ホスホリパーゼＣガンマの調節、並びにそれによる疼痛及び侵害受容の制御
【課題】疼痛を予防及び治療する方法、そのための薬剤を同定する方法、並びに疼痛の治療及び／又は予防のためのそれらの使用を提供する。更に疼痛を診断及び予知する方法を提供する。
【解決手段】患者におけるＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節（例えば阻害）すること、又はＰＬＣγに対するリガンド若しくは結合パートナーの結合を調節すること。更に、対照区と比較し、ＰＬＣγの活性及び／又は発現が調節されていることを測定し、それを指標とすること。
【解決手段】患者におけるＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節（例えば阻害）すること、又はＰＬＣγに対するリガンド若しくは結合パートナーの結合を調節すること。更に、対照区と比較し、ＰＬＣγの活性及び／又は発現が調節されていることを測定し、それを指標とすること。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、患者のホスホリパーゼＣガンマ（ＰＬＣγ）の活性、機能及び／又は発現の調節、並びに、例えば疼痛の治療及び予防のためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
疼痛治療のための新規な、改良された方法及び薬剤の必要性は、現在の医学において重大な問題となっている。例えば損傷又は疾病に関連する激しい急性疼痛は、患者の回復に重大な影響を及ぼす。更に大きな問題は慢性疼痛であり、これは大多数の人々を悩ませており、相当の不快感を起こすだけでなく、自尊感情の低下、憂鬱、怒りを生じさせ、また患者の通常の日常的な活動を妨げ、あるいは完全に阻止することさえある。
【０００３】
この分野では多数の研究がなされているが、痛覚に関与する機構及び経路の多くは未だ十分に解明されていない。疼痛治療のための治療的介入の新たな戦略を提供する必要性が今なお残されている。
【非特許文献１】Ｌｅｅら、Ｍｏｌ．Ｖｉｓ．８：１７−２５、２００２
【非特許文献２】Ｂｕｃｋｌｅｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：４１８０７−１４、２００４
【非特許文献３】Ｍｏｎｉｃｋ、Ｍ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２、３００５、１９９９
【非特許文献４】Ｍａｒａｇｏｕｄａｋｉｓ、Ｍ．Ｅ．ら、１９９３、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．４３、１４７、
【非特許文献５】Ｓｃｈｕｔｚｅ、Ｓ．ら、Ｃｅｌｌ ７１、７６５、１９９２
【非特許文献６】Ｍｕｌｌｅｒ−Ｄｅｃｋｅｒ、Ｋ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１６２、１９８、１９８９
【非特許文献７】Ｓａｕｅｒ、Ｇ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１、３２６３、１９８４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、疼痛を治療及び／又は予防する方法に関する。本発明は更に、患者におけるホスホリパーゼＣガンマ（ＰＬＣγ）の活性、発現、及び／又は機能を調節（例えば阻害）する方法に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の一実施形態によれば、患者の疼痛を治療又は予防する方法を提供し、該方法は、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することを含む。
【０００６】
本発明の他の一実施形態によれば、患者の疼痛を治療又は予防する方法を提供し、該方法は、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤を該患者に投与することを含む。
【０００７】
本発明の更なる他の一実施形態によれば、患者の疼痛を治療又は予防する方法を提供し、該方法は、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する組成物を、該患者に投与することを含む。
【０００８】
本発明の更なる他の一実施形態によれば、患者の疼痛を治療又は予防するための組成物を提供し、該組成物は、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する。
【０００９】
本発明の更なる他の一実施形態によれば、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤、及び疼痛の治療又は予防におけるその使用の方法に関する説明書を含むパッケージを提供する。
【００１０】
本発明の更なる他の一実施形態によれば、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体、及び疼痛の治療又は予防におけるその使用の方法に関する説明書を含むパッケージを提供する。
【００１１】
また本発明の更なる実施形態によれば、疼痛を治療又は予防するための、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤の使用を提供する。
【００１２】
本発明の他の一実施形態によれば、疼痛を治療又は予防する医薬品の製造のための、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤の使用を提供する。
【００１３】
本発明の更なる他の一実施形態によれば、疼痛の治療又は予防のための、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する組成物の使用を提供する。
【００１４】
本発明の他の一実施形態によれば、疼痛の治療又は予防のための薬剤を同定又は解析する方法を提供し、該方法は、試験薬剤の存在下でＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を測定することを含む。一実施態様において、本方法は、試験薬剤をＰＬＣγ、又はＰＬＣγの活性、機能及び／若しくは発現を有する細胞と接触させ、薬剤の存在下でＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現が調節（例えば阻害）されるか否かを測定する工程を含み、ここで該調節が、薬剤が疼痛の治療又は予防に使用することが可能であることを示す指標となる。
【００１５】
本発明は更に、疼痛の治療又は予防のための化合物を同定又は解析する方法を提供し、該方法は、（ａ）試験化合物を、レポータータンパク質をコードすることができるレポーター遺伝子を含む第二の核酸に作動可能に結合した、通常ＰＬＣγ遺伝子関連転写調節因子を含む第一の核酸を有する細胞と接触させ、（ｂ）該試験化合物の存在下で、レポーター遺伝子の発現又はレポータータンパク質の活性が低下されるか否かを測定する工程を含み、ここで前記レポーター遺伝子の発現の低下、又はレポータータンパク質活性の低下が、前記試験化合物が疼痛の治療又は予防に使用することが可能であることを示す指標となる。
【００１６】
本発明は更に、疼痛の治療又は予防のための薬剤を同定又は解析する方法を提供し、該方法は、薬剤及びＰＬＣγリガンドを、ＰＬＣγを含む細胞と接触させ、該薬剤の存在下で、ＰＬＣγに対するリガンドの結合が低下するか否かを測定することを含み、ここで該低下が、薬剤が疼痛の治療又は予防に使用することが可能であることを示す指標となる。
【００１７】
本発明は更に、疼痛の治療又は予防のための薬剤を同定又は解析する方法を提供し、該方法は、薬剤及びＰＬＣγリガンドをＰＬＣγと接触させ、該薬剤の存在下で、ＰＬＣγに対するリガンドの結合が低下するか否かを測定することを含み、ここで該低下が、薬剤が疼痛の治療又は予防に使用することが可能であることを示す指標となる。
【００１８】
本発明の更なる他の一実施形態によれば、患者における侵害受容を減少させる方法を提供し、該方法は、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することを含む。
【００１９】
本発明の更なる他の一実施形態によれば、患者における侵害受容を減少させる方法を提供し、該方法は、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤を、該患者に投与することを含む。
【００２０】
本発明の更なる実施形態によれば、患者における侵害受容を減少させる方法を提供し、該方法は、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する組成物を、該患者に投与することを含む。
【００２１】
一実施態様において、上述したＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現の調節は、ＰＬＣγの活性又は発現を阻害することである。一実施態様において、上述したＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤は、ＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を阻害することができる薬剤である。
【００２２】
一実施態様において、本願に定義する薬剤は、ＰＬＣγ阻害剤、抗ＰＬＣγ抗体、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、又はＰＬＣγとリガンド又は結合パートナーとの結合の阻害剤であり得る。例えば、ＰＬＣγ阻害剤は、トリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、又は１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンであり得る。
【００２３】
一実施態様において、アンチセンス分子は、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である。一実施態様において、アンチセンス分子は、配列番号２及び配列番号４から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸に対して実質的に相補的な核酸である。更なる実施態様において、アンチセンス分子は、配列番号１及び配列番号３から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸に対して実質的に相補的な核酸である。一実施態様において、上記のｍＲＮＡの部分は、少なくとも５個の連続した塩基を含む。
【００２４】
一実施態様において、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子は、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分と実質的に同一である。一実施態様において、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子は、配列番号２及び配列番号４から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするＤＮＡ配列に対応するｍＲＮＡの部分と実質的に同一である。更なる実施態様において、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子は、配列番号１及び配列番号３から選択されるＤＮＡ配列に対応するｍＲＮＡの部分と実質的に同一である。一実施態様において、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子は、約３０個未満のヌクレオチドを含み、他の実施態様においては約２１〜２３個のヌクレオチドを含む。
【００２５】
一実施態様において、疼痛は、神経因性疼痛及び／又はＣＮＳ不全関連疼痛である。
【００２６】
更なる実施態様において、疼痛は、神経因性疼痛、体性痛又は内臓痛であり得る。例えば、神経因性疼痛は、神経又は路の損傷を含む。また他の一実施態様では、疼痛は慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛又は反復性急性疼痛を含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
本発明は患者の疼痛を予防及び／又は治療するための方法を提供する。実施態様において、患者は、脊椎動物又は哺乳類であり得る。一実施態様において、患者は哺乳類、例えばヒトである。本方法は、患者の、例えば患者の細胞又は組織の、例えば中枢神経系（ＣＮＳ）の神経細胞又は組織のホスホリパーゼＣガンマ（ＰＬＣγ）の活性、機能及び／又は発現を阻害又は低下させることを含む。本方法は、患者に対して、疼痛を緩和する手段としてＰＬＣγの活性、発現及び／又は機能を調節、例えば阻害することができる薬剤を、全身又は局所的に投与することを含み得る。薬剤は疼痛の開始前、ほぼ開始時、又は開始後に投与することが可能である。
【００２８】
一実施態様において、そのＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現が調節されるＣＮＳ神経細胞は、後角表層又は脊髄に位置する。加えて、前記細胞は、疼痛シグナルが発する末梢神経細胞又は神経線維に対して経シナプス的に連結する。
【００２９】
本発明はまた、急性及び慢性疼痛の治療、より詳細には神経因性疼痛の治療に関する。本願で使用する「神経因性疼痛」は、神経の損傷関連慢性疼痛（例えば、神経の挫傷、離断若しくは圧迫の後、又は疾病から起こる神経退化の後）を指す。神経因性疼痛は、神経又は路の損傷に関連することが可能である。更に、神経因性疼痛は内臓痛及び／又は体性痛に関連することが可能である。
【００３０】
一実施態様において、疼痛は慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、反復性急性疼痛、及び／又はその任意の組み合わせから選択される病状に関連するものを含む。
【００３１】
本発明は更に、患者における侵害受容を減少させる方法を提供する。本方法は、侵害受容を減少させるために患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することを含む。本願で使用する「侵害受容」は、疼痛の感覚成分を指す。疼痛は、圧力、損傷、熱刺激又は化学的（例えば、イオン）刺激を含むが、これらに限定されるものではない様々な刺激の結果起こり得る。
【００３２】
薬剤は、タンパク質活性を直接又は間接的に変更するもの、及びタンパク質の生成及び／又は安定性を調節する（例えば、転写、翻訳、成熟、転写後修飾、リン酸化及び分解のレベルで）ものを含むが、これらに限定されるものではない。例えば、薬剤は、ＰＬＣγ阻害剤であり得る。一実施態様において、そのような阻害剤は、ペプチド又はペプチドをベースとした化合物（例えば、ペプチド類似物）を含む。更なる実施態様において、薬剤は、ＰＬＣγの結合、及び／又は触媒活性を調節することができる抗ＰＬＣγ抗体を含む。抗ＰＬＣγ抗体の例は、例えば非特許文献１及び２に記載されている。更なる実施態様において、薬剤は、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの全部又は一部に対して相補的なアンチセンス分子を含む。更なる実施態様において、薬剤は、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子を含む。
【００３３】
更なる実施態様において、上述した阻害は、ＰＬＣγの結合領域（一つ又は複数）の阻害により行われる。この場合、薬剤は、ＰＬＣγに対するリガンド又は結合パートナーの阻害剤である。例えば、ＰＬＣγに対する（例えば、Ｄドメインに対する）マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（例えば細胞外シグナル関連キナーゼ（ＥＲＫ１及びＥＲＫ２））の結合を阻害することが可能である。非特許文献２に示されるように、ＥＲＫ及びリン酸化ＥＲＫの両方が（ＢＤＮＦのＴｒｋＢとの結合によりＰＬＣγが活性化される様に）ＰＬＣγのＤドメインに結合し、このアイソザイムのリン酸化を誘導する。
【００３４】
一実施態様において、ＰＬＣγの活性及び／又は発現を調節することができる薬剤は、ＰＬＣγ阻害剤である。ＰＬＣγ阻害剤の例は、トリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンを含むが、これらに限定されるものではない。トリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸（Ｄ６０９とも称される）のＰＬＣγ阻害作用を説明する参考文献は、非特許文献３から７等が挙げられる。上記のＰＬＣγ阻害剤は、ＥＭＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ部）から入手可能である。
【００３５】
他の一実施態様において、ＰＬＣγの活性及び／又は発現を調節することができる薬剤は、抗ＰＬＣγ抗体である。抗ＰＬＣγ抗体の例は、例えば非特許文献１及び２に記載されている。そのような抗ＰＬＣγ抗体を調製するために、ＰＬＣγ又はその断片、ホモログ、及び／若しくは変異体を使用して、小哺乳類、例えばマウス又はウサギを免疫して、ＰＬＣγを認識する抗体を産生させもよい。抗ＰＬＣγ抗体はポリクローナル及びモノクローナルのいずれであってもよい。ポリクローナル又はモノクローナル抗体を調製する方法は、当該技術分野にて周知である。Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、及びＹｅｌｔｏｎ等（１９８１）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５０：６５７−６９０を参照（参照により本願に援用される）。モノクローナル抗体に関しては、参照により本願に援用されるＫｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７を参照されたい。
【００３６】
「ＰＬＣガンマ」又は「ＰＬＣγ」は、ホスファチジルイノシトール４，５二リン酸を切断してジアシルグリセロール及びイノシトール１，４，５−トリホスフェートを提供することができる活性を有するポリペプチドを指す。実施態様において、ＰＬＣγは、ＰＬＣγ１及びＰＬＣγ２アイソフォームから選択される。ヒトＰＬＣγポリペプチドをコードする遺伝子は、例えばＮＣＢＩアクセッション番号Ｍ３４６６７、ＮＭ＿００２６６０、ＮＭ＿００２６６１及びＮＭ＿１８２８１１に記されている。ヒトＰＬＣγポリペプチドをコードする遺伝子、及びそれらがコードするポリペプチドの例を、図２及び図３並びに配列番号１から４に示す。ＰＬＣγ活性に関し、Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ及びＪｉ（１９９９、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２５３：１５−２４）を参照のこと。ＰＬＣγ活性は、例えばゲルシフトアッセイ（Ｎｏｈ等、１９９８、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１８：２６４３−８）及びミオイノシトール１，４，５−トリホスフェート放射性受容体アッセイ（Ｓｈｕ等、２００２、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：１８４４７−１８４５３）により解析することが可能である。
【００３７】
上記したように、本発明の方法には、活性を維持するＰＬＣγの断片、ホモログ及び／又は変異体を使用してもよい。ホモログは、ＰＬＣγのアミノ酸配列と実質的に同一であるタンパク質配列を含み、ＰＬＣγと有意な構造的及び機能的相同性を共有する。変異体は、任意の修飾、及び／又はアミノ酸置換、削除又は追加によりＰＬＣγとは異なるタンパク質、又はペプチドを含むが、これらに限定されるものではない。修飾は、ポリペプチド骨格、（即ち、アミノ酸配列）、アミノ酸残基、及びアミノ又はカルボキシ末端を含む任意の場所に施すことが可能である。そのような置換、削除又は追加は、一個又は二個以上のアミノ酸に関するものでもよい。断片は、ＰＬＣγの断片若しくは一部、又はＰＬＣγのホモログ若しくは変異体の断片若しくは一部を含む。
【００３８】
抗体は、例えばキメラ（例えば、ヒト由来の定常領域に連結したマウス由来の可変領域によって構成された）、ヒト化（ヒト免疫グロブリンの定常領域、及び動物、例えばマウス由来の超可変領域）、並びに／又は一本鎖であり得る。ポリクローナル及びモノクローナル抗体の両方が、免疫グロブリン断片、例えば、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆａｂ又はＦａｂ’断片の形態を有してもよい。抗体は、任意のアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ又はＩｇＡであってもよく、またポリクローナル抗体は、一種のアイソタイプ又はアイソタイプの混合物であってもよい。抗ＰＬＣγ抗体は、標準的な免疫学的アッセイ、例えばウエスタンブロット、ドットブロット、又はＥＬＩＳＡによる解析法を用いて調製及び同定することが可能である。
【００３９】
ＰＬＣγ発現の制限に使用することが可能である化合物の別の一クラスは、ＰＬＣγ転写物のレベルを低下させる化合物である。それにより、これらの化合物がＰＬＣγポリペプチドの生成レベルを減少させ、疼痛の治療又は予防に使用することができる。これらの化合物は、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はリボザイムを含むが、これらに限定されない。
【００４０】
一実施態様において、標的ポリペプチド、又はその断片をコードする核酸の発現は、転写後遺伝子サイレンシングの一種であるＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）技術を用いて阻害、又は予防することが可能である。ＲＮＡｉは擬「ノックアウト」、即ち、遺伝子、又は標的のコード領域によりコードされた生成物の発現が低下される系を形成する際に使用され、それにより該系においては、コードされた生成物の活性全体が低下される。そのようなものとして、ＲＮＡｉは、標的の核酸、又はその断片若しくは変異体を標的とし、続いてその発現及びそれがコードする生成物の活性レベルを低下させる。このような系は、生成物の機能的解析や、そのような生成物の活性関連疾患の治療にも使用することが可能である。ＲＮＡｉは、例えばＨａｍｍｏｎｄ等（２００１）、Ｓｈａｒｐ（２００１）、Ｃａｐｌｅｎ等（２００１）、Ｓｅｄｌａｋ（２０００）並びに公開された米国特許出願公開第２００２０１７３４７８号（Ｇｅｗｉｒｔｚ、２００２年１１月２１日公開）及び米国特許出願公開第２００２０１３２７８８号（Ｌｅｗｉｓ等、２００２年１１月７日公開）に記載されている。ＲＮＡｉを実施するための試薬及びキットは、例えばＡｍｂｉｏｎ Ｉｎｃ．（Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸ、ＵＳＡ）及びＮｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｉｎｃ．（Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ、ＵＳＡ）から商業的に入手可能である。
