１〜５mol％）と室温で反応させることにより行われる。これらの条件下で、付加環化部分を、０℃〜６０℃、好ましくは２０℃〜６０℃、より好ましくは室温で行うことができる。
【００３０】
他の添加順序、例えばＴＨＦ中の、フマル酸ジエステル、トリフルオロ酢酸、及びホルムアルデヒドの混合物へのＮ−ベンジル−トリメチルシリルメチルアミン１の添加、またはＴＨＦ中の、Ｎ−ベンジル−トリメチルシリルメチルアミン１、トリフルオロ酢酸及びフマル酸ジエステルの混合物へのホルムアルデヒドの添加、又は対応する逆の添加様式が可能である。
【００３１】
代替の方法は、フマル酸ジエステルの熱混合物に、Ｎ−ベンジル−トリメチルシリルメチルアミン１とホルムアルデヒドとの混合物を添加することにある（例えばＴＨＦ中で４０℃〜還流温度で、好ましくは還流で）。イリドが生成し、そして水によりクエンチされるので、フマル酸ジエステルの非存在下でＮ−ベンジル−トリメチルシリルメチルアミン、ホルムアルデヒド及びトリフルオロ酢酸を混合することは、好ましくない。
【００３２】
適切な条件下で、環付加物の純度は、それが次の工程に直接導入されるために十分である。しかし、必要であれば、環付加物を、当業者に公知の方法、例えば蒸留、クロマトグラフィー又は塩形成により精製することができる。
【００３３】
１−２．及び３． 脱ベンジル化−Ｂｏｃ保護
化合物２を、例えばパラジウム担持炭又は水酸化パラジウム担持炭などの触媒の存在下での水素化分解を含む、当業者に公知の標準条件下で脱ベンジル化することができる。水素化分解を、エタノール、ＴＨＦ、酢酸エチル及び酢酸などの適切な溶媒中で行うことができる。エタノールが好ましい。塩酸などの酸を添加することができるが、反応は、好ましくは遊離塩基に対して行われる。脱保護されたアミン３を、当業者に公知の標準条件により、Ｂｏｃ保護して、化合物４を提供することができる。好ましい条件は、エタノール、ＴＨＦ、ＭＴＢＥ、酢酸エチル及びトルエンなどの溶媒中で、好ましくはエタノール又はＴＨＦ中で、０℃〜１００℃、好ましくは２０℃〜４０℃の間の温度で、より好ましくは室温で、化合物３をＢｏｃ２Ｏと反応させることを含む。過剰のＢｏｃ２Ｏを破壊するために、粗生成物を、水性ＴＨＦ中で、ＤＭＡＰ又はグリシンと、好ましくはＤＭＡＰと反応させることができる。
【００３４】
適切な条件下で（実験の部参照）、粗生成物は、それが次の工程に直接導入されるために適切な純度のものである。しかし、必要であれば、当業者に公知の方法により、例えば蒸留又はクロマトグラフィーによりそれを精製することができる。
【００３５】
１−４．及び５． 酵素的分割／モノ加水分解
【００３６】
【化４】
【００３７】
スキーム２において、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである。式（６）で示される化合物は、水和物でありうる。特に、式６［式中、Ｒは、Ｅｔである］で示される化合物を、対応する水和物６’：
【００３８】
【化５】
として容易に単離することができる。
【００３９】
式（６）で示される（Ｒ，Ｒ）−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸モノエステルは、式（Ｘ）で示される化合物を調製するための中間体として使用される。Ｒについて好ましいＣ１−５アルキルは、メチル、エチル又はｎ−プロピルであり、より好ましくはメチル又はエチル、特にエチルである。式（４）で示されるジエステルは、前記のように調製される。
【００４０】
中間体（６）を、下記の動力学的ラセミ分割に基づく化学酵素的手順により調製することができる。
１． スキーム２に概略を示すような、trans−ラセミ体Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエステル（４）のエナンチオ選択的酵素的加水分解
及び
２． スキーム２による、水性緩衝液中での保持された（Ｒ，Ｒ）−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエステル（５）の選択的モノ加水分解。
【００４１】
エナンチオ選択的加水分解は、保持されたジエステル（５）が鏡像異性体の高い過剰（＞５０％の転換）に達するまで、水性緩衝液中に乳化したジエステル基質（４）と酵素を激しい撹拌によって接触させることにより実施される。
【００４２】
文献（Rodriguez Sarmiento, Wirz & Iding (2003) Tetrahedron: Asymm. 14, 1547-1551）に記載される専用酵素 ESP-ESL 1199（Diversa Corporation）を用いたジエチルエステル４の分割に加えて、適切な反応条件を適用すれば、以下のさらなるエナンチオ選択的酵素を見出すことができる：Esterase NE09（Selectchemie AG [Etzelstrasse 42, P.O. Box 772, CH-8038 Zurich, Switzerland]から購入されるThermogen）、リゾプス・オリゼ（Rhizopus oryzae）由来リパーゼ及びサーモミセス・ラヌギノサス（Thermomyces lanuginosus）由来リパーゼ。好ましいのは、リゾプス・オリゼ由来リパーゼ（その市販調製物は、Amano Enzymes Inc.（Nagoya, Japan）からのLipase Dである）及びサーモミセス・ラヌギノサス由来リパーゼであり、もっとも好ましいのは、サーモミセス・ラヌギノサス由来リパーゼであり、その市販されている代表は、Novozymes（Bagsvaerd, Denmark）からのLipolase 100L Type EXであり、これは、基質の質に関してEsterase 1199よりも強いことが判明した廉価商品酵素である。
【００４３】
適切な緩衝液は、ｐＨ５〜１０、好ましくは６〜９の範囲の、生化学において一般に使用される従来の緩衝液である。反応の過程で、反応混合物のｐＨは、塩基、優先的にはＮａＯＨ又はＫＯＨ溶液の添加により、選択された値で一定に保たれる。
【００４４】
Lipolase 100L Type EXの場合、ｎ−ヘプタン（例えば５％v/v）又は塩化アンモニウム（例えば０．５M）などの非極性有機溶媒の存在下でのリン酸緩衝液（例えばｐＨ７）の使用は、選択性に正の影響を及ぼす（Ｅ≧２５）。より高濃度のリン酸緩衝液（例えば１００mM）は、酵素活性を強く増強し、それが今度は、エナンチオ選択性の増加のために温度を低下させる。基質濃度は、１〜２０％w/w、好ましくは５〜１５％w/wの範囲でありうる。
【００４５】
エナンチオ選択性を増強するために、全ての酵素を、より低い温度（０〜２５℃）で適用しうる。より高い温度で作業することによって酵素の活性を増加させることができるが、しかし選択性が犠牲にされる。代替として、酵素を固定化形態で使用してもよい。反応の終了後、ジエステル生成物を抽出により従来どおりに処理する。
【００４６】
次いで、保持された鏡像異性的に純粋な（典型的には９９％ e.e.超で得られる）（Ｒ，Ｒ）−ジエステル（５）を、文献に記載されるように（Rodriguez Sarmiento, Wirz & Iding (2003) Tetrahedron: Asymm. 14, 1547-1551）、カンジダ・シリンドラセ（Candida cylindracea）由来の市販酵素であるLipase OF（Ｃ．ルゴサ（C. rugosa）；Meito Sangyo; Tokyo, Japan）を使用して鏡像異性的に純粋な（Ｒ，Ｒ）−モノエステル（６）にモノ加水分解する。より高く、技術的により関連する５〜１５％の基質濃度では、二酸の形成がより顕著であったが、酵素の性能を改善することができた。
【００４７】
より高い基質濃度でのLipase OFの選択性は、水性緩衝液に糖（例えば１M Ｄ−グルコース）を添加することにより引き起こされた。抽出剤（例えば酢酸エチル）として技術的に関連する溶媒を用いる生成物の単離のために、生成物であるモノエステル及び二酸副生成物を含有する水相のｐＨを、４．０〜４．５に調整した。
【００４８】
場合により、（Ｒ，Ｒ）−モノエステル６を、高度に（Ｒ，Ｒ）選択性の酵素を使用して、エナンチオ選択的モノ加水分解によりジエステル４から直接合成しうる。
【００４９】
１−６． 第１のアミドカップリング
アミドエステル７を提供するための、式６で示される化合物（無水形態として）および化合物１１の反応に適切な条件は、当業者に周知である。このような反応を、ジクロロメタン、ＤＭＦ、アセトニトリル、ＴＨＦ、ＮＭＰ及びＤＭＡなどの適切な溶媒中で、好ましくはＴＨＦ又はアセトニトリル中で、より好ましくはＴＨＦ中で、ＥＤＣ、ＤＩＣ、ＤＣＣ、ＣＤＩ、ＴＢＴＵ、ＨＢＴＵ、ＥＥＤＱ、ＣＩＰ、ＨＯＢｔ、ＨＡＴＵ、ＰｙＢＯＰ、ＰｙＢｒＯＰ、ＢＯＰ、ＢＯＰ−Ｃｌ及びＴＦＦＨなどの適切なカップリング剤の存在下で、−２０℃〜１２０℃の範囲で選択されうる適切な温度で実施することができる。さらなる反応条件は、ＣＤＭＴ（２−クロロ−４，６−ジメトキシ−［１，３，５］トリアジン）、トリクロロトリアジン又はそれらの対応するＮ−メチルモルホリン付加物（すなわち、４−（４，６−ジメトキシ−［１，３，５］トリアジン−２−イル）−４−メチル−モルホリニウムクロリド）などのカップリング剤の使用を含んでもよい。
【００５０】
あるいは、酸６を、クロロギ酸アルキル又はクロロギ酸アリール、好ましくはクロロギ酸アルキル、好ましくはクロロギ酸低級アルキル、より好ましくはクロロギ酸イソブチルの使用により、ジクロロメタン、ＤＭＦ、アセトニトリル、ＴＨＦ、ＮＭＰ及びＤＭＡなどの溶媒中で、好ましくはＤＭＦ、ＴＨＦ又はアセトニトリル中で、より好ましくはＴＨＦ中で、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン及びコリジンなどの塩基と組み合わせて、好ましくはＮ−メチルモルホリン又はコリジンと組み合わせて、より好ましくはＮ−メチルモルホリンと組み合わせて活性化しうる。活性化は、−５０℃〜５０℃、好ましくは−２０℃〜４０℃、より好ましくは−１０℃〜２０℃より選択される適切な温度で行われる。クロロギ酸エステルを、酸６と適切なアミンとの混合物に添加することができるか、またはクロロギ酸エステルへのアミンと酸６との混合物の逆の添加によることができ、好ましくは後者の添加順序である。
【００５１】
次いで、活性化した酸を、０℃〜１２０℃、好ましくは２０℃〜６０℃、好ましくは５０℃〜６０℃より選択される温度で、アニリン１１と反応させる。反応を室温で容易に行わせる塩化リチウムなどの無機塩の添加により、反応速度を劇的に増加させることができることが見出された。塩化リチウムは、１，３−ジカルボニルフラグメントの錯体化により混合無水物を活性化する見込みが高い。
【００５２】
あるいは、酸を、当業者に周知の条件下でアニリン１１と反応させる前に、対応する酸塩化物に転換することができる。好ましい条件は、ＳＯＣｌ２、ＯＰＣｌ３、オキサリルクロリド又はテトラメチルケテンイミニウムクロリド、好ましくはオキサリルクロリドを用いた活性化を含む。使用する試薬に応じて、Ｂｏｃ脱保護を回避するために、生成した塩酸を第三級塩基の使用によりクエンチすることが必要でありうる。
【００５３】
１−７． 第２のアミドカップリング
アミドエステル７を、２−アミノ−５−クロロピリジンを用いて、当業者に公知の条件下で、トリアルキルアラン又はジアルキルアルミニウムクロリド又はアルキルアルミニウムジクロリドの存在下で、好ましくはトリアルキルアランの存在下で、ＴＨＦ、ジオキサン、ＤＭＥ及びトルエンなどの適切な溶媒中で、好ましくはジオキサン又はトルエン中で、より好ましくはトルエン中で、−１０℃〜１２０℃、好ましくは５０℃〜１２０℃、より好ましくは９０℃〜１１０℃の範囲で選択される適切な温度で、ビス−アミド８に直接転換することができる。
【００５４】
あるいは、アミドエステル７を、当業者に公知の条件下で、ＮａＨ、ＬｉＨ、ＫＨ、ＬＤＡ、ＬｉＨＭＤＳ、ＫＨＭＤＳ、ＮａＨＭＤＳ、ＬｉＯｔＢｕ、ＫＯｔＢｕ、ＮａＯｔＢｕ、リチウムｔ−アミラート、カリウムｔ−アミラート及びナトリウムｔ−アミラートなどの強塩基の存在下で、好ましくはＬｉＨＭＤＳ、ＬＤＡ又はリチウムｔ−アミラートの存在下で、より好ましくはＬｉＨＭＤＳ又はリチウムｔ−アミラートの存在下で、さらにより好ましくはＬｉＨＭＤＳの存在下で、ＴＨＦ、ジオキサン、ＤＭＥ、トルエン又はＤＭＳＯなどの適切な溶媒中で、好ましくはＴＨＦ、ジオキサン又はＤＭＥ中で、より好ましくはＴＨＦ中で、例えば−２０℃〜８０℃から選択することのできる適切な温度で、ビス−アミド８に直接転換することができる。好ましい条件は、−１０℃〜６０℃、好ましくは０℃〜４０℃、より好ましくは０℃〜室温の温度でのＴＨＦ中のＬｉＨＭＤＳの使用を含む。
【００５５】
反応混合物の処理後に、生成物８は、最良にはエタノールから結晶化される。
【００５６】
あるいは、ビス−アミド８を、アミドエステル７から、対応する酸アミドにけん化し、続いて５−クロロ−２−アミノ−ピリジンとカップリングさせることにより得ることができる。エステルのけん化に使用すべき条件は、当業者に周知である。同じことは５−クロロ−２−アミノ−ピリジンとのカップリングに当てはまり、このための一般的な条件も本発明の説明中に見出すことができる。
【００５７】
１−８．及び９． Ｂｏｃ脱保護−アルキル化
ビス−アミド８を、当業者に周知の条件下で、トルエン、エタノール、酢酸エチル、アセトン、ジオキサン、ＴＨＦ、イソプロパノール及び水などの適切な溶媒中で、好ましくはＴＨＦ、イソプロパノール又は水中で、より好ましくは水中で、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、リン酸、ＨＢｒ、硫酸、トリフリン酸、トリフルオロ酢酸及び塩酸などの酸の存在下で、好ましくはトリフルオロ酢酸又は塩酸の存在下で、より好ましくは塩酸の存在下で、Ｂｏｃ−脱保護することができる。
【００５８】
脱保護されたアミン９を、当業者に公知の処理により、塩として（例えば、ｉＰｒＯＨ中でＨＣｌを用いてＢｏｃ脱保護を行う場合に、塩酸塩９・ｎＨＣｌ（ｎは典型的には１．８〜２．６）が濾過により単離されうる）、又は遊離塩基として、単離することができる。しかし、遊離塩基の水溶性に起因して、生成物は、好ましくは後の工程、すなわちアルキル化工程に直接導入される。適切な反応条件下で、粗反応混合物を、次の工程に直接導入することができる（下記参照）。
【００５９】
アミン９を、アセトニトリル、ＴＨＦ、ジオキサン、ジクロロメタン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ＤＭＡ、ＮＭＰ及び酢酸エチルなどの適切な溶媒中で、好ましくはＴＨＦ、ＤＭＳＯ、ジクロロメタン又はアセトニトリル中で、より好ましくはジクロロメタン又はアセトニトリル中で、さらにより好ましくはアセトニトリル中で、２，２−ジフルオロエチルハロゲニド（ヨージド、ブロミド、クロリド）、２，２−ジフルオロエチルトシラート、２，２−ジフルオロエチルメタンスルホナート、２，２−ジフルオロエチルｎ−ニトロベンゼンスルホナート（ｎ＝２、３もしくは４）又は２，２−ジフルオロエチルトリフラートなどのアルキル化剤を用いて、好ましくは２，２−ジフルオロエチルｎ−ニトロベンゼンスルホナート（ｎ＝２、３、４）又は２，２−ジフルオロエチルトリフラートを用いて、より好ましくは２，２−ジフルオロエチル３−ニトロベンゼンスルホナート又は２，２−ジフルオロエチルトリフラートを用いて、例えば２０℃〜１３０℃より選択される適切な温度で、トリエチルアミン、エチル−ジイソプロピルアミン、コリジン、ピリジン、ルチジン、Ｎａ２ＣＯ３、ＮａＨＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３及びＣs２ＣＯ３などの適切な塩基の存在下で、好ましくはエチル−ジイソプロピルアミン又はコリジンの存在下で、より好ましくはエチル−ジイソプロピルアミンの存在下で、アルキル化することができる。遊離塩基のアルキル化のための好ましい条件は、アセトニトリル中で、２０℃〜８０℃、好ましくは５０℃〜８０℃の温度で、より好ましくは還流アセトニトリル中で、エチル−ジイソプロピルアミンなどの第三級アミンの存在下で、２，２−ジフルオロエチル−３−ニトロベンゼンスルホナートと反応させることを含む。アミン９のアルキル化のための他の好ましい条件は、ＴＨＦ、アセトニトリル、酢酸エチル又はジクロロメタン中で、好ましくはＴＨＦ、アセトニトリル又はジクロロメタン中で、より好ましくはジクロロメタン中で、−１０℃〜８０℃、好ましくは０℃〜５０℃、より好ましくは０℃〜室温の温度で、エチル−ジイソプロピルアミンなどの第三級アミンの存在下で、２，２−ジフルオロエチルトリフラートと反応させることを含む。
