先天性免疫修飾疾患を処置および予防するためのＤ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールを含んでなる化合物の使用
本発明は、炎症反応、刺激状態または不耐性を誘導することなく、抗微生物ペプチド、好ましくはｈＢＤ−２の増産により先天性免疫および／または獲得免疫の修飾に関連する疾病を処置および／または予防すること目的とする薬剤の製造のための、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールを含んでなる化合物の使用に関する。該化合物はまた、アボカドペプチド抽出物および／またはルピナスペプチド抽出物も含み得る。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、先天性免疫の修飾に関連する疾患を処置および／または予防すること目的とする薬剤を製造するための、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールを含んでなる化合物の使用に関する。
【０００２】
総ての動物種は、日々、それらの健康、場合によっては生命をも脅かす恐れのある細菌、真菌、寄生生物またはウイルスなどの多数の微生物に曝されている。これらの微生物には、ヒトをはじめとする総ての動物に共通している先天性免疫と呼ばれる系と、潜在的攻撃者との接触後に細胞や免疫メディエーターによって獲得される、いわゆる適応または特異免疫系の２つの防御系が抵抗している。
【０００３】
先天性免疫応答または適応免疫応答は、これらの微生物に対する認識機構が異なる。先天性免疫では、受容体の特異性が生まれた時から遺伝的に決定されていて、変わらない。これらの受容体は、特定の上皮細胞や内皮細胞、樹状細胞、単球およびマクロファージなどの細胞で発現される。先天性免疫受容体によって認識される総ての構造は、極めて多数の微生物に共通している。適応的免疫応答とは対照的に、先天性免疫応答機構（食作用、抗微生物ペプチドなど）は感染時に活性化され、宿主に侵入する病原体の増殖をほとんど即座に制御する。その後を適応的免疫応答が引き継ぐ。
【０００４】
抗微生物ペプチドは、植物界でも動物界でも見つけられており、昆虫からヒトまで５００種を超える抗微生物ペプチドが発見されている。これらの抗微生物ペプチドは、幅広い種類の微生物（グラム陽性菌および／またはグラム陰性菌、真菌、ウイルス、形質転換細胞）を、それらの細胞膜を透過性にすることにより破壊することができる小分子（１０〜５０個のアミノ酸）である。さらに、これらの抗微生物ペプチドのうちあるものは、それらの化学誘引性から、樹状細胞またはさらにはＴリンパ球など、適応免疫に関与する細胞を動員することができる。多数の抗微生物ペプチドが胎脂や羊水、ならびに新生児の皮膚で見つけられているが、このことは、出生時だけでなく、獲得免疫が未熟である生涯の始まりの時期から、微生物に対する防御にそれらが重要な役割を果たしていることを示唆する。
【０００５】
ほとんどの生物は、幅広い活性域を規定するために、異なる上皮のレベルで数種類の抗微生物ペプチドを合成する。哺乳類では、微生物との接触により生産が誘導される２つの主要なクラスの抗微生物ペプチド、すなわち、カテリシジンとデフェンシンが記載されている。
【０００６】
ヒトカテリシジン（ＬＬ−３７）は、骨髄細胞から初めて単離された。ＬＬ−３７は、主として、ヒト皮膚、爪、ならびに健康な滑膜および炎症を起こした滑膜（とりわけ関節炎に罹患している患者の場合）で発現される。ＬＬ−３７は、幅広い活性域を有し、他の抗微生物ペプチド、とりわけデフェンシンと相乗作用するものと思われる。また、ＬＬ−３７は化学誘引性を有しており、適応免疫細胞を動員することができる。
【０００７】
デフェンシンはそれ自体、二次構造に基づいて、αとβの２つのファミリー、に分けられる。α−デフェンシン（現在分かっているのは６種類）は、主に好中球などの特殊化した細胞の貯蔵顆粒または腸パネート細胞に存在するが、β−デフェンシンの方は上皮組織に特徴的なものである。デフェンシンは、先天性免疫における役割の他、有糸分裂誘発性についても同様に知られており、治癒プロセスに関係している可能性が示唆される。
【０００８】
ヒトでは、現在までに４種類のβ−デフェンシンが確認されている（発明者らのゲノムには、抗微生物ペプチドをコードする遺伝子は２０個以上存在していると考えられている）。ヒトβ−デフェンシン１（ｈＢＤ−１）は、一般に構成的に生産され、肝臓で大半が発現され、膵臓、唾液腺、呼吸器系の上皮、女性の泌尿生殖器系、健康な滑膜、ならびに胎盤でもわずかながら発現される。ｈＢＤ−１はまた皮膚でも発現される。β−デフェンシンの他の種類、ｈＢＤ−２、３および４は誘導性のものである。ｈＢＤ−３は、例えば、関節炎病態のような炎症滑膜で誘導される。ｈＢＤ−２の発現は、これまでのところ、皮膚、泌尿生殖路、汗腺および毛包皮脂腺単位(pilo-sebacic unit)において報告されている。
【０００９】
皮膚では、エラスターゼ／ＳＫＡＬＰ／エラフィンの特異的阻害剤であるアドレノメデュリン、シスタチンなどの他のペプチドまたはタンパク質が抗微生物活性を有すると思われる。最近になって、デルミシジン(dermicidin)（広域活性）が皮膚に特異的な抗微生物ペプチドであると特徴付けられた。この抗微生物ペプチドはエクリン汗腺において生成されると思われ、汗との同時分泌が局部および全身感染に対する先天性的防御系の重要な役割を果たしていると考えられる。初めて、ｈＢＤ−２が乾癬鱗屑において特徴付けられた。ｈＢＤ−２および３ならびにＬＬ−３７の発現は乾癬病変で高まることから、この病態に罹患している患者の感染への抵抗性が高くなることが説明される。一方、アトピー性皮膚炎（慢性病変および発疹性病変）では、アトピーのメディエーターであるインターロイキン−４（ＩＬ−４）とインターロイキン−１３（ＩＬ−１３）の影響を下で、ＬＬ−３７とｈＢＤ−２の発現が低下する。この不全によってアトピー性皮膚炎に罹患している患者の感染に対する感受性の上昇を説明することができる。座瘡では、P acnesの増殖に対する反応としてβ−デフェンシン（ｈＢＤ−１および２）の発現が高まる。さらに、座瘡患者は初期に細菌増殖に関与する抗微生物ペプチドの平衡異常に苦しむが、その代償に細菌が先天性的免疫防御を刺激すると考えられている。
【００１０】
そのため、炎症は抗微生物ペプチドの誘導における主要な因子であると思われる。さらに、インターロイキン−１、ＴＮＦ−α（腫瘍壊死因子α）および紫外線照射がｈＢＤ−２の産生を刺激することも示されている。また、ｈＢＤ−２の発現は、ケラチノサイトの分化状態にも関連している。従って、とりわけデフェンシンファミリー由来の抗微生物ペプチド、より詳しくはｈＢＤ−２の産生が刺激されることで、とりわけ眼および上皮（表皮、膣、腸、鼻腔および耳の粘膜、気道）の先天性免疫の増強および／または回復が可能となる。
【００１１】
口腔は、常に多様な種類の微生物（細菌、ウイルス、真菌）に曝されている。細菌、とりわけ、アクチノバチルス・アクチノミセテムコミタンス(actinobacillus actinomycetemcomitans)、ポルフィロモナス・ギンギバリス(porphyromonas gingivalis)などが、歯周病（歯肉炎および歯周炎）の発症に関与する重要な要因であることはよく知られている。歯肉上皮は、口内環境に存在する種々の病原体に対する第１の防御壁となる。これに関して、歯肉ケラチノサイトで広範な抗微生物ペプチドパネル、ｈＢＤ−１、−２、−３、ＬＬ３７が生産される。また、これらのペプチドは、頬粘膜においてや唾液腺によっても生産される。
【００１２】
より詳しくは、抗微生物ペプチドの刺激によって、一般に免疫が十分でない乳児や小児の健康な皮膚または病的状態の皮膚や、成人の皮膚または健康な、もしくは病的状態の高齢者の皮膚（免疫抑制状態）において先天性免疫の増進および／または回復が可能となる。よって、この刺激により、有利には角質層（角質細胞＋細胞間質）からなる皮膚の受動防御系が完全なものとなり、健康な状態または病的状態の乳児、小児、成人および高齢者において適応免疫応答がもたらされる。また、同時に、瘢痕形成も促進される。
【００１３】
１９１６年にLa Forgeによって同定された最初のケトヘプトースであるＤ−マンノヘプツロースは、一般式（Ｉ）：
【化１】
を有し、特定の植物、特にムラサキウマゴヤシすなわちアルファルファ(Medicago Sativa L.)、アボカド、イチジク(Ficus officinalis L.)およびサクラソウ(Primula officinalis Jacq.)に見られる。しかしながら、Ｄ−マンノヘプツロースの最大含量はアボカドにおいて認められる。Ｄ−マンノヘプツロースは治療用途ですでに使用されている。例えば、特許出願ＷＯ９５／０３８０９には、腫瘍細胞の発達阻害のためのグルコキナーゼ阻害剤としてのＤ−マンノヘプツロースの使用が記載されており、特許出願ＵＳ２００３／００９２６６９には、インスリンレベルを降下することができ、それにより減量を可能にする、Ｄ−マンノヘプツロースを含む経口栄養補助食品が記載されている。
【００１４】
ポリオール型Ｄ−マンノヘプツロースであるペルセイトールは一般式（II）：
【化２】
を有し、これもまたアボカド、特に果実やアボカド核に見られる。
【００１５】
“Search for pharmacochemical leads from tropical rainforest plants”, Hitotaka Shibuya et al. Pure Appl. Chem., vol. 71, no 6, pp 1109-1113, 1999によれば、カリウムイオンと結合したペルセイトールによって、ロイシン−３Ｈをエールリッヒ腹水肉腫の腫瘍細胞に取り込ませることができるとされている。
【００１６】
驚くべきことに、本発明者らは、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールを含んでなる組成物によって、炎症反応、刺激状態または不耐性を誘導することなく、とりわけ、炎症反応の場合に通常発現される分子の分泌を有意に刺激することなく、抗微生物ペプチド、有利にはｈＢＤ−２の増産が可能であることを見出した。
【００１７】
よって、本発明の対象は、カテリシジンファミリーおよび／またはβ−デフェンシンファミリーの抗微生物ペプチド、有利にはｈＢＤ−２の増産により先天性免疫および／または獲得免疫の修飾に関連する疾病を治療および／または予防すること目的とする薬剤または獣医学的組成物の製造のための、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと適当な薬学上許容される賦形剤とを含んでなる化合物の使用である。本発明の範囲において、「修飾」とは、増強または低下を意味する。
【００１８】
本発明はまた、エラスターゼの特異的阻害剤、特にエラフィン（ＳＫＡＬＰ）などの抗微生物ペプチドの増産により先天性免疫および／または獲得免疫の修飾に関連する疾病を治療および／または予防すること目的とする薬剤または獣医学的組成物の製造のための、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと適当な薬学上許容される賦形剤とを含んでなる組成物の使用にも関する。
【００１９】
本発明の薬剤または獣医学的組成物は、有利には、先天性免疫および／または獲得免疫を刺激し、かつ／または完全なものとすることができる。
概して、本発明において、前記疾病は、微生物、とりわけグラム陽性菌および／もしくはグラム陰性菌、真菌、酵母またはウイルスの存在に関連するものであり得る。
【００２０】
より詳しくは、前記疾病は、視覚系および聴覚系、非角化上皮（膣、腸、歯肉、肺、気道、肛門および尿道の粘膜）ならびに皮膚などの角化上皮の感染症であり得る。前記疾病はまた、ファネラ(phanera)または皮膚付属器（毛、爪、汗腺、皮脂腺）の感染症でもあり得る。ゆえに、前記疾病は、毛包炎、せつ、膿瘍、膿痂疹またはひょう疽などの病態であり得る。
前記疾病は、ふけ症などの頭皮の病態、より広くは脂漏過剰に関連する障害であり得る。
【００２１】
前記疾病は、アトピー性皮膚炎などのＴｈ１／Ｔｈ２バランスの修飾に関連する病態であり得る。
前記疾病は、とりわけ、アトピー性皮膚炎の場合、ＩＬ−４および／またはＩＬ−１３などのサイトカインの合成の修飾に関連する病態であり得る。
【００２２】
前記疾病はまた、アトピー性皮膚炎、アトピー性および／または接触性湿疹、乾癬、座瘡ならびに皮膚の刺激状態などの炎症性皮膚疾患でもあり得る。
前記疾病はまた、熱傷、特に第１度および第２度熱傷でもあり得る。
【００２３】
前記疾病はまた、皮膚バリアの欠如に関連する病態でもあり得る。よって、本発明の薬剤は、過敏感反応性の皮膚（敏感皮膚、炎症を起こした皮膚、アレルギー性皮膚）、アトピー性皮膚、乾燥皮膚もしくは老化した皮膚の処置に使用することができる。前記疾病はまた、とりわけ、寒さ、汚染、ストレス、タバコ、日光暴露によって起こる、環境からの攻撃によって弱くなった皮膚に関連する病態でもあり得る。
【００２４】
本発明において、この薬剤はまた、乳児や小児の未成熟な、健康な皮膚または病的状態の皮膚の保護にも好適である。実際に、この薬剤は、一般に免疫が十分でない小児の表皮の先天性防御の強化を可能にする。
【００２５】
本発明において、この薬剤はまた、成人または高齢者、とりわけ免疫抑制状態の人の、健康な皮膚または病的状態の皮膚の保護にも適している。
本発明の薬剤はまた、正常または病的瘢痕形成（潰瘍および痂皮など）のプロセスにおける瘢痕形成の促進にも適している。
【００２６】
本発明において、この薬剤はまた、歯周病、関節炎などの関節の炎症性病態、粘膜感染症、とりわけ膣、腸、呼吸器、鼻腔もしくは耳の粘膜の感染症、または視覚系の感染症の治療および／または予防も目的とする。
【００２７】
本発明の組成物は、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０乾燥重量％のＤ−マンノヘプツロース、さらに有利には０．０１〜２０乾燥重量％、さらに有利には０．０１〜１０乾燥重量％、さらに有利には０．５〜５乾燥重量％のＤ−マンノヘプツロースを含んでなる。本発明の組成物は、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０乾燥重量％のペルセイトール、さらに有利には０．０１〜２０乾燥重量％、さらに有利には０．０１〜１０乾燥重量％、さらに有利には０．５〜５乾燥重量％のペルセイトールを含んでなる。本発明において、「Ｄ−マンノヘプツロース」および「ペルセイトール」には、それらの化学的誘導体も含む。
【００２８】
Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールの供給源は、アボカドまたは別の植物由来の糖の水溶性抽出物であり得る。また、Ｄ−マンノヘプツロースおよびペルセイトールは、商業的にも入手可能である（合成源）。本発明の有利な変形形態によれば、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールの供給源はアボカド由来の糖の水溶性抽出物である。
【００２９】
アボカド由来の糖の水溶性抽出物は、果実、果皮、核、アボカドの樹の葉または根など、アボカドまたはアボカドの樹のいずれの部分からでも直接得ることができる。また、アボカド変換工業の副産物からペプチド抽出物を得ることもでき、中でも、限定されるものではないが、アボカド生果果肉、冷凍果肉、脱水果肉、オイル抽出工程（予め脱水した果実の機械的抽出および／または溶媒抽出）から得られるアボカドオイルケーク、湿式オイル抽出工程（遠心分離工程）から得られる脱油固体、アボカドの酵素的抽出工程から得られる脱油固体、生のアボカドマッシュ（グアカモーレ）、これらのマッシュの製造ユニットから得られる固形廃棄物が挙げられる。抽出物はアボカドの樹の生果から得るのが有利である。果実はハス種(Hass)、フェルテ種(Fuerte)、エッチンジャー種(Ettinger)、ベーコン種(Bacon)、ナバル種(Nabal)、アナハイム種(Anaheim)種、ルラ種(Lula)、リード種(Reed)、ズタノ種(Zutano)、クィーン種(Queen)、クリオラ・セルバ種(Criola Selva)、メキシカナ・カンタ種(Mexicana Canta)、チャン地方種(Region Dschang)、ハル種(Hall)、ブース種(Booth)、パターソン種(Peterson)およびコリンソン・レッド種(Collinson Redn)、より有利にはハス種、フェルテ種およびリード種から選択することができる。ハス種、フェルテ種、エッチンジャー種およびベーコン種が好ましく、ハス種およびフェルテ種が最も好ましい。
【００３０】
アボカド果実は、主として水分、果肉、オイルおよび核種で構成される。あらゆる天然植物産物の場合と同様、これらの構成要素の割合は極めて多様である。しかしながら、一般には、表１に示される数値（生果のパーセンテージで示す）が平均組成と見られる。
【００３１】
【表１】
【００３２】
実際、アボカドに多糖が特に多く含まれているというわけではない。しかしながら、ペルセイトールまたは７個の炭素原子で構成されるＤ−マンノヘプツロースなどの可溶性単糖の性質は極めて特殊なものである。
【００３３】
アボカド由来の糖類の水溶性抽出物は、以下の一連の工程：
−有利にはアボカド果実から、アボカドを乾燥させた後に脂質（オイル）を抽出することによりアボカドオイルケークを得る工程；その後
−前記オイルケークを低温粉砕し、完全脱脂した後、デカントし、遠心分離して、Ｃ７糖に富んだ可溶性画分を回収する（ケークの除去）工程；