【００４１】
いくつかの系において、ＲＮＡｉのための最初の薬剤は、標的核酸に対応するｄｓＲＮＡ分子であると思われる。次いで、ｄｓＲＮＡは、２１〜２３ヌクレオチド長（各々２ヌクレオチドの３’オーバーハング（ｏｖｅｒｈａｎｇ）を有する１９〜２１ｂｐの二重鎖）の短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）に切断されると考えられる。この第一の切断ステップに係ると考えられている酵素は「ダイサー」（Ｄｉｃｅｒ）と称され、ｄｓＲＮＡ特異的リボヌクレアーゼのＲＮａｓｅＩＩＩファミリーのメンバーに分類されている。あるいは、ＲＮＡｉは、直接導入するか、又はそのようなｓｉＲＮＡ若しくはｓｉＲＮＡ様分子の適切な前駆体（例えば、前駆体（一つ又は複数）をコードするベクター等）を細胞内に導入して、細胞内で生成させることによって実施してもよい。次いで、ｓｉＲＮＡは他の細胞内成分と結合して、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）を形成することが可能である。このように形成されたＲＩＳＣは続いて、そのｓｉＲＮＡ成分と標的転写物との間の相補的塩基対間相互作用を介して標的転写物を検知し、ｓｉＲＮＡの３’末端から約１２ヌクレオチドの標的転写物を切断する。このように、標的ｍＲＮＡは切断され、それがコードするタンパク質生成物のレベルが低下する。
【００４２】
ＲＮＡｉは、インビトロで合成された適切なｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子の細胞内への導入により実施される。ＲＮＡｉは、例えば化学合成されたＲＮＡ（Ｂｒｏｗｎ等、２００２）を使用して実施される。あるいは、適切な発現ベクターを用いて、インビトロ又はインビボのいずれかで、そのようなＲＮＡを転写してもよい。（同一又は別個のベクター上に存在する配列によりコードされた）センス及びアンチセンス鎖は、例えばＴ７ＲＮＡポリメラーゼを使用してインビトロで転写されてもよく、この場合、ベクターは、Ｔ７プロモーターに作動可能に連結した適切なコード配列を含み得る。インビトロで転写されたＲＮＡは、実施態様においては、インビトロで（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉのＲＮａｓｅＩＩＩを使用して）ＲＮＡｉを実行させるためのサイズに加工することが可能である。センス及びアンチセンス転写物を組み合わせてＲＮＡ二重鎖を形成し、標的細胞内に導入する。ｓｉＲＮＡ様分子に加工することが可能であるスモールヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を発現する他のベクターを使用してもよい。ベクターをベースとする様々な方法が、例えばＢｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ等（２００２）、Ｌｅｅ等（２００２）、Ｍｉｙａｇａｓｈｉ及びＴａｉｒａ（２００２）、Ｐａｄｄｉｓｏｎ等（２００２）、Ｐａｕｌ等（２００２）、Ｓｕｉ等（２００２）、並びにＹｕ等（２００２）に記載されている。インビトロ又はインビボのいずれかでそのようなベクターを細胞内に導入する様々な方法は（例えば、遺伝子治療）、当該技術分野にて公知である。
【００４３】
従って、一実施態様において、ＰＬＣγをコードする核酸又はその断片の発現は、標的のポリペプチドをコードする核酸、若しくはその断片、又はそれと相同な核酸に対応するｓｉＲＮＡ若しくはｓｉＲＮＡ様分子を細胞内に導入するか、又は細胞内で生成させることによって阻害することが可能である。「ｓｉＲＮＡ様分子」とは、ｓｉＲＮＡと類似し（例えば、寸法及び構造において）、ｓｉＲＮＡ活性を引き出すことができ、即ちＲＮＡｉの仲介による発現の阻害を実行する核酸分子を指す。様々な実施態様において、このような方法はｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子の細胞内への直接投与、又は上記したベクターベースの方法の使用を伴う。一実施態様において、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子は、約３０個未満のヌクレオチドの長さを有する。更なる実施態様において、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子は、約２１〜２３個のヌクレオチドの長さを有する。一実施態様において、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子は１９〜２１ｂｐの二重鎖部分を含み、各鎖は、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを有する。実施態様において、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子は、ＰＬＣγをコードする核酸、又はその断片若しくは変異体（若しくは変異体の断片）と実質的に同一である。そのような変異体は、ＰＬＣγと類似した活性を有するタンパク質をコードすることが可能である。実施態様において、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子のセンス鎖は、配列番号１若しくは３、又はその断片と実質的に同一である（ＤＮＡ配列のＴ塩基の代わりにＵを有するＲＮＡ）。
【００４４】
また他の一実施態様では、ＰＬＣγの発現を阻害するために、アンチセンスコンストラクトによる細胞の形質転換を使用することが可能である。アンチセンスコンストラクトは、転写されて、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの全部、又は一部に対して実質的に相補的なアンチセンス分子を提供する核酸分子であり、従ってアンチセンスコンストラクトの発現はＰＬＣγの発現を妨げる。一実施態様において、前記のアンチセンス分子は、ＰＬＣγを、一実施態様においてはヒトＰＬＣγをコードするＤＮＡ配列に対してアンチセンスである。従って、幾つかの実施態様において、本発明のアンチセンスコンストラクトは、ＰＬＣγをコードする核酸配列の連続部分に対して実質的に相補的な、５個又は６個以上の連続した核酸塩基をコードする。
【００４５】
更なる実施態様において、本願に記載するものと実質的に同一のポリペプチド及び核酸を、本発明にて使用してもよい。
【００４６】
本発明において「相同性」及び「相同な」とは、２個のペプチド又は２個の核酸分子間の配列類似性を意味する。相同性は、整列された配列内で各位置を比較して決定することが可能である。核酸間又はアミノ酸配列間の相同性の程度は、配列により共有される位置におけるヌクレオチド又はアミノ酸の同一又は一致する数の関数である。本願において核酸配列は、２個の配列が実質的に同一であり、配列の機能的活性が保存される場合に、別の一配列と「相同」である（本願において用語「相同な」とは、進化学的な関連性を推測するものではない）という。２個の核酸配列は、最適に整列された際（ギャップが許可されて）、それらが少なくとも約５０％の配列類似性若しくは同一性を共有する場合、又は配列が規定された機能的モチーフを共有する場合に、実質的に同一であると考慮される。あるいは、他の実施態様において、最適に整列された実質的に同一な配列の配列類似性は、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％であり得る。本願で使用されるように、配列間の相同性の所定の割合は、最適に整列された配列における配列同一性の程度を表す。「無関係の」又は「非相同な」配列は、配列番号１から４のいずれかと４０％未満の同一性を共有するが、好ましくは、約２５％未満の同一性を共有する。
【００４７】
実質的に相補的な核酸とは、一つの分子の「相補物（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）」が、他の分子と実質的に同一である核酸を指す。同一性比較のための配列の最適なアラインメントは、例えばＳｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎ、１９８１、Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ ２：４８２の局所的相同性アラインメントアルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈ、１９７０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性アラインメントアルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ及びＬｉｐｍａｎ、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４の類似性サーチ方法のような様々なアルゴリズム、及びこれらアルゴリズムのコンピュータによる処理（例えば、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、Ｕ．Ｓ．ＡのＷｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ内のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ及びＴＦＡＳＴＡ）を使用して実施することできる。配列同一性はまた、Ａｌｔｓｃｈｕｌ等、１９９０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０に記載されているＢＬＡＳＴアルゴリズム（公開されたデフォルト設定）を使用して決定してもよい。ＢＬＡＳＴ解析を実行するためのソフトウエアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎから（インターネットのｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／を介して）入手可能であり得る。ＢＬＡＳＴアルゴリズムでは、最初に、データベース配列内の同一長の単語と整列した場合に、正の値の閾値スコアＴに一致するか、又はそのいくつかを満たす、クエリー配列内の長さＷの短い単語を同定することによって、ハイスコアの配列対（ＨＳＰ）を同定する。Ｔは、近隣単語スコア閾値と称される。最初の近隣単語ヒットは、より長いＨＳＰを見つけるための種として機能する。単語ヒットは、累積アラインメントスコアが増大することが可能である限り、各配列に沿って両方向へ伸張される。単語ヒットの各方向における伸張は、累積アラインメントスコアが、その最大達成値から量Ｘだけ低下した場合、累積スコアが、一つ若しくは二つ以上の負スコアの残基のアラインメントの蓄積によって、ゼロ若しくはそれ未満になった場合、又はいずれかの配列が終点に到達した場合に停止される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ及びＸは、アラインメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴプログラムはデフォルトとして単語長（Ｗ）１１、ＢＬＯＳＵＭ６２スコアマトリクス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ及びＨｅｎｉｋｏｆｆ、１９９２、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５−１０９１９）アラインメント（Ｂ）５０、期待値（Ｅ）１０（又は１又は０．１又は０．０１又は０．００１又は０．０００１）、Ｍ＝５、Ｎ＝４、及び両鎖の比較を使用することが可能である。ＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用した二つの配列間の統計的類似性の一つの基準は、最小和確率（ｓｍａｌｌｅｓｔ ｓｕｍ ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ）（Ｐ（Ｎ））であり、これは二つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間で一致が偶然に発生する確率の指標を提供する。本発明の他の実施態様では、試験配列の比較における最小和確率が約１未満、好ましくは約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、最も好ましくは約０．００１未満の場合、ヌクレオチド又はアミノ酸配列は実質的に同一であると考えられる。
【００４８】
あるいは、二つの核酸配列が実質的に相補的であることの指標として、二つの配列が中度にストリンジェントな条件下で、又は好ましくは厳密な条件下で互いにハイブリダイズすることである。中度に厳密な条件下におけるフィルター結合配列に対するハイブリダイゼーションでは、例えば０．５Ｍ ＮａＨＰＯ４、７％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、１ｍＭ ＥＤＴＡ中で６５℃にて実施され、０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中で４２℃にて洗浄される（Ａｕｓｕｂｅｌら（ｅｄｓ）、１９８９、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１、Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｉｎｃ．及びＪｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ｐ．２．１０．３参照）。あるいは、ストリンジェントな条件下におけるフィルター結合配列に対するハイブリダイゼーションでは、例えば０．５Ｍ ＮａＨＰＯ４、７％ＳＤＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ中で６５℃にて実施され、０．１×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中で６８℃にて洗浄される（Ａｕｓｕｂｅｌ、等（ｅｄｓ）、１９８９、前出参照）。ハイブリダイゼーション条件は、標的配列に応じて、周知の方法に従って変更されてもよい（Ｔｉｊｓｓｅｎ、１９９３、Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ−Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｐｒｏｂｅｓ、Ｐａｒｔ Ｉ、Ｃｈａｐｔｅｒ ２“Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｂｅ ａｓｓａｙｓ”、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、ＮｅｗＹｏｒｋ参照）。一般に、厳密な条件は、規定されたイオン強度及びｐＨにおいて、特定の配列の融点より約５℃以上低いように選択される。
【００４９】
他の実施態様において、本発明は、外因的に投与され、ＰＬＣγｍＲＮＡに結合して、翻訳を低下及び／又は阻害するアンチセンス分子及びリボザイムを提供する。参照により本願に援用される治療的アンチセンスオリゴヌクレオチドの例として、米国特許第５１３５９１７号（１９９２年８月４日公開）、米国特許第５０９８８９０号（１９９２年３月２４日公開）、米国特許第５０８７６１７号（１９９２年２月１１日公開）、米国特許第５１６６１９５号（１９９２年１１月２４日公開）、米国特許第５００４８１０号（１９９１年４月２日公開）、米国特許第５１９４４２８号（１９９３年３月１６日公開）、米国特許第４８０６４６３号（１９８９年２月２１日公開）、米国特許第５２８６７１７号（１９９４年２月１５日公開）、並びに米国特許第５２６４４２３号及び米国特許第５２７６０１９号、Ｂｉｏ Ｗｏｒｌｄ Ｔｏｄａｙ、Ａｐｒ．２９（１９９４）ｐ．３を含む。
【００５０】
アンチセンス分子は、特異的な結合が所望される条件下で、例えばインビボアッセイ若しくは治療的処置の場合は生理的条件下で、又はインビトロアッセイの場合はそのアッセイが実施される条件下で、非標的配列に対するアンチセンス分子の非特異的結合を避けるために、ＰＬＣγｍＲＮＡに対する十分な程度の相補性を有することが好ましい。アンチセンス結合のための標的ｍＲＮＡは、タンパク質をコードする情報のみでなく、例えば５’非翻訳領域、３’非翻訳領域、５’キャップ領域及びイントロン／エクソン接合部リボヌクレオチドなどの関連するリボヌクレオチドを含み得る。本発明の阻害剤として使用することが可能であるアンチセンス及びリボザイム核酸のスクリーニング法は、米国特許第５９３２４３５号に開示されている（参照により本願に援用される）。
【００５１】
本発明のアンチセンス分子（オリゴヌクレオチド）は、例えばホスホトリエステル、メチルホスホネート、短鎖アルキル若しくはシクロアルキル糖間結合又は短鎖複素原子若しくは複素環糖間結合、ホスホロチオエート及びＣＨ２−ＮＨ−Ｏ−ＣＨ２、ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−ＣＨ２（メチレン（メチルイミノ）又はＭＭＩ骨格として周知）、ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２、ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２及びＯ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ２骨格（ここでホスホジエステルはＯ−Ｐ−Ｏ−ＣＨ２である）を有するもののような、骨格の糖間結合を有するものでもよい。モルホリノ骨格構造を有するオリゴヌクレオチドを使用してもよい（米国特許第５０３４５０６号）。他の実施態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ペプチド核酸（ＰＮＡ、「タンパク質核酸」とも称される）骨格を有してもよく、ここでオリゴヌクレオチドのホスホジエステル骨格はポリアミド骨格と置き換えられ、ヌクレオチド塩基がポリアミド骨格のアザ窒素原子、又はメチレン基に直接又は間接的に結合している（Ｎｉｅｌｓｅｎ等、１９９１、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１４９７及び米国特許第５５３９０８２号）。ホスホジエステル結合は、キラル及びエナンチオマー特異的な構造で置き換えられてもよい。当業者は、本発明の実施の際に使用するために、他の結合を選択することが可能である。
【００５２】
オリゴヌクレオチドはまた、少なくとも一つの修飾されたヌクレオチド塩基を有する化学種を含み得る。従って、通常自然界に見られるものとは異なるプリン及びピリミジンを使用することが可能である。同様に、ヌクレオチドサブユニットのペントフラノシル部分上にも修飾が行われ得る。そのような修飾の例は、２’−Ｏ−アルキル−及び２’−ハロゲン置換ヌクレオチドである。本発明に有用な、糖部分の２’位における修飾のいくつかの特定の例は、ＯＨ、ＳＨ、ＳＣＨ３、Ｆ、ＯＣＮ、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２若しくはＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ３（ここでｎは１〜約１０である）、Ｃ１〜Ｃ１０の低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリル（ａｌｋａｒｙｌ）若しくはアラルキル、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｏ−、Ｓ−、若しくはＮ−アルキル、Ｏ−、Ｓ−、若しくはＮ−アルケニル、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、オリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改善する基、又はオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改善する基、及び同様の特性を有する他の置換基がある。一つ又は二つ以上のペントフラノシル基は、別の糖、例えばシクロブチルのような糖類似体、又は糖に代わる別の部分によって代替されてもよい。
【００５３】
数個の実施態様において、本発明におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、約５〜約１００のヌクレオチド単位を含み得る。公知のように、ヌクレオチド単位は、ホスホジエステル、又は骨格構造を形成する他の結合を介して、隣接するヌクレオチド単位に対して適切に結合した塩基−糖の組み合わせ（又はそれに類似した構造の組み合わせ）である。
【００５４】
本発明はまた、ＰＬＣγの活性及び／又は発現を調節することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する医薬組成物（医薬品）を提供する。一実施態様において、そのような組成物は、疼痛を治療又は緩和するのに十分な治療的又は予防的有効量の薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する。
【００５５】
「治療的有効量」とは、必要な用量及び時間内において、例えば疼痛の軽減のような所望の治療結果を達成するために有効な量を指す。ＰＬＣγの活性及び／又は発現を調節することができる薬剤の治療的有効量は、個人の疾病状態、年齢、性別、及び体重、並びに個人にて所望の応答を誘発する該薬剤の能力のような要因に従って変動することが可能である。投与計画は最適な治療効果を提供するように調節することが可能である。治療的有効量はまた、治療的に有益な効果が、薬剤の有毒又は有害な任意の効果を上回る量である。「予防的有効量」は、その必要な用量及び時間において、所望の予防結果を達成する、例えば疼痛の開始又は疼痛の度合いの増大を予防若しくは抑制するために有効な量を指す。予防的有効量は、治療的有効量に関して上述と同様に決定することが可能である。任意の特定の患者に関して、特定の投与計画は、個人の必要性、及び組成物を投与する又は組成物の投与を管理する者の専門的判断に従って、長期に亘って調整することが可能である。
【００５６】
本願で使用する「医薬的に許容される担体」又は「賦形剤」は、任意の及び全ての溶媒、分散媒体、皮膜、抗菌及び抗真菌薬、等張及び吸収遅延剤、及び生理学的に適合可能な同様物を含む。一実施態様において、担体は非経口投与に用いられるものである。あるいは、担体は静脈内、腹腔内、筋内、頭蓋内、くも膜下腔内、舌下又は経口投与に用いられるものである。医薬的に許容される担体は、無菌水性溶液又は分散剤、及び無菌注射溶液若しくは分散剤の即時調製のための無菌粉末を含む。医薬的活性物質のためのこれら媒体及び薬剤の使用は、当該技術分野にて周知である。従来の任意の媒体又は薬剤が活性薬剤と不適合な場合を除いて、本発明の医薬組成物中でそれらを使用することが想定される。補助的な活性化合物を組成物中に組み入れてもよい。
【００５７】