【００６０】
酸塩としての脱保護されたアミンを、遊離塩基について上記したのと同様の条件下でアルキル化することができ、後者は、適切な塩基の作用によりインサイチュで生成する。しかし、この塩の対陰イオン部分が求核剤として作用し（塩化物イオンのように）、そしてアルキル化剤と競合的に反応することもできる場合、過剰のアルキル化剤を導入することが必要である。この場合、二相性の水性／有機溶媒条件下で作用させることが好ましくありうる。適切な条件下で、対陰イオンを、水相中に隔離することができ、そしてこれは有機相に存在するアルキル化剤と反応することができない。適切な塩基の使用によりインサイチュで生成した遊離アミンは、部分的に水溶性であるが、有機相中に連続的に抽出され、ここでそれは適切なアルキル化剤によりアルキル化される。
【００６１】
Ｂｏｃ脱保護／二相性アルキル化のために最も好ましい条件は、酢酸エチル、ＴＨＦ、イソプロパノール又は水中での、好ましくはＴＨＦ、イソプロパノール又は水中での、より好ましくは水中でのＢｏｃ脱保護を含む。アルキル化工程は、粗Ｂｏｃ脱保護反応混合物から、水、ならびにエチル−ジイソプロピルアミン、Ｎａ２ＣＯ３、ＮａＨＣＯ３、ＫＨＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、ＮａＯＨ、ＫＯＨなどの適切な塩基、又はその混合物、例えばエチル−ジイソプロピルアミンとＮａＯＨ（又はＫＯＨ）との混合物、エチル−ジイソプロピルアミンとＮａＨＣＯ３（又はＫＨＣＯ３）との混合物、ＮａＨＣＯ３とＮａＯＨ（ＫＯＨ）との混合物及びＫＨＣＯ３とＫＯＨ（又はＮａＯＨ）との混合物の存在下で、より好ましくはＮａＨＣＯ３の存在下で、ならびに酢酸エチル、酢酸イソプロピル、２−メチル−ＴＨＦ、ＭＴＢＥ及びトルエンなどのさらなる有機溶媒の存在下で、好ましくは酢酸エチル、酢酸イソプロピル又は２−メチル−ＴＨＦの存在下で、より好ましくは酢酸エチルの存在下で、ならびに２，２−ジフルオロエチルｎ−ニトロベンゼンスルホナート（ｎ＝２、３、４）及び２，２−ジフルオロエチルトリフラートなどのアルキル化剤の存在下で、好ましくはジフルオロエチル３−ニトロベンゼンスルホナート又は２，２−ジフルオロエチルトリフラートの存在下で、より好ましくは２，２−ジフルオロエチルトリフラートの存在下で、０℃〜１００℃、好ましくは２０℃〜５０℃より選択される適切な温度で行われる。
【００６２】
至適条件下で、等量又はほんのわずかに過剰のアルキル化剤を使用することが可能である（反応及び類似の例の実験の説明を参照されたい）。
【００６３】
II 付加環化／Ｂｏｃ保護によりＢｏｃ−ピロリジン中間体４を得るための代替経路
Ｂｏｃ−ピロリジン中間体４の調製のための代替方法は、トリメチルシリルメチル−アミン１２から［３＋２］付加環化して、アミナール１３を提供することからなり、これを、所望のＢｏｃ−ピロリジンに直接転換するか、またはピロリジン３に遊離させることができ、これは、上記のように容易にＢｏｃ保護されて、４を提供する。この順序は、脱ベンジル化工程を不要にし、そしてより原子効率的でもある。
【００６４】
【化６】
【００６５】
スキーム３において、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである。
【００６６】
II−１． 新たな［３＋２］付加環化
トリメチルシリルメチルアミンとフマル酸ジエステルとの間の［３＋２］付加環化を、１から２への転換について記載した付加環化に類似した条件下で行うことができる。しかし、同一条件下では、低〜中程度の収率が得られる。反応の最良の成果に重要なのは、使用するホルムアルデヒドの量である。反応は、１．３当量を超える、好ましくは１．５〜３当量、より好ましくは２当量の過剰のホルムアルデヒドを使用して最良に行われる。１から２への転換について記載した酸触媒作用による活性化は可能ではあるが、反応は、４０℃〜１２０℃、好ましくは５０℃〜８０℃、より好ましくは５５℃〜６５℃より選択される温度での純粋な熱条件下で、ＴＨＦ、ジオキサン、ＮＭＰ、ＤＭＳＯ、ＤＭＡ、ＤＭＥ、ＤＭＦ、酢酸エチル及びトルエンなどの溶媒中で、好ましくはＴＨＦ、ジオキサン、ＤＭＳＯ又はトルエン中で、より好ましくはＴＨＦ又はジオキサン中で最良に行われる。
【００６７】
II−２． Ｂｏｃ保護
アミナールを、水／有機溶媒混合物中でＢｏｃ２Ｏとの反応によりＢｏｃ保護されたピロリジン４に直接転換することができる。反応の間に、アミナールは、対応するピロリジン３にインサイチュで加水分解され、これは、次いでＢｏｃ２Ｏと反応して４を与える。反応は、水と、ＴＨＦ、ジオキサン、トルエン、酢酸エチル、ＭＴＢＥ、酢酸イソプロピル、アセトン及びジクロロメタンなどの有機溶媒との混合物中で最良に行われる。好ましい有機溶媒は、ＴＨＦ、ジオキサン、トルエン、酢酸エチル、ＭＴＢＥ又は酢酸イソプロピル、より好ましくは酢酸エチル、ＭＴＢＥ又はＴＨＦである。反応を、ＮａＨＣＯ３、ＫＨＣＯ３、トリエチルアミン、Ｎａ２ＣＯ３及びＫ２ＣＯ３などの塩基の存在下で行うこともできる。好ましい塩基は、ＮａＨＣＯ３又はＫＨＣＯ３、特にＮａＨＣＯ３である。あるいは、アミナールを、例えば水／有機溶媒混合物中で、塩酸ヒドロキシルアミンと反応させて、処理後にピロリジン３を提供することができる。この反応は、場合により、ＮａＨＣＯ３、ＫＨＣＯ３、トリエチルアミン、Ｎａ２ＣＯ３及びＫ２ＣＯ３などの塩基の存在下で行われる。好ましい塩基は、ＮａＨＣＯ３又はＫＨＣＯ３、特にＮａＨＣＯ３である。必要であれば、Ｂｏｃ−ピロリジン４を、当業者に公知の方法、例えばクロマトグラフィー又は蒸留により精製することができる。
【００６８】
III 脱保護／遊離塩基形成／アルキル化／アミド形成によりアミドエステル７を化合物（Ｘ）に転換するための代替経路
【００６９】
【化７】
【００７０】
スキーム４において、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである。
【００７１】
アミドエステル７を化合物（Ｘ）に転換するための代替法は、ａ）Ｂｏｃ脱保護、ｂ）アルキル化（好ましくは遊離塩基に対する）、及び第２のアミド形成を含む反応順序にある。
【００７２】
Ｂｏｃ脱保護は、当業者に公知の条件下で行われる。脱保護されたピロリジンを、適切な処理により塩酸塩又は遊離塩基として単離することができる。例えば、ＲがＥｔである塩酸塩１４を、適切な溶媒中でＮＨ３（例えばエタノール溶液として）との反応により遊離アミン１５に転換することができる。適切な溶媒は、エタノール、又はエタノールと、酢酸エチル、トルエン、ＭＴＢＥ、アセトン、酢酸イソプロピル、ジイソプロピルエーテル及びＴＨＦなどの有機溶媒との、好ましくは酢酸エチルとの混合物を含む。
【００７３】
次いで、遊離アミン１５を、類似の基質についてすでに上記した条件によりアルキル化する。好ましい条件は、適切な溶媒又は溶媒混合物中で、適切な塩基の存在下で、ジフルオロエチルトリフラート及びジフルオロエチル３−ニトロベンゼンスルホナートを使用することを含む。
【００７４】
IV 酵素的経路Ｂ
【００７５】
【化８】
【００７６】
スキーム５において、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである。Ｒは、好ましくは、場合によりハロゲン、メトキシ又はヒドロキシにより置換されているＣ１−３アルキル、より好ましくはＣ１−３アルキル、特にメチルである。
【００７７】
化合物（Ｘ）はまた、先のスキームに概略を示すようなＮ−（２，２−ジフルオロエチル）−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエステルの酵素的分割によって入手可能である。経路を、上記で定義するようなエステル系列で実施することができるが、好ましくはメチルエステル系列で行う。
【００７８】
ラセミ体エステルを、すでに上記した条件下で、適切なフマル酸ジエステルと、アミン１及びホルムアルデヒドの組み合わせに由来するアゾメチンイリドとの間の［３＋２］付加環化により調製する。得られたＮ−ベンジル−ピロリジンジカルボン酸ジエステルを、当業者に公知の条件下で脱保護する。次いで、ピロリジンを、類似の基質について先に記載した条件下で（すなわち、適切な溶媒又は溶媒混合物中で、適切な塩基の存在下で、ジフルオロエチルトリフラート又はジフルオロエチル３−ニトロベンゼンスルホナートとの反応により）アルキル化する。次いで、ラセミ体ジエステルを分割し、所望の（Ｒ，Ｒ）−ピロリジンジエステルをもたらす。次いで、後者を、一酸モノエステルにモノ加水分解し、これを、今度は類似の基質について本特許において記載する条件下で、化合物（Ｘ）に転換する。
【００７９】
この順序は、以下を含む：
１． ピロリジン１７を提供するための、フマル酸ジエステルと、アミン１及びホルムアルデヒドの組み合わせに由来するアゾメチンイリドとの間の［３＋２］付加環化
２． １８を提供するための、１７の脱ベンジル化。
３． 化合物１９を提供する、ピロリジン１８のアルキル化
４． （rac）−ピロリジンジエステル１９の（Ｒ，Ｒ）−ピロリジンジエステル２０への分割
５． ピロリジンジエステル２０の（Ｒ，Ｒ）−一酸モノエステル２１へのモノ加水分解。
６． モノアミドモノエステル２２を得るための、一酸モノエステル２１のアニリン１１とのカップリング
７． モノエステルモノアミド２２の２−アミノ−５−クロロピリジンとの直接カップリング。
【００８０】
あるいは、ピロリジン１９を、以下を含む工程により直接入手することができる：
１． トリメチルシリルメチルアミンを、２，２−ジフルオロエチルトリフラート、２，２−ジフルオロエチルトシラート、２，２−ジフルオロエチルｎ−ニトロベンゼンスルホナート（ｎ＝２，３，４）、２，２−ジフルオロエチル２，４−ジクロロベンゼンスルホナート及び２，２−ジフルオロエチルメシラートなどのアルキル化剤、好ましくは２，２−ジフルオロエチルトリフラート又は２，２−ジフルオロエチル３−ニトロベンゼンスルホナート、より好ましくは２，２−ジフルオロエチルトリフラートを用いてアルキル化し、Ｎ，Ｎ，−（トリメチルシリルメチル）−（ジフルオロエチル）−アミン２９をもたらす。
２． 今度は、試薬２９を、酸（アルキル化工程で使用する任意の過剰の塩基を少なくともプロトン化するために十分な量の）の存在下で、ホルムアルデヒド、フマル酸ジエステルと反応させ、対応する［３＋２］付加環化生成物、すなわちピロリジン１９をもたらす。あるいは、付加環化工程を、熱条件下で行うことができる。
【００８１】
【化９】
【００８２】
スキーム６において、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである。Ｒは、好ましくは、場合によりハロゲン、メトキシ又はヒドロキシにより置換されているＣ１−３アルキル、より好ましくはＣ１−３アルキル、特にメチルである。
【００８３】
あるいは、アミドエステル２２を、当業者に公知の条件下で、対応するアミド酸へのエステル加水分解及び酸官能基の２−アミノ−５−クロロピリジンとのカップリングにより、１０に転換することができる。
【００８４】
酵素的分割／モノ加水分解
【００８５】
【化１０】
【００８６】
スキーム７において、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである。Ｒは、好ましくは、場合によりハロゲン、メトキシ又はヒドロキシにより置換されているＣ１−３アルキル、より好ましくはＣ１−３アルキル、特にメチルである。
【００８７】
式２１の（Ｒ，Ｒ）−Ｎ−（２，２−ジフルオロエチル）−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸モノエステルは、式（Ｘ）で示される化合物を調製するための中間体として使用される。Ｒについての好ましいＣ１−３アルキルは、メチル又はエチルである。式１９、２０及び２１において、Ｒは、優先的にエチル又はメチルであり、最も好ましいのはメチルである。
【００８８】
中間体２１を、下記の動力学的ラセミ分割に基づく化学酵素的手順により調製することができる。
１． スキーム７に概略を示すような、trans−ラセミ体Ｎ−（２，２−ジフルオロエチル−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエステル１９のエナンチオ選択的酵素的加水分解
および
２． スキーム７による、水性緩衝液中での保持された（Ｒ，Ｒ）−Ｎ−（２，２−ジフルオロエチル）−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエステル２０の選択的モノ加水分解。
【００８９】
エナンチオ選択的加水分解（スキーム７）を、保持されたジエステル２０が高い鏡像異性体過剰（＞５０％の転換）に達するまで、水性緩衝液中に乳化したジエステル基質１９と酵素を激しい撹拌よって接触させることにより実施する。
【００９０】
適切な反応条件を適用すれば、いくつかのエナンチオ選択的酵素を見出すことができる：カンジダ・アンタルクチカＢ型（Candida antarctica form B）由来リパーゼ、フィコミセス・ニテンス（Phycomyces nitens）由来リパーゼ、バチルス種（Bacillus sp.）由来プロテアーゼ（Esperase 4.0 T; Novozymes）、バチルス種由来ズブチリシン（Alcalase 2.5L; Novozymes）及びエステラーゼ ESP-ESL-1199。好ましいのは、カンジダ・アンタルクチカＢ型由来リパーゼ、フィコミセス・ニテンス由来リパーゼ（Lipase PN, Wako Pure Chemical Industries Ltd.; Osaka, Japan）及びエステラーゼ ESP-ESL-1199（Diverasa Corporation; San Diego, USA）であり、最も好ましいのは、カンジダ・アンタルクチカＢ型由来リパーゼ（その市販調製物はLipozyme CALB L又はNovozyme CALB L; Novozymes; Bagsvaerd, Denmarkである）である。
【００９１】
適切な緩衝液は、ｐＨ５〜９、好ましくは６〜８の範囲の、生化学において一般に使用される従来の緩衝液である。反応の過程で、反応混合物のｐＨは、塩基、優先的にはＮａＯＨ又はＫＯＨ溶液の添加により、選択された値で一定に保たれる。
【００９２】
エステラーゼ ESP-ESL-1199の場合、ｐＨ７．２のリン酸緩衝液（例えば３０mM）を、酢酸マグネシウム（例えば飽和）、アセトニトリル（例えば５％v/v）及びエタノール（例えば５％v/v）などの添加剤と共に使用することが、選択性にとって有益である（Ｅ≫４０）。また、７未満のｐＨ（例えばＭＥＳ緩衝液、ｐＨ６．２）は、選択性を増強する。
【００９３】
カンジダ・アンタルクチカＢ型由来リパーゼの場合、ｐＨ７．２のリン酸緩衝液（例えば３０mM）を、硫酸カリウム（例えば０．５M）、塩化カリウム（例えば０．５M）、ロダンリチウム（例えば０．１M）、酢酸マグネシウム（例えば飽和）、ポリエチレングリコール6000（例えば１０％w/v）、塩化グアニジウム（例えば０．１M）、Ｄ−グルコース（例えば０．５M）、ＤＭＳＯ（例えば５％v/v）及びエタノール（例えば５％v/v）などの添加剤と共に使用することが、選択性にとって有益である（Ｅ≫４０）。また、７未満のｐＨ（例えば酢酸緩衝液又はＭＥＳ緩衝液）は、選択性を増強する。
