ヒドロラーゼ、それをコードする核酸並びにその製造および使用方法
本発明は、ヒドロラーゼ、それをコードするポリヌクレオチド、並びにこれらのポリヌクレオチドおよびポリペプチドを製造および使用する方法を提供する。ある特徴では、本発明は、ポリペプチド(例えばヒドロラーゼ活性(例えばエステラーゼ、アシラーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ(例えばホスホリパーゼA、B、CおよびD活性、パタチン活性、脂質アシルヒドロラーゼ(LAH)活性)、またはプロテアーゼ活性であり、熱安定性および耐熱性のヒドロラーゼ活性を含む)を有する酵素)、およびこれらの酵素をコードするポリヌクレオチド、並びに、これらのポリヌクレオチドおよびポリペプチドの製造および使用を対象とする。本発明のポリペプチドおよびペプチドのヒドロラーゼ活性は、エステラーゼ活性、リパーゼ活性(脂質の加水分解)、酸分解反応(エステル化脂肪酸を遊離脂肪酸と交換するための反応)、エステル転移反応(トリグリセリド間の脂肪酸の交換)、エステル合成、エステル交換反応、ホスホリパーゼ活性およびプロテアーゼ活性(ペプチド結合の加水分解)を含む。本発明のポリペプチドは、化粧品および栄養補助食品の製造などを含む広範な薬学、農業、および工業用途に使用し得る。ある特徴では、本発明のポリペプチドはエナンチオマー的に純粋なキラル生成物の合成に使用される。
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【特許請求の範囲】
【請求項1】
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【請求項2】
配列同一性が少なくとも約51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%の領域にわたる若しくはそれより高い、または100%である、請求項1記載の単離または組換え核酸。
【請求項3】
配列同一性が、少なくとも約50、75、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450、1500、1550残基若しくはそれより多い残基の領域、または遺伝子若しくは転写物の全長にわたる配列同一性である、請求項1記載の単離または組換え核酸。
【請求項4】
配列番号:1、配列番号:3、配列番号:5、配列番号:7、配列番号:9、配列番号:11、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:17、配列番号:19、配列番号:21、配列番号:23、配列番号:25、配列番号:27、配列番号:29、配列番号:31、配列番号:33、配列番号:35、配列番号:37、配列番号:39、配列番号:41、配列番号:43、配列番号:45、配列番号:47、配列番号:49、配列番号:51、配列番号:53、配列番号:55、配列番号:57、配列番号:59、配列番号:61、配列番号:63、配列番号:65、配列番号:67、配列番号:69、配列番号:71、配列番号:73、配列番号:75、配列番号:77、配列番号:79、配列番号:81、配列番号:83、配列番号:85、配列番号:87、配列番号:89、配列番号:91、配列番号:93、配列番号:95、配列番号:97、配列番号:99、配列番号:101、配列番号:103、配列番号:105、配列番号:107、配列番号:109、配列番号:111、配列番号:113、配列番号:115、配列番号:117、配列番号:119、配列番号:121、配列番号:123、配列番号:125、配列番号:127、配列番号:129、配列番号:131、配列番号:133、配列番号:135、配列番号:137、配列番号:139、配列番号:141、配列番号:143、配列番号:145、配列番号:147、配列番号:149、配列番号:151、配列番号:153、配列番号:155、配列番号:157、配列番号:159、配列番号:161、配列番号:163、配列番号:165、配列番号:167、配列番号:169、配列番号:171、配列番号:173、配列番号:175、配列番号:177、配列番号:179、配列番号:181、配列番号:183、配列番号:185、配列番号:187、配列番号:189、配列番号:191、配列番号:193、配列番号:195、配列番号:197、配列番号:199、配列番号:201、配列番号:203、配列番号:205、配列番号:207、配列番号:209、配列番号:211、配列番号:213、配列番号:215、配列番号:217、配列番号:219、配列番号:221、配列番号:223、配列番号:225、配列番号:227、配列番号:229、配列番号:231、配列番号:233、配列番号:235、配列番号:237、配列番号:239、配列番号:241、配列番号:243、配列番号:245、配列番号:247、配列番号:249、配列番号:251、配列番号:253、配列番号:255、配列番号:257、配列番号:259、配列番号:261、配列番号:263、配列番号:265、配列番号:267、配列番号:269、配列番号:271、配列番号:273、配列番号:275、配列番号:277、配列番号:279、配列番号:281、配列番号:283、配列番号:285、配列番号:287、配列番号:289、配列番号:291、配列番号:293、配列番号:295、配列番号:297、配列番号:299、配列番号:301、配列番号:303、配列番号:305、配列番号:307、配列番号:309、配列番号:311、配列番号:313、配列番号:315、配列番号:317、配列番号:319、配列番号:321、配列番号:323、配列番号:325、配列番号:327、配列番号:329、配列番号:331、配列番号:333、配列番号:335、配列番号:337、配列番号:339、配列番号:341、配列番号:343、配列番号:345、配列番号:347、配列番号:349、配列番号:351、配列番号:353、配列番号:355、配列番号:357、配列番号:359、配列番号:361、配列番号:363、配列番号:365、配列番号:367、配列番号:369、配列番号:371、配列番号:373、配列番号:375、配列番号:377、配列番号:379、配列番号:381、配列番号:383、配列番号:385、配列番号:387、配列番号:389、配列番号:391、配列番号:393、配列番号:395、配列番号:397、配列番号:399、配列番号:401、配列番号:403、配列番号:405、配列番号:407、配列番号:409、配列番号:411、配列番号:413、配列番号:415、配列番号:417、配列番号:419、配列番号:421、配列番号:423、配列番号:425、配列番号:427、配列番号:429、配列番号:431、配列番号:433、配列番号:435、配列番号:437、配列番号:439、配列番号:441、配列番号:443、配列番号:445、配列番号:447、配列番号:449、配列番号:451、配列番号:453、配列番号:455、配列番号:457、配列番号:459、配列番号:461、配列番号:463、配列番号:465、配列番号:467、配列番号:469、配列番号:471、配列番号:473、配列番号:475、配列番号:477、配列番号:479、配列番号:481、配列番号:483、配列番号:485、配列番号:487、配列番号:489、配列番号:491、配列番号:493、配列番号:495、配列番号:497、配列番号:499、配列番号:501、配列番号:503、配列番号:505、配列番号:507、配列番号:509、配列番号:511、配列番号:513、配列番号:515、配列番号:517、配列番号:519、配列番号:521、配列番号:523、配列番号:525、配列番号:527、配列番号:529、配列番号:531、配列番号:533、配列番号:535、配列番号:537、配列番号:539、配列番号:541、配列番号:543、配列番号:545、配列番号:547、配列番号:549、配列番号:551、配列番号:553、配列番号:555、配列番号:557、配列番号:559、配列番号:561、配列番号:563、配列番号:565、配列番号:567、配列番号:569、配列番号:571、配列番号:573、配列番号:575、配列番号:577、配列番号:579、配列番号:581、配列番号:583、配列番号:585、配列番号:587、配列番号:589、配列番号:591、配列番号:593、配列番号:595、配列番号:597、配列番号:599、配列番号:601、配列番号:603、配列番号:605、配列番号:607、配列番号:609、配列番号:611、配列番号:613、配列番号:615、配列番号:617、配列番号:619、配列番号:621、配列番号:623、配列番号:625、配列番号:627、配列番号:629、配列番号:631、配列番号:633、配列番号:635、配列番号:637、配列番号:639、配列番号:641、配列番号:643、配列番号:645、配列番号:647、配列番号:649、配列番号:651、配列番号:653、配列番号:655、配列番号:657、配列番号:659、配列番号:661、配列番号:663、配列番号:665、配列番号:667、配列番号:669、配列番号:671、配列番号:673、配列番号:675、配列番号:677、配列番号:679、配列番号:681、配列番号:683、配列番号:685、配列番号:687、配列番号:689、配列番号:691、配列番号:693、配列番号:695、配列番号:697、配列番号:699、配列番号:701、配列番号:703、配列番号:705、配列番号:707、配列番号:709、配列番号:711、配列番号:713、配列番号:715、配列番号:717、配列番号:719、配列番号:721、配列番号:723、配列番号:725、配列番号:727、配列番号:729、配列番号:731、配列番号:733、配列番号:735、配列番号:737、配列番号:739、配列番号:741、配列番号:743、配列番号:745、配列番号:747、配列番号:749、配列番号:751、配列番号:753、配列番号:755、配列番号:757、配列番号:759、配列番号:761、配列番号:763、配列番号:765、配列番号:767、配列番号:769、配列番号:771、配列番号:773、配列番号:775、配列番号:777、配列番号:779、配列番号:781、配列番号:783、配列番号:785、配列番号:787、配列番号:789、配列番号:791、配列番号:793、配列番号:795、配列番号:797、配列番号:799、配列番号:801、配列番号:803、配列番号:805、配列番号:807、配列番号:809、配列番号:811、配列番号:813、配列番号:815、配列番号:817、配列番号:819、配列番号:821、配列番号:823、配列番号:825、配列番号:827、配列番号:829、配列番号:831、配列番号:833、配列番号:835、配列番号:837、配列番号:839、配列番号:841、配列番号:843、配列番号:845、配列番号:847、配列番号:849、配列番号:851、配列番号:853、配列番号:855、配列番号:857、配列番号:859、配列番号:861、配列番号:863、配列番号:865、配列番号:867、配列番号:869、配列番号:871、配列番号:873、配列番号:875、配列番号:877、配列番号:879、配列番号:881、配列番号:883、配列番号:885、配列番号:887、配列番号:889、配列番号:891、配列番号:893、配列番号:895、配列番号:897、配列番号:899、配列番号:901、配列番号:903、配列番号:905、配列番号:907、配列番号:909、配列番号:911、配列番号:913、配列番号:915、配列番号:917、配列番号:919、配列番号:921、配列番号:923、配列番号:925、配列番号:927、配列番号:929、配列番号:931、配列番号:933、配列番号:935、配列番号:937、配列番号:939、配列番号:941、配列番号:943、配列番号:945、配列番号:947、配列番号:949、配列番号:951または配列番号:953記載の配列を含む、請求項1記載の単離または組換え核酸。
【請求項5】
配列番号:2、配列番号:4、配列番号:6、配列番号:8、配列番号:10、配列番号:12、配列番号:14、配列番号:16、配列番号:18、配列番号:20、配列番号:22、配列番号:24、配列番号:26、配列番号:28、配列番号:30、配列番号:32、配列番号:34、配列番号:36、配列番号:38、配列番号:40、配列番号:42、配列番号:44、配列番号:46、配列番号:48、配列番号:50、配列番号:52、配列番号:54、配列番号:56、配列番号:58、配列番号:60、配列番号:62、配列番号:64、配列番号:66、配列番号:68、配列番号:70、配列番号:72、配列番号:74、配列番号:76、配列番号:78、配列番号:80、配列番号:82、配列番号:84、配列番号:86、配列番号:88、配列番号:90、配列番号:92、配列番号:94、配列番号:96、配列番号:98、配列番号:100、配列番号:102、配列番号:104、配列番号:106、配列番号:108、配列番号:110、配列番号:112、配列番号:114、配列番号:116、配列番号:118、配列番号:120、配列番号:122、配列番号:124、配列番号:126、配列番号:128、配列番号:130、配列番号:132、配列番号:134、配列番号:136、配列番号:138、配列番号:140、配列番号:142、配列番号:143、配列番号:146、配列番号:148、配列番号:150、配列番号:152、配列番号:154、配列番号:156、配列番号:158、配列番号:160、配列番号:162、配列番号:164、配列番号:166、配列番号:168、配列番号:170、配列番号:172、配列番号:174、配列番号:176、配列番号:178、配列番号:180、配列番号:182、配列番号:184、配列番号:186、配列番号:188、配列番号:190、配列番号:192、配列番号:194、配列番号:196、配列番号:198、配列番号:200、配列番号:202、配列番号:204、配列番号:206、配列番号:208、配列番号:210、配列番号:212、配列番号:214、配列番号:216、配列番号:218、配列番号:220、配列番号:222、配列番号:224、配列番号:226、配列番号:228、配列番号:230、配列番号:232、配列番号:234、配列番号:236、配列番号:238、配列番号:240、配列番号:242、配列番号:244、配列番号:246、配列番号:248、配列番号:250、配列番号:252、配列番号:254、配列番号:256、配列番号:258、配列番号:260、配列番号:262、配列番号:264、配列番号:266、配列番号:268、配列番号:270、配列番号:272、配列番号:274、配列番号:276、配列番号:278、配列番号:280、配列番号:282、配列番号:284、配列番号:286、配列番号:288、配列番号:290、配列番号:292、配列番号:294、配列番号:296、配列番号:298、配列番号:300、配列番号:302、配列番号:304、配列番号:306、配列番号:308、配列番号:310、配列番号:312、配列番号:314、配列番号:316、配列番号:318、配列番号:320、配列番号:322、配列番号:324、配列番号:326、配列番号:328、配列番号:330、配列番号:332、配列番号:334、配列番号:336、配列番号:338、配列番号:340、配列番号:342、配列番号:344、配列番号:346、配列番号:348、配列番号:350、配列番号:352、配列番号:354、配列番号:356、配列番号:358、配列番号:360、配列番号:362、配列番号:364、配列番号:366、配列番号:368、配列番号:370、配列番号:372、配列番号:374、配列番号:376、配列番号:378、配列番号:380、配列番号:382、配列番号:384、配列番号:386、配列番号:388、配列番号:390、配列番号:392、配列番号:394、配列番号:396、配列番号:398、配列番号:400、配列番号:402、配列番号:404、配列番号:406、配列番号:408、配列番号:410、配列番号:412、配列番号:414、配列番号:416、配列番号:418、配列番号:420、配列番号:422、配列番号:424、配列番号:426、配列番号:428、配列番号:430、配列番号:432、配列番号:434、配列番号:436、配列番号:438、配列番号:440、配列番号:442、配列番号:444、配列番号:446、配列番号:448、配列番号:450、配列番号:452、配列番号:454、配列番号:456、配列番号:458、配列番号:460、配列番号:462、配列番号:464、配列番号:466、配列番号:468、配列番号:470、配列番号:472、配列番号:474、配列番号:476、配列番号:478、配列番号:480、配列番号:482、配列番号:484、配列番号:486、配列番号:488、配列番号:490、配列番号:492、配列番号:494、配列番号:496、配列番号:498、配列番号:500、配列番号:502、配列番号:504、配列番号:506、配列番号:508、配列番号:510、配列番号:512、配列番号:514、配列番号:516、配列番号:518、配列番号:520、配列番号:522、配列番号:524、配列番号:526、配列番号:528、配列番号:530、配列番号:532、配列番号:534、配列番号:536、配列番号:538、配列番号:540、配列番号:542、配列番号:544、配列番号:546、配列番号:548、配列番号:550、配列番号:552、配列番号:554、配列番号:556、配列番号:558、配列番号:560、配列番号:562、配列番号:564、配列番号:566、配列番号:568、配列番号:570、配列番号:572、配列番号:574、配列番号:576、配列番号:578、配列番号:580、配列番号:582、配列番号:584、配列番号:586、配列番号:588、配列番号:590、配列番号:592、配列番号:594、配列番号:596、配列番号:598、配列番号:600、配列番号:602、配列番号:604、配列番号:606、配列番号:608、配列番号:610、配列番号:612、配列番号:614、配列番号:616、配列番号:618、配列番号:620、配列番号:622、配列番号:624、配列番号:626、配列番号:628、配列番号:630、配列番号:632、配列番号:634、配列番号:636、配列番号:638、配列番号:640、配列番号:642、配列番号:644、配列番号:646、配列番号:648、配列番号:650、配列番号:652、配列番号:654、配列番号:656、配列番号:658、配列番号:660、配列番号:662、配列番号:664、配列番号:666、配列番号:668、配列番号:670、配列番号:672、配列番号:674、配列番号:676、配列番号:678、配列番号:680、配列番号:682、配列番号:684、配列番号:686、配列番号:688、配列番号:690、配列番号:692、配列番号:694、配列番号:696、配列番号:698、配列番号:700、配列番号:702、配列番号:704、配列番号:706、配列番号:708、配列番号:710、配列番号:712、配列番号:714、配列番号:716、配列番号:718、配列番号:720、配列番号:722、配列番号:724、配列番号:726、配列番号:728、配列番号:730、配列番号:732、配列番号:734、配列番号:736、配列番号:738、配列番号:740、配列番号:742、配列番号:744、配列番号:746、配列番号:748、配列番号:750、配列番号:752、配列番号:754、配列番号:756、配列番号:758、配列番号:760、配列番号:762、配列番号:764、配列番号:766、配列番号:768、配列番号:770、配列番号:772、配列番号:774、配列番号:776、配列番号:778、配列番号:780、配列番号:782、配列番号:784、配列番号:786、配列番号:788、配列番号:790、配列番号:792、配列番号:794、配列番号:796、配列番号:798、配列番号:800、配列番号:802、配列番号:804、配列番号:808、配列番号:808、配列番号:810、配列番号:812、配列番号:814、配列番号:816、配列番号:818、配列番号:820、配列番号:822、配列番号:824、配列番号:826、配列番号:828、配列番号:830、配列番号:832、配列番号:834、配列番号:836、配列番号:838、配列番号:840、配列番号:842、配列番号:844、配列番号:846、配列番号:848、配列番号:850、配列番号:852、配列番号:854、配列番号:856、配列番号:858、配列番号:860、配列番号:862、配列番号:864、配列番号:866、配列番号:868、配列番号:870、配列番号:872、配列番号:874、配列番号:876、配列番号:878、配列番号:880、配列番号:882、配列番号:884、配列番号:886、配列番号:888、配列番号:890、配列番号:892、配列番号:894、配列番号:896、配列番号:898、配列番号:900、配列番号:902、配列番号:904、配列番号:906、配列番号:908、配列番号:910、配列番号:912、配列番号:914、配列番号:916、配列番号:918、配列番号:920、配列番号:922、配列番号:924、配列番号:926、配列番号:928、配列番号:930、配列番号:932、配列番号:934、配列番号:936、配列番号:938、配列番号:940、配列番号:942、配列番号:944、配列番号:946、配列番号:948、配列番号:950、配列番号:952または配列番号:954記載の配列を有するポリペプチドをコードする、請求項1記載の単離または組換え核酸。
【請求項6】
配列比較アルゴリズムがBLAST Ver.2.2.2アルゴリズムであって、フィルタリング設定がblastall -p blastp -d “nr pataa” -F Fに設定され、他のオプションが規定値に設定されている、請求項1記載の単離または組換え核酸。
【請求項7】
ヒドロラーゼ活性がリパーゼ活性、プロテアーゼ活性、エステラーゼ活性またはホスホリパーゼ活性を含む、請求項1記載の単離または組換え核酸。
【請求項8】
リパーゼ活性が、トリアシルグリセロールをジアシルグリセロールと遊離脂肪酸に加水分解すること、または、トリアシルグリセロールをモノアシルグリセロールと遊離脂肪酸に加水分解すること、または、ジアシルグリセロールをモノアシルグリセロールと遊離脂肪酸に加水分解すること、または、モノアシルグリセロールを遊離脂肪酸とグリセロールに加水分解することを含む、あるいは、トリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)を加水分解することを含む、請求項7記載の単離または組換え核酸。
【請求項9】
リパーゼ活性が、ジアシルグリセロールまたはモノアシルグリセロール、および遊離脂肪酸とからトリアシルグリセロールを合成することを含む、請求項7記載の単離または組換え核酸。
【請求項10】
リパーゼ活性が、1,3-ジパルミトイル-2-オレオイルグリセロール(POP)、1,3-ジステアロイル-2-オレオイルグリセロール(SOS)、1-ジパルミトイル-2-オレオイル-3-ステアロイルグリセロール(POS)もしくは1-オレオイル-2,3-ジミリストイルグリセロール(OMM)、長鎖ポリ不飽和脂肪酸、アラキドン酸、ドコサヘキサエン酸(DHA)またはエイコサペンタエン酸(EPA)を合成することを含む、請求項7記載の単離または組換え核酸。
【請求項11】
リパーゼ活性がトリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)位置特異的である、請求項7記載の単離または組換え核酸。
【請求項12】
リパーゼ活性がSn2-特異的、Sn1-またはSn3-特異的である、請求項11記載の単離または組換え核酸。
【請求項13】
リパーゼ活性が脂肪酸特異的である、請求項7記載の単離または組換え核酸。
【請求項14】
リパーゼ活性が、加水分解、アルコール分解、エステル化、エステル転移またはエステル交換によって油を改変することを含む、請求項7記載の単離または組換え核酸。
【請求項15】
リパーゼ活性が位置特異的または化学選択的である、請求項7記載の単離または組換え核酸。
【請求項16】
リパーゼ活性が、エナンチオマー的に純粋なキラル生成物を合成することを含む、請求項15記載の単離または組換え核酸。
【請求項17】
リパーゼ活性がウンベリフェリル脂肪酸(FA)エステルを合成することを含む、請求項7記載の単離または組換え核酸。
【請求項18】
ヒドロラーゼ活性が熱安定性である、請求項7記載の単離または組換え核酸。
【請求項19】
ポリペプチドが約37℃〜約95℃、約55℃〜約85℃、約70℃〜約95℃または約90℃〜約95℃の温度範囲を含む条件下でリパーゼ活性を維持する、請求項18記載の単離または組換え核酸。
【請求項20】
ヒドロラーゼ活性が耐熱性である、請求項1記載の単離または組換え核酸。
【請求項21】
ポリペプチドが、37℃より高い温度から約95℃、55℃より高い温度から約85℃、または90℃よりも高い温度から約95℃の範囲の温度に曝露した後にヒドロラーゼ活性を維持する、請求項20記載の単離または組換え核酸。
【請求項22】
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【請求項23】
核酸が少なくとも長さ約50、75、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000若しくはそれより多い残基、または遺伝子若しくは転写物の完全長である、請求項23記載の単離または組換え核酸。
【請求項24】
ストリンジェントな条件が、0.2 x SSC中で約65℃にて約15分間の洗浄を含む洗浄工程を含む、請求項22記載の単離または組換え核酸。
【請求項25】
請求項1記載の配列の少なくとも10の連続する塩基を含み、結合またはハイブリダイゼーションによってヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を同定するための核酸プローブ。
【請求項26】
少なくとも約10〜50、約20〜60、約30〜70、約40〜80、約60〜100または約50〜150の連続する塩基を含むオリゴヌクレオチドを含む、請求項25記載の核酸プローブ。
【請求項27】
ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を同定するための核酸プローブであって、前記プローブが、配列番号:1、配列番号:3、配列番号:5、配列番号:7、配列番号:9、配列番号:11、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:17、配列番号:19、配列番号:21、配列番号:23、配列番号:25、配列番号:27、配列番号:29、配列番号:31、配列番号:33、配列番号:35、配列番号:37、配列番号:39、配列番号:41、配列番号:43、配列番号:45、配列番号:47、配列番号:49、配列番号:51、配列番号:53、配列番号:55、配列番号:57、配列番号:59、配列番号:61、配列番号:63、配列番号:65、配列番号:67、配列番号:69、配列番号:71、配列番号:73、配列番号:75、配列番号:77、配列番号:79、配列番号:81、配列番号:83、配列番号:85、配列番号:87、配列番号:89、配列番号:91、配列番号:93、配列番号:95、配列番号:97、配列番号:99、配列番号:101、配列番号:103、配列番号:105、配列番号:107、配列番号:109、配列番号:111、配列番号:113、配列番号:115、配列番号:117、配列番号:119、配列番号:121、配列番号:123、配列番号:125、配列番号:127、配列番号:129、配列番号:131、配列番号:133、配列番号:135、配列番号:137、配列番号:139、配列番号:141、配列番号:143、配列番号:145、配列番号:147、配列番号:149、配列番号:151、配列番号:153、配列番号:155、配列番号:157、配列番号:159、配列番号:161、配列番号:163、配列番号:165、配列番号:167、配列番号:169、配列番号:171、配列番号:173、配列番号:175、配列番号:177、配列番号:179、配列番号:181、配列番号:183、配列番号:185、配列番号:187、配列番号:189、配列番号:191、配列番号:193、配列番号:195、配列番号:197、配列番号:199、配列番号:201、配列番号:203、配列番号:205、配列番号:207、配列番号:209、配列番号:211、配列番号:213、配列番号:215、配列番号:217、配列番号:219、配列番号:221、配列番号:223、配列番号:225、配列番号:227、配列番号:229、配列番号:231、配列番号:233、配列番号:235、配列番号:237、配列番号:239、配列番号:241、配列番号:243、配列番号:245、配列番号:247、配列番号:249、配列番号:251、配列番号:253、配列番号:255、配列番号:257、配列番号:259、配列番号:261、配列番号:263、配列番号:265、配列番号:267、配列番号:269、配列番号:271、配列番号:273、配列番号:275、配列番号:277、配列番号:279、配列番号:281、配列番号:283、配列番号:285、配列番号:287、配列番号:289、配列番号:291、配列番号:293、配列番号:295、配列番号:297、配列番号:299、配列番号:301、配列番号:303、配列番号:305、配列番号:307、配列番号:309、配列番号:311、配列番号:313、配列番号:315、配列番号:317、配列番号:319、配列番号:321、配列番号:323、配列番号:325、配列番号:327、配列番号:329、配列番号:331、配列番号:333、配列番号:335、配列番号:337、配列番号:339、配列番号:341、配列番号:343、配列番号:345、配列番号:347、配列番号:349、配列番号:351、配列番号:353、配列番号:355、配列番号:357、配列番号:359、配列番号:361、配列番号:363、配列番号:365、配列番号:367、配列番号:369、配列番号:371、配列番号:373、配列番号:375、配列番号:377、配列番号:379、配列番号:381、配列番号:383、配列番号:385、配列番号:387、配列番号:389、配列番号:391、配列番号:393、配列番号:395、配列番号:397、配列番号:399、配列番号:401、配列番号:403、配列番号:405、配列番号:407、配列番号:409、配列番号:411、配列番号:413、配列番号:415、配列番号:417、配列番号:419、配列番号:421、配列番号:423、配列番号:425、配列番号:427、配列番号:429、配列番号:431、配列番号:433、配列番号:435、配列番号:437、配列番号:439、配列番号:441、配列番号:443、配列番号:445、配列番号:447、配列番号:449、配列番号:451、配列番号:453、配列番号:455、配列番号:457、配列番号:459、配列番号:461、配列番号:463、配列番号:465、配列番号:467、配列番号:469、配列番号:471、配列番号:473、配列番号:475、配列番号:477、配列番号:479、配列番号:481、配列番号:483、配列番号:485、配列番号:487、配列番号:489、配列番号:491、配列番号:493、配列番号:495、配列番号:497、配列番号:499、配列番号:501、配列番号:503、配列番号:505、配列番号:507、配列番号:509、配列番号:511、配列番号:513、配列番号:515、配列番号:517、配列番号:519、配列番号:521、配列番号:523、配列番号:525、配列番号:527、配列番号:529、配列番号:531、配列番号:533、配列番号:535、配列番号:537、配列番号:539、配列番号:541、配列番号:543、配列番号:545、配列番号:547、配列番号:549、配列番号:551、配列番号:553、配列番号:555、配列番号:557、配列番号:559、配列番号:561、配列番号:563、配列番号:565、配列番号:567、配列番号:569、配列番号:571、配列番号:573、配列番号:575、配列番号:577、配列番号:579、配列番号:581、配列番号:583、配列番号:585、配列番号:587、配列番号:589、配列番号:591、配列番号:593、配列番号:595、配列番号:597、配列番号:599、配列番号:601、配列番号:603、配列番号:605、配列番号:607、配列番号:609、配列番号:611、配列番号:613、配列番号:615、配列番号:617、配列番号:619、配列番号:621、配列番号:623、配列番号:625、配列番号:627、配列番号:629、配列番号:631、配列番号:633、配列番号:635、配列番号:637、配列番号:639、配列番号:641、配列番号:643、配列番号:645、配列番号:647、配列番号:649、配列番号:651、配列番号:653、配列番号:655、配列番号:657、配列番号:659、配列番号:661、配列番号:663、配列番号:665、配列番号:667、配列番号:669、配列番号:671、配列番号:673、配列番号:675、配列番号:677、配列番号:679、配列番号:681、配列番号:683、配列番号:685、配列番号:687、配列番号:689、配列番号:691、配列番号:693、配列番号:695、配列番号:697、配列番号:699、配列番号:701、配列番号:703、配列番号:705、配列番号:707、配列番号:709、配列番号:711、配列番号:713、配列番号:715、配列番号:717、配列番号:719、配列番号:721、配列番号:723、配列番号:725、配列番号:727、配列番号:729、配列番号:731、配列番号:733、配列番号:735、配列番号:737、配列番号:739、配列番号:741、配列番号:743、配列番号:745、配列番号:747、配列番号:749、配列番号:751、配列番号:753、配列番号:755、配列番号:757、配列番号:759、配列番号:761、配列番号:763、配列番号:765、配列番号:767、配列番号:769、配列番号:771、配列番号:773、配列番号:775、配列番号:777、配列番号:779、配列番号:781、配列番号:783、配列番号:785、配列番号:787、配列番号:789、配列番号:791、配列番号:793、配列番号:795、配列番号:797、配列番号:799、配列番号:801、配列番号:803、配列番号:805、配列番号:807、配列番号:809、配列番号:811、配列番号:813、配列番号:815、配列番号:817、配列番号:819、配列番号:821、配列番号:823、配列番号:825、配列番号:827、配列番号:829、配列番号:831、配列番号:833、配列番号:835、配列番号:837、配列番号:839、配列番号:841、配列番号:843、配列番号:845、配列番号:847、配列番号:849、配列番号:851、配列番号:853、配列番号:855、配列番号:857、配列番号:859、配列番号:861、配列番号:863、配列番号:865、配列番号:867、配列番号:869、配列番号:871、配列番号:873、配列番号:875、配列番号:877、配列番号:879、配列番号:881、配列番号:883、配列番号:885、配列番号:887、配列番号:889、配列番号:891、配列番号:893、配列番号:895、配列番号:897、配列番号:899、配列番号:901、配列番号:903、配列番号:905、配列番号:907、配列番号:909、配列番号:911、配列番号:913、配列番号:915、配列番号:917、配列番号:919、配列番号:921、配列番号:923、配列番号:925、配列番号:927、配列番号:929、配列番号:931、配列番号:933、配列番号:935、配列番号:937、配列番号:939、配列番号:941、配列番号:943、配列番号:945、配列番号:947、配列番号:949、配列番号:951または配列番号:953の少なくとも約10の連続する塩基を含む核酸を含み、前記配列同一性が配列比較アルゴリズムによる分析または目視精査によって決定される前記核酸プローブ。