治療組成物は、一般に、製造及び保管条件下で無菌かつ安定である必要がある。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、又は高い薬物濃度に適した他の特殊な形態として処方することが可能である。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール、並びに同様物）、並びにそれらの適切な混合物を含む溶媒、又は分散媒体であり得る。適当な流動性は、例えばレシチンのような被膜の使用により、分散剤の場合は、必要とされる粒径の保守により、及び界面活性剤の使用により維持することが可能である。多くの場合、組成物中に例えば糖、例えばマンニトール、ソルビトールのような多価ポリアルコール、又は塩化ナトリウムのような等張剤を含めることが好ましいであろう。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを組成物中に含めることによって可能となる。更に、ＰＬＣγの活性及び／又は発現を調節することができる薬剤は、時限放出製剤、例えば遅延放出ポリマーを含有する組成物にて投与することが可能である。活性化合物は、例えばインプラント及びマイクロカプセル化送達システムを含む徐放製剤等、該化合物を急速放出から保護する担体と共に調製することが可能である。エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸、及びポリ乳酸−ポリグリコール酸コポリマー（ＰＬＧ）のような生分解性、生体適合性ポリマーを使用することが可能である。これら製剤を調製する多数の方法が特許され、又は一般に当業者に知られている。
【００５８】
無菌注射溶液は、活性薬剤（例えば、ＰＬＣγの活性及び／又は発現を調節することができる薬剤）の必要な量を、必要に応じて上記に列挙した一種の又は組み合わせた成分と共に適正な溶媒中に組み入れた後、濾過滅菌して調製することが可能である。一般に、分散剤は、基本的な分散媒体と、上記に列挙したものから選択した必要な他の成分とを含有する無菌ビヒクル中に活性薬剤を組み入れて調製することが可能である。無菌注射溶液を調製する無菌粉末の場合、調製の好ましい方法は、真空乾燥及び凍結乾燥であり、これらによって、その予め濾過滅菌した溶液からの活性成分、及び任意の更なる所望の成分の粉末が得られる。本発明の他の実施形態によれば、患者のＰＬＣγの活性及び／又は発現を調節することができる薬剤は、その可溶性を高める一種又は二種以上の更なる化合物と共に処方することが可能である。
【００５９】
他の一実施態様において、本発明の薬剤は、ＣＮＳ組織又はＣＮＳ神経細胞と接触するよう投与される。本願で使用する「中枢神経系」又はＣＮＳは、脳及び脊髄（例えば、腰部領域内）を含む神経系である。一方、「末梢神経系」又はＰＮＳは、脳及び脊髄以外の神経系である。更なる実施態様において、ＣＮＳ組織は後角表層であり、更なる実施態様においては、ラミナＩ神経細胞である。そのようなものとして、実施態様において本発明の薬剤は、インビボで頭蓋内若しくはくも膜下腔内へ直接投与されるか、又は脳脊髄液内へ投与されて、ＣＮＳ細胞を治療することが可能である。あるいは、薬剤は血液脳関門を通過してＣＮＳに入ることができる形態で、全身投与（例えば、静脈内又は経口投与）されてもよい。本願で「神経」及び「神経細胞」は、互換的に使用され、両方とも神経細胞及び神経系に関係する。
【００６０】
本発明の更なる実施態様において、ＣＮＳ細胞のＰＬＣγの活性及び／又は発現を低下／阻害することができる薬剤を含有する本発明の治療的組成物は、キット／容器又はパッケージ（例えば、商業的パッケージ）として提供されてもよく、これらは疼痛治療のためにそれらを使用する際の説明書を更に含む。同様に、本発明は、ＰＬＣγの活性及び／又は発現を低下／阻害することができる薬剤を、疼痛の予防及び／又は治療のための説明書と共に含むパッケージを提供する。
【００６１】
本発明は更に、疼痛の予防及び／若しくは治療のための、又は疼痛の予防及び／若しくは治療のための医薬品の製造のための、ＰＬＣγの活性及び／若しくは発現を低下／阻害することができる薬剤、又はＰＬＣγの活性及び／若しくは発現を低下／阻害することができる薬剤を含有する組成物の使用を提供する。
【００６２】
他の一実施形態において、本発明は、ＰＬＣγの活性及び／又は発現を低下／阻害することができる薬剤の同定及び解析に使用することが可能であるスクリーニング法における標的としてのＰＬＣγの使用に関する。従って、本発明は更に、候補の薬剤が、患者のＰＬＣγの活性及び／又は発現を調節することができ、それ故疼痛の予防及び治療に有用であるか否かを測定する方法を提供する。一実施態様において、該方法は、細胞（例えば、ＣＮＳ由来の細胞）を候補薬剤と接触させ、試験薬剤の存在下でＰＬＣγ活性が低下又は阻害されているか否かを測定することを含む。更なる実施態様において、アッセイは、活性ＰＬＣγの適切な標本又は試料を提供し、ＰＬＣγを候補薬剤と接触させ、その活性が試験化合物の存在下で阻害又は低下されるか否かを同様に測定することにより、無細胞系内で実施することが可能である。更なる実施態様において、アッセイは、候補化合物がＰＬＣγに対する結合パートナー、又はリガンドの結合を阻害するか否かを評価することを含み得る。この場合、該方法は、ＰＬＣγ、又はＰＬＣγを含む細胞を、候補薬剤及び結合パートナー又はリガンドと接触させ、候補又は試験化合物の存在下で、ＰＬＣγに対する結合パートナー、又はリガンドの結合が低下されるか否かを測定することを含む。実施態様において、結合パートナー又はリガンドは、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ、又はそのホモログ若しくは断片である（例えば、ＥＲＫ１若しくはＥＲＫ２、又はそのホモログ若しくは断片）。一実施態様において、ＰＬＣγのＤドメインに対する結合が測定される。
【００６３】
ＰＬＣγ活性の阻害若しくは低下、又は上述した結合の阻害若しくは低下は、試験薬剤が疼痛の治療又は予防に使用することが可能であることの指標となる。
【００６４】
本願で使用される「ＣＮＳ由来の細胞」は、ＣＮＳ組織から単離された細胞、又はＣＮＳ組織由来の細胞であり、実施態様においては神経細胞の初代培養物、不死化神経細胞株、及び許容されたインビトロでの神経細胞モデル系（例えば、インビトロで神経細胞に分化した細胞）の両方を含む。一実施態様において、上述した細胞は、ＰＬＣγ活性を有する。
【００６５】
上述した方法は、一種の試験薬剤、又は複数の試験薬剤、若しくは試験薬剤のライブラリー（例えば、組み合わせライブラリー）を用いて実施することが可能である。後者の場合、薬剤の組み合わせにより提供された相乗効果も、同定及び解析することが可能である。上述した薬剤は、疼痛の治療及び／又は予防に使用、又は向上された特異性、効力及び／又は薬理学的（例えば、薬物動態学的）性質を有する更なる薬剤を開発及び試験するためのリード薬剤として使用することが可能である。一実施態様において、薬剤は、適切な作用部位、例えばＣＮＳ組織内（例えば、脊髄内）でその活性型に変更されるプロドラッグであり得る。所定の実施態様において、本発明のスクリーニング／試験方法のステップの一つ又は複数が自動化されてもよい。
【００６６】
本発明は更に、ＰＬＣγ遺伝子の発現を低下／阻害することができる薬剤を、同定及び解析するための方法を提供する。この方法は、試験薬剤の存在下でのＰＬＣγ遺伝子の発現を、試験薬剤の不在下でのＰＬＣγ遺伝子の発現に対して測定することを含む。このような遺伝子発現は、対応するＲＮＡ若しくはタンパク質を検出するか、又はレポーター遺伝子に作動可能に結合した、通常このようなＰＬＣγ遺伝子に結合した転写調節因子（一つ又は複数）を含む適切なレポーター構造を使用して測定することができる。第一の核酸配列は、該第一の核酸配列が第二の核酸配列と機能的位置関係に配置される場合、第二の核酸配列と「作動可能に結合」することが可能である。例えば、プロモーターは、該プロモーターがコード配列の転写又は発現に影響を与える場合、コード配列に作動可能に結合されているという。一般に、作動可能に結合したＤＮＡ配列は連続しており、また必要な場合、リーディングフレーム内の二つのタンパク質コード領域を接続する。しかしながら、例えば、エンハンサーは通常、プロモーターから数ｋｂだけ離れている場合に機能し、イントロン配列は多様な長さを有することが可能であるため、数個のポリヌクレオチド要素は作動可能に結合することが可能であるが、連続的ではない。「転写調節要素」とは、例えば開始及び終止シグナル、エンハンサー、並びにプロモーター、スプライシングシグナル、ポリアデニル化シグナル等のＤＮＡ配列を指す一般名であり、それらが作動可能に結合するタンパク質コード配列の転写を誘導又は制御する。そのようなレポーター遺伝子の発現は、転写又は翻訳レベルで、例えば生産されるＲＮＡ又はタンパク質の量によって測定することが可能である。ＲＮＡは、例えばノーザン分析により、又は逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）法により検出することが可能である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ等（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＵＳＡ参照）。タンパク質レベルは、親和性試薬（例えば、抗体又はその断片（方法に関しては、例えばＨａｒｌｏｗ、Ｅ．及びＬａｎｅ、Ｄ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹを参照）、タンパク質に結合するリガンド）を使用して、又は他の特性（例えば、緑色蛍光タンパク質の場合の蛍光）を使用して直接検出することが可能であるか、又は検出可能な生成物（例えば、分光学的特性の変化）若しくは検出可能な表現型（例えば、細胞増殖の変化）を生成することが可能である酵素活性を含むタンパク質の活性を測定することによって検出することが可能である。適切なレポーター遺伝子は、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、β−Ｄガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、又は緑色蛍光タンパク質を含むが、これらに限定されるものではない。
【００６７】
本発明は更に、ＣＮＳ不全関連疼痛を診断又は予知するための方法を提供する。一実施態様において、そのようなＣＮＳ不全に関連する疼痛は、神経因性疼痛である。一実施態様において、本方法は、ＰＬＣγに対応する対照区における活性及び／又は発現と比較して、ＣＮＳ神経細胞のＰＬＣγの活性及び／又は発現が調節されているか否かを測定することを含む。この特定の方法において、対照のレベルに対する試験レベルの差異は、患者がＣＮＳ不全関連疼痛を体験していることを示す。一実施態様において、本方法は、ＰＬＣγの活性及び／又は発現が、対照の活性及び／又は発現と比較して調節されているか否かを測定することを含み得る。また他の一実施態様において、ＰＬＣγの活性及び／又は発現は、以下の確立された標準、例えば以前に患者にて測定された対応するＰＬＣγ活性及び／又は発現レベル；患者が上記した痛覚と比較してより軽い疼痛を体験しているか又は実質的に無疼痛の際に前記患者において測定された、対応するＰＬＣγ活性及び／又は発現レベル；又は上記した試験患者の現在の痛覚と比較してより軽い疼痛を体験しているか又は実質的に無疼痛の対照患者において測定された、対応するＰＬＣγ活性及び／又は発現レベル、から選択することができる。一実施態様において、より軽い疼痛を体験しているか又は実質的に無疼痛である患者又は対照患者は、該患者の中枢又は末梢神経系における明らかな損傷（例えば、神経因性疼痛）、又は持続性疼痛を示さない。
【００６８】
例えば、ＰＬＣγ活性及び／又は発現は、患者に対してその患者のＣＮＳ神経細胞と接触することができるインジケータ化合物（例えば、ＰＬＣγの活性及び／又は発現を示す化合物）を投与することにより測定することが可能である。インジケータ化合物を投与した後、そのインジケータ化合物関連インビボシグナルを評価することが可能である。一実施態様において、インジケータ化合物、例えば免疫検出ベースの試薬（例えば、ＰＬＣγポリペプチドに対抗する抗体、一本鎖抗体、若しくはＦａｂ断片）、又はＰＬＣγ活性により検出可能な生成物を与える適切な基質を使用することが可能である。インジケータ化合物を注入した後、画像技術を用いてインビボでインジケータ化合物関連シグナルを評価することが可能である。画像技術は、インビボでのインジケータ化合物のシグナルの評価を可能にすることが可能である。
【００６９】
一実施態様において、上記した診断／予知の方法は、上記した治療的／予防的方法と共に実施されて、患者の疼痛を予防又は治療することが可能である。従って、このような方法は、疼痛を診断又は予知し、かつ患者のＰＣＬγの活性及び／又は発現を調節することによって、疼痛を予防又は治療することを含む。
【００７０】
本願に本発明の様々な実施態様が開示されているが、当業者が共有する一般的な知識に従って、本発明の範囲内で様々な調節及び変更をなすることが可能である。そのような変更は、実質的に同一の方法で同一の結果を達成するために、本発明の任意の実施形態を公知の同等物で置換することを含む。範囲を定義する数字には、数値域が含まれる。請求項において、「を含む」という言葉は、オープンエンドを指す用語として使用され、「を含むが、限定されない」という表現と実質的に同等である。以下の実施例は、本発明の様々な実施形態を説明するものであり、本願に開示する本発明の幅広い実施形態を限定するものではない。
【実施例１】
【００７１】
１１匹の成熟したＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの坐骨神経に、人為的に絞扼性神経損傷を与えた（Ｍｏｓｃｏｎｉ＆Ｋｒｕｇｅｒ、１９９６、Ｐａｉｎ ６４：３７−５７）。２週間に亘り徐々に増大した神経因性疼痛を示す疼痛過敏を、Ｖｏｎ Ｆｒｅｙ法により監視した（Ｃｈａｐｌａｎ等、１９９４、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ５３：５５−６３）。アロディニア発生後（≦２．０ｇの５０％逃避閾値（ＷＤ５０）により解析）、くも膜下カテーテルを用いて、ラットにトリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸５００ｎｇを投与した。トリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸は、生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）溶液中にて、１０％ｖ／ｖジメチルスルホキシドと共に調製された。トリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸は、ＥＭＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ部）から入手可能である。１０％ｖ／ｖジメチルスルホキシドを含む生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）溶液をビヒクルとして、対照ラットに注入した。投与したビヒクルの体積は、ＰＬＣγ阻害剤溶液と同一であった。
【００７２】
７匹のアロディニアのラットがビヒクルのくも膜下投与を１回受けた一方、４匹のラットがトリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸の投与を１回受けた。注入前、両方のグループの平均ＷＤ５０は、１．９±０．２ｇであった。注入後、僅か４時間で、トリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸を投与されたラットのＷＤ５０は、ビヒクルを受けたラットと有意に異なり（トリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸、８．８±２．１ｇ対ビヒクル、４．１±０．７ｇ、ｐ＜０．０５）、また、開始時、注入前のＷＤ５０と有意に異なっていた（ｐ＜０．０５、混合モデルのＡＮＯＶＡ（ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ：分散分析）にて）。この疼痛過敏の有意な低下は、６時間以上持続した。
【００７３】
本出願全体を通して多くの参考文献が引用され、本発明が属する技術分野の状況をより詳細に説明している。これら参考文献の開示は、本願において参照により本開示内に援用される。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１】トリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸（○）及びビヒクル（□）で処置されたラットの疼痛過敏の５０％逃避閾値の比較。
【図２Ａ】ヒトホスホリパーゼＣガンマ１のＤＮＡ配列（配列番号１）（ＰＬＣＧ１、アクセッション番号ＮＭ＿００２６６０）。コーディング配列は、ＤＮＡ配列の１２２−３９９７位で定義される。
【図２Ｂ】図２Ａの続き。
【図２Ｃ】図２Ｂの続き。
【図２Ｄ】図２Ｃの続き。
【図２Ｅ】ヒトホスホリパーゼＣガンマ１のポリペプチド配列（配列番号２）（ＰＬＣＧ１、アクセッション番号ＮＰ＿００２６５１）。コーディング配列は、ＤＮＡ配列の１２２−３９９７位で定義される。
【図３Ａ】ヒトホスホリパーゼＣガンマ２のＤＮＡ配列（配列番号３）（ＰＬＣＧ２、アクセッション番号ＮＭ＿００２６６１）。コーディング配列は、ＤＮＡ配列の１５３−３９１１位で定義される。
【図３Ｂ】図３Ａの続き。
【図３Ｃ】図３Ｂの続き。
【図３Ｄ】ヒトホスホリパーゼＣガンマ２のポリペプチド配列（配列番号４）（ＰＬＣＧ２、アクセッション番号ＮＭ＿００２６６１及びＮＰ＿００２６５２）。コーディング配列は、ＤＮＡ配列の１５３−３９１１位で定義される。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、患者のホスホリパーゼＣガンマ（ＰＬＣγ）の活性、機能及び／又は発現の調節、並びに、例えば疼痛の治療及び予防のためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
疼痛治療のための新規な、改良された方法及び薬剤の必要性は、現在の医学において重大な問題となっている。例えば損傷又は疾病に関連する激しい急性疼痛は、患者の回復に重大な影響を及ぼす。更に大きな問題は慢性疼痛であり、これは大多数の人々を悩ませており、相当の不快感を起こすだけでなく、自尊感情の低下、憂鬱、怒りを生じさせ、また患者の通常の日常的な活動を妨げ、あるいは完全に阻止することさえある。
【０００３】
この分野では多数の研究がなされているが、痛覚に関与する機構及び経路の多くは未だ十分に解明されていない。疼痛治療のための治療的介入の新たな戦略を提供する必要性が今なお残されている。
【非特許文献１】Ｌｅｅら、Ｍｏｌ．Ｖｉｓ．８：１７−２５、２００２
【非特許文献２】Ｂｕｃｋｌｅｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：４１８０７−１４、２００４
【非特許文献３】Ｍｏｎｉｃｋ、Ｍ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２、３００５、１９９９
【非特許文献４】Ｍａｒａｇｏｕｄａｋｉｓ、Ｍ．Ｅ．ら、１９９３、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．４３、１４７、
【非特許文献５】Ｓｃｈｕｔｚｅ、Ｓ．ら、Ｃｅｌｌ ７１、７６５、１９９２
【非特許文献６】Ｍｕｌｌｅｒ−Ｄｅｃｋｅｒ、Ｋ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１６２、１９８、１９８９
【非特許文献７】Ｓａｕｅｒ、Ｇ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１、３２６３、１９８４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、疼痛を治療及び／又は予防する方法に関する。本発明は更に、患者におけるホスホリパーゼＣガンマ（ＰＬＣγ）の活性、発現、及び／又は機能を調節（例えば阻害）する方法に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の一実施形態によれば、患者の疼痛を治療又は予防する方法を提供し、該方法は、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することを含む。
【０００６】
本発明の他の一実施形態によれば、患者の疼痛を治療又は予防する方法を提供し、該方法は、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤を該患者に投与することを含む。
【０００７】
本発明の更なる他の一実施形態によれば、患者の疼痛を治療又は予防する方法を提供し、該方法は、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する組成物を、該患者に投与することを含む。
【０００８】
本発明の更なる他の一実施形態によれば、患者の疼痛を治療又は予防するための組成物を提供し、該組成物は、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する。
【０００９】
本発明の更なる他の一実施形態によれば、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤、及び疼痛の治療又は予防におけるその使用の方法に関する説明書を含むパッケージを提供する。
【００１０】
本発明の更なる他の一実施形態によれば、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体、及び疼痛の治療又は予防におけるその使用の方法に関する説明書を含むパッケージを提供する。
【００１１】
また本発明の更なる実施形態によれば、疼痛を治療又は予防するための、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤の使用を提供する。
【００１２】
本発明の他の一実施形態によれば、疼痛を治療又は予防する医薬品の製造のための、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤の使用を提供する。
【００１３】
本発明の更なる他の一実施形態によれば、疼痛の治療又は予防のための、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する組成物の使用を提供する。
【００１４】
本発明の他の一実施形態によれば、疼痛の治療又は予防のための薬剤を同定又は解析する方法を提供し、該方法は、試験薬剤の存在下でＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を測定することを含む。一実施態様において、本方法は、試験薬剤をＰＬＣγ、又はＰＬＣγの活性、機能及び／若しくは発現を有する細胞と接触させ、薬剤の存在下でＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現が調節（例えば阻害）されるか否かを測定する工程を含み、ここで該調節が、薬剤が疼痛の治療又は予防に使用することが可能であることを示す指標となる。
【００１５】
本発明は更に、疼痛の治療又は予防のための化合物を同定又は解析する方法を提供し、該方法は、（ａ）試験化合物を、レポータータンパク質をコードすることができるレポーター遺伝子を含む第二の核酸に作動可能に結合した、通常ＰＬＣγ遺伝子関連転写調節因子を含む第一の核酸を有する細胞と接触させ、（ｂ）該試験化合物の存在下で、レポーター遺伝子の発現又はレポータータンパク質の活性が低下されるか否かを測定する工程を含み、ここで前記レポーター遺伝子の発現の低下、又はレポータータンパク質活性の低下が、前記試験化合物が疼痛の治療又は予防に使用することが可能であることを示す指標となる。