【００９４】
エナンチオ選択性を増強するために、全ての酵素を、より低い温度（０〜２５℃）で適用しうる。より高い温度で作業することによって酵素の活性を増加させることができるが、しかし選択性が犠牲にされる。代替として、固定化形態で酵素を使用してもよい。
【００９５】
反応の終了後に、ジエステル生成物を抽出により従来どおりに処理する。
【００９６】
次いで、保持された鏡像異性的に純粋な（Ｒ，Ｒ）−ジエステル２０を、それを水性系中でリパーゼ、エステラーゼ、コレステラーゼ又はプロテアーゼと接触させることにより、鏡像異性的に純粋な（Ｒ，Ｒ）−モノエステル２１にモノ加水分解する。ブタ肝臓エステラーゼ（その市販調製物は、例えばRoche Applied SciencesからのPLE Technical Grade（３．１２MU/L；カタログ番号10491228；Penzberg, Germany)である）及びカンジダ・シリンドラセ由来Lipase OF（Ｃ．ルゴサ；Meito Sangyo; Tokyo, Japan）が最も適切な酵素であると判明した。
【００９７】
基質濃度は、１〜２０％w/w、好ましくは５〜１５％w/wの範囲でありうる。
【００９８】
モノエステル生成物を、酢酸エチルを用いたｐＨ３．５〜４での（抽出工程の間にｐＨを調整して、又は強ｐＨ３．５〜４リン酸緩衝液を使用して）反復した抽出により、水相から抽出する。
【００９９】
場合により、（Ｒ，Ｒ）−モノエステル２１を、高度に（Ｒ，Ｒ）選択的な酵素を使用するエナンチオ選択的モノ加水分解により、ジエステル１９から直接合成してもよい。
【０１００】
Ｖ 環状無水物経路
【０１０１】
【化１１】
【０１０２】
スキーム８において、Ｒ１は、メチル、エチル、シンナミル、ベンジル又はフェネチルである。
【０１０３】
この経路は、以下の工程を含む：
１． ジフルオロエチルピロリジン２３をもたらす、［３＋２］付加環化反応
２． cis−ビス−酸２４を提供する、ベンジルエステル水素化分解
３． 環状無水物２５の形成
４． cis一酸モノエステル２６を形成させるための、無水物脱対称化（desymmetrization）
５． αエステル中心の対応するtrans一酸モノエステル２７へのエピマー化
６． アミドエステル２８を与える、アニリン１１を用いた第１のアミドカップリング
７． 化合物１０をもたらす、エステルアミド２８の２−アミノ−５−クロロピリジンとの直接カップリング
【０１０４】
付加環化工程（２３の形成）のための条件は、試薬２９による（トリメチルシリル−メチル）−アミンからのピロリジン１９の調製について記載したものと同様である。
【０１０５】
２３の２４への水素化分解は、当業者に公知の条件下で行われる。使用する条件に応じて、水素化分解の間に結晶化が起こりうる。これを、トリエチルアミン及びジイソプロピルエチルアミンなどの第三級アミンの存在下で、好ましくはトリエチルアミンの存在下で水素化分解を行うことにより、回避することができる。ビス酸２４は、酢酸、又は酢酸と、トルエン、酢酸エチル、酢酸イソプロピル及びＭＴＢＥなどの溶媒との混合物から、好ましくは酢酸とＭＴＢＥの混合物中で最良に結晶化される。対応するtrans 酸へのエピマー化が、例えばcis 酸２４を酢酸中で加熱した場合に起こりうることに留意しなければならない。このエピマー化を回避するために、処理条件を慎重に選択しなければならない。しかし、より強烈な条件下ではあるが、２４のtrans 異性体を環状無水物に転換することが可能である（下記参照）。
【０１０６】
環状無水物の形成は、cisビス酸２４を、塩化スルホニル、酸化リン（ＯＰＣｌ３、Ｐ２Ｏ５）、ハロゲン化リン（ＰＣｌ３、ＰＣｌ５、ＰＢｒ３）又は無水プロピオン酸及び無水酢酸などの無水カルボン酸などの脱水剤と反応させることにより行われる。好ましい条件は、適切な溶媒、好ましくは酢酸中で無水酢酸を使用することを含む。
【０１０７】
式２６で示される化合物は、式２５のメソ環状無水物の脱対称化反応により入手される（例えばBolm et al, Tetrahedron: Asymmetry 2003, 3455；Bolm et al, J. Org. Chem. 2000, 6984；Deng et al., 米国特許出願公開第２００４／００８２８０９号；Deng et al, J. Am. Chem. Soc. 2000、9542を参照されたい）。
【０１０８】
アルコールを用いた選択的開環による環状無水物脱対称化は、キラルアミン、特にキナアルカロイド又はその誘導体などのキラル試薬の存在下で、好ましくはキニーネの存在下で行われる。反応を、ＴＨＦ、トルエン、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、アセトン、ＭＴＢＥ、２−メチル−ＴＨＦ及びアセトニトリルなどの有機溶媒中で、好ましくはＴＨＦ、トルエン又は２−メチル−ＴＨＦ中で、より好ましくはトルエン又はＴＨＦ中で行うことができる（以下の表を参照されたい）。
【０１０９】
プロモーターとしてのキニーネ及び求核剤としてのＢｎＯＨを用いて行ったスクリーニングからの結果：
【０１１０】
【表１】
【０１１１】
溶媒の混合物もまた可能である。しかし、試薬の溶解度、反応性及び選択性の間の至適バランスを見出さなければならない。
【０１１２】
この反応を、準化学量論的な量のキニーネを用いて行うことができる。しかし、この場合、反応は、添加剤、好ましくはヒューニッヒ塩基及びテトラメチルピペリジンなどの非求核塩基の存在下で、好ましくはヒューニッヒ塩基の存在下で最良に行われる。反応は、−８０℃〜５０℃、好ましくは−４０℃〜２５℃、より好ましくは約−２０℃より選択される温度で行われる。
【０１１３】
キニーネがプロモーターとして使用される場合、無水物を、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ベンジルアルコール、シンナミルアルコール及び２−フェニル−エタノールなどのアルコールを用いて、好ましくはメタノール、エタノール、ベンジルアルコール、シンナアミルアルコール又は２−フェニル−エタノールを用いて、より好ましくはエタノール、ベンジルアルコール又は２−フェニル−エタノールを用いて、より好ましくは２−フェニル−エタノールを用いて開環することができる。至適条件下で、生成物は、９０〜９５：１０〜５の鏡像異性体比で得られる。
【０１１４】
生成物を、抽出などの、当業者に公知の処理により単離することができる。いくつかの場合、そのキニーネ塩を、反応混合物から直接に、又は適切な溶媒交換後に、単離することができる。
【０１１５】
一酸モノエステルの鏡像異性体純度を、場合によっては、アミン、例えばキニーネを用いるそれらの塩の結晶化／再結晶化により向上させることができる。鏡像異性体純度を、一酸モノエステル２６（ここで、Ｒは、ＰｈＣＨ２ＣＨ２である）の場合と同様に、水から酸を結晶化することにより向上させることができる。
【０１１６】
cis一酸モノエステル２６の対応するtrans一酸モノエステル２７へのエピマー化は、＞１当量、好ましくは１．０５〜３当量、より好ましくは１．１〜２当量、より好ましくは１．３〜１．６当量の強塩基、例えばＬｉＨＭＤＳ、ＫＨＭＤＳ、ＮａＨＭＤＳ、ＬＤＡ、ＫＯｔＢｕ、ＮａＯｔＢｕ、ＬｉＯｔＢｕ、リチウムｔ−アミラート、カリウムｔ−アミラート及びナトリウムｔ−アミラートを使用して、塩基性条件下で行われる。好ましい塩基は、ＫＯｔＢｕ又はカリウムｔ−アミラート、特にＫＯｔＢｕである。反応は、トルエン、ＴＨＦ、ＤＭＥ及びジオキサンなどの溶媒中で、好ましくはトルエン又はＴＨＦ中で、より好ましくはＴＨＦ中で行われる。反応は、−８０℃〜５０℃、好ましくは−８０℃〜室温、より好ましくは−８０℃〜−１５℃、さらにより好ましくは−８０℃〜−６０℃より選択される温度で行われる。
【０１１７】
出発一酸モノエステル２６の塩基との反応を可能にするように、それが完全に溶解しているか、又は少なくとも十分な溶解度を示すことに注意を払わなければならない。好ましくない溶解度の場合、可溶性塩を形成する第三級アミンの添加で、問題が解決されうる。好ましいアミンは、例えばトリエチルアミン、トリブチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン、より好ましくはトリエチルアミンである。
【０１１８】
ジアステレオマー純度（trans：cis）は、一般に粗混合物中約９９％である。ＲがＰｈＣＨ２ＣＨ２の場合、これは、処理及び水からの結晶化後にさらに増加しうる。
【０１１９】
ＲがＰｈＣＨ２ＣＨ２の場合、エナンチオ純度とジアステレオマー純度の両方を、例えば酢酸エチルとヘプタンとの混合物中で（再）結晶化することにより向上させることができる。
【０１２０】
２７の１０への転換は、類似の基質について本特許においてすでに記載した条件下で行われる。
【０１２１】
環状無水物２５を、以下のスキームに示す順序により入手することもでき、以下の工程を含む：
１． アミナール３０（異性体の混合物、隣接エステル基の間ですべてtransの相対立体配置、ここでＲはベンジルである）をもたらす、１２の１３への転換についてすでに記載した条件と同様の条件下でのトリメチルシリルメチルアミン／ホルムアルデヒド／ジベンジルフマラートの間での付加環化。
２． アミナールの対応するアミンへのインサイチュでの開裂（これは塩酸塩３１として単離される）。
３． 類似の基質について本特許においてすでに記載した条件下での、３２をもたらす、３１の対応する遊離アミンのアルキル化。
４． transビス酸３３をもたらす、ベンジルエステル水素化分解
５． 無水物形成。
【０１２２】
【化１２】
【０１２３】
trans ビス酸３３を、cis 無水物２５に直接転換することができる。実際、適切な反応条件下で、３３のcis及びtrans異性体の間に平衡が存在する。次いで、cis 異性体を無水酢酸によりトラップし、所望の無水物に転換する。反応条件は、十分に速やかにtrans−cis 異性化をさせるために反応温度を上げなければならない以外、２４から２５への転換に使用する条件と同様である。好ましい条件は、６０℃〜１４０℃、好ましくは８０℃〜１２０℃、より好ましくは１００℃〜１１０℃の温度で、適切な溶媒、好ましくは酢酸中で、ビス酸３３を無水酢酸と反応させることを含む。
【０１２４】
ビス酸３３を、対応するエステル（例えばジメチル−、ジエチル−、ジ−ベンジル−、ジプロピル、ジイソプロピル−、ジブチル−エステル）の加水分解及びｐＨ３〜３．５の水からの結晶化により得ることもできる。
【０１２５】
１−（４−アミノ−３−フルオロ−フェニル）−１Ｈ−ピリジン−２−オン（化合物１１）の調製
米国特許出願公開第２００５／０２１５５９９号に記載される方法、すなわち４−ブロモ−２−フルオロアニリンを用いた２−ヒドロキシピリジンの銅触媒Ｎ−アリール化は、重大な安全上の問題を抱えている。
【０１２６】
【化１３】
【０１２７】
実際、Ｋ２ＣＯ３とＤＭＳＯとの混合物は高温で潜在的に暴走事象（runaway event）をもたらし、これは、非常に高い断熱温度上昇を伴う。暴走事象についての最大速度までの時間（ＡＲＣの測定から）はおよそ反応時間であり、従ってこのような方法を、そのままスケールアップすることができない。この方法の第１の改変は、ＤＭＳＯをＮＭＰ又はＤＭＡに、好ましくはＤＭＡに置き換えることを含んだ。
【０１２８】
銅（Ｉ）供給源は、ＣｕＩ、ＣｕＣｌ、ＣｕＢｒ、Ｃｕ２Ｏ、好ましくはＣｕＩ及びＣｕ２Ｏ、より好ましくはＣｕ２Ｏでありうる。
【０１２９】
Ｎ−アリール化のための好ましい条件は、ＤＭＡ中、Ｋ２ＣＯ３の存在下で、１１０℃〜１５０℃、より好ましくは１２０〜１４０℃、さらにより好ましくは１３０〜１４０℃の温度で、０．０５〜１当量、好ましくは０．０５〜０．５当量、より好ましくは０．１〜０．２当量のＣｕ２Ｏを使用することを含む。
【０１３０】
他の好ましい条件は、１００〜１５０℃、好ましくは１００〜１２０℃（沸点を超える温度についてはオートクレーブを使用する）の温度で、溶媒としてのピリジン及び０．１〜１当量、より好ましくは０．２５〜０．７５当量、さらにより好ましくは約０．５当量のＣｕ２Ｏを使用することを含む。
【０１３１】
両方の場合に、生成物は、水の添加により、結晶化により単離される。
【０１３２】
必要であれば、生成物を、活性炭処理及び／又はエタノールもしくはメタノール、好ましくはメタノール中の再結晶化によりさらに精製することができる。
【０１３３】
Ｎ−アリール化を、トルエン中で、trans−シクロヘキシル−１，２−ジアミン、ＴＭＥＤＡ、エチレンジアミン、trans−Ｎ，Ｎ’−ジメチル−シクロヘキシル−１，２−ジアミン、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレン−１，２−ジアミン、好ましくはtrans−Ｎ，Ｎ’−ジメチル−シクロヘキシル−１，２−ジアミン及びＴＭＥＤＡなどのリガンド、好ましくはＴＭＥＤＡの存在下で行うこともできる。
【０１３４】
アニリン１１を、まず４−ブロモ−２−フルオロアニリンの保護、続いてＮ−アリール化（非保護アニリンに関して上記したものと同様の条件下で）、続いて脱保護を含む順序により調製することもできる。４−ブロモ−２−フルオロアニリンは、好ましくはビス−ベンジル化により保護される。結晶性中間体を、各工程で得る。ピリドン環の水素化を回避するために、脱保護工程は、水素化分解の慎重なモニタリングを必要とする。触媒の適切な選択もまた重要であり、本発明者らの手持ちでは、Johnson Mattheyからの５％ Ｐｄ／Ｃが最良の結果を与えた。
【０１３５】
【化１４】
【０１３６】
実施例
下記の実施例は、本発明を更に詳細に説明するために役立つ。しかし、これらは本発明の範囲をどのようにも制限することを意図しない。
【０１３７】
実施例１ 酵素的経路Ａ
工程１：［３＋２］付加環化
【０１３８】
【化１５】
【０１３９】
Ｎ−ベンジル−Ｎ−トリメチルシリルメチル−アミン９００ｇ（４６５４mmol）を、ＴＨＦ ５．６Ｌに２０〜２５℃で溶解した。温度を２０〜２５℃の間に保持しながら、３６％ホルムアルデヒド水溶液４５０ml（５８８０mmol、１．２６当量）を１５分間かけて加えた。１５分後、ジエチルフマラート７６０ml（１当量）、ＴＨＦ ２．２５Ｌ及びトリフルオロ酢酸１１．２ml（０．０３当量）の混合物を１５分間かけて加えた。温度を２０〜３０℃に保持しながら、反応混合物を一晩撹拌した（ＧＣによる工程内管理（in process control））。１N ＨＣｌ ３．５Ｌを加え、続いてヘプタン２．３Ｌを加えた。水相を分離し、ヘプタン３．４Ｌで洗浄した。ヘプタン相を１N ＨＣｌ ３．５Ｌで順次洗浄した。ＭＴＢＥ ４．５Ｌを、合わせた水相に加えた。３２％ ＮａＯＨ水溶液７２０mlを激しく撹拌しながら加えた（ｐＨ １３）。水相を分離し、ＭＴＢＥ ４．５Ｌで再抽出した。ＭＴＢＥ相を水２．２Ｌで順次洗浄し、合わせ、４５℃で濃縮乾固して、粗（rac）−trans−Ｎ−ベンジル−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエチルエステル１．２９５kgを得た。必要であれば、粗環付加物を蒸留することができる。
【０１４０】
工程１：［３＋２］付加環化（代替条件）
Ｎ−ベンジル−Ｎ−トリメチルシリルメチル−アミン２００ｇ（１０３５mmol）を、ＴＨＦ ８００mlに溶解した。この溶液に、３７％ホルムアルデヒド水溶液９８．３ml（１．２６当量）を室温で加えた。室温で１５分間撹拌した後、得られた溶液をジエチルフマラート１８１．８ｇ（１０３５mmol）、ＴＨＦ １．２Ｌ及びトリフルオロ酢酸２．５ml（０．０３当量）からなる熱（５０〜５５℃）溶液に２時間かけて加えた。反応が完了した後（ＧＣ又はＨＰＬＣによるＩＰＣ）、反応混合物を室温に冷まし、先の実施例に記載されているように処理して、予想される環付加物３０１．８ｇを得た。