−前記工程から得られた前記可溶性画分をイオン樹脂で脱塩する工程；その後
−１００００ダルトンの限外濾過を行う工程、および
−所望により、真空下で濃縮し、パッケージングする工程
を含む方法により得ることができる。
【００３４】
この方法の第１段階は、果実を乾燥させることと、その後、オイルを抽出することからなる。果実をスライスして薄片とした後、当業者に公知の技術のいずれかによりそれを乾燥させることができる。それらの技術としては、熱風乾燥、凍結乾燥、または場合によっては浸透乾燥が挙げられる。一般に、温度は、使用する技術に関わらず、この乾燥工程中は８０℃以下に維持することが有利である。本方法においては、適用の容易さとコスト的な理由で、薄膜として、熱気流下、７０℃〜７５℃間の温度での換気乾燥機での乾燥が好ましい。実施は、５時間〜７２時間の間で様々であってよい。
【００３５】
乾燥させた果実の脂質を、その後、連続スクリュープレスで機械的に抽出するか、あるいは、とりわけ特許出願ＦＲ２８４３０２７に記載されている方法に従うか、または超臨界ＣＯ２を利用する方法により、ヘキサンなどの溶媒を用いて、ソックスレー抽出装置(soxhelet extractor)か、もしくはデスメット(de Smet)（登録商標）型の連続バンド抽出装置で化学的に抽出する。この方法の主に重要な点として、オイル副産物が明らかに商品価値のある産物となっているということがある。これが脂質を機械抽出する方が好ましい理由である。乾燥および脱油を行った果実（オイルケークとも呼ばれる）に対して以下の工程：
−低温粉砕、
−特にアセトンおよび／またはエタノールでの完全脱脂、
−デカンテーション、その後のオイルケークの水による洗浄、
−遠心分離、可溶性画分の回収（ケークの除去）、
−イオン交換による脱塩、
−サイズ閾値１０ｋＤでの限外濾過、
−真空下での濃縮、保存剤の添加およびパッケージング
を行うことができる。
【００３６】
一般に、最終的な水性抽出物は、０．１〜１０重量％の乾燥体、有利には１〜７重量％の乾燥体、より有利には３〜５重量％の乾燥体を含み得る。乾燥体中のＣ７糖含量、すなわち、Ｄ−マンノヘプツロースとペルセイトールは、有利には総乾燥体重量に対して６５〜９０重量％である。上記の方法によって得られた５％乾燥抽出物を含む水溶液の平均分析データを表２に示す。
【００３７】
【表２】
【００３８】
水溶性抽出物中の糖類の相対濃度（抽出物中の総乾燥体重量に対する重量）は、有利には以下の基準（ＨＰＬＣ、高速液体クロマトグラフィーによって決定された相対組成)に従う。
−Ｄ−マンノヘプツロース ５〜８０％
−ペルセイトール ５〜８０％
−サッカロース １０％未満
−グルコース １０％未満
−フルクトース １０％未満
【００３９】
アボカド糖類の水溶性抽出物は、有利には総乾燥体重量に対して１０〜８０重量％のＤ−マンノヘプツロース、より有利には１５〜７０重量％のＤ−マンノヘプツロースを含む。アボカド糖類の水溶性抽出物は、有利には総乾燥体重量に対して２０〜８０重量％のペルセイトール、より有利には２５〜７０％重量％のペルセイトールを含む。
【００４０】
好ましくは、水溶性抽出物中の糖類の相対組成（抽出物中の総乾燥体重量に対する重量）は、以下の基準（ＨＰＬＣによって決定された相対組成）に従う。
−Ｄ−マンノヘプツロース ２５〜６０％
−ペルセイトール ２５〜６０％
−サッカロース １０％未満
−グルコース １０％未満
−フルクトース １０％未満
驚くべきことに、本発明者らは、アボカド糖類の抽出物中に存在しているＤ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと少量の糖類（フルクトース、グルコース、サッカロース）との間の相乗作用を観察した。
【００４１】
所望により、得られた抽出物を凍結乾燥して、完全に溶解する固体粉末（乾燥抽出物）を得てもよい。
本発明の有利な変形形態によれば、組成物は、アボカドのペプチド抽出物を、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０乾燥重量％、より有利には０．０１〜２０乾燥重量％、より有利には０．１〜１５乾燥重量％、より有利には０．５〜１０乾燥重量％、より有利には０．７〜８乾燥重量％、より有利には１〜５乾燥重量％の割合でさらに含んでなる。その際に相乗作用が認められることが有利である。
【００４２】
本発明の組成物に添加されるアボカドのペプチド抽出物は、有利にはペプチド抽出物の乾燥体重量に対して２〜１０重量％のα−アミン窒素を含んでなる。本発明において、「α−アミン窒素」とは、遊離α−アミン基の形態にあるペプチドの窒素含量のことを意味すると理解される。ペプチド中のα−アミン窒素含量から、タンパク質の加水分解度ならびにペプチドの平均分子量が推定可能である。
【００４３】
より詳しくは、アボカドのペプチド抽出物は、以下の工程：
−有利にはアボカド果実から、アボカドを乾燥させた後、脂質を抽出することによりアボカドオイルケークを得る工程、その後
−前記オイルケークの低温粉砕と完全脱脂を行った後、そのケークのデカンテーション、遠心分離、および回収を行う工程、その後
−グルカナーゼの存在下で第一の加水分解を行った後、遠心分離して可溶性画分を除去する工程；
−１種または数種のプロテアーゼの存在下で第二の加水分解を行った後、遠心分離して沈殿を除去する工程；
−ナノフィルトレーションによりペプチド相を濃縮する工程；
−例えば活性炭の存在下で脱色し、単純濾過（１０μｍ）を行った後、限外濾過（カットオフ限界１０ｋＤ）を行う工程；最後に
−所望により、最終の除菌マイクロフィルトレーション（０．２μｍ）を行い、保存剤を添加し、パッケージングする工程
を含む方法によって得られ得る。
【００４４】
アボカドのオイルケークを得る方法と脂質の抽出は、アボカドのペプチド抽出物およびアボカドの糖類の場合と同様に行うことが有利である。その後、乾燥および脱油を行った果実（オイルケークとも呼ばれる）に対して以下の工程：
−低温粉砕する工程
−特にアセトンおよび／またはエタノールを用いて完全脱脂する工程、
−デカントした後、オイルケークを水で洗浄する工程、
−遠心分離し、ケークを回収する工程、
−１種または複数のグルカナーゼの存在下で第１の加水分解を行う工程、
−遠心分離し、可溶性画分の除去を行う工程、
−１種または複数のプロテアーゼの存在下で第２の加水分解を行う工程、
−遠心分離し、残渣の除去を行う工程、
−ナノフィルトレーションにより濃縮する工程、
−とりわけ活性炭の存在下で脱色を行う工程、
−単純濾過（１０μｍ）の後、限外濾過（カットオフ限界１０ｋＤ）を行う工程、
−充填し、保存剤を添加する工程、
−最終の除菌マイクロフィルトレーション（０．２μｍ）を行う工程、
−保存剤を添加し、パッケージングする工程
を実施することができる。
【００４５】
最終的な水性抽出物は、１〜６０重量％の乾燥体、場合によっては３〜２０重量％の乾燥体、好ましくは５〜６重量％の乾燥体を含み得る。所望により、得られた抽出物を凍結乾燥して、固体粉末（乾燥抽出物）を得ることもできるが、アボカドの最初のタンパク質に関しては完全水溶性ではない。α−アミン窒素含量は、乾燥体の重量に対して２〜１０重量％、好ましくは５〜７重量％であり得る。乾燥体の重量に対して１．２重量％の乾燥抽出物を含有する水溶液のｐＨは、一般に３〜６、より有利には４〜５となる。
【００４６】
本発明の有利な変形形態によれば、組成物は、ルピナスのペプチド抽出物を、組成物の総重量に対して、０．００１〜３０重量％の乾燥体、さらに有利には０．０１〜１０重量％の乾燥体の量でさらに含むことが有利である。本発明の組成物に添加されるルピナスのペプチド抽出物は、ペプチド抽出物の乾燥体重量に対して少なくとも７０％、有利には少なくとも８０重量％のペプチドを含んでなる。その際に相乗作用が認められることが有利である。
【００４７】
特に、ルピナスのペプチド抽出物は、以下の工程：
−粉砕したルピナスのオイルケークまたはルピナスの微粉末を製造する工程；
−次に、溶媒抽出により脱脂する工程；
−可溶性のタンパク質画分とその配糖体画分を抽出するか、またはタンパク質を等電点で析出させる工程；
−必要であれば、タンパク質画分を分離する工程；
−タンパク質画分を酵素により加水分解し、場合によって濾過を行った後、ペプチド抽出物を回収する工程
を含む方法により得られる。
ペプチド抽出物を調製する方法は、Expanscience laboratoriesにより提出された仏国特許出願ＦＲ２７９２２０２に記載されている。
【００４８】
さらに、本組成物は、皮膚軟化剤、水和剤、ケラチン合成の活性化剤、ケラトレギュレーター(keratoregulators)、角質溶解剤、皮膚バリア再構築剤（皮膚脂質合成活性化剤、ＰＰＡＲアゴニストまたはペルオキシソーム増殖剤応答性受容体(Peroxysome Proliferator Activated Receptor)）、ケラチノサイト分化活性化剤（レチノイド、calcidone（登録商標）、カルシウム）、抗生物質、抗菌薬、殺真菌薬、抗ウイルス薬、セボレギュレーター(sebo-regulators)（例えば、５−αレダクターゼ阻害剤、特にles laboratoires Expanscienceにより市販されている、活性型５−α Avocuta（登録商標）など）、免疫調節剤（タクロリムス、ピメクロリムス、オキサゾリンなど）、保存剤、抗そう痒薬、無痛化剤、サンフィルターおよびサンスクリーン、抗酸化剤、増殖因子、治癒薬または栄養分子、薬剤および抗炎症薬、ならびに植物油不鹸化物を含んでなる化合物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物を含み得る。
【００４９】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能なケラチン合成活性化剤は、有利にはレチノイド、ルピナスのペプチド（Silab社により市販）、角質層または顆粒層の重要なタンパク質（ケラチン）である。
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能な抗生物質は、有利にはフシジン酸(fucidic acid)、ペニシリン、テトラサイクリン、プリスチナマイシン(pristinamycine)、エリスロマイシン(erythromycine)、クリンダマイシン(clindamycine)、ムピロシン、ミノサイクリン、ドキシサイクリンである。本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能な抗ウイルス薬は、有利にはアシクロビルおよびバラシクロビルである。本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能な抗そう痒薬は、有利にはグリシン、ルピナスの糖類および／またはペプチド、シクロセラミド（登録商標）（オキサゾリン誘導体）である。
【００５０】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能な無痛化剤は、有利にはαビサボロール、甘草誘導体である。本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能なケラトレギュレーターは、有利にはαヒドロキシ酸およびそれらの誘導体である。本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能な角質溶解剤は、特にサリチル酸およびその誘導体である。本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能な抗酸化剤は、有利にはビタミン（Ｃ、Ｅ）、微量元素（銅、亜鉛、セレン）である。本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能な増殖因子は、有利にはベカプレルミンおよびＴＧＦ−β（形質転換増殖因子β）である。
【００５１】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能な治癒薬は、有利にはビタミンＡ、パンテノール、Avocadofurane（登録商標）、酸化亜鉛、酸化マグネシウム、酸化ケイ素、マデカシン酸またはアシアチン酸である。
【００５２】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能な薬剤は、有利にはアトピー(atopis)（コルチコイド、皮膚軟化剤）、座瘡（抗生物質、過酸化ベンゾイル、レチノイド、アゼライン酸、ビタミンＰＰ、亜鉛、サイクリン）、湿疹（免疫調節剤、皮膚軟化剤、サーモン油、ルリヂサ油、プレバイオティクス）、乾癬（コルチコイド、カルシポトリオール、カルシトリオール、タザロテン、ジュニパータール油、アシトレチン(acitretine)、ＰＵＶＡ療法）の予防および／または処置のための、局所投与または経口投与に適した薬剤である。本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールとの併用が可能な抗炎症薬は、有利にはコルチコイドなどのステロイド系抗炎症薬（ＡＩＳ）または非ステロイド系抗炎症薬である。
【００５３】
本発明において、表皮の重要な脂質の合成を刺激することを可能とし、かつ、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと、有利には相乗作用を伴って併用が可能な皮膚バリア再構築剤は、有利にはヒマワリのリノール酸濃縮物（Laboratoires Expanscienceから市販されている薬剤Soline（登録商標）など）（国際特許出願ＷＯ０１／２１１５０参照）、植物油不鹸化物（Avocadofurane（登録商標）など）（国際特許出願ＷＯ０１／２１１５０参照）、アゴニストＰＰＡＲ（ロシグリタゾン、ピオグリタゾン）である。これらの再構築剤は、有利には組成物または薬剤の総重量に対して０．００１〜３０重量％の割合で存在する。本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールとの併用が可能な抗真菌薬は、有利にはエコナゾールおよびケトコナゾールである。
【００５４】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールとの併用が可能な抗菌保存剤は、例えば、トリクロサン、クロルヘキシジン、第四級アンモニウムである。本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと、有利には相乗作用を伴って併用が可能な免疫調節剤は、有利にはタクロリムス、ピメクロリムスおよびオキサゾリンである。
【００５５】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと、有利には相乗作用を伴って併用が可能なオキサゾリンは、有利には２−ウンデシル−４−ヒドロキシメチル−４−メチル−１，３−オキサゾリン、２−ウンデシル−４，４−ジメチル−１，３−オキサゾリン、（Ｅ）−４，４−ジメチル−２−ヘプタデク−８−エニル−１，３−オキサゾリン、４−ヒドロキシメチル−４−メチル−２−ヘプタデシル−１，３−オキサゾリン、（Ｅ）−４−ヒドロキシメチル−４−メチル−２−ヘプタデク−８−エニル−１，３−オキサゾリン、２−ウンデシル−４−エチル−４−ヒドロキシメチル−１，３−オキサゾリンからなる群から選択されるオキサゾリンである。さらに有利には、前記オキサゾリンが２−ウンデシル−４，４−ジメチル−１，３−オキサゾリン（ＯＸ−１００またはシクロセラミド（登録商標）と呼ばれる）である。
【００５６】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと、有利には相乗作用を伴って併用が可能な植物油不鹸化物を含んでなる化合物は、有利にはアボカドのフラン脂質、アボカドおよびダイズの不鹸化物、ルピナス油の濃縮物、ヒマワリ油の濃縮物ならびにそれらの混合物からなる群から選択される。
【００５７】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと、有利には相乗作用を伴って併用が可能なアボカドのフラン脂質は、有利には天然２−アルキルフラン、特にLaboratoires Expanscienceから市販されているAvocadofurane（登録商標）（国際特許出願ＷＯ０１／２１６０５に記載されている方法によって得ることができる）である。
【００５８】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと、有利には相乗作用を伴って併用が可能なアボカドおよびダイズの不鹸化物は、有利にはアボカドのフラン不鹸化物とダイズの不鹸化物の約１／３〜２／３の割合での混合物である。アボカドおよびダイズの不鹸化物は、さらに有利にはLaboratories Expanscienceから市販されている製品Piascledine（登録商標）である。
【００５９】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと、有利には相乗作用を伴って併用が可能なルピナス油の濃縮物は、有利にはルピナス油、有利には国際特許出願ＷＯ９８／４７４７９に記載されているものなどの、ハウチワマメ(sweet white lupine)油、の分子蒸留によって得られる濃縮物である。それらは約６０重量％の不鹸化物を含んでいるのが有利である。
【００６０】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと、有利には相乗作用を伴って併用が可能なヒマワリ油の濃縮物は、有利には、Laboratoires Expanscienceから市販されている有効成分Soline（登録商標）（国際特許出願ＷＯ０１／２１１５０参照）などのヒマワリ油のリノール酸濃縮物である。