【００１６】
本発明は更に、疼痛の治療又は予防のための薬剤を同定又は解析する方法を提供し、該方法は、薬剤及びＰＬＣγリガンドを、ＰＬＣγを含む細胞と接触させ、該薬剤の存在下で、ＰＬＣγに対するリガンドの結合が低下するか否かを測定することを含み、ここで該低下が、薬剤が疼痛の治療又は予防に使用することが可能であることを示す指標となる。
【００１７】
本発明は更に、疼痛の治療又は予防のための薬剤を同定又は解析する方法を提供し、該方法は、薬剤及びＰＬＣγリガンドをＰＬＣγと接触させ、該薬剤の存在下で、ＰＬＣγに対するリガンドの結合が低下するか否かを測定することを含み、ここで該低下が、薬剤が疼痛の治療又は予防に使用することが可能であることを示す指標となる。
【００１８】
本発明の更なる他の一実施形態によれば、患者における侵害受容を減少させる方法を提供し、該方法は、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することを含む。
【００１９】
本発明の更なる他の一実施形態によれば、患者における侵害受容を減少させる方法を提供し、該方法は、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤を、該患者に投与することを含む。
【００２０】
本発明の更なる実施形態によれば、患者における侵害受容を減少させる方法を提供し、該方法は、患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する組成物を、該患者に投与することを含む。
【００２１】
一実施態様において、上述したＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現の調節は、ＰＬＣγの活性又は発現を阻害することである。一実施態様において、上述したＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することができる薬剤は、ＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を阻害することができる薬剤である。
【００２２】
一実施態様において、本願に定義する薬剤は、ＰＬＣγ阻害剤、抗ＰＬＣγ抗体、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、又はＰＬＣγとリガンド又は結合パートナーとの結合の阻害剤であり得る。例えば、ＰＬＣγ阻害剤は、トリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、又は１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンであり得る。
【００２３】
一実施態様において、アンチセンス分子は、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である。一実施態様において、アンチセンス分子は、配列番号２及び配列番号４から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸に対して実質的に相補的な核酸である。更なる実施態様において、アンチセンス分子は、配列番号１及び配列番号３から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸に対して実質的に相補的な核酸である。一実施態様において、上記のｍＲＮＡの部分は、少なくとも５個の連続した塩基を含む。
【００２４】
一実施態様において、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子は、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分と実質的に同一である。一実施態様において、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子は、配列番号２及び配列番号４から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするＤＮＡ配列に対応するｍＲＮＡの部分と実質的に同一である。更なる実施態様において、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子は、配列番号１及び配列番号３から選択されるＤＮＡ配列に対応するｍＲＮＡの部分と実質的に同一である。一実施態様において、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子は、約３０個未満のヌクレオチドを含み、他の実施態様においては約２１〜２３個のヌクレオチドを含む。
【００２５】
一実施態様において、疼痛は、神経因性疼痛及び／又はＣＮＳ不全関連疼痛である。
【００２６】
更なる実施態様において、疼痛は、神経因性疼痛、体性痛又は内臓痛であり得る。例えば、神経因性疼痛は、神経又は路の損傷を含む。また他の一実施態様では、疼痛は慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛又は反復性急性疼痛を含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
本発明は患者の疼痛を予防及び／又は治療するための方法を提供する。実施態様において、患者は、脊椎動物又は哺乳類であり得る。一実施態様において、患者は哺乳類、例えばヒトである。本方法は、患者の、例えば患者の細胞又は組織の、例えば中枢神経系（ＣＮＳ）の神経細胞又は組織のホスホリパーゼＣガンマ（ＰＬＣγ）の活性、機能及び／又は発現を阻害又は低下させることを含む。本方法は、患者に対して、疼痛を緩和する手段としてＰＬＣγの活性、発現及び／又は機能を調節、例えば阻害することができる薬剤を、全身又は局所的に投与することを含み得る。薬剤は疼痛の開始前、ほぼ開始時、又は開始後に投与することが可能である。
【００２８】
一実施態様において、そのＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現が調節されるＣＮＳ神経細胞は、後角表層又は脊髄に位置する。加えて、前記細胞は、疼痛シグナルが発する末梢神経細胞又は神経線維に対して経シナプス的に連結する。
【００２９】
本発明はまた、急性及び慢性疼痛の治療、より詳細には神経因性疼痛の治療に関する。本願で使用する「神経因性疼痛」は、神経の損傷関連慢性疼痛（例えば、神経の挫傷、離断若しくは圧迫の後、又は疾病から起こる神経退化の後）を指す。神経因性疼痛は、神経又は路の損傷に関連することが可能である。更に、神経因性疼痛は内臓痛及び／又は体性痛に関連することが可能である。
【００３０】
一実施態様において、疼痛は慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、反復性急性疼痛、及び／又はその任意の組み合わせから選択される病状に関連するものを含む。
【００３１】
本発明は更に、患者における侵害受容を減少させる方法を提供する。本方法は、侵害受容を減少させるために患者のＰＬＣγの活性、機能及び／又は発現を調節することを含む。本願で使用する「侵害受容」は、疼痛の感覚成分を指す。疼痛は、圧力、損傷、熱刺激又は化学的（例えば、イオン）刺激を含むが、これらに限定されるものではない様々な刺激の結果起こり得る。
【００３２】
薬剤は、タンパク質活性を直接又は間接的に変更するもの、及びタンパク質の生成及び／又は安定性を調節する（例えば、転写、翻訳、成熟、転写後修飾、リン酸化及び分解のレベルで）ものを含むが、これらに限定されるものではない。例えば、薬剤は、ＰＬＣγ阻害剤であり得る。一実施態様において、そのような阻害剤は、ペプチド又はペプチドをベースとした化合物（例えば、ペプチド類似物）を含む。更なる実施態様において、薬剤は、ＰＬＣγの結合、及び／又は触媒活性を調節することができる抗ＰＬＣγ抗体を含む。抗ＰＬＣγ抗体の例は、例えば非特許文献１及び２に記載されている。更なる実施態様において、薬剤は、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの全部又は一部に対して相補的なアンチセンス分子を含む。更なる実施態様において、薬剤は、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子を含む。
【００３３】
更なる実施態様において、上述した阻害は、ＰＬＣγの結合領域（一つ又は複数）の阻害により行われる。この場合、薬剤は、ＰＬＣγに対するリガンド又は結合パートナーの阻害剤である。例えば、ＰＬＣγに対する（例えば、Ｄドメインに対する）マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（例えば細胞外シグナル関連キナーゼ（ＥＲＫ１及びＥＲＫ２））の結合を阻害することが可能である。非特許文献２に示されるように、ＥＲＫ及びリン酸化ＥＲＫの両方が（ＢＤＮＦのＴｒｋＢとの結合によりＰＬＣγが活性化される様に）ＰＬＣγのＤドメインに結合し、このアイソザイムのリン酸化を誘導する。
【００３４】
一実施態様において、ＰＬＣγの活性及び／又は発現を調節することができる薬剤は、ＰＬＣγ阻害剤である。ＰＬＣγ阻害剤の例は、トリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンを含むが、これらに限定されるものではない。トリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸（Ｄ６０９とも称される）のＰＬＣγ阻害作用を説明する参考文献は、非特許文献３から７等が挙げられる。上記のＰＬＣγ阻害剤は、ＥＭＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ部）から入手可能である。
【００３５】
他の一実施態様において、ＰＬＣγの活性及び／又は発現を調節することができる薬剤は、抗ＰＬＣγ抗体である。抗ＰＬＣγ抗体の例は、例えば非特許文献１及び２に記載されている。そのような抗ＰＬＣγ抗体を調製するために、ＰＬＣγ又はその断片、ホモログ、及び／若しくは変異体を使用して、小哺乳類、例えばマウス又はウサギを免疫して、ＰＬＣγを認識する抗体を産生させもよい。抗ＰＬＣγ抗体はポリクローナル及びモノクローナルのいずれであってもよい。ポリクローナル又はモノクローナル抗体を調製する方法は、当該技術分野にて周知である。Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、及びＹｅｌｔｏｎ等（１９８１）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５０：６５７−６９０を参照（参照により本願に援用される）。モノクローナル抗体に関しては、参照により本願に援用されるＫｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７を参照されたい。
【００３６】
「ＰＬＣガンマ」又は「ＰＬＣγ」は、ホスファチジルイノシトール４，５二リン酸を切断してジアシルグリセロール及びイノシトール１，４，５−トリホスフェートを提供することができる活性を有するポリペプチドを指す。実施態様において、ＰＬＣγは、ＰＬＣγ１及びＰＬＣγ２アイソフォームから選択される。ヒトＰＬＣγポリペプチドをコードする遺伝子は、例えばＮＣＢＩアクセッション番号Ｍ３４６６７、ＮＭ＿００２６６０、ＮＭ＿００２６６１及びＮＭ＿１８２８１１に記されている。ヒトＰＬＣγポリペプチドをコードする遺伝子、及びそれらがコードするポリペプチドの例を、図２及び図３並びに配列番号１から４に示す。ＰＬＣγ活性に関し、Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ及びＪｉ（１９９９、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２５３：１５−２４）を参照のこと。ＰＬＣγ活性は、例えばゲルシフトアッセイ（Ｎｏｈ等、１９９８、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１８：２６４３−８）及びミオイノシトール１，４，５−トリホスフェート放射性受容体アッセイ（Ｓｈｕ等、２００２、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：１８４４７−１８４５３）により解析することが可能である。
【００３７】
上記したように、本発明の方法には、活性を維持するＰＬＣγの断片、ホモログ及び／又は変異体を使用してもよい。ホモログは、ＰＬＣγのアミノ酸配列と実質的に同一であるタンパク質配列を含み、ＰＬＣγと有意な構造的及び機能的相同性を共有する。変異体は、任意の修飾、及び／又はアミノ酸置換、削除又は追加によりＰＬＣγとは異なるタンパク質、又はペプチドを含むが、これらに限定されるものではない。修飾は、ポリペプチド骨格、（即ち、アミノ酸配列）、アミノ酸残基、及びアミノ又はカルボキシ末端を含む任意の場所に施すことが可能である。そのような置換、削除又は追加は、一個又は二個以上のアミノ酸に関するものでもよい。断片は、ＰＬＣγの断片若しくは一部、又はＰＬＣγのホモログ若しくは変異体の断片若しくは一部を含む。
【００３８】
抗体は、例えばキメラ（例えば、ヒト由来の定常領域に連結したマウス由来の可変領域によって構成された）、ヒト化（ヒト免疫グロブリンの定常領域、及び動物、例えばマウス由来の超可変領域）、並びに／又は一本鎖であり得る。ポリクローナル及びモノクローナル抗体の両方が、免疫グロブリン断片、例えば、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆａｂ又はＦａｂ’断片の形態を有してもよい。抗体は、任意のアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ又はＩｇＡであってもよく、またポリクローナル抗体は、一種のアイソタイプ又はアイソタイプの混合物であってもよい。抗ＰＬＣγ抗体は、標準的な免疫学的アッセイ、例えばウエスタンブロット、ドットブロット、又はＥＬＩＳＡによる解析法を用いて調製及び同定することが可能である。
【００３９】
ＰＬＣγ発現の制限に使用することが可能である化合物の別の一クラスは、ＰＬＣγ転写物のレベルを低下させる化合物である。それにより、これらの化合物がＰＬＣγポリペプチドの生成レベルを減少させ、疼痛の治療又は予防に使用することができる。これらの化合物は、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はリボザイムを含むが、これらに限定されない。
【００４０】
一実施態様において、標的ポリペプチド、又はその断片をコードする核酸の発現は、転写後遺伝子サイレンシングの一種であるＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）技術を用いて阻害、又は予防することが可能である。ＲＮＡｉは擬「ノックアウト」、即ち、遺伝子、又は標的のコード領域によりコードされた生成物の発現が低下される系を形成する際に使用され、それにより該系においては、コードされた生成物の活性全体が低下される。そのようなものとして、ＲＮＡｉは、標的の核酸、又はその断片若しくは変異体を標的とし、続いてその発現及びそれがコードする生成物の活性レベルを低下させる。このような系は、生成物の機能的解析や、そのような生成物の活性関連疾患の治療にも使用することが可能である。ＲＮＡｉは、例えばＨａｍｍｏｎｄ等（２００１）、Ｓｈａｒｐ（２００１）、Ｃａｐｌｅｎ等（２００１）、Ｓｅｄｌａｋ（２０００）並びに公開された米国特許出願公開第２００２０１７３４７８号（Ｇｅｗｉｒｔｚ、２００２年１１月２１日公開）及び米国特許出願公開第２００２０１３２７８８号（Ｌｅｗｉｓ等、２００２年１１月７日公開）に記載されている。ＲＮＡｉを実施するための試薬及びキットは、例えばＡｍｂｉｏｎ Ｉｎｃ．（Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸ、ＵＳＡ）及びＮｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｉｎｃ．（Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ、ＵＳＡ）から商業的に入手可能である。
【００４１】
いくつかの系において、ＲＮＡｉのための最初の薬剤は、標的核酸に対応するｄｓＲＮＡ分子であると思われる。次いで、ｄｓＲＮＡは、２１〜２３ヌクレオチド長（各々２ヌクレオチドの３’オーバーハング（ｏｖｅｒｈａｎｇ）を有する１９〜２１ｂｐの二重鎖）の短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）に切断されると考えられる。この第一の切断ステップに係ると考えられている酵素は「ダイサー」（Ｄｉｃｅｒ）と称され、ｄｓＲＮＡ特異的リボヌクレアーゼのＲＮａｓｅＩＩＩファミリーのメンバーに分類されている。あるいは、ＲＮＡｉは、直接導入するか、又はそのようなｓｉＲＮＡ若しくはｓｉＲＮＡ様分子の適切な前駆体（例えば、前駆体（一つ又は複数）をコードするベクター等）を細胞内に導入して、細胞内で生成させることによって実施してもよい。次いで、ｓｉＲＮＡは他の細胞内成分と結合して、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）を形成することが可能である。このように形成されたＲＩＳＣは続いて、そのｓｉＲＮＡ成分と標的転写物との間の相補的塩基対間相互作用を介して標的転写物を検知し、ｓｉＲＮＡの３’末端から約１２ヌクレオチドの標的転写物を切断する。このように、標的ｍＲＮＡは切断され、それがコードするタンパク質生成物のレベルが低下する。
【００４２】
ＲＮＡｉは、インビトロで合成された適切なｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子の細胞内への導入により実施される。ＲＮＡｉは、例えば化学合成されたＲＮＡ（Ｂｒｏｗｎ等、２００２）を使用して実施される。あるいは、適切な発現ベクターを用いて、インビトロ又はインビボのいずれかで、そのようなＲＮＡを転写してもよい。（同一又は別個のベクター上に存在する配列によりコードされた）センス及びアンチセンス鎖は、例えばＴ７ＲＮＡポリメラーゼを使用してインビトロで転写されてもよく、この場合、ベクターは、Ｔ７プロモーターに作動可能に連結した適切なコード配列を含み得る。インビトロで転写されたＲＮＡは、実施態様においては、インビトロで（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉのＲＮａｓｅＩＩＩを使用して）ＲＮＡｉを実行させるためのサイズに加工することが可能である。センス及びアンチセンス転写物を組み合わせてＲＮＡ二重鎖を形成し、標的細胞内に導入する。ｓｉＲＮＡ様分子に加工することが可能であるスモールヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を発現する他のベクターを使用してもよい。ベクターをベースとする様々な方法が、例えばＢｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ等（２００２）、Ｌｅｅ等（２００２）、Ｍｉｙａｇａｓｈｉ及びＴａｉｒａ（２００２）、Ｐａｄｄｉｓｏｎ等（２００２）、Ｐａｕｌ等（２００２）、Ｓｕｉ等（２００２）、並びにＹｕ等（２００２）に記載されている。インビトロ又はインビボのいずれかでそのようなベクターを細胞内に導入する様々な方法は（例えば、遺伝子治療）、当該技術分野にて公知である。
【００４３】
従って、一実施態様において、ＰＬＣγをコードする核酸又はその断片の発現は、標的のポリペプチドをコードする核酸、若しくはその断片、又はそれと相同な核酸に対応するｓｉＲＮＡ若しくはｓｉＲＮＡ様分子を細胞内に導入するか、又は細胞内で生成させることによって阻害することが可能である。「ｓｉＲＮＡ様分子」とは、ｓｉＲＮＡと類似し（例えば、寸法及び構造において）、ｓｉＲＮＡ活性を引き出すことができ、即ちＲＮＡｉの仲介による発現の阻害を実行する核酸分子を指す。様々な実施態様において、このような方法はｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子の細胞内への直接投与、又は上記したベクターベースの方法の使用を伴う。一実施態様において、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子は、約３０個未満のヌクレオチドの長さを有する。更なる実施態様において、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子は、約２１〜２３個のヌクレオチドの長さを有する。一実施態様において、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子は１９〜２１ｂｐの二重鎖部分を含み、各鎖は、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを有する。実施態様において、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子は、ＰＬＣγをコードする核酸、又はその断片若しくは変異体（若しくは変異体の断片）と実質的に同一である。そのような変異体は、ＰＬＣγと類似した活性を有するタンパク質をコードすることが可能である。実施態様において、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ様分子のセンス鎖は、配列番号１若しくは３、又はその断片と実質的に同一である（ＤＮＡ配列のＴ塩基の代わりにＵを有するＲＮＡ）。
【００４４】
また他の一実施態様では、ＰＬＣγの発現を阻害するために、アンチセンスコンストラクトによる細胞の形質転換を使用することが可能である。アンチセンスコンストラクトは、転写されて、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの全部、又は一部に対して実質的に相補的なアンチセンス分子を提供する核酸分子であり、従ってアンチセンスコンストラクトの発現はＰＬＣγの発現を妨げる。一実施態様において、前記のアンチセンス分子は、ＰＬＣγを、一実施態様においてはヒトＰＬＣγをコードするＤＮＡ配列に対してアンチセンスである。従って、幾つかの実施態様において、本発明のアンチセンスコンストラクトは、ＰＬＣγをコードする核酸配列の連続部分に対して実質的に相補的な、５個又は６個以上の連続した核酸塩基をコードする。
【００４５】
更なる実施態様において、本願に記載するものと実質的に同一のポリペプチド及び核酸を、本発明にて使用してもよい。
【００４６】
本発明において「相同性」及び「相同な」とは、２個のペプチド又は２個の核酸分子間の配列類似性を意味する。相同性は、整列された配列内で各位置を比較して決定することが可能である。核酸間又はアミノ酸配列間の相同性の程度は、配列により共有される位置におけるヌクレオチド又はアミノ酸の同一又は一致する数の関数である。本願において核酸配列は、２個の配列が実質的に同一であり、配列の機能的活性が保存される場合に、別の一配列と「相同」である（本願において用語「相同な」とは、進化学的な関連性を推測するものではない）という。２個の核酸配列は、最適に整列された際（ギャップが許可されて）、それらが少なくとも約５０％の配列類似性若しくは同一性を共有する場合、又は配列が規定された機能的モチーフを共有する場合に、実質的に同一であると考慮される。あるいは、他の実施態様において、最適に整列された実質的に同一な配列の配列類似性は、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％であり得る。本願で使用されるように、配列間の相同性の所定の割合は、最適に整列された配列における配列同一性の程度を表す。「無関係の」又は「非相同な」配列は、配列番号１から４のいずれかと４０％未満の同一性を共有するが、好ましくは、約２５％未満の同一性を共有する。