【０１４１】
工程２〜３：脱ベンジル化／Ｂｏｃ保護
【０１４２】
【化１６】
【０１４３】
（rac）−trans−１−ベンジル−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエチルエステル１．２９５kgを、ＥｔＯＨ ６．５Ｌ中で、１０％ Ｐｄ／Ｃ 触媒１００ｇを用いて室温にて水素化した。反応が完了した後、触媒を濾過し、ＥｔＯＨ ４８０ml中のジ−ｔ−ブチル−ジカルボナート９３５ｇ（１．０１当量）の溶液を加えた。反応が完了した後（ＧＣによる工程内管理）、反応混合物を蒸発させ、ＴＨＦ ９．７Ｌに溶解した。水８mlを加え、続いてＤＭＡＰ ５．３ｇ（０．０１当量）を加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、濃縮乾固した。残留物をＭＴＢＥ ６．５Ｌに溶解し、５％クエン酸水溶液１．２９Ｌ、１０％ ＮａＨＣＯ３水溶液３．３Ｌ及び水３．３Ｌで洗浄した。水相をＭＴＢＥ ６．５Ｌで順次再抽出した。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、４０℃で濃縮乾固して、粗（rac）−trans−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエチルエステル１．２３３kgを得た。
【０１４４】
注： 酵素的分割をLipolase 100L Type EX 酵素を用いて実施する場合、ＤＭＡＰクエンチを省略してもよい。
【０１４５】
工程４：酵素的分割（Lipolase）
【０１４６】
【化１７】
【０１４７】
（rac）−trans−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエチルエステル ３２ｇ（９６．１９mmol、９５ａ％ ＧＣ）を、ヘプタン３２ml及び０．１M リン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ ７．０ ２５６ml中で激しく撹拌しながら乳化した。エマルションを０〜１℃に冷却した。Novozyme Lipolase 100L Type EX（Novozyme）２．３０mlを加え、１．０M ＮａＯＨ溶液の自動添加（ｐＨ−スタット）によりｐＨを７．０で一定に保持した。目標の鏡像異性体過剰に達した後（典型的には＞９９％、反応時間約４５時間、０．５５当量 ＮａＯＨを添加、ＧＣ工程内管理）、ジクロロメタン２５０mlを加えた。水相を分離し、ジクロロメタン５００mlで２回抽出した。合わせた有機相を蒸発させ、その間に白色の沈殿物が形成された。残留物を酢酸エチル２５０mlに再溶解し、白色の沈殿物を濾別した。濾液を重炭酸ナトリウム飽和水溶液７５mlで洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させ、高真空下で一晩乾燥させて、（３Ｒ，４Ｒ）−trans−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエチルエステル １３．４７ｇを明黄色の油状物（ＧＣにより純度９６％）として得た。
【０１４８】
あるいは、生成物をヘプタン又はＭＴＢＥで、好ましくはヘプタンで抽出することができる。相分離を促進するために、ＮａＣｌもまた水相に加えることができる。
【０１４９】
工程５：選択的モノ加水分解
【０１５０】
【化１８】
【０１５１】
（３Ｒ，４Ｒ）−trans−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸ジエチルエステル２．９５kgを、５mM リン酸カリウム／１M Ｄ−グルコース緩衝液の水溶液２６．５Ｌ中で撹拌して、エマルションを形成した。水０．５Ｌに溶解したLipase OF（Meito Sangyo）５．９ｇを加えた。１M ＮａＯＨを加えることによりｐＨを７．２に保持した。反応が完了した後（１M ＮａＯＨ ８．４kg、反応時間２４時間、ＧＣ工程内管理）、ＭＴＢＥ １０Ｌを加えた。有機層を分離し、廃棄した。酢酸エチル４０Ｌを加え、Ｈ２ＳＯ４を加えることによりｐＨを４に調整した。有機層を分離し、水相を酢酸エチル４０Ｌで再抽出した。合わせた有機相を蒸発乾固して、（３Ｒ，４Ｒ）−trans−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸モノエチルエステル２．３５kgを得た。
【０１５２】
（３Ｒ，４Ｒ）−trans−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸モノエチルエステルをアセトン／水中で結晶化させることができる：
（３Ｒ，４Ｒ）−trans−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸モノエチルエステル３．２kgを、アセトン３．２Ｌに溶解した。この溶液に、０．１％酢酸水溶液３．２Ｌを室温で加えた。混濁した溶液に播種した。結晶化が１５分後に開始した。さらなる３０分の後、水３０Ｌを加え、懸濁液を室温で２２時間撹拌した。懸濁液を濾過した。フィルターケーキを合計７Ｌの水少量ずつで洗浄し、恒量に乾燥させて、（３Ｒ，４Ｒ）−trans−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸モノエチルエステル一水和物３．２９５kgを白色の粉末として得た。
【０１５３】
工程６：第１のアミドカップリング
【０１５４】
【化１９】
【０１５５】
trans−Ｎ−Ｂｏｃ−ピロリジン−３，４−ジカルボン酸モノエチルエステル一水和物１３５ｇを、トルエン７００mlに懸濁し、１５０〜２００mlに濃縮した（約１００mbar下、ジャケット温度６０℃；水の共沸除去、カールフィッシャー分析により残留含水量をチェック）。ＴＨＦ ４００mlを加え、続いてＮ−メチルモルホリン ５５ml（１．１１当量）を加えた。得られた溶液を、ＴＨＦ ９００ml中のクロロギ酸イソブチル６０ml（１．０４当量）の冷（０〜５℃）溶液に３０分間かけて加えた。添加漏斗をＴＨＦ ５０mlで洗浄した。白色の懸濁液を０〜５℃で１５分間撹拌した。フルオロアニリン９０ｇ（１．０当量）を一度に加え、反応混合物を加熱還流した。反応が完了した後（ＨＰＬＣ工程内管理）、反応混合物を室温に冷ました。トルエン９００mlを加え、続いて１M ＨＣｌ ５００mlを加えた。水相を分離し、トルエン９００mlで抽出した。有機相を１M ＨＣｌ ５００ml及び５％ ＮａＨＣＯ３水溶液５００mlで順次洗浄した。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、約５００mlに濃縮した（ジャケット温度６０℃）。イソブタノールを、トルエン約１Ｌを用いる定容量での共沸蒸留により除去した（イソブタノール除去をＧＣによりチェック）。次に、粗生成物溶液を３３７ｇに濃縮した（トルエン中の６０％ m/m 溶液、それを次の工程に直接使用した、収率９７％に対応）。
【０１５６】
あるいは、反応をＬｉＣｌ活性化で室温にて実施することができる：一水和物としての一酸モノエステル １０ｇ（３２．７５mmol １当量）を、ＴＨＦ １００mlに溶解し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、ＴＨＦ ３０mlにＮ−メチルモルホリン４．１５ml（１．１５当量）と一緒に再溶解した。この溶液を、ＴＨＦ ５０ml中のクロロギ酸イソブチル４．４６ml（１．０当量）の冷０〜５℃溶液に１５分間かけて加えた。０〜５℃での１．５時間の後（活性化工程は主に供給制御されるので、保持時間をより短くすることができる。これはまた、いかなる混合無水物の分解も減少させる）、塩化リチウム１．４ｇ（１．０当量）を加え、続いてアニリン６．８８ｇを加えた（最初にアニリンを、続いてＬｉＣｌを加えることも可能である）。室温で１８時間反応させた後、トルエン １５０mlを加えた。反応混合物を、１N ＨＣｌ ６０ml、５％ ＮａＨＣＯ３水溶液 ６０ml及びＮａＣｌ半飽和水溶液６０mlで２回洗浄した。水相をトルエン１００mlで順次再抽出した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下４５℃で濃縮乾固して、泡状物１５．９２ｇを得た（収率約９７％、約４％トルエンを含有する）。イソブタノール除去を確実にしなければならない。さらなる共沸除去が可能である。先の実施例を参照のこと。
【０１５７】
工程７：第２のアミドカップリング
【０１５８】
【化２０】
【０１５９】
トルエン中の６０％ m/m アミドエステル（前記工程を参照）溶液３３７ｇ（４３１mmol、１当量）を反応器に入れ、続いてＴＨＦ ６５０mlを入れた。５−クロロ−２−アミノピリジン８６ｇ（１．５当量）を加えた。温度を２０〜２５℃の間に保持しながら、ＴＨＦ中の１M ＬｉＨＭＤＳ溶液１．２Ｌを３０分間かけて加えた。反応が完了した後（ＨＰＬＣ工程内管理）、水１．２Ｌ中の３７％ ＨＣｌ水溶液３００mlからなる溶液を加えた（ｐＨ １〜２）。ジクロロメタン２Ｌを加え、有機相を分離し、水１Ｌで洗浄した。水相をジクロロメタン１Ｌで順次抽出した。合わせたジクロロメタン相を２．５〜３．５Ｌの容量に濃縮した。エタノールへの溶媒交換を定容量で実施し（ジャケット温度６０℃、４００〜１００mbar、合計でエタノール５Ｌ）、その間に結晶化が開始した。懸濁液を室温に冷まし、室温で一晩撹拌し、０〜５℃で２時間撹拌した。懸濁液を濾過し、フィルターケーキを冷（−２０℃）ＥｔＯＨ ２５０mlで４回洗浄した。結晶を減圧下４５℃で恒量に乾燥させて、予想されるＢｏｃ−ピロリジンビス−アミド１８０ｇを白色の粉末として得た（収率７５％）。
【０１６０】
工程８〜９：Ｂｏｃ脱保護／アルキル化
【０１６１】
【化２１】
【０１６２】
Ｂｏｃ−ピロリジンビス−アミド５３．２ｇ（９５．７mmol、１当量）を、水１６０ml及び３７％ ＨＣｌ水溶液１６０ml（２０当量）からなる溶液に室温で少量ずつ加えた。反応が完了した後（約３０分間、ＨＰＬＣ工程内管理）、得られた溶液を重炭酸ナトリウム１９７ｇ（２４．５当量）、水３２０ml、酢酸エチル５３０ml及び２，２−ジフルオロエチルトリフラート２３ｇ（１．１当量）からなる熱（５０℃）溶液に１時間かけて加えた。添加漏斗を水１５mlで洗浄した。反応が完了した後（約３０分間、ＨＰＬＣ工程内管理）、反応混合物を室温に冷ました。水相を分離し、酢酸エチル５３０mlで再抽出した。有機相をＮａＣｌ半飽和溶液２６５mlで順次洗浄した。合わせた酢酸エチル相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過した。Ｎａ２ＳＯ４フィルターケーキを酢酸エチル２３０mlで洗浄した。エタノールに溶媒交換し、室温で一晩結晶化させた後、得られた懸濁液を−２０℃に冷却した。−２０℃での１時間の後、懸濁液を濾過し、冷（−２０℃）エタノール合計１００mlで少量ずつ洗浄した。結晶を恒量に乾燥させて（５０℃／減圧）、白色の粉末４０ｇを得た（収率７８％）。
【０１６３】
実施例２ 付加環化／Ｂｏｃ保護によるＢｏｃ−ピロリジン中間体４を得るための代替経路
１． 新たな［３＋２］付加環化
【０１６４】
【化２２】
【０１６５】
トリメチルシリルメチルアミン５０ｇ（４７５mmol、１当量）を、ＴＨＦ ５００mlに溶解し、３７％ホルムアルデヒド水溶液７１．７ml（２当量）で室温にて処理した。この温度での１５分の後、得られた溶液を、ＴＨＦ ５００ml中のジエチルフマラート８３．４mlの６０℃の熱溶液に１０分間かけて加えた。反応混合物を一晩還流した。反応混合物を室温に冷まし、濃縮乾固した。残留物をＭＴＢＥ １Ｌに再溶解し、１M ＨＣｌ水溶液５００mlで抽出した。ＭＴＢＥ ５００mlを水相に加え、続いて１M ＮａＯＨ ５００mlを激しく撹拌しながら加えた。水相を分離し、ＭＴＢＥ ２５０mlで再抽出した。合わせた有機相をＮａＣｌ飽和水溶液２５０mlで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、粗環付加物アミナール８３．３ｇを油状物として得た（収率８０％）。生成物は、いくらかの量の加水分解したアミナールを含有してもよい。
【０１６６】
２． アミナールからの直接Ｂｏｃ保護
【０１６７】
【化２３】
【０１６８】
前記工程からの環付加物アミナール７９．８ｇ（１８０mmol、１当量）を、ＴＨＦ ７９８mlに溶解した。水３２０ml及びジ−ｔ−ブチル−ジカルボナート８６．８ｇ（２．１６当量）を、撹拌しながら連続して室温で加えた。清澄で二相性の反応混合物を室温で一晩撹拌した（ＴＬＣ工程内管理）。反応が完了した後、ＤＭＡＰ ２２５mgを加えて過剰量のジ−ｔ−ブチル−ジカルボナートを破壊した。ＴＨＦを減圧下で蒸発させ、ＭＴＢＥ １Ｌを加えた。粗生成物溶液を１N ＨＣｌ水溶液０．８Ｌで洗浄した。水相をＭＴＢＥ １Ｌで再抽出した。合わせた有機相を水５００mlで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮乾固して、予想されるＢｏｃ保護ピロリジン９６．６ｇを油状物として得た（収率８７％）。
【０１６９】
あるいは、Ｂｏｃ保護を、容易な直接的抽出を可能にするＭＴＢＥ／水混合物中で実施することができる。しかし、この場合、ＤＭＡＰを用いたＢｏｃ２Ｏクエンチは上記のように可能ではない。しかし、実施例１：工程４のLipolaseを用いた分割に記載されるように、粗生成物を続く酵素の工程に直接使用することができるのでこれは問題ではない。
【０１７０】
実施例３ 酵素的経路Ｂ
工程１：付加環化
【０１７１】
【化２４】
【０１７２】
Ｎ−ベンジル−トリメチルシリルメチル−アミン１８０ｇ（９０３mmol、１当量）を、ＴＨＦ １．２５Ｌに溶解し、３７％ホルムアルデヒド水溶液８７．２ml（１．２８当量）で処理した。室温での１５分の後、ＴＨＦ ６２５ml中のジメチルフマラート１３４ｇ（１当量）及びトリフルオロ酢酸１．４ml（０．０２当量）の懸濁液を加えた。温度を２０〜３５℃の間に保持しながら、反応混合物を完了するまで（ＧＣ工程内管理、約５時間）撹拌した。ヘプタン１Ｌを加え、続いて１M ＨＣｌ水溶液９６６mlと水２００mlのと混合物を加えた。有機相を分離し、１M ＨＣｌ水溶液４５０mlと水１Ｌとの混合物で抽出した。ＭＴＢＥ １Ｌを、合わせた水相に加え、続いて３２％ ＮａＯＨ水溶液１５０mlを激しく撹拌しながら加えた。水相を分離し、ＭＴＢＥ １Ｌで再抽出した。合わせた有機相を水５００mlで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、環付加物２３８ｇを黄色の油状物として得た（収率９５％）。
【０１７３】
工程２：脱ベンジル化
【０１７４】
【化２５】
【０１７５】
Ｎ−ベンジルピロリジン２３５ｇを、ＭｅＯＨ ２．３５Ｌに溶解し、２０％ Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ ４７ｇの存在下、大気水素圧下、室温で水素化した。反応が完了した後、触媒を濾別し、濾液を減圧下で濃縮乾固して、アミン１４７．７ｇを得た（収率９３％）。あるいは、Ｐｄ担持炭もまた使用できる。
【０１７６】
工程３：アルキル化
【０１７７】
【化２６】
【０１７８】
アミン１２５ｇ（６６８mmol、１当量）を、アセトニトリル６２５mlに溶解した。ジフルオロエチル ３−ニトロベンゼンスルホナート１７８ｇ（１当量）及びエチルジイソプロピルアミン１１４ml（１当量）を加えた。反応が完了するまで（ＧＣ工程内管理、約２０時間）、反応混合物を加熱還流した。反応混合物を室温に冷まし、濃縮乾固した。ＭＴＢＥ ５００ml及び１０％ Ｎａ２ＣＯ３水溶液２５０mlを加えた。有機相を分離し、２５％ ＮＨ４Ｃｌ水溶液で２回洗浄した。水相をＭＴＢＥ ５００mlで順次再抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、ジフルオロエチルアミン生成物１６２．８ｇを得た（収率８４％、ＧＣにより約８６ａ％）。
