不妊症におけるホスホジエステラーゼ阻害剤
本発明は、哺乳類における卵母細胞の産出を増加する方法に向けられる。より具体的には、本明細書は、ＰＤＥ阻害剤を使用する卵胞の成熟を誘導するための方法及び組成物を説明する。当該阻害剤は、高用量において単独で使用することができる。あるいは、当該卵胞の成熟は、低用量のＦＳＨとＰＤＥ阻害剤処置を併用することにより達成される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般的に、生殖生物学、及び補助生殖医療（ＡＲＴ）、例えば、試験管内受精（ＩＶＦ）のための卵巣過剰刺激（ＣＯＨ）に導かれる。より特別には、本発明は、例えば、排卵誘発（ＯＩ）のための卵胞成熟刺激を含む１又は複数のホスホジエステラーゼ阻害剤単独、又は１又は複数のゴナドトロピンとの組み合わせのいずれかを使用する生体内における卵胞の成熟を誘導するための方法及び組成物に向けられる。更に本発明は、１又は複数のホスホジエステラーゼ阻害剤単独、又はゴナドトロピンとの組み合わせのいずれかを使用する試験管内における卵胞成熟を誘導するための方法及び組成物に向けられる。
【０００２】
当該出願は、その全体として本明細書における引用により組み入れられている２００３年４月１日に出願した米国特許仮出願第６０／４５８，９５５号、２００３年５月１５日に出願した米国特許仮出願第６０／４７０，４３４号、２００４年１月２８日に出願した米国特許仮出願第６０／５４０，３０１号、及び２００４年２月１２日に出願した米国特許仮出願第６０／４７０，４３４号の利益を主張する。
【背景技術】
【０００３】
女性ヒト生殖周期は、いくつかのゴナドトロピンホルモンに依存する。これらの基礎は、下垂体ホルモン、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）である。卵形成中、女性の生殖細胞である卵子が産出されることによるプロセスは、卵胞中において生じる。卵胞は、卵母細胞（卵）を含む卵巣の中の細胞の集まりである。排卵を顕著に誘導する卵胞成熟は、ＦＳＨの刺激効果に依存する。
【０００４】
各月経周期において、卵母細胞成熟のために多くの卵胞が漸加する。約２８日の月経周期の開始において、卵胞は、細胞の単一の層により囲まれた単純な卵母細胞である始原形態中に存在する。卵胞の成長及び成熟は、ＦＳＨ、初期の細胞の単一層の周りの顆粒膜細胞形態の複数層、中期周期まで継続するプロセスにより達成される。これらの顆粒膜細胞は、卵母細胞を養うこと、及びエストロゲンの産出及び放出に関係する。下垂体により産出されるＦＳＨは、顆粒膜細胞においてアロマターゼ活性を誘導し、これによりエストロゲンの産出を増加する。従って、卵胞の成熟と同時に、２８日の月経周期の初期においてエストロゲン産出を増加する。また、卵胞は二次下垂体ゴナドトロピン、ＬＨのレセプターを含む。中期周期（約１４日）により、当該卵胞が成長及び成熟を続けると、スペース（洞）が、顆粒膜細胞の集団の中に発生する。中期周期において、ファロピウス管を移動し、そして引き続いて受精することができる卵母細胞を破裂し、そして放出するための卵胞を発生するためにＬＰ産出の増加がＬＨレセプターにおいて作用する。通常の排卵している女性は、それぞれの月経周期に約３００の未成熟な卵母細胞が漸加するが、ある卵胞は、退行（閉鎖）し、そして単一の優性卵胞が出現し、そして卵母細胞の放出を続けるであろう。
【０００５】
排卵誘発（ＯＩ）及び補助生殖医療（ＡＲＴ）療法は、２つの主な期を含んで成る：刺激期及び排卵期を含んで成るホルモン療法である。適当な場合、抑制期は、刺激期を先行してよい。当該抑制期は、ＬＨ又はエストラジオールのレベルを抑制するために使用されるＧｎＲＨアゴニストの投与を含む。当該刺激期は、卵胞刺激活性（例えば、ＦＳＨ）を有する薬剤の投与により開始し、そして通常６〜１０日間である。典型的には、患者は、自発的な又は誘発された月経後最初の約３日間において、１日当たり約１５０ＩＵのＦＳＨで処置される。ＦＳＨ投与は、１つの卵胞の平均直径が、約１６〜１８ｍｍ以上又は同じになるまで続けられる（卵胞の発達は超音波により評価することができる）。この時点において、排卵期は、卵胞を破裂させるために及び中期周期で発生する自然な黄体化ホルモン（ＬＨ）のピーク又は増加を模倣するために、ファロピウス管に単一の卵母細胞を放出する誘引とするために、比較的大用量（５，０００〜１０，０００ＩＵ）のＬＨ活性を有する薬剤、例えば、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）を使用して誘発する。患者は、大用量のｈＣＧの投与から２４〜３８時間後に性交することを指示される。刺激期において、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、又は卵胞刺激活性を発揮する薬剤、又は内因性ＦＳＨ放出を刺激する薬剤の投与は、卵巣の卵胞の成長を刺激する。ＦＳＨ、又はＦＳＨ様活性を発揮する薬剤、又は内因性ＦＳＨ放出を刺激する薬剤の投与は、刺激期において続ける必要はなく、刺激期の終了まで続ける必要もない。刺激期又は排卵期のいずれかにおいて作用できる別の薬剤、特に経口的に利用できる薬剤が望ましい。米国２００２／０１０３１０６ Ａｌ(Palmer et al.)は、排卵の誘引とするための排卵期におけるIV型ホスホジエステラーゼの阻害剤の経口及び皮下的使用を開示する。米国２００３／００１８０３７(Westbrook Lempriere et al.)は、胚の生存を向上させるための、出生時体重を増加させるための、子宮血液流を増加させるための、及びプロゲステロン血清中レベルを増加させるための、非補助における周期の排卵後のＰＤＦ５阻害剤の使用を開示する。
【０００６】
排卵誘発（ＯＩ）は、生体内受精又は子宮内精子注入（ＩＵＩ）における単一の卵母細胞のファロピウス管への放出を発生させるための無排卵又はアンモニア排出の女性の処置である。ＯＩ療法の目的は、複数の妊娠を避けるために、放出すべき単一の卵母細胞を発生させることである。ＯＩの慣習的な療法において、治療の初期は、刺激期と呼ばれている。
【０００７】
ＯＩが行われる何人かの患者においては、抑制期で治療を開始することが望ましいであろう。抑制期において、下垂体ゴナドトロピンは、ＦＳＨでの治療の前におけるゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）アゴニストの投与により抑制される。ＧｎＲＨアゴニストの投与は、月経周期の黄体期において開始される（通常、月経周期の約２０日目）。卵巣機能の抑制は、通常、ＧｎＲＨアゴニストで８〜２１日かかり、そしてＬＨ又はエストラジオール（Ｅ2）レベル（ＬＨ＜５ＩＵ／Ｌ、Ｅ2＜５０ｐｇ／ｍｌは、通常、適切な抑制を示す）でモニタリングすることによりモニターできる。それから当該刺激期は、ＦＳＨの投与により開始される。ＧｎＲＨアゴニストの使用は、未成熟な卵母細胞の放出の誘引となりうる天然のＬＨのピーク又は増加を抑制する。これは、当該卵母細胞の放出、つまり性交のよりよいタイミングを許容する。多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）に苦しむ患者において、これらの患者は、しばしば不適当な高い内因性ＬＨレベルを有するため、また、ＧｎＲＨアゴニストを使用することが望ましく、それは刺激期においてＬＨの抑制を許容し、ＦＳＨに対するよりよい応答を許容する。
【０００８】
また、ＯＩの刺激期は、しばしば内因性ＦＳＨ放出を誘発する薬剤、例えば、クエン酸クロミフェン又はアロマターゼ阻害剤を使用して行われる。クエン酸クロミフェンは、刺激期を通して投与され（通常、月経周期の３〜７又は７〜９日目に１００ｍｇの用量）、内因性ＦＳＨ分泌の増大を生じ、卵胞の成長を誘導する。アロマターゼ阻害剤、例えば、レトロゾール、アナストロゾール、ＹＭ−５１１は、月経周期の３〜７又は５〜９日目に与えることができ、そしてまた、引例として本明細書に組み入れられているＷＯ０２／０８３２３９で説明されるように、内因性ＦＳＨの放出を誘発する。
【０００９】
ＯＩとは対照的に、単一の排卵性卵胞及び単一の卵母細胞が所望される場合、補助生殖医療（ＡＲＴ）療法において、可能な限り多くの単一周期における卵母細胞を収集することが所望される。ＡＲＴによる不妊症の治療、例えば、試験管内受精（ＩＶＦ）、卵細胞内精子注入法（ＩＣＳＩ）、配偶子卵管内移植法（ＧＩＦＴ）、及び接合体卵管内移植法（ＺＩＦＴ）は、女性の配偶子の数を増加するための卵巣過剰刺激（ＣＯＨ）が必要である Healy, et al., Lancet 343: 1539-1544 (1994）。例えば、現在、ヒト女性及び男性の生殖能力の治療のために一般的に使用される処置である試験管内受精（ＩＶＦ）は、成熟ヒト卵母細胞の回収、続いて、成熟卵母細胞と精子の受精に基づくＡＲＴ技術である。標準的なＩＶＦ処置プロトコル下において、ヒト成熟卵母細胞は、長期、例えば、３０日間のホルモン療法において漸加される。当該プロトコルは、ゴナドトロピン放出ホルモンＧｎＲＨ又はＧｎＲＨの類似体により患者自身のＦＳＨ及びＬＨを制御すること、続いて、複数の排卵前期の卵胞の発達を保証するための外因性ゴナドトロピン、例えば、ＦＳＨ及び／又はＬＨの注射より開始される。卵胞の成長の適当な時期において、複数の卵母細胞は、排卵直前に吸引により収集される。吸引された卵母細胞は、続いて試験管内において受精され、そして典型的には、４〜８細胞期における生じた胚の子宮への移植前に３日間培養される。
【００１０】
より特別には、ＡＲＴにおけるＣＯＨのための標準的な療法は、内因性ＬＨが、月経周期の黄体期において開始するＧｎＲＨアゴニストの投与により抑制される下方制御期とも呼ばれる抑制期を含む（通常月経周期の約２０日目）。卵巣機能の抑制は、ＧｎＲＨアゴニストで通常８〜２１日かかり、そしてＬＨ又はエストラジオールレベル（ＬＨ＜５ＩＵ／Ｌ、Ｅ2＜５０ｐｇ／ｍｌは、通常、適切な抑制を示す）でモニタリングすることによりモニターできる。下方制御は、卵胞の発達が、通常約７５〜６００ＩＵ／日における卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の毎日の投与により誘導される刺激期を伴う。
【００１１】
あるいは、通常、自発的な又は誘発された月経後１、２、又は３日目において、卵胞刺激がＦＳＨで開始し、そして月経後約６日目において開始する内因性ＬＨの産出がＧｎＲＨアンタゴニストの投与により抑制される場合、ＧｎＲＨアゴニストの代わりに、ＧｎＲＨアンタゴニストを使用することができる。ＧｎＲＨアンタゴニスト及びＦＳＨ投与は、以下に説明する通り、ｈＣＧの排卵−誘引用量の投与のための判断基準が一致するまで続けられる。
【００１２】
刺激期の間、卵胞の発達を検出及び測定するために、卵巣は超音波により検査される。複数の卵胞の発達は、ＡＲＴにおけるＣＯＨプロトコルの目的であるため、当該卵巣が１６ｍｍ以上の平均直径を伴う少なくとも３つの卵胞（好ましくは、１つの１８ｍｍ）を示す場合、排卵の誘引とするために、ｈＣＧ（５，０００〜１０，０００ＩＵ）の注射が与えられる。卵母細胞は、ｈＣＧ注射から３６〜３８時間後に計測される。卵母細胞は通常、排卵前期の卵胞から吸引により回収される。
【００１３】
例えば、上述のプロトコルが臨床的なプロトコルにおいて何年間も使用されているという事実にも関わらず、これらのプロトコルはいくつかの有意な不利益がないというわけではない。ＦＳＨは、比較的短い半減期を有し、そしてＯＩ又はＡＲＴのいずれかのＦＳＨでの処置は、刺激期間、比較的大用量のＦＳＨの毎日の注射に関係する（毎日７５〜６００ ＩＵ ＦＳＨ）。毎日の注射は患者の不快感及び不便性の原因となり、そして比較的高価となりうる。このような用量及び毎日の投与は、重篤な場合生命を危うくし得る卵巣過剰刺激症候群（ＯＨＳＳ）を生じる関連リスクを有する。ゴナドトロピン調製物由来の他の追加的な副作用は、体重の増加、鼓脹、悪心、嘔吐、モニタリングプロセスに関連する時間、及び未知の長期間の癌のリスク含む。これらのホルモン処置療法は、これらのプログラムにおいて男性パートナーの不十分な精子の質に関係する不妊症の問題によりＩＦＶが完全に正常な女性に提供される場合に、より問題となるだろう。従って、ＩＶＦのために卵母細胞の発生において使用される現在のプロトコルに関連する問題が存在する。排卵に受け入れられる卵母細胞のより優れた質の産出のための必要性が残されている。
【００１４】
ゴナドトロピンの投与に関するリスクにより、多様な他のプロトコルが示差されてきた。制御された卵巣刺激プロトコルのリスク、副作用、及び経済的不利益を緩和するための一つの方法は、試験管内における成熟による未成熟卵母細胞の回収に関する。当該アプローチにおいて、女性は刺激されず、又は最小の刺激のみを受け、そして回収された卵母細胞は、試験管内においてホルモン処置にかけられる。当該試験管内成熟（ＩＶＭ）プロトコルは、上述のいくつかの副作用の有意な減少／除去に関し、そして治療に使用されるホルモンの量の減少という二次的な経済的有利性を有する。しかしながら、試験管内成熟（ＩＶＭ）は、ＩＶＦのための卵母細胞の産出に有効な方法になるが、臨床的なヒトＩＶＭの記録された成功割合は低下している。
【００１５】
他の代替として、卵胞成長を助け、そしてＯＨＳＳのリスクを避ける能力を有する代替医薬によるＦＳＨの置き換えが高く所望されるであろう。更に、卵胞成長を生じるためのＦＳＨで作用する調製物の供給もまた高く所望され、低内因性ＦＳＨレベルを増大することができ、低内因性ＦＳＨレベルが原因により無排卵である患者において卵胞成長を生じ、あるいは、それは外因的に投与されたＦＳＨを増大することができ、ＡＲＴにおいて乏しい応答者における向上された応答を許容し、あるいはＯＨＳＳのリスクを避けるのと同時に低用量及び／又は頻繁なＦＳＨ注射によりＡＲＴにおいて同じ応答を許容することができる。
【発明の開示】
【００１６】
ある観点において、本発明は、卵胞の成長及び成熟を刺激するための有効量におけるホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤で哺乳類を処置すること含んで成る卵胞成熟を増大する方法を供する。他の観点において、本発明は、患者における卵巣の卵胞の成長を刺激するために、ホスホジエステラーゼ酵素の阻害剤の使用を供する。更に他の観点において、本発明は、患者に対して有効用量のホスホジエステラーゼ阻害剤の投与を含んで成る、これが必要な患者において卵巣の卵胞成長を刺激する方法を供する。また、本発明に含まれる観点は、哺乳類をＰＤＥ阻害剤及びゴナドトロピンホルモンで処置することを含んで成る卵胞成熟を増大する方法である。ここで、ＰＤＥ阻害剤及びゴナドトロピンは、卵胞成長及び成熟を刺激するための総体的有効量において供される。
【００１７】
他の観点において、本発明は、患者における卵巣の卵胞成長を刺激するための医薬の調製のためのＰＤＥ阻害剤の使用を供する。好ましくは、ＰＤＥ阻害剤は、排卵の誘発が行われている患者における卵巣の卵胞の成長を刺激するための医薬の調製において使用される。より好ましくは、ＰＤＥは、補助生殖医療のために調節された卵巣過剰刺激が起きている患者における卵巣の卵胞の成長を刺激するための医薬の調製において使用される。当該ＰＤＥ阻害剤は、排卵前期の刺激期の初期において投与され、そして好ましくは、排卵期が多量のＬＨ活性を有する薬剤（例えば、５，０００〜１０，０００ｈＣＧ）の投与により開始される前又はその日に投与される。最も好ましくは、ＰＤＥ阻害剤の投与は、ＨＣＧが投与される２、１、又は０日前に止める。最も好ましくは、ＰＤＥ阻害剤の投与はｈＣＧを投与する日に止める。
【００１８】
上記医薬は、ＦＳＨ、又はＦＳＨ活性を有する薬剤、又は内因性ＦＳＨの放出を誘導する薬剤と同時に、別々に、又は続けて投与してもよい。好ましくは、上記医薬は、ＦＳＨと同時に、別々に、又は続けて投与される。あるいは、上記医薬は、ＦＳＨ活性を有する薬剤、又は内因性ＦＳＨの放出を誘導する薬剤と同時に、別々に、又は続けて投与される。上記医薬は、好ましくは、月経の開始日又は約２〜３日後に投与される。それは、毎日、ｈＣＧの排卵誘引用量において、好ましくは５，０００〜１０，０００ＩＵで卵胞成長が十分となるまで投与される。上記医薬がＦＳＨとともに投与される場合、卵胞成長の点において同じ結果を達成するために、ＦＳＨの用量は、ＰＤＥ阻害剤が不存在の同じ患者において必要とされる用量に関して減少する。
【００１９】
本発明の当該観点に従う好ましい態様において、ＰＤＥ阻害剤は、１、５、及び６から選択される少なくとも１つのＰＤＥ型の阻害剤である。当該ＰＤＥ阻害剤は以下の化合物から選択される：
５−［２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）；ザプリナスト；ジピリジダモール；５−（２−エトキシ−５−モルホリノアセチルフェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−２０ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシエトキシ）ピリジ−ｎ−３−イル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；（＋）−３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシ−１（Ｒ）−メチルエトキシ）ピリジン−３−イル］−２−メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−ｌ−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−［２−メトキシエチル］−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−イソ−ブトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−フェニル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−（５−アセチル−２−プロポキシ−３−ピリジンイル）−３−エチル−２−（１−イソプロピル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−（５−アセチル−２−ブトキシ−３−ピリジンイル）−３−エチル−２−（１−エチル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（−３，４−メチレンジオキシフェニル）ピラジノ［２’，１’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（タダラフィル；ＩＣ−３５１）；公表された国際出願ＷＯ９５／１９９７８の実施例７８及び９５の化合物、並びにその実施例１、３、７及び８の化合物；２−［２−エトキシ−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル−１−スルホニル）−フェニル］−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−オン（バルデナフィル）；公表された国際出願Ｗ０９３／０７１２４（ＥＩＳＡＩ）の実施例１１の化合物；Ｒｏｔｅｌｌａ ＤＰ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０００，４３，１２５７由来の化合物３及び１４；４−ブロモ−５−（ピリジルメチルアミノ）−６−［３−（４−クロロフェニル）−プロポキシ］−３（２Ｈ）ピリダジノン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソル−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キノゾリニル］−４−ピペリジン−カルボン酸、モノナトリウム塩；（＋）−ｃｉｓ−５，６ａ，７，９，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２−［４−（トリフルオロメチル）−フェニルメチル−５−メチル−シクロペント−［４，５］イミダゾ［２，１−ｂ]−プリン−４（３Ｈ）オン；フラジオシリン；ｃｉｓ−２−ヘキシル−５−メチル−３，４，５，６ａ，７，８，９，９ａ−オクタヒドロシクロペント［４，５］−イミダゾ［２−，１−ｂ］プリン−４−オン；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；４−ブロモ−５−（３−ピリジルメチルアミノ）−６−（３−（４−クロロフェニル）プロポキシ）−３−（２Ｈ）ピリダジノン；ｌ−メチル−５（５−モルホリノアセチル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ（４，３−ｄ）ピリミジン−７−オン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソル−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キナゾリニル］−４−ピペリジンカルボン酸、モノナトリウム塩；ファーマプロジェクト Ｎｏ．４５１６（Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）；ファーマプロジェクト Ｎｏ．５０５１（Ｂａｙｅｒ）；ファーマプロジェクト Ｎｏ．５０６４（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ；ＷＯ９６／２６９４０を参照のこと）；ファーマプロジェクト Ｎｏ．５０６９（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｐｌｏｕｇｈ）；ＧＦ−１９６９６０（Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）；Ｅ−８０１０及びＥ−４０１０（Ｅｉｓａｉ）；Ｂａｙ−３８−３０４５＆Ｂａｙ−３８−９４５６（Ｂａｙｅｒ）、ビンポセチン（Ｒｉｃｈｔｅｒ ｇｉｄｅｏｎ）；ＳＣＨ−５１８６６（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、ＳＣＨ−５９４９８；（６ａＲ，９ａＳ）−２−（ビフェニルイルメチル）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ−［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）−オン；５’−メチル−２’（ビフェニルイルメチル）−３’−（フェニルメチル）スピロ［シクロペンタン−１，７’（８’Ｈ）−［３Ｈ］イミダゾ［２，１−ｂ]プリン］−４（５’Ｈ）−オン；（６ａＲ，９ａＳ）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−２−（フェニルエチニル）−３−（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ［２，１−ｂ］−プリン−４（３Ｈ）−オン；ジピリジダモール；ＡＷＤ−１２−１７１及びＡＷＤ−１２−２１７（ＡＳＴＡ Ｍｅｄｉｃａ）；ＢＭＳ−３４１４００（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｅｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）；ＵＫ−３４３，６６４（Ｐｆｉｚｅｒ）；５Ｅ−３６２３、５Ｅ−３５６９、５Ｅ−３６５７、Ｅ４０２１（Ｅｉｓａｉ）；ＫＳ−５０５ａ（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ）；ＹＣ−１（Ｙｕｎｇ Ｓｈｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）；ＩＤＤＢレファレンス３２３９５１（Ｂａｙｅｒ）；ＷＩＮ−６１６９１（Ｓａｎｏｆｉ Ｗｉｎｔｈｒｏｐ）；ＦＲ２２６８０７（Ｆｕｊｉｓａｗａ）；ＩＤＤＢレファレンス４６１３１７、４６２５０３、４６１３２１、４６１３２４、４６６１４６（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）；ピリジン−４−イルメチル３−（１，３−ベンゾジオキソル−５−イル）−９−オキソ−１，３，４，９テトラヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］キノリン−２−カルボキシレート：
【化１】
Ｊｉａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４６：４４１−４４４（２００３）の表１に挙げる化合物、特に、化合物２０ｂ，２０ｅ，２０ｆ，２０１，２０ｏ，２０ｐ，（−）−２０ｑ，２０ｔ，２０ｕ，２０ｖ，２０ｗ及び２６ａ。
【００２０】
ＰＤＥ阻害剤は、ＰＥＤ１若しくはＰＥＤ５の選択的阻害剤、又はＰＤＥ１若しくはＰＤＥ５であってよい。当該ＰＥＤ阻害剤は、シルデナフィル及びザプリナスト、ジピリダモール、並びに（６ａＲ，９ａＳ）−２−（ビフェニルイルメチル）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ−［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）−オン及び５’−メチル−２’（ビフェニルイルメチル）−３’−（フェニルメチル）スピロ［シクロペンタン−１，７’（８’Ｈ）−［３Ｈ］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン］−４（５’Ｈ）−オン(Ahn, et al. , J. Med. Chem., 40: 2196-2210 (1997) においてそれぞれ説明されている「化合物番号３１」及び「化合物番号３３」) から選択されてよい。
【００２１】
他の観点において、本発明は、試験管内において、卵母細胞をＰＤＥ阻害剤で、又はＰＤＥ阻害剤及びゴナドトロピンホルモンで処置することを含んで成る、試験管内における卵母細胞の成熟の方法を供する。ここでＰＤＥ阻害剤及びゴナドトロピンは、卵母細胞の成熟に十分な合計量として供される。好ましくは、上記処置の不存在における０〜１オーダーにおける成熟卵母細胞数の増加は、本明細書において説明される方法の使用により、４又はそれ以上に増加する。
【００２２】
本発明の特別な観点は、動物に対して少なくとも１つのＰＤＥ阻害剤及びゴナドトロピンホルモンを含んで成る組成物の投与を含んで成る卵胞の成熟を増加する方法を供する。ここでＰＤＥ阻害剤及びゴナドトロピンは、絨毛性ゴナドトロピン応答性卵母細胞の数を増大するために十分な合計量で投与される。特に好ましい態様において、ＰＥＤ阻害剤はＰＤＥ４阻害剤である。使用することができる典型的なＰＤＥ４阻害剤は、制限されることなく、ピクラミラスト、ロフルミラスト、アリフロ、フィラミナスト、メソプラム、Ｄ４４１８、アロフィリン、及びＣＬ１０４４から成る群から選択されるものを含む。更なるＰＤＥ４阻害剤を使用してもよい。多くは、以下の本明細書において例示されるが、ＰＤＥ４阻害活性を有する化合物の類似体及び誘導体もまた使用できることが理解されるべきである。本発明の方法は、１つのＰＤＥ阻害剤のみを使用して行うことができることが意図される。あるいは、複数のＰＤＥ阻害剤の反応混液を利用することができる。このような反応混液は、１又は複数の他のＰＤＥ阻害剤に追加して１又は複数のＰＤＥ4阻害剤を含んでよい。上記組成物は、少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤、及び、ＰＤＥ１阻害剤、ＰＤＥ５阻害剤、ＰＤＥ６阻害剤、ＰＤＥ７阻害剤、ＰＤＥ９阻害剤、ＰＤＥ１０、及びＰＤＥ１１阻害剤から成る群から選択される阻害剤、少なくとも１つのほかのＰＤＥ阻害剤を含んで成ることが意図される。特別な態様において、本発明の方法は、２又は複数のＰＤＥ４阻害剤を含んで成る組成物を利用する。
【００２３】
本発明の方法において、卵胞の成熟を刺激又は増大するために使用されるゴナドトロピンは、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、及び絨毛性ゴナドトロピン（ＣＧ）並びにこれらの組み合わせから成る群から選択される。好ましくは、当該ゴナドトロピンはＦＳＨである。他の態様において、当該方法は、ＦＳＨを投与すること、更に、非−ＦＳＨゴナドトロピンホルモン、例えば、ＬＨを投与することを含んで成る。あるいは、当該方法は、ＦＳＨの刺激剤、アゴニスト又はアジュバントとの組み合わせにおけるＦＳＨとの投与を含んで成る。あるいは、当該方法はＰＤＥ４阻害剤と併用して、ＦＳＨの刺激剤、アゴニスト又はアジュバント単独の投与を含んで成ってよい。典型的なＦＳＨ活性の刺激剤は、アロマターゼ阻害剤、例えば、レトロゾール、アナストロゾール及びボロゾール（引用により本明細書に組み入れられているＰＣＴ／ＥＰ０１／１４７３０及び米国特許第２００２０１０３１０６号を参照のこと）を含む。
【００２４】
特別な態様において、上記ＰＤＥ阻害剤及びゴナドトロピンホルモン処置は同時に投与される。「ゴナドトロピンホルモン処置」により、本発明は、ＦＳＨ処置単独、非−ＦＳＨゴナドトロピンとの組み合わせにおける処置、あるいはＦＳＨの刺激剤若しくは他のアゴニスト単独、あるいはＦＳＨ及び／又は他の非−ＦＳＨゴナドトロピンとの組み合わせにおける処置のいずれかを意図する。いくつかの態様において、当該ＰＤＥ阻害剤は、ゴナドトロピンホルモンの投与前に投与される。他の態様において、ＰＤＥ阻害剤は、ゴナドトロピンホルモンの投与後に投与される。ＦＳＨの薬用量は、臨床的設定において慣習的に使用されるいずれかの薬用量でよい。例えば、ＦＳＨは約５〜４５０ＩＵ／日の範囲の薬用量で投与することができる。より好ましくは、ＦＳＨは約５〜７５ＩＵ／日の範囲の薬用量で投与される。特別な態様において、ＰＤＥ又は他のＰＤＥ阻害剤の投与は、個々に対して通常投与されるＦＳＨの量において減少を許容するであろうことが意図される。当該出願の目的のために、「最適以下の」ＦＳＨの用量は、いずれかのこのようなＦＳＨの減少した薬用量であり、これは卵胞の成熟の最適な刺激をもたらすものよりも少ないＦＳＨの薬用量である。当該ＦＳＨは、組み換えＦＳＨ（ｒ−ＦＳＨ）であってよく、好ましくは、ヒト組み換えＦＳＨ（ｈＦＳＨ）である。他の態様において、当該ＦＳＨは尿から精製される。
【００２５】
また、本発明は、哺乳類における生体内において排卵前期の卵胞の発達を増加する方法を供し、当該方法は、哺乳類に対して、少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤及び外因性ＦＳＨホルモンを含んで成る組成物の投与を含んで成る。このような方法は、更に、ＰＤＥ４及びＦＳＨホルモンの投与の前に、哺乳類における内因性ＦＳＨ及びＬＨ生成物の抑制を含んで成ってよい。好ましくは、当該外因性ＦＳＨホルモンは、組み換えＦＳＨホルモンである。他の態様において、外因性ＦＳＨホルモンは、尿ＦＳＨホルモンである。
【００２６】
特別の態様において、上記ＰＤＥ４阻害剤は、約０．０５ｍｇ／日〜約５ｍｇ／日の用量において投与される。当該阻害剤の薬用量は、特定の阻害剤、並びに処置される患者の特性に従い変化するであろうことが意図される。当該薬用量は、０．０５ｍｇ／日；０．０７５ｍｇ／日；０．０１０ｍｇ／日；０．１２５ｍｇ／日；０．１５０ｍｇ／日；０．１７５ｍｇ／日；０．２０ｍｇ／日；０．２２５ｍｇ／日；０．２５０ｍｇ／日；０．２７５ｍｇ／日；０．３０ｍｇ／日；０．３２５ｍｇ／日；０．３５０ｍｇ／日； ０．３７５ｍｇ／日；０．４０ｍｇ／日；０．４２５ｍｇ／日；０．４５０ｍｇ／日；０．４７５ｍｇ／日；０．５０ｍｇ／日；０．５２５ｍｇ／日；０．５５０ｍｇ／日；０．５７５ｍｇ／日；０．６０ｍｇ／日；０．６２５ｍｇ／日；０．６５０ｍｇ／日；０．６７５ｍｇ／日；０．７０ｍｇ／日；０．７２５ｍｇ／日；０．７５０ｍｇ／日；０．７７５ｍｇ／日；０．８０ｍｇ／日；０．８２５ｍｇ／日；３４００．８５０ｍｇ／日；０．８７５ｍｇ／日；０．９０ｍｇ／日；０．９２５ｍｇ／日；０．９５０ｍｇ／日；０．９７５ｍｇ／日；１．０ｍｇ／日；１．２５ｍｇ／日；１．５ｍｇ／日；１．７５ｍｇ／日；２．０ｍｇ／日；２．２５ｍｇ／日；２．５ｍｇ／日；２．７５ｍｇ／日；３．０ｍｇ／日；３．２５ｍｇ／日；３．５ｍｇ／日；３．７５ｍｇ／日；４．０ｍｇ／日；４．２５ｍｇ／日；４．５ｍｇ／日；４．７５ｍｇ／日；５．０ｍｇ／日又は１日当たりそれ以上でよいことが意図される。好ましい態様において、当該ＰＤＥ４阻害剤は、約１０ｍｇ／日〜約２００ｍｇ／日の薬用量において投与されることが意図される。当業者は、単に典型的な薬用量及び範囲であることを理解すべきである。本明細書において表現的に引用される薬用量間のいずれかの個々の数値量が好ましくは考慮され、そしてそれぞれのこれらの用量の個々の値は、本発明の範囲内であることが特に意図される。本明細書に挙げられる特定の用量間の当該個々の値は、読みやすいように簡単に省略され、だからといって出願の範囲から除外することを意図したものではない。同じことは本明細書における他の非−ＰＤＥ阻害剤組成物にもあてはまる。
【００２７】
他の態様において、上記ＦＳは、５ ＩＵ ＦＳＨ／日〜７５ ＩＵ ＦＳＨ／日の薬用量において投与されることが意図される。しかしながら、当該ＦＳＨは１日当たり１５０ ＩＵ ＦＳＨの薬用量として投与することもできる。当該ＦＳＨは、好ましくは、単一用量において投与される。他の態様は、複数用量においてＦＳＨを投与することを考慮する。当該ＦＳＨは、筋肉内、皮下的、又はいずれかの他の慣習的な投与方法を介して投与することができる。好ましくは、ＦＳＨは、哺乳類の月経周期の２日目〜１４日目に投与される。特別な態様において、ＦＳＨは、連続して７〜１２日目に投与される。
【００２８】
特別な態様において、内因性ＦＳＨ及びＬＨの抑制は、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）又はこれらの類似体の哺乳類に対する投与を含んで成る。より好ましくは、当該ＧｎＲＨは、ＰＤＥ４阻害剤及びＦＳＨホルモンの投与の３０日前に哺乳類に対して投与される。当該ＧｎＲＨの薬用量は、内因性ゴナドトロピンの抑制のために慣習的に使用されるいずれかの薬用量でよい。このような態様は、一般的には、１日当たり約０．２５ｍｇ〜３ｍｇのＧｎＲＨの薬用量範囲において投与されるＧｎＲＨ又はこれらのアンタゴニストを利用してもよい。
【００２９】
本発明の方法において、ＰＤＥ４阻害剤及びＦＳＨの投与を欠くｈＣＧの排卵性卵母細胞の産出と比較して、哺乳類におけるＰＤＥ４及びＦＳＨの投与は、よりｈＣＧ排卵性卵母細胞を産出する。例えば、これらの処置を欠く場合、当該対象は、０〜１のｈＣＧ排卵性卵母細胞を産出できるが、しかしながら、当該処置はその数を４又はそれ以上のｈＣＧ排卵性卵母細胞に増加する。従って、本発明の方法の結果として、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上の卵母細胞を回収できる。本発明の方法は、ＰＤＥ４阻害剤及びＦＳＨホルモンの初期投与後１２日目に卵母細胞を回収することを意図する。当該方法は、更に、試験管内における回収した卵母細胞の受精、そして回収し、受精した卵母細胞を４〜８細胞期に培養することを含む。このような４〜８細胞期の受精した卵母細胞は、更に哺乳類の子宮に移植することができる。当該哺乳類は、当該卵母細胞を回収したものと同じ哺乳類であってよく、又は当該卵母細胞を回収したものと異なる哺乳類であってよい。
【００３０】
本発明は、更に、不妊症の処置のためのキットを供する。当該キットは、医薬的に受容可能な製剤において、１以上のＰＤＥ４阻害剤を含んで成る第一組成物、及び医薬的に受容可能な製剤においてＦＳＨを含んで成る第二組成物を含んで成る。当該キットは尿ＦＳＨ又は組み換えＦＳＨを含んで成ってよい。ＦＳＨのいずれかの場合、好ましくはヒトＦＳＨである。当該キットのＦＳＨは、好ましくは、約５ ＩＵ ＦＳＨ〜約７５ ＩＵ ＦＳＨの単位用量において供される。当該キットは、更に、医薬的に受容可能な製剤においてＬＨを含んで成る第三組成物を含んで成ってよい。当該キットにおける単位用量において利用されるＬＨの典型的な量は、約７５ ＩＵ ＬＨ〜約１５０ ＩＵ ＬＨである。
【００３１】
本発明の他の特色及び有利性は、以下の詳細な説明により明らかになるであろう。しかしながら、詳細な説明及び本発明の好ましい態様を示す特定の実施例は、発明の精神の範囲における多様な変化及び修正は当該詳細な説明より当業者に明らかになることから、実例の一つとして与えられるものと理解されるべきである。
好ましい態様の詳細な説明
【００３２】
ゴナドトロピンホルモンを使用する卵巣刺激は、現在、受胎能の最適以下のレベルを有するカップルのための有意な処置療法として認識されている。ＩＶＦの手順は、受精のための卵母細胞の産出を刺激するために、ＦＳＨ及び他のゴナドトロピンホルモンの有意な量の使用に依存する。しかしながら、このような卵巣刺激は、しばしば、有害な副作用に導く。従って、ゴナドトロピンによる卵巣刺激に専ら依存しない排卵性卵母細胞の産出を増加する更なる方法が必要である。
【００３３】
本発明は、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤を使用する卵胞成熟の誘導に向けられる。未成熟のラットに投与する場合、ＰＤＥの阻害剤はｈＣＧ−排卵性母卵細胞数の増加に導くことが発見されている。より具体的には、ＦＳＨの最適以下の用量と併用して投与する場合、ＰＤＥ４阻害剤は、このような卵母細胞の数を実質的に増加させる。また、本発明者は、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）酵素、好ましくは、１、５、６、７、９、１０、１１から選択されるＰＥＤ型、より好ましくはＰＤＥ１及び５型の阻害剤の分子が、本発明の全ての範囲において、最適以下の量のＦＳＨの存在下において、卵胞の成長を補助することができるという驚くべき発見をした。
【００３４】
特別な典型的な態様において、ＰＤＥ４阻害剤であるピクラミラスト及びロフルミラストの投与が、ＦＳＨ−誘導性卵胞成熟を増加したことが発見された。最も顕著な効果は、ＰＤＥ４阻害剤と併用して低用量のＦＳＨを投与した場合に明らかである。図１２〜１４のデータからわかるように、低用量のＦＳＨ単独の投与（図１１及び図１２を参照のこと）は、高用量のＦＳＨで刺激した卵巣と比較して、ラット当たりより少ない排卵された卵子を産出する。それは、典型的には、ラットあたり１５〜１８の排卵された卵子のオーダーにおいて産出されるであろう。高用量のＦＳＨを使用する問題は、上記において議論されている。本発明は、ラットをＰＤＥ４阻害剤で処置した場合、排卵性卵母細胞の数が、低ＦＳＨで示される基底数から顕著に増加させることができることを示す。実際に、図１１及び図１２からわかるように、低用量のＦＳＨと０．４ｍｇ／ｋｇのピクラミラスト又はロフルミラストのいずれかの組み合わせた投与は、高用量のＦＳＨ単独によるものより、排卵性卵母細胞をより産出した（図１１及び図１２）。更に、図１４からわかるように、ＦＳＨの共投与の無い高用量のピクラミラスト（例えば、２ｍｇ／ｋｇ）は、ｈＣＧ排卵性卵母細胞を増加した。
【００３５】
上記の典型的なデータを考慮すると、ＰＤＥ阻害剤、及び特にＰＤＥ４阻害剤は、生体内における排卵性卵母細胞を産出するために使用することができることが予想される。これは、女性の不妊症の処置において特に有用であり、正常な女性にとっても、特に妊娠の可能性を上昇させることを所望する場合、このような処置により有益となるであろう。より具体的な態様において、ＰＤＥ４阻害剤は、ＰＤＥ阻害剤の投与の欠如において産出される排卵性卵母細胞の数と比較して、生体内における哺乳類中の排卵性卵母細胞の数の増加を産出することによる卵胞の成熟の増強又は増加において特に有用であることが予想される。
【００３６】
図１４において明らかなように、同時的な低用量のＦＳＨの刺激がないＰＤＥ４阻害剤単独の投与は、女性における排卵性卵母細胞を増加するために十分であることが予想される。このように、本発明のある方法は、外因性ＦＳＨでの卵巣刺激の必要性を完全に回避する。あるいは、図１１〜１４からわかるように、本発明の方法はまた、排卵性卵母細胞の顕著な増加を産出するのに十分なＰＤＥ４阻害剤との組み合わせにおける低用量のＦＳＨの投与を含んで成る。ＰＤＥ４阻害剤が単独で、又は低レベルのＦＳＨとの組み合わせ処置の一部として投与されるかに関わらず、本発明の方法は、排卵性卵母細胞の治療的に有利な増加を生じるために必要なＦＳＨの刺激の量を顕著に減少することにより、当業界において有意な有利性を供する。必要とされるＦＳＨの量のこのような顕著な減少は、受精治療におけるゴナドトロピンの投与に関する多くの問題を減少し、又は除去することから極めて有利である。特に、ＦＳＨ薬用量における減少は、不妊治療を行っている女性におけるＯＨＳＳの誘導の可能性を減少するであろう。
【００３７】
本明細書において議論された大半は、ＰＤＥ４阻害剤の使用に関し、本発明の発見は、他のいずれかのＰＤＥ阻害剤単独、又はＰＤＥ４阻害剤との組み合わせにおける、低用量のＦＳＨとの組み合わせにおける、又はＰＤＥ４及び低用量のＦＳＨとの組み合わせにおける使用を支持する。例えば、他のＰＤＥ阻害剤、例えば、ＰＤＥ５阻害剤は、哺乳類における排卵性卵母細胞の数を増加する方法において使用することができる。このような方法はＰＤＥ５阻害剤単独において使用でき、あるいは当該方法はＰＤＥ４阻害剤又は低用量のＦＳＨとのいずれかの組み合わせにおいてＰＤＥ５阻害剤を使用することができ、あるいは、当該方法はＰＤＥ４阻害剤及び低用量のＦＳＨと併用してＰＤＥ５阻害剤を使用することができる。好ましい態様において、当該阻害剤は、ホスホジエステラーゼ１型及び／又は５型から選択できる。（「選択的」ＰＤＥ１型及び／又は５型の阻害剤は、例えば、他のＰＤＥ型の分子のＩＣ50よりも、約１０倍、好ましくは１００倍、より好ましくは１０００倍低いＰＤＥ１型及び／又は５型のＩＣ50を示す分子を意味する。ＰＤＥ酵素の分子のＩＣ50は、例えば、Thompson, et al., Adv. Cyclic Nucleotide Res. 10 : 69-92 (1979)において報告されるとおり、試験管内アッセイにより測定することができる。また、好ましくは、ＰＤＥ阻害剤は、５００Ｄａ以下の分子量を有する。更に好ましい態様において、ＰＤＥ阻害剤は、ＰＤＥ１型の阻害剤であり、最も好ましくはＰＤＥ１型の選択的阻害剤である。好ましくは、ＰＤＥ阻害剤は、非ペプチドＰＤＥ阻害剤である。更に他の好ましいものは、ＰＤＥ４阻害剤がＰＤＥ５阻害剤及び低用量のＦＳＨと併用して投与される方法である。このような方法において、ＰＤＥ阻害剤が投与される場合に使用されるＦＳＨの用量は、同じレベルの卵胞成熟を達成するためにＰＤＥ阻害剤の使用の欠如における同患者に必要であろうＦＳＨの用量の７５％以下であってよい。より好ましくは、ＦＳＨの量は、同患者において必要とされるＦＳＨの用量の約５０％以下であり、更により好ましくは、ＰＤＥ阻害剤を伴わない同患者において必要とさるＦＳＨの用量の少なくとも３０％以下であろう。ＰＤＥ阻害剤及びＦＳＨ組成物の使用の組み合わせ及び方法は、明細書の以下の詳細において議論される。
ＦＳＨ及び他のゴナドトロピン組成物
【００３８】
ＦＳＨは、２つのサブユニットから構成される下垂体の糖タンパク質ホルモンである。α−サブユニットは、ＦＳＨ、並びに他の糖タンパク質であるＬＨ、ｈＣＧ及びＴＳＨに共通であり、β−サブユニットはＦＳＨ特異性を与える。不妊治療の分野は進歩しており、そして現在、商業的に入手可能な、そして本発明の方法において使用できる多数のＦＳＨ調製物が存在する。このような商業的な調製物は、尿誘導ＦＳＨ組成物及び組み換えＦＳＨ組成物を含む。これらの組成物は、例えば、ＰｅｒｇｏｎａｌTM、ＦｅｒｔｉｎｅｘTM、ＲｅｐｒｏｎｅｘTM、ＢｒａｖｅｌｌｅTM、ＨｕｍｅｇｏｎTM、Ｇｏｎａｌ−Ｆ、ＦｏｌｌｉｓｔｉｍTMを含む。これらは単に、典型的な商業的ＦＳＨ調製物あり、当業者は、本発明の方法及び組成物における使用のための他のこのようなＦＳＨ調製物を産出することが可能であることを理解するであろう。先の組成物が、使用できるＦＳＨの製剤及び薬用量としての典型的なガイダンスを供する範囲に対し、これらは以下にさらに詳細に議論される。しかしながら、このような用量及び製剤は容易に改変でき、そして１又は複数のＰＤＥ阻害剤との組み合わせにおける投与される場合、このような投与の欠如において産出される卵母細胞の数と比較してＦＳＨの薬用量及び製剤が生体内における排卵性卵母細胞の数の増加が生じる限り、本発明の関係において有用となりうる。
【００３９】
ＨｕｍｅｇｏｎTM(Organon, West Orange, NJ)は、ＦＳＨ及びＬＨ活性を有するゴナドトロピンの精製された調製物である。ゴナドトロピンの当該調製物の使用のための特性、効能、及びプロトコルは、Physician's Desk Reference において詳細に議論されている(引用として本明細書に組み入れられているPDRTM 52nd Ed. 1998, ページ1949-1951)。端的には、各バイアルは、７５ ＩＵ、又は１５０ ＩＵ ＦＳＨ、７５ ＩＵ、又は１５０ ＩＵ ＬＨを含む。ＨｕｍｅｇｏｎTM及びｈＣＧは、無排卵の原因が機能的であり、且つ卵巣不全ではない無排卵の不妊症の女性において排卵及び妊娠のために、継続的な方法において投与することができる。同様に、ＨｕｍｅｇｏｎTM及びｈＣＧは、試験管内における受精プログラムに関連する排卵性の患者のために、複数の卵胞の発達を刺激するために必要とされる（即ち、卵胞発達の刺激）。典型的には、卵胞の成熟を生じるために使用されるＨｕｍｅｇｏｎTMの投与は、各患者に適用し、そして個別化することが必要とされる。しかしながら、典型的には、初期に推奨される用量は、筋肉内において７〜１２日間投与される７５ ＩＵ ＦＳＨ／ＬＨ／日、続いてｈＣＧの用量（５，０００〜１０，０００Ｕ）であり、最後のＨｕｍｅｇｏｎTMの用量から１日後に投与されるであろう。典型的には、ＨｕｍｅｇｏｎTMの治療は、治療の一過程において連続して１２日以上継続するべきではない。投与のために、ＨｕｍｅｇｏｎTMのバイアル（７５ ＩＵ ＦＳＨ／ＬＨ、又は１５０ ＩＵ ＦＳＨ／ＬＨのいずれかを含む）は２ｍｌの無菌生理食塩水に溶解し、そして直ぐに筋肉内に投与される。
【００４０】
Physician's Desk Reference (PDRTM, 52nd Ed. 1998, ページ2773-2775)において説明されているＰｅｒｇｏｎａｌTM(Serono Laboratories Inc. , Randolph, MA）は、本発明の方法のＦＳＨ組成物を供するために使用することができる閉経後の女性の尿から調製されるゴナドトロピンの他の商業的に説明された精製した調製物である。当該組成物は、筋肉内投与のために処方される。また、これは、７５ ＩＵ ＦＳＨ／ＬＨ、又は１５０ ＩＵ ＦＳＨ／ＬＨの単一用量を含んで成る医薬組成物である。当該医薬剤は、卵巣不全を有さない女性における卵胞の成長を生じるための女性に対する投与のための組成物としてよく認識されている。単に卵胞の成熟というより排卵に影響するように、ｈＣＧのボーラス投与により、７〜１２日間ＰｅｒｇｏｎａｌTM投与が続けられる。
【００４１】
Physician's Desk Reference (PDRTM, 57th Ed. 2003, ページ1325-1327)において説明されているＲｅｐｒｏｎｅｘTM(Ferring Pharmaceutical Inc., Tarrytown, NJ)は、閉経後の女性の尿から単離されるゴナドトロピンの他の典型的な精製された調製物である。７５ ＩＵ ＦＳＨ／ＬＨ、又は１５０ ＩＵ ＦＳＨ／ＬＨ活性の単一用量において入手可能な当該組成物は、卵巣の卵胞成長を生じるように７〜１２日間投与される。十分な卵胞成熟が生じたら、排卵を誘発するためにｈＣＧが投与される。ＲｅｐｒｏｎｅｘTMは、皮下的又は筋肉内的に、過少無排卵（oligoanovulation)を伴う不妊症の患者に対して、又は補助生殖医療を行っている患者のために投与することができる。最初の指標において、内因性ゴナドトロピンの抑制のために治療的な介入を受けている患者のために、１日当たり１５０ ＩＵの初期用量において、治療の最初の５日間、ＲｅｐｒｏｎｅｘTMが投与される。例えば、血清中のエストラジオール濃度の臨床的なモニタリング、及び膣の超音波モニタリングに基づき、引き続く投薬は患者の個々の応答に従い上方又は下方に調節される。好ましくは、薬用量の調整は、一日おき以上でされるべきではなく、そして調整当たり７５〜１５０ ＩＵ以上の変化を超えるべきではない。好ましくは、１日の最大用量は４５ ＩＵを超えるべきではなく、継続的なＲｅｐｒｏｎｅｘTMの治療の最大日数は１２日を越えるべきではない。このような薬用量調整のガイドラインは、本明細書において議論される他のＦＳＨ調製物に対しても適用可能である。患者に卵胞の成熟の兆候がみえたら、ＲｅｐｒｏｎｅｘTMに基づく治療の休止から１日後にｈＣＧを投与する。
【００４２】
補助生殖医療のためにＲｅｐｒｏｎｅｘTMで治療されている患者において、ここで患者は、初期のゴナドトロピン抑制治療を受けている（例えば、ＧｎＲＨ又はアンタゴニスト下垂体抑制）、典型的な初期用量は、２２５ ＩＵ ＲｅｐｒｏｎｅｘTMであってよく、それは、続いて患者の個々の応答に従い調整することができる。有意な卵胞の発達が示されたら、卵母細胞の回収のための調製において、最後の卵胞成熟を誘導するために、ｈＣＧ（５，０００〜１０，０００ＵＳＰ単位）を投与する。ＲｅｐｒｏｎｅｘTMの投与の結果、卵巣が異常に拡張した場合、ＯＨＳＳの発達の可能性を減少させるために、ｈＣＧを与えずにおく。上述のように、当該組成物は、皮下的に投与することができる。皮下投与のために、ＲｅｐｒｏｎｅｘTMを２ｍｌの生理食塩水と混合し、そして皮下注射は下腹部に与えられる。
【００４３】
Physician's Desk Reference (PDRTM, 52 d Ed. 1998, ページ2771-2773)において説明されているＦｅｒｔｉｎｅｘTM(Serono Laboratories Inc., Randolph, MA)は、閉経後の女性の尿から精製される高精製ＦＳＨ調製物である。ＦＳＨ組成物の精製は、ＦＳＨに対するマウスモノクローナル抗体、及び約８，５００〜１３，５００ ＩＵ ＦＳＨ／ｍｇのタンパク質、超低量のＬＨ、及びほかの尿タンパク質に関して９５％以上の純度の特異的な活性特性を有するＦＳＨの産出を使用して免疫親和性クロマトグラフィーを通して達成される。このような精製法は、非商業的な原料、例えば、閉経後の女性の尿からＦＳＨを得るために容易に使用することができる。ＦｅｒｔｉｎｅｘTMは、皮下的に投与することができ、そして７５ ＩＵ ＦＳＨ、又は１５０ ＩＵ ＦＳＨを含む容器中において供される。当該ＦＳＨは、７５ ＩＵ〜３００ ＩＵの典型的な薬用量範囲において投与される。
【００４４】
Physician's Desk Reference (PDRTM, 57th Ed. 2003, ページ1325-1327)において説明されているＢｒａｖｅｌｌｅTM(Ferring Pharmaceutical Inc. , Tarrytown, NJ）は、本方法において使用することができる他の典型的な高精製ＦＳＨ調製物である。ＢｒａｖｅｌｌｅTMは、皮下又は筋肉内に投与することができ、そして７５ ＩＵ及び１５０ ＩＵ ＦＳＨの単位用量において入手可能である。
【００４５】
Ｇｏｎａｌ ＦTMは、皮下投与に適当な組み替えＦＳＨ調製物である。Ｇｏｎａｌ ＦTMの特性及び特徴は、Physician's Desk Referenceにおいて詳細に説明されている(PDRTM, 57th Ed. 2003, ページ 3124-3128).