【００６１】
本発明の組成物は、局所投与に、また、経口投与、直腸投与、膣投与、鼻腔投与、耳内投与または気管支投与から非経口投与までに適した種々の製剤の形態に処方することができる。これらの種々の製剤は局所投与に適していることが好ましく、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤、オイル剤、パッチ剤、スプレー剤または他のあらゆる外用薬が挙げられる。本発明の化合物および組成物の投与様式、薬量学ならびに最適な剤形は、特に、患者または動物に適した皮膚科的または獣医学的(veterinarial)薬剤処置の確立を一般に検討する判定基準（例えば、患者または動物の齢および体重、全身状態の重大性、処置に対する許容度、副作用および皮膚のタイプなど）に従って決定することができる。所望の投与形に応じて、本発明の組成物および／または有効化合物はまた、少なくとも１種類の薬学上、特に皮膚科的に許容される賦形剤も含み得る。外用局所投与に適した賦形剤を使用するのが好ましい。本発明の組成物は、当業者には公知である、増粘剤、保存剤、香料、着色剤、ミネラルフィルターまたは薬液用フィルター、保湿剤、鉱水などから選択される少なくとも１種類の補助剤をさらに含み得る。
【００６２】
本発明はまた、薬剤の総重量に対して０．００１〜３０重量％のＤ−マンノヘプツロースおよび０．００１〜３０重量％のペルセイトール、さらに有利には０．０１〜１０重量％のＤ−マンノヘプツロースおよび０．０１〜１０重量％のペルセイトールと薬学上適当な賦形剤とを含んでなる薬剤または獣医学的組成物に関する。
【００６３】
本発明の薬剤または獣医学的組成物は、局所投与に、また、経口投与、直腸投与、膣投与、鼻腔投与、耳内投与または気管支投与に、また、非経口投与に適した種々の製剤の形態に処方することができる。本発明の薬剤または獣医学的組成物の投与様式、薬量学および最適な剤形は、特に、患者に適した皮膚科的薬剤処置または獣医学的処置の確立を一般に検討する判定基準に従って決定することができる。
【００６４】
本発明はまた、組成物の総重量に対して０．００１〜３０重量％のペルセイトールおよび０．００１〜３０重量％のＤ−マンノヘプツロース、さらに有利には０．０１〜１０重量％のペルセイトールおよび０．０１〜１０重量％のＤ−マンノヘプツロースを含んでなる美容組成物に関する。本発明の有利な変形形態によれば、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールの供給源はアボカド由来の糖の水溶性抽出物であり、これは上記のような方法によって得ることができる。実際には、アボカドのＤ−マンノヘプツロース、ペルセイトールおよび微量糖（フルクトース、グルコース、サッカロース）の間の相乗作用が存在する。
【００６５】
本発明の有利な変形形態によれば、組成物はさらに、アボカドのペプチド抽出物を、有利には相乗作用量で含んでなる。アボカドのペプチド抽出物は、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０乾燥重量％、より有利には０．０１〜１０乾燥重量％の量で存在する。本発明の組成物に添加されるアボカドのペプチド抽出物は、有利にはペプチド抽出物の乾燥体重に対して２〜１０重量％のα−アミン窒素を含んでなる。このペプチド抽出物は上記のような方法によって得ることができる。
【００６６】
本発明の有利な変形形態によれば、組成物はさらに、ルピナスのペプチド抽出物を、有利には相乗作用量で含んでなる。ルピナスのペプチド抽出物は、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０乾燥重量％、より有利には０．１〜１０乾燥重量％の量で存在する。本発明の組成物に添加されるルピナスのペプチド抽出物は、ペプチド抽出物の乾燥体重量に対して少なくとも７０重量％、有利には少なくとも８０重量％のペプチドを含んでなる。このペプチド抽出物は上記のような方法によって得ることができる。
【００６７】
さらに、組成物は、皮膚バリア再構築剤および上記のような植物油不鹸化物含有化合物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物を、有利には相乗作用量で含み得る。特に、美容組成物は、Laboratoires Expanscienceから市販されているSoline（登録商標）、Avocadofurane（登録商標）およびpiascledine（登録商標）からなる群から選択される有効成分を含み得る。本発明の組成物は、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０重量％の少なくとも１種類の皮膚バリア再構築剤を含んでなる。
【００６８】
本発明の化粧料組成物は、局所投与に、また、経口または直腸投与、膣投与、尿道投与、耳内投与、鼻腔投与もしくは気管支投与に適した種々の製剤の形態に処方することができる。これらの種々の製剤は局所投与に適していることが好ましく、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤、オイル剤、パッチ剤、スプレー剤または他のあらゆる外用薬が挙げられる。所望の投与形に応じて、本発明の組成物および／または有効化合物は、少なくとも１種類の化粧料的に許容される賦形剤も含み得る。本発明の化粧料組成物はさらに、当業者には公知である、増粘剤、保存剤、香料、着色剤、ミネラルフィルターまたは薬液用フィルター、保湿剤、鉱水などから選択される少なくとも１種類の美容補助剤を含み得る。
【００６９】
本発明はまた、環境の攻撃によって弱くなった皮膚バリアの障害を呈し、皮膚の発赤を示しているか、または非病的免疫平衡異常を示している、敏感、炎症を起こした、アレルギー性、乾燥、老化した、不耐性皮膚および／または粘膜の美容的処置法であって、本発明の組成物を皮膚および／または粘膜に塗布することからなることを特徴とする方法にも関する。
【００７０】
最後に、本発明は、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと食用に適した許容される賦形剤を含んでなる栄養補給用組成物に関する。本発明の栄養補給用組成物は、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０重量％のＤ−マンノヘプツロース、さらに有利には０．０１〜１０重量％のＤ−マンノヘプツロースを含んでなる。本発明の栄養補給用組成物は、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０重量％のペルセイトール、さらに有利には０．０１〜１０重量％のペルセイトールを含んでなる。本発明の栄養補給用組成物は、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０重量％のペルセイトールと０．００１〜３０重量％のＤ−マンノヘプツロース、さらに有利には０．０１〜１０重量％のペルセイトールと０．０１〜１０重量％のＤ−マンノヘプツロースを含んでなる。本発明の有利な変形形態によれば、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールの供給源は、アボカド由来の糖の水溶性抽出物であり、これは上記のような方法によって得ることができる。
【００７１】
本発明の有利な変形形態によれば、組成物はさらに、アボカドのペプチド抽出物を、有利には相乗作用量で、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０％の乾燥体量で含んでなる。本発明の組成物に添加されるアボカドのペプチド抽出物は、有利にはペプチド抽出物の乾燥体重量に対して２〜１０重量％のα−アミン窒素を含んでなる。このペプチド抽出物は上記のような方法によって得ることができる。
【００７２】
本発明の有利な変形形態によれば、組成物はさらに、ルピナスのペプチド抽出物を、有利には相乗作用量で、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０％の乾燥体量で含んでなる。本発明の組成物に添加されるルピナスのペプチド抽出物は、ペプチド抽出物の乾燥体重量に対して少なくとも７０重量％、有利には少なくとも８０重量％のペプチドを含んでなる。このペプチド抽出物は上記のような方法によって得ることができる。
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明を何ら限定するものではない。
【実施例】
【００７３】
実施例１：アボカド由来の糖の水溶性抽出物の調製
ハス種のアボカド生果５０ｋｇを、核を含め、ディスクスライサーにより２〜５ｍｍの厚さに薄切りにした。乾燥装置は温度調節式熱風炉であった。薄切りにしたアボカドを段状のラックに４〜５ｃｍの厚さで並べた。乾燥温度は８０℃に設定し、乾燥時間は４８時間とした。乾燥させたところで、果実を冷圧した。この操作はsmall Komet（登録商標） laboratory pressを用いて行った。
【００７４】
次に、この脱脂した果実（オイルケーク）４ｋｇを低温粉砕した後、エタノール２５リットルの存在下で還流させながら抽出した。この脂質を除いた粉末を、次に、ブフナー漏斗で濾過することにより回収し、炉内で５０℃にて５時間乾燥させた。
【００７５】
次に、オイルケークを脱塩水（１０リットル）で洗浄した後、遠心分離により分離した。この可溶性画分（液体）を精製のために取り、それを以下の方法に従って濃縮した。
・イオン交換樹脂による脱塩：
ＯＨ−樹脂に通した後、Ｈ＋樹脂に通すことによるヘプツロースの脱塩
・１００００Ｄａでの限外濾過：限外濾過は、カットオフ閾値１０ｋＤａの４つのメンブランを備えた系を用いて実施した。
【００７６】
・真空濃縮：精製した抽出物をエバポレーターにより乾燥体レベル４％まで真空濃縮する。
・パッケージング：抽出物の濃度を乾燥体５％に調整し、保存剤を添加した後、それを、閾値０．２μｍのメンブランを用いて無菌条件下で濾過し、パッケージングする。
表３は、上記方法に従って調製された、アボカド由来のＣ７糖における抽出物（乾燥体５％）の組成を示す。
【００７７】
【表３】
【００７８】
他の２つの抽出物も同じ方法に従って調製し、そのｐＨ、吸光度およびＣ７糖含量を下表４に示す。Ｃ７糖含量は、ＨＰＬＣにより分析したペルセイトールとＤ−マンノヘプツロースの合計に相当する。
【００７９】
【表４】
【００８０】
実施例２：アボカドのペプチド抽出物の調製
ハス種のアボカド生果５０ｋｇを、核を含め、ディスクスライサーにより２〜５ｍｍの厚さに薄切りにした。乾燥装置は温度調節式熱風炉であった。薄切りにしたアボカドを段状のラックに４〜５ｃｍの厚さで並べた。乾燥温度は８０℃に設定し、乾燥時間は４８時間とした。乾燥させたところで、果実を冷圧した。この操作はsmall Komet（登録商標） laboratory pressを用いて行った。次に、この脱脂した果実（オイルケーク）４ｋｇを低温粉砕した後、エタノール２５リットルの存在下で還流させながら抽出した。この脂質を除いた粉末を、次に、ブフナー漏斗で濾過することにより回収し、炉内で５０℃にて５時間乾燥させた。 次に、このオイルケークを脱塩水（１０リットル）で洗浄した後、遠心分離により分離した。固形画分を水溶液に取り、ＨＣｌでｐＨ５まで酸性化し、その後、乾燥体に対して２％セルラーゼと接触させた。加水分解時間は６時間とした。
【００８１】
次に、この混合物を補助剤（２．５重量％／ｖ）の存在下で遠心分離した。その後、回収した沈渣に対して、０．５％Ａｌｃａｌａｓｅ（登録商標）（プロテアーゼ種に由来する市販の酵素）の存在下、ｐＨ値８．０、温度５５℃で２時間、第二の加水分解を行った。加水分解は、２Ｍ水酸化ナトリウムを継続的に添加することにより一定のｐＨ値に維持した。最後に、８５℃で１０分間加熱することによりプロテアーゼを変性させた。
【００８２】
得られた混合物を遠心分離し、上清液を７．５μｍのメンブランで濾過した。その後、カットオフ１０ｋＤのメンブランで限外濾過を行った。
得られた乾燥体２０％の粗ペプチド抽出物を、１％活性炭Ｎｏｒｉｔ（登録商標）の存在下で脱色した後、再び７．５μｍのメンブランで濾過した。次に、この脱色された抽出物のマイクロフィルトレーション（０．２μｍ）を行い、乾燥体濃度５％に希釈した後、保存剤を添加し（Ｐｈｅｎｏｎｉｐ（登録商標）０．４重量％／ｖ）最後に生成物をパッケージングした。本方法により得られたアボカドの水溶性ペプチド抽出物（乾燥体５％）の特性を下表５に示す。
【００８３】
【表５】
他の抽出物も同じ方法に従って調製し、その分析データを下表６に示す。
【００８４】
【表６】
【００８５】
１Ｎ×６．２５は、サンプルの総窒素（Ｎ）量に、分析するタンパク質に特異な係数を掛けたものである。分析タンパク質に関する係数が正確に分からない場合は、便宜上、係数６．２５を使用する。
【００８６】
下表７に示すアミノグラムでは、値は分析したアミノ酸の総重量に対する重量％で示す。
アスパラギン酸およびグルタミン酸の値には、それぞれアスパラギン含量およびグルタミン含量も含む。
【００８７】
【表７】
【００８８】
実施例３〜７では、特に断りのない限り、パーセンテージは乾燥体の総重量に対する重量で示す。
【００８９】
実施例３：アボカドの糖類によるβ−デフェンシン−２の誘導
Ｉ．細胞の接種（Ｊ０）：
これまでに刊行物"Human β-Defensin-2 production in Keratinocytes is regulated by Interleukin-1, Bacteria, and the State of Differentiation”, Alice Y. Liu et al,, The Society for Investigative Dermatology, vol. 118, No. 2, Feb. 2002, pages 275 to 281に記載されているように、健常なヒトのケラチノサイトを、９６ウェルプレート(plaque)中、カルシウム豊富な（終濃度１．３ｍＭ）な特殊な培地の存在下に接種した（約２００００細胞／ウェル）。
II．細胞の処理（ＪＩ）：
３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間インキュベーションした後、
→２００μｌ／ウェルのＰＢＳ（生理食塩水中、リン酸バッファー）で２回すすぎ、
→細胞を以下のもの２００μｌ／ウェル（Ｃａ＋＋添加培地中）によって刺激する。
・乾燥体濃度０．５、０．０５および０．００５ｗ／ｗのアボカド糖類水溶性抽出物
・１００ｎｇ／ｍｌ濃度のＩＬ−１β（ｈＢＤ−２の誘導の陽性対照）
III．処理の終了（Ｊ２）：ＥＬＩＳＡ
インキュベーション２４時間後、ｈＢＤ−２の誘導を、特異的抗体（ヒトＢＤ２に対するヤギポリクローナル抗体；Ａｂｃａｍ；ａｂ９８７１）を用いてＥＬＩＳＡ法により評価した。
乾燥重量に対して４０％のＤ−マンノヘプツロースと４０％のペルセイトールを含むアボカド糖類水溶性抽出物バッチＡで得られた結果を下表８にまとめる。
【００９０】
【表８】
ｈＢＤ−２の生産量は本発明のアボカド糖類水溶性抽出物バッチＡにより上昇することが認められた。
【００９１】
乾燥重量に対して１０％のＤ−マンノヘプツロースと７０％のペルセイトールを含むバッチＢで得られた結果を下表９にまとめる。
ＯＤ＝光学濃度
【００９２】
【表９】
ｈＢＤ−２の生産はアボカド糖類水溶性抽出物バッチＢにより用量依存的に上昇することが認められた。
【００９３】
実施例４：上皮細胞におけるｈＢＤ−２の発現に対するアボカドの糖の効果
１．細胞
口腔研究で一般に用いられているヒト口腔癌由来の上皮細胞系統であるＫＢ細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ−１７）を９６ウェルプレートに接種し、１０％ＶＦＳ（ウシ胎児血清）＋抗生物質のＧｌｕｔａｍａｘ（商標）１を含むＲＰＭＩ１６４０(Roswell Park Memorial Institute Medium)中で培養した。
２．処理
インキュベーション２４時間後、培養培地を除去し、細胞層をＰＢＳで２回すすいだ。
次に、これらの細胞を上記で定義した条件下で２４時間および４８時間処理した。
・対照細胞：培地のみ
・ＴＮＦα（Ｓｉｇｍａから市販されている）１００ｎｇ／ｍｌ
・アボカド糖水溶性抽出物（４０％Ｄ−マンノヘプツロース／４０％ペルセイトール）０．００５〜０．０５および０．５ｗ／ｗ（乾燥体の）（バッチＡ）
３．処理の終了
・細胞に対するＥＬＩＳＡによる抗微生物ペプチドの分析
種々の処理条件下で４８時間インキュベーションした後、ＫＢ細胞内に存在するβ−デフェンシン−２および３ならびにＬＬ−３７を細胞に対するＥＬＩＳＡ法により分析した。
各ウェルの細胞総数を求めるため、同じ条件下で処理した細胞に対し、並行してＭＴＴによる試験を行った。
【００９４】
・結果の有用性
各処理条件について、ＯＤ４５０ ＡＭＰ（抗微生物ペプチド）をＯＤ５７０ ＭＴＴで割り、生細胞１個当たりに生産されたＡＭＰの量を算出した。
各条件について平均値と標準偏差を算出し、種々のＡＭＰの誘導を、対照細胞に対する増加率％として算出した。
【００９５】
４．結果
ＨＢＤ−２の誘導
ここでＡＭＰの誘導の陽性対照として用いたＴＮＦ−αは、４８時間の時点でＫＢ細胞によるｈＢＤ−２生産に２３９％という有意な増加を生じさせる。アボカド糖水溶性抽出物もまた、ＫＢ細胞におけるｈＢＤ−２の生産に統計学的に有意な増加をもたらす（表１０の結果を参照）。