【００４７】
実質的に相補的な核酸とは、一つの分子の「相補物（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）」が、他の分子と実質的に同一である核酸を指す。同一性比較のための配列の最適なアラインメントは、例えばＳｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎ、１９８１、Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ ２：４８２の局所的相同性アラインメントアルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈ、１９７０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性アラインメントアルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ及びＬｉｐｍａｎ、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４の類似性サーチ方法のような様々なアルゴリズム、及びこれらアルゴリズムのコンピュータによる処理（例えば、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、Ｕ．Ｓ．ＡのＷｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ内のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ及びＴＦＡＳＴＡ）を使用して実施することできる。配列同一性はまた、Ａｌｔｓｃｈｕｌ等、１９９０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０に記載されているＢＬＡＳＴアルゴリズム（公開されたデフォルト設定）を使用して決定してもよい。ＢＬＡＳＴ解析を実行するためのソフトウエアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎから（インターネットのｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／を介して）入手可能であり得る。ＢＬＡＳＴアルゴリズムでは、最初に、データベース配列内の同一長の単語と整列した場合に、正の値の閾値スコアＴに一致するか、又はそのいくつかを満たす、クエリー配列内の長さＷの短い単語を同定することによって、ハイスコアの配列対（ＨＳＰ）を同定する。Ｔは、近隣単語スコア閾値と称される。最初の近隣単語ヒットは、より長いＨＳＰを見つけるための種として機能する。単語ヒットは、累積アラインメントスコアが増大することが可能である限り、各配列に沿って両方向へ伸張される。単語ヒットの各方向における伸張は、累積アラインメントスコアが、その最大達成値から量Ｘだけ低下した場合、累積スコアが、一つ若しくは二つ以上の負スコアの残基のアラインメントの蓄積によって、ゼロ若しくはそれ未満になった場合、又はいずれかの配列が終点に到達した場合に停止される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ及びＸは、アラインメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴプログラムはデフォルトとして単語長（Ｗ）１１、ＢＬＯＳＵＭ６２スコアマトリクス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ及びＨｅｎｉｋｏｆｆ、１９９２、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５−１０９１９）アラインメント（Ｂ）５０、期待値（Ｅ）１０（又は１又は０．１又は０．０１又は０．００１又は０．０００１）、Ｍ＝５、Ｎ＝４、及び両鎖の比較を使用することが可能である。ＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用した二つの配列間の統計的類似性の一つの基準は、最小和確率（ｓｍａｌｌｅｓｔ ｓｕｍ ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ）（Ｐ（Ｎ））であり、これは二つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間で一致が偶然に発生する確率の指標を提供する。本発明の他の実施態様では、試験配列の比較における最小和確率が約１未満、好ましくは約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、最も好ましくは約０．００１未満の場合、ヌクレオチド又はアミノ酸配列は実質的に同一であると考えられる。
【００４８】
あるいは、二つの核酸配列が実質的に相補的であることの指標として、二つの配列が中度にストリンジェントな条件下で、又は好ましくは厳密な条件下で互いにハイブリダイズすることである。中度に厳密な条件下におけるフィルター結合配列に対するハイブリダイゼーションでは、例えば０．５Ｍ ＮａＨＰＯ４、７％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、１ｍＭ ＥＤＴＡ中で６５℃にて実施され、０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中で４２℃にて洗浄される（Ａｕｓｕｂｅｌら（ｅｄｓ）、１９８９、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１、Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｉｎｃ．及びＪｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ｐ．２．１０．３参照）。あるいは、ストリンジェントな条件下におけるフィルター結合配列に対するハイブリダイゼーションでは、例えば０．５Ｍ ＮａＨＰＯ４、７％ＳＤＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ中で６５℃にて実施され、０．１×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中で６８℃にて洗浄される（Ａｕｓｕｂｅｌ、等（ｅｄｓ）、１９８９、前出参照）。ハイブリダイゼーション条件は、標的配列に応じて、周知の方法に従って変更されてもよい（Ｔｉｊｓｓｅｎ、１９９３、Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ−Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｐｒｏｂｅｓ、Ｐａｒｔ Ｉ、Ｃｈａｐｔｅｒ ２“Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｂｅ ａｓｓａｙｓ”、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、ＮｅｗＹｏｒｋ参照）。一般に、厳密な条件は、規定されたイオン強度及びｐＨにおいて、特定の配列の融点より約５℃以上低いように選択される。
【００４９】
他の実施態様において、本発明は、外因的に投与され、ＰＬＣγｍＲＮＡに結合して、翻訳を低下及び／又は阻害するアンチセンス分子及びリボザイムを提供する。参照により本願に援用される治療的アンチセンスオリゴヌクレオチドの例として、米国特許第５１３５９１７号（１９９２年８月４日公開）、米国特許第５０９８８９０号（１９９２年３月２４日公開）、米国特許第５０８７６１７号（１９９２年２月１１日公開）、米国特許第５１６６１９５号（１９９２年１１月２４日公開）、米国特許第５００４８１０号（１９９１年４月２日公開）、米国特許第５１９４４２８号（１９９３年３月１６日公開）、米国特許第４８０６４６３号（１９８９年２月２１日公開）、米国特許第５２８６７１７号（１９９４年２月１５日公開）、並びに米国特許第５２６４４２３号及び米国特許第５２７６０１９号、Ｂｉｏ Ｗｏｒｌｄ Ｔｏｄａｙ、Ａｐｒ．２９（１９９４）ｐ．３を含む。
【００５０】
アンチセンス分子は、特異的な結合が所望される条件下で、例えばインビボアッセイ若しくは治療的処置の場合は生理的条件下で、又はインビトロアッセイの場合はそのアッセイが実施される条件下で、非標的配列に対するアンチセンス分子の非特異的結合を避けるために、ＰＬＣγｍＲＮＡに対する十分な程度の相補性を有することが好ましい。アンチセンス結合のための標的ｍＲＮＡは、タンパク質をコードする情報のみでなく、例えば５’非翻訳領域、３’非翻訳領域、５’キャップ領域及びイントロン／エクソン接合部リボヌクレオチドなどの関連するリボヌクレオチドを含み得る。本発明の阻害剤として使用することが可能であるアンチセンス及びリボザイム核酸のスクリーニング法は、米国特許第５９３２４３５号に開示されている（参照により本願に援用される）。
【００５１】
本発明のアンチセンス分子（オリゴヌクレオチド）は、例えばホスホトリエステル、メチルホスホネート、短鎖アルキル若しくはシクロアルキル糖間結合又は短鎖複素原子若しくは複素環糖間結合、ホスホロチオエート及びＣＨ２−ＮＨ−Ｏ−ＣＨ２、ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−ＣＨ２（メチレン（メチルイミノ）又はＭＭＩ骨格として周知）、ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２、ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２及びＯ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ２骨格（ここでホスホジエステルはＯ−Ｐ−Ｏ−ＣＨ２である）を有するもののような、骨格の糖間結合を有するものでもよい。モルホリノ骨格構造を有するオリゴヌクレオチドを使用してもよい（米国特許第５０３４５０６号）。他の実施態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ペプチド核酸（ＰＮＡ、「タンパク質核酸」とも称される）骨格を有してもよく、ここでオリゴヌクレオチドのホスホジエステル骨格はポリアミド骨格と置き換えられ、ヌクレオチド塩基がポリアミド骨格のアザ窒素原子、又はメチレン基に直接又は間接的に結合している（Ｎｉｅｌｓｅｎ等、１９９１、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１４９７及び米国特許第５５３９０８２号）。ホスホジエステル結合は、キラル及びエナンチオマー特異的な構造で置き換えられてもよい。当業者は、本発明の実施の際に使用するために、他の結合を選択することが可能である。
【００５２】
オリゴヌクレオチドはまた、少なくとも一つの修飾されたヌクレオチド塩基を有する化学種を含み得る。従って、通常自然界に見られるものとは異なるプリン及びピリミジンを使用することが可能である。同様に、ヌクレオチドサブユニットのペントフラノシル部分上にも修飾が行われ得る。そのような修飾の例は、２’−Ｏ−アルキル−及び２’−ハロゲン置換ヌクレオチドである。本発明に有用な、糖部分の２’位における修飾のいくつかの特定の例は、ＯＨ、ＳＨ、ＳＣＨ３、Ｆ、ＯＣＮ、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２若しくはＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ３（ここでｎは１〜約１０である）、Ｃ１〜Ｃ１０の低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリル（ａｌｋａｒｙｌ）若しくはアラルキル、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｏ−、Ｓ−、若しくはＮ−アルキル、Ｏ−、Ｓ−、若しくはＮ−アルケニル、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、オリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改善する基、又はオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改善する基、及び同様の特性を有する他の置換基がある。一つ又は二つ以上のペントフラノシル基は、別の糖、例えばシクロブチルのような糖類似体、又は糖に代わる別の部分によって代替されてもよい。
【００５３】
数個の実施態様において、本発明におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、約５〜約１００のヌクレオチド単位を含み得る。公知のように、ヌクレオチド単位は、ホスホジエステル、又は骨格構造を形成する他の結合を介して、隣接するヌクレオチド単位に対して適切に結合した塩基−糖の組み合わせ（又はそれに類似した構造の組み合わせ）である。
【００５４】
本発明はまた、ＰＬＣγの活性及び／又は発現を調節することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する医薬組成物（医薬品）を提供する。一実施態様において、そのような組成物は、疼痛を治療又は緩和するのに十分な治療的又は予防的有効量の薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する。
【００５５】
「治療的有効量」とは、必要な用量及び時間内において、例えば疼痛の軽減のような所望の治療結果を達成するために有効な量を指す。ＰＬＣγの活性及び／又は発現を調節することができる薬剤の治療的有効量は、個人の疾病状態、年齢、性別、及び体重、並びに個人にて所望の応答を誘発する該薬剤の能力のような要因に従って変動することが可能である。投与計画は最適な治療効果を提供するように調節することが可能である。治療的有効量はまた、治療的に有益な効果が、薬剤の有毒又は有害な任意の効果を上回る量である。「予防的有効量」は、その必要な用量及び時間において、所望の予防結果を達成する、例えば疼痛の開始又は疼痛の度合いの増大を予防若しくは抑制するために有効な量を指す。予防的有効量は、治療的有効量に関して上述と同様に決定することが可能である。任意の特定の患者に関して、特定の投与計画は、個人の必要性、及び組成物を投与する又は組成物の投与を管理する者の専門的判断に従って、長期に亘って調整することが可能である。
【００５６】
本願で使用する「医薬的に許容される担体」又は「賦形剤」は、任意の及び全ての溶媒、分散媒体、皮膜、抗菌及び抗真菌薬、等張及び吸収遅延剤、及び生理学的に適合可能な同様物を含む。一実施態様において、担体は非経口投与に用いられるものである。あるいは、担体は静脈内、腹腔内、筋内、頭蓋内、くも膜下腔内、舌下又は経口投与に用いられるものである。医薬的に許容される担体は、無菌水性溶液又は分散剤、及び無菌注射溶液若しくは分散剤の即時調製のための無菌粉末を含む。医薬的活性物質のためのこれら媒体及び薬剤の使用は、当該技術分野にて周知である。従来の任意の媒体又は薬剤が活性薬剤と不適合な場合を除いて、本発明の医薬組成物中でそれらを使用することが想定される。補助的な活性化合物を組成物中に組み入れてもよい。
【００５７】
治療組成物は、一般に、製造及び保管条件下で無菌かつ安定である必要がある。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、又は高い薬物濃度に適した他の特殊な形態として処方することが可能である。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール、並びに同様物）、並びにそれらの適切な混合物を含む溶媒、又は分散媒体であり得る。適当な流動性は、例えばレシチンのような被膜の使用により、分散剤の場合は、必要とされる粒径の保守により、及び界面活性剤の使用により維持することが可能である。多くの場合、組成物中に例えば糖、例えばマンニトール、ソルビトールのような多価ポリアルコール、又は塩化ナトリウムのような等張剤を含めることが好ましいであろう。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを組成物中に含めることによって可能となる。更に、ＰＬＣγの活性及び／又は発現を調節することができる薬剤は、時限放出製剤、例えば遅延放出ポリマーを含有する組成物にて投与することが可能である。活性化合物は、例えばインプラント及びマイクロカプセル化送達システムを含む徐放製剤等、該化合物を急速放出から保護する担体と共に調製することが可能である。エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸、及びポリ乳酸−ポリグリコール酸コポリマー（ＰＬＧ）のような生分解性、生体適合性ポリマーを使用することが可能である。これら製剤を調製する多数の方法が特許され、又は一般に当業者に知られている。
【００５８】
無菌注射溶液は、活性薬剤（例えば、ＰＬＣγの活性及び／又は発現を調節することができる薬剤）の必要な量を、必要に応じて上記に列挙した一種の又は組み合わせた成分と共に適正な溶媒中に組み入れた後、濾過滅菌して調製することが可能である。一般に、分散剤は、基本的な分散媒体と、上記に列挙したものから選択した必要な他の成分とを含有する無菌ビヒクル中に活性薬剤を組み入れて調製することが可能である。無菌注射溶液を調製する無菌粉末の場合、調製の好ましい方法は、真空乾燥及び凍結乾燥であり、これらによって、その予め濾過滅菌した溶液からの活性成分、及び任意の更なる所望の成分の粉末が得られる。本発明の他の実施形態によれば、患者のＰＬＣγの活性及び／又は発現を調節することができる薬剤は、その可溶性を高める一種又は二種以上の更なる化合物と共に処方することが可能である。
【００５９】
他の一実施態様において、本発明の薬剤は、ＣＮＳ組織又はＣＮＳ神経細胞と接触するよう投与される。本願で使用する「中枢神経系」又はＣＮＳは、脳及び脊髄（例えば、腰部領域内）を含む神経系である。一方、「末梢神経系」又はＰＮＳは、脳及び脊髄以外の神経系である。更なる実施態様において、ＣＮＳ組織は後角表層であり、更なる実施態様においては、ラミナＩ神経細胞である。そのようなものとして、実施態様において本発明の薬剤は、インビボで頭蓋内若しくはくも膜下腔内へ直接投与されるか、又は脳脊髄液内へ投与されて、ＣＮＳ細胞を治療することが可能である。あるいは、薬剤は血液脳関門を通過してＣＮＳに入ることができる形態で、全身投与（例えば、静脈内又は経口投与）されてもよい。本願で「神経」及び「神経細胞」は、互換的に使用され、両方とも神経細胞及び神経系に関係する。
【００６０】
本発明の更なる実施態様において、ＣＮＳ細胞のＰＬＣγの活性及び／又は発現を低下／阻害することができる薬剤を含有する本発明の治療的組成物は、キット／容器又はパッケージ（例えば、商業的パッケージ）として提供されてもよく、これらは疼痛治療のためにそれらを使用する際の説明書を更に含む。同様に、本発明は、ＰＬＣγの活性及び／又は発現を低下／阻害することができる薬剤を、疼痛の予防及び／又は治療のための説明書と共に含むパッケージを提供する。
【００６１】
本発明は更に、疼痛の予防及び／若しくは治療のための、又は疼痛の予防及び／若しくは治療のための医薬品の製造のための、ＰＬＣγの活性及び／若しくは発現を低下／阻害することができる薬剤、又はＰＬＣγの活性及び／若しくは発現を低下／阻害することができる薬剤を含有する組成物の使用を提供する。
【００６２】
他の一実施形態において、本発明は、ＰＬＣγの活性及び／又は発現を低下／阻害することができる薬剤の同定及び解析に使用することが可能であるスクリーニング法における標的としてのＰＬＣγの使用に関する。従って、本発明は更に、候補の薬剤が、患者のＰＬＣγの活性及び／又は発現を調節することができ、それ故疼痛の予防及び治療に有用であるか否かを測定する方法を提供する。一実施態様において、該方法は、細胞（例えば、ＣＮＳ由来の細胞）を候補薬剤と接触させ、試験薬剤の存在下でＰＬＣγ活性が低下又は阻害されているか否かを測定することを含む。更なる実施態様において、アッセイは、活性ＰＬＣγの適切な標本又は試料を提供し、ＰＬＣγを候補薬剤と接触させ、その活性が試験化合物の存在下で阻害又は低下されるか否かを同様に測定することにより、無細胞系内で実施することが可能である。更なる実施態様において、アッセイは、候補化合物がＰＬＣγに対する結合パートナー、又はリガンドの結合を阻害するか否かを評価することを含み得る。この場合、該方法は、ＰＬＣγ、又はＰＬＣγを含む細胞を、候補薬剤及び結合パートナー又はリガンドと接触させ、候補又は試験化合物の存在下で、ＰＬＣγに対する結合パートナー、又はリガンドの結合が低下されるか否かを測定することを含む。実施態様において、結合パートナー又はリガンドは、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ、又はそのホモログ若しくは断片である（例えば、ＥＲＫ１若しくはＥＲＫ２、又はそのホモログ若しくは断片）。一実施態様において、ＰＬＣγのＤドメインに対する結合が測定される。
【００６３】
ＰＬＣγ活性の阻害若しくは低下、又は上述した結合の阻害若しくは低下は、試験薬剤が疼痛の治療又は予防に使用することが可能であることの指標となる。
【００６４】
本願で使用される「ＣＮＳ由来の細胞」は、ＣＮＳ組織から単離された細胞、又はＣＮＳ組織由来の細胞であり、実施態様においては神経細胞の初代培養物、不死化神経細胞株、及び許容されたインビトロでの神経細胞モデル系（例えば、インビトロで神経細胞に分化した細胞）の両方を含む。一実施態様において、上述した細胞は、ＰＬＣγ活性を有する。
【００６５】
上述した方法は、一種の試験薬剤、又は複数の試験薬剤、若しくは試験薬剤のライブラリー（例えば、組み合わせライブラリー）を用いて実施することが可能である。後者の場合、薬剤の組み合わせにより提供された相乗効果も、同定及び解析することが可能である。上述した薬剤は、疼痛の治療及び／又は予防に使用、又は向上された特異性、効力及び／又は薬理学的（例えば、薬物動態学的）性質を有する更なる薬剤を開発及び試験するためのリード薬剤として使用することが可能である。一実施態様において、薬剤は、適切な作用部位、例えばＣＮＳ組織内（例えば、脊髄内）でその活性型に変更されるプロドラッグであり得る。所定の実施態様において、本発明のスクリーニング／試験方法のステップの一つ又は複数が自動化されてもよい。
【００６６】