【００４６】
商業的に入手可能なこれらの化合物に追加して、当業者は、当業者に周知な技術を使用して天然資源、例えば、閉経後の女性の尿からＦＳＨを精製することを選択することができる（例えば、米国特許第５，７６７，０６７号を参照のこと）。
【００４７】
あるいは、当業者は、当業者に周知な技術を使用して組み換えＦＳＨを作製することを選択することができる。持続性のＦＳＨアゴニストは、本発明の方法において有用であることが特に予想される。例えば、ｈＣＧは、ＦＳＨよりも長い半減期を有することが知られている。これらのゴナドトロピンの両方は、β−サブユニットにより与えられている特異的な活性を伴い、共通のα−サブユニットを有する。あるゴナドトロピンのα−サブユニットは他のβ−サブユニットと共に使用することができ、そして更に生理活性キメラゴナドトロピンを産出することが実証されている。更に、ＬＨと比較して、ｈＣＧの増加した生物作用強度は、ｈＣＧのβ−サブユニットのカルボキシ末端ペプチドが原因であることが示されている(Matzuk et al., Endocrinology 126: 376-383,1990)。ＦＳＨの持続性のアゴニストは、ＦＳＨβ−サブユニットのカルボキシ末端におけるｈＣＧβ−サブユニットのカルボキシ末端ペプチドの伸展を含み産出することができる(LaPolt et al., Endocrinology, 131: 6,2514-2520, 1992)。このようなキメラ分子は、野生型のＦＳＨと比較して顕著に増加した循環半減期及び作用強度を有することが示されている(Fares et al. , Proc. Nat'1 Acad. Sci., 89: 4304-4308,1992)。
【００４８】
ＦＳＨの原料に関わらず、卵胞の成熟の有意な誘導はＦＳＨの最適以下の用量を使用して達成することができることが本明細書において実証されている。上述のように、不妊症処置プロトコルにおいて典型的に投与されるＦＳＨの用量は、約７日〜約１２日間で、約７５ ＩＵ ＦＳＨ／日〜約４５０ ＩＵ ＦＳＨ／日の範囲である。本発明の方法において、ＰＤＥ４又は他のＰＤＥ阻害剤と併用して卵胞の成熟を刺激するために使用されるＦＳＨの用量は、過少無排卵（oligoanovulation)の処置及び／又は補助生殖医療において現在使用されている用量と同じであってよい（即ち、１日当たり７５ ＩＵ ＦＳＨ〜約４５０ ＩＵ ＦＳＨ）。しかしながら、本発明はこのような用量がＰＤＥ４と併用して投与される場合、最適以下の用量であっても卵胞の成熟を得ることが可能であることを示し、これらの典型的な用量より低い用量であることが好ましい。
【００４９】
本発明は、５ＩＵ ＦＳＨ／日と同じ程度少量において使用できるこが意図される。従って、与えられたいずれかの処置療法は、５ ＩＵ ＦＳＨ／日、１０ ＩＵ ＦＳＨ／日、１５ ＩＵ ＦＳＨ／日、２０ ＩＵ ＦＳＨ／日、２５ ＩＵ ＦＳＨ／日、３０ ＩＵ ＦＳＨ／日、３５ ＩＵ ＦＳＨ／日、４０ ＩＵ ＦＳＨ／日、４５ ＩＵ ＦＳＨ／日、５０ ＩＵ ＦＳＨ／日、５５ ＩＵ ＦＳＨ／日、６０ ＩＵ ＦＳＨ／日、６５ ＩＵ ＦＳＨ／日、７０ ＩＵ ＦＳＨ／日、７５ ＩＵ ＦＳＨ／日、１５０ ＩＵ ＦＳＨ／日、又は１日当たりそれ以上の単位のＦＳＨを利用することができることが意図される。当然に、これらは、１日の薬用量の単なる例示であり、特に挙げられた用量のいずれかの間の整数の他の用量も本発明の治療方法において使用することができることが理解されるべきである。更に、当該薬用量は、与えられたいずれかのＦＳＨの投与において上方又は下方調節することができる。当該ＦＳＨは、ゴナドトロピンホルモンの投与のために通常利用されるいずれかの経路を通して投与することができる。最も好ましい投与方法は、筋肉内又は皮下注射のいずれかを介する投与である。当該処置プロトコルを通して、患者はＯＨＳＳの徴候を含む有害的な応答の徴候をモニターされる。
【００５０】
ＦＳＨに追加して、他のゴナドトロピンホルモンは、本発明の方法において使用され、そして本明細書において説明されるキットにおいてパッケージングされるだろう。このようなホルモンはｈＣＧを包含する。これは、Physician's Desk Reference (PDRTM, 57th Ed. 2003, ページ1324-1325)において説明されるＮｏｖａｒｅｌTM(Ferring Pharmaceutical Inc., Tarrytown, NJ)として商業的に入手可能であり、そしてヒト胎盤により産出されるゴナドトロピンであり、そして妊娠した女性の尿から得られる。ｈＣＧの他の商業的な調製物は、ＰｒｅｇｎｙｌTM(Organon, West Orange, NJ)である。当該ホルモンの使用のための特性、徴候、及びプロトコルは、Physician's Desk Reference(PDRTM, 57th Ed. 2003, ページ 2401)において説明される。これらの両調製物は、筋肉内注射される。典型的には、当該ホルモンは、排卵を誘発するために、約５，０００ユニット〜１０，０００ユニットの薬用量で投与される。
【００５１】
本明細書において使用され、そしてパッケージングすることができる更に他のホルモンはＧｎＲＨである。当該ホルモンの商業的に入手可能な多数の原料が存在する。ＧｎＲＨ及びこれらの類似体はＣｅｔｒｏｔｉｄｅTM(Serono, PDRTM, 57th Ed. 2003, ページ 3119- 3121)；ＥｌｉｇａｒｄTM(Sanofi-Synthelabo, PDRTM, 57th Ed. 2003, ページ2994)；ＬｕｐｒｏｎTM(PDRTM, 57th Ed. 2003, ページ3185)；及びＺｏｌａｄｅｘTM(AstraZeneca PDRTM, 57th Ed. 2003, ページ695)として商業的に入手可能である。これらの薬剤は、女性におけるＬＨ／ＦＳＨ産出を抑制するために使用され、そしてこのため、これらは毎日の排卵のために使用される。これらの薬剤の典型的な用量は、約０．２５ｍｇ〜約３ｍｇである。ＦＳＨによる卵巣刺激治療は、典型的には、月経周期の２日目又は３日目に開始される。当該ＧｎＲＨ又はこの類似体は１日に１回（低量、例えば、０．２５ｍｇ）、又は初期から中期の卵胞期（「刺激期」）においての単一用量（例えば、３ｍｇ）のいずれかで投与される。ＧｎＲＨはｈＣＧ投与の日まで投与される。超音波分析で卵胞の適切な大きさを明らかにし、ｈＣＧは排卵及び卵母細胞の最終的な成熟を誘発するために投与される。
ホスホジエステラーゼ阻害剤
【００５２】
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）は、細胞内の二次メッセンジャーサイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）及びサイクリックＧＭＰ（ｃＧＭＰ）の代謝に関する酵素ファミリーである。ＰＤＥ４は炎症及び免疫細胞において発見される、唯一ではないが、主なｃＡＭＰ代謝性酵素であるｃＡＭＰ特異性ＰＤＥであり、平滑筋におけるサイクリックＡＭＰ代謝に対して有意に貢献する。ＰＤＥ４は、抗うつ薬であるロリプラム（４−［３−（シクロペンチロキシ）−４−メトキシ−フェニル］−２−ピロリジノンにより阻害される（A. G. Scientific, Inc., San Diego, CA)。ロリプラムは開発されたＰＤＥ４阻害剤の第一次世代である（Conti, Biology of Reproduction 67: 1653-1661,2002を参照のこと)。引き続いて、他のこのような阻害剤は、制限されることなくピクラミラスト、ロフルミラスト、アリフロ、フィラミナスト、メソプラム、Ｄ４４１８、アロフィリン、ＣＬ１０４４を含むことが認識されている。更に、他のＰＤＥ阻害剤、例えば、シルデナフィル、ＡＳ７０１９４８／１及びＡＳ７０１９４７／１もまた本発明に有用であろう。このように、本発明における使用のための特に好ましいＰＤＥ４阻害剤は、リリミラスト（lirimilast)(Bayer AG）；ＣＤＰ−８４０(Celltech Group PLC)、ＮＣＳ−６１３(Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS)、Ｅ−４０２１(Eisai CoLtd)、ＧＲＣ−３７８５(Glenmark Pharmaceuticals Ltd)、ＩＣ−４８５(ICOS Corp）；ＩＰＬ−４５５９０３(Inflazyme Pharmaceuticals Ltd）、ＯＮＯ−６１２６(Ono Pharmaceutical Co Ltd)、トフィミラスト（Tofimilast)(Pfizer Inc.)、ピクラミラスト(Piclamilast)(Rhone-Poulenc SA(Aventis SA))、シロミラスト(Cilomilast)(SmithKline Beecham PLC)、フィラミナスト(Filaminast)(Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals Inc)、ＷＡＹ−１２６１２０(Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals IncO)、メソプラム（Mesopram)(Schering）、及びロフルミラスト(Roflumilast)(Altana)を含む。
【００５３】
上述及び他のＰＤＥ４阻害剤は、当業者に周知であり、そして、例えば、米国特許第６６４９６３３号；米国特許第６６２４１８１号；米国特許第６１２７３６３号；ＤＥ１５４５６８７，ＤＥ２０２８８６９，ＤＥ２１２３３２８，ＤＥ２３１５８０１，ＤＥ２４０２９０８，ＤＥ２４１３９３５，ＤＥ３９００２３３，ＥＰ０１０３４９７，ＥＰ０１３９４６４，ＥＰ０１５８３８０，ＥＰ０１６３９６５，ＥＰ０３３５３８６，ＥＰ０３８９２８２，ＥＰ０４２８３０２，ＥＰ０４３５８１１，ＥＰ０４５９５０５，ＥＰ０４７０８０５，ＥＰ０４９０８２３，ＥＰ０５０６１９４，ＥＰ０５１１８６５，ＥＰ０５２７１１７，ＥＰ０３９３５００，ＥＰ０５１０５６２，ＥＰ０５５３１７４，ＥＰ０５５７０１６，ＥＰ０６２６９３９，ＥＰ０６６４２８９，ＥＰ０６７１３８９，ＥＰ０６８５４７４，ＥＰ０６８５４７５，ＥＰ０６８５４７９，ＥＰ０７３６５３２，ＥＰ０７３８７１５，ＥＰ０７４８８０５，ＥＰ０７６３５３４，ＥＰ０８１６３５７，ＥＰ０８１９６８８，ＥＰ０８１９６８９，ＥＰ０８３２８８６，ＥＰ０８３４５０８，ＥＰ０８４８０００，ＪＰ９２２３４３８９，ＪＰ９４３２９６５２，ＪＰ９５０１０８７５，ＪＰ９８０７２４１５，ＪＰ９８１４７５８５，米国特許第５，７０３，０９８号、５，７３９，１４４号、ＷＯ９１１７９９１，ＷＯ９２００９６８，ＷＯ９２１２９６１，ＷＯ９３０７１４６，ＷＯ９３１５０４４，ＷＯ９３１５０４５，ＷＯ９３１８０２４，ＷＯ９３１９０６８，ＷＯ９３１９７２０，ＷＯ９３１９７４７，ＷＯ９３１９７４９，ＷＯ９３１９７５１，ＷＯ９３２５５１７，ＷＯ９４０２４６５，ＷＯ９４１２４６１，ＷＯ９４２０４５５，ＷＯ９４２２８５２，ＷＯ９４２７９４７，ＷＯ９５０１３３８，ＷＯ９５０１９８０，ＷＯ９５０３７９４，ＷＯ９５０４０４５，ＷＯ９５０４０４６，ＷＯ９５０５３８６，ＷＯ９５０８５３４，ＷＯ９５０９６２３，ＷＯ９５０９６２４，ＷＯ９５０９６２７，ＷＯ９５０９８３６，ＷＯ９５１４６６７，ＷＯ９５１４６８０，ＷＯ９５１４６８１，ＷＯ９５１７３９２，ＷＯ９５１７３９９，ＷＯ９５１９３６２，ＷＯ９５２０５７８，ＷＯ９５２２５２０，ＷＯ９５２４３８１，ＷＯ９５２７６９２，ＷＯ９５３５２８１，ＷＯ９５３５２８３，ＷＯ９５３５２８４，ＷＯ９６００２１８，ＷＯ９６０１８２５，ＷＯ９６０６８４３，ＷＯ９６１１６９０，ＷＯ９６１１９１７，ＷＯ９６１２７２０，ＷＯ９６３１４８６，ＷＯ９６３１４８７，ＷＯ９６３５６８３，ＷＯ９６３６５９５，ＷＯ９６３６５９６，ＷＯ９６３６６１１，ＷＯ９６３６６２５，ＷＯ９６３６６３８，ＷＯ９６３８１５０，ＷＯ９６３９４０８，ＷＯ９６４０６３６，ＷＯ９７０３９６７，ＷＯ９７０４７７９，ＷＯ９７０５１０５，ＷＯ９７０８１４３，ＷＯ９７０９３４５，ＷＯ９７１２８９５，ＷＯ９７１８２０８，ＷＯ９７１９０７８，ＷＯ９７２０８３３，ＷＯ９７２２５８５，ＷＯ９７２２５８６，ＷＯ９７２３４５７，ＷＯ９７２３４６０，ＷＯ９７２３４６１，ＷＯ９７２４１１７，ＷＯ９７２４３５５，ＷＯ９７２５３１２，ＷＯ９７２８１３１，ＷＯ９７３０９９９，ＷＯ９７３１０００，ＷＯ９７３２８５３，ＷＯ９７３５８５４，ＷＯ７６０９７３６９０５，ＷＯ９７４３２８８，ＷＯ９７４４０３６，ＷＯ９７４４３２２，ＷＯ９７４７６０４，ＷＯ９７４８６９７，ＷＯ９８０４５３４，ＷＯ９８０５３２７，ＷＯ９８０６６９２，ＷＯ９８０６７０４，ＷＯ９８０７７１５，ＷＯ９８０８８２８，ＷＯ９８０８８３０，ＷＯ９８０８８４１，ＷＯ９８０８８４４，ＷＯ９８０９９４６，ＷＯ９８０９９６１，ＷＯ９８１１１１３，ＷＯ９８１４４４８，ＷＯ９８１８７９６，ＷＯ９８２１２０８，ＷＯ９８２２４５３，ＷＯ９８４５２６８，ＷＯ９８５５４８１，ＷＯ９８５６７５６，ＷＯ９９０５１１１，ＷＯ９９０５１１２，ＷＯ９５０５１１３，ＷＯ９９０６４０４，ＷＯ９９１８０９５，ＷＯ７６５９５０１３３８，ＷＯ９６０３３９９，ＷＯ９６３６６２５，ＷＯ９６３６６２６，ＷＯ９７３５８５４，ＷＯ９８２１２０８，ＷＯ９８３１６７４，ＷＯ９８４０３８２，ＷＯ９８５５４８１，ＷＯ９９０５１１１，ＷＯ９９０５１１２，ＷＯ９９０５１１３，ＷＯ９９３１０７１及びＷＯ９９３１０９０において説明されている。このような物質のいずれかは、本発明の関係においてＰＤＥ４阻害組成物として使用することができる。優れた経口的な利用可能性を有する物質は特に好ましい。
【００５４】
ＰＤＥ４のこれらの阻害剤は、ＰＤＥ阻害剤の投与に通常利用されるいずれかの経路を通して投与することができる。典型的には、これらの化学薬剤は経口投与のために処方される。タブレットは、５０μｇ；１００μｇ；２００μｇ；２５０μｇ；３００μｇ；４００μｇ；４５０μｇ；５００μｇを含んで成るように処方される。現在、ロフルミラストは、経口投与のために、約４００μｇ／日の用量での肺の適応のために開発されている。また、このような用量は、本発明の関係において有用となりうる。ＰＤＥ４阻害剤は、対象に対して、２００μｇ／日；３００μｇ／日；４００μｇ／日；５００μｇ／日、又は１〜５ｍｇ／日の１日の用量において投与される。典型的には、患者は、処置の過程において１００μｇ／日と同じ程度少量を受けてもよい。当然に、対象は個別化された必要性に従い、より多い又はより少ないＰＤＥ４阻害剤を受けることができることが理解されるべきである。典型的には、１００ｍｇ／日以上の用量は避けるべきである。ＰＤＥ４阻害剤は、単一用量において送達されてもよく、あるいは与えられた期間にわたり複数用量において細分化し、投与することができる。当該阻害剤を含有する通常のタブレットの投与は、１日あたり１回、２回、３回、又はそれ以上としてよい。また、経口投与が好ましい一方で、他の投与経路を通して同程度の用量を投与することができることを理解するべきである。
【００５５】
シルデナフィルは、ＰＤＥ４阻害剤の処方及び投与経路としての追加的なガイダンスを供することができる医薬的に認可されたＰＤＥ５阻害剤である(例えば、PDRTM 57th Ed. ページ 2653-2656 を参照のこと)。処置プロトコルのために、当業者は、当該医薬的なＰＤＥ阻害剤のために使用されるガイドラインを使用することができる。他のＰＤＥ５、並びにＰＤＥ１阻害剤は本発明において有用となりうる。このような阻害剤は、"Inhibitors of PDE Enzymes in Infertility" と題された米国特許第６０／４７０，４３４号及び本発明の卵胞の成熟法において使用することができる排卵の誘引とするためのＰＤＥ３／４阻害剤の多様性を説明している"Methods of Inducing Ovulation"と題された米国特許出願第１０／０１４，８１２号（米国特許公報第２００２０１０３１０６，引用としてその全体において本明細書に組み入れられている)において説明されている。本発明の方法は、卵胞の成熟を増加する方法を誘導し、そして排卵の誘発方法とは異なることに注意するべきである。追加的な組成物は、ＰＣＴ／ＥＰ０１／１４７３０において説明されている。
【００５６】
本明細書において議論される治療と併用して有用となることができる典型的な阻害剤は、制限されることなく、５−［２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）；ザプリナスト；ジピリマドール；５−（２−エトキシ−５−モルホリノアセチルフェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−２０ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシエトキシ）ピリジ−ｎ−３−イル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；（＋）−３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシ−１（Ｒ）−メチルエトキシ）ピリジン−３−イル］−２−メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−［２−メトキシエチル］−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−イソ−ブトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−（ｌ−メチルピペリジン−４−イル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−フェニル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−（５−アセチル−２−プロポキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（ｌ−イソプロピル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−イソ−ブトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−フェニル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−（５−アセチル−２−ブトキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（１−エチル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（−３，４−メチレンジオキシフェニル）ピラジノ［２’，ｌ’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（タダラフィル；ＩＣ−３５１），即ち、公表された国際出願ＷＯ９５／１９９７８の実施例７８及び９５の化合物、並びにその実施例１、３、７及び８の化合物；２−［２−エトキシ−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル−１−スルホニル）−フェニル］−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−オン（バルデナフィル）；公表された国際出願Ｗ０９３／０７１２４の実施例１１の化合物（ＥＩＳＡＩ）；Ｒｏｔｅｌｌａ ＤＰ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０００，４３，１２５７由来の化合物３及び１４；４−ブロモ−５−（ピリジルメチルアミノ）−６−［３−（４−クロロフェニル）−プロポキシ］−３（２Ｈ）ピリダジノン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソル−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キノゾリニル］−４−ピペリジン−カルボン酸，モノナトリウム塩；（＋）−ｃｉｓ−５，６ａ，７，９，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２−［４−（トリフルオロメチル）−フェニルメチル−５−メチル−シクロペント−［４，５］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）オン；フラジオシリン；ｃｉｓ−２−ヘキシル−５−メチル−３，４，５，６ａ，７，８，９，９ａ−オクタヒドロシクロペント［４，５］−イミダゾ［２−，１−ｂ］プリン−４−オン；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；４−ブロモ−５−（３−ピリジルメチルアミノ）−６−（３−（４−クロロフェニル）プロポキシ）−３−（２Ｈ）ピリダジノン；１−メチル−５（５−モルホリノアセチル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ（４，３−ｄ）ピリミジン−７−オン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソル−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キナゾリニル］−４−ピペリジンカルボン酸，モノナトリウム塩；ファーマプロジェクトＮｏ．４５１６（Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）；ファーマプロジェクトＮｏ．５０５１（Ｂａｙｅｒ）；ファーマプロジェクトＮｏ．５０６４（ＫｙｏｗａＨａｋｋｏ；ＷＯ９６／２６９４０を参照のこと）；ファーマプロジェクトＮｏ．５０６９（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｐｌｏｕｇｈ）；ＧＦ−１９６９６０（Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）；Ｅ−８０１０及びＥ−４０１０（Ｅｉｓａｉ）；Ｂａｙ−３８−３０４５＆Ｂａｙ−３８−９４５６（Ｂａｙｅｒ），ビンポセチン（Ｒｉｃｈｔｅｒ Ｇｉｄｅｏｎ）；ＳＣＨ−５１８６６（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ），ＳＣＨ−５９４９８，（６ａＲ，９ａＳ）−２−（ビフェニルイルメチル）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ−［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）−オン；５’−メチル−２’（ビフェニルイルメチル）−３’−（フェニルメチル）スピロ［シクロペンタン−１，７’（８’Ｈ）−［３Ｈ］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン］−４（５’Ｈ）−オン；（６ａＲ，９ａＳ）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−２−（フェニルエチニル）−３−（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ［２，１−ｂ］−プリン−４（３Ｈ）−オン；ジピリダモール；ＡＷＤ−１２−１７１及びＡＷＤ−１２−２１７（ＡＳＴＡ Ｍｅｄｉｃａ），ＢＭＳ−３４１４００（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｅｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ），ＵＫ−３４３，６６４（Ｐｆｉｚｅｒ），５Ｅ−３６２３，５Ｅ−３５６９，５Ｅ−３６５７，Ｅ４０２１（Ｅｉｓａｉ），ＫＳ５０５ａ（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ），ＹＣ−１（Ｙｕｎｇ Ｓｈｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ），ＩＤＤＢレファレンスナンバー３２３９５１（Ｂａｙｅｒ），ＷＩＮ−６１６９１（Ｓａｎｏｆｉ Ｗｉｎｔｈｒｏｐ），ＦＲ２２６８０７（Ｆｕｊｉｓａｗａ），ＩＤＤＢレファレンス４６１３１７，４６２５０３，４６１３２１，４６１３２４，４６６１４６（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）；ピリジン−４−イルメチル３−（１，３−ベンゾヂオキソル−５−イル）−９−オキソ−１，３，４，テトラヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］キノリン−２−カルボキシレート：
【化２】
Ｊｉａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４６：４４１−４４４（２００３）の表１に挙げられる化合物、特に化合物２０ｂ，２０ｅ，２０ｆ，２０ｌ，２０ｏ，２０ｐ，（−）−２０ｑ，２０ｔ，２０ｕ，２０ｖ，２０ｗ及び２６ａを含む。
【００５７】
特に好ましい、ＰＤＥ阻害剤は、シルデナフィル及びザプリナスト、ジピリダモール、及び化合物番号３１及び３３である(６ａＲ，９ａＳ）−２−（ビフェニルメチル）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ−［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）−オン；及び５’−メチル−２７（ビフェニルメチル）−３７−（フェニルメチル）スピロ［シクロペンタン−１，７７（８７Ｈ）−［３Ｈ]イミダゾ［２，１−ｂ］プリン］−４（５’Ｈ）−オンである。
【００５８】
本発明の方法において使用することができるＰＤＥ阻害剤を含んで成る医薬組成物は、ＰＤＥ阻害剤が意図する目的を達成するための有効量において含まれる全ての組成物を含む。更に、医薬組成物は医薬的に使用することができる当該活性化合物の調製剤への加工を促進する賦形剤及び補助剤を含んで成る適当な医薬的に受容可能な担体を含んでよい。適当な医薬的に受容可能な媒体は当業界において周知であり、例えば、当該分野におけるGennaro等の標準的な関連テキストにおいて説明されている。Gennaro, et al., of Remington's Pharmaceutical Sciences, Part 8, 20th Ed., Merck Publishing Company, Easton, Pennsylvania (2000)。医薬的に受容可能な媒体は、ＰＤＥ阻害剤の投与方法並びに溶解性及び安定性に関連して慣習的に選択することができる。例えば、血管内投与のための製剤は、バッファー希釈剤及び他の適当な添加物を含むことができる無菌水溶液を含んでよい。薬剤送達のための生体適合物質及び他のポリマーの使用、並びに特定の投与方法を確認するための異なる技術及び方法は、文献において開示されている(Luo, et al., Exp. Opifa. Ther. Patents, 11 : 1395-1410 (2001); Cleland, et al., 880 Curr. Opina. Bioteclanol., 12: 212-9 (2001))。
【００５９】
上記ＰＤＥ阻害剤は、意図される目的を達成するいずれかの方法により投与することができる。例えば、投与は、制限されることなく、皮下、血管内、皮内、筋肉内、腹腔内、脳内、鞘内、鼻腔内、経口、直腸、経皮内、鼻腔内、又は頬側を含むいくつかの異なる経路により投与することができる。好ましくはＰＤＥ阻害剤は経口的に投与される。
【００６０】
非経口的な投与は、ボーラス注射により、又は漸進的パーフュージョンにより投与することができる。投与される薬用量は、レシピエントの年齢、健康、及び体重、存在するならば、併用している治療、治療の頻度、及び所望される効果の性質に依存するであろう。各治療に必要とされる総用量は、複数用量により又は単一用量において投与することができる。
【００６１】
非経口的な投与の調製物は、当業界において既知な補助的な薬剤又は賦形剤を含むことができる無菌水性又は非水性溶液、懸濁液、及び乳濁液を含む。非経口投与のための適当な製剤は、水溶性形態、例えば、水溶性塩における活性化合物の水溶液を含む。更に、油性の注射用製剤としての活性化合物の懸濁液も投与することができる。
【００６２】
意図される送達の経路に依存して、ＰＤＥ阻害剤は、注射用又は経口用組成物として処方することができる。経口投与のための組成物は、膨張性水溶液若しくは懸濁液、又は膨張性粉末の形態をとることができる。より一般的には、しかしながら、当該組成物は、正確な投薬を促進するための単位薬用量形態において存在する。「単位薬用量形態」の語は、ヒト対象及び他の哺乳類のための単位薬用量として適当な物理的に分離した単位を意味し、各単位は適当な医薬賦形剤に関連した所望する治療的効果を生じるために計算された活性物質の予定された量を含む。典型的な単位薬用量形態は、あらかじめ充填された、あらかじめ測定された液体組成物又は固形組成物の場合におけるピル、タブレット、カプセル等のアンプル又はシリンジを含む。このような組成物において、ＰＤＥ阻害剤は所望する投薬形態を形成するために役立つ多様な媒体又は担体及び促進剤である残部を伴う通常微量な組成物である（約０．１〜約５０重量％、好ましくは約１〜約４０重量％）。
【００６３】
経口投与に適当な液体形態は、バッファー、懸濁剤、分散剤、着色料、芳香剤等を伴う適当な水性又は非水性媒体を含んでよい。固形形態は、例えば、以下のいずれかの成分、又は同様な特性の化合物を含んでよい：結合剤、例えば、微結晶性セルロース、トラガカントゴム、；賦形剤、例えば、スターチ又はラクトース；崩壊剤、例えば、アルギニン酸、プリモゲル、又はコーンスターチ；潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム；流動促進剤（glidant）、例えば、コロイド性シリコンジオキシド；甘味剤、例えば、スクロース又はサッカリン；又は芳香剤、例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、又はオレンジフレーバー。
【００６４】
注射用組成物は、典型的には、注射用無菌生理食塩水、又はリン酸バッファー生理食塩水、又は当業界に既知な他の注射用担体に基づく。
【００６５】
経口投与又は注射用組成物のための上述の化合物は、単なる例示的なものである。更なる物質、並びに技術等は、当業者に既知である(Gennaro et al., 2000)。
【００６６】
また、ＰＤＥ阻害剤は持続性の遊離形態において又は持続性の遊離薬物送達系から投与することができる。また、代表的な持続性の遊離物質の説明は当業者に既知である(Karsa, et al. (ed.), Encapsulation and Controlled Release, Springer Verlag (1993); Yacobi, et al., Oral Sustained Release Formulations : Design and Evaluation, Pergamon Press (1998))。
【００６７】
「有効量」は、外因性ＦＳＨ又はＦＳＨ置換を伴う又は伴わない卵胞の成長を促進することができるＰＤＥ阻害剤の濃度を達成するために十分な量を意味する。このような濃度は当業者により慣習的に測定することができる。実際に投与される化合物の量は、典型的には、治療すべき状態、投与経路の選択、実際に投与される化合物、個々の患者の年齢、体重、及び応答、患者の内因性ＦＳＨ濃度等を含む関連する状況に明るい医師により決定されるであろう。
【００６８】
「医薬的に受容可能」の表現は、活性成分の生理活性の有効性に実質的に影響せず、且つ投与される宿主に対して毒性でないいかなる担体をも含むことを意味する。例えば、非経口投与のために、上記の活性成分は、媒体、例えば、生理食塩水、血清アルブミン、及びリンゲル液における注射のために単一の薬用量形態において処方することができる。
【００６９】
更に、また、医薬的に受容可能な担体、ＰＤＥ阻害剤を含んで成る組成物は、微量な添加剤、例えば、安定化剤、賦形剤、バッファー、及び防腐剤を含んで成ってよい。
【００７０】
当業者は、"Inhibitors of PDE Enzymes in Infertility. "と題される米国仮出願第６０／４７０，４３４を参照する。上記明細書において、試験管内における受精のために排卵を誘発し、そして卵巣過剰刺激を制御するＰＤＥ１及び／又はＰＤＥ５阻害剤の使用の方法及び組成物が記載されている。上記の全ての文は、阻害剤及びこのような阻害剤の投与のためのプロトコルを示す本明細書中に引用として組み入れられている。開示されているいずれかの阻害剤は本発明のプロトコルにおいて使用することができる。
【００７１】
本明細書において使用することができる特に好ましいＰＤＥ４阻害剤は、制限されることなく、ロフルミラスト（当該化合物の製造のための方法及び組成は、Ｗ０９５０１３３８において見つけることができる）、ピクラミラスト（同製造方法は、J. Med. 955 Chem. 37: 1696-1703 (1994) において説明されている）、アリフロ／シロミラスト（同製造方法は、J. Med. Chem. 41: 821-835 (1998) において説明されている）、メソプラム（洞製造方法はＷＯ９７／５５６１において説明されている）、フィラミナスト（同製造方法は、ＥＰ０４７０ ８０５ Ｂ１において説明されている）を含む。
卵胞の成熟を誘導するためのＦＳＨ及びホスホジエステラーゼ阻害剤の組み合わせの送達
【００７２】
ある観点において、本発明の方法はＰＤＥ４阻害剤と卵胞成熟を増加するための組成物を含んで成るＦＳＨの併用を意図する。しかしながら、ＦＳＨ／ＰＤＥ４の組み合わせの送達治療に専ら基づく治療に追加して、本発明の方法はまた、本発明の治療方法の卵胞成熟の効果を増強するであろう第三組成物を伴う併用治療を意図する。このような第三組成物は、二次ＰＤＥ４阻害剤、又はＰＤＥ４阻害剤に特異的でないＰＤＥの二次阻害剤であってよい。例えば、本発明の方法は、更にＰＤＥ１及び／又はＰＤＥ５阻害剤の投与を含むことができることが予想される。更に、ＬＨ及び／又はｈＣＧもまた、本発明の方法において供されるであろう。有益な治療は、ＰＤＥ４阻害剤単独の投与により達成することができることが理解されるべきである。
【００７３】
本明細書において意図される併用治療における適当な治療結果を達成するために、即ち、処置される哺乳類の排卵性卵母細胞の数の増加を達成するために、ＦＳＨ及びＰＤＥ４阻害剤組成物が対象に一般的に投与されるであろう。これらの組成物は、所望する治療的結果を生じるために有効な併用量として供されるであろう。典型的には、上述のように、ＦＳＨ処置は、７〜１２日間の毎日の投与である。ＰＤＥ阻害剤の投与は、ＦＳＨ治療と同時に投与することができる。このような場合、ＰＤＥ阻害剤及びＦＳＨは混合物として同じバイアル中に入れることができる。あるいは、ＰＤＥ４阻害剤組成物は、ＦＳＨ治療の前又は後に採ることができる。更に、ＦＳＨ治療が、好ましくは月経周期のいずれかにおける７〜１２日間のみ投与されるべきである一方、投与が有害な副作用を生じない限り、当該周期中ＰＤＥ阻害剤を継続して投与できる。あるいは、ＰＤＥ阻害剤は、ＦＳＨ治療よりも低頻度で投与することができる。
【００７４】
第三治療剤が投与される他の態様において、当該第三薬剤は、ＦＳＨ及びＰＤＥ４阻害剤治療組成物の一方、他方、又は両方と同時に再投与することができ、あるいは、ＦＳＨ／ＰＤＥ４治療の前又は後に投与することができる。
【００７５】
２又は複数の治療組成物が別々に投与される全ての態様において、一般的に、ＰＤＥ４型薬剤及びＦＳＨ投与及び／又は第三薬剤は、細胞において更に有利な併用効果を発揮することができる有意な期間が、各送達の期間中で失効しないことを補償する。このような例において、各約１２〜２４時間以内に、そしてより好ましくは各約６〜１２時間以内に全ての３つの組成物を投与することが意図され、約１２時間のみの遅延時間が最も好ましい。いくつかの状況において、処置時間を有意に延長することが望ましいであろうが、それぞれの投与の間、数日間（２、３、４、５、６、又は７）が経過する。同様に全てのプロトコルが繰り返される場合、持続周期を通してプロトコルを繰り返すことが望まれ、医師は本発明の２つの処置プロトコル間の１、２、３、４、又はそれ以上の周期の経過を許容することが望ましいことを決定できる。
患者の選択及びモニタリング
【００７６】
本発明の治療を受ける患者は、好ましくは２０〜４５歳の女性の患者である。本発明の方法のための患者の選択は、上述の治療に基づくＦＳＨの使用のためのＰＤＲTMエントリーにおいて説明されるものと同じパラメーターを利用することができる。例えば、処置の前に、患者を骨盤解剖の評価を含む婦人科検診及び内分泌評価にかける。原発性卵巣不全は、基礎ゴナドトロピンレベルを測定することにより除外されるべきであり、そして患者が妊娠していないことを保証するべきである。
【００７７】