【０１７９】
生成物を、必要であれば精製することができ、又は次の工程に直接使用することができる。
【０１８０】
工程４：酵素的分割
【０１８１】
【化２７】
【０１８２】
例ａ）：
（rac）−trans−ジメチルエステル１３２．５ｇ（４５４mmol、１当量、ＧＣにより純度８６％）を、０．０５M 酢酸マグネシウムｐＨ６水溶液１．２Ｌ中で撹拌した。酢酸を加えることにより、得られたエマルション（ｐＨ ８．２）のｐＨを６．５に調整した。次にNovozyme CALB L（Novozyme）９．７mlを加え、反応を引き起こした。１M ＮａＯＨの自動添加により（ｐＨ−スタット）、ｐＨを６．５で一定に保持した。反応が完了した後（目標のｅ．ｅ．に到達、典型的には＞９９％ｅ．ｅ．、反応時間約９０時間、ＮａＯＨ ０．５７当量添加、ＧＣ工程内管理）、ジクロロメタン１Ｌを加えた。ｐＨを７に調整した。水相を分離し、ジクロロメタン１Ｌで３回再抽出した。有機相をＮａＨＣＯ３飽和溶液４００ml及び水４００mlで洗浄した。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固して、粗（Ｒ，Ｒ）−ジエステル６４．２ｇを得た（収率４９％、ＧＣにより純度８８％）。
【０１８３】
例ｂ）：
（rac）−trans−ジメチルエステル５００ｇ（１．８３９mol、１当量、ＧＣにより純度９２．４％）を、０．０５M 酢酸マグネシウムｐＨ ６水溶液４．５Ｌ中で撹拌した。酢酸を加えることにより、得られたエマルションのｐＨを６．５に調整した。次にNovozymes CALB L（Novozyme）４０mlを加え、反応を引き起こした。１M ＮａＯＨの自動添加により（ｐＨスタット）、ｐＨを６．５で一定に保持した。反応が完了した後（目標のｅ．ｅ．に到達、典型的には＞９９％ｅ．ｅ．、反応時間約６９時間、ＮａＯＨ ０．５５当量添加、ＧＣ工程内管理）、ジクロロメタン１００mlを加えた。塩化ナトリウム１kgを加え、反応混合物をＭＴＢＥ ５Ｌで２回抽出した。合わせた有機相をＮａＨＣＯ３飽和溶液２Ｌ及び水２Ｌで洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固して、粗（Ｒ，Ｒ）−ジエステル２１５．５ｇを得た（収率４３％、ＧＣにより純度９２％）。
【０１８４】
工程５：酵素的モノ加水分解
【０１８５】
【化２８】
【０１８６】
例ａ）：
粗（Ｒ，Ｒ）−ジエステル ６３．１ｇを、０．１M ＮａＣｌ水溶液／３．８M リン酸ナトリウム ｐＨ ７緩衝液７３０ml中で撹拌した。得られたエマルションに、工業グレードのブタ肝臓エステラーゼ ２１０μl（Technical grade；Catalogue No. 10491228; Roche Applied Sciences）を室温で加えた。１M ＮａＯＨ水溶液の自動添加により、ｐＨを７．０で保持した。反応が完了した後（１M ＮａＯＨ ２４０ml消費、反応時間約７５時間、ＧＣ工程内管理）、ジクロロメタン１Ｌを加えた。有機相を分離し、廃棄した。２５％ ＨＣｌ水溶液を加えることにより水相のｐＨを３．５に調整した。水相を酢酸エチル１Ｌで抽出した。ｐＨ調整及び抽出の工程を４回繰り返した。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、一酸モノエステル４１．８ｇを得た（ＧＣにより純度９８％、収率７８％）。
【０１８７】
例ｂ）：
機械式撹拌機、温度計、ｐＨプローブ及びｐＨ−スタットに接続された滴定薬剤注入口を備えた７５０mlの４つ口フラスコ中で、（Ｒ，Ｒ）−ジエステル３８ｇ（１４１．３mmol；ＧＣ−純度９３．４％）を、０．１M 塩化ナトリウム／３．８mM リン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ ７．０ ３４０ml中で激しく撹拌しながら乳化した。ブタ肝臓エステラーゼ（Technical Grade、３．１２M U/L; Roche Applied Sciences）２４０μlを加えることにより反応を開始し、激しく撹拌しながら１．０M ＮａＯＨ溶液の自動添加により（ｐＨ−スタット）、ｐＨを７．０で一定に保持した。１．０M ＮａＯＨ溶液１３７．３ml（１３７mmol、９７．２％転換、４６時間後）の消費後、ジクロロメタン２０mlを加えることにより反応を停止し、ＭＴＢＥ ７６０mlで洗浄した。濃リン酸ナトリウム溶液１３９ml（２８％ ＮａＯＨ ７６mlに対してリン酸６３ml）を加えることにより、水相をｐＨ ３．６に調整し、酢酸エチル３×７６０mlで抽出した。合わせた酢酸エチル相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させ、乾燥させて、（Ｒ，Ｒ）−一酸２９．４ｇ（８６％）を白色の固体として得た。
【０１８８】
粗一酸モノエステルの結晶化： 粗一酸モノエステル５６．３７ｇを、酢酸エチル２００mlに加熱しながら溶解した。溶液を室温に冷まし、ヘプタン４００mlをゆっくり加えた。混濁した溶液に播種した。室温での１時間の後、懸濁液を濾過した。フィルターケーキを減圧下４５℃で乾燥させて、白色の粉末４６．８２ｇを得た。母液を蒸発させ、酢酸エチル２０mlに再溶解した。ヘプタン６０mlを加えた。室温での３時間の後、懸濁液を濾過した。フィルターケーキを減圧下４５℃で乾燥させて、白色の粉末７．１２ｇを得た。合計で５３．９４ｇの一酸モノエステルを単離した。
【０１８９】
工程６：第１のアミドカップリング
【０１９０】
【化２９】
【０１９１】
例ａ）：
一酸モノエステル１ｇ（４．２mmol、１当量）を、Ｎ−メチルモルホリン４６５μl（１当量）と一緒にＴＨＦ ３mlに溶解した。この溶液を、ＴＨＦ ５ml中のクロロギ酸イソブチル５７５μlの冷０〜５℃溶液に２０分間かけて滴下した。０〜５℃での１時間の後、塩化リチウム１８１mg（１当量）を加え、続いてフルオロアニリン８６１mg（１当量）を加えた。反応が完了するまで（ＨＰＬＣ工程内管理、約１〜３時間）、反応混合物を室温で撹拌した。水７ml、酢酸エチル２０ml及び１M ＨＣｌ水溶液１０mlを加えた。有機相を分離し、１M ＨＣｌ水溶液１０mlで再抽出した。飽和Ｎａ２ＣＯ３を加えることにより、合わせた水相のｐＨを９〜１０に調整し、酢酸エチル５０mlで２回抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固して、アミドエステル１．７２ｇを得た（ＨＰＬＣにより純度９６％、収率９６％）。
【０１９２】
例ｂ）：
一酸モノエステル２０ｇ（８４．３mmol、１当量）を、Ｎ−メチルモルホリン（１当量）９．２９mlと一緒にＴＨＦ ６０mlに溶解した。得られた溶液を、ＴＨＦ １００ml中のクロロギ酸イソブチルの冷（０〜５℃）溶液１１．４９ml（１当量）に２０分間かけて滴下した。０〜５℃での１時間の後（活性化は供給制御されるので、この保持時間はより短くすることができる）、フルオロアニリン１７．２２ｇ（１当量）を加え、続いて塩化リチウム３．５７ｇ（１当量）を加えた。反応混合物を室温に温めた。３時間反応させた後、水１４０ml、酢酸エチル４００ml及び１M ＨＣｌ ２００を加えた。有機相を分離し、１M ＨＣｌ ２００mlで再抽出した。水相を合わせ、Ｎａ２ＣＯ３飽和水溶液１６０mlを加えることによりｐＨを約１０に調整した。得られた混合物を酢酸エチル４００mlで２回抽出した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で約１４０mlの容量に濃縮した（結晶化がすでに開始しうる）。ヘプタン４２０mlをゆっくり加えた。得られた懸濁液を室温で３時間撹拌し、濾過した。フィルターケーキを減圧下で乾燥させて、生成物３１．１ｇを得た（収率８７％）。
【０１９３】
工程７：第２のアミドカップリング
【０１９４】
【化３０】
【０１９５】
例ａ）：
５−クロロ−２−アミノピリジン４６５mg（１．５当量）を、アミドエステル１ｇ（２．３６mmol、１当量）と一緒にＴＨＦ ８mlに溶解した。溶液を０〜２℃に冷却し、ＴＨＦ中の１M ＬｉＨＭＤＳ溶液７．１ml（３当量）を滴下した。反応が完了した後（約２時間、ＨＰＬＣ工程内管理）、２M ＨＣｌ水溶液（約６ml、５当量）を加えることにより、ｐＨを３．５に調整した。反応混合物を酢酸エチル１５mlで２回抽出した。有機相を水１３mlで順次洗浄した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固して、式（Ｘ）の粗化合物１．２７ｇを得た。
【０１９６】
例ｂ）：
２−アミノ−５−クロロピリジン１３．９４ｇ（１．５当量）及びモノエステルモノアミド３０ｇ（７０．８５mmol、１当量）を、ＴＨＦ ２４０mlに溶解した。溶液を０〜２℃に冷却し、ＴＨＦ中の１M ＬｉＨＭＤＳ溶液２１２．６ml（３当量）を２０分間かけて加えた。１．５時間反応させた後（ＨＰＬＣによる工程内管理）、温度を０〜１０℃の間に保持しながら、２M ＨＣｌ水溶液２４５mlを１５分間かけて加えた（得られた混合物のｐＨ：３．２）。得られた混合物を酢酸エチル３５０mlで２回抽出した。有機相をＮａＣｌ半飽和水溶液２００mlで順次洗浄し、合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、次にそれを１：２ エタノール／ヘプタン混合物からの結晶化により精製した（収率８５％）。
【０１９７】
ブランチ１：ジフルオロエチル ３−ニトロ−ベンゼンスルホナート
【０１９８】
【化３１】
【０１９９】
３−ニトロ−ベンゼンスルホニルクロリド１９４ｇ（１．１３当量）を反応器に入れ、続いて酢酸イソプロピル１．３Ｌを入れて、溶液を０〜５℃に冷却した。２，２−ジフルオロエタノール６５ｇ（７５３mmol、１当量）、トリエチルアミン１６３ml（１．５５当量）及び酢酸イソプロピル３２５mlの溶液を、温度を０〜５℃の間に保持しながら３０分間かけて滴下した。４時間反応させた後（ＨＰＬＣ工程内管理）、反応混合物を水６５０mlで洗浄した。水相を酢酸イソプロピル６５０mlで再抽出した。有機相を１M ＨＣｌ水溶液６５０ml及び１０％ ＮａＣｌ水溶液６５０mlで洗浄した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固して、２，２−ジフルオロエチル ３−ニトロベンゼンスルホナート１９６ｇを粘性の油状物として得て（収率９７％）、それを静置して結晶化させた。生成物をイソプロパノール（３０℃で播種、濃度：約１３Ｌ／ｋｇ生成物）から結晶化させることもできる。
【０２００】
ブランチ２：フルオロアニリン法Ａ：
【０２０１】
【化３２】
【０２０２】
４−ブロモ−２−フルオロアニリン４４ｇ（２２９mmol、１当量）、２−ヒドロキシピリジン３１．５ｇ（１．４当量）、炭酸カリウム３４．８０ｇ（１．１当量）、ヨウ化銅（Ｉ）６．５５ｇ（０．１５当量）を反応器に入れ、続いてＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド１００mlを入れた。懸濁液を１５５℃（ジャケット温度）で４時間加熱した（ＨＰＬＣ工程内管理）。反応混合物を１２０℃（ジャケット温度）に冷却し、水４００mlを３０分間かけて加え、反応混合物を室温にゆっくり冷ました。３０分後、反応混合物を０〜５℃に冷却し、この温度で１時間保持して、濾過した。フィルターケーキを水（０〜５℃）２００mlで洗浄し、結晶を減圧下７０℃で一晩乾燥させて、粗生成物４３．１ｇを得た。粗生成物を活性炭Norit SX-3 ５ｇと一緒にエタノール１Ｌに懸濁し、３０分間加熱還流した。熱懸濁液を圧力濾過器（木炭プレートを有する）で濾過した。フィルターケーキを熱エタノール２００mlで洗浄した。濾液を約１８０mbar下、６０℃で約５００mlに濃縮した。次に懸濁液を室温で３０分間、続いて０〜２℃で３０分間撹拌し、最後に濾過した。結晶を冷０℃エタノール合計５０mlで少量ずつ洗浄し、減圧下６０℃で恒量まで乾燥させて、生成物３３．９ｇを得た（収率７２％）。
【０２０３】
ブランチ２：フルオロアニリン法Ｂ：
４−ブロモ−２−フルオロアニリン５０ｇ（２６３mmol）、２−ヒドロキシピリジン２５ｇ（２６３．１mmol）及び酸化銅（Ｉ）１９．４ｇ（０．５当量）を反応器に入れた。ピリジン１００mlを加え、懸濁液を１４時間加熱還流した（ＨＰＬＣ工程内管理、＜３ａ％ ４−ブロモ−２−フルオロアニリン）。温度を８５〜９５℃の間に保持しながら、ピリジン１００mlを暗反応混合物に加えた。水２００mlを８５〜９５℃で１５〜３０分間かけて加えた。暗溶液を０℃に３時間かけて冷却した（結晶化が４０℃で自発的に起こらない場合、溶液に種結晶０．５ｇを４０℃にて播種する − 播種を必要に応じて３０〜４０℃の間で繰り返すことができる）。暗懸濁液を０℃で３０分間〜１時間撹拌し、濾過した。フィルターケーキを冷（４〜１０℃）水１００mlで３回洗浄した。結晶を減圧下６０〜６５℃で恒量まで乾燥させて、生成物２８．９ｇを得た（純度９４％ m/m、収率５０％）。
【０２０４】
粗生成物の品質が適切でない場合、それを、熱ＭｅＯＨ中で活性炭処理し、続いて熱濾過し、そしてＭｅＯＨ中で結晶化させることにより、向上させることができる。
【０２０５】
ブランチ２：フルオロアニリン法Ｃ：
４−ブロモ−２−フルオロアニリン３．０ｇ（１５．８mmol）、２−ヒドロキシピリジン１．５ｇ（１５．８mmol．１．０当量）、酸化銅（Ｉ）０．４７ｇ（３．１６mol、０．２当量）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン３４７μl（３．１６mmol、０．２当量）及び炭酸カリウム２．４ｇ（１７．４当量、１．１当量）を反応器中に入れた。トルエン３４mlを加え、懸濁液を１６時間加熱還流した（ＨＰＬＣ工程内管理、＜１ａ％ ４−ブロモ−２−フルオロアニリン）。温度を８５〜９５℃に保持しながらトルエン１０mlを暗反応混合物に加えた。水４５mLを８５〜９５℃で１５〜３０分間かけて加えた。暗溶液を０℃に冷却することにより結晶化させ、０℃で３０分間〜１時間撹拌して、濾過した。フィルターケーキを冷（４〜１０℃）水２５mlで３回洗浄した。結晶を減圧下６０〜６５℃で恒量まで乾燥させて、生成物３．０ｇを得た（純度７９％ m/m、収率７５％）。
【０２０６】
粗生成物の品質が適切でない場合、それを、熱ＭｅＯＨ中で活性炭処理し、続いて熱濾過し、そしてＭｅＯＨ中で結晶化させることにより、向上させることができる。
【０２０７】
ブランチ２：フルオロアニリン法Ｄ：
４−ブロモ−２−フルオロアニリン２０ｇ（１０３mmol、１当量）及び２−ヒドロキシピリジン１５．１６ｇ（１５５mmol、１．５当量）を反応器に入れ、続いてジメチルアセトアミド４０mlを入れた。炭酸カリウム１５．７ｇ（１．１当量）及びＣｕ２Ｏ ７６０mg（０．０５当量）を加えた。懸濁液を１３０℃で１８時間加熱した（ＨＰＬＣ工程内管理）。Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド ７０mlを加えた。反応混合物を１００℃に冷却した。水６０mlを加え、反応混合物を室温にゆっくり冷ました（結晶化が約４０℃で開始した、必要に応じて播種を行うことができる）。２M ＨＣｌ水溶液２７mlを加えることにより、ｐＨを８に調整した。懸濁液を０℃に冷却し、０℃で２時間撹拌した。懸濁液を濾過し、フィルターケーキを水５０ml及びＭＴＢＥ ８０mlで洗浄した。結晶を６０℃で恒量まで乾燥させて、生成物１５．２ｇを得た（９３ａ％ 収率約６７％）。
【０２０８】
粗生成物の品質が適切でない場合、それを、熱ＭｅＯＨ中で活性炭処理し、続いて熱濾過し、そしてＭｅＯＨ中で結晶化させることにより、向上させることができる。