【請求項28】
少なくとも約10〜50、約20〜60、約30〜70、約40〜80、約60〜100または約50〜150の連続する塩基を含むオリゴヌクレオチドを含む、請求項27記載の核酸プローブ。
【請求項29】
請求項1または22記載の配列を含む核酸またはその部分配列を増幅することのできる、ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を増幅するための増幅プライマー配列対。
【請求項30】
増幅プライマー配列対の各構成プライマーが、前記配列の約10〜50の連続する塩基を含むオリゴヌクレオチドを含む、請求項29記載の増幅プライマー対。
【請求項31】
請求項1若しくは請求項22記載の核酸配列またはその部分配列を増幅することのできる増幅プライマー配列対で鋳型核酸を増幅することを含む、ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を増幅する方法。
【請求項32】
請求項1または請求項22記載の配列を含む核酸を含む発現カセット。
【請求項33】
請求項1または請求項22記載の配列を含む核酸を含むベクター。
【請求項34】
ウイルスベクター、プラスミド、ファージ、ファージミド、コスミド、フォスミド、バクテリオファージまたは人工染色体を含む、請求項1または請求項22記載の配列を含む核酸を含むクローニングビヒクル。
【請求項35】
ウイルスベクターがアデノウイルスベクター、レトロウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクターを含む、請求項34記載のクローニングビヒクル。
【請求項36】
細菌人工染色体(BAC)、プラスミド、バクテリオファージP1-誘導体ベクター(PAC)、酵母人工染色体(YAC)、哺乳動物人工染色体(MAC)を含む、請求項34記載のクローニングビヒクル。
【請求項37】
請求項1または請求項22記載の配列を含む核酸を含む形質転換細胞。
【請求項38】
請求項32記載の発現カセットを含む形質転換細胞。
【請求項39】
バクテリア細胞、哺乳動物細胞、真菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、または植物細胞である、請求項37または請求項38記載の形質転換細胞。
【請求項40】
請求項1または請求項22記載の配列を含む非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
【請求項41】
マウスである、請求項40記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
【請求項42】
請求項1または請求項22記載の配列を含むトランスジェニック植物。
【請求項43】
トウモロコシ、モロコシ、ジャガイモ、トマト、コムギ、油糧種子植物、ナタネ、ダイズ、イネ、オオムギ、草本、またはタバコである、請求項42記載のトランスジェニック植物。
【請求項44】
請求項1または請求項22記載の配列を含むトランスジェニック種子。
【請求項45】
種子が、イネ、トウモロコシ種子、コムギ核、油糧種子、ナタネ種子、ヤシ核、ヒマワリ種子、ゴマ種子、コメ、オオムギ、ラッカセイ、タバコ種子である、請求項44記載のトランスジェニック種子。
【請求項46】
請求項1若しくは請求項22記載の配列またはその部分配列に相補的またはストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることのできる核酸配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項47】
約10〜50、約20〜60、約30〜70、約40〜80または約60〜100塩基長である、請求項46記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項48】
請求項1若しくは請求項22記載の配列に相補的またはストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることのできる核酸配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを細胞に導入するまたは細胞中で発現させることを含む、細胞中のヒドロラーゼメッセージの翻訳を阻害する方法。
【請求項49】
請求項1または請求項22記載の配列の部分配列を含む二本鎖阻害性RNA(RNAi)分子。
【請求項50】
約15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25またはそれより長い二重鎖ヌクレオチド長である、請求項49記載の二本鎖阻害性RNA(RNAi)分子。
【請求項51】
請求項1または請求項22記載の配列の部分配列を含む二本鎖阻害性RNA(RNAi)分子を細胞に投与するまたは細胞内で発現させることを含む、細胞におけるヒドロラーゼの発現を阻害する方法。
【請求項52】
(i)配列番号:2、配列番号:4、配列番号:6、配列番号:8、配列番号:10、配列番号:12、配列番号:14、配列番号:16、配列番号:18、配列番号:20、配列番号:22、配列番号:24、配列番号:26、配列番号:28、配列番号:30、配列番号:32、配列番号:34、配列番号:36、配列番号:38、配列番号:40、配列番号:42、配列番号:44、配列番号:46、配列番号:48、配列番号:50、配列番号:52、配列番号:54、配列番号:56、配列番号:58、配列番号:60、配列番号:62、配列番号:64、配列番号:66、配列番号:68、配列番号:70、配列番号:72、配列番号:74、配列番号:76、配列番号:78、配列番号:80、配列番号:82、配列番号:84、配列番号:86、配列番号:88、配列番号:90、配列番号:92、配列番号:94、配列番号:96、配列番号:98、配列番号:100、配列番号:102、配列番号:104、配列番号:106、配列番号:108、配列番号:110、配列番号:112、配列番号:114、配列番号:116、配列番号:118、配列番号:120、配列番号:122、配列番号:124、配列番号:126、配列番号:128、配列番号:130、配列番号:132、配列番号:134、配列番号:136、配列番号:138、配列番号:140、配列番号:142、配列番号:143、配列番号:146、配列番号:148、配列番号:150、配列番号:152、配列番号:154、配列番号:156、配列番号:158、配列番号:160、配列番号:162、配列番号:164、配列番号:166、配列番号:168、配列番号:170、配列番号:172、配列番号:174、配列番号:176、配列番号:178、配列番号:180、配列番号:182、配列番号:184、配列番号:186、配列番号:188、配列番号:190、配列番号:192、配列番号:194、配列番号:196、配列番号:198、配列番号:200、配列番号:202、配列番号:204、配列番号:206、配列番号:208、配列番号:210、配列番号:212、配列番号:214、配列番号:216、配列番号:218、配列番号:220、配列番号:222、配列番号:224、配列番号:226、配列番号:228、配列番号:230、配列番号:232、配列番号:234、配列番号:236、配列番号:238、配列番号:240、配列番号:242、配列番号:244、配列番号:246、配列番号:248、配列番号:250、配列番号:252、配列番号:254、配列番号:256、配列番号:258、配列番号:260、配列番号:262、配列番号:264、配列番号:266、配列番号:268、配列番号:270、配列番号:272、配列番号:274、配列番号:276、配列番号:278、配列番号:280、配列番号:282、配列番号:284、配列番号:286、配列番号:288、配列番号:290、配列番号:292、配列番号:294、配列番号:296、配列番号:298、配列番号:300、配列番号:302、配列番号:304、配列番号:306、配列番号:308、配列番号:310、配列番号:312、配列番号:314、配列番号:316、配列番号:318、配列番号:320、配列番号:322、配列番号:324、配列番号:326、配列番号:328、配列番号:330、配列番号:332、配列番号:334、配列番号:336、配列番号:338、配列番号:340、配列番号:342、配列番号:344、配列番号:346、配列番号:348、配列番号:350、配列番号:352、配列番号:354、配列番号:356、配列番号:358、配列番号:360、配列番号:362、配列番号:364、配列番号:366、配列番号:368、配列番号:370、配列番号:372、配列番号:374、配列番号:376、配列番号:378、配列番号:380、配列番号:382、配列番号:384、配列番号:386、配列番号:388、配列番号:390、配列番号:392、配列番号:394、配列番号:396、配列番号:398、配列番号:400、配列番号:402、配列番号:404、配列番号:406、配列番号:408、配列番号:410、配列番号:412、配列番号:414、配列番号:416、配列番号:418、配列番号:420、配列番号:422、配列番号:424、配列番号:426、配列番号:428、配列番号:430、配列番号:432、配列番号:434、配列番号:436、配列番号:438、配列番号:440、配列番号:442、配列番号:444、配列番号:446、配列番号:448、配列番号:450、配列番号:452、配列番号:454、配列番号:456、配列番号:458、配列番号:460、配列番号:462、配列番号:464、配列番号:466、配列番号:468、配列番号:470、配列番号:472、配列番号:474、配列番号:476、配列番号:478、配列番号:480、配列番号:482、配列番号:484、配列番号:486、配列番号:488、配列番号:490、配列番号:492、配列番号:494、配列番号:496、配列番号:498、配列番号:500、配列番号:502、配列番号:504、配列番号:506、配列番号:508、配列番号:510、配列番号:512、配列番号:514、配列番号:516、配列番号:518、配列番号:520、配列番号:522、配列番号:524、配列番号:526、配列番号:528、配列番号:530、配列番号:532、配列番号:534、配列番号:536、配列番号:538、配列番号:540、配列番号:542、配列番号:544、配列番号:546、配列番号:548、配列番号:550、配列番号:552、配列番号:554、配列番号:556、配列番号:558、配列番号:560、配列番号:562、配列番号:564、配列番号:566、配列番号:568、配列番号:570、配列番号:572、配列番号:574、配列番号:576、配列番号:578、配列番号:580、配列番号:582、配列番号:584、配列番号:586、配列番号:588、配列番号:590、配列番号:592、配列番号:594、配列番号:596、配列番号:598、配列番号:600、配列番号:602、配列番号:604、配列番号:606、配列番号:608、配列番号:610、配列番号:612、配列番号:614、配列番号:616、配列番号:618、配列番号:620、配列番号:622、配列番号:624、配列番号:626、配列番号:628、配列番号:630、配列番号:632、配列番号:634、配列番号:636、配列番号:638、配列番号:640、配列番号:642、配列番号:644、配列番号:646、配列番号:648、配列番号:650、配列番号:652、配列番号:654、配列番号:656、配列番号:658、配列番号:660、配列番号:662、配列番号:664、配列番号:666、配列番号:668、配列番号:670、配列番号:672、配列番号:674、配列番号:676、配列番号:678、配列番号:680、配列番号:682、配列番号:684、配列番号:686、配列番号:688、配列番号:690、配列番号:692、配列番号:694、配列番号:696、配列番号:698、配列番号:700、配列番号:702、配列番号:704、配列番号:706、配列番号:708、配列番号:710、配列番号:712、配列番号:714、配列番号:716、配列番号:718、配列番号:720、配列番号:722、配列番号:724、配列番号:726、配列番号:728、配列番号:730、配列番号:732、配列番号:734、配列番号:736、配列番号:738、配列番号:740、配列番号:742、配列番号:744、配列番号:746、配列番号:748、配列番号:750、配列番号:752、配列番号:754、配列番号:756、配列番号:758、配列番号:760、配列番号:762、配列番号:764、配列番号:766、配列番号:768、配列番号:770、配列番号:772、配列番号:774、配列番号:776、配列番号:778、配列番号:780、配列番号:782、配列番号:784、配列番号:786、配列番号:788、配列番号:790、配列番号:792、配列番号:794、配列番号:796、配列番号:798、配列番号:800、配列番号:802、配列番号:804、配列番号:808、配列番号:808、配列番号:810、配列番号:812、配列番号:814、配列番号:816、配列番号:818、配列番号:820、配列番号:822、配列番号:824、配列番号:826、配列番号:828、配列番号:830、配列番号:832、配列番号:834、配列番号:836、配列番号:838、配列番号:840、配列番号:842、配列番号:844、配列番号:846、配列番号:848、配列番号:850、配列番号:852、配列番号:854、配列番号:856、配列番号:858、配列番号:860、配列番号:862、配列番号:864、配列番号:866、配列番号:868、配列番号:870、配列番号:872、配列番号:874、配列番号:876、配列番号:878、配列番号:880、配列番号:882、配列番号:884、配列番号:886、配列番号:888、配列番号:890、配列番号:892、配列番号:894、配列番号:896、配列番号:898、配列番号:900、配列番号:902、配列番号:904、配列番号:906、配列番号:908、配列番号:910、配列番号:912、配列番号:914、配列番号:916、配列番号:918、配列番号:920、配列番号:922、配列番号:924、配列番号:926、配列番号:928、配列番号:930、配列番号:932、配列番号:934、配列番号:936、配列番号:938、配列番号:940、配列番号:942、配列番号:944、配列番号:946、配列番号:948、配列番号:950、配列番号:952または配列番号:954と少なくとも約100残基の領域にわたって少なくとも50%の配列同一性を有する(前記配列同一性は配列比較アルゴリズムを用いる分析によって、または目視精査によって決定される);または、
(ii)請求項1または請求項22記載の核酸によってコードされる、
単離または組換えポリペプチド。
【請求項53】
配列同一性が、少なくとも約51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれより高い領域にわたる、または100%の配列同一性である請求項52に記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項54】
配列同一性が、少なくとも酵素の約10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050残基またはそれより多い残基領域、または酵素の全長にわたる、請求項52記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項55】
配列番号:2、配列番号:4、配列番号:6、配列番号:8、配列番号:10、配列番号:12、配列番号:14、配列番号:16、配列番号:18、配列番号:20、配列番号:22、配列番号:24、配列番号:26、配列番号:28、配列番号:30、配列番号:32、配列番号:34、配列番号:36、配列番号:38、配列番号:40、配列番号:42、配列番号:44、配列番号:46、配列番号:48、配列番号:50、配列番号:52、配列番号:54、配列番号:56、配列番号:58、配列番号:60、配列番号:62、配列番号:64、配列番号:66、配列番号:68、配列番号:70、配列番号:72、配列番号:74、配列番号:76、配列番号:78、配列番号:80、配列番号:82、配列番号:84、配列番号:86、配列番号:88、配列番号:90、配列番号:92、配列番号:94、配列番号:96、配列番号:98、配列番号:100、配列番号:102、配列番号:104、配列番号:106、配列番号:108、配列番号:110、配列番号:112、配列番号:114、配列番号:116、配列番号:118、配列番号:120、配列番号:122、配列番号:124、配列番号:126、配列番号:128、配列番号:130、配列番号:132、配列番号:134、配列番号:136、配列番号:138、配列番号:140、配列番号:142、配列番号:143、配列番号:146、配列番号:148、配列番号:150、配列番号:152、配列番号:154、配列番号:156、配列番号:158、配列番号:160、配列番号:162、配列番号:164、配列番号:166、配列番号:168、配列番号:170、配列番号:172、配列番号:174、配列番号:176、配列番号:178、配列番号:180、配列番号:182、配列番号:184、配列番号:186、配列番号:188、配列番号:190、配列番号:192、配列番号:194、配列番号:196、配列番号:198、配列番号:200、配列番号:202、配列番号:204、配列番号:206、配列番号:208、配列番号:210、配列番号:212、配列番号:214、配列番号:216、配列番号:218、配列番号:220、配列番号:222、配列番号:224、配列番号:226、配列番号:228、配列番号:230、配列番号:232、配列番号:234、配列番号:236、配列番号:238、配列番号:240、配列番号:242、配列番号:244、配列番号:246、配列番号:248、配列番号:250、配列番号:252、配列番号:254、配列番号:256、配列番号:258、配列番号:260、配列番号:262、配列番号:264、配列番号:266、配列番号:268、配列番号:270、配列番号:272、配列番号:274、配列番号:276、配列番号:278、配列番号:280、配列番号:282、配列番号:284、配列番号:286、配列番号:288、配列番号:290、配列番号:292、配列番号:294、配列番号:296、配列番号:298、配列番号:300、配列番号:302、配列番号:304、配列番号:306、配列番号:308、配列番号:310、配列番号:312、配列番号:314、配列番号:316、配列番号:318、配列番号:320、配列番号:322、配列番号:324、配列番号:326、配列番号:328、配列番号:330、配列番号:332、配列番号:334、配列番号:336、配列番号:338、配列番号:340、配列番号:342、配列番号:344、配列番号:346、配列番号:348、配列番号:350、配列番号:352、配列番号:354、配列番号:356、配列番号:358、配列番号:360、配列番号:362、配列番号:364、配列番号:366、配列番号:368、配列番号:370、配列番号:372、配列番号:374、配列番号:376、配列番号:378、配列番号:380、配列番号:382、配列番号:384、配列番号:386、配列番号:388、配列番号:390、配列番号:392、配列番号:394、配列番号:396、配列番号:398、配列番号:400、配列番号:402、配列番号:404、配列番号:406、配列番号:408、配列番号:410、配列番号:412、配列番号:414、配列番号:416、配列番号:418、配列番号:420、配列番号:422、配列番号:424、配列番号:426、配列番号:428、配列番号:430、配列番号:432、配列番号:434、配列番号:436、配列番号:438、配列番号:440、配列番号:442、配列番号:444、配列番号:446、配列番号:448、配列番号:450、配列番号:452、配列番号:454、配列番号:456、配列番号:458、配列番号:460、配列番号:462、配列番号:464、配列番号:466、配列番号:468、配列番号:470、配列番号:472、配列番号:474、配列番号:476、配列番号:478、配列番号:480、配列番号:482、配列番号:484、配列番号:486、配列番号:488、配列番号:490、配列番号:492、配列番号:494、配列番号:496、配列番号:498、配列番号:500、配列番号:502、配列番号:504、配列番号:506、配列番号:508、配列番号:510、配列番号:512、配列番号:514、配列番号:516、配列番号:518、配列番号:520、配列番号:522、配列番号:524、配列番号:526、配列番号:528、配列番号:530、配列番号:532、配列番号:534、配列番号:536、配列番号:538、配列番号:540、配列番号:542、配列番号:544、配列番号:546、配列番号:548、配列番号:550、配列番号:552、配列番号:554、配列番号:556、配列番号:558、配列番号:560、配列番号:562、配列番号:564、配列番号:566、配列番号:568、配列番号:570、配列番号:572、配列番号:574、配列番号:576、配列番号:578、配列番号:580、配列番号:582、配列番号:584、配列番号:586、配列番号:588、配列番号:590、配列番号:592、配列番号:594、配列番号:596、配列番号:598、配列番号:600、配列番号:602、配列番号:604、配列番号:606、配列番号:608、配列番号:610、配列番号:612、配列番号:614、配列番号:616、配列番号:618、配列番号:620、配列番号:622、配列番号:624、配列番号:626、配列番号:628、配列番号:630、配列番号:632、配列番号:634、配列番号:636、配列番号:638、配列番号:640、配列番号:642、配列番号:644、配列番号:646、配列番号:648、配列番号:650、配列番号:652、配列番号:654、配列番号:656、配列番号:658、配列番号:660、配列番号:662、配列番号:664、配列番号:666、配列番号:668、配列番号:670、配列番号:672、配列番号:674、配列番号:676、配列番号:678、配列番号:680、配列番号:682、配列番号:684、配列番号:686、配列番号:688、配列番号:690、配列番号:692、配列番号:694、配列番号:696、配列番号:698、配列番号:700、配列番号:702、配列番号:704、配列番号:706、配列番号:708、配列番号:710、配列番号:712、配列番号:714、配列番号:716、配列番号:718、配列番号:720、配列番号:722、配列番号:724、配列番号:726、配列番号:728、配列番号:730、配列番号:732、配列番号:734、配列番号:736、配列番号:738、配列番号:740、配列番号:742、配列番号:744、配列番号:746、配列番号:748、配列番号:750、配列番号:752、配列番号:754、配列番号:756、配列番号:758、配列番号:760、配列番号:762、配列番号:764、配列番号:766、配列番号:768、配列番号:770、配列番号:772、配列番号:774、配列番号:776、配列番号:778、配列番号:780、配列番号:782、配列番号:784、配列番号:786、配列番号:788、配列番号:790、配列番号:792、配列番号:794、配列番号:796、配列番号:798、配列番号:800、配列番号:802、配列番号:804、配列番号:808、配列番号:808、配列番号:810、配列番号:812、配列番号:814、配列番号:816、配列番号:818、配列番号:820、配列番号:822、配列番号:824、配列番号:826、配列番号:828、配列番号:830、配列番号:832、配列番号:834、配列番号:836、配列番号:838、配列番号:840、配列番号:842、配列番号:844、配列番号:846、配列番号:848、配列番号:850、配列番号:852、配列番号:854、配列番号:856、配列番号:858、配列番号:860、配列番号:862、配列番号:864、配列番号:866、配列番号:868、配列番号:870、配列番号:872、配列番号:874、配列番号:876、配列番号:878、配列番号:880、配列番号:882、配列番号:884、配列番号:886、配列番号:888、配列番号:890、配列番号:892、配列番号:894、配列番号:896、配列番号:898、配列番号:900、配列番号:902、配列番号:904、配列番号:906、配列番号:908、配列番号:910、配列番号:912、配列番号:914、配列番号:916、配列番号:918、配列番号:920、配列番号:922、配列番号:924、配列番号:926、配列番号:928、配列番号:930、配列番号:932、配列番号:934、配列番号:936、配列番号:938、配列番号:940、配列番号:942、配列番号:944、配列番号:946、配列番号:948、配列番号:950、配列番号:952または配列番号:954記載の配列を有する、請求項52記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項56】
ヒドロラーゼ活性を有する、請求項60記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項57】
ヒドロラーゼ活性がエステラーゼ活性、リパーゼ活性、ホスホリパーゼ活性またはプロテアーゼ活性を含む、請求項52記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項58】
リパーゼ活性が、トリアシルグリセロールをジアシルグリセロールと遊離脂肪酸に加水分解すること、または、トリアシルグリセロールをモノアシルグリセロールと遊離脂肪酸に加水分解すること、または、ジアシルグリセロールをモノアシルグリセロールと遊離脂肪酸に加水分解すること、または、モノアシルグリセロールを遊離脂肪酸とグリセロールに加水分解することを含む、あるいは、トリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)を加水分解することを含む、請求項57記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項59】
リパーゼ活性が、ジアシルグリセロールまたはモノアシルグリセロール、および遊離脂肪酸とからトリアシルグリセロールを合成することを含む、請求項57記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項60】
リパーゼ活性が、1,3-ジパルミトイル-2-オレオイルグリセロール(POP)、1,3-ジステアロイル-2-オレオイルグリセロール(SOS)、1-ジパルミトイル-2-オレオイル-3-ステアロイルグリセロール(POS)もしくは1-オレオイル-2,3-ジミリストイルグリセロール(OMM)、長鎖ポリ不飽和脂肪酸、アラキドン酸、ドコサヘキサエン酸(DHA)またはエイコサペンタエン酸(EPA)を合成することを含む、請求項57記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項61】
リパーゼ活性がトリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)位置特異的である、請求項57記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項62】
リパーゼ活性がSn2-特異的、Sn1-またはSn3-特異的である、請求項61記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項63】
リパーゼ活性が脂肪酸特異的である、請求項57記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項64】
リパーゼ活性が、加水分解、アルコール分解、エステル化、エステル転移またはエステル交換によって油を改変することを含む、請求項57記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項65】
リパーゼ活性が位置特異的または化学選択的である、請求項57記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項66】
リパーゼ活性が、エナンチオマー的に純粋なキラル生成物を合成することを含む、請求項65記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項67】
リパーゼ活性がウンベリフェリル脂肪酸(FA)エステルを合成することを含む、請求項57記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項68】
ヒドロラーゼ活性が熱安定性である、請求項57記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項69】
ポリペプチドが約37℃〜約95℃、約55℃〜約85℃、約70℃〜約95℃または約90℃〜約95℃の温度範囲を含む条件下でヒドロラーゼ活性を維持する、請求項68記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項70】
ヒドロラーゼ活性が耐熱性である、請求項56記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項71】
ポリペプチドが、37℃より高い温度から約95℃、55℃より高い温度から約85℃、または90℃よりも高い温度から約95℃の範囲の温度に曝露した後にヒドロラーゼ活性を維持する、請求項70記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項72】
請求項52記載のポリペプチドを含み、シグナル配列を欠く単離または組換えポリペプチド。
【請求項73】