【００９６】
【表１０】
【００９７】
ＨＢＤ−３の誘導
ここでＡＭＰの誘導の陽性対照として用いたＴＮＦ−αは、４８時間の時点でＫＢ細胞によるｈＢＤ−３生産に３０％という有意な増加を生じさせる。この試験によりこのモデルを立証する。アボカド糖水溶性抽出物もまた、ＫＢ細胞におけるｈＢＤ−３の生産に統計学的に有意な増加をもたらす（表１１の結果を参照）。
【表１１】
ＬＬ−３７の誘導
ここでＡＭＰの誘導の陽性対照として用いたＴＮＦ−αは、４８時間の時点でＫＢ細胞によるＬＬ−３７生産に８８％という有意な増加を生じさせる。この試験によりこのモデルを立証する。アボカド糖水溶性抽出物もまた、ＫＢ細胞におけるＬＬ−３７の生産に統計学的に有意な増加をもたらす（表１２の結果を参照）。
【００９８】
【表１２】
【００９９】
結果として、アボカド糖（アボカド糖水溶性抽出物）は、ＫＢ型の上皮細胞において抗微生物ペプチド、とりわけｈＢＤ−２、−３およびＬＬ−３７の合成を誘導することができることが示された。
【０１００】
実施例５：炎症性分子に対するアボカド糖の作用
方法：
健常なヒトのケラチノサイトを、これまでに刊行物"Human β-Defensin-2 production in Keratinocytes is regulated by Interleukin-1, Bacteria, and the State of Differentiation”, Alice Y. Liu et al., The Society for Investigative Dermatology, vol. 118, No, 2, Feb. 2002, pages 275-281に記載されているように、２４ウェルプレート中、カルシウム豊富な（終濃度１．３ｍＭ）な特殊な培地の存在下に接種した（約５００００細胞／ウェル）。
【０１０１】
これらの細胞を０．０５％ｗ／ｗのアボカド糖（バッチＡ、４０％マンノヘプツロース／４０％ ペルセイトール）の存在下で２４時間処理した。炎症性サイトカインＩＬ−１β、ＩＬ−８およびＴＮＦ−αを、培養の上清液においてＥＬＩＳＡ法(Kits R & D System)により分析した。細胞の生存率をニュートラルレッド試験により測定した。結果は、生産されるサイトカインの量が生細胞の量に転換されるような、ニュートラルレッドＯＤ値に対して示されている（表１３、１４、１５）。
結果：
【０１０２】
【表１３】
【０１０３】
【表１４】
【０１０４】
【表１５】
【０１０５】
結論：アボカド糖（アボカドの糖の水溶性抽出物）は、通常β−デフェンシン（ＩＬ−１、ＩＬ−８、ＴＮＦ−α）と同時発現する炎症性分子の生産を誘導しない。従って、このアボカド糖はＡＭＰの誘導因子であるが、炎症性は伴わない。
【０１０６】
実施例６：アボカド糖の抽出物中に存在する種々の糖によるＨＢＤ−２の合成の調整
実施例３と同様の試験を、
−フルクトース（５％）、グルコース（５％）およびサッカロース（３％）の混合物；
−Ｄ−マンノヘプツロース（４０％）；
−ペルセイトール（４０％）；
−フルクトース（５％）、グルコース（５％）、サッカロース（３％）およびＤ−マンノヘプツロース（４０％）の混合物；
−フルクトース（５％）、グルコース（５％）、サッカロース（３％）およびペルセイトール（４０％）の混合物；
−フルクトース（５％）、グルコース（５％）、サッカロース（３％）、Ｄ−マンノヘプツロース（４０％）およびペルセイトール（４０％）の混合物；および
−アボカド糖の抽出物（バッチＡ）
を用いて行った。
【０１０７】
アボカド糖の抽出物を乾燥体の総重量に対して４０重量％のＤ−マンノヘプツロースおよび４０重量％のペルセイトールを含んでなる。結果を下表１６に示す。
【０１０８】
【表１６】
【０１０９】
アボカドの微量糖（フルクトース、グルコースおよびサッカロース）には、ＨＢＤ−２の合成に対する作用はない。同量（乾燥体重量に対して４０重量％）ではＤ−マンノヘプツロースがペルセイトールよりも活性が高い。Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールをアボカドの微量糖（フルクトース、グルコースおよびサッカロース）と混合すると、相乗作用が見られる。
【０１１０】
フルクトース、グルコース、サッカロース、ペルセイトールおよびＤ−マンノヘプツロースの混合物（再構成混合物）と実施例１で得られたアボカド糖水溶性抽出物は同等の活性を有する。
【０１１１】
実施例７：市販のＤ−マンノヘプツロースおよびペルセイトールの活性
実施例３と同様の試験を市販のＤ−マンノヘプツロースおよびペルセイトールを用いて行った。結果を下表１７に示す。
【０１１２】
【表１７】
【０１１３】
個別に試験したところ、Ｄ−マンノヘプツロースおよびペルセイトールはｈＢＤ−２の生産を誘導することができる。
【０１１４】
実施例８：アトピー性皮膚炎のin vitroモデルに関する、ＩＬ−４により調整されるｈＢＤ−２の発現に対するアボカド糖の作用
健常なヒトのケラチノサイトを実施例３に記載のように接種した。
３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間インキュベーションした後、培養培地を除去し、細胞層をＰＢＳで２回すすいだ。次に、これらの細胞を以下に定義する条件下で２４時間細胞を処理した。
【０１１５】
−対照細胞：培地のみ
−ＩＬ−１β １００ｎｇ／ｍｌ（ｈＢＤ−２の誘導に関する陽性対照）
−ＩＬ−４ ５０ｎｇ／ｍｌ
−アボカド糖水溶性抽出物（バッチＡ）乾燥体の０．５ｗ／ｗ
−ＩＬ−１β １００ｎｇ／ｍｌおよびＩＬ−４ ５０ｎｇ／ｍｌ
−ＩＬ−４ ５０ｎｇ／ｍｌおよびアボカド糖水溶性抽出物（バッチＡ）乾燥体の０．５ｗ／ｗ
−ＩＬ−１β １００ｎｇ／ｍｌおよびＩＬ−４ ５０ｎｇ／ｍｌおよびアボカド糖水溶性抽出物（バッチＡ）乾燥体の０．５ｗ／ｗ
【０１１６】
処理が終了したところで、ｈＢＤ−２の誘導を細胞に対するＥＬＩＳＡ法により評価し、それと並行して、各ウェルの細胞総数を求めるため、同じ条件下で処理した細胞に対してＭＴＴによる試験を行った。そして、各条件について、ＯＤ４５０ ｈＢＤ−２をＯＤ５７０ ＭＴＴで割り、生細胞１個当たりに生産されたｈＢＤ−２の量を求めた。
結果を下表１８に示す。
【０１１７】
【表１８】
【０１１８】
陽性対照ＩＬ−１βは、対照細胞に対して、ｈＢＤ−２の合成に有意な増加をもたらす（＋８０％）。
同様に、アボカド糖水溶性抽出物バッチＡも、ｈＢＤ−２の合成を増加させる（＋４８％）。
ＩＬ−４単独では、ケラチノサイトが発現するｈＢＤ−２の量に影響がない。
ＩＬ−４の存在下で、ＩＬ−１βにより誘導されるｈＢＤ−２の合成は３２％有意に阻害される。
【０１１９】
これらの条件下では、ＩＬ−１β＋ＩＬ−４にバッチＡを加えると、この場合もｈＢＤ−２の合成が高まり、ＩＬ−１β＋ＩＬ−４に対して１５２％という有意な増加が見られる。
【０１２０】
結論：
アトピー性皮膚炎は、抗微生物ペプチド（ｈＢＤ−２、ｈＢＤ−３、ＬＬ−３７）の欠損を特徴とする。この欠損により、とりわけ、ＴＨ１／ＴＨ２バランスの調節不全とサイトカインＴＨ２（ＩＬ−４およびＩＬ−１３）の過剰生産が説明できる。このモデルにおいて、本発明者らは、アボカド糖水溶性抽出物がＩＬ−４により誘導されるｈＢＤ−２の阻害に対抗することができることを示した。従って、アボカド糖はアトピー性皮膚炎を抑える目的で注目される。
【０１２１】
実施例９：本発明の美容処方物
抗座瘡クリーム １番
イソノナン酸イソノニル ７．０００
ジ−Ｃ１２−１３アルキルマレエート ７．０００
ステアリン酸イソセチル ５．０００
ブチレングリコール ３．０００
イネ(Oryza sativa) ２．５００
アボカド糖水溶性抽出物 ３．０００
ジカプリリルエーテル ２．０００
シランジオールのサリチル酸塩 ２．０００
アラキン(Arachnidic)アルコール １．６５０
トロメタミン １．１８０
セチルアルコール １．０００
サリチル酸 １．０００
アスコルビルグルコシド １．０００
グリシン １．０００
酢酸トコフェリル １．０００
ビフェニルアルコール ０．９００
スクアラン ０．７９０
クエン酸ナトリウム ０．６６０
コポリマーＰＰＧ−１２／ＳＭＤＩ ０．５００
アラキジルグルコシド ０．４５０
香料 ０．４００
スクレロチウムガム ０．１６０
セテアリルアルコール ０．１３０
クエン酸 ０．１１０
セピゲル３０５＊ ０．１００
保存剤系 適量
水 加えて１００とする
＊Ｓｅｐｐｉｃ社から市販されている製品
座瘡皮膚用フォーミングウォッシュエマルション １番
水 加えて１００とする
Ａｒｌａｔｏｎｅ ｄｕｏ＊ ２０．０００００
ココグルコシド １２．０００００
グアーヒドロキシプロピル ２．０００００
アボカド糖水溶性抽出物 １．０００００
パルミチン酸(palmate)水素化グリセリルＰＥＧ−２００ １．１００００
ＰＥＧ−７グリセリルココエート １．１００００
シランジオールのサリチル酸塩 １．０００００
コカミドＤＢＡ １．０００００
カプリロールグリシン ０．５００００
ソルビン酸カリウム ０．５００００
ポリクオタニウム１０ ０．４００００
香料 ０．４００００
クエン酸 ０．３００００
亜鉛ＰＣＡ ０．２００００
＊Ｑｕｉｍａｓｓｏ社から市販されている製品
座瘡皮膚用フォーミングウォッシュエマルション ２番
水 加えて１００とする
Ａｒｌａｔｏｎｅ ｄｕｏ＊ ２０．０００００
ココグルコシド １２．０００００
グアーヒドロキシプロピル １２．０００００
アボカド糖水溶性抽出物 ２．０００００
パルミチン酸水素化グリセリルＰＥＧ−２００ １．１００００
ＰＥＧ−７グリセリルココエート １．１００００
シランジオールのサリチル酸塩 １．０００００
コカミドＤＥＡ １．０００００
グリシンのカプリロール ０．５００００
ソルビン酸カリウム ０．５００００
ポリクオタニウム１０ ０．４００００
香料 ０．４００００
クエン酸 ０．３００００
亜鉛ＰＣＡ ０．２００００
＊Ｑｕｉｍａｓｓｏ社から市販されている製品
練り歯磨き
水 加えて１００とする
アボカド糖水溶性抽出物 ２．００
モノフルオロリン酸ナトリウム ０．７５
フッ化ナトリウム ０．１０
７０％ソルビトール ３５
高研磨合成シリカ １３
低研磨合成シリカ ５
カルボキシメチルセルロースナトリウム １．６
ラウリル硫酸ナトリウム １
メントールアロマ ０．８５
二酸化チタン ０．５
灰汁 ０．５
シクラミン酸ナトリウム ０．３
メントール ０．１５
ナトリウムサッカライド ０．０７
口内洗浄剤
ＡＣＴＭＰ １９３（登録商標）
（ルピナス ペプチド） ２．００
クレモホール ＲＨ４０（登録商標） ０．３０
グリセリン １５
ナトリウムサッカライド ０．０３
アボカド糖水溶性抽出物 １．００
ユーカリミントアロマ ０．０８
ＰＯＢＡ ０．２０
ソルビン酸カリウム ０．５０
水 加えて１００とする
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、先天性免疫の修飾に関連する疾患を処置および／または予防すること目的とする薬剤を製造するための、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールを含んでなる化合物の使用に関する。
【０００２】
総ての動物種は、日々、それらの健康、場合によっては生命をも脅かす恐れのある細菌、真菌、寄生生物またはウイルスなどの多数の微生物に曝されている。これらの微生物には、ヒトをはじめとする総ての動物に共通している先天性免疫と呼ばれる系と、潜在的攻撃者との接触後に細胞や免疫メディエーターによって獲得される、いわゆる適応または特異免疫系の２つの防御系が抵抗している。
【０００３】
先天性免疫応答または適応免疫応答は、これらの微生物に対する認識機構が異なる。先天性免疫では、受容体の特異性が生まれた時から遺伝的に決定されていて、変わらない。これらの受容体は、特定の上皮細胞や内皮細胞、樹状細胞、単球およびマクロファージなどの細胞で発現される。先天性免疫受容体によって認識される総ての構造は、極めて多数の微生物に共通している。適応的免疫応答とは対照的に、先天性免疫応答機構（食作用、抗微生物ペプチドなど）は感染時に活性化され、宿主に侵入する病原体の増殖をほとんど即座に制御する。その後を適応的免疫応答が引き継ぐ。
【０００４】
抗微生物ペプチドは、植物界でも動物界でも見つけられており、昆虫からヒトまで５００種を超える抗微生物ペプチドが発見されている。これらの抗微生物ペプチドは、幅広い種類の微生物（グラム陽性菌および／またはグラム陰性菌、真菌、ウイルス、形質転換細胞）を、それらの細胞膜を透過性にすることにより破壊することができる小分子（１０〜５０個のアミノ酸）である。さらに、これらの抗微生物ペプチドのうちあるものは、それらの化学誘引性から、樹状細胞またはさらにはＴリンパ球など、適応免疫に関与する細胞を動員することができる。多数の抗微生物ペプチドが胎脂や羊水、ならびに新生児の皮膚で見つけられているが、このことは、出生時だけでなく、獲得免疫が未熟である生涯の始まりの時期から、微生物に対する防御にそれらが重要な役割を果たしていることを示唆する。
【０００５】
ほとんどの生物は、幅広い活性域を規定するために、異なる上皮のレベルで数種類の抗微生物ペプチドを合成する。哺乳類では、微生物との接触により生産が誘導される２つの主要なクラスの抗微生物ペプチド、すなわち、カテリシジンとデフェンシンが記載されている。
【０００６】
ヒトカテリシジン（ＬＬ−３７）は、骨髄細胞から初めて単離された。ＬＬ−３７は、主として、ヒト皮膚、爪、ならびに健康な滑膜および炎症を起こした滑膜（とりわけ関節炎に罹患している患者の場合）で発現される。ＬＬ−３７は、幅広い活性域を有し、他の抗微生物ペプチド、とりわけデフェンシンと相乗作用するものと思われる。また、ＬＬ−３７は化学誘引性を有しており、適応免疫細胞を動員することができる。
【０００７】
デフェンシンはそれ自体、二次構造に基づいて、αとβの２つのファミリー、に分けられる。α−デフェンシン（現在分かっているのは６種類）は、主に好中球などの特殊化した細胞の貯蔵顆粒または腸パネート細胞に存在するが、β−デフェンシンの方は上皮組織に特徴的なものである。デフェンシンは、先天性免疫における役割の他、有糸分裂誘発性についても同様に知られており、治癒プロセスに関係している可能性が示唆される。
【０００８】
ヒトでは、現在までに４種類のβ−デフェンシンが確認されている（発明者らのゲノムには、抗微生物ペプチドをコードする遺伝子は２０個以上存在していると考えられている）。ヒトβ−デフェンシン１（ｈＢＤ−１）は、一般に構成的に生産され、肝臓で大半が発現され、膵臓、唾液腺、呼吸器系の上皮、女性の泌尿生殖器系、健康な滑膜、ならびに胎盤でもわずかながら発現される。ｈＢＤ−１はまた皮膚でも発現される。β−デフェンシンの他の種類、ｈＢＤ−２、３および４は誘導性のものである。ｈＢＤ−３は、例えば、関節炎病態のような炎症滑膜で誘導される。ｈＢＤ−２の発現は、これまでのところ、皮膚、泌尿生殖路、汗腺および毛包皮脂腺単位(pilo-sebacic unit)において報告されている。
【０００９】
皮膚では、エラスターゼ／ＳＫＡＬＰ／エラフィンの特異的阻害剤であるアドレノメデュリン、シスタチンなどの他のペプチドまたはタンパク質が抗微生物活性を有すると思われる。最近になって、デルミシジン(dermicidin)（広域活性）が皮膚に特異的な抗微生物ペプチドであると特徴付けられた。この抗微生物ペプチドはエクリン汗腺において生成されると思われ、汗との同時分泌が局部および全身感染に対する先天性的防御系の重要な役割を果たしていると考えられる。初めて、ｈＢＤ−２が乾癬鱗屑において特徴付けられた。ｈＢＤ−２および３ならびにＬＬ−３７の発現は乾癬病変で高まることから、この病態に罹患している患者の感染への抵抗性が高くなることが説明される。一方、アトピー性皮膚炎（慢性病変および発疹性病変）では、アトピーのメディエーターであるインターロイキン−４（ＩＬ−４）とインターロイキン−１３（ＩＬ−１３）の影響を下で、ＬＬ−３７とｈＢＤ−２の発現が低下する。この不全によってアトピー性皮膚炎に罹患している患者の感染に対する感受性の上昇を説明することができる。座瘡では、P acnesの増殖に対する反応としてβ−デフェンシン（ｈＢＤ−１および２）の発現が高まる。さらに、座瘡患者は初期に細菌増殖に関与する抗微生物ペプチドの平衡異常に苦しむが、その代償に細菌が先天性的免疫防御を刺激すると考えられている。
【００１０】
そのため、炎症は抗微生物ペプチドの誘導における主要な因子であると思われる。さらに、インターロイキン−１、ＴＮＦ−α（腫瘍壊死因子α）および紫外線照射がｈＢＤ−２の産生を刺激することも示されている。また、ｈＢＤ−２の発現は、ケラチノサイトの分化状態にも関連している。従って、とりわけデフェンシンファミリー由来の抗微生物ペプチド、より詳しくはｈＢＤ−２の産生が刺激されることで、とりわけ眼および上皮（表皮、膣、腸、鼻腔および耳の粘膜、気道）の先天性免疫の増強および／または回復が可能となる。
【００１１】
口腔は、常に多様な種類の微生物（細菌、ウイルス、真菌）に曝されている。細菌、とりわけ、アクチノバチルス・アクチノミセテムコミタンス(actinobacillus actinomycetemcomitans)、ポルフィロモナス・ギンギバリス(porphyromonas gingivalis)などが、歯周病（歯肉炎および歯周炎）の発症に関与する重要な要因であることはよく知られている。歯肉上皮は、口内環境に存在する種々の病原体に対する第１の防御壁となる。これに関して、歯肉ケラチノサイトで広範な抗微生物ペプチドパネル、ｈＢＤ−１、−２、−３、ＬＬ３７が生産される。また、これらのペプチドは、頬粘膜においてや唾液腺によっても生産される。