本発明の処置療法を通して、患者は、ＯＨＳＳの徴候ためにモニターするための治療の前、間、及び後に評価するべきである。ＯＨＳＳの徴候は、制限されることなく、腹痛、腹腔膨張、悪心を含む消化管の症状、下痢、重篤な卵巣拡大、体重増加、呼吸困難、及び乏尿を含む。臨床的に、当該症状は、血液量減少、水胸急性肺障害、及び血栓塞栓症において顕著である。ＯＨＳＳの症状がＦＳＨに基づく治療の投与を通して、又はいずれかの他の薬剤が卵胞成熟の刺激のために投与される間にＯＨＳＳの症状が発生する場合、当該投与を終了するべきであり、そして対象は、入院又は他の処置が必要であるかを決定するために医学的監督下に置くべきである。ＦＳＨに基づく治療をモニターするために使用できる他の症状は、膣細胞学における変化、膣粘膜の外観及び容積、頚管粘液の牽糸性及びシダ状結晶形成を含む。これらの後半の症状は、治療のエストロゲンの影響を示し、そしてＦＳＨ投与がエストロゲン生成物を刺激するのでモニターするべきである。好ましくはこれらのエストロゲンの影響は、卵胞の発達のより直接的な測定、例えば、血清中エストラジオールの測定及び超音波検査と併用してモニターするべきである。
【００７８】
妊娠以外の排卵の臨床的な徴候は、プロゲステロン生成物の直接的又は間接的な測定のいずれかを通して得ることができる。このような指標は以下を含む：基礎体温の上昇、血清中のプロゲステロンの増加、体温変化による月経。プロゲステロン生成物の上記指標と併用して、超音波検査の卵巣の可視化は、排卵が生じているかを測定することを補助するために使用することができる。このような超音波検査モニタリングは、盲嚢における体液、卵巣紅斑、及び崩壊した卵胞の存在を評価することを含んでよい。超音波検査測定はまた、卵巣がＯＨＳＳにおいて拡張しているか否かを決定することにおいて補助するであろう。
排卵を誘発するためのＰＤＥの阻害剤の使用
【００７９】
ＰＤＥ阻害剤は、好ましくは、刺激期のおよそ２日目〜およそ１０日目における、より好ましくはおよそ３日目〜およそ８日目患者に対して投与され、好ましくは月経周期のおよそ２日目又は３日目に開始する。ＯＩのために、投与は、好ましくは、平均直径が１６〜１８ｍｍ以上である卵胞が１つ存在するまで続けられる（そして好ましくは、１４ｍｍ以上の平均直径の卵胞が２つ以下）。ＰＤＥ阻害剤の投与は好ましくは、排卵期を開始するためにｈＣＧを投与する日において終了する。
【００８０】
排卵誘発のために、ＰＤＥ阻害剤は単独で投与することができる（内因性ＦＳＨと作用する）、又はそれはＦＳＨ若しくはＦＳＨ活性を有する薬剤と併用して投与することができ、又は内因性ＦＳＨ放出を刺激する。他の卵胞刺激剤との組み合わせにおけるＰＤＥ阻害剤の投与は、同時に、別々に、又は逐次的にしてもよい。ＦＳＨ活性を有する薬剤は、組み換え及び尿ＦＳＨ、並びに様々な量のＬＨ、例えば、ｈＭＧと混合したＦＳＨもまた含む。ＦＳＨ活性を有する薬剤は、ＦＳＨの類体、例えば、ＣＴＰ−ＦＳＨ[野生型α−サブユニット及びｈＣＧのカルボキシ末端ペプチドがＦＳＨのβ−サブユニットのＣ−末端に融合しているハイブリッドβ−サブユニットから成る長時間作用性改変組み換えＦＳＨ、LaPolt, et al., Endocrinology, 131: 2514-2520 (1992) ; 又はKlein, et al. , Human Reprod. 18: 50-56 (2003)を参照のこと]を含む。また、以下の配列から成る一本鎖ＦＳＨ−ＣＴＰ、一本鎖分子を含む（Ｎ−末端〜Ｃ−末端）：。
【表１】
Klein et al., Fertility & Sterility ; 77: 1248-1255 (2002)において説明されるように、表中、βＦＳＨはＦＳＨのβ−サブユニットを示し、βｈＣＧ ＣＴＰ（１１３〜１４５）はｈＣＧのカルボキシ末端ペプチドを示し、そしてαＦＳＨはＦＳＨのα−サブユニットを示す。内因性ＦＳＨ生成物を刺激し又は誘導し、あるいは放出する薬剤は、クエン酸クロミフェン及びアロマターゼ阻害剤、例えば、レトロゾール、ＹＭ−５１１、アナストロゾール、又はファドロゾールを含む。ＯＩにおけるこれらの分子の使用は、例えば、ＷＯ０２／０８３２４１及びＷＯ０２／０８３２３９において開示される。
【００８１】
ＯＩのための好ましい療法において、患者はＰＤＥ阻害剤、好ましくはＰＤＥ１及び／又は５阻害剤、より好ましくは選択的ＰＤＥ１及び／又は５阻害剤、最も好ましくは選択的ＰＤＥ１阻害剤を投与され、好ましくは月経後およそ３日目に開始する。これは刺激期の開始を特徴付ける。ＰＤＥ阻害剤の投与は、好ましくは毎日において継続されるが、１日に２回、又は一日おきに、又は単一用量において投与してもよい。卵巣の発達の進行は、超音波によりモニターすることができる。卵胞成長は、平均直径が約１６〜１８ｍｍ以上である１つの卵胞が存在する場合、そして好ましくは排卵の誘引となる１６ｍｍ以上の平均直径を有する２以下の卵胞が存在する場合に、ＬＨ−活性を有する薬剤、例えば、ｈＣＧ（通常、５，０００〜１０，０００ＩＵ）、ＬＨ（２５，０００〜７０，０００ＩＵ）、又はＰＤＥ ＩＶ阻害剤（公表された米国特許第出願第２００２／０１０３１０６１０８０Ａｌにおいて説明されている）を使用して、十分に判断される（刺激期を終わらせ、そして波乱期を開始する）。それから患者は、排卵の誘引点の投与から２４〜３６時間後に性交を持つように指示される。あるいは受精を子宮内精子注入（ＩＵＩ）により行ってもよい。
【００８２】
非−刺激及び非−下方調節された（自然周期）血清中のＦＳＨレベル以下、又は約２ ＩＵ／リットル（月経時又は約２日後に測定した）を有する患者において、排卵誘発は、好ましくは、ＦＳＨ又はＦＳＨ活性を有する薬剤、又はＦＳＨの内因性放出を刺激する薬剤との組み合わせにおけるＰＤＥ阻害剤を使用して行われる。必要とされるＦＳＨの用量は、８日の刺激における約１６ｍｍ以上の平均直径を有する卵胞の数に関して、同じ又はより優れた応答を達成するために、ＰＤＥ阻害剤を受けていない患者に必要とされるものよりも低いだろう。
【００８３】
ＦＳＨ又は卵胞−刺激活性を有する薬剤、又はＦＳＨの内因性放出を刺激する薬剤は、ＯＩにおいて使用され、ＦＳＨの投与はＰＤＥ阻害剤の投与の前後に開始してよく、又は当該２つの薬剤は同時に投与開始することができる。好ましくはＦＳＨの投与は、ＰＤＥ阻害剤の投与と同時に、又はＰＤＥ阻害剤の投与のおよそ１日前に開始する。刺激期は、どちらが最初であろうと、又はＰＤＥ阻害剤のみが使用されたとしても、投与開始の日においてＦＳＨ又はＰＤＥ阻害剤の最初の投与で開始する。
調節された卵巣過剰刺激のためのＰＤＥ阻害剤の使用
【００８４】
ＡＲＴのために調節された卵巣過剰刺激のために、本発明に従い、内因性ＦＳＨレベルを増強するために外因性ＦＳＨ無しにＰＤＥ阻害剤を使用することができ（又は卵胞−刺激活性を有する薬剤）、調節された卵巣過剰刺激、及び複数の排卵性卵胞の発達をもたらす。患者が、約５ＩＵ／リットル又はそれ以下の非−刺激及び非−下方調節（自然周期）の血清中のＦＳＨレベルを有する場合（月経時又はおよそ２日後に測定された）、ＣＯＨは、好ましくは、例えば、上述のようなＦＳＨ又は卵胞−刺激活性を有する薬剤、又はＦＳＨの内因性放出を刺激する薬剤と併用してＰＤＥ阻害剤を使用して行われるべきである。ＦＳＨ又は卵胞−刺激活性を有する薬剤、又はＦＳＨの内因性放出を刺激する薬剤が、ＣＯＨにおいて使用される場合、ＦＳＨの投与は、ＰＤＥ阻害剤の投与の前又は後に開始してよく、又は２つの薬剤は同時に開始して投与することができる。好ましくはＦＳＨの投与は、ＰＤＥ阻害剤の投与と同時に、又はＰＤＥ阻害剤の投与のおよそ１日前に開始する。刺激期は、どちらが最初であろうと、又はＰＤＥ阻害剤のみが使用されたとしても、投与開始の日においてＦＳＨ又はＰＤＥ阻害剤の最初の投与で開始する。
【００８５】
ＣＯＨのための好ましい療法において、患者は先ず、月経周期の黄体期（通常、月経周期のおよそ２０日目）において開始するゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）アゴニストの投与により内因性黄体形成ホルモン（ＬＨ）を抑制するために下方調節される。卵巣機能の抑制は通常、ＧｎＲＨアゴニストで８〜２１日間かかり、そして、ＬＨ又はエストラジオールレベルをモニタリングすることによりモニターすることができる（ＬＨ＜５ＩＵ／Ｌ、Ｅ2＜５０ｐｇ／ｍｌは通常適切な抑制を示す）。ＧｎＲＨアゴニストは、例えば、ブセレリン、ゴセレリン、リュープロレリン、トリプトレリン、及びナファレリンを含む。下方調節は、卵胞の発達がＰＤＥ阻害剤、好ましくはＰＤＥ１及び／又は５阻害剤、より好ましくは選択的ＰＤＥ１及び／又は５阻害剤、より好ましくはＰＤＥ１阻害剤、最も好ましくは選択的ＰＤＥ１阻害剤を使用して刺激される刺激期において行われる。当該ＰＤＥ阻害剤は、単独で、又は卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）若しくはＦＳＨ活性を有する薬剤、若しくは内因性ＦＳＨ放出を刺激する薬剤の投与と併用して使用することができる。どちらが最初に開始したとしても、ＰＤＥ阻害剤又はＦＳＨで投与を開始した日が刺激期の開始として定義する。ＣＯＨのためにＦＳＨが単独で使用される一方、ＰＤＥ阻害剤の使用は同じ患者に使用するよりも低用量のＦＳＨ（又は当量）を許容し、刺激の８日目において約１６ｍｍ以上の平均直径を有する卵胞の数に関して、同じ又は優れた卵胞応答を達成する。好ましくは、ＰＤＥ阻害剤が投与される場合に使用されるＦＳＨの用量は、同じ卵胞応答を達成するためにＰＤＥ阻害剤を伴わない同じ患者において必要とされるＦＳＨの７５％以下であり、より好ましくはＰＤＥ阻害剤を伴わない同じ患者において必要とされるＦＳＨの用量の約５０％以下であり、最も好ましくは、ＦＳＨの用量は、ＰＤＥ阻害剤を伴わない同じ患者において必要とされるＦＳＨの用量の約３０％以下である。
【００８６】
ＰＤＥ阻害剤が投与される場合、ＦＳＨの用量は、好ましくは１日に約２５〜６００ＩＵ ＦＳＨであり、好ましくは１日に約５０〜４５０ＩＵであり、最も好ましくは１日に約５０〜３００ＩＵである。外因性ＦＳＨ（又は相当物）の不存在下又は存在下におけるＰＤＥ阻害剤の刺激は、好ましくは卵胞成長が十分に判断されるまで、即ち、約１６ｍｍ以上の平均直径を有する少なくとも３つの卵胞が存在するまで続けられ（好ましくは１つの１８ｍｍ）、一方ＧｎＲＨアンタゴニストの投与は続けられる。ＯＩのために説明したとおり、ＬＨ活性を有する薬剤の排卵誘引性用量（例えば、５，０００〜１０，０００ＩＵのｈＣＧ）をそれから投与する。卵母細胞の回収は、排卵の誘引後３６〜３８時間にされる。卵母細胞は通常吸引により排卵前期の卵胞から回収される。卵母細胞は類別され、試験管内で受精され、そして胚は収集から約７２〜９６時間後に子宮に移植するために選択される。
【００８７】
ＣＯＨのための他の好ましい療法において、ＧｎＲＨアンタゴニストが使用される。ＧｎＲＨアゴニストの投与無しに、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）又はＦＳＨ活性を有する薬剤又は内因性ＦＳＨ放出を刺激する薬剤と併用して、ＰＤＥ阻害剤、好ましくはＰＤＥ１又は５阻害剤、より好ましくは選択的ＰＤＥ１及び／又は５阻害剤、より好ましくはＰＤＥ１阻害剤、最も好ましくは選択的ＰＤＥ１阻害剤により通常自発性又は誘発性月経後、１、２、又は３日目に卵胞刺激が開始される。それから、ＧｎＲＨ−アンタゴニストは、月経後およそ６日目において投与が開始される。ＧｎＲＨ−アンタゴニストは、例えば、セトロレリックス、Ｎａｌ−Ｇｌｕ、アンチド、ガニレリックス、アザリンＢ及びアンタレリックスを含む。ＰＤＥ阻害剤及びＦＳＨ（又は相当物）での刺激は、約１６ｍｍ以上の平均直径を有する少なくとも３つの卵胞（好ましくは１つの１８ｍｍ）が存在するまで続けられる。それからＯＩのために説明されるように、排卵誘引用量のＬＨ−活性を有する薬剤が投与される。当該ＧｎＲＨアンタゴニストは排卵誘引の日まで投与される。
【００８８】
ＣＯＨのための他の好ましい療法において、卵胞刺激は、好ましくは月経後３〜６日目において、ＰＤＥ阻害剤、好ましくはＰＤＥ１及び／又は５阻害剤、より好ましくは選択的ＰＤＥ１及び／又は５阻害剤、より好ましくはＰＤＥ１阻害剤、最も好ましくは選択的ＰＤＥ１阻害剤と併用してアロマターゼ阻害剤の投与により開始される。およそ６日目において、ＧｎＲＨアンタゴニストが与えられ、アロマターゼ阻害剤を中止し、そしてＦＳＨの注射を開始する。ＰＤＥ阻害剤、ＦＳＨ及びＧｎＲＨアンタゴニストの投与は、排卵誘引用量のｈＣＧが投与されるまで続けられる。
試験管内における受精のための卵母細胞の使用
【００８９】
本発明の方法は、ｈＣＧ排卵性卵母細胞を産出するために使用される。併用されるＰＤＥ４阻害剤／ＦＳＨホルモン処置は、下垂体の下方調節を伴う又は伴わない、あるいはＧｎＲＨアンタゴニストの使用を伴う又は伴わない、及びｈＣＧの使用を伴う又は伴わない短期又は長期の処置であってよい。当該併用されるＰＤＥ４阻害剤／ＦＳＨホルモン治療は、卵胞が中程度から完全な大きさの卵胞に成熟するまで投与される（１０〜２５ｍｍ、好ましくは１６〜２０ｍｍのサイズの卵胞）。このような卵胞由来の卵母細胞は、内因性ゴナドトロピンホルモン生成物が抑制されない場合には患者自身の月経周期由来のｈＣＧサージを通して、あるいは患者に対して外因性のｈＣＧ注射（例えば、５，０００〜１０，０００ユニット）を供することにより生体内で排卵することを許容することができる。
【００９０】
あるいは、中程度から完全な大きさの卵胞（大きさ１０〜２５ｍｍ、好ましくは１６〜２０ｍｍの卵胞）は、試験管内で受精するために超音波誘導下における吸引により回収される。吸引された液体は、卵丘卵母細胞複合体（ＣＯＣ）を診査され、そして立体顕微鏡（胚フィルターをの使用を伴う又は伴わない）で確認し、ＣＯＣを培養液中に置く。広範で多様な卵母細胞培養培地又は培地成分は当業者に既知である。このような培地はヒト結成アルブミン（ＨＳＡ）を含んでもよいが、必ず含まなければならないわけではない。
【００９１】
試験管内における培養後又はその間、卵母細胞は慣習的なＩＶＦにより、又は細胞質内血清注射（ＩＣＳＩ）により、又は受精接合体に導入するいずれかの他の慣習的な受精方法により受精させることができる。発達している胚は、受精後１〜６日目、好ましくは２〜３日目に、単一卵移植又は複数卵移植のいずれかとして移植することができる。
【００９２】
患者は、適当な受容性の子宮内膜系統を刺激及び維持するために個々に設計されたプロトコルにおいて卵移植の前後においてプロゲステロン及び／又はエストロゲン治療を受けることができる。
【００９３】
本発明の方法は、例えば、上述のようなＩＶＦ手順において使用される排卵性卵母細胞の増加数を産出する。しかしながら、本発明の方法は、未成熟卵母細胞の試験管内における成熟に有用となりうる。このような態様において、卵母細胞は、ゴナドトロピンの中周期サージに暴露する前に卵巣の胞状卵胞から回収され、従って未成熟又は完全には成熟していない卵母細胞として特徴づけられる。ヒト卵母細胞、並びに他の種由来の卵母細胞は、卵丘拡張をほとんど又は全く有さないことが認識されるであろうし、胚胞があり、極体がないことが認識され、そしてＩＶＦ−処置における当業者により簡単に認識されるであろう。このような処置が、補助生殖医療のための回収と言うよりは、自然受精のための単一又は優勢の卵胞の成熟を増大できる場合、本発明の治療の１つの潜在的な使用は非−ＩＶＦプロトコルにおけるＣＣ又はＦＳＨの置換に対するものであろう。
【００９４】
本明細書における多くの議論はヒトの卵胞の成熟を説明したが、本発明の方法は他の哺乳類、例えば、ペット（例えば、ネコ、イヌ、又はモルモット）；又は動物園の動物（例えば、霊長類）のＩＶＦのための卵母細胞の産出のために利用できることが意図される。更に好ましい態様において、哺乳類、好ましくは家畜、例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ミンク、ヤギ、又はヒツジは産業の一部である。最も好ましい態様において、哺乳類はヒトである。試験管内の成熟のために、未成熟卵母細胞は、受精することができる成熟卵母細胞を産出するために、試験管内においてＰＤＥ阻害剤、又はＰＤＥ阻害剤及びゴナドトロピンホルモンで処置される。
医薬組成物及びキット
【００９５】
本発明に従う投与のための医薬組成物は、少なくとも１のゴナドトロピンホルモン、好ましくは医薬的に受容可能な担体と任意的に組み合わせた医薬的に受容可能な形態おける本発明に従うＦＳＨを含んで成ってよい。これらの組成物は、これらの意図された目的を達成するいずれかの方法により投与することができる。本発明の方法を使用する卵胞の成熟の刺激ためのＦＳＨ組成物の投与のための個別的な量及び療法は、無排卵疾患の処置におけるこのような組成物の使用及び補助生殖医療におけるこれらの使用のために、Physician's Desk Reference により供されるガイダンスを使用して当業者により容易に決定することができる。上述の通り、当業者はこのような医薬関係において現在使用されているＦＳＨの量及び療法を最初に利用することができる。当該効果に対して、当業者は上述の Physician's Desk Reference における各エントリーを参照し、そしてこれらのエントリーは、薬剤、例えば、本明細書において上述したＦｅｒｔｉｎｅｘTM、Ｇｏｎａｌ ＦTM、ＢｒａｖｅｌｌｅTM等の投与のための方法及び組成物を示すために、これらのエントリーにおける引用により本明細書に組み入れられている。Physician's Desk Reference 中のこれらの各エントリーは、ＦＳＨの投与において使用することができる処方の種類、投与経路、及び治療法に関して典型的なガイダンスを供する。そこに説明されている当該プロトコル、処方、投与経路等のいずれかは、本発明における使用のために容易に修正することができる。
【００９６】
本発明の範囲における組成物は、単独で投与される場合、又はより好ましくは低用量のＦＳＨと併用して投与される場合のいずれかにおいて、動物における排卵性卵母細胞の数を刺激、誘発、あるいは増加の意図された目的を達成するための有効量において、本発明に従う少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤を含んで成る全ての組成物を含む。ＰＤＥ４阻害剤及び／又は本発明において使用される他の活性剤は、このような投与のために通常利用されるいずれかの方法により投与することができる。当業者は特に、出願に関する受胎能におけるＰＤＥ阻害剤の投与の量及び経路を説明する"Inhibitors of PDE Enzymes in Infertility"と題される米国特許出願第６０／４７０，４３４号、米国特許公報第２００２０１０３１０６号、及びＰＣＴ／ＥＰ０１／１４７３０を参照する。最も好ましくは、本発明において使用される組成物は経口的に投与される。
【００９７】
個々は変化を必要とするが、各成分の有効量の最適な範囲の決定は、当業者の範疇である。典型的なＦＳＨの薬用量は、７〜１２日間において、約５ＩＵ ＦＳＨ／日〜約７５ＩＵ ＦＳＨ／日を含んで成る。ｈｅＰＤＥ４阻害剤の典型的な用量は、約５ｍｇ／日〜約１００ｍｇ／日、又はそれ以上であってよい。継続する間、ＰＤＥ４の毎日の投与は、ＦＳＨの投与を終えると同時にＰＤＥの投与を終えることが望ましいことが予想される。当然にＦＳＨ治療が、伝統的に７〜１２日間与えられる間、本発明の文脈において、増加した卵胞の成熟の治療的な有利な結果に影響するための単一又は微低用量のＦＳＨのみが必要とされてよい。ＯＨＳＳの徴候が観察された場合には治療を中止するべきである。
【００９８】
本発明に従う組成物の適当な用量は、レシピエントの年齢、健康、及び体重、存在するならば、併用する治療、治療の頻度、及び所望する効果の性質に依存するであろうことが理解される。しかしながら、最も好ましい薬用量は、過度の実験をすることなく当業者により理解され、決定できるように個々の対象に合わせることができる。これは典型的には、標準的な用量の調節、例えば、患者が軽い体重を有する場合、当該用量を減少することを含む。
【００９９】
上述のように、各処置に必要とされる総用量は、複数用量又は単一用量において投与することができる。上記組成物は、単独で又は疾患に対する治療若しくは他の症状に対する治療と併用して投与することができる。
【０１００】
本明細書の開示から明らかなように、広範な観点において、本出願はＰＤＥ阻害剤を含有する第一組成物、及びＦＳＨを含有する第二組成物を含んで成る併用治療の臨床的な適用が意図される。従って、当該組成物は、適当な医薬組成物、即ち、このような併用治療における生体内の適用に適当な形態に処方するべきである。一般的に、これは発熱物質、並びにヒト又は動物に有害な不純物を含まないことが必須である組成物の調製を必要とするであろう。当該ＦＳＨ製剤は、本明細書を通して議論される現在入手可能なＦＳＨ調製物と同様に処方することができる。ＰＤＥ４阻害製剤は、例えば、周知なＰＤＥ５阻害剤であるＶｉａｇｒａTMと同様に処方することができる。
【０１０１】
標的部位において組成物を取り込むのに適当なそして許容する組成物を与えるために適当な塩及びバッファーを利用することが一般的に所望されるであろう。一般的に、本発明のホルモン組成物は、投与前に再構成される凍結乾燥形態において供され、そしてＰＤＥ４阻害剤組成物はおそらくタブレット形態に処方される。当該ホルモンの再構成のためのバッファー及び溶液は、投与のための本発明の水性組成物を産出するために医薬製剤と共に供することができる。このような水性組成物は、医薬的に受容可能な担体又は水性媒体において使用され、溶解され、又は分散する治療薬剤の各の有効量を含んで成るであろう。また、このような組成物は、接種材料としても適用する。「医薬的又は薬理的に受容可能」のフレーズは、動物又はヒトに投与した場合に、有害な、アレルギー性の、又は他の有害な反応を産出しない分子実体及び組成物を意味する。本明細書において使用される「医薬的に受容可能な担体」は、いずれかの及び全ての溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等を含む。医薬活性物質のためのこのような媒体及び薬剤の使用は当業界において周知である。いずれかの慣習的な媒体又は薬剤が治療組成物と不適合である範囲を除き、治療組成物におけるその使用が意図される。補充的な活性成分もまた当該組成物に組み入れることができる。
【０１０２】
本発明の活性組成物は、本明細書において議論された古典的なＦＳＨの医薬調製物、並びに当業者に既知であるこれらのものを含む。また、ＰＤＥ４阻害剤も当業者に既知である。本発明に従うこれらの組成物の投与は、標的組織がその経路を介して利用できる限り、いかなる通常の経路も介するであろう。経口投与が問題である場合、例えば、皮下、血管内、筋肉内、乳内、腹腔内、くも膜下腔内、眼内、延髄後、肺内（例えば、期間放出）、エアロゾル、舌下、経鼻、肛門、膣、又は経皮性送達による、又は特定の部位での外科的移植による最も一般的な投与経路を使用することもできる。治療は、期間にわたって、単一用量又は複数用量から成ってよい。
【０１０３】
活性化合物は、海面活性剤、例えば、ヒドロキシプロピルセルロースと適当に混合した水中の遊離塩基又は医薬的に受容可能な塩の溶液としての投与のために調製することができる。また、分散剤もグリセロール、液体ポリエチレングリコール、及びこれらの混合体中、及び油中で調製することができる。貯蔵及び使用の通常の条件下において、これらの調製物は、微生物の成長を防止するために防腐剤を含む。
【０１０４】
注射の使用に適当な医薬形態は、無菌の注射用溶液又は分散剤の即席の使用のための無菌水性溶液又は分散剤及び無菌粉末を含む。すべての場合において、当該形態は無菌でなければならず、そして容易なシリンジ能が存在する範囲の液体でなければならない。それは製造及び貯蔵条件下において安定でなければならず、そして微生物、例えば、細菌及び真菌の汚染作用に対して保存されなければならない。当該担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）、これらの適当な混合体、及び植物油を含む溶媒又は分散媒体であってよい。当該適当な流動性は、例えば、コーティング剤、例えば、レシチンの使用により、分散の場合に必要とされる粒子サイズの維持により、及び海面活性剤の使用により維持することができる。微生物作用の防止は、多様な抗菌及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等によりもたらすことができる。多くの場合において、等張剤、例えば、糖又は塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。注射用組成物の遅延性の吸収は、吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの組成物における使用によりもたらすことができる。
【０１０５】
無菌注射用溶液は、必要量の活性化合物を、必要ならば上記に列挙した多様な他の成分を伴う適当な溶媒中に組み入れること、続いて無菌的にろ過されることにより調製される。一般的に分散剤は、多様な無菌活性成分を、塩基性分散媒体及び上記に列挙したもの由来の必要とされる他の成分を含む無菌媒体に組み入れることにより調製される。無菌注射用溶液の調製の無菌粉末の場合において、好ましい調製方法は、活性成分と前述の無菌ろ過溶液由来のいずれかの追加的に所望される成分の粉末を産出する真空乾燥及び凍結乾燥技術である。
【０１０６】
本明細書において使用される「医薬的に受容可能な担体」は、いずれかの及び全ての溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤、及び抗真菌剤、等張剤、及び吸収遅延剤等を含む。医薬活性物質のためのこのような媒体及び薬剤の使用は当業界において周知である。いずれかの慣習的な媒体又は薬剤が活性成分と不適合である範囲を除き、治療組成物におけるその使用が意図される。補充的な活性成分もまた当該組成物に組み入れることができる。
【０１０７】
本発明の組成物は天然又は塩形態において処方することができる。医薬的に受容可能な塩は、無機酸、例えば、塩酸、若しくはリン酸、又は有機酸、例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸、等と形成する酸添加塩（タンパク質の遊離アミノ基と形成される）を含む。また、遊離カルボキシル基と形成される塩は、無機塩基、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、又は水酸化第二鉄、及び有機塩基、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカイン等に由来することができる。
【０１０８】
製剤において、溶液は製剤の投薬量に適合した方法及び治療的に有効な量において投与されるであろう。当該製剤は様々な投薬形態、例えば、注射用溶液、薬剤放出カプセル等において容易に投与される。水溶液における非経口的な投与のために、例えば、必要ならば溶液は適当なバッファーとすべきであり、そして液体希釈剤は、最初に十分な生理食塩水又はグルコースで等張性を与えるべきである。これらの特別な水性溶液は、特に、血管内、筋肉内、皮下及び腹腔内投与に適当である。
【０１０９】
「単一用量」は、適当な担体中に分散する治療組成物の別々の量として定義される。ＦＳＨ及びＰＤＥ阻害剤の好ましい用量の例は上述されている。１又は両方の治療化合物の非経口投与は、薬剤製品の治療的な循環レベルを維持するために、最初にボーラスで、続いて連続的インフュージョンで行うことができる。当業者は、優れた医療行為及び個々の患者の臨床的な状態により決定した通り、有効投与量及び投与療法を容易に最適化するであろう。
【０１１０】
投薬の頻度は、薬剤の薬物動態学的なパラメーター及び投与経路に依存するであろう。最適な医薬製剤は、当業者により、投与経路及び所望される薬用量に依存して決定されるであろう。例えば、引用として本明細書に組み入れられている Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack, Easton, PA (1990) を参照のこと。このような製剤は、物理状態、安定性、投与された薬剤の生体内放出速度及び生体内クリアランス速度に影響しうる。投与経路に依存して、適当な用量は、体重、体の表面積、又は器官の大きさに従い計算することができる。更に、適当な治療用量を決定するために必要な計算の改良は、特に薬用量の情報、及び本明細書において開示されるアッセイ、並びに臨床的な試験動物又はヒトにおいて観察される薬物動態学的なデータに明るい当業者により、過剰な実験を有することなく慣習的に行われる。
【０１１１】
適当な薬用量は、関連する用量応答データと併用して血液レベルを測定するための確立されたアッセイの使用を通して確かめることができる。最終的な薬用量療法は、医師の診断、薬剤の作用を改変する因子、例えば、薬剤の特異的な活性、患者の損傷の重症度及び応答性、患者の年齢、状態、体重、性別、及び食事、いずれかの感染の重症度、投与時間及び他の臨床的な因子を考慮することにより決定することができる。実験を行うことにより、更に適当な薬用量レベル並びに特定の疾患及び状態のための持続時間に関する情報が現れるだろう。
【０１１２】
本発明の医薬組成物及び処置方法は、ヒト医薬及び獣医薬の分野において有用であることが認識されるであろう。従って治療すべき対象は、哺乳類、好ましくはヒト又は他の動物であってよい。獣医目的のために、対象は、家畜、例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ヤギ、コンパニオン動物、例えば、イヌ、ネコ、外来の及び／又は動物園の動物、実験動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、及びハムスター；及び家禽、例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒル、及びガチョウを含む。
【０１１３】
また、本発明は、不妊疾患の処置における使用のためのキットを意図する。このようなキットは、少なくとも医薬的に受容可能な担体におけるＦＳＨを含んで成る第一組成物、及び医薬的に受容可能な担体において少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤を含んで成る第二組成物を含む。当該キットは追加的に、第一及び第二組成物の伝達に影響するための溶液又はバッファーを含んで成ってよい。当該キットは、更にＰＤＥ阻害剤、例えば、追加的なＰＤＥ４阻害剤、又は追加的なＰＤＥ１又はＰＤＥ５阻害剤、及び／又は更にホルモン、例えば、ｈＣＧ、ＬＨ等を含む追加的な組成物を更に含んで成ってよい。当該キットは、カテーテル、シリンジ、又は、本発明の方法において使用される１又は複数の組成物の送達のための他の送達装置を更に含んで成ってよい。当該キットは、当該治療法のための投与プロトコルを含む説明書を更に含んで成ってよい。
【実施例】
【０１１４】
以下の実施例は、本発明の好ましい態様を説明するために含まれる。本発明の実施においてよく機能するために、実施例において開示されている技術が発明者により発見された技術を表すことが当業者により認識されるべきであり、従ってその実施のために好ましい型を構成することを考慮することができる。しかしながら、本開示に明るい当業者は、多くの変更が、開示された特別な態様において行うことができ、そしてなお本発明の精神及び範囲から離れることなく同様な又は類似した結果を得ることができることを認識する。
材料及び方法
【０１１５】
動物：受領において体重が３６〜３９ｇの未成熟Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ ＣＤ（ＳＤ）ＢＲメスラットが使用された。当該動物は、以下の定常環境条件化において飼育した：温度２２℃±２、相対湿度５５％±１０、１時間当たり１５〜２０回空気交換（ＨＥＰＡ９９．９９％におけるろ過）及び１２時間の概日周期の人工照明（７時〜１９時）。
【０１１６】
実験の全期間、ラットは、ステンレススチールフィーダーを伴うケージにおいて飼育し（ｃｍ．４０．５×３８．５×１８ｈ）、そして標準的なペレット状の食餌（Charles River Italia's licensee Mucedola s. r. l.により生産された４ＲＦ２１）及び水を「自由に」与えた。
【０１１７】
化学物質：ヒト組み換え卵胞刺激ホルモン（ｒ−ｈＦＳＨ）及びヒト組み換え絨毛性ゴナドトロピン（ｒ−ｈＣＧ）は、Laboratoires Serono Aubonne (LSA, Aubonne, Switzerland)により供された。試験化合物は、公表された化合物合成法に基づき合成されたか、又は商業者から購入した。特に、当業者は、ロフルミラストの製造方法を示すＷ０９５０１３３８、ピクラミラストの製造方法の詳細な説明のためのJ. Med. Chem. 1994,37, 1696-1703、アリフロ／シロミラストの製造方法の説明のためのJ. Med. Chem. 1998,41, 821-835、メソプラムの製造方法のためのＷ０９７／１５５６１、及びフィラミナストの製造方法のためのＥＰ０４７０ ８０５ Ｂ１を参照する。他の試験化合物(ジピリダモール、ザプリナスト、シルデナフィル)は、公表された化合物の合成方法に基づき合成したか、又は商業者から購入した。更に、"Inhibitors of PDE Enzymes in Infertility" と題された米国特許出願第６０／４７０，４３４号、米国特許公報第２００２０１０３１０６号、及びＰＣＴ／ＥＰ０１／１４７３０は、本明細書において使用することができるこのような化合物に関して他に示す通り、引用により本明細書に組み入れられている。
【０１１８】
生体内ラット卵胞成熟アッセイ：未成熟メスラットは実験の前の週の金曜日に、１８〜１９日齢で、授乳しているメス（授乳中のメスあたり１０匹の子供）と共に到着した。すべてのラットは、翌月曜日に母親から離乳させ（２１〜２２日齢）、そして、任意に実験グループに選別した（６〜８動物／グループ）。
【０１１９】
上記ラットに皮下的に２日間、１日に２回（最初の注射：８．３０〜９．００及び２回目の注射１５．３０〜１６．００）、２５０μＬ／注射の容量においてｒ−ｈＦＳＨ又は媒体（ＰＢＳ）注射した（首の後部）。注射したＦＳＨの用量は、ポジティブコントロールとして最適以下（６０６ｎｇ／ラットの総用量を４回の注射に分けた；図において「低ＦＳＨ」として示す）又は高（２４２４．８ｎｇ／ラットの総用量を４回の注射に分けた；図において「高ＦＳＨ」として示す）とした。
【０１２０】
上記注射に追加して、示した容量（ｍｇ／ｋｇ／注射）において２日間１日に２回、ラットにＦＳＨ注射と同時に試験化合物又は媒体を皮下注射した。これらの化合物ＮＰ３Ｓ（ｎ−メチル−２−ピロリジン５％、ポリエチレングリコール４００ ３０％、ポリエチレングリコール２００ ２５％、プロピレングリコール２０％、生理食塩水２０％）又は水性媒体のいずれかに希釈した。従って、卵胞成長を促進するために各ラットが受けた注射の総数は８回であり、ｒ−ｈＦＳＨ又はｒ−ｈＦＳＨ媒体の４回の注射、及び試験化合物又は試験化合物媒体の４回の注射を含む。
【０１２１】
最後のｒ−ｈＦＳＨ注射を伴う実験の２日目において、全ての又はほとんどの成熟した卵胞の排卵を誘発するために、ラットをｒ−ｈＣＧ（１４３０ｎｇ／ラット）の一度の皮下的注射でまた処置した。
【０１２２】
ｒ−ｈＣＧ投与後の朝１０時に、ラットをＣＯ2窒息により安楽死させた。当該動物を仰向けに寝かせ、そして無菌化し、そして動物の解剖において落ちる体毛を保持するために側面をエタノールで噴霧した。ハサミ及びピンセットにより、皮膚と筋肉を恥骨結合から胸骨まで反口−口方向に切開した。内部器官を暴露し、そして腸を片方に移動させた。脂肪及び結合組織を摘まみながら、卵巣、子宮角及び子宮体を除去した。それから生殖路を、ＰＢＳを含有する２４ウェルプレート中のウェルに置いた（１動物／ウェル）。
【０１２３】
全ての動物を犠牲にし、当該卵巣を摘出した後、卵管を静かに卵巣から除去し、ＰＢＳ中に浸漬し、そして顕微鏡スライドに置いた。それから当該卵巣を取り、浄化し、そして秤量のためにＰＢＳ中に置いた（子宮は処分した）。
【０１２４】
卵管の対を１つのスライドに置き、それから両方のスライドの被せた端を固定するためにテープ断片を使用してスライドを最初のスライドの上層に置いた。卵管をボトムスライドに置いた後、トップスライドを折り、そして被されていない端をテープし、２つのスライド間の卵管を加圧した。当該卵管をそれからコントラスト条件下において光学顕微鏡で調べ（４０×拡大率の最小）、そして存在するとすれば、各ラットの２つの膨大部に存在する卵子をカウントした。当該結果は、ラット当たりの排卵した卵母細胞の平均数としてグラフにした。エラーバーは、各グループの平均値の標準誤差を表す。
実施例１：低−用量のＦＳＨとの組み合わせにおける多様なＰＤＥ阻害剤を使用する排卵の誘発
【０１２５】
実験は、上述の生体内におけるラット卵胞成熟アッセイに従い行った。ある実験において、組織学的アッセイの処置の２日目の日中において、注射の最後のセットの前に卵巣をラットから摘出した。これらのラットは、安楽死及び器官の摘出の前にＦＳＨ及び試験化合物の最初の３つの用量のみを受けた。二次卵胞は、二次卵胞の総数をカウントすることにより評価した：両方の小さな卵胞（成熟の中間期のいずれかにおける、最初の散乱した空胞を伴うが洞は伴わない多層顆粒膜を有する）及び胞状卵胞（顆粒膜細胞層の減少を伴う又は伴わない約５００ミクロン又はそれ以上の外径を伴う洞拡張を有する）を含む。胞状卵胞（＞５００ｍｃｍ）もまた別々にカウントした。
データ分析：
【０１２６】