【０２０９】
ブランチ２：フルオロアニリン法Ｅ：
工程１：
【０２１０】
【化３３】
【０２１１】
４−ブロモ−２−フルオロアニリン１０ｇ（５１．６mmol、１当量）、Ｎａ２ＣＯ３ ８．２６ｇ（１．５当量）及びＤＭＦ ６０mlを反応器に入れ、続いて臭化ベンジル１３．１３ml（２．１当量）を入れた。反応混合物を１００〜１１０℃に約２〜４時間加熱し（ＨＰＬＣ工程内管理）、次に室温に冷ました。反応混合物を、水１２０mlとＭＴＢＥ ２００mlとの混合物に加えた（撹拌しながら）。有機相を分離し、水１２０mlで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させて、濾過した。溶媒を、約１：３ m/v 生成物／ヘプタンの最終濃度でヘプタンに交換した。得られた混合物を約７０℃で加熱し、そして室温に、次に０℃に１時間冷却した。得られた白色の懸濁液を濾過し、冷（０〜５℃）ヘプタンで洗浄し、恒量まで乾燥させて（５０℃／５〜１０mbar）、オフホワイトの粉末１４．４ｇを得た。
【０２１２】
工程２：
【０２１３】
【化３４】
【０２１４】
ジベンジルアニリン２０ｇ（４８．６４mmol、１当量）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド４０mlに室温で溶解した。２−ヒドロキシピリジン７．１５ｇ（１．５当量）、Ｃｕ２Ｏ ７１７mg（０．１当量）及びＫ２ＣＯ３ ７．３９ｇ（１．１当量）を順次加えた。反応混合物を１３０℃に約２３時間加熱し（ＨＰＬＣ工程内管理）、次に室温に冷ました。ジクロロメタン１００ml及び２M ＨＣｌ ２００mlを加えた。有機相を分離し、２M ＨＣｌ ２００mlで洗浄した。水相をジクロロメタン１００mlで抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下４５℃で恒量まで濃縮した。得られた粗固体（約２０ｇ）を、ＡｃＯＥｔ １５０ml中で溶解するまで加熱した。混濁した溶液が得られるまでヘプタン１００mlをゆっくり加えた。混合物を室温にゆっくり冷ました。約３０分後、結晶化が開始した（開始しない場合、播種を実行することができる）。室温でさらに１時間撹拌した後、懸濁液を濾過した。フィルターケーキをヘプタンとＡｃＯＥｔとの１：１の混合物４０mlで洗浄し、減圧下５０℃で恒量まで乾燥させて、オフホワイトの粉末１６ｇを得た（収率８３％）。
【０２１５】
工程３：
【０２１６】
【化３５】
【０２１７】
ジベンジルアミン４ｇを、ＭｅＯＨ ８０mlとＡｃＯＥｔ ８０mlとの混合物に溶解した。５％ Ｐｄ／Ｃ（Johnson Matthey）４００mgを入れた。水素化を大気圧のＨ2下、室温で実施した。過水素化（ピリドン環の）を回避するために、水素化をガス取り込み及びＨＰＬＣによりモニターした。反応が完了した後、反応混合物を濾過して触媒を除去し、フィルターケーキをＭｅＯＨ ４０mlで洗浄した。濾液を減圧下で濃縮して、粗生成物２ｇを得た。ＭｅＯＨ ２５mlを加え、溶解が完了するまで混合物を加熱した。溶液を室温に冷まし、４時間撹拌した。得られた懸濁液を濾過した。フィルターケーキを冷（０〜５℃）ＭｅＯＨ ２mlで洗浄し、減圧下５０℃で恒量まで乾燥させて、オフホワイトの粉末１．５ｇを得た（収率７２％）。
【０２１８】
実施例４ 脱保護／遊離塩基形成／アルキル化／アミド形成によりアミドエステルを化合物（Ｘ）に転換するための代替経路
工程１：Ｂｏｃ脱保護
【０２１９】
【化３６】
【０２２０】
粗Ｂｏｃ−ピロリジン１５ｇ（３１．６８mmol、１当量）を、エタノール１５０mlに溶解した。塩化アセチル１３．６４ml（６当量）を室温で２０分間かけて加えた。その間に懸濁液が形成される２０時間の反応の後、ＭＴＢＥ １５０mlを５分間かけて加えた。９０分後、懸濁液を濾過し、フィルターケーキを減圧下４５℃で乾燥させて、塩酸塩１２．０７ｇを得た（約２〜３ ＨＣｌ、収率約９０％）。
【０２２１】
工程２：遊離塩基形成
【０２２２】
【化３７】
【０２２３】
塩酸塩 １．７９ｇ（４mmol、１当量、ビス塩酸塩として取得、ｎ＝２）（前記工程を参照）を、ＡｃＯＥｔ ５０mlとエタノール９mlとの混合物に懸濁した。５M エタノールＮＨ３溶液１０ml（２０mmol、５当量）を加え、懸濁液を室温で７０時間撹拌して、濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、遊離アミン１．５ｇを得た（定量収率）。
【０２２４】
あるいは、アミン塩酸塩を塩基性ｐＨ下で抽出することにより遊離することができる。
【０２２５】
工程３：アルキル化
【０２２６】
【化３８】
【０２２７】
アミン３ｇ（８mmol、１当量）を、ジフルオロエチル−３−ニトロ−ベンゼンスルホナート２．３９ｇ（１当量）及びエチル−ジイソプロピルアミン１．５ml（１．１当量）と一緒に、アセトニトリル１５mlに溶解した。溶液を８０℃で２２時間加熱した（ＨＰＬＣ工程内管理）。反応混合物を室温に冷まし、減圧下で濃縮した。残留物をＡｃＯＥｔ ３０mlに再溶解した。１０％ Ｋ２ＣＯ３水溶液１５mlを加えた。混合物を濾過した。二相性の濾液からの有機相を分離し、１０％ Ｋ２ＣＯ３水溶液１５mlで２回洗浄した。水相をＡｃＯＥｔ ３０mlで順次再抽出した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で約１０mlの容量に濃縮した。ＭＴＢＥ ３５mlをゆっくり加え、混濁した溶液がもたらされた。混濁した溶液に播種し、室温で１時間撹拌して、部分的に濃縮すると、結晶化が開始した。室温で２時間撹拌した後、懸濁液を濾過した。フィルターケーキを減圧下４５℃で乾燥させて、明黄色の結晶２．５６ｇを得た（収率７２％）。
【０２２８】
あるいは、ａ）生成物を、例えばクロマトグラフィーにより精製することもできる。ｂ）Ｎａ２ＣＯ３水溶液を、抽出の間、炭酸カリウム溶液の代わりに使用することもできる。
【０２２９】
工程４：第２のアミド形成
【０２３０】
【化３９】
【０２３１】
５−クロロ−２−アミノピリジン１．０４ｇ（７．９mmol、１．５当量）、アミドエステル２．３ｇ（５．３mmol、１当量）及びＴＨＦ １８．４mlを反応器に入れ、得られた混合物を０〜５℃に冷却した。ＴＨＦ中の１M ＬｉＨＭＤＳ溶液１５．８ml（３当量）を２０分間かけて加えた。３時間反応させた後（ＨＰＬＣ工程内管理）、２M ＨＣｌ水溶液１８ml（６．８５当量）を加えた（ｐＨ ３．３）。得られた混合物をＡｃＯＥｔ ９２mlで２回抽出した。有機相をＮａＣｌ飽和水溶液２３mlで順次洗浄し、合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物２．７８ｇを得た。
【０２３２】
生成物を、クロマトグラフィー、又はＥｔＯＨもしくはエタノール／ヘプタンからの結晶化により精製することができる。
【０２３３】
実施例５ 環状無水物アプローチ
工程１： 付加環化
【０２３４】
【化４０】
【０２３５】
ジフルオロエチルトリフラート２５ｇ（１１７mmol、１当量）を、ＴＨＦ ２２５ml中のトリメチルシリルメチル−アミン１６ml（１当量）及びエチルジイソプロピルアミン２０ml（１当量）の溶液に２０〜２５℃で滴下した。２時間後、反応混合物を３７％ホルムアルデヒド水溶液１１．４６ml（１．３当量）で処理した。室温での１０分の後、ジベンジルマレアート３４．６１ｇ（１当量）、ＴＨＦ １２．５ml及びトリフルオロ酢酸９１３μl（０．１当量）からなる溶液を加えた。１７時間反応させた後、反応混合物を約８０mlに濃縮した。ＭＴＢＥ １２５ml及び１M ＨＣｌ水溶液１０４ml（２．５当量）を加えた。水相を分離し、ＭＴＢＥ ６２．５mlで再抽出した。有機相を水１２５ml及びＮａＨＣＯ３半飽和水溶液１６７mlで洗浄し、合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固して、粗環付加物４５．５ｇを得た（収率約８６％、約１１％ m/m ジベンジルマレアートを含有）。
【０２３６】
粗生成物を、例えばクロマトグラフィーにより精製することができるが、より好都合にはこれを精製しないで次の工程に導入する。
【０２３７】
工程２：水素化
【０２３８】
【化４１】
【０２３９】
粗ジベンジルエステル４５．５ｇ（１００mmol、１当量、純度８９％ m/m、前記工程を参照）を、エタノール３６４mlに溶解し、続いてトリエチルアミン３２．１５ml（２．３当量）及び１０％ Ｐｄ／Ｃ ２．１ｇを加えた。ジベンジルエステルを大気水素圧下で水素化した。反応が完了した後、触媒を濾別し、酢酸８０．７mlを加え、続いて種結晶を加えた。エタノールを減圧下４０℃で留去した（６０℃で、有意なcisからtransへの異性化が観察される）。得られた懸濁液を室温で一晩撹拌し、濾過した。結晶を酢酸２０ml、ＭＴＢＥ ６０mlで洗浄し、減圧下で乾燥させて、ビス−酸 １４．６ｇを白色の粉末として得た（収率６０％、約９％m/m 残留酢酸を含有）。
【０２４０】
工程３：環状無水物形成：
【０２４１】
【化４２】
【０２４２】
ビス酸１４．３ｇ（５８．６mmol、１当量、９２％ m/m）を酢酸１４３mlに懸濁した。無水酢酸２７．７ml（５当量）を加え、反応混合物を６０℃に加熱した。１時間後、溶液を得た。３時間後、反応混合物を室温に冷まし、濃縮して無色の油状物とし、それにジイソプロピルエーテル５０mlを加えた。溶液に播種した。室温で１時間撹拌した後、懸濁液を濾過した。結晶をジイソプロピルエーテルで洗浄し、減圧下５０℃で乾燥させて、無水物７．８ｇを白色の粉末として得た。母液を濃縮乾固し、残留油状物をジイソプロピルエーテル５０ml及び種結晶で処理して、濾過、洗浄及び乾燥の後、無水物の第２産生物（３．２ｇ）を得た。合計収率：９１％。
【０２４３】
工程４：環状無水物開環：
【０２４４】
【化４３】
【０２４５】
例ａ）：
ＴＨＦ １２０ml中のキニーネ１６．９４ｇ（１当量）及び２−フェニルエタノール９．３ml（１．５当量）からなる溶液を、−２０〜−１５℃に冷却した。ＴＨＦ ３０ml中の無水物１０．５ｇ（５１．２mmol、１当量）の溶液を滴下した。４時間反応させた後（ＨＰＬＣ工程内管理、又は ReactIR iC10 システムを用いたインラインＦＴＩＲ分光法）、得られた懸濁液を室温に一晩温め、濃縮乾固して、キニーネ塩としての粗エステル酸４３．５ｇ（ＨＰＬＣにより９２：８ d.r.）を得た。粗塩を、酢酸イソプロピル５０mlと水５０mlとの混合物に懸濁した。２５％ ＨＣｌ水溶液２０mlを加えることによりｐＨを１に調整した。水相を分離し、酢酸イソプロピル５０mlで洗浄した。有機相を１M ＨＣｌ ２５mlで再抽出した。水相を合わせ、０〜２℃に冷却し、３２％ ＮａＯＨ水溶液を加えることによりｐＨを３．０に調整した。生成物が結晶し始めた。０〜２℃で２時間撹拌した後、懸濁液を濾過した。フィルターケーキを冷０〜２℃水５０mlで洗浄し、減圧下６０℃で乾燥させて、生成物１４．８ｇを白色の粉末を得た（収率８８％、９５：５ ｄ．ｒ．）。
【０２４６】
例ｂ）：
ＴＨＦ １５０ml中の無水物４０ｇ（１９５mmol、１当量）の溶液を、ＴＨＦ ７５０ml中のキニーネ７１ｇ（１．１当量）及び２−フェニルエタノール３６．１ｇ（１．５当量）からなる溶液に−２０〜−１５℃の間で滴下した。一晩反応させた後（ＨＰＬＣ工程内管理、又は ReactIR iC10 システムを用いたインラインＦＴＩＲ分光法）、得られた懸濁液を室温に温め、水２５０mlを加えた。ＴＨＦを減圧下４０℃で留去した。ＭＴＢＥ １２５mlを得られた水性懸濁液に加え、２５％ＨＣｌ水溶液１２５mlを加えることによりｐＨを約１に調整した。水相を分離し、ＭＴＢＥ １２５mlで洗浄した。有機相を１M ＨＣｌ水溶液６２．５mlで順次洗浄した。酸性の水相を合わせ、０〜５℃に冷却した。３２％ ＮａＯＨ水溶液 ５５mlを加えることによりｐＨを３．０に調整すると、生成物が沈殿した。懸濁液を０〜５℃で４時間撹拌し、濾過した。フィルターケーキを冷（０〜５℃）水１２５mlで２回洗浄し、減圧下６０℃で恒量まで乾燥させて、ヘミエステル５９．９ｇを白色の粉末として得た（９５：５ｅ．ｒ．、定量的ＨＰＬＣにより９８．７％w/w、収率９３％）。
【０２４７】
工程５：エピマー化
【０２４８】
【化４４】
【０２４９】
例ａ）
（cis）−酸エステル１０．６ｇ（３２．４mmol、１当量）を、ＴＨＦ ２１２ml（溶液を有するために重要である）に溶解した。溶液を−７０℃に冷却し、カリウム ｔ−ブトキシド５．５６ｇ（１．５当量）を加えた。３０分間反応させた後（ＨＰＬＣ工程内管理）、酢酸９．３ml（５当量）を加えた。反応混合物を水１００ml（ｐＨ ６．５）に加え、１M ＨＣｌ（約６０ml、１．８５当量）を加えることによりｐＨを３．０に調整した。ＴＨＦを減圧下４０℃で除去すると、結晶化が開始した。白色の懸濁液を室温で３０分間撹拌し、濾過した。フィルターケーキを冷水で洗浄した。結晶を減圧下５０℃で乾燥させて、trans−エステル一酸８．０ｇを白色の粉末として得た（収率７６％、＞９９％ trans：＜１％ cis）。
【０２５０】
あるいは、反応をジオキサン中のＨＣｌｇを加えることによりクエンチすることができる。
【０２５１】
ＫＯｔＢｕ添加の前に溶液を得るのは重要である。実際、出発物質溶液を−７０℃に冷却している間に、若干の沈殿が時々観察された。これらの場合、本発明者らは、出発物質の溶解度が非常に低いために出発物質が完全には反応せずに、低trans／cis 選択性がもたらされたことを後に示した。ここにこの問題を回避する改善方法がある。出発物質を、適切な可溶性アミン塩、例えばそのトリエチルアミン塩の形成により、ＴＨＦ中の溶液中に保持することができる：
【０２５２】
例ｂ）
cis−一酸モノエステル５０ｇ（１５１mmol、１当量）を反応器に入れ、続いてＴＨＦ ８５０ml及びトリエチルアミン２１ml（１当量）を入れた。得られた溶液を−７０℃に冷却し、ＴＨＦ １００ml中のＫＯｔＢｕ ２５．９ｇ（１．５当量）の溶液を、温度を＜−６５℃に維持しながら滴下した。４５分間反応させた後（ＨＰＬＣによる工程内管理）、酢酸１２．９ml（１．５当量）を加えることにより反応物をクエンチした。反応混合物を室温に温め、水２５０mlを加えた（得られたｐＨ約７．８）。ＴＨＦを減圧下４０℃で留去した。酢酸エチル３００mlを加え、２M ＨＣｌ（約１８０ml、２．４当量）を加えることによりｐＨを３．０に調整した。水相を分離し、酢酸エチル１５０mlで再抽出した。有機相を水２５０mlで洗浄し、合わせ、４０℃／約１５０mbarで約２５０mlに濃縮した。ヘプタン５００mlを加え、懸濁液を溶解するまで加熱還流した。加熱を停止し、溶液を室温にゆっくり冷まし、その間に結晶化が開始した。室温で一晩撹拌した後、懸濁液を濾過した。フィルターケーキを１：２ 酢酸エチル／ヘプタンの混合物２００mlで洗浄し、減圧下５０℃で恒量まで乾燥させて、trans ヘミエステル４２．５ｇを白色の粉末として得た（収率８６％、ＨＰＬＣによりｅ．ｒ．およびｄ．ｒ． ＞９９：＜１、検出限界未満）。
【０２５３】
工程６：第１のアミドカップリング
【０２５４】
【化４５】
【０２５５】
例ａ）
trans−酸エステル５００mg（１．５８mmol、１当量）を、Ｎ−メチルモルホリン１６８μl（１．０当量）と一緒にＴＨＦ １．５mlに溶解した。この溶液を、ＴＨＦ ２．５ml中のクロロギ酸イソブチル２０８μl（１当量）の冷０〜５℃溶液に加えた。３０分間反応させた後、塩化リチウム６５mg（１当量）を加え、続いてアニリン３１２mg（１当量）を加えた。次に反応混合物を室温で２時間撹拌した（ＴＬＣ又はＨＰＬＣ工程内管理）。水３．５ml、酢酸エチル１５ml及び１M ＨＣｌ水溶液 ５mlを加えた。有機相を分離し、１M ＨＣｌ水溶液３．６mlで再抽出して、廃棄した。Ｎａ２ＣＯ３ １．５mlを加えることにより、合わせた水相のｐＨを９〜１０に調整し、酢酸エチル２５mlで２回抽出した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固して、粗アミドエステル７２０mgを得た（収率９０％）。