請求項52記載のポリペプチドを含み、異種シグナル配列を含む単離または組換えポリペプチド。
【請求項74】
ヒドロラーゼ活性が約37℃にて、タンパク質1mgあたり約100〜約1000ユニット、タンパク質1mgあたり約500〜約750ユニット、タンパク質1mgあたり約500〜1200ユニット、またはタンパク質1mgあたり約750〜1000ユニットの比活性を含む請求項56記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項75】
耐熱性が、上昇した温度まで加熱後に37℃におけるヒドロラーゼの比活性の少なくとも半分の活性を維持することを含む、請求項70記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項76】
耐熱性が、上昇した温度まで加熱後に37℃においてタンパク質1mgあたり約500〜1200ユニットの比活性を維持することを含む、請求項70記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項77】
少なくとも一つのグリコシル化部位を含む、請求項52記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項78】
グリコシル化がN-結合グリコシル化である、請求項77記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項79】
P.パストリスまたはS.ポンベで発現させるとグリコシル化される、請求項78記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項80】
約pH6.5、pH6.0、pH5.5、pH5.0、pH4.5またはpH4.0を含む条件下でヒドロラーゼ活性を維持する、請求項56記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項81】
約pH8.0、pH8.5、pH9、pH9.5、pH10またはpH10.5を含む条件下でヒドロラーゼ活性を維持する、請求項56記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項82】
液体、固体、またはゲルを含む、請求項52記載のポリペプチドを含むタンパク質調製物。
【請求項83】
請求項52記載のポリペプチドおよび第二のドメインを含むヘテロ二量体。
【請求項84】
第二のドメインがポリペプチドであり、ヘテロ二量体が融合タンパク質である、請求項83記載のヘテロ二量体。
【請求項85】
第2のドメインがエピトープまたはタグである、請求項84記載のヘテロ二量体。
【請求項86】
請求項52記載のポリペプチドを含むホモ二量体。
【請求項87】
前記ポリペプチドペプチドが請求項52記載の配列またはその部分配列を含む固定化ポリペプチド。
【請求項88】
ポリペプチドが細胞上、金属上、樹脂上、ポリマー上、セラミック上、ガラス上、微小電極上、グラファイト粒子上、ビーズ上、ゲル上、プレート上、アレイ上、またはキャピラリー管上に固定化されている、請求項87記載の固定化ポリペプチド。
【請求項89】
固定化された請求項52記載のポリペプチドを含むアレイ。
【請求項90】
固定化された請求項1または請求項22記載の核酸を含むアレイ。
【請求項91】
請求項52記載のポリペプチドに特異的に結合する単離または組換え抗体。
【請求項92】
モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である、請求項91記載の単離または組換え抗体。
【請求項93】
請求項52記載のポリペプチドに特異的に結合する抗体を含むハイブリドーマ。
【請求項94】
請求項52記載のポリペプチドまたはその部分配列を含む動物用食品補助物。
【請求項95】
ポリペプチドがグリコシル化されている、請求項94記載の動物用食品補助物。
【請求項96】
請求項52記載のポリペプチドを含む食用酵素デリバリーマトリックス。
【請求項97】
ペレットを含む、請求項96記載の食用酵素デリバリーマトリックス。
【請求項98】
ポリペプチドがグリコシル化されている、請求項97記載の食用酵素デリバリーマトリックス。
【請求項99】
ポリペプチドが耐熱性または熱安定性のヒドロラーゼ活性を有する、請求項96記載の食用酵素デリバリーマトリックス。
【請求項100】
以下の工程を含む、ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを単離または同定する方法:
(a)請求項91記載の抗体を提供する工程;
(b)ポリペプチドを含むサンプルを提供する工程;
(c)工程(b)のサンプルを工程(a)の抗体と、前記抗体が前記ポリペプチドへ特異的に結合することのできる条件下で接触させ、それによりヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを単離または同定する工程。
【請求項101】
請求項1または請求項22記載の核酸またはその部分配列を液性免疫応答を生じさせるに充分な量で非ヒト動物に投与し、それによって抗ヒドロラーゼ抗体を生じさせることを含む、抗ヒドロラーゼ抗体の作製方法。
【請求項102】
請求項52記載のポリペプチドまたはその部分配列を液性免疫応答を生じさせるに充分な量で非ヒト動物に投与し、それによって抗ヒドロラーゼ抗体を生じさせることを含む、抗ヒドロラーゼ抗体の作製方法。
【請求項103】
以下の工程を含む、組換えポリペプチドを製造する方法:
(a)プロモーターに機能可能に連結した核酸を提供する工程であって、前記核酸が請求項1または22記載の配列を含む核酸である、前記工程;および、
(b)工程(a)の核酸を、ポリペプチドの発現が可能な条件下で発現させ、それによって組換えポリペプチドを生成させる工程。
【請求項104】
更に、工程(a)の核酸で宿主細胞を形質転換し、続いて工程(a)の核酸を発現させ、それにより形質転換細胞において組換えポリペプチドを生成させることを含む、請求項103記載の方法。
【請求項105】
(a)請求項56記載のポリペプチドを提供する工程;
(b)ヒドロラーゼ基質を提供する工程;および
(c)前記ポリペプチドを工程(b)の基質と接触させ、前記基質の量の減少または反応生成物の量の増加を検出する工程、
を含み、基質の量の減少または反応生成物の量の増加によりヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを検出することを含む、ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを同定する方法。
【請求項106】
基質が脂肪酸、トリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)である、請求項105記載の方法。
【請求項107】
(a)請求項56記載のポリペプチドを提供する工程;
(b)試験基質を提供する工程;および
(c)工程(a)のポリペプチドを工程(b)の試験基質と接触させ、前記基質の量の減少または反応生成物の量の増加を検出する工程、
を含み、前記基質の量が減少または前記反応生成物が増加すれば前記試験基質をヒドロラーゼ基質として同定することを含む、ヒドロラーゼ基質を同定する方法。
【請求項108】
(a)請求項1または請求項22記載の配列を有する核酸または前記核酸を含むベクターを、前記核酸がポリペプチドに翻訳され得る条件下で発現させる工程;
(b)試験化合物を提供する工程;
(c)前記ポリペプチドを前記試験化合物と接触させる工程;および、
(d)工程(b)の試験化合物が前記ポリペプチドに特異的に結合するかどうかを測定する工程、
を含む、試験化合物がポリペプチドに特異的に結合するかどうかを決定する方法。
【請求項109】
(a)請求項52記載の配列を有するポリペプチドを提供する工程;
(b)試験化合物を提供する工程;
(c)前記ポリペプチドを前記試験化合物と接触させる工程;および、
(d)工程(b)の試験化合物が前記ポリペプチドに特異的に結合するかどうかを測定する工程、
を含む、試験化合物がポリペプチドに特異的に結合するかどうかを決定する方法。
【請求項110】
(a)請求項56記載のポリペプチドを提供する工程;
(b)試験化合物を提供する工程;
(c)工程(a)のポリペプチドを工程(b)の試験化合物に接触させ、ヒドロラーゼ活性を測定する工程、
を含み、前記試験化合物の非存在下で測定されるヒドロラーゼ活性に比較して前記試験化合物の存在下で測定されるヒドロラーゼ活性が変化すれば、前記試験化合物がヒドロラーゼ活性を調節すると決定する、ヒドロラーゼ活性の調節因子を同定する方法。
【請求項111】
ヒドロラーゼ活性が、ヒドロラーゼ基質を提供すること、および基質の量の減少若しくは反応生成物の量の増加を検出する、または、基質の量の増加若しくは反応生成物の量の減少を検出すること、によって測定される、請求項110記載の方法。
【請求項112】
試験化合物非存在下における基質の量若しくは反応生成物の量に比較して、前記試験化合物存在下における基質の量が減少若しくは反応生成物の量が増加すれば、前記試験化合物をヒドロラーゼ活性の活性化因子であると同定する、請求項111記載の方法。
【請求項113】
試験化合物非存在下における基質の量若しくは反応生成物の量に比較して、前記試験化合物存在下における基質の量が増加若しくは反応生成物の量が減少すれば、前記試験化合物をヒドロラーゼ活性の阻害因子であると同定する、請求項111記載の方法。
【請求項114】
プロセッサおよびデータ保存装置を含むコンピュータシステムであって、前記データ保存装置にはポリペプチド配列または核酸配列が保存され、前記ポリペプチド配列は請求項52記載の配列または請求項1若しくは請求項22記載の核酸配列によってコードされるポリペプチドを含む、前記コンピュータシステム。
【請求項115】
更に、配列比較アルゴリズムおよび少なくとも一つの参照配列が保存されたデータ保存装置を含む、請求項114記載のコンピュータシステム。
【請求項116】
配列比較アルゴリズムが多型性を表示するコンピュータプログラムを含む、請求項115記載のコンピュータシステム。
【請求項117】
配列の1以上の特徴を同定するアイデンティファイアーを更に含む請求項114記載のコンピュータシステム。
【請求項118】
ポリペプチド配列または核酸配列が保存されたコンピュータ読取り可能媒体であって、前記ポリペプチド配列が請求項52記載のポリペプチドまたは請求項1若しくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む、前記コンピュータ読取り可能媒体。
【請求項119】
以下の工程を含む、配列中の特徴を同定する方法:
(a)配列中の1以上の特徴を同定するコンピュータプログラムを用いて配列を読む工程であって、前記配列はポリペプチド配列または核酸配列を含み、前記ポリペプチド配列は請求項52記載のポリペプチドまたは請求項1若しくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む、前記工程;および、
(b)前記コンピュータプログラムにより前記配列中の1以上の特徴を同定する工程。
【請求項120】
以下の工程を含む、第1の配列と第2の配列とを比較する方法;
(a)配列を比較するコンピュータプログラムを用いて第1の配列及び第2の配列を読む工程であって、前記第1の配列はポリペプチド配列または核酸配列を含み、前記ポリペプチド配列は請求項52記載のポリペプチドまたは請求項1若しくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む、前記工程;および、
(b)前記第1の配列と前記第2の配列間の相違を前記コンピュータプログラムにより決定する工程。
【請求項121】
第1の配列と第2の配列間の相違を決定する工程が、更に多型性を同定する工程を含む、請求項120記載の方法。
【請求項122】
配列中の1以上の特徴を同定するアイデンティファイアーを更に含む、請求項120記載の方法。
【請求項123】
コンピュータプログラムを用いて第1の配列を読み、前記配列中の1以上の特徴を同定することを含む、請求項122記載の方法。
【請求項124】
以下の工程を含む、環境サンプルからヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を単離または回収する方法:
(a)請求項29記載の増幅プライマー配列対を提供する工程;
(b)環境サンプルから核酸を単離する、または環境サンプルを前記サンプル中の核酸が前記増幅プライマー対へハイブリダーゼションのために接近可能となるように処理する工程;および、
(c)工程(b)の核酸を工程(a)の増幅プライマー対と合わせ、前記環境サンプルからの核酸を増幅し、それによって前記環境サンプルからヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を単離または回収する工程。
【請求項125】
増幅プライマー配列対の各構成プライマーが、配列番号:1、配列番号:3、配列番号:5、配列番号:7、配列番号:9、配列番号:11、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:17、配列番号:19、配列番号:21、配列番号:23、配列番号:25、配列番号:27、配列番号:29、配列番号:31、配列番号:33、配列番号:35、配列番号:37、配列番号:39、配列番号:41、配列番号:43、配列番号:45、配列番号:47、配列番号:49、配列番号:51、配列番号:53、配列番号:55、配列番号:57、配列番号:59、配列番号:61、配列番号:63、配列番号:65、配列番号:67、配列番号:69、配列番号:71、配列番号:73、配列番号:75、配列番号:77、配列番号:79、配列番号:81、配列番号:83、配列番号:85、配列番号:87、配列番号:89、配列番号:91、配列番号:93、配列番号:95、配列番号:97、配列番号:99、配列番号:101、配列番号:103、配列番号:105、配列番号:107、配列番号:109、配列番号:111、配列番号:113、配列番号:115、配列番号:117、配列番号:119、配列番号:121、配列番号:123、配列番号:125、配列番号:127、配列番号:129、配列番号:131、配列番号:133、配列番号:135、配列番号:137、配列番号:139、配列番号:141、配列番号:143、配列番号:145、配列番号:147、配列番号:149、配列番号:151、配列番号:153、配列番号:155、配列番号:157、配列番号:159、配列番号:161、配列番号:163、配列番号:165、配列番号:167、配列番号:169、配列番号:171、配列番号:173、配列番号:175、配列番号:177、配列番号:179、配列番号:181、配列番号:183、配列番号:185、配列番号:187、配列番号:189、配列番号:191、配列番号:193、配列番号:195、配列番号:197、配列番号:199、配列番号:201、配列番号:203、配列番号:205、配列番号:207、配列番号:209、配列番号:211、配列番号:213、配列番号:215、配列番号:217、配列番号:219、配列番号:221、配列番号:223、配列番号:225、配列番号:227、配列番号:229、配列番号:231、配列番号:233、配列番号:235、配列番号:237、配列番号:239、配列番号:241、配列番号:243、配列番号:245、配列番号:247、配列番号:249、配列番号:251、配列番号:253、配列番号:255、配列番号:257、配列番号:259、配列番号:261、配列番号:263、配列番号:265、配列番号:267、配列番号:269、配列番号:271、配列番号:273、配列番号:275、配列番号:277、配列番号:279、配列番号:281、配列番号:283、配列番号:285、配列番号:287、配列番号:289、配列番号:291、配列番号:293、配列番号:295、配列番号:297、配列番号:299、配列番号:301、配列番号:303、配列番号:305、配列番号:307、配列番号:309、配列番号:311、配列番号:313、配列番号:315、配列番号:317、配列番号:319、配列番号:321、配列番号:323、配列番号:325、配列番号:327、配列番号:329、配列番号:331、配列番号:333、配列番号:335、配列番号:337、配列番号:339、配列番号:341、配列番号:343、配列番号:345、配列番号:347、配列番号:349、配列番号:351、配列番号:353、配列番号:355、配列番号:357、配列番号:359、配列番号:361、配列番号:363、配列番号:365、配列番号:367、配列番号:369、配列番号:371、配列番号:373、配列番号:375、配列番号:377、配列番号:379、配列番号:381、配列番号:383、配列番号:385、配列番号:387、配列番号:389、配列番号:391、配列番号:393、配列番号:395、配列番号:397、配列番号:399、配列番号:401、配列番号:403、配列番号:405、配列番号:407、配列番号:409、配列番号:411、配列番号:413、配列番号:415、配列番号:417、配列番号:419、配列番号:421、配列番号:423、配列番号:425、配列番号:427、配列番号:429、配列番号:431、配列番号:433、配列番号:435、配列番号:437、配列番号:439、配列番号:441、配列番号:443、配列番号:445、配列番号:447、配列番号:449、配列番号:451、配列番号:453、配列番号:455、配列番号:457、配列番号:459、配列番号:461、配列番号:463、配列番号:465、配列番号:467、配列番号:469、配列番号:471、配列番号:473、配列番号:475、配列番号:477、配列番号:479、配列番号:481、配列番号:483、配列番号:485、配列番号:487、配列番号:489、配列番号:491、配列番号:493、配列番号:495、配列番号:497、配列番号:499、配列番号:501、配列番号:503、配列番号:505、配列番号:507、配列番号:509、配列番号:511、配列番号:513、配列番号:515、配列番号:517、配列番号:519、配列番号:521、配列番号:523、配列番号:525、配列番号:527、配列番号:529、配列番号:531、配列番号:533、配列番号:535、配列番号:537、配列番号:539、配列番号:541、配列番号:543、配列番号:545、配列番号:547、配列番号:549、配列番号:551、配列番号:553、配列番号:555、配列番号:557、配列番号:559、配列番号:561、配列番号:563、配列番号:565、配列番号:567、配列番号:569、配列番号:571、配列番号:573、配列番号:575、配列番号:577、配列番号:579、配列番号:581、配列番号:583、配列番号:585、配列番号:587、配列番号:589、配列番号:591、配列番号:593、配列番号:595、配列番号:597、配列番号:599、配列番号:601、配列番号:603、配列番号:605、配列番号:607、配列番号:609、配列番号:611、配列番号:613、配列番号:615、配列番号:617、配列番号:619、配列番号:621、配列番号:623、配列番号:625、配列番号:627、配列番号:629、配列番号:631、配列番号:633、配列番号:635、配列番号:637、配列番号:639、配列番号:641、配列番号:643、配列番号:645、配列番号:647、配列番号:649、配列番号:651、配列番号:653、配列番号:655、配列番号:657、配列番号:659、配列番号:661、配列番号:663、配列番号:665、配列番号:667、配列番号:669、配列番号:671、配列番号:673、配列番号:675、配列番号:677、配列番号:679、配列番号:681、配列番号:683、配列番号:685、配列番号:687、配列番号:689、配列番号:691、配列番号:693、配列番号:695、配列番号:697、配列番号:699、配列番号:701、配列番号:703、配列番号:705、配列番号:707、配列番号:709、配列番号:711、配列番号:713、配列番号:715、配列番号:717、配列番号:719、配列番号:721、配列番号:723、配列番号:725、配列番号:727、配列番号:729、配列番号:731、配列番号:733、配列番号:735、配列番号:737、配列番号:739、配列番号:741、配列番号:743、配列番号:745、配列番号:747、配列番号:749、配列番号:751、配列番号:753、配列番号:755、配列番号:757、配列番号:759、配列番号:761、配列番号:763、配列番号:765、配列番号:767、配列番号:769、配列番号:771、配列番号:773、配列番号:775、配列番号:777、配列番号:779、配列番号:781、配列番号:783、配列番号:785、配列番号:787、配列番号:789、配列番号:791、配列番号:793、配列番号:795、配列番号:797、配列番号:799、配列番号:801、配列番号:803、配列番号:805、配列番号:807、配列番号:809、配列番号:811、配列番号:813、配列番号:815、配列番号:817、配列番号:819、配列番号:821、配列番号:823、配列番号:825、配列番号:827、配列番号:829、配列番号:831、配列番号:833、配列番号:835、配列番号:837、配列番号:839、配列番号:841、配列番号:843、配列番号:845、配列番号:847、配列番号:849、配列番号:851、配列番号:853、配列番号:855、配列番号:857、配列番号:859、配列番号:861、配列番号:863、配列番号:865、配列番号:867、配列番号:869、配列番号:871、配列番号:873、配列番号:875、配列番号:877、配列番号:879、配列番号:881、配列番号:883、配列番号:885、配列番号:887、配列番号:889、配列番号:891、配列番号:893、配列番号:895、配列番号:897、配列番号:899、配列番号:901、配列番号:903、配列番号:905、配列番号:907、配列番号:909、配列番号:911、配列番号:913、配列番号:915、配列番号:917、配列番号:919、配列番号:921、配列番号:923、配列番号:925、配列番号:927、配列番号:929、配列番号:931、配列番号:933、配列番号:935、配列番号:937、配列番号:939、配列番号:941、配列番号:943、配列番号:945、配列番号:947、配列番号:949、配列番号:951または配列番号:953記載の配列またはその部分配列の少なくとも約10〜50の連続する塩基を含むオリゴヌクレオチドを含む、請求項124記載の方法。
【請求項126】
以下の工程を含む、環境サンプルからヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を単離または回収する方法:
(a)請求項1または請求項22、またはその部分配列を含むポリヌクレオチドプローブを提供する工程;
(b)環境サンプルから核酸を単離する、または、環境サンプルを前記サンプル中の核酸が工程(a)のポリヌクレオチドプローブにハイブリダイゼーションのために接近可能であるように処理する工程;および、
(c)工程(b)の単離された核酸または処理された環境サンプルを工程(a)のポリヌクレオチドプローブと一緒にする工程;
(d)工程(a)のポリヌクレオチドプローブと特異的にハイブリダイズする核酸を単離し、それによって、環境サンプルからヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を単離または回収する工程。
【請求項127】
環境サンプルが水サンプル、液体サンプル、土壌サンプル、大気サンプルまたは生物学的サンプルを含む、請求項124または請求項126記載の方法。
【請求項128】
生物学的サンプルが細菌細胞、原生動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞、植物細胞、真菌細胞、または哺乳動物細胞に由来する請求項127記載の方法。
【請求項129】
以下の工程を含む、ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸の変種を作製する方法:
(a)請求項1または請求項22記載の配列を含む鋳型核酸を提供する工程;および、
(b)前記鋳型配列における1以上のヌクレオチドを改変、欠失または付加、またはそれらの組合せにより、前記鋳型核酸の変種を作製する工程。
【請求項130】
変種核酸を発現させて変種ヒドロラーゼポリペプチドを生成させることを更に含む、請求項129記載の方法。
【請求項131】
改変、付加または欠失が、変異性PCR、シャッフリング、オリゴヌクレオチド特異的変異導入、アッセンブリPCR、セクシュアルPCR変異導入、in vivo変異導入、カセット変異導入、再帰的アンサンブル変異導入、エクスポネンシャル変異導入、部位特異的変異導入、遺伝子再アッセンブリ、遺伝子部位飽和変異導入(GSSM)、合成連結アッセンブリ(SLR)およびそれらの組合せを含む方法により導入される、請求項129記載の方法。
【請求項132】
改変、付加、欠失が、組換え、再帰的配列組換え、ホスホチオエート-修飾DNA変異導入、ウラシル含有鋳型変異導入、ギャップ付加二重鎖変異導入、点ミスマッチ修復変異導入、修復欠損宿主株変異導入、化学変異導入、放射性変異導入、欠失変異導入、制限-選択変異導入、制限-精製変異導入、人工遺伝子合成、アンサンブル変異導入、キメラ核酸マルチマー生成、およびそれらの組合せによって導入される、請求項129記載の方法。
【請求項133】
鋳型核酸によってコードされるポリペプチドの活性または安定性に対して変異した若しくは異なる活性を有する、または、変異した若しくは異なる安定性を有するヒドロラーゼが生成されるまで反復される、請求項129記載の方法。
【請求項134】
変種ヒドロラーゼポリペプチドが耐熱性であって、上昇した温度に曝露した後にある程度の活性を維持する、請求項133記載の方法。
【請求項135】
変種ヒドロラーゼポリペプチドが鋳型核酸によってコードされるポリペプチドに比較してグリコシル化が増加する、請求項133記載の方法。
【請求項136】
変種ヒドロラーゼポリペプチドが高温下でヒドロラーゼ活性を有し、鋳型核酸によってコードされるヒドロラーゼが高温下で活性を有しない、請求項133記載の方法。
【請求項137】
鋳型核酸のコドン使用とは異なるコドン使用を有するヒドロラーゼコード配列が生成されるまで反復される、請求項129記載の方法。
【請求項138】
鋳型核酸のものよりも高いもしくは低い、メッセージ発現レベルもしくは安定性を有するヒドロラーゼ遺伝子が生成されるまで反復される、請求項129記載の方法。
【請求項139】
以下の工程を含む、ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸のコドンを改変して宿主細胞における前記核酸の発現を増加させる方法:
(a)請求項1または請求項22記載の配列を含む、ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を提供する工程;および、
(b)工程(a)の核酸中の非優先コドンまたは低優先コドンを同定し、前記コドンを置換されるコドンと同じアミノ酸をコードする優先コドンまたは中性的に使用されるコドンに置換し、それによって核酸を改変して発現を増加させる工程であって、前記優先コドンとは宿主中の遺伝子内のコード配列において高頻度に提示されるコドンであり、非優先コドンまたは低優先コドンとは前記宿主中の遺伝子内のコード配列において低頻度に提示されるコドンである、前記工程。
【請求項140】
以下の工程を含む、ヒドロラーゼポリペプチドをコードする核酸のコドンを改変する方法:
(a)請求項1または請求項22記載の配列を含む、ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を提供する工程;および、
(b)工程(a)の核酸中のコドンを同定し、前記コドンを置換されるコドンと同一のアミノ酸をコードする異なるコドンに置換し、それによってヒドロラーゼをコードする核酸中のコドンを改変する工程。
【請求項141】
以下の工程を含む、ヒドロラーゼポリペプチドをコードする核酸のコドンを改変して宿主における前記核酸の発現を増加させる方法:
(a)請求項1または請求項22記載の配列を含む、ヒドロラーゼポリペプチドをコードする核酸を提供する工程;および、
(b)工程(a)の核酸中の非優先コドンまたは低優先コドンを同定し、前記コドンを置換されるコドンと同じアミノ酸をコードする優先コドンまたは中性的に使用されるコドンに置換し、それによって核酸を改変して発現を増加させる工程であって、前記優先コドンとは宿主細胞中の遺伝子内のコード配列において高頻度に提示されるコドンであり、非優先コドンまたは低優先コドンとは前記宿主細胞中の遺伝子内のコード配列において低頻度に提示されるコドンである、前記工程。
【請求項142】
以下の工程を含む、ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸のコドンを改変して宿主細胞における前記核酸の発現を減少させる方法:
(a)請求項1または請求項22記載の配列を含む、ヒドロラーゼポリペプチドをコードする核酸を提供する工程;および、
(b)工程(a)の核酸中の少なくとも一つの優先コドンを同定し、前記コドンを置換されるコドンと同じアミノ酸をコードする非優先コドンまたは低優先コドンに置換し、それによって核酸を改変して宿主細胞でのその発現を減少させる工程であって、前記優先コドンとは宿主細胞中の遺伝子内のコード配列において高頻度に提示されるコドンであり、非優先コドンまたは低優先コドンとは前記宿主細胞中の遺伝子内のコード配列において低頻度に提示されるコドンである、前記工程。
【請求項143】
宿主細胞が細菌細胞、真菌細胞、昆虫細胞、酵母細胞、植物細胞または哺乳動物細胞である、請求項141または請求項142記載の方法。
【請求項144】
以下の工程を含む、複数の改変ヒドロラーゼ活性部位または基質結合部位をコードする核酸のライブラリーを作製する方法であって、前記改変ヒドロラーゼ活性部位または基質結合部位が第1の活性部位または第1の基質結合部位をコードする配列を含む第1の核酸に由来する前記方法:
(a)第1の活性部位または第1の基質結合部位をコードする第1の核酸を提供する工程であって、前記第1の核酸の配列が、請求項1または請求項22記載の配列またはその部分配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列を含み、前記核酸がヒドロラーゼ活性部位またはヒドロラーゼ基質結合部位をコードする、前記工程;
(b)前記第1の核酸中の複数の標的コドンにおいて天然のアミノ酸変種をコードする、変異性オリゴヌクレオチドの組を提供する工程;および、
(c)前記変異性オリゴヌクレオチドの組を用いて、変異させた各アミノ酸コドンにおいて一群のアミノ酸変種をコードする、一組の活性部位コード変種核酸または結合部位コード変種核酸を生成し、それによって複数の改変ヒドロラーゼ活性部位または基質結合部位をコードする核酸のライブラリーを作製する工程。
【請求項145】
工程(a)の第1の核酸を、最適化定方向進化システム、遺伝子部位飽和変異導入(GSSM)、または合成連結再アッセンブリ(SLR)を含む方法によって変異させることを含む、請求項144記載の方法。
【請求項146】
変異性PCR、シャッフリング、オリゴヌクレオチド指向変異導入、アッセンブリPCR、セクシュアルPCR変異導入、in vivo変異導入、カセット変異導入、再帰的アンサンブル変異導入、エクスポネンシャルアンサンブル変異導入、部位特異的変異導入、遺伝子再アッセンブリ、遺伝子部位飽和変異導入(GSSM)、合成連結再アッセンブリ(SLR)またはそれらの組合せを含む方法によって、工程(a)の第1の核酸または変種に変異導入することを含む請求項144記載の方法。
【請求項147】
組換え、再帰的配列組換え、ホスホチオエート-修飾DNA変異導入、ウラシル含有鋳型変異導入、ギャップ付加二重鎖変異導入、点ミスマッチ修復変異導入、修復欠損宿主株変異導入、化学変異導入、放射性変異導入、欠失変異導入、制限-選択変異導入、制限-精製変異導入、人工遺伝子合成、アンサンブル変異導入、キメラ核酸マルチマー生成、またはそれらの組合せを含む方法によって工程(a)の第1の核酸または変種に変異導入することを含む請求項144記載の方法。
【請求項148】
以下の工程を含む、小分子を作製する方法:
(a)小分子を合成または改変できる複数の生合成酵素を提供する工程であって、前記酵素の一つが請求項1または請求項22記載の配列を含む核酸によってコードされるヒドロラーゼ酵素を含む、前記工程;
(b)工程(a)の酵素の少なくとも一つに対する基質を提供する工程;および
(c)複数の生体触媒反応を容易にする条件下で工程(b)の基質を前記酵素と反応させ、一連の生体触媒反応によって小分子を生成させる工程。
【請求項149】
以下の工程を含む小分子を改変する方法:
(a)ヒドロラーゼ酵素を提供する工程であって、前記酵素は請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1若しくは請求項22記載の核酸配列を含む核酸によってコードされるポリペプチドを含む酵素である、前記工程;
(b)小分子を提供する工程;
(c)工程(a)の酵素を、前記ヒドロラーゼ酵素によって触媒される酵素反応を容易にする条件下で、工程(b)の小分子と反応させる工程。
【請求項150】
工程(a)の酵素に対する複数の小分子基質を含み、それによって前記ヒドロラーゼ酵素によって触媒される少なくとも一つの酵素反応によって生成される改変小分子のライブラリーを作製することを含む、請求項149記載の方法。
【請求項151】
酵素による複数の生体触媒反応を容易にして前記複数の酵素反応によって生成される改変小分子のライブラリーを生成させる条件下で複数の追加の酵素を含む、請求項149記載の方法。
【請求項152】
ライブラリーを試験して、前記ライブラリー中に所望の活性を示す特定の改変小分子が存在するかどうかを決定する工程をさらに含む、請求項151記載の方法。
【請求項153】
ライブラリーを試験する工程が、更に、改変小分子の一部を所望の活性を有する特定の改変小分子の存在または非存在について試験し、前記所望の活性を有する特定の改変小分子を生成する少なくとも一つの特異的な生体触媒反応を同定することによって、ライブラリー中の複数の改変小分子の一部を生成するために使用された生体触媒反応の一つを除く全てを系統的に除去する工程を含む、請求項152記載の方法。
【請求項154】
以下の工程を含む、ヒドロラーゼ酵素の機能的断片を決定する方法:
(a)ヒドロラーゼ酵素を提供する工程であって、前記酵素は請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1若しくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む酵素である、前記工程;
(b)工程(a)の配列から複数のアミノ酸残基を欠失させ、残存する部分配列についてヒドロラーゼ活性を試験し、それによってヒドロラーゼ酵素の機能的断片を決定する工程。
【請求項155】
ヒドロラーゼ活性が、ヒドロラーゼ基質を提供すること、および、基質の量の減少または反応生成物の量の増加を検出すること、によって測定される、請求項154記載の方法。
【請求項156】
以下の工程を含む、リアルタイム代謝フラックス分析を用いた、新規な、または、改変された表現型について全細胞を操作する方法:
(a)細胞の遺伝的構成を改変することによって改変細胞を作製する工程であって、前記遺伝的構成が細胞に請求項1または請求項22記載の配列を含む核酸を導入することによって改変される、前記工程;
(b)前記改変細胞を培養して複数の改変細胞を生成させる工程;
(c)リアルタイムで工程(b)の細胞培養物を監視することにより、前記細胞の少なくとも一つの代謝パラメーターを測定する工程;および、
(d)工程(c)のデータを解析して、測定されたパラメーターが同様な条件下における未改変細胞の対応する測定値と異なるかどうかを決定し、それによってリアルタイム代謝フラックスを用いて細胞の操作された表現型を同定する工程。
【請求項157】
細胞の遺伝的構成が細胞中の配列の欠失または配列の改変、もしくは遺伝子の発現をノックアウトすることによって改変される、請求項156記載の方法。
【請求項158】
新規に操作された表現型を含む細胞を選抜することを更に含む、請求項157記載の方法。
【請求項159】
さらに、選抜した細胞を培養し、新規に操作された表現型を含む新規な細胞株を生成させることを含む、請求項158記載の方法。
【請求項160】
以下の工程を含む、トリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)を加水分解する方法:
(a)ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを提供する工程であって、前記ポリペプチドは請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む、前記工程;
(b)トリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)を含む組成物を提供する工程;および、
(c)前記ポリペプチドがトリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)を加水分解する条件下で工程(a)のポリペプチドを工程(b)の組成物と接触させる工程。
【請求項161】
以下の工程を含む、組成物からトリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)を除去またはその量を低減する方法:
(a)ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを提供する工程であって、前記ポリペプチドは請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む、前記工程;
(b)トリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)を含む組成物を提供する工程;および、
(c)前記ポリペプチドがトリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)を除去またはその量を低減する条件下で工程(a)のポリペプチドを工程(b)の組成物と接触させる工程。
【請求項162】
ヒドロラーゼポリペプチドのグリコシル化を含む、ヒドロラーゼポリペプチドの耐熱性または熱安定性を増大させる方法であって、前記ポリペプチドが請求項52記載のポリペプチドまたは請求項1若しくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドの少なくとも30個の連続するアミノ酸を含む、前記方法。
【請求項163】
ヒドロラーゼ比活性が、約37℃より高い温度から約95℃の範囲の温度において熱安定性または耐熱性である、請求項163記載の方法。
【請求項164】
請求項1または請求項24記載の核酸を含むベクターを発現させることを含む、細胞で組換えヒドロラーゼポリペプチドを過剰発現させる方法であって、過剰発現が高活性プロモーター、二シストロン性ベクター、またはベクターの遺伝子増幅によって行われる、前記方法。
【請求項165】
請求項52記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む洗剤組成物であって、前記ポリペプチドがヒドロラーゼ活性を有する、前記洗剤組成物。
【請求項166】
ヒドロラーゼが、非界面活性ヒドロラーゼまたは界面活性ヒドロラーゼである、請求項166記載の洗剤組成物。
【請求項167】
ヒドロラーゼが、非水性液状組成物、鋳造固形物、顆粒形態、粒状形態、打錠剤、ゲル状形態、ペーストまたはスラリー状形態として製剤化される請求項165の洗剤組成物。
【請求項168】
以下の工程を含む物体の洗浄方法:
(a)ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを含む組成物を提供する工程であって、前記ポリペプチドは請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む、前記工程;
(b)物体を提供する工程;および
(c)前記組成物が前記物体を洗浄することができる条件下で工程(a)のポリペプチドを工程(b)の物体と接触させる工程。
【請求項169】
以下の工程を含む、動物によって消費されるに先立って、飼料または食物中の油を加水分解する方法:
(a)油を含む飼料材料を入手する工程であって、前記油はヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドで加水分解されていてもよく、ここで前記ポリペプチドは請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む、前記工程;および、
(b)前記油が加水分解され処理済食物または飼料が生成されるために十分な量で十分な時間、工程(a)のポリペプチドを前記飼料または食物材料に加え、それによって動物が消費する前に前記食物または飼料中の油を加水分解する工程。
【請求項170】
食物または飼料がコメ、トウモロコシ、オオムギ、コムギ、豆類、またはジャガイモである請求項169記載の方法。
【請求項171】
請求項52記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む飼料または食物。
【請求項172】
油、および請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む組成物。
【請求項173】
請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む医薬組成物。
【請求項174】
核酸が植物プロモーターに機能可能に連結されている、請求項32記載の発現カセット。
【請求項175】
植物発現ベクターをさらに含む、請求項174記載の発現カセット。
【請求項176】
植物発現ベクターが植物ウィルスを含む、請求項175記載の発現カセット。
【請求項177】
植物プロモーターが、ジャガイモのプロモーター、イネのプロモーター、トウモロコシのプロモーター、コムギまたはオオムギのプロモーターを含む、請求項174記載の発現カセット。
【請求項178】
プロモーターが、アグロバクテリウム・ツメファシエンスのT-DNA由来のプロモーターを含む、請求項174記載の発現カセット。
【請求項179】
プロモーターが構成的プロモーターである、請求項174記載の発現カセット。
【請求項180】
構成的プロモーターがCaMV35Sである、請求項179記載の発現カセット。
【請求項181】
プロモーターが誘導性プロモーターまたは組織特異的プロモーターである、請求項174記載の発現カセット。
【請求項182】
組織特異的プロモーターが、種子特異的、葉特異的、根特異的、茎特異的または離脱-誘導プロモーターである、請求項181記載の発現カセット。
【請求項183】
植物細胞が、ジャガイモ、イネ、トウモロコシ、コムギ、タバコまたはオオムギの細胞である、請求項39記載の形質転換細胞。
【請求項184】
以下の工程を含むトランスジェニック植物の作製方法:
(a)請求項1または請求項22記載の配列を含む異種核酸配列を細胞に導入し、それにより形質転換植物細胞を生成する工程;
(b)前記形質転換細胞からトランスジェニック植物を生成する工程。
【請求項185】
工程(a)が更に、植物細胞プロトプラストのエレクトロポレーションまたはマイクロインジェクションによって異種核酸を導入することを含む、請求項184記載の方法。
【請求項186】
工程(a)が更に、DNA粒子ボンバードメントによって異種核酸を植物組織に直接導入することを含む、請求項184記載の方法。
【請求項187】
工程(a)が更に、アグロバクテリウム・ツメファシエンス宿主を使用して異種核酸を植物細胞DNAに導入することを含む、請求項184記載の方法。
【請求項188】
以下の工程を含む、植物細胞中で異種核酸配列を発現させる方法:
(a)プロモーターに機能可能に結合した異種核酸配列で植物細胞を形質転換する工程であって、前記異種核酸配列が請求項1または請求項22記載の配列を含む、前記工程;
(b)前記植物細胞中で前記異種核酸配列が発現する条件下で植物を生育させる工程。
【請求項189】
請求項52記載のポリペプチドの部分配列を有するペプチドを含む、シグナル配列。
【請求項190】
請求項52記載のポリペプチドの部分配列を有するペプチドからなる、シグナル配列。
【請求項191】
請求項189または請求項190記載のシグナル配列を含む第一のドメインおよび少なくとも第二のドメインを含む、キメラタンパク質。
【請求項192】
タンパク質が融合タンパク質である、請求項191記載のキメラタンパク質。
【請求項193】
第二のドメインが酵素を含む、請求項191記載のキメラタンパク質。
【請求項194】
酵素がヒドロラーゼである、請求項193記載のキメラタンパク質。
【請求項195】
以下の工程を含む、構造脂質を生体触媒合成する方法:
(a)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程;
(b)トリアシルグリセリド(TAG)を含む組成物を提供する工程;
(c)トリアシルグリセリド(TAG)のSn2位にあるアシル残基をポリペプチドが加水分解する条件下で工程(a)のポリペプチドを工程(b)の組成物と接触させ、それによって1,3-ジアシルグリセリド(DAG)を生成する工程;
(d)R1エステルを提供する工程;
(e)R1-特異的ヒドロラーゼを提供する工程;および、
(f)R1-特異的ヒドロラーゼがSn2位のエステル化を触媒する条件下で工程(c)の1,3-DAGを工程(d)のR1エステルおよび工程(e)のR1-特異的ヒドロラーゼと接触させ、それによって構造脂質を生成する工程。
【請求項196】
ヒドロラーゼがSn2-特異的リパーゼである、請求項195記載の方法。
【請求項197】
構造脂質がココアバター代替物(CBA)、合成ココアバター、天然ココアバター、1,3-ジパルミトイル-2-オレオイルグリセロール(POP)、1,3-ジステアロイル-2-オレオイルグリセロール(SOS)、1-パルミトイル-2-オレオイル-3-ステアロイルグリセロール(POS)または1-オレオイル-2,3-ジミリストイルグリセロール(OMM)を含む、請求項195記載の方法。
【請求項198】
以下の工程を含む、構造脂質を生体触媒合成する方法:
(a)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程;
(b)トリアシルグリセリド(TAG)を含む組成物を提供する工程;
(c)ポリペプチドがトリアシルグリセリド(TAG)のSn1位またはSn3位にあるアシル残基を加水分解する条件下で工程(a)のポリペプチドを工程(b)の組成物と接触させ、それによって1,2-DAGまたは2,3-DAGを生成する工程;および、
(d)動力学的に制御された条件下で工程(c)の1,2-DAGまたは2,3-DAGにおけるアシル移動を促進し、それによって1,3-DAGを生成する工程。
【請求項199】
R1エステルおよびR1-特異的リパーゼを提供する工程、および、前記R1-特異的リパーゼがSn2位のエステル化を触媒する条件下で工程(d)の1,3-DAGをR1エステルおよびR1-特異的リパーゼと接触させ、それによって構造脂質を生成する工程をさらに含む、請求項198記載の方法。
【請求項200】
リパーゼがSn1またはSn3-特異的リパーゼである、請求項198記載の方法。
【請求項201】
構造脂質がココアバター代替物(CBA)、合成ココアバター、天然ココアバター、1,3-ジパルミトイル-2-オレオイルグリセロール(POP)、1,3-ジステアロイル-2-オレオイルグリセロール(SOS)、1-パルミトイル-2-オレオイル-3-ステアロイルグリセロール(POS)または1-オレオイル-2,3-ジミリストイルグリセロール(OMM)を含む、請求項198記載の方法。
【請求項202】
工程(d)がさらに、イオン交換樹脂を使用することを含む、請求項198記載の方法。
【請求項203】
動力学的に制御された条件が、1,3-DAG対2,3-DAGの比が2:1よりも大きい最終生成物を生成する結果となる非平衡条件を含む、請求項198記載の方法。
【請求項204】
工程(b)の組成物が蛍光脂肪酸(FA)を含む、請求項195または請求項198記載の方法。
【請求項205】
工程(b)の組成物がウンベリフェリルFAエステルを含む、請求項195または請求項198記載の方法。
【請求項206】
最終生成物がエナンチオマー的に純粋である、請求項195または請求項198記載の方法。
【請求項207】
以下の工程を含む、プロピオン酸のラセミエステルからプロピオン酸の1つの光学異性体を調製する方法:
(a)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程であって、前記ヒドロラーゼはプロピオン酸の1つの光学異性体に対する立体選択性を有する、前記工程;
(b)ラセミエステルを提供する工程;
(c)エステルの加水分解を選択的に触媒することができる工程(a)のポリペプチドを工程(b)のラセミエステルと接触させ、それによってプロピオン酸の前記光学異性体を生成する工程。
【請求項208】
プロピオン酸の光学異性体が2-(6-メトキシ-2-ナフチル)プロピオン酸のS(+)体を含み、そしてラセミエステルが2-(6-メトキシ-2-ナフチル)プロピオン酸のラセミ(R,S)エステルを含む、請求項207記載の方法。
【請求項209】
以下の工程を含む、2-置換酸のエステルのラセミ混合物を立体選択的に加水分解する方法:
(a)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程であって、前記ヒドロラーゼは立体選択的である、前記工程;
(b)2-置換酸のエステルのラセミ混合物を含む組成物を提供する工程;および、
(c)工程(b)のポリペプチドが前記エステルを選択的に加水分解し得る条件下で工程(a)のポリペプチドを工程(b)の組成物と接触させる工程。
【請求項210】
ヒドロラーゼが固定化されている、請求項195、請求項198または請求項209記載の方法。
【請求項211】
2-置換酸が、2-アリールオキシ置換酸、R-2-(4-ヒドロキシフェノキシ)プロピオン酸または2-アリールプロピオン酸を含む、請求項209記載の方法。
【請求項212】
2-置換酸がケトプロフェンを含む、請求項209記載の方法。
【請求項213】
以下の工程を含む、油または脂肪を改変する方法:
(a)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程;
(b)油または脂肪を提供する工程;および、
(c)前記ヒドロラーゼが前記油または脂肪を改変し得る条件下で工程(a)のヒドロラーゼを工程(b)の油または脂肪と接触させる工程。
【請求項214】
改変が油または脂肪のヒドロラーゼ触媒加水分解を含む、請求項213記載の方法。
【請求項215】
加水分解が、油または脂肪の完全または部分的加水分解である、請求項214記載の方法。
【請求項216】
油が、ポリ不飽和脂肪酸のグリセロールエステル、または、魚油、動物油もしくは植物油を含む、請求項214記載の方法。
【請求項217】
植物油が、オリーブ、キャノーラ、ヒマワリ、ヤシ、ダイズもしくはラウリン系の油または米糠油を含む、請求項216記載の方法。
【請求項218】
以下の工程を含む、ポリ不飽和脂肪酸(PUFA)エステルを加水分解する方法:
(a)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程;
(b)ポリ不飽和脂肪酸エステルを含む組成物を提供する工程;および、
(c)前記ヒドロラーゼが前記ポリ不飽和脂肪酸(PUFA)を加水分解し得る条件下でヒドロラーゼを工程(b)の組成物と接触させる工程。
【請求項219】
以下の工程を含む、飽和脂肪酸エステルに優先してポリ不飽和脂肪酸エステルを選択的に加水分解する方法:
(a)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程であって、前記ヒドロラーゼはリパーゼ活性を有し、かつポリ不飽和脂肪酸(PUFA)エステルを選択的に加水分解する、前記工程;
(b)ポリ不飽和エステルおよび飽和エステルの混合物を含む組成物を提供する工程;および、
(c)前記ポリペプチドが前記ポリ不飽和脂肪酸エステルを選択的に加水分解し得る条件下で工程(a)のポリペプチドを工程(b)の組成物と接触させる工程。
【請求項220】
以下の工程を含む、ポリ不飽和脂肪酸(PUFA)を含む食物または飼料添加物を調製する方法:
(a)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程であって、前記ヒドロラーゼはポリ不飽和脂肪酸(PUFA)エステルを選択的に加水分解する、前記工程;
(b)PUFAエステルを含む組成物を提供する工程;および、
(c)前記ポリペプチドが前記ポリ不飽和脂肪酸エステルの加水分解を選択的に触媒し得る条件下で工程(a)のポリペプチドを工程(b)の組成物と接触させ、それによってPUFA-含有食物または飼料添加物を製造する工程。
【請求項221】
以下の工程を含む、ラテックスを処理する方法:
(a)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程であって、このポリペプチドは不飽和エステルに優先して飽和エステルに対して選択性を有し、それによって前記飽和エステルをその対応する酸およびアルコールに変換する、前記工程;
(b)飽和および不飽和エステルを含むラテックス組成物を提供する工程;
(c)前記ポリペプチドが前記飽和エステルを選択的に加水分解し得る条件下で工程(a)のヒドロラーゼを工程(b)の組成物と接触させ、それによってラテックスを処理する工程。
【請求項222】
アクリル酸エチルに優先してプロピオン酸エチルが選択的に加水分解される、請求項221記載の方法。
【請求項223】
工程(b)のラテックス組成物が、アクリル、ビニルおよび不飽和酸モノマー、アクリル酸アルキルモノマー、アクリル酸メチル、アクリル酸エチル、アクリル酸プロピルおよびアクリル酸ブチル、アクリレート酸、アクリル酸、メタクリル酸、クロトン酸、イタコン酸およびそれらの混合物を含むポリマーを含む、請求項221記載の方法。
【請求項224】
ラテックス組成物が毛定着性である、請求項221記載の方法。
【請求項225】
工程(c)の条件が、約pH4からpH8の範囲内のpHおよび約20℃から約50℃の範囲内の温度を含む、請求項221記載の方法。
【請求項226】
以下の工程を含む、潤滑油を精製する方法:(a)請求項56記載のヒドロラーゼを含む組成物を提供する工程;(b)潤滑油を提供する工程;および、(c)前記ヒドロラーゼが前記潤滑油の中の油を選択的に加水分解し得る条件下で潤滑油をヒドロラーゼで処理し、それによって潤滑油を精製する工程。
【請求項227】
潤滑油が油圧油である、請求項226記載の方法。
【請求項228】
以下の工程を含む、繊維製品を処理する方法:(a)請求項56記載のヒドロラーゼを含む組成物を提供する工程であって、前記ヒドロラーゼはカルボキシルエステルを選択的に加水分解し得る、前記工程;(b)繊維製品を提供する工程;および、(c)前記ヒドロラーゼがカルボキシルエステルを選択的に加水分解し得る条件下で前記繊維製品をヒドロラーゼで処理し、それによって繊維製品を処理する工程。
【請求項229】
繊維製品の処理が、最終繊維製品の手ざわりおよび垂れ具合の向上、染色、難燃性の獲得、撥水性の獲得、光学的な明るさの獲得、または樹脂加工の獲得を含む、請求項228記載の方法。
【請求項230】
繊維製品が、綿、ビスコース、レーヨン、リオセル、亜麻、リネン、カラムシ、すべてのそれらの混紡、または、それらとポリエステル、ウール、ポリアミド繊維、アクリル繊維もしくはポリアクリル繊維との混紡を含む、請求項228記載の方法。
【請求項231】
請求項56記載のヒドロラーゼを含む、繊維製品、織物糸または繊維。
【請求項232】
ヒドロラーゼが繊維製品、織物糸、または繊維の表面に吸着または固定されている、請求項231記載の繊維製品、織物糸、または繊維。
【請求項233】
食物または油の汚れを除去またはその量を低減する方法であって、請求項56記載のヒドロラーゼを、前記ヒドロラーゼが汚れの中の油または脂肪を加水分解し得る条件下で、食物または油の汚れと接触させる工程を含む、前記方法。
【請求項234】
ヒドロラーゼの、界面活性剤による変性および熱による非活性化に対する安定性が向上されている、請求項233記載の方法。
【請求項235】
ヒドロラーゼが洗剤または洗濯水である、請求項233記載の方法。
【請求項236】
請求項56記載のヒドロラーゼを含む食品組成物。
【請求項237】
脂肪を含む栄養素をさらに含む、請求項236記載の食品組成物。
【請求項238】
ヒドロラーゼが胆汁酸塩によって活性化される、請求項236記載の食品組成物。
【請求項239】
牛乳ベースの乳幼児用調製乳をさらに含む、請求項236記載の食品組成物。
【請求項240】
ヒドロラーゼが長鎖脂肪酸を加水分解し得る、請求項239記載の食品組成物。
【請求項241】
以下の工程を含む、ミルクまたは植物ベースの食品組成物の脂肪含有量を低減する方法:(a)請求項56記載のヒドロラーゼを含む組成物を提供する工程;(b)ミルクまたは植物油を含む組成物を提供する工程;および、(c)前記ヒドロラーゼが前記組成物中の油または脂肪を加水分解し得る条件下で工程(b)の組成物をヒドロラーゼで処理し、それによってその脂肪含有量を低減する工程。
【請求項242】
栄養素を含むヒトまたは非反芻動物用の食品組成物であって、前記栄養素は脂肪を含み、ヒドロラーゼを全くまたはほとんど含まず、そして効果的な量の請求項56記載のヒドロラーゼを含み、それによってヒトまたは非反芻動物の脂肪吸収および成長を増進させる、前記組成物。
【請求項243】
以下の工程を含む、エステル交換反応を触媒して新たなトリグリセリドを生成する方法:(a)請求項56記載のヒドロラーゼを含む組成物を提供する工程であって、前記ヒドロラーゼはエステル交換反応を触媒し得る、前記工程;(b)トリグリセリドと遊離脂肪酸の混合物を提供する工程;(c)前記ヒドロラーゼが遊離脂肪酸とトリグリセリドのアシル基との交換を触媒し得る条件下で工程(b)の組成物をヒドロラーゼで処理し、それによって付加脂肪酸のエンリッチされた新たなトリグリセリドを生成する工程。
【請求項244】
ヒドロラーゼがSn1、Sn3-特異的リパーゼである、請求項243記載の方法。
【請求項245】
以下の工程を含む、トランス酸および中間鎖脂肪酸の含有量の少ないマーガリン油を調製するためのエステル転移方法:(a)ステアリン酸、低分子量一価アルコールのステアリン酸モノエステルおよびそれらの混合物からなる群より選択されるステアリン酸原料物質を含むエステル転移反応混合物を提供する工程;(b)液体の植物油を提供する工程;(c)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程であって、このポリペプチドは1,3-特異的リパーゼ活性を含む、前記工程;(d)ステアリン酸原料物質および植物油トリグリセリドをエステル転移して、反応混合物のグリセリド成分の1-、3-位にあるエステル基を非グリセリド脂肪酸成分と実質的に平衡化する工程:(e)エステル転移混合物のグリセリド成分からエステル転移化遊離脂肪酸成分を分離して、エステル転移化マーガリン油生成物と、植物油から遊離された脂肪酸、脂肪酸モノエステルまたはそれらの混合物を含む脂肪酸混合物とを提供する工程;および、(f)前記脂肪酸混合物を水素添加する工程。
【請求項246】
1-パルミトイル-3-ステアロイル-2-モノレイン(POSt)および1,3-ジステアロイル-2-モノレイン(StOSt)を含む組成物を製造する方法であって、請求項56記載のリパーゼを提供する工程を含み、ここで前記リパーゼは、1,3-ジパルミトイル-2-モノレイン(POP)とステアリン酸またはトリステアリンとの1,3-特異的リパーゼ-触媒エステル交換によって1-パルミトイル-3-ステアロイル-2-モノレイン(POSt)または1,3-ジステアロイル-2-モノレイン(StOSt)のエンリッチされた生成物を製造することが可能である、前記方法。
【請求項247】
リポポリサッカライド(LPS)-媒介毒性を軽減または予防する方法であって、請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む医薬組成物を患者に投与する工程を含む、前記方法。
【請求項248】
エンドトキシンを解毒する方法であって、前記エンドトキシンを請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドと接触させる工程を含む、前記方法。
【請求項249】
リピドAから2'または3'脂肪酸鎖を脱アシル化する方法であって、前記リピドAを請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドと接触させる工程を含む、前記方法。
【請求項1】