排卵している動物の割合、ラット当たりの膨大部において存在する卵子の平均数、及び平均卵巣重量は、各実験グループの１つの値から算出し、そして関連グラフをプロットした。全ての図は、平均値プラス／マイナス平均値の標準誤差を示す。当該図において、標準誤差バーの上の数字は、グループ中のラットの総数と比較した１又は複数の排卵した卵子を有するグループ中のラット数を意味し、例えば、Ｘ／Ｙは、Ｙの総数当たりＸのラットが１又は複数の排卵した卵子を有したことを意味する。
試験した化合物
以下の化合物を上記プロトコルにおいて試験した：
（ｉ）ザプリナスト（ＰＤＥの１，５，６，７，９，１０，１１の阻害剤）；
（ii）シルデナフィル（ＰＤＥの１，５及び６阻害剤）；
（iii ）ジピリダモール（ＰＤＥの５，６，７，８，１０，１１の阻害剤）；
（iv）タダラフィル（ＰＤＥの５及び６の阻害剤）
（ｖ）化合物番号３１（（６ａＲ，９ａＳ）−２−（ビフェニルイルメチル）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ−［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）−オン）（ＰＤＥ１の阻害剤）
（vi）化合物番号３３（５’−メチル−２’（ビフェニルイルメチル）−３’−（フェニルメチル）スピロ［シクロペンタン−１，７’（８’Ｈ）−［３Ｈ］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン］−４（５’Ｈ）−オン）（ＰＤＥ１の阻害剤）
【０１２７】
これらの分子は、様々なＰＤＥ酵素のための以下の選択性を示すことが示される：
【表２】
*ＰＤＥ３は卵母細胞中で発現し、ＰＤＥ３の阻害剤は非至適卵母細胞の成長に導くことができることから、好ましくはＰＤＥ阻害剤はＰＤＥ３に対して選択的である。Wiersma, et al., J. 1530 Clin. Invest., 102 (3): 532-537 (1998)。
**ＰＤＥ６は網膜の桿体及び錐状体中で発現し；ＰＤＥ６阻害剤は、穏やかな視覚障害を引き起こしうる；好ましいＰＤＥ阻害剤はＰＤＥ６に対して選択的である（即ち、好ましくは、ＰＤＥ６と比較してＰＤＥ１又はＰＤＥ５を阻害するために少なくとも又は約１００倍以上の能力を有する）；
結果：
【０１２８】
ジピリダモール（ＰＤＥの５，６，７，８，１０，１１の阻害剤）は、低用量のＦＳＨを伴うＮＰ３Ｓにおいてラット当たり１、５及び２５ｍｇ／ｋｇ×４注射の用量において投与し（皮下的に）、低用量のＦＳＨ＋ＮＰ３Ｓ媒体コントロールと比較してラット当たり排卵性卵母細胞の数の増加をもたらした。ＦＳＨ低用量単独では、ラット当たり１つの卵母細胞の平均が得られ、１０匹中４匹のラットのみが排卵した。反対に、ＦＳＨ低用量をジピリダモール（１、５又は２５ｍｇ／ｋｇ）と併用して投与した場合、ラット当たりの卵母細胞の平均数は、それぞれ７．５、６．８及び６．２であり、そして１０匹中７匹、１０匹中６匹、又は１０匹中１０匹のラットがそれぞれ排卵した。これらの結果は図１に示す。
【０１２９】
ザプリナスト（ＰＤＥの１，５，６，７，９，１０，１１の阻害剤）は、低用量のＦＳＨを伴うＮＰ３Ｓにおいてラット当たり１、５及び２５ｍｇ／ｋｇ×４注射の用量において投与し（皮下的に）、低用量のＦＳＨ＋ＮＰ３Ｓ媒体コントロールと比較してラット当たり排卵性卵母細胞の数の用量関連性の増加をもたらした。ＦＳＨ低用量単独では、ラット当たり２．４の卵母細胞の平均が得られ、１０匹中５匹のラットのみが排卵した（実験１）。反対に、ＦＳＨ低用量をザプリナスト（１、５又は２５ｍｇ／ｋｇ）と併用して投与した場合、ラット当たりの卵母細胞の平均数は、それぞれ３．２５、６．４及び９．５であり、そして１０匹中６匹、１０匹中９匹、又は１０匹中１０匹のラットがそれぞれ排卵した（実験１）。これらの結果は図２に示す。
【０１３０】
シルデナフィル（ＰＤＥの１，５及び６阻害剤）は、低用量のＦＳＨを伴うＮＰ３Ｓにおいてラット（皮下的に）当たり１、５及び２５ｍｇ／ｋｇ×４注射の用量において投与し、低用量のＦＳＨ＋ＮＰ３Ｓ媒体コントロールと比較してラット当たり排卵性卵母細胞の数の用量関連性の増加をもたらした。ＦＳＨ低用量単独では、ラット当たり１の卵母細胞の平均が得られ、１０匹中３匹のラットのみが排卵した（実験１）。反対に、ＦＳＨ低用量をシルデナフィル（１、５又は２５ｍｇ／ｋｇ）と併用して投与した場合、ラット当たりの卵母細胞の平均数は、それぞれ３．５、５．５及び６．９であり、そして８匹中６匹、８匹中５匹、又は８匹中７のラットがそれぞれ排卵した（実験１）。これらの結果は図３に示す。
【０１３１】
媒体、低ＦＳＨ、高ＦＳＨ、又は低ＦＳＨ＋７５ｍｇ／ｋｇのシルデナフィルで処置したラットにおけるラット当たり（２つの卵巣）の二次卵胞の総数を図４に示す。二次卵胞の総数は、シルデナフィル＋ＦＳＨグループにおける方が他のいずれかのグループにおける場合よりも多い[媒体＝６９；低ＦＳＨ＝６４；低ＦＳＨ＋シルデナフィル＝８４；高ＦＳＨ＝６４]。
【０１３２】
媒体、低ＦＳＨ、高ＦＳＨ、又は低ＦＳＨ＋７５ｍｇ／ｋｇのシルデナフィルで処置したラットにおけるラット当たり（２つの卵巣）の胞状卵胞の総数を図５に示す。シルデナフィル＋ＦＳＨで処置したラットにおける胞状卵胞の総数は、低ＦＳＨで処置したラットにおける胞状卵胞の数よりも多い[媒体＝３．２；低ＦＳＨ＝４．１；低ＦＳＨ＋シルデナフィル＝７．４；高ＦＳＨ＝９．５]。
【０１３３】
シルデナフィルは、低用量のＦＳＨを伴う水性媒体においてラット（皮下的に）当たり１、５及び２５ｍｇ／ｋｇ×４注射の用量において投与し、低用量のＦＳＨ単独＋水性媒体コントロールと比較して、ラット当たり排卵性卵母細胞の数の用量関連性の増加をもたらした。ＦＳＨ低用量単独では、ラット当たり１の卵母細胞の平均が得られ、そして８匹中２匹のラットのみが排卵した。反対に、ＦＳＨ低用量をシルデナフィル（５ｍｇ／ｋｇ）と併用して投与した場合、ラット当たりの卵母細胞の平均数は、２０であり、そして８匹中７匹のラットが排卵した。これらの結果は図６に示す[注意：図６は、媒体が有機ＮＰ３Ｓ−ＳＭでなく水性であるという点において図３とは異なる]。
【０１３４】
タダラフィル（ＰＤＥの５及び６の阻害剤）は、低用量のＦＳＨを伴う水性媒体においてラット（皮下的に）当たり２５ｍｇ／ｋｇ×４注射の用量において投与し、低用量のＦＳＨ単独＋ＮＰ３Ｓ媒体コントロールと比較して、ラット当たり排卵性卵母細胞の数の用量関連性の増加をもたらした。ＦＳＨ無しを使用した場合、ラット当たり１以下の卵母細胞が回収された。これらの結果は図７に示す。ＦＳＨ無しで投与した場合、ラット当たり平均１の卵母細胞が回収された。最適以下の用量のＦＳＨ（「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×４）では、ラット当たり平均５の卵母細胞が回収された。最適以下の用量をタダラフィルと併用した場合（ラット当たり２５ｍｇ／ｋｇ×４；「低ＦＳＨ＋タダラフィル」）、ラット当たり平均１６の卵母細胞が回収された。高用量のＦＳＨ（「高ＦＳＨ」：ラット当たり６０６．２ｎｇ×３）では、ラット当たり平均２１の卵母細胞が回収された。
【０１３５】
Ahn, et al., J. Med. Chem., 40: 2196-2210 (1997) 由来の化合物番号３１である（（６ａＲ，９ａＳ）−２−（ビフェニルイルメチル）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ−［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）−オン）（ＰＤＥ１の阻害剤）を以下に示す：
【化３】
【０１３６】
化合物番号３１は、低用量のＦＳＨを伴うＮＰ３Ｓにおいてラット当たり２５ｍｇ／ｋｇ×４注射の用量において投与し（皮下的に）、低用量のＦＳＨ単独＋ＮＰ３Ｓ媒体コントロールと比較して、ラット当たり排卵性卵母細胞の数の用量関連性の増加をもたらした。これらの結果は図８に示す。ＦＳＨ無しで投与した場合、ラット当たり平均１の卵母細胞が回収された。最適以下の用量のＦＳＨ（「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×４）では、ラット当たり平均５の卵母細胞が回収された。最適以下の用量を化合物番号３１と併用した場合（ラット当たり２５ｍｇ／ｋｇ×４）、ラット当たり平均１８の卵母細胞が回収された。高用量のＦＳＨ（「高ＦＳＨ」：ラット当たり６０６．２ｎｇ×３）では、ラット当たり平均２１の卵母細胞が回収された。
【０１３７】
Ahn, et al., J. Med. Chem., 40: 2196-2210 (1997) 由来の化合物番号３３である（５’−メチル−２’（ビフェニルイルメチル）−３’−（フェニルメチル）スピロ［シクロペンタン−１，７’（８’Ｈ）−［３Ｈ］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン］−４（５’Ｈ）−オン（ＰＤＥ１の阻害剤）を以下に示す。
【化４】
【０１３８】
化合物番号３３は、低用量のＦＳＨを伴うＮＰ３Ｓ媒体においてラット当たり２５ｍｇ／ｋｇ×４注射の用量において投与し（皮下的に）、低用量のＦＳＨ単独＋ＮＰ３Ｓ媒体コントロールと比較して、ラット当たり排卵性卵母細胞の数の用量関連性の増加をもたらした。これらの結果は図９に示す。ＦＳＨ無しで投与した場合、ラット当たり平均１の卵母細胞が回収された。最適以下の用量のＦＳＨ（「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×４）では、ラット当たり平均５の卵母細胞が回収された。最適以下の用量を化合物番号３３と併用した場合（ラット当たり２５ｍｇ／ｋｇ×４）、ラット当たり平均２７の卵母細胞が回収された。高用量のＦＳＨ（「高ＦＳＨ」：ラット当たり６０６．２ｎｇ×３）では、ラット当たり平均２０の卵母細胞が回収された。
【０１３９】
メソプラムは、低用量のＦＳＨと共に０．０８、０．４、及び２ｍｇ／ｋｇ／日において投与した。卵胞の成熟の有意な増強は、低ＦＳＨ単独を受けたグループに見られた。高用量において、卵巣の成熟が減少しているようであった。それから、メソプラムをより低用量：０．０３２、０．０１６、０．０８ｍｇ／ｋｇで低用量のＦＳＨと一緒に投与し、用量依存性の卵胞の成熟の増加を示し、０．０８ｍｇ／ｋｇにおいて有意性に達した。これらの結果は図１５に示す。
【０１４０】
上記モデルにおいて他のＰＤＥ阻害剤を試験し、当該結果は表１に挙げる。
表１．多様なＰＤＥ阻害剤の卵胞成長活性
【表３】
実施例２：低用量ＦＳＨとの組み合わせにおける多様なＰＤＥ阻害剤を使用するｃＡＭＰの誘導
【０１４１】
上述の通り産出したラット顆粒膜細胞の評価に追加して、細胞株中のｃＡＭＰを測定するために、ＪＣ−４１０ブタ顆粒膜細胞を使用した。これらの細胞は Dr. Jorge Chedrese (University of Saskatchewan)から入手した。当該細胞は、５％新生仔ウシ血清(Gibco)及び５μｇ/ｍｌのインシュリン(Gibco)で補助したＤＭＥＭ／Ｆ１２中に維持した。安定な細胞株は、ヒトＬＨ及びＦＳＨレセプターのｃＤＮＡを標準的なトランスフェクション技術の使用及び３００μｇ/ｍｌのジェネテシン(Gibco)での選択により、細胞にトランスフェクションすることにより確立した。選択後、当該細胞を同濃度のジェネテシン中に維持した。ｃＡＭＰの測定のために、当該細胞は、アッセイの１日前に９６ウェルプレート中に、ウェル当たり２５，０００細胞の密度で置いた。翌日、当該細胞は、示される通り、１ｎＭのＦＳＨの存在下又は不存在下において増加用量の阻害剤分子で１時間刺激した。全ての化合物は、４％ＤＭＳＯ（アッセイにおける最終濃度は０．５％）を含有するアッセイバッファー（ＤＭＥＭ／Ｆ１２、０．１％ＢＳＡ−Sigma）中に希釈した。１時間の刺激後、当該細胞を溶解し、そして商業者のプロトコルに従いｃＡＭＰをＴｒｏｐｉｘ ｃＡＭＰ−Ｓｃｒｅｅｎアッセイ(Applied Biosystems)を使用してアッセイした。
【０１４２】
原発卵巣分散培養液中のｃＡＭＰの測定は、以下のようにモニターした。卵巣をＳＤラット（２２日齢）から摘出し、そして３〜５ｍｌの消化培地中で手術用顕微鏡下で皮膜を取り除いた。当該消化培地は、８ｍｇ／ｍｌのコラゲナーゼ(Sigma)、及び０．０５％のＤＮａｓｅ(Invitrogen)を含有するアッセイ培地（１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ(Sigma)、５μｇ／ｍｌのゲンタマイシン及び３μｇ／ｍｌのアンホテリシンＢ(Gibco)で補充したＭｃＣｏｙ’ｓ５Ａ培地）から成る。皮膜除去後、当該卵胞を２７ゲージニードルを使用して小片に解剖し、１５ｍｌのチューブに移し、そして、振盪しながら３７℃で４５分間消化した。当該消化した組織を７０μｍのＮａｌｇｅｎフィルターを通してろ過し、そして当該ろ液を１０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。当該ペレットをアッセイ培地で洗浄し、そして２回目の遠心分離をした。生じたペレットは、２ｍｌの成長培地（５％ＦＢＳ、５μｇ／ｍｌのゲンタマイシン及び３μｇ／ｍｌのアンホテリシンＢ(Gibco)で補充したＭｃＣｏｙ’ｓ５Ａ培地）に懸濁し、そして当該細胞をカウントした。当該細胞は成長培地に希釈し、２５〜３０，０００細胞／ウェルに置き、そして刺激する前に４８時間培養した。当該細胞を刺激し、そして細胞株の測定のためにｃＡＭＰを上述の通りアッセイした。
結果：
【０１４３】
ＰＤＥ４阻害剤のパネルは、試験管内におけるＦＳＨ処置した又は未処置のラット顆粒膜細胞及び／又はヒトＦＳＨ−発現ブタ顆粒膜細胞株ＪＣ−４１０（ＪＣ４１０ＦＳＨＲ）中におけるｃＡＭＰを誘導するこれらの能力のために試験した。ＰＤＥ阻害剤のいくつかは、当該モデルにおいてｃＡＭＰの誘導において高活性であり、いくつかは中程度の活性であり、そしていくつかはほとんど又は全く活性ではない。注目すべきことに、ＦＳＨの不存在において、ＰＤＥ４阻害剤はｃＡＭＰを誘導する能力をほとんど又は全く有さない（１０Ａ〜１０Ｃを参照のこと）。当該阻害剤の能力は、顆粒膜細胞の原料に関わらず同じであった。即ち、当該細胞株及び一次顆粒膜細胞の両方において比較的類似していた。
【０１４４】
生体内において、２つの典型的なＰＤＥ４阻害剤であるピクラミラスト及びロフルミラストはＦＳＨ−誘発性卵胞成熟を増加した。低濃度のピクラミラスト（０．０８及び０．４ｍｇ／ｋｇ）は、低レベルの外因性ＦＳＨの不存在下において卵胞成熟を誘導するために有意ではなかった（図１３）。しかしながら、高濃度の２ｍｇ／ｋｇにおいてピクラミラストは、卵胞の成熟を誘導した（図１３を参照のこと）。ピクラミラストを低用量のＦＳＨの存在下で投与した場合、排卵性卵母細胞の数の増加によって明らかなように、卵胞成熟において極めて顕著な誘導が存在した（図１４）。
【０１４５】
上記結果は、最適以下の量のＦＳＨと共に哺乳類に投与した場合、ＰＤＥ阻害剤がｈＣＧ−排卵性卵母細胞の数の増加を誘導することを示す。当該発見を活用するための方法及び組成物は上述のとおりである。
【０１４６】
本明細書において開示され、そして要求された全ての組成物及び／又は方法は、本開示に明るい者において、過剰な実験なしに作製及び実行することができる。本発明の組成物及び方法は好ましい態様の点において説明されるが、多くのものが、発明の概念、精神及び範囲から離れることなく本明細書において説明された方法の工程又は工程順序において当該組成物及び／又は方法を適用できることは当業者に明らかであろう。より特別には、化学的及び生理的に関係する一定の薬剤は、同じ又は同様な結果が達成されるなら本明細書で説明された薬剤に代えることができる。当業者に明らかな全てのこのような類似した代替及び修正は、付加クレームにより明らかなように、発明の精神、範囲、及び概念中にあるものとみなされる。
【０１４７】
本明細書において明記されるものに対する典型的な手順又は他の捕捉を供する範囲に対して本明細書を通して引用される引用例、特許及び特許公報は、引用として全て特別に本明細書に組み入れられている。
【０１４８】
以下の図面は本明細書の一部を形成し、そして本発明の更なる説明的観点に含まれる。本発明は、本明細書に供される特別な態様の詳細な説明との組み合わせにおける図面に対する引用により、より理解されることができる。
【図面の簡単な説明】
【０１４９】
【図１】図１は最適以下の用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×４)で処置された未成熟な雌のラット、及び最適以下の用量のＦＳＨ（「低ＦＳＨ」）＋ジピリダモール（ラット当たり１、５、２５ｍｇ／ｋｇ×４）で処置されたラットにおける、ラット当たりの排卵された卵母細胞の数を示す。
【０１５０】
【図２】図２は最適以下の用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×４)で処置された未成熟な雌のラット、及び最適以下の用量のＦＳＨ（「低ＦＳＨ」）＋ザプリナスト（ラット当たり１、５、２５ｍｇ／ｋｇ×４）で処置されたラットにおける、ラット当たりの排卵された卵母細胞の数を示す。
【０１５１】
【図３】図３は最適以下の用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×４)で処置された未成熟な雌のラット、及び最適以下の用量のＦＳＨ（「低ＦＳＨ」）＋シルデナフィル（ラット当たり１、５、２５ｍｇ／ｋｇ×４）で処置されたラットにおける、ラット当たりの排卵された卵母細胞の数を示す。
【０１５２】
【図４】図４は低用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×３)、高用量のＦＳＨ(「高ＦＳＨ」：ラット当たり６０６．２ｎｇ×３)、及び低用量のＦＳＨ＋シルデナフィル（ラット当たり２５ｍｇ／ｋｇ×３）で処置されたラットにおける二次卵胞の数を示す。
【０１５３】
【図５】図５は低用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×３)、高用量のＦＳＨ(「高ＦＳＨ」：ラット当たり６０６．２ｎｇ×３)、及び低用量のＦＳＨ＋７５ｍｇ／ｋｇのシルデナフィルで処置されたラットにおける胞状卵胞の数を示す。
【０１５４】
【図６】図６は水性バッファーにおいて投与された低用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×３)、高用量のＦＳＨ(「高ＦＳＨ」：ラット当たり６０６．２ｎｇ×３)、及び低用量のＦＳＨ＋シルデナフィル（ラット当たり１、５、２５ｍｇ／ｋｇ×４）で処置された未成熟な雌のラットにおけるラット当たりの排卵された卵母細胞の数を示す。
【０１５５】
【図７】図７は水性バッファーにおいて投与されたＦＳＨ無し（「ＦＳＨ無し」）、最適以下の用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×３)、最適以下の用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×４)＋タダラフィル（ラット当たり２５ｍｇ／ｋｇ×４）、及び高用量のＦＳＨ(「高ＦＳＨ」：ラット当たり６０６．２ｎｇ×３)で処置された未成熟な雌のラットにおけるラット当たりの排卵された卵母細胞の数を示す。
【０１５６】
【図８】図８は水性バッファーにおいて投与されたＦＳＨ無し（「ＦＳＨ無し」）、最適以下の用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×３)、最適以下の用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×４)＋化合物番号３１（（６ａＲ，９ａＳ）−２−（ビフェニルイルメチル）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ−［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）−オン）（ラット当たり２５ｍｇ／ｋｇ×４）、及び高用量のＦＳＨ(「高ＦＳＨ」：ラット当たり６０６．２ｎｇ×３)で処置された未成熟な雌のラットにおけるラット当たりの排卵された卵母細胞の数を示す。
【０１５７】
【図９】図９は水性バッファーにおいて投与されたＦＳＨ無し（「ＦＳＨ無し」）、最適以下の用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×３)、最適以下の用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×４)＋化合物番号３３（５’−メチル−２’（ビフェニルイルメチル）−３’−（フェニルメチル）スピロ［シクロペンタン−１，７’（８’Ｈ）−［３Ｈ］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン］−４（５’Ｈ）−オン）（ラット当たり２５ｍｇ／ｋｇ×４）、及び高用量のＦＳＨ(「高ＦＳＨ」：ラット当たり６０６．２ｎｇ×３)で処置された未成熟な雌のラットにおけるラット当たりの排卵された卵母細胞の数を示す。
【０１５８】
【図１０Ａ】図１０Ａ〜１０Ｃ。ラット顆粒膜細胞（ラット卵巣分散物質）及び／又はヒトＦＳＨレセプター−発現ブタ顆粒膜細胞（ＪＣ４１０／ＦＳＨＲ）におけるｃＡＭＰを誘導し、又は増加させるためのＰＤＥ阻害剤の能力を測定するための試験管内における実験。
【図１０Ｂ】図１０Ａ〜１０Ｃ。ラット顆粒膜細胞（ラット卵巣分散物質）及び／又はヒトＦＳＨレセプター−発現ブタ顆粒膜細胞（ＪＣ４１０／ＦＳＨＲ）におけるｃＡＭＰを誘導し、又は増加させるためのＰＤＥ阻害剤の能力を測定するための試験管内における実験。
【図１０Ｃ】図１０Ａ〜１０Ｃ。ラット顆粒膜細胞（ラット卵巣分散物質）及び／又はヒトＦＳＨレセプター−発現ブタ顆粒膜細胞（ＪＣ４１０／ＦＳＨＲ）におけるｃＡＭＰを誘導し、又は増加させるためのＰＤＥ阻害剤の能力を測定するための試験管内における実験。
【０１５９】
【図１１】低用量のＦＳＨと様々な濃度（０．０８ｍｇ／ｋｇ；０．４ｍｇ／ｋｇ；２ｍｇ／ｋｇ）のピクラミラストとの組み合わせの投与による卵胞成熟化の誘導の生体内における実証。
【０１６０】
【図１２】低用量のＦＳＨと様々な濃度（０．０８ｍｇ／ｋｇ；０．４ｍｇ／ｋｇ；２ｍｇ／ｋｇ）のロフルミラストとの組み合わせの投与による卵胞成熟化の誘導の生体内における実証。
【０１６１】
【図１３】卵胞成熟化の誘導の生体内における実証。低及び高用量のＦＳＨ単独；様々な濃度（０．０８ｍｇ／ｋｇ；０．４ｍｇ／ｋｇ；２ｍｇ／ｋｇ）のピクラミラスト、及び低用量のＦＳＨと様々な濃度（０．０８ｍｇ／ｋｇ；０．４ｍｇ／ｋｇ；２ｍｇ／ｋｇ）のピクラミラストとの組み合わせを使用する刺激下における卵母細胞の産出の比較。２つの独立した実験からの結果が示される。
【０１６２】
【図１４】卵胞成熟化の誘導の生体内における実証。低用量のＦＳＨと様々な濃度（０．０８ｍｇ／ｋｇ；０．４ｍｇ／ｋｇ；２ｍｇ／ｋｇ）のピクラミラストとの組み合わせを使用する刺激下における増加した卵母細胞の産出を実証する累積データ。
【０１６３】
【図１５】卵胞成熟化の誘導の生体内における実証。低用量のＦＳＨと様々な濃度（０．０３２、０，０１６、０．０８ｍｇ／ｋｇ；０．４ｍｇ／ｋｇ；２ｍｇ／ｋｇ）のメソプラムとの組み合わせを使用する刺激下における増加した卵母細胞の産出を実証する累積データ。２つの独立した実験からの結果が示される。
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般的に、生殖生物学、及び補助生殖医療（ＡＲＴ）、例えば、試験管内受精（ＩＶＦ）のための卵巣過剰刺激（ＣＯＨ）に導かれる。より特別には、本発明は、例えば、排卵誘発（ＯＩ）のための卵胞成熟刺激を含む１又は複数のホスホジエステラーゼ阻害剤単独、又は１又は複数のゴナドトロピンとの組み合わせのいずれかを使用する生体内における卵胞の成熟を誘導するための方法及び組成物に向けられる。更に本発明は、１又は複数のホスホジエステラーゼ阻害剤単独、又はゴナドトロピンとの組み合わせのいずれかを使用する試験管内における卵胞成熟を誘導するための方法及び組成物に向けられる。
【０００２】
当該出願は、その全体として本明細書における引用により組み入れられている２００３年４月１日に出願した米国特許仮出願第６０／４５８，９５５号、２００３年５月１５日に出願した米国特許仮出願第６０／４７０，４３４号、２００４年１月２８日に出願した米国特許仮出願第６０／５４０，３０１号、及び２００４年２月１２日に出願した米国特許仮出願第６０／４７０，４３４号の利益を主張する。
【背景技術】
【０００３】
女性ヒト生殖周期は、いくつかのゴナドトロピンホルモンに依存する。これらの基礎は、下垂体ホルモン、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）である。卵形成中、女性の生殖細胞である卵子が産出されることによるプロセスは、卵胞中において生じる。卵胞は、卵母細胞（卵）を含む卵巣の中の細胞の集まりである。排卵を顕著に誘導する卵胞成熟は、ＦＳＨの刺激効果に依存する。
【０００４】
各月経周期において、卵母細胞成熟のために多くの卵胞が漸加する。約２８日の月経周期の開始において、卵胞は、細胞の単一の層により囲まれた単純な卵母細胞である始原形態中に存在する。卵胞の成長及び成熟は、ＦＳＨ、初期の細胞の単一層の周りの顆粒膜細胞形態の複数層、中期周期まで継続するプロセスにより達成される。これらの顆粒膜細胞は、卵母細胞を養うこと、及びエストロゲンの産出及び放出に関係する。下垂体により産出されるＦＳＨは、顆粒膜細胞においてアロマターゼ活性を誘導し、これによりエストロゲンの産出を増加する。従って、卵胞の成熟と同時に、２８日の月経周期の初期においてエストロゲン産出を増加する。また、卵胞は二次下垂体ゴナドトロピン、ＬＨのレセプターを含む。中期周期（約１４日）により、当該卵胞が成長及び成熟を続けると、スペース（洞）が、顆粒膜細胞の集団の中に発生する。中期周期において、ファロピウス管を移動し、そして引き続いて受精することができる卵母細胞を破裂し、そして放出するための卵胞を発生するためにＬＰ産出の増加がＬＨレセプターにおいて作用する。通常の排卵している女性は、それぞれの月経周期に約３００の未成熟な卵母細胞が漸加するが、ある卵胞は、退行（閉鎖）し、そして単一の優性卵胞が出現し、そして卵母細胞の放出を続けるであろう。
【０００５】
排卵誘発（ＯＩ）及び補助生殖医療（ＡＲＴ）療法は、２つの主な期を含んで成る：刺激期及び排卵期を含んで成るホルモン療法である。適当な場合、抑制期は、刺激期を先行してよい。当該抑制期は、ＬＨ又はエストラジオールのレベルを抑制するために使用されるＧｎＲＨアゴニストの投与を含む。当該刺激期は、卵胞刺激活性（例えば、ＦＳＨ）を有する薬剤の投与により開始し、そして通常６〜１０日間である。典型的には、患者は、自発的な又は誘発された月経後最初の約３日間において、１日当たり約１５０ＩＵのＦＳＨで処置される。ＦＳＨ投与は、１つの卵胞の平均直径が、約１６〜１８ｍｍ以上又は同じになるまで続けられる（卵胞の発達は超音波により評価することができる）。この時点において、排卵期は、卵胞を破裂させるために及び中期周期で発生する自然な黄体化ホルモン（ＬＨ）のピーク又は増加を模倣するために、ファロピウス管に単一の卵母細胞を放出する誘引とするために、比較的大用量（５，０００〜１０，０００ＩＵ）のＬＨ活性を有する薬剤、例えば、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）を使用して誘発する。患者は、大用量のｈＣＧの投与から２４〜３８時間後に性交することを指示される。刺激期において、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、又は卵胞刺激活性を発揮する薬剤、又は内因性ＦＳＨ放出を刺激する薬剤の投与は、卵巣の卵胞の成長を刺激する。ＦＳＨ、又はＦＳＨ様活性を発揮する薬剤、又は内因性ＦＳＨ放出を刺激する薬剤の投与は、刺激期において続ける必要はなく、刺激期の終了まで続ける必要もない。刺激期又は排卵期のいずれかにおいて作用できる別の薬剤、特に経口的に利用できる薬剤が望ましい。米国２００２／０１０３１０６ Ａｌ(Palmer et al.)は、排卵の誘引とするための排卵期におけるIV型ホスホジエステラーゼの阻害剤の経口及び皮下的使用を開示する。米国２００３／００１８０３７(Westbrook Lempriere et al.)は、胚の生存を向上させるための、出生時体重を増加させるための、子宮血液流を増加させるための、及びプロゲステロン血清中レベルを増加させるための、非補助における周期の排卵後のＰＤＦ５阻害剤の使用を開示する。
【０００６】
排卵誘発（ＯＩ）は、生体内受精又は子宮内精子注入（ＩＵＩ）における単一の卵母細胞のファロピウス管への放出を発生させるための無排卵又はアンモニア排出の女性の処置である。ＯＩ療法の目的は、複数の妊娠を避けるために、放出すべき単一の卵母細胞を発生させることである。ＯＩの慣習的な療法において、治療の初期は、刺激期と呼ばれている。
【０００７】
ＯＩが行われる何人かの患者においては、抑制期で治療を開始することが望ましいであろう。抑制期において、下垂体ゴナドトロピンは、ＦＳＨでの治療の前におけるゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）アゴニストの投与により抑制される。ＧｎＲＨアゴニストの投与は、月経周期の黄体期において開始される（通常、月経周期の約２０日目）。卵巣機能の抑制は、通常、ＧｎＲＨアゴニストで８〜２１日かかり、そしてＬＨ又はエストラジオール（Ｅ2）レベル（ＬＨ＜５ＩＵ／Ｌ、Ｅ2＜５０ｐｇ／ｍｌは、通常、適切な抑制を示す）でモニタリングすることによりモニターできる。それから当該刺激期は、ＦＳＨの投与により開始される。ＧｎＲＨアゴニストの使用は、未成熟な卵母細胞の放出の誘引となりうる天然のＬＨのピーク又は増加を抑制する。これは、当該卵母細胞の放出、つまり性交のよりよいタイミングを許容する。多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）に苦しむ患者において、これらの患者は、しばしば不適当な高い内因性ＬＨレベルを有するため、また、ＧｎＲＨアゴニストを使用することが望ましく、それは刺激期においてＬＨの抑制を許容し、ＦＳＨに対するよりよい応答を許容する。
【０００８】
また、ＯＩの刺激期は、しばしば内因性ＦＳＨ放出を誘発する薬剤、例えば、クエン酸クロミフェン又はアロマターゼ阻害剤を使用して行われる。クエン酸クロミフェンは、刺激期を通して投与され（通常、月経周期の３〜７又は７〜９日目に１００ｍｇの用量）、内因性ＦＳＨ分泌の増大を生じ、卵胞の成長を誘導する。アロマターゼ阻害剤、例えば、レトロゾール、アナストロゾール、ＹＭ−５１１は、月経周期の３〜７又は５〜９日目に与えることができ、そしてまた、引例として本明細書に組み入れられているＷＯ０２／０８３２３９で説明されるように、内因性ＦＳＨの放出を誘発する。
【０００９】
ＯＩとは対照的に、単一の排卵性卵胞及び単一の卵母細胞が所望される場合、補助生殖医療（ＡＲＴ）療法において、可能な限り多くの単一周期における卵母細胞を収集することが所望される。ＡＲＴによる不妊症の治療、例えば、試験管内受精（ＩＶＦ）、卵細胞内精子注入法（ＩＣＳＩ）、配偶子卵管内移植法（ＧＩＦＴ）、及び接合体卵管内移植法（ＺＩＦＴ）は、女性の配偶子の数を増加するための卵巣過剰刺激（ＣＯＨ）が必要である Healy, et al., Lancet 343: 1539-1544 (1994）。例えば、現在、ヒト女性及び男性の生殖能力の治療のために一般的に使用される処置である試験管内受精（ＩＶＦ）は、成熟ヒト卵母細胞の回収、続いて、成熟卵母細胞と精子の受精に基づくＡＲＴ技術である。標準的なＩＶＦ処置プロトコル下において、ヒト成熟卵母細胞は、長期、例えば、３０日間のホルモン療法において漸加される。当該プロトコルは、ゴナドトロピン放出ホルモンＧｎＲＨ又はＧｎＲＨの類似体により患者自身のＦＳＨ及びＬＨを制御すること、続いて、複数の排卵前期の卵胞の発達を保証するための外因性ゴナドトロピン、例えば、ＦＳＨ及び／又はＬＨの注射より開始される。卵胞の成長の適当な時期において、複数の卵母細胞は、排卵直前に吸引により収集される。吸引された卵母細胞は、続いて試験管内において受精され、そして典型的には、４〜８細胞期における生じた胚の子宮への移植前に３日間培養される。
【００１０】
より特別には、ＡＲＴにおけるＣＯＨのための標準的な療法は、内因性ＬＨが、月経周期の黄体期において開始するＧｎＲＨアゴニストの投与により抑制される下方制御期とも呼ばれる抑制期を含む（通常月経周期の約２０日目）。卵巣機能の抑制は、ＧｎＲＨアゴニストで通常８〜２１日かかり、そしてＬＨ又はエストラジオールレベル（ＬＨ＜５ＩＵ／Ｌ、Ｅ2＜５０ｐｇ／ｍｌは、通常、適切な抑制を示す）でモニタリングすることによりモニターできる。下方制御は、卵胞の発達が、通常約７５〜６００ＩＵ／日における卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の毎日の投与により誘導される刺激期を伴う。
【００１１】
あるいは、通常、自発的な又は誘発された月経後１、２、又は３日目において、卵胞刺激がＦＳＨで開始し、そして月経後約６日目において開始する内因性ＬＨの産出がＧｎＲＨアンタゴニストの投与により抑制される場合、ＧｎＲＨアゴニストの代わりに、ＧｎＲＨアンタゴニストを使用することができる。ＧｎＲＨアンタゴニスト及びＦＳＨ投与は、以下に説明する通り、ｈＣＧの排卵−誘引用量の投与のための判断基準が一致するまで続けられる。
【００１２】
刺激期の間、卵胞の発達を検出及び測定するために、卵巣は超音波により検査される。複数の卵胞の発達は、ＡＲＴにおけるＣＯＨプロトコルの目的であるため、当該卵巣が１６ｍｍ以上の平均直径を伴う少なくとも３つの卵胞（好ましくは、１つの１８ｍｍ）を示す場合、排卵の誘引とするために、ｈＣＧ（５，０００〜１０，０００ＩＵ）の注射が与えられる。卵母細胞は、ｈＣＧ注射から３６〜３８時間後に計測される。卵母細胞は通常、排卵前期の卵胞から吸引により回収される。
【００１３】
例えば、上述のプロトコルが臨床的なプロトコルにおいて何年間も使用されているという事実にも関わらず、これらのプロトコルはいくつかの有意な不利益がないというわけではない。ＦＳＨは、比較的短い半減期を有し、そしてＯＩ又はＡＲＴのいずれかのＦＳＨでの処置は、刺激期間、比較的大用量のＦＳＨの毎日の注射に関係する（毎日７５〜６００ ＩＵ ＦＳＨ）。毎日の注射は患者の不快感及び不便性の原因となり、そして比較的高価となりうる。このような用量及び毎日の投与は、重篤な場合生命を危うくし得る卵巣過剰刺激症候群（ＯＨＳＳ）を生じる関連リスクを有する。ゴナドトロピン調製物由来の他の追加的な副作用は、体重の増加、鼓脹、悪心、嘔吐、モニタリングプロセスに関連する時間、及び未知の長期間の癌のリスク含む。これらのホルモン処置療法は、これらのプログラムにおいて男性パートナーの不十分な精子の質に関係する不妊症の問題によりＩＦＶが完全に正常な女性に提供される場合に、より問題となるだろう。従って、ＩＶＦのために卵母細胞の発生において使用される現在のプロトコルに関連する問題が存在する。排卵に受け入れられる卵母細胞のより優れた質の産出のための必要性が残されている。
【００１４】
ゴナドトロピンの投与に関するリスクにより、多様な他のプロトコルが示差されてきた。制御された卵巣刺激プロトコルのリスク、副作用、及び経済的不利益を緩和するための一つの方法は、試験管内における成熟による未成熟卵母細胞の回収に関する。当該アプローチにおいて、女性は刺激されず、又は最小の刺激のみを受け、そして回収された卵母細胞は、試験管内においてホルモン処置にかけられる。当該試験管内成熟（ＩＶＭ）プロトコルは、上述のいくつかの副作用の有意な減少／除去に関し、そして治療に使用されるホルモンの量の減少という二次的な経済的有利性を有する。しかしながら、試験管内成熟（ＩＶＭ）は、ＩＶＦのための卵母細胞の産出に有効な方法になるが、臨床的なヒトＩＶＭの記録された成功割合は低下している。
【００１５】
他の代替として、卵胞成長を助け、そしてＯＨＳＳのリスクを避ける能力を有する代替医薬によるＦＳＨの置き換えが高く所望されるであろう。更に、卵胞成長を生じるためのＦＳＨで作用する調製物の供給もまた高く所望され、低内因性ＦＳＨレベルを増大することができ、低内因性ＦＳＨレベルが原因により無排卵である患者において卵胞成長を生じ、あるいは、それは外因的に投与されたＦＳＨを増大することができ、ＡＲＴにおいて乏しい応答者における向上された応答を許容し、あるいはＯＨＳＳのリスクを避けるのと同時に低用量及び／又は頻繁なＦＳＨ注射によりＡＲＴにおいて同じ応答を許容することができる。
【発明の開示】
【００１６】
ある観点において、本発明は、卵胞の成長及び成熟を刺激するための有効量におけるホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤で哺乳類を処置すること含んで成る卵胞成熟を増大する方法を供する。他の観点において、本発明は、患者における卵巣の卵胞の成長を刺激するために、ホスホジエステラーゼ酵素の阻害剤の使用を供する。更に他の観点において、本発明は、患者に対して有効用量のホスホジエステラーゼ阻害剤の投与を含んで成る、これが必要な患者において卵巣の卵胞成長を刺激する方法を供する。また、本発明に含まれる観点は、哺乳類をＰＤＥ阻害剤及びゴナドトロピンホルモンで処置することを含んで成る卵胞成熟を増大する方法である。ここで、ＰＤＥ阻害剤及びゴナドトロピンは、卵胞成長及び成熟を刺激するための総体的有効量において供される。