本発明は更に、ＰＬＣγ遺伝子の発現を低下／阻害することができる薬剤を、同定及び解析するための方法を提供する。この方法は、試験薬剤の存在下でのＰＬＣγ遺伝子の発現を、試験薬剤の不在下でのＰＬＣγ遺伝子の発現に対して測定することを含む。このような遺伝子発現は、対応するＲＮＡ若しくはタンパク質を検出するか、又はレポーター遺伝子に作動可能に結合した、通常このようなＰＬＣγ遺伝子に結合した転写調節因子（一つ又は複数）を含む適切なレポーター構造を使用して測定することができる。第一の核酸配列は、該第一の核酸配列が第二の核酸配列と機能的位置関係に配置される場合、第二の核酸配列と「作動可能に結合」することが可能である。例えば、プロモーターは、該プロモーターがコード配列の転写又は発現に影響を与える場合、コード配列に作動可能に結合されているという。一般に、作動可能に結合したＤＮＡ配列は連続しており、また必要な場合、リーディングフレーム内の二つのタンパク質コード領域を接続する。しかしながら、例えば、エンハンサーは通常、プロモーターから数ｋｂだけ離れている場合に機能し、イントロン配列は多様な長さを有することが可能であるため、数個のポリヌクレオチド要素は作動可能に結合することが可能であるが、連続的ではない。「転写調節要素」とは、例えば開始及び終止シグナル、エンハンサー、並びにプロモーター、スプライシングシグナル、ポリアデニル化シグナル等のＤＮＡ配列を指す一般名であり、それらが作動可能に結合するタンパク質コード配列の転写を誘導又は制御する。そのようなレポーター遺伝子の発現は、転写又は翻訳レベルで、例えば生産されるＲＮＡ又はタンパク質の量によって測定することが可能である。ＲＮＡは、例えばノーザン分析により、又は逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）法により検出することが可能である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ等（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＵＳＡ参照）。タンパク質レベルは、親和性試薬（例えば、抗体又はその断片（方法に関しては、例えばＨａｒｌｏｗ、Ｅ．及びＬａｎｅ、Ｄ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹを参照）、タンパク質に結合するリガンド）を使用して、又は他の特性（例えば、緑色蛍光タンパク質の場合の蛍光）を使用して直接検出することが可能であるか、又は検出可能な生成物（例えば、分光学的特性の変化）若しくは検出可能な表現型（例えば、細胞増殖の変化）を生成することが可能である酵素活性を含むタンパク質の活性を測定することによって検出することが可能である。適切なレポーター遺伝子は、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、β−Ｄガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、又は緑色蛍光タンパク質を含むが、これらに限定されるものではない。
【００６７】
本発明は更に、ＣＮＳ不全関連疼痛を診断又は予知するための方法を提供する。一実施態様において、そのようなＣＮＳ不全に関連する疼痛は、神経因性疼痛である。一実施態様において、本方法は、ＰＬＣγに対応する対照区における活性及び／又は発現と比較して、ＣＮＳ神経細胞のＰＬＣγの活性及び／又は発現が調節されているか否かを測定することを含む。この特定の方法において、対照のレベルに対する試験レベルの差異は、患者がＣＮＳ不全関連疼痛を体験していることを示す。一実施態様において、本方法は、ＰＬＣγの活性及び／又は発現が、対照の活性及び／又は発現と比較して調節されているか否かを測定することを含み得る。また他の一実施態様において、ＰＬＣγの活性及び／又は発現は、以下の確立された標準、例えば以前に患者にて測定された対応するＰＬＣγ活性及び／又は発現レベル；患者が上記した痛覚と比較してより軽い疼痛を体験しているか又は実質的に無疼痛の際に前記患者において測定された、対応するＰＬＣγ活性及び／又は発現レベル；又は上記した試験患者の現在の痛覚と比較してより軽い疼痛を体験しているか又は実質的に無疼痛の対照患者において測定された、対応するＰＬＣγ活性及び／又は発現レベル、から選択することができる。一実施態様において、より軽い疼痛を体験しているか又は実質的に無疼痛である患者又は対照患者は、該患者の中枢又は末梢神経系における明らかな損傷（例えば、神経因性疼痛）、又は持続性疼痛を示さない。
【００６８】
例えば、ＰＬＣγ活性及び／又は発現は、患者に対してその患者のＣＮＳ神経細胞と接触することができるインジケータ化合物（例えば、ＰＬＣγの活性及び／又は発現を示す化合物）を投与することにより測定することが可能である。インジケータ化合物を投与した後、そのインジケータ化合物関連インビボシグナルを評価することが可能である。一実施態様において、インジケータ化合物、例えば免疫検出ベースの試薬（例えば、ＰＬＣγポリペプチドに対抗する抗体、一本鎖抗体、若しくはＦａｂ断片）、又はＰＬＣγ活性により検出可能な生成物を与える適切な基質を使用することが可能である。インジケータ化合物を注入した後、画像技術を用いてインビボでインジケータ化合物関連シグナルを評価することが可能である。画像技術は、インビボでのインジケータ化合物のシグナルの評価を可能にすることが可能である。
【００６９】
一実施態様において、上記した診断／予知の方法は、上記した治療的／予防的方法と共に実施されて、患者の疼痛を予防又は治療することが可能である。従って、このような方法は、疼痛を診断又は予知し、かつ患者のＰＣＬγの活性及び／又は発現を調節することによって、疼痛を予防又は治療することを含む。
【００７０】
本願に本発明の様々な実施態様が開示されているが、当業者が共有する一般的な知識に従って、本発明の範囲内で様々な調節及び変更をなすることが可能である。そのような変更は、実質的に同一の方法で同一の結果を達成するために、本発明の任意の実施形態を公知の同等物で置換することを含む。範囲を定義する数字には、数値域が含まれる。請求項において、「を含む」という言葉は、オープンエンドを指す用語として使用され、「を含むが、限定されない」という表現と実質的に同等である。以下の実施例は、本発明の様々な実施形態を説明するものであり、本願に開示する本発明の幅広い実施形態を限定するものではない。
【実施例１】
【００７１】
１１匹の成熟したＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの坐骨神経に、人為的に絞扼性神経損傷を与えた（Ｍｏｓｃｏｎｉ＆Ｋｒｕｇｅｒ、１９９６、Ｐａｉｎ ６４：３７−５７）。２週間に亘り徐々に増大した神経因性疼痛を示す疼痛過敏を、Ｖｏｎ Ｆｒｅｙ法により監視した（Ｃｈａｐｌａｎ等、１９９４、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ５３：５５−６３）。アロディニア発生後（≦２．０ｇの５０％逃避閾値（ＷＤ５０）により解析）、くも膜下カテーテルを用いて、ラットにトリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸５００ｎｇを投与した。トリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸は、生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）溶液中にて、１０％ｖ／ｖジメチルスルホキシドと共に調製された。トリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸は、ＥＭＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ部）から入手可能である。１０％ｖ／ｖジメチルスルホキシドを含む生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）溶液をビヒクルとして、対照ラットに注入した。投与したビヒクルの体積は、ＰＬＣγ阻害剤溶液と同一であった。
【００７２】
７匹のアロディニアのラットがビヒクルのくも膜下投与を１回受けた一方、４匹のラットがトリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸の投与を１回受けた。注入前、両方のグループの平均ＷＤ５０は、１．９±０．２ｇであった。注入後、僅か４時間で、トリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸を投与されたラットのＷＤ５０は、ビヒクルを受けたラットと有意に異なり（トリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸、８．８±２．１ｇ対ビヒクル、４．１±０．７ｇ、ｐ＜０．０５）、また、開始時、注入前のＷＤ５０と有意に異なっていた（ｐ＜０．０５、混合モデルのＡＮＯＶＡ（ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ：分散分析）にて）。この疼痛過敏の有意な低下は、６時間以上持続した。
【００７３】
本出願全体を通して多くの参考文献が引用され、本発明が属する技術分野の状況をより詳細に説明している。これら参考文献の開示は、本願において参照により本開示内に援用される。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１】トリシクロデカン−９−イル−キサントゲン酸（○）及びビヒクル（□）で処置されたラットの疼痛過敏の５０％逃避閾値の比較。
【図２Ａ】ヒトホスホリパーゼＣガンマ１のＤＮＡ配列（配列番号１）（ＰＬＣＧ１、アクセッション番号ＮＭ＿００２６６０）。コーディング配列は、ＤＮＡ配列の１２２−３９９７位で定義される。
【図２Ｂ】図２Ａの続き。
【図２Ｃ】図２Ｂの続き。
【図２Ｄ】図２Ｃの続き。
【図２Ｅ】ヒトホスホリパーゼＣガンマ１のポリペプチド配列（配列番号２）（ＰＬＣＧ１、アクセッション番号ＮＰ＿００２６５１）。コーディング配列は、ＤＮＡ配列の１２２−３９９７位で定義される。
【図３Ａ】ヒトホスホリパーゼＣガンマ２のＤＮＡ配列（配列番号３）（ＰＬＣＧ２、アクセッション番号ＮＭ＿００２６６１）。コーディング配列は、ＤＮＡ配列の１５３−３９１１位で定義される。
【図３Ｂ】図３Ａの続き。
【図３Ｃ】図３Ｂの続き。
【図３Ｄ】ヒトホスホリパーゼＣガンマ２のポリペプチド配列（配列番号４）（ＰＬＣＧ２、アクセッション番号ＮＭ＿００２６６１及びＮＰ＿００２６５２）。コーディング配列は、ＤＮＡ配列の１５３−３９１１位で定義される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者の疼痛を治療又は予防する方法であって、その患者のホスホリパーゼＣγ（ＰＬＣγ）の活性又は発現を阻害することを含む方法。
【請求項２】
前記患者がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞又は組織において、ＰＬＣγの活性又は発現を調節することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
疼痛シグナルが、経シナプスでＣＮＳ細胞へ至る末梢神経系（ＰＮＳ）細胞又は神経線維から発せられる、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記疼痛が、慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
患者の疼痛を治療又は予防する方法であって、患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤をその患者に投与することを含む方法。
【請求項１１】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記アンチセンス分子が、配列番号２及び配列番号４から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸に対して実質的に相補的な核酸である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記アンチセンス分子が、配列番号１及び配列番号３から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸に対して実質的に相補的な核酸である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記ｍＲＮＡの部分が、少なくとも５個の連続した塩基を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記ｓｉＲＮＡ又は前記ｓｉＲＮＡ様分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分と実質的に同一である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
前記ｓｉＲＮＡ又は前記ｓｉＲＮＡ様分子が、配列番号２及び配列番号４から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするＤＮＡ配列に対応するｍＲＮＡの部分と実質的に同一である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ｓｉＲＮＡ又は前記ｓｉＲＮＡ様分子が、配列番号１及び配列番号３から選択されるＤＮＡ配列に対応するｍＲＮＡの部分と実質的に同一である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を調節することを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
疼痛シグナルが、経シナプスでＣＮＳ細胞へ至るＰＮＳ細胞又は神経線維から発せられる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項１０に記載の方法。
【請求項２７】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記疼痛が、慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項３０】
患者の疼痛を治療又は予防する方法であって、その患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する組成物を、その患者に投与することを含む方法。
【請求項３１】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３６】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を調節することを含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
疼痛シグナルが、経シナプスでＣＮＳ細胞へ至るＰＮＳ細胞又は神経線維から発せられる、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項３０に記載の方法。
【請求項４１】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記疼痛が、慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項４４】
患者の疼痛の治療又は予防のための組成物であって、患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する組成物。
【請求項４５】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４８】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４９】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項４６に記載の組成物。
【請求項５０】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】
ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を調節することを含む、請求項４４に記載の組成物。
【請求項５２】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
疼痛シグナルが、経シナプスでＣＮＳ細胞へ至るＰＮＳ細胞又は神経線維から発せられる、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５４】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項４４に記載の組成物。
【請求項５５】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５６】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５７】
前記疼痛が、慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項４４に記載の組成物。
【請求項５８】
患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤、及び疼痛の治療又は予防におけるその薬剤の使用の方法に関する説明書を含むパッケージ。
【請求項５９】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項５８に記載のパッケージ。
【請求項６０】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項５９に記載のパッケージ。
【請求項６１】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項５９に記載のパッケージ。
【請求項６２】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項５９に記載のパッケージ。
【請求項６３】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項５９に記載のパッケージ。
【請求項６４】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項６３に記載のパッケージ。
【請求項６５】
方法が、ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を調節することを含む、請求項５９に記載のパッケージ。
【請求項６６】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項６５に記載のパッケージ。
【請求項６７】
疼痛シグナルが経シナプスでＣＮＳ細胞へ至るＰＮＳ細胞又は神経線維から発せられる、請求項６５に記載のパッケージ。
【請求項６８】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項５９に記載のパッケージ。
【請求項６９】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項６８に記載のパッケージ。
【請求項７０】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項６８に記載のパッケージ。
【請求項７１】
前記疼痛が、慢性炎症痛、、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項５８に記載のパッケージ。
【請求項７２】
患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤を含有する組成物、及び医薬的に許容される担体、並びに疼痛の治療又は予防における前記組成物の使用の方法に関する説明書、を含むパッケージ。
【請求項７３】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項７２に記載のパッケージ。
【請求項７４】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［β−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項７３に記載のパッケージ。
【請求項７５】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項７３に記載のパッケージ。
【請求項７６】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項７２に記載のパッケージ。
【請求項７７】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項７２に記載のパッケージ。
【請求項７８】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項７７に記載のパッケージ。
【請求項７９】
方法が、ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を調節することを含む、請求項７２に記載のパッケージ。
【請求項８０】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項７９に記載のパッケージ。
【請求項８１】
疼痛シグナルが、経シナプスでＣＮＳ細胞へ至るＰＮＳ細胞又は神経線維から発せられる、請求項７９に記載のパッケージ。
【請求項８２】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項７２に記載のパッケージ。
【請求項８３】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項８２に記載のパッケージ。
【請求項８４】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項８２に記載のパッケージ。
【請求項８５】
前記疼痛が、慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項７２に記載のパッケージ。
【請求項８６】
疼痛を治療又は予防するための、患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤の使用。
【請求項８７】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項８６に記載の使用。
【請求項８８】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項８７に記載の使用。
【請求項８９】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項８７に記載の使用。
【請求項９０】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項８６に記載の使用。
【請求項９１】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項８６に記載の使用。
【請求項９２】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項９１に記載の使用。
【請求項９３】
方法が、ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を調節することを含む、請求項８６に記載の使用。
【請求項９４】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項９３に記載の使用。
【請求項９５】