配列番号:1、配列番号:3、配列番号:5、配列番号:7、配列番号:9、配列番号:11、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:17、配列番号:19、配列番号:21、配列番号:23、配列番号:25、配列番号:27、配列番号:29、配列番号:31、配列番号:33、配列番号:35、配列番号:37、配列番号:39、配列番号:41、配列番号:43、配列番号:45、配列番号:47、配列番号:49、配列番号:51、配列番号:53、配列番号:55、配列番号:57、配列番号:59、配列番号:61、配列番号:63、配列番号:65、配列番号:67、配列番号:69、配列番号:71、配列番号:73、配列番号:75、配列番号:77、配列番号:79、配列番号:81、配列番号:83、配列番号:85、配列番号:87、配列番号:89、配列番号:91、配列番号:93、配列番号:95、配列番号:97、配列番号:99、配列番号:101、配列番号:103、配列番号:105、配列番号:107、配列番号:109、配列番号:111、配列番号:113、配列番号:115、配列番号:117、配列番号:119、配列番号:121、配列番号:123、配列番号:125、配列番号:127、配列番号:129、配列番号:131、配列番号:133、配列番号:135、配列番号:137、配列番号:139、配列番号:141、配列番号:143、配列番号:145、配列番号:147、配列番号:149、配列番号:151、配列番号:153、配列番号:155、配列番号:157、配列番号:159、配列番号:161、配列番号:163、配列番号:165、配列番号:167、配列番号:169、配列番号:171、配列番号:173、配列番号:175、配列番号:177、配列番号:179、配列番号:181、配列番号:183、配列番号:185、配列番号:187、配列番号:189、配列番号:191、配列番号:193、配列番号:195、配列番号:197、配列番号:199、配列番号:201、配列番号:203、配列番号:205、配列番号:207、配列番号:209、配列番号:211、配列番号:213、配列番号:215、配列番号:217、配列番号:219、配列番号:221、配列番号:223、配列番号:225、配列番号:227、配列番号:229、配列番号:231、配列番号:233、配列番号:235、配列番号:237、配列番号:239、配列番号:241、配列番号:243、配列番号:245、配列番号:247、配列番号:249、配列番号:251、配列番号:253、配列番号:255、配列番号:257、配列番号:259、配列番号:261、配列番号:263、配列番号:265、配列番号:267、配列番号:269、配列番号:271、配列番号:273、配列番号:275、配列番号:277、配列番号:279、配列番号:281、配列番号:283、配列番号:285、配列番号:287、配列番号:289、配列番号:291、配列番号:293、配列番号:295、配列番号:297、配列番号:299、配列番号:301、配列番号:303、配列番号:305、配列番号:307、配列番号:309、配列番号:311、配列番号:313、配列番号:315、配列番号:317、配列番号:319、配列番号:321、配列番号:323、配列番号:325、配列番号:327、配列番号:329、配列番号:331、配列番号:333、配列番号:335、配列番号:337、配列番号:339、配列番号:341、配列番号:343、配列番号:345、配列番号:347、配列番号:349、配列番号:351、配列番号:353、配列番号:355、配列番号:357、配列番号:359、配列番号:361、配列番号:363、配列番号:365、配列番号:367、配列番号:369、配列番号:371、配列番号:373、配列番号:375、配列番号:377、配列番号:379、配列番号:381、配列番号:383、配列番号:385、配列番号:387、配列番号:389、配列番号:391、配列番号:393、配列番号:395、配列番号:397、配列番号:399、配列番号:401、配列番号:403、配列番号:405、配列番号:407、配列番号:409、配列番号:411、配列番号:413、配列番号:415、配列番号:417、配列番号:419、配列番号:421、配列番号:423、配列番号:425、配列番号:427、配列番号:429、配列番号:431、配列番号:433、配列番号:435、配列番号:437、配列番号:439、配列番号:441、配列番号:443、配列番号:445、配列番号:447、配列番号:449、配列番号:451、配列番号:453、配列番号:455、配列番号:457、配列番号:459、配列番号:461、配列番号:463、配列番号:465、配列番号:467、配列番号:469、配列番号:471、配列番号:473、配列番号:475、配列番号:477、配列番号:479、配列番号:481、配列番号:483、配列番号:485、配列番号:487、配列番号:489、配列番号:491、配列番号:493、配列番号:495、配列番号:497、配列番号:499、配列番号:501、配列番号:503、配列番号:505、配列番号:507、配列番号:509、配列番号:511、配列番号:513、配列番号:515、配列番号:517、配列番号:519、配列番号:521、配列番号:523、配列番号:525、配列番号:527、配列番号:529、配列番号:531、配列番号:533、配列番号:535、配列番号:537、配列番号:539、配列番号:541、配列番号:543、配列番号:545、配列番号:547、配列番号:549、配列番号:551、配列番号:553、配列番号:555、配列番号:557、配列番号:559、配列番号:561、配列番号:563、配列番号:565、配列番号:567、配列番号:569、配列番号:571、配列番号:573、配列番号:575、配列番号:577、配列番号:579、配列番号:581、配列番号:583、配列番号:585、配列番号:587、配列番号:589、配列番号:591、配列番号:593、配列番号:595、配列番号:597、配列番号:599、配列番号:601、配列番号:603、配列番号:605、配列番号:607、配列番号:609、配列番号:611、配列番号:613、配列番号:615、配列番号:617、配列番号:619、配列番号:621、配列番号:623、配列番号:625、配列番号:627、配列番号:629、配列番号:631、配列番号:633、配列番号:635、配列番号:637、配列番号:639、配列番号:641、配列番号:643、配列番号:645、配列番号:647、配列番号:649、配列番号:651、配列番号:653、配列番号:655、配列番号:657、配列番号:659、配列番号:661、配列番号:663、配列番号:665、配列番号:667、配列番号:669、配列番号:671、配列番号:673、配列番号:675、配列番号:677、配列番号:679、配列番号:681、配列番号:683、配列番号:685、配列番号:687、配列番号:689、配列番号:691、配列番号:693、配列番号:695、配列番号:697、配列番号:699、配列番号:701、配列番号:703、配列番号:705、配列番号:707、配列番号:709、配列番号:711、配列番号:713、配列番号:715、配列番号:717、配列番号:719、配列番号:721、配列番号:723、配列番号:725、配列番号:727、配列番号:729、配列番号:731、配列番号:733、配列番号:735、配列番号:737、配列番号:739、配列番号:741、配列番号:743、配列番号:745、配列番号:747、配列番号:749、配列番号:751、配列番号:753、配列番号:755、配列番号:757、配列番号:759、配列番号:761、配列番号:763、配列番号:765、配列番号:767、配列番号:769、配列番号:771、配列番号:773、配列番号:775、配列番号:777、配列番号:779、配列番号:781、配列番号:783、配列番号:785、配列番号:787、配列番号:789、配列番号:791、配列番号:793、配列番号:795、配列番号:797、配列番号:799、配列番号:801、配列番号:803、配列番号:805、配列番号:807、配列番号:809、配列番号:811、配列番号:813、配列番号:815、配列番号:817、配列番号:819、配列番号:821、配列番号:823、配列番号:825、配列番号:827、配列番号:829、配列番号:831、配列番号:833、配列番号:835、配列番号:837、配列番号:839、配列番号:841、配列番号:843、配列番号:845、配列番号:847、配列番号:849、配列番号:851、配列番号:853、配列番号:855、配列番号:857、配列番号:859、配列番号:861、配列番号:863、配列番号:865、配列番号:867、配列番号:869、配列番号:871、配列番号:873、配列番号:875、配列番号:877、配列番号:879、配列番号:881、配列番号:883、配列番号:885、配列番号:887、配列番号:889、配列番号:891、配列番号:893、配列番号:895、配列番号:897、配列番号:899、配列番号:901、配列番号:903、配列番号:905、配列番号:907、配列番号:909、配列番号:911、配列番号:913、配列番号:915、配列番号:917、配列番号:919、配列番号:921、配列番号:923、配列番号:925、配列番号:927、配列番号:929、配列番号:931、配列番号:933、配列番号:935、配列番号:937、配列番号:939、配列番号:941、配列番号:943、配列番号:945、配列番号:947、配列番号:949、配列番号:951または配列番号:953と、少なくとも約100残基の領域にわたって少なくとも50%の配列同一性を有する核酸配列を含む単離または組換え核酸であって、ヒドロラーゼ活性を有する少なくとも1つのポリペプチドをコードし、さらに前記配列同一性が配列比較アルゴリズムを用いる分析によって、または目視精査によって決定される前記核酸。
【請求項2】
配列同一性が少なくとも約51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%の領域にわたる若しくはそれより高い、または100%である、請求項1記載の単離または組換え核酸。
【請求項3】
配列同一性が、少なくとも約50、75、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450、1500、1550残基若しくはそれより多い残基の領域、または遺伝子若しくは転写物の全長にわたる配列同一性である、請求項1記載の単離または組換え核酸。
【請求項4】
配列番号:1、配列番号:3、配列番号:5、配列番号:7、配列番号:9、配列番号:11、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:17、配列番号:19、配列番号:21、配列番号:23、配列番号:25、配列番号:27、配列番号:29、配列番号:31、配列番号:33、配列番号:35、配列番号:37、配列番号:39、配列番号:41、配列番号:43、配列番号:45、配列番号:47、配列番号:49、配列番号:51、配列番号:53、配列番号:55、配列番号:57、配列番号:59、配列番号:61、配列番号:63、配列番号:65、配列番号:67、配列番号:69、配列番号:71、配列番号:73、配列番号:75、配列番号:77、配列番号:79、配列番号:81、配列番号:83、配列番号:85、配列番号:87、配列番号:89、配列番号:91、配列番号:93、配列番号:95、配列番号:97、配列番号:99、配列番号:101、配列番号:103、配列番号:105、配列番号:107、配列番号:109、配列番号:111、配列番号:113、配列番号:115、配列番号:117、配列番号:119、配列番号:121、配列番号:123、配列番号:125、配列番号:127、配列番号:129、配列番号:131、配列番号:133、配列番号:135、配列番号:137、配列番号:139、配列番号:141、配列番号:143、配列番号:145、配列番号:147、配列番号:149、配列番号:151、配列番号:153、配列番号:155、配列番号:157、配列番号:159、配列番号:161、配列番号:163、配列番号:165、配列番号:167、配列番号:169、配列番号:171、配列番号:173、配列番号:175、配列番号:177、配列番号:179、配列番号:181、配列番号:183、配列番号:185、配列番号:187、配列番号:189、配列番号:191、配列番号:193、配列番号:195、配列番号:197、配列番号:199、配列番号:201、配列番号:203、配列番号:205、配列番号:207、配列番号:209、配列番号:211、配列番号:213、配列番号:215、配列番号:217、配列番号:219、配列番号:221、配列番号:223、配列番号:225、配列番号:227、配列番号:229、配列番号:231、配列番号:233、配列番号:235、配列番号:237、配列番号:239、配列番号:241、配列番号:243、配列番号:245、配列番号:247、配列番号:249、配列番号:251、配列番号:253、配列番号:255、配列番号:257、配列番号:259、配列番号:261、配列番号:263、配列番号:265、配列番号:267、配列番号:269、配列番号:271、配列番号:273、配列番号:275、配列番号:277、配列番号:279、配列番号:281、配列番号:283、配列番号:285、配列番号:287、配列番号:289、配列番号:291、配列番号:293、配列番号:295、配列番号:297、配列番号:299、配列番号:301、配列番号:303、配列番号:305、配列番号:307、配列番号:309、配列番号:311、配列番号:313、配列番号:315、配列番号:317、配列番号:319、配列番号:321、配列番号:323、配列番号:325、配列番号:327、配列番号:329、配列番号:331、配列番号:333、配列番号:335、配列番号:337、配列番号:339、配列番号:341、配列番号:343、配列番号:345、配列番号:347、配列番号:349、配列番号:351、配列番号:353、配列番号:355、配列番号:357、配列番号:359、配列番号:361、配列番号:363、配列番号:365、配列番号:367、配列番号:369、配列番号:371、配列番号:373、配列番号:375、配列番号:377、配列番号:379、配列番号:381、配列番号:383、配列番号:385、配列番号:387、配列番号:389、配列番号:391、配列番号:393、配列番号:395、配列番号:397、配列番号:399、配列番号:401、配列番号:403、配列番号:405、配列番号:407、配列番号:409、配列番号:411、配列番号:413、配列番号:415、配列番号:417、配列番号:419、配列番号:421、配列番号:423、配列番号:425、配列番号:427、配列番号:429、配列番号:431、配列番号:433、配列番号:435、配列番号:437、配列番号:439、配列番号:441、配列番号:443、配列番号:445、配列番号:447、配列番号:449、配列番号:451、配列番号:453、配列番号:455、配列番号:457、配列番号:459、配列番号:461、配列番号:463、配列番号:465、配列番号:467、配列番号:469、配列番号:471、配列番号:473、配列番号:475、配列番号:477、配列番号:479、配列番号:481、配列番号:483、配列番号:485、配列番号:487、配列番号:489、配列番号:491、配列番号:493、配列番号:495、配列番号:497、配列番号:499、配列番号:501、配列番号:503、配列番号:505、配列番号:507、配列番号:509、配列番号:511、配列番号:513、配列番号:515、配列番号:517、配列番号:519、配列番号:521、配列番号:523、配列番号:525、配列番号:527、配列番号:529、配列番号:531、配列番号:533、配列番号:535、配列番号:537、配列番号:539、配列番号:541、配列番号:543、配列番号:545、配列番号:547、配列番号:549、配列番号:551、配列番号:553、配列番号:555、配列番号:557、配列番号:559、配列番号:561、配列番号:563、配列番号:565、配列番号:567、配列番号:569、配列番号:571、配列番号:573、配列番号:575、配列番号:577、配列番号:579、配列番号:581、配列番号:583、配列番号:585、配列番号:587、配列番号:589、配列番号:591、配列番号:593、配列番号:595、配列番号:597、配列番号:599、配列番号:601、配列番号:603、配列番号:605、配列番号:607、配列番号:609、配列番号:611、配列番号:613、配列番号:615、配列番号:617、配列番号:619、配列番号:621、配列番号:623、配列番号:625、配列番号:627、配列番号:629、配列番号:631、配列番号:633、配列番号:635、配列番号:637、配列番号:639、配列番号:641、配列番号:643、配列番号:645、配列番号:647、配列番号:649、配列番号:651、配列番号:653、配列番号:655、配列番号:657、配列番号:659、配列番号:661、配列番号:663、配列番号:665、配列番号:667、配列番号:669、配列番号:671、配列番号:673、配列番号:675、配列番号:677、配列番号:679、配列番号:681、配列番号:683、配列番号:685、配列番号:687、配列番号:689、配列番号:691、配列番号:693、配列番号:695、配列番号:697、配列番号:699、配列番号:701、配列番号:703、配列番号:705、配列番号:707、配列番号:709、配列番号:711、配列番号:713、配列番号:715、配列番号:717、配列番号:719、配列番号:721、配列番号:723、配列番号:725、配列番号:727、配列番号:729、配列番号:731、配列番号:733、配列番号:735、配列番号:737、配列番号:739、配列番号:741、配列番号:743、配列番号:745、配列番号:747、配列番号:749、配列番号:751、配列番号:753、配列番号:755、配列番号:757、配列番号:759、配列番号:761、配列番号:763、配列番号:765、配列番号:767、配列番号:769、配列番号:771、配列番号:773、配列番号:775、配列番号:777、配列番号:779、配列番号:781、配列番号:783、配列番号:785、配列番号:787、配列番号:789、配列番号:791、配列番号:793、配列番号:795、配列番号:797、配列番号:799、配列番号:801、配列番号:803、配列番号:805、配列番号:807、配列番号:809、配列番号:811、配列番号:813、配列番号:815、配列番号:817、配列番号:819、配列番号:821、配列番号:823、配列番号:825、配列番号:827、配列番号:829、配列番号:831、配列番号:833、配列番号:835、配列番号:837、配列番号:839、配列番号:841、配列番号:843、配列番号:845、配列番号:847、配列番号:849、配列番号:851、配列番号:853、配列番号:855、配列番号:857、配列番号:859、配列番号:861、配列番号:863、配列番号:865、配列番号:867、配列番号:869、配列番号:871、配列番号:873、配列番号:875、配列番号:877、配列番号:879、配列番号:881、配列番号:883、配列番号:885、配列番号:887、配列番号:889、配列番号:891、配列番号:893、配列番号:895、配列番号:897、配列番号:899、配列番号:901、配列番号:903、配列番号:905、配列番号:907、配列番号:909、配列番号:911、配列番号:913、配列番号:915、配列番号:917、配列番号:919、配列番号:921、配列番号:923、配列番号:925、配列番号:927、配列番号:929、配列番号:931、配列番号:933、配列番号:935、配列番号:937、配列番号:939、配列番号:941、配列番号:943、配列番号:945、配列番号:947、配列番号:949、配列番号:951または配列番号:953記載の配列を含む、請求項1記載の単離または組換え核酸。
【請求項5】
配列番号:2、配列番号:4、配列番号:6、配列番号:8、配列番号:10、配列番号:12、配列番号:14、配列番号:16、配列番号:18、配列番号:20、配列番号:22、配列番号:24、配列番号:26、配列番号:28、配列番号:30、配列番号:32、配列番号:34、配列番号:36、配列番号:38、配列番号:40、配列番号:42、配列番号:44、配列番号:46、配列番号:48、配列番号:50、配列番号:52、配列番号:54、配列番号:56、配列番号:58、配列番号:60、配列番号:62、配列番号:64、配列番号:66、配列番号:68、配列番号:70、配列番号:72、配列番号:74、配列番号:76、配列番号:78、配列番号:80、配列番号:82、配列番号:84、配列番号:86、配列番号:88、配列番号:90、配列番号:92、配列番号:94、配列番号:96、配列番号:98、配列番号:100、配列番号:102、配列番号:104、配列番号:106、配列番号:108、配列番号:110、配列番号:112、配列番号:114、配列番号:116、配列番号:118、配列番号:120、配列番号:122、配列番号:124、配列番号:126、配列番号:128、配列番号:130、配列番号:132、配列番号:134、配列番号:136、配列番号:138、配列番号:140、配列番号:142、配列番号:143、配列番号:146、配列番号:148、配列番号:150、配列番号:152、配列番号:154、配列番号:156、配列番号:158、配列番号:160、配列番号:162、配列番号:164、配列番号:166、配列番号:168、配列番号:170、配列番号:172、配列番号:174、配列番号:176、配列番号:178、配列番号:180、配列番号:182、配列番号:184、配列番号:186、配列番号:188、配列番号:190、配列番号:192、配列番号:194、配列番号:196、配列番号:198、配列番号:200、配列番号:202、配列番号:204、配列番号:206、配列番号:208、配列番号:210、配列番号:212、配列番号:214、配列番号:216、配列番号:218、配列番号:220、配列番号:222、配列番号:224、配列番号:226、配列番号:228、配列番号:230、配列番号:232、配列番号:234、配列番号:236、配列番号:238、配列番号:240、配列番号:242、配列番号:244、配列番号:246、配列番号:248、配列番号:250、配列番号:252、配列番号:254、配列番号:256、配列番号:258、配列番号:260、配列番号:262、配列番号:264、配列番号:266、配列番号:268、配列番号:270、配列番号:272、配列番号:274、配列番号:276、配列番号:278、配列番号:280、配列番号:282、配列番号:284、配列番号:286、配列番号:288、配列番号:290、配列番号:292、配列番号:294、配列番号:296、配列番号:298、配列番号:300、配列番号:302、配列番号:304、配列番号:306、配列番号:308、配列番号:310、配列番号:312、配列番号:314、配列番号:316、配列番号:318、配列番号:320、配列番号:322、配列番号:324、配列番号:326、配列番号:328、配列番号:330、配列番号:332、配列番号:334、配列番号:336、配列番号:338、配列番号:340、配列番号:342、配列番号:344、配列番号:346、配列番号:348、配列番号:350、配列番号:352、配列番号:354、配列番号:356、配列番号:358、配列番号:360、配列番号:362、配列番号:364、配列番号:366、配列番号:368、配列番号:370、配列番号:372、配列番号:374、配列番号:376、配列番号:378、配列番号:380、配列番号:382、配列番号:384、配列番号:386、配列番号:388、配列番号:390、配列番号:392、配列番号:394、配列番号:396、配列番号:398、配列番号:400、配列番号:402、配列番号:404、配列番号:406、配列番号:408、配列番号:410、配列番号:412、配列番号:414、配列番号:416、配列番号:418、配列番号:420、配列番号:422、配列番号:424、配列番号:426、配列番号:428、配列番号:430、配列番号:432、配列番号:434、配列番号:436、配列番号:438、配列番号:440、配列番号:442、配列番号:444、配列番号:446、配列番号:448、配列番号:450、配列番号:452、配列番号:454、配列番号:456、配列番号:458、配列番号:460、配列番号:462、配列番号:464、配列番号:466、配列番号:468、配列番号:470、配列番号:472、配列番号:474、配列番号:476、配列番号:478、配列番号:480、配列番号:482、配列番号:484、配列番号:486、配列番号:488、配列番号:490、配列番号:492、配列番号:494、配列番号:496、配列番号:498、配列番号:500、配列番号:502、配列番号:504、配列番号:506、配列番号:508、配列番号:510、配列番号:512、配列番号:514、配列番号:516、配列番号:518、配列番号:520、配列番号:522、配列番号:524、配列番号:526、配列番号:528、配列番号:530、配列番号:532、配列番号:534、配列番号:536、配列番号:538、配列番号:540、配列番号:542、配列番号:544、配列番号:546、配列番号:548、配列番号:550、配列番号:552、配列番号:554、配列番号:556、配列番号:558、配列番号:560、配列番号:562、配列番号:564、配列番号:566、配列番号:568、配列番号:570、配列番号:572、配列番号:574、配列番号:576、配列番号:578、配列番号:580、配列番号:582、配列番号:584、配列番号:586、配列番号:588、配列番号:590、配列番号:592、配列番号:594、配列番号:596、配列番号:598、配列番号:600、配列番号:602、配列番号:604、配列番号:606、配列番号:608、配列番号:610、配列番号:612、配列番号:614、配列番号:616、配列番号:618、配列番号:620、配列番号:622、配列番号:624、配列番号:626、配列番号:628、配列番号:630、配列番号:632、配列番号:634、配列番号:636、配列番号:638、配列番号:640、配列番号:642、配列番号:644、配列番号:646、配列番号:648、配列番号:650、配列番号:652、配列番号:654、配列番号:656、配列番号:658、配列番号:660、配列番号:662、配列番号:664、配列番号:666、配列番号:668、配列番号:670、配列番号:672、配列番号:674、配列番号:676、配列番号:678、配列番号:680、配列番号:682、配列番号:684、配列番号:686、配列番号:688、配列番号:690、配列番号:692、配列番号:694、配列番号:696、配列番号:698、配列番号:700、配列番号:702、配列番号:704、配列番号:706、配列番号:708、配列番号:710、配列番号:712、配列番号:714、配列番号:716、配列番号:718、配列番号:720、配列番号:722、配列番号:724、配列番号:726、配列番号:728、配列番号:730、配列番号:732、配列番号:734、配列番号:736、配列番号:738、配列番号:740、配列番号:742、配列番号:744、配列番号:746、配列番号:748、配列番号:750、配列番号:752、配列番号:754、配列番号:756、配列番号:758、配列番号:760、配列番号:762、配列番号:764、配列番号:766、配列番号:768、配列番号:770、配列番号:772、配列番号:774、配列番号:776、配列番号:778、配列番号:780、配列番号:782、配列番号:784、配列番号:786、配列番号:788、配列番号:790、配列番号:792、配列番号:794、配列番号:796、配列番号:798、配列番号:800、配列番号:802、配列番号:804、配列番号:808、配列番号:808、配列番号:810、配列番号:812、配列番号:814、配列番号:816、配列番号:818、配列番号:820、配列番号:822、配列番号:824、配列番号:826、配列番号:828、配列番号:830、配列番号:832、配列番号:834、配列番号:836、配列番号:838、配列番号:840、配列番号:842、配列番号:844、配列番号:846、配列番号:848、配列番号:850、配列番号:852、配列番号:854、配列番号:856、配列番号:858、配列番号:860、配列番号:862、配列番号:864、配列番号:866、配列番号:868、配列番号:870、配列番号:872、配列番号:874、配列番号:876、配列番号:878、配列番号:880、配列番号:882、配列番号:884、配列番号:886、配列番号:888、配列番号:890、配列番号:892、配列番号:894、配列番号:896、配列番号:898、配列番号:900、配列番号:902、配列番号:904、配列番号:906、配列番号:908、配列番号:910、配列番号:912、配列番号:914、配列番号:916、配列番号:918、配列番号:920、配列番号:922、配列番号:924、配列番号:926、配列番号:928、配列番号:930、配列番号:932、配列番号:934、配列番号:936、配列番号:938、配列番号:940、配列番号:942、配列番号:944、配列番号:946、配列番号:948、配列番号:950、配列番号:952または配列番号:954記載の配列を有するポリペプチドをコードする、請求項1記載の単離または組換え核酸。
【請求項6】
配列比較アルゴリズムがBLAST Ver.2.2.2アルゴリズムであって、フィルタリング設定がblastall -p blastp -d “nr pataa” -F Fに設定され、他のオプションが規定値に設定されている、請求項1記載の単離または組換え核酸。
【請求項7】
ヒドロラーゼ活性がリパーゼ活性、プロテアーゼ活性、エステラーゼ活性またはホスホリパーゼ活性を含む、請求項1記載の単離または組換え核酸。
【請求項8】
リパーゼ活性が、トリアシルグリセロールをジアシルグリセロールと遊離脂肪酸に加水分解すること、または、トリアシルグリセロールをモノアシルグリセロールと遊離脂肪酸に加水分解すること、または、ジアシルグリセロールをモノアシルグリセロールと遊離脂肪酸に加水分解すること、または、モノアシルグリセロールを遊離脂肪酸とグリセロールに加水分解することを含む、あるいは、トリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)を加水分解することを含む、請求項7記載の単離または組換え核酸。
【請求項9】
リパーゼ活性が、ジアシルグリセロールまたはモノアシルグリセロール、および遊離脂肪酸とからトリアシルグリセロールを合成することを含む、請求項7記載の単離または組換え核酸。
【請求項10】
リパーゼ活性が、1,3-ジパルミトイル-2-オレオイルグリセロール(POP)、1,3-ジステアロイル-2-オレオイルグリセロール(SOS)、1-ジパルミトイル-2-オレオイル-3-ステアロイルグリセロール(POS)もしくは1-オレオイル-2,3-ジミリストイルグリセロール(OMM)、長鎖ポリ不飽和脂肪酸、アラキドン酸、ドコサヘキサエン酸(DHA)またはエイコサペンタエン酸(EPA)を合成することを含む、請求項7記載の単離または組換え核酸。
【請求項11】
リパーゼ活性がトリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)位置特異的である、請求項7記載の単離または組換え核酸。
【請求項12】
リパーゼ活性がSn2-特異的、Sn1-またはSn3-特異的である、請求項11記載の単離または組換え核酸。
【請求項13】
リパーゼ活性が脂肪酸特異的である、請求項7記載の単離または組換え核酸。
【請求項14】
リパーゼ活性が、加水分解、アルコール分解、エステル化、エステル転移またはエステル交換によって油を改変することを含む、請求項7記載の単離または組換え核酸。
【請求項15】
リパーゼ活性が位置特異的または化学選択的である、請求項7記載の単離または組換え核酸。
【請求項16】
リパーゼ活性が、エナンチオマー的に純粋なキラル生成物を合成することを含む、請求項15記載の単離または組換え核酸。
【請求項17】
リパーゼ活性がウンベリフェリル脂肪酸(FA)エステルを合成することを含む、請求項7記載の単離または組換え核酸。
【請求項18】
ヒドロラーゼ活性が熱安定性である、請求項7記載の単離または組換え核酸。
【請求項19】
ポリペプチドが約37℃〜約95℃、約55℃〜約85℃、約70℃〜約95℃または約90℃〜約95℃の温度範囲を含む条件下でリパーゼ活性を維持する、請求項18記載の単離または組換え核酸。
【請求項20】
ヒドロラーゼ活性が耐熱性である、請求項1記載の単離または組換え核酸。
【請求項21】
ポリペプチドが、37℃より高い温度から約95℃、55℃より高い温度から約85℃、または90℃よりも高い温度から約95℃の範囲の温度に曝露した後にヒドロラーゼ活性を維持する、請求項20記載の単離または組換え核酸。
【請求項22】
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【請求項23】
核酸が少なくとも長さ約50、75、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000若しくはそれより多い残基、または遺伝子若しくは転写物の完全長である、請求項23記載の単離または組換え核酸。
【請求項24】
ストリンジェントな条件が、0.2 x SSC中で約65℃にて約15分間の洗浄を含む洗浄工程を含む、請求項22記載の単離または組換え核酸。
【請求項25】
請求項1記載の配列の少なくとも10の連続する塩基を含み、結合またはハイブリダイゼーションによってヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を同定するための核酸プローブ。
【請求項26】
少なくとも約10〜50、約20〜60、約30〜70、約40〜80、約60〜100または約50〜150の連続する塩基を含むオリゴヌクレオチドを含む、請求項25記載の核酸プローブ。
【請求項27】
ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を同定するための核酸プローブであって、前記プローブが、配列番号:1、配列番号:3、配列番号:5、配列番号:7、配列番号:9、配列番号:11、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:17、配列番号:19、配列番号:21、配列番号:23、配列番号:25、配列番号:27、配列番号:29、配列番号:31、配列番号:33、配列番号:35、配列番号:37、配列番号:39、配列番号:41、配列番号:43、配列番号:45、配列番号:47、配列番号:49、配列番号:51、配列番号:53、配列番号:55、配列番号:57、配列番号:59、配列番号:61、配列番号:63、配列番号:65、配列番号:67、配列番号:69、配列番号:71、配列番号:73、配列番号:75、配列番号:77、配列番号:79、配列番号:81、配列番号:83、配列番号:85、配列番号:87、配列番号:89、配列番号:91、配列番号:93、配列番号:95、配列番号:97、配列番号:99、配列番号:101、配列番号:103、配列番号:105、配列番号:107、配列番号:109、配列番号:111、配列番号:113、配列番号:115、配列番号:117、配列番号:119、配列番号:121、配列番号:123、配列番号:125、配列番号:127、配列番号:129、配列番号:131、配列番号:133、配列番号:135、配列番号:137、配列番号:139、配列番号:141、配列番号:143、配列番号:145、配列番号:147、配列番号:149、配列番号:151、配列番号:153、配列番号:155、配列番号:157、配列番号:159、配列番号:161、配列番号:163、配列番号:165、配列番号:167、配列番号:169、配列番号:171、配列番号:173、配列番号:175、配列番号:177、配列番号:179、配列番号:181、配列番号:183、配列番号:185、配列番号:187、配列番号:189、配列番号:191、配列番号:193、配列番号:195、配列番号:197、配列番号:199、配列番号:201、配列番号:203、配列番号:205、配列番号:207、配列番号:209、配列番号:211、配列番号:213、配列番号:215、配列番号:217、配列番号:219、配列番号:221、配列番号:223、配列番号:225、配列番号:227、配列番号:229、配列番号:231、配列番号:233、配列番号:235、配列番号:237、配列番号:239、配列番号:241、配列番号:243、配列番号:245、配列番号:247、配列番号:249、配列番号:251、配列番号:253、配列番号:255、配列番号:257、配列番号:259、配列番号:261、配列番号:263、配列番号:265、配列番号:267、配列番号:269、配列番号:271、配列番号:273、配列番号:275、配列番号:277、配列番号:279、配列番号:281、配列番号:283、配列番号:285、配列番号:287、配列番号:289、配列番号:291、配列番号:293、配列番号:295、配列番号:297、配列番号:299、配列番号:301、配列番号:303、配列番号:305、配列番号:307、配列番号:309、配列番号:311、配列番号:313、配列番号:315、配列番号:317、配列番号:319、配列番号:321、配列番号:323、配列番号:325、配列番号:327、配列番号:329、配列番号:331、配列番号:333、配列番号:335、配列番号:337、配列番号:339、配列番号:341、配列番号:343、配列番号:345、配列番号:347、配列番号:349、配列番号:351、配列番号:353、配列番号:355、配列番号:357、配列番号:359、配列番号:361、配列番号:363、配列番号:365、配列番号:367、配列番号:369、配列番号:371、配列番号:373、配列番号:375、配列番号:377、配列番号:379、配列番号:381、配列番号:383、配列番号:385、配列番号:387、配列番号:389、配列番号:391、配列番号:393、配列番号:395、配列番号:397、配列番号:399、配列番号:401、配列番号:403、配列番号:405、配列番号:407、配列番号:409、配列番号:411、配列番号:413、配列番号:415、配列番号:417、配列番号:419、配列番号:421、配列番号:423、配列番号:425、配列番号:427、配列番号:429、配列番号:431、配列番号:433、配列番号:435、配列番号:437、配列番号:439、配列番号:441、配列番号:443、配列番号:445、配列番号:447、配列番号:449、配列番号:451、配列番号:453、配列番号:455、配列番号:457、配列番号:459、配列番号:461、配列番号:463、配列番号:465、配列番号:467、配列番号:469、配列番号:471、配列番号:473、配列番号:475、配列番号:477、配列番号:479、配列番号:481、配列番号:483、配列番号:485、配列番号:487、配列番号:489、配列番号:491、配列番号:493、配列番号:495、配列番号:497、配列番号:499、配列番号:501、配列番号:503、配列番号:505、配列番号:507、配列番号:509、配列番号:511、配列番号:513、配列番号:515、配列番号:517、配列番号:519、配列番号:521、配列番号:523、配列番号:525、配列番号:527、配列番号:529、配列番号:531、配列番号:533、配列番号:535、配列番号:537、配列番号:539、配列番号:541、配列番号:543、配列番号:545、配列番号:547、配列番号:549、配列番号:551、配列番号:553、配列番号:555、配列番号:557、配列番号:559、配列番号:561、配列番号:563、配列番号:565、配列番号:567、配列番号:569、配列番号:571、配列番号:573、配列番号:575、配列番号:577、配列番号:579、配列番号:581、配列番号:583、配列番号:585、配列番号:587、配列番号:589、配列番号:591、配列番号:593、配列番号:595、配列番号:597、配列番号:599、配列番号:601、配列番号:603、配列番号:605、配列番号:607、配列番号:609、配列番号:611、配列番号:613、配列番号:615、配列番号:617、配列番号:619、配列番号:621、配列番号:623、配列番号:625、配列番号:627、配列番号:629、配列番号:631、配列番号:633、配列番号:635、配列番号:637、配列番号:639、配列番号:641、配列番号:643、配列番号:645、配列番号:647、配列番号:649、配列番号:651、配列番号:653、配列番号:655、配列番号:657、配列番号:659、配列番号:661、配列番号:663、配列番号:665、配列番号:667、配列番号:669、配列番号:671、配列番号:673、配列番号:675、配列番号:677、配列番号:679、配列番号:681、配列番号:683、配列番号:685、配列番号:687、配列番号:689、配列番号:691、配列番号:693、配列番号:695、配列番号:697、配列番号:699、配列番号:701、配列番号:703、配列番号:705、配列番号:707、配列番号:709、配列番号:711、配列番号:713、配列番号:715、配列番号:717、配列番号:719、配列番号:721、配列番号:723、配列番号:725、配列番号:727、配列番号:729、配列番号:731、配列番号:733、配列番号:735、配列番号:737、配列番号:739、配列番号:741、配列番号:743、配列番号:745、配列番号:747、配列番号:749、配列番号:751、配列番号:753、配列番号:755、配列番号:757、配列番号:759、配列番号:761、配列番号:763、配列番号:765、配列番号:767、配列番号:769、配列番号:771、配列番号:773、配列番号:775、配列番号:777、配列番号:779、配列番号:781、配列番号:783、配列番号:785、配列番号:787、配列番号:789、配列番号:791、配列番号:793、配列番号:795、配列番号:797、配列番号:799、配列番号:801、配列番号:803、配列番号:805、配列番号:807、配列番号:809、配列番号:811、配列番号:813、配列番号:815、配列番号:817、配列番号:819、配列番号:821、配列番号:823、配列番号:825、配列番号:827、配列番号:829、配列番号:831、配列番号:833、配列番号:835、配列番号:837、配列番号:839、配列番号:841、配列番号:843、配列番号:845、配列番号:847、配列番号:849、配列番号:851、配列番号:853、配列番号:855、配列番号:857、配列番号:859、配列番号:861、配列番号:863、配列番号:865、配列番号:867、配列番号:869、配列番号:871、配列番号:873、配列番号:875、配列番号:877、配列番号:879、配列番号:881、配列番号:883、配列番号:885、配列番号:887、配列番号:889、配列番号:891、配列番号:893、配列番号:895、配列番号:897、配列番号:899、配列番号:901、配列番号:903、配列番号:905、配列番号:907、配列番号:909、配列番号:911、配列番号:913、配列番号:915、配列番号:917、配列番号:919、配列番号:921、配列番号:923、配列番号:925、配列番号:927、配列番号:929、配列番号:931、配列番号:933、配列番号:935、配列番号:937、配列番号:939、配列番号:941、配列番号:943、配列番号:945、配列番号:947、配列番号:949、配列番号:951または配列番号:953の少なくとも約10の連続する塩基を含む核酸を含み、前記配列同一性が配列比較アルゴリズムによる分析または目視精査によって決定される前記核酸プローブ。
【請求項28】
少なくとも約10〜50、約20〜60、約30〜70、約40〜80、約60〜100または約50〜150の連続する塩基を含むオリゴヌクレオチドを含む、請求項27記載の核酸プローブ。
【請求項29】
請求項1または22記載の配列を含む核酸またはその部分配列を増幅することのできる、ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を増幅するための増幅プライマー配列対。
【請求項30】
増幅プライマー配列対の各構成プライマーが、前記配列の約10〜50の連続する塩基を含むオリゴヌクレオチドを含む、請求項29記載の増幅プライマー対。
【請求項31】
請求項1若しくは請求項22記載の核酸配列またはその部分配列を増幅することのできる増幅プライマー配列対で鋳型核酸を増幅することを含む、ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を増幅する方法。
【請求項32】
請求項1または請求項22記載の配列を含む核酸を含む発現カセット。
【請求項33】
請求項1または請求項22記載の配列を含む核酸を含むベクター。
【請求項34】
ウイルスベクター、プラスミド、ファージ、ファージミド、コスミド、フォスミド、バクテリオファージまたは人工染色体を含む、請求項1または請求項22記載の配列を含む核酸を含むクローニングビヒクル。
【請求項35】
ウイルスベクターがアデノウイルスベクター、レトロウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクターを含む、請求項34記載のクローニングビヒクル。
【請求項36】
細菌人工染色体(BAC)、プラスミド、バクテリオファージP1-誘導体ベクター(PAC)、酵母人工染色体(YAC)、哺乳動物人工染色体(MAC)を含む、請求項34記載のクローニングビヒクル。
【請求項37】
請求項1または請求項22記載の配列を含む核酸を含む形質転換細胞。
【請求項38】
請求項32記載の発現カセットを含む形質転換細胞。
【請求項39】
バクテリア細胞、哺乳動物細胞、真菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、または植物細胞である、請求項37または請求項38記載の形質転換細胞。
【請求項40】
請求項1または請求項22記載の配列を含む非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
【請求項41】
マウスである、請求項40記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
【請求項42】
請求項1または請求項22記載の配列を含むトランスジェニック植物。
【請求項43】
トウモロコシ、モロコシ、ジャガイモ、トマト、コムギ、油糧種子植物、ナタネ、ダイズ、イネ、オオムギ、草本、またはタバコである、請求項42記載のトランスジェニック植物。
【請求項44】
請求項1または請求項22記載の配列を含むトランスジェニック種子。
【請求項45】
種子が、イネ、トウモロコシ種子、コムギ核、油糧種子、ナタネ種子、ヤシ核、ヒマワリ種子、ゴマ種子、コメ、オオムギ、ラッカセイ、タバコ種子である、請求項44記載のトランスジェニック種子。
【請求項46】
請求項1若しくは請求項22記載の配列またはその部分配列に相補的またはストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることのできる核酸配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項47】
約10〜50、約20〜60、約30〜70、約40〜80または約60〜100塩基長である、請求項46記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項48】
請求項1若しくは請求項22記載の配列に相補的またはストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることのできる核酸配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを細胞に導入するまたは細胞中で発現させることを含む、細胞中のヒドロラーゼメッセージの翻訳を阻害する方法。
【請求項49】
請求項1または請求項22記載の配列の部分配列を含む二本鎖阻害性RNA(RNAi)分子。
【請求項50】
約15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25またはそれより長い二重鎖ヌクレオチド長である、請求項49記載の二本鎖阻害性RNA(RNAi)分子。
【請求項51】
請求項1または請求項22記載の配列の部分配列を含む二本鎖阻害性RNA(RNAi)分子を細胞に投与するまたは細胞内で発現させることを含む、細胞におけるヒドロラーゼの発現を阻害する方法。
【請求項52】
(i)配列番号:2、配列番号:4、配列番号:6、配列番号:8、配列番号:10、配列番号:12、配列番号:14、配列番号:16、配列番号:18、配列番号:20、配列番号:22、配列番号:24、配列番号:26、配列番号:28、配列番号:30、配列番号:32、配列番号:34、配列番号:36、配列番号:38、配列番号:40、配列番号:42、配列番号:44、配列番号:46、配列番号:48、配列番号:50、配列番号:52、配列番号:54、配列番号:56、配列番号:58、配列番号:60、配列番号:62、配列番号:64、配列番号:66、配列番号:68、配列番号:70、配列番号:72、配列番号:74、配列番号:76、配列番号:78、配列番号:80、配列番号:82、配列番号:84、配列番号:86、配列番号:88、配列番号:90、配列番号:92、配列番号:94、配列番号:96、配列番号:98、配列番号:100、配列番号:102、配列番号:104、配列番号:106、配列番号:108、配列番号:110、配列番号:112、配列番号:114、配列番号:116、配列番号:118、配列番号:120、配列番号:122、配列番号:124、配列番号:126、配列番号:128、配列番号:130、配列番号:132、配列番号:134、配列番号:136、配列番号:138、配列番号:140、配列番号:142、配列番号:143、配列番号:146、配列番号:148、配列番号:150、配列番号:152、配列番号:154、配列番号:156、配列番号:158、配列番号:160、配列番号:162、配列番号:164、配列番号:166、配列番号:168、配列番号:170、配列番号:172、配列番号:174、配列番号:176、配列番号:178、配列番号:180、配列番号:182、配列番号:184、配列番号:186、配列番号:188、配列番号:190、配列番号:192、配列番号:194、配列番号:196、配列番号:198、配列番号:200、配列番号:202、配列番号:204、配列番号:206、配列番号:208、配列番号:210、配列番号:212、配列番号:214、配列番号:216、配列番号:218、配列番号:220、配列番号:222、配列番号:224、配列番号:226、配列番号:228、配列番号:230、配列番号:232、配列番号:234、配列番号:236、配列番号:238、配列番号:240、配列番号:242、配列番号:244、配列番号:246、配列番号:248、配列番号:250、配列番号:252、配列番号:254、配列番号:256、配列番号:258、配列番号:260、配列番号:262、配列番号:264、配列番号:266、配列番号:268、配列番号:270、配列番号:272、配列番号:274、配列番号:276、配列番号:278、配列番号:280、配列番号:282、配列番号:284、配列番号:286、配列番号:288、配列番号:290、配列番号:292、配列番号:294、配列番号:296、配列番号:298、配列番号:300、配列番号:302、配列番号:304、配列番号:306、配列番号:308、配列番号:310、配列番号:312、配列番号:314、配列番号:316、配列番号:318、配列番号:320、配列番号:322、配列番号:324、配列番号:326、配列番号:328、配列番号:330、配列番号:332、配列番号:334、配列番号:336、配列番号:338、配列番号:340、配列番号:342、配列番号:344、配列番号:346、配列番号:348、配列番号:350、配列番号:352、配列番号:354、配列番号:356、配列番号:358、配列番号:360、配列番号:362、配列番号:364、配列番号:366、配列番号:368、配列番号:370、配列番号:372、配列番号:374、配列番号:376、配列番号:378、配列番号:380、配列番号:382、配列番号:384、配列番号:386、配列番号:388、配列番号:390、配列番号:392、配列番号:394、配列番号:396、配列番号:398、配列番号:400、配列番号:402、配列番号:404、配列番号:406、配列番号:408、配列番号:410、配列番号:412、配列番号:414、配列番号:416、配列番号:418、配列番号:420、配列番号:422、配列番号:424、配列番号:426、配列番号:428、配列番号:430、配列番号:432、配列番号:434、配列番号:436、配列番号:438、配列番号:440、配列番号:442、配列番号:444、配列番号:446、配列番号:448、配列番号:450、配列番号:452、配列番号:454、配列番号:456、配列番号:458、配列番号:460、配列番号:462、配列番号:464、配列番号:466、配列番号:468、配列番号:470、配列番号:472、配列番号:474、配列番号:476、配列番号:478、配列番号:480、配列番号:482、配列番号:484、配列番号:486、配列番号:488、配列番号:490、配列番号:492、配列番号:494、配列番号:496、配列番号:498、配列番号:500、配列番号:502、配列番号:504、配列番号:506、配列番号:508、配列番号:510、配列番号:512、配列番号:514、配列番号:516、配列番号:518、配列番号:520、配列番号:522、配列番号:524、配列番号:526、配列番号:528、配列番号:530、配列番号:532、配列番号:534、配列番号:536、配列番号:538、配列番号:540、配列番号:542、配列番号:544、配列番号:546、配列番号:548、配列番号:550、配列番号:552、配列番号:554、配列番号:556、配列番号:558、配列番号:560、配列番号:562、配列番号:564、配列番号:566、配列番号:568、配列番号:570、配列番号:572、配列番号:574、配列番号:576、配列番号:578、配列番号:580、配列番号:582、配列番号:584、配列番号:586、配列番号:588、配列番号:590、配列番号:592、配列番号:594、配列番号:596、配列番号:598、配列番号:600、配列番号:602、配列番号:604、配列番号:606、配列番号:608、配列番号:610、配列番号:612、配列番号:614、配列番号:616、配列番号:618、配列番号:620、配列番号:622、配列番号:624、配列番号:626、配列番号:628、配列番号:630、配列番号:632、配列番号:634、配列番号:636、配列番号:638、配列番号:640、配列番号:642、配列番号:644、配列番号:646、配列番号:648、配列番号:650、配列番号:652、配列番号:654、配列番号:656、配列番号:658、配列番号:660、配列番号:662、配列番号:664、配列番号:666、配列番号:668、配列番号:670、配列番号:672、配列番号:674、配列番号:676、配列番号:678、配列番号:680、配列番号:682、配列番号:684、配列番号:686、配列番号:688、配列番号:690、配列番号:692、配列番号:694、配列番号:696、配列番号:698、配列番号:700、配列番号:702、配列番号:704、配列番号:706、配列番号:708、配列番号:710、配列番号:712、配列番号:714、配列番号:716、配列番号:718、配列番号:720、配列番号:722、配列番号:724、配列番号:726、配列番号:728、配列番号:730、配列番号:732、配列番号:734、配列番号:736、配列番号:738、配列番号:740、配列番号:742、配列番号:744、配列番号:746、配列番号:748、配列番号:750、配列番号:752、配列番号:754、配列番号:756、配列番号:758、配列番号:760、配列番号:762、配列番号:764、配列番号:766、配列番号:768、配列番号:770、配列番号:772、配列番号:774、配列番号:776、配列番号:778、配列番号:780、配列番号:782、配列番号:784、配列番号:786、配列番号:788、配列番号:790、配列番号:792、配列番号:794、配列番号:796、配列番号:798、配列番号:800、配列番号:802、配列番号:804、配列番号:808、配列番号:808、配列番号:810、配列番号:812、配列番号:814、配列番号:816、配列番号:818、配列番号:820、配列番号:822、配列番号:824、配列番号:826、配列番号:828、配列番号:830、配列番号:832、配列番号:834、配列番号:836、配列番号:838、配列番号:840、配列番号:842、配列番号:844、配列番号:846、配列番号:848、配列番号:850、配列番号:852、配列番号:854、配列番号:856、配列番号:858、配列番号:860、配列番号:862、配列番号:864、配列番号:866、配列番号:868、配列番号:870、配列番号:872、配列番号:874、配列番号:876、配列番号:878、配列番号:880、配列番号:882、配列番号:884、配列番号:886、配列番号:888、配列番号:890、配列番号:892、配列番号:894、配列番号:896、配列番号:898、配列番号:900、配列番号:902、配列番号:904、配列番号:906、配列番号:908、配列番号:910、配列番号:912、配列番号:914、配列番号:916、配列番号:918、配列番号:920、配列番号:922、配列番号:924、配列番号:926、配列番号:928、配列番号:930、配列番号:932、配列番号:934、配列番号:936、配列番号:938、配列番号:940、配列番号:942、配列番号:944、配列番号:946、配列番号:948、配列番号:950、配列番号:952または配列番号:954と少なくとも約100残基の領域にわたって少なくとも50%の配列同一性を有する(前記配列同一性は配列比較アルゴリズムを用いる分析によって、または目視精査によって決定される);または、
(ii)請求項1または請求項22記載の核酸によってコードされる、
単離または組換えポリペプチド。
【請求項53】
配列同一性が、少なくとも約51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれより高い領域にわたる、または100%の配列同一性である請求項52に記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項54】
配列同一性が、少なくとも酵素の約10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050残基またはそれより多い残基領域、または酵素の全長にわたる、請求項52記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項55】
配列番号:2、配列番号:4、配列番号:6、配列番号:8、配列番号:10、配列番号:12、配列番号:14、配列番号:16、配列番号:18、配列番号:20、配列番号:22、配列番号:24、配列番号:26、配列番号:28、配列番号:30、配列番号:32、配列番号:34、配列番号:36、配列番号:38、配列番号:40、配列番号:42、配列番号:44、配列番号:46、配列番号:48、配列番号:50、配列番号:52、配列番号:54、配列番号:56、配列番号:58、配列番号:60、配列番号:62、配列番号:64、配列番号:66、配列番号:68、配列番号:70、配列番号:72、配列番号:74、配列番号:76、配列番号:78、配列番号:80、配列番号:82、配列番号:84、配列番号:86、配列番号:88、配列番号:90、配列番号:92、配列番号:94、配列番号:96、配列番号:98、配列番号:100、配列番号:102、配列番号:104、配列番号:106、配列番号:108、配列番号:110、配列番号:112、配列番号:114、配列番号:116、配列番号:118、配列番号:120、配列番号:122、配列番号:124、配列番号:126、配列番号:128、配列番号:130、配列番号:132、配列番号:134、配列番号:136、配列番号:138、配列番号:140、配列番号:142、配列番号:143、配列番号:146、配列番号:148、配列番号:150、配列番号:152、配列番号:154、配列番号:156、配列番号:158、配列番号:160、配列番号:162、配列番号:164、配列番号:166、配列番号:168、配列番号:170、配列番号:172、配列番号:174、配列番号:176、配列番号:178、配列番号:180、配列番号:182、配列番号:184、配列番号:186、配列番号:188、配列番号:190、配列番号:192、配列番号:194、配列番号:196、配列番号:198、配列番号:200、配列番号:202、配列番号:204、配列番号:206、配列番号:208、配列番号:210、配列番号:212、配列番号:214、配列番号:216、配列番号:218、配列番号:220、配列番号:222、配列番号:224、配列番号:226、配列番号:228、配列番号:230、配列番号:232、配列番号:234、配列番号:236、配列番号:238、配列番号:240、配列番号:242、配列番号:244、配列番号:246、配列番号:248、配列番号:250、配列番号:252、配列番号:254、配列番号:256、配列番号:258、配列番号:260、配列番号:262、配列番号:264、配列番号:266、配列番号:268、配列番号:270、配列番号:272、配列番号:274、配列番号:276、配列番号:278、配列番号:280、配列番号:282、配列番号:284、配列番号:286、配列番号:288、配列番号:290、配列番号:292、配列番号:294、配列番号:296、配列番号:298、配列番号:300、配列番号:302、配列番号:304、配列番号:306、配列番号:308、配列番号:310、配列番号:312、配列番号:314、配列番号:316、配列番号:318、配列番号:320、配列番号:322、配列番号:324、配列番号:326、配列番号:328、配列番号:330、配列番号:332、配列番号:334、配列番号:336、配列番号:338、配列番号:340、配列番号:342、配列番号:344、配列番号:346、配列番号:348、配列番号:350、配列番号:352、配列番号:354、配列番号:356、配列番号:358、配列番号:360、配列番号:362、配列番号:364、配列番号:366、配列番号:368、配列番号:370、配列番号:372、配列番号:374、配列番号:376、配列番号:378、配列番号:380、配列番号:382、配列番号:384、配列番号:386、配列番号:388、配列番号:390、配列番号:392、配列番号:394、配列番号:396、配列番号:398、配列番号:400、配列番号:402、配列番号:404、配列番号:406、配列番号:408、配列番号:410、配列番号:412、配列番号:414、配列番号:416、配列番号:418、配列番号:420、配列番号:422、配列番号:424、配列番号:426、配列番号:428、配列番号:430、配列番号:432、配列番号:434、配列番号:436、配列番号:438、配列番号:440、配列番号:442、配列番号:444、配列番号:446、配列番号:448、配列番号:450、配列番号:452、配列番号:454、配列番号:456、配列番号:458、配列番号:460、配列番号:462、配列番号:464、配列番号:466、配列番号:468、配列番号:470、配列番号:472、配列番号:474、配列番号:476、配列番号:478、配列番号:480、配列番号:482、配列番号:484、配列番号:486、配列番号:488、配列番号:490、配列番号:492、配列番号:494、配列番号:496、配列番号:498、配列番号:500、配列番号:502、配列番号:504、配列番号:506、配列番号:508、配列番号:510、配列番号:512、配列番号:514、配列番号:516、配列番号:518、配列番号:520、配列番号:522、配列番号:524、配列番号:526、配列番号:528、配列番号:530、配列番号:532、配列番号:534、配列番号:536、配列番号:538、配列番号:540、配列番号:542、配列番号:544、配列番号:546、配列番号:548、配列番号:550、配列番号:552、配列番号:554、配列番号:556、配列番号:558、配列番号:560、配列番号:562、配列番号:564、配列番号:566、配列番号:568、配列番号:570、配列番号:572、配列番号:574、配列番号:576、配列番号:578、配列番号:580、配列番号:582、配列番号:584、配列番号:586、配列番号:588、配列番号:590、配列番号:592、配列番号:594、配列番号:596、配列番号:598、配列番号:600、配列番号:602、配列番号:604、配列番号:606、配列番号:608、配列番号:610、配列番号:612、配列番号:614、配列番号:616、配列番号:618、配列番号:620、配列番号:622、配列番号:624、配列番号:626、配列番号:628、配列番号:630、配列番号:632、配列番号:634、配列番号:636、配列番号:638、配列番号:640、配列番号:642、配列番号:644、配列番号:646、配列番号:648、配列番号:650、配列番号:652、配列番号:654、配列番号:656、配列番号:658、配列番号:660、配列番号:662、配列番号:664、配列番号:666、配列番号:668、配列番号:670、配列番号:672、配列番号:674、配列番号:676、配列番号:678、配列番号:680、配列番号:682、配列番号:684、配列番号:686、配列番号:688、配列番号:690、配列番号:692、配列番号:694、配列番号:696、配列番号:698、配列番号:700、配列番号:702、配列番号:704、配列番号:706、配列番号:708、配列番号:710、配列番号:712、配列番号:714、配列番号:716、配列番号:718、配列番号:720、配列番号:722、配列番号:724、配列番号:726、配列番号:728、配列番号:730、配列番号:732、配列番号:734、配列番号:736、配列番号:738、配列番号:740、配列番号:742、配列番号:744、配列番号:746、配列番号:748、配列番号:750、配列番号:752、配列番号:754、配列番号:756、配列番号:758、配列番号:760、配列番号:762、配列番号:764、配列番号:766、配列番号:768、配列番号:770、配列番号:772、配列番号:774、配列番号:776、配列番号:778、配列番号:780、配列番号:782、配列番号:784、配列番号:786、配列番号:788、配列番号:790、配列番号:792、配列番号:794、配列番号:796、配列番号:798、配列番号:800、配列番号:802、配列番号:804、配列番号:808、配列番号:808、配列番号:810、配列番号:812、配列番号:814、配列番号:816、配列番号:818、配列番号:820、配列番号:822、配列番号:824、配列番号:826、配列番号:828、配列番号:830、配列番号:832、配列番号:834、配列番号:836、配列番号:838、配列番号:840、配列番号:842、配列番号:844、配列番号:846、配列番号:848、配列番号:850、配列番号:852、配列番号:854、配列番号:856、配列番号:858、配列番号:860、配列番号:862、配列番号:864、配列番号:866、配列番号:868、配列番号:870、配列番号:872、配列番号:874、配列番号:876、配列番号:878、配列番号:880、配列番号:882、配列番号:884、配列番号:886、配列番号:888、配列番号:890、配列番号:892、配列番号:894、配列番号:896、配列番号:898、配列番号:900、配列番号:902、配列番号:904、配列番号:906、配列番号:908、配列番号:910、配列番号:912、配列番号:914、配列番号:916、配列番号:918、配列番号:920、配列番号:922、配列番号:924、配列番号:926、配列番号:928、配列番号:930、配列番号:932、配列番号:934、配列番号:936、配列番号:938、配列番号:940、配列番号:942、配列番号:944、配列番号:946、配列番号:948、配列番号:950、配列番号:952または配列番号:954記載の配列を有する、請求項52記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項56】
ヒドロラーゼ活性を有する、請求項60記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項57】
ヒドロラーゼ活性がエステラーゼ活性、リパーゼ活性、ホスホリパーゼ活性またはプロテアーゼ活性を含む、請求項52記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項58】
リパーゼ活性が、トリアシルグリセロールをジアシルグリセロールと遊離脂肪酸に加水分解すること、または、トリアシルグリセロールをモノアシルグリセロールと遊離脂肪酸に加水分解すること、または、ジアシルグリセロールをモノアシルグリセロールと遊離脂肪酸に加水分解すること、または、モノアシルグリセロールを遊離脂肪酸とグリセロールに加水分解することを含む、あるいは、トリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)を加水分解することを含む、請求項57記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項59】
リパーゼ活性が、ジアシルグリセロールまたはモノアシルグリセロール、および遊離脂肪酸とからトリアシルグリセロールを合成することを含む、請求項57記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項60】