【００１２】
より詳しくは、抗微生物ペプチドの刺激によって、一般に免疫が十分でない乳児や小児の健康な皮膚または病的状態の皮膚や、成人の皮膚または健康な、もしくは病的状態の高齢者の皮膚（免疫抑制状態）において先天性免疫の増進および／または回復が可能となる。よって、この刺激により、有利には角質層（角質細胞＋細胞間質）からなる皮膚の受動防御系が完全なものとなり、健康な状態または病的状態の乳児、小児、成人および高齢者において適応免疫応答がもたらされる。また、同時に、瘢痕形成も促進される。
【００１３】
１９１６年にLa Forgeによって同定された最初のケトヘプトースであるＤ−マンノヘプツロースは、一般式（Ｉ）：
【化１】
を有し、特定の植物、特にムラサキウマゴヤシすなわちアルファルファ(Medicago Sativa L.)、アボカド、イチジク(Ficus officinalis L.)およびサクラソウ(Primula officinalis Jacq.)に見られる。しかしながら、Ｄ−マンノヘプツロースの最大含量はアボカドにおいて認められる。Ｄ−マンノヘプツロースは治療用途ですでに使用されている。例えば、特許出願ＷＯ９５／０３８０９には、腫瘍細胞の発達阻害のためのグルコキナーゼ阻害剤としてのＤ−マンノヘプツロースの使用が記載されており、特許出願ＵＳ２００３／００９２６６９には、インスリンレベルを降下することができ、それにより減量を可能にする、Ｄ−マンノヘプツロースを含む経口栄養補助食品が記載されている。
【００１４】
ポリオール型Ｄ−マンノヘプツロースであるペルセイトールは一般式（II）：
【化２】
を有し、これもまたアボカド、特に果実やアボカド核に見られる。
【００１５】
“Search for pharmacochemical leads from tropical rainforest plants”, Hitotaka Shibuya et al. Pure Appl. Chem., vol. 71, no 6, pp 1109-1113, 1999によれば、カリウムイオンと結合したペルセイトールによって、ロイシン−３Ｈをエールリッヒ腹水肉腫の腫瘍細胞に取り込ませることができるとされている。
【００１６】
驚くべきことに、本発明者らは、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールを含んでなる組成物によって、炎症反応、刺激状態または不耐性を誘導することなく、とりわけ、炎症反応の場合に通常発現される分子の分泌を有意に刺激することなく、抗微生物ペプチド、有利にはｈＢＤ−２の増産が可能であることを見出した。
【００１７】
よって、本発明の対象は、カテリシジンファミリーおよび／またはβ−デフェンシンファミリーの抗微生物ペプチド、有利にはｈＢＤ−２の増産により先天性免疫および／または獲得免疫の修飾に関連する疾病を治療および／または予防すること目的とする薬剤または獣医学的組成物の製造のための、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと適当な薬学上許容される賦形剤とを含んでなる化合物の使用である。本発明の範囲において、「修飾」とは、増強または低下を意味する。
【００１８】
本発明はまた、エラスターゼの特異的阻害剤、特にエラフィン（ＳＫＡＬＰ）などの抗微生物ペプチドの増産により先天性免疫および／または獲得免疫の修飾に関連する疾病を治療および／または予防すること目的とする薬剤または獣医学的組成物の製造のための、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと適当な薬学上許容される賦形剤とを含んでなる組成物の使用にも関する。
【００１９】
本発明の薬剤または獣医学的組成物は、有利には、先天性免疫および／または獲得免疫を刺激し、かつ／または完全なものとすることができる。
概して、本発明において、前記疾病は、微生物、とりわけグラム陽性菌および／もしくはグラム陰性菌、真菌、酵母またはウイルスの存在に関連するものであり得る。
【００２０】
より詳しくは、前記疾病は、視覚系および聴覚系、非角化上皮（膣、腸、歯肉、肺、気道、肛門および尿道の粘膜）ならびに皮膚などの角化上皮の感染症であり得る。前記疾病はまた、ファネラ(phanera)または皮膚付属器（毛、爪、汗腺、皮脂腺）の感染症でもあり得る。ゆえに、前記疾病は、毛包炎、せつ、膿瘍、膿痂疹またはひょう疽などの病態であり得る。
前記疾病は、ふけ症などの頭皮の病態、より広くは脂漏過剰に関連する障害であり得る。
【００２１】
前記疾病は、アトピー性皮膚炎などのＴｈ１／Ｔｈ２バランスの修飾に関連する病態であり得る。
前記疾病は、とりわけ、アトピー性皮膚炎の場合、ＩＬ−４および／またはＩＬ−１３などのサイトカインの合成の修飾に関連する病態であり得る。
【００２２】
前記疾病はまた、アトピー性皮膚炎、アトピー性および／または接触性湿疹、乾癬、座瘡ならびに皮膚の刺激状態などの炎症性皮膚疾患でもあり得る。
前記疾病はまた、熱傷、特に第１度および第２度熱傷でもあり得る。
【００２３】
前記疾病はまた、皮膚バリアの欠如に関連する病態でもあり得る。よって、本発明の薬剤は、過敏感反応性の皮膚（敏感皮膚、炎症を起こした皮膚、アレルギー性皮膚）、アトピー性皮膚、乾燥皮膚もしくは老化した皮膚の処置に使用することができる。前記疾病はまた、とりわけ、寒さ、汚染、ストレス、タバコ、日光暴露によって起こる、環境からの攻撃によって弱くなった皮膚に関連する病態でもあり得る。
【００２４】
本発明において、この薬剤はまた、乳児や小児の未成熟な、健康な皮膚または病的状態の皮膚の保護にも好適である。実際に、この薬剤は、一般に免疫が十分でない小児の表皮の先天性防御の強化を可能にする。
【００２５】
本発明において、この薬剤はまた、成人または高齢者、とりわけ免疫抑制状態の人の、健康な皮膚または病的状態の皮膚の保護にも適している。
本発明の薬剤はまた、正常または病的瘢痕形成（潰瘍および痂皮など）のプロセスにおける瘢痕形成の促進にも適している。
【００２６】
本発明において、この薬剤はまた、歯周病、関節炎などの関節の炎症性病態、粘膜感染症、とりわけ膣、腸、呼吸器、鼻腔もしくは耳の粘膜の感染症、または視覚系の感染症の治療および／または予防も目的とする。
【００２７】
本発明の組成物は、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０乾燥重量％のＤ−マンノヘプツロース、さらに有利には０．０１〜２０乾燥重量％、さらに有利には０．０１〜１０乾燥重量％、さらに有利には０．５〜５乾燥重量％のＤ−マンノヘプツロースを含んでなる。本発明の組成物は、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０乾燥重量％のペルセイトール、さらに有利には０．０１〜２０乾燥重量％、さらに有利には０．０１〜１０乾燥重量％、さらに有利には０．５〜５乾燥重量％のペルセイトールを含んでなる。本発明において、「Ｄ−マンノヘプツロース」および「ペルセイトール」には、それらの化学的誘導体も含む。
【００２８】
Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールの供給源は、アボカドまたは別の植物由来の糖の水溶性抽出物であり得る。また、Ｄ−マンノヘプツロースおよびペルセイトールは、商業的にも入手可能である（合成源）。本発明の有利な変形形態によれば、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールの供給源はアボカド由来の糖の水溶性抽出物である。
【００２９】
アボカド由来の糖の水溶性抽出物は、果実、果皮、核、アボカドの樹の葉または根など、アボカドまたはアボカドの樹のいずれの部分からでも直接得ることができる。また、アボカド変換工業の副産物からペプチド抽出物を得ることもでき、中でも、限定されるものではないが、アボカド生果果肉、冷凍果肉、脱水果肉、オイル抽出工程（予め脱水した果実の機械的抽出および／または溶媒抽出）から得られるアボカドオイルケーク、湿式オイル抽出工程（遠心分離工程）から得られる脱油固体、アボカドの酵素的抽出工程から得られる脱油固体、生のアボカドマッシュ（グアカモーレ）、これらのマッシュの製造ユニットから得られる固形廃棄物が挙げられる。抽出物はアボカドの樹の生果から得るのが有利である。果実はハス種(Hass)、フェルテ種(Fuerte)、エッチンジャー種(Ettinger)、ベーコン種(Bacon)、ナバル種(Nabal)、アナハイム種(Anaheim)種、ルラ種(Lula)、リード種(Reed)、ズタノ種(Zutano)、クィーン種(Queen)、クリオラ・セルバ種(Criola Selva)、メキシカナ・カンタ種(Mexicana Canta)、チャン地方種(Region Dschang)、ハル種(Hall)、ブース種(Booth)、パターソン種(Peterson)およびコリンソン・レッド種(Collinson Redn)、より有利にはハス種、フェルテ種およびリード種から選択することができる。ハス種、フェルテ種、エッチンジャー種およびベーコン種が好ましく、ハス種およびフェルテ種が最も好ましい。
【００３０】
アボカド果実は、主として水分、果肉、オイルおよび核種で構成される。あらゆる天然植物産物の場合と同様、これらの構成要素の割合は極めて多様である。しかしながら、一般には、表１に示される数値（生果のパーセンテージで示す）が平均組成と見られる。
【００３１】
【表１】
【００３２】
実際、アボカドに多糖が特に多く含まれているというわけではない。しかしながら、ペルセイトールまたは７個の炭素原子で構成されるＤ−マンノヘプツロースなどの可溶性単糖の性質は極めて特殊なものである。
【００３３】
アボカド由来の糖類の水溶性抽出物は、以下の一連の工程：
−有利にはアボカド果実から、アボカドを乾燥させた後に脂質（オイル）を抽出することによりアボカドオイルケークを得る工程；その後
−前記オイルケークを低温粉砕し、完全脱脂した後、デカントし、遠心分離して、Ｃ７糖に富んだ可溶性画分を回収する（ケークの除去）工程；
−前記工程から得られた前記可溶性画分をイオン樹脂で脱塩する工程；その後
−１００００ダルトンの限外濾過を行う工程、および
−所望により、真空下で濃縮し、パッケージングする工程
を含む方法により得ることができる。
【００３４】
この方法の第１段階は、果実を乾燥させることと、その後、オイルを抽出することからなる。果実をスライスして薄片とした後、当業者に公知の技術のいずれかによりそれを乾燥させることができる。それらの技術としては、熱風乾燥、凍結乾燥、または場合によっては浸透乾燥が挙げられる。一般に、温度は、使用する技術に関わらず、この乾燥工程中は８０℃以下に維持することが有利である。本方法においては、適用の容易さとコスト的な理由で、薄膜として、熱気流下、７０℃〜７５℃間の温度での換気乾燥機での乾燥が好ましい。実施は、５時間〜７２時間の間で様々であってよい。
【００３５】
乾燥させた果実の脂質を、その後、連続スクリュープレスで機械的に抽出するか、あるいは、とりわけ特許出願ＦＲ２８４３０２７に記載されている方法に従うか、または超臨界ＣＯ２を利用する方法により、ヘキサンなどの溶媒を用いて、ソックスレー抽出装置(soxhelet extractor)か、もしくはデスメット(de Smet)（登録商標）型の連続バンド抽出装置で化学的に抽出する。この方法の主に重要な点として、オイル副産物が明らかに商品価値のある産物となっているということがある。これが脂質を機械抽出する方が好ましい理由である。乾燥および脱油を行った果実（オイルケークとも呼ばれる）に対して以下の工程：
−低温粉砕、
−特にアセトンおよび／またはエタノールでの完全脱脂、
−デカンテーション、その後のオイルケークの水による洗浄、
−遠心分離、可溶性画分の回収（ケークの除去）、
−イオン交換による脱塩、
−サイズ閾値１０ｋＤでの限外濾過、
−真空下での濃縮、保存剤の添加およびパッケージング
を行うことができる。
【００３６】
一般に、最終的な水性抽出物は、０．１〜１０重量％の乾燥体、有利には１〜７重量％の乾燥体、より有利には３〜５重量％の乾燥体を含み得る。乾燥体中のＣ７糖含量、すなわち、Ｄ−マンノヘプツロースとペルセイトールは、有利には総乾燥体重量に対して６５〜９０重量％である。上記の方法によって得られた５％乾燥抽出物を含む水溶液の平均分析データを表２に示す。
【００３７】
【表２】
【００３８】
水溶性抽出物中の糖類の相対濃度（抽出物中の総乾燥体重量に対する重量）は、有利には以下の基準（ＨＰＬＣ、高速液体クロマトグラフィーによって決定された相対組成)に従う。
−Ｄ−マンノヘプツロース ５〜８０％
−ペルセイトール ５〜８０％
−サッカロース １０％未満
−グルコース １０％未満
−フルクトース １０％未満
【００３９】
アボカド糖類の水溶性抽出物は、有利には総乾燥体重量に対して１０〜８０重量％のＤ−マンノヘプツロース、より有利には１５〜７０重量％のＤ−マンノヘプツロースを含む。アボカド糖類の水溶性抽出物は、有利には総乾燥体重量に対して２０〜８０重量％のペルセイトール、より有利には２５〜７０％重量％のペルセイトールを含む。
【００４０】
好ましくは、水溶性抽出物中の糖類の相対組成（抽出物中の総乾燥体重量に対する重量）は、以下の基準（ＨＰＬＣによって決定された相対組成）に従う。
−Ｄ−マンノヘプツロース ２５〜６０％
−ペルセイトール ２５〜６０％
−サッカロース １０％未満
−グルコース １０％未満
−フルクトース １０％未満
驚くべきことに、本発明者らは、アボカド糖類の抽出物中に存在しているＤ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと少量の糖類（フルクトース、グルコース、サッカロース）との間の相乗作用を観察した。
【００４１】
所望により、得られた抽出物を凍結乾燥して、完全に溶解する固体粉末（乾燥抽出物）を得てもよい。
本発明の有利な変形形態によれば、組成物は、アボカドのペプチド抽出物を、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０乾燥重量％、より有利には０．０１〜２０乾燥重量％、より有利には０．１〜１５乾燥重量％、より有利には０．５〜１０乾燥重量％、より有利には０．７〜８乾燥重量％、より有利には１〜５乾燥重量％の割合でさらに含んでなる。その際に相乗作用が認められることが有利である。
【００４２】
本発明の組成物に添加されるアボカドのペプチド抽出物は、有利にはペプチド抽出物の乾燥体重量に対して２〜１０重量％のα−アミン窒素を含んでなる。本発明において、「α−アミン窒素」とは、遊離α−アミン基の形態にあるペプチドの窒素含量のことを意味すると理解される。ペプチド中のα−アミン窒素含量から、タンパク質の加水分解度ならびにペプチドの平均分子量が推定可能である。
【００４３】
より詳しくは、アボカドのペプチド抽出物は、以下の工程：
−有利にはアボカド果実から、アボカドを乾燥させた後、脂質を抽出することによりアボカドオイルケークを得る工程、その後
−前記オイルケークの低温粉砕と完全脱脂を行った後、そのケークのデカンテーション、遠心分離、および回収を行う工程、その後
−グルカナーゼの存在下で第一の加水分解を行った後、遠心分離して可溶性画分を除去する工程；
−１種または数種のプロテアーゼの存在下で第二の加水分解を行った後、遠心分離して沈殿を除去する工程；
−ナノフィルトレーションによりペプチド相を濃縮する工程；
−例えば活性炭の存在下で脱色し、単純濾過（１０μｍ）を行った後、限外濾過（カットオフ限界１０ｋＤ）を行う工程；最後に
−所望により、最終の除菌マイクロフィルトレーション（０．２μｍ）を行い、保存剤を添加し、パッケージングする工程
を含む方法によって得られ得る。
【００４４】
アボカドのオイルケークを得る方法と脂質の抽出は、アボカドのペプチド抽出物およびアボカドの糖類の場合と同様に行うことが有利である。その後、乾燥および脱油を行った果実（オイルケークとも呼ばれる）に対して以下の工程：
−低温粉砕する工程
−特にアセトンおよび／またはエタノールを用いて完全脱脂する工程、
−デカントした後、オイルケークを水で洗浄する工程、
−遠心分離し、ケークを回収する工程、
−１種または複数のグルカナーゼの存在下で第１の加水分解を行う工程、
−遠心分離し、可溶性画分の除去を行う工程、
−１種または複数のプロテアーゼの存在下で第２の加水分解を行う工程、
−遠心分離し、残渣の除去を行う工程、
−ナノフィルトレーションにより濃縮する工程、
−とりわけ活性炭の存在下で脱色を行う工程、
−単純濾過（１０μｍ）の後、限外濾過（カットオフ限界１０ｋＤ）を行う工程、
−充填し、保存剤を添加する工程、
−最終の除菌マイクロフィルトレーション（０．２μｍ）を行う工程、
−保存剤を添加し、パッケージングする工程
を実施することができる。
【００４５】
最終的な水性抽出物は、１〜６０重量％の乾燥体、場合によっては３〜２０重量％の乾燥体、好ましくは５〜６重量％の乾燥体を含み得る。所望により、得られた抽出物を凍結乾燥して、固体粉末（乾燥抽出物）を得ることもできるが、アボカドの最初のタンパク質に関しては完全水溶性ではない。α−アミン窒素含量は、乾燥体の重量に対して２〜１０重量％、好ましくは５〜７重量％であり得る。乾燥体の重量に対して１．２重量％の乾燥抽出物を含有する水溶液のｐＨは、一般に３〜６、より有利には４〜５となる。
【００４６】