【０２５６】
例ｂ）
ＴＨＦ １２０ml中のtrans 酸エステル４０ｇ（１２２mmol、１当量）及びＮ−メチル−モルホリン１３．４６ml（１当量）の溶液を、ＴＨＦ ２００ml中のクロロギ酸イソブチルの冷（０〜５℃）溶液に３０分間かけて加えた。０〜５℃での６０分の後（反応を供給制御し、それでこの保持時間を減ずることができる）、アニリン２４．９５ｇ（１当量）及び塩化リチウム５．２３ｇ（１当量）を加えた。反応混合物を室温に温めた。反応が完了した後（約３時間、ＨＰＬＣによる工程内管理）、水２８０ml、酢酸エチル４００ml及び１M ＨＣｌ ４００mlを加えた。有機相を分離し、１M ＨＣｌ ２００mlで抽出した。水相を合わせ、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液１７０mlを加えることによりｐＨを約９〜１０に調整して、酢酸エチル２００mlで２回抽出した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下４５℃で濃縮して、アミドエステル５４．２ｇを半固体の油状物として得た（収率８４％、２％残留酢酸エチルのために補正）。
【０２５７】
工程７：第２のアミドカップリング：
【０２５８】
【化４６】
【０２５９】
例ａ）
２−アミノ−５−クロロピリジン１９７mg（１．５当量）及びアミドエステル５００mg（０．９７mmol、１当量）を、ＴＨＦ ４mlに溶解した。溶液を０〜５℃に冷却した。ＴＨＦ中の１M ＬｉＨＭＤＳ溶液２．９ml（３当量）を５分間かけて加えた。反応が完了した後（ＨＰＬＣ工程内管理）、１M ＨＣｌ ２．５mlを１５分間かけて加えて反応をクエンチし、ｐＨを３．５に調整した。二相性の混合物を酢酸エチル７．５mlで２回抽出した。有機相をＮａＣｌ半飽和水溶液６．３mlで洗浄し、合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固して、式（Ｘ）の粗化合物７２０mgを得た。
【０２６０】
例ｂ）
２−アミノ−５−クロロピリジン８．９ｇ（１．５当量）及びアミドエステル２５ｇ（４５．３mmol、１当量）を、ＴＨＦ ２００mlに溶解した。溶液を０〜５℃に冷却した。ＴＨＦ中の１M ＬｉＨＭＤＳ溶液１３６ml（３当量）を２０分間かけて滴下した。１時間反応させた後（ＨＰＬＣ工程内管理）、２M ＨＣｌ水溶液１７１mlを加えることによりｐＨを３．５に調整した。反応混合物を酢酸エチル１００mlで２回抽出した。有機相を半飽和ＮａＣｌ １００mlで順次洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下４５℃で濃縮して、粗化合物Ｘ ３４．８ｇを得た。粗生成物をエタノール２６０mlに溶解し、ヘプタン２６０mlを１０分間かけて加えた。清澄な溶液に播種した。懸濁液を約１５分後に得た。室温での６０分の後、ヘプタン２６０mlを３０分間かけて加えた。懸濁液を室温で３０分間、０℃で２時間撹拌し、濾過した。フィルターケーキをエタノール／ヘプタンの冷（０〜５℃）１：３混合物５０mlで洗浄し、減圧下５０℃で乾燥させて、化合物Ｘ ２１．５ｇを白色の粉末として得た（収率８６％、３％残留ヘプタンのために補正、及び９７．５ａ％ＨＰＬＣ、（Ｓ，Ｓ）鏡像異性体及びcis 異性体はＨＰＬＣにより検出されない）。
【０２６１】
あるいは、環状無水物を下記の順序により調製することができる：
【０２６２】
工程１：［３＋２］付加環化：
【０２６３】
【化４７】
【０２６４】
（トリメチルシリルメチル）−アミン６９．５ｇ（６６０mmol、１当量）を、ＴＨＦ ７６５mlに溶解した。温度を２０〜２５℃の間に維持しながら、３７％ホルムアルデヒド水溶液９９．７ml（２当量）を加えた。室温で１５分間撹拌した後、得られた溶液をＴＨＦ ７６５ml中のジベンジルフマラート２００ｇ（１当量）の還流している溶液に４０分間かけて加えた。２０時間反応させた後、反応混合物を室温に冷まし、ＴＨＦ ４００ml中のヒドロキシルアミン塩酸塩５２．３ｇ（１．１４当量）の懸濁液に１０分間かけて加えた。得られた清澄な溶液に播種すると、混濁した溶液が得られた。結晶化がすぐに開始した。白色の懸濁液を室温で１時間撹拌し、Ｐ３ガラスフィルターで濾過した。フィルターケーキを水７２mlで、そしてＭＴＢＥ ４００mlで２回洗浄した。結晶を減圧下５０℃で恒量まで乾燥させて、ピロリジン塩酸塩２１５ｇを得た（収率８６％）。
【０２６５】
工程２：遊離塩基形成／アルキル化：
【０２６６】
【化４８】
【０２６７】
塩酸塩１８８．５ｇ（５０１．５mmol、１当量）を、ＭＴＢＥ ７００mlに懸濁した。１M ＮａＯＨ ５９７mlを０〜５℃で加えた。得られた清澄で二相性の混合物を分離し、水相（ｐＨ １３）をＭＴＢＥ ３５０mlで再抽出した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下４０℃で濃縮して、無色の油状物１６６ｇを得た（収率９８％）。
【０２６８】
得られた油状物１４５ｇ（４２７mmol、１当量）を、アセトニトリル１．１６Ｌに再溶解した。ジフルオロエチル−３−ベンゼンスルホナート１１４ｇ（４２７mmol、１当量）を加え、続いてエチル−ジイソプロピルアミン８７．８ml（１．２当量）を得た。溶液を２４時間加熱還流し（＞９０％転換）、室温に冷まし、減圧下で４０℃にて粘性で橙色の油状物に濃縮した。粗混合物をＡｃＯＥｔ ７５０mlに溶解し、Ｎａ２ＣＯ３水溶液、ＮＨ４Ｃｌ水溶液及び水で洗浄した。水相をＡｃＯＥｔで順次再抽出した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物１７８．５ｇを得た（８０〜８５％ m/m、収率＞９０％）。
【０２６９】
工程３：脱ベンジル化：
【０２７０】
【化４９】
【０２７１】
前記工程からの粗ビスエステル１７５ｇを酢酸１．６Ｌに溶解し、１０％ Ｐｄ／Ｃ ９．２ｇで大気圧にて６０℃で水素化した。水素化が完了した後、反応混合物を６０℃で濾過した。触媒を熱（６０℃）酢酸１７５mlで洗浄した。濾液を室温に冷まし、ＭＴＢＥ ８００mlを加え、混濁した溶液を得た。溶液に播種し、室温で１時間撹拌した。ＭＴＢＥ ９５０mlを懸濁液に加え、これを次に室温で一晩、次に０℃で３時間撹拌した。懸濁液を濾過し、フィルターケーキをＭＴＢＥ １００mlで２回洗浄した。結晶を減圧下６０℃で乾燥させて、生成物８９．７ｇを白色の粉末として得た（収率９０％）。
【０２７２】
ＭＴＢＥ／ＡｃＯＨ中の結晶化は、粗反応混合物の純度に感受性である。あるいは、反応混合物を濃縮し、生成物をＥｔＯＨ中で結晶化させることができる。水からの（再）結晶化もまた可能である。
【０２７３】
工程４：環状無水物形成：
【０２７４】
【化５０】
【０２７５】
ビス酸５０ｇ（２２１mmol、１当量）を、酢酸１５０mlと無水酢酸２４ml（１．１５当量）との混合物に懸濁し、１０５℃で加熱した。１時間後、清澄な溶液を得た。反応が完了した後（約５時間、ＮＭＲによるＩＰＣ）、反応混合物を５０℃に冷却し、約８０mbar下６０℃で約４０〜５０mlの容量（９０ｇの溶液）に濃縮した。ｔ−アミルアルコール４００mlを６０℃で加え、溶液を約８０mbar下６０℃で１５０ｇに濃縮した（溶媒をｔ−アミルアルコールに交換し、ＡｃＯＨを除去した）。橙色の溶液を４０℃にゆっくり冷却すると、結晶化が開始した。ヘプタン３００mlを４０℃で３０分間かけて加えた。懸濁液を室温で一晩撹拌し、濾過した。フィルターケーキをヘプタン１００mlで洗浄し、減圧下４５〜５０℃で恒量まで乾燥させて、明褐色の粉末４１ｇを得た（収率約９０％）。
【０２７６】
ビス酸３３の代替調製
【０２７７】
【化５１】
【０２７８】
ビスエステル２０ｇ（７４．７５mmol、１当量）を、ＴＨＦ４０mlと水２０mlとの混合物に溶解した。３２％ ＮａＯＨ水溶液２０．８ml（３当量）を加え、反応混合物を５０℃で２時間加熱した（ＴＬＣによるＩＰＣ、ＡｃＯＥｔ／ヘプタン ３：１、ＫＭｎＯ４を用いて可視化）。ＴＨＦを減圧下４０℃で蒸留により除去した。水相を室温に冷まし、ＡｃＯＥｔ ２０mlで洗浄した。水相中の残留有機溶媒を減圧下４０℃で蒸留により除去した。水相を室温に冷まし、２５％ ＨＣｌ水溶液（約２７ml）を加えることによりｐＨを３．５に調整すると、生成物が結晶化した。高粘度の懸濁液を室温で一晩撹拌し、濾過した。フィルターケーキを冷（０〜５℃）水２０mlで洗浄し、減圧下５０℃で恒量まで乾燥させて、予想されるビス−酸１３．５ｇを白色の粉末として得た（収率８１％）。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｘ）：
【化５２】
で示される化合物の製造方法であって、式（９）：
【化５３】
で示される化合物の遊離塩基又は式（９）で示される化合物の塩を、ジフルオロエチル−トリフラート及びジフルオロエチル−ペルフルオロブタンスルホナートからなる群より選択されるアルキル化剤と、二相性の水性／有機溶媒条件で反応させる工程を含む、方法。
【請求項２】
式（Ｘ）：
【化５４】
で示される化合物の製造方法であって、
ａ）式（４）：
【化５５】
で示される化合物のラセミ混合物にエナンチオ選択的酵素的加水分解を行って、
式（５）：
【化５６】
で示される化合物を得る工程、
ｂ）式（５）で示される化合物を選択的にモノ加水分解して、式（６）：
【化５７】
で示される化合物又はその水和物を得る工程、
ｃ）式（６）で示される化合物又はその水和物の１−（４−アミノ−３−フルオロ−フェニル）−１Ｈ−ピリジン−２−オンとのカップリングを行って、式（７）：
【化５８】
で示される化合物を得る工程、
ｄ）式（７）で示される化合物の５−クロロ−２−アミノピリジンとのカップリングを行って、式（８）：
【化５９】
で示される化合物を得る工程、
ｅ）式（８）で示される化合物にＢｏｃ脱保護を行って、式（９）：
【化６０】
で示される化合物又はその塩を得る工程、及び
ｆ）式（９）で示される化合物の遊離塩基又は式（９）で示される化合物の塩をアルキル化剤と反応させて、式（Ｘ）で示される化合物を得る工程を含み、
式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである、方法。
【請求項３】
工程（ａ）が、リゾプス・オリゼ由来リパーゼ又はサーモミセス・ラヌギノサス由来リパーゼを使用することにより行われ、そして工程（ｂ）が、カンジダ・シリンドラセ由来リパーゼを使用することにより行われる、請求項２記載の方法。
【請求項４】
式（６’）：
【化６１】
で示される化合物。
【請求項５】
式（６）：
【化６２】
で示される化合物又はその水和物の製造方法であって、
式（４）：
【化６３】
で示される化合物のラセミ混合物に、リゾプス・オリゼ由来リパーゼ又はサーモミセス・ラヌギノサス由来リパーゼを使用して、エナンチオ選択的酵素的加水分解を行って、式（５）：
【化６４】
で示される化合物を得る工程、及び
カンジダ・シリンドラセ由来リパーゼにより、式（５）で示される化合物を選択的にモノ加水分解する工程を含み、
式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである、方法。
【請求項６】
式（Ｘ）：
【化６５】
で示される化合物の製造方法であって、請求項５記載の方法を含む、方法。
【請求項７】
式（Ｘ）：
【化６６】
で示される化合物の製造方法であって、
ａ）式（４）：
【化６７】
で示される化合物のラセミ混合物にエナンチオ選択的酵素的加水分解を行って、式（５）：
【化６８】
で示される化合物を得る工程、
ｂ）式（５）で示される化合物を選択的にモノ加水分解して、式（６）：
【化６９】
で示される化合物又はその水和物を得る工程、
ｃ）式（６）で示される化合物又はその水和物の１−（４−アミノ−３−フルオロ−フェニル）−１Ｈ−ピリジン−２−オンとのカップリングを行って、式（７）：
【化７０】
で示される化合物を得る工程、
ｄ）式（７）で示される化合物にＢｏｃ脱保護を行って、式（１４’）：
【化７１】
で示される化合物又はその塩を得る工程、
ｅ）式（１４）で示される化合物の遊離塩基又は式（１４）で示される化合物の塩をアルキル化剤と反応させて、式（１６）：
【化７２】
で示される化合物を得る工程、
ｆ）式（１６）で示される化合物の５−クロロ−２−アミノピリジンとのカップリングを行って、式（Ｘ）で示される化合物を得る工程を含み、
式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである、方法。
【請求項８】
工程（ａ）が、リゾプス・オリゼ由来リパーゼ又はサーモミセス・ラヌギノサス由来リパーゼを使用することにより行われ、そして工程（ｂ）が、カンジダ・シリンドラセ由来リパーゼを使用することにより行われる、請求項７記載の方法。
【請求項９】
工程ｅ）におけるアルキル化剤が、式（ＸＸ）：
【化７３】
で示される化合物又はジフルオロエチルトリフラートである、請求項７及び８のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０】
式（Ｘ）：
【化７４】
で示される化合物の製造方法であって、式（１４’）：
【化７５】
で示される化合物又は式（１４’）で示される化合物の塩を、式（ＸＸ）：
【化７６】
で示されるアルキル化剤又はジフルオロエチルトリフラートと反応させて、式（１６）：
【化７７】
で示される化合物を得る工程を含み、
式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである、方法。
【請求項１１】
式（１６）：
【化７８】
［式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである］で示される化合物。
【請求項１２】
式（Ｘ）：
【化７９】
で示される化合物の製造方法であって、
ａ）式（１８）：
【化８０】
で示される化合物のラセミ混合物をアルキル化剤と反応させて、式（１９）：
【化８１】
で示される化合物のラセミ混合物を得る工程、
ｂ）式（１９）で示される化合物のラセミ混合物にエナンチオ選択的酵素的加水分解を行って、式（２０）：
【化８２】
で示される化合物を得る工程、
ｃ）式（２０）で示される化合物を選択的にモノ加水分解して、式（２１）：
【化８３】
で示される化合物を得る工程、
ｄ）式（２１）で示される化合物の１−（４−アミノ−３−フルオロ−フェニル）−１Ｈ−ピリジン−２−オンとのカップリングを行って、式（２２）：
【化８４】
で示される化合物を得る工程、
ｅ）式（２２）で示される化合物の５−クロロ−２−アミノピリジンとのカップリングを行って、式（Ｘ）で示される化合物を得る工程を含み、
式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである、方法。
【請求項１３】
工程ａ）におけるアルキル化剤が、式（ＸＸ）：
【化８５】
で示される化合物又はジフルオロエチルトリフラートである、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
式（Ｘ）：
【化８６】
で示される化合物の製造方法であって、式（１８）：
【化８７】
で示される化合物のラセミ混合物を、式（ＸＸ）：
【化８８】
で示されるアルキル化剤又はジフルオロエチルトリフラートと反応させて、式（１９）：
【化８９】
で示される化合物のラセミ混合物を得る工程を含み、
式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである、方法。
【請求項１５】
式（Ｘ）：
【化９０】
で示される化合物の製造方法であって、式（１４’）：
【化９１】
で示される化合物又は式（１４’）で示される化合物の塩を、式（ＸＸ）：
【化９２】
で示されるアルキル化剤又はジフルオロエチルトリフラートと反応させて、式（１６）：