【００１７】
他の観点において、本発明は、患者における卵巣の卵胞成長を刺激するための医薬の調製のためのＰＤＥ阻害剤の使用を供する。好ましくは、ＰＤＥ阻害剤は、排卵の誘発が行われている患者における卵巣の卵胞の成長を刺激するための医薬の調製において使用される。より好ましくは、ＰＤＥは、補助生殖医療のために調節された卵巣過剰刺激が起きている患者における卵巣の卵胞の成長を刺激するための医薬の調製において使用される。当該ＰＤＥ阻害剤は、排卵前期の刺激期の初期において投与され、そして好ましくは、排卵期が多量のＬＨ活性を有する薬剤（例えば、５，０００〜１０，０００ｈＣＧ）の投与により開始される前又はその日に投与される。最も好ましくは、ＰＤＥ阻害剤の投与は、ＨＣＧが投与される２、１、又は０日前に止める。最も好ましくは、ＰＤＥ阻害剤の投与はｈＣＧを投与する日に止める。
【００１８】
上記医薬は、ＦＳＨ、又はＦＳＨ活性を有する薬剤、又は内因性ＦＳＨの放出を誘導する薬剤と同時に、別々に、又は続けて投与してもよい。好ましくは、上記医薬は、ＦＳＨと同時に、別々に、又は続けて投与される。あるいは、上記医薬は、ＦＳＨ活性を有する薬剤、又は内因性ＦＳＨの放出を誘導する薬剤と同時に、別々に、又は続けて投与される。上記医薬は、好ましくは、月経の開始日又は約２〜３日後に投与される。それは、毎日、ｈＣＧの排卵誘引用量において、好ましくは５，０００〜１０，０００ＩＵで卵胞成長が十分となるまで投与される。上記医薬がＦＳＨとともに投与される場合、卵胞成長の点において同じ結果を達成するために、ＦＳＨの用量は、ＰＤＥ阻害剤が不存在の同じ患者において必要とされる用量に関して減少する。
【００１９】
本発明の当該観点に従う好ましい態様において、ＰＤＥ阻害剤は、１、５、及び６から選択される少なくとも１つのＰＤＥ型の阻害剤である。当該ＰＤＥ阻害剤は以下の化合物から選択される：
５−［２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）；ザプリナスト；ジピリジダモール；５−（２−エトキシ−５−モルホリノアセチルフェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−２０ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシエトキシ）ピリジ−ｎ−３−イル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；（＋）−３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシ−１（Ｒ）−メチルエトキシ）ピリジン−３−イル］−２−メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−ｌ−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−［２−メトキシエチル］−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−イソ−ブトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−フェニル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−（５−アセチル−２−プロポキシ−３−ピリジンイル）−３−エチル−２−（１−イソプロピル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−（５−アセチル−２−ブトキシ−３−ピリジンイル）−３−エチル−２−（１−エチル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（−３，４−メチレンジオキシフェニル）ピラジノ［２’，１’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（タダラフィル；ＩＣ−３５１）；公表された国際出願ＷＯ９５／１９９７８の実施例７８及び９５の化合物、並びにその実施例１、３、７及び８の化合物；２−［２−エトキシ−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル−１−スルホニル）−フェニル］−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−オン（バルデナフィル）；公表された国際出願Ｗ０９３／０７１２４（ＥＩＳＡＩ）の実施例１１の化合物；Ｒｏｔｅｌｌａ ＤＰ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０００，４３，１２５７由来の化合物３及び１４；４−ブロモ−５−（ピリジルメチルアミノ）−６−［３−（４−クロロフェニル）−プロポキシ］−３（２Ｈ）ピリダジノン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソル−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キノゾリニル］−４−ピペリジン−カルボン酸、モノナトリウム塩；（＋）−ｃｉｓ−５，６ａ，７，９，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２−［４−（トリフルオロメチル）−フェニルメチル−５−メチル−シクロペント−［４，５］イミダゾ［２，１−ｂ]−プリン−４（３Ｈ）オン；フラジオシリン；ｃｉｓ−２−ヘキシル−５−メチル−３，４，５，６ａ，７，８，９，９ａ−オクタヒドロシクロペント［４，５］−イミダゾ［２−，１−ｂ］プリン−４−オン；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；４−ブロモ−５−（３−ピリジルメチルアミノ）−６−（３−（４−クロロフェニル）プロポキシ）−３−（２Ｈ）ピリダジノン；ｌ−メチル−５（５−モルホリノアセチル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ（４，３−ｄ）ピリミジン−７−オン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソル−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キナゾリニル］−４−ピペリジンカルボン酸、モノナトリウム塩；ファーマプロジェクト Ｎｏ．４５１６（Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）；ファーマプロジェクト Ｎｏ．５０５１（Ｂａｙｅｒ）；ファーマプロジェクト Ｎｏ．５０６４（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ；ＷＯ９６／２６９４０を参照のこと）；ファーマプロジェクト Ｎｏ．５０６９（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｐｌｏｕｇｈ）；ＧＦ−１９６９６０（Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）；Ｅ−８０１０及びＥ−４０１０（Ｅｉｓａｉ）；Ｂａｙ−３８−３０４５＆Ｂａｙ−３８−９４５６（Ｂａｙｅｒ）、ビンポセチン（Ｒｉｃｈｔｅｒ ｇｉｄｅｏｎ）；ＳＣＨ−５１８６６（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、ＳＣＨ−５９４９８；（６ａＲ，９ａＳ）−２−（ビフェニルイルメチル）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ−［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）−オン；５’−メチル−２’（ビフェニルイルメチル）−３’−（フェニルメチル）スピロ［シクロペンタン−１，７’（８’Ｈ）−［３Ｈ］イミダゾ［２，１−ｂ]プリン］−４（５’Ｈ）−オン；（６ａＲ，９ａＳ）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−２−（フェニルエチニル）−３−（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ［２，１−ｂ］−プリン−４（３Ｈ）−オン；ジピリジダモール；ＡＷＤ−１２−１７１及びＡＷＤ−１２−２１７（ＡＳＴＡ Ｍｅｄｉｃａ）；ＢＭＳ−３４１４００（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｅｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）；ＵＫ−３４３，６６４（Ｐｆｉｚｅｒ）；５Ｅ−３６２３、５Ｅ−３５６９、５Ｅ−３６５７、Ｅ４０２１（Ｅｉｓａｉ）；ＫＳ−５０５ａ（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ）；ＹＣ−１（Ｙｕｎｇ Ｓｈｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）；ＩＤＤＢレファレンス３２３９５１（Ｂａｙｅｒ）；ＷＩＮ−６１６９１（Ｓａｎｏｆｉ Ｗｉｎｔｈｒｏｐ）；ＦＲ２２６８０７（Ｆｕｊｉｓａｗａ）；ＩＤＤＢレファレンス４６１３１７、４６２５０３、４６１３２１、４６１３２４、４６６１４６（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）；ピリジン−４−イルメチル３−（１，３−ベンゾジオキソル−５−イル）−９−オキソ−１，３，４，９テトラヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］キノリン−２−カルボキシレート：
【化１】
Ｊｉａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４６：４４１−４４４（２００３）の表１に挙げる化合物、特に、化合物２０ｂ，２０ｅ，２０ｆ，２０１，２０ｏ，２０ｐ，（−）−２０ｑ，２０ｔ，２０ｕ，２０ｖ，２０ｗ及び２６ａ。
【００２０】
ＰＤＥ阻害剤は、ＰＥＤ１若しくはＰＥＤ５の選択的阻害剤、又はＰＤＥ１若しくはＰＤＥ５であってよい。当該ＰＥＤ阻害剤は、シルデナフィル及びザプリナスト、ジピリダモール、並びに（６ａＲ，９ａＳ）−２−（ビフェニルイルメチル）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ−［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）−オン及び５’−メチル−２’（ビフェニルイルメチル）−３’−（フェニルメチル）スピロ［シクロペンタン−１，７’（８’Ｈ）−［３Ｈ］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン］−４（５’Ｈ）−オン(Ahn, et al. , J. Med. Chem., 40: 2196-2210 (1997) においてそれぞれ説明されている「化合物番号３１」及び「化合物番号３３」) から選択されてよい。
【００２１】
他の観点において、本発明は、試験管内において、卵母細胞をＰＤＥ阻害剤で、又はＰＤＥ阻害剤及びゴナドトロピンホルモンで処置することを含んで成る、試験管内における卵母細胞の成熟の方法を供する。ここでＰＤＥ阻害剤及びゴナドトロピンは、卵母細胞の成熟に十分な合計量として供される。好ましくは、上記処置の不存在における０〜１オーダーにおける成熟卵母細胞数の増加は、本明細書において説明される方法の使用により、４又はそれ以上に増加する。
【００２２】
本発明の特別な観点は、動物に対して少なくとも１つのＰＤＥ阻害剤及びゴナドトロピンホルモンを含んで成る組成物の投与を含んで成る卵胞の成熟を増加する方法を供する。ここでＰＤＥ阻害剤及びゴナドトロピンは、絨毛性ゴナドトロピン応答性卵母細胞の数を増大するために十分な合計量で投与される。特に好ましい態様において、ＰＥＤ阻害剤はＰＤＥ４阻害剤である。使用することができる典型的なＰＤＥ４阻害剤は、制限されることなく、ピクラミラスト、ロフルミラスト、アリフロ、フィラミナスト、メソプラム、Ｄ４４１８、アロフィリン、及びＣＬ１０４４から成る群から選択されるものを含む。更なるＰＤＥ４阻害剤を使用してもよい。多くは、以下の本明細書において例示されるが、ＰＤＥ４阻害活性を有する化合物の類似体及び誘導体もまた使用できることが理解されるべきである。本発明の方法は、１つのＰＤＥ阻害剤のみを使用して行うことができることが意図される。あるいは、複数のＰＤＥ阻害剤の反応混液を利用することができる。このような反応混液は、１又は複数の他のＰＤＥ阻害剤に追加して１又は複数のＰＤＥ4阻害剤を含んでよい。上記組成物は、少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤、及び、ＰＤＥ１阻害剤、ＰＤＥ５阻害剤、ＰＤＥ６阻害剤、ＰＤＥ７阻害剤、ＰＤＥ９阻害剤、ＰＤＥ１０、及びＰＤＥ１１阻害剤から成る群から選択される阻害剤、少なくとも１つのほかのＰＤＥ阻害剤を含んで成ることが意図される。特別な態様において、本発明の方法は、２又は複数のＰＤＥ４阻害剤を含んで成る組成物を利用する。
【００２３】
本発明の方法において、卵胞の成熟を刺激又は増大するために使用されるゴナドトロピンは、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、及び絨毛性ゴナドトロピン（ＣＧ）並びにこれらの組み合わせから成る群から選択される。好ましくは、当該ゴナドトロピンはＦＳＨである。他の態様において、当該方法は、ＦＳＨを投与すること、更に、非−ＦＳＨゴナドトロピンホルモン、例えば、ＬＨを投与することを含んで成る。あるいは、当該方法は、ＦＳＨの刺激剤、アゴニスト又はアジュバントとの組み合わせにおけるＦＳＨとの投与を含んで成る。あるいは、当該方法はＰＤＥ４阻害剤と併用して、ＦＳＨの刺激剤、アゴニスト又はアジュバント単独の投与を含んで成ってよい。典型的なＦＳＨ活性の刺激剤は、アロマターゼ阻害剤、例えば、レトロゾール、アナストロゾール及びボロゾール（引用により本明細書に組み入れられているＰＣＴ／ＥＰ０１／１４７３０及び米国特許第２００２０１０３１０６号を参照のこと）を含む。
【００２４】
特別な態様において、上記ＰＤＥ阻害剤及びゴナドトロピンホルモン処置は同時に投与される。「ゴナドトロピンホルモン処置」により、本発明は、ＦＳＨ処置単独、非−ＦＳＨゴナドトロピンとの組み合わせにおける処置、あるいはＦＳＨの刺激剤若しくは他のアゴニスト単独、あるいはＦＳＨ及び／又は他の非−ＦＳＨゴナドトロピンとの組み合わせにおける処置のいずれかを意図する。いくつかの態様において、当該ＰＤＥ阻害剤は、ゴナドトロピンホルモンの投与前に投与される。他の態様において、ＰＤＥ阻害剤は、ゴナドトロピンホルモンの投与後に投与される。ＦＳＨの薬用量は、臨床的設定において慣習的に使用されるいずれかの薬用量でよい。例えば、ＦＳＨは約５〜４５０ＩＵ／日の範囲の薬用量で投与することができる。より好ましくは、ＦＳＨは約５〜７５ＩＵ／日の範囲の薬用量で投与される。特別な態様において、ＰＤＥ又は他のＰＤＥ阻害剤の投与は、個々に対して通常投与されるＦＳＨの量において減少を許容するであろうことが意図される。当該出願の目的のために、「最適以下の」ＦＳＨの用量は、いずれかのこのようなＦＳＨの減少した薬用量であり、これは卵胞の成熟の最適な刺激をもたらすものよりも少ないＦＳＨの薬用量である。当該ＦＳＨは、組み換えＦＳＨ（ｒ−ＦＳＨ）であってよく、好ましくは、ヒト組み換えＦＳＨ（ｈＦＳＨ）である。他の態様において、当該ＦＳＨは尿から精製される。
【００２５】
また、本発明は、哺乳類における生体内において排卵前期の卵胞の発達を増加する方法を供し、当該方法は、哺乳類に対して、少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤及び外因性ＦＳＨホルモンを含んで成る組成物の投与を含んで成る。このような方法は、更に、ＰＤＥ４及びＦＳＨホルモンの投与の前に、哺乳類における内因性ＦＳＨ及びＬＨ生成物の抑制を含んで成ってよい。好ましくは、当該外因性ＦＳＨホルモンは、組み換えＦＳＨホルモンである。他の態様において、外因性ＦＳＨホルモンは、尿ＦＳＨホルモンである。
【００２６】
特別の態様において、上記ＰＤＥ４阻害剤は、約０．０５ｍｇ／日〜約５ｍｇ／日の用量において投与される。当該阻害剤の薬用量は、特定の阻害剤、並びに処置される患者の特性に従い変化するであろうことが意図される。当該薬用量は、０．０５ｍｇ／日；０．０７５ｍｇ／日；０．０１０ｍｇ／日；０．１２５ｍｇ／日；０．１５０ｍｇ／日；０．１７５ｍｇ／日；０．２０ｍｇ／日；０．２２５ｍｇ／日；０．２５０ｍｇ／日；０．２７５ｍｇ／日；０．３０ｍｇ／日；０．３２５ｍｇ／日；０．３５０ｍｇ／日； ０．３７５ｍｇ／日；０．４０ｍｇ／日；０．４２５ｍｇ／日；０．４５０ｍｇ／日；０．４７５ｍｇ／日；０．５０ｍｇ／日；０．５２５ｍｇ／日；０．５５０ｍｇ／日；０．５７５ｍｇ／日；０．６０ｍｇ／日；０．６２５ｍｇ／日；０．６５０ｍｇ／日；０．６７５ｍｇ／日；０．７０ｍｇ／日；０．７２５ｍｇ／日；０．７５０ｍｇ／日；０．７７５ｍｇ／日；０．８０ｍｇ／日；０．８２５ｍｇ／日；３４００．８５０ｍｇ／日；０．８７５ｍｇ／日；０．９０ｍｇ／日；０．９２５ｍｇ／日；０．９５０ｍｇ／日；０．９７５ｍｇ／日；１．０ｍｇ／日；１．２５ｍｇ／日；１．５ｍｇ／日；１．７５ｍｇ／日；２．０ｍｇ／日；２．２５ｍｇ／日；２．５ｍｇ／日；２．７５ｍｇ／日；３．０ｍｇ／日；３．２５ｍｇ／日；３．５ｍｇ／日；３．７５ｍｇ／日；４．０ｍｇ／日；４．２５ｍｇ／日；４．５ｍｇ／日；４．７５ｍｇ／日；５．０ｍｇ／日又は１日当たりそれ以上でよいことが意図される。好ましい態様において、当該ＰＤＥ４阻害剤は、約１０ｍｇ／日〜約２００ｍｇ／日の薬用量において投与されることが意図される。当業者は、単に典型的な薬用量及び範囲であることを理解すべきである。本明細書において表現的に引用される薬用量間のいずれかの個々の数値量が好ましくは考慮され、そしてそれぞれのこれらの用量の個々の値は、本発明の範囲内であることが特に意図される。本明細書に挙げられる特定の用量間の当該個々の値は、読みやすいように簡単に省略され、だからといって出願の範囲から除外することを意図したものではない。同じことは本明細書における他の非−ＰＤＥ阻害剤組成物にもあてはまる。
【００２７】
他の態様において、上記ＦＳは、５ ＩＵ ＦＳＨ／日〜７５ ＩＵ ＦＳＨ／日の薬用量において投与されることが意図される。しかしながら、当該ＦＳＨは１日当たり１５０ ＩＵ ＦＳＨの薬用量として投与することもできる。当該ＦＳＨは、好ましくは、単一用量において投与される。他の態様は、複数用量においてＦＳＨを投与することを考慮する。当該ＦＳＨは、筋肉内、皮下的、又はいずれかの他の慣習的な投与方法を介して投与することができる。好ましくは、ＦＳＨは、哺乳類の月経周期の２日目〜１４日目に投与される。特別な態様において、ＦＳＨは、連続して７〜１２日目に投与される。
【００２８】
特別な態様において、内因性ＦＳＨ及びＬＨの抑制は、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）又はこれらの類似体の哺乳類に対する投与を含んで成る。より好ましくは、当該ＧｎＲＨは、ＰＤＥ４阻害剤及びＦＳＨホルモンの投与の３０日前に哺乳類に対して投与される。当該ＧｎＲＨの薬用量は、内因性ゴナドトロピンの抑制のために慣習的に使用されるいずれかの薬用量でよい。このような態様は、一般的には、１日当たり約０．２５ｍｇ〜３ｍｇのＧｎＲＨの薬用量範囲において投与されるＧｎＲＨ又はこれらのアンタゴニストを利用してもよい。
【００２９】
本発明の方法において、ＰＤＥ４阻害剤及びＦＳＨの投与を欠くｈＣＧの排卵性卵母細胞の産出と比較して、哺乳類におけるＰＤＥ４及びＦＳＨの投与は、よりｈＣＧ排卵性卵母細胞を産出する。例えば、これらの処置を欠く場合、当該対象は、０〜１のｈＣＧ排卵性卵母細胞を産出できるが、しかしながら、当該処置はその数を４又はそれ以上のｈＣＧ排卵性卵母細胞に増加する。従って、本発明の方法の結果として、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上の卵母細胞を回収できる。本発明の方法は、ＰＤＥ４阻害剤及びＦＳＨホルモンの初期投与後１２日目に卵母細胞を回収することを意図する。当該方法は、更に、試験管内における回収した卵母細胞の受精、そして回収し、受精した卵母細胞を４〜８細胞期に培養することを含む。このような４〜８細胞期の受精した卵母細胞は、更に哺乳類の子宮に移植することができる。当該哺乳類は、当該卵母細胞を回収したものと同じ哺乳類であってよく、又は当該卵母細胞を回収したものと異なる哺乳類であってよい。
【００３０】
本発明は、更に、不妊症の処置のためのキットを供する。当該キットは、医薬的に受容可能な製剤において、１以上のＰＤＥ４阻害剤を含んで成る第一組成物、及び医薬的に受容可能な製剤においてＦＳＨを含んで成る第二組成物を含んで成る。当該キットは尿ＦＳＨ又は組み換えＦＳＨを含んで成ってよい。ＦＳＨのいずれかの場合、好ましくはヒトＦＳＨである。当該キットのＦＳＨは、好ましくは、約５ ＩＵ ＦＳＨ〜約７５ ＩＵ ＦＳＨの単位用量において供される。当該キットは、更に、医薬的に受容可能な製剤においてＬＨを含んで成る第三組成物を含んで成ってよい。当該キットにおける単位用量において利用されるＬＨの典型的な量は、約７５ ＩＵ ＬＨ〜約１５０ ＩＵ ＬＨである。
【００３１】
本発明の他の特色及び有利性は、以下の詳細な説明により明らかになるであろう。しかしながら、詳細な説明及び本発明の好ましい態様を示す特定の実施例は、発明の精神の範囲における多様な変化及び修正は当該詳細な説明より当業者に明らかになることから、実例の一つとして与えられるものと理解されるべきである。
好ましい態様の詳細な説明
【００３２】
ゴナドトロピンホルモンを使用する卵巣刺激は、現在、受胎能の最適以下のレベルを有するカップルのための有意な処置療法として認識されている。ＩＶＦの手順は、受精のための卵母細胞の産出を刺激するために、ＦＳＨ及び他のゴナドトロピンホルモンの有意な量の使用に依存する。しかしながら、このような卵巣刺激は、しばしば、有害な副作用に導く。従って、ゴナドトロピンによる卵巣刺激に専ら依存しない排卵性卵母細胞の産出を増加する更なる方法が必要である。
【００３３】
本発明は、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤を使用する卵胞成熟の誘導に向けられる。未成熟のラットに投与する場合、ＰＤＥの阻害剤はｈＣＧ−排卵性母卵細胞数の増加に導くことが発見されている。より具体的には、ＦＳＨの最適以下の用量と併用して投与する場合、ＰＤＥ４阻害剤は、このような卵母細胞の数を実質的に増加させる。また、本発明者は、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）酵素、好ましくは、１、５、６、７、９、１０、１１から選択されるＰＥＤ型、より好ましくはＰＤＥ１及び５型の阻害剤の分子が、本発明の全ての範囲において、最適以下の量のＦＳＨの存在下において、卵胞の成長を補助することができるという驚くべき発見をした。
【００３４】
特別な典型的な態様において、ＰＤＥ４阻害剤であるピクラミラスト及びロフルミラストの投与が、ＦＳＨ−誘導性卵胞成熟を増加したことが発見された。最も顕著な効果は、ＰＤＥ４阻害剤と併用して低用量のＦＳＨを投与した場合に明らかである。図１２〜１４のデータからわかるように、低用量のＦＳＨ単独の投与（図１１及び図１２を参照のこと）は、高用量のＦＳＨで刺激した卵巣と比較して、ラット当たりより少ない排卵された卵子を産出する。それは、典型的には、ラットあたり１５〜１８の排卵された卵子のオーダーにおいて産出されるであろう。高用量のＦＳＨを使用する問題は、上記において議論されている。本発明は、ラットをＰＤＥ４阻害剤で処置した場合、排卵性卵母細胞の数が、低ＦＳＨで示される基底数から顕著に増加させることができることを示す。実際に、図１１及び図１２からわかるように、低用量のＦＳＨと０．４ｍｇ／ｋｇのピクラミラスト又はロフルミラストのいずれかの組み合わせた投与は、高用量のＦＳＨ単独によるものより、排卵性卵母細胞をより産出した（図１１及び図１２）。更に、図１４からわかるように、ＦＳＨの共投与の無い高用量のピクラミラスト（例えば、２ｍｇ／ｋｇ）は、ｈＣＧ排卵性卵母細胞を増加した。
【００３５】
上記の典型的なデータを考慮すると、ＰＤＥ阻害剤、及び特にＰＤＥ４阻害剤は、生体内における排卵性卵母細胞を産出するために使用することができることが予想される。これは、女性の不妊症の処置において特に有用であり、正常な女性にとっても、特に妊娠の可能性を上昇させることを所望する場合、このような処置により有益となるであろう。より具体的な態様において、ＰＤＥ４阻害剤は、ＰＤＥ阻害剤の投与の欠如において産出される排卵性卵母細胞の数と比較して、生体内における哺乳類中の排卵性卵母細胞の数の増加を産出することによる卵胞の成熟の増強又は増加において特に有用であることが予想される。
【００３６】
図１４において明らかなように、同時的な低用量のＦＳＨの刺激がないＰＤＥ４阻害剤単独の投与は、女性における排卵性卵母細胞を増加するために十分であることが予想される。このように、本発明のある方法は、外因性ＦＳＨでの卵巣刺激の必要性を完全に回避する。あるいは、図１１〜１４からわかるように、本発明の方法はまた、排卵性卵母細胞の顕著な増加を産出するのに十分なＰＤＥ４阻害剤との組み合わせにおける低用量のＦＳＨの投与を含んで成る。ＰＤＥ４阻害剤が単独で、又は低レベルのＦＳＨとの組み合わせ処置の一部として投与されるかに関わらず、本発明の方法は、排卵性卵母細胞の治療的に有利な増加を生じるために必要なＦＳＨの刺激の量を顕著に減少することにより、当業界において有意な有利性を供する。必要とされるＦＳＨの量のこのような顕著な減少は、受精治療におけるゴナドトロピンの投与に関する多くの問題を減少し、又は除去することから極めて有利である。特に、ＦＳＨ薬用量における減少は、不妊治療を行っている女性におけるＯＨＳＳの誘導の可能性を減少するであろう。
【００３７】
本明細書において議論された大半は、ＰＤＥ４阻害剤の使用に関し、本発明の発見は、他のいずれかのＰＤＥ阻害剤単独、又はＰＤＥ４阻害剤との組み合わせにおける、低用量のＦＳＨとの組み合わせにおける、又はＰＤＥ４及び低用量のＦＳＨとの組み合わせにおける使用を支持する。例えば、他のＰＤＥ阻害剤、例えば、ＰＤＥ５阻害剤は、哺乳類における排卵性卵母細胞の数を増加する方法において使用することができる。このような方法はＰＤＥ５阻害剤単独において使用でき、あるいは当該方法はＰＤＥ４阻害剤又は低用量のＦＳＨとのいずれかの組み合わせにおいてＰＤＥ５阻害剤を使用することができ、あるいは、当該方法はＰＤＥ４阻害剤及び低用量のＦＳＨと併用してＰＤＥ５阻害剤を使用することができる。好ましい態様において、当該阻害剤は、ホスホジエステラーゼ１型及び／又は５型から選択できる。（「選択的」ＰＤＥ１型及び／又は５型の阻害剤は、例えば、他のＰＤＥ型の分子のＩＣ50よりも、約１０倍、好ましくは１００倍、より好ましくは１０００倍低いＰＤＥ１型及び／又は５型のＩＣ50を示す分子を意味する。ＰＤＥ酵素の分子のＩＣ50は、例えば、Thompson, et al., Adv. Cyclic Nucleotide Res. 10 : 69-92 (1979)において報告されるとおり、試験管内アッセイにより測定することができる。また、好ましくは、ＰＤＥ阻害剤は、５００Ｄａ以下の分子量を有する。更に好ましい態様において、ＰＤＥ阻害剤は、ＰＤＥ１型の阻害剤であり、最も好ましくはＰＤＥ１型の選択的阻害剤である。好ましくは、ＰＤＥ阻害剤は、非ペプチドＰＤＥ阻害剤である。更に他の好ましいものは、ＰＤＥ４阻害剤がＰＤＥ５阻害剤及び低用量のＦＳＨと併用して投与される方法である。このような方法において、ＰＤＥ阻害剤が投与される場合に使用されるＦＳＨの用量は、同じレベルの卵胞成熟を達成するためにＰＤＥ阻害剤の使用の欠如における同患者に必要であろうＦＳＨの用量の７５％以下であってよい。より好ましくは、ＦＳＨの量は、同患者において必要とされるＦＳＨの用量の約５０％以下であり、更により好ましくは、ＰＤＥ阻害剤を伴わない同患者において必要とさるＦＳＨの用量の少なくとも３０％以下であろう。ＰＤＥ阻害剤及びＦＳＨ組成物の使用の組み合わせ及び方法は、明細書の以下の詳細において議論される。
ＦＳＨ及び他のゴナドトロピン組成物
【００３８】
ＦＳＨは、２つのサブユニットから構成される下垂体の糖タンパク質ホルモンである。α−サブユニットは、ＦＳＨ、並びに他の糖タンパク質であるＬＨ、ｈＣＧ及びＴＳＨに共通であり、β−サブユニットはＦＳＨ特異性を与える。不妊治療の分野は進歩しており、そして現在、商業的に入手可能な、そして本発明の方法において使用できる多数のＦＳＨ調製物が存在する。このような商業的な調製物は、尿誘導ＦＳＨ組成物及び組み換えＦＳＨ組成物を含む。これらの組成物は、例えば、ＰｅｒｇｏｎａｌTM、ＦｅｒｔｉｎｅｘTM、ＲｅｐｒｏｎｅｘTM、ＢｒａｖｅｌｌｅTM、ＨｕｍｅｇｏｎTM、Ｇｏｎａｌ−Ｆ、ＦｏｌｌｉｓｔｉｍTMを含む。これらは単に、典型的な商業的ＦＳＨ調製物あり、当業者は、本発明の方法及び組成物における使用のための他のこのようなＦＳＨ調製物を産出することが可能であることを理解するであろう。先の組成物が、使用できるＦＳＨの製剤及び薬用量としての典型的なガイダンスを供する範囲に対し、これらは以下にさらに詳細に議論される。しかしながら、このような用量及び製剤は容易に改変でき、そして１又は複数のＰＤＥ阻害剤との組み合わせにおける投与される場合、このような投与の欠如において産出される卵母細胞の数と比較してＦＳＨの薬用量及び製剤が生体内における排卵性卵母細胞の数の増加が生じる限り、本発明の関係において有用となりうる。
【００３９】
ＨｕｍｅｇｏｎTM(Organon, West Orange, NJ)は、ＦＳＨ及びＬＨ活性を有するゴナドトロピンの精製された調製物である。ゴナドトロピンの当該調製物の使用のための特性、効能、及びプロトコルは、Physician's Desk Reference において詳細に議論されている(引用として本明細書に組み入れられているPDRTM 52nd Ed. 1998, ページ1949-1951)。端的には、各バイアルは、７５ ＩＵ、又は１５０ ＩＵ ＦＳＨ、７５ ＩＵ、又は１５０ ＩＵ ＬＨを含む。ＨｕｍｅｇｏｎTM及びｈＣＧは、無排卵の原因が機能的であり、且つ卵巣不全ではない無排卵の不妊症の女性において排卵及び妊娠のために、継続的な方法において投与することができる。同様に、ＨｕｍｅｇｏｎTM及びｈＣＧは、試験管内における受精プログラムに関連する排卵性の患者のために、複数の卵胞の発達を刺激するために必要とされる（即ち、卵胞発達の刺激）。典型的には、卵胞の成熟を生じるために使用されるＨｕｍｅｇｏｎTMの投与は、各患者に適用し、そして個別化することが必要とされる。しかしながら、典型的には、初期に推奨される用量は、筋肉内において７〜１２日間投与される７５ ＩＵ ＦＳＨ／ＬＨ／日、続いてｈＣＧの用量（５，０００〜１０，０００Ｕ）であり、最後のＨｕｍｅｇｏｎTMの用量から１日後に投与されるであろう。典型的には、ＨｕｍｅｇｏｎTMの治療は、治療の一過程において連続して１２日以上継続するべきではない。投与のために、ＨｕｍｅｇｏｎTMのバイアル（７５ ＩＵ ＦＳＨ／ＬＨ、又は１５０ ＩＵ ＦＳＨ／ＬＨのいずれかを含む）は２ｍｌの無菌生理食塩水に溶解し、そして直ぐに筋肉内に投与される。
【００４０】
Physician's Desk Reference (PDRTM, 52nd Ed. 1998, ページ2773-2775)において説明されているＰｅｒｇｏｎａｌTM(Serono Laboratories Inc. , Randolph, MA）は、本発明の方法のＦＳＨ組成物を供するために使用することができる閉経後の女性の尿から調製されるゴナドトロピンの他の商業的に説明された精製した調製物である。当該組成物は、筋肉内投与のために処方される。また、これは、７５ ＩＵ ＦＳＨ／ＬＨ、又は１５０ ＩＵ ＦＳＨ／ＬＨの単一用量を含んで成る医薬組成物である。当該医薬剤は、卵巣不全を有さない女性における卵胞の成長を生じるための女性に対する投与のための組成物としてよく認識されている。単に卵胞の成熟というより排卵に影響するように、ｈＣＧのボーラス投与により、７〜１２日間ＰｅｒｇｏｎａｌTM投与が続けられる。
【００４１】
Physician's Desk Reference (PDRTM, 57th Ed. 2003, ページ1325-1327)において説明されているＲｅｐｒｏｎｅｘTM(Ferring Pharmaceutical Inc., Tarrytown, NJ)は、閉経後の女性の尿から単離されるゴナドトロピンの他の典型的な精製された調製物である。７５ ＩＵ ＦＳＨ／ＬＨ、又は１５０ ＩＵ ＦＳＨ／ＬＨ活性の単一用量において入手可能な当該組成物は、卵巣の卵胞成長を生じるように７〜１２日間投与される。十分な卵胞成熟が生じたら、排卵を誘発するためにｈＣＧが投与される。ＲｅｐｒｏｎｅｘTMは、皮下的又は筋肉内的に、過少無排卵（oligoanovulation)を伴う不妊症の患者に対して、又は補助生殖医療を行っている患者のために投与することができる。最初の指標において、内因性ゴナドトロピンの抑制のために治療的な介入を受けている患者のために、１日当たり１５０ ＩＵの初期用量において、治療の最初の５日間、ＲｅｐｒｏｎｅｘTMが投与される。例えば、血清中のエストラジオール濃度の臨床的なモニタリング、及び膣の超音波モニタリングに基づき、引き続く投薬は患者の個々の応答に従い上方又は下方に調節される。好ましくは、薬用量の調整は、一日おき以上でされるべきではなく、そして調整当たり７５〜１５０ ＩＵ以上の変化を超えるべきではない。好ましくは、１日の最大用量は４５ ＩＵを超えるべきではなく、継続的なＲｅｐｒｏｎｅｘTMの治療の最大日数は１２日を越えるべきではない。このような薬用量調整のガイドラインは、本明細書において議論される他のＦＳＨ調製物に対しても適用可能である。患者に卵胞の成熟の兆候がみえたら、ＲｅｐｒｏｎｅｘTMに基づく治療の休止から１日後にｈＣＧを投与する。
【００４２】
補助生殖医療のためにＲｅｐｒｏｎｅｘTMで治療されている患者において、ここで患者は、初期のゴナドトロピン抑制治療を受けている（例えば、ＧｎＲＨ又はアンタゴニスト下垂体抑制）、典型的な初期用量は、２２５ ＩＵ ＲｅｐｒｏｎｅｘTMであってよく、それは、続いて患者の個々の応答に従い調整することができる。有意な卵胞の発達が示されたら、卵母細胞の回収のための調製において、最後の卵胞成熟を誘導するために、ｈＣＧ（５，０００〜１０，０００ＵＳＰ単位）を投与する。ＲｅｐｒｏｎｅｘTMの投与の結果、卵巣が異常に拡張した場合、ＯＨＳＳの発達の可能性を減少させるために、ｈＣＧを与えずにおく。上述のように、当該組成物は、皮下的に投与することができる。皮下投与のために、ＲｅｐｒｏｎｅｘTMを２ｍｌの生理食塩水と混合し、そして皮下注射は下腹部に与えられる。
【００４３】
Physician's Desk Reference (PDRTM, 52 d Ed. 1998, ページ2771-2773)において説明されているＦｅｒｔｉｎｅｘTM(Serono Laboratories Inc., Randolph, MA)は、閉経後の女性の尿から精製される高精製ＦＳＨ調製物である。ＦＳＨ組成物の精製は、ＦＳＨに対するマウスモノクローナル抗体、及び約８，５００〜１３，５００ ＩＵ ＦＳＨ／ｍｇのタンパク質、超低量のＬＨ、及びほかの尿タンパク質に関して９５％以上の純度の特異的な活性特性を有するＦＳＨの産出を使用して免疫親和性クロマトグラフィーを通して達成される。このような精製法は、非商業的な原料、例えば、閉経後の女性の尿からＦＳＨを得るために容易に使用することができる。ＦｅｒｔｉｎｅｘTMは、皮下的に投与することができ、そして７５ ＩＵ ＦＳＨ、又は１５０ ＩＵ ＦＳＨを含む容器中において供される。当該ＦＳＨは、７５ ＩＵ〜３００ ＩＵの典型的な薬用量範囲において投与される。
【００４４】
Physician's Desk Reference (PDRTM, 57th Ed. 2003, ページ1325-1327)において説明されているＢｒａｖｅｌｌｅTM(Ferring Pharmaceutical Inc. , Tarrytown, NJ）は、本方法において使用することができる他の典型的な高精製ＦＳＨ調製物である。ＢｒａｖｅｌｌｅTMは、皮下又は筋肉内に投与することができ、そして７５ ＩＵ及び１５０ ＩＵ ＦＳＨの単位用量において入手可能である。
【００４５】
Ｇｏｎａｌ ＦTMは、皮下投与に適当な組み替えＦＳＨ調製物である。Ｇｏｎａｌ ＦTMの特性及び特徴は、Physician's Desk Referenceにおいて詳細に説明されている(PDRTM, 57th Ed. 2003, ページ 3124-3128).