本発明の有利な変形形態によれば、組成物は、ルピナスのペプチド抽出物を、組成物の総重量に対して、０．００１〜３０重量％の乾燥体、さらに有利には０．０１〜１０重量％の乾燥体の量でさらに含むことが有利である。本発明の組成物に添加されるルピナスのペプチド抽出物は、ペプチド抽出物の乾燥体重量に対して少なくとも７０％、有利には少なくとも８０重量％のペプチドを含んでなる。その際に相乗作用が認められることが有利である。
【００４７】
特に、ルピナスのペプチド抽出物は、以下の工程：
−粉砕したルピナスのオイルケークまたはルピナスの微粉末を製造する工程；
−次に、溶媒抽出により脱脂する工程；
−可溶性のタンパク質画分とその配糖体画分を抽出するか、またはタンパク質を等電点で析出させる工程；
−必要であれば、タンパク質画分を分離する工程；
−タンパク質画分を酵素により加水分解し、場合によって濾過を行った後、ペプチド抽出物を回収する工程
を含む方法により得られる。
ペプチド抽出物を調製する方法は、Expanscience laboratoriesにより提出された仏国特許出願ＦＲ２７９２２０２に記載されている。
【００４８】
さらに、本組成物は、皮膚軟化剤、水和剤、ケラチン合成の活性化剤、ケラトレギュレーター(keratoregulators)、角質溶解剤、皮膚バリア再構築剤（皮膚脂質合成活性化剤、ＰＰＡＲアゴニストまたはペルオキシソーム増殖剤応答性受容体(Peroxysome Proliferator Activated Receptor)）、ケラチノサイト分化活性化剤（レチノイド、calcidone（登録商標）、カルシウム）、抗生物質、抗菌薬、殺真菌薬、抗ウイルス薬、セボレギュレーター(sebo-regulators)（例えば、５−αレダクターゼ阻害剤、特にles laboratoires Expanscienceにより市販されている、活性型５−α Avocuta（登録商標）など）、免疫調節剤（タクロリムス、ピメクロリムス、オキサゾリンなど）、保存剤、抗そう痒薬、無痛化剤、サンフィルターおよびサンスクリーン、抗酸化剤、増殖因子、治癒薬または栄養分子、薬剤および抗炎症薬、ならびに植物油不鹸化物を含んでなる化合物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物を含み得る。
【００４９】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能なケラチン合成活性化剤は、有利にはレチノイド、ルピナスのペプチド（Silab社により市販）、角質層または顆粒層の重要なタンパク質（ケラチン）である。
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能な抗生物質は、有利にはフシジン酸(fucidic acid)、ペニシリン、テトラサイクリン、プリスチナマイシン(pristinamycine)、エリスロマイシン(erythromycine)、クリンダマイシン(clindamycine)、ムピロシン、ミノサイクリン、ドキシサイクリンである。本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能な抗ウイルス薬は、有利にはアシクロビルおよびバラシクロビルである。本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能な抗そう痒薬は、有利にはグリシン、ルピナスの糖類および／またはペプチド、シクロセラミド（登録商標）（オキサゾリン誘導体）である。
【００５０】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能な無痛化剤は、有利にはαビサボロール、甘草誘導体である。本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能なケラトレギュレーターは、有利にはαヒドロキシ酸およびそれらの誘導体である。本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能な角質溶解剤は、特にサリチル酸およびその誘導体である。本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能な抗酸化剤は、有利にはビタミン（Ｃ、Ｅ）、微量元素（銅、亜鉛、セレン）である。本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能な増殖因子は、有利にはベカプレルミンおよびＴＧＦ−β（形質転換増殖因子β）である。
【００５１】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能な治癒薬は、有利にはビタミンＡ、パンテノール、Avocadofurane（登録商標）、酸化亜鉛、酸化マグネシウム、酸化ケイ素、マデカシン酸またはアシアチン酸である。
【００５２】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと併用可能な薬剤は、有利にはアトピー(atopis)（コルチコイド、皮膚軟化剤）、座瘡（抗生物質、過酸化ベンゾイル、レチノイド、アゼライン酸、ビタミンＰＰ、亜鉛、サイクリン）、湿疹（免疫調節剤、皮膚軟化剤、サーモン油、ルリヂサ油、プレバイオティクス）、乾癬（コルチコイド、カルシポトリオール、カルシトリオール、タザロテン、ジュニパータール油、アシトレチン(acitretine)、ＰＵＶＡ療法）の予防および／または処置のための、局所投与または経口投与に適した薬剤である。本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールとの併用が可能な抗炎症薬は、有利にはコルチコイドなどのステロイド系抗炎症薬（ＡＩＳ）または非ステロイド系抗炎症薬である。
【００５３】
本発明において、表皮の重要な脂質の合成を刺激することを可能とし、かつ、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと、有利には相乗作用を伴って併用が可能な皮膚バリア再構築剤は、有利にはヒマワリのリノール酸濃縮物（Laboratoires Expanscienceから市販されている薬剤Soline（登録商標）など）（国際特許出願ＷＯ０１／２１１５０参照）、植物油不鹸化物（Avocadofurane（登録商標）など）（国際特許出願ＷＯ０１／２１１５０参照）、アゴニストＰＰＡＲ（ロシグリタゾン、ピオグリタゾン）である。これらの再構築剤は、有利には組成物または薬剤の総重量に対して０．００１〜３０重量％の割合で存在する。本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールとの併用が可能な抗真菌薬は、有利にはエコナゾールおよびケトコナゾールである。
【００５４】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールとの併用が可能な抗菌保存剤は、例えば、トリクロサン、クロルヘキシジン、第四級アンモニウムである。本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと、有利には相乗作用を伴って併用が可能な免疫調節剤は、有利にはタクロリムス、ピメクロリムスおよびオキサゾリンである。
【００５５】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと、有利には相乗作用を伴って併用が可能なオキサゾリンは、有利には２−ウンデシル−４−ヒドロキシメチル−４−メチル−１，３−オキサゾリン、２−ウンデシル−４，４−ジメチル−１，３−オキサゾリン、（Ｅ）−４，４−ジメチル−２−ヘプタデク−８−エニル−１，３−オキサゾリン、４−ヒドロキシメチル−４−メチル−２−ヘプタデシル−１，３−オキサゾリン、（Ｅ）−４−ヒドロキシメチル−４−メチル−２−ヘプタデク−８−エニル−１，３−オキサゾリン、２−ウンデシル−４−エチル−４−ヒドロキシメチル−１，３−オキサゾリンからなる群から選択されるオキサゾリンである。さらに有利には、前記オキサゾリンが２−ウンデシル−４，４−ジメチル−１，３−オキサゾリン（ＯＸ−１００またはシクロセラミド（登録商標）と呼ばれる）である。
【００５６】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと、有利には相乗作用を伴って併用が可能な植物油不鹸化物を含んでなる化合物は、有利にはアボカドのフラン脂質、アボカドおよびダイズの不鹸化物、ルピナス油の濃縮物、ヒマワリ油の濃縮物ならびにそれらの混合物からなる群から選択される。
【００５７】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと、有利には相乗作用を伴って併用が可能なアボカドのフラン脂質は、有利には天然２−アルキルフラン、特にLaboratoires Expanscienceから市販されているAvocadofurane（登録商標）（国際特許出願ＷＯ０１／２１６０５に記載されている方法によって得ることができる）である。
【００５８】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと、有利には相乗作用を伴って併用が可能なアボカドおよびダイズの不鹸化物は、有利にはアボカドのフラン不鹸化物とダイズの不鹸化物の約１／３〜２／３の割合での混合物である。アボカドおよびダイズの不鹸化物は、さらに有利にはLaboratories Expanscienceから市販されている製品Piascledine（登録商標）である。
【００５９】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと、有利には相乗作用を伴って併用が可能なルピナス油の濃縮物は、有利にはルピナス油、有利には国際特許出願ＷＯ９８／４７４７９に記載されているものなどの、ハウチワマメ(sweet white lupine)油、の分子蒸留によって得られる濃縮物である。それらは約６０重量％の不鹸化物を含んでいるのが有利である。
【００６０】
本発明において、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと、有利には相乗作用を伴って併用が可能なヒマワリ油の濃縮物は、有利には、Laboratoires Expanscienceから市販されている有効成分Soline（登録商標）（国際特許出願ＷＯ０１／２１１５０参照）などのヒマワリ油のリノール酸濃縮物である。
【００６１】
本発明の組成物は、局所投与に、また、経口投与、直腸投与、膣投与、鼻腔投与、耳内投与または気管支投与から非経口投与までに適した種々の製剤の形態に処方することができる。これらの種々の製剤は局所投与に適していることが好ましく、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤、オイル剤、パッチ剤、スプレー剤または他のあらゆる外用薬が挙げられる。本発明の化合物および組成物の投与様式、薬量学ならびに最適な剤形は、特に、患者または動物に適した皮膚科的または獣医学的(veterinarial)薬剤処置の確立を一般に検討する判定基準（例えば、患者または動物の齢および体重、全身状態の重大性、処置に対する許容度、副作用および皮膚のタイプなど）に従って決定することができる。所望の投与形に応じて、本発明の組成物および／または有効化合物はまた、少なくとも１種類の薬学上、特に皮膚科的に許容される賦形剤も含み得る。外用局所投与に適した賦形剤を使用するのが好ましい。本発明の組成物は、当業者には公知である、増粘剤、保存剤、香料、着色剤、ミネラルフィルターまたは薬液用フィルター、保湿剤、鉱水などから選択される少なくとも１種類の補助剤をさらに含み得る。
【００６２】
本発明はまた、薬剤の総重量に対して０．００１〜３０重量％のＤ−マンノヘプツロースおよび０．００１〜３０重量％のペルセイトール、さらに有利には０．０１〜１０重量％のＤ−マンノヘプツロースおよび０．０１〜１０重量％のペルセイトールと薬学上適当な賦形剤とを含んでなる薬剤または獣医学的組成物に関する。
【００６３】
本発明の薬剤または獣医学的組成物は、局所投与に、また、経口投与、直腸投与、膣投与、鼻腔投与、耳内投与または気管支投与に、また、非経口投与に適した種々の製剤の形態に処方することができる。本発明の薬剤または獣医学的組成物の投与様式、薬量学および最適な剤形は、特に、患者に適した皮膚科的薬剤処置または獣医学的処置の確立を一般に検討する判定基準に従って決定することができる。
【００６４】
本発明はまた、組成物の総重量に対して０．００１〜３０重量％のペルセイトールおよび０．００１〜３０重量％のＤ−マンノヘプツロース、さらに有利には０．０１〜１０重量％のペルセイトールおよび０．０１〜１０重量％のＤ−マンノヘプツロースを含んでなる美容組成物に関する。本発明の有利な変形形態によれば、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールの供給源はアボカド由来の糖の水溶性抽出物であり、これは上記のような方法によって得ることができる。実際には、アボカドのＤ−マンノヘプツロース、ペルセイトールおよび微量糖（フルクトース、グルコース、サッカロース）の間の相乗作用が存在する。
【００６５】
本発明の有利な変形形態によれば、組成物はさらに、アボカドのペプチド抽出物を、有利には相乗作用量で含んでなる。アボカドのペプチド抽出物は、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０乾燥重量％、より有利には０．０１〜１０乾燥重量％の量で存在する。本発明の組成物に添加されるアボカドのペプチド抽出物は、有利にはペプチド抽出物の乾燥体重に対して２〜１０重量％のα−アミン窒素を含んでなる。このペプチド抽出物は上記のような方法によって得ることができる。
【００６６】
本発明の有利な変形形態によれば、組成物はさらに、ルピナスのペプチド抽出物を、有利には相乗作用量で含んでなる。ルピナスのペプチド抽出物は、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０乾燥重量％、より有利には０．１〜１０乾燥重量％の量で存在する。本発明の組成物に添加されるルピナスのペプチド抽出物は、ペプチド抽出物の乾燥体重量に対して少なくとも７０重量％、有利には少なくとも８０重量％のペプチドを含んでなる。このペプチド抽出物は上記のような方法によって得ることができる。
【００６７】
さらに、組成物は、皮膚バリア再構築剤および上記のような植物油不鹸化物含有化合物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物を、有利には相乗作用量で含み得る。特に、美容組成物は、Laboratoires Expanscienceから市販されているSoline（登録商標）、Avocadofurane（登録商標）およびpiascledine（登録商標）からなる群から選択される有効成分を含み得る。本発明の組成物は、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０重量％の少なくとも１種類の皮膚バリア再構築剤を含んでなる。
【００６８】
本発明の化粧料組成物は、局所投与に、また、経口または直腸投与、膣投与、尿道投与、耳内投与、鼻腔投与もしくは気管支投与に適した種々の製剤の形態に処方することができる。これらの種々の製剤は局所投与に適していることが好ましく、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤、オイル剤、パッチ剤、スプレー剤または他のあらゆる外用薬が挙げられる。所望の投与形に応じて、本発明の組成物および／または有効化合物は、少なくとも１種類の化粧料的に許容される賦形剤も含み得る。本発明の化粧料組成物はさらに、当業者には公知である、増粘剤、保存剤、香料、着色剤、ミネラルフィルターまたは薬液用フィルター、保湿剤、鉱水などから選択される少なくとも１種類の美容補助剤を含み得る。
【００６９】
本発明はまた、環境の攻撃によって弱くなった皮膚バリアの障害を呈し、皮膚の発赤を示しているか、または非病的免疫平衡異常を示している、敏感、炎症を起こした、アレルギー性、乾燥、老化した、不耐性皮膚および／または粘膜の美容的処置法であって、本発明の組成物を皮膚および／または粘膜に塗布することからなることを特徴とする方法にも関する。
【００７０】
最後に、本発明は、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと食用に適した許容される賦形剤を含んでなる栄養補給用組成物に関する。本発明の栄養補給用組成物は、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０重量％のＤ−マンノヘプツロース、さらに有利には０．０１〜１０重量％のＤ−マンノヘプツロースを含んでなる。本発明の栄養補給用組成物は、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０重量％のペルセイトール、さらに有利には０．０１〜１０重量％のペルセイトールを含んでなる。本発明の栄養補給用組成物は、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０重量％のペルセイトールと０．００１〜３０重量％のＤ−マンノヘプツロース、さらに有利には０．０１〜１０重量％のペルセイトールと０．０１〜１０重量％のＤ−マンノヘプツロースを含んでなる。本発明の有利な変形形態によれば、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールの供給源は、アボカド由来の糖の水溶性抽出物であり、これは上記のような方法によって得ることができる。