リパーゼ活性が、1,3-ジパルミトイル-2-オレオイルグリセロール(POP)、1,3-ジステアロイル-2-オレオイルグリセロール(SOS)、1-ジパルミトイル-2-オレオイル-3-ステアロイルグリセロール(POS)もしくは1-オレオイル-2,3-ジミリストイルグリセロール(OMM)、長鎖ポリ不飽和脂肪酸、アラキドン酸、ドコサヘキサエン酸(DHA)またはエイコサペンタエン酸(EPA)を合成することを含む、請求項57記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項61】
リパーゼ活性がトリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)位置特異的である、請求項57記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項62】
リパーゼ活性がSn2-特異的、Sn1-またはSn3-特異的である、請求項61記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項63】
リパーゼ活性が脂肪酸特異的である、請求項57記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項64】
リパーゼ活性が、加水分解、アルコール分解、エステル化、エステル転移またはエステル交換によって油を改変することを含む、請求項57記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項65】
リパーゼ活性が位置特異的または化学選択的である、請求項57記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項66】
リパーゼ活性が、エナンチオマー的に純粋なキラル生成物を合成することを含む、請求項65記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項67】
リパーゼ活性がウンベリフェリル脂肪酸(FA)エステルを合成することを含む、請求項57記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項68】
ヒドロラーゼ活性が熱安定性である、請求項57記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項69】
ポリペプチドが約37℃〜約95℃、約55℃〜約85℃、約70℃〜約95℃または約90℃〜約95℃の温度範囲を含む条件下でヒドロラーゼ活性を維持する、請求項68記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項70】
ヒドロラーゼ活性が耐熱性である、請求項56記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項71】
ポリペプチドが、37℃より高い温度から約95℃、55℃より高い温度から約85℃、または90℃よりも高い温度から約95℃の範囲の温度に曝露した後にヒドロラーゼ活性を維持する、請求項70記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項72】
請求項52記載のポリペプチドを含み、シグナル配列を欠く単離または組換えポリペプチド。
【請求項73】
請求項52記載のポリペプチドを含み、異種シグナル配列を含む単離または組換えポリペプチド。
【請求項74】
ヒドロラーゼ活性が約37℃にて、タンパク質1mgあたり約100〜約1000ユニット、タンパク質1mgあたり約500〜約750ユニット、タンパク質1mgあたり約500〜1200ユニット、またはタンパク質1mgあたり約750〜1000ユニットの比活性を含む請求項56記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項75】
耐熱性が、上昇した温度まで加熱後に37℃におけるヒドロラーゼの比活性の少なくとも半分の活性を維持することを含む、請求項70記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項76】
耐熱性が、上昇した温度まで加熱後に37℃においてタンパク質1mgあたり約500〜1200ユニットの比活性を維持することを含む、請求項70記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項77】
少なくとも一つのグリコシル化部位を含む、請求項52記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項78】
グリコシル化がN-結合グリコシル化である、請求項77記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項79】
P.パストリスまたはS.ポンベで発現させるとグリコシル化される、請求項78記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項80】
約pH6.5、pH6.0、pH5.5、pH5.0、pH4.5またはpH4.0を含む条件下でヒドロラーゼ活性を維持する、請求項56記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項81】
約pH8.0、pH8.5、pH9、pH9.5、pH10またはpH10.5を含む条件下でヒドロラーゼ活性を維持する、請求項56記載の単離または組換えポリペプチド。
【請求項82】
液体、固体、またはゲルを含む、請求項52記載のポリペプチドを含むタンパク質調製物。
【請求項83】
請求項52記載のポリペプチドおよび第二のドメインを含むヘテロ二量体。
【請求項84】
第二のドメインがポリペプチドであり、ヘテロ二量体が融合タンパク質である、請求項83記載のヘテロ二量体。
【請求項85】
第2のドメインがエピトープまたはタグである、請求項84記載のヘテロ二量体。
【請求項86】
請求項52記載のポリペプチドを含むホモ二量体。
【請求項87】
前記ポリペプチドペプチドが請求項52記載の配列またはその部分配列を含む固定化ポリペプチド。
【請求項88】
ポリペプチドが細胞上、金属上、樹脂上、ポリマー上、セラミック上、ガラス上、微小電極上、グラファイト粒子上、ビーズ上、ゲル上、プレート上、アレイ上、またはキャピラリー管上に固定化されている、請求項87記載の固定化ポリペプチド。
【請求項89】
固定化された請求項52記載のポリペプチドを含むアレイ。
【請求項90】
固定化された請求項1または請求項22記載の核酸を含むアレイ。
【請求項91】
請求項52記載のポリペプチドに特異的に結合する単離または組換え抗体。
【請求項92】
モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である、請求項91記載の単離または組換え抗体。
【請求項93】
請求項52記載のポリペプチドに特異的に結合する抗体を含むハイブリドーマ。
【請求項94】
請求項52記載のポリペプチドまたはその部分配列を含む動物用食品補助物。
【請求項95】
ポリペプチドがグリコシル化されている、請求項94記載の動物用食品補助物。
【請求項96】
請求項52記載のポリペプチドを含む食用酵素デリバリーマトリックス。
【請求項97】
ペレットを含む、請求項96記載の食用酵素デリバリーマトリックス。
【請求項98】
ポリペプチドがグリコシル化されている、請求項97記載の食用酵素デリバリーマトリックス。
【請求項99】
ポリペプチドが耐熱性または熱安定性のヒドロラーゼ活性を有する、請求項96記載の食用酵素デリバリーマトリックス。
【請求項100】
以下の工程を含む、ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを単離または同定する方法:
(a)請求項91記載の抗体を提供する工程;
(b)ポリペプチドを含むサンプルを提供する工程;
(c)工程(b)のサンプルを工程(a)の抗体と、前記抗体が前記ポリペプチドへ特異的に結合することのできる条件下で接触させ、それによりヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを単離または同定する工程。
【請求項101】
請求項1または請求項22記載の核酸またはその部分配列を液性免疫応答を生じさせるに充分な量で非ヒト動物に投与し、それによって抗ヒドロラーゼ抗体を生じさせることを含む、抗ヒドロラーゼ抗体の作製方法。
【請求項102】
請求項52記載のポリペプチドまたはその部分配列を液性免疫応答を生じさせるに充分な量で非ヒト動物に投与し、それによって抗ヒドロラーゼ抗体を生じさせることを含む、抗ヒドロラーゼ抗体の作製方法。
【請求項103】
以下の工程を含む、組換えポリペプチドを製造する方法:
(a)プロモーターに機能可能に連結した核酸を提供する工程であって、前記核酸が請求項1または22記載の配列を含む核酸である、前記工程;および、
(b)工程(a)の核酸を、ポリペプチドの発現が可能な条件下で発現させ、それによって組換えポリペプチドを生成させる工程。
【請求項104】
更に、工程(a)の核酸で宿主細胞を形質転換し、続いて工程(a)の核酸を発現させ、それにより形質転換細胞において組換えポリペプチドを生成させることを含む、請求項103記載の方法。
【請求項105】
(a)請求項56記載のポリペプチドを提供する工程;
(b)ヒドロラーゼ基質を提供する工程;および
(c)前記ポリペプチドを工程(b)の基質と接触させ、前記基質の量の減少または反応生成物の量の増加を検出する工程、
を含み、基質の量の減少または反応生成物の量の増加によりヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを検出することを含む、ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを同定する方法。
【請求項106】
基質が脂肪酸、トリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)である、請求項105記載の方法。
【請求項107】
(a)請求項56記載のポリペプチドを提供する工程;
(b)試験基質を提供する工程;および
(c)工程(a)のポリペプチドを工程(b)の試験基質と接触させ、前記基質の量の減少または反応生成物の量の増加を検出する工程、
を含み、前記基質の量が減少または前記反応生成物が増加すれば前記試験基質をヒドロラーゼ基質として同定することを含む、ヒドロラーゼ基質を同定する方法。
【請求項108】
(a)請求項1または請求項22記載の配列を有する核酸または前記核酸を含むベクターを、前記核酸がポリペプチドに翻訳され得る条件下で発現させる工程;
(b)試験化合物を提供する工程;
(c)前記ポリペプチドを前記試験化合物と接触させる工程;および、
(d)工程(b)の試験化合物が前記ポリペプチドに特異的に結合するかどうかを測定する工程、
を含む、試験化合物がポリペプチドに特異的に結合するかどうかを決定する方法。
【請求項109】
(a)請求項52記載の配列を有するポリペプチドを提供する工程;
(b)試験化合物を提供する工程;
(c)前記ポリペプチドを前記試験化合物と接触させる工程;および、
(d)工程(b)の試験化合物が前記ポリペプチドに特異的に結合するかどうかを測定する工程、
を含む、試験化合物がポリペプチドに特異的に結合するかどうかを決定する方法。
【請求項110】
(a)請求項56記載のポリペプチドを提供する工程;
(b)試験化合物を提供する工程;
(c)工程(a)のポリペプチドを工程(b)の試験化合物に接触させ、ヒドロラーゼ活性を測定する工程、
を含み、前記試験化合物の非存在下で測定されるヒドロラーゼ活性に比較して前記試験化合物の存在下で測定されるヒドロラーゼ活性が変化すれば、前記試験化合物がヒドロラーゼ活性を調節すると決定する、ヒドロラーゼ活性の調節因子を同定する方法。
【請求項111】
ヒドロラーゼ活性が、ヒドロラーゼ基質を提供すること、および基質の量の減少若しくは反応生成物の量の増加を検出する、または、基質の量の増加若しくは反応生成物の量の減少を検出すること、によって測定される、請求項110記載の方法。
【請求項112】
試験化合物非存在下における基質の量若しくは反応生成物の量に比較して、前記試験化合物存在下における基質の量が減少若しくは反応生成物の量が増加すれば、前記試験化合物をヒドロラーゼ活性の活性化因子であると同定する、請求項111記載の方法。
【請求項113】
試験化合物非存在下における基質の量若しくは反応生成物の量に比較して、前記試験化合物存在下における基質の量が増加若しくは反応生成物の量が減少すれば、前記試験化合物をヒドロラーゼ活性の阻害因子であると同定する、請求項111記載の方法。
【請求項114】
プロセッサおよびデータ保存装置を含むコンピュータシステムであって、前記データ保存装置にはポリペプチド配列または核酸配列が保存され、前記ポリペプチド配列は請求項52記載の配列または請求項1若しくは請求項22記載の核酸配列によってコードされるポリペプチドを含む、前記コンピュータシステム。
【請求項115】
更に、配列比較アルゴリズムおよび少なくとも一つの参照配列が保存されたデータ保存装置を含む、請求項114記載のコンピュータシステム。
【請求項116】
配列比較アルゴリズムが多型性を表示するコンピュータプログラムを含む、請求項115記載のコンピュータシステム。
【請求項117】
配列の1以上の特徴を同定するアイデンティファイアーを更に含む請求項114記載のコンピュータシステム。
【請求項118】
ポリペプチド配列または核酸配列が保存されたコンピュータ読取り可能媒体であって、前記ポリペプチド配列が請求項52記載のポリペプチドまたは請求項1若しくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む、前記コンピュータ読取り可能媒体。
【請求項119】
以下の工程を含む、配列中の特徴を同定する方法:
(a)配列中の1以上の特徴を同定するコンピュータプログラムを用いて配列を読む工程であって、前記配列はポリペプチド配列または核酸配列を含み、前記ポリペプチド配列は請求項52記載のポリペプチドまたは請求項1若しくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む、前記工程;および、
(b)前記コンピュータプログラムにより前記配列中の1以上の特徴を同定する工程。
【請求項120】
以下の工程を含む、第1の配列と第2の配列とを比較する方法;
(a)配列を比較するコンピュータプログラムを用いて第1の配列及び第2の配列を読む工程であって、前記第1の配列はポリペプチド配列または核酸配列を含み、前記ポリペプチド配列は請求項52記載のポリペプチドまたは請求項1若しくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む、前記工程;および、
(b)前記第1の配列と前記第2の配列間の相違を前記コンピュータプログラムにより決定する工程。
【請求項121】
第1の配列と第2の配列間の相違を決定する工程が、更に多型性を同定する工程を含む、請求項120記載の方法。
【請求項122】
配列中の1以上の特徴を同定するアイデンティファイアーを更に含む、請求項120記載の方法。
【請求項123】
コンピュータプログラムを用いて第1の配列を読み、前記配列中の1以上の特徴を同定することを含む、請求項122記載の方法。
【請求項124】
以下の工程を含む、環境サンプルからヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を単離または回収する方法:
(a)請求項29記載の増幅プライマー配列対を提供する工程;
(b)環境サンプルから核酸を単離する、または環境サンプルを前記サンプル中の核酸が前記増幅プライマー対へハイブリダーゼションのために接近可能となるように処理する工程;および、
(c)工程(b)の核酸を工程(a)の増幅プライマー対と合わせ、前記環境サンプルからの核酸を増幅し、それによって前記環境サンプルからヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を単離または回収する工程。
【請求項125】
増幅プライマー配列対の各構成プライマーが、配列番号:1、配列番号:3、配列番号:5、配列番号:7、配列番号:9、配列番号:11、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:17、配列番号:19、配列番号:21、配列番号:23、配列番号:25、配列番号:27、配列番号:29、配列番号:31、配列番号:33、配列番号:35、配列番号:37、配列番号:39、配列番号:41、配列番号:43、配列番号:45、配列番号:47、配列番号:49、配列番号:51、配列番号:53、配列番号:55、配列番号:57、配列番号:59、配列番号:61、配列番号:63、配列番号:65、配列番号:67、配列番号:69、配列番号:71、配列番号:73、配列番号:75、配列番号:77、配列番号:79、配列番号:81、配列番号:83、配列番号:85、配列番号:87、配列番号:89、配列番号:91、配列番号:93、配列番号:95、配列番号:97、配列番号:99、配列番号:101、配列番号:103、配列番号:105、配列番号:107、配列番号:109、配列番号:111、配列番号:113、配列番号:115、配列番号:117、配列番号:119、配列番号:121、配列番号:123、配列番号:125、配列番号:127、配列番号:129、配列番号:131、配列番号:133、配列番号:135、配列番号:137、配列番号:139、配列番号:141、配列番号:143、配列番号:145、配列番号:147、配列番号:149、配列番号:151、配列番号:153、配列番号:155、配列番号:157、配列番号:159、配列番号:161、配列番号:163、配列番号:165、配列番号:167、配列番号:169、配列番号:171、配列番号:173、配列番号:175、配列番号:177、配列番号:179、配列番号:181、配列番号:183、配列番号:185、配列番号:187、配列番号:189、配列番号:191、配列番号:193、配列番号:195、配列番号:197、配列番号:199、配列番号:201、配列番号:203、配列番号:205、配列番号:207、配列番号:209、配列番号:211、配列番号:213、配列番号:215、配列番号:217、配列番号:219、配列番号:221、配列番号:223、配列番号:225、配列番号:227、配列番号:229、配列番号:231、配列番号:233、配列番号:235、配列番号:237、配列番号:239、配列番号:241、配列番号:243、配列番号:245、配列番号:247、配列番号:249、配列番号:251、配列番号:253、配列番号:255、配列番号:257、配列番号:259、配列番号:261、配列番号:263、配列番号:265、配列番号:267、配列番号:269、配列番号:271、配列番号:273、配列番号:275、配列番号:277、配列番号:279、配列番号:281、配列番号:283、配列番号:285、配列番号:287、配列番号:289、配列番号:291、配列番号:293、配列番号:295、配列番号:297、配列番号:299、配列番号:301、配列番号:303、配列番号:305、配列番号:307、配列番号:309、配列番号:311、配列番号:313、配列番号:315、配列番号:317、配列番号:319、配列番号:321、配列番号:323、配列番号:325、配列番号:327、配列番号:329、配列番号:331、配列番号:333、配列番号:335、配列番号:337、配列番号:339、配列番号:341、配列番号:343、配列番号:345、配列番号:347、配列番号:349、配列番号:351、配列番号:353、配列番号:355、配列番号:357、配列番号:359、配列番号:361、配列番号:363、配列番号:365、配列番号:367、配列番号:369、配列番号:371、配列番号:373、配列番号:375、配列番号:377、配列番号:379、配列番号:381、配列番号:383、配列番号:385、配列番号:387、配列番号:389、配列番号:391、配列番号:393、配列番号:395、配列番号:397、配列番号:399、配列番号:401、配列番号:403、配列番号:405、配列番号:407、配列番号:409、配列番号:411、配列番号:413、配列番号:415、配列番号:417、配列番号:419、配列番号:421、配列番号:423、配列番号:425、配列番号:427、配列番号:429、配列番号:431、配列番号:433、配列番号:435、配列番号:437、配列番号:439、配列番号:441、配列番号:443、配列番号:445、配列番号:447、配列番号:449、配列番号:451、配列番号:453、配列番号:455、配列番号:457、配列番号:459、配列番号:461、配列番号:463、配列番号:465、配列番号:467、配列番号:469、配列番号:471、配列番号:473、配列番号:475、配列番号:477、配列番号:479、配列番号:481、配列番号:483、配列番号:485、配列番号:487、配列番号:489、配列番号:491、配列番号:493、配列番号:495、配列番号:497、配列番号:499、配列番号:501、配列番号:503、配列番号:505、配列番号:507、配列番号:509、配列番号:511、配列番号:513、配列番号:515、配列番号:517、配列番号:519、配列番号:521、配列番号:523、配列番号:525、配列番号:527、配列番号:529、配列番号:531、配列番号:533、配列番号:535、配列番号:537、配列番号:539、配列番号:541、配列番号:543、配列番号:545、配列番号:547、配列番号:549、配列番号:551、配列番号:553、配列番号:555、配列番号:557、配列番号:559、配列番号:561、配列番号:563、配列番号:565、配列番号:567、配列番号:569、配列番号:571、配列番号:573、配列番号:575、配列番号:577、配列番号:579、配列番号:581、配列番号:583、配列番号:585、配列番号:587、配列番号:589、配列番号:591、配列番号:593、配列番号:595、配列番号:597、配列番号:599、配列番号:601、配列番号:603、配列番号:605、配列番号:607、配列番号:609、配列番号:611、配列番号:613、配列番号:615、配列番号:617、配列番号:619、配列番号:621、配列番号:623、配列番号:625、配列番号:627、配列番号:629、配列番号:631、配列番号:633、配列番号:635、配列番号:637、配列番号:639、配列番号:641、配列番号:643、配列番号:645、配列番号:647、配列番号:649、配列番号:651、配列番号:653、配列番号:655、配列番号:657、配列番号:659、配列番号:661、配列番号:663、配列番号:665、配列番号:667、配列番号:669、配列番号:671、配列番号:673、配列番号:675、配列番号:677、配列番号:679、配列番号:681、配列番号:683、配列番号:685、配列番号:687、配列番号:689、配列番号:691、配列番号:693、配列番号:695、配列番号:697、配列番号:699、配列番号:701、配列番号:703、配列番号:705、配列番号:707、配列番号:709、配列番号:711、配列番号:713、配列番号:715、配列番号:717、配列番号:719、配列番号:721、配列番号:723、配列番号:725、配列番号:727、配列番号:729、配列番号:731、配列番号:733、配列番号:735、配列番号:737、配列番号:739、配列番号:741、配列番号:743、配列番号:745、配列番号:747、配列番号:749、配列番号:751、配列番号:753、配列番号:755、配列番号:757、配列番号:759、配列番号:761、配列番号:763、配列番号:765、配列番号:767、配列番号:769、配列番号:771、配列番号:773、配列番号:775、配列番号:777、配列番号:779、配列番号:781、配列番号:783、配列番号:785、配列番号:787、配列番号:789、配列番号:791、配列番号:793、配列番号:795、配列番号:797、配列番号:799、配列番号:801、配列番号:803、配列番号:805、配列番号:807、配列番号:809、配列番号:811、配列番号:813、配列番号:815、配列番号:817、配列番号:819、配列番号:821、配列番号:823、配列番号:825、配列番号:827、配列番号:829、配列番号:831、配列番号:833、配列番号:835、配列番号:837、配列番号:839、配列番号:841、配列番号:843、配列番号:845、配列番号:847、配列番号:849、配列番号:851、配列番号:853、配列番号:855、配列番号:857、配列番号:859、配列番号:861、配列番号:863、配列番号:865、配列番号:867、配列番号:869、配列番号:871、配列番号:873、配列番号:875、配列番号:877、配列番号:879、配列番号:881、配列番号:883、配列番号:885、配列番号:887、配列番号:889、配列番号:891、配列番号:893、配列番号:895、配列番号:897、配列番号:899、配列番号:901、配列番号:903、配列番号:905、配列番号:907、配列番号:909、配列番号:911、配列番号:913、配列番号:915、配列番号:917、配列番号:919、配列番号:921、配列番号:923、配列番号:925、配列番号:927、配列番号:929、配列番号:931、配列番号:933、配列番号:935、配列番号:937、配列番号:939、配列番号:941、配列番号:943、配列番号:945、配列番号:947、配列番号:949、配列番号:951または配列番号:953記載の配列またはその部分配列の少なくとも約10〜50の連続する塩基を含むオリゴヌクレオチドを含む、請求項124記載の方法。
【請求項126】
以下の工程を含む、環境サンプルからヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を単離または回収する方法:
(a)請求項1または請求項22、またはその部分配列を含むポリヌクレオチドプローブを提供する工程;
(b)環境サンプルから核酸を単離する、または、環境サンプルを前記サンプル中の核酸が工程(a)のポリヌクレオチドプローブにハイブリダイゼーションのために接近可能であるように処理する工程;および、
(c)工程(b)の単離された核酸または処理された環境サンプルを工程(a)のポリヌクレオチドプローブと一緒にする工程;
(d)工程(a)のポリヌクレオチドプローブと特異的にハイブリダイズする核酸を単離し、それによって、環境サンプルからヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を単離または回収する工程。
【請求項127】
環境サンプルが水サンプル、液体サンプル、土壌サンプル、大気サンプルまたは生物学的サンプルを含む、請求項124または請求項126記載の方法。
【請求項128】
生物学的サンプルが細菌細胞、原生動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞、植物細胞、真菌細胞、または哺乳動物細胞に由来する請求項127記載の方法。
【請求項129】
以下の工程を含む、ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸の変種を作製する方法:
(a)請求項1または請求項22記載の配列を含む鋳型核酸を提供する工程;および、
(b)前記鋳型配列における1以上のヌクレオチドを改変、欠失または付加、またはそれらの組合せにより、前記鋳型核酸の変種を作製する工程。
【請求項130】
変種核酸を発現させて変種ヒドロラーゼポリペプチドを生成させることを更に含む、請求項129記載の方法。
【請求項131】
改変、付加または欠失が、変異性PCR、シャッフリング、オリゴヌクレオチド特異的変異導入、アッセンブリPCR、セクシュアルPCR変異導入、in vivo変異導入、カセット変異導入、再帰的アンサンブル変異導入、エクスポネンシャル変異導入、部位特異的変異導入、遺伝子再アッセンブリ、遺伝子部位飽和変異導入(GSSM)、合成連結アッセンブリ(SLR)およびそれらの組合せを含む方法により導入される、請求項129記載の方法。
【請求項132】
改変、付加、欠失が、組換え、再帰的配列組換え、ホスホチオエート-修飾DNA変異導入、ウラシル含有鋳型変異導入、ギャップ付加二重鎖変異導入、点ミスマッチ修復変異導入、修復欠損宿主株変異導入、化学変異導入、放射性変異導入、欠失変異導入、制限-選択変異導入、制限-精製変異導入、人工遺伝子合成、アンサンブル変異導入、キメラ核酸マルチマー生成、およびそれらの組合せによって導入される、請求項129記載の方法。
【請求項133】
鋳型核酸によってコードされるポリペプチドの活性または安定性に対して変異した若しくは異なる活性を有する、または、変異した若しくは異なる安定性を有するヒドロラーゼが生成されるまで反復される、請求項129記載の方法。
【請求項134】
変種ヒドロラーゼポリペプチドが耐熱性であって、上昇した温度に曝露した後にある程度の活性を維持する、請求項133記載の方法。
【請求項135】
変種ヒドロラーゼポリペプチドが鋳型核酸によってコードされるポリペプチドに比較してグリコシル化が増加する、請求項133記載の方法。
【請求項136】
変種ヒドロラーゼポリペプチドが高温下でヒドロラーゼ活性を有し、鋳型核酸によってコードされるヒドロラーゼが高温下で活性を有しない、請求項133記載の方法。
【請求項137】
鋳型核酸のコドン使用とは異なるコドン使用を有するヒドロラーゼコード配列が生成されるまで反復される、請求項129記載の方法。
【請求項138】
鋳型核酸のものよりも高いもしくは低い、メッセージ発現レベルもしくは安定性を有するヒドロラーゼ遺伝子が生成されるまで反復される、請求項129記載の方法。
【請求項139】
以下の工程を含む、ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸のコドンを改変して宿主細胞における前記核酸の発現を増加させる方法:
(a)請求項1または請求項22記載の配列を含む、ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を提供する工程;および、
(b)工程(a)の核酸中の非優先コドンまたは低優先コドンを同定し、前記コドンを置換されるコドンと同じアミノ酸をコードする優先コドンまたは中性的に使用されるコドンに置換し、それによって核酸を改変して発現を増加させる工程であって、前記優先コドンとは宿主中の遺伝子内のコード配列において高頻度に提示されるコドンであり、非優先コドンまたは低優先コドンとは前記宿主中の遺伝子内のコード配列において低頻度に提示されるコドンである、前記工程。
【請求項140】
以下の工程を含む、ヒドロラーゼポリペプチドをコードする核酸のコドンを改変する方法:
(a)請求項1または請求項22記載の配列を含む、ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸を提供する工程;および、
(b)工程(a)の核酸中のコドンを同定し、前記コドンを置換されるコドンと同一のアミノ酸をコードする異なるコドンに置換し、それによってヒドロラーゼをコードする核酸中のコドンを改変する工程。
【請求項141】
以下の工程を含む、ヒドロラーゼポリペプチドをコードする核酸のコドンを改変して宿主における前記核酸の発現を増加させる方法:
(a)請求項1または請求項22記載の配列を含む、ヒドロラーゼポリペプチドをコードする核酸を提供する工程;および、
(b)工程(a)の核酸中の非優先コドンまたは低優先コドンを同定し、前記コドンを置換されるコドンと同じアミノ酸をコードする優先コドンまたは中性的に使用されるコドンに置換し、それによって核酸を改変して発現を増加させる工程であって、前記優先コドンとは宿主細胞中の遺伝子内のコード配列において高頻度に提示されるコドンであり、非優先コドンまたは低優先コドンとは前記宿主細胞中の遺伝子内のコード配列において低頻度に提示されるコドンである、前記工程。
【請求項142】
以下の工程を含む、ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸のコドンを改変して宿主細胞における前記核酸の発現を減少させる方法:
(a)請求項1または請求項22記載の配列を含む、ヒドロラーゼポリペプチドをコードする核酸を提供する工程;および、
(b)工程(a)の核酸中の少なくとも一つの優先コドンを同定し、前記コドンを置換されるコドンと同じアミノ酸をコードする非優先コドンまたは低優先コドンに置換し、それによって核酸を改変して宿主細胞でのその発現を減少させる工程であって、前記優先コドンとは宿主細胞中の遺伝子内のコード配列において高頻度に提示されるコドンであり、非優先コドンまたは低優先コドンとは前記宿主細胞中の遺伝子内のコード配列において低頻度に提示されるコドンである、前記工程。
【請求項143】