【００４６】
商業的に入手可能なこれらの化合物に追加して、当業者は、当業者に周知な技術を使用して天然資源、例えば、閉経後の女性の尿からＦＳＨを精製することを選択することができる（例えば、米国特許第５，７６７，０６７号を参照のこと）。
【００４７】
あるいは、当業者は、当業者に周知な技術を使用して組み換えＦＳＨを作製することを選択することができる。持続性のＦＳＨアゴニストは、本発明の方法において有用であることが特に予想される。例えば、ｈＣＧは、ＦＳＨよりも長い半減期を有することが知られている。これらのゴナドトロピンの両方は、β−サブユニットにより与えられている特異的な活性を伴い、共通のα−サブユニットを有する。あるゴナドトロピンのα−サブユニットは他のβ−サブユニットと共に使用することができ、そして更に生理活性キメラゴナドトロピンを産出することが実証されている。更に、ＬＨと比較して、ｈＣＧの増加した生物作用強度は、ｈＣＧのβ−サブユニットのカルボキシ末端ペプチドが原因であることが示されている(Matzuk et al., Endocrinology 126: 376-383,1990)。ＦＳＨの持続性のアゴニストは、ＦＳＨβ−サブユニットのカルボキシ末端におけるｈＣＧβ−サブユニットのカルボキシ末端ペプチドの伸展を含み産出することができる(LaPolt et al., Endocrinology, 131: 6,2514-2520, 1992)。このようなキメラ分子は、野生型のＦＳＨと比較して顕著に増加した循環半減期及び作用強度を有することが示されている(Fares et al. , Proc. Nat'1 Acad. Sci., 89: 4304-4308,1992)。
【００４８】
ＦＳＨの原料に関わらず、卵胞の成熟の有意な誘導はＦＳＨの最適以下の用量を使用して達成することができることが本明細書において実証されている。上述のように、不妊症処置プロトコルにおいて典型的に投与されるＦＳＨの用量は、約７日〜約１２日間で、約７５ ＩＵ ＦＳＨ／日〜約４５０ ＩＵ ＦＳＨ／日の範囲である。本発明の方法において、ＰＤＥ４又は他のＰＤＥ阻害剤と併用して卵胞の成熟を刺激するために使用されるＦＳＨの用量は、過少無排卵（oligoanovulation)の処置及び／又は補助生殖医療において現在使用されている用量と同じであってよい（即ち、１日当たり７５ ＩＵ ＦＳＨ〜約４５０ ＩＵ ＦＳＨ）。しかしながら、本発明はこのような用量がＰＤＥ４と併用して投与される場合、最適以下の用量であっても卵胞の成熟を得ることが可能であることを示し、これらの典型的な用量より低い用量であることが好ましい。
【００４９】
本発明は、５ＩＵ ＦＳＨ／日と同じ程度少量において使用できるこが意図される。従って、与えられたいずれかの処置療法は、５ ＩＵ ＦＳＨ／日、１０ ＩＵ ＦＳＨ／日、１５ ＩＵ ＦＳＨ／日、２０ ＩＵ ＦＳＨ／日、２５ ＩＵ ＦＳＨ／日、３０ ＩＵ ＦＳＨ／日、３５ ＩＵ ＦＳＨ／日、４０ ＩＵ ＦＳＨ／日、４５ ＩＵ ＦＳＨ／日、５０ ＩＵ ＦＳＨ／日、５５ ＩＵ ＦＳＨ／日、６０ ＩＵ ＦＳＨ／日、６５ ＩＵ ＦＳＨ／日、７０ ＩＵ ＦＳＨ／日、７５ ＩＵ ＦＳＨ／日、１５０ ＩＵ ＦＳＨ／日、又は１日当たりそれ以上の単位のＦＳＨを利用することができることが意図される。当然に、これらは、１日の薬用量の単なる例示であり、特に挙げられた用量のいずれかの間の整数の他の用量も本発明の治療方法において使用することができることが理解されるべきである。更に、当該薬用量は、与えられたいずれかのＦＳＨの投与において上方又は下方調節することができる。当該ＦＳＨは、ゴナドトロピンホルモンの投与のために通常利用されるいずれかの経路を通して投与することができる。最も好ましい投与方法は、筋肉内又は皮下注射のいずれかを介する投与である。当該処置プロトコルを通して、患者はＯＨＳＳの徴候を含む有害的な応答の徴候をモニターされる。
【００５０】
ＦＳＨに追加して、他のゴナドトロピンホルモンは、本発明の方法において使用され、そして本明細書において説明されるキットにおいてパッケージングされるだろう。このようなホルモンはｈＣＧを包含する。これは、Physician's Desk Reference (PDRTM, 57th Ed. 2003, ページ1324-1325)において説明されるＮｏｖａｒｅｌTM(Ferring Pharmaceutical Inc., Tarrytown, NJ)として商業的に入手可能であり、そしてヒト胎盤により産出されるゴナドトロピンであり、そして妊娠した女性の尿から得られる。ｈＣＧの他の商業的な調製物は、ＰｒｅｇｎｙｌTM(Organon, West Orange, NJ)である。当該ホルモンの使用のための特性、徴候、及びプロトコルは、Physician's Desk Reference(PDRTM, 57th Ed. 2003, ページ 2401)において説明される。これらの両調製物は、筋肉内注射される。典型的には、当該ホルモンは、排卵を誘発するために、約５，０００ユニット〜１０，０００ユニットの薬用量で投与される。
【００５１】
本明細書において使用され、そしてパッケージングすることができる更に他のホルモンはＧｎＲＨである。当該ホルモンの商業的に入手可能な多数の原料が存在する。ＧｎＲＨ及びこれらの類似体はＣｅｔｒｏｔｉｄｅTM(Serono, PDRTM, 57th Ed. 2003, ページ 3119- 3121)；ＥｌｉｇａｒｄTM(Sanofi-Synthelabo, PDRTM, 57th Ed. 2003, ページ2994)；ＬｕｐｒｏｎTM(PDRTM, 57th Ed. 2003, ページ3185)；及びＺｏｌａｄｅｘTM(AstraZeneca PDRTM, 57th Ed. 2003, ページ695)として商業的に入手可能である。これらの薬剤は、女性におけるＬＨ／ＦＳＨ産出を抑制するために使用され、そしてこのため、これらは毎日の排卵のために使用される。これらの薬剤の典型的な用量は、約０．２５ｍｇ〜約３ｍｇである。ＦＳＨによる卵巣刺激治療は、典型的には、月経周期の２日目又は３日目に開始される。当該ＧｎＲＨ又はこの類似体は１日に１回（低量、例えば、０．２５ｍｇ）、又は初期から中期の卵胞期（「刺激期」）においての単一用量（例えば、３ｍｇ）のいずれかで投与される。ＧｎＲＨはｈＣＧ投与の日まで投与される。超音波分析で卵胞の適切な大きさを明らかにし、ｈＣＧは排卵及び卵母細胞の最終的な成熟を誘発するために投与される。
ホスホジエステラーゼ阻害剤
【００５２】
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）は、細胞内の二次メッセンジャーサイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）及びサイクリックＧＭＰ（ｃＧＭＰ）の代謝に関する酵素ファミリーである。ＰＤＥ４は炎症及び免疫細胞において発見される、唯一ではないが、主なｃＡＭＰ代謝性酵素であるｃＡＭＰ特異性ＰＤＥであり、平滑筋におけるサイクリックＡＭＰ代謝に対して有意に貢献する。ＰＤＥ４は、抗うつ薬であるロリプラム（４−［３−（シクロペンチロキシ）−４−メトキシ−フェニル］−２−ピロリジノンにより阻害される（A. G. Scientific, Inc., San Diego, CA)。ロリプラムは開発されたＰＤＥ４阻害剤の第一次世代である（Conti, Biology of Reproduction 67: 1653-1661,2002を参照のこと)。引き続いて、他のこのような阻害剤は、制限されることなくピクラミラスト、ロフルミラスト、アリフロ、フィラミナスト、メソプラム、Ｄ４４１８、アロフィリン、ＣＬ１０４４を含むことが認識されている。更に、他のＰＤＥ阻害剤、例えば、シルデナフィル、ＡＳ７０１９４８／１及びＡＳ７０１９４７／１もまた本発明に有用であろう。このように、本発明における使用のための特に好ましいＰＤＥ４阻害剤は、リリミラスト（lirimilast)(Bayer AG）；ＣＤＰ−８４０(Celltech Group PLC)、ＮＣＳ−６１３(Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS)、Ｅ−４０２１(Eisai CoLtd)、ＧＲＣ−３７８５(Glenmark Pharmaceuticals Ltd)、ＩＣ−４８５(ICOS Corp）；ＩＰＬ−４５５９０３(Inflazyme Pharmaceuticals Ltd）、ＯＮＯ−６１２６(Ono Pharmaceutical Co Ltd)、トフィミラスト（Tofimilast)(Pfizer Inc.)、ピクラミラスト(Piclamilast)(Rhone-Poulenc SA(Aventis SA))、シロミラスト(Cilomilast)(SmithKline Beecham PLC)、フィラミナスト(Filaminast)(Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals Inc)、ＷＡＹ−１２６１２０(Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals IncO)、メソプラム（Mesopram)(Schering）、及びロフルミラスト(Roflumilast)(Altana)を含む。
【００５３】
上述及び他のＰＤＥ４阻害剤は、当業者に周知であり、そして、例えば、米国特許第６６４９６３３号；米国特許第６６２４１８１号；米国特許第６１２７３６３号；ＤＥ１５４５６８７，ＤＥ２０２８８６９，ＤＥ２１２３３２８，ＤＥ２３１５８０１，ＤＥ２４０２９０８，ＤＥ２４１３９３５，ＤＥ３９００２３３，ＥＰ０１０３４９７，ＥＰ０１３９４６４，ＥＰ０１５８３８０，ＥＰ０１６３９６５，ＥＰ０３３５３８６，ＥＰ０３８９２８２，ＥＰ０４２８３０２，ＥＰ０４３５８１１，ＥＰ０４５９５０５，ＥＰ０４７０８０５，ＥＰ０４９０８２３，ＥＰ０５０６１９４，ＥＰ０５１１８６５，ＥＰ０５２７１１７，ＥＰ０３９３５００，ＥＰ０５１０５６２，ＥＰ０５５３１７４，ＥＰ０５５７０１６，ＥＰ０６２６９３９，ＥＰ０６６４２８９，ＥＰ０６７１３８９，ＥＰ０６８５４７４，ＥＰ０６８５４７５，ＥＰ０６８５４７９，ＥＰ０７３６５３２，ＥＰ０７３８７１５，ＥＰ０７４８８０５，ＥＰ０７６３５３４，ＥＰ０８１６３５７，ＥＰ０８１９６８８，ＥＰ０８１９６８９，ＥＰ０８３２８８６，ＥＰ０８３４５０８，ＥＰ０８４８０００，ＪＰ９２２３４３８９，ＪＰ９４３２９６５２，ＪＰ９５０１０８７５，ＪＰ９８０７２４１５，ＪＰ９８１４７５８５，米国特許第５，７０３，０９８号、５，７３９，１４４号、ＷＯ９１１７９９１，ＷＯ９２００９６８，ＷＯ９２１２９６１，ＷＯ９３０７１４６，ＷＯ９３１５０４４，ＷＯ９３１５０４５，ＷＯ９３１８０２４，ＷＯ９３１９０６８，ＷＯ９３１９７２０，ＷＯ９３１９７４７，ＷＯ９３１９７４９，ＷＯ９３１９７５１，ＷＯ９３２５５１７，ＷＯ９４０２４６５，ＷＯ９４１２４６１，ＷＯ９４２０４５５，ＷＯ９４２２８５２，ＷＯ９４２７９４７，ＷＯ９５０１３３８，ＷＯ９５０１９８０，ＷＯ９５０３７９４，ＷＯ９５０４０４５，ＷＯ９５０４０４６，ＷＯ９５０５３８６，ＷＯ９５０８５３４，ＷＯ９５０９６２３，ＷＯ９５０９６２４，ＷＯ９５０９６２７，ＷＯ９５０９８３６，ＷＯ９５１４６６７，ＷＯ９５１４６８０，ＷＯ９５１４６８１，ＷＯ９５１７３９２，ＷＯ９５１７３９９，ＷＯ９５１９３６２，ＷＯ９５２０５７８，ＷＯ９５２２５２０，ＷＯ９５２４３８１，ＷＯ９５２７６９２，ＷＯ９５３５２８１，ＷＯ９５３５２８３，ＷＯ９５３５２８４，ＷＯ９６００２１８，ＷＯ９６０１８２５，ＷＯ９６０６８４３，ＷＯ９６１１６９０，ＷＯ９６１１９１７，ＷＯ９６１２７２０，ＷＯ９６３１４８６，ＷＯ９６３１４８７，ＷＯ９６３５６８３，ＷＯ９６３６５９５，ＷＯ９６３６５９６，ＷＯ９６３６６１１，ＷＯ９６３６６２５，ＷＯ９６３６６３８，ＷＯ９６３８１５０，ＷＯ９６３９４０８，ＷＯ９６４０６３６，ＷＯ９７０３９６７，ＷＯ９７０４７７９，ＷＯ９７０５１０５，ＷＯ９７０８１４３，ＷＯ９７０９３４５，ＷＯ９７１２８９５，ＷＯ９７１８２０８，ＷＯ９７１９０７８，ＷＯ９７２０８３３，ＷＯ９７２２５８５，ＷＯ９７２２５８６，ＷＯ９７２３４５７，ＷＯ９７２３４６０，ＷＯ９７２３４６１，ＷＯ９７２４１１７，ＷＯ９７２４３５５，ＷＯ９７２５３１２，ＷＯ９７２８１３１，ＷＯ９７３０９９９，ＷＯ９７３１０００，ＷＯ９７３２８５３，ＷＯ９７３５８５４，ＷＯ７６０９７３６９０５，ＷＯ９７４３２８８，ＷＯ９７４４０３６，ＷＯ９７４４３２２，ＷＯ９７４７６０４，ＷＯ９７４８６９７，ＷＯ９８０４５３４，ＷＯ９８０５３２７，ＷＯ９８０６６９２，ＷＯ９８０６７０４，ＷＯ９８０７７１５，ＷＯ９８０８８２８，ＷＯ９８０８８３０，ＷＯ９８０８８４１，ＷＯ９８０８８４４，ＷＯ９８０９９４６，ＷＯ９８０９９６１，ＷＯ９８１１１１３，ＷＯ９８１４４４８，ＷＯ９８１８７９６，ＷＯ９８２１２０８，ＷＯ９８２２４５３，ＷＯ９８４５２６８，ＷＯ９８５５４８１，ＷＯ９８５６７５６，ＷＯ９９０５１１１，ＷＯ９９０５１１２，ＷＯ９５０５１１３，ＷＯ９９０６４０４，ＷＯ９９１８０９５，ＷＯ７６５９５０１３３８，ＷＯ９６０３３９９，ＷＯ９６３６６２５，ＷＯ９６３６６２６，ＷＯ９７３５８５４，ＷＯ９８２１２０８，ＷＯ９８３１６７４，ＷＯ９８４０３８２，ＷＯ９８５５４８１，ＷＯ９９０５１１１，ＷＯ９９０５１１２，ＷＯ９９０５１１３，ＷＯ９９３１０７１及びＷＯ９９３１０９０において説明されている。このような物質のいずれかは、本発明の関係においてＰＤＥ４阻害組成物として使用することができる。優れた経口的な利用可能性を有する物質は特に好ましい。
【００５４】
ＰＤＥ４のこれらの阻害剤は、ＰＤＥ阻害剤の投与に通常利用されるいずれかの経路を通して投与することができる。典型的には、これらの化学薬剤は経口投与のために処方される。タブレットは、５０μｇ；１００μｇ；２００μｇ；２５０μｇ；３００μｇ；４００μｇ；４５０μｇ；５００μｇを含んで成るように処方される。現在、ロフルミラストは、経口投与のために、約４００μｇ／日の用量での肺の適応のために開発されている。また、このような用量は、本発明の関係において有用となりうる。ＰＤＥ４阻害剤は、対象に対して、２００μｇ／日；３００μｇ／日；４００μｇ／日；５００μｇ／日、又は１〜５ｍｇ／日の１日の用量において投与される。典型的には、患者は、処置の過程において１００μｇ／日と同じ程度少量を受けてもよい。当然に、対象は個別化された必要性に従い、より多い又はより少ないＰＤＥ４阻害剤を受けることができることが理解されるべきである。典型的には、１００ｍｇ／日以上の用量は避けるべきである。ＰＤＥ４阻害剤は、単一用量において送達されてもよく、あるいは与えられた期間にわたり複数用量において細分化し、投与することができる。当該阻害剤を含有する通常のタブレットの投与は、１日あたり１回、２回、３回、又はそれ以上としてよい。また、経口投与が好ましい一方で、他の投与経路を通して同程度の用量を投与することができることを理解するべきである。
【００５５】
シルデナフィルは、ＰＤＥ４阻害剤の処方及び投与経路としての追加的なガイダンスを供することができる医薬的に認可されたＰＤＥ５阻害剤である(例えば、PDRTM 57th Ed. ページ 2653-2656 を参照のこと)。処置プロトコルのために、当業者は、当該医薬的なＰＤＥ阻害剤のために使用されるガイドラインを使用することができる。他のＰＤＥ５、並びにＰＤＥ１阻害剤は本発明において有用となりうる。このような阻害剤は、"Inhibitors of PDE Enzymes in Infertility" と題された米国特許第６０／４７０，４３４号及び本発明の卵胞の成熟法において使用することができる排卵の誘引とするためのＰＤＥ３／４阻害剤の多様性を説明している"Methods of Inducing Ovulation"と題された米国特許出願第１０／０１４，８１２号（米国特許公報第２００２０１０３１０６，引用としてその全体において本明細書に組み入れられている)において説明されている。本発明の方法は、卵胞の成熟を増加する方法を誘導し、そして排卵の誘発方法とは異なることに注意するべきである。追加的な組成物は、ＰＣＴ／ＥＰ０１／１４７３０において説明されている。
【００５６】
本明細書において議論される治療と併用して有用となることができる典型的な阻害剤は、制限されることなく、５−［２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）；ザプリナスト；ジピリマドール；５−（２−エトキシ−５−モルホリノアセチルフェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−２０ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシエトキシ）ピリジ−ｎ−３−イル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；（＋）−３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシ−１（Ｒ）−メチルエトキシ）ピリジン−３−イル］−２−メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−［２−メトキシエチル］−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−イソ−ブトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−（ｌ−メチルピペリジン−４−イル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−フェニル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−（５−アセチル−２−プロポキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（ｌ−イソプロピル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−イソ−ブトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−フェニル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−（５−アセチル−２−ブトキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（１−エチル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（−３，４−メチレンジオキシフェニル）ピラジノ［２’，ｌ’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（タダラフィル；ＩＣ−３５１），即ち、公表された国際出願ＷＯ９５／１９９７８の実施例７８及び９５の化合物、並びにその実施例１、３、７及び８の化合物；２−［２−エトキシ−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル−１−スルホニル）−フェニル］−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−オン（バルデナフィル）；公表された国際出願Ｗ０９３／０７１２４の実施例１１の化合物（ＥＩＳＡＩ）；Ｒｏｔｅｌｌａ ＤＰ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０００，４３，１２５７由来の化合物３及び１４；４−ブロモ−５−（ピリジルメチルアミノ）−６−［３−（４−クロロフェニル）−プロポキシ］−３（２Ｈ）ピリダジノン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソル−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キノゾリニル］−４−ピペリジン−カルボン酸，モノナトリウム塩；（＋）−ｃｉｓ−５，６ａ，７，９，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２−［４−（トリフルオロメチル）−フェニルメチル−５−メチル−シクロペント−［４，５］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）オン；フラジオシリン；ｃｉｓ−２−ヘキシル−５−メチル−３，４，５，６ａ，７，８，９，９ａ−オクタヒドロシクロペント［４，５］−イミダゾ［２−，１−ｂ］プリン−４−オン；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；４−ブロモ−５−（３−ピリジルメチルアミノ）−６−（３−（４−クロロフェニル）プロポキシ）−３−（２Ｈ）ピリダジノン；１−メチル−５（５−モルホリノアセチル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ（４，３−ｄ）ピリミジン−７−オン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソル−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キナゾリニル］−４−ピペリジンカルボン酸，モノナトリウム塩；ファーマプロジェクトＮｏ．４５１６（Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）；ファーマプロジェクトＮｏ．５０５１（Ｂａｙｅｒ）；ファーマプロジェクトＮｏ．５０６４（ＫｙｏｗａＨａｋｋｏ；ＷＯ９６／２６９４０を参照のこと）；ファーマプロジェクトＮｏ．５０６９（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｐｌｏｕｇｈ）；ＧＦ−１９６９６０（Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）；Ｅ−８０１０及びＥ−４０１０（Ｅｉｓａｉ）；Ｂａｙ−３８−３０４５＆Ｂａｙ−３８−９４５６（Ｂａｙｅｒ），ビンポセチン（Ｒｉｃｈｔｅｒ Ｇｉｄｅｏｎ）；ＳＣＨ−５１８６６（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ），ＳＣＨ−５９４９８，（６ａＲ，９ａＳ）−２−（ビフェニルイルメチル）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ−［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）−オン；５’−メチル−２’（ビフェニルイルメチル）−３’−（フェニルメチル）スピロ［シクロペンタン−１，７’（８’Ｈ）−［３Ｈ］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン］−４（５’Ｈ）−オン；（６ａＲ，９ａＳ）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−２−（フェニルエチニル）−３−（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ［２，１−ｂ］−プリン−４（３Ｈ）−オン；ジピリダモール；ＡＷＤ−１２−１７１及びＡＷＤ−１２−２１７（ＡＳＴＡ Ｍｅｄｉｃａ），ＢＭＳ−３４１４００（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｅｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ），ＵＫ−３４３，６６４（Ｐｆｉｚｅｒ），５Ｅ−３６２３，５Ｅ−３５６９，５Ｅ−３６５７，Ｅ４０２１（Ｅｉｓａｉ），ＫＳ５０５ａ（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ），ＹＣ−１（Ｙｕｎｇ Ｓｈｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ），ＩＤＤＢレファレンスナンバー３２３９５１（Ｂａｙｅｒ），ＷＩＮ−６１６９１（Ｓａｎｏｆｉ Ｗｉｎｔｈｒｏｐ），ＦＲ２２６８０７（Ｆｕｊｉｓａｗａ），ＩＤＤＢレファレンス４６１３１７，４６２５０３，４６１３２１，４６１３２４，４６６１４６（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）；ピリジン−４−イルメチル３−（１，３−ベンゾヂオキソル−５−イル）−９−オキソ−１，３，４，テトラヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］キノリン−２−カルボキシレート：
【化２】
Ｊｉａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４６：４４１−４４４（２００３）の表１に挙げられる化合物、特に化合物２０ｂ，２０ｅ，２０ｆ，２０ｌ，２０ｏ，２０ｐ，（−）−２０ｑ，２０ｔ，２０ｕ，２０ｖ，２０ｗ及び２６ａを含む。
【００５７】
特に好ましい、ＰＤＥ阻害剤は、シルデナフィル及びザプリナスト、ジピリダモール、及び化合物番号３１及び３３である(６ａＲ，９ａＳ）−２−（ビフェニルメチル）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ−［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）−オン；及び５’−メチル−２７（ビフェニルメチル）−３７−（フェニルメチル）スピロ［シクロペンタン−１，７７（８７Ｈ）−［３Ｈ]イミダゾ［２，１−ｂ］プリン］−４（５’Ｈ）−オンである。
【００５８】
本発明の方法において使用することができるＰＤＥ阻害剤を含んで成る医薬組成物は、ＰＤＥ阻害剤が意図する目的を達成するための有効量において含まれる全ての組成物を含む。更に、医薬組成物は医薬的に使用することができる当該活性化合物の調製剤への加工を促進する賦形剤及び補助剤を含んで成る適当な医薬的に受容可能な担体を含んでよい。適当な医薬的に受容可能な媒体は当業界において周知であり、例えば、当該分野におけるGennaro等の標準的な関連テキストにおいて説明されている。Gennaro, et al., of Remington's Pharmaceutical Sciences, Part 8, 20th Ed., Merck Publishing Company, Easton, Pennsylvania (2000)。医薬的に受容可能な媒体は、ＰＤＥ阻害剤の投与方法並びに溶解性及び安定性に関連して慣習的に選択することができる。例えば、血管内投与のための製剤は、バッファー希釈剤及び他の適当な添加物を含むことができる無菌水溶液を含んでよい。薬剤送達のための生体適合物質及び他のポリマーの使用、並びに特定の投与方法を確認するための異なる技術及び方法は、文献において開示されている(Luo, et al., Exp. Opifa. Ther. Patents, 11 : 1395-1410 (2001); Cleland, et al., 880 Curr. Opina. Bioteclanol., 12: 212-9 (2001))。
【００５９】
上記ＰＤＥ阻害剤は、意図される目的を達成するいずれかの方法により投与することができる。例えば、投与は、制限されることなく、皮下、血管内、皮内、筋肉内、腹腔内、脳内、鞘内、鼻腔内、経口、直腸、経皮内、鼻腔内、又は頬側を含むいくつかの異なる経路により投与することができる。好ましくはＰＤＥ阻害剤は経口的に投与される。
【００６０】
非経口的な投与は、ボーラス注射により、又は漸進的パーフュージョンにより投与することができる。投与される薬用量は、レシピエントの年齢、健康、及び体重、存在するならば、併用している治療、治療の頻度、及び所望される効果の性質に依存するであろう。各治療に必要とされる総用量は、複数用量により又は単一用量において投与することができる。
【００６１】
非経口的な投与の調製物は、当業界において既知な補助的な薬剤又は賦形剤を含むことができる無菌水性又は非水性溶液、懸濁液、及び乳濁液を含む。非経口投与のための適当な製剤は、水溶性形態、例えば、水溶性塩における活性化合物の水溶液を含む。更に、油性の注射用製剤としての活性化合物の懸濁液も投与することができる。
【００６２】
意図される送達の経路に依存して、ＰＤＥ阻害剤は、注射用又は経口用組成物として処方することができる。経口投与のための組成物は、膨張性水溶液若しくは懸濁液、又は膨張性粉末の形態をとることができる。より一般的には、しかしながら、当該組成物は、正確な投薬を促進するための単位薬用量形態において存在する。「単位薬用量形態」の語は、ヒト対象及び他の哺乳類のための単位薬用量として適当な物理的に分離した単位を意味し、各単位は適当な医薬賦形剤に関連した所望する治療的効果を生じるために計算された活性物質の予定された量を含む。典型的な単位薬用量形態は、あらかじめ充填された、あらかじめ測定された液体組成物又は固形組成物の場合におけるピル、タブレット、カプセル等のアンプル又はシリンジを含む。このような組成物において、ＰＤＥ阻害剤は所望する投薬形態を形成するために役立つ多様な媒体又は担体及び促進剤である残部を伴う通常微量な組成物である（約０．１〜約５０重量％、好ましくは約１〜約４０重量％）。
【００６３】
経口投与に適当な液体形態は、バッファー、懸濁剤、分散剤、着色料、芳香剤等を伴う適当な水性又は非水性媒体を含んでよい。固形形態は、例えば、以下のいずれかの成分、又は同様な特性の化合物を含んでよい：結合剤、例えば、微結晶性セルロース、トラガカントゴム、；賦形剤、例えば、スターチ又はラクトース；崩壊剤、例えば、アルギニン酸、プリモゲル、又はコーンスターチ；潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム；流動促進剤（glidant）、例えば、コロイド性シリコンジオキシド；甘味剤、例えば、スクロース又はサッカリン；又は芳香剤、例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、又はオレンジフレーバー。
【００６４】
注射用組成物は、典型的には、注射用無菌生理食塩水、又はリン酸バッファー生理食塩水、又は当業界に既知な他の注射用担体に基づく。
【００６５】
経口投与又は注射用組成物のための上述の化合物は、単なる例示的なものである。更なる物質、並びに技術等は、当業者に既知である(Gennaro et al., 2000)。
【００６６】
また、ＰＤＥ阻害剤は持続性の遊離形態において又は持続性の遊離薬物送達系から投与することができる。また、代表的な持続性の遊離物質の説明は当業者に既知である(Karsa, et al. (ed.), Encapsulation and Controlled Release, Springer Verlag (1993); Yacobi, et al., Oral Sustained Release Formulations : Design and Evaluation, Pergamon Press (1998))。
【００６７】
「有効量」は、外因性ＦＳＨ又はＦＳＨ置換を伴う又は伴わない卵胞の成長を促進することができるＰＤＥ阻害剤の濃度を達成するために十分な量を意味する。このような濃度は当業者により慣習的に測定することができる。実際に投与される化合物の量は、典型的には、治療すべき状態、投与経路の選択、実際に投与される化合物、個々の患者の年齢、体重、及び応答、患者の内因性ＦＳＨ濃度等を含む関連する状況に明るい医師により決定されるであろう。
【００６８】
「医薬的に受容可能」の表現は、活性成分の生理活性の有効性に実質的に影響せず、且つ投与される宿主に対して毒性でないいかなる担体をも含むことを意味する。例えば、非経口投与のために、上記の活性成分は、媒体、例えば、生理食塩水、血清アルブミン、及びリンゲル液における注射のために単一の薬用量形態において処方することができる。
【００６９】
更に、また、医薬的に受容可能な担体、ＰＤＥ阻害剤を含んで成る組成物は、微量な添加剤、例えば、安定化剤、賦形剤、バッファー、及び防腐剤を含んで成ってよい。
【００７０】
当業者は、"Inhibitors of PDE Enzymes in Infertility. "と題される米国仮出願第６０／４７０，４３４を参照する。上記明細書において、試験管内における受精のために排卵を誘発し、そして卵巣過剰刺激を制御するＰＤＥ１及び／又はＰＤＥ５阻害剤の使用の方法及び組成物が記載されている。上記の全ての文は、阻害剤及びこのような阻害剤の投与のためのプロトコルを示す本明細書中に引用として組み入れられている。開示されているいずれかの阻害剤は本発明のプロトコルにおいて使用することができる。
【００７１】
本明細書において使用することができる特に好ましいＰＤＥ４阻害剤は、制限されることなく、ロフルミラスト（当該化合物の製造のための方法及び組成は、Ｗ０９５０１３３８において見つけることができる）、ピクラミラスト（同製造方法は、J. Med. 955 Chem. 37: 1696-1703 (1994) において説明されている）、アリフロ／シロミラスト（同製造方法は、J. Med. Chem. 41: 821-835 (1998) において説明されている）、メソプラム（洞製造方法はＷＯ９７／５５６１において説明されている）、フィラミナスト（同製造方法は、ＥＰ０４７０ ８０５ Ｂ１において説明されている）を含む。
卵胞の成熟を誘導するためのＦＳＨ及びホスホジエステラーゼ阻害剤の組み合わせの送達
【００７２】
ある観点において、本発明の方法はＰＤＥ４阻害剤と卵胞成熟を増加するための組成物を含んで成るＦＳＨの併用を意図する。しかしながら、ＦＳＨ／ＰＤＥ４の組み合わせの送達治療に専ら基づく治療に追加して、本発明の方法はまた、本発明の治療方法の卵胞成熟の効果を増強するであろう第三組成物を伴う併用治療を意図する。このような第三組成物は、二次ＰＤＥ４阻害剤、又はＰＤＥ４阻害剤に特異的でないＰＤＥの二次阻害剤であってよい。例えば、本発明の方法は、更にＰＤＥ１及び／又はＰＤＥ５阻害剤の投与を含むことができることが予想される。更に、ＬＨ及び／又はｈＣＧもまた、本発明の方法において供されるであろう。有益な治療は、ＰＤＥ４阻害剤単独の投与により達成することができることが理解されるべきである。
【００７３】
本明細書において意図される併用治療における適当な治療結果を達成するために、即ち、処置される哺乳類の排卵性卵母細胞の数の増加を達成するために、ＦＳＨ及びＰＤＥ４阻害剤組成物が対象に一般的に投与されるであろう。これらの組成物は、所望する治療的結果を生じるために有効な併用量として供されるであろう。典型的には、上述のように、ＦＳＨ処置は、７〜１２日間の毎日の投与である。ＰＤＥ阻害剤の投与は、ＦＳＨ治療と同時に投与することができる。このような場合、ＰＤＥ阻害剤及びＦＳＨは混合物として同じバイアル中に入れることができる。あるいは、ＰＤＥ４阻害剤組成物は、ＦＳＨ治療の前又は後に採ることができる。更に、ＦＳＨ治療が、好ましくは月経周期のいずれかにおける７〜１２日間のみ投与されるべきである一方、投与が有害な副作用を生じない限り、当該周期中ＰＤＥ阻害剤を継続して投与できる。あるいは、ＰＤＥ阻害剤は、ＦＳＨ治療よりも低頻度で投与することができる。
【００７４】
第三治療剤が投与される他の態様において、当該第三薬剤は、ＦＳＨ及びＰＤＥ４阻害剤治療組成物の一方、他方、又は両方と同時に再投与することができ、あるいは、ＦＳＨ／ＰＤＥ４治療の前又は後に投与することができる。
【００７５】
２又は複数の治療組成物が別々に投与される全ての態様において、一般的に、ＰＤＥ４型薬剤及びＦＳＨ投与及び／又は第三薬剤は、細胞において更に有利な併用効果を発揮することができる有意な期間が、各送達の期間中で失効しないことを補償する。このような例において、各約１２〜２４時間以内に、そしてより好ましくは各約６〜１２時間以内に全ての３つの組成物を投与することが意図され、約１２時間のみの遅延時間が最も好ましい。いくつかの状況において、処置時間を有意に延長することが望ましいであろうが、それぞれの投与の間、数日間（２、３、４、５、６、又は７）が経過する。同様に全てのプロトコルが繰り返される場合、持続周期を通してプロトコルを繰り返すことが望まれ、医師は本発明の２つの処置プロトコル間の１、２、３、４、又はそれ以上の周期の経過を許容することが望ましいことを決定できる。
患者の選択及びモニタリング
【００７６】
本発明の治療を受ける患者は、好ましくは２０〜４５歳の女性の患者である。本発明の方法のための患者の選択は、上述の治療に基づくＦＳＨの使用のためのＰＤＲTMエントリーにおいて説明されるものと同じパラメーターを利用することができる。例えば、処置の前に、患者を骨盤解剖の評価を含む婦人科検診及び内分泌評価にかける。原発性卵巣不全は、基礎ゴナドトロピンレベルを測定することにより除外されるべきであり、そして患者が妊娠していないことを保証するべきである。
【００７７】
本発明の処置療法を通して、患者は、ＯＨＳＳの徴候ためにモニターするための治療の前、間、及び後に評価するべきである。ＯＨＳＳの徴候は、制限されることなく、腹痛、腹腔膨張、悪心を含む消化管の症状、下痢、重篤な卵巣拡大、体重増加、呼吸困難、及び乏尿を含む。臨床的に、当該症状は、血液量減少、水胸急性肺障害、及び血栓塞栓症において顕著である。ＯＨＳＳの症状がＦＳＨに基づく治療の投与を通して、又はいずれかの他の薬剤が卵胞成熟の刺激のために投与される間にＯＨＳＳの症状が発生する場合、当該投与を終了するべきであり、そして対象は、入院又は他の処置が必要であるかを決定するために医学的監督下に置くべきである。ＦＳＨに基づく治療をモニターするために使用できる他の症状は、膣細胞学における変化、膣粘膜の外観及び容積、頚管粘液の牽糸性及びシダ状結晶形成を含む。これらの後半の症状は、治療のエストロゲンの影響を示し、そしてＦＳＨ投与がエストロゲン生成物を刺激するのでモニターするべきである。好ましくはこれらのエストロゲンの影響は、卵胞の発達のより直接的な測定、例えば、血清中エストラジオールの測定及び超音波検査と併用してモニターするべきである。
【００７８】
妊娠以外の排卵の臨床的な徴候は、プロゲステロン生成物の直接的又は間接的な測定のいずれかを通して得ることができる。このような指標は以下を含む：基礎体温の上昇、血清中のプロゲステロンの増加、体温変化による月経。プロゲステロン生成物の上記指標と併用して、超音波検査の卵巣の可視化は、排卵が生じているかを測定することを補助するために使用することができる。このような超音波検査モニタリングは、盲嚢における体液、卵巣紅斑、及び崩壊した卵胞の存在を評価することを含んでよい。超音波検査測定はまた、卵巣がＯＨＳＳにおいて拡張しているか否かを決定することにおいて補助するであろう。
排卵を誘発するためのＰＤＥの阻害剤の使用
【００７９】
ＰＤＥ阻害剤は、好ましくは、刺激期のおよそ２日目〜およそ１０日目における、より好ましくはおよそ３日目〜およそ８日目患者に対して投与され、好ましくは月経周期のおよそ２日目又は３日目に開始する。ＯＩのために、投与は、好ましくは、平均直径が１６〜１８ｍｍ以上である卵胞が１つ存在するまで続けられる（そして好ましくは、１４ｍｍ以上の平均直径の卵胞が２つ以下）。ＰＤＥ阻害剤の投与は好ましくは、排卵期を開始するためにｈＣＧを投与する日において終了する。
【００８０】
排卵誘発のために、ＰＤＥ阻害剤は単独で投与することができる（内因性ＦＳＨと作用する）、又はそれはＦＳＨ若しくはＦＳＨ活性を有する薬剤と併用して投与することができ、又は内因性ＦＳＨ放出を刺激する。他の卵胞刺激剤との組み合わせにおけるＰＤＥ阻害剤の投与は、同時に、別々に、又は逐次的にしてもよい。ＦＳＨ活性を有する薬剤は、組み換え及び尿ＦＳＨ、並びに様々な量のＬＨ、例えば、ｈＭＧと混合したＦＳＨもまた含む。ＦＳＨ活性を有する薬剤は、ＦＳＨの類体、例えば、ＣＴＰ−ＦＳＨ[野生型α−サブユニット及びｈＣＧのカルボキシ末端ペプチドがＦＳＨのβ−サブユニットのＣ−末端に融合しているハイブリッドβ−サブユニットから成る長時間作用性改変組み換えＦＳＨ、LaPolt, et al., Endocrinology, 131: 2514-2520 (1992) ; 又はKlein, et al. , Human Reprod. 18: 50-56 (2003)を参照のこと]を含む。また、以下の配列から成る一本鎖ＦＳＨ−ＣＴＰ、一本鎖分子を含む（Ｎ−末端〜Ｃ−末端）：。
【表１】
Klein et al., Fertility & Sterility ; 77: 1248-1255 (2002)において説明されるように、表中、βＦＳＨはＦＳＨのβ−サブユニットを示し、βｈＣＧ ＣＴＰ（１１３〜１４５）はｈＣＧのカルボキシ末端ペプチドを示し、そしてαＦＳＨはＦＳＨのα−サブユニットを示す。内因性ＦＳＨ生成物を刺激し又は誘導し、あるいは放出する薬剤は、クエン酸クロミフェン及びアロマターゼ阻害剤、例えば、レトロゾール、ＹＭ−５１１、アナストロゾール、又はファドロゾールを含む。ＯＩにおけるこれらの分子の使用は、例えば、ＷＯ０２／０８３２４１及びＷＯ０２／０８３２３９において開示される。
【００８１】
ＯＩのための好ましい療法において、患者はＰＤＥ阻害剤、好ましくはＰＤＥ１及び／又は５阻害剤、より好ましくは選択的ＰＤＥ１及び／又は５阻害剤、最も好ましくは選択的ＰＤＥ１阻害剤を投与され、好ましくは月経後およそ３日目に開始する。これは刺激期の開始を特徴付ける。ＰＤＥ阻害剤の投与は、好ましくは毎日において継続されるが、１日に２回、又は一日おきに、又は単一用量において投与してもよい。卵巣の発達の進行は、超音波によりモニターすることができる。卵胞成長は、平均直径が約１６〜１８ｍｍ以上である１つの卵胞が存在する場合、そして好ましくは排卵の誘引となる１６ｍｍ以上の平均直径を有する２以下の卵胞が存在する場合に、ＬＨ−活性を有する薬剤、例えば、ｈＣＧ（通常、５，０００〜１０，０００ＩＵ）、ＬＨ（２５，０００〜７０，０００ＩＵ）、又はＰＤＥ ＩＶ阻害剤（公表された米国特許第出願第２００２／０１０３１０６１０８０Ａｌにおいて説明されている）を使用して、十分に判断される（刺激期を終わらせ、そして波乱期を開始する）。それから患者は、排卵の誘引点の投与から２４〜３６時間後に性交を持つように指示される。あるいは受精を子宮内精子注入（ＩＵＩ）により行ってもよい。
【００８２】
非−刺激及び非−下方調節された（自然周期）血清中のＦＳＨレベル以下、又は約２ ＩＵ／リットル（月経時又は約２日後に測定した）を有する患者において、排卵誘発は、好ましくは、ＦＳＨ又はＦＳＨ活性を有する薬剤、又はＦＳＨの内因性放出を刺激する薬剤との組み合わせにおけるＰＤＥ阻害剤を使用して行われる。必要とされるＦＳＨの用量は、８日の刺激における約１６ｍｍ以上の平均直径を有する卵胞の数に関して、同じ又はより優れた応答を達成するために、ＰＤＥ阻害剤を受けていない患者に必要とされるものよりも低いだろう。
【００８３】
ＦＳＨ又は卵胞−刺激活性を有する薬剤、又はＦＳＨの内因性放出を刺激する薬剤は、ＯＩにおいて使用され、ＦＳＨの投与はＰＤＥ阻害剤の投与の前後に開始してよく、又は当該２つの薬剤は同時に投与開始することができる。好ましくはＦＳＨの投与は、ＰＤＥ阻害剤の投与と同時に、又はＰＤＥ阻害剤の投与のおよそ１日前に開始する。刺激期は、どちらが最初であろうと、又はＰＤＥ阻害剤のみが使用されたとしても、投与開始の日においてＦＳＨ又はＰＤＥ阻害剤の最初の投与で開始する。
調節された卵巣過剰刺激のためのＰＤＥ阻害剤の使用
【００８４】
ＡＲＴのために調節された卵巣過剰刺激のために、本発明に従い、内因性ＦＳＨレベルを増強するために外因性ＦＳＨ無しにＰＤＥ阻害剤を使用することができ（又は卵胞−刺激活性を有する薬剤）、調節された卵巣過剰刺激、及び複数の排卵性卵胞の発達をもたらす。患者が、約５ＩＵ／リットル又はそれ以下の非−刺激及び非−下方調節（自然周期）の血清中のＦＳＨレベルを有する場合（月経時又はおよそ２日後に測定された）、ＣＯＨは、好ましくは、例えば、上述のようなＦＳＨ又は卵胞−刺激活性を有する薬剤、又はＦＳＨの内因性放出を刺激する薬剤と併用してＰＤＥ阻害剤を使用して行われるべきである。ＦＳＨ又は卵胞−刺激活性を有する薬剤、又はＦＳＨの内因性放出を刺激する薬剤が、ＣＯＨにおいて使用される場合、ＦＳＨの投与は、ＰＤＥ阻害剤の投与の前又は後に開始してよく、又は２つの薬剤は同時に開始して投与することができる。好ましくはＦＳＨの投与は、ＰＤＥ阻害剤の投与と同時に、又はＰＤＥ阻害剤の投与のおよそ１日前に開始する。刺激期は、どちらが最初であろうと、又はＰＤＥ阻害剤のみが使用されたとしても、投与開始の日においてＦＳＨ又はＰＤＥ阻害剤の最初の投与で開始する。
【００８５】
ＣＯＨのための好ましい療法において、患者は先ず、月経周期の黄体期（通常、月経周期のおよそ２０日目）において開始するゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）アゴニストの投与により内因性黄体形成ホルモン（ＬＨ）を抑制するために下方調節される。卵巣機能の抑制は通常、ＧｎＲＨアゴニストで８〜２１日間かかり、そして、ＬＨ又はエストラジオールレベルをモニタリングすることによりモニターすることができる（ＬＨ＜５ＩＵ／Ｌ、Ｅ2＜５０ｐｇ／ｍｌは通常適切な抑制を示す）。ＧｎＲＨアゴニストは、例えば、ブセレリン、ゴセレリン、リュープロレリン、トリプトレリン、及びナファレリンを含む。下方調節は、卵胞の発達がＰＤＥ阻害剤、好ましくはＰＤＥ１及び／又は５阻害剤、より好ましくは選択的ＰＤＥ１及び／又は５阻害剤、より好ましくはＰＤＥ１阻害剤、最も好ましくは選択的ＰＤＥ１阻害剤を使用して刺激される刺激期において行われる。当該ＰＤＥ阻害剤は、単独で、又は卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）若しくはＦＳＨ活性を有する薬剤、若しくは内因性ＦＳＨ放出を刺激する薬剤の投与と併用して使用することができる。どちらが最初に開始したとしても、ＰＤＥ阻害剤又はＦＳＨで投与を開始した日が刺激期の開始として定義する。ＣＯＨのためにＦＳＨが単独で使用される一方、ＰＤＥ阻害剤の使用は同じ患者に使用するよりも低用量のＦＳＨ（又は当量）を許容し、刺激の８日目において約１６ｍｍ以上の平均直径を有する卵胞の数に関して、同じ又は優れた卵胞応答を達成する。好ましくは、ＰＤＥ阻害剤が投与される場合に使用されるＦＳＨの用量は、同じ卵胞応答を達成するためにＰＤＥ阻害剤を伴わない同じ患者において必要とされるＦＳＨの７５％以下であり、より好ましくはＰＤＥ阻害剤を伴わない同じ患者において必要とされるＦＳＨの用量の約５０％以下であり、最も好ましくは、ＦＳＨの用量は、ＰＤＥ阻害剤を伴わない同じ患者において必要とされるＦＳＨの用量の約３０％以下である。
【００８６】