疼痛シグナルが、経シナプスでＣＮＳ細胞へ至るＰＮＳ細胞又は神経線維から発せられる、請求項９３に記載の使用。
【請求項９６】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項８６に記載の使用。
【請求項９７】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項９６に記載の使用。
【請求項９８】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項９６に記載の使用。
【請求項９９】
前記疼痛が、慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項８６に記載の使用。
【請求項１００】
疼痛を治療又は予防する医薬品の製造のための、患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤の使用。
【請求項１０１】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項１００に記載の使用。
【請求項１０２】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項１０１に記載の使用。
【請求項１０３】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項１０１に記載の使用。
【請求項１０４】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項１０２に記載の使用。
【請求項１０５】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項１０４に記載の使用。
【請求項１０６】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項１０５に記載の使用。
【請求項１０７】
方法が、ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を調節することを含む、請求項１００に記載の使用。
【請求項１０８】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項１０７に記載の使用。
【請求項１０９】
疼痛シグナルが、経シナプスでＣＮＳ細胞へ至るＰＮＳ細胞又は神経線維から発せられる、請求項１０７に記載の使用。
【請求項１１０】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項１００に記載の使用。
【請求項１１１】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項１１０に記載の使用。
【請求項１１２】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項１１０に記載の使用。
【請求項１１３】
前記疼痛が、慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項１００に記載の使用。
【請求項１１４】
疼痛の治療又は予防のための、患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する組成物の使用。
【請求項１１５】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項１１４の使用。
【請求項１１６】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項１１５に記載の使用。
【請求項１１７】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項１１５に記載の使用。
【請求項１１８】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項１１４に記載の使用。
【請求項１１９】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項１１４に記載の使用。
【請求項１２０】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項１１９に記載の使用。
【請求項１２１】
方法が、ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を調節することを含む、請求項１１４に記載の使用。
【請求項１２２】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項１２１に記載の使用。
【請求項１２３】
疼痛シグナルが、経シナプスでＣＮＳ細胞へ至るＰＮＳ細胞又は神経線維から発せられる、請求項１２１に記載の使用。
【請求項１２４】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項１１４に記載の使用。
【請求項１２５】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項１２４に記載の使用。
【請求項１２６】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項１２４に記載の使用。
【請求項１２７】
前記疼痛が、慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項１１４に記載の使用。
【請求項１２８】
疼痛の治療又は予防のための薬剤を同定又は解析する方法であって、薬剤をＰＬＣγの活性又は発現を有する細胞と接触させ、その薬剤の存在下でＰＬＣγの活性又は発現が阻害されるか否かを測定することを含み、ここでその阻害を、薬剤が疼痛の治療又は予防に使用され得ることを示す指標とする、方法。
【請求項１２９】
疼痛の治療又は予防のための薬剤を同定又は解析する方法であって、薬剤をＰＬＣγと接触させ、その薬剤の存在下でＰＬＣγ活性が阻害されるか否かを測定することを含み、ここでその阻害を、薬剤が疼痛の治療又は予防に使用され得ることを示す指標とする、方法。
【請求項１３０】
ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現が、阻害されるか否かを測定することを含む、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３１】
ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
疼痛シグナルが、経シナプスでＣＮＳ細胞へ至るＰＮＳ細胞又は神経線維から発せられる、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３３】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３４】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１３５】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１３６】
前記疼痛が、慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３７】
患者の侵害受容を減少させる方法であって、その患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することを含む方法。
【請求項１３８】
前記患者がヒトである、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
前記ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を阻害することを含む、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４０】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１４１】
患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤をその患者に投与することを含む、患者の侵害受容を減少させる方法。
【請求項１４２】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１４４】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１４５】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１４６】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１４７】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１４８】
ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を阻害することを含む、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４９】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項１４８に記載の方法。
【請求項１５０】
患者の侵害受容を減少させる方法であって、患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する組成物を、その患者に投与することを含む方法。
【請求項１５１】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５２】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５３】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５４】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５５】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５６】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項１５５に記載の方法。
【請求項１５７】
ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を阻害することを含む、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５８】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１５９】
疼痛の治療又は予防のための化合物を同定又は解析する方法であって、
（ａ）試験化合物を、レポータータンパク質をコードするレポーター遺伝子を含む第二の核酸に対して作動可能に結合した、通常ＰＬＣγ遺伝子関連転写調節因子を含む第一の核酸を有する細胞と接触させ、
（ｂ）前記試験化合物の存在下で、レポーター遺伝子の発現又はレポータータンパク質の活性が低下されるか否かを測定することを含み、
ここで前記レポーター遺伝子の発現又はレポータータンパク質活性の低下を、前記試験化合物が疼痛の治療又は予防に使用され得ることを示す指標とする、方法。
【請求項１６０】
前記細胞がＣＮＳ由来の細胞である、請求項１５９に記載の方法。
【請求項１６１】
疼痛の治療又は予防のための薬剤を同定又は解析する方法であって、薬剤及びＰＬＣγリガンドを、ＰＬＣγを含む細胞と接触させ、その薬剤の存在下で、ＰＬＣγに対するリガンドの結合が低下するか否かを測定することを含み、ここでその低下を、薬剤が疼痛の治療又は予防に使用され得ることを示す指標とする、方法。
【請求項１６２】
前記細胞がＣＮＳ由来の細胞である、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６３】
疼痛の治療又は予防のための薬剤を同定又は解析する方法であって、薬剤及びＰＬＣγリガンドをＰＬＣγと接触させ、その薬剤の存在下で、ＰＬＣγに対するリガンドの結合が低下するか否かを測定することを含み、ここでその低下を、薬剤が疼痛の治療又は予防に使用され得ることを示す指標とする、方法。
【請求項１６４】
前記リガンドが、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ、又はそのホモログ若しくは断片である、請求項１５、３５、１４６、１５５、１６１及び１６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６５】
前記マイトジェン活性化プロテインキナーゼが、細胞外シグナル関連キナーゼである、請求項１６４に記載の方法。
【請求項１６６】
前記細胞外シグナル関連キナーゼが、ＥＲＫ１又はＥＲＫ２である、請求項１６５に記載の方法。
【請求項１６７】
前記結合が、前記ＰＬＣγのＤドメインに対してなされる、請求項１５、３５、１４６、１５５、１６１及び１６３〜１６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６８】
前記リガンドが、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ、又はそのホモログ若しくは断片である、請求項４９に記載の組成物。
【請求項１６９】
前記マイトジェン活性化プロテインキナーゼが、細胞外シグナル関連キナーゼである、請求項１６８に記載の組成物。
【請求項１７０】
前記細胞外シグナル関連キナーゼが、ＥＲＫ１又はＥＲＫ２である、請求項１６９に記載の組成物。
【請求項１７１】
前記結合が、前記ＰＬＣγのＤドメインに対してなされる、請求項１６８に記載の組成物。
【請求項１７２】
前記リガンドが、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ、又はそのホモログ若しくは断片である、請求項４９又は６３に記載のパッケージ。
【請求項１７３】
前記マイトジェン活性化プロテインキナーゼが、細胞外シグナル関連キナーゼである、請求項１７２に記載のパッケージ。
【請求項１７４】
前記細胞外シグナル関連キナーゼが、ＥＲＫ１又はＥＲＫ２である、請求項１７３に記載のパッケージ。
【請求項１７５】
前記結合が、前記ＰＬＣγのＤドメインに対してなされる、請求項１７４に記載のパッケージ。
【請求項１７６】
前記リガンドが、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ、又はそのホモログ若しくは断片である、請求項９１、１０５及び１１９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７７】
前記マイトジェン活性化プロテインキナーゼが、細胞外シグナル関連キナーゼである、請求項１７６に記載の使用。
【請求項１７８】
前記細胞外シグナル関連キナーゼが、ＥＲＫ１又はＥＲＫ２である、請求項１７７に記載の使用。
【請求項１７９】
前記結合が、前記ＰＬＣγのＤドメインに対してなされる、請求項１７９に記載の使用。
【請求項１】
患者の疼痛を治療又は予防する方法であって、その患者のホスホリパーゼＣγ（ＰＬＣγ）の活性又は発現を阻害することを含む方法。
【請求項２】
前記患者がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞又は組織において、ＰＬＣγの活性又は発現を調節することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
疼痛シグナルが、経シナプスでＣＮＳ細胞へ至る末梢神経系（ＰＮＳ）細胞又は神経線維から発せられる、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記疼痛が、慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
患者の疼痛を治療又は予防する方法であって、患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤をその患者に投与することを含む方法。
【請求項１１】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記アンチセンス分子が、配列番号２及び配列番号４から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸に対して実質的に相補的な核酸である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記アンチセンス分子が、配列番号１及び配列番号３から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸に対して実質的に相補的な核酸である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記ｍＲＮＡの部分が、少なくとも５個の連続した塩基を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記ｓｉＲＮＡ又は前記ｓｉＲＮＡ様分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分と実質的に同一である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
前記ｓｉＲＮＡ又は前記ｓｉＲＮＡ様分子が、配列番号２及び配列番号４から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするＤＮＡ配列に対応するｍＲＮＡの部分と実質的に同一である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ｓｉＲＮＡ又は前記ｓｉＲＮＡ様分子が、配列番号１及び配列番号３から選択されるＤＮＡ配列に対応するｍＲＮＡの部分と実質的に同一である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を調節することを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
疼痛シグナルが、経シナプスでＣＮＳ細胞へ至るＰＮＳ細胞又は神経線維から発せられる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項１０に記載の方法。
【請求項２７】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記疼痛が、慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項３０】
患者の疼痛を治療又は予防する方法であって、その患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する組成物を、その患者に投与することを含む方法。
【請求項３１】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３６】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を調節することを含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
疼痛シグナルが、経シナプスでＣＮＳ細胞へ至るＰＮＳ細胞又は神経線維から発せられる、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項３０に記載の方法。
【請求項４１】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記疼痛が、慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項４４】
患者の疼痛の治療又は予防のための組成物であって、患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する組成物。
【請求項４５】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４８】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４９】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項４６に記載の組成物。
【請求項５０】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】
ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を調節することを含む、請求項４４に記載の組成物。
【請求項５２】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
疼痛シグナルが、経シナプスでＣＮＳ細胞へ至るＰＮＳ細胞又は神経線維から発せられる、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５４】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項４４に記載の組成物。
【請求項５５】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５６】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５７】
前記疼痛が、慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項４４に記載の組成物。
【請求項５８】
患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤、及び疼痛の治療又は予防におけるその薬剤の使用の方法に関する説明書を含むパッケージ。
【請求項５９】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項５８に記載のパッケージ。
【請求項６０】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項５９に記載のパッケージ。
【請求項６１】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項５９に記載のパッケージ。
【請求項６２】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項５９に記載のパッケージ。
【請求項６３】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項５９に記載のパッケージ。
【請求項６４】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項６３に記載のパッケージ。
【請求項６５】
方法が、ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を調節することを含む、請求項５９に記載のパッケージ。
【請求項６６】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項６５に記載のパッケージ。
【請求項６７】
疼痛シグナルが経シナプスでＣＮＳ細胞へ至るＰＮＳ細胞又は神経線維から発せられる、請求項６５に記載のパッケージ。