【００７１】
本発明の有利な変形形態によれば、組成物はさらに、アボカドのペプチド抽出物を、有利には相乗作用量で、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０％の乾燥体量で含んでなる。本発明の組成物に添加されるアボカドのペプチド抽出物は、有利にはペプチド抽出物の乾燥体重量に対して２〜１０重量％のα−アミン窒素を含んでなる。このペプチド抽出物は上記のような方法によって得ることができる。
【００７２】
本発明の有利な変形形態によれば、組成物はさらに、ルピナスのペプチド抽出物を、有利には相乗作用量で、有利には組成物の総重量に対して０．００１〜３０％の乾燥体量で含んでなる。本発明の組成物に添加されるルピナスのペプチド抽出物は、ペプチド抽出物の乾燥体重量に対して少なくとも７０重量％、有利には少なくとも８０重量％のペプチドを含んでなる。このペプチド抽出物は上記のような方法によって得ることができる。
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明を何ら限定するものではない。
【実施例】
【００７３】
実施例１：アボカド由来の糖の水溶性抽出物の調製
ハス種のアボカド生果５０ｋｇを、核を含め、ディスクスライサーにより２〜５ｍｍの厚さに薄切りにした。乾燥装置は温度調節式熱風炉であった。薄切りにしたアボカドを段状のラックに４〜５ｃｍの厚さで並べた。乾燥温度は８０℃に設定し、乾燥時間は４８時間とした。乾燥させたところで、果実を冷圧した。この操作はsmall Komet（登録商標） laboratory pressを用いて行った。
【００７４】
次に、この脱脂した果実（オイルケーク）４ｋｇを低温粉砕した後、エタノール２５リットルの存在下で還流させながら抽出した。この脂質を除いた粉末を、次に、ブフナー漏斗で濾過することにより回収し、炉内で５０℃にて５時間乾燥させた。
【００７５】
次に、オイルケークを脱塩水（１０リットル）で洗浄した後、遠心分離により分離した。この可溶性画分（液体）を精製のために取り、それを以下の方法に従って濃縮した。
・イオン交換樹脂による脱塩：
ＯＨ−樹脂に通した後、Ｈ＋樹脂に通すことによるヘプツロースの脱塩
・１００００Ｄａでの限外濾過：限外濾過は、カットオフ閾値１０ｋＤａの４つのメンブランを備えた系を用いて実施した。
【００７６】
・真空濃縮：精製した抽出物をエバポレーターにより乾燥体レベル４％まで真空濃縮する。
・パッケージング：抽出物の濃度を乾燥体５％に調整し、保存剤を添加した後、それを、閾値０．２μｍのメンブランを用いて無菌条件下で濾過し、パッケージングする。
表３は、上記方法に従って調製された、アボカド由来のＣ７糖における抽出物（乾燥体５％）の組成を示す。
【００７７】
【表３】
【００７８】
他の２つの抽出物も同じ方法に従って調製し、そのｐＨ、吸光度およびＣ７糖含量を下表４に示す。Ｃ７糖含量は、ＨＰＬＣにより分析したペルセイトールとＤ−マンノヘプツロースの合計に相当する。
【００７９】
【表４】
【００８０】
実施例２：アボカドのペプチド抽出物の調製
ハス種のアボカド生果５０ｋｇを、核を含め、ディスクスライサーにより２〜５ｍｍの厚さに薄切りにした。乾燥装置は温度調節式熱風炉であった。薄切りにしたアボカドを段状のラックに４〜５ｃｍの厚さで並べた。乾燥温度は８０℃に設定し、乾燥時間は４８時間とした。乾燥させたところで、果実を冷圧した。この操作はsmall Komet（登録商標） laboratory pressを用いて行った。次に、この脱脂した果実（オイルケーク）４ｋｇを低温粉砕した後、エタノール２５リットルの存在下で還流させながら抽出した。この脂質を除いた粉末を、次に、ブフナー漏斗で濾過することにより回収し、炉内で５０℃にて５時間乾燥させた。 次に、このオイルケークを脱塩水（１０リットル）で洗浄した後、遠心分離により分離した。固形画分を水溶液に取り、ＨＣｌでｐＨ５まで酸性化し、その後、乾燥体に対して２％セルラーゼと接触させた。加水分解時間は６時間とした。
【００８１】
次に、この混合物を補助剤（２．５重量％／ｖ）の存在下で遠心分離した。その後、回収した沈渣に対して、０．５％Ａｌｃａｌａｓｅ（登録商標）（プロテアーゼ種に由来する市販の酵素）の存在下、ｐＨ値８．０、温度５５℃で２時間、第二の加水分解を行った。加水分解は、２Ｍ水酸化ナトリウムを継続的に添加することにより一定のｐＨ値に維持した。最後に、８５℃で１０分間加熱することによりプロテアーゼを変性させた。
【００８２】
得られた混合物を遠心分離し、上清液を７．５μｍのメンブランで濾過した。その後、カットオフ１０ｋＤのメンブランで限外濾過を行った。
得られた乾燥体２０％の粗ペプチド抽出物を、１％活性炭Ｎｏｒｉｔ（登録商標）の存在下で脱色した後、再び７．５μｍのメンブランで濾過した。次に、この脱色された抽出物のマイクロフィルトレーション（０．２μｍ）を行い、乾燥体濃度５％に希釈した後、保存剤を添加し（Ｐｈｅｎｏｎｉｐ（登録商標）０．４重量％／ｖ）最後に生成物をパッケージングした。本方法により得られたアボカドの水溶性ペプチド抽出物（乾燥体５％）の特性を下表５に示す。
【００８３】
【表５】
他の抽出物も同じ方法に従って調製し、その分析データを下表６に示す。
【００８４】
【表６】
【００８５】
１Ｎ×６．２５は、サンプルの総窒素（Ｎ）量に、分析するタンパク質に特異な係数を掛けたものである。分析タンパク質に関する係数が正確に分からない場合は、便宜上、係数６．２５を使用する。
【００８６】
下表７に示すアミノグラムでは、値は分析したアミノ酸の総重量に対する重量％で示す。
アスパラギン酸およびグルタミン酸の値には、それぞれアスパラギン含量およびグルタミン含量も含む。
【００８７】
【表７】
【００８８】
実施例３〜７では、特に断りのない限り、パーセンテージは乾燥体の総重量に対する重量で示す。
【００８９】
実施例３：アボカドの糖類によるβ−デフェンシン−２の誘導
Ｉ．細胞の接種（Ｊ０）：
これまでに刊行物"Human β-Defensin-2 production in Keratinocytes is regulated by Interleukin-1, Bacteria, and the State of Differentiation”, Alice Y. Liu et al,, The Society for Investigative Dermatology, vol. 118, No. 2, Feb. 2002, pages 275 to 281に記載されているように、健常なヒトのケラチノサイトを、９６ウェルプレート(plaque)中、カルシウム豊富な（終濃度１．３ｍＭ）な特殊な培地の存在下に接種した（約２００００細胞／ウェル）。
II．細胞の処理（ＪＩ）：
３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間インキュベーションした後、
→２００μｌ／ウェルのＰＢＳ（生理食塩水中、リン酸バッファー）で２回すすぎ、
→細胞を以下のもの２００μｌ／ウェル（Ｃａ＋＋添加培地中）によって刺激する。
・乾燥体濃度０．５、０．０５および０．００５ｗ／ｗのアボカド糖類水溶性抽出物
・１００ｎｇ／ｍｌ濃度のＩＬ−１β（ｈＢＤ−２の誘導の陽性対照）
III．処理の終了（Ｊ２）：ＥＬＩＳＡ
インキュベーション２４時間後、ｈＢＤ−２の誘導を、特異的抗体（ヒトＢＤ２に対するヤギポリクローナル抗体；Ａｂｃａｍ；ａｂ９８７１）を用いてＥＬＩＳＡ法により評価した。
乾燥重量に対して４０％のＤ−マンノヘプツロースと４０％のペルセイトールを含むアボカド糖類水溶性抽出物バッチＡで得られた結果を下表８にまとめる。
【００９０】
【表８】
ｈＢＤ−２の生産量は本発明のアボカド糖類水溶性抽出物バッチＡにより上昇することが認められた。
【００９１】
乾燥重量に対して１０％のＤ−マンノヘプツロースと７０％のペルセイトールを含むバッチＢで得られた結果を下表９にまとめる。
ＯＤ＝光学濃度
【００９２】
【表９】
ｈＢＤ−２の生産はアボカド糖類水溶性抽出物バッチＢにより用量依存的に上昇することが認められた。
【００９３】
実施例４：上皮細胞におけるｈＢＤ−２の発現に対するアボカドの糖の効果
１．細胞
口腔研究で一般に用いられているヒト口腔癌由来の上皮細胞系統であるＫＢ細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ−１７）を９６ウェルプレートに接種し、１０％ＶＦＳ（ウシ胎児血清）＋抗生物質のＧｌｕｔａｍａｘ（商標）１を含むＲＰＭＩ１６４０(Roswell Park Memorial Institute Medium)中で培養した。
２．処理
インキュベーション２４時間後、培養培地を除去し、細胞層をＰＢＳで２回すすいだ。
次に、これらの細胞を上記で定義した条件下で２４時間および４８時間処理した。
・対照細胞：培地のみ
・ＴＮＦα（Ｓｉｇｍａから市販されている）１００ｎｇ／ｍｌ
・アボカド糖水溶性抽出物（４０％Ｄ−マンノヘプツロース／４０％ペルセイトール）０．００５〜０．０５および０．５ｗ／ｗ（乾燥体の）（バッチＡ）
３．処理の終了
・細胞に対するＥＬＩＳＡによる抗微生物ペプチドの分析
種々の処理条件下で４８時間インキュベーションした後、ＫＢ細胞内に存在するβ−デフェンシン−２および３ならびにＬＬ−３７を細胞に対するＥＬＩＳＡ法により分析した。
各ウェルの細胞総数を求めるため、同じ条件下で処理した細胞に対し、並行してＭＴＴによる試験を行った。
【００９４】
・結果の有用性
各処理条件について、ＯＤ４５０ ＡＭＰ（抗微生物ペプチド）をＯＤ５７０ ＭＴＴで割り、生細胞１個当たりに生産されたＡＭＰの量を算出した。
各条件について平均値と標準偏差を算出し、種々のＡＭＰの誘導を、対照細胞に対する増加率％として算出した。
【００９５】
４．結果
ＨＢＤ−２の誘導
ここでＡＭＰの誘導の陽性対照として用いたＴＮＦ−αは、４８時間の時点でＫＢ細胞によるｈＢＤ−２生産に２３９％という有意な増加を生じさせる。アボカド糖水溶性抽出物もまた、ＫＢ細胞におけるｈＢＤ−２の生産に統計学的に有意な増加をもたらす（表１０の結果を参照）。
【００９６】
【表１０】
【００９７】
ＨＢＤ−３の誘導
ここでＡＭＰの誘導の陽性対照として用いたＴＮＦ−αは、４８時間の時点でＫＢ細胞によるｈＢＤ−３生産に３０％という有意な増加を生じさせる。この試験によりこのモデルを立証する。アボカド糖水溶性抽出物もまた、ＫＢ細胞におけるｈＢＤ−３の生産に統計学的に有意な増加をもたらす（表１１の結果を参照）。
【表１１】
ＬＬ−３７の誘導
ここでＡＭＰの誘導の陽性対照として用いたＴＮＦ−αは、４８時間の時点でＫＢ細胞によるＬＬ−３７生産に８８％という有意な増加を生じさせる。この試験によりこのモデルを立証する。アボカド糖水溶性抽出物もまた、ＫＢ細胞におけるＬＬ−３７の生産に統計学的に有意な増加をもたらす（表１２の結果を参照）。
【００９８】
【表１２】
【００９９】
結果として、アボカド糖（アボカド糖水溶性抽出物）は、ＫＢ型の上皮細胞において抗微生物ペプチド、とりわけｈＢＤ−２、−３およびＬＬ−３７の合成を誘導することができることが示された。
【０１００】
実施例５：炎症性分子に対するアボカド糖の作用
方法：
健常なヒトのケラチノサイトを、これまでに刊行物"Human β-Defensin-2 production in Keratinocytes is regulated by Interleukin-1, Bacteria, and the State of Differentiation”, Alice Y. Liu et al., The Society for Investigative Dermatology, vol. 118, No, 2, Feb. 2002, pages 275-281に記載されているように、２４ウェルプレート中、カルシウム豊富な（終濃度１．３ｍＭ）な特殊な培地の存在下に接種した（約５００００細胞／ウェル）。
【０１０１】
これらの細胞を０．０５％ｗ／ｗのアボカド糖（バッチＡ、４０％マンノヘプツロース／４０％ ペルセイトール）の存在下で２４時間処理した。炎症性サイトカインＩＬ−１β、ＩＬ−８およびＴＮＦ−αを、培養の上清液においてＥＬＩＳＡ法(Kits R & D System)により分析した。細胞の生存率をニュートラルレッド試験により測定した。結果は、生産されるサイトカインの量が生細胞の量に転換されるような、ニュートラルレッドＯＤ値に対して示されている（表１３、１４、１５）。
結果：
【０１０２】
【表１３】
【０１０３】
【表１４】
【０１０４】
【表１５】
【０１０５】
結論：アボカド糖（アボカドの糖の水溶性抽出物）は、通常β−デフェンシン（ＩＬ−１、ＩＬ−８、ＴＮＦ−α）と同時発現する炎症性分子の生産を誘導しない。従って、このアボカド糖はＡＭＰの誘導因子であるが、炎症性は伴わない。
【０１０６】
実施例６：アボカド糖の抽出物中に存在する種々の糖によるＨＢＤ−２の合成の調整
実施例３と同様の試験を、
−フルクトース（５％）、グルコース（５％）およびサッカロース（３％）の混合物；
−Ｄ−マンノヘプツロース（４０％）；
−ペルセイトール（４０％）；
−フルクトース（５％）、グルコース（５％）、サッカロース（３％）およびＤ−マンノヘプツロース（４０％）の混合物；
−フルクトース（５％）、グルコース（５％）、サッカロース（３％）およびペルセイトール（４０％）の混合物；
−フルクトース（５％）、グルコース（５％）、サッカロース（３％）、Ｄ−マンノヘプツロース（４０％）およびペルセイトール（４０％）の混合物；および
−アボカド糖の抽出物（バッチＡ）
を用いて行った。
【０１０７】
アボカド糖の抽出物を乾燥体の総重量に対して４０重量％のＤ−マンノヘプツロースおよび４０重量％のペルセイトールを含んでなる。結果を下表１６に示す。
【０１０８】
【表１６】
【０１０９】
アボカドの微量糖（フルクトース、グルコースおよびサッカロース）には、ＨＢＤ−２の合成に対する作用はない。同量（乾燥体重量に対して４０重量％）ではＤ−マンノヘプツロースがペルセイトールよりも活性が高い。Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールをアボカドの微量糖（フルクトース、グルコースおよびサッカロース）と混合すると、相乗作用が見られる。
【０１１０】
フルクトース、グルコース、サッカロース、ペルセイトールおよびＤ−マンノヘプツロースの混合物（再構成混合物）と実施例１で得られたアボカド糖水溶性抽出物は同等の活性を有する。
【０１１１】
実施例７：市販のＤ−マンノヘプツロースおよびペルセイトールの活性
実施例３と同様の試験を市販のＤ−マンノヘプツロースおよびペルセイトールを用いて行った。結果を下表１７に示す。
【０１１２】
【表１７】
【０１１３】
個別に試験したところ、Ｄ−マンノヘプツロースおよびペルセイトールはｈＢＤ−２の生産を誘導することができる。
【０１１４】
実施例８：アトピー性皮膚炎のin vitroモデルに関する、ＩＬ−４により調整されるｈＢＤ−２の発現に対するアボカド糖の作用
健常なヒトのケラチノサイトを実施例３に記載のように接種した。
３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間インキュベーションした後、培養培地を除去し、細胞層をＰＢＳで２回すすいだ。次に、これらの細胞を以下に定義する条件下で２４時間細胞を処理した。
【０１１５】
−対照細胞：培地のみ
−ＩＬ−１β １００ｎｇ／ｍｌ（ｈＢＤ−２の誘導に関する陽性対照）
−ＩＬ−４ ５０ｎｇ／ｍｌ
−アボカド糖水溶性抽出物（バッチＡ）乾燥体の０．５ｗ／ｗ
−ＩＬ−１β １００ｎｇ／ｍｌおよびＩＬ−４ ５０ｎｇ／ｍｌ
−ＩＬ−４ ５０ｎｇ／ｍｌおよびアボカド糖水溶性抽出物（バッチＡ）乾燥体の０．５ｗ／ｗ
−ＩＬ−１β １００ｎｇ／ｍｌおよびＩＬ−４ ５０ｎｇ／ｍｌおよびアボカド糖水溶性抽出物（バッチＡ）乾燥体の０．５ｗ／ｗ
【０１１６】
処理が終了したところで、ｈＢＤ−２の誘導を細胞に対するＥＬＩＳＡ法により評価し、それと並行して、各ウェルの細胞総数を求めるため、同じ条件下で処理した細胞に対してＭＴＴによる試験を行った。そして、各条件について、ＯＤ４５０ ｈＢＤ−２をＯＤ５７０ ＭＴＴで割り、生細胞１個当たりに生産されたｈＢＤ−２の量を求めた。
結果を下表１８に示す。
【０１１７】
【表１８】
【０１１８】
陽性対照ＩＬ−１βは、対照細胞に対して、ｈＢＤ−２の合成に有意な増加をもたらす（＋８０％）。
同様に、アボカド糖水溶性抽出物バッチＡも、ｈＢＤ−２の合成を増加させる（＋４８％）。
ＩＬ−４単独では、ケラチノサイトが発現するｈＢＤ−２の量に影響がない。
ＩＬ−４の存在下で、ＩＬ−１βにより誘導されるｈＢＤ−２の合成は３２％有意に阻害される。
【０１１９】
これらの条件下では、ＩＬ−１β＋ＩＬ−４にバッチＡを加えると、この場合もｈＢＤ−２の合成が高まり、ＩＬ−１β＋ＩＬ−４に対して１５２％という有意な増加が見られる。
【０１２０】
結論：
アトピー性皮膚炎は、抗微生物ペプチド（ｈＢＤ−２、ｈＢＤ−３、ＬＬ−３７）の欠損を特徴とする。この欠損により、とりわけ、ＴＨ１／ＴＨ２バランスの調節不全とサイトカインＴＨ２（ＩＬ−４およびＩＬ−１３）の過剰生産が説明できる。このモデルにおいて、本発明者らは、アボカド糖水溶性抽出物がＩＬ−４により誘導されるｈＢＤ−２の阻害に対抗することができることを示した。従って、アボカド糖はアトピー性皮膚炎を抑える目的で注目される。
【０１２１】
実施例９：本発明の美容処方物
抗座瘡クリーム １番
イソノナン酸イソノニル ７．０００
ジ−Ｃ１２−１３アルキルマレエート ７．０００
ステアリン酸イソセチル ５．０００
ブチレングリコール ３．０００