宿主細胞が細菌細胞、真菌細胞、昆虫細胞、酵母細胞、植物細胞または哺乳動物細胞である、請求項141または請求項142記載の方法。
【請求項144】
以下の工程を含む、複数の改変ヒドロラーゼ活性部位または基質結合部位をコードする核酸のライブラリーを作製する方法であって、前記改変ヒドロラーゼ活性部位または基質結合部位が第1の活性部位または第1の基質結合部位をコードする配列を含む第1の核酸に由来する前記方法:
(a)第1の活性部位または第1の基質結合部位をコードする第1の核酸を提供する工程であって、前記第1の核酸の配列が、請求項1または請求項22記載の配列またはその部分配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列を含み、前記核酸がヒドロラーゼ活性部位またはヒドロラーゼ基質結合部位をコードする、前記工程;
(b)前記第1の核酸中の複数の標的コドンにおいて天然のアミノ酸変種をコードする、変異性オリゴヌクレオチドの組を提供する工程;および、
(c)前記変異性オリゴヌクレオチドの組を用いて、変異させた各アミノ酸コドンにおいて一群のアミノ酸変種をコードする、一組の活性部位コード変種核酸または結合部位コード変種核酸を生成し、それによって複数の改変ヒドロラーゼ活性部位または基質結合部位をコードする核酸のライブラリーを作製する工程。
【請求項145】
工程(a)の第1の核酸を、最適化定方向進化システム、遺伝子部位飽和変異導入(GSSM)、または合成連結再アッセンブリ(SLR)を含む方法によって変異させることを含む、請求項144記載の方法。
【請求項146】
変異性PCR、シャッフリング、オリゴヌクレオチド指向変異導入、アッセンブリPCR、セクシュアルPCR変異導入、in vivo変異導入、カセット変異導入、再帰的アンサンブル変異導入、エクスポネンシャルアンサンブル変異導入、部位特異的変異導入、遺伝子再アッセンブリ、遺伝子部位飽和変異導入(GSSM)、合成連結再アッセンブリ(SLR)またはそれらの組合せを含む方法によって、工程(a)の第1の核酸または変種に変異導入することを含む請求項144記載の方法。
【請求項147】
組換え、再帰的配列組換え、ホスホチオエート-修飾DNA変異導入、ウラシル含有鋳型変異導入、ギャップ付加二重鎖変異導入、点ミスマッチ修復変異導入、修復欠損宿主株変異導入、化学変異導入、放射性変異導入、欠失変異導入、制限-選択変異導入、制限-精製変異導入、人工遺伝子合成、アンサンブル変異導入、キメラ核酸マルチマー生成、またはそれらの組合せを含む方法によって工程(a)の第1の核酸または変種に変異導入することを含む請求項144記載の方法。
【請求項148】
以下の工程を含む、小分子を作製する方法:
(a)小分子を合成または改変できる複数の生合成酵素を提供する工程であって、前記酵素の一つが請求項1または請求項22記載の配列を含む核酸によってコードされるヒドロラーゼ酵素を含む、前記工程;
(b)工程(a)の酵素の少なくとも一つに対する基質を提供する工程;および
(c)複数の生体触媒反応を容易にする条件下で工程(b)の基質を前記酵素と反応させ、一連の生体触媒反応によって小分子を生成させる工程。
【請求項149】
以下の工程を含む小分子を改変する方法:
(a)ヒドロラーゼ酵素を提供する工程であって、前記酵素は請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1若しくは請求項22記載の核酸配列を含む核酸によってコードされるポリペプチドを含む酵素である、前記工程;
(b)小分子を提供する工程;
(c)工程(a)の酵素を、前記ヒドロラーゼ酵素によって触媒される酵素反応を容易にする条件下で、工程(b)の小分子と反応させる工程。
【請求項150】
工程(a)の酵素に対する複数の小分子基質を含み、それによって前記ヒドロラーゼ酵素によって触媒される少なくとも一つの酵素反応によって生成される改変小分子のライブラリーを作製することを含む、請求項149記載の方法。
【請求項151】
酵素による複数の生体触媒反応を容易にして前記複数の酵素反応によって生成される改変小分子のライブラリーを生成させる条件下で複数の追加の酵素を含む、請求項149記載の方法。
【請求項152】
ライブラリーを試験して、前記ライブラリー中に所望の活性を示す特定の改変小分子が存在するかどうかを決定する工程をさらに含む、請求項151記載の方法。
【請求項153】
ライブラリーを試験する工程が、更に、改変小分子の一部を所望の活性を有する特定の改変小分子の存在または非存在について試験し、前記所望の活性を有する特定の改変小分子を生成する少なくとも一つの特異的な生体触媒反応を同定することによって、ライブラリー中の複数の改変小分子の一部を生成するために使用された生体触媒反応の一つを除く全てを系統的に除去する工程を含む、請求項152記載の方法。
【請求項154】
以下の工程を含む、ヒドロラーゼ酵素の機能的断片を決定する方法:
(a)ヒドロラーゼ酵素を提供する工程であって、前記酵素は請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1若しくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む酵素である、前記工程;
(b)工程(a)の配列から複数のアミノ酸残基を欠失させ、残存する部分配列についてヒドロラーゼ活性を試験し、それによってヒドロラーゼ酵素の機能的断片を決定する工程。
【請求項155】
ヒドロラーゼ活性が、ヒドロラーゼ基質を提供すること、および、基質の量の減少または反応生成物の量の増加を検出すること、によって測定される、請求項154記載の方法。
【請求項156】
以下の工程を含む、リアルタイム代謝フラックス分析を用いた、新規な、または、改変された表現型について全細胞を操作する方法:
(a)細胞の遺伝的構成を改変することによって改変細胞を作製する工程であって、前記遺伝的構成が細胞に請求項1または請求項22記載の配列を含む核酸を導入することによって改変される、前記工程;
(b)前記改変細胞を培養して複数の改変細胞を生成させる工程;
(c)リアルタイムで工程(b)の細胞培養物を監視することにより、前記細胞の少なくとも一つの代謝パラメーターを測定する工程;および、
(d)工程(c)のデータを解析して、測定されたパラメーターが同様な条件下における未改変細胞の対応する測定値と異なるかどうかを決定し、それによってリアルタイム代謝フラックスを用いて細胞の操作された表現型を同定する工程。
【請求項157】
細胞の遺伝的構成が細胞中の配列の欠失または配列の改変、もしくは遺伝子の発現をノックアウトすることによって改変される、請求項156記載の方法。
【請求項158】
新規に操作された表現型を含む細胞を選抜することを更に含む、請求項157記載の方法。
【請求項159】
さらに、選抜した細胞を培養し、新規に操作された表現型を含む新規な細胞株を生成させることを含む、請求項158記載の方法。
【請求項160】
以下の工程を含む、トリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)を加水分解する方法:
(a)ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを提供する工程であって、前記ポリペプチドは請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む、前記工程;
(b)トリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)を含む組成物を提供する工程;および、
(c)前記ポリペプチドがトリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)を加水分解する条件下で工程(a)のポリペプチドを工程(b)の組成物と接触させる工程。
【請求項161】
以下の工程を含む、組成物からトリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)を除去またはその量を低減する方法:
(a)ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを提供する工程であって、前記ポリペプチドは請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む、前記工程;
(b)トリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)を含む組成物を提供する工程;および、
(c)前記ポリペプチドがトリアシルグリセロール(TAG)、ジアシルグリセロール(DAG)またはモノアシルグリセロール(MAG)を除去またはその量を低減する条件下で工程(a)のポリペプチドを工程(b)の組成物と接触させる工程。
【請求項162】
ヒドロラーゼポリペプチドのグリコシル化を含む、ヒドロラーゼポリペプチドの耐熱性または熱安定性を増大させる方法であって、前記ポリペプチドが請求項52記載のポリペプチドまたは請求項1若しくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドの少なくとも30個の連続するアミノ酸を含む、前記方法。
【請求項163】
ヒドロラーゼ比活性が、約37℃より高い温度から約95℃の範囲の温度において熱安定性または耐熱性である、請求項163記載の方法。
【請求項164】
請求項1または請求項24記載の核酸を含むベクターを発現させることを含む、細胞で組換えヒドロラーゼポリペプチドを過剰発現させる方法であって、過剰発現が高活性プロモーター、二シストロン性ベクター、またはベクターの遺伝子増幅によって行われる、前記方法。
【請求項165】
請求項52記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む洗剤組成物であって、前記ポリペプチドがヒドロラーゼ活性を有する、前記洗剤組成物。
【請求項166】
ヒドロラーゼが、非界面活性ヒドロラーゼまたは界面活性ヒドロラーゼである、請求項166記載の洗剤組成物。
【請求項167】
ヒドロラーゼが、非水性液状組成物、鋳造固形物、顆粒形態、粒状形態、打錠剤、ゲル状形態、ペーストまたはスラリー状形態として製剤化される請求項165の洗剤組成物。
【請求項168】
以下の工程を含む物体の洗浄方法:
(a)ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを含む組成物を提供する工程であって、前記ポリペプチドは請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む、前記工程;
(b)物体を提供する工程;および
(c)前記組成物が前記物体を洗浄することができる条件下で工程(a)のポリペプチドを工程(b)の物体と接触させる工程。
【請求項169】
以下の工程を含む、動物によって消費されるに先立って、飼料または食物中の油を加水分解する方法:
(a)油を含む飼料材料を入手する工程であって、前記油はヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドで加水分解されていてもよく、ここで前記ポリペプチドは請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む、前記工程;および、
(b)前記油が加水分解され処理済食物または飼料が生成されるために十分な量で十分な時間、工程(a)のポリペプチドを前記飼料または食物材料に加え、それによって動物が消費する前に前記食物または飼料中の油を加水分解する工程。
【請求項170】
食物または飼料がコメ、トウモロコシ、オオムギ、コムギ、豆類、またはジャガイモである請求項169記載の方法。
【請求項171】
請求項52記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む飼料または食物。
【請求項172】
油、および請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む組成物。
【請求項173】
請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む医薬組成物。
【請求項174】
核酸が植物プロモーターに機能可能に連結されている、請求項32記載の発現カセット。
【請求項175】
植物発現ベクターをさらに含む、請求項174記載の発現カセット。
【請求項176】
植物発現ベクターが植物ウィルスを含む、請求項175記載の発現カセット。
【請求項177】
植物プロモーターが、ジャガイモのプロモーター、イネのプロモーター、トウモロコシのプロモーター、コムギまたはオオムギのプロモーターを含む、請求項174記載の発現カセット。
【請求項178】
プロモーターが、アグロバクテリウム・ツメファシエンスのT-DNA由来のプロモーターを含む、請求項174記載の発現カセット。
【請求項179】
プロモーターが構成的プロモーターである、請求項174記載の発現カセット。
【請求項180】
構成的プロモーターがCaMV35Sである、請求項179記載の発現カセット。
【請求項181】
プロモーターが誘導性プロモーターまたは組織特異的プロモーターである、請求項174記載の発現カセット。
【請求項182】
組織特異的プロモーターが、種子特異的、葉特異的、根特異的、茎特異的または離脱-誘導プロモーターである、請求項181記載の発現カセット。
【請求項183】
植物細胞が、ジャガイモ、イネ、トウモロコシ、コムギ、タバコまたはオオムギの細胞である、請求項39記載の形質転換細胞。
【請求項184】
以下の工程を含むトランスジェニック植物の作製方法:
(a)請求項1または請求項22記載の配列を含む異種核酸配列を細胞に導入し、それにより形質転換植物細胞を生成する工程;
(b)前記形質転換細胞からトランスジェニック植物を生成する工程。
【請求項185】
工程(a)が更に、植物細胞プロトプラストのエレクトロポレーションまたはマイクロインジェクションによって異種核酸を導入することを含む、請求項184記載の方法。
【請求項186】
工程(a)が更に、DNA粒子ボンバードメントによって異種核酸を植物組織に直接導入することを含む、請求項184記載の方法。
【請求項187】
工程(a)が更に、アグロバクテリウム・ツメファシエンス宿主を使用して異種核酸を植物細胞DNAに導入することを含む、請求項184記載の方法。
【請求項188】
以下の工程を含む、植物細胞中で異種核酸配列を発現させる方法:
(a)プロモーターに機能可能に結合した異種核酸配列で植物細胞を形質転換する工程であって、前記異種核酸配列が請求項1または請求項22記載の配列を含む、前記工程;
(b)前記植物細胞中で前記異種核酸配列が発現する条件下で植物を生育させる工程。
【請求項189】
請求項52記載のポリペプチドの部分配列を有するペプチドを含む、シグナル配列。
【請求項190】
請求項52記載のポリペプチドの部分配列を有するペプチドからなる、シグナル配列。
【請求項191】
請求項189または請求項190記載のシグナル配列を含む第一のドメインおよび少なくとも第二のドメインを含む、キメラタンパク質。
【請求項192】
タンパク質が融合タンパク質である、請求項191記載のキメラタンパク質。
【請求項193】
第二のドメインが酵素を含む、請求項191記載のキメラタンパク質。
【請求項194】
酵素がヒドロラーゼである、請求項193記載のキメラタンパク質。
【請求項195】
以下の工程を含む、構造脂質を生体触媒合成する方法:
(a)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程;
(b)トリアシルグリセリド(TAG)を含む組成物を提供する工程;
(c)トリアシルグリセリド(TAG)のSn2位にあるアシル残基をポリペプチドが加水分解する条件下で工程(a)のポリペプチドを工程(b)の組成物と接触させ、それによって1,3-ジアシルグリセリド(DAG)を生成する工程;
(d)R1エステルを提供する工程;
(e)R1-特異的ヒドロラーゼを提供する工程;および、
(f)R1-特異的ヒドロラーゼがSn2位のエステル化を触媒する条件下で工程(c)の1,3-DAGを工程(d)のR1エステルおよび工程(e)のR1-特異的ヒドロラーゼと接触させ、それによって構造脂質を生成する工程。
【請求項196】
ヒドロラーゼがSn2-特異的リパーゼである、請求項195記載の方法。
【請求項197】
構造脂質がココアバター代替物(CBA)、合成ココアバター、天然ココアバター、1,3-ジパルミトイル-2-オレオイルグリセロール(POP)、1,3-ジステアロイル-2-オレオイルグリセロール(SOS)、1-パルミトイル-2-オレオイル-3-ステアロイルグリセロール(POS)または1-オレオイル-2,3-ジミリストイルグリセロール(OMM)を含む、請求項195記載の方法。
【請求項198】
以下の工程を含む、構造脂質を生体触媒合成する方法:
(a)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程;
(b)トリアシルグリセリド(TAG)を含む組成物を提供する工程;
(c)ポリペプチドがトリアシルグリセリド(TAG)のSn1位またはSn3位にあるアシル残基を加水分解する条件下で工程(a)のポリペプチドを工程(b)の組成物と接触させ、それによって1,2-DAGまたは2,3-DAGを生成する工程;および、
(d)動力学的に制御された条件下で工程(c)の1,2-DAGまたは2,3-DAGにおけるアシル移動を促進し、それによって1,3-DAGを生成する工程。
【請求項199】
R1エステルおよびR1-特異的リパーゼを提供する工程、および、前記R1-特異的リパーゼがSn2位のエステル化を触媒する条件下で工程(d)の1,3-DAGをR1エステルおよびR1-特異的リパーゼと接触させ、それによって構造脂質を生成する工程をさらに含む、請求項198記載の方法。
【請求項200】
リパーゼがSn1またはSn3-特異的リパーゼである、請求項198記載の方法。
【請求項201】
構造脂質がココアバター代替物(CBA)、合成ココアバター、天然ココアバター、1,3-ジパルミトイル-2-オレオイルグリセロール(POP)、1,3-ジステアロイル-2-オレオイルグリセロール(SOS)、1-パルミトイル-2-オレオイル-3-ステアロイルグリセロール(POS)または1-オレオイル-2,3-ジミリストイルグリセロール(OMM)を含む、請求項198記載の方法。
【請求項202】
工程(d)がさらに、イオン交換樹脂を使用することを含む、請求項198記載の方法。
【請求項203】
動力学的に制御された条件が、1,3-DAG対2,3-DAGの比が2:1よりも大きい最終生成物を生成する結果となる非平衡条件を含む、請求項198記載の方法。
【請求項204】
工程(b)の組成物が蛍光脂肪酸(FA)を含む、請求項195または請求項198記載の方法。
【請求項205】
工程(b)の組成物がウンベリフェリルFAエステルを含む、請求項195または請求項198記載の方法。
【請求項206】
最終生成物がエナンチオマー的に純粋である、請求項195または請求項198記載の方法。
【請求項207】
以下の工程を含む、プロピオン酸のラセミエステルからプロピオン酸の1つの光学異性体を調製する方法:
(a)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程であって、前記ヒドロラーゼはプロピオン酸の1つの光学異性体に対する立体選択性を有する、前記工程;
(b)ラセミエステルを提供する工程;
(c)エステルの加水分解を選択的に触媒することができる工程(a)のポリペプチドを工程(b)のラセミエステルと接触させ、それによってプロピオン酸の前記光学異性体を生成する工程。
【請求項208】
プロピオン酸の光学異性体が2-(6-メトキシ-2-ナフチル)プロピオン酸のS(+)体を含み、そしてラセミエステルが2-(6-メトキシ-2-ナフチル)プロピオン酸のラセミ(R,S)エステルを含む、請求項207記載の方法。
【請求項209】
以下の工程を含む、2-置換酸のエステルのラセミ混合物を立体選択的に加水分解する方法:
(a)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程であって、前記ヒドロラーゼは立体選択的である、前記工程;
(b)2-置換酸のエステルのラセミ混合物を含む組成物を提供する工程;および、
(c)工程(b)のポリペプチドが前記エステルを選択的に加水分解し得る条件下で工程(a)のポリペプチドを工程(b)の組成物と接触させる工程。
【請求項210】
ヒドロラーゼが固定化されている、請求項195、請求項198または請求項209記載の方法。
【請求項211】
2-置換酸が、2-アリールオキシ置換酸、R-2-(4-ヒドロキシフェノキシ)プロピオン酸または2-アリールプロピオン酸を含む、請求項209記載の方法。
【請求項212】
2-置換酸がケトプロフェンを含む、請求項209記載の方法。
【請求項213】
以下の工程を含む、油または脂肪を改変する方法:
(a)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程;
(b)油または脂肪を提供する工程;および、
(c)前記ヒドロラーゼが前記油または脂肪を改変し得る条件下で工程(a)のヒドロラーゼを工程(b)の油または脂肪と接触させる工程。
【請求項214】
改変が油または脂肪のヒドロラーゼ触媒加水分解を含む、請求項213記載の方法。
【請求項215】
加水分解が、油または脂肪の完全または部分的加水分解である、請求項214記載の方法。
【請求項216】
油が、ポリ不飽和脂肪酸のグリセロールエステル、または、魚油、動物油もしくは植物油を含む、請求項214記載の方法。
【請求項217】
植物油が、オリーブ、キャノーラ、ヒマワリ、ヤシ、ダイズもしくはラウリン系の油または米糠油を含む、請求項216記載の方法。
【請求項218】
以下の工程を含む、ポリ不飽和脂肪酸(PUFA)エステルを加水分解する方法:
(a)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程;
(b)ポリ不飽和脂肪酸エステルを含む組成物を提供する工程;および、
(c)前記ヒドロラーゼが前記ポリ不飽和脂肪酸(PUFA)を加水分解し得る条件下でヒドロラーゼを工程(b)の組成物と接触させる工程。
【請求項219】
以下の工程を含む、飽和脂肪酸エステルに優先してポリ不飽和脂肪酸エステルを選択的に加水分解する方法:
(a)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程であって、前記ヒドロラーゼはリパーゼ活性を有し、かつポリ不飽和脂肪酸(PUFA)エステルを選択的に加水分解する、前記工程;
(b)ポリ不飽和エステルおよび飽和エステルの混合物を含む組成物を提供する工程;および、
(c)前記ポリペプチドが前記ポリ不飽和脂肪酸エステルを選択的に加水分解し得る条件下で工程(a)のポリペプチドを工程(b)の組成物と接触させる工程。
【請求項220】
以下の工程を含む、ポリ不飽和脂肪酸(PUFA)を含む食物または飼料添加物を調製する方法:
(a)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程であって、前記ヒドロラーゼはポリ不飽和脂肪酸(PUFA)エステルを選択的に加水分解する、前記工程;
(b)PUFAエステルを含む組成物を提供する工程;および、
(c)前記ポリペプチドが前記ポリ不飽和脂肪酸エステルの加水分解を選択的に触媒し得る条件下で工程(a)のポリペプチドを工程(b)の組成物と接触させ、それによってPUFA-含有食物または飼料添加物を製造する工程。
【請求項221】
以下の工程を含む、ラテックスを処理する方法:
(a)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程であって、このポリペプチドは不飽和エステルに優先して飽和エステルに対して選択性を有し、それによって前記飽和エステルをその対応する酸およびアルコールに変換する、前記工程;
(b)飽和および不飽和エステルを含むラテックス組成物を提供する工程;
(c)前記ポリペプチドが前記飽和エステルを選択的に加水分解し得る条件下で工程(a)のヒドロラーゼを工程(b)の組成物と接触させ、それによってラテックスを処理する工程。
【請求項222】
アクリル酸エチルに優先してプロピオン酸エチルが選択的に加水分解される、請求項221記載の方法。
【請求項223】
工程(b)のラテックス組成物が、アクリル、ビニルおよび不飽和酸モノマー、アクリル酸アルキルモノマー、アクリル酸メチル、アクリル酸エチル、アクリル酸プロピルおよびアクリル酸ブチル、アクリレート酸、アクリル酸、メタクリル酸、クロトン酸、イタコン酸およびそれらの混合物を含むポリマーを含む、請求項221記載の方法。
【請求項224】
ラテックス組成物が毛定着性である、請求項221記載の方法。
【請求項225】
工程(c)の条件が、約pH4からpH8の範囲内のpHおよび約20℃から約50℃の範囲内の温度を含む、請求項221記載の方法。
【請求項226】
以下の工程を含む、潤滑油を精製する方法:(a)請求項56記載のヒドロラーゼを含む組成物を提供する工程;(b)潤滑油を提供する工程;および、(c)前記ヒドロラーゼが前記潤滑油の中の油を選択的に加水分解し得る条件下で潤滑油をヒドロラーゼで処理し、それによって潤滑油を精製する工程。
【請求項227】
潤滑油が油圧油である、請求項226記載の方法。
【請求項228】
以下の工程を含む、繊維製品を処理する方法:(a)請求項56記載のヒドロラーゼを含む組成物を提供する工程であって、前記ヒドロラーゼはカルボキシルエステルを選択的に加水分解し得る、前記工程;(b)繊維製品を提供する工程;および、(c)前記ヒドロラーゼがカルボキシルエステルを選択的に加水分解し得る条件下で前記繊維製品をヒドロラーゼで処理し、それによって繊維製品を処理する工程。
【請求項229】
繊維製品の処理が、最終繊維製品の手ざわりおよび垂れ具合の向上、染色、難燃性の獲得、撥水性の獲得、光学的な明るさの獲得、または樹脂加工の獲得を含む、請求項228記載の方法。
【請求項230】
繊維製品が、綿、ビスコース、レーヨン、リオセル、亜麻、リネン、カラムシ、すべてのそれらの混紡、または、それらとポリエステル、ウール、ポリアミド繊維、アクリル繊維もしくはポリアクリル繊維との混紡を含む、請求項228記載の方法。
【請求項231】
請求項56記載のヒドロラーゼを含む、繊維製品、織物糸または繊維。
【請求項232】
ヒドロラーゼが繊維製品、織物糸、または繊維の表面に吸着または固定されている、請求項231記載の繊維製品、織物糸、または繊維。
【請求項233】
食物または油の汚れを除去またはその量を低減する方法であって、請求項56記載のヒドロラーゼを、前記ヒドロラーゼが汚れの中の油または脂肪を加水分解し得る条件下で、食物または油の汚れと接触させる工程を含む、前記方法。
【請求項234】
ヒドロラーゼの、界面活性剤による変性および熱による非活性化に対する安定性が向上されている、請求項233記載の方法。
【請求項235】
ヒドロラーゼが洗剤または洗濯水である、請求項233記載の方法。
【請求項236】
請求項56記載のヒドロラーゼを含む食品組成物。
【請求項237】
脂肪を含む栄養素をさらに含む、請求項236記載の食品組成物。
【請求項238】
ヒドロラーゼが胆汁酸塩によって活性化される、請求項236記載の食品組成物。
【請求項239】
牛乳ベースの乳幼児用調製乳をさらに含む、請求項236記載の食品組成物。
【請求項240】
ヒドロラーゼが長鎖脂肪酸を加水分解し得る、請求項239記載の食品組成物。
【請求項241】
以下の工程を含む、ミルクまたは植物ベースの食品組成物の脂肪含有量を低減する方法:(a)請求項56記載のヒドロラーゼを含む組成物を提供する工程;(b)ミルクまたは植物油を含む組成物を提供する工程;および、(c)前記ヒドロラーゼが前記組成物中の油または脂肪を加水分解し得る条件下で工程(b)の組成物をヒドロラーゼで処理し、それによってその脂肪含有量を低減する工程。
【請求項242】
栄養素を含むヒトまたは非反芻動物用の食品組成物であって、前記栄養素は脂肪を含み、ヒドロラーゼを全くまたはほとんど含まず、そして効果的な量の請求項56記載のヒドロラーゼを含み、それによってヒトまたは非反芻動物の脂肪吸収および成長を増進させる、前記組成物。
【請求項243】
以下の工程を含む、エステル交換反応を触媒して新たなトリグリセリドを生成する方法:(a)請求項56記載のヒドロラーゼを含む組成物を提供する工程であって、前記ヒドロラーゼはエステル交換反応を触媒し得る、前記工程;(b)トリグリセリドと遊離脂肪酸の混合物を提供する工程;(c)前記ヒドロラーゼが遊離脂肪酸とトリグリセリドのアシル基との交換を触媒し得る条件下で工程(b)の組成物をヒドロラーゼで処理し、それによって付加脂肪酸のエンリッチされた新たなトリグリセリドを生成する工程。
【請求項244】
ヒドロラーゼがSn1、Sn3-特異的リパーゼである、請求項243記載の方法。
【請求項245】
以下の工程を含む、トランス酸および中間鎖脂肪酸の含有量の少ないマーガリン油を調製するためのエステル転移方法:(a)ステアリン酸、低分子量一価アルコールのステアリン酸モノエステルおよびそれらの混合物からなる群より選択されるステアリン酸原料物質を含むエステル転移反応混合物を提供する工程;(b)液体の植物油を提供する工程;(c)請求項56記載のヒドロラーゼを提供する工程であって、このポリペプチドは1,3-特異的リパーゼ活性を含む、前記工程;(d)ステアリン酸原料物質および植物油トリグリセリドをエステル転移して、反応混合物のグリセリド成分の1-、3-位にあるエステル基を非グリセリド脂肪酸成分と実質的に平衡化する工程:(e)エステル転移混合物のグリセリド成分からエステル転移化遊離脂肪酸成分を分離して、エステル転移化マーガリン油生成物と、植物油から遊離された脂肪酸、脂肪酸モノエステルまたはそれらの混合物を含む脂肪酸混合物とを提供する工程;および、(f)前記脂肪酸混合物を水素添加する工程。
【請求項246】
1-パルミトイル-3-ステアロイル-2-モノレイン(POSt)および1,3-ジステアロイル-2-モノレイン(StOSt)を含む組成物を製造する方法であって、請求項56記載のリパーゼを提供する工程を含み、ここで前記リパーゼは、1,3-ジパルミトイル-2-モノレイン(POP)とステアリン酸またはトリステアリンとの1,3-特異的リパーゼ-触媒エステル交換によって1-パルミトイル-3-ステアロイル-2-モノレイン(POSt)または1,3-ジステアロイル-2-モノレイン(StOSt)のエンリッチされた生成物を製造することが可能である、前記方法。
【請求項247】
リポポリサッカライド(LPS)-媒介毒性を軽減または予防する方法であって、請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドを含む医薬組成物を患者に投与する工程を含む、前記方法。
【請求項248】
エンドトキシンを解毒する方法であって、前記エンドトキシンを請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドと接触させる工程を含む、前記方法。
【請求項249】
リピドAから2'または3'脂肪酸鎖を脱アシル化する方法であって、前記リピドAを請求項56記載のポリペプチドまたは請求項1もしくは請求項22記載の核酸によってコードされるポリペプチドと接触させる工程を含む、前記方法。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
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【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
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【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図31】
【公表番号】特表2007−524375(P2007−524375A)
【公表日】平成19年8月30日(2007.8.30)
【国際特許分類】
【出願番号】特願2006−509241(P2006−509241)
【出願日】平成16年3月8日(2004.3.8)
【国際出願番号】PCT/US2004/007095
【国際公開番号】WO2005/032496
【国際公開日】平成17年4月14日(2005.4.14)
【出願人】(503089489)ダイヴァーサ コーポレイション (31)
【Fターム(参考)】
【公表日】平成19年8月30日(2007.8.30)
【国際特許分類】
【出願日】平成16年3月8日(2004.3.8)
【国際出願番号】PCT/US2004/007095
【国際公開番号】WO2005/032496
【国際公開日】平成17年4月14日(2005.4.14)
【出願人】(503089489)ダイヴァーサ コーポレイション (31)
【Fターム(参考)】
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