【請求項６８】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項５９に記載のパッケージ。
【請求項６９】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項６８に記載のパッケージ。
【請求項７０】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項６８に記載のパッケージ。
【請求項７１】
前記疼痛が、慢性炎症痛、、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項５８に記載のパッケージ。
【請求項７２】
患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤を含有する組成物、及び医薬的に許容される担体、並びに疼痛の治療又は予防における前記組成物の使用の方法に関する説明書、を含むパッケージ。
【請求項７３】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項７２に記載のパッケージ。
【請求項７４】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［β−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項７３に記載のパッケージ。
【請求項７５】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項７３に記載のパッケージ。
【請求項７６】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項７２に記載のパッケージ。
【請求項７７】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項７２に記載のパッケージ。
【請求項７８】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項７７に記載のパッケージ。
【請求項７９】
方法が、ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を調節することを含む、請求項７２に記載のパッケージ。
【請求項８０】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項７９に記載のパッケージ。
【請求項８１】
疼痛シグナルが、経シナプスでＣＮＳ細胞へ至るＰＮＳ細胞又は神経線維から発せられる、請求項７９に記載のパッケージ。
【請求項８２】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項７２に記載のパッケージ。
【請求項８３】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項８２に記載のパッケージ。
【請求項８４】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項８２に記載のパッケージ。
【請求項８５】
前記疼痛が、慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項７２に記載のパッケージ。
【請求項８６】
疼痛を治療又は予防するための、患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤の使用。
【請求項８７】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項８６に記載の使用。
【請求項８８】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項８７に記載の使用。
【請求項８９】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項８７に記載の使用。
【請求項９０】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項８６に記載の使用。
【請求項９１】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項８６に記載の使用。
【請求項９２】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項９１に記載の使用。
【請求項９３】
方法が、ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を調節することを含む、請求項８６に記載の使用。
【請求項９４】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項９３に記載の使用。
【請求項９５】
疼痛シグナルが、経シナプスでＣＮＳ細胞へ至るＰＮＳ細胞又は神経線維から発せられる、請求項９３に記載の使用。
【請求項９６】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項８６に記載の使用。
【請求項９７】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項９６に記載の使用。
【請求項９８】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項９６に記載の使用。
【請求項９９】
前記疼痛が、慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項８６に記載の使用。
【請求項１００】
疼痛を治療又は予防する医薬品の製造のための、患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤の使用。
【請求項１０１】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項１００に記載の使用。
【請求項１０２】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項１０１に記載の使用。
【請求項１０３】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項１０１に記載の使用。
【請求項１０４】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項１０２に記載の使用。
【請求項１０５】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項１０４に記載の使用。
【請求項１０６】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項１０５に記載の使用。
【請求項１０７】
方法が、ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を調節することを含む、請求項１００に記載の使用。
【請求項１０８】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項１０７に記載の使用。
【請求項１０９】
疼痛シグナルが、経シナプスでＣＮＳ細胞へ至るＰＮＳ細胞又は神経線維から発せられる、請求項１０７に記載の使用。
【請求項１１０】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項１００に記載の使用。
【請求項１１１】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項１１０に記載の使用。
【請求項１１２】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項１１０に記載の使用。
【請求項１１３】
前記疼痛が、慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項１００に記載の使用。
【請求項１１４】
疼痛の治療又は予防のための、患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する組成物の使用。
【請求項１１５】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項１１４の使用。
【請求項１１６】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項１１５に記載の使用。
【請求項１１７】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項１１５に記載の使用。
【請求項１１８】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項１１４に記載の使用。
【請求項１１９】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項１１４に記載の使用。
【請求項１２０】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項１１９に記載の使用。
【請求項１２１】
方法が、ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を調節することを含む、請求項１１４に記載の使用。
【請求項１２２】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項１２１に記載の使用。
【請求項１２３】
疼痛シグナルが、経シナプスでＣＮＳ細胞へ至るＰＮＳ細胞又は神経線維から発せられる、請求項１２１に記載の使用。
【請求項１２４】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項１１４に記載の使用。
【請求項１２５】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項１２４に記載の使用。
【請求項１２６】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項１２４に記載の使用。
【請求項１２７】
前記疼痛が、慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項１１４に記載の使用。
【請求項１２８】
疼痛の治療又は予防のための薬剤を同定又は解析する方法であって、薬剤をＰＬＣγの活性又は発現を有する細胞と接触させ、その薬剤の存在下でＰＬＣγの活性又は発現が阻害されるか否かを測定することを含み、ここでその阻害を、薬剤が疼痛の治療又は予防に使用され得ることを示す指標とする、方法。
【請求項１２９】
疼痛の治療又は予防のための薬剤を同定又は解析する方法であって、薬剤をＰＬＣγと接触させ、その薬剤の存在下でＰＬＣγ活性が阻害されるか否かを測定することを含み、ここでその阻害を、薬剤が疼痛の治療又は予防に使用され得ることを示す指標とする、方法。
【請求項１３０】
ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現が、阻害されるか否かを測定することを含む、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３１】
ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
疼痛シグナルが、経シナプスでＣＮＳ細胞へ至るＰＮＳ細胞又は神経線維から発せられる、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３３】
前記疼痛が神経因性疼痛である、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３４】
前記神経因性疼痛が、神経又は路の損傷に関連する、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１３５】
前記神経因性疼痛が、体性痛及び内臓痛からなる群から選択される、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１３６】
前記疼痛が、慢性炎症痛、関節炎関連疼痛、線維症、背痛、癌関連疼痛、消化器疾患関連疼痛、クローン病関連疼痛、自己免疫疾患関連疼痛、内分泌疾患関連疼痛、糖尿病性神経障害関連疼痛、幻肢痛、自発痛、慢性の術後痛、慢性顎関節痛、灼熱痛、帯状疱疹後神経痛、ＡＩＤＳ関連の疼痛、複合性局所疼痛症候群タイプＩ及びＩＩ、三叉神経痛、慢性背痛、脊髄損傷関連疼痛、並びに反復性急性疼痛からなる群から選択される、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３７】
患者の侵害受容を減少させる方法であって、その患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することを含む方法。
【請求項１３８】
前記患者がヒトである、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
前記ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を阻害することを含む、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４０】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１４１】
患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤をその患者に投与することを含む、患者の侵害受容を減少させる方法。
【請求項１４２】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１４４】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１４５】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１４６】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１４７】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１４８】
ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を阻害することを含む、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４９】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項１４８に記載の方法。
【請求項１５０】
患者の侵害受容を減少させる方法であって、患者のＰＬＣγの活性又は発現を阻害することができる薬剤、及び医薬的に許容される担体を含有する組成物を、その患者に投与することを含む方法。
【請求項１５１】
前記薬剤がＰＬＣγ阻害剤である、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５２】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、硫酸ネオマイシン、スペルミンテトラヒドロクロリド、１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、及び１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−２，５−ピロリジンジオンからなる群から選択される、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５３】
前記ＰＬＣγ阻害剤が、トリシクロデカン−９−イルキサントゲン酸である、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５４】
前記薬剤が抗ＰＬＣγ抗体である、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５５】
前記薬剤が、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ様分子、及びＰＬＣγとリガンドとの結合の阻害剤から選択される、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５６】
前記アンチセンス分子が、ＰＬＣγをコードするｍＲＮＡの部分に対して実質的に相補的な核酸である、請求項１５５に記載の方法。
【請求項１５７】
ＣＮＳの細胞又は組織におけるＰＬＣγの活性又は発現を阻害することを含む、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５８】
前記ＣＮＳの細胞又は組織が、脊髄細胞又は組織である、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１５９】
疼痛の治療又は予防のための化合物を同定又は解析する方法であって、
（ａ）試験化合物を、レポータータンパク質をコードするレポーター遺伝子を含む第二の核酸に対して作動可能に結合した、通常ＰＬＣγ遺伝子関連転写調節因子を含む第一の核酸を有する細胞と接触させ、
（ｂ）前記試験化合物の存在下で、レポーター遺伝子の発現又はレポータータンパク質の活性が低下されるか否かを測定することを含み、
ここで前記レポーター遺伝子の発現又はレポータータンパク質活性の低下を、前記試験化合物が疼痛の治療又は予防に使用され得ることを示す指標とする、方法。
【請求項１６０】
前記細胞がＣＮＳ由来の細胞である、請求項１５９に記載の方法。
【請求項１６１】
疼痛の治療又は予防のための薬剤を同定又は解析する方法であって、薬剤及びＰＬＣγリガンドを、ＰＬＣγを含む細胞と接触させ、その薬剤の存在下で、ＰＬＣγに対するリガンドの結合が低下するか否かを測定することを含み、ここでその低下を、薬剤が疼痛の治療又は予防に使用され得ることを示す指標とする、方法。
【請求項１６２】
前記細胞がＣＮＳ由来の細胞である、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６３】
疼痛の治療又は予防のための薬剤を同定又は解析する方法であって、薬剤及びＰＬＣγリガンドをＰＬＣγと接触させ、その薬剤の存在下で、ＰＬＣγに対するリガンドの結合が低下するか否かを測定することを含み、ここでその低下を、薬剤が疼痛の治療又は予防に使用され得ることを示す指標とする、方法。
【請求項１６４】
前記リガンドが、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ、又はそのホモログ若しくは断片である、請求項１５、３５、１４６、１５５、１６１及び１６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６５】
前記マイトジェン活性化プロテインキナーゼが、細胞外シグナル関連キナーゼである、請求項１６４に記載の方法。
【請求項１６６】
前記細胞外シグナル関連キナーゼが、ＥＲＫ１又はＥＲＫ２である、請求項１６５に記載の方法。
【請求項１６７】
前記結合が、前記ＰＬＣγのＤドメインに対してなされる、請求項１５、３５、１４６、１５５、１６１及び１６３〜１６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６８】
前記リガンドが、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ、又はそのホモログ若しくは断片である、請求項４９に記載の組成物。
【請求項１６９】
前記マイトジェン活性化プロテインキナーゼが、細胞外シグナル関連キナーゼである、請求項１６８に記載の組成物。
【請求項１７０】
前記細胞外シグナル関連キナーゼが、ＥＲＫ１又はＥＲＫ２である、請求項１６９に記載の組成物。
【請求項１７１】
前記結合が、前記ＰＬＣγのＤドメインに対してなされる、請求項１６８に記載の組成物。
【請求項１７２】
前記リガンドが、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ、又はそのホモログ若しくは断片である、請求項４９又は６３に記載のパッケージ。
【請求項１７３】
前記マイトジェン活性化プロテインキナーゼが、細胞外シグナル関連キナーゼである、請求項１７２に記載のパッケージ。
【請求項１７４】
前記細胞外シグナル関連キナーゼが、ＥＲＫ１又はＥＲＫ２である、請求項１７３に記載のパッケージ。
【請求項１７５】
前記結合が、前記ＰＬＣγのＤドメインに対してなされる、請求項１７４に記載のパッケージ。
【請求項１７６】
前記リガンドが、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ、又はそのホモログ若しくは断片である、請求項９１、１０５及び１１９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７７】
前記マイトジェン活性化プロテインキナーゼが、細胞外シグナル関連キナーゼである、請求項１７６に記載の使用。
【請求項１７８】
前記細胞外シグナル関連キナーゼが、ＥＲＫ１又はＥＲＫ２である、請求項１７７に記載の使用。
【請求項１７９】
前記結合が、前記ＰＬＣγのＤドメインに対してなされる、請求項１７９に記載の使用。
【図１】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図２Ｄ】
【図２Ｅ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図３Ｄ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図２Ｄ】
【図２Ｅ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図３Ｄ】
【公表番号】特表２００７−５３７１６７（Ｐ２００７−５３７１６７Ａ）
【公表日】平成１９年１２月２０日（２００７．１２．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５１１８１６（Ｐ２００７−５１１８１６）
【出願日】平成１７年５月１３日（２００５．５．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＡ２００５／０００７３８
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１１０４９０
【国際公開日】平成１７年１１月２４日（２００５．１１．２４）
【出願人】（５０１４４９４７０）ユニヴェルシテ ラヴァル (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年１２月２０日（２００７．１２．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年５月１３日（２００５．５．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＡ２００５／０００７３８
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１１０４９０
【国際公開日】平成１７年１１月２４日（２００５．１１．２４）
【出願人】（５０１４４９４７０）ユニヴェルシテ ラヴァル (2)
【Ｆターム（参考）】
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