ＰＤＥ阻害剤が投与される場合、ＦＳＨの用量は、好ましくは１日に約２５〜６００ＩＵ ＦＳＨであり、好ましくは１日に約５０〜４５０ＩＵであり、最も好ましくは１日に約５０〜３００ＩＵである。外因性ＦＳＨ（又は相当物）の不存在下又は存在下におけるＰＤＥ阻害剤の刺激は、好ましくは卵胞成長が十分に判断されるまで、即ち、約１６ｍｍ以上の平均直径を有する少なくとも３つの卵胞が存在するまで続けられ（好ましくは１つの１８ｍｍ）、一方ＧｎＲＨアンタゴニストの投与は続けられる。ＯＩのために説明したとおり、ＬＨ活性を有する薬剤の排卵誘引性用量（例えば、５，０００〜１０，０００ＩＵのｈＣＧ）をそれから投与する。卵母細胞の回収は、排卵の誘引後３６〜３８時間にされる。卵母細胞は通常吸引により排卵前期の卵胞から回収される。卵母細胞は類別され、試験管内で受精され、そして胚は収集から約７２〜９６時間後に子宮に移植するために選択される。
【００８７】
ＣＯＨのための他の好ましい療法において、ＧｎＲＨアンタゴニストが使用される。ＧｎＲＨアゴニストの投与無しに、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）又はＦＳＨ活性を有する薬剤又は内因性ＦＳＨ放出を刺激する薬剤と併用して、ＰＤＥ阻害剤、好ましくはＰＤＥ１又は５阻害剤、より好ましくは選択的ＰＤＥ１及び／又は５阻害剤、より好ましくはＰＤＥ１阻害剤、最も好ましくは選択的ＰＤＥ１阻害剤により通常自発性又は誘発性月経後、１、２、又は３日目に卵胞刺激が開始される。それから、ＧｎＲＨ−アンタゴニストは、月経後およそ６日目において投与が開始される。ＧｎＲＨ−アンタゴニストは、例えば、セトロレリックス、Ｎａｌ−Ｇｌｕ、アンチド、ガニレリックス、アザリンＢ及びアンタレリックスを含む。ＰＤＥ阻害剤及びＦＳＨ（又は相当物）での刺激は、約１６ｍｍ以上の平均直径を有する少なくとも３つの卵胞（好ましくは１つの１８ｍｍ）が存在するまで続けられる。それからＯＩのために説明されるように、排卵誘引用量のＬＨ−活性を有する薬剤が投与される。当該ＧｎＲＨアンタゴニストは排卵誘引の日まで投与される。
【００８８】
ＣＯＨのための他の好ましい療法において、卵胞刺激は、好ましくは月経後３〜６日目において、ＰＤＥ阻害剤、好ましくはＰＤＥ１及び／又は５阻害剤、より好ましくは選択的ＰＤＥ１及び／又は５阻害剤、より好ましくはＰＤＥ１阻害剤、最も好ましくは選択的ＰＤＥ１阻害剤と併用してアロマターゼ阻害剤の投与により開始される。およそ６日目において、ＧｎＲＨアンタゴニストが与えられ、アロマターゼ阻害剤を中止し、そしてＦＳＨの注射を開始する。ＰＤＥ阻害剤、ＦＳＨ及びＧｎＲＨアンタゴニストの投与は、排卵誘引用量のｈＣＧが投与されるまで続けられる。
試験管内における受精のための卵母細胞の使用
【００８９】
本発明の方法は、ｈＣＧ排卵性卵母細胞を産出するために使用される。併用されるＰＤＥ４阻害剤／ＦＳＨホルモン処置は、下垂体の下方調節を伴う又は伴わない、あるいはＧｎＲＨアンタゴニストの使用を伴う又は伴わない、及びｈＣＧの使用を伴う又は伴わない短期又は長期の処置であってよい。当該併用されるＰＤＥ４阻害剤／ＦＳＨホルモン治療は、卵胞が中程度から完全な大きさの卵胞に成熟するまで投与される（１０〜２５ｍｍ、好ましくは１６〜２０ｍｍのサイズの卵胞）。このような卵胞由来の卵母細胞は、内因性ゴナドトロピンホルモン生成物が抑制されない場合には患者自身の月経周期由来のｈＣＧサージを通して、あるいは患者に対して外因性のｈＣＧ注射（例えば、５，０００〜１０，０００ユニット）を供することにより生体内で排卵することを許容することができる。
【００９０】
あるいは、中程度から完全な大きさの卵胞（大きさ１０〜２５ｍｍ、好ましくは１６〜２０ｍｍの卵胞）は、試験管内で受精するために超音波誘導下における吸引により回収される。吸引された液体は、卵丘卵母細胞複合体（ＣＯＣ）を診査され、そして立体顕微鏡（胚フィルターをの使用を伴う又は伴わない）で確認し、ＣＯＣを培養液中に置く。広範で多様な卵母細胞培養培地又は培地成分は当業者に既知である。このような培地はヒト結成アルブミン（ＨＳＡ）を含んでもよいが、必ず含まなければならないわけではない。
【００９１】
試験管内における培養後又はその間、卵母細胞は慣習的なＩＶＦにより、又は細胞質内血清注射（ＩＣＳＩ）により、又は受精接合体に導入するいずれかの他の慣習的な受精方法により受精させることができる。発達している胚は、受精後１〜６日目、好ましくは２〜３日目に、単一卵移植又は複数卵移植のいずれかとして移植することができる。
【００９２】
患者は、適当な受容性の子宮内膜系統を刺激及び維持するために個々に設計されたプロトコルにおいて卵移植の前後においてプロゲステロン及び／又はエストロゲン治療を受けることができる。
【００９３】
本発明の方法は、例えば、上述のようなＩＶＦ手順において使用される排卵性卵母細胞の増加数を産出する。しかしながら、本発明の方法は、未成熟卵母細胞の試験管内における成熟に有用となりうる。このような態様において、卵母細胞は、ゴナドトロピンの中周期サージに暴露する前に卵巣の胞状卵胞から回収され、従って未成熟又は完全には成熟していない卵母細胞として特徴づけられる。ヒト卵母細胞、並びに他の種由来の卵母細胞は、卵丘拡張をほとんど又は全く有さないことが認識されるであろうし、胚胞があり、極体がないことが認識され、そしてＩＶＦ−処置における当業者により簡単に認識されるであろう。このような処置が、補助生殖医療のための回収と言うよりは、自然受精のための単一又は優勢の卵胞の成熟を増大できる場合、本発明の治療の１つの潜在的な使用は非−ＩＶＦプロトコルにおけるＣＣ又はＦＳＨの置換に対するものであろう。
【００９４】
本明細書における多くの議論はヒトの卵胞の成熟を説明したが、本発明の方法は他の哺乳類、例えば、ペット（例えば、ネコ、イヌ、又はモルモット）；又は動物園の動物（例えば、霊長類）のＩＶＦのための卵母細胞の産出のために利用できることが意図される。更に好ましい態様において、哺乳類、好ましくは家畜、例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ミンク、ヤギ、又はヒツジは産業の一部である。最も好ましい態様において、哺乳類はヒトである。試験管内の成熟のために、未成熟卵母細胞は、受精することができる成熟卵母細胞を産出するために、試験管内においてＰＤＥ阻害剤、又はＰＤＥ阻害剤及びゴナドトロピンホルモンで処置される。
医薬組成物及びキット
【００９５】
本発明に従う投与のための医薬組成物は、少なくとも１のゴナドトロピンホルモン、好ましくは医薬的に受容可能な担体と任意的に組み合わせた医薬的に受容可能な形態おける本発明に従うＦＳＨを含んで成ってよい。これらの組成物は、これらの意図された目的を達成するいずれかの方法により投与することができる。本発明の方法を使用する卵胞の成熟の刺激ためのＦＳＨ組成物の投与のための個別的な量及び療法は、無排卵疾患の処置におけるこのような組成物の使用及び補助生殖医療におけるこれらの使用のために、Physician's Desk Reference により供されるガイダンスを使用して当業者により容易に決定することができる。上述の通り、当業者はこのような医薬関係において現在使用されているＦＳＨの量及び療法を最初に利用することができる。当該効果に対して、当業者は上述の Physician's Desk Reference における各エントリーを参照し、そしてこれらのエントリーは、薬剤、例えば、本明細書において上述したＦｅｒｔｉｎｅｘTM、Ｇｏｎａｌ ＦTM、ＢｒａｖｅｌｌｅTM等の投与のための方法及び組成物を示すために、これらのエントリーにおける引用により本明細書に組み入れられている。Physician's Desk Reference 中のこれらの各エントリーは、ＦＳＨの投与において使用することができる処方の種類、投与経路、及び治療法に関して典型的なガイダンスを供する。そこに説明されている当該プロトコル、処方、投与経路等のいずれかは、本発明における使用のために容易に修正することができる。
【００９６】
本発明の範囲における組成物は、単独で投与される場合、又はより好ましくは低用量のＦＳＨと併用して投与される場合のいずれかにおいて、動物における排卵性卵母細胞の数を刺激、誘発、あるいは増加の意図された目的を達成するための有効量において、本発明に従う少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤を含んで成る全ての組成物を含む。ＰＤＥ４阻害剤及び／又は本発明において使用される他の活性剤は、このような投与のために通常利用されるいずれかの方法により投与することができる。当業者は特に、出願に関する受胎能におけるＰＤＥ阻害剤の投与の量及び経路を説明する"Inhibitors of PDE Enzymes in Infertility"と題される米国特許出願第６０／４７０，４３４号、米国特許公報第２００２０１０３１０６号、及びＰＣＴ／ＥＰ０１／１４７３０を参照する。最も好ましくは、本発明において使用される組成物は経口的に投与される。
【００９７】
個々は変化を必要とするが、各成分の有効量の最適な範囲の決定は、当業者の範疇である。典型的なＦＳＨの薬用量は、７〜１２日間において、約５ＩＵ ＦＳＨ／日〜約７５ＩＵ ＦＳＨ／日を含んで成る。ｈｅＰＤＥ４阻害剤の典型的な用量は、約５ｍｇ／日〜約１００ｍｇ／日、又はそれ以上であってよい。継続する間、ＰＤＥ４の毎日の投与は、ＦＳＨの投与を終えると同時にＰＤＥの投与を終えることが望ましいことが予想される。当然にＦＳＨ治療が、伝統的に７〜１２日間与えられる間、本発明の文脈において、増加した卵胞の成熟の治療的な有利な結果に影響するための単一又は微低用量のＦＳＨのみが必要とされてよい。ＯＨＳＳの徴候が観察された場合には治療を中止するべきである。
【００９８】
本発明に従う組成物の適当な用量は、レシピエントの年齢、健康、及び体重、存在するならば、併用する治療、治療の頻度、及び所望する効果の性質に依存するであろうことが理解される。しかしながら、最も好ましい薬用量は、過度の実験をすることなく当業者により理解され、決定できるように個々の対象に合わせることができる。これは典型的には、標準的な用量の調節、例えば、患者が軽い体重を有する場合、当該用量を減少することを含む。
【００９９】
上述のように、各処置に必要とされる総用量は、複数用量又は単一用量において投与することができる。上記組成物は、単独で又は疾患に対する治療若しくは他の症状に対する治療と併用して投与することができる。
【０１００】
本明細書の開示から明らかなように、広範な観点において、本出願はＰＤＥ阻害剤を含有する第一組成物、及びＦＳＨを含有する第二組成物を含んで成る併用治療の臨床的な適用が意図される。従って、当該組成物は、適当な医薬組成物、即ち、このような併用治療における生体内の適用に適当な形態に処方するべきである。一般的に、これは発熱物質、並びにヒト又は動物に有害な不純物を含まないことが必須である組成物の調製を必要とするであろう。当該ＦＳＨ製剤は、本明細書を通して議論される現在入手可能なＦＳＨ調製物と同様に処方することができる。ＰＤＥ４阻害製剤は、例えば、周知なＰＤＥ５阻害剤であるＶｉａｇｒａTMと同様に処方することができる。
【０１０１】
標的部位において組成物を取り込むのに適当なそして許容する組成物を与えるために適当な塩及びバッファーを利用することが一般的に所望されるであろう。一般的に、本発明のホルモン組成物は、投与前に再構成される凍結乾燥形態において供され、そしてＰＤＥ４阻害剤組成物はおそらくタブレット形態に処方される。当該ホルモンの再構成のためのバッファー及び溶液は、投与のための本発明の水性組成物を産出するために医薬製剤と共に供することができる。このような水性組成物は、医薬的に受容可能な担体又は水性媒体において使用され、溶解され、又は分散する治療薬剤の各の有効量を含んで成るであろう。また、このような組成物は、接種材料としても適用する。「医薬的又は薬理的に受容可能」のフレーズは、動物又はヒトに投与した場合に、有害な、アレルギー性の、又は他の有害な反応を産出しない分子実体及び組成物を意味する。本明細書において使用される「医薬的に受容可能な担体」は、いずれかの及び全ての溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等を含む。医薬活性物質のためのこのような媒体及び薬剤の使用は当業界において周知である。いずれかの慣習的な媒体又は薬剤が治療組成物と不適合である範囲を除き、治療組成物におけるその使用が意図される。補充的な活性成分もまた当該組成物に組み入れることができる。
【０１０２】
本発明の活性組成物は、本明細書において議論された古典的なＦＳＨの医薬調製物、並びに当業者に既知であるこれらのものを含む。また、ＰＤＥ４阻害剤も当業者に既知である。本発明に従うこれらの組成物の投与は、標的組織がその経路を介して利用できる限り、いかなる通常の経路も介するであろう。経口投与が問題である場合、例えば、皮下、血管内、筋肉内、乳内、腹腔内、くも膜下腔内、眼内、延髄後、肺内（例えば、期間放出）、エアロゾル、舌下、経鼻、肛門、膣、又は経皮性送達による、又は特定の部位での外科的移植による最も一般的な投与経路を使用することもできる。治療は、期間にわたって、単一用量又は複数用量から成ってよい。
【０１０３】
活性化合物は、海面活性剤、例えば、ヒドロキシプロピルセルロースと適当に混合した水中の遊離塩基又は医薬的に受容可能な塩の溶液としての投与のために調製することができる。また、分散剤もグリセロール、液体ポリエチレングリコール、及びこれらの混合体中、及び油中で調製することができる。貯蔵及び使用の通常の条件下において、これらの調製物は、微生物の成長を防止するために防腐剤を含む。
【０１０４】
注射の使用に適当な医薬形態は、無菌の注射用溶液又は分散剤の即席の使用のための無菌水性溶液又は分散剤及び無菌粉末を含む。すべての場合において、当該形態は無菌でなければならず、そして容易なシリンジ能が存在する範囲の液体でなければならない。それは製造及び貯蔵条件下において安定でなければならず、そして微生物、例えば、細菌及び真菌の汚染作用に対して保存されなければならない。当該担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）、これらの適当な混合体、及び植物油を含む溶媒又は分散媒体であってよい。当該適当な流動性は、例えば、コーティング剤、例えば、レシチンの使用により、分散の場合に必要とされる粒子サイズの維持により、及び海面活性剤の使用により維持することができる。微生物作用の防止は、多様な抗菌及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等によりもたらすことができる。多くの場合において、等張剤、例えば、糖又は塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。注射用組成物の遅延性の吸収は、吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの組成物における使用によりもたらすことができる。
【０１０５】
無菌注射用溶液は、必要量の活性化合物を、必要ならば上記に列挙した多様な他の成分を伴う適当な溶媒中に組み入れること、続いて無菌的にろ過されることにより調製される。一般的に分散剤は、多様な無菌活性成分を、塩基性分散媒体及び上記に列挙したもの由来の必要とされる他の成分を含む無菌媒体に組み入れることにより調製される。無菌注射用溶液の調製の無菌粉末の場合において、好ましい調製方法は、活性成分と前述の無菌ろ過溶液由来のいずれかの追加的に所望される成分の粉末を産出する真空乾燥及び凍結乾燥技術である。
【０１０６】
本明細書において使用される「医薬的に受容可能な担体」は、いずれかの及び全ての溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤、及び抗真菌剤、等張剤、及び吸収遅延剤等を含む。医薬活性物質のためのこのような媒体及び薬剤の使用は当業界において周知である。いずれかの慣習的な媒体又は薬剤が活性成分と不適合である範囲を除き、治療組成物におけるその使用が意図される。補充的な活性成分もまた当該組成物に組み入れることができる。
【０１０７】
本発明の組成物は天然又は塩形態において処方することができる。医薬的に受容可能な塩は、無機酸、例えば、塩酸、若しくはリン酸、又は有機酸、例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸、等と形成する酸添加塩（タンパク質の遊離アミノ基と形成される）を含む。また、遊離カルボキシル基と形成される塩は、無機塩基、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、又は水酸化第二鉄、及び有機塩基、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカイン等に由来することができる。
【０１０８】
製剤において、溶液は製剤の投薬量に適合した方法及び治療的に有効な量において投与されるであろう。当該製剤は様々な投薬形態、例えば、注射用溶液、薬剤放出カプセル等において容易に投与される。水溶液における非経口的な投与のために、例えば、必要ならば溶液は適当なバッファーとすべきであり、そして液体希釈剤は、最初に十分な生理食塩水又はグルコースで等張性を与えるべきである。これらの特別な水性溶液は、特に、血管内、筋肉内、皮下及び腹腔内投与に適当である。
【０１０９】
「単一用量」は、適当な担体中に分散する治療組成物の別々の量として定義される。ＦＳＨ及びＰＤＥ阻害剤の好ましい用量の例は上述されている。１又は両方の治療化合物の非経口投与は、薬剤製品の治療的な循環レベルを維持するために、最初にボーラスで、続いて連続的インフュージョンで行うことができる。当業者は、優れた医療行為及び個々の患者の臨床的な状態により決定した通り、有効投与量及び投与療法を容易に最適化するであろう。
【０１１０】
投薬の頻度は、薬剤の薬物動態学的なパラメーター及び投与経路に依存するであろう。最適な医薬製剤は、当業者により、投与経路及び所望される薬用量に依存して決定されるであろう。例えば、引用として本明細書に組み入れられている Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack, Easton, PA (1990) を参照のこと。このような製剤は、物理状態、安定性、投与された薬剤の生体内放出速度及び生体内クリアランス速度に影響しうる。投与経路に依存して、適当な用量は、体重、体の表面積、又は器官の大きさに従い計算することができる。更に、適当な治療用量を決定するために必要な計算の改良は、特に薬用量の情報、及び本明細書において開示されるアッセイ、並びに臨床的な試験動物又はヒトにおいて観察される薬物動態学的なデータに明るい当業者により、過剰な実験を有することなく慣習的に行われる。
【０１１１】
適当な薬用量は、関連する用量応答データと併用して血液レベルを測定するための確立されたアッセイの使用を通して確かめることができる。最終的な薬用量療法は、医師の診断、薬剤の作用を改変する因子、例えば、薬剤の特異的な活性、患者の損傷の重症度及び応答性、患者の年齢、状態、体重、性別、及び食事、いずれかの感染の重症度、投与時間及び他の臨床的な因子を考慮することにより決定することができる。実験を行うことにより、更に適当な薬用量レベル並びに特定の疾患及び状態のための持続時間に関する情報が現れるだろう。
【０１１２】
本発明の医薬組成物及び処置方法は、ヒト医薬及び獣医薬の分野において有用であることが認識されるであろう。従って治療すべき対象は、哺乳類、好ましくはヒト又は他の動物であってよい。獣医目的のために、対象は、家畜、例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ヤギ、コンパニオン動物、例えば、イヌ、ネコ、外来の及び／又は動物園の動物、実験動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、及びハムスター；及び家禽、例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒル、及びガチョウを含む。
【０１１３】
また、本発明は、不妊疾患の処置における使用のためのキットを意図する。このようなキットは、少なくとも医薬的に受容可能な担体におけるＦＳＨを含んで成る第一組成物、及び医薬的に受容可能な担体において少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤を含んで成る第二組成物を含む。当該キットは追加的に、第一及び第二組成物の伝達に影響するための溶液又はバッファーを含んで成ってよい。当該キットは、更にＰＤＥ阻害剤、例えば、追加的なＰＤＥ４阻害剤、又は追加的なＰＤＥ１又はＰＤＥ５阻害剤、及び／又は更にホルモン、例えば、ｈＣＧ、ＬＨ等を含む追加的な組成物を更に含んで成ってよい。当該キットは、カテーテル、シリンジ、又は、本発明の方法において使用される１又は複数の組成物の送達のための他の送達装置を更に含んで成ってよい。当該キットは、当該治療法のための投与プロトコルを含む説明書を更に含んで成ってよい。
【実施例】
【０１１４】
以下の実施例は、本発明の好ましい態様を説明するために含まれる。本発明の実施においてよく機能するために、実施例において開示されている技術が発明者により発見された技術を表すことが当業者により認識されるべきであり、従ってその実施のために好ましい型を構成することを考慮することができる。しかしながら、本開示に明るい当業者は、多くの変更が、開示された特別な態様において行うことができ、そしてなお本発明の精神及び範囲から離れることなく同様な又は類似した結果を得ることができることを認識する。
材料及び方法
【０１１５】
動物：受領において体重が３６〜３９ｇの未成熟Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ ＣＤ（ＳＤ）ＢＲメスラットが使用された。当該動物は、以下の定常環境条件化において飼育した：温度２２℃±２、相対湿度５５％±１０、１時間当たり１５〜２０回空気交換（ＨＥＰＡ９９．９９％におけるろ過）及び１２時間の概日周期の人工照明（７時〜１９時）。
【０１１６】
実験の全期間、ラットは、ステンレススチールフィーダーを伴うケージにおいて飼育し（ｃｍ．４０．５×３８．５×１８ｈ）、そして標準的なペレット状の食餌（Charles River Italia's licensee Mucedola s. r. l.により生産された４ＲＦ２１）及び水を「自由に」与えた。
【０１１７】
化学物質：ヒト組み換え卵胞刺激ホルモン（ｒ−ｈＦＳＨ）及びヒト組み換え絨毛性ゴナドトロピン（ｒ−ｈＣＧ）は、Laboratoires Serono Aubonne (LSA, Aubonne, Switzerland)により供された。試験化合物は、公表された化合物合成法に基づき合成されたか、又は商業者から購入した。特に、当業者は、ロフルミラストの製造方法を示すＷ０９５０１３３８、ピクラミラストの製造方法の詳細な説明のためのJ. Med. Chem. 1994,37, 1696-1703、アリフロ／シロミラストの製造方法の説明のためのJ. Med. Chem. 1998,41, 821-835、メソプラムの製造方法のためのＷ０９７／１５５６１、及びフィラミナストの製造方法のためのＥＰ０４７０ ８０５ Ｂ１を参照する。他の試験化合物(ジピリダモール、ザプリナスト、シルデナフィル)は、公表された化合物の合成方法に基づき合成したか、又は商業者から購入した。更に、"Inhibitors of PDE Enzymes in Infertility" と題された米国特許出願第６０／４７０，４３４号、米国特許公報第２００２０１０３１０６号、及びＰＣＴ／ＥＰ０１／１４７３０は、本明細書において使用することができるこのような化合物に関して他に示す通り、引用により本明細書に組み入れられている。
【０１１８】
生体内ラット卵胞成熟アッセイ：未成熟メスラットは実験の前の週の金曜日に、１８〜１９日齢で、授乳しているメス（授乳中のメスあたり１０匹の子供）と共に到着した。すべてのラットは、翌月曜日に母親から離乳させ（２１〜２２日齢）、そして、任意に実験グループに選別した（６〜８動物／グループ）。
【０１１９】
上記ラットに皮下的に２日間、１日に２回（最初の注射：８．３０〜９．００及び２回目の注射１５．３０〜１６．００）、２５０μＬ／注射の容量においてｒ−ｈＦＳＨ又は媒体（ＰＢＳ）注射した（首の後部）。注射したＦＳＨの用量は、ポジティブコントロールとして最適以下（６０６ｎｇ／ラットの総用量を４回の注射に分けた；図において「低ＦＳＨ」として示す）又は高（２４２４．８ｎｇ／ラットの総用量を４回の注射に分けた；図において「高ＦＳＨ」として示す）とした。
【０１２０】
上記注射に追加して、示した容量（ｍｇ／ｋｇ／注射）において２日間１日に２回、ラットにＦＳＨ注射と同時に試験化合物又は媒体を皮下注射した。これらの化合物ＮＰ３Ｓ（ｎ−メチル−２−ピロリジン５％、ポリエチレングリコール４００ ３０％、ポリエチレングリコール２００ ２５％、プロピレングリコール２０％、生理食塩水２０％）又は水性媒体のいずれかに希釈した。従って、卵胞成長を促進するために各ラットが受けた注射の総数は８回であり、ｒ−ｈＦＳＨ又はｒ−ｈＦＳＨ媒体の４回の注射、及び試験化合物又は試験化合物媒体の４回の注射を含む。
【０１２１】
最後のｒ−ｈＦＳＨ注射を伴う実験の２日目において、全ての又はほとんどの成熟した卵胞の排卵を誘発するために、ラットをｒ−ｈＣＧ（１４３０ｎｇ／ラット）の一度の皮下的注射でまた処置した。
【０１２２】
ｒ−ｈＣＧ投与後の朝１０時に、ラットをＣＯ2窒息により安楽死させた。当該動物を仰向けに寝かせ、そして無菌化し、そして動物の解剖において落ちる体毛を保持するために側面をエタノールで噴霧した。ハサミ及びピンセットにより、皮膚と筋肉を恥骨結合から胸骨まで反口−口方向に切開した。内部器官を暴露し、そして腸を片方に移動させた。脂肪及び結合組織を摘まみながら、卵巣、子宮角及び子宮体を除去した。それから生殖路を、ＰＢＳを含有する２４ウェルプレート中のウェルに置いた（１動物／ウェル）。
【０１２３】
全ての動物を犠牲にし、当該卵巣を摘出した後、卵管を静かに卵巣から除去し、ＰＢＳ中に浸漬し、そして顕微鏡スライドに置いた。それから当該卵巣を取り、浄化し、そして秤量のためにＰＢＳ中に置いた（子宮は処分した）。
【０１２４】
卵管の対を１つのスライドに置き、それから両方のスライドの被せた端を固定するためにテープ断片を使用してスライドを最初のスライドの上層に置いた。卵管をボトムスライドに置いた後、トップスライドを折り、そして被されていない端をテープし、２つのスライド間の卵管を加圧した。当該卵管をそれからコントラスト条件下において光学顕微鏡で調べ（４０×拡大率の最小）、そして存在するとすれば、各ラットの２つの膨大部に存在する卵子をカウントした。当該結果は、ラット当たりの排卵した卵母細胞の平均数としてグラフにした。エラーバーは、各グループの平均値の標準誤差を表す。
実施例１：低−用量のＦＳＨとの組み合わせにおける多様なＰＤＥ阻害剤を使用する排卵の誘発
【０１２５】
実験は、上述の生体内におけるラット卵胞成熟アッセイに従い行った。ある実験において、組織学的アッセイの処置の２日目の日中において、注射の最後のセットの前に卵巣をラットから摘出した。これらのラットは、安楽死及び器官の摘出の前にＦＳＨ及び試験化合物の最初の３つの用量のみを受けた。二次卵胞は、二次卵胞の総数をカウントすることにより評価した：両方の小さな卵胞（成熟の中間期のいずれかにおける、最初の散乱した空胞を伴うが洞は伴わない多層顆粒膜を有する）及び胞状卵胞（顆粒膜細胞層の減少を伴う又は伴わない約５００ミクロン又はそれ以上の外径を伴う洞拡張を有する）を含む。胞状卵胞（＞５００ｍｃｍ）もまた別々にカウントした。
データ分析：
【０１２６】
排卵している動物の割合、ラット当たりの膨大部において存在する卵子の平均数、及び平均卵巣重量は、各実験グループの１つの値から算出し、そして関連グラフをプロットした。全ての図は、平均値プラス／マイナス平均値の標準誤差を示す。当該図において、標準誤差バーの上の数字は、グループ中のラットの総数と比較した１又は複数の排卵した卵子を有するグループ中のラット数を意味し、例えば、Ｘ／Ｙは、Ｙの総数当たりＸのラットが１又は複数の排卵した卵子を有したことを意味する。
試験した化合物
以下の化合物を上記プロトコルにおいて試験した：
（ｉ）ザプリナスト（ＰＤＥの１，５，６，７，９，１０，１１の阻害剤）；
（ii）シルデナフィル（ＰＤＥの１，５及び６阻害剤）；
（iii ）ジピリダモール（ＰＤＥの５，６，７，８，１０，１１の阻害剤）；
（iv）タダラフィル（ＰＤＥの５及び６の阻害剤）
（ｖ）化合物番号３１（（６ａＲ，９ａＳ）−２−（ビフェニルイルメチル）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ−［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）−オン）（ＰＤＥ１の阻害剤）
（vi）化合物番号３３（５’−メチル−２’（ビフェニルイルメチル）−３’−（フェニルメチル）スピロ［シクロペンタン−１，７’（８’Ｈ）−［３Ｈ］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン］−４（５’Ｈ）−オン）（ＰＤＥ１の阻害剤）
【０１２７】
これらの分子は、様々なＰＤＥ酵素のための以下の選択性を示すことが示される：
【表２】
*ＰＤＥ３は卵母細胞中で発現し、ＰＤＥ３の阻害剤は非至適卵母細胞の成長に導くことができることから、好ましくはＰＤＥ阻害剤はＰＤＥ３に対して選択的である。Wiersma, et al., J. 1530 Clin. Invest., 102 (3): 532-537 (1998)。
**ＰＤＥ６は網膜の桿体及び錐状体中で発現し；ＰＤＥ６阻害剤は、穏やかな視覚障害を引き起こしうる；好ましいＰＤＥ阻害剤はＰＤＥ６に対して選択的である（即ち、好ましくは、ＰＤＥ６と比較してＰＤＥ１又はＰＤＥ５を阻害するために少なくとも又は約１００倍以上の能力を有する）；
結果：
【０１２８】
ジピリダモール（ＰＤＥの５，６，７，８，１０，１１の阻害剤）は、低用量のＦＳＨを伴うＮＰ３Ｓにおいてラット当たり１、５及び２５ｍｇ／ｋｇ×４注射の用量において投与し（皮下的に）、低用量のＦＳＨ＋ＮＰ３Ｓ媒体コントロールと比較してラット当たり排卵性卵母細胞の数の増加をもたらした。ＦＳＨ低用量単独では、ラット当たり１つの卵母細胞の平均が得られ、１０匹中４匹のラットのみが排卵した。反対に、ＦＳＨ低用量をジピリダモール（１、５又は２５ｍｇ／ｋｇ）と併用して投与した場合、ラット当たりの卵母細胞の平均数は、それぞれ７．５、６．８及び６．２であり、そして１０匹中７匹、１０匹中６匹、又は１０匹中１０匹のラットがそれぞれ排卵した。これらの結果は図１に示す。
【０１２９】
ザプリナスト（ＰＤＥの１，５，６，７，９，１０，１１の阻害剤）は、低用量のＦＳＨを伴うＮＰ３Ｓにおいてラット当たり１、５及び２５ｍｇ／ｋｇ×４注射の用量において投与し（皮下的に）、低用量のＦＳＨ＋ＮＰ３Ｓ媒体コントロールと比較してラット当たり排卵性卵母細胞の数の用量関連性の増加をもたらした。ＦＳＨ低用量単独では、ラット当たり２．４の卵母細胞の平均が得られ、１０匹中５匹のラットのみが排卵した（実験１）。反対に、ＦＳＨ低用量をザプリナスト（１、５又は２５ｍｇ／ｋｇ）と併用して投与した場合、ラット当たりの卵母細胞の平均数は、それぞれ３．２５、６．４及び９．５であり、そして１０匹中６匹、１０匹中９匹、又は１０匹中１０匹のラットがそれぞれ排卵した（実験１）。これらの結果は図２に示す。
【０１３０】
シルデナフィル（ＰＤＥの１，５及び６阻害剤）は、低用量のＦＳＨを伴うＮＰ３Ｓにおいてラット（皮下的に）当たり１、５及び２５ｍｇ／ｋｇ×４注射の用量において投与し、低用量のＦＳＨ＋ＮＰ３Ｓ媒体コントロールと比較してラット当たり排卵性卵母細胞の数の用量関連性の増加をもたらした。ＦＳＨ低用量単独では、ラット当たり１の卵母細胞の平均が得られ、１０匹中３匹のラットのみが排卵した（実験１）。反対に、ＦＳＨ低用量をシルデナフィル（１、５又は２５ｍｇ／ｋｇ）と併用して投与した場合、ラット当たりの卵母細胞の平均数は、それぞれ３．５、５．５及び６．９であり、そして８匹中６匹、８匹中５匹、又は８匹中７のラットがそれぞれ排卵した（実験１）。これらの結果は図３に示す。
【０１３１】
媒体、低ＦＳＨ、高ＦＳＨ、又は低ＦＳＨ＋７５ｍｇ／ｋｇのシルデナフィルで処置したラットにおけるラット当たり（２つの卵巣）の二次卵胞の総数を図４に示す。二次卵胞の総数は、シルデナフィル＋ＦＳＨグループにおける方が他のいずれかのグループにおける場合よりも多い[媒体＝６９；低ＦＳＨ＝６４；低ＦＳＨ＋シルデナフィル＝８４；高ＦＳＨ＝６４]。
【０１３２】
媒体、低ＦＳＨ、高ＦＳＨ、又は低ＦＳＨ＋７５ｍｇ／ｋｇのシルデナフィルで処置したラットにおけるラット当たり（２つの卵巣）の胞状卵胞の総数を図５に示す。シルデナフィル＋ＦＳＨで処置したラットにおける胞状卵胞の総数は、低ＦＳＨで処置したラットにおける胞状卵胞の数よりも多い[媒体＝３．２；低ＦＳＨ＝４．１；低ＦＳＨ＋シルデナフィル＝７．４；高ＦＳＨ＝９．５]。
【０１３３】
シルデナフィルは、低用量のＦＳＨを伴う水性媒体においてラット（皮下的に）当たり１、５及び２５ｍｇ／ｋｇ×４注射の用量において投与し、低用量のＦＳＨ単独＋水性媒体コントロールと比較して、ラット当たり排卵性卵母細胞の数の用量関連性の増加をもたらした。ＦＳＨ低用量単独では、ラット当たり１の卵母細胞の平均が得られ、そして８匹中２匹のラットのみが排卵した。反対に、ＦＳＨ低用量をシルデナフィル（５ｍｇ／ｋｇ）と併用して投与した場合、ラット当たりの卵母細胞の平均数は、２０であり、そして８匹中７匹のラットが排卵した。これらの結果は図６に示す[注意：図６は、媒体が有機ＮＰ３Ｓ−ＳＭでなく水性であるという点において図３とは異なる]。
【０１３４】
タダラフィル（ＰＤＥの５及び６の阻害剤）は、低用量のＦＳＨを伴う水性媒体においてラット（皮下的に）当たり２５ｍｇ／ｋｇ×４注射の用量において投与し、低用量のＦＳＨ単独＋ＮＰ３Ｓ媒体コントロールと比較して、ラット当たり排卵性卵母細胞の数の用量関連性の増加をもたらした。ＦＳＨ無しを使用した場合、ラット当たり１以下の卵母細胞が回収された。これらの結果は図７に示す。ＦＳＨ無しで投与した場合、ラット当たり平均１の卵母細胞が回収された。最適以下の用量のＦＳＨ（「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×４）では、ラット当たり平均５の卵母細胞が回収された。最適以下の用量をタダラフィルと併用した場合（ラット当たり２５ｍｇ／ｋｇ×４；「低ＦＳＨ＋タダラフィル」）、ラット当たり平均１６の卵母細胞が回収された。高用量のＦＳＨ（「高ＦＳＨ」：ラット当たり６０６．２ｎｇ×３）では、ラット当たり平均２１の卵母細胞が回収された。
【０１３５】
Ahn, et al., J. Med. Chem., 40: 2196-2210 (1997) 由来の化合物番号３１である（（６ａＲ，９ａＳ）−２−（ビフェニルイルメチル）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ−［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）−オン）（ＰＤＥ１の阻害剤）を以下に示す：
【化３】
【０１３６】
化合物番号３１は、低用量のＦＳＨを伴うＮＰ３Ｓにおいてラット当たり２５ｍｇ／ｋｇ×４注射の用量において投与し（皮下的に）、低用量のＦＳＨ単独＋ＮＰ３Ｓ媒体コントロールと比較して、ラット当たり排卵性卵母細胞の数の用量関連性の増加をもたらした。これらの結果は図８に示す。ＦＳＨ無しで投与した場合、ラット当たり平均１の卵母細胞が回収された。最適以下の用量のＦＳＨ（「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×４）では、ラット当たり平均５の卵母細胞が回収された。最適以下の用量を化合物番号３１と併用した場合（ラット当たり２５ｍｇ／ｋｇ×４）、ラット当たり平均１８の卵母細胞が回収された。高用量のＦＳＨ（「高ＦＳＨ」：ラット当たり６０６．２ｎｇ×３）では、ラット当たり平均２１の卵母細胞が回収された。
【０１３７】
Ahn, et al., J. Med. Chem., 40: 2196-2210 (1997) 由来の化合物番号３３である（５’−メチル−２’（ビフェニルイルメチル）−３’−（フェニルメチル）スピロ［シクロペンタン−１，７’（８’Ｈ）−［３Ｈ］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン］−４（５’Ｈ）−オン（ＰＤＥ１の阻害剤）を以下に示す。
【化４】
【０１３８】
化合物番号３３は、低用量のＦＳＨを伴うＮＰ３Ｓ媒体においてラット当たり２５ｍｇ／ｋｇ×４注射の用量において投与し（皮下的に）、低用量のＦＳＨ単独＋ＮＰ３Ｓ媒体コントロールと比較して、ラット当たり排卵性卵母細胞の数の用量関連性の増加をもたらした。これらの結果は図９に示す。ＦＳＨ無しで投与した場合、ラット当たり平均１の卵母細胞が回収された。最適以下の用量のＦＳＨ（「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×４）では、ラット当たり平均５の卵母細胞が回収された。最適以下の用量を化合物番号３３と併用した場合（ラット当たり２５ｍｇ／ｋｇ×４）、ラット当たり平均２７の卵母細胞が回収された。高用量のＦＳＨ（「高ＦＳＨ」：ラット当たり６０６．２ｎｇ×３）では、ラット当たり平均２０の卵母細胞が回収された。
【０１３９】
メソプラムは、低用量のＦＳＨと共に０．０８、０．４、及び２ｍｇ／ｋｇ／日において投与した。卵胞の成熟の有意な増強は、低ＦＳＨ単独を受けたグループに見られた。高用量において、卵巣の成熟が減少しているようであった。それから、メソプラムをより低用量：０．０３２、０．０１６、０．０８ｍｇ／ｋｇで低用量のＦＳＨと一緒に投与し、用量依存性の卵胞の成熟の増加を示し、０．０８ｍｇ／ｋｇにおいて有意性に達した。これらの結果は図１５に示す。
【０１４０】
上記モデルにおいて他のＰＤＥ阻害剤を試験し、当該結果は表１に挙げる。
表１．多様なＰＤＥ阻害剤の卵胞成長活性
【表３】
実施例２：低用量ＦＳＨとの組み合わせにおける多様なＰＤＥ阻害剤を使用するｃＡＭＰの誘導
【０１４１】
上述の通り産出したラット顆粒膜細胞の評価に追加して、細胞株中のｃＡＭＰを測定するために、ＪＣ−４１０ブタ顆粒膜細胞を使用した。これらの細胞は Dr. Jorge Chedrese (University of Saskatchewan)から入手した。当該細胞は、５％新生仔ウシ血清(Gibco)及び５μｇ/ｍｌのインシュリン(Gibco)で補助したＤＭＥＭ／Ｆ１２中に維持した。安定な細胞株は、ヒトＬＨ及びＦＳＨレセプターのｃＤＮＡを標準的なトランスフェクション技術の使用及び３００μｇ/ｍｌのジェネテシン(Gibco)での選択により、細胞にトランスフェクションすることにより確立した。選択後、当該細胞を同濃度のジェネテシン中に維持した。ｃＡＭＰの測定のために、当該細胞は、アッセイの１日前に９６ウェルプレート中に、ウェル当たり２５，０００細胞の密度で置いた。翌日、当該細胞は、示される通り、１ｎＭのＦＳＨの存在下又は不存在下において増加用量の阻害剤分子で１時間刺激した。全ての化合物は、４％ＤＭＳＯ（アッセイにおける最終濃度は０．５％）を含有するアッセイバッファー（ＤＭＥＭ／Ｆ１２、０．１％ＢＳＡ−Sigma）中に希釈した。１時間の刺激後、当該細胞を溶解し、そして商業者のプロトコルに従いｃＡＭＰをＴｒｏｐｉｘ ｃＡＭＰ−Ｓｃｒｅｅｎアッセイ(Applied Biosystems)を使用してアッセイした。
【０１４２】
原発卵巣分散培養液中のｃＡＭＰの測定は、以下のようにモニターした。卵巣をＳＤラット（２２日齢）から摘出し、そして３〜５ｍｌの消化培地中で手術用顕微鏡下で皮膜を取り除いた。当該消化培地は、８ｍｇ／ｍｌのコラゲナーゼ(Sigma)、及び０．０５％のＤＮａｓｅ(Invitrogen)を含有するアッセイ培地（１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ(Sigma)、５μｇ／ｍｌのゲンタマイシン及び３μｇ／ｍｌのアンホテリシンＢ(Gibco)で補充したＭｃＣｏｙ’ｓ５Ａ培地）から成る。皮膜除去後、当該卵胞を２７ゲージニードルを使用して小片に解剖し、１５ｍｌのチューブに移し、そして、振盪しながら３７℃で４５分間消化した。当該消化した組織を７０μｍのＮａｌｇｅｎフィルターを通してろ過し、そして当該ろ液を１０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。当該ペレットをアッセイ培地で洗浄し、そして２回目の遠心分離をした。生じたペレットは、２ｍｌの成長培地（５％ＦＢＳ、５μｇ／ｍｌのゲンタマイシン及び３μｇ／ｍｌのアンホテリシンＢ(Gibco)で補充したＭｃＣｏｙ’ｓ５Ａ培地）に懸濁し、そして当該細胞をカウントした。当該細胞は成長培地に希釈し、２５〜３０，０００細胞／ウェルに置き、そして刺激する前に４８時間培養した。当該細胞を刺激し、そして細胞株の測定のためにｃＡＭＰを上述の通りアッセイした。
結果：
【０１４３】
ＰＤＥ４阻害剤のパネルは、試験管内におけるＦＳＨ処置した又は未処置のラット顆粒膜細胞及び／又はヒトＦＳＨ−発現ブタ顆粒膜細胞株ＪＣ−４１０（ＪＣ４１０ＦＳＨＲ）中におけるｃＡＭＰを誘導するこれらの能力のために試験した。ＰＤＥ阻害剤のいくつかは、当該モデルにおいてｃＡＭＰの誘導において高活性であり、いくつかは中程度の活性であり、そしていくつかはほとんど又は全く活性ではない。注目すべきことに、ＦＳＨの不存在において、ＰＤＥ４阻害剤はｃＡＭＰを誘導する能力をほとんど又は全く有さない（１０Ａ〜１０Ｃを参照のこと）。当該阻害剤の能力は、顆粒膜細胞の原料に関わらず同じであった。即ち、当該細胞株及び一次顆粒膜細胞の両方において比較的類似していた。
【０１４４】
生体内において、２つの典型的なＰＤＥ４阻害剤であるピクラミラスト及びロフルミラストはＦＳＨ−誘発性卵胞成熟を増加した。低濃度のピクラミラスト（０．０８及び０．４ｍｇ／ｋｇ）は、低レベルの外因性ＦＳＨの不存在下において卵胞成熟を誘導するために有意ではなかった（図１３）。しかしながら、高濃度の２ｍｇ／ｋｇにおいてピクラミラストは、卵胞の成熟を誘導した（図１３を参照のこと）。ピクラミラストを低用量のＦＳＨの存在下で投与した場合、排卵性卵母細胞の数の増加によって明らかなように、卵胞成熟において極めて顕著な誘導が存在した（図１４）。
【０１４５】
上記結果は、最適以下の量のＦＳＨと共に哺乳類に投与した場合、ＰＤＥ阻害剤がｈＣＧ−排卵性卵母細胞の数の増加を誘導することを示す。当該発見を活用するための方法及び組成物は上述のとおりである。
【０１４６】
本明細書において開示され、そして要求された全ての組成物及び／又は方法は、本開示に明るい者において、過剰な実験なしに作製及び実行することができる。本発明の組成物及び方法は好ましい態様の点において説明されるが、多くのものが、発明の概念、精神及び範囲から離れることなく本明細書において説明された方法の工程又は工程順序において当該組成物及び／又は方法を適用できることは当業者に明らかであろう。より特別には、化学的及び生理的に関係する一定の薬剤は、同じ又は同様な結果が達成されるなら本明細書で説明された薬剤に代えることができる。当業者に明らかな全てのこのような類似した代替及び修正は、付加クレームにより明らかなように、発明の精神、範囲、及び概念中にあるものとみなされる。
【０１４７】
本明細書において明記されるものに対する典型的な手順又は他の捕捉を供する範囲に対して本明細書を通して引用される引用例、特許及び特許公報は、引用として全て特別に本明細書に組み入れられている。
【０１４８】
以下の図面は本明細書の一部を形成し、そして本発明の更なる説明的観点に含まれる。本発明は、本明細書に供される特別な態様の詳細な説明との組み合わせにおける図面に対する引用により、より理解されることができる。
【図面の簡単な説明】
【０１４９】
【図１】図１は最適以下の用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×４)で処置された未成熟な雌のラット、及び最適以下の用量のＦＳＨ（「低ＦＳＨ」）＋ジピリダモール（ラット当たり１、５、２５ｍｇ／ｋｇ×４）で処置されたラットにおける、ラット当たりの排卵された卵母細胞の数を示す。
【０１５０】
【図２】図２は最適以下の用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×４)で処置された未成熟な雌のラット、及び最適以下の用量のＦＳＨ（「低ＦＳＨ」）＋ザプリナスト（ラット当たり１、５、２５ｍｇ／ｋｇ×４）で処置されたラットにおける、ラット当たりの排卵された卵母細胞の数を示す。
【０１５１】
【図３】図３は最適以下の用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×４)で処置された未成熟な雌のラット、及び最適以下の用量のＦＳＨ（「低ＦＳＨ」）＋シルデナフィル（ラット当たり１、５、２５ｍｇ／ｋｇ×４）で処置されたラットにおける、ラット当たりの排卵された卵母細胞の数を示す。
【０１５２】
【図４】図４は低用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×３)、高用量のＦＳＨ(「高ＦＳＨ」：ラット当たり６０６．２ｎｇ×３)、及び低用量のＦＳＨ＋シルデナフィル（ラット当たり２５ｍｇ／ｋｇ×３）で処置されたラットにおける二次卵胞の数を示す。
【０１５３】
【図５】図５は低用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×３)、高用量のＦＳＨ(「高ＦＳＨ」：ラット当たり６０６．２ｎｇ×３)、及び低用量のＦＳＨ＋７５ｍｇ／ｋｇのシルデナフィルで処置されたラットにおける胞状卵胞の数を示す。
【０１５４】
【図６】図６は水性バッファーにおいて投与された低用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×３)、高用量のＦＳＨ(「高ＦＳＨ」：ラット当たり６０６．２ｎｇ×３)、及び低用量のＦＳＨ＋シルデナフィル（ラット当たり１、５、２５ｍｇ／ｋｇ×４）で処置された未成熟な雌のラットにおけるラット当たりの排卵された卵母細胞の数を示す。
【０１５５】
【図７】図７は水性バッファーにおいて投与されたＦＳＨ無し（「ＦＳＨ無し」）、最適以下の用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×３)、最適以下の用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×４)＋タダラフィル（ラット当たり２５ｍｇ／ｋｇ×４）、及び高用量のＦＳＨ(「高ＦＳＨ」：ラット当たり６０６．２ｎｇ×３)で処置された未成熟な雌のラットにおけるラット当たりの排卵された卵母細胞の数を示す。