【化９３】
で示される化合物を得る工程を含み、
式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである、方法。
【請求項１６】
式（１９）：
【化９４】
で示される化合物のラセミ混合物であって、式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである、ラセミ混合物。
【請求項１７】
式（２０）：
【化９５】
［式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである］）で示される化合物。
【請求項１８】
式（２１）：
【化９６】
［式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである］で示される化合物。
【請求項１９】
式（Ｘ）：
【化９７】
で示される化合物の製造方法であって、
ａ）式（２３）：
【化９８】
で示される化合物にベンジルエステル水素化分解を行って、式（２４）：
【化９９】
で示される化合物を得る工程、又は
ａ’）式（３２）：
【化１００】
で示される化合物のラセミ混合物にベンジルエステル水素化分解を行って、式（３３）：
【化１０１】
で示される化合物のラセミ混合物を得る工程、又は
ａ”）式（１９）：
【化１０２】
で示される化合物のラセミ混合物にエステル加水分解を行って、式（３３）：
【化１０３】
で示される化合物のラセミ混合物を得る工程、
ｂ）式（２４）で示される化合物又は式（３３）で示される化合物を、式（２５）：
【化１０４】
で示される化合物に転換する工程、
ｃ）Ｒ１ＯＨ及びキラル試薬を用いて式（２５）で示される化合物に環状無水物脱対称化を行って、式（２６）：
【化１０５】
で示される化合物を得る工程、
ｄ）式（２６）で示される化合物のエピマー化を行って、式（２７）：
【化１０６】
で示される化合物を得る工程、
ｅ）式（２７）で示される化合物の１−（４−アミノ−３−フルオロ−フェニル）−１Ｈ−ピリジン−２−オンとのカップリングを行って、式（２８）：
【化１０７】
で示される化合物を得る工程、
ｆ）式（２８）で示される化合物の５−クロロ−２−アミノピリジンとのカップリングを行って、式（Ｘ）で示される化合物を得る工程含み、
式中、Ｒ１は、メチル、エチル、シンナミル、ベンジル又はフェネチルである、方法。
【請求項２０】
式（２３）：
【化１０８】
で示される化合物。
【請求項２１】
式（２４）：
【化１０９】
で示される化合物。
【請求項２２】
式（３３）：
【化１１０】
で示される化合物のラセミ混合物。
【請求項２３】
式（２５）：
【化１１１】
で示される化合物。
【請求項２４】
式（２６）：
【化１１２】
［式中、Ｒ１は、メチル、エチル、シンナミル、ベンジル又はフェネチルである］で示される化合物。
【請求項２５】
式（２７）：
【化１１３】
［式中、Ｒ１は、メチル、エチル、シンナミル、ベンジル又はフェネチルである］で示される化合物。
【請求項２６】
式（ＸＸ’）：
【化１１４】
で示される化合物。
【請求項２７】
式（３２）：
【化１１５】
で示される化合物のラセミ混合物。
【請求項２８】
本明細書中上記で定義する発明。
【請求項１】
式（Ｘ）：
【化５２】
で示される化合物の製造方法であって、式（９）：
【化５３】
で示される化合物の遊離塩基又は式（９）で示される化合物の塩を、ジフルオロエチル−トリフラート及びジフルオロエチル−ペルフルオロブタンスルホナートからなる群より選択されるアルキル化剤と、二相性の水性／有機溶媒条件で反応させる工程を含む、方法。
【請求項２】
式（Ｘ）：
【化５４】
で示される化合物の製造方法であって、
ａ）式（４）：
【化５５】
で示される化合物のラセミ混合物にエナンチオ選択的酵素的加水分解を行って、
式（５）：
【化５６】
で示される化合物を得る工程、
ｂ）式（５）で示される化合物を選択的にモノ加水分解して、式（６）：
【化５７】
で示される化合物又はその水和物を得る工程、
ｃ）式（６）で示される化合物又はその水和物の１−（４−アミノ−３−フルオロ−フェニル）−１Ｈ−ピリジン−２−オンとのカップリングを行って、式（７）：
【化５８】
で示される化合物を得る工程、
ｄ）式（７）で示される化合物の５−クロロ−２−アミノピリジンとのカップリングを行って、式（８）：
【化５９】
で示される化合物を得る工程、
ｅ）式（８）で示される化合物にＢｏｃ脱保護を行って、式（９）：
【化６０】
で示される化合物又はその塩を得る工程、及び
ｆ）式（９）で示される化合物の遊離塩基又は式（９）で示される化合物の塩をアルキル化剤と反応させて、式（Ｘ）で示される化合物を得る工程を含み、
式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである、方法。
【請求項３】
工程（ａ）が、リゾプス・オリゼ由来リパーゼ又はサーモミセス・ラヌギノサス由来リパーゼを使用することにより行われ、そして工程（ｂ）が、カンジダ・シリンドラセ由来リパーゼを使用することにより行われる、請求項２記載の方法。
【請求項４】
式（６’）：
【化６１】
で示される化合物。
【請求項５】
式（６）：
【化６２】
で示される化合物又はその水和物の製造方法であって、
式（４）：
【化６３】
で示される化合物のラセミ混合物に、リゾプス・オリゼ由来リパーゼ又はサーモミセス・ラヌギノサス由来リパーゼを使用して、エナンチオ選択的酵素的加水分解を行って、式（５）：
【化６４】
で示される化合物を得る工程、及び
カンジダ・シリンドラセ由来リパーゼにより、式（５）で示される化合物を選択的にモノ加水分解する工程を含み、
式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである、方法。
【請求項６】
式（Ｘ）：
【化６５】
で示される化合物の製造方法であって、請求項５記載の方法を含む、方法。
【請求項７】
式（Ｘ）：
【化６６】
で示される化合物の製造方法であって、
ａ）式（４）：
【化６７】
で示される化合物のラセミ混合物にエナンチオ選択的酵素的加水分解を行って、式（５）：
【化６８】
で示される化合物を得る工程、
ｂ）式（５）で示される化合物を選択的にモノ加水分解して、式（６）：
【化６９】
で示される化合物又はその水和物を得る工程、
ｃ）式（６）で示される化合物又はその水和物の１−（４−アミノ−３−フルオロ−フェニル）−１Ｈ−ピリジン−２−オンとのカップリングを行って、式（７）：
【化７０】
で示される化合物を得る工程、
ｄ）式（７）で示される化合物にＢｏｃ脱保護を行って、式（１４’）：
【化７１】
で示される化合物又はその塩を得る工程、
ｅ）式（１４）で示される化合物の遊離塩基又は式（１４）で示される化合物の塩をアルキル化剤と反応させて、式（１６）：
【化７２】
で示される化合物を得る工程、
ｆ）式（１６）で示される化合物の５−クロロ−２−アミノピリジンとのカップリングを行って、式（Ｘ）で示される化合物を得る工程を含み、
式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである、方法。
【請求項８】
工程（ａ）が、リゾプス・オリゼ由来リパーゼ又はサーモミセス・ラヌギノサス由来リパーゼを使用することにより行われ、そして工程（ｂ）が、カンジダ・シリンドラセ由来リパーゼを使用することにより行われる、請求項７記載の方法。
【請求項９】
工程ｅ）におけるアルキル化剤が、式（ＸＸ）：
【化７３】
で示される化合物又はジフルオロエチルトリフラートである、請求項７及び８のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０】
式（Ｘ）：
【化７４】
で示される化合物の製造方法であって、式（１４’）：
【化７５】
で示される化合物又は式（１４’）で示される化合物の塩を、式（ＸＸ）：
【化７６】
で示されるアルキル化剤又はジフルオロエチルトリフラートと反応させて、式（１６）：
【化７７】
で示される化合物を得る工程を含み、
式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである、方法。
【請求項１１】
式（１６）：
【化７８】
［式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである］で示される化合物。
【請求項１２】
式（Ｘ）：
【化７９】
で示される化合物の製造方法であって、
ａ）式（１８）：
【化８０】
で示される化合物のラセミ混合物をアルキル化剤と反応させて、式（１９）：
【化８１】
で示される化合物のラセミ混合物を得る工程、
ｂ）式（１９）で示される化合物のラセミ混合物にエナンチオ選択的酵素的加水分解を行って、式（２０）：
【化８２】
で示される化合物を得る工程、
ｃ）式（２０）で示される化合物を選択的にモノ加水分解して、式（２１）：
【化８３】
で示される化合物を得る工程、
ｄ）式（２１）で示される化合物の１−（４−アミノ−３−フルオロ−フェニル）−１Ｈ−ピリジン−２−オンとのカップリングを行って、式（２２）：
【化８４】
で示される化合物を得る工程、
ｅ）式（２２）で示される化合物の５−クロロ−２−アミノピリジンとのカップリングを行って、式（Ｘ）で示される化合物を得る工程を含み、
式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである、方法。
【請求項１３】
工程ａ）におけるアルキル化剤が、式（ＸＸ）：
【化８５】
で示される化合物又はジフルオロエチルトリフラートである、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
式（Ｘ）：
【化８６】
で示される化合物の製造方法であって、式（１８）：
【化８７】
で示される化合物のラセミ混合物を、式（ＸＸ）：
【化８８】
で示されるアルキル化剤又はジフルオロエチルトリフラートと反応させて、式（１９）：
【化８９】
で示される化合物のラセミ混合物を得る工程を含み、
式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである、方法。
【請求項１５】
式（Ｘ）：
【化９０】
で示される化合物の製造方法であって、式（１４’）：
【化９１】
で示される化合物又は式（１４’）で示される化合物の塩を、式（ＸＸ）：
【化９２】
で示されるアルキル化剤又はジフルオロエチルトリフラートと反応させて、式（１６）：
【化９３】
で示される化合物を得る工程を含み、
式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである、方法。
【請求項１６】
式（１９）：
【化９４】
で示される化合物のラセミ混合物であって、式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである、ラセミ混合物。
【請求項１７】
式（２０）：
【化９５】
［式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである］）で示される化合物。
【請求項１８】
式（２１）：
【化９６】
［式中、Ｒは、Ｃ１−５アルキル、又はヒドロキシル、メトキシ、エトキシ及びハロゲンからなる群より選択される一つ以上の置換基により置換されているＣ１−３アルキルである］で示される化合物。
【請求項１９】
式（Ｘ）：
【化９７】
で示される化合物の製造方法であって、
ａ）式（２３）：
【化９８】
で示される化合物にベンジルエステル水素化分解を行って、式（２４）：
【化９９】
で示される化合物を得る工程、又は
ａ’）式（３２）：
【化１００】
で示される化合物のラセミ混合物にベンジルエステル水素化分解を行って、式（３３）：
【化１０１】
で示される化合物のラセミ混合物を得る工程、又は
ａ”）式（１９）：
【化１０２】
で示される化合物のラセミ混合物にエステル加水分解を行って、式（３３）：
【化１０３】
で示される化合物のラセミ混合物を得る工程、
ｂ）式（２４）で示される化合物又は式（３３）で示される化合物を、式（２５）：
【化１０４】
で示される化合物に転換する工程、
ｃ）Ｒ１ＯＨ及びキラル試薬を用いて式（２５）で示される化合物に環状無水物脱対称化を行って、式（２６）：
【化１０５】
で示される化合物を得る工程、
ｄ）式（２６）で示される化合物のエピマー化を行って、式（２７）：
【化１０６】
で示される化合物を得る工程、
ｅ）式（２７）で示される化合物の１−（４−アミノ−３−フルオロ−フェニル）−１Ｈ−ピリジン−２−オンとのカップリングを行って、式（２８）：
【化１０７】
で示される化合物を得る工程、
ｆ）式（２８）で示される化合物の５−クロロ−２−アミノピリジンとのカップリングを行って、式（Ｘ）で示される化合物を得る工程含み、
式中、Ｒ１は、メチル、エチル、シンナミル、ベンジル又はフェネチルである、方法。
【請求項２０】
式（２３）：
【化１０８】
で示される化合物。
【請求項２１】
式（２４）：
【化１０９】
で示される化合物。
【請求項２２】
式（３３）：
【化１１０】
で示される化合物のラセミ混合物。
【請求項２３】
式（２５）：
【化１１１】
で示される化合物。
【請求項２４】
式（２６）：
【化１１２】
［式中、Ｒ１は、メチル、エチル、シンナミル、ベンジル又はフェネチルである］で示される化合物。
【請求項２５】
式（２７）：
【化１１３】
［式中、Ｒ１は、メチル、エチル、シンナミル、ベンジル又はフェネチルである］で示される化合物。
【請求項２６】
式（ＸＸ’）：
【化１１４】
で示される化合物。
【請求項２７】
式（３２）：
【化１１５】
で示される化合物のラセミ混合物。
【請求項２８】
本明細書中上記で定義する発明。
【公表番号】特表２０１０−５１３３８１（Ｐ２０１０−５１３３８１Ａ）
【公表日】平成２２年４月３０日（２０１０．４．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５４１９９８（Ｐ２００９−５４１９９８）
【出願日】平成１９年１２月１２日（２００７．１２．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０６３８３３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０７７７９７
【国際公開日】平成２０年７月３日（２００８．７．３）
【出願人】（５９１００３０１３）エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー (1,754)
【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ−ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年４月３０日（２０１０．４．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１２月１２日（２００７．１２．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０６３８３３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０７７７９７
【国際公開日】平成２０年７月３日（２００８．７．３）
【出願人】（５９１００３０１３）エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー (1,754)
【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ−ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ
【Ｆターム（参考）】
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