イネ(Oryza sativa) ２．５００
アボカド糖水溶性抽出物 ３．０００
ジカプリリルエーテル ２．０００
シランジオールのサリチル酸塩 ２．０００
アラキン(Arachnidic)アルコール １．６５０
トロメタミン １．１８０
セチルアルコール １．０００
サリチル酸 １．０００
アスコルビルグルコシド １．０００
グリシン １．０００
酢酸トコフェリル １．０００
ビフェニルアルコール ０．９００
スクアラン ０．７９０
クエン酸ナトリウム ０．６６０
コポリマーＰＰＧ−１２／ＳＭＤＩ ０．５００
アラキジルグルコシド ０．４５０
香料 ０．４００
スクレロチウムガム ０．１６０
セテアリルアルコール ０．１３０
クエン酸 ０．１１０
セピゲル３０５＊ ０．１００
保存剤系 適量
水 加えて１００とする
＊Ｓｅｐｐｉｃ社から市販されている製品
座瘡皮膚用フォーミングウォッシュエマルション １番
水 加えて１００とする
Ａｒｌａｔｏｎｅ ｄｕｏ＊ ２０．０００００
ココグルコシド １２．０００００
グアーヒドロキシプロピル ２．０００００
アボカド糖水溶性抽出物 １．０００００
パルミチン酸(palmate)水素化グリセリルＰＥＧ−２００ １．１００００
ＰＥＧ−７グリセリルココエート １．１００００
シランジオールのサリチル酸塩 １．０００００
コカミドＤＢＡ １．０００００
カプリロールグリシン ０．５００００
ソルビン酸カリウム ０．５００００
ポリクオタニウム１０ ０．４００００
香料 ０．４００００
クエン酸 ０．３００００
亜鉛ＰＣＡ ０．２００００
＊Ｑｕｉｍａｓｓｏ社から市販されている製品
座瘡皮膚用フォーミングウォッシュエマルション ２番
水 加えて１００とする
Ａｒｌａｔｏｎｅ ｄｕｏ＊ ２０．０００００
ココグルコシド １２．０００００
グアーヒドロキシプロピル １２．０００００
アボカド糖水溶性抽出物 ２．０００００
パルミチン酸水素化グリセリルＰＥＧ−２００ １．１００００
ＰＥＧ−７グリセリルココエート １．１００００
シランジオールのサリチル酸塩 １．０００００
コカミドＤＥＡ １．０００００
グリシンのカプリロール ０．５００００
ソルビン酸カリウム ０．５００００
ポリクオタニウム１０ ０．４００００
香料 ０．４００００
クエン酸 ０．３００００
亜鉛ＰＣＡ ０．２００００
＊Ｑｕｉｍａｓｓｏ社から市販されている製品
練り歯磨き
水 加えて１００とする
アボカド糖水溶性抽出物 ２．００
モノフルオロリン酸ナトリウム ０．７５
フッ化ナトリウム ０．１０
７０％ソルビトール ３５
高研磨合成シリカ １３
低研磨合成シリカ ５
カルボキシメチルセルロースナトリウム １．６
ラウリル硫酸ナトリウム １
メントールアロマ ０．８５
二酸化チタン ０．５
灰汁 ０．５
シクラミン酸ナトリウム ０．３
メントール ０．１５
ナトリウムサッカライド ０．０７
口内洗浄剤
ＡＣＴＭＰ １９３（登録商標）
（ルピナス ペプチド） ２．００
クレモホール ＲＨ４０（登録商標） ０．３０
グリセリン １５
ナトリウムサッカライド ０．０３
アボカド糖水溶性抽出物 １．００
ユーカリミントアロマ ０．０８
ＰＯＢＡ ０．２０
ソルビン酸カリウム ０．５０
水 加えて１００とする
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カテリシジンファミリーおよび／またはβ−デフェンシンファミリーの抗微生物ペプチド、有利にはｈＢＤ−２の増産により先天性免疫および／または獲得免疫の修飾に関連する疾病を処置および／または予防することを目的とする薬剤または獣医学的組成物の製造のための、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと適当な薬学上許容される賦形剤とを含んでなる組成物の使用。
【請求項２】
エラスターゼの特異的阻害剤、特にエラフィン（ＳＫＡＬＰ）などの抗微生物ペプチドの増産により先天性免疫および／または獲得免疫の修飾に関連する疾病を処置および／または予防すること目的とする薬剤または獣医学的組成物の製造のための、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと適当な薬学上許容される賦形剤とを含んでなる組成物の使用。
【請求項３】
前記疾病が、グラム陽性菌および／もしくはグラム陰性菌、真菌、酵母またはウイルスなどの微生物の存在に関連している、請求項１または請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記疾病が、
特に毛包炎、ふけ症、脂漏過剰、せつ、膿瘍、膿痂疹またはひょう疽(panaris)からなる群から選択される皮膚およびファネラエ(phanerae)の感染症；
アトピー性皮膚炎、アトピー性および／または接触性湿疹、乾癬、座瘡ならびに皮膚の刺激状態などの炎症性皮膚疾患；
Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスの修飾に関連する疾病；
ＩＬ−４および／またはＩＬ−１３などサイトカインの合成の修飾に関連する疾病；または
熱傷
からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記疾病が、過敏感反応性皮膚、アトピー性皮膚、乾燥皮膚または老化皮膚などの、皮膚(cuteaneous)バリアの欠如に関連する病態、または環境からの攻撃によって弱くなった皮膚に関連する病態である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
薬剤が、
健康な、乳児および小児の未熟な皮膚；
病的状態の、乳児および小児の未熟な皮膚；または
成人または高齢者の、健康な皮膚または病的状態の皮膚
の保護に適している、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
薬剤が、潰瘍および痂皮などの正常または病的な瘢痕形成における治癒プロセスの増進に適している、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
薬剤が、歯周病(parodontal)の処置および／または予防を目的とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
薬剤が、関節炎などの関節の炎症性病態の処置および／または予防を目的とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
薬剤が、粘膜、特に膣、腸、呼吸器、鼻腔または耳の粘膜の感染症の処置および／または予防を目的とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
薬剤が、視覚系の感染症の処置および／または予防を目的とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
組成物が、その総重量に対して０．００１〜３０重量％のＤ−マンノヘプツロースおよび／またはその総重量に対して０．００１〜３０重量％のペルセイトールを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールの供給源が、有利には以下の一連の工程：
有利にはアボカド果実から、アボカドを乾燥させた後に脂質を抽出することにより、アボカドオイルケークを得る工程；その後
前記オイルケークを低温粉砕し、完全脱脂した後、デカントし、遠心分離して、Ｃ７糖に富んだ可溶性画分を回収する（ケークの除去）工程；
前記工程から得られた前記可溶性画分をイオン樹脂で脱塩する工程；その後
１００００ダルトンの限外濾過を行う工程、および
真空下で濃縮し、パッケージングする工程
を含む方法により得られる、アボカドの糖の水溶性抽出物である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
アボカドの糖の水溶性抽出物が、抽出物の総乾燥体重量に対する重量として（ＨＰＬＣにより測定した相対組成）：
−Ｄ−マンノヘプツロース ５〜８０重量％
−ペルセイトール ５〜８０重量％
−サッカロース １０％重量未満
−グルコース １０％重量未満
−フルクトース １０％重量未満
を含んでなる、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
組成物が、アボカドのペプチド抽出物、特にペプチド抽出物の乾燥体重量に対して２〜１０重量％のα−アミン窒素を含むアボカドのペプチド抽出物、をさらに含んでなる、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
薬剤の総重量に対して０．００１〜３０重量％のＤ−マンノヘプツロースおよび０．００１〜３０重量％のペルセイトールと、適当な薬学上許容される賦形剤とを含んでなる、薬剤。
【請求項１７】
前記組成物の総重量に対して０．００１〜３０重量％のＤ−マンノヘプツロースおよび０．００１〜３０重量％のペルセイトールと、それぞれ、適当な美容的に許容される賦形剤または食物性賦形剤とを含んでなる、美容組成物または栄養補給用組成物。
【請求項１８】
アボカドのペプチド抽出物をさらに含んでなる、請求項１７に記載の美容または栄養補給用組成物。
【請求項１９】
環境の攻撃によって弱化された皮膚バリアの障害を呈して、皮膚の発赤を示しているか、または免疫学的な非病的平衡異常を示している、敏感、炎症、アレルギー性、乾燥、老化、不耐性の皮膚および／または粘膜の美容的処置法であって、請求項１７または請求項１８に記載の組成物を皮膚および／または粘膜に塗布することからなる、処置法。
【請求項１】
カテリシジンファミリーおよび／またはβ−デフェンシンファミリーの抗微生物ペプチド、有利にはｈＢＤ−２の増産により先天性免疫および／または獲得免疫の修飾に関連する疾病を処置および／または予防することを目的とする薬剤または獣医学的組成物の製造のための、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと適当な薬学上許容される賦形剤とを含んでなる組成物の使用。
【請求項２】
エラスターゼの特異的阻害剤、特にエラフィン（ＳＫＡＬＰ）などの抗微生物ペプチドの増産により先天性免疫および／または獲得免疫の修飾に関連する疾病を処置および／または予防すること目的とする薬剤または獣医学的組成物の製造のための、Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールと適当な薬学上許容される賦形剤とを含んでなる組成物の使用。
【請求項３】
前記疾病が、グラム陽性菌および／もしくはグラム陰性菌、真菌、酵母またはウイルスなどの微生物の存在に関連している、請求項１または請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記疾病が、
特に毛包炎、ふけ症、脂漏過剰、せつ、膿瘍、膿痂疹またはひょう疽(panaris)からなる群から選択される皮膚およびファネラエ(phanerae)の感染症；
アトピー性皮膚炎、アトピー性および／または接触性湿疹、乾癬、座瘡ならびに皮膚の刺激状態などの炎症性皮膚疾患；
Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスの修飾に関連する疾病；
ＩＬ−４および／またはＩＬ−１３などサイトカインの合成の修飾に関連する疾病；または
熱傷
からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記疾病が、過敏感反応性皮膚、アトピー性皮膚、乾燥皮膚または老化皮膚などの、皮膚(cuteaneous)バリアの欠如に関連する病態、または環境からの攻撃によって弱くなった皮膚に関連する病態である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
薬剤が、
健康な、乳児および小児の未熟な皮膚；
病的状態の、乳児および小児の未熟な皮膚；または
成人または高齢者の、健康な皮膚または病的状態の皮膚
の保護に適している、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
薬剤が、潰瘍および痂皮などの正常または病的な瘢痕形成における治癒プロセスの増進に適している、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
薬剤が、歯周病(parodontal)の処置および／または予防を目的とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
薬剤が、関節炎などの関節の炎症性病態の処置および／または予防を目的とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
薬剤が、粘膜、特に膣、腸、呼吸器、鼻腔または耳の粘膜の感染症の処置および／または予防を目的とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
薬剤が、視覚系の感染症の処置および／または予防を目的とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
組成物が、その総重量に対して０．００１〜３０重量％のＤ−マンノヘプツロースおよび／またはその総重量に対して０．００１〜３０重量％のペルセイトールを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
Ｄ−マンノヘプツロースおよび／またはペルセイトールの供給源が、有利には以下の一連の工程：
有利にはアボカド果実から、アボカドを乾燥させた後に脂質を抽出することにより、アボカドオイルケークを得る工程；その後
前記オイルケークを低温粉砕し、完全脱脂した後、デカントし、遠心分離して、Ｃ７糖に富んだ可溶性画分を回収する（ケークの除去）工程；
前記工程から得られた前記可溶性画分をイオン樹脂で脱塩する工程；その後
１００００ダルトンの限外濾過を行う工程、および
真空下で濃縮し、パッケージングする工程
を含む方法により得られる、アボカドの糖の水溶性抽出物である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
アボカドの糖の水溶性抽出物が、抽出物の総乾燥体重量に対する重量として（ＨＰＬＣにより測定した相対組成）：
−Ｄ−マンノヘプツロース ５〜８０重量％
−ペルセイトール ５〜８０重量％
−サッカロース １０％重量未満
−グルコース １０％重量未満
−フルクトース １０％重量未満
を含んでなる、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
組成物が、アボカドのペプチド抽出物、特にペプチド抽出物の乾燥体重量に対して２〜１０重量％のα−アミン窒素を含むアボカドのペプチド抽出物、をさらに含んでなる、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
薬剤の総重量に対して０．００１〜３０重量％のＤ−マンノヘプツロースおよび０．００１〜３０重量％のペルセイトールと、適当な薬学上許容される賦形剤とを含んでなる、薬剤。
【請求項１７】
前記組成物の総重量に対して０．００１〜３０重量％のＤ−マンノヘプツロースおよび０．００１〜３０重量％のペルセイトールと、それぞれ、適当な美容的に許容される賦形剤または食物性賦形剤とを含んでなる、美容組成物または栄養補給用組成物。
【請求項１８】
アボカドのペプチド抽出物をさらに含んでなる、請求項１７に記載の美容または栄養補給用組成物。
【請求項１９】
環境の攻撃によって弱化された皮膚バリアの障害を呈して、皮膚の発赤を示しているか、または免疫学的な非病的平衡異常を示している、敏感、炎症、アレルギー性、乾燥、老化、不耐性の皮膚および／または粘膜の美容的処置法であって、請求項１７または請求項１８に記載の組成物を皮膚および／または粘膜に塗布することからなる、処置法。
【公表番号】特表２００７−５３５５２３（Ｐ２００７−５３５５２３Ａ）
【公表日】平成１９年１２月６日（２００７．１２．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５１００８１（Ｐ２００７−５１００８１）
【出願日】平成１７年４月２９日（２００５．４．２９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００５／００１０７５
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１１５４２１
【国際公開日】平成１７年１２月８日（２００５．１２．８）
【出願人】（５０３０２８５２５）ラボラトワール エクスパンシアンス (12)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年１２月６日（２００７．１２．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年４月２９日（２００５．４．２９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００５／００１０７５
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１１５４２１
【国際公開日】平成１７年１２月８日（２００５．１２．８）
【出願人】（５０３０２８５２５）ラボラトワール エクスパンシアンス (12)
【Ｆターム（参考）】
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