【０１５６】
【図８】図８は水性バッファーにおいて投与されたＦＳＨ無し（「ＦＳＨ無し」）、最適以下の用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×３)、最適以下の用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×４)＋化合物番号３１（（６ａＲ，９ａＳ）−２−（ビフェニルイルメチル）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ−［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）−オン）（ラット当たり２５ｍｇ／ｋｇ×４）、及び高用量のＦＳＨ(「高ＦＳＨ」：ラット当たり６０６．２ｎｇ×３)で処置された未成熟な雌のラットにおけるラット当たりの排卵された卵母細胞の数を示す。
【０１５７】
【図９】図９は水性バッファーにおいて投与されたＦＳＨ無し（「ＦＳＨ無し」）、最適以下の用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×３)、最適以下の用量のＦＳＨ(「低ＦＳＨ」：ラット当たり１５１．５ｎｇ×４)＋化合物番号３３（５’−メチル−２’（ビフェニルイルメチル）−３’−（フェニルメチル）スピロ［シクロペンタン−１，７’（８’Ｈ）−［３Ｈ］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン］−４（５’Ｈ）−オン）（ラット当たり２５ｍｇ／ｋｇ×４）、及び高用量のＦＳＨ(「高ＦＳＨ」：ラット当たり６０６．２ｎｇ×３)で処置された未成熟な雌のラットにおけるラット当たりの排卵された卵母細胞の数を示す。
【０１５８】
【図１０Ａ】図１０Ａ〜１０Ｃ。ラット顆粒膜細胞（ラット卵巣分散物質）及び／又はヒトＦＳＨレセプター−発現ブタ顆粒膜細胞（ＪＣ４１０／ＦＳＨＲ）におけるｃＡＭＰを誘導し、又は増加させるためのＰＤＥ阻害剤の能力を測定するための試験管内における実験。
【図１０Ｂ】図１０Ａ〜１０Ｃ。ラット顆粒膜細胞（ラット卵巣分散物質）及び／又はヒトＦＳＨレセプター−発現ブタ顆粒膜細胞（ＪＣ４１０／ＦＳＨＲ）におけるｃＡＭＰを誘導し、又は増加させるためのＰＤＥ阻害剤の能力を測定するための試験管内における実験。
【図１０Ｃ】図１０Ａ〜１０Ｃ。ラット顆粒膜細胞（ラット卵巣分散物質）及び／又はヒトＦＳＨレセプター−発現ブタ顆粒膜細胞（ＪＣ４１０／ＦＳＨＲ）におけるｃＡＭＰを誘導し、又は増加させるためのＰＤＥ阻害剤の能力を測定するための試験管内における実験。
【０１５９】
【図１１】低用量のＦＳＨと様々な濃度（０．０８ｍｇ／ｋｇ；０．４ｍｇ／ｋｇ；２ｍｇ／ｋｇ）のピクラミラストとの組み合わせの投与による卵胞成熟化の誘導の生体内における実証。
【０１６０】
【図１２】低用量のＦＳＨと様々な濃度（０．０８ｍｇ／ｋｇ；０．４ｍｇ／ｋｇ；２ｍｇ／ｋｇ）のロフルミラストとの組み合わせの投与による卵胞成熟化の誘導の生体内における実証。
【０１６１】
【図１３】卵胞成熟化の誘導の生体内における実証。低及び高用量のＦＳＨ単独；様々な濃度（０．０８ｍｇ／ｋｇ；０．４ｍｇ／ｋｇ；２ｍｇ／ｋｇ）のピクラミラスト、及び低用量のＦＳＨと様々な濃度（０．０８ｍｇ／ｋｇ；０．４ｍｇ／ｋｇ；２ｍｇ／ｋｇ）のピクラミラストとの組み合わせを使用する刺激下における卵母細胞の産出の比較。２つの独立した実験からの結果が示される。
【０１６２】
【図１４】卵胞成熟化の誘導の生体内における実証。低用量のＦＳＨと様々な濃度（０．０８ｍｇ／ｋｇ；０．４ｍｇ／ｋｇ；２ｍｇ／ｋｇ）のピクラミラストとの組み合わせを使用する刺激下における増加した卵母細胞の産出を実証する累積データ。
【０１６３】
【図１５】卵胞成熟化の誘導の生体内における実証。低用量のＦＳＨと様々な濃度（０．０３２、０，０１６、０．０８ｍｇ／ｋｇ；０．４ｍｇ／ｋｇ；２ｍｇ／ｋｇ）のメソプラムとの組み合わせを使用する刺激下における増加した卵母細胞の産出を実証する累積データ。２つの独立した実験からの結果が示される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
女性における卵胞成長の刺激のための医薬の調製のためのＰＤＥ酵素の阻害剤の使用。
【請求項２】
上記患者が排卵誘発を受けている、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
上記患者が制御された卵巣過剰刺激を受けている、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
上記医薬が、ＦＳＨ、又はＦＳＨ活性を有する薬剤、又は内因性ＦＳＨ放出を刺激する薬剤と同時に、別々に、又は逐次的に投与するためのものである、請求項１、２、又は３に記載の使用。
【請求項５】
上記医薬がＦＳＨと同時に、別々に、又は逐次的に投与するためのものである、請求項１、２、又は３に記載の方法。
【請求項６】
上記医薬が、ＦＳＨ活性を有する薬剤、又は内因性ＦＳＨ放出を刺激する薬剤と同時に、別々に、又は逐次的に投与するためのものである、請求項１、２、又は３に記載の使用。
【請求項７】
月経後およそ２〜３日目に上記医薬の投与が開始される、上記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
排卵誘引用量のｈＣＧが投与される場合、卵胞の成長が十分となるまで上記医薬が毎日投与される、上記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
上記ｈＣＧの排卵誘引用量が５，０００〜１０，０００ＩＵである、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
上記医薬がＦＳＨと共に投与され、そして当該ＦＳＨの用量が、卵胞成長の点から同じ結果を達成するために、ＰＤＥ阻害剤の不存在における同じ患者において必要とされる用量よりも少ない、上記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
上記ＰＤＥ阻害剤が１、５及び６から選択される少なくとも１つのＰＤＥ型の阻害剤である、上記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
上記ＰＤＥ阻害剤が以下から選択されるＰＤＥ阻害剤である、上記請求項のいずれか一項に記載の使用：
５−［２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）；ザプリナスト；ジピリジダモール；５−（２−エトキシ−５−モルホリノアセチルフェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−２０ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシエトキシ）ピリジ−ｎ−３−イル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；（＋）−３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシ−１（Ｒ）−メチルエトキシ）ピリジン−３−イル］−２−メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−ｌ−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−［２−メトキシエチル］−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−イソ−ブトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−フェニル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−（５−アセチル−２−プロポキシ−３−ピリジンイル）−３−エチル−２−（１−イソプロピル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−（５−アセチル−２−ブトキシ−３−ピリジンイル）−３−エチル−２−（１−エチル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（−３，４−メチレンジオキシフェニル）ピラジノ［２’，１’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（タダラフィル；ＩＣ−３５１）；２−［２−エトキシ−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル−１−スルホニル）−フェニル］−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−オン（バルデナフィル）；４−ブロモ−５−（ピリジルメチルアミノ）−６−［３−（４−クロロフェニル）−プロポキシ］−３（２Ｈ）ピリダジノン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソル−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キノゾリニル］−４−ピペリジン−カルボン酸、モノナトリウム塩；（＋）−ｃｉｓ−５，６ａ，７，９，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２−［４−（トリフルオロメチル）−フェニルメチル−５−メチル−シクロペント−［４，５］イミダゾ［２，１−ｂ]−プリン−４（３Ｈ）オン；フラジオシリン；ｃｉｓ−２−ヘキシル−５−メチル−３，４，５，６ａ，７，８，９，９ａ−オクタヒドロシクロペント［４，５］−イミダゾ［２−，１−ｂ］プリン−４−オン；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；４−ブロモ−５−（３−ピリジルメチルアミノ）−６−（３−（４−クロロフェニル）プロポキシ）−３−（２Ｈ）ピリダジノン；ｌ−メチル−５（５−モルホリノアセチル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ（４，３−ｄ）ピリミジン−７−オン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソル−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キナゾリニル］−４−ピペリジンカルボン酸、モノナトリウム塩；ファーマプロジェクト Ｎｏ．４５１６；ファーマプロジェクト Ｎｏ．５０５１；ファーマプロジェクト Ｎｏ．５０６４；ファーマプロジェクト Ｎｏ．５０６９；ＧＦ−１９６９６０；Ｅ−８０１０及びＥ−４０１０；Ｂａｙ−３８−３０４５＆Ｂａｙ−３８−９４５６、ビンポセチン；ＳＣＨ−５１８６６；ＳＣＨ−５９４９８；（６ａＲ，９ａＳ）−２−（ビフェニルイルメチル）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ−［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）−オン；５’−メチル−２’（ビフェニルイルメチル）−３’−（フェニルメチル）スピロ［シクロペンタン−１，７’（８’Ｈ）−［３Ｈ］イミダゾ［２，１−ｂ]プリン］−４（５’Ｈ）−オン；（６ａＲ，９ａＳ）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−２−（フェニルエチニル）−３−（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ［２，１−ｂ］−プリン−４（３Ｈ）−オン；ジピリジダモール；ＡＷＤ−１２−１７１及びＡＷＤ−１２−２１７；ＢＭＳ−３４１４００；ＵＫ−３４３，６６４；５Ｅ−３６２３、５Ｅ−３５６９、５Ｅ−３６５７、Ｅ４０２１；ＫＳ−５０５ａ；ＹＣ−１；ＩＤＤＢレファレンス３２３９５１；ＷＩＮ−６１６９１；ＦＲ２２６８０７；ＩＤＤＢレファレンス４６１３１７、４６２５０３、４６１３２１、４６１３２４、４６６１４６；ピリジン−４−イルメチル３−（１，３−ベンゾジオキソル−５−イル）−９−オキソ−１，３，４，９テトラヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］キノリン−２−カルボキシレート：
【化１】
【請求項１３】
上記ＰＤＥ阻害剤が、シルデナフィル；ザプリナスト、ジピリダモール；（６ａＲ，９ａＳ）−２−（ビフェニルイルメチル）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ−［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）−オン；及び５’−メチル−２’（ビフェニルイルメチル）−３’−（フェニルメチル）スピロ［シクロペンタン−１，７’（８’Ｈ）−［３Ｈ］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン］−４（５’Ｈ）−オンから選択される、上記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
上記ＰＤＥ阻害剤がザプリナストである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
上記ＰＤＥ阻害剤がシルデナフィルである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
上記ＰＤＥ阻害剤がタダラフィルである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７】
上記ＰＤＥ阻害剤がＰＤＥ１及びＰＤＥ５の選択的阻害剤である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８】
上記ＰＤＥ阻害剤がＰＤＥ１の選択的阻害剤である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９】
上記ＰＤＥ阻害剤がＰＤＥ５の選択的阻害剤である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２０】
卵胞の成熟を刺激するための有効量におけるホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤を含んで成る組成物で女性を処置することを含んで成る、卵胞成熟を増大する方法。
【請求項２１】
卵母細胞の成熟を生じさせるための有効量におけるＰＤＥ阻害剤を含んで成る組成物で試験管内において卵母細胞を処置することを含んで成る、卵母細胞の成熟を増加する方法。
【請求項２２】
上記組成物が少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤を含んで成る、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２３】
上記組成物がピクラミラスト、ロフルミラスト、アリフロ、フィラミナスト、メソプラム、Ｄ４４１８、アロフィリン、及びＣＬ１０４４から成る群から選択される少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤を含んで成る、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２４】
上記組成物が少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤、及びＰＤＥ１阻害剤、ＰＤＥ７阻害剤、ＰＤＥ９阻害剤、ＰＤＥ１０、及びＰＤＥ１１阻害剤から成る群から選択される１つの他のＰＤＥ阻害剤を含んで成る、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２５】
上記方法が、ＦＳＨ、黄体形成ホルモン、及び絨毛性ゴナドトロピンから成る群から選択される少なくとも１つのゴナドトロピンでの処置を更に含んで成る、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２６】
上記方法が、ＦＳＨ、黄体形成ホルモン、及び絨毛性ゴナドトロピンから成る群から選択される少なくとも１つのゴナドトロピンでの処置を更に含んで成る、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
上記方法が、ＦＳＨ、黄体形成ホルモン、及び絨毛性ゴナドトロピンから成る群から選択される少なくとも１つのゴナドトロピンでの処置を更に含んで成る、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
上記方法が、ＦＳＨ、黄体形成ホルモン、及び絨毛性ゴナドトロピンから成る群から選択される少なくとも１つのゴナドトロピンでの処置を更に含んで成る、請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
上記方法がＦＳＨでの処置を更に含んで成る、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項３０】
上記方法がＦＳＨ及び少なくとも１つの非−ＦＳＨゴナドトロピンホルモンを投与することを更に含んで成る、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項３１】
上記非−ＦＳＨゴナドトロピンホルモンが黄体形成ホルモンである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
上記非−ＦＳＨゴナドトロピンホルモンが絨毛性ゴナドトロピンである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
上記方法が、ＰＤＥ阻害剤との組み合わせにおいて、ＦＳＨの刺激剤、アゴニスト、又はアジュバント単独の投与を含んで成る、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項３４】
上記ＦＳＨの刺激剤が、レトロゾール、アナストロゾール、及びボロゾールから成る群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ＰＤＥ阻害剤及びゴナドトロピンホルモンが同時に投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３６】
上記ＰＤＥ４阻害剤及びＦＳＨが、混合物として１つのバイアル中に含まれる、請求項２５に記載の方法。
【請求項３７】
単用量のＰＤＥ４阻害剤及びＦＳＨの混合物を含むバイアル。
【請求項３８】
上記ＰＤＥがゴナドトロピンホルモン処置の前に投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３９】
上記ＰＤＥ阻害剤がゴナドトロピンホルモン処置の後に投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項４０】
上記ＦＳＨが約５〜４５０ＩＵ／日の薬用量範囲において投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項４１】
上記ＦＳＨが約５〜７５ＩＵ／日の薬用量範囲において投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項４２】
上記方法が、女性に対して、少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤及び外因性ＦＳＨホルモンを含んで成る組成物を投与することを含んで成る、請求項２０に記載の方法。
【請求項４３】
上記外因性ＦＳＨホルモンが、組み換えＦＳＨホルモンである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
上記外因性ＦＳＨホルモンが、尿ＦＳＨホルモンである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
上記ＰＤＥ４阻害剤が、約０．０５ｍｇ／日〜約５ｍｇ／日の用量において投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４６】
上記ＰＤＥ４阻害剤が、約１０ｍｇ／日〜約２００ｍｇ／日の用量において投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４７】
上記ＦＳＨが、５ＩＵ ＦＳＨ／日〜７５ＩＵ ＦＳＨ／日の範囲において投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４８】
上記ＦＳＨが１日当たり１５０ＩＵ ＦＳＨの薬用量において投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４９】
上記ＦＳＨが単用量において投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項５０】
上記ＦＳＨが複数用量において投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項５１】
上記ＦＳＨが筋肉内的に又は皮下的に投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項５２】
上記ＦＳＨが、女性の月経周期の２〜１４日目に投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項５３】
上記ＦＳＨが、継続的に７〜１２日間投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項５４】
上記方法が、ＰＤＥ４阻害剤及びＦＳＨホルモンの投与の前に、女性における内因性ＦＳＨ及びＬＨ生成物の抑制を更に含んで成る、請求項４２に記載の方法。
【請求項５５】
上記内因性ＦＳＨ及びＬＨ生成物の抑制が、ＧｎＲＨ又はその類似体を女性に対して投与することによりもたらされる、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤及び外因性ＦＳＨホルモンの投与の前に、上記ＧｎＲＨ、又はその類似体が女性に対して３０日間投与される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
上記ＧｎＲＨ、又はこの類似体が、毎日約０．２５ｍｇ〜約３ｍｇのＧｎＲＨの薬用量範囲において投与される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
上記女性が４又はそれ以上の回収可能な卵母細胞を産出する、請求項４２に記載の方法。
【請求項５９】
ＰＤＥ４及びＦＳＨが最初に投与された後１２日目に卵母細胞を回収する工程を更に含んで成る、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
試験管内において回収した卵母細胞を受精する工程、回収し、受精した卵母細胞を４〜８細胞期に培養する工程、及び当該４〜８細胞期の受精した卵母細胞を女性の子宮に移植する工程を更に含んで成る、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
不妊症の処置のためのキットであって、当該キットが、
医薬的に受容可能な製剤において少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤を含んで成る第一組成物、及び、
医薬的に受容可能な製剤においてＦＳＨを含んで成る第二組成物
を含んで成るキット。
【請求項６２】
上記キットが尿ＦＳＨ又は組み換えＦＳＨを含んで成る、請求項６１に記載のキット。
【請求項６３】
上記キットがヒトＦＳＨを含んで成る、請求項６２に記載のキット。
【請求項６４】
上記キットのＦＳＨが、約５ＩＵ ＦＳＨ〜約７５ＩＵ ＦＳＨの単位用量において供される、請求項６１に記載のキット。
【請求項６５】
医薬的に受容可能な製剤において、ＬＨを含んで成る第三組成物を更に含んで成る、請求項６１に記載のキット。
【請求項６６】
上記キットのＬＨが、約７５ＩＵ ＬＨ〜約１５０ＩＵ ＬＨの単位用量において供される、請求項６５に記載のキット。
【請求項１】
女性における卵胞成長の刺激のための医薬の調製のためのＰＤＥ酵素の阻害剤の使用。
【請求項２】
上記患者が排卵誘発を受けている、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
上記患者が制御された卵巣過剰刺激を受けている、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
上記医薬が、ＦＳＨ、又はＦＳＨ活性を有する薬剤、又は内因性ＦＳＨ放出を刺激する薬剤と同時に、別々に、又は逐次的に投与するためのものである、請求項１、２、又は３に記載の使用。
【請求項５】
上記医薬がＦＳＨと同時に、別々に、又は逐次的に投与するためのものである、請求項１、２、又は３に記載の方法。
【請求項６】
上記医薬が、ＦＳＨ活性を有する薬剤、又は内因性ＦＳＨ放出を刺激する薬剤と同時に、別々に、又は逐次的に投与するためのものである、請求項１、２、又は３に記載の使用。
【請求項７】
月経後およそ２〜３日目に上記医薬の投与が開始される、上記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
排卵誘引用量のｈＣＧが投与される場合、卵胞の成長が十分となるまで上記医薬が毎日投与される、上記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
上記ｈＣＧの排卵誘引用量が５，０００〜１０，０００ＩＵである、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
上記医薬がＦＳＨと共に投与され、そして当該ＦＳＨの用量が、卵胞成長の点から同じ結果を達成するために、ＰＤＥ阻害剤の不存在における同じ患者において必要とされる用量よりも少ない、上記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
上記ＰＤＥ阻害剤が１、５及び６から選択される少なくとも１つのＰＤＥ型の阻害剤である、上記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
上記ＰＤＥ阻害剤が以下から選択されるＰＤＥ阻害剤である、上記請求項のいずれか一項に記載の使用：
５−［２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）；ザプリナスト；ジピリジダモール；５−（２−エトキシ−５−モルホリノアセチルフェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−２０ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシエトキシ）ピリジ−ｎ−３−イル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；（＋）−３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシ−１（Ｒ）−メチルエトキシ）ピリジン−３−イル］−２−メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−ｌ−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−［２−メトキシエチル］−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−イソ−ブトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−フェニル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−（５−アセチル−２−プロポキシ−３−ピリジンイル）−３−エチル−２−（１−イソプロピル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；５−（５−アセチル−２−ブトキシ−３−ピリジンイル）−３−エチル−２−（１−エチル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（−３，４−メチレンジオキシフェニル）ピラジノ［２’，１’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（タダラフィル；ＩＣ−３５１）；２−［２−エトキシ−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル−１−スルホニル）−フェニル］−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−オン（バルデナフィル）；４−ブロモ−５−（ピリジルメチルアミノ）−６−［３−（４−クロロフェニル）−プロポキシ］−３（２Ｈ）ピリダジノン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソル−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キノゾリニル］−４−ピペリジン−カルボン酸、モノナトリウム塩；（＋）−ｃｉｓ−５，６ａ，７，９，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２−［４−（トリフルオロメチル）−フェニルメチル−５−メチル−シクロペント−［４，５］イミダゾ［２，１−ｂ]−プリン−４（３Ｈ）オン；フラジオシリン；ｃｉｓ−２−ヘキシル−５−メチル−３，４，５，６ａ，７，８，９，９ａ−オクタヒドロシクロペント［４，５］−イミダゾ［２−，１−ｂ］プリン−４−オン；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；４−ブロモ−５−（３−ピリジルメチルアミノ）−６−（３−（４−クロロフェニル）プロポキシ）−３−（２Ｈ）ピリダジノン；ｌ−メチル−５（５−モルホリノアセチル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ（４，３−ｄ）ピリミジン−７−オン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソル−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キナゾリニル］−４−ピペリジンカルボン酸、モノナトリウム塩；ファーマプロジェクト Ｎｏ．４５１６；ファーマプロジェクト Ｎｏ．５０５１；ファーマプロジェクト Ｎｏ．５０６４；ファーマプロジェクト Ｎｏ．５０６９；ＧＦ−１９６９６０；Ｅ−８０１０及びＥ−４０１０；Ｂａｙ−３８−３０４５＆Ｂａｙ−３８−９４５６、ビンポセチン；ＳＣＨ−５１８６６；ＳＣＨ−５９４９８；（６ａＲ，９ａＳ）−２−（ビフェニルイルメチル）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ−［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）−オン；５’−メチル−２’（ビフェニルイルメチル）−３’−（フェニルメチル）スピロ［シクロペンタン−１，７’（８’Ｈ）−［３Ｈ］イミダゾ［２，１−ｂ]プリン］−４（５’Ｈ）−オン；（６ａＲ，９ａＳ）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−２−（フェニルエチニル）−３−（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ［２，１−ｂ］−プリン−４（３Ｈ）−オン；ジピリジダモール；ＡＷＤ−１２−１７１及びＡＷＤ−１２−２１７；ＢＭＳ−３４１４００；ＵＫ−３４３，６６４；５Ｅ−３６２３、５Ｅ−３５６９、５Ｅ−３６５７、Ｅ４０２１；ＫＳ−５０５ａ；ＹＣ−１；ＩＤＤＢレファレンス３２３９５１；ＷＩＮ−６１６９１；ＦＲ２２６８０７；ＩＤＤＢレファレンス４６１３１７、４６２５０３、４６１３２１、４６１３２４、４６６１４６；ピリジン−４−イルメチル３−（１，３−ベンゾジオキソル−５−イル）−９−オキソ−１，３，４，９テトラヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］キノリン−２−カルボキシレート：
【化１】
【請求項１３】
上記ＰＤＥ阻害剤が、シルデナフィル；ザプリナスト、ジピリダモール；（６ａＲ，９ａＳ）−２−（ビフェニルイルメチル）−５，６ａ，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３（フェニルメチル）シクロペント［４，５］イミダゾ−［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）−オン；及び５’−メチル−２’（ビフェニルイルメチル）−３’−（フェニルメチル）スピロ［シクロペンタン−１，７’（８’Ｈ）−［３Ｈ］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン］−４（５’Ｈ）−オンから選択される、上記請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
上記ＰＤＥ阻害剤がザプリナストである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
上記ＰＤＥ阻害剤がシルデナフィルである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
上記ＰＤＥ阻害剤がタダラフィルである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７】
上記ＰＤＥ阻害剤がＰＤＥ１及びＰＤＥ５の選択的阻害剤である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８】
上記ＰＤＥ阻害剤がＰＤＥ１の選択的阻害剤である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９】
上記ＰＤＥ阻害剤がＰＤＥ５の選択的阻害剤である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２０】
卵胞の成熟を刺激するための有効量におけるホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤を含んで成る組成物で女性を処置することを含んで成る、卵胞成熟を増大する方法。
【請求項２１】
卵母細胞の成熟を生じさせるための有効量におけるＰＤＥ阻害剤を含んで成る組成物で試験管内において卵母細胞を処置することを含んで成る、卵母細胞の成熟を増加する方法。
【請求項２２】
上記組成物が少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤を含んで成る、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２３】
上記組成物がピクラミラスト、ロフルミラスト、アリフロ、フィラミナスト、メソプラム、Ｄ４４１８、アロフィリン、及びＣＬ１０４４から成る群から選択される少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤を含んで成る、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２４】
上記組成物が少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤、及びＰＤＥ１阻害剤、ＰＤＥ７阻害剤、ＰＤＥ９阻害剤、ＰＤＥ１０、及びＰＤＥ１１阻害剤から成る群から選択される１つの他のＰＤＥ阻害剤を含んで成る、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２５】
上記方法が、ＦＳＨ、黄体形成ホルモン、及び絨毛性ゴナドトロピンから成る群から選択される少なくとも１つのゴナドトロピンでの処置を更に含んで成る、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２６】
上記方法が、ＦＳＨ、黄体形成ホルモン、及び絨毛性ゴナドトロピンから成る群から選択される少なくとも１つのゴナドトロピンでの処置を更に含んで成る、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
上記方法が、ＦＳＨ、黄体形成ホルモン、及び絨毛性ゴナドトロピンから成る群から選択される少なくとも１つのゴナドトロピンでの処置を更に含んで成る、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
上記方法が、ＦＳＨ、黄体形成ホルモン、及び絨毛性ゴナドトロピンから成る群から選択される少なくとも１つのゴナドトロピンでの処置を更に含んで成る、請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
上記方法がＦＳＨでの処置を更に含んで成る、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項３０】
上記方法がＦＳＨ及び少なくとも１つの非−ＦＳＨゴナドトロピンホルモンを投与することを更に含んで成る、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項３１】
上記非−ＦＳＨゴナドトロピンホルモンが黄体形成ホルモンである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
上記非−ＦＳＨゴナドトロピンホルモンが絨毛性ゴナドトロピンである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
上記方法が、ＰＤＥ阻害剤との組み合わせにおいて、ＦＳＨの刺激剤、アゴニスト、又はアジュバント単独の投与を含んで成る、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項３４】
上記ＦＳＨの刺激剤が、レトロゾール、アナストロゾール、及びボロゾールから成る群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ＰＤＥ阻害剤及びゴナドトロピンホルモンが同時に投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３６】
上記ＰＤＥ４阻害剤及びＦＳＨが、混合物として１つのバイアル中に含まれる、請求項２５に記載の方法。
【請求項３７】
単用量のＰＤＥ４阻害剤及びＦＳＨの混合物を含むバイアル。
【請求項３８】
上記ＰＤＥがゴナドトロピンホルモン処置の前に投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３９】
上記ＰＤＥ阻害剤がゴナドトロピンホルモン処置の後に投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項４０】
上記ＦＳＨが約５〜４５０ＩＵ／日の薬用量範囲において投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項４１】
上記ＦＳＨが約５〜７５ＩＵ／日の薬用量範囲において投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項４２】
上記方法が、女性に対して、少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤及び外因性ＦＳＨホルモンを含んで成る組成物を投与することを含んで成る、請求項２０に記載の方法。
【請求項４３】
上記外因性ＦＳＨホルモンが、組み換えＦＳＨホルモンである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
上記外因性ＦＳＨホルモンが、尿ＦＳＨホルモンである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
上記ＰＤＥ４阻害剤が、約０．０５ｍｇ／日〜約５ｍｇ／日の用量において投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４６】
上記ＰＤＥ４阻害剤が、約１０ｍｇ／日〜約２００ｍｇ／日の用量において投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４７】
上記ＦＳＨが、５ＩＵ ＦＳＨ／日〜７５ＩＵ ＦＳＨ／日の範囲において投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４８】
上記ＦＳＨが１日当たり１５０ＩＵ ＦＳＨの薬用量において投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４９】
上記ＦＳＨが単用量において投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項５０】
上記ＦＳＨが複数用量において投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項５１】
上記ＦＳＨが筋肉内的に又は皮下的に投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項５２】
上記ＦＳＨが、女性の月経周期の２〜１４日目に投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項５３】
上記ＦＳＨが、継続的に７〜１２日間投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項５４】
上記方法が、ＰＤＥ４阻害剤及びＦＳＨホルモンの投与の前に、女性における内因性ＦＳＨ及びＬＨ生成物の抑制を更に含んで成る、請求項４２に記載の方法。
【請求項５５】
上記内因性ＦＳＨ及びＬＨ生成物の抑制が、ＧｎＲＨ又はその類似体を女性に対して投与することによりもたらされる、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤及び外因性ＦＳＨホルモンの投与の前に、上記ＧｎＲＨ、又はその類似体が女性に対して３０日間投与される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
上記ＧｎＲＨ、又はこの類似体が、毎日約０．２５ｍｇ〜約３ｍｇのＧｎＲＨの薬用量範囲において投与される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
上記女性が４又はそれ以上の回収可能な卵母細胞を産出する、請求項４２に記載の方法。
【請求項５９】
ＰＤＥ４及びＦＳＨが最初に投与された後１２日目に卵母細胞を回収する工程を更に含んで成る、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
試験管内において回収した卵母細胞を受精する工程、回収し、受精した卵母細胞を４〜８細胞期に培養する工程、及び当該４〜８細胞期の受精した卵母細胞を女性の子宮に移植する工程を更に含んで成る、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
不妊症の処置のためのキットであって、当該キットが、
医薬的に受容可能な製剤において少なくとも１つのＰＤＥ４阻害剤を含んで成る第一組成物、及び、
医薬的に受容可能な製剤においてＦＳＨを含んで成る第二組成物
を含んで成るキット。
【請求項６２】
上記キットが尿ＦＳＨ又は組み換えＦＳＨを含んで成る、請求項６１に記載のキット。
【請求項６３】
上記キットがヒトＦＳＨを含んで成る、請求項６２に記載のキット。
【請求項６４】
上記キットのＦＳＨが、約５ＩＵ ＦＳＨ〜約７５ＩＵ ＦＳＨの単位用量において供される、請求項６１に記載のキット。
【請求項６５】
医薬的に受容可能な製剤において、ＬＨを含んで成る第三組成物を更に含んで成る、請求項６１に記載のキット。
【請求項６６】
上記キットのＬＨが、約７５ＩＵ ＬＨ〜約１５０ＩＵ ＬＨの単位用量において供される、請求項６５に記載のキット。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１０Ｃ】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１０Ｃ】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【公表番号】特表２００６−５２２１５１（Ｐ２００６−５２２１５１Ａ）
【公表日】平成１８年９月２８日（２００６．９．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５０９６７９（Ｐ２００６−５０９６７９）
【出願日】平成１６年４月１日（２００４．４．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１０３４６
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０８７２１１
【国際公開日】平成１６年１０月１４日（２００４．１０．１４）
【出願人】（５９９１７７３９６）アプライド リサーチ システムズ エーアールエス ホールディング ナームロゼ フェンノートシャップ (70)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年９月２８日（２００６．９．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年４月１日（２００４．４．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１０３４６
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０８７２１１
【国際公開日】平成１６年１０月１４日（２００４．１０．１４）
【出願人】（５９９１７７３９６）アプライド リサーチ システムズ エーアールエス ホールディング ナームロゼ フェンノートシャップ (70)
【Ｆターム（参考